特許 7370983 ヘンドラウイルス感染症及びニパウイルス感染症に対するワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-20

(45)【発行日】2023-10-30

(54)【発明の名称】ヘンドラウイルス感染症及びニパウイルス感染症に対するワクチン

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/155 20060101AFI20231023BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20231023BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20231023BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20231023BHJP

【ＦＩ】

A61K39/155 ZNA

A61K39/39

A61K9/107

A61P31/14

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2020534362

(86)(22)【出願日】2018-12-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-02-22

(86)【国際出願番号】 US2018066145

(87)【国際公開番号】W WO2019126110

(87)【国際公開日】2019-06-27

【審査請求日】2021-11-12

(31)【優先権主張番号】62/608,092

(32)【優先日】2017-12-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515230154

【氏名又は名称】ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100107386

【弁理士】

【氏名又は名称】泉谷 玲子

(72)【発明者】

【氏名】ドミノウスキー，ポール・ジョセフ

(72)【発明者】

【氏名】ムワンギ，ダンカン・エム

(72)【発明者】

【氏名】フォス，デニス・リー

(72)【発明者】

【氏名】レイ，シャラス・ケイ

(72)【発明者】

【氏名】ハーダム，ジョン・モーガン

【審査官】佐々木 大輔

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１４－５１６９５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５３４９７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５１５７４８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ニパウイルス感染症から保護することを、それを必要とするブタ動物において行う方法であって、前記動物に単回投与のワクチンを投与することを含み、前記ワクチンは、
ａ）ヘンドラ抗原またはニパ抗原を含む抗原成分であって、ニパ抗原は配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ヘンドラ抗原は配列番号１２またはそのアミノ酸７３～６０４に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、さらに、前記単回投与が１００マイクログラムの抗原を含有する、抗原成分と、
ｂ）非代謝性油、ＤＥＡＥデキストラン及びＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含むアジュバントと、
を含み、前記ワクチンは、Ｗ／Ｏエマルジョンである、前記方法。

【請求項2】

前記ニパ抗原が配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２に対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記アミノ酸配列が、配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２と同一である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

ＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドが５’ＴＬＲ活性化ドメイン及び少なくとも２つのパリンドローム領域を含有し、一方のパリンドローム領域は、少なくとも６ヌクレオチド長の５’パリンドローム領域であり、直接的にまたはスペーサーを介して、少なくとも８ヌクレオチド長の３’パリンドローム領域に連結している、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

ＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドがホスホロチオエート結合を含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記非代謝性油が軽質ミネラルオイルである、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記動物が、これまでにニパウイルスに対するワクチン接種を受けていない、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記単回投与のワクチンが、約０．１２５ｍｌ～約２ｍｌの体積を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記単回投与のワクチンが、約０．２５ｍｌ～約１ｍｌの体積を有する、請求項８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、概して、ヘンドラウイルス（ＨｅＶ）及びニパウイルス（ＮｉＶ）の感染症に対する動物ワクチンの分野に関する。

【背景技術】

【0002】

ＨｅＶ及びＮｉＶなどのパラミクソウイルスは、ウイルス粒子のエンベロープ上に２つの主要な膜結合型糖タンパク質を有する。糖タンパク質の１つは、ビリオンが宿主細胞上の受容体に結合するために必要であり、赤血球凝集素－ノイラミニダーゼタンパク質（ＨＮ）または赤血球凝集素タンパク質（Ｈ）のいずれかで表される。もう一つは、赤血球凝集能もノイラミニダーゼ活性も持たない糖タンパク質（Ｇ）である。これらの結合糖タンパク質は、分子のアミノ（Ｎ）末端が細胞質側に向いており、タンパク質のカルボキシ（Ｃ）末端が細胞外にある、ＩＩ型膜タンパク質である。他の主要な糖タンパク質は、融合（Ｆ）糖タンパク質であり、これは、２つの７残基繰り返し（ＨＲ）領域及び疎水性融合ペプチドを含有する、三量体のクラスＩ膜融合性エンベロープ糖タンパク質である。ＨｅＶ及びＮｉＶは、受容体結合後、結合Ｇ糖タンパク質とＦ糖タンパク質との協働作用による受け手の宿主細胞へのｐＨに依存しない膜融合プロセスを介して、細胞に感染する。ＨｅＶ及びＮｉＶの結合Ｇ糖タンパク質の主な機能は、宿主細胞の表面上の適切な受容体に結合することであり、十分に特徴付けられたパラミクソウイルスの大部分では、シアル酸部分である。ＨｅＶ及びＮｉＶのＧ糖タンパク質は、宿主細胞のタンパク質受容体エフリンＢ２及び／またはエフリンＢ３を利用しており、Ｇ糖タンパク質によるウイルス結合を遮断する抗体が開発されている（ＷＯ２００６１３７９３１、Ｂｉｓｈｏｐ（２００８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１１３９８－１１４０９）。更に、ＨｅＶ感染症及びＮｉＶ感染症に対する免疫防御応答をもたらす手段としてもＧ糖タンパク質を使用するワクチンが開発されている（ＷＯ２００９１１７０３５）。

【0003】

現在、ヘンドラウイルスによって引き起こされた感染症または疾患の予防に対して認可され、ウマでの使用が承認されたワクチンは１つ（Ｅｑｕｉｖａｃ（登録商標）ＨｅＶ；Ｚｏｅｔｉｓ）あるが、ニパウイルス感染症の予防に対して認可されたワクチンは存在しない。ニパウイルス及びヘンドラウイルスはいずれも、アメリカ国立アレルギー感染症研究所により、バイオディフェンス問題上優先すべきカテゴリーＣに分類される病原体である。更に、これらのウイルスは、人獣共通性感染症のバイオセーフティレベル４の病原体（ＢＳＬ－４）であるため、ワクチン及び／または診断薬の安全な生産は、非常に費用がかかり、困難である。アメリカ合衆国農務省は、ニパウイルス及びヘンドラウイルスの両方を、重大な影響をもたらす外来動物疾患に分類している。

【発明の概要】

【0004】

第１の態様において、本発明は、ヘンドラウイルス感染症またはニパウイルス感染症から保護することを、それを必要とする動物において行う方法であって、当該動物に単回投与のワクチンを投与することを含み、ワクチンは、ヘンドラ抗原またはニパ抗原を含む抗原成分と、油、ポリカチオン性担体及びＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含むアジュバントと、を含み、ワクチンは、Ｗ／Ｏエマルジョンである、方法を提供する。

【0005】

特定の実施形態において、動物は、ブタ動物であり、ニパ抗原は、配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９８％）同一であるアミノ酸配列を含む。

【0006】

特定の実施形態において、動物は、ウマ動物であり、ヘンドラ抗原は、配列番号１２またはそのアミノ酸７３～６０４に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９８％）同一であるアミノ酸配列を含む。

【0007】

上記のいずれかの実施形態と組み合わせることができる更なる実施形態において、油は、非代謝性油である。

【0008】

上記のいずれかの実施形態と組み合わせることができる更なる実施形態において、ポリカチオン性担体は、ＤＥＡＥデキストランである。

【0009】

上記のいずれかの実施形態と組み合わせることができる更なる実施形態において、当該単回投与のワクチンは、約０．１２５ｍｌ～約２ｍｌの体積を有する。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1-1】ニパウイルスＧ糖タンパク質である配列番号１１を示す。

【図1-2】ニパウイルスＧ糖タンパク質である配列番号１１を示す。

【図2-1】ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質である配列番号１２を示す。

【図2-2】ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質である配列番号１２を示す。

【発明を実施するための形態】

【0011】

定義

【0012】

「約」または「およそ」は、測定可能な数値変数に関して使用される場合、その変数が示す値、及びその示された値の実験誤差内（例えば、平均の９５％信頼区間内）またはその示された値の１０％以内である変数のいずれか大きいほうの全ての値を指す。ただし、約が週単位の時間間隔に関して使用される場合、「約３週」は１７～２５日であり、約２～約４週は１０～４０日である。

【0013】

「抗原」または「免疫原」は、動物の免疫系によって認識され、免疫応答を引き起こす任意の物質を指す。この用語には、死滅した、不活性化した、弱毒化した、または改変された生きた細菌、ウイルス、または寄生生物が含まれる。「抗原」という用語にはまた、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、組み換えタンパク質、合成ペプチド、タンパク質抽出物、細胞（腫瘍細胞を含む）、組織、多糖、もしくは脂質、またはその断片が含まれ、単独またはそれらの任意の組み合わせを含む。抗原という用語にはまた、抗イディオタイプ抗体またはその断片などの抗体、及び抗原または抗原決定基（エピトープ）を模倣し得る合成ペプチドミモトープが含まれる。

【0014】

「緩衝液」は、他の化学物質の濃度変化を防ぐ化学系を意味し、例えば、プロトン供与体及び受容体系は、水素イオン濃度（ｐＨ）の著しい変化を防ぐ緩衝液として作用する。緩衝液の更なる例は、弱酸とその塩（共役塩基）または弱塩基とその塩（共役酸）の混合物を含有する溶液である。

【0015】

「対象に単回投与のワクチンＸを投与することを含む」方法は、複数回投与のワクチンＸ」が投与される治療レジメンを除外する。

【0016】

アジュバント製剤に適用される「本質的に～からなる」は、列挙されていない追加の免疫賦活剤または免疫調節剤が測定可能な免疫賦活作用または免疫調節作用を発揮するような量でこれらの剤を含有していない製剤を指す。

【0017】

「単回投与ワクチンとして有効な」組成物またはワクチンへの言及は、ニパまたはヘンドラに対して免疫化されていない動物に単回投与したとき、それぞれニパ抗原投与またはヘンドラ抗原投与に対して、少なくとも５ヶ月、例えば、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、または１４ヶ月の免疫持続期間を与える、ニパまたはヘンドラワクチンを指す。

【0018】

「乳化剤」という用語は、本開示において広義に使用される。乳化剤は、乳化剤として一般に許容される物質を含み、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）またはＳＰＡＮ（登録商標）の製品ラインの様々な製品（それぞれポリエトキシレート化ソルビトールの脂肪酸エステル及び脂肪酸置換ソルビタン界面活性剤）、及びＰＥＧ－４０ヒマシ油または別のＰＥＧ化硬化油などの様々な可溶性促進剤を含む。

【0019】

抗原の「免疫学的防御量」または「免疫学的に有効な量」または「免疫応答をもたらすのに有効な量」は、レシピエントにおいて、免疫原性応答を誘導するのに有効な量である。免疫原性応答は、診断目的もしくは他の検査に十分なものであり得るか、または病原体の感染によって生じる健康への悪影響もしくはその合併症を含む、疾患の徴候もしくは症状を予防するのに十分なものであり得る。体液性免疫もしくは細胞媒介性免疫のいずれか、または両方が誘導され得る。免疫原性組成物に対する動物の免疫原性応答は、例えば、野生型株による抗原投与後の抗体価の測定、リンパ球増殖アッセイを介して間接的に、または徴候及び症状のモニタリングによって直接的に評価され得、一方、ワクチンによって付与される防御免疫は、例えば、対象者の死亡率、罹患率、体温数、全身状態、ならびに全般的な健康状態及び動作などの臨床徴候の低減を測定することによって評価することができる。免疫応答は、限定するものではないが、細胞性免疫及び／または体液性免疫の誘導を含み得る。

【0020】

「免疫原性」とは、免疫応答または抗原性応答を惹起することを意味する。したがって、免疫原性組成物は、免疫応答を誘導する任意の組成物である。

【0021】

「脂質」は、水には不溶性（またはやや難溶）であるが、非極性有機溶媒には可溶であり、触ると油っぽく、炭水化物及びタンパク質とともに生細胞の主要な構造材料を構成すると通常みなされる、脂肪、油、ワックス、ステロール、及びトリグリセリドを含む、有機化合物群のいずれかを指す。

【0022】

「薬学的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内で、対象の組織との接触に使用するのに好適であり、過度な毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことなく、妥当な利益／リスク比に見合い、かつ意図される使用に効果的である、物質を指す。

【0023】

本発明は、本明細書に記載されるワクチンの単回投与を動物に投与することによって、ヘンドラ感染症及び／またはニパ感染症に対するワクチン接種を、それを必要とする動物に行う方法を提供する。簡潔に述べれば、ワクチンは、以下に詳述するアジュバントＴＸＯで免疫賦活されたヘンドラ抗原またはニパ抗原を含有する。

【0024】

抗原

【0025】

本発明の実施に有用なヘンドラウイルスＧ糖タンパク質ポリペプチド、及びその組み換え発現については、そのような情報が明示された公開済みの国際特許出願第ＷＯ２０１２／１５８６４３号及び同第ＷＯ２００６／０８５９７９号の開示全体を参照されたい。本明細書で有用な特定のヘンドラウイルスＧタンパク質ポリペプチドの好ましい例は、ＷＯ２０１２／１５８６４３に開示されており、例えば、全長Ｇタンパク質（配列番号１２）、その可溶性断片（配列番号１２のアミノ酸７３～６０４をコードする断片）、及びＩｇ（カッパ）リーダー配列を有する当該開示の更なる断片が挙げられる。例えば、ＷＯ２０１２／１５８６４３の配列番号１５を参照されたい。一般に、ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質の可溶性形態は、エクトドメインの全てまたは一部を含み、Ｇ糖タンパク質の膜貫通ドメインの全てまたは一部、及び細胞質尾部の全てまたは一部を除去することによって生成される。好ましくは、コード遺伝子配列は、発現に対してコドン最適化される。

【0026】

いくつかの実施形態において、ヘンドラＧ糖タンパク質は、二量体及び／または四量体の形態であり得る。そのような二量体は、Ｇ糖タンパク質内のシステイン残基間に形成されるジスルフィド結合の形成に応じて変化する。そのようなジスルフィド結合は、天然Ｇ糖タンパク質で形成される結合に相当し得、あるいは、異なるジスルフィド結合が形成されることで、抗原性を増強させる異なるＧ糖タンパク質二量体及び／または四量体の形態が生じ得る。更に、また、Ｇ糖タンパク質が数多くの立体配座依存性エピトープ（すなわち、三次元の三次構造から生じるもの）を生じることと、それゆえ、そのような多数の天然エピトープを維持することが中和抗体応答を付与するために非常に好ましいことを考慮すると、二量体化及び四量体化していない形態もまた本発明の実施に有用である。

【0027】

概して言えば、ヘンドラＧタンパク質の発現ベクターの構築は、ＷＯ２０１２／１５８６４３の実施例１に記載されているとおりであり、ＣＨＯ細胞から得られるタンパク質発現は、その実施例２に記載されているとおりであり、あるいは、ワクシニア系（その実施例３参照）または２９３細胞（その実施例４参照）を使用してもよい。好ましい具体例において、可溶性Ｇタンパク質は、天然ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質のアミノ酸７３～６０４として記載される（配列番号１２と同一であるＷＯ２０１２／１５８６４３の配列番号２参照。その二量体化は、自然に、ＣＨＯ細胞からの発現と同時に生じ、得られるＧタンパク質は、およそ５０％が二量体、５０％が四量体であり、単量体はほとんど残らない。２９３Ｆ細胞での発現は、約７０％が二量体になる。

【0028】

ニパＧタンパク質の発現ベクターの構築も記載されている。例えば、ＷＯ２０１２／１５８６４３の実施例１及び２を参照されたい。本明細書で有用な特定のニパウイルスＧタンパク質ポリペプチドの好ましい例は、ＷＯ２０１２／１５８６４３に開示されており、例えば、全長Ｇタンパク質（配列番号１１）、その可溶性断片（配列番号１１のアミノ酸７１～６０２をコードする断片）、及びＩｇ（カッパ）リーダー配列を有する当該開示の更なる断片が挙げられる。一般に、ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質の可溶性形態は、エクトドメインの全てまたは一部を含み、Ｇ糖タンパク質の膜貫通ドメインの全てまたは一部、及び細胞質尾部の全てまたは一部を除去することによって生成される。好ましくは、コード遺伝子配列は、発現に対してコドン最適化される。

【0029】

ニパＧ抗原は、ヘンドラＧ抗原と同様に産生され得、例えば、ＷＯ２０１２／１５８６４３の実施例３に記載されているとおりである。

【0030】

大型動物に対する好ましい抗原用量は、約５０～約２００マイクログラム／用量の範囲内であり、約１００マイクログラムが最も好ましい用量である。イヌなどの小型動物の場合、５～５０マイクログラム、例えば、約１０マイクログラム、約１５マイクログラム、約２０マイクログラム、約２５マイクログラム、約３０マイクログラム、約３５マイクログラム、約４０マイクログラム、約４５マイクログラムなど、より少ない量が必要とされる。

【0031】

特定の実施形態において、ニパ抗原及び／またはヘンドラ抗原は、それぞれ配列番号１１及び１２であり、アミノ酸が最大５％異なる。好ましくは、改変アミノ酸は、保存的に置換される。次の８つの群は、それぞれが互いに保存的に置換されているアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（１９８４）参照）。

【0032】

ヘンドラ抗原またはニパ抗原が配列番号１１または１２に少なくとも９５％同一であるかどうかを決定するために、当該抗原が追加の断片（例えば、精製タグまたはＩｇ（カッパ）リーダー配列）を含む実施形態において、そのような追加の断片は、比較から除外される。

【0033】

更なる実施形態において、抗原成分は、上記アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸配列を含むベクターを含み得る。好適なベクターには、ポックスベクター（例えば、ワクシニアベクターまたはＡＬＶＡＣなどのカナリア痘ベクター）、アデノウイルスベクター、ＳＩＲＮＡＶＡＸ^ＳＭプラットフォームなどが含まれる。

【0034】

アジュバント

【0035】

本発明のワクチンは、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョンである。複数の油及びそれらの組み合わせが本発明の使用に適している。これらの油には、限定するものではないが、動物油、植物油、及び非代謝性油が含まれる。本発明に好適な植物油の非限定的な例は、トウモロコシ油、ピーナッツ油、大豆油、ヤシ油、及びオリーブ油である。動物油の非限定的な例は、スクアランである。非代謝性油の好適な非限定的な例には、軽質ミネラルオイル、直鎖状または分岐状の飽和油などが挙げられる。

【0036】

一連の実施形態において、本発明のアジュバント製剤に使用される油は、軽質ミネラルオイルである。本明細書で使用されるとき、「ミネラルオイル」という用語は、蒸留技術を介してペトロラタムから得られる液体炭化水素の混合物を指す。この用語は、「流動パラフィン」、「流動ワセリン」及び「ホワイトミネラルオイル」と同義である。この用語はまた、「軽質ミネラルオイル」、すなわち、ペトロラタムの蒸留によって同様に得られるが、ホワイトミネラルオイルよりも比重がわずかに低い油を含むことが意図される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐａｇｅｓ ７８８ ａｎｄ １３２３）を参照されたい。ミネラルオイルは、様々な商業的供給元、例えば、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｐａ．）、ＵＳＢ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，Ｏｈｉｏ）から入手することができる。好ましいミネラルオイルは、ＤＲＡＫＥＯＬ（登録商標）の名称で市販されている軽質ミネラルオイルである。

【0037】

典型的に、油相は、ワクチン組成物の５０体積％～９５体積％の量、好ましくは、５０％超～８５％ｖ／ｖの量、より好ましくは、５０％超～６０％ｖ／ｖの量、より好ましくは、５０超～５２％ｖ／ｖの量で存在する。油相は、任意の乳化剤（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）８０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０など）が存在する場合、油と、そのような乳化剤とを含む。油相の体積は、油及び乳化剤（複数可）の体積の合計として計算される。したがって、例えば、油の体積が組成物の４０％であり、乳化剤（複数可）の体積が１２％である場合、油相は、組成物の５２％ｖ／ｖで存在することになる。同様に、油が組成物の約４５％の量で存在し、乳化剤（複数可）が約６％の量で存在する場合、油相は、組成物の約５１％ｖ／ｖで存在する。

【0038】

本発明の全てのアジュバント／ワクチンに適用可能な実施形態のサブセットにおいて、油と油溶性乳化剤を合わせた体積パーセンテージは、ワクチン組成物の少なくとも５０％、例えば、５０体積％～９５体積％、好ましくは、５０％超～８５％ｖ／ｖの量、より好ましくは、５０％～６０％ｖ／ｖの量、より好ましくは、５０～５２％ｖ／ｖの量である。したがって、例えば、限定するものではないが、油は、４５％の量で存在し得、脂溶性乳化剤は、５％ｖ／ｖを超える量で存在することになる。したがって、油と油溶性乳化剤を合わせた体積パーセンテージは、少なくとも５０％となる。

【0039】

本発明の全てのワクチンに適用可能な更に別のサブセットにおいて、油の体積パーセンテージは、ワクチン組成物の４０％超であり、例えば、４０体積％～９０体積％、４０％～８５％ｖ／ｖ、４３％～６０％ｖ／ｖ、４４～５０％ｖ／ｖである。

【0040】

本発明のエマルジョンでの使用に好適な乳化剤には、生物学的に適合性のある天然乳化剤及び非天然合成界面活性剤が含まれる。生物学的に適合性のある乳化剤には、リン脂質化合物またはリン脂質の混合物が含まれる。好ましいリン脂質は、大豆レシチンまたは卵レシチンなどのホスファチジルコリン（レシチン）である。レシチンは、粗植物油を水洗し、得られた含水ガムを分離及び乾燥させることによって、ホスファチドとトリグリセリドの混合物として得ることができる。精製された生成物は、アセトン洗浄によってトリグリセリド及び植物油を除去した後に残留する、アセトン不溶性のリン脂質及び糖脂質の混合物を分画することによって得ることができる。あるいは、レシチンは、様々な商業的供給元から入手することができる。他の好適なリン脂質には、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、カルジオリピン、及びホスファチジルエタノールアミンが含まれる。リン脂質は、天然源から単離されたものであってもよいし、従来とおりに合成されたものであってもよい。

【0041】

追加の実施形態において、本明細書で使用される乳化剤は、レシチンを含まないか、または免疫学的に有効ではない量でレシチンを使用する。

【0042】

本発明のアジュバント製剤での使用に好適な非天然の合成乳化剤には、ソルビタンをベースにした非イオン性界面活性剤、例えば、脂肪酸置換ソルビタン界面活性剤（ＳＰＡＮ（登録商標）またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）の名称で市販されているもの）、ポリエトキシレート化ソルビトールの脂肪酸エステル（ＴＷＥＥＮ（登録商標））、ヒマシ油などの供給源から得られる脂肪酸のポリエチレングリコールエステル（ＥＭＵＬＦＯＲ（登録商標））、ポリエトキシレート化脂肪酸（例えば、ＳＩＭＵＬＳＯＬ（登録商標）Ｍ－５３の名称で入手可能なステアリン酸）、ポリエトキシレート化イソオクチルフェノール／ホルムアルデヒドポリマー（ＴＹＬＯＸＡＰＯＬ（登録商標））、ポリオキシエチレン脂肪族アルコールエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標））、ポリオキシエチレンノンフェニルエーテル（ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｎ）、ポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエーテル（ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ）が含まれる。好ましい合成界面活性剤は、ＳＰＡＮ（登録商標）及びＴＷＥＥＮ（登録商標）、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０（モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン）及びＳＰＡＮ（登録商標）－８０（モノオレイン酸ソルビタン）の名称で入手可能な界面活性剤である。

【0043】

一般的に言えば、乳化剤（複数可）は、ワクチン組成物中に、０．０１体積％～４０体積％、好ましくは、０．１％～１５％、より好ましくは、２％～１０％の量で存在し得る。

【0044】

本発明のアジュバント製剤中に存在する追加成分には、カチオン性担体及びＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドが含まれる。免疫刺激性オリゴヌクレオチド及びポリカチオン性担体を含むＷ／Ｏワクチン組成物を形成するそのようなアジュバントは、「ＴＸＯ」と呼ばれる。

【0045】

好適なカチオン性担体には、限定するものではないが、デキストラン、ＤＥＡＥ（ジエチル－アミノエチル）デキストラン（及びその誘導体）、ＰＥＧ、グアーガム、キトサン誘導体、ポリセルロース誘導体、例えば、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）ポリエチレンイメン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｅｎｅ）、ポリリシンなどのポリアミノなどが含まれる。

【0046】

ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、特定の塩基配列状態で非メチル化ＣＧジヌクレオチドが存在すること（ＣｐＧモチーフ）を特徴とする薬物治療薬の一種類である（Ｈａｎｓｅｌ ＴＴ，Ｂａｒｎｅｓ ＰＪ（ｅｄｓ）：Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ Ａｓｔｈｍａ，Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ ＣＯＰＤ．Ｐｒｏｇ Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ．Ｂａｓｅｌ，Ｋａｒｇｅｒ，２００１，ｖｏｌ ３１，ｐｐ ２２９－２３２；参照により本明細書に援用される）。これらのＣｐＧモチーフは、真核生物ＤＮＡにはみられないものであり、真核生物ＤＮＡでは、ＣＧジヌクレオチドが抑制され、存在している場合は通常メチル化されているが、細菌ＤＮＡには存在し、細菌に免疫刺激性を付与する。

【0047】

選択された実施形態において、本発明のアジュバントは、いわゆるＰ型免疫刺激性オリゴヌクレオチド、より好ましくは、修飾されたＰ型免疫刺激性オリゴヌクレオチド、更により好ましくは、Ｅ修飾されたＰ型オリゴヌクレオチドを利用する。Ｐ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、パリンドロームの存在を特徴とする、一般に６～２０ヌクレオチド長のＣｐＧオリゴヌクレオチドである。Ｐ型オリゴヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても、コンカテマーに自然に自己会合する能力を有する。これらのオリゴヌクレオチドは、厳密な意味では一本鎖であるが、パリンドロームの存在により、コンカテマー、または場合によりステム・ループ構造、更には二次及び三次構造の形成が可能になる。Ｐ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドの全長は、１９～１００ヌクレオチド、例えば、１９～３０ヌクレオチド、３０～４０ヌクレオチド、４０～５０ヌクレオチド、５０～６０ヌクレオチド、６０～７０ヌクレオチド、７０～８０ヌクレオチド、８０～９０ヌクレオチド、９０～１００ヌクレオチドである。

【0048】

本発明の一態様において、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１つの５’ＴＬＲ活性化ドメイン及び少なくとも２つのパリンドローム領域を含有し、一方のパリンドローム領域は、少なくとも６ヌクレオチド長の５’パリンドローム領域であり、直接的にまたはスペーサーを介して、少なくとも８ヌクレオチド長の３’パリンドローム領域に連結している。

【0049】

Ｐ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、当該技術分野において知られている技術に従って修飾され得る。例えば、Ｊ修飾は、ヨード修飾されたヌクレオチドを指す。Ｅ修飾は、エチル修飾されたヌクレオチド（複数可）を指す。したがって、Ｅ修飾されたＰ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチド（好ましくは、５’ヌクレオチド）がエチル化されている、Ｐ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドである。更なる修飾には、６－ニトロ－ベンゾイミダゾールの結合、Ｏ－メチル化、プロイニル－ｄＵでの修飾、イノシン修飾、２－ブロモビニル結合（好ましくは、ウリジンへの結合）が含まれる。

【0050】

Ｐ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、限定するものではないが、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合を含む、修飾されたヌクレオチド間結合を含有し得る。本発明のオリゴヌクレオチドは、合成されたものであってもよいし、商業的供給元から入手したものであってもよい。

【0051】

Ｐ型オリゴヌクレオチド及び修飾されたＰ型オリゴヌクレオチドは、２００８年６月１２日に公開された公開済みのＰＣＴ出願第ＷＯ２００８／０６８６３８号に更に開示されている。修飾されたＰ型免疫刺激性オリゴヌクレオチドの好適な非限定的な例は、以下に記載される（配列番号１～１０において、「^＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）。
配列番号１ ５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’
配列番号２ ５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’
配列番号３ ５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’
配列番号４ ５’ＪＵ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’
配列番号５ ５’ＪＵ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’
配列番号６ ５’ＪＵ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’
配列番号７ ５’ＥＵ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’
配列番号８ ５’ＪＵ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’
配列番号９ ５’ＪＵ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’
配列番号１０ ５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’

【0052】

ＴＸＯアジュバントの場合、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、好ましくは、パリンドローム配列を含有し、任意選択により修飾された骨格を含む、好ましくは、ＯＤＮは、０．５～４００μｇ／用量の量で存在し得、ポリカチオン性担体は、０．５～４００ｍｇ／用量の量で存在し得る。投与量は、対象の種に応じて注意が必要である。

【0053】

例えば、成体のブタにとってより好適な特定の実施形態において、ＴＸＯの一用量は、約５０～４００μｇ（例えば、成体のブタの場合、５０～３００、または１００～２５０μｇ、または約５０～約１００μｇ）の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含み、ポリカチオン性担体は、約５～約５００ｍｇ／用量（例えば、１０～５００ｍｇ、または１０～３００ｍｇ、または５０～２００ｍｇ／用量）の量で存在し得る。子ブタにとってより好適な実施形態において、ＴＸＯの一用量は、約５～１００μｇ（例えば、１０～８０μｇ、または２０～５０μｇ）の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含み、一方、ポリカチオン性担体は、１～５０ｍｇ／用量（例えば、１～２５ｍｇ／用量、または１０～２５ｍｇ／用量）の量で存在し得る。

【0054】

ＴＸＯアジュバントは、次のように調製することができる。
ａ）モノオレイン酸ソルビタンを軽質ミネラルオイルに溶解する。得られた油性溶液を滅菌濾過する。
ｂ）免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ＤＥＡＥデキストラン及びモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンを水相に溶解し、それにより、水溶液を形成する。
ｃ）連続的な均質化の下で水溶液を油性溶液に加え、それにより、アジュバント製剤ＴＸＯを形成する。

【0055】

抗原は、水相を調製する工程で、免疫刺激性オリゴヌクレオチドとポリカチオン性担体の混合物中に加えることができる。

【0056】

ワクチンは、限定するものではないが、サポニン（例えば、Ｑｕｉｌ Ａまたはその精製画分）、糖脂質、例えば、ＢＡＹ（登録商標）Ｒ１００５（塩または塩基のいずれかの形態）、ＭＰＬＡ、ステロール（例えば、コレステロール）、カチオン化ステロール（例えば、ＤＣ－コレステロールとしても知られる、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール）、リン脂質（例えば、レシチン）、ミョウバン、四級アミン、例えば、ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウム）などを含む、追加の免疫調節分子を更に含み得る。

【0057】

ワクチンは、様々な薬学的に許容される賦形剤、例えば、緩衝液、ｐＨ及び／または浸透圧調整剤、及び／または防腐剤を更に含み得る。例えば、クロロクレゾールは、防腐剤として、０．０１～０．５％ｗ／ｖ／用量、より好ましくは、０．０５～０．２％、最も好ましくは、約０．１％の量で使用され得る。他の好適な賦形剤には、酢酸及び塩（１～２％ｗ／ｖ）、クエン酸及び塩（１～３％ｗ／ｖ）、ホウ酸及び塩（０．５～２．５％ｗ／ｖ）、ならびにリン酸及び塩（０．８～２％ｗ／ｖ）が含まれる。好適な防腐剤には、塩化ベンザルコニウム（０．００３～０．０３％ｗ／ｖ）、クロロブタノール（０．３～０．９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１～０．２５％ｗ／ｖ）及びチメロサール（０．００４～０．０２％ｗ／ｖ）、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。

【0058】

非経口製剤は、典型的に、塩、炭水化物及び緩衝剤（好ましくは、約３～約９、または約４～約８、または約５～約７．５、または約６～約７．５、または約７～約７．５のｐＨにするもの）などの賦形剤を含有し得る水溶液であるが、ある用途については、無菌非水溶液として、または無菌パイロジェンフリー水などの好適なビヒクルとともに使用される乾燥形態として、より好適に製剤化され得る。

【0059】

無菌条件下での非経口製剤の調製、例えば、凍結乾燥による調製は、当業者によく知られている標準的な製薬技術を使用して容易に達成することができる。

【0060】

ワクチンの体積は、変えることができる。一般に、ブタの標準用量は、１回の投与あたり約２ｍｌのワクチンである。異なる実施形態において、その体積は、例えば、０．１２５ｍｌ～約５ｍｌ、例えば、２ｍｌ、１ｍｌ、０．５、ｍｌ、０．２５ｍｌなどに変えることができる。体積が減少しても、依然として、油中水型エマルジョンであり、好ましくは、５０％以上の油相を含有する。抗原、ポリカチオン性担体及びＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドの量は、好ましくは、標準的な２ｍｌ用量の場合と同様である。そのようなマイクロドージングは、少なくとも２つの側面で有利である。第１に、動物にとって苦痛が少なく、第２に、特に家畜動物にとって重要であるが、油の量が減少することで、代謝が速くなり、それにより、屠殺保留（すなわち、規制機関によって許可される屠殺とワクチン接種との間の時間）が減少するだろう。

【0061】

現在、ニパ抗原を含有するワクチンは上市されておらず、ヘンドラ抗原を含有するワクチンは１つしかない。ＥＱＵＩＶＡＣ（登録商標）ヘンドラ（Ｚｏｅｔｉｓ）は、ヘンドラＧタンパク質に由来する抗原を含有し、ＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）で免疫賦活化されている。ＥＱＵＩＶＡＣ（登録商標）ヘンドラは、筋肉内投与される。適切な治療レジメンは、初回投与と追加投与（初回投与から約３週間後の追加投与）の両方と、年１回の再接種を要する。対照的に、本明細書に記載されるワクチンは、１回のみの投与（初回投与及び追加投与とは対照的）と、年１回の再接種である。

【0062】

本明細書において引用される全ての公開物は、特許公報及び非特許公報のいずれも、本発明が属する分野の当業者のレベルを示すものである。これらの公開物は全て、それぞれ個々の公開物が参照により援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、参照により本明細書に完全に援用される。

【0063】

本明細書において、本発明を特定の実施形態を参照して説明してきたが、これらの実施形態は、本発明の原理及び用途の単なる例示であることを理解されたい。したがって、以下の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、例示的な実施形態に対して多数の変更を行うことができ、他の構成が考案され得ることを理解されたい。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
ヘンドラウイルス感染症またはニパウイルス感染症から保護することを、それを必要とする動物において行う方法であって、前記動物に単回投与のワクチンを投与することを含み、前記ワクチンは、
ａ）ヘンドラ抗原またはニパ抗原を含む抗原成分と、
ｂ）油、ポリカチオン性担体及びＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含むアジュバントと、を含み、前記ワクチンは、Ｗ／Ｏエマルジョンである、前記方法。
［態様２］
前記動物がブタ動物であり、前記ニパ抗原が配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、態様１に記載の方法。
［態様３］
前記アミノ酸配列が、配列番号１１またはそのアミノ酸７１～６０２に対して少なくとも９８％同一である、態様２に記載の方法。
［態様４］
前記動物がウマ動物であり、前記ヘンドラ抗原が配列番号１２またはそのアミノ酸７３～６０４に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、態様１に記載の方法。
［態様５］
前記アミノ酸配列が、配列番号１２またはそのアミノ酸７３～６０４に対して少なくとも９８％同一である、態様４に記載の方法。
［態様６］
前記油が非代謝性油である、態様１～５のいずれか１項に記載の方法。
［態様７］
前記非代謝性油が軽質ミネラルオイルである、態様６に記載の方法。
［態様８］
前記ポリカチオン性担体が、デキストラン、ＤＥＡＥデキストラン、ＰＥＧ、グアーガム、キトサン誘導体、ポリセルロース誘導体、例えば、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）ポリエチレンイメン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｅｎｅ）、ポリアミノ及びポリリシンから選択される、態様１～７のいずれか１項に記載の方法。
［態様９］
前記ポリカチオン性担体がＤＥＡＥデキストランである、態様８に記載の方法。
［態様１０］
前記動物が、これまでにヘンドラウイルスまたはニパウイルスに対するワクチン接種を受けていない、態様１～９のいずれか１項に記載の方法。
［態様１１］
前記単回投与のワクチンが、約０．１２５ｍｌ～約２ｍｌの体積を有する、態様１～１０のいずれか１項に記載の方法。
［態様１２］
前記単回投与のワクチンが、約０．２５ｍｌ～約１ｍｌの体積を有する、態様１１に記載の方法。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】