特許 7386877 新規の抗ＩＦＮＡＲ１抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-11-16

(45)【発行日】2023-11-27

(54)【発明の名称】新規の抗ＩＦＮＡＲ１抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20231117BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20231117BHJP

   C12N 5/16 20060101ALI20231117BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20231117BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 5/16 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231117BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20231117BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20231117BHJP

   C07K 14/715 20060101ALN20231117BHJP

   A61K 38/21 20060101ALN20231117BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/16

C12P21/08

A61K39/395 N

A61P31/18

A61P3/10

A61P1/04

A61P1/00

A61P11/00

A61P17/06

A61P5/14

A61P5/16

A61P13/12

A61P25/02

A61P21/04

A61P17/00

A61P37/02

A61P21/00

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P25/00

A61P37/06

G01N33/53 P

G01N33/53 N

C07K14/715

A61K38/21

【請求項の数】 36

(21)【出願番号】P 2021544443

(86)(22)【出願日】2020-01-23

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-05-10

(86)【国際出願番号】 CN2020073939

(87)【国際公開番号】W WO2020156474

(87)【国際公開日】2020-08-06

【審査請求日】2021-11-01

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2019/074263

(32)【優先日】2019-01-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【微生物の受託番号】CGMCC  CGMCC 16286

【微生物の受託番号】CGMCC  CGMCC 16287

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】521336093

【氏名又は名称】イミューンセント バイオテクノロジー，インコーポレイテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】521336107

【氏名又は名称】インスティテュート オブ バイオフィジックス，チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシズ

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(74)【代理人】

【識別番号】100204582

【弁理士】

【氏名又は名称】大栗 由美

(72)【発明者】

【氏名】リ，ジンギュン

(72)【発明者】

【氏名】イェ，ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】リウ，タオ

(72)【発明者】

【氏名】ザン，シュヤン

(72)【発明者】

【氏名】ザン，リゴ

(72)【発明者】

【氏名】ガオ，ガンシャ

【審査官】坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２００８／０１０２０７２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特開２００６－０８９４９４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００８－５０８８６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／０２３９７６（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＰｕｂＭｅｄ

Ｇｏｏｇｌｅ／Ｇｏｏｇｌｅ Ｓｃｈｏｌａｒ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗体またはその抗原結合断片であって、
ａ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；または
ｅ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３
を含み、ヒトインターフェロンアルファ受容体１（ヒトＩＦＮＡＲ１）に特異的に結合することができる、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、
ａ）ＨＦＲ１は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３３）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＸ_１０ＰＧＱＧＬＥＷＸ_１１Ｇ（配列番号３４）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＸ_１２ＴＸ_１３ＤＸ_１４ＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３５）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号３７）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ_１５ＡＰＫＬＬＩＸ_１６（配列番号３８）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
ｇ）ＬＦＲ３はＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＸ_１７ＤＸ_１８ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号３９）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、ならびに
ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４０）またはその少なくとも９０％配列同一性の相同配列を含み、
Ｘ_１０はＡまたはＲであり、Ｘ_１１はＭまたはＩであり、Ｘ_１２はＭまたはＬであり、Ｘ_１３はＲまたはＶであり、Ｘ_１４はＴまたはＫであり、Ｘ_１５はＫまたはＮであり、Ｘ_１６はＹまたはＳであり、Ｘ_１７はＴまたはＫであり、Ｘ_１８はＦまたはＹである、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

ＨＦＲ１が、配列番号３３の配列を含み、
ＨＦＲ２が、配列番号４１、４２および４３から選択される配列を含み、
ＨＦＲ３が、配列番号４４および４５から選択される配列を含み、
ＨＦＲ４が、配列番号３６の配列を含み、
ＬＦＲ１が、配列番号３７の配列を含み、
ＬＦＲ２が、配列番号４６、４７および４８から選択される配列を含み、
ＬＦＲ３が、配列番号４９および５０から選択される配列を含み、ならびに
ＬＦＲ４が、配列番号４０の配列を含む、
請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号７、９、６７、もしくは５１～５４の配列または配列番号７、９、６７、もしくは５１～５４と少なくとも９０％配列同一性を有するその相同配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む、請求項１～３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

配列番号８、１０、６８、もしくは５５～５８の配列または配列番号８、１０、６８、もしくは５５～５８と少なくとも９０％配列同一性を有するその相同配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、請求項１～４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

免疫グロブリン定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

ヒト免疫グロブリンの定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

ヒトＩｇＧの定常領域をさらに含む、請求項１～５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

ヒト化モノクローナル抗体である、請求項１～８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

ＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性を阻害しない、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

ＩＦＮα媒介またはＩＦＮω媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化に対するその阻害効果が、ＩＦＮβ媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化に対する阻害効果の少なくとも４、５、６、または７倍高い、請求項１または１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

１つまたは複数のコンジュゲート部分に連結されている、請求項１～１１のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

ａ）アミノ酸残基１２７～２２７またはｂ）アミノ酸残基２３１～３２９を欠くトランケート型ヒトＩＦＮＡＲ１には結合しない、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

ＩＧＨＶ１－６９遺伝子、ＩＧＨＤ２－４遺伝子、およびＩＧＨＪ４遺伝子から選択される１つもしくは複数のマウス生殖系列免疫グロブリン遺伝子の産物であるか、もしくはこれに由来する重鎖可変領域、ならびに／またはＩＧＫＶ１３－８４遺伝子およびＩＧＫＪ４遺伝子から選択される１つもしくは複数のマウス生殖系列免疫グロブリン遺伝子の産物であるか、もしくはこれに由来する軽鎖可変領域を含む、請求項１～１３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項15】

ヒト化されている、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項16】

ＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８６もしくはＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８７の寄託番号を有するハイブリドーマ細胞により産生される抗体またはその抗原結合断片。

【請求項17】

二重特異性である、請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項18】

請求項１～１７のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。

【請求項19】

請求項１８に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター。

【請求項20】

請求項１９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項21】

請求項１～１５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を産生することができる、請求項２０に記載の宿主細胞。

【請求項22】

ＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８６またはＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８７の寄託番号を有するハイブリドーマ細胞。

【請求項23】

請求項１９に記載の発現ベクターが発現される条件下で、請求項２０～２１のいずれかに記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項１～１５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を産生する方法。

【請求項24】

宿主細胞により産生された抗体またはその抗原結合断片を精製することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項26】

対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置するための医薬組成物であって、治療有効量の、請求項１～１６のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物。

【請求項27】

Ｉ型ＩＦＮがＩＦＮαおよび／またはＩＦＮωである、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項28】

疾患または状態が、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）および／またはＩ型ＩＦＮシグネチャー遺伝子を発現または過剰発現することを特徴とする、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項29】

疾患が、ＨＩＶ感染またはＡＩＤＳ、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫原発性甲状腺機能低下症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症を伴う破壊性甲状腺炎、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、レイノー症候群、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）、びらん性扁平苔癬、天疱瘡水疱症、表皮水疱症、接触性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎、多発性神経根炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、筋肉炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性硬化症、強皮症、多発性硬化症（ＭＳ）、特発性炎症性筋疾患（ＩＩＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ならびにエカルディグティエール症候群（ＡＧＳ）である、請求項２８に記載の医薬組成物。

【請求項30】

ＩＦＮβ媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化が阻害されない、請求項２６～２９のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項31】

治療有効量のＩＦＮβの投与と組み合わせて使用される、請求項２６～３０のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項32】

ＩＦＮαおよび／またはＩＦＮωを発現するまたは過剰発現する細胞の生理活性を阻害するインビトロの方法であって、細胞を請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法。

【請求項33】

試料中のヒトＩＦＮＡＲ１の存在またはレベルを検出する方法であって、試料を請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法。

【請求項34】

請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片および使用説明書を含む検出または治療キット。

【請求項35】

それを必要とする対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置するための薬物の製造における請求項１～１５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。

【請求項36】

請求項１～１６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片およびＩＦＮβを含む治療キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は全般的には新規な抗ＩＦＮＡＲ１抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ－Ｉ）は、抗ウイルス、免疫調節性および抗増殖活性を有するサイトカインの大きなファミリーを含む。ＩＦＮ－Ｉファミリーは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮε、ＩＦＮκおよびＩＦＮωを含む５つの密接な関係があるメンバーからなる。ＩＦＮβは、単球分化を阻害する、ウイルス複製を阻害する、およびヒト腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することなどにおいて、ＩＦＮαまたはＩＦＮωよりもはるかに大きな効力を示す（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｇ，ら、（２０１５）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３６：１３９～４９頁）。一方、ＩＦＮβはあるＩＦＮ－Ｉ関連疾患病態形成には最小の関与しかしておらず、これによりＩＦＮβはＩＦＮαおよびＩＦＮωとは区別される（Ｓｌａｖｉｋｏｖａ Ｍら、（２００３）Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ ２３：１４３～１４７頁、Ｈｕａ Ｊ，ら、（２００６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ５４：１９０６～１６頁）。

【0003】

すべてのＩＦＮ－Ｉは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２鎖からなるＩＦＮ－α受容体（ＩＦＮＡＲ）として知られるヘテロ二量体受容体を通じてシグナルを送る。ＩＦＮＡＲ１は、ＩＦＮＡＲ複合体の高親和性結合および差示的特異性に不可欠である（Ｃｕｔｒｏｎｅ ＥＣら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：１７１４０頁）。

【0004】

新規な抗ＩＦＮＡＲ１抗体の必要性が残っている。

【発明の概要】

【0005】

本開示全体を通じて、冠詞「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、冠詞の文法的対象の１つまたは１つよりも多い（すなわち、少なくとも１つ）をさすのに本明細書では使用される。例として、「１つ（ａｎ）の抗体」は１つの抗体または１つよりも多い抗体を意味する。

【0006】

本開示は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体（例えば、抗ヒトＩＦＮＡＲ１）またはその抗原結合断片、それをコードする単離されたポリヌクレオチド、それを含む医薬組成物、およびその使用を提供する。

【0007】

一態様では、本開示は、重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３、ならびに／または軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１は、ＳＸ_１ＷＸ_１９Ｎ（配列番号１）またはその少なくとも７５％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％）配列同一性の相同配列を含み、ＨＣＤＲ２は、ＫＩＤＰＳＤＳＥＸ_２Ｘ_２０Ｘ_２１ＮＱＫＦＸ_２２Ｄ（配列番号２）またはその少なくとも７５％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％）配列同一性の相同配列を含み、ＨＣＤＲ３は、ＧＧＸ_３ＩＸ_４Ｘ_５ＤＹＤＸ_６ＡＸ_７ＤＹ（配列番号３）またはその少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％）配列同一性の相同配列を含み、ＬＣＤＲ１は、ＫＸ_２３ＳＥＶＩＹＮＲＬＡ（配列番号４）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８４％）配列同一性の相同配列を含み、ＬＣＤＲ２は、ＧＡＴＸ_２４ＬＥＸ_２５（配列番号５）またはその少なくとも６５％配列同一性の相同配列を含み、ＬＣＤＲ３は、ＱＱＹＷＸ_８Ｘ_９ＰＦＴ（配列番号６）またはその少なくとも６５％（例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％）配列同一性の相同配列を含み、Ｘ_１はＹまたはＦであり、Ｘ_２はＴまたはＩであり、Ｘ_３はＲまたはＧであり、Ｘ_４はＳまたはＹであり、Ｘ_５はＦまたはＹであり、Ｘ_６はＡまたはＧであり、Ｘ_７はＬまたはＭであり、Ｘ_８はＮまたはＳであり、Ｘ_９はＫまたはＳであり、Ｘ_１９はＭまたはＬであり、Ｘ_２０はＨまたはＲであり、Ｘ_２１はＦまたはＹであり、Ｘ_２２はＲまたはＫであり、Ｘ_２３はＳまたはＡであり、Ｘ_２４はＴまたはＳであり、Ｘ_２５はＳまたはＴであり、抗体またはその抗原結合断片はＩＦＮＡＲ１、例えば、ヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる、抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0008】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に３、２、もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＣＤＲ１、配列番号２に６、５、４、３、２、もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＣＤＲ２、配列番号３に６、５、４、３、２、もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＣＤＲ３、配列番号４に２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＣＤＲ１、配列番号５に３、２、もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＣＤＲ２、および／または配列番号６に３、２、もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＣＤＲ３を含む。

【0009】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１および２５から選択される配列を含む重鎖ＨＣＤＲ１、配列番号２２および２６から選択される配列を含む重鎖ＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２３、２７および６５から選択される配列を含む重鎖ＨＣＤＲ３を含む。

【0010】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７０および７２から選択される配列を含む軽鎖ＬＣＤＲ１、配列番号７１および６６から選択される配列を含む軽鎖ＬＣＤＲ２、ならびに配列番号２４および２８から選択される配列を含む軽鎖ＬＣＤＲ３を含む。

【0011】

ある特定の実施形態では、重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、ａ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ３；ｂ）配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＨＣＤＲ３；ならびにｃ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３から選択される。

【0012】

ある特定の実施形態では、軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、ａ）配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；ｂ）配列番号７２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３；ならびにｃ）配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３から選択される。

【0013】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；ｂ）配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３；ｃ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；ｄ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２３の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３；またはｅ）配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。

【0014】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、ａ）ＨＦＲ１は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３３）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）配列同一性の相同配列を含み、ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＸ_１０ＰＧＱＧＬＥＷＸ_１１Ｇ（配列番号３４）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％）配列同一性の相同配列を含み、ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＶＴＸ_１２ＴＸ_１３ＤＸ_１４ＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３５）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％）配列同一性の相同配列を含み、ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％）配列同一性の相同配列を含み、ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号３７）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％）配列同一性の相同配列を含み、ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＸ_１５ＡＰＫＬＬＩＸ_１６（配列番号３８）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％）配列同一性の相同配列を含み、ｇ）ＬＦＲ３はＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＸ_１７ＤＸ_１８ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号３９）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％）配列同一性の相同配列を含み、ならびにｈ）ＬＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４０）またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％）配列同一性の相同配列を含み、Ｘ_１０はＡまたはＲであり、Ｘ_１１はＭまたはＩであり、Ｘ_１２はＭまたはＬであり、Ｘ_１３はＲまたはＶであり、Ｘ_１４はＴまたはＫであり、Ｘ_１５はＫまたはＮであり、Ｘ_１６はＹまたはＳであり、Ｘ_１７はＴまたはＫであり、Ｘ_１８はＦまたはＹである。

【0015】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３の配列に３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＦＲ１、配列番号３４の配列に３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＦＲ２、配列番号３５の配列に６、５、４、３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＦＲ３、配列番号３６の配列に４、３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＨＦＲ４、配列番号３７の配列に６、５、４、３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＦＲ１、配列番号３８の配列に４、３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＦＲ２、配列番号３９の配列に６、５、４、３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＦＲ３、および／または配列番号４０の配列に３、２もしくは１以下のアミノ酸置換を有するＬＦＲ４を含む。

【0016】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３の配列を含む重鎖ＨＦＲ１、配列番号４１、４２および４３から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ２、配列番号４４および４５から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ３、ならびに配列番号３６の配列を含む重鎖ＨＦＲ４をさらに含む。

【0017】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３７の配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、配列番号４６、４７および４８から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、配列番号４９および５０から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、ならびに配列番号４０の配列を含む軽鎖ＬＦＲ４をさらに含む。

【0018】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３３の配列を含むＨＦＲ１、配列番号４１の配列を含むＨＦＲ２、配列番号４４の配列を含むＨＦＲ３、および配列番号３６の配列を含むＨＦＲ４；ｂ）配列番号３３の配列を含むＨＦＲ１、配列番号４１の配列を含むＨＦＲ２、配列番号４５の配列を含むＨＦＲ３、および配列番号３６の配列を含むＨＦＲ４；ｃ）配列番号３３の配列を含むＨＦＲ１、配列番号４２の配列を含むＨＦＲ２、配列番号４５の配列を含むＨＦＲ３、および配列番号３６の配列を含むＨＦＲ４；ならびにｄ）配列番号３３の配列を含むＨＦＲ１、配列番号４３の配列を含むＨＦＲ２、配列番号４５の配列を含むＨＦＲ３、および配列番号３６の配列を含むＨＦＲ４から選択される重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４の組合せをさらに含む。

【0019】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３７の配列を含むＬＦＲ１、配列番号４６の配列を含むＬＦＲ２、配列番号４９の配列を含むＬＦＲ３、および配列番号４０の配列を含むＬＦＲ４；ｂ）配列番号３７の配列を含むＬＦＲ１、配列番号４６の配列を含むＬＦＲ２、配列番号５０の配列を含むＬＦＲ３、および配列番号４０の配列を含むＬＦＲ４；ｃ）配列番号３７の配列を含むＬＦＲ１、配列番号４７の配列を含むＬＦＲ２、配列番号５０の配列を含むＬＦＲ３、および配列番号４０の配列を含むＬＦＲ４；ならびにｄ）配列番号３７の配列を含むＬＦＲ１、配列番号４８の配列を含むＬＦＲ２、配列番号５０の配列を含むＬＦＲ３、および配列番号４０の配列を含むＬＦＲ４から選択される軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４の組合せをさらに含む。

【0020】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、９、６７、もしくは５１～５４の配列またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）配列同一性を有する相同配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。

【0021】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８、１０、６８、もしくは５５～５８の配列またはその少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）配列同一性を有する相同配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。

【0022】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域；ｂ）配列番号９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０の配列を含む軽鎖可変領域；ｃ）配列番号５１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５５の配列を含む軽鎖可変領域；ｄ）配列番号５２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５５の配列を含む軽鎖可変領域；ｅ）配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５５の配列を含む軽鎖可変領域；ｆ）配列番号５４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５５の配列を含む軽鎖可変領域；ｇ）配列番号５１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域；ｈ）配列番号５２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域；ｉ）配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域；ｊ）配列番号５４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域；ｋ）配列番号５１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５７の配列を含む軽鎖可変領域；ｌ）配列番号５２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５７の配列を含む軽鎖可変領域；ｍ）配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５７の配列を含む軽鎖可変領域；ｎ）配列番号５４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５７の配列を含む軽鎖可変領域；ｏ）配列番号５１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５８の配列を含む軽鎖可変領域；ｐ）配列番号５２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５８の配列を含む軽鎖可変領域；ｑ）配列番号５３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５８の配列を含む軽鎖可変領域；ｒ）配列番号５４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５８の配列を含む軽鎖可変領域；ｓ）配列番号６７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号５６の配列を含む軽鎖可変領域；ｔ）配列番号５２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６８の配列を含む軽鎖可変領域；またはｕ）配列番号６７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0023】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域、任意選択で、ヒト免疫グロブリンの定常領域、または任意選択で、ヒトＩｇＧの（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の）定常領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、定常領域は１つまたは複数の改変を含む。ある特定の実施形態では、改変はグリコシル化部位を導入するまたは取り除く。ある特定の実施形態では、改変は遊離のシステイン残基を導入する。ある特定の実施形態では、改変は、Ｆｃ媒介エフェクター機能、例えば、増加したもしくは低減した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、またはＦｃ受容体結合を変更する。

【0024】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、キメラ抗体またはその抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、その抗原結合断片は、ラクダ化単一ドメイン抗体、ダイアボディ、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ（二重特異性Ｆｖ）、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である。

【0025】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化を阻害する。

【0026】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮβ媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない。

【0027】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性を阻害しない。

【0028】

ある特定の実施形態では、ＩＦＮα媒介もしくはＩＦＮω媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化に対するまたは抗ウイルス活性に対する抗体またはその抗原結合断片の阻害効果は、ＩＦＮβ媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化または抗ウイルス活性に対する阻害効果の少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５倍である。

【0029】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、その天然の供給源から単離される。

【0030】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分（ｍｏｉｅｔｉｅｓ）に連結されている。

【0031】

別の態様では、本開示は、ヒトＩＦＮＡＲ１への結合を巡って本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片と競合する抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片はＩＦＮβ媒介ヒトＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない。

【0032】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合、８×１０^－８Ｍ以下（例えば、５×１０^－８Ｍ以下、２×１０^－８Ｍ以下、８×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、２×１０^－９Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、８×１０^－１０Ｍ以下、７×１０^－１０Ｍ以下、または６×１０^－１０Ｍ以下）のＫ_Ｄ値でヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる。

【0033】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＥＬＩＳＡにより測定した場合、０．１μｇ／ｍｌ以下（例えば、０．０９μｇ／ｍｌ以下、０．０８μｇ／ｍｌ以下、０．０７μｇ／ｍｌ以下、０．０６μｇ／ｍｌ以下、０．０５μｇ／ｍｌ以下、０．０４μｇ／ｍｌ以下、０．０３μｇ／ｍｌ以下、０．０２μｇ／ｍｌ以下、０．０１μｇ／ｍｌ以下、０．００９μｇ／ｍｌ以下、０．００８μｇ／ｍｌ以下、０．００７μｇ／ｍｌ以下、０．００６μｇ／ｍｌ以下、または０．００５μｇ／ｍｌ以下）のＥＣ_５０値でヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる。

【0034】

別の態様では、本開示は、ＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１２７～２２７内の第１の断片とＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基２３１～３２９内の第２の断片の両方に結合し、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒト／マウスキメラＩＦＮＡＲ１（すなわち、配列番号６９）に特異的に結合することができる。

【0035】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）アミノ酸残基１２７～２２７またはｂ）アミノ酸残基２３１～３２９を欠くトランケート型ヒトＩＦＮＡＲ１には結合しない。

【0036】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）アミノ酸残基３２～１２６、ｂ）アミノ酸残基３３１～４３２、またはａ）とｂ）の両方を欠くトランケート型ヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる。

【0037】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、完全長ヒトＩＦＮＡＲ１の結合能力に匹敵する結合能力でトランケート型ヒトＩＦＮＡＲ１に結合する。

【0038】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウスＩＧＨＶ１－６９遺伝子、マウスＩＧＨＤ２－４遺伝子、およびマウスＩＧＨＪ４遺伝子の産物であるもしくはこれに由来する重鎖可変領域、ならびに／またはマウスＩＧＫＶ１３－８４遺伝子およびマウスＩＧＫＪ４遺伝子の産物であるもしくはこれに由来する軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化されている。

【0039】

別の態様では、本開示は、ＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８６もしくはＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８７の寄託番号、またはその抗原結合断片を有するハイブリドーマ細胞により産生される抗体を提供する。

【0040】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は二重特異性である。

【0041】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１１および１３、ならびに配列番号１１または１３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１２および１４、ならびに配列番号１２または１４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、相同配列は、配列番号１１、１２、１３、または１４によりコードされるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列をコードする。

【0042】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。

【0043】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片を産生することができる。

【0044】

別の態様では、本開示は、ＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８６またはＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８７の寄託番号を有するハイブリドーマ細胞を提供する。

【0045】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、本明細書で提供される発現ベクターが発現される条件下で、本明細書で提供される宿主細胞を培養することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、宿主細胞により産生された抗体またはその抗原結合断片を精製することをさらに含む。

【0046】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0047】

別の態様では、本開示は、対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書で提供される医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮはＩＦＮαおよび／またはＩＦＮωである。ある特定の実施形態では、疾患または状態は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）および／またはＩ型ＩＦＮシグネチャー遺伝子を発現するまたは過剰発現することを特徴とする。ある特定の実施形態では、疾患は、ＨＩＶ感染またはＡＩＤＳ、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫原発性甲状腺機能低下症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症を伴う破壊性甲状腺炎、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、レイノー症候群、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）、びらん性扁平苔癬、天疱瘡水疱症（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｂｕｌｌｏｓａ）、表皮水疱症、接触性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎、多発性神経根炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、筋肉炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性硬化症、強皮症、多発性硬化症（ＭＳ）、特発性炎症性筋疾患（ＩＩＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ならびにエカルディグティエール症候群（ＡＧＳ）である。ある特定の実施形態では、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化は阻害されない。ある特定の実施形態では、方法は、治療有効量のＩＦＮβを投与することをさらに含む。

【0048】

別の態様では、本開示は、ＩＦＮαおよび／またはＩＦＮωを発現するまたは過剰発現する細胞の生物活性を阻害する方法であって、細胞を本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法を提供する。

【0049】

別の態様では、本開示は、試料中のヒトＩＦＮＡＲ１の存在またはレベルを検出する方法であって、試料を本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法を提供する。

【0050】

別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片および使用説明書を含む検出または治療キットを提供する。

【0051】

別の態様では、本開示は、それを必要とする対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置するための薬物の製造における本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1A】図１Ａは、ヒトＩＦＮＡＲ１への抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合を示している。図１Ａは、２９３Ｔ細胞表面に過剰発現されたヒトＩＦＮＡＲ１への７Ｇ４および１０Ｃ５結合の模式的フローサイトメトリー図である（「アイソタイプ」はＩＦＮＡＲ１に結合しないアイソタイプ対照抗体を意味し、「７Ｇ４」は７Ｇ４抗体を意味し、「１０Ｃ５」は１０Ｃ５抗体を意味する）。Ｙ軸は緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の強度であり、ヒトＩＦＮＡＲ１発現を表し、Ｘ軸はフィコエリトリン（ＰＥ）の強度であり、ヒトＩＦＮＡＲ１へのモノクローナル抗体の結合を示している。

【図1B】図１Ｂは、ヒトＩＦＮＡＲ１への抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合を示している。図１Ｂは、図１ＡでのＸ軸上のＧＦＰ陽性細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の統計結果である。

【図2A】図２Ａは、ヒトＩＦＮＡＲ１の異なる切詰型への抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合を示している。図２Ａは、ヒトＩＦＮＡＲ１の切詰型の模式図、および７Ｇ４および１０Ｃ５結合結果の要約である。「＋」は抗体が切詰型に結合することを示し；「－」は抗体が切詰型に結合しないことを示す。

【図2B】図２Ｂは、ヒトＩＦＮＡＲ１の異なる切詰型への抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合を示している。図２Ｂは、ＰＥ陽性細胞の割合の統計棒グラフであり、７Ｇ４および１０Ｃ５は、ヒトＩＦＮＡＲ１の異なる切詰型を過剰発現している２９３Ｔ細胞に結合する。

【図3】図３は、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が、フローサイトメトリーにより測定した場合、ＩＦＮα２ｂ（図３Ａ）、１２ＩＦＮαサブタイプ（図３Ｂ）、およびＩＦＮω（図３Ｃ）により媒介されるヒトＩＦＮＡＲ１の活性化を遮断したが、ＩＦＮβ（図３Ｄ）により媒介されるヒトＩＦＮＡＲ１活性化を遮断しなかったことを示している。「１０Ｃ２」は国際公開第２０１８／０１０１４０号に開示されている抗体１０Ｃ２を意味する。

【図4】図４は、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が、ＩＦＮα媒介ウイルス複製阻害を遮断したがＩＦＮβ媒介ウイルス複製阻害には影響を及ぼさなかったことを示している。図４Ａおよび図４Ｂは、シンドビスウイルス（ＳＩＮＶ）についての結果を表す。図４Ｃおよび図４Ｄは、インフルエンザウイルス（Ｆｌｕ）についての結果を表す。図４Ｅおよび図４Ｆは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）についての結果を表す。「^＊」は、アイソタイプ対照と比較した場合の、ｐ＜０．０５を示し、「^＊＊」はｐ＜０．０１を示し、および「ｎｓ」は有意差なしを表す。

【図5】図５は、ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が、ＳＬＥ患者の血清においてＩＦＮ－Ｉにより媒介されるヒトＩＦＮＡＲ１活性化を遮断したことを示している。「^＊」はｐ＜０．０５を表し、「^＊＊」はｐ＜０．０１を表し、および「ｎｓ」は有意差なしを表す。

【図6】図６は、抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１１）およびアミノ酸配列（配列番号７）を示している。陰影は、それぞれ重鎖のＣＤＲ１（配列番号２１）、ＣＤＲ２（配列番号２２）およびＣＤＲ３（配列番号２３）の配列を示している。

【図7】図７は、ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１２）およびアミノ酸配列（配列番号８）を示している。陰影は、それぞれ軽鎖のＣＤＲ１（配列番号７０）、ＣＤＲ２（配列番号７１）およびＣＤＲ３（配列番号２４）の配列を示している。

【図8】図８は、抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体１０Ｃ５の重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１３）およびアミノ酸配列（配列番号９）を示している。陰影は、それぞれ重鎖のＣＤＲ１（配列番号２５）、ＣＤＲ２（配列番号２６）およびＣＤＲ３（配列番号２７）の配列を示している。

【図9】図９は、抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体１０Ｃ５の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１４）およびアミノ酸配列（配列番号１０）を示している。陰影は、それぞれ軽鎖のＣＤＲ１（配列番号７２）、ＣＤＲ２（配列番号６６）およびＣＤＲ３（配列番号２８）の配列を示している。

【図10】図１０は、抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４（配列番号７）および１０Ｃ５（配列番号９）の重鎖可変領域のアミノ酸配列と、マウスＶ領域（配列番号１５）の最初のＶＤＪ遺伝子によりコードされるアミノ酸配列のアライメント結果を示している。マウス種の重鎖可変領域のコンセンサス配列もアライメントに示されている。

【図11】図１１は、抗ヒトＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４（配列番号８）および１０Ｃ５（配列番号１０）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と、マウスＶ領域（配列番号１６）の最初のＶＪ遺伝子によりコードされるアミノ酸配列のアライメント結果を示している。マウス種の軽鎖可変領域のコンセンサス配列もアライメントに示されている。

【図12】図１２は、ヒト化７Ｇ４バリアント（すなわち、Ｈｕ４－６、Ｈｕ４－１３～Ｈｕ４－１６）のＥＬＩＳＡ結合アッセイの結果を示している。

【図13】図１３は、ＩＦＮα（図１３Ａ）により媒介されるがＩＦＮβ（図１３Ｂ）により媒介されないヒトＩＦＮＡＲ１活性化に対するＨｕ７Ｇ４バリアント（すなわち、Ｈｕ４－５～Ｈｕ４－１６）の遮断活性を示している。横軸は、試験抗体またはＭｏｃｋまたはアイソタイプの対照を示している。「５」はＨｕ４－５を意味する、その他。

【図14】図１４Ａ～図１４Ｄは、フローサイトメトリーにより測定した場合、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が、既存の抗体１０Ｃ２および１０Ｃ９が結合する部位とは異なる部位でヒトＩＦＮＡＲ１に結合することを示している。ＩＦＮＡＲ１－ＷＴ：野生型ヒトＩＦＮＡＲ１；ＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４：アミノ酸残基１４９～２１４がマウスＩＦＮＡＲ１ホモグラフィック配列により置き換えられたヒトＩＦＮＡＲ１。ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１４９～２１４は、抗体１０Ｃ２および１０Ｃ９の結合に必要である（図１４Ａおよび１４Ｂ）が、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合に異なる役割を果たしていることが明らかにされており、したがって、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５と抗体１０Ｃ２および１０Ｃ９を区別する。

【図15A】図１５Ａは、１つ、２つまたは３つの突然変異を有するヒト化７Ｇ４抗体がそれでもヒトＩＦＮＡＲ１への類似する結合特性を見せたことを示している。図１５Ａは、ヒトＩＦＮＡＲ１への類似する結合効率を有する２つの７Ｇ４ヒト化抗体Ｈｕ４－６およびＨｕ４－１３を示している。

【図15B】図１５Ｂは、１つ、２つまたは３つの突然変異を有するヒト化７Ｇ４抗体がそれでもヒトＩＦＮＡＲ１への類似する結合特性を見せたことを示している。図１５Ｂは、Ｈｕ４－６変異体の３つ全てが類似する結合効率でヒトＩＦＮＡＲ１に結合することを示している。Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－１：ＶＨにおいてＡ１０８Ｇ；Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－２：ＶＬにおいてＴ５３ＳおよびＳ５６Ｔ；Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－３：ＶＨにおいてＡ１０８ＧならびにＶＬにおいてＴ５３ＳおよびＳ５６Ｔ。

【図16】図１６は、本明細書で言及される配列番号１～配列番号７２の配列を示している。

【発明を実施するための形態】

【0053】

本開示の以下の説明は、本開示の種々の実施形態を例示することだけが意図されている。したがって、考察されている特定の改変は、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本開示の範囲から逸脱することなく種々の均等物、変更、および改変を加えうることは当業者には明らかになり、そのような均等な実施形態が本明細書に含まれることになると理解される。刊行物、特許および特許出願を含む、本明細書に引用されるすべての参考文献は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。

【0054】

定義
本明細書で使用される用語「抗体」は、特定の抗原に結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、多重特異性抗体、または二重特異性抗体を含む。天然の無傷の抗体は、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物重鎖は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューに分類され、それぞれの重鎖は可変領域（Ｖ_Ｈ）ならびに第１の、第２の、第３の、および任意選択で第４の定常領域（ぞれぞれＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、Ｃ_Ｈ４）からなり；哺乳動物軽鎖はλまたはκに分類され、それぞれの軽鎖は可変領域（Ｖ_Ｌ）および定常領域からなる。抗体は「Ｙ」形を有し、Ｙの茎はジスルフィド結合を経て結び付けられた２本の重鎖の第２と第３の定常領域からなる。Ｙのそれぞれのアームは１本の軽鎖の可変および定常領域に結合した１本の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽および重鎖の可変領域は抗原結合を担当している。両方の鎖の可変領域は一般に３つの高度に可変なループを含有し相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる（軽鎖ＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む）。本明細書で開示される抗体と抗原結合断片についてのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習により定義されるまたは同定されてもよい（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３（４）、９２７頁（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１～６３頁（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．およびＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１頁（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７～８３頁（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２７：５５～７７頁（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１（３）、（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（第２版）、ｃｈａｐｔｅｒ ２６、４８１～５１４頁（２０１５））。３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られる隣接するストレッチの間に挿入されており、フレームワーク領域はＣＤＲよりも高度に保存されており高頻度可変ループを支える足場を形成する。重および軽鎖の定常領域は抗原結合に関与していないが、種々のエフェクター機能を見せる。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、これらのクラスはそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミュー重鎖の存在を特徴とする。主要な抗体クラスのうちのいくつかは、ＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、ＩｇＡ２（アルファ２重鎖）などのサブクラスに分割される。

【0055】

本明細書で使用される用語「二価」とは、２つの抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片のことであり、用語「一価」とは、単一の抗原結合部位のみを有する抗体または抗原結合断片のことであり、用語「多価」とは、複数の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片のことである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は二価である。

【0056】

本明細書で使用される場合、「二重特異性」抗体とは、２つの異なるモノクローナル抗体由来の断片を有し、２つの異なるエピトープに結合することができる人工抗体のことである。２つのエピトープは同じ抗原上に存在していてもよく、または２つの異なる抗原上に存在していてもよい。

【0057】

本明細書で使用される用語「抗原結合断片」とは、１つもしくは複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される抗体断片、または抗原に結合するが無傷の天然の抗体構造を含まない任意の他の抗体断片のことである。抗原結合断片の例は、限定せずに、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、および二価ドメイン抗体を含む。抗原結合断片は、親抗体が結合する同じ抗原に結合することができる。

【0058】

抗体に関して「Ｆａｂ」とは、抗体のうち、ジスルフィド結合により単一重鎖の可変領域と第１の定常領域に結合している単一軽鎖（可変と定常領域の両方）からなる部分のことである。

【0059】

「Ｆａｂ’」とは、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂ断片のことである。

【0060】

「Ｆ（ａｂ’）_２」とは、Ｆａｂ’のダイマーのことである。抗体に関して「Ｆｖ」とは、抗体のうち完全な抗原結合部位を保有する最小の断片のことである。Ｆｖ断片は、単一重鎖の可変領域に結合している単一軽鎖の可変領域からなる。

【0061】

「ｄｓＦｖ」とは、単一軽鎖の可変領域と単一重鎖の可変領域の間の連鎖がジスルフィド結合であるジスルフィド安定化Ｆｖ断片のことである。一部の実施形態では、「（ｄｓＦｖ）_２」または「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は３つのペプチド鎖を含み：２つのＶ_Ｈ部分がペプチドリンカー（例えば、長い柔軟なリンカー）により連結され、ジスルフィド架橋を経てそれぞれ２つのＶ_Ｌ部分に結合されている。一部の実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、それぞれのジスルフィド対合した重と軽鎖が異なる抗原特異性を有する二重特異性である。

【0062】

「一本鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」とは、互いに直接またはペプチドリンカー配列を経て接続された軽鎖可変領域と重鎖可変領域からなる操作された抗体のことである（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８５：５８７９頁（１９８８））。

【0063】

抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＤアイソタイプ）に関する「Ｆｃ」とは、抗体のうち、ジスルフィド結合を経て第２の重鎖の第２および第３の定常ドメインに結合している第１の重鎖の第２および第３の定常ドメインからなる部分のことである。ＩｇＭおよびＩｇＥアイソタイプという抗体に関するＦｃは、第４の定常ドメインをさらに含む。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの種々のエフェクター機能を担当するが、抗原結合には機能しない。

【0064】

「一本鎖Ｆｖ－Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」とは、抗体のＦｃ領域に接続されたｓｃＦｖからなる操作された抗体のことである。

【0065】

「ラクダ化単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、または「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶ_Ｈドメインを含有し軽鎖は含まない抗体のことである（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．およびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１２月１０日；２３１（１－２）：２５～３８頁（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．、Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６月；７４（４）：２７７～３０２頁（２００１）；国際公開第９４／０４６７８号；国際公開第９４／２５５９１号；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体ははじめラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびラマ）に由来していた。軽鎖を欠くが、ラクダ化抗体は信頼できる抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ．６月 ３；３６３（６４２８）：４４６～８頁（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．４月；５４（１）：３９～４７頁（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．５月；１０９（１）：９３～１０１頁（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答により生み出される知られる中で最も小さな抗原結合単位を表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．１１月；２１（１３）：３４９０～８頁．Ｅｐｕｂ ２００７年 ６月１５日（２００７））。

【0066】

「ナノボディ」とは、重鎖抗体由来のＶＨＨドメインならびに２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片のことである。

【0067】

「ダイアボディ」または「ｄＡｂ」は２つの抗原結合部位のある小抗体断片を含み、断片は同じポリペプチド鎖でＶ_Ｌドメインに接続されたＶ_Ｈドメインを含む（Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．７月１５日；９０（１４）：６４４４～８頁（１９９３）；欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号参照）。同じ鎖上の２つのドメイン間で対合させるには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインを別の鎖の相補的なドメインと対合させ、それによって２つの抗原結合部位を作り出す。抗原結合部位は同じまたは異なる抗原（またはエピトープ）を標的にしてもよい。ある特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓダイアボディ」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的にするダイアボディである。ある特定の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、１つの部分のＶ_Ｈがもう一方の部分のＶ_Ｌと連携して、同じ抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的にすることができる２つの結合部位を形成するように、別のＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ部分と二量体化したＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ（ペプチドリンカーにより連結されている）を含む二価ダイアボディまたは二価ＳｃＦｖ（ＢｓＦｖ）である。他の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、Ｖ_Ｈ１とＶ_Ｌ１が連携しＶ_Ｈ２とＶ_Ｌ２が連携し、それぞれの連携した対が異なる抗原特異性を有するように、Ｖ_Ｌ１－Ｖ_Ｈ２（これもペプチドリンカーにより連結されている）と会合しているＶ_Ｈ１－Ｖ_Ｌ２（ペプチドリンカーにより連結されている）を含む二重特異性ダイアボディである。

【0068】

「ドメイン抗体」とは、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片のことである。ある特定の例では、２つまたはそれよりも多いＶ_Ｈドメインが、ペプチドリンカーと共有結合して二価または多価ドメイン抗体を作り出す。二価ドメイン抗体の２つのＶ_Ｈドメインは同じまたは異なる抗原を標的にしてもよい。

【0069】

本明細書で使用される用語「キメラ」とは、１つの種に由来する重および／または軽鎖の一部、ならびに異なる種に由来する重および／または軽鎖の残りを有する抗体または抗原結合断片を意味する。実例では、キメラ抗体は、ヒト由来の定常領域およびマウスなどの非ヒト動物由来の可変領域を含む場合がある。一部の実施形態では、非ヒト動物は哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターである。

【0070】

本明細書で使用される用語「ヒト化」とは、抗体または抗原結合断片が、非ヒト動物由来のＣＤＲ、ヒト由来のＦＲ領域、および適用できる場合、ヒト由来の定常領域を含むことを意味する。

【0071】

本明細書で使用される「ＩＦＮＡＲ１」とは、霊長類（例えば、ヒト、サル）などの哺乳動物由来のインターフェロンアルファ受容体１のことである。ある特定の実施形態では、ＩＦＮＡＲ１はヒトＩＦＮＡＲ１である。ヒトＩＦＮＡＲ１の例示的配列は、ヒトＩＦＮＡＲ１タンパク質（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿０００６２０．２）を含む。ＩＦＮＡＲ１の例示的配列は、アカゲザル（リーサスザル）ＩＦＮＡＲ１タンパク質（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿００１２５３４４２．１）、カニクイザルＩＦＮＡＲ１タンパク質（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ Ｎｏ．ＸＰ＿００５５４８８６６．２、またはＮｏ．ＸＰ＿０１５３０２３８５．１、またはＮｏ．ＸＰ＿００５５４８８６４．１、またはＮｏ．ＸＰ＿００５５４８８６５．１）を含む。

【0072】

ＩＦＮＡＲ１は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ－Ｉ）がそれを通してシグナル伝達する２つの膜貫通タンパク質のうちの１つである。ＩＦＮ－ＩによるＩＦＮＡＲ１の活性化は、抗ウイルス活性、ならびに、抗菌、抗原虫、免疫調節、抗増殖活性および細胞成長調節機能をもたらすことが知られている。

【0073】

ＩＦＮ－Ｉは、多種多様な細胞型に対して多面的効果を有する構造的に関連するサイトカインの大きなファミリーである。ある特定の実施形態では、ＩＦＮ－ＩはヒトＩＦＮ－Ｉである。ＩＦＮ－Ｉファミリーは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮε、ＩＦＮκおよびＩＦＮωを含む５つの密接な関係のあるメンバーからなる。ＩＦＮαは、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７およびＩＦＮＡ２１を含む全部で１３のサブタイプを有し、ＩＦＮＡ１とＩＦＮＡ１３は同一のアミノ酸配列を有する。本明細書で使用される「ＩＦＮα」はＩＦＮαのすべてのサブタイプを包含する。

【0074】

「ＩＦＮω」は、少なくとも５つの偽遺伝子およびＩＦＮα遺伝子に７０％相同性を見せる１つの機能的遺伝子によりコードされるもう１つのＩＦＮ－Ｉである。

【0075】

「ＩＦＮβ」は、ＩＦＮα遺伝子におおよそ５０％相同性を有する単一コピー遺伝子によりコードされる。ＩＦＮβは、ＩＦＮαまたはＩＦＮωと比べると細胞表面受容体に対してかなり高い総体的（ｉｎｔｅｇｒａｌ）親和性を有する。したがって、ＩＦＮβはＩＦＮＡＲ１にＩＦＮＡＲ２非依存性で結合するが、ＩＦＮαもＩＦＮωもＩＦＮＡＲ１に結合せず、ＩＦＮＡＲ１－ＩＦＮβ複合体はもっと効率的な方法でシグナルを伝達する。ＩＦＮβは、単球分化を阻害する、ウイルス複製を阻害する、およびヒト腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することなどにおいてＩＦＮαまたはＩＦＮωよりはるかに大きな効力を見せる。

【0076】

用語「抗ＩＦＮＡＲ１抗体」とは、ＩＦＮＡＲ１（例えば、ヒトまたはサルＩＦＮＡＲ１）に特異的に結合することができる抗体のことである。用語「抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体」とは、ヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる抗体のことである。

【0077】

本明細書で使用される用語「特異的な結合」または「特異的に結合する」とは、例えば、抗体と抗原の間などの、２つの分子間の非ランダム結合反応のことである。特異的な結合は、例えば、Ｋ_Ｄ値、すなわち、抗原と抗原結合分子の間の結合が平衡に到達するときの解離速度の会合速度に対する比率（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）により表される結合親和性で特徴付けることができる。Ｋ_Ｄは、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケール熱泳動法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法およびフローサイトメトリー（ＦＡＣＳなどの）法を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の任意の従来法を使用することにより決定してもよい。≦１０^－６Ｍ（例えば、≦５×１０^－７Ｍ、≦２×１０^－７Ｍ、≦１０^－７Ｍ、≦５×１０^－８Ｍ、≦２×１０^－８Ｍ、≦１０^－８Ｍ、≦５×１０^－９Ｍ、≦４×１０^－９Ｍ、≦３×１０^－９Ｍ、≦３×１０^－９Ｍ、または≦１０^－９Ｍ）のＫ_Ｄ値は、抗体またはその抗原結合断片とＩＦＮＡＲ１（例えば、ヒトＩＦＮＡＲ１）の間の特異的結合を示すことができる。

【0078】

本明細書で使用される「同じエピトープを巡って競合する」能力とは、２つの分子（例えば、ヒトＩＦＮＡＲ１と抗ＩＦＮＡＲ１抗体）間の結合相互作用を検出可能な程度に阻害する抗体またはその抗原結合断片の能力のことである。ある特定の実施形態では、２つの分子間の結合を遮断する抗体またはその抗原結合断片は、２つの分子間の結合相互作用を少なくとも８５％、または少なくとも９０％阻害する。ある特定の実施形態では、この阻害は、９５％よりも大きい、または９９％よりも大きくてもよい。

【0079】

本明細書で使用される用語「エピトープ」とは、抗体が結合する抗原上の特定の原子団またはアミノ酸のことである。２つの抗体は、抗原を巡って競合的結合を見せる場合、抗原内の同じまたは密接な関係のあるエピトープに結合してもよい。エピトープは、線形または立体構造（すなわち、間隔が開けられたアミノ酸残基を含む）であることが可能である。例えば、抗体または抗原結合断片が、抗原への参照抗体の結合を少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％遮断する場合、抗体または抗原結合断片は、参照抗体と同じ／密接な関係のあるエピトープに結合すると見なされてもよい。

【0080】

当業者であれば、必要以上の実験をせずに、所与の抗体が本開示の抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５、ならびにヒト化抗体Ｈｕ４－１、Ｈｕ４－２、Ｈｕ４－３、Ｈｕ４－４、Ｈｕ４－５、Ｈｕ４－６、Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－１、Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－２、Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－３、Ｈｕ４－７、Ｈｕ４－８、Ｈｕ４－９、Ｈｕ４－１０、Ｈｕ４－１１、Ｈｕ４－１２、Ｈｕ４－１３、Ｈｕ４－１４、Ｈｕ４－１５、Ｈｕ４－１６）と同じまたは密接な関係のあるエピトープに結合するかどうかを、後者がＩＦＮＡＲ１抗原ポリペプチドに結合するのを前者が妨げるかどうかを確かめることにより判定できることを認識する。ＩＦＮＡＲ１抗原ポリペプチドへの本開示の抗体による結合の減少により示されるように、所与の抗体が本開示の抗体と競合する場合、２つの抗体は同じまたは密接な関係のあるエピトープに結合する。または、ＩＦＮＡＲ１抗原ポリペプチドへの所与の抗体の結合が本開示の抗体により阻害された場合、２つの抗体は同じもしくは密接な関係のあるエピトープに結合する。

【0081】

アミノ酸配列に関する「保存的置換」とは、アミノ酸残基を類似の物理化学的特性のある側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置き換えることである。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）を有するアミノ酸残基の間で、中性の親水性側鎖（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）を有する残基の間で、酸性の側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）を有する残基の間で、塩基性の側鎖（例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）を有するアミノ酸の間で、または芳香族側鎖（例えば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）を有する残基の間で行うことができる。当技術分野では公知であるように、保存的置換は、通常、タンパク質立体構造に著しい変化を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を保持することができると考えられる。

【0082】

本明細書で使用される用語「相同性の」とは、最適に整列された場合、別の配列と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補鎖）またはアミノ酸配列のことである。

【0083】

アミノ酸配列（または核酸配列）に関する「パーセント（％）配列同一性」は、配列を整列させ、必要な場合には、最大数の同一アミノ酸（または核酸）を達成するためにギャップを導入した後、参照配列中のアミノ酸（または核酸）残基と同一である候補配列中のアミノ酸（または核酸）残基の百分率と定義される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と見なしてもよいし見なさなくてもよい。パーセントアミノ酸（または核酸）配列同一性を決定するための整列は、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（ａｖａｉｌａｂｌｅ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｂｓｉｔｅ ｏｆ Ｕ．Ｓ． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３～４１０頁（１９９０）も参照；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９～３４０２頁（１９９７））、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（ａｖａｉｌａｂｌｅ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｂｓｉｔｅ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２６６：３８３～４０２頁（１９９６）も参照；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ， Ｅｎｇｌａｎｄ）、２３（２１）：２９４７～８頁（２００７））、およびＡＬＩＧＮ ｏｒ Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公表されているツールを使用して達成することができる。当業者であれば、ツールにより提供されるデフォルトパラメータを使用してもよく、または、例えば、適切なアルゴリズムを選択することによりなどの、パラメータを整列に適するようにカスタマイズしてもよい。

【0084】

本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、Ｃ１複合体およびＦｃ受容体などのそのエフェクターへの抗体のＦｃ領域の結合に帰せられる生物活性のことである。例示的エフェクター機能は、抗体とＣ１複合体上のＣ１ｑの相互作用により媒介される補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；エフェクター細胞上のＦｃ受容体への抗体のＦｃ領域の結合により媒介される抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；および食作用を含む。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイ、および細胞溶解アッセイなどの種々のアッセイを使用して評価することができる。

【0085】

「単離された」物質は、天然の状態から人の手により変更されている。「単離された」組成物または物質が天然に存在する場合には、その組成物または物質は、変更されたもしくはその元の環境から取り除かれた、またはその両方である。例えば、生存動物に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いないが、実質的に純粋な状態で存在するように、その天然の状態の共存している物質から十分に分離されている場合には、同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いる。「単離された核酸配列」とは、単離された核酸分子の配列のことである。ある特定の実施形態では、「単離された抗体またはその抗原結合断片」とは、電気泳動的方法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動などの）、またはクロマトグラフ法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣなどの）により決定された場合、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体またはその抗原結合断片のことである。

【0086】

本明細書で使用される用語「ベクター」とは、遺伝要素によりコードされたタンパク質、ＲＮＡもしくはＤＮＡを作製するため、または遺伝要素を複製するためなどの、その遺伝要素の発現を引き起こすように、遺伝要素が作動可能に挿入されている媒体のことである。ベクターを使用して、宿主細胞内でベクターが保有する遺伝要素の発現を引き起こすように宿主細胞を形質転換する、形質導入する、またはトランスフェクトしてもよい。ベクターの例は、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスを含む。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能エレメント、およびリポーター遺伝子を含む発現を制御するための種々のエレメントを含有していてもよい。さらに、ベクターは複製起点を含有していてもよい。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパク質コーティングを含むがこれらに限定されない細胞内への進入を支援する物質を含んでいてもよい。ベクターは、発現ベクターまたはクローニングベクターが可能である。本開示は、抗体またはその抗原結合断片をコードする本明細書で提供される核酸配列、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーを含有するベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。

【0087】

本明細書で使用される語句「宿主細胞」とは、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターを導入することができるまたは導入されている細胞のことである。

【0088】

本明細書で使用される状態を「処置する」またはこれの「処置」は、状態を予防するもしくは軽減する、状態の発病または発生速度を遅くする、状態を発症するリスクを低減する、状態に関連する症状の発症を予防するもしくは遅らせる、状態に関連する症状を低減するもしくは終わらせる、状態の完全なもしくは部分的後退を生じる、状態を治癒する、またはこれらのある組合せを含む。

【0089】

本明細書で使用される「Ｉ型ＩＦＮ関連」疾患または状態とは、Ｉ型ＩＦＮの増加したまたは減少した発現または活性により引き起こされる、悪化される、または他の点で関連している任意の疾患または状態のことである。一部の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態は、例えば、自己免疫疾患などの免疫関連障害である。ある特定の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ－Ｉ）および／またはＩ型ＩＦＮシグネチャー遺伝子を発現するまたは過剰発現することで特徴付けられる。

【0090】

用語「薬学的に許容される」とは、指定された担体、媒体、希釈剤、賦形剤（複数可）、および／または塩が、製剤を構成するその他の成分と一般に化学的におよび／または物理的に適合性であり、そのレシピエントと生理的に適合性であることを示している。

【0091】

抗ＩＦＮＡＲ１抗体
本開示は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片を提供する。本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる。

【0092】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその断片は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる８×１０^－８Ｍ以下、５×１０^－８Ｍ以下、２×１０^－８Ｍ以下、８×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、２×１０^－９Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、８×１０^－１０Ｍ以下、７×１０^－１０Ｍ以下、または６×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄ値でヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合する。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイは表面プラズモン共鳴技術に基づいており、例えば、Ｍｕｒｐｈｙ、Ｍ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃｈａｐｔｅｒ １９、ｕｎｉｔ １９．１４、２００６年を参照されたい。

【0093】

ヒトＩＦＮＡＲ１への抗体の結合は、「半数効果濃度」（ＥＣ_５０）値によっても表すことができ、これはその最大結合の５０％が観察される抗体の濃度のことである。ＥＣ_５０値は、当技術分野で公知の結合アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのサンドイッチアッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、および他の結合アッセイにより測定することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその断片は、ＥＬＩＳＡによる、０．１μｇ／ｍｌ以下、０．０９μｇ／ｍｌ以下、０．０８μｇ／ｍｌ以下、０．０７μｇ／ｍｌ以下、０．０６μｇ／ｍｌ以下、０．０５μｇ／ｍｌ以下、０．０４μｇ／ｍｌ以下、０．０３μｇ／ｍｌ以下、０．０２μｇ／ｍｌ以下、０．０１μｇ／ｍｌ以下、０．００９μｇ／ｍｌ以下、０．００８μｇ／ｍｌ以下、０．００７μｇ／ｍｌ以下、０．００６μｇ／ｍｌ以下、または０．００５μｇ／ｍｌ以下のＥＣ_５０（５０％結合濃度）でヒトＩＦＮＡＲ１に特異的に結合する。

【0094】

本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、ヒトＩＦＮＡＲ１に、ＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１２７～２２７内の第１の断片とＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基２３１～３２９内の第２の断片の両方を包含するエピトープで結合する。

【0095】

非プロセス型のヒトＩＦＮＡＲ１発現産物は、４０９残基の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、２１残基の膜貫通ドメイン、および１００残基の細胞内ドメインを含む５５７アミノ酸で構成されている。ＩＦＮＡＲ１のＥＣＤは、２つのドメイン、ドメイン１とドメイン２で構成されており、これらのドメインは３プロリンモチーフで分離されている。それぞれのドメインはおおよそ２００残基で構成されており、おおよそ１００アミノ酸の２つの相同なサブドメインにさらに細分することができる。したがって、ＩＦＮＡＲ１のＥＣＤは、４つのサブドメイン：サブドメイン１（野生型ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基３２～１２６、すなわち、配列番号１７にまたがっている）、サブドメイン２（すなわち、野生型ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１２７～２２７、すなわち、配列番号１８）、サブドメイン３（野生型ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基２３１～３２９、すなわち、配列番号１９）、およびサブドメイン４（野生型ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基３３１～４３２、すなわち、配列番号２０）に分割することができる。

【0096】

ＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１２７～２２７（サブドメイン２）内の第１の断片は、抗体結合のためのエピトープの部分を構成するのに十分ないかなる適切な長さ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、２５、４０、５０、６０、７０、８０、または９０アミノ酸残基）であってもよく、ＩＦＮＡＲ１のサブドメイン２内のいかなる適切な位置（例えば、アミノ酸残基１２７もしくは２２７の近くに、またはアミノ酸残基１２７と２２７の間のどこか）であってもよい。

【0097】

同様に、ＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基２３１～３２９（サブドメイン３）内の第２の断片は、抗体結合のためのエピトープの部分を構成するのに十分ないかなる適切な長さ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、２５、または４０アミノ酸残基）であってもよく、ＩＦＮＡＲ１のサブドメイン３内のいかなる適切な位置（例えば、アミノ酸残基２３１もしくは３２９の近くに、またはアミノ酸残基２３１と３２９の間のどこか）であってもよい。

【0098】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および抗原結合断片は、サブドメイン２とサブドメイン３の間の交差を通じてまたがるエピトープに特異的に結合することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および抗原結合断片は、アミノ酸残基２２７～２３１のセグメント、またはアミノ酸残基２２６～２３２のセグメントを包含するエピトープに特異的に結合することができる。一方、本明細書で提供される抗体および抗原結合断片は、サブドメイン２またはサブドメイン３の全長にわたるありとあらゆる残基に結合する必要はない。サブドメイン２内の少なくとも１つの結合部位およびサブドメイン３内の少なくとも１つの追加の結合部位を有し、したがって、サブドメイン２とサブドメイン３の両方への結合を見せるので十分である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および抗原結合断片は、アミノ酸残基１４９～２１４がマウスＩＦＮＡＲ１対応物で置き換えられていることを除いて、ヒト野生型ＩＦＮＡＲ１配列を含むヒト／マウスキメラＩＦＮＡＲ１（すなわち、配列番号６９）に特異的に結合することができる。

【0099】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ａ）アミノ酸残基１２７～２２７（サブドメイン２）またはｂ）アミノ酸残基２３１～３２９（サブドメイン３）を欠くトランケート型ＩＦＮＡＲ１に結合しない。本明細書で使用される「トランケート型ＩＦＮＡＲ１」とは、１つまたは複数の断片を欠くまたはアラニンもしくはポリアラニンなどの著しく異なる断片で置き換えられていることを除いて、他の点では野生型ＩＦＮＡＲ１と同一である改変されたＩＦＮＡＲ１のことである。本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、サブドメイン２を欠く、またはサブドメイン３を欠く、または両方を欠くトランケート型ＩＦＮＡＲ１に結合することができない。これは、ＩＦＮＡＲ１のサブドメイン２内の結合部位とサブドメイン３内の結合部位の両方が、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片がＩＦＮＡＲ１に特異的に結合するのに必要不可欠であることを示している。サブドメイン２またはサブドメイン３または両方の欠如は、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片のＩＦＮＡＲ１特異的結合を損なうまたは除去するのに十分である。一方、これは、サブドメイン２とサブドメイン３の間の交差が、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片がＩＦＮＡＲ１に特異的に結合するのに潜在的に必要であることをさらにまたは代わりに示している可能性がある。

【0100】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）アミノ酸残基３２～１２６（サブドメイン１）、ｂ）アミノ酸残基３３１～４３２（サブドメイン４）、またはａ）とｂ）の両方を欠くトランケート型ＩＦＮＡＲ１に特異的に結合することができる。サブドメイン１、サブドメイン４、または両方は、抗体およびその抗原結合断片のＩＦＢＡＲ１特異的結合に必要ではない（不可欠でさえない）。

【0101】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、完全長ＩＦＮＡＲ１の結合能力に匹敵する結合能力で、サブドメイン１、サブドメイン４または両方を欠くトランケート型ＩＦＮＡＲ１に結合する。

【0102】

本明細書で使用される「結合能力」とは、別の分子（抗原などの）に結合する分子（抗体などの）の能力のことである。能力は、例えば、当技術分野で公知である任意の適切な結合アッセイを使用して目的の抗原への結合活性により測定することができる。例えば、目的の抗体を標識化すれば、抗原への結合活性の直接定量化を可能にすることができる。別の例では、その抗原への目的の抗体（すなわち、一次抗体）の結合活性も標識化二次抗体（例えば、抗種抗体）を使用することにより検出することができ、この二次抗体は複合体中の一次抗体に結合することによりその抗原に結合している一次抗体の複合体を検出し、したがって、結合活性を間接的に定量化する。標識化抗体は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ、例えば、標識が酵素である場合）、フローサイトメトリー（例えば、標識が蛍光である場合）、ウェスタンブロット（例えば、標識が蛍光または放射性リガンドである場合）、比色法、化学発光ベースの方法、等により検出することができる。

【0103】

等価なアッセイ条件下で検出される場合、異なる抗原への結合活性の違いが２０％以下（例えば、１５％、１０％、８％、５％以下）である場合、異なる抗原への結合能力は匹敵すると見なされる。本明細書で使用される「等価なアッセイ条件」とは、同じまたは等価な条件、等で検出される同じまたは等価な対照と比べて、抗体または抗原の同じまたは等価な濃度で試験される同じアッセイタイプのことである。

【0104】

本明細書で提供される抗体および抗原結合断片は、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない。ＩＦＮβは、ＩＦＮαおよびＩＦＮωなどの他のＩＦＮ－Ｉ同様に、ＩＦＮＡＲ１に結合しＩＦＮＡＲ１活性化を誘導することができる。本明細書で使用される「ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化」とは、ＩＦＮβに媒介されたまたはＩＦＮβの存在へ応答したＩＦＮＡＲ１活性化を意味する。ＩＦＮＡＲ１活性化を判定するには多くのアッセイを使用することができる。非限定的例は、関係のあるＩＦＮ－Ｉの存在下で、または１つもしくは複数のＩＦＮ－Ｉを含有する生体試料（ＳＬＥ患者由来の血漿試料などの）の存在下で判定される、ダウディ細胞増殖、インターフェロン活性化応答エレメント（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｌｅｍｅｎｔ（ＩＳＲＥ））連結レポーター遺伝子発現の活性化、ＩＦＮ－Ｉエフェクター遺伝子（例えば、ｍｘ２およびｉｓｇ１５）発現、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＰ－１０発現、樹状細胞発生、および抗ウイルス活性を含む。したがって、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化は、ＩＦＮβの存在下対その非存在下での、ＩＦＮＡＲ１活性化に適した任意のアッセイを使用して判定することができる。

【0105】

「ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない」抗体または抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、抗体の非存在下でまたは等価濃度の対照抗体（ＩＦＮβに結合しないアイソタイプ対照抗体などの）の存在下で測定したＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化のレベルに対して見せる阻害が２０％未満である抗体または抗原結合断片である。対照抗体はＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を妨害しないことが分かっているいかなる抗体であってもよい。これは、例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮβに結合しない抗体を含むことができる。

【0106】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ設定下、抗体の非存在下でまたは等価濃度の対照抗体（ＩＦＮＡＲ１に結合しないアイソタイプ対照抗体などの）の存在下で測定したベースラインＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化と比べた場合、適切なＩＦＮＡＲ１活性化アッセイにおいてＩＦＮβ媒介ＩＦＢＡＲ１活性化に対する阻害が２０％以下、１５％以下、１０％以下、８％以下、５％以下、２％以下、または１％以下である。

【0107】

ある特定の実施形態では、ＩＦＮＡＲ１活性化アッセイは、例えば、国際公開第２０１８／０１０１４０号に記載される、ＩＦＮ－Ｉレポーターアッセイである。手短に言えば、レポーター細胞株は、ｍｘ２およびｉｓｇ１５などのＩＦＮエフェクター遺伝子のプロモーターの制御下でレポーター遺伝子（緑色蛍光タンパク質、ＧＦＰなどの）を作製することにより構築される。ＩＦＮ－Ｉ（例えば、ＩＮＦβ）の存在下で、ＩＦＮＡＲ１は活性化され、これが続いてｍｘ２またはｉｓｇ１５プロモーターの活性化をもたらし、次に、レポーター遺伝子の発現を開始する。レポーター遺伝子シグナルは、フローサイトメトリーなどの従来の方法により分析することができる。レポーター遺伝子シグナルの強度またはレポーター遺伝子シグナルについて陽性の細胞の数は、ＩＦＮＡＲ１活性化のレベルを示すことができる。ＩＦＮ－Ｉにより媒介されるＩＦＮＡＲ１活性化またはＩＦＮＡＲ１へのＩＦＮ－Ｉの結合を阻害する抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、抗体の非存在下でまたは等価濃度の対照抗体（アイソタイプ対照抗体などの）の存在下で測定した活性化シグナル阻害のベースラインレベルと比べて、ＩＦＮ－Ｉにより媒介されるより多くのＩＦＮＡＲ１活性化シグナルを阻害する。

【0108】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害する。本明細書で使用される「ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化」および「ＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化」は、それぞれＩＦＮαまたはＩＦＮωに媒介されたまたはこの存在に応答したＩＦＮＡＲ１活性化を意味する。同様に、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化は、それぞれＩＦＮαおよびＩＦＮωの存在下で対その非存在下で、上記のＩＦＮＡＲ１活性化を判定するのに適した任意のアッセイにより判定することができる。

【0109】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、抗体の非存在下でまたは等価濃度の対照抗体（ＩＦＮＡＲ１に結合しないアイソタイプ対照抗体などの）の存在下で測定した、それぞれベースラインＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化と比べた場合の、適切なＩＦＮＡＲ１活性化アッセイにおけるＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化の少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％、または約１００％阻害する。そのような対照抗体は、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を妨げないことが分かっているいかなる抗体であってもよい。これは、例えば、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮαおよびＩＦＮωに結合しない抗体を含むことができる。

【0110】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性を阻害しない。

【0111】

本明細書で使用されるインターフェロンにより媒介される用語「抗ウイルス活性」とは、ウイルス活性、例えば、ウイルスの感染力、複製、または生存能を低減するインターフェロンの能力のことである。抗ウイルス活性の阻害は、当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して判定してもよい。例示的な方法は、一般に、前播種されたＩＦＮＡＲ１発現細胞を試験抗体またはその抗原結合断片の存在下で目的のインターフェロン（例えば、ＩＦＮβ）と一緒に例えば１日インキュベートし、その後もう１日ウイルス曝露し、次に、培養物中の残存生存細胞の量を定量化する、細胞を溶解後培養物においてウイルス力価を定量化する、または感染細胞上で形成されたプラークを定量化することにより抗ウイルス活性を決定することを含む。別の例示的方法は、細胞がウイルスに感染した場合にレポーター遺伝子発現が誘導されるように、ＳＩＮＶ－Ｌｕｃ（Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１６年１０月２８日；９０（２２）：１０２４７～１０２５８頁）およびＦｌｕ－Ｌｕｃ（Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ．２０１８年７月１０日（Ｓｕｐｐｌ １９）：Ｓ２２３０～Ｓ２２３７頁）などのレポーター遺伝子構築物を含有する細胞をインキュベートすることを含む。

【0112】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、同じタイプのウイルス活性アッセイにおいて、抗体の非存在下でまたは等価濃度の対照抗体（ＩＦＮＡＲ１に結合しないアイソタイプ対照抗体などの）の存在下で測定されたレベルと類似するまたはおおよそ同じレベルのＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性を見せる。

【0113】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、等価濃度の対照抗体の存在下で測定されたベースラインＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性と比べた場合、適切な抗ウイルスアッセイにおいてＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性に対する阻害が２０％以下、１５％以下、１０％以下、８％以下、５％以下、２％以下、または１％以下である。

【0114】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介抗ウイルス活性を阻害する。

【0115】

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、等価なアッセイ条件下、等価濃度の対照抗体の存在下で測定された、それぞれベースラインＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介抗ウイルス活性と比べた場合、適切な抗ウイルスアッセイにおいてＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介抗ウイルス活性の少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％、または約１００％を阻害する。

【0116】

ある特定の実施形態では、ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対するもしくはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対するまたはＩＦＮα媒介抗ウイルス活性に対するもしくはＩＦＮω媒介抗ウイルス活性に対する本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片の阻害効果は、それぞれＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対するまたはＩＦＮβ媒介抗ウイルス活性に対する阻害効果の少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または２０倍である。ＩＦＮα媒介、ＩＦＮω媒介、およびＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化または抗ウイルス活性に対する本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片の阻害効果は、同じタイプのアッセイを使用して、等価なアッセイパラメータを使用して、同じまたは等価濃度の試験抗体を使用して、および同じまたは等価な量のＩＦＮＡＲ１発現細胞を使用してなどのしかしこれらに限定されない、等価なアッセイ条件下で測定される。ある特定の実施形態では、ＩＦＮα媒介、ＩＦＮω媒介、もしくはＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化または抗ウイルス活性に対する阻害効果は、それぞれ１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮα、５０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮω、または５０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮβの存在下で測定される。

【0117】

いかなる理論にも縛られたくはないが、抗体およびその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化とＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化の両方を優先的に阻害し、およびＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対する阻害を最小限に抑えるのに特に有利であると考えられる。

【0118】

ＩＦＮαとＩＦＮωの両方は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）などのＩ型ＩＦＮ関連疾患の病態において誘導されることが報告されている。ＳＬＥ患者ではＩＦＮω発現がＲＮＡレベルで上方調節されている（Ｙａｏ Ｙら、Ｈｕｍ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ２００９年）。ＩＦＮωは、ＳＬＥにおいてＩＦＮシグネチャーを誘導する活性Ｉ型ＩＦＮ環境の一部である。ＩＦＮωとＩＦＮαの両方の共抑制により、ＳＬＥ患者の血液中において永続化されたＩＦＮシグネチャーはＩＦＮαまたはＩＦＮωインヒビター単独よりも明白に抑制されたことが報告されている（米国特許第９９０２７７０号において詳細を参照）。同様に、ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化とＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化の両方を阻害することにより、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片は、ＩＦＮω抗体またはＩＦＮα抗体単独よりも優れた治療効果も提供すると予想される。

【0119】

ＩＦＮβは、初期転写応答を活性化するのにＩＦＮαまたはＩＦＮωと等しく強力である（Ｃｏｅｌｈｏ ＬＦら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００５年８月１６日；１０２（３３）：１１９１７～２２頁）が、ＩＦＮβは、一部のＩ型ＩＦＮ関連疾患の病態形成に最小限にしか関与していない。これは、ＩＦＮβを阻害してもこれらのＩＦＮ関連疾患に対して極めて限られた治療効果しかもてないことを示唆している。

【0120】

一方、ＩＦＮβは、単球分化を阻害する、ウイルス複製を阻害する、およびヒト腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することなどにおいて、ＩＦＮαまたはＩＦＮωよりもはるかに大きな効力を見せる。これらのＩＦＮβ媒介効果は実際、対象の健康にとって多くの状況において有益であり、したがって、阻害されないほうがよいと考えられる。それ故に、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片は、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しないことによって追加の利点を提供する。

【0121】

ＩＦＮβのはっきり異なった機能は、少なくとも部分的には、ＩＦＮαまたはＩＦＮωと比べてＩＦＮβの細胞表面受容体への実質的に高い「総体的」親和性に起因する。３，３００Å^２に達するＩＦＮＡＲ１－ＩＦＮβ複合体の全埋もれた表面積は、合計で２，０３０Å^２（ＩＦＮωでは２，２００Å^２）になるＩＦＮＡＲ１－ＩＦＮα２境界面の面積よりもはるかに広い。したがって、この増加した結合境界面は、ＩＦＮαまたはＩＦＮωと比べて、ＩＦＮβに対するＩＦＮＡＲ１の結合親和性のおおよそ１００倍の増加を説明する（ｄｅ Ｗｅｅｒｄ ＮＡら、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４：９０１～７頁（２０１３））。ＩＦＮβの全く異なる機能も、ＩＦＮβは、ＩＦＮαやＩＦＮωと違って、ＩＦＮＡＲ１にＩＦＮＡＲ２非依存的に結合するという事実、およびＩＦＮＡＲ１－ＩＦＮβ複合体のほうがより効率的にシグナルを伝達するという事実に寄与できる。したがって、本明細書で提供される抗体の独特の機能的特徴は、本明細書で提供される抗体のほうが当技術分野で公知である抗体よりも有利である独特の結合部位および結合特徴を有することも意味する。

【0122】

特定の抗ＩＦＮＡＲ１抗体
ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＸ_１ＷＸ_１９Ｎ（配列番号１）、ＫＩＤＰＳＤＳＥＸ_２Ｘ_２０Ｘ_２１ＮＱＫＦＸ_２２Ｄ（配列番号２）、ＧＧＸ_３ＩＸ_４Ｘ_５ＤＹＤＸ_６ＡＸ_７ＤＹ（配列番号３）、ＫＸ_２３ＳＥＶＩＹＮＲＬＡ（配列番号４）、ＧＡＴＸ_２４ＬＥＸ_２５（配列番号５）、およびＱＱＹＷＸ_８Ｘ_９ＰＦＴ（配列番号６）からなる群から選択され、Ｘ_１はＹまたはＦであり、Ｘ_２はＴまたはＩであり、Ｘ_３はＲまたはＧであり、Ｘ_４はＳまたはＹであり、Ｘ_５はＦまたはＹであり、Ｘ_６はＡまたはＧであり、Ｘ_７はＬまたはＭであり、Ｘ_８はＮまたはＳであり、Ｘ_９はＫまたはＳであり、Ｘ_１９はＭまたはＬであり、Ｘ_２０はＨまたはＲであり、Ｘ_２１はＦまたはＹであり、Ｘ_２２はＲまたはＫであり、Ｘ_２３はＳまたはＡであり、Ｘ_２４はＴまたはＳであり、Ｘ_２５はＳまたはＴである配列を含む１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、または６）のＣＤＲを含む抗ＩＦＮＡＲ１抗体（例えば、抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体）およびその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１～６のいずれかへの１つ、２つまたは３つ以下のアミノ酸残基置換を有し、Ｘ_１はＹまたはＦであり、Ｘ_２はＴまたはＩであり、Ｘ_３はＲまたはＧであり、Ｘ_４はＳまたはＹであり、Ｘ_５はＦまたはＹであり、Ｘ_６はＡまたはＧであり、Ｘ_７はＬまたはＭであり、Ｘ_８はＮまたはＳであり、Ｘ_９はＫまたはＳであり、Ｘ_１９はＭまたはＬであり、Ｘ_２０はＨまたはＲであり、Ｘ_２１はＦまたはＹであり、Ｘ_２２はＲまたはＫであり、Ｘ_２３はＳまたはＡであり、Ｘ_２４はＴまたはＳであり、Ｘ_２５はＳまたはＴである抗体および抗原結合断片をさらに包含する。

【0123】

本明細書で使用される「７Ｇ４」とは、配列番号７の配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８の配列を有する軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体のことである。

【0124】

本明細書で使用される「１０Ｃ５」とは、配列番号９の配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体のことである。

【0125】

ある特定の実施形態では、本開示は、抗体７Ｇ４または抗体１０Ｃ５の１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、または６）のＣＤＲ配列を含む抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片を提供する。

【0126】

ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２３もしくは配列番号６５の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号７０の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号７１もしくは配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片を提供する。

【0127】

ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２７の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号７２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号６６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片を提供する。

【0128】

下の表１は、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５のＣＤＲ配列を示している。下の表２は、７Ｇ４および１０Ｃ５の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を示しており、下の表３は、可変領域をコードする核酸配列を示している。

【0129】

【表1】

【0130】

【表2】

【0131】

【表3】

【0132】

本開示は、それぞれ７Ｇ４および１０Ｃ５を発現するハイブリドーマ細胞も提供し、これらの細胞は中国科学院微生物研究所（ＣＧＭＣＣ）に寄託されている。

【0133】

７Ｇ４を産生するハイブリドーマの詳細な寄託情報は以下の通りである：微生物寄託番号：ＣＧＭＣＣ番号１６２８６；分類学的名称：ハイブリドーマ細胞株；寄託住所：Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １、Ｎｏ．１ Ｂｅｉｃｈｅｎ Ｗｅｓｔ Ｒｏａｄ、Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ、北京；寄託部署：中国科学院微生物研究所；および寄託日：２０１８年８月２７日。

【0134】

１０Ｃ５を産生するハイブリドーマの詳細な寄託情報は以下の通りである：微生物寄託番号：ＣＧＭＣＣ番号１６２８７；分類学的名称：ハイブリドーマ細胞株；寄託住所：Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １、Ｎｏ．１ Ｂｅｉｃｈｅｎ Ｗｅｓｔ Ｒｏａｄ、Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ、北京；寄託部署：中国科学院微生物研究所；および寄託日：２０１８年８月２７日。

【0135】

本開示は、ＣＧＭＣＣ寄託番号１６２８６の寄託番号を有するハイブリドーマ細胞から、または寄託番号１６２８７を有するハイブリドーマ細胞から発現される抗体、およびそれらの抗原結合断片も提供する。

【0136】

７Ｇ４および１０Ｃ５のそれぞれがＩＦＮＡＲ１に結合できることならびに抗原結合特異性が主にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域により与えられることを考慮すると、７Ｇ４および１０Ｃ５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列は「混合し適合させ」て（すなわち、異なる抗体由来のＣＤＲを混合し適合させることが可能であるが、それぞれの抗体はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含有しなければならない）、本開示の抗ＩＦＮＡＲ１結合分子を作り出すことが可能である。そのような「混合され適合された」抗体のＩＦＮＡＲ１結合は、上におよび実施例に記載される結合アッセイを使用して検出することができる。好ましくは、ＶＨ ＣＤＲ配列が混合され適合される場合、特定のＶＨ配列由来のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３配列は構造的に類似するＣＤＲ配列（複数可）で置き換えられる。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列が混合され適合される場合、特定のＶＬ配列由来のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３配列は、好ましくは、構造的に類似するＣＤＲ配列（複数可）で置き換えられる。例えば、７Ｇ４および１０Ｃ５のＶＨ ＨＣＤＲ１はある構造的類似性を共有しており、したがって、混合および適合を受け入れられる。新規のＶＨおよびＶＬ配列が、１つまたは複数のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を、モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５について本明細書で開示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列で置換することにより作り出せることは当業者には容易に明らかになる。

【0137】

ＣＤＲは抗原結合を担当することが知られている。しかし、６つのＣＤＲすべてが不可欠であるまたは変わることができないわけではないことが見出されている。言い換えると、抗ＩＦＮＡＲ１抗体７Ｇ４または１０Ｃ５の１つまたは複数のＣＤＲを取り替えるまたは交換するまたは改変するが、ＩＦＮＡＲ１に対する特異的結合親和性は実質的に保持することは可能である。

【0138】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、抗体７Ｇ４または１０Ｃ５の重鎖ＣＤＲ３配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、配列番号２３、６５および２７からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。

【0139】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片は、抗体およびその抗原結合断片がＩＦＮＡＲ１に特異的に結合できる限り、適切なフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。表１に提供されるＣＤＲ配列はマウス抗体から得られるが、これらのＣＤＲ配列は、とりわけ、組換え技法などの当技術分野で公知の適切な方法を使用して、マウス、ヒト、ラット、ウサギなどの任意の適切な種の任意の適切なＦＲ配列に移植することができる。

【0140】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片はヒト化される。ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトにおけるその低減した免疫原性の点で望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトまたは実質的にヒトＦＲ配列に移植されているので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合断片のヒト化は、本質的に、非ヒト（マウスなどの）ＣＤＲ遺伝子をヒト免疫グロブリン遺伝子中の対応するヒトＣＤＲ遺伝子の代わりに使うことにより実施することができる（例えば、Ｊｏｎｅｓら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２～５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４～１５３６頁参照）。

【0141】

当技術分野で公知の方法を使用してこの目的を達成するように、適切なヒト重鎖および軽鎖可変ドメインを選択することができる。説明的な例では、「最適適合」アプローチを使用することができ、その場合、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体可変ドメイン配列はスクリーニングされるまたは既知のヒト可変ドメイン配列のデータベースに対してＢＬＡＳＴされ、非ヒト問い合わせ配列に最も近いヒト配列が同定され非ヒトＣＤＲ配列を移植するためのヒトスキャホールドとして使用される（例えば、Ｓｉｍｓら、（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６頁；Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１頁参照）。代わりに、すべてのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワークを、非ヒトＣＤＲ配列を移植するために使用してもよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５頁；Ｐｒｅｓｔａら、（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３頁参照）。

【0142】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて実質的にすべてのヒト配列で構成されている。一部の実施形態では、可変領域ＦＲ、および定常領域は、存在するとすれば、完全にまたは実質的にヒト免疫グロブリン配列由来である。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子由来でもよく、例えば、ＦＲ配列は１つのヒト抗体由来であり定常領域は別のヒト抗体由来である。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖ＨＦＲ１～４、および／または軽鎖ＬＦＲ１～４を含む。

【0143】

一部の実施形態では、ヒト由来のＦＲ領域は、それが由来するヒト免疫グロブリンと同じアミノ酸配列を含みうる。一部の実施形態では、ヒトＦＲの１つまたは複数のアミノ酸残基は、親非ヒト抗体由来の対応する残基で置き替えられる。これは、ヒト化抗体またはその断片を非ヒト親抗体構造に密に近似させるのにある特定の実施形態では望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトＦＲ配列のそれぞれにおいて１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下のアミノ酸残基置換を、または重もしくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲにおいて１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下のアミノ酸残基置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸残基のそのような変化は、重鎖ＦＲ領域のみに、軽鎖ＦＲ領域のみに、または両方の鎖において存在することができると考えられる。

【0144】

ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３３の配列を含む重鎖ＨＦＲ１、配列番号４１、４２および４３から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ２、配列番号４４および４５から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ３、ならびに配列番号３６の配列を含む重鎖ＨＦＲ４を含むヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片も提供する。

【0145】

ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３７の配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、配列番号４６、４７および４８から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、配列番号４９および５０から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、ならびに配列番号４０の配列を含む軽鎖ＬＦＲ４を含むヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片も提供する。

【0146】

ある特定の実施形態では、本開示は、７Ｇ４－ｇ０－ＶＨ（配列番号５１）、７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）、７Ｇ４－ｇ２－ＶＨ（配列番号５３）、および７Ｇ４－ｇ３－ＶＨ（配列番号５４）からなる群から選択される重鎖可変領域に含有されるＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、および／またはＨＦＲ４配列を含むヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片も提供する。

【0147】

ある特定の実施形態では、本開示は、７Ｇ４－ｇ０－ＶＬ（配列番号５５）、７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）、７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ－ｍｕｔ－１（配列番号６８）、７Ｇ４－ｇ２－ＶＬ（配列番号５７）、および７Ｇ４－ｇ３－ＶＬ（配列番号５８）からなる群から選択される軽鎖可変領域に含有されるＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、および／またはＬＦＲ４配列を含むヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片も提供する。

【0148】

ある特定の実施形態では、本開示で提供されるヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列、ならびに／または配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、および配列番号５８からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。

【0149】

本開示は、
１）７Ｇ４－ｇ０－ＶＨ（配列番号５１）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ０－ＶＬ（配列番号５５）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１」；
２）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ０－ＶＬ（配列番号５５）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－２」；
３）７Ｇ４－ｇ２－ＶＨ（配列番号５３）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ０－ＶＬ（配列番号５５）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－３」；
４）７Ｇ４－ｇ３－ＶＨ（配列番号５４）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ０－ＶＬ（配列番号５５）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－４」；
５）７Ｇ４－ｇ０－ＶＨ（配列番号５１）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－５」；
６）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－６」；
７）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ－ｍｕｔ－１（配列番号６７）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－１」；
８）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ－ｍｕｔ－１（配列番号６８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－２」；
９）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ－ｍｕｔ－１（配列番号６７）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ－ｍｕｔ－１（配列番号６８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－６－ｍｕｔ－３」；
１０）７Ｇ４－ｇ２－ＶＨ（配列番号５３）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－７」；
１１）７Ｇ４－ｇ３－ＶＨ（配列番号５４）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ１－ＶＬ（配列番号５６）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－８」；
１２）７Ｇ４－ｇ０－ＶＨ（配列番号５１）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ２－ＶＬ（配列番号５７）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－９」；
１３）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ２－ＶＬ（配列番号５７）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１０」；
１４）７Ｇ４－ｇ２－ＶＨ（配列番号５３）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ２－ＶＬ（配列番号５７）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１１」；
１５）７Ｇ４－ｇ３－ＶＨ（配列番号５４）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ２－ＶＬ（配列番号５７）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１２」；
１６）７Ｇ４－ｇ０－ＶＨ（配列番号５１）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ３－ＶＬ（配列番号５８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１３」；
１７）７Ｇ４－ｇ１－ＶＨ（配列番号５２）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ３－ＶＬ（配列番号５８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１４」；
１８）７Ｇ４－ｇ２－ＶＨ（配列番号５３）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ３－ＶＬ（配列番号５８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１５」；
１９）７Ｇ４－ｇ３－ＶＨ（配列番号５４）の重鎖可変領域および７Ｇ４－ｇ３－ＶＬ（配列番号５８）の軽鎖可変領域を含む「Ｈｕ４－１６」
を含む、７Ｇ４の例示的ヒト化抗体も提供する。

【0150】

これらの例示的ヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体はＩＦＮＡＲ１に対する特異的結合能力または親和性を保持し、その面では親マウス抗体７Ｇ４に少なくとも匹敵する、または親マウス抗体７Ｇ４よりはるかに優れている。例えば、データは実施例９に提供されている。

【0151】

遺伝子セグメントの再配列由来の抗体
ある特定の実施形態では、本開示で提供される抗体またはその抗原結合断片は、マウスＩＧＨＶ１－６９遺伝子の産物であるもしくはこの遺伝子に由来するＶ遺伝子、マウスＩＧＨＤ２－４遺伝子の産物であるもしくはこの遺伝子に由来するＤ遺伝子、およびマウスＩＧＨＪ４遺伝子の産物であるもしくはこの遺伝子に由来するＪ遺伝子を含む特定のマウス生殖系列重鎖Ｉｇ遺伝子由来の重鎖可変領域、ならびに／またはマウスＩＧＫＶ１３－８４遺伝子の産物であるもしくはこの遺伝子に由来するＶ遺伝子、およびマウスＩＧＫＪ４遺伝子の産物であるもしくはこの遺伝子に由来するＪ遺伝子を含む特定のマウス生殖系列軽鎖Ｉｇ遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。

【0152】

特定のマウス生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列「の産物」であるまたはこの遺伝子配列「に由来する」抗体またはその抗原結合断片は、例えば、天然に存在する体細胞突然変異または部位特異的突然変異の意図的な導入のせいで、生殖系列免疫グロブリン配列と比べて１つまたは複数のアミノ酸残基の違いを含有する場合がある。しかし、本開示で提供される選択された抗体またはその抗原結合断片は、典型的には、マウス生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされているアミノ酸配列に少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％）アミノ酸配列が同一であり、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、ラット生殖系列配列）と比べた場合、抗体またはその抗原結合断片をマウスであるまたはヒトであると確認するアミノ酸残基を含有しうる。

【0153】

例示的マウス抗体７Ｇ４および１０Ｃ５は両方とも、重鎖可変領域ではＩＧＨＶ１－６９遺伝子、ＩＧＨＤ２－４遺伝子、およびＩＧＨＪ４遺伝子を含むマウス生殖系列Ｉｇ遺伝子に、ならびに軽鎖可変領域ではＩＧＫＶ１３－８４遺伝子およびＩＧＫＪ４遺伝子に由来している。いかなる理論にも縛られたくはないが、マウス遺伝子のこの組合せは、再配列されると、本明細書に開示される７Ｇ４および１０Ｃ５に類似する結合能力、結合特徴および／または生物活性を有する抗ＩＦＮＡＲ１抗体に集合することができるＶＨとＶＬの組合せを生じるのに有利になるように偏っていると考えられる。

【0154】

当業者であれば、例えば、ファージディスプレイライブラリーを使用することにより、遺伝子配列の人工的突然変異によりなどの当技術分野で公知の方法を使用して、またはトランスジェニック動物を使用して、ＩＧＨＶ１－６９遺伝子、ＩＧＨＤ２－４遺伝子、ＩＧＨＪ４遺伝子、ＩＧＫＶ１３－８４遺伝子、およびＩＧＫＪ４遺伝子を含むマウス生殖系列Ｉｇ遺伝子に由来する抗ＩＦＮＡＲ１抗体を得ることができる。一実施形態では、マウス遺伝子をクローニングしてファージディスプレイライブラリー中に組換えにより導入し、続いて目的の抗原（例えば、ＩＦＮＡＲ１）に結合することができるファージクローンをパニングまたはスクリーニングすることができる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３～４５５頁（１９９４）に記載されている）。別の実施形態では、ＩＧＨＶ１－６９、ＩＧＨＤ２－４、ＩＧＨＪ４、ＩＧＫＶ１３－８４、およびＩＧＫＪ４遺伝子の遺伝子配列は、コードされた重または軽鎖可変領域配列が配列番号１５（重鎖）にまたは配列番号１６（軽鎖）に少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％）アミノ酸配列が同一であるように、１つまたは複数の突然変異を導入するよう操作することができる。別の実施形態では、内在性抗体産生遺伝子を欠くトランスジェニック動物は、マウスＩＧＨＶ１－６９遺伝子、ＩＧＨＤ２－４遺伝子、ＩＧＨＪ４遺伝子、ＩＧＫＶ１３－８４遺伝子およびＩＧＫＪ４遺伝子の特定の組合せを保有するように操作することができ、そこでは、目的の抗原（例えば、ＩＦＮＡＲ１）に対して免疫化されると、トランスジェニック動物は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体を生じる可能性があるこれらの操作されたマウス遺伝子から抗ＩＦＮＡＲ１抗体を産生しやすくなる。

【0155】

一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部および／または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む。一実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、本明細書で提供される重鎖可変ドメインのすべてまたは一部からなる単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体のさらに多くの情報は当技術分野で入手可能である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号参照）。

【0156】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域をさらに含み、この定常領域は任意選択で、重鎖および／または軽鎖定常領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、および／またはＣＨ２－ＣＨ３領域（または任意選択で、ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４領域）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその断片は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域はＣκまたはＣλを含む。本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその断片の定常領域は、野生型定常領域配列と同一であるまたは１つもしくは複数の突然変異が異なっていてもよい。

【0157】

ある特定の実施形態では、重鎖定常領域はＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域は、抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣなどのエフェクター機能を媒介することが知られている。Ｉｇアイソタイプが異なればそのＦｃ領域が持つエフェクター機能を誘導する能力も異なる。例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３のＦｃ領域は、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のＦｃ領域よりも効果的にＡＤＣＣとＣＤＣの両方を誘導することが認識されていた。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣを誘導することができたＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３アイソタイプのＦｃ領域を含む；または代わりに、エフェクター機能を低減したもしくは枯渇させたＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４アイソタイプの定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６１の配列を含む野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域または他の野生型ヒトＩｇＧ１対立遺伝子を含む。

【0158】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその断片は、診断および／または治療用途を提供するのに十分であるヒトＩＦＮＡＲ１に対する特異的結合親和性を有する。

【0159】

本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、標識抗体、二価抗体、または抗イディオタイプ抗体が可能である。組換え抗体は、動物においてではなく組換え法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで調製される抗体である。

【0160】

ある特定の実施形態では、本出願は抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片を提供し、これは本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片とＩＦＮＡＲ１への結合を巡って競合し、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害しない。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介および／またはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化を阻害する。そのような抗体またはその抗原結合断片は、ウイルス複製の阻害などのＩＦＮβの望ましい生物活性を保持したままでＩＦＮＡＲ１活性化を十分に阻害することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対してもしくはＩＦＮω媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対して阻害効果を有する、または抗ウイルス活性は、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化に対する阻害効果の少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または２０倍である。

【0161】

抗体バリアント
本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片は、その種々のバリアントも包含する。

【0162】

ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、上の表１に提供される１つもしくは複数のＣＤＲ配列、上の表２に提供される１つもしくは複数の可変領域配列（しかし、ＣＤＲ配列のいずれにでもない）、および／または定常領域（例えば、Ｆｃ領域）に１つまたは複数の改変または置換を含む。そのようなバリアントは、その親抗体のＩＦＮＡＲ１に対する結合特異性を保持するが、改変（複数可）または置換（複数可）により与えられる１つまたは複数の望ましい特性を有する。例えば、抗体バリアントは、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、グリコシル化の減少したリスク、減少した脱アミノ化、減少したもしくは枯渇したエフェクター機能（複数可）、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増加した薬物動態半減期、ｐＨ感受性、および／またはコンジュゲーションへの適合性（例えば、１つまたは複数の導入されたシステイン残基）を有することができる。

【0163】

親抗体配列は、当技術分野で公知の方法、例えば、「アラニンスキャニング変異誘発」を使用して、改変されるまたは置換されるのに適切なまたは好ましい残基を特定するためにスクリーニングしてもよい（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ （１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１～１０８５頁参照）。手短に言えば、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕなどの荷電残基）は特定して、中性または負電荷アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えることができ、改変された抗体が産生され関心のある特性を求めてスクリーニングされる。特定のアミノ酸位置での置換が興味のある機能上の変化を示す場合、その位置は改変または置換の可能性のある残基として特定することができる。可能性のある残基は、異なるタイプの残基（例えば、システイン残基、正電荷残基、等）で置換することによりさらに評価してもよい。

【0164】

親和性バリアント
親和性バリアントは、上の表１に提供される１つもしくは複数のＣＤＲ配列、本明細書で提供される１つもしくは複数のＦＲ配列、または上の表２に提供される重もしくは軽鎖可変領域配列に改変または置換を含有していてもよい。ＦＲ配列は、当業者であれば上の表１のＣＤＲ配列および上の表２の可変領域配列に基づいて容易に特定することができる。なぜならば、ＣＤＲ領域は可変領域では２つのＦＲ領域と隣接していることは当技術分野では周知であるからである。親和性バリアントは、親抗体のＩＦＮＡＲ１に対する特異的結合親和性を保持している、または親抗体よりも改善されたＩＦＮＡＲ１特異的結合親和性さえ有する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列、または可変領域配列における置換（複数可）の少なくとも１つ（またはすべて）が保存的置換を含む。

【0165】

当業者であれば、上の表１および上の表２に提供されるＣＤＲ配列および可変領域配列では、１つまたは複数のアミノ酸残基を置換しうるが、それでも得られた抗体または抗原結合断片はまだＩＦＮＡＲ１に対する結合親和性もしくは結合能力を保持しており、または改善された結合親和性もしくは能力さえ有する。当技術分野で公知の種々の方法を使用すればこの目的を達成することができる。例えば、抗体バリアント（ＦａｂまたはｓｃＦｖバリアント）のライブラリーを、ファージディスプレイ技術を用いて作製し発現させ、次に、ヒトＩＦＮＡＲ１に対する結合親和性についてスクリーニングすることができる。別の例として、コンピュータソフトウェアを使用すれば、ヒトＩＦＮＡＲ１への抗体の結合のシミュレーションを実質的に行い、結合面を形成する抗体上のアミノ酸残基を特定することができる。そのような残基は、結合親和性の低減を予防するように置換において避ける、またはもっと強い結合を提供するように置換の標的にしてもよい。

【0166】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列、および／または１つもしくは複数のＦＲ配列に１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含む。ある特定の実施形態では、親和性バリアントは、ＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列に合計で２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下の置換を含む。

【0167】

ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、上の表１に収載される配列（単数または複数）と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）配列同一性を有する１、２、または３つのＣＤＲ配列を含み、その一方で、その親抗体に類似するレベルでまたはそれよりもはるかに高いレベルでＩＦＮＡＲ１に対する結合親和性を保持する。

【0168】

ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、上の表２に収載される配列（単数または複数）と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、その一方で、その親抗体に類似するレベルでまたはそれよりもはるかに高いレベルでＩＦＮＡＲ１に対する結合親和性を保持する。一部の実施形態では、上の表２に収載される可変領域配列に全部で１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失はＣＤＲの外側の領域で（例えば、ＦＲで）生じる。

【0169】

グリコシル化バリアント
本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、グリコシル化バリアントも包含しており、このバリアントは抗体または抗原結合断片のグリコシル化の程度を増やすまたは減らすために得ることができる。

【0170】

抗体またはその抗原結合断片は、グリコシル化部位を導入するまたは取り除く１つまたは複数の改変を含んでいてもよい。グリコシル化部位は、炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造体）を結合させることができる側鎖を有するアミノ酸残基である。抗体のグリコシル化は典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基、例えば、Ｘがプロリンを除く任意のアミノ酸であるアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニンなどのトリペプチド配列のアスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合のことである。Ｏ結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸への、もっとも一般的にはセリンまたはスレオニンへの糖Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの結合のことである。天然のグルコシル化部位の除去は、例えば、上記のトリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位では）または配列中に存在するセリンもしくはスレオニン残基（Ｏ結合型グリコシル化部位では）のうちの１つが置換されるように、アミノ酸配列を変更することにより都合よく達成することができる。新しいグリコシル化部位は、そのようなトリペプチド配列またはセリンもしくはスレオニン残基を導入することにより同様のやり方で作り出すことができる。

【0171】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、グリコシル化部位を取り除くためＮ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｇ）に突然変異を含む。

【0172】

システイン操作バリアント
本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、システイン操作バリアントも包含しており、このバリアントは１つまたは複数の導入された遊離のシステインアミノ酸残基を含む。

【0173】

遊離のシステイン残基は、ジスルフィド架橋の一部ではない残基である。システイン操作バリアントは、操作されたシステインの部位で、例えば、マレイミドまたはハロアセチルを通じて、例えば、細胞傷害性および／もしくは撮像化合物、標識、または、とりわけ、放射性アイソトープとのコンジュゲーションに有用である。抗体またはその抗原結合断片を操作して遊離のシステイン残基を導入するための方法は当技術分野では公知であり、例えば、国際公開第２００６／０３４４８８号を参照されたい。

【0174】

Ｆｃバリアント
本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、Ｆｃバリアントも包含しており、このバリアントは、例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣなどの変更されたエフェクター機能を提供するために、そのＦｃ領域および／またはヒンジ領域に１つまたは複数のアミノ酸残基改変または置換を含む。抗体操作によりＡＤＣＣ活性を変更する方法は、当技術分野に記載されており、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１年．２７６（９）：６５９１～６０４頁；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年．１６４（８）：４１７８～８４頁；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５年、１５５（３）：１１６５～７４頁；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１年、１６６（４）：２５７１～５頁；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ら、ＰＮＡＳ、２００６年、１０３（１１）：４００５～４０１０頁；Ｒｙａｎ ＭＣ．ら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．、２００７年、６：３００９～３０１８年；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，ら、Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８年、７（８）：２５１７～２７年；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ． Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２００２年、２７７：２６７３３～２６７４０頁；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２００３年、２７８：３４６６～３４７３頁を参照されたい。

【0175】

本明細書で提供される抗体のＣＤＣ活性は、例えば、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善するまたは減少することにより変更することもできる（例えば、国際公開第９９／５１６４２号；Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８～４０頁（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＦｃ領域バリアントの他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号参照）。Ｆｃ領域のアミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１つまたは複数のアミノ酸は、異なるアミノ酸残基で置き替えれば、Ｃ１ｑ結合および／または低減したもしくは消失した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更することができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号参照）。１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を導入して、補体を固定する抗体の能力を変更することもできる（Ｂｏｄｍｅｒらによる国際公開第９４／２９３５１号参照）。

【0176】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は低減したエフェクター機能を有し、ＩｇＧ１での２３４、２３５、２３７、および２３８、２６８、２９７、３０９、３３０、および３３１からなる群から選択される位置に１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、およびその任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、およびその任意の組合せ（例えば、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびその任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ２／ＩｇＧ４クロスアイソタイプである。ＩｇＧ２／ＩｇＧ４クロスアイソタイプの例は、Ｒｏｔｈｅｒ ＲＰら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５：１２５６～１２６４頁（２００７）に記載されている。

【0177】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ１アイソタイプであり、２３４、２３５および３３１のうちの１つまたは複数の地点に１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片はＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｆｃ領域に三重突然変異Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、配列番号６２の配列を含む変異Ｆｃ領域を含む。

【0178】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体および抗原結合断片は、増加したＡＤＣＣおよび／またはＦｃγ受容体に対する増加した親和性を有し、以下の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９のうちの１つまたは複数に１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む（Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号参照）。位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９での特定の突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが明らかにされた。さらに、以下の組合せ変異体：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが明らかにされた。

【0179】

ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。そのようなバリアントは長い薬物動態半減期を持つことができる。なぜならば、リソソームでの分解から免れることを可能にする酸性ｐＨでＦｃＲｎに結合し、次に、移動されて細胞外に放出されるからである。抗体およびその抗原結合断片を操作してＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は当技術分野では周知であり、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、６（１）：６３～７３頁、１９９８年；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｒ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｖｏｌｕｍｅ １、Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ、ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１０年；Ｙｅｕｎｇ、Ｙ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７０：３２６９～３２７７年（２０１０）；およびＨｉｎｔｏｎ，Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７６：３４６～３５６頁（２００６）を参照されたい。

【0180】

ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｃ領域の境界にヘテロ二量体化を推進するおよび／または促進する１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。これらの改変は、第１のＦｃポリペプチド中に突起を、第２のＦｃポリペプチド中に空洞を導入することを含み、第１と第２のＦｃポリペプチドの相互作用を促進してヘテロ二量体または複合体を形成するように、突起を空洞中に配置することができる。これらの改変を有する抗体を産生する方法は当技術分野では公知であり、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。

【0181】

抗原結合断片
抗ＩＦＮＡＲ１抗原結合断片も本明細書で提供される。種々のタイプの抗原結合断片が当技術分野では公知であり、例えば、そのＣＤＲおよび可変配列が表１および２に示されている例示的抗体、ならびにその異なるバリアント（親和性バリアント、グリコシル化バリアント、Ｆｃバリアント、システイン操作バリアント等々などの）を含む、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗体に基づいて開発することが可能である。

【0182】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＦＮＡＲ１抗原結合断片は、ラクダ化単一ドメイン抗体、ダイアボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である。

【0183】

そのような抗原結合断片の産生のために種々の技法を使用することができる。実例となる方法は、無傷の抗体の酵素的消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７～１１７頁（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１頁（１９８５）参照）、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）などの宿主細胞による組換え発現（例えば、Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片では）、上で考察されたファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖでは）、およびＦ（ａｂ’）_２断片を形成するための２つのＦａｂ’－ＳＨ断片の化学的連結（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３～１６７頁（１９９２））を含む。抗体断片の産生のための他の技法は当業者には明らかである。

【0184】

ある特定の実施形態では、抗原結合断片はｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの作製は、例えば、国際公開第９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、および米国特許第５，５８７，４５８号に記載されている。ｓｃＦｖは、アミノ末端またはカルボキシル末端でエフェクタータンパク質に融合させて融合タンパク質を提供してもよい（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ参照）。

【0185】

ある特定の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は二重特異性である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、前記ＩＦＮＡＲ１抗体、またはその抗原結合断片から、異なる結合特異性を有する第２の機能的部分にさらに連結される。

【0186】

コンジュゲート
一部の実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、コンジュゲート部分をさらに含む。コンジュゲート部分は、抗体およびその抗原結合断片に連結することができる。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合断片に結合することができる部分である。様々なコンジュゲート部分を、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片に連結しうることが想定されている（例えば、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅおよびＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（編）、Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、（１９８９）参照）。これらのコンジュゲート部分は、数ある方法の中でも、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、混合、または付加により抗体またはその抗原結合断片に連結してもよい。

【0187】

ある特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、エピトープ結合部分の外側に、１つまたは複数のコンジュゲート部分に結合するために利用しうる特定の部位を含有するように操作してもよい。例えば、そのような部位は、コンジュゲート部分への共有結合を促進するために、例えば、システインまたはヒスチジン残基などの１つまたは複数の反応性アミノ酸残基を含んでもよい。

【0188】

ある特定の実施形態では、抗体はコンジュゲート部分に間接的に、または別のコンジュゲート部分を通じて連結してもよい。例えば、抗体またはその抗原結合部分は、ビオチンにコンジュゲートする、次に、アビジンにコンジュゲートされている第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートしてもよい。コンジュゲートは、クリアランス改変剤、毒素（例えば、化学療法薬）、検出可能な標識（例えば、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識、または酵素基質標識）、または精製部分が可能である。

【0189】

「毒素」は、細胞にとって有害であるまたは細胞を損傷するもしくは殺傷することができるいかなる薬剤でありうる。毒素の例は、限定せずに、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシンおよびその類似体、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤、ならびにチューブリン結合剤を含む。

【0190】

検出可能な標識の例は、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、またはテキサスレッド）、酵素基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、グリコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼまたはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３Ｈ、^１１１Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１４Ｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^８６Ｙ、^８８Ｙ、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^２１１Ａｔ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^２１２Ｂｉ、および^３２Ｐ、他のランタニド）、発光標識、発色団部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子または検出用の金を含みうる。

【0191】

ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、抗体の半減期を増やす一助となるクリアランス改変剤が可能である。実例は、ＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびエチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体などの水溶性ポリマーを含む。ポリマーは、いかなる分子量でもよく、分岐状でも分岐していなくてもよい。抗体に結合しているポリマーの数は変動してもよく、１つよりも多いポリマーが結合している場合、同じまたは異なる分子であることが可能である。

【0192】

ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、磁気ビーズなどの精製部分が可能である。

【0193】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片は、コンジュゲートのためのベースとして使用される。

【0194】

ポリヌクレオチドおよび組換え方法
本開示は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書で使用される用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」とは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）および一本鎖型または二本鎖型のそのポリマーのことである。ある特定の実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１１、１２、１３、および１４に示される１つまたは複数のヌクレオチド配列、ならびに／または少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）配列同一性を有するその相同配列、ならびに／または縮重した置換のみを有するそのバリアントを含み、本明細書で提供される見本となる抗体の可変領域をコードする。別段指示されなければ、特定のポリヌクレオチド配列は、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列ならびに明白に指示される配列も暗黙の裡に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（またはすべての）コドンの第３の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を作製することにより達成しうる（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１頁（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５～２６０８頁（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１～９８頁（１９９４）参照）。

【0195】

モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され塩基配列決定される。コードＤＮＡは合成法により得てもよい。

【0196】

抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド（例えば、表３に示される配列を含む）は、当技術分野で公知の組換え技法を使用して、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のためにまたは発現のためにベクター中に挿入することができる。利用可能なベクターの数は多い。ベクター成分は、一般に、以下の：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および転写終結配列のうちの１つまたは複数を含むがこれらに限定されない。

【0197】

本開示は、本明細書で提供される単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合断片、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーをコードする。ベクターの例は、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ラムダファージ、およびＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓ等を含むがこれらに限定されない。

【0198】

抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターは、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入することができる。本明細書のベクターにおいてＤＮＡをクローニングするまたは発現するのに適した宿主細胞は、上記の原核生物、酵母、または高等真核細胞である。この目的に適した原核生物は、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、大腸菌類（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）などの腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）および赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ならびに枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバシラス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）などの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）を含む。

【0199】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体コードベクターに適したクローニングまたは発現宿主である。出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または一般的パン酵母は、下等真核宿主微生物の中では最も一般的に使用されている微生物である。しかし、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）；例えば、Ｋ・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ・フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ・ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ・ウィッカーラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ・ウォルティ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ・ドロソフィララム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ・サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、およびＫ・マルキシアナス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）などのクリベロマイセス宿主；ヤロウイア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ ４０２，２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）（ＥＰ １８３，０７０）；カンジダ菌（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ ２４４，２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）などのシュワニオミセス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）；および例えば、パンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、アオカビ類（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラディウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）などの糸状菌、ならびに偽巣性コウジ菌（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）およびＡ・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）などのアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主などの多くの他の属、種、および株が一般に利用可能であり本明細書で有用である。

【0200】

本明細書で提供されるグリコシル化抗体または抗原断片の発現に適した宿主細胞は多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例は植物および昆虫細胞を含む。数多くのバキュロウイルス株およびバリアントならびにヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ミバエ）、およびカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）などの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、キンウワバ科（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１バリアントおよびカイコＮＰＶのＢｍ－５株が公開されており、そのようなウイルスは、特に、ヨウトガ細胞のトランスフェクションのための、本明細書の本発明に従ったウイルスとして使用してもよい。綿、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。

【0201】

しかし、脊椎動物細胞への関心が最大であり、培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖がこれまで常法であった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚腎臓株（２９３ ｏｒ ２９３ ｃｅｌｌｓ ｓｕｂｃｌｏｎｅｄ ｆｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９頁（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６頁（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３～２５１頁（１９８０））、サル腎培養細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎培養細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４～６８頁（１９８２））；ＭＲＣ ５細胞：ＦＳ４細胞；およびヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。一部の好ましい実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、２９３およびこれらの誘導体などの哺乳動物培養細胞株である。

【0202】

宿主細胞は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体産生のために上記の発現またはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて改変された従来の栄養培地で培養される。別の実施形態では、抗体は当技術分野で公知の相同組換えにより産生してもよい。ある特定の実施形態では、宿主細胞は本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片を産生することができる。

【0203】

本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片を産生するのに使用される宿主細胞は、種々の培地で培養しうる。ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４頁（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５頁（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；米国特許第４，６５７，８６６号；米国特許第４，９２７，７６２号；米国特許第４，５６０，６５５号；または米国特許第５，１２２，４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号、または米国特許第Ｒｅ．３０，９８５号に記載されている培地のいずれでも宿主細胞用の培養培地として使用しうる。これらの培地のいずれも、必要次第で、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子などの）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩などの）、バッファー（ＨＥＰＥＳなどの）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなどの）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬などの）、微量元素（最終濃度ではマイクロモル範囲で通常存在する無機化合物と定義される）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源を補充してもよい。いかなる他の必要な栄養補助剤も、当業者には知られていると考えられる適切な濃度で含まれてもよい。温度およびｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞を用いて以前使用された培養条件であり、当業者には明らかである。

【0204】

組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に、細胞膜周辺腔に、産生される、または直接培地中に分泌させることができる。抗体が細胞内に産生される場合、第１段階として、微粒子のデブリ、宿主細胞または溶解した断片は、例えば、遠心分離または限外濾過により除去される。Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３～１６７頁（１９９２）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。手短に言えば、細胞ペーストは、約３０分間にわたり酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下で解凍される。細胞デブリスは遠心分離により除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合、そのような発現系からの上澄みは、一般に先ず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置を使用して濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために前述のステップのいずれに含まれていてもよく、抗生物質は偶然の汚染物質の成長を予防するために含まれていてもよい。

【0205】

細胞から調製される抗ＩＦＮＡＲ１抗体およびその抗原結合断片は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥセルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモノウム沈澱、塩析、およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技法である。

【0206】

ある特定の実施形態では、固相上に固定されたプロテインＡは、抗体およびその抗原結合断片の免疫親和性精製に使用される。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依拠する。プロテインＡを使用すれば、ヒトガンマ１、ガンマ２、またはガンマ４重鎖を基盤とする抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１～１３頁（１９８３））。プロテインＧはあらゆるマウスアイソタイプにおよびヒトガンマ３に推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７～１５７５頁（１９８６））。親和性リガンドが結合しているマトリックスはほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリックスが利用可能である。細孔性ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定しているマトリックスは、アガロースにより達成することができるよりも速い流速および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製には有用である。イオン交換カラム上での分画、エタノール沈澱、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィーのアニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなどの）上でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈澱などのタンパク質精製のための他の技法も回収される抗体に応じて利用可能である。

【0207】

任意の予備精製ステップ（複数可）に続いて、目的の抗体と夾雑物の混合物は、溶出バッファーを約２．５～４．５の間のｐＨで使用して低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけ、好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩）で実施してもよい。

【0208】

医薬組成物
本開示は、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。

【0209】

本明細書で開示される医薬組成物において使用するための薬学的に許容される担体は、例えば、薬学的に許容される液体、ゲル、もしくは固体担体、水性媒体、非水性媒体、抗菌剤、等張剤、バッファー、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁／分散剤、封鎖もしくはキレート剤、希釈剤、アジュバンド、賦形剤、または非毒性補助物質、当技術分野で公知の他の成分、またはこれらの種々の組合せを含んでいてもよい。

【0210】

適切な成分は、例えば、抗酸化剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、保存剤、潤滑剤、香味剤、濃厚剤、着色剤、乳化剤または糖およびシクロデキストリンなどの安定化剤を含んでいてもよい。適切な抗酸化剤は、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、および／または没食子酸プロピルを含んでいてもよい。本明細書に開示される場合、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片およびコンジュゲートを含む組成物中へのメチオニンなどの１つまたは複数の抗酸化剤の包含は抗体または抗原結合断片の酸化を減少させる。この酸化の低減は、結合親和性の消失を予防するまたは低減し、それによって抗体安定性を改善し半減期を最大にする。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で開示される１つまたは複数の抗体またはその抗原結合断片およびメチオニンなどの１つまたは複数の抗酸化剤を含む組成物が提供される。抗体または抗原結合断片をメチオニンなどの１つまたは複数の抗酸化剤と混合することにより、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片の酸化を予防し、半減期を延ばし、および／または効力を改善するための方法がさらに提供される。

【0211】

さらに説明すると、薬学的に許容される担体は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張ブドウ糖注射液、減菌水注射液、またはブドウ糖および乳酸加リンゲル液、などの水性媒体、植物性起源の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、またはピーナッツ油などの非水性媒体、静菌性または静真菌性濃度での抗菌剤、塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの等張剤、リン酸またはクエン酸バッファーなどのバッファー、硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、塩酸プロカインなどの局所麻酔剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはポリビニルピロリドンなどの懸濁および分散剤、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ－８０）などの乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸などの封鎖またはキレート剤を含んでいてもよい。フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムならびに塩化ベンゼトニウムを含む、担体として利用される抗菌剤は複数用量容器中において医薬組成物に添加してもよい。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、またはエタノールを含んでいてもよい。適切な非毒性補助物質は、例えば、湿潤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、可溶性エンハンサー、または酢酸ナトリウム、ソルビタンモノウラレート、オレイン酸トリエタノールアミン、もしくはシクロデキストリンなどの薬剤を含んでいてもよい。

【0212】

医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、乳濁液、ピル、カプセル、錠剤、徐放製剤、または粉末が可能である。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、等などの標準担体を含むことができる。

【0213】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、注射用組成物に処方される。注射用医薬組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、乳濁液、または液体溶液、懸濁液、もしくは乳濁液を作製するのに適した固体形態などの任意の従来の形態で調製してもよい。注射用の製剤は、注射の準備ができている無菌および／または非発熱性溶液、植込錠を含む、使用直前に溶媒と組み合わせる準備ができている凍結乾燥粉末などの無菌乾燥可溶性製品、注射の準備ができている無菌懸濁液、使用直前に媒体と組み合わせる準備ができている無菌乾燥不溶性製品、ならびに無菌および／または非発熱性乳濁液を含んでいてもよい。溶液は水性または非水性でもよい。

【0214】

ある特定の実施形態では、単位服用量非経口製剤は、アンプル、バイアルまたは針付きの注射器に詰め込まれる。非経口投与用のすべての製剤は、当技術分野で公知であり実践されているように、無菌で非発熱性であるべきである。

【0215】

ある特定の実施形態では、無菌凍結乾燥粉末は、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片を適切な溶媒に溶解することにより調製される。溶媒は、粉末または粉末から調製された復元溶液の安定性または他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有していてもよい。使用してもよい賦形剤は、水、ブドウ糖、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、サクロースまたは他の適切な薬剤を含むがこれらに限定されない。溶媒は、一実施形態では、約中性のｐＨで、クエン酸、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウムなどのバッファーまたは当業者には公知である他のそのようなバッファーを含有していてもよい。溶液のその後の無菌濾過、続いて当業者には公知である標準条件下での凍結乾燥により望ましい製剤が提供される。一実施形態では、こうして得られた溶液は凍結乾燥のためにバイアル中に配分される。それぞれのバイアルは、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその抗原結合断片またはその組成物の単回投薬量または複数回投薬量を含有することができる。用量または用量のセットに必要な量よりも少量多い（例えば、約１０％）過剰充填バイアルは、正確なサンプル引き出しおよび正確な投与を促進するために容認可能である。凍結乾燥粉末は、約４℃から室温までなどの適切な条件下で保存することができる。

【0216】

注射のための凍結乾燥粉末の水での復元は、非経口投与において使用するための製剤を提供する。一実施形態では、復元では、無菌および／もしくは非発熱性水または他の液体の適切な担体が凍結乾燥粉末に添加される。正確な量は、与えられている選択された療法に依拠しており、経験的に決めることができる。

【0217】

使用方法
本開示は、対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書で提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法も提供する。ある特定の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態は、ＩＦＮαおよび／またはＩＦＮω関連疾患または状態である。

【0218】

一部の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）および／またはＩ型ＩＦＮシグネチャー遺伝子を発現しているまたは過剰発現していることを特徴とする。

【0219】

本明細書で使用される用語「シグネチャー遺伝子」または「遺伝子シグネチャー」または「遺伝子発現シグネチャー」とは、変更されたもしくは変更のない生物学的過程または自己免疫疾患などの病原性の病状の結果として起こる遺伝子発現の独特の特徴的パターンを有する細胞の単一の遺伝子または組合せ群の遺伝子のことである。遺伝子発現シグネチャーにより理論的に定義されうる表現型は、疾患を持つ個人の生存または予後を予測する表現型、疾患の異なるサブタイプを区別するのに使用される表現型から、特定の経路の活性化を予測する表現型までの範囲に及ぶ。遺伝子シグネチャーを使用すれば、理想的には、特定の処置が効果的になる患者の群を選択することができる。

【0220】

ある特定の実施形態では、特定の疾患でのＩ型インターフェロンシグネチャー遺伝子は、マイクロアレイなどの、当技術分野で公知の方法を使用して得ることができる（例えば、Ｌｉら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０年３月；１５９（３）：２８１～２９１頁；およびＨａｒｍａｎら、Ｂｌｏｏｄ ２０１１年 １１８：２９８～３０８頁参照）。

【0221】

ＩＦＮ－ＩまたはＩ型ＩＦＮシグネチャー遺伝子の過剰発現は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、筋肉炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性硬化症、強皮症、多発性硬化症（ＭＳ）、特発性炎症性筋疾患（ＩＩＭ）および関節リウマチ（ＲＡ）を含むいくつかの自己免疫疾患で記述されてきた（Ｐｓａｒｒａｓ Ａ，ら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）５６：１６６２～１６７５頁（２０１７）．、Ｌｅｅ－Ｋｉｒｓｃｈ ＭＡら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ ６８：２９７～３１５頁（２０１７））。ＩＦＮ－Ｉ（Ｋｈａｍａｓｈｔａ Ｍｅｔら、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．；７５（１１）：１９０９～１９１６頁（２０１６））またはＩＦＮＡＲ１（Ｆｕｒｉｅ Ｒｅｔら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ６９：３７６～３８６頁（２０１７））に対する遮断抗体は、活発な中等度から重度のＳＬＥを抱えた処置患者において効果的であることが実証された。

【0222】

ある特定の実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態は、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、これは自己免疫成分を有するウイルス疾患である）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー疱疹状皮膚炎、慢性疲労免疫性機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、乾癬、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性原発性甲状腺機能低下症、グレーブ病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症を伴う破壊性甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、特発性炎症性筋疾患（ＩＩＭ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、若年性関節リウマチ（スチル病）、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、レイノー症候群、掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）、びらん性扁平苔癬、天疱瘡水疱症、表皮水疱症、接触性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎、多発神経根炎、悪性貧血（ｐｅｍａｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ）、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られる）、全身硬直症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、筋肉炎、シェーグレン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、セリアック病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ブドウ膜炎、白斑ならびにウェゲナー肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。

【0223】

ある特定の実施形態では、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化は本明細書で提供される処置方法では阻害されない。本明細書で使用される「阻害されない」とは、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化のレベルに対する阻害が２０％未満であることを意味する。ある特定の実施形態では、処置方法は、治療有効量のＩＦＮβを投与することをさらに含む。ＩＦＮβ投与は、ＩＦＮβ媒介ＩＦＮＡＲ１活性化の少なくとも一部をさらに回復させると考えられている。

【0224】

本明細書で提供される抗体または抗原結合断片の治療有効量は、例えば、体重、年齢、既往歴、現在の薬物、対象の健康状態と交差反応の可能性、アレルギー、感受性および有害な副作用ならびに投与経路および発症の程度などの、当技術分野で公知の種々の要因に依拠する。投薬量は、これらのおよび他の状況または要件により指示を受ける当業者（例えば、医師または獣医）が、比例関係で減らすまたは増やしてもよい。

【0225】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療有効量で投与してもよい。ある特定の実施形態では、投与量は、処置の間に変化してもよい。例えば、ある特定の実施形態では、開始投与量はその後の投与量よりも多い場合がある。ある特定の実施形態では、投与量は、対象の反応に応じて処置の間に変更してもよい。

【0226】

投与計画は最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整してもよい。例えば、単回用量が投与されてもよく、または数回に分けられた用量が時間をかけて投与されてもよい。

【0227】

本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、例えば、非経口（例えば、皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内、または皮内注射）または非経口ではない（例えば、経口、鼻腔内、眼球内、舌下、直腸、または局所）経路などの、当技術分野で公知のいかなる経路で投与してもよい。

【0228】

一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片は、単独でまたは１つもしくは複数の追加の治療手段もしくは治療薬と組み合わせて投与してもよい。例えば、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片は、別の治療薬、例えば、ＩＦＮ－β、抗ＩＦＮα抗体、抗ＩＦＮβ抗体、抗ＴＮＦ抗体、抗ＴＮＦ受容体抗体、または可溶性ＴＮＦ受容体と組み合わせて投与してもよい。

【0229】

これらの実施形態のうちのある特定の実施形態では、１つまたは複数の追加の治療薬と組み合わせて投与される本明細書で開示される抗体または抗原結合断片は、１つまたは複数の追加の治療薬と同時に投与してもよく、これらの実施形態のうちのある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片および追加の治療薬（複数可）は同じ医薬組成物の一部として投与してもよい。しかし、別の治療薬と「組み合わせて」投与される抗体または抗原結合断片は、薬剤と同時にまたは薬剤と同じ組成物で投与される必要はない。別の薬剤に先立ってまたはその後で投与される抗体または抗原結合断片は、たとえ抗体または抗原結合断片および第２の薬剤が異なる経路を経て投与されようと、本明細書で使用されるその語句通りにその薬剤と「組み合わせて」投与されると見なされる。可能な場合には、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与される追加の治療薬は、追加の治療薬の製品情報シートに収載されるスケジュールに従って、または医師用添付文書集（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５７版、；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；第５７版（２００２年１１月））もしくは当技術分野で周知のプロトコールに従って投与される。

【0230】

本開示は、ＩＦＮαおよび／またはＩＦＮωを発現しているまたは過剰発現している細胞の生物活性を阻害する方法であって、細胞を本明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法をさらに提供する。

【0231】

一部の実施形態では、本開示は、試料中でＩＦＮＡＲ１の存在またはレベルを検出する方法であって、試料を明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む方法を提供する。

【0232】

一部の実施形態では、本開示は、明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片および使用説明書を含み、任意選択で検出可能な部分にコンジュゲートされた検出または治療キットを提供する。キットは、ＩＦＮＡＲ１の検出またはＩ型ＩＦＮ関連疾患もしくは状態のための治療用途に有用でもよい。

【0233】

一部の実施形態では、本開示は、対象においてＩ型ＩＦＮ関連疾患または状態を処置するための薬物の製造における、Ｉ型ＩＦＮ関連疾患または状態を診断するための診断試薬の製造における明細書で提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。

【0234】

以下の実施例は、請求する発明をもっとよく説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。下に記載されるすべての特定の組成物、材料、および方法は、全体においてまたは一部において、本発明の範囲内に収まる。これらの特定の組成物、材料、および方法は、本発明を限定することを意図しておらず、本発明の範囲に収まる特定の実施形態を説明することが意図されているだけである。当業者であれば、発明の能力を発揮しなくても、本発明の範囲から逸脱せずに、等価な組成物、材料、および方法を開発しうる。本発明の範囲内にまだ留まりながら記載される本明細書の手順で多くの変動を加えることができることは理解されるであろう。そのような変動が本発明の範囲内に含まれることは本発明者たちが意図することである。

【実施例】

【0235】

材料
リポフェクタミン２０００はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から購入した。アイソタイプ対照はＢｉｏｌｅｇｅｎｄ社から購入した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株はＡＴＣＣから購入した製品であった。ヒトＩＦＮα２ｂはＣｅｄａｒｌａｎｅ社から購入した製品であった。１２の異なるＩＦＮαサブタイプはＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅから購入した。ヒトＩＦＮωはＲ＆Ｄ社から購入した製品であった。ヒトＩＦＮβはＰｅｐｒｏＴｅｃｈから購入した。

【0236】

ＰＢＳ溶液は以下の通り調製した。０．２７ｇのＫＨ_２ＰＯ_４、１．４２ｇのＮａ_２ＨＰＯ_４、８ｇのＮａＣｌ、および０．２ｇのＫＣｌを適量の水に溶解し、ｐＨは７．２～７．４に調整した。最終容積は水で１Ｌに合わせた。

【0237】

ＦＡＣＳバッファーは２％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清および２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ溶液であった。

【0238】

ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体１０Ｃ２および１０Ｃ９は、国際公開第２０１８／０１０１４０号の開示に従って調製した。

【0239】

ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体を作製する方法は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９５年 ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．を参照した。

【実施例1】

【0240】

ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の産生
抗体７Ｇ４および１０Ｃ５は、従来のハイブリドーマアプローチを使用して産生した。一般には、マウスをヒトＩＦＮＡＲ１抗原で免疫化し、脾臓細胞を採取し不死化細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞株を作製した。ハイブリドーマ細胞から分泌される抗体は、ヒトＩＦＮＡＲ１との結合親和性についてスクリーニングし、７Ｇ４および１０Ｃ５抗体を発現するハイブリドーマ細胞株を特定した。

【0241】

ハイブリドーマ細胞株７Ｇ４および１０Ｃ５は、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して溶解し、製造業者の説明書に従ってハイブリドーマ細胞株のＲＮＡを抽出した。得られたＲＮＡ溶液は、オリゴｄＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。得られたｃＤＮＡを鋳型として使用して、ＰＣＲ増幅を重鎖プライマー対（重鎖プライマーＦおよび重鎖プライマーＲを含む）および軽鎖プライマー対（軽鎖プライマーＦおよび軽鎖プライマーＲを含む）を使用して実行した。下の表５を参照されたい。

【0242】

【表4】

【0243】

重鎖をコードする断片および軽鎖をコードする断片は順次得られ、塩基配列決定される。

【0244】

抗体７Ｇ４の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は図６に示されており、ＣＤＲ１（アミノ酸残基３１～３５）、ＣＤＲ２（アミノ酸残基５０～６６）、およびＣＤＲ３（アミノ酸残基９９～１１２）の配列は、それに応じて印をつけられている。

【0245】

抗体７Ｇ４の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は図７に示されており、ＣＤＲ１（アミノ酸残基２４～３４）、ＣＤＲ２（アミノ酸残基５０～５６）、およびＣＤＲ３（アミノ酸残基８９～９７）の配列は、それに応じて印をつけられている。

【0246】

抗体１０Ｃ５の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は図８に示されており、ＣＤＲ１（アミノ酸残基３１～３５）、ＣＤＲ２（アミノ酸残基５０～６６）、およびＣＤＲ３（アミノ酸残基９９～１１２）の配列は、それに応じて印をつけられている。

【0247】

抗体１０Ｃ５の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は図９に示されており、ＣＤＲ１（アミノ酸残基２４～３４）、ＣＤＲ２（アミノ酸残基５０～５６）、およびＣＤＲ３（アミノ酸残基８９～９７）の配列は、それに応じて印をつけられている。

【0248】

４．抗体配列の分析
抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の核酸断片は、ｉｇｂｌａｓｔツール（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）を使用して分析した。ＶドメインはＫａｂａｔ番号付け方式を使用して描写される。結果は以下の通りであった。

【0249】

両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の重鎖をコードするＶ遺伝子、Ｄ遺伝子およびＪ遺伝子は、それぞれマウスＩＧＨＶ１－６９遺伝子、ＩＧＨＤ２－４遺伝子およびＩＧＨＪ４遺伝子に対応している。マウスＶ領域（配列番号１５）の抗体７Ｇ４（配列番号７）および抗体１０Ｃ５（配列番号９）の重鎖可変領域のアミノ酸配列間のアライメント結果は図１０に示されている。両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の軽鎖をコードするＶ遺伝子およびＪ遺伝子は、それぞれマウスＩＧＫＶ１３－８４遺伝子およびＩＧＫＪ４遺伝子に対応している。マウスＶ領域（配列番号１６）の抗体７Ｇ４（配列番号８）および抗体１０Ｃ５（配列番号１０）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列間のアライメント結果は図１１に示されている。

【実施例2】

【0250】

７Ｇ４および１０Ｃ５はヒトＩＦＮ－Ｉ受容体ＩＦＮＡＲ１に結合する
７Ｇ４および１０Ｃ５抗体の結合は下に簡潔に記載されている手順に従って、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して試験した。

【0251】

完全長ヒトＩＦＮＡＲ１の発現ベクターを構築した。ヒトＩＦＮＡＲ１完全長ＣＤＳ配列（ＮＭ＿０００６２９）を、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｕ．Ｓ．；第４版、２０１２年に記載されている一般手順に従って、制限部位ＮｈｅＩおよびＥｃｏＲＩによってベクターｐＩＲＥＳ２－ＥＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅから購入）中に挿入した。構築物プラスミドｐＩＲＥＳ２－ＥＧＦＰ－ＩＦＮＡＲ１はこのようにして入手した。

【0252】

プラスミドｐＩＲＥＳ２－ＥＧＦＰ－ＩＦＮＡＲ１を、リポフェクタミン２０００を使用してＨＥＫ２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。２４時間後、細胞はＰＢＳ中２ｍＭのＥＤＴＡで希釈して単細胞浮遊液を作製し、これをその後１０，０００細胞／２００μＬ／ウェルの密度で９６ウェルＵ字形底プレートに添加した。２２００ｒｐｍで３分間の遠心分離後上澄みは破棄し、細胞ペレットを収集して再懸濁した。

【0253】

試験抗体（７Ｇ４または１０Ｃ５またはアイソタイプ抗体）をＦＡＣＳバッファーで濃度１０μｇ／ｍｌまで希釈し、４℃で３０分間再懸濁細胞ペレットと一緒にインキュベートした。インキュベーション後、細胞は、次の遠心分離および再懸濁前に、遠心分離し２００μＬのＦＡＣＳバッファーで再懸濁した。

【0254】

１対４００でＦＡＣＳバッファーに希釈したＰＥ標識化ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）をそれぞれのウェルに添加した。細胞は再懸濁し、暗所で４℃、３０分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートは遠心分離し、上澄みは破棄し、細胞は上記の通りに１回洗浄し、２００μＬのＦＡＣＳバッファーを添加することにより再懸濁した。最後に、再懸濁細胞を、フローサイトメトリーＧｕａｖａ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して細胞ＧＦＰおよびＰＥシグナルについて分析した。

【0255】

結果は図１Ａおよび１Ｂに示されている。プロット中のＧＦＰ陽性細胞が右に移動したので、７Ｇ４と１０Ｃ５の両方の抗体がヒトＩＦＮＡＲ１を過剰発現している細胞に特異的に結合することが明らかにされた。

【実施例3】

【0256】

ヒトＩＦＮＡＲ１の異なる切詰型への７Ｇ４と１０Ｃ５の結合
異なる長さと切詰型を有するヒトＩＦＮＡＲ１バリアントを構築し、２９３Ｔ細胞上で発現させた。バリアントは、ＩＦＮＡＲ１－ａａ１－５５７（すなわち、完全長）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ３２－１２６（すなわち、アミノ酸残基３２～１２６にまたがるサブドメインを欠く）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ１２７－２２７（すなわち、アミノ酸残基１２７～２２７にまたがるサブドメインを欠く）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ２３１－３２９（すなわち、アミノ酸残基２３１～３２９にまたがるサブドメインを欠く）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ３３１－４３２（すなわち、アミノ酸残基３３１～４３２にまたがるサブドメインを欠く）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ３２－１２６、Δａａ３３１－４３２（すなわち、アミノ酸残基３２～１２６にまたがるサブドメインとアミノ酸残基３３１～４３２にまたがるサブドメインの両方を欠く）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ２３１－４３２（すなわち、アミノ酸残基２３１～４３２にまたがるサブドメインを欠く）、およびＩＦＮＡＲ１－Δａａ３２－２２７（すなわち、アミノ酸残基３２～２２７にまたがるサブドメインを欠く）を含む。

【0257】

それぞれ８つのヒトＩＦＮＡＲ１バリアントを過剰発現している２９３Ｔ細胞への７Ｇ４および１０Ｃ５抗体の結合は、実施例１の手順に従ってフローサイトメトリーにより検出した。

【0258】

図２Ａおよび図２Ｂに示されているように、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５は、８つの試験されたヒトＩＦＮＡＲ１バリアントへの類似する結合特徴を示した。具体的には、７Ｇ４および１０Ｃ５は両方が、完全長ＩＦＮＡＲ１（すなわち、ＩＦＮＡＲ１－ａａ１－５５７）、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ３２－１２６、ＩＦＮＡＲ１－Δａａ３３１－４３２およびＦＮＡＲ１－Δａａ３２－１２６、Δａａ３３１－４３２に結合し、これら４つのバリアントへの結合活性は類似しているようであった。結果は、両抗体がヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基３２～１２６、またはアミノ酸残基３３１～４３２にまたがる断片に結合しないことも示していた。なぜならば、いずれか１つのまたは両断片の非存在が、ヒトＩＦＮＡＲ１トランケート型バリアントへの両抗体の結合に影響を与えていないようだったからである。両抗体はＩＦＮＡＲ１－Δａａ３２－１２６、Δａａ３３１－４３２によく結合し、ヒトＩＦＮＡＲ１の１２７－３３０ａａ断片がヒトＩＦＮＡＲ１への７Ｇ４および１０Ｃ５の結合にとって十分であったことを示している。

【0259】

しかし、ヒトＩＦＮＡＲ１への両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の結合は、アミノ酸残基１２７～２２７およびアミノ酸残基２３１～２３９にまたがる断片のいずれかまたは両方が欠損していると消失した。これにより、両抗体が、ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１２７～２２７内の第１の結合断片とアミノ酸残基２３１～２３９内の第２の結合断片の両方に結合することが明らかにされた。

【0260】

これは、７Ｇ４および１０Ｃ５の結合エピトープがヒトＩＦＮＡＲ１の１２７～３２９ａａ断片内にある可能性があることを証明している。

【実施例4】

【0261】

７Ｇ４および１０Ｃ５は１０Ｃ２および１０Ｃ９のエピトープとは異なるエピトープでヒトＩＦＮＡＲ１に結合する
７Ｇ４および１０Ｃ５の結合エピトープをさらに調べ、１０Ｃ２および１０Ｃ９のエピトープと比較するため、ヒト／マウスキメラＩＦＮＡＲ１バリアント（すなわち、ＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４）を構築し、２９３Ｔ上で発現させた。ＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４は配列番号６９のアミノ酸配列を有し、すなわち、野生型ヒトＩＦＮＡＲ１中のアミノ酸残基１４９～２１４にまたがる断片（配列番号６３）がマウスＩＦＮＡＲ１ホモグラフィック配列（配列番号６４）で置き換えた。それぞれＩＦＮＡＲ１－ＷＴおよびＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４を過剰発現する２９３Ｔへの１０Ｃ２、１０Ｃ９、７Ｇ４および１０Ｃ５抗体への結合は、実施例１の手順に従ってフローサイトメトリーにより検出した。抗体は図１４Ａ～１４Ｄでの指示濃度に希釈された。

【0262】

図１４Ａおよび図１４Ｂに示されているように、１０Ｃ２および１０Ｃ９は、ＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４への結合を全く示さないまたは著しく減少した結合を示したが、１０Ｃ２と１０Ｃ９の両方は野生型ＩＦＮＡＲ１には濃度依存的結合を示した。これとは対照的に、７Ｇ４と１０Ｃ５の両方は、野生型ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ１－ｍ１４９－２１４には匹敵する結合を示した（図１４Ｃおよび図１４Ｄ）。

【0263】

これにより、７Ｇ４と１０Ｃ５が１０Ｃ２と１０Ｃ９とはヒトＩＦＮＡＲ１上の結合部位が異なることがはっきり示された。具体的には、ヒトＩＦＮＡＲ１のアミノ酸残基１４９～２１４にまたがる断片が、１０Ｃ２および１０Ｃ９がヒトＩＦＮＡＲ１に結合するのに必要であることが明らかにされた。しかし、７Ｇ４および１０Ｃ５については結果は異なっており、この断片への７Ｇ４および１０Ｃ５の結合が１０Ｃ２および１０Ｃ９の結合とは異なっていることを示している。

【実施例5】

【0264】

レポーター細胞株におけるヒトＩＦＮ－Ｉの生物活性を遮断することに対する抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の効果
ＩＦＮ－Ｉレポーター細胞株を、国際公開第２０１８／０１０１４０号に記載される通りに構築した。レポーター細胞を９６ウェルプレートに添加し（３０，０００細胞／２００μＬ／ウェル）、２４時間培養した。細胞培養の上澄みは取り除き、細胞は、抗体濃度１０μｇ／ｍＬで１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを補充したＤＭＥＭで希釈したそれぞれの試験抗体（７Ｇ４または１０Ｃ５）で処理した。次に、細胞は、１００μＬのＤＭＥＭ中１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮα２ｂ、または５０ｐｇ／ｍｌのヒトＩＦＮβで処理する前に、３７℃で１時間インキュベートした。異なるヒトＩＦＮα因子、すなわち、ＩＦＮα２ａ、ＩＦＮα８、ＩＦＮα１０、ＩＦＮα１、ＩＦＮα２１、ＩＦＮα５、ＩＦＮα１４、ＩＦＮα１７、ＩＦＮα７、ＩＦＮα６、ＩＦＮα４、およびＩＦＮα１６も、その因子それぞれを、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００、１０００、３０００ユニット／ｍＬの段階希釈で試験したこと以外、別々に試験した。ＩＦＮωも、濃度が５０ｐｇ／ｍｌであったこと以外別々に試験した。処理した細胞は、細胞をフローサイトメトリーにより分析してレポーター細胞でのＩＦＮ誘導ＧＦＰ発現に対する抗体の遮断効果を判定する前に、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間さらに培養した。

【0265】

遮断効果は、（対照抗体のＧＦＰ陽性率－遮断抗体のＧＦＰ陽性率）／（対照抗体のＧＦＰ陽性率－ブランク対照のＧＦＰ陽性率）＊１００％として計算することができる。

【0266】

実験結果は表６および図３に示されている。

【0267】

【表5】

【0268】

表６に示されるように、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５は、１３の異なるＩＦＮα因子すべてによりおよびＩＦＮωにより誘導されるＧＦＰ発現を遮断し、すべてが８０％よりも大きな阻止率であった。これは、抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体として知られた対照抗体１０Ｃ２および１０Ｃ９で観察された結果に匹敵していた。しかし、１０Ｃ２および１０Ｃ９とは対照的に、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が示したのは、ＩＦＮβにより誘導されるＧＦＰ発現の遮断の１０％未満であり、これは、１０Ｃ２および１０Ｃ９で観察された結果よりはるかに低く、１０Ｃ２および１０Ｃ９ではＩＦＮβにより誘導されるＧＦＰ発現に対して４０％～８０％の間の阻止率であった。

【0269】

図３でも類似する結果が示されている。ＧＦＰ陽性細胞の割合は、ＩＦＮα、ＩＦＮωおよびＩＦＮβを含む、ＩＦＮ－Ｉの活性化シグナルを反映していた。全くインターフェロンを添加しなければ（Ｍｏｃｋ対照）、バックグラウンド割合は約５％であった。１ｎｇ／ｍＬのヒトＩＦＮα２ｂ、５０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮω、および５０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮβの添加はすべて、ＧＦＰ陽性細胞の割合の５倍を超える増加（すなわち、３０％、４０％を超えるまで、または５０％を超えるまで）を誘導した。これは、ヒトＩＦＮＡＲ１の活性化を示す。図３Ｂに示される１２の他のＩＦＮαサブタイプは、Ｍｏｃｋ対照と比べて５倍を超える活性化を与える閾値濃度で添加された。

【0270】

７Ｇ４と１０Ｃ５の両方は、ヒトＩＦＮα２ｂおよびＩＦＮωの生物活性を有意に遮断し、シグナルを１０％を下回るまで、またはＭｏｃｋ対照に匹敵するまで抑制した（図３Ａ、３Ｃ）。１２の異なるヒトＩＦＮαサブタイプに対しても類似する遮断効果が観察された（図３Ｂ）。

【0271】

ＩＦＮαおよびＩＦＮωに対する遮断に反して、７Ｇ４と１０Ｃ５の両方が示すヒトＩＦＮβに対する遮断効果は最小の検出または非検出であり（図３Ｄ）、７Ｇ４および１０Ｃ５の存在下でのシグナルはアイソタイプ対照のシグナルに匹敵していた（例えば、４０％を超える）。これは、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５を既存の抗体１０Ｃ２と区別し、１０Ｃ２はヒトＩＦＮβ媒介活性化をまだ遮断し、約２０％のシグナル、すなわち、７Ｇ４および１０Ｃ５について観察されるシグナルの半分しか示さなかった。ヒトＩＦＮβを遮断する効果では７Ｇ４と１０Ｃ５の間で有意差は観察されなかった。

【0272】

結論として、ＩＦＮＡＲ１モノクローナル抗体７Ｇ４および１０Ｃ５は、すべてのＩＦＮαサブタイプおよびＩＦＮωを遮断することができるが、ＩＦＮβは遮断しなかった。

【実施例6】

【0273】

ＩＦＮα２ｂおよびＩＦＮβによるウイルス複製の阻害を遮断する際の抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の効果
手短に言えば、ＩＦＮα２ｂまたはＩＦＮβの存在下でまたはヌルで（Ｍｏｃｋ対照として）ウイルス複製アッセイにおいて抗体を試験した。１日目、試験細胞は１２ウェルプレートにおいてポリ－Ｌ－リジン処理を用いて調製した。２日目、それぞれの抗ＩＦＮＡＲ１試験抗体（すなわち、アイソタイプ、１０Ｃ２、７Ｇ４、または１０Ｃ５）を１０μｇ／ｍｌで細胞中に添加して１時間インキュベートし、その後ＩＦＮαまたはＩＦＮβを添加し、続いてインキュベートした（例えば、１時間または８時間）。次に、ウェルを洗浄し、細胞に適切な試験ウイルスを適切な感染多重度（ＭＯＩ）で感染させた。２４または４８時間後、ルシフェラーゼ活性を試験した（Ｐｒｏｍｅｇａ）。異なる試験ウイルスについてのアッセイ設定は下の表７に収載された。

【0274】

【表6】

【0275】

図４Ａ、４Ｃ、および４Ｅに示されるように、ＩＦＮαが存在する場合、ウイルス複製レベルは有意に阻害され（アイソタイプについての結果参照）、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が存在するとウイルス複製はＭｏｃｋ対照（すなわち、ＩＦＮαの非存在）のレベルに匹敵するレベルにまで回復した。そのような結果は１０Ｃ２の場合も示され、ＩＦＮα媒介ＩＦＮＡＲ１活性化の阻害に起因していた。

【0276】

アイソタイプについての結果では、図４Ｂ、４Ｄ、および４Ｆで示すように、ＩＦＮβもウイルス複製レベルを有意に阻害した。しかし、ＩＦＮαを用いた結果に反して、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が存在してもウイルス複製レベルを変化させず、そのレベルはアイソタイプ対照を用いて観察されたレベルと同じくらい低いままであった。これとは対照的に、抗体１０Ｃ２は、アイソタイプ対照のレベルよりも有意に上のレベルまでのウイルス複製の回復を示した。これは、両抗体７Ｇ４および１０Ｃ５がＩＦＮβ媒介ウイルス複製阻害を遮断しないことをさらに実証し、これにより、両抗体と１０Ｃ２などの既存の抗体が区別された。

【実施例7】

【0277】

ＳＬＥ患者由来の血清においてＩＦＮ－Ｉを遮断する際の抗体７Ｇ４および１０Ｃ５の効果
アッセイは、１ｎｇ／ｍＬのヒトＩＦＮα２ｂをＳＬＥ患者由来の血清で置き換えたことを除いて、実施例５による同じ手順に従って実施した。他のステップは変えないでおいた。すなわち、ＩＦＮ－Ｉレポーター細胞株をそれぞれの抗体で処理し、続いてＳＬＥ患者由来の血清と一緒にインキュベートし、ＧＦＰ陽性細胞の比率を決定した。

【0278】

結果は図５に示されている。アイソタイプ抗体は、約１５％のＧＦＰ陽性細胞の割合を示しており、ＩＦＮＡＲ１がＳＬＥ患者由来の血清中のＩＦＮ－Ｉにより活性化されたことを示している。比較すると、３つの試験抗体、１０Ｃ２、７Ｇ４、および１０Ｃ５すべてが、Ｍｏｃｋ対照のレベル、すなわち、ＳＬＥ患者血清の非存在下に匹敵するレベルにまで、その割合をほぼ３倍阻害した。これは、抗体７Ｇ４および１０Ｃ５が、ＳＬＥ患者血清中のＩＦＮ－Ｉにより媒介されるＩＦＮＡＲ１活性化を阻害するのに比較できるほどに効果的であることを示していた。

【実施例8】

【0279】

抗体ヒト化
１．親抗体の配列分析
ＶＨ／ＶＬ ＣＤＲ残基はＫａｂａｔ番号付け方式を用いて注釈をつけた（図６～９参照）。配列分析では、ＣＤＲ内の不対システイン残基、Ｎ－グリコシル化部位、および脱アミノ化部位を含む大きく危険なホットスポットは明らかにならなかった。

【0280】

２．ヒト生殖系列アクセプターファミリーサブセットの選択
マウス抗体とヒト生殖系列フレームワーク領域の間の配列相同性に基づいて、最良のヒト生殖系列フレームワークアクセプター、ＩＧＨＶ１－４６^＊０１およびＩＧＫＶ１Ｄ－３９^＊０１をＣＤＲ移植のために選択した。ＩＧＨＶ１－４６^＊０１およびＩＧＫＶ１Ｄ－３９^＊０１のコードされたアミノ酸配列は、配列番号５９および６０に提供されている。ヒトＪ－領域は、最良の配列相同性に基づいて選択した。

【0281】

３．逆突然変異設計
相同性モデルの３Ｄ構造に従って、ＣＤＲの５Å距離内の残基を潜在的逆突然変異部位として選択した。なぜならば、露出した残基は抗原結合に直接関与している可能性があり、埋もれた残基はＣＤＲ立体構造を維持するのに重要である可能性があるからである。ＶＨ／ＶＬ境界面を分析し、逆突然変異は立体衝突などの問題が特定されたところに導入された。個々の逆突然変異の重要性は、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ分析により判定され、単一逆突然変異の異なる組合せを含有する操作された抗体のパネルが設計された。

【0282】

４．操作された抗体の作製
組換えＤＮＡ構築物は遺伝子合成され、抗体発現のために選択されたヒトＩｇ骨格にサブクローニングされた。それぞれ４つの異なるヒト化ＶＨおよび４つの異なるヒト化ＶＬを得た。全部で１６の操作されたＬＣ／ＨＣ構築物をハイスループットフォーマットで同時発現させ、これからＨＥＫ２９３細胞株から一過性に発現される抗体のパネルを得た。次に、これらの抗体をプロテインＡカラムを使用して精製し、１×ＰＢＳ ｐＨ７．４に処方した。結合、機能的および生物物理的特徴付けために約１ｍｇのそれぞれのタンパク質を産生した。

【0283】

ヒト化７Ｇ４の１６のクローンは表８に収載されている。

【0284】

【表7】

【実施例9】

【0285】

ヒト化７Ｇ４抗体の特徴付け
１．ヒト化抗体はＥＬＩＳＡを使用して結合親和性について試験した
９６ウェルプレートに、１×ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌのヒトＩＦＮＡＲ１ ＥＣＤを１００μｌ用いて表面を覆い、４℃で一晩インキュベートした。次に、プレートをＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄して、ＲＴで２時間遮断バッファー（１×ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０＋１％のＢＳＡ）で遮断した。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄後、精製したヒト化７Ｇ４抗体（Ｈｕ７Ｇ４）を１００μｌ／ウェルで添加し、ＲＴで１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、続いて１００μｌ／ウェルで抗体（ヤギで産生された抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）－ペルオキシダーゼ抗体、ＺＳＧＢ－ＢＩＯ）を添加し、次に、ＲＴで１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで５回洗浄し、次に１００μｌ／ウェルのＴＭＢを添加して、１５分後、プレートは５０μｌ／ウェルの２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４でクエンチした。プレートは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅ ｓｐｅｃｔｒａ ｍａｘを用いて４５０ｎｍで読み取った。

【0286】

結果は図１２に示した。試験したバリアント全てが、ＩＦＮＡＲ１への匹敵する結合活性を示し、ＥＣ_５０は約０．００２～０．００４μｇ／ｍｌであった。

【0287】

２．ヒトＩＦＮＡＲ１へのＨｕ７Ｇ４バリアントの結合はＢｉａｃｏｒｅを使用して試験した
材料および試薬

【0288】

【表8】

【0289】

ＣＭ５チップ表面の調製：ランニングバッファーとしてＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）を使用して、ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１０００－３０）の両チャネル１＆２を、５０ｍＭのＮＨＳと２００ｍＭのＥＤＣの新鮮な混合物（１対１）で活性化した。次に、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ、１０ｍＭのＮａＯＡｃバッファー（ｐＨ５．０）中２０μｇ／ｍｌを、２つのフローセルの活性化された表面上をそれぞれのチャネルに１０μｌ／分で通過させた（標的約１００００ＲＵ）。残りの活性な結合部位は、１Ｍのエタノールアミンの１０分間注入で遮断した。低い流速は、固定化したタンパク質の平衡のために２時間にわたり維持された。

【0290】

２．結合速度論の測定：それぞれの抗体は、参照細胞としてＦＣ１を使用して、フローセルＦＣ２のそれぞれ約２５０ＲＵのチャネル１＆２において捕捉し、続いて抗原試料を様々な濃度で注入した。捕捉された抗体のないシグナルから差し引かれた捕捉された抗体を持つシグナルは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェアで計算した。ランニングバッファーは、ＨＢＳ－ＥＰ＋（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）であった。

【0291】

抗体－抗原相互作用の結果は下の表９に示された。

【0292】

【表9】

【0293】

３．Ｈｕ７Ｇ４バリアントの遮断活性
レポーター細胞株でのヒトＩＦＮ－Ｉの生物活性を遮断することに対するＨｕ７Ｇ４バリアントの効果は、実施例５での方法に類似する方法を使用して試験した。試験したＨｕ７Ｇ４バリアント（Ｈｕ４－５～Ｈｕ４－１６）はＩＦＮαに対する遮断活性を維持する（図１３Ａ）が、ＩＦＮβを阻害しない（図１３Ｂ参照）。

【実施例10】

【0294】

ヒト化７Ｇ４抗体は、ヒトＩＦＮＡＲ１への結合能力は変化しないで、ＣＤＲ配列でのアミノ酸残基置換を許容した
１．ヒトＩＦＮＡＲ１に対するヒト化モノクローナル抗体の産生
ヒト化抗体Ｈｕ４－６は変異の基盤として選択された。３つの変異体：Ｍｕｔ－１（Ａ１０８Ｇ、ＨＣＤＲ３中）、Ｍｕｔ－２（Ｔ５３ＳおよびＳ５６Ｔ、ＬＣＤＲ２中）、およびＭｕｔ－３（Ａ１０８Ｇ ＨＣＤＲ３中、Ｔ５３ＳおよびＳ５６Ｔ ＬＣＤＲ２中）が作製された。３つの変異体の配列は表１０に示された。

【0295】

【表10】

【0296】

重鎖および軽鎖の完全長コード領域を、抗体発現のために選択されたヒトＩｇ骨格中にクローニングした。１００ｍｍ皿のＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、重鎖遺伝子を含有するプラスミドと軽鎖遺伝子を含有するプラスミドを１対１の比で、リポフェクタミン２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により同時トランスフェクトした。培養上澄みはトランスフェクション後２４時間、４８時間および７２時間で収穫した。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、プロテインＡ親和性樹脂（ＲＥＰＬＩＧＥＮ）を使用して培養上澄みから精製した。

【0297】

２．ヒトＩＦＮＡＲ１への突然変異抗体の結合能力
ヒトＩＦＮＡＲ１への抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体の結合を試験するため、抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体およびアイソタイプ対照ｍＡｂを、図１５Ａ～１５Ｂに指示された濃度でＦＡＣＳバッファーに希釈した。フローサイトメトリーは実施例１の手順に従った。

【0298】

それぞれの試料についてのＰＥの中央値蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して、ヒトＩＦＮＡＲ１への抗体の結合能力を決定した。

【0299】

図１５Ｂに示されているように、ＣＤＲ領域での１つまたは複数のアミノ酸残基の置換はすべて、ヒトＩＦＮＡＲ１への本明細書で開示される抗体の結合効率に影響を与えなかった。

【0300】

本開示は特定の実施形態（その一部は好ましい実施形態である）を参照して具体的に示され記載されてきたが、本明細書に開示される本開示の精神および範囲から逸脱することなく、形態および詳細における種々の変化をその中に加えてもよいことは当業者であれば理解するはずである。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16-1】

【図16-2】

【図16-3】

【図16-4】

【図16-5】

【配列表】

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