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特許7387585混合系統白血病（ＭＬＬ）特異的ホスホペプチドに結合するＴ細胞受容体およびその使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-11-17
(45)【発行日】2023-11-28
(54)【発明の名称】混合系統白血病（ＭＬＬ）特異的ホスホペプチドに結合するＴ細胞受容体およびその使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/12 20060101AFI20231120BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20231120BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231120BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20231120BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20231120BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20231120BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20231120BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20231120BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20231120BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231120BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20231120BHJP
【ＦＩ】
C12N15/12 ZNA
C07K14/725
C12N5/10
C12N5/0783
C12P21/02 C
A61K38/17
A61K31/7088
A61K35/17
A61K48/00
A61P35/00
A61P37/04
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2020512821
(86)(22)【出願日】2018-09-04
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-11-12
(86)【国際出願番号】 US2018049397
(87)【国際公開番号】W WO2019046856
(87)【国際公開日】2019-03-07
【審査請求日】2021-09-06
(31)【優先権主張番号】62/553,957
(32)【優先日】2017-09-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】515124598
【氏名又は名称】アジェナス インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】マルク・ファン・デイク
(72)【発明者】
【氏名】エカテリーナ・ウラジーミロヴナ・ブレオウス－ニストロム
(72)【発明者】
【氏名】アレッサンドラ・フランチーノ
(72)【発明者】
【氏名】セバスチャン・ラルヴェ
(72)【発明者】
【氏名】アーサー・アンドリュー・ハーウィッツ
(72)【発明者】
【氏名】マーク・エイドリアン・エクスレイ
(72)【発明者】
【氏名】ベンジャミン・ジェイコブ・ウルフ
【審査官】西 賢二
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１１／１４９９０９（ＷＯ，Ａ２）
【文献】PubMed Central, [online], PMCID: PMC4071620, Cobbold, M. et al.，"MHC class-I associated phosphopeptides are the targets of memory-like immunity in leukemia"，Sci. Transl. Med. Author manuscript; available in PMC 2014 Jun 26，Vol. 5, 203ra125，2013年，pp. 1-23, Supplementary Materials，Internet, [retrieved on 2020.07.20], <URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4071620/>
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ａ６１Ｋ ３８／００－３８／５８
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１１、１６、及び２１に示されるアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α及びＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）、ならびに配列番号２６、３１、及び３６に示されるアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、及びＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）
を含む、混合系統白血病（ＭＬＬ）ホスホペプチドを結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
【請求項2】
配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶα、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶβを含む、請求項１に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項3】
配列番号５８のアミノ酸配列を含むα鎖、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項１又は２に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項4】
前記ＴＣＲが、（ａ）ヒトＴＣＲである；及び／又は
（ｂ）全長ＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、若しくは単鎖ＴＣＲである、
請求項１～３のいずれか１項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項5】
前記ＴＣＲが、エフェクター部分に結合しており、任意で、前記エフェクター部分が、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、検出可能な標識、又は結合部分であり、任意で、前記結合部分が、抗体又は抗体Ｆｃ領域である、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離されたＴＣＲ。
【請求項6】
請求項１～４のいずれか１項に記載のＴＣＲのα鎖可変領域及びβ鎖可変領域、又はα鎖及びβ鎖を含むポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、任意で、前記ポリヌクレオチドが、ベクター内に含まれ、任意で、前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及びバキュロウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項7】
請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む改変された細胞。
【請求項8】
細胞表面に請求項１～５のいずれか１項に記載のＴＣＲを提示する改変された細胞であって、任意で、前記細胞が、前記ＴＣＲを発現する、並びに／又は、前記細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から任意で選択される、ヒトリンパ球である、改変された細胞。
【請求項9】
請求項６に記載のポリヌクレオチドによってコードされる単離されたＴＣＲ。
【請求項10】
請求項１～４若しくは９のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項６に記載のポリヌクレオチド、又は請求項７若しくは８に記載の改変された細胞、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項11】
（ａ）配列番号４５若しくは４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを生成する方法であって、前記方法が、ポリヌクレオチドが発現して前記ＴＣＲが生成されるように請求項８に記載の改変された細胞を培養することを含む、方法；又は（ｂ）配列番号４５若しくは４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを発現する改変された細胞を生成する方法であって、前記方法が、請求項６に記載のポリヌクレオチドと細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで接触させることであって、前記細胞への前記ポリヌクレオチドの導入を可能とする条件下で、接触させることを含む、方法。
【請求項12】
（ａ）対象におけるがんの治療；及び／又は（ｂ）対象における配列番号４５若しくは４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する細胞に対する免疫応答の誘導
における使用のための、請求項１～４若しくは９のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項６に記載のポリヌクレオチド、請求項７若しくは８に記載の改変された細胞、又は請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項13】
（ａ）前記ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、若しくは医薬組成物が、静脈内投与され、（ｂ）追加の治療薬が、前記対象に投与され、
前記追加の治療薬が、任意で、化学療法薬、放射線治療薬、若しくはチェックポイント標的薬であり、
前記チェックポイント標的薬が、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニストＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、及びアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から任意で選択される、並びに／若しくは
前記追加の治療薬が、ワクチンであり、任意で、前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含み、任意で、前記熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されており、若しくは前記熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されており、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、
請求項１２に記載の使用のためのＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０１７年９月４日に出願された米国仮出願第６２／５５３，９５７号の権益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１７年９月４日に出願された米国仮出願第６２／５５３，９５７号の権益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、混合系統白血病（ＭＬＬ）ホスホペプチドに結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【0003】
脱制御された翻訳後修飾から生じるリンタンパク質は、がん性細胞の形質転換の重要な決定因子である。これらのリンタンパク質の分解により、ＭＨＣ分子によって提示されてがん特異的なＴ細胞応答を媒介する、ホスホペプチドが生成される。混合系統白血病（ＭＬＬ、ヒストン－リジンＮ－メチルトランスフェラーゼ２Ａ（ＫＭＴ２Ａ）とも呼ばれる）は、ゲノムのアクセシビリティと転写を調節するヒストン修飾酵素である。ＭＬＬに由来する多くのホスホペプチドが報告されており、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｂｂｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３ Ｓｅｐ １８；５（２０３）：２０３ｒａ１２５を参照されたい。腫瘍発現プロファイルを考慮すると、ＭＬＬホスホペプチドはがん治療の標的として大いに有望である。
【0004】
したがって、当該技術分野では、その表面にＭＬＬホスホペプチドを提示するがん細胞を認識し、これらの細胞に対する免疫応答を誘導することができる新規組成物が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【文献】Ｃｏｂｂｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３ Ｓｅｐ １８；５（２０３）：２０３ｒａ１２５
【発明の概要】
【0006】
本開示は、ＴＣＲ（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えばホスホペプチドＭＬＬ－ｐＭ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰ ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）に結合するＴＣＲ）、これらのＴＣＲを含む細胞および医薬組成物、これらのＴＣＲをコードする核酸、これらのＴＣＲを生成するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらのＴＣＲを使用して対象を治療する方法を提供する。本明細書に開示されるＴＣＲは、ＭＬＬを発現するがん細胞（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えばホスホペプチドＭＬＬ－ｐＭ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰ ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）を提示するがん細胞）に対する免疫応答を誘導し、したがって対象におけるＭＬＬ発現がんを治療するのに特に有用である。
【0007】
したがって、一態様では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１１および１６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５８、２３６、２５９、２６０、２７２、２６１、および２４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９、２３７、２６２、２６３、２６４、２７３、６０、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0008】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９、２３７、２６２、２６３、２６４、２７３、６０、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0009】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７３に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む。
【0010】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、アミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む。
【0011】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含む。
【0012】
別の態様では、本明細書に開示されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号８６および８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0013】
別の態様では、本明細書に開示されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含み、および／またはβ鎖は配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、および／またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含み、および／またはβ鎖は、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される単離されたＴＣＲは、配列番号５８、２３６、２５９、２６０、２７２、２６１、および２４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖と、および配列番号５９、２３７、２６２、２６３、２６４、２７３、６０、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖と、を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖と、配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖と、を含む。
【0014】
別の態様では、本明細書に開示されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号５８もしくは２３６に示されるアミノ酸配列を含み、および／またはβ鎖は配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0015】
別の態様では、本明細書に開示されるのは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲであり、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１２および１７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２７および３２に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0016】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２７および３２に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0017】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７５に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。
【0018】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、アミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。
【0019】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１２、１７、２２、２７、３２、および３７に示されるアミノ酸配列を含む。
【0020】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１２、１７、２２、２７、３２、および３７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号８８および８９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号３および４に示されるアミノ酸配列を含む。
【0021】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0022】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0023】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含み、および／またはβ鎖は配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、および／またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0024】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲであり、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１３および１０９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２８および３３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0025】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲであり、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１３および１８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２８および３３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0026】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２８および３３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0027】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７７に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0028】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、アミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0029】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１３、１０９、２３、２８、３３、および３８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0030】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１３、１８、２３、２８、３３、および３８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0031】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１３、１０９、２３、２８、３３、および３８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号１０６および１０７に示されるアミノ酸配列を含む。
【0032】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１３、１８、２３、２８、３３、および３８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号５および６に示されるアミノ酸配列を含む。
【0033】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0034】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0035】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0036】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲであり、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１４および１９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２９および３４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0037】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２９および３４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0038】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号７９に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0039】
別の態様では、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、アミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0040】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１４、１９、２４、２９、３４、および３９に示されるアミノ酸配列を含む。
【0041】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１４、１９、２４、２９、３４、および３９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号７および１０８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号７および８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0042】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0043】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0044】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0045】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲであり、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１５および２０に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号３０および３５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0046】
別の態様では、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは相補性決定領域ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号３０および３５に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。
【0047】
別の態様では、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号８１に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むα鎖可変領域（Ｖα）を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0048】
別の態様では、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲが本明細書で提供され、ＴＣＲは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、アミノ酸配列を含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0049】
前述の態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１５、２０、２５、３０、３５、および４０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0050】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、相補性決定領域ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１５、２０、２５、３０、３５、および４０に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号９および１０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0051】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0052】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0053】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、α鎖およびβ鎖を含む単離されたＴＣＲであり、α鎖は配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含み、およびβ鎖は配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0054】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示されるＴＣＲと同一のエピトープに結合する単離されたＴＣＲである。
【0055】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【0056】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【0057】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離されたＴＣＲは、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｖ）それらの任意の組み合わせに結合しないか、または実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離されたＴＣＲは、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、または５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。
【0058】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、単離されたＴＣＲは、ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｄ）それらの任意の組み合わせに結合しないか、または実質的に結合しない。
【0059】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、単離されたＴＣＲは、ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、または５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。
【0060】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｘ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｘ）配列番号２２６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｘｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｘｉｉ）それらの任意の組み合わせに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【0061】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｘ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｘ）配列番号２２６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｘｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【0062】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｘ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｘ）配列番号２２６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｘｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｘｉｉ）それらの任意の組み合わせに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、単離されたＴＣＲは、ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｄ）それらの任意の組み合わせに結合しないか、または実質的に結合しない。
【0063】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｘ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｘ）配列番号２２６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｘｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であり、単離されたＴＣＲは、ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、または５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。
【0064】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合する単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｖ）それらの任意の組み合わせに結合しないか、または実質的に結合しない。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。特定の実施形態では、ＴＣＲと、配列番号４６、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５７、または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合は、ＴＣＲと、配列番号４５、５１、５６、１１７、１２８、１３５、１９２、または２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合と比較して実質的に弱められている。特定の実施形態では、ＴＣＲと、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうちのいずれかとの間の結合は、ＴＣＲと、ａ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｂ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｃ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｄ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｅ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｆ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｇ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｈ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうちのいずれかとの間の結合と比較して実質的に弱められている。
【0065】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、
ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、および
ｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、からなる群から選択されるペプチドのうちの少なくとも１つに結合する単離されたＴＣＲである。
ここで、単離されたＴＣＲは、
ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、または５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、および
ｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドからなる群から選択されるペプチドのうちの少なくとも１つと結合しないか、または実質的に結合しない。
ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、および
ｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、からなる群から選択されるペプチドのうちの少なくとも１つに結合する単離されたＴＣＲである。
ここで、単離されたＴＣＲは、
ａ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、
ｂ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、または５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、および
ｃ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドからなる群から選択されるペプチドのうちの少なくとも１つと結合しないか、または実質的に結合しない。
【0066】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１１および１６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５９、２６０、２７２、２６１、または２４９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、または２５０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１１および１６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５９、２６０、２７２、２６１、または２４９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、または２５０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0067】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0068】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号８６および８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含む。
ａ）ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｖｉｉｉ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｘ）それらの任意の組み合わせに結合し、
ｂ）ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含む、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号８６および８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0069】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のコンテキストで配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化される、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ならびにｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のコンテキストで配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、活性化される。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４６に記載に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくはは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示するする第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化されないか、または実質的に活性化されない。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、のペプチドのうちのいずれかを提示する第２の細胞と共培養するときに、活性化されないか、または実質的に活性化されない。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を配列番号４６、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５７、または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４６、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５７、または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するときに、Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞を配列番号４５、５１、５６、１１７、１２８、１３５、１９２、または２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４５、５１、５６、１１７、１２８、１３５、１９２、または２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞）と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、実質的に弱められる。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）のうちのいずれかを提示する第２の細胞と共培養するときに、Ｔ細胞の活性化は、ａ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｂ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ｃ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）、ならびにｄ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して）のうちのいずれかを提示する第３の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、実質的に弱められる。
【0070】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞のうちのいずれかと別個に共培養するときに、Ｔ細胞の活性化が、ａ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｂ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｃ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｄ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｅ）配列番号１２８に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｆ）配列番号１３５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、ｇ）配列番号１９２に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞、およびｈ）配列番号２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞のうちのいずれかと別個に共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、実質的に弱められる、単離されたＴＣＲである。別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）を含み、ＣＤＲ３αが配列番２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞が、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のコンテキストで配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはそれらの任意の組み合わせのときに活性化される、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖαは、それぞれ配列番号１１および１６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１αおよびＣＤＲ２αを含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖαは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２５９、２６０、２７２、２６１、および２４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0071】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）を含み、ＣＤＲ３βは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含み、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のコンテキストで配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化される単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、Ｖβは、それぞれ配列番号２６および３１に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１βおよびＣＤＲ２βを含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｖβは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、β鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２６２、２６３、２６４、２７３、および２５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。
【0072】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むα鎖可変領域（Ｖα）と、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むβ鎖可変領域（Ｖβ）と、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含み、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に関連して配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号５６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のコンテキストで配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、またはｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化される、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号８６および８７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶαおよびＶβは、それぞれ配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0073】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合する単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。特定の実施形態では、ＴＣＲと、配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合は、ＴＣＲと配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合と比較して、実質的に弱められている。
【0074】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、単離されたＴＣＲであって、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、Ｔ細胞が活性化される、単離されたＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、活性化されないか、または実質的に活性化されない。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４５、４６、および４９～５７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するときに、Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞を配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞）と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、実質的に弱められる。
【0075】
先行する態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖定常領域を含むα鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖定常領域は、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含む。先行する態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２４７に示されるアミノ酸配列を含むα鎖定常領域をα鎖を含む。
【0076】
先行する態様の特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４３、４４、または２４８に示されるアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。
【0077】
以下の実施形態は、先行する態様のそれぞれに適用される。
【0078】
特定の実施形態では、ＴＣＲはヒトＴＣＲ（例えば、全長ヒトＴＣＲ）である。特定の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、または単鎖ＴＣＲである。
【0079】
特定の実施形態では、ペプチドは、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連して提示される。特定の実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞は、ペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連してペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、活性化される。特定の実施形態では、ペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連してペプチドを提示する第２の細胞）と共培養するとき、Ｔ細胞は（ａ）ＣＤ６９表面発現の増加、（ｂ）ＣＤ２５表面発現の増加、（ｃ）ＣＤ１０７ａ発現の増加、（ｄ）Ｔ細胞増殖の増加、（ｅ）ＩＦＮγ分泌の増加、または（ｆ）活性化T細胞核内因子（ＮＦＡＴ）プロモーター活性の増加を示す。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ペプチドを提示する第２の細胞（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と関連してペプチドを提示する第２の細胞）のアポトーシスまたは死を誘導する。
【0080】
特定の実施形態では、ＴＣＲはエフェクター部分に結合している。特定の実施形態では、エフェクター部分は、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、検出可能な標識、または結合部分である。特定の実施形態では、結合部分は抗体である。特定の実施形態では、結合部分は抗体Ｆｃ領域である。
【0081】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲのα鎖可変領域および／もしくはβ鎖可変領域、またはα鎖および／もしくはβ鎖を含むポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９０の核酸配列を含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３８の核酸配列を含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８３、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９２のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【0082】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含む単離されたベクターを提供する。特定の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびバキュロウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号８３、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0083】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドまたはベクターを含む改変された細胞を提供する。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはベクターは、配列番号８３、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。別の態様では、本開示は、配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを生成する方法を提供し、該方法は、ポリヌクレオチドが発現してＴＣＲが生成されるように改変された細胞を培養することを含む。別の態様では、本開示は、そのような方法により生成される単離されたＴＣＲを提供する。
【0084】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド配列によりコードされるＴＣＲを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド配列の発現から生じるＴＣＲを提供する。
【0085】
別の態様では、本開示は、配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを発現する改変された細胞を生成する方法を提供し、該方法は、本明細書に開示されるＴＣＲのα鎖可変領域および／もしくはβ鎖可変領域、または本明細書に開示されるＴＣＲのα鎖および／もしくはβ鎖をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号９０または２３８の核酸配列を含むポリヌクレオチド）（またはそのようなポリヌクレオチドを含むベクター）と細胞とを、ベクターを細胞に導入できる条件下で接触させることを含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクター（例えば、ウイルスベクター）を使用して細胞に導入される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、エレクトロポレーションにより細胞に導入される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドはｍＲＮＡであり、エレクトロポレーションにより細胞に導入される。
【0086】
別の態様では、本開示は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを提示する改変された細胞を提供する。特定の実施形態では、細胞はＴＣＲを発現する。特定の実施形態では、細胞はヒトリンパ球である。特定の実施形態では、細胞は、アルファベータまたはガンマデルタＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＣＤ４＋Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡｉＴ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。一実施形態では、細胞はｉＮＫＴ細胞である。
【0087】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、または改変された細胞、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【0088】
別の態様では、本開示は、対象において配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する細胞に対する免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。別の態様では、本開示は、対象においてがんを治療する方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は静脈内投与される。特定の実施形態では、本方法は、追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線治療薬、またはチェックポイント標的薬である。特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニストＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。特定の実施形態では、追加の治療薬は抗ＰＤ－１抗体であり、必要に応じて、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブまたはニボルマブである。特定の実施形態では、追加の治療薬は、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される。特定の実施形態では、阻害剤はエパカドスタットである。特定の実施形態では、追加の治療薬はワクチンである。特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。特定の実施形態では、熱ショックタンパク質はｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化している。特定の実施形態では、熱ショックタンパク質はｇｐ９６であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化し、ＨＳＰＰＣは対象から得られた腫瘍に由来する。特定の実施形態では、がんは白血病（例えば、混合系統白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病）、肺胞横紋筋肉腫、骨癌、脳癌（例えば、膠芽腫）、乳癌、肛門癌、肛門管癌、または肛門直腸癌、眼癌、肝内胆管癌（例えば、肝内胆管細胞癌）、関節癌、首癌、胆嚢癌、胸膜癌、または鼻癌、鼻腔癌、または中耳癌、口腔癌、外陰部癌、骨髄腫（例えば、慢性骨髄性癌）、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、胃腸カルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、喉頭癌、肝癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜癌、網癌、腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、胃癌、小腸癌、軟部癌、胃癌、がん腫、肉腫（例えば、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、尿管癌、および膀胱癌である。特定の実施形態では、がんは黒色腫、乳癌、肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、卵巣癌、または滑膜肉腫である。一実施形態では、がんは滑膜肉腫または脂肪肉腫（例えば、粘液様／円形細胞脂肪肉腫）である。
【図面の簡単な説明】
【0089】
【図1】ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、ＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）、またはウイルスＴ細胞エピトープから選択されたペプチドの混合物によってＰＢＭＣが刺激された後の３人のＨＬＡ－Ｂ＊０７０２健常ドナーのからの総ＣＤ８＋細胞のうちのＴＮＦα＋細胞のパーセンテージを示す棒グラフである。
【図2】パルスされていないＤＣ（「ペプチドなし」）またはペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）（「ＭＬＬ－ｐＭペプチド」）によってパルスされたＤＣと共培養したメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の分析を示すフローサイトメトリープロットの対である。共培養後、細胞をＭＬＬ－ｐＭ／ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体と抗ＣＤ８抗体で染色した。
【図3】ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）（５μＬ／ウェルまたは０．５μＬ／ウェル）、非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチド（ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ；配列番号４６）（５μＬ／ウェル）またはＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）（５μＬ／ウェル）をロードしたＰＥ標識ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体によるキメラＴＣＲ、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の染色を示すフローサイトメトリープロットのセットである。五量体＋ＴＣＲ＋細胞のパーセンテージは、各プロットの右上パネルに示される。
【図4A】５０μｇ／ｍｌもしくは５μｇ／ｍＬの、ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－Ｍ対照ペプチド（ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ；配列番号４６）、または、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）でパルスしたＴ２－Ｂ７細胞（すなわち、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴ２細胞）と、２：１のエフェクター対ターゲット細胞比において共培養した後の、キメラＴＣＲ、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３単一細胞の活性化を試験するアッセイの結果を示すフローサイトメトリープロットである。ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞のみ、またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞とパルスしていないＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養を対照として含めた。ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージは、各プロットの右上パネルに示される。
【図4B】５０μｇ／ｍｌもしくは５μｇ／ｍＬの、ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－Ｍ対照ペプチド（ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ；配列番号４６）、または、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）でパルスしたＴ２－Ｂ７細胞（すなわち、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴ２細胞）と、２：１のエフェクター対ターゲット細胞比において共培養した後の、キメラＴＣＲ、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３単一細胞の活性化を試験するアッセイの結果を示すフローサイトメトリープロットである。ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞のみ、またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞とパルスしていないＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養を対照として含めた。ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージは、各プロットの右上パネルに示される。
【図5】５０μｇ／ｍｌもしくは５μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－Ｍ対照ペプチド（ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ；配列番号４６）、または５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）でパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞においてアポトーシスを誘導するＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３単一細胞クローンの可能性を試験するアッセイの結果を示すヒストグラムのセットである。パルスしていないＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を伴わずにインキュベートしたＴ２－Ｂ７細胞は、対照として機能した。カスパーゼ＋Ｔ２－Ｂ７細胞のパーセンテージは、各ヒストグラムの右上パネルに示される。
【図6A】ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、そのアラニン修飾バリアント、ＭＬＬ－Ｍペプチド、またはＭＬＬ－ｐＰペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養した後のＴＣＲ００７７発現またはＴＣＲ００８５発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化を示す棒グラフである。ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化は、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトの活性化から生じるＥＧＦＰ発現を測定することにより評価された。アッセイは三重で実施し、ｙ軸はＥＧＦＰ陽性ＴＣＲ陽性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞のパーセンテージを示す。
【図6B】ＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）、そのアラニン修飾バリアント、ＭＬＬ－Ｍペプチド、またはＭＬＬ－ｐＰペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養した後のＴＣＲ００７７発現またはＴＣＲ００８５発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化を示す棒グラフである。ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化は、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトの活性化から生じるＥＧＦＰ発現を測定することにより評価された。アッセイは三重で実施し、ｙ軸はＥＧＦＰ陽性ＴＣＲ陽性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞のパーセンテージを示す。
【図7A】示されたＴＣＲ（図７Ａ：ＴＣＲ００７７、図７Ｂ：ＴＣＲ００８１）の特異性をペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のバリアントのパネルと比較するヒートマップであり、配列番号４５のアンカー位置Ｐ２（Ｐ）およびＰ９（Ｍ）を除く各ペプチドの各アミノ酸位置は、１９の他の可能な天然に存在するアミノ酸うちのそれぞれと個別に置換され、位置Ｐ４（［ｐＳ］）は、非リン酸化セリンでさらに置換された。パネルの各ペプチドは、ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３エフェクター細胞と共培養する前に、Ｔ２ターゲット細胞に別個にロードされた。得られた変異ペプチドにＴＣＲが結合すると、ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は活性化されてＥＧＦＰレポーターを発現し、これはＦＡＣＳにより検出された。結果は、各ブロックがＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の天然残基のアミノ酸残基置換を表すヒートマップとして示される。天然の残基は横軸に示され、置換された残基は縦軸に示される。各ブロックは、正規化された平均活性化に対してスケールで陰影が付けられる（正規化された値は最小０．０および最大１．０にトリミングされる）。「Ｘ」は試験されていないバリアントを示す。バックグラウンドの活性化（ペプチドがロードされていない）は、全てのペプチドがロードされた試料（改変配列および天然配列）から差し引かれた。
【図7B】示されたＴＣＲ（図７Ａ：ＴＣＲ００７７、図７Ｂ：ＴＣＲ００８１）の特異性をペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のバリアントのパネルと比較するヒートマップであり、配列番号４５のアンカー位置Ｐ２（Ｐ）およびＰ９（Ｍ）を除く各ペプチドの各アミノ酸位置は、１９の他の可能な天然に存在するアミノ酸うちのそれぞれと個別に置換され、位置Ｐ４（［ｐＳ］）は、非リン酸化セリンでさらに置換された。パネルの各ペプチドは、ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３エフェクター細胞と共培養する前に、Ｔ２ターゲット細胞に別個にロードされた。得られた変異ペプチドにＴＣＲが結合すると、ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は活性化されてＥＧＦＰレポーターを発現し、これはＦＡＣＳにより検出された。結果は、各ブロックがＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の天然残基のアミノ酸残基置換を表すヒートマップとして示される。天然の残基は横軸に示され、置換された残基は縦軸に示される。各ブロックは、正規化された平均活性化に対してスケールで陰影が付けられる（正規化された値は最小０．０および最大１．０にトリミングされる）。「Ｘ」は試験されていないバリアントを示す。バックグラウンドの活性化（ペプチドがロードされていない）は、全てのペプチドがロードされた試料（改変配列および天然配列）から差し引かれた。
【図8A】示されたＴＣＲの特異性プロファイルを比較する棒グラフであり（図８Ａ：ＴＣＲ００７７、図８Ｂ：ＴＣＲ００８１）、表８に記載されている各バリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドの正規化された平均活性化値（黒点、「改変」）、およびペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の値（白四角、「エピトープ」）を示す。表８におけるバリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドに対応する正規化された平均活性化値は、表８のペプチド配列、すなわち、配列番号４９、１１０～１２７、５１、１２８～１４５、５２、１４６～１５９、４６、１６０～１６３、５３、１６４～１８１、５４、１８２～１９９、５５、２００～２１７、５６、および２１８～２３５に従って左から右に示される。ブラケットを使用して、ＭＬＬ－ｐＭペプチド配列内のバリアント残基の位置に従って、バリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドのグループを指定した。エラーバーは平均値の標準偏差（ＳＥＭ）を表す。
【図8B】示されたＴＣＲの特異性プロファイルを比較する棒グラフであり（図８Ａ：ＴＣＲ００７７、図８Ｂ：ＴＣＲ００８１）、表８に記載されている各バリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドの正規化された平均活性化値（黒点、「改変」）、およびペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の値（白四角、「エピトープ」）を示す。表８におけるバリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドに対応する正規化された平均活性化値は、表８のペプチド配列、すなわち、配列番号４９、１１０～１２７、５１、１２８～１４５、５２、１４６～１５９、４６、１６０～１６３、５３、１６４～１８１、５４、１８２～１９９、５５、２００～２１７、５６、および２１８～２３５に従って左から右に示される。ブラケットを使用して、ＭＬＬ－ｐＭペプチド配列内のバリアント残基の位置に従って、バリアントＭＬＬ－ｐＭペプチドのグループを指定した。エラーバーは平均値の標準偏差（ＳＥＭ）を表す。
【図9A】は、対照Ｔ細胞とＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の表現型を示すフローサイトメトリープロットである。具体的には、刺激された初代Ｔ細胞を、ＴＣＲ形質導入を伴って、または伴わず、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ試薬、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体、ならびにＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した。図９Ａは、無傷の生きた単一細胞を同定するために使用されるフローサイトメトリーゲートの連続を示す。具体的には、左側のパネルは、試料全体から無傷の細胞を選択するために使用されるゲートを示し、中央のパネルは、無傷の細胞から生細胞を選択するために使用されるゲートを示し、右のパネルは、生細胞から単一細胞を選択するためのゲートを示す。図９Ａのデータは、対照Ｔ細胞のためのものである。同一のフローサイトメトリーゲートパラメーターを使用して、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞について同様のデータが得られた。各パネルの数字は、各ゲートを通過する細胞のパーセンテージを示しており、残りの実験では無傷の生きた単一細胞が使用される。図９Ｂでは、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体染色を使用してＴ細胞を同定し、五量体染色を使用して、対照（左）とＴＣＲ００７８形質導入（右）Ｔ細胞の両方でＴＣＲ００７８を発現する細胞を同定した。図９Ｃは、３つの条件のそれぞれにおけるＣＤ４およびＣＤ８の発現を示す：左パネルは、対照Ｔ細胞の全集団から（図９Ｂ、左パネルから）のデータを示す；中央のパネルは、ＴＣＲ００７８形質導入細胞の全集団から（図９Ｂ、右パネルから）のデータを示す；右パネルは、五量体染色によりＴＣＲ００７８を発現していると同定された５８．１％の細胞から（図９Ｂの右パネルのゲートされた細胞から）のデータを示す。ＣＤ４およびＣＤ８は、それぞれ抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体で染色することにより同定された。２つの細胞集団が同定された（ＣＤ４＋／ＣＤ８－およびＣＤ４－／ＣＤ８＋）。２つの細胞集団はまた、五量体染色を伴う、抗ＣＤ３または抗ＣＤ８抗体などの他の染色でも明らかであった（図９Ｄ）。
【図9B】は、対照Ｔ細胞とＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の表現型を示すフローサイトメトリープロットである。具体的には、刺激された初代Ｔ細胞を、ＴＣＲ形質導入を伴って、または伴わず、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ試薬、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体、ならびにＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した。図９Ａは、無傷の生きた単一細胞を同定するために使用されるフローサイトメトリーゲートの連続を示す。具体的には、左側のパネルは、試料全体から無傷の細胞を選択するために使用されるゲートを示し、中央のパネルは、無傷の細胞から生細胞を選択するために使用されるゲートを示し、右のパネルは、生細胞から単一細胞を選択するためのゲートを示す。図９Ａのデータは、対照Ｔ細胞のためのものである。同一のフローサイトメトリーゲートパラメーターを使用して、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞について同様のデータが得られた。各パネルの数字は、各ゲートを通過する細胞のパーセンテージを示しており、残りの実験では無傷の生きた単一細胞が使用される。図９Ｂでは、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体染色を使用してＴ細胞を同定し、五量体染色を使用して、対照（左）とＴＣＲ００７８形質導入（右）Ｔ細胞の両方でＴＣＲ００７８を発現する細胞を同定した。図９Ｃは、３つの条件のそれぞれにおけるＣＤ４およびＣＤ８の発現を示す：左パネルは、対照Ｔ細胞の全集団から（図９Ｂ、左パネルから）のデータを示す；中央のパネルは、ＴＣＲ００７８形質導入細胞の全集団から（図９Ｂ、右パネルから）のデータを示す；右パネルは、五量体染色によりＴＣＲ００７８を発現していると同定された５８．１％の細胞から（図９Ｂの右パネルのゲートされた細胞から）のデータを示す。ＣＤ４およびＣＤ８は、それぞれ抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体で染色することにより同定された。２つの細胞集団が同定された（ＣＤ４＋／ＣＤ８－およびＣＤ４－／ＣＤ８＋）。２つの細胞集団はまた、五量体染色を伴う、抗ＣＤ３または抗ＣＤ８抗体などの他の染色でも明らかであった（図９Ｄ）。
【図9C】は、対照Ｔ細胞とＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の表現型を示すフローサイトメトリープロットである。具体的には、刺激された初代Ｔ細胞を、ＴＣＲ形質導入を伴って、または伴わず、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ試薬、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体、ならびにＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した。図９Ａは、無傷の生きた単一細胞を同定するために使用されるフローサイトメトリーゲートの連続を示す。具体的には、左側のパネルは、試料全体から無傷の細胞を選択するために使用されるゲートを示し、中央のパネルは、無傷の細胞から生細胞を選択するために使用されるゲートを示し、右のパネルは、生細胞から単一細胞を選択するためのゲートを示す。図９Ａのデータは、対照Ｔ細胞のためのものである。同一のフローサイトメトリーゲートパラメーターを使用して、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞について同様のデータが得られた。各パネルの数字は、各ゲートを通過する細胞のパーセンテージを示しており、残りの実験では無傷の生きた単一細胞が使用される。図９Ｂでは、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体染色を使用してＴ細胞を同定し、五量体染色を使用して、対照（左）とＴＣＲ００７８形質導入（右）Ｔ細胞の両方でＴＣＲ００７８を発現する細胞を同定した。図９Ｃは、３つの条件のそれぞれにおけるＣＤ４およびＣＤ８の発現を示す：左パネルは、対照Ｔ細胞の全集団から（図９Ｂ、左パネルから）のデータを示す；中央のパネルは、ＴＣＲ００７８形質導入細胞の全集団から（図９Ｂ、右パネルから）のデータを示す；右パネルは、五量体染色によりＴＣＲ００７８を発現していると同定された５８．１％の細胞から（図９Ｂの右パネルのゲートされた細胞から）のデータを示す。ＣＤ４およびＣＤ８は、それぞれ抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体で染色することにより同定された。２つの細胞集団が同定された（ＣＤ４＋／ＣＤ８－およびＣＤ４－／ＣＤ８＋）。２つの細胞集団はまた、五量体染色を伴う、抗ＣＤ３または抗ＣＤ８抗体などの他の染色でも明らかであった（図９Ｄ）。
【図9D】は、対照Ｔ細胞とＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の表現型を示すフローサイトメトリープロットである。具体的には、刺激された初代Ｔ細胞を、ＴＣＲ形質導入を伴って、または伴わず、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ試薬、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体、ならびにＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した。図９Ａは、無傷の生きた単一細胞を同定するために使用されるフローサイトメトリーゲートの連続を示す。具体的には、左側のパネルは、試料全体から無傷の細胞を選択するために使用されるゲートを示し、中央のパネルは、無傷の細胞から生細胞を選択するために使用されるゲートを示し、右のパネルは、生細胞から単一細胞を選択するためのゲートを示す。図９Ａのデータは、対照Ｔ細胞のためのものである。同一のフローサイトメトリーゲートパラメーターを使用して、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞について同様のデータが得られた。各パネルの数字は、各ゲートを通過する細胞のパーセンテージを示しており、残りの実験では無傷の生きた単一細胞が使用される。図９Ｂでは、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ抗体染色を使用してＴ細胞を同定し、五量体染色を使用して、対照（左）とＴＣＲ００７８形質導入（右）Ｔ細胞の両方でＴＣＲ００７８を発現する細胞を同定した。図９Ｃは、３つの条件のそれぞれにおけるＣＤ４およびＣＤ８の発現を示す：左パネルは、対照Ｔ細胞の全集団から（図９Ｂ、左パネルから）のデータを示す；中央のパネルは、ＴＣＲ００７８形質導入細胞の全集団から（図９Ｂ、右パネルから）のデータを示す；右パネルは、五量体染色によりＴＣＲ００７８を発現していると同定された５８．１％の細胞から（図９Ｂの右パネルのゲートされた細胞から）のデータを示す。ＣＤ４およびＣＤ８は、それぞれ抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体で染色することにより同定された。２つの細胞集団が同定された（ＣＤ４＋／ＣＤ８－およびＣＤ４－／ＣＤ８＋）。２つの細胞集団はまた、五量体染色を伴う、抗ＣＤ３または抗ＣＤ８抗体などの他の染色でも明らかであった（図９Ｄ）。
【図10】モックｍＲＮＡ、ＴＣＲ００８６ ｍＲＮＡ、またはＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡでエレクトロポレーションし、２：１のエフェクター：ターゲット比で、ＭＬＬを発現するＫＧ１ａ－Ａ２細胞、またはＭＬＬを発現するＫＧ１ａ－Ｂ７細胞と共培養したＴ細胞の活性化を試験するアッセイの結果を示す棒グラフのセットである。左のパネルは、ＣＤ２５＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。中央のパネルは、ＣＤ１０７ａ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。右のパネルは、増殖しているＴ細胞のパーセンテージを示す。
【図11】モックｍＲＮＡ、ＴＣＲ００８６ ｍＲＮＡ、またはＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたＴ細胞によるＫＧ１ａ－Ｂ７ターゲット細胞の特異的殺傷のパーセンテージを示すグラフである。ｘ軸は、この研究で使用されるエフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比を示す。
【図12A】ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するさまざまな腫瘍細胞株と共培養した際の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。図１２Ａでは、Ｊｕｒｋａｔ細胞（エフェクター）は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ細胞（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫ５６２細胞（「Ｋ５６２ Ｂ７」）、Ｎａｍａｌｗａ細胞、またはＬｏｕｃｙ細胞（ターゲット）と、さまざまなエフェクター：ターゲット比（ｘ軸）で２４時間共培養された。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。図１２Ｂは、ＴＣＲ００７８で形質導入されていないＪｕｒｋａｔレポーター細胞が同一の腫瘍細胞と共培養されたネガティブコントロールを表す。陽性対照として、ＴＣＲ００７８を発現するかまたはしていないＪｕｒｋａｔ細胞を、、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで刺激した（最大ＮＦＡＴルシフェラーゼ発現を示す）後に発光を測定した（図１２Ｃ）。「Ｊｕｒｋａｔ対照」として、図１２Ｂについて記載した形質導入していないＪｕｒｋａｔレポート細胞を使用した。「ＴＣＲを発現するＪｕｒｋａｔ」として、最適なＴＣＲ発現を有する１つの細胞クローン（「ｃ７５」）に由来するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を使用した。
【図12B】ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するさまざまな腫瘍細胞株と共培養した際の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。図１２Ａでは、Ｊｕｒｋａｔ細胞（エフェクター）は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ細胞（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫ５６２細胞（「Ｋ５６２ Ｂ７」）、Ｎａｍａｌｗａ細胞、またはＬｏｕｃｙ細胞（ターゲット）と、さまざまなエフェクター：ターゲット比（ｘ軸）で２４時間共培養された。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。図１２Ｂは、ＴＣＲ００７８で形質導入されていないＪｕｒｋａｔレポーター細胞が同一の腫瘍細胞と共培養されたネガティブコントロールを表す。陽性対照として、ＴＣＲ００７８を発現するかまたはしていないＪｕｒｋａｔ細胞を、、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで刺激した（最大ＮＦＡＴルシフェラーゼ発現を示す）後に発光を測定した（図１２Ｃ）。「Ｊｕｒｋａｔ対照」として、図１２Ｂについて記載した形質導入していないＪｕｒｋａｔレポート細胞を使用した。「ＴＣＲを発現するＪｕｒｋａｔ」として、最適なＴＣＲ発現を有する１つの細胞クローン（「ｃ７５」）に由来するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を使用した。
【図12C】ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するさまざまな腫瘍細胞株と共培養した際の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。図１２Ａでは、Ｊｕｒｋａｔ細胞（エフェクター）は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ細胞（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫ５６２細胞（「Ｋ５６２ Ｂ７」）、Ｎａｍａｌｗａ細胞、またはＬｏｕｃｙ細胞（ターゲット）と、さまざまなエフェクター：ターゲット比（ｘ軸）で２４時間共培養された。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。図１２Ｂは、ＴＣＲ００７８で形質導入されていないＪｕｒｋａｔレポーター細胞が同一の腫瘍細胞と共培養されたネガティブコントロールを表す。陽性対照として、ＴＣＲ００７８を発現するかまたはしていないＪｕｒｋａｔ細胞を、、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで刺激した（最大ＮＦＡＴルシフェラーゼ発現を示す）後に発光を測定した（図１２Ｃ）。「Ｊｕｒｋａｔ対照」として、図１２Ｂについて記載した形質導入していないＪｕｒｋａｔレポート細胞を使用した。「ＴＣＲを発現するＪｕｒｋａｔ」として、最適なＴＣＲ発現を有する１つの細胞クローン（「ｃ７５」）に由来するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を使用した。
【図13A】さまざまな腫瘍細胞株と共培養した後の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（エフェクター）を、Ｌｏｕｃｙ、Ｈ９２９、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）（図１３Ａ）、Ｒａｊｉ、ＹＴ－Ｉｎｄｙ、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＲａｊｉ（図１３Ｂ）、ならびにＴＨＰ－１、ＬＣＬ ７２１．２２１、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴＨＰ－１、Ｕ２６６Ｂ１、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＬＣＬ ７２１．２２１（「７２１．２２１ Ｂ７」）（図１３Ｃ）などの腫瘍細胞株と、さまざまな比率で２４時間共培養した。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ生物発光活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞株は、各図の他の腫瘍細胞株の参照として使用された。
【図13B】さまざまな腫瘍細胞株と共培養した後の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（エフェクター）を、Ｌｏｕｃｙ、Ｈ９２９、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）（図１３Ａ）、Ｒａｊｉ、ＹＴ－Ｉｎｄｙ、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＲａｊｉ（図１３Ｂ）、ならびにＴＨＰ－１、ＬＣＬ ７２１．２２１、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴＨＰ－１、Ｕ２６６Ｂ１、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＬＣＬ ７２１．２２１（「７２１．２２１ Ｂ７」）（図１３Ｃ）などの腫瘍細胞株と、さまざまな比率で２４時間共培養した。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ生物発光活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞株は、各図の他の腫瘍細胞株の参照として使用された。
【図13C】さまざまな腫瘍細胞株と共培養した後の、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株の活性化を示す棒グラフのセットである。ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴＣＲ００７８形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（エフェクター）を、Ｌｏｕｃｙ、Ｈ９２９、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＫＧ１ａ（「ＫＧ１ａ Ｂ７」）（図１３Ａ）、Ｒａｊｉ、ＹＴ－Ｉｎｄｙ、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＲａｊｉ（図１３Ｂ）、ならびにＴＨＰ－１、ＬＣＬ ７２１．２２１、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴＨＰ－１、Ｕ２６６Ｂ１、ＫＧ１ａ Ｂ７、およびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＬＣＬ ７２１．２２１（「７２１．２２１ Ｂ７」）（図１３Ｃ）などの腫瘍細胞株と、さまざまな比率で２４時間共培養した。Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化は、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターの活性化に起因するルシフェラーゼ生物発光活性（ｙ軸上で任意単位（ａ．ｕ．）で表される）を測定することにより評価された。ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞株は、各図の他の腫瘍細胞株の参照として使用された。
【図14】モックｍＲＮＡまたはＴＣＲ００７８をコードするｍＲＮＡでエレクトロポレーションし、ＭＬＬ－ｐＭホスホペプチドまたは非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養したＴ細胞の活性化を試験するアッセイからの結果を示すグラフのパネルである。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともにインキュベートしたＴ細胞を陽性対照として使用した（「ＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡ；ＣＤ３／ＣＤ２８」）。上の２つのパネルは、ＣＤ２５＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。下の２つのパネルは、ＣＤ１０７ａ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。４つのパネル全てで、ｘ軸は、Ｔ２－Ｂ７細胞のパルスに使用されるペプチドの濃度を示す。
【図15】モックｍＲＮＡまたはＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたＴ細胞と共培養した後のペプチドパルスＴ２－Ｂ７細胞の数を示す一対のグラフである。Ｔ２－Ｂ７細胞は、共培養の前にＭＬＬ－ｐＭホスホペプチドまたは非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドでパルスされていた。ｘ軸は、Ｔ２－Ｂ７細胞のパルスに使用されるペプチドの濃度を示す。
【図16】ＭＬＬホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＳＨＳＭ（配列番号４５）または非リン酸化対照ペプチドＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）でパルスされたＴ２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）と共培養したＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の活性化および細胞傷害活性を試験するアッセイを示すグラフのセットである。ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞をＣＦＳＥで標識し、ＴＣＲ００７８を安定に発現する初代Ｔ細胞と２０時間共培養する前に、いずれかのペプチドの用量漸増で２．５時間パルスした。図１６Ａは、共培養後のＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞による、Ｔ２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞の殺傷のパーセンテージを示す（エフェクター初代Ｔ細胞と共培養していない総Ｔ２－Ｂ７数から生存Ｔ２－Ｂ７細胞数を引いて、共培養していない総Ｔ２－Ｂ７数で割って計算した）。図１６Ｂおよび１６Ｃは、抗ＣＤ２５－ＰＥ／Ｃｙ７および抗ＩＦＮγ－ＦＩＴＣ抗体によって検出され、対応する蛍光色素から放出される蛍光によって測定された、総初代Ｔ細胞におけるＣＤ２５およびＩＦＮ－γ陽性初代Ｔ細胞のパーセンテージをそれぞれ示す。ｘ軸は、Ｔ２－Ｂ７細胞のパルスに使用されるペプチドの濃度を示す。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。
【図17A】ホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）または非リン酸化ペプチドＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）のいずれかでパルスしたＨＬＡ＊Ａ０２．０１またはＴ２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞と共培養したＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞の活性化を試験するアッセイを示す一対の棒グラフである。エフェクター初代Ｔ細胞によるＣＤ２５およびＩＦＮγの発現は、図１６のように測定された。図１７Ａは、異なるペプチドでパルスしたＴ２ターゲット細胞と共培養した後のＴ細胞上のＣＤ２５の表面発現を比較する（ＭＦＩ＝平均蛍光発現）。図１７Ｂは、共培養後の総エフェクター初代Ｔ細胞のＩＦＮ－γ陽性Ｔ細胞のパーセンテージを比較する。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊」はｐ＝０．０５を意味する。「＊＊」はｐ＝０．０１を意味する。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。「ｎｓ」は有意ではないことを意味する。
【図17B】ホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）または非リン酸化ペプチドＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）のいずれかでパルスしたＨＬＡ＊Ａ０２．０１またはＴ２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞と共培養したＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞の活性化を試験するアッセイを示す一対の棒グラフである。エフェクター初代Ｔ細胞によるＣＤ２５およびＩＦＮγの発現は、図１６のように測定された。図１７Ａは、異なるペプチドでパルスしたＴ２ターゲット細胞と共培養した後のＴ細胞上のＣＤ２５の表面発現を比較する（ＭＦＩ＝平均蛍光発現）。図１７Ｂは、共培養後の総エフェクター初代Ｔ細胞のＩＦＮ－γ陽性Ｔ細胞のパーセンテージを比較する。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊」はｐ＝０．０５を意味する。「＊＊」はｐ＝０．０１を意味する。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。「ｎｓ」は有意ではないことを意味する。
【図18】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ＊Ａ０２．０１またはＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２のいずれかと共培養した対照またはＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞の細胞傷害活性および活性化を試験するアッセイを示す棒グラフのセットである。共培養、細胞染色、および数の計数方法は、図１６のものと同一であった。図１８Ａは、共培養後の初代Ｔ細胞によるＫＧ１ａ腫瘍細胞の殺傷のパーセンテージを示し、ＫＧ１ａ腫瘍細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性を表す。図１８Ｂおよび図１８Ｃは、共培養後のＣＤ２５およびＩＦＮ－γ陽性初代Ｔ細胞のパーセンテージをそれぞれ示す。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。
【図19】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２、Ｋ５６２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２、ＳＫ－ＭＥＬ－５、Ｕ２６６Ｂ１、またはＮａｍａｌｗａ腫瘍細胞株と共培養した対照およびＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞の細胞傷害活性を試験するアッセイを示す棒グラフのセットである。共培養、細胞染色、および数の計数方法は、図１８Ａ～１８Ｃに示される実験で使用されたものと同一であった。ｘ軸は、使用されたＴ細胞／腫瘍細胞の比率を示す。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊」はｐ＝０．０５を意味する。「＊＊」はｐ＝０．０１を意味する。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。
【図20】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持するＮＯＧマウスに養子移入する前に、ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と共培養したＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞の細胞傷害活性および活性化のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを示す棒グラフのセットである。図２０Ａおよび図２０Ｂはそれぞれ、対照とＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞間の細胞傷害活性およびＴ細胞活性化（ＣＤ２５発現によって表される）を比較する。ｘ軸は、さまざまなＴ細胞／腫瘍細胞比を示す。
【図21A】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持するＮＯＧマウスへの養子移入後のＴＣＲ００７８形質導入ヒト初代Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示すグラフとフローサイトメトリープロットのセットである。２０匹のマウスにそれぞれ１００万個の腫瘍細胞（ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）を皮下注射した。注射の１日後、２０匹のマウスのうち１０匹に５００万個のＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞（「ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞」）を静脈内注射し、他の１０匹のマウスは注射しなかった（「Ｔ細胞なし」）。図２１Ａは、７日目～４２日目まで３～５日ごとに測定されたマウスの２つの群（各ｎ＝１０）における腫瘍体積（平均＋／－ＳＥＭ）を比較する。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。図２１Ｂは、ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞を注射した１０匹の個々のマウスの腫瘍体積を比較する。７日目に最初の測定の後、１０匹のマウスのうちの２匹はＴ細胞注射およびホーミングを確認するために屠殺し、したがって、７日目以降、これら２匹のマウスのデータポイントは利用できなかった。図２１Ｂの各線は、４２日間にわたる残りの８匹のマウスのうちの１匹の腫瘍体積を表す。大幅な腫瘍増殖を有する２匹のマウス（白丸）を除いて、８匹のマウスのうち６匹は最小限の腫瘍増殖を示した（黒丸）。図２１Ｃは、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞を注射したマウスの脾臓におけるヒトＴ細胞および転移性腫瘍細胞を同定する一対のフローサイトメトリープロットを示す。腫瘍移植後４１日目に全てのマウスを屠殺し、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によるその後の検出のために、それらの脾臓を採取し、処理し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ４５抗体で染色した。図２１Ｃの左パネルは、図２１Ｂにおける大幅な腫瘍増殖を有する注射したマウスのＴ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．０２７％）および腫瘍細胞（ＣＤ３－／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．２５％）のパーセンテージを示す。図２１Ｃの右パネルは、図２１Ｂの最小限の腫瘍増殖の注射マウスの脾臓におけるＴ細胞（７２．５％）および腫瘍細胞（０．０３７％）のパーセンテージを示す。各ゲート内の細胞のパーセンテージが示される。
【図21B】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持するＮＯＧマウスへの養子移入後のＴＣＲ００７８形質導入ヒト初代Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示すグラフとフローサイトメトリープロットのセットである。２０匹のマウスにそれぞれ１００万個の腫瘍細胞（ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）を皮下注射した。注射の１日後、２０匹のマウスのうち１０匹に５００万個のＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞（「ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞」）を静脈内注射し、他の１０匹のマウスは注射しなかった（「Ｔ細胞なし」）。図２１Ａは、７日目～４２日目まで３～５日ごとに測定されたマウスの２つの群（各ｎ＝１０）における腫瘍体積（平均＋／－ＳＥＭ）を比較する。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。図２１Ｂは、ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞を注射した１０匹の個々のマウスの腫瘍体積を比較する。７日目に最初の測定の後、１０匹のマウスのうちの２匹はＴ細胞注射およびホーミングを確認するために屠殺し、したがって、７日目以降、これら２匹のマウスのデータポイントは利用できなかった。図２１Ｂの各線は、４２日間にわたる残りの８匹のマウスのうちの１匹の腫瘍体積を表す。大幅な腫瘍増殖を有する２匹のマウス（白丸）を除いて、８匹のマウスのうち６匹は最小限の腫瘍増殖を示した（黒丸）。図２１Ｃは、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞を注射したマウスの脾臓におけるヒトＴ細胞および転移性腫瘍細胞を同定する一対のフローサイトメトリープロットを示す。腫瘍移植後４１日目に全てのマウスを屠殺し、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によるその後の検出のために、それらの脾臓を採取し、処理し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ４５抗体で染色した。図２１Ｃの左パネルは、図２１Ｂにおける大幅な腫瘍増殖を有する注射したマウスのＴ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．０２７％）および腫瘍細胞（ＣＤ３－／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．２５％）のパーセンテージを示す。図２１Ｃの右パネルは、図２１Ｂの最小限の腫瘍増殖の注射マウスの脾臓におけるＴ細胞（７２．５％）および腫瘍細胞（０．０３７％）のパーセンテージを示す。各ゲート内の細胞のパーセンテージが示される。
【図21C】ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持するＮＯＧマウスへの養子移入後のＴＣＲ００７８形質導入ヒト初代Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示すグラフとフローサイトメトリープロットのセットである。２０匹のマウスにそれぞれ１００万個の腫瘍細胞（ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）を皮下注射した。注射の１日後、２０匹のマウスのうち１０匹に５００万個のＴＣＲ００７８形質導入初代Ｔ細胞（「ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞」）を静脈内注射し、他の１０匹のマウスは注射しなかった（「Ｔ細胞なし」）。図２１Ａは、７日目～４２日目まで３～５日ごとに測定されたマウスの２つの群（各ｎ＝１０）における腫瘍体積（平均＋／－ＳＥＭ）を比較する。ボンフェローニ検定による二元ＡＮＯＶＡが使用された。「＊＊＊」はｐ＝０．００１を意味する。図２１Ｂは、ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞を注射した１０匹の個々のマウスの腫瘍体積を比較する。７日目に最初の測定の後、１０匹のマウスのうちの２匹はＴ細胞注射およびホーミングを確認するために屠殺し、したがって、７日目以降、これら２匹のマウスのデータポイントは利用できなかった。図２１Ｂの各線は、４２日間にわたる残りの８匹のマウスのうちの１匹の腫瘍体積を表す。大幅な腫瘍増殖を有する２匹のマウス（白丸）を除いて、８匹のマウスのうち６匹は最小限の腫瘍増殖を示した（黒丸）。図２１Ｃは、ＴＣＲ００７８形質導入Ｔ細胞を注射したマウスの脾臓におけるヒトＴ細胞および転移性腫瘍細胞を同定する一対のフローサイトメトリープロットを示す。腫瘍移植後４１日目に全てのマウスを屠殺し、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によるその後の検出のために、それらの脾臓を採取し、処理し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ４５抗体で染色した。図２１Ｃの左パネルは、図２１Ｂにおける大幅な腫瘍増殖を有する注射したマウスのＴ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．０２７％）および腫瘍細胞（ＣＤ３－／ＣＤ４５＋、試料中の全細胞の０．２５％）のパーセンテージを示す。図２１Ｃの右パネルは、図２１Ｂの最小限の腫瘍増殖の注射マウスの脾臓におけるＴ細胞（７２．５％）および腫瘍細胞（０．０３７％）のパーセンテージを示す。各ゲート内の細胞のパーセンテージが示される。
【発明を実施するための形態】
【0090】
ＴＣＲ（例えば、ＭＬＬホスホペプチドに結合するＴＣＲ）、これらのＴＣＲを含む細胞および医薬組成物、これらのＴＣＲをコードする核酸、これらのＴＣＲを生成するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらのＴＣＲを使用して対象を治療する方法が提供される。本明細書に開示されるＴＣＲは、細胞表面にＭＬＬホスホペプチドを提示するがん細胞に対する免疫応答を誘導するために、したがって対象のＭＬＬ発現がんを治療するために特に有用である。
【0091】
５．１定義
本明細書で使用されるとき、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、５％から１０％上（例えば、５％から１０％上まで）および５％から１０％下（例えば、５％から１０％下まで）の偏差を示し、値または範囲は、記載された値または範囲の意図された意味内に留まる。
本明細書で使用されるとき、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、５％から１０％上（例えば、５％から１０％上まで）および５％から１０％下（例えば、５％から１０％下まで）の偏差を示し、値または範囲は、記載された値または範囲の意図された意味内に留まる。
【0092】
本明細書で使用されるとき、「ＭＬＬ」という用語は、ヒトではＫＭＴ２Ａ遺伝子によってコードされる混合系統白血病（ヒストン－リジンＮ－メチルトランスフェラーゼ２Ａとしても知られる）を指す。
【0093】
本明細書で使用される「Ｔ細胞受容体」および「ＴＣＲ」という用語は互換可能に使用され、αβまたはγδＴ細胞受容体からのＣＤＲまたは可変領域を含む分子を指す。ＴＣＲの例には、全長ＴＣＲ、ＴＣＲの抗原結合フラグメント、膜貫通領域および細胞質領域を欠く可溶性ＴＣＲ、柔軟なリンカーによって結合されたＴＣＲの可変領域を含む単鎖ＴＣＲ、改変されたジスルフィド結合、単一のＴＣＲ可変ドメイン、単一のペプチドＭＨＣ特異的ＴＣＲ、多重特異性ＴＣＲ（二重特異性ＴＣＲを含む）、ＴＣＲ融合体、共刺激領域を含むＴＣＲ、ヒトＴＣＲ、ヒト化ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、組換え産生ＴＣＲ、および合成ＴＣＲが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＴＣＲは、全長α鎖および全長β鎖を含む全長ＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通領域および／または細胞質領域を欠く可溶性ＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開：ＷＯ２００３／０２０７６３、ＷＯ２００４／０３３６８５、またはＷＯ２０１１／０４４１８６に記載されているような構造を有するｓｃＴＣＲなどの、ペプチドリンカーにより連結されたＶαおよびＶβを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。特定の実施形態では、ＴＣＲは膜貫通領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは共刺激シグナル伝達領域を含む。
【0094】
本明細書で使用されるとき、「全長ＴＣＲ」という用語は、その各々がＴＣＲ可変領域とＴＣＲ膜貫通領域およびＴＣＲ細胞質領域を含むＴＣＲ定常領域とを含む第１および第２ポリペプチド鎖の二量体を含むＴＣＲを指す。特定の実施形態では、全長ＴＣＲは、１つまたは２つの非修飾ＴＣＲ鎖、例えば、非修飾α、β、γ、またはδＴＣＲ鎖を含む。特定の実施形態では、全長ＴＣＲは、キメラＴＣＲ鎖および／または非修飾ＴＣＲ鎖と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含むＴＣＲ鎖などの１つまたは２つの改変されたＴＣＲ鎖を含む。特定の実施形態では、全長ＴＣＲは、成熟した全長ＴＣＲα鎖および成熟した全長ＴＣＲβ鎖を含む。特定の実施形態では、全長ＴＣＲは、成熟した全長ＴＣＲγ鎖および成熟した全長ＴＣＲδ鎖を含む。
【0095】
本明細書で使用されるとき、「ＴＣＲ可変領域」という用語は、ＴＣＲα鎖の場合はＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ鎖の場合はＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２遺伝子のいずれか、ＴＣＲδ鎖の場合はＴＲＤＣ遺伝子、またはＴＣＲγ鎖の場合はＴＲＧＣ１またはＴＲＧＣ２遺伝子のいずれかによってコードされていない成熟ＴＣＲポリペプチド鎖（例えば、ＴＣＲα鎖またはβ鎖）の部分を指す。いくつかの実施形態では、ＴＣＲα鎖のＴＣＲ可変領域は、ＴＲＡＶおよび／またはＴＲＡＪ遺伝子によってコードされる成熟ＴＣＲα鎖ポリペプチドの全てのアミノ酸を包含し、ＴＣＲβ鎖のＴＣＲ可変領域はＴＲＢＶ、ＴＲＢＤ、および／またはＴＲＢＪ遺伝子によってコードされる成熟ＴＣＲβ鎖ポリペプチド全てのアミノ酸を包含する（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＴ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，（２００１） ＬｅＦｒａｎｃ ａｎｄ ＬｅＦｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ ０－１２－４４１３５２－８を参照されたい）。ＴＣＲ可変領域は一般に、フレームワーク領域（ＦＲ）１、２、３、および４と相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、および３とをふくむ。
【0096】
本明細書で使用されるとき、「α鎖可変領域」および「Ｖα」という用語は互換可能に使用され、ＴＣＲα鎖の可変領域を指す。
【0097】
本明細書で使用されるとき、「β鎖可変領域」および「Ｖβ」という用語は互換可能に使用され、ＴＣＲβ鎖の可変領域を指す。
【0098】
ＴＣＲと関連して本明細書で使用されるとき、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、ＴＣＲ鎖（例えば、α鎖またはβ鎖）の可変領域内に見られる非隣接抗原結合部位を意味する。これらの領域は、Ｌｅｆｒａｎｃ，（１９９９） Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６，Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９９） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２，ＬｅＦｒａｎｃ（２００１） Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ ０－１２－４４１３５２－８，Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２００３） Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７、およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔに記載され、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、ＣＤＲは、前出のＬｅｆｒａｎｃ（１９９９）に記載されているＩＭＧＴ付番システムに従って決定される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、前出のＫａｂａｔに記載されたＫａｂａｔ付番システムに従って決定される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲと同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義される。特定の実施形態では、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖のＣＤＲは、異なる慣例に従って（例えば、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴの付番システムに従って、または構造分析に基づいて経験的に）定義される。
【0099】
本明細書で使用されるとき、「フレームワークアミノ酸残基」という用語は、ＴＣＲ鎖のフレームワーク領域（例えば、α鎖またはβ鎖）のアミノ酸を指す。本明細書で使用されるとき、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という用語は、ＴＣＲ可変領域の一部であるがＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を含む。
【0100】
本明細書で使用されるとき、ＴＣＲに関する「定常領域」という用語は、ＴＲＡＣ遺伝子（ＴＣＲα鎖の場合）、ＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２遺伝子のいずれか（ＴＣＲβ鎖の場合）、ＴＲＤＣ遺伝子（ＴＣＲδ鎖の場合）、またはＴＲＧＣ１もしくはＴＲＧＣ２遺伝子のいずれか（ＴＣＲγ鎖の場合）によってコードされるＴＣＲの部分を指し、必要に応じて膜貫通領域の全てもしくは一部、および／または細胞質領域の全てもしくは一部を欠く。特定の実施形態では、ＴＣＲ定常領域は、膜貫通領域および細胞質領域を欠く。ＴＣＲ定常領域には、ＴＲＡＶ、ＴＲＡＪ、ＴＲＢＶ、ＴＲＢＤ、ＴＲＢＪ、ＴＲＤＶ、ＴＲＤＤ、ＴＲＤＪ、ＴＲＧＶ、またはＴＲＧＪ遺伝子によってコードされるアミノ酸が含まれない（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，（２００１） ＬｅＦｒａｎｃ ａｎｄ ＬｅＦｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ ０－１２－４４１３５２－８を参照されたい）。
【0101】
本明細書で使用されるとき、「主要組織適合性複合体」および「ＭＨＣ」という用語は互換可能に使用され、ＭＨＣクラスＩ分子および／またはＭＨＣクラスＩＩ分子を指す。
【0102】
本明細書で使用されるとき、「ＭＨＣクラスＩ」という用語は、ＭＨＣクラスＩα鎖とβ２ミクログロブリン鎖の二量体を指し、「ＭＨＣクラスＩＩ」という用語は、ＭＨＣクラスＩＩα鎖とＭＨＣクラスＩＩβ鎖の二量体を指す。
【0103】
本明細書で使用されるとき、「ペプチド－ＭＨＣ複合体」という用語は、ＭＨＣの当該技術分野で認識されているペプチド結合ポケットに結合したペプチドを含むＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ）を指す。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ分子は細胞表面に発現する膜結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ分子は、膜貫通領域または細胞質領域を欠く可溶性タンパク質である。
【0104】
本明細書で使用されるとき、「［ｐＳ］」および「（ｐＳ）」という用語は互換可能に使用され、ホスホセリンを指す。
【0105】
本明細書で使用されるとき、ＴＣＲに関連する「細胞外」という用語は、細胞の外側に位置する組換え膜貫通タンパク質の一部または複数の部分を指す。
【0106】
本明細書で使用されるとき、ＴＣＲ鎖に関連する「膜貫通」という用語は、細胞の原形質膜に埋め込まれたＴＣＲ鎖の一部または複数の部分を指す。
【0107】
本明細書で使用されるとき、ＴＣＲ鎖に関連する「細胞質」という用語は、細胞の細胞質に位置するＴＣＲ鎖の一部または複数の部分を指す。
【0108】
本明細書で使用されるとき、「共刺激シグナル伝達領域」という用語は、細胞内シグナル伝達事象の媒介に関与する共刺激分子の細胞内部分を指す。
【0109】
「結合親和性」は、分子（例えば、ＴＣＲ）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、ペプチド－ＭＨＣ複合体）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書において使用されるとき、「結合親和性」は、結合対の構成員（例えば、ＴＣＲとペプチド－ＭＨＣ複合体）の間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性は、一般的に解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で周知の多くの方法で測定および／または表現することができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるが、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、ペプチド－ＭＨＣ複合体へのＴＣＲの会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、ペプチド－ＭＨＣ複合体へのＴＣＲの解離速度定数を指す。ｋｏｎおよびｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡの使用など、当業者に知られている技術によって決定することができる。本明細書で使用されるとき、「親和性が低い」とは、より大きなＫＤを指す。
【0110】
本明細書で使用されるとき、「特異的に結合する」という用語は、特定の抗原（例えば、特定のペプチドまたは特定のペプチド－ＭＨＣ複合体の組み合わせ）に優先的に結合するＴＣＲの能力を指し、そのような結合は、当業者によって理解される。例えば、抗原に特異的に結合するＴＣＲは、一般に、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、または当該技術分野で知られている他のイムノアッセイにより決定される低い親和性で、他の抗原に結合できる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９９，１０（４）：４８５－９２を参照されたい）。特定の実施形態では、抗原に特異的に結合するＴＣＲは、ＴＣＲが別の抗原に結合するときのＫａよりも、少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍大きい会合定数（Ｋａ）で抗原に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。
【0111】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲが別の抗原に結合するときのＫａよりも、少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍小さい会合定数（Ｋａ）で抗原に結合するとき、抗原に実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲと抗原との間の結合が、ＴＣＲと別の抗原との間の結合よりも、少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍弱いとき、抗原に実質的に結合しない。
【0112】
本明細書で使用されるとき、試験ＴＣＲと第１の抗原との間の結合は、試験ＴＣＲと第１の抗原との間の結合が、例えば、所定の実験において、または複数の実験からの平均値を使用して、試験ＴＣＲと第２の抗原との間の結合と比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％減少する場合、試験ＴＣＲと第２の抗原との間の結合と比較して「実質的に弱められる」。
【0113】
いくつかの実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞をペプチドを提示する第２の細胞と共培養するとき、Ｔ細胞の活性化が、Ｔ細胞を別のペプチドを提示する第３の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化よりも、少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍弱い場合、Ｔ細胞は実質的に活性化されない。
【0114】
本明細書で使用されるとき、試験ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を第１のペプチドを提示する第２の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化は、Ｔ細胞を第１のペプチドを提示する第２の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化が、例えば、所定の実験において、または複数の実験からの平均値を使用して、例えば、（ａ）ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトを含むＴ細胞で試験ＴＣＲを発現する、（ｂ）ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陽性Ｔ２細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）に第１のペプチドまたは第２のペプチドでパルスする、（ｃ）ＴＣＲ発現Ｔ細胞をペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と１：２の比率で３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間共培養する、（ｄ）フローサイトメトリーを使用してＴＣＲおよびＥＧＦＰの発現を分析する、（ｅ）ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージを決定する、（ｆ）ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のそれぞれのパーセンテージに基づいて、第２のペプチドを提示するＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養するときと比較して、第１のペプチドを提示するＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化の減少を決定する、ステップを含むアッセイによって、第２のペプチドを提示する第３の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％減少する場合、Ｔ細胞を第２のペプチドを提示する第３の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、「実質的に弱められる」。
【0115】
本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、当該技術分野での用語であり、ＴＣＲが結合できる抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体）の局所領域を指す。特定の実施形態では、ＴＣＲが結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、フローサイトメトリー分析、変異導入マッピング（例えば、部位特異的変異導入マッピング）、および／または構造モデリングによって決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４） Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０） Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７） Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。ＴＣＲ：抗原の結晶は、よく知られたＸ線回折技術を使用して研究することができ、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布される、例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５） ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４を参照されたい）およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３） Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７） Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）のようなソフトウェアを使用して精密化し得る。変異導入マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。例えば、アラニンスキャニング変異導入技術を含む変異導入技術の説明について、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。特定の実施形態では、抗原のエピトープは、アラニンスキャニング変異導入研究を使用して決定される。特定の実施形態では、抗原のエピトープは、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換を使用して決定される。特定の実施形態では、抗原はペプチド－ＭＨＣ複合体である。特定の実施形態では、抗原は、ＭＨＣ分子によって提示されるペプチドである。
【0116】
本明細書で使用されるとき、「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、本明細書に記載の治療的または予防的手段を指す。いくつかの実施形態では、「治療」の方法は、疾患または障害を有する、またはそのような疾患または障害を有する素因を有する対象に対し、疾患もしくは障害または再発性の疾患もしくは障害を、予防、治癒、遅延、その重症度の軽減、またはその１つ以上の症状の改善のため、あるいは、そのような治療の非存在下で予想されるものを超えて対象の生存を延長するために、ＴＣＲまたはＴＣＲを発現する細胞の投与を採用する。
【0117】
本明細書で使用されるとき、対象への療法の投与の文脈における「有効量」という用語は、所望の予防または治療効果を達成する療法の量を指す。
【0118】
本明細書で使用されるとき、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。一実施形態では、対象はヒトまたは非ヒト哺乳動物である。一実施形態では、対象はヒトである。
【0119】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に使用される数学的アルゴリズムの特定の非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ Ｓ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ（１９９３） ＰＮＡＳ ９０：５８７３－５８７７に記載されるように修正された、Ｋａｒｌｉｎ Ｓ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ（１９９０） ＰＮＡＳ ８７：２２６４－２２６８のアルゴリズムであり、これらの各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。そのようなアルゴリズムは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ ｅｔ ａｌ．，（１９９０） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメーターセット、例えばスコア＝１００、ワード長＝１２でＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施して、本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＸＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメーターセット、例えばスコア＝５０、ワード長＝３でＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施して、本明細書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較の目的でギャップ付きのアライメントを得るには、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ ｅｔ ａｌ．，（１９９７） Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２５：３３８９－３４０２に記載されているように、ギャップ付きＢＬＡＳＴを利用できる。代替的に、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の遠い関係を検出する反復検索を実行できる。（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用するとき、それぞれのプログラム（ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴなど）のデフォルトパラメーターを使用できる（ワールドワイドウェブ、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の特定の非限定的な例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７，のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用できる。
【0120】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許可するかどうかにかかわらず、上記と同様の手法を使用して決定できる。同一性パーセントの計算では、通常、完全一致のみが計数される。
【0121】
本明細書で使用されるとき、「エフェクター部分」という用語は、分子の自然な活性を増加または減少させるか、または分子に新規活性を付与する、分子の成分または官能基を指す。特定の実施形態では、エフェクター部分は結合部分である。一実施形態では、結合部分は細胞表面タンパク質に結合する。特定の実施形態では、結合部分は抗体である。
【0122】
本明細書で使用されるとき、「抗体」および「複数の抗体」という用語には、全長抗体、全長抗体の抗原結合フラグメント、および抗体のＣＤＲ、ＶＨ領域またはＶＬ領域を含む分子が含まれる。抗体の例には、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体－薬物コンジュゲート、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体）、および上記のいずれかの抗原結合フラグメントが含まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）またはそのサブクラスである。特定の実施形態では、抗体はヒト化モノクローナル抗体である。別の特定の実施形態では、抗体はヒトモノクローナル抗体である。
【0123】
５．２ Ｔ細胞受容体
一態様では、本開示は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを提供する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。一態様では、本開示は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）に結合するＴＣＲを提供する。一態様では、本開示は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲを提供する。例示的なＴＣＲのアミノ酸配列は、本明細書の表１に示される。
一態様では、本開示は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを提供する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。一態様では、本開示は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）に結合するＴＣＲを提供する。一態様では、本開示は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲを提供する。例示的なＴＣＲのアミノ酸配列は、本明細書の表１に示される。
【0124】
一態様では、本開示は、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲを提供する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）のアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。一態様では、本開示は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）に結合するＴＣＲを提供する。一態様では、本開示は、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲを提供する。例示的なＴＣＲのアミノ酸配列は、本明細書の表１に示される。
【0125】
【表1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【表1-10】
【表1-11】
【表1-12】
【0126】
【表2】
【0127】
【表3】
【0128】
【表4】
【0129】
【表5】
【0130】
本明細書で開示されるＴＣＲのＣＤＲは、当該技術分野で認識されている任意の付番規則を使用して定義することができる。追加的または代替的に、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲと同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義できる。
【0131】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）、または配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、本明細書の表１に開示されたＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）前出およびＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）前出に記載されるような、ＩＭＧＴ付番システムに従って定義される。
【0132】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）、または配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、本明細書の表１に開示されたＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ前出に記載されるような、Ｋａｂａｔ付番システムに従って定義される。
【0133】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）、または配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、本明細書の表１に開示されたＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲと同族抗原（例えば、ペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【0134】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に結合するＴＣＲ（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）、または配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、本明細書の表１に開示されたＶαまたはＶβのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含み、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴまたはＫａｂａｔ付番システムに従って定義されるか、または例えばＴＣＲと同族抗原（例えば、ペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【0135】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号１のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号２のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号８６のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号８７のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号３のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号４のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号８８のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号８９のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号５のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号６のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号１０６のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１０７のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号８のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号７のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１０８のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを含むＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含むＶβとを含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αは、それぞれ配列番号９のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ配列番号１０のＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴ付番システムに従って定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番システムに従って定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、例えば、ＴＣＲと同族抗原（例えば、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に定義される。一実施形態では、各ＣＤＲは、ＩＭＧＴまたはＫａｂａｔ付番システムに従って独立して定義されるか、または例えばＴＣＲと同族抗原（例えばペプチド－ＭＨＣ複合体）との相互作用の構造分析に基づいて経験的に決定される。
【0136】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0137】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0138】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0139】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0140】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0141】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１α、および／または
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２α、および／または
（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３α、および／または
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１β、および／または
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２β、および／または
（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３β、を含む。
【0142】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよび／または配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよび／または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよび／または配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよび／または配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３αおよび／または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３βを含む。
【0143】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号１１、１６、および２１、１２、１７、および２２、１３、１８、および２３、１３、１０９、および２３、または１４、１９、および２４に示されるＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を有するＶαを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号１１、１６、および２１に示されるＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【0144】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号２６、３１、および３６、２７、３２、および３７、２８、３３、および３８、または２９、３４、および３９に示されるＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を有するＶβを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号２６、３１、および３６に示されるＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【0145】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号１５、２０、および２５に示されるＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【0146】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号３０、３５、および４０に示されるＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【0147】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを有するＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを有するＶβと、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ、配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６、１２、１７、２２、２７、３２、および３７、１３、１８、２３、２８、３３、および３８、１３、１０９、２３、２８、３３、および３８、または１４、１９、２４、２９、３４、および３９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを有するＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを有するＶβと、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ、配列番号１１、１６、２１、２６、３１、および３６に示されるアミノ酸配列を含む。
【0148】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、およびＣＤＲ３αを有するＶαと、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを有するＶβと、を含み、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βは、それぞれ、配列番号１５、２０、２５、３０、３５、および４０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0149】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号１、３、５、７、８６、８８、または１０６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１、３、５、７、８６、８８、または１０６に示されるアミノ酸配列を有するＶαを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号８６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【0150】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号２、４、６、８、８７、８９、１０７、または１０８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２、４、６、８、８７、８９、１０７、または１０８に示されるアミノ酸配列を有するＶβを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号８７に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【0151】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＶαを含む。
【0152】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβを含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＶβを含む。
【0153】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号１、３、５、７、８６、８８、または１０６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２、４、６、８、８７、８９、１０７、または１０８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβと、を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、それぞれ配列番号１および２、３および４、５および６、７および８、８６および８７、８８および８９、１０６および１０７、７および１０８に示されるアミノ酸配列を含むＶαおよびＶβを含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号８６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号８７に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβと、を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、それぞれ配列番号８６および８７に示されるアミノ酸配列を含むＶαおよびＶβを含む。
【0154】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を有するＶβと、を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、それぞれ配列番号９および１０に示されるアミノ酸配列を含むＶαおよびＶβを含む。
【0155】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＡＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７３のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＡＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７３のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７３のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７３のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【0156】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＢＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７４のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＢＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７４のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７４のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ２７生殖系列配列（例えば、配列番号７４のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【0157】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＡＶ１０生殖系列配列（例えば、配列番号７５のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＡＶ１０生殖系列配列（例えば、配列番号７５のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ１０生殖系列配列（例えば、配列番号７５のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ１０生殖系列配列（例えば、配列番号７５のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【0158】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＢＶ１２－３生殖系列配列（例えば、配列番号７６のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＢＶ１２－３生殖系列配列（例えば、配列番号７６のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ１２－３生殖系列配列（例えば、配列番号７６のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ１２－３生殖系列配列（例えば、配列番号７６のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【0159】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＡＶ８－４生殖系列配列（例えば、配列番号７７のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＡＶ８－４生殖系列配列（例えば、配列番号７７のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ８－４生殖系列配列（例えば、配列番号７７のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ８－４生殖系列配列（例えば、配列番号７７のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【0160】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＢＶ９生殖系列配列（例えば、配列番号７８のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＢＶ９生殖系列配列（例えば、配列番号７８のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ９生殖系列配列（例えば、配列番号７８のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ９生殖系列配列（例えば、配列番号７８のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【0161】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＡＶ２０生殖系列配列（例えば、配列番号７９のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＡＶ２０生殖系列配列（例えば、配列番号７９のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ２０生殖系列配列（例えば、配列番号７９のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ２０生殖系列配列（例えば、配列番号７９のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【0162】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＢＶ７－９生殖系列配列（例えば、配列番号８０のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＢＶ７－９生殖系列配列（例えば、配列番号８０のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ７－９生殖系列配列（例えば、配列番号８０のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ７－９生殖系列配列（例えば、配列番号８０のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【0163】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＡＶ２１生殖系列配列（例えば、配列番号８１のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＡＶ２１生殖系列配列（例えば、配列番号８１のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１α、およびＣＤＲ２αは全て、ヒトＴＲＡＶ２１生殖系列配列（例えば、配列番号８１のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＡＶ２１生殖系列配列（例えば、配列番号８１のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶαと、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３αと、を含む。
【0164】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはＴＲＢＶ５－１生殖系列配列（例えば、配列番号８２のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβを含む。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βから選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域の２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＴＲＢＶ５－１生殖系列配列（例えば、配列番号８２のアミノ酸配列を含む）に由来し得る。特定の実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲ１β、およびＣＤＲ２βは全て、ヒトＴＲＢＶ５－１生殖系列配列（例えば、配列番号８２のアミノ酸配列を含む）に由来する。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトＴＲＢＶ５－１生殖系列配列（例えば、配列番号８２のアミノ酸配列を含む）に由来するアミノ酸配列を有するＶβと、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３βと、を含む。
【0165】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号２４９および２５０、２５１および２５２、２５３および２５４、２５５および２５６、または２５７および２５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号２４９および２５０、２５１および２５２、２５３および２５４、２５５および２５６、または２５７および２５８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0166】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号５８および５９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号５８および６０に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、それぞれ配列番号２３６および２３７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、α鎖は、配列番号５８、２３６、２５９、２６０、２７２、および２６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、β鎖は、それぞれ配列番号５９、２３７、２６２、２６３、２６４、２７３、および６０からなる群から選択されるアミノ酸配列をさらに含む。
【0167】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６１および６２に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６１および６３に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0168】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６４および６５に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６４および６６に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0169】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６７および６８に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号６７および６９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0170】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号７０および７１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本開示は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ）（例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２複合体に結合するＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲはそれぞれ、配列番号７０および７２に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号９３）のアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含むか、またはβ鎖はＣ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、α鎖は、Ｃ末端にＧＳのアミノ酸配列をさらに含み、およびβ鎖は、Ｃ末端にＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧのアミノ酸配列（配列番号９３）をさらに含む。
【0171】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、上述のＴＣＲのように、配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列を含むペプチドの同一のエピトープ（例えば、同じアミノ酸残基）に結合するＴＣＲである。特定の実施形態では、ペプチドは、上述のように、ＭＨＣと複合体を形成している（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ｉｎ ｖｉｖｏで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。
【0172】
一態様では、本明細書に提供されるのは、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｖ）配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドのうちの１つ、２つ、３つ、または４つ全てに結合するＴＣＲである。一実施形態では、ＴＣＲは、例えば、フローサイトメトリーまたはＢｉａｃｏｒｅ分析において測定されるとき、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、またはｉｖ）それらの任意の組み合わせに結合しないか、または実質的に結合しない。一実施形態では、ＴＣＲは、例えば、フローサイトメトリーまたはＢｉａｃｏｒｅ分析において測定されるとき、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合しないか、または実質的に結合しない。一実施形態では、ＴＣＲと、配列番号４６、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５７、または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合は、例えば、フローサイトメトリーまたはＢｉａｃｏｒｅ分析において測定されるとき、ＴＣＲと、配列番号４５、５１、５６、１１７、１２８、１３５、１９２、または２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドとの間の結合と比較して実質的に弱められている（例えば、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％弱められる）。
【0173】
一態様では、本明細書で提供されるのは、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、例えば、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトを使用して測定されるとき、Ｔ細胞が、ｉ）配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号５１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、ｉｉｉ）配列番号５６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、または配列番号１１７、１２８、１３５、１９２、および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、またはｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化されるＴＣＲである。一実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、例えば、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトを使用して測定されるとき、Ｔ細胞が、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、ｉｉ）配列番号４９、５０、５２、５３、５４、５５、もしくは５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、またはｉｉｉ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養されるとき、またはｉｖ）それらの任意の組み合わせのときに、活性化されないか、または実質的に活性化されない。一実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、例えば、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトを使用して測定されるとき、Ｔ細胞が、ｉ）配列番号４６に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉ）配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｉｉ）配列番号５０に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｉｖ）配列番号５２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖ）配列番号５３に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉ）配列番号５４に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｖｉｉｉ）配列番号５７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、およびｉｘ）配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、のうちのいずれかを提示する第２の細胞と共培養されるとき、活性化されないか、または実質的に活性化されない。一実施形態では、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、ＴＣＲがＴ細胞の表面で発現する場合、Ｔ細胞を配列番号４６、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５７、または４７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第２の細胞と共培養するときに、Ｔ細胞の活性化は、例えば、（ａ）ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトを含むＴ細胞で試験ＴＣＲを発現する、（ｂ）ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陽性Ｔ２細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）に第１のペプチドまたは第２のペプチドでパルスする、（ｃ）ＴＣＲ発現Ｔ細胞をペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と１：２の比率で３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間共培養する、（ｄ）フローサイトメトリーを使用してＴＣＲおよびＥＧＦＰの発現を分析する、（ｅ）ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージを決定する、（ｆ）ＴＣＲ＋ＥＧＦＰ＋細胞のそれぞれのパーセンテージに基づいて、第２のペプチドを提示するＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養するときと比較して、第１のペプチドを提示するＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化の減少を決定する、のステップを含むアッセイによって測定されるとき、Ｔ細胞を配列番号４５、５１、５６、１１７、１２８、１３５、１９２、または２３３に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを提示する第３の細胞と共培養するときのＴ細胞の活性化と比較して、実質的に弱められる（例えば、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％弱められる）。
【0174】
任意の種由来の任意のＴＣＲ定常領域を、本明細書で開示されるＴＣＲにおいて使用することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ヒトα、β、γ、またはδＴＣＲ定常領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは野生型定常領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、野生型定常領域と比較して、キメラ定常領域または１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含む定常領域などの改変された定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４１のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４２のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号４３または４４のβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲはマウスＴＣＲ定常領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは野生型マウス定常領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、野生型マウス定常領域と比較して、キメラ定常領域または１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含む定常領域などの改変されたマウス定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２４７のα鎖定常領域を含むα鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２４８のβ鎖定常領域を含むβ鎖を含む。
【0175】
本明細書で開示されるＴＣＲは、任意のＴＣＲ構造形式で使用することができる。例えば、特定の実施形態では、ＴＣＲは、全長α鎖および全長β鎖を含む全長ＴＣＲである。膜貫通領域（および必要に応じて細胞質領域も）を全長ＴＣＲから除去して、可溶性ＴＣＲを生成することができる。したがって、特定の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通および／または細胞質領域を欠く可溶性ＴＣＲである。可溶性ＴＣＲを生成する方法は、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＣＲは、二量体化を促進する改変されたジスルフィド結合を含み、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，３２９，７３１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＣＲは、本明細書に記載のＴＣＲの細胞外ドメインを他のタンパク質ドメイン、例えばマルトース結合タンパク質、チオレドキシン、ヒト定常カッパドメイン、またはロイシンジッパーに融合することにより生成され、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｏｓｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｏｎｃｏｌ．２０１４；４：３７８を参照されたい。ペプチドリンカーによって連結されたＶαおよびＶβを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）も生成され得る。そのようなｓｃＴＣＲは、それぞれＴＣＲ定常領域に連結されたＶαおよびＶβを含むことができる。代替的に、ｓｃＴＣＲはＶαおよびＶβを含むことができ、Ｖα、Ｖβのいずれか、またはＶαとＶβの両方がＴＣＲ定常領域に連結されていない。例示的なｓｃＴＣＲは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００３／０２０７６３、ＷＯ２００４／０３３６８５、およびＷＯ２０１１／０４４１８６に記載されており、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。さらに、本明細書に開示されるＴＣＲは、鎖間ジスルフィド結合を形成できるシステイン残基を鎖がそれぞれ有するように改変された２つのポリペプチド鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含むことができる。したがって、特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、改変されたジスルフィド結合により連結された２つのポリペプチド鎖を含む。改変されたジスルフィド結合を有する例示的なＴＣＲは、米国特許第８，３６１，７９４号および同第８，９０６，３８３号に記載されており、これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0176】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、膜貫通領域を有する１つ以上の鎖（例えば、α鎖および／またはβ鎖）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、膜貫通領域を有する２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。膜貫通領域は、そのＴＣＲ鎖の内因性膜貫通領域、内因性膜貫通領域のバリアント、または異種膜貫通領域であり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、内因性膜貫通領域を有するα鎖およびβ鎖を含む。
【0177】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、細胞質領域を有する１つ以上の鎖（例えば、α鎖および／またはβ鎖）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、それぞれ細胞質領域を有する２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。細胞質領域は、そのＴＣＲ鎖の内因性細胞質領域、内因性細胞質領域のバリアント、または異種細胞質領域であり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が膜貫通領域を有するが１つの鎖が細胞質領域を欠く２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が内因性膜貫通領域を有するが内因性細胞質領域を欠く２つの鎖（例えば、α鎖およびβ鎖）を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、両方の鎖が内因性膜貫通領域を有するが内因性細胞質領域を欠くα鎖およびβ鎖を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲは、共刺激分子からの共刺激シグナル伝達領域を含み、例えば、その全ての全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９６／０１８１０５、ＷＯ１９９９／０５７２６８、およびＷＯ２０００／０３１２３９、ならびに米国特許第７，０５２，９０６号を参照されたい。
【0178】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列を有するペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体に結合し、ＭＨＣは任意のＭＨＣであり得る。特定の実施形態では、ＭＨＣはヒトＭＨＣである。特定の実施形態では、ＭＨＣは、ＭＨＣクラスＩ重鎖（例えば、任意の多型形態の任意のサブタイプを含むＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、またはＨＬＡ－Ｃ）およびβ２－ミクログロブリン軽鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子である。特定の実施形態では、ＭＨＣはＨＬＡ－Ｂ＊０７０２である。特定の実施形態では、ペプチド－ＭＨＣ複合体は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２である。特定の実施形態では、ペプチド－ＭＨＣ複合体はＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２である。特定の実施形態では、ＭＨＣは、ＭＨＣクラスＩＩα鎖（例えば、任意の多型形態の任意のサブタイプを含む、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＰのα鎖）およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖（例えば、任意の多型形態の任意のサブタイプを含む、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＰのβ鎖）を含むＭＨＣクラスＩＩ分子である。特定の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩα鎖およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖は同一のタイプ（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＰ）に由来する。
【0179】
特定の実施形態では、本開示は、一緒に融合されたＴＣＲのα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）を含むポリペプチドを提供する。例えば、そのようなポリペプチドは、ＶαとＶβ、またはＶβとＶαを順番に含み、必要に応じて２つの領域の間にリンカー（例えばペプチドリンカー）を含むことができる。例えば、フューリンおよび／または２Ａ切断部位（例えば、表７の配列の１つ）、またはそれらの組み合わせを、Ｖα／Ｖβ融合ポリペプチドのリンカーにおいて使用することができる。
【0180】
特定の実施形態では、本開示は、一緒に融合されたＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドを提供する。例えば、そのようなポリペプチドは、α鎖とβ鎖、またはβ鎖とα鎖を順番に含み、必要に応じて２つの鎖の間にリンカー（例えばペプチドリンカー）を含むことができる。例えば、フューリンおよび／または２Ａ切断部位（例えば、表７の配列の１つ）、またはそれらの組み合わせを、α／β融合ポリペプチドのリンカーにおいて使用することができる。例えば、融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのα鎖、フューリン切断部位、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含み得る。ＴＣＲ００７８の場合の例示的なα鎖－フューリン－Ｐ２Ａ－β鎖融合ＴＣＲ配列には、配列番号２６８および２６９が含まれる。特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのβ鎖、フューリン切断部位、２Ａエレメント、およびＴＣＲのα鎖を含む。例示的なβ鎖－フューリン－Ｐ２Ａ－α鎖融合ＴＣＲ配列には、配列番号２６５（ＴＣＲ００８０の場合）、２６６（ＴＣＲ００７８の場合）、および２６７（ＴＣＲ００７８の場合）が含まれる。特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのα鎖、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含む。ＴＣＲ００７８の場合の例示的なα鎖－Ｐ２Ａ－β鎖融合ＴＣＲ配列には、配列番号２７０および２７１が含まれる。特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのβ鎖、２Ａエレメント、およびＴＣＲのα鎖を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのα鎖、フューリン切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのβ鎖、フューリンエレメント、およびＴＣＲのα鎖を含む。例示的なβ鎖－Ｐ２Ａ－α鎖融合ＴＣＲ配列には、配列番号８３（ＴＣＲ００７８の場合）、９１（ＴＣＲ００８０の場合）、および９２（ＴＣＲ００８６の場合）が含まれる。
【0181】
５．３ Ｔ細胞受容体を提示する細胞
別の態様では、本開示は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを提示する哺乳動物細胞（例えば、改変された哺乳動物細胞）またはその集団を提供する。本明細書に開示されるＴＣＲを提示するために、任意の哺乳動物細胞を使用することができる。特定の実施形態では、哺乳動物細胞はＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および２つのＣＤ３ε鎖）を発現する。特定の実施形態では、哺乳動物細胞はヒト細胞である。細胞免疫系のエフェクター細胞は、細胞表面ＴＣＲがこれらのエフェクター細胞をＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を発現する腫瘍細胞に誘導することができ、これにより腫瘍細胞の殺傷が促進されるので、本明細書に開示されるＴＣＲを提示するのに特に有用である。したがって、特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。特定の実施形態では、リンパ球はＴ細胞である。任意の発生段階の任意のＴ細胞を使用して、本明細書に開示されるＴＣＲを提示することができる。例えば、特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞）、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、胸腺細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞、例えばインバリアントナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。細胞免疫系の前駆細胞（例えば、Ｔリンパ球の前駆細胞）も、エフェクター細胞に分化、発達、または成熟する可能性があるため、本明細書に開示されるＴＣＲの提示に有用である。したがって、特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞）、造血幹細胞、またはリンパ球前駆細胞である。特定の実施形態では、造血幹細胞またはリンパ球前駆細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、または末梢血から単離および／または濃縮される。
別の態様では、本開示は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを提示する哺乳動物細胞（例えば、改変された哺乳動物細胞）またはその集団を提供する。本明細書に開示されるＴＣＲを提示するために、任意の哺乳動物細胞を使用することができる。特定の実施形態では、哺乳動物細胞はＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および２つのＣＤ３ε鎖）を発現する。特定の実施形態では、哺乳動物細胞はヒト細胞である。細胞免疫系のエフェクター細胞は、細胞表面ＴＣＲがこれらのエフェクター細胞をＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を発現する腫瘍細胞に誘導することができ、これにより腫瘍細胞の殺傷が促進されるので、本明細書に開示されるＴＣＲを提示するのに特に有用である。したがって、特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。特定の実施形態では、リンパ球はＴ細胞である。任意の発生段階の任意のＴ細胞を使用して、本明細書に開示されるＴＣＲを提示することができる。例えば、特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞）、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、胸腺細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞、例えばインバリアントナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。細胞免疫系の前駆細胞（例えば、Ｔリンパ球の前駆細胞）も、エフェクター細胞に分化、発達、または成熟する可能性があるため、本明細書に開示されるＴＣＲの提示に有用である。したがって、特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞）、造血幹細胞、またはリンパ球前駆細胞である。特定の実施形態では、造血幹細胞またはリンパ球前駆細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、または末梢血から単離および／または濃縮される。
【0182】
細胞は、腫瘍、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアフェレーシス製品を含むが、これらに限定されない多数の供給源から取得できる。特定の実施形態では、細胞は、対象に機能性Ｔ細胞を残す治療の直後に患者から得られる。この点に関し、特定のがん治療後、特に、免疫系を損傷する薬物による特定の治療に続いて、患者が通常治療から回復する期間中に治療直後に、得られるＴ細胞の質は、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖する能力に関して最適であるか、または改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したｅｘ ｖｉｖｏ操作に続いて、これらの細胞は、強化された生着およびｉｎ ｖｉｖｏ増殖のための好ましい状態であり得る。したがって、特定の実施形態では、細胞は、この回復段階の間に、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアフェレーシス製品から収集される。
【0183】
特定の実施形態では、哺乳動物細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを提示する細胞の集団である。細胞の集団は、不均一でも均一でもよい。特定の実施形態では、集団のうちの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が本明細書に記載の細胞である。特定の実施形態では、集団は実質的に純粋であり、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が均一である。特定の実施形態では、集団は不均一であり、細胞の混合集団を含む（例えば、細胞は、異なる細胞型、発達段階、起源を有し、異なる方法により単離、精製、または濃縮され、異なる薬剤で刺激され、および／またはさまざまな方法で改変されている）。特定の実施形態では、細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（例えば、ヒトＰＢＭＣ）の集団である。
【0184】
必要に応じて、細胞の集団を濃縮または精製できる。特定の実施形態では、例えば、ビーズ、粒子、または細胞などの表面に結合した抗ＣＤ２５抗体を使用することにより、制御性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞）を集団から枯渇させる。特定の実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、蛍光色素にコンジュゲートされる（例えば、蛍光標識細胞分取で使用するため）。特定の実施形態では、チェックポイント受容体（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１３７、またはＣＥＡＣＡＭ１）を発現する細胞を、例えば、ビーズ、粒子、細胞などの表面に結合したチェックポイント受容体に特異的に結合する抗体を使用することにより、集団から枯渇させる。特定の実施形態では、Ｔ細胞集団は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１３、グランザイム（例えば、グランザイムＢ）、およびパーフォリン、または他の適切な分子、例えば他のサイトカインのうちの１つ以上を発現するように選択することができる。そのような発現を判定する方法は、例えば、ＰＣＴ公開番号：ＷＯ２０１３／１２６７１２に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0185】
細胞をｅｘ ｖｉｖｏで刺激して、生存率、増殖、および／または活性を高めることができる。いくつかの実施形態では、誘導は規定の抗原をまったく含まず、したがって抗原反応性に関してポリクローナルである細胞集団を提供する。特定の実施形態では、細胞は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナル（例えば、抗ＣＤ３抗体）を誘導または活性化する第１の薬剤と接触させられる。特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子（例えば、ＣＤ２８のリガンドまたは抗ＣＤ２８抗体）を刺激する第２の薬剤と接触させられる。特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ３とＣＤ２８の両方と相互作用する分子または複合体と接触し、分子または複合体は表面（例えば、ビーズ、粒子、または細胞）上に提示され得る。特定の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を提示する表面（例えば、ビーズ、粒子、または細胞）と接触させられる。特定の実施形態では、細胞は、細胞表面受容体に結合してＴ細胞の生存率、増殖、および／または活性を増加させる１つ以上の薬剤（例えば、ＩＬ－２またはＩＬ－７）と接触させられる。特定の実施形態では、細胞をフィトヘマグルチニンと接触させる。特定の実施形態では、細胞を、Ｃａ２＋放出などの１つ以上の細胞内シグナルを刺激する薬剤（例えば、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートおよび／またはイオノマイシン）と接触させる。代替的に、誘導は、提示されたＴＣＲに結合するペプチド（例えば、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド））を含む抗原を含んでもよく、したがって、抗原反応性に関して濃縮された（例えば、モノクローナル）細胞集団を提供する。抗原は、ペプチドと複合体を形成したＭＨＣ分子（例えばＨＬＡ分子）をさらに含んでもよい。抗原は、可溶性形態として提示されるか、膜に結合されるか、または表面に提示され得る。上述の薬剤は、任意の組み合わせで使用することができ、エフェクター細胞またはその前駆体と同時または逐次的に接触させることができる。細胞が増加した生存率、増殖、および／または活性の状態にとどまり得る間に、接触を終了することができる。長期間にわたるＴ細胞の持続的な増殖により、元のＴ細胞集団と比較して数倍増加した細胞数をもたらす可能性がある。いくつかの実施形態では、生物エネルギー燃料源の提供を通じて代謝適合性を促進するために活性化を実施することができ、これにより、最適な生物活性および生存のためにＴ細胞の調整が可能になる。
【0186】
特定の実施形態では、哺乳動物細胞（例えば、リンパ球）は、細胞に導入された導入遺伝子から本明細書に開示されるＴＣＲを発現し、細胞表面にＴＣＲを提示する。ＴＣＲは、細胞表面に構成的に提示される。代替的に、細胞は、ＴＣＲの条件付き発現および／または提示が可能であってもよい。例えば、ＴＣＲの発現または提示は、外因性の刺激または細胞の分化によって誘導される。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＴＣＲα鎖および／またはβ鎖、またはその断片（例えば、Ｖα、Ｖβ、ＣＤＲ３αおよび／またはＣＤＲ３β）をコードする。特定の実施形態では、導入遺伝子は、外因性の転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結されている。特定の実施形態では、導入遺伝子は、その天然のゲノム遺伝子座ではなく、内因性の転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される（例えば、ベクターによって導入される）。特定の実施形態では、導入遺伝子は、その天然ゲノム遺伝子座で内因性の転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される（例えば、導入遺伝子を天然ゲノム遺伝子座に挿入することにより）。
【0187】
特定の実施形態では、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれたＤＮＡであり、この組み込みは、部位特異的組み込み（例えば、相同組換え）またはＤＮＡのランダム挿入により生じる。特定の実施形態では、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれていないＤＮＡである（例えば、非組み込みウイルスゲノムとしてまたはエピソームＤＮＡとして維持される）。特定の実施形態では、導入遺伝子は、本明細書に開示されるＴＣＲを発現するために転写および／または翻訳され得るポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、および修飾ＲＮＡを含むがこれらに限定されない）である。特定の実施形態では、導入遺伝子は、５’末端にキャップおよび／または３’末端にポリ（Ａ）テールを有するＲＮＡであり、キャップおよびポリ（Ａ）テールは、リボソーム結合、翻訳の開始、および細胞内のＲＮＡの安定性を調節し得る。
【0188】
特定の実施形態では、導入遺伝子は第１および第２の配列を含み、第１の配列は、ＴＣＲα鎖またはその断片（例えば、ＶαまたはＣＤＲ３α）を含むポリペプチドをコードし、第２の配列はＴＣＲβ鎖またはその断片（例えば、ＶβまたはＣＤＲ３β）を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、第１および第２の配列はそれぞれ、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結されている。特定の実施形態では、第１および第２の配列は、異なるポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、または修飾ＲＮＡ）分子内にある。特定の実施形態では、導入遺伝子の第１および第２の配列は、同一のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、または修飾ＲＮＡ）分子内にある。特定の実施形態では、第１および第２の配列は、２つの別個のポリペプチドの生成を促進するリンカー配列（例えば、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）、または細胞内または細胞外プロテアーゼによって認識されるペプチド配列）によって作動可能に連結される。特定の実施形態では、第１および第２の配列は、独立して転写および／または翻訳され得る。特定の実施形態では、第１および第２の配列はそれぞれ宿主細胞ゲノムに組み込まれる。特定の実施形態では、第１および第２の配列はそれぞれ、宿主細胞ゲノムの異なる領域に組み込まれる。
【0189】
代替的に、特定の実施形態では、細胞はＴＣＲを発現しないが、代わりにＴＣＲは化学的手段またはＴＣＲの細胞表面抗原への結合によって細胞の外側表面に付着する。したがって、特定の実施形態では、ＴＣＲは細胞表面抗原に結合する結合部分に連結している。任意のタイプの結合部分を、本明細書に開示されているＴＣＲに（共有結合または非共有結合で）連結させることができる。特定の実施形態では、ＴＣＲは、細胞の細胞表面抗原（例えば、リンパ球）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントに（化学的または遺伝的に）融合される。
【0190】
特定の実施形態では、細胞は、細胞死を誘導することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域および細胞死誘導領域を含むキメラポリペプチドであり、細胞死誘導領域は多量体化により活性化される。特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、プロテアーゼ活性を有するカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－９）の配列を含む。特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、全長ヒトカスパーゼ－９ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞死誘導領域は、切断型ヒトカスパーゼ－９ポリペプチド（例えば、カスパーゼ－９のＣＡＲＤドメインが欠失している）を含む。
【0191】
特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞活性化を誘導することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／１２３５２７に記載されているように、誘導性キメラ刺激分子である。特定の実施形態では、ポリペプチドは多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域を含み、ポリペプチドは多量体化時にＴ細胞活性化を誘導する。
【0192】
例えば、細胞死を誘導可能なポリペプチドまたはＴ細胞活性化を誘導可能なポリペプチドに存在する多量体化領域は、リガンド（例えば、合成リガンド）への結合時に多量体化するリガンド結合ドメインを含むことができる。リガンドは２つ以上の結合部位を有してもよく、各結合部位はキメラポリペプチドのリガンド結合ドメインに結合することができる。特定の実施形態では、リガンドは２つの結合部位を有し、キメラポリペプチドの二量体化を誘導することができる。さまざまな合成リガンドおよび対応するリガンド結合ドメインを使用することができる。例えば、多量体（例えば、二量体）ＦＫ５０６を使用して、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ；例えば、ＦＫＢＰ１２またはそのバリアント）を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）シクロスポリンＡを使用して、シクロフィリン受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）エストロゲンを使用して、エストロゲン受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）グルココルチコイドを使用して、グルココルチコイド受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）テトラサイクリンを使用して、テトラサイクリン受容体を多量体化することができ、多量体（例えば、二量体）ビタミンＤを使用して、ビタミンＤ受容体を多量体化することができる。リガンド結合ドメインは、コンストラクトの性質とリガンドの選択に応じて、細胞膜の内部または外部に存在し得る。リガンドおよび対応するリガンド結合ドメインの非限定的な例は、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，０８９，５２０号；Ｋｏｐｙｔｅｋ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７：３１３－３２１（２０００）；Ｇｅｓｔｗｉｃｋｉ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，ＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＣｈｅｍ．＆ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ １０：６６７－６７５（２００７）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ ６７：４４０－２（２００６）；およびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｆｒｏｍ Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ（Ｗｉｌｅｙ，２００７）に記載されている。
【0193】
特定の実施形態では、細胞死を誘導できるポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドおよび完全長または切断型カスパーゼ－９（例えば、ヒトカスパーゼ－９）ポリペプチドを含むキメラポリペプチドである。特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは３６位にバリンを含む。特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２多量体化を誘導することができるリガンドは、ＡＰ１９０３（ＣＡＳ登録番号：１９５５１４－６３－７、分子式：Ｃ７８Ｈ９８Ｎ４Ｏ２０、分子量：１４１１．６５）である。特定の実施形態では、リガンドはＡＰ２０１８７またはＡＰ２０１８７類似体（例えばＡＰ１５１０）である。特定の実施形態では、カスパーゼ－９ポリペプチドは、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む。
【0194】
【表6】
【0195】
特定の実施形態では、細胞死を誘導できるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結される。ポリヌクレオチドは、宿主細胞ゲノムに組み込まれ得る。代替的に、ポリヌクレオチドは、非組み込みウイルスゲノムとして、またはエピソームＤＮＡとして維持されてもよい。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つの別個のポリペプチドの生成を促進するリンカー配列（例えば、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）、または細胞内または細胞外プロテアーゼによって認識されるペプチド配列）によって、ＴＣＲをコードする第１および／または第２の配列に作動可能に連結される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１および／または第２の配列から独立して転写および／または翻訳される。
【0196】
特定の実施形態では、細胞は溶液で提供される。特定の実施形態では、細胞は、約－８０℃以下で凍結保存される（例えば、液体窒素貯蔵タンク内）。凍結保存の方法は、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５８０，７１４号および同第６，７４０，４８４号に記載されているように、当該技術分野で周知である。凍結保存された細胞は、解凍により回復することができ、上述のようなＴＣＲの単離、精製、濃縮、刺激、および提示のいずれかが、凍結保存の前または回復後に行われ得る。
【0197】
５．４ 使用方法
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞（例えば、異種および／または組換え核酸を含む細胞）、または医薬組成物を使用して対象を治療する方法を提供する。ＴＣＲのＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）への標的化から利益を得るであろう対象のいずれかの疾患または障害は、本明細書に開示されるＴＣＲを強い王して治療できる。本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、および医薬組成物は、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体、例えばＭＬＬホスホペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体、例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２またはＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）を提示する腫瘍に対する免疫を誘導するのに特に有用であり、したがって、ＭＬＬ陽性がん（例えば、ＭＬＬホスホペプチド陽性がん）を有する対象に対する免疫療法として使用できる。例えば、特定の実施形態では、本開示は、対象において、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に応答して細胞性免疫を誘導する方法を提供し、方法は、本明細書に記載の有効量のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、本開示は、対象においてがんを治療する方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に開示されるような、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞（例えば、異種および／または組換え核酸を含む細胞）、または医薬組成物を使用して対象を治療する方法を提供する。ＴＣＲのＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）への標的化から利益を得るであろう対象のいずれかの疾患または障害は、本明細書に開示されるＴＣＲを強い王して治療できる。本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、および医薬組成物は、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体、例えばＭＬＬホスホペプチドを含むペプチド－ＭＨＣ複合体、例えば、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２またはＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）を提示する腫瘍に対する免疫を誘導するのに特に有用であり、したがって、ＭＬＬ陽性がん（例えば、ＭＬＬホスホペプチド陽性がん）を有する対象に対する免疫療法として使用できる。例えば、特定の実施形態では、本開示は、対象において、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に応答して細胞性免疫を誘導する方法を提供し、方法は、本明細書に記載の有効量のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、本開示は、対象においてがんを治療する方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に開示されるような、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。
【0198】
特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示されるような有効量の細胞またはその集団を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるようなＴＣＲを構成的に提示するように改変される。特定の実施形態では、細胞は、誘導事象に応答して細胞表面上に本明細書に開示されるようなＴＣＲを条件的に提示するように改変される。この誘導事象は、細胞の投与の前、同時、または後に投与された外因性物質による刺激のいずれかであり得る。追加または代替として、誘導事象は、対象の細胞、組織、または病変による刺激であり得る。
【0199】
特定の実施形態では、細胞は、リガンド結合多量体化（例えば、二量体化またはオリゴマー化）領域および細胞死誘導領域を含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、方法は、多量体化領域のリガンドを投与するステップをさらに含む。特定の実施形態では、キメラポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドおよびカスパーゼ－９（例えば、ヒトカスパーゼ－９）ポリペプチドを含み、方法は、ＦＫＢＰ１２リガンド（例えば、ＡＰ１９０３）を投与するステップをさらに含む。特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２リガンドは、疾患の改善の兆候（例えば、がんの縮小、がんマーカーの減少、および／またはがん症状の改善）を観察した後、または耐容できない副作用（例えば、高レベルの炎症性サイトカイン、および／または宿主による投与細胞の拒絶）を同定した後に投与される。
【0200】
上記で開示したように、対象に投与される細胞は自家または同種であり得る。特定の実施形態では、自己細胞は、がん治療の直後の患者から得られる。この点に関し、特定のがん治療後、特に、免疫系を損傷する薬物による特定の治療に続いて、患者が通常治療から回復する期間中に治療直後に、得られるＴ細胞の質は、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖する能力に関して最適であるか、または改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したｅｘ ｖｉｖｏ操作に続いて、これらの細胞は、強化された生着およびｉｎ ｖｉｖｏ増殖のための好ましい状態であり得る。したがって、特定の実施形態では、細胞は、この回復段階の間に、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアフェレーシス製品から収集される。更に、特定の態様では、動員および前処置レジメンを使用して、特に治療後の定義された時間範囲の間に、特定の細胞型の再集団、再循環、再生、および／または増殖が好ましい状況を対象においてもたらすことができる。動員剤は、ＣＸＣＬ１２相互作用ヘパリノイド、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ（例えば、非修飾、グリコシル化、またはＰＥＧ化）、ＩＬ－２（例えば、非修飾、グリコシル化、またはＰＥＧ化）、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、プレリキサフォル）、インテグリンα４β１アンタゴニスト（例えば、ＢＩＯ５１９２）、シクロホスファミド、５－フルオロウラシル、シスプラチン、エトポシド、イホスファミド、シタラビン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。
【0201】
使用される細胞の数は、細胞の寿命、使用されるプロトコール（例えば、投与回数）、細胞が増殖する能力、組換えコンストラクトの安定性などを含む多くの状況に依存するであろう。特定の実施形態では、細胞は、一般に、目的の部位またはその近傍に注射される分散液として投与される。細胞は、生理学的に許容される任意の媒体で投与されてもよい。
【0202】
本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物で治療できるがんは、ＭＬＬを発現する任意の腫瘍（例えば、細胞表面にＭＬＬホスホペプチド／ＭＨＣ複合体を提示する任意の腫瘍）であり得る。ＭＬＬを発現する腫瘍（例えば、細胞表面にＭＬＬホスホペプチド／ＭＨＣ複合体を提示する腫瘍）の例は、例えば、そのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｂｂｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３ Ｓｅｐ １８；５（２０３）：２０３ｒａ１２５；Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２０１５ Ｊｕｎ；１５（６）：３３４－４６；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１４ Ｄｅｃ；４２（１２）：９９５－１０１２；およびＫｒｉｖｔｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２００７ Ｎｏｖ；７（１１）：８２３－３３に開示されている。
【0203】
特定の実施形態では、がんは白血病（例えば、混合系統白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病）、肺胞横紋筋肉腫、骨癌、脳癌（例えば、膠芽腫）、乳癌、肛門癌、肛門管癌、または肛門直腸癌、眼癌、肝内胆管癌（例えば、肝内胆管細胞癌）、関節癌、首癌、胆嚢癌、胸膜癌、または鼻癌、鼻腔癌、または中耳癌、口腔癌、外陰部癌、骨髄腫（例えば、慢性骨髄性癌）、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、胃腸カルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、喉頭癌、肝癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜癌、網癌、腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、胃癌、小腸癌、軟部癌、胃癌、がん腫、肉腫（例えば、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）、精巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、尿管癌、および膀胱癌である。特定の実施形態では、がんは黒色腫、乳癌、肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、卵巣癌、または滑膜肉腫である。一実施形態では、がんは滑膜肉腫または脂肪肉腫（例えば、粘液様／円形細胞脂肪肉腫）である。
【0204】
特定の実施形態では、これらの方法は、追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬、放射線治療薬、またはチェックポイント標的薬である。特定の実施形態では、化学療法剤は低メチル化剤（例えば、アザシチジン）である。特定の実施形態では、チェックポイント標的薬は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニストＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。
【0205】
特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に開示される方法で使用される。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発された、ＢＭＳ－９３６５５８またはＭＤＸ１１０６としても知られている、ニボルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏによって開発された、ランブロリズマブまたはＭＫ－３４７５としても知られるペンブロリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＣｕｒｅＴｅｃｈによって開発された、ＣＴ－０１１としても知られるピディリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発された、ＡＭＰ－５１４としても知られるＭＥＤＩ０６８０である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＰＤＲ００１である。特定の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＲＥＧＮ２８１０である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒによって開発されたＰＦ－０６８０１５９１である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅによって開発されたＢＧＢ－Ａ３１７である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏおよびＴｅｓａｒｏによって開発されたＴＳＲ－０４２である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉによって開発されたＳＨＲ－１２１０である。
【0206】
本明細書に開示される治療方法において使用され得る抗ＰＤ－１抗体のさらなる非限定的な例は、以下の特許および特許出願に開示されており、それらは全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる：米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１１４，８４５号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許第８，６８６，１１９号、米国特許第８，７３５，５５３号、米国特許第８，７４７，８４７号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第８，９２７，６９７号、米国特許第８，９９３，７３１号、米国特許第９，１０２，７２７号、米国特許第９，２０５，１４８号、米国公開番号ＵＳ２０１３／０２０２６２３Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１３／０２９１１３６Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１４／０３５６３６３Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１６／００７５７８３Ａ１、ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１３／０３３０９１Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／０３６３９４Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／１７９６６４Ａ２、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／２０９８０４Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／２０６１０７Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／０５８５７３Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／２００１１９Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０１５６８５Ａ１、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０２０８５６Ａ１。
【0207】
特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に開示される方法で使用される。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたアテゾリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ、およびＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたデュルバルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｍｅｒｃｋ ＳｅｒｏｎｏおよびＰｆｉｚｅｒにより開発された、ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られるアベルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＭＤＸ－１１０５である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫによって開発されたＡＭＰ－２２４である。
【0208】
本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＰＤ－Ｌ１抗体の非限定的な例は、以下の特許および特許出願に開示されており、それらは全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる：米国特許第７，９４３，７４３号、米国特許第８，１６８，１７９号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許第８，５５２，１５４号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許第８，９８１，０６３号、米国特許第９，１７５，０８２号、米国公開番号ＵＳ２０１０／０２０３０５６Ａ１、米国公開番号ＵＳ２００３／０２３２３２３Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１３／０３２３２４９Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１５／０２０３５８０Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１５／０２２５４８３Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１５／０３４６２０８Ａ１、米国公開番号ＵＳ２０１５／０３５５１８４Ａ１、ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／１０００７９Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／０２２７５８Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／０５５８９７Ａ２、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／０６１６６８Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／１０９１２４Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／１９５１６３Ａ１、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０００６１９Ａ１、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０３０３５０Ａ１。
【0209】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、ＩＤＯ（インドールアミン－（２，３）－ジオキシゲナーゼ）および／またはＴＤＯ（トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ）などの免疫調節酵素を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態では、そのような化合物は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐ；例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１０／００５９５８を参照されたい）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、化合物はエパカドスタットである。別の実施形態では、化合物はＦ００１２８７である。別の実施形態では、化合物はインドキシモドである。別の実施形態では、化合物はＮＬＧ９１９である。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、がんを治療するためのＩＤＯ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。がんの治療に使用する本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、錠剤、丸剤またはカプセルなどの医薬組成物の固体剤形で存在し、医薬組成物はＩＤＯ阻害剤および薬学的に許容される賦形剤を含む。したがって、本明細書に記載のＴＣＲ、細胞、または医薬組成物および本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、別々の剤形として別々に、逐次的に、または同時に投与することができる。一実施形態では、細胞または医薬組成物は非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は経口投与される。特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。エパカドスタットは、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００５９５８号に記載されている。一実施形態では、阻害剤はエパカドスタットである。別の実施形態では、阻害剤はＦ００１２８７である。別の実施形態では、阻害剤はインドキシモドである。別の実施形態では、阻害剤はＮＬＧ９１９である。
【0210】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、ワクチンと組み合わせて対象に投与される。ワクチンは、例えば、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチン、またはＲＮＡワクチンであり得る。特定の実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンである。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、全ての種にわたって遍在する高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショックまたは毒素への曝露、酸化ストレス、またはグルコース欠乏などの他の形態のストレスの結果として、はるかに高いレベルに強力に誘導され得る。分子量に応じて、ＨＳＰ－１１０、－９０、－７０、－６０、および－２８の５つのファミリーに分類されている。ＨＳＰは、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）の交差提示経路を介して免疫原性ペプチドを送達し、Ｔ細胞の活性化をもたらす。ＨＳＰは、腫瘍特異的免疫を誘導できる複合体を形成する腫瘍関連抗原ペプチドのシャペロンキャリアとして機能する。死にかけている腫瘍細胞から放出されると、ＨＳＰ－抗原複合体は抗原提示細胞（ＡＰＣ）に取り込まれ、そこで抗原はＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合して抗腫瘍ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化をもたらすペプチドへと加工される。腫瘍調製物に由来するＨＳＰ複合体によって誘発される免疫は、各対象のがんによって発現する固有の抗原ペプチドレパートリーに対して特異的なものである。
【0211】
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的に複合体化した熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは自然免疫応答と適応免疫応答の両方を誘発する。特定の実施形態では、抗原性ペプチドは、治療されているがんに対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主にＣＤ９１）を介して、またはＴｏｌｌ様受容体に結合することにより、ＡＰＣによって効率的に捕捉される。ＨＳＰＰＣの内在化により、ケモカインおよびサイトカイン産生を伴うＡＰＣの機能的成熟がもたらされ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、Ｔｈ１およびＴｈ－２を介した免疫応答が活性化される。特定の実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体化したストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリー由来の１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはそれらの２つ以上の組み合わせを含む。
【0212】
特定の実施形態では、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、組換え抗原ペプチドと複合体化した組換え熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０もしくはｈｓｃ７０）またはそのペプチド結合ドメインを含む。組換え熱ショックタンパク質は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｗｏｒｎｉｃｚａｋ ａｎｄ Ｍｉｒａｕｌｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：５１８１－５１９７（１９８７）ならびにＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ１１１４２および／またはＹ００３７１に記載されるような、ヒトｈｓｃ７０配列を使用して、組換えＤＮＡ技術によって生成できる。特定の実施形態では、Ｈｓｐ７０配列は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２（１９），６４５５－６４５９（１９８５）ならびにＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ０ＤＭＶ８および／またはＭ１１７１７に記載されるようなものである。抗原性ペプチドはまた、当該分野で公知の組換えＤＮＡ方法によって調製され得る。
【0213】
特定の実施形態では、抗原性ペプチドは修飾アミノ酸を含む。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、翻訳後修飾の模倣物を含む。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミンでリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓアミノ酸の模倣物である。
【0214】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば熱ショックタンパク質ペプチド複合体－９６（ＨＳＰＰＣ－９６）と組み合わせて対象に投与されてがんを治療する。ＨＳＰＰＣ－９６は、抗原ペプチドと複合体化した９６ｋＤａの熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ－９６は、対象の腫瘍から製造されたがん免疫療法であり、がんの抗原性「指紋」を含む。特定の実施形態では、この指紋は、特定の対象の特定のがん細胞にのみ存在する固有の抗原を含み、ワクチンの注射は、対象の免疫系を刺激して、特定のがんの指紋を持つ細胞を認識および攻撃することを意図する。
【0215】
特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えばＨＳＰＰＣ－９６は、対象の腫瘍組織から生成される。特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は、治療されているがんまたはその転移のタイプの腫瘍から生成される。別の特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は、治療されている対象に対して自家性のものである。特定の実施形態では、腫瘍組織は非壊死性腫瘍組織である。特定の実施形態では、少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）の非壊死性腫瘍組織を使用して、ワクチンレジメンを生成する。特定の実施形態では、外科的切除後、ワクチン調製物で使用する前に非壊死性腫瘍組織を凍結する。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えばＨＳＰＰＣ－９６は、精製技術により腫瘍組織から単離され、濾過され、注射可能なワクチン用に調製される。特定の実施形態では、対象は、ＨＳＰＣＣ、例えばＨＳＰＣＣ－９６の６～１２用量を投与される。そのような実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ－９６の用量は、最初の４回の投与については毎週投与され、その後、２～８の追加の投与については隔週で投与され得る。
【0216】
本明細書に記載される方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣのさらなる例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３９１，３０６号、同第６，３８３，４９２号、同第６，４０３，０９５号、同第６，４１０，０２６号、同第６，４３６，４０４号、同第６，４４７，７８０号、同第６，４４７，７８１号、および同第６，６１０，６５９号、の特許および特許出願に開示されている。
【0217】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、細胞、または医薬組成物は、アジュバントと組み合わせて対象に投与される。治療状況に応じて、さまざまなアジュバントを使用できる。適切なアジュバントの非限定的な例には、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）、モンタニドＩＳＡ（Ｓｅｐｐｉｃ不完全アジュバント）、Ｒｉｂｉアジュバントシステム（ＲＡＳ）、Ｔｉｔｅｒ Ｍａｘ、ムラミルペプチド、Ｓｙｎｔｅｘ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ）、ミョウバン（水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム）、アルミニウム塩アジュバント、Ｇｅｒｂｕ（登録商標）アジュバント、ニトロセルロース吸収抗原、カプセル化または封入された抗原、３ Ｄｅ－Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３ Ｄ－ＭＰＬ）、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ）リガンド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、サポニン、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＳ－２１、ＱＳ－７、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸなどの免疫刺激複合体、などが含まれるが、これらに限定されない。他のアジュバントには、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびｐｏｌｙ（Ａ）やｐｏｌｙ（Ｕ）などの二本鎖ＲＮＡ分子が含まれる。上述のアジュバントの組み合わせも使用され得る。例えば、その全ての全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６４５，４９５号、同第７，０２９，６７８号、および同第７，８５８，５８９号を参照されたい。一実施形態では、本明細書で使用されるアジュバントは、ＱＳ－２１ＳＴＩＭＵＬＯＮである。
【0218】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）調整剤と組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態では、ＴＭＥ調節剤はサイトカイン（例えば、インターロイキン－２、インターフェロン－α、インターフェロン－β、インターフェロン－γ、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４））である。特定の実施形態では、サイトカインはケモカイン（例えば、（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）およびＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０））である。特定の実施形態では、ＴＭＥ調整剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のアゴニストである。特定の実施形態では、アゴニストは、ＴＬＲ９の合成アゴニスト（例えば、ＣｐＧ）である。特定の実施形態では、アゴニストは、ＳＴＩＮＧの合成アゴニスト（例えば、ｃＧＡＭＰ）である。
【0219】
ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物、および追加の治療薬（例えば、化学療法薬、放射線治療薬、チェックポイント標的薬、ＩＤＯ阻害剤、ワクチン、アジュバント、および／またはＴＭＥ調整剤）は、別々の剤形として、別々に、逐次的に、または同時に投与できる。一実施形態では、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は経口投与される。
【0220】
本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は、様々な経路で対象に送達され得る。これらには、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、髄腔内、および皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。肺内投与もまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびスプレーとしての使用のためのエアロゾル化剤による製剤化により使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は、静脈内送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は皮下送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は、腫瘍内送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【0221】
状態の治療および／または予防に有効であるＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、改変された細胞、または医薬組成物の量は、疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術により決定することができる。
【0222】
組成物に使用される正確な用量は、投与経路、およびそれによって引き起こされる感染または疾患の重篤度にも依存し、開業医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、健康を含む）、患者がヒトか動物か、投与された他の薬物、または治療法が予防的であるかまたは治療的であるかに応じて、有効用量が異なり得る。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック動物を含む非ヒト哺乳動物もまた治療できる。治療用量は、安全性と有効性を最適化するために最適に調整される。
【0223】
本明細書に記載のＴＣＲを使用して、生体試料中の、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体のレベル、および／またはＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数を、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、またはウェスタンブロット法などの免疫測定法を含む、当業者に知られている古典的な免疫組織学的方法を用いてアッセイすることもできる。適切なＴＣＲアッセイ標識は当該技術分野で知られており、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体、ルミノールなどの発光ラベル、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光ラベル、ならびにビオチンが含まれる。そのようなラベルを使用して、本明細書に記載のＴＣＲを標識することができる。代替的に、本明細書に記載のＴＣＲを認識する分子を標識し、本明細書に記載のＴＣＲと組み合わせて使用して、生体試料中の、ＭＬＬペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体および／またはＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数を検出することができる。
【0224】
ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体のレベルのアッセイは、第１の生体試料中のＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体のレベルを、直接的（例えば、絶対タンパク質レベルを決定もしくは推定することにより）または相対的（例えば、第２の生体試料の疾患関連タンパク質レベルと比較することにより）のいずれかで、定性的または定量的の測定または推定を含むことを意図している。第１の生体試料中のＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体のレベルは、測定または推定および標準レベルと比較することができ、標準は、病気にかかっていない個人から得られた第２の生体試料から取得されるか、または病気にかかっていない個人の集団のレベルを平均することによって決定される。当該技術分野で理解されるように、「標準」レベルが分かると、比較のための標準として繰り返し使用することができる。
【0225】
本明細書で使用される「生体試料」という用語は、対象、細胞株、組織、またはＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５もしくは４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を潜在的に提示する他の細胞供給源から得られる任意の生体試料を指す。動物（例えば、ヒト）から組織生検および体液を得る方法は、当該技術分野で周知である。生体試料には、末梢血単核球が含まれる。
【0226】
本明細書に記載のＴＣＲは、本明細書に基づいて、当業者に周知かつ標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ用途を含む、予後、診断、モニタリング、およびスクリーニング用途に使用することができる。免疫系の状態および／または免疫応答のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価および評価のための予後診断、診断、モニタリングおよびスクリーニングアッセイおよびキットを使用して、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞に関連する障害を有することが知られているかまたは疑われるものを含む患者の試料を予測、診断、およびモニターすることができる。生体内用途には、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５もしくは４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞、組織、または臓器の指向性細胞療法および免疫系調節およびラジオイメージングが含まれる。
【0227】
一実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲを、生検試料の免疫組織化学中の、ＭＬＬペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体および／またはＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞の数を検出するのに使用することができる。本明細書に記載のＴＣＲは、検出可能な、または機能的標識を担持していてもよい。蛍光標識が使用されるとき、現在利用可能な顕微鏡検査および蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野で知られている両方の方法の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを特定および定量することができる。本明細書に記載されるＴＣＲは、蛍光標識を担持してもよい。例示的な蛍光標識には、例えば、反応性および共役プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセインおよびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素、およびＤｙＬｉｇｈｔ色素が含まれる。本明細書に記載されるＴＣＲは、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、および１８６Ｒｅなどの放射性標識を担持してもよい。放射性標識を使用するとき、当該技術分野で知られている現在利用可能な計数手順を利用して、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体へのＴＣＲの特異的結合を特定および定量することができる。標識が酵素である場合、検出は、現在利用されている当該技術分野で知られている比色法、分光光度法、蛍光分光光度法、電流測定法、またはガス測定法のいずれかによって達成することができる。これは、ＴＣＲとＭＬＬペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体との複合体形成を可能にする条件下で、本明細書に記載のＴＣＲと、試料または対照試料を接触させることによって達成できる。ＴＣＲとペプチド－ＭＨＣ複合
体との間に形成された複合体は、試料と対照とで検出され、比較される。ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体について本明細書に記載のＴＣＲの特異的結合に照らして、ＴＣＲを、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞を検出するために使用することができる。本明細書に記載のＴＣＲは、免疫親和性精製を介してそのような複合体または細胞を精製するためにも使用できる。本明細書にさらに含まれるのは、例えばＭＬＬペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体、またはペプチド－ＭＨＣ複合体を含む複合体の存在の程度の半定量的または定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムである。システムまたは試験キットは、標識成分、例えば標識ＴＣＲ、および１つ以上の追加の免疫化学試薬を含んでもよい。
体との間に形成された複合体は、試料と対照とで検出され、比較される。ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体について本明細書に記載のＴＣＲの特異的結合に照らして、ＴＣＲを、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体を提示する細胞を検出するために使用することができる。本明細書に記載のＴＣＲは、免疫親和性精製を介してそのような複合体または細胞を精製するためにも使用できる。本明細書にさらに含まれるのは、例えばＭＬＬペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体、またはペプチド－ＭＨＣ複合体を含む複合体の存在の程度の半定量的または定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムである。システムまたは試験キットは、標識成分、例えば標識ＴＣＲ、および１つ以上の追加の免疫化学試薬を含んでもよい。
【0228】
５．５ ポリヌクレオチド、ベクター、およびＴＣＲの生成方法
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉおよび哺乳動物細胞）における組換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターである。本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるＴＣＲのいずれかのα鎖および／またはβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、哺乳動物細胞などの宿主細胞におけるそれらの効率的な発現のための発現ベクターである。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉおよび哺乳動物細胞）における組換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターである。本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるＴＣＲのいずれかのα鎖および／またはβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、哺乳動物細胞などの宿主細胞におけるそれらの効率的な発現のための発現ベクターである。
【0229】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたは核酸分子は単離または精製されている。一般的に、単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然の供給源（例えば、マウスまたはヒト）に存在する他の核酸分子から分離されたものである。追加的にまたは代替的に、単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ分子）は、組換え技術により産生される場合、他の細胞物質または培地を実質的に含まず、または化学合成される場合、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。例えば、「実質的に含まない」という言葉には、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に約１０％未満）の他の物質、例えば、細胞物質、培地、他の核酸分子、化学前駆体、および／または他の化学物質を有する、ポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。
【0230】
特定の態様では、本明細書において提供されるのは、上述のＴＣＲとして、配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列を含むペプチドの同一のエピトープに結合するＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、ペプチドは、上述のように、ＭＨＣと複合体を形成している（例えば、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２）。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ｉｎ ｖｉｖｏで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｖｏで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲをコードするＤＮＡの生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列を含む。
【0231】
特定の態様では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖ＦＲおよびＣＤＲを含むα鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１を参照されたい）または本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖ＦＲおよびＣＤＲを含むβ鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１を参照されたい）を含み得る。
【0232】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖およびβ鎖をコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのα鎖、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのβ鎖、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのα鎖を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのα鎖、フューリン切断部位、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのβ鎖を含むポリペプチドをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＴＣＲのβ鎖、フューリン切断部位、２Ａ切断部位、およびＴＣＲのα鎖を含むポリペプチドをコードする。フューリン切断部位は、一般にＲＸ１Ｘ２Ｒのコンセンサス配列を有し、配列中、Ｘ１は任意のアミノ酸であり得、Ｘ２はＫまたはＲである（配列番号９６）。特定の実施形態では、Ｘ１はＫまたはＲである。特定の実施形態では、フューリン切断部位はＲＡＫＲの配列（配列番号９７）を有する。特定の実施形態では、フューリン切断部位は、第２のアルギニン残基の後ろで切断される。２Ａ切断部位は一般に、Ｘ１Ｘ２ＥＸ３ＮＰＧＰのコンセンサス配列を含み、配列中、Ｘ１はＤまたはＧであり、Ｘ２はＶまたはＩであり、Ｘ３は任意のアミノ酸である（配列番号９９）。特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、Ｃ末端プロリン残基と先行するグリシン残基との間で切断される。特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号１００～１０５および２３９～２４６から選択されるアミノ酸配列を含む（表７）。特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を有するブタテッショウウイルス－１ ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位である。特定の実施形態では、２Ａ切断部位は、配列番号２３９に示されるアミノ酸配列を有するブタテッショウウイルス－１ ２Ａ（Ｐ２Ａ）切断部位である。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９０をコードする核酸配列を含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３８をコードする核酸配列を含む。
【0233】
【表7】
【0234】
また、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列との置換、およびｍＲＮＡ不安定性要素の除去により最適化される。コドン変化を導入し、および／またはｍＲＮＡの阻害領域を除去することにより、組換え発現のためのＴＣＲ（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、および同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適応することによって実施できる。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位と不安定要素（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕリッチエレメント）は、核酸配列によってコードされるアミノ酸を改変せずに変異させて、組換え発現のためのＲＮＡの安定性を高めることができる。改変は、例えば、同一のアミノ酸の代替コドンを使用して、遺伝暗号の縮重を利用する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコドンを改変して保存的変異、例えば元のアミノ酸と類似の化学構造および特性および／または機能を有する類似のアミノ酸をコードすることが望ましい場合がある。そのような方法は、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされるＴＣＲの発現と比較して、ＴＣＲの発現を少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍、またはそれ以上増加させることができる。
【0235】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化ポリヌクレオチド配列（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメインおよび／またはＶβドメイン）は、本明細書に記載のＴＣＲをコードする非最適化ポリヌクレオチド配列（例えば、α鎖、β鎖、Ｖαドメイン、および／またはＶβドメイン）のアンチセンス（例えば、相補的）ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする非最適化ポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに対して高ストリンジェンシー条件下で本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化ヌクレオチド配列。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードする最適化ヌクレオチド配列は、本明細書に記載のＴＣＲをコードする非最適化ヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高ストリンジェンシー、中または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報が記載されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２～７３）を参照されたい。
【0236】
当該技術分野で公知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ得、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に記載のＴＣＲ、例えば表１～４に記載のＴＣＲ、およびこれらのＴＣＲの修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野で周知の方法を使用して決定でき、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、そのようなＴＣＲをコードする核酸を生成するように組み立てられる。ＴＣＲをコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２－６に記載されているように）、簡潔に述べると、ＴＣＲをコードする配列の部分を含むオーバーラップするオリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、そしてＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【0237】
代替的に、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング法）を使用して、適切な供給源（例えば、Ｔリンパ球）由来の核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、目的のＴＣＲを発現するＴ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実施できる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、ＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、ＴＣＲのＶαドメインおよび／またはＶβドメインをコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、例えばキメラおよびヒト化ＴＣＲを生成するために、宿主細胞での発現およびさらなるクローニングのためにベクターにクローニングすることができる。
【0238】
特定のＴＣＲをコードする核酸を含むクローンが利用できないが、ＴＣＲ分子の配列がわかっている場合、ＴＣＲをコードする核酸を化学的に合成するか、適切な供給源（例えば、本明細書に記載のＴＣＲを発現するように選択されたＴリンパ球などのＴＣＲを発現する任意の組織または細胞から単離された生成されたＴＣＲ ｃＤＮＡライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー、または核酸、例えばポリＡ＋ＲＮＡ）から配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズする合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または、例えば、ＴＣＲをコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するための、特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって取得することができる。次いで、ＰＣＲにより生成された増幅された核酸は、当該技術分野で周知の任意の方法を使用して複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【0239】
本明細書に記載のＴＣＲをコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて、例えば、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって、容易に単離してシーケンシングすることができる。Ｔリンパ球は、このようなＤＮＡの供給源として機能する。単離されたＤＮＡは発現ベクターに入れられ、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ））、または他の方法でＴＣＲタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞でのＴＣＲの合成をもたらす。
【0240】
ＴＣＲ全体を生成するために、ＶαまたはＶβヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ＶαまたはＶβ配列を増幅して、クローン、例えば個々のＶαまたはＶβヌクレオチド配列のクローン、または柔軟なリンカーによって接続されたＴＣＲの可変領域を含む単鎖ＴＣＲのクローンとすることができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅Ｖαドメインをα鎖定常領域を発現するベクターにクローニングし、ＰＣＲ増幅Ｖβドメインをβ鎖定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。特定の実施形態では、ＶαまたはＶβドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ－１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域のクローニング部位、定常ドメイン、およびネオマイシンなどの選択マーカーを含む。次いで、α鎖およびβ鎖ベクターを細胞株に同時または逐次的に共トランスフェクトして、当業者に公知の技術を使用してＴＣＲ全体を発現する安定または一過性の細胞株を生成する。ＶαまたはＶβドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、ベクターを細胞株にトランスフェクトして、当業者に公知の技術を使用してＴＣＲ全体を発現する安定または一過性の細胞株を生成する。
【0241】
ＤＮＡはまた、例えば、マウス配列の代わりにヒトα鎖およびβ鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより、またはＴＣＲコード配列を非ＴＣＲポリペプチドのコード配列の全てまたは一部に共有結合することにより、修飾することができる。
【0242】
また、高、中、または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドが提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、高、中、または低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書で提供されるＶαドメインおよび／またはＶβドメインをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。
【0243】
ハイブリダイゼーション条件は当該技術分野で記載されており、当業者に知られている。例えば、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションには、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーションと、その後に約５０～６５℃で０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳで１回以上洗浄されるものが含まれ、高度にストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションには、約４５℃で６×ＳＳＣのフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーションと、その後に約６８℃で０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳで１回以上洗浄されるものが含まれる。他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは当業者に知られており、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（６．３．１－６．３．６および２．１０．３ページ）に記載されており、参照されたい。
【0244】
特定の態様では、本明細書に提供されるのは、ＭＬＬポリペプチド（例えばＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する本明細書に記載のＴＣＲを（例えば組換えにより）発現する細胞（例えば宿主細胞）、ならびに関連するポリヌクレオチドおよび発現ベクターである。本明細書で提供されるのは、宿主細胞、例えば哺乳動物細胞での組換え発現のためのそのようなＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば発現ベクター）である。本明細書でさらに提供されるのは、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、ヒトまたはヒト化ＴＣＲ）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む宿主細胞である。特定の態様では、本明細書に提供されるのは、宿主細胞からこのようなＴＣＲを発現させることを含む、本明細書に記載のＴＣＲを生成する方法である。
【0245】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載の改変された細胞（例えば、異種および／または組換え核酸を含む細胞）を生成する方法である。特定の実施形態では、方法は、細胞へのベクターの導入を可能にする条件下で、細胞を本明細書に記載のベクターと接触させることを含む。特定の実施形態では、条件は、ベクターによる細胞のトランスフェクションを可能にする（例えば、リポソームまたはエレクトロポレーションによる）。一実施形態では、この条件により、エレクトロポレーションによるｍＲＮＡベクターによる細胞のトランスフェクションが可能になる。特定の実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、条件は細胞にウイルスベクターを形質導入することを可能にする。特定の実施形態では、ベクターは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで細胞に導入される。特定の実施形態では、ベクターはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に導入される。
【0246】
ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、全長ＴＣＲ、ＴＣＲのα鎖および／またはβ鎖、本明細書に記載の単鎖ＴＣＲ）の組換え発現は、ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を含む。本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが得られると、ＴＣＲ分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。したがって、ヌクレオチド配列をコードするＴＣＲを含むポリヌクレオチドを発現させることによりタンパク質を調製する方法が本明細書に記載されている。当業者に周知の方法を使用して、ＴＣＲコード配列および適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子組換えが含まれる。さらに提供されるのは、プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載のＴＣＲ分子（例えば、全長ＴＣＲ、ＴＣＲのα鎖もしくはβ鎖、ＴＣＲのＶαもしくはＶβ、またはαもしくはβ鎖ＣＤＲ）をコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターである。
【0247】
ベクターは、一本鎖または二本鎖であり、合成または天然供給源から部分的に得られ、天然、非天然、または改変したヌクレオチドを含むことができる任意のタイプのヌクレオチド（ＤＮＡおよびＲＮＡを含むがこれらに限定されない）を含むことができる。組換え発現ベクターは、天然に存在するかまたは天然に存在しないヌクレオチド間結合、または両方のタイプの結合を含むことができる。一実施形態では、天然に存在しないかまたは改変されされたヌクレオチドまたはヌクレオチド間結合は、ベクターの転写または複製を妨げない。発現ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクター）であり得る。特定の実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１ゲノムの遺伝エレメントを含むベクター）またはウマ伝染性貧血ウイルスベクターである。特定の実施形態では、ベクターは、ウイルス粒子を提供するために、１つ以上のウイルスキャプシドタンパク質とともにパッケージされる。
【0248】
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に導入され得、次いで、得られた細胞は、本明細書に記載のＴＣＲを生成するために従来の技術によって培養され得る。したがって、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＴＣＲ分子（例えば、ＴＣＲの完全長ＴＣＲ、α鎖もしくはβ鎖、ＴＣＲのＶαもしくはＶβ、またはαもしくはβ鎖ＣＤＲ）をコードする、宿主細胞におけるそのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結されているポリヌクレオチドを含む宿主細胞である。特定の実施形態では、二本鎖ＴＣＲの発現のために、以下に詳述するように、ＴＣＲ分子全体の発現のために、α鎖とβ鎖の両方を個別にコードするベクターを宿主細胞で共発現させることができる。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖とβ鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む。特定の実施形態では、宿主細胞は２つの異なるベクター、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、および本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の実施形態では、第１の細胞により発現するα鎖またはα鎖可変領域は、第２の細胞により発現するβ鎖またはβ鎖可変領域と会合して本明細書に記載のＴＣＲを形成する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、そのような第１の宿主細胞およびそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団である。
【0249】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖またはα鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１ベクター、および本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖またはβ鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含むベクターの集団である。
【0250】
様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載のＴＣＲ分子を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、その後精製することができる媒体を表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトすると、本明細書に記載のＴＣＲ分子をｉｎ ｓｉｔｕで発現できる細胞も表す。これらには、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはＴＣＲコード配列を含むコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物、ＴＣＲコード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）、ＴＣＲコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（バキュロウイルスなど）に感染した昆虫細胞系、ＴＣＲコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したか、またはＴＣＲコード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、クＣｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻）、または哺乳類細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）に由来するプロモーターを含む組換え発現コンストラクトを担持する哺乳類細胞システム（例、ＣＯＳ（例、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲを発現するための細胞はＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲを発現するための細胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞株である。特定の実施形態では、哺乳動物発現ベクターはｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に組換えＴＣＲ分子全体の発現のために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が組換えＴＣＲ分子の発現のために使用される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な最初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせて、ＴＣＲの効果的な発現システムである（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ ＆ Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６） Ｇｅｎｅ ４５：１０１－５；およびＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８（７）：６６２－７）。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲをコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより調節される。
【0251】
特定の実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。特定の実施形態では、リンパ球はＴ細胞である。任意の発生段階の任意のＴ細胞を使用して、本明細書に開示されるＴＣＲを発現することができる。例えば、特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１またはＴｈ２細胞）、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、胸腺細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（例えばインバリアントナチュラルキラーＴ細胞）からなる群から選択される。細胞免疫系の前駆細胞（例えば、Ｔリンパ球の前駆細胞）も、エフェクター細胞に分化、発達、または成熟する可能性があるため、本明細書に開示されるＴＣＲの提示に有用である。したがって、特定の実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞）、リンパ球前駆細胞、または造血幹細胞（例えば、骨髄、臍帯血、または末梢血から単離および／または濃縮される）である。
【0252】
細胞は、腫瘍、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアフェレーシス製品を含むが、これらに限定されない多数の供給源から取得できる。特定の実施形態では、細胞は、対象に機能性Ｔ細胞を残す治療の直後に患者から得られる。この点に関し、特定のがん治療後、特に、免疫系を損傷する薬物による特定の治療に続いて、患者が通常治療から回復する期間中に治療直後に、得られるＴ細胞の質は、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖する能力に関して最適であるか、または改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したｅｘ ｖｉｖｏ操作に続いて、これらの細胞は、強化された生着およびｉｎ ｖｉｖｏ増殖のための好ましい状態であり得る。したがって、特定の実施形態では、細胞は、この回復段階の間に、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または別の組織もしくは体液、またはアフェレーシス製品から収集される。
【0253】
特定の実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、細胞表面上に本明細書に開示されるＴＣＲを提示する細胞の集団である。細胞の集団は、不均一でも均一でもよい。特定の実施形態では、集団のうちの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が本明細書に記載の細胞である。特定の実施形態では、集団は実質的に純粋であり、集団の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、または９９．９％）が均一である。特定の実施形態では、集団は不均一であり、細胞の混合集団を含む（例えば、細胞は、異なる細胞型、発達段階、起源を有し、異なる方法により単離、精製、または濃縮され、異なる薬剤で刺激され、および／またはさまざまな方法で改変されている）。特定の実施形態では、細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（例えば、ヒトＰＢＭＣ）の集団である。
【0254】
細菌系では、発現するＴＣＲ分子の用途に応じて、多くの発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、ＴＣＲ分子の医薬組成物の生成のために、そのようなＴＣＲを大量に産生する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターには、ＴＣＲコード配列を、融合タンパク質が産生されるようにｌａｃ Ｚコード領域とフレームを合わせて、ベクターに個別にライゲーションできる、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ Ｕ ＆ Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｌｌ Ｂ（１９８３） ＥＭＢＯ Ｊ ２：１７９１－１７９４）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５） Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９）などが含まれるが、これに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、外来ポリペプチドをグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合に続く遊離グルタチオンの存在下での溶離により溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターはトロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されているため、クローニングされた標的遺伝子産物はＧＳＴ部分から放出される。
【0255】
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクターとして使用して、外来遺伝子を発現させることができる。ウイルスはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞で増殖する。ＴＣＲコード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローン化され、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【0256】
哺乳動物宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系を利用できる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的のＴＣＲコード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび３個に分割された（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）に挿入すると、感染宿主で生存でき、ＴＣＲ分子を発現することのできる組換えウイルスが生成される（例えば、Ｌｏｇａｎ Ｊ ＆ Ｓｈｅｎｋ Ｔ（１９８４） ＰＮＡＳ ８１（１２）：３６５５－９を参照されたい）。挿入されたＴＣＲコード配列の効率的な翻訳には、特定の開始シグナも必要になる場合がある。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンと隣接配列が含まれる。さらに、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然と合成の両方のさまざまな起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含めることにより高めることができる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４参照されたい）。
【0257】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾および加工する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）および加工（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後加工および修飾のための特徴的かつ特定のメカニズムを有する。適切な細胞株または宿主システムを選択して、発現された外来タンパク質の正しい修飾および加工を保証することができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切なプロセシング、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞機構を保有する真核生物宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因的にいずれの免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲ分子は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で産生される。
【0258】
組換えＴＣＲの長期発現のために、安定した発現細胞を生成できる。例えば、本明細書に記載のＴＣＲを安定して発現する細胞株を改変することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される細胞は、会合して本明細書に記載のＴＣＲを形成するα鎖またはα鎖可変領域およびβ鎖またはβ鎖可変領域を安定に発現する。
【0259】
特定の態様では、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、改変された細胞を濃縮培地で１～２日間増殖させ、その後選択培地に切り替える。組換えプラスミドの選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドを染色体に安定して組み込み、増殖して、結果的に細胞株にクローニングして増殖させることのできるフォーカスを形成できるようにする。この方法は、本明細書に記載のＴＣＲを発現する細胞株を改変するために有利に使用することができる。そのような改変された細胞株は、ＴＣＲ分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価に特に有用であり得る。
【0260】
それぞれ、ｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－、またはａｐｒｔ－細胞における、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９７７） Ｃｅｌｌ １１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＥＨ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ Ｗ（１９６２） ＰＮＡＳ ４８（１２）：２０２６－２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ Ｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８０） Ｃｅｌｌ ２２（３）：８１７－２３）の遺伝子を含むがこれらに限定されない多くの選択システムを使用することができ、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。また、代謝拮抗剤耐性は、以下の遺伝子に対する選択の基礎として使用できる：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８０） ＰＮＡＳ ７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８１） ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ ＆ Ｂｅｒｇ Ｐ（１９８１） ＰＮＡＳ ７８（４）：２０７２－６）；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ＧＹ ＆ Ｗｕ ＣＨ（１９９１） Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３） Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；およびＭｏｒｇａｎ ＲＡ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３） Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７；Ｎａｂｅｌ ＧＪ ＆ Ｆｅｌｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３） Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）；ならびにハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ＲＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８４） Ｇｅｎｅ ３０（１－３）：１４７－５６）、これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に知られている方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用でき、そのような方法は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ Ｍ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；およびＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ＮＣ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ Ｆ ｅｔ ａｌ．，（１９８１） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５０：１－１４に記載される。
【0261】
ＴＣＲ分子の発現レベルは、ベクター増幅によって高めることができる（総説については、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ＣＲ ＆ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ ＣＣＧ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。ＴＣＲを発現するベクター系のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピー数が増加した宿主細胞が選択される。増幅された領域はＴＣＲ遺伝子に関連しているため、ＴＣＲの産生も増加する（その全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｒｏｕｓｅ ＧＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８３） Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２５７－６６）。
【0262】
他の態様では、宿主細胞は、本明細書に記載のＴＣＲをコードする配列を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクター）で形質導入することができる。特定の実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１ゲノムの遺伝エレメントを含むベクター）またはウマ伝染性貧血ウイルスベクターである。特定の実施形態では、ベクターは、ウイルス粒子を提供するために、１つ以上のウイルスキャプシドタンパク質とともにパッケージされる。
【0263】
特定の実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のＴＣＲをコードする配列に作動可能に連結された転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）をさらに含む。代替的に、ＴＣＲをコードする配列は、転写および／または翻訳制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、および／またはコザック配列）に作動可能に連結されなくてもよいが、宿主細胞ゲノムの遺伝子座に隣接する配列に相同な配列が隣接し、ＴＣＲコード配列の組み込みにより、ゲノム遺伝子座またはその近傍の転写および／または翻訳制御配列からのコードされたＴＣＲの発現が可能になる。
【0264】
宿主細胞は、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクター、α鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター、およびβ鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターで、共導入（例えば、共トランスフェクトまたは共形質導入）できる。２つのベクターは、α鎖およびβ鎖ポリペプチドの同等の発現を可能にする同一の選択マーカーを含むことができる。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターで共導入することができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターと第２の発現ベクターの１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０の以下の比率のうちのいずれか１つで、共導入できる。いくつかの実施形態では、α鎖およびβ鎖のコード配列はＤＮＡである。いくつかの実施形態では、α鎖およびβ鎖のコード配列はＲＮＡである。
【0265】
代替的に、α鎖ポリペプチドとβ鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現できる単一のベクターを使用することができる。α鎖およびβ鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含むことができる。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸コンストラクトは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上、または２～５、５～１０、もしくは１０～２０個の範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列でコードすることができる。例えば、バイシストロン性核酸コンストラクトは、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載のＴＣＲのβ鎖）、および第２の遺伝子（例えば、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖）を含むことができる。このような発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写はプロモーターによって駆動され、一方、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳はキャップ依存性スキャン機構によって開始され、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳はキャップに依存しないメカニズム、例えば、ＩＲＥＳによってなされる。代替的に、２つの遺伝子は、自己切断ペプチド（例えば、２Ａペプチド）または細胞内もしくは細胞外プロテアーゼにより認識されるペプチド配列により作動可能に連結され得る。
【0266】
本明細書に記載のＴＣＲ分子が組換え発現により産生されると、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野で公知の任意の方法、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、および選別カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度の違い、またはタンパク質精製のための他の標準的な手法によって精製することができる。さらに、本明細書に記載のＴＣＲは、精製を促進するために、本明細書に記載の、または当該技術分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合することができる。
【0267】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは単離または精製されている。一般に、単離されたＴＣＲは、単離されたＴＣＲとは異なる抗原特異性を持つ他のＴＣＲを実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲの調製物は、細胞物質および／または化学前駆体を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という言葉には、ＴＣＲが単離または組換え産生された細胞の細胞成分からＴＣＲが分離されているＴＣＲの調製物が含まれる。したがって、細胞物質を実質的に含まないＴＣＲには、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％（乾燥重量で）未満の異種タンパク質（本明細書では「混入タンパク質」とも呼ばれる）および／またはＴＣＲのバリアント、例えば、ＴＣＲの異なる翻訳後修飾形態もしくはＴＣＲの他の異なるバージョン（例えばその断片）を有する、ＴＣＲの調製物が含まれる。ＴＣＲが組換え産生されるとき、それはまた一般に培地を実質的に含まない、すなわち、培地はタンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満を占める。ＴＣＲが化学合成により生成される場合、一般に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、ＴＣＲの合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、そのようなＴＣＲの調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量による）未満の目的のＴＣＲ以外の化学前駆体または化学物質を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは単離または精製されている。
【0268】
ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＴＣＲは、ＴＣＲの合成について当該技術分野で公知の任意の方法、例えば、化学合成または組換え発現技術によって生成され得る。本明細書に記載の方法は、別途示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、および当業者の範囲内の関連分野における従来の技術を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書に引用された参考文献に記載されており、文献に完全に説明されている。例えば、そのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８２） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７および年次改訂）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７および年次改訂） Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４） Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１） Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９） Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
【0269】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲは、例えばＤＮＡ配列の合成、遺伝子工学を介した創出を含む任意の手段により調製、発現、創出、または単離されたＴＣＲ（例えば組換えＴＣＲ）である。特定の実施形態では、そのようなＴＣＲは、ｉｎ ｖｉｖｏで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のＴＣＲ生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、またはアミノ酸配列）を含む。
【0270】
一態様では、本明細書に提供されるのは、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＴＣＲを生成する方法であって本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む方法である。特定の態様では、本明細書に提供されるのは、ＭＬＬポリペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＴＣＲを生成する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載のＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用してＴＣＲを発現（例えば、組換え発現）することを含む、方法である。特定の実施形態では、細胞は単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。特定の実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られたＴＣＲを精製するステップをさらに含む。
【0271】
本明細書に記載のＴＣＲは、当該技術分野で知られている様々なファージディスプレイ法を使用して生成することができる。ファージディスプレイ法では、機能的ＴＣＲドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を運ぶファージ粒子の表面に提示される。特に、ＶαおよびＶβドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶαおよびＶβドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってペプチドリンカーに連結され、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターを大腸菌にエレクトロポレーションし、大腸菌にヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶαおよびＶβドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、例えば、細胞の表面に提示されるか、固体表面またはビーズに捕捉されるそのような複合体を使用して、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体で選択または同定することができる。本明細書に記載のＴＣＲを生成するために使用できるファージディスプレイ法の例には、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺｈａｏ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７９：５８４５－５４に開示されるものが含まれる。
【0272】
上述の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージからのＴＣＲコード領域を単離し、ヒトＴＣＲを含むＴＣＲ全体を生成し、例えば、以下に記載されているように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の望ましい宿主で発現させることができる。
【0273】
特定の実施形態では、ＴＣＲ全体を生成するために、ＶαまたはＶβヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護する隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、テンプレート、例えばペプチドリンカーによって接続されたＴＣＲの可変領域を含む単鎖ＴＣＲのクローンからＶαまたはＶβ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶαドメインをＶα定常領域を発現するベクターにクローニングし、ＰＣＲ増幅ＶβドメインをＶβ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。次いで、α鎖およびβ鎖ベクターを細胞株に同時または逐次的に共トランスフェクトして、当業者に公知の技術を使用してＴＣＲ全体を発現する安定または一過性の細胞株を生成する。ＶαまたはＶβドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、ベクターを細胞株にトランスフェクトして、当業者に公知の技術を使用してＴＣＲ全体を発現する安定または一過性の細胞株を生成する。
【0274】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖およびβ鎖をコードするポリヌクレオチド、またはそれを含むベクターからＴＣＲ全体を生成するために、ＴＣＲのα鎖およびβ鎖を含むポリペプチドをポリヌクレオチドまたはベクターから発現する。ポリペプチドは、必要に応じて、単離および／または精製される。ポリペプチドをフューリン酵素と接触させる。フューリン切断部位がＲＸ１Ｘ２Ｒのアミノ酸配列を有し、配列中、Ｘ１がＫまたはＲであり、Ｘ２がＫまたはＲ（配列番号９８）である特定の実施形態では、ポリペプチドは、同時またはその後のいずれかでカルボキシペプチダーゼと接触させられ、カルボキシペプチダーゼがポリペプチドのＣ末端から塩基性アミノ酸ＫまたはＲを除去する。
【0275】
キメラＴＣＲは、ＴＣＲの異なる部分が異なるＴＣＲ分子、例えば異なる種のＴＣＲに由来する分子である。
【0276】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＣＲとして配列番号４５または４７に示されるアミノ酸配列を含むペプチドの同一のエピトープに結合する本明細書に記載のＴＣＲは、ヒトＴＣＲである。ヒトＴＣＲは、当該技術分野で公知の任意の方法を使用して産生され得る。例えば、機能的な内因性ＴＣＲを発現できないが、ヒトＴＣＲ遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用できる。特に、ヒトαおよびβ鎖ＴＣＲ遺伝子は、ランダムに、または相同組換えによりマウス胚性幹細胞に導入することができる。マウスのαおよびβ鎖ＴＣＲ遺伝子は、相同組換えによるヒトＴＣＲ遺伝子座の導入と別個に、または同時に非機能的とすることができる。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失により、内因性ＴＣＲの産生が妨げられる。改変された胚性幹細胞を増殖し、胚盤胞に微量注入して、キメラマウスを作成する。次いで、キメラマウスを交配させて、ヒトＴＣＲを発現するホモ接合の子孫を生成する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＭＬＬペプチド、例えばＭＬＬホスホペプチド）の全てまたは一部で通常の方法によって免疫される。抗原に対するＴＣＲを含むＴリンパ球は、免疫されたトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが担持するヒトＴＣＲ導入遺伝子は、Ｔ細胞分化中に再配列する。したがって、そのような技術を使用して、ｉｎ ｖｉｖｏ免疫化から生じる治療的に有用なＴＣＲを生成することが可能である。
【0277】
ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するヒトＴＣＲは、ヒトＴＣＲ配列から派生したＴＣＲライブラリーを使用したファージディスプレイ法または哺乳類ディスプレイを含む当該技術分野で知られている様々な方法により生成することができる。
【0278】
５．６ キット
さらに提供されるのは、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲ、その医薬組成物またはコンジュゲート、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（例えば発現ベクター）、または本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲを発現する細胞を含むキットである。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される１つ以上のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、または細胞など、本明細書に記載の医薬組成物の成分の１つ以上で満たされた１つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットである。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物および本明細書に記載のものなどの任意の予防薬または治療薬を含む。特定の実施形態では、キットは、例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）および／またはホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）などのＴ細胞マイトジェン、または抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などのＴＣＲ複合体刺激抗体を含み得る。このような容器に必要に応じて付随するのは、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知であり得、この通知はヒトの投与のために製造、使用、または販売の代理店による承認を反映している。
さらに提供されるのは、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲ、その医薬組成物またはコンジュゲート、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（例えば発現ベクター）、または本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲを発現する細胞を含むキットである。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される１つ以上のＴＣＲ、ポリヌクレオチド、または細胞など、本明細書に記載の医薬組成物の成分の１つ以上で満たされた１つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットである。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物および本明細書に記載のものなどの任意の予防薬または治療薬を含む。特定の実施形態では、キットは、例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）および／またはホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）などのＴ細胞マイトジェン、または抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などのＴＣＲ複合体刺激抗体を含み得る。このような容器に必要に応じて付随するのは、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知であり得、この通知はヒトの投与のために製造、使用、または販売の代理店による承認を反映している。
【0279】
さらに提供されるのは、上述の方法で使用できるキットである。一実施形態では、キットは、本明細書に記載のＴＣＲ、例えば精製ＴＣＲを１つ以上の容器内に含む。特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照抗原としてＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含む実質的に単離されたペプチド－ＭＨＣ複合体を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体と反応しない対照ＴＣＲをさらに含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号ＮＯ：４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体へのＴＣＲの結合を検出するための１つ以上の要素を含む（例えば、ＴＣＲは、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物または発光化合物などの検出可能な基質にコンジュゲートすることができるか、またはＴＣＲを認識する結合分子は、検出可能な基板にコンジュゲートすることができる）。特定の実施形態では、本明細書で提供されるキットは、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含む、組換えにより生成または化学合成されたペプチド－ＭＨＣ複合体を含むことができる。キットで提供されるＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体は、固体支持体（例えば、固体表面またはビーズ）に結合され得るかまたは脂質膜（例えば、リポソーム、または固定細胞）に組み込み得る。より具体的な実施形態では、上述のキットの検出手段は、ＭＬＬペプチド（例えば、ＭＬＬホスホペプチド、例えば、配列番号４５または４７のアミノ酸配列からなるペプチド）を含むペプチド－ＭＨＣ複合体が結合する固体支持体を含む。そのようなキットは、ＴＣＲを認識する非結合レポーター標識結合分子も含むことができる。この実施形態では、ペプチド－ＭＨＣ複合体へのＴＣＲの結合は、上記レポーター標識結合分子の結合により検出され得る。
【実施例】
【0280】
このセクション（すなわち、セクション６）の例は、例示のために提供されるものであり、限定のためのものではない。
【0281】
６．１ 実施例１：新規ＭＬＬ ＴＣＲの発見
ＭＬＬホスホペプチドに結合する新規ＴＣＲは、２つの独自のプラットフォームを使用して特定された。第１のプラットフォームは、機能的スクリーニングとＮＧＳベースの配列決定により、ホスホペプチド特異的同族ＴＣＲαβ対が特定された初代Ｔ細胞増殖プラットフォームである。第２のプラットフォームは、ＴＣＲディスプレイプラットフォームであり、αおよびβ鎖ライブラリーがドナーＰＢＭＣから生成され、必要に応じて以前の標的特異的刺激なしで、標的特異的ホスホペプチド結合のためのＴＣＲ濃縮のラウンドが続く。
ＭＬＬホスホペプチドに結合する新規ＴＣＲは、２つの独自のプラットフォームを使用して特定された。第１のプラットフォームは、機能的スクリーニングとＮＧＳベースの配列決定により、ホスホペプチド特異的同族ＴＣＲαβ対が特定された初代Ｔ細胞増殖プラットフォームである。第２のプラットフォームは、ＴＣＲディスプレイプラットフォームであり、αおよびβ鎖ライブラリーがドナーＰＢＭＣから生成され、必要に応じて以前の標的特異的刺激なしで、標的特異的ホスホペプチド結合のためのＴＣＲ濃縮のラウンドが続く。
【0282】
６．１．１ 細胞の調製
ヒト樹状細胞（ＤＣ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、健康なドナーＨＬＡ－Ｂ＊０７０２＋ＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｓｈａｋｅｒ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＯＨ）から単離された。
ヒト樹状細胞（ＤＣ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、健康なドナーＨＬＡ－Ｂ＊０７０２＋ＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｓｈａｋｅｒ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＯＨ）から単離された。
【0283】
簡潔に述べると、ＣＤ１４＋単球は、製造者の取扱説明書（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号：１３０－０５０－２０１）に従って、抗ＣＤ１４マイクロビーズを使用した磁気分離によるポジティブ選択によりＰＢＭＣから単離され、ＤＣへの分化を誘導するために、５％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｈ３６６７－１００ｍＬ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ａｍｉｍｅｄ Ｄｉｒｅｃｔ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ、カタログ番号：４－０１Ｆ００－Ｈ）、８００Ｕ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：１３０－０９５－３７２）、および１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：１３０－０９３－９１７）を補充したＣｅｌｌＧｒｏ（登録商標）ＤＣ－培地（Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｉｘ、カタログ番号：２０８０１－０５５００）からなる増殖培地で３日間培養された。１０ｎｇ／ｍＬのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，＃Ｌ４３９１－１ＭＧ）、１００Ｕ／ｍＬのＩＦＮγ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ、カタログ番号：３００－０２）、ならびに２０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）またはＦＬＵおよびＣＭＶ対照ペプチドを補充した増殖培地でさらに１６時間インキュベートした後の完全な分化に続いて、ＤＣは、５０μｇ／ｍＬのマイトマイシン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｍ０５０５３－２ＭＧ）の存在下で６０分間インキュベートし、樹状細胞の増殖を阻害した。抗原ペプチドの非存在下でインキュベートしたＤＣを対照試料として調製した。
【0284】
ＣＤ８＋Ｔ細胞は、製造者の取扱説明書（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：１３０－０９６－４９５）に従って、磁気ビーズヒトＣＤ８＋Ｔ細胞分離キットを使用したネガティブ選択によりＣＤ１４＋単球枯渇ＰＢＭＣから単離された。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、カタログ番号：９０４３－００８７－１２０）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＰＥ－Ｃｙ７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号：２５－０４５８－４２）、抗ＣＤ４５ＲＯ－ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：１１－０４５７－４２）、抗ＣＤ５７－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、カタログ番号：３２２３１２）、抗ＣＣＲ７－ＢＶ４２１（ＢＤ ｈｏｒｉｚｏｎ、カタログ番号：５６２５５５）、および抗ＣＤ６２Ｌ－ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：１７－０６２９－４２）試薬のカクテルで表面染色した後に、ＦＡＣＳＡｒｉａＩＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）セルソーターを使用して、ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ５７－メモリーＴ細胞およびＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋／ＣＤ６２Ｌ＋ナイーブＴ細胞集団に分離された。
【0285】
６．１．２ ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞のホスホペプチド特異的刺激と染色
５μｇ／ｍＬのＩＬ－７（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：１３０－０９３－９３７）で１６時間処理したメモリーおよびナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット（１．０×１０６細胞／ｍＬ）を、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号：２００－２１）を補充した増殖培地中で、ペプチドでパルスした、またはパルスしていないＤＣ（２．５×１０５細胞／ｍＬ）と、４：１のＴ細胞：ＤＣ比で１０時間共インキュベートした。３、６、８、および１０日後、５ｎｇ／ｍＬ（１０日目に１０ｎｇ／ｍＬ）のＩＬ－１５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号：５７０３０２）およびＩＬ－７を補充した新鮮な増殖培地を共培養に添加した。
５μｇ／ｍＬのＩＬ－７（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：１３０－０９３－９３７）で１６時間処理したメモリーおよびナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット（１．０×１０６細胞／ｍＬ）を、３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号：２００－２１）を補充した増殖培地中で、ペプチドでパルスした、またはパルスしていないＤＣ（２．５×１０５細胞／ｍＬ）と、４：１のＴ細胞：ＤＣ比で１０時間共インキュベートした。３、６、８、および１０日後、５ｎｇ／ｍＬ（１０日目に１０ｎｇ／ｍＬ）のＩＬ－１５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号：５７０３０２）およびＩＬ－７を補充した新鮮な増殖培地を共培養に添加した。
【0286】
ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）、Ｆｌｕ対照ペプチドＱＰＥＷＦＲＮＶＬ（配列番号８４）、またはＣＭＶ対照ペプチドＴＰＲＶＴＧＧＧＡＭ（配列番号８５）をロードした１０μＬのＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体を添加した前に、共培養からの１．０×１０６個の細胞を１μＭのダサチニブ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号：９０５２Ｓ）で処理した。抗ＣＤ８－Ｐｅｒ－ＣＰ試薬の添加後、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーにより、ＣＤ８＋Ｔ細胞の五量体結合を評価した。その後、ＭＬＬ－ｐＭペプチドに結合するメモリーまたはナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞を含む共培養の最大１．０×１０６個の細胞をモネンシン（１：１０００）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：００－４５０５－５１）およびブレフェルジンＡ（１：１０００）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：００４５０６－６１）で処理し、上述のようにｐＭＨＣ五量体で染色した。抗ＣＤ８－ＦＩＴＣ、抗ＫＬＧＲ１－ＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ７１０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：４６－９４８８－４９）、抗４－１ＢＢ－ＢＶ４２１、抗ＣＤ６９－ＰＥ－Ｃｙ７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：２５－０６９９４２）、抗ＩＦＮγ－ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：１７－７３１９－８２）または抗ＩＦＮγ－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：１２－７３１９－８２）、および抗ＴＮＦα－ＢＶ５１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号：５０２９５０）を含むカクテルを使用して、Ｔ細胞活性化マーカーの表面および細胞内発現を検出した。細胞は、製造者の取扱説明書に従ってＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ、カタログ番号：５１－２０９０ＫＺ）およびＰｅｒｍＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ、カタログ番号：５１－２０９１ＫＺ）を使用して、透過処理された。ペプチド五量体結合は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩサイトメーターを使用して再評価され、ＭＬＬ－ｐＭペプチドに結合および／またはＭＬＬ－ｐＭ刺激に応答するメモリーおよびナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットは、ＦＡＣＳＡｒｉａＩＩサイトメーターを使用して取得された。
【0287】
６．１．３ スクリーニングプロセスからの例示的なデータ
第１の研究では、１７人のＨＬＡ－Ｂ＊０７０２健常ドナーからのＰＢＭＣをＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）によって７日間刺激し、その後ＩＦＮγおよびＴＮＦαの細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を実施した。ウイルスＴ細胞エピトープから選択された３２個のペプチドのプールを陽性対照として使用した。図１に示されているのは、ペプチドなしの陰性対照よりもＴＮＦα産生が増加した３人のドナーからの代表的なデータである。
第１の研究では、１７人のＨＬＡ－Ｂ＊０７０２健常ドナーからのＰＢＭＣをＭＬＬ－ｐＭペプチド（ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ；配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰペプチド（ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ；配列番号４７）によって７日間刺激し、その後ＩＦＮγおよびＴＮＦαの細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を実施した。ウイルスＴ細胞エピトープから選択された３２個のペプチドのプールを陽性対照として使用した。図１に示されているのは、ペプチドなしの陰性対照よりもＴＮＦα産生が増加した３人のドナーからの代表的なデータである。
【0288】
第２の研究では、メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットをペプチドでパルスしたか、またはパルスしていないＤＣと１０日間共培養した。共培養からの細胞を、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）および抗ＣＤ８抗体をロードしたＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色し、その後フローサイトメトリーによる結合評価を実施した。図２に示されるように、細胞のＣＤ８＋五量体＋集団は、ＭＬＬ－ｐＭペプチドでパルスしたＤＣと共培養した後に検出された。
【0289】
６．１．４ ＴＣＲサブライブラリーの生成とレトロウイルスの形質導入
ＴＣＲαおよびβ鎖用に個別のライブラリーが生成された。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｍｉｄｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：７５１４２）またはＡｌｌＰｒｅｐ（商標）ＤＮＡ／ＲＮＡマイクロキット（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：８０２０４）を使用して、ＭＬＬ－ｐＭでパルスしたＤＣでの刺激により濃縮された健全なドナーのＨＬＡ－Ｂ＊０７０２＋ＰＢＭＣ－由来ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞から単離された。単離されたＲＮＡは、製造者の取扱説明書に従って、２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号：ＤＥ１３７０１１４７）を使用したＲＮＡ６０００ Ｐｉｃｏアッセイ（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号：５０６７－１５１３）で分析された。ＲＮＡはＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号：６３４８６０）を使用してｃＤＮＡに転写され、可変ＴＣＲα（ＴＲＡＶおよびＴＲＡＪ遺伝子）ならびにβ鎖（ＴＲＢＶおよびＴＲＢＪ遺伝子）はマルチプレックスＰＣＲによって別々に増幅された。
ＴＣＲαおよびβ鎖用に個別のライブラリーが生成された。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｍｉｄｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：７５１４２）またはＡｌｌＰｒｅｐ（商標）ＤＮＡ／ＲＮＡマイクロキット（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：８０２０４）を使用して、ＭＬＬ－ｐＭでパルスしたＤＣでの刺激により濃縮された健全なドナーのＨＬＡ－Ｂ＊０７０２＋ＰＢＭＣ－由来ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞から単離された。単離されたＲＮＡは、製造者の取扱説明書に従って、２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号：ＤＥ１３７０１１４７）を使用したＲＮＡ６０００ Ｐｉｃｏアッセイ（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号：５０６７－１５１３）で分析された。ＲＮＡはＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号：６３４８６０）を使用してｃＤＮＡに転写され、可変ＴＣＲα（ＴＲＡＶおよびＴＲＡＪ遺伝子）ならびにβ鎖（ＴＲＢＶおよびＴＲＢＪ遺伝子）はマルチプレックスＰＣＲによって別々に増幅された。
【0290】
得られた可変鎖ＴＣＲαおよびＴＣＲβ遺伝子ライブラリーは、マウスＣＤ３との相互作用およびマウスＴ細胞におけるシグナル伝達を可能にする膜貫通および細胞内ドメインを含むマウス非可変αまたはβ領域を含むレトロウイルス発現ベクター（ＭＩＧＲ１、Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号：２７４９０に由来）に別々にクローニングされた。αおよびβ鎖発現ベクターは、それぞれ発現マーカーＣＤ６およびＣＤ７も含む。得られたプラスミドライブラリーの多様性は、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって評価された。安定した細胞ＴＣＲαβライブラリーを得るために、ＴＣＲαおよびＴＣＲβライブラリープラスミドをマウス細胞株ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３に連続的に導入した。ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３はマウス胸腺腫由来マウスＴＣＲ陰性、マウスＣＤ８陰性細胞株であり、キメラＣＤ８（対応するマウスＣＤ８αおよびβ膜貫通および細胞内領域に融合したヒトＣＤ８αおよびβ細胞外領域）ならびにＥＧＦＰに作動可能に連結された３つのＮＦＡＴ結合部位を含む最小ＩＬ－２プロモーターを含むＴ細胞活性化レポーター受容体コンストラクト（「ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰ」レポーターコンストラクト）を発現する。αおよびβ鎖の発現は、抗ヒトＣＤ６－ｂｉｏ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｏｎｌｉｎｅ、カタログ番号：ＡＢＩＮ６０９８８７）（１：１０００）および抗マウスＴＣＲβ－ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号：５５３１７２）（１：１０００）試薬で染色した後にフローサイトメトリーで確認され、ＮＧＳによって最終的な鎖の分布と多様性が決定された。
【0291】
６．２ 実施例２：マウス細胞における新規ＭＬＬ ＴＣＲの特性評価
ＭＬＬホスホペプチドに結合する５つの新規ＴＣＲは、独自の哺乳類細胞ＴＣＲディスプレイプラットフォームを使用して開発された。これらのＴＣＲの４つ、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、およびＴＣＲ００８３は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に結合する。これらのＴＣＲの１つであるＴＣＲ００８５は、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に結合する。２つのホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）およびＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）は、それぞれＭＬＬ－ｐＭおよびＭＬＬ－ｐＰペプチドと呼ばれた。これら５つのＴＣＲのα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）の配列を表４に示す。これらのＴＣＲは、上述のマウス細胞株ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３の表面上で、ヒト可変領域がマウス定常領域に融合したキメラタンパク質として発現した。マウス定常領域は、マウスＣＤ３との適切な固定と相互作用、およびマウスシグナル伝達経路の適切な誘発を保証する。
ＭＬＬホスホペプチドに結合する５つの新規ＴＣＲは、独自の哺乳類細胞ＴＣＲディスプレイプラットフォームを使用して開発された。これらのＴＣＲの４つ、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、およびＴＣＲ００８３は、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に結合する。これらのＴＣＲの１つであるＴＣＲ００８５は、ＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２に結合する。２つのホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）およびＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）は、それぞれＭＬＬ－ｐＭおよびＭＬＬ－ｐＰペプチドと呼ばれた。これら５つのＴＣＲのα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）の配列を表４に示す。これらのＴＣＲは、上述のマウス細胞株ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３の表面上で、ヒト可変領域がマウス定常領域に融合したキメラタンパク質として発現した。マウス定常領域は、マウスＣＤ３との適切な固定と相互作用、およびマウスシグナル伝達経路の適切な誘発を保証する。
【0292】
６．２．１ ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞のペプチド－ＭＨＣ五量体への結合
ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、キメラＴＣＲの、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するように形質導入され、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地（ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔ、カタログ番号：１－２８Ｓ０７－１）を使用して３７℃、１０％ＣＯ２で３日間増殖させた。ＴＣＲ陰性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を陰性対照として含めた。１．０×１０５個のＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を９６ウェルアッセイプレートのウェルごとに播種し、３００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、２００μＬのアッセイ緩衝液（２％ＦＣＳを補充した１×ＰＢＳ）を使用して２回洗浄し、１．０×１０５個の細胞／１００μＬの濃度でアッセイ緩衝液に再懸濁した。染色には、２０μＬの抗マウスＴＣＲβ鎖ＡＰＣ抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５３１７４、クローンＨ５７－５９７）（１：５００）およびＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）（５μＬ／ウェルもしくは０．５μＬ／ウェル）、ＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）（５μＬ／ウェル）、または非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）（５μＬ／ウェル）をロードしたＰＥ標識ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）のストック溶液をウェルごとに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーターを使用してフローサイトメトリーで分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）対ｐＭＨＣ結合（ＰＥ＋）について細胞を分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ドットプロットを生成し、ＴＣＲ＋ｐＭＨＣ＋細胞のパーセンテージ（％）を決定した。
ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、キメラＴＣＲの、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するように形質導入され、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地（ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔ、カタログ番号：１－２８Ｓ０７－１）を使用して３７℃、１０％ＣＯ２で３日間増殖させた。ＴＣＲ陰性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を陰性対照として含めた。１．０×１０５個のＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を９６ウェルアッセイプレートのウェルごとに播種し、３００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、２００μＬのアッセイ緩衝液（２％ＦＣＳを補充した１×ＰＢＳ）を使用して２回洗浄し、１．０×１０５個の細胞／１００μＬの濃度でアッセイ緩衝液に再懸濁した。染色には、２０μＬの抗マウスＴＣＲβ鎖ＡＰＣ抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５３１７４、クローンＨ５７－５９７）（１：５００）およびＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）（５μＬ／ウェルもしくは０．５μＬ／ウェル）、ＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）（５μＬ／ウェル）、または非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）（５μＬ／ウェル）をロードしたＰＥ標識ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）のストック溶液をウェルごとに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーターを使用してフローサイトメトリーで分析した。ＴＣＲ発現（ＡＰＣ＋）対ｐＭＨＣ結合（ＰＥ＋）について細胞を分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ドットプロットを生成し、ＴＣＲ＋ｐＭＨＣ＋細胞のパーセンテージ（％）を決定した。
【0293】
図３に示すように、キメラＴＣＲの、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、およびＴＣＲ００８３は全てＭＬＬ－ｐＭ／ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体に結合するが、キメラＴＣＲのＴＣＲ００８５はＭＬＬ－ｐＰ／ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体に結合する。５つのＴＣＲのいずれも、非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－ＭをロードしたＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体に結合しない。
【0294】
６．２．２ ペプチドでパルスしたＨＬＡ－Ｂ＊０７０２ Ｔ２細胞によるＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化
ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトおよびキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を上述のようにＳＦ－ＩＭＤＭ培地で培養した。並行して、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陽性Ｔ２ターゲット細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）をＭＬＬペプチドでパルスした。簡潔に述べると、Ｔ２－Ｂ７細胞を３００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、１×ＰＢＳで洗浄し、５０μｇ／ｍＬもしくは５μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）、または５０μｇ／ｍＬの非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）を補充した１×ＰＢＳで、１．０×１０６細胞／２５０μＬの最終濃度に再懸濁した。細胞を３７℃で３時間インキュベートし、１×ＰＢＳを使用して２回洗浄し、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地を使用して５．０×１０６細胞／２０ｍＬの最終濃度に再懸濁した。２００μＬ（５．０×１０４細胞）のＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を９６ウェルアッセイプレートのウェルごとに添加し、３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。次いで、１００μＬ（２．５×１０４細胞）のＴ２－Ｂ７ターゲット細胞懸濁液を各ウェルに添加し、３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間共インキュベートした。
ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトおよびキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を上述のようにＳＦ－ＩＭＤＭ培地で培養した。並行して、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陽性Ｔ２ターゲット細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）をＭＬＬペプチドでパルスした。簡潔に述べると、Ｔ２－Ｂ７細胞を３００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、１×ＰＢＳで洗浄し、５０μｇ／ｍＬもしくは５μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）、または５０μｇ／ｍＬの非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）を補充した１×ＰＢＳで、１．０×１０６細胞／２５０μＬの最終濃度に再懸濁した。細胞を３７℃で３時間インキュベートし、１×ＰＢＳを使用して２回洗浄し、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地を使用して５．０×１０６細胞／２０ｍＬの最終濃度に再懸濁した。２００μＬ（５．０×１０４細胞）のＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を９６ウェルアッセイプレートのウェルごとに添加し、３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。次いで、１００μＬ（２．５×１０４細胞）のＴ２－Ｂ７ターゲット細胞懸濁液を各ウェルに添加し、３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間共インキュベートした。
【0295】
染色のために、細胞懸濁液を３００×ｇで１０分間遠心分離し、アッセイ緩衝液を使用して２回洗浄し、２０μＬ／ウェルの染色溶液（１：５００ＡＰＣ標識抗マウスＴＣＲβ鎖抗体を補充した１×ＰＢＳ）を使用して再懸濁し、室温で３０分間インキュベートした。続いて、アッセイ緩衝液を使用して細胞を２回洗浄し、８０μＬのアッセイ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーにより分析した。ＴＣＲの発現（ＡＰＣ＋）対Ｔ細胞の活性化（ＥＧＦＰ＋）について、細胞をゲートした。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ドットプロットを生成し、ＡＰＣ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージ（％）を決定した。Ｔ２－Ｂ７ターゲット細胞の非存在下で培養されたＡＫ－Ｄ１０Ｒ３、またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞と非パルスＴ２－Ｂ７細胞の共培養は陰性対照として機能した。
【0296】
キメラＴＣＲの、ＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、またはＴＣＲ００８３を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、ホスホペプチドＭＬＬ－ｐＭでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞と共培養した後、ＩＬ－２－ＮＦＡＴレポーターコンストラクトの活性化を示したが、非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍでは示さなかった（図４Ａ）。キメラＴＣＲのＴＣＲ００８５は、ホスホペプチドＭＬＬ－ｐＰでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞と共培養した後、ＩＬ－２－ＮＦＡＴレポーターコンストラクトの活性化を媒介した（図４Ａ）。ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の活性化はＭＬＬ ＴＣＲとその同族ペプチド－ＭＨＣ複合体間の相互作用に依存していたが、それは、ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を単独で試験したとき、またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞をペプチドでパルスしなかったＴ２－Ｂ７細胞とインキュベートしたとき、そのような活性化が観察されなかったからである（図４Ｂ）。
【0297】
６．２．３ 細胞毒性アッセイ
次に、同様の共培養試験において、ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞におけるアポトーシスを誘導する潜在能力について評価した。簡潔に述べると、Ｔ２－Ｂ７ターゲット細胞に５μｇ／ｍＬもしくは５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）、または５０μｇ／ｍＬの非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）でパルスした。キメラＴＣＲのＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、上述のように、５００ｎｇ／ｍＬの抗ＦＡＳ試薬（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３０５７０２、クローンＥＯＳ９．１）および１０μＭカンポテシン（Ｓｉｇｍａ＃Ｃ９９１１）を補充したＳＦ－ＩＭＤＭ培地（Ａｍｉｍｅｄ＃１－２８５０７－Ｉ）中で、３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養した。次いで、細胞を抗マウスＴＣＲβ－ＡＰＣおよび抗カスパーゼ３－ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ＃５５０８２１）で染色し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーにより評価した。パルスされていないＴ２－Ｂ７細胞またはＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の非存在下でのＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養は、対照として機能した。
次に、同様の共培養試験において、ＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞におけるアポトーシスを誘導する潜在能力について評価した。簡潔に述べると、Ｔ２－Ｂ７ターゲット細胞に５μｇ／ｍＬもしくは５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）、５０μｇ／ｍＬのＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）、または５０μｇ／ｍＬの非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－Ｍ ＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）でパルスした。キメラＴＣＲのＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、ＴＣＲ００８３、またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、上述のように、５００ｎｇ／ｍＬの抗ＦＡＳ試薬（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３０５７０２、クローンＥＯＳ９．１）および１０μＭカンポテシン（Ｓｉｇｍａ＃Ｃ９９１１）を補充したＳＦ－ＩＭＤＭ培地（Ａｍｉｍｅｄ＃１－２８５０７－Ｉ）中で、３７℃、１０％ＣＯ２で１６時間ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養した。次いで、細胞を抗マウスＴＣＲβ－ＡＰＣおよび抗カスパーゼ３－ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ＃５５０８２１）で染色し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーにより評価した。パルスされていないＴ２－Ｂ７細胞またはＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の非存在下でのＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養は、対照として機能した。
【0298】
図５に示すように、キメラＴＣＲのＴＣＲ００７７、ＴＣＲ００７９、ＴＣＲ００８１、またはＴＣＲ００８３を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＭＬＬ－ｐＭホスホペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞においてカスパーゼ３発現レベルを増加させたが、非リン酸化対照ペプチドＭＬＬ－ＭでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞ではそうならなかった。キメラＴＣＲのＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＭＬＬ－ｐＰホスホペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞のカスパーゼ３発現レベルを増加させた（図５）。カスパーゼ３の発現は、パルスしていないＴ２－Ｂ７細胞またはＴＣＲ発現ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞の非存在下でのＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養では最小であった（図５）。
【0299】
６．２．４ アラニンスキャニングを使用したＴＣＲ特異性の特性評価
ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の抗原認識を評価するため、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトおよびキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞、またはＴＣＲ陰性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、ＭＬＬ－ｐＭペプチドまたはそのアラニン修飾バリアント：ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ１ ＡＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４９）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ２ ＥＡＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号５０）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ３ ＥＰＡ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号５１）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ４ ＥＰＲＡＰＳＨＳＭ（配列番号５２）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ５ ＥＰＲ［ｐＳ］ＡＳＨＳＭ（配列番号５３）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ６ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＡＨＳＭ（配列番号５４）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ７ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＡＳＭ（配列番号５５）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ８ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＡＭ（配列番号５６）、もしくはＭＬＬ－ｐＭ－Ａ９ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＡ（配列番号５７）でパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と、２：１のターゲット：エフェクター比で、３７℃、１０％ＣＯ２において、１６時間共培養した。抗マウスＴＣＲβ－ＡＰＣ抗体で染色した後、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターの発現をフローサイトメトリーで評価した。ＴＣＲの発現対Ｔ細胞の活性化（ＥＧＦＰ＋）について、細胞をゲートした。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ドットプロットを生成し、ＡＰＣ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージ（％）を決定した。データは、グラフ生成のためにペプチドでパルスしていないＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養について決定された活性化値の減算によるバックグラウンド補正のためにＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにコピーされた。
ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）の抗原認識を評価するため、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターコンストラクトおよびキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７またはＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞、またはＴＣＲ陰性ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、ＭＬＬ－ｐＭペプチドまたはそのアラニン修飾バリアント：ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ１ ＡＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４９）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ２ ＥＡＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号５０）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ３ ＥＰＡ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号５１）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ４ ＥＰＲＡＰＳＨＳＭ（配列番号５２）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ５ ＥＰＲ［ｐＳ］ＡＳＨＳＭ（配列番号５３）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ６ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＡＨＳＭ（配列番号５４）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ７ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＡＳＭ（配列番号５５）、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ８ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＡＭ（配列番号５６）、もしくはＭＬＬ－ｐＭ－Ａ９ ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＡ（配列番号５７）でパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と、２：１のターゲット：エフェクター比で、３７℃、１０％ＣＯ２において、１６時間共培養した。抗マウスＴＣＲβ－ＡＰＣ抗体で染色した後、ＩＬ－２－（ＮＦＡＴ）３－ＥＧＦＰレポーターの発現をフローサイトメトリーで評価した。ＴＣＲの発現対Ｔ細胞の活性化（ＥＧＦＰ＋）について、細胞をゲートした。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ドットプロットを生成し、ＡＰＣ＋ＥＧＦＰ＋細胞のパーセンテージ（％）を決定した。データは、グラフ生成のためにペプチドでパルスしていないＴ２－Ｂ７細胞を含む共培養について決定された活性化値の減算によるバックグラウンド補正のためにＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにコピーされた。
【0300】
図６Ａに示すように、キメラＴＣＲのＴＣＲ００７７を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞は、ＭＬＬ－ｐＭペプチド、ＭＬＬ－ｐＭ－Ａ３ペプチド、またはＭＬＬ－ｐＭ－Ａ８ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞と共培養された後、ＩＬ－２－ＮＦＡＴレポーターコンストラクトの活性化を示した。ＴＣＲ００７７を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、ＭＬＬ－ｐＭの他のアラニン修飾バリアント、ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチド、またはＭＬＬ－ｐＰ対照ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞とインキュベートすると、最小限の活性化が検出された（図６Ａ）。対照として、キメラＴＣＲのＴＣＲ００８５を発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を同じ条件下で試験し、これらの細胞はＭＬＬ－ｐＰでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞の存在下でのみＥＧＦＰ発現の増加を示したが、ＭＬＬ－Ｍペプチド、ＭＬＬ－ｐＭペプチド、またはＭＬＬ－ｐＭペプチドのアラニン修飾バリアントのいずれかでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞ではそうならなかった（図６Ｂ）。
【0301】
６．２．５ Ｘ－ｓｃａｎを使用したＴＣＲ特異性の特性評価
ＴＣＲ００７７およびＴＣＲ００８１の標的特異性は、以下に記載されるように、ペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のバリアントのライブラリーを使用する「ｘスキャン」アッセイにより評価された。
ＴＣＲ００７７およびＴＣＲ００８１の標的特異性は、以下に記載されるように、ペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のバリアントのライブラリーを使用する「ｘスキャン」アッセイにより評価された。
【0302】
ペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のバリアントセットが調製され、配列番号４５のアンカー位置Ｐ２（Ｐ）およびＰ９（Ｍ）を除く各ペプチドの各アミノ酸位置は、１９の他の可能な天然に存在するアミノ酸うちのそれぞれと個別に置換され、位置Ｐ４（［ｐＳ］）は、非リン酸化セリンでさらに置換された。得られた１３４のバリアントペプチドを表８に列挙する。ＴＣＲ００７７とＴＣＲ００８１の特異性プロファイルは、１３４のバリアントペプチドまたは親ペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のうちの１つをロードしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞と共培養した後のＴＣＲを発現するＡＫ－Ｄ１０Ｒ３エフェクター細胞の活性化を測定することによって評価された。
【0303】
ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞を、キメラＴＣＲのＴＣＲ００７７またはＴＣＲ００８１、キメラマウス／ヒトＣＤ８、３つのＮＦＡＴ結合部位（３×ＮＦＡＴ）を含む最小のＩＬ－２プロモーターに連結されたＥＧＦＰ－レポーターコンストラクトで安定に形質導入した。細胞は、３％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ；Ａｍｉｍｅｄ Ｄｉｒｅｃｔ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、および５０μＭのβ－メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＫ）を補充したＳＦ－ＩＭＤＭ（Ａｍｉｍｅｄ Ｄｉｒｅｃｔ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）中で、３７℃、１０％ＣＯ２で培養した。ＡＴＣＣ（ＣＲＬ－１９９２（商標））からの抗原提示するタップ欠損Ｔ２（１７４×ＣＥＭ．Ｔ２）細胞は、１０％ＦＣＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ １６４０（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）中で、３７℃および５％ＣＯ２で維持された。
【0304】
ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｅｌｅｐｈａｎｔｓ，Ｇｅｒｍａｎｙから購入、または社内で製造）をＤＭＳＯに懸濁し、濃度を４ｍｇ／ｍｌに調整した。
【0305】
Ｔ２－Ｂ７細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で洗浄し、１×１０６個の細胞あたり１３４個の改変ペプチドのそれぞれの２０μｇとともに、３７℃、５％ＣＯ２で３時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｔ２－Ｂ７細胞をＰＢＳ／２％ＦＣＳで洗浄し、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地に再懸濁した。目的のＴＣＲを発現するエフェクター細胞をペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７細胞（９６ウェルプレートのウェルあたり合計１５０，０００個の細胞）と１：２比で、ＳＦ－ＩＭＤＭ培地中で、３７℃および１０％ＣＯ２で、１６時間共培養した。細胞を２％ＦＣＳ／ＰＢＳで２回洗浄し、１：５００希釈の抗マウスＴＣＲ－β鎖抗体（クローンＨ５７－５９７；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で、室温で３０分間染色した。細胞を２回洗浄した後、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してＦＡＣＳ分析を実施した。
【0306】
データ分析は、ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０ソフトウェアを使用して実施された。ＴＣＲ活性化は、ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３集団におけるＥＧＦＰ発現細胞のパーセンテージとして計算された（ＡＫ－Ｄ１０Ｒ３細胞はＴＣＲ発現に基づいて同定された）。バックグラウンドの活性化（アッセイのＴ２－Ｂ７細胞にペプチドがロードされていない場合）は、ペプチドがロードされた全ての試料（改変された天然配列）から差し引かれた。バックグラウンドを差し引いた値の平均および平均の標準誤差（ＳＥＭ）は、全ての複製（各ＴＣＲに対して少なくとも３回の複製）から計算され、値はペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）のものに対して正規化され、表示目的で正規化された値が最小０．０（ヒートマップのみ）および最大１．０（ヒートマップのみ）にトリミングされた。正規化された値は、図７Ａ（ＴＣＲ００７７）および７Ｂ（ＴＣＲ００８１）のヒートマップ形式、ならびに図８Ａ（ＴＣＲ００７７）および８Ｂ（ＴＣＲ００８１）の棒グラフ形式で示される。
【0307】
ヒートマップと棒グラフは、試験された各ＴＣＲの明確な特異性プロファイルを明らかにする。一般に、白の大きいパーセンテージ（正規化値が低い）は、上述のアッセイと関連してＭＬＬ－ｐＭ同族ペプチドの変異に対する耐性が低く、ＭＬＬ－ｐＭ同族ペプチドに対する特異性が高いことを示す。図７Ａおよび７Ｂに示すように、ＴＣＲ００７７とＴＣＲ００８１は両方ともＭＬＬ－ｐＭ同族ペプチドの各残基位置に対して様々な程度の特異性を示した。
【0308】
【表8】
【表8-2】
【0309】
６．３ 実施例３：初代ヒトＴ細胞における新規ＭＬＬＴＣＲの特性評価
この実施例では、上述のキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７およびＴＣＲ００８５は、それぞれＴＣＲ００７８およびＴＣＲ００８６と呼ばれる完全ヒトＴＣＲとして発現した。ＴＣＲ００７８は、可変領域のフレームワーク４の少数の変異を除き、可変領域配列をＴＣＲ００７７と共有し、ヒト定常領域を含む。具体的には、ＴＣＲ００７８は、それぞれ配列番号５８および５９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。ＴＣＲ００８６は可変領域配列をＴＣＲ００８５と共有し、ヒト定常領域を含む。ＴＣＲ００８６は、それぞれ配列番号７０および７１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。この実施例に記載されるような、ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６の例示的な発現コンストラクトは、ＴＣＲβ鎖、Ｐ２Ａ自己切断部位、およびＴＣＲα鎖を順番にコードする融合タンパク質をコードする。表１に列挙されているように、例示的な未成熟ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６融合タンパク質（α鎖とβ鎖の両方のためのシグナルペプチドを含む）は、それぞれ配列番号８３または９２に示されるアミノ酸配列を有する。発現後、融合タンパク質はＰ２Ａ部位で切断され、ＴＣＲ００７８（それぞれ配列番号２３６および２３７）またはＴＣＲ００８６の成熟αおよびβ鎖を生成する。配列番号２３６に示されるように、ＴＣＲ００７８の例示的な成熟α鎖は、融合タンパク質上のクローニングの傷に起因する、そのコア配列（配列番号５８）のＣ末端へのＧＳアミノ酸残基伸長を含む。配列番号２３７に示されるように、ＴＣＲ００７８の例示的な成熟β鎖は、融合タンパク質のＰ２Ａ切断から生じる、そのコア配列（配列番号５９）のＣ末端への短いペプチド伸長（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ、配列番号９３）を含む。さらなる例示的な未成熟ＴＣＲ００７８融合タンパク質（α鎖とβ鎖の両方のためのシグナルペプチドを含む）は、表１に示されるように、配列番号２６６～２７１に示されるアミノ酸配列を有する。
この実施例では、上述のキメラＴＣＲのＴＣＲ００７７およびＴＣＲ００８５は、それぞれＴＣＲ００７８およびＴＣＲ００８６と呼ばれる完全ヒトＴＣＲとして発現した。ＴＣＲ００７８は、可変領域のフレームワーク４の少数の変異を除き、可変領域配列をＴＣＲ００７７と共有し、ヒト定常領域を含む。具体的には、ＴＣＲ００７８は、それぞれ配列番号５８および５９に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。ＴＣＲ００８６は可変領域配列をＴＣＲ００８５と共有し、ヒト定常領域を含む。ＴＣＲ００８６は、それぞれ配列番号７０および７１に示されるアミノ酸配列を含むα鎖およびβ鎖を含む。この実施例に記載されるような、ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６の例示的な発現コンストラクトは、ＴＣＲβ鎖、Ｐ２Ａ自己切断部位、およびＴＣＲα鎖を順番にコードする融合タンパク質をコードする。表１に列挙されているように、例示的な未成熟ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６融合タンパク質（α鎖とβ鎖の両方のためのシグナルペプチドを含む）は、それぞれ配列番号８３または９２に示されるアミノ酸配列を有する。発現後、融合タンパク質はＰ２Ａ部位で切断され、ＴＣＲ００７８（それぞれ配列番号２３６および２３７）またはＴＣＲ００８６の成熟αおよびβ鎖を生成する。配列番号２３６に示されるように、ＴＣＲ００７８の例示的な成熟α鎖は、融合タンパク質上のクローニングの傷に起因する、そのコア配列（配列番号５８）のＣ末端へのＧＳアミノ酸残基伸長を含む。配列番号２３７に示されるように、ＴＣＲ００７８の例示的な成熟β鎖は、融合タンパク質のＰ２Ａ切断から生じる、そのコア配列（配列番号５９）のＣ末端への短いペプチド伸長（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ、配列番号９３）を含む。さらなる例示的な未成熟ＴＣＲ００７８融合タンパク質（α鎖とβ鎖の両方のためのシグナルペプチドを含む）は、表１に示されるように、配列番号２６６～２７１に示されるアミノ酸配列を有する。
【0310】
６．３．１ 形質導入されたＴ細胞の表面でのＴＣＲ００７８の発現
初代Ｔ細胞は、１×１０６細胞／ｍｌの濃度で、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）と、１：１のＴ細胞：ビーズ比で、３７℃４８時間の共インキュベーションにより刺激された。次いで、Ｔ細胞に、レンチゲン（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）によって作製された、ＴＣＲ００７８（配列番号８３）のβ鎖、Ｐ２Ａ切断部位、およびα鎖を順番にコードするレンチウイルスを形質導入した。形質導入のために、８μｇ／ｍｌポリブレン（ＥＭＤ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を含む新鮮なＴ細胞培地にＴ細胞／ビーズを１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞懸濁液をレンチウイルス（ＭＯＩ１０：１）と混合し、形質導入を促進するために、３２℃、１２００ｇで９０分間遠心分離した。細胞／ビーズ懸濁液を３７℃で４時間インキュベートし、その後１容量のＴ細胞培地を添加し、細胞／ビーズを３７℃で一晩さらにインキュベートした。翌日、細胞を洗浄し、Ｔ細胞培地に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した後、３７℃でさらにインキュベートした。形質導入後３日目に、ＤｙｎａＭａｇマグネット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して細胞培養からビーズを除去した。形質導入後５日目に、ＴＣＲ００７８発現をフローサイトメトリーにより評価した。具体的には、製造者の取扱説明書に従って、細胞を最初にＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して、死細胞から生細胞を区別した。次いで、細胞を洗浄し、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５；ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体、ならびに抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む抗体カクテルで、光から保護して室温で３０分間染色した。非形質導入Ｔ細胞を陰性対照として使用した。染色されたＴ細胞を洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーで分析した。
初代Ｔ細胞は、１×１０６細胞／ｍｌの濃度で、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）と、１：１のＴ細胞：ビーズ比で、３７℃４８時間の共インキュベーションにより刺激された。次いで、Ｔ細胞に、レンチゲン（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）によって作製された、ＴＣＲ００７８（配列番号８３）のβ鎖、Ｐ２Ａ切断部位、およびα鎖を順番にコードするレンチウイルスを形質導入した。形質導入のために、８μｇ／ｍｌポリブレン（ＥＭＤ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を含む新鮮なＴ細胞培地にＴ細胞／ビーズを１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞懸濁液をレンチウイルス（ＭＯＩ１０：１）と混合し、形質導入を促進するために、３２℃、１２００ｇで９０分間遠心分離した。細胞／ビーズ懸濁液を３７℃で４時間インキュベートし、その後１容量のＴ細胞培地を添加し、細胞／ビーズを３７℃で一晩さらにインキュベートした。翌日、細胞を洗浄し、Ｔ細胞培地に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した後、３７℃でさらにインキュベートした。形質導入後３日目に、ＤｙｎａＭａｇマグネット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して細胞培養からビーズを除去した。形質導入後５日目に、ＴＣＲ００７８発現をフローサイトメトリーにより評価した。具体的には、製造者の取扱説明書に従って、細胞を最初にＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して、死細胞から生細胞を区別した。次いで、細胞を洗浄し、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５；ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）をロードしたＰＥ結合ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体、ならびに抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣｐ／Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８－ＰＥ／Ｃｙ７抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む抗体カクテルで、光から保護して室温で３０分間染色した。非形質導入Ｔ細胞を陰性対照として使用した。染色されたＴ細胞を洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩサイトメーターを使用したフローサイトメトリーで分析した。
【0311】
ＴＣＲ００７８は、無傷の生きた一重項Ｔ細胞で効率的に発現した。図９Ａに示されるように、対照細胞については、検出された細胞の６２．８％が無傷であった（左パネル）。これらの無傷の細胞のうち、９９．２％が生細胞であった（中央のパネル）。これらの生細胞のうち、８１．３％が一重項であった（右パネル）。ＴＣＲ００７８で形質導入された細胞については同一のフローサイトメトリーゲートが使用され、同様のデータが得られた（データ示さず）。残りの実験で使用するために、無傷の生きた一重項細胞を選択した。対照Ｔ細胞については、ＣＤ３と五量体染色の両方で陽性であったのは１．１１％のみであった（図９Ｂ、左パネル）。ＴＣＲ００７８で形質導入された細胞では、５８．１％がＣＤ３と五量体の両方で陽性であった（図９Ｂ、右パネル）。ＴＣＲ００７８形質導入細胞における高レベルの五量体染色は、刺激されたＴ細胞におけるＴＣＲ００７８の陽性発現の指標であった。
【0312】
対照とＴＣＲ００７８を発現する刺激されたＴ細胞との両方は、主に２つの集団：ＣＤ８＋／ＣＤ４－細胞集団とＣＤ８－／ＣＤ４＋細胞集団のうちの１つに存在した。対照Ｔ細胞は、４４．６％ＣＤ８＋／ＣＤ４－および４９．１％ＣＤ８－／ＣＤ４＋であった（図９Ｃ、左パネル）。ＴＣＲ００７８形質導入細胞の全集団（図９Ｃ、中央パネル）および五量体染色により決定されたＴＣＲ００７８発現細胞（図９Ｃ、右パネル）について同様の結果が得られた。また、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋集団は、五量体染色のレベルを示すために提示されたフローサイトメトリーデータで識別できた（図９Ｄ、両方のパネル）。
【0313】
６．３．２ ＫＧ１ａターゲット細胞と共培養されたＭＬＬＴＣＲを発現するヒトＴ細胞の特性評価
初代ヒトＴ細胞をＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６をコードするｍＲＮＡと混合し、０日目にエレクトロポレーションした。２つのＴＣＲは、ＴＣＲβ鎖、Ｐ２Ａ切断部位、およびＴＣＲα鎖を順番にコードするベクターから発現した。１日目に、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）をロードしたＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した後、フローサイトメトリーによりターゲットＴＣＲ発現を評価した。次いで、Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）を使用して、Ｔ細胞を標識した。並行して、ＫＧ１ａ細胞（内因的にＭＬＬを発現し、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２（「ＫＧ１ａ－Ｂ７細胞」）またはＨＬＡ－Ａ＊０２０１（「ＫＧ１ａ－Ａ２細胞」を過剰発現する骨髄性白血病細胞株）は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：４２３８０１）で標識された。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識Ｔ細胞は、ＣＦＳＥ標識ＫＧ１ａ－Ｂ２細胞またはＫＧ１ａ－Ａ２細胞と４：１～０．２５：１の範囲のエフェクター：ターゲット比で共培養された。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともにインキュベートしたＴ細胞を陽性対照として使用した。２日目に、フローサイトメトリーを使用して、細胞をＣＤ２５発現、ＣＤ１０７ａ発現、Ｔ細胞増殖、およびターゲット細胞の特異的殺傷について評価した。モックｍＲＮＡ（対照ＴＣＲをコードするｍＲＮＡ）をエレクトロポレーションした初代ヒトＴ細胞を陰性対照として使用した。
初代ヒトＴ細胞をＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６をコードするｍＲＮＡと混合し、０日目にエレクトロポレーションした。２つのＴＣＲは、ＴＣＲβ鎖、Ｐ２Ａ切断部位、およびＴＣＲα鎖を順番にコードするベクターから発現した。１日目に、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）またはＭＬＬ－ｐＰペプチドＲＶＲ［ｐＳ］ＰＴＲＳＰ（配列番号４７）をロードしたＨＬＡ－Ｂ＊０７０２五量体で染色した後、フローサイトメトリーによりターゲットＴＣＲ発現を評価した。次いで、Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）を使用して、Ｔ細胞を標識した。並行して、ＫＧ１ａ細胞（内因的にＭＬＬを発現し、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２（「ＫＧ１ａ－Ｂ７細胞」）またはＨＬＡ－Ａ＊０２０１（「ＫＧ１ａ－Ａ２細胞」を過剰発現する骨髄性白血病細胞株）は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：４２３８０１）で標識された。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識Ｔ細胞は、ＣＦＳＥ標識ＫＧ１ａ－Ｂ２細胞またはＫＧ１ａ－Ａ２細胞と４：１～０．２５：１の範囲のエフェクター：ターゲット比で共培養された。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともにインキュベートしたＴ細胞を陽性対照として使用した。２日目に、フローサイトメトリーを使用して、細胞をＣＤ２５発現、ＣＤ１０７ａ発現、Ｔ細胞増殖、およびターゲット細胞の特異的殺傷について評価した。モックｍＲＮＡ（対照ＴＣＲをコードするｍＲＮＡ）をエレクトロポレーションした初代ヒトＴ細胞を陰性対照として使用した。
【0314】
２：１のエフェクター：ターゲット比での代表的な実験を図１０に示す。ＭＬＬ ＴＣＲ ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６を発現するＴ細胞は、ＣＤ２５発現、ＣＤ１０７ａ発現、およびＴ細胞増殖によって測定されるとき、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＫＧ１ａ細胞によってのみ活性化されたが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１を発現するＫＧ１ａ細胞によっては活性化されなかった。モックｍＲＮＡでエレクトロポレーションされたＴ細胞は同じ条件下では活性化されなかったため、Ｔ細胞の活性化はＭＬＬ ＴＣＲの発現に依存していた（図１０）。
【0315】
ＭＬＬ ＴＣＲ ＴＣＲ００７８またはＴＣＲ００８６を発現するＴ細胞は、低いエフェクター：ターゲット比でもＫＧ１－Ｂ７ターゲット細胞を特異的に殺傷することができたが、モックｍＲＮＡでエレクトロポレーションされたＴ細胞は、ターゲット細胞を殺傷しなかった（図１１）。
【0316】
６．３．３ ＩＬ－２－ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター発現Ｔ細胞株を使用したＴＣＲ００７８の特性評価
この研究では、ＩＬ－２－ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターＴ細胞株を使用して、さまざまな腫瘍細胞株と共培養した際にＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞の活性化の特異性を評価する。具体的には、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ応答エレメントと短いＣＭＶ最小プロモーターの制御下でルシフェラーゼレポーターを安定して発現するＪｕｒｋａｔ細胞株Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５（ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号：ＴＩＢ－１５３（商標））は、セクション６．３．１で記載したのと同じレンチウイルスで形質導入された。簡潔に述べると、対照（形質導入されていない）またはＴＣＲ００７８形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞は、さまざまなＪｕｒｋａｔ：腫瘍（エフェクター：ターゲット）細胞比（０．１：１～２：１の範囲）で、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫＧ１ａ、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫ５６２細胞（ＭＬＬを内因的に発現する骨髄性白血病細胞株）、Ｌｏｕｃｙ細胞（ＭＬＬおよびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を内因的に発現するリンパ芽球性白血病細胞株）、またはＮａｍａｌｗａ細胞（ＭＬＬおよびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を内因的に発現するバーキットリンパ腫細胞株）と３７℃で２４時間共培養した。次いで、製造者の取扱説明書に従って、細胞を洗浄し、溶解し、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と混合した。Ｊｕｒｋａｔ細胞活性化の程度を表す、発現したＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターからの発光が記録された。製造者の取扱説明書に従って、ＩＬ－２－ＮＦＡＴレポーターの活性化の陽性対照として、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテート（ＰＭＡ）、およびイオノマイシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して、対照およびＴＣＲ００７８で形質導入されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞で最大のＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ発現を誘導した。
この研究では、ＩＬ－２－ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターＴ細胞株を使用して、さまざまな腫瘍細胞株と共培養した際にＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞の活性化の特異性を評価する。具体的には、ＩＬ－２－ＮＦＡＴ応答エレメントと短いＣＭＶ最小プロモーターの制御下でルシフェラーゼレポーターを安定して発現するＪｕｒｋａｔ細胞株Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５（ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号：ＴＩＢ－１５３（商標））は、セクション６．３．１で記載したのと同じレンチウイルスで形質導入された。簡潔に述べると、対照（形質導入されていない）またはＴＣＲ００７８形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞は、さまざまなＪｕｒｋａｔ：腫瘍（エフェクター：ターゲット）細胞比（０．１：１～２：１の範囲）で、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫＧ１ａ、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫ５６２細胞（ＭＬＬを内因的に発現する骨髄性白血病細胞株）、Ｌｏｕｃｙ細胞（ＭＬＬおよびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を内因的に発現するリンパ芽球性白血病細胞株）、またはＮａｍａｌｗａ細胞（ＭＬＬおよびＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を内因的に発現するバーキットリンパ腫細胞株）と３７℃で２４時間共培養した。次いで、製造者の取扱説明書に従って、細胞を洗浄し、溶解し、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と混合した。Ｊｕｒｋａｔ細胞活性化の程度を表す、発現したＩＬ－２－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターからの発光が記録された。製造者の取扱説明書に従って、ＩＬ－２－ＮＦＡＴレポーターの活性化の陽性対照として、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテート（ＰＭＡ）、およびイオノマイシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して、対照およびＴＣＲ００７８で形質導入されたＪｕｒｋａｔエフェクター細胞で最大のＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ発現を誘導した。
【0317】
図１２Ａに示されるように、ＴＣＲ００７８を発現するＪｕｒｋａｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫＧ１ａ細胞またはＫ５６２細胞と様々な比率で共培養するときに大幅に活性化された。Ｎａｍａｌｗａ細胞は、試験した全てのエフェクター：ターゲット比でＴＣＲ００７８発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を活性化した。Ｌｏｕｃｙ細胞は、図１２Ｂに示す対照Ｊｕｒｋａｔ細胞活性化レベルと比較して、より高いエフェクター：ターゲット比でＴＣＲ００７８発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を活性化した。予想どおり、ＰＭＡ／ロノマイシンはＪｕｒｋａｔ細胞で最大のレポーター活性化を誘導した（図１２Ｃ）。
【0318】
前述のレポーター活性化アッセイは、他の腫瘍ターゲット細胞でも実施された。Ｈ９２９細胞およびＵ２６６Ｂ１細胞（どちらもＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を内因的に発現する）、ならびにＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現するＴＨＰ－１細胞（ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陰性）は全て、Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞を活性化した（図１３Ａおよび１３Ｃ）。Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－８６（商標）、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陰性細胞株）とＬＣＬ７２１．２２１細胞（ＭＨＣ－Ｉ陰性ヒト細胞株）の両方は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を過剰発現しているときに、ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞よりも強力に、Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞（図１３Ｂおよび１３Ｃ）を大幅に活性化した。対照的に、ＹＴ－Ｉｎｄｙ細胞（ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陰性）、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５細胞（ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２陰性）、Ｒａｊｉ細胞、ＴＨＰ－１細胞、およびＬＣＬ７２１．２２１細胞はＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を活性化しなかった（図１３Ａ－１３Ｃ）。
【0319】
６．３．４ Ｔ細胞活性化およびターゲット細胞殺傷に対するペプチド用量漸増の影響
次に、ＭＬＬ特異的ＴＣＲの感受性を評価する研究が実施された。簡潔に述べると、０日目に、初代ヒトＴ細胞を上述のようにモックｍＲＮＡ（対照ＴＣＲをコードするｍＲＮＡ）またはＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡでエレクトロポレーションした。１日目に、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）をＣｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）を使用して標識し、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）または非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）の用量漸増でパルスした。次いで、Ｔ２－Ｂ７ターゲット細胞を、１：１のエフェクター：ターゲット比でＣＦＳＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：４２３８０１）で標識されたエレクトロポレーションされたＴ細胞と共培養した。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともにインキュベートしたＴ細胞を陽性対照として使用した。２日目に、フローサイトメトリーを使用して、細胞をＣＤ２５発現、ＣＤ１０７ａ発現、およびターゲット細胞の特異的殺傷について評価した。
次に、ＭＬＬ特異的ＴＣＲの感受性を評価する研究が実施された。簡潔に述べると、０日目に、初代ヒトＴ細胞を上述のようにモックｍＲＮＡ（対照ＴＣＲをコードするｍＲＮＡ）またはＴＣＲ００７８ ｍＲＮＡでエレクトロポレーションした。１日目に、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）をＣｅｌｌｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）を使用して標識し、ＭＬＬ－ｐＭペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）または非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号４６）の用量漸増でパルスした。次いで、Ｔ２－Ｂ７ターゲット細胞を、１：１のエフェクター：ターゲット比でＣＦＳＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：４２３８０１）で標識されたエレクトロポレーションされたＴ細胞と共培養した。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともにインキュベートしたＴ細胞を陽性対照として使用した。２日目に、フローサイトメトリーを使用して、細胞をＣＤ２５発現、ＣＤ１０７ａ発現、およびターゲット細胞の特異的殺傷について評価した。
【0320】
図１４に示すように、ＭＬＬ ＴＣＲ ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞は、低用量のペプチドでも、ホスホペプチドＭＬＬ－ｐＭでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞によって活性化された。非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドはＴ細胞を活性化しないため、Ｔ細胞の活性化はホスホセリル部分の存在に依存していた（図１４、右上および右下のパネル）。モックｍＲＮＡでエレクトロポレーションされたＴ細胞は、ターゲット細胞によって活性化されなかった（図１４）。
【0321】
Ｔ細胞活性化の観察と一致して、ＭＬＬ ＴＣＲ ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞はＭＬＬ－ｐＭペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞を効果的に殺傷したが、非リン酸化ＭＬＬ－Ｍ対照ペプチドでパルスしたＴ２－Ｂ７ターゲット細胞を殺傷しなかった（図１５）。モックｍＲＮＡでエレクトロポレーションされたＴ細胞は、ターゲット細胞を殺傷しなかった（図１５）。
【0322】
ＭＬＬホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）に対するＴＣＲの感受性を評価する同様の研究が、ＴＣＲ００７８を安定に発現する初代Ｔ細胞を使用して実施された。簡潔に述べると、セクション６．３．１に記載されているように、ＴＣＲ００７８（配列番号８３）をコードするレンチウイルスで初代Ｔ細胞を形質導入した。１３日後、ＭＬＬホスホペプチドの存在下で、形質導入されたＴ細胞の活性化およびターゲット細胞に対する細胞傷害活性を試験した。ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するＴ２細胞（「Ｔ２－Ｂ７細胞」）をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号：４２３８０１）で標識し、ＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）ホスホペプチドまたはＥＰＲＳＰＳＨＳＭ（配列番号：４６）ペプチドのいずれかの用量漸増で２．５時間パルスした。次いで、パルスしたＴ２－Ｂ７細胞（ターゲット）を、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ、カタログ番号：Ｃ３４５５７）を使用してあらかじめ標識した、ＴＣＲ００７８（エフェクター）を発現する初代Ｔ細胞と、１：１のエフェクター：ターゲット比で、３７℃において２０時間共培養した。翌日に、細胞傷害活性（Ｔ２－Ｂ７細胞の殺傷により測定）およびエフェクター初代Ｔ細胞のＣＤ２５およびＩＦＮ－γ発現を、フローサイトメトリーにより評価した。Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ染色で検出された生Ｔ２－Ｂ７細胞の数を計数した。死滅したＴ２－Ｂ７細胞のパーセンテージ（エフェクター初代Ｔ細胞と共培養していない総Ｔ２－Ｂ７細胞数から共培養後の生Ｔ２－Ｂ７細胞数を引き、次いで共培養していない総Ｔ２－Ｂ７細胞数で割って計算された）は、エフェクター初代Ｔ細胞の細胞傷害活性を表す。ＣＤ２５の検出では、製造者の取扱説明書に従って、最初に細胞をＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して生細胞を識別し、次いで抗ＣＤ２５－ＰＥ／Ｃｙ７抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。ＩＦＮ－γ発現の検出のために、染色の前に細胞をブレフェルジンＡおよびモネンシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともに５時間インキュベートした。前述のように、細胞生存率染色ならびにＣＤ２５－ＰＥ／Ｃｙ７、ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５、およびＣＤ８／ＰＥに対する表面染色の後、製造者の取扱説明書に従って、細胞を固定および透過処理（Ｂｉｏｌｅｇｎｅｄ）してから、抗ＩＦＮ－γ－ＦＩＴＣ抗体（バイオレジェンド）によって染色した。測定された蛍光は、ＣＤ２５およびＩＦＮ－γの発現レベルを示した。
【0323】
図１６Ａ～１６Ｃに示されるように、細胞傷害活性、ＣＤ２５発現、およびＩＦＮ－γ発現の増加が、ホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）濃度の増加とともに用量依存的な様式でエフェクター初代Ｔ細胞で観察された。対照的に、非修飾ＭＬＬ－Ｍペプチドは、Ｔ細胞の細胞傷害活性、ＣＤ２５発現、またはＩＦＮ－γ発現を増加させなかった（図１６Ａ～１６Ｃ）。これらの結果は、ＴＣＲ００７８がホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）に特異的であることを示す。
【0324】
ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２およびホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）に対するＴＣＲ００７８特異性をさらに特性評価するため、ＴＣＲ００７８で形質導入された初代Ｔ細胞を、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２またはＨＬＡ－Ａ＊０２．０１のいずれかを発現するペプチドでパルスしたＴ２細胞と共培養した。次いで、細胞を染色し、ＣＤ２５およびＩＦＮ－γＴ細胞の発現を、上述と同一の方法を使用してフローサイトメトリーで分析した。
【0325】
図１７Ａおよび１７Ｂに示すように、ホスホペプチドＥＰＲ［ｐＳ］ＰＳＨＳＭ（配列番号４５）でパルスしたＴ２－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２と共培養すると、初代Ｔ細胞が活性化された。対照的に、ホスホペプチドまたは非修飾ペプチドのいずれかでパルスしたＴ２－ＨＬＡ－Ａ＊０２．０２と共培養したとき、初代Ｔ細胞は活性化されなかった。
【0326】
６．４ 実施例４：がん治療としてのＴＣＲ００７８の特性評価
６．４．１ ターゲット細胞として腫瘍細胞を使用したＴＣＲ００７８の特性評価
腫瘍細胞株に対するＴＣＲ００７８の有効性を評価するために、ＴＣＲ００７８で形質導入するかまたは形質導入されていない初代Ｔ細胞をＫＧ１ａ細胞（内因的にＭＬＬを発現し、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２またはＨＬＡ－Ａ＊０２．０２を過剰発現する）と、実施例３で説明されているように、さまざまなエフェクター：ターゲット比で２０時間共培養した。細胞を染色し（例えば、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）、抗ＣＤ２５抗体、および抗ＩＦＮ－γ抗体により）、細胞傷害活性およびエフェクター初代Ｔ細胞の活性化を、実施例３に記載のようにフローサイトメトリーで分析した。
６．４．１ ターゲット細胞として腫瘍細胞を使用したＴＣＲ００７８の特性評価
腫瘍細胞株に対するＴＣＲ００７８の有効性を評価するために、ＴＣＲ００７８で形質導入するかまたは形質導入されていない初代Ｔ細胞をＫＧ１ａ細胞（内因的にＭＬＬを発現し、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２またはＨＬＡ－Ａ＊０２．０２を過剰発現する）と、実施例３で説明されているように、さまざまなエフェクター：ターゲット比で２０時間共培養した。細胞を染色し（例えば、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）、抗ＣＤ２５抗体、および抗ＩＦＮ－γ抗体により）、細胞傷害活性およびエフェクター初代Ｔ細胞の活性化を、実施例３に記載のようにフローサイトメトリーで分析した。
【0327】
さまざまなエフェクター：ターゲット比での、ＨＬＡ－Ａ＊０２．０１を発現するＫＧ１ａ細胞ではなく、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定的に発現するＫＧ１ａ細胞によるＴＣＲ００７８発現初代Ｔ細胞の活性化は、ターゲットＫＧ１ａ細胞の殺傷の増加（図．１８Ａ）、ならびにエフェクター初代Ｔ細胞におけるＣＤ２５（図１８Ｂ）およびＩＦＮ－γ（図１８Ｃ）発現の増加によって確認された。対照的に、形質導入されていない初代Ｔ細胞（陰性対照）は、前述のＫＧ１ａ細胞株のいずれによっても活性化されなかった。
【0328】
内因性または組換えＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現する様々な腫瘍細胞（ＫＧ１ａ細胞、Ｋ５６２細胞、ＳＫ－ＭＥＬ－５細胞、Ｕ２６６Ｂ１細胞、およびＮａｍａｌｗａ細胞）と、さまざまなエフェクター：ターゲット比で共培養した初代Ｔ細胞（ＴＣＲ００７８形質導入を有するかまたは有さない）を使用して、同様のアッセイを実施した。初代Ｔ細胞の活性化は、実施例３に記載されているようなプロトコールおよびフローサイトメトリー法を使用して、ターゲット腫瘍細胞の殺傷により測定された。図１９に示すように、ＴＣＲ００７８を発現する初代Ｔ細胞は、さまざまなエフェクター：ターゲット比で、組換えＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を安定に発現するターゲットＫＧ１ａ（図１９Ａ）およびＫ５６２（図１９Ｂ）細胞、ならびにＳＫ－ＭＥＬ－５細胞（図１９Ｃ）およびＵ２６６Ｂ１細胞（図１９Ｄ）の殺傷を大幅に促進したが、ＴＣＲ００７８を発現しない対照Ｔ細胞ではそうならなかった。エフェクター初代Ｔ細胞の細胞傷害活性はそれほど強力ではなかったが、ターゲットＮａｍａｌｗａ細胞に対して統計的に有意であった（図１９Ｅ）。
【0329】
６．４．２ ＴＣＲ００７８のｉｎ ｖｉｖｏ抗がん活性
ＴＣＲ００７８発現初代Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を評価するために、ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持する免疫抑制ＮＯＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）でのＴ細胞養子移入実験を実施した。
ＴＣＲ００７８発現初代Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を評価するために、ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍を担持する免疫抑制ＮＯＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）でのＴ細胞養子移入実験を実施した。
【0330】
養子移入の前に、ＴＣＲ００７８で形質導入された初代Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験して、ＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍細胞に対する活性化と細胞傷害活性を確認した。前述のように、対照およびＴＣＲ００７８で形質導入されたＴ細胞は、さまざまなエフェクター：ターゲット比で腫瘍細胞と共培養された。実施例３に記載されるように、殺細胞効率およびＴ細胞活性化をフローサイトメトリーにより分析した。
【0331】
図２０Ａに示すように、ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２を発現するターゲットＫＧ１ａ細胞の様々なエフェクター：ターゲット比での殺傷を有意に促進したが、対照Ｔ細胞ではそうならなかった。ＴＣＲ００７８を発現する初代Ｔ細胞におけるＣＤ２５発現も、対照Ｔ細胞のＣＤ２５レベルと比較して大幅に増加した（図２０Ｂ）。したがって、ＴＣＲ００７８を発現する初代Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２細胞によって活性化され、それに対する細胞傷害活性を有していた。
【0332】
養子移入のために、０日目に、１００万個のＫＧ１ａ－ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２腫瘍細胞を２０匹のマウスのそれぞれに皮下注射した。１５日前にＴＣＲ００７８で形質導入した５×１０６個の初代Ｔ細胞を、１日目に１０匹のマウスに静脈内注射した。他の１０匹のマウスは、対照として注射しなかった。Ｔ細胞の注入とホーミングを確認するために、腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍の体積を計算した（測定された長さと幅を掛け、次いで０．５２を掛けることにより）後に、注射した１０匹のマウスのうち２匹を７日目に屠殺した。他の注射および対照マウスの腫瘍の体積は、７日目とその後４２日目まで３～５日ごとに同一の方法で計算された。その後、腫瘍移植後４２日目に全てのマウスを屠殺し、Ｔ細胞および腫瘍細胞を検出するために、脾臓を採取、処理、およびＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）試薬、抗ＣＤ３抗体、および抗ＣＤ４５抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。
【0333】
図２１Ａに示すように、ＴＣＲ００７８発現Ｔ細胞を注射したマウスは、注射していないマウスと比較して、平均して大幅に遅い腫瘍増殖を示した。４２日間生存している８匹全ての注射マウスのうち、２匹のみが大幅な腫瘍増殖を示し（図２１Ａの注射していないマウスの腫瘍体積に匹敵する図２１Ｂの白い円）、他の６匹は最小の腫瘍増殖を示し（図２１Ｂの黒丸）、大幅な腫瘍抑制を示している。フローサイトメトリーにより検出するとき、図２１Ｂで大幅な腫瘍増殖を示す１匹のマウスは、注射されたヒトＴ細胞として０．０２７％の脾臓細胞（ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋）および転移性腫瘍細胞として０．２５％の脾臓細胞（ＣＤ４５＋／ＣＤ３－）を有していた（図２１Ｃ、左パネル）。対照的に、図２１Ｂで腫瘍増殖が最小の１匹のマウスは、ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋Ｔ細胞としての脾臓細胞のパーセンテージが大きく（７２．５％）、転移性ＣＤ４５＋／ＣＤ３－腫瘍細胞としての脾臓細胞のパーセンテージが小さく（０．０３７％）（図２１Ｃ、右パネル）、ＴＣＲ００７８を発現するＴ細胞の注射が転移および腫瘍体積を阻害したことを示している。
＊ ＊ ＊
＊ ＊ ＊
【0334】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、説明されたものに加えて、本発明の様々な修正が、上述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。
【0335】
本明細書に引用された全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、あたかも個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が具体的かつ個別にあらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれていることが示されているのと同程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0336】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21A】
【図21B】
【図21C】
【配列表】