特許 7398516 アツバノリの抽出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-06

(45)【発行日】2023-12-14

(54)【発明の名称】アツバノリの抽出方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/04 20060101AFI20231207BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20231207BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20231207BHJP

   A61K 8/9717 20170101ALI20231207BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20231207BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20231207BHJP

   A23L 33/105 20160101ALI20231207BHJP

   A23L 17/60 20160101ALI20231207BHJP

【ＦＩ】

A61K36/04

A61P17/10

A61Q19/00

A61K8/9717

A61Q7/00

A61P17/14

A23L33/105

A23L17/60 B

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2022099480

(22)【出願日】2022-06-21

(65)【公開番号】P2023158612

(43)【公開日】2023-10-30

【審査請求日】2022-06-21

(31)【優先権主張番号】111114658

(32)【優先日】2022-04-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

(73)【特許権者】

【識別番号】500447978

【氏名又は名称】台灣中油股▲フン▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】鄭▲シュ▼玉

(72)【発明者】

【氏名】高艾玲

(72)【発明者】

【氏名】翁▲ユ▼翔

(72)【発明者】

【氏名】黄冬梨

(72)【発明者】

【氏名】陳勁中

(72)【発明者】

【氏名】洪培景

(72)【発明者】

【氏名】王昭竣

(72)【発明者】

【氏名】張文騰

【審査官】松浦 安紀子

(56)【参考文献】

【文献】特開２０２３－０２０８２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０２３－０２０８２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１０／００４７２１９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】Chieh-Chih Shih,et al.，Int. J. Mol. Sci.，2017年，18, 2437

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３６／０４

Ａ６１Ｐ １７／１０

Ａ６１Ｑ １９／００

Ａ６１Ｋ ８／９７１７

Ａ６１Ｑ ７／００

Ａ６１Ｐ １７／１４

Ａ２３Ｌ ３３／１０５

Ａ２３Ｌ １７／６０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）乾燥したアツバノリの粉末を提供する工程と、
（ｂ）二酸化炭素流体で当該乾燥したアツバノリの粉末に対して抽出を行って抽出アツバノリの抽出液を取得する工程であって、当該アツバノリの抽出液にアツバノリの抽出物と当該二酸化炭素流体溶剤とが含有され、抽出圧力は３００－６５０ｂａｒであり、抽出温度は４５－５５℃であり、抽出時間は２－６時間である、工程と、
（ｃ）当該アツバノリの抽出液から当該アツバノリの抽出物を分離する工程であって、
分離圧力は３０－１００ｂａｒである、工程とを含む、
ことを特徴とするアツバノリの抽出物の抽出方法。

【請求項2】

前記抽出圧力は３５０ｂａｒであり、前記抽出温度は５５℃であり、前記抽出時間は２時間である
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抽出圧力は３６５ｂａｒであり、前記抽出温度は５５℃であり、前記抽出時間は４時間である
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記抽出圧力は４２０ｂａｒであり、前記抽出温度は５５℃であり、前記抽出時間は４時間である
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アツバノリの抽出方法、アツバノリの抽出物及びその用途、特に、超臨界流体による抽出により製造されるアツバノリの抽出物に関する創作である。

【背景技術】

【0002】

アツバノリ（Ｓａｒｃｏｄｉａ）は、暗赤色の扁平状の藻体であり、現在、アツバノリには、食物繊維、ミネラル、人体に必須のアミノ酸、ビタミンＥ、オメガ脂肪酸その他の栄養素が豊富に含まれていることが知られている。よって、アツバノリは、人体の健康に有益である健康食品とされている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

しかしながら、現在、アツバノリは、栄養素を豊富に有し、健康食品としての利用に適していることが知られているが、未だにアツバノリから高い経済価値を有する成分は抽出されていない。よって、如何に新たな抽出方法を提供して、アツバノリから高い経済価値を有する成分を抽出するのかは、依然として未解決の課題である。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本発明の目的は、前記問題に対処し、（ａ）乾燥したアツバノリの粉末を提供する、（ｂ）二酸化炭素流体で当該乾燥したアツバノリの粉末に対して抽出を行って抽出アツバノリの抽出液を取得し、当該アツバノリの抽出液にアツバノリの抽出物と当該二酸化炭素流体溶剤とが含有され、抽出圧力は３００－６５０ｂａｒであり、抽出温度は４５－５５℃であり、抽出時間は２－６時間である、及び（ｃ）当該アツバノリの抽出液から当該アツバノリの抽出物を分離し、分離圧力は３０－１００ｂａｒである、前記（ａ）から（ｃ）の工程を含むことを特徴とするアツバノリの抽出物の抽出方法を提供することである。

【0005】

上述に記載の方法の通り、抽出圧力は３５０ｂａｒであり、抽出温度は５５℃であり、抽出時間は２時間である。

【0006】

上述に記載の方法の通り、抽出圧力は３６５ｂａｒであり、抽出温度は５５℃であり、抽出時間は４時間である。

【0007】

上述に記載の方法の通り、抽出圧力は４２０ｂａｒであり、抽出温度は５５℃であり、抽出時間は４時間である。

【0008】

前記目的及びその他目的を達成するために、本発明は、当該アツバノリ抽出物を提供し、当該アツバノリ抽出物は以上に記載の抽出方法によって製造される。

【0009】

前記目的及びその他目的を達成するために、本発明は、当該アツバノリ抽出物の濃度は５μｇ／ｍＬ以上であることを特徴とする毛包細胞の成長活性を促進する薬物を調製する用途のための、前記アツバノリ抽出物を提供する。

【0010】

前記目的及びその他目的を達成するために、本発明は、当該アツバノリ抽出物の濃度は０．５ｍｇ／ｍＬ以上であることを特徴とするアクネ桿菌の成長を抑制する薬物又は化粧品を調製する用途のための前記アツバノリ抽出物を提供する。

【0011】

前記目的及びその他目的を達成するために、本発明は、当該アツバノリ抽出物の濃度は１μｇ／ｍＬ以上であり、角質細胞の移動活性を増進する薬物又は化粧品を調製する用途のための前記アツバノリ抽出物を提供する。

【0012】

前記目的及びその他目的を達成するために、本発明は、当該アツバノリ抽出物の濃度は６μｇ／ｍＬ以上であり、抽出物角質細胞の成長活性を増進する薬物又は化粧品を調製する用途のためのアツバノリの抽出物を提供する。

【発明の効果】

【0013】

本発明は、上述のようなアツバノリの抽出物、その抽出方法及びその用途によって、新たな抽出方法を提供することで、アツバノリから高い経済価値を有する成分を抽出することができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】本発明の実施例１１のアツバノリの抽出物の波長が２１０ｎｍであるＵＶ光下でのＨＰＬＣ指紋プロファイルを示すものである。

【図2】本発明の実施例１１のアツバノリの抽出物の波長が２５４ｎｍであるＵＶ光下でのＨＰＬＣ指紋プロファイルを示すものである。

【図3】本発明の実施例１１のアツバノリの抽出物の波長が２８０ｎｍであるＵＶ光下でのＨＰＬＣ指紋プロファイルを示すものである。

【図4】本発明の実施例１１のアツバノリの抽出物のガスクロマトグラフィープロファイルを示すものである。

【図5】本発明の実施例１１のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞に対する細胞成長の促進に関する試験結果を示すものである。

【図6】本発明の実施例１２のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞に対する細胞成長の促進に関する試験結果を示すものである。

【図7】本発明の実施例１３のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞に対する細胞成長の促進に関する試験結果を示すものである。

【図8】本発明の実施例１４の異なるアツバノリの抽出物のＨＰＬＣ指紋プロファイルの比較結果を示すものである。

【図9】本発明の実施例１６のアツバノリの抽出物の角質細胞の移動能力を促進する試験における蛍光画像を示すものである。

【図10】本発明の実施例１６のアツバノリの抽出物の角質細胞の移動能力を促進する試験における細胞移動率を示すものである。

【図11】本発明の実施例１７のアツバノリの抽出物の角質細胞成長を促進する試験の結果を示すものである。

【発明を実施するための形態】

【0015】

以下、本発明の目的、特徴および効果を十分に理解するために、以下の具体的な実施例によって、添付された図面とともに、本発明について詳細について以下にて説明する。

【0016】

実施例１のアツバノリの抽出物の抽出方法

【0017】

本実施例１のアツバノリの抽出物の抽出方法の略述は、以下の通りである。

【0018】

まず、乾燥したアツバノリの粉末を提供する。本実施例１における乾燥したアツバノリの粉末は、アツバノリの粉末の一般的な調製方法で製造されるが、市販のものを取得することも可能である。アツバノリの粉末の一般的な調製方法は、以下の通り、新鮮なアツバノリを収穫した後、洗浄し、アツバノリに乾燥処理を行い、乾燥処理の方法はアツバノリをオーブンに入れ５０℃で２４時間持続的に乾燥し行う、乾燥処理後のアツバノリは粉砕機で粉砕して粉にすることで、アツバノリの粉末を調製し、アツバノリの粉末の粒径は、より好ましくは、１－４ｍｍであるが、その他の必要に応じてアツバノリの粉末の粒径を調整することができる。

【0019】

そして、超臨界流体の抽出設備を用意し、前記超臨界流体の抽出設備は金属工業研究発展センター（ＭＩＲＤＣ）により提供されたものであり、モデル番号はＳＦＥ－３５０Ｓ－１０００Ｒである。超臨界流体の抽出設備を使用して前記アツバノリの粉末からアツバノリの抽出物を抽出する。抽出方法は下記の通りであり、前記アツバノリの粉末を当該超臨界流体の抽出設備の抽出槽に入れ、アツバノリの粉末の使用量は抽出槽体の約９０－９９％の体積である（アツバノリの粉末の供給体積は８５０ｇから９５０ｇであり、抽出槽体の体積は１．２Ｌである）。そして、超臨界流体作を溶剤として、超臨界流体の抽出設備の操作マニュアルが提供する操作方法に基づき、当該乾燥したアツバノリの粉末に対して抽出を行い、本実施例１において使用される超臨界流体は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は３５０ｂａｒであり（製造工程の必要に応じて３００ｂａｒ－６５０ｂａｒの間で調整することができる）、抽出槽における抽出温度は５５℃であり（抽出温度は、製造工程の必要に応じて、４５℃－５５℃の間で調整することができる）、抽出時間は２時間であり、二酸化炭素流体の流量は１０Ｌ／ｈに設定したが、抽出の製造工程の必要に応じて、二酸化炭素流体の流量は５～１５Ｌ／ｈの範囲の間に設定することができる。抽出完了すると、アツバノリの抽出液を取得することができ、当該アツバノリの抽出液にはアツバノリの抽出物と当該二酸化炭素流体溶剤が含有され、当該アツバノリの抽出物は当該二酸化炭素流体溶剤に溶解している。

【0020】

最後に、当該アツバノリの抽出液を当該超臨界流体の抽出設備の分離槽に送入して減圧を行い、分離圧力は３５ｂａｒであり（分離圧力はアツバノリの抽出物の分離要件に基づいて３０－１００ｂａｒの間で調整することができる）、これにより、当該アツバノリの抽出液からアツバノリの抽出物を分離することができ、当該アツバノリの抽出物と二酸化炭素流体溶剤とを分離した後、エタノールで当該超臨界流体の抽出設備の抽出配管を洗浄し、当該抽出配管に付着した当該アツバノリの抽出物を洗浄する、即ち、当該アツバノリの抽出物をエタノールに溶解させ、当該アツバノリの抽出物を含むエタノールを当該抽出配管から流出させ、これにより、当該アツバノリの抽出物を収集し、エタノールに融解した当該アツバノリの抽出物を室温下に置き、エタノールが室温で揮発するまで待てば、当該アツバノリの抽出物を取得することができる。

【0021】

実施例１のアツバノリの抽出物のＨＰＬＣ分析

【0022】

実施例１のアツバノリの抽出物中の成分を分析するために、ＨＰＬＣカラムで分析を行う。分析条件は以下の通りである。ＨＰＬＣカラムＰｏｒｏｓｈｅｌｌＨＰＨ－Ｃ１８８（４．６ｘ１００ｍｍ、２．７μｍ）を使用し、流速は１ｍｌ／ｍｉｎであり、紫外線／可視光線検出器Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０ＤＡＤを使用して検出を行い（検出過程は、Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０ＤＡＤの操作マニュアルを参照されたい）、検出光は波長２１０ｎｍ、２５４ｎｍ及び２８０ｎｍのＵＶ光に設定した。アツバノリの抽出物のＨＰＬＣ指紋プロファイルは、図１－３に示す通りである。

【0023】

実施例１のアツバノリの抽出物のＧＣ／ＭＳ分析

【0024】

前記アツバノリの抽出物をガスクロマトグラフ（ＧＣ）（Ａｇｉｌｅｎｔ７８９０ＢＧＣ／５９７７ＢＥＩＭａｓｓＳｐｅｃ検出器）に置いて分析を行い、より明瞭なＧＣプロファイルを取得するため、前記アツバノリの抽出物のサンプルを別途採取してシリル化の前処理を行い、同一の方法でガスクロマトグラフィー分析を行い、前記ガスクロマトグラフィーが使用する分析カラムはＺＢ－１ＸＴＳＩＭＤＩＳＴｃｏｌｕｍｎ（５ｍｘ０．５３ｍｍＩＤ、０．０９μｍ膜厚）であり、ガスクロマトグラフィーの分析結果は、図４に示す通りであり、当該アツバノリの抽出物にはミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の脂肪酸及び植物ステロールが含有されている。

【0025】

実施例１のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞の細胞成長を促進する試験

【0026】

まず、前記抽出方法でアツバノリの抽出物を調製すると同時に、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌ）細胞株ＨＦＤＰＣ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社から購入したものであり、製品モデルはＣ１２０７１である）を用意する。

【0027】

そして、９６穴の細胞培養皿を用意し、そのうちの９穴にＨＦＤＰＣ細胞を含有する細胞液（毛包真皮乳頭細胞の成長培養基ＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈＭｅｄｉｕｍ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、Ｃ－２６５０１））を加え、各穴には５－８×１０^３個の細胞が含有されており、三穴を一群とし、前記ＨＦＤＰＣ細胞液を加えた９穴を制御群、実験群１及び実験群２に分け、制御群にはアツバノリの抽出物を完全に加えず、実験群１に最終濃度が５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加え、実験群２に最終濃度が２５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加えた。実験群１及び実験群２にアツバノリの抽出物を加えた後、細胞培養皿を細胞培養箱に入れて３７℃の環境で４８時間培養し、それぞれ培養から２４時間目及び４８時間目に、各穴からサンプルを採取して、細胞の生存率に関する試験（ＭＴＴ試験）により実験群１及び実験群２の細胞増加率を検査した。計算方法は（実験群の吸光値（１又は２）／制御群の吸光値）ｘ１００である。

【0028】

試験結果は以下の表一及び図５に示すとおりであり、培養から２４時間目における実験１の制御群に対する細胞成長率は１０６．５％であり、培養から４８時間目における実験１の制御群に対する細胞成長率は１０８．３％であり、培養から２４時間目における実験２の制御群に対する細胞成長率は１１３．１％であり、培養から４８時間目における実験２の制御群に対する細胞成長率は１０９．２％であった。

【0029】

【表1】

【0030】

実施例２のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞の細胞成長を促進する試験

【0031】

まず、実施例１のアツバノリの抽出方法に基づくが、抽出圧力を３６５ｂａｒに調整することで、実施例２のアツバノリの抽出物を調製すると同時に、ヒト毛包真皮乳頭細胞の細胞株ＨＦＤＰＣ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社から購入したものであり、製品モデルはＣ１２０７１である）を用意する。

【0032】

そして、細胞培養皿を用意し、そのうちの９穴にＨＦＤＰＣ細胞を含有する細胞液を加え、三穴を一群とし、前記ＨＦＤＰＣ細胞液を加えた９穴を制御群、実験群１及び実験群２に分け、制御群にはアツバノリの抽出物を完全に加えず、実験群１に最終濃度が５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加え、実験群２に最終濃度が２５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加えた。実験群１及び実験群２にアツバノリの抽出物を加えた後、細胞培養皿を細胞培養箱に入れて３７℃の環境で４８時間培養し、それぞれ培養から２４時間目及び４８時間目に、各穴からサンプルを採取して、ＭＴＴ試験により各群の細胞増加率を検査した。

【0033】

試験結果は図６に示す通りであり、培養から２４時間目における制御群に対する実験群１の細胞成長率は１０７．２％であり、培養から４８時間目における制御群に対する実験群１の細胞成長率は１１１．６％であり、培養から２４時間目における制御群に対する実験２の細胞成長率は１２５．７％であり、培養から４８時間目における制御群に対する実験２の細胞成長率は１４５．９％であった。

【0034】

実施例３のアツバノリの抽出物によるヒト毛包真皮乳頭細胞の細胞成長を促進する試験

【0035】

まず、実施例１のアツバノリの抽出方法に基づくが、抽出圧力を４２０ｂａｒに調整することで実施例３のアツバノリの抽出物を調製すると同時に、ヒト毛包真皮乳頭細胞の細胞株ＨＦＤＰＣ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社から購入したものであり、製品モデルはＣ１２０７１である）を用意した。

【0036】

そして、細胞培養皿を用意し、そのうちの９穴にＨＦＤＰＣ細胞を含有する細胞液を加え、三穴を一群とし、前記ＨＦＤＰＣ細胞液を加えた９穴を制御群、実験群１及び実験群２に分け、制御群にはアツバノリの抽出物を完全に加えず、実験群１に最終濃度が５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加え、実験群２に最終濃度が２５μｇ／ｍＬであるアツバノリの抽出物を加えた。実験群１及び実験群２にアツバノリの抽出物を加えた後、細胞培養皿を細胞培養箱に入れて３７℃の環境で４８時間培養し、それぞれ培養から２４時間目及び４８時間目に、各穴からサンプルを採取して、ＭＴＴ試験により各群の細胞増加率を検査した。

【0037】

試験結果は図７に示す通りであり、培養から２４時間目における制御群に対する実験群１の細胞成長率は１０５．６％であり、培養から４８時間目における制御群に対する実験群１の細胞成長率は１１０．３％であり、培養から２４時間目における制御群に対する実験２の細胞成長率は１１６．２％であり、培養から４８時間目における制御群に対する実験２の細胞成長率は１２６．１％であった。

【0038】

実施例４の異なるアツバノリの抽出物のＨＰＬＣ指紋プロファイルの比較

【0039】

まず、比較のサンプルとしてのアツバノリの抽出物Ａ－Ｅを提供する。

【0040】

アツバノリの抽出物Ａは、前記実施例１におけるアツバノリの抽出物の抽出方法に基づき、抽出条件を以下の条件の通り設定して調製したものである。抽出溶剤は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は３５０ｂａｒであり、抽出槽における抽出温度は５５℃であり、抽出時間は６時間である。

【0041】

アツバノリの抽出物Ｂは、前記実施例１におけるアツバノリの抽出物の抽出方法に基づき、抽出条件を以下の条件の通り設定して調製したものである。抽出溶剤は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は６５０ｂａｒであり、抽出槽における抽出温度は５５℃であり、抽出時間は２時間である。

【0042】

アツバノリの抽出物Ｃは、酢酸エチルで抽出したアツバノリの抽出物であり、抽出温度は５０℃であり、抽出圧力は１ｂａｒであり、抽出時間は６時間である。

【0043】

アツバノリの抽出物Ｄは、純水で抽出したアツバノリの抽出物であり、抽出温度は５０℃であり、抽出圧力は１ｂａｒであり、抽出時間は６時間である。

【0044】

アツバノリの抽出物Ｅは、９５％エタノールで抽出したアツバノリの抽出物であり、抽出温度は５０℃であり、抽出圧力は１ｂａｒであり、抽出時間は６時間である。

【0045】

そして、前記アツバノリの抽出物Ａ－ＥのＨＰＬＣ分析を行った。分析条件は以下の通りである。ＨＰＬＣカラムＴＳＫｇｅｌＯＤＳ－１００Ｓ（２５０ｘ４．６ｍｍ）を使用し、流速は１ｍｌ／ｍｉｎであり、紫外線／可視光線検出器を使用して検出を行い、検出光は波長２８０ｎｍのＵＶ光に設定した。

【0046】

分析結果は図８に示す通りであり、図中の各種アツバノリの抽出物のＨＰＬＣ指紋プロファイル波頭から見ると、同様に、超臨界流体を用いるが、異なる抽出圧力で抽出したアツバノリの抽出物Ａ、Ｂはその内容物の成分が比較的近く、酢酸エチル、水及びエタノールを溶剤として抽出したアツバノリの抽出物Ｃ－Ｅの内容物の成分は、アツバノリの抽出物Ａ、Ｂの内容物の成分と異なる。

【0047】

実施例５のアツバノリの抽出物のアクネ桿菌の成長を抑制する試験

【0048】

まず、実施例１のアツバノリの抽出方法に基づき、アツバノリの抽出物を調製すると同時に、当該アツバノリの抽出物の抑菌効果の検査標的としてアクネ桿菌を用意し、選用されたアクネ桿菌の菌種はプロピオニバクテリウム・アクネス菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｎｅｓ）（ＢＣＲＣ１０７２３）である。並びに、四皿の強化クロストリジウム培養基（ＲＣＭｍｅｄｉｕｍ）を用意し、一つ目の培養基には濃度が５０μｇ／ｍＬである抗生物質ゲンタマイシン（Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）が含有されているものを制御群１とした。二つ目の培養基には別途成分を添加しないものを制御群２とした。三つ目の培養基には濃度が１ｍｇ／ｍＬである前記アツバノリの抽出物を添加したものを実験群１とした。四つ目の培養基には濃度が０．５ｍｇ／ｍＬである前記アツバノリの抽出物を添加したものを実験群２とした。

【0049】

そして、アクネ桿菌を強化クロストリジウム液体培地（ＲＣＭ）培養液に接種し、アクネ桿菌の初期接種菌量は１．１５×１０^５ＣＦＵ／ｍＬであり、３７℃で４８時間嫌気培養すると、アクネ桿菌菌液が得られ、前記４群の培養基に１００μＬのアクネ桿菌菌液を均等に塗り、アクネ桿菌菌液を塗った前記４群の培養基を３７℃の培養箱に入れて嫌気培養を４８時間行い、培養が完了した後、培養箱から前記４群の培養基を取り出し、前記４群のコロニー形成単位（Ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ、ＣＦＵ）を計算する。

【0050】

実施例５の試験結果は以下表二に示す通りであり、制御群１に抗生物質を添加したため、殺菌効果を奏することができた。実施例５のアツバノリの抽出物の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬに達したとき、制御群２と比較して、菌量成長を抑制する現象があった。実施例５のアツバノリの抽出物の濃度が１ｍｇ／ｍＬに達したとき、殺菌効果があった。

【0051】

【表2】

【0052】

実施例６のアツバノリの抽出物の角質細胞移動を促進する能力に関する試験

【0053】

まず、比較サンプルとしてアツバノリの抽出物Ｆ－Ｈを提供する。

【0054】

アツバノリの抽出物Ｆは、前記実施例１におけるアツバノリの抽出物の抽出方法に基づき、抽出条件を以下の条件の通り設定して調製したものである。抽出対象は番号１０８１２０４の乾燥したアツバノリ細粉であり、抽出溶剤は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は３６５ｂａｒであり、抽出槽における抽出温度は５５℃であり、抽出時間は４時間である。

【0055】

アツバノリの抽出物Ｇは、前記実施例１におけるアツバノリの抽出物の抽出方法に基づき、抽出条件を以下の条件の通り設定して調製したものである。抽出対象は番号１０８１１０５－１の乾燥したアツバノリ細粉であり、抽出溶剤は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は３６５ｂａｒであり、抽出槽における抽出温度は５５℃であり、抽出時間は４時間である。

【0056】

アツバノリの抽出物Ｈは、前記実施例１におけるアツバノリの抽出物の抽出方法に基づき、抽出条件を以下の条件の通り設定して調製したものである。抽出対象は番号１０８１１０５－２の乾燥したアツバノリ細粉であり、抽出溶剤は二酸化炭素流体であり、抽出槽における抽出圧力は４２０ｂａｒであり、抽出槽における抽出温度は５５℃であり、抽出時間は４時間である。

【0057】

そして、９６穴の細胞培養皿及びＯｒｉｓ^ＴＭＣｅｌｌＭｉｇｒａｔｉｏｎキットを用意し、そのうちの１５個の穴にＯｒｉｓ^ＴＭＣｅｌｌＭｉｇｒａｔｉｏｎキットの中のストッパを挿入し、ストッパに前記１５個の穴に配置した後、それぞれ前記当該穴に２×１０^４のヒト角質細胞株（ＡＴＣＣＣＲＬ－２３０９）をそれぞれ接種し、三穴を一群とし、前記ヒト角質細胞株を接種した１５穴を制御群１、制御群２、実験群１、実験群２及び実験群３に分けた。制御群１に０．０５％のＤＭＳＯを加え、制御群２に０．０５％のＤＭＳＯ及び１００ｎｇ／ｍＬの表皮成長因子（ＥＧＦ）（ＥＧＦはヒト角質細胞の移動を促進することができる）を加え、実験群１に０．０５％のＤＭＳＯ及び１μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物Ｆを加え、実験群２に０．０５％のＤＭＳＯ及び１μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物Ｇを加え、実験群３に０．０５％のＤＭＳＯ及び１μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物Ｈを加えた。前記五群に検査したサンプルを加え終わった後、前記９６穴の細胞培養皿を細胞箱に入れて、３７℃の環境で２４時間培養し、前記９６穴の細胞培養皿で２４時間培養した後に、各群の穴に配置されたストッパ取り出して、各群の穴の上清液を取り除き、５０μＬの生体蛍光染料（ＣａｌｃｅｉｎＡＭ）（１μＭ）を加えて１時間静置した。

【0058】

最後に、蛍光顕微鏡ＯｌｙｍｐｕｓＣＫＸ５３で前記五群の穴の影像を撮影し、撮影した影像数値（即ち、蛍光信号の数値を選定した）から前記五群の穴のヒト角質細胞株の細胞移動率を計算した。

【0059】

試験結果は図９及び図１０に示す通りである。図９からわかる通り、ヒト角質細胞の移動を促進することができる成分を添加しない制御群１と比較して、実験群１、実験群２及び実験群３は明らかな細胞の移動傾向を有しており、図１０からわかる通り、実験群１、実験群２及び実験群３の細胞移動率はいずれも制御群１より高く、制御群１の移動率は１００％であり、実験群１の移動率は１６５．７８％であり、実験群２の移動率は１９０．２５％であり、実験群３の移動率は１５６．０８％であった。

【0060】

実施例７のアツバノリの抽出物の角質細胞の成長を促進する試験

【0061】

まず、実施例１のアツバノリの抽出方法に基づきアツバノリの抽出物を調製すると同時に本試験の検査標的として、ヒト角質細胞株（ＡＴＣＣＣＲＬ－２３０９）を用意した。

【0062】

そして、９６穴の細胞培養皿を用意し、そのうちの１５個の穴に２×１０^４ヒト角質細胞株（ＡＴＣＣＣＲＬ－２３０９）を接種し、三穴を一群とし、前記接種したヒト角質細胞株の１５穴を制御群１、制御群２、実験群１、実験群２及び実験群３に分けた。制御群１に１％のＤＭＳＯを加え、制御群２に１％のＤＭＳＯ及び１００ｎｇ／ｍＬの表皮成長因子（ＥＧＦ）を加え、実験群１に１％のＤＭＳＯ及び１．２μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物を加え、実験群２に１％のＤＭＳＯ及び６．０μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物を加え、実験群３に１％のＤＭＳＯ及び２４．１μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物を加えた。

【0063】

前記五群に検査サンプルを加え終わった後、前記９６穴の細胞培養皿を細胞培養箱に入れて３７℃の環境で２４時間培養し、前記９６穴の細胞培養皿を２４時間培養した後、ＭＴＳ／ＰＭＳ試験で細胞の生存率を検査する。本実施例７におけるＭＴＳ／ＰＭＳ試験の大まかな過程は以下の通りである。９６穴の細胞培養皿にＭＴＳ／ＰＭＳ試薬を加えて４時間反応させ、波長４９０ｎｍの箇所の吸光値を測定して細胞の生存率を計算する。

【0064】

試験結果は図１１に示す通りであり、濃度が６μｇ／ｍＬ以上であるアツバノリの抽出物は角質細胞の成長を促進する効果を有する。制御群１のＯＤ_４９０吸光値は１．５７に達し、制御群２のＯＤ_４９０吸光値は１．６２に達し、実験群１のＯＤ_４９０吸光値は１．５９に達し、実験群２のＯＤ_４９０吸光値は１．６８に達し、実験群３のＯＤ_４９０吸光値は１．８９に達した。これらの数値からわかる通り、実験群２（６．０μｇ／ｍＬのアツバノリの抽出物を含有する）は制御群２（表皮成長因子を添加した）に相当する効果を有する。

【0065】

前記アツバノリの抽出物方法により、新たな抽出方法を提供することで、アツバノリから高い経済価値を有する成分を抽出する、即ち、前記方法より抽出したアツバノリの抽出物は、毛包細胞の成長活性を促進する薬物、アクネ桿菌の成長を抑制する薬物若しくは化粧品又は角質細胞の活性を増進する薬物若しくは化粧品を調製するために用いることができる。

【0066】

本発明は前記で好ましい実施例を開示しているものの、前記実施例は本発明を記述するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものと捉えてはならないと、当業者は理解するものとする。注意すべきは、前記実施例の等価変更や置換は何れも本発明の範疇に含まれるものとする。従って、本発明の保護範囲は下記の特許請求の範囲で定義するものを基準とする。

【符号の説明】

【0067】

無し

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】