特許7397103ヒアルロン酸誘導体組成物、医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-12-04
(45)【発行日】2023-12-12
(54)【発明の名称】ヒアルロン酸誘導体組成物、医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 47/36 20060101AFI20231205BHJP
C08B 37/08 20060101ALI20231205BHJP
A61K 38/02 20060101ALI20231205BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231205BHJP
A61K 9/00 20060101ALI20231205BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20231205BHJP
A61K 47/61 20170101ALI20231205BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20231205BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231205BHJP
【ＦＩ】
A61K47/36
C08B37/08 Z
A61K38/02
A61K45/00
A61K9/00
A61K47/10
A61K47/61
A61K31/7088
A61P43/00 111
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2021575872
(86)(22)【出願日】2021-02-05
(86)【国際出願番号】 JP2021004200
(87)【国際公開番号】W WO2021157677
(87)【国際公開日】2021-08-12
【審査請求日】2022-05-20
(31)【優先権主張番号】P 2020018312
(32)【優先日】2020-02-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000000033
【氏名又は名称】旭化成株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100149548
【弁理士】
【氏名又は名称】松沼 泰史
(74)【代理人】
【識別番号】100188558
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100165179
【弁理士】
【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡
(74)【代理人】
【識別番号】100189337
【弁理士】
【氏名又は名称】宮本 龍
(72)【発明者】
【氏名】中川 慶之
(72)【発明者】
【氏名】藪内 昂平
(72)【発明者】
【氏名】福本 圭介
(72)【発明者】
【氏名】勝又 徹
(72)【発明者】
【氏名】梁 昭淵
【審査官】安藤 倫世
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１４／０３８６４１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１０／０５３１４０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１７／１９５８８０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０９８３９３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０３４３５７１８（ＣＮ，Ａ）
【文献】特開２００５－１３９４０９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０５－０５８８８１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１６－５００１３０（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０２０／１５８７７１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２１／１５７６６５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Advanced Functional Materials，2018年，Vol.28 No.17，Page.e1707371，doi：10.1002/adfm.201707371
【文献】シリカ‐疎水化ヒアルロン酸複合ヒドロゲルの合成，日本化学会春季年会講演予稿集(CD-ROM)，Vol.99th，2019年，Page.ROMBUNNO.1PB-030
【文献】疎水化ヒアルロン酸‐リン酸カルシウムハイブリッド微粒子の合成，日本化学会春季年会講演予稿集(CD-ROM) ，2016年，Vol.96th，Page.ROMBUNNO.2B6-29
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ｃ０８Ｂ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体と、（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物と、
を含むヒアルロン酸誘導体組成物であって、
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する前記ステリル基の導入率が６％以上２２％以下であり、
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の重量平均分子量が５，０００以上１００，０００以下であり、
前記（Ｂ）極性基含有化合物が、アルコールであり、前記アルコールが、モノアルコール又は２価のアルコールであり、
前記（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して０．００１質量ｐｐｍ以上７００質量ｐｐｍ以下 である、ヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項2】
前記（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して０．００６１質量ｐｐｍ以上９９質量ｐｐｍ以下である、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項3】
前記（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して１０質量ｐｐｍ以上９９質量ｐｐｍ以下である、請求項２に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項4】
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の重量平均分子量が３５，０００以上５０，０００以下である、請求項１～３のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項5】
前記（Ｂ）極性基含有化合物が、エタノール、イソプロパノール、又は、エチレングリコールである、請求項１～４のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項6】
前記モノアルコールが、エタノール、又は、イソプロパノールであり、
前記２価のアルコールが、エチレングリコールである、請求項１～４のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項7】
前記（Ｂ）極性基含有化合物がモノアルコールであり、
前記モノアルコールの含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して１０質量ｐｐｍ以上９９質量ｐｐｍ以下であり、
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する前記ステリル基の導入率が１５％以上２０％以下である、請求項１～４のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項8】
前記（Ｂ）極性基含有化合物が2価のアルコールであり、
前記２価のアルコールの含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して０．００６１質量ｐｐｍ以上９９質量ｐｐｍ以下であり、
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する前記ステリル基の導入率が１２％以上１９％以下であり、
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の重量平均分子量が３５，０００以上５０，０００以下である、請求項１～４のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項9】
前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。【化1】
Ｚは、直接結合、又は２個以上３０個以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーを表し；
Ｘ１は、以下の式：
－ＮＲｂ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、
－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｓ－Ｒ、
－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、及び
－Ｓ－Ｓ－Ｒ、
で表される基からなる群より選択される基であり；
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、ここで当該基のアルキル部分は、－Ｏ－及び－ＮＲｆ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｆは、水素原子、Ｃ１－１２アルキル、アミノＣ２－１２アルキル及びヒドロキシＣ２－１２アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、ここで、当該アルキレンは、－Ｏ－、－ＮＲｇ－及び－Ｓ－Ｓ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｇは、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｙａは、Ｃ１－５アルキレンであり；
Ｙｂは、Ｃ２－８アルキレン又はＣ２－８アルケニレンであり；
ｍは、１以上１００以下の整数である。
【請求項10】
前記Ｒがコレステリル基である、請求項９に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【請求項11】
薬物と、担体を含み、前記担体が、請求項１～１０のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物である、医薬組成物。
【請求項12】
前記薬物が（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する、請求項１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記薬物が、薬理活性を有するタンパク質、ペプチド又は核酸である、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
請求項１～１０のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物および薬物を含み、前記ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれる（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に、前記薬物が結合した、ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヒアルロン酸誘導体組成物、医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物に関する。
本願は、２０２０年２月５日に、日本に出願された特願２０２０－０１８３１２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
本願は、２０２０年２月５日に、日本に出願された特願２０２０－０１８３１２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【0002】
近年、タンパク質やペプチド、核酸を活性成分とする医薬品であるバイオ医薬品が実用化されており、その数は年々増え続けている。バイオ医薬品は、従来の低分子医薬では満たすことができなかった未充足医療ニーズを満たすことができる。しかしながら、消化管乃至粘膜等からは吸収されにくい上、体内では不安定で血中半減期が短いという課題がある。そのため、バイオ医薬品は注射による頻回投与が必要であり、患者と医療関係者いずれにとっても負担が大きい。そこで、薬理活性を損なうことなくバイオ医薬品をカプセル化して生体内で徐々に有効成分を放出することができる薬物基材（徐放性ドラッグデリバリーシステム基材）が求められている。
【0003】
このような背景から、特許文献１では、安全性に優れたヒアルロン酸誘導体からなる徐放性ドラッグデリバリーシステム基材が提案されている。このヒアルロン酸誘導体は、水溶液中で自発的に会合し、薬物、特にバイオ医薬品を、その生物活性を維持したまま効率よく封入することができ、生理食塩濃度下で凝集し（或いは、生理食塩濃度下でも分散し）、なおかつ血中滞留性が良好である。このヒアルロン酸誘導体は、特にバイオ医薬品を有効成分として使用する場合に、薬理活性を維持したまま多くの薬物を効率よく封入できる担体、及び血中滞留性に優れた血中徐放キャリア並びにターゲティングキャリアとして用いることができ、薬物を持続的に徐放できる局所（例えば、皮下等）徐放キャリアにもなり得るとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】国際公開第２０１０／０５３１４０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
しかしながら、特許文献１に記載されたヒアルロン酸誘導体では、塩濃度依存的に沈殿形成能を調整することが難しく、また、生理食塩濃度下における沈殿形成能が十分でないため、ヒアルロン酸誘導体を含む薬物組成物の生体内での局所滞留性が損なわれるリスクがある。
【0006】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、生理食塩濃度下での沈殿形成能に優れるヒアルロン酸誘導体組成物、並びに、前記ヒアルロン酸誘導体組成物を用いた医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
（１） （Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体と、
（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物と、
を含むヒアルロン酸誘導体組成物であって、
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する前記ステリル基の導入率が０．１％以上３５％未満である、ヒアルロン酸誘導体組成物。
（２） 前記（Ｂ）極性基含有化合物が、ヒドロキシ基を少なくとも一つ有する極性基含有化合物である、前記（１）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（３） 前記（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して０．００１質量ｐｐｍ以上１０００質量ｐｐｍ未満である、前記（１）又は（２）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（４） 前記（Ｂ）極性基含有化合物が複数の極性基を有している化合物である、前記（１）～（３）いずれかに記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（５）前記（Ｂ）極性基含有化合物が、アルコールである前記（１）～（４）いずれかに記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（６） 前記アルコールが、エタノール、イソプロパノール、及び、多価アルコールからなる群より選択される、前記（５）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（７） 前記アルコールが、多価アルコールである、前記（６）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（８） 前記アルコールが、エチレングリコールである、前記（７）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（９） 前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有する、（１）～（８）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（１） （Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体と、
（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物と、
を含むヒアルロン酸誘導体組成物であって、
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する前記ステリル基の導入率が０．１％以上３５％未満である、ヒアルロン酸誘導体組成物。
（２） 前記（Ｂ）極性基含有化合物が、ヒドロキシ基を少なくとも一つ有する極性基含有化合物である、前記（１）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（３） 前記（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が、前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して０．００１質量ｐｐｍ以上１０００質量ｐｐｍ未満である、前記（１）又は（２）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（４） 前記（Ｂ）極性基含有化合物が複数の極性基を有している化合物である、前記（１）～（３）いずれかに記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（５）前記（Ｂ）極性基含有化合物が、アルコールである前記（１）～（４）いずれかに記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（６） 前記アルコールが、エタノール、イソプロパノール、及び、多価アルコールからなる群より選択される、前記（５）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（７） 前記アルコールが、多価アルコールである、前記（６）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（８） 前記アルコールが、エチレングリコールである、前記（７）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（９） 前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有する、（１）～（８）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
【0008】
【化1】
【0009】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル及びＣ１－６アルキルカルボニルからなる群より選択され；
Ｚは、直接結合、又は２個以上３０個以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーを表し；
Ｘ１は、以下の式：
－ＮＲｂ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、
－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｓ－Ｒ、
－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、及び
－Ｓ－Ｓ－Ｒ、
で表される基からなる群より選択される基であり；
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、ここで当該基のアルキル部分は、－Ｏ－及び－ＮＲｆ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｆは、水素原子、Ｃ１－１２アルキル、アミノＣ２－１２アルキル及びヒドロキシＣ２－１２アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、ここで、当該アルキレンは、－Ｏ－、－ＮＲｇ－及び－Ｓ－Ｓ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｇは、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｙａは、Ｃ１－５アルキレンであり；
Ｙｂは、Ｃ２－８アルキレン又はＣ２－８アルケニレンであり；
ｍは、１以上１００以下の整数である。
(１０) 前記Ｒがコレステリル基である、前記（９）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
(１１) 前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量が１,０００以上１,０００,０００未満である、前記（１）～（１０）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（１２） 薬物と、担体を含み、前記担体が前記（１）～（１１）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物である、医薬組成物。
（１３） 前記薬物が（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する、前記（１２）に記載の医薬組成物。
（１４） 薬物が、薬理活性を有するタンパク質、ペプチド又は核酸である、前記（１２）又は（１３）に記載の医薬組成物。
（１５） 前記（１）～（１１）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物および１以上の薬物を含み、前記ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれる（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に、前記１以上の薬物が結合した、ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物。
Ｚは、直接結合、又は２個以上３０個以下のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーを表し；
Ｘ１は、以下の式：
－ＮＲｂ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、
－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｓ－Ｒ、
－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、及び
－Ｓ－Ｓ－Ｒ、
で表される基からなる群より選択される基であり；
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、ここで当該基のアルキル部分は、－Ｏ－及び－ＮＲｆ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｆは、水素原子、Ｃ１－１２アルキル、アミノＣ２－１２アルキル及びヒドロキシＣ２－１２アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、ここで、当該アルキレンは、－Ｏ－、－ＮＲｇ－及び－Ｓ－Ｓ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｇは、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｙａは、Ｃ１－５アルキレンであり；
Ｙｂは、Ｃ２－８アルキレン又はＣ２－８アルケニレンであり；
ｍは、１以上１００以下の整数である。
(１０) 前記Ｒがコレステリル基である、前記（９）に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
(１１) 前記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量が１,０００以上１,０００,０００未満である、前記（１）～（１０）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物。
（１２） 薬物と、担体を含み、前記担体が前記（１）～（１１）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物である、医薬組成物。
（１３） 前記薬物が（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する、前記（１２）に記載の医薬組成物。
（１４） 薬物が、薬理活性を有するタンパク質、ペプチド又は核酸である、前記（１２）又は（１３）に記載の医薬組成物。
（１５） 前記（１）～（１１）のいずれか一項に記載のヒアルロン酸誘導体組成物および１以上の薬物を含み、前記ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれる（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に、前記１以上の薬物が結合した、ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物。
【発明の効果】
【0010】
上記態様のヒアルロン酸誘導体組成物によれば、生理食塩濃度下での沈殿形成能に優れるヒアルロン酸誘導体組成物、これを含む医薬組成物およびヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】実施例１におけるコレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。
【図2】実施例１におけるヒアルロン酸（ＨＡ）のテトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。
【図3】実施例１における６－アミノヘキシルカーバメートを導入したＨＡ誘導体（ＨＡ－Ｃ６－Ｃｈｏｌ）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明の実施形態（以下、「本実施形態」という。）について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で様々な変形が可能である。
【0013】
以下、本明細書において使用される用語を説明する。
【0014】
本明細書において使用される「Ｃ１－２０アルキル」という用語は、炭素数１以上２０以下の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等の「Ｃ１－４アルキル」が含まれ、さらに、ｎ－ペンチル、３－メチルブチル、２－メチルブチル、１－メチルブチル、１－エチルプロピル、ｎ－ヘキシル、４－メチルペンチル、３－メチルペンチル、２－メチルペンチル、１－メチルペンチル、３－エチルブチル、２－エチルブチル等が含まれる。Ｃ１－２０アルキルには、炭素数が１以上１２以下のＣ１－１２アルキル、炭素数が１以上６以下のＣ１－６アルキル基も含まれる。
【0015】
本明細書において使用される「Ｃ１－６アルキルカルボニル」という用語は、アルキル部分が既に言及したＣ１－６アルキルであるアルキルカルボニル基を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ｎ－プロピルカルボニル、ｉｓｏ－プロピルカルボニル、ｎ－ブチルカルボニル、ｓｅｃ－ブチルカルボニル、ｉｓｏ－ブチルカルボニル、ｔｅｒｔ－ブチルカルボニル等の「Ｃ１－４アルキルカルボニル」が含まれる。
【0016】
本明細書において使用される「アミノＣ２－２０アルキル」という用語は、置換基としてアミノ基を有する炭素数２以上２０以下の直鎖状又は分岐鎖状のアルキルを意味し、例えば、アミノ基はアルキル基の末端の炭素原子上に位置していてもよい。アミノＣ２－２０アルキルには、炭素数が２以上１２以下のアミノＣ２－１２アルキルも含まれる。
【0017】
本明細書において使用される「ヒドロキシＣ２－２０アルキル」という用語は、置換基としてヒドロキシ基を有する炭素数２以上２０以下の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、ヒドロキシ基はアルキル基の末端の炭素原子上に位置していてもよい。ヒドロキシＣ２－２０アルキルには、炭素数が２以上１２以下のヒドロキシＣ２－１２アルキルも含まれる。
【0018】
本明細書において使用される「Ｃ２－３０アルキレン」という用語は、炭素数２以上３０以下の直鎖状又は分岐鎖状の２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチレン、プロピレン等を含み、炭素数が２以上２０以下のＣ２－２０アルキレン、炭素数が２以上８以下のＣ２－８アルキレン、基「－（ＣＨ２）ｎ－」（ここで、ｎは２以上３０以下であり、２以上２０以下が好ましく、２以上１５以下がより好ましい。）を含む。
【0019】
本明細書において使用される「Ｃ１－５アルキレン」という用語は、炭素数１以上５以下の直鎖状又は分岐鎖状の２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン等を含む。
【0020】
本明細書で言及する用語「Ｃ２－８アルケニレン」とは、炭素数２以上８以下の直鎖状又は分岐鎖状の、１以上の二重結合を含む、２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、－ＣＨ＝ＣＨ－、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ－、２－ブテン－１，４－ジイル、ヘプタ－２，４－ジエン－１，６－ジイル、オクタ－２，４，６－トリエン－１，８－ジイル等を含む。幾何異性が存在する場合は、それぞれの異性体及びそれらの混合物も含まれる。
【0021】
≪ヒアルロン酸誘導体組成物≫
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物は、（Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体（以下、「（Ａ）ヒアルロン酸誘導体」と称する場合がある）と、（Ｂ）（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物と、を含む。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対するステリル基の導入率が０．１％以上３５％未満である。
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物は、（Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体（以下、「（Ａ）ヒアルロン酸誘導体」と称する場合がある）と、（Ｂ）（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物と、を含む。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対するステリル基の導入率が０．１％以上３５％未満である。
【0022】
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物は、塩濃度依存的に沈殿形成能を調整することができ、低塩濃度では良好に溶解しつつ、生理食塩濃度下では、ステリル基の導入率が上記の範囲内の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対して、（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物が凝集促進剤として機能し、生理食塩濃度下での沈殿形成能が向上するものである。ここでいう「生理食塩濃度」とは、投与対象である動物の投与部位における塩濃度を意味する。例えば、ヒトにおける生理食塩濃度とは、塩化ナトリウム濃度が１５０ｍＭ程度の濃度である。また、「低塩濃度」とは、生理食塩濃度よりも十分に低い濃度を意味する。
【0023】
＜（Ａ）ステリル基を導入したヒアルロン酸誘導体＞
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体において、ステリル基は、ヒアルロン酸に対して直接的に結合していてもよく、リンカーを解して結合されていてもよい。
ここでいう「リンカー」とは、遺伝子工学により導入し得る任意のペプチドリンカー、又は合成化合物リンカーを用いることができるが、本実施形態の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体においては、ペプチドリンカーが好ましい。ペプチドリンカーの長さは特に限定されず、目的に応じて当業者が適宜選択することが可能であるが、好ましい長さは２アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１５アミノ酸である。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に含まれるペプチドリンカーは、全て同じ長さのペプチドリンカーを用いてもよく、異なる長さのペプチドリンカーを用いてもよい。
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体において、ステリル基は、ヒアルロン酸に対して直接的に結合していてもよく、リンカーを解して結合されていてもよい。
ここでいう「リンカー」とは、遺伝子工学により導入し得る任意のペプチドリンカー、又は合成化合物リンカーを用いることができるが、本実施形態の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体においては、ペプチドリンカーが好ましい。ペプチドリンカーの長さは特に限定されず、目的に応じて当業者が適宜選択することが可能であるが、好ましい長さは２アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１５アミノ酸である。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に含まれるペプチドリンカーは、全て同じ長さのペプチドリンカーを用いてもよく、異なる長さのペプチドリンカーを用いてもよい。
【0024】
［ステリル基］
本明細書において使用される「ステリル基」という用語は、ステロイド骨格を有する基であれば特に制限されない。ここでステロイドとしては、具体的には、コレステロール、コレスタノール、カンペスタノール、エルゴスタノール、スチグマスタノール、コプロスタノール、スチグマステロール、シトステロール、ラノステロール、エルゴステロール、シミアレノール、胆汁酸、テストステロン、エストラジオール、プロゲストロン、コルチゾール、コルチゾン、アルドステロン、コルチコステロン、デオキシコルチステロン等が挙げられる。ステリル基としては、コレステリル基、スチグマステリル基、ラノステリル基、エルゴステリル基等が挙げられ、中でも、コレステリル基（特に、コレスタ－５－エン－３β－イル基）が好ましい。
本明細書において使用される「ステリル基」という用語は、ステロイド骨格を有する基であれば特に制限されない。ここでステロイドとしては、具体的には、コレステロール、コレスタノール、カンペスタノール、エルゴスタノール、スチグマスタノール、コプロスタノール、スチグマステロール、シトステロール、ラノステロール、エルゴステロール、シミアレノール、胆汁酸、テストステロン、エストラジオール、プロゲストロン、コルチゾール、コルチゾン、アルドステロン、コルチコステロン、デオキシコルチステロン等が挙げられる。ステリル基としては、コレステリル基、スチグマステリル基、ラノステリル基、エルゴステリル基等が挙げられ、中でも、コレステリル基（特に、コレスタ－５－エン－３β－イル基）が好ましい。
【0025】
［ステリル基導入率］
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対するステリル基の導入率（以下、単に「ステリル基導入率」と称する場合がある）は０．１％以上３５％未満であり、５％以上３３％以下が好ましく、６％以上２２％以下がより好ましく、６％以上２０％以下がさらに好ましい。
ステリル基導入率が上記範囲内であることで、ヒアルロン酸誘導体が純水中又は低塩濃度下では良好に溶解しつつ、生理食塩濃度下で凝集して沈殿を形成するという性質を有するようになる。ステリル基導入率が上記範囲内であることで、ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化させた、ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、体内に投与（例えば、皮下投与）する際に、投与後に凝集する特長を生かした沈殿型の徐放製剤となり得る。
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対するステリル基の導入率（以下、単に「ステリル基導入率」と称する場合がある）は０．１％以上３５％未満であり、５％以上３３％以下が好ましく、６％以上２２％以下がより好ましく、６％以上２０％以下がさらに好ましい。
ステリル基導入率が上記範囲内であることで、ヒアルロン酸誘導体が純水中又は低塩濃度下では良好に溶解しつつ、生理食塩濃度下で凝集して沈殿を形成するという性質を有するようになる。ステリル基導入率が上記範囲内であることで、ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化させた、ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、体内に投与（例えば、皮下投与）する際に、投与後に凝集する特長を生かした沈殿型の徐放製剤となり得る。
【0026】
ステリル基導入率は、後述する実施例に記載した方法に従って１Ｈ－ＮＭＲ測定により測定することができる。すなわち、ヒアルロン酸誘導体組成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルにおける（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のステリル基に由来するピークの積分値と、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に含まれるＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基に由来するピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）の積分値と、を用いて、以下の式に基づいて計算することができる。
［ステリル基導入率（％）］＝［（（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のステリル基に由来するピークの積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００
［ステリル基導入率（％）］＝［（（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のステリル基に由来するピークの積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００
【0027】
ステリル基がコレステリル基である場合、ステリル基導入率は、具体的には、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）の積分値と、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）の積分値より算出される。なお、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークが含まれる１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークにコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なるため、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークの積分値からコレステリル基メチル由来のピーク（０．７ｐｐｍ）の積分値を５／３倍したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークの積分値として使用する。
［ステリル基導入率（％）］＝［（コレステリル基中のメチル基由来のピーク積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００＝［積分値（０．７ｐｐｍ）／｛積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３｝］×１００
［ステリル基導入率（％）］＝［（コレステリル基中のメチル基由来のピーク積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００＝［積分値（０．７ｐｐｍ）／｛積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３｝］×１００
【0028】
［（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量］
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量は特に限定はされないが、局所投与における拡散遅延由来の徐放機能を期待する観点や前述した生理食塩濃度下における沈殿形成能という観点からは、分子量の比較的大きい（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が好ましく、最終剤形が溶液製剤の場合はシリンジアビリティの観点から分子量の比較的小さい（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が好ましい。このような（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量としては、１，０００（１ｋＤａ）以上１，０００，０００（１，０００ｋＤａ）未満が好ましく、３ｋＤａ以上５００ｋＤａ以下がより好ましく、５ｋＤａ以上３００ｋＤａ以下がより好ましく、５ｋＤａ以上１２０ｋＤａ以下がさらに好ましく、１０ｋＤａ以上１００ｋＤａ以下が特に好ましい。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量は、一般的には、対応する分子量を有する原料を使用することにより調節することができる。
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量は特に限定はされないが、局所投与における拡散遅延由来の徐放機能を期待する観点や前述した生理食塩濃度下における沈殿形成能という観点からは、分子量の比較的大きい（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が好ましく、最終剤形が溶液製剤の場合はシリンジアビリティの観点から分子量の比較的小さい（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が好ましい。このような（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量としては、１，０００（１ｋＤａ）以上１，０００，０００（１，０００ｋＤａ）未満が好ましく、３ｋＤａ以上５００ｋＤａ以下がより好ましく、５ｋＤａ以上３００ｋＤａ以下がより好ましく、５ｋＤａ以上１２０ｋＤａ以下がさらに好ましく、１０ｋＤａ以上１００ｋＤａ以下が特に好ましい。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量は、一般的には、対応する分子量を有する原料を使用することにより調節することができる。
【0029】
ここでいう、「（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の分子量」は、サイズ排除クロマトグラフィー多角度光散乱検出器（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）により決定された重量平均分子量である。具体的には、後述する実施例に記載された方法に従って測定することができる。
【0030】
好ましい（Ａ）ヒアルロン酸誘導体として具体的には、例えば、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（以下、「繰り返し単位（Ｉ）」と称する場合がある）を１以上有するヒアルロン酸誘導体等が挙げられる。
【0031】
【化2】
【0032】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル及びＣ１－６アルキルカルボニルからなる群より選択され；
Ｚは、直接結合、又は２個以上３０個以下の任意のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーを表し；
Ｘ１は、以下の式：
－ＮＲｂ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、
－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｓ－Ｒ、
－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、及び
－Ｓ－Ｓ－Ｒ、
で表される基からなる群より選択される基であり；
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、ここで当該基のアルキル部分は、－Ｏ－及び－ＮＲｆ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｆは、水素原子、Ｃ１－１２アルキル、アミノＣ２－１２アルキル及びヒドロキシＣ２－１２アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、ここで、当該アルキレンは、－Ｏ－、－ＮＲｇ－及び－Ｓ－Ｓ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｇは、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｙａは、Ｃ１－５アルキレンであり；
Ｙｂは、Ｃ２－８アルキレン又はＣ２－８アルケニレンであり；
ｍは、１以上１００以下の整数である。
Ｚは、直接結合、又は２個以上３０個以下の任意のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーを表し；
Ｘ１は、以下の式：
－ＮＲｂ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、
－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－Ｓ－Ｒ、
－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、
－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、
－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、及び
－Ｓ－Ｓ－Ｒ、
で表される基からなる群より選択される基であり；
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、ここで当該基のアルキル部分は、－Ｏ－及び－ＮＲｆ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｆは、水素原子、Ｃ１－１２アルキル、アミノＣ２－１２アルキル及びヒドロキシＣ２－１２アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、ここで、当該アルキレンは、－Ｏ－、－ＮＲｇ－及び－Ｓ－Ｓ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｒｇは、水素原子、Ｃ１－２０アルキル、アミノＣ２－２０アルキル及びヒドロキシＣ２－２０アルキルからなる群より選択され、当該基のアルキル部分は－Ｏ－及び－ＮＨ－からなる群より選択される基が挿入されていてもよく；
Ｙａは、Ｃ１－５アルキレンであり；
Ｙｂは、Ｃ２－８アルキレン又はＣ２－８アルケニレンであり；
ｍは、１以上１００以下の整数である。
【0033】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、下記一般式（Ｉａ）で表される繰り返し単位（以下、「繰り返し単位（Ｉａ）」と称する場合がある）を、１以上有するヒアルロン酸誘導体を含むことが好ましい。
【0034】
【化3】
【0035】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル及びＣ１－６アルキルカルボニルからなる群より選択され；
Ｘは、－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒで表される疎水性基であり；
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立に、水素原子及びＣ１－６アルキルからなる群より選択され；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、
ｍは、１以上１００以下の整数である。
Ｘは、－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒで表される疎水性基であり；
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立に、水素原子及びＣ１－６アルキルからなる群より選択され；
Ｒは、ステリル基であり；
Ｙは、Ｃ２－３０アルキレン、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、
ｍは、１以上１００以下の整数である。
【0036】
ここで、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に繰り返し単位（Ｉ）又は繰り返し単位（Ｉａ）がそれぞれ２以上含まれる場合に、当該繰り返し単位は同一であってもよく、異なっていてもよい。
【0037】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）又は繰り返し単位（Ｉａ）以外の位置において、修飾されていてもよく、例えば、ヒドロキシ基は－Ｏ（Ｃ１－６アルキル）、－Ｏ（ホルミル）、－Ｏ（Ｃ１－６アルキルカルボニル）等に変換されていてもよく、カルボキシ基は、アミド又はエステルに変換されていてもよく、塩を形成していてもよい。
【0038】
［繰り返し単位（Ｉ）］
一般式（Ｉ）中の基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」は、以下の式：
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｓ－Ｒ；及び
－Ｚ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ
（式中、ｍｚは、２以上３０以下の整数であり、Ｒ８は、水素原子又はメチル基であり、Ｚ、Ｒａ、Ｙ、Ｒｂ、Ｒ及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
で表される基からなる群より選択される基であることが好ましい。
前記基：－Ｚ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒとしては、下記式：
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
（式中、Ｒ、ｍｚ及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
からなる群より選択されるで表される基であることが好ましい。
これらの中でも、一般式（Ｉ）中の基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」として、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；及び
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｓ－Ｒ
（ここで、ｍｚ、Ｒ、及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
からなる群より選択される基であることがより好ましい。
一般式（Ｉ）中の基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」は、以下の式：
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ８）－ＣＨ２－Ｓ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｓ－Ｒ；及び
－Ｚ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ
（式中、ｍｚは、２以上３０以下の整数であり、Ｒ８は、水素原子又はメチル基であり、Ｚ、Ｒａ、Ｙ、Ｒｂ、Ｒ及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
で表される基からなる群より選択される基であることが好ましい。
前記基：－Ｚ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒとしては、下記式：
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
（式中、Ｒ、ｍｚ及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
からなる群より選択されるで表される基であることが好ましい。
これらの中でも、一般式（Ｉ）中の基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」として、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－Ｒ；及び
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍｚ－Ｓ－Ｓ－Ｒ
（ここで、ｍｚ、Ｒ、及びｍは、本明細書で既に定義したとおりである。）
からなる群より選択される基であることがより好ましい。
【0039】
（Ｚ）
一般式（Ｉ）において、Ｚは直接結合であることが好ましい。
また、別の態様において、Ｚがペプチドリンカーである場合に、Ｘ１は－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒであることが好ましい。
さらに、別の態様において、Ｚは、－ＮＨ－［ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯＮＨ］ｎ－１－ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯ－で表されるペプチドリンカーであってもよく、ここで、ｎは２以上３０以下の整数であり、Ｚａは、それぞれ独立に、Ｈ２Ｎ－ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯＯＨとして表されるα－アミノ酸中の置換基を表す。当該ペプチドリンカーは、Ｎ末端にてグルクロン酸部分のカルボキシ基に結合し、Ｃ末端にて基－Ｎ（－Ｒａ）－Ｙ－Ｘ１に結合する。当該ペプチドリンカーのアミノ酸残基として利用できるアミノ酸の例としてはα－アミノ酸、例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン、メチオニン、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンといった天然型（Ｌ型）のアミノ酸、それらのＤ体等が挙げられ、合成されたアミノ酸を含む全てのα－アミノ酸を用いることができる。すなわち、Ｚａとしては、例えば、－ＣＨ３、Ｈ２ＮＣ（ＮＨ）ＮＨ（ＣＨ２）３－、Ｈ２ＮＣＯＣＨ２－等が挙げられる。また、ｎ個のＺは、同一でも異なっていてもよい。ｎは、２以上３０以下の整数であるが、２以上１０以下が好ましく、２以上４以下がより好ましい。ペプチドリンカーの好ましい例としては、例えば、－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－、－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－、－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－、Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－等が挙げられる。
一般式（Ｉ）において、Ｚは直接結合であることが好ましい。
また、別の態様において、Ｚがペプチドリンカーである場合に、Ｘ１は－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒであることが好ましい。
さらに、別の態様において、Ｚは、－ＮＨ－［ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯＮＨ］ｎ－１－ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯ－で表されるペプチドリンカーであってもよく、ここで、ｎは２以上３０以下の整数であり、Ｚａは、それぞれ独立に、Ｈ２Ｎ－ＣＨ（－Ｚａ）－ＣＯＯＨとして表されるα－アミノ酸中の置換基を表す。当該ペプチドリンカーは、Ｎ末端にてグルクロン酸部分のカルボキシ基に結合し、Ｃ末端にて基－Ｎ（－Ｒａ）－Ｙ－Ｘ１に結合する。当該ペプチドリンカーのアミノ酸残基として利用できるアミノ酸の例としてはα－アミノ酸、例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン、メチオニン、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンといった天然型（Ｌ型）のアミノ酸、それらのＤ体等が挙げられ、合成されたアミノ酸を含む全てのα－アミノ酸を用いることができる。すなわち、Ｚａとしては、例えば、－ＣＨ３、Ｈ２ＮＣ（ＮＨ）ＮＨ（ＣＨ２）３－、Ｈ２ＮＣＯＣＨ２－等が挙げられる。また、ｎ個のＺは、同一でも異なっていてもよい。ｎは、２以上３０以下の整数であるが、２以上１０以下が好ましく、２以上４以下がより好ましい。ペプチドリンカーの好ましい例としては、例えば、－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－、－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－、－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－、Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－等が挙げられる。
【0040】
（Ｙ）
一般式（Ｉ）において、Ｙは－（ＣＨ２）ｎ１－及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ１－ＣＨ２ＣＨ２－（ここで、ｎ１は、２以上２０以下の整数であり、２以上１５以下の整数が好ましく、２以上１２以下の整数がより好ましく、２以上６以下の整数がさらに好ましい。ｍ１は、１以上４以下の整数である）からなる群より選択される基が好ましい。具体的には、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）８－、－（ＣＨ２）１２－、又は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－が好ましい。また、純水中乃至低塩濃度下では高い溶解性を実現させつつ、生理食塩濃度下では高い沈殿形成能を示させるという観点からは、Ｙは－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）８－及び－（ＣＨ２）１２－からなる群より選択される基が好ましく、－（ＣＨ２）６－がより好ましい。
一般式（Ｉ）において、Ｙは－（ＣＨ２）ｎ１－及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ１－ＣＨ２ＣＨ２－（ここで、ｎ１は、２以上２０以下の整数であり、２以上１５以下の整数が好ましく、２以上１２以下の整数がより好ましく、２以上６以下の整数がさらに好ましい。ｍ１は、１以上４以下の整数である）からなる群より選択される基が好ましい。具体的には、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）８－、－（ＣＨ２）１２－、又は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－が好ましい。また、純水中乃至低塩濃度下では高い溶解性を実現させつつ、生理食塩濃度下では高い沈殿形成能を示させるという観点からは、Ｙは－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）８－及び－（ＣＨ２）１２－からなる群より選択される基が好ましく、－（ＣＨ２）６－がより好ましい。
【0041】
Ｙは、例えば、－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－等であってもよい。
【0042】
（Ｙａ）
Ｙａとしては、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－が好ましい。
Ｙａとしては、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－ＣＨ２－が好ましい。
【0043】
（Ｙｂ）
Ｙｂとしては、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、２－ブテン－１，４－ジイル、ヘプタ－２，４－ジエン－１，６－ジイル又はオクタ－２，４，６－トリエン－１，８－ジイルが好ましく、－ＣＨ２－ＣＨ２－又は－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－がより好ましい。
Ｙｂとしては、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、２－ブテン－１，４－ジイル、ヘプタ－２，４－ジエン－１，６－ジイル又はオクタ－２，４，６－トリエン－１，８－ジイルが好ましく、－ＣＨ２－ＣＨ２－又は－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－がより好ましい。
【0044】
（Ｒ）
Ｒとしては、コレステリル基が好ましい。
Ｒとしては、コレステリル基が好ましい。
【0045】
基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」の具体例としては、－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）４－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）４－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－ＣＯ－ＮＨ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－ＣＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）３－ＮＨ－（ＣＨ２）４－Ｎ（－（ＣＨ２）３－ＮＨ２）－コレステリル等が挙げられる。好ましい基「－Ｚ－Ｎ（Ｒａ）Ｙ－Ｘ１」としては、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、水素原子であり、Ｙが、直鎖状のＣ２－３０アルキレン又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－であり、Ｙａが、直鎖状のＣ１－５アルキレンであるか、又はＹｂが、直鎖状のＣ２－８アルキレン若しくは直鎖状のＣ２－８アルケニレンである。
【0046】
［繰り返し単位（Ｉａ）］
一般式（Ｉａ）において、Ｘは、－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）６－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）１２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル又は－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリルが好ましく、－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）６－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル又は－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリルがより好ましい。
一般式（Ｉａ）において、Ｘは、－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）６－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）１２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル又は－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリルが好ましく、－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル、－ＮＨ－（ＣＨ２）６－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリル又は－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯＯ－コレステリルがより好ましい。
【0047】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）に加えて、一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（以下、「繰り返し単位（ＩＩ）」と称する場合がある）を更に含むことができる。
【0048】
【化4】
【0049】
式中、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、及びＲ４ａは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル及びＣ１－６アルキルカルボニルからなる群より選択され；
Ｘａは、ヒドロキシ及び－Ｏ－Ｑ＋からなる群より選択され；ここで、Ｑ＋は、カウンターカチオンである。
Ｘａは、ヒドロキシ及び－Ｏ－Ｑ＋からなる群より選択され；ここで、Ｑ＋は、カウンターカチオンである。
【0050】
ここで、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に繰り返し単位（ＩＩ）が２以上含まれる場合に、当該繰り返し単位は同一であってもよく、異なっていてもよい。
別の態様において、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）、繰り返し単位（Ｉａ）及び繰り返し単位（ＩＩ）から実質的になるヒアルロン酸誘導体であってもよい。
別の態様において、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）、繰り返し単位（Ｉａ）及び繰り返し単位（ＩＩ）から実質的になるヒアルロン酸誘導体であってもよい。
【0051】
［繰り返し単位（ＩＩ）］
一般式（ＩＩ）において、Ｑ＋はカルボキシ基と水中で塩を形成するカウンターカチオンであれば特に限定されず、２価以上の場合は価数に応じて複数のカルボキシ基と塩を形成する。カウンターカチオンの例としては、リチウムイオン、ナトリウムイオン、ルビジウムイオン、セシウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン等の金属イオン；式：Ｎ＋ＲｊＲｋＲｌＲｍ（式中、Ｒｊ、Ｒｋ、Ｒｌ及びＲｍは、それぞれ独立に、水素原子及びＣ１－６アルキルからなる群より選択される）で表されるアンモニウムイオン等が挙げられる。中でも、Ｑ＋は、ナトリウムイオン、カリウムイオン、又はテトラアルキルアンモニウムイオン（例えば、テトラｎ－ブチルアンモニウムイオン等）が好ましい。Ｒｊ、Ｒｋ、Ｒｌ及びＲｍは、Ｃ１－６アルキルからなる群より選択される同一の基であることが好ましく、ｎ－ブチル基が好ましい。
一般式（ＩＩ）において、Ｑ＋はカルボキシ基と水中で塩を形成するカウンターカチオンであれば特に限定されず、２価以上の場合は価数に応じて複数のカルボキシ基と塩を形成する。カウンターカチオンの例としては、リチウムイオン、ナトリウムイオン、ルビジウムイオン、セシウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン等の金属イオン；式：Ｎ＋ＲｊＲｋＲｌＲｍ（式中、Ｒｊ、Ｒｋ、Ｒｌ及びＲｍは、それぞれ独立に、水素原子及びＣ１－６アルキルからなる群より選択される）で表されるアンモニウムイオン等が挙げられる。中でも、Ｑ＋は、ナトリウムイオン、カリウムイオン、又はテトラアルキルアンモニウムイオン（例えば、テトラｎ－ブチルアンモニウムイオン等）が好ましい。Ｒｊ、Ｒｋ、Ｒｌ及びＲｍは、Ｃ１－６アルキルからなる群より選択される同一の基であることが好ましく、ｎ－ブチル基が好ましい。
【0052】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４、並びにＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、及びＲ４ａは、全て水素原子であることが好ましい。また、Ｒａ及びＲｂは、いずれも水素原子であることが好ましい。
【0053】
中でも、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）及び繰り返し単位（ＩＩ）から実質的になるヒアルロン酸誘導体であることが好ましい。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、当該誘導体に含まれるＤ－グルクロン酸とＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンとから成る二糖の繰り返し単位のうちの、例えば８０％以上が、好ましくは９０％以上が、より好ましくは９５％以上が繰り返し単位（Ｉ）及び繰り返し単位（ＩＩ）である。（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、繰り返し単位（Ｉ）及び繰り返し単位（ＩＩ）のみから構成されていてもよい。
【0054】
［（Ｂ）極性基含有化合物］
（Ｂ）極性基含有化合物は、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する。
（Ｂ）極性基含有化合物は、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する。
【0055】
（Ｂ）極性基含有化合物の含有量は、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対して、０．００１質量ｐｐｍ以上１０００質量ｐｐｍ未満が好ましく、０．００１質量ｐｐｍ以上９００質量ｐｐｍ以下がより好ましく、０．００５質量ｐｐｍ以上８００質量ｐｐｍ以下がさらに好ましく、０．００６質量ｐｐｍ以上７００質量ｐｐｍ以下が特に好ましい。
（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が上記下限値以上であることで、ヒアルロン酸誘導体組成物の生理食塩濃度下での沈殿形成能をより高くすることができ、一方、上記上限値以下であることで、純水中乃至低塩濃度下における（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の凝集をより効果的に抑制することができ、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の０．２２μｍフィルターを用いた滅菌ろ過のろ過性をさらに向上させることができる。
（Ｂ）極性基含有化合物の含有量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析（ＧＣ－ＭＳ）法により測定することができ、具体的には後述する実施例に記載された方法に従って測定することができる。
（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が上記下限値以上であることで、ヒアルロン酸誘導体組成物の生理食塩濃度下での沈殿形成能をより高くすることができ、一方、上記上限値以下であることで、純水中乃至低塩濃度下における（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の凝集をより効果的に抑制することができ、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の０．２２μｍフィルターを用いた滅菌ろ過のろ過性をさらに向上させることができる。
（Ｂ）極性基含有化合物の含有量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析（ＧＣ－ＭＳ）法により測定することができ、具体的には後述する実施例に記載された方法に従って測定することができる。
【0056】
前記（Ｂ）極性基含有化合物として、ヒドロキシ基を少なくも一つ有する化合物が含まれることが好ましく、アルコールが含まれることが好ましい。アルコールは、生理食塩濃度下で（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の凝集促進剤として機能し、生理食塩濃度下における（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の沈殿形成能を向上させる。アルコールは、水溶性の化合物が多く、また、ステリル骨格と相性が良く、ステロール化合物の溶解性が比較的高い。そのため、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を水中に分散させると、自発的にナノオーダーのゲルを形成するが、アルコールを含むことにより、コレステロールドメインの流動性が高くなり、ナノオーダーのゲル同士の物理的架橋が促進されやすくなると考えられる。よって、アルコールが微量含まれることで、ナノゲル間の凝集が進みやすくなり、生理食塩濃度化での沈殿形成能が向上すると考えられる。
【0057】
前記アルコールとしては、モノアルコールであってもよく、多価アルコールであってもよい。モノアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール（イソプロパノール）、１－ブタノール、２－ブタノール、イソブタノール、１－ペンタノール、２－ペンタノール、イソアミルアルコール、１－ヘキサノール、２－ヘキサノール、１－ヘプタノール、１－オクタノール、２－エチル－１－ヘキサノール、３，３，５－トリメチル－１－ヘキサノール、トリデカノール、ペンタデカノール、パルミチルアルコール、ステアリルアルコール、シクロペンタノール、シクロヘキサノール、メチルシクロヘキサノール、トリメチルシクロヘキサノール等が挙げられる。多価アルコールとしては、２価のアルコールであってもよく、３価のアルコールであってもよい。２価のアルコールとしては、例えば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ネオペンチルグリコール、１，４－ブタンジオール、１，６－ヘキサンジオール等が挙げられる。３価のアルコールとしては、例えば、グリセリン、トリメチロールプロパン等が挙げられる。
中でも、アルコールとして、エタノール、イソプロパノール、及び、多価アルコールからなる群より選択される１種以上のアルコールが好ましく、多価アルコールがより好ましく、エチレングリコールがさらに好ましい。
中でも、アルコールとして、エタノール、イソプロパノール、及び、多価アルコールからなる群より選択される１種以上のアルコールが好ましく、多価アルコールがより好ましく、エチレングリコールがさらに好ましい。
【0058】
（Ｂ）極性基含有化合物は、極性基を複数有する多官能化合物であることが好ましい。この場合、ヒアルロン酸同士の水素結合、ここではナノオーダーのゲル間の水素結合を促進させるため、凝集しやすい状態となり、生理塩食塩濃度化での沈殿形成能が向上する傾向がある。
【0059】
カルボキシ基を含有する（Ｂ）極性基含有化合物としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、ヘキサン酸などのＣ１－１２の分岐してもよい炭化水素酸、安息香酸などの芳香族基を有するカルボン酸化合物が挙げられる。また、多官能カルボン酸化合物としては、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸などが挙げられる。多官能カルボン酸化合物は、凝集状態を促進する観点から好ましく含まれる。カルボキシ基とヒドロキシ基を有する化合物、例えば、サリチル酸なども複数の水素結合可能な官能基を有することから好ましい。
【0060】
アミノ基を含有する（Ｂ）極性基含有化合物としては、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のカルボキシとの相互作用をする観点で、１級、２級、３級アミン化合物を用いることができ、塩交換により、４級アンモニウム塩も使用できる。
アミン化合物としては、メチルアミン、エチルアミン、n-プロピルアミン、ブチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジn-プロピルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリn-プロピルアミンなどのＣ１－１２の分岐してもよい炭化水素基を有する１級から３級アミン化合物、テトラメチルアンモニウムフルオリド、テトラメチルアンモニウムクロリド、テトラメチルアンモニウムブロミド、テトラメチルアンモニウムヨージド、テトラエチルアンモニウムフルオリド、テトラエチルアンモニウムクロリド、テトラエチルアンモニウムブロミド、テトラエチルアンモニウムヨージド、テトラn-プロピルフルオリド、テトラn-プロピルクロリド、テトラn-プロピルブロミド、テトラn-プロピルヨージド、テトラｎ－ブチルフルオリド、テトラｎ－ブチルクロリド、テトラｎ－ブチルブロミド、テトラｎ－ブチルヨージドなどのＣ１－１２の分岐してもよい炭化水素基を有する４級アンモニウム塩が挙げられる。
アミン化合物としては、メチルアミン、エチルアミン、n-プロピルアミン、ブチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジn-プロピルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリn-プロピルアミンなどのＣ１－１２の分岐してもよい炭化水素基を有する１級から３級アミン化合物、テトラメチルアンモニウムフルオリド、テトラメチルアンモニウムクロリド、テトラメチルアンモニウムブロミド、テトラメチルアンモニウムヨージド、テトラエチルアンモニウムフルオリド、テトラエチルアンモニウムクロリド、テトラエチルアンモニウムブロミド、テトラエチルアンモニウムヨージド、テトラn-プロピルフルオリド、テトラn-プロピルクロリド、テトラn-プロピルブロミド、テトラn-プロピルヨージド、テトラｎ－ブチルフルオリド、テトラｎ－ブチルクロリド、テトラｎ－ブチルブロミド、テトラｎ－ブチルヨージドなどのＣ１－１２の分岐してもよい炭化水素基を有する４級アンモニウム塩が挙げられる。
【0061】
アミド基を含有する（Ｂ）極性基含有化合物としては、Ｃ１－１２の分岐していてもよい炭化水素酸とＣ１－１２の分岐していてもよい炭化水素基を有する１級または２級アミン化合物との縮合化合物が挙げられる。例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミドが挙げられる。そのほか、β―ラクタム、γ―ラクタム、δ-ラクタムなどの環状アミド化合物を用いてもよい。
【0062】
チオールを含有する（Ｂ）極性基含有化合物としては、Ｃ１－１２の分岐していてもよい炭化水素基を有する化合物、例えば、メタンチオール、エタンチオール、ｎ－プロプルチオールなどが挙げられる。
【0063】
その他、（Ｂ）極性基含有化合物として、尿素などのウレア基を含有する化合物や、カルバメート基を含有する化合物を用いてもよい。
【0064】
＜ヒアルロン酸誘導体組成物の製造方法＞
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物は、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を製造した後に、当該（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物を添加することなどで、製造することができる。
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物は、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を製造した後に、当該（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に（Ｂ）ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、アミド基、カルバメート基、ウレア基およびチオール基からなる群から選ばれる少なくとも一種類の官能基を有する極性基含有化合物を添加することなどで、製造することができる。
【0065】
まず、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の製造方法としては、例えば、グルクロン酸のカルボキシ基をアミドに変換し、ステリル基を導入することで、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体が得られる。また、原料のヒアルロン酸又はその誘導体に対して、反応させるステリル基を有する化合物の配合量を調整することで、ステリル基導入率を０．１％以上３５％未満とすることができる。
【0066】
グルクロン酸のカルボキシ基をアミドに変換して、ステリル基を導入する方法として具体的には、例えば、原料のヒアルロン酸又はその誘導体、好ましくは、繰り返し単位（ＩＩ）のみから構成されるヒアルロン酸又はその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と、式：「ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－Ｒ、ＮＨＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＣＯＯ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－Ｏ－ＣＯＯ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－Ｓ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＣＯ－Ｙａ－Ｓ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－Ｏ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－Ｙｂ－Ｓ－Ｒ、ＨＮＲａ－Ｙ－Ｓ－Ｓ－Ｒ、又は－Ｚ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｙ、Ｙａ、Ｙｂ、Ｚ及びＲは本明細書で既に定義したとおりである）」で表されるステリル基（特に、コレステリル基）を導入したアミンと、を反応させる方法が挙げられる。
【0067】
上記の反応において使用することができる縮合剤は特に限定されず、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン）－４－メチルモルホリウム（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｎ，Ｎ’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ－エトキシカルボニル－２－エトキシ－１，２－ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、２－ベンゾトリアゾール－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム４フッ化ホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－４－オキソ－１，２，３－ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、ベンゾトリアゾール－１－オキシ－トリス－ピロリジノ－ホスホニウム６フッ化リン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）等が挙げられる。
【0068】
特に、限定はされないが、ＤＭＴ－ＭＭは水及び有機溶媒の混合溶媒中でも反応が高効率に進む点において好ましい。また、ＤＭＴ－ＭＭを縮合剤として使用することにより、多数のヒドロキシが共存する系において、エステル結合形成を抑えつつ、高選択的にアミノ基とカルボキシ基によるアミド結合形成を行うことができる。この縮合剤の使用により、例えば、溶媒であるアルコールがヒアルロン酸部分のカルボキシ基と反応することや、ヒアルロン酸部分に同時に存在するカルボキシ基とヒドロキシとが、分子内又は分子間で結合して、望まない架橋を形成してしまうことを防ぐことができる。
【0069】
ステリル基導入反応において用いる溶媒としては、水、ＤＭＳＯ、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール、多価アルコール、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、及びこれらの混合溶媒等が挙げられる。多価アルコールとしては、上記アルコールにおいて例示されたものと同様のものが挙げられる。
【0070】
或いは、原料のヒアルロン酸又はその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩とスペーサー部分を反応させ（この際、必要に応じて保護及び脱保護反応を行ってもよい）、原料のヒアルロン酸又はその誘導体のカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）を変換し、その後に適当な試薬と反応させてもよい。カルボキシ基から誘導される基と、反応試薬の組み合わせの例を以下に示す。
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯＲ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ ＨＯＣＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯＨ ＋ ＨＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ ＨＯＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯＯＨ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯＯＨ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯＯＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯ－Ｈａｌ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＳＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－Ｈａｌ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯ－Ｙａ－Ｈａｌ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯ－Ｙａ－ＳＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ＝ＣＨ２ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－ＣＨ（ＣＨ３）＝ＣＨ２ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＳＨ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＺ－ＯＨ ＋ ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＣＯＺ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯ－Ｒ
（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｙ、Ｙａ、Ｙｂ、及びＺは本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素からなる群より選択されるハロゲン原子を表す）。
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯＲ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ ＨＯＣＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯＨ ＋ ＨＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－ＮＲｃＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ ＨＯＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯ－ＮＲｃ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯＯＨ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯＯＨ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯＯＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＯＣＯ－Ｈａｌ ＋ ＨＯ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＳＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－Ｈａｌ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯ－Ｙａ－Ｈａｌ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＣＯ－Ｙａ－ＳＨ ＋ Ｈａｌ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ＝ＣＨ２ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯ－ＣＨ（ＣＨ３）＝ＣＨ２ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＮＲａ－Ｙ－ＳＨ ＋ ＨＳ－Ｒ；
－ＣＯＺ－ＯＨ ＋ ＨＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂ－ＣＯＯ－Ｒ；
－ＣＯＺ－ＮＲａ－Ｙ－ＮＲｂＨ ＋ Ｈａｌ－ＣＯＯ－Ｒ
（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｙ、Ｙａ、Ｙｂ、及びＺは本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素からなる群より選択されるハロゲン原子を表す）。
【0071】
反応様式としては、脱ハロゲン化水素反応、縮合反応、脱水反応、マイケル付加等の求核付加反応、酸化的なジスルフィド形成反応等が挙げられ、これらは周知な反応であり、当業者が適宜選択し、好ましい反応条件を見出して行うことができる。変換体又は反応物がカルボキシ基を有する場合は、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（以下、「ＮＨＳ」とも称す）エステルとし、反応させてもよい。
【0072】
また、原料のヒアルロン酸又はその誘導体のカルボキシ基に、２－アミノエチル ２－ピリジル ジスルフィドを反応させて、末端に脱離基で修飾されたメルカプト基を有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体を調製し、これにチオコレステロールを求核置換反応させてジスルフィド結合を形成する方法が挙げられる。
【0073】
さらに、ヒアルロン酸又はその誘導体のカルボキシ基にスペーサーの一部を導入したものと、ステリル基にスペーサーの一部を導入したものを調製し、これらを反応させる方法も挙げられる。具体例の一部は上述したが、さらに、Ｙに－Ｓ－Ｓ－が挿入されている場合は、ヒアルロン酸のカルボキシ基に、末端にメルカプト基を有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体と、末端にメルカプト基を有するスペーサーが導入されたステリル基をそれぞれ調製し、これらを酸化的に反応させてジスルフィド結合を形成させる方法も挙げられる。このとき、一方のメルカプト基を２－メルカプトピリジンと反応させてジスルフィドとした後に、他方のメルカプト基と置換させることもできる。
【0074】
また、本発明のヒアルロン酸誘導体を調製後、さらに他の置換基を導入してもよい。例えば、繰り返し単位（Ｉ）、及び繰り返し単位（ＩＩ）から実質的になるヒアルロン酸誘導体におけるカルボキシ基の０．１％以上９９．５％以下、好ましくは１０％以上４０％以下を、－ＣＯ－Ｘｚ、［ここで、Ｘｚは、以下の基：
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－Ｏ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｒ－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；
－ＮＨ－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）４－ＣＯ－ＮＨ－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｒ－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）－ＳＨ；
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；及び
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）２－ＣＯＮＨ－ＣＨ（ＣＯＮＨ－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ）－ＣＨ２－ＳＨ
（ここで、Ｒ１７は、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、ｐ１は２以上１０以下の整数、ｑは１以上２００以下の整数、ｒは１以上３以下の整数を、それぞれ表す）からなる群より選択される］
に変換することで、分子内或いは他分子を含めた分子間で架橋させてゲル化することもできる。
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－Ｏ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｒ－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｐ１－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；
－ＮＨ－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）４－ＣＯ－ＮＨ－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－Ｃ（Ｒ１７）＝ＣＨ２；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－（ＣＨ２）３－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｒ－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（Ｒ１７）－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＳＨ；
－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｑ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）－ＳＨ；
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）２－ＳＨ；及び
－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）－（ＣＨ２）２－ＣＯＮＨ－ＣＨ（ＣＯＮＨ－ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ）－ＣＨ２－ＳＨ
（ここで、Ｒ１７は、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、ｐ１は２以上１０以下の整数、ｑは１以上２００以下の整数、ｒは１以上３以下の整数を、それぞれ表す）からなる群より選択される］
に変換することで、分子内或いは他分子を含めた分子間で架橋させてゲル化することもできる。
【0075】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体を、化学架橋によりゲル化させる工程は、適宜その条件を選択してもよい。架橋の条件とは、架橋方法、ポリマー濃度、架橋剤濃度、溶媒、溶媒ｐＨ、塩濃度、温度、時間等がある。
【0076】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程において、架橋形成の反応条件の中で、例えば化学架橋時のポリマー濃度及び架橋形成が可能な基の導入率を高くすることで、生成するゲルの架橋密度を高くすることが可能である。
【0077】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程における架橋剤濃度は、両端に架橋形成が可能な基を有するものを使用する場合、当該基が過不足なく速やかに架橋反応に関与できるような濃度で添加することが好ましい。例えば、メタクリロイル基（ＭＡ基）を導入したポリマーを、ＤＴＴを用いてマイケル付加反応により架橋する場合は、ＭＡ基：ＳＨ基＝３：１～１：３が好ましく、２：１～１：２が特に好ましい。
【0078】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程における溶媒は、ポリマー及び架橋剤を充分に溶解することができるものが好ましく、特に限定されないが、水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）及びこれらから選択される混合溶媒を用いることが好ましい。また、これらの溶媒に混和する有機溶媒を混合して使用することも可能である。特に限定されないが、混和する有機溶媒としては例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、多価アルコール、アセトン、アセトニトリル等が挙げられる。多価アルコールとしては、上記「アルコール」において例示されたものと同様のものが挙げられ、中でも、エチレングリコールが好ましい。
【0079】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体は、水溶液中においてナノ微粒子を形成するため、希薄な条件化において架橋することにより、ナノサイズの微粒子ゲルを形成することができ、血中徐放キャリア、ターゲティングキャリアとして用いることができる。希薄な条件とは１０ｍｇ／ｍＬ以下であり、好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下、さらに好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下である。一方、高濃度な条件下において架橋することにより、微粒子同士が架橋した、バルク状のゲルを形成することができる。これは皮下徐放型のキャリアとして有用である。高濃度な条件とは５ｍｇ／ｍＬ以上であり、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ以上、さらに好ましくは４０ｍｇ／ｍＬである。
【0080】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程は、バルクで行ってもよく、エマルション中や噴霧液滴中等の不連続相中で行ってもよい。例えば、Ｗ／Ｏエマルション中で行う場合は、ポリマーや架橋剤等を溶解させた水相を、水に混和しない溶媒中に乳化し、ゲル化反応を行えばよい。水に混和しない溶媒とは、特に限定されないが、例えばヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、流動パラフィン、大豆油等が挙げられる。乳化を安定化するための界面活性剤を添加してもよい。また、例えば、超臨界二酸化炭素中やＰＥＧ中等の脱溶媒が可能な溶媒中で行ってもよい。この場合は、ポリマーや架橋剤等を溶解させた水相や有機溶媒相を、前例の溶媒中に乳化、分散することで、脱溶媒（溶媒拡散）に伴うポリマーの濃縮が成されることから、より高い架橋密度のゲルを得ることが可能になる。
【0081】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程、及びその後に、架橋反応を停止する操作及び残存した架橋性官能基を失活若しくは洗浄する操作を行ってもよい。反応に関与しなかった架橋性官能基、架橋剤の片端のみが結合した基、残存した架橋剤等は、安全性の観点、保存中安定性の観点、封入される薬物との副反応等の観点から除去した方が好ましい。特に限定されないが、例えば、未反応の架橋剤が残存している場合は、過剰の水等で洗浄することで除去してもよい。また、例えばポリマーに置換したメタクリロイル基が残存する場合は、過剰のメルカプトエタノール等を添加し、メタクリロイル基を失活させた後、過剰の水等で余剰のメルカプトエタノールを洗浄することで除去してもよい。さらには、例えばメルカプト基が残存する場合は、過剰の３－マレイミドプロピオン酸、ヨード酢酸等を添加し、メルカプト基を失活させた後、過剰の水等で余剰の３－マレイミドプロピオン酸、ヨード酢酸を洗浄することで除去してもよい。
【0082】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程の後に、粉砕工程を行ってもよい。粉砕方法としては、乳棒と乳鉢を用いる粉砕やミルを用いる粉砕が挙げられるが、ミルを用いる粉砕が好ましい。ミル粉砕装置としては、遠心式粉砕機（日本精機製作所）及びインパクトミル（株式会社ダルトン）等の回転円板型の粉砕装置、アトマイザー（東京アトマイザー製造株式会社）、サンプルミル（東京アトマイザー製造株式会社）、バンタムミル（東京アトマイザー製造株式会社）、及びＳＫミル（トッケン）等のスクリーンミルの粉砕装置、超微少量ラボジェットミル（Ａ－Ｏジェットミル、セイシン企業）等のジェット粉砕装置、並びに、超低温での粉砕が可能なリンレックスミル（リキッドガス株式会社）等が挙げられるが、ＳＫミル及びリンレックスミルが好ましい。
【0083】
（Ａ）ヒアルロン酸誘導体をゲル化させる工程の後に、乾燥工程を行ってもよい。乾燥方法としては、例えば通風乾燥、恒温槽中での乾燥、減圧乾燥、熱風循環式乾燥等が挙げられる。風速、乾燥時間、温度、圧力等は（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のゲルが分解や変質を生じない範囲で適宜選択される。
【0084】
上記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の製造において、製造時に使用した溶媒由来の（Ｂ）極性基含有化合物が残存している場合には、（Ｂ）極性基含有化合物を添加せずにヒアルロン酸誘導体組成物を得ることができる。或いは、（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が所望の量となるように、上記（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の製造後に、（Ｂ）極性基含有化合物を添加することで、ヒアルロン酸誘導体組成物を得ることができる。（Ｂ）極性基含有化合物を添加する場合には、上記乾燥工程の前に添加することが好ましい。
【0085】
≪医薬組成物≫
本実施形態の医薬組成物は、薬物と担体を含み、上記ヒアルロン酸誘導体組成物を担体として含む。本実施形態の医薬組成物において、担体と薬物は、水素結合、イオン結合、ファンデルワース力等の非共有結合等により直接的又は間接的に結合して、複合体を形成しており、互いに遊離していない状態であることが望ましい。当該医薬組成物を生体内に投与した際には、担体から薬物が徐々に遊離し、良好な徐放性を期待できる。
本実施形態の医薬組成物は、薬物と担体を含み、上記ヒアルロン酸誘導体組成物を担体として含む。本実施形態の医薬組成物において、担体と薬物は、水素結合、イオン結合、ファンデルワース力等の非共有結合等により直接的又は間接的に結合して、複合体を形成しており、互いに遊離していない状態であることが望ましい。当該医薬組成物を生体内に投与した際には、担体から薬物が徐々に遊離し、良好な徐放性を期待できる。
【0086】
本実施形態の医薬組成物において、薬物は、担体であるヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と複合体を形成していることが好ましい。溶媒中において、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体のステリル基と、系中に存在する薬物との疎水性相互作用により、自発的に会合することで、薬物と（Ａ）ヒアルロン酸誘導体との複合体が形成されると考えられる。当該複合体を形成することにより、当該薬物の保存安定性向上や生物活性の維持、徐放性の向上等が期待される。
【0087】
＜薬物＞
本実施形態の医薬組成物に含まれる薬物としては、特に限定されず、例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、核酸、低分子化合物等が挙げられる。本実施形態の医薬組成物は、薬理活性を有するタンパク質、ペプチド、核酸等のバイオ医薬品又は低分子化合物が、ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と、複合体を形成して含まれることが好ましい。
本実施形態の医薬組成物に含まれる薬物としては、特に限定されず、例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、核酸、低分子化合物等が挙げられる。本実施形態の医薬組成物は、薬理活性を有するタンパク質、ペプチド、核酸等のバイオ医薬品又は低分子化合物が、ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体と、複合体を形成して含まれることが好ましい。
【0088】
［低分子化合物］
低分子化合物としては、例えば、制癌剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アルカロイド等）、免疫抑制剤、抗炎症剤（ステロイド剤、非ステロイド剤系抗炎症剤等）、抗リウマチ剤、抗菌剤（β－ラクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、サルファ剤等）等が挙げられる。
低分子化合物としては、例えば、制癌剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アルカロイド等）、免疫抑制剤、抗炎症剤（ステロイド剤、非ステロイド剤系抗炎症剤等）、抗リウマチ剤、抗菌剤（β－ラクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、サルファ剤等）等が挙げられる。
【0089】
［タンパク質及びペプチド］
タンパク質及びペプチドとしては、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、グラニュロサイトコロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、インターフェロン－α、β、γ、（ＩＮＦ－α、β、γ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、シリアリーニュートロフィクファクター（ＣＮＴＦ）、チューマーネクローシスファクター（ＴＮＦ）、チューマーネクローシスファクター結合タンパク質（ＴＮＦｂｐ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、ＦＭＳ類似チロシンカイネース（Ｆｌｔ－３）、成長ホルモン（ＧＨ）、インシュリン、インシュリン類似成長因子－１（ＩＧＦ－１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ－１ｒａ）、ブレイン由来ニューロトロフィクファクター（ＢＤＮＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、メガカリオサイト成長分化因子（ＭＧＤＦ）、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）、レプチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、塩基性フィブロブラスト成長因子（ｂ－ＦＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、抗体、ダイアボディー、ミニボディー、断片化抗体等が挙げられる。
タンパク質及びペプチドとしては、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、グラニュロサイトコロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、インターフェロン－α、β、γ、（ＩＮＦ－α、β、γ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、シリアリーニュートロフィクファクター（ＣＮＴＦ）、チューマーネクローシスファクター（ＴＮＦ）、チューマーネクローシスファクター結合タンパク質（ＴＮＦｂｐ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、ＦＭＳ類似チロシンカイネース（Ｆｌｔ－３）、成長ホルモン（ＧＨ）、インシュリン、インシュリン類似成長因子－１（ＩＧＦ－１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ－１ｒａ）、ブレイン由来ニューロトロフィクファクター（ＢＤＮＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、メガカリオサイト成長分化因子（ＭＧＤＦ）、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）、レプチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、塩基性フィブロブラスト成長因子（ｂ－ＦＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、抗体、ダイアボディー、ミニボディー、断片化抗体等が挙げられる。
【0090】
［核酸］
核酸としては、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス核酸、デコイ核酸、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ、核酸アプタマー等が挙げられる。
核酸としては、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス核酸、デコイ核酸、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ、核酸アプタマー等が挙げられる。
【0091】
［多糖類］
多糖類としては、例えば、レンチナン、シゾフィラン、パヒマラン、プスチュラン、イーストグルカン、イーストマンナン、マリナクタン、カードラン、デキストラン硫酸、ヘパリン、カラゲナン、イヌリン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。
多糖類としては、例えば、レンチナン、シゾフィラン、パヒマラン、プスチュラン、イーストグルカン、イーストマンナン、マリナクタン、カードラン、デキストラン硫酸、ヘパリン、カラゲナン、イヌリン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。
【0092】
＜形態＞
本実施形態の医薬組成物は、分散性微粒子溶液であってもよく、沈殿性懸濁液であってもよく、凍結乾燥体であってもよい。分散性微粒子溶液である場合は、体内に投与する前は溶液状態でありながら体内に投与（例えば、皮下投与）することにより投与後に体内のその場で凝集する特長を有する沈殿型の徐放製剤となりうる。沈殿性懸濁液である場合は、活性成分がバーストリリースされにくいことを特長とする沈殿型の徐放製剤となりうる。この場合、シリンジアビリティも付与することが可能であることから、沈殿物の大きさは２００μｍ以下が好ましく、１００μｍ以下がより好ましく、２０μｍ以下がさらに好ましい。また、凍結乾燥体の場合は、医師が投与前に生理食塩水等の等張液を加えて投与液を用事調製するタイプの沈殿型の徐放製剤となりうる。この場合、溶液状態では不安定な活性成分を含む医薬組成物に適していると考えられる。
本実施形態の医薬組成物は、分散性微粒子溶液であってもよく、沈殿性懸濁液であってもよく、凍結乾燥体であってもよい。分散性微粒子溶液である場合は、体内に投与する前は溶液状態でありながら体内に投与（例えば、皮下投与）することにより投与後に体内のその場で凝集する特長を有する沈殿型の徐放製剤となりうる。沈殿性懸濁液である場合は、活性成分がバーストリリースされにくいことを特長とする沈殿型の徐放製剤となりうる。この場合、シリンジアビリティも付与することが可能であることから、沈殿物の大きさは２００μｍ以下が好ましく、１００μｍ以下がより好ましく、２０μｍ以下がさらに好ましい。また、凍結乾燥体の場合は、医師が投与前に生理食塩水等の等張液を加えて投与液を用事調製するタイプの沈殿型の徐放製剤となりうる。この場合、溶液状態では不安定な活性成分を含む医薬組成物に適していると考えられる。
【0093】
本実施形態の医薬組成物が分散性微粒子溶液又は沈殿物懸濁液である場合、医薬組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の濃度は、１ｍｇ／ｍＬ以上２００ｍｇ／ｍＬ以下が好ましく、４ｍｇ／ｍＬ以上１００ｍｇ／ｍＬ以下がより好ましく、４ｍｇ／ｍＬ以上５０ｍｇ／ｍＬ以下がさらに好ましく、４ｍｇ／ｍＬ以上１２ｍｇ／ｍＬ以下が特に好ましい。医薬組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の濃度が上記下限値以上であることで、生理食塩濃度下での沈殿形成能をより優れたものとすることができ、薬物の投与量もより多くできる傾向にある。一方、医薬組成物中の（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の濃度が上記上限値以下であることで、注射針を用いて生体内に投与する際のインジェクタビリティがより向上するとともに、滅菌ろ過性がより向上する傾向にある。
【0094】
≪ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物≫
本実施形態のヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、上記ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物と１以上の薬物を含み、上記ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれる（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に、上記１以上の薬物が結合している。
本実施形態のヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、上記ヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物と１以上の薬物を含み、上記ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれる（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に、上記１以上の薬物が結合している。
【0095】
本実施形態のヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物を形成させるのに適した薬物は、タンパク質、ペプチド、核酸等のバイオ医薬品又は低分子化合物である。
【0096】
本実施形態の医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、既に述べた形態に限定されることはなく、ナノ微粒子、ミクロ微粒子、溶液、エマルジョン、懸濁液、ゲル、ミセル、インプラント、粉末、又はフィルムの形態にあってもよい。粉末は、凍結乾燥又は噴霧乾燥により得た固体を粉砕して製造してもよく、沈殿物を乾燥したものから製造してもよい。
【0097】
本実施形態の医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、経口、腸管外、鼻腔内、膣内、眼内、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内又は口腔内の経路を経て投与されてよい。また、本実施形態の医薬組成物及びヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物は、注射剤に限定されることはなく、貼付製剤やマイクロニードル製剤、塗り薬、点眼薬、噴霧薬、吸入薬等であってもよい。
【実施例】
【0098】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を実施例に制限することを意図したものではない。
【0099】
実施例及び比較例で製造したヒアルロン酸誘導体組成物の各物性の測定方法及び評価方法は以下のとおりである。
【0100】
［物性１］
（ヒアルロン酸誘導体の分子量）
ヒアルロン酸誘導体の分子量は、サイズ排除クロマトグラフィー多角度光散乱検出器（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）により決定された重量平均分子量である。ヒアルロン酸誘導体組成物（２０ｍｇ）を超純水（１０ｍＬ）に溶解して室温で１２時間以上撹拌し、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を得た。このヒアルロン酸誘導体組成物水溶液（７５０μＬ）に対して３００ｍＭ ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）水溶液（７５０μＬ）加えて振とう機を用いて１０秒間混合し、３７℃にて１時間インキュベートした。そして、得られた試料をＳＥＣ－ＭＡＬＳ測定に供して重量平均分子量を決定した。ＳＥＣ－ＭＡＬＳ測定の条件を以下に示す。
（ヒアルロン酸誘導体の分子量）
ヒアルロン酸誘導体の分子量は、サイズ排除クロマトグラフィー多角度光散乱検出器（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）により決定された重量平均分子量である。ヒアルロン酸誘導体組成物（２０ｍｇ）を超純水（１０ｍＬ）に溶解して室温で１２時間以上撹拌し、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を得た。このヒアルロン酸誘導体組成物水溶液（７５０μＬ）に対して３００ｍＭ ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）水溶液（７５０μＬ）加えて振とう機を用いて１０秒間混合し、３７℃にて１時間インキュベートした。そして、得られた試料をＳＥＣ－ＭＡＬＳ測定に供して重量平均分子量を決定した。ＳＥＣ－ＭＡＬＳ測定の条件を以下に示す。
【0101】
（測定条件）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＰＷＸＬ（東ソー株式会社製）２本
カラム温度：３０℃
溶離液：１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ入りリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／分
注入量：２００μＬ
カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＰＷＸＬ（東ソー株式会社製）２本
カラム温度：３０℃
溶離液：１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ入りリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／分
注入量：２００μＬ
【0102】
［物性２］
（ステリル基導入率）
ヒアルロン酸誘導体のステリル基導入率は、１Ｈ－ＮＭＲ測定により決定した。まず、ジメチルスルホキシド－ｄ６（９９．９ｖ／ｖ％、０．０５ｖ／ｖ％のトリメチルシリル（ＴＭＳ）含有、富士フイルム和光製）と２０％重塩酸（９９．５ｖ／ｖ％、富士フイルム和光製）とを質量比９９：１にて混合し、測定溶媒を調製した。続いて、この測定溶媒（０．６ｍＬ）にヒアルロン酸誘導体組成物（２ｍｇ）を添加し、超音波バスにて３０分間処理して完全に溶解させて１Ｈ－ＮＭＲ測定に供した。１Ｈ－ＮＭＲ測定は、フーリエ変換核磁気共鳴装置（ＦＴ－ＮＭＲ装置）（ＥＣＳ４００、日本電子製）を用いてサンプル温度８５℃にて実施した。ステリル基導入率は、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）の積分値と、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）の積分値より、以下に示す式を用いてヒアルロン酸ユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した。なお、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークが含まれる１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークの積分値からコレステリル基メチル由来のピーク（０．７ｐｐｍ）の積分値を５／３倍したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークの積分値として、ステリル基導入率の計算に使用した。
（ステリル基導入率）
ヒアルロン酸誘導体のステリル基導入率は、１Ｈ－ＮＭＲ測定により決定した。まず、ジメチルスルホキシド－ｄ６（９９．９ｖ／ｖ％、０．０５ｖ／ｖ％のトリメチルシリル（ＴＭＳ）含有、富士フイルム和光製）と２０％重塩酸（９９．５ｖ／ｖ％、富士フイルム和光製）とを質量比９９：１にて混合し、測定溶媒を調製した。続いて、この測定溶媒（０．６ｍＬ）にヒアルロン酸誘導体組成物（２ｍｇ）を添加し、超音波バスにて３０分間処理して完全に溶解させて１Ｈ－ＮＭＲ測定に供した。１Ｈ－ＮＭＲ測定は、フーリエ変換核磁気共鳴装置（ＦＴ－ＮＭＲ装置）（ＥＣＳ４００、日本電子製）を用いてサンプル温度８５℃にて実施した。ステリル基導入率は、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）の積分値と、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）の積分値より、以下に示す式を用いてヒアルロン酸ユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した。なお、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークが含まれる１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下付近のピークの積分値からコレステリル基メチル由来のピーク（０．７ｐｐｍ）の積分値を５／３倍したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピークの積分値として、ステリル基導入率の計算に使用した。
【0103】
［ステリル基導入率（％）］
＝［（コレステリル基中のメチル基由来のピーク積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００
＝［積分値（０．７ｐｐｍ）／｛積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３｝］×１００
＝［（コレステリル基中のメチル基由来のピーク積分値）／（Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク積分値）］×１００
＝［積分値（０．７ｐｐｍ）／｛積分値（１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下）－積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３｝］×１００
【0104】
［物性３］
（極性基含有化合物の含有量）
ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ｂ）極性基含有化合物の含有量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析（ＧＣ－ＭＳ）法により測定した。
まず、ヒアルロン酸誘導体組成物（１６．０ｍｇ）を超純水（２．０ｍＬ）に添加し、１２時間以上撹拌して溶解させて８．０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を得た。その後、得られた水溶液をＧＣ－ＭＳ測定に供し、外部標準法によって測定試料中の（Ｂ）極性基含有化合物の含有量を求めた。そののち、添加したヒアルロン酸誘導体の量に対する測定試料中の（Ｂ）極性基含有化合物の質量比を、ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性基含有化合物の含有量として算出した。定量分析に必要な検量線は、市販標品を用いて作成した。ＧＣ－ＭＳ測定の条件を以下に示す。
（極性基含有化合物の含有量）
ヒアルロン酸誘導体組成物中の（Ｂ）極性基含有化合物の含有量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析（ＧＣ－ＭＳ）法により測定した。
まず、ヒアルロン酸誘導体組成物（１６．０ｍｇ）を超純水（２．０ｍＬ）に添加し、１２時間以上撹拌して溶解させて８．０ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を得た。その後、得られた水溶液をＧＣ－ＭＳ測定に供し、外部標準法によって測定試料中の（Ｂ）極性基含有化合物の含有量を求めた。そののち、添加したヒアルロン酸誘導体の量に対する測定試料中の（Ｂ）極性基含有化合物の質量比を、ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性基含有化合物の含有量として算出した。定量分析に必要な検量線は、市販標品を用いて作成した。ＧＣ－ＭＳ測定の条件を以下に示す。
【0105】
（測定条件）
ＧＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，７８９０Ａ
カラム：ＤＢ－６２４（６０ｍ×０．２５ｍｍΦ）、膜厚１．４０μｍ
カラム温度：５０℃（５分間)→２０℃／分の速度で昇温→１５８℃（２分間)→３℃／分の速度で昇温→１８０℃（０分間）→２０℃／分の速度で昇温→２５０℃（５．８分間)
流速：１ｍＬ／分
注入口温度：２５０℃
スプリット比：１／５０
ＧＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，７８９０Ａ
カラム：ＤＢ－６２４（６０ｍ×０．２５ｍｍΦ）、膜厚１．４０μｍ
カラム温度：５０℃（５分間)→２０℃／分の速度で昇温→１５８℃（２分間)→３℃／分の速度で昇温→１８０℃（０分間）→２０℃／分の速度で昇温→２５０℃（５．８分間)
流速：１ｍＬ／分
注入口温度：２５０℃
スプリット比：１／５０
【0106】
定量する化合物にもよるが５０質量ｐｐｍ以下の場合は、以下の手法が用いられた。
（測定条件：エチレングリコールの場合）
ヒアルロン酸誘導体を０．１ｇをガラスチューブに入れ、２００℃で１０分間加熱脱着を行い、揮発成分を－１３０℃にてトラップした。その後、冷却されていたトラップを２５０℃で急速加熱し、ＧＣ－ＭＳ測定を行った。
濃度既知のエチレングリコール標準品を同様の条件で測定し、検出ピーク面積値から検量線を作成した。検量線からサンプル中のエチレングリコールの質量を算出した。その後、使用した（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対するサンプル中のエチレングリコールの質量比を、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性官能基含有化合物の含有量として算出した。
加熱脱着装置：ＧＥＲＳＴＥＬ ＴＤＵ，ＣＩＳ４
脱着温度：２００℃
脱着時間：１０分
スプリット：スプリットレス
クライオフォーカシング温度：－１３０℃
注入温度：２５０℃
ＣＩＳライナー：Ｔｅｎａｘ（ＧＬサイエンス）
ＧＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ７８９０
カラム：ＧＬサイエンス ＤＢ－ＷＡＸ （３０ｍ×０．２５ｍｍΦ、膜厚０．２５ｍｍ）
温度条件：４０℃（５分）→２０℃／分→２５０℃（５分保持）
ＭＳ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７０００
イオン化：ＥＩ ７０ｅＶ
イオン源温度２５０℃
スキャン範囲：ＳＩＭ（ｍ／ｚ３３）
イソプロパノールおよびエタノールの場合は、温度条件を５０℃（５分）→１０℃／分→２４０℃（６分保持）とした以外は、エチレングリコールと同様に測定した。
（測定条件：エチレングリコールの場合）
ヒアルロン酸誘導体を０．１ｇをガラスチューブに入れ、２００℃で１０分間加熱脱着を行い、揮発成分を－１３０℃にてトラップした。その後、冷却されていたトラップを２５０℃で急速加熱し、ＧＣ－ＭＳ測定を行った。
濃度既知のエチレングリコール標準品を同様の条件で測定し、検出ピーク面積値から検量線を作成した。検量線からサンプル中のエチレングリコールの質量を算出した。その後、使用した（Ａ）ヒアルロン酸誘導体の質量に対するサンプル中のエチレングリコールの質量比を、（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性官能基含有化合物の含有量として算出した。
加熱脱着装置：ＧＥＲＳＴＥＬ ＴＤＵ，ＣＩＳ４
脱着温度：２００℃
脱着時間：１０分
スプリット：スプリットレス
クライオフォーカシング温度：－１３０℃
注入温度：２５０℃
ＣＩＳライナー：Ｔｅｎａｘ（ＧＬサイエンス）
ＧＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ７８９０
カラム：ＧＬサイエンス ＤＢ－ＷＡＸ （３０ｍ×０．２５ｍｍΦ、膜厚０．２５ｍｍ）
温度条件：４０℃（５分）→２０℃／分→２５０℃（５分保持）
ＭＳ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７０００
イオン化：ＥＩ ７０ｅＶ
イオン源温度２５０℃
スキャン範囲：ＳＩＭ（ｍ／ｚ３３）
イソプロパノールおよびエタノールの場合は、温度条件を５０℃（５分）→１０℃／分→２４０℃（６分保持）とした以外は、エチレングリコールと同様に測定した。
【0107】
［評価１］
（沈殿率）
ヒアルロン酸誘導体組成物の沈殿率は、以下に示す手順により決定した。まず、６００ｍＭ塩化ナトリウム入りの４０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）を調製した（濃縮緩衝液と呼ぶ）。次に、ヒアルロン酸誘導体組成物に超純水を加え、１２時間以上撹拌して溶解させてヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を得た。この水溶液を、ろ過チューブ（ポアサイズ：５．０μｍ；ＵＦＣ４０ＳＶ２５；メルク社製）に入れて遠心分離機にかけ、ろ過処理した。続いて、ろ過済みヒアルロン酸誘導体水溶液（６００μＬ）と濃縮緩衝液（２００μＬ）を混合した沈殿形成サンプル（Ｎ数：３）、及び、ろ過済みヒアルロン酸誘導体水溶液（６００μＬ）と超純水（２００μＬ）を混合したリファレンスサンプル（Ｎ数：２）を調製した。その後、沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルを３７℃にて２０分間インキュベートし、そののちに遠心分離機（２，０００×ｇ、１０分間）にかけた。遠心分離後のサンプルそれぞれの上澄みを２００μＬ採取し、いずれも３００ｍＭヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）水溶液（２００μＬ）を加えて２倍希釈したうえで、３７℃にて２時間インキュベートした。さらに、全てのサンプルに対して１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ水溶液（１０００μＬ）を加えて希釈し、シリンジフィルター（ポアサイズ：０．４５μｍ）により処理した。そして、得られた沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルをサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）測定に供した。ヒアルロン酸誘導体組成物の沈殿率は、沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルのＳＥＣクロマトグラムのヒアルロン酸誘導体由来のピーク（７分付近）の面積値を用いて、以下に示す式に基づいて算出した。
（沈殿率）
ヒアルロン酸誘導体組成物の沈殿率は、以下に示す手順により決定した。まず、６００ｍＭ塩化ナトリウム入りの４０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）を調製した（濃縮緩衝液と呼ぶ）。次に、ヒアルロン酸誘導体組成物に超純水を加え、１２時間以上撹拌して溶解させてヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を得た。この水溶液を、ろ過チューブ（ポアサイズ：５．０μｍ；ＵＦＣ４０ＳＶ２５；メルク社製）に入れて遠心分離機にかけ、ろ過処理した。続いて、ろ過済みヒアルロン酸誘導体水溶液（６００μＬ）と濃縮緩衝液（２００μＬ）を混合した沈殿形成サンプル（Ｎ数：３）、及び、ろ過済みヒアルロン酸誘導体水溶液（６００μＬ）と超純水（２００μＬ）を混合したリファレンスサンプル（Ｎ数：２）を調製した。その後、沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルを３７℃にて２０分間インキュベートし、そののちに遠心分離機（２，０００×ｇ、１０分間）にかけた。遠心分離後のサンプルそれぞれの上澄みを２００μＬ採取し、いずれも３００ｍＭヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）水溶液（２００μＬ）を加えて２倍希釈したうえで、３７℃にて２時間インキュベートした。さらに、全てのサンプルに対して１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ水溶液（１０００μＬ）を加えて希釈し、シリンジフィルター（ポアサイズ：０．４５μｍ）により処理した。そして、得られた沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルをサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）測定に供した。ヒアルロン酸誘導体組成物の沈殿率は、沈殿形成サンプル及びリファレンスサンプルのＳＥＣクロマトグラムのヒアルロン酸誘導体由来のピーク（７分付近）の面積値を用いて、以下に示す式に基づいて算出した。
【0108】
［沈殿率］（％）
＝ ［１－（沈殿形成サンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値）／（リファレンスサンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値）］×１００
＝ ［１－（沈殿形成サンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値）／（リファレンスサンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値）］×１００
【0109】
ここで、沈殿形成サンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値はＮ＝３で調製した沈殿形成サンプルそれぞれにおける面積値の平均値を使用し、リファレンスサンプルにおけるヒアルロン酸誘導体由来のピークの面積値はＮ＝２で調製したリファレンスサンプルそれぞれにおける面積値の平均値を使用した。なお、ＳＥＣ測定の条件を以下に示す。
【0110】
（測定条件）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ４０００ＳＷＸＬ（東ソー株式会社製）
カラム温度：３５℃
溶離液：１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ入りリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／分
注入量：９０μＬ
検出：示差屈折率検出器（ＲＩ検出器）又は紫外検出器（ＵＶ検出器）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ４０００ＳＷＸＬ（東ソー株式会社製）
カラム温度：３５℃
溶離液：１０ｍＭ ＨＰ－β－ＣＤ入りリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／分
注入量：９０μＬ
検出：示差屈折率検出器（ＲＩ検出器）又は紫外検出器（ＵＶ検出器）
【0111】
［評価２］
（滅菌ろ過性）
滅菌ろ過性は、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を０．２２μｍフィルターで処理した際のろ過最大量により評価した。すなわち、ヒアルロン酸誘導体組成物を超純水に溶解して０．９ｍｇ／ｍＬとし、得られたヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を０．２２μｍフィルター（ステリカップ-ＧＰ Ｓ２ＧＰＵ０５ＲＥ、有効ろ過面積４０ｃｍ２、メルク社製）により膜が目詰まりして水溶液が透過しなくなるまでろ過しつづけた。そして、ろ過済みのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の体積を測定し、有効ろ過面積あたりのろ過済みのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の体積を計算してろ過最大量とした。
（滅菌ろ過性）
滅菌ろ過性は、ヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を０．２２μｍフィルターで処理した際のろ過最大量により評価した。すなわち、ヒアルロン酸誘導体組成物を超純水に溶解して０．９ｍｇ／ｍＬとし、得られたヒアルロン酸誘導体組成物水溶液を０．２２μｍフィルター（ステリカップ-ＧＰ Ｓ２ＧＰＵ０５ＲＥ、有効ろ過面積４０ｃｍ２、メルク社製）により膜が目詰まりして水溶液が透過しなくなるまでろ過しつづけた。そして、ろ過済みのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の体積を測定し、有効ろ過面積あたりのろ過済みのヒアルロン酸誘導体組成物水溶液の体積を計算してろ過最大量とした。
【0112】
＜ヒアルロン酸誘導体組成物の製造＞
［実施例１］
（ヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１の製造）
ヒアルロン酸誘導体組成物を次の工程１～工程３に従って調製した。
［実施例１］
（ヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１の製造）
ヒアルロン酸誘導体組成物を次の工程１～工程３に従って調製した。
【0113】
１．工程１
（コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の合成）
コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（Ｃｈｏｌ塩酸塩）を次に示す工程１－１、続いて工程１－２に従って合成した。
（コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の合成）
コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（Ｃｈｏｌ塩酸塩）を次に示す工程１－１、続いて工程１－２に従って合成した。
【0114】
（１）工程１－１
コレステリルクロロホルメート（３．３７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）の溶液に、アルゴン雰囲気下、トリエチルアミン（ＴＥＡ、１．０５ｍＬ）を加えて撹拌した。氷冷下で、６－（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ－１－アミノヘキサン（１．１２ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を滴下して加え、そのまま氷冷下で３０分間攪拌後、室温まで昇温し、当該混合物を一晩撹拌した。反応混合物を、超純水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：ｎ－ヘキサン＝１：４)で精製し、目的物のフラクションを合わせて溶媒を減圧下留去した。
コレステリルクロロホルメート（３．３７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）の溶液に、アルゴン雰囲気下、トリエチルアミン（ＴＥＡ、１．０５ｍＬ）を加えて撹拌した。氷冷下で、６－（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ－１－アミノヘキサン（１．１２ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を滴下して加え、そのまま氷冷下で３０分間攪拌後、室温まで昇温し、当該混合物を一晩撹拌した。反応混合物を、超純水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：ｎ－ヘキサン＝１：４)で精製し、目的物のフラクションを合わせて溶媒を減圧下留去した。
【0115】
（２）工程１－２
得られた残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し、４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（４０ｍＬ）を加えて室温で一晩撹拌した。生じた沈殿物を遠心分離により回収した。得られた固体を酢酸エチルにて４回洗浄後、減圧下で乾燥し、コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（Ｃｈｏｌ塩酸塩）１．２ｇを得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（ＣＳ４００ 日本電子製、ＥｔＯＨ－ｄ６）を図１に示す。
得られた残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し、４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（４０ｍＬ）を加えて室温で一晩撹拌した。生じた沈殿物を遠心分離により回収した。得られた固体を酢酸エチルにて４回洗浄後、減圧下で乾燥し、コレステリル ６－アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（Ｃｈｏｌ塩酸塩）１．２ｇを得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（ＣＳ４００ 日本電子製、ＥｔＯＨ－ｄ６）を図１に示す。
【0116】
２．工程２
（ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩の調製）
ヒアルロン酸のＴＢＡ塩（ＨＡ－ＴＢＡ）を次に示す工程２－１、続いて工程２－２に従って調製した。
（ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩の調製）
ヒアルロン酸のＴＢＡ塩（ＨＡ－ＴＢＡ）を次に示す工程２－１、続いて工程２－２に従って調製した。
【0117】
（１）工程２－１
ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ－８－４００（アルドリッチ社製）を超純水に懸濁させ、デカンテーションにより樹脂を超純水で３回程度洗浄した。４０質量％テトラブチルアンモニウムヒドロキシド水溶液（ＴＢＡ－ＯＨ）（アルドリッチ社製）を樹脂のカチオン交換能に対し約１．５倍モル等量加え、３０分間撹拌した。余剰のＴＢＡ－ＯＨ溶液をデカンテーションにより除去した後、さらに過剰の超純水で洗浄することで、ＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂を得た。
ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ－８－４００（アルドリッチ社製）を超純水に懸濁させ、デカンテーションにより樹脂を超純水で３回程度洗浄した。４０質量％テトラブチルアンモニウムヒドロキシド水溶液（ＴＢＡ－ＯＨ）（アルドリッチ社製）を樹脂のカチオン交換能に対し約１．５倍モル等量加え、３０分間撹拌した。余剰のＴＢＡ－ＯＨ溶液をデカンテーションにより除去した後、さらに過剰の超純水で洗浄することで、ＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂を得た。
【0118】
（２）工程２－２
分子量５０，０００（５０ｋＤａ）の原料ヒアルロン酸ナトリウム塩（ＨＡ－Ｎａ）を１５ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解した。「（１）工程２－１」でＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニット（ユニット分子量４０１．３）のモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で５倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、０．４５μｍのフィルターを用いて濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ヒアルロン酸のＴＢＡ塩（ＨＡ－ＴＢＡ）を白色固体として得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（ＥＣＳ４００ 日本電子製、ＥｔＯＨ－ｄ６）を図２に示す。
分子量５０，０００（５０ｋＤａ）の原料ヒアルロン酸ナトリウム塩（ＨＡ－Ｎａ）を１５ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解した。「（１）工程２－１」でＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニット（ユニット分子量４０１．３）のモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で５倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、０．４５μｍのフィルターを用いて濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ヒアルロン酸のＴＢＡ塩（ＨＡ－ＴＢＡ）を白色固体として得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（ＥＣＳ４００ 日本電子製、ＥｔＯＨ－ｄ６）を図２に示す。
【0119】
３．工程３
「２．（２）工程２－２」で調製したＨＡ－ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。その後、ＨＡ－ＴＢＡ中に存在する二糖繰り返し単位（ＨＡユニット）に対する、「１．工程１」で合成したＣｈｏｌ塩酸塩の添加量がモル比（Ｃｈｏｌ塩酸塩／ＨＡユニット）で１５／１００となるように添加した。次に、ＨＡユニットに対する４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）の添加量がモル比（ＤＭＴ－ＭＭ／ＨＡユニット）で２１．６／１００となるように加え、室温で一晩撹拌した。反応溶液は、０．３Ｍ 酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア４（スペクトラム社製）、分画分子量（ＭＷＣＯ）：１２，０００以上１４，０００以下）した。得られた透析液に対し、エチレングリコール（ＥＧ）を、組成物中の含有量が０．００６２質量ｐｐｍとなるように加え、その後凍結乾燥して目的物（ＨＡ－Ｃ６－Ｃｈｏｌ）を白色固体として得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図３に示す。Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）が確認された。
「２．（２）工程２－２」で調製したＨＡ－ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。その後、ＨＡ－ＴＢＡ中に存在する二糖繰り返し単位（ＨＡユニット）に対する、「１．工程１」で合成したＣｈｏｌ塩酸塩の添加量がモル比（Ｃｈｏｌ塩酸塩／ＨＡユニット）で１５／１００となるように添加した。次に、ＨＡユニットに対する４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）の添加量がモル比（ＤＭＴ－ＭＭ／ＨＡユニット）で２１．６／１００となるように加え、室温で一晩撹拌した。反応溶液は、０．３Ｍ 酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア４（スペクトラム社製）、分画分子量（ＭＷＣＯ）：１２，０００以上１４，０００以下）した。得られた透析液に対し、エチレングリコール（ＥＧ）を、組成物中の含有量が０．００６２質量ｐｐｍとなるように加え、その後凍結乾燥して目的物（ＨＡ－Ｃ６－Ｃｈｏｌ）を白色固体として得た。生成物の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図３に示す。Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）が確認された。
【0120】
［実施例２～２５及び比較例１～２］
（ヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ２～ＨＡ－ａ２５及びＨＡ－ｂ１～ＨＡ－ｂ２の製造）
「３．工程３」において、ＨＡユニットに対するＣｈｏｌ塩酸塩の添加量、及び、ＨＡユニットに対するＤＭＴ－ＭＭの添加量がモル比で下記表に示す比率となるようにし、アルコールの種類及び（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が下記表に示すようにした以外は、実施例１と同様の方法を用いて、各ヒアルロン酸誘導体組成物を得た。得られたヒアルロン酸誘導体組成物の１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、各ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれるヒアルロン酸誘導体においていずれも、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）が確認された。
（ヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ２～ＨＡ－ａ２５及びＨＡ－ｂ１～ＨＡ－ｂ２の製造）
「３．工程３」において、ＨＡユニットに対するＣｈｏｌ塩酸塩の添加量、及び、ＨＡユニットに対するＤＭＴ－ＭＭの添加量がモル比で下記表に示す比率となるようにし、アルコールの種類及び（Ａ）ヒアルロン酸誘導体に対する（Ｂ）極性基含有化合物の含有量が下記表に示すようにした以外は、実施例１と同様の方法を用いて、各ヒアルロン酸誘導体組成物を得た。得られたヒアルロン酸誘導体組成物の１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、各ヒアルロン酸誘導体組成物に含まれるヒアルロン酸誘導体においていずれも、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＯＣＨ３、１．６ｐｐｍ以上２．０ｐｐｍ以下、３Ｈ）、コレステリル基中のメチル基由来のピーク（ＣＨ３、０．７ｐｐｍ、３Ｈ）が確認された。
【0121】
なお、下記表において、アルコールの種類及び略称は以下のとおりである。
（アルコールの種類及び略称）
イソプロパノール：ＩＰＡ
エタノール：ＥｔＯＨ
（アルコールの種類及び略称）
イソプロパノール：ＩＰＡ
エタノール：ＥｔＯＨ
【0122】
実施例及び比較例で得られたヒアルロン酸誘導体組成物について、上述の方法を用いて、各物性を測定し、各種評価を行なった。結果を下記表に示す。
【0123】
【表1】
【0124】
【表2】
【0125】
【表3】
【0126】
【表4】
【0127】
【表5】
【0128】
【表6】
【0129】
前記表１～４から、ヒアルロン酸の分子量が５０ｋＤａである場合に、アルコールを含有するヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１～ＨＡ－ａ１２、ＨＡ－ａ１７及びＨＡ－ａ１８（実施例１～１２、１７及び１８）では、６ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が７４．５％以上９１．３％以下と良好であった。一方、アルコールを含まないヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ｂ１（比較例１）では、６ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が４６．０％と不良であった。
また、ステリル基導入率が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１、ＨＡ－ａ１７及びＨＡ－ａ１８（実施例１、１７及び１８）において、ステリル基導入率が低くなるほど、６ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率がより良好になる傾向がみられた。
また、ステリル基導入率が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１、ＨＡ－ａ１７及びＨＡ－ａ１８（実施例１、１７及び１８）において、ステリル基導入率が低くなるほど、６ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率がより良好になる傾向がみられた。
【0130】
表５～６から、ヒアルロン酸の分子量が１００ｋＤａである場合に、アルコールを含有するヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１９～ＨＡ－ａ２５（実施例１９～２５）では、低濃度である１．２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が２３．９％以上５０．９％以下と良好であった。一方、アルコールを含まないヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ｂ２（比較例２）では、１．２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が１２．４％と不良であった。
また、アルコールの含有量が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１９及びＨＡ－ａ２３（実施例１９及び２３）において、アルコールの含有量が少なくなるほど、ろ過最大量が増加する傾向がみられた。
また、アルコールの種類が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ２３～ＨＡ－ａ２５（実施例２３～２５）において、エチレングリコールを使用した場合に、１．２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が良好であった。
また、アルコールの含有量が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ１９及びＨＡ－ａ２３（実施例１９及び２３）において、アルコールの含有量が少なくなるほど、ろ過最大量が増加する傾向がみられた。
また、アルコールの種類が異なるヒアルロン酸誘導体組成物ＨＡ－ａ２３～ＨＡ－ａ２５（実施例２３～２５）において、エチレングリコールを使用した場合に、１．２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ含有濃縮緩衝液での沈殿率が良好であった。
【産業上の利用可能性】
【0131】
本実施形態のヒアルロン酸誘導体組成物によれば、生理食塩濃度下での沈殿形成能に優れるヒアルロン酸誘導体組成物、これを含む医薬組成物およびヒアルロン酸誘導体－薬物結合体組成物を提供することができる。
【図1】
【図2】
【図3】