▶ クワンチョウ ジョーヨー ファーマテック カンパニー，リミティドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-10-27
(45)【発行日】2023-11-07
(54)【発明の名称】選択性の高いＲＯＳ１阻害剤としての化合物、及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 498/22 20060101AFI20231030BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20231030BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231030BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231030BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20231030BHJP
【ＦＩ】
C07D498/22 CSP
A61K31/519
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P11/00
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2022529102
(86)(22)【出願日】2020-11-18
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-24
(86)【国際出願番号】 CN2020129652
(87)【国際公開番号】W WO2021098703
(87)【国際公開日】2021-05-27
【審査請求日】2022-05-18
(31)【優先権主張番号】201911128342.0
(32)【優先日】2019-11-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202010388478.1
(32)【優先日】2020-05-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202010995918.X
(32)【優先日】2020-09-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】520175190
【氏名又は名称】クワンチョウ ジョーヨー ファーマテック カンパニー，リミティド
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ワン、チエンフェイ
(72)【発明者】
【氏名】ヤン、コアンウェン
(72)【発明者】
【氏名】スン、チーコイ
(72)【発明者】
【氏名】アオ、チーホア
(72)【発明者】
【氏名】リー、ポン
(72)【発明者】
【氏名】チャン、ヤン
(72)【発明者】
【氏名】リー、チウ
(72)【発明者】
【氏名】リー、チエン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、シューホイ
【審査官】高森 ひとみ
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／１６５９６７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／１７０３８１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０９４１４３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／２０６０６９（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（ＩＶ）で表される化合物、又はその薬学的に許容される塩。【化1】
（ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
構造単位
【化2】
から選択され；
Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択される。）
【請求項2】
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及びＣＨ３から選択され、前記ＣＨ３は任意選択で１、２又は３個のＲａで置換される、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ１がＦから選択される、請求項２に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ２がＨ、及びＣＨ３から選択される、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
構造単位【化3】
から選択される、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
下記から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。【化4】
（ただし、
Ｒ１は請求項１～３のいずれか１項に定義された通りであり；
Ｌ１は－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、
【化5】
から選択される。）
【請求項7】
下記の化合物から選択される化合物、又はその薬学的に許容される塩。【化6】
【請求項8】
下記から選択される請求項７に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。【化7】
【請求項9】
式（Ｖ）又は式（ＶＩ）で表される化合物。【化8】
（ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、
【化9】
から選択され；
Ｒａ 及びＲ ｂ はそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択される。）
【請求項10】
ＲＯＳ１阻害剤関連医薬の調製における、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項11】
前記ＲＯＳ１阻害剤関連医薬が癌の治療に使用される医薬であることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項12】
ＲＯＳ１阻害剤関連医薬が肺癌の治療に使用される医薬であることを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は下記に優先権を主張する：
ＣＮ２０１９１１１２８３４２．０、出願日は：２０１９年１１月１８日であり；
ＣＮ２０２０１０３８８４７８．１、出願日は：２０２０年０５月０９であり；
ＣＮ２０２０１０９９５９１８．Ｘ、出願日は：２０２０年０９月２１である。
ＣＮ２０１９１１１２８３４２．０、出願日は：２０１９年１１月１８日であり；
ＣＮ２０２０１０３８８４７８．１、出願日は：２０２０年０５月０９であり；
ＣＮ２０２０１０９９５９１８．Ｘ、出願日は：２０２０年０９月２１である。
【0002】
本発明は選択性の高いＲＯＳ１阻害効果を有する化合物、及びＲＯＳ１キナーゼの異常な発現に関連する疾患の医薬の調製におけるその使用に関する。具体的に、式（ＩＶ）で表される化合物、及びその薬学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【0003】
プロテインキナーゼは人体内で重要な役割を果たしており、人体のさまざまな細胞の増殖、分化、代謝、アポトーシスなどのプロセスに広く関与している。プロテインキナーゼの発癌性形態は、さまざまな異なるヒト腫瘍タイプで豊富に発現され、いくつかの特定のキナーゼ阻害剤に非常に反応する。ｃ－ｒｏｓプロトオンコジーン１受容体チロシンキナーゼ（ｃ－ｒｏｓｏｎｃｏｇｅｎｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ、ＲＯＳ１）は、インスリン受容体スーパーファミリーに属し、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＳＴＡＴ３などの主要なシグナル経路を調節することにより、細胞の成長、増殖、及び形質転換に広く関与し、器官の発育と成熟に関与している可能性がある。遺伝子点突然変異、過剰発現、及び遺伝子融合などのＲＯＳ１キナーゼの異常な発現のいずれも、そのキナーゼ活性の調節不全を引き起こすことができ、また、多くのヒトの癌タイプに関連している。
【0004】
ＲＯＳ１融合キナーゼは細胞外ドメインを失い、膜貫通型、及び細胞内チロシンキナーゼドメインを保留する。それは、リガンド結合なしで構成的に活性化され、基質タンパク質をリン酸化することによって腫瘍形成を誘導し、腫瘍細胞の生存と増殖を促進する。ＣＤ７４－ＲＯＳ１遺伝子融合は、２００７年にＮＳＣＬＣ患者で最初に発見され、これまでは１４種を超えるパートナー遺伝子が同定された。ＲＯＳ１遺伝子融合は、ＥＧＦＲ突然変異とＡＬＫ融合後のもう１つの明確なＮＳＣＬＣドライバー遺伝子であり、東アジアの人の陽性発生率は約２～３％であり、欧米は約１～２％である。２０１６年３月、わずか５０人の患者のデータ（ＰＲＯＦＩＬＥ１００１）に基づいて、ＦＤＡはクリゾチニブ（Ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）をＲＯＳ１遺伝子融合ＮＳＣＬＣの治療薬として承認した。クリゾチニブの効果は有意であるが（客観的奏効率は７２％である）、約１年後に薬剤耐性に発展し、その中で脳転移（最大４７％）とＲＯＳ１キナーゼの薬剤耐性突然変異（約５０～６０％、溶媒フロンティア突然変異Ｇ２０３２Ｒが約４０％を占める）は、クリゾチニブの主な薬剤耐性メカニズムであることが証明された。脳転移のある患者の場合、脳に入る可能性のある医薬であるエントレクチニブ（ＲＸＤＸ－１０１）とロルラチニブ（Ｌｏｒｌａｔｉｎｉｂ）はさらなるＰＦＳメリットをもたらす可能性があるが、後天的な薬剤耐性突然変異は必然的に発生する。一次治療又は二次治療が失敗した後は、利用できる薬がない。後天性Ｇ２０３２Ｒ溶媒フロンティア薬剤耐性突然変異を有する患者については、現在、市販されている標的薬はない。臨床研究中のＲＯＳ１阻害剤の中で、ＴＰ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社によって開発されたレポトレクチニブ（ＴＰＸ－０００５）のみが、Ｇ２０３２Ｒ溶媒フロンティア薬剤耐性突然変異を有する患者に有効であることが証明された。しかし、他のすべての臨床ＲＯＳ１阻害剤と同様に、レポトレクチニブ（ＴＰＸ－０００５）もマルチキナーゼ阻害剤であり、重大なオフターゲット副作用を伴う。特に、エントレクチニブ（ＲＸＤＸ－１０１）とレポトレクチニブ（ＴＰＸ－０００５）はどちらも強力な汎ＮＴＲＫ阻害剤であり、味覚障害、めまい、知覚異常、体重増加などの臨床で広範な副作用があり、これらの副作用は、それがＴｒｋキナーゼに対する強力な阻害によるオフターゲットに関連している可能性がある。ＲＯＳ１遺伝子融合のみの患者の場合、標的関連の副作用に加えて、標的外によって引き起こされる追加的な副作用にも耐える必要があり、これは治療効果と患者の体験に影響を及ぼす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
したがって、ＲＯＳ１遺伝子融合によるＮＳＣＬＣの臨床治療には、血液脳関門を突破し、現在の市場で薬剤耐性突然変異に効果的である可能性のある、標的外の副作用が少ない選択的ＲＯＳ１阻害剤を有する化合物が緊急に必要となっている。
【0006】
【化1】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明は式（ＩＶ）で表される化合物、又はその薬学的に或許容される塩を提供し、
【0008】
【化2】
【0009】
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｌ２は－Ｃ１－３アルキル－、及び－Ｏ－から選択され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択される。
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｌ２は－Ｃ１－３アルキル－、及び－Ｏ－から選択され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択される。
【0010】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及びＣＨ３から選択され、前記ＣＨ３は任意選択で１、２又は３個のＲａで置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0011】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｒ１はＦから選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0012】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｒ２はＨ、及びＣＨ３から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0013】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｌ１は－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－シクロプロピル－ＣＨ２－、及び－シクロブチル－から選択され、前記－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－シクロプロピル－ＣＨ２－、及び－シクロブチル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され、他の変量は本発明で定義された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｌ１は－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｌ１は－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、
【0014】
【化3】
【0015】
から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0016】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｌ２は－ＣＨ２－、及び－Ｏ－から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0017】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記構造単位
【0018】
【化4】
【0019】
から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0020】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記構造単位
【0021】
【化5】
【0022】
から選択され、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0023】
本発明のいくつかの実施の態様では、前記変量の任意の組み合わせからなるものである。
【0024】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記化合物、又はその薬学的に許容される塩は下記から選択され：
【0025】
【化6】
【0026】
ただし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、及びＬ２は本発明で定義された通りであり；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、及びＬ２は本発明で定義された通りであり；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0027】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記化合物、又はその薬学的に許容される塩は下記から選択され：
【0028】
【化7】
【0029】
ただし、
Ｒ１、及びＬ１は本発明で定義された通りである。
Ｒ１、及びＬ１は本発明で定義された通りである。
【0030】
本発明は、更に下記の式で表される化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、それは下記から選択される。
【0031】
【化8】
【0032】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記化合物、又はその薬学的に許容される塩は下記から選択される。
【0033】
【化9】
【0034】
本発明の幾つかの実施の態様において、式（Ｖ）で表される化合物と式（ＶＩ）で表される化合物であり、
【0035】
【化10】
【0036】
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0037】
本発明の幾つかの実施の態様において、塩基と溶媒Ａの条件下で、式（Ｖ）から式（ＶＩ）を調製し；
【0038】
【化11】
【0039】
式（ＶＩ）はリガンドと溶媒Ｂの条件下で式（ＩＶ－３）又は（ＩＶ－４）を調製し；
【0040】
【化12】
【0041】
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0042】
Ｒ３がＯＨから選択される時、
前記塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミンから選択され；
前記縮合剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ビス（２－オキソ－３－オキサゾリジニル）次亜リン酸塩化物（ＢＯＰ－Ｃｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリス（ピロリジノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、及びＯ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）から選択され；
前記溶媒Ａは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、及びＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミドから選択され；
Ｒ３がＯ－Ｃ１－３アルキルから選択される時、
前記塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミンから選択される。
前記リガンドは、トリフェニルホスフィン、トリメチルフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、トリブチルホスフィン、及びジエチルフェニルホスフィンから選択され；
前記塩基性試薬は、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、及びアゾジカルボン酸ジエチルから選択され；
前記溶媒Ｂは、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びＮ－メチルピロリドンから選択される。
前記塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミンから選択され；
前記縮合剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ビス（２－オキソ－３－オキサゾリジニル）次亜リン酸塩化物（ＢＯＰ－Ｃｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリス（ピロリジノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、及びＯ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）から選択され；
前記溶媒Ａは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、及びＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミドから選択され；
Ｒ３がＯ－Ｃ１－３アルキルから選択される時、
前記塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミンから選択される。
前記リガンドは、トリフェニルホスフィン、トリメチルフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、トリブチルホスフィン、及びジエチルフェニルホスフィンから選択され；
前記塩基性試薬は、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、及びアゾジカルボン酸ジエチルから選択され；
前記溶媒Ｂは、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びＮ－メチルピロリドンから選択される。
【0043】
本発明の幾つかの実施の態様において、塩基と溶媒Ａの条件下で、式（Ｖ）から式（ＶＩ）はを調製し、次に、式（ＶＩ）をリガンドと溶媒Ｂの条件下で式（ＩＶ－３）又は（ＩＶ－４）を調製し；
【0044】
【化13】
【0045】
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0046】
前記塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミンから選択され；
前記溶媒Ａは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、及びＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミドから選択され；
前記リガンドは、トリフェニルホスフィン、トリメチルフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、トリブチルホスフィン、及びジエチルフェニルホスフィンから選択され；
前記溶媒Ｂは、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びＮ－メチルピロリドンから選択される。
前記溶媒Ａは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、及びＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミドから選択され；
前記リガンドは、トリフェニルホスフィン、トリメチルフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、トリブチルホスフィン、及びジエチルフェニルホスフィンから選択され；
前記溶媒Ｂは、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びＮ－メチルピロリドンから選択される。
【0047】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ｒ３はＯＨ、Ｏ－Ｍｅ、及びＯ－Ｅｔから選択される。
【0048】
本発明の幾つかの実施の態様において、ＲＯＳ１阻害剤関連治療薬の調製における前記化合物又はその薬学的に許容される塩の使用である。
【0049】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記使用は、前記ＲＯＳ１阻害剤に関連する医薬が癌に使用される医薬であることを特徴とする。
【0050】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記使用は、前記ＲＯＳ１阻害剤に関連する医薬が肺癌に使用される医薬であることを特徴とする。
【0051】
合成方法：
本発明の化合物は、当業者に周知の様々な合成方法、一連の合成ステップによって調製することができる。
本発明の化合物は、当業者に周知の様々な合成方法、一連の合成ステップによって調製することができる。
【0052】
一般に、式（ＩＶ）で表される化合物は、式（Ｖ）で表される中間化合物を出発材料として、下記の反応プロセス１で調製することができる。
【0053】
反応プロセス１：
【0054】
【化14】
【0055】
又は
【0056】
【化15】
【0057】
；
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
ただし、
Ｒ１はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、及び任意選択で１、２又は３個のＲａで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ２はＨ、及び任意選択で１、２又は３個のＲｂで置換されたＣ１－３アルキルから選択され；
Ｒ３はＯＨから選択され；
Ｌ１は－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－から選択され、前記－Ｃ１－３アルキル－、－Ｃ３－６シクロアルキル－、及び－Ｃ３－６シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－は任意選択で１、２又は３個のＲｃで置換され；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃはそれぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＣＨ３から選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0058】
式（Ｖ）で表される化合物を反応プロセス１のステップ１における出発材料とし、
【0059】
【化16】
【0060】
と反応させる。当該反応は、適切な塩基（例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、炭酸水素マグネシウム、ギ酸ナトリウム、プロピオン酸カリウム、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、又はＮ－エチルジイソプロピルアミン）、縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ビス（２－オキソ－３－オキサゾリジニル）次亜リン酸塩化物（ＢＯＰ－Ｃｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリス（ピロリジノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、及びＯ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ））、適切な溶媒Ａ（例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、又はＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）を必要とし、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
【0061】
反応ステップ２において、式（ＶＩ）はリガンドと溶媒の条件下で式（ＩＶ）を調製し、当該反応はリガンド（例えば、トリフェニルホスフィン、トリメチルフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、トリブチルホスフィン、又はジエチルフェニルホスフィン）、塩基性試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、又はアゾジカルボン酸ジエチル）、適切な溶媒Ｂ（例えば、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、又はＮ－メチルピロリドン）を必要とし、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
【0062】
式（Ｖ）で表される化合物は、当業者に周知の一般的な反応プロセスに従って調製することができる。例えば、式（Ｖ）で表される化合物は、反応プロセス２に従って調製することができる。
【0063】
反応プロセス２：
【0064】
【化17】
【0065】
；
ただし、ＹはＯＴｆ、ＯＴｓ、及びＯＳＯ２Ｐｈから選択され；ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択され；Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
ただし、ＹはＯＴｆ、ＯＴｓ、及びＯＳＯ２Ｐｈから選択され；ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択され；Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0066】
反応ステップにおいて、式（ＶＩＩ）で表される化合物と式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を塩基、適切な溶媒の条件下で反応させる。当該反応は、塩基（トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、又は４－ジメチルアミノピリジン）、適切な溶媒（たとえば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、又はＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）を必要とし、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
【0067】
式（Ｖ－１）で表される化合物は、当業者に周知の一般的な反応プロセスに従って調製することができる。例えば、式（Ｖ－１）で表される化合物は、反応プロセス３に従って調製することができる。
【0068】
反応プロセス３：
【0069】
【化18】
【0070】
ただし、Ｒ３はＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
「＊」がついた炭素原子はキラル炭素原子であり、（Ｒ）又は（Ｓ）単一のエナンチオマーの形態、又は１つのエナンチオマーに富んだ形態で存在する。
【0071】
反応ステップにおいて、式（Ｖ－１）で表される化合物は適切な塩基（例えば、水酸化リチウム一水和物）と適切な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）で、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
【0072】
式（ＶＩＩ）で表される化合物は、当業者に周知の一般的な反応プロセスに従って調製することができる。例えば、式（ＶＩＩ）で表される化合物は、反応プロセス４に従って調製することができる。
【0073】
反応プロセス４：
【0074】
【化19】
【0075】
ただし、ＹはＯＴｆ、ＯＴｓ、及びＯＳＯ２Ｐｈから選択され；Ｒ３はＯＨ、及びＯ－Ｃ１－３アルキルから選択され；
反応ステップ４において、式（ＩＸ）で表される化合物は、適切な塩基と適切な溶媒の条件下で、３－エトキシアクリル酸エチルと反応させる。当該反応は適切な塩基（例えば、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、リン酸カリウム、又は酢酸ナトリウム）、適切な溶媒（例えば、トルエン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、又はＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）を必要とし、反応温度１１０℃～１３０℃で反応させる。次の反応ステップ５において、シアン化第一銅を適切な溶媒（例えば、Ｎ、Ｎ－ジメチルホルムアミド）の条件下で反応させる。次の反応ステップ６において、求電子試薬（例えば、トリフルオロメタンスルホニルクロリド、ｐ－トルエンスルホニルクロリド、ベンゼンスルホニルクロリド）と適切な塩基（例えば、トリエチルアミン）、適切な溶媒（例えば、ジクロロメタン）の中で、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
反応ステップ４において、式（ＩＸ）で表される化合物は、適切な塩基と適切な溶媒の条件下で、３－エトキシアクリル酸エチルと反応させる。当該反応は適切な塩基（例えば、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、リン酸カリウム、又は酢酸ナトリウム）、適切な溶媒（例えば、トルエン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、又はＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）を必要とし、反応温度１１０℃～１３０℃で反応させる。次の反応ステップ５において、シアン化第一銅を適切な溶媒（例えば、Ｎ、Ｎ－ジメチルホルムアミド）の条件下で反応させる。次の反応ステップ６において、求電子試薬（例えば、トリフルオロメタンスルホニルクロリド、ｐ－トルエンスルホニルクロリド、ベンゼンスルホニルクロリド）と適切な塩基（例えば、トリエチルアミン）、適切な溶媒（例えば、ジクロロメタン）の中で、反応温度２０℃～３０℃で反応させる。
【0076】
［技術的効果］
本発明の化合物は、ＲＯＳ１キナーゼとその突然変異体ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒにおいて高いキナーゼ阻害活性を示し、これは、ＴＰＸ－０００５の活性に匹敵する；しかしながら、本発明の化合物は、ＴｒｋＡとＡＬＫキナーゼに対する阻害活性は弱く、高い選択性を示し、選択性は、ＴＰＸ－０００５よりも有意に優れている。本発明の化合物は、ＲＯＳ１融合細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１とその突然変異細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒに対して高い細胞増殖阻害活性を示し、本発明の化合物は、Ｂａ／Ｆ３ ＬＭＮＡ－ＮＴＲＫ１－ＷＴ細胞株に対して弱い阻害活性を示し、Ｂａ／Ｆ３ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１細胞株とＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株と比較して、特にＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株に対して有意な阻害選択性を示す；本発明の化合物は、優れた薬物動態特性を示す；本発明の化合物は、有意な腫瘍抑制効果を有する。
本発明の化合物は、ＲＯＳ１キナーゼとその突然変異体ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒにおいて高いキナーゼ阻害活性を示し、これは、ＴＰＸ－０００５の活性に匹敵する；しかしながら、本発明の化合物は、ＴｒｋＡとＡＬＫキナーゼに対する阻害活性は弱く、高い選択性を示し、選択性は、ＴＰＸ－０００５よりも有意に優れている。本発明の化合物は、ＲＯＳ１融合細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１とその突然変異細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒに対して高い細胞増殖阻害活性を示し、本発明の化合物は、Ｂａ／Ｆ３ ＬＭＮＡ－ＮＴＲＫ１－ＷＴ細胞株に対して弱い阻害活性を示し、Ｂａ／Ｆ３ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１細胞株とＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株と比較して、特にＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株に対して有意な阻害選択性を示す；本発明の化合物は、優れた薬物動態特性を示す；本発明の化合物は、有意な腫瘍抑制効果を有する。
【0077】
定義と説明
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を有する。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されたいない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を有する。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されたいない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【0078】
本明細書で用いられる「薬学的に許容される」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対するもので、これらは信頼できる医学的判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織との接触に適し、毒性、刺激性、アレルギー反応又はほかの問題又は合併症があまりなく、合理的な利益／リスク比に合う。
【0079】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩で、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物と比較的に無毒の酸又は塩基とで製造される。本発明の化合物に比較的に酸性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の塩基でこれらの化合物と接触させることで塩基付加塩を得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミン又はマグネシウムの塩或いは類似の塩を含む。本発明の化合物に比較的に塩基性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の酸でこれらの化合物と接触させることで酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の実施例は、無機酸塩及び有機酸塩、さらにアミノ酸（例えば、アルギニンなど）の塩、及びグルクロン酸のような有機酸の塩を含み、前記無機酸は、たとえば塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素イオン、リン酸、リン酸一水素イオン、リン酸二水素イオン、硫酸、硫酸水素イオン、ヨウ化水素酸、亜リン酸などを含み、前記有機酸は、たとえば酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、ベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸やメタンスルホン酸などの類似の酸を含む。本発明の一部の特定の化合物は、塩基性及び酸性の官能基を含有するため、任意の塩基付加塩又は酸付加塩に転換することができる。
【0080】
本発明の薬学的に許容される塩は、酸基又は塩基性基を含む母体化合物から通常の方法で合成することができる。通常の場合、このような塩の製造方法は、水又は有機溶媒或いは両者の混合物において、遊離酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させて製造する。
【0081】
別途に説明しない限り、用語「異性体」は、幾何異性体、シス－トランス異性体、立体異性体、エナンチオマー、光学異性体、ジアステレオマー、及び互変異性体異性体を含むことを意味する。
【0082】
本発明の化合物は、特定の幾何又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明は、すべてのこのような化合物を想定し、シス及びトランス異性体、（－）－及び（＋）－鏡像異性体、（Ｒ）－及び（Ｓ）－鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物ならびにほかの混合物、たとえばエナンチオマー又はジアステレオマーを多く含有する混合物を含み、すべてのこれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。アルキルなどの置換基にほかの不斉炭素原子が存在してもよい。すべてのこれらの異性体及びこれらの混合物はいずれも本発明の範囲内に含まれる。
【0083】
別途に説明しない限り、用語「エナンチオマー」又は「光学異性体」とは互いに鏡像の関係にある立体異性体である。
【0084】
別途に説明しない限り、用語「シス－トランス異性体」又は「幾何異性体」とは二重結合又は環構成炭素原子の単結合が自由に回転できないことによるものである。
【0085】
別途に説明しない限り、用語「ジアステレオマー」とは分子が二つ又は複数のキラル中心を有し、かつ分子同士は非鏡像の関係にある立体異性体である。
【0086】
別途に説明しない限り、「（＋）」は右旋を、「（－）」は左旋を、「「（±）」はラセミを表す。
【0087】
別途に説明しない限り、楔形実線結合
【0088】
【化20】
【0089】
を表す。
【0090】
別途に説明しない限り、用語「一つの異性体を豊富に含む」、「異性体が豊富に含まれる」、「一つのエナンチオマーを豊富に含む」又は「エナンチオマーが豊富に含まれる」とは、それにおける一つの異性体又はエナンチオマーの含有量が１００％未満で、かつ当該異性体又はエナンチオマーの含有量が６０％以上、又は７０％以上、又は８０％以上、又は９０％以上、又は９５％以上、又は９６％以上、又は９７％以上、又は９８％以上、又は９９％以上、又は９９．５％以上、又は９９．６％以上、又は９９．７％以上、又は９９．８％以上、又は９９．９％以上である。
【0091】
別途に説明しない限り、用語「異性体の過剰量」又は「エナンチオマーの過剰量」とは、二つの異性体又は二つのエナンチオマーの間の相対百分率の差の値である。たとえば、その一方の異性体又はエナンチオマーの含有量が９０％で、もう一方の異性体又はエナンチオマーの含有量が１０％である場合、異性体又はエナンチオマーの過剰量（ｅｅ値）は８０％である。
【0092】
光学活性な（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体ならびにＤ及びＬ異性体は、不斉合成又はキラル試薬又はほかの通常の技術を用いて調製することができる。本発明のある化合物の一つのエナンチオマーを得るには、不斉合成又はキラル補助剤を有する誘導作用によって調製することができるが、ここで、得られたジアステレオマー混合物を分離し、かつ補助基を分解させて単離された所要のエナンチオマーを提供する。或いは、分子に塩基性官能基（例えば、アミノ基）又は酸性官能基（例えば、カルボキシ基）が含まれる場合、適切な光学活性な酸又は塩基とジアステレオマーの塩を形成させ、さらに本分野で公知の通常の方法によってジアステレオマーの分割を行った後、回収して単離されたエナンチオマーを得る。また、エナンチオマーとジアステレオマーの分離は、通常、クロマトグラフィー法によって行われ、前記クロマトグラフィー法はキラル固定相を使用し、かつ任意に化学誘導法（例えば、アミンからカルバミン酸塩を生成させる）と併用する。
【0093】
本発明の化合物は、当該化合物を構成する一つ又は複数の原子には、非天然の比率の原子同位元素が含まれてもよい。たとえば、三重水素（３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）又はＣ－１４（１４Ｃ）のような放射性同位元素で化合物を標識することができる。また、たとえば、水素を重水素で置換して重水素化薬物を形成し、重水素と炭素からなる結合は水素と炭素からなる結合よりも強固で、未重水素化薬物と比べ、重水素化薬物は毒性・副作用の低下、薬物の安定性の増加、治療効果の増強、薬物の生物半減期の延長などの優勢がある。本発明の化合物のすべての同位体の構成の変換は、放射性の有無を問わず、いずれも本発明の範囲内に含まれる。
【0094】
「任意の」又は「任意に」とは後記の事項又は状況によって可能であるが必ずしも現れるわけではなく、かつ当該記述はそれに記載される事項又は状況が生じる場合及びその事項又は状況が生じない場合を含むことを意味する。
【0095】
用語「置換される」とは、特定の原子における任意の一つ又は複数の水素原子が置換基で置換されることで、特定の原子の原子価状態が正常でかつ置換後の化合物が安定していれば、重水素及び水素の変形体を含んでもよい。置換基が酸素（即ち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味する。酸素置換は、芳香族基に生じない。用語「任意に置換される」とは、置換されていてもよく、置換されていなくてもよく、別途に定義しない限り、置換基の種類と数は化学的に安定して実現できれば任意である。
【0096】
変量（たとえばＲ）のいずれかが化合物の組成又は構造に１回以上現れる場合、その定義はいずれの場合においても独立である。そのため、たとえば、一つの基が０～２個のＲで置換された場合、前記基は任意に２個以下のＲで置換され、かついずれの場合においてもＲが独立の選択肢を有する。また、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0097】
連結基の数が０の場合、例えば、－（ＣＲＲ）０－は当該連結基が単結合であることを表す。
【0098】
置換基の数が０の場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、－Ａ－（Ｒ）０は当該構造が実際に－Ａであることを表す。
【0099】
置換基がない場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、Ａ－ＸにおけるＸがない場合、当該構造が実際にＡとなることを表す。
【0100】
そのうちの一つの変量が単結合の場合、それで連結している２つの基が直接連結しており、たとえばＡ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚになる。
置換基の結合は交差して一つの環における２個以上の原子に連結する場合、このような置換基はこの環における任意の原子と結合してもよく、たとえば、構造単位
置換基の結合は交差して一つの環における２個以上の原子に連結する場合、このような置換基はこの環における任意の原子と結合してもよく、たとえば、構造単位
【0101】
【化21】
【0102】
はその置換基Ｒがシクロヘキシル基又はシクロヘキサジエンにおける任意の位置に置換されてもよいことを表す。挙げられた置換基に対してどの原子を通して置換された基に連結するか明示しない場合、こうのような置換基はその任意の原子を通して結合してもよく、たとえば、ピリジル基は置換基としてピリジン環における炭素原子のいずれかを通して置換された基に連結してもよい。
【0103】
挙げられた連結基に対してその連結方向を明示しない場合、その連結方向は任意で、例えば、
【0104】
【化22】
【0105】
における連結基Ｌは－Ｍ－Ｗ－で、この時－Ｍ－Ｗ－は左から右への読む順と同様の方向で環Ａと環Ｂを連結して
【0106】
【化23】
【0107】
を構成してもよく、左から右への読む順と反対の方向で環Ａと環Ｂを連結して
【0108】
【化24】
【0109】
を構成してもよい。前記連結基、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせで安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0110】
別途に定義しない限り、ある基が一つ又は複数の連結可能な部位を有する場合、当該基の任意の一つ又は複数の部位は化学結合を介してほかの基と連結してもよい。前記部位のほかの基と連結する化学結合は、直線形実線
【0111】
【化25】
【0112】
で表示される。たとえば、－ＯＣＨ３における直線形実線の結合は当該基における酸素原子を介してほかの基と連結していることを表す。
【0113】
【化26】
【0114】
における直線形破線の結合は当該基における窒素原子の両端を介してほかの基と連結していることを表す。
【0115】
【化27】
【0116】
における波線は当該フェニルにおける１及び２位の炭素原子を介してほかの基と連結していることを表す；
【0117】
【化28】
【0118】
は当該ピペリジニルの任意の連結可能部位が一つの化学結合を介して他のラジカルに連結され得ることを表し、少なくとも
【0119】
【化29】
【0120】
の４つの連結形態が含まれ、－Ｎ－にＨ原子を描く場合でも
【0121】
【化30】
【0122】
は依然として
【0123】
【化31】
【0124】
結合型のラジカルを含み、１つの化学結合のみが連結されている場合、その部位のＨはそれに応じて１つが減少して対応する一価ピペリジニルになる。
【0125】
別途に定義しない限り、環における原子の数は、通常、環の員数と定義され、例えば、「５～７員環」とは５～７個の原子が環状に並んでいる「環」を表す。
【0126】
用語「保護基」は「アミノ保護基」、「ヒドロキシ保護基」又は「メルカプト保護基」を含むが、これらに限定されない。用語「アミノ保護基」とはアミノ基の窒素の位置における副反応の防止に適する保護基を指す。代表的なアミノ保護基は、ホルミル基、アルカノイル基（たとえばアセチル基、トリクロロアセチル基又はトリフルオロアセチル基）ようなようアシル基、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基のようなアルコキシカルボニル基、ベントキシカルボニル（Ｃｂｚ）基及び９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基のようなアリールメトキシカルボニル基、ベンジル（Ｂｎ）基、トリフェニルメチル（Ｔｒ）基、１，１－ビス（４’－メトキシフェニル）メチル基のようなアリールメチル基、トリメチルシリル（ＴＭＳ）基及びｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）基のようなシリル基などを含むが、これらに限定されない。用語「ヒドロキシ保護基」とはヒドロキシ基の副反応の防止に適する保護基を指す。代表的なヒドロキシ保護基は、メチル基、エチル基及びｔ－ブチル基のようなアルキル基、アルカノイル基（たとえばアセチル基）ようなようアシル基、ベンジル（Ｂｎ）基、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）基、９－フルオレニルメチル（Ｆｍ）基及びジフェニルメチル（ＤＰＭ）基のようなアリールメチル基、トリメチルシリル（ＴＭＳ）基及びｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）基のようなシリル基などを含むが、これらに限定されない。
【0127】
本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造するができ、以下挙げられた具体的な実施形態、ほかの化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【0128】
本発明の化合物は当業者に熟知の通常の方法によって構造を確認することができ、本発明が化合物の絶対配置に関わる場合、当該絶対配置は本分野の通常の技術手段によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）では、育った単結晶をＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折装置によって回折強度のデータを収集し、光源をＣｕＫα輻射とし、走査モード：φ／ω走査で、関連データを収集した後、さらに直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）によって結晶構造を解析することで、絶対配置を確認することができる。
【0129】
本発明に使用される溶媒は市販品として入手可能である。
【0130】
本発明において下記略語が使用される：ａｑは水を表し；ＨＡＴＵは２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートを表し；ｅｑは当量、等量を表し；ＤＣＭはジクロロメタンを表し；ＰＥは石油エーテルを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニルを表し、アミン保護基であり；Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、アミン保護基であり；ｒ．ｔ．は室温を表し；Ｏ／Ｎは一晩を表し；ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し；Ｂｏｃ２Ｏは二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルを表し；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し；ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し；ｉＰｒＯＨは２－プロパノールを表し；ｍｐは融点を表す。
【0131】
化合物は本分野の通常の命名原則又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称が使用される。
【図面の簡単な説明】
【0132】
【図1】Ｂａ／Ｆ３ ＣＤ７４－ＲＯＳ１－ＷＴ皮下異種移植モデルであり；Ｖｅｈｉｃｌｅは溶媒対照群を表す。
【図2】：ヒト肺癌ＬＤ１－００２５－３６１０１９ ＰＤＸ動物モデルであり；Ｖｅｈｉｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌは溶媒対照群を表す。
【発明を実施するための形態】
【0133】
以下、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明の何らの不利な制限にもならない。本明細書は本発明を詳しく説明し、その具体的な実施例も開示したが、当業者には、本発明の精神と範囲を逸脱することなく、本発明の具体的な実施形態に様々な変更や改良を加えることは、容易に想到できることである。
【0134】
参照例２：中間体Ａ－２の合成
【0135】
【化32】
【0136】
ステップ１：化合物Ａ－２－２の合成
【0137】
５Ｌの３つ口フラスコで、撹拌しながら、化合物Ａ－２－１（１７０ｇ、８２５．１９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８５０ｍＬ）と水（３４０ｍＬ）の混合溶媒に加え、次に、順次に炭酸カリウム（１７１．０７ｇ、１．２４ｍｏｌ、１．５ｅｑ）、テトラブチルアンモニウムアセテート（４９７．６１ｇ、１．６５ｍｏｌ、２ｅｑ）と３，３－ジメトキシプロピレン（２５２．８３ｇ、２．４８ｍｏｌ、３ｅｑ）を加えた後、窒素ガスで３回置換した、次に酢酸パラジウム（２．５５ｇ、１１．３６ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス雰囲気下でゆっくりと９５℃に加熱し（昇温時間は１．５時間である）、当該温度で１６時間攪拌して反応させた。反応溶液を５℃に冷却させた後、塩酸水溶液（４Ｍ、８６０ｍＬ、４．１７ｅｑ）を滴下して加え、内部温度を１０～２０℃に制御し（滴下時間は２５分である）、滴下完了後、２０～２５℃で続いて３０分間撹拌して反応させた。反応フラスコにゆっくりと炭酸水素ナトリウムを加えて、ｐＨを６～７に調節し、２０分間撹拌した後、反応溶液をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで３回抽出した（１回目と２回目の抽出体積は１３６０ｍＬであり、３回目の抽出体積は８５０ｍＬである）。すべての有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し（毎回８５０ｍＬである）、有機相を無水硫酸ナトリウム（１７０ｇ）で乾燥させ、減圧濾過し、濾液を４５～５０℃で真空濃縮して濃縮物を得た。当該濃縮物をｎ－ヘプタンとメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルの混合溶媒（５１０ｍＬ；体積比はｎ－ヘプタン：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル＝５．６：１である）で１０分間スラリー化させ、濾過し、ケーキを真空乾燥させて粗生成物を得た。（Ｒ）－ジフェニルプロリノールトリメチルシリルエーテル（１３５．１２ｇ、４１５．０９ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）をジクロロメタン（１５００ｍＬ）に溶解させ、０～５℃に冷却させ、攪拌しながら前記粗生成物と安息香酸（５０．６９ｇ、４１５．０９ｍｍｏｌ、０．２当量）を加え、０～５℃で０．５時間撹拌した。次に、温度を－５～－７℃に冷却させ、ベンジルＮ－ヒドロキシカルバメート（４１６．３３ｇ、２．４９ｍｏｌ、１．２ｅｑ）を加え、－５～１０℃で続いて４時間攪拌して反応させた。反応完了後、反応溶液を０～５℃に冷却させ、次に濾過し、ケーキをジクロロメタン（５００ｍＬ）で洗浄し、ケーキを４５℃で１６時間真空乾燥させて、化合物Ａ－２－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ：７．９８ （ｄ， Ｊ＝２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５７ （ｄｄ， Ｊ＝２．８， ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４６ － ７．３７ （ｍ， ５Ｈ）， ５．８６ （ｄ， Ｊ＝４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６２ （ｔ， Ｊ＝７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３０ （ｑ， Ｊ＝１２．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．０１ （ｄｄ， Ｊ＝８．５， １２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２１ － ２．１３ （ｍ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３４９．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【0138】
ステップ２：化合物Ａ－２－３の合成
【0139】
化合物Ａ－２－２（５０ｇ、１４３．５４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をメタノール（２５０ｍＬ）に加え、撹拌し、０℃に冷却させ、バッチで水素化ホウ素ナトリウム（６．７９ｇ、１７９．４３ｍｍｏｌ、１．２５ｅｑ）を加え、内部温度を０～１０℃に制御し、添加完了後、２０℃で６０分間撹拌した反応させた。反応完了後、反応溶液に１００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液を加えて反応をクエンチングさせ、次に５０ｍＬの水を加え、反応溶液をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで３回抽出し、毎回２００ｍＬであった。有機相を合わせ、３００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を４５℃で真空濃縮して、化合物Ａ－２－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ：７．８９ （ｄ， Ｊ＝２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．６６ （ｄｄ， Ｊ＝２．８， ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ － ７．２７ （ｍ， ５Ｈ）， ５．５２ （ｄｄ， Ｊ＝４．８， １０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２７ － ５．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０１ － ３．８４ （ｍ， １Ｈ）， ３．８８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．８２ － ３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９ － ２．０７ （ｍ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３５１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0140】
ステップ３：化合物Ａ－２－４の合成
【0141】
化合物Ａ－２－３（４９ｇ、１３９．８６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＴＨＦ（２５０ｍＬ）に溶解させ、反応溶液にトリフェニルホスフィン（４４．０２ｇ、１６７．８４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を加え、０℃でアゾジカルボン酸ジイソプロピル（４２．４２ｇ、２０９．８０ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を滴下して加え、反応温度を０～１０℃に制御し、－０～１０℃で続いて０．５時間攪拌して反応させた。反応完了後、反応溶液を４５℃で真空濃縮した。当該濃縮物をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとｎ－ヘプタンの混合溶媒（１００ｍＬ；体積比はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル：ｎ－ヘプタン＝１：１である）で攪拌して０．５時間スラリー化させた後、濾過し、濾液を真空で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離・精製（勾配溶出：ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１００：０～９２：８）して、化合物Ａ－２－４を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ：７．９０ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄｄ， Ｊ＝２．４， ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ － ７．３２ （ｍ， ５Ｈ）， ５．４４ （ｄｄ， Ｊ＝５．２， ８．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３１ － ５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２０ － ４．０９ （ｍ， １Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９５ － ３．８３ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７ － ２．８０ （ｍ， １Ｈ）， ２．２３ － ２．０９ （ｍ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３３３．２［Ｍ＋Ｈ］ ＋。ＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３、３ μｍ、０．４６ｃｍ ｉｄ×５ｃｍ Ｌ；移動相：Ａ（ＣＯ２）とＢ（イソプロパノール、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５～４０％、２分、４０％、１．２分間保持し、次に５％、０．８分；流量：４ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０ｎｍ；圧力：１５００ｐｓｉ；保持時間：０．８８７ｍｉｎ、ｅｅ％＝９８．９４％。
【0142】
ステップ４：化合物Ａ－２の合成
【0143】
化合物Ａ－２－４（３５ｇ、１０５．３２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をジクロロメタン（１７５ｍＬ）に溶解させた後、臭化水素酸／酢酸溶液（６８ｍＬ、４１３．２４ｍｍｏｌ、質量分率：３３％、３．９２ｅｑ）を加え、２５℃で５日間攪拌して反応させた後、臭化水素酸／酢酸溶液（５１ｍＬ、３．０ｅｑ）を追加し、続いて１日間反応させた。窒素ガス保護下で、反応液を減圧して濾過し、ケーキを３０ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで洗浄した後、ケーキを真空乾燥させて化合物Ａ－２（イオンクロマトグラフィーで同定し、Ｂｒ含有量は２つの塩に適合した）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ：７．９３ （ｄｄ， Ｊ＝２．４， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６９ （ｔ， Ｊ＝３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３ （ｔ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５９ （ｄｔ， Ｊ＝３．６， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４１ （ｄｔ， Ｊ＝６．０， ８．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．００ － ２．８９ （ｍ， １Ｈ）， ２．８７ － ２．７３ （ｍ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝１８５．０［Ｍ＋Ｈ］＋。ＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３、３μｍ、０．４６ ｃｍ ｉｄ×５ｃｍ Ｌ；移動相：Ａ（ＣＯ２）とＢ（イソプロパノール、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５～４０％、５ｍｉｎ、次に４０～５％、０．５ｍｉｎ、最後に５％で保持、１．５ｍｉｎ；流量：２．５ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０ｎｍ；圧力：１５００ｐｓｉ；保持時間：３．６２４ ｍｉｎ、ｅｅ％＝９８．３２％。
【0144】
実施例１：化合物ＷＸ－００１の合成
【0145】
【化33】
【0146】
ステップ１：化合物１－２の合成
【0147】
酢酸エチル（３０００ｍＬ）と炭酸カリウム（１３．３６ｇ、９６．６８ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）を化合物１－１（３００ｇ、１．９３ｍｏｌ、１ｅｑ）に加え、窒素ガス保護下で、反応溶液を内部温度－５℃に冷却させ、バッチでＮ－ブロモスクシンイミド（４３０．１８ｇ、２．４２ｍｏｌ、１．２５ｅｑ）を加え、反応温度を－５～５℃に制御し、材料供給時間を２．５時間にし、その後、室温（２０℃）で１６時間撹拌した。反応溶液に亜硫酸ナトリウム水溶液（無水亜硫酸ナトリウム４００ｇと２３００ｍＬの水で調製）を加え、続いて１０分間撹拌した後、分層し、有機相を１０００ｍＬの飽和食塩水で１回洗浄した。当該バッチと別の並行バッチの反応（同じスケール：３００ｇの化合物１－１）を同じ処理をした後得られた有機相と水相をそれぞれ合わせて処理した。最初分層した水相（懸濁液）を濾過し、濾液を酢酸エチルで２回抽出し（毎回１５００ｍＬ）、合わせた有機相を２０００ｍＬの飽和食塩水で１回洗浄した。すべての有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ケーキを酢酸エチル（５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を４５℃で真空濃縮して、８８０ｇの固体粗生成物を得、粗生成物をメタノール（３９６０ｍＬ）で攪拌して１６時間スラリー化させ、濾過し、ケーキをメタノール（３００ｍＬ）で洗浄し、濾液を４５℃で真空濃縮して、７８０ｇの粗生成物を得た。当該粗生成物をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（７８０ｍＬ）で室温で撹拌して３時間スラリー化させ、濾過し、ケーキを真空乾燥させて化合物１－２。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ５．３３ （ｂｒ ｓ， ２ Ｈ）， ４．２６ （ｑ， Ｊ＝７．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， １．３２ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝２３３．８［Ｍ＋１］＋。
【0148】
ステップ２：化合物１－４の合成
【0149】
化合物１－２（２９４ｇ、１．２６ｍｏｌ、１ｅｑ）とリン酸カリウム（３９９．９５ｇ、１．８８ｍｏｌ、１．５ｅｑ）を順次にＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２２５０ｍＬ）に加え、撹拌し、次に３－エトキシアクリル酸エチル（１８１．１０ｇ、１．２６ｍｏｌ、１８１．４６ｍＬ、１ｅｑ）を加え、１２５℃に加熱して８時間反応させた。室温に冷却させた後、反応溶液に６００ｍＬの冷水を加え、５分間撹拌し、次に反応溶液に氷（２０００ｍＬ）を加え、攪拌しながらゆっくりと塩酸溶液（３Ｍ、２０００ｍＬ）を加え、ｐＨを２に調節し、１０分間攪拌した後、濾過した。ケーキを水（１０００ｍＬ）で攪拌して１０分間スラリー化させ、次に濾過し、得られたケーキを攪拌し、続いてメタノール（１０００ｍＬ）で攪拌して２０分間スラリー化させた。濾過し、ケーキをメタノール（２００ｍＬ）で洗浄した後、４５℃で真空乾燥させて化合物１－４を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ９．７６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９７ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０９ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｑ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３５ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。
【0150】
ステップ３：化合物１－１１の的合成
【0151】
化合物１－４（５０ｇ、１４５．０６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）とシアン化第一銅（３２．４８ｇ、３６２．６６ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２５０ｍＬ）に加え、次に１２５℃に昇温させて６０時間反応させた。反応完了後、室温に冷却させ、反応溶液を水（５００ｍＬ）に注ぎ、２時間撹拌した後、混合物液を減圧濾過し、ケーキを収集し、ケーキを真空乾燥させて化合物１－１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １２．２８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．６８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｑ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３１ （ｔ， Ｊ＝７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）。
【0152】
ステップ４：化合物１－１２の合成
【0153】
化合物１－１１（３４ｇ、１４６．４３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、トリエチルアミン（４４．４５ｇ、４３９．２９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）と４－ジメチルアミノピリジン（３．５８ｇ、２９．２９ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）を順次にジクロロメタン（３００ｍＬ）に加え、窒素ガスで置換した後、０℃でｐ－トルエンスルホニルクロリド（６９．７９ｇ、３６６．０７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液を滴下して加え、添加完了後、反応溶液をゆっくりと室温２０℃に昇温させて、６時間反応させた。反応終了後、反応溶液を水（１５００ｍＬ）に注ぎ、次にジクロロメタン（２５００ｍＬ）を加えて１時間撹拌した後、静置して分層した。有機相に水（１５００ｍＬ）を加えた後、１時間撹拌し、静置して分層し、水相を廃棄した。最初分層した水相にジクロロメタン（１５００ｍＬ）を加えた後、１時間撹拌し、静置して分層した。２回分層した有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空濃縮して、粗生成物を得た。当該粗生成物をメタノール（１５０ｍＬ）で室温２０℃で２時間撹拌してスラリー化させ、濾過し、ケーキを少量のメタノール（３ｍＬ）で洗浄し、ケーキを真空乾燥させて化合物１－１２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ８．６８ （ｄ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３６ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８７ （ｄ， Ｊ＝７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５４ （ｑ， Ｊ＝７．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４８ （ｓ， ３Ｈ）， １．５２ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３８７．０［Ｍ＋１］＋。
【0154】
ステップ５：化合物１－１４の合成
【0155】
化合物Ａ－２（１．０ｇ、２．８９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をイソプロパノール（１０ｍＬ）に加え、次に化合物１－１２（８９３．３９ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ、０．８０ｅｑ）を加え、最後にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．１２ｇ、８．６７ｍｍｏｌ、１．５１ｍＬ、３ｅｑ）を加え、４０℃で３時間撹拌した。反応完了後、反応系を室温に冷却させ、濾過してケーキを得、ケーキを酢酸エチル（２ｍＬ）で室温で３０分間スラリー化させ、次に濾過して化合物１－１４を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ８．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｓ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５７ － ５．５３ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ － ４．１６ （ｍ， ３Ｈ） ， ４．０２ － ３．９６ （ｍ， １Ｈ）， ２．８４ － ２．６７ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９ － ２．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．１８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝３９９．１［Ｍ＋１］ ＋。
【0156】
ステップ６：化合物１－１５の合成
【0157】
化合物１－１４（８．７ｇ、２１．８４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を水（２２ｍＬ）とテトラヒドロフラン（６５ｍＬ）の混合溶液に溶解させ、次に水酸化リチウム一水和物（３．６７ｇ、８７．３６ｍｍｏｌ、４ｅｑ）を加え、窒素ガスで置換して、反応系が混濁から透明になり、２５℃で４時間撹拌した。１Ｍの塩酸溶液（１５ｍＬ）で反応溶液をｐＨ＝６～７に調節し、固体を沈殿させた。反応系を漏斗で濾過し、ケーキを毎回４ｍＬの水で２回洗浄した。ケーキを真空乾燥させて化合物１－１５を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３７１．０ ［Ｍ＋ Ｈ］ ＋。ＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３，３ μｍ，０．４６ ｃｍ ｉｄ ×５ｃｍ Ｌ；移動相：Ａ（ＣＯ２）とＢ（ＥｔＯＨ、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５～５０％，３ ｍｉｎ；流速：３．４ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０ｎｍ；圧力：１００ｂａｒ，保持時間：１．６８ｍｉｎ，ｅｅ％＝１００％。
【0158】
ステップ７：化合物１－１６の合成
【0159】
化合物１－１５（３３．４ｇ、９０．２０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）と１－アミノシクロプロパンメタノール塩酸塩（１２．２６ｇ、９９．２２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ、ＨＣｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３３４ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで置換した後ＨＡＴＵ（３７．７３ｇ）を加え、窒素ガスで再度置換し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４６．６３ｇ、３６０．７９ｍｍｏｌ、６２．８４ｍＬ、４ｅｑ）を加え、反応系が白色濁度から透明な黄色に変化し、更に黄色濁度に変化し、２５℃で３．５時間撹拌した。反応系に飽和塩化アンモニウム溶液（３．３４、０．１Ｖ）を加え、次にアセトニトリル（１３３．６ｍＬ、４Ｖ）を加えて３０分間撹拌した後、ブフナー漏斗で濾過し、ケーキを毎回１０ｍＬでアセトニトリルで３回洗浄した。ケーキを収集し、ケーキを真空乾燥させて化合物１－１６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： １１．８６ （ｓ， １Ｈ）， ８．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７０ （ｓ， １Ｈ）， ７．６０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４６ － ７．４３（ｍ， １Ｈ）， ７．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８， １Ｈ）， ４．５９ － ４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ４．３４ － ４．３０ （ｍ， １Ｈ）， ４．０８ － ４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４７ － ３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０３ － ２．９５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２５ － ２．１８ （ｍ， １Ｈ）， ０．７４ － ０．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．６０ － ０．５７ （ｍ， １Ｈ）， ０．３５ － ０．３２ （ｍ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４４０．１ ［Ｍ＋ Ｈ］ ＋。ＳＦＣ （カラム：（Ｓ，Ｓ）－ＷＨＥＬＫ－Ｏ１，３．５μｍ，０．４６ ｃｍ ｉｄ ×５ｃｍＬ；移動相：Ａ（ＣＯ２）とＢ（ＥｔＯＨ、０．０５％のＤＥＡを含む）；勾配：Ｂ％＝５～５０％，３ｍｉｎ；流量：３．４ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０ｎｍ；カラム温度：３５℃；カラム圧力：１８００ｐｓｉ，保持時間：１．６５ｍｉｎ，ｅｅ％＝１００％。
【0160】
ステップ８：化合物ＷＸ－００１の合成
【0161】
化合物１－１６（４５ｇ、１０２．４１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をテトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで置換した後、トリ－ｎ－ブチルホスフィン（４１．４４ｇ、２０４．８３ｍｍｏｌ、５０．５４ｍＬ、２ｅｑ）を加え、更にアゾジカルボニルジピペリジン（５１．６８ｇ、２０４．８３ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を加え、２０℃で３時間反応させた。反応系を他の２バッチの反応系（４．４５ｇ＋５ｇ）と合わせた後、反応系にメタノール（２２０ｍＬ、４Ｖ）を加え、３０分間撹拌した後、濾過してケーキ固体を得、次にケーキ固体をメタノール（１６５ｍＬ、５Ｖ）で室温で３回スラリー化させ、毎回３０分間撹拌した後、濾過し、ケーキを収集し、ケーキを真空乾燥させて化合物をＷＸ－００１を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ９．２６ （ｓ， １Ｈ）， ８．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９７ （ｔ， Ｊ ＝ ８．４， １Ｈ）， ４．７６ （ｄ， Ｊ ＝ １０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２ － ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．９１ （ｄ， Ｊ ＝ １０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０７ － ３．０１ （ｍ， １Ｈ）， ２．６３ － ２．５７ （ｍ， １Ｈ）， ２．１３ － ２．０８ （ｍ， １Ｈ）， １．２８ － １．２４ （ｍ， １Ｈ）， ０．９８ － ０．８９ （ｍ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４２２．１ ［Ｍ＋ Ｈ］ ＋。ＳＦＣ （カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ－３，３ μｍ，０．４６ ｃｍ ｉｄ × ５ｃｍ Ｌ；移動相：Ａ （ＣＯ２）とＢ （ＭｅＯＨ、０．０５％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝１０～４０％，３ ｍｉｎ；流量： ４．０ ｍＬ／ｍｉｎ；波長： ２２０ ｎｍ；圧力： １００ ｂａｒ，保持時間：２．０３ ｍｉｎ，ｅｅ％＝１００％。
【0162】
実施例２：化合物ＷＸ－００２ＡとＷＸ－００２Ｂの合成
【0163】
【化34】
【0164】
ステップ１：化合物２－２の合成
【0165】
化合物２－１（０．２ｇ、１．０７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を酢酸エチル（０．５ｍＬ）に溶解させ、次に塩酸／酢酸エチル（２ｍＬ、４Ｍ）を加え、室温２０℃で１０分間反応させた。反応溶液を４５℃で減圧濃縮して、化合物２－２（粗生成物）を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ８．３４ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ５．１２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６８ － ３．６０ （ｍ， １Ｈ）， ２．３５ － ２．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１５ － ２．０９ （ｍ， ２Ｈ）。
【0166】
ステップ２：化合物１－１５Ａの合成
【0167】
化合物１－１４（１．４ｇ、３．５１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に溶解させ、次に酸化アルミニウム（１．４７ｇ、１４．４１ｍｍｏｌ、４．１ｅｑ）とトリメチルシリコン酸カリウム（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｌａｔｅ）（９０１．７６ｍｇ、７．０３ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を加え、窒素ガスで置換し、８０℃に加熱して３時間撹拌した。トリメチルシリコン酸カリウム（９０．１８ｍｇ、０．７０３ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）を追加した後、続いて８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却させた後、反応系を濾過し、ケーキをアセトニトリルで毎回１．０ｍＬで２回洗浄し、得られたケーキは粗生成物であった。粗生成物を混合溶媒（１７．５ｍＬのアセトニトリルと３．５ｍＬのメタノール）で室温でスラリー化させ、濾過し、ケーキを真空で乾燥させて化合物１－１５Ａを得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝３７１．０ ［Ｍ＋ Ｈ］ ＋。ＳＦＣ （カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３，３ μｍ，０．４６ ｃｍ ｉｄ ×５ｃｍ Ｌ；移動相：Ａ（ＣＯ２）とＢ（ＥｔＯＨ、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５～５０％，３ｍｉｎ；流量：３．４ｍＬ／ｍｉｎ；波長：２２０ｎｍ；圧力：１００ｂａｒ，保持時間：１．６８ ｍｉｎ。ｅｅ％＝７９．５６％であり、当該条件下で部分的な製品がラセミ体であることを示した。
【0168】
ステップ３：化合物２－３の合成
【0169】
化合物１－１５Ａ（５７０ｍｇ、７６９．６６μｍｏｌ、１ｅｑ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）に溶解させた後、順次にＨＡＴＵ（２３４．１２ｍｇ、６１５．７３μｍｏｌ、０．８ｅｑ）、化合物２－２（７３．７６ｍｇ、５９６．８４μｍｏｌ、ＨＣｌ）とＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２９８．４１ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、反応溶液を室温２０℃で１時間反応させた。反応系に２滴の水を加えて反応をクエンチングさせた後、反応溶液を４５℃で真空濃縮して残留物を得た。残留物シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９０：１０）で分離・精製して、化合物２－３を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４４０．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ４：化合物ＷＸ－００２ＡとＷＸ－００２Ｂの合成
化合物２－３（７０ｍｇ、１５９．３１μｍｏｌ、１ｅｑ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解させた後、順次にトリフェニルホスフィン（１２５．３６ｍｇ、４７７．９３μｍｏｌ、３ｅｑ）とアゾジカルボン酸ジイソプロピル（９６．６４ｍｇ、４７７．９３μｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、添加完了後、室温２０℃で１時間撹拌して反応させた。反応系に２滴の水を加えて反応をクエンチングさせた後、反応溶液を真空で濃縮して残留物を得た。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（溶離液はジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９０：１０である）して、粗生成物を得た。前記粗生成物を１ｍＬのジクロロメタンと１ｍＬのメタノールの混合溶液で１０分間攪拌してスラリー化させた後、濾過し、ケーキを真空で乾燥させて生成物を得た。当該生成物をＳＦＣで分離（クロマトグラフィーカラム：ＲＥＧＩＳ（ｓ、ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（２５０ｍｍ＊５０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ２；Ｂ：［ＭｅＯＨ、０．１％のアンモニア水を含む］；勾配Ｂ％：５３％～５３％）した。化合物ＷＸ－００２Ａと化合物ＷＸ－００２Ｂを得た。
ステップ４：化合物ＷＸ－００２ＡとＷＸ－００２Ｂの合成
化合物２－３（７０ｍｇ、１５９．３１μｍｏｌ、１ｅｑ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解させた後、順次にトリフェニルホスフィン（１２５．３６ｍｇ、４７７．９３μｍｏｌ、３ｅｑ）とアゾジカルボン酸ジイソプロピル（９６．６４ｍｇ、４７７．９３μｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、添加完了後、室温２０℃で１時間撹拌して反応させた。反応系に２滴の水を加えて反応をクエンチングさせた後、反応溶液を真空で濃縮して残留物を得た。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（溶離液はジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９０：１０である）して、粗生成物を得た。前記粗生成物を１ｍＬのジクロロメタンと１ｍＬのメタノールの混合溶液で１０分間攪拌してスラリー化させた後、濾過し、ケーキを真空で乾燥させて生成物を得た。当該生成物をＳＦＣで分離（クロマトグラフィーカラム：ＲＥＧＩＳ（ｓ、ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（２５０ｍｍ＊５０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ２；Ｂ：［ＭｅＯＨ、０．１％のアンモニア水を含む］；勾配Ｂ％：５３％～５３％）した。化合物ＷＸ－００２Ａと化合物ＷＸ－００２Ｂを得た。
【0170】
ＷＸ－００２Ａ：１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９ － ７．５６ （ｍ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ － ５．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．９７ － ４．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．５６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９８ － ３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ３．１５ － ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０２ － ２．９６ （ｍ， １Ｈ）， ２．５５ － ２．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２７ － ２．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ － １．８７ （ｍ， １Ｈ）； ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４２２．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋。ＳＦＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ（ｓ、ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（５０ｍｍ＊４．６ｍｍ、３μｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ２；Ｂ：［ＭｅＯＨ、０．０５％のジエチルアミンを含む］；勾配Ｂ％は１．２分で５％から５０％に増加し、１分間Ｂ％＝５０％を保持し、その後０．８分で５０％から５％に減少）；流量：３．４ｍＬ／ｍｉｎ；温度：３５℃；圧力：１００ｂａｒ；保持時間：２．２４３ｍｉｎ、ｅｅ％＝９７．６０％。
【0171】
ＷＸ－００２Ｂ：１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９ － ７．５６ （ｍ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３０ － ５．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．９７ － ４．９２ （ｍ， １Ｈ）， ４．５６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９７ － ３．９１ （ｍ， １Ｈ）， ３．１５ － ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０２ － ２．９６ （ｍ， １Ｈ）， ２．５５ － ２．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２７ － ２．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ － １．８７ （ｍ， １Ｈ）； ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ＝ ４２２．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋。 ＳＦＣ （カラム： ＲＥＧＩＳ （ｓ，ｓ） ＷＨＥＬＫ－Ｏ１ （５０ ｍｍ＊４．６ ｍｍ， ３ μｍ）； 移動相： Ａ： ＣＯ２； Ｂ： ［ＭｅＯＨ、０．０５％のジエチルアミンを含む］；勾配Ｂ％は１．２分で５％から５０％に増加し、１分間Ｂ％＝５０％を保持し、その後０．８分で５０％から５％に減少）；流量：３．４ｍＬ／ｍｉｎ；温度：３５℃；圧力：１００ｂａｒ；保持時間：２．４４０ｍｉｎ、ｅｅ％＝９５．９８％。
【0172】
実施例３：化合物ＷＸ－００３の合成
【0173】
【化35】
【0174】
ステップ１：化合物３－１の合成
【0175】
化合物１－１５（２００．０ｍｇ、４８９．７３μｍｏｌ、１ｅｑ）と（Ｒ）－（－）－２－アミノ－１－プロパノール（３６．７８ｍｇ、４８９．７３μｍｏｌ、１ｅｑ）溶液をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解させ、ＨＡＴＵ（１４８．９７ｍｇ、３９１．７９μｍｏｌ、０．８ｅｑ）を加えた後、窒素ガスの雰囲気下でジイソプロピルエチルアミン（１８９．８８ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、添加完了後、反応溶液を２５℃で９時間撹拌した。反応溶液を直接に真空濃縮して残留物を得、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離・精製（溶離液：メタノール：ジクロロメタン＝０～１：１）して、化合物３－１を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４２８．１ ［Ｍ＋ Ｈ］ ＋。
【0176】
ステップ２：化合物ＷＸ－００３の合成
【0177】
化合物３－１（６７ｍｇ、１５６．７７μｍｏｌ、１ｅｑ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させ、次にトリフェニルホスフィン（１２３．３５ｍｇ、４７０．３０μｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、窒素ガスで置換した後、アゾジカルボン酸ジエチル（８１．９０ｍｇ、４７０．３０μｍｏｌ、３ｅｑ）を加え、添加完了後、２５℃で７時間撹拌した。反応溶液に３滴の水を滴下して反応をクエンチングさせた後、反応溶液を真空濃縮し、濃縮した残留物を分取薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートで分離・精製（展開剤：酢酸エチル）して化合物ＷＸ－００３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ９．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５７ － ７．５４ （ｍ， １Ｈ）， ６．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０４ － ６．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．６９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．８， ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６１ － ４．５７ （ｍ， １Ｈ） ， ４．４８ － ４．４５ （ｍ， １Ｈ）， ４．３１ － ４．２５ （ｍ， １Ｈ）， ４．０４ － ３．９７ （ｍ， １Ｈ）， ３．１４ － ３．０７ （ｍ， １Ｈ）， ２．６４ － ２．５５ （ｍ， １Ｈ）， １．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４１０．１ ［Ｍ＋ Ｈ］＋。
【0178】
試験データ
【0179】
実施例１：ＴｒｋＡとＲＯＳ１に対する化合物のキナーゼ阻害活性
【0180】
ＴｒｋＡとＲＯＳ１に対する化合物のキナーゼ阻害活性試験は、Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ．社によって完成された。反応緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％のＢｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、２ｍＭのＤＴＴ、１％のＤＭＳＯ）に順次に特定の濃度の基質、補酵素因子、キナーゼ、及び試験化合物（１０個の投与量、３倍で段階希釈、２％のＤＭＳＯ最終濃度）を加え、均一に混合し、混合物を室温で２０分間培養し、反応混合溶液に所定の濃度の３３Ｐ－ＡＴＰを加えて反応を開始させ、次に室温で１２０分間培養した。最後に、反応物の放射性をフィルター結合法で検出した。最終的なキナーゼ活性は、ＤＭＳＯ対照群のキナーゼ活性に対する試験サンプル中の残りのキナーゼ活性の比率で表した。用量効果曲線をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアでフィッティングし、ＩＣ５０を計算した。結果は表１に示される通りである：
【0181】
【表1】
【0182】
結果は：本発明の化合物が、ＲＯＳ１キナーゼとその突然変異体ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒにおいて、ＴＰＸ－０００５の活性に匹敵する高いキナーゼ阻害活性を示したことを示した；しかし、本発明の化合物はＴｒｋＡとＡＬＫキナーゼに対する阻害活性は弱く、高い選択性を示し、選択性はＴＰＸ－０００５よりも有意に優れた。
【0183】
実施例２：細胞増殖に対する化合物の阻害活性
【0184】
アデノシン三リン酸（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｔｒｉ－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＡＴＰ）は、自然界のあらゆる種類の生命活動に共有されるエネルギー担体であり、エネルギーの貯蔵と伝達の最小単位である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏＴＭ生細胞試験試薬キットは、ルシフェラーゼを検出物として使用し、発光過程でルシフェラーゼはＡＴＰの関与を必要とする。細胞培地にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏＴＭ試薬を加え、発光値を測定し、光信号は反応系内のＡＴＰ量に正比例し、ＡＴＰは生細胞数と正の相関がある。したがって、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットを使用してＡＴＰ含有量を検出することにより、細胞の増殖状況を検出することができる。本試験において、細胞株はＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－ＷＴ、Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ、Ｂａ／Ｆ３ ＬＭＮＡ－ＮＴＲＫ１－ＷＴ安定的にトランスフェクトされた細胞株であり、５０００個細胞／ウェルであった。
【0185】
ＩＣ５０試験過程：
１ 細胞の培養と接種
ａ） 対数増殖期の細胞を採取し、血小板カウンターを使用して細胞をカウントした。トリパンブルー排除法で細胞生存率を検出し、細胞生存率が９０％以上であることを確保した。
ｂ） 細胞濃度の調節：９０μＬの細胞懸濁液をそれぞれ９６ウェルプレートに添加した。
ｃ） ９６ウェルプレートの細胞を３７℃、５％ＣＯ２、９５％湿度で一晩培養した。
１ 細胞の培養と接種
ａ） 対数増殖期の細胞を採取し、血小板カウンターを使用して細胞をカウントした。トリパンブルー排除法で細胞生存率を検出し、細胞生存率が９０％以上であることを確保した。
ｂ） 細胞濃度の調節：９０μＬの細胞懸濁液をそれぞれ９６ウェルプレートに添加した。
ｃ） ９６ウェルプレートの細胞を３７℃、５％ＣＯ２、９５％湿度で一晩培養した。
【0186】
２薬物の希釈と投薬
ａ） １０倍の薬物溶液を調製し、９個濃度で３倍希釈して最高濃度は１０μＭであり、細胞を播種した９６ウェルプレートの各ウェルに１０μＬの薬物溶液を加え、各薬物濃度に３つの複製ウェルを設定した。
ｂ） 医薬を加えた９６ウェルプレートの細胞を３７℃、５％ＣＯ２、９５％湿度の条件下で続いて７２時間培養した後、ＣＴＧ分析を行った。
ａ） １０倍の薬物溶液を調製し、９個濃度で３倍希釈して最高濃度は１０μＭであり、細胞を播種した９６ウェルプレートの各ウェルに１０μＬの薬物溶液を加え、各薬物濃度に３つの複製ウェルを設定した。
ｂ） 医薬を加えた９６ウェルプレートの細胞を３７℃、５％ＣＯ２、９５％湿度の条件下で続いて７２時間培養した後、ＣＴＧ分析を行った。
【0187】
３ エンドポイントプレートの読み取り
ａ） ＣＴＧ試薬を溶かし、セルプレートを室温で３０分間平衡化した。
ｂ） 同じ体積のＣＴＧ溶液を各ウェルに加えた。
ｃ） オービタルシェーカーで５分間振とうして細胞を溶解させた。
ｄ） 細胞板を室温で２０分間置いて、発光シグナルを安定させた。
ｅ） 発光値を読み取った。
ａ） ＣＴＧ試薬を溶かし、セルプレートを室温で３０分間平衡化した。
ｂ） 同じ体積のＣＴＧ溶液を各ウェルに加えた。
ｃ） オービタルシェーカーで５分間振とうして細胞を溶解させた。
ｄ） 細胞板を室温で２０分間置いて、発光シグナルを安定させた。
ｅ） 発光値を読み取った。
【0188】
４ データ処理
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェアを使用してデータを分析し、非線形Ｓ曲線回帰を使用してデータをフィッティングすることにより用量効果曲線を得、これによりＩＣ５０値を計算し、データは表２に示される通りである。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェアを使用してデータを分析し、非線形Ｓ曲線回帰を使用してデータをフィッティングすることにより用量効果曲線を得、これによりＩＣ５０値を計算し、データは表２に示される通りである。
【0189】
【表2】
【0190】
結果は：本発明の化合物が、ＲＯＳ１融合細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１とその突然変異細胞株Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒに対して高い細胞増殖阻害活性を示したことを示した。同時に、本発明の化合物は、Ｂａ／Ｆ３ ＬＭＮＡ－ＮＴＲＫ１－ＷＴ細胞株に対して弱い阻害活性を示し、Ｂａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１細胞株とＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株、特にＢａ／Ｆ３ ＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１－Ｇ２０３２Ｒ細胞株に対して、有意な阻害選択性を示した。
【0191】
実験例３：マウス体内における化合物のカセット（ｃａｓｓｅｔｔｅ）薬物動態試験
【0192】
実験目的：７～９週齢のオスＣＤ－１マウスを試験動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を使用して化合物を単回静脈内注射（ＩＶ）及び経口投与（ＰＯ）で投与した後、異なる時点における血漿中の化合物の薬物濃度を測定して、マウス体内における本発明の化合物の薬物動態学的挙動を研究し、その薬物動態学的特性を評価することである。
【0193】
医薬の調製：化合物を５％のＤＭＳＯ＋１０％のｓｏｌｕｔｏｌ＋８５％の水を溶媒として透明な溶液に調製し、ＩＶ（静脈内注射）及びＰＯ（経口投与）群の投与に使用した。投与方法はカセット投与（ｃａｓｓｅｔｔｅ ｄｏｓｉｎｇ）であり、各化合物の投与量は：ＩＶは０．５ｍｇ／ｋｇであり、ＰＯの投与量は２．５ｍｇ／ｋｇであった。薬物動態パラメータの結果は表３に示される通りである：
【0194】
【表3】
【0195】
結果は、同じ投与量で、本発明の化合物ＷＸ－００１を経口投与した後の総全身曝露量とピーク濃度は、クリゾチニブ、エントレチニブ、ロルラチニブとＴＰＸ－００５より有意に高く、その見かけクリアランス率は、クリゾチニブ、エントレチニブ、ロルラチニブとＴＰＸ－００５より有意に低く、優れた薬物動態特性を示したことを示した。エントレチニとロルラチニブと比較して、投与の０．５時間と２時間後、本発明の化合物の脳と脳脊髄液中の濃度は、エントレクチニブよりも有意に高く、ロルラチニブに匹敵した。ＴＰＸ－０００５と比較して、投与の０．５時間と２時間後、本発明の化合物は２つの時点で肺、脳と脳脊髄液中の濃度は有意に高かった。
【0196】
実施例４：マウス体内における化合物の薬物動態試験
【0197】
実験目的：７～９週齢のオスＣＤ－１マウスを試験動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を使用して化合物を単回静脈内注射（ＩＶ）及び経口投与（ＰＯ）で投与した後、異なる時点における血漿中の化合物の薬物濃度を測定して、マウス体内における本発明の化合物の薬物動態学的挙動を研究し、その薬物動態学的特性を評価することである。
【0198】
医薬の調製：化合物を１０％のＤＭＳＯ＋１０％のｓｏｌｕｔｏｌ＋８０％の水を溶媒として透明な溶液に調製し、ＩＶ（静脈内注射）及びＰＯ（経口投与）群の投与に使用した。各化合物の投与量は：ＩＶは１ｍｇ／ｋｇであり、ＰＯの投与量は３ｍｇ／ｋｇであった。薬物動態パラメータの結果は表４に示される通りである：
【0199】
【表4】
【0200】
結果は：経口投与後の本発明の化合物の総全身曝露、ピーク濃度、及びバイオアベイラビリティはすべて高く、優れた薬物動態特性を示したことを示した。
【0201】
実験例５：マウス体内における化合物の有効性試験
【0202】
実験目的：Ｂａ ／Ｆ３ ＣＤ７４－ＲＯＳ１－ＷＴ皮下異種移植腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスモデルにおけるＷＸ－００１の体内有効性を評価することである。
【0203】
医薬の調製：化合物を１０％のＤＭＳＯ＋１０％のｓｏｌｕｔｏｌ＋８０％の水を溶媒として透明な溶液に調製し、ＰＯ（経口投与）群の投与に使用した。
【0204】
腫瘍の測定：腫瘍の直径を、ノギスを使用して週に２回測定した。腫瘍体積の計算式は、：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ここで、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。化合物の抗腫瘍効果はＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価された。ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖阻害率を反映する。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群の平均ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：陰性対照群の平均ＲＴＶ）。腫瘍測定の結果に基づいて相対腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＲＴＶ）を計算し、計算式はＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０であり、ここで、Ｖ０は群分け投与開始時（即ちＤｏ）測定した腫瘍体積であり、Ｖｔは特定の測定における対応するマウスの腫瘍体積であり、ＴＲＴＶとＣＲＴＶは同じ日のデータを取った。ＴＧＩ（％）＝［（１－（特定の治療群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該治療群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。結果は図１に示される通りである。
【0205】
統計分析：統計分析は、実験終了時の相対腫瘍体積と腫瘍重量データに基づいてＳＰＳＳソフトウェアを使用して実行された。複数の群間の比較は、Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ分析によって分析され、分散が均一である場合（Ｆ値に有意差がない場合）、Ｔｕｋｅｙ’ｓ検定を使用して分析し、分散が均一ではない場合（Ｆ値に有意差がある場合）、Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ検定を使用して検定した。ｐ＜０．０５は有意差があると見なされた。
【0206】
実験結果：Ｂａ／Ｆ３ ＣＤ７４－ＲＯＳ１－ＷＴ皮下異種移植腫瘍モデルでは、投与７日後、クリゾチニブ（３０ｍｇ／ｋｇ）とＷＸ－００１（１０ｍｇ／ｋｇ）のＴＧＩはそれぞれ１１０．４０％及び１１２．１７％であり、Ｐ値はすべて０．００４であり、有意な抗腫瘍効果を有した。
【0207】
実験結論：ＷＸ－００１は、Ｂａ／Ｆ３ ＣＤ７４－ＲＯＳ１－ＷＴヌードマウス異種移植腫瘍の増殖に対して有意に抑制効果があった。
【0208】
実施例６：マウス体内における化合物の有効性試験
【0209】
実験目的：ヒト肺癌ＬＤ１－００２５－３６１０１９ ＰＤＸ動物モデルにおけるＷＸ－００１の抗腫瘍効果を評価することである。
【0210】
医薬の調製：化合物を１０％のＤＭＳＯ＋１０％のｓｏｌｕｔｏｌ＋８０％の水を溶媒として透明な溶液に調製し、ＰＯ（経口投与）群の投与に使用した。
【0211】
腫瘍の測定：腫瘍の直径を、ノギスを使用して週に２回測定した。腫瘍体積の計算式は、：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２であり、ここで、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。化合物の抗腫瘍効果はＴＧＩ（％）によって評価された。ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）＝［（１－（特定の処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。結果は図２に示される通りである。
【0212】
統計分析：すべてのデータはＭｅａｎ±ＳＥＭで表し、Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ＬＳＤ ｔｅｓｔを使用して、治療群の腫瘍体積と腫瘍重量を対照群と比べて有意差の有無を比較した。すべてのデータはＧｒａｐｈｐａｄで分析した。ｐ＜０．０５は有意差があると見なされた。
【0213】
実験結果：ヒト肺癌ＬＤ１－００２５－３６１０１９ ＰＤＸ動物モデル（ＣＤ７４－ＲＯＳ１融合＆Ｇ２０３２Ｒ突然変異）は２１日間投与した時、クリゾチニブ（５０ｍｇ／ｋｇ）投与群、ＷＸ－００１高用量（２０ｍｇ／ｋｇ）投与群、ＷＸ－００１中用量（１５ｍｇ／ｋｇ）投与群とＷＸ－００１低用量（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群において、その腫瘍増殖阻害率ＴＧＩがそれぞれ３５．４３％、８２．３８％、７０．０３％と６０．８３％であった。溶媒対照群と比較して、ＷＸ－００１ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群、ＷＸ－００１ １５ｍｇ／ｋｇ投与群とＷＸ－００１ １０ｍｇ／ｋｇ投与群はいずれも有意な抗腫瘍増殖効果を表した（Ｐ＜０．０１）。
【0214】
実験結論：ヒト肺癌ＬＤ１－００２５－３６１０１９ ＰＤＸ動物モデルにおいて、ＷＸ－００１は有意な抗腫瘍効果を有し、抗腫瘍効果は用量依存的な傾向があった（低用量群と比べて、高用量群ｐ＜０．０５）。
【図1】
【図2】
