特許 7398716 ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-07

(45)【発行日】2023-12-15

(54)【発明の名称】ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20231208BHJP

   C07K 5/083 20060101ALI20231208BHJP

   C07K 5/093 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 38/06 20060101ALI20231208BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20231208BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20231208BHJP

   A23L 33/18 20160101ALI20231208BHJP

【ＦＩ】

C07K7/06 ZNA

C07K5/083

C07K5/093

A61K38/06

A61K38/08

A61P25/24

A23L33/18

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2021555111

(86)(22)【出願日】2020-11-05

(86)【国際出願番号】 JP2020041417

(87)【国際公開番号】W WO2021090894

(87)【国際公開日】2021-05-14

【審査請求日】2022-03-01

(31)【優先権主張番号】P 2019200911

(32)【優先日】2019-11-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】504132272

【氏名又は名称】国立大学法人京都大学

(73)【特許権者】

【識別番号】596175810

【氏名又は名称】公益財団法人かずさＤＮＡ研究所

(73)【特許権者】

【識別番号】390019987

【氏名又は名称】亀田製菓株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100206335

【弁理士】

【氏名又は名称】太田 和宏

(74)【代理人】

【識別番号】100120857

【弁理士】

【氏名又は名称】渡邉 聡

(72)【発明者】

【氏名】大日向 耕作

(72)【発明者】

【氏名】徐 宸東

(72)【発明者】

【氏名】鈴木 秀幸

(72)【発明者】

【氏名】佐藤 大

(72)【発明者】

【氏名】伊藤 彰

(72)【発明者】

【氏名】樋口 裕樹

【審査官】藤山 純

(56)【参考文献】

【文献】特表２００８－５２８００２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００５－５０７３６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０８－２１７７９４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００６－５０２０７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１７／０４２２８２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開昭５４－１２５６５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１０－５３２７６１（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１１／１２６０５４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開２０１４－１６２７３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１７－０４８１２４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１６－２２２６４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００４－１０７３５２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ ７／０６

Ｃ０７Ｋ ５／０８３

Ｃ０７Ｋ ５／０９３

Ａ６１Ｋ ３８／０６

Ａ６１Ｋ ３８／０８

Ａ６１Ｐ ２５／２４

Ａ２３Ｌ ３３／１８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

気分障害の治療、予防、又は改善に用いられる組成物であって、
前記組成物が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるペプチドのうちいずれか１以上を含む、
組成物。

【請求項2】

前記気分障害が、意欲低下、うつ、及び、うつ的気分障害、並びに、それらに基づく症状からなる群から選択される１以上である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

医薬品である請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

飲食品である請求項１又は２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

現代のストレス社会を反映し、意欲低下やうつ病等に代表される気分障害の増加が問題となっている。気分障害の病因の１つである不安感は、生体において危険を回避するための警告として本来必要なものであるが、過剰な不安感は気分障害の発症や症状の進行に関与し、不安感を緩和する食品や医薬品の開発が期待されている。

【0003】

例えば、特許文献１には、所定のジペプチドが、抗不安薬等として適していることが記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】国際公開第２０１３／１２９２２０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかし、気分障害を治療、予防、又は改善できる機能性素材に対するさらなるニーズがある。

【0006】

本発明は、上記の状況に鑑みてなされたものであり、気分障害を治療、予防、又は改善できる新規ペプチドを提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、特定のアミノ酸配列からなるペプチドによれば上記課題を解決できる点を見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のものを提供する。

【0008】

（１） 配列番号１又は配列番号２に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、３以上５以下のアミノ酸長である、ペプチド。

【0009】

（２） 前記ペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる、（１）に記載のペプチド。

【0010】

（３） （１）又は（２）に記載のペプチドを含み、気分障害の治療、予防、又は改善に用いられる組成物。

【0011】

（４） 前記気分障害が、意欲低下、うつ、及び、うつ的気分障害、並びに、それらに基づく症状からなる群から選択される１以上である、（３）に記載の組成物。

【0012】

（５） 医薬品である（３）又は（４）に記載の組成物。

【0013】

（６） 飲食品である（３）又は（４）に記載の組成物。

【0014】

（７） （３）から（５）のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、気分障害を治療、予防、又は改善する方法。

【発明の効果】

【0015】

本発明によれば、気分障害を治療、予防、又は改善できる新規ペプチドが提供される。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】各種ペプチドを経口投与したマウスを用いた、尾懸垂試験の結果である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお、本発明は以下の実施形態に限定されない。

【0018】

＜本発明のペプチド＞
本発明のペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＱＳＱ）又は配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＳＱＫ）を有し、かつ、３以上５以下のアミノ酸長である。なお、以下、アミノ酸配列は、Ｎ末端を左端に置き、Ｎ末端からＣ末端にかけて記載する。

【0019】

本発明者らは、各種ペプチド混合物の一斉分析情報や、情動行動に影響を及ぼす既知のペプチドの構造－活性相関情報に基づき検討した結果、気分障害の治療等に対して効果を示す新規ペプチド、すなわち、上記ペプチドを発見した。

【0020】

本発明のペプチドは、配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列からなるもの（トリペプチド）であってもよく、配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列のＮ末端側及び／又はＣ末端側に任意のアミノ酸が付加されたものであってもよい。

【0021】

なお、配列番号１に記載のアミノ酸配列において、Ｎ末端のアミノ酸はＱ（グルタミン）であり、Ｃ末端のアミノ酸はＱ（グルタミン）である。配列番号２に記載のアミノ酸配列において、Ｎ末端のアミノ酸はＳ（セリン）であり、Ｃ末端のアミノ酸はＫ（リシン）である。

【0022】

本発明のペプチドのアミノ酸長の上限は５以下のアミノ酸長であり、好ましくは４以下のアミノ酸長である。最も好ましくは、本発明のペプチドのアミノ酸長は３である（つまり、最も好ましくは、本発明のペプチドは、配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列からなる。）。

【0023】

配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列のＮ末端側及び／又はＣ末端側にアミノ酸が付加されたペプチドとしては、特に限定されないが、好ましい例として、配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＱＳＱＳＱ）からなるペプチド、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＳＱＳＱＫ）からなるペプチドが挙げられる。

【0024】

なお、配列番号３に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載のアミノ酸配列のＮ末端側に２つのアミノ酸（ＱＳ）が付加されたもの、又は、配列番号１に記載のアミノ酸配列のＣ末端側に２つのアミノ酸（ＳＱ）が付加されたものに相当する。配列番号４に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載のアミノ酸配列のＮ末端側に１つのアミノ酸（Ｓ）が付加され、かつ、Ｃ末端側に１つのアミノ酸（Ｋ）が付加されたもの、又は、配列番号２に記載のアミノ酸配列のＮ末端側に２つのアミノ酸（ＳＱ）が付加されたものに相当する。

【0025】

本発明者らの検討の結果、本発明のペプチドを構成するトリペプチド（配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列からなるペプチド）が意欲向上効果を奏するための最少単位であることが示唆された。本発明のペプチドを構成する、２アミノ酸長以下の部分ペプチド（例えば、ＱＳ、ＱＫ、ＳＱ等のジペプチド）は充分な意欲向上効果を奏することができないことがわかった。

【0026】

本発明のペプチドは、化学合成や、天然のタンパク質又はポリペプチドの加水分解によって得られる。

【0027】

化学合成の方法としては、公知のペプチド合成法が挙げられる。具体的には、ペプチド合成に通常用いられる方法である液相法又は固相法が挙げられる。さらに具体的には、Ｆｍｏｃ法、Ｂｏｃ法等が挙げられる。合成されたペプチドは、精製してもよい。精製方法としては、例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等を用いた方法が挙げられる。

【0028】

加水分解の方法としては、加水分解酵素を用いた方法、強酸又は強塩基を用いた方法等が挙げられる。

【0029】

加水分解酵素を用いた方法においては、動物、植物又は微生物由来の加水分解酵素（トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ぺプシン、カルボキシペプチダーゼ、サーモリシン等）を使用できる。加水分解酵素としては、食品として用いることができる微生物（例えば、パン酵母、ビール酵母等の食用酵母）等を用いてもよい。

【0030】

加水分解酵素を用いた加水分解の条件としては、特に限定されないが、用いる酵素に応じてｐＨを適切な値に調整し、３０～７０℃程度の温度下にて、３０分～４８時間反応させてもよい。得られた反応液から本発明のペプチドを精製して用いてもよい。加水分解した対象が食品素材である場合は、そのまま、又は、他の食品素材に添加して食品として供することもできる。

【0031】

強酸を用いた方法においては、例えば、塩酸、硝酸、硫酸等を用いることができる。強塩基を用いた方法においては、例えば、アルカリ金属水酸化物（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等）、アルカリ金属炭酸塩（炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等）、アルカリ金属炭酸水素塩（炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等）を用いることができる。

【0032】

強酸又は強塩基を用いた加水分解の条件としては、特に限定されないが、強酸又は強塩基の存在下で、水中で、１～１００℃の温度下にて、３０分～４８時間反応させてもよい。加水分解の反応生成物は、ｐＨを調製した後、そのまま使用してもよく、精製により本発明のペプチドを単離して使用してもよい。

【0033】

各種方法によって得られたペプチドのアミノ酸配列は、エドマン分解法でＣ－末端からアミノ酸配列を読み取るプロテインシークエンサー、ＧＣ－ＭＳ等で分析できる。

【0034】

＜本発明の組成物＞
本発明の組成物は、少なくとも本発明のペプチドを含み、本発明のペプチドからなるものであってもよく、その他の成分を含んでいてもよい。

【0035】

本発明のペプチドを摂取することにより、気分障害を治療、予防、又は改善できる。したがって、本発明の組成物は、気分障害の治療、予防、又は改善のために好ましく使用できる。

【0036】

本発明において、「気分障害」とは、気分（感情）に関する障害を有する精神疾患を意味する。具体的には、意欲低下、うつ、及び、うつ的気分障害、並びに、これらに基づく症状のうち１以上が挙げられる。本発明によれば、気分障害のうち、特に意欲低下を治療、予防、又は改善できる。

【0037】

本発明において、「治療」とは、例えば、気分障害の進行の遅延、並びに、症状の治癒等を意味する。「予防」とは、例えば、気分障害の発症の抑制又は遅延等を意味する。「改善」とは、例えば、気分障害の症状の緩和、軽減等を意味する。

【0038】

本発明の組成物は、任意の形態に調製でき、医薬品や飲食品として調製してもよい。

【0039】

本発明の組成物を医薬品として調製する場合、経口投与剤又は非経口投与剤として調製できる。本発明の組成物は、例えば、本発明のペプチド単独で、又は、担体、希釈剤若しくは賦形剤とともに、以下の製剤として調製できる；タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠等）、カプセル、トローチ、粉末、細粒剤、顆粒剤、液剤、懸濁液、乳濁液、ペースト、クリーム、注射剤（アミノ酸輸液、電解質輸液等の輸液に配合する場合を含む）、腸溶性の錠剤、カプセル剤、徐放性製剤等。

【0040】

担体、希釈剤又は賦形剤としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用いられる。例えば、以下のものが挙げられる；乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等。

【0041】

本発明の組成物を飲食品として調製する場合、任意の形態に調製でき、例えば、以下のものが挙げられる；飲料類（コーヒー、ココア、ジュース、清涼飲料、ミネラル飲料、茶飲料、緑茶、紅茶、烏龍茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料等）、米菓（煎餅、おかき、あられ等）、ガム、グミ、ゼリー、キャンディ、クッキー、クラッカー、ビスケット、氷菓（アイスクリーム、アイスキャンディ、シャーベット、かき氷等）、レトルト食品、ゼリー状食品（ゼリー、寒天、ゼリー状飲料等）等。

【0042】

本発明の飲食品は、いわゆる健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、特定保健用食品、機能性表示食品、病者用食品・病者用組合せ食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）又は高齢者用食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）として調製してもよい。

【0043】

本発明の組成物における、本発明のペプチドの量は、得ようとする効果等に応じて適宜設定できる。例えば、組成物に対して、本発明のペプチドを、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは１．００質量％以上配合してもよい。また、組成物に対して、本発明のペプチドを、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９０質量％以下配合してもよい。なお、上記の値は、本発明の組成物に本発明のペプチド以外のペプチドが含まれる場合、本発明のペプチドの量に換算したものである。

【0044】

本発明の組成物における、本発明のペプチド以外の成分の量は、該成分の種類、組成物の形態、得ようとする効果等に応じて適宜設定できる。

【0045】

本発明の組成物の投与方法は特に限定されず、経口投与、又は非経口投与（注射等）のいずれであってもよい。本発明の効果が奏されやすいという観点から、本発明の組成物は経口投与されることが好ましい。

【0046】

本発明の組成物の投与量は、投与方法、投与対象の状態や年齢等により異なるが、例えば、本発明のペプチドの量に換算して、成人１日あたり、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇである。上記範囲内において、投与量が多いほど、本発明の効果がより奏されやすい傾向にある。

【0047】

本発明の組成物の製造方法としては、得ようとする形態に応じて、公知の方法を採用できる。

【0048】

＜気分障害を治療、予防、又は改善する方法＞
本発明の組成物を対象に投与することで、気分障害を治療、予防、又は改善することができる。

【0049】

投与方法は、組成物の形態に応じて適宜選択することができる。

【0050】

投与回数、投与間隔、投与量は、投与対象の状態（症状、年齢、体重等）に応じて適宜選択することができる。

【0051】

投与対象としては特に限定されず、ヒト、ヒト以外の哺乳類（イヌ、ネコ、家畜（ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等）等）等が挙げられる。

【実施例】

【0052】

以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

【0053】

＜ペプチドの作製＞
以下の８種類のペプチドを、Ｆｍｏｃ法による合成、次いで、逆相ＨＰＬＣによる精製によって作製した。ペプチド１乃至４が本発明のペプチドに相当する。
（ペプチド１）配列番号１で表されるアミノ酸配列（ＱＳＱ）からなるペプチド
（ペプチド２）配列番号２で表されるアミノ酸配列（ＳＱＫ）からなるペプチド
（ペプチド３）配列番号３で表されるアミノ酸配列（ＱＳＱＳＱ）からなるペプチド
（ペプチド４）配列番号４で表されるアミノ酸配列（ＳＱＳＱＫ）からなるペプチド
（ペプチド５）配列番号５で表されるアミノ酸配列（ＱＳ）からなるペプチド
（ペプチド６）配列番号６で表されるアミノ酸配列（ＱＫ）からなるペプチド
（ペプチド７）配列番号７で表されるアミノ酸配列（ＳＱ）からなるペプチド
（ペプチド８）配列番号８で表されるアミノ酸配列（ＱＳＱＳＱＫ）からなるペプチド

【0054】

作製した各ペプチドを、以下の方法で、マウス（ｄｄｙマウス（５週齢の雄、体重２４～２８ｇ））に投与し、尾懸垂試験によって意欲向上効果を評価した。その結果を図１に示す。

【0055】

＜ペプチドの投与＞
各ペプチドを生理食塩水に溶解させ、ペプチド３、４、８については体重あたり０．３ｍｇ／ｋｇの量で、ペプチド１、２、５、６、７については０．２μｍｏｌ／ｋｇの量で、マウスに経口投与した（ｎ＝５）。対照として生理食塩水のみを経口投与したマウスを用意した（ｎ＝５）。各マウスを以下の尾懸垂試験に供し、本発明のペプチドによる意欲向上効果を評価した。

【0056】

＜尾懸垂試験（Ｔａｉｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｔｅｓｔ）：意欲向上効果の評価＞
各マウスを、ペプチド投与から３０分後に、床の上から３０ｃｍの位置に尾でつり下げて懸垂させた。次いで、試験開始（０分）から６分間にわたって、逃避行動を開始した後に認められる無動状態であった時間（無動時間（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ ｔｉｍｅ））を測定し、平均値を求めた。無動状態は、「絶望状態」として知られ、無動時間が短いほど、絶望状態が改善し、意欲が向上したものと評価できる。したがって、この試験において意欲向上効果をもたらす物質は、気分障害の治療、予防、又は改善に有効であり得る。

【0057】

＜結果＞
図１の結果は、対照の無動時間を「１００」とした場合の、各ペプチドを投与されたマウスの無動時間を相対値として表したものである。図１において値が小さいほど、絶望状態が改善し、意欲が向上したものと評価できる。

【0058】

図１に示されるとおり、本発明のペプチド（ペプチド１乃至４）を投与されたマウスは、対照と比較して無動時間が短かった。したがって、本発明のペプチドは、意欲向上効果を奏し、気分障害の治療や予防に有用であることが示された。

【0059】

さらに、本発明のペプチドのうち、所定のトリペプチド（ペプチド１及び２）による意欲向上効果が特に良好だった。

【0060】

他方、ＱＳ、ＱＫ、ＳＱで表されるアミノ酸配列を有するジペプチド（ペプチド５乃至７）を投与されたマウスは、対照と比較して無働時間の減少がほぼ認められなかった。

【0061】

以上の結果から、本発明のペプチドが意欲向上効果を有すること、さらには、本発明のペプチドを構成するトリペプチド（ペプチド１及び２）が意欲向上効果を奏するための最少単位であることが示唆された。

【図1】

【配列表】

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