7390315 スプライシング調節薬抗体－薬物コンジュゲート及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-11-22

(45)【発行日】2023-12-01

(54)【発明の名称】スプライシング調節薬抗体－薬物コンジュゲート及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 405/14 20060101AFI20231124BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20231124BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231124BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231124BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20231124BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231124BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20231124BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20231124BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20231124BHJP

   C12Q 1/6886 20180101ALI20231124BHJP

   C12Q 1/6869 20180101ALI20231124BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20231124BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20231124BHJP

   C07K 16/32 20060101ALN20231124BHJP

【ＦＩ】

C07D405/14

A61K47/68 ZNA

A61P43/00 111

A61P35/00

A61P35/02

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K47/65

A61K47/10

A61K31/496

C12Q1/6886 Z

C12Q1/6869 Z

A61K45/00

C12N15/13

C07K16/32

【請求項の数】 25

(21)【出願番号】P 2020567044

(86)(22)【出願日】2019-05-31

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-11-25

(86)【国際出願番号】 US2019035015

(87)【国際公開番号】W WO2019232449

(87)【国際公開日】2019-12-05

【審査請求日】2022-05-27

(31)【優先権主張番号】62/679,631

(32)【優先日】2018-06-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/679,672

(32)【優先日】2018-06-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/779,324

(32)【優先日】2018-12-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506137147

【氏名又は名称】エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100126653

【弁理士】

【氏名又は名称】木元 克輔

(72)【発明者】

【氏名】パッゾーリ， エーミラ

(72)【発明者】

【氏名】ブオナミーチ， シルヴィア

(72)【発明者】

【氏名】サマラクーン， シワンカ

(72)【発明者】

【氏名】プラジャーパティ， スディープ

(72)【発明者】

【氏名】フィシュキン， ネイサン

(72)【発明者】

【氏名】パラチノ， ジェームズ

(72)【発明者】

【氏名】セイラー， マイケル

(72)【発明者】

【氏名】ズー， ピン

(72)【発明者】

【氏名】クック， アンドリュー

(72)【発明者】

【氏名】スミス， ピーター

(72)【発明者】

【氏名】リュウ， シャン

(72)【発明者】

【氏名】エラリー， シェルビー

(72)【発明者】

【氏名】レイノルズ， ドミニク

(72)【発明者】

【氏名】ユー， リーファ

(72)【発明者】

【氏名】ウー， ジェンホア

(72)【発明者】

【氏名】ポン， ショウヨン

(72)【発明者】

【氏名】カランドラ， ニコラス

(72)【発明者】

【氏名】シーハン， メーガン

(72)【発明者】

【氏名】シャオ， ヨンホン

【審査官】奥谷 暢子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２００３／０９９８１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２００４／０１１６６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／１５１９７９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１６－５２８１８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】眞鍋史乃，抗体ー薬物複合体開発の発展と現状，Drug Delivery System，2019年01月25日，34巻,１号，１０－２１

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ｃ１２Ｑ

Ｃ１２Ｎ

Ｃ０７Ｋ

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩＩ）：

【化1】

（式中、
Ｒ１は、存在なし、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルコキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアミノ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルカルボン酸基、Ｃ１～Ｃ６アルキルヒドロキシ基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ３～Ｃ８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、及び－ＣＤ３から選択され；
Ｒ２は、少なくとも１つの切断可能部分を含むリンカーＬであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルコキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアミノ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルカルボン酸基、Ｃ１～Ｃ６アルキルヒドロキシ基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ３～Ｃ８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基から選択され；
Ｒ４、Ｒ５、及びＲ８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、及びＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され；
Ｒ６及びＲ７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、及び－ＮＲ１５Ｒ１６から選択され；
Ｒ１５及びＲ１６は、各々独立に、水素、Ｒ１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ１７から選択され；
Ｒ１７は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｚ”は、

【化2】

から選択され；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１５、Ｒ１６、及びＲ１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルキルヒドロキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ６及びＲ７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｚ”が

【化3】

であり、Ｒ３、Ｒ６及びＲ７が水素であり、Ｒ４がメトキシであり、Ｒ５がヒドロキシル基である場合、Ｒ１は存在なしでもメチルでもない）
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

Ｒ１は、存在なし、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル基、Ｃ１～Ｃ４アルキルカルボン酸基、Ｃ１～Ｃ４アルキルヒドロキシ基、及びＣ３～Ｃ８シクロアルキル基から選択され；
Ｒ２は、少なくとも１つの切断可能部分を含むリンカーＬであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル基、Ｃ１～Ｃ４アルキルアルコキシ基、Ｃ１～Ｃ４アルキルカルボン酸基、及びＣ１～Ｃ４アルキルヒドロキシ基から選択され；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基、及びＣ１～Ｃ４アルキル基から選択され；
Ｒ５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基及びＣ１～Ｃ４アルキル基から選択され；
Ｒ６は、水素、－Ｏ－Ｒ１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１７、及びＣ１～Ｃ４アルキル基から選択され；
Ｒ７は、水素、－Ｏ－Ｒ１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、及び－ＮＲ１５Ｒ１６から選択され；
Ｒ８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基、及びＣ１～Ｃ４アルキル基から選択され；
Ｒ１５及びＲ１６は、各々独立に、水素、Ｒ１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ１７から選択され；
Ｒ１７は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｚ”は、

【化4】

から選択され；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１５、Ｒ１６、及びＲ１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルキルヒドロキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ６及びＲ７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｚ”が

【化5】

であり、Ｒ３、Ｒ６及びＲ７が水素であり、Ｒ４がメトキシであり、Ｒ５がヒドロキシル基である場合、Ｒ１は存在なしでもメチルでもない、
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項3】

Ｒ１は、存在なし、水素、メチル、及びＣ１～Ｃ４アルキルカルボン酸基から選択され；
Ｒ２は、少なくとも１つの切断可能部分を含むリンカーＬであり；
Ｒ３は、水素、及びＣ１～Ｃ４アルキルカルボン酸基から選択され；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基、及びＣ１～Ｃ４アルキル基から選択され；
Ｒ５は、水素、及びヒドロキシル基から選択され；
Ｒ６は、水素であり；
Ｒ７は、水素であり；
Ｒ８は、水素、及びヒドロキシル基から選択され；
Ｚ”は、

【化6】

であり；
Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルキルヒドロキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ３が水素であり、Ｒ４がメトキシであり、Ｒ５がヒドロキシル基である場合、Ｒ１は存在なしでもメチルでもない、
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項4】

式

【化7】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項5】

式

【化8】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項6】

前記リンカーＬ中の少なくとも１つの切断可能部分が、
（ｉ）少なくとも１つの切断可能なペプチド部分；ここで、前記切断可能なペプチド部分は、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、バリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）、グルタミン酸－バリン－シトルリン（Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、又はアラニン－アラニン－アスパラギン（Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ）を含んでもよく；又は
（ｉｉ）少なくとも１つの切断可能なグルクロニド部分；ここで、前記切断可能なグルクロニド部分は酵素によって切断可能であってもよく、前記切断可能なグルクロニド部分はグルクロニダーゼによって切断可能であってもよく、前記切断可能なグルクロニド部分はβ－グルクロニダーゼによって切断可能であってもよい、
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項7】

前記リンカーが、マレイミド（Ｍａｌ）部分を含み、ここで、前記マレイミド部分はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含んでもよく、前記リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ又はＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａを含んでもよい、
請求項６に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項8】

前記リンカーが少なくとも１つのスペーサー単位を含み、ここで、
（ｉ）前記スペーサー単位はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含んでもよく；ここで、前記ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含んでもよく、ｍは１～１０の整数であり、ｍは２であってもよい、又は
（ｉｉ）前記スペーサー単位はアルキル部分を含み；ここで、前記アルキル部分は－（ＣＨ_２）_ｎ－を含んでもよく、ｎは１～１０の整数であり、ｎは２、５又は６であってもよく、ここで、前記スペーサー単位はマレイミド（Ｍａｌ）部分に結び付けられていてもよい（Ｍａｌ－スペーサー単位）、
請求項６又は７に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項9】

前記リンカーＬ中の前記切断可能部分は、
（ｉ）アラニン（Ａｌａ）に結び付けられたバリン（Ｖａｌ）；ここで、Ａｌａは、直接又は別のスペーサー単位を通じて、式（ＩＩＩ）の化合物に共有結合的に結びついている、又は、
（ｉｉ）シトルリン（Ｃｉｔ）に結び付けられたバリン（Ｖａｌ）；ここで、Ｃｉｔは、直接又は別のスペーサー単位を通じて、式（ＩＩＩ）の化合物に共有結合的に結びついている、
を含む、
請求項６～８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項10】

前記リンカーＬの前記切断可能部分が、前記化合物のスプライシング調節薬部分に直接結び付けられている、又は、スペーサー単位が、前記リンカーＬの前記切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けており、ここで、前記リンカー中の前記切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位は、自己犠牲的であってよく、前記リンカー中の切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位はｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）又はｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）を含んでもよく、前記リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ又はＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含んでもよい、
請求項６～８のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項11】

前記リンカーＬが

【化9】

を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。

【請求項13】

新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を治療するための、ここで、前記新生物障害は
（ｉ）血液学的悪性腫瘍；ここで、前記血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択されてもよく、
又は
（ｉｉ）固形腫瘍；ここで、前記固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択されてもよい、
請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、スプライシング調節薬又はそのその薬学的に許容可能な塩であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結びつけるリンカーである、
Ｌ－Ｄは、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物を含み；
ｐは、１～１５の整数である）
の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項15】

前記リンカーＬが、少なくとも１つの切断可能なペプチド部分を含み、前記切断可能なペプチド部分は、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、バリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）、グルタミン酸－バリン－シトルリン（Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、又はアラニン－アラニン－アスパラギン（Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ）を含むアミノ酸単位を含んでもよく、前記切断可能なペプチド部分は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、又はＶａｌ－Ａｌａ）を含んでもよい、
請求項１４に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項16】

前記リンカーが、マレイミド（Ｍａｌ）部分を介して前記抗体又は抗原結合断片に結び付いており、ここで、前記マレイミド部分はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含んでもよく、前記リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ又はＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａを含んでもよい、
請求項１５に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項17】

前記リンカーが少なくとも１つのスペーサー単位を含み、ここで、
（ｉ）前記スペーサー単位はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含んでもよく；ここで、前記ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含んでもよく、ｍは１～１０の整数であり、ｍは２であってもよい、又は
（ｉｉ）前記スペーサー単位はアルキル部分を含んでもよく；ここで、前記アルキル部分は－（ＣＨ_２）_ｎ－を含んでもよく、ｎは１～１０の整数であり、ｎは２、５又は６であってもよい、
請求項１５又は１６に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項18】

前記リンカーが、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）又はｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）を含む少なくとも１つのスペーサー単位を含み、ここで、前記ｐＡＢＣ又はｐＡＢは、前記リンカー中の前記切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けてもよく、前記リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ又はＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含んでもよい、
請求項１５～１７のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項19】

Ｌ－Ｄが

【化10】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項20】

Ｌ－Ｄが

【化11】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項21】

ｐが１～１０であり、ｐは２～８であってもよく、ｐは４～８であってもよく、ｐは４であってもよく、ｐは８であってもよい、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項22】

前記抗体又は抗原結合断片が
（ｉ）血液学的悪性腫瘍；ここで、前記血液学的悪性腫瘍はＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択されてもよく、前記血液学的悪性腫瘍は急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択されてもよい；
又は
（ｉｉ）固形腫瘍；ここで、前記固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択されてもよい、
に由来する新生物細胞を標的化する、
請求項１４～２１のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項23】

前記抗体又は抗原結合断片が
（ｉ）ＨＥＲ２発現細胞；ここで、前記抗体又は抗原結合断片が抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片であってもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含んでいてもよく、
（ｉｉ）ＣＤ１３８発現細胞；ここで、前記抗体又は抗原結合断片が抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片であってもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含んでいてもよく、
又は
（ｉｉｉ）ＥＰＨＡ２発現細胞；ここで、前記抗体又は抗原結合断片が抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片であってもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含んでいてもよく、前記抗体又は抗原結合断片がヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含んでいてもよい、
を標的化する、請求項１４～２２のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。

【請求項24】

請求項１４～２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートの複数のコピーを含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体－薬物コンジュゲートの平均ｐが３．５～５．５である、７～９である、４である、又は８である、組成物。

【請求項25】

新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を治療するための、請求項１４～２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物又は請求項２４に記載の組成物であって、
ここで、前記新生物障害は
（ｉ）血液学的悪性腫瘍；ここで、前記血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択されてもよく、
又は
（ｉｉ）固形腫瘍；ここで、前記固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択されてもよい、
である、組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、２０１８年６月１日に出願された米国仮特許出願第６２／６７９，６７２号明細書；２０１８年６月１日に出願された米国仮特許出願第６２／６７９，６３１号明細書；及び２０１８年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／７７９，３２４号明細書に対する優先権の利益を主張する。前述の出願は、全て全体として参照により本明細書に援用される。

【0002】

本開示は、スプライシング調節薬と、ヒト腫瘍学抗原標的に結合する抗体又はその抗原結合断片とを含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。本開示は、標的抗原を発現し、且つ／又はＲＮＡスプライシングの破壊による治療に適している癌の治療又は診断において有用な方法及び組成物並びにそのような組成物を作製する方法に更に関する。

【背景技術】

【0003】

ヒトゲノムにおけるタンパク質コード遺伝子の大部分は、複数のエクソン（コード領域）がイントロン（非コード領域）により隔てられて構成されている。遺伝子発現の結果、単一の前駆体メッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）となる。続いてスプライシングと呼ばれる過程によってイントロン配列がプレｍＲＮＡから取り除かれると、成熟メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）となる。選択的スプライシングでは、様々な組み合わせのエクソンが包含されることにより、個別的なタンパク質アイソフォームをコードするｍＲＮＡが生じる。

【0004】

ＲＮＡスプライシングは、５つの核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ Ｕ１、Ｕ２、Ｕ４、Ｕ５、及びＵ６）と関連するタンパク質とで構成される動的多タンパク質－ＲＮＡ複合体であるスプライセオソームによって触媒される。スプライセオソームはプレｍＲＮＡ上に集合して、イントロンの切り出し及びエクソンのライゲーションを触媒する複数のＲＮＡ及びタンパク質相互作用の動的カスケードを構築する（Ｍａｔｅｒａ ａｎｄ Ｗａｎｇ（２０１４）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５（２）：１０８－２１）。多くの遺伝子に影響を与えるＲＮＡスプライシングの異常制御にヒト疾患を関係付けるエビデンスが増えつつある（Ｓｃｏｔｔｉ ａｎｄ Ｓｗａｎｓｏｎ（２０１６）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ．１７（１）：１９－３２）。

【0005】

スプライセオソームは、癌生物学の重要な標的である。現在、幾つかの研究において、癌細胞のスプライシングプロファイル並びにスプライシング因子それ自体の重大な変化が実証されている（Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ．４８：６７－７４）。選択的スプライシングは、エクソン包含／除去、イントロンリテンション、又は潜在的スプライス部位の使用率の違いにつながり得る（Ｓｅｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．２３（１）：２８２－２９６）。まとめると、これらのイベントは、腫瘍発生又は治療抵抗性に寄与し得る機能変化を説明する（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ ａｎｄ Ｋａｒｎｉ（２０１８）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ．４８：１６－２１）。

【0006】

ある種の天然産物は、ＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体と結合することができる。こうした小分子は、イントロンリテンション及び／又はエクソンスキッピングを増進させることによりスプライシングを調節する（Ｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．８：１５５２２）。得られる転写物のかなりの割合が、ナンセンス変異依存ｍＲＮＡ分解機構（ＮＭＤ）を惹起する未成熟終止コドンを含む。更に、カノニカルなスプライシングが損なわれるため、カノニカルな転写物が著しく減少し、これが細胞の機能及び生存能力に負の影響を与え得る。このため、スプライシング調節薬は癌の治療に有望な薬物クラスとなっている（Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２７：１８８０－８）。

【0007】

癌原遺伝子ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）は、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーに属する膜貫通型チロシンキナーゼ受容体をコードする（Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：９７４－６）。ＨＥＲ２の過剰発現は、ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ経路などの成長因子シグナル伝達経路の構成的活性化を可能にし、従って浸潤性乳癌の約２０％を含め、幾つかの癌種で発癌ドライバーとしての役割を果たす（Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－１２；Ｇａｊｒｉａ ａｎｄ Ｃｈａｎｄａｒｌａｐａｔｙ（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１１：２６３－７５）。ＨＥＲ２増幅が形質転換表現型を媒介することを所与とすれば、及びＨＥＲ２発現は大部分が悪性細胞に限られているため、ＨＥＲ２は、ある種の癌のターゲティング及び／又は新規癌治療の送達に有望な抗原である（Ｐａｒａｋｈ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｖ．５９：１－２１）。標的化した癌療法送達のための更なる抗原としては、限定はされないが、ＣＤ１３８（別名シンデカン－１）及びエフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）が挙げられる。

【0008】

ＣＤ１３８は、細胞形態の維持及び周囲微小環境との相互作用に必須の細胞表面ヘパラン硫酸プロテオグリカンである（Ａｋｌ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ６（３０）：２８６９３－７１５；Ｓｚａｔｍａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｄｉｓ Ｍａｒｋｅｒｓ ２０１５：７９６０５２）。概して、癌細胞においてＣＤ１３８発現が失われると、細胞外マトリックスへの細胞接着が減少し、細胞運動性及び侵入が亢進する（Ｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ．３１：３－１６）。間質ＣＤ１３８発現の増加もフィブロネクチン産生及び細胞外マトリックス組織を変化させる（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１７８：３２５－３５）。加えて、間質線維芽細胞におけるＣＤ１３８発現の増加は血管新生及び癌の進行に関連する（Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２５：１４０８－１２）。ＣＤ１３８発現はＢ細胞発生中に増加し、その存在は形質細胞の特徴である（Ｒｉｂａｔｔｉ（２０１７）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．１８８：６４－７）。ＣＤ１３８発現は、形質細胞の悪性腫瘍である多発性骨髄腫で維持される。従ってＣＤ１３８は、標的化した幾つかの癌及び他の血液学的悪性腫瘍の治療に魅力的な抗原である（Ｓｈｅｒｂｅｎｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２９（２）：８１－９１；Ｗｉｊｄｅｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．９４（２）：３１８－２３）。

【0009】

ＥＰＨＡ２は、幾つかの悪性癌由来細胞株及び進行型の癌で多量に過剰発現する膜貫通糖タンパク質である（Ｗｙｋｏｓｋｙ ａｎｄ Ｄｅｂｉｎｓｋｉ（２００８）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｆ．６（１２）：１７９５－１８０６）。例えば、ＥＰＨＡ２は、ＧＢＭ患者腫瘍の約６１％（Ｗｙｋｏｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４：１９９－２０８）、卵巣癌の７６％（Ｔｈａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５１４５－５０）、及び前立腺腺癌の８５％（Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１６３：２２７１－６）に強力に過剰発現する。ＥＰＨＡ２タンパク質は、患者腫瘍における割合及び腫瘍内の細胞における割合で見て高度に過剰発現するものであり、リガンド結合時にインターナライズすることのできる細胞膜局在性受容体である（Ｗａｌｋｅｒ－Ｄａｎｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１：７９－８７）。更に、ＥＰＨＡ２の発現は、予後不良、転移増加、及び生存低下に関連する。従って、その発現パターン、局在、及び癌患者の転帰における機能的重要性のために、ＥＰＨＡ２は、標的化した新規抗癌療法の送達に魅力的なもう１つの抗原である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

様々な実施形態において、本開示は、一部には、抗新生物細胞性の生物学的活性を有する新規化合物を提供する。本化合物は、哺乳類における腫瘍成長を減速させ、阻害し、且つ／又は逆転させるものであり得、ヒト癌患者の治療に有用であり得る。様々な実施形態において、本開示は、この新規化合物又は他の機能性スプライス阻害薬分子を用いる新規抗体－薬物コンジュゲートを提供する。

【0011】

本開示は、より具体的には、様々な実施形態において、新生物細胞に結合してそれを殺傷する能力を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物に関する。様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣ化合物は、スプライシング調節薬を完全長抗体又は抗原結合断片に結び付けるリンカーを含む。様々な実施形態において、ＡＤＣ化合物は、結合後に標的細胞にインターナライズする能力も有する。

【0012】

様々な実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞又は別の腫瘍学関連標的を標的化する抗体又はその抗原結合断片であり；
Ｄは、スプライシング調節薬であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0013】

様々な実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片であり；
Ｄは、式（ＩＩ）：

【化1】

のスプライシング調節薬又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、及び－ＮＲ^１５Ｒ^１６から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
Ｚは、

【化2】

から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され、
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0014】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は標的細胞にインターナライズする能力を有する。一部の実施形態において、リンカーは式（ＩＩ）のスプライシング調節薬に共有結合的に結び付き（「Ｌ－Ｄ」）、Ｌ－Ｄは、式（ＩＩ－Ａ）：

【化3】

（式中、Ｚ’は、

【化4】

から選択され；
全ての他の可変要素は、式（ＩＩ）について定義されるとおりである）
の構造又はその薬学的に許容可能な塩を有する。

【0015】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片であり；
Ｄは、式（ＩＶ）：

【化5】

のスプライシング調節薬又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、及び－ＮＲ^１５Ｒ^１６から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され、
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0016】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は標的細胞にインターナライズする能力を有する。一部の実施形態において、リンカーはスプライシング調節薬に共有結合的に結び付き（「Ｌ－Ｄ」）、Ｌ－Ｄは、式（ＩＶ－Ａ）：

【化6】

の構造又はその薬学的に許容可能な塩を有する。

【0017】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片であり；
Ｄは、式（ＶＩ）：

【化7】

のスプライシング調節薬又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ^１及びＲ^９は、各々独立に、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^１及びＲ^９が両方とも存在しないことはあり得ず；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0018】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は標的細胞にインターナライズする能力を有する。一部の実施形態において、リンカーはスプライシング調節薬に共有結合的に結び付き（「Ｌ－Ｄ」）、Ｌ－Ｄは、式（ＶＩ－Ａ）：

【化8】

の構造又はその薬学的に許容可能な塩を有する。

【0019】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片であり；
Ｄは、式（ＶＩＩＩ）：

【化9】

のスプライシング調節薬又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；及び
Ｒ^１０は、３～１０員炭素環及び３～１０員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～３個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、－Ｓ（＝Ｏ）_ｗ－（４～７員ヘテロ環）、４～７員炭素環、及び４～７員ヘテロ環から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリル基）、－Ｓ（＝Ｏ）_ｗ－（Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基（ここで、この各々は、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びＣ_１～Ｃ_３アルキル基から独立に選択される０、１、又は２個の基で置換される）から独立に選択される０～３個の基で置換され、；及び
ｗは、０、１、又は２であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0020】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は標的細胞にインターナライズする能力を有する。一部の実施形態において、リンカーはスプライシング調節薬に共有結合的に結び付き（「Ｌ－Ｄ」）、Ｌ－Ｄは、式（ＶＩＩＩ－Ａ）：

【化10】

の構造又はその薬学的に許容可能な塩を有する。

【0021】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＳＦ３ｂ複合体の調節薬を含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はプラジエノライド又はプラジエノライド誘導体を含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はプラジエノライドＤ又はプラジエノライドＤ誘導体を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体は、Ｄ２、Ｄ１、Ｄ４、Ｄ８、Ｄ１０、Ｄ１１（Ｅ７１０７）、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ１２、又はＤ２５を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体はＤ２を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体はＤ１を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体はＤ４を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体はＤ１２を含む。

【0022】

一部の実施形態において、プラジエノライドＤ又は誘導体は双性イオン性プラジエノライドＤ又は誘導体である。一部の実施形態において、双性イオン性プラジエノライドＤ又は誘導体はＤ２２又はＤ２５を含む。

【0023】

一部の他の実施形態において、スプライシング調節薬はプラジエノライドＢ又はプラジエノライドＢ誘導体を含む。一部の実施形態において、プラジエノライドＢ又は誘導体は、Ｄ９、Ｄ１８、Ｄ１９、又はＤ１３を含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はアリールプラジエノライドを含む。一部の実施形態において、アリールプラジエノライドは、Ｄ１５、Ｄ１４、Ｄ１６、Ｄ１７、Ｄ２６、又はＤ３３を含む。一部の実施形態において、アリールプラジエノライドはＤ１５を含む。一部の実施形態において、アリールプラジエノライドは双性イオン性アリールプラジエノライドである。一部の実施形態において、双性イオン性アリールプラジエノライドはＤ３３を含む。

【0024】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１：

【化11】

を含む。

【0025】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２：

【化12】

を含む。

【0026】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３：

【化13】

を含む。

【0027】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ４：

【化14】

を含む。

【0028】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ４’：

【化15】

を含む。

【0029】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ５：

【化16】

を含む。

【0030】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ６：

【化17】

を含む。

【0031】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ７：

【化18】

を含む。

【0032】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ８：

【化19】

を含む。

【0033】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ９：

【化20】

を含む。

【0034】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１０：

【化21】

を含む。

【0035】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１１：

【化22】

を含む。

【0036】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１２：

【化23】

を含む。

【0037】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１３：

【化24】

を含む。

【0038】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１４：

【化25】

を含む。

【0039】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１５：

【化26】

を含む。

【0040】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１６：

【化27】

を含む。

【0041】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１７：

【化28】

を含む。

【0042】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１８：

【化29】

を含む。

【0043】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１９：

【化30】

を含む。

【0044】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２０：

【化31】

を含む。

【0045】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２１：

【化32】

を含む。

【0046】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２２：

【化33】

を含む。

【0047】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２３：

【化34】

を含む。

【0048】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２４：

【化35】

を含む。

【0049】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２５：

【化36】

を含む。

【0050】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２６：

【化37】

を含む。

【0051】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２７：

【化38】

を含む。

【0052】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２８：

【化39】

を含む。

【0053】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２９：

【化40】

を含む。

【0054】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３０：

【化41】

を含む。

【0055】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３１：

【化42】

を含む。

【0056】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３２：

【化43】

を含む。

【0057】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３３：

【化44】

を含む。

【0058】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３４：

【化45】

を含む。

【0059】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３５：

【化46】

を含む。

【0060】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、表７に掲載される薬物部分の１つを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ４’、Ｄ５、Ｄ６、Ｄ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｄ１０、Ｄ１１、Ｄ１２、Ｄ１３、Ｄ１４、Ｄ１５、Ｄ１６、Ｄ１７、Ｄ１８、Ｄ１９、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ２３、Ｄ２４、Ｄ２５、Ｄ２６、Ｄ２７、Ｄ２８、Ｄ２９、Ｄ３０、Ｄ３１、Ｄ３２、Ｄ３３、Ｄ３４、及び／又はＤ３５を含む。

【0061】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬並びに治療薬としての単独での又はＡＤＣの一部としてのその使用が開示される。一部の実施形態において、本スプライシング調節薬は、Ｄ４、Ｄ４’、Ｄ１２、Ｄ１５、Ｄ８、Ｄ９、Ｄ１０、Ｄ１３、Ｄ１８、Ｄ１９、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ２５、又はＤ３３を含む。

【0062】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＤ４を含み、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＤ４を含み、リンカーはＭＣ－β－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＤ１２を含み、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＤ１２を含み、リンカーはＭＣ－β－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＤ１５を含み、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。

【0063】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用されるリンカーは細胞の外部で安定しており、そのためＡＤＣは細胞外条件に存在するときインタクトなままであるが、細胞、例えば腫瘍又は癌細胞にインターナライズされると切断を受けることができる。一部の実施形態では、スプライシング調節薬は、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片によって標的化される抗原を発現する細胞にＡＤＣが侵入したとき、抗体又は抗原結合断片から切断される。一部の実施形態において、リンカーは切断可能リンカーである。

【0064】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はリンカーはアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はバリン－シトルリン（「Ｖａｌ－Ｃｉｔ」又は「ＶＣ」）を含む。一部の他の実施形態において、アミノ酸単位はバリン－アラニン（「Ｖａｌ－Ａｌａ」又は「ＶＡ」）を含む。一部の他の実施形態において、アミノ酸単位はグルタミン酸－バリン－シトルリン（「Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ」又は「ＥＶＣ」）を含む。一部の他の実施形態において、アミノ酸単位はアラニン－アラニン－アスパラギン（「Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ」又は「ＡＡＮ」）を含む。

【0065】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なグルクロニド部分を含む。一部の実施形態において、切断可能なグルクロニド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、切断可能なグルクロニド部分はグルクロニダーゼによって切断可能である。一部の実施形態において、切断可能なグルクロニド部分はβ－グルクロニダーゼによって切断可能である。

【0066】

一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つのスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位又はリンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の他の実施形態において、スペーサー単位又はリンカーはアルキル部分を含む。一部の実施形態において、アルキル部分は－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、ｎは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｎは２である。一部の実施形態において、ｎは５である。一部の実施形態において、ｎは６である。

【0067】

一部の実施形態において、スペーサー単位はマレイミド（Ｍａｌ）部分を介して抗体又は抗原結合断片に結び付く（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基との反応性を有する。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。

【0068】

一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位と切断可能なペプチド部分とを含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位はＶａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位はＶａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はＰＥＧ部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をリンカーの切断可能部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分は切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、又はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はＰＥＧ部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。

【0069】

一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分はスプライシング調節薬に直接つなぎ合わされるか、又はスペーサー単位がリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、コンジュゲートの切断は、抗体又は抗原結合断片及びリンカーからスプライシング調節薬を放出させる。一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位は自己犠牲性である。

【0070】

一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位はｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）を含む。一部の実施形態において、ｐＡＢＣはリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分は切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、又はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の他の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。

【0071】

一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位はｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）を含む。一部の実施形態において、ｐＡＢはリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分は切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分又はアミノ酸単位は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、又はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の他の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。一部の他の実施形態において、リンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の他の実施形態において、リンカーはＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢを含む。

【0072】

様々な実施形態において、リンカーは非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＣのスプライシング調節薬は抗体又は抗原結合断片の分解によって放出される。一部の実施形態において、リンカーは、標的細胞によるインターナリゼーション及び標的細胞内での分解を受けても抗体及び薬物の少なくとも１つのアミノ酸と共有結合的に結び付いたままである。

【0073】

一部の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つのスペーサー単位を含む非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、スペーサー単位又はリンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の他の実施形態において、スペーサー単位又はリンカーはアルキル部分を含む。一部の実施形態において、アルキル部分は－（ＣＨ_２）_ｎ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｎを含み、ｎは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｎは２である。一部の実施形態において、ｎは５である。一部の実施形態において、ｎは６である。

【0074】

一部の実施形態において、非切断可能リンカーのスペーサー単位はマレイミド（Ｍａｌ）部分を介して抗体又は抗原結合断片に結び付く（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基との反応性を有する。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はＰＥＧ部分を含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）と少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭＣ－（ＰＥＧ）_２を含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭＣ－（ＰＥＧ）_２と少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｈｅｘを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｈｅｘと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｅｔを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｅｔと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含む。一部の実施形態において、リンカー又はＭａｌ－スペーサー単位はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をスプライシング調節薬に結び付ける。

【0075】

様々な実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞又は別の腫瘍学関連標的、例えば癌抗原などを標的化する抗体又はその抗原結合断片（例えば、本明細書に開示される抗体又は結合ドメイン配列のいずれか）であり；Ｄは、癌の治療に好適な任意の小分子（例えば、スプライシング調節薬、例えば、本明細書に開示されるスプライシング調節薬のいずれか）であり；Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカー（例えば、本明細書に開示されるリンカーのいずれか）であり；及びｐは、１～１５の整数である）
によって表され得る。

【0076】

一部の実施形態において、Ａｂは、本明細書に開示される抗体又は結合ドメイン配列のいずれかから選択される。一部の実施形態において、Ａｂは、ＨＥＲ２及び／又はＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＣＤ１３８及び／又はＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＥＰＨＡ２及び／又はＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＭＳＬＮ及び／又はＭＳＬＮを発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＦＯＬＨ１及び／又はＦＯＬＨ１を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＣＤＨ６及び／又はＣＤＨ６を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＣＥＡＣＡＭ５及び／又はＣＥＡＣＡＭ５を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＣＦＣ１Ｂ及び／又はＣＦＣ１Ｂを発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＥＮＰＰ３及び／又はＥＮＰＰ３を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＦＯＬＲ１及び／又はＦＯＬＲ１を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＨＡＶＣＲ１及び／又はＨＡＶＣＲ１を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＫＩＴ及び／又はＫＩＴを発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＭＥＴ及び／又はＭＥＴを発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＭＵＣ１６及び／又はＭＵＣ１６を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＳＬＣ３９Ａ６及び／又はＳＬＣ３９Ａ６を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＳＬＣ４４Ａ４及び／又はＳＬＣ４４Ａ４を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、ＳＴＥＡＰ１及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する新生物細胞を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。一部の実施形態において、Ａｂは、別の癌抗原を標的化する抗体又は結合ドメイン配列である。

【0077】

一部の実施形態において、Ｄはスプライシング調節薬である。一部の実施形態において、Ｄは、本明細書に開示されるスプライシング調節薬のいずれかから選択される。一部の実施形態において、Ｄは、Ｄ２、Ｄ１、Ｄ４、Ｄ８、Ｄ１０、Ｄ１１（Ｅ７１０７）、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ１２、Ｄ２５、Ｄ９、Ｄ１８、Ｄ１９、Ｄ１３、Ｄ１５、Ｄ１４、Ｄ１６、Ｄ１７、Ｄ２６、及びＤ３３、又はその任意の誘導体から選択されるスプライシング調節薬である。一部の実施形態において、Ｄは、Ｄ４、Ｄ１２、Ｄ１５、Ｄ８、Ｄ９、Ｄ１０、Ｄ１３、Ｄ１８、Ｄ１９、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ２５、及びＤ３３、又はその任意の誘導体から選択されるスプライシング調節薬である。一部の実施形態において、Ｄは、Ｄ２又はその任意の誘導体を含むスプライシング調節薬である。一部の実施形態において、Ｄは、Ｄ１又はその任意の誘導体を含むスプライシング調節薬である。

【0078】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１０、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ１５、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２２、又はＡＤＬ２３リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ１リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ２リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ５リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ６リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ７リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ１２リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ１４リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、ＬはＡＤＬ１５リンカーであり、任意選択で１つ以上の追加的なスペーサー単位を含み得る。本明細書に記載されるＡＤＣの様々な実施形態において、ｐは１～１０である。様々な実施形態において、ｐは２～８である。様々な実施形態において、ｐは４～８である。一部の実施形態において、ｐは４である。一部の実施形態において、ｐは８である。

【0079】

一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ６－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１８である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ１９である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１４－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１５－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ２０である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１０－Ｄ１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１５－Ｄ２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ２１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ６－Ｄ９である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ４である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ３である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ７である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ６である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ５である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ２２－Ｄ４である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ１０である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ１１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１３である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ８である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ２２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ２５である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ２２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ１５である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１４である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ２６である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ１６である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ１７である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ３３である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ２８である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ３１である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ２９である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ３５である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ３２である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ５－Ｄ２７である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ３５である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１２－Ｄ２８である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ２３である。一部の実施形態において、式（Ｉ）のＬ－ＤはＡＤＬ１－Ｄ２４である。

【0080】

一部の実施形態において、ＡＤＣのプールが提供され、それによってランダムなコンジュゲーションが起こり、プール中の平均ｐは約２～約８である。一部の実施形態において、ＡＤＣのプールが提供され、それによってランダムなコンジュゲーションが起こり、プール中の平均ｐは約４～約８である。一部の実施形態において、ＡＤＣのプールが提供され、それによってランダムなコンジュゲーションが起こり、プール中の平均ｐは約４である。一部の実施形態において、ＡＤＣのプールが提供され、それによってランダムなコンジュゲーションが起こり、プール中の平均ｐは約８である。記載されるＡＤＣのいずれかの複数のコピーを含む組成物（例えば、医薬組成物）であって、組成物中のＡＤＣの平均薬物負荷量（平均ｐ）が約３．５～約５．５（例えば約４）、又は約７～約９（例えば約８）である組成物が本明細書に提供される。

【0081】

一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）は、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍に由来する新生物細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、血液学的悪性腫瘍に由来する新生物細胞を標的化する。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病（例えば、急性骨髄性白血病）、リンパ腫、及び骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、固形腫瘍に由来する新生物細胞を標的化する。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌（例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌）、胃癌（例えば、胃腺癌）、前立腺癌、卵巣癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0082】

様々な実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）は抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２に結合し、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する（即ち、このＡＤＣは、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する）。一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗ＨＥＲ２抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片である。

【0083】

一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトフレームワーク配列を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ又はラムダ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合は、配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号２０の軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープへの結合に関して競合し、及び／又はそれに結合する。

【0084】

様々な実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）は抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８に結合し、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する（即ち、このＡＤＣは、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する）。一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗ＣＤ１３８抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片である。

【0085】

一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はヒトフレームワーク配列を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ又はラムダ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合は、配列番号２１の重鎖可変ドメイと配列番号２２の軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープへの結合に関して競合し、及び／又はそれに結合する。

【0086】

様々な実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）は抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２に結合し、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する（即ち、このＡＤＣは、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する）。一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗ＥＰＨＡ２抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片である。

【0087】

一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片はヒトフレームワーク配列を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ又はラムダ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合は、配列番号２３の重鎖可変ドメイと配列番号２４の軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープへの結合に関して競合し、及び／又はそれに結合する。

【0088】

また本明細書には、様々な実施形態において、一般式：Ｌ－Ｄ（式中、Ｌ＝リンカー部分、及びＤ＝薬物部分（例えば、スプライシング調節薬薬物部分）である）によって定義されるリンカー－薬物を含む化合物も提供される。様々な実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、抗体又は抗原結合断片に結び付き得、且つ／又は本明細書に開示されるＡＤＣ、例えば式（Ｉ）のＡＤＣにおける使用に好適である。

【0089】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＩＩＩ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＩＩＩ）：

【化47】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
Ｚ”は、

【化48】

から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在しない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0090】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（Ｖ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（Ｖ）：

【化49】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在しない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0091】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＶＩＩ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＶＩＩ）：

【化50】

（式中、
Ｒ^１及びＲ^９は、各々独立に、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在せず；
Ｒ^１及びＲ^９が両方とも存在しないことはあり得ない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0092】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＩＸ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＩＸ）：

【化51】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、リンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^１０は、３～１０員炭素環及び３～１０員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～３個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、－Ｓ（＝Ｏ）_ｗ－（４～７員ヘテロ環）、４～７員炭素環、及び４～７員ヘテロ環から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基（ここで、この各々は、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びＣ_１～Ｃ_３アルキル基から独立に選択される０、１、又は２個の基で置換される）から独立に選択される０～３個の基で置換され；及び
ｗは、０、１、又は２である）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0093】

また、様々な実施形態において、本明細書には、例えば、新生物障害、例えば癌の治療における、記載されるＡＤＣ化合物及び組成物についての治療的使用も提供される。特定の態様において、本開示は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、又はＳＴＥＡＰ１など、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片によって標的化される抗原を発現する新生物障害、例えば癌を治療する方法を提供する。

【0094】

特定の態様において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、記載されるＡＤＣ又は組成物のいずれか１つの治療有効量及び／又は治療有効レジメンを対象に投与することにより治療する方法を提供する。一部の実施形態において、新生物障害は血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍である。一部の実施形態において、新生物障害は血液学的悪性腫瘍である。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、新生物障害は固形腫瘍である。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌（例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌）、胃癌（例えば、胃腺癌）、前立腺癌、卵巣癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0095】

一部の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、標的抗原を発現しないが、標的抗原を発現する新生物細胞に隣接する新生物細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。一部の実施形態において、対象は、標的抗原を発現する１つ以上の新生物細胞を有する。

【0096】

一部の実施形態において、標的抗原はＨＥＲ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＥＲ２を発現する乳癌、卵巣癌、胃癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、骨肉腫、又は唾液管癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＨＥＲ２抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0097】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＤ１３８である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤ１３８を発現する多発性骨髄腫に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＣＤ１３８抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0098】

一部の実施形態において、標的抗原はＥＰＨＡ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＰＨＡ２を発現する乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、黒色腫、結腸癌、又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＥＰＨＡ２抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0099】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＳＬＮである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＳＬＮを発現する卵巣癌、子宮頸癌、膵癌、又は肺癌（例えば、肺腺癌）に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＭＳＬＮ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0100】

一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＨ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＨ１を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＦＯＬＨ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0101】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＤＨ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤＨ６を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＣＤＨ６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0102】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＥＡＣＡＭ５である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する結腸直腸癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0103】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＦＣ１Ｂである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＦＣ１Ｂを発現する膵癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＣＦＣ１Ｂ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0104】

一部の実施形態において、標的抗原はＥＮＰＰ３である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＮＰＰ３を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＥＮＰＰ３抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0105】

一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＲ１を発現する卵巣癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＦＯＬＲ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0106】

一部の実施形態において、標的抗原はＨＡＶＣＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＡＶＣＲ１を発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＨＡＶＣＲ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0107】

一部の実施形態において、標的抗原はＫＩＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＫＩＴを発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＫＩＴ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0108】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＥＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＥＴを発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＭＥＴ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0109】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＵＣ１６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＵＣ１６を発現する卵巣癌、子宮頸癌、又は乳癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＭＵＣ１６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0110】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ３９Ａ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ３９Ａ６を発現する乳癌又は前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0111】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ４４Ａ４である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ４４Ａ４を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0112】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＴＥＡＰ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＴＥＡＰ１を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、対象は、（ａ）単独投与時の抗ＳＴＥＡＰ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不応性又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のスプライシング調節薬による治療に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0113】

特定の他の態様において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象における腫瘍の成長を、記載されるＡＤＣ又は組成物のいずれか１つの治療有効量及び／又は治療有効レジメンを対象に投与することにより低減又は阻害する方法を提供する。

【0114】

一部の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、標的抗原を発現しないが、標的抗原を発現する新生物腫瘍細胞に隣接する新生物腫瘍細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。一部の実施形態において、腫瘍は、標的抗原を発現する１つ以上の新生物細胞を含む。

【0115】

一部の実施形態において、標的抗原はＨＥＲ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＥＲ２を発現する乳癌、卵巣癌、胃癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、骨肉腫、又は唾液管癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＨＥＲ２抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0116】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＤ１３８である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤ１３８を発現する多発性骨髄腫に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＣＤ１３８抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0117】

一部の実施形態において、標的抗原はＥＰＨＡ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＰＨＡ２を発現する乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、黒色腫、結腸癌、又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＥＰＨＡ２抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0118】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＳＬＮである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＳＬＮを発現する卵巣癌、子宮頸癌、膵癌、又は肺癌（例えば、肺腺癌）に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＭＳＬＮ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0119】

一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＨ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＨ１を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＦＯＬＨ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0120】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＤＨ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤＨ６を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＣＤＨ６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0121】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＥＡＣＡＭ５である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する結腸直腸癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0122】

一部の実施形態において、標的抗原はＣＦＣ１Ｂである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＦＣ１Ｂを発現する膵癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＣＦＣ１Ｂ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0123】

一部の実施形態において、標的抗原はＥＮＰＰ３である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＮＰＰ３を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＥＮＰＰ３抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0124】

一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＲ１を発現する卵巣癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＦＯＬＲ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0125】

一部の実施形態において、標的抗原はＨＡＶＣＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＡＶＣＲ１を発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＨＡＶＣＲ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0126】

一部の実施形態において、標的抗原はＫＩＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＫＩＴを発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＫＩＴ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0127】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＥＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＥＴを発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＭＥＴ抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0128】

一部の実施形態において、標的抗原はＭＵＣ１６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＵＣ１６を発現する卵巣癌、子宮頸癌、又は乳癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＭＵＣ１６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0129】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ３９Ａ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ３９Ａ６を発現する乳癌又は前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0130】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ４４Ａ４である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ４４Ａ４を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0131】

一部の実施形態において、標的抗原はＳＴＥＡＰ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＴＥＡＰ１を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、腫瘍は、（ａ）単独投与時の抗ＳＴＥＡＰ１抗体及び／又は（ｂ）単独投与時のスプライシング調節薬による治療に抵抗性又は難治性である。

【0132】

更に他の態様において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象に、記載されるＡＤＣ又は組成物のいずれか１つによる治療が奏効するかどうかを、対象からの生体試料を提供することと、生体試料をＡＤＣ又は組成物に接触させることとによって決定する方法を提供する。一部の実施形態において、生体試料は腫瘍試料である。一部の実施形態において、腫瘍試料は腫瘍生検又は血液試料である。一部の実施形態において、血液試料は、血液、血液分画物、又は血液若しくは血液分画物から得られる細胞から選択される。一部の実施形態において、対象は、標的抗原を発現する１つ以上の新生物細胞を有する。一部の実施形態において、標的抗原はＨＥＲ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＥＲ２を発現する乳癌、卵巣癌、胃癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、骨肉腫、又は唾液管癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＣＤ１３８である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤ１３８を発現する多発性骨髄腫に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＥＰＨＡ２である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＰＨＡ２を発現する乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、黒色腫、結腸癌、又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＭＳＬＮである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＳＬＮを発現する卵巣癌、子宮頸癌、膵癌、又は肺癌（例えば、肺腺癌）に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＨ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＨ１を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＣＤＨ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＤＨ６を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＣＥＡＣＡＭ５である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する結腸直腸癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＣＦＣ１Ｂである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＣＦＣ１Ｂを発現する膵癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＥＮＰＰ３である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＥＮＰＰ３を発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＦＯＬＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＦＯＬＲ１を発現する卵巣癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＨＡＶＣＲ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＨＡＶＣＲ１を発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＫＩＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＫＩＴを発現する腎癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＭＥＴである。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＥＴを発現する腎癌又は食道癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＭＵＣ１６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＭＵＣ１６を発現する卵巣癌、子宮頸癌、又は乳癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ３９Ａ６である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ３９Ａ６を発現する乳癌又は前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＳＬＣ４４Ａ４である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＬＣ４４Ａ４を発現する前立腺癌に由来する。一部の実施形態において、標的抗原はＳＴＥＡＰ１である。一部の実施形態において、１つ以上の新生物細胞は、ＳＴＥＡＰ１を発現する前立腺癌に由来する。

【0133】

更に、本明細書には、様々な実施形態において、ＡＤＣと、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。記載されるＡＤＣ化合物及び組成物の作製方法も開示される。

【図面の簡単な説明】

【0134】

【図1】競合的結合アッセイにおける例示的ペイロード化合物の用量反応を示す。野生型ｆｌａｇタグ付加ＳＦ３Ｂ１を過剰発現する２９３Ｆ細胞からの核抽出物を抗ＳＦ３Ｂ１抗体及びシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズカクテルで免疫沈降させた。結合反応物には抗体－ビーズ混合物及び漸増濃度の化合物が含まれ、続いて^３Ｈ標識プラジエノライドＢ（ＰＢ）プローブと競合させた。ｙ軸は、ＤＭＳＯ対照（０％）と比べた特異的結合のパーセント変化率（％反応）を表す。データは平均値±標準偏差（ＳＤ）として表される。

【図2】インビトロスプライシングアッセイにおける例示的ペイロード化合物によるスプライシングの調節を示す。ＨｅＬａ Ｓ３細胞からの核抽出物をＡｄ２．２プレｍＲＮＡ及び漸増濃度の化合物とインキュベートし、続いてスプライシング調節をＲＴ－ＰＣＲによって定量化した。Ａｄ２．２配列は、枝分かれ部位配列の周りに修飾を有するアデノウイルスＡｄ２プレｍＲＮＡ基質に由来する。ｙ軸は、ＤＭＳＯ対照（０％）と比べたスプライシングのパーセント変化率（％反応）を表す。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図3】ＨＥＲ２増幅乳癌細胞（ＨＣＣ１９５４）における例示的ペイロード化合物の生存能力用量反応を示す。細胞を化合物と１４４時間（６日間）インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で生存能力を読み取った。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図4】細胞結合アッセイの結果を示す。例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣによるＪＩＭＴ１細胞への結合をフローサイトメトリーによって判定した。平均蛍光強度値を測定してコンジュゲート、続いてＰＥ標識二次の結合を決定した。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図5A】図５Ａは、ＨＥＲ２増幅乳癌細胞（ＨＣＣ１９５４）における例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣの生存能力用量反応を示す。

【図5B】図５Ｂは、ＨＥＲ２増幅胃癌細胞（Ｎ８７）における例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣの生存能力用量反応を示す。

【図5C】細胞をコンジュゲートと１４４時間（６日間）インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で生存能力を読み取った。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図6】非ＨＥＲ２発現乳癌細胞（ＭＣＦ７）における例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣの生存能力用量反応を示す。細胞をコンジュゲートと１４４時間（６日間）インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で生存能力を読み取った。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図7】ＨＥＲ２増幅乳癌細胞（ＨＣＣ１９５４）におけるＳＬＣ２５Ａ１９スプライシングアッセイの結果を示す。細胞をコンジュゲートと２４時間インキュベートし、特異的Ｔａｑｍａｎプライマー－プローブセットを用いたリアルタイムｑＰＣＲ反応でＳＬＣ２５Ａ１９転写物のスプライシングを測定した。ｙ軸は、ＤＭＳＯ対照（０％）と比べたパーセント（％）反応を表す。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図8】バイスタンダー殺傷アッセイの結果を示す。単独でプレーティングしたか、又は共培養で１４４時間（６日間）一緒にインキュベートしたかのいずれかの、ＨＥＲ２を過剰発現するＨ１５６８細胞（標的陽性）又はルシフェラーゼをタグ付加したＨ１５６８細胞（標的陰性）を例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣで処理した。プレートをＯｎｅＧｌｏ（登録商標）試薬で読み取った。ｙ軸は、ＰＢＳ対照（１００％）と比べたパーセント（％）反応を表す。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図9】例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ又は対応する用量対応ペイロードの単回静脈内投与で治療したＨＣＣ１９５４移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの各群についての腫瘍成長動態を示す（各群６～１０匹の動物）。腫瘍容積は治療後週２回測定した。データは平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表される。

【図10】ＣＤ１３８を発現する多発性骨髄腫細胞株における例示的ＣＤ１３８－ＡＤＣの生存能力用量反応を示す。ＭＯＬＰ８細胞をコンジュゲートと共に１４４時間（６日間）インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で生存能力を読み取った。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図11】ＥＰＨＡ２を発現する前立腺癌細胞株における例示的ＥＰＨ２Ａ－ＡＤＣの生存能力用量反応を示す。ＰＣ３細胞をコンジュゲートと共に１４４時間（６日間）インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で生存能力を読み取った。データは平均値±ＳＤとして表される。

【図12A】例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１についてのインビトロ安定性アッセイの結果を示す。ｙ軸は全抗体（図１２Ａ）及びコンジュゲートした（インタクトな）ペイロード（図１２Ｂ）の濃度を表す；ｘ軸は、３７℃における時間単位で測定したときの時間を表す。

【図12B】例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１についてのインビトロ安定性アッセイの結果を示す。ｙ軸は全抗体（図１２Ａ）及びコンジュゲートした（インタクトな）ペイロード（図１２Ｂ）の濃度を表す；ｘ軸は、３７℃における時間単位で測定したときの時間を表す。

【図13】ＣＤ１７－ＳＣＩＤ Ｎ８７腫瘍担持マウスにおける単回静脈内投与後の、例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の血漿濃度を示す。

【図14】例示的ＲＮＡシーケンシング及びタンパク質リガンドーム実験の概略図を示す。

【図15】例示的Ｔ細胞プライミング実験の概略図を示す。

【図16】ＦＡＣＳ分析の結果を示す。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単球を分離し、サイトカインカクテル中で培養することにより樹状細胞（ＤＣ）への分化を誘導した。ＦＡＣＳを実施して、単球からのＤＣの成熟を確認した。

【図17A】ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す。図１７Ａは、ネオ抗原１によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｂは、ネオ抗原１ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ａ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（スポット数）を示す。図１７Ｃは、ネオ抗原３によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｄは、ネオ抗原３ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ｃ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（変化倍数）を示す。

【図17B】ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す。図１７Ａは、ネオ抗原１によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｂは、ネオ抗原１ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ａ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（スポット数）を示す。図１７Ｃは、ネオ抗原３によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｄは、ネオ抗原３ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ｃ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（変化倍数）を示す。

【図17C】ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す。図１７Ａは、ネオ抗原１によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｂは、ネオ抗原１ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ａ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（スポット数）を示す。図１７Ｃは、ネオ抗原３によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｄは、ネオ抗原３ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ｃ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（変化倍数）を示す。

【図17D】ＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す。図１７Ａは、ネオ抗原１によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｂは、ネオ抗原１ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ａ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（スポット数）を示す。図１７Ｃは、ネオ抗原３によるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化のプライミングを指示するＥＬＩＳｐｏｔプレートを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激はＩＦＮγの分泌によってモニタした。図１７Ｄは、ネオ抗原３ ＥＬＩＳｐｏｔプレート（図１７Ｃ）におけるＩＦＮγスポットの定量化（変化倍数）を示す。

【図18】ＨＣＣ１９５４乳癌細胞における例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣについてスプライシング効力（ＩＣ５０ ｑＰＣＲ）を細胞効力（ＧＩ５０ ＣＴＧ）と比較するプロットを示す。値の表示は細胞致死率に応じて大きさを変え、選択的スプライシング反応の深さに応じて網掛けを付す。

【図19】Ｎ８７胃癌細胞における例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣについてスプライシング効力（ＩＣ５０ ｑＰＣＲ）を細胞効力（ＧＩ５０ ＣＴＧ）と比較するプロットを示す。値の表示は細胞致死率に応じて大きさを変え、選択的スプライシング反応の深さに応じて網掛けを付す。

【図20】例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの（ＨＣＣ１９５４乳癌細胞における）効力及び致死率を対応するペイロードの安定性及び透過性と比較するプロットを示す。値の表示はペイロード安定性に応じて大きさを変え、ペイロード透過性に応じて網掛けを付す。

【図21】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの各群（各群Ｎ＝８）についての腫瘍成長動態を示す。データは平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）（ｍｍ^３）として表される。

【図22】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの各群（各群Ｎ＝８）についての体重変化を示す。データは平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表される（％）。

【図23】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの各群（各群Ｎ＝８）についての腫瘍成長動態（左）及び体重変化（右）を示す。データは平均値±ＳＥＭ（腫瘍容積、ｍｍ^３）又は平均値±ＳＥＭ（体重、％）として表される。

【図24A】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおけるｍＲＮＡジャンクションの薬力学（ＰＤ）調節を示す。ＦＢＸＷ５（成熟ｍＲＮＡ転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ａ及び図２４Ｃに示す。ＴＡＯＫ１（ネオジャンクション転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ｂ及び図２４Ｄに示す。動物（各群Ｎ＝４）は、４８時間（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は指示される時間（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）のいずれかの時点で回収した。ＲＮＡ抽出及びＲＴ－ｑＰＣＲのため腫瘍を摘出した。

【図24B】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおけるｍＲＮＡジャンクションの薬力学（ＰＤ）調節を示す。ＦＢＸＷ５（成熟ｍＲＮＡ転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ａ及び図２４Ｃに示す。ＴＡＯＫ１（ネオジャンクション転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ｂ及び図２４Ｄに示す。動物（各群Ｎ＝４）は、４８時間（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は指示される時間（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）のいずれかの時点で回収した。ＲＮＡ抽出及びＲＴ－ｑＰＣＲのため腫瘍を摘出した。

【図24C】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおけるｍＲＮＡジャンクションの薬力学（ＰＤ）調節を示す。ＦＢＸＷ５（成熟ｍＲＮＡ転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ａ及び図２４Ｃに示す。ＴＡＯＫ１（ネオジャンクション転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ｂ及び図２４Ｄに示す。動物（各群Ｎ＝４）は、４８時間（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は指示される時間（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）のいずれかの時点で回収した。ＲＮＡ抽出及びＲＴ－ｑＰＣＲのため腫瘍を摘出した。

【図24D】媒体又は１０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、ＴＤＭ１、又は例示的ＨＥＲ２－ＡＤＣ Ｑ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内治療したＮ８７移植ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおけるｍＲＮＡジャンクションの薬力学（ＰＤ）調節を示す。ＦＢＸＷ５（成熟ｍＲＮＡ転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ａ及び図２４Ｃに示す。ＴＡＯＫ１（ネオジャンクション転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。これは図２４Ｂ及び図２４Ｄに示す。動物（各群Ｎ＝４）は、４８時間（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は指示される時間（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）のいずれかの時点で回収した。ＲＮＡ抽出及びＲＴ－ｑＰＣＲのため腫瘍を摘出した。

【図25】例示的標的適応疾患分析の概略図を示す。

【図26】スプライシング調節薬を使用したＡＤＣの調製についての例示的バイオコンジュゲーションスキームを示す。

【発明を実施するための形態】

【0135】

開示される組成物及び方法は、本開示の一部を成す添付の図に関連して解釈される以下の詳細な説明を参照することにより更に容易に理解し得る。

【0136】

本文書全体を通じて、記載は組成物及びその組成物の使用方法に言及している。本開示が、ある組成物に関連する特徴又は実施形態を記載又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、その組成物の使用方法にも等しく適用可能である。同様に、本開示が、ある組成物の使用方法に関連する特徴又は実施形態を記載又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、その組成物にも等しく適用可能である。

【0137】

値の範囲が表されるとき、それには、その範囲内にある任意の特定の値を用いる実施形態が含まれる。更に、範囲で記述される値への言及には、その範囲内にある個々の値が含まれる。全ての範囲はその端点を含み、且つ組み合わせ可能である。先行語「約」の使用によって値が近似値として表されるとき、その特定の値が別の実施形態を成すことは理解されるであろう。特定の数値への言及には、文脈上特に明確に指示されない限り、少なくともその特定の値が含まれる。「又は」の使用は、それが使用されている具体的な文脈上特に指示されない限り、「及び／又は」を意味するものとする。本明細書に引用する全ての参考文献は、あらゆる目的で参照によって援用される。参考文献と本明細書が矛盾する場合、本明細書が優先するものとする。

【0138】

明確にするため、本明細書に別々の実施形態に関連して記載される本開示の組成物及び方法の特定の特徴がまた、単一の実施形態で組み合わせて提供され得ることが理解されるべきである。逆に、簡略にするため、単一の実施形態に関連して記載される本開示の組成物及び方法の様々な特徴がまた、別々に又は任意の部分的な組み合わせで提供され得る。

【0139】

定義
本明細書及び特許請求の範囲全体を通じて、記載の態様に関して様々な用語が用いられる。かかる用語には、特に指示されない限り、当技術分野におけるその通常の意味が与えられるべきである。他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される定義と整合するように解釈されるべきである。

【0140】

本明細書で使用されるとき、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、文脈上特に明確に指示されない限り、複数形を含む。

【0141】

数的な値及び範囲に関連して、用語「約」又は「近似的に」は、当業者には本明細書に含まれる教示から明らかなとおり、反応混合物中に所望の量の核酸又はポリペプチドを有するなど、実施形態が意図したとおりに動作し得るような、記載される値若しくは範囲を近似する又はそれに近い値若しくは範囲を指す。一部の実施形態において、約とは、ある数的な量の±１０％を意味する。

【0142】

用語「抗体－薬物コンジュゲート」、「抗体コンジュゲート」、「コンジュゲート」、「イムノコンジュゲート」、及び「ＡＤＣ」は同義的に使用され、一般式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ（式Ｉ）（式中、Ａｂ＝抗体又は抗原結合断片、Ｌ＝リンカー部分、Ｄ＝薬物部分（例えば、スプライシング調節薬薬物部分）、及びｐ＝各抗体又は抗原結合断片当たりの薬物部分の数である）によって定義される、１つ以上の抗体又は抗原結合断片に連結した１つ以上の治療用化合物（例えば、スプライシング調節薬）を指す。スプライシング調節薬薬物部分を含むＡＤＣは、本明細書では更に具体的に「スプライシング調節薬負荷抗体（ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ－ｌｏａｄｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」又は「ＳＭＬＡ」とも称され得る。スプライシング調節薬薬物部分を含むＡＤＣにおいて、「ｐ」は、抗体又は抗原結合断片に連結したスプライシング調節薬化合物の数を指す。一部の実施形態において、リンカーＬは、抗体又は抗原結合断片と治療用化合物との間に切断可能部分を含み得る。一部の実施形態において、リンカーＬは、抗体又は抗原結合断片及び治療用化合物のいずれか一方又は両方に１つ又は複数のスペーサー単位によって結び付くことのできる切断可能部分を含み得る。一部の実施形態において、スペーサー単位が切断可能部分を治療用化合物に結び付けるとき、それは自己犠牲性スペーサー単位である。他の実施形態において、リンカーＬは切断可能部分を含まず、非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカーＬは、抗体又は抗原結合断片に、及び治療用化合物に直接結び付くことのできる少なくとも１つのスペーサー単位を含み得る。例示的な切断可能及び非切断可能リンカーについては、本明細書に記載及び例示される。

【0143】

用語「抗体」は、最も広義には、免疫グロブリン分子の可変領域内にある少なくとも１つの抗原認識部位を通じて、タンパク質、ポリペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又は前述の組み合わせなどの標的を認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を指して使用される。抗体の重鎖は重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）と重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）とで構成される。軽鎖は軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）と軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）とで構成される。本願の目的上、成熟重鎖及び軽鎖可変ドメインは、各々が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を４つのフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）内に、Ｎ末端からＣ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４に並んで含む。「抗体」は、天然に存在するものであるか、又は従来のハイブリドーマ技術によって作製されるモノクローナル抗体など、人工的であり得る。用語「抗体」には、完全長モノクローナル抗体及び完全長ポリクローナル抗体並びにＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及び単鎖抗体などの抗体断片が含まれる。抗体は、５つの主要な免疫グロブリンクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、又はそのサブクラス（例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のいずれか１つであり得る。この用語は更に、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び所望の生物学的活性（例えば、標的抗原に結合する、標的抗原発現細胞内にインターナライズする）を示す限りにおいて、抗原認識部位を含有する任意の修飾免疫グロブリン分子を包含する。

【0144】

用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用されるとき、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、即ち、その集団を占める個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある天然に存在する突然変異を除いては同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原エピトープを対象とする。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体製剤は、典型的には、異なるエピトープを対象とする（又はそれに特異的な）多数の抗体を含む。修飾語句「モノクローナル」は、その抗体が実質的に均質な抗体集団から得られているという性格を指示するものであり、その抗体が任意の特定の方法によって作製されている必要があると解釈されてはならない。例えば、本開示において使用されることになるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は組換えＤＮＡ法によって作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。モノクローナル抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－８、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７に記載される技法を用いてもファージ抗体ライブラリから単離され得る。

【0145】

本明細書に記載されるモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種に由来する又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は相同である一方、１つ又は複数の鎖の残りの部分が、別の種に由来する又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体並びに標的抗原に特異的に結合し及び／又は所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、かかる抗体の断片を含む。

【0146】

用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用されるとき、ヒトによって産生される抗体又はヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列を有する抗体を指す。

【0147】

用語「キメラ抗体」は、本明細書で使用されるとき、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。一部の例では、重鎖及び軽鎖の両方の可変領域が、所望の特異性、親和性、及び活性を有する１つの種に由来する抗体の可変領域に対応する一方、定常領域が、別の種（例えば、ヒト）に由来する抗体と相同であり、それにより後者の種における免疫応答が最小限に抑えられる。

【0148】

本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト（例えば、マウス）抗体並びにヒト抗体からの配列を含む抗体の形態を指す。かかる抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここでは超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は任意選択でまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことになる。ヒト化抗体は、抗体特異性、親和性、及び／又は活性の精緻化及び最適化のため、Ｆｖフレームワーク領域及び／又は置き換えられた非ヒト残基内のいずれかにある残基の置換によって更に修飾され得る。

【0149】

抗体の「抗原結合断片」又は「抗原結合部分」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ１）に特異的に結合する能力を保持している抗体又はタンパク質の１つ以上の断片を指す。抗原結合断片は、抗原発現細胞にインターナライズする能力も保持し得る。一部の実施形態において、抗原結合断片は、免疫エフェクター活性も保持する。完全長抗体の断片が完全長抗体の抗原結合機能を果たし得ることが示されている。抗体の「抗原結合断片」又は「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一の可変ドメイン、例えばＶ_Ｈドメインを含むｄＡｂ断片（例えば、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－６；及び国際公開第１９９０／００５１４４号パンフレットを参照されたい）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは別個の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いると、これらを合成リンカーによってつなぎ合わせることができ、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作製することが可能となる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－８３を参照されたい。かかる単鎖抗体も抗体の「抗原結合断片」又は「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含されることが意図され、当技術分野では、結合時に細胞内にインターナライズすることのできる例示的なタイプの結合断片として公知である（例えば、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．（２０１０）９：２１３１－４１；Ｈｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．５１：４２７－３２；及びＦｉｔｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＭＡｂｓ ７：３９０－４０２を参照されたい）。特定の実施形態において、ｓｃＦｖ分子は融合タンパク質に組み込まれ得る。ダイアボディなど、他の形態の単鎖抗体も包含される。ダイアボディは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現する二価の二重特異性抗体であるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を許容しないほど短いリンカーを使用し、従ってそれらのドメインが強制的に別の鎖の相補ドメインと対合して２つの抗原結合部位を作り出す（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－８；及びＰｏｌｊａｋ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－３を参照されたい）。抗原結合断片は、当業者に公知の従来技法を用いて得られ、そうした結合断片は、インタクトな抗体と同じ方法で有用性（例えば、結合親和性、インターナリゼーション）に関してスクリーニングされる。抗原結合断片は、インタクトなタンパク質が例えばプロテアーゼ又は化学的切断によって切断されることにより調製され得る。

【0150】

「インターナリゼーション性」は、抗体又は抗原結合断片に関連して本明細書で使用されるとき、細胞への結合時に細胞の脂質二重層膜を通って細胞の内部コンパートメント、好ましくは分解性コンパートメントの中に取り込まれる（即ち、「インターナライズされる」）能力を有する抗体又は抗原結合断片を指す。例えば、インターナリゼーション性抗ＨＥＲ２抗体は、細胞膜上のＨＥＲ２への結合後に細胞内に取り込まれる能力を有するものである。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗体又は抗原結合断片は細胞表面抗原（例えば、ＨＥＲ２）を標的化し、且つインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である（即ち、このＡＤＣは抗原結合後に細胞膜を通って移行する）。一部の実施形態において、インターナリゼーション性抗体又は抗原結合断片は細胞表面上の受容体に結合する。細胞膜上の受容体を標的化するインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片は、受容体介在性エンドサイトーシスを誘導し得る。一部の実施形態において、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片は、受容体介在性エンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれる。

【0151】

「非インターナリゼーション性」は、抗体又は抗原結合断片に関連して本明細書で使用されるとき、細胞への結合時に細胞表面に留まる抗体又は抗原結合断片を指す。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗体又は抗原結合断片は細胞表面抗原を標的化し、且つ非インターナリゼーション性抗体又は非インターナリゼーション性抗原結合断片である（即ち、このＡＤＣは抗原結合後に細胞表面に留まり、細胞膜を通って移行しない）。一部の実施形態において、非インターナリゼーション性抗体又は抗原結合断片は非インターナリゼーション性受容体又は他の細胞表面抗原に結合する。例示的非インターナリゼーション性細胞表面抗原としては、限定はされないが、ＣＡ１２５及びＣＥＡが挙げられ、非インターナリゼーション性抗原標的に結合する抗体についても当技術分野において公知である（例えば、Ｂａｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．６８（５）：１３３１－７；Ｓｃｈｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｕｒｂａｎ（２００７）Ｂｉｏｍａｒｋ Ｍｅｄ．１（４）：５１３－２３；及びＢｏｕｄｏｕｓｑ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８（７）：ｅ６９６１３を参照されたい）。

【0152】

用語「ヒト上皮成長因子受容体２」、「ＨＥＲ２」、又は「ＨＥＲ２／ＮＥＵ」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＨＥＲ２を指す。この用語は、完全長ＨＥＲ２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ０４６２６；配列番号３１）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＨＥＲ２を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＨＥＲ２の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＨＥＲ２の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＨＥＲ２はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0153】

用語「抗ＨＥＲ２抗体」又は「ＨＥＲ２に結合する抗体」は、ＨＥＲ２に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＨＥＲ２に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。米国特許第５，８２１，３３７号明細書は、例示的抗ＨＥＲ２抗体配列を含め、例示的ＨＥＲ２結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＨＥＲ２抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。トラスツズマブ（米国特許第５，８２１，３３７号明細書；Ｍｏｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１２）：４７４４－９）が、例示的抗ヒトＨＥＲ２抗体である。

【0154】

用語「シンデカン－１」、「ＳＤＣ１」、又は「ＣＤ１３８」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＣＤ１３８を指す。この用語は、完全長ＣＤ１３８（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ１８８２７；配列番号３２）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＣＤ１３８を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＣＤ１３８の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＣＤ１３８の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＣＤ１３８はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0155】

用語「抗ＣＤ１３８抗体」又は「ＣＤ１３８に結合する抗体」は、ＣＤ１３８に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＣＤ１３８に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＣＤ１３８抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。Ｂ－Ｂ４（Ｔａｓｓｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｌｏｏｄ １０４：３６８８－９６）が、例示的抗ヒトＣＤ１３８抗体である。

【0156】

用語「エフリンＡ型受容体２」又は「ＥＰＨＡ２」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＥＰＨＡ２を指す。この用語は、完全長ＥＰＨＡ２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ２９３１７；配列番号３３）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＥＰＨＡ２を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＥＰＨＡ２の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＥＰＨＡ２の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＥＰＨＡ２はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0157】

用語「抗ＥＰＨＡ２抗体」又は「ＥＰＨＡ２に結合する抗体」は、ＥＰＨＡ２に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＥＰＨＡ２に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２００７／０３０６４２号パンフレットは、例示的抗ＥＰＨＡ２抗体配列を含め、例示的ＥＰＨＡ２結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＥＰＨＡ２抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。１Ｃ１（国際公開第２００７／０３０６４２号パンフレット；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８（２２）：９３６７－７４）が、例示的抗ヒトＥＰＨＡ２抗体である。

【0158】

用語「メソテリン」又は「ＭＳＬＮ」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＭＳＬＮを指す。この用語は、完全長ＭＳＬＮ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ１３４２１；配列番号４３）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＭＳＬＮを包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＭＳＬＮの１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＭＳＬＮの機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＭＳＬＮはヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0159】

用語「抗ＭＳＬＮ抗体」又は「ＭＳＬＮに結合する抗体」は、ＭＳＬＮに結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＭＳＬＮに結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２０１１／０７４６２１号パンフレットは、例示的抗ＭＳＬＮ抗体配列を含め、例示的ＭＳＬＮ結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＭＳＬＮ抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。１１－２５、ＩＣ１４－３０、ＩＣ７－４、ＩＣ１７－３５及び２－９が、例示的抗ヒトＭＳＬＮ抗体である。

【0160】

用語「グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ２」又は「ＦＯＬＨ１」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＦＯＬＨ１を指す。この用語は、完全長ＦＯＬＨ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ０４６０９；配列番号４４）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＦＯＬＨ１を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＦＯＬＨ１の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＦＯＬＨ１の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＦＯＬＨ１はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0161】

用語「抗ＦＯＬＨ１抗体」又は「ＦＯＬＨ１に結合する抗体」は、ＦＯＬＨ１に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＦＯＬＨ１に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２０１９／０１２２６０号パンフレット及び国際公開第２０１７／２１２２５０号パンフレットは、例示的抗ＦＯＬＨ１抗体配列を含め、例示的ＦＯＬＨ１結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＦＯＬＨ１抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。Ｊ５９１（脱免疫化）が、例示的抗ヒトＦＯＬＨ１抗体である。

【0162】

用語「カドヘリン－６」又は「ＣＤＨ６」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＣＤＨ６を指す。この用語は、完全長ＣＤＨ６（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ５５２８５；配列番号４５）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＣＤＨ６を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＣＤＨ６の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＣＤＨ６の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＣＤＨ６はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0163】

用語「抗ＣＤＨ６抗体」又は「ＣＤＨ６に結合する抗体」は、ＣＤＨ６に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＣＤＨ６に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２０１８／１８５６１８号パンフレットは、例示的抗ＣＤＨ６抗体配列を含め、例示的ＣＤＨ６結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＣＤＨ６抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0164】

用語「癌胎児性抗原関連細胞接着分子５」又は「ＣＥＡＣＡＭ５」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＣＥＡＣＡＭ５を指す。この用語は、完全長ＣＥＡＣＡＭ５（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ０６７３１；配列番号４６）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＣＥＡＣＡＭ５を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＣＥＡＣＡＭ５の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＣＥＡＣＡＭ５の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＣＥＡＣＡＭ５はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0165】

用語「抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体」又は「ＣＥＡＣＡＭ５に結合する抗体」は、ＣＥＡＣＡＭ５に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＣＥＡＣＡＭ５に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。米国特許出願公開第２０１５／０１２５３８６号明細書は、例示的抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体配列を含め、例示的ＣＥＡＣＡＭ５結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。ｈＭＮ１４が、例示的抗ヒトＣＥＡＣＡＭ５抗体である。

【0166】

用語「クリプティックファミリータンパク質１Ｂ」又は「ＣＦＣ１Ｂ」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＣＦＣ１Ｂを指す。この用語は、完全長ＣＦＣ１Ｂ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ０ＣＧ３６；配列番号４７）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＣＦＣ１Ｂを包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＣＦＣ１Ｂの１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＣＦＣ１Ｂの機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＣＦＣ１Ｂはヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0167】

用語「抗ＣＦＣ１Ｂ抗体」又は「ＣＦＣ１Ｂに結合する抗体」は、ＣＦＣ１Ｂに結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＣＦＣ１Ｂに結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２００２／０８８１７０号パンフレットは、例示的抗ＣＦＣ１Ｂ抗体配列を含め、例示的ＣＦＣ１Ｂ結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＣＦＣ１Ｂ抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0168】

用語「エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３」又は「ＥＮＰＰ３」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＥＮＰＰ３を指す。この用語は、完全長ＥＮＰＰ３（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｏ１４６３８；配列番号４８）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＥＮＰＰ３を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＥＮＰＰ３の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＥＮＰＰ３の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＥＮＰＰ３はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0169】

用語「抗ＥＮＰＰ３抗体」又は「ＥＮＰＰ３に結合する抗体」は、ＥＮＰＰ３に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＥＮＰＰ３に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｄｏｎａｔｅ ｅｔ ａｌ．（（２０１６）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２２（８）：１９８９－９９）は、例示的抗ＥＮＰＰ３抗体配列を含め、例示的ＥＮＰＰ３結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＥＮＰＰ３抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0170】

用語「葉酸受容体α」又は「ＦＯＬＲ１」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＦＯＬＲ１を指す。この用語は、完全長ＦＯＬＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ１５３２８；配列番号４９）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＦＯＬＲ１を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＦＯＬＲ１の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＦＯＬＲ１の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＦＯＬＲ１はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0171】

用語「抗ＦＯＬＲ１抗体」又は「ＦＯＬＲ１に結合する抗体」は、ＦＯＬＲ１に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＦＯＬＲ１に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２００５／０８０４３１号パンフレット及びＣｏｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１（２２）：６１２５－３２）は、例示的抗ＦＯＬＲ１抗体配列を含め、例示的ＦＯＬＲ１結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＦＯＬＲ１抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。ファルレツズマブ及びＭＯｖ１９が、例示的抗ヒトＦＯＬＲ１抗体である。

【0172】

用語「Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１」又は「ＨＡＶＣＲ１」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＨＡＶＣＲ１を指す。この用語は、完全長ＨＡＶＣＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ９６Ｄ４２；配列番号５０）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＨＡＶＣＲ１を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＨＡＶＣＲ１の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＨＡＶＣＲ１の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＨＡＶＣＲ１はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0173】

用語「抗ＨＡＶＣＲ１抗体」又は「ＨＡＶＣＲ１に結合する抗体」は、ＨＡＶＣＲ１に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＨＡＶＣＲ１に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．（（２０１６）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１５（１２）：２９４６－５４）は、例示的抗ＨＡＶＣＲ１抗体配列を含め、例示的ＨＡＶＣＲ１結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＨＡＶＣＲ１抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0174】

用語「マスト／幹細胞成長因子受容体Ｋｉｔ」又は「ＫＩＴ」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＫＩＴを指す。この用語は、完全長ＫＩＴ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ１０７２１；配列番号５１）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＫＩＴを包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＫＩＴの１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＫＩＴの機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＫＩＴはヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0175】

用語「抗ＫＩＴ抗体」又は「ＫＩＴに結合する抗体」は、ＫＩＴに結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＫＩＴに結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（（２０１６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １１３（３３）：Ｅ４７８４－９３）及びＡｂｒａｍｓ ｅｔ ａｌ．（（２０１８）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２４（１７）：４２９７－３０８）は、例示的抗ＫＩＴ抗体配列を含め、例示的ＫＩＴ結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＫＩＴ抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0176】

用語「肝細胞増殖因子受容体」又は「ＭＥＴ」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＭＥＴを指す。この用語は、完全長ＭＥＴ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｐ０８５８１；配列番号５２）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＭＥＴを包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＭＥＴの１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＭＥＴの機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＭＥＴはヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0177】

用語「抗ＭＥＴ抗体」又は「ＭＥＴに結合する抗体」は、ＭＥＴに結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＭＥＴに結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（（２０１９）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｉｎ．）は、例示的抗ＭＥＴ抗体配列を含め、例示的ＭＥＴ結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＭＥＴ抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0178】

用語「ムチン－１６」又は「ＭＵＣ１６」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＭＵＣ１６を指す。この用語は、完全長ＭＵＣ１６（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ８ＷＸＩ７；配列番号５３）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＭＵＣ１６を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＭＵＣ１６の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＭＵＣ１６の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＭＵＣ１６はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0179】

用語「抗ＭＵＣ１６抗体」又は「ＭＵＣ１６に結合する抗体」は、ＭＵＣ１６に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＭＵＣ１６に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（（２０１６）Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２７（１１）：２１２４－３０）は、例示的抗ＭＵＣ１６抗体配列を含め、例示的ＭＵＣ１６結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＭＵＣ１６抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0180】

用語「亜鉛トランスポーターＺＩＰ６」又は「ＳＬＣ３９Ａ６」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＳＬＣ３９Ａ６を指す。この用語は、完全長ＳＬＣ３９Ａ６（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ１３４３３；配列番号５４）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＳＬＣ３９Ａ６を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＳＬＣ３９Ａ６の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＳＬＣ３９Ａ６の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＳＬＣ３９Ａ６はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0181】

用語「抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体」又は「ＳＬＣ３９Ａ６に結合する抗体」は、ＳＬＣ３９Ａ６に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＳＬＣ３９Ａ６に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｓｕｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（（２０１４）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１３（１２）：２９９１－３０００）は、例示的抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体配列を含め、例示的ＳＬＣ３９Ａ６結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0182】

用語「コリントランスポーター様タンパク質４」又は「ＳＬＣ４４Ａ４」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＳＬＣ４４Ａ４を指す。この用語は、完全長ＳＬＣ４４Ａ４（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ５３ＧＤ３；配列番号５５）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＳＬＣ４４Ａ４を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＳＬＣ４４Ａ４の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＳＬＣ４４Ａ４の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＳＬＣ４４Ａ４はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0183】

用語「抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体」又は「ＳＬＣ４４Ａ４に結合する抗体」は、ＳＬＣ４４Ａ４に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＳＬＣ４４Ａ４に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。Ｍａｔｔｉｅ ｅｔ ａｌ．（（２０１６）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１５（１１）：２６７９－８７）は、例示的抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体配列を含め、例示的ＳＬＣ４４Ａ４結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0184】

用語「メタロレダクターゼＳＴＥＡＰ１」又は「ＳＴＥＡＰ１」は、本明細書で使用されるとき、任意の天然形態のヒトＳＴＥＡＰ１を指す。この用語は、完全長ＳＴＥＡＰ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列：Ｑ９ＵＨＥ８；配列番号５６）並びに細胞プロセシングによって生じ得る任意の形態のヒトＳＴＥＡＰ１を包含する。この用語は、限定はされないが、ヒトＳＴＥＡＰ１の１つ以上の生物学的機能を保持しているスプライス変異体、アレル変異体、及びアイソフォームを含め、ヒトＳＴＥＡＰ１の機能性変異体又は断片も包含する（即ち、この用語が野生型タンパク質のみを指して使用されることが文脈上指示されない限り、変異体及び断片が包含される）。ＳＴＥＡＰ１はヒトから単離することができ、又は組換え的に若しくは合成方法により作製され得る。

【0185】

用語「抗ＳＴＥＡＰ１抗体」又は「ＳＴＥＡＰ１に結合する抗体」は、ＳＴＥＡＰ１に結合する、例えば特異的に結合する任意の形態の抗体又はその断片を指し、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及びＳＴＥＡＰ１に結合する、例えば特異的に結合する限りにおいて、生物学的に機能性の抗体断片を包含する。国際公開第２００８／０５２１８７号パンフレットは、例示的抗ＳＴＥＡＰ１抗体配列を含め、例示的ＳＴＥＡＰ１結合配列を提供しており、それに関して参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣに使用される抗ＳＴＥＡＰ１抗体は、インターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗体断片である。

【0186】

本明細書で使用されるとき、用語「特異的」、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、及び「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」は、タンパク質及び他の生物学的物質の異種集団中における抗体又は抗原結合断片（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）と標的抗原（例えば、ＨＥＲ２）との間の結合反応を指す。抗体は、所与の一組の条件下で適切な抗原への結合を無関係な抗原又は抗原混合物への結合と比較することにより、結合の特異性に関して試験することができる。抗体が無関係な抗原又は抗原混合物と比べて少なくとも２、５、７倍、好ましくは１０倍以上高い親和性で適切な抗原に結合する場合、それは特異的と見なされる。「特異的抗体」又は「標的特異的抗体」は、標的抗原（例えば、ＨＥＲ２）にのみ結合するが、他の抗原に結合しない（又は最小限の結合のみを呈する）ものである。特定の実施形態において、標的抗原（例えば、ＨＥＲ２）に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、１×１０^－６Ｍ未満、１×１０^－７Ｍ未満、１×１０^－８Ｍ未満、１×１０^－９Ｍ未満、１×１０^－１０Ｍ未満、１×１０^－１１Ｍ未満、１×１０^－１２Ｍ未満、又は１×１０^－１３Ｍ未満のＫ_Ｄを有する。特定の実施形態において、Ｋ_Ｄは１ｐＭ～５００ｐＭである。一部の実施形態において、Ｋ_Ｄは５００ｐＭ～１μＭ、１μＭ～１００ｎＭ、又は１００ｍＭ～１０ｎＭである。

【0187】

用語「エピトープ」は、抗体によって認識され、且つ特異的に結合される能力を有する抗原の一部分を指す。抗原がポリペプチドであるとき、エピトープは連続アミノ酸で形成され得るか、又はポリペプチドが三次構造に折り畳まれることにより隣り合って並ぶ非連続アミノ酸で形成され得る。抗体によって結合されるエピトープは、抗原－抗体複合体の直接的な視覚化によるエピトープ同定用のＸ線結晶学並びに抗体による抗原の断片又は突然変異変種への結合のモニタリング、又は抗体及び抗原の種々の部分の溶媒露出度のモニタリングを含め、当技術分野において公知の任意のエピトープマッピング技法を用いて同定され得る。抗体エピトープのマッピングに使用される例示的戦略としては、限定はされないが、アレイベースのオリゴペプチドスキャニング、タンパク質限定分解、部位特異的突然変異誘発、ハイスループット突然変異誘発マッピング、水素重水素交換、及び質量分析法が挙げられる（例えば、Ｇｅｒｓｈｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）２１：１４５－５６；及びＨａｇｅｒ－Ｂｒａｕｎ ａｎｄ Ｔｏｍｅｒ（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ２：７４５－５６を参照されたい）。

【0188】

競合的結合及びエピトープビニングも、同一の又は重複するエピトープを共有する抗体の決定に用いることができる。競合的結合は、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１^ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ １９８８，２^ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ ２０１４）に記載されるアッセイなど、交差ブロッキングアッセイを用いて評価することができる。一部の実施形態において、交差ブロッキングアッセイにおいて参照抗体又は結合タンパク質（例えば、表２～表４に特定されるものから選択されるＣＤＲ及び／又は可変ドメインを含む結合タンパク質）によるＨＥＲ２などの標的抗原への結合が試験抗体又は結合タンパク質によって少なくとも約５０％（例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、又はそれ以上、又は間にある任意のパーセンテージ）だけ低下するとき、及び／又はその逆のとき、競合的結合が同定される。一部の実施形態において、競合的結合は、共有されている若しくは同様の（例えば、部分的に重複している）エピトープに起因し得るか、又は抗体若しくは結合タンパク質が近傍のエピトープに結合する立体障害に起因し得る（例えば、Ｔｚａｒｔｏｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｄ．（１９９８）ｖｏｌ．６６，ｐｐ．５５－６６）を参照されたい）。一部の実施形態では、競合的結合を用いて、同様のエピトープを共有する結合タンパク質群を分取することができる。例えば、結合に関して競合する結合タンパク質は、重複する又は近傍のエピトープを有する結合タンパク質群として「ビンに入れる」ことができ、一方、競合しないものは、重複する又は近傍のエピトープを有しない別の結合タンパク質群に分けられる。

【0189】

用語「ｋ_ｏｎ」又は「ｋ_ａ」は、抗体／抗原複合体を形成するための抗原への抗体の会合についてのオン速度定数を指す。この速度は、表面プラズモン共鳴、バイオレイヤー干渉法、又はＥＬＩＳＡアッセイなどの標準アッセイを用いて決定することができる。

【0190】

用語「ｋ_ｏｆｆ」又は「ｋ_ｄ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についてのオフ速度定数を指す。この速度は、表面プラズモン共鳴、バイオレイヤー干渉法、又はＥＬＩＳＡアッセイなどの標準アッセイを用いて決定することができる。

【0191】

用語「Ｋ_Ｄ」は、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。Ｋ_Ｄは、ｋ_ａ／ｋ_ｄによって計算される。この速度は、表面プラズモン共鳴、バイオレイヤー干渉法、又はＥＬＩＳＡアッセイなどの標準アッセイを用いて決定することができる。

【0192】

用語「ｐ」又は「薬物負荷量」又は「薬物：抗体比」又は「薬物対抗体比」又は「ＤＡＲ」は、各抗体又は抗原結合断片当たりの薬物部分の数、即ち、薬物負荷量、又は式（Ｉ）のＡＤＣにおける各抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）当たりの－Ｌ－Ｄ部分の数を指す。スプライシング調節薬薬物部分を含むＡＤＣでは、「ｐ」は、抗体又は抗原結合断片に連結したスプライシング調節薬化合物の数を指す。例えば、２つのスプライシング調節薬化合物（例えば、各々がＤ１の構造を有する２つの化合物）が抗体又は抗原結合断片に連結している場合、ｐ＝２である。式（Ｉ）のＡＤＣの複数のコピーを含む組成物では、「平均ｐ」は各抗体又は抗原結合断片当たりの－Ｌ－Ｄ部分の数の平均を指し、「平均薬物負荷量」とも称される。

【0193】

「リンカー」又は「リンカー部分」は、本明細書では、化合物、通常はスプライシング調節薬薬物部分などの薬物部分を抗体又は抗原結合断片などの別の部分に共有結合的につなぎ合わせる能力を有する任意の化学的部分を指して使用される。リンカーは、化合物又は抗体が活性のままである条件で、酸誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、光に基づく切断、エステラーゼ誘導切断、及び／又はジスルフィド結合切断を起こし易いことがあり得るか、又はそれに対して実質的に抵抗性であり得る。

【0194】

用語「薬剤」は、本明細書では、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的巨大分子、又は生物学的材料から作られる抽出物を指して使用される。用語「療法剤」又は「薬物」は、生物学的過程を調節する能力を有する、及び／又は生物学的活性を有する薬剤を指す。本明細書に記載されるスプライシング調節薬化合物は、例示的療法剤である。

【0195】

用語「化学療法剤」又は「抗癌剤」は、本明細書では、作用機序に関わらず、癌の治療に有効なあらゆる薬剤を指して使用される。転移又は血管新生の阻害が、高い頻度で化学療法剤の特性である。化学療法剤には、抗体、生体分子、及び小分子が含まれ、本明細書に記載されるスプライシング調節薬化合物が包含される。化学療法剤は、細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤であり得る。用語「細胞増殖抑制剤」は、細胞成長及び／又は細胞の増大を阻害し又は抑制する薬剤を指す。用語「細胞傷害剤」は、主に細胞の発現活性及び／又は機能への干渉によって細胞死を引き起こす物質を指す。

【0196】

本明細書で使用されるとき、用語「スプライシング調節薬」、「スプライセオソーム調節薬」、又は「スプライス調節薬」は、スプライセオソームの成分と相互作用することにより抗癌活性を有する化合物を指す。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、標的細胞におけるスプライシングの速度又は形態を変化させる。例えば、阻害性薬剤として機能するスプライシング調節薬は、無制御な細胞増殖を減少させる能力を有する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬はＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体に結合することにより作用し得る。かかる調節薬は天然化合物又は合成化合物であり得る。スプライシング調節薬の非限定的な例及びかかる調節薬の分類には、プラジエノライド（例えば、プラジエノライドＤ又はプラジエノライドＢ）、プラジエノライド誘導体（例えば、プラジエノライドＤ又はプラジエノライドＢ誘導体）、ハーボキシジエン、ハーボキシジエン誘導体、スプライソスタチン、スプライソスタチン誘導体、スデマイシン（ｓｕｄｅｍｙｃｉｎ）、又はスデマイシン誘導体が含まれる。本明細書で使用されるとき、スプライシング調節薬などに言及するときの用語「誘導体」及び「類似体」は、元の化合物と本質的に同じ、同様の、又は亢進した生物学的機能又は活性を保持しているが、化学的又は生物学的構造は変化している任意のかかる化合物を意味する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、プラジエノライド又はプラジエノライド誘導体である。

【0197】

本明細書で使用されるとき、「プラジエノライド誘導体」は、プラジエノライドとして知られる天然産物ファミリーのメンバーに構造的に関係した、出発化合物の１つ以上の生物学的機能を保持している化合物を指す。プラジエノライドは当初、細菌ストレプトミセス・プラテンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）において（Ｍｉｚｕｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔ．５７：１８８－９６）、潜在的に細胞傷害性で、細胞周期のＧ１期及びＧ２／Ｍ期における細胞周期停止を生じさせるものとして同定された（例えば、Ｂｏｎｎａｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ １１：８４７－５９）。天然に存在するプラジエノライドは、プラジエノライドＡ～Ｇまで７つある（Ｍｉｚｕｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔ．５７：１８８－９６；Ｓａｋａｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ５７：１８０－７）。米国特許第７，８８４，１２８号明細書及び同第７，８１６，４０１号明細書は、プラジエノライドＢ及びＤの例示的合成方法を記載しており、かかる方法に関して各々参照により本明細書に援用される。プラジエノライドＢ及びＤの合成は、Ｋａｎａｄａ ｅｔ ａｌ．（（２００７）Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ．４６：４３５０－５）に記載される例示的方法を用いても実施され得る。Ｋａｎａｄａ ｅｔ ａｌ．及び国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットは、プラジエノライドＤ（国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットの１１１０７Ｄ）からのＥ７１０７（Ｄ１１）（国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットの化合物４５）の例示的合成方法を記載している。対応する米国特許番号は、Ｋｏｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第７，５５０，５０３号明細書である。これらの参考文献の各々は、記載される合成方法に関して本明細書に援用される。

【0198】

本明細書で使用されるとき、「スプライシング調節薬薬物部分」は、スプライシング調節薬化合物の構造を提供するＡＤＣ又は組成物の成分、例えば、式（Ｉ）のＡＤＣ中、又は－Ｌ－Ｄを含む組成物中のスプライシング調節薬（Ｄ）成分を指す。

【0199】

本明細書で使用されるとき、「スプライセオソーム」は、プレｍＲＮＡセグメントなど、１つ以上のＲＮＡセグメントからイントロンを取り除くリボ核タンパク質複合体を指す。

【0200】

用語「相同体」は、例えば、対応する位置において同じ又は同様である化学的残基の配列を有することにより、別の分子との相同性を呈する分子を指す。

【0201】

用語「～を阻害する」又は「～の阻害」は、本明細書で使用されるとき、測定可能な量だけ減少させることを意味し、必須ではないが、完全な防止又は阻害を含み得る。

【0202】

用語「標的陰性」、「標的抗原陰性」、又は「抗原陰性」は、細胞又は組織による標的抗原発現がないことを指す。用語「標的陽性」、「標的抗原陽性」、又は「抗原陽性」は、標的抗原発現があることを指す。例えば、標的抗原を発現しない細胞又は細胞株は、標的陰性と記載され得る一方、標的抗原を発現する細胞又は細胞株は、標的陽性と記載され得る。

【0203】

用語「バイスタンダー殺傷」又は「バイスタンダー効果」は、標的陽性細胞の存在下における標的陰性細胞の殺傷を指し、ここで標的陽性細胞の非存在下では、標的陰性細胞の殺傷は観察されない。標的陽性細胞と標的陰性細胞との間の細胞間接触、又は少なくとも近接性が、バイスタンダー殺傷を可能にする。この種の殺傷は、標的陰性細胞の無差別な殺傷を指す「オフターゲット殺傷」と区別可能である。「オフターゲット殺傷」は標的陽性細胞の非存在下でも観察され得る。

【0204】

用語「新生物障害」及び「癌」は、本明細書では、無制御な増殖、不死性、転移能、急激な成長及び増殖速度、及び／又はある種の形態学的特徴など、癌を引き起こす細胞に典型的な特性を備える細胞の存在を指して同義的に使用される。多くの場合、癌細胞は腫瘍又は塊の形態であり得るが、かかる細胞は対象体内に単独で存在し得るか、又は白血病細胞若しくはリンパ腫細胞のように、独立した細胞として血流中で循環し得る。用語「新生物障害」及び「癌」には、血液学的悪性腫瘍、固形腫瘍、肉腫、癌腫並びに他の固形及び非固形腫瘍癌を含め、あらゆる種類の癌及び癌転移が含まれる。血液学的悪性腫瘍には、Ｂ細胞悪性腫瘍、血液の癌（白血病）、形質細胞の癌（骨髄腫、例えば多発性骨髄腫）、又はリンパ節の癌（リンパ腫）が含まれ得る。例示的Ｂ細胞悪性腫瘍には、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。白血病には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）等が含まれ得る。リンパ腫には、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫が含まれ得る。他の血液学的悪性腫瘍には、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）が含まれ得る。固形腫瘍には、腺癌、例えば、乳癌、膵癌、前立腺癌、結腸又は結腸直腸癌、肺癌、胃癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌、神経膠腫、黒色腫など、癌腫が含まれ得る。

【0205】

用語「腫瘍」及び「新生物」は、前癌病変を含め、良性又は悪性いずれかの、過剰な細胞成長又は増殖によって生じる任意の組織塊を指す。

【0206】

用語「腫瘍細胞」及び「新生物細胞」は同義的に使用され、非腫瘍原性細胞及び癌幹細胞の両方を含め、腫瘍又は新生物に由来する個々の細胞又は全細胞集団を指す。本明細書で使用されるとき、用語「腫瘍細胞」は、単に再生・分化能を欠いている腫瘍細胞を指す場合には用語「非腫瘍原性」で修飾して、そうした腫瘍細胞を癌幹細胞と区別することになる。

【0207】

用語「対象」及び「患者」は、本明細書では、限定はされないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを含め、任意の哺乳類など、任意の動物を指して同義的に使用される。一部の実施形態において、哺乳類はマウスである。一部の実施形態において、哺乳類はヒトである。一部の実施形態において、対象はマウスである。一部の実施形態において、対象はヒトである。

【0208】

用語「共投与」又は１つ以上の療法剤「と併用した」投与は、同時に行われる投与及びいずれの順序であれ連続的な投与を含む。

【0209】

「医薬組成物」は、投与を可能にし、続いて１つ又は複数の活性成分の意図した生物学的活性を提供するような形態、及び／又は治療効果を実現するような形態の調製物であって、その製剤が投与された対象にとって許容し難いほど毒性の高い追加の構成成分を含有しない調製物を指す。医薬組成物は無菌であり得る。

【0210】

「医薬賦形剤」は、アジュバント、担体、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、湿潤剤、保存剤などの材料を含む。

【0211】

「薬学的に許容可能」は、動物、より詳細にはヒトにおける使用が連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認済み若しくは承認見込みであること、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められている薬局方に掲載されていることを意味する。

【0212】

「薬学的に許容可能な塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持している、且つ望ましくない毒物学的効果を与えない塩である。かかる塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などと形成される酸付加塩；及び有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などと形成される塩；及び（ｂ）塩素、臭素、及びヨウ素などの元素アニオンから形成される塩である。例えば、Ｈａｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｍｅｎｔａｒｙ：Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ Ａｎｉｏｎｓ ａｎｄ Ｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ，”Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ．９４，ｎｏ．１０（２００５）、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ．６６，ｎｏ．１（１９７７）（これらは参照によって本明細書に援用される）を参照されたい。

【0213】

用語「有効量」は、本明細書で使用されるとき、具体的に記載される目的を果たすのに十分な、例えば、投与後に、腫瘍成長速度又は腫瘍容積の低下、癌の症状の低下、又は他の何らかの治療有効性を示すものなど、治療効果を生み出すのに十分な、本明細書に記載される化合物、ＡＤＣ、又は組成物（例えば、スプライシング調節薬又はＡＤＣ）の量を指す。有効量は、記載される目的に関連してルーチンの方法で決定することができる。用語「治療有効量」は、腫瘍細胞の成長又は広がり、腫瘍のサイズ又は数、及び／又はその他の、癌のレベル、ステージ、進行及び／又は重症度の尺度の検出可能な殺傷、低減、及び／又は阻害に有効な、本明細書に記載される化合物、ＡＤＣ、又は組成物の量を指す。治療有効量は、意図される適用（インビトロ又はインビボ）、又は治療下の対象及び疾患状態、例えば、対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与方法などに応じて異なり得、当業者が容易に決定することができる。この用語は、標的細胞において特定の応答、例えば細胞成長の阻害を誘導するであろう用量にも適用される。具体的な用量は、例えば、詳細な医薬組成物、対象及びその年齢並びに既存の健康状態又は健康状態に関するリスク、従うべき投与レジメン、疾患の重症度、それが他の薬剤と併用して投与されるかどうか、投与タイミング、それが投与される組織、及びそれが運ばれる物理的送達システムに応じて異なり得る。癌の場合、ＡＤＣの治療有効量は、癌細胞の数を低減し、腫瘍サイズを低減し、腫瘍転移を阻害し（例えば、減速又は停止させ）、腫瘍成長を阻害し（例えば、減速又は停止させ）、及び／又は１つ以上の症状を緩和することができる。

【0214】

「予防有効量」は、所望の予防的結果を実現するのに必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。典型的には、予防的用量は対象において疾患に先立ち、又は疾患の初期ステージで使用されるため、予防有効量は治療有効量より少ないことになる。

【0215】

本明細書で使用されるとき、「治療すること」又は「療法的」及び文法的に関連する用語は、代替的な治療モダリティから生じる生存の長期化、低い罹患率、及び／又は副作用の軽減など、疾患の任意の帰結の任意の改善を指す。当技術分野において容易に理解されるとおり、疾患の完全な根絶が包含されるが、治療行為に必須ではない。「治療」又は「治療する」は、本明細書で使用されるとき、対象、例えば患者への記載されるＡＤＣ又は組成物の投与を指す。治療とは、例えば癌などの障害、障害の症状又は障害になり易い素因を治癒すること、癒すこと、緩和すること、軽減すること、変化させること、改善すること、寛解させること、和らげること、向上させること又はそれに影響を及ぼすことであり得る。一部の実施形態において、ある病態を有する対象を治療することに加えて、本明細書に開示される組成物は、その病態が発症する可能性を防止又は低減するために予防的に提供することもできる。

【0216】

一部の実施形態において、標識されたＡＤＣが使用される。好適な「標識」としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害薬、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが挙げられる。

【0217】

「タンパク質」とは、本明細書で使用されるとき、少なくとも２つの共有結合的に結び付いたアミノ酸を意味する。この用語は、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドを包含する。一部の実施形態において、２つ以上の共有結合的に結び付いたアミノ酸は、ペプチド結合によって結び付いている。例えばタンパク質が発現システム及び宿主細胞を使用して組換えで作られるとき、タンパク質は、天然に存在するアミノ酸及びペプチド結合で構成され得る。代わりに、タンパク質は、合成アミノ酸（例えば、ホモフェニルアラニン、シトルリン、オルニチン、及びノルロイシン）、又はペプチドミメティクス構造、即ち、ペプトイドなどの「ペプチド又はタンパク質類似体」を含み得る。ペプトイドは、その側鎖がα炭素（アミノ酸の場合のように）でなく、むしろペプチド骨格の窒素原子に付加されている例示的ペプチドミメティクスクラスであり、ペプチドと比較して異なる水素結合及びコンホメーション特徴を有する（例えば、Ｓｉｍｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９３６７を参照されたい）。そのため、ペプトイドは、タンパク質分解又は他の生理学的な若しくは貯蔵上の条件に抵抗性があり、細胞膜の透過に有効であり得る。かかる合成アミノ酸は、特に抗体のインビトロ合成時に当技術分野において周知の従来方法によって取り入れられ得る。加えて、ペプチドミメティクス、合成及び天然に存在する残基／構造の任意の組み合わせを用いることができる。「アミノ酸」には、プロリン及びヒドロキシプロリンなど、イミノ酸残基も含まれる。アミノ酸「Ｒ基」又は「側鎖」は（Ｌ）配置又は（Ｓ）配置のいずれかであり得る。具体的な実施形態において、アミノ酸は（Ｌ）配置又は（Ｓ）配置である。

【0218】

「組換えタンパク質」は、当技術分野において公知の任意の技法及び方法を用いた組換え技術を用いて、即ち組換え核酸の発現を通じて作られたタンパク質である。組換えタンパク質の作製方法及び技法は当技術分野において周知である。

【0219】

「単離された」タンパク質は、例えば、所与の試料中の全タンパク質の少なくとも約５重量％、又は少なくとも約５０重量％を占める、その自然状態で通常それに付随している材料の少なくとも一部を伴わないものである。状況によっては、単離タンパク質は全タンパク質含量の５重量％～９９．９重量％を占め得ることが理解される。例えば、このタンパク質は、誘導性プロモーター又は高発現プロモーターを用いて大幅に高い濃度で作られ得、このようにしてタンパク質が増加した濃度レベルで作られる。この定義には、当技術分野において公知の多種多様な生物及び／又は宿主細胞における抗体の産生が含まれる。

【0220】

アミノ酸配列について、配列同一性及び／又は類似性は、限定はされないが、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍａｔｈ．２：４８２の局所的配列同一性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４８：４４３の配列同一性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピューター化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１２：３８７－９５によって記載されるＢｅｓｔ Ｆｉｔシーケンスプログラムであって、好ましくはデフォルト設定を使用するもの、又は目視検査によることを含め、当技術分野において公知の標準技法を用いることにより決定され得る。好ましくは、パーセント同一性は、ＦａｓｔＤＢによって以下のパラメータ：ミスマッチペナルティ１；ギャップペナルティ１；ギャップサイズペナルティ０．３３；及びジョイニングペナルティ３０に基づき計算される（“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ，”Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．１２７－１４９（１９８８），Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ）。

【0221】

有用なアルゴリズムの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、一群の関連性のある配列から漸進的ペアワイズアラインメントを用いて多重配列アラインメントを作成する。これは、アラインメントの作成に使用されたクラスタリング関係を示すツリーもプロットすることができる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ ＆ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ．３５：３５１－６０の漸進的アラインメント法の単純化を用いる；この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１－３によって記載されるものと同様である。デフォルトギャップ重み付け３．００、デフォルトギャップ長さ重み付け０．１０、及び重み付き末端ギャップを含む有用なＰＩＬＥＵＰパラメータ。

【0222】

有用なアルゴリズムの別の例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２５：３３８９－４０２；及びＫａｒｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－８７に記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムである。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２プログラムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０－８０から得られたものである。ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２は幾つかの検索パラメータを使用し、そのほとんどがデフォルト値に設定される。調整可能なパラメータは以下の値：オーバーラップ幅＝ｌ、オーバーラップ率＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝ＩＩを用いて設定される。ＨＳＰ Ｓ及びＨＳＰ Ｓ２パラメータは動的な値であり、特定の配列の組成及び目的の配列の検索が行われている特定のデータベースの組成に応じてプログラムそれ自体によって確立される。しかしながら、感度を高めるため、これらの値が調整され得る。

【0223】

更なる有用なアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２５：３３８９－４０２によって報告されるとおりのギャップ付きＢＬＡＳＴである。ギャップ付きＢＬＡＳＴは、ＢＬＯＳＵＭ－６２置換スコア；９に設定された閾値Ｔパラメータ；２ヒット法によるギャップなし伸長の開始、ｋのギャップ長に１０＋ｋのコストを課し；１６に設定されたＸｕ、及びデータベース検索段階について４０に設定され、アルゴリズムの出力段階について６７に設定されたＸｇを使用する。ギャップ付きアラインメントは約２２ビットに対応するスコアによって開始される。

【0224】

一般に、本明細書に開示されるタンパク質及びその変異体、例えば、標的抗原（ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、又はＳＴＥＡＰ１など）の変異体及び抗体可変ドメインの変異体（個々の変異体ＣＤＲを含む）の間のアミノ酸相同性、類似性、又は同一性は、本明細書に示される配列と少なくとも８０％であり、例えば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ほぼ１００％、又は１００％の相同性又は同一性である。

【0225】

同じように、本明細書に特定される抗体及び他のタンパク質の核酸配列に関する「パーセント（％）核酸配列同一性」は、抗原結合タンパク質のコード配列中のヌクレオチド残基と同一である候補配列中にあるヌクレオチド残基のパーセンテージとして定義される。具体的な方法は、デフォルトパラメータに設定した、オーバーラップ幅及びオーバーラップ率をそれぞれ１及び０．１２５に設定したＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２のＢＬＡＳＴＮモジュールを利用する。

【0226】

アミノ酸配列変異を導入する部位又は領域は予め決められているが、突然変異それ自体は予め決められたものでなくてもよい。例えば、所与の部位における突然変異のパフォーマンスを最適化するため、標的コドン又は領域でランダム突然変異誘発が行われ得、発現した抗原結合タンパク質ＣＤＲ変異体が所望の活性の最適な組み合わせに関してスクリーニングされる。既知の配列を有するＤＮＡ中の予め決められた部位に置換突然変異を作り出す技法は、例えば、ＭＩ３プライマー突然変異誘発及びＰＣＲ突然変異誘発など、周知である。

【0227】

「アルキル」又は「アルキル基」は、本明細書で使用されるとき、完全に飽和している直鎖、分枝状、又は環状炭化水素鎖を意味する。特定の実施形態において、アルキル基は１～８個の炭素原子を含有し得る（「Ｃ_１～Ｃ_８アルキル」）。特定の実施形態において、アルキル基は１～６個の炭素原子を含有し得る（「Ｃ_１～Ｃ_６アルキル」）。特定の実施形態において、アルキル基は１～３個の炭素原子を含有する。なおも他の実施形態において、アルキル基は２～３個の炭素原子を含有し、更に他の実施形態においてアルキル基は１～２個の炭素原子を含有する。

【0228】

「アルキルアルコキシ」は、本明細書で使用されるとき、アルコキシ基で置換されているアルキル基を意味する。「アルコキシ」は、本明細書で使用されるとき、上記に定義したとおりのアルキル基が酸素（「アルコキシ」）原子によって炭素主鎖に結び付いているものを指す。

【0229】

「アルキルアミノ」は、本明細書で使用されるとき、アミノ基で置換されているアルキル基を意味する。「アミノ」は、本明細書で使用されるとき、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、又は－Ｎ（アルキル）（アルキル）を指す。

【0230】

「アルキルヒドロキシ」は、本明細書で使用されるとき、アミノ基で置換されているアルキル基を意味する。「ヒドロキシ」又は「ヒドロキシル」は、本明細書で使用されるとき、－ＯＨを指す。

【0231】

「アルキレン」は、アルキル基の二価の基を指す。例えば、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－は、それぞれ、メチレン、エチレン、ｎ－プロピレン、ｎ－ブチレン、ｎ－ペンチレン、及びｎ－ヘキシレンを指す。

【0232】

「炭素環」は、本明細書で使用されるとき、芳香族（例えば、アリール）及び非芳香族（例えば、シクロアルキル）の両方の基を含む。特定の実施形態において、炭素環基は３～１０個の炭素原子を含有する（「３～１０員炭素環」）。特定の実施形態において、炭素環基は３～８個の炭素原子を含有する（「３～８員炭素環」）。特定の実施形態において、炭素環基は３～６個の炭素原子を含有する（「３～６員炭素環」）。特定の実施形態において、炭素環基は３～５個の炭素原子を含有する（「３～５員炭素環」）。

【0233】

「ハロゲン」は、任意のハロゲンの基、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、又は－Ｉを指す。

【0234】

用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、及び「ヘテロ環式」は、本明細書で使用されるとき、環に少なくとも１個のヘテロ原子を含有する単環式ヘテロ環、二環式ヘテロ環、又は三環式ヘテロ環を意味する。

【0235】

単環式ヘテロ環は、Ｏ、Ｎ、及びＳから独立に選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する３、４、５、６、７、又は８員環である。一部の実施形態において、ヘテロ環は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する３又は４員環である。一部の実施形態において、ヘテロ環は、０又は１個の二重結合と、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子とを含有する５員環である。一部の実施形態において、ヘテロ環は、０、１又は２個の二重結合と、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子とを含有する６、７、又は８員環である。単環式ヘテロ環の代表的な例としては、限定はされないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３－ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ジヒドロピラニル（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン－６－イルを含む）、１，３－ジチオラニル、１，３－ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルを含む）、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１－ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、及びトリチアニルが挙げられる。

【0236】

本開示の二環式ヘテロ環には、合計５～１２個の環原子を有するアリール基と縮合した単環式ヘテロ環、又は単環式シクロアルキルと縮合した単環式ヘテロ環、又は単環式シクロアルケニルと縮合した単環式ヘテロ環、又は単環式ヘテロ環と縮合した単環式ヘテロ環が含まれ得る。二環式ヘテロ環の例としては、限定はされないが、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、１，３－ベンゾジオキソリル、１，３－ベンゾジチオリル、２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシニル、２，３－ジヒドロ－１－ベンゾフラニル、２，３－ジヒドロ－１－ベンゾチエニル、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インドリル、及び１，２，３，４－テトラヒドロキノリニルが挙げられる。

【0237】

用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、及び「ヘテロ環式」は、ヘテロアリールを包含する。「ヘテロアリール」は、１つ以上の閉環を有する環状部分であって、環の少なくとも１つに１個以上のヘテロ原子（酸素、窒素又は硫黄）があるものを指し、ここで環の少なくとも１つは芳香族であり、１つ又は複数の環は独立に縮合及び／又は架橋され得る。例としては、限定なしに、フェニル、チオフェニル、トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、及びピラジニルが挙げられる。

【0238】

本明細書に記載されるとおり、本開示の化合物は、「任意選択で置換されている」部分を含み得る。概して、用語「置換されている」は、用語「任意選択で」が前に付くか否かに関わらず、指定される部分の１つ以上の水素が好適な置換基に置き換えられることを意味する。特に指示されない限り、「任意選択で置換されている」基は、その基の各置換可能な位置に好適な置換基を有し得、いずれかの所与の構造において２つ以上の位置が、指定の基から選択される２つ以上の置換基で置換され得るとき、置換基は、各位置で同じであるか又は異なるかのいずれでもあり得る。本開示に基づき想定される置換基の組み合わせは、好ましくは安定化合物又は化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。

【0239】

当業者は、「置換」又は「～で置換されている」又は「存在なし」に、かかる置換又は存在なしが置換される原子及び置換基の許容される原子価に従うものであり、且つその置換又は存在なしの結果、安定化合物、例えば、転位、環化、脱離等によるなどの転換を自発的に起こさない化合物が生じるという黙示的条件が含まれることを理解するであろう。本開示の目的上、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基、及び／又はそのヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載される有機化合物の任意の許容される置換基を有し得る。

【0240】

「安定」は、本明細書に開示される目的の１つ以上のためのその生成、検出並びに特定の実施形態ではその回収、精製、及び使用を可能にする条件に供されたときも実質的に化学的及び／又は物理的に変化しない化合物を指す。一部の実施形態において、安定化合物又は化学的に実現可能な化合物は、４０℃以下の温度で水分の非存在下又は他の化学反応条件下に少なくとも１週間置いたとき実質的に変化しないものである。一部の実施形態において、本明細書に開示される化合物は安定である。

【0241】

本明細書に教示されるエナンチオマーには、特定の１つ又は複数の不斉中心に実質的に単一のエナンチオマーを含む、例えば、９０％、９２％、９５％、９８％、又は９９％以上の、又は１００％に等しい単一のエナンチオマーを含む「エナンチオ純粋な」異性体が含まれ得る。「不斉中心」又は「キラル中心」は、４つの異なる置換基を含む四面体炭素原子を指す。

【0242】

本明細書に記載される化合物は、かかる化合物を構成する原子の１つ以上に非天然比率の同位体原子も含み得る。例えば、化合物は、例えば、重水素（^２Ｈ）、トリチウム（^３Ｈ）、炭素１３（^１３Ｃ）、又は炭素１４（^１４Ｃ）などの放射性同位体で放射性標識され得る。本明細書に開示される化合物の同位体変種の全ては、放射性か否かに関わらず、本開示の範囲内に包含されることが意図される。加えて、本明細書に記載される化合物の互変異性型の全ては、特許請求される本開示の範囲内にあることが意図される。

【0243】

抗体－薬物コンジュゲート
本開示の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物は、抗癌活性を有するものを含む。詳細には、本ＡＤＣ化合物は、薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）にコンジュゲートした（即ち、リンカーによって共有結合的に結び付いた）抗体又は抗原結合断片（その抗原結合断片を含む）を含み、ここで薬物部分は、抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートされていないとき、細胞傷害効果又は細胞増殖抑制効果を有する。様々な実施形態において、薬物部分は、抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートされていないとき、ＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体に結合し、及び／又はそれと相互作用する能力を有する。様々な実施形態において、薬物部分は、抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートされていないとき、インビトロ及び／又はインビボＲＮＡスプライシングを調節する能力を有する。ＲＮＡスプライシングを標的化することにより、様々な実施形態において、本明細書に開示される薬物部分及びＡＤＣは強力な抗増殖剤である。様々な実施形態において、本明細書に開示される薬物部分及びＡＤＣは、活発に分裂する細胞及び静止細胞の両方を標的化することができる。

【0244】

様々な実施形態において、本開示は、少なくとも一部には、ある種の生物学的に活性なスプライシング調節薬が、ＡＤＣに使用すると向上した特性をもたらし得るという発見に基づく。スプライシング調節薬は、単独で使用したとき、望ましいことに向上した特徴（例えば、ロバストなＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体結合、強力なＲＮＡスプライシング調節）を示し得るが、様々な実施形態において、スプライシング調節薬は、抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートすると、同じ望ましいことに向上した特徴の減少を呈し得る。従って、ヒト療法剤、例えば腫瘍学的薬剤としての使用のためのＡＤＣの開発及び生産には、所望の１つ又は複数の標的に結合し且つ単独で癌の治療に使用される薬物に結び付く能力を有する抗体を同定する以上のことが必要となり得る。抗体を薬物に連結すると、抗体及び薬物の一方又は両方の活性に大きい効果が及ぶこともあり、この効果は、選択されるリンカー及び／又は薬物の種類に応じて異なることになる。従って、一部の実施形態において、ＡＤＣの成分は、（ｉ）抗体及び薬物部分が単独で呈する１つ以上の治療特性が保持される、（ｉｉ）抗体又は抗原結合断片の特異的結合特性が維持される；（ｉｉｉ）薬物負荷量及び薬物対抗体比が最適化される；（ｉｖ）抗体又は抗原結合断片との安定した結び付きによる薬物部分の送達、例えば細胞内送達が可能である；（ｖ）標的部位に輸送又は送達されるまではインタクトなコンジュゲートとしてＡＤＣの安定性が保持される；（ｖｉ）投与前又は投与後のＡＤＣの凝集が最小限となる；（ｖｉｉ）細胞環境における切断後又は他の放出機構後に薬物部分の治療効果、例えば細胞傷害効果が実現する；（ｖｉｉｉ）抗体及び薬物部分単独と同等か又はそれより優れたインビボ抗癌治療有効性を呈する；（ｉｘ）薬物部分によるオフターゲット殺傷が最小限となる；及び／又は（ｘ）望ましい薬物動態学的特性及び薬力学特性、製剤化可能性、及び毒物学的／免疫学的プロファイルを呈するように選択される。治療的使用のための向上したＡＤＣの同定には、これらの特性の各々が必要であり得る（Ａｂ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１４：１６０５－１３）。

【0245】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、予測外にも、上記に挙げたカテゴリーの一部又は各々において有利な特性を呈する。例えば、一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＤＣコンストラクトは、意外にも、別のリンカー及び／又は薬物部分（例えば、選択的スプライシング調節薬）を含むＡＤＣと比較したとき、有利な薬物負荷量、凝集、及び／又は安定性プロファイルを呈し、及び／又は抗体結合機能、薬物活性、及び／又は向上したバイスタンダー殺傷を維持している一方、オフターゲット殺傷は減少する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣコンストラクトは、別のリンカー及び／又は薬物部分（例えば、選択的スプライシング調節薬）を使用するＡＤＣと比較したとき、優れた安定性、活性、効力、又は他の効果（インビボ又はインビトロで測定される）を実証する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣコンストラクトは、単回用量として投与したときインビボ治療有効性を呈する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣコンストラクトは、意外にも、別のリンカー及び／又は薬物部分（例えば、選択的スプライシング調節薬）を使用するＡＤＣと比較したとき、安定している。

【0246】

本開示のＡＤＣ化合物は、有効用量の細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤を癌細胞又は腫瘍組織に選択的に送達し得る。開示される本ＡＤＣは、それぞれの標的抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ１）を発現する細胞に対して強力な細胞傷害活性及び／又は細胞増殖抑制活性を有することが発見された。一部の実施形態において、ＡＤＣの細胞傷害活性及び／又は細胞増殖抑制活性は細胞の標的抗原発現に依存する。一部の実施形態において、開示される本ＡＤＣは特に、オフターゲット殺傷を最小限に抑えつつ、標的抗原を発現する癌細胞を殺傷するのに有効である。一部の実施形態において、開示される本ＡＤＣは、標的抗原を発現しない癌細胞に対しては細胞傷害効果及び／又は細胞増殖抑制効果を呈しない。

【0247】

ＨＥＲ２を発現する例示的癌としては、限定はされないが、乳癌、胃癌、膀胱癌、尿路上皮細胞癌、食道癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、及び卵巣癌が挙げられる（Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ Ｔｈｅｒ．１７：８５－９９）。

【0248】

ＣＤ１３８を発現する例示的癌としては、限定はされないが、胸腔内癌（例えば、肺癌、中皮腫）、皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌）、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭）、乳癌、泌尿生殖器癌（例えば、子宮頸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌）、血液学的悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫などの骨髄腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、ホジキンリンパ腫）、及び甲状腺癌が挙げられる（Ｓｚａｔｍａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｄｉｓ Ｍａｒｋｅｒｓ ２０１５：７９６０５２）。

【0249】

ＥＰＨＡ２を発現する例示的癌としては、乳癌、脳癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、食道癌、肺癌、前立腺癌、黒色腫、食道癌、及び胃癌が挙げられる（Ｔａｎｄｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ １５（１）：３１－５１）。

【0250】

一部の実施形態において、ＡＤＣが切断されると、抗体又は抗原結合断片及びリンカーからスプライシング調節薬が放出される。一部の実施形態において、リンカー及び／又はスプライシング調節薬は、バイスタンダー殺傷（隣接細胞の殺傷）を促進するように設計される。一部の実施形態において、リンカー及び／又はスプライシング調節薬は、細胞インターナリゼーション後の切断及び隣接細胞へのリンカー－薬物部分及び／又は薬物部分単独の拡散を通じてバイスタンダー殺傷を促進するように設計される。一部の実施形態において、リンカーは細胞インターナリゼーションを増進する。一部の実施形態において、リンカーは、細胞外環境では切断が最小限に抑えられ、それによってオフターゲット組織（例えば、非癌性組織）に対する毒性が低下する一方、標的組織へのＡＤＣ結合、及びＡＤＣの抗体又は抗原結合断片によって標的化される抗原を発現しないが、その抗原を発現する標的癌組織を取り囲む癌性組織のバイスタンダー殺傷は維持するように設計される。一部の実施形態において、薬物部分、又はＡＤＣの切断によって産生される薬物部分の異化産物は、標的細胞又は隣接細胞による取り込み（即ち、細胞透過性）を促進するように設計される。かかる薬物部分及び異化産物は、本明細書では「バイスタンダー活性」と称され得る一方、細胞透過性が低下した薬物部分又は異化産物は、「バイスタンダー不活性」と称され得る。

【0251】

一部の実施形態において、開示される本ＡＤＣは、バイスタンダー殺傷活性も実証するが、オフターゲット細胞傷害性が低い。理論により拘束されるものではないが、ＡＤＣのバイスタンダー殺傷活性は、固形腫瘍へのその透過性が限られている場合、及び／又は腫瘍細胞間での標的抗原発現が不均一な場合に特に有益であり得る。一部の実施形態において、切断可能リンカーを含むＡＤＣは、非切断可能リンカーを含むＡＤＣによる同等の治療と比べてバイスタンダー殺傷に特に有効であり、及び／又は向上したバイスタンダー殺傷活性を実証する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、薬物部分それ自体と比べて溶解度及び標的細胞透過性の向上を呈する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、薬物部分それ自体と比べて細胞傷害性の向上を呈する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、単独での薬物として評価したとき低い細胞傷害性を呈する薬物部分を使用するが、しかし、意外にも、単独での薬物として評価したとき高い細胞傷害性を有する他の薬物部分を含むＡＤＣよりも良好である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬の切断及び放出が、非切断可能リンカーを含むＡＤＣによる同等の治療と比べてＡＤＣの細胞傷害性を向上させる。他の実施形態において、スプライシング調節薬の切断及び放出は、ＡＤＣが望ましい生物学的活性を備えるために必須というわけではない。一部の実施形態において、スペーサー長さが増加した非切断可能リンカー（例えば、ＡＤＬ１２）を含むＡＤＣが、切断可能リンカー（例えば、ＡＤＬ１、ＡＤＬ５）を含むＡＤＣによる同等の治療と比べて同じ又は同程度の細胞傷害性をもたらし、及び意外にも、より短い非切断可能リンカーを含むＡＤＣによる同等の治療と比べて優れた細胞傷害性をもたらす。一部の実施形態において、カルボニル基を含まないスペーサー長さが増加した非切断可能リンカー（例えば、ＡＤＬ１２）を含むＡＤＣは、切断可能リンカー（例えば、ＡＤＬ１、ＡＤＬ５）を含むＡＤＣによる同等の治療と比べて同じ又は同程度の細胞傷害性をもたらし、及び意外にも、カルボニル基を含む同じ又は同程度のスペーサー長さを有する非切断可能リンカー（例えば、ＡＤＬ１０）を含むＡＤＣによる同等の治療と比べて優れた細胞傷害性をもたらす。一部の実施形態において、非切断可能ＭＣリンカーからカルボニル基を取り除くと（例えば、ＡＤＬ１２）、修飾されていない非切断可能ＭＣリンカー（例えば、ＡＤＬ１０）を含むＡＤＣによる同等の治療と比べて５０倍より大きい、７５倍より大きい、１００倍より大きい、１５０倍より大きい、又は２００倍より大きい細胞傷害性の増加が生じ得る。一部の実施形態において、非切断可能ＭＣリンカーからカルボニル基を取り除き（例えば、ＡＤＬ１２）、スペーサー長さを増加させると（例えば、少なくとも１つのスペーサー単位の付加）、修飾されていない非切断可能ＭＣリンカー（例えば、ＡＤＬ１０）を含むＡＤＣによる同等の治療と比べて５０倍より大きい、７５倍より大きい、１００倍より大きい、１５０倍より大きい、又は２００倍より大きい細胞傷害性の増加が生じ得る。

【0252】

本明細書には、腫瘍細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片（Ａｂ）と、スプライシング調節薬薬物部分（Ｄ）と、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカー部分（Ｌ）とを含むＡＤＣ化合物が提供される。特定の態様において、抗体又は抗原結合断片は、腫瘍関連抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ１）に高い特異性及び高い親和性で結合することが可能である。特定の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は結合時に標的細胞内、例えば細胞における分解性のコンパートメント内にインターナライズされる。様々な実施形態において、標的細胞への結合時にインターナライズし、分解を起こし、スプライシング調節薬薬物部分を放出して癌細胞を殺傷するＡＤＣが使用され得る。スプライシング調節薬薬物部分は、ＡＤＣの抗体及び／又はリンカー部分から、酵素作用、加水分解、酸化、又は任意の他の機構によって放出され得る。

【0253】

例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂ＝抗体又は抗原結合断片、Ｌ＝リンカー部分、Ｄ＝スプライシング調節薬薬物部分、及びｐ＝各抗体又は抗原結合断片当たりのスプライシング調節薬薬物部分の数）
を有する。

【0254】

特定の好ましい実施形態において、記載されるＡＤＣ及び組成物における使用のための薬物ターゲティング部分は、抗体又は抗原結合断片である。記載されるＡＤＣ及び組成物における使用のための他の例示的薬物ターゲティング部分も本明細書に提供され、記載される。一部の実施形態において、薬物ターゲティング部分は、種々の細胞結合剤及び非抗体足場のいずれか１つであり得る。一部の実施形態において、薬物ターゲティング部分は細胞結合剤である。本明細書で使用されるとき、用語「細胞結合剤」は、動物（例えば、ヒト）細胞に結合し、且つ薬物部分（例えば、本明細書に開示されるとおりのスプライシング調節薬薬物部分）を送達する能力を有する任意の薬剤を指す。この用語は、本明細書に開示される例示的抗体及び抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体並びにＦａｂ及びｓｃＦＶなどのその断片）を包含する。この用語は更に、例示的細胞結合剤、例えば、ＤＡＲＰｉｎ、デュオボディ（ｄｕｏｂｏｄｙ）、二環状ペプチド、ナノボディ、センチリン、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、受容体－Ｆｃ融合分子、Ｔ細胞受容体構造、アンドロゲン及びエストロゲンなどのステロイドホルモン、成長因子、ＥＧＦなどのコロニー刺激因子、及び他の非抗体足場を包含する。様々な実施形態において、非抗体足場は、広くは２つの構造クラス、即ちドメインサイズの化合物（約６～２０ｋＤａ）及び制約されたペプチド（約２～４ｋＤａ）に分けることができる。例示的なドメインサイズの足場としては、限定はされないが、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）、ＤＡＲＰｉｎ、ＦＮ３足場（例えば、アドネクチン及びセンチリン）、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、クニッツドメイン、プロネクチン（ｐｒｏｎｅｃｔｉｎ）、Ｏボディ（Ｏ－ｂｏｄｙ）、及び受容体－Ｆｃ融合タンパク質が挙げられ、一方、例示的な制約されたペプチドとしては、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、二環状ペプチド、及びＣｙｓノットが挙げられる。一部の実施形態において、記載されるＡＤＣ及び組成物に使用される薬物ターゲティング部分は、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）、ＤＡＲＰｉｎ、アドネクチン又はセンチリンなどのＦＮ３足場、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、クニッツドメイン、プロネクチン（ｐｒｏｎｅｃｔｉｎ）、Ｏボディ（Ｏ－ｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、二環状ペプチド、及びＣｙｓノットから選択される。一部の実施形態において、記載されるＡＤＣ及び組成物に使用される薬物ターゲティング部分は、受容体－Ｆｃ融合タンパク質、例えばＨＥＲ２－Ｆｃキメラ融合タンパク質である。非抗体足場については、例えば、Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｌｏｍｂａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ Ｔｏｄａｙ ２０（１０）：１２７１－８３にレビューされている。

【0255】

抗体
式（Ｉ）の抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）は、その範囲内に、癌細胞上の標的抗原に特異的に結合する任意の抗体又は抗原結合断片を含む。抗体又は抗原結合断片は、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）分析によって測定したとき≦１ｍＭ、≦１００ｎＭ又は≦１０ｎＭ、又は間にある任意の量の解離定数（Ｋ_Ｄ）で標的抗原に結合し得る。特定の実施形態において、Ｋ_Ｄは１ｐＭ～５００ｐＭである。一部の実施形態において、Ｋ_Ｄは５００ｐＭ～１μＭ、１μＭ～１００ｎＭ、又は１００ｍＭ～１０ｎＭである。

【0256】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は４本鎖抗体（免疫グロブリン又は完全長抗体若しくはインタクトな抗体とも称される）であり、２本の重鎖と２本の軽鎖とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、２本鎖ハーフボディ（ｈａｌｆ ｂｏｄｙ）（１本の軽鎖及び１本の重鎖）、又は免疫グロブリンの抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、標的癌抗原に結合し及び／又は免疫グロブリンの機能を提供する能力を保持している免疫グロブリンの抗原結合断片である。

【0257】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ある抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、インターナリゼーション性抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、インターナリゼーション性抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片は、細胞の表面に発現する標的癌抗原に結合し、結合時に細胞に侵入する。一部の実施形態において、ＡＤＣのスプライシング調節薬薬物部分は、標的癌抗原を発現する細胞にＡＤＣが侵入してそこに存在するようになった後（即ち、ＡＤＣがインターナライズされ終えた後）、例えば、切断によるか、抗体又は抗原結合断片の分解によるか、又は任意の他の好適な放出機構により、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片から放出される。

【0258】

本開示の例示的抗体のアミノ酸配列を表２～表４に示す。

【0259】

【表1】

【0260】

【表2】

【0261】

【表3】

【0262】

【表4】

【0263】

【表5】

【0264】

【表6】

【0265】

【表7】

【0266】

【表8】

【0267】

【表9】

【0268】

【表10】

【0269】

【表11】

【0270】

【表12】

【0271】

【表13】

【0272】

【表14】

【0273】

【表15】

【0274】

【表16】

【0275】

【表17】

【0276】

【表18】

【0277】

【表19】

【0278】

【表20】

【0279】

【表21】

【0280】

【表22】

【0281】

【表23】

【0282】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、上記の表に挙げられる任意の一組の重鎖及び軽鎖可変ドメインを含み得るか、又は重鎖及び軽鎖の組からの一組の６つのＣＤＲ配列を、例えば、それらの６つのＣＤＲを選択のヒトドナー抗体フレームワークに移植することにより含み得る。様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、ＡＤＣがその標的癌抗原に（例えば、１×１０^－８Ｍ未満のＫ_Ｄで）結合する能力を保持し、且つ本明細書に開示されるＡＤＣの１つ以上の機能特性（例えば、インターナライズする能力、ＲＮＡスプライシングを調節する能力、細胞成長を阻害する能力等）を保持している限りは、上記の表に挙げられる配列と相同なアミノ酸配列を含み得る。

【0283】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン又はその断片を更に含む。例えば、ＡＤＣは、ヒトＩｇＧ重鎖定常ドメイン（ＩｇＧ１など）及びヒトカッパ又はラムダ軽鎖定常ドメインを含み得る。様々な実施形態において、記載されるＡＤＣの抗体又は抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンＧサブタイプ１（ＩｇＧ１）重鎖定常ドメインをヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインと共に含む。

【0284】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣの標的癌抗原はヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）である。

【0285】

様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片は、以下のとおりの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ：Ｋａｂａｔ付番方式によって定義したとき、配列番号１からなる重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２からなる重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、配列番号３からなる重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；配列番号４からなる軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号５からなる軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６からなる軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。

【0286】

様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１９の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖可変領域アミノ酸配列及び／又は配列番号２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する。

【0287】

様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン及びヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインを含む。

【0288】

様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１９の重鎖アミノ酸配列又は配列番号１９と少なくとも９５％同一の配列、及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号２０と少なくとも９５％同一の配列を含む。詳細な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１９の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する。様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブ、又はその抗原結合断片である。

【0289】

様々な実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片はトラスツズマブの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含み、又はここでＣＤＲは、ＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＨＣＤＲ２（配列番号２）、ＨＣＤＲ３（配列番号３）；ＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＬＣＤＲ２（配列番号５）、及びＬＣＤＲ３（配列番号６）のアミノ酸付加、欠失又は置換を１、２、３、４、５又は６個以下のみ含む。

【0290】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣの標的癌抗原はヒトシンデカン－１（ＣＤ１３８）である。

【0291】

様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片は、以下のとおりの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ：Ｋａｂａｔ付番方式によって定義したとき、配列番号７からなる重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号８からなる重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、配列番号９からなる重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；配列番号１０からなる軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１からなる軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２からなる軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。

【0292】

様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖可変領域アミノ酸配列及び／又は配列番号２２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する。

【0293】

様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体は、マウスＩｇＧ２ａ重鎖定常ドメイン及びマウスＩｇカッパ軽鎖定常ドメインを含む。様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体は、ヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常ドメイン及びヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインを含む。

【0294】

様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体は、配列番号２１の重鎖アミノ酸配列又は配列番号２１と少なくとも９５％同一の配列、及び配列番号２２の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号２２と少なくとも９５％同一の配列を含む。詳細な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体は、配列番号２１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体は、配列番号２１と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する。様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体はＢ－Ｂ４、又はその抗原結合断片である。

【0295】

様々な実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片はＢ－Ｂ４の３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含み、又はここでＣＤＲは、ＨＣＤＲ１（配列番号７）、ＨＣＤＲ２（配列番号８）、ＨＣＤＲ３（配列番号９）；ＬＣＤＲ１（配列番号１０）、ＬＣＤＲ２（配列番号１１）、及びＬＣＤＲ３（配列番号１２）のアミノ酸付加、欠失又は置換を１、２、３、４、５又は６個以下のみ含む。

【0296】

様々な他の実施形態において、ＡＤＣの標的癌抗原はヒトエフリンＡ型受容体２（ＥＰＨＡ２）である。

【0297】

様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片は、以下のとおりの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ：Ｋａｂａｔ付番方式によって定義したとき、配列番号１３からなる重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４からなる重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、配列番号１５からなる重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；配列番号１６からなる軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７からなる軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８からなる軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。

【0298】

様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２３の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖可変領域アミノ酸配列及び／又は配列番号２４と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する。

【0299】

様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン及びヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインを含む。

【0300】

様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は、配列番号２３の重鎖アミノ酸配列又は配列番号２３と少なくとも９５％同一の配列、及び配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列又は配列番号２４と少なくとも９５％同一の配列を含む。詳細な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は、配列番号２３の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４の軽鎖アミノ酸配列、又は開示される配列と少なくとも９５％同一の配列を含む。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は、配列番号２３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２４と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する。一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は、配列番号２３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；及び配列番号２４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体は１Ｃ１、又はその抗原結合断片である。

【0301】

様々な実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片は１Ｃ１の３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含み、又はここでＣＤＲは、ＨＣＤＲ１（配列番号１３）、ＨＣＤＲ２（配列番号１４）、ＨＣＤＲ３（配列番号１５）；ＬＣＤＲ１（配列番号１６）、ＬＣＤＲ２（配列番号１７）、及びＬＣＤＲ３（配列番号１８）のアミノ酸付加、欠失又は置換を１、２、３、４、５又は６個以下のみ含む。

【0302】

様々な実施形態において、アミノ酸置換は単一残基のものである。挿入は通常、約１～約２０アミノ酸残基程度であり得るが、生物学的機能（例えば、標的抗原への結合）が保持されている限りは、著しく大きい挿入が許容され得る。欠失は通常、約１～約２０アミノ酸残基の範囲であるが、場合により、欠失は、はるかに大きいことができる。置換、欠失、挿入又はこれらの任意の組み合わせを用いることにより、最終的な誘導体又は変異体に達し得る。概して、これらの変更は、分子の変化、特に抗原結合タンパク質の免疫原性及び特異性の変化を最小限に抑えるため、少数のアミノ酸に対して行われる。しかしながら、特定の状況では、より大きい変更が許容され得る。概して、表６として示す以下のチャートに従い保存的置換が行われる。

【0303】

【表24】

【0304】

表６に示されるものよりも保存性の低い置換を選択することにより、機能又は免疫学的アイデンティティの実質的な変更が行われる。例えば、変化領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えばαヘリックス又はβシート構造；標的部位における分子の電荷又は疎水性；又は側鎖のバルクに一層重大な影響を及ぼす置換が行われ得る。一般にポリペプチドの特性に最も大きい変更を生じさせ得る置換は、（ａ）親水性残基、例えばセリル又はスレオニルが、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリル又はアラニルの代わりに（又はそれによって）置換されるもの；（ｂ）システイン又はプロリンが任意の他の残基の代わりに（又はそれによって）置換されるもの；（ｃ）電気陽性側鎖を有する残基、例えば、リシル、アルギニル、又はヒスチジルが、電気陰性残基、例えば、グルタミル又はアスパルチルの代わりに（又はそれによって）置換されるもの；又は（ｄ）バルク性側鎖、例えばフェニルアラニンを有する残基が、側鎖を有しないもの、例えばグリシンの代わりに（又はそれによって）置換されるものである。

【0305】

ＡＤＣに変異体抗体配列が使用される様々な実施形態において、変異体は典型的には同じ定性的生物学的活性を呈し、同じ免疫応答を誘発することになるが、変異体は、必要に応じて抗原結合タンパク質の特徴を改変するようにも選択され得る。代わりに、変異体は、抗原結合タンパク質の生物学的活性が変化するように設計され得る。例えば、グリコシル化部位を変化させるか又は取り除き得る。

【0306】

癌細胞を標的化するため、本明細書に使用されるＡＤＣと共に様々な抗体が使用され得る。以下に示すとおり、本明細書に開示されるＡＤＣのリンカー－ペイロードは、意外にも、種々の腫瘍抗原標的化抗体と共に有効である。腫瘍細胞に発現するが健常細胞には発現しない、又は健常細胞と比べて腫瘍細胞で高度に発現する好適な抗原は、それらに対する抗体と同じく、当技術分野において公知である。これらの抗体は、本明細書に開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードと共に使用され得る。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２を標的化し、ＨＥＲ２標的化抗体又は抗原結合断片はトラスツズマブである。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８を標的化し、ＣＤ１３８標的化抗体又は抗原結合断片はＢ－Ｂ４である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２を標的化し、ＥＰＨＡ２標的化抗体又は抗原結合断片は１Ｃ１である。一部の実施形態において、開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードは、意外にも幾つかの異なる腫瘍標的化抗体と共に有効であるが、トラスツズマブなどのＨＥＲ２標的化抗体、Ｂ－Ｂ４などのＣＤ１３８標的化抗体、及び１Ｃ１などのＥＰＨＡ２標的化抗体が、特に向上した薬物：抗体比、凝集レベル、安定性（即ち、インビトロ及びインビボ安定性）、腫瘍標的化（即ち、細胞傷害性、効力）、及び／又は治療有効性をもたらした。治療有効性の向上はインビトロ又はインビボで測定することができ、腫瘍成長速度の低下及び／又は腫瘍容積の減少を含み得る。

【0307】

特定の実施形態では、同じ標的に対する別の抗体又は異なる抗原標的に対する抗体が使用され、上記に記載される有利な機能特性（例えば、安定性の向上、腫瘍標的化の向上、治療有効性の向上等）の少なくとも一部をもたらす。一部の実施形態では、開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードを別のＨＥＲ２標的化、ＣＤ１３８標的化、又はＥＰＨＡ２標的化抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートしたとき、これらの有利な機能特性の一部又は全てが観察される。一部の他の実施形態では、開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードをＨＥＲ２標的化抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートしたとき、これらの有利な機能特性の一部又は全てが観察される。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２を標的化する。一部の実施形態において、ＨＥＲ２標的化抗体又は抗原結合断片はトラスツズマブである。一部の他の実施形態において、開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードをＣＤ１３８標的化抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートしたとき、これらの有利な機能特性の一部又は全てが観察される。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８を標的化する。一部の実施形態において、ＣＤ１３８標的化抗体又は抗原結合断片はＢ－Ｂ４である。一部の他の実施形態において、開示されるリンカー及びスプライシング調節薬ペイロードをＥＰＨＡ２標的化抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートしたとき、これらの有利な機能特性の一部又は全てが観察される。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２を標的化する。一部の実施形態において、ＥＰＨＡ２標的化抗体又は抗原結合断片は１Ｃ１である。

【0308】

リンカー
様々な実施形態において、ＡＤＣのリンカーは、治療上有効であるのに十分に細胞外で安定している。一部の実施形態において、リンカーは細胞の外部で安定しており、そのためＡＤＣは細胞外条件に存在するとき（例えば、細胞への輸送又は送達前は）インタクトなままである。ＡＤＣに関連して使用される用語「インタクト」は、抗体又は抗原結合断片が薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）に結び付いたままであることを意味する。本明細書で使用されるとき、「安定」は、リンカー又はリンカーを含むＡＤＣに関連して、ＡＤＣが細胞外条件下に存在するときＡＤＣの試料中にあるリンカーのうち、切断される（又は全ＡＤＣの場合、他の点でインタクトでない）ものが２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約３％以下、又は約１％以下（又は間にある任意のパーセンテージ）であることを意味する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー及び／又はＡＤＣは、意外にも、別のリンカー及び／又は別のリンカー及び／又はスプライシング調節薬ペイロードを有するＡＤＣと比較して安定している。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、約４８時間超、６０時間超、約７２時間超、約８４時間超、又は約９６時間超インタクトなままであることができる。

【0309】

リンカーが細胞外で安定しているかどうかは、例えば、ＡＤＣを血漿中に所定の時間（例えば、２、４、６、８、１６、２４、４８、又は７２時間）にわたって含め、次に血漿中に存在する遊離薬物部分の量を定量化することにより決定し得る。安定性は、ＡＤＣが標的腫瘍細胞に局在化し、薬物部分の早過ぎる放出（これは、正常組織及び腫瘍組織の両方が無差別に損傷することにより、ＡＤＣの治療指数が低下する可能性がある）を防止するのに十分な時間を与え得る。一部の実施形態において、リンカーは標的細胞の外部では安定しており、細胞の内部に入ると、ＡＤＣから薬物部分を放出し、薬物がその標的に（例えば、ＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体に）結合できるようになる。従って、有効なリンカーは、（ｉ）抗体又は抗原結合断片の特異的結合特性を維持しており；（ｉｉ）抗体又は抗原結合断片との安定した結び付きによる薬物部分の送達、例えば細胞内送達を可能にし；（ｉｉｉ）ＡＤＣがその標的部位に輸送又は送達され終えるまで、安定したまま及びインタクトなままであり；及び（ｉｖ）切断後又は別の放出機構後に薬物部分の治療効果、例えば細胞傷害効果を実現するものということになる。

【0310】

リンカーは、ＡＤＣの物理化学的特性に影響し得る。多くの細胞傷害剤が本質的に疎水性であることに伴い、それを更なる疎水性部分を持つ抗体に連結すると、凝集につながり得る。ＡＤＣ凝集体は不溶性であり、多くの場合に抗体上に実現可能な薬物負荷量を制限し、これはＡＤＣの効力に悪影響を及ぼし得る。生物学的製剤のタンパク質凝集体は、一般に、免疫原性の増加とも関係付けられている。以下に示すとおり、本明細書に開示されるリンカーは、凝集レベルが低い、且つ望ましい薬物負荷量レベルのＡＤＣをもたらす。

【0311】

リンカーは、「切断可能」又は「非切断可能」であり得る（Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｓｔｕｍｐ（２０１０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２１：５－１３）。切断可能リンカーは、特定の環境因子に供されたとき、例えば標的細胞内にインターナライズされたとき薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）を放出するように設計され、一方、非切断可能リンカーは、概して抗体又は抗原結合断片それ自体の分解に頼る。

【0312】

一部の実施形態において、リンカーは非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＣのスプライシング調節薬薬物部分は抗体又は抗原結合断片の分解によって放出される。非切断可能リンカーは、標的細胞によるインターナリゼーション及びその内部での分解を受けても、抗体及び薬物の少なくとも１つのアミノ酸と共有結合的に会合したままの傾向がある。数多くの例示的非切断可能リンカーが本明細書に記載され、他にも当技術分野では公知である。例示的非切断可能リンカーは、チオエーテル、シクロヘキシル、Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、又はＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、１個以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分、例えば、１、２、３、４、５、又は６個のＰＥＧ部分、又は１個以上のアルキル部分を含み得る。

【0313】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能リンカーである。切断可能リンカーとは、切断可能部分を含む任意のリンカーを指す。本明細書で使用されるとき、用語「切断可能部分」は、切断されることのできる任意の化学結合を指す。好適な切断可能化学結合は当技術分野において周知であり、限定はされないが、酸不安定性結合、プロテアーゼ／ペプチダーゼ不安定性結合、光不安定性結合、ジスルフィド結合、及びエステラーゼ不安定性結合が挙げられる。切断可能部分を含むリンカーは、リンカーの特定の部位における切断により、ＡＤＣからのスプライシング調節薬薬物部分の放出を可能にし得る。

【0314】

一部の実施形態において、リンカーは細胞内条件下で切断可能であり、従って細胞内環境ではリンカーの切断によることで十分に抗体又は抗原結合断片からスプライシング調節薬薬物部分が放出されて薬物が活性化し、及び／又は薬物が治療上有効になる。一部の実施形態において、スプライシング調節薬薬物部分は、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片に特異的な抗原を発現する細胞内にＡＤＣが入るまでは抗体又は抗原結合断片から切断されず、細胞に入り次第、スプライシング調節薬薬物部分は抗体又は抗原結合断片から切断される。一部の実施形態において、リンカーは、切断時にリンカー又は抗体若しくは抗原結合断片のいかなる一部分もスプライシング調節薬薬物部分に結合したまま残ることのないような位置にある切断可能部分を含む。例示的切断可能リンカーとしては、酸不安定性リンカー、プロテアーゼ／ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチル含有、ジスルフィド含有、又はスルホンアミド含有リンカーが挙げられる。

【0315】

一部の実施形態において、リンカーはｐＨ感受性リンカーであり、特定のｐＨ値で加水分解に対する感受性がある。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは酸性条件下で切断可能である。この切断戦略は、概して、エンドソーム（ｐＨ約５～６）及びリソソーム（ｐＨ約４．８）の細胞内コンパートメントのｐＨがサイトゾル（ｐＨ約７．４）と比較したとき低いことを利用して、ヒドラゾンなど、リンカー中の酸不安定性基の加水分解を引き起こすものである（Ｊａｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ３２：３５２６－４０）。一部の実施形態において、リンカーは酸不安定性及び／又は加水分解性リンカーである。例えば、リソソーム内で加水分解性であり、且つ酸不安定性基（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ－アコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を含有する酸不安定性リンカーを使用することができる。例えば、米国特許第５，１２２，３６８号明細書；同第５，８２４，８０５号明細書；同第５，６２２，９２９号明細書；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ（１９９９）Ｐｈａｒｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３－６１を参照されたい。かかるリンカーは、血中にあるものなど、中性ｐＨ条件下で比較的安定しているが、リソソームの近似的ｐＨであるｐＨ５．５又は５．０を下回ると不安定である。特定の実施形態において、加水分解性リンカーはチオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して療法剤に結び付いたチオエーテルなど）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号明細書を参照されたい）。

【0316】

一部の実施形態において、リンカーは還元条件下で切断可能である。一部の実施形態において、リンカーは、グルタチオン又はジチオスレイトールなどの還元剤の存在下で切断可能である。一部の実施形態において、リンカーは切断可能なジスルフィドリンカー又は切断可能なスルホンアミドリンカーである。

【0317】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なジスルフィドリンカーである。種々のジスルフィドリンカーが、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチレート）及びＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢとＳＭＰＴを使用して形成することのできるものを含め、当技術分野において公知である。例えば、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：５９２４－３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７）を参照されたい。また、米国特許第４，８８０，９３５号明細書も参照されたい。ジスルフィドリンカーは、典型的には、そのジスルフィド結合の切断を促進し得る細胞内チオールが多量にあることを利用して用いられる。最も多量にある細胞内チオール、還元型グルタチオンの細胞内濃度は概して１～１０ｎＭの範囲であり、これは血中に約５μＭで最も多量にある低分子チオール（即ち、システイン）の約１，０００倍の高さである（Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ（Ｇ．Ｌ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１３））。タンパク質ジスルフィドイソメラーゼファミリーの細胞内酵素もジスルフィドリンカーの細胞内切断に寄与し得る。本明細書で使用されるとき、切断可能なジスルフィドリンカーとは、切断可能なジスルフィド部分を含む任意のリンカーを指す。用語「切断可能なジスルフィド部分」は、例えばチオール又は酵素によって切断及び／又は還元されることのできるジスルフィド結合を指す。

【0318】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なスルホンアミドリンカーである。本明細書で使用されるとき、切断可能なスルホンアミドリンカーは、切断可能なスルホンアミド部分を含む任意のリンカーを指す。用語「切断可能なスルホンアミド部分」は、スルホンアミド基、即ちアミン基につながっているスルホニル基を指し、ここでは硫黄－窒素結合が切断されることができる。

【0319】

一部の実施形態において、リンカーは、分岐した多官能性リンカー部分を介して２つ以上の薬物部分を抗体又は抗原結合断片に共有結合的に結び付けるための樹状型リンカーであり得る。例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．１２：２２１３－５；Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．１１：１７６１－８を参照されたい。樹状リンカーは薬物対抗体のモル比、即ち薬物負荷量を増加させることができ、これはＡＤＣの効力に関係する。従って、抗体又は抗原結合断片が１つの反応性システインチオール基のみを担持する場合、例えば、樹状リンカーによって多数のスプライシング調節薬薬物部分を結び付け得る。一部の実施形態において、リンカー部分又はリンカー－薬物部分は、還元型ジスルフィド架橋化学又はリジン限定利用技術によって抗体又は抗原結合断片に結び付け得る。例えば、国際公開第２０１３／１７３３９１号パンフレット及び同第２０１３／１７３３９３号パンフレットを参照されたい。

【0320】

一部の実施形態において、リンカーは、細胞内環境に（例えば、リソソーム又はエンドソーム又はカベオラの中に）存在する切断剤、例えば酵素によって切断可能である。リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又は限定はされないがリソソーム若しくはエンドソームプロテアーゼを含めたプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチドリンカーであり得る。

【0321】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なペプチドリンカーである。本明細書で使用されるとき、切断可能なペプチドリンカーとは、切断可能なペプチド部分を含む任意のリンカーを指す。用語「切断可能なペプチド部分」は、細胞内環境に存在する薬剤によって切断されることのできる任意の化学結合連結アミノ酸（天然又は合成アミノ酸誘導体）を指す。例えば、リンカーは、カテプシン、例えばカテプシンＢなどのペプチダーゼによって切断可能なバリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）配列、又はバリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）配列を含み得る。一部の実施形態において、リンカーはグルタミン酸－バリン－シトルリン（Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ）配列を含み得る。一部の実施形態において、リンカーは酵素切断可能なリンカーであり、リンカー中の切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はリソソーム酵素、例えばカテプシンによって切断可能である。一部の実施形態において、リンカーはカテプシン切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカー中の切断可能なペプチド部分は、カテプシンＢ、Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｏ、Ｓ、Ｖ、Ｘ、又はＷなど、リソソームシステインカテプシンによって切断可能である。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はカテプシンＢによって切断可能である。カテプシンＢによって切断され得る例示的ジペプチドは、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）である（Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１３：８５５－６９）。

【0322】

一部の実施形態において、リンカー又はリンカー中の切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はプロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、従って、１つ以上のリソソーム酵素など、１つ以上の細胞内プロテアーゼへの曝露時にＡＤＣからのスプライシング調節薬薬物部分の放出を促進する（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８－８４；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ（１９９９）Ｐｈａｒｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３）。例示的アミノ酸単位としては、限定はされないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが挙げられる。例示的ジペプチドとしては、限定はされないが、バリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－アスパラギン（Ａｌａ－Ａｓｎ）、アラニン－フェニルアラニン（Ａｌａ－Ｐｈｅ）、フェニルアラニン－リジン（Ｐｈｅ－Ｌｙｓ）、アラニン－リジン（Ａｌａ－Ｌｙｓ）、アラニン－バリン（Ａｌａ－Ｖａｌ）、バリン－リジン（Ｖａｌ－Ｌｙｓ）、リジン－リジン（Ｌｙｓ－Ｌｙｓ）、フェニルアラニン－シトルリン（Ｐｈｅ－Ｃｉｔ）、ロイシン－シトルリン（Ｌｅｕ－Ｃｉｔ）、イソロイシン－シトルリン（Ｉｌｅ－Ｃｉｔ）、トリプトファン－シトルリン（Ｔｒｐ－Ｃｉｔ）、及びフェニルアラニン－アラニン（Ｐｈｅ－Ａｌａ）が挙げられる。例示的トリペプチドとしては、限定はされないが、アラニン－アラニン－アスパラギン（Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ）、グリシン－バリン－シトルリン（Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、グリシン－グリシン－グリシン（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）、フェニルアラニン－フェニルアラニン－リジン（Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ）、グルタミン酸－バリン－シトルリン（Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ）（例えば、Ａｎａｍｉ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｎａｔ Ｃｏｍｍ．９：２５１２（これは、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む例示的リンカーに関して参照により本明細書に援用される）を参照されたい）、及びグリシン－フェニルアラニン－リジン（Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ）が挙げられる。他の例示的アミノ酸単位としては、限定はされないが、例えば米国特許第６，２１４，３４５号明細書に記載されるとおりの、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号３４）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３５）、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号３６）、Ｐｈｅ－Ｎ^９－トシル－Ａｒｇ、及びＰｈｅ－Ｎ^９－ニトロ－Ａｒｇが挙げられる。一部の実施形態において、リンカー中のアミノ酸単位はＶａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、リンカー中のアミノ酸単位はＶａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカー中のアミノ酸単位はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。アミノ酸単位は、天然に存在するアミノ酸残基及び／又は微量アミノ酸及び／又は天然に存在しないアミノ酸類似体、例えばシトルリンなどを含み得る。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、リソソームプロテアーゼ、例えばカテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、又はＳなど、又はプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断向けに設計し、最適化することができる。

【0323】

一部の実施形態において、リンカーは切断可能なβ－グルクロニドリンカーである。本明細書で使用されるとき、切断可能なβ－グルクロニドリンカーとは、切断可能なβ－グルクロニド部分を含む任意のリンカーを指す。例示的な切断可能なβ－グルクロニドリンカーは、構造：

【化52】

を含む。

【0324】

用語「切断可能なβ－グルクロニド部分」は、β－グルクロニダーゼ活性を有する薬剤によって切断されることのできるグリコシド結合を指す。一部の実施形態において、リンカーは、β－グルクロニダーゼによって切断されることのできるグリコシド結合を含む。β－グルクロニダーゼは、β配置を有するグルクロニドのグリコシド結合の加水分解を触媒するＵＤＰ－グルクロノシルトランスフェラーゼである。

【0325】

一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、リンカー中に、酵素によって切断可能である切断可能なβ－グルクロニド部分を含む。一部の実施形態において、リンカー中の切断可能なβ－グルクロニド部分は、リソソーム酵素、例えばβ－グルクロニダーゼによって切断可能である。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニダーゼ切断可能リンカーである。一部の実施形態において、リンカー中の切断可能なβ－グルクロニド部分は、ＡＤＣのインターナリゼーション後にβ－グルクロニダーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって細胞環境内でのＡＤＣからの薬物部分の放出を促進する。

【0326】

一部の実施形態において、本明細書に開示される任意のＡＤＣにおけるリンカーは、抗体又は抗原結合断片を薬物部分（例えば、スプライシング調節薬薬物部分）につなぎ合わせる少なくとも１つのスペーサー単位を含み得る。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片と切断可能部分との間のスペーサー単位は、存在する場合、リンカー中の切断部位（例えば、切断可能なペプチド部分）を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。一部の実施形態において、薬物部分と切断可能部分との間のスペーサー単位は、存在する場合、リンカー中の切断部位（例えば、切断可能なペプチド部分）を薬物部分につなぎ合わせる。一部の実施形態において、切断部位は存在せず、スペーサー単位が抗体又は抗原結合断片を薬物部分に連結するために使用される。

【0327】

一部の実施形態において、リンカー、及び／又はリンカー中のスペーサー単位は実質的に親水性である。親水性リンカーを使用すると、薬物が抵抗性癌細胞から多剤耐性（ＭＤＲ）又は機能的に類似した輸送体によって送り出され得る程度を低減し得る。一部の実施形態において、親水性リンカーは、１個以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分、例えば、１、２、３、４、５、又は６個のＰＥＧ部分を含み得る。一部の実施形態において、リンカーは２個のＰＥＧ部分を含む。

【0328】

一部の実施形態において、リンカー中のスペーサー単位は１個以上のＰＥＧ部分を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は１個以上の－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、ｍは１～１０の整数である（即ち、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり得る）。一部の実施形態において、ｍは、１～１０；２～８；２～６；２～５；２～４；又は２～３の範囲である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の実施形態において、スペーサー単位は、（ＰＥＧ）_２、（ＰＥＧ）_３、（ＰＥＧ）_４、（ＰＥＧ）_５、（ＰＥＧ）_６、（ＰＥＧ）_７、（ＰＥＧ）_８、（ＰＥＧ）_９、又は（ＰＥＧ）_１０を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は（ＰＥＧ）_２を含む。

【0329】

一部の実施形態において、リンカー中のスペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は１個以上の－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、ｎは１～１０の整数である（即ち、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり得る）。一部の実施形態において、ｎは、１～１０；２～８；２～６；２～５；２～４；又は２～３の範囲である。一部の実施形態において、ｎは２である。一部の実施形態において、ｎは５である。一部の実施形態において、ｎは６である。一部の実施形態において、スペーサー単位は、（ＣＨ_２）_２、（ＣＨ_２）_３、（ＣＨ_２）_４、（ＣＨ_２）_５、（ＣＨ_２）_６、（ＣＨ_２）_７、（ＣＨ_２）_８、（ＣＨ_２）_９、又は（ＣＨ_２）_１０を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は（ＣＨ_２）_２（「Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は（ＣＨ_２）_６（「Ｈｅｘ」）を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２（「Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔ」）を含む。

【0330】

スペーサー単位は、例えば抗体又は抗原結合断片を薬物部分に直接又は間接的に連結するために用いられ得る。一部の実施形態において、スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をスプライシング調節薬薬物部分に直接連結する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片とスプライシング調節薬薬物部分とは、１個以上のＰＥＧ部分（例えば、（ＰＥＧ）_２）、又は１個以上のアルキル部分（例えば、（ＣＨ_２）_２、（ＣＨ_２）_６、又は（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２）を含むスペーサー単位を介して結び付けられる。一部の実施形態において、スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をスプライシング調節薬薬物部分に間接的に連結する。一部の実施形態において、スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をスプライシング調節薬薬物部分に、切断可能部分（例えば、切断可能なペプチド又は切断可能なβ－グルクロニド）及び／又はスペーサー単位を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるための結び付ける部分、例えばマレイミド部分を通じて間接的に連結する。

【0331】

スペーサー単位は、様々な実施形態において、マレイミド（Ｍａｌ）部分を介して抗体又は抗原結合断片（即ち、抗体又は抗原結合断片）に結び付く。

【0332】

Ｍａｌを介して抗体又は抗原結合断片に結び付くスペーサー単位は、本明細書では「Ｍａｌ－スペーサー単位」と称される。用語「Ｍａｌ」又は「マレイミド部分」は、本明細書で使用されるとき、マレイミド基を含有し、且つスルフヒドリル基、例えば抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基のスルフヒドリル基との反応性を有する化合物を意味する。スルフヒドリル基（チオール類）との反応性を有する他の官能基としては、限定はされないが、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片上のシステイン残基との反応性を有する。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はシステイン残基を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はＰＥＧ部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はアルキル部分を含む。

【0333】

特定の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位と切断可能なペプチド部分とを含む。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位とＶａｌ－Ｃｉｔとを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位とＶａｌ－Ａｌａとを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位とＶａｌ－Ｃｉｔとを含み、ここでＭａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位とＶａｌ－Ａｌａとを含み、ここでＭａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位と切断可能なβ－グルクロニド部分とを含む。

【0334】

一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－スペーサー単位を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：ＭＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－（ＣＨ_２）_６（「Ｍａｌ－Ｈｅｘ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯを含む。

【0335】

様々な実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片を切断可能なペプチド部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－ペプチドを含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－スペーサー単位－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。

【0336】

一部の実施形態において、リンカーは構造：Ｍａｌ－スペーサー単位－Ｖａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーは構造：ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａを含む。

【0337】

様々な実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片を切断可能なβ－グルクロニド部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－β－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニドを含む。

【0338】

様々な実施形態において、リンカーの切断可能部分はスプライシング調節薬薬物部分に直接つなぎ合わされる。他の実施形態では、スペーサー単位を使用してリンカーの切断可能部分がスプライシング調節薬薬物部分に結び付けられる。様々な実施形態において、スプライシング調節薬はリンカーの切断可能部分にスペーサー単位によって結び付けられる。

【0339】

スペーサー単位は「自己犠牲性」又は「非自己犠牲性」であり得る。「非自己犠牲性」スペーサー単位は、リンカーの切断を受けてもスペーサー単位の一部又は全てがスプライシング調節薬薬物部分に結合したまま残るものである。非自己犠牲性スペーサー単位の例としては、限定はされないが、グリシンスペーサー単位及びグリシン－グリシンスペーサー単位が挙げられる。非自己犠牲性スペーサー単位は、時間が経つと最終的には分解し得るが、細胞条件下においても、連結した天然薬物部分全体を直ちに放出することはない。「自己犠牲性」スペーサー単位は細胞内条件下で天然薬物部分の放出を可能にする。「天然薬物」又は「天然薬物部分」は、スペーサー単位の切断／分解後にスペーサー単位の一部又は他の化学修飾が残らないものである。

【0340】

自己犠牲化学は当技術分野において公知であり、開示されるＡＤＣのために容易に選択することができる。様々な実施形態において、リンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬薬物部分に結び付けるスペーサー単位は自己犠牲性であり、細胞内条件下で切断可能部分の切断と同時又はその直前／直後に自己犠牲を起こす。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられ、この切断可能部分はＶａｌ－Ｃｉｔを含み、マレイミドカプロイル（ＭＣ）が切断可能部分を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられ、この切断可能部分はＶａｌ－Ａｌａを含み、マレイミドカプロイル（ＭＣ）が切断可能部分を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられ、この切断可能部分はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含み、マレイミドカプロイル（ＭＣ）が切断可能部分を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は、ｐＡＢＣ又はｐＡＢ自己犠牲性スペーサー単位及びＶａｌ－Ｃｉｔ切断可能部分につなぎ合わされたリンカー中のＭａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。特定の他の実施形態において、スプライシング調節薬は、ｐＡＢＣ又はｐＡＢ自己犠牲性スペーサー単位及びＶａｌ－Ａｌａ切断可能部分につなぎ合わされたリンカー中のＭａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。特定の他の実施形態において、スプライシング調節薬は、ｐＡＢＣ又はｐＡＢ自己犠牲性スペーサー単位及びＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ切断可能部分につなぎ合わされたリンカー中のＭａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）を介して抗体又は抗原結合断片につなぎ合わされる。

【0341】

特定の実施形態において、リンカー中の自己犠牲性スペーサー単位はｐ－アミノベンジル単位を含む。一部の実施形態において、ｐ－アミノベンジルアルコール（ｐＡＢＯＨ）はアミド結合を介してアミノ酸単位又はリンカー中の他の切断可能部分に結び付けられ、ｐＡＢＯＨと薬物部分との間にカルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、又は炭酸塩が作られる（Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔｅｎｔｓ １５：１０８７－１０３）。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位はｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）であるか、又はそれを含む。理論により拘束されるものではないが、ｐＡＢＣの自己犠牲には自発的な１，６－脱離反応が関わるものと思われる（Ｊａｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．３２：３５２６－４０）。

【0342】

様々な実施形態において、開示されるＡＤＣに使用されるｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）の構造は、以下に示される。

【化53】

【0343】

様々な実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位はリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位はｐＡＢＣである。一部の実施形態において、ｐＡＢＣはリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、ｐＡＢＣは切断可能部分の切断時に自己犠牲を起こし、スプライシング調節薬がＡＤＣからその天然の活性形態で放出される。

【0344】

一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0345】

一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0346】

一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0347】

一部の実施形態において、ｐＡＢＣはリンカー中の切断可能なペプチド部分の切断時に自己犠牲を起こす。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、リンカーはアミノ酸単位－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ｃｉｔである。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ａｌａである。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔである。一部の実施形態において、リンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎである。一部の実施形態において、リンカーはＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。

【0348】

一部の実施形態において、ｐＡＢＣはリンカー中の切断可能なβ－グルクロニド部分の切断時に自己犠牲を起こす。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニド－ｐＡＢＣを含む。

【0349】

特定の実施形態において、リンカー中の自己犠牲性スペーサー単位はｐ－アミノベンジル単位を含む。一部の実施形態において、リンカー中の自己犠牲性スペーサー単位はｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）を含む。一部の実施形態において、ｐＡＢの自己犠牲には自発的１，６－脱離反応が関わる。

【0350】

様々な実施形態において、開示されるＡＤＣに使用されるｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）の構造は、以下に示される。

【化54】

【0351】

様々な実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位はリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位はｐＡＢである。一部の実施形態において、ｐＡＢはリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、ｐＡＢは切断可能部分の切断時に自己犠牲を起こし、スプライシング調節薬がＡＤＣからその天然の活性形態で放出される。

【0352】

一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0353】

一部の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0354】

一部の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。他の実施形態において、抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片は、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含むリンカーによってスプライシング調節薬につなぎ合わされる。

【0355】

一部の実施形態において、ｐＡＢはリンカー中の切断可能なペプチド部分の切断時に自己犠牲を起こす。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、リンカーはアミノ酸単位－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ｃｉｔである。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＶａｌ－Ａｌａである。一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔである。一部の実施形態において、リンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位はＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎである。一部の実施形態において、リンカーはＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢを含む。

【0356】

一部の実施形態において、ｐＡＢはリンカー中の切断可能なβ－グルクロニド部分の切断時に自己犠牲を起こす。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニド－ｐＡＢを含む。

【0357】

一部の他の実施形態において、スプライシング調節薬は非自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は非自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられ、切断可能部分はＶａｌ－Ｃｉｔを含み、マレイミドカプロイル（ＭＣ）が切断可能部分を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。特定の実施形態において、スプライシング調節薬は非自己犠牲性スペーサー単位によってリンカーの切断可能部分に結び付けられ、切断可能部分はＶａｌ－Ａｌａを含み、マレイミドカプロイル（ＭＣ）が切断可能部分を抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせる。

【0358】

様々な態様において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はリンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされ、ここでリンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）と切断可能なアミノ酸単位とｐＡＢＣとを含む。一部の実施形態において、スペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－アミノ酸単位－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－アミノ酸単位－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。

【0359】

様々な他の態様において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はリンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされ、ここでリンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）と切断可能なアミノ酸単位とｐＡＢとを含む。一部の実施形態において、スペーサー単位はアルキル部分を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位はマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－アミノ酸単位－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－アミノ酸単位－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢを含む。

【0360】

様々な他の態様において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はリンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされ、ここでリンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）と切断可能なβ－グルクロニドとｐＡＢＣとを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－β－グルクロニド－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢＣを含む。

【0361】

更に他の態様において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片はリンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされ、ここでリンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位（例えば、ＭＣ）と切断可能なβ－グルクロニドとｐＡＢとを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－スペーサー単位－β－グルクロニド－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢを含む。

【0362】

様々な実施形態において、ＡＤＣ化合物は、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、スプライシング調節薬であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0363】

一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（Ａｂ）はリンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされ、ここでリンカーは、本明細書に開示される又は参照により援用されるリンカーのいずれかであるか、又は本明細書に開示される又は参照により援用されるリンカーのいずれかの１つ以上の成分を含む。

【0364】

一部の実施形態において、リンカーは、切断後にリンカー又は抗体若しくは抗原結合断片のいかなる一部分もスプライシング調節薬に結合したまま残ることのないような位置にある切断可能部分を含む。一部の実施形態において、切断可能部分は切断可能なペプチド部分、例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔ又はＶａｌ－Ａｌａなどのアミノ酸単位である。一部の実施形態において、アミノ酸単位又はリンカーはＶａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位又はリンカーはＶａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、アミノ酸単位又はリンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。

【0365】

一部の実施形態において、リンカーは、抗体又は抗原結合断片を切断可能部分につなぎ合わせる少なくとも１つのスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、リンカーは、抗体又は抗原結合断片を薬物部分につなぎ合わせる少なくとも１つのスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位又はリンカーは少なくとも１つのアルキル部分を含む。

【0366】

一部の実施形態において、リンカー中のスペーサー単位はＭａｌ部分を介して抗体又は抗原結合断片に結び付く（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は少なくとも１つのアルキル部分を含む。一部の実施形態において、リンカーはマレイミドカプロイル（ＭＣ）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_６（「Ｍａｌ－Ｈｅｘ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。

【0367】

一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーは、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_３、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_４、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_５、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_６、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_７、又はＭａｌ－（ＰＥＧ）_８を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＰＥＧ）_２を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーは、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_３－ＣＯ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_４－ＣＯ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_５－ＣＯ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_６－ＣＯ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_７－ＣＯ、又はＭａｌ－（ＰＥＧ）_８－ＣＯを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯは抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯを含むか、又はそれからなる。「Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ」リンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ２」又は「ＡＤＬ２」リンカーとも称される。

【0368】

一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭＣを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、ＭＣは抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭＣを含むか、又はそれからなる。「ＭＣ」リンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ１０」又は「ＡＤＬ１０」リンカーとも称される。

【0369】

一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_６（「Ｍａｌ－Ｈｅｘ」）を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－Ｈｅｘと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－Ｈｅｘは抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－Ｈｅｘを含む。「Ｍａｌ－Ｈｅｘ」リンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ１２」又は「ＡＤＬ１２」リンカーとも称される。

【0370】

一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－Ｅｔと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－Ｅｔは抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－Ｅｔを含む。「Ｍａｌ－Ｅｔ」リンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ１４」又は「ＡＤＬ１４」リンカーとも称される。

【0371】

一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２（「Ｍａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔ」）を含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、Ｍａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔは抗体又は抗原結合断片を薬物部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーはＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含む。「Ｍａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔ」リンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ１５」又は「ＡＤＬ１５」リンカーとも称される。

【0372】

一部の他の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位は抗体又は抗原結合断片をリンカーの切断可能部分に結び付ける。一部の実施形態において、リンカーの切断可能部分は切断可能なペプチド部分、例えばアミノ酸単位である。一部の実施形態において、切断可能なペプチド部分はＶａｌ－Ｃｉｔ又はＶａｌ－Ａｌａである。一部の実施形態において、Ｍａｌ－スペーサー単位又はリンカーはＭＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを含む。

【0373】

一部の実施形態において、スペーサー単位はリンカーの切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付けるスペーサー単位は自己犠牲性である。

【0374】

一部の実施形態において、スペーサー単位はｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、ｐＡＢＣは切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、切断可能部分は切断可能なペプチド部分、例えばアミノ酸単位である。一部の実施形態において、リンカーはアミノ酸単位－ｐＡＢＣを含む。

【0375】

一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ１」又は「ＡＤＬ１」リンカーとも称される。

【0376】

一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ６」又は「ＡＤＬ６」リンカーとも称される。

【0377】

一部の実施形態において、リンカーはＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ２３」又は「ＡＤＬ２３」リンカーとも称される。

【0378】

一部の実施形態において、リンカーはＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ２１」又は「ＡＤＬ２１」リンカーとも称される。

【0379】

一部の他の実施形態において、スペーサー単位はｐＡＢを含む。一部の実施形態において、ｐＡＢは切断可能部分をスプライシング調節薬に結び付ける。一部の実施形態において、切断可能部分は切断可能なペプチド部分、例えばアミノ酸単位である。一部の実施形態において、リンカーはアミノ酸単位－ｐＡＢを含む。

【0380】

一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ５」又は「ＡＤＬ５」リンカーとも称される。

【0381】

一部の実施形態において、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢリンカーの例は、本明細書では「ＡＤＬ７」又は「ＡＤＬ７」リンカーとも称される。

【0382】

一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニド－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーは、β－グルクロニド－ｐＡＢＣと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢＣと少なくとも１つの追加的なスペーサー単位とを含む。ＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢＣの例は、本明細書では「ＡＤＬ１３」又は「ＡＤＬ１３」リンカーとも称される。

【0383】

一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニド－ｐＡＢを含む。一部の実施形態において、リンカーは、β－グルクロニド－ｐＡＢと、リンカーを抗体又は抗原結合断片につなぎ合わせるＭＣ Ｍａｌ－スペーサー単位とを含む。一部の実施形態において、リンカーはＭＣ－β－グルクロニド－ｐＡＢを含む。

【0384】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーを介してスプライシング調節薬薬物部分にコンジュゲートされる。様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーとスプライシング調節薬薬物部分とを含むＡＤＣは、治療用ＡＤＣに望ましい特性を実証することが発見されている。様々な実施形態において、それらの特性としては、限定はされないが、いずれも他のリンカー－ペイロードを使用するＡＤＣと比較したときの、有効な薬物負荷レベル、低い凝集レベル、貯蔵条件下での又は体内で循環中にあるときの安定性（例えば、血清安定性）、非コンジュゲート化抗体と同等の標的発現細胞に対する親和性の保持、標的発現細胞に対する強力な細胞傷害性、低いオフターゲット細胞殺傷レベル、高レベルのバイスタンダー殺傷、及び／又は有効なインビボ抗癌活性が挙げられる。例えば、様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーとスプライシング調節薬薬物部分とを含むＡＤＣは、他のリンカー－ペイロード（例えば、ＡＤＬ１０リンカー及びスプライシング調節薬薬物部分）を使用するＡＤＣと比較したとき、標的発現細胞の成長及び／又は増殖を阻害する能力の上昇を呈する。様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーとスプライシング調節薬薬物部分とを含むＡＤＣは、意外にも、他のスプライシング調節薬ベースのＡＤＣと比較したとき生体内安定性（例えば、血漿安定性）の上昇を呈する（例えば、タイランスタチンＡ系ＡＤＣ、例えば、Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（２０１６）２７：１８８０－８に報告されるとおり）。

【0385】

一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーとスプライシング調節薬薬物部分との特定の組み合わせによってもたらされる良好な又は優れた機能特性は、例えば、トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；Ｂ－Ｂ４などの抗ＣＤ１３８抗体；又は１Ｃ１などの抗ＥＰＨＡ２抗体にコンジュゲートされたリンカー－ペイロードで観察され得る。

【0386】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ２－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ５－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ６－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ７－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１２－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１３－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１４－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１５－スプライシング調節薬と、新生物細胞を標的化し及びそこにインターナライズする能力を保持している抗体又はその抗原結合断片を含む抗体又は抗原結合断片とを含む。

【0387】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ２－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ５－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ６－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ７－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１２－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１３－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１４－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１５－スプライシング調節薬と、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。

【0388】

一部の実施形態において、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む。

【0389】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
（ｉ）Ａｂは、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片であり；
（ｉｉ）Ｄは、スプライシング調節薬であり；
（ｉｉｉ）Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５を含むリンカーであり；及び
（ｉｖ）ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0390】

一部の実施形態において、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインとヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインとを含む。一部の実施形態において、抗体はトラスツズマブである。一部の実施形態において、ｐは、１～１０、２～８、又は４～８の整数である。一部の実施形態において、ｐは４である。一部の実施形態において、ｐは８である。

【0391】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ２－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ５－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ６－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ７－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１２－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１３－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１４－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１５－スプライシング調節薬と、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。

【0392】

一部の実施形態において、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む。

【0393】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
（ｉ）Ａｂは、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む抗ＣＤ１３８抗体又はその抗原結合断片であり；
（ｉｉ）Ｄは、スプライシング調節薬であり；
（ｉｉｉ）Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５を含むリンカーであり；及び
（ｉｖ）ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0394】

一部の実施形態において、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、マウスＩｇＧ２ａ重鎖定常ドメインとマウスＩｇカッパ軽鎖定常ドメインとを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１３８を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常ドメインとヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインとを含む。一部の実施形態において、抗体はＢ－Ｂ４である。一部の実施形態において、ｐは、１～１０、２～８、又は４～８の整数である。一部の実施形態において、ｐは４である。一部の実施形態において、ｐは８である。

【0395】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ２－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ５－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ６－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ７－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１２－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１３－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１４－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、ＡＤＬ１５－スプライシング調節薬と、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片とを含む。

【0396】

一部の実施形態において、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む。

【0397】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
（ｉ）Ａｂは、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む抗ＥＰＨＡ２抗体又はその抗原結合断片であり；
（ｉｉ）Ｄは、スプライシング調節薬であり；
（ｉｉｉ）Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５を含むリンカーであり；及び
（ｉｖ）ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0398】

一部の実施形態において、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、ＥＰＨＡ２を発現する新生物細胞を標的化する抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインとヒトＩｇカッパ軽鎖定常ドメインとを含む。一部の実施形態において、抗体は１Ｃ１である。一部の実施形態において、ｐは、１～１０、２～８、又は４～８の整数である。一部の実施形態において、ｐは４である。一部の実施形態において、ｐは８である。

【0399】

薬物部分
本明細書に記載されるＡＤＣの薬物部分（Ｄ）は、任意の化学療法剤であり得る。有用な化学療法剤クラスとしては、例えば、ＲＮＡスプライシングの調節薬が挙げられる。特定の好ましい実施形態において、薬物部分はスプライシング調節薬である。例示的スプライシング調節薬化合物は本明細書に記載及び例示される。

【0400】

様々な実施形態において、薬物部分は、式（ＩＩ）：

【化55】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、及び－ＮＲ^１５Ｒ^１６から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
Ｚは、

【化56】

から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され、
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素である）
のスプライシング調節薬化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。

【0401】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0402】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0403】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0404】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0405】

一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0406】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0407】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0408】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0409】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0410】

一部の実施形態において、Ｚは

【化57】

である。一部の実施形態において、Ｚは

【化58】

である。一部の実施形態において、Ｚは

【化59】

である。一部の実施形態において、Ｚは

【化60】

である。一部の実施形態において、Ｚは

【化61】

である。

【0411】

一部の実施形態において、式（ＩＩ）のスプライシング調節薬化合物は、式（ＩＩ－Ａ）：

【化62】

（式中、Ｚ’は、

【化63】

から選択され；
全ての他の可変要素は、式（ＩＩ）について定義されるとおりである）
に示されるとおり、例えば式（Ｉ）のＡＤＣ中にあるリンカーＬに結び付く。

【0412】

様々な他の実施形態において、薬物部分は、式（ＩＶ）：

【化64】

（式中、
Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、及び－ＮＲ^１５Ｒ^１６から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され、
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素である）
のスプライシング調節薬化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。

【0413】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0414】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0415】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0416】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0417】

一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0418】

一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0419】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0420】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0421】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0422】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0423】

一部の実施形態において、式（ＩＶ）のスプライシング調節薬化合物は、式（ＩＶ－Ａ）：

【化65】

に示されるとおり、例えば式（Ｉ）のＡＤＣ中にあるリンカーＬに結び付く。

【0424】

様々な他の実施形態において、薬物部分は、式（ＶＩ）：

【化66】

（式中、
Ｒ^１及びＲ^９は、各々独立に、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^１及びＲ^９が両方とも存在しないことはあり得ない）
のスプライシング調節薬化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。

【0425】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0426】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0427】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0428】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0429】

一部の実施形態において、Ｒ^９は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^９は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^９は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はメチルである。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^９は－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基は－（Ｃ＝Ｏ）－メチルである。一部の実施形態において、Ｒ^９は－ＣＤ_３である。

【0430】

一部の実施形態において、Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１０は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はメチルである。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１０は－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基は－（Ｃ＝Ｏ）－メチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１０は－ＣＤ_３である。

【0431】

一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0432】

一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0433】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0434】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0435】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0436】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0437】

一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、５、又は６である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、又は５である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、又は４である。一部の実施形態において、ａは、１、２、又は３である。一部の実施形態において、ａは、１又は２である。一部の実施形態において、ａは１である。一部の実施形態において、ａは２である。一部の実施形態において、ａは３である。一部の実施形態において、ａは４である。一部の実施形態において、ａは５である。一部の実施形態において、ａは６である。一部の実施形態において、ａは７である。一部の実施形態において、ａは８である。一部の実施形態において、ａは９である。一部の実施形態において、ａは１０である。

【0438】

一部の実施形態において、式（ＶＩ）のスプライシング調節薬化合物は、式（ＶＩ－Ａ）：

【化67】

に示されるとおり、例えば式（Ｉ）のＡＤＣ中にあるリンカーＬに結び付く。

【0439】

様々な他の実施形態において、薬物部分は、式（ＶＩＩＩ）：

【化68】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；及び
Ｒ^１０は、３～１０員炭素環及び３～１０員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～３個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、－Ｓ（＝Ｏ）_ｗ－（４～７員ヘテロ環）、４～７員炭素環、及び４～７員ヘテロ環から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリル基）、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基（ここで、この各々は、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びＣ_１～Ｃ_３アルキル基から独立に選択される０、１、又は２個の基で置換される）から独立に選択される０～３個の基で置換され；及び
ｗは、０、１、又は２である）
のスプライシング調節薬化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。

【0440】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0441】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0442】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0443】

一部の実施形態において、Ｒ^１０は、６～９員炭素環及び６～９員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～２個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。

【0444】

一部の実施形態において、炭素環は、０～２個のＲ^ａで置換されているフェニルであり、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、フェニルは２個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、フェニルは

【化69】

である。

【0445】

一部の実施形態において、ヘテロ環は、０～２個のＲ^ａで置換されている９員ヘテロ環であり、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、９員ヘテロ環は

【化70】

である。

【0446】

一部の実施形態において、Ｒ^ａは、ハロゲン、３～１０員炭素環、及び３～１０員ヘテロ環から選択され、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、Ｒ^ａは、ハロゲン、

【化71】

から選択される。

【0447】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0448】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0449】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0450】

一部の実施形態において、式（ＶＩＩＩ）のスプライシング調節薬化合物は、式（ＶＩＩＩ－Ａ）：

【化72】

に示されるとおり、例えば式（Ｉ）のＡＤＣ中にあるリンカーＬに結び付く。

【0451】

様々な実施形態において、薬物部分は、Ｄ２及びＤ１から選択されるスプライシング調節薬である。

【0452】

様々な実施形態において、薬物部分はＤ２である。様々な実施形態において、開示されるＡＤＣに使用されるＤ２薬物部分の構造は、以下に示される：

【化73】

【0453】

様々な実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ（例えば、式（Ｉ）のＡＤＣ）中のリンカーは、ピペラジン基のアミンを介してＤ２薬物部分に共有結合的に結び付く。様々な実施形態において、薬物部分はＤ２の誘導体である。様々な実施形態において、Ｄ２誘導体は、Ｄ２としての少なくとも１つの生物学的機能又は活性（例えば、ＳＦ３ｂ複合体結合、インビトロスプライシング活性、細胞傷害性）を保持しているが、化学構造は変化している。

【0454】

様々な実施形態において、薬物部分はＤ１又はその薬学的に許容可能な塩である。様々な実施形態において、開示されるＡＤＣに使用されるＤ１薬物部分の構造は、以下に示される：

【化74】

【0455】

様々な実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ（例えば、式（Ｉ）のＡＤＣ）中のリンカーは、ピペラジン基のアミンを介してＤ１薬物部分に共有結合的に結び付く。様々な実施形態において、薬物部分はＤ１の誘導体である。様々な実施形態において、Ｄ１誘導体は、Ｄ１としての少なくとも１つの生物学的機能又は活性（例えば、ＳＦ３ｂ複合体結合、インビトロスプライシング活性、細胞傷害性）を保持しているが、化学構造は変化している。

【0456】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１：

【化75】

を含む。

【0457】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２：

【化76】

を含む。

【0458】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３：

【化77】

を含む。

【0459】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ４：

【化78】

を含む。

【0460】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ４’：

【化79】

を含む。

【0461】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ５：

【化80】

を含む。

【0462】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ６：

【化81】

を含む。

【0463】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ７：

【化82】

を含む。

【0464】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ８：

【化83】

を含む。

【0465】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ９：

【化84】

を含む。

【0466】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１０：

【化85】

を含む。

【0467】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１１：

【化86】

を含む。

【0468】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１２：

【化87】

を含む。

【0469】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１３：

【化88】

を含む。

【0470】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１４：

【化89】

を含む。

【0471】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１５：

【化90】

を含む。

【0472】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１６：

【化91】

を含む。

【0473】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１７：

【化92】

を含む。

【0474】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１８：

【化93】

を含む。

【0475】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ１９：

【化94】

を含む。

【0476】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２０：

【化95】

を含む。

【0477】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２１：

【化96】

を含む。

【0478】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２２：

【化97】

を含む。

【0479】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２３：

【化98】

を含む。

【0480】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２４：

【化99】

を含む。

【0481】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２５：

【化100】

を含む。

【0482】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２６：

【化101】

を含む。

【0483】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２７：

【化102】

を含む。

【0484】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２８：

【化103】

を含む。

【0485】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ２９：

【化104】

を含む。

【0486】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３０：

【化105】

を含む。

【0487】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３１：

【化106】

を含む。

【0488】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３２：

【化107】

を含む。

【0489】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３３：

【化108】

を含む。

【0490】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３４：

【化109】

を含む。

【0491】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、Ｄ３５：

【化110】

を含む。

【0492】

例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ２であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0493】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する細胞を標的化する。

【0494】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0495】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0496】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0497】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＳＬＮ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＳＬＮ抗体又は抗原結合断片である。

【0498】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＨ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＨ１抗体又は抗原結合断片である。

【0499】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤＨ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤＨ６抗体又は抗原結合断片である。

【0500】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＥＡＣＡＭ５発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体又は抗原結合断片である。

【0501】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＦＣ１Ｂ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＦＣ１Ｂ抗体又は抗原結合断片である。

【0502】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＮＰＰ３発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＮＰＰ３抗体又は抗原結合断片である。

【0503】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0504】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＡＶＣＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＡＶＣＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0505】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＫＩＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＫＩＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0506】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＥＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＥＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0507】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＵＣ１６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片である。

【0508】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ３９Ａ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体又は抗原結合断片である。

【0509】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ４４Ａ４発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体又は抗原結合断片である。

【0510】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＴＥＡＰ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＴＥＡＰ１抗体又は抗原結合断片である。

【0511】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。

【0512】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ１であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0513】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する細胞を標的化する。

【0514】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0515】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0516】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0517】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＳＬＮ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＳＬＮ抗体又は抗原結合断片である。

【0518】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＨ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＨ１抗体又は抗原結合断片である。

【0519】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤＨ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤＨ６抗体又は抗原結合断片である。

【0520】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＥＡＣＡＭ５発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体又は抗原結合断片である。

【0521】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＦＣ１Ｂ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＦＣ１Ｂ抗体又は抗原結合断片である。

【0522】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＮＰＰ３発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＮＰＰ３抗体又は抗原結合断片である。

【0523】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0524】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＡＶＣＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＡＶＣＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0525】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＫＩＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＫＩＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0526】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＥＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＥＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0527】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＵＣ１６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片である。

【0528】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ３９Ａ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体又は抗原結合断片である。

【0529】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ４４Ａ４発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体又は抗原結合断片である。

【0530】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＴＥＡＰ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＴＥＡＰ１抗体又は抗原結合断片である。

【0531】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ４であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0532】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する細胞を標的化する。

【0533】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0534】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0535】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0536】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＳＬＮ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＳＬＮ抗体又は抗原結合断片である。

【0537】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＨ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＨ１抗体又は抗原結合断片である。

【0538】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤＨ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤＨ６抗体又は抗原結合断片である。

【0539】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＥＡＣＡＭ５発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体又は抗原結合断片である。

【0540】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＦＣ１Ｂ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＦＣ１Ｂ抗体又は抗原結合断片である。

【0541】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＮＰＰ３発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＮＰＰ３抗体又は抗原結合断片である。

【0542】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0543】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＡＶＣＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＡＶＣＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0544】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＫＩＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＫＩＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0545】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＥＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＥＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0546】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＵＣ１６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片である。

【0547】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ３９Ａ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体又は抗原結合断片である。

【0548】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ４４Ａ４発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体又は抗原結合断片である。

【0549】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＴＥＡＰ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＴＥＡＰ１抗体又は抗原結合断片である。

【0550】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ１２であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0551】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する細胞を標的化する。

【0552】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0553】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0554】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0555】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＳＬＮ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＳＬＮ抗体又は抗原結合断片である。

【0556】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＨ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＨ１抗体又は抗原結合断片である。

【0557】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤＨ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤＨ６抗体又は抗原結合断片である。

【0558】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＥＡＣＡＭ５発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体又は抗原結合断片である。

【0559】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＦＣ１Ｂ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＦＣ１Ｂ抗体又は抗原結合断片である。

【0560】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＮＰＰ３発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＮＰＰ３抗体又は抗原結合断片である。

【0561】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0562】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＡＶＣＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＡＶＣＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0563】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＫＩＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＫＩＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0564】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＥＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＥＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0565】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＵＣ１６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片である。

【0566】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ３９Ａ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体又は抗原結合断片である。

【0567】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ４４Ａ４発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体又は抗原結合断片である。

【0568】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＴＥＡＰ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＴＥＡＰ１抗体又は抗原結合断片である。

【0569】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、
Ａｂは、新生物細胞を標的化する抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ１５であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0570】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、及び／又はＳＴＥＡＰ１を発現する細胞を標的化する。

【0571】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＥＲ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0572】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤ１３８発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はマウスＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0573】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＰＨＡ２発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0574】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＳＬＮ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＳＬＮ抗体又は抗原結合断片である。

【0575】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＨ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＨ１抗体又は抗原結合断片である。

【0576】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＤＨ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＤＨ６抗体又は抗原結合断片である。

【0577】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＥＡＣＡＭ５発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体又は抗原結合断片である。

【0578】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＣＦＣ１Ｂ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＣＦＣ１Ｂ抗体又は抗原結合断片である。

【0579】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＥＮＰＰ３発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＥＮＰＰ３抗体又は抗原結合断片である。

【0580】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＦＯＬＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＦＯＬＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0581】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＨＡＶＣＲ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＨＡＶＣＲ１抗体又は抗原結合断片である。

【0582】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＫＩＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＫＩＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0583】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＥＴ発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＥＴ抗体又は抗原結合断片である。

【0584】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＭＵＣ１６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＭＵＣ１６抗体又は抗原結合断片である。

【0585】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ３９Ａ６発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ３９Ａ６抗体又は抗原結合断片である。

【0586】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＬＣ４４Ａ４発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体又は抗原結合断片である。

【0587】

一部の他の実施形態において、抗体又は抗原結合断片はＳＴＥＡＰ１発現細胞を標的化する。一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は抗ＳＴＥＡＰ１抗体又は抗原結合断片である。

【0588】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは切断可能リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは非切断可能リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣ、又はβ－グルクロニドを含むリンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。

【0589】

一部の実施形態において、ｐは１～１０である。一部の実施形態において、ｐは２～８である。一部の実施形態において、ｐは４～８である。一部の実施形態において、ｐは４である。一部の実施形態において、ｐは８である。

【0590】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ２、Ｄ１、Ｄ４、Ｄ１２、又はＤ１５であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0591】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0592】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。

【0593】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む抗ＣＤ１３８抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ２、Ｄ１、Ｄ４、Ｄ１２、又はＤ１５であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0594】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0595】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。

【0596】

別の例示的ＡＤＣは、式（Ｉ）：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ （Ｉ）
（式中、Ａｂは、配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む抗ＥＰＨＡ２抗体又は抗原結合断片であり；
Ｄは、Ｄ２、Ｄ１、Ｄ４、Ｄ１２、又はＤ１５であり；
Ｌは、ＡｂをＤに共有結合的に結び付けるリンカーであり；及び
ｐは、１～１５の整数である）
を有する。

【0597】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0598】

一部の実施形態において、Ｌは、本明細書に開示されるリンカーのいずれか、又は本明細書に開示されるリンカー成分の任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態において、Ｌは、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、Ｍａｌ－（ＰＥＧ）_２－ＣＯ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、Ｍａｌ－Ｈｅｘ、Ｍａｌ－Ｅｔ、又はＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを含むリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、Ｌは、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１４、又はＡＤＬ１５リンカーである。一部の実施形態において、ＡＤＬ１、ＡＤＬ２、ＡＤＬ５、ＡＤＬ６、ＡＤＬ７、ＡＤＬ１２、ＡＤＬ１３、ＡＤＬ１４、ＡＤＬ２１、ＡＤＬ２３、又はＡＤＬ１５リンカーは、１つ以上の追加的なスペーサー単位も含み得る。

【0599】

様々な実施形態において、Ｄ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣは、切断可能又は非切断可能リンカーであり得る。

【0600】

様々な実施形態において、リンカーは切断可能リンカーである。様々な実施形態において、切断可能リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。様々な実施形態において、切断可能リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣを含む。様々な実施形態において、切断可能リンカーはＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢを含む。様々な実施形態において、切断可能リンカーはＭＣ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣを含む。様々な実施形態において、切断可能リンカーはＭＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ｐＡＢＣを含む。

【0601】

様々な他の実施形態において、リンカーは非切断可能リンカーである。様々な実施形態において、非切断可能リンカーはＭＣを単独で、又は少なくとも１つの追加的なスペーサー単位との組み合わせで含む。様々な実施形態において、非切断可能リンカーはＭａｌ－Ｈｅｘを単独で、又は少なくとも１つの追加的なスペーサー単位との組み合わせで含む。様々な実施形態において、非切断可能リンカーはＭａｌ－Ｅｔを単独で、又は少なくとも１つの追加的なスペーサー単位との組み合わせで含む。様々な実施形態において、非切断可能リンカーはＭａｌ－Ｅｔ－Ｏ－Ｅｔを単独で、又は少なくとも１つの追加的なスペーサー単位との組み合わせで含む。

【0602】

様々な実施形態において、Ｄ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣにおいて、ｐは１～１０である。様々な実施形態において、ｐは２～８である。様々な実施形態において、ｐは４～８である。様々な実施形態において、ｐは４である。様々な実施形態において、ｐは８である。

【0603】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるとおりのＤ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣは、別の薬物部分（例えば、別のスプライシング調節薬薬物部分）を含むＡＤＣと比べて薬物：抗体比の向上、凝集レベルの低下、安定性の増加、癌細胞のオンターゲット殺傷の増加、非癌細胞のオフターゲット殺傷の減少、及び／又は細胞傷害性及び／又は効力の増加を実証する。一部の実施形態において、本明細書に開示されるとおりのＤ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣは、上記に挙げたカテゴリーの１つ以上において、又は治療用ＡＤＣについての一連の機能特性にわたって良好な又は優れた特性を提供する。一部の実施形態において、Ｄ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣは、意外にも、別の薬物部分（例えば、別のスプライシング調節薬薬物部分）を含むＡＤＣと比較したとき、ＡＤＣによって標的化される抗原を発現する細胞において有効な効力並びに細胞成長及び／又は増殖の阻害の増加を呈する。一部の実施形態において、効力は、細胞増殖の５０％の低下を引き起こす化合物濃度（ＧＩ_５０）に関して測定することができる。様々な実施形態において、Ｄ２又はＤ１薬物部分を含むＡＤＣは、意外にも、別の薬物部分（例えば、別のスプライシング調節薬薬物部分、例えばタイランスタチンＡ）を含むＡＤＣと比較したとき、生体内安定性（例えば、血漿安定性）の増加を呈する。例えば、Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（２０１６）２７：１８８０－８）に記載されるＡＤＣを参照されたく、これは７２時間までにペイロードの完全な生物変換（即ち、酢酸塩が完全に加水分解される）を示す。

【0604】

特定の実施形態では、リンカー部分の前駆体である中間体を適切な条件下で薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）と反応させる。特定の実施形態では、薬物及び／又は中間体若しくはリンカー上の反応基が使用される。続いて薬物と中間体との間の反応生成物、又は誘導体化薬物（薬物＋リンカー）を適切な条件下で抗体又は抗原結合断片と反応させる。代わりに、中間体又はリンカーは、初めに抗体又は抗原結合断片、又は誘導体化抗体又は抗原結合断片と反応させて、次に薬物又は誘導体化薬物と反応させ得る。

【0605】

薬物部分及び／又はリンカー部分を抗体又は抗原結合断片に共有結合的に結び付けるには、幾つもの異なる反応が利用可能である。これは、多くの場合、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の様々な部分を含め、抗体又は抗原結合断片の１つ以上のアミノ酸残基の反応によって達成される。例えば、非特異的に共有結合的に結び付けることが、薬物部分上のカルボキシ基（又はアミノ基）を抗体又は抗原結合断片上のアミノ基（又はカルボキシ基）に連結するカルボジイミド反応を用いて行われ得る。加えて、ジアルデヒド類又はイミドエステル類などの二官能性薬剤も、薬物部分上のアミノ基を抗体又は抗原結合断片上のアミノ基に連結するために用いられ得る。また、薬物（例えば、スプライシング調節薬）を結合剤に結び付けるためにシッフ塩基反応も利用可能である。この方法には、グリコール基又はヒドロキシ基を含有する薬物の過ヨウ素酸酸化が関わり、ひいてはアルデヒドが形成され、次にはそれが結合剤と反応する。結び付きは、結合剤のアミノ基とのシッフ塩基の形成により起こる。イソチオシアン酸塩も、薬物を結合剤に共有結合的に結び付けるためのカップリング剤として使用され得る。他の技法が当業者に公知であり、本開示の範囲内にある。当技術分野において公知の様々な化学を用いて作成し、抗体又は抗原結合断片に連結することのできる薬物部分の例としては、スプライシング調節薬、例えば、本明細書に記載及び例示されるスプライシング調節薬が挙げられる。

【0606】

リンカー－薬物／薬物化合物
本明細書には、例示的リンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物並びにかかる化合物の複数のコピーを含む組成物が更に開示される。様々な実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物化合物は一般式：Ｌ－Ｄ（式中、Ｌ＝リンカー部分、及びＤ＝薬物部分（例えば、スプライシング調節薬薬物部分）である）によって定義することができる。特定の実施形態において、開示されるＬ－Ｄ化合物は、本明細書に記載されるＡＤＣ、例えば式（Ｉ）のＡＤＣにおける使用に好適である。

【0607】

様々な実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＩＩＩ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＩＩＩ）：

【化111】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
Ｚ”は、

【化112】

から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在しない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0608】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0609】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0610】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0611】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0612】

一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^６はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^７はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。

【0613】

一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0614】

一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0615】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0616】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0617】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0618】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0619】

一部の実施形態において、Ｚ’は

【化113】

である。一部の実施形態において、Ｚ’は

【化114】

である。一部の実施形態において、Ｚ’は

【化115】

である。一部の実施形態において、Ｚ’は

【化116】

である。一部の実施形態において、Ｚ’は

【化117】

である。

【0620】

一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つの切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、リンカー又は切断可能なペプチド部分は少なくとも１つのアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、及びシトルリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、リンカーは、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、リンカーは、アラニン及びバリンを含む。

【0621】

一部の実施形態において、リンカーは、スルホンアミド、β－グルクロニド、ジスルフィド、及びカルボニルから選択される部分を含む。一部の実施形態において、リンカーはスルホンアミドを含む。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、リンカーはジスルフィドを含む。一部の実施形態において、リンカーはカルボニルを含む。

【0622】

一部の実施形態において、リンカーはスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は、アルキル基及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分から選択される。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_１２アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はメチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はエチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－プロピレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ブチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ペンチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ヘキシレンである。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは１である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の実施形態において、ｍは３である。一部の実施形態において、ｍは４である。一部の実施形態において、ｍは５である。一部の実施形態において、ｍは６である。

【0623】

一部の実施形態において、リンカーはマレイミド（Ｍａｌ）部分を含む（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、リンカーは自己犠牲性スペーサー単位を含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）及びｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）から選択される。

【0624】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とアルキル基と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基を含む。

【0625】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とＰＥＧ部分と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～６の整数である。

【0626】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（Ｖ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（Ｖ）：

【化118】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；及び
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在しない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0627】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0628】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0629】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0630】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0631】

一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^６はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^７はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。

【0632】

一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0633】

一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0634】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0635】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0636】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0637】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0638】

一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つの切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、リンカー又は切断可能なペプチド部分は少なくとも１つのアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、及びシトルリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、リンカーは、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、リンカーは、アラニン及びバリンを含む。

【0639】

一部の実施形態において、リンカーは、スルホンアミド、β－グルクロニド、ジスルフィド、及びカルボニルから選択される部分を含む。一部の実施形態において、リンカーはスルホンアミドを含む。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、リンカーはジスルフィドを含む。一部の実施形態において、リンカーはカルボニルを含む。

【0640】

一部の実施形態において、リンカーはスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は、アルキル基及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分から選択される。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_１２アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はメチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はエチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－プロピレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ブチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ペンチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ヘキシレンである。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは１である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の実施形態において、ｍは３である。一部の実施形態において、ｍは４である。一部の実施形態において、ｍは５である。一部の実施形態において、ｍは６である。

【0641】

一部の実施形態において、リンカーはマレイミド（Ｍａｌ）部分を含む（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、リンカーは自己犠牲性スペーサー単位を含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）及びｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）から選択される。

【0642】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とアルキル基と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基を含む。

【0643】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とＰＥＧ部分と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～６の整数である。

【0644】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＶＩＩ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＶＩＩ）：

【化119】

（式中、
Ｒ^１及びＲ^９は、各々独立に、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、存在しないか、又はリンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^８は、各々独立に、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^６及びＲ^７は、各々独立に、水素、－Ｏ－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びリンカーから選択され；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；及び
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
Ｒ^６及びＲ^７の少なくとも一方は、水素であり；
Ｒ^２がリンカーである場合、Ｒ^６又はＲ^７のいずれもリンカーでなく、Ｒ^６又はＲ^７がリンカーである場合、Ｒ^２は、存在せず；
Ｒ^１及びＲ^９が両方とも存在しないことはあり得ない）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0645】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0646】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0647】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0648】

一部の実施形態において、Ｒ^５は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^５はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^５は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^５はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。

【0649】

一部の実施形態において、Ｒ^９は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^９は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^９は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はメチルである。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^９は－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基は－（Ｃ＝Ｏ）－メチルである。一部の実施形態において、Ｒ^９は－ＣＤ_３である。

【0650】

一部の実施形態において、Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１０は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はメチルである。一部の実施形態において、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１０は－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基は－（Ｃ＝Ｏ）－メチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１０は－ＣＤ_３である。

【0651】

一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^６はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２は存在せず、及びＲ^７はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＯＲ^１７であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－Ｏ－Ｒ^１７であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は、水素及びＣ^１～Ｃ^４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７であり、及びＲ^７は水素であり、式中、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は水素であり、及びＲ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、式中、Ｒ^１５はＨであり、及びＲ^１６は、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^６は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0652】

一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１～Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ^７は－ＮＲ^１５Ｒ^１６である。

【0653】

一部の実施形態において、Ｒ^８は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及び（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^８は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^８はヒドロキシル基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^８は－Ｏ－（Ｃ_１アルキル）基である。

【0654】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0655】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0656】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0657】

一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、５、又は６である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、４、又は５である。一部の実施形態において、ａは、１、２、３、又は４である。一部の実施形態において、ａは、１、２、又は３である。一部の実施形態において、ａは、１又は２である。一部の実施形態において、ａは１である。一部の実施形態において、ａは２である。一部の実施形態において、ａは３である。一部の実施形態において、ａは４である。一部の実施形態において、ａは５である。一部の実施形態において、ａは６である。一部の実施形態において、ａは７である。一部の実施形態において、ａは８である。一部の実施形態において、ａは９である。一部の実施形態において、ａは１０である。

【0658】

一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つの切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、リンカー又は切断可能なペプチド部分は少なくとも１つのアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、及びシトルリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、リンカーは、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、リンカーは、アラニン及びバリンを含む。

【0659】

一部の実施形態において、リンカーは、スルホンアミド、β－グルクロニド、ジスルフィド、及びカルボニルから選択される部分を含む。一部の実施形態において、リンカーはスルホンアミドを含む。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、リンカーはジスルフィドを含む。一部の実施形態において、リンカーはカルボニルを含む。

【0660】

一部の実施形態において、リンカーはスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は、アルキル基及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分から選択される。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_１２アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はメチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はエチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－プロピレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ブチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ペンチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ヘキシレンである。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは１である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の実施形態において、ｍは３である。一部の実施形態において、ｍは４である。一部の実施形態において、ｍは５である。一部の実施形態において、ｍは６である。

【0661】

一部の実施形態において、リンカーはマレイミド（Ｍａｌ）部分を含む（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、リンカーは自己犠牲性スペーサー単位を含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）及びｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）から選択される。

【0662】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とアルキル基と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基を含む。

【0663】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とＰＥＧ部分と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～６の整数である。

【0664】

様々な他の実施形態において、本明細書に開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物は、式（ＩＸ）に係るリンカー－薬物構造を含む。様々な実施形態において、本開示は、式（ＩＸ）：

【化120】

（式中、
Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及び－ＣＤ_３から選択され；
Ｒ^２は、リンカーであり；
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアミノ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、Ｃ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基、及び－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基から選択され；
Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキル基から選択され；
Ｒ^１０は、３～１０員炭素環及び３～１０員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～３個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、－Ｓ（＝Ｏ）_ｗ－（４～７員ヘテロ環）、４～７員炭素環、及び４～７員ヘテロ環から選択され；
Ｒ^１５及びＲ^１６は、各々独立に、水素、Ｒ^１７、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７から選択され；及び
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１０、Ｒ^１５、Ｒ^１６、及びＲ^１７は、各々独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_３～Ｃ_８シクロアルキル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルヒドロキシ基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルアルコキシ基、ベンジル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から独立に選択される０～３個の基で置換され；
各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（Ｃ_３～Ｃ_１０ヘテロシクリル基）、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基（ここで、この各々は、ハロゲン、ヒドロキシル基、－ＮＲ^１５Ｒ^１６、及びＣ_１～Ｃ_３アルキル基から独立に選択される０、１、又は２個の基で置換される）から独立に選択される０～３個の基で置換され；及び
ｗは、０、１、又は２である）
のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0665】

一部の実施形態において、Ｒ^１は、存在なし、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１は存在しない。一部の実施形態において、Ｒ^１は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^１は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ^１はＣ_３～Ｃ_８シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１はシクロヘプチルである。

【0666】

一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルアルコキシ基、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキルヒドロキシ基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は、水素及びＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^３は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^３はＣ_１～Ｃ_４アルキルカルボン酸基である。一部の実施形態において、Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈである。

【0667】

一部の実施形態において、Ｒ^４は、水素、ヒドロキシル基、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基、及びＣ_１～Ｃ_４アルキル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^４は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^４はヒドロキシルである。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）基である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４は－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^４はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^４はメチルである。一部の実施形態において、Ｒ^４はエチルである。

【0668】

一部の実施形態において、Ｒ^１０は、６～９員炭素環及び６～９員ヘテロ環から選択され、この各々は、０～２個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。

【0669】

一部の実施形態において、炭素環は、０～２個のＲ^ａで置換されているフェニルであり、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、フェニルは２個のＲ^ａで置換され、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、フェニルは

【化121】

である。

【0670】

一部の実施形態において、ヘテロ環は、０～２個のＲ^ａで置換されている９員ヘテロ環であり、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、９員ヘテロ環は

【化122】

である。

【0671】

一部の実施形態において、Ｒ^ａは、ハロゲン、３～１０員炭素環、及び３～１０員ヘテロ環から選択され、式中、各Ｒ^ａは、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル基、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）基、－（Ｃ＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）－（３～１０員ヘテロ環）基、及びＣ_１～Ｃ_６アルキルカルボン酸基から独立に選択される０～３個の基で置換される。一部の実施形態において、Ｒ^ａは、ハロゲン、

【化123】

から選択される。

【0672】

一部の実施形態において、Ｒ^１５は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１５はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１５は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0673】

一部の実施形態において、Ｒ^１６は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１６はＲ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^１７である。一部の実施形態において、Ｒ^１６は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１７である。

【0674】

一部の実施形態において、Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル基、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル基、及びＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１７は水素である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１～Ｃ_４アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_１アルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６シクロアルキル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３～Ｃ_８ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_３ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_４ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_５ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_６ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_７ヘテロシクリル基である。一部の実施形態において、Ｒ^１７はＣ_８ヘテロシクリル基である。

【0675】

一部の実施形態において、Ｒ^２はリンカーである。一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つの切断可能なペプチド部分を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの切断可能なペプチド部分は酵素によって切断可能である。一部の実施形態において、リンカー又は切断可能なペプチド部分は少なくとも１つのアミノ酸単位を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、及びシトルリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、リンカーは、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、リンカーは、アラニン及びバリンを含む。

【0676】

一部の実施形態において、リンカーは、スルホンアミド、β－グルクロニド、ジスルフィド、及びカルボニルから選択される部分を含む。一部の実施形態において、リンカーはスルホンアミドを含む。一部の実施形態において、リンカーはβ－グルクロニドを含む。一部の実施形態において、リンカーはジスルフィドを含む。一部の実施形態において、リンカーはカルボニルを含む。

【0677】

一部の実施形態において、リンカーはスペーサー単位を含む。一部の実施形態において、スペーサー単位は、アルキル基及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分から選択される。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_１２アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基である。一部の実施形態において、アルキル基はメチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はエチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－プロピレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ブチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ペンチレンである。一部の実施形態において、アルキル基はｎ－ヘキシレンである。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｍは１である。一部の実施形態において、ｍは２である。一部の実施形態において、ｍは３である。一部の実施形態において、ｍは４である。一部の実施形態において、ｍは５である。一部の実施形態において、ｍは６である。

【0678】

一部の実施形態において、リンカーはマレイミド（Ｍａｌ）部分を含む（「Ｍａｌ－スペーサー単位」）。一部の実施形態において、リンカーは自己犠牲性スペーサー単位を含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｐＡＢＣ）及びｐ－アミノベンジル（ｐＡＢ）から選択される。

【0679】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とアルキル基と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、アルキル基はＣ_１～Ｃ_６アルキル基を含む。

【0680】

一部の実施形態において、リンカーは、Ｍａｌ－スペーサー単位とＰＥＧ部分と少なくとも１つのアミノ酸単位と自己犠牲性スペーサーとを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン、シトルリン、及びバリンから選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、アラニン及びバリンを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸単位は、シトルリン及びバリンを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーは、ｐＡＢ及びｐＡＢＣから選択される。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢを含む。一部の実施形態において、自己犠牲性スペーサーはｐＡＢＣを含む。一部の実施形態において、ＰＥＧ部分は－（ＰＥＧ）_ｍ－を含み、式中、ｍは１～６の整数である。

【0681】

一部の実施形態において、薬物部分は、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ４’、Ｄ５、Ｄ６、Ｄ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｄ１０、Ｄ１１、Ｄ１２、Ｄ１３、Ｄ１４、Ｄ１５、Ｄ１６、Ｄ１７、Ｄ１８、Ｄ１９、Ｄ２０、Ｄ２１、Ｄ２２、Ｄ２３、Ｄ２４、Ｄ２５、Ｄ２６、Ｄ２７、Ｄ２８、Ｄ２９、Ｄ３０、Ｄ３１、Ｄ３２、Ｄ３３、Ｄ３４、及びＤ３５から選択されるスプライシング調節薬である。

【0682】

様々な実施形態において、薬物部分は、Ｄ２及びＤ１から選択されるスプライシング調節薬である。

【0683】

様々な実施形態において、薬物部分はＤ２である。様々な実施形態において、開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物に使用されるＤ２薬物部分の構造は、以下に示される：

【化124】

【0684】

様々な実施形態において、本明細書に記載されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物中のリンカーは、ピペラジン基のアミンを介してＤ２薬物部分に共有結合的に結び付く。様々な実施形態において、薬物部分はＤ２の誘導体である。様々な実施形態において、Ｄ２誘導体は、Ｄ２としての少なくとも１つの生物学的機能又は活性（例えば、ＳＦ３ｂ複合体結合、インビトロスプライシング活性、細胞傷害性）を保持しているが、化学構造は変化している。

【0685】

様々な実施形態において、薬物部分はＤ１である。様々な実施形態において、開示されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物に使用されるＤ１薬物部分の構造は、以下に示される：

【化125】

【0686】

様々な実施形態において、本明細書に記載されるリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）化合物中のリンカーは、ピペラジン基のアミンを介してＤ１薬物部分に共有結合的に結び付く。様々な実施形態において、薬物部分はＤ１の誘導体である。様々な実施形態において、Ｄ１誘導体は、Ｄ１としての少なくとも１つの生物学的機能又は活性（例えば、ＳＦ３ｂ複合体結合、インビトロスプライシング活性、細胞傷害性）を保持しているが、化学構造は変化している。

【0687】

また、本明細書には、単独での、又は本明細書に開示されるＡＤＣ中の薬物部分としての使用のための例示的スプライシング調節薬薬物化合物も開示される。本開示は、様々な実施形態において、かかる化合物の複数のコピーを含む組成物、例えば、スプライシング調節薬薬物化合物と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0688】

様々な実施形態において、本開示は、式

【化126】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0689】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化127】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0690】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化128】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0691】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化129】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0692】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化130】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0693】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化131】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0694】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化132】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0695】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化133】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0696】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化134】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0697】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化135】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0698】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化136】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0699】

様々な他の実施形態において、本開示は、式

【化137】

の化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選択される化合物を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本化合物又はその薬学的に許容可能な塩と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。

【0700】

バイオコンジュゲーション
一部の実施形態において、リンカー－薬物化合物は、図２６に示される例示的スキームのとおりに抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートされ得る。簡潔に言えば、一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片を試薬、例えば還元剤、例えばトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンで処理して１つ以上のジスルフィド結合を還元することにより、抗体又は抗原結合断片を活性化し得る。一部の実施形態では、次に活性化した抗体又は抗原結合断片を所定の化学量論のリンカー－薬物化合物で処理する。その後、一部の実施形態では、次に混合物を精製技法、例えばサイズ排除樹脂又は限外ろ過に供すると、所望の抗体－薬物コンジュゲートが得られる。

【0701】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化138】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ１－Ｄ１）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0702】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化139】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ１－Ｄ４）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0703】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化140】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ１－Ｄ１２）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0704】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化141】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ５－Ｄ２）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0705】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化142】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ５－Ｄ１５）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0706】

一部の実施形態において、本明細書には、構造

【化143】

（式中、Ａｂは、抗体又は抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片上のチオール基の硫黄原子を通じてリンカー－薬物化合物（ＡＤＬ１３－Ｄ４）のマレイミド基に共有結合的に結合した抗体又は抗原結合断片である）
を有する抗体－薬物コンジュゲートが提供される。

【0707】

一部の実施形態において、Ａｂは抗ＨＥＲ２抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施形態において、ＡｂはＨＥＲ２に結合し、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する（即ち、このＡＤＣは、ＨＥＲ２を発現する新生物細胞を標的化する）。一部の実施形態において、Ａｂはインターナリゼーション性抗ＨＥＲ２抗体又はそのインターナリゼーション性抗原結合断片である。

【0708】

一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）と；配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）とを含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はインターナリゼーション性抗体又はインターナリゼーション性抗原結合断片である。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトフレームワーク配列を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体又は抗原結合断片はヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む。

【0709】

薬物負荷量
薬物負荷量はｐによって表され、本明細書では薬物対抗体比（ＤＡＲ）とも称される。薬物負荷量は各抗体又は抗原結合断片当たり１～１０個の薬物部分の範囲であり得る。一部の実施形態において、ｐは１～１０の整数である。一部の実施形態において、ｐは、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、又は１～２の整数である。一部の実施形態において、ｐは、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、又は２～３の整数である。一部の実施形態において、ｐは、１～８の整数である。一部の実施形態において、ｐは、２～４の整数である。他の実施形態において、ｐは、４～８の整数である。他の実施形態において、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、又は８、好ましくは４又は８である。

【0710】

薬物負荷量は、抗体又は抗原結合断片上の結び付き部位の数によって制限され得る。一部の実施形態において、ＡＤＣのリンカー部分（Ｌ）は、抗体又は抗原結合断片上の１つ以上のアミノ酸残基上の化学的に活性な基を通じて抗体又は抗原結合断片に結び付く。例えば、リンカーは、遊離アミノ、イミノ、ヒドロキシル、チオール、又はカルボキシル基を介して抗体又は抗原結合断片に（例えば、Ｎ末端又はＣ末端に、１つ以上のリジン残基のεアミノ基に、１つ以上のグルタミン酸又はアスパラギン酸残基の遊離カルボン酸基に、又は１つ以上のシステイン残基のスルフヒドリル基に）結び付き得る。リンカーが結び付けられる部位は、抗体若しくは抗原結合断片のアミノ酸配列中の天然残基であり得るか、又はそれは、例えば、ＤＮＡ組換え技術（例えば、アミノ酸配列にシステイン残基を導入することによる）若しくはタンパク質生化学（例えば、還元、ｐＨ調整、又は加水分解による）によって抗体若しくは抗原結合断片に導入され得る。

【0711】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片にコンジュゲートすることのできる薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって制限される。例えば、結び付きがシステインチオール基である場合、抗体がシステインチオール基を１個又は数個のみ有することがあるか、又はリンカーが結び付き得る十分な反応性のあるチオール基を１個又は数個のみ有することがある。概して、抗体は、薬物部分に連結し得る遊離及び反応性システインチオール基をあまり多く含まない。実際、抗体中のほとんどのシステインチオール残基は、鎖間又は鎖内のいずれかのジスルフィド結合に関与する。従ってシステインへのコンジュゲーションには、一部の実施形態では、抗体の少なくとも部分的な還元が必要であり得る。リンカー－毒素を抗体に過剰に結び付けると、ジスルフィド結合の形成に利用可能なシステイン残基が還元されることにより抗体が不安定になり得る。従って、最適な薬物：抗体比は、抗体又は抗原結合断片を不安定にすることなくＡＤＣの効力を（各抗体当たりに結び付いた薬物部分の数を増加させることにより）増加させなければならない。一部の実施形態において、最適な比は、２、４、６、又は８であり得る。

【0712】

一部の実施形態において、１つ以上の遊離システイン残基を生じさせるため、抗体又は抗原結合断片はコンジュゲーション前に還元条件に曝露される。抗体は、一部の実施形態では、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤によって部分的又は完全還元条件下で還元され得、それにより反応性システインチオール基が生じ得る。制限されたモル当量のＴＣＥＰによる部分的還元を通じて不対のシステインを生じさせ得、このＴＣＥＰは、鎖内ジスルフィド結合をインタクトなままとしながら、軽鎖と重鎖（各Ｈ－Ｌ対形成につき１つの対）及びヒンジ領域における２つの重鎖（ヒトＩｇＧ１の場合には各Ｈ－Ｈ対形成につき２つの対）を連結する鎖間ジスルフィド結合を還元することができる（Ｓｔｅｆａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１０４５：１４５－７１）。実施形態において、抗体内のジスルフィド結合は、例えば還元及び酸化電圧を交互に印加する作用電極を利用することにより電気化学的に還元される。この手法は、分析的装置（例えば、電気化学的検出装置、ＮＭＲ分光計、又は質量分析計）又は化学的分離装置（例えば、液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）又は電気泳動装置（例えば、米国特許出願公開第２０１４００６９８２２号明細書を参照されたい））とのジスルフィド結合還元のオンライン結合を可能にし得る。特定の実施形態において、抗体は変性条件に供され、システインなど、アミノ酸残基上の反応性求核基が明らかにされる。

【0713】

ＡＤＣの薬物負荷量は、別様に、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物－リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること；（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間又は温度を制限すること；（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的又は制限的還元条件；及び／又は（ｉｖ）リンカー－薬物の結び付きの数及び／又は位置の制御のためシステイン残基の数及び位置が修飾されるような抗体のアミノ酸配列の組換え技術による改変によって制御され得る。

【0714】

一部の実施形態において、抗体又は抗原結合断片のアミノ酸配列に遊離システイン残基が導入される。例えば、親抗体の１つ以上のアミノ酸がシステインアミノ酸に置き換えられているシステイン改変抗体を調製することができる。任意の形態の抗体をこのように改変し得、即ち突然変異させ得る。例えば、親Ｆａｂ抗体断片を改変して、「ＴｈｉｏＦａｂ」と称されるシステイン改変Ｆａｂを形成し得る。同様に、親モノクローナル抗体を改変して「ＴｈｉｏＭａｂ」を形成し得る。ＴｈｉｏＦａｂでは単一の部位突然変異が単一の改変システイン残基を生じさせるが、一方、ＴｈｉｏＭａｂではＩｇＧ抗体の二量体の性質に起因して、単一部位突然変異が２つの改変されたシステイン残基を生じさせる。親ポリペプチドのアミノ酸配列変異体をコードするＤＮＡは、当技術分野において公知の種々の方法により調製することができる（例えば、国際公開第２００６／０３４４８８号パンフレットに記載される方法を参照されたい）。これらの方法としては、限定はされないが、先に調製しておいた、そのポリペプチドをコードするＤＮＡの部位特異的（又はオリゴヌクレオチド媒介性）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及びカセット突然変異誘発による調製が挙げられる。組換え抗体の変異体は、制限酵素断片操作によるか、又は合成オリゴヌクレオチドによるオーバーラップエクステンションＰＣＲによっても構築され得る。式（Ｉ）のＡＤＣとしては、限定はされないが、１、２、３、又は４つの改変されたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられる（Ｌｙｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：１２３－３８）。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片には、改変を用いることなく１つ以上の遊離システイン残基が既に存在し、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して抗体又は抗原結合断片を薬物部分にコンジュゲートし得る。

【0715】

抗体又は抗原結合断片の複数のコピー及びリンカー部分を含む反応混合物中において、２つ以上の求核基が薬物－リンカー中間体又はリンカー部分試薬、続いて薬物部分試薬と反応する場合、得られる生成物は、混合物中の抗体又は抗原結合断片の各コピーに結び付いた１つ以上の薬物部分の分布を有するＡＤＣ化合物の混合物であり得る。一部の実施形態において、コンジュゲーション反応から得られるＡＤＣの混合物の薬物負荷量は、各抗体又は抗原結合断片当たりに結び付いた１～１０個の薬物部分の範囲である。各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数（即ち、平均薬物負荷量、又は平均ｐ）は、当技術分野において公知の任意の従来方法、例えば、質量分析（例えば、逆相ＬＣ－ＭＳ）、及び／又は高速液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）により計算し得る。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、疎水性相互作用クロマトグラフィー－高速液体クロマトグラフィー（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）により決定される。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、逆相液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により決定される。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、約１．５～約３．５、約２．５～約４．５、約３．５～約５．５、約４．５～約６．５、約５．５～約７．５、約６．５～約８．５、又は約７．５～約９．５である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、約２～約４、約３～約５、約４～約６、約５～約７、約６～約８、約７～約９、約２～約８、又は約４～約８である。

【0716】

一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は約２である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、又は約２．５である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は２である。

【0717】

一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は約４である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、又は約４．５である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は４である。

【0718】

一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は約８である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、又は約８．５である。一部の実施形態において、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数は８である。

【0719】

様々な実施形態において、用語「約」は、各抗体又は抗原結合断片当たりの平均薬物部分数に関して使用されるとき、±１０％を意味する。

【0720】

個々のＡＤＣ化合物、又は「種」は、混合物中に質量スペクトル法によって同定し、ＵＰＬＣ又はＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）によって分離し得る。特定の実施形態では、例えば電気泳動法又はクロマトグラフィーにより、コンジュゲーション混合物から単一の負荷量値の均一な又はほぼ均一なＡＤＣ生成物を分離し得る。

【0721】

一部の実施形態において、薬物負荷量が高いと（例えば、ｐ＞８）、ある種の抗体－薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性、又は細胞透過性の喪失が生じ得る。薬物負荷量が高いと、ある種のＡＤＣの薬物動態（例えば、クリアランス）にも悪影響が及び得る。一部の実施形態において、薬物負荷量が低いと（例えば、ｐ＜２）、標的発現細胞及び／又はバイスタンダー細胞に対するある種のＡＤＣの効力が低下し得る。一部の実施形態において、本開示のＡＤＣの薬物負荷量は、約２～約８；約２～約６；約２～約５；約３～約５；約２～約４；又は約４～約８の範囲である。

【0722】

一部の実施形態では、例えば抗体又は抗原結合断片上の鎖内ジスルフィドの部分的還元を用いて約２の薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が実現され、これが有益な特性をもたらす。一部の実施形態において、例えば抗体又は抗原結合断片上の鎖内ジスルフィドの部分的還元を用いて約４の薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が実現され、これが有益な特性をもたらす。一部の実施形態において、例えば抗体又は抗原結合断片上の鎖内ジスルフィドの部分的還元を用いて約８の薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が実現され、これが有益な特性をもたらす。一部の実施形態において、薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が約２に満たないと、標的抗原への結合に関してＡＤＣと競合し及び／又は治療有効性の低下をもたらし得る非コンジュゲート化抗体種のレベルが許容し難いほど高くなり得る。一部の実施形態において、薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が約８を超えると、生成物の不均一性及び／又はＡＤＣ凝集のレベルが許容し難いほど高くなり得る。薬物負荷量及び／又は平均薬物負荷量が約８を超えるとまた、抗体又は抗原結合断片を安定させるために必要な１つ以上の化学結合が失われることに起因して、ＡＤＣの安定性にも影響が及び得る。

【0723】

本開示は、記載されるＡＤＣの作製方法を含む。簡潔に言えば、ＡＤＣは、本抗体又は抗原結合断片のような抗体又は抗原結合断片、薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）、及び薬物部分と抗体又は抗原結合断片とをつなぎ合わせるリンカーを含む。一部の実施形態において、ＡＤＣは、薬物部分及び抗体又は抗原結合断片に共有結合的に結び付くための反応性官能基を有するリンカーを用いて調製することができる。例えば、一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片のシステインチオールが、リンカー又は薬物－リンカー中間体の反応性官能基（例えば、マレイミド部分）と結合を形成してＡＤＣを作り出すことができる。ＡＤＣの作成は、当業者に公知の任意の技法により達成することができる。

【0724】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、抗体又は抗原結合断片にリンカー及び薬物部分（例えば、スプライシング調節薬）を順次接触させることにより作製され、従って抗体又は抗原結合断片が初めにリンカーに共有結合的に連結され、次に予め形成された抗体－リンカー中間体が薬物部分と反応する。抗体－リンカー中間体は、薬物部分との接触前に精製ステップに供されても又は供されなくてもよい。他の実施形態では、ＡＤＣは、リンカーを薬物部分と反応させることによって予め形成されたリンカー－薬物化合物を抗体又は抗原結合断片に接触させることにより作製される。予め形成されたリンカー－薬物化合物は、抗体又は抗原結合断片との接触前に精製ステップに供されても又は供されなくてもよい。他の実施形態では、抗体又は抗原結合断片を１つの反応混合物中でリンカー及び薬物部分に接触させて、抗体又は抗原結合断片とリンカーとの間、及びリンカーと薬物部分との間の共有結合的結合の同時形成が実現される。このＡＤＣ作製方法は、反応混合物にリンカーを加える前に抗体又は抗原結合断片を抗体又は抗原結合断片に接触させる反応、及びその逆の反応を含み得る。特定の実施形態において、ＡＤＣは、コンジュゲーションを許容する条件下において、ＡＤＬ１－スプライシング調節薬（例えば、ＡＤＬ１－Ｄ１）又はＡＤＬ５－スプライシング調節薬（例えば、ＡＤＬ５－Ｄ２）など、薬物部分につなぎ合わされたリンカーと抗体又は抗原結合断片を反応させることにより作製される。

【0725】

上記に記載される方法のとおり調製したＡＤＣは、精製ステップに供され得る。精製ステップは、タンパク質を精製するための当技術分野において公知の任意の生化学的方法、又はそれらの方法の任意の組み合わせを含み得る。そうした方法としては、限定はされないが、タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、任意の電荷又は等電点に基づくクロマトグラフィー、混合モードクロマトグラフィー、例えば、ＣＨＴ（セラミックヒドロキシアパタイト）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、透析、ろ過、選択的沈殿、又はこれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0726】

治療的使用及び組成物
本明細書には、障害、例えば新生物障害についての対象の治療における開示されるＡＤＣ及び組成物の使用方法が開示される。ＡＤＣは単独で、又は第２の療法剤と組み合わせて投与され得、任意の薬学的に許容可能な製剤、投薬量、及び投与レジメンで投与され得る。ＡＤＣ治療有効性は、毒性並びに有効性の指標に関して評価され、それに応じて調整され得る。有効性の尺度としては、限定はされないが、インビトロ又はインビボで観察される細胞増殖抑制効果及び／又は細胞傷害効果、腫瘍容積の低下、腫瘍増殖抑制率、及び／又は生存の延長が挙げられる。

【0727】

ＡＤＣが細胞に細胞増殖抑制効果及び／又は細胞傷害効果を及ぼすかどうかを決定する方法は公知である。例えば、ＡＤＣの細胞傷害活性又は細胞増殖抑制活性は、標的タンパク質を発現する哺乳類細胞を細胞培養培地中でＡＤＣに曝露すること；約６時間～約６日の期間にわたって細胞を培養すること；及び細胞生存能力を測定することにより測定し得る。細胞ベースのインビトロアッセイは、生存能力（増殖）、細胞傷害性、及びＡＤＣのアポトーシス誘導（カスパーゼ活性化）の測定にも用いられ得る。

【0728】

ＡＤＣが細胞増殖抑制効果を及ぼすかどうかの決定には、チミジン取り込みアッセイを用い得る。例えば、９６ウェルの１ウェル当たり５，０００細胞の密度でプレーティングした標的抗原を発現する癌細胞を７２時間の期間にわたって培養し、その７２時間の期間中最後の８時間の間、０．５μＣｉの^３Ｈ－チミジンに曝露することができる。ＡＤＣの存在下及び非存在下における培養物の細胞への^３Ｈ－チミジンの取り込みが測定される。

【0729】

細胞傷害性の決定には、壊死又はアポトーシス（プログラム細胞死）が測定され得る。壊死は、典型的には細胞膜の透過性の増加；細胞の腫脹、及び細胞膜の破裂を伴う。アポトーシスは、例えばＤＮＡ断片化を測定することにより定量化し得る。ＤＮＡ断片化をインビトロで定量的に決定する市販の測光的方法が利用可能である。かかるアッセイの例は、ＴＵＮＥＬ（これは、断片化したＤＮＡにおける標識ヌクレオチドの取り込みを検出する）及びＥＬＩＳＡベースのアッセイを含め、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ（１９９９）Ｎｏ．２，ｐｐ．３４－３７（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に記載されている。

【0730】

アポトーシスは、細胞の形態学的変化を測定することによっても決定され得る。例えば、壊死と同様に、ある種の色素（例えば、例としてアクリジンオレンジ又は臭化エチジウムなどの蛍光色素）の取り込みを測定することにより、細胞膜の完全性の喪失を決定し得る。アポトーシス細胞数の測定方法については、Ｄｕｋｅ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．（１９９２）ｐｐ．３．１７．１－３．１７．１６）によって記載されている。細胞は、ＤＮＡ色素（例えば、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、又はヨウ化プロピジウム）で標識し、核の内膜に沿ったクロマチン凝縮及び辺縁趨向に関して細胞を観察することもできる。アポトーシスは、一部の実施形態では、カスパーゼ活性をスクリーニングすることによっても決定され得る。一部の実施形態では、Ｃａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを用いてカスパーゼ－３及びカスパーゼ－７の活性を測定することができる。一部の実施形態では、このアッセイは、カスパーゼ活性、ルシフェラーゼ活性、及び細胞溶解に関して最適化された試薬中に発光性のカスパーゼ－３／７基質を提供する。一部の実施形態では、「添加－混合－測定（ａｄｄ－ｍｉｘ－ｍｅａｓｕｒｅ）」フォーマットでＣａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（登録商標）３／７試薬を加えると、細胞溶解、続いて基質のカスパーゼ切断、及びルシフェラーゼによって生じる「グロー型」発光シグナルの生成が起こり得る。一部の実施形態において、発光はカスパーゼ活性の存在量に比例し得、アポトーシスの指標としての役割を果たし得る。アポトーシスを決定するため測定し得る他の形態学的変化としては、例えば、細胞質凝集、膜ブレブ形成の増加、及び細胞萎縮が挙げられる。癌細胞に対するこれらの効果のいずれかの決定が、ＡＤＣが癌の治療において有用であることを示す。

【0731】

細胞生存能力は、例えば、細胞において、ニュートラルレッド、トリパンブルー、クリスタルバイオレット、又はＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルーなどの色素の取り込みを決定することにより測定され得る（例えば、Ｐａｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔｌ Ｊ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３：４７３－６を参照されたい）。かかるアッセイでは、色素を含有する培地中で細胞がインキュベートされ、細胞が洗浄され、及び細胞による色素の取り込みを反映する残留色素が分光光度法で測定される。細胞生存能力は、例えば、代謝活性を有する細胞の指標であるＡＴＰを定量化することによっても測定され得る。特定の実施形態において、調製されたＡＤＣ又はスプライシング調節薬化合物のインビトロ効力及び／又は細胞生存能力は、本明細書に提供される例に記載されるとおり、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存能力アッセイを用いて判定され得る。このアッセイでは、特定の実施形態において、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬）が、血清補足培地で培養されている細胞に直接加えられる。試薬を加えると、ＡＴＰの存在量に比例した細胞溶解及び発光シグナルの生成が起こる。ＡＴＰの量は、培養下に存在する細胞の数に正比例する。タンパク質結合色素スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）も細胞傷害性の測定に使用することができる（Ｓｋｅｈａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：１１０７－１２）。

【0732】

開示されるＡＤＣは、バイスタンダー殺傷活性に関しても評価され得る。バイスタンダー殺傷活性は、例えば、１つは標的抗原陽性及び１つは標的抗原陰性の２つの細胞株を用いるアッセイにより決定され得る。特定の実施形態では、アッセイの設計により、標的陰性細胞のみを追跡することが可能である。特定の実施形態では、細胞を３つの条件下にプレーティングする：（ｉ）標的陰性細胞単独（タグ付加又は標識されている）；（ｉｉ）標的陽性細胞単独；及び（ｉｉｉ）標的陰性細胞と標的陽性細胞との共培養。次に細胞をＡＤＣで処理し、続いて細胞傷害性をモニタする。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬でプレートを読み取ると、全ての細胞集団の生存能力をモニタすることができる。ＯｎｅＧｌｏ（登録商標）試薬でプレートを読み取ると、タグ付加又は標識された標的陰性細胞のみがシグナルを生じる。標的陽性細胞と混合したときの標的陰性細胞の殺傷がバイスタンダー殺傷の指標となる一方、標的陽性細胞がないときの標的陰性細胞の殺傷がオフターゲット殺傷の指標となる。

【0733】

特定の態様において、本開示は、ＲＮＡスプライシングを破壊することにより癌細胞又は癌組織を殺傷し、その成長を阻害又は調節し、又はその代謝に干渉する方法を特徴とする。本方法は、ＲＮＡスプライシングの破壊によって治療利益を得る任意の対象で用いることができる。ＲＮＡスプライシングの破壊が有益となり得る対象としては、限定はされないが、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍などの新生物障害を有するか又は有するリスクがある者が挙げられる。特定の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、血液の癌（白血病）、形質細胞の癌（骨髄腫、例えば多発性骨髄腫）、又はリンパ節の癌（リンパ腫）である。特定の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病又は多発性骨髄腫である。特定の実施形態において、白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、又は急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）である。特定の実施形態において、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。特定の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌、膵癌、前立腺癌、結腸又は結腸直腸癌、肺癌、胃癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌、神経膠腫、又は黒色腫などの癌腫である。特定の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌である。特定の実施形態において、肺癌は肺腺癌である。特定の実施形態において、子宮癌は漿液性子宮内膜癌である。

【0734】

様々な実施形態において、開示されるＡＤＣは、ＨＥＲ２発現新生物細胞又は組織など、ＨＥＲ２を発現する任意の細胞又は組織において投与され得る。例示的実施形態には、ＨＥＲ２媒介性細胞シグナル伝達を阻害する方法又は細胞を殺傷する方法が含まれる。本方法は、癌性細胞又は転移性病変など、ＨＥＲ２を発現する任意の細胞又は組織で用いることができる。ＨＥＲ２を発現する癌の非限定的な例としては、乳癌、胃癌、膀胱癌、尿路上皮細胞癌、食道癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、及び卵巣癌が挙げられる（Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ Ｔｈｅｒ．１７：８５－９９）。ＨＥＲ２発現細胞の非限定的な例としては、ＨＣＣ１９５４及びＳＫＢＲ３ヒト乳管癌細胞、Ｎ８７ヒト胃癌細胞、及びＨＥＲ２又はその一部分をコードする組換え核酸を含む細胞が挙げられる。

【0735】

様々な実施形態において、開示されるＡＤＣは、ＣＤ１３８発現新生物細胞又は組織など、ＣＤ１３８を発現する任意の細胞又は組織において投与され得る。例示的実施形態には、ＣＤ１３８媒介性細胞シグナル伝達を阻害する方法又は細胞を殺傷する方法が含まれる。本方法は、癌性細胞又は転移性病変など、ＣＤ１３８を発現する任意の細胞又は組織で用いることができる。ＣＤ１３８を発現する癌の非限定的な例としては、胸腔内癌（例えば、肺癌、中皮腫）、皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌）、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭）、乳癌、泌尿生殖器癌（例えば、子宮頸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌）、血液学的悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫などの骨髄腫、ホジキンリンパ腫）、及び甲状腺癌が挙げられる（Ｓｚａｔｍａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｄｉｓ Ｍａｒｋｅｒｓ ２０１５：７９６０５２）。ＣＤ１３８発現細胞の非限定的な例としては、ＭＯＬＰ８ヒト多発性骨髄腫細胞、及びＣＤ１３８又はその一部分をコードする組換え核酸を含む細胞が挙げられる。

【0736】

様々な実施形態において、開示されるＡＤＣは、ＥＰＨＡ２発現新生物細胞又は組織など、ＥＰＨＡ２を発現する任意の細胞又は組織において投与され得る。例示的実施形態には、ＥＰＨＡ２媒介性細胞シグナル伝達を阻害する方法又は細胞を殺傷する方法が含まれる。本方法は、癌性細胞又は転移性病変など、ＥＰＨＡ２を発現する任意の細胞又は組織で用いることができる。ＥＰＨＡ２を発現する癌の非限定的な例としては、乳癌、脳癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、食道癌、肺癌、前立腺癌、黒色腫、食道癌、及び胃癌が挙げられる（Ｔａｎｄｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ １５（１）：３１－５１。ＥＰＨＡ２発現細胞の非限定的な例としては、ＰＣ３ヒト前立腺癌細胞、及びＥＰＨＡ２又はその一部分をコードする組換え核酸を含む細胞が挙げられる。

【0737】

例示的方法は、有効量、即ち、細胞を殺傷するのに十分な量の本明細書に記載されるとおりのＡＤＣを細胞に接触させるステップを含む。本方法は、培養下の細胞に対して、例えばインビトロ、インビボ、エキソビボ、又はインサイチューで使用することができる。例えば、ＨＥＲ２を発現する細胞（例えば、腫瘍又は転移性病変の生検により回収された細胞；樹立癌細胞株からの細胞；又は組換え細胞）を培養培地中でインビトロ培養することができ、接触させるステップは、培養培地にＡＤＣを加えることにより影響を受け得る。本方法は、詳細にはＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞を含めた、ＨＥＲ２を発現する細胞の殺傷を生じさせることになる。代わりに、本ＡＤＣは、インビボで効果を及ぼすための任意の好適な投与経路（例えば、静脈内、皮下、又は腫瘍組織との直接的な接触）によって対象に投与することができる。この手法は、他の細胞表面抗原（例えば、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２）を標的化する抗体に用いることができる。

【0738】

開示されるＡＤＣ治療組成物のインビボ効果は、好適な動物モデルで評価することができる。例えば、異種癌モデルを使用し得、ここでは癌外植片又は継代異種移植片組織がヌードマウス又はＳＣＩＤマウスなどの免疫不全動物に導入される（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．３：４０２－８）。有効性は、腫瘍形成、腫瘍退縮又は転移などの阻害を測定するアッセイを用いて予測され得る。

【0739】

アポトーシスなどの機構による腫瘍死滅の促進を評価するインビボアッセイも用いることができる。一実施形態において、治療組成物で治療された腫瘍担持マウスからの異種移植片をアポトーシスフォーカスの存在に関して調べ、未治療の対照異種移植片担持マウスと比較することができる。治療したマウスの腫瘍にアポトーシスフォーカスがどの程度見られるかが、組成物の治療有効性の指標を与える。

【0740】

更に、本明細書には、新生物障害、例えば癌の治療方法が提供される。本明細書に開示されるＡＤＣは、治療目的で非ヒト哺乳類又はヒト対象に投与することができる。治療的方法は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象に、癌細胞表面に発現する抗原に結合するか、そこでの結合に利用可能であるか、又はそこに局在化するターゲティング抗体に連結したスプライシング調節薬を含むＡＤＣ又は組成物の治療有効量を投与することを伴う。一部の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、標的抗原を発現しないが、標的抗原を発現する新生物細胞に隣接する新生物細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。

【0741】

例示的実施形態は、ＨＥＲ２を発現する細胞にスプライシング調節薬を送達する方法であって、ＨＥＲ２エピトープに免疫特異的に結合する抗体にスプライシング調節薬をコンジュゲートすること、及び細胞をこのＡＤＣに曝露することを含む方法である。本開示のＡＤＣが適応となるＨＥＲ２を発現する例示的腫瘍細胞としては、胃癌細胞及び乳管癌細胞が挙げられる。

【0742】

別の例示的実施形態は、ＣＤ１３８を発現する細胞にスプライシング調節薬を送達する方法であって、ＣＤ１３８エピトープに免疫特異的に結合する抗体にスプライシング調節薬をコンジュゲートすること、及び細胞をこのＡＤＣに曝露することを含む方法である。本開示のＡＤＣが適応となるＣＤ１３８を発現する例示的腫瘍細胞としては、多発性骨髄腫細胞が挙げられる。

【0743】

別の例示的実施形態は、ＥＰＨＡ２を発現する細胞にスプライシング調節薬を送達する方法であって、ＥＰＨＡ２エピトープに免疫特異的に結合する抗体にスプライシング調節薬をコンジュゲートすること、及び細胞をこのＡＤＣに曝露することを含む方法である。本開示のＡＤＣが適応となるＥＰＨＡ２を発現する例示的腫瘍細胞としては、前立腺癌細胞が挙げられる。

【0744】

別の例示的実施形態は、腫瘍（例えば、ＨＥＲ２発現腫瘍、ＣＤ１３８発現腫瘍、ＥＰＨＡ２発現腫瘍）の成長を低減又は阻害する方法であって、治療有効量のＡＤＣ又はＡＤＣを含む組成物を投与することを含む方法である。一部の実施形態において、治療は、患者の腫瘍の成長を低減又は阻害し、転移性病変の数又はサイズを低減し、腫瘍負荷を低減し、原発腫瘍負荷を低減し、侵襲性を低減し、生存期間を延長させ、及び／又はクオリティ・オブ・ライフを維持し又は向上させるのに十分である。一部の実施形態において、腫瘍は、単独投与時のＡＤＣの抗体又は抗原結合断片（例えば、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＥＰＨＡ２抗体）による治療に抵抗性又は難治性であり、及び／又は腫瘍は、単独投与時のスプライシング調節薬薬物部分による治療に抵抗性又は難治性である。

【0745】

特定の態様において、本開示は、ＨＥＲ２発現腫瘍の成長を低減又は阻害する方法を提供する。特定の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、ＨＥＲ２を発現しないが、ＨＥＲ２を実に発現する新生物腫瘍細胞に隣接する腫瘍細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。例示的ＨＥＲ２発現腫瘍型としては、限定はされないが、ＨＥＲ２を発現する乳癌、胃癌、膀胱癌、尿路上皮細胞癌、食道癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、及び卵巣癌に由来する腫瘍が挙げられる。特定の実施形態において、ＨＥＲ２発現腫瘍は、ＨＥＲ２を発現する乳癌、卵巣癌、胃癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、骨肉腫、又は唾液管癌に由来する腫瘍である。特定の実施形態において、ＨＥＲ２発現腫瘍は肺腺癌又は漿液性子宮内膜癌である。

【0746】

特定の態様において、本開示は、ＣＤ１３８発現腫瘍の成長を低減又は阻害する方法を提供する。特定の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、ＣＤ１３８を発現しないが、ＣＤ１３８を実に発現する新生物腫瘍細胞に隣接する腫瘍細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。例示的ＣＤ１３８発現腫瘍型としては、限定はされないが、ＣＤ１３８を発現する胸腔内癌（例えば、肺癌、中皮腫）、皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌）、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭）、乳癌、泌尿生殖器癌（例えば、子宮頸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌）、及び甲状腺癌に由来する腫瘍が挙げられる。

【0747】

特定の態様において、本開示は、ＥＰＨＡ２発現腫瘍の成長を低減又は阻害する方法を提供する。特定の実施形態において、本抗体－薬物コンジュゲート又は組成物による治療は、ＥＰＨＡ２を発現しないが、ＥＰＨＡ２を実に発現する新生物腫瘍細胞に隣接する腫瘍細胞のバイスタンダー殺傷を誘導する。例示的ＥＰＨＡ２発現腫瘍型としては、限定はされないが、ＥＰＨＡ２を発現する乳癌、脳癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、食道癌、肺癌、前立腺癌、黒色腫、食道癌、及び胃癌に由来する腫瘍が挙げられる。特定の実施形態において、ＥＰＨＡ２発現腫瘍は、ＥＰＨＡ２を発現する乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、黒色腫、結腸癌、又は食道癌に由来する腫瘍である。

【0748】

更に、本開示の抗体は、獣医学的目的で、又はヒト疾患の動物モデルとして、ＡＤＣが結合能を有する抗原を発現する非ヒト哺乳類に投与され得る。後者に関して、かかる動物モデルは、開示されるＡＤＣの治療有効性の評価（例えば、投薬量及び投与の時間経過の試験）に有用であり得る。

【0749】

更に、本明細書には、開示されるＡＤＣ及び組成物の治療的使用が提供される。例示的実施形態は、新生物障害（例えば、ＨＥＲ２発現癌、ＣＤ１３８発現癌、ＥＰＨＡ２発現癌）の治療におけるＡＤＣの使用である。別の例示的実施形態は、新生物障害（例えば、ＨＥＲ２発現癌、ＣＤ１３８発現癌、ＥＰＨＡ２発現癌）の治療における使用のためのＡＤＣである。標的抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ１）を発現する癌を有する対象の同定方法は当技術分野において公知であり、開示されるＡＤＣによる治療に好適な患者の同定に用いることができる。

【0750】

別の例示的実施形態は、新生物障害（例えば、ＨＥＲ２発現癌、ＣＤ１３８発現癌、ＥＰＨＡ２発現癌）の治療のための医薬品を製造する方法におけるＡＤＣの使用である。

【0751】

前述の方法の実施において使用される治療組成物は、所望の送達方法に好適な薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物に製剤化され得る。例示的実施形態は、本開示のＡＤＣと薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物である。好適な担体には、治療組成物と組み合わせたとき、治療組成物の抗腫瘍機能を保持し、且つ概して患者の免疫系との反応性を有しない任意の材料が含まれる。薬学的に許容可能な担体には、生理的に適合性のあるあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に許容可能な担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、メシル酸塩などの１つ以上並びにこれらの組み合わせが挙げられる。多くの場合、組成物中には等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール類、又は塩化ナトリウムが含まれる。薬学的に許容可能な担体は、湿潤剤又は乳化剤、保存剤又は緩衝液など、ＡＤＣの保存期間又は有効性を亢進させる少量の補助物質を更に含み得る。

【0752】

治療製剤は、可溶化され、治療組成物を腫瘍部位に送達可能な任意の経路によって投与され得る。潜在的に有効な投与経路としては、限定はされないが、静脈内、非経口、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、皮内、臓器内、同所性などが挙げられる。治療用タンパク質調製物は凍結乾燥し、滅菌粉末として例えば真空下で保存し、次に注射前に静菌水中（例えば、ベンジルアルコール保存剤を含有する）又は滅菌水中に再構成することができる。治療製剤は、ＡＤＣ又はその薬学的に許容可能な塩、例えばメシル酸塩を含み得る。

【0753】

一部の実施形態において、ＡＤＣは、連日、隔月、又は間の任意の期間で患者に投与される。前述の方法を用いた癌の治療用の投薬量及び投与プロトコルは、方法及び標的の癌によって異なることになり、概して当技術分野で認められている幾つもの他の要因に依存することになる。

【0754】

様々な送達システムが公知であり、本開示の１つ以上のＡＤＣの投与に用いることができる。ＡＤＣの投与方法としては、限定はされないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、及び粘膜投与（例えば、鼻腔内及び経口経路）が挙げられる。加えて、例えば、インへラー又は噴霧器、及びエアロゾル化性薬剤を含む製剤の使用により、肺内投与が用いられ得る。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、同第５，９８５，３２０号明細書、同第５，９８５，３０９号明細書、同第５，９３４，２７２号明細書、同第５，８７４，０６４号明細書、同第５，８５５，９１３号明細書、同第５，２９０，５４０号明細書、及び同第４，８８０，０７８号明細書；及び国際公開第１９９２／０１９２４４号パンフレット、同第１９９７／０３２５７２号パンフレット、同第１９９７／０４４０１３号パンフレット、同第１９９８／０３１３４６号パンフレット、及び同第１９９９／０６６９０３号パンフレットに記載される肺内投与用の組成物及び方法を参照されたい。ＡＤＣは、任意の好都合な経路、例えば、注入若しくはボーラス注射によるか、又は上皮若しくは皮膚粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）からの吸収により投与され得る。投与は全身投与又は局所投与のいずれでもあり得る。

【0755】

本明細書に開示される治療組成物は、無菌で、且つ製造及び貯蔵条件下で安定しているものであり得る。一部の実施形態において、ＡＤＣ、又は医薬組成物の１つ以上が、乾燥滅菌凍結乾燥粉末又は水分を含まない濃縮物としてハーメチックシール容器に供給され、これは対象への投与に適切な濃度となるように（例えば、水又は生理食塩水で）再構成することができる。一部の実施形態において、予防剤又は療法剤又は医薬組成物の１つ以上は、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇ、又は間の任意の量の単位投薬量の乾燥滅菌凍結乾燥粉末としてハーメチックシール容器に供給される。一部の実施形態において、凍結乾燥ＡＤＣ又は医薬組成物は当初の容器に２℃～８℃で保存される。一部の実施形態において、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の１つ以上は、ハーメチックシール容器、例えば薬剤の分量及び濃度を指示する容器に液体形態で供給される。一部の実施形態において、投与される組成物の液体形態は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、又は少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ ＡＤＣのハーメチックシール容器に供給される。液体形態は、当初の容器に２℃～８℃で保存され得る。

【0756】

一部の実施形態において、開示されるＡＤＣは、非経口投与に好適な医薬組成物に取り入れることができる。注射用溶液は、フリント若しくはアンバーバイアル、アンプル若しくはプレフィルドシリンジ、又は他の公知の送達若しくは保存装置内にある液体又は凍結乾燥剤形のいずれかで構成され得る。

【0757】

本明細書に記載される組成物は種々の形態であり得る。それらとしては、例えば、液体、半固体、及び固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散液又は懸濁液、錠剤、丸薬、散剤、リポソーム、及び坐薬などが挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療上の適用に依存する。

【0758】

様々な実施形態において、治療は、許容可能な投与経路によるＡＤＣ調製物の単回ボーラス又は反復投与を含む。

【0759】

最も有効な投与レジメンの決定等を助けるため、所与の試料中の標的抗原レベル（例えば標的抗原発現細胞レベル）に関して患者が評価され得る。例示的実施形態は、本開示のＡＤＣによる治療が患者に奏効するかどうかを決定する方法であって、患者からの生体試料を提供することと、生体試料にＡＤＣを接触させることとを含む方法である。例示的生体試料としては、炎症性滲出物、血液、血清、腸液、便試料、又は腫瘍生検（例えば、標的抗原を発現する癌、例えば、ＨＥＲ２発現癌、ＣＤ１３８発現癌、ＥＰＨＡ２発現癌を有する又はそのリスクがある患者に由来する腫瘍生検）など、組織又は体液が挙げられる。一部の実施形態において、対象から試料（例えば、組織及び／又は体液）を入手することができ、好適な免疫学的方法を用いて標的抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ１３８、ＥＰＨＡ２、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＨ１、ＣＤＨ６、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＣ１Ｂ、ＥＮＰＰ３、ＦＯＬＲ１、ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＭＵＣ１６、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＴＥＡＰ１）のタンパク質発現を検出及び／又は測定することができる。かかる評価は、療法全体を通じたモニタリングのためにも用いられ、他のパラメータの評価と組み合わせて療法の成功を判断するのに有用である。

【0760】

一部の実施形態において、ＡＤＣの有効性は、対象からの腫瘍試料にＡＤＣを接触させること、及び腫瘍成長速度又は容積を評価することにより評価され得る。一部の実施形態において、ＡＤＣが有効であると決定された場合、それを対象に投与し得る。

【0761】

上記の治療手法は、多種多様な追加の手術、化学療法、又は放射線療法レジメンのいずれか１つと組み合わせることができる。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣ又は組成物は、１つ以上の追加の療法剤、例えば１つ以上の化学療法剤と共製剤化され、及び／又は共投与される。化学療法剤の非限定的な例としては、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン化合物、及びスルホン酸アルキル；代謝拮抗薬、例えば、葉酸、プリン又はピリミジン拮抗薬；抗有糸分裂剤、例えば、エリブリン又はエリブリンメシル酸塩（Ｈａｌａｖｅｎ（商標））、ビンカアルカロイド類、及びアウリスタチン類などの抗チューブリン剤；細胞傷害性抗生物質；ＤＮＡ発現又は複製に損傷を与える又は干渉する化合物、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤；及び成長因子受容体拮抗薬が挙げられる。一部の実施形態において、化学療法剤は細胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤であり得る。細胞傷害剤の例としては、限定はされないが、エリブリン又はエリブリンメシル酸塩（Ｈａｌａｖｅｎ（商標））、アウリスタチン類（例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ））、メイタンシノイド類（例えば、メイタンシン）、ドラスタチン類、デュオスタチン類、クリプトフィシン類、ビンカアルカロイド類（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン）、タキサン類、タキソール類、及びコルヒチン類などの抗有糸分裂剤；アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン）；細胞傷害性抗生物質（例えば、マイトマイシン類、アクチノマイシン類、デュオカルマイシン類（例えば、ＣＣ－１０６５）、オーレオマイシン類、デュオマイシン類、カリケアマイシン類、エンドマイシン類、フェノマイシン類）；アルキル化剤（例えば、シスプラチン）；インターカレート剤（例えば、臭化エチジウム）；トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシド、テニポシド）；Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２又は^２１３、Ｐ^３２などの放射性同位体、及びルテチウムの放射性同位体（例えば、Ｌｕ^１７７）；及び細菌、真菌、植物又は動物起源の毒素（例えば、リシン（例えば、リシンＡ鎖）、ジフテリア毒素、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素Ａ（例えば、ＰＥ４０）、エンドトキシン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、コンブレスタチン、レストリクトシン、ゲロニン、αサルシン、アブリン（例えば、アブリンＡ鎖）、モデシン（例えば、モデシンＡ鎖）、クリシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、サボンソウ阻害薬、グルココルチコイド）が挙げられる。

【0762】

また、本明細書には、例えば上記に記載される方法に係る癌の治療のための医薬品の製造における開示されるＡＤＣの１つ以上の使用も開示される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるＡＤＣは、例えば上記に記載される方法に係る癌の治療に使用される。

【0763】

様々な実施形態において、本明細書に記載される臨床検査及び治療上の適用における使用のためのキットが、本開示の範囲内にある。かかるキットは、バイアル、チューブなどの１つ以上の容器であって、その各々が本明細書に開示される方法で使用される別個の要素の１つを含む容器を受けるように区画化されている運搬手段、パッケージ、又は容器を、本明細書に記載される使用など、使用に関する説明書を含む表示又は添付文書と共に含み得る。キットは、薬物部分を含む容器を含み得る。本開示は、薬剤の分量を指示するアンプル又はサッシェなどのハーメチックシール容器にパッケージングされたＡＤＣの１つ以上、又はその医薬組成物も提供する。

【0764】

キットは、上記に記載される容器と、それに関連する１つ以上の他の容器であって、緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ；内容物を列挙する運搬手段、パッケージ、容器、バイアル及び／又はチューブの表示及び／又は使用説明書、及び使用説明書を含む添付文書を含めた、商業的観点及び使用者の観点から望ましい材料を含む容器とを含み得る。

【0765】

本組成物が特定の治療法又は予後判定、予防、診断若しくは臨床検査適用などの非治療的適用に使用されることを指示するため、容器上又は容器と共に表示が存在し得る。表示は、本明細書に記載されるものなど、インビボ又はインビトロのいずれかの使用についての指図も指示し得る。指図及び／又は他の情報は、キットと共に又はキット上に含まれる１つ又は複数の添付文書又は１つ又は複数の表示にも含まれ得る。表示は容器上にあるか又はそれに付随し得る。表示は、表示を形成する英字、数字、又は他の文字が容器それ自体に成形又はエッチングされているとき、容器上にあるとし得る。表示は、それが同時に容器も保持する入れ物又は運搬手段の中に例えば添付文書として存在するとき、容器に付随するとし得る。表示は、本組成物が本明細書に記載される癌などの病態の診断又は治療に使用されることを指示し得る。

【0766】

ネオ抗原及び使用方法
本明細書には、様々な実施形態において、患者の免疫系がクリアランスの標的とし得る腫瘍細胞のネオ抗原を誘導することにより患者を治療する方法も開示される。理論により拘束されるものではないが、様々な実施形態において、スプライシング調節薬を単独で、及び／又はＡＤＣ若しくは組成物の一部として投与すると、免疫応答を誘導する、例えばイントロン常在内因性レトロウイルスが再発現する結果として二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導するネオ抗原が生じ、及び／又は免疫原性細胞死を誘導するネオ抗原が生じ得る。

【0767】

本明細書で使用されるとき、用語「ネオ抗原」は、免疫系が過去に曝露したことのない、１つ以上の腫瘍特異的突然変異及び／又は薬物（例えば、単独での、及び／又はＡＤＣ若しくは組成物の一部としての、本明細書に開示されるスプライシング調節薬の任意の１つ以上）への腫瘍の曝露から生じる任意の抗原を指す。腫瘍特異的突然変異には、ミスセンス突然変異、フレームシフト、転座、及びｍＲＮＡスプライシング変異体並びにリン酸化及びグリコシル化などの翻訳後プロセシングに影響を与える突然変異が含まれ得る。これらの例示的突然変異は、様々な実施形態において、非同義的コード変化及び／又はｍＲＮＡプロセシング（例えば、スプライシング）を変化させる突然変異に由来し得る。これらの例示的突然変異の全ては、様々な実施形態において、適切なＴ細胞受容体が判別することのできる分子変化を生じさせ得る。様々な好ましい実施形態において、例示的ネオ抗原は、単独での、及び／又はＡＤＣ若しくは組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達によって誘導されるネオ抗原である。様々な実施形態において、スプライシング調節薬（例えば、本明細書に開示されるスプライシング調節薬の任意の１つ以上）の送達は、免疫系が過去に曝露したことのない１つ以上の新規ペプチドドメインを含有するタンパク質の翻訳を生じさせる新規ｍＲＮＡスプライシングを誘導することができる。様々な実施形態において、腫瘍特異的突然変異は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物の送達又は投与によって生じるｍＲＮＡスプライシング変異体であり得る。

【0768】

理論により拘束されるものではないが、様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達は、様々な遺伝子のオープンリーディングフレーム及び／又はコード配列に変化を生じさせる新規ｍＲＮＡスプライシング（例えば、エクソンスキッピング、イントロンリテンション）を誘導し得る。様々な実施形態において、これらの変化した遺伝子は、免疫系が外来性と認識する１つ以上の新規ペプチドドメインを含有するタンパク質に翻訳される。様々な実施形態において、これらの１つ以上の新規ペプチドドメインは、スプライシング調節薬治療がなければタンパク質に存在せず、又はヒトプロテオームのいかなる他の部分にも存在しない。様々な実施形態において、１つ以上の新規ペプチドドメインを含有するタンパク質はプロテアソームによって分解されて新規ペプチド断片を作り出すことができ、この断片が、例えばＭＨＣ提示を介して免疫ペプチド提示機構の基質としての役割を果たす。様々な実施形態において、ネオ抗原に相当するこの新規ペプチド断片は、例えば腫瘍細胞上のＭＨＣ１が結合したペプチドームにおいて提示されることができる。

【0769】

様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達は、１つ以上の腫瘍細胞固有イベント（例えば、細胞成長停止）につながり得る。様々な実施形態において、１つ又は複数の腫瘍細胞固有イベントは、（１）貪食細胞による会合亢進（Ｂｒａｃｃｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２１（１）：１５－２５）；（２）腫瘍流入領域リンパ節への新規ペプチド断片の輸送による抗原提示細胞との会合；（３）貪食された腫瘍細胞からの新規ペプチド断片を抗原提示細胞がプロセシングし、その断片をネオ抗原として循環中のナイーブＴ細胞集団に提示すること；（４）新規ペプチド断片が、その断片をネオ抗原として認識する受容体を発現するＴ細胞と相互作用すること；（５）エフェクターＴ細胞応答の成熟及び活性化（例えば、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞；及び／又は（６）スプライシング調節薬治療に曝露された、及びその表面ＭＨＣ１複合体上にネオ抗原に相当する新規ペプチド断片を提示する更なる腫瘍細胞とのＴ細胞の会合につながり得る。様々な実施形態において、１つ又は複数の腫瘍細胞固有イベントは、直接的又は間接的に、エフェクター機能のＴ細胞会合及び／又はネオ抗原を提示する腫瘍細胞の死滅をもたらし得る。

【0770】

また、理論により拘束されるものではないが、様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達が、イントロン常在内因性レトロウイルスの再発現を生じさせ、二本鎖ＲＮＡ免疫応答につながり得る。

【0771】

更に、理論により拘束されるものではないが、様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達は、スプライス調節薬の誘導による突然変異由来ネオ抗原の放出によって惹起される免疫原性細胞死につながり得る。様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達は、二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導し得る。様々な実施形態において、二本鎖ＲＮＡ免疫応答は、イントロン常在内因性レトロウイルスが再発現することにより起こり得る。様々な実施形態において、二本鎖ＲＮＡ免疫応答により、腫瘍細胞死が起こり得る。様々な実施形態において、単独での、及びＡＤＣ又は組成物の一部としてのスプライシング調節薬の送達は、免疫原性細胞死を誘導し得る。様々な実施形態において、免疫原性細胞死は、突然変異由来ネオ抗原の放出及び／又は腫瘍細胞に対する宿主免疫応答により起こり得る。

【0772】

従って、様々な実施形態において、１つ以上のスプライシング調節薬及び／又はＡＤＣ及び／又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物、例えば、本明細書に開示される任意のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与することによってネオ抗原を誘導することを含む治療方法が開示される。様々な実施形態において、本方法は、ネオ抗原の誘導がなかったならば必要となったであろうよりも低い投薬量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与することを含む。一部の実施形態において、本方法は、１つ以上の初期導入用量を投与してネオ抗原を産生させ、免疫応答を誘導すること（例えば、ナイーブＴ細胞を記憶細胞に変換させること）と、続く低減した投薬量又は投与頻度（即ち、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とネオ抗原の免疫ターゲティングとの併用効果に起因する）を含む。一部の実施形態において、治療は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原ベースの免疫応答を誘導することと、少なくとも１つの追加療法（例えば、第２の抗癌療法）との併用を含み得る。例えば、一部の実施形態では、治療は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原ベースの免疫応答を誘導することと、１つ以上のチェックポイント阻害薬との併用を含み得る。一部の実施形態において、治療は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原ベースの免疫応答を誘導することと、１つ以上のサイトカイン又はサイトカイン類似体との併用を含み得る。一部の実施形態において、治療は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原ベースの免疫応答を誘導することと、１つ以上のネオ抗原ワクチンとの併用を含み得る。一部の他の実施形態において、治療は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原ベースの免疫応答を誘導することと、１つ以上の改変腫瘍標的化Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）との併用を含み得る。

【0773】

一部の実施形態では、ネオ抗原を使用して、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療の有効性をモニタすることができる。例えば、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与後に患者試料（例えば、腫瘍生検）を入手し、ネオ抗原に関して、又は免疫応答若しくは炎症反応の同定因子に関してスクリーニングすることができる。ネオ抗原及び／又は免疫応答が検出された場合、更なる治療を例えば低減した投薬量で提供することができる。

【0774】

様々な実施形態において、１つ以上のスプライシング調節薬及び／又はＡＤＣ及び／又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物、例えば、本明細書に開示される任意のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与することによって二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導することを含む治療方法が開示される。

【0775】

様々な実施形態において、１つ以上のスプライシング調節薬及び／又はＡＤＣ及び／又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物、例えば、本明細書に開示される任意のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与することによって免疫原性細胞死を誘導することを含む治療方法が開示される。

【0776】

様々な実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬を含む組成物の投与は、任意の公知の抗癌療法と併用することができる。現行の腫瘍科治療に利用可能な免疫活性化戦略の例としては、限定はされないが、免疫チェックポイント阻害薬（ＩＣＩ）分子による治療、サイトカイン又はサイトカイン類似体による治療、腫瘍関連ワクチンの接種、及び腫瘍標的化Ｔ細胞の改変（例えば、腫瘍浸潤リンパ球の拡大又はＣＡＲ－Ｔ）が挙げられる。これらの技術は主に、既に存在している腫瘍抗原（突然変異又は細胞表面タンパク質の異常発現のいずれか）に対する免疫応答を亢進させ又は誘導することに焦点を置いている。これらの戦略の１つ以上に、抗原性Ｔ細胞応答の誘導能を有する１つ以上の突然変異が関わり得る。例えば、チェックポイント阻害に対する患者奏効は非同義突然変異荷重と相関し得る。加えて、既存の突然変異及びそれらの突然変異の抗原性に頼る癌ワクチン手法が用いられ得る。

【0777】

スプライシング調節薬及び／又はかかる調節薬を含むＡＤＣは、多系統に起こる広範囲のトランスクリプトーム変化を誘導し得る。これらのｍＲＮＡ変化が翻訳されると、複数のＨＬＡアイソタイプにわたって高親和性のＭＨＣ１結合ネオペプチドを生み出すロバストな再現性のあるタンパク質変化が生じ得る。理論により拘束されるものではないが、トランスクリプトーム及びプロテオームの数多くの変化に起因して、スプライシング調節薬及び／又はＡＤＣによる治療は、潜在的に応答性のネオ抗原の数を増強して適応免疫応答の関与を亢進させ得る。

【0778】

本明細書に記載されるとき、用語「スプライシング調節薬」、「スプライセオソーム調節薬」、又は「スプライス調節薬」は、スプライセオソームの成分と相互作用することにより抗癌活性を有する化合物を指す。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、標的細胞におけるスプライシングの速度又は形態を変化させる。例えば、阻害性薬剤として機能するスプライシング調節薬は、無制御な細胞増殖を低下させる能力を有する。詳細には、一部の実施形態では、スプライシング調節薬は、ＳＦ３ｂスプライセオソーム複合体を阻害することにより作用し得る。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、本明細書に開示されるスプライシング調節薬の任意の１つ以上から選択される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬は、単独の薬剤として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与される。一部の他の実施形態において、スプライシング調節薬は、ＡＤＣ（例えば、本明細書に開示される例示的ＡＤＣのいずれかから選択されるＡＤＣ）の一部として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与される。一部の他の実施形態において、スプライシング調節薬は、スプライシング調節薬の複数のコピー又はスプライシング調節薬を担持するＡＤＣの複数のコピーを含む組成物の一部として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与される。かかる組成物は本明細書に開示される。

【0779】

一部の実施形態において、ＡＤＣ（例えば、本明細書に開示される例示的ＡＤＣのいずれかから選択されるＡＤＣ）の一部として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与されるスプライシング調節薬は、単独の薬剤として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与されるスプライシング調節薬と比べて付加的な治療利益をもたらす。例えば、一部の実施形態では、ＡＤＣの一部として使用され、細胞に送達され、及び／又は対象に投与されるスプライシング調節薬は、標的抗原（即ち、ＡＤＣの抗体部分によって標的化される抗原）を発現する新生物細胞へのスプライシング調節薬の標的化した送達をもたらす。一部の実施形態において、このように標的化されたスプライシング調節薬送達は、オフターゲット治療及び／又はオフターゲット細胞傷害性を低減する。一部の実施形態において、このように標的化された送達は、標的抗原を発現しない健常細胞上ではなく、新生物細胞上での腫瘍選択的ネオ抗原提示を増進する。一部の実施形態において、かかる標的化した送達は、例えば、新規ｍＲＮＡ及びＭＨＣ結合ペプチドの選択的スプライシング及び誘導の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％が、オフターゲット細胞よりむしろ、標的化された新生物細胞におけるネオ抗原に相当することにつながる。従って、理論により拘束されるものではないが、一部の実施形態では、本明細書に開示されるとおりのＡＤＣによる治療後に腫瘍細胞上にネオ抗原が優先的に発現するため、エフェクターＴ細胞プライミング及び／又は拡大（例えば、ネオ抗原ワクチンを使用）の後、免疫系は健常細胞でなく、むしろネオ抗原提示新生物細胞を優先的に攻撃し得る。

【0780】

免疫誘導及び治療レジメン：
様々な実施形態において、本開示は、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、スプライシング調節薬ベースの抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物に接触させることにより、少なくとも１つのネオ抗原を誘導する方法を提供する。様々な実施形態において、本開示は、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、スプライシング調節薬ベースの抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物に接触させることにより、二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導する方法を提供する。様々な実施形態において、本開示は、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、スプライシング調節薬ベースの抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物に接触させることにより、免疫原性細胞死を誘導する方法を提供する。

【0781】

一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0782】

一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍に由来する。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌（例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌）、胃癌（例えば、胃腺癌）、前立腺癌、卵巣癌、肺癌（例えば、肺腺癌）、子宮癌（例えば、漿液性子宮内膜癌）、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0783】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象において、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を誘導する方法を更に提供する。また本明細書には、様々な実施形態において、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより治療する方法も提供され、ここでスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を誘導する。

【0784】

様々な他の実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象において、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導する方法を提供する。また本明細書には、様々な実施形態において、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより治療する方法も提供され、ここでスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導する。

【0785】

なおも他の実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象において、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより免疫原性細胞死を誘導する方法を提供する。更に本明細書には、様々な実施形態において、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより治療する方法が提供され、ここでスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、免疫原性細胞死を誘導する。

【0786】

本明細書に記載される治療的方法の一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0787】

一部の実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、第２の薬剤を含む１つ以上の追加療法との併用で、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することにより治療する方法を更に提供し、ここでスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、免疫原性細胞死を誘導する。

【0788】

本明細書に記載される治療的方法の一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の投与される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の標準的な投薬量と比較したとき、少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答の誘導を理由として低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の投与量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の標準的な投与レジメンと比較したとき、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低い頻度で投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、又は第２の薬剤の投与量及び／又は投薬量は、全身毒性の低下及び／又は忍容性の向上をもたらす。

【0789】

本明細書で使用されるとき、用語「標準的な投薬量」又は「標準的な投与レジメン」は、療法剤についての任意の通常の又はルーチンの投与レジメン、例えば、製造者によって提案されるレジメン、規制当局によって承認されているレジメン、又は他の形で平均的な患者の必要に応えるためヒト対象で試験されるレジメンを指す。一部の実施形態において、療法剤は、抗癌活性を有するスプライシング調節薬、抗体、又は抗体－薬物コンジュゲートである。

【0790】

例えば、本明細書に開示される例示的抗ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブの標準的な投与レジメンは、９０分かけて静脈内投与される８ｍｇ／ｋｇ（１週目）と、それに続く３週間毎に３０～９０分かけて静脈内投与される６ｍｇ／ｋｇ（４週目から療法サイクルの終了時まで）であり得る（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）ＦＤＡ表示補足、２０１７）。

【0791】

別の例として、例示的抗ＣＴＬＡ４チェックポイント阻害薬抗体であるイピリムマブの標準的な投与レジメンは、４用量にわたって３週間毎に９０分かけて静脈内投与される３ｍｇ／ｋｇであり得る（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）ＦＤＡ表示補足、２０１８）。イピリムマブの別の標準的な投与レジメンは、４用量にわたって３週間毎に９０分かけて静脈内投与される１０ｍｇ／ｋｇと、それに続く最長３年間の１２週間毎の１０ｍｇ／ｋｇであり得る（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）ＦＤＡ表示補足、２０１８）。

【0792】

別の例として、例示的抗ＰＤ１チェックポイント阻害薬抗体であるニボルマブの標準的な投与レジメンは、２週間毎に６０分かけて静脈内投与される３ｍｇ／ｋｇであり得る（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ）ＦＤＡ表示、２０１５）。

【0793】

別の例として、例示的抗ＰＤＬ１チェックポイント阻害薬抗体であるアテゾリズマブの標準的な投与レジメンは、３週間毎に６０分かけて静脈内投与される１２００ｍｇであり得る（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）（アテゾリズマブ）ＦＤＡ表示補足、２０１８）。

【0794】

更に別の例として、例示的抗ＨＥＲ２抗体薬物コンジュゲートであるＴ－ＤＭ１の標準的な投与レジメンは、３週間毎に９０分かけて静脈内投与される３．６ｍｇ／ｋｇであり得る（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）（Ｔ－ＤＭ１）ＦＤＡ表示補足、２０１６）。

【0795】

一部の実施形態において、本明細書に記載される方法は、少なくとも１つの追加療法（例えば、チェックポイント阻害薬、ネオ抗原ワクチン、サイトカイン又はサイトカイン類似体、ＣＡＲ－Ｔ等）を投与することを更に含み得る。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答の誘導を理由として低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、二本鎖ＲＮＡ免疫応答の誘導を理由として低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、免疫原性細胞死の誘導を理由として低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投与レジメンと比較したとき、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低い頻度で投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、組成物、及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与量及び／又は投薬量は、全身毒性の低下及び／又は忍容性の向上をもたらす。

【0796】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与前に開始される。他の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与後に開始される。なおも他の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与と同時に開始される。

【0797】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の標準的な投薬量又は初回投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。

【0798】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量又は初回投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。

【0799】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与は、少なくとも１つの追加療法の反復投与と同時である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の反復投与と逐次的であるか又は時間をずらされる。

【0800】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、チェックポイント阻害薬、例えば、本明細書に開示される任意のチェックポイント阻害薬を投与することを含む。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のチェックポイント阻害薬に不忍容、不応性、又は難反応性である。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＧＩＴＲ、及び／又はＫＩＲを標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲを標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、その標的に対する阻害活性又はアゴニスト活性を有する抗体である。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は阻害抗体又は他の類似の阻害性分子で標的化する。他の実施形態において、チェックポイント阻害薬はアゴニスト抗体又は他の類似のアゴニスト分子で標的化する。

【0801】

一部の他の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、ネオ抗原ワクチン、例えば、本明細書に開示される任意のネオ抗原ワクチンを投与することを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与前に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与後に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与と同時に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。

【0802】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ペプチドを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは１つ又は２つ以上のネオ抗原配列を含む。

【0803】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0804】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６～９３のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６の抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７４～７７のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分はカノニカルペプチド配列（例えば、表２１において下線が付されている例示的カノニカルペプチド配列のいずれか）と排他的に重複せず、又はそれからならない。

【0805】

ネオ抗原配列の「抗原性部分」又は「抗原性断片」という用語は、本明細書で使用されるとき、Ｔ細胞応答（例えば、１つ又は複数のエフェクターＴ細胞集団の抗原特異的拡大及び／又は成熟）を誘導する能力を保持しているネオ抗原配列の１つ以上の断片を指す。抗原性部分は、一部の実施形態では、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）によってインターナライズされ、プロセシングされ、及び／又は提示される能力も保持し得る。一部の実施形態において、抗原性部分は、Ｔ細胞プライミング機能も保持する。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分（例えば、配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分）、又はそのコードｍＲＮＡは、ネオ抗原ワクチンとして製剤化される。

【0806】

抗原性部分の例示的実施形態は、配列番号６６のアミノ酸４５～５３に隣接する１つ又は複数の領域である。抗原性部分の別の例示的実施形態は、配列番号６６のアミノ酸８２～９０に隣接する１つ又は複数の領域である。一部の実施形態において、抗原性部分は、対象において発現する少なくとも１つのＨＬＡアレル（例えば、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１）に結合する能力を有する。一部の他の実施形態において、抗原性部分は、新生物障害に罹患している対象集団中の対象の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、又は少なくとも４５％に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、抗原性部分は、新生物障害に罹患している対象集団の少なくとも１％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％に存在する腫瘍に対するＴ細胞応答を誘発する能力を有する。

【0807】

一部の実施形態において、抗原性部分はカノニカルペプチド配列と排他的に重複せず、又はそれからならない。用語「カノニカルペプチド配列」は、本明細書で使用されるとき、スプライシング調節薬との接触がない中で（例えば、単独での、及び／又はＡＤＣ若しくは組成物の一部としてのスプライシング調節薬との接触がない中で）、及び／又は免疫が過去に曝露したことがあるスプライシング調節薬との接触がない中でヒトプロテオームに存在する任意の連続ペプチド配列を指す。一部の実施形態において、カノニカルペプチド配列は、カノニカル転写物オープンリーディングフレームに由来し、及び／又はそれによってコードされる。表２１において例示的カノニカルペプチド配列に下線を付す。

【0808】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬が（例えば、単独で、及び／又はＡＤＣ若しくは組成物の一部として）投与されるとき、カノニカルペプチド配列は、スプライシング調節薬によって誘導される異常スプライシングイベントに先行する直ちに５’側のインフレーム２４ヌクレオチドに由来し、及び／又はそれによってコードされ得る。従って、一部の実施形態では、カノニカルペプチド配列は、スプライシング調節薬によって誘導されるネオ抗原配列の直ちにＮ末端側８アミノ酸を含むか、又はそれからなる。一部の実施形態において、５’エクソン配列が、あるコドンの終結ヌクレオチドで終結するとき、カノニカルペプチド配列はそのエクソンの終わりで終結する。一部の他の実施形態において、５’エクソン配列が、あるコドンの３つのヌクレオチドの１つ又は２つで終結するとき、カノニカルペプチド配列は、その不完全なコドンに先行する２４ヌクレオチドに由来し、及び／又はそれによってコードされる。一部の実施形態において、異常スプライシングイベントの３’側のｍＲＮＡ配列は、５’エクソンに由来する同じオープンリーディングフレーム内において、そこで翻訳が終結し得る終止コドンに達するまで翻訳され得る。一部の実施形態において、異常スプライシングイベント（例えば、エクソンスキッピング）の結果としてカノニカル転写物オープンリーディングフレームが保存されるとき、Ｃ末端配列は、Ｃ末端８アミノ酸をコードする更なる２４ヌクレオチドが翻訳され得る。これに関連して、一部の実施形態では、異常エクソンジャンクションにまたがる領域のみがネオ抗原配列をコードし得る。一部の実施形態において、オープンリーディングフレームがシフトするとき（例えば、イントロンリテンション）、完全なＣ末端配列（３’ｍＲＮＡによってコードされる）がネオ抗原配列をコードし得る。

【0809】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は、ネオ抗原配列をカノニカルペプチド配列と比較すること；及びカノニカルペプチド配列と排他的に重複しない、それからならない、及び／又はそれとアラインメントしないネオ抗原配列中の一部分を選び出すことにより選択される。ネオ抗原配列の抗原性部分は、一部の実施形態では、完全長ネオ抗原配列（例えば、抗原性部分の由来であるネオ抗原配列）と同じようにして抗原性及び／又はＴ細胞プライミング機能に関してスクリーニングすることができる。一部の実施形態において、ネオ抗原配列の抗原性部分は、本明細書に記載される例示的Ｔ細胞プライミング実験など、Ｔ細胞プライミングアッセイを用いて抗原性及び／又はＴ細胞プライミング機能が評価される。

【0810】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に特異的なネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象のために個別化されたネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、対象のために個別化されたネオ抗原ワクチンの作成に使用されるネオ抗原配列は、対象に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、個別化されたネオ抗原ワクチンは、例えばスプライシング調節薬又はＡＤＣの投与後に、対象の腫瘍に発現するネオ抗原を同定し、及び患者の腫瘍に認められるネオ抗原配列を含むワクチン、例えば、腫瘍において観察される配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むワクチンを選択することにより選択される。

【0811】

用語「個別化された」は、ネオ抗原ワクチンについての記載に使用されるとき、患者において産生される１つ以上のネオ抗原、好ましくは患者においてスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物への曝露後に同定されるものを同定し、次にそれらのネオ抗原の１つ以上を同じ患者用のワクチンのベースとして使用することにより作成されるワクチンを指す。従って、一部の実施形態では、患者にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を与え、その治療によって産生されたネオ抗原に関してスクリーニングする。一部の実施形態において、選択されたネオ抗原ワクチンは、本明細書に開示される、且つスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物への曝露後に患者に存在することが確認されたネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡを含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物及び／又はペプチド若しくはｍＲＮＡワクチンは患者に１回又は反復して投与され得る。その後、一部の実施形態では、それらのネオ抗原の１つ以上を使用して、患者に与える個別化されたワクチンが作成される。一部の実施形態において、個別化されたワクチンの作成に使用される１つ以上のネオ抗原は、１つ以上の患者特異的ＨＬＡアレルに対して結合親和性を有する。一部の実施形態において、患者は、１つ以上のネオ抗原に結合する１つ以上のＭＨＣ１アレルを発現する。所与のネオ抗原が特異的ＭＨＣ１アレルに結合するかどうかの予測は、当技術分野において公知の任意の計算的予測方法を用いて決定することができる。例示的な計算的予測方法については、例えば、Ｍｅｙｄａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １４（Ｓｕｐｐｌ．２）：Ｓ１３（これは、かかる方法について参照により本明細書に援用される）に開示されている。

【0812】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原ワクチンである。

【0813】

用語「ユニバーサル」は、ネオ抗原ワクチンについての記載に使用されるとき、好ましくはスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物への曝露後に、複数の患者及び／又は患者組織試料において産生されるネオ抗原をシーケンシングすることによって認められる共通の又は既知の１つ又は複数のネオ抗原をベースとするペプチド又はｍＲＮＡ配列を有するワクチンを指す。ワクチンに使用されるペプチド又はｍＲＮＡ配列があらゆる患者に存在する必要はなく、むしろ少なくとも一部の患者又は患者組織試料に認められることで十分である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物及び／又はペプチド若しくはｍＲＮＡワクチンは患者に１回又は反復して投与され得る。その後、一部の実施形態では、そのペプチド又はｍＲＮＡ配列が更なる患者のワクチン接種に使用される。一部の実施形態では、患者にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を与え、次に既知のネオ抗原のペプチド又はｍＲＮＡワクチンを与えることにより、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生されるネオ抗原に対する免疫応答を亢進させる。一部の実施形態では、患者にユニバーサルペプチド又はｍＲＮＡワクチンを与え、次にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を１回又は反復して与える。一部の実施形態において、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの作成に使用される１つ又は複数のネオ抗原配列は、所与の患者集団における全体的なＭＨＣ１アレル頻度に基づき選択される（Ｍａｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６８（９）：７７９－８８）。

【0814】

一部の実施形態において、ネオ抗原（例えば、ユニバーサルネオ抗原）配列は、新生物障害に罹患している対象集団中の対象の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、又は少なくとも４５％に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団の少なくとも１％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％に存在する腫瘍に対するＴ細胞応答を誘発する能力を有する。

【0815】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物を投与することにより、対象において誘導される少なくとも１つのネオ抗原ペプチド、又はそのコードｍＲＮＡをシーケンシングすることによって同定されている。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物に接触させることによって誘導されるネオ抗原配列を含む。一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。

【0816】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドと、薬学的に許容可能な担体（例えば、本明細書に記載される例示的担体のいずれか）とを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは薬学的に許容可能な担体に連結される。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、ペプチド、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン、チログロブリン、オボアルブミン、トキソイド又は弱毒化トキソイド誘導体、サイトカイン、及びケモカインから選択される。一部の実施形態において、ネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能な担体とはリンカーを介して共有結合的に結び付けられる。一部の実施形態において、ネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能な担体とは融合タンパク質として発現する。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能なアジュバントとを含む。

【0817】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは１つ又は２つ以上のネオ抗原配列をコードする。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0818】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６～９３のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６の抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７４～７７のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分はカノニカルペプチド配列（例えば、表２１において下線が付されている例示的カノニカルペプチド配列のいずれか）と排他的に重複せず、又はそれからならない。

【0819】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に特異的なネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象のために個別化されたネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。

【0820】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団中の対象の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、又は少なくとも４５％に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団の少なくとも１％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％に存在する腫瘍に対するＴ細胞応答を誘発する能力を有する。

【0821】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、少なくとも１つのネオ抗原のタンパク質配列をシーケンシングすることによって同定されている。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物を投与することにより、対象において誘導されるネオ抗原をコードする少なくとも１つのｍＲＮＡをシーケンシングすることによって同定されている。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物に接触させることによって誘導されるネオ抗原配列をコードする。一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。

【0822】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと、薬学的に許容可能な担体（例えば、本明細書に記載される例示的担体のいずれか）とを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは薬学的に許容可能な担体に連結される。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、ペプチド、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン、チログロブリン、オボアルブミン、トキソイド又は弱毒化トキソイド誘導体、サイトカイン、及びケモカインから選択される。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと薬学的に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと薬学的に許容可能なアジュバントとを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ｍＲＮＡは封入剤によって封入される。一部の実施形態において、封入剤はリポソームである。一部の実施形態において、封入剤はナノ粒子である。

【0823】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、サイトカイン又はサイトカイン類似体、例えば、本明細書に開示される任意のサイトカイン又はサイトカイン類似体を投与することを含む。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のサイトカイン又はサイトカイン類似体に不忍容、不応性、又は難反応性である。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＴ細胞エンハンサーを含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮγ、及び／又はＴＮＦαを含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、及び／又はＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体を投与すると、ネオ抗原の誘導及び提示に起因して、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後のＴ細胞プライミングが亢進する。

【0824】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、改変腫瘍標的化Ｔ細胞（即ち、ＣＡＲ－Ｔ）、例えば、本明細書に開示される任意のＣＡＲ－Ｔ療法を投与することを含む。

【0825】

一部の実施形態において、本明細書に記載される方法は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後に対象において１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を検出すること及び任意選択で１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与を継続することを更に含み得る。一部の実施形態において、対象における１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答の検出は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物による治療の有効性を指示する。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物と併せて、追加療法による治療が継続される。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答が検出された場合、低減した投薬量及び／又は頻度で治療が継続される。

【0826】

一部の実施形態において、本明細書に記載される方法は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後に対象において二本鎖ＲＮＡ免疫応答を検出すること及び任意選択で二本鎖ＲＮＡ免疫応答が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与を継続することを更に含み得る。一部の実施形態において、対象における二本鎖ＲＮＡ免疫応答の検出により、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物による治療の有効性が指示される。一部の実施形態において、二本鎖ＲＮＡ免疫応答が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物と併せて、追加療法による治療が継続される。一部の実施形態において、二本鎖ＲＮＡ免疫応答が検出された場合、低減した投薬量及び／又は頻度で治療が継続される。

【0827】

一部の実施形態において、本明細書に記載される方法は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後に対象において免疫原性細胞死を検出すること及び任意選択で免疫原性細胞死が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与を継続することを更に含み得る。一部の実施形態において、対象における免疫原性細胞死の検出により、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物による治療の有効性が指示される。一部の実施形態において、免疫原性細胞死が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物と併せて、追加療法による治療が継続される。一部の実施形態において、免疫原性細胞死が検出された場合、低減した投薬量及び／又は頻度で治療が継続される。

【0828】

一部の実施形態において、対象は約１５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約１００個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は、新生物障害、例えば、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍を有するか、又はそれを有する疑いがある。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0829】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を治療する方法であって、（ａ）有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与することであって、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与が少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を誘導する、投与すること；（ｂ）スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後に対象において１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を検出すること；及び（ｃ）１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答が検出された場合、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与を継続することを含む方法を更に提供する。一部の実施形態において、対象における１つ以上のネオ抗原及び／又はＴ細胞応答の検出は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物による治療の有効性を指示する。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、１つ以上のネオ抗原は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0830】

スプライシング調節薬／ＡＤＣと免疫チェックポイント阻害との併用：
様々な実施形態において、本明細書に記載されるとおりの癌を有する患者は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とチェックポイント阻害薬療法との併用で治療することができる。免疫チェックポイントは、免疫応答を減速又は停止させて、免疫細胞の無制御な活性による過剰な組織損傷を防ぐ抑制経路である。本明細書で使用されるとき、用語「チェックポイント阻害薬」は、抑制経路の１つ以上を阻害し、それにより更なる広範な免疫活性を可能にする、任意の小分子化学的化合物、抗体、核酸分子、又はポリペプチド、又はその任意の断片を含めた任意の療法剤を指すことが意図される。

【0831】

免疫チェックポイント阻害による患者の治療は、ある種の臨床適応にロバストな有効性を有することが示されている。最近になって、ＦＤＡは、組織系統に依存せず、高マイクロサテライト不安定性を呈する腫瘍を有する患者におけるチェックポイント阻害薬の使用を承認した。この承認は、一部には、奏効率が突然変異荷重と正の相関関係にあるという観察に基づくものであった（Ｒｉｚｖｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２３０）：１２４－８；Ｈｅｌｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３３（５）：８５３－８６１）。文献からの推定では、絶対数の点で、及び系統毎にばらつきがあるが、概して、約１５０～２５０個の突然変異の閾値を上回ると奏効確率が上昇することが裏付けられる。ＴＣＧＡデータの分析が示すところによれば、成人発症型腫瘍系統の大部分が比較的低い非同義突然変異荷重を有する（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：１５４９－５８）。ほとんどの系統について、非同義突然変異率中央値は、チェックポイント阻害薬の奏効可能性が向上する閾値をはるかに下回る患者１人当たり約３０～８０である。

【0832】

例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌は、患者試料１例当たりに存在する非同義突然変異の中央値が約６０個であることが示されている。しかしながら、上述のとおり、チェックポイント阻害薬の治療有効性閾値は約１５０～２５０個の非同義突然変異の範囲であると推定され、即ち、この閾値を上回る患者は、完全寛解、部分寛解、及び／又は病勢安定を示す可能性が高く、一方、この閾値を下回る患者は病勢進行を呈する可能性が高い。従って、腫瘍細胞上に提示される見かけ上の非同義突然変異数及び／又はネオ抗原数を亢進させる戦略が望ましく、それにより例えばチェックポイント阻害薬療法の全体的な奏効確率が亢進し得る。サイトカイン（及びその類似体）も同様の作用機序によって作用するため、かかる戦略は、サイトカインベースの療法の全体的な奏効確率も亢進させ得る。

【0833】

ＨＥＲ２陽性乳癌における現在の奏効率は約１５～２５％である（ＣＴＩ ＮＣＴ０２１２９５５６）。本明細書に開示される様々な実施形態において、チェックポイント阻害薬及び／又はサイトカイン療法と併用したスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療によれば、かかる奏効率が向上し得る。様々な実施形態において、チェックポイント阻害薬及び／又はサイトカイン療法と併用したスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療は、任意の成人発症型腫瘍、特に非同義突然変異率中央値が推定約１５０個の突然変異の閾値を下回るものに適用され得る。様々な実施形態において、単独での、又は追加療法（例えば、チェックポイント阻害薬療法、サイトカイン療法）との併用での本開示のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療に好適な例示的癌種としては、限定はされないが、食道癌、非ホジキンリンパ腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、胃癌、子宮内膜癌、膵臓腺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、膠芽腫、乳癌（例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、慢性リンパ球性白血病、及び急性骨髄性白血病が挙げられる。他の例示的な好適な癌種は、例えば、Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：１５４９－５８（これは全体として参照により本明細書に援用される）に特定されている。

【0834】

多くのチェックポイント阻害薬療法が慢性的な腫瘍関連抗原発現に基づくことに伴い、有効性のため、及び応答性Ｔ細胞集団の「再ブースト」のため、定期的な治療ブーストが必要である。本明細書に記載されるスプライシング調節薬又はＡＤＣ由来ネオ抗原の誘導可能な性質から、慢性的抗原刺激によって引き起こされることの多いＴ細胞枯渇を抑えつつ、ネオ抗原応答性Ｔ細胞の免疫応答を亢進させるように設計され得る療法的投与レジメンが提供される。例えば、一部の実施形態では、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の初回用量を対象に投与して、異常スプライシング及びネオ抗原ペプチドの産生を惹起する。タンパク質産生及び抗原提示に十分な時間の経過後、一部の実施形態では、次に対象にチェックポイント阻害薬の初回用量を投与して、エフェクターＴ細胞プライミング及び拡大をブーストし、及び／又は亢進させる。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とチェックポイント阻害薬との用量間の待機期間は、約２、約３、約４、約５、約６、又は約７日である。一部の実施形態において、待機期間は約３日～約５日である。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲを標的化する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とチェックポイント阻害薬との併用療法利益は相加的又は超相加的であり得る。

【0835】

一部の実施形態において、Ｔ細胞プライミング及び拡大に十分な期間の経過後、次に対象に、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量を投与して、ネオ抗原ペプチドの再提示を惹起する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の初回用量と、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量との間の待機期間は、約２、約３、約４、又は約５週間である。一部の実施形態において、待機期間は約３週間である。スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量を受けて、一部の実施形態では、免疫系がネオ抗原提示腫瘍細胞に会合し、及び／又は腫瘍細胞殺傷を誘発し得る。一部の実施形態では、二次的Ｔ細胞プライミング及び拡大を可能にした後、次に対象にチェックポイント阻害薬の第２の用量又は後続用量が投与され、記憶エフェクターＴ細胞集団が更に拡大される。

【0836】

一部の実施形態において、この例示的初期治療レジメンに続くスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与はパルス投与であることができ、即ち、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、抗原提示、Ｔ細胞会合及び／又は腫瘍細胞殺傷、及び／又は記憶Ｔ細胞集団の回復に十分な長い間隔で（例えば、約４週間毎、約５週間毎、約６週間毎に）投与され得る。後の時点で、一部の実施形態では、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物治療は、枯渇したＴ細胞集団へのエフェクター機能の回復を標的化する１つ以上のチェックポイント阻害薬と併用され得る。例えば、一部の実施形態では、後の時点で、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物治療は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＬＡＧ３、及び／又はＴＩＭ３を標的化する１つ以上のチェックポイント阻害薬と併用され得る。一部の実施形態において、ネオ抗原提示及びプライミングがパルス状の性質であることにより、チェックポイント阻害薬及び／又はスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を低い頻度及び／又は低い用量で投与することが可能となり得る。一部の実施形態において、ネオ抗原提示がパルス状の性質であることにより、同時のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物治療なしに投与したときのチェックポイント阻害薬と比較すると、例えば、チェックポイント阻害薬の標準的な投与レジメンで観察されることの多い有害反応の潜在的リスクが低下することにより、チェックポイント阻害薬（例えば、イピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ４抗体）に１つ以上の治療利益がもたらされ得る。

【0837】

特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ４）経路の阻害薬である。ＣＴＬＡ４は、ＣＤ１５２としても知られ、免疫応答を下方制御するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ４は制御性Ｔ細胞に構成的に発現するが、従来のＴ細胞では活性化後にのみ上方制御される。本明細書で使用されるとき、用語「ＣＴＬＡ４阻害薬」とは、ＣＴＬＡ４及び／又はＣＴＬＡ４経路の任意の阻害薬を指すことが意図される。例示的ＣＴＬＡ４阻害薬としては、限定はされないが、抗ＣＴＬＡ４抗体が挙げられる。ヒトにおける使用のためのＣＴＬＡ４遮断抗体は、抗腫瘍免疫のマウスモデルで見られる前臨床活性に基づき開発された。例示的抗ＣＴＬＡ４抗体としては、限定はされないが、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０）及びトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）が挙げられ、これらは両方とも完全ヒトである。イピリムマブは、血漿中半減期が約１２～１４日のＩｇＧ１である；トレメリムマブは、血漿中半減期が約２２日のＩｇＧ２である。例えば、Ｐｈａｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１００：８３７２－７；Ｒｉｂａｓ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２３：８９６８－７７；Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２６：５９５０－６を参照されたい。一部の実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体はイピリムマブである。

【0838】

特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、プログラム死－１（ＰＤ１）経路の阻害薬である。プログラム細胞死１（ＰＤ１）経路は、腫瘍細胞が活性Ｔ細胞免疫監視を切り抜けるため会合し得る主要な免疫制御スイッチに相当する。ＰＤ１のリガンド（ＰＤＬ１及びＰＤＬ２）は様々な腫瘍に構成的に発現し、又は誘導することができる。腫瘍細胞上でのＰＤＬ１（及び程度は低いがＰＤＬ２）の高発現は、様々な他の固形腫瘍種における予後不良及び生存と相関することが分かっている。更に、ＰＤ１は、悪性黒色腫患者において腫瘍特異的Ｔ細胞拡大を制御することが示唆されている。これらの観察は、ＰＤ１／ＰＤＬ１経路が腫瘍免疫回避において決定的な役割を果たすものであり、治療介入に魅力的な標的と見なし得ることを示唆している。本明細書で使用されるとき、用語「ＰＤ１阻害薬」は、ＰＤ１及び／又はＰＤ１経路の任意の阻害薬を指すことが意図される。例示的ＰＤ１阻害薬としては、限定はされないが、抗ＰＤ１及び抗ＰＤＬ１抗体が挙げられる。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ１抗体である。例示的抗ＰＤ１抗体としては、限定はされないが、ニボルマブ及びペンブロリズマブ（ＭＫ－３４７５）が挙げられる。例えば、ニボルマブは、ＰＤ１受容体とそのリガンドＰＤＬ１及びＰＤＬ２との相互作用、それによる細胞性免疫応答の抑制を破壊する完全ヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）ＰＤ１免疫チェックポイント阻害薬抗体である（Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８（３）：４１０－６）。一部の実施形態において、抗ＰＤ１抗体はニボルマブである。例えば、ペンブロリズマブは、ＰＤ１とそのリガンドＰＤＬ１及びＰＤＬ２との間の相互作用を直接遮断するように設計されたＩｇＧ４／カッパアイソタイプの強力で高度に選択的なヒト化ｍＡｂである。ペンブロリズマブは、健康ヒトドナー、癌患者、及び霊長類からの培養血液細胞においてＴリンパ球免疫応答を強力に亢進させる。ペンブロリズマブは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、及び他のサイトカインのレベルを調節することも報告されている。例示的抗ＰＤＬ１抗体としては、限定はされないが、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブが挙げられる。例えば、アテゾリズマブは、非常に多くの種類の悪性細胞上に発現するＰＤＬ１を標的化することによりＰＤ１／ＰＤＬ１相互作用を遮断することが報告されているＩｇＧ１ヒト化ｍＡｂである。ＰＤ１／ＰＤＬ１経路のこの遮断は、抗腫瘍免疫防御機構を刺激し得る（Ａｂｄｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ）１０（２）：３２）。一部の実施形態において、抗ＰＤＬ１抗体はアテゾリズマブである。

【0839】

特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＧＩＴＲ、及び／又はＫＩＲを標的化する。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲを標的化する。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、阻害抗体又は他の類似の阻害性分子（例えば、阻害性抗ＣＴＬＡ４又は抗ＰＤ１／ＰＤＬ１抗体）で標的化する。特定の他の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、標的のアゴニストで標的化する；このクラスの例としては、刺激性標的ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲが挙げられる。一部の実施形態において、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲを標的化するチェックポイント阻害薬は、アゴニスト抗体である。ＯＸ４０に仕向けられるアゴニスト抗体は、制御性Ｔ細胞抑制を阻害することと、一方でエフェクターＴ細胞機能を亢進させることとの二重の役割を有し得る。アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、制御性Ｔ細胞によって誘導される抑制に対するエフェクターＴ細胞の抵抗性を高めることも示されている（Ｋａｒａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｂａｓｅｌ）４（４）：３７）。同様に、アゴニストＣＤ４０抗体はＴ細胞依存的抗腫瘍活性も実証している。樹状細胞上でＣＤ４０が活性化すると、腫瘍抗原の交差提示が増加し、結果的に活性化腫瘍標的化エフェクターＴ細胞の数が増加する（Ｅｌｌｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌ．４（７）：ｅ１０１１４８４）。

【0840】

特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＣＴＬＡ４を標的化する（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体）。特定の実施形態において、ＣＴＬＡ４の標的化は、ナイーブＴ細胞のプライミング及び活性化を促進する。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＯＸ４０を標的化する（例えば、抗ＯＸ４０抗体）。特定の実施形態において、ＯＸ４０の標的化は、エフェクターＴ細胞の拡大を亢進させる。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＣＤ４０を標的化する（例えば、抗ＣＤ４０抗体）。特定の実施形態において、ＣＤ４０の標的化は、Ｔ細胞の「寛容原性」プライミング及び／又は制御性Ｔ細胞の形成を阻害する。特定の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＧＩＴＲを標的化する（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）。特定の実施形態において、ＧＩＴＲの標的化は、制御性Ｔ細胞の活性を阻害する。特定の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とＣＴＬＡ４標的化、ＯＸ４０標的化、ＣＤ４０標的化、及び／又はＧＩＴＲ標的化薬剤とによる併用療法の利益（例えば、少なくとも１つの症状又は疾患進行リスク／速度に及ぼす効果）は相加的である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とＣＴＬＡ４標的化、ＯＸ４０標的化、ＣＤ４０標的化、及び／又はＧＩＴＲ標的化薬剤とによる併用療法の利益は超相加的（即ち、相乗的）である。

【0841】

チェックポイント阻害薬治療戦略は、抗原性が弱い又は低い腫瘍に対するＴ細胞応答のプライミングが治療によって促進される及び／又は亢進するか（例えば、ＣＴＬＡ４）、又は腫瘍抗原に応答するが、抗原提示の慢性的性質に起因して「枯渇した」状態になったＴ細胞が治療によって回復する及び／又は再活性化する（例えば、ＰＤ１、ＰＤＬ１）という仮説に基づく（Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｍｅｌｌｍａｎ（２０１３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：１－１０）。好適なチェックポイント阻害療法及び薬剤の例、例えば、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、又は抗ＣＴＬＡ４抗体については、当技術分野において公知である。例えば、国際公開第２００１／０１４４２４号パンフレット、国際公開第２０１３／１７３２２３号パンフレット、国際公開第２０１６／００７２３５号パンフレットを参照されたい。

【0842】

チェックポイント阻害薬療法後のこれらのプライミングされたＴ細胞応答と、プライミングされた免疫系が応答し得るネオ抗原を腫瘍細胞に誘導する治療との併用は、有益な相乗作用をもたらし得る。スプライシング調節薬又はＡＤＣから生じるネオ抗原は、Ｔ細胞プライミングのために提示されたことがまだないため、ＣＴＬＡ４阻害薬との併用が特に有益であり得る。一部の実施形態において、治療は、１つ以上のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与してネオ抗原の産生を誘導し、その前、それと同時、又はその後に、ＣＴＬＡ４阻害薬の初回投与を続けてＣＤ８ Ｔ細胞プライミングを刺激することを含む。一部の実施形態において、例えばネオ抗原応答性ＣＤ８集団のプライミング及び／又は活性化を更に刺激するため、ＣＴＬＡ４阻害薬の追加投与が患者に提供される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の追加投与を患者に与えることにより、腫瘍によるネオ抗原提示を増加させることができる。スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物及びチェックポイント阻害薬療法の反復投与は、同時に、又は時間をずらした間隔で行うことができる。一部の実施形態において、治療は、ＰＤ１／ＰＤＬ１阻害薬共治療を投与することであって、例えばそれにより腫瘍微小環境内で枯渇したネオ抗原標的化Ｔ細胞のエフェクター機能を回復させることを更に含む。

【0843】

用語「併用」又は「併用療法」は、本明細書で使用されるとき、１つ以上のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を追加の薬剤又は療法（例えば、チェックポイント阻害薬、サイトカイン又はサイトカイン類似体、ネオ抗原ワクチン、ＣＡＲ－Ｔ）と一緒に、投与される薬剤の１つ以上の共作用による有益な（即ち、相加的又は相乗的な）効果を提供することを意図した治療レジメンの一環として投与することを指す。一部の実施形態において、併用には、限定はされないが、化学療法剤、抗血管新生剤、及び免疫抑制を低減する薬剤（例えば、第２のチェックポイント阻害薬）を含めた１つ以上の追加の薬剤も含まれ得る。併用の有益な効果としては、限定はされないが、療法剤の併用によって生じる薬物動態学的又は薬力学的共作用が挙げられる。これらの療法剤の併用での投与は、典型的には、定義付けられた期間（例えば、選択の併用に応じて数分間、数時間、数日間、又は数週間）にわたって行われる。

【0844】

「併用して」投与される又は「共投与」は、本明細書で使用されるとき、対象が医学的病態（例えば、新生物障害）に罹患している間に対象に２つ以上の異なる治療が送達されることを意味する。例えば、一部の実施形態では、対象が疾患又は障害と診断された後、且つその疾患又は障害が治癒又は消失する前に、又は対象がその疾患のリスクがあると同定されたとき、しかし、対象がその症状を発症する前に２つ以上の治療が送達される。一部の実施形態において、１つの治療の送達は、第２の治療の送達の開始時になおも行われており、そのため重複がある。一部の実施形態において、第１及び第２の治療は同時に開始される。この種の送達は、本明細書では時に、「同時」、「並行」、又は「併用」送達と称される。他の実施形態では、１つの治療の送達が第２の治療の送達の開始前に終わる。この種の送達は、本明細書では時に、「連続」又は「逐次」送達と称される。

【0845】

一部の実施形態において、２つの治療（例えば、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物及びチェックポイント阻害薬）は同じ組成物中に含まれる。かかる組成物は、任意の適切な形態で、及び任意の好適な経路によって投与され得る。他の実施形態において、２つの治療（例えば、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物及びチェックポイント阻害薬）は、別個の組成物で、任意の適切な形態で、及び任意の好適な経路によって投与される。例えば、一部の実施形態では、スプライシング調節薬又はＡＤＣを含む組成物及びチェックポイント阻害薬を含む組成物が、並行して、又はいずれの順序であれ異なる時点で逐次的に投与され得る。いずれの場合にも、それらは所望の治療的又は予防的効果をもたらすように時間的に十分に近接して投与されなければならない。

【0846】

同時送達又は逐次送達のいずれの実施形態においても、併用投与であることにより、治療は一層有効であり得る。一部の実施形態において、第１の治療は、第２の治療がない中で第１の治療が投与されたならば見られたであろうよりも有効性が高く、例えば、より少ない第１の治療で（例えば、より低い用量で）等価な効果が見られる。一部の実施形態において、第１の治療は、症状、又は疾患若しくは障害に関連する他のパラメータの低減が、第２の治療がない中で第１の治療を送達して観察されるであろうよりも大きくなるなど有効性が高くなる。他の実施形態において、同様の状況が第２の治療でも観察される。一部の実施形態において、併用療法の利益（例えば、少なくとも１つの症状又は疾患進行リスク／速度に対する効果）は相加的である。一部の実施形態において、併用療法の利益は超相加的である。

【0847】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物；及び少なくとも１つの追加療法（例えば、チェックポイント阻害薬療法、サイトカイン又はサイトカイン類似体、ネオ抗原ワクチン、ＣＡＲ－Ｔ）を対象に投与することにより治療する方法を提供する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与は、少なくとも１つのネオ抗原及び／又はＴ細胞応答を誘導する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与は、二本鎖ＲＮＡ免疫応答を誘導する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与は免疫原性細胞死を誘導する。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、又は少なくとも５つの追加療法を含み得る。例えば、一部の実施形態では、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、２つのチェックポイント療法と併用して、即ち、２つの異なるチェックポイント阻害薬を使用して投与され得る。一部の他の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、チェックポイント阻害薬療法及びネオ抗原ワクチンと併用して投与され得る。

【0848】

併用療法の一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート若しくは組成物及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート若しくは組成物及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート若しくは組成物及び／又は少なくとも１つの追加療法は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート若しくは組成物及び／又は少なくとも１つの追加療法の標準的な投与レジメンと比較したとき、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低い頻度で投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート若しくは組成物及び／又は少なくとも１つの追加療法の投与量及び／又は投薬量は、全身毒性の低下及び／又は忍容性の向上をもたらす。

【0849】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与前に開始される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与後に開始される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、少なくとも１つの追加療法の投与と同時に開始される。

【0850】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与に使用される量は、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。

【0851】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法の反復投与に使用される量は、少なくとも１つの追加療法の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。

【0852】

一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与は、少なくとも１つの追加療法の反復投与と同時である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の反復投与は、少なくとも１つの追加療法の反復投与と逐次的であるか又は時間をずらされる。

【0853】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物；及びチェックポイント阻害薬療法を対象に投与することにより治療する方法を提供する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬療法は、少なくとも１つのチェックポイント阻害薬を投与することを含む。一部の実施形態において、対象は、単独投与時の少なくとも１つのチェックポイント阻害薬に不忍容、不応性、又は難反応性である。一部の実施形態において、対象は、例えば、免疫関連効果評価基準（ｉｍｍｕｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ：ｉｒＲＣ）及び／又は免疫関連固形癌効果評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ：ｉｒＲＥＣＩＳＴ）を用いて決定したとき、少なくとも１つのチェックポイント阻害薬に不応性又は難反応性であると見なされ得る。例えば、Ｗｏｌｃｈｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５（２３）：７４１２－２０；Ｂｏｈｎｓａｃｋ ｅｔ ａｌ．“Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ：ｉｒＲＥＣＩＳＴ”（Ａｂｓｔｒａｃｔ ４９５８）ＥＳＭＯ ２０１４を参照されたい。例示的評価基準には、評価される治療が免疫腫瘍学的薬物（例えば、チェックポイント阻害薬）である場合、治療中に癌患者の腫瘍が改善したとき（「奏効する」）、同じままであるとき（「安定化する」）、又は悪化したとき（「進行する」）を定義するため当技術分野で用いられているものが含まれ得る。一部の実施形態において、それぞれのチェックポイント阻害薬（例えば、イピリムマブ）について特定される１つ又は２つ以上の有害な（グレード２以上の）事象が対象に見られる場合、その対象は少なくとも１つのチェックポイント阻害薬に不忍容と見なされ得る。一部の実施形態において、例えば、腸炎、肝炎、皮膚炎（中毒性表皮壊死症を含む）、ニューロパチー、及び内分泌病から選択される１つ以上の有害事象が対象に見られる場合、その対象はイピリムマブ治療に不忍容と見なされ得る（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）ＦＤＡ表示補足、２０１８）。

【0854】

一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＧＩＴＲ、及び／又はＫＩＲを標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及び／又はＧＩＴＲを標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は阻害抗体又は他の類似の阻害性分子で標的化する。一部の他の実施形態において、チェックポイント阻害薬はアゴニスト抗体又は他の類似のアゴニスト分子で標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬は細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４経路（ＣＴＬＡ４）阻害薬を含む。一部の実施形態において、ＣＴＬＡ４阻害薬は抗ＣＴＬＡ４抗体である。一部の実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体はイピリムマブである。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬はプログラム死－１経路（ＰＤ１）阻害薬を含む。一部の実施形態において、ＰＤ１阻害薬は抗ＰＤ１抗体である。一部の実施形態において、抗ＰＤ１抗体はニボルマブである。一部の実施形態において、ＰＤ１阻害薬は抗ＰＤＬ１抗体である。一部の実施形態において、抗ＰＤＬ１抗体はアテゾリズマブである。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＣＴＬＡ４阻害薬及びＰＤ１阻害薬を含む。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＯＸ４０を標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＣＤ４０を標的化する。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬はＧＩＴＲを標的化する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とチェックポイント阻害薬（例えば、ＣＴＬＡ４標的化、ＰＤ１／ＰＤＬ１標的化、ＯＸ４０標的化、ＣＤ４０標的化、及び／又はＧＩＴＲ標的化抗体又は分子）とによる併用療法の利益（例えば、少なくとも１つの症状又は疾患進行リスク／速度に及ぼす効果）は相加的である。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とチェックポイント阻害薬（例えば、ＣＴＬＡ４標的化、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＯＸ４０標的化、ＣＤ４０標的化、及び／又はＧＩＴＲ標的化抗体又は分子）とによる併用療法の利益は超相加的（即ち、相乗的）である。

【0855】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物；及びサイトカイン又はサイトカイン類似体療法を対象に投与することにより治療する方法を提供する。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体療法は、少なくとも１つのサイトカイン又はサイトカイン類似体を投与することを含む。一部の実施形態において、対象は、単独投与時の少なくとも１つのサイトカイン又はサイトカイン類似体に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0856】

一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＴ細胞エンハンサーを含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮγ、及び／又はＴＮＦαを含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、及び／又はＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体を投与すると、ネオ抗原の誘導及び提示に起因して、スプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物の投与後のＴ細胞プライミングが亢進する。

【0857】

一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－２はエフェクター細胞へのシグナルをブーストしてその拡大を促進する（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２０１４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２（１２）：５４５１－８）。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＩＬ－１０を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－１０はＣＤ８＋ Ｔ細胞プライミング及び活性化をブーストする（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０（６）：７８１－９６）。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＩＬ－１２を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－１２は自然免疫応答と適応免疫応答とを結び付けて抗原特異的プライミング及びターゲティングをブーストする（Ｔｕｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２２（２）：２３７－４６）。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＩＬ－１５を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－１５はＴエフェクター（ＣＤ８）細胞プライミング及び／又は活性化をブーストする。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＩＦＮγを含む。一部の実施形態において、ＩＦＮγはＴエフェクター細胞によるＩＦＮγ分泌を補足する。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体はＴＮＦαを含む。一部の実施形態において、ＴＮＦαはＴエフェクター細胞によるＴＮＦα分泌を補足する。

【0858】

一部の実施形態では、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の初回用量を対象に投与して、異常スプライシング及びネオ抗原ペプチドの産生を惹起する。タンパク質産生及び抗原提示に十分な時間の経過後、一部の実施形態では、次に対象にサイトカイン又はサイトカイン類似体の初回用量を投与して、エフェクターＴ細胞プライミング及び拡大をブーストし、及び／又は亢進させる。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とサイトカイン又はサイトカイン類似体との用量間の待機期間は、約２、約３、約４、約５、約６、又は約７日である。一部の実施形態において、待機期間は約３日～約５日である。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮγ、及び／又はＴＮＦαである。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とサイトカイン又はサイトカイン類似体との併用療法利益は相加的又は超相加的であり得る。

【0859】

一部の他の実施形態では、サイトカイン又はサイトカイン類似体の初回用量を対象に投与して、エフェクターＴ細胞プライミング及び拡大をブーストし、及び／又は亢進させる。待機期間後、一部の実施形態では、次に対象にはスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の初回用量を投与して、異常スプライシング及びネオ抗原ペプチドの産生を惹起する。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体とスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物との用量間の待機期間は、約２、約３、約４、約５、約６、又は約７日である。一部の実施形態において、待機期間は約３日～約５日である。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体は、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮγ、及び／又はＴＮＦαである。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体とスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物との併用療法利益は相加的又は超相加的であり得る。

【0860】

一部の実施形態では、Ｔ細胞プライミング及び拡大に十分な期間の経過後、次に対象に、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量を投与してネオ抗原ペプチドの再提示を惹起する。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体の初回用量とスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量との間の待機期間は、約２、約３、約４、又は約５週間である。一部の実施形態において、待機期間は約３週間である。一部の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン類似体の後続用量は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の後続用量の間に投与され、例えば割り込ませ得る。スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の第２の用量又は後続用量を受けて、一部の実施形態では、免疫系がネオ抗原提示腫瘍細胞に会合し、及び／又は腫瘍細胞殺傷を誘発し得る。一部の実施形態において、この例示的初期治療レジメン後、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与はパルス投与であることができ、即ち、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、抗原提示、Ｔ細胞会合及び／又は腫瘍細胞殺傷、及び／又は記憶Ｔ細胞集団の回復に十分な長い間隔で（例えば、約４週間毎、約５週間毎、約６週間毎に）投与され得る。

【0861】

一部の実施形態において、対象は約１５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約１００個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は、新生物障害、例えば、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍を有するか、又はそれを有する疑いがある。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0862】

スプライシング調節薬／ＡＤＣとネオ抗原ワクチンとの併用：
様々な実施形態において、本明細書に記載されるとおりの癌を有する患者は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物とネオ抗原ワクチンとの併用で治療することができる。理論により拘束されるものではないが、単独で、又は免疫チェックポイント阻害薬（ＩＣＩ）分子と併用して使用されるワクチンは、初期試験で有望であったが（Ｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２１７－２１；Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２２２－６）、概して患者腫瘍突然変異のシーケンシングが必要である（Ｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２１７－２１；Ａｌｄｏｕｓ ａｎｄ Ｄｏｎｇ（２０１８）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６（１０）：２８４２－９）。このように、ワクチンは、多くの場合、十分な数の抗原性の非同義突然変異があるかに依存する。概して、突然変異負荷が極めて低い腫瘍は僅かな抗原候補のみを提供し、急激に増殖する腫瘍では、患者特異的ワクチンの同定及び生産に使える時間が限られている。

【0863】

現在までのところ、大部分の患者に広範な免疫原性があり得るワクチンを開発しようとする試みは、高頻度に突然変異するか、異所的に過剰発現するか、又は増幅するかのいずれかのタンパク質、及び／又は生物内に「自己」タンパク質として存在するタンパク質に焦点が置かれている。加えて、これらのタンパク質は、多くの場合に免疫学的に限定された組織に発現し（例えば、神経内分泌腫瘍型に発現する神経細胞マーカー）、一方、他のものは、胚発生時に正常に発現し得る（例えば、癌胎児性抗原）。従って、かかるタンパク質を抗原として使用するワクチンの有用性は、多くの場合、抗原の１つ以上が提示される特定の腫瘍系統又はサブセットに限られている。ワクチンの有用性は、患者腫瘍試料のシーケンシングによって確認することも必要となり得るが、これには時間がかかり得る。

【0864】

更に、これらの抗原が「自己」タンパク質として存在すれば、免疫系がそれを「自己」として認識するようにプライミングされ、ひいては応答しない可能性もあり得る。又は、代わりに免疫系がそうした抗原に対してエフェクター応答を開始可能な場合、その抗原が発現し得る組織におけるオンターゲット副作用につながり得る。これらのいずれの場合にも、鍵となる課題の１つは、多くの抗原ペプチドが「パッセンジャー」遺伝子（即ち、腫瘍発生の過程で突然変異し又は増幅するが、腫瘍それ自体が生存又は増殖を継続するにおいて決定的な役割は果たさない遺伝子）に由来することである。このように、これらの遺伝子は、腫瘍進行に重大な影響を与えることなくサイレンシングされ得るため、ひいては腫瘍がそれらの抗原に対する免疫応答から「逃れる」ことが可能になり得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、この機構は腫瘍進化において役割を果たし得るものであり、ここでは強力な抗原性のあるランダム突然変異が多くの場合に腫瘍発生の初期段階で腫瘍によって「対抗選択」される（Ｄｕｎｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：３２９－６０）。

【0865】

加えて、あるエビデンスは、慢性的な抗原提示及び免疫刺激が免疫細胞アネルギー及び枯渇につながり得ることも示している（Ｐａｒｄｏｌｌ（２０１２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ １２（４）：２５２－６４）。ＩＣＩは免疫細胞枯渇表現型を抑制するか（α－ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１）、又は追加的な免疫細胞応答を促進するか（α－ＣＴＬＡ４）のいずれかであることが示されているとおり、これらの表現型は、現在のＩＣＩ治療の背後にある療法の理論的根拠の基礎をなす。注目すべきことに、α－ＣＴＬＡ４療法では、ある一部の患者が、Ｔ細胞活性化の促進及び自己反応性免疫応答を抑止する免疫寛容機構の破壊に原因を帰し得る重篤な免疫関連有害事象を呈することが報告されている。

【0866】

これらの手法（即ち、ネオ抗原に対するデノボ免疫応答を惹起し若しくは亢進させること又は既存の免疫応答のアネルギー若しくは枯渇を解除すること）は両方とも、慢性的免疫活性化に関係している。このように、これらの手法は、アネルギー、編集、及び免疫会合を抑制するように設計された他の腫瘍媒介性機構に対して感受性がある。

【0867】

対照的に、本明細書に開示されるスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療は、ネオ抗原に相当する新規配列に対する免疫応答を誘導し得る。一部の実施形態において、ネオ抗原の提示により、適応免疫系が会合し、活性化する標的が一層多様となる。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物が選択的スプライシング及び結果として生じるネオ抗原を急性的に誘導可能であることにより、突然変異由来ネオ抗原への慢性的な曝露に起因する免疫系の疲労リスクが低減され、及び／又は腫瘍細胞が療法を回避するように適合する能力が制限され得る。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物をネオ抗原ワクチンと併用して投与すると、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生されるネオ抗原に対する免疫応答が亢進する。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ワクチン接種の前、その最中、又はその後に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物及び／又はワクチンは、治療の経過中に１回又は２回以上投与され得る。一部の実施形態において、治療の経過中にワクチンは１回投与され、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は２回以上投与される。一部の実施形態において、治療の経過中にワクチンは１回投与され、次に１つ以上のブースターが投与される。

【0868】

本明細書で使用されるとき、用語「ネオ抗原ワクチン」は、１つ以上の免疫原性ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡ、例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５つ、又はそれ以上のネオ抗原ペプチドのプール試料を指す。用語「ワクチン」は、疾患（例えば、新生物障害、例えば、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍）の予防及び／又は治療のため免疫を生じさせる組成物を指す。従って、ワクチンは、免疫原性薬剤を含む医薬品であり、ヒト又は動物においてワクチン接種後に特異的免疫防御及び保護物質を生じさせるため使用することが意図される。ネオ抗原ワクチンは、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、及び／又はアジュバントを更に含むことができる。

【0869】

本明細書で使用されるとき、用語「免疫原性」は、免疫応答、例えばＴ細胞応答を誘発することのできる任意の薬剤又は組成物を指す。免疫応答は抗体媒介性又は細胞媒介性、又は両方であり得る。

【0870】

一部の実施形態では、患者にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を与え、次に既知のネオ抗原のペプチド又はｍＲＮＡワクチンを与えることにより、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生されるネオ抗原に対する免疫応答を亢進させる。一部の他の実施形態では、患者にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を与え、その治療によって産生されたネオ抗原に関してスクリーニングする。その後、それらのネオ抗原の１つ以上を使用して、患者に与える個別化されたワクチンが作成される。これらの実施形態のいずれにおいても、スプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物及び／又はペプチド若しくはｍＲＮＡワクチンは患者に１回又は反復して投与され得る。

【0871】

様々な実施形態において、ワクチンに好適なネオ抗原は、患者の１つ以上の組織試料からの（例えば、腫瘍生検からの）スプライシングの変化及びロバストな発現を伴う転写物のパネルをスクリーニングすることによって同定し得る。一部の実施形態において、変異体タンパク質配列は、スクリーニングされた試料において、ジャンクションにわたるアミノ酸変化に隣接するタンパク質配列の一部分（最大１２アミノ酸）は保持しながらも異常にスプライシングされたｍＲＮＡジャンクションにまたがる翻訳に基づき同定される。一部の実施形態において、これらのジャンクションにわたるペプチド断片が、例えばＮｅｔＭＨＣ１などのツールを使用してＭＨＣ１アレルに対する高親和性結合に関してスキャンされる（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ １２（５）：１００７－１７；Ａｎｄｒｅａｔｔａ ａｎｄ Ｎｅｉｌｓｅｎ（２０１６）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ３２（４）：５１１－７）。これらの結果により、ユニークな患者ＨＬＡアレル構成に対する予測高親和性結合剤となるようにネオペプチドをフィルタリングし、且つ種々の集団で高頻度に見られるＨＬＡアレルに幅広く結合すると予測されるネオペプチドのプールをアセンブルすることが可能となる（Ｍａｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６８（９）：７７９－８８）。様々な実施形態において、同定されたネオペプチドは次に、例えば好適な担体又はアジュバントとのコンジュゲーションにより、ワクチンとして製剤化されるか（Ｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２１７－２１）、又はｍＲＮＡとしての送達用に製剤化される（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２２２－６）。

【0872】

一部の実施形態において、選択されるネオ抗原は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物に対する個々の患者の腫瘍応答のスクリーニングにより、治療の結果生じる１つ以上のネオ抗原を続くワクチン接種への使用のため同定することに基づく。他の実施形態において、ネオ抗原は、例えば、異なる患者からの試料パネルのスクリーニングにより、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生される共通のネオ抗原を同定することに基づき選択され、次に将来の患者用のユニバーサルワクチンとして使用される。

【0873】

理論により拘束されるものではないが、一部の実施形態では、ユニバーサルネオ抗原ワクチンを使用すれば、選択されるネオ抗原は腫瘍突然変異に依存せず、むしろスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生され且つ概して生体によって外来性と認識されるネオ抗原を模倣するため、各患者の腫瘍のユニークな突然変異状態についてシーケンシング及び分析する必要がなくなり得る。加えて、一部の実施形態では、患者の腫瘍細胞は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって産生されるネオ抗原を模倣するものと比較したとき、腫瘍突然変異に依存する１つ以上のネオ抗原の産生から離れて突然変異する可能性がより高いものであり得るため、ネオ抗原ワクチンの使用は特に有効であり得る。これは、大部分の患者にわたって幅広い免疫原性があり得るバルクワクチンの製剤化を可能にし、治療レジームの開始を早め得る。患者は、本明細書に概説されるスケジュールに従いワクチン接種を受け得ると共に、続くワクチン接種の完了前に、例えばネオ抗原ペプチドの発現を誘導するため、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物によって更に治療される可能性がある。一部の実施形態では、患者はスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物をワクチン接種の前、それと同時、又はその後に投与され得る。一部の実施形態では、患者はスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物を投与され、ユニバーサルネオ抗原のパネルに見られる１つ以上のネオ抗原に関してスクリーニングされ、その対象において同定された少なくとも１つのユニバーサルネオ抗原を含むユニバーサルネオ抗原ワクチンを接種される。一部の実施形態では、患者はスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物をワクチン接種後１回又は２回以上投与され得る。スプライシング調節薬又はＡＤＣ又は組成物及び／又はワクチンは、治療の経過中に１回又は２回以上投与され得る。

【0874】

様々な実施形態において、ワクチンは１つ又は２つ以上のネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡを含み得る。様々な実施形態において、ワクチンは１つ又は２つ以上のロングネオ抗原ペプチドを含み得る。かかる「ロング」ネオ抗原ペプチドは、様々な実施形態において、樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞で効率的なインターナリゼーション、プロセシング、及び交差提示を起こす。同様に、ロングワクチンペプチドは、他のコンテクストでは、ヒトにおいて細胞傷害性Ｔ細胞を誘導することが示されている（Ｍｅｌｉｅｆ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ（２００８）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ８（５）：３５１－６０）。様々な実施形態において、ネオ抗原ペプチドは、ネオ抗原ペプチド配列それ自体を隣接アミノ酸配列に加えて含むように伸長される。様々な実施形態において、伸長ペプチド配列は、抗原提示細胞、例えば樹状細胞によるタンパク質の取り込みを促進する。様々な実施形態において、伸長ペプチド配列は、種々のＨＬＡアイソタイプのモデルにおいて効率的な抗原提示及びＴ細胞プライミングを可能にする。様々な実施形態において、長いネオ抗原ペプチド及び／又は伸長ペプチド配列ほど、短いネオ抗原ペプチド及び／又は短いペプチド配列（例えば、約１０アミノ酸長未満又は約５アミノ酸長未満のペプチド配列）と比較したとき、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）による取り込みの増加、抗原提示の増加、及び／又はＴ細胞プライミングの増加を呈する。一部の実施形態において、ロングネオ抗原ペプチドは約５～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ロングネオ抗原ペプチドは約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ロングネオ抗原ペプチドは約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ロングネオ抗原ペプチドは約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。例示的ロングネオ抗原ペプチドのアミノ酸配列を表２１に示す。

【0875】

本明細書で使用されるとき、ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡワクチンは、その断片が免疫原性の潜在的能力を保持している限り、ネオ抗原ペプチドの断片又はそのコードｍＲＮＡを使用することを包含する。

【0876】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ペプチドを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１５、又は少なくとも２０のネオ抗原ペプチドを含む。一部の実施形態において、１つ又は複数のネオ抗原ペプチドは約５～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、１つ又は複数のネオ抗原ペプチドは約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、１つ又は複数のネオ抗原ペプチドは約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、１つ又は複数のネオ抗原ペプチドは約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。

【0877】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物；及びネオ抗原ワクチンを対象に投与することにより治療する方法を提供する。ネオ抗原ワクチンは、例えば、ペプチド又はｍＲＮＡネオ抗原ワクチンであり得る。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与前に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与後に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物は、ネオ抗原ワクチンの投与と同時に投与される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。

【0878】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象の治療における使用のための、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物と；ネオ抗原ワクチン（例えば、ユニバーサルネオ抗原ワクチン）とを含む併用を更に提供する。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンはペプチド又はｍＲＮＡネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、併用は少なくとも１つの追加療法を更に含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、又は少なくとも５つの追加療法を含む。

【0879】

様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、（ａ）有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物を対象に投与すること；（ｂ）スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の投与後に対象において１つ以上のネオ抗原を検出すること；（ｃ）１つ以上のネオ抗原をユニバーサルネオ抗原のパネルと比較すること；及び（ｄ）対象に存在する少なくとも１つのユニバーサルネオ抗原を含むユニバーサルネオ抗原ワクチンを対象に投与することにより治療する方法を更に提供する。一部の実施形態において、ユニバーサルネオ抗原ワクチンは、単独で、又は少なくとも１つの追加療法と併用して投与される。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、又は少なくとも５つの追加療法を含む。

【0880】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与を含む。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与前に開始される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与後に開始される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与と同時に開始される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の初回投与及び／又は反復投与に使用される量は、ワクチン治療なしに使用されるときのスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の初回投与及び／又は反復投与に使用される量は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。

【0881】

一部の実施形態において、少なくとも１つの追加療法は、チェックポイント阻害薬（例えば、本明細書に記載される例示的チェックポイント阻害薬のいずれか）を投与することを含む。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の投与は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与及び／又はスプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物の反復投与前に開始される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の投与は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与及び／又はスプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物の反復後に開始される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の投与は、ユニバーサルネオ抗原ワクチンの投与及び／又はスプライシング調節薬、ＡＤＣ若しくは組成物の反復投与と同時に開始される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の投与は、初回投与後に少なくとも１回反復される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の反復投与に使用される量は、初回投与に使用される量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の反復投与に使用される量は、チェックポイント阻害薬の標準的な投薬量と比較したときに低減される。一部の実施形態において、チェックポイント阻害薬の反復投与に使用される量は、チェックポイント阻害薬の標準的な投薬量と比較したとき、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、又は９０％低減される。一部の実施形態において、対象は、単独投与時のチェックポイント阻害薬に不忍容、不応性、又は難反応性である。

【0882】

また本明細書には、様々な実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチド又は少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡを含むネオ抗原ワクチンも提供される。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ペプチドを含む。一部の他の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡを含む。

【0883】

また本明細書には、様々な実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物と；ネオ抗原ワクチン（例えば、ユニバーサルネオ抗原ワクチン）とを含むキットも提供される。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンはペプチド又はｍＲＮＡネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、本キットは、限定はされないが、使用説明書；他の薬剤、例えば１つ以上の追加の療法剤；スプライシング調節薬、ＡＤＣ、組成物、及び／又はネオ抗原ワクチンを治療的投与用に調製するための装置、容器、又は他の材料；薬学的に許容可能な担体；及びスプライシング調節薬、ＡＤＣ、組成物、及び／又はネオ抗原ワクチンを患者に投与するための装置、容器、又は他の材料を含めた、１つ以上の追加の構成要素を更に含む。使用説明書には、例えば新生物障害を有するか又は有する疑いがある患者における推奨される投薬量及び／又は投与方法を含めた治療上の適用に関する手引きが含まれ得る。様々な実施形態において、本キットには、治療上の使用、例えば、患者の新生物障害を治療又は予防するためのスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物、及びネオ抗原ワクチンの使用に関する説明書が更に含まれる。様々な実施形態において、本キットには、少なくとも１つの追加の療法剤（例えば、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物、及びネオ抗原ワクチンと一緒に投与するためのもの、例えば、チェックポイント阻害薬）が更に含まれる。様々な実施形態において、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、組成物、及び／又はネオ抗原ワクチンは、医薬組成物として製剤化される。

【0884】

本明細書に開示される方法及び組成物の一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ペプチドを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。

【0885】

一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは１つ又は２つ以上のネオ抗原配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0886】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６～９３のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６の抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７４～７７のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分はカノニカルペプチド配列（例えば、表２１において下線が付されている例示的カノニカルペプチド配列のいずれか）と排他的に重複せず、又はそれからならない。

【0887】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に特異的なネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象のために個別化されたネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。

【0888】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団中の対象の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、又は少なくとも４５％に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団の少なくとも１％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％に存在する腫瘍に対するＴ細胞応答を誘発する能力を有する。

【0889】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物を投与することにより、対象において誘導される少なくとも１つのネオ抗原ペプチドをシーケンシングすることによって同定されている。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ペプチドは、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物に接触させることによって誘導されるネオ抗原配列を含む。一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。

【0890】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡと薬学的に許容可能な担体とを含む。様々な実施形態において、ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡは、免疫応答を誘発する助けとなる好適な担体に連結することができる。免疫原性薬剤（例えば、ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡ）と連結するための例示的担体としては、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド、又は他の病原性細菌由来の、例えばジフテリア、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、コレラ若しくはＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）などのトキソイド、又は弱毒化毒素誘導体が挙げられる。免疫応答を刺激する又は亢進させるための他の担体としては、サイトカイン、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α及びβペプチド、ＩＬ－２、γＩＮＦ、ＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦなど、並びにケモカイン、例えばＭ１Ｐ１α及びβ及びＲＡＮＴＥＳなどが挙げられる。免疫原性薬剤は、例えば、国際公開第９７／１７６１３号パンフレット及び国際公開第９７／１７６１４号パンフレットに記載されるとおりの、組織間輸送を亢進させるペプチドに連結することもできる。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、ペプチド、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン、チログロブリン、オボアルブミン、トキソイド又は弱毒化トキソイド誘導体、サイトカイン、及びケモカインから選択される。

【0891】

一部の実施形態において、ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡは薬学的に許容可能な担体に連結され得る。免疫原性薬剤は、化学的架橋結合によって担体に連結することができる。免疫原性ペプチドを担体に連結する技法としては、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジル－チオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（ペプチドがスルフヒドリル基を欠いている場合、これはシステイン残基の付加によって提供され得る）を使用したジスルフィド結合の形成が挙げられる。これらの試薬は、それ自体と１つのタンパク質上のペプチドシステイン残基との間にジスルフィド結合を作り出し、リジン上のε－アミノ、又は他のアミノ酸における他の遊離アミノ基を介してアミド結合を作り出す。種々のかかるジスルフィド／アミド形成剤が、Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（（１９８２）Ｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ．６２：１８５）に記載されている。他の二官能性カップリング剤は、ジスルフィド結合よりむしろチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは市販されており、６－マレイミドカプロン酸、２－ブロモ酢酸、及び２－ヨード酢酸、４－（Ｎ－マレイミド－メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸の反応性エステルが挙げられる。カルボキシル基は、それをスクシンイミド又は１－ヒドロキシル－２－ニトロ－４－スルホン酸、ナトリウム塩と組み合わせることにより活性化させることができる。一部の実施形態において、ネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能な担体とはリンカーを介して共有結合的に結び付けられる。

【0892】

ネオ抗原及び他のかかる免疫原性ペプチドは、担体との融合タンパク質として発現させることもできる。免疫原性ペプチドは、アミノ末端、カルボキシル末端、又はペプチド内のいずれかの部位で（内部的に）担体に連結することができる。一部の実施形態において、融合タンパク質には免疫原性ペプチドの複数のリピートが存在し得る。一部の実施形態において、ネオ抗原ペプチドと薬学的に許容可能な担体とは融合タンパク質として発現する。

【0893】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ペプチド又はそのコードｍＲＮＡと薬学的に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ペプチド又はそのコードｍＲＮＡと薬学的に許容可能なアジュバント（例えば、本明細書に記載されるとおりのアジュバント）とを含む。

【0894】

本明細書に開示される方法及び組成物の一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは１つ又は２つ以上のネオ抗原配列をコードする。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0895】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６～９３のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６の抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７４～７７のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列及び／又は抗原性部分はカノニカルペプチド配列（例えば、表２１において下線が付されている例示的カノニカルペプチド配列のいずれか）と排他的に重複せず、又はそれからならない。

【0896】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に特異的なネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象のために個別化されたネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、対象に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。

【0897】

一部の他の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原配列である。一部の実施形態において、ネオ抗原配列はユニバーサルネオ抗原ワクチンである。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団中の対象の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、又は少なくとも４５％に発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合する能力を有する。一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、新生物障害に罹患している対象集団の少なくとも１％、少なくとも５％、又は少なくとも１０％に存在する腫瘍に対するＴ細胞応答を誘発する能力を有する。

【0898】

一部の実施形態において、ネオ抗原配列は、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物を投与することにより、対象において誘導される少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡをシーケンシングすることによって同定されている。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは、新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、抗体－薬物コンジュゲート、又は組成物に接触させることによって誘導されるネオ抗原配列をコードする。一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。

【0899】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと薬学的に許容可能な担体とを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡは薬学的に許容可能な担体に連結される。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、ペプチド、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン、チログロブリン、オボアルブミン、トキソイド又は弱毒化トキソイド誘導体、サイトカイン、及びケモカインから選択される。

【0900】

一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと薬学的に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、ネオ抗原ワクチンは、少なくとも１つのネオ抗原ｍＲＮＡと薬学的に許容可能なアジュバント（例えば、本明細書に記載されるとおりのアジュバント）とを含む。

【0901】

一部の実施形態において、ネオ抗原ｍＲＮＡは封入剤によって封入される。一部の実施形態において、封入剤はネオ抗原ｍＲＮＡを分解から保護し、ワクチン送達を向上させる（ＭｃＮａｍａｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１５：７９４５２８）。一部の実施形態において、封入剤はリポソームである。一部の実施形態において、リポソームは、Ｎ－［１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド１（ＤＯＴＡＰ）などのカチオン性リポソームである。一部の実施形態において、封入剤はナノ粒子である。一部の実施形態において、ナノ粒子はネオ抗原ｍＲＮＡをヌクレアーゼ分解から保護し、及び／又は細胞取り込み及び／又は送達効率を亢進させる。一部の実施形態において、ナノ粒子は、完全に分解性となるように改変され得る。一部の実施形態において、ナノ粒子は、ｐＨ応答性ポリ－（ｂ－アミノエステル）（ＰＢＡＥ）コアがリン脂質シェルに包まれた生分解性コア－シェル構造ナノ粒子である（Ｓｕ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．８（３）：７７４－８７）。一部の実施形態において、かかるナノ粒子は、インビボでのｍＲＮＡの送達及び抗腫瘍免疫応答の誘発において特に効率的である。

【0902】

一部の実施形態において、対象は約１５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約１００個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は約５０個以下の突然変異の非同義突然変異荷重を有する。一部の実施形態において、対象は、新生物障害、例えば、血液学的悪性腫瘍又は固形腫瘍を有するか、又はそれを有する疑いがある。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病及び多発性骨髄腫から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、乳癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、子宮癌、唾液管癌、黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、膵癌、腎癌、結腸直腸癌、及び食道癌から選択される。一部の実施形態において、固形腫瘍は、ＨＥＲ２陽性乳癌、胃腺癌、前立腺癌、及び骨肉腫から選択される。

【0903】

本明細書で使用されるとき、「アジュバント」は、付随する免疫原性薬剤、例えばネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡに対する免疫応答を増加させ、増幅し、又は調節する能力を有する物質を指す。特定の実施形態において、本開示のネオ抗原は、アジュバント、即ち、それ自体は適応免疫応答を引き起こさないが、付随するネオ抗原に対する応答を増幅し又は調節する物質と併用して投与することができる。免疫応答を誘発するため、開示されるネオ抗原との併用で種々のアジュバントを使用することができる。一部の実施形態において、１つ又は複数のアジュバントは、応答の定性的形態に影響を及ぼし得るネオ抗原のコンホメーション変化を引き起こすことなくネオ抗原に対する固有の応答を増強するように選択される。一部の実施形態において、１つ又は複数のアジュバントは、Ｔエフェクター（例えば、ＣＤ８）細胞プライミング及び／又は活性化が亢進するように選択される。

【0904】

特定の実施形態において、アジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、及び硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩（ミョウバン）である。かかるアジュバントは、３－Ｏ－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）又は３－ＤＭＰ、ポリグルタミン酸又はポリリジンなどの重合体又は単量体アミノ酸など、他の特定の免疫賦活剤と共に又はそれ無しで使用することができる。かかるアジュバントは、ムラミルペプチド（例えば、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－Ａｌ－Ｄ－イソｇｌｕ－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ－ＤＰＰ））、又は他の細菌細胞壁構成成分など、他の特定の免疫賦活剤と共に又はそれ無しで使用することができる。他のアジュバントは水中油型エマルションであり、（ａ）Ｍｏｄｅｌ １１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）などのマイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に製剤化された、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０、及び０．５％Ｓｐａｎ ８５を含有する（任意選択で様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含有する）ＭＦ５９（国際公開第９０／１４８３７号パンフレット）、（ｂ）サブミクロンエマルションにマイクロ流体化されるか、又はより大きい粒径のエマルションが生成されるようにボルテックスされるかのいずれかの、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ ８０、５％プルロニックブロック化ポリマーＬ１２１、及びｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、及び（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ ８０、及び１つ以上の細菌細胞壁構成成分であって、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの細菌細胞壁構成成分、例えばＭＰＬ－ＦＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含有するＲｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ）が挙げられる。一部の実施形態において、アジュバントは、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（ＱＳ２１）などのサポニン、又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）及びＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸなどのそれから生成される粒子である。他のアジュバントとしては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、サイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、及びＩＬ－１２）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などが挙げられる。

【0905】

アジュバントは免疫原性薬剤（例えば、ネオ抗原ペプチド又はｍＲＮＡ）と共に単一の組成物として投与することができ、又は免疫原性薬剤の投与前、それと同時若しくはその後に投与することができる。一部の実施形態において、免疫原性薬剤とアジュバントとは同じバイアルに包装して供給することができ、又は別個のバイアルに包装して使用前に混合することができる。一部の実施形態において、免疫原性薬剤及びアジュバントは、意図される治療上の適用を指示する表示を伴い包装することができる。一部の実施形態において、免疫原性薬剤とアジュバントとが別個に包装される場合、包装には、使用前に混合するよう指示が含まれ得る。アジュバント及び／又は担体の選択は、アジュバントを含有する免疫原性製剤の安定性、投与経路、投薬スケジュール、ワクチンを接種される種に対するアジュバントの有効性に依存し、ヒトでは、薬学的に許容可能なアジュバントとは、関連する規制当局によってヒト投与が承認済みのもの、又は承認見込みのものである。例えば、完全フロイントアジュバントはヒト投与に好適でない。しかしながら、ミョウバン、ＭＰＬ又は不完全フロイントアジュバント（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．３２：１７３－１８６）は、単独で、又は任意選択で、ミョウバン、ＱＳ２１、及びＭＰＬのいずれか、及びこれらの全ての組み合わせとの併用で、ヒト投与に好適である。

【0906】

様々な実施形態において、本開示は、少なくとも１つのネオ抗原をスクリーニングして同定する方法を更に提供する。より具体的には、様々な実施形態において、本開示は、（ａ）新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物に接触させること；（ｂ）新生物細胞を、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物に接触させた後、少なくとも１つの選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物を検出すること；（ｃ）少なくとも１つの選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物の、少なくとも１つのペプチドへの翻訳を予測すること；及び（ｄ）少なくとも１つのペプチドを参照プロテオームと比較することによって少なくとも１つのネオ抗原を同定する方法を提供し、ここで少なくとも１つのペプチドが参照プロテオームのいかなるペプチドとも一致しない場合、少なくとも１つのネオ抗原が同定される。様々な実施形態において、本方法は、１つ以上の追加の新生物細胞を接触させて少なくとも１つのユニバーサルネオ抗原を同定することを更に含む。様々な実施形態において、１つ以上の追加の新生物細胞又は試料（例えば、組織生検）で本方法を繰り返すことにより、（例えば、ネオ抗原ワクチンでの使用に）好適なネオ抗原が確認され、及び／又は１つ以上のユニバーサルネオ抗原が同定される。

【0907】

様々な他の実施形態において、本開示は、（ａ）新生物細胞を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物に接触させること；（ｂ）新生物細胞を、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物に接触させた後、潜在的ネオ抗原配列を含む少なくとも１つのペプチドを検出すること；及び（ｃ）少なくとも１つのペプチドを参照プロテオームと比較することによって少なくとも１つのネオ抗原を同定する方法を提供し、ここで少なくとも１つのペプチドが参照プロテオームのいかなるペプチドとも一致しない場合、少なくとも１つのネオ抗原が同定される。様々な実施形態において、本方法は、１つ以上の追加の新生物細胞を接触させて少なくとも１つのユニバーサルネオ抗原を同定することを更に含む。様々な実施形態において、１つ以上の追加の新生物細胞又は試料（例えば、組織生検）で本方法を繰り返すことにより、（例えば、ネオ抗原ワクチンでの使用に）好適なネオ抗原が確認され、及び／又は１つ以上のユニバーサルネオ抗原が同定される。

【0908】

本明細書に記載されるネオ抗原同定方法の一部の実施形態において、少なくとも１つの選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物を検出することは、ＲＮＡｓｅｑを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物の翻訳を予測することは、少なくとも１つの転写物に関するパーセントスプライスイン（ｄＰＳＩ）値の変化を定量化することを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物の翻訳を予測することは、ＲｉｂｏＳｅｑ及び／又はリボソームプロファイリングを含む。

【0909】

本明細書に記載されるネオ抗原同定方法の一部の実施形態において、本方法は、予測される主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）結合に関して少なくとも１つのペプチドを評価することを更に含む。一部の実施形態において、予測ＭＨＣ結合は、少なくとも１つのペプチドの未補正親和性予測結合強度を測定することによって決定される。一部の実施形態において、約５００ｎＭ以上の未補正親和性予測結合強度がＭＨＣ結合を示す。一部の実施形態において、予測ＭＨＣ結合は、一連のランダムペプチドに関して予測結合強度の分布を同定し；及び少なくとも１つのペプチドの予測結合強度をその分布と比較することによって決定される。一部の実施形態において、分布の上位２．０％にある予測結合強度が弱いＭＨＣ結合を示す。一部の実施形態において、分布の上位０．５％にある予測結合強度が強いＭＨＣ結合を示す。

【0910】

本明細書に記載されるネオ抗原同定方法の一部の実施形態において、新生物細胞はインビトロ細胞培養物中に存在する。一部の実施形態において、新生物細胞は対象から入手される。一部の実施形態において、新生物細胞は対象に存在する。

【0911】

また本明細書には、様々な実施形態において、（ａ）本明細書に開示される例示的同定方法のいずれかを用いて少なくとも１つのネオ抗原（例えば、少なくとも１つのネオ抗原ペプチド又はそのコードｍＲＮＡ）を同定すること；及び（ｂ）少なくとも１つのネオ抗原を薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又はアジュバント（例えば、本明細書に記載される薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又はアジュバントのいずれか）と共に製剤化することによってネオ抗原ワクチンを作製する方法も提供される。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号３７～６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号４６～４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0912】

一部の他の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号６６～９３のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号６６～９３のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号６６のアミノ酸配列、又は配列番号６６の抗原性部分を含む。一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、配列番号７４～７７のいずれか１つのアミノ酸配列、又は配列番号７４～７７のいずれか１つの抗原性部分を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原及び／又は抗原性部分は約１０～約５０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原及び／又は抗原性部分は約１０～約３５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原及び／又は抗原性部分は約１５～約２５アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原及び／又は抗原性部分は約１０～約２０アミノ酸長の範囲である。一部の実施形態において、少なくとも１つのネオ抗原及び／又は抗原性部分はカノニカルペプチド配列（例えば、表２１において下線が付されている例示的カノニカルペプチド配列のいずれか）と排他的に重複せず、又はそれからならない。

【0913】

一部の実施形態において、ワクチンに使用される少なくとも１つのネオ抗原は、薬学的に許容可能な担体に連結される。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な担体は、ペプチド、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン、チログロブリン、オボアルブミン、トキソイド又は弱毒化トキソイド誘導体、サイトカイン、及びケモカインから選択される。

【0914】

スプライシング調節薬／ＡＤＣと改変Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）との併用：
様々な実施形態において、本明細書に記載されるとおりの癌を有する患者は、スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物と１つ以上の改変腫瘍標的化Ｔ細胞（即ち、ＣＡＲ－Ｔ）との併用で治療することができる。従って、様々な実施形態において、本開示は、新生物障害を有するか又は有する疑いがある対象を、有効量のスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又はスプライシング調節薬若しくはＡＤＣを含む組成物；及び改変腫瘍標的化Ｔ細胞（即ち、ＣＡＲ－Ｔ）を対象に投与することにより治療する方法を提供する。様々な実施形態において、キメラＴ細胞受容体は、同定されたネオ抗原との反応性を有する抗原認識配列を使用して改変することができる。

【0915】

例えば、様々な実施形態において、スプライシング調節薬又はＡＤＣによって誘導される細胞表面タンパク質の細胞外ドメインの変化を標的化するため、キメラ抗原反応性Ｔ細胞受容体（ＣＡＲ）を改変し得、これは初めに、細胞表面発現ネオ抗原タンパク質ドメインを認識する抗体を同定することによる。次に選択的標的化及び活性化のため、かかる抗体の抗原認識配列をＴ細胞受容体ドメインと融合させることができる。

【0916】

様々な他の実施形態において、腫瘍細胞の抗原提示機構をスプライシング調節薬由来又はＡＤＣ由来ネオ抗原と共に統合する戦略が用いられる。一部の実施形態では、既知の高頻度に出現するＨＬＡアレル（例えば、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１）を含有する細胞をスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物で処理することができ、リガンドミクスによりＭＨＣ１結合ネオ抗原が同定される。一部の実施形態では、これらのペプチドを使用して、同じＨＬＡアレルを発現する健常ドナーからのＴ細胞をプライミングし及び／又は拡大することができる。一部の実施形態では、かかるＴ細胞を単離し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖及びβ鎖をシーケンシングしてコグネイト抗原認識／可変領域を同定することができる。一部の実施形態では、次にコグネイトＣＡＲを改変することができる。

【0917】

一部の実施形態において、ＣＡＲ配列は、現在利用可能なプロトコルを用いて患者由来Ｔ細胞集団にクローニングされ、拡大される。一部の実施形態において、次にスプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療後、改変Ｔ細胞が輸注されて患者の循環に戻される。スプライシング調節薬、ＡＤＣ、又は組成物による治療後、一部の実施形態では、腫瘍細胞が抗原を提示し始め得る。一部の実施形態において、改変されたＴ細胞集団は抗原提示腫瘍細胞に会合し、それを殺傷することができる。

【0918】

当業者には、本明細書に記載される本開示の方法の他の好適な変形及び適合が自明であり、本開示又は本明細書に開示される実施形態の範囲から逸脱することなく好適な均等物を用いて行われ得ることが容易に理解されるであろう。ここでは本開示を詳細に記載したが、あくまでも説明のために含まれる、限定することは意図しない以下の例を参照することにより、それが更に明確に理解されるであろう。

【実施例】

【0919】

実施例１
構造を表７～表９に示したペイロード、リンカー、及びコンジュゲート可能なリンカー－ペイロード（リンカー－薬物、Ｌ－Ｄ）化合物の合成方法について記載する。コンジュゲート可能なリンカー－ペイロードは抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の調製において使用した。例示的ＡＤＣは実施例３～５に記載する。

【0920】

１．１ 試薬及び材料
以下の合成方法に使用される出発材料は、市販されているか、又は標準方法により公知の材料から容易に調製できるかのいずれかである。開示されるコンジュゲート可能なリンカー－ペイロードは、本明細書に記載される反応及び技法を用いて調製することができる。以下に記載される合成方法の説明において、提案される反応条件の全ては、溶媒、反応雰囲気、反応温度、実験の所要時間、及びワークアップ手順の選択を含め、特に指示されない限り、その反応に標準的な条件となるように選択し得ることが理解されるべきである。有機合成分野の当業者によれば、分子の様々な部分に存在する官能基が、提案される試薬及び反応と適合しなければならないことが理解される。反応条件との適合性がない置換基は当業者には明らかであり、従って本明細書では別の方法が指示される。

【0921】

分取液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ ＡｕｔｏＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ及びＸＴｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８カラム（５μｍ、１９ｍｍ×１００ｍｍ）を使用して酸性移動相条件下で行った。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｖａｒｉａｎ機器（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して４００ＭＨｚで記録した。マイクロ波加熱は、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｅｍｒｙｓ Ｌｉｂｅｒａｔｏｒ又はＩｎｉｔｉａｔｏｒマイクロ波を使用して実施した。カラムクロマトグラフィーは、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｒｆ２００ｄを使用して実行した。溶媒除去は、Ｂｕｅｃｈｉロータリーエバポレータ又はＧｅｎｅｖａｃ遠心エバポレータのいずれかを使用して実行した。

【0922】

用語／略語：本明細書で使用されるとき、用語「不活性化された」は、反応器（例えば、反応槽、フラスコ、ガラス反応器）中の空気が、本質的に水分を含まない窒素又はアルゴンなどの不活性ガスに置き換えられることを指す。本明細書では以下の略語を使用する：ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー、ＫＨＭＤＳ＝カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー－質量分析法、ＭｅＯＨ＝メタノール、ＲＴ＝室温、ＴＢＳＣｌ＝ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー。多重度は以下の略語を用いて指示される：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｑｕｉｎｔ＝五重線、ｓｘｔ＝六重線、ｍ＝多重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ｂｒ ｓ＝幅広一重線。

【0923】

ＬＣ／ＭＳ：移動相＝Ａ（Ｈ２Ｏ中０．１％ギ酸）及びＢ（アセトニトリル中０．１％ギ酸）。グラジエント＝Ｂ ５％～９５％、１．８分。カラム＝Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）。

【0924】

参考文献：米国特許第７，８８４，１２８号明細書及び同第７，８１６，４０１号明細書は、プラジエノライドＢ及びＤの例示的合成方法について記載しており、かかる方法に関して各々参照により本明細書に援用される。プラジエノライドＢ及びＤの合成は、Ｋａｎａｄａ ｅｔ ａｌ．（（２００７）Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ．４６：４３５０－５）に記載される例示的方法を用いても実施され得る。Ｋａｎａｄａ ｅｔ ａｌ．及び国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットは、プラジエノライドＤ（国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットの１１１０７Ｄ）からのＥ７１０７（Ｄ１１）（国際公開第２００３／０９９８１３号パンフレットの化合物４５）の例示的合成方法について記載している。対応する米国特許番号はＫｏｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第７，５５０，５０３号明細書である。これらの参考文献の各々は、記載される合成方法に関して本明細書に援用される。

【0925】

【表25】

【0926】

【表26】

【0927】

【表27】

【0928】

【表28】

【0929】

【表29】

【0930】

【表30】

【0931】

【表31】

【0932】

【表32】

【0933】

【表33】

【0934】

【表34】

【0935】

【表35】

【0936】

【表36】

【0937】

【表37】

【0938】

【表38】

【0939】

【表39】

【0940】

【表40】

【0941】

【表41】

【0942】

【表42】

【0943】

【表43】

【0944】

【表44】

【0945】

【表45】

【0946】

【表46】

【0947】

【表47】

【0948】

【表48】

【0949】

【表49】

【0950】

【表50】

【0951】

１．２ プラジエノライドベースのペイロードの調製
１．２．１ 概要－一般的手順１

【化144】

ステップ１：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７，１０－ジヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（１．７ｇ、３．１５４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４．４０ｍＬ、３１．５３６ｍｍｏｌ）、１，２－ジクロロエタン（３１．５ｍＬ、３．１５４ｍｍｏｌ）を合わせて室温で撹拌した。クロロトリエチルシラン（２．１ｍＬ、１２．６１５ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌した。ブラインを反応混合物に注入して３０分間撹拌し、有機層を分離した。水層をＤＣＭ（３×）で逆抽出した。有機層を合わせ、乾燥させて（無水Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮乾固し、クロマトグラフィーにかけて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（１．２７４ｇ、１．４２３ｍｍｏｌ、４５．１％収率）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．５１－０．６４（ｍ，１８Ｈ）０．７４－０．８４（ｍ，９Ｈ）０．９０－０．９７（ｍ，２６Ｈ）１．０４（ｓ，３Ｈ）１．１８（ｓ，４Ｈ）１．３７（ｓ，３Ｈ）１．４１－１．５７（ｍ，４Ｈ）１．６９（ｓ，３Ｈ）１．８４－１．９３（ｍ，１Ｈ）２．００－２．０５（ｍ，３Ｈ）２．２４－２．３５（ｍ，１Ｈ）２．３８－２．４５（ｍ，１Ｈ）２．７２－２．８０（ｍ，１Ｈ）３．２８－３．３０（ｍ，１Ｈ）３．６２－３．７０（ｍ，１Ｈ）３．８０－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．５６（ｓ，１Ｈ）４．８１－４．９３（ｍ，２Ｈ）５．４１－５．５２（ｍ，１Ｈ）５．６３－５．７３（ｍ，１Ｈ）５．７７－５．８７（ｍ，１Ｈ）６．０１－６．１２（ｍ，１Ｈ）６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１５．１２，１１．１１Ｈｚ，１Ｈ）．

【0952】

ステップ２：トルエン（４．１６ｍＬ、３９．０８５ｍｍｏｌ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（０．７ｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）の溶液に、１，８－ナフタレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－（１．１７３ｇ、５．４７２ｍｍｏｌ）、続いてトリフルオロメタンスルホン酸メチル（０．３５４ｍＬ、３．１２７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。次にこの反応混合物を５０℃に加温し、３時間加熱した。溶媒を蒸発させた。カラムクロマトグラフィーによる精製により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（４６７ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ、６５．７％収率）を無色の油として得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．６２－０．７０（ｍ，１８Ｈ）０．８３－０．９５（ｍ，１３Ｈ）０．９９－１．０７（ｍ，２７Ｈ）１．２２（ｓ，３Ｈ）１．２４－１．３６（ｍ，２Ｈ），１．２８－１．２８（ｍ，１Ｈ）１．４５（ｓ，３Ｈ）１．４７－１．６５（ｍ，８Ｈ）１．７８（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，３Ｈ）１．９１－２．００（ｍ，１Ｈ）２．０７（ｓ，３Ｈ）２．３７－２．４５（ｍ，１Ｈ）２．５１－２．６８，（ｍ，３Ｈ）２．８８－２．９２（ｍ，１Ｈ）３．２０－３．２４（ｍ，１Ｈ）３．３５（ｓ，３Ｈ）３．７４－３．８２（ｍ，１Ｈ）３．９３－４．０２（ｍ，１Ｈ）４．９４－４．９９（ｍ，１Ｈ）５．０８－５．１４（ｍ，１Ｈ），５．５３－５．６４（ｍ，１Ｈ）５．７０－５．７９（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．８８（ｍ，１Ｈ）６．１２－６．１８（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．５８（ｍ，１Ｈ）．

【0953】

ステップ３：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（５００ｍｇ、０．５５８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（６００９μＬ、１４８．５２４ｍｍｏｌ）に溶解し、炭酸カリウム（２３２ｍｇ、１．６７５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌し、反応の完了が示された。この反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機分をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーによる精製により、（４Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，Ｅ）－７，８－ジヒドロキシ－７，１１－ジメチル－１２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－４－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－９－エン－２－オン（３０５ｍｇ、０．３５７ｍｍｏｌ、６４．０％収率）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．６１－０．７２（ｍ，１８Ｈ）０．８２－０．９２（ｍ，７Ｈ）０．９２－１．０６（ｍ，３０Ｈ）１．１９－１．４０（ｍ，７Ｈ）１．４２－１．６６（ｍ，８Ｈ）１．５１－１．５２（ｍ，１Ｈ）１．７５－１．８１（ｍ，３Ｈ）１．９１－２．０１（ｍ，１Ｈ）２．３４－２．４５（ｍ，１Ｈ）２．５１－２．６１（ｍ，２Ｈ）２．６１－２．６９（ｍ，１Ｈ）２．８６－２．９４（ｍ，１Ｈ）３．６７－３．７３（ｍ，１Ｈ）３．７３－３．８０（ｍ，１Ｈ）３．８９－３．９６（ｍ，１Ｈ）４．０８－４．１７（ｍ，１Ｈ）４．９３－４．９９（ｍ，１Ｈ）５．３６－５．４７（ｍ，１Ｈ）５．６７－５．７８（ｍ，１Ｈ）５．８０－５．８８（ｍ，１Ｈ）６．１０－６．１９（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．５８（ｍ，１Ｈ）．

【0954】

ステップ４：（４Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，Ｅ）－８－ヒドロキシ－７－メトキシ－７，１１－ジメチル－１２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－４－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－９－エン－２－オン（０．３８６ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（０．１Ｍ）、ＤＭＡＰ（１．０当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、クロロギ酸４－ニトロフェニル（１．８当量）を合わせ、一晩撹拌した。次にこの反応混合物を１Ｎ ＮａＯＨで抽出した。有機層を乾燥させて（無水Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮乾固した。残渣をＤＣＭ（０．１Ｍ）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、アミン（２．０当量）と混合し、これらを合わせて１時間撹拌した。この反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィーにかけて、ｔｒｉＴＥＳ－プラジエノライドカルバメートを得た。

【0955】

ステップ５：ｔｒｉＴＥＳ－プラジエノライドカルバメート（１当量）、ＤＣＭ（０．０４Ｍ）、及びＤＩＰＥＡ（１９１当量）を合わせ、－７８℃に冷却した。フッ化水素ピリジン（６．２当量）を加え、この反応物を室温に加温させ、一晩撹拌した。この反応混合物を氷浴で冷却し、次に飽和ＮａＨＣＯ_３を加え、撹拌し、ＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、濃縮し、クロマトグラフィーにかけて、プラジエノライドカルバメートを得た。

【0956】

１．２．１．１ Ｄ１
一般的手順１（セクション１．２．１に概説される）を用いてＤ１を合成した。

【化145】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２４０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、５５．１％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９８０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．５６－０．６６（ｍ，１８Ｈ）０．７８－０．９１（ｍ，９Ｈ） ０．９６（ｔ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，２７Ｈ）１．１８－１．２２（ｍ，３Ｈ）１．２３－１．２８（ｍ，１Ｈ）１．３７－１．４１（ｍ，３Ｈ）１．４１－１．６３（ｍ，７Ｈ）１．６９－１．７４（ｍ，３Ｈ）１．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．８７，４．９６Ｈｚ，１Ｈ）２．３３－２．６２（ｍ，４Ｈ）２．７８－２．８９（ｍ，５Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ）３．４３－３．５２（ｍ，４Ｈ）３．７３（ｔｄ，Ｊ＝６．４０，３．５１Ｈｚ，１Ｈ）３．８６（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝７．８４，３．９５Ｈｚ，１Ｈ）４．９４－５．１３（ｍ，２Ｈ）５．５８－５．７６（ｍ，３Ｈ）６．１２，（ｂｒ ｄ，Ｊ＝０．７５Ｈｚ，１Ｈ）６．４１（ｄｄ，Ｊ＝１５．０６，１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）．

【0957】

Ｄ１

【化146】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８３－１．０１（ｍ，１０Ｈ）１．２３（ｓ，３Ｈ）１．２５－１．３２（ｍ，１Ｈ）１．３５（ｓ，３Ｈ）１．４０－１．６１（ｍ，６Ｈ）１．６１－１．７１（ｍ，２Ｈ）１．７９（ｄ，Ｊ＝０．７５Ｈｚ，３Ｈ）１．８４－１．９３（ｍ，１Ｈ）２．４５－２．６３（ｍ，３Ｈ）２．６３－２．７２（ｍ，１Ｈ）２．７７－２．８５（ｍ，４Ｈ）２．８６－２．９４（ｍ，１Ｈ）３．３３－３．３７（ｍ，３Ｈ）３．４０－３．５７（ｍ，５Ｈ）３．７７－３．８９（ｍ，１Ｈ）４．３８－４．４２（ｍ，１Ｈ）５．０１－５．１２（ｍ，２Ｈ）５．５２－５．６５（ｍ，１Ｈ）５．６９－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８４－５．９２（ｍ，１Ｈ）６．０９－６．１８（ｍ，１Ｈ）６．４９－６．６０（ｍ，１Ｈ）．

【0958】

１．２．１．２ Ｄ２
一般的手順１（セクション１．２．１に概説される）を用いてＤ２を合成した。

【化147】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（４１３ｍｇ、０．４１６ｍｍｏｌ、９０％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９９４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．６１－０．７１（ｍ，１８Ｈ）０．８３－０．９４（ｍ，９Ｈ）０．９８－１．０７（ｍ，２８Ｈ）１．２３（ｓ，３Ｈ）１．４１－１．４８（ｍ，３Ｈ）１．４８－１．６５（ｍ，７Ｈ）１．７２－１．８１（ｍ，３Ｈ）１．９３－１．９９（ｍ，１Ｈ）２．０３（ｓ，３Ｈ）２．３２（ｓ，３Ｈ）２．３８－２．４８（ｍ，５Ｈ）２．５２－２．６７（ｍ，３Ｈ）２．８７－２．９３（ｍ，１Ｈ）３．４７－３．６１（ｍ，４Ｈ）３．７２－３．８１（ｍ，１Ｈ）３．９６－４．０４（ｍ，１Ｈ）４．５３－４．６２（ｍ，１Ｈ）４．９３－５．０７（ｍ，２Ｈ）５．５１－５．６４（ｍ，１Ｈ）５．６９－５．７９（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．９２（ｍ，１Ｈ）６．０９－６．２１（ｍ，１Ｈ）６．４６－６．６０（ｍ，１Ｈ）．

【0959】

Ｄ２

【化148】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（３７．８ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、２４．０５％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６５１．６９［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．７６－０．８９（ｍ，９Ｈ）１．１０（ｓ，３Ｈ）１．２０－１．２６（ｍ，３Ｈ）１．３０－１．４２（ｍ，４Ｈ）１．４２－１．５５（ｍ，２Ｈ）１．６６－１．７５（ｍ，３Ｈ）１．７５－１．８２（ｍ，１Ｈ）２．１３－２．２１（ｍ，３Ｈ）２．２５（ｂｒ ｓ，４Ｈ）２．３１－２．４１（ｍ，２Ｈ）２．５４－２．６０（ｍ，２Ｈ）２．７２－２．８２（ｍ，１Ｈ）３．２２（ｓ，３Ｈ）３．３６－３．４０（ｍ，３Ｈ）３．６６－３．７６（ｍ，１Ｈ）４．３６－４．４６（ｍ，１Ｈ）４．５３－４．６０（ｍ，１Ｈ）４．７８－４．８５（ｍ，１Ｈ）４．８６－４．９６（ｍ，２Ｈ）５．３６－５．５０（ｍ，１Ｈ）５．６０－５．７４（ｍ，１Ｈ）５．８０－５．９２（ｍ，１Ｈ）６．０２－６．１１（ｍ，１Ｈ）６．３４－６．４６（ｍ，１Ｈ）．

【0960】

１．３ ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣリンカー－ペイロードの調製
１．３．１ 概要－一般的手順１

【化149】

ペイロード（１．０当量）、ヒューニッヒ塩基（３．０当量）、ＤＭＦ（０．１Ｍ）、及び４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１．２当量）を合わせて室温で一晩撹拌した。次に反応混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中ＭｅＯＨ）又は逆相ＨＰＬＣによって精製して生成物を得た。

【0961】

１．３．１．１ ＡＤＬ１－Ｄ１

【化150】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ１）：一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いて１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（５０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ、４２％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２５８．５［Ｍ＋Ｎａ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．０４（ｍ，１６Ｈ）１．１８－１．２６（ｍ，３Ｈ）１．２６－１．３８（ｍ，６Ｈ）１．４０－１．７１（ｍ，１４Ｈ）１．８０（ｓ，３Ｈ）１．８５－１．９８（ｍ，２Ｈ）２．０２－２．１５（ｍ，１Ｈ）２．２４－２．３４（ｍ，２Ｈ）２．４４－２．６４（ｍ，３Ｈ）２．６５－２．７２（ｍ，１Ｈ）２．８７－２．９６（ｍ，１Ｈ）３．０６ －３．２７（ｍ，２Ｈ）３．３７（ｓ，６Ｈ）３．４３－３．６１（ｍ，１２Ｈ）３．７９－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．１２－４．２１（ｍ，１Ｈ）４．４８－４．５５（ｍ，１Ｈ）５．０２－５．１４（ｍ，４Ｈ）５．５５－５．６５（ｍ，１Ｈ），５．６９－５．８１（ｍ，１Ｈ）５．８５－５．９３（ｍ，１Ｈ）６．１２－６．１９（ｍ，１Ｈ）６．４９－６．６０（ｍ，１Ｈ）６．８１（ｓ，２Ｈ）７．２９－７．３８（ｍ，２Ｈ）７．５７－７．６５（ｍ，２Ｈ）．

【0962】

１．３．１．２ ＡＤＬ１－Ｄ１８
プラジエノライドＢを出発材料（ＳＭ）として利用して（Ｒ＝Ｈ；スキーム１）、セクション１．２．１に概説される手順を用いてペイロードＤ１８を調製した。

【化151】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｓ，２Ｅ，４Ｅ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２０５ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ、７７％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６２１．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８８－０．９９（ｍ，９Ｈ）１．１０（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２４（ｓ，４Ｈ）１．４２－１．６９（ｍ，８Ｈ）１．７７（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，３Ｈ）２．４３－２．６３（ｍ，４Ｈ）２．６４－２．７０（ｍ，１Ｈ）２．７１－２．８２（ｍ，５Ｈ）３．３４（ｂｒ ｓ，３Ｈ）３．３７（ｓ，２Ｈ）３．４２－３．５７（ｍ，５Ｈ）３．７９－３．８９（ｍ，１Ｈ）５．０６（ｓ，２Ｈ），５．５４－５．６３（ｍ，１Ｈ）５．６４－５．８０（ｍ，２Ｈ）６．０７－６．１６（ｍ，１Ｈ）６．２９－６．４０（ｍ，１Ｈ）．

【0963】

【化152】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ１８）：一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いて１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｓ，２Ｅ，４Ｅ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（７２ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ、５４．７％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２２０．０８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８７－１．０２（ｍ，１５Ｈ）１．１０（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２３（ｓ，４Ｈ）１．２９－１．３８（ｍ，２Ｈ）１．４４－１．６８（ｍ，１３Ｈ），１．５４－１．５５（ｍ，１Ｈ）１．７７（ｄ，Ｊ＝０．７５Ｈｚ，４Ｈ）１．８７－１．９５（ｍ，１Ｈ）２．０５－２．１５（ｍ，１Ｈ）２．２４－２．３２（ｍ，２Ｈ）２．４５－２．６２（ｍ，４Ｈ）２．６５－２．７０（ｍ，１Ｈ），２．７１－２．７８（ｍ，１Ｈ）３．１３－３．１８（ｍ，２Ｈ）３．４６－３．５８（ｍ，１１Ｈ）３．７９－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．１３－４．２１（ｍ，１Ｈ）４．４７－４．５６（ｍ，１Ｈ）５．１１（ｓ，４Ｈ）５．５３－５．８１（ｍ，３Ｈ）６．０６－６．１６（ｍ，１Ｈ）６．２９－６．４０（ｍ，１Ｈ）６．８１（ｓ，２Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．６０（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【0964】

１．３．１．３ ＡＤＬ１－Ｄ８及びＡＤＬ６－Ｄ８
以下に概説する手順のとおりペイロードＤ８を合成した：

【化153】

【0965】

ステップ１：０℃でジクロロメタン（２ｍＬ）中のトリ－ＴＥＳ－プラジエノライドＤ（２００ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＡＰ（４０９ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸４－ニトロフェニル（３３８ｍｇ、１．６７５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で７日間撹拌し、ＥｔＯＡｃ及び水で希釈し、次に層を分離させた。水層をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、ろ過し、真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーにより、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（１７０ｍｇ、７２％収率）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．５４－０．６７（ｍ，１８Ｈ）０．７８－１．０３（ｍ，３６Ｈ）１．１９－１．３２（ｍ，１Ｈ）１．３９（ｓ，３Ｈ）１．４３－１．５２（ｍ，３Ｈ）１．５５－１．６３（ｍ，３Ｈ）１．６４（ｓ，３Ｈ）１．７４（ｓ，３Ｈ）１．８８（ｄｄ，Ｊ＝１３．８０，５．０２Ｈｚ，１Ｈ）２．１３（ｓ，３Ｈ）２．２３－２．３７（ｍ，１Ｈ）２．３９－２．４８（ｍ，２Ｈ）２．５１－２．６３（ｍ，２Ｈ）２．８４（ｓ，１Ｈ）３．６９－３．７７（ｍ，１Ｈ）３．８２－４．００（ｍ，１Ｈ）５．０４（ｄ，Ｊ＝１０．７９Ｈｚ，１Ｈ）５．２４（ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，１Ｈ）５．６７－５．８４（ｍ，３Ｈ）６．１２（ｄ，Ｊ＝１０．１６Ｈｚ，１Ｈ）６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１５．０６，１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，２Ｈ）８．２９（ｄ，Ｊ＝９．１６Ｈｚ，２Ｈ）．

【0966】

【化154】

ステップ２：ＤＣＭ中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルアセテート（１００ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）の溶液にピペラジン及びＤＭＡＰを加えた。得られた黄色がかった懸濁液を６時間撹拌した。この反応混合物を濃縮して粗生成物を生じさせた。フラッシュクロマトグラフィーにより、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレート（９５ｍｇ、１００％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１００８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．４２－０．７０（ｍ，２２Ｈ）０．７９－０．８４（ｍ，７Ｈ）０．８６－０．９１（ｍ，４Ｈ）０．９２－１．０３（ｍ，３０Ｈ）１．１５－１．３０（ｍ，２Ｈ）１．３７－１．４２（ｍ，３Ｈ）１．４４－１．５２（ｍ，３Ｈ）１．５６－１．６２（ｍ，２Ｈ）１．６２－１．６８（ｍ，１Ｈ）１．７１－１．７６（ｍ，３Ｈ）１．８３－１．９３（ｍ，１Ｈ）２．０３－２．１１（ｍ，４Ｈ）２．３６－２．４５（ｍ，２Ｈ）２．４５－２．５３（ｍ，２Ｈ）２．５４－２．６４（ｍ，１Ｈ）２．７８－２．８６（ｍ，１Ｈ）２．８６－３．０７（ｍ，４Ｈ）３．３２－３．４５（ｍ，１Ｈ）３．４５－３．６４（ｍ，３Ｈ）３．６９－３．７８（ｍ，１Ｈ）３．７９－３．９４（ｍ，１Ｈ）５．００（ｄ，Ｊ＝１０．５４Ｈｚ，１Ｈ）５．１８（ｓ，１Ｈ）５．５４－５．７９（ｍ，３Ｈ）５．９８－６．２１（ｍ，１Ｈ）６．３３－６．５７（ｍ，１Ｈ）６．８４－６．９６（ｍ，３Ｈ）８．０２－８．３５（ｍ，２Ｈ）８．０６－８．０８（ｍ，１Ｈ）．

【0967】

【化155】

ステップ３：ＴＨＦ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレート（９５ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）の溶液にＴＢＡＦ（０．４２４ｍＬ、１Ｍ、０．４２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０時間撹拌した。この混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、ろ過し、真空濃縮した。ＨＰＬＣ精製により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１６ｍｇ、２６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６６５．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．９０（ｄｄ，Ｊ＝６．８４，２．２０Ｈｚ，６Ｈ）０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，３Ｈ）１．２０－１．３０（ｍ，１Ｈ）１．３４（ｓ，３Ｈ）１．３９－１．５４（ｍ，３Ｈ）１．５５（ｓ，３Ｈ）１．５９－１．７３（ｍ，３Ｈ）１．７８（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，３Ｈ）１．８６（ｄｄ，Ｊ＝１３．９９，５．４６Ｈｚ，１Ｈ）２．０５（ｓ，３Ｈ）２．３９－２．５３（ｍ，３Ｈ）２．５５－２．６５（ｍ，１Ｈ）２．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．０３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）２．８９（ｓ，１Ｈ）３．２２（ｂｒ ｓ，４Ｈ）３．５０－３．５７（ｍ，１Ｈ）３．５８－３．９０（ｍ，５Ｈ）５．０８（ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ）５．１８（ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，１Ｈ）５．５８－５．７８（ｍ，２Ｈ）５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）６．１０－６．２３（ｍ，１Ｈ）６．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２５，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ）．

【0968】

ステップ４：

【化156】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ８）：ＤＭＦ（３１５μＬ、４．０６６ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（７．５ｍｇ、１０．１６６μｍｏｌ）をヒューニッヒ塩基（５．３３μＬ、０．０３ｍｍｏｌ）と加え合わせた。この反応物を０℃に冷却し、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレート（７．５０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を出発材料が消費されるまで室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーにより、ＡＤＬ１－Ｄ８（７．２ｍｇ、５．７０μｍｏｌ、５６．１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２６３．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。ＡＤＬ１－１１０９８７の調製には、一般的手順１（１．３．１）も利用することができる。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８０－１．０２（ｍ，１６Ｈ）１．２０－１．３５（ｍ，６Ｈ）１．３８－１．４８（ｍ，２Ｈ）１．５７－１．６９（ｍ，７Ｈ）１．７４－１．８１（ｍ，４Ｈ）１．８６－１．９６（ｍ，２Ｈ）２．００－２．１１（ｍ，４Ｈ）２．３１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．０２Ｈｚ，２Ｈ）２．４５－２．５５（ｍ，２Ｈ）２．５９－２．７４（ｍ，２Ｈ）２．８５－２．９６（ｍ，１Ｈ）３．０５－３．２５（ｍ，５Ｈ）３．４０－３．５９（ｍ，９Ｈ）３．６２－３．８８（ｍ，１Ｈ）４．１５（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ，１Ｈ）５．０５－５．２２（ｍ，５Ｈ）５．５６－５．７７（ｍ，２Ｈ）５．８４－５．９８（ｍ，１Ｈ）６．１１－６．２２（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．６１（ｍ，１Ｈ）７．３１－７．４０（ｍ，２Ｈ）７．５６－７．６５（ｍ，２Ｈ）．

【0969】

【化157】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ６－Ｄ８）：ＤＭＦ（２３８μＬ、３．０６９ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（５ｍｇ、７．６７３μｍｏｌ）をヒューニッヒ塩基（４．０２μＬ、０．０２３ｍｍｏｌ）と加え合わせた。この反応混合物を０℃に冷却し、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレートを加えた。この反応混合物を出発材料が消費されるまで室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。ＨＰＬＣ精製により、ＡＤＬ６－Ｄ８（１．２ｍｇ、１．０１９μｍｏｌ、１３．２８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１９９．９［Ｍ＋Ｎａ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．７８－１．０４（ｍ，１８Ｈ）１．１５－１．５２（ｍ，５８Ｈ）１．６４－１．７２（ｍ，３Ｈ）１．７８（ｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，４Ｈ）２．０４－２．１９（ｍ，３Ｈ）２．２１－２．３０（ｍ，１Ｈ）２．４４－２．６７（ｍ，４Ｈ）２．７６（ｄｄ，Ｊ＝６．０９，２．９５Ｈｚ，１Ｈ）２．９０－３．０２（ｍ，１Ｈ）３．４２－３．５７（ｍ，８Ｈ）３．６１－３．７０（ｍ，１Ｈ）３．７７（ｂｒ ｓ，１Ｈ）４．１０－４．２７（ｍ，１Ｈ）４．５８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，１Ｈ）５．０１－５．２６（ｍ，４Ｈ）５．５２－５．７０（ｍ，２Ｈ）５．８８（ｓ，１Ｈ）５．９３－６．０２（ｍ，１Ｈ）６．０８－６．１８（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．５８（ｍ，１Ｈ）７．２９－７．３５（ｍ，２Ｈ）７．５５（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，１Ｈ）．

【0970】

１．３．１．４ ＡＤＬ１－Ｄ４
以下に概説する手順を用いてＡＤＬ１－Ｄ４を合成した。

【化158】

【0971】

ステップ１：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－６－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－７－イルアセテート

【0972】

【化159】

２０℃で１，２－ジクロロエタン（５ｍＬ）中のトリ－ＴＥＳプラジエノライドＤ（１６０ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（３２．７ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．７５ｍＬ、５．３６ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸４－ニトロフェニル（３６０ｍｇ、１．７８７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を４０℃で４日間、及び６０℃で２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、次に層を分離させた。水層をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を水及びブラインで順次洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させて、ろ過し、真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーにより、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１５０ｍｇ、７９％収率）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．４８－０．７１（ｍ，２４Ｈ）０．７８－０．８５（ｍ，７Ｈ）０．８６－０．９３（ｍ，５Ｈ）０．９４－１．０３（ｍ，３４Ｈ）１．１８－１．２２（ｍ，２Ｈ）１．２２－１．２６（ｍ，２Ｈ）１．３５－１．４３（ｍ，４Ｈ）１．４３－１．５２（ｍ，４Ｈ）１．５４（ｓ，４Ｈ）１．５６－１．６５（ｍ，３Ｈ）１．６８－１．７２（ｍ，３Ｈ）１．７５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝０．７５Ｈｚ，２Ｈ）１．８４－１．９５（ｍ，１Ｈ）２．０１－２．０６（ｍ，２Ｈ）２．０９（ｓ，２Ｈ）２．１１（ｓ，２Ｈ）２．３３－２．５２（ｍ，４Ｈ）２．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．０９，２．０７Ｈｚ，２Ｈ）２．８０－２．９０（ｍ，１Ｈ）３．６６－３．８０（ｍ，１Ｈ）３．８２－３．９３（ｍ，２Ｈ）４．９２－５．１３（ｍ，２Ｈ）５．６３－５．６８（ｍ，１Ｈ）５．６９－５．７４（ｍ，１Ｈ）５．７５－５．８３（ｍ，２Ｈ）６．１２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ）６．４１（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１５，１１．０１，５．０８Ｈｚ，１Ｈ）７．５０（ｄ，Ｊ＝９．４１Ｈｚ，２Ｈ）８．３５（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，２Ｈ）．

【0973】

ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート

【化160】

【0974】

ＤＣＭ（１ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－６－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－７－イルアセテートの溶液にピペラジン（０．４４７ｇ、５．１９５ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（０．９ｍＬ、５．１９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた黄色がかった懸濁液を６時間撹拌した。この反応混合物を濃縮し、シリカゲルでのクロマトグラフィーにかけて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１．０ｇ、０．８４４ｍｍｏｌ、８１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１００８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0975】

Ｄ４

【化161】

ステップ３：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１．０９ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２０．７１ｍＬ、３２１．８２６ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１９．９１ｍＬ、１１４．０１８ｍｍｏｌ）を合わせ、－７８℃に冷却した。フッ化水素ピリジン（０．５１８ｇ、５．２３２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温に加温させて、一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによって脱シリル化が示唆された。この反応混合物を氷浴で冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３を加え、撹拌し、ＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて濃縮し、クロマトグラフィーにかけて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２２５ｍｇ、３６．８％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６６５．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９２（ｍ，６Ｈ）０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，３Ｈ）１．１６－１．３１（ｍ，１Ｈ）１．３５（ｓ，３Ｈ）１．４０－１．５６（ｍ，４Ｈ）１．５９（ｓ，３Ｈ）１．６６（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１４．６８，７．０３Ｈｚ，３Ｈ）１．７６－１．８０（ｍ，３Ｈ）１．８７（ｄｄ，Ｊ＝１４．１２，５．４６Ｈｚ，１Ｈ）２．０５（ｓ，３Ｈ）２．３０－２．４１（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．７６Ｈｚ，２Ｈ）２．５６－２．７２（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，１Ｈ）３．１９（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，４Ｈ）３．５０－３．５９（ｍ，１Ｈ）３．７１（ｂｒ ｓ，４Ｈ）３．７７－３．８９（ｍ，１Ｈ）５．０１－５．１３（ｍ，２Ｈ）５．５８－５．７１（ｍ，１Ｈ）５．７１－５．８１（ｍ，１Ｈ）５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）６．１５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．７９Ｈｚ，１Ｈ）６．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．１８，１０．９２Ｈｚ，１Ｈ）．

【0976】

ＡＤ１－Ｄ４

【化162】

丸底フラスコ内のＤＭＦ（９６６μＬ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（２３ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）にヒューニッヒ塩基（１６．３３μＬ、０．０９４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却し、Ｄ４（２２．８０ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。この反応混合物を真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーにより、ＡＤＬ１－Ｄ４（３０．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、７７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２６３．８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９３（ｍ，７Ｈ）０．９３－１．０１（ｍ，８Ｈ）１．１９－１．３４（ｍ，４Ｈ）１．５０（ｓ，３Ｈ）１．５７（ｓ，５Ｈ）１．５８－１．７０（ｍ，６Ｈ）１．７０－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．７８（ｓ，３Ｈ）１．８３－１．９５（ｍ，２Ｈ）２．０４（ｓ，３Ｈ）２．０５－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，２Ｈ）２．５５－２．７４（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｔｄ，Ｊ＝５．８３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．０３－３．２６（ｍ，２Ｈ）３．３５（ｓ，１３Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１１Ｈ）３．８０（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝９．８５，３．５８Ｈｚ，１Ｈ）４．１６（ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．５６（ｓ，１Ｈ）５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１４．３７，１０．１０Ｈｚ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．４９（ｓ，１Ｈ）５．５９－５．６９（ｍ，１Ｈ）５．７２－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．０９－６．２２（ｍ，１Ｈ）６．４４－６．６０（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【0977】

１．３．１．５ ＡＤＬ１－Ｄ９、ＡＤＬ６－Ｄ９、及びＡＤＬ１－Ｄ１３
Ｄ９及びＤ１３
トリ－ＴＥＳプラジエノライドＢを利用するＤ４の合成（スキーム４）に概説する手順を用いて３：１の異性体混合物としてＤ９及びＤ１３を合成した。

【化163】

ペイロード（Ｄ９）：ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６４９．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８７－１．０１（ｍ，１０Ｈ）１．０８（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２７－１．６３（ｍ，１２Ｈ）１．６６－１．７４（ｍ，１Ｈ）１．７６（ｓ，３Ｈ）１．９７－２．１０（ｍ，３Ｈ）２．３５－２．５７（ｍ，５Ｈ）２．５８－２．６５（ｍ，１Ｈ）２．６５－２．７１（ｍ，１Ｈ）２．７７（ｔｄ，Ｊ＝５．９３，２．３２Ｈｚ，１Ｈ）２．８９－３．０５（ｍ，４Ｈ）３．０７－３．３４（ｍ，８Ｈ）３．５０－３．６８（ｍ，５Ｈ）３．７２－３．８８（ｍ，１Ｈ）４．８８－５．０９（ｍ，１Ｈ）５．１８（ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ）５．５０－５．８４（ｍ，３Ｈ）６．０１－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．１９－６．３６（ｍ，１Ｈ）．

【化164】

ペイロード（Ｄ１３）：ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６４９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８４－１．０１（ｍ，１１Ｈ）１．０８（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２９－１．６４（ｍ，１０Ｈ）１．６３－１．７３（ｍ，１Ｈ）１．７６（ｓ，３Ｈ）１．９４－２．１２（ｍ，４Ｈ）２．３７－２．５８（ｍ，４Ｈ）２．５９－２．６５（ｍ，１Ｈ）２．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．４０，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）２．７７（ｔｄ，Ｊ＝５．９３，２．３２Ｈｚ，１Ｈ）３．０１－３．３０（ｍ，４Ｈ）３．４９（ｓ，１Ｈ）３．５４－３．６７（ｍ，２Ｈ）３．６９－３．９２（ｍ，５Ｈ）４．１３－４．７８（ｍ，１１Ｈ）５．１３－５．２４（ｍ，２Ｈ）５．４８－５．６１（ｍ，１Ｈ）５．６２－５．７４（ｍ，２Ｈ）６．０４－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．１８－６．３２（ｍ，１Ｈ）．

【0978】

ＡＤＬ１－Ｄ９
一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いてＡＤＬ１－Ｄ９を合成した。

【化165】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ９）：（３０．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、７７％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２６３．８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９３（ｍ，７Ｈ）０．９３－１．０１（ｍ，８Ｈ）１．１９－１．３４（ｍ，４Ｈ）１．５０（ｓ，３Ｈ）１．５７（ｓ，５Ｈ）１．５８－１．７０（ｍ，６Ｈ）１．７０－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．７８（ｓ，３Ｈ）１．８３－１．９５（ｍ，２Ｈ）２．０４（ｓ，３Ｈ）２．０５－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，２Ｈ）２．５５－２．７４（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｔｄ，Ｊ＝５．８３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．０３－３．２６（ｍ，２Ｈ）３．３５（ｓ，１３Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１１Ｈ）３．８０（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝９．８５，３．５８Ｈｚ，１Ｈ）４．１６（ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．５６（ｓ，１Ｈ）５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１４．３７，１０．１０Ｈｚ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．４９（ｓ，１Ｈ）５．５９－５．６９（ｍ，１Ｈ）５．７２－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．０９－６．２２（ｍ，１Ｈ）６．４４－６．６０（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【0979】

ＡＤＬ６－Ｄ９
一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いてＡＤＬ６－Ｄ９を合成した。

【化166】

【0980】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ６－Ｄ９）：ＤＭＦ（７８４μＬ）中の希釈した４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１６．５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）に、ヒューニッヒ塩基（１３．２７μＬ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却し、Ｄ９を加えた。反応混合物をＬＣ／ＭＳが反応の完了を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨによるシリカゲルでの残渣のフラッシュクロマトグラフィーにより、表題化合物（１６．７ｍｇ、５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１８４．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８０－１．０２（ｍ，１６Ｈ）１．０５－１．１２（ｍ，４Ｈ）１．１３－１．３４（ｍ，５Ｈ）１．３８－１．５１（ｍ，７Ｈ）１．５３－１．６８（ｍ，１１Ｈ）１．７１－１．８０（ｍ，４Ｈ）１．９７－２．１６（ｍ，４Ｈ）２．２４－２．３２（ｍ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．４３－２．５５（ｍ，３Ｈ）２．５６－２．６９（ｍ，３Ｈ）２．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ）３．０７－３．１８（ｍ，１Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１７Ｈ）３．７５－３．９１（ｍ，１Ｈ）４．１１－４．２４（ｍ，１Ｈ）４．４３（ｓ，２Ｈ）５．５９－５．８８（ｍ，４Ｈ）６．０６－６．１７（ｍ，１Ｈ）６．２９－６．３９（ｍ，１Ｈ）７．２４－７．３９（ｍ，２Ｈ）７．５２－７．６４（ｍ，２Ｈ）．

【0981】

ＡＤＬ１－Ｄ１３

【化167】

リンカー－ペイロード（ＡＤ１－Ｄ１３）：ＤＭＦ（１７６μＬ、２．２７７ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（４．２ｍｇ、５．６９３μｍｏｌ）をヒューニッヒ塩基（２．９８μＬ、０．０１７ｍｍｏｌ）と加え合わせた。この反応混合物を０℃に冷却し、Ｄ１３（４．０６ｍｇ、６．２６２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＬＣ／ＭＳが反応の完了を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨによるシリカゲルでの残渣のフラッシュクロマトグラフィーにより、表題化合物（４．８ｍｇ、６８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２４８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．５８－０．９８（ｍ，１０Ｈ）０．９９－１．０６（ｍ，２Ｈ）１．１１－１．３１（ｍ，６Ｈ）１．５７－１．７５（ｍ，３Ｈ）２．１１－２．２６（ｍ，１Ｈ）２．３０－２．７３（ｍ，２Ｈ）３．２８－３．８０（ｍ，７Ｈ）４．１４－４．３３（ｍ，１Ｈ）４．４４－４．５５（ｍ，１Ｈ）４．６３－４．８１（ｍ，１Ｈ）４．９２－５．０６（ｍ，１Ｈ）５．０９（ｓ，１Ｈ）５．４９－５．７４（ｍ，１Ｈ）５．８８－６．０９（ｍ，１Ｈ）６．１４－６．３６（ｍ，１Ｈ）６．９９－７．０８（ｍ，１Ｈ）７．２１－７．３８（ｍ，２Ｈ）７．５３－７．６７（ｍ，１Ｈ）７．９５（ｓ，１Ｈ）．

【0982】

１．３．１．６ ＡＤＬ１－Ｄ１４

【化168】

一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いて１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（１－（１－アセチルピペリジン－４－イル）－４－フルオロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－６－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、３９．２％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２５４．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．７５－１．００（ｍ，１２Ｈ），１．０６－１．２６（ｍ，４Ｈ），１．２６－１．７７（ｍ，１３Ｈ），１．７５－２．０２（ｍ，７Ｈ），２．０８（ｓ，８Ｈ），２．２３－２．３５（ｍ，２Ｈ），２．５４－２．７０（ｍ，２Ｈ），２．７８－３．１０（ｍ，４Ｈ），３．３６（ｂｒ ｓ，１３Ｈ），３．６６－３．７９（ｍ，１Ｈ），３．９５－４．０８（ｍ，１Ｈ），４．１１－４．２５（ｍ，１Ｈ），４．２８－４．４６（ｍ，１Ｈ），４．４６－４．５８（ｍ，１Ｈ），４．５８－４．６６（ｍ，１Ｈ），４．６６－４．７７（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｓ，３Ｈ），５．１４－５．２７（ｍ，１Ｈ），５．３９（ｓ，４Ｈ），５．７１－５．７９（ｍ，１Ｈ），５．８７－６．００（ｍ，１Ｈ），６．６３－６．７５（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｓ，２Ｈ），７．１３－７．２４（ｍ，１Ｈ），７．２４－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．５２－７．６２（ｍ，２Ｈ），７．６５－７．７４（ｍ，１Ｈ），７．７５－７．８２（ｍ，１Ｈ），７．９８－８．１３（ｍ，１Ｈ）．

【0983】

１．３．１．７ ＡＤＬ１－Ｄ３３
Ｄ３３

【化169】

０℃でＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（２－メトキシ－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２７ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＬｉＯＨを加え、反応混合物を２５℃になるまでゆっくりと加温させた。国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（例えば、手順１７及び１９を参照されたい）（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（２－メトキシ－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレートを合成した。６時間後、反応混合物をリン酸緩衝液（ＮａＨ_２ＰＯ_４、１．０Ｍ、３ｍＬ）で中和し、相を分離させた。水層を酢酸エチル（３×２ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、真空濃縮した。逆相カラムクロマトグラフィーにより、表題化合物（１９．４ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、７３．４％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６３１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．１６（ｍ，２Ｈ）１．２３－１．５２（ｍ，１Ｈ）１．５７－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．８７（ｓ，１Ｈ）１．９２－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．３５－２．５５（ｍ，１Ｈ）２．５０－２．７４（ｍ，１Ｈ）３．１１（ｂｒ ｓ，１Ｈ）３．３６－３．５４（ｍ，２Ｈ）３．６４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．４２Ｈｚ，２Ｈ）３．７７－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．７６（ｂｒ ｓ，４Ｈ）５．０７－５．１９（ｍ，１Ｈ）５．３８－５．６８（ｍ，１Ｈ）６．４０－６．７６（ｍ，１Ｈ）８．０２－８．６６（ｍ，１Ｈ）．

【0984】

ＡＤＬ１－Ｄ３３

【化170】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ３３）：ＤＭＦ（７１４μＬ、９．２１７ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１７ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）に、ヒューニッヒ塩基（１２．０７μＬ、０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却し、２－（４－（３－フルオロ－５－（（Ｅ）－２－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソ－６－（（ピペラジン－１－カルボニル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－２－イル）プロパ－１－エン－１－イル）フェニル）ピペラジン－１－イル）酢酸（１６．７１ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＬＣ／ＭＳが反応の完了を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー及び更なるＨＰＬＣ精製により、表題化合物（１３．５ｍｇ、１０．９８μｍｏｌ、４７．７％収率）が得られた。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２２９．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．９２－０．９９（ｍ，１０Ｈ）１．０１（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２４－１．４６（ｍ，９Ｈ）１．５２－１．７０（ｍ，１０Ｈ）１．７０－１．８２（ｍ，１Ｈ）１．８７（ｄ，Ｊ＝１．００Ｈｚ，４Ｈ）１．８９－２．００（ｍ，２Ｈ）２．０１－２．２３（ｍ，２Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１４．３１，５．２７Ｈｚ，１Ｈ）２．５７－２．７１（ｍ，２Ｈ）２．８６（ｄ，Ｊ＝０．６３Ｈｚ，１Ｈ）３．００（ｓ，１Ｈ）３．０６－３．２７（ｍ，４Ｈ）３．３５（ｓ，５Ｈ）３．４１－３．５３（ｍ，１９Ｈ）３．６６（ｓ，２Ｈ）３．７６－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．０７－４．２１（ｍ，１Ｈ）４．３９－４．６９（ｍ，３７Ｈ）５．０９（ｓ，３Ｈ）５．１３（ｄ，Ｊ＝１０．５４Ｈｚ，１Ｈ）５．５２（ｄｄ，Ｊ＝１４．５６，９．０３Ｈｚ，２Ｈ）６．５５（ｂｒ ｓ，２Ｈ）６．６９（ｄ，Ｊ＝１．３８Ｈｚ，２Ｈ）７．３３（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．８８－８．０４（ｍ，１Ｈ）８．１６－８．３３（ｍ，１Ｈ）．

【0985】

１．３．２ ＡＤＬ１－Ｄ４、ＡＤＬ１－Ｄ５、ＡＤＬ２１－Ｄ４、ＡＤＬ２２－Ｄ４、ＡＤＬ２３－Ｄ４、ＡＤＬ１３－Ｄ４
１．３．２．１ Ｄ４及びＤ５の一般的調製手順
以下に概説する４ステップ手順を用いて表題化合物を合成した。

【化171】

【0986】

ステップ２
２０℃で１，２－ジクロロエタン（０．２Ｍ）中のトリ－ＴＥＳプラジエノライドＤ（１．０当量）の溶液に、ＤＭＡＰ（１．５当量）、トリエチルアミン（３０当量）及びクロロギ酸４－ニトロフェニル（１０当量）を加えた。この混合物を４０℃で４日間、次に６０℃で２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、次に層を分離させて、水層をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を水及びブラインで順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させて、ろ過し、真空濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中ＥｔＯＡｃ）によって精製して、中間体炭酸塩を得た。炭酸塩（１．０当量）、ＤＣＭ（０．２Ｍ）、トリエチルアミン（３．０当量）、及びアミン（２．０当量）を合わせて室温で１時間撹拌した。得られた混合物を真空濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）にかけて、カルバメート中間体を位置異性体の混合物として得た。

【0987】

ステップ３
ステップ２で得られた位置異性体カルバメートの混合物（１．０当量）をＤＣＭ（０．０４Ｍ）に溶解した。ヒューニッヒ塩基（１２４当量）を加え、得られた混合物を－７８℃に冷却した。ＨＦ・ピリジン（３０当量）を滴下して加え、混合物を室温に加温し、室温で一晩撹拌した。次にこの混合物を－７８℃に冷却し、反応混合物に飽和重炭酸ナトリウムを滴下して加え、混合物を室温に加温した。有機層を分配し、水層をＤＣＭ（３×）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、ろ過し、真空濃縮した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣ精製に供して、所望の位置異性体生成物の各々を得た。

【0988】

Ｄ５
一般的手順１．３．２．１ステップ２及び３により、ステップ２で２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタンを使用して表題化合物を調製した。

【0989】

ステップ２

【化172】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イル２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－カルボキシレートと（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－７－イル２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－カルボキシレートとの混合物を無色の油として入手した（２１．７ｍｇ、４５．１％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），［Ｍ＋Ｈ］^＋１０２０．６
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ）δ ｐｐｍ ０．６１－０．７０（ｍ，１９Ｈ）０．８２－０．９５（ｍ，１０Ｈ）０．９５－１．０４（ｍ，２９Ｈ）１．２３（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝７．１５，４．６４Ｈｚ，１Ｈ）１．３０（ｓ，１Ｈ）１．４２－１．６４（ｍ，１２Ｈ）１．７８（ｓ，４Ｈ）１．８８－２．０１（ｍ，２Ｈ）２．０６（ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．９２Ｈｚ，３Ｈ）２．１４（ｂｒ ｓ，１Ｈ）２．４３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．６４Ｈｚ，２Ｈ）２．４９（ｂｒ ｓ，１Ｈ）２．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．１６，２．１３Ｈｚ，２Ｈ）２．８６－２．９１（ｍ，１Ｈ）３．４７－３．６６（ｍ，２Ｈ）３．７６（ｔｄ， Ｊ＝６．３７，３．３３Ｈｚ，１Ｈ）３．９５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．２７Ｈｚ，１Ｈ）４．３４（ｂｒ ｓ，１Ｈ）６．１５（ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．９２Ｈｚ，１Ｈ）６．５２（ｄｄ，Ｊ＝１５．１２，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ）

【0990】

ステップ３
Ｄ５

【化173】

ＨＰＬＣ精製により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル（１Ｓ，４Ｓ）－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－カルボキシレート（５ｍｇ、３４．７％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），［Ｍ＋Ｈ］^＋６７７．６
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ｐｐｍ ０．８５－０．９８（ｍ，９Ｈ）１．２５（ｔｄ，Ｊ＝７．４０，４．１４Ｈｚ，１Ｈ）１．３４（ｓ，３Ｈ）１．４２－１．６９（ｍ，９Ｈ）１．７９（ｓ，４Ｈ）１．８２－１．９６（ｍ，２Ｈ）２．０４（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，３Ｈ）２．３３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．０４Ｈｚ，１Ｈ）２．４７－２．５４（ｍ，２Ｈ）２．５７－２．７２（ｍ，２Ｈ）２．８７－２．９２（ｍ，１Ｈ）３．０３（ｂｒ ｓ，２Ｈ）３．３３－３．４３（ｍ，２Ｈ）３．４３－３．５７（ｍ，２Ｈ）３．７７－３．８４（ｍ，１Ｈ）３．８６－３．９４（ｍ，１Ｈ）４．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ）４．９７－５．１１（ｍ，２Ｈ）５．６０－５．６８（ｍ，１Ｈ）５．７３－５．８２（ｍ，１Ｈ）５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）６．１５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）６．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２５，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ）８．５４（ｓ，１Ｈ）

【0991】

Ｄ４
一般的手順１．３．２．１ステップ２及び３により、ステップ２でピペラジンを使用して表題化合物を調製した

【0992】

ステップ２：

【化174】

一般的手順１．３．２．１、ピペラジンを用いるステップ２により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１．０ｇ、０．８４４ｍｍｏｌ、８１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１００８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【0993】

ステップ３：Ｄ４

【化175】

ＨＰＬＣ精製により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２２５ｍｇ、３６．８％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６６５．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９２（ｍ，６Ｈ）０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，３Ｈ）１．１６－１．３１（ｍ，１Ｈ）１．３５（ｓ，３Ｈ）１．４０－１．５６（ｍ，４Ｈ）１．５９（ｓ，３Ｈ）１．６６（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１４．６８，７．０３Ｈｚ，３Ｈ）１．７６－１．８０（ｍ，３Ｈ）１．８７（ｄｄ，Ｊ＝１４．１２，５．４６Ｈｚ，１Ｈ）２．０５（ｓ，３Ｈ）２．３０－２．４１（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．７６Ｈｚ，２Ｈ）２．５６－２．７２（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，１Ｈ）３．１９（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，４Ｈ）３．５０－３．５９（ｍ，１Ｈ）３．７１（ｂｒ ｓ，４Ｈ）３．７７－３．８９（ｍ，１Ｈ）５．０１－５．１３（ｍ，２Ｈ）５．５８－５．７１（ｍ，１Ｈ）５．７１－５．８１（ｍ，１Ｈ）５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）６．１５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．７９Ｈｚ，１Ｈ）６．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．１８，１０．９２Ｈｚ，１Ｈ）．

【0994】

ＡＤＬ１－Ｄ４

【化176】

ＡＤＬ１－Ｄ４の調製には、一般的手順１（１．３．１）を用いた。フラッシュクロマトグラフィーにより、ＡＤＬ１－Ｄ４（３０．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、７７％収率）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２６３．８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９３（ｍ，７Ｈ）０．９３－１．０１（ｍ，８Ｈ）１．１９－１．３４（ｍ，４Ｈ）１．５０（ｓ，３Ｈ）１．５７（ｓ，５Ｈ）１．５８－１．７０（ｍ，６Ｈ）１．７０－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．７８（ｓ，３Ｈ）１．８３－１．９５（ｍ，２Ｈ）２．０４（ｓ，３Ｈ）２．０５－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，２Ｈ）２．５５－２．７４（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｔｄ，Ｊ＝５．８３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．０３－３．２６（ｍ，２Ｈ）３．３５（ｓ，１３Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１１Ｈ）３．８０（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝９．８５，３．５８Ｈｚ，１Ｈ）４．１６（ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．５６（ｓ，１Ｈ）５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１４．３７，１０．１０Ｈｚ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．４９（ｓ，１Ｈ）５．５９－５．６９（ｍ，１Ｈ）５．７２－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．０９－６．２２（ｍ，１Ｈ）６．４４－６．６０（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【0995】

ＡＤＬ１－Ｄ５

【化177】

Ｄ５を使用したＡＤＬ１－Ｄ５の調製には、一般的手順１（１．３．１）を用いた。フラッシュクロマトグラフィーにより、（１４ｍｇ、５１．６％収率）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２７６．４３［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ｐｐｍ ０．８６－１．００（ｍ，１６Ｈ）１．２３－１．４０（ｍ，７Ｈ）１．４２－１．６９（ｍ，１６Ｈ）１．７３－１．８０（ｍ，４Ｈ）１．８４－１．９６（ｍ，４Ｈ）１．９８－２．１０（ｍ，４Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．３１－２．４１（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．３９Ｈｚ，２Ｈ）２．５６－２．６４（ｍ，１Ｈ）２．６４－２．７２（ｍ，１Ｈ）２．８０－２．９３（ｍ，１Ｈ）３．１２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．９０Ｈｚ，１Ｈ）３．１６－３．２６（ｍ，１Ｈ）３．３５－３．５６（ｍ，７Ｈ）３．７６－３．８６（ｍ，１Ｈ）４．１６（ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．４８－４．５８（ｍ，３Ｈ）４．９３－５．１６（ｍ，４Ｈ）５．６５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．９１Ｈｚ，１Ｈ）５．７０－５．８２（ｍ，１Ｈ）５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．１４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）６．５０－６．５８（ｍ，１Ｈ），６．７９（ｓ，２Ｈ）７．２６－７．３６（ｍ，２Ｈ）７．５６－７．６３（ｍ，２Ｈ）

【0996】

１．３．３ ＡＤＬ２２－Ｄ４の合成

【化178】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の溶液に、４－（（２Ｓ，５Ｓ）－１５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５－イソプロピル－４，７－ジオキソ－２－（３－ウレイドプロピル）－１０，１３－ジオキサ－３，６－ジアザペンタデカンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１６．９８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（７．００ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２０℃で１時間撹拌した。混合物を直接シリカゲル上で真空濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ０～２０％）によって精製すると、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－１５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５－イソプロピル－４，７－ジオキソ－２－（３－ウレイドプロピル）－１０，１３－ジオキサ－３，６－ジアザペンタデカンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（１２ｍｇ、９．１６μｍｏｌ、５０．８％収率）が白色固体としてもたらされた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３１０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
化学式：Ｃ６５Ｈ９６Ｎ８ Ｏ２０分子量：１３０９．５２
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ０．７３－０．８９（ｍ，１７Ｈ）１．０３－１．１３（ｍ，１Ｈ）１．２１－１．２５（ｍ，４Ｈ）１．２５－１．４０（ｍ，５Ｈ）１．４２－１．４７（ｍ，４Ｈ）１．４８，（ｂｒ ｓ，３Ｈ）１．６９（ｓ，４Ｈ）１．７３－１．８３（ｍ，１Ｈ）１．９９（ｓ，２Ｈ）２．１０－２．２５（ｍ，１Ｈ）２．３６（ｂｒ ｓ，３Ｈ）２．４０－２．４８（ｍ，２Ｈ）２．５４－２．６６（ｍ，２Ｈ）２．７２－２．８０，（ｍ，１Ｈ）２．８８－３．０８（ｍ，２Ｈ）３．３４－３．４４（ｍ，９Ｈ）３．４４－３．４８（ｍ，３Ｈ）３．４８－３．５２（ｍ，２Ｈ）３．５２－３．５９（ｍ，３Ｈ）３．６４－３．７５（ｍ，１Ｈ）４．２４（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．６５Ｈｚ，２Ｈ）４．６２（ｄ，Ｊ＝５．０２Ｈｚ，１Ｈ）４．８０－４．８５（ｍ，１Ｈ）４．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，２Ｈ）５．０１（ｓ，２Ｈ）５．４０（ｓ，２Ｈ）５．４８－５．５７（ｍ，１Ｈ），５．６６－５．７６（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．９１（ｍ，１Ｈ）５．９４－６．０１（ｍ，１Ｈ）６．０２－６．１１（ｍ，１Ｈ）６．３６－６．４５（ｍ，１Ｈ）７．０２（ｓ，２Ｈ）７．２７－７．３３（ｍ，２Ｈ）７．５８（ｓ，２Ｈ）７．８１－７．８９（ｍ，１Ｈ）８．１１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）９．９６－１０．０２（ｍ，１Ｈ）

【0997】

１．３．４ ＡＤＬ２１－Ｄ１２、ＡＤＬ２１－Ｄ１、ＡＤＬ２１－Ｄ４の一般的合成手順：

【化179】

ステップ１
ペイロード（１．０当量）及び（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－アミノ－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１，４－ジオキソブタン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）カルバメート（１．０当量）をＤＭＦ（０．１Ｍ）中に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（３．０当量）を加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、反応物を真空中で濃縮し、得られた残渣をクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）にかけて、所望の生成物を得た。

【0998】

ステップ２及び３
ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－アスパラギンＰＡＢＣペイロード（１．０当量）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．０５Ｍ）に溶解し、次にジエチルアミン（６．０当量）を加えた。この反応物を室温で１時間撹拌し、混合物を蒸発乾固させた。この粗生成物をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．０５Ｍ）で希釈した。２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（１．２当量）及びヒューニッヒ塩基（２．５当量）を混合物に加え、室温で１にわたって撹拌し、次に混合物を真空濃縮し、得られた残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望のマレイミドカプロイルＡｌａ－Ａｌａ－アスパラギンＰＡＢＣリンカーペイロードを得た。

【0999】

１．３．４．１ ＡＤＬ２１－Ｄ１
ステップ１：

【化180】

１－（４－（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－（２－アミノ－２－オキソエチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－２－オキサ－４，７，１０－トリアザドデカン－１２－アミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（１４０．２ｍｇ、７１．９％）ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２６５．６［Ｍ＋Ｈ］^＋
化学式：Ｃ_６７Ｈ_８９Ｎ_７Ｏ_１７
分子量：１２６４．４８

【1000】

ステップ２及び３：

【化181】

１－（４－（（Ｓ）－４－アミノ－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）－４－オキソブタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（４９．１ｍｇ、３５．８％）ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２５８．１９［Ｍ＋Ｎａ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ｐｐｍ ０．８５－０．９８（ｍ，１０Ｈ）１．２２（ｓ，４Ｈ）１．２６－１．４５（ｍ，１４Ｈ）１．４５－１．６９（ｍ，１２Ｈ）１．７９（ｓ，３Ｈ）１．９０（ｓ，２Ｈ）２．２０－２．２７（ｍ，２Ｈ）２．５２（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１０．１０，３．７０Ｈｚ，３Ｈ）２．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ）２．８５（ｔ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，３Ｈ）３．１４（ｔ，Ｊ＝１．５７Ｈｚ，１Ｈ）３．４１－３．５７，（ｍ，１４Ｈ）３．７８－３．８８（ｍ，１Ｈ）４．２７（ｄｄ，Ｊ＝１２．３６，７．０９Ｈｚ，２Ｈ）４．７７（ｓ，１Ｈ）４．９７－５．１３（ｍ，６Ｈ）５．５１－５．６４（ｍ，１Ｈ）５．７２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６６Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝１５．４３Ｈｚ，１Ｈ）６．１２－６．１７（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．６１（ｍ，１Ｈ）６．７９（ｓ，２Ｈ）７．３３（ｍ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｍ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）

【1001】

１．３．４．２ ＡＤＬ２１－Ｄ４
ステップ１

【化182】

１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－（２－アミノ－２－オキソエチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－２－オキサ－４，７，１０－トリアザドデカン－１２－アミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（１２５ｍｇ、８５．６％）ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２９３．４［Ｍ＋Ｈ］^＋

【1002】

ステップ２及び３

【化183】

１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－４－アミノ－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）－４－オキソブタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３５ｍｇ、８０％）ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２８５．０［Ｍ＋Ｎａ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ０．７１－０．８７（ｍ，９Ｈ）１．０４－１．１２（ｍ，１Ｈ）１．１４－１．２６（ｍ，１３Ｈ）１．２７－１．４０（ｍ，３Ｈ）１．４０－１．５２（ｍ，９Ｈ）１．５２－１．６２（ｍ，１Ｈ）１．６９（ｓ，３Ｈ）１．７４－１．８３（ｍ，１Ｈ）１．９９（ｄ，Ｊ＝４．２７Ｈｚ，４Ｈ）２．０３－２．１４（ｍ，２Ｈ）２．１５－２．２６（ｍ，１Ｈ）２．３１－２．４１（ｍ，２Ｈ）２．５４－２．６５（ｍ，４Ｈ）２．７２－２．８０（ｍ，１Ｈ）３．１７（ｄ，Ｊ＝５．２７Ｈｚ，３Ｈ）３．３６（ｂｒ ｓ，９Ｈ）３．６３－３．７４（ｍ，１Ｈ）３．９９－４．１２（ｍ，２Ｈ）４．１４－４．２２（ｍ，１Ｈ）４．２３－４．３０（ｍ，１Ｈ）４．４０（ｄ，Ｊ＝５．６５Ｈｚ，１Ｈ）４．５５－４．６５（ｍ，２Ｈ）４．８２（ｓ，１Ｈ）４．８７－４．９３（ｍ，２Ｈ）５．０１（ｓ，２Ｈ）５．４７－５．５７（ｍ，１Ｈ）５．６６－５．７７（ｍ，１Ｈ）６．０１－６．０９（ｍ，１Ｈ）６．３５－６．４５（ｍ，１Ｈ）６．８９－６．９６（ｍ，１Ｈ）６．９９（ｓ，２Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．３６－７．４２（ｍ，１Ｈ）７．６２（ｓ，２Ｈ）７．９７－８．２１（ｍ，３Ｈ），９．６２－９．７２（ｍ，１Ｈ）．

【1003】

１．３．５ ＡＤＬ２１－Ｄ１２

【化184】

ＤＭＦ（１ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７，１０－ジヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－アミノ－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１，４－ジオキソブタン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）カルバメート（７３．９ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）、続いてＮ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（１０４ｍｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１時間撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分を濃縮すると澄明な油がもたらされ、これを１００％収率と仮定して次のステップに直接回した。次に入手された油をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ジエチルアミン（５８．７ｍｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）をチャージした。得られた混合物を２０℃で１時間撹拌し、真空濃縮した。残渣を再びＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させて、次に２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（３２．２ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）及びＮ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（１０４ｍｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１時間撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固し、逆相ＨＰＬＣ下で精製すると、１－（４－（（Ｓ）－４－アミノ－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）－４－オキソブタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７，１０－ジヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（７．５ｍｇ、６．１４μｍｏｌ、７．６５％収率）が白色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２２２．２８［Ｍ＋Ｈ］^＋

【1004】

１．３．６ ＡＤＬ２１－Ｄ８

【化185】

ＤＭＦ中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２７．０ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）の溶液に（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－アミノ－１－（（４（（（（４ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１，４－ジオキソブタン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）カルバメート（４０．５ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）、続いてヒューニッヒ塩基（３６．２μｌ、０．２０３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０分間撹拌した後、次に混合物を真空濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、所望の中間体を得た。次に残渣をＤＭＦ（２ｍＬ）及びジエチルアミン（２９．７ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）と合わせ、室温で２０分間撹拌した。その後、混合物を真空濃縮し、得られた残渣を再びＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解させて、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（１６．２８ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（３６．２μｌ、０．２０３ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を２０分間撹拌した後、濃縮乾固し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィーによって中間体と共に０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭグラジエントで溶出して精製した。次に入手された残渣を逆相ＨＰＬＣ精製に供して、単離された１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イル）４－（４－（（Ｓ）－４－アミノ－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）－４－オキソブタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３．５ｍｇ、２．７７μｍｏｌ、６．８２％収率）を白色固体として得た。１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－６－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－７－イル）４－（４－（（Ｓ）－４－アミノ－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）－４－オキソブタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３．５ｍｇ、６．８％）ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１２８５．６０［Ｍ＋Ｎａ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ：０．６８－０．９０（ｍ，１１Ｈ）１．０３－１．１３（ｍ，２Ｈ）１．１５－１．２６（ｍ，１４Ｈ）１．２４－１．３８（ｍ，４Ｈ）１．４０－１．６３（ｍ，１２Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ）１．７４－１．８３（ｍ，１Ｈ）２．０３（ｓ，３Ｈ）２．０６－２．１２（ｍ，２Ｈ）２．２４－２．４１（ｍ，３Ｈ）２．５３－２．６３（ｍ，４Ｈ），３．７９－３．８０（ｍ，１Ｈ）４．１３－４．３０（ｍ，２Ｈ）４．３２－４．３３（ｍ，１Ｈ）４．３３－４．４７（ｍ，１Ｈ）４．４４－４．４８（ｍ，１Ｈ）４．５２－４．７３（ｍ，２Ｈ）４．７４－４．９７（ｍ，２Ｈ）５．０３（ｓ，３Ｈ）５．４７－５．６１（ｍ，１Ｈ）５．６５－５．７７（ｍ，１Ｈ）５．７９－５．９２（ｍ，１Ｈ）５．９８－６．１２（ｍ，１Ｈ）６．３０－６．４６（ｍ，１Ｈ）６．７５－６．８５（ｍ，１Ｈ）６．９０－６．９５（ｍ，１Ｈ）６．９９（ｓ，１Ｈ）７．２６－７．３６（ｍ，２Ｈ）７．３７－７．４６（ｍ，１Ｈ）７．５６－７．７３（ｍ，２Ｈ）７．９０－８．０９（ｍ，１Ｈ）８．０７－８．２２（ｍ，２Ｈ）８．４６（ｓ，１Ｈ）９．５９－９．７８（ｍ，１Ｈ）

【1005】

１．３．７ ＤＢＣＯ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣリンカー－ペイロード、ＡＤＬ２５－Ｄ４の調製

【化186】

０℃でＤＣＭ（５ｍＬ）中の３－アミノ－１－（１１，１２－ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－イル）プロパン－１－オン（１９．３６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒューニッヒ塩基（１０．２６ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）、続いて４－ニトロフェニルカルボノクロリデート（１４．１２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を２０℃に加温し、２時間撹拌した。次にこの混合物を濃縮乾固し、ＤＭＦで希釈した。得られた混合物にヒューニッヒ塩基（１０．２６ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）及び１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（５０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）をチャージし、１時間撹拌した。次にこの混合物を濃縮乾固し、カラムクロマトグラフィー、続いて逆相精製によって精製して、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（９Ｓ，１２Ｓ）－９－イソプロピル－３，７，１０－トリオキソ－１２－（３－ウレイドプロピル）－２，６，８，１１－テトラアザトリデカン－１３－ジベンゼンシクロオクチンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（５．３ｍｇ、８．２７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１３７２．７［Ｍ］^＋

【1006】

１．３．８．マレイミド－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣリンカー－ペイロードの調製

【化187】

ＤＭＦ（１ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液に（Ｓ）－４－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－（（（Ｓ）－３－メチル－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（３２．３ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１１．６６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で１時間撹拌した。次にジエチルアミン（１１０ｍｇ、１．５０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０℃で更に３０分間撹拌した。次に混合物を酢酸エチルで希釈し、真空濃縮した。得られた残渣をＤＭＦ（１ｍＬ）、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（１３．９１ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１１．６６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）で希釈し、反応物を５０分間撹拌した。次に反応混合物を酢酸エチルで希釈し、濃縮乾固し、逆相ＨＰＬＣを用いて精製して、（Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－１－カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）アミノ）－４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－５－オキソペンタン酸（９．３ｍｇ、６．６８μｍｏｌ、２２．２０％収率）を白色固体として得た；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）１３９３．４［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ０．７４－０．８９（ｍ，１６Ｈ）１．０３－１．６６（ｍ，２５Ｈ）１．６９（ｓ，４Ｈ）１．７４－１．９４（ｍ，２Ｈ）２．００（ｓ，４Ｈ）２．０９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．３９Ｈｚ，２Ｈ）２．２１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ，３Ｈ）２．３１－２．４２（ｍ，２Ｈ）２．５３－２．８４（ｍ，３Ｈ）２．８９－３．０９（ｍ，２Ｈ）３．３４－３．４８（ｍ，１０Ｈ）３．６５－３．７４（ｍ，１Ｈ）４．１９，（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，６．５９Ｈｚ，１Ｈ）４．２６－４．４５（ｍ，３Ｈ）４．５７－４．６４（ｍ，１Ｈ）４．７９－４．８５（ｍ，１Ｈ）４．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，２Ｈ）５．０１（ｓ，２Ｈ）５．４３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），５．４７－５．５９（ｍ，１Ｈ）５．６７－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．９３（ｍ，１Ｈ）５．９４－６．１４（ｍ，２Ｈ）６．３５－６．４７（ｍ，１Ｈ）６．９９（ｓ，２Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５８，（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．６３－７．７１（ｍ，１Ｈ）７．９８－８．０６（ｍ，１Ｈ）８．１５－８．２７（ｍ，１Ｈ）９．９９－１０．０９（ｍ，１Ｈ）

【1007】

１．３．１０．ＡＤＬ１－Ｄ３、ＡＤＬ１０－Ｄ３
以下に提供する手順により、ペイロードＤ３を調製した

【1008】

Ｄ３

【化188】

ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（５５ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）の混合物に（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－オキソエチル）カルバメート（４６．５ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５２．６ｍｇ、０．２４８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２０分間撹拌した。次に反応混合物を濃縮乾固し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製した。精製した材料をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。次にこの混合物にジエチルアミン（１２１ｍｇ、１．６５５ｍｍｏｌ）をチャージし、室温で撹拌した。次にこの混合物を真空濃縮し、逆相ＨＰＬＣ精製によって精製して、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－アミノエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（６ｍｇ、８．４８μｍｏｌ、１０．２５％収率）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），７０８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ０．７４－０．８６（ｍ，９Ｈ）１．０４－１．１５（ｍ，１Ｈ）１．２３（ｓ，３Ｈ）１．２６－１．４０（ｍ，３Ｈ）１．４５（ｓ，４Ｈ）１．４７－１．５１（ｍ，１Ｈ），１．５２－１．６３（ｍ，１Ｈ）１．６９（ｓ，３Ｈ）１．７３－１．８２（ｍ，１Ｈ）１．９９（ｓ，３Ｈ）２．１３－２．４２（ｍ，９Ｈ）２．５３－２．６５（ｍ，４Ｈ）２．７２－２．８０（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．４１（ｍ，３Ｈ） ３．６５－３．７６（ｍ，１Ｈ）４．３６－４．４６（ｍ，１Ｈ）４．５７－４．６６（ｍ，１Ｈ）４．７９－４．８５（ｍ，１Ｈ）４．８７－４．９５（ｍ，２Ｈ）５．４３－５．５６（ｍ，１Ｈ）５．６４－５．７７（ｍ，１Ｈ）５．８０－５．９１（ｍ，１Ｈ）６．０１－６．１２（ｍ，１Ｈ）６．３３－６．４９（ｍ，１Ｈ）．

【1009】

１．３．１０．１ ＡＤＬ１０－Ｄ３

【化189】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－アミノエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（４０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）の溶液に、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（２７．９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、続いてヒューニッヒ塩基（３６．５ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。次に得られた混合物をシリカゲル上で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製すると、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２２ｍｇ、４３．２％収率）が黄色がかった固体としてもたらされた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）９０２．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ０．７３－０．８９（ｍ，１０Ｈ）０．９９－１．２９（ｍ，１０Ｈ）１．３０－１．３８（ｍ，２Ｈ）１．４０－１．４９（ｍ，９Ｈ）１．５２－１．６４（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ）１．７４－１．８３（ｍ，１Ｈ）１．９３－２．０７（ｍ，５Ｈ）２．３４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１６．９４Ｈｚ，９Ｈ）２．５９（ｓ，３Ｈ）３．０７－３．２１（ｍ，２Ｈ）３．３６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．０５Ｈｚ，３Ｈ）３．６６－３．７８（ｍ，１Ｈ）４．３７－４．４５（ｍ，１Ｈ）４．５７－４．６６（ｍ，１Ｈ）４．７９－４．８６（ｍ，１Ｈ）４．８７－４．９７（ｍ，２Ｈ）５．４６－５．５７（ｍ，１Ｈ）５．６６－５．７５（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．９１（ｍ，１Ｈ）５．９９－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．３１－６．４７（ｍ，１Ｈ）７．００（ｓ，２Ｈ）７．６２－７．７１（ｍ，１Ｈ）

【1010】

１．３．１０．２ ＡＤＬ１－Ｄ３

【化190】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－アミノエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（３０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の溶液に、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－３－メチル－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（３５．７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）、続いてヒューニッヒ塩基（１６．４３ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１時間撹拌させておいた。得られた混合物をシリカゲル上で直接濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製すると、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレートがもたらされ、これを直接次のステップに直接回した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（３０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の溶液にジエチルアミン（８２ｍｇ、１．１２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０℃で１時間撹拌させておいた。得られた混合物を酢酸エチルで希釈し、真空濃縮した。次に得られた残渣を再びＤＭＦに溶解させて、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（８．３１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（８．７１ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）をチャージした。得られた混合物を２０℃で１時間撹拌した。次に溶液をシリカゲル上で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製すると、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、８５％収率）が白色固体としてもたらされた；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３０６．２［Ｍ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．７５－０．８９（ｍ，１８Ｈ）１．０５－１．１２（ｍ，１Ｈ）１．１５－１．２０（ｍ，１Ｈ）１．２１－１．２６（ｍ，４Ｈ）１．２６－１．３９（ｍ，５Ｈ）１．４０－１．４０（ｍ，１Ｈ）１．４２－１．４７（ｍ，５Ｈ）１．５７（ｂｒ ｓ，３Ｈ）１．６９（ｓ，４Ｈ）１．７３－１．８１（ｍ，１Ｈ）１．９２－１．９８（ｍ，１Ｈ）１．９９（ｄ，Ｊ＝４．３９Ｈｚ，４Ｈ）２．１４－２．２６（ｍ，１Ｈ）２．２９－２．４２（ｍ，４Ｈ）２．４２－２．４７（ｍ，１Ｈ）２．５３－２．６４（ｍ，２Ｈ）２．７３－２．７８（ｍ，１Ｈ）２．８８－３．０８（ｍ，２Ｈ）３．３５－３．６０（ｍ，１９Ｈ）３．６５－３．７５（ｍ，１Ｈ）４．２２（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，６．７１Ｈｚ，１Ｈ）４．３２－４．４５（ｍ，２Ｈ）４．６０－４．６５（ｍ，１Ｈ）４．７９－４．８５（ｍ，１Ｈ）４．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，２Ｈ）５．０１（ｓ，２Ｈ）５．４０（ｓ，２Ｈ）５．４７－５．５８（ｍ，１Ｈ）５．６６－５．７７（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｓ，１Ｈ）５．９７（ｓ，１Ｈ）６．０３－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．３５－６．４５（ｍ，１Ｈ）７．０２（ｓ，２Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．８１－７．８８（ｍ，１Ｈ），８．０９－８．１５（ｍ，１Ｈ）９．９０－１０．０９（ｍ，１Ｈ）

【1011】

１．３．１１ 以下の一般的手順によりＡＤＬ１－Ｄ６及びＡＤＬ１－Ｄ７を調製した

【化191】

ＤＣＭ（０．１Ｍ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（３０ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の溶液に（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチルメチル（２－オキソエチル）カルバメート（５当量）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１０当量）を加え、３０分間撹拌した。次にこの混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭグラジエント）によって精製して、所望の生成物を単離した。次に得られた材料をＤＭＦ（０．１Ｍ）で希釈し、ジエチルアミン（２０当量）をチャージし、２０分間撹拌した。次にこの混合物を濃縮乾固し、再びＤＭＦに希釈し、４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１．２当量）、次にヒューニッヒ塩基（３．０当量）をチャージした。この混合物を３０分間撹拌し、真空濃縮し、分取ＨＰＬＣ精製によって精製して、目標生成物を得た。

【1012】

１．３．１１．２ ＡＤＬ１－Ｄ７

【化192】

一般的手順１（１．３．１１）により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７，１０－ジヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェノキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（３．１ｍｇ、５．０３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２７８．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【1013】

１．３．１１．２ ＡＤＬ１－Ｄ６

【化193】

一般的手順１（１．３．１１）により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－アセトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェノキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２ｍｇ、３．３６％収率を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３２１．３７［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【1014】

１．３．１．５ ＡＤＬ１－Ｄ９、ＡＤＬ６－Ｄ９、及びＡＤＬ１－Ｄ１３
Ｄ９及びＤ１３
トリ－ＴＥＳプラジエノライドＢを利用するＤ４の合成（スキーム４）に概説する手順を用いて３：１の異性体混合物としてＤ９及びＤ１３を合成した。

【1015】

【化194】

ペイロード（Ｄ９）：ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６４９．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８７－１．０１（ｍ，１０Ｈ）１．０８（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２７－１．６３（ｍ，１２Ｈ）１．６６－１．７４（ｍ，１Ｈ）１．７６（ｓ，３Ｈ）１．９７－２．１０（ｍ，３Ｈ）２．３５－２．５７（ｍ，５Ｈ）２．５８－２．６５（ｍ，１Ｈ）２．６５－２．７１（ｍ，１Ｈ）２．７７（ｔｄ，Ｊ＝５．９３，２．３２Ｈｚ，１Ｈ）２．８９－３．０５（ｍ，４Ｈ）３．０７－３．３４（ｍ，８Ｈ）３．５０－３．６８（ｍ，５Ｈ）３．７２－３．８８（ｍ，１Ｈ）４．８８－５．０９（ｍ，１Ｈ）５．１８（ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ）５．５０－５．８４（ｍ，３Ｈ）６．０１－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．１９－６．３６（ｍ，１Ｈ）．

【1016】

【化195】

ペイロード（Ｄ１３）：ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６４９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８４－１．０１（ｍ，１１Ｈ）１．０８（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２９－１．６４（ｍ，１０Ｈ）１．６３－１．７３（ｍ，１Ｈ）１．７６（ｓ，３Ｈ）１．９４－２．１２（ｍ，４Ｈ）２．３７－２．５８（ｍ，４Ｈ）２．５９－２．６５（ｍ，１Ｈ）２．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．４０，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）２．７７（ｔｄ，Ｊ＝５．９３，２．３２Ｈｚ，１Ｈ）３．０１－３．３０（ｍ，４Ｈ）３．４９（ｓ，１Ｈ）３．５４－３．６７（ｍ，２Ｈ）３．６９－３．９２（ｍ，５Ｈ）４．１３－４．７８（ｍ，１１Ｈ）５．１３－５．２４（ｍ，２Ｈ）５．４８－５．６１（ｍ，１Ｈ）５．６２－５．７４（ｍ，２Ｈ）６．０４－６．１３（ｍ，１Ｈ）６．１８－６．３２（ｍ，１Ｈ）．

【1017】

ＡＤＬ１－Ｄ９
一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いてＡＤＬ１－Ｄ９を合成した。

【1018】

【化196】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ９）：（３０．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、７７％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２６３．８［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８７－０．９３（ｍ，７Ｈ）０．９３－１．０１（ｍ，８Ｈ）１．１９－１．３４（ｍ，４Ｈ）１．５０（ｓ，３Ｈ）１．５７（ｓ，５Ｈ）１．５８－１．７０（ｍ，６Ｈ）１．７０－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．７８（ｓ，３Ｈ）１．８３－１．９５（ｍ，２Ｈ）２．０４（ｓ，３Ｈ）２．０５－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，２Ｈ）２．５５－２．７４（ｍ，２Ｈ）２．９０（ｔｄ，Ｊ＝５．８３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．０３－３．２６（ｍ，２Ｈ）３．３５（ｓ，１３Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１１Ｈ）３．８０（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝９．８５，３．５８Ｈｚ，１Ｈ）４．１６（ｄ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，５．１４Ｈｚ，１Ｈ）４．５６（ｓ，１Ｈ）５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１４．３７，１０．１０Ｈｚ，２Ｈ）５．０９（ｓ，２Ｈ）５．４９（ｓ，１Ｈ）５．５９－５．６９（ｍ，１Ｈ）５．７２－５．８０（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．０９－６．２２（ｍ，１Ｈ）６．４４－６．６０（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【1019】

ＡＤＬ６－Ｄ９
一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いてＡＤＬ６－Ｄ９を合成した。

【1020】

【化197】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ６－Ｄ９）：ＤＭＦ（７８４μＬ）中の希釈した４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１６．５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）にヒューニッヒ塩基（１３．２７μＬ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却し、Ｄ９を加えた。この反応混合物をＬＣ／ＭＳが反応の完了を示すまで室温で撹拌した。この反応混合物を真空濃縮した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨによるシリカゲルでの残渣のフラッシュクロマトグラフィーにより、表題化合物（１６．７ｍｇ、５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１８４．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．８０－１．０２（ｍ，１６Ｈ）１．０５－１．１２（ｍ，４Ｈ）１．１３－１．３４（ｍ，５Ｈ）１．３８－１．５１（ｍ，７Ｈ）１．５３－１．６８（ｍ，１１Ｈ）１．７１－１．８０（ｍ，４Ｈ）１．９７－２．１６（ｍ，４Ｈ）２．２４－２．３２（ｍ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．４３－２．５５（ｍ，３Ｈ）２．５６－２．６９（ｍ，３Ｈ）２．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ）３．０７－３．１８（ｍ，１Ｈ）３．４２－３．６１（ｍ，１７Ｈ）３．７５－３．９１（ｍ，１Ｈ）４．１１－４．２４（ｍ，１Ｈ）４．４３（ｓ，２Ｈ）５．５９－５．８８（ｍ，４Ｈ）６．０６－６．１７（ｍ，１Ｈ）６．２９－６．３９（ｍ，１Ｈ）７．２４－７．３９（ｍ，２Ｈ）７．５２－７．６４（ｍ，２Ｈ）．

【1021】

ＡＤＬ１－Ｄ１３

【化198】

リンカー－ペイロード（ＡＤ１－Ｄ１３）：ＤＭＦ（１７６μＬ、２．２７７ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（４．２ｍｇ、５．６９３μｍｏｌ）をヒューニッヒ塩基（２．９８μＬ、０．０１７ｍｍｏｌ）と加え合わせた。この反応混合物を０℃に冷却し、Ｄ１３（４．０６ｍｇ、６．２６２μｍｏｌ）を加えた。反応が完了したことがＬＣ／ＭＳにより示されるまで、この反応混合物を室温で撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨによるシリカゲルでの残渣のフラッシュクロマトグラフィーにより、表題化合物（４．８ｍｇ、６８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２４８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．５８－０．９８（ｍ，１０Ｈ）０．９９－１．０６（ｍ，２Ｈ）１．１１－１．３１（ｍ，６Ｈ）１．５７－１．７５（ｍ，３Ｈ）２．１１－２．２６（ｍ，１Ｈ）２．３０－２．７３（ｍ，２Ｈ）３．２８－３．８０（ｍ，７Ｈ）４．１４－４．３３（ｍ，１Ｈ）４．４４－４．５５（ｍ，１Ｈ）４．６３－４．８１（ｍ，１Ｈ）４．９２－５．０６（ｍ，１Ｈ）５．０９（ｓ，１Ｈ）５．４９－５．７４（ｍ，１Ｈ）５．８８－６．０９（ｍ，１Ｈ）６．１４－６．３６（ｍ，１Ｈ）６．９９－７．０８（ｍ，１Ｈ）７．２１－７．３８（ｍ，２Ｈ）７．５３－７．６７（ｍ，１Ｈ）７．９５（ｓ，１Ｈ）．

【1022】

１．３．１．６ ＡＤＬ１－Ｄ１４

【化199】

一般的手順１（セクション１．３．１に概説される）を用いて、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（１－（１－アセチルピペリジン－４－イル）－４－フルオロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－６－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、３９．２％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２５４．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ０．７５－１．００（ｍ，１２Ｈ），１．０６－１．２６（ｍ，４Ｈ），１．２６－１．７７（ｍ，１３Ｈ），１．７５－２．０２（ｍ，７Ｈ），２．０８（ｓ，８Ｈ），２．２３－２．３５（ｍ，２Ｈ），２．５４－２．７０（ｍ，２Ｈ），２．７８－３．１０（ｍ，４Ｈ），３．３６（ｂｒ ｓ，１３Ｈ），３．６６－３．７９（ｍ，１Ｈ），３．９５－４．０８（ｍ，１Ｈ），４．１１－４．２５（ｍ，１Ｈ），４．２８－４．４６（ｍ，１Ｈ），４．４６－４．５８（ｍ，１Ｈ），４．５８－４．６６（ｍ，１Ｈ），４．６６－４．７７（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｓ，３Ｈ），５．１４－５．２７（ｍ，１Ｈ），５．３９（ｓ，４Ｈ），５．７１－５．７９（ｍ，１Ｈ），５．８７－６．００（ｍ，１Ｈ），６．６３－６．７５（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｓ，２Ｈ），７．１３－７．２４（ｍ，１Ｈ），７．２４－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．５２－７．６２（ｍ，２Ｈ），７．６５－７．７４（ｍ，１Ｈ），７．７５－７．８２（ｍ，１Ｈ），７．９８－８．１３（ｍ，１Ｈ）．

【1023】

１．３．１．７ ＡＤＬ１－Ｄ３３
Ｄ３３

【化200】

０℃でＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（２－メトキシ－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（２７ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＬｉＯＨを加え、反応混合物を２５℃になるまでゆっくりと加温させた。国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（例えば、手順１７及び１９を参照されたい）（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（２－メトキシ－２－オキソエチル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレートを合成した。６時間後、反応混合物をリン酸緩衝液（ＮａＨ_２ＰＯ_４、１．０Ｍ、３ｍＬ）で中和し、相を分離させた。水層を酢酸エチル（３×２ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、真空濃縮した。逆相カラムクロマトグラフィーにより、表題化合物（１９．４ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、７３．４％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６３１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．１６（ｍ，２Ｈ）１．２３－１．５２（ｍ，１Ｈ）１．５７－１．７７（ｍ，１Ｈ）１．８７（ｓ，１Ｈ）１．９２－２．１３（ｍ，１Ｈ）２．３５－２．５５（ｍ，１Ｈ）２．５０－２．７４（ｍ，１Ｈ）３．１１（ｂｒ ｓ，１Ｈ）３．３６－３．５４（ｍ，２Ｈ）３．６４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．４２Ｈｚ，２Ｈ）３．７７－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．７６（ｂｒ ｓ，４Ｈ）５．０７－５．１９（ｍ，１Ｈ）５．３８－５．６８（ｍ，１Ｈ）６．４０－６．７６（ｍ，１Ｈ）８．０２－８．６６（ｍ，１Ｈ）．

【1024】

ＡＤＬ１－Ｄ３３

【化201】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１－Ｄ３３）：ＤＭＦ（７１４μＬ、９．２１７ｍｍｏｌ）中の４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１７ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）にヒューニッヒ塩基（１２．０７μＬ、０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却し、２－（４－（３－フルオロ－５－（（Ｅ）－２－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソ－６－（（ピペラジン－１－カルボニル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－２－イル）プロパ－１－エン－１－イル）フェニル）ピペラジン－１－イル）酢酸（１６．７１ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応が完了したことがＬＣ／ＭＳにより示されるまで、この反応混合物を室温で撹拌した。次に反応混合物を真空濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー及び更なるＨＰＬＣ精製により、表題化合物（１３．５ｍｇ、１０．９８μｍｏｌ、４７．７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２２９．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ_４）：δ ｐｐｍ ０．９２－０．９９（ｍ，１０Ｈ）１．０１（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２４－１．４６（ｍ，９Ｈ）１．５２－１．７０（ｍ，１０Ｈ）１．７０－１．８２（ｍ，１Ｈ）１．８７（ｄ，Ｊ＝１．００Ｈｚ，４Ｈ）１．８９－２．００（ｍ，２Ｈ）２．０１－２．２３（ｍ，２Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１４．３１，５．２７Ｈｚ，１Ｈ）２．５７－２．７１（ｍ，２Ｈ）２．８６（ｄ，Ｊ＝０．６３Ｈｚ，１Ｈ）３．００（ｓ，１Ｈ）３．０６－３．２７（ｍ，４Ｈ）３．３５（ｓ，５Ｈ）３．４１－３．５３（ｍ，１９Ｈ）３．６６（ｓ，２Ｈ）３．７６－３．９０（ｍ，１Ｈ）４．０７－４．２１（ｍ，１Ｈ）４．３９－４．６９（ｍ，３７Ｈ）５．０９（ｓ，３Ｈ）５．１３（ｄ，Ｊ＝１０．５４Ｈｚ，１Ｈ）５．５２（ｄｄ，Ｊ＝１４．５６，９．０３Ｈｚ，２Ｈ）６．５５（ｂｒ ｓ，２Ｈ）６．６９（ｄ，Ｊ＝１．３８Ｈｚ，２Ｈ）７．３３（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．８８－８．０４（ｍ，１Ｈ）８．１６－８．３３（ｍ，１Ｈ）．

【1025】

ＡＤＬ１－Ｄ２８

【化202】

４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（６．１７ｍｇ、８．３７μｍｏｌ）及び（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）スルホニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（６ｍｇ、８．３７μｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍｌ）に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（４．３９μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣ精製に供して、１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）スルホニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（１．５ｍｇ、１３．６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３１５．６６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．８５－０．９３（ｍ，１２Ｈ）１．１６－１．３１（ｍ，６Ｈ）１．４３－１．５７（ｍ，９Ｈ）１．６２－１．７０（ｍ，１Ｈ）１．７５（ｓ，３Ｈ）１．７７－１．９０（ｍ，２Ｈ）１．９６－２．０３（ｍ，１Ｈ）２．１３－２．２０（ｍ，２Ｈ）２．３１－２．４０（ｍ，１Ｈ）２．４６－２．５５（ｍ，２Ｈ）２．９７－３．０６（ｍ，２Ｈ）３．０８－３．１０（ｍ，１Ｈ）３．１５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．２７Ｈｚ，９Ｈ）３．３３－３．４３（ｍ，１０Ｈ）３．７１（ｓ，４Ｈ）４．０３－４．０９（ｍ，１Ｈ）４．３７－４．４４（ｍ，１Ｈ）４．４４－４．５３（ｍ，１Ｈ）４．９６－５．０６（ｍ，３Ｈ）５．３３－ ５．５１（ｍ，２Ｈ）６．３６－６．４４（ｍ，２Ｈ）６．４５－６．５３（ｍ，２Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．１９－７．２５（ｍ，２Ｈ）７．４７－７．５２（ｍ，２Ｈ）７．６３－７．７０（ｍ，２Ｈ）

【1026】

ＡＤＬ１－Ｄ３１

【化203】

４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１３．１２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（５－クロロピリジン－３－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（９ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１７９μｌ、２．３１２ｍｍｏｌ）に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（９．３２μｌ、０．０５３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣによって精製して、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（５－クロロピリジン－３－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（６．９ｍｇ、３４．０９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１０５．５９［Ｍ＋Ｈ］^＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．８８（ｓ，１２Ｈ）１．１７－１．３１（ｍ，４Ｈ）１．４３－１．５７（ｍ，８Ｈ）１．６１－１．７０（ｍ，１Ｈ）１．８０（ｄ，Ｊ＝１．２５Ｈｚ，５Ｈ），１．９２－２．０１（ｍ，１Ｈ）２．１４－２．２０（ｍ，２Ｈ）２．３２－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．４８－２．５９（ｍ，２Ｈ）２．９６－３．１４（ｍ，３Ｈ）３．３８（ｓ，１０Ｈ）３．３６－３．３６（ｍ，１Ｈ）３．３８－３．４０（ｍ，３Ｈ）３．６７－３．７５（ｍ，１Ｈ）４．０３－４．０７（ｍ，１Ｈ）４．３７－４．４２（ｍ，１Ｈ）４．９７－５．０１（ｍ，２Ｈ）５．０４－５．１１（ｍ，１Ｈ）５．３５－５．５１（ｍ，２Ｈ）６．４６－６．５２，（ｍ，１Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．１８－７．２６（ｍ，２Ｈ）７．４５－７．５４（ｍ，２Ｈ）７．６８－７．７４（ｍ，１Ｈ）８．２９－８．３４（ｍ，２Ｈ）．

【1027】

ＡＤＬ１－Ｄ２９

【化204】

４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（８．６２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－（ジメチルアミノ）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１８μｌ、１．５１８ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（６．１２μｌ、０．０３５ｍｍｏｌ）に溶解させた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣによって精製して、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－（ジメチルアミノ）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（４．０ｍｇ、３０．７９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１１２．５９［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ｐｐｍ ０．８７（ｓ，１２Ｈ）１．１７－１．２３（ｍ，３Ｈ）１．２６－１．３２（ｍ，１Ｈ）１．４４－１．５７（ｍ，８Ｈ）１．６３－１．６９（ｍ，１Ｈ）１．７４－１．８１（ｍ，４Ｈ）１．８３－１．８８（ｍ，１Ｈ）１．９３－２．０３（ｍ，１Ｈ）２．１３－２．２０（ｍ，２Ｈ）２．３４－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．４８－２．５７（ｍ，２Ｈ）２．８１（ｓ，５Ｈ）２．９８－３．０５（ｍ，２Ｈ）３．０８－３．１４（ｍ，１Ｈ）３．３８（ｂｒ ｓ，９Ｈ）３．６５－３．７５（ｍ，１Ｈ）４．０３－４．０７（ｍ，１Ｈ）４．３５－４．４３（ｍ，１Ｈ）４．４４－４．５２（ｍ，１Ｈ）４．９６－５．０１（ｍ，２Ｈ）５．０２－５．０８（ｍ，１Ｈ）５．３４－５．５１（ｍ，２Ｈ）６．４３－６．４８（ｍ，１Ｈ）６．５１－６．６１（ｍ，３Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．０３－７．１０（ｍ，１Ｈ）７．２０－７．２６（ｍ，２Ｈ）７．４６－７．５１（ｍ，２Ｈ）．

【1028】

ＡＤＬ１－Ｄ３５

【化205】

４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（９．７８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソ－２－（（Ｅ）－１－（３－（ピロリジン－１－イルスルホニル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１３３μｌ、１．７２２ｍｍｏｌ）に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（６．９４μｌ、０．０４ｍｍｏｌ）［２滴］を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、真空濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、生成物１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソ－２－（（Ｅ）－１－（３－（ピロリジン－１－イルスルホニル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（８．２ｍｇ、５１．４７％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２０３．５３［Ｍ＋Ｈ］^＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．８５－０．９３（ｍ，１２Ｈ）１．１７－１．３４（ｍ，４Ｈ）１．４２－１．５７（ｍ，８Ｈ）１．６１－１．６９（ｍ，５Ｈ）１．７９（ｓ，４Ｈ）１．８３－１．９０（ｍ，１Ｈ）１．９４－２．０３（ｍ，１Ｈ）２．１２－２．２０（ｍ，２Ｈ）２．３３－２．４３（ｍ，１Ｈ）２．４８－２．５９（ｍ，２Ｈ）２．９６－３．０５（ｍ，２Ｈ）３．０６－３．１７（ｍ，６Ｈ）３．３１ －３．４１（ｍ，１０Ｈ）３．６７－３．７７（ｍ，１Ｈ）４．０２－４．１０（ｍ，１Ｈ）４．３６－４．４３（ｍ，１Ｈ）４．９６－５．０２（ｍ，２Ｈ）５．０４－５．１１（ｍ，１Ｈ）５．３５－５．５１（ｍ，２Ｈ）６．５９（ｓ，１Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．２０－７．２７（ｍ，２Ｈ）７．４５－７．５２（ｍ，４Ｈ）７．５８－７．６５（ｍ，２Ｈ）．

【1029】

１．４ ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣリンカー－ペイロードの調製
１．４．１ 概要

【化206】

ステップ１：大員環ペイロード（１．０当量）、ＤＭＦ（０．１Ｍ）、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－３－メチル－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１．５当量；国際公開第２０１２／１５３１９３号パンフレットに記載される手順を用いて調製した）、及びヒューニッヒ塩基（３．０当量）を合わせ、一晩撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固し、クロマトグラフィーにかけて、ｆｍｏｃＶａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ－ペイロードを得た。

【1030】

ステップ２：ＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解させたアンモニウムｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣペイロード（１．０当量）、及びジエチルアミン（１０当量）を合わせ、３０分間撹拌した。この反応混合物を高真空下で濃縮乾固した。粗生成物をＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解し、ヒューニッヒ塩基（２当量）を加え、その後、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（３当量）を加え、一晩撹拌した。次に反応混合物を濃縮乾固し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～３０％ＭｅＯＨ）にかけて、所望のＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢＣ－ペイロードを得た。

【1031】

１．４．１．１ ＡＤＬ６－Ｄ１
スキーム５－ステップ１：上記に概説した一般的手順（セクション１．４．１）に従い、１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（３２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、２７．９％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），［Ｍ＋Ｎａ］^＋１２００．５．

【化207】

【1032】

スキーム５－ステップ２：上記に概説した一般的手順（セクション１．４．１）に従い、１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）４－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（２４ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、７７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１４９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．０２（ｍ，１６Ｈ），１．２０－１．２３（ｍ，３Ｈ）１．２３－１．３２（ｍ，３Ｈ）１．３４（ｓ，３Ｈ）１．４１－１．４６（ｍ，４Ｈ）１．４６－１．７２（ｍ，１１Ｈ）１．７８（ｓ，３Ｈ）１．８７（ｄｄ，Ｊ＝１４．０５，５．４０Ｈｚ，１Ｈ）２．０８（ｄｑ，Ｊ＝１３．７７，６．８３Ｈｚ，１Ｈ）２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）２．４３－２．６３（ｍ，３Ｈ）２．６４－２．７０（ｍ，１Ｈ）２．９０（ｔｄ，Ｊ＝５．８３，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．３２－３．３３（ｍ，４Ｈ）３．４２－３．５７（ｍ，１１Ｈ）３．８２（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝８．６６，３．８９Ｈｚ，１Ｈ）４．１５（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｑ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ）４．９９－５．１２（ｍ，４Ｈ）５．５７（ｄｄ，Ｊ＝１５．１８，９．７９Ｈｚ，１Ｈ）５．６９－５．７８（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ）６．１３（ｄ，Ｊ＝１０．９２Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．３１，１０．９２Ｈｚ，１Ｈ）６．７８（ｓ，２Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ）．

【1033】

１．４．１．２ ＡＤＬ６－Ｄ１６

【化208】

スキーム５－ステップ１：上記に概説した一般的手順（セクション１．４．１）に従い、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－（４－（２－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アセチル）ピペラジン－１－イル）－５－フルオロフェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（０．０６０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、６０．８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２２３．６８［Ｍ＋Ｈ］．

【1034】

スキーム５－ステップ２：上記に概説した一般的手順（セクション１．４．１）に従い、１－（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－（４－（２－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アセチル）ピペラジン－１－イル）－５－フルオロフェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）４－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）ピペラジン－１，４－ジカルボキシレート（１１．５０ｍｇ、９．６４μｍｏｌ、１２．０５％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１９４．８２［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．９７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１．２５Ｈｚ，１２Ｈ），１．２４－１．４１（ｍ，５Ｈ），１．４１－１．４７（ｍ，３Ｈ），１．５２－１．６９（ｍ，６Ｈ），１．８４－１．９０（ｍ，３Ｈ），１．９２－２．０１（ｍ，１Ｈ），２．０２－２．１６（ｍ，１Ｈ），２．２３－２．３０（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．５１（ｍ，１Ｈ），２．５７－２．６５（ｍ，２Ｈ），３．１９－３．２８（ｍ，４Ｈ），３．３５（ｓ，４Ｈ），３．４０－３．５４（ｍ，１１Ｈ），３．６９－３．７７（ｍ，４Ｈ），３．７８－３．８５（ｍ，１Ｈ），４．１２－４．１８（ｍ，１Ｈ），４．４３－４．５１（ｍ，１Ｈ），５．０７－５．１６（ｍ，３Ｈ），５．２０（ｓ，２Ｈ），５．４２ －５．６２（ｍ，２Ｈ），６．２９－６．３８（ｍ，１Ｈ），６．４６－６．５８（ｍ，２Ｈ），６．５９－６．６８（ｍ，２Ｈ），７．２８－７．３７（ｍ，２Ｈ），７．５０－７．６７（ｍ，４Ｈ）．

【1035】

１．５ ＭＣ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢリンカー－ペイロードの調製
１．５．１ 概要

【化209】

ステップ１：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（０．５ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（９．７０ｍＬ、０．９７ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．５０９ｇ、１．９３９ｍｍｏｌ）、Ｎ－ブロモコハク酸イミド（０．３４５ｇ、１．９３９ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（２．４２４ｍＬ、０．９７ｍｍｏｌ）を合わせ、室温で３時間撹拌した。この反応混合物を濃縮し、クロマトグラフィーにかけて、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（ブロモメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（１１６ｍｇ、０．２０１ｍｍｏｌ、２０．６８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），５８０．１４［Ｍ＋Ｈ］．

【1036】

ステップ２：ペイロード（１．０当量）、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（ブロモメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（０．０６９ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．１Ｍ）、及びヒューニッヒ塩基（１．５当量）を合わせ、一晩撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１０％ＭｅＯＨ）にかけて、第４級アンモニウムｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢペイロードを得た。

【1037】

ステップ３：ＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解させた第４級アンモニウムｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ｐＡＢペイロード（１．０当量）、及びジエチルアミン（１０当量）を合わせ、３０分間撹拌した。この反応混合物を高真空下で濃縮乾固した。この粗生成物をＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（２当量）を加え、その後、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（３当量）を加え、一晩撹拌した。次に反応混合物を濃縮乾固し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～３０％ＭｅＯＨ）にかけて、所望の第４級アンモニウムリンカー－ペイロードを得た。

【1038】

１．５．１．１ ＡＤＬ５－Ｄ２

【化210】

スキーム６－ステップ２：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウムブロミド（３０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、２６．５％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１４９．７７［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【1039】

スキーム６－ステップ３：モノ（１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム－２－イリウム）モノブロミド（４．８ｍｇ、１５．３３％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１２０．９９［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８８（ｓ，１５Ｈ），１．０９－１．２６（ｍ，９Ｈ），１．３１－１．５８（ｍ，１４Ｈ），１．４２－１．４４（ｍ，１Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．７３－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．９１－２．０３（ｍ，１Ｈ），２．１４－２．２２（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．５２（ｍ，３Ｈ），２．５３－２．６０（ｍ，１Ｈ），２．７４－２．８３（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），３．２５（ｓ，１Ｈ），３．２８－３．４６（ｍ，８Ｈ），３．５２－３．６６（ｍ，２Ｈ），３．７０－３．７８（ｍ，１Ｈ），３．９７－４．１１（ｍ，３Ｈ），４．３２－４．４１（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．５４（ｍ，２Ｈ），４．９１－５．０１（ｍ，２Ｈ），５．４４－５．５５（ｍ，１Ｈ），５．５７－５．７０（ｍ，１Ｈ），５．７２－５．８２（ｍ，１Ｈ），６．００－６．０８（ｍ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２５，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｓ，２Ｈ），７．３６－７．４７（ｍ，２Ｈ），７．６７－７．７５（ｍ，２Ｈ）．

【1040】

１．５．１．２ ＡＤＬ５－Ｄ１９
上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ１９を合成した。ペイロードＤ１９は、セクション１．２．１に概説される手順を用いて合成した。

【1041】

Ｄ１９

【化211】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｓ，２Ｅ，４Ｅ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１１４．２ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ、８２％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６３５．８［Ｍ＋Ｈ］．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８８－１．００（ｍ，９Ｈ）１．１０（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，３Ｈ）１．１６－１．２７（ｍ，４Ｈ）１．４０－１．７０（ｍ，８Ｈ）１．７７（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，３Ｈ）２．２８－２．３６（ｍ，３Ｈ）２．４２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．０８Ｈｚ，３Ｈ）２．４７－２．６１（ｍ，４Ｈ）２．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．２２，２．２０Ｈｚ，１Ｈ）２．７４（ｔｄ，Ｊ＝５．９９，２．２０Ｈｚ，１Ｈ）３．１３－３．１７（ｍ，１Ｈ）３．３４－３．３８（ｍ，３Ｈ）３．４７－３．５８（ｍ，５Ｈ）３．８１－３．８７（ｍ，１Ｈ）５．０１－５．１０（ｍ，２Ｈ）５．５４－５．８１（ｍ，３Ｈ）６．０６－６．１５（ｍ，１Ｈ）６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１５．００，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ）．
１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｓ，２Ｅ，４Ｅ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（２５ｍｇ、４５．６％）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１３３．１［Ｍ＋］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９４（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１８．４５，７．１５Ｈｚ，１８Ｈ）１．１０（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．２５（ｓ，４Ｈ）１．２８－１．３５（ｍ，１Ｈ）１．４６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，９Ｈ）１．５９－１．７０（ｍ，２Ｈ）１．７７（ｓ，３Ｈ）２．０５－２．１２（ｍ，１Ｈ）２．４４－２．６０（ｍ，４Ｈ）２．６３－２．７２（ｍ，１Ｈ）２．７０－２．７７（ｍ，１Ｈ）３．０６（ｓ，３Ｈ）３．４０－３．４４（ｍ，１Ｈ）３．５０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１．６３Ｈｚ，４Ｈ）３．６４－３．７５（ｍ，１Ｈ）３．８０－３．８８（ｍ，１Ｈ）３．９１－３．９９（ｍ，１Ｈ）４．０４－４．２０（ｍ，１Ｈ）４．２１－４．２８（ｍ，１Ｈ）４．３７－４．４３（ｍ，１Ｈ）４．５９（ｂｒ ｓ，２Ｈ）４．９３－４．９５（ｍ，２Ｈ）５．０６－５．０８（ｍ，２Ｈ）５．５７－５．８０（ｍ，４Ｈ）６．０５－６．１６（ｍ，１Ｈ）６．２７－６．４１（ｍ，１Ｈ）７．２８－７．３７（ｍ，２Ｈ）７．３８－７．４５（ｍ，２Ｈ）７．４７－７．５３（ｍ，２Ｈ）７．６５－７．７２（ｍ，２Ｈ）７．７４－７．８６（ｍ，４Ｈ）．

【1042】

ＡＤＬ５－Ｄ１９

【化212】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ５－Ｄ１９）：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｓ，２Ｅ，４Ｅ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１９．４ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、８０％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１０５．９［Ｍ＋Ｈ］．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．０３（ｍ，１６Ｈ）１．１０（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，３Ｈ）１．１７－１．２７（ｍ，４Ｈ）１．２９－１．３７（ｍ，３Ｈ）１．４４－１．７０，（ｍ，１５Ｈ）１．７４－１．８０（ｍ，３Ｈ）２．０４－２．１４（ｍ，１Ｈ）２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，２Ｈ）２．４４－２．６１（ｍ，４Ｈ）２．６４－２．６９（ｍ，１Ｈ）２．７２－２．７８（ｍ，１Ｈ）３．０９（ｓ，３Ｈ）３．４０－３．５９（ｍ，９Ｈ）３．６２－３．７７（ｍ，２Ｈ）３．８２－３．８９（ｍ，１Ｈ）４．１２－４．２１（ｍ，３Ｈ）４．４０－４．５５（ｍ，１Ｈ）４．５６－４．６６（ｍ，３Ｈ）５．０３－５．１２（ｍ，２Ｈ）５．５５－５．８１（ｍ，３Ｈ）６．０６－６．１６（ｍ，１Ｈ）６．２６－６．４１（ｍ，１Ｈ）６．８１（ｓ，２Ｈ）７．４８－７．５７（ｍ，２Ｈ）７．７８－７．８６（ｍ，２Ｈ）．

【1043】

１．５．１．３ ＡＤＬ５－Ｄ１７
上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ１７を合成した。ペイロードＤ１７は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（例えば、手順２、手順３、及び手順４又は５を参照されたい）（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて合成した。

【1044】

【化213】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－モルホリノフェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１２．９ｍｇ、６９．８％）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０８６．４３［Ｍ＋Ｈ］．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９６－１．０７（ｍ，１２Ｈ），１．２７－１．４２（ｍ，３Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，３Ｈ），１．６２－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｄ，Ｊ＝１．１３Ｈｚ，３Ｈ），１．９７－２．０６（ｍ，１Ｈ），２．０４－２．１４（ｍ，１Ｈ），２．４４－２．５３（ｍ，１Ｈ），２．５８－２．６９（ｍ，２Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ），３．１３－３．１９（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．５６（ｍ，４Ｈ），３．６１－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７９－３．８８（ｍ，５Ｈ），３．９０－３．９８（ｍ，１Ｈ），４．０７－４．１８（ｍ，２Ｈ），４．２０－４．２９（ｍ，１Ｈ），４．３５－４．４５（ｍ，２Ｈ），４．４５－４．５４（ｍ，１Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），４．８６－４．９２（ｍ，２Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ），５．４６－５．６５（ｍ，２Ｈ），６．４６－６．６７（ｍ，４Ｈ），７．２８－７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３７－７．４５（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．５３（ｍ，２Ｈ），７．６６－７．７１（ｍ，２Ｈ），７．７４－７．８４（ｍ，４Ｈ）．

【1045】

ステップ２：１－（４－（（Ｒ）－２－（（Ｒ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－モルホリノフェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウムブロミド（７．６ｍｇ、６０．５％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０５７．６２［Ｍ＋Ｈ］．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９５－１．０８（ｍ，１２Ｈ），１．２４－１．４２（ｍ，５Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，３Ｈ），１．５２－１．７１（ｍ，６Ｈ），１．８９（ｄ，Ｊ＝１．１３Ｈｚ，３Ｈ），１．９５－２．０５（ｍ，１Ｈ），２．０５－２．１５（ｍ，１Ｈ），２．２６－２．３４（ｍ，２Ｈ），２．４６－２．５３（ｍ，１Ｈ），２．５８－２．６９（ｍ，２Ｈ），３．０７－３．１２（ｍ，３Ｈ），３．１４ －３．１９（ｍ，４Ｈ），３．３９－３．５８（ｍ，６Ｈ），３．６１－３．７６（ｍ，２Ｈ），３．８０－３．８６（ｍ，５Ｈ），４．０９－４．１８（ｍ，３Ｈ），４．４３－４．５１（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），４．８７－４．９３（ｍ，２Ｈ），５．１２－５．１９（ｍ，１Ｈ），５．４６－５．６５（ｍ，２Ｈ），６．４７－６．６６（ｍ，４Ｈ），６．８０（ｓ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ）．

【1046】

１．５．１．４ ＡＤＬ５－Ｄ１０
上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ１０を合成した。ペイロードＤ１０は、セクション１．２．１に概説される手順を用いて合成した。

【1047】

【化214】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－エトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１６．６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、３８．７％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６６５．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ）：δ ｐｐｍ ０．７６－０．８７（ｍ，９Ｈ），１．０３－１．０９（ｍ，３Ｈ），１．１０－１．１３（ｍ，３Ｈ）１．１３－１．１９（ｍ，１Ｈ）１．２０－１．２７（ｍ，３Ｈ），１．２９－１．４８（ｍ，６Ｈ）１．５１－１．５９（ｍ，１Ｈ）１．６５－１．７１（ｍ，３Ｈ）１．７３－１．８１（ｍ，１Ｈ）２．２０（ｓ，３Ｈ），２．２７－２．３４（ｍ，４Ｈ）２．３４－２．４４（ｍ，２Ｈ）２．４４－２．５３（ｍ，１Ｈ）２．５３－２．５９（ｍ，１Ｈ）２．７６－２．８３（ｍ，１Ｈ）３．２３－３．２６（ｍ，１Ｈ）３．３４－３．５２（ｍ，７Ｈ）３．６７－３．７５（ｍ，１Ｈ）４．８６－４．９２（ｍ，１Ｈ）４．９２－４．９９（ｍ，１Ｈ），５．４１－５．５１（ｍ，１Ｈ），５．６０－５．７１（ｍ，１Ｈ），５．７２－５．８２（ｍ，１Ｈ），６．００－６．０７（ｍ，１Ｈ），６．３７－６．４８（ｍ，１Ｈ）

【1048】

【化215】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－エトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１８．６ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、８７％収率）、無色のグレーズとして。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１６３．０１［Ｍ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８６－１．０３（ｍ，１６Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，４Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．４３－１．７２（ｍ，１０Ｈ），１．８１（ｓ，３Ｈ），１．８４ －１．９２（ｍ，１Ｈ），２．０６－２．１４（ｍ，１Ｈ），２．４６－２．６３（ｍ，３Ｈ），２．６７－２．７２（ｍ，１Ｈ），２．８８－２．９４（ｍ，１Ｈ），３．０３－３．０９（ｍ，３Ｈ），３．３８－３．４５（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｓ，６Ｈ），３．６３－３．７９（ｍ，２Ｈ），３．８１－３．８８（ｍ，１Ｈ），３．９２－３．９８（ｍ，１Ｈ），４．０７－４．１８（ｍ，２Ｈ），４．２１－４．２８（ｍ，１Ｈ），４．３６－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．４７－４．５３（ｍ，１Ｈ），４．５５－４．６３（ｍ，３Ｈ），５．０２－５．１１（ｍ，３Ｈ），５．５６－５．６６（ｍ，１Ｈ），５．７５－５．８４（ｍ，１Ｈ），５．８６－５．９２（ｍ，１Ｈ），６．１２－６．１９（ｍ，１Ｈ），６．４９－６．６１（ｍ，１Ｈ），７．２９－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．４４（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．５３（ｍ，２Ｈ），７．６４－７．７１（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝１５．０６，７．９１Ｈｚ，４Ｈ）．

【1049】

【化216】

ステップ２：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－エトキシ－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１４．０９ｍｇ、８２％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０５７．６２［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８７－１．０３（ｍ，１５Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），１．２２－１．２９（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｓ，６Ｈ），１．４５－１．７２（ｍ，１４Ｈ），１．８１（ｓ，３Ｈ），１．８４－１．９５（ｍ，１Ｈ），２．０５－２．１６（ｍ，１Ｈ），２．２６－２．３６（ｍ，２Ｈ），２．４７－２．６２（ｍ，３Ｈ），２．６６－２．７４（ｍ，１Ｈ），２．８６－２．９５（ｍ，１Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），３．４２－３．５１（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，５Ｈ），３．６４－３．７８（ｍ，２Ｈ），３．８１－３．８９（ｍ，１Ｈ），４．０９－４．２０（ｍ，３Ｈ），４．４３－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．５９（ｍ，１Ｈ），４．５５－４．６７（ｍ，２Ｈ），４．６０－４．６８（ｍ，２Ｈ），５．０１－５．１２（ｍ，２Ｈ），５．５４－５．６５（ｍ，１Ｈ），５．７５－５．８６（ｍ，１Ｈ），５．８６－５．９４（ｍ，１Ｈ），６．１０－６．２１（ｍ，１Ｈ），６．４７－６．６２（ｍ，１Ｈ），６．８１（ｓ，２Ｈ），７．４９－７．６０（ｍ，２Ｈ）７．７６－７．８９（ｍ，２Ｈ）．

【1050】

１．５．１．５ ＡＤＬ５－Ｄ１５
上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ１５を合成した。ペイロードＤ１５は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて合成した。

【1051】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（１－（１－アセチルピペリジン－４－イル）－４－フルオロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－６－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１００ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ、５７．３％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１６７．７６［Ｍ＋Ｈ］．

【1052】

【化217】

ステップ２：４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（１－（１－アセチルピペリジン－４－イル）－４－フルオロ－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－６－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（３２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、３２．８％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１３８．６４［Ｍ＋Ｈ］．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９９（ｓ，１０Ｈ），１．２６－１．４０（ｍ，５Ｈ），１．４２－１．４９（ｍ，３Ｈ），１．６７（ｂｒ ｓ，６Ｈ），１．９６（ｄ，Ｊ＝１．００Ｈｚ，３Ｈ），２．００－２．１３（ｍ，２Ｈ），２．１６－２．４２（ｍ，７Ｈ），２．４４－２．５５（ｍ，１Ｈ），２．５９－２．７６（ｍ，２Ｈ），２．９８－３．２６（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．５９（ｍ，７Ｈ），３．６０－３．７６（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．９０（ｍ，１Ｈ），４．１３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，３Ｈ），４．４１－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．５３－４．７１（ｍ，３Ｈ），４．８９－４．９７（ｍ，１Ｈ），５．１０－５．２７（ｍ，２Ｈ），５．４８－５．６７（ｍ，２Ｈ），６．７９（ｓ，２Ｈ）７．０７－７．１７（ｍ，１Ｈ），７．４８－７．６１（ｍ，３Ｈ），７．７８－７．８４（ｍ，２Ｈ）．

【1053】

１．５．１．５ ＡＤＬ５－Ｄ３２

【化218】

上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ３２を合成した。ペイロードＤ１５は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて合成した。

【1054】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（５－クロロピリジン－３－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、６９．６％収率）ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０１８．４［Ｍ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．９９（ｓ，１４Ｈ）１．２９－１．４１（ｍ，３Ｈ）１．４４－１．４９（ｍ，３Ｈ）１．６１－１．７１（ｍ，２Ｈ）１．９２（ｄ，Ｊ＝１．２５Ｈｚ，３Ｈ），１．９５－２．１３（ｍ，２Ｈ）２．４５－２．５３（ｍ，１Ｈ）２．６０－２．７０（ｍ，２Ｈ）３．０４－３．０９（ｍ，３Ｈ）３．３７（ｓ，３Ｈ）３．３９－３．４７（ｍ，１Ｈ）３．４７－３．５４（ｍ，２Ｈ）３．６１－３．７５，（ｍ，２Ｈ）３．７８－３．８７（ｍ，１Ｈ）３．９３－３．９９（ｍ，１Ｈ）４．０８－４．１８（ｍ，２Ｈ）４．２２－４．２９（ｍ，１Ｈ）４．３９－４．４５（ｍ，２Ｈ）４．４５－４．５３（ｍ，１Ｈ）４．５６－４．６３（ｍ，３Ｈ）５．１７－５．２３（ｍ，１Ｈ）５．４８－５．６４（ｍ，２Ｈ）６．５７－６．６４（ｍ，１Ｈ）７．２８－７．３６（ｍ，２Ｈ）７．３７－７．４５（ｍ，２Ｈ）７．４７－７．５４（ｍ，２Ｈ）７．６４－７．７０（ｍ，２Ｈ）７．７５－７．８４（ｍ，５Ｈ）８．４１－８．４８（ｍ，２Ｈ）

【1055】

ステップ２：４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（５－クロロピリジン－３－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（６．２ｍｇ、４２．５％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９９０．３４［Ｍ＋Ｈ］．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．９７－１．０９（ｍ，１２Ｈ）１．２４－１．４１（ｍ，５Ｈ）１．４７（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，３Ｈ）１．５５－１．７１（ｍ，６Ｈ）１．９２（ｄ，Ｊ＝１．１３Ｈｚ，３Ｈ）１．９８－２．１５（ｍ，２Ｈ）２．２７－２．３６（ｍ，２Ｈ）２．４６－２．５３（ｍ，１Ｈ）２．６０－２．７１（ｍ，２Ｈ）３．０６－３．１３（ｍ，３Ｈ）３．３５－３．３８（ｍ，１Ｈ）３．４１－３．５８（ｍ，６Ｈ）３．６２－３．７６（ｍ，２Ｈ）３．８０－３．８８（ｍ，１Ｈ）４．０８－４．１９（ｍ，３Ｈ）４．４３－４．５２（ｍ，１Ｈ）４．５７－４．６６（ｍ，２Ｈ）５．１６－５．２４（ｍ，１Ｈ）５．４９－５．６８，（ｍ，２Ｈ）６．６２（ｓ，１Ｈ）６．８１（ｓ，２Ｈ）７．４９－７．５７（ｍ，２Ｈ）７．７６－７．８７（ｍ，３Ｈ）８．３９－８．４９（ｍ，２Ｈ）

【1056】

１．５．１．５ ＡＤＬ５－Ｄ３０

【化219】

上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ３０を合成した。ペイロードＤ３０は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて合成した。

【1057】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－（ジメチルアミノ）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１６ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、５１．４％収率）ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０２７．５０［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）ｄ ｐｐｍ ０．９５－１．０７（ｍ，１３Ｈ）１．３１－１．４２（ｍ，２Ｈ）１．４４－１．５０（ｍ，３Ｈ）１．６３－１．７１（ｍ，２Ｈ）１．８４－１．９２（ｍ，３Ｈ）１．９８－２．１４（ｍ，２Ｈ）２．４７－２．５６（ｍ，１Ｈ）２．６０－２．６７（ｍ，２Ｈ）２．９３（ｓ，６Ｈ）３．０３－３．０９（ｍ，３Ｈ）３．３７（ｓ，４Ｈ）３．４７－３．５６（ｍ，２Ｈ）３．６３－３．７５（ｍ，２Ｈ）３．７９－３．８８（ｍ，１Ｈ）３．９２－３．９８（ｍ，１Ｈ）４．０８－４．１９（ｍ，２Ｈ）４．２１－４．２７（ｍ，１Ｈ）４．３７－４．４４（ｍ，２Ｈ）４．４５－４．５４（ｍ，１Ｈ）４．５７－４．６２（ｍ，２Ｈ）４．９１－４．９４（ｍ，２Ｈ）５．１５－５．２０（ｍ，１Ｈ）５．４７－５．５５（ｍ，１Ｈ）５．５６－５．６５（ｍ，１Ｈ）６．５８（ｓ，１Ｈ）６．６７（ｄ，Ｊ＝１．５１Ｈｚ，３Ｈ）７．１５－７．２４（ｍ，１Ｈ），７．２８－７．３６（ｍ，２Ｈ）７．３８－７．４５（ｍ，２Ｈ）７．４７－７．５４（ｍ，２Ｈ）７．６４－７．７３（ｍ，２Ｈ）７．７５－７．８５（ｍ，４Ｈ）

【1058】

ステップ２：４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（５－クロロピリジン－３－イル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（６．２ｍｇ、４２．５％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９９０．３４［Ｍ＋Ｈ］．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．８８（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，１２Ｈ）１．１６－１．３０（ｍ，４Ｈ）１．３２－１．３８（ｍ，３Ｈ）１．４３－１．５８（ｍ，６Ｈ）１．７５－１．８０，（ｍ，３Ｈ）１．８４－１．９２（ｍ，１Ｈ）１．９３－２．０２（ｍ，１Ｈ）２．１４－２．２１（ｍ，２Ｈ）２．３５－２．４２（ｍ，１Ｈ）２．４８－２．５７（ｍ，２Ｈ）２．８２（ｓ，６Ｈ）２．９４－３．０２（ｍ，３Ｈ），３．２７－３．３２（ｍ，１Ｈ）３．３５－３．４５（ｍ，４Ｈ）３．５０－３．６４（ｍ，２Ｈ）３．６８－３．７６（ｍ，１Ｈ）３．９７－４．０７（ｍ，３Ｈ）４．３１－４．４０（ｍ，１Ｈ）４．４７－４．５３（ｍ，２Ｈ）５．０３－ ５．０９（ｍ，１Ｈ）５．３５－５．４４（ｍ，１Ｈ）５．４５－５．５５（ｍ，１Ｈ）６．４２－６．５０（ｍ，１Ｈ）６．５１－６．６２（ｍ，３Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．０３－７．１２（ｍ，１Ｈ）７．３８－７．４４（ｍ，２Ｈ）７．６６－７．７５（ｍ，２Ｈ）８．４２－８．４７（ｍ，１Ｈ）．

【1059】

１．５．１．５ ＡＤＬ５－Ｄ２７

【化220】

上記に概説した一般的手順（セクション１．５．１）を用いてＡＤＬ５－Ｄ２７を合成した。ペイロードＤ２７は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２６９９２号明細書（これは参照により本明細書に援用される）に概説される手順を用いて合成した。

【1060】

ステップ１：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）スルホニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（２５．２ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、８３％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２３０．５４［Ｍ＋Ｈ］^＋
ステップ２：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）スルホニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（５．２ｍｇ、４．３３μｍｏｌ、２１．１３％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２０１．６８［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）ｄ ｐｐｍ ０．８７（ｄ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，１２Ｈ）１．１３－１．２９（ｍ，４Ｈ）１．３１－１．３８（ｍ，３Ｈ）１．４３－１．５９（ｍ，６Ｈ）１．７１－１．７９，（ｍ，３Ｈ）１．８３－２．０２（ｍ，２Ｈ）２．１４－２．２１（ｍ，２Ｈ）２．３４－２．４１（ｍ，１Ｈ）２．５６（ｓ，８Ｈ）２．９４－３．０１（ｍ，３Ｈ）３．１２－３．１８（ｍ，８Ｈ）３．２８－３．４５（ｍ，５Ｈ），３．４８－３．６３（ｍ，２Ｈ）３．７０（ｓ，４Ｈ）３．９７－４．０７（ｍ，３Ｈ）４．２９－４．４１（ｍ，１Ｈ）４．４９（ｓ，２Ｈ）４．９８－５．０６（ｍ，１Ｈ）５．３４－５．５４（ｍ，２Ｈ）６．３７－６．４５（ｍ，２Ｈ）６．５１（ｓ，２Ｈ）６．６９（ｓ，２Ｈ）７．３７－７．４３（ｍ，２Ｈ）７．６３－７．７３（ｍ，４Ｈ）

【1061】

１．５．１．６ ＡＤＬ１０－Ｄ１

【化221】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（０．０１２ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（０．０１２ｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（０．１８８ｍｌ、０．０１９ｍｍｏｌ）を合わせ、一晩撹拌した。この混合物をシリカゲルカラムに直接ロードし、クロマトグラフィーにかけて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル）ピペラジン－１－カルボキシレート（８．４ｍｇ、１０．１２μｍｏｌ、５３．７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］８５３．５．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８９（ｓ，９Ｈ）１．２１－１．３９（ｍ，９Ｈ）１．４１－１．５６（ｍ，５Ｈ）１．５７－１．７１（ｍ，６Ｈ）１．６９－１．７１（ｍ，１Ｈ）１．７９，（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，３Ｈ）１．８２－１．９０（ｍ，１Ｈ）２．３４－２．４３（ｍ，１Ｈ）２．４１－２．４１（ｍ，１Ｈ）２．４６－２．６３（ｍ，３Ｈ）２．６５－２．６８（ｍ，２Ｈ）２．６８（ｓ，３Ｈ）２．８６－２．９２（ｍ，１Ｈ）３．３３（ｓ，３Ｈ）３．５１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，６Ｈ）３．５４－３．６０（ｍ，５Ｈ）３．７７－３．８８（ｍ，１Ｈ）５．０６（ｓ，２Ｈ）５．５３－５．６３（ｍ，１Ｈ）５．７０－５．８０（ｍ，１Ｈ），５．８３－５．９４（ｍ，１Ｈ）６．０８－６．１９（ｍ，１Ｈ）６．４７－６．５９（ｍ，１Ｈ）６．８０（ｓ，２Ｈ）．

【1062】

１．６ ＡＤＬ１２－Ｄ１、ＡＤＬ１４－Ｄ１、及びＡＤＬ１５－Ｄ１の調製
１．６．１ 概要－一般的手順１

【化222】

ＡＤＬ１２－Ｄ１について－ステップ１：ＤＣＭ（２０．２８ｍＬ、１．０１４ｍｍｏｌ）中の１－（６－ヒドロキシヘキシル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（０．２００ｇ、１．０１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＰＤＣ（３．８１ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．１ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で３時間撹拌した。次に反応混合物をシリカパッドでろ過し、濃縮乾固して、６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサナール（４０ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、２０．２１％収率）を得た。

【1063】

ＡＤＬ１４－Ｄ１及びＡＤＬ１５－Ｄ１について－ステップ１：ＤＣＭ（０．０５Ｍ）中のマレイミドアルコール（１．０当量）の撹拌溶液に、予め活性化させた粉末状ＭＳ－４Ａ １ｍｇのアルコール当たり２．６ｍｇ、Ｎ－メチルモルホリン－Ｎ－オキシド（１．２当量）、及びＴＰＡＰ（０．１当量）をこの順番で加えた。この反応混合物を室温で６０分間撹拌した。次に反応混合物をシリカゲルパッドでろ過し、濃縮乾固した。未精製の生成物を次のステップ（ステップ２）に進めた。

【1064】

ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルピペラジン－１－カルボキシレート（１．０当量）、２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアルデヒド（２．０－３．０当量）、ＤＣＭ（０．１Ｍ）、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３．０当量）を混合し、１０分間撹拌した。次にこの反応混合物をシリカゲルカラムに直接ロードし、クロマトグラフィーにかけて、所望のリンカー－ペイロードを得た。

【1065】

１．６．１．１ ＡＤＬ１２－Ｄ１

【化223】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１２－Ｄ１）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）ピペラジン－１－カルボキシレート（４１ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、８０％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］^＋８１６．７５．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８６－０．９８（ｍ，９Ｈ）１．２０－１．２３（ｍ，３Ｈ）１．２３－１．４０（ｍ，８Ｈ）１．４１－１．７０（ｍ，１２Ｈ）１．７９（ｄ，Ｊ＝０．６３Ｈｚ，３Ｈ）１．８３－１．９１（ｍ，１Ｈ）２．３３－２．４０（ｍ，２Ｈ）２．４３（ｂｒ ｔ，Ｊ＝４．７７Ｈｚ，４Ｈ）２．４８－２．６４（ｍ，３Ｈ）２．６５－２．６９（ｍ，１Ｈ）２．８７－２．９２（ｍ，１Ｈ）３．３２（ｓ，３Ｈ）３．４１－３．６０（ｍ，７Ｈ）３．７９－３．８７（ｍ，１Ｈ）５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１９．３９，１０．２３Ｈｚ，２Ｈ）５．５７（ｄｄ，Ｊ＝１５．１８，９．７９Ｈｚ，１Ｈ）５．６９－５．７９（ｍ，１Ｈ）５．８７（ｄ，Ｊ＝１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）６．１１－６．１７（ｍ，１Ｈ）６．４９－６．５８（ｍ，１Ｈ）６．８０（ｓ，２Ｈ）．

【1066】

１．６．１．Ｘ ＡＤＬ１２－Ｄ２８

【化224】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１２－Ｄ２８）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－２－（（Ｅ）－１－（３－フルオロ－５－（４－（（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）スルホニル）ピペラジン－１－イル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２．３ｍｇ、３０．７％）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］^＋８９７．３２
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ｐｐｍ ０．８５－０．９３（ｍ，６Ｈ）１．１６－１．３４（ｍ，６Ｈ）１．３７－１．５８（ｍ，６Ｈ）１．７２－１．７７（ｍ，３Ｈ）１．８０－１．８８（ｍ，１Ｈ），２．２３－２．４１（ｍ，７Ｈ）２．４７－２．５７（ｍ，２Ｈ）３．０８－３．１９（ｍ，９Ｈ）３．３３－３．４２（ｍ，５Ｈ）３．７０（ｓ，４Ｈ）４．６７－４．７２（ｍ，１Ｈ）４．９８－５．０７（ｍ，１Ｈ）５．３３－５．５０（ｍ，２Ｈ）６．３６－６．４３（ｍ，２Ｈ）６．４４－６．５３（ｍ，２Ｈ）６．７０（ｓ，２Ｈ）７．６２－７．６９（ｍ，２Ｈ）

【1067】

１．６．１．Ｘ ＡＤＬ１２－Ｄ３５

【化225】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１２－Ｄ３５）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソ－２－（（Ｅ）－１－（３－（ピロリジン－１－イルスルホニル）フェニル）プロパ－１－エン－２－イル）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）ピペラジン－１－カルボキシレート（４．０ｍｇ、５．１１μｍｏｌ、２８．８％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋７８３．５
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）ｄ ｐｐｍ ０．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．７８，２．５１Ｈｚ，６Ｈ）１．１７－１．３３（ｍ，６Ｈ）１．３８－１．５９（ｍ，６Ｈ）１．６５（ｓ，４Ｈ）１．８０（ｓ，３Ｈ），１．８２－１．９１（ｍ，１Ｈ）２．２３－２．４１（ｍ，７Ｈ）２．４９－２．６１（ｍ，２Ｈ）３．１４（ｓ，４Ｈ）３．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，６Ｈ）３．６７－３．７６（ｍ，１Ｈ）４．６８－４．７３（ｍ，１Ｈ）５．０３－５．１１（ｍ，１Ｈ）５．３４－５．５２（ｍ，２Ｈ）６．５５－６．６２（ｍ，１Ｈ）６．７０（ｓ，２Ｈ）７．４６－７．５４（ｍ，２Ｈ）７．５８－７．６５（ｍ，２Ｈ）

【1068】

１．６．１．Ｘ ＡＤＬ１２－Ｄ２２（Ｒ）

【化226】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１２－Ｄ２８）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、３－（（Ｒ）－１－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（３．２ｍｇ、３．６０μｍｏｌ、１５．３９％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］^＋８８８．５

【1069】

１．６．１．Ｘ ＡＤＬ１２－Ｄ２２（Ｓ）

【化227】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１２－Ｄ２８）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、３－（（Ｓ）－１－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（３．６ｍｇ、３．６０μｍｏｌ、２８．７％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］^＋８８８．５６

【1070】

１．６．１．２ ＡＤＬ１４－Ｄ１

【化228】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１４－Ｄ１）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（８ｍｇ、１０．５３μｍｏｌ、３３．５％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７６０．３．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．０１（ｍ，９Ｈ），１．１７－１．３３（ｍ，５Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．４１－１．７１（ｍ，７Ｈ），１．８０（ｓ，３Ｈ），１．８３－１．９５（ｍ，１Ｈ），２．４８（ｂｒ ｓ，１０Ｈ），２．８９－２．９８（ｍ，１Ｈ），３．４０－３．５７（ｍ，５Ｈ），３．６１－３．７２（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．９１（ｍ，１Ｈ），４．９８－５．１４（ｍ，２Ｈ），５．５０－５．５２（ｍ，１Ｈ），５．５２－５．６５（ｍ，１Ｈ），５．６９－５．８２（ｍ，１Ｈ），５．８６－５．９６（ｍ，１Ｈ），６．０９－６．２１（ｍ，１Ｈ），６．４７－６．６０（ｍ，１Ｈ），６．７９－６．９０（ｍ，２Ｈ）．

【1071】

１．６．１．３ ＡＤＬ１５－Ｄ１

【化229】

リンカー－ペイロード（ＡＤＬ１５－Ｄ１）：セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いて、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（７ｍｇ、８．７１μｍｏｌ、２３．１０％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＝＋Ｈ］８０４．１．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８５－１．０２（ｍ，９Ｈ），１．１８－１．３２（ｍ，４Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．４０－１．７２（ｍ，７Ｈ），１．７８－１．８３（ｍ，３Ｈ），１．８５－１．９３（ｍ，１Ｈ），２．４２－２．６５（ｍ，９Ｈ），２．６７－２．７３（ｍ，１Ｈ），２．８９－２．９６（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｓ，５Ｈ），３．４１－３．５８（ｍ，５Ｈ），３．５９－３．６７（ｍ，４Ｈ），３．６８－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．８１－３．８９（ｍ，１Ｈ），４．９４－５．１５（ｍ，２Ｈ），５．６１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．０４Ｈｚ，１Ｈ），５．６９－５．８２（ｍ，１Ｈ），５．８９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５．１８Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．９２Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．７７－６．９１（ｍ，２Ｈ）．

【1072】

１．７ ＡＤＬ１２－Ｄ２

【化230】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２６ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（３１９μＬ、０．０３２ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（１９．９２μＬ、０．３１９ｍｍｏｌ）を合わせ、一晩撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～３０％ＭｅＯＨ）にかけて、１－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－メチルピペラジン－１－イウム（１４ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、５２．９％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］８３１．６．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．８６－０．９８（ｍ，９Ｈ）１．２６（ｓ，４Ｈ）１．３６（ｓ，３Ｈ）１．４０－１．５８（ｍ，９Ｈ）１．６０－１．７１（ｍ，４Ｈ）１．８０（ｄ，Ｊ＝０．８８Ｈｚ，４Ｈ）１．８５－１．９１（ｍ，１Ｈ）１．８７－１．８８（ｍ，１Ｈ）２．４８－２．６３（ｍ，３Ｈ）２．６５－２．７２（ｍ，１Ｈ）２．８８－２．９４（ｍ，１Ｈ）３．１８（ｓ，３Ｈ）３．３４－３．４１（ｍ，３Ｈ）３．５３（ｓ，１０Ｈ）３．７３－３．９０（ｍ，３Ｈ）３．９０－４．０６（ｍ，２Ｈ）５．０２－５．１１（ｍ，２Ｈ）５．５６－５．６６（ｍ，１Ｈ）５．７０－５．８１（ｍ，１Ｈ）５．８４－５．９４（ｍ，１Ｈ）６．１１－６．２０（ｍ，１Ｈ）６．５０－６．６０（ｍ，１Ｈ）６．８３（ｓ，２Ｈ）．

【1073】

１．８ ＡＤＬ１５－Ｄ２

【化231】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（６ｍｇ、７．４６３μｍｏｌ）、ヨードメタン（０．４６７μＬ、７．４６３μｍｏｌ）、及びアセトニトリル（０．３９０μＬ、７．４６３μｍｏｌ）を合わせて室温で撹拌した。この反応混合物を濃縮乾固して、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（２－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ）エチル）－４－メチル－４ｌ４－ピペラジン－１－カルボキシレート（６ｍｇ、７．３３μｍｏｌ、９８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋］^＋８１９．２８．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．７４－０．８８（ｍ，９Ｈ）１．１８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．２７Ｈｚ，５Ｈ）１．２３－１．２７（ｍ，３Ｈ）１．２８－１．４９（ｍ，５Ｈ）１．５１－１．６１（ｍ，２Ｈ）１．６６－１．７１（ｍ，３Ｈ）１．７３－１．８０（ｍ，１Ｈ）２．３６－２．５３（ｍ，３Ｈ）２．５５－２．６０（ｍ，１Ｈ）２．７８－２．８３（ｍ，１Ｈ）３．１０－３．１４（ｍ，３Ｈ）３．２３－３．２５（ｍ，３Ｈ）３．３２－３．５１（ｍ，５Ｈ）３．５２－３．６７（ｍ，６Ｈ）３．６７－３．８７（ｍ，７Ｈ）４．９３－５．０１（ｍ，２Ｈ）５．４４－５．５５（ｍ，１Ｈ）５．６１－５．７０（ｍ，１Ｈ）６．００－６．０７（ｍ，１Ｈ）６．３８－６．４８（ｍ，１Ｈ）６．７５（ｓ，２Ｈ）．

【1074】

１．９ ＡＤＬ５－Ｄ２５

【化232】

ステップ１：Ｄ１（４０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（７３０μｌ、９．４２２ｍｍｏｌ）に溶解し、ブロモ酪酸メチル（２３．６９μＬ、０．１８８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（３５．０μＬ、０．２５１ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で２日間撹拌した。溶媒を蒸発させた。カラムクロマトグラフィーによる精製により、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（４－メトキシ－４－オキソブチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（５１ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ、約１００％収率）を無色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），７３７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．７６－０．８６（ｍ，９Ｈ），１．１２（ｓ，３Ｈ），１．１４－１．１９（ｍ，１Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ），１．３４－１．５０（ｍ，５Ｈ），１．５２－１．６０（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ），２．２７（ｓ，８Ｈ），２．３７－２．４９（ｍ，３Ｈ），２．５４－２．６１（ｍ，１Ｈ），２．７７－２．８３（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．４７（ｍ，５Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．６７－３．７６（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｓ，３Ｈ），４．８９－５．００（ｍ，３Ｈ），５．４２－５．５２（ｍ，１Ｈ），５．５７－５．７０（ｍ，１Ｈ），５．７３－５．８１（ｍ，１Ｈ），５．９８－６．０８（ｍ，１Ｈ），６．４３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２５，１０．９８Ｈｚ，１Ｈ）．

【1075】

ステップ２：Ｆｍｏｃ－ＶａｌＡｌａ－ＰＡＢ臭化物（８８ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル４－（４－メトキシ－４－オキソブチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（５１ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６７０μＬ、８．６５１ｍｍｏｌ）に懸濁した。この反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させた。カラムクロマトグラフィーによる精製により、１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－（４－メトキシ－４－オキソブチル）ピペラジン－１－イウム（４２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、４９．１％収率）を蝋様の固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１２３５．４［Ｍ］^＋．

【1076】

ステップ３：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）－１－（４－メトキシ－４－オキソブチル）ピペラジン－１－イウム（４２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を５：２：１比のＴＨＦ（６００μＬ、７．３２２ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２５０μＬ、６．１７９ｍｍｏｌ）、水（１２５μＬ、６．９３９ｍｍｏｌ）に溶解し、水酸化リチウム（１．２２１ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸（５．８４μＬ、０．１０２ｍｍｏｌ）でクエンチし、溶媒を蒸発させて、ＲＰ ＨＰＬＣによって精製して、１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－１－（３－カルボキシプロピル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イウムを蝋様の固体として得た（１８．４ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、５４．２％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９９８．５［Ｍ］^＋．

【1077】

ステップ４：１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－１－（３－カルボキシプロピル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イウム（１８．４ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３５６μＬ、４．６０３ｍｍｏｌ）に溶解し、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（６．８１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）、続いてヒューニッヒ塩基（８．０４μ、０．０４６ｍｍ）を加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗残渣をＲＰ ＨＰＬＣによって精製して、（１－（３－カルボキシプロピル）－１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｒ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イウム（８．８ｍｇ、７．３８μｍｏｌ、４０．１％収率）を白色の凍結乾燥固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１１９１．５［Ｍ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．６８－０．８１（ｍ，１８Ｈ），０．９８－１．０７（ｍ，４Ｈ），１．０７－１．１４（ｍ，３Ｈ），１．１６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．８９Ｈｚ，５Ｈ），１．２２－１．３３（ｍ，８Ｈ），１．３６－１．４７（ｍ，７Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ）１．６６－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．８３－１．９２（ｍ，５Ｈ），１．９８－２．１３（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｄｔ，Ｊ＝３．５４，１．８０Ｈｚ，１Ｈ），２．２７－２．３３（ｍ，１Ｈ），２．４７－２．５１（ｍ，２Ｈ），２．５８－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．６６－２．７２（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ）３．４５－３．５８（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．６８（ｍ，２Ｈ）３．７７－３．８６（ｍ，２Ｈ），４．０６－４．１３（ｍ，１Ｈ），４．２７－４．３７（ｍ，２Ｈ），４．４６－４．５４（ｍ，３Ｈ），４．７２－４．７８（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．８７（ｍ，２Ｈ），５．３２－５．４８（ｍ，１Ｈ），５．５３－５．６７（ｍ，１Ｈ），５．７３－５．８６（ｍ，１Ｈ），５．９３－６．０５（ｍ，１Ｈ），６．１６－６．２６（ｍ，１Ｈ），６．２０（ｓ，１Ｈ），６．２３－６．４１（ｍ，１Ｈ），６．２７－６．３８（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｓ，２Ｈ），６．９８－７．０６（ｍ，２Ｈ），７．４３－７．５０（ｍ，２Ｈ），７．６２－７．６９（ｍ，２Ｈ），７．７４－７．８０（ｍ，１Ｈ），８．２２－８．２７（ｍ，１Ｈ），８．４４－８．４９（ｍ，４Ｈ），１０．１５－１０．２２（ｍ，１Ｈ）．

【1078】

１．１０ ＡＤＬ１２－Ｄ２０及びＡＤＬ１２－Ｄ２１
セクション１．２．１に概説される一般的手順１を用いてＤ２０を合成した。

【1079】

【化233】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イルメチル（２－（メチルアミノ）エチル）カルバメート（４３ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、９０％収率）、無色の油として。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），９８１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．６２－０．７３（ｍ，１８Ｈ），０．８２－０．９３（ｍ，９Ｈ），０．９５－１．０６（ｍ，２７Ｈ），１．２４（ｂｒ ｓ，４Ｈ），１．４５（ｂｒ ｓ，１０Ｈ），１．７８（ｂｒ ｓ，３Ｈ），１．９２－２．００（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．５１－２．６７（ｍ，３Ｈ），２．７６－２．８４（ｍ，２Ｈ），２．８６－２．９３（ｍ，１Ｈ），２．９３－３．０２（ｍ，３Ｈ），３．３４－３．３８（ｍ，３Ｈ），３．４３－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．７２－３．８２（ｍ，１Ｈ），３．９３－４．０４（ｍ，１Ｈ），４．９４－５．０７（ｍ，２Ｈ），５．５３－５．６４（ｍ，１Ｈ），５．７２－５．８９（ｍ，２Ｈ），６．０７－６．２１（ｍ，１Ｈ），６．４４－６．６１（ｍ，１Ｈ）．

【1080】

Ｄ２０

【化234】

（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イルメチル（２－（メチルアミノ）エチル）カルバメート（１６．４ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、５８．６％収率）、無色の油として。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），６３９．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，９Ｈ），１．２５（ｂｒ ｓ，４Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．４１－１．７４（ｍ，６Ｈ），１．４５－１．５９（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｓ，３Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．５０－２．６３（ｍ，３Ｈ），２．６５－２．７３（ｍ，１Ｈ），２．７３－２．８０（ｍ，２Ｈ），２．８８－３．０１（ｍ，４Ｈ），３．３５－３．３８（ｍ，３Ｈ），３．３５－３．４０（ｍ，３Ｈ），３．４１－３．４８（ｍ，２Ｈ），３．５２－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．７８－３．８９（ｍ，１Ｈ），５．００－５．１３（ｍ，２Ｈ），５．５３－５．６４（ｍ，１Ｈ），５．７１－５．８２（ｍ，１Ｈ），５．８４－５．９４（ｍ，１Ｈ），６．１２－６．１９（ｍ，１Ｈ），６．４９－６．６１（ｍ，１Ｈ）．

【1081】

ＡＤＬ１２－Ｄ２０

【化235】

セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いてＡＬＤ１２－Ｄ２０を合成し（１３．０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、６７．７％）を無色の油として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），８１８．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．９１（ｂｒ ｓ，９Ｈ），１．２１－１．３１（ｍ，４Ｈ），１．３６（ｂｒ ｓ，７Ｈ），１．４６－１．７３（ｍ，１１Ｈ），１．８０（ｓ，３Ｈ），１．８４－１．９３（ｍ，１Ｈ），２．５０－２．７２（ｍ，７Ｈ），２．７５－２．８５（ｍ，１Ｈ），２．８７－３．０９（ｍ，７Ｈ），３．４８－３．６８（ｍ，６Ｈ）３．８０－３．８９（ｍ，１Ｈ），５．０２－５．１３（ｍ，２Ｈ），５．５５－５．６６（ｍ，１Ｈ），５．７１－５．８２（ｍ，１Ｈ），５．８５－５．９４（ｍ，１Ｈ），６．１１－６．２２（ｍ，１Ｈ），６．４９－６．６１（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１．１３Ｈｚ，２Ｈ）．

【1082】

ＡＤＬ１２－Ｄ２１

【化236】

（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル（２－（（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキシル）（メチル）アミノ）エチル）（メチル）カルバメート（７ｍｇ、８．５５７μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（９９μｌ、１．２８４ｍｍｏｌ）に溶解し、ヨウ化メチル（２．６８μＬ、０．０４３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させた。カラムクロマトグラフィーによる精製により、６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－（２－（（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサン－１－アミニウム（７ｍｇ、８．４０μｍｏｌ、９８％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），８３２．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．７５－０．８７（ｍ，９Ｈ），１．１４（ｓ，４Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ），１．２７－１．４５（ｍ，９Ｈ），１．４８－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．６９（ｓ，４Ｈ），１．７２－１．７９（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．５３（ｍ，３Ｈ），２．５３－２．６０（ｍ，１Ｈ），２．７５－２．８３（ｍ，１Ｈ），２．８５－２．９５（ｍ，３Ｈ），３．０６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．４２Ｈｚ，６Ｈ），３．１５－３．２０（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．３８Ｈｚ，３Ｈ），３．４２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．９０Ｈｚ，５Ｈ），３．５３－３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．７８（ｍ，１Ｈ），４．８８－５．０１（ｍ，２Ｈ），５．４４－５．５６（ｍ，１Ｈ），５．５９－５．７２（ｍ，１Ｈ），５．７３－５．８３（ｍ，１Ｈ），５．９９－６．１０（ｍ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ）．

【1083】

１．１１ ＡＤＬ１２－Ｄ２２
セクション１．２．１に概説される一般的手順１を用いてＤ２２を合成した。

【化237】

【1084】

３－（４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－メチル－６－（（トリエチルシリル）オキシ）－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（トリエチルシリル）オキシ）ペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）ヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－１２－オキソ－１０－（（トリエチルシリル）オキシ）オキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（４８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、３４．４％収率）、無色の油として。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１０５１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．６２－０．７０（ｍ，１８Ｈ），０．８２－０．９４（ｍ，９Ｈ），１．０１（ｔｔ，Ｊ＝７．９２，３．１８Ｈｚ，２７Ｈ），１．２２－１．２８（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ），１．４７－１．６６（ｍ，７Ｈ），１．７６－１．８７（ｍ，５Ｈ），１．９２－１．９９（ｍ，１Ｈ），２．３６－２．４７（ｍ，３Ｈ），２．５０－２．６８（ｍ，３Ｈ），２．８６－２．９３（ｍ，１Ｈ），２．９８－３．０８（ｍ，２Ｈ），３．１０－３．１８（ｍ，１Ｈ），３．１８－３．２６（ｍ，２Ｈ），３．２７－３．３１（ｍ，１Ｈ），３．３４－３．３６（ｍ，３Ｈ），３．３６－３．３７（ｍ，１Ｈ）３．７２－３．８１（ｍ，１Ｈ），３．９５－４．１９（ｍ，３Ｈ），４．９３－５．００（ｍ，１Ｈ），５．０１－５．０７（ｍ，１Ｈ），５．５４－５．６６（ｍ，１Ｈ）５．７２－５．８１（ｍ，１Ｈ）５．８１－５．９０（ｍ，１Ｈ），６．１２－６．１９（ｍ，１Ｈ），６．４７－６．５８（ｍ，１Ｈ）．

【1085】

Ｄ２２

【化238】

Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－３－（４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（２３．５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、６８．２％収率）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），７０９．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．７１－０．７７（ｍ，９Ｈ），１．０３（ｓ，５Ｈ），１．１４－１．２０（ｍ，６Ｈ），１．２３－１．３３（ｍ，５Ｈ），１．３６－１．４８（ｍ，５Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．６７－１．７５（ｍ，１Ｈ），２．１３－２．２４（ｍ，４Ｈ），２．５８－２．６４（ｍ，１Ｈ），２．６８－２．８１（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．６１－３．７７（ｍ，４Ｈ），４．２８－４．３９（ｍ，１Ｈ），４．４４－４．５３（ｍ，１Ｈ），４．７９－４．８８（ｍ，２Ｈ），５．２８－５．４３（ｍ，１Ｈ），５．５２－５．６６（ｍ，１Ｈ），５．７３－５．８５（ｍ，１Ｈ），５．９４－６．０４（ｍ，１Ｈ），６．２７－６．４１（ｍ，１Ｈ），６．４３－６．５３（ｍ，２Ｈ），８．１９－８．２９（ｍ，１Ｈ）．

【1086】

ＡＤＬ１２－Ｄ２２

【化239】

セクション１．６．１に概説される一般的手順を用いてＡＤＬ１２－Ｄ２２（３．６ｍｇ、４．０５μｍｏｌ、３４．４％収率）を合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），８８８．７［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ－ｄ４）：δ ｐｐｍ ０．７７－０．８９（ｍ，９Ｈ），１．０８－１．３１（ｍ，１３Ｈ），１．３５－１．６０（ｍ，１２Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ），１．７３－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．９７（ｍ，１Ｈ），２．１５－２．２７（ｍ，１Ｈ），２．２７－２．８３（ｍ，１１Ｈ），２．８４－２．９８（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｓ，７Ｈ），３．６７－３．７７（ｍ，１Ｈ），４．８９－５．０１（ｍ，２Ｈ），５．４０－５．５３（ｍ，１Ｈ），５．５９－５．６９（ｍ，１Ｈ），５．７２－５．８３（ｍ，１Ｈ），５．９９－６．１１（ｍ，１Ｈ），６．３７－６．４９（ｍ，１Ｈ），６．６９（ｓ，２Ｈ）．

【1087】

ＡＤＬ１－Ｄ２２

【化240】

セクション１．２．１に概説される一般的手順１を用いてＡＤＬ１－Ｄ２２（４．７ｍｇ、３．５９μｍｏｌ、３８．６％収率）を白色の凍結乾燥固体として合成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３０７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ｐｐｍ ０．６８－０．７９（ｍ，１６Ｈ），１．０３（ｓ，３Ｈ），１．１６（ｓ，５Ｈ），１．２３－１．４４（ｍ，１３Ｈ），１．４８－１．５５（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｓ，４Ｈ），１．６８－１．７４（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．９３（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｓ，４Ｈ），２．２４－２．３７（ｍ，３Ｈ），２．４６－２．５１（ｍ，２Ｈ），２．６６－２．７３（ｍ，１Ｈ），２．７９－２．９９（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），３．２１－３．２２（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｓ，４Ｈ），３．６１－３．６７（ｍ，１Ｈ），３．７３－３．８８（ｍ，３Ｈ），４．０１－４．０８（ｍ，１Ｈ），４．０９－４．１６（ｍ，１Ｈ），４．２９－４．３８（ｍ，２Ｈ），４．４３－４．５１（ｍ，１ Ｈ），４．７３－４．７８（ｍ，１Ｈ），４．７９－４．８８（ｍ，２Ｈ），４．９１－４．９８（ｍ，２Ｈ），５．２９－５．４３（ｍ，３Ｈ），５．５４－５．６７（ｍ，１Ｈ），５．７４－５．８３（ｍ，１Ｈ），５．９５－６．０７（ｍ，１Ｈ），６．２８－６．４０（ｍ，１Ｈ），６．５４－６．６２（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｓ，２Ｈ），７．１７－７．２６（ｍ，２Ｈ），７．４４－７．５７（ｍ，２Ｈ），７．６６－７．７６（ｍ，１Ｈ），７．９５－８．０３（ｍ，１Ｈ），８．４２－８．４９（ｍ，１Ｈ），９．８９－９．９６（ｍ，１Ｈ）．

【1088】

ＡＤＬ１－Ｄ２３

【化241】

４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（１６．７６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）及び３－（（Ｒ）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（１６．１ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２２９μｌ、２．９５３ｍｍｏｌ）に溶解させて、ヒューニッヒ塩基（１１．９０μｌ、０．０６８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に溶媒を蒸発させて、逆相ＨＰＬＣ精製に供して、３－（（Ｒ）－１－（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（３．９ｍｇ、２．９８μｍｏｌ、１３．１３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３０８．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【1089】

ＡＤＬ１－Ｄ２４（Ｓ）

【化242】

３－（（Ｓ）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（１０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１４１μｌ、０．０１４ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（５μｌ、０．０２８ｍｍｏｌ）、４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－ニトロフェニル）カーボネート（２０．８ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を合わせて、２時間撹拌した。クロマトグラフィーにかけて（ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）、３－（（Ｓ）－１－（（（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）－４－（（（（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）－１０－ヒドロキシ－２－（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）－６－ヒドロキシ－７－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシペンタン－２－イル）オキシラン－２－イル）－６－メチルヘプタ－２，４－ジエン－２－イル）－７－メトキシ－３，７－ジメチル－１２－オキソオキサシクロドデカ－４－エン－６－イル）オキシ）カルボニル）ピペラジン－２－イル）プロパン酸（５ｍｇ、３．８２μｍｏｌ、２７．１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ），１３０８．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【1090】

実施例２
ＡＤＣの調製に使用される例示的スプライセオソーム調節薬ペイロードをプロファイリングした。ＳＦ３ｂ複合体への結合性、インビトロスプライシング活性、及び細胞成長の阻害能力に関してペイロードを評価した。

【1091】

２．１ ＳＦ３Ｂ１結合性／シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）
シンチレーション近接アッセイを実施して、ＳＦ３ｂ複合体に対する化合物（「ペイロード」）の結合親和性を測定した。抗マウスＰＶＴ ＳＰＡシンチレーションビーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）への抗ＳＦ３Ｂ１抗体（ＭＢＬ）のバッチ固定化を以下のとおり調製した：２．５ｍｇの核抽出物につき５μｇの抗ＳＦ３Ｂ１抗体及び１．５ｍｇのビーズを１５０μＬ ＰＢＳ中に混合した。この抗体－ビーズ混合物を室温で３０分間インキュベートし、１８，０００ｇで５分間遠心した。１．５ｍｇ抗体－ビーズ混合物につき１５０μＬ ＰＢＳを再懸濁に使用した。ビーズを懸濁し、調製した核抽出物に加えた。このスラリーを４℃で２時間、穏やかに撹拌しながらインキュベートした。次にビーズを１８，０００ｇで５分間遠心することにより回収し、ＰＢＳ＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で２回洗浄した。最後の遠心ステップの後、１．５ｍｇのビーズにつき１５０μＬのＰＢＳで懸濁した。以前記載されているとおり合成した（Ｋｏｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．３（９）：５７０－５）、［^３Ｈ］標識プラジエノライドＢプローブ結合性（［^３Ｈ］－ＰＢ）に関してＳＦ３ｂ複合体を試験した。１００μＬ結合反応物を５０μＬビーズスラリーと共に、様々な濃度のＰＢ又はＰＢ－ＯＨを加えることにより調製し、３０分間プレインキュベートした後、２．５ｎＭの［^３Ｈ］－ＰＢを加えた。この混合物を３０分間インキュベートし、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ２プレートカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して発光シグナルを読み取った。データの非線形回帰曲線フィッティングにはＰｒｉｓｍ ７（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用した。

【1092】

試験した全てのペイロードについて同様の結合プロファイルが観察された（図１）。概して、特異的結合は低いナノモル濃度範囲であったことから、試験した全てのペイロードが強力なＳＦ３ｂ複合体結合剤であり、ＡＤＣにおける使用に有望な候補化合物であることが示唆される。

【1093】

２．２ インビトロスプライシング（ＩＶＳ）
無細胞系におけるペイロード活性を評価するため、インビトロスプライシングアッセイを実施した。ペイロードを核抽出物及びプレｍＲＮＡ基質ミニ遺伝子とインキュベートした。

【1094】

ＨｅＬａ核抽出物調製：ＨｅＬａ Ｓ３細胞ペレットを低張性緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．９、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ ＫＣｌ、０．２ｍＭ ＰＭＳＦ、０．５ｍＭ ＤＴＴ）に再懸濁し、懸濁液を合計５パック細胞容積（ＰＣＶ）となるようにした。遠心後、上清を廃棄し、細胞を低張性緩衝液で３ＰＣＶとなるようにして、氷上で１０分間インキュベートした。ダウンス型ホモジナイザーを使用して細胞を溶解させ、次に遠心した。上清を廃棄し、１／２パック核容積（ｐａｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｖｏｌｕｍｅ：ＰＮＶ）の低塩濃度緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．９、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２０ｍＭ ＫＣｌ、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、２５％グリセロール、０．２ｍＭ ＰＭＳＦ、０．５ｍＭ ＤＴＴ）、続いて１／２ＰＮＶの高塩濃度緩衝液（１．４Ｍ ＫＣｌを除いて低塩濃度緩衝液と同じ）でペレットを再懸濁した。核を穏やかに３０分間混合した後、遠心した。次に上清（核抽出物）を保存緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．９、１００ｍＭ ＫＣｌ、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、２０％グリセロール、０．２ｍＭ ＰＭＳＦ、０．５ｍＭ ＤＴＴ）に透析した。タンパク質濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００紫外可視分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して決定した。

【1095】

ＩＶＳ：Ａｄ２由来配列（Ｐｅｌｌｉｚｚｏｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｃｅｌｌ ９５（５）：６１５－２４）は、全て５’ＥｃｏＲＩ及び３’ＸｂａＩ制限部位を用いてｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローニングした。これらのプラスミドを、ＸｂａＩを用いて線状化し、インビトロ転写反応においてＤＮＡ鋳型として使用した。ＦｔｚΔｉ無イントロンプラスミド（Ｌｕｏ ａｎｄ Ｒｅｅｄ（１９９９）９６（２６）：１４９３７－４２）を、ＥｃｏＲＩを用いて線状化した。全てのＲＮＡをインビトロ転写し、次に、それぞれＭＥＧＡＳｃｒｉｐｔ Ｔ７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＭｅｇａＣｌｅａｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）キットを使用して精製した。Ａｄ２変異体プレｍＲＮＡを使用するスプライシング反応については、ＨｅＬａ Ｓ３から調製した８μｇ核抽出物、２ｎｇプレｍＲＮＡ、０．２ｎｇ ＦＴＺΔｉ、及び様々な濃度の化合物又はＤＭＳＯを使用して１μＬ反応物を調製した。３０℃で１５分間プレインキュベートした後、１μＬスプライシング活性化緩衝液（０．５ｍＭ ＡＴＰ、２０ｍＭクレアチンリン酸、１．６ｍＭ ＭｇＣｌ_２）を加え、反応物を３０℃で９０分間インキュベートした。次に反応物を１３μＬ ＤＭＳＯでクエンチし、ＲＴ－ｑＰＣＲに２５ｎＬを使用した。ＴａｑＭａｎ ＲＮＡ－ｔｏ－Ｃ_Ｔ １－ｓｔｅｐキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、スプライシング反応からのＲＮＡ、Ａｄ２（フォワード：ＡＣＴＣＴＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＧＣＴＧＴ；リバース：ＣＣＧＡＣＧＧＧＴＴＴＣＣＧＡＴＣＣＡＡ；プローブ：ＣＴＧＴＴＧＧＧＣＴＣＧＣＧＧＴＴＧ）及びＦｔｚ（フォワード：ＴＧＧＣＡＴＣＡＧＡＴＴＧＣＡＡＡＧＡＣ；リバース：ＡＣＧＣＣＧＧＧＴＧＡＴＧＴＡＴＣＴＡＴ；プローブ：ＣＧＡＡＡＣＧＣＡＣＣＣＧＴＣＡＧＡＣＧ）ｍＲＮＡプライマー－プローブセットを使用してＲＴ－ｑＰＣＲ反応物を調製した。形成されたスプライシング産物の非線形回帰曲線フィッティングにはＰｒｉｓｍ ７（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用し、対照（ＤＭＳＯ）試料に対して正規化した。試験した全てのペイロードがＳＦ３ｂ複合体に特異的に結合し、同様の結合プロファイルを実証することを考えれば（図１）、全てのペイロードがまた、スプライシングも同程度に調節するはずであると仮定された。全てのペイロードがＡｄ２．２プレｍＲＮＡのスプライシングを有意に調節した（図２）。ペイロードの存在下では、スプライス産物量の低下が観察された。

【1096】

２．３ 細胞生存能力
ＨＣＣ１９５４（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ））乳管癌細胞を平底９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０％ウシ胎仔血清（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補足した総容積９０μＬの組織培養培地に２０００細胞／ウェルでプレーティングした。細胞を化合物の２００ｎＭ～０．０３ｎΜの３倍段階希釈液で処理した。各濃度をトリプリケートで試験した。処理時点で、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０発光細胞生存能力アッセイを製造者の推奨に従い使用して（Ｐｒｏｍｅｇａ；＃Ｇ９２４１）、未処理細胞のプレートを評価した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０試薬を培地に加え、インキュベートし、ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でアッセイした。値は０時点（Ｔ０）を表す。１４４時間の化合物処理後（Ｔ１４４）における生存細胞数もＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０発光細胞生存能力アッセイを用いて決定した。０時点での発光値（Ｔ０）、ＤＭＳＯ対照成長（Ｃ）、及び化合物の存在下での試験成長（Ｔ１４４）を用いて、各々の化合物濃度レベルでの成長率を計算した。成長阻害率は、Ｔ１４４≧Ｔ０の濃度について［（Ｔ１４４－Ｔ０）／（Ｃ－Ｔ０）］×１００、又はＴ１４４＜Ｔ０の濃度について［（Ｔ１４４－Ｔ０）／Ｔ０］×１００として計算した。Ｐｒｉｓｍ ７（Ｇｒａｐｈｐａｄ）並びに非線形回帰分析及びｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．反応－可変傾斜（４パラメータ）を用いたフィッティングを使用して用量反応曲線プロットを作成した。

【1097】

全てのペイロードについてＨＥＲ２増幅ＨＣＣ１９５４乳癌細胞で細胞生存能力用量反応を決定した。Ｄ２５など、透過性の低いペイロードを除き、試験したペイロードのほとんどが一桁のナノモル濃度範囲のＧＩ_５０値（即ち、細胞増殖の５０％の減少を生じさせるための化合物の濃度）を呈した（図３）。例示的透過性データは表１４に示す。

【1098】

実施例３
実施例２で評価した例示的ペイロードを例示的抗ＨＥＲ２抗体（トラスツズマブ）に抗体のシステイン残基を介してコンジュゲートした。例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの調製及び評価を以下に記載する。

【1099】

３．１ 抗体
抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ（本明細書ではＳＭＬＡとも称される）の調製には、トラスツズマブ抗体（「ＡＢ１８５」）（Ｍｏｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１２）：４７４４－９）を使用した。

【1100】

３．２ バイオコンジュゲーション
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）中１０ｍｇ／ｍＬの抗体（トラスツズマブ）を５ｍＭ ＴＣＥＰ（２～４モル当量）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃７７７２０）と混合して鎖間ジスルフィド結合を破壊した。この反応物を２２℃で３時間、穏やかに混合した。次にプロピレングリコール（１５％ｖ／ｖ）、続いて８モル当量のリンカー－ペイロード（ＤＭＳＯ中６ｍＭストック）を加え、溶液を十分に混合した。この反応物を２２℃のインキュベーター内の回転プレートに置いた。２時間のコンジュゲーション後、反応混合物を精製して、コンジュゲートしなかったペイロードをＤＰＢＳ（ｐＨ７．５）中にＡＫＴＡ ＧＥ Ｍ１５０（ＨｉＴｒａｐ（商標）２６／１０脱塩カラム；流量：３ｍＬ／分）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって取り除いた。得られたコンジュゲートをＡｍｉｃｏｎ限外ろ過（３０ｋＤａ、Ｕｌｔｒａ－４）（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、０．２２μｍ ＰＶＤＦ使い捨てフィルタ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で滅菌ろ過にかけた。最終的な澄明溶液をＵＶ－ＶＩＳによって測定し、抗体濃度（［ｍＡｂ］；モル／Ｌ）及びコンジュゲート化したペイロード濃度（［ＬＤ］；モル／Ｌ）をランベルト・ベールの法則（Ａ＝Ｅ・ｃ・ｌ）及び以下の式により決定した：
Ａ_{２８０ｎｍ＝}Ｅ^ｍＡｂ _{２８０ｎｍ}×［ｍＡｂ］×ｌ＋Ｅ^ＬＤ _{２８０ｎｍ}×［ＬＤ］×ｌ
Ａ_{２５２ｎｍ＝}Ｅ^ｍＡｂ _{２５２ｎｍ}×［ｍＡｂ］×ｌ＋Ｅ^ＬＤ _{２５２ｎｍ}×［ＬＤ］×ｌ
Ｅ^ｍＡｂ _{２８０ｎｍ}：トラスツズマブ＝２１３，３８０ｃｍ^－１Ｍ^－１
Ｅ^ｍＡｂ _{２５２ｎｍ}：トラスツズマブ＝７９，１１２ｃｍ^－１Ｍ^－１
Ｅ^ＬＤ _{２８０ｎｍ}＝８００ｃｍ^－１Ｍ^－１
Ｅ^ＬＤ _{２５２ｎｍ}＝３１，０００ｃｍ^－１Ｍ^－１
略語：ｃ－モル濃度；ｌ－光路長（Ｎａｎｏｄｒｏｐ：０．１ｃｍ）；Ｅ－モル吸光係数；Ａ－吸光度。

【1101】

３．３ 生物物理学的特性
例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣに関して、それぞれ、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、及び逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、薬物対抗体比（ＤＡＲ）、凝集率、及び非コンジュゲート化ペイロード率を分析した。概して、コンジュゲートは２％未満の遊離薬物を含み、１０％未満の凝集を含んだ。

【1102】

３．３．１ ＬＣ／ＭＳ分析－ＤＡＲ
Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ６２２４Ａ Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｍａｓｓ ＴＯＦ質量分析計に結合したＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＵＰＬＣシステムを使用してＬＣ／ＭＳ分析を実施した。コンジュゲートをＰＮＧａｓｅ Ｆ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ；＃Ｐ０７０５Ｌ）によって３７℃で４時間脱グリコシルし、８Ｍ Ｇｄｎ－ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｇ９２８４）で変性させて、最後にＤＴＴ（５ｍＭ終濃度）（Ｐｒｏｍｅｇａ；＃Ｖ３１５１）を用いて軽鎖ドメインと重鎖ドメインとに分離した。調製した試料をＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ－Ｓカラム（２．１×１５０ｍｍ、８μｍ）に注入し、２５％Ｂ～５０％Ｂのグラジエントによって室温（ＲＴ）で２８分かけて溶出させた。移動相Ａは、０．０５％ＴＦＡ含有水であり、移動相Ｂは０．０４％ＴＦＡ含有アセトニトリルであり、流量は１ｍＬ／分であった。デコンボリューション質量スペクトルから、軽鎖（Ｌ０又はＬ１）及び重鎖（Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３）について非コンジュゲート化ピーク及び薬物コンジュゲートピークの強度を加重平均することによりＤＡＲを計算した。式：（ＤＡＲ_ＬＣ×２）＋（ＤＡＲ_ＨＣ×２）＝総ＤＡＲを用いて、インタクトなコンジュゲートの総ＤＡＲを計算した。例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのＤＡＲ値は表１０～表１４に報告する。

【1103】

３．３．２ ＳＥＣ分析－凝集
ＴＯＳＯＮ－Ｇ３０００ＳＷＸＬ（＃００８５４１）カラムを使用して、０．２５ｍＭ塩化カリウム及び１５％（ｖ／ｖ）ＩＰＡを含有する０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７）中、０．７５ｍＬ／分の流量でサイズ排除クロマトグラフィーを実施した。高分子量の単量体コンジュゲート成分について、２８０ｎｍにおけるピーク面積吸光度を曲線下面積積分値により決定した。例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの単量体率は表１０に報告する。

【1104】

３．３．３ ＨＰＬＣ分析－遊離薬物
コンジュゲートを１０容量のアセトニトリルによって氷上で２時間沈殿させて、スピンダウンした。次に残留非コンジュゲート化ペイロードを含有する上清をＡｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＳＢ－Ｃ１８ １２０Ａカラム（４．６×１００ｍｍ、２．７μｍ）に注入し、４５％Ｂ～７０％Ｂのグラジエントにより室温で１０分間かけて溶出させた。移動相Ａは１００％水であり、移動相Ｂは１００％アセトニトリルであり、流量は０．６ｍＬ／分で、２５２ｎｍで検出した。ＵＶ検出により、非コンジュゲート化リンカー－ペイロードの外部検量線との比較で残留遊離薬物の量を定量化した。例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの遊離薬物率は表１０に報告する。

【1105】

３．４ 結合特性決定
３．４．１ 標的陽性細胞へのＦＡＣＳ結合
非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２抗体及び抗ＨＥＲ２ ＡＤＣによる標的陽性細胞への結合について、フローサイトメトリーにより間接免疫蛍光法を用いて評価した。ＨＥＲ２を内因的に発現する乳癌細胞株であるＪＩＭＴ１細胞（ＤＳＭＺ）をＶ字底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）にプレーティングし（５×１０^４細胞／ウェル）、アッセイ培地（１０％（ｗ／ｖ）胎仔ウシ血清アルブミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を補足したＲＰＭＩ－１６４０）中、様々な濃度に希釈した試験化合物と共に４℃で２時間インキュベートした。次に細胞をＰＢＳ＋２％ＦＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で洗浄し、フィコエリトリン標識（ＰＥ）ヤギ抗ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって暗所下４℃で４０分間染色した。細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦｌｕｒｏＦｉｘ緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって室温で３０分間固定した。固定液をＦＡＣＳ緩衝液で洗い流した。固定した細胞をＰＥの幾何平均蛍光に関してＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して分析した。対照としてトラスツズマブ及びＴ－ＤＭ１（トラスツズマブにコンジュゲートしたＤＭ１）を含めた。

【1106】

全ての抗ＨＥＲ２ ＡＤＣが、ＪＩＭＴ１細胞においてＨＥＲ２へのロバストな結合を実証した。ＡＤＣ結合はトラスツズマブ及びＴ－ＤＭ１の結合と同等であった（図４）。これは、ペイロードへのコンジュゲーションが抗体の抗原結合親和性に影響を及ぼさないことを示唆している。

【1107】

３．５ インビトロ分析
３．５．１ 細胞生存能力
幾つかのＨＥＲ２増幅細胞株で抗ＨＥＲ２ ＡＤＣが細胞成長を阻害するその能力に関して試験した。ＨＣＣ１９５４（ＡＴＣＣ）、２０００細胞／ウェル）、Ｎ８７（ＡＴＣＣ、４０００細胞／ウェル）、ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ、３０００細胞／ウェル）、及びＭＣＦ７（ＡＴＣＣ、１５００細胞／ウェル）細胞株を使用した。細胞生存能力分析はセクション２．３に記載のとおり実施した。

【1108】

意外にも、結合プロファイルが同様で（図１）、且つペイロードが同様の生化学的特性を有するにも関わらず、全てのＡＤＣがＨＣＣ１９５４細胞において活性というわけではなかった。ある種のリンカー（例えば、ＡＤＬ１０）及び／又はある種のペイロード（例えば、Ｄ１４）を有するＡＤＣは細胞成長の阻害能がより低く、一方、別のリンカー（ＡＤＬ１、ＡＤＬ５、ＡＤＬ１２）及び／又はペイロード（例えば、Ｄ１、Ｄ２５、Ｄ２、Ｄ４）を有するＡＤＣは、ＨＣＣ１９５４細胞においてより強力であった（図５Ａ並びに表１０、表１１、及び表１４）。この傾向は、概して細胞株（ＨＣＣ１９５４、Ｎ８７、及びＳＫＢＲ３）及び適応疾患（ＨＣＣ１９５４及びＳＫＢＲ３は高ＨＥＲ２乳癌株である；Ｎ８７は高ＨＥＲ２胃癌株である）全体にわたって観察された（図５Ｂ～図５Ｃ並びに表１１及び表１２）。更に、一般に、ＡＤＬ１０などの従来の非切断可能リンカーはスプライシング調節薬ペイロードを効率的に送達しなかった。しかしながら、同じリンカーについて長さを少し変更すると、ＡＤＣははるかに強力になった。例えばＡＢ１８５－ＡＤＬ１０－Ｄ１の細胞生存能力用量反応をＡＢ１８５－ＡＤＬ１２－Ｄ１と比較されたい（図５Ａ～図５Ｃ）。

【1109】

抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの活性が抗原依存性であることを確実にするため、ＨＥＲ２陰性ＭＣＦ７細胞を処理した。試験したＡＤＣのいずれも、ＨＥＲ２陽性細胞をロバストに標的化した同じ濃度で活性を有しなかった（図６及び表１３）。これは、抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ活性が抗原依存性であることを示唆している。

【1110】

【表51】

【1111】

【表52】

【1112】

【表53】

【1113】

【表54】

【1114】

【表55】

【1115】

【表56】

【1116】

【表57】

【1117】

【表58】

【1118】

３．５．２ ＡＤＣペイロードのＣａｃｏ－２透過性
Ｃａｃｏ－２細胞をトランズウェル（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）２４ウェルプレートにおいて３７℃、９５％湿度、５％ＣＯ_２で２１日間培養した。細胞単層の完全性をＴＥＥＲ（経上皮電気抵抗）及びルシファーイエローによって確認した。ペイロードは細胞単層の両側にデュプリケートで１０μＭで別々にスパイクした。処理直後（ｔ＝０）及び２時間のインキュベーション後に両方のチャンバからアリコートを採取することにより、頂端側から側底側への（Ａ－Ｂ）方向及び側底側から頂端側への（Ｂ－Ａ）方向の透過速度を決定した。試料は、内部標準を含有する有機溶媒でタンパク質沈殿させて、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＳＣＩＥＸ；ＡＰＩ ５５００）により分析した。両方向におけるペイロード／内部標準の経時的面積比反応を用いて透過性（ｃｍ／秒）値を求めた。Ｂ－Ａ／Ａ－Ｂの除算によって外向きフラックス比を計算した。低透過性及び高透過性並びに外向きフラックスについての対照化合物は、予想どおり挙動した。透過性値は表１４に報告する。

【1119】

３．５．３ ＡＤＣペイロードの化学安定性
Ｍｃｉｌｖａｎｅ（クエン酸塩－リン酸塩）緩衝液、ｐＨ５．５（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ；＃ＢＢ－２４６６）中において２０μＭの終濃度（ストック溶液からの０．５％未満のＤＭＳＯ）でペイロードをインキュベートした。ペイロード溶液及び内部標準を９６ウェルプレートにピペッティングし、ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ Ｈクラス）にかけ、初期クロマトグラフィーシグナル（ｔ＝０）に関して分析した。カラムはＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μｍ ２．１×５０ｍｍカラム（＃１８６００３５３８）であった。移動相Ａ９５％～１０％のグラジエントを１分かけて用い、ここでＡは水中０．１％ギ酸であり、移動相Ｂはアセトニトリル中０．１％ギ酸であった（流量０．９ｍＬ／分）。ペイロード溶液の残りは３７℃でプレート振盪機（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒ）上に保持した。３７℃でのインキュベーション後２４、７２、及び９６時間の時点でＵＰＬＣによる試料分析を繰り返した。ペイロード及び内部標準の面積比反応は３時点で決定した：０時点、１日目、及び３日目又は４日目のいずれか。０時点を１００に設定した。後の時点の面積比反応を０時点と比較した。残存率は以下のとおり計算した：（面積比Ｘ日目／面積比０時点）×１００＝残存率％。Ｅｘｃｅｌで％残存率の対数及び時点を比較する線の傾きを計算した。Ｅｘｃｅｌでｌｎ（２）／傾きにより半減期を計算した。表１４に報告する。

【1120】

【表59】

【1121】

【表60】

【1122】

【表61】

【1123】

３．５．４ インセルスプライシングＰＤアッセイ
例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの作用機序を調査するため、漸増濃度のＡＤＣで処理したＨＣＣ１９５４細胞においてＳＬＣ２５Ａ１９成熟転写物のスプライシングを調べた。

【1124】

ＨＣＣ１９５４細胞（ＡＴＣＣ）を９０μＬ／ウェルの１×１０^５細胞／ウェルでフェノールレッド不含ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地（ＡＴＣＣ）にプレーティングした。細胞を３倍希釈用量反応でコンジュゲートによって処理した。それぞれ２４時間後又は６時間後、２５μＬ／ｍＬのＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含有する５０μＬのＣＬ緩衝液（ＩｇｅＰａｌ ＣＡ－６３０、５Ｍ ＮａＣｌ、１ＭトリスＨＣｌ １Ｍ 水中ｐＨ７．４）で細胞を溶解させて、揺動機上において室温で４５分間インキュベートした。得られた混合物（０．５μＬ）を使用して、製造者の推奨に従い以下のＴａｑｍａｎプライマー：ＳＬＣ２５Ａ１９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈｓ００２２２２６５＿ｍ１）；ＲＰＬＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈｓ９９９９９９０２＿ｍ１）；１８Ｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈｓ９９９９９９０１＿ｓ１）によるＴａｑｍａｎ Ｆａｓｔ Ｖｉｒｕｓ １－Ｓｔｅｐマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）逆転写ＰＣＲ反応でスプライシング調節を判定した。

【1125】

Ｔ－ＤＭ１対照（ペイロードとして微小管破壊剤を有するトラスツズマブ）はＳＬＣ２５Ａ１９スプライシングに影響を及ぼさなかった（図７）。対照的に、試験した種々の細胞株で強力な成長阻害活性を実証した（図５）抗ＨＥＲ２ ＡＤＣは、強力なスプライシング調節も実証したことから、オンターゲット作用機序が指示される（図７）。同様に、細胞生存能力アッセイで低い効力を呈した抗ＨＥＲ２ ＡＤＣは、スプライシング調節の点でも効力が低かった。

【1126】

３．５．５ バイスタンダー細胞殺傷アッセイ
バイスタンダー細胞殺傷アッセイにおいて、例示的抗ＨＥＲ２コンジュゲートが標的陽性細胞及び隣接標的陰性細胞の両方を殺傷する能力を測定した。ＮＣＩ－Ｈ１５６８、非小細胞肺癌細胞（ＡＴＣＣ）を、ルシフェラーゼを発現するように改変した。ＧｅｎｅＡｒｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でｃＤＮＡが合成され、ｐＬＶＸ－ＥＦ１ａデスティネーションベクター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングされた。これとは別に、ＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）ウイルストランスフェクションシステムを製造者の指示（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ ＬＬＣ；＃ＭＩＲ６００３）に従い利用して、ＮＣＩ－Ｈ１５６８を、ヒトＨＥＲ２を発現するように改変した（ｐＬｅｎｔｉ６．３／Ｖ５－ＤＥＳＴ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃにクローニングした）。コンジュゲートのバイスタンダー活性を判定するため、２０００個の標的陽性（ＨＥＲ２形質導入）ＮＣＩ－Ｈ１５６８細胞及び２０００個の標的陰性（ｌｕｃタグ付加）ＮＣＩ－Ｈ１５６８細胞を共に透明９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にプレーティングし、トリプリケートで３倍段階希釈、３０～０．００５ｎＭで投与したコンジュゲートとインキュベートした。処理時点で、ＯｎｅＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０発光細胞生存能力アッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造者の推奨に従い使用して未処理細胞のプレートをアッセイし、０時点（Ｔ０）を確立した。培養下で６日後、ＯｎｅＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって残存細胞集団を分析し、標的陰性細胞の生存率を測定した。全体的な生存能力をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０発光細胞生存能力アッセイシステムによって測定した（Ｔ１４４）。用量反応曲線をセクション２．３に記載のとおり計算した。

【1127】

バイスタンダー殺傷アッセイの設計により、その排出を隣接標的陽性細胞によって放出される異化産物の取り込みに頼る標的陰性細胞のみを追跡することが可能になる。上記で考察したとおり、細胞は、（１）標的陰性（ｌｕｃタグ付加）細胞単独；（２）標的陽性細胞単独；及び（３）標的陰性細胞と標的陽性細胞との共培養の３つの条件下でプレーティングする。プレートをＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬で読み取ると、全ての細胞集団の生存能力を追跡して抗原依存性ＡＤＣ活性を確認することができる。対照的に、ＯｎｅＧｌｏ（登録商標）試薬を使用すると、標的陰性（ｌｕｃタグ付加）細胞のみがシグナルを有することになる。

【1128】

標的陰性（ｌｕｃタグ付加）細胞は、単独での培養時、抗ＨＥＲ２ ＡＤＣによる処理に対して感受性を有しなかった（図８）。しかしながら、標的陰性細胞を標的陽性細胞と共に培養したとき、抗ＨＥＲ２ ＡＤＣによる処理によって標的陰性細胞の殺傷が増加した。これらのデータは、標的陰性細胞が標的陽性細胞と共培養したとき抗ＨＥＲ２ ＡＤＣによって一層有効に殺傷されることを示唆しており、これは本明細書においてバイスタンダー殺傷と称される。バイスタンダー殺傷は、標的陽性細胞との共培養がない、それと独立した中での、標的（抗原）陰性細胞単独の殺傷として定義されるオフターゲット殺傷と区別可能である。

【1129】

本実験では、ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２は、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１と比較したとき、抗原が不均一な癌細胞集団を殺傷する能力の増加を実証した。理論によって拘束されることを望むものではないが、この効力の差は、Ｄ２における１つのメチル基の付加に起因し得、これがＤ１と比較したときのペイロード細胞効力及び透過性の３倍の増加をもたらす（表１４を参照されたい）。Ｄ２ ＡＤＣは、抗原が不均一な癌細胞集団をＡＢ１８５－ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ対照ＡＤＣと同程度に有効に処理した。

【1130】

３．６ インビボ分析
強力なスプライシング調節及び細胞成長阻害を呈した例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣをインビボで判定した。

【1131】

３．６．１ ＨＣＣ１９５４異種移植片有効性研究
マウス異種移植モデルにおいて例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの有効性を調査するため、ＨＣＣ１９５４（ＡＴＣＣ）乳管癌細胞（１０×１０^６細胞／１００μＬ／１：１ＲＰＭＩ：マトリゲル容積）を雌ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下移植した。マウスを単回ボーラスＩＶ用量のコンジュゲート（ＤＰＢＳ、ｐＨ７．４中に製剤化した）又は媒体対照で治療した。動物には、図９に指示する量を与えた。以下のエンドポイント：（１）過度の腫瘍容積（楕円体の式：（長さ×幅^２）／２を用いることにより計算する）；又は（２）過度の体重減少など、何らかの健康問題の発生のいずれか一方に達するまで、全ての動物について腫瘍成長及び体重を週２回モニタした。動物研究は、全てＨ３ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従い行った。

【1132】

２ｍｇ／ｋｇもの低い単回用量の抗ＨＥＲ２ ＡＤＣ（ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２又はＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１）による治療が有意な腫瘍退縮をもたらした（図９）。コンジュゲート化したペイロードについて用量反応も観察され、ＤＡＲ値が高い抗ＨＥＲ２ ＡＤＣほど（ＤＡＲ約４）、用量対応抗体Ｔ－ＤＭ１対照と比べて有効性が増加し、及び腫瘍再成長が遅いことを実証した。加えて、ＡＤＣによって腫瘍に標的化されたペイロードは、対応する非コンジュゲート化ペイロードと比べてより強力であった。

【1133】

実施例４
実施例３に記載される例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの特性が、別の抗原及び／又は適応疾患を標的化する他のＡＤＣにも当てはまり得るかどうかを決定するため、選択のペイロードを例示的抗ＣＤ１３８抗体（Ｂ－Ｂ４）及び例示的抗ＥＰＨ２Ａ抗体（１Ｃ１）にコンジュゲートした。ＣＤ１３８は、例えば多発性骨髄腫で悪性形質細胞に発現し、一方、ＥＰＨ２Ａは、種々の悪性腫瘍でより広く発現する。例示的抗ＣＤ１３８及び抗ＥＰＨ２Ａ ＡＤＣの調製及び評価について以下に記載する。

【1134】

４．１ 抗体
抗ＣＤ１３８ ＡＤＣ及び抗ＥＰＨ２Ａ ＡＤＣの調製には、それぞれ、Ｂ－Ｂ４抗体（「ＡＢ２０５」）（Ｔａｓｓｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｌｏｏｄ １０４：３６８８－９６）及び１Ｃ１抗体（「ＡＢ２０６」）（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８（２２）：９３６７－７４）を使用した。

【1135】

４．２ バイオコンジュゲーション
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）中１０ｍｇ／ｍＬの抗体（Ｂ－Ｂ４又は１Ｃ１）を５ｍＭ ＴＣＥＰ（２～４モル当量）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃７７７２０）と混合して鎖間ジスルフィド結合を破壊した。この反応物を２２℃で３時間、穏やかに混合した。次にプロピレングリコール（１５％ｖ／ｖ）、続いて８モル当量のリンカー－ペイロード（ＤＭＳＯ中６ｍＭストック）を加え、溶液を十分に混合した。この反応物を２２℃のインキュベーター内の回転プレートに置いた。２時間のコンジュゲーション後、反応混合物を精製して、コンジュゲートしなかったペイロードをＤＰＢＳ（ｐＨ７．５）中にＡＫＴＡ ＧＥ Ｍ１５０（ＨｉＴｒａｐ（商標）２６／１０脱塩カラム；流量：３ｍＬ／分）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって取り除いた。得られたコンジュゲートをＡｍｉｃｏｎ限外ろ過（３０ｋＤａ、Ｕｌｔｒａ－４）（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、０．２２μｍ ＰＶＤＦ使い捨てフィルタ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で滅菌ろ過にかけた。最終的な澄明溶液をＵＶ－ＶＩＳによって測定し、抗体濃度（［ｍＡｂ］；モル／Ｌ）及びコンジュゲート化したペイロード濃度（［ＬＤ］；モル／Ｌ）をランベルト・ベールの法則（Ａ＝Ｅ×ｃ×ｌ）及び以下の式により決定した：
Ａ_{２８０ｎｍ＝}Ｅ^ｍＡｂ _{２８０ｎｍ}×［ｍＡｂ］×ｌ＋Ｅ^ＬＤ _{２８０ｎｍ}×［ＬＤ］×ｌ
Ａ_{２５２ｎｍ＝}Ｅ^ｍＡｂ _{２５２ｎｍ}×［ｍＡｂ］×ｌ＋Ｅ^ＬＤ _{２５２ｎｍ}×［ＬＤ］×ｌ
Ｅ^ｍＡｂ _{２８０ｎｍ}：Ｂ－Ｂ４＝２２４，３２０ｃｍ^－１Ｍ^－１
１Ｃ１＝２１５，３８０ｃｍ^－１Ｍ^－１
Ｅ^ｍＡｂ _{２５２ｎｍ}：Ｂ－Ｂ４＝８３，６７０ｃｍ^－１Ｍ^－１
１Ｃ１＝８０，３３７ｃｍ^－１Ｍ^－１；
Ｅ^ＬＤ _{２８０ｎｍ}＝８００ｃｍ^－１Ｍ^－１
Ｅ^ＬＤ _{２５２ｎｍ}＝３１，０００ｃｍ^－１Ｍ^－１
略語：ｃ－モル濃度；ｌ－光路長（Ｎａｎｏｄｒｏｐ：０．１ｃｍ）；Ｅ－モル吸光係数；Ａ－吸光度。

【1136】

４．３ 生物物理学的特性
例示的抗ＣＤ１３８及び抗ＥＰＨＡ２ ＡＤＣに関して、それぞれ、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、及び逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、ＤＡＲ、凝集率、及び非コンジュゲート化ペイロード率を分析した。本明細書に記載される全てのコンジュゲートが２％未満の遊離薬物を含み、１０％未満の凝集を含んだ。

【1137】

４．３．１ ＬＣ／ＭＳ分析－ＤＡＲ
セクション３．３．１に記載のとおりＬＣ／ＭＳ分析を実施した。例示的抗ＣＤ１３８及び抗ＥＰＨＡ２ ＡＤＣのＤＡＲ値は表１５～表１８に報告する。

【1138】

４．３．２ ＳＥＣ分析－凝集
セクション３．３．２に記載のとおりＳＥＣ分析を実施した。例示的抗ＣＤ１３８及び抗ＥＰＨＡ２ ＡＤＣの単量体率は表１５及び表１７に報告する。

【1139】

４．３．３ ＨＰＬＣ分析－遊離薬物
セクション３．３．３に記載のとおりＨＰＬＣ分析を実施した。例示的抗ＣＤ１３８及び抗ＥＰＨＡ２ ＡＤＣの遊離薬物率は表１５及び表１７に報告する。

【1140】

４．４ インビトロ分析
４．４．１ 細胞生存能力
ＣＤ１３８発現ＭＯＬＰ８多発性骨髄腫細胞株で抗ＣＤ１３８ ＡＤＣを試験した。同様に、ＥＰＨＡ２発現ＰＣ３前立腺癌細胞株で抗ＥＰＨＡ２ ＡＤＣを試験した。細胞生存能力の分析はセクション２．３に記載のとおり実施した。

【1141】

抗ＣＤ１３８抗体（図１０及び表１６）及び抗ＥＰＨＡ２抗体（図１１及び表１８）にコンジュゲートしたペイロードでは、セクション３．５．１で抗ＨＥＲ２ ＡＤＣに関して考察したものと同様の傾向が生じた。詳細には、ある種のリンカー（例えば、ＡＤＬ１２）及び／又はペイロード（例えば、Ｄ１、Ｄ２５、Ｄ４）を有するＡＤＣが、抗原発現細胞で最も高い効力を実証した。一貫して、別のペイロード（例えば、Ｄ１４）は、強力な小分子であるにも関わらず、抗体媒介性送達によると細胞成長の阻害能が低かった。

【1142】

【表62】

【1143】

【表63】

【1144】

【表64】

【1145】

【表65】

【1146】

【表66】

【1147】

【表67】

【1148】

実施例５
例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビトロ及び／又はインビボ安定性を以下に記載するとおり判定した。

【1149】

５．１ 血漿中におけるＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の全抗体及びコンジュゲート化ペイロード
ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１によるインビトロ処理（セクション５．１．１）又はインビボ治療（セクション５．１．２）の後、免疫沈降ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ技法により血漿中の全抗体（ＴＡｂ）及びコンジュゲート化ペイロード（ＣＰ）のレベルを定量化した。定量化フィッティングは、ＴＡｂ及びＣＰについて、それぞれマウス血漿中０．５～１００μｇ／ｍＬ、及び０．５～５００ｎｇ／ｍＬの１／ｘ^２重み付けによる直線であった。血漿試料を安定同位体標識ユニバーサルモノクローナルヒト抗体内部標準（ＳＩｕ（商標）ＭＡＢ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）及び１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．４と混合し、室温で１時間インキュベートした。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＴ１磁気ビーズ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を混合物に加え、室温で更に３０分間インキュベートした。磁気スタンドを使用してビーズを結合させ、それをＣＨＡＰＳ緩衝液、次にＰＢＳ緩衝液で順次洗浄した。３０ｍＭ ＨＣｌでビーズから目的の分析物を溶出させた。別個の溶出液アリコートを使用してＴＡｂ又はＣＰを定量化した。ＴＡｂについては、トリス－ＨＣｌ、ｐＨ８．３、続いてトリプシンを加え、３７℃で一晩インキュベートさせておいた。ＣＰについては、１Ｍ酢酸アンモニウム、続いて重水素化したペイロード内部標準、及びカテプシンＢを加え、２５℃で一晩インキュベートさせておいた。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより試料を分析し、分析物対内部標準の面積比を用いて定量化し、それぞれの検量線と比較した。ＣＰ濃度を計算するため、ペイロードの分子量、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の分子量及びＤＡＲ（薬物対抗体比）に関してＴＡｂの濃度を補正した。

【1150】

５．１．１ マウス、ラット、及びサル血漿中におけるＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１のインビトロ安定性
マウス、ラット、及びサルからのプール血漿（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ）並びにＰＢＳをＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１（４．８１ｍｇ／ｍＬ）でスパイクし、５０μｇ／ｍＬの終濃度を実現した。試料を３７℃、９５％湿度、５％ＣＯ_２で４日間、ｐＨが安定し、且つ非特異的結合及び蒸発が最小限となるようにしてインキュベートした。４、２４、４８、７２、及び９６時間の時点でアリコートを取り出し、処理時まで－７０℃で保管した。試料を解凍し、全抗体及びコンジュゲート化ペイロードに関して上記に記載した方法（セクション５．１）を用いてバイオ分析用に処理した。各マトリックスについて０時点を１００％に設定した。後の時点における面積比反応を各マトリックスについて別々に０時点と比較した。残存率は以下のとおり計算した：（面積比Ｘ日目／面積比０時点）×１００＝％残存率。Ｅｘｃｅｌで％残存率の対数及び時点を比較する線の傾きを計算した。Ｅｘｃｅｌでｌｎ（２）／傾きにより半減期を計算した。

【1151】

ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１からの全抗体は、緩衝液中及び全ての種の血漿中で安定していることが見出され、４日間で僅かな沈殿を呈したに過ぎなかった（図１２Ａ）。コンジュゲートした（インタクトな）ペイロードＤ１のレベルは４日間維持された（図１２Ｂ）。

【1152】

５．１．２ ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の単回ＩＶ投与後のマウス血漿中におけるスナップショット薬物動態（ＰＫ）
マウス（ＣＢ１７－ＳＣＩＤ）を１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇのＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の単回ＩＶ用量で治療した後、続いて投与後２４、４８、及び７２時間の時点でヘパリンリチウムチューブ（各用量群につき１時点当たりｎ＝３）に致死採血（心穿刺）を行った。血液を４℃、５０００ｒｐｍで５分間遠心して赤血球を取り除き、血漿を処理時まで－８０℃で保管した。試料を解凍し、全抗体及びコンジュゲート化ペイロードに関して上記に記載した方法（セクション５．１）を用いてバイオ分析用に処理した。

【1153】

ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１の単回ＩＶ投与を受けて、投与後７２時間の時点で４００ｎｇ／ｍＬを超えるインタクトなＤ１ペイロードがＡＢ１８５抗体にコンジュゲートしたままであった（図１３）。ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１ ＡＤＣは、同様の作用機序のペイロードを担持する別のＡＤＣと比較したとき、安定性の向上を実証した。Ｐｕｔｈｅｎｖｅｅｔｉｌ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（２０１６）２７：１８８０－８）に報告されるタイランスタチンＡベースのＡＤＣは比較的安定性が低く、７２時間までにペイロードの完全な生物変換を示す（即ち、酢酸塩が完全に加水分解される）。

【1154】

５．２ ＡＢ１８５－ＡＤＬ１４－Ｄ１及びＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２５の加速安定性試験
作製したてのＳＭＬＡ（エッペンドルフチューブ内の各約１ｍｇ、４～５ｍｇ／ｍＬ）を遠心し、２８０ｎｍでの紫外吸収（ＮａｎｏＤｒｏｐ）により測定して、タンパク質濃度を決定した。次に試料を３７℃水浴中でインキュベートし、４時点、０（調製したて）、１日、２日、及び４日で試料採取した。異なる時点で採取した試料は、最後の試料採取が完了するまで－８０℃で保管した。２２℃で解凍した後、抗体凝集／断片の定量化、及びＤＡＲに関して、ＳＥＣ、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、及び逆相－ＭＳ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）で試料を分析した。４時点におけるＡＢ１８５－ＡＤＬ１４－Ｄ１及びＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２５の凝集率、濃度、及びＤＡＲ値（ＨＩＣ及びＲＰ－ＨＰＬＣ）を表１９に示す。

【1155】

【表68】

【1156】

実施例６
スプライシング調節薬ベースのＡＤＣ（即ち、本明細書に記載される例示的ＡＤＣ）で処理した細胞が、ナイーブＴ細胞をプライミングしてエフェクター細胞（即ち、ネオ抗原を標的化する能力を有するエフェクター細胞）に移行させるのに好適なネオ抗原を産生することができたかどうかを決定するため、以下の実験を実施した。

【1157】

６．１ ＲＮＡシーケンシング及びタンパク質リガンドーム実験
６．１．１ 概要
ＡＤＣ処理後のトランスクリプトームの変化を調査した。ＨＥＲ２を過剰発現する２つの細胞株、１つは改変非小細胞肺癌株（ＮＣＩ－Ｈ１５６８）及び１つはＨＥＲ２増幅乳癌株（ＨＣＣ１９５４）を、ロバストな異常ｍＲＮＡスプライシングを惹起することを意図した濃度（それぞれ、４ｎＭ及び１．３ｎＭ）のＡＤＣ（ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１）で処理した。処理後２４時間でＲＮＡｓｅｑ実験を実施した。これらの実験により、複数のｍＲＮＡ転写物がスプライシングパターンの変化を呈したことが実証された。

【1158】

次に、同定された転写物が翻訳され、ネオ抗原として腫瘍細胞ＭＨＣ１複合体上に提示されることができたかどうかを調査するため、ｍＲＮＡ転写物の翻訳には十分だが、広範な細胞傷害効果（分析用細胞材料の採取を損ない得るようなもの）には先行するであろう時点を選択した。次にＮＣＩ－Ｈ１５６８及びＨＣＣ１９５４細胞株を３ｎＭのＡＤＣで４８時間処理し、ＭＨＣ１結合ペプチドームをＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析した。ペプチドームデータを一次ペプチドサイズによって８～１４アミノ酸断片（ＭＨＣ１に結合するためのサイズ限界基準として定義される）にフィルタリングし、次に既知のヒトタンパク質に対してフィルタリングした。同定されたペプチドは、どの条件下か、及びどの細胞株にそれが検出されたかに関わらず、自己抗原として特徴付けた。残りのペプチド配列は、全てＲＮＡｓｅｑデータの３フレーム翻訳に対してマッピングした。ペプチド配列のストリンジェントな評価基準（任意の未処理試料に同定された任意のペプチド、カノニカルなオープンリーディングフレームにコードされなかった任意のペプチド、及びＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１による処理によってエクソンジャンクションが変化したｍＲＮＡのエクソンジャンクションにまたがる部分によってコードされなかった任意のペプチドの排除を含む）を用いて、４つのＭＨＣ１結合ネオペプチドが同定された。例示的ＲＮＡシーケンシング及びタンパク質リガンドーム実験の概略図については、図１４を参照されたい。

【1159】

６．１．２ 方法の詳細
６．１．２．１ ＡＤＣ処理細胞のＲＮＡシーケンシング
ＨＣＣ１９５４及びＨＥＲ２を過剰発現するＮＣＩ－Ｈ１５６８（ＡＴＣＣ）細胞を６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の個々のウェル当たり１×１０^５細胞でプレーティングした。細胞をリン酸緩衝生理食塩水又はそれぞれ１．３ｎＭ及び４ｎＭのＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１で２４時間処理した。ＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して細胞から全ＲＮＡを抽出し、クオリティ及び量を判定した（２１００ ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒでのＲＮＡ ６０００ Ｎａｎｏ ＬａｂＣｈｉｐキット、両方ともにＡｇｉｌｅｎｔ）。ポリＡ選択ＲＮＡ－Ｓｅｑライブラリを標準的なＩｌｌｕｍｉｎａプロトコルのとおり調製した。ｃＤＮＡライブラリのクオリティチェックを行い、２１００ ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒでＤＮＡ－１０００キット（両方ともにＡｇｉｌｅｎｔ）を使用して定量化した。ライブラリをプールし、ＨｉＳｅｑ２０００（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）でシーケンシングして１０１塩基ペアエンドリードを得た。

【1160】

未補正の配列リードをＳＴＡＲ ２．４．２ａによって２パスアラインメント３５を用いてヒト参照配列ｈｇ１９とアラインメントし、ＧＲＣｈ３７にマッピングされたＧＥＮＣＯＤＥアノテーションｖ２５に対してＫａｌｌｉｓｔｏ ０．４２．４を用いてアイソフォーム定量化を実施した（Ｂｒａｙ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３４（５）：５２５－７）。６ｎｔ（スプライス部位から－３ｎｔ及びスプライス部位の後ろ＋３）のエクソン－イントロン境界領域を定義して、それらの領域と完全にオーバーラップしたアラインメントをカウントすることにより、保持されたイントロンのカウントの推定を実施した。全ての未補正ジャンクションカウントを、エクソン－イントロン境界からのものを含め、コホート毎に全てのテクニカルレプリケートにわたってプールした。処理済み試料プールと未処理試料プールとの間の比率の差についての二項Ｚ検定を用いて差次的ジャンクション使用を判定した。比率は、パーセントスプライスイン（ＰＳＩ）の測定と同様に、スプライス部位を共有する全てのスプライスジャンクション（及びエクソン－イントロン境界）に基づき計算した。ガウス仮定を保つため、処理済み及び未処理の両方のコホートで総ジャンクションカウント（そのスプライス部位を共有する全てのジャンクションにわたる合計未補正カウント）が１０リード以上の共有スプライス部位のみを分析に考慮した。処理済みの（「異常な」）ジャンクションについて≦０．０５及び未処理の（「カノニカルな」）ジャンクションについて≦０．２０の偽発見率（ＦＤＲ）補正後ｑ値に対応するｚスコアを有意と見なした。

【1161】

スプライス部位を共有し、且つ処理済み試料で有意に上方制御される少なくとも１つのジャンクション又は未処理試料で有意に上方制御される少なくとも１つのジャンクションを有する２つ以上のスプライスジャンクションを、それぞれ異常な又はカノニカルなジャンクションと見なした。あるイベントを差次的スプライシングと見なすには、それに異常なジャンクション及びカノニカルなジャンクションの両方が存在する必要があった。イントロンリテンションイベントの場合、有意であるためには、エクソン－イントロン境界（５’及び３’スプライス部位）並びにこれらの２つを橋渡しするジャンクションの両方が必要であった。

【1162】

６．１．２．２ ＡＤＣ処理細胞のＭＨＣ１結合ペプチドーム
ＨＣＣ１９５４及びＨＥＲ２を過剰発現するＮＣＩ－Ｈ１５６８（ＡＴＣＣ）細胞を１５ｃｍ^２組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１×１０^８細胞でプレーティングした。細胞をリン酸緩衝生理食塩水又は３ｎＭのＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１で４８時間処理した。細胞をプレートから機械的に取り出し、Ｂａｓｓａｎｉ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（（２０１５）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １４（３）：６５８－７３）のとおりに処理した。簡潔に言えば、この手順には、細胞膜からのＭＨＣ－１タンパク質複合体の可溶化、免疫沈降によるＭＨＣ－１タンパク質のその結合ペプチドと併せた濃縮、結合ペプチドの選択的溶出及び精製並びにＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析によるペプチドの同定及び定量化が含まれた。免疫沈降には、そのハイブリドーマ細胞株ＨＢ－９５（商標）から精製されたモノクローナル抗体Ｗ６／３２を使用した。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ ＨＦ機器で質量分光分析を実施した。この研究で取得されたローファイルをＭａｘＱｕａｎｔソフトウェアスイート（バージョン１．５．７．１３）で処理することにより、ペプチド及びタンパク質の同定及び定量化を、ヒトタンパク質配列データベース（バージョン２２０１７）を用いて行った。このデータベースに加えて、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１処理したＨＣＣ１９５４及びＮＣＩ－Ｈ１５６８細胞のＲＮＡｓｅｑ実験に基づく予測転写物変異体を含めた。ＭａｘＱｕａｎｔは６フレーム翻訳を実施し、取得されたペプチド配列をＭＳ^２スペクトルとのマッチング用に統合する。データは更に、ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１処理済み試料にユニークなペプチド配列に関して、且つＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１処理によって調節されたｍＲＮＡスプライスジャンクションによってコードされるペプチドに関して手動でフィルタリングした（図１４）。ＲＮＡｓｅｑ及びＭＨＣ－１結合リガンドームデータの高ストリンジェンシーフィルタリングにより、４つのネオペプチドが同定された。これらは４つの遺伝子によってコードされた。本明細書においてネオ抗原１、ネオ抗原２、ネオ抗原３、及びネオ抗原４と称されるこれらの４つのネオペプチドのタンパク質配列を、免疫細胞プライミングの惹起に関する続く実験のため伸長した。伸長したタンパク質配列は、ネオペプチド配列それ自体を隣接アミノ酸配列に加えて両方取り込む。伸長したタンパク質配列は、樹状細胞によるタンパク質の取り込みをより良好に促進し、異なるＨＬＡアイソタイプのモデルにおける抗原提示及びＴ細胞プライミングを可能にする。

【1163】

６．２ Ｔ細胞プライミング実験
６．２．１ 概要
この実験は、正常なヒト二次リンパ器官（例えば、腫瘍流入領域リンパ節）で起こる相互作用のインビトロ再構成であった。この実験では、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単球を単離し、サイトカインカクテル中で培養することにより樹状細胞（ＤＣ）への分化を誘導した。成熟ＤＣへの分化後、その成熟ＤＣを伸長ネオペプチド配列と培養した。培養中、成熟ＤＣはペプチドを取り込み、それを断片にプロセシングし、ＣＤ８ Ｔ細胞のプライミングのためそれをＭＨＣ１上に提示する。次にＤＣを同じドナーからの更なるＰＢＭＣと混合し、サイトカインカクテル中で約２週間インキュベートしてＣＤ８ Ｔ細胞の活性化を刺激した。インキュベーション後、プライミングに用いるペプチドで再びコートしておいたＥＬＩＳｐｏｔプレートに細胞を移し、ＣＤ８ Ｔ細胞の再刺激をＩＦＮγの分泌によってモニタした。次にＥＬＩＳｐｏｔプレートを処理及び画像化し、ＩＦＮγスポットをカウントして活性ＣＤ８ Ｔ細胞の数を推定した。例示的Ｔ細胞プライミング実験の概略図については、図１５を参照されたい。

【1164】

６．２．２ 方法の詳細
６．２．２．１ ネオ抗原媒介性Ｔ細胞プライミング及び活性化ＥＬＩＳｐｏｔ
複数の供給業者（ＳｔｅｍＥｘｐｒｅｓｓ、ＨｅｍａＣａｒｅ、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）からバルク末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を購入し、それを使用してＷｏｅｌｆｌ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ（（２０１４）Ｎａｔ Ｐｒｏｔ．９（４）：９５０－６６；図１５）のとおり抗原反応性ＣＤ８＋ Ｔ細胞を作成した。簡潔に言えば、凍結ＰＢＭＣ（５×１０^７細胞）を解凍し、Ｔ－７５組織培養プラスチック（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において５％ヒトＡＢ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ１６４０中に２～３時間プレーティングした。非接着細胞を取り除いて廃棄し、２０ｎｇ／ｍＬ ＧＭ－ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－４を補足したＲＰＭＩ１６４０／５％ヒト血清中で接着細胞を５日間培養した。６日目、培地に２０ｎｇ／ｍＬ ＴＮＦ－αを更に補足した。７日目、成熟ＤＣを回収し、カウントし、ＭＨＣ１－ペプチドーム実験から同定されたネオペプチドを負荷した（図１６）。細胞を分離し、各ペプチドを１０μｇ／１０^６細胞／ｍＬの終濃度で負荷し、１日インキュベートした。８日目、ＤＣを２０μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣで３０分間処理し、十分に洗浄した。ＤＣの処理と同時に、１０^８個の対応ＰＢＭＣを解凍し、ＲＰＭＩ１６４０で洗浄した。次にＴ２５フラスコ内の３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を補足した１０ｍＬ ＲＰＭＩ１６４０／５％ヒトＡＢ血清中にＰＢＭＣをＤＣと１０：１の比で混合した。３日間の共培養後（１１日目）、更なる１０ｍＬの新鮮培地を加え、５ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した。更なる３日間の共培養後（１４日目）、５ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した更なる１０ｍＬの新鮮培地を加え、この共培養物をＴ－７５フラスコに移し替えた。１７日目、１０ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した更なる２０ｍＬの培地を加え、細胞をＴ－１７５フラスコに移した。２０日目、細胞を回収し、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを製造者の指示どおり（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）実施した。ウェルは、１ウェル当たり１０μｇ／ｍＬ終濃度のペプチド、１ウェル当たり２×１０^５細胞の細胞密度、デュプリケート播種、及び一晩インキュベーションを用いて予め負荷した。ＩＦＮγスポットを発色させて、ＡＩＤ ＥＬＩＳｐｏｔリーダーで製造者の指示どおり読み取った（図１７Ａ～図１７Ｄ）。

【1165】

抗原プライミング実験の例示的データを図１７Ａ～図１７Ｄに示す。図１５に概説するとおり、ドナー由来のＰＢＭＣロットをＤＣに分化させて、ネオペプチドでプライミングした。ＥＬＩＳｐｏｔデータの分析からは、健常ドナーＰＢＭＣにおいて、ネオペプチドを提示するＤＣでナイーブＴ細胞をプライミングすると、エフェクター（ＣＤ８）Ｔ細胞集団の抗原特異的拡大及び成熟が起こり得ることが示される。こうしたＴ細胞集団は、ＩＦＮγ分泌が抗原ペプチドの存在下のみであり、非プライミングペプチドの存在下ではないことからも明らかなとおり、抗原特異的再活性化を呈する。

【1166】

ＲＴ－ｑＰＣＲ
ＲＮｅａｓｙ ＭｉｎｉをＤＮａｓｅＩ処理（Ｑｉａｇｅｎ）と共に用いて細胞株からＲＮＡを精製し、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ逆転写酵素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を２０μＬ中で製造者の指示どおり使用して１～２μｇのＲＮＡを逆転写した。ＲＮＡライセートを単離し、ＴａｑＭａｎ遺伝子発現Ｃｅｌｌｓ－ｔｏ－ＣＴキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造者の指示どおり使用して逆転写した。ＧＡＰＤＨ ＲＮＡ ＶＩＣ－ＰＬ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と二重鎖化したネオ抗原ジャンクションを標的化する転写プローブと共にＴａｑＭａｎ遺伝子発現マスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して定量的ＰＣＲを実施し、ΔΔＣｔ法を用いて定量化した。

【1167】

実施例７
７．１ ＲＮＡシーケンシング及びタンパク質リガンドーム実験
７．１．１ 方法
実施例６（セクション６．１）に記載されるとおり、ＲＮＡシーケンシング及びタンパク質リガンドーム実験を実施した。例示的ＲＮＡシーケンシング及びＭＨＣ１リガンドーム実験の概略図については、図１４を参照されたい。

【1168】

７．１．２ 結果
ＲＮＡｓｅｑの高ストリンジェンシーフィルタリング及びＭＨＣ１結合リガンドームデータにより、２９個のネオペプチドが同定された（表２０）。免疫細胞プライミングの惹起に関する続く実験のため４個のネオペプチドを選択し、伸長させた。これらの４個の選択されたネオペプチドは、表２０に太字で示す。

【1169】

【表69】

【1170】

２９個のネオペプチドのタンパク質配列を伸長させた。伸長したタンパク質配列は、ネオペプチド配列それ自体を隣接アミノ酸配列に加えて両方取り込む。伸長したタンパク質配列は、樹状細胞によるタンパク質の取り込みをより良好に促進し、異なるＨＬＡアイソタイプのモデルにおける抗原提示及びＴ細胞プライミングを可能にする。２９個の伸長ネオペプチドのアミノ酸配列を表２１に示す。

【1171】

【表70】

【1172】

【表71】

【1173】

７．２ Ｔ細胞プライミング実験
７．２．１ 概要
例示的Ｔ細胞プライミング実験の概略図については、図１５を参照されたい。

【1174】

７．２．２ 材料
Ｔ細胞プライミングに使用した材料：
・ＲＰＭＩ １６４０培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４９１－０１）
・ペニシリン／ストレプトマイシン（１００×、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５１４０１２２）
・ヒト血清ＡＢ型（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ３６６７－１００ＭＬ）
・組換えヒトＩＬ－４（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００－０４）
・組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号３００－０３）
・組換えヒトＴＮＦ－α（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号３００－０１Ａ）
・ヒトＩＬ－７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００－０７）
・ヒトＩＬ－１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００－１５）
・ヒトＩＬ－２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００－２１）
・ペプチド（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ－９５％純度、ＤＭＳＯ中に溶解して１０μｇ／μＬ濃度の１０００×ストックにした）
・ヒトＩＦＮ－ｙ用ＥＬＩＳｐｏｔキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＥＬ２８５）

【1175】

７．２．３ 方法
７．２．３．１ ヒト単球由来樹状細胞の作成及び成熟並びにネオペプチドの負荷
凍結又は新鮮ＰＢＭＣを解凍し、予め温めたＲＰＭＩ培地で１回洗浄し、ベースラインＴＣＲシーケンシング用に非接着細胞のアリコートを確保した。ＰＢＭＣを１０ｍＬの樹状細胞（ＤＣ）培地（ＲＰＭＩ１６４０、５％ヒトＡＢ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補足）に５×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、合計５０００万個の細胞とした。細胞をＴ－７５組織培養プラスチックに移し、３７℃、５％ＣＯ_２で２～３時間インキュベートした。穏やかに振盪した後、非接着細胞を取り除いて廃棄し、予め温めたＤＣ培地で接着（単球濃縮）細胞を３回洗浄した。終濃度２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４を補足した１０ｍＬのＤＣ培地を接着細胞に加えた。接着細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で１００％湿度において５日間インキュベートした。６日目、組換えＴＮＦ－αを２０ｎｇ／ｍＬの終濃度となるように更に４８時間加えた。７日目、ＤＣを回収してカウントし、次にネオペプチド（各１０μｇ／１×１０^６細胞／ｍＬ）又は非ネオペプチド対照を負荷した。８日目、細胞を成熟ＤＣとして回収した。成熟ＤＣを２０μｇ／ｍＬの終濃度のマイトマイシンＣによって３７℃で３０分間処理し、続いて十分に洗浄した後、プライミングのためＴ細胞とコインキュベートした。

【1176】

７．２．３．２ 自己Ｔ細胞との共培養の開始
０日目、凍結又は新鮮を解凍し、予め温めた培地で１回洗浄した。次にＰＢＭＣを再懸濁し、ＤＣと１０：１の比（１０×１０^６：１×１０^６細胞）でＴ２５フラスコ内の３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を補足した１０ｍＬ ＲＰＭＩ１６４０／５％ヒトＡＢ血清中に混合した。３日間の共培養後（３日目）、更なる１０ｍＬの新鮮培地を加え、５ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した。更なる３日間の共培養後（６日目）、５ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した更なる１０ｍＬの新鮮培地を加え、共培養物をＴ－７５フラスコに移し替えた。９日目、１０ｎｇ／ｍＬの終濃度のＩＬ－７及びＩＬ－１５を補足した更なる２０ｍＬの培地を加え、細胞をＴ－１７５フラスコに移した。１１～１２日目、細胞を回収し、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを製造者の指示どおり（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）実施し、ＴＣＲシーケンシングを実施した（１×１０^６細胞）。１ウェル当たり１０μｇ／ｍＬ終濃度のペプチド、１ウェル当たり２×１０^５細胞の細胞密度、デュプリケート播種、及び一晩インキュベーションを用いてウェルに予め負荷した。ＩＦＮγスポットを発色させて、ＡＩＤ ＥＬＩＳｐｏｔリーダーで製造者の指示どおり読み取った。

【1177】

７．２．４ 結果
抗原プライミング実験の例示的データは表２２に提供する。

【1178】

【表72】

【1179】

図１５に概説されるとおり、ドナー由来のＰＢＭＣロットをＤＣに分化させて、ネオペプチドでプライミングした。ＥＬＩＳｐｏｔデータの分析からは、健常ドナーＰＢＭＣにおいて、ネオペプチドを提示するＤＣでナイーブＴ細胞をプライミングすると、エフェクター（ＣＤ８）Ｔ細胞集団の抗原特異的拡大及び成熟が起こり得ることが示される。こうしたＴ細胞集団は、ＩＦＮγ分泌が抗原ペプチドの存在下のみであり、非プライミングペプチドの存在下ではないことからも明らかなとおり、抗原特異的再活性化を呈する。データは、必ずしもネオペプチドに対する応答をＨＬＡに基づいて予測できるわけではないことも示唆している。

【1180】

実施例８
８．１ ネオペプチドの同定
８．１．１ 概要
スプライシング調節によって生じるネオペプチドを同定するため、カノニカルな及びスプライシング調節されたプロテオームからの８～１１アミノ酸長の、ＭＨＣクラスＩに結合すると予測されるペプチドを、標準的なターゲット－デコイ手法を用いてタンデム質量スペクトルに対して個別にマッチングさせた。初めに、選択的にスプライシングされたｍＲＮＡ転写物を翻訳し、参照プロテオームと比較した。次に、参照プロテオームと一致しなかったスペクトルについて、マッチする新規ペプチドを検索した。スプライシング調節によって生じる新規ペプチドを同定するための例示的プロセスの概略図については、図１４を参照されたい。

【1181】

８．１．２ 方法
８．１．２．１ 潜在的ネオペプチドのデータベースの創製
潜在的ネオペプチドのデータベースを作成するため、参照プロテオームには見られない、ジャンクションにまたがる又はイントロンを含有するペプチドを同定した（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０（５）：Ｍ１１０．００６５３６を参照されたい）。参照プロテオームに由来するペプチドは、手作業でレビューしたタンパク質配列から選択し、ダウンロードした。加えて、正常組織に見られるジャンクションに関してこれらのタンパク質をフィルタリングした。代替的手法として、スプライシングイベントから完全なタンパク質を翻訳し、ジャンクションにまたがる又はイントロンを含有するペプチドを検索し、次にＢＬＡＳＴによって参照プロテオームとマッチングし得る。

【1182】

不必要な統計的検定を回避するため、ＭＨＣに結合する可能性が高いと予測されるペプチドのみを使用した。タンパク質配列（参照プロテオーム及びエクソンスキッピング又はイントロンリテンションを受けた転写物の予測される翻訳の両方からのもの）について、ＮｅｔＭＨＣＰａｎ及び／又はＭＨＣｎｕｇｇｅｔｓソフトウェアを使用してＭＨＣ１アレルへの高親和性結合を評価した。両方のソフトウェアパッケージとも、（ｉ）未補正の親和性結合予測強度（弱い結合について５００ｎＭ閾値）によるか、又は（ｉｉ）多数のランダムな現実のペプチドを選択し、それらのペプチドの予測結合強度の分布を同定することにより、強い又は弱い結合のヒットを選択した。次に任意の新規ペプチドの予測結合強度をこの分布に対してマッチングさせた。後者の方法（方法（ｉｉ））によって測定される強い及び弱い結合の閾値は、ランダムな現実のペプチドのそれぞれ上位０．５％又は上位２．０％の範囲内にある予測結合強度であった（Ｎｉｅｌｓｅｎ ａｎｄ Ａｎｄｒｅａｔｔａ（２０１６）Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ．８（１）：３３）。現在、ＭＨＣ予測は、８～１１アミノ酸長の、免疫エピトープデータベース（ＩＥＤＢ）に含まれるペプチド配列に限られている。

【1183】

８．１．２．２ ＲＮＡｓｅｑ及びＲｉｂｏＳｅｑによるスプライシング調節由来転写物の同定
幾つかのネオペプチドは大型のペプチドドメイン（例えば、ＴＵＢＡ１Ｃ）に由来し、一方、翻訳された領域の残りの部分からのペプチド断片は、検出されずにいるリスクがあり得る。これは、未検出領域の分解の亢進、ＭＨＣ１結合親和性、又は質量分析法（ＭＳ）による検出に付随する技術的課題のいずれかの帰結であり得る。概して、ＲＮＡｓｅｑ分析は予測ネオペプチドの数を過大に見積もることになり（選択的にスプライシングされた転写物が全て翻訳されるわけではないため）、一方、ＭＨＣ１－リガンドームは予測ネオペプチドの数を過小に見積もることになる。

【1184】

ネオペプチドのリストを構築するため、タンパク質への翻訳マーカーとして、結合したリボソームを有する利用可能なスプライシング調節由来変異体スプライスジャンクションを同定した（Ａｎｄｒｅｅｖ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４５（２）：５１３－２６）。ＲｉｂｏＳｅｑ又はリボソームプロファイリングにより、転写物に結合したリボソームの存在並びに特異的エクソンジャンクションドメインからも明らかなとおり、活性な翻訳を起こしているｍＲＮＡ配列（及び変異体ドメイン）の検出が可能となった。

【1185】

実施例９
９．１ 例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビトロ分析
９．１．１ 方法
ＨＣＣ１９５４、ＮＣＩ－Ｎ８７、又はＭＣＦ７細胞（ＡＴＣＣ）を９０μＬ／ウェルの２．５×１０^３細胞／ウェルでフェノールレッド不含ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ）又はＥＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋インスリン（０．０１ｍｇ／ｍＬ）（ＭＣＦ７について）にプレーティングした。細胞（各条件につきｎ＝３ウェル）を３倍希釈用量反応でコンジュゲートによって処理した。２４時間後、２５μＬ／ｍＬのＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含有する５０μＬのＣＬ緩衝液（ＩｇｅＰａｌ ＣＡ－６３０、５Ｍ ＮａＣｌ、１ＭトリスＨＣｌ １Ｍ 水中ｐＨ７．４）で細胞を溶解させて、揺動機上において室温で４５分間インキュベートした。得られた混合物（１μＬ）を使用して、製造者の推奨に従い以下のＴａｑｍａｎプライマーによるＴａｑｍａｎ Ｆａｓｔ Ｖｉｒｕｓ １－Ｓｔｅｐマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）逆転写ＰＣＲ反応でスプライシング調節を判定した：ＳＬＣ２５Ａ１９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈｓ００２２２２６５＿ｍ１）；ＦＢＸＷ５（ＩＤＴ、フォワードプライマー：ＣＡＣＡＣＣＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＡ（配列番号３７）、リバースプライマー：ＣＧＡＴＧＡＴＧＴＧＴＣＣＧＴＧＴＡＴＧＴ（配列番号３８）、プローブ：ＡＴＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＡＣ（配列番号３９）、色素：ＦＡＭ、消光剤：ＺＥＮ／Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ ＦＱ）；ＴＡＯＫ１（ＩＤＴ、フォワードプライマー：ＣＴＧＣＴＴＣＧＧＡＴＴＴＡＣＴＡＧＡＡＧＡＧＡＴＡ（配列番号４０）、リバースプライマー：ＧＣＧＴＴＣＣＣＡＣＡＡＡＧＧＡＡＴＴＧ（配列番号４１）、プローブ：ＴＧＣＴＧＡＣＴＴＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＣＡＴ（配列番号４２）、色素：ＦＡＭ、消光剤：ＺＥＮ／Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ ＦＱ）；ＲＰＬＰ０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｈｓ９９９９９９０２＿ｍ１）。

【1186】

９．２ 例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビボ有効性及び薬力学（ＰＤ）
９．２．１ 方法－ＮＣＩ－Ｎ８７異種移植モデルにおけるインビボ有効性
ＣＢ１７－ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、マサチューセッツ州ケンブリッジ市の動物研究に関する連邦、州、市、及びＡＡＡＬＡＣ認定指針に基づき飼育した。ＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－５８２２）から購入した。腫瘍実験には、継代１４代目の細胞を使用した。細胞が最後に検査されたのは、マウス病原体に関しては２０１６年９月、及びマイコプラズマに関しては２０１８年１２月であった。

【1187】

０．１ｍＬ当たり５００万個の細胞の単一細胞懸濁液（５０％ＡＴＣＣ変法ＲＰＭＩ－１６４０培地、カタログ番号Ａ１０４９１－０１（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；及び５０％Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｍａｔｒｉｇｅｌ、カタログ番号３５６２５４（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））を２５Ｇａ針のシリンジで右側腹部に皮下注射した。平均腫瘍容積が１８０～１８３ｍｍ^３になった時点で、０日目、有効性については各群ｎ＝８匹及び薬力学（ＰＤ）については各群ｎ＝４匹のマウスを無作為化した。１日目、試験物質を投与し（１０ｍｇ／ｋｇ）、有効性については５ｍＬ／ｋｇの容積で静脈内に７日毎に２サイクルにわたり；ＰＤ判定には、単回の治療コースを用いた。ＰＤコホートの動物は、試験物質に応じて、単回用量の投与後２４、４８、７２、及び／又は９６時間の時点で安楽死させた。研究の終了時（６１日目）まで、腫瘍容積及び体重を週１回又は２回測定した。腫瘍容積は式、長さ×幅^２／２を用いて計算した。研究の間、エンドポイント（任意の方向で腫瘍サイズ≧２０ｍｍ^３又は腫瘍容積≧出発時の体重×１００）に達したマウス、又は腫瘍潰瘍若しくは眼感染症を有したマウスは取り除いた。

【1188】

化合物は生物学的安全キャビネット内で製剤化した。試験物質媒体はリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４（カタログ番号Ａ１００１０－０４９（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））であった。群は表２３に示すとおりであった。

【1189】

抗腫瘍活性は以下のとおり計算した：
％Ｔ／Ｃ式＝治療／対照×１００
％ＴＧＩ式＝（媒体平均_Ｘ日目－治療平均_Ｘ日目）／媒体平均_Ｘ日目×１００、式中、Ｘ日目は２２日目である。

【1190】

９．２．２ 方法－インビボＰＤ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）
マイクロアレイキット用のＭａｇＭＡＸ－９６及びＭａｇＭＡＸ Ｅｘｐｒｅｓｓ－９６ディープウェル磁性粒子プロセッサ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して腫瘍試料からＲＮＡを精製した。腫瘍試料（サイズ５０～１００ｍｇ）をＲＮＡｌａｔｅｒ緩衝液中に収集し、ＲＮＡ単離時まで－８０℃に保った。腫瘍が入ったチューブに２～３個のセラミックビーズ及び１ｍＬのＴｒｉ－ｒｅａｇｅｎｔを加え、続いてＯｍｎｉ Ｂｅａｄ Ｒｕｐｔｏｒ ２４機器（Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）で破壊することにより、組織ホモジナイゼーションを実施した。製造者の指示どおりＲＮＡ単離を行った。

【1191】

ＲＮＡライセートを単離し、ＴａｑＭａｎ Ｆａｓｔ Ｖｉｒｕｓ １－Ｓｔｅｐマスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造者の指示どおり使用して逆転写した。

【1192】

ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ ＶＩＣ－ＰＬ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と二重鎖化したＦＢＸＷ５又はＴＡＯＫ１ジャンクションを標的化する転写プローブと共にＴａｑＭａｎ遺伝子発現マスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してｃＤＮＡからの定量的ＰＣＲを実施し、ΔΔＣｔ法を用いて定量化した。

【1193】

【表73】

【1194】

９．３ 結果
インビトロ分析：
異なる系統の２つのＨＥＲ２陽性細胞株（ＨＣＣ１９５４乳癌及びＮ８７胃癌）及びＨＥＲ２陰性細胞株（ＭＣＦ７）において例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの抗増殖活性を測定した。成長阻害効率（ＧＩ５０効力）並びに反応の深さ（対照と比較したＲ ｍｉｎ）を測定した。指定の細胞株に対するＡＤＣ処理後に、代表的なハウスキーピング遺伝子ＳＬＣ２５Ａ１９における選択的スプライシングをｑＰＣＲにより測定した。ＧＩ５０及びスプライシング反応の深さを測定した。インビトロ分析の結果を表２５に示す。

【1195】

一般に、試験した抗ＨＥＲ２ ＡＤＣは抗原陽性細胞株において有利な効力を示し、抗原陰性細胞株において最小の生存能力及びスプライシング反応を示した。ＡＤＣは、細胞殺傷における反応の深さ、及びＳＬＣ２５Ａ１９の選択的ジャンクションスプライシングの完全性の点で異なった。ＡＤＣは、抗原陽性細胞株の各々に対して４つのカテゴリーの１つに分けられた：１）高い反応の深さ／致死率及び高いスプライシング反応；２）高い反応の深さ／致死率及び低いスプライシング反応；３）低い反応の深さ／致死率及び高いスプライシング反応；又は４）低い細胞致死率及び低いスプライシング反応。幾つかのＡＤＣは、Ｎ８７胃癌細胞株に対して有利なカテゴリー３挙動を示した。ＡＢ１８５－ＡＤＬ１３－Ｄ４は一貫して致死性であり、ＨＣＣ１９５４細胞及びＮ８７細胞の両方で強力なスプライシング反応深さを示した。この一貫した抗原特異的致死は、概してＡＤＣに望ましく、水溶性リンカーであれば、良好なコンジュゲート仕様で更に高い薬物負荷量さえも可能になり得る。リンカーをＡＤＬ２３（ＥＶＣトリペプチド）に取り換えると、意外にも両方の細胞株でプロファイルが変化した。ＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ１２もＨＣＣ１９５４に対して極めて高い致死性であるが、幾つもの固形及びヘム腫瘍株でペイロードの細胞効力は一貫して低い点でユニークであった。Ｄ１２は、この系列中で外向きフラックス比が低い唯一のペイロードでもある。従って、このペイロードを放出するＡＤＣは、標的抗原を発現する多剤耐性癌に対して活性であり得る。

【1196】

ＨＣＣ１９５４乳癌細胞でスプライシング効力（ＩＣ５０ ｑＰＣＲ）を細胞効力（ＧＩ５０ ＣＴＧ）と比較したとき、グルクロニドリンカー及びＤ１２ペイロードが有利な特性を示した。Ｃ６／Ｃ７カルバメートスイッチ（Ｄ８）ペイロード及び二塩基性ペイロード（Ｄ５）は、細胞効力を示したが、最も効率的な選択的スプライシングは実証しなかった。ジペプチドからＤ４又はＤ１ペイロードを有するトリペプチドリンカーに切り換えると、選択的スプライシング効率が低下したが、細胞活性は高いままであった。図１８を参照されたい（細胞致死率に応じてサイズを変え、選択的スプライシング反応の深さに応じて網掛けを付す）。

【1197】

Ｎ８７胃癌細胞でスプライシング効力（ＩＣ５０ ｑＰＣＲ）を細胞効力（ＧＩ５０ ＣＴＧ）と比較したとき、ＨＣＣ１９５４と同じように、グルクロニドリンカー（Ｄ４を有する）及び１２ペイロードが有利な特性を示した。総じて、全てのＡＤＣがＨＥＲ２陰性細胞株ＭＣＦ７に対しては最小限のスプライシング及び効力を示した。Ｄ１２ペイロードの細胞効力は比較的低いにも関わらず、このペイロードを有する抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの活性は高く、ペイロードは低い外向きフラックス比を示した。これらの特性は、多剤耐性癌セッティングにおいて潜在的により良好な有効性につながり得る。図１９を参照されたい（細胞致死率に応じてサイズを変え、選択的スプライシング反応の深さに応じて網掛けを付す）。

【1198】

更なる抗ＨＥＲ２ ＡＤＣでインビトロ分析を実施した。抗ＨＥＲ２ ＡＤＣと対応するペイロードとの間の比較を表２６に示す。抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの効力及び致死率を対応するペイロードの安定性及び透過性と比較したとき（図２０）、ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ１５が、効力、致死率、化学安定性、及び異化産物透過性の（例えば、推定バイスタンダー殺傷に）有利なバランスを実証した。以下に記載するとおり、ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ１５は、インビボでも活性であり、ＮＣＩ－Ｎ８７異種移植モデルにおいて強力な抗腫瘍活性を実証した。

【1199】

インビボ有効性：
ＮＣＩ－Ｎ８７細胞をＳＣＩＤマウスに接種して例示的抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの抗腫瘍活性を評価することにより、ヒトＨＥＲ２を発現するＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞株及びその異種移植モデルを作成した。トラスツズマブ及びＴＤＭ１を対照薬として使用した。

【1200】

ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌異種移植モデルにおける静脈内トラスツズマブ、ＴＤＭ１、及び４つのＨＥＲ２ ＡＤＣの抗腫瘍効果を図２１及び図２３に示す。体重効果を図２２及び図２３に示す。試験物質又は媒体はＱ７Ｄで２サイクルにわたって静脈内（ＩＶ）投与した。データは平均値±ＳＥＭ（腫瘍容積、ｍｍ^３）又は±ＳＥＭ（体重、％）（Ｎ＝８）を表す。^＊一元配置ＡＮＯＶＡ検定を用いた２２日目における媒体群との比較でｐ＜０．０００１。

【1201】

ＮＣＩ－Ｎ８７におけるインビトロ及びインビボ有効性について表にしたデータを表２４に提供する。表にしたデータは、パーセント（％）腫瘍増殖抑制率（腫瘍容積のＴＧＩ）又は％Ｔ／Ｃ（腫瘍容積）（Ｎ＝８）を表す。ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２は、インビトロでの致死率が僅かであるにも関わらず、インビボでは意外にも活性であり、例えばＡＢ１８５－ＡＤＬ１４－Ｄ１と比較したときインビボ有効性の向上を実証した。

【1202】

【表74】

【1203】

このモデルでは、ＨＥＲ２陽性乳癌に対するトラスツズマブ、抗ヒトＨＥＲ２抗体及び標準治療療法は抗腫瘍活性を実証しなかった。しかしながら、トラスツズマブ＋共有結合的に連結されたＤＭ１（細胞傷害剤）を含む第二選択治療であるＴＤＭ１は、トラスツズマブ単独（ＴＧＩ４％）と比べて有意に良好な抗腫瘍活性（ＴＧＩ７１％）を示した。試験した４つのＡＤＣの中でも、ＡＢＬ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２、ＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ１５、及びＡＢ１８５－ＡＤＬ１－Ｄ４は強力な抗腫瘍活性を示し、腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）はそれぞれ、７３％、６７％、及び６８％であった。全ての奏効群の腫瘍が、最終的には再び成長し始めた。いずれの群においても完全奏効は観察されず、以下の群：ＴＤＭ１、ＡＢＬ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ２、及びＡＢ１８５－ＡＤＬ５－Ｄ１５の各々において８匹中１匹の動物が部分奏効を示した。全ての試薬及び試験物質はマウスによって良好に忍容され、観察された体重減少は最小限であった。総じて、大幅な体重減少のないＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍モデルにおけるＴＤＭ１との比較で、試験した４つの抗ＨＥＲ２ ＡＤＣの３つが同程度に強力な抗腫瘍活性を実証した。

【1204】

インビボＰＤ：
ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌異種移植モデルにおける静脈内トラスツズマブ、ＴＤＭ１、及び４つの抗ＨＥＲ２ ＡＤＣによるｍＲＮＡジャンクションのＰＤ調節を図２４Ａ～図２４Ｄに示す。ＦＢＸＷ５（成熟ｍＲＮＡ転写物）及びＴＡＯＫ１（ネオジャンクション転写物）のＲＴ－ｑＰＣＲをモニタした。試験物質又は媒体は１０ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）投与した。動物（各群Ｎ＝４）は、４８時間（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は指示される時間（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）のいずれかの時点で回収した。ＲＮＡ抽出及びＲＴ－ｑＰＣＲのため腫瘍を摘出した。^＊一元配置ＡＮＯＶＡ（図２４Ａ及び図２４Ｂ）又は二元配置ＡＮＯＶＡ（図２４Ｃ及び図２４Ｄ）を用いた媒体との比較でｐ＜０．０５。

【1205】

トラスツズマブもＴＤＭ１も、ＦＢＸＷ５又はＴＡＯＫ１のいずれの観察されるスプライシングについても有意な変化を呈しなかった。ＡＢ１８５コンジュゲートＡＤＬ５－Ｄ２／ＡＤＬ１－Ｄ４／ＡＤＬ５－Ｄ１５は、全てＦＢＸＷ５の有意な枯渇を呈し、及びＡＢ１８５コンジュゲートＡＤＬ５－Ｄ２／ＡＤＬ１－Ｄ４はＴＡＯＫ１の有意な増加を呈した。ＡＤＬ５－Ｄ１５はＴＡＯＫ１の増加を示したが、統計的有意性に達しなかった。ＡＤＬ１４－Ｄ１はいずれのｍＲＮＡ転写物の存在量についても統計的に有意な変化を呈しなかった。

【1206】

【表75】

【1207】

【表76】

【1208】

【表77】

【1209】

【表78】

【1210】

実施例１０
１０．１ バイオインフォマティクス－ドライブされる適応疾患／標的選択
正常組織と比較して腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ）が低い腫瘍において高度に発現する標的抗原を同定するため、バイオインフォマティクス予測分析を実施した。本例には、１）どのように各フィルタを定義したか；及び２）どのように抗原／適応疾患テーブルを用いて好適な標的／腫瘍対を同定するかを説明する。例示的標的適応疾患分析の概略図については、図２５を参照されたい。

【1211】

１０．１．１ 概要
バイオインフォマティクス予測分析を用いて標的抗原及び適応疾患を同定した。腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ）、ＡＤＣ送達のための標的抗原の発現、及び腫瘍免疫浸潤に関して、ＴＣＧＡからのデータを処理した。ＴＭＢ及び浸潤の既発表のカットオフを用いて免疫チェックポイント阻害薬（ＩＣＩ）に対する予測される奏効例と非奏効例を層別化する分析を実施して、適応疾患及び対応する抗原を同定した。表面抗原発現を更にフィルタリングして、抗原発現が（ＧＴＥｘ組織発現データベースから評価したとき）任意の正常組織の少なくとも２倍高い確率的集団を判定した。１つ以上の標的抗原を有する患者の割合が好適な適応疾患（又はＴＣＧＡ系統のサブセット）を突然変異及び免疫メトリックに関して更に分析した。腫瘍突然変異負荷が総計１０突然変異／メガベースを下回り、且つＴ細胞浸潤スコアが０．５を上回る抗原陽性患者の割合を判定した。推定約５０％の患者がこれらの判定基準を満たす適応疾患を表２７に挙げる。これらのコホート（但しこれらのコホートに限定されない）の患者は、スプライシング調節薬ＡＤＣ（例えば、本明細書に記載されるスプライシング調節薬ＡＤＣ）による治療が奏効し得る。

【1212】

１０．１．２ 方法
Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ抗原テーブルアノテーションについての適応疾患予測：
Ａｎｔｉｇｅｎ：抗原遺伝子名、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ文献レビュー（Ｍｏｅｋ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２８：３０８３－３０９１を参照されたい）から良好なＡＤＣ標的である可能性が高い５９個の遺伝子のみをテーブルに含めた（初期フルアナリシスは、全てのインシリコサーフェスオーム遺伝子を含んだ）
Ｃｏｈｏｒｔ：ＴＣＧＡコホート名
ＳＵＢＴＹＰＥ：ＴＣＧＡ腫瘍サブタイプ情報
Ｃａｓｅｓ＿Ｔｏｔａｌ：合計症例数
Ｃａｓｅｓ．ｂｙ．ｓｕｂｔｙｐｅ：サブタイプ別症例数
ＬＴＰＭ＿ｍｅｄｉａｎ：Ｌｏｇ２（ＴＰＭ＋１）による発現中央値
ＬＴＰＭ＿ｍｅｄｉａｎ＿ＬｏｗＴＭＢ：低ＴＭＢ（＜３５０）症例についてのＬｏｇ２（ＴＰＭ＋１）による発現中央値
ＬＴＭＢ＿Ｍｅｄｉａｎ：Ｌｏｇ１０（ＴＭＢ）の中央値
ＬＴＭＢ＿ＭＡＤ：Ｌｏｇ１０（ＴＭＢ）のＭＡＤ値による標準偏差のロバストな測定値
Ｉｎｆｉｌ＿Ｍｅｄｉａｎ：ＰＬｏＳ Ｏｎｅ Ｔ細胞シグネチャに基づく浸潤スコアの中央値
Ｉｎｆｉｌ＿ＭＡＤ：ＰＬｏＳ Ｏｎｅ Ｔ細胞シグネチャに基づく浸潤スコアのＭＡＤ値による標準偏差のロバストな測定値
Ｃｏｒ．ｗｉｔｈ．Ｐｕｒｉｔｙ：腫瘍純度との発現相関
ＧＴＥＸ＿Ｔｉｓｓｕｅ：発現中央値が最も高いＧＴＥｘ組織名
ＧＴＥＸ＿ＬＴＰＭ＿Ｍｅｄｉａｎ：発現中央値が最も高いＧＴＥｘ組織における抗原の発現中央値
Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ^＊：サーフェスオームフィルタ：発現＞中央値が最も高いＧＴＥｘ正常組織の２倍を適用した後の患者集団
ＬｏｗＴＭＢ．Ｆｉｌｔｅｒ：低ＴＭＢフィルタ：＜エクソーム－ｓｅｑ当たり３５０（メガベース２当たり１０）を適用した後の患者集団
ＬｏｗＴＭＢ．Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ：サーフェスオーム及びｔｍｂの両方のフィルタを適用した後の患者集団
ＨｉＩｎｆｉｌ．ＬｏｗＴＭＢ．Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ：３フィルタ：サーフェスオーム発現フィルタ、低ｔｍｂフィルタ及び高浸潤フィルタを適用した後の患者集団
Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ．Ｐｅｒｃ：サーフェスオームフィルタ：発現＞中央値が最も高いＧＴＥｘ正常組織の２倍を適用した後の集団のパーセンテージ
ＬｏｗＴＭＢ．Ｆｉｌｔｅｒ．Ｐｅｒｃ：低ＴＭＢフィルタ：＜３５０を適用した後の集団のパーセンテージ
ＬｏｗＴＭＢ．Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ．Ｐｅｒｃ：サーフェスオーム及びｔｍｂの両方のフィルタを適用した後の集団のパーセンテージ
ＨｉＩｎｆｉｌ．ＬｏｗＴＭＢ．Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ．Ｐｅｒｃ：３フィルタ：サーフェスオーム発現フィルタ、低ｔｍｂフィルタ、及び高浸潤フィルタを適用した後の集団のパーセンテージ

【1213】

患者集団の確率的推定値：
コンパイルしたリソース：
１．汎癌免疫ランドスケープペーパー（Ｒｅａｄｙ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３７：９９２－１０００）
２．ＯｍｉｃｓｏｆｔからのＴＣＧＡ ＲＮＡ－ｓｅｑ／エクソーム－ｓｅｑデータバンドル
３．免疫遺伝子シグネチャ（Ｔｈｏｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４８，８１２－８３０）
４．ＧＴＥｘデータｖ７
腫瘍突然変異負荷は、Ｏｍｉｃｓｏｆｔデータを用いてＴＣＧＡエクソーム－ｓｅｑ突然変異コールから計算した。ＰＬｏＳ Ｏｎｅ Ｔ細胞シグネチャ（ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ２）を使用して試料の免疫浸潤を定量化した。ＴＣＧＡ ＲＮＡ－ｓｅｑデータからｌｏｇ２（ＴＰＭ＋１）値を使用してｚスコアを求めた。
Ｓｕｒｆａｃｅｏｍｅ．Ｆｉｌｔｅｒ：中央値が最も高いＧＴＥｘ正常組織と比較して２倍より高い発現（ｌｏｇ２（ＴＰＭ＋１））値を個々の患者が有する確率を以下のとおり計算した：
１．全てのＧＴＥｘ正常組織の中でこの遺伝子について中央値が最も高いＧＴＥｘ正常組織を同定し、それをＴ_ｈと仮定する
２．組織別のデータ分布を維持する合成マイノリティオーバーサンプリング法（ＳＭＯＴＥ（Ｓｉｅｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，１２（７）：ｅ０１７９７２６）を用いて各組織につき１０００患者でこの遺伝子のＧＴＥｘデータを合成する
３．この患者がその組織についてのＧＴＥｘ合成データＴ_ｈの２倍を超える回数（ｎ回）をカウントする。この患者がＧＴＥｘ正常の２倍を超える確率はｎ／１０００である
４．この確率を全ての患者について計算する
５．個々の確率の和が、ＧＴＥｘ正常の２倍を超えるコホート集団の確率的推定値である
６．他のフィルタを併せて適用すると、個々の確率の和は、それらの他のフィルタを通過する患者についてのもののみとなる

【1214】

１０．１．３ 例
上記に記載した例示的バイオインフォマティクス予測分析を用いて同定された標的抗原及び適応疾患を表２７に示す。

【1215】

【表79】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図24D】

【図25】

【図26】

【配列表】

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