特許 7393348 （１－（３－フルオロ－２（トリフルオロメチル）イソニコチニル）ピぺリジン―４－オン）を作製するためのプロセス及び中間体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-11-28

(45)【発行日】2023-12-06

(54)【発明の名称】（１－（３－フルオロ－２（トリフルオロメチル）イソニコチニル）ピぺリジン―４－オン）を作製するためのプロセス及び中間体

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/06 20060101AFI20231129BHJP

   C07D 487/04 20060101ALI20231129BHJP

   A61K 31/519 20060101ALN20231129BHJP

   A61P 29/00 20060101ALN20231129BHJP

   A61P 35/00 20060101ALN20231129BHJP

   A61P 37/02 20060101ALN20231129BHJP

   A61P 43/00 20060101ALN20231129BHJP

【ＦＩ】

C07D401/06 CSP

C07D487/04 140

A61K31/519

A61P29/00

A61P35/00

A61P37/02

A61P43/00 111

【請求項の数】 27

(21)【出願番号】P 2020562089

(86)(22)【出願日】2019-01-29

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-05-13

(86)【国際出願番号】 US2019015582

(87)【国際公開番号】W WO2019152374

(87)【国際公開日】2019-08-08

【審査請求日】2022-01-28

(31)【優先権主張番号】62/623,664

(32)【優先日】2018-01-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】505193450

【氏名又は名称】インサイト・コーポレイション

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＣＹＴＥ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】デンジン・ワン

(72)【発明者】

【氏名】ピンリー・リウ

(72)【発明者】

【氏名】ヨンジョン・ウー

(72)【発明者】

【氏名】ジアチェン・チョウ

【審査官】土橋 敬介

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１３－５２２２１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１２－１０２１４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００８－１７９６２１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＣＡＳＲＥＡＣＴ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式ＩＩＩの化合物：

【化1】

またはその塩を、４－ヒドロキシピペリジンと反応させて、式ＩＶの化合物：

【化2】

またはその塩を形成することを含む、プロセス。

【請求項2】

前記４－ヒドロキシピペリジンとの反応が、塩基の存在下において遂行される、請求項１に記載のプロセス。

【請求項3】

前記塩基が第三級アミンである、請求項２に記載のプロセス。

【請求項4】

前記第三級アミンがＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである、請求項３に記載のプロセス。

【請求項5】

前記４－ヒドロキシピペリジンとの反応が、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される、請求項１～４のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項6】

前記４－ヒドロキシピペリジンとの反応が２５℃～３５℃の温度で遂行される、請求項１～５のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項7】

前記式ＩＩＩの化合物が、式ＩＩの化合物：

【化3】

またはその塩を、塩化オキサリルと反応させて、前記式ＩＩＩの化合物またはその塩を形成することを含むプロセスによって形成される、請求項１～６のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項8】

前記塩化オキサリルとの前記式ＩＩの化合物の反応が、触媒量のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下において遂行される、請求項７に記載のプロセス。

【請求項9】

前記塩化オキサリルとの前記式ＩＩの化合物の反応が、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される、請求項７または８のプロセス。

【請求項10】

前記塩化オキサリルとの前記式ＩＩの化合物の反応が、１５℃～２５℃の温度で遂行される、請求項７～９のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項11】

前記式ＩＶの化合物またはその塩を酸化条件下で反応させて、式Ｖの化合物：

【化4】

またはその塩を形成することをさらに含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項12】

前記酸化条件が第１の酸化剤を含む、請求項１１に記載のプロセス。

【請求項13】

前記酸化条件が第２の酸化剤を含む、請求項１２に記載のプロセス。

【請求項14】

前記第１の酸化剤がトリクロロイソシアヌル酸（ＴＣＩＣ）である、請求項１２または１３に記載のプロセス。

【請求項15】

前記ＴＣＩＣが、前記式ＩＶの化合物に関して、０．５～０．７モル当量の間で存在する、請求項１４に記載のプロセス。

【請求項16】

前記第２の酸化剤が２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）である、請求項１３～１５のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項17】

前記ＴＥＭＰＯが、前記式ＩＶの化合物に関して、０．０１５～０．０２５モル当量の間で存在する、請求項１６に記載のプロセス。

【請求項18】

前記酸化条件下での前記式ＩＶの化合物の反応が、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム及び臭化ナトリウムのうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項１１～１７のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項19】

前記酸化条件下での前記式ＩＶの化合物の反応が、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素をさらに含む、請求項１１～１８のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項20】

前記溶媒構成要素が水をさらに含む、請求項１９に記載のプロセス。

【請求項21】

前記酸化条件が、トリクロロイソシアヌル酸を、前記式ＩＶの化合物及びＴＥＭＰＯを含む溶液へ０℃～５℃の温度で添加することを含む、請求項１１に記載のプロセス。

【請求項22】

前記トリクロロイソシアヌル酸の添加が、少なくとも２つの小分けでトリクロロイソシアヌル酸を添加することを含む、請求項２１に記載のプロセス。

【請求項23】

前記溶液が、前記添加後に０℃～５℃の温度で３０分間撹拌される、請求項２１または２２に記載のプロセス。

【請求項24】

前記撹拌後に、前記溶液を２０℃～２５℃の温度へ１時間～２時間の時間で暖めることをさらに含む、請求項２３に記載のプロセス。

【請求項25】

還元剤の存在下において、前記式Ｖの化合物を、式ＶＩの化合物：

【化5】

またはその塩と反応させて、式Ｉの化合物：

【化6】

またはその塩を形成することをさらに含み、
式中、Ｚ^１はＨまたは保護基である、
請求項１１～２４のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項26】

Ｚ^１がＨである、請求項２５に記載のプロセス。

【請求項27】

前記還元剤が、水素化シアノホウ素ナトリウムまたは水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである、請求項２５または２６に記載のプロセス。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、炎症性障害、自己免疫障害、がん及び他の疾患を含む、Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）の活性に関連する疾患の治療に有用な、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルを作製するためのプロセス及び中間体に関する。

【背景技術】

【0002】

タンパク質キナーゼ（ＰＫ）は、とりわけ、細胞増殖、生存、分化、器官形成、形態形成、新生血管形成、組織修復及び再生を含む多様な生物学的プロセスを調節する。タンパク質キナーゼは、がんを含む多数のヒト疾患においても特定化した役割を果たす。サイトカイン、低分子量ポリペプチドまたは糖タンパク質は、敗血症への宿主炎症応答に関与する多くの経路を調節する。サイトカインは細胞の分化、増殖及び活性化に影響を及ぼし、炎症誘発性及び抗炎症性の両方の応答を調節して、宿主が病原体へ適切に反応することを可能にできる。広範囲のサイトカインのシグナリングには、タンパク質チロシンキナーゼのＪａｎｕｓキナーゼファミリー（ＪＡＫ）及びシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）が関与する。４つの公知の哺乳動物ＪＡＫ、すなわちＪＡＫ１（Ｊａｎｕｓキナーゼ－１）、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３（白血球Ｊａｎｕｓキナーゼ、ＪＡＫＬ及びＬ－ＪＡＫとしても公知）及びＴＹＫ２（タンパク質チロシンキナーゼ２）がある。

【0003】

サイトカイン刺激性の免疫応答及び炎症応答は、以下の様に疾患の病因に寄与する。重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）等の病理は免疫系の抑制から生じるが、過活性または不適切な免疫／炎症性応答は、自己免疫疾患（例えば喘息、全身性紅斑性狼瘡、甲状腺炎、心筋炎）ならびに硬皮症及び骨関節炎等の疾患の病理に寄与する（Ｏｒｔｍａｎｎ，Ｒ．Ａ．，Ｔ．Ｃｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ ２（１）：１６－３２）。

【0004】

ＪＡＫの発現の欠損は多くの疾患状態と関連する。例えば、Ｊａｋ１－／－マウスは出産時に発育不全であり、授乳できず、周産期に死亡する（Ｒｏｄｉｇ，Ｓ．Ｊ．，Ｍ．Ａ．Ｍｅｒａｚ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｃｅｌｌ ９３（３）：３７３－８３）。Ｊａｋ２－／－マウス胚は貧血症であり、明確な赤血球形成の非存在に起因して交尾後およそ１２．５日で死亡する。

【0005】

ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路（特に４つのすべてのＪＡＫ）は、喘息応答、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、及び下気道の他の関連する炎症性疾患の病因における役割を果たすと考えられている。ＪＡＫを介してシグナリングする複数のサイトカインが、古典的アレルギー反応であってもそうでなくても、上気道の炎症性疾患／病態（鼻及び副鼻腔に影響するもの（例えば鼻炎及び副鼻腔炎）等）へ結びつけられている。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路は、眼の炎症性疾患／病態及び慣性的なアレルギー反応にも関与するとされている。

【0006】

がんにおけるＪＡＫ／ＳＴＡＴの活性化は、サイトカイン刺激（例えばＩＬ－６またはＧＭ－ＣＳＦ）によって、またはＪＡＫシグナルの内在性抑制因子（ＳＯＣＳ（サイトカインシグナル抑制因子）もしくはＰＩＡＳ（活性化ＳＴＡＴのタンパク質阻害物質）等）の低減によって生じ得る（Ｂｏｕｄｎｙ，Ｖ．，ａｎｄ Ｋｏｖａｒｉｋ，Ｊ．，Ｎｅｏｐｌａｓｍ．４９：３４９－３５５，２００２）。ＳＴＡＴシグナルに加えて、ＪＡＫ（例えばＡｋｔ）の下流の他の経路の活性化は、多くのがんタイプの予後不良と相関している（Ｂｏｗｍａｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：２４７４－２４８８，２０００）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴを介してシグナリングする血中循環サイトカインのレベルの上昇は、悪液質及び／または慢性疲労における因果的役割を果たす。それゆえ、ＪＡＫ阻害は、可能性のある抗腫瘍活性にとどまらない理由により、がん患者へ有益であり得る。

【0007】

ＪＡＫ２チロシンキナーゼは、骨髄増殖性症候群（例えば真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄線維症を伴う骨髄様化生（ＭＭＭ））の有る患者に有益であり得る（Ｌｅｖｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，ｖｏｌ．７，２００５：３８７－３９７）。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆキナーゼの阻害は造血細胞の増殖を減少させ、ＰＶ、ＥＴ及びＭＭＭの有る患者における薬理学的阻害についての可能性のある標的としてＪＡＫ２を示唆する。

【0008】

ＪＡＫの阻害は、皮膚免疫障害（乾癬等）及び皮膚感作を患う患者に利益をもたらし得る。乾癬の維持は、様々なケモカイン及び増殖因子に加えていくつかの炎症性サイトカインに依存すると考えられており（ＪＣＩ，１１３：１６６４－１６７５）、その多くはＪＡＫを介してシグナリングする（Ａｄｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００；４７：１１３－７４）。

【0009】

ＪＡＫ１は、調節異常の場合に、疾患状態をもたらし得るかまたはそれに寄与し得る、いくつかのサイトカイン及び増殖因子のシグナル経路において中心的な役割を果たす。例えば、ＩＬ－６レベルは関節リウマチで上昇し、この疾患において、ＩＬ－６は有害な効果があることが示唆されている（Ｆｏｎｅｓｃａ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，８：５３８－４２，２００９）。ＩＬ－６は少なくとも部分的にＪＡＫ１を介してシグナリングするので、ＪＡＫ１阻害を介して、直接的にまたは間接的にＩＬ－６に拮抗することは、臨床的利益を提供することが予想される（Ｇｕｓｃｈｉｎ，Ｄ．，Ｎ．，ｅｔ ａｌ Ｅｍｂｏ Ｊ １４：１４２１，１９９５；Ｓｍｏｌｅｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ ３７１：９８７，２００８）。さらに、いくつかのがんにおいて、ＪＡＫ１は変異しており、構成的に所望されない腫瘍細胞の増殖及び生存をもたらす（Ｍｕｌｌｉｇｈａｎ ＣＧ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０６：９４１４－８，２００９；Ｆｌｅｘ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０５：７５１－８，２００８）。他の自己免疫疾患及びがんにおいて、ＪＡＫ１を活性化する炎症性サイトカインの全身レベルの上昇も、疾患及び／または関連する症状に寄与し得る。したがって、かかる疾患の有る患者は、ＪＡＫ１の阻害により恩恵を受け得る。ＪＡＫ１の選択的阻害物質は、他のＪＡＫキナーゼを阻害することによる不必要且つ所望されない可能性のある効果を回避しながら、有益であり得る。

【0010】

他のＪＡＫキナーゼに比べてＪＡＫ１を選択的に阻害する物質は、選択性の低い阻害物質を上回る複数の治療的な利点を有し得る。ＪＡＫ２に対する選択性に関して、例えばエリスロポエチン（Ｅｐｏ）及びトロンボポイエチン（Ｔｐｏ）を含む、いくつかの重要なサイトカイン及び増殖因子が、ＪＡＫ２を介してシグナリングする（Ｐａｒｇａｎａｓ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ．９３：３８５－９５，１９９８）。Ｅｐｏは赤血球産生のための重要な増殖因子であり、したがって、Ｅｐｏ依存性シグナルの不足は、赤血球の数の低減及び貧血をもたらし得る（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ Ｋ，ＮＥＪＭ ３５４：２０３４－４５，２００６）。ＪＡＫ２依存性増殖因子のもう1つの例であるＴｐｏは、巨核球（それから血小板が産生される細胞）の分裂増殖及び成熟の制御において中心的な役割を果たす（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ Ｋ，ＮＥＪＭ ３５４：２０３４－４５，２００６）。それゆえ、Ｔｐｏシグナルの低減は、巨核球数を減少させ（巨核球減少症）、血中循環血小板数を低下させる（血小板減少症）ことになるであろう。これは、所望されない及び／または制御不可能な出血をもたらし得る。ＪＡＫ３及びＴｙｋ２等の他のＪＡＫの阻害の低減も所望され得るが、その理由は、これらのキナーゼの機能的なバージョンを欠くヒトが、重症複合免疫不全症または高免疫グロブリンＥ症候群等の多数の疾患を患うことが示されているからである（Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ，Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２５：７４５－５５，２００６；Ｍａｃｃｈｉ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．３７７：６５－８，１９９５）。したがって、他のＪＡＫについて低減した親和性を備えたＪＡＫ１阻害物質は、免疫抑制、貧血及び血小板減少症が関わる副作用の低減に関して、選択性の低い阻害物質を上回る有意な利点を有するであろう。

【0011】

ＪＡＫ阻害物質に有用性があるので、ＪＡＫ阻害物質を作製する新規プロセスの開発が必要とされる。本発明は、この必要性及び他の必要性のために行われる。

【発明の概要】

【0012】

ＪＡＫ阻害物質はＵＳ２０１１／０２２４１９０（その全体が参照により本明細書に援用される）中で記載され、式Ｉとして以下に図示される、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルが含まれる。

【化1】

【0013】

本発明は、とりわけ、式Ｉの化合物を作製するためのプロセス及び中間体を提供する。

【0014】

特に、本発明は、式ＩＩＩの化合物：

【化2】

またはその塩を、４－ヒドロキシピペリジンと反応させて、式ＩＶの化合物：

【化3】

またはその塩を形成することを含むプロセスを提供する。

【0015】

本明細書において記載されるプロセスは、式ＩＶの化合物またはその塩を酸化条件下で反応させて、式Ｖの化合物：

【化4】

またはその塩を形成することをさらに含み得る。

【0016】

本発明は、式ＩＩＩの化合物：

【化5】

またはその塩を、４－ピペリドンまたはその塩と反応させて、式Ｖの化合物：

【化6】

またはその塩を形成することを含むプロセスも提供する。

【0017】

いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるプロセスは、還元剤の存在下において、式Ｖの化合物を、式ＶＩの化合物：

【化7】

またはその塩と反応させて、式Ｉの化合物：

【化8】

またはその塩を形成することをさらに含み、
式中、Ｚ^１はＨまたは保護基である。

【0018】

本発明は、式ＩＩＩの化合物：

【化9】

またはその塩も提供する。

【発明を実施するための形態】

【0019】

明確にするために別個の実施形態の文脈中で記載される本発明のある特定の特徴を組み合わせて、単一の実施形態においても提供され得ることが理解される。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈中で記載される本発明の様々な特徴は、別個にまたは任意の適切な下位の組み合わせでも提供され得る。

【0020】

本明細書において記載されるプロセスは、当技術分野において公知の任意の適切な方法に従ってモニタリングされ得る。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば核磁気共鳴分光法（例えば^１Ｈまたは^１３Ｃ）、赤外分光法、もしくは分光測光法（例えばＵＶ－可視光等によって、またはクロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、または他の関連技法等によってモニタリングされ得る。

【0021】

本明細書において使用される時、「反応させる」という用語は、当技術分野において公知であるように使用され、化学試薬を、分子レベルでのそれらの相互作用が化学的変化または物理変化を達成することを可能にするような方式で、一緒にすることを一般に指す。いくつかの実施形態において、反応は２つの試薬が関与し、そこで、第１の試薬に関して１当量以上の第２の試薬が使用される。本明細書において記載されるプロセスの反応ステップは、特定される生成物の調製に好適な時間で及び条件下で遂行され得る。

【0022】

化合物の調製は、様々な化学基の保護及び脱保護を含み得る。保護及び脱保護についての必要性ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学的性質は、例えばＧｒｅｅｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｄ．Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００７（その全体は参照により本明細書に援用される）中で見出され得る。本明細書において記載される、保護基ならびに形成方法及び切断方法に対する調整は、様々な置換基を考慮して必要に応じてなされ得る。

【0023】

本明細書において記載されるプロセスの反応は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る好適な溶媒中で実行され得る。好適な溶媒は、反応が実行される温度、例えば溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲であり得る温度で、出発材料（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または２つ以上の溶媒の混合物中で実行され得る。特定の反応ステップに依存して、特定の反応ステップに好適な溶媒が選択され得る。いくつかの実施形態において、反応は、試薬のうちの少なくとも１つが液体または気体である等の場合に、溶媒の非存在下において実行され得る。

【0024】

好適な溶媒としては、四塩化炭素、ブロモジクロロメタン、ジブロモクロロメタン、ブロモホルム、クロロホルム、ブロモクロロメタン、ジブロモメタン、塩化ブチル、ジクロロメタン、四塩化エチレン、トリクロロエチレン、１，１，１－トリクロルエタン、１，１，２－トリクロロエタン、１，１－ジクロロエタン、２－クロロプロパン、α，α，α－トリフルオロトルエン、１，２－ジクロロエタン、１，２－ジブロモエタン、ヘキサフルオロベンゼン、１，２，４－トリクロロベンゼン、１，２－ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、その混合物及び同種のもの等のハロゲン化溶媒が挙げられ得る。

【0025】

好適なエーテル溶媒としては、ジメトキシメタン、テトラヒドロフラン、１，３－ジオキサン、１，４－ジオキサン、フラン、ジエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、トリエチレングリコールジメチルエーテル、アニソール、ｔ－ブチルメチルエーテル、その混合物及び同種のものが挙げられる。

【0026】

好適なプロトン性溶媒としては、一例として限定されずに、水、メタノール、エタノール、２－ニトロエタノール、２－フルオロエタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、エチレングリコール、１－プロパノール、２－プロパノール、２－メトキシエタノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｉ－ブチルアルコール、ｔ－ブチルアルコール、２－エトキシエタノール、ジエチレングリコール、１－ペンタノール、２－ペンタノール、もしくは３－ペンタノール、ｎｅｏ－ペンチルアルコール、ｔ－ペンチルアルコール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、シクロヘキサノール、ベンジルアルコール、フェノールまたはグリセロールが挙げられる。

【0027】

好適な非プロトン性溶媒としては、一例として限定されずに、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ホルムアミド、Ｎ－メチルアセトアミド、Ｎ－メチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピオニトリル、ギ酸エチル、酢酸メチル、ヘキサクロロアセトン、アセトン、エチルメチルケトン、酢酸エチル、スルホラン、Ｎ，Ｎ－ジメチルプロピオンアミド、テトラメチル尿素、ニトロメタン、ニトロベンゼンまたはヘキサメチルホスホルアミドが挙げられる。

【0028】

好適な炭化水素溶媒としては、ベンゼン、シクロヘキサン、ペンタン、ヘキサン、トルエン、シクロヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、エチルベンゼン、ｍ－キシレン、ｏ－キシレン、もしくはｐ－キシレン、オクタン、インダン、ノナンまたはナフタレンが挙げられる。

【0029】

本明細書において記載されるプロセスの反応は、当業者によって容易に決定され得る適切な温度で実行され得る。反応温度は、例えば試薬及び溶媒（存在するならば）の融点及び沸点、反応の熱力学（例えば激しい発熱反応は低減された温度で実行される必要があり得る）、ならびに反応の速度論（例えば高い活性化エネルギー障壁は高温を必要とし得る）に依存するであろう。「高温」は、室温（約２２℃）より高い温度を指す。

【0030】

本明細書において記載されるプロセスの反応は、空気中でまたは不活性雰囲気下で実行され得る。典型的には、空気と実質的に反応性のある試薬または生成物を含む反応は、当業者に周知の空気感受性合成技法を使用して実行され得る。

【0031】

いくつかの実施形態において、化合物の調製は、例えば所望される反応の触媒作用または塩形態（酸付加塩等）の形成に影響する酸または塩基の添加を包含し得る。

【0032】

例示的な酸は、無機酸または有機酸であり得る。無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸及び硝酸が挙げられる。有機酸としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、安息香酸、４－ニトロ安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸、プロピオル酸、酪酸、２－ブチン酸、ビニル酢酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸及びデカン酸が挙げられる。

【0033】

例示的な塩基としては、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム及び重炭酸ナトリウムが挙げられる。いくつかの例示的な強塩基としては、水酸化物、アルコキシド、金属アミド、金属水素化物、金属ジアルキルアミド及びアリールアミンが挙げられるがこれらに限定されず、そこで、アルコキシドとしては、メチルオキシド、エチルオキシド及びｔ－ブチルオキシドのリチウム塩、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられ、金属アミドとしては、ナトリウムアミド、カリウムアミド及びリチウムアミドが挙げられ、金属水素化物としては、水素化ナトリウム、水素化カリウム及び水素化リチウムが挙げられ、金属ジアルキルアミドとしては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、トリメチルシリル及びシクロヘキシルで置換されたアミドのナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられる。

【0034】

中間体及び生成物は、本明細書において開示される化合物の塩も含み得る。本明細書において使用される時、「塩」という用語は、許容可能な酸または塩基を本明細書において開示される化合物へ付加することによって形成された塩を指す。いくつかの実施形態において、塩は薬学的に許容可能な塩である。本明細書において使用される時、「薬学的に許容される」という表現は、毒性学上の観点から薬学的適用における使用に許容可能であり、活性成分と不利に相互作用しない物質を指す。単塩及び二塩を含めた薬学的に許容される塩としては、酢酸、乳酸、クエン酸、ケイ皮酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、シュウ酸、プロピオン酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、グリコール酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、及び類似の公知の許容可能な酸等であるがこれらに限定されない、有機酸及び無機酸に由来するものが挙げられるがこれらに限定されない。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）（その各々はそれらの全体を参照することによって本明細書に援用される）中で見出される。

【0035】

本明細書において記載されるプロセスに従う化合物の調製の実行に際して、濃縮、濾過、抽出、固相抽出、再結晶、クロマトグラフィー、及び同種のもの等の通常の単離及び精製の操作を使用して、所望される生成物を単離することができる。

【0036】

いくつかの実施形態において、本明細書において記載される化合物及びその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離される」によって、化合物が、それが形成または検出された環境から少なくとも部分的にまたは実質的に分離されることが意味される。部分的な分離は、例えば本発明の化合物が濃縮された組成物を含み得る。実質的な分離は、本発明の化合物またはその塩を、重量で少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％または少なくとも約９９％含有する組成物を含み得る。化合物及びそれらの塩を単離する方法は、当技術分野において日常的である。

【0037】

中間体のいくつかを調製するプロセスは、２０１５年３月２４日に発行された米国特許第８，９８７，４４３号、２０１６年１１月８日に発行された米国特許第９，４８７，５２１号、２０１３年４月２日に発行された米国特許第８，４１０，２６５号、及び２０１４年７月１日に発行された米国特許第８，７６５，７３４号（その各々はその全体を参照することにより本明細書に援用される）中で見出され得る。

【0038】

プロセス及び中間体
本発明は、とりわけ、式Ｉの化合物を作製するためのプロセス及び中間体を提供する。したがって、一態様において、式ＩＩＩの化合物：

【化10】

またはその塩を、４－ヒドロキシピペリジンと反応させて、式ＩＶの化合物：

【化11】

またはその塩を形成することを含むプロセスが、本明細書において提供される。

【0039】

いくつかの実施形態において、４－ヒドロキシピペリジンとの反応は、塩基の存在下において遂行される。

【0040】

いくつかの実施形態において、塩基は、第三級アミンである。

【0041】

いくつかの実施形態において、第三級アミンは、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。

【0042】

いくつかの実施形態において、４－ヒドロキシピペリジンとの反応は、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される。

【0043】

いくつかの実施形態において、４－ヒドロキシピペリジンとの反応は、約２５℃～約３５℃の温度で遂行される。

【0044】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物は、式ＩＩの化合物：

【化12】

またはその塩を、塩化オキサリルと反応させて、式ＩＩＩの化合物またはその塩を形成することを含むプロセスによって形成される。

【0045】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、触媒量のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下において遂行される。いくつかの実施形態において、ＤＭＦは、式ＩＩの化合物に関して、約０．０１～約０．０３モル当量の間で存在する。

【0046】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される。

【0047】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、約１５℃～約２５℃の温度で遂行される。

【0048】

本明細書において記載されるプロセスは、式ＩＶの化合物またはその塩を酸化条件下で反応させて、式Ｖの化合物：

【化13】

またはその塩を形成することをさらに含み得る。

【0049】

いくつかの実施形態において、酸化条件は少なくとも１つの酸化剤（すなわち第１の酸化剤）を含む。いくつかの実施形態において、酸化条件は第２の酸化剤を含む。

【0050】

いくつかの実施形態において、酸化剤は、トリクロロイソシアヌル酸（ＴＣＩＣ）である。いくつかの実施形態において、ＴＣＩＣは、式ＩＶの化合物に関して、約０．５～約０．７モル当量の間で存在する。

【0051】

いくつかの実施形態において、酸化剤は、２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）である。いくつかの実施形態において、ＴＥＭＰＯは、式ＩＶの化合物に関して、約０．００５～約０．０５モル当量の間で存在する。いくつかの実施形態において、ＴＥＭＰＯは、式ＩＶの化合物に関して、約０．０１５～約０．０２５モル当量の間で存在する。いくつかの実施形態において、ＴＥＭＰＯは、式ＩＶの化合物に関して、約０．０２０モル当量で存在する。

【0052】

いくつかの実施形態において、酸化条件は、少なくともＴＣＩＣ（第１の酸化剤）及びＴＥＭＰＯ（第２の酸化剤）を含む。いくつかの実施形態において、酸化条件は、金属臭化物、例えば臭化ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、臭化ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約０．００５～約０．０１５モル当量の間で存在する。いくつかの実施形態において、臭化ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約０．０１当量で存在する。

【0053】

いくつかの実施形態において、酸化条件は、塩基をさらに含む。いくつかの実施形態において、塩基は、重炭酸ナトリウム及び／または炭酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、重炭酸ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約１～約１０モル当量の間で存在する。いくつかの実施形態において、重炭酸ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約５モル当量で存在する。いくつかの実施形態において、炭酸ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約０．１～約１モル当量の間で存在する。いくつかの実施形態において、炭酸ナトリウムは、式ＩＶの化合物に関して、約０．５モル当量で存在する。

【0054】

いくつかの実施形態において、式ＩＶの化合物の酸化条件下での反応は、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム及び臭化ナトリウムのうちの１つまたは複数をさらに含む。いくつかの実施形態において、式ＩＶの化合物の酸化条件下での反応は、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム及び臭化ナトリウムをさらに含む。

【0055】

いくつかの実施形態において、式ＩＶの化合物の酸化条件下での反応は、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素をさらに含む。いくつかの実施形態において、溶媒構成要素は、水をさらに含む。

【0056】

いくつかの実施形態において、酸化条件は、トリクロロイソシアヌル酸（ＴＣＩＣ）を、式ＩＶ及びＴＥＭＰＯの化合物を含む溶液へ約０℃～約５℃の温度で添加することを含む。いくつかの実施形態において、トリクロロイソシアヌル酸の添加は、少なくとも２つの小分けでトリクロロイソシアヌル酸を添加することを含む。いくつかの実施形態において、溶液は、上記添加後に約０℃～約５℃の温度で約３０分間撹拌される。いくつかの実施形態において、プロセスは、上記溶液を、上記撹拌後に約２０℃～約２５℃の温度へ約１時間～約２時間の時間で暖めることをさらに含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、酸化条件は、約９９％よりも高い純度を有する式Ｖの化合物をもたらす。

【0058】

いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるプロセスは、還元剤の存在下において、式Ｖの化合物を、式ＶＩの化合物：

【化14】

またはその塩と反応させて、式Ｉの化合物：

【化15】

またはその塩を形成することをさらに含み、
式中、Ｚ^１はＨまたは保護基である。

【0059】

いくつかの実施形態において、Ｚ^１は、Ｈである。

【0060】

いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化シアノホウ素ナトリウムまたは水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物に基づいて、１当量を超える（例えば２当量）の水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムが使用される。

【0061】

還元剤は、還元的アミノ化における使用に好適な任意の還元剤であり得、Ｅｌｌｅｎ Ｗ．Ｂａｘｔｅｒ ａｎｄ Ａｌｌｅｎ Ｂ．Ｒｅｉｔｚ，Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ Ａｍｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｉｔｈ Ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ ａｎｄ Ｂｏｒａｎｅ Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｐａｇｅｓ １－５７（Ｗｉｌｅｙ，２００２）（その全体は参照により本明細書に援用される）中のもの等の様々な水素化ホウ素及びボラン還元剤が挙げられる。適切な還元剤の非限定的クラスとしては、水素化ホウ素、水素化シアノホウ素、トリ（Ｃ_１－４アシル）オキシ水素化ホウ素（例えば水素化トリアセトキシホウ素誘導体）、９－ボロビシクロ［３．３．１］ノナンヒドリド、トリ（Ｃ_１－４アルキル）水素化ホウ素及び水素化ジソピノカンプテイルシアノホウ素（ｄｉｓｏｐｉｎｏｃａｍｐｔｅｙｌｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）誘導体、アミノボラン、ボラン－ピリジン錯体ならびにアルキルアミンボランが挙げられる。適切な還元剤の非限定例としては、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、ナトリウムシアノ－９－ボロビシクロ［３．３．１］ノナンヒドリド、水素化シアノホウ素テトラブチルアンモニウム、固体支持体上の水素化シアノホウ素、水素化トリアセトキシホウ素テトラメチルアンモニウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化トリ（ｓｅｃ－ブチル）ホウ素リチウム、水素化ジソピノカンプテイルシアノホウ素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｄｉｓｏｐｉｎｏｃａｍｐｔｅｙｌｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、水素化ホウ素リチウム、水素気体の存在下におけるパラジウム、５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）、２－ピコリンボラン、またはポリマーに支持された水素化トリアセトキシホウ素が挙げられる。いくつかの実施形態において、前述のもののうちの任意のもの及び好ましくは水素化シアノホウ素ナトリウムは、チタン（ＩＶ）添加物、脱水剤またはハロゲン化亜鉛添加物と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、還元剤は、テトラ（Ｃ_１－４アルキル）アンモニウム水素化シアノホウ素もしくは水素化トリアセトキシホウ素、水素化シアノホウ素アルカリ金属もしくは水素化トリアセトキシホウ素、または水素化シアノホウ素アルカリ土類もしくは水素化トリアセトキシホウ素である。いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化シアノホウ素アルカリ金属である。いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化シアノホウ素ナトリウム及び水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムから選択される。いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。本明細書において使用される時、チタン（ＩＶ）添加物は、チタン（ＩＶ）金属を含有するルイス酸（例えば四塩化チタン、チタンイソプロポキシド、チタンエトキシド及び同種のもの）である。

【0062】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩は、２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルジヒドロクロライド塩である。いくつかの実施形態において、反応は、少なくとも２当量の第２の塩基の存在下において実行される。いくつかの実施形態において、第２の塩基は、第三級アミン（例えばトリエチルアミン）である。本明細書において使用される時、「第２の塩基」という表現中の「第２」は、プロセスの前のステップまたは後のステップにおいて使用される他の塩基と塩基を区別するために使用され、２つの塩基が存在しなくてはならないことを指摘するものではない。

【0063】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩に基づいて、１当量を超える式Ｖの化合物が使用される。

【0064】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩と式Ｖの化合物との反応は、ジクロロメタン溶媒中で遂行される。

【0065】

いくつかの実施形態において、プロセスは、式Ｉの化合物をアジピン酸と反応させて、式Ｉの化合物のアジピン酸塩を形成することをさらに含む。

【0066】

別の態様において、式ＩＩＩの化合物：

【化16】

またはその塩を、４－ピペリドンまたはその塩と反応させて、式Ｖの化合物：

【化17】

またはその塩を形成することを含むプロセスが、本明細書において提供される。

【0067】

いくつかの実施形態において、４－ピペリドンまたはその塩は、４－ピペリドン塩酸塩である。いくつかの実施形態において、４－ピペリドンまたはその塩は、４－ピペリドン塩酸塩一水和物である。

【0068】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物と４－ピペリドンとの反応は塩基をさらに含む。いくつかの実施形態において、塩基は、炭酸ナトリウムである。

【0069】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物と４－ピペリドンとの反応は、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される。

【0070】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物と４－ピペリドンとの反応は、約０℃～約５℃の温度で遂行される。

【0071】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物は、式ＩＩの化合物：

【化18】

またはその塩を、塩化オキサリルと反応させて、式ＩＩＩの化合物またはその塩を形成することを含むプロセスによって形成される。

【0072】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、触媒量のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下において遂行される。いくつかの実施形態において、ＤＭＦは、式ＩＩの化合物に関して、約０．０１～約０．０３モル当量の間で存在する。

【0073】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、ジクロロメタンを含む溶媒構成要素中で遂行される。

【0074】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応は、約１５℃～約２５℃の温度で遂行される。

【0075】

いくつかの実施形態において、式ＩＩＩの化合物は、式ＩＩＩの化合物を４－ピペリドンと反応させる前に単離されない。

【0076】

いくつかの実施形態において、式ＩＩの化合物と塩化オキサリルとの反応及び式ＩＩＩの化合物と４－ピペリドンとの反応は、単一反応器中で遂行される。

【0077】

いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるプロセスは、還元剤の存在下において、式Ｖの化合物を、式ＶＩの化合物：

【化19】

またはその塩と反応させて、式Ｉの化合物：

【化20】

またはその塩を形成することをさらに含み、
式中、Ｚ^１はＨまたは保護基である。

【0078】

いくつかの実施形態において、Ｚ^１は、Ｈである。

【0079】

いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化シアノホウ素ナトリウムまたは水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態において、還元剤は、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物に基づいて、１当量を超える（例えば２当量）の水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムが使用される。

【0080】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩は、２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルジヒドロクロライド塩である。いくつかの実施形態において、反応は、少なくとも２当量の第２の塩基の存在下において実行される。いくつかの実施形態において、第２の塩基は、第三級アミン（例えばトリエチルアミン）である。

【0081】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩に基づいて、１当量を超える式Ｖの化合物が使用される。

【0082】

いくつかの実施形態において、式ＶＩの化合物またはその塩と式Ｖの化合物との反応は、ジクロロメタン溶媒中で遂行される。

【0083】

いくつかの実施形態において、プロセスは、式Ｉの化合物をアジピン酸と反応させて、式Ｉの化合物のアジピン酸塩を形成することをさらに含む。

【0084】

一態様において、式ＩＩＩの化合物：

【化21】

またはその塩が、本明細書において提供される。

【0085】

使用
式Ｉの化合物である｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルは、ＪＡＫ（例えばＪＡＫ１、ＪＡＫ２）の阻害物質である。ＪＡＫ阻害物質は、様々なＪＡＫ関連の疾患または障害の治療において有用である。ＪＡＫ関連疾患の例としては、例えば移植臓器拒絶（例えば同種異系移植片拒絶及び移植片対宿主病）を包含する、免疫系に関与する疾患が挙げられる。ＪＡＫ関連疾患のさらなる例としては、多発性硬化症、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、１型糖尿病、狼瘡、乾癬、炎症性大腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリンＡ腎症、心筋炎、自己免疫性甲状腺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び同種のもの等の自己免疫疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡（ＰＶ）または水疱性類天疱瘡（ＢＰ）等の自己免疫性水疱性皮膚障害である。

【0086】

ＪＡＫ関連疾患のさらなる例としては、喘息、食物アレルギー、湿疹性皮膚炎、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎（アトピー性湿疹）及び鼻炎等のアレルギー性病態が挙げられる。ＪＡＫ関連疾患のさらなる例としては、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ １、水痘・帯状ヘルペスウイルス（ＶＺＶ）及びヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）等のウイルス性疾患が挙げられる。

【0087】

ＪＡＫ関連疾患のさらなる例としては、軟骨ターンオーバーと関連する疾患、例えば痛風性関節炎、敗血症性関節炎もしくは感染性関節炎、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、疼痛性ジストロフィー、Ｔｉｅｔｚｅ症候群、肋関節症、地方病性変形性骨関節炎、Ｍｓｅｌｅｎｉ病、Ｈａｎｄｉｇｏｄｕ病、線維筋痛症からもたらされる変性、全身性紅斑性狼瘡、硬皮症、または強直性脊椎炎が挙げられる。

【0088】

ＪＡＫ関連疾患のさらなる例としては、遺伝性軟骨融解、軟骨形成不全症、及び偽性軟骨形成不全（例えば小耳症、無耳症及び骨幹端軟骨形成不全症）を含む、先天性軟骨形成異常が挙げられる。

【0089】

ＪＡＫ関連の疾患または病態のさらなる例としては、乾癬（例えば尋常性乾癬）、アトピー性皮膚炎、皮膚発疹、皮膚刺激、皮膚感作（例えば接触性皮膚炎またはアレルギー性接触皮膚炎）等の皮膚障害が挙げられる。例えば、いくつかの医薬品を含むある特定の物質は、局所的に適用された場合に皮膚感作を引き起こし得る。いくつかの実施形態において、本発明の少なくとも１つのＪＡＫ阻害物質を、望まれない感作を引き起こす薬剤と一緒に共投与または逐次投与することは、かかる望まれない感作または皮膚炎の治療において有用であり得る。いくつかの実施形態において、皮膚障害は、本発明の少なくとも１つのＪＡＫ阻害物質の局所投与によって治療される。

【0090】

ＪＡＫ関連の疾患または病態のさらなる例としては、固形腫瘍（例えば前立腺癌、腎癌、肝癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部、甲状腺癌、神経膠芽細胞腫、カポジ肉腫、Ｃａｓｔｌｅｍａｎ病、子宮平滑筋肉腫、黒色腫などのがん）、血液のがん（例えばリンパ腫、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または多発性骨髄腫等））、及び皮膚癌（皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）及び皮膚のＢ細胞リンパ腫等）によって特徴づけられるものが挙げられる。例示的なＣＴＣＬとしては、Ｓｅｚａｒｙ症候群及び菌状息肉腫が挙げられる。ＪＡＫ関連の疾患または病態の他の例としては、肺動脈性肺高血圧症が挙げられる。

【0091】

ＪＡＫ関連の疾患または病態の他の例としては、炎症関連癌が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは炎症性大腸疾患と関連する。いくつかの実施形態において、炎症性大腸疾患は潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態において、炎症性大腸疾患はクローン病である。いくつかの実施形態において、炎症関連癌は大腸炎関連癌である。いくつかの実施形態において、炎症関連癌は結腸癌または結腸直腸癌である。いくつかの実施形態において、がんは、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、腺癌、小腸癌または直腸癌である。

【0092】

ＪＡＫ関連疾患としては、偽キナーゼドメイン中に少なくとも１つの突然変異を有するもの（例えばＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）等のＪＡＫ２変異の発現、偽キナーゼドメインの外側に少なくとも１つの突然変異を有するＪＡＫ２変異の発現、ＪＡＫ１変異の発現、ＪＡＫ３変異の発現、エリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）変異の発現またはＣＲＬＦ２の脱調節発現によって特徴づけられるものがさらに挙げられ得る。

【0093】

ＪＡＫ関連疾患としては、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄様化生を伴う骨髄線維症（ＭＭＭ）、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、高好酸球症候群（ＨＥＳ）、全身性肥満細胞症（ＳＭＣＤ）、及び同種のもの等の骨髄増殖性症候群（ＭＰＤ）がさらに挙げられ得る。いくつかの実施形態において、骨髄増殖性疾患は、骨髄線維症（例えば原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）または真性多血症後／本態性血小板血症後骨髄線維症（Ｐｏｓｔ－ＰＶ／Ｐｏｓｔ－ＥＴ ＭＦ））である。いくつかの実施形態において、骨髄増殖性疾患は、本態性血小板血症後骨髄線維症（Ｐｏｓｔ－ＥＴ ＭＦ）である。いくつかの実施形態において、骨髄増殖性疾患は、真性多血症後骨髄線維症（Ｐｏｓｔ－ＰＶ ＭＦ）である。

【0094】

ＪＡＫ関連の疾患または病態の他の例には、他の医薬品の皮膚副作用を本発明の化合物の投与によって寛解することが含まれる。例えば、多数の医薬用薬剤は、ざ瘡様皮疹または関連する皮膚炎として現われ得る望まれないアレルギー反応をもたらす。かかる所望されない副作用を有する例示的な医薬用薬剤としては、ゲフィチニブ、セツキシマブ、エルロチニブ及び同種のもの等の抗癌薬が挙げられる。本発明の化合物は、所望されない皮膚副作用を有する医薬用薬剤と組み合わせて（例えば同時にまたは逐次的に）、全身的にまたは局所的に（例えば皮膚炎の近辺への局在化させて）投与され得る。いくつかの実施形態において、他の医薬品が、本発明の化合物の非存在下において局所的に適用された場合に、接触性皮膚炎、アレルギー性接触感作または類似する皮膚障害を引き起こすところで、本発明の化合物は、１つまたは複数の他の医薬品と一緒に局所的に投与され得る。したがって、本発明の組成物は、本発明の化合物、及び皮膚炎、皮膚障害、または関連副作用を引き起こし得るさらなる医薬剤を含有する局所製剤を含む。

【0095】

さらなるＪＡＫ関連疾患としては、炎症及び炎症性疾患が挙げられる。例示的な炎症性疾患としては、サルコイドーシス、眼の炎症性疾患（例えば虹彩炎、ぶどう膜炎、強膜炎、結膜炎または関連疾患）、気道の炎症性疾患（例えば鼻炎または副鼻腔炎等の鼻及び副鼻腔を含む上気道または気管支炎、慢性閉塞性肺疾患及び同種のものを含む下気道）、心筋炎等の炎症性筋疾患及び他の炎症性疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、眼の炎症疾患は眼瞼炎である。

【0096】

さらなるＪＡＫ関連疾患としては、虚血再灌流傷害または卒中または心拍停止等の炎症性虚血性事象に関連する疾患もしくは病態、エンドトキシン駆動性疾患状態（例えばバイパス手術後の合併症、または慢性心不全の一因となる慢性エンドトキシン状態）、拒食症、悪液質、がんからもたらされるかまたはがんと関連するもの等の疲労、再狭窄、硬化性皮膚炎、線維症、例えば糖尿病網膜症、がんまたは神経変性等の低酸素状態またはアストログリオーシスと関連する病態、及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）及び敗血症性ショック等の他の炎症性疾患が挙げられる。他のＪＡＫ関連疾患としては、痛風及び例えば良性前立腺肥大症または良性前立腺過形成に起因する前立腺サイズの増加に加えて、骨粗鬆症もしくは骨関節炎、ホルモン平衡異常及び／またはホルモン療法、自己免疫疾患（例えば骨サルコイドーシス）またはがん（例えば骨髄腫）と関連する骨吸収疾患等の骨吸収疾患が挙げられる。

【0097】

さらなるＪＡＫ関連疾患としてはドライアイ障害が挙げられる。本明細書において使用される時、「ドライアイ障害」は、Ｄｒｙ Ｅｙｅ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（ＤＥＷＳ）の最近の公式報告中で要約された疾患状態を包含することが意図され、この報告は「不快感、視覚障害、及び眼表面への損傷の可能性の有る涙液層不安定性の症状をもたらす、涙液及び眼表面の多因子性疾患である。それには、涙液層の浸透圧の増加及び眼表面の炎症が付随する。」としてドライアイを定義した（Ｌｅｍｐ，“Ｔｈｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｒｙ Ｅｙｅ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｙ Ｅｙｅ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ”，Ｔｈｅ Ｏｃｕｌａｒ Ｓｕｒｆａｃｅ，５（２），７５－９２ Ａｐｒｉｌ ２００７、その全体は参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、ドライアイ障害は、涙液減少型ドライアイ（ＡＤＤＥ）もしくは蒸発型ドライアイ障害、または適切なその組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、ドライアイ障害は、シェーグレン症候群ドライアイ（ＳＳＤＥ）である。いくつかの実施形態において、ドライアイ障害は、非シェーグレン症候群ドライアイ（ＮＳＳＤＥ）である。

【0098】

さらなるＪＡＫ関連疾患としては、結膜炎、ぶどう膜炎（慢性ぶどう膜炎を包含する）、脈絡膜炎、網膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎または虹彩炎が挙げられる。他のＪＡＫ関連疾患としては、インフルエンザ及びＳＡＲＳ等のウイルス感染と関連する呼吸器の疾患または機能不全が挙げられる。

【実施例】

【0099】

本発明を、具体的な実施例によって より詳しく記載する。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定するようには意図されない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらす、変更または改変され得る多様な重要でないパラメーターを容易に認識するであろう。

【0100】

実施例１。２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルアジピン酸塩（９）の合成
スキームＩ

【化22】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－カルボキシレート（３）。窒素注入口、サーモカップル及びメカニカルスターラーを装備した１Ｌのフラスコへ、イソプロパノール（ＩＰＡ、２００ｍＬ）、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－エン（ＤＢＵ、９．８ｇ、６４．４ｍｍｏｌ、０．１２５当量）、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１、１０１ｇ、５２０．５１ｍｍｏｌ、１．０１当量）及びｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチレン）アゼチジン－１－カルボキシレート（２、１００ｇ、５１４．８５ｍｍｏｌ）を、周囲温度で逐次的に添加して、懸濁物として反応混合物を生成した。もたらされた反応混合物を３０分間加熱還流して均一な溶液を提供し、混合物を追加の２～３時間還流で維持した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した後に、ｎ－ヘプタン（４００ｍＬ）を、混合物を還流で維持しながら反応混合物へ徐々に４５分間で添加した。ｎ－ヘプタンの添加の間に固体が沈殿した。ｎ－ヘプタンの添加が完了したら、混合物を周囲温度へ徐冷し、周囲温度で追加の１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ｎ－ヘプタン（２００ｍＬ）により洗浄し、窒素スイーピングにより５０℃で真空下で一定重量へ乾燥させて、白色から淡黄色の固体として、ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－カルボキシレート（３、１８１ｇ、理論上１９９．９ｇ、９０．５％）を得た。３について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７４ （ｓ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２３ － ４．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５６ （ｓ， ２Ｈ）， １．３８ （ｓ， ９Ｈ）， １．２５ （ｓ， １２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １５５．３４， １４５．５０， １３５．８８， １１６．８８， １０７．０８ （ｂｒ）， ８３．１５， ７９．３６， ５８．７４ （ｂｒ）， ５６．２８， ２７．９６， ２６．５９， ２４．６３ ｐｐｍ；Ｃ_１９Ｈ_２９ＢＮ_４Ｏ_４ （分子量３８８．２７）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ３８９ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0101】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－３－（シアノメチル）－アゼチジン－１－カルボキシレート（５）。窒素注入口、サーモカップル及びメカニカルスターラーを装備した１Ｌのフラスコへ、４－クロロ－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（４、３９．６ｇ、２５７．６ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－カルボキシレート（３、１００ｇ、２５７．６ｍｍｏｌ、１．０当量）、フッ化セシウム（１３６．９ｇ、９０１．４ｍｍｏｌ、３．５当量）、ｔｅｒｔ－ブタノール（２５０ｍＬ）、水（２５０ｍＬ）及び［１，１’－ビス（ジ－シクロヘキシルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ－１２７、３５１．４ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、０．００１８当量）を、周囲温度で添加した。もたらされた反応混合物を脱気し、窒素を３回補充し、その後加熱還流し、窒素下で２０～２４時間還流で維持した。ＨＰＬＣが反応の完了を示した時に、反応混合物を４５～５５℃へ３０分間で冷却し、２つの相を分離し、水相を廃棄した。ｎ－ヘプタン（１２５ｍＬ）を有機相へ４５～５５℃で３０分間で添加した。もたらされた混合物を周囲温度へ１時間でゆっくり冷却し、周囲温度で追加の２時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ｎ－ヘプタン（１００ｍＬ）により洗浄し、窒素スイーピングにより５０℃で真空下で一定重量へ乾燥させて、淡黄色固体として、ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－３－（シアノメチル）－アゼチジン－１－カルボキシレート（５、９６．８ｇ、理論上９７．７ｇ、９９％）を得た。５について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．８９ （ｓ， １Ｈ）， ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．４４ （ｓ， １Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２ － ４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３１ － ４．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６７ （ｓ， ２Ｈ）， １．３９ （ｓ， ９Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １５５．４０， １５２．６０， １５０．６３， １４９．１５， １３９．７６， １２９．５３， １２７．６５， １２２．２５， １１６．９２， １１３．２１， ９９．７１， ７９．４５， ５８．３４ （ｂｒ）， ５６．８０， ２７．９９， ２６．８３ ｐｐｍ；Ｃ_１９Ｈ_２１Ｎ_７Ｏ_２ （分子量３７９．４）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ３８０ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0102】

２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル二塩酸塩（６）。窒素注入口、サーモカップル、添加漏斗及びメカニカルスターラーを装備した０．５Ｌのフラスコへ、ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－３－（シアノメチル）アゼチジン－１－カルボキシレート（５、１５ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）、水（７．５ｍＬ、４１６ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（７５ｍＬ）を、室温で添加した。混合物を室温で撹拌して、懸濁物を生成した。イソプロパノール（５５ｍＬ、２７５ｍｍｏｌ、７．０当量）中の５Ｍの塩化水素（ＨＣｌ）の溶液を、懸濁物へ５分間で添加した。次いでもたらされた反応混合物を穏やかに加熱還流し、３～４時間還流で維持した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した後に、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、４５ｍＬ）を反応懸濁物へ添加した。混合物を室温へ徐冷し、追加の１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、４５ｍＬ）により洗浄し、窒素スイーピングにより５０℃で真空下で一定重量へ乾燥させて、灰白色から淡黄色の固体として、２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル二塩酸塩（６、１３．６ｇ、理論上１３．９ｇ、９８％）を得た。６について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ_２Ｏ） δ ８．９６ （ｓ， １Ｈ）， ８．８１ （ｓ， １Ｈ）， ８．４９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｄ， Ｊ ＝ ３．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．９３ （ｄ， Ｊ ＝ １２．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７４ （ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７４ （ｓ， ２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， Ｄ_２Ｏ） δ １５１．３５， １４３．７５， １４３．３３， １４１．３３， １３２．０３， １３１．９７， １１５．９０， １１４．５４， １１３．８５， １０３．１８， ５９．７２， ５４．４５ （２Ｃ）， ２７．０２ ｐｐｍ；Ｃ_１４Ｈ_１５Ｃｌ_２Ｎ_７ （遊離塩基についてＣ_１４Ｈ_１３Ｎ_７，分子量２７９．３０）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２８０ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0103】

２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（８、遊離塩基）。窒素注入口、サーモカップル、添加漏斗及びメカニカルスターラーを装備した０．５Ｌのフラスコへ、２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル二塩酸塩（６、２０ｇ、５６．７８ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２００ｍＬ）及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、１６．６２ｍＬ、１１９．２ｍｍｏｌ、２．１当量）を、周囲温度で添加した。混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、その後１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７、１７．１５ｇ、５７．９１ｍｍｏｌ、１．０２当量）を混合物へ添加した。次いで混合物を、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（２５．３４ｇ、１１３．６ｍｍｏｌ、２．０当量）により周囲温度（２６℃未満）で５分間処理した。もたらされた反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した後に、反応混合物をＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２００ｍＬ）によりクエンチした。２つの相を分離し、水相を塩化メチレン（２００ｍＬ）により抽出した。合わせた有機相を４％のブライン（１００ｍＬ）により洗浄し、続いて、塩化メチレンのアセトンへの溶媒スイッチを蒸留によって行った。アセトン中の所望される粗生成物（８）のもたらされた溶液を、後続のアジピン酸塩形成のために直接使用した。小分けの溶液を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ＥｔＯＡｃ勾配溶出において０～１０％のＭｅＯＨ）によって精製して、灰白色固体として、分析的に純粋な２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（８、遊離塩基）を得た。８について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８５ （ｓ， １Ｈ）， ８．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ８．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｍ， １Ｈ）， ３．２８ （ｔ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １３．２， ９．５， ３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５８ （ｍ， １Ｈ）， １．８３ － １．７５ （ｍ， １Ｈ）， １．７０ － １．６３ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ － １．２１ （ｍ， ２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １６０．２８， （１５３．５１， １５０．８６）， １５２．２０， １５０．９４， １４９．６２， （１４６．３０， １４６．２５）， １３９．４８， （１３４．７８， １３４．６１）， （１３５．０４， １３４．９２， １３４．７２， １３４．６０， １３４．３８， １３４．２６， １３４．０３， １３３．９２）， １２９．２１， １２７．６２， １２６．８４， １２１．９９， １２２．０４， （１２４．７７， １２２．０２， １１９．１９， １１６．５２）， １１７．３９， １１３．００， ９９．９９， ６１．４７， ６０．４９， ５７．０５， ４４．２３， ２８．６２， ２７．８８， ２７．１９ ｐｐｍ；Ｃ_２６Ｈ_２３Ｆ_４Ｎ_９Ｏ （分子量， ５５３．５１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ５５４．１ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0104】

２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルアジピン酸塩（９）。メカニカルターラー、サーモカップル、添加漏斗及び窒素注入口を装備した０．５Ｌのフラスコへ、アセトン（２２０ｍＬ）中の粗製２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（８、遊離塩基、３１．３８ｇ、５６．７ｍｍｏｌ）の溶液、及びアジピン酸（８．７ｇ、５９．５３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を、周囲温度で添加した。次いで反応混合物を加熱還流して、溶液を得た。ｎ－ヘプタン（２２０ｍＬ）を、反応混合物へ４０～５０℃で１時間で徐々に添加した。もたらされた混合物を周囲温度へ１時間で徐冷し、周囲温度で追加の１６時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ｎ－ヘプタン（２×６０ｍＬ）により洗浄し、窒素スイーピングにより５０℃で真空下で一定重量へ乾燥させて、白色から灰白色の固体として、２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルアジピン酸塩（９、３４．０ｇ、理論上３９．７ｇ、２ステップで８５．６％）を得た。９：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．１６ （ｓ， １Ｈ）， １２．０５ （ｂｒｓ， ２Ｈ）， ８．８５ （ｓ， １Ｈ）， ８．７２ （ｓ， １Ｈ）， ８．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．６， １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， δ ４．１１ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．０， ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４４ （ｄｔ， Ｊ ＝ １４．４， ４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２８ （ｔ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １３．２， ９．６， ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５８ （ｔｔ， Ｊ ＝ ８．６， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２８ － ２．１７ （ｍ， ４Ｈ）， １．８３ － １．７４ （ｍ， １Ｈ）， １．６７ （ｄ， Ｊ ＝ １１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．５９ － １．４６ （ｍ， ４Ｈ）， １．３７ － １．２１ （ｍ， ２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １７４．３８， １６０．２９， （１５３．５２， １５０．８７）， １５２．２０， １５０．９４， １４９．６３， （１４６．３０， １４６．２５）， １３９．４８， （１３４．７９， １３４．６２）， （１３５．０８， １３４．９７， １３４．７４， １３４．６２， １３４．３８， １３４．２８， １３４．０４， １３３．９３）， １２９．２１， １２７．６２， １２６．８４， １２２．０５， （１２４．７５， １２２．０２， １１９．２９， １１６．５４）， １１７．３９， １１３．０１， ９９．９９， ６１．４７， ６０．５０， ５７．０６， ４４．２４， ３３．４２， ３０．７０， ２８．６３， ２７．８９， ２７．２０， ２４．０７ ｐｐｍ；Ｃ_３２Ｈ_３３Ｆ_４Ｎ_９Ｏ_５ （分子量６９９．６６；遊離塩基についてＣ_２６Ｈ_２３Ｆ_４Ｎ_９Ｏ，分子量 ５５３．５１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ５５４．０ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0105】

実施例２：２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリルの代替合成
スキームＩＩ

【化23】

２－（アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル塩酸塩（２ａ）。窒素注入口、サーモカップル、及びメカニカルスターラーを装備した０．５Ｌのフラスコへ、ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチレン）アゼチジン－１－カルボキシレート（２、３０ｇ、１５４．４６ｍｍｏｌ）及び塩化メチレン（３００ｍＬ）を、周囲温度で添加した。次いで溶液をイソプロパノール溶液（２９４．２ｍＬ、１．５４ｍｏｌ、１０当量）中の５Ｍの塩化水素（ＨＣｌ）の溶液により周囲温度で処理し、もたらされた反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した後に、懸濁物にｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、１５０ｍＬ）を添加し、混合物を周囲温度で２時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ｎ－ヘプタン（２×１００ｍＬ）により洗浄し、周囲温度で３時間濾過漏斗上で乾燥させて、白色固体として、２－（アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル塩酸塩（２ａ、１３．７ｇ、理論上２０．２ｇ、６７．８％）を得た。２ａについて：^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ９．９９ （ｓ， ２Ｈ）， ５．９４ （ｐ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８５ － ４．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７７ － ４．７１ （ｍ， ２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １５５．６５， １１４．５４， ９４．７８， ５５．２６， ５４．６３ ｐｐｍ；Ｃ_５Ｈ_７ＣｌＮ_２ （分子量１３０．５８；遊離塩基についてＣ_５Ｈ_６Ｎ_２，分子量９４．１１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ９５ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0106】

２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル（１０）。窒素注入口、サーモカップル及びマグネティックスターラーを装備した０．２５Ｌのフラスコへ、２－（アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル塩酸塩（２ａ、４．５ｇ、３４．４６ｍｍｏｌ）、１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７、１０ｇ、３４．４６ｍｍｏｌ、１．０当量）及び塩化メチレン（１００ｍＬ）を、周囲温度で添加し、次いでもたらされた混合物を水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（１４．６ｇ、６８．９３ｍｍｏｌ、２．０当量）により周囲温度で処理した。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、その後重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）飽和水溶液（５０ｍＬ）によりクエンチした。２つの相を分離し、水相をジクロロメタン（２００ｍＬ）により抽出した。合わせた有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）により洗浄し、減圧下で濃縮して、所望される粗生成物（１０）を得て、それを、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン勾配溶出において０～１０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として、２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル（１０、９．５ｇ、理論上１２．７ｇ、７４．８％）を得た。１０について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｔ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ （ｐ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１８ － ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０８ － ４．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９８ － ３．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７ － ３．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１７ － ３．０４ （ｍ， １Ｈ）， ２．５６ （ｔｔ， Ｊ ＝ ７．４， ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８６ － １．７７ （ｍ， １Ｈ）， １．７５ － １．６４ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ － １．４３ （ｍ， １Ｈ）， １．４３ － １．３１ （ｍ， １Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １６１．３４， １６０．７３， １５２．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ２６９．１ Ｈｚ）， １４５．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）， １３６．７３ （ｑｄ， Ｊ ＝ ３６．１， １２．０ Ｈｚ）， １３４．５６ （ｄ， Ｊ ＝ １６．９ Ｈｚ）， １２６．８９， １２０．５８ （ｑｄ， Ｊ ＝ ２７５．０， ４．９ Ｈｚ）， １１５．１１， ９２．０４， ６２．０５， ６０．５７ （２Ｃ）， ４４．４７， ３９．４２， ２９．３８， ２８．４７ ｐｐｍ；Ｃ_１７Ｈ_１６Ｆ_４Ｎ_４Ｏ （分子量３６８．３３）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ３６９ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0107】

２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（１１）。窒素注入口、サーモカップル及びマグネティックスターラーを装備した２５ｍＬのフラスコへ、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１、２１０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．０８当量）、２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イリデン）アセトニトリル（１０、３７０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（３ｍＬ）を、周囲温度で添加した。次いで溶液を、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－エン（ＤＢＵ、１７３ｍｇ、０．１７ｍＬ、１．１２ｍｍｏｌ、１．１２当量）により周囲温度で処理し、もたらされた反応混合物を５０℃へ暖め、５０℃で一晩撹拌した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した時に、反応混合物を、クロマトグラフィー精製のためのシリカゲル（ＳｉＯ_２）カラム（酢酸エチル勾配溶出において０～２．５％のＭｅＯＨ）上に直接ロードして、白色固体として、２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（１１、２６３ｍｇ、理論上５６２．４ｍｇ、４６．７％）を得た。１１について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ０．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６９ （ｓ， １Ｈ）， ４．１０ － ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５２ － ３．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．３３ （ｍ， １Ｈ）， ３．２８ － ３．１５ （ｍ， １Ｈ）， ３．０３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １２．９， ９．２， ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５１ － ２．４４ （ｍ， １Ｈ）， １．７７ － １．６６ （ｍ， １Ｈ）， １．６４ － １．５４ （ｍ， １Ｈ）， １．２８ － １．１７ （ｍ， ２Ｈ）， １．２４ （ｓ， １２Ｈ） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １６０．２２， １５２．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ２６５．８ Ｈｚ）， １４６．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ）， １４５．１２， １３５．４１， １３４．６６ （ｄ， Ｊ ＝ １６．９ Ｈｚ）， １３４．４３ （ｑｄ， Ｊ ＝ ３５．０， １１．７ Ｈｚ）， １２７．５８， １２０．６１ （ｑｄ， Ｊ ＝ ２７４．４， ４．６ Ｈｚ）， １１７．３５， １０６．５９ （ｂｒ）， ８３．１０， ６１．４０， ６０．５３ （２Ｃ）， ５６．４９， ４４．１７， ３８．９９， ２８．５５， ２７．８２， ２７．０２， ２４．６３ ｐｐｍ；Ｃ_２６Ｈ_３１ＢＦ_４Ｎ_６Ｏ_３ （分子量５６２．３７）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ５６３ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0108】

２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（８）。窒素注入口、サーモカップル、添加漏斗及びマグネティックスターラーを装備した２５ｍＬフラスコへ、２－（１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－３－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（１１、３０７ｍｇ、０．５４６ｍｍｏｌ）、４－クロロ－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（４、８４．８ｍｇ、０．５４８ｍｍｏｌ、１．０当量）、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３、２２９ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ、５．０当量）、水（１．６ｍＬ）及び１，４－ジオキサン（１．６ｍＬ）を、周囲温度で添加した。次いで混合物をテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１２．８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．０２当量）により周囲温度で処理し、もたらされた反応混合物を脱気し、窒素を３回補充し、その後８５℃へ加熱した。反応混合物を窒素下で８５℃で一晩撹拌した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した時に、反応混合物を減圧下で濃縮乾固し、乾燥された反応混合物の直接的なシリカゲル（ＳｉＯ_２）カラムクロマトグラフィー（ヘキサン勾配溶出において０～１０％の酢酸エチル）精製によって、所望される生成物（２－（３－（４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１－（１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル）アセトニトリル（８、遊離塩基、１３５ｍｇ、理論上３０２．２ｍｇ、４４．６％）を、灰白色固体として得た。この合成アプローチによって得られた化合物は、すべての類似する態様において、実施例１における上記の合成方法によって製造された化合物８に同一である。

【0109】

実施例３。１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）の合成
スキームＩＩＩ

【化24】

（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４，５］デカノ－８－イル）メタノン（１４）。メカニカルスターラー、添加漏斗及び隔壁を装備した３０Ｌの反応器へ、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、１．４ｋｇ、３５ｍｏｌ、２．０当量）及び水（７Ｌ）を充填し、もたらされた溶液を１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４．５］デカン塩酸塩（３．１３ｋｇ、１７．４３ｍｏｌ）により周囲温度で処理した。次いでもたらされた混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、その後固体の塩化ナトリウム（１．３ｋｇ）により飽和させ、２－メチル－テトラヒドロフラン（３×７Ｌ）により抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４、１．３ｋｇ）により乾燥させ、濾過によって乾燥剤（硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４））を除去した後に、減圧下（７０ｍｍＨｇ）で５０℃で濃縮した。このようにして得られた黄色油を減圧下（８０ｍｍＨｇ、沸点１１５～１２０℃）で蒸留して、透明な油として、１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４．５］デカン（２．３４ｋｇ、理論上２．４９６ｋｇ、９３．８％）を得て、それを後続のカップリング反応において直接使用した。メカニカルスターラー、添加漏斗、温度計及び真空排気口を装備した乾燥された１００Ｌの反応器へ、３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１３、３．０ｋｇ、１４．３５ｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ試薬、７．６ｋｇ、１７．２ｍｏｌ、１．２当量）、１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４．５］デカン（２．３４ｋｇ、１６．３６ｍｏｌ、１．１４当量）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１８Ｌ）を、周囲温度で充填した。次いでもたらされた溶液を周囲温度で２０分間撹拌し、その後５～１０℃へ冷却した。次いでトリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ、４Ｌ、２８．６７ｍｏｌ、２．０当量）を、反応混合物へ１時間にわたって添加し、内部温度をトリエチルアミンの添加の間に５℃～１０℃の間で保った。このようにして得られた暗褐色溶液を周囲温度（およそ２０℃）で１２時間撹拌し、次いでおよそ１０℃へ冷却した。激しく撹拌しながら、１８Ｌの重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）飽和水溶液及び３６Ｌの水を、冷却した反応混合物へ逐次的に添加し、内部温度を１５℃より下で保った。このようにして得られた沈殿（フィルターケーキ）を濾過によって収集した。次いで水相を１２ｋｇの固体の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）により飽和させ、ＥｔＯＡｃにより抽出した（２×１８Ｌ）。合わせた有機層を、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）飽和水溶液（１８Ｌ）及び水（２×１８Ｌ）により逐次的に洗浄した。次いで収集されたフィルターケーキを有機相中に戻して溶解し、もたらされた暗褐色溶液を水（２×１８Ｌ）により洗浄し、その後減圧下（４０～５０℃、３０ｍｍＨｇ）で濃縮して、粘性のある茶色油として、およそ５．０ｋｇの粗製の所望される生成物（１４）を得た。次いで上で得られた粗生成物をＥｔＯＨ（８．１５Ｌ）中で５０℃で溶解し、もたらされた溶液をおよそ５０℃で３０分間にわたって水（１６．３Ｌ）により処理した。茶色溶液をシーディングし、その後撹拌しながら３時間にわたって周囲温度（およそ２０℃）へ徐冷し、周囲温度で１２時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、ＥｔＯＨ及び水の混合物（ＥｔＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１：２０、２Ｌ）により洗浄し、およそ６０℃で２４時間減圧（５０ｍｍＨｇ）下で乾燥させて、白色固体として、（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４，５］デカノ－８－イル）メタノン（１４、３．９８ｋｇ、理論上４．７９７ｋｇ、８３．０％）を得た。１４について：^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．６４ （ｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６８ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）， ７．９２ （ｄｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６８ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＨＦ ＝ ４．６８ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， ３．８７ － ３．９１ （ｍ， ４Ｈ， ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）， ３．７０ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ， 両者はアキシアル位である）， ３．２６ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ５．８６ Ｈｚ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はエクアトリアル位である）， １．６７ （ｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ５．８６ Ｈｚ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＣＨ_２のうちの１つ，両者はエクアトリアル位である）， １．５８ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＣＨ_２のうちの１つ，両者はアキシアル位である） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （７５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １６１．０３ （Ｎ－Ｃ＝Ｏ）， １５１．１６ （ｄ， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２６６．０３ Ｈｚ， Ｃ－Ｆ）， １４６．８５ （ｄ， ^４Ｊ_ＣＦ ＝ ４．３２ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＨ）， １３５．２４ （ｄ， ^２Ｊ_ＣＦ ＝ １１．５１ Ｈｚ， Ｃ－Ｃ＝Ｏ）， １３５．０２ （四重線， ^２Ｊ_ＣＦ ＝ ３４．５７ Ｈｚ， ＮＣＣＦ_３）， １２８．２４ （ｄ， ^４Ｊ_ＣＦ ＝ ７．４８ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， １１９．４３ （ｄ × 四重線， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２７４．３８ Ｈｚ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ４．８９ Ｈｚ， ＣＦ_３）， １０６．７４ （ＯＣＯ）， ６４．６０ （ＯＣＣＯ）， ４５．３４ ピペリジン環中のＮＣ）， ３９．６２（ピペリジン環中のＮＣ）， ３４．７９（ピペリジン環中のＮＣＣ）， ３４．１０ ピペリジン環中のＮＣＣ） ｐｐｍ；^１９Ｆ ＮＭＲ （２８２ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ －６４．６９ （ｄ， ^４Ｊ_ＦＦ ＝ １５．８５ Ｈｚ， Ｆ_３Ｃ）， －１２９．２６ （ｄ × 四重線， ^４Ｊ_ＦＦ ＝ １５．８５ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＦＨ ＝ ３．９６ Ｈｚ， ＦＣ） ｐｐｍ；Ｃ_１４Ｈ_１４Ｆ_４Ｎ_２Ｏ_３ （分子量， ３３４．２７）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ３３５．１ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0110】

１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）。メカニカルスターラー、サーモカップル、添加漏斗及び窒素注入口を装備した５Ｌの四つ首の丸底フラスコ中に、アセトニトリル（ＡＣＮ、４００ｍＬ）中の（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（１，４－ジオキサ－８－アザスピロ［４，５］デカノ－８－イル）メタノン（１４、１００ｇ、０．２９９ｍｏｌ）を、周囲温度で充填した。もたらされた溶液を１０℃未満へ冷却し、その後内部温度を１０℃未満で保ちながら、６．０Ｎの塩酸（ＨＣｌ）水溶液（４５０ｍＬ、２．７０ｍｏｌ、９．０当量）により処理した。次いでもたらされた反応混合物を室温へ徐々に暖め、追加量の６．０Ｎの塩酸（ＨＣｌ）水溶液（１０５０ｍＬ、６．３０ｍｏｌ、２１．０当量）を、添加漏斗経由で周囲温度で８時間にわたって反応混合物へゆっくり導入した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了した時に、次いで反応混合物を０℃へ冷却し、その後内部温度を１０℃未満で保ちながら、３０％の水酸化ナトリウム水溶液（ＮａＯＨ、８６０ｍＬ、８．５７ｍｍｏｌ、２８．６当量）により処理した。後続して、もたらされた反応混合物を周囲温度へ暖め、その後１時間にわたって固体の重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３、８５．０ｇ、１．０１ｍｏｌ、３．３７当量）を添加した。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（２×１．２Ｌ）により抽出し、合わせた有機相を１６％の塩化ナトリウム水溶液（２×８００ｍＬ）により洗浄し、真空蒸留によっておよそ１．０Ｌへ濃縮した。ｎ－ヘプタン（２．１Ｌ）を残留物へ添加し、もたらされた混合物を真空蒸留によって１．０Ｌへ濃縮した。濃縮混合物へ、ｎ－ヘプタン（２．１Ｌ）を添加した。次いでもたらされた白色スラリーを真空蒸留によって１．０Ｌへ濃縮した。次いで白色スラリーへ、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、１．９４Ｌ）を添加した。白濁物を４０℃へ加熱して、透明な溶液を得た。もたらされた溶液を真空蒸留によって約１．０Ｌへ濃縮した。混合物を室温で１時間撹拌した。白色沈降物を濾過によって収集し、ｎ－ヘプタン（４００ｍＬ）により洗浄し、吸引真空により窒素下でフィルター上で乾燥させて、灰白色固体として、１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７、７８．３ｇ、理論上８６．８ｇ、９０．２％の収率、及びＨＰＬＣによって測定して９８％の純度をもたらす）を得た。７について：^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．６８ （ｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）， ７．９７ （ｄｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＨＦ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， ３．９２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はアキシアル位である）， ３．５４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はエクアトリアル位である）， ２．４８ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．４４ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ_２）， ２．３４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ_２） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （７５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ２０７．１７ （Ｃ＝Ｏ）， １６１．６６ （Ｎ－Ｃ＝Ｏ）， １５１．２６ （ｄ， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２６６．８９ Ｈｚ， Ｃ－Ｆ）， １４６．９０ （ｄ， ^４Ｊ_ＣＦ ＝ ６．０５ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＨ）， １３５．５６ （Ｃ－Ｃ＝Ｏ）， １３４．７８ －１３５．５６ （ｍ， ＮＣＣＦ_３）， １２８．２７ （ｄ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ７．１９ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， １１９．５２ （ｄ× 四重線， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２７４．３８ Ｈｚ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ４．８９ Ｈｚ， ＣＦ_３）， ４５．１０ （ピペリジン環中のＮＣ） ｐｐｍ，１つの炭素（ピペリジン環中のＮＣＣ）が（ＣＤ_３）_２ＳＯとのオーバーラップに起因して欠損する；^１９Ｆ ＮＭＲ （２８２ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ －６４．５８ （ｄ， ^４Ｊ_ＦＦ ＝ １５．８５ Ｈｚ， Ｆ_３Ｃ）， －１２８．９０ （ｄ × 四重線， ^４Ｊ_ＦＦ ＝１ ５．８５ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＦＨ ＝ ４．０５ Ｈｚ， ＦＣ） ｐｐｍ；Ｃ_１２Ｈ_１０Ｆ_４Ｎ_２Ｏ_２ （分子量， ２９０．２１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２９１．１ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0111】

実施例４。ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチレン）アゼチジン－１－カルボキシレートの合成
スキームＩＶ

【化25】

１－ベンズヒドリルアゼチジン－３－オール塩酸塩（１６）。メタノール（ＭｅＯＨ、６Ｌ）中のジフェニルメタンアミン（２７３７ｇ、１５．０ｍｏｌ、１．０４当量）の溶液を、添加漏斗からの２－（クロロメチル）オキシラン（１３３０ｇ、１４．５ｍｏｌ）により周囲温度で処理した。初回添加の間に、わずかな吸熱が認められた。もたらされた反応混合物を室温で３日間撹拌し、その後追加の３日間温めて還流させた。ＴＬＣが反応が完了しているであろうことを示した時に、反応混合物を、最初に室温へ、次いで氷浴中で０～５℃へ冷却した。固体を濾過によって収集し、アセトン（４Ｌ）により洗浄して、所望された粗生成物の第１の収穫物（１５１６ｇ）を得た。濾液を減圧下で濃縮し、もたらされた半固体をアセトン（１Ｌ）により希釈した。次いでこの固体を濾過によって収集して、所望される粗生成物の第２の収穫物（２２１ｇ）を得た。粗生成物である１－ベンズヒドリルアゼチジン－３－オール塩酸塩（１７３７ ３９９８．７ｇ理論上ｇ、４３．４％の収率）は、さらなる精製無しに後続反応において使用するのに十分に純粋であることが見出された。^１ＨＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．２８ （ｂｒ． ｄ， １Ｈ）， ７．７ （ｍ， ５Ｈ）， ７．４９ （ｍ， ５Ｈ）， ６．３８ （ｄ， １Ｈ）， ４．７２ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８５ （ｍ， ２Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_１６Ｈ_１８ＣｌＮＯ （分子量２７５．７７；遊離塩基についてＣ_１６Ｈ_１７ＮＯ，分子量， ２３９．３１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２４０ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0112】

ｔｅｒｔ－ブチル３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボキシレート（１７）。１０％の炭酸ナトリウムの水溶液（Ｎａ_２ＣＯ_３、５Ｌ）及びジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２、５Ｌ）中の１－ベンズヒドリルアゼチジン－３－オール塩酸塩（６２５ｇ、２．２７ｍｏｌ）の懸濁物を、固体がすべて溶解するまで室温で撹拌した。２つの層を分離し、水層をジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２、２Ｌ）により抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）の上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次いでもたらされた粗製１－ベンズヒドリルアゼチジン－３－オール遊離塩基をＴＨＦ（６Ｌ）中で溶解し、溶液を大きなＰａｒｒボンベの中へ置いた。ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカルボナート（ＢＯＣ_２Ｏ、５４５ｇ、２．５ｍｏｌ、１．１当量）及び２０％の炭素担持パラジウム（Ｐｄ）（１２５ｇ、水分５０％）を、Ｐａｒｒボンベへ添加した。容器に水素気体（Ｈ_２）を３０ｐｓｉまで充填し、一定の水素雰囲気（容器に３回再充填して３０ｐｓｉの圧力を維持した）下で室温で１８時間撹拌した。ＨＰＬＣが反応が完了したことを示した時に（これ以上水素が取り込まれなかった）、反応混合物をセライトパッドを介して濾過し、セライトパッドをＴＨＦ（４Ｌ）により洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、残留物を最小量のジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）とともにＢｉｏｔａｇｅ １５０カラム上に入れた。カラムをｎ－ヘプタン中の２０～５０％の酢酸エチルにより溶出し、純粋な所望される生成物であるｔｅｒｔ－ブチル３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボキシレートを含有する画分を収集し、合わせた。溶媒を減圧下で除去して、無色油として、ｔｅｒｔ－ブチル３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボキシレート（３５７ｇ、理論上３９３．２ｇ、９０．８％の収率）を得て、それは真空で周囲温度で放置すると固体化した。^１ＨＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）， δ ４．５６ （ｍ １Ｈ）， ４．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， １．４３ （ｓ， ９Ｈ） ｐｐｍ．

【0113】

ｔｅｒｔ－ブチル３－オキソアゼチジン－１－カルボキシレート（１８）。酢酸エチル（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－ヒドロキシアゼチジン－１－カルボキシレート（５０ｇ、２８９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃へ冷却した。次いでもたらされた溶液を、固体のＴＥＭＰＯ（０．５ｇ、３．２ｍｍｏｌ、０．０１１当量）、及び水（６０ｍＬ）中の臭化カリウム（ＫＢｒ、３．９ｇ、３３．２ｍｍｏｌ、０．１１５当量）の溶液により０～５℃で処理した。０～５℃の間で反応温度を保ちながら、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（ＮａＨＣＯ_３、４５０ｍＬ）及び次亜塩素酸ナトリウム水溶液（ＮａＣｌＯ、１０～１３％の有効塩素、４５０ｍＬ）を添加した。次亜塩素酸ナトリウムの溶液を添加すると、反応混合物の色は直ちに変化した。追加量の次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加した時に、反応混合物の色は徐々に退色した。ＴＬＣが出発材料のすべてが消費されたことを示した時に、反応混合物の色はもはや変化しなかった。次いで反応混合物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、５００ｍＬ）により希釈し、２つの層を分離した。有機層を、水（５００ｍＬ）及び塩化ナトリウム飽和水溶液（５００ｍＬ）により洗浄し、硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）の上で乾燥させた。次いで溶媒を減圧下で除去して、粗生成物（ｔｅｒｔ－ブチル３－オキソアゼチジン－１－カルボキシレート（４８ｇ、理論上４９．４７ｇ、９７％の収率））を得て、これは、さらなる精製無しに後続反応において直接使用するのに十分に純粋であることが見出された。^１ＨＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ ４．６５ （ｓ， ４Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ） ｐｐｍ．

【0114】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチレン）アゼチジン－１－カルボキシレート（２）。ジエチルシアノメチルホスフェート（７４５ｇ、４．２０ｍｏｌ、１．２０当量）及び無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、９Ｌ）を、サーモウェル、添加漏斗及び窒素保護チューブを装備した四つ首のフラスコへ室温で添加した。溶液を氷メタノール浴により－１４℃へ冷却し、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３．８５Ｌ）中の１．０Ｍのカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ｔ－ＢｕＯＫ）（３．８５ｍｏｌ、１．１当量）の溶液を、反応温度を－５℃未満に保って、２０分間にわたって添加した。もたらされた反応混合物を－１０℃で３時間撹拌し、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２Ｌ）中の１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－３－アゼチジノン（６００ｇ、３．５０ｍｏｌ）の溶液を、内部温度を－５℃未満で保って、２時間にわたって添加した。反応混合物を－５～－１０℃で１時間にわたって撹拌し、次いでゆっくり室温まで暖め、室温で一晩撹拌した。次いで反応混合物を水（４．５Ｌ）及び塩化ナトリウム飽和水溶液（ＮａＣｌ、４．５Ｌ）により希釈し、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、２×９Ｌ）により抽出した。合わせた有機層をブライン（６Ｌ）により洗浄し、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）の上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物をジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２、４Ｌ）により希釈し、その後シリカゲル（ＳｉＯ_２、１．５ｋｇ）の上で吸収させた。シリカゲル上で吸収させた粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、３．５ｋｇ、０～２５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配溶出）によって精製して、白色固体として、ｔｅｒｔ－ブチル３－（シアノメチレン）アゼチジン－１－カルボキシレート（２、４１４．７ｇ、理論上６７９．８ｇ、６１％の収率）を得た。２について：^１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ５．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_１０Ｈ_１４Ｎ_２Ｏ_２ （分子量， １９４．２３）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２１７ （Ｍ^＋ ＋ Ｎａ）．

【0115】

実施例５。４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾールの合成
スキームＶ

【化26】

４－ヨードピラゾール（２０）。窒素注入口、添加漏斗、サーモウェル及びメカニカルスターラーを装備したフラスコに、ピラゾール（１、４５０ｇ、６．６２ｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５Ｌ）を、周囲温度で充填した。次いで混合物を１０℃へ冷却し、Ｎ－ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ、１４９０ｇ、６．６２ｍｏｌ、１．０当量）を固体として小分けで混合物へおよそ１０℃で添加した。次いでもたらされた反応混合物を、周囲温度で１時間（周囲温度に依存してより長い反応時間は必要であり得る）撹拌した。次いで混合物を濾過し、ＴＨＦを減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル（６Ｌ）中で懸濁し、不溶性物質を濾過した。黒ずんだ濾液を、チオ硫酸ナトリウム飽和水溶液（２×３Ｌ）（有機層は淡黄色に明るくなる）、水（２×３Ｌ）及びブライン（２Ｌ）により逐次的に洗浄した。次いでもたらされた有機層を硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、真空オーブン中でおよそ３０℃で一晩乾燥させた後に、白色から淡黄色の固体として、４－ヨードピラゾール（１１３８ｇ、理論上１２８４．１ｇ、８８．６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．１７ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｂｓ，１Ｈ）， ７．５５ （ｂｓ，１Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_３Ｈ_３ＩＮ_２ （分子量， １９３．９７）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ １９５ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0116】

１－トリメチルシリル－４－ヨードピラゾール（２１）。還流冷却器、窒素注入口、メカニカルスターラー及びサーモウェルを装備したフラスコへ、４－ヨードピラゾール（２００ｇ、１．０３ｍｏｌ）及びＴＨＦ（２Ｌ）を、周囲温度で充填した。この溶液へ、トリエチルアミン（ＴＥＡ、１５８ｍＬ、１．１３ｍｏｌ、１．１当量）を添加し、もたらされた溶液を氷－ブライン浴中で０℃へ冷却した。この溶液へ、クロロトリメチルシラン（ＴＭＳ－Ｃｌ、１３７ｍＬ、１．０８ｍｏｌ、１．０５当量）を激しく撹拌ながら添加し、温度を１８℃に到達させた（反応物は非常に濃厚であり撹拌するのが難しくなるが、時間がたった後に扱いやすくなる）。発熱性プロセスが静まった時に、冷浴を除去し、反応物を室温へ暖めた。ＧＣによって反応を追跡し約１時間後に完了しているだろうことが見出された（反応物のサンプリングを空気が無い状態で行い、無水溶媒により希釈して、ＴＭＳの加水分解を防止しなくてはならない）。次いで反応混合物をｎ－ヘプタン（２Ｌ）により希釈し、その後窒素下で濾過した。ロータリーエバポレーターを窒素により通気して減圧下で、溶媒を濾液から除去した。残留油をｎ－ヘプタン（１Ｌ）により希釈し、再濃縮した。ｎ－ヘプタンの添加に際して固体が形成されたならば、第２の濾過が必要であった。次いでＫｕｇｅｌｏｈｒを使用して減圧下（約０．５Ｔｏｒｒで７０～９０℃）で残留物を蒸留して、無色油として、１－トリメチルシリル－４－ヨードピラゾール（２６３ｇ、理論上２７４．１ｇ、９６％）を得た。ＴＭＳ基が迅速に加水分解するので、この物質は常に窒素下で保たなくてはならない。後続して、１－トリメチルシリル－４－ヨードピラゾールは、ヨードピラゾールを２当量のヘキサメチルジシラザンと１時間加熱することによって調製できることが見出された。

【0117】

４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１）。メカニカルスターラー、窒素注入口、添加漏斗及びサーモウェルを装備したフラスコに、１－トリメチルシリル－４－ヨードピラゾール（２２５．１ｇ、０．８５ｍｏｌ）及びＴＨＦ（２２００ｍＬ）を周囲温度で充填した。この混合物を氷／塩／ブライン浴中でおよそ－６℃へ冷却し、その後ＴＨＦ中のイソプロピル塩化マグネシウムの溶液（ＴＨＦ中で２Ｍの溶液、５１０ｍＬ、１．０２ｍｏｌ、１．２当量）を、内部温度が０℃を越えないような率で添加した。金属／ハロゲン交換の程度をＧＣによってモニタリングし、約１０分間後に完了したことが見出された。次いで橙褐色溶液へ、２－イソプロポキシ－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（イソプロピルピナコールボレート、３４７ｍＬ、１．７ｍｏｌ、２．０当量）を、０℃未満の温度を保って、最初はゆっくり、次いで約半分の化合物を添加した後にかなり迅速に添加し、温度を５℃に到達させた（反応物はかなり濃厚になり、次いでゆっくり粘度が低下した）。次いで反応物を０℃で１０分間撹拌し、その後周囲温度へ１時間にわたって暖め、周囲温度で追加の１時間撹拌した。反応混合物をおよそ６℃へ冷却し、塩化アンモニウム飽和水溶液（ＮＨ_４Ｃｌ、２．２Ｌ）を添加し、温度は２５℃へ増加した。混合物を５分間撹拌し、その後トルエン（１０Ｌ）により希釈した。層を分離し（多量の固体が水層中に存在する）、有機層を水（６×２．２Ｌ）及びブライン（２×２．２）により逐次的に洗浄し、その後硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）の上で乾燥させた。乾燥剤である硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）を濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮した。残留トルエンをｎ－ヘプタンと共蒸発させて、白色固体として、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１、９０．３ｇ、理論上１６４．９ｇ、５４．８％）を得た。１について：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．０８ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ，１Ｈ）， ７．６２ （ｓ，１Ｈ）， １．２３ （ｓ， １２Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_９Ｈ_１５ＢＮ_２Ｏ_２ （分子量， １９４．０４）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ １９５ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0118】

実施例６。４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾールの代替合成
スキームＶＩ

【化27】

４－ブロモピラゾール（２２）。ピラゾール（１９、３４．０ｇ、０．５ｍｏｌ）及びＮＢＳ（８９．０ｇ、０．５ｍｏｌ、１．０当量）を、水（６２５ｍｌ）中で周囲温度で懸濁した。もたらされた懸濁物を、周囲温度で一晩撹拌した。次いで反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）により抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物をＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液及びブラインにより洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４の上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、白色固体として、粗製４－ブロモピラゾール（７２．０ｇ、理論上７３．５ｇ、９８％の収率）を得て（ＧＣ純度：＞９８％）、それはさらなる精製無しに後続反応中で直接使用した。

【0119】

４－ブロモ－１－（エトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾール（２３）。ＣＨ_２Ｃｌ_２（６００ｍＬ）中の４－ブロモピラゾール（７０．０ｇ、０．４７６ｍｏｌ）の溶液へ、ジオキサン（４ｍＬ）及びエチルビニルエーテル（４１ｇ、０．５６９ｍｏｌ、１．２当量）中の３．１ＭのＨＣｌの溶液を、周囲温度で添加した。もたらされた反応混合物を周囲温度で３時間撹拌した。反応物をＮａＨＣＯ_３水溶液によりクエンチし、２つの層を分離した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４の上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、水により洗浄して、油として、４－ブロモ－１－（エトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾール（１１３ｇ、理論上１０４．３ｇ、９７％の収率）を得て（ＧＣ純度：８９％）、それはさらなる精製無しに後続反応中で直接使用した。

【0120】

１－（エトキシエチル）－４－（４，４，５，５－テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（２４）。ＴＨＦ中のｉＰｒＭｇＣｌ．ＬｉＣｌ（５０ｍｍｏｌ、１．８当量）の１００ｍｌの溶液へ、４－ブロモ－１－（エトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾール（６．１５ｇ、２８ｍｍｏｌ）を、周囲温度で添加した。もたらされた反応混合物を周囲温度で１２時間撹拌し、次いで－２０℃へ冷却した。次いでメトキシピナコールボレート（１０．６ｇ、６７ｍｍｏｌ、２．４当量）を、反応混合物へ－２０℃で添加した。もたらされた混合物を０～１０℃で１時間撹拌した。ＮＨ_４Ｃｌ水溶液を添加して、反応物をクエンチした。次いで混合物を石油エーテル（ＰＥ）により抽出した。合わせたＰＥ抽出物を飽和ＮａＨＣＯ_３により洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４の上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をＰＥ中で結晶化して、白色から灰白色の固体として、１－（エトキシエチル）－４－（４，４，５，５－テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（２４、４．２ｇ、理論上７．４５ｇ、５６．４％の収率）を得た（ＧＣ純度：９９％）。２４について：^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ） δ ８．０９ （ｓ， １Ｈ）， ８．５８ （ｓ，１Ｈ）， ７．６２ （ｓ，１Ｈ）， ５．５５ （ｑ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）， ３．３７ （ｄｑ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．１， ９．６ Ｈｚ）， ３．１２ （ｄｑ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．０， ９．７ Ｈｚ）， １．５６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， １．２４ （ｓ， １２Ｈ）， １．００ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ） ｐｐｍ；Ｃ_１３Ｈ_２３ＢＮ_２Ｏ_３ （分子量， ２６６．１４）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２６７ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0121】

４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１）。１，２－ジクロルエタン（７５０ｋｇ）中の２，３－ジメチルブタン－２，３－ジオール（２５．０ｋｇ、２１１．６ｍｏｌ）及び１－（１－エトキシエチル）－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（２４，５５．０ｋｇ、２０６．７ｍｏｌ）の混合物へ、ＭＴＢＥ（２５．０ｋｇ、ＨＣｌの２０～３０％）中のＨＣｌの溶液を、０～５℃でゆっくり添加した。次いでもたらされた反応混合物を、１０～２０℃で３～５時間撹拌した。ＨＰＬＣによってモニタリングして選択的脱保護反応が完了した後に（１：１％未満）、反応混合物を脱気し、窒素を補充し、その後－１５℃へ冷却した。次いで冷却した反応混合物にトリエチルアミン（ＴＥＡ、３０．０ｋｇ、２９６．５ｍｏｌ）を添加して、ｐＨを７～８へ調整した。次いで混合物を周囲温度へ徐々に暖め、その後水（１５０ｋｇ）により処理した。２つの相を分離し、有機層をブライン（６０ｋｇ）により洗浄し、硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）の上で乾燥させた。乾燥剤である硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）を濾過によって除去し、もたらされた溶液を減圧下で４０～５０℃で濃厚な油へ濃縮した。残留物を６０～７０℃へ暖め、石油エーテル（１００ｋｇ）により同じ温度で希釈した。次いでもたらされた混合物を、徐々に周囲温度へ後続して－５℃へ冷却し、同じ温度で３時間撹拌した。固体を遠心分離によって収集し、５０～６０℃で真空下で乾燥させて、所望される粗生成物（１、３３．７５ｋｇ、理論上４０．１１ｋｇ、８４．１％）を得た。次いで所望される粗生成物を１，２－ジクロルエタン（３０ｋｇ）中で懸濁し、透明な溶液が形成されるまで、もたらされた混合物を加熱還流した。次いで高温の溶液へ、石油エーテル（１５０ｋｇ）を同じ温度で添加した。次いでもたらされた混合物を、徐々に周囲温度へ後続して－５℃へ冷却し、同じ温度で３時間撹拌した。固体を遠心分離によって収集し、５０～６０℃で真空下で乾燥させて、灰白色固体として、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１、３１．０ｋｇ、理論上４０．１１ｋｇ、７７．３％）を得て、それは、すべての類似する態様において、実施例５における上記の合成方法によって合成された材料に同一である。

【0122】

実施例７。４－クロロ－７Ｈ－［ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジンの合成
スキームＶＩＩ

【化28】

４，６－ジクロロピリミジン－５－カルバルデヒド（２６）。メカニカルスターラー、添加漏斗、コンデンサー、サーモカップル及びＮａＯＨスクラビング水溶液の中へのＮ_２スイープを装備した５Ｌの四つ首フラスコ中に、オキシ塩化リン（ＰＯＣｌ_３、１Ｌ、１０．５７２ｍｏｌ、４．８２当量）を、氷／塩浴中で充填し冷却した。次いでＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、３２０ｍＬ、４．１３８ｍｏｌ、１．８５当量）を、フラスコへ０±２℃で滴加した。およそ０．５時間にわたっておよそ１００ｍＬのＤＭＦを添加した後に、結晶化が起こり、反応温度は０から１０℃へ増加した。添加を停止し、混合物をおよそ２℃へ再度冷却した。残りのＤＭＦを８℃未満で２．５時間にわたって添加した。懸濁物は非常に濃厚になり、撹拌を困難にした。ＤＭＦの添加が完了した時に、混合物を３～５℃で０．５時間撹拌した。４，６－ジヒドロキシピリミジン（２５０ｇ、２．２３２ｍｏｌ）を、固体として小分けで添加した。４，６－ジヒドロキシピリミジンのうちの約３分の１を添加した後に、反応混合物はより流動性になり、遅い発熱性の現象が起こり、反応温度はおよそ１２℃へ０．５時間にわたって増加した。残りの４，６－ジヒドロキシピリミジンを０．２５時間にわたって小分けで添加し、反応温度は１２から２７℃へ増加した。反応温度を間欠的な冷却により２５～２７℃で維持しその時間の間に、黄色懸濁物は粘度が低下し、次いでもう一度濃厚になった。発熱現象が約１時間で静まった後に、反応混合物をゆっくり加熱した。約５５℃で、反応混合物は非常に濃厚になり、第２の穏やかな発熱現象が起こった。加熱マントルを除去したが、反応温度は約６３℃へ増加し続け、この温度で数分間とどまり、その後低下した。温和な還流（約１００℃）が達成されるまで、混合物の加熱を再開した。約９５℃で、ＨＣｌガスの安定したかなり急速な発生が開始し、反応混合物は徐々に粘度が低下し黒ずんできた。約０．５時間後に、透明な茶色溶液が生じ、還流温度は１１５℃へ１．２５時間にわたってゆっくり増加した。合計で２．５時間の還流後に、反応混合物を周囲温度へ冷却し、周囲温度で一晩撹拌した。過剰量のＰＯＣｌ_３（可能な限り）を減圧下で除去した（浴温４５～５０℃）。濃厚な残留した茶色油を、２０Ｌの分離漏斗中で冷Ｈ_２Ｏ（５Ｌ）の中へ非常にゆっくり注ぎ、必要に応じて氷を添加して、室温の近くで水性混合物を維持した。水性混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×３Ｌ、続いて１×２Ｌ）により抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物をＨ_２Ｏ（２×２．５Ｌ）、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（１Ｌ）、ブライン（１Ｌ）により洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して（３５℃の浴温）、黄橙色固体として、粗製４，６－ジクロロピリミジン－５－カルバルデヒド（２７０ ３９５ｇ理論上ｇ、６８．４％）を得た。この粗製材料の２０ｇの小分けを、Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留（９０～１００℃のオーブン温度、２２５ｍＴｏｒｒ）によって精製して、室温で放置すると黄色になる白色固体として、１５．３ｇの純粋な４，６－ジクロロピリミジン－５－カルバルデヒドを得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．４６ （ｓ， １Ｈ）， ８．８９ （ｓ，１Ｈ） ｐｐｍ．

【0123】

４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒド（２７）。ＭｅＯＨ（２６５ｍＬ、１．８５５ｍｏｌ、２．０当量）中の７ＭのＮＨ_３の溶液を、トルエン（３Ｌ）中の４，６－ジクロロピリミジン－５－カルバルデヒド（１６３．７ｇ、０．９３０１ｍｏｌ）の溶液へ周囲温度で１．２５時間にわたって添加した。反応温度は２０℃から２６℃へゆっくり増加し、黄色懸濁物が形成された。穏やかな冷却を適用して、反応温度を２６℃未満で維持した。懸濁物を周囲温度で３．５時間撹拌し、その後固体を濾過によって収集した。固体をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）により洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、固体をトルエン及びｎ－ヘプタン（２：１ ｖ／ｖ、６００ｍＬ）により粉砕し、濾過し、乾燥させて、黄色固体として、７１．１ｇの４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒドを得た。反応混合物から濾過した元の固体は、追加量の４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒドを含有していた。ＥｔＯＡｃ（１．２５Ｌ）中で１．５時間撹拌し、濾過し、次いでＴＨＦ（７５０ｍＬ）中で１時間撹拌し、再び濾過することによって、生成物を濾過した固体から抽出した。ＥｔＯＡｃ及びＴＨＦの両方の濾液を減圧下で濃縮し、もたらされた固体をトルエン及びｎ－ヘプタン（２：１ ｖ／ｖ、４５０ｍＬ）により粉砕し、濾過し、乾燥させて、黄色固体として、追加の４４．１ｇの４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒドを得た。４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒドの合わせた収率（１１５．２ｇ、理論上１４６．５ｇ）は、７８．６％であった。^１ＨＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １０．２３ （ｓ， １Ｈ）， ８．７１ （ｂｓ，１Ｈ）， ８．５５ （ｂｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_５Ｈ_４ＣｌＮ_３Ｏ （分子量， １５７．５６）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ １５８ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0124】

６－クロロ－５－（２－メトキシビニル）ピリミジン－４－イルアミン（２８）。ＴＨＦ（１．５Ｌ）中の（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリド（２７６．０ｇ、０．８０７ｍｏｌ、１．１当量）の懸濁物を、氷／塩浴中で－２℃へ冷却し、ＴＨＦ中の１Ｍのカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＫＯｔＢｕ）（８０７ｍＬ、０．８０７ｍｏｌ、１．１当量）を、－２～－３℃で１．５時間にわたって添加した。深紅から橙色の混合物を、－２～－３℃で１時間撹拌した。次いで４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－カルバルデヒド（１１５．２ｇ、０．７３３８ｍｏｌ、１．０当量）を、容器及び漏斗をすすぐためにＴＨＦ（２００ｍＬ）を使用して、固体形態として小分けで反応混合物へ添加した。添加の間に、反応温度は－３から１３℃へ増加し、茶色に顕色した。反応温度が１０℃へ低下した時に、冷却浴を除去し、反応混合物を周囲温度へ温まらせ、周囲温度で４２時間撹拌した。反応混合物を－２℃へ冷却し、その後ＮＨ_４Ｃｌ飽和水溶液（７５０ｍＬ）のゆっくりした添加によってクエンチした。混合物を減圧下で濃縮して、大部分のＴＨＦを除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（３Ｌ）とＨ_２Ｏ（１Ｌ）との間で分配した。有機相を濾過して界面の不溶性物質を除去し、次いで２ＮのＨＣｌ（４×２５０ｍＬ）続いて３ＮのＨＣｌ（２×２５０ｍＬ）により抽出した。合わせたＨＣｌ抽出物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）により逆抽出し、次いでセライトを介して濾過して不溶性物質を除去した。濾液を氷／ブライン浴中で冷却し、６ＮのＮａＯＨ水溶液によりｐＨ８へ調整し、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）により抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物をブライン（１Ｌ）により洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４の上で乾燥させ、活性炭（１０ｇ）及びシリカゲル（１０ｇ）と共に１時間撹拌した。混合物をセライトを介して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）によりセライトパッドを洗浄した。濾液を濃縮し、残留ＥｔＯＡｃをｎ－ヘプタン（５００ｍＬ）と共蒸発させた。もたらされた褐色固体を高真空下で２時間ポンプで減圧して、粗製６－クロロ－５－（２－メトキシビニル）ピリミジン－４－イルアミン（７２．３ｇ、理論上１３６．２ｇ、５３．１％）を得た。所望される粗生成物を、さらなる精製無しに以下の反応物において使用した。粗生成物のサンプル（２．３ｇ）を、０～３５％のＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘプタンにより溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として、１．７ｇの純粋な６－クロロ－５－（２－メトキシビニル）ピリミジン－４－イルアミンを得て、それはＥ／Ｚ異性体の１対２の混合物であることが見出された。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）Ｅ異性体について： δ ８．０２ （ｓ， １Ｈ）， ７．０８ （ｂｓ， ２Ｈ）， ６．９２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．１）， ５．３５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ）， ３．６８ （ｓ， ３Ｈ） ｐｐｍ 及びＺ異性体について： δ ８．０６ （ｓ， １Ｈ）， ７．０８ （ｂｓ， ２Ｈ）， ６．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ）， ５．０２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ）， ３．６９ （ｓ， ３Ｈ） ｐｐｍ；Ｃ_７Ｈ_８ＣｌＮ_３Ｏ （分子量， １８５．６１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ １８６／１８８ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．

【0125】

４－クロロ－７Ｈ－［ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（４）。濃ＨＣｌ（５ｍＬ）を、ＴＨＦ（７００ｍＬ）中の粗製６－クロロ－５－（２－メトキシビニル）ピリミジン－４－イルアミン（７０．０ｇ、０．３７８４ｍｏｌ）の溶液へ添加し、もたらされた反応混合物を７．５時間加熱還流した。加温に際して、軽い懸濁物が形成され、それは徐々に再溶解した。ＨＰＬＣによってモニタリングして反応が完了したと見なされた時に、反応混合物を周囲温度へ冷却し、周囲温度で一晩撹拌した。固体ＮａＨＣＯ_３（１５ｇ）を反応混合物へ添加し、もたらされた混合物を周囲温度で１時間撹拌した。活性炭（７ｇ）、シリカゲル（７ｇ）及びＮａ_２ＳＯ_４（２０ｇ）を添加し、混合物を４０℃へ１時間加熱した。次いで混合物を周囲温度へ冷却し、セライトを介して濾過し、ＴＨＦ（１Ｌ）によりセライトパッドを洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、もたらされた固体を減圧下で乾燥させて、黄褐色固体として、粗製４－クロロ－７Ｈ－［ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（４、５８．１ｇ、理論上５８．１ｇ、１００％）を得た。この所望される粗生成物をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）中で５０～５５℃で溶解し、活性炭（３ｇ）により処理した。混合物を暖めながらセライトを介して濾過し、セライトパッドを暖めたＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）により洗浄した。濾液を約５００ｍＬへ濃縮し、懸濁物を周囲温度で一晩放置した。後続して懸濁物を０～５℃へ２時間冷却し、その後固体を濾過によって収集した。固体を乾燥させて、黄褐色結晶として、純粋な４－クロロ－７Ｈ－［ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（４、５４．５ｇ、理論上５８．１ｇ、９４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．５８ （ｂｓ， １Ｈ）， ８．５８ （ｓ，１Ｈ）， ７．６９ （ｄ，１Ｈ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ）， ６．５９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ） ｐｐｍ；ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ １５４／１５６ （Ｍ^＋ ＋Ｈ）．

【0126】

実施例８。１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）の代替合成
スキームＶＩＩＩ

【化29】

ステップ１：（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）メタノン（３０）。ジクロロメタン（２７０ｍＬ）中の３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１３）（５４．０１ｇ、２５８．３ｍｍｏｌ）の溶液へ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．３４ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）を、室温で添加した。この溶液へ、ジクロロメタン（８１ｍｌ）中の塩化オキサリル（３４．４１ｇ、２７１．２ｍｍｏｌ）を、添加漏斗経由で３０分間にわたって添加し、その間、内部温度を１５～２５℃で維持した。添加漏斗をジクロロメタン（２７ｍＬ）によりすすいだ。混合物を室温で２時間撹拌して、茶色溶液を得た。ジクロロメタンを減圧下で３０℃の温度で蒸留した。残留物をジクロロメタン（２７０ｍＬ）中で溶解し、溶媒を減圧下で３０℃で蒸留した。もたらされた残留物をジクロロメタン（２７０ｍＬ）中で溶解して、３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイルクロリド（２９）のジクロロメタン溶液を得た。別のフラスコへ、４－ヒドロキシピペリジン（３３．１８ｇ、３２８ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２７０ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１０８ｍＬ、６１９．９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３３℃へ加熱して、溶液を形成した。混合物を室温へ冷却した。溶液へ、ジクロロメタン中の３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイルクロリド（２９）を、２５～３５℃の温度で添加した。添加後に、混合物を２５～３５℃でもう１時間撹拌した。容器へ、水（４３０ｍＬ）及び３７％の塩酸（６２．４ｇ、６３３ｍｍｏｌ）を添加した。希釈塩酸を反応混合物へ２５℃未満の内部温度で添加した。混合物を３０分間撹拌した後に、有機相を分離によって収集した。有機相を９．５％のブライン（２１０ｇ）により洗浄した。水相を合わせ、ジクロロメタン（４３０ｍＬ）により抽出した。有機相を合わせ、４．５％のブライン（２１０ｍｌ）及び水（２１５ｍＬ）により洗浄した。２－メトキシ－２－メチルプロパン（ＴＢＭＥ）の中への溶媒交換によって、ジクロロメタンを除去した。ＴＢＭＥ（１３５ｍＬ）中の残留物を６０℃へ１時間加熱した。混合物を０℃へ徐冷して、（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）メタノンを結晶化させた。混合物を濾過し、湿潤ケーキをＴＢＭＥ（２７ｍＬ）により洗浄した。固体を５０℃で乾燥させて、薄茶色固体として、（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）メタノン（３０）（６９．９５ｇ、９２％）を得た。ＨＰＬＣ－ＭＳ： ２９３．０ （Ｍ＋Ｈ）． ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ３．０９ － ３．９９ （ｍ， ４Ｈ）；１，３７ － １．８０ （ｍ， ４Ｈ）；３．７５ （ｍ， １Ｈ）；４，８４ （ｄ， １Ｈ （ｂ））；８．６５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．７Ｈｚ）；７．８９ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４，７， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ３３，５， ３４，３， ３８．９， ４４．０， ６５．０， １２０．６， １２７．６， １３４．５， １３４．７， １４６．２， １５２．２；１６０．２． Ｃ_１２Ｈ_１２Ｆ_４Ｎ_２Ｏ_２ （分子量２９２．２３）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２９３．０ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．このプロセス経由の化合物３０の純度は、ＨＰＬＣによって測定して、約９８％よりも高いことが決定された。

【0127】

ステップ２：１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）。フラスコへ、（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル）（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）メタノン（３０）（５０ｇ、１７１．１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（７３３ｍＬ）、水（７６６ｍＬ）、重炭酸ナトリウム（７１．４ｇ、８４９．７）、炭酸ナトリウム（９９．１ｇ、８５．２ｍｍｏｌ）、臭化ナトリウム（１．７６ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）及び２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）（０．５３５ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を１５～２５℃で添加した。混合物を０～５℃へ冷却した。混合物へ、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－４，４，６－トリオン（２３．８ｇ、１０２ｍｍｏｌ）を、４つの小分けで１０分間にわたって添加した。混合物を０～５℃で３０分間撹拌し、次いで混合物を２０～２５℃へ３０分間で暖めた。混合物を２０～２５℃でもう１時間撹拌した後に、反応物を、メタノール（２６．２３ｍＬ、６４７．５ｍｍｏｌ）の添加によって２０～２５℃でクエンチした。混合物を２０分間撹拌し、セライト床を通して濾過した。セライト（２０ｇ）床をジクロロメタン（５０ｍＬ）により洗浄した。有機相を分離した。有機相を、６％のブライン（２６６ｇ）及び水（２５０ｍＬ）により逐次的に洗浄した。活性炭（３．５ｇ）を有機相へ添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後に、それをセライト（２０ｇ）床を通して濾過した。濾床をジクロロメタン（５０ｍＬ）により洗浄した。２－メトキシ－２－メチルプロパン（ＴＢＭＥ）の中への溶媒交換によってジクロロメタンを除去し、ＴＢＭＥ（１８０ｍＬ）中の残留物を５０～６０℃へ加熱した。ヘプタン（５００ｍＬ）を暖めた混合物（５００ｍＬ）へ徐々に添加し、その間、内部温度を５０℃より上で維持して、生成物を結晶化させた。混合物を１０℃へ徐冷し、濾過した。湿潤ケーキをヘプタン（２×７５ｍＬ）により洗浄した。固体を減圧下で乾燥させて、灰白色から茶色の固体として、１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）（４９．７ｇ、８７．９％の収率）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．６８ （ｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）， ７．９７ （ｄｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＨＦ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， ３．９２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はアキシアル位である）， ３．５４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はエクアトリアル位である）， ２．４８ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ＝ ６．４４ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ_２）， ２．３４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ_２） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （７５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ２０７．１７ （Ｃ＝Ｏ）， １６１．６６ （Ｎ－Ｃ＝Ｏ）， １５１．２６ （ｄ， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２６６．８９ Ｈｚ， Ｃ－Ｆ）， １４６．９０ （ｄ， ^４Ｊ_ＣＦ ＝ ６．０５ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＨ）， １３５．５６ （Ｃ－Ｃ＝Ｏ）， １３４．７８ －１３５．５６ （ｍ，ＮＣＣＦ_３）， １２８．２７ （ｄ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ７．１９ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， １１９．５２ （ｄ×四重線， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２７４．３８ Ｈｚ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ４．８９ Ｈｚ， ＣＦ_３）， ４５．１０ （ピペリジン環中のＮＣ） ｐｐｍ， １つの炭素（ピペリジン環中のＮＣＣ）が（ＣＤ_３）_２ＳＯとのオーバーラップに起因して欠損する；^１９Ｆ ＮＭＲ （２８２ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ －６４．５８ （ｄ， ^４Ｊ_ＦＦ ＝ １５．８５ Ｈｚ， Ｆ_３Ｃ）， －１２８．９０ （ｄ ×四重線， ^４Ｊ_ＦＦ ＝１ ５．８５ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＦＨ ＝ ４．０５ Ｈｚ， ＦＣ） ｐｐｍ；Ｃ_１２Ｈ_１０Ｆ_４Ｎ_２Ｏ_２ （分子量， ２９０．２１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２９１．１ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．このプロセス経由の化合物７の純度は、ＨＰＬＣによって測定されたように、約９０％～約９６％の間であることが決定された。

【0128】

酸化剤（例えばＴＥＭＰＯ）の使用の増加は、不純物形成の増加及び単離収率の減少をもたらし得ることが指摘される。より長い酸化時間も、不純物形成の増加及び単離収率の減少を導き得る。

【0129】

実施例９。１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）の代替合成
スキームＩＸ

【化30】

１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）。ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１３）（２０ｇ、９６．６５ｍｍｏｌ）の溶液へ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．１３ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を、室温で添加した。この溶液へ、ジクロロメタン（４０ｍｌ）中の塩化オキサリル（１２．７５ｇ、１００．４ｍｍｏｌ）を、添加漏斗経由で３０分間にわたって添加し、その間、内部温度を１５～２５℃で維持した。添加漏斗をジクロロメタン（１０ｍＬ）によりすすいだ。混合物を室温で２時間撹拌して、中間体の３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイルクロリドの茶色溶液を得た。溶液へ、４－ピペリドン一水和塩酸塩（１９．１ｇ、１２４．３ｍｍｏｌ）を充填した。混合物を０～５℃へ冷却し、水（２００ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（２０．２８ｇ、１９１．３ｍｍｏｌ）の水溶液を添加した。添加後に、混合物を室温へ暖め、２時間撹拌した。有機相を分離し、６％のブライン（１１０ｇ）及び水（１００ｍＬ）により逐次的に洗浄した。有機相へ、活性炭（１．４ｇ）を添加した。混合物を室温で６０分間撹拌した後に、混合物をセライト（５ｇ）床を通して濾過した。濾床をジクロロメタン（４０ｍＬ）により洗浄した。２－メトキシ－２－メチルプロパン（ＴＢＭＥ）の中への溶媒交換によってジクロロメタンを除去し、ＴＢＭＥ（１００ｍＬ）中の残留物を５０～６０℃へ加熱した。ヘプタン（２５０ｍＬ）を暖めた混合物（５００ｍＬ）へ徐々に添加し、その間、内部温度を５０℃より上で維持して、生成物を結晶化させた。混合物を１０℃へ徐冷し、濾過した。湿潤ケーキをヘプタン（２×４０ｍＬ）により洗浄した。固体を減圧下で乾燥させて、灰白色から茶色の固体として、１－（３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン－４－オン（７）（２５．８ｇ、９２．７％の収率）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．６８ （ｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）， ７．９７ （ｄｄ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ４．６９ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＨＦ ＝ ４．６９ Ｈｚ， １Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， ３．９２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はアキシアル位である）， ３．５４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ_２のうちの１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ_２のうちの１つ，両者はエクアトリアル位である）， ２．４８ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．４４ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ_２）， ２．３４ （ｔ， ^３Ｊ_ＨＨ ＝ ６．１５ Ｈｚ， ２Ｈ， ＮＣＣＨ^２） ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ （７５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ２０７．１７ （Ｃ＝Ｏ）， １６１．６６ （Ｎ－Ｃ＝Ｏ）， １５１．２６ （ｄ， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２６６．８９ Ｈｚ， Ｃ－Ｆ）， １４６．９０ （ｄ， ^４Ｊ_ＣＦ ＝ ６．０５ Ｈｚ， ピリジン中のＮＣＨ）， １３５．５６ （Ｃ－Ｃ＝Ｏ）， １３４．７８ －１３５．５６ （ｍ，ＮＣＣＦ_３）， １２８．２７ （ｄ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ７．１９ Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＣＨ）， １１９．５２ （ｄ×四重線， ^１Ｊ_ＣＦ ＝ ２７４．３８ Ｈｚ， ^３Ｊ_ＣＦ ＝ ４．８９ Ｈｚ， ＣＦ_３）， ４５．１０ （ピペリジン環中のＮＣ） ｐｐｍ，１つの炭素（ピペリジン環中のＮＣＣ）が（ＣＤ_３）_２ＳＯとのオーバーラップに起因して欠損する；^１９Ｆ ＮＭＲ （２８２ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ －６４．５８ （ｄ， ^４Ｊ_ＦＦ ＝ １５．８５ Ｈｚ， Ｆ_３Ｃ）， －１２８．９０ （ｄ ×四重線， ^４Ｊ_ＦＦ ＝１ ５．８５ Ｈｚ， ^４Ｊ_ＦＨ ＝ ４．０５ Ｈｚ， ＦＣ） ｐｐｍ；Ｃ_１２Ｈ_１０Ｆ_４Ｎ_２Ｏ_２ （分子量， ２９０．２１）， ＬＣＭＳ （ＥＩ） ｍ／ｅ ２９１．１ （Ｍ^＋ ＋ Ｈ）．このプロセス経由の化合物７の純度は、ＨＰＬＣによって測定して、約９９％よりも高いことが決定された。

【0130】

実施例Ａ：インビトロのＪＡＫキナーゼアッセイ
式Ｉの化合物を、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９９，２６９，９４－１０４中で記載される以下のインビトロアッセイに従って、ＪＡＫ標的の阻害活性について試験した。Ｎ末端Ｈｉｓタグを備えたヒトＪＡＫ１（アミノ酸８３７～１１４２）及びＪＡＫ２（アミノ酸８２８～１１３２）の触媒ドメインを、昆虫細胞中でバキュロウイルスを使用して発現させ、精製した。ＪＡＫ１及びＪＡＫ２の触媒活性を、ビオチン化ペプチドのリン酸化の測定によってアッセイした。リン酸化ペプチドを均一系時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって検出した。１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ及び０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）のＢＳＡを含む５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．８）バッファー中の、酵素、ＡＴＰ及び５００ｎＭのペプチドを含む４０μＬの反応物において、各々のキナーゼについて化合物のＩＣ_５０を測定した。１ｍＭのＩＣ_５０測定について、反応中のＡＴＰ濃度は１ｍＭであった。反応を室温で１時間実行し、次いで２０μＬのアッセイバッファー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）中の、４５ｍＭのＥＤＴＡ、３００ｎＭのＳＡ－ＡＰＣ、６ｎＭのＥｕ－Ｐｙ２０により停止した。ユウロピウム標識抗体への結合を４０分間行い、ＨＴＲＦシグナルをＦｕｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）上で測定した。式Ｉの化合物及びアジピン酸塩は≦５ｎＭのＪＡＫ１でＩＣ_５０を有し（１ｍＭのＡＴＰで測定した）、＞１０のＪＡＫ２／ＪＡＫ１比であった（１ｍＭのＡＴＰで測定した）。

【0131】

実施例Ｂ：細胞アッセイ
増殖についてサイトカイン及びしたがってＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル形質導入に依存する癌細胞株は、ＲＰＭＩ １６４０、１０％のＦＢＳ、及び１ｎＧ／ｍＬの適切なサイトカイン中で１ウェル（９６ウェルプレートフォーマット）あたり６０００細胞でプレーティングすることができる。化合物をＤＭＳＯ／培地（０．２％のＤＭＳＯの最終濃度）中で細胞へ添加し、３７℃、５％のＣＯ_２で７２時間インキュベーションすることができる。細胞生存率に対する化合物の効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、続いてＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）の定量を使用して査定する。化合物の可能性のあるオフターゲット効果を、非ＪＡＫ駆動性の細胞株を使用して、同じアッセイのリードアウトにより並列して測定する。すべての実験を典型的には二重で遂行する。

【0132】

上記の細胞株を使用して、ＪＡＫキナーゼ、もしくはＳＴＡＴタンパク質、Ａｋｔ、Ｓｈｐ２またはＥｒｋ等の可能性のある下流の基質のリン酸化に対する化合物の効果を検討することができる。これらの実験を、一晩のサイトカイン飢餓、続いて化合物による短時間のプレインキュベーション（２時間以下）及びおよそ１時間以下のサイトカイン刺激後に遂行することができる。次いでタンパク質を細胞から抽出し、リン酸化タンパク質と全タンパク質の間で区別できる抗体を使用する、ウエスタンブロットまたはＥＬＩＳＡを含む、当業者が精通する技法によって分析する。これらの実験は、正常細胞またはがん細胞を利用して、腫瘍細胞生存の生物学または炎症性疾患メディエーターに対する化合物の活性を調査することができる。例えば、後者に関して、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３またはＩＦＮ等のサイトカインを使用してＪＡＫ活性化を刺激し、ＳＴＡＴタンパク質（複数可）のリン酸化、ならびに可能性として、ＩＬ－１７等の、タンパク質の転写プロファイル（アレイ技術またはｑＰＣＲ技術によって査定される）または産生及び／または分泌をもたらすことができる。化合物がこれらのサイトカイン媒介性効果を阻害する能力は、当業者に共通の技法を使用して、測定することができる。

【0133】

本明細書における化合物は、変異体ＪＡＫ、例えば骨髄増殖性障害において見出されるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異に対するそれらの効力及び活性を評価するようにデザインされた細胞モデルにおいても試験することができる。これらの実験は、野生型ＪＡＫキナーゼまたは変異体ＪＡＫキナーゼが異所的に発現される血液系譜のサイトカイン依存性細胞（例えばＢａＦ／３）を頻繁に利用する（Ｊａｍｅｓ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４３４：１１４４－１１４８；Ｓｔａｅｒｋ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．ＪＢＣ ２８０：４１８９３－４１８９９）。エンドポイントとしては、細胞生存、分裂増殖及びリン酸化ＪＡＫ、ＳＴＡＴ、ＡｋｔまたはＥｒｋタンパク質に対する化合物の効果が挙げられる。

【0134】

本明細書における、ある特定の化合物は、Ｔ細胞分裂増殖を阻害する活性について評価することができる。かかるアッセイは、第２のサイトカイン（すなわちＪＡＫ）駆動性の分裂増殖アッセイ、及び免疫抑制または免疫活性化の阻害の単純化したアッセイとみなすことができる。以下は、かかる実験をどのように遂行することができるかについての簡潔な概略である。末梢血中単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ分離法を使用してヒト全血サンプルから調製し、Ｔ細胞（画分２０００）を溶出によってＰＢＭＣから得ることができる。新鮮分離したヒトＴ細胞は、３７℃で２×１０^６細胞／ｍｌの密度で、培養培地（１０％のウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ １６４０）中で２日間まで維持することができる。ＩＬ－２刺激性の細胞分裂増殖分析のために、Ｔ細胞を、最初に１０μｇ／ｍＬの最終濃度のフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）により７２時間処理する。ＰＢＳにより１回洗浄した後に、６０００細胞／ウェルを９６ウェルプレート中でプレーティングし、１００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ－２（ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ；Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）の存在下において、培養培地中の異なる濃度の化合物により処理する。プレートを３７℃で７２時間のインキュベーションし、製造所に示唆されたプロトコール（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）に従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ試薬を使用して、分裂増殖の指標を査定する。

【0135】

実施例Ｃ：インビボの抗腫瘍有効性
本明細書における化合物は、免疫不全マウス中のヒト腫瘍異種移植モデルにおいて評価することができる。例えば、ＩＮＡ－６形質細胞腫細胞株の腫瘍形成性バリアントを使用して、ＳＣＩＤマウスに皮下接種することができる（Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ Ｊ．２：４２－５３，２００１）。次いで担がん動物を薬物処置群またはベヒクル処置群へと無作為化し、異なる用量の化合物を、経口、腹腔内、または植込み可能なポンプを使用する連続点滴を含む、いくつかの通常の経路によって投与することができる。腫瘍増殖を、キャリパーを使用して経時的に追跡する。さらに、上で記載されるような分析（実施例Ｂ）のために、腫瘍サンプルを処理の開始後の任意の時間で収穫して、ＪＡＫ活性及び下流のシグナル経路に対する化合物効果を評価することができる。加えて、化合物（複数可）の選択性を、他の公知のキナーゼ（例えばＢｃｒ－Ａｂｌ）によって駆動される、Ｋ５６２腫瘍モデル等の異種移植腫瘍モデルを使用して査定することができる。

【0136】

実施例Ｄ：マウスの皮膚接触遅延型過敏性応答の試験
本明細書における化合物を、Ｔ細胞駆動性のマウスの遅延型過敏性の試験モデルにおける（ＪＡＫ標的の阻害の）有効性についても試験することができる。マウスの皮膚接触遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答は、臨床的な接触性皮膚炎、及び乾癬等の他のＴリンパ球媒介性の皮膚の免疫障害の有効なモデルであるとみなされている（Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ．１９９８ Ｊａｎ；１９（１）：３７－４４）。マウスのＤＴＨは、免疫浸潤、炎症性サイトカインの付随する増加、及びケラチノサイト過剰増殖を含む、複数の特徴を乾癬と共有している。さらに、クリニックでの乾癬の治療において有効な多くのクラスの薬剤が、マウスにおけるＤＴＨ応答の有効な阻害物質でもある（Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ．１９９３ Ｊａｎ；３８（１－２）：１１６－２１）。

【0137】

０日目及び１日目に、剃毛した腹部への抗原２，４，ジニトロ－フルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）による局所適用によりＢａｌｂ／ｃマウスを感作する。５日目に、技術者用マイクロメーターを使用して、耳の厚さを測定する。この測定値を記録し、ベースラインとして使用する。次いで動物の両耳を、０．２％の濃度で合計で２０μＬ中のＤＮＦＢ（内部耳介上に１０μＬ及び外部耳介上に１０μＬ）の局所適用によって攻撃投与する。攻撃投与の２４～７２時間後に、耳を再び測定する。試験化合物による処置を、感作段階及び攻撃投与段階の全体にわたって（－１日目～７日目）、または攻撃投与段階の前及びその全体にわたって（通常４日目の午後～７日目）、与える。試験化合物（異なる濃度における）の処置を、全身的にまたは局所的に（耳への処理の局所適用）のいずれかで投与する。試験化合物の有効性は、処置無しの状況へ比較した、耳腫脹の低減によって示される。２０％以上の低減を引き起こす化合物が、有効であるとみなされた。いくつかの実験において、マウスに攻撃投与するが感作しない（陰性対照）。

【0138】

試験化合物の阻害性効果（ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路の活性化の阻害）は、免疫組織化学的分析によって確認することができる。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路（複数可）の活性化は、機能的な転写因子の形成及び移行をもたらす。さらに、免疫細胞流入及びケラチノサイト分裂増殖増加は、調査及び定量化可能な耳における固有の発現プロファイル変化も提供するに違いない。ホルマリン固定及びパラフィン包埋した耳切片（ＤＴＨモデルにおける攻撃投与段階後に収穫した）に、リン酸化ＳＴＡＴ３と特異的に相互作用する抗体（クローン５８Ｅ１２、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、免疫組織化学的分析を行う。マウスの耳を、比較のために、ＤＴＨモデルにおいて、試験化合物、ベヒクルもしくはデキサメタゾン（乾癬のための臨床的に有効な治療）により処理するか、または処理をしない。試験化合物及びデキサメタゾンは、類似する転写変化を定性的及び定量的の両方をもたらすことができ、試験化合物及びデキサメタゾンの両方は、浸潤細胞の数を低減することができる。試験化合物の全身的投与及び局所的投与の両方は、阻害有効性、すなわち浸潤細胞の数の低減及び転写変化の阻害を生ずることができる。

【0139】

実施例Ｅ：インビボの抗炎症作用
本明細書における化合物は、単一または複雑な炎症応答を再現するように設計された齧歯動物モデルまたは非齧歯動物モデルにおいて評価することができる。例えば、関節炎の齧歯類モデルを使用して、予防的にまたは治療的に投薬した化合物の処置可能性を評価することができる。これらのモデルとしては、マウスまたはラットのコラーゲン誘発関節炎、ラットのアジュバント誘発関節炎、及びコラーゲン抗体誘発関節炎が挙げられるがこれらに限定されない。多発性硬化症、１型糖尿病、ぶどう膜網膜炎、甲状腺炎、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、気道感作（喘息）、狼瘡または大腸炎が挙げられるがこれらに限定されない自己免疫疾患を使用して、本明細書における化合物の治療可能性を評価することができる。これらのモデルは研究コミュニティーにおいて十分に確立されており、当業者は精通している（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３．，Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｗｉｌｅｙ Ｐｒｅｓｓ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｖｏｌ．２２５，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．，Ｗｉｎｙａｒｄ，Ｐ．Ｇ．ａｎｄ Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ，Ｄ．Ａ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２００３．）。

【0140】

実施例Ｆ：ドライアイ、ぶどう膜炎及び結膜炎の治療のための動物モデル
薬剤は、ウサギのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）涙腺モデル、マウスのスコポラミンモデル（皮下または経皮）、マウスのＢｏｔｕｌｉｎｕｍｎ涙腺モデル、または眼腺機能不全をもたらすいくつかの自然発生する齧歯類自己免疫モデル（例えばＮＯＤ－ＳＣＩＤ、ＭＲＬ／ｌｐｒまたはＮＺＢ／ＮＺＷ）のいずれかが挙げられるがこれらに限定されない、１つまたは複数の当業者に公知のドライアイの前臨床モデルにおいて評価することができる（Ｂａｒａｂｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４，７９，６１３－６２１及びＳｃｈｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ｋａｒｇｅｒ ２００８，４１，２９８－３１２、その各々の全体は参照により本明細書に援用される）。これらのモデルにおけるエンドポイントとしては、眼腺及び眼（角膜など）の組織病理学、ならびに場合によっては涙液産生を測定する古典的Ｓｃｈｉｒｍｅｒ試験またはその修飾バージョン（Ｂａｒａｂｉｎｏ ｅｔ ａｌ．）が挙げられ得る。活性は、複数の投与経路（例えば全身的または局所的）を経由して投薬することによって査定することができ、それは測定可能な疾患が存在する前またはその後に開始することができる。

【0141】

薬剤は、当業者に公知のぶどう膜炎の１つまたは複数の前臨床モデルにおいて評価することができる。これらものとしては、実験的な自己免疫性ぶどう膜炎（ＥＡＵ）及びエンドトキシン誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）のモデルが挙げられるがこれらに限定されない。ＥＡＵ実験は、ウサギ、ラットまたはマウスにおいて遂行することができ、受動免疫または能動免疫を含み得る。例えば、いくつかの網膜の抗原のうちの任意のものを使用して妥当な免疫原に動物を感作することができ、その後、動物を同じ抗原により眼から攻撃投与することができる。ＥＩＵモデルはより急性であり、致死未満用量でのリポポリサッカライドの局所投与または全身投与を含む。ＥＩＵ及びＥＡＵの両方のモデルについてエンドポイントとしては、眼底検査、とりわけ組織病理学が挙げられ得る。これらのモデルは、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９８，７６，４９７－５１２、その全体は参照により本明細書に援用される）によって概説される。活性を、複数の投与経路（例えば全身的または局所的）を経由して投薬することによって査定し、それは測定可能な疾患が存在する前またはその後に開始することができる。上で列挙したいくつかのモデルは、強膜炎／上強膜炎、脈絡膜炎、毛様体炎または虹彩炎も発症することができ、したがってこれらの疾患の治療的処置のための化合物の可能性のある活性の調査において有用である。

【0142】

薬剤は、当業者に公知の結膜炎の１つまたは複数の前臨床モデルにおいても評価することができる。これらものとしては、モルモット、ラットまたはマウスを利用する齧歯動物のモデルが挙げられるがこれらに限定されない。モルモットのモデルとしては、能動免疫もしくは受動免疫及び／またはオボアルブミンまたはブタクサ等の抗原による免疫攻撃投与プロトコールを利用するものが挙げられる（Ｇｒｏｎｅｂｅｒｇ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ ２００３，５８，１１０１－１１１３中で概説され、その全体は参照により本明細書に援用される）。ラット及びマウスのモデルは、全体的なデザインがモルモットのものに類似する（同様にＧｒｏｎｅｂｅｒｇによって概説される）。活性は、複数の投与経路（例えば全身的または局所的）を経由して投薬することによって査定することができ、それは測定可能な疾患が存在する前またはその後に開始することができる。かかる研究についてのエンドポイントとしては、例えば結膜等の眼組織の組織学的分析、免疫学的分析、生化学的分析、分子的分析が挙げられ得る。

【0143】

実施例Ｇ：骨のインビボの保護
化合物は、骨減少症、骨粗鬆症、または当業者に公知の骨吸収の様々な前臨床モデルにおいて評価することができる。例えば、卵巣切除歯動物を使用して、化合物が骨の再形成及び／または密度の徴候及びマーカーに影響する能力を評価することができる（Ｗ．Ｓ．Ｓ．Ｊｅｅ ａｎｄ Ｗ．Ｙａｏ，Ｊ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌ．Ｎｕｅｒｏｎ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．，２００１，１（３），１９３－２０７、その全体は参照により本明細書に援用される）。あるいは、骨の密度及び構造を、コントロールまたは化合物により処置した、治療（例えばグルココルチコイド）誘発骨減少症のモデルにおける齧歯動物で評価することができる（Ｙａｏ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，２００８，５８（６），３４８５－３４９７、及び同上５８（１１），１６７４－１６８６、その両方の全体は参照することによって本明細書に援用される）。加えて、骨の吸収及び密度に対する化合物の効果は、上で考察された関節炎の齧歯類のモデル（実施例Ｅ）において評価することができる。これらのすべてのモデルについてのエンドポイントは、変化し得るが、多くの場合、組織学的査定及び放射線学的査定に加えて、骨再形成の免疫組織学及び適切な生化学的マーカーを含み得る。

【0144】

本発明のいくつかの実施形態を記載した。しかしながら、様々な改変が本発明の趣旨 及び範囲から逸脱せずに行われ得ることが理解されるであろう。したがって、他の実施形態は以下の請求項の範囲内である。