特許 7369620 マクロファージ上のＦｃ受容体結合の破壊による抗ＳｌＲＰα抗体療法の効果増強

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-18

(45)【発行日】2023-10-26

(54)【発明の名称】マクロファージ上のＦｃ受容体結合の破壊による抗ＳｌＲＰα抗体療法の効果増強

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20231019BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231019BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231019BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231019BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231019BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P43/00 111

C07K16/28

【請求項の数】 17

(21)【出願番号】P 2019505387

(86)(22)【出願日】2017-07-26

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-12-05

(86)【国際出願番号】 US2017043935

(87)【国際公開番号】W WO2018026600

(87)【国際公開日】2018-02-08

【審査請求日】2020-07-21

【審判番号】

【審判請求日】2022-02-08

(31)【優先権主張番号】62/370,422

(32)【優先日】2016-08-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515158308

【氏名又は名称】ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー

(73)【特許権者】

【識別番号】518247726

【氏名又は名称】フォーティー セブン，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114557

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 英仁

(74)【代理人】

【識別番号】100078868

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 登夫

(72)【発明者】

【氏名】リュウ，ジー

(72)【発明者】

【氏名】リング，アーロン マイケル

(72)【発明者】

【氏名】フォルクマー，ジェンス－ピーター

(72)【発明者】

【氏名】ワイスマン，アービング エル．

【合議体】

【審判長】福井 悟

【審判官】松本 淳

【審判官】高堀 栄二

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１５／１３８６００号（ＷＯ，Ａ２）

【文献】特表２０１４－５１９３３８号公報（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５４１５２２号公報（ＪＰ，Ａ）

【文献】Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ ｅｔ ａｌ、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２００１年、Ｖｏｌ．２７６、Ｎｏ．９、ｐ．６５９１－６６０４

【文献】Ｒｅｖｉｅｗ Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、２０１１年、ＵＲＬ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ．ｃｏｍ／ｓｉｔｅｓ／ｄｅｆａｕｌｔ／ｆｉｌｅｓ／ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｒｅｖｉｅｗｓ／ｒｅｖｉｅｗ－Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ－Ｆｃ－Ｒｅｇｉｏｎｓ－ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ．ｐｄｆ

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N

C07K

A61K

A61P

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤＳ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／Ｇｅｎｅｓｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離された治療用の抗体であって、
（ｉ）ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する可変領域と、
（ｉｉ）ヒトＦｃ受容体に対する結合を低減する改変を含むヒトＦｃ領域と
を含んでおり、
前記ヒトＦｃ領域のグリコシル化が、グリコシル化に必要なアミノ酸残基の改変によって低減され、
前記グリコシル化に必要なアミノ酸残基は、ＥＵインデックス位置のアスパラギン２９７であり、
配列番号３～５及び６～８に記述されるＣＤＲ配列のそれぞれを含むヒト化抗体である
抗体。

【請求項2】

Ｎ２９７Ａ／Ｑ／Ｄ／Ｈ／Ｇ／Ｃのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記改変は、ＣＨ２領域内のＥＵインデックス位置２３４、２３５、または２３７におけるアミノ酸置換である、請求項１に記載の抗体。

【請求項4】

前記改変は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａである、請求項２に記載の抗体。

【請求項5】

改変Ｋ３２２Ａをさらに含む、請求項３に記載の抗体。

【請求項6】

前記改変は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＋Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓを含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項7】

２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰαアイソタイプに特異的に結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項8】

ヒトＳＩＲＰαアイソタイプに特異的である、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項9】

配列番号１及び配列番号２、配列番号９及び配列番号１０、またはそれらに由来する生物学的に活性なバリアントの可変領域配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体を含む、医薬組成物。

【請求項11】

単位用量製剤中にある、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

希釈剤を伴う単位用量での滅菌プレパックとして提供される、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

第２の治療用抗体をさらに含む、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

ヒト対象における標的細胞の食作用を増加させるための組成物であって、
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体を、前記標的細胞の食作用を増加させるために有効な量だけ含む、組成物。

【請求項15】

前記標的細胞はがん細胞である、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

第２の治療用抗体をさらに含む、請求項１４または１５に記載の組成物。

【請求項17】

前記第２の治療用抗体は、がん細胞の表面のたんぱく質に結合する、請求項１６に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

細胞のターンオーバーは、アポトーシスプログラム、または除去するものとして細胞に印を付ける他の細胞の変化の誘導、及び後に続く、マクロファージ、樹状細胞等を含む食細胞によるマーカーの認識によって開始する。このプロセスは、不要な細胞の特異的かつ選択的な除去を必要とする。健康な細胞とは異なり、不要な／老化した／死につつある細胞は、「イートミー（ｅａｔ ｍｅ）」シグナル、すなわち、「自己改変（ａｌｔｅｒｅｄ ｓｅｌｆ）」と呼ばれるマーカーまたはリガンドを示し、これは次に食細胞上の受容体によって認識され得る。健康な細胞は、食作用を能動的に阻害する「ドントイートミー（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」シグナルを示すことができ、これらのシグナルはまた、死につつある細胞において下方制御されるか、異なる構造で存在するか、または「イートミー」もしくは食作用誘発性シグナルの上方制御によって取って代わられている。健康な細胞上の細胞表面タンパク質ＣＤ４７、及びその食細胞受容体、ＳＩＲＰαの結合は、アポトーシスによる細胞排除及びＦｃＲ媒介食作用を含む複数の様式により媒介される貪食を止めることができる、重要な「ドントイートミー」シグナルを構成する。食細胞上のＳＩＲＰαのＣＤ４７媒介性結合を遮断することは、「イートミー」シグナルを持つ生細胞の除去を引き起こすことができる。

【0002】

ＣＤ４７は、単一のＩｇ様ドメイン及び５つの膜貫通領域を有する、広範囲に発現する膜貫通糖タンパク質であり、ＳＩＲＰαの細胞リガンドとして機能し、結合は、ＳＩＲＰαのＮＨ２末端Ｖ様ドメインにより媒介される。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、顆粒球、骨髄樹状細胞（ＤＣ）、マスト細胞、及び造血幹細胞を含むそれらの前駆体を含む骨髄性細胞上に主として発現する。ＣＤ４７結合を媒介するＳＩＲＰα上の構造決定基は、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：７７４１－７７５０、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂ．Ｃ．２８２：１４５６７－７５において論じられ、ＣＤ４７結合におけるＳＩＲＰαシス二量体化の役割は、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｂ．Ｃ．２８５：３７９５３－６３に論じられている。正常細胞の食作用を阻害するＣＤ４７の役割と一致して、それが造血幹細胞（ＨＳＣ）及び前駆細胞上において、その移動段階の直前またはその間に一時的に上方制御され、これらの細胞上のＣＤ４７のレベルが、それらがインビボで貪食される確率を決定するという証拠が存在する。

【0003】

プログラム細胞死（ＰＣＤ）及び食作用の細胞除去は、生物が損傷を受けた細胞、前がん性の細胞、または感染した細胞を除去するために応答する、共通の方法である。この宿主の応答を生き延びる細胞（例えば、がん細胞、慢性感染細胞等）は、ＰＣＤ、及び／または食作用の細胞除去を回避する方法を工夫している。ＣＤ４７、すなわち「ドントイートミー」シグナルは、多種多様な病的な細胞、がん細胞、及び感染細胞において構成的に上方制御され、これらの細胞が食作用を回避することを可能にする。細胞（例えば、がん細胞、感染細胞等）上のＣＤ４７と別の細胞（例えば、食細胞）上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する抗ＣＤ４７剤は、ＣＤ４７発現の増加に対抗し、がん細胞及び／または感染細胞の食作用を促進する。したがって、抗ＣＤ４７剤は、多種多様な状態／障害を治療及び／またはそれを防ぐために使用することができる。実際、抗ＣＤ４７及び抗ＳＩＲＰα遮断抗体は、インビボ及びインビトロにおいてがん細胞の食作用を大幅に増加させる。それらは、白血病から固形腫瘍にわたる広範囲のヒトがんを移植されたマウスの治療において有効であることが示されている。しかしながら、いくつかの場合において、抗ＣＤ４７剤の初期の高用量が、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）のモデルにおいて、赤血球（ＲＢＣ）表面上のＣＤ４７に対する結合による用量依存的なＲＢＣの損失を引き起こし得る。この貧血の重篤度が、治療有効性と関連する持続血清濃度を達成するために必要とされる、より高い用量の使用を妨げ得る。

【発明の概要】

【0004】

抗ＣＤ４７剤の代替として、抗ＳＩＲＰα抗体は、細胞型に関して比較的制限された発現プロファイルに関連する潜在的な利点を有する。抗ＳＩＲＰα抗体の態様及びそれらの使用が本明細書において提供される。

【0005】

ＳＩＲＰαに結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する抗体に関する組成物及び方法が提供される。ＣＤ４７－ＳＩＲＰα経路を遮断することは、標的細胞の食作用を媒介し、非限定的に、がん特異的抗体、病原体特異的抗体等の他の細胞標的化剤と相乗作用することができる。驚くべきことに、エフェクター細胞に対する抗ＳＩＲＰα抗体の活性は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦｃγＲＩＩＢ２、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢの受容体１つ以上を非限定的に含む、エフェクター細胞表面上のＦｃ受容体に、抗体が生産的に結合するとき、実質的に低減され得ることが示されている。有効性の低減は、患者の応答性の個体間の変動をもたらし得る。ＦｃＲｎ以外の１つ以上のＦｃ受容体に対する結合を低減することによって生産的なＦｃ受容体の結合を不可能にし、Ｆｃ受容体が単量体ＩｇＧ及び／または多量体免疫複合体に結合すると、抗体の活性が回復し、改善された治療プロファイルを提供する。

【0006】

いくつかの実施形態において、（ｉ）ＳＩＲＰα、例えばヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する可変領域、及び（ｉｉ）野生型Ｆｃ領域と比較して低減した、ヒトＦｃγ受容体を含むＦｃ受容体に対する結合を有するＦｃ領域を含むか、または機能的なＦｃ領域を欠く抗体が提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＳＩＲＰ－βとヒトＳＩＲＰγとの１つまたは両方に結合する。他の実施形態において、抗体はヒトＳＩＲＰ－βとヒトＳＩＲＰγとの１つまたは両方との実質的な結合を欠く。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰαのＶ１及びＶ２のアイソタイプに特異的に結合する。いくつかのそのような実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域であり、ここでＦｃは、Ｆｃ受容体結合を低減するように１つ以上のアミノ酸の変更によって改変されている。抗体は、検出可能な標識によって標識され、固相上に固定化され、及び／または異種化合物とコンジュゲートしていてもよい。

【0007】

抗体はまた、特にがん抗原、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激アゴニスト、慢性感染の抗原等を含む第２の抗原に応答性である、二重特異性抗体または多重特異性抗体として提供されてもよい。いくつかの実施形態において、二重特異性抗原は、活性を有するＦｃ領域を有する。

【0008】

いくつかの実施形態において、配列番号１に記述される重鎖可変領域と配列番号２に記述される軽鎖可変領域との１つまたは両方、またはそれらに由来する生物学的に活性なバリアントを含む、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体が提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域を含み、そのＦｃ領域は、任意選択で、Ｆｃ受容体に対する低減した結合を有するＦｃ領域である。他の実施形態において、抗体はＦｃ領域を欠き、例えば、Ｆ（ａｂ）₂ 抗体として供給される。

【0009】

本発明の組成物及び方法は、ヒトの疾患の治療に使用でき、ここで抗ＳＩＲＰα抗体は、例えば、標的細胞表面の抗原に結合する第２の抗体と組み合わせて、標的細胞の食作用を増加させる。例えばマクロファージを含む食細胞のエフェクター細胞は、多くのＦｃγ受容体を発現し、低減したＦｃＲ結合を有する抗ＳＩＲＰα抗体の使用の恩恵を受ける。

【0010】

いくつかの実施形態において、例えばヒト対象の治療において使用するための医薬製剤が提供され、ここで製剤は、（ｉ）ＳＩＲＰα、例えばヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する可変領域、及び（ｉｉ）Ｆｃ受容体、例えばヒトＦｃγ受容体に対する低減した結合を有するＦｃ領域を含むか、または機能的なＦｃ領域を欠く抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＳＩＲＰ－βとヒトＳＩＲＰγとの１つまたは両方に結合する。他の実施形態において、抗体はヒトＳＩＲＰ－βとヒトＳＩＲＰγとの１つまたは両方との実質的な結合を欠く。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰαのＶ１及びＶ２のアイソタイプに特異的に結合する。いくつかのそのような実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域であり、ここでＦｃは、Ｆｃ受容体結合を低減するように１つ以上のアミノ酸の変更によって改変されている。医薬製剤は、凍結乾燥された抗体を含み得、及び／または薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。医薬製剤は、単位用量として、例えば、希釈剤及び送達デバイス、例えば、吸入器、シリンジ等を伴う、単位用量での滅菌プレパックとして提供され得る。医薬組成物またはキットは、第２の抗原、例えばがん細胞マーカー、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激アゴニスト、慢性感染のマーカー等に結合する第２の抗体をさらに含み得る。

【0011】

対象の抗体は、様々な治療方法、例えば、ヒトにおけるＣＤ４７に関連する疾患、例えばがん、慢性感染、アテローム性動脈硬化、動脈瘤等の治療のための治療方法における使用を見出だす。いくつかの実施形態において、個体を有効量の本発明の抗体に接触させることを含み、ここで有効量が、本発明の抗体の食細胞への結合を提供し、それによってＣＤ４７を発現する標的細胞の食作用を増加させる、治療方法が提供される。治療は全身性または局所的であり得、例えば、腫瘍内注入等による送達等であり得る。

【0012】

本開示はさらに、抗体及びそれらのバリアントをコードする単離された核酸、任意選択で、ベクターで形質転換した宿主細胞によって認識される制御配列に制御可能に連結されたその核酸を含むベクター、そのベクターを含む宿主細胞、宿主細胞を培養し、核酸が発現するようにすること、及び任意選択で、宿主細胞培養物から（例えば、宿主細胞培地から）抗体を回収することを含む、抗体の産生プロセスを提供する。

【0013】

本発明は、添付の図面と併せて読まれるとき、以下の詳細な説明から最もよく理解される。慣例に従って、図面の様々な特徴は一定の縮尺ではないことが強調される。逆に、様々な特徴の寸法は、明確さのために任意に拡大または縮小されている。図面に含まれるものは以下の図である。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】抗ＣＤ４７（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）またはマウス抗ＳＩＲＰα（ｍＫＷＡＲ）抗体の、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）抗体との組み合わせは、対照のＩｇＧ抗体またはリツキシマブ単独の治療と比較して、リンパ腫がん細胞（Ｒａｊｉ）の食作用を増強させ、ＫＷＡＲのヒトＩｇＧまたはヒトＩｇＧ４とのキメラ（マウス抗原結合領域、ヒト定常Ｆｃ領域）抗体バリアントは、機能しない（ｄｅａｄ）ＦｃとのキメラＫＷＡＲ抗体と比較して、食作用増強効果を低下させることを示すパネルである。

【図2-1】マクロファージ媒介性のＲａｊｉリンパ腫細胞の食作用を促進する、抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲとリツキシマブのバリアントの相乗効果を決定することを示すパネルＡ～Ｄである。

【図2-2】マクロファージ媒介性のＲａｊｉリンパ腫細胞の食作用を促進する、抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲとリツキシマブのバリアントの相乗効果を決定することを示すパネルＥ～Ｊである。

【図3】９Ｂ１１及び７Ｅ１１はリツキシマブと相乗作用してマクロファージ媒介性のＲａｊｉ細胞の食作用を促進することを示すパネルＡ及びＢである。

【図4】ヒト化ＫＷＡＲ重鎖（パネルＡ）及びヒト化ＫＷＡＲ軽鎖（パネルＢ）のアミノ酸配列を示すパネルＡ及びＢである。

【図5】ヒト化ＫＷＡＲは治療用抗体と相乗作用して食作用を促進することを示すパネルＡ及びＢである。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明の方法及び組成物を説明する前に、本発明は記載された特定の方法または組成物に限定されず、よって当然のことながら変化し得ることが理解されるべきである。本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定することを目的とするものではないことも理解されるべきである。

【0016】

一定の範囲の値が提供されるとき、文脈が他を明確に指示しない限り、その範囲の上限と下限との間における、各々の中間の値は、その下限の単位の１０分の１まで本発明に包含される。任意の述べられる値の間の各々のより小さな範囲または述べられる範囲の中間の値、及びその述べられる範囲内の任意の他の述べられる値または中間の値は、本発明に包含される。これらのより小さな範囲の上限及び下限は独立して、範囲内に含まれても排除されていてもよく、いずれかの限界、または両方の限界がより小さな範囲に含まれているか、両方の限界がより小さな範囲に含まれていない各々の範囲はまた、本発明に包含され、述べられる範囲の任意の具体的に排除される限界に従う。述べられる範囲が限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれた限界のいずれかまたは両方を除外する範囲はまた、本発明に含まれる。

【0017】

別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されているものと類似または同等の任意の方法及び物質は、本発明の実施または試験において使用することができるが、いくつかの考え得る、好ましい方法及び物質はここに記載される。本明細書において述べられた全ての刊行物は、共に刊行物が引用されている方法及び／または物質を開示及び記載するための参照により本明細書に組み込まれる。本開示は、矛盾がある限りにおいて、組み込まれた刊行物のいかなる開示にも優先することが理解される。

【0018】

本開示を読む当業者には明らかなように、本明細書に記載され図示された個別の実施形態の各々は、本発明の範囲または精神から逸脱することなく他のいくつかの実施形態の特徴から容易に分離または組み合わされ得る個別の構成要素及び特徴を有する。任意の列挙された方法は、列挙された事象の順序で、または論理的に可能である任意の他の順序で実行され得る。

【0019】

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含することは留意すべきである。したがって、例えば「細胞」に対する言及は、複数のそのような細胞を含み、「ペプチド」に対する言及は、１つ以上のペプチド及び当業者に公知のそれらの同等物、例えばポリペプチドを含むというような具合である。

【0020】

本明細書において述べられている刊行物は、本出願の出願日より前のそれらの開示についてのみが提供されている。本明細書中のいかなるものも、先行発明のために、本発明がそのような刊行物に先行する権利がないということの承認として解釈されるべきではない。さらに、提示される公開日が、実際の公開日と異なることがあり得、それは、個別に確認する必要がある場合がある。

【0021】

用語「治療」、「治療すること」「治療する」等は、概して所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを指すために本明細書において使用される。効果は、疾患またはその病状（複数可）を完全にまたは部分的に予防することに関して予防的であり得、及び／または疾患及び／または疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な安定化もしくは治癒に関して治療的であり得る。用語「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患や病状にかかりやすいが、まだそれを有していると診断されていない対象において疾患及び／または病状（複数可）が生じることを予防すること、（ｂ）疾患及び／または病状（複数可）を阻害すること、すなわちそれらの発症を阻止すること、または（ｃ）疾患の病状（複数可）を緩和する、すなわち疾患及び／または病状（複数可）を後退させることを含む。治療の必要があるものは、すでに罹患しているもの（例えば、がんを有するもの、感染しているもの等）、及び予防が望ましいもの（例えば、がんに対する高い感受性を有するもの、感染の高い可能性を有するもの、がんがあると疑われるもの、感染があると疑われるもの等）を含む。

【0022】

治療的処置は、対象が投与前に罹患しているものであり、予防的処置は対象が投与前に罹患していないものである。いくつかの実施形態において、対象は、罹患する可能性が高いか、または治療前に罹患していると疑われる。いくつかの実施形態において、対象は、罹患する可能性が高いと疑われる。

【0023】

用語「レシピエント」、「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、本明細書において交換可能に使用され、診断、治療または療法が望まれる任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。治療の目的に関して「哺乳動物」は、ヒト、家畜、農場の動物、及び動物園、スポーツ、またはペットの動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ等を含む、哺乳動物であると分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。

【0024】

本発明において使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合する抗原上の任意の抗原決定基を意味する。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

【0025】

本明細書で使用されるとき、用語「標識」は、抗体に直接または間接的にコンジュゲートしている検出可能な化合物または組成物を指す。標識はそれ自体で検出可能であり得（例えば放射性同位体標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合には検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒し得る。

【0026】

「固相」によって、本発明の抗体が付着することができる非水性マトリックスを意味する。本明細書に包含される固相の例は、ガラス（例えば制御細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ））、多糖類（例えばアガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンから部分的または全体的に形成されたものを含む。ある特定の実施形態において、文脈に応じて、固相はアッセイプレートのウェルを構成することができ、他の場合において、それは精製カラム（例えばアフィニティークロマトグラフィーカラム）である。この用語はまた、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されるもの等の離散粒子の不連続固相をも含む。

【0027】

用語「特異的結合」、「特異的に結合する」等は、溶液または反応混合物における、他の分子または部分と比較した、分子への非共有または共有の優先的な結合を指す（例えば、抗体は、他の利用可能なポリペプチドと比較して、特定のポリペプチドまたはエピトープに特異的に結合する）。いくつかの実施形態において、１つの分子の、それが特異的に結合する別の分子への親和性は、１０^-5Ｍ以下（例えば、１０^-6Ｍ以下、１０^-7Ｍ以下、１０^-8Ｍ以下、１０^-9Ｍ以下、１０^-10 Ｍ以下、１０^-11 Ｍ以下、１０^-12 Ｍ以下、１０^-13 Ｍ以下、１０^-14 Ｍ以下、１０^-15 Ｍ以下、１０^-16 以下）のＫ_d （解離定数）を特徴とする。「親和性」は、結合の強さを指し、増加する結合親和性は、低下するＫ_d と相関する。

【0028】

本明細書において使用されるとき、用語「特異的結合メンバー」は、特異的結合の対（すなわち、分子の１つ、例えば第１の特異的結合メンバーが、他の分子、例えば第２の特異的結合メンバーに非共有結合の手段で特異的に結合する、２つの分子、通常２つの異なる分子）のメンバーを指す。

【0029】

Ｆｃ受容体
ヒトＩｇＧ受容体ファミリーは、ｈＦｃγＲＩ、ｈＦｃγＲＩＩＡ、ｈＦｃγＲＩＩＣ、ｈＦｃγＲＩＩＩＡ、ｈＦｃγＲＩＩＢ、ｈＦｃＲＩＩＩＢを含む多くの受容体からなる。ＩｇＧはまた、ＩｇＧの再利用及び輸送に関与するＦｃＲｎに結合する。Ｆｃ受容体の活性化は、細胞表面において発現及び機能するためにＦｃＲサブユニットを必要とし得る。他のＦｃ受容体は、例えば、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、ＦｃεＲＩ等を含む。Ｆｃ受容体の発現は、免疫エフェクター細胞間で変動する。ｈＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、単球／マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）に限定され、誘導されて好中球及び肥満細胞に発現し、ｈＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）は、全ての骨髄細胞に発現するがリンパ球に発現せず、ｈＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は、循環Ｂ細胞及び好塩基球においてのみ高発現し、組織マクロファージ及びＤＣにおいて発現するが、肥満細胞において発現せず、ｈＦｃγＲＩＩＣ（ＣＤ３２Ｃ）は、ＮＫ細胞、単球、及び好中球において発現し、ｈＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）は、ＮＫ細胞及び単球／マクロファージで発現し、ｈＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）は、好中球、及び好塩基球のサブセットで発現する。

【0030】

血中の抗体の生物学的半減期に大きく寄与するＦｃＲｎは、抗原提示細胞、単球／マクロファージ、好中球、血管内皮細胞、腸上皮細胞、及び合胞体栄養膜細胞で発現する。

【0031】

Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧに対するそれらの親和性において異なり、そして同様に、異なるＩｇＧサブクラスは、Ｆｃγ受容体の各々に対して独自の親和性を有する。これらの相互作用は、例えばＩｇＧのＣＨ２－８４．４の位置におけるグリカン（オリゴ糖）によってさらに調整される。例えば、立体障害を生じることによって、ＣＨ２－８４．４グリカンを含有するフコースは、ＦｃγＲＩＩＩＡに対するＩｇＧの親和性を低減する。

【0032】

Ｆｃドメインまたは領域
抗体のＦｃ領域は、その血清半減期、ならびに補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）等のエフェクター機能を媒介する。治療用モノクローナル抗体またはＦｃ融合タンパク質のＦｃ領域を遺伝子操作することは、それらに要求される薬理活性により良好に適した分子の産生を可能にする。ＩｇＧの半減期は、新生児受容体ＦｃＲｎへのそのｐＨ依存性結合に依存する。内皮細胞表面に発現するＦｃＲｎは、ｐＨ依存性の様式でＩｇＧに結合し、それを分解から保護する。

【0033】

「野生型Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域のエフェクター機能を有し、特に、本発明の目的に関して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦｃγＲＩＩＢ２、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体等の１つ以上のＦｃ受容体と相互作用し、例えば本明細書において定義で開示される様々なアッセイを用いて評価することができる。「機能しない（ｄｅａｄ）」Ｆｃは、例えば、ＦｃＲｎとの相互作用を介して血清半減期を延長させることに関する活性を保持するが、非限定的に上記で列挙されるようなヒトＦｃγＲを含む１つ以上の他のＦｃ受容体（複数可）への結合が低減されるかまたは不存在であるように変異されたものである。

【0034】

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに天然に存在するそれらのバリアントを含む。

【0035】

「バリアントＦｃ領域」または「遺伝子操作を受けたＦｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域のものとは、少なくとも１つのアミノ酸修飾のために、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）のために、異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比べて少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域において、または親ポリペプチドのＦｃ領域において約１つ～約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１つ～約５つのアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも８０％の相同性、最も好ましくはそれらと少なくとも９０％の相同性、より好ましくはそれらと少なくとも９５％の相同性を有する。

【0036】

「機能しないＦｃ」のバリアントＦｃ配列は、ＥＵインデックス位置２３４、２３５、及び２３７におけるＦｃγＲＩを低減するＣＨ２領域における３つのアミノ酸置換を含み得る（Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：５６３を参照）。ＥＵインデックス位置３３０及び３３１における補体Ｃ１ｑ結合部位における２つのアミノ酸置換は、補体結合を低減する（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．１７８：６６１（１９９３）、及びＣａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．１７３：１４８３（１９９１）を参照）。ＩｇＧ２の２３３～２３６の位置の残基、ならびにＩｇＧ４の３２７、３３０、及び３３１の位置の残基の、ヒトＩｇＧ１に対する置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低減する（例えば、Ａｒｍｏｕｒ ＫＬ． ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２９（８）：２６１３－２４、及びＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ． ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４を参照）。

【0037】

ＩｇＧのＦｃγＲまたはＣ１ｑに対する結合は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメインに位置する残基に依存する。ＣＨ２ドメインの２つの領域は、ＦｃγＲ及びＣ１ｑの結合にとって極めて重要であり、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４において特有の配列を有する。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２の２３３～２３６の位置の残基ならびにＩｇＧ４の３２７、３３０、及び３３１の位置の残基に対する置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低減する。ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインにおいて数多くの変異がなされている。

【0038】

三重アミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａは、ＦｃγＲ及び補体エフェクター機能を大幅に除去する（例えばＵＳ２０１００２６６５０５を参照）。

【0039】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、天然のタンパク質と比べて低減したグリコシル化及びＦｃγＲへの結合を有するために、発現宿主の選択、アミノ酸置換の酵素処理によって改変されている。ＦｃγＲへの結合を低減する変異は、非限定的に、最適なＦｃＲ相互作用に必要であることが知られている、Ｆｃドメインのアスパラギン２９７上のグリコシル化の修飾を含む。例えば、既知のアミノ酸置換は、Ｎ２９７変異、例えば、Ｎ２９７Ａ／Ｑ／Ｄ／Ｈ／Ｇ／Ｃを含み、これらの変化はタンパク質のグリコシル化部位の喪失をもたらす。酵素的に脱グリコシル化したＦｃドメイン、グリコシル化阻害剤の存在下で組換え発現された抗体、及び細菌におけるＦｃドメインの発現は、グリコシル化、及び続くＦｃγＲへの結合の同様の喪失を有する。

【0040】

ＬＡＬＡ変異、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａはまた、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＋Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓのような、大幅に低減したＦｃγＲ結合を有する。例えば、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４を参照のこと。一連の変異：Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａは、ＦｃγＲ及びＣ１ｑの結合をほぼ完全に無効にするために十分である。一連の３つの変異、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＴＭと呼ばれる）は、非常に類似した効果を有する。

【0041】

ジスルフィド結合を形成することができる領域が欠失されているもの、または、天然Ｆｃ形態のＮ末端においてある特定のアミノ酸残基が除外されているか、またはメチオニン残基がそこに付加されているものを非限定的に含む、他のＦｃバリアントもまた可能である。

【0042】

Ｆｃは、天然糖鎖を有する形態、天然形態と比べて増加した糖鎖を有する形態、もしくは天然形態と比べて減少した糖鎖を有する形態であり得、またはグリコシル化されていないかもしくは脱グリコシル化された形態であり得る。糖鎖の増加、減少、除去、または他の改変は、化学的方法、酵素的方法等の当該技術分野において一般的な方法によって、またはそれを、遺伝的に操作を受けた産生細胞株において発現することによって、達成することができる。そのような細胞株は、微生物、例えば、Ｐｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏｒｉｓ、及び、グリコシル化酵素を通常発現している哺乳動物細胞株、例えばＣＨＯ細胞を含み得る。さらに、微生物または細胞は、グリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作を受け得るか、または、グリコシル化酵素を発現することができないようにされ得る（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１３：１４４１（２００６）、Ｋａｎｄａ， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３０：３００（２００７）、Ｋｉｔａｇａｗａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．，２６９（２７）：１７８７２（１９９４）、Ｕｊｉｔａ－Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．，２６４（２３）：１３８４８ （１９８９）、Ｉｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ， ｅｔ ａｌ， ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：８４（２００７）、及びＷＯ０７／０５５９１６を参照）。改変されたシリル化活性を有するように遺伝子操作を受けた細胞の１つの例として、α－２，６－シリルトランスフェラーゼ１遺伝子がチャイニーズハムスター卵巣細胞及びｓｆ９細胞内で遺伝子操作されている。したがって、これらの遺伝子操作を受けた細胞によって発現される抗体は、外来性遺伝子産物としてシリル化されている。複数の天然分子と比べて改変された量の糖残基を有するＦｃ分子を得るためのさらなる方法は、例えば、レクチン親和性クロマトグラフィーを用いて上記複数の分子をグリコシル化及び非グリコシル化画分へと分離することを含む（例えばＷＯ０７／１１７５０５を参照）。特定のグリコシル化部分の存在は、免疫グロブリンの機能を改変することが示されている。例えば、Ｆｃ分子からの糖鎖の除去は、第１の補体成分Ｃ１のＣ１ｑ部分に対する結合親和性の急激な低下、及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）における低下または喪失をもたらし、これによってインビボでの不要な免疫応答を誘導しない。さらなる重要な改変は、シリル化及びフコシル化を含み、ＩｇＧにおけるシアル酸の存在は、抗炎症性活性と相関しており（例えば、Ｋａｎｅｋｏ， ｅｔ ａｌ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１３：７６０（２００６）を参照）、一方で、ＩｇＧからのフコースの除去は、増強されたＡＤＣＣ活性をもたらす（例えば、Ｓｈｏｊ－Ｈｏｓａｋａ， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４０：７７７（２００６）を参照）。

【0043】

用語「Ｆｃ領域含有抗体」は、Ｆｃ領域を含む抗体を指す。例えば、抗体の精製の最中に、または抗体をコードする核酸の組換え操作によって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）を除去することができる。したがって、本発明によるＦｃ領域を有する抗体は、Ｋ４４７を有するかまたは有しない抗体を含み得る。

【0044】

免疫グロブリンとも呼ばれる抗体は、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含み、ここで、重鎖及び軽鎖のアミノ末端ドメインは配列において可変であり、それゆえ、一般的に、可変領域ドメイン、または可変重鎖（ＶＨ）ドメインもしくは可変軽鎖（ＶＨ）ドメインと呼ばれる。２つのドメインは、一般的に会合して特異的結合領域を形成するが、本明細書において論じられるように、特異的な結合は、可変配列のみの重鎖によって得ることもでき、様々な非天然の構成の抗体が当該技術分野において知られ、使用されている。

【0045】

本明細書において述べられるとき、「治療用」抗体は、患者の治療に好適な抗体、すなわち、治療用用途、例えばヒト対象の治療に適切な文脈でインビボ活性を有する抗体を指す。いくつかの実施形態において、治療用抗体は、標的細胞の表面上に存在する抗原、例えば、腫瘍特異的抗体、病原体特異的抗体等に結合する抗体を指し得る。そのような治療用抗体は、抗ＳＩＲＰα抗体と組み合わせて、標的細胞の食作用を増強することができる。

【0046】

本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味において使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単量体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、重鎖のみ抗体、三本鎖抗体、単一鎖Ｆｖ、ナノボディ等を具体的に包含し、所望の生物活性を示す限り抗体フラグメントをも含む（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ． ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４－４８６１）。例えば、Ｆ（ａｂ’）₂ フラグメントは、抗ＳＩＲＰα抗体のフォーマットとして対象のものである。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであってよく、または他の種由来であってもよい。多くの目的のために、本発明の抗体は、ヒトの遺伝子操作を受けたＦｃ領域を含む。

【0047】

用語、「抗体」は、全長重鎖、全長軽鎖、無傷の免疫グロブリン分子、または任意のそれらのポリペプチドの免疫学的に活性な部分を指し得る。本明細書において開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスであり得、低減したエフェクター細胞活性を提供する遺伝子操作を受けたＦｃ部分を有する改変されたサブクラスを含む。免疫グロブリンは任意の種由来であり得る。一態様において、免疫グロブリンは大部分がヒト起源であるもの、ヒト化されたもの、またはヒトＦｃ領域に関してキメラ化したものである。

【0048】

用語「可変」は、可変ドメインの特定の部分が抗体間で配列において大幅に異なり、その特定の部分が、その特定の抗原に対する各々の特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって、均等に分布していない。可変性は、軽鎖と重鎖との可変ドメインの両方の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度の保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主としてβ－シート構造を採用し、３つのループ状連結を形成し、場合によりβ－シート構造の部分を形成する３つの超可変領域によって連結される４つのＦＲを含む。各々の鎖中の超可変領域は、ＦＲによって、他の鎖からの超可変領域と共に近接して保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ （１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．を参照）。

【0049】

本明細書において使用されるとき、用語「超可変領域」は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基、及び／または「超可変ループ」からのそれらの残基を含み得る。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるような、超可変領域残基以外の可変ドメインの残基である。

【0050】

対象の可変領域は、抗ＳＩＲＰα抗体の可変領域の軽鎖及び重鎖からの少なくとも１つのＣＤＲ配列、通常少なくとも２つのＣＤＲ配列、より通常は３つのＣＤＲ配列を含む。当業者は、配列可変性に基づき、最も一般に使用されるＫａｂａｔの定義（「Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ． Ａ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ．」Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４７：６９４－７００を参照）を含む、多くのＣＤＲの定義が一般的に使用されることを理解する。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づく（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．「Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．」Ｎａｔｕｒｅ．１９８９；３４２：８７７－８８３）。対象のＣＤＲの代替的な定義は、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，「Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ： ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ．」Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００１；３０９：６５７－６７０、Ｏｆｒａｎ ｅｔ ａｌ．「Ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ （ＣＤＲｓ） ｒｅｖｅａｌｓ ｐｅｃｕｌｉａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＣＤＲｓ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ．」Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８１：６２３０－６２３５、Ａｌｍａｇｒｏ「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｉｚｅ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．」Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００４；１７：１３２－１４３、及び、Ｐａｄｌａｎｅｔ ａｌ．「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」Ｆａｓｅｂ Ｊ． １９９５；９：１３３－１３９に開示されるものを非限定的に含み、その各々は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。

【0051】

本明細書において使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集合より取得される抗体、すなわち集合を構成する個別の抗体が、少量で存在し得る起こりうる自然発生の変異を除いて同一であるものを指す。モノクローナル抗体は、高い特異性があり、単一の抗原部位を標的とする。さらに、異なる決定基（エピトープ）を標的とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤と比較して、各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を標的とする。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体による混入がなく合成できるという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集合より取得されるという抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。

【0052】

本明細書における抗体は、「キメラ」抗体であり、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種由来の抗体中または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、鎖（複数可）の残余の部分が、別の種由来の抗体中または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同である「キメラ」抗体、ならびに、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを具体的に含む（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８４）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５）。本明細書における対照のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界猿、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む「霊長類化」抗体を含む。

【0053】

本明細書において使用されるとき、「無傷の抗体鎖」は、全長可変領域と全長定常領域とを含むものである。無傷の「標準的な」抗体は、分泌ＩｇＧについて、無傷の軽鎖及び無傷の重鎖、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。ＩｇＭまたはＩｇＡ等の他のアイソタイプは、異なるＣＨドメインを有し得る。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）、またはそれらのアミノ酸配列バリアントであり得る。

【0054】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位と抗原結合部位とを含む最小の抗体フラグメントである。本発明のＣＤ３結合抗体は、強い非共有結合にある１つの重鎖と１つの軽鎖可変ドメインとの二量体を含むが、例えば、多重特異性の構成における使用のための追加の抗体は、ＶＬ配列が非存在であるＶＨを含み得る。単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、抗原を認識し結合する能力を有するが、親和性は２つのドメイン結合部位のものよりも低いものであり得る。

【0055】

Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端において、抗体ヒンジ領域由来の一または複数のシステインを含むいくつかの残基を付加している点でＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が少なくとも１つの遊離チオール基を有するＦａｂ’の表示である。Ｆ（ａｂ’）₂ 抗体フラグメントは、元来、それらの間のヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として生産された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。

【0056】

非ヒト（例えばげっ歯動物）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ，（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２２４，４８７－４９９、Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，（１９９２）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－４９９、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１，２６２３－２６３２、Ｗｅｒｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １５７：４９８６－４９９５、及び、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈａｅｍｏｓｔ． ８５：３７９－３８９を参照のこと。さらなる詳細については、米国特許第５，２２５，５３９号、米国特許第６，５４８，６４０号、米国特許第６，９８２，３２１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第６，４０７，２１３号、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５、及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９を参照のこと。

【0057】

さらに、本明細書において使用されるとき、用語「抗体」は、適切な実施形態において（他が述べられていないか、または文脈から他が明らかでない限り）、代替的な提示において抗体の構造及び機能的特徴を使用するための、任意の公知の、または開発されたコンストラクトまたはフォーマットを指す。例えば、実施形態、すなわち本発明によって使用される抗体は、無傷のＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ、二重または多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）等）、単一鎖Ｆｖｓ、ポリペプチド－Ｆｃ融合、Ｆａｂ、ラクダ抗体、マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、小モジュール免疫薬（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、「ＳＭＩＰ（商標））単一鎖またはタンデムジアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、ナノボディ（登録商標）、ミニボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリンリピートまたはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、アドネクチン（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、トランスボディ（登録商標）、アフィボディ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、マイクロタンパク質、Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）、及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）を含むがこれらに限定されないフォーマットにある。いくつかの実施形態において、抗体は、天然に産生される場合に有するであろう共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）を欠き得る。いくつかの実施形態において、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード、例えば検出可能な部分、治療用部分、触媒部分等）、または他のペンダント基（例えばポリエチレングリコール等）の付着を含み得る。

【0058】

例示的な抗体剤は、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、コンジュゲート抗体（すなわち、他のタンパク質、放射性標識、サイトカインにコンジュゲートまたは融合された抗体）、小モジュール免役薬（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、「ＳＭＩＰ（商標））、単一鎖抗体、ラクダ抗体、及び抗体フラグメントを含むがこれらには限定されない。本明細書において使用されるとき、用語「抗体剤」はまた、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそれらのフラグメント））、少なくとも２つの無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物活性を示す限り抗体フラグメントをも含む。いくつかの実施形態において、用語は、ステープルペプチド（ｓｔａｐｌｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）を包含する。いくつかの実施形態において、用語は、１つ以上の抗体様結合ペプチド模倣薬を包含する。いくつかの実施形態において、用語は、１つ以上の抗体様結合スキャフォールドタンパク質を包含する。いくつかの実施形態において、用語は、モノボディまたはアドネクチンを包含する。

【0059】

本明細書において使用されるとき、「抗体フラグメント」及び全てのそれらの文法的変形は、無傷の抗体の抗原結合部位または可変領域を含む無傷の抗体の部分として使用され、ここで部分は、無傷の抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、抗体のアイソタイプに応じてＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含まない。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）₂ 、及びＦｖフラグメント、ジアボディ、非限定的に、（１）単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（２）会合した重鎖部分を有さない、１つの軽鎖可変ドメインのみを含む単一鎖ポリペプチドまたは軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むそれらのフラグメント、及び（３）会合した軽鎖部分を有さない、１つの重鎖可変領域のみを含む単一鎖ポリペプチドまたは重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むそれらのフラグメントを含む、連続的アミノ酸残基の１つのとぎれない配列（本明細書において、「単一鎖抗体フラグメント」または「単一鎖ポリペプチド」と呼ばれる）からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体フラグメント、ならびに、抗体フラグメントから形成される多重特異性または多価構造を含む。１つ以上の重鎖を含む抗体フラグメントにおいて、重鎖（複数可）は、無傷の抗体の非Ｆｃ領域に見出される任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプ中のＣＨ１）を含み得、及び／または無傷の抗体に見出される任意のヒンジ領域配列を含み得、及び／または重鎖（複数可）のヒンジ領域配列または定常ドメイン配列に融合するかまたはその中に位置するロイシンジッパー配列を含み得る。

【0060】

逆のことが特段に示されない限り、本明細書において、記載及び請求されるとき、用語「コンジュゲート」は、１つ以上の抗体フラグメント（複数可）の１つ以上のポリマー分子（複数可）への共有結合によって形成される不均質な分子として定義され、ここで不均質な分子は水溶性、すなわち、血液等の生理的液体に可溶であり、ここで不均質な分子は、いかなる構造化凝集体も含まない。対象のコンジュゲートはＰＥＧである。先行する定義に関連して、用語「構造化凝集体」は、（１）スフェロイドまたはスフェロイドシェル構造を有する水溶液中の任意の分子の凝集体であって、不均質な分子が、ミセルまたは他のエマルション構造にあらず、脂質二重膜、小胞、またはリポソームに係留されていないもの、及び（２）クロマトグラフィービーズマトリックス等の固体または不溶化形態の分子の任意の凝集体であって、水相との接触の際に不均質な分子を溶液中に放出しないものを指す。したがって、用語「コンジュゲート」は、本明細書において定義されるとき、沈殿物、沈降物、生体内分解性マトリックスまたはその他の固体であって、固体の水和の際に不均質な分子を水溶液中に放出することができるものの中にある上述の不均質な分子を包含する。

【0061】

本明細書における抗ＳＩＲＰα抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種由来の抗体中または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、鎖（複数可）の残余の部分が、別の種由来の抗体中または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を具体的に含み、そして、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを具体的に含む。

【0062】

「単離された」抗体は、その天然の環境の構成要素で同定され、分離され、及び／またはそこから回収されているものである。その天然環境の混入構成要素は、抗体の診断または治療用用途と干渉する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質の、または非タンパク質の溶質を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法により決定されるとき、７５重量％を超える、最も好ましくは８０重量％、９０重量％または９９重量％を超える抗体となるように、または（２）クマシーブルー、または好ましくは銀染色を用いて、還元または非還元の条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一となるように、精製される。単離された抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組換え細胞内のその場での抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。

【0063】

用語「エピトープタグ付けされた」は、本明細書において使用されるとき、「エピトープタグ」に融合された抗ＳＩＲＰα抗体（またはフラグメント）を指す。エピトープタグポリペプチドは、それに対して抗体を作製することができるエピトープを提供するために十分であるが、抗ＳＩＲＰα抗体の活性と干渉することがないように十分に短い残基を有する。エピトープタグは、好ましくは、エピトープに特異的である抗体が、実質的に他のエピトープと交差することがないように十分に特有である。好適なタグポリペプチドは概して、少なくとも６つのアミノ酸残基を有し、通常、約８つ～５０個のアミノ酸残基の間（好ましくは約９つ～３０個の残基の間）である。例は、ｃ－ｍｙｃタグ、ならびに、それらに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７、及び９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．５（１２）：３６１０－３６１６（１９８５））、ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ３（６）：５４７－５５３（１９９０））を含む。さらなる例は、「ヒスチジンタグ」または「ヒスチジンリッチ親和性ペプチド」であり、それは、ヒスチジンが豊富である金属イオン親和性ペプチドである（例えば、６×Ｈｉｓタグ、ＨＡＴタグ、６×ＨＮタグ等）。ヒスチジンタグはまた、抗Ｈｉｓ抗体に特異的に結合できる。

【0064】

ＳＩＲＰα１（ＰＴＰＮＳ１、ＳＨＰＳ１）は、主に骨髄細胞及び神経細胞に発現する膜貫通糖タンパク質である。ＳＩＲＰαは、広く分布する膜タンパク質ＣＤ４７と相互作用する。ＳＩＲＰαに加えて、ＳＩＲＰファミリーにおいて、２つの密接に関連するタンパク質：ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγが存在する。３つともすべてが、それらの細胞外領域に３つの免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインを有する。ヒトにおいて、ＳＩＲＰαタンパク質は２つの主要な形態で見出される。１つの形態、すなわちバリアント１またはＶ１形態は、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿５４２９７０．１として示されているアミノ酸配列を有する（残基２７～５０４は成熟型を構成する）。別の形態、すなわちバリアント２またはＶ２形態は、１３個のアミノ酸と異なり、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＣＡＡ７１４０３．１として示されているアミノ酸配列を有する（残基３０～５０４は成熟型を構成する）。これらのＳＩＲＰαの２つの型は、ヒトに存在するＳＩＲＰαの型の約８０％を構成し、両方とも、本明細書において、用語「ヒトＳＩＲＰα」に包含される。ヒトに内在性であり、ＣＤ４７に結合する際に、ＣＤ４７を通じてシグナル伝達を誘発する同一の特性を有するそれらの主要でない形態もまた、用語「ヒトＳＩＲＰα」に包含される。ヒトＳＩＲＰａバリアントの配列は、公的なデータベースを通じてアクセスすることができ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号：ｒｅｆ｜ＮＰ＿５４２９７０．１、ｇｂ｜ＥＡＸ１０６０６．１、ｒｅｆ｜ＸＰ＿００５２６０７２６．１、ｇｂ｜ＥＡＸ１０６０６．１、ＸＰ＿００５２６０７２６．１、ｇｂ｜ＥＡＸ１０６１１．１、ｇｂ｜ＥＡＸ１０６０９．１、ｄｂｊ｜ＢＡＡ１２９７４．１、ｇｂ｜ＡＡＨ２６６９２．１、ｒｅｆ｜ＸＰ＿０１１５２７４７５．１を含む。例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９（１１）：７７４１－７７５０を参照でき、参照により、本明細書に具体的に組み込まれる。

【0065】

ヒトＳＩＲＰａに特異的に結合する抗体は、当該技術分野において公知であり、使用され、本明細書に開示されるように遺伝子操作を受けたＦｃ領域の使用に適合され得る。例示的な抗体は、国際特許出願ＷＯ２０１５／１３８６００、米国特許出願公開第２０１４／０２４２０９５号（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｅａｌｔｈ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ）、中国特許出願公開ＣＮ１０３６６５１６５（ＪＩＡＮＧＳＵ ＫＵＡＮＧＹＡ ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＭＥＤＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ ＆ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ、Ｚｈａｏ ＸＷ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ１０８：１８３４２－７（２０１１）に開示されるものを含み、各々は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。抗ＳＩＲＰα抗体は、汎特異的、すなわち、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰαのアイソフォームに結合するものであり得るか、または１つのアイソフォームに特異的であり得る。例えば、Ｚｈａｎｇらによって記載される抗体１．２３Ａは、ＳＩＲＰα１バリアントに特異的であると報告され、一方で、１２Ｃ４抗体は汎特異的である。抗ＳＩＲＰα抗体はまた、ＳＩＲＰαに特異的であり得、かつＳＩＲＰβ及び／またはＳＩＲＰγへの結合を欠き得る。抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰβ及び／またはＳＩＲＰγに関して汎特異的であり得る。

【0066】

用語「共投与」、「共投与する」、及び「～と組み合わせて」は、同時の、並行した、または非特定の制限時間内の連続的な、２つ以上の治療薬の投与を含む。一実施形態において、剤は、細胞内または対象の生体内に同時に存在するか、またはそれらの生物学的または治療的な効果を同時に発揮する。一実施形態において、治療薬は、同一の組成物または単位剤形中にある。他の実施形態において、治療薬は別個の組成物または単位剤形中にある。ある特定の実施形態において、第１の剤は、第２の剤の投与の前に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前に）、投与され得るか、または、第２の剤の投与と並行して、または第２の剤の投与に続いて（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後に）、投与され得る。

【0067】

抗ＳＩＲＰα抗体は、標的細胞に選択的に結合する第２の抗体または剤と組み合わせて治療に使用され得る。用語「標的細胞」は、文脈に応じて種々の方法で使用できる。典型的には「標的細胞」は、食細胞（例えば、食細胞）によって食作用される細胞であり、ここで食作用は、対象に抗ＳＩＲＰα抗体を投与することの結果として増強されている。したがって、用語「標的細胞」は、対象の抗ＳＩＲＰα抗体が、ＣＤ４７発現細胞とＳＩＲＰα発現食細胞との間の相互作用を阻害することによってＣＤ４７発現細胞の食作用を促進するので、ＣＤ４７発現細胞を指し得る。

【0068】

しかしながら、いくつかの場合において、対象の多重特異性抗体に関して、標的細胞の食作用を誘導するために、標的細胞が高レベルのＣＤ４７を発現する必要はない（いくつかの場合において、ＣＤ４７を発現している必要がまったくない）。例えば、多重特異性（例えば二重特異性）抗体に関連して、対象の多重特異性（例えば、二重特異性）抗体のＳＩＲＰα結合領域（第１の結合領域）は、食細胞（例えば、マクロファージ）上のＳＩＲＰαに結合し、これは、多重特異性抗体第２の結合領域（例えば、二重特異性抗体の第２の結合領域）によって認識される（特異的に結合される）抗原（例えば、がん細胞のマーカー）を発現する細胞の近隣に食細胞を移動させるためのテザーとして多重特異性抗体が作用することを可能にする。したがって、多重特異性抗体に関連して、標的細胞は、高レベルのＣＤ４７を発現していない細胞であり得る（ＣＤ４７を発現していない細胞でもあり得る）。いくつかの実施形態において、標的細胞は哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞である。標的細胞は、以下に記載されるような任意の個体（例えば、患者、対象等）であり得る。

【0069】

いくつかの場合において、標的細胞は、「罹患した」細胞（例えば、「罹患した」個体由来の細胞）であり、ここで用語「罹患した」は、対象の抗ＳＩＲＰα抗体によって治療することができる病状、疾病、または疾患を有する対象を指すために本明細書において使用される。「罹患した」対象は、がんを有し得、感染を内部に有し得（例えば、慢性感染）、及び／または他の過剰増殖状態、例えば、硬化症、線維症等を有し得る。非限定的に、動脈瘤、アテローム性動脈硬化等を含む心血管疾患の治療における使用もまた対象である。「罹患した細胞」は、病状、疾病、または疾患を引き起こす細胞であり得る。非限定的な例として、罹患した患者の罹患した細胞は、ＣＤ４７発現のがん細胞、感染細胞、炎症細胞、免疫細胞等であり得る。疾病または疾患が対象の抗ＳＩＲＰα抗体によって治療され得るという１つの指標は、関与する細胞（すなわち、罹患した細胞、例えばがん細胞、感染細胞、炎症細胞、免疫細胞等）がＣＤ４７を発現する（例えば、いくつかの場合において、同一の細胞型の正常細胞と比較して増加したＣＤ４７のレベル）ことである。

【0070】

がんの治療のために、抗ＳＩＲＰα抗体は、腫瘍抗原に特異的な１つ以上の抗体と組み合わせてもよい。これらの中で、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、比較的腫瘍細胞に限定されるが、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）は、腫瘍細胞に特有である。ＴＳＡ及びＴＡＡは、典型的には、主要組織適合遺伝子複合体の一部として細胞表面上に発現する細胞内分子の部分である。

【0071】

組織特異的分化抗原は、腫瘍細胞上及びそれらの正常細胞の同等物上に存在する分子である。治療用ｍＡｂによって認識されることが知られている腫瘍関連抗原は、いくつかの異なる分類に含まれる。造血分化抗原は、通常、分化クラスター（ＣＤ）分類と関連する糖タンパク質であり、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３及びＣＤ５２を含む。細胞表面分化抗原は、正常細胞と腫瘍細胞との両方の表面に見られる糖タンパク質及び炭水化物の多様な群である。増殖及び分化のシグナル伝達に関与する抗原は、しばしば増殖因子及び増殖因子受容体である。がん患者において抗体の標的である増殖因子は、ＣＥＡ、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ１としても知られる）、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２としても知られる）、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ（ＨＧＦＲとしても知られる）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、エフリン受容体Ａ３（ＥＰＨＡ３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連アポトーシス誘導性リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａとしても知られる）、ＴＲＡＩＬＲ２（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂとしても知られる）及び核内因子κＢ活性化受容体リガンド（ＲＡＮＫＬ、ＴＮＦＳＦ１１としても知られる）を含む。血管新生に関与する抗原は、通常、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）、インテグリンαＶβ３及びインテグリンα５β１を含む、新しい微小血管系の形成を支えるタンパク質または増殖因子である。腫瘍間質及び細胞外マトリックスは、腫瘍にとって不可欠な支持構造である。治療標的である間質及び細胞外マトリックスの抗原は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及びテネイシンを含む。

【0072】

二重特異性の構成において、または併用療法として有用な治療用抗体の例は、非限定的に、リツキシマブ、イブリツモマブ、チウキセタン、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、ベドチン、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、アレムツズマブ、ＩＧＮ１０１、アデカツムマブ、ラベツズマブ、ｈｕＡ３３、ペムツモマブ、オレゴボマブ、ＣＣ４９（ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ））、ｃＧ２５０、Ｊ５９１、ＭＯｖ１８、ＭＯＲＡｂ－００３（ファーレツズマブ）、３Ｆ８、ｃｈ１４．１８、ＫＷ－２８７１、ｈｕ３Ｓ１９３、ＩｇＮ３１１、ベバシズマブ、ＩＭ－２Ｃ６、ＣＤＰ７９１、エタラシズマブ、ボロシキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、８０６、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＭＭ－１２１、ＡＭＧ １０２、ＭＥＴＭＡＢ、ＳＣＨ ９００１０５、ＡＶＥ１６４２、ＩＭＣ－Ａ１２、ＭＫ－０６４６、Ｒ１５０７、ＣＰ ７５１８７１、ＫＢ００４、ＩＩＩＡ４、マパツズマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ１）、ＨＧＳ－ＥＴＲ２、ＣＳ－１００８、デノスマブ、シブロツズマブ、Ｆ１９、及び８１Ｃ６を含む。二重特異性抗体は、Ｆｃγ受容体を活性化するＦｃ領域を使用し得る。

【0073】

がんの治療のために、抗ＳＩＲＰα抗体は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害する１つ以上の抗体と組み合わせてもよい。特に興味深いものは、腫瘍細胞表面上に提示される免疫チェックポイントタンパク質である。臨床がん免疫療法に関連して最も活発に研究されている免疫チェックポイント受容体である、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られる）、及びプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１、ＣＤ２７９としても知られる）は、いずれも阻害性受容体である。これらの受容体のいずれかを遮断する抗体の臨床活性は、抗腫瘍免疫が複数のレベルで増強され得ること、及び機序の考察と前臨床モデルとに誘導されて、組み合わせ戦略を論理的に設計することができることを暗示する。

【0074】

ＰＤ１に対する２つのリガンドは、ＰＤ１リガンド１（ＰＤＬ１、Ｂ７－Ｈ１及びＣＤ２７４としても知られる）とＰＤＬ２（Ｂ７－ＤＣ及びＣＤ２７３としても知られる）とである。ＰＤＬ１はがん細胞において発現し、Ｔ細胞上のその受容体ＰＤ１への結合を介して、Ｔ細胞活性化／機能を阻害する。例えば、治療用抗体としてのアベルマブを参照できる。

【0075】

免疫共刺激分子をアゴナイズする剤はまた、本発明の方法において有用である。そのような剤はアゴニストまたはＣＤ４０及びＯＸ４０を含む。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に見られる共刺激タンパク質であり、それらの活性化に必要である。これらのＡＰＣは食細胞（マクロファージ及び樹状細胞）、ならびにＢ細胞を含む。ＣＤ４０は、ＴＮＦ受容体ファミリーの一部である。ＣＤ４０の一次活性化シグナル伝達分子は、ＩＦＮγ及びＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。ＣＤ４０を介した刺激はマクロファージを活性化する。

【0076】

対象の抗ＣＣＲ４（ＣＤ１９４）抗体は、潜在的な抗炎症性及び抗新生物の活性を有する、Ｃ－Ｃケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）に対するヒト化モノクローナル抗体を含む。

【0077】

対象の抗ＳＩＲＰα抗体によって治療できる病状、疾病、及び／または疾患の例は、がん（がん腫、軟部組織腫瘍、肉腫、奇形腫、黒色腫、白血病、リンパ腫、脳腫瘍、固形腫瘍、中皮腫（ＭＳＴＯ）等を含むがこれらに限定されない任意の形態のがん）、感染（例えば、慢性感染）、及び免疫学的疾患または障害（例えば、炎症疾患）（例えば、多発性硬化症、関節炎等、例えば、免疫抑制療法のためのもの）を含むがこれらには限定されない。対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、移植前処置（例えば、幹細胞移植、骨髄移植等）（例えば、悪性細胞を破壊するため、患者の生体がドナーの細胞／幹細胞を拒絶することを防ぐために免疫抑制を提供するため等）のために使用することもできる。例えば、いくつかの場合において、対象の抗体の組み合わせ、または二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ１１７と組み合わせた抗ＳＩＲＰα）は、移植前処置における使用を見出だす。例えば、対象の抗体の組み合わせ、または二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ１１７と組み合わせた抗ＳＩＲＰα）は、骨髄の移植前処置のために使用することができる。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体（例えば、抗体の組み合わせ）は、免疫抑制療法のために使用することができる。

【0078】

例えば、がん細胞が、非がん細胞と比べて増加したＣＤ４７の発現を示すがんはいずれも、対象の方法及び組成物によって治療するために好適ながんである。本明細書において使用されるとき、「がん」は、最小残存病変を含み、原発腫瘍と転移性腫瘍との両方を含む、固形腫瘍がん（例えば、肺、前立腺、乳房、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、膠芽細胞腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮がん、黒色腫、神経内分泌等）、及び液体がん（ｌｉｑｕｉｄ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、血液がん）、がん腫、軟組織腫瘍、肉腫、奇形腫、黒色腫、白血病、リンパ腫、及び脳腫瘍を含むがこれらに限定されない任意の形態のがんを含む。がん細胞がＣＤ４７を発現する（例えば、いくつかの場合において、がん細胞が、非がん細胞と比べて増加したＣＤ４７の発現を示す）任意のがんは、対象の方法及び組成物（例えば、対象の抗ＳＩＲＰα抗体）によって治療されるために好適ながんである。

【0079】

がん腫は、上皮組織に由来する悪性腫瘍である。上皮細胞は、生体の外面を覆い、内部の腔を裏打ちし、そして腺組織の内層を形成する。がん腫の例は、腺がん（腺（分泌）細胞から発生するがん）（例えば、乳房、膵臓、肺、前立腺、及び結腸のがんは、腺がんであり得る）、副腎皮質がん、肝細胞がん、腎細胞がん、卵巣がん、上皮内がん、腺管がん、乳がん、基底細胞がん、扁平上皮がん、移行上皮がん、結腸がん、上咽頭がん、多嚢胞性腎細胞がん、燕麦細胞がん、大細胞肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん等を含むが、これらには限定されない。がん腫は、前立腺、すい臓、結腸、脳（通常、続発性の転移として）、肺、乳房、皮膚などに見出し得る。

【0080】

軟部組織腫瘍は、結合組織に由来する非常にまれな腫瘍の多様な群である。軟部組織腫瘍の例は、胞状軟部肉腫、類血管腫型線維性組織球腫、軟骨粘液線維腫、骨格性軟骨肉腫、骨外性粘液性軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、乳児線維肉腫、消化管間質性腫瘍、骨巨細胞腫、腱滑膜巨細胞腫瘍、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、子宮平滑筋腫、平滑筋肉腫、脂肪芽細胞腫、典型的脂肪腫、紡錘細胞または多形性脂肪腫、異型性脂肪腫、軟骨様脂肪腫、高分化型脂肪肉腫、粘液／円形細胞脂肪肉腫、多形性脂肪肉腫、粘液腫型悪性線維性組織球腫、高悪性度悪性線維性組織球腫、粘液線維肉腫、悪性神経鞘腫、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、未分化神経外胚葉性腫瘍、胞巣状横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、良性または悪性神経鞘腫、滑膜肉腫、Ｅｖａｎｓ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、単発性線維性腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、膝関節内腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性異形成、粘液線維肉腫、線維肉腫、滑膜肉腫、悪性神経鞘腫、神経線維腫、及び軟組織の多形腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞及び神経鞘細胞に由来する新生物を含むが、これらには限定されない。

【0081】

肉腫は、間葉由来の細胞、例えば骨、または軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、または他の結合組織もしくは支持組織を含む生体の軟組織に生じる稀な型のがんである。種々の型の肉腫はがんが形成される場所に基づく。例えば、骨肉腫は骨に形成され、脂肪肉腫は脂肪に形成され、そして横紋筋肉腫は筋肉に形成される。肉腫の例は、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、及び軟組織肉腫（例えば、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、嚢腫肉腫、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管外皮腫、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）（より一般的に「血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）」と呼ばれる）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、悪性神経鞘腫（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、滑膜肉腫、未分化多形性肉腫等）を含むが、これらには限定されない。

【0082】

奇形腫は、例えば、毛髪、筋肉、及び骨を含む、いくつかの異なる型の組織（例えば、３つの胚葉：内胚葉、中胚葉、及び外胚葉のいずれか及び／または全てに由来する組織）を含み得る胚細胞腫瘍の一種である。奇形腫は、女性の卵巣、男性の精巣、及び子供の尾骨に最も頻繁に発生する。

【0083】

黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを産生する細胞）から発生するがんの形態である。それはほくろ（皮膚黒色腫）で始まることがあるが、目の中または腸の中等、他の色素性組織で始まることもある。

【0084】

白血病は骨髄などの造血組織から発生するがんであり、大量の異常な血球を産生させて血流に進入させる。例えば、白血病は、通常血流中で成熟する骨髄由来細胞に由来し得る。白血病は、疾患がどれだけ早く発症しそして進行するか（例えば急性対慢性）及び影響を受ける白血球の型（例えば骨髄性対リンパ性）にちなんで名付けられている。骨髄性白血病は、骨髄性または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病はまた、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞はリンパ節に集まる場合があり、リンパ節は腫脹する可能性がある。白血病の例は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらには限定されない。

【0085】

リンパ腫は免疫系の細胞から発生するがんである。例えば、リンパ腫は、通常リンパ系で成熟する骨髄由来細胞に由来し得る。２つの基本的なリンパ腫の分類が存在する。１つは、これはリード－シュテルンベルク細胞と呼ばれる細胞の型の存在を特徴とするホジキンリンパ腫（ＨＬ）である。現在、ＨＬには６つの認められているタイプが存在する。ホジキンリンパ腫の例は、結節硬化型古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞型ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優位型ＨＬを含む。

【0086】

リンパ腫の他の分類は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、それは、免疫系細胞のがんの大規模で多様な群を含む。非ホジキンリンパ腫は、緩慢性の（増殖が遅い）経過を有するがんと、侵攻性（増殖が速い）経過を有するものとにさらに分類することができる。現在、ＮＨＬには６１種の認められているタイプが存在する。非ホジキンリンパ腫の例は、エイズ関連リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小型非切れ込み核細胞性リンパ腫）、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾γδＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻部Ｔ細胞性リンパ腫、小児リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むが、これらには限定されない。

【0087】

脳腫瘍は、脳組織の全てのがんを含む。脳腫瘍の例は、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫等）、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）等を含むが、これらには限定されない。

【0088】

本明細書において使用されるとき、用語「感染」は、生物（すなわち、対象）の少なくとも１つの細胞が感染体によって感染されている（例えば、対照が、細胞内病原体感染、例えば慢性細胞内病原体感染を有する）任意の状態を指す。本明細書において使用されるとき、用語「感染体」は、感染生物の少なくとも１つの細胞において、ＣＤ４７発現を誘導する（例えば増加したＣＤ４７発現）外来の生物学的実体（すなわち、病原体）を指す。例えば、感染体は、細菌、ウイルス、原虫、及び真菌を指すがこれらに限定されない。細胞内病原体は特に興味深い。感染性疾患は、感染体によって引き起こされる障害である。いくつかの感染体は、ある特定の条件において、認識し得る病状または疾患を引き起こさないが、変化した条件下で病状または疾患を引き起こす可能性がある。対象の方法は、例えば、ウイルス感染、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ヒトパピローマウイルス等、細胞内細菌感染、例えばＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ種、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ等、及び細胞内原虫病原体、例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ種、Ｇｉａｒｄｉａ種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種等を含むが、これらに限定されない慢性病原体感染の治療において使用できる。

【0089】

同様に、例えば、参照により各々が本明細書に具体的に組み込まれる、特許公開ＷＯ２０１５／０４１９８７、ＷＯ２０１６／１３８３０６、ＷＯ２０１６／０４４０２１に記載されているような、アテローム性動脈硬化、動脈瘤等の予防または治療の方法を非限定的に含む、対象における冠動脈疾患（ＣＡＤ）の予防及び治療もまた抗ＳＩＲＰα抗体による治療の対象である。

【0090】

ポリペプチド
一態様において、本開示は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合し、１つの細胞（例えば、がん細胞、感染細胞等）上のＣＤ４７と別の細胞（例えば、食細胞）上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を低減する抗体（すなわち、抗ＳＩＲＰα抗体）（及びそのような抗体を産生する細胞株）に関する。抗体は、（ｉ）ＳＩＲＰα、例えばヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する可変領域と、（ｉｉ）ＦｃＲｎ以外の１つ以上の、ヒトＦｃγ受容体を含むＦｃ受容体に対する低減した結合を有するＦｃ領域とを含むか、またはＦｃ領域を欠く。いくつかのそのような実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域であり、ここでＦｃは、Ｆｃ受容体結合を低減するように１つ以上のアミノ酸の変更によって改変されているか、または遺伝子操作を受けている。特異的な抗ＳＩＲＰα抗体は、非限定的にＫＷＡＲ２３を含み、この抗体は本明細書において、キメラ及びヒト化のフォーマットで開示されている。

【0091】

抗体はまた、特にがん抗原、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激アゴニスト、慢性感染の抗原等を含む第２の抗原に応答性である、二重特異性または多重特異性抗体として提供されてもよい。抗ＳＩＲＰα抗体は、食作用を阻害（ＳＩＲＰαを通じたシグナル伝達を活性化または刺激することは食作用を阻害する）することなくＳＩＲＰαに結合することができる。換言すると、抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰαに結合し得るが、ＣＤ４７誘発性ＳＩＲＰαシグナル伝達を遮断し得る。したがって、好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、エフェクター細胞上に存在し、特にヒトマクロファージ上に存在するＦｃＲに対する低減した結合によってＣＤ４７誘導性ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害することによって、正常細胞よりも罹患した細胞（例えば、がん細胞、感染細胞等）への優先的な食作用を促進する。

【0092】

本明細書において提示されるデータは、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１領域等の野生型ヒトＦｃ領域を含む抗ＳＩＲＰα抗体の活性、例えば、食作用の増強における活性は、細胞標的化抗体と組み合わされるとき、個体間の変動を示し得る。特に、いくらかの個体（応答者）は、食作用における相乗作用的な増加によって応答するが、一方で他の個体（無応答者）は、食作用の大幅な増強を欠く。集団中の無応答者の数は、集団の組成によって変動するであろうが、約１０％まで、約２０％まで、約３０％まで、約４０％まで、約５０％まで、約６０％まで、約７０％まで、約８０％まで、約９０％まで、またはそれ以上であり得る。臨床目的のためには、集団内に無応答者がいることは望ましくない。「機能しない」Ｆｃ、すなわち、ＦｃＲｎ以外の１つ以上のヒトＦｃＲへの低減した結合を有するように遺伝子操作を受けたヒトＦｃ配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体は、集団内の無応答者の数を低減し、例えば、無応答者の数を、約１０％まで、約２０％まで、約３０％まで、約４０％まで、約５０％まで、約６０％まで、約７０％まで、約８０％まで、約９０％まで、またはそれ以上で低減する。

【0093】

本明細書において使用されるとき、用語「無応答者」は、細胞標的化抗体の投与を含む療法への抗ＳＩＲＰα抗体の添加が、細胞標的化抗体の有効性を大幅に増強しない個体を指す。「応答者」は、細胞標的化抗体の投与を含む療法への抗ＳＩＲＰα抗体の添加が、細胞標的化抗体の有効性を大幅に増強し、相乗効果的な応答を提供し得、ここで活性のレベルが、例えば、陰性対照で標準化するとき、いずれかの抗体の単独療法の活性よりも高い、個体である。

【0094】

好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、そのような抗体の完全なヒト、ヒト化、またはキメラ版を含み、ここでＦｃ領域は、ＦｃＲｎ以外の１つ以上のＦｃに対するＦｃＲの結合を低減するために、１つ以上のアミノ酸変化によって改変されている。ヒト化抗体は、それらの低い抗原性のために、ヒトにおけるインビボ適用に特に有用である。同様に、イヌ化抗体、ネコ化抗体などは、それぞれイヌ、ネコ、及び他の種における適用に特に有用である。対象の抗体は、ヒト化抗体、またはイヌ化抗体、ネコ化抗体、ウマ化抗体、ウシ化抗体、ブタ化抗体等、及びそれらのバリアントを含む。

【0095】

例示的な抗体の可変領域が提供される。いくつかの実施形態において、可変領域は、「機能しない」Ｆｃ領域に連結されるか、またはＦｃ領域を欠く、ＫＷＡＲ２３のＣＤＲ配列、例えば、重鎖について配列番号３、４、５、軽鎖について配列番号６、７、８に記述されるようなものを含む。対象の抗体は、それらの提供された組み合わせ、及び、可変領域の適切な定常領域への融合、または例えばＦ（ａｂ）’抗体を産生するための定常領域のフラグメントへの融合を含む。対象の可変領域は、提供される抗ＳＩＲＰα抗体の少なくとも１つのＣＤＲ配列を含み、ここでＣＤＲは、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、またはそれ以上のアミノ酸であり得る。代替的に、対象の抗体は、提供される抗体に記述されるような可変領域、または本明細書に記述される可変領域配列の対を含む。

【0096】

他の実施形態において、ヒト化ＫＷＡＲ２３抗体が提供され、その抗体は、配列番号１及び配列番号２に提供される可変領域配列の１つまたは両方、またはそれらに由来する生物学的に活性なバリアントを含む。ヒト化ＫＷＡＲ２３は、野生型Ｆｃ領域、例えばヒトＦｃ領域を含み得るか、または改変されたＦｃ領域、例えば、機能しないＦｃを含み得る。

【0097】

ヒト化ＫＷＡＲ２３の生物学的に活性なバリアントは、配列番号１または配列番号２に記述されるアミノ酸配列に対して、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．５％以上、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２と比べて、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、６つ以下、７つ以下、８つ以下、９つ以下、１０個以下等のアミノ酸の変化を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸の変化は、例えば配列番号３、４、５、６、７、８において定義されるような、ＣＤＲ残基以外の残基においてであり、すなわち、アミノ酸の変化はフレームワーク配列においてである。生物学的に活性なバリアントは、ヒトＳＩＲＰα、通常Ｖ１とＶ２とのバリアントの両方に特異的に結合する能力を保持する。

【0098】

いくつかの実施形態において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５及び６～８に記述されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを、１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上のＣＤＲ）含む。対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５及び６～８のいずれかに記述されるＣＤＲのアミノ酸配列と比べて、６つまでのアミノ酸（例えば、５つまでのアミノ酸、４つまでのアミノ酸、３つまでのアミノ酸、２つまでのアミノ酸、または１つまでのアミノ酸）において異なるＣＤＲ配列を含むことができる。

【0099】

いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５及び６～８のいずれかに記述されるＣＤＲのアミノ酸配列と比べて、６つまでのアミノ酸（例えば、５つまでのアミノ酸、４つまでのアミノ酸、３つまでのアミノ酸、２つまでのアミノ酸、または１つまでのアミノ酸）において異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを、１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上のＣＤＲ）含む。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５及び６～８のいずれかに記述されるＣＤＲのアミノ酸配列と比べて、６つまでのアミノ酸（例えば、５つまでのアミノ酸、４つまでのアミノ酸、３つまでのアミノ酸、２つまでのアミノ酸、または１つまでのアミノ酸）において異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを、２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上のＣＤＲ）含む。

【0100】

いくつかの実施形態において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５及び６～８のいずれかに記述されるＣＤＲのアミノ酸配列に対して、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９２％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．５％以上、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５に記述されるアミノ酸配列の１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、または３つ）を有する重鎖を含む。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号３～５に記述されるアミノ酸配列の３つ全てを有する重鎖を含む。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号６～８に記述されるアミノ酸配列の１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、または３つ）を有する軽鎖を含む。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号６～８に記述されるアミノ酸配列の３つ全てを有する軽鎖を含む。

【0101】

いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号６～８に記述されるアミノ酸配列の３つ全てを有する軽鎖と、配列番号３～５に記述されるアミノ酸配列の３つ全てを有する重鎖とを含む。

【0102】

いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、３つのＣＤＲを有する重鎖を含み、ここでＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号３に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号５に記述されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、３つのＣＤＲを有する軽鎖を含み、ここでＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号６に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号８に記述されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、（ｉ）３つのＣＤＲを有する重鎖であって、ここでＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号３に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号５に記述されるアミノ酸配列を有する、重鎖と、（ｉｉ）３つのＣＤＲを有する軽鎖であって、ここでＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号６に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号７に記述されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号８に記述されるアミノ酸配列を有する、軽鎖とを含む。

【0103】

いくつかの実施形態において、対象の抗体は二重特異性抗体である。用語「多重特異性」または「二重特異性」抗体（二機能性抗体または多機能性抗体としても知られる）は、第１の抗原に特異的である少なくとも１つの領域（例えば、第１の抗体の可変領域に由来する）と、第２の抗原に特異的である少なくとも１つの第２の領域（例えば、第２の抗体の可変領域に由来する）とを有するために、２つ以上の異なる抗原を認識する抗体を指す。二重特異性抗体は、２つの標的抗原に特異的に結合し、よって多重特異性抗体の１つの型である。多重特異性抗体は、組換えＤＮＡ法によって産生することができ、任意の従来法によって化学的に産生される抗体を含むが、これらに限定されない。二重特異性抗体は、２つの異なる抗原を認識することができる全ての抗体、または抗体のコンジュゲート、または多量体形態の抗体を含む。二重特異性抗体は、それらの二価の特徴を保持するように還元されそして再形成された抗体、及びそれらが各々の抗原に対する複数の抗原認識部位を有することができるように化学的に結合された抗体を含む。

【0104】

対象の二重特異性抗体は、ＳＩＲＰα及び第２の抗原に対して向けられる。対象の二重特異性抗体は、第２の抗原を発現する細胞集団の食作用を可能にする。例示的な二重特異性抗体は、ＳＩＲＰαと、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）等のがん細胞マーカーとの組み合わせを標的化するものを含む。そのため、いくつかの場合において、対象の抗体はＳＩＲＰαと少なくとも１つの第２の抗原に特異的に結合する、二重特異性または多重特異性抗体である。いくつかの場合において、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）から選択される。

【0105】

いくつかの場合において、例示的な二重特異性抗体は、本明細書において、ＳＩＲＰαへの特異的な結合を提供すると開示される配列（例えばＣＤＲ）、及びがん細胞マーカーに結合する抗体由来の配列（例えば、ＣＤＲ）を含む。がん細胞への特異的な結合を提供するＣＤＲを有する抗体の例は、セツキシマブ（ＥＧＦＲに結合する）、パニツムマブ（ＥＧＦＲに結合する）、リツキシマブ（ＣＤ２０に結合する）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、アレムツズマブ（ＣＤ５２に結合する）、ブレンツキシマブ（ＣＤ３０に結合する）等を含むが、これらに限定されない。

【0106】

二重特異性抗体を産生する方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５９８９８３０号、米国特許第５７９８２２９号のような文献に記載されている。高次の特異性、例えば三重特異性抗体は、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３：１１２６－１１３６に記載されている。

【0107】

本開示の文脈において、抗体は、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）₂ ）、キメラ抗体、二重機能性または二重特異性抗体、ならびに四量体抗体複合体を含むと理解される。抗体はまた、それらのエピトープ、すなわちＳＩＲＰαに対する可変領域の結合親和性の観点で記載または特定され得、１０^-5Ｍ以下（例えば、１０^-6Ｍ以下、１０^-7Ｍ以下、１０^-8Ｍ以下、１０^-9Ｍ以下、１０^-10 Ｍ以下、１０^-11 Ｍ以下、１０^-12 Ｍ以下、１０^-13 Ｍ以下、１０^-14 Ｍ以下、１０^-15 Ｍ以下、１０^-16 Ｍ以下）のＫ_d （解離定数）を特徴とするものを含む。１を超える特異性（すなわち、１を超える結合定数）を有する二重特異性及び／または多重特異性抗体について、各々の抗原特異性領域は、１０^-5Ｍ以下（例えば、１０^-6Ｍ以下、１０^-7Ｍ以下、１０^-8Ｍ以下、１０^-9Ｍ以下、１０^-10 Ｍ以下、１０^-11 Ｍ以下、１０^-12 Ｍ以下、１０^-13 Ｍ以下、１０^-14 Ｍ以下、１０^-15 Ｍ以下、１０^-16 Ｍ以下）のＫ_d （解離定数）を有することができる。

【0108】

抗体は、ＦｃＲｎ以外の１つ以上のＦｃＲに対する低減した結合を特徴とし得、ここで、非限定的にＦｃγＲを含む１つ以上のＦｃＲに対する結合は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％またはそれ以上低減している。

【0109】

核酸
本開示はまた、対象の抗ＳＩＲＰα抗体（例えば、上述のポリペプチドの任意のものを含む）をコードする単離された核酸、核酸を含むベクター及び宿主細胞、抗体を産生するための組換え技術を提供する。当該技術分野において知られているように、可変領域の配列は、任意の適切な定常領域配列に融合することができる。

【0110】

抗体の組換え産生について、コードする核酸は、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または発現のために複製可能なベクターに挿入することができる。対象の抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離してシーケンシングすることができる。多くのベクターが利用可能である。ベクターの構成要素は、一般的に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー因子、プロモーター、及び転写終結配列の１つ以上を含むが、これらに限定されない。

【0111】

本開示の対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、直接的だけでなく、シグナル配列、または成熟タンパク質もしくはポリペプチドのＮ末端の特異的な切断部位、免疫グロブリン定常領域配列等を有する他のポリペプチド等を含む、異種または同種のポリペプチドとの融合ポリペプチドとして、組換えによって産生できる。選択される異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識され、処理され得る（例えば、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。天然の抗体シグナル配列を認識も処理もしない原核細胞宿主細胞について、シグナル配列は、選択された原核生物のシグナル配列と置換される。

【0112】

「単離された」核酸分子は、通常、抗体の核酸の天然の源において関連している少なくとも１つの混入核酸分子から同定され分離される核酸分子である。単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または状況以外のものである。したがって、単離された核酸分子は、天然の細胞に存在するような核酸分子とは区別される。しかしながら、単離された核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なる染色体位置にある通常に抗体を発現する細胞に含まれる核酸分子を含む。

【0113】

対象の核酸をクローニングまたは発現させるために好適な宿主細胞の例は、原核生物、酵母、より高次の真核生物細胞を含むが、これらに限定する必要はない。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎臓株（２９３または懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ， Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、Ｂｕｆｆａｌｏ系ラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１．９８２））、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。宿主細胞は、上述の抗ＳＩＲＰα抗体の産生のための発現またはクローニングベクターによって形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選別、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切なように改変された標準的な栄養培地中で培養される。

【0114】

細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製でき、ここでアフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づいて、抗体を精製するために使用できる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。プロテインＧは、通常ヒトＩｇＧ３に推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着するマトリックスは、ほとんどの場合はアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成され得るよりも速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ₃ ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ． Ｔ． Ｂａｋｅｒ， Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ， Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。イオン交換カラムでの分画化、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿等の他のたんぱく質精製のための技術もまた、回収すべき抗体に応じて利用可能である。

【0115】

任意の予備精製ステップ（複数可）に続いて、対象の抗体及び混入物を含む混合物を、約２．５～４．５の間のｐＨで、好ましくは低塩濃度（例えば約０～０．２５Ｍ塩）の溶離緩衝液を用いる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供することができる。

【0116】

使用方法
本明細書において提供される抗ＳＩＲＰα抗体は、特にインビボ治療用途のために、食作用の調節（例えば、食作用の誘導）において使用され得る。例えば、本明細書において提供される対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、１つの細胞上のＣＤ４７と別のものの上のＳＩＲＰαとの相互作用が遮断されるべきである任意の方法において使用することができる。対象の抗ＳＩＲＰα抗体を使用するための例示的な方法は、米国特許出願第２０１３０１４２７８６号、米国特許出願第２０１２０２８２１７４号、米国特許出願第２０１１００７６６８３号、米国特許出願第２０１２０２２５０７３号、米国特許出願第２０１１００７６６８３号、米国特許出願第２０１１００１５０９０号、米国特許出願第２０１１００１４１１９号、米国特許出願第２０１００２３９５７９号、米国特許出願第２００９０１９１２０２号、米国特許出願第２００７０２３８１２７号、米国特許出願第２００７０１１１２３８号、及び米国特許出願第２００４００１８５３１号に記載される方法を含むが、こられには限定されない。これらは、参照によりその全ての内容が本明細書に具体的に組み込まれる。例えば、抗体組成物は、ＣＤ４７を発現しているがん細胞、炎症細胞、及び／または慢性感染細胞の食作用を誘導するために投与され得る。

【0117】

本明細書において提供される対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、病状、疾病、及び／または疾患を治療するために、単独で、または別の抗体と組み合わされて対象に投与され得る。対象の抗ＳＩＲＰα抗体によって治療できる病状、疾病、及び／または疾患の例は、がん（がん腫、軟部組織腫瘍、肉腫、奇形腫、黒色腫、白血病、リンパ腫、脳腫瘍、固形腫瘍、中皮腫（ＭＳＴＯ）等を含むがこれらに限定されない任意の形態のがん）、感染（例えば、慢性感染）、心血管疾患、例えばアテローム性動脈硬化、動脈瘤等、及び免疫学的疾患または障害（例えば、炎症疾患）（例えば、多発性硬化症、関節炎等）、（例えば、免疫抑制療法のためのもの）を含むが、これらには限定されない。対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、移植前処置（例えば、幹細胞移植、骨髄移植等）（例えば、悪性細胞を破壊するため、患者の生体がドナーの細胞／幹細胞を拒絶することを防ぐために免疫抑制を提供するため等）のために使用することもできる。

【0118】

いくつかの実施形態において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体（例えば、二重特異性マクロファージ誘導抗体を含む）は、個体を治療するために別の抗体と組み合わせて使用される。一実施形態において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、１つ以上のがんマーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）等）に対するモノクローナル抗体と組み合わせられ得る（共投与され得る）。いくつかの場合において、組み合わせ組成物は、単一の抗体の使用と比較した標的細胞の食細胞の増強において相乗作用的であり得る。原理の証明としてＣＤ４７に対する剤（例えば、抗ＣＤ４７抗体）は、Ｂ細胞リンパ腫に対するリツキシマブ（抗ＣＤ２０）及びＨＥＲ２＋乳がんに対するトラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）等の腫瘍特異的抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）との顕著な抗腫瘍相乗効果を示す。これらのｍＡｂのＦｃフラグメントは、マクロファージ上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）を活性化して、受容体のＩＴＡＭ（免疫受容活性化チロシンモチーフ）によって伝播されるリン酸化カスケードを駆動する。ＳＩＲＰαは、反対のＩＴＩＭ（免疫受容抑制性チロシンモチーフ）を通じてシグナル伝達するので、ＳＩＲＰαを遮断することは、ＩＴＡＭシグナル伝達を支持するバランスを傾け、それによって食作用を増強する。

【0119】

いくつかの実施形態において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、第２の抗原、例えば、腫瘍関連抗原及び腫瘍特異的抗原を非限定的に含む、ＣＤ４７発現細胞のマーカー（例えば、がん細胞マーカー、炎症細胞のマーカー等）に特異的に結合する抗体と共に投与される（すなわち、組み合わせて投与される）。例えば、いくつかの場合において、対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、セツキシマブ（ＥＧＦＲに結合する）、パニツムマブ（ＥＧＦＲに結合する）、リツキシマブ（ＣＤ２０に結合する）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、アレムツズマブ（ＣＤ５２に結合する）、及びブレンツキシマブ（ＣＤ３０に結合する）、ゲムツズマブ（ＣＤ３３に結合する）、ロルボツズマブ（ＣＤ５６に結合する）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）に結合する）、ニボルマブ（ＰＤ－１（ＣＤ２７９）に結合する、アベルマブ（ＰＤＬ－１に結合する）等から選択される１つ以上の抗体と共に投与される。

【0120】

本開示の１つ以上の抗体を含む治療用製剤は、所望の純度を有する抗体を任意選択の生理学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｏｓｏｌ， Ａ． Ｅｄ．（１９８０））。抗体組成物は、優れた医療行為と一致する方法で製剤化され、投薬され、そして投与される。これに関連して考慮すべき要素は、治療される特定の傷害、治療される特定の哺乳動物、個別の患者の臨床状態、傷害の原因、剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医療従事者に知られている他の要素を含む。投与される抗体の「治療有効量」は、そのような考慮によって統制され、そしてＣＤ４７関連疾患を予防するために必要な最小量である。

【0121】

治療量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重であり得、３００ｍｇ／ｋｇ体重未満、約２００ｍｇ／ｋｇ体重未満、約１００ｍｇ／ｋｇ体重未満であり得る。そのような指針は活性剤の分子量について、例えば、抗体フラグメントの使用、または抗体コンジュゲートの使用において調整されることは当業者に理解される。局所投与、例えば、鼻腔内、吸入等に関して、または全身投与、例えばｉ．ｍ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．等に関して、用量はまた変動し得る。

【0122】

抗体は、活性を増強するか、またはそうでなければ治療効果を増強する１つ以上の剤と共に製剤化されている必要はないが、任意選択でそのように製剤化されている。これらは、本明細書に上述するように使用されるものと同一の用量及び投与経路において、または約１％から９９％の従来使用される用量において、一般的に使用される。

【0123】

許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、使用される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。インビボ投与のために使用される製剤は滅菌される必要がある。これは、滅菌ろ過膜を通じたろ過によって容易に達成される。

【0124】

活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって調製されたマイクロカプセル中に、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルション中に、捕捉され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｏｓｏｌ， Ａ． Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

【0125】

抗ＳＩＲＰα抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内を含む、任意の好適な手段によって投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下の投与を含む。さらに、抗ＳＩＲＰα抗体は、特に抗体の用量の低下を伴って、パルス注入によって好適に投与される。

【0126】

疾患の予防または治療のために、抗体の適切な投与量は、上記で定義されたように治療される疾患の型、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的のために投与されるか否か、以前の治療、患者の病歴及び抗体に対する応答、ならびに主治医の判断に依存する。抗体は、一度にまたは一連の治療にわたって患者に好適に投与される。

【0127】

本開示の別の実施形態において、上述の障害の治療に有用な物質を含む製品が提供される。製品は容器とラベルとを含む。好適な容器は、例えば、瓶、バイアル、注射器、及び試験管を含む。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成することができる。容器は、状態を治療するために有効な組成物を保持し、そして滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の活性剤は抗ＳＩＲＰα抗体であり得る。容器上の、または容器に付随するラベルは、組成物が選択の状態を治療するために使用されることを示すことができる。製品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容可能な緩衝液を含む第２の容器をさらに含み得る。それはさらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、注射器、及び使用説明書を含む添付文書を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質を含み得る。

【0128】

本開示の対象の抗ＳＩＲＰα抗体は、キット中、すなわち所定量の試薬と投与及び／またはアッセイを実施するための説明書との包装された組み合わせで提供され得る。いくつかの場合において、対象のキットは、抗ＳＩＲＰα抗体と組み合わせて使用できる１つ以上の追加の抗体を含み得る。例えば、いくつかの場合において、対象のキットは、各々が第２の抗原（例えば、がん細胞マーカー）と結合する１つ以上の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、及びＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）から選択される抗原である。いくつかの実施形態において、対象のキットは、対象のＳＩＲＰα抗体と、セツキシマブ（ＥＧＦＲに結合する）、パニツムマブ（ＥＧＦＲに結合する）、リツキシマブ（ＣＤ２０に結合する）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２に結合する）、アレムツズマブ（ＣＤ５２に結合する）、及びブレンツキシマブ（ＣＤ３０に結合する）、ゲムツズマブ（ＣＤ３３に結合する）、ロルボツズマブ（ＣＤ５６に結合する）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）に結合する）、ならびにニボルマブ（ＰＤ－１（ＣＤ２７９）に結合する）から選択される１つ以上の抗体とを含む。

【0129】

抗体が酵素によって標識されるとき、キットは、酵素によって必要とされる基質及び補因子（例えば、検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含み得る。さらに、安定剤、緩衝剤（例えば、ブロッキング緩衝液または溶解緩衝液）などの他の添加剤もまた含まれ得る。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するために広範囲で変動し得る。特に、試薬は、溶解の際に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する、賦形剤を含む、通常は凍結乾燥された乾燥粉末として提供され得る。

【0130】

本発明がここで十分に記載されたが、様々な変更及び改変が、本発明の精神または範囲を逸脱することなくなされ得ることは、当業者にとって明白である。

【0131】

実験
以下の実施例は、当業者に本発明をいかに作製及び使用するかの完全な開示及び説明を提供するために進められ、本願発明者が自身の発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではなく、また以下の実験が実施された全部または唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数字（例えば、量、温度等）に関して正確さを確実にするための努力がなされてきたが、いくつかの実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。別途示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、そして圧力は大気圧または大気圧付近である。

【0132】

本明細書において引用されるすべての刊行物及び特許出願は、個別の刊行物または特許出願が、参照により本明細書に組み込まれるように具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。

【0133】

本発明は、本発明の実施のための好ましい様式を含むと本願発明者によって見出されまたは提案された特定の実施形態に関して説明されている。本開示に照らして、本発明の意図する範囲から逸脱することなく、例示された特定の実施形態において多数の改変及び変更がなされ得ることは当業者には理解される。例えば、コドン縮重のために、タンパク質配列に影響を与えることなく基礎となるＤＮＡ配列に変更を加えることができる。さらに、生物学的機能の等価性の考察により、種類または量において生物学的作用に影響を与えることなくタンパク質構造に変更を加えることができる。全てのそのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。

【0134】

実施例１
ＣＤ４７－ＳＩＲＰα経路の遮断は、がん細胞の食作用を媒介し、がんを標的とするモノクローナル抗体と相乗的に作用する。遮断剤は、例えば、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、及びＳＩＲＰαに特異的に結合する抗体を含む。後者は、ＳＩＲＰαの発現がＣＤ４７よりも限定されているので、治療用途において、ある特定の利点を有し得る。これは、薬物動態学及び毒物学プロファイルに影響を与える可能性がある。

【0135】

患者への投与後、望ましい剤は治療上の利益をもたらすために十分な期間、生物学的活性を保持する。例えば、がん及び他の慢性状態の治療において、数日から数週間の半減期が好ましくあり得る。Ｆｃ領域を含む抗体はこのレベルの安定性を容易に達成することができ、これは少なくとも部分的に、Ｆｃ領域と、ＩｇＧの再利用及び輸送に関与する低親和性受容体、ｈＦｃＲｎとの相互作用の相互作用によって媒介されると考えられている。

【0136】

治療薬の別の望ましい特質は、患者に投与したときの最小限の免疫原性である。この理由から、ヒトの療法のための抗体は、典型的に少なくともヒトＦｃ領域（キメラ抗体の場合）、または、ヒトフレームワークと定常領域と（ヒト化抗体の場合）を含むよう改変されている。異種Ｆｃ領域を有する抗体の治療的用途は、一般的には反対が示されている。

【0137】

様々な目的のために、インビトロモデル系、または遺伝子操作されたインビボ動物モデルを用いて、剤の毒性及び有効性を決定することができることに留意することは重要である。そのようなモデル系において、例えば、ヒトがん細胞がマウスに異種移植されている場所に存在する標的細胞とエフェクター細胞との「ミスマッチ」があり得る。多くの目的に有用ではあるが、そのようなモデルは、標的細胞とエフェクター細胞とが同じ種、例えばヒトのものであろう患者環境における抗体の活性を正確には予測できない可能性がある。これらの理由から、治療効果に関する有益な情報は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、ヒト標的細胞に対するヒト抗体またはヒト化抗体の活性を試験することによって得られる。

【0138】

天然のヒト抗体は、ＦｃドメインのＮ２９７位（Ｅｕナンバリング）に偏在するＮ－結合型グリカンを含む糖タンパク質である。Ｎ２９７でのグリコシル化の改変がＦｃγＲとの相互作用を改変し、それによって抗体エフェクター機能に影響を及ぼし得ることを、研究が実証した。Ｎ２９７におけるグリカンの非存在は、ＦｃγＲへの結合及び抗体エフェクター機能を無効にする。Ｆｃ領域における他のアミノ酸の変化は、二重置換、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）を含み、これはＦｃγＲへの結合を大幅に低減する。Ｅ．ｃｏｌｉで産生された脱グリコシル化抗体もまた、ＦｃγＲへの結合が最小であり、単純化されたそしてより経済的な抗体産生プラットフォームを提供し得る。

【0139】

治療目的のための抗ＳＩＲＰα抗体を調製する際に、ＫＷＡＲ２３抗体（国際出願ＷＯ２０１５／１３８６００に開示されており、参照により本明細書に具体的に組み込まれる）は、ヒトＦｃ領域を含むように改変された。驚くべきことに、ヒトエフェクター細胞環境においてがん標的化モノクローナル抗体と組み合わせたとき、Ｆｃ領域における変化が食作用の増強における活性にとって有害であることが判明した。

【0140】

ＳＩＲＰαとエフェクター細胞上に存在する高親和性Ｆｃγ受容体との同時結合が、例えば抗体、Ｆｃγ受容体、及び細胞表面上のＳＩＲＰαの間での三分子複合体の形成を通じて、食作用の阻害をもたらすと仮定された。この問題に対処するために、抗ＳＩＲＰα抗体のＦｃを、いわゆる「機能しないＦｃ」、すなわちアミノ酸の変化の導入によりＦｃγ受容体への低減した結合を有するように遺伝子操作されたＦｃ領域によって置き換えることにより、Ｆｃγ受容体結合を遮断した。特異的に遺伝子操作されたＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域中のＮ２９７Ａアミノ酸置換を含んだ。図１に示されるように、この改変は阻害効果を克服し、そして所望の食作用促進効果を回復した。

【0141】

実施例２
インビトロにおいてリツキシマブと組み合わされた、ヒトマクロファージによるＮＨＬ細胞の食作用のための低減したＦｃγＲ結合を有する抗ＳＩＲＰα抗体に関して、実施例１で述べたように、遺伝子操作されたＦｃ領域を含む抗ヒトＳＩＲＰα抗体を、インビトロでヒトマクロファージによるヒトＮＨＬ細胞株、初代培養ＮＨＬ細胞、及び正常末梢血（ＮＰＢ）細胞の食作用を可能にする能力について評価する。ＮＨＬ細胞をＩｇＧ１アイソタイプ対照または抗ＣＤ４５ ＩｇＧ１抗体の存在下でインキュベートし、リツキシマブの存在下で、野生型または遺伝子操作を受けたＮ２９７Ａ Ｆｃ領域を有するヒト化抗ＳＩＲＰα抗体の存在下での活性を比較する。これらの条件下における腫瘍細胞の食作用が測定される。

【0142】

細胞株
バーキットリンパ腫細胞株（Ｒａｊｉ）及びＤＬＢＣＬ細胞株（ＳＵＤＨＬ４）は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関から取得されるか、または研究室で樹立される。ＮＨＬ１７^＊細胞株は、バルク細胞を、１０％ヒトＡＢ血清を補充したＩＭＤＭによって１．５ヶ月間インビトロで培養することによってＤＬＢＣＬを有する患者から樹立される。

【0143】

ヒト試料
正常ヒト末梢血及びヒトＮＨＬ試料は、ＩＲＢ承認プロトコルに従ってインフォームドコンセントを得て、または地域倫理委員会（ＲＥＫ）承認プロトコルに従ってノルウェーラジウム病院（ノルウェー、オスロ）からインフォームドコンセントを得て取得される。胚中心Ｂ細胞解析のための正常扁桃腺は、同意された小児患者からの廃棄された扁桃摘出標本から得られる。

【0144】

フローサイトメトリー解析
正常末梢血球、胚中心Ｂ細胞、及び初代ＮＨＬ細胞の解析のために、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ１０、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ３８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ， ＵＳＡ ａｎｄ ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ， ＵＳＡ）の抗体を使用した。ＣＤ４７発現の解析は、抗ヒトＣＤ４７ＦＩＴＣ抗体（クローンＢ６Ｈ１２．２、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって実施した。細胞染色及びフローサイトメトリー解析は、以前に記載されたように実施した。

【0145】

治療用抗体
リツキシマブ（ａｎｔｉ－ＣＤ２０、ヒトＩｇＧ１）は、スタンフォード大学メディカルセンターより得られ、マウス抗ヒトＣＤ２０，ＩｇＧ２ａは、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｍｉａｍｉ， ＦＬ， ＵＳＡ）より得られる。

【0146】

インビトロイソボログラム研究
示された抗体、抗ＣＤ２０ ＩｇＧ２ａ、またはリツキシマブを単独で、または１μｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌの濃度で組み合わせてインキュベートされたＮＨＬ細胞によってインビトロ食作用アッセイを実施する。規定された単剤効果（食作用指数）を生じるために必要とされる各々の抗体の濃度は、各細胞型について決定される。次いで、この同一の食作用指数を達成するために組み合わせた２つの抗体の濃度をアイソボログラムにプロットし、そして組み合わせ指数（ＣＩ）を決定する。ＣＩは、式ＣＩ＝（ｄ１／Ｄ１）＋（ｄ２／Ｄ２）から計算され、ここで、ｄ１＝食作用指数を達成するための組み合わせでの薬物１の用量、ｄ２＝食作用指数を達成するための組み合わせでの薬物２の用量、Ｄ１＝食作用指数を達成するための薬物１単独の用量、Ｄ２＝食作用指数を達成するための薬物２単独の用量である。１未満、１に等しい、及び１を超えるＣＩは、それぞれ相乗作用、相加性、及び拮抗作用を示す。

【0147】

実施例３
インビトロにおいて抗ＥＧＦＲと組み合わされた、ヒトマクロファージによる結腸直腸がん細胞の食作用のための低減したＦｃγＲ結合を有する抗ＳＩＲＰα抗体がん細胞
ＤＬＤ１細胞（ＡＴＣＣ）、ＨＴ２９細胞（ＡＴＣＣ）、ＳＷ６２０細胞（ＡＴＣＣ）、ＳＷ４８細胞（ＡＴＣＣ）、ＬＳ１７４Ｔ細胞（ＡＴＣＣ）、ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ）、及びＣＡＣＯ－２細胞（ＡＴＣＣ）は、１０％ウシ胎仔血清（Ｏｍｅｇａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓ）を補充した、ＲＰＭＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓ．）（ＤＬＤ１）、ＥＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓ．）（ＣＡＣＯ－２、ＬＳ１７４Ｔ）、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓ．）（ＨＴ２９、ＨＣＴ１１６）、またはＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓ．）（ＳＷ４８、ＳＷ ６２０）において培養される。ＧＦＰ－ルシフェラーゼ＋ＤＬＤ１細胞株は、ｅＧＦＰ－ルシフェラーゼ２（ｐｇｌ４）融合タンパク質を発現するよう遺伝子操作を受けたｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ－ＥＦ１ ｐｕｒｏ ＨＩＶに基づくレンチウイルスベクター（Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて形質導入することによって樹立された。安定な株は、ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩセルソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でＧＦＰ発現についてソーティングすることによって作製された。腫瘍細胞は、６μｇ／ｍＬのポリブレンを含む培地中で、レンチウイルスによって一晩形質導入された。次の日に、細胞を繰り返し洗浄してポリブレンと細胞外のレンチウイルスを除去した。形質導入された（ＧＦＰ＋）細胞は、後に、ＦＡＣＳによって移植腫瘍から単離された。

【0148】

インビトロ食作用アッセイ
末梢血単核細胞を密度勾配遠心分離によって濃縮し、単球を抗ＣＤ１４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で精製し、１０％ＡＢ－ヒト血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ならびに１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＩＭＤＭ＋ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で７～１０日間培養することによってマクロファージに分化させる。食作用アッセイは、５０，０００のマクロファージと１００，０００のＧＦＰ＋腫瘍細胞との２時間の共培養によって実施され、その後、ハイスループットサンプラー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を備えたＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ細胞分析装置を用いて解析される。処理に使用された抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照、活性の、または機能しないＦｃ領域を有する抗ＳＩＲＰα、及び抗ＥＧＦＲセツキシマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）を含む。マクロファージは抗ＣＤ２０６抗体を用いてフローサイトメトリーで同定される。死細胞は、ＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ）による染色によって解析より排除された。食作用は、ＧＦＰ＋マクロファージのパーセンテージによって評価され、各々の細胞株に対する各々の独立したドナーによる最大応答に対して標準化された。

【0149】

実施例４
進行悪性腫瘍において抗ＳＩＲＰαと併用したアベルマブ
上述のアッセイを用いて、野生型または機能しないＦｃを有する抗ＳＩＲＰα抗体の、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）と組み合わせた組み合わせを、進行性または転移性固形腫瘍（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、及び頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ））の、インビトロでの食作用及び／または細胞媒介細胞溶解について試験する。

【0150】

実施例５
個体の応答における変動
マウスＦｃ配列を有する抗ＳＩＲＰα ＫＷＡＲ２３の可変領域を用いて（ｍＫＷＡＲと命名）、ヒトＦｃγＲとの相互作用を無効にするためのＮ２９７Ａ変異を含むヒトＦｃ配列とのキメラ（ｃｈＫＷＡＲ－ｄｅａｄ－Ｆｃと命名）、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃとのキメラ（ｃｈＫＷＡＲ－ＩｇＧ１と命名）、及びヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域とのキメラ（ｃｈＫＷＡＲ－ＩｇＧ４と命名）の抗体を作製した。

【0151】

リツキシマブと組み合わせたときの、がん細胞の食作用の増強における相乗的応答について抗体をアッセイし、データを図２に示す。

【0152】

１０個の異なるドナー由来のヒトマクロファージは、ヒト血清の存在下で７日間、ドナー番号で示される単球から分化させた。Ｒａｊｉリンパ腫細胞をＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルは蛍光細胞染色色素である）で標識し、１０μｇ／ｍｌのリツキシマブ（抗ＣＤ２０Ａｂ）単独の存在下で、１０μｇ／ｍｌのＫＷＡＲバリアントまたは対照としてのヒトＩｇＧ４と組み合わせてマクロファージと共にインキュベートした。２時間のインキュベーションの後、食作用は、ＣＦＳＥ陽性マクロファージとしてフローサイトメトリーによって決定された。ベースラインの食作用は、ヒトＩｇＧ４対照Ａｂによって決定された。リツキシマブとヒトＩｇＧ対照Ａｂとの組み合わせを用いて、リツキシマブ特異的なベースライン食作用を確立した。点線は、リツキシマブ単独による食作用のレベルを示す。

【0153】

複数の個体からの応答を試験する際に、食作用の増強において個体間の変動が存在したことが見出された。リツキシマブとマウス抗ＳＩＲＰαＡｂ（ｍＫＷＡＲ）との組み合わせは、１０個の全てのドナーマクロファージについて、リツキシマブ単独と比較して、食作用を増強した（点線より上の増加として示される）。

【0154】

対照的に、リツキシマブとキメラ抗ＳＩＲＰαＡｂ（ｃｈＫＷＡＲ－ＩｇＧ４）との組み合わせは、３個のドナーについてはドナーマクロファージについて食作用の大幅な増強を示したが、他の７個のドナーについてはそうではなかった。同様に、野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域（ｃｈＫＷＡＲ－ＩｇＧ１）で試験した６個のドナーにおいて、ドナーの半分が対照に対して大幅な増強を示さなかった。

【0155】

対照的に、「機能しない」ＩｇＧ１－Ｆｃ領域を有するキメラ抗ＳＩＲＰα Ａｂ（ＫＷＡＲ－ｄｅａｄ－Ｆｃ）をリツキシマブと組み合わせたとき、１０個のドナー全てが食作用の大幅な増強を有した。

【0156】

これらの実験は、応答性の変動を減少させること、すなわち、細胞標的化抗体と組み合わせたときの食作用の増強において無応答者である個体の数を減少させることにおいて、抗ＳＩＲＰα抗体に対する機能しないＦｃコンストラクトの一般的な利点を実証する。

【0157】

実施例６
さらなる抗ＳＩＲＰα抗体
ヒトＳＩＲＰαに対するさらなる抗体が、マウスをヒトタンパク質で免疫して、ＳＩＲＰａに結合した抗体をスクリーニングすることによって作製された。２つのモノクローナル抗体のクローンは、それぞれ９Ｂ１１及び７Ｅ１１と名付けられた。マウス可変領域をヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域（７Ｅ１１－Ｇ４または９Ｂ１１－Ｇ４と命名）にキメラとして結合するか、またはヒトＦｃγＲとの相互作用を無効にするためのＮ２９７Ａ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域にキメラとして結合した（７Ｅ１１－Ｇ１または９Ｂ１１－Ｇ１と命名）。

【0158】

ＫＷＡＲ２３で見出されたように、９Ｂ１１及び７Ｅ１１抗体は、リツキシマブと組み合わせたとき、がん細胞の食作用を増強することにおいて相乗的な応答を示した。図３に示されるように、マクロファージは、ヒト血清の存在下で７日間、ドナーＡ（Ａ）及びドナーＢ（Ｂ）の単球から分化させた。Ｒａｊｉ細胞をＣＦＳＥによって標識し、１０μｇ／ｍｌリツキシマブ（Ｒｘ）単独、または１０μｇ／ｍｌの９Ｂ１１－Ｇ４、９Ｂ１１－Ｇ１、７Ｅ１１－Ｇ４、もしくは７Ｅ１１－Ｇ１と組み合わせた１０μｇ／ｍｌリツキシマブの存在下で、マクロファージと共に培養した。２時間後、ＧＦＰ＋マクロファージを観察するフローサイトメトリー解析によって食作用のパーセンテージを計算した。

【0159】

データは、ＩｇＧ４フォーマット化抗体と変異型ＩｇＧ１フォーマット化抗体との両方が相乗的応答を提供し得るが、変異型ＩｇＧ１フォーマットはドナー間でより一貫した応答を提供することを示す。

【0160】

実施例７
Ｆ（ａｂ）₂ フラグメント
Ｆｃγ受容体に対する低減した親和性を有するヒトＦｃ領域を含む抗体の使用の代替として、例えばＦ（ａｂ’）₂ フラグメントを産生することによってＦｃ配列を欠くように抗体を遺伝子操作することができる。

【0161】

例えば、参照により本明細書に具体的に組み込まれる米国特許出願ＵＳ－２０１７－００７３４１４－Ａ１に開示される抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲ２３は、マウス抗ヒト抗体として最初に開発された。Ｆ（ａｂ）₂ フラグメントを産生するために、精製した抗体を、製造者の取扱説明書に従って、沈降樹脂に固定化されたＰｉｅｒｃｅ Ｆ（ａｂ’）₂ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎペプシンで懸濁する。ペプシン消化は典型的に、Ｆ（ａｂ’）₂ フラグメント（非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥで約１１０ｋＤａ）、及びＦｃ部分の多数の小ペプチドを生じる。得られるＦ（ａｂ’）₂ フラグメントは、２つのジスルフィド結合によって結合する一対のＦａｂ’単位からなる。Ｆｃフラグメントは、広範囲に分解され、そして透析、ゲル濾過、またはイオン交換クロマトグラフィーによりＦ（ａｂ′）₂ から分離される。

【0162】

実施例８
ヒト化ＫＷＡＲ抗体
例えば、参照により本明細書に具体的に組み込まれる米国特許出願ＵＳ－２０１７－００７３４１４－Ａ１に開示される抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲ２３は、マウス抗ヒト抗体として最初に開発された。
マウスＫＷＡＲ２３可変重鎖（ＶＨ）（ＣＤＲに下線を付す）

【0163】

【化1】

【0164】

マウスＫＷＡＲ２３可変軽鎖（ＶＬ）（ＣＤＲに下線を付す）

【0165】

【化2】

【0166】

ヒト化ＫＷＡＲ２３可変重鎖（ＶＨ）、配列番号１：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＤＲＡＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＧＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ヒト化ＫＷＡＲ２３可変軽鎖（ＶＬ）、配列番号２：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＰＴＬＳＬＳＰＧＥＲＶＴＬＴＣＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＦＣＨＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ

【0167】

ＫＷＡＲ２３可変重鎖のＣＤＲ（ＩＭＧＴによって定義される）は以下の通りである。
ＣＤＲ－Ｈ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号３）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＤ（配列番号４）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＷＧＡＹ（配列番号５）

【0168】

ＫＷＡＲ２３可変軽鎖のＣＤＲ（ＩＭＧＴによって定義される）は以下の通りである。
ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹ（配列番号６）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号７）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＨＱＷＳＳＹＰＲＴ（配列番号８）

【0169】

ＣＤＲ移植のテンプレートとして使用するヒト抗体フレームワーク（ＦＲ）を選択するために、マウスＫＷＡＲ２３のＶＬ及びＶＨ領域を、ヒトの生殖系列配列のものと比較した。ヒトフレームワーク配列は、マウスフレームワーク配列に基づいて選択された。ヒトの選択された配列由来のＦＲは、ヒト化ＫＷＡＲ２３の設計のための開始点を提供した。マウスの配列と同一のＦＲの残基が保持され、非同一の残基は保持されるかまたは分子モデリングに基づいて置換された。ヒト化ＫＷＡＲ２３コード配列は、細胞にトランスフェクトされ、精製された。配列は図４に示される。

【0170】

次いで、ヒトＳＩＲＰαを認識するヒト化ＫＷＡＲ２３の能力がＢｉａｃｏｒｅアッセイによって試験された。マウス抗体の結合親和性は、１．１８×１０^-9Ｍであると決定された。ヒト化抗体の結合親和性は、１．５４×１０^-9Ｍであると決定された。

【0171】

ヒト化Ｋｗａｒを、図５に示す食作用を促進する治療用抗体との相乗効果について試験した。（Ａ）Ｒａｊｉ細胞をＣＦＳＥによって標識し、１０μｇ／ｍｌリツキシマブ単独、または１０μｇ／ｍｌのＨｕＫｗａｒ－Ｇ１と組み合わせた１０μｇ／ｍｌリツキシマブの存在下で、ヒト単球由来マクロファージと共に培養した。提示されるデータは６個の個別のドナー由来の結果であった。（Ｂ）ＨＴ２９細胞をＣＦＳＥによって標識し、０．１μｇ／ｍｌセツキシマブ単独、または１０μｇ／ｍｌのＨｕＫＷａｒ－Ｇ１と組み合わせた０．１μｇ／ｍｌセツキシマブの存在下で、ヒト単球由来マクロファージと共に培養した。２時間後、ＧＦＰ＋マクロファージを観察するフローサイトメトリー解析によって食作用のパーセンテージを計算した。提示されるデータは６つの個別のドナー由来の結果であった。ヒトＩｇＧ１は、ヒトＦｃγＲとの相互作用を無効にするために、Ｎ２９７Ａ変異を有するように遺伝子操作されている。データは、両方の腫瘍特異的抗体とのヒト化抗体の応答の相乗効果を示す。

【0172】

要約すると、本願発明者らは、マウス／ヒトキメラ抗体及びヒト化抗体を作製する方法を使用することによって、ヒトＳＩＲＰαに対するマウスモノクローナル抗体ＫＷＡＲ２３に基づく治療用抗体を開発した。キメラ抗体及びヒト化抗体は、ＳＩＲＰαに特異的に結合する能力を保持する。

【0173】

相互参照
本願は、２０１６年８月３日に出願された米国仮特許出願第６２／３７０，４２２号の権益を主張し、その出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【配列表】

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