特許 7376870 抗不安医薬組成物およびそれを含む加工食品

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-31

(45)【発行日】2023-11-09

(54)【発明の名称】抗不安医薬組成物およびそれを含む加工食品

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4965 20060101AFI20231101BHJP

   A61K 31/045 20060101ALI20231101BHJP

   A61K 31/341 20060101ALI20231101BHJP

   A61K 31/4015 20060101ALI20231101BHJP

   A61K 31/197 20060101ALI20231101BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20231101BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20231101BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4965

A61K31/045

A61K31/341

A61K31/4015

A61K31/197

A61P25/22

A23L33/10

【請求項の数】 6

(21)【出願番号】P 2019127709

(22)【出願日】2019-07-09

(65)【公開番号】P2021011462

(43)【公開日】2021-02-04

【審査請求日】2022-04-20

(73)【特許権者】

【識別番号】000125347

【氏名又は名称】学校法人近畿大学

(73)【特許権者】

【識別番号】591040236

【氏名又は名称】石川県

(73)【特許権者】

【識別番号】504061259

【氏名又は名称】株式会社丸八製茶場

(74)【代理人】

【識別番号】100118924

【弁理士】

【氏名又は名称】廣幸 正樹

(72)【発明者】

【氏名】山田 康枝

(72)【発明者】

【氏名】笹木 哲也

(72)【発明者】

【氏名】丸谷 誠慶

【審査官】長部 喜幸

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１４－０１９６４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】Food Chemistry，2008年，Vol.108，pp.840-846

【文献】Biol. Pharm. Bull.，2001年，Vol.24, No.9，pp.1068-1071

【文献】日本食品科学工学会誌，2016年，Vol.63, No.9，pp.394-404

【文献】J Sci Food Agric，2018年，Vol.99，pp.1780-1786

【文献】Fundam. Clin. Pharmacol.，1988年，Vol.2，pp.77-82

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０

Ａ２３Ｌ ３３／１０

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

２－エチル－３，５－ジメチルピラジンと２－エチル－３，６－ジメチルピラジンを含み、カテキン類を含まない抗不安組成物。

【請求項2】

さらに２，３，５－トリメチルピラジン、２，３－ジエチル－５－メチルピラジン、３，７－ジメチル－２，６－オクタジエン－１－オール、４－ヒドロキシ－２，５－ジメチル－３（２Ｈ）－フラノンから選ばれる少なくとも１種の抗不安化合物を含む請求項１に記載された抗不安組成物。

【請求項3】

ピログルタミン酸をさらに含むことを特徴とする請求項１または２の請求項に記載された抗不安組成物。

【請求項4】

ＧＡＢＡをさらに含むことを特徴とする請求項１乃至３の何れか一の請求項に記載された抗不安組成物。

【請求項5】

請求項１乃至４の何れか一の請求項に記載された抗不安組成物を含む医薬組成物。

【請求項6】

請求項１乃至４の何れか一の請求項に記載された抗不安組成物を含む加工食品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗不安作用を有する抗不安化合物を含む医薬組成物および加工食品に関するものである。

【背景技術】

【0002】

抗不安剤としては、ベンゾジアゼピン系のものが多く提案されている。しかしこのような合成化合物は、習慣性等の問題を否定できない。通常、人が飲食するものの中に、同じような効果を有するものがあれば、摂取する際に安心感は高くなる。

【0003】

特許文献１には、シソの抽出物に抗不安効果があることが開示されている。そして、特にロズマリン酸が主要な成分であるとしている。

【0004】

また、特許文献２には、ユリ科植物、特許文献３には、蓮の種子の胚芽である連子心（れんししん）、特許文献４には、ラフマ（中国北部・西部原産のキョウチクトウ科の多年草）の抽出物が抗不安作用を奏することが示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【文献】特開２００２－２７５０６１号公報

【文献】特開２００４－１６１７１７号公報

【文献】特開２００６－０４２６６４号公報

【文献】特開２０１１－０９３８４２号公報

【非特許文献】

【0006】

【文献】Ｓａｓａｋｉ Ｔ， Ｋｏｓｈｉ Ｅ， Ｔａｋｅ Ｈ， Ｍｉｃｈｉｈａｔａ Ｔ， Ｍａｒｕｙａ Ｍ， Ｅｎｏｍｏｔｏ Ｔ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｄｏｒａｎｔｓ ｉｎ ｒｏａｓｔｅｄ ｓｔｅｍ ｔｅａ ｕｓｉｎｇ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｏｌｆａｃｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ． ２０１７；２２０：１７７－１８３

【文献】ＳＨＥＩＫＨ ＪＵＬＦＩＫＡＲ ＨＯＳＳＡＩＮ ｅｔ ａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｔｅａ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ＧＡＢＡＡ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｘｅｎｏｐｕｓ Ｏｏｃｙｔｅｓ ＪＯＵＲＮＡＬ ｏｆ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＡＬ ａｎｄ ＦＯＯＤ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ２００２，５０，３９５４－３９６０．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかし、これらの植物は大量に入手するのは容易ではない。長年にわたって人が飲食した歴史を有し、なおかつ現在でも大量に入手可能な飲食物から抗不安効果を有するものを得られるのが望ましい。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は上記のような課題を鑑みて想到されたものであり、ほうじ茶に含まれる成分に抗不安作用を有する化合物があることを見出して完成させた。

【0009】

より具体的に本発明に係る抗不安組成物と、抗不安組成物を含む医薬組成物若しくは加工食品は、２－エチル－３，５－ジメチルピラジンと２－エチル－３，６－ジメチルピラジンを含み、カテキン類を含まないことを特徴とする。

【発明の効果】

【0010】

これらの抗不安化合物はほうじ茶に含まれるものであり、長年わが国では飲用されてきたものであるから、習慣性や副作用といった摂取による障害に対する安全性は高いものがあるといえる。また、ほうじ茶は、煎茶や番茶を作製した後の茶葉や茎の残り物で作られるものであり、現在でも大量に生産されているため、コストを安くできる見込みが高い。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】ＧＡＢＡ_Ａ受容体の説明をする図である。

【図2】アフリカツメガエルの卵母細胞にＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現させる工程を示す模式図である。

【図3】二電極膜電位固定法を説明する図である。

【図4】ピラジンＡ、ピラジンＢ、ピラジンＣのＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示すグラフである。

【図5】ピラジンＡ（ＧＡＢＡ１０μＭ共存下）についての活性化曲線を示すグラフである。

【図6】ゲラニオール、ヒドロキシフラノンのＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示すグラフである。

【図7】エタノールとほうじ茶の抽出液のＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示すグラフである。

【図8】ピログルタミン酸のＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下に本発明に係る抗不安化合物を用いた抗不安組成物と、抗不安組成物を用いた抗不安医薬組成物およびそれを用いた加工食品について実施例を示し説明を行う。なお、以下の説明は、本発明の一実施形態および一実施例を例示するものであり、本発明が以下の説明に限定されるものではない。以下の説明は本発明の趣旨を逸脱しない範囲で改変することができる。

【0013】

ＧＡＢＡ受容体は、ＧＡＢＡを選択的に受容する受容体であり、ＧＡＢＡ_Ａ(イオンチャネル型)、ＧＡＢＡ_Ｂ(代謝型)、ＧＡＢＡ_Ｃ(イオンチャネル型)受容体の３種類が確認されている。これらの受容体のうちＧＡＢＡ_Ａ受容体は、α、β、γ、δ、ε、θ、πの７つのサブファミリーがあり、そのうち５種類のサブユニットで５量体を形成している。

【0014】

図１は、ＧＡＢＡ_Ａ受容体の構造を示す図である。図１（ａ）は、ＧＡＢＡ_Ａ受容体の拡大模式図であり、図１（ｂ）は、神経細胞でＧＡＢＡ_Ａ受容体が形成されている状態を示している。脳内で発現するＧＡＢＡ_Ａ受容体は、図１（ａ）に示すように、２つのαサブユニットと２つのβサブユニット、１つのγサブユニットから成ると考えられている。このα、βサブユニットの間にＧＡＢＡが結合することでチャネルが開口し、Ｃｌ^－イオンを透過する。このＣｌ^－イオンが細胞外から細胞内に流入することにより、神経細胞が過分極して興奮が抑制される。

【0015】

ＧＡＢＡ_Ａ受容体には、５種類のサブユニットの一部が組み合わされて形成された、リガンドであるＧＡＢＡ結合部位がある。このＧＡＢＡ結合部位の他に、バルビツール結合部位、ベンゾジアゼピン結合部位、糖質コルチコイド結合部位、ペニシリン結合部位、フロセミド結合部位などが知られており、ＧＡＢＡとの反応性の調節を行っている。

【0016】

例えば、βサブユニットの孔側にはピクロトキシンが結合し、非競合的に活性を阻害する。睡眠鎮静作用や抗不安作用などの薬理作用で知られているベンゾジアゼピンは、αサブユニットに結合し、ＧＡＢＡの作用を増強する。また、γサブユニットに結合するエタノールはＧＡＢＡの作用を増強する。

【0017】

このように、ＧＡＢＡ_Ａ受容体にはさまざまな薬物が作用するため、その程度に応じて、安らぎ、精神安定、睡眠、麻酔効果などが生じることが知られており、ＧＡＢＡ_Ａ受容体は気分に影響する物質の主要な作用対象である。ＧＡＢＡ_Ａ受容体の機能発現を欠損させると、てんかんや不安障害、認識障害、統合失調症、うつ、薬物依存などになることから、ＧＡＢＡ_Ａ受容体に作用する物質は鎮静・催眠薬、抗痙攣薬や抗不安薬などの鎮静型の神経作用薬の開発のターゲットになる。以上のことから、ＧＡＢＡ_Ａ受容体に作用する物質（組成物）が重要となる。以下ＧＡＢＡ_Ａ受容体を活性化する能力を「ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能」と呼ぶ。

【0018】

本発明に係る抗不安医薬組成物およびそれを用いた加工食品には、ほうじ茶に含まれる成分の内、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を活性化する物質で構成されている。ほうじ茶には、香気成分、有機酸、カテキンといった成分が多種含まれている（非特許文献１）。その中で、香気成分である２－エチル－３，５－ジメチルピラジン（ＣＡＳ番号１３９２５－０７－０）、２－エチル－３，６－ジメチルピラジン（ＣＡＳ番号１３３６０－６５－１）（これらを合わせて以後「ピラジンＡ」と呼ぶ。）、２，３，５－トリメチルピラジン（ＣＡＳ番号１４６６７－５５－１）、以後「ピラジンＢ」と呼ぶ。）、２，３－ジエチル－５－メチルピラジン（ＣＡＳ番号１８１３８－０４－０、以後「ピラジンＣ」と呼ぶ。）、３，７－ジメチル－２，６－オクタジエン－１－オール（ＣＡＳ番号１０６－２４－１、以後「ゲラニオール」と呼ぶ。）、４－ヒドロキシ－２，５－ジメチル－３（２Ｈ）－フラノン（ＣＡＳ番号３６５８－７７－３、以後「ヒドロキシフラノン」と呼ぶ。）、ピログルタミン酸（ＣＡＳ番号９８－７９－３）が、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を有することがわかった。本明細書では、これらの物質を「抗不安化合物」と呼ぶ。

【0019】

また、本明細書において、抗不安組成物は、抗不安化合物が少なくとも1種類以上含まれるものをいう。結果、本発明に係る抗不安医薬組成物およびそれを用いた加工食品は、抗不安組成物を含むことになる。

【0020】

本発明に係る抗不安医薬組成物中に含まれる抗不安化合物は、水、メタノール、エタノール、アセトン等の溶媒中で、薬学上許容される酸と混合することで、塩にすることができる。薬学上許容される酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸塩、リン酸、硝酸等の無機酸、あるいは酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、アスコルビン酸等の有機酸が挙げられる。

【0021】

また、本発明に係る抗不安医薬組成物は、経口摂取で効果を有する。そのため、粉末若しくは粒状の上記物質をカプセル剤、顆粒剤、散剤、錠剤等に製剤化して提供することができる。また、経口剤とする際には、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤といった添加剤を加え、カプセル剤、顆粒剤、散剤、錠剤を常法によって製造することができる。

【0022】

また、これらの抗不安医薬組成物は、静脈内、皮下、もしくは筋肉内注射、局所的、経直腸的、経皮的、または経鼻的といった非経口的摂取によっても効果を奏する。

【0023】

本発明に係る抗不安化合物は、加熱により揮発しやすい。したがって、本発明に係る抗不安医薬組成物は、最終段階で加熱を要さない加工食品に含ませることができる。例えば、飴、ガム、ゼリー、魚肉・畜肉練製品、清涼飲料、乳飲料、乳清飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン等といった嗜好食品や健康食品を含む一般加工食品に対して好適に利用できる。またこれらの加工食品だけでなく、厚生労働省の保健機能食品制度に規定された特定保健用食品や栄養機能食品などの保健機能食品を含む。さらに、栄養補助食品（サプリメント）、飼料、食品添加物等も本発明に係る抗不安医薬組成物を適用できる加工食品に含まれる。これらの加工食品の原料中に、抗不安医薬組成物を添加することで、本発明に係る加工食品を調製することができる。

【0024】

なお、後述する実施例に示すように、抗不安化合物は、ＧＡＢＡ_Ａ受容体の阻害剤となり得るカテキンとの共存では、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能が抑制されてしまう。したがって、本発明に係る抗不安医薬組成物およびそれを用いた加工食品には、カテキン類が含まれていないことを必要とする。

【0025】

ここで、カテキン類とは、ガレート型カテキンであるエピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、また遊離型カテキンであるエピガロカテキン、エピカテキン、カテキン、ガロカテキンをいう。

【実施例】

【0026】

＜ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能の評価＞
ＧＡＢＡ_Ａ受容体はすべて神経細胞に発現しており、ＧＡＢＡによって活性化するＧＡＢＡ_Ｂ(代謝型)、ＧＡＢＡ_Ｃ(イオンチャネル型)受容体などがある。よって、神経細胞への直接的なＧＡＢＡの投与ではＧＡＢＡ_Ａ受容体単独の活性をみることは非常に難しい。そこで、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を評価用の細胞に発現させ、評価対象化合物をその細胞に灌流する。評価対象化合物によって、ＧＡＢＡ_Ａ受容体が活性すれば、ＧＡＢＡ_Ａ受容体チャネルが開くため、細胞の内外に電流が流れる。この電流を測定することで、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を評価した。

【0027】

より具体的には、評価用の細胞としてアフリカツメガエルの卵母細胞を選んだ。アフリカツメガエルの卵母細胞発現系では、外来のｍＲＮＡを注入すると、効率よくそのタンパク質を発現できることが知られている。そこで、アフリカツメガエルの卵母細胞にＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現させ、評価対象化合物を灌流させＧＡＢＡ_Ａ受容体に作用させた。この受容体が作用するとＣｌ^－イオンがＧＡＢＡ_Ａ受容体チャネルを通過し、卵母細胞の内外方向に電流が生じる。この電流を、二電極膜電位固定法によって測定し、受容体活性を測定した。

【0028】

（卵母細胞の摘出と卵胞膜の除去）
以下の操作は可能な限り、無菌的に行った。メスのアフリカツメガエルを氷水の中で約１時間放置し、強制的に冬眠させた後、必要分の卵母細胞を約５ｍｍの塊となるように取り出し、コラゲナーゼ溶液に浸した。卵母細胞をコラゲナーゼ溶液に入れ、温室２０～２５℃で１～１．５時間浸した後にＢａｒｔｈ溶液で洗い流し、顕微鏡下で、Ｂａｒｔｈ溶液の入ったシャーレ中で卵母細胞の表面を覆っている卵胞膜をピンセットで取り除いた。卵胞膜を取り除いた卵母細胞を２０℃のサーモプレート上で保存した。

【0029】

（ｍＲＮＡのインジェクション）
卵母細胞ひとつひとつに合成した牛由来のα１、β１のｍＲＮＡを５０ｎＬ（α１は０．０８μｇ／ｏｏｃｙｔｅ，β１は０．０９μｇ／ｏｏｃｙｔｅ）ずつインジェクションした。その後、インジェクションした卵母細胞は、Ｂａｒｔｈ溶液が入った新しいシャーレに入れ、２０℃でインキュベートし、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現させた（図２）。

【0030】

（二電極膜電位固定法）
二電極膜電位固定法で膜電位を－７０ｍＶに固定し、細胞膜を通過するイオンを電流測定電極で測定した。アンプはオーサイトクランプ装置（ＴＥＶ－２００Ａ ＶＯＬＴＡＧＥ ＣＬＡＭＰ）を用い、電流値をＰｏｗｅｒ Ｌａｂ／２００でＡＤ変換し、ソフトＣｈａｒｔで取り込んだ。図３はリガンドであるＧＡＢＡを灌流させた時の、ＧＡＢＡ_Ａ受容体の標準的な測定状態を示したものである。図３を参照して、横軸が時間（ｓｅｃ）であり、縦軸が電流（μＡ）を表している。ＧＡＢＡは、計測開始後５秒目から２５秒目まで灌流した。図３では、この間、細胞膜を通過する電流が計測されているのがわかる。

【0031】

評価対象化合物となるピラジンＡ、ピラジンＢおよびピラジンＣ、ゲラニオール、ヒドロキシフラノンおよびピログルタミン酸は、それぞれ合成化学物を購入した。これらの成分はほうじ茶に含まれている。これらの成分は所定の濃度に設定し、ＧＡＢＡ１０μＭと共に電極を設置した卵母細胞に灌流させた。電流の変化は灌流してから５分後に測定した。

【0032】

まず、ＧＡＢＡ１０μＭの条件で電流を流しその時の値を測定した。ＧＡＢＡ１０μＭがコントロールとなる。次に、各サンプルを２．５ｍＭの濃度で、ＧＡＢＡ１０μＭと共に、灌流させた。各サンプルの灌流時の測定電流とＧＡＢＡ１０μＭの時の電流との比を求めた。なお、ＧＡＢＡ１０μＭだけの時の電流値を１００とした。この比を持って、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性率（％）とした。ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性率が１００％を超えれば、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を有すると言える。

【0033】

図４にピラジンＡ、ピラジンＢ、ピラジンＣのＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示す。図４を参照して、横軸はサンプル種であり、縦軸はＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化率（％）を表す。ピラジンＡ、Ｃに強いＧＡＢＡ_Ａ受容体活性が見られた。また、ピラジンＢもピラジンＡ、Ｃより低いものの、活性化が見られた。

【0034】

図５は、ピラジンＡ（ＧＡＢＡ１０μＭ共存下）について活性化曲線を求めた結果を示す。図５は、ＧＡＢＡ１０μＭの時の電流値と所定濃度のピラジンＡをＧＡＢＡ１０μＭと共に灌流させた時の電流値との比で求めたものである。したがって、図５では、ＧＡＢＡ１０μＭだけの時の電流値を１としている。この比を活性度（％）とした。横軸はピラジンＡの濃度（ｍＭ）であり、縦軸は活性度（％）を表す。これより、ピラジンＡのＥＣ５０は１．１３ｍＭであった。

【0035】

図６にゲラニオール、ヒドロキシフラノンのＧＡＢＡ_Ａ受容体に対する効果を示す。なお、コントロール（ＧＡＢＡ１０μＭのみ）と共に、エタノール、リナロールについての結果も示す。エタノールはすでにＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化能を有していることが分かっている。また、リナロールもほうじ茶に含まれる成分の１つである。

【0036】

図６を参照して、横軸はサンプル種およびその濃度であり、縦軸はＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化率（％）である。コントロール（ＧＡＢＡ１０μＭのみ）に対して、エタノール、ゲラニオール、ヒドロキシフラノンが１２０％以上であり、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能が認められた。

【0037】

図７には、１００ｍＭのエタノールと、ほうじ茶の抽出液のＧＡＢＡ_Ａ受容体活性を比較したグラフを示す。全てのサンプルはＧＡＢＡ１０μＭ存在下での測定結果である。ほうじ茶の抽出は「煮出し」と「水出し」に分けた。「煮出し」とは、沸騰した１００ｍｌＮＤ９６に茶葉２．３１ｇを加え、２０～２５秒浸出させた抽出液である。また、「水出し」とは、１００ｍｌＮＤ９６に茶葉を加え、冷蔵庫で３時間放置した抽出液である。これらの抽出液を１０倍、５０倍、１００倍、２００倍に希釈したものを用意した。

【0038】

図７を参照して、縦軸はサンプル種を表し、横軸はＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化率（％）を表す。ほうじ茶を抽出したもので、コントロール（ＧＡＢＡ１０μＭのみ）以上のＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を示したのは、水出し２００倍希釈と水出し１００倍希釈であった。なお、いずれの場合もエタノールよりもＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能は低く、図５、図６で示したピラジンＡ、ピラジンＢ、ピラジンＣ、ゲラニオール、ヒドロキシフラノンのＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能よりは低かった。すなわち、本発明に係る抗不安化合物は、ほうじ茶に含まれているだけでは大きな効果を示すことはないが、単体で使用すると、抗不安作用が極めて大きいことがわかる。

【0039】

非特許文献２にも示されているように、カテキン類はＧＡＢＡ_Ａ受容体阻害物質として働く。表１は、ほうじ茶中の香気成分量を示し、表２はほうじ茶中の有機酸量を表し、表３は、ほうじ茶中のカテキン類の量を示している。ほうじ茶中には、ＧＡＢＡ_Ａ受容体阻害物質として働くカテキン類は、およそ１．５ｍＭ程度含まれている。一方、抗不安化合物であるピラジンＡ、Ｂ、Ｃ、ゲラニオール、ヒドロキシフラノン（いずれも香気成分）は、合わせても１０．２３μＭしか含まれていない。

【0040】

【表1】

【0041】

【表2】

【0042】

【表3】

【0043】

ほうじ茶の抽出液を希釈してＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化率（％）が増えるのは、ＧＡＢＡ_Ａ受容体阻害物質および抗不安化合物ともに希釈されるが、図５に示したように、抗不安化合物は非常にわずかであっても、効果があるためと考えられる。したがって、本発明に係る抗不安化合物は、カテキン類と共に使用しないことで、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を発揮することができると言える。

【0044】

＜ピログルタミン酸の効果＞
図８にはピログルタミン酸のＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化能の試験結果を示す。図８（ａ）は、ＧＡＢＡ単体の結果であり、図８（ｂ）は、ＧＡＢＡ単体に対するピログルタミン酸の比率を示している。横軸はいずれも濃度（μＭ）を示している。なお、この実験では、ピログルタミン酸を灌流する場合に、ＧＡＢＡは共存させていない。つまり、ピログルタミン酸は、単独でＧＡＢＡと同じ効果を有している。

【0045】

図８（ａ）よりＧＡＢＡのＥＣ５０は、６５．１μＭであり、図８(ｂ)よりピログルタミン酸のＥＣ５０は、１１６μＭであった。ピログルタミン酸のＥＣ５０はＧＡＢＡより高く、ＧＡＢＡ_Ａ受容体活性化能はＧＡＢＡより低かった。しかし、ピログルタミン酸は、それ自体がＧＡＢＡ_Ａ受容体のアゴニストとして働き、ＧＡＢＡの存否に係らず、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を活性化させることができる。

【0046】

つまり、ピログルタミン酸は、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を活性化するので、すでに説明したピラジンＡ、ピラジンＢ、ピラジンＣ、ゲラニオール、ヒドロキシフラノンといった抗不安化合物と共に使用することで、これらの化合物のＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を引き出すことができる。

【0047】

以上のように、抗不安化合物であるピラジンＡ、ピラジンＢ、ピラジンＣ、ゲラニオール、ヒドロキシフラノンは、ＧＡＢＡ若しくはピログルタミン酸との共存下でＧＡＢＡ_Ａ受容体活性能を有することが分かった。

【0048】

＜マウスによる抗不安効果の確認＞
次に実際の抗不安効果をマウスを用いて確認した。

【0049】

（マウス飼育方法）
９週齢のＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌＣｒｌｊ雄性マウス（日本チャールスリバー社）を購入後、動物飼育室で飼育順応させて高架式十字迷路試験を行った。マウスは４匹ずつ、ペーパーチップ床敷を敷いたポリカーボネート製ケージ（３０×２０×１５ｃｍ）に入れ、飼料と水道水を自由に摂取させて飼育した。飼料は、動物用固形飼料ＭＦ（オリエンタル酵母工業株式会社）を用いた。動物実験室内は、１２時間毎の明暗（明期：２０時より８時、暗期：８時より２０時）、室温２３℃及び湿度６０％に調節した。

【0050】

（高架式十字迷路試験装置）
実験に使用した高架式十字迷路は床上４０ｃｍにあり、直行する４本のアーム（６×３０ｃｍ）とそれらが交差する部分のプラットホーム（９×９ｃｍ）から構成されている。２本のオープンアーム（高さ２ｃｍのふち付き）には側壁がないが、２本のクローズアームは灰色不透明の側壁（高さ１０ｃｍ）付きでその他の床も灰色不透明になっている。

【0051】

（実験方法）
水は自由摂取させたが、コントロール、抗不安化合物、比較例のサンプル物質の投与前から高架式十字迷路試験終了まで、３～５時間マウスは絶食とした。各サンプル物質をマウスの体重に応じた量（７９ｍｇ／ｋｇ ＢＷ）だけ腹腔内投与した。なお、ほうじ茶水出し２倍希釈およびほうじ茶煮出し２倍希釈については、５ｍｌ／ｋｇ ＢＷの量を腹腔内投与した。投与してから１時間後にマウスを高架式十字迷路のプラットホーム部分に置き、頭をオープン方向に向けて試験を開始し、１０分間、オープンとクローズのそれぞれのアームへの侵入回数と滞在時間を観察し、記録した。プラットホームから四肢全部がアーム部分に出た場合を、アームへの移行として記録した。

【0052】

高架式十字迷路は側壁に囲まれたクローズアームと側壁がない開放されたオープンアームからなり、抗不安作用が増すことにより、マウスのオープンアームへの侵入回数と滞在時間が増加する。アームへの侵入回数合計（回）、各アームへの侵入回数の合計に対するオープンアーム侵入回数の割合（％）、各アームへの滞在時間の合計に対するオープンアーム滞在時間の割合（％）を以下に結果を示した。これらの割合が高いほど、抗不安作用が高いことを示す。

【0053】

表４には、リンゲル液（コントロール）、ピラジンＣ、ほうじ茶水出し２倍希釈、ほうじ茶煮出し２倍希釈の４種の比較の結果を示す。また、表５には、リンゲル液（コントロール）とピラジンＡの場合の結果も示す。

【0054】

ピラジンＣは、オープンアームへの侵入回数および滞在時間とも他のいずれの場合よりも高く、抗不安作用が増加しているのが確認された。また、ピラジンＡもオープンアームへの侵入回数はリンゲル液に対して有意に高く、抗不安作用が増加しているのが確認された。

【0055】

【表4】

【0056】

【表5】

【0057】

以上のように、本発明に係る抗不安化合物は、精神を安定させ、不安な気持ちを抑制することができる。

【産業上の利用可能性】

【0058】

本発明は、抗不安医薬組成物として好適に利用できるほか、サプリメントといった健康食品若しくは加工食品での利用が可能である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】