特許 7399507 乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-08

(45)【発行日】2023-12-18

(54)【発明の名称】乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/704 20060101AFI20231211BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20231211BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20231211BHJP

【ＦＩ】

A61K31/704

A61P17/06

A61K9/20

A61K9/14

A61K9/08

A61K9/06

A61K9/107

A61K9/12

A61K9/48

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2022113501

(22)【出願日】2022-07-14

(65)【公開番号】P2023095751

(43)【公開日】2023-07-06

【審査請求日】2022-08-04

(31)【優先権主張番号】202111601109.7

(32)【優先日】2021-12-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】522284100

【氏名又は名称】広西馨海薬業科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＧＵＡＮＧＸＩ ＸＩＮＨＡＩ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】１Ｆ， Ｆａｃｔｏｒｙ Ｎｏ．２ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｉｎ Ｌｕｏｗｅｉ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｚｏｎｅ， Ｎｏ． ７ Ｐｕｔａｏｓｈａｎ， Ｌｉｕｚｈｏｕ Ｃｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｘｉ， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100091683

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼川 俊雄

(74)【代理人】

【識別番号】100179316

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 寛奈

(72)【発明者】

【氏名】高紅偉

(72)【発明者】

【氏名】楊世林

(72)【発明者】

【氏名】苑仁▲イ▼坤

(72)【発明者】

【氏名】李笑然

【審査官】伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】韓国公開特許第１０－２０１６－００１９７７２（ＫＲ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１３３１８００２（ＣＮ，Ａ）

【文献】Chemico-Biological Interactions，2021年，345，109534 (9 pages)

【文献】Chin Med，2020年，15，68 (13 pages)，https://doi.org/10.1186/s13020-020-00350-w

【文献】Journal of Immunology Research，2020年，2020，Article ID 7502301 (13 pages)

【文献】International Immunopharmacology，2020年，87，106794 (12 pages)

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の使用。

【請求項2】

前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４と、薬学的に許容可能なベクターを含有することを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４の塩酸塩、過塩素酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩又は硫酸塩と、薬学的に許容可能なベクターを含有することを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項4】

薬学的に許容可能なベクターは、希釈剤、可溶化剤、共溶媒、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、矯味剤、酸化防止剤、結合剤、吸収剤、湿潤剤、緩衝剤、架橋剤を含むことを特徴とする請求項２又は３に記載の使用。

【請求項5】

前記薬物は、薬学的に許容される剤形に製造されることを特徴とする請求項４に記載の使用。

【請求項6】

前記剤形には、丸剤、タブレット、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、滴丸、滴剤、スプレー剤、注射剤、懸濁液、膏剤、ゲル剤、座薬が含まれることを特徴とする請求項５に記載の使用。

【請求項7】

アネモシドＢ４の投与量は５ｍｇ／ｋｇ・ｄ以上とすることを特徴とする請求項１に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、薬物の技術分野に関する。より具体的に、本発明は、乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途に関する。

【背景技術】

【0002】

乾癬は、臨床でよく見られる慢性炎症性疾患であり、胴体と四肢に広く表れる鱗屑性紅斑が主な臨床症状である。乾癬は、治療難度が高く、再発しやすいとの特性を有する。本邦における乾癬発症率は０．４７％であり、乾癬の中でも尋常性乾癬が最もよく見られるタイプとなっている。乾癬は発症メカニズムが複雑であり、現在のところ、遺伝、炎症、精神的緊張、薬物、免疫不全等の複数の要因が関係すると考えられている。乾癬には、西洋医学的治療のほか、グルココルチコイドが主に用いられているが、効果には限界がある。また、長期的にグルココルチコイドを外用していると皮膚の角質層が薄くなってしまう。そこで、現在、漢方薬による乾癬治療に研究の注目が集まっている。漢方では、臨床的に、乾癬には血熱症が多く見られ、素体の営血不足、血熱内蘊、化燥生風、筋肉と皮膚の栄養不足が原因と考えられている。ハクトウオウ（Ａｎｅｍｏｎｅ ｃｈｉｎｅｎｓ）は、清熱解毒、涼血等の作用を有するが、現在のところ、アネモシドＢ（Ａｎｅｍｏｓｉｄｅ Ｂ４）による乾癬の予防・治療については報告がない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

本発明は、乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途を提供する。アネモシドＢ４は、乾癬に対する治療作用を有し、その作用メカニズムは、炎症反応の抑制、免疫機能の調節、血管新生の抑制に関連すると思われる。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本発明に係るこれらの目的及びその他の利点を実現するために、乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途を提供する。

【0005】

好ましくは、前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４と、薬学的に許容可能なベクターを含有する。

【0006】

好ましくは、前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４の塩酸塩、過塩素酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩又は硫酸塩と、薬学的に許容可能なベクターを含有する。

【0007】

好ましくは、薬学的に許容可能なベクターは、希釈剤、可溶化剤、共溶媒、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、矯味剤、酸化防止剤、結合剤、吸収剤、湿潤剤、緩衝剤、架橋剤を含む。

【0008】

好ましくは、前記薬物は薬学的に許容される剤形に製造される。

【0009】

好ましくは、前記剤形には、丸剤、タブレット、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、滴丸、滴剤、スプレー剤、注射剤、懸濁液、膏剤、ゲル剤、座薬が含まれる。

【0010】

好ましくは、アネモシドＢ４の投与量は５ｍｇ／ｋｇ・ｄ以上とする。

【発明の効果】

【0011】

本発明は、少なくとも以下の有益な効果を有する。

【0012】

アネモシドＢ４群は、乾癬に対し一定の治療作用を有する。ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウスの皮膚病変には、多くの紅斑、小さな鱗屑、皮膚病変の浸潤・肥厚が認められた。一方、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群の皮膚病変症状はモデル対照群に比べ軽減した。また、モデル対照群のＰＡＳＩスコアは上昇したが、アネモシドＢ４投与群ではＰＡＳＩスコアを顕著に低下させることができた。また、モデル対照群のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルは上昇したが、アネモシドＢ４の各投与量群では、投薬後にＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルが低下した。また、ブランク対照群と比較して、モデル対照群は、血清中のＣＤ３^＋（％）、ＣＤ４^＋（％）及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋比が顕著に低下した。一方、アネモシドＢ４群は、ＣＤ３^＋（％）、ＣＤ４^＋（％）及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋レベルを顕著に上昇させることができた。以上の結果より、アネモシドＢ４は、乾癬に対する治療作用を有し、その作用メカニズムは、炎症反応の抑制、免疫機能の調節、血管新生の抑制に関連すると思われる。

【0013】

本発明のその他の利点、目標及び特徴は、一部が以下の説明から明らかとなる。また、一部は、本発明の研究及び実践を通して当業者に理解される。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】図１は、本発明におけるマウスの乾癬皮膚病変に対する各群の影響である。

【図2】図２は、本発明におけるマウスの乾癬ＰＡＳＩスコアに対する各群の影響である。

【図3】図３は、本発明におけるマウス血清のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルに対する各群の影響である。

【図4】図４は、本発明におけるマウスのＴ細胞サブセットＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋に対する各群の影響である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

以下に、当業者が明細書の記載を参照して実施し得るよう、図面を組み合わせて本発明につき更に詳細に説明する。

【0016】

理解すべき点として、本文中で使用する「有する」、「含有する」及び「含む」といった用語は、１又は複数のその他の要素又はその組み合わせの存在又は追加を排除するものではない。

【0017】

説明すべき点として、特に説明がない場合、以下の実施方案で記載する実験方法はいずれも一般的な方法である。また、特に説明がない場合、記載する試薬及び材料はいずれもビジネスルートで取得可能である。

【0018】

乾癬を治療又は予防する薬物の製造におけるアネモシドＢ４の用途。

【0019】

前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４と、薬学的に許容可能なベクターを含有する。

【0020】

前記薬物は、治療有効量のアネモシドＢ４の塩酸塩、過塩素酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩又は硫酸塩と、薬学的に許容可能なベクターを含有する。

【0021】

薬学的に許容可能なベクターは、希釈剤、可溶化剤、共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、矯味剤、酸化防止剤、結合剤、吸収剤、湿潤剤、緩衝剤、架橋剤を含む。

【0022】

前記薬物は、薬学的に許容される剤形に製造される。前記剤形には、丸剤、タブレット、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、滴丸（Ｇｕｔｔａｔｅ Ｐｉｌｌｓ）、滴剤、スプレー剤、注射剤、懸濁液、膏剤、ゲル剤、座薬が含まれる。

【0023】

アネモシドＢ４の投与量は５ｍｇ／ｋｇ・ｄ以上とする。本発明の製剤は、体重当たり服用量の形式で使用する。

【0024】

１ 材料及び方法
１．１ 薬物及び試薬
アネモシドＢ４（実験室で抽出）、イミキモドクリーム（四川明欣薬業有限責任公司製品、ロット番号１０１１１２）、アシトレチンカプセル（重慶華邦只要有限責任公司、医薬品製造承認番号２００１０１２６）、注射用生理食塩水（四川科倫薬業股▲フン▼有限公司、ロット番号：Ｌ２１９０１２２１１）。ＥＬＩＳＡ試薬キットは欣博盛社より購入し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８抗体はＢＤ社より購入した。

【0025】

１．２ 実験動物
ＳＰＦグレード、体重約１８０ｇの健康なオスのＳＤラット（６～８週齢）６０匹が北京維通利華実験動物技術有限公司から提供された。動物合格証番号：ＳＣＸＫ京２０１６－０００６。

【0026】

１．３ 計器
１／１０００精密天秤（梅特勒－托利多（メトラー・トレド）儀器上海有限公司、型番：ＭＥ２０４Ｅ）、低温高速遠心分離機（エッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）社、型番：５４２５Ｒ）、病理画像アナライザ（日本オリンパス社、型番：ＢＸ－６０）、組織破砕装置（傑霊儀器制造天津有限公司、型番：ＴＰ－２４）。

【0027】

１．４ 実験方法
オスのＳＤラットをブランク対照群、モデル対照群、アネモシドＢ４ ５ｍｇ／ｋｇ胃内投与群、アネモシドＢ４ １０ｍｇ／ｋｇ胃内投与群、アネモシドＢ４ ２０ｍｇ／ｋｇ胃内投与群、及びアシトレチン ５ｍｇ／ｋｇ胃内投与群の６群に分けた。各群のマウスの背部剃毛面積は２．５ｃｍ×３ｃｍの領域とした。ブランク対照群を除くその他の５群については、５％イミキモドクリーム６２．５ｍｇを毎日投与して乾癬を誘発し、連続８日間にわたりモデル作製を行った。そして、モデル作製に成功したと判断したあと、７日間連続で投薬を行った。アネモシドＢ４群については、胃内投与によって対応投与量のアネモシドＢ４溶液を与え、アシトレチン陽性対照薬群については、胃内投与によってアシトレチン溶液を与えた。また、モデル対照群にはワセリン６２．５ｍｇを塗布し、ブランク対照群にはワセリン６２．５ｍｇを塗布した。投薬は連続７日間行った。

【0028】

２ 測定指標
２．１ ＰＡＳＩスコア
各群のマウスの乾癬様皮膚病変面積及び疾病重症度（ＰＡＳＩ）スコアについて、皮膚のモデル作製部位を撮影記録した。また、ＰＡＳＩスコアの基準に基づき、マウスの皮膚病変箇所における紅斑、鱗屑及び浸潤・肥厚度合に０～４点を付与し、これらの点数を加算して合計点を取得した。ＰＡＳＩスコアの基準は、０：なし、１：軽症、２：中等症、３：重症、４：極めて重症、であった。

【0029】

２．２ ＥＬＩＳＡによる血清中Ｍ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－１７レベルの測定

【0030】

投薬終了後に、腹部大動脈から採血し、遠心分離にかけて血清を収集した。そして、ＥＬＩＳＡ試薬キットを用い、説明書に従い操作して、血清中のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルを測定した。

【0031】

２．３ フローサイトメトリーによる血清中Ｔ細胞サブセットＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋の測定
投薬終了後、腹部大動脈から採血し、赤血球溶解バッファを加えて遠心分離によりＴ細胞を収集した。また、４℃でＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８抗体を２０ｍｉｎ培養し、バッファで１回洗浄した。そして、遠心分離にかけて細胞を収集し、フローサイトメトリーによりＴ細胞のサブセット比率を測定した。

【0032】

２．４ 統計分析
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．４．３ソフトウェアを用いて統計を行った。データはいずれもｍｅａｎ±ＳＤで表した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施して群間の差の有意性を評価したところ、統計学的に有意であった（^＊＊＊Ｐ＜０．００１、^＃＃＃Ｐ＜０．００１）。

【0033】

３ 実験結果
３．１ 乾癬皮膚病変に対するアネモシドＢ４の影響

【0034】

図１に示すように、ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウスの皮膚病変には、多くの紅斑、小さな鱗屑、皮膚病変の浸潤・肥厚が認められた。また、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群の皮膚病変症状はモデル対照群に比べ軽減した。図２に示すように、ＰＡＳＩスコアの結果より、モデル対照群はＰＡＳＩスコアが顕著に上昇したが、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群はＰＡＳＩスコアを顕著に低下させることができた（注：ブランク対照群と比較して、^＃＃＃Ｐ＜０．００１、モデル対照群と比較して、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．０５であった）。以上の結果より、アネモシドＢ４群は乾癬皮膚病変に対し一定の治療作用を有することが示された。

【0035】

３．２ 血清中Ｍ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルに対するアネモシドＢ４の影響
図３に示すように、ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウス血清中のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルはいずれも顕著に増加した。一方、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群では、血清中のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルが顕著に低下した。なお、図中のＡはＭ－ＣＳＦレベル、ＢはＶＥＧＦレベル、ＣはＩＬ－６レベル、ＤはＩＬ－１７レベルを示している。（注：ブランク対照群と比較して、^＃＃＃Ｐ＜０．００１、モデル対照群と比較して、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．０５であった）。以上の結果より、アネモシドＢ４は、血清中のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルを低下させることで乾癬治療作用を発揮すると思われる。

【0036】

３．３ Ｔ細胞サブセットＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋に対するアネモシドＢ４の影響
図４に示すように、ブランク対照群と比較して、モデル対照群は、マウス血清中のＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋比がいずれも顕著に低下した。一方、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群では、血清中のＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋比がいずれも顕著に上昇した。なお、図中のＡはＣＤ４^＋比率、ＢはＣＤ３^＋比率、ＣはＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋を示している（注：ブランク対照群と比較して、^＃＃＃Ｐ＜０．００１、モデル対照群と比較して、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．０５であった）。以上の結果より、アネモシドＢ４は、血清中のＣＤ４^＋、ＣＤ３^＋及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋レベルを上昇させることで乾癬治療作用を発揮すると思われる。

【0037】

４ 結論
アネモシドＢ４群は、乾癬に対し一定の治療作用を有する。ブランク対照群と比較して、モデル対照群のマウスの皮膚病変には、多くの紅斑、小さな鱗屑、皮膚病変の浸潤・肥厚が認められた。一方、アネモシドＢ４の各投与量群及びアシトレチン群の皮膚病変症状はモデル群に比べ軽減した。また、モデル群のＰＡＳＩスコアは上昇したが、アネモシドＢ４投与群ではＰＡＳＩスコアを顕著に低下させることができた。また、モデル群のＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルは上昇したが、アネモシドＢ４の各投与量群では、投薬後にＭ－ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－６及びＩＬ－１７レベルが低下した。また、ブランク対照群と比較して、モデル対照群は、血清中のＣＤ３^＋（％）、ＣＤ４^＋（％）及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋比が顕著に低下した。一方、アネモシドＢ４群は、ＣＤ３^＋（％）、ＣＤ４^＋（％）及びＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋レベルを顕著に上昇させることができた。以上の結果より、アネモシドＢ４は、乾癬に対する治療作用を有し、その作用メカニズムは、炎症反応の抑制、免疫機能の調節、血管新生の抑制に関連すると思われる。

【0038】

ここで説明した機器の数及び処理規模は本発明の説明を簡略化するためのものである。本発明の応用、修正及び変形は、当業者にとって自明である。

【0039】

本発明の実施方案を上記のように開示したが、本発明は明細書及び実施形態で列挙した運用に限らず、本発明に適合する各種分野に完全に適用可能である。当業者であれば、別の修正を容易に実現可能であるため、請求項及び同等の範囲で規定される一般概念を逸脱しなければ、本発明は、特定の詳細及びここで提示及び記載した図示に限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】