特許 7403734 ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体及びその製造方法、並びにファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-15

(45)【発行日】2023-12-25

(54)【発明の名称】ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体及びその製造方法、並びにファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キット

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/071 20100101AFI20231218BHJP

   C12N 5/077 20100101ALI20231218BHJP

   C12N 11/084 20200101ALI20231218BHJP

【ＦＩ】

C12N5/071

C12N5/077

C12N11/084

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2019204500

(22)【出願日】2019-11-12

(65)【公開番号】P2021073932

(43)【公開日】2021-05-20

【審査請求日】2022-08-23

(73)【特許権者】

【識別番号】504182255

【氏名又は名称】国立大学法人横浜国立大学

(74)【代理人】

【識別番号】110000154

【氏名又は名称】弁理士法人はるか国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】福田 淳二

(72)【発明者】

【氏名】景山 達斗

(72)【発明者】

【氏名】南茂 彩華

【審査官】馬場 亮人

(56)【参考文献】

【文献】特表平１０－５０５２５０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ ５／０７１

Ｃ１２Ｎ ５／０７７

Ｃ１２Ｎ １１／０８４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）基材と前記基材の表面上に配置されたファイバー担体とを用意すること；、
（２）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、ハイドロゲル高分子と分散された細胞とを含む液滴を形成すること；、
（３）気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得ること；、
を含む、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項2】

前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体を前記基材の前記表面から脱離させることをさらに含む、
請求項１に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項3】

前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養することをさらに含む、
請求項１又は２に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項4】

前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養して、前記細胞の凝集塊を形成する、
請求項３に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項5】

前記（２）において、気相中、前記基材の前記表面上で、互いに離間して１つの前記ファイバー担体に付着し、各々が前記ハイドロゲル高分子と前記分散された細胞とを含む複数の前記液滴を形成し、
前記（３）において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記１つのファイバー担体と、互いに離間して前記１つのファイバー担体に付着した複数の前記細胞含有ゲル体とを含む前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得る、
請求項１乃至４のいずれかに記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項6】

前記ファイバー担体－細胞含有ハイドロゲル複合体の前記１つのファイバー担体を切断して、１つのファイバー担体片と前記１つのファイバー担体片に付着した１つの前記細胞含有ゲル体とを含む、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体片を得ることをさらに含む、
請求項５に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項7】

前記（１）において、前記基材の前記表面上に配置された複数の前記ファイバー担体を用意し、
前記複数のファイバー担体の各々について、前記（２）及び（３）を実施する、
請求項１乃至６のいずれかに記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項8】

前記（１）において、一部が支持部材に固定され、他の一部が前記基材の前記表面上に配置された前記ファイバー担体を用意し、
前記支持部材に固定された前記ファイバー担体について、前記（２）及び（３）を実施する、
請求項１乃至７のいずれかに記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項9】

前記（２）は、
（２－１）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第一のハイドロゲル高分子と分散された第一の細胞とを含む第一の液滴を形成すること、及び、
（２－２）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第二のハイドロゲル高分子と分散された第二の細胞とを含み、前記第一の液滴と連結した第二の液滴を形成して、前記ファイバー担体に付着した液滴連結体を得ることを含み、
前記（３）において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴連結体をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した前記細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得る、
請求項１乃至８のいずれかに記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項10】

前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項９に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法。

【請求項11】

１つのファイバー担体と、
各々がハイドロゲル高分子及び細胞を含む、互いに離間して前記１つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体と、
を含む、
ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体。

【請求項12】

前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、前記細胞の凝集塊を含む、
請求項１１に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体。

【請求項13】

前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、第一のハイドロゲル高分子及び第一の細胞を含む第一のゲル部と、第二のハイドロゲル高分子及び第二の細胞を含む第二のゲル部とを含む、
請求項１１又は１２に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体。

【請求項14】

前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項１１乃至１３のいずれかに記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体。

【請求項15】

請求項１乃至１０のいずれかに記載の方法に使用するためのキットであって、
ハイドロゲル高分子及び細胞を含む細胞含有ゲル体を付着させるファイバー担体と、
前記ファイバー担体が固定された支持部材と、
を含む、
ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キット。

【請求項16】

その表面上に、気相中、前記支持部材に固定された前記ファイバー担体が配置されるとともに、前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体が形成される基材をさらに含む、
請求項１５に記載のファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体及びその製造方法、並びにファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キットに関する。

【背景技術】

【0002】

特許文献１には、ガイドを有する移植用再生器官原基の製造方法であって、間葉系細胞から実質的に構成される第１の細胞集合体と、上皮系細胞から実質的に構成される第２の細胞集合体とを密着させて支持担体内部で培養することにより再生器官原基を調製する工程と、当該再生器官原基にガイドを挿入する工程とを含む製造方法が記載されている。

【0003】

特許文献２には、移植後に生じる発毛の毛色が制御された移植用再生毛包原基の製造方法であって、間葉系細胞を含む第１の細胞集合体を調製する工程、上皮系細胞を含む第２の細胞集合体を調製する工程、色素幹細胞を含む細胞集合体を調製する工程、前記第１の細胞集合体と前記第２の細胞集合体との少なくとも一方に、前記色素幹細胞を含む細胞集合体とを結合させる工程、及び、続いて、前記第１の細胞集合体と前記第２の細胞集合体であって、少なくとも一方が、前記色素幹細胞を含む細胞集合体と結合した前記第１の細胞集合体と前記第２の細胞集合体とを密着させて支持部材内部で培養する工程、を含み、前記再生毛包原基にガイドを挿入する工程をさらに含む移植用再生毛包原基の製造方法が記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】国際公開第２０１２／１０８０６９号

【文献】国際公開第２０１２／１１５０７９号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかしながら、特許文献１及び特許文献２に記載の方法においては、まず再生器官原基を調製し、その後、当該再生器官原基にガイドを挿入するため、操作には熟練を要していた。さらに、大量の再生器官原基を調製する場合、当該大量の再生器官原基の各々にガイドを挿入するため、大量のガイドの挿入、及び、ガイドが挿入された大量の再生器官原基の取扱いにおいては、操作が煩雑にならざるを得なかった。

【0006】

本発明は、上記課題に鑑みて為されたものであり、取り扱いが容易なファイバー担体－細胞含有ゲル複合体、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造する方法、並びに、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造するためのキットを提供することをその目的の一つとする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

上記課題を解決するための本発明の一実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法は、（１）基材と前記基材の表面上に配置されたファイバー担体とを用意すること；、（２）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、ハイドロゲル高分子と分散された細胞とを含む液滴を形成すること；、（３）気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得ること；、を含む。本発明によれば、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造する方法が提供される。

【0008】

前記方法は、前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体を前記基材の前記表面から脱離させることをさらに含むこととしてもよい。また、前記方法は、前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養することをさらに含むこととしてもよい。この場合、前記細胞含有ゲル体内で前記細胞を培養して、前記細胞の凝集塊を形成することとしてもよい。

【0009】

前記方法では、前記（２）において、気相中、前記基材の前記表面上で、互いに離間して１つの前記ファイバー担体に付着し、各々が前記ハイドロゲル高分子と前記分散された細胞とを含む複数の前記液滴を形成し、前記（３）において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴をゲル化させて、前記１つのファイバー担体と、互いに離間して前記１つのファイバー担体に付着した複数の前記細胞含有ゲル体とを含む前記ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得ることとしてもよい。この場合、前記方法は、前記ファイバー担体－細胞含有ハイドロゲル複合体の前記１つのファイバー担体を切断して、１つのファイバー担体片と前記１つのファイバー担体片に付着した１つの前記細胞含有ゲル体とを含む、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体片を得ることをさらに含むこととしてもよい。

【0010】

前記方法では、前記（１）において、前記基材の前記表面上に配置された複数の前記ファイバー担体を用意し、前記複数のファイバー担体の各々について、前記（２）及び（３）を実施することとしてもよい。また、前記方法では、前記（１）において、一部が支持部材に固定され、他の一部が前記基材の前記表面上に配置された前記ファイバー担体を用意し、前記支持部材に固定された前記ファイバー担体について、前記（２）及び（３）を実施することとしてもよい。

【0011】

前記方法において、前記（２）は、（２－１）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第一のハイドロゲル高分子と分散された第一の細胞とを含む第一の液滴を形成すること、及び、（２－２）気相中、前記基材の前記表面上で、前記ファイバー担体に付着し、第二のハイドロゲル高分子と分散された第二の細胞とを含み、前記第一の液滴と連結した第二の液滴を形成して、前記ファイバー担体に付着した液滴連結体を得ることを含み、前記（３）において、気相中、前記基材の前記表面上で、前記液滴連結体をゲル化させて、前記ファイバー担体と前記ファイバー担体に付着した前記細胞含有ゲル体とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を得ることとしてもよい。この場合、前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせであることとしてもよい。

【0012】

上記課題を解決するための本発明の一実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体は、１つのファイバー担体と、各々がハイドロゲル高分子及び細胞を含む、互いに離間して前記１つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体と、を含む。本発明によれば、取り扱いが容易なファイバー担体－細胞含有ゲル複合体が提供される。

【0013】

前記複合体において、前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、前記細胞の凝集塊を含むこととしてもよい。また、前記複合体において、前記複数の細胞含有ゲル体の各々は、第一のハイドロゲル高分子及び第一の細胞を含む第一のゲル部と、第二のハイドロゲル高分子及び第二の細胞を含む第二のゲル部とを含むこととしてもよい。また、前記複合体において、前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせであることとしてもよい。

【0014】

上記課題を解決するための本発明の一実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キットは、ハイドロゲル高分子及び細胞を含む細胞含有ゲル体を付着させるファイバー担体と、前記ファイバー担体が固定された支持部材と、を含む。本発明によれば、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造するためのキットが提供される。

【0015】

前記キットは、その表面上に、気相中、前記支持部材に固定された前記ファイバー担体が配置されるとともに、前記ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体が形成される基材をさらに含むこととしてもよい。

【発明の効果】

【0016】

本発明によれば、取り扱いが容易なファイバー担体－細胞含有ゲル複合体、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造する方法、並びに、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を簡便に製造するためのキットが提供される。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程の一部を模式的に示す説明図である。

【図1B】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程の他の部を模式的に示す説明図である。

【図1C】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図1D】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図1E】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図1F】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図1G】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図1H】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の一例に含まれる主な工程のさらに他の部を模式的に示す説明図である。

【図2A】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程の一部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2B】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程の他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2C】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2D】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2E】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2F】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2G】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図2H】本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法の他の例に含まれる主な工程のさらに他の部を平面視で模式的に示す説明図である。

【図3A】図２Ａに示すＩＩＩ－Ａ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3B】図２Ｂに示すＩＩＩ－Ｂ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3C】図２Ｃに示すＩＩＩ－Ｃ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3D】図２Ｄに示すＩＩＩ－Ｄ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3E】図２Ｅに示すＩＩＩ－Ｅ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3F】図２Ｆに示すＩＩＩ－Ｆ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3G】図２Ｇに示すＩＩＩ－Ｇ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図3H】図２Ｈに示すＩＩＩ－Ｈ線で切断した断面を模式的に示す説明図である。

【図4A】本実施形態に係る実施例１における培養１日目の複合体の位相差顕微鏡写真を示す説明図である。

【図4B】本実施形態に係る実施例１における培養３日目の複合体の位相差顕微鏡写真を示す説明図である。

【図5A】本実施形態に係る実施例１における培養１日目の複合体の蛍光顕微鏡写真を示す説明図である。

【図5B】本実施形態に係る実施例１における培養３日目の複合体の蛍光顕微鏡写真を示す説明図である。

【図6A】本実施形態に係る実施例２においてファイバー担体－細胞含有ゲル複合体を移植後３週間が経過した時点における発毛を観察した結果の一例を示す説明図である。

【図6B】本実施形態に係る実施例２においてファイバー担体を含まない細胞含有ゲル体のみを移植後３週間が経過した時点における発毛を観察した結果の一例を示す説明図である。

【図7】本実施形態に係る実施例３において、支持部材に固定されたファイバー担体と、当該ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体とを含む複合体を製造した結果の一例を示す説明図である。

【図8A】本実施形態に係る実施例３における培養１日目の複合体の光学顕微鏡写真を示す説明図である。

【図8B】本実施形態に係る実施例３における培養３日目の複合体の光学顕微鏡写真を示す説明図である。

【図9A】本実施形態に係る実施例３における培養開始直後の複合体の位相差顕微鏡写真を示す説明図である。

【図9B】本実施形態に係る実施例３における培養３日目の複合体の位相差顕微鏡写真を示す説明図である。

【図10A】本実施形態に係る実施例３における培養開始直後の複合体の蛍光顕微鏡写真を示す説明図である。

【図10B】本実施形態に係る実施例３における培養３日目の複合体の蛍光顕微鏡写真を示す説明図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

以下に、本発明の一実施形態について説明する。なお、本発明は本実施形態に限られるものではない。

【0019】

図１Ａ～図１Ｈには、本実施形態に係るファイバー担体－細胞含有ゲル複合体の製造方法（以下、「本方法」という。）の一例に含まれる主な工程を模式的に示す。本方法は、（１）基材１００と当該基材１００の表面１１０上に配置されたファイバー担体１０とを用意すること（図１Ａ）；、（２）気相２００中、当該基材表面１１０上で、当該ファイバー担体１０に付着し、ハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む液滴３０を形成すること（図１Ｂ～図１Ｄ）；、（３）気相２００中、当該基材表面１１０上で、当該液滴３０をゲル化させて、当該ファイバー担体１０と当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体５０を得ること（図１Ｅ）；、を含む。

【0020】

ここで、本明細書においては、上記（２）が、（２－１）気相２００中、基材表面１１０上で、ファイバー担体１０に付着し、第一のハイドロゲル高分子と分散された第一の細胞２１とを含む第一の液滴３１を形成すること（図１Ｂ）、及び、（２－２）気相２００中、当該基材表面１１０上で、当該ファイバー担体１０に付着し、第二のハイドロゲル高分子と分散された第二の細胞２２とを含み、当該第一の液滴３１と連結した第二の液滴３２を形成して（図１Ｃ）、当該ファイバー担体１０に付着した液滴連結体３３を得ること（図１Ｄ）を含み、上記（３）において、気相２００中、基材表面１１０上で、当該液滴連結体３３をゲル化させて、当該ファイバー担体１０と当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０とを含む複合体５０を得る（図１Ｅ）場合について主に説明する。

【0021】

本方法においては、まず、上記（１）において、ファイバー担体１０が配置された基材表面１１０を用意する。ファイバー担体１０は、ファイバー状の形状を有し、液滴３０及び細胞含有ゲル体４０が付着可能な担体であれば特に限られない。ファイバー担体１０を構成する材料は、本発明の効果が得られる範囲であれば特に限られず、例えば、有機材料、無機材料、金属、セラミック等、任意の材料が用いられる。ファイバー担体１０としては、例えば、人工繊維、又は天然繊維が好ましく用いられる。

【0022】

人工繊維としては、例えば、合成樹脂繊維等の人工有機繊維、半合成繊維、再生繊維、ガラス繊維等の人工無機繊維、ステンレス繊維等の金属繊維、及びセラミック繊維からなる群より選択される１以上が用いられる。

【0023】

天然繊維としては、例えば、動物由来繊維、植物由来繊維、及び、鉱物由来繊維からなる群より選択される１以上が用いられる。動物由来繊維としては、例えば、ヒトの毛髪、又は非ヒト動物の毛（非ヒト哺乳類の毛、鳥類の毛、絹繊維等の昆虫由来繊維を含む。）が用いられる。植物由来繊維としては、例えば、綿繊維、又は麻繊維が用いられる。ファイバー担体１０としては、生分解性繊維を用いることとしてもよい。

【0024】

ファイバー担体１０は、可撓性を有することが好ましく、動物の毛（特に、ヒトの毛髪）に類似した可撓性を有することが特に好ましい。ファイバー担体１０の形状は、本発明による効果が得られる範囲であれば特に限られないが、例えば、動物の毛（特に、ヒトの毛髪）に類似した形状を有することが好ましい。ファイバー担体１０の断面形状は、本発明による効果が得られる範囲であれば特に限られず、円形、楕円形、矩形、その他の任意の形状であってよいが、円形又は楕円形であることが好ましい。ファイバー担体１０は、中空体（例えば、中空糸）であってもよいし、中実体であってもよいが、中実体であることが好ましい。

【0025】

各ファイバー担体１０は、単独で存在する１本のファイバー状の担体である。すなわち、ファイバー担体１０は、例えば、他のファイバーと編まれていない。また、ファイバー担体１０は、例えば、シート状の布（例えば、織布及び不織布）を構成するものではない。

【0026】

ファイバー担体１０の断面積（ファイバー担体１０の長手方向に直交する断面の面積）は、本発明による効果が得られる範囲であれば特に限られないが、例えば、１００μｍ^２以上であることとしてもよく、３００μｍ^２以上であることが好ましく、５００μｍ^２以上であることがより好ましく、１０００μｍ^２以上であることが特に好ましい。また、ファイバー担体１０の断面積は、例えば、１ｍｍ^２以下であることとしてもよく、１０００００μｍ^２以下であることが好ましく、５００００μｍ^２以下であることがより好ましく、１００００μｍ^２以下であることが特に好ましい。ファイバー担体１０の断面積は、上述した下限値の一つと、上述した上限値の一つとを任意に組み合わせて特定されてもよい。

【0027】

ファイバー担体１０の長さは、本発明による効果が得られる範囲であれば特に限られないが、例えば、５ｍｍ以上であることとしてもよく、１０ｍｍ以上であることとしてもよく、１５ｍｍ以上であることとしてもよく、２０ｍｍ以上であることとしてもよく、２５ｍｍ以上であることとしてもよく、３０ｍｍ以上であることとしてもよい。また、ファイバー担体３０の長さは、例えば、５００ｍｍ以下であることとしてもよく、３００ｍｍ以下であることとしてもよい。ファイバー担体１０の長さは、上述した下限値の一つと、上述した上限値の一つとを任意に組み合わせて特定されてもよい。

【0028】

ファイバー担体１０は、その一部に液滴３０が付着できるように基材表面１１０上に配置されていればよく、当該ファイバー担体１０は当該基材表面１１０と接していなくてもよいが、当該ファイバー担体１０の少なくとも一部が当該基材表面１１０と接していることが好ましい。

【0029】

ファイバー担体１０の少なくとも一部が基材表面１１０上に接して配置されている場合、当該ファイバー担体１０の少なくとも一部は、当該基材表面１１０に脱離可能に接して配置されていることが好ましい。

【0030】

基材１００は、その表面１１０上に、ファイバー担体１０を配置でき、且つ、液滴３０及び細胞含有ゲル体４０を形成できるものであれば特に限られず、例えば、樹脂、ガラス、セラミック又は金属の基材であることとしてもよい。

【0031】

基材表面１１０は、少なくとも液滴３０及び細胞含有ゲル４０が形成される部分が、撥水性表面であることが好ましい。この場合、撥水性の基材表面１１０の水接触角は、例えば、９０°以上であることとしてもよく、１００°以上であることが好ましく、１０５°以上であることがより好ましく、１１０℃以上であることが特に好ましい。

【0032】

撥水性の基材表面１１０は、例えば、撥水性の材料（例えば、フッ素含有ポリマー等の疎水性樹脂）の基材１００の使用、及び／又は、撥水性処理（例えば、フッ素含有官能基等の疎水性官能基による修飾）により形成される。また、基材表面１１０は、平坦であることが好ましい。

【0033】

気相２００は、気体の相であれば特に限られないが、当該気体は、酸素を含むことが好ましく、空気が好ましく使用される。液滴３０を形成する気相２００と、細胞含有ゲル体４０を形成する気相２００とは、気体組成が同一であってもよいし、異なっていてもよい。

【0034】

本方法においては、次に、上記（２）において、気相２００中、基材表面１１０上で、ファイバー担体１０に付着した液滴３０を形成する。具体的に、液滴３０は、ハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む、当該細胞２０の懸濁液（細胞２０が懸濁されたハイドロゲル水溶液）を、ファイバー担体１０の一部を覆うように基材表面１１０上に滴下して形成する。

【0035】

より具体的に、図１Ｂ～図１Ｄに示す例では、気相２００中、基材表面１１０上で、ファイバー担体１０に付着した液滴３０として、第一の液滴３１、第二の液滴３２、及び液滴連結体３３を形成する。第一の液滴３１は、細胞２０として第一の細胞２１を含み、第二の液滴３２は、細胞２０として第二の細胞２２を含み、液滴連結体３３は、細胞２０として当該第一の細胞２１及び第二の細胞２２を含む。

【0036】

すなわち、まず、第一のハイドロゲル高分子を含む第一の細胞２１の懸濁液を、ファイバー担体１０の一部を覆うように滴下して、当該ファイバー担体１０に付着した第一の液滴３１を形成し、次いで、第二のハイドロゲル高分子を含む第二の細胞２２の懸濁液を、当該第一の液滴３２に隣接した当該ファイバー担体１０の他の一部を覆うように滴下して、当該ファイバー担体１０に付着し当該第一の液滴３１と連結した第二の液滴３２を形成する。こうして、第一の液滴３１と第二の液滴３２とが融合して形成された、ファイバー担体１０に付着した液滴連結体３３を得る。液滴３０の滴下は、図１Ｂ及び図１Ｃに示すように、ピペット等の分注器具３００を用いて好ましく行われる。

【0037】

ファイバー担体１０に付着した液滴３０の表面の一部は、基材表面１１０に接する。すなわち、図１Ｂ～図１Ｄに示す例では、第一の液滴３１の表面の一部は、基材表面１１０の一部に接し、第二の液滴３２の表面の一部は、当該基材表面１１０の他の一部に接する。

【0038】

ファイバー担体１０に付着した液滴３０は、気相２００中で流動性を有するが、ハイドロゲル高分子を含み、水よりも粘性及び比重が大きいため、当該液滴３０中において細胞２０は、分散された状態で維持される。

【0039】

すなわち、図１Ｂ～図１Ｄに示す例では、液滴連結体３３の第一の液滴３１に由来する部分では、第一の細胞２１が分散された状態で維持され、当該液滴連結体３３の第二の液滴３２に由来する部分では、第二の細胞２２が分散された状態で維持される。

【0040】

液滴３０において、分散された個々の細胞は、他の細胞と結合しておらず、又は数個の細胞と結合しているのみであり、当該液滴３０中に分散されて浮遊している細胞である。例えば、細胞懸濁液に含まれる細胞と溶媒とを分離するために、分散された細胞を含む当該細胞懸濁液を遠心する場合、遠心後に形成される当該細胞の沈殿物は、当該細胞の凝集塊であり、当該沈殿物を構成する細胞は、分散された細胞ではない。

【0041】

細胞２０は、動物に由来する生きた細胞であれば特に限られない。動物は、ヒトであってもよいし、非ヒト動物（ヒト以外の動物）であってもよいが、ヒト細胞を用いることが好ましい。非ヒト動物は、特に限られないが、非ヒト脊椎動物（ヒト以外の脊椎動物）であることが好ましい。非ヒト脊椎動物は、特に限られないが、非ヒト哺乳類であることが好ましい。非ヒト哺乳類は、特に限られないが、例えば、霊長類（例えば、サル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ）、食肉類（例えば、イヌ、ネコ）、又は有蹄類（例えば、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ）であってもよい。

【0042】

細胞２０は、分化細胞であってもよいし、未分化細胞（幹細胞）であってもよい。幹細胞は、全能性幹細胞であってもよいし、多能性幹細胞であってもよいし、組織幹細胞であってもよい。具体的に、幹細胞は、例えば、人工多能性（ｉＰＳ）幹細胞であってもよいし、胚性幹（ＥＳ）細胞であってもよいし、胚性生殖（ＥＧ）細胞であってもよい。分化細胞は、分化した機能を有する細胞であれば特に限られないが、例えば、生体から採取された細胞（生体から採取された後に培養された細胞であってもよい。）であってもよいし、生体外において幹細胞から誘導された細胞であってもよい。

【0043】

細胞２０は、生体内の組織に由来する細胞であることとしてもよい。生体内の組織は、特に限られないが、例えば、毛包組織、皮膚組織、肝臓組織、心臓組織、腎臓組織、神経組織、骨組織、軟骨組織、骨髄組織、肺組織、腺組織、歯周組織又は血液であることとしてもよい。

【0044】

細胞２０は、接着性細胞であってもよいし、非接着性細胞であってもよいが、接着性細胞であることが好ましい。接着性細胞は、生体内において、他の細胞及び／又は細胞外マトリクスに接着した状態で存在する細胞である。

【0045】

細胞２０としては、１種の細胞のみを用いてもよいし、２種以上の細胞を組み合わせて用いてもよい。すなわち、１つの液滴３０は、１種の細胞のみを含むこととしてもよいし、２種以上の細胞を含むこととしてもよい。また、１つの細胞含有ゲル体４０は、１種の細胞のみを含むこととしてもよいし、２種以上の細胞を含むこととしてもよい。

【0046】

図１Ａ～図１Ｈに示すように、第一の細胞２１と第二の細胞２２とを少なくとも用いる場合、当該第一の細胞２１と当該第二の細胞２２との組み合わせは、本発明による効果が得られる範囲であれば特に限られないが、相互作用する異なる細胞の組み合わせであることが好ましい。異なる細胞の組み合わせは、例えば、分化機能、増殖性、及び細胞表面マーカーからなる群より選択される１以上が異なる細胞の組み合わせである。

【0047】

第一の細胞２１と第二の細胞２２との相互作用は、特に限られないが、例えば、一方の細胞が分泌する物質が他方の細胞に作用する組み合わせ、及び／又は、細胞間結合を形成する組み合わせであることが好ましい。なお、一方の細胞が分泌する物質が他方の細胞に作用する場合、さらに、当該他方の細胞が分泌する物質が当該一方の細胞に作用してもよい。また、一方の細胞が分泌する物質が他方の細胞に作用する場合、当該物質が細胞含有ゲル体４０の内部を拡散して当該他方の細胞に作用することとしてもよいし、当該物質が細胞含有ゲル体４０を含む溶液（例えば、培養液）中に拡散し、その後、当該溶液中から当該細胞含有ゲル体４０の当該他方の細胞に作用することとしてもよい。

【0048】

第一の細胞２１と第二の細胞２２との組み合わせは、生体内において相互作用する異なる細胞の組み合わせであることが好ましい。この場合、第一の細胞２１と第二の細胞２２との組み合わせは、生体内の同一の組織において相互作用する異なる細胞の組み合わせであってもよい。生体内の組織は、特に限られないが、例えば、毛包組織、皮膚組織、肝臓組織、心臓組織、腎臓組織、神経組織、骨組織、軟骨組織、骨髄組織、肺組織、腺組織、歯周組織又は血液であることとしてもよい。

【0049】

第一の細胞２１と第二の細胞２２との組み合わせは、同一の動物に由来する細胞の組み合わせであってもよいし、異なる動物に由来する細胞の組み合わせであってもよい。すなわち、第一の細胞２１及び第二の細胞２２は、いずれもヒト細胞（ヒトに由来する細胞）であってもよいし、いずれも非ヒト動物細胞（ヒト以外の動物に由来する細胞）であってもよいし、一方がヒト細胞であり、他方が非ヒト動物細胞であってもよい。

【0050】

第一の細胞２１と第二の細胞２２との組み合わせは、例えば、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせであることとしてもよい。上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせは、特に限られないが、例えば、毛包組織又は腺組織（例えば、汗腺、皮脂腺、涙腺、及び唾液腺からなる群より選択される１以上）において相互作用する上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせであることが好ましい。

【0051】

上皮系細胞及び／又は間葉系細胞は、生体の毛包組織又は腺組織（例えば、汗腺、皮脂腺、涙腺、及び唾液腺からなる群より選択される１以上）から採取された細胞（例えば、当該毛包組織から採取された後に培養された細胞）であってもよいし、生体外において幹細胞から誘導された細胞であってもよい。

【0052】

具体的に、上皮系細胞は、毛包組織のバルジ領域の外毛根鞘最外層細胞、毛母基部に由来する上皮系細胞、又は幹細胞（例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、又はＥＧ細胞）から誘導された毛包上皮系細胞であることとしてもよい。また、上皮系細胞は、上皮幹細胞であってもよい。

【0053】

上皮系細胞は、発毛関連特性（例えば、発毛関連遺伝子の発現、及び／又は、間葉系細胞との共培養による毛包原基の形成）を有するものであってもよい。上皮系細胞は、毛包組織（例えば、毛包組織のバルジ領域の外毛根鞘最外層、及び又は、毛母基部）に由来する細胞であってもよく、皮膚組織に由来する細胞であってもよく、生体外で幹細胞（例えば、ｉＰＳ幹細胞、ＥＳ細胞、又はＥＧ細胞）から誘導された細胞であってもよい。

【0054】

上皮系細胞は、生体から採取された初代細胞であってもよく、予め培養された細胞（例えば、継代培養された細胞、及び／又は、株化された細胞）であってもよい。上皮系細胞は、例えば、サイトケラチンを発現する細胞として特定される。上皮系細胞は、上皮幹細胞であることが好ましい。上皮幹細胞は、例えば、サイトケラチン１５、及び／又は、ＣＤ３４を発現する細胞として特定される。

【0055】

間葉系細胞は、毛乳頭細胞、真皮毛根鞘細胞、発生期の皮膚間葉系細胞、又は幹細胞（例えば、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、又はＥＧ細胞）から誘導された毛包間葉系細胞であることとしてもよい。

【0056】

間葉系細胞は、発毛関連特性（例えば、発毛関連遺伝子の発現、及び／又は、上皮系細胞との共培養による毛包原基の形成）を有するものであってもよい。間葉系細胞は、成体毛包組織（例えば、毛乳頭及び／又は毛球部毛根鞘）に由来する細胞であってもよく、皮膚組織（胎児、幼体、成体のいずれの皮膚組織であってもよい。）に由来する細胞であってもよく、生体外で幹細胞（例えば、人工多能性（ｉＰＳ）幹細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、又は胚性生殖（ＥＧ）細胞）から誘導された細胞であってもよい。

【0057】

間葉系細胞は、生体から採取された初代細胞であってもよく、予め培養された細胞（例えば、継代培養された細胞、及び／又は、株化された細胞）であってもよい。間葉系細胞は、例えば、Ｖｅｒｓｉｃａｎ及びＡＬＰ（アルカリフォスファターゼ）を発現する細胞として特定される。具体的に、間葉系細胞としては、毛乳頭細胞及び／又は毛球部毛根鞘細胞が好ましく用いられる。毛乳頭細胞及び毛球部毛根鞘細胞は、Ｖｅｒｓｉｃａｎ及びＡＬＰを発現する。

【0058】

図１Ｂ～図１Ｄに示す例において、第一の液滴３１は、細胞２０として主に第一の細胞２１を含み、第二の液滴３２は、細胞２０として主に第二の細胞２２を含む。すなわち、第一の液滴３１に含まれる細胞の総数に対する第一の細胞２１の数の割合、及び／又は、第二の液滴３２に含まれる細胞の総数に対する第二の細胞２２の数の割合は、それぞれ互いに独立に、例えば、５０％以上であることとしてもよく、６０％以上であることが好ましく、７０％以上であることがより好ましく、８０％以上であることがより一層好ましく、９０％以上であることが特に好ましい。

【0059】

ハイドロゲル高分子は、ゲル化能を有する親水性高分子であれば特に限られない。ハイドロゲル高分子は、天然由来の高分子であってもよいし、人工的に合成された高分子であってもよいが、天然由来の高分子であることが好ましい。また、ハイドロゲル高分子は、生体適合性の高分子であることが好ましい。

【0060】

ハイドロゲル高分子は、細胞外マトリクスであることが好ましい。細胞外マトリクスは、生体内に存在するものであれば特に限られない。ハイドロゲル高分子は、細胞２０に対して細胞接着性を有することとしてもよい。

【0061】

すなわち、図１Ｂ及び図１Ｃに示す例において、第一の液滴３１に含まれる第一のハイドロゲル高分子は、第一の細胞２１に対して細胞接着性を有し、及び／又は、第二の液滴３２に含まれる第二のハイドロゲル高分子は、第二の細胞２２に対して細胞接着性を有することとしてもよい。

【0062】

細胞接着性を有するハイドロゲル高分子は、細胞表面の分子と結合する高分子であり、例えば、当該細胞表面の分子と特異的に、又は非特異的に結合する特定のアミノ酸配列、及び／又は糖鎖を有する。

【0063】

具体的に、細胞接着性を有するハイドロゲル高分子は、例えば、コラーゲン（例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型、及びＸＩ型からなる群より選択される１以上のコラーゲン）、フィブロネクチン、ラミニン、エラスチン、グリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸）、プロテオグリカン、フィブリン、及びゼラチンからなる群より選択される１以上であることとしてもよい。

【0064】

また、ハイドロゲル高分子は、ゼラチン、アガロース、アルギン酸ナトリウム、及び合成高分子（例えば、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリエチレンオキシド等）からなる群より選択される１以上であることとしてもよい。

【0065】

図１Ｂ及び図１Ｃに示す例において、第一の液滴３１に含まれる第一のハイドロゲル高分子と、第二の液滴に含まれる第二のハイドロゲル高分子とは、同一種類の高分子であってもよいし、異なる種類の高分子であってもよい。すなわち、例えば、第一のハイドロゲル高分子及び第二のハイドロゲル高分子は、いずれもＩ型コラーゲンであることとしてもよいし、第一のハイドロゲル高分子がＩ型コラーゲンであり、第二のハイドロゲル高分子がグリコサミノグリカンであることとしてもよい。

【0066】

液滴３０に含まれる細胞２０の密度（複数の液滴３１，３２を滴下する場合には、当該複数の液滴３１，３２の各々に含まれる細胞２０の密度）は、本発明の効果が得られる範囲内であれば特に限られないが、例えば、１×１０^２ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよい。

【0067】

液滴３０の体積（複数の液滴３１，３２を滴下する場合には、当該複数の液滴３１，３２の各々の体積（１つの液滴の体積））は、本発明の効果が得られる範囲内であれば特に限られないが、例えば、０．０１μＬ以上、１ｍＬ以下であることとしてもよく、０．１μＬ以上、１００μＬ以下であることとしてもよく、１μＬ以上、１０μＬ以下であることとしてもよい。

【0068】

なお、本方法においてゲル化の対象となる液滴３０は、図１Ｄ及び図１Ｅに示すように、２つの液滴３１，３２が融合して形成された液滴連結体３３であってもよいが、これに限られず、１つの液滴から構成されてもよいし、３つ以上の液滴が融合して形成された液滴連結体であってもよい。

【0069】

本方法においては、さらに、上記（３）において、気相２００中、基材表面１１０上で、ファイバー担体１０に付着した液滴３０をゲル化させる。すなわち、図１Ｄ及び図１Ｅに示す例では、気相２００中、基材表面１１０上で、ファイバー担体１０に付着した液滴連結体３３をゲル化させる。

【0070】

この結果、ファイバー担体１０と、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０と、を含む複合体５０が得られる。すなわち、図１Ｄ及び図１Ｅに示す例では、液滴連結体３３をゲル化することにより、第一の液滴３１に由来する第一のゲル部４１と、第二の液滴３２に由来する第二のゲル部４２と、を含む細胞含有ゲル体４０が得られる。複合体５０において、流動性を有しない細胞含有ゲル体４０は、ファイバー担体１０に固定される。

【0071】

液滴３０のゲル化によって形成された細胞含有ゲル体４０は、当該液滴３０と同様、ファイバー担体１０の一部を覆い、且つ、当該細胞含有ゲル体４０の表面の一部は、基材表面１１０に接する。

【0072】

ゲル化により、液滴３０に含まれていたハイドロゲル高分子が分子間ネットワークを形成し、当該液滴３０は流動性を失い、細胞含有ゲル体４０が得られる。ゲル化の方法は、特に限られず、例えば、液滴３０に含まれているハイドロゲル高分子の種類及び／又は濃度に応じて、適切な条件でゲル化を行う。具体的に、例えば、液滴３０が、ハイドロゲル高分子としてＩ型コラーゲンを含む場合、当該液滴３０を２５℃～３７℃で、１５分～６０分維持することにより、ゲル化を行うことができる。

【0073】

未だ培養されていない細胞含有ゲル体４０の体積は、本発明の効果が得られる範囲内であれば特に限られないが、例えば、０．０１μＬ以上、１００ｍＬ以下であることとしてもよく、０．１μＬ以上、１０ｍＬ以下であることとしてもよく、１μＬ以上、１ｍＬ以下であることとしてもよく、１μＬ以上、５００μＬ以下であることとしてもよい。

【0074】

未だ培養されていない細胞含有ゲル体４０に含まれる細胞２０の密度は、特に限られないが、例えば、１×１０^２ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよい。

【0075】

本方法によれば、気相２００中、基材表面１１０上で、まず、ファイバー担体１０に付着した、ハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む液滴３０を形成し、次いで、当該液滴３０をゲル化させるという簡便な操作により、当該ファイバー担体１０に固定された細胞含有ゲル体４０を含む複合体５０を容易に製造することができる。

【0076】

また、図１Ａ～図１Ｅに示すように、気相２００中、基材表面１１０上で、複数の液滴３１，３２を連結する場合には、例えば、各液滴３１，３２のサイズ、及び／又は、配置を調節することにより、最終的に形成される細胞含有ゲル体４０における複数の細胞２１，２２間の相互作用のための境界面の大きさを簡便且つ効果的に調節することができる。

【0077】

本方法は、複合体５０の細胞含有ゲル体４０を基材表面１１０から脱離させることをさらに含むこととしてもよい。すなわち、この場合、図１Ｅ及び図１Ｆに示すように、ファイバー担体１０に付着し、基材表面１１０に接していた細胞含有ゲル体を、当該基材表面１１０から脱離させて、当該基材表面１１０に接していない、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０を得る。

【0078】

細胞含有ゲル体４０を基材表面１１０から脱離させる方法は、当該細胞含有ゲル体４０に含まれる細胞２０の生存を維持しつつ当該細胞含有ゲル体４０を基材表面１１０から脱離させる方法であれば特に限られないが、例えば、当該細胞含有ゲル体４０が接している当該基材表面１１０を培養液等の水溶液中に浸漬する方法、当該細胞含有ゲル体４０及び／又は当該基材表面１１０に培養液等の水溶液の流れを与える方法、又は、培養液等の水溶液中、ピペットチップ等の器具で細胞含有ゲル体４０に軽く触れる方法が好ましく使用される。

【0079】

また、基材表面１１０から脱離させて回収した細胞含有ゲル体４０を、そのまま使用して、当該細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養する場合には、当該細胞含有ゲル体４０に含まれるハイドロゲル高分子を分解する酵素処理を行うことなく、当該細胞含有ゲル体４０を当該基材表面１１０から脱離させることが好ましい。

【0080】

なお、複合体５０の細胞含有ゲル体４０はファイバー担体１０の一部に付着していることから、当該細胞含有ゲル体４０を基材表面１１０から脱離させる際には、当該ファイバー担体１０の少なくとも当該一部も脱離させることになる。

【0081】

細胞含有ゲル体４０の脱離により、基材表面１１０に付着していない細胞含有ゲル体４０を含む複合体５０が得られる。ファイバー担体１０以外に付着していない細胞含有ゲル４０を含む複合体５０は、様々な用途に供することができる。

【0082】

基材表面１１０から脱離した複合体５０は、図１Ｆ～図１Ｈに示すように、細胞含有ゲル体４０から延び出した、ファイバー担体１０の端部１０ａ，１０ｂを有する。複合体５０において細胞含有ゲル体４０から延び出すファイバー担体１０の端部１０ａ，１０ｂは、当該ファイバー担体１０の２つの端部１０ａ，１０ｂの両方であってもよいし、当該２つの端部１０ａ，１０ｂの一方のみであってもよい。また、複合体５０の細胞含有ゲル体４０から延び出すファイバー担体１０の端部１０ａ，１０ｂは、図１Ｆ～図１Ｈに示すように、自由端である。

【0083】

本方法は、複合体５０の細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することをさらに含むこととしてもよい。この場合、複合体５０の細胞含有ゲル体４０を培養液４１０に浸漬して、当該培養液４１０中の細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養する。

【0084】

また、基材表面１１０から脱離した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することが好ましい。すなわち、図１Ｆ～図１Ｈに示す例では、基材表面１１０から細胞含有ゲル体４０を脱離させた後、当該細胞含有ゲル体４０を培養容器４００内の培養液４１０に浸漬し、当該培養液４１０中の当該細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養する。より具体的に、細胞含有ゲル体４０において、第一のゲル部４１内で第一の細胞２１を培養するとともに、第二のゲル部４２内で第二の細胞２２を培養する。

【0085】

また、図１Ｆ～図１Ｈに示すように、自由端（端部１０ａ，１０ｂ）を有するファイバー担体１０の全体を培養液４１０に浸漬し、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することとしてもよい。

【0086】

培養液４１０は、細胞２０の生存を維持するために必要な組成、ｐＨ及び浸透圧等の特性を有する水溶液であれば特に限られない。培養液４１０に含まれる成分としては、例えば、糖類、アミノ酸、ビタミン、無機塩、抗生物質、増殖因子が挙げられる。

【0087】

培養時間は、特に限られず、例えば、１２時間以上、１０日以下であることとしてもよく、１日以上、７日以下であることとしてもよい。培養温度は、細胞２０の生存を維持できる範囲であれば特に限られず、例えば、２５℃以上、４０℃以下であることとしてもよく、３０℃以上、３９℃以下であることが好ましい。

【0088】

本方法においては、細胞含有ゲル体４０を培養液４１０中で浮いた状態に維持し、当該浮いた状態の細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することが好ましい。すなわち、図１Ｇ及び図１Ｈに示す例では、培養液４１０中で浮いた状態の細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養している。

【0089】

なお、培養液４１０中で細胞含有ゲル体４０が浮いている状態とは、当該細胞含有ゲル体４０が培養容器４００の壁面に実質的に付着していない状態である。すなわち、例えば、培養容器４００の壁面に接することなく培養液４１０中で浮いている細胞含有ゲル体４０のみならず、培養液４１０に流れを発生させれば、培養容器４００の壁面から容易に脱離する程度に当該壁面に弱く付着した状態の細胞含有ゲル体４０も、実質的に浮いた状態である。

【0090】

本方法においては、細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養して、当該細胞２０の凝集塊６０を形成することとしてもよい。すなわち、この場合、ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することにより、当該細胞含有ゲル体４０内において、当該ファイバー担体１０に付着した細胞凝集塊６０を形成する。

【0091】

すなわち、細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養する場合には、当該細胞含有ゲル体４０内で、細胞凝集塊６０として、当該第一の細胞２１の凝集塊６１、及び／又は、当該第二の細胞２２の凝集塊６２を形成する。

【0092】

具体的に、図１Ｇ及び図１Ｈに示す例では、ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養することにより、第一のゲル部４１において当該ファイバー担体１０に付着した当該第一の細胞２１の凝集塊６１を形成するとともに、第二のゲル部４２において当該ファイバー担体１０に付着した当該第二の細胞２２の凝集塊６２を形成している。

【0093】

細胞凝集塊６０は、細胞含有ゲル体４０内において、培養時間の経過に伴い、細胞２０が互いに結合し、自発的に凝集することにより形成される。すなわち、図１Ｇ及び図１Ｈに示す例では、細胞含有ゲル体４０内において、第一の細胞２１が凝集して第一の細胞凝集塊６１を形成するとともに、第二の細胞２２が凝集して第二の細胞凝集塊６２を形成している。

【0094】

また、図１Ｇ及び図１Ｈに示すように、互いに結合した第一の細胞凝集塊６１及び第二の細胞凝集塊６２を形成することとしてもよい。この場合、第一の細胞凝集塊６１を構成する第一の細胞２１のうち一部の第一の細胞２１と、第二の細胞凝集塊６２を構成する第二の細胞２２のうち一部の第二の細胞２２とが結合を形成する。その結果、細胞含有ゲル体４０内において、第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とを含む、ファイバー担体１０に付着した細胞凝集塊連結体６３が形成される。この細胞凝集塊連結体６３において、第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とは、図１Ｈに示すように、ファイバー担体１０が延びる方向（当該ファイバー担体１０の長手方向）に連結されている。

【0095】

具体的に、例えば、第一の細胞２１が上皮系細胞（例えば、毛包組織に由来する上皮幹細胞等の毛包上皮系細胞）であり、第二の細胞２２が間葉系細胞（例えば、毛乳頭細胞等の毛包間葉系細胞）である場合、ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で、当該第一の細胞２１が第一の細胞凝集塊６１を形成するとともに、当該第二の細胞２２が第二の細胞凝集塊６２を形成し、さらに、当該第一の細胞凝集塊６１と当該第二の細胞凝集塊６２とが連結することにより、毛包原基である細胞凝集塊連結体６３が形成される。この毛包原基である細胞凝集塊連結体６３は、好ましくは、生体に移植した場合に発毛する能力を有する。

【0096】

本方法においては、分散された細胞２０を含む細胞含有ゲル体４０を培養して、当該細胞２０の凝集塊６０を含む、収縮した細胞含有ゲル体４０を得ることとしてもよい。すなわち、培養時間の経過に伴い、細胞含有ゲル体４０内で細胞２０が互いに結合し、徐々に凝集して細胞凝集塊６０を形成する場合、当該細胞含有ゲル体４０は、培養時間の経過に伴って、ファイバー担体１０に付着したまま収縮する。

【0097】

具体的に、図１Ｇ及び図１Ｈに示すように、分散された第一の細胞２１及び分散された第二の細胞２２を含む細胞含有ゲル体４０を培養することにより、当該第一の細胞２１の凝集塊６１及び当該第二の細胞２２の凝集塊６２を含む、収縮した細胞含有ゲル体４０が得られる。

【0098】

培養開始時の分散された細胞２０を含む細胞含有ゲル体４０（例えば、図１Ｇに示す、分散された第一の細胞２１及び分散された第二の細胞２２を含む細胞含有ゲル体４０）の体積に対する、培養後の細胞凝集塊６０を含む細胞含有ゲル体４０（例えば、図１Ｈに示す、第一の細胞凝集塊６１及び第二の細胞凝集塊６２を含む細胞含有ゲル体４０）の体積の割合は、例えば、５０％以下であることとしてもよく、４０％以下であることとしてもよく、３０％以下であることとしてもよく、２０％以下であることとしてもよく、１０％以下であることとしてもよい。

【0099】

このような培養経過に伴う細胞含有ゲル体４０の収縮は、ハイドロゲル高分子が細胞２０に対して細胞接着性を有する場合に顕著となる。すなわち、図１Ｇ及び図１Ｈに示すような培養経過に伴う細胞含有ゲル体４０の収縮は、第一のハイドロゲル高分子が第一の細胞２１に対して細胞接着性を有し、及び／又は、第二のハイドロゲル高分子が第二の細胞２２に対して細胞接着性を有する場合に顕著となる。

【0100】

細胞凝集塊６０は、当該細胞含有ゲル体４０を基材表面１１０から脱離させた後、培養液４１０中で浮いた状態の当該細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することにより、効果的に形成される。

【0101】

細胞凝集塊６０を含む細胞含有ゲル体４０における細胞２０の密度（当該細胞含有ゲル体４０の単位体積に含まれる細胞２０の数）は、例えば、１×１０^２ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^１１ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^１０ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^１０ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよく、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以上、１×１０^９ｃｅｌｌｓ／ｍＬ以下であることとしてもよい。

【0102】

本方法においては、ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養して、細胞凝集塊６０と、当該細胞凝集塊６０を覆うハイドロゲル被覆部４０ａとを含み、当該細胞凝集塊６０の内部におけるハイドロゲル高分子の密度が、当該ハイドロゲル被覆部４０ａにおけるそれより大きい、細胞含有ゲル体４０を得ることとしてもよい。

【0103】

すなわち、図１Ｈに示す例では、細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養して、下記（a）及び／又は（ｂ）の特性：（ａ）第一の細胞凝集塊６１と、当該第一の細胞凝集塊６１を覆う第一のハイドロゲル被覆部４１ａとを含み、当該第一の細胞凝集塊６１の内部における第一のハイドロゲル高分子の密度が、当該第一のハイドロゲル被覆部４１ａにおけるそれより大きい；、（ｂ）第二の細胞凝集塊６２と、当該第二の細胞凝集塊６２を覆う第二のハイドロゲル被覆部４２ａとを含み、当該第二の細胞凝集塊６２の内部における第二のハイドロゲル高分子の密度が、当該第二のハイドロゲル被覆部４２ａにおけるそれより大きい；、を有する細胞含有ゲル体４０を得る。

【0104】

すなわち、ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内において、培養時間の経過に伴って細胞２０が凝集して細胞凝集塊６０を形成する場合、凝集した当該細胞２０間のハイドロゲル部分は、当該細胞凝集塊６０を被覆するハイドロゲル部分に比べて顕著に収縮する。

【0105】

その結果、細胞凝集塊６０を含む細胞含有ゲル体４０においては、当該細胞凝集塊６０の内部におけるハイドロゲル高分子の密度が、ハイドロゲル被覆部４０ａにおけるそれより大きくなる。

【0106】

このようなハイドロゲル高分子の局所的な濃縮は、特に、当該ハイドロゲル高分子が細胞２０に対して細胞接着性を有する場合に顕著となる。すなわち、この場合、細胞２０は、それが接着しているハイドロゲル高分子を手繰り寄せながら凝集するため、当該細胞２０の近傍のハイドロゲル高分子は、当該細胞２０から離れたハイドロゲル高分子に比べて顕著に濃縮される。

【0107】

細胞含有ゲル体４０内におけるハイドロゲル高分子の密度の分布は、例えば、当該ハイドロゲル高分子に特異的な染色法を用いることにより、確認することができる。具体的に、例えば、細胞含有ゲル体４０に含まれるハイドロゲル高分子を、蛍光標識した抗体を用いて染色し、染色後の当該細胞含有ゲル体４０を蛍光顕微鏡下で観察して、細胞凝集塊６０の内部における蛍光強度と、ハイドロゲル被覆部４０ａにおける蛍光強度とを比較することにより、当該細胞凝集塊６０の内部におけるハイドロゲル高分子の密度と、ハイドロゲル被覆部４０ａにおけるハイドロゲル高分子の密度とを定量的に比較することができる。

【0108】

具体的に、細胞凝集塊６０を含む細胞含有ゲル体４０において、ハイドロゲル被覆部４０ａにおけるハイドロゲル高分子の密度に対する、当該細胞凝集塊６０の内部における当該ハイドロゲル高分子の密度は、例えば、２倍以上であることとしてもよく、５倍以上であることとしてもよく、１０倍以上であることとしてもよい。

【0109】

このような細胞含有ゲル体４０内における、ハイドロゲル高分子の偏在は、まず気相２００中で、分散された細胞２０を含む細胞含有ゲル体４０を形成し、その後、当該細胞含有ゲル体４０内で当該細胞２０を培養して細胞凝集塊６０を形成するという本方法に特徴的な操作に起因するものである。

【0110】

本方法において、まず気相２００中で、複数の液滴３１，３２を連結しゲル化して細胞含有ゲル体４０を形成し、その後、当該細胞含有ゲル体４０内で細胞２１，２２を培養して、互いに結合した複数の細胞凝集塊６１，６２を形成する場合、例えば、当該複数の液滴３１，３２のサイズ、及び／又は、配置を調節することにより、最終的に得られる細胞含有ゲル体４０における当該複数の細胞凝集塊６１，６２間の結合面の大きさを簡便且つ効果的に制御することができる。

【0111】

また、上述のようにして得られる細胞含有ゲル体４０においては、第一の細胞２１と第二の細胞２２との相互作用のための境界面、及び／又は、第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２との相互作用のための境界面（当該第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とが結合している場合には、その結合面）の大きさを任意に設定することができる。

【0112】

図２Ａ～図２Ｈには、本方法の他の例に含まれる主な工程を平面視で模式的に示す。図３Ａ～図３Ｈには、図２Ａ～図２Ｈに示すＩＩＩ－Ａ線～ＩＩＩ－Ｈ線で切断した断面を模式的に示す。

【0113】

本方法の上記（１）においては、基材表面１１０上に配置された複数のファイバー担体１０を用意し、当該複数のファイバー担体１０の各々について、上記（２）及び（３）を実施することとしてもよい。

【0114】

すなわち、図２Ａ～図２Ｅ及び図３Ａ～図３Ｅに示す例では、まず、基材表面１１０上に配置された複数（３つ）のファイバー担体１０を用意し、次いで、当該複数（３つ）のファイバー担体１０の各々について、当該ファイバー担体１０に付着した液滴３０の形成、及び、当該液滴３０のゲル化による細胞含有ゲル体４０の形成を実施して、各々が１つのファーバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０を含む、複数（３つ）の複合体５０を製造している。

【0115】

なお、複数のファイバー担体１０は、基材表面１１０上に平行に配置されることが好ましい。また、基材表面１１０上に複数のファイバー担体１０が配置される場合であっても、各細胞含有ゲル体４０は、当該複数のファイバー担体１０の１つのみに付着するよう形成される。すなわち、各細胞含有ゲル体４０が付着しているファイバー担体１０の数は１である。このため、本方法により製造される各複合体５０は、１つのファイバー担体１０を含む。すなわち、各複合体５０に含まれるファイバー担体１０の数は１である。

【0116】

本方法は、上記（２）において、気相２００中、基材表面１１０上で、各々がハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む、互いに離間して１つのファイバー担体１０に付着した複数の液滴３０を形成し、上記（３）において、気相２００中、基材表面１１０上で、当該液滴３０をゲル化させて、当該１つのファイバー担体１０と、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数の細胞含有ゲル体４０とを含む複合体５０を得ることとしてもよい。

【0117】

すなわち、図２Ｃ～図２Ｅ及び図３Ｃ～図３Ｅに示す例では、気相２００中、基材表面１１０上で、各ファイバー担体１０について、まず、互いに離間して１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の液滴３０を形成し、次いで、当該液滴３０をゲル化させて、当該１つのファイバー担体１０と、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の細胞含有ゲル体４０とを含む複合体５０を製造している。

【0118】

より具体的には、基材表面１１０上に配置された複数（３つ）のファイバー担体１０の各々に関し、上記（２－１）において、気相２００中、基材表面１１０上で、各々が第一のハイドロゲル高分子と分散された第一の細胞２１とを含む、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の第一の液滴３１を形成し（図２Ｃ及び図３Ｃ）、上記（２－２）において、気相２００中、当該基材表面１１０上で、各々が第二のハイドロゲル高分子と分散された第二の細胞２２とを含み且つ当該複数（３つ）の第一の液滴３１の異なる１つと連結した、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の第二の液滴３２を形成して、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の液滴連結体３３を得（図２Ｄ及び図３Ｄ）、上記（３）において、気相２００中、基材表面１１０上で、当該複数（３つ）の液滴連結体３３をゲル化させて、当該１つのファイバー担体１０と、互いに離間して当該１つのファイバー担体１０に付着した複数（３つ）の細胞含有ゲル体４０とを含む複合体５０を得る（図２Ｅ及び図３Ｅ）。

【0119】

なお、ファイバー担体１０に付着した複数の液滴３０の滴下には、規則的に配置された複数の分注器具（例えば、複数のピペットチップ）を備えた自動分注ロボットが好ましく使用される。このような自動分注ロボットは、例えば、ハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む懸濁液を収容するタンクと、基材１００を置くステージとを有し、その動作は、コンピュータにより制御される。

【0120】

そして、自動分注ロボットを動作させることにより、規則的に配置された複数の分注器具から、タンク内の細胞懸濁液を、基材１００の表面１１０上に配置されたファイバー担体１０上の互いに離間した複数の位置に滴下することにより、当該分注器具の配置に対応した規則的な配置で、互いに離間して当該ファイバー担体１０に付着した複数の液滴３０を効率よく形成することができる。

【0121】

本方法は、上記（１）において、一部が支持部材５００に固定され、他の一部が基材表面１１０上に配置されたファイバー担体１０を用意し、当該支持部材５００に固定された当該ファイバー担体１０について、上記（２）及び（３）を実施することとしてもよい。

【0122】

この場合、ファイバー担体１０の支持部材５００に固定される一部は、当該ファイバー担体１０の一部であれば特に限られないが、当該ファイバー担体１０の一方の端部１０ａ及び／又は他方の端部１０ｂであることが好ましく、当該ファイバー担体１０の両端部１０ａ，１０ｂであることが特に好ましい。

【0123】

また、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０の基材表面１１０上に配置される他の一部は、当該ファイバー担体１０の当該支持部材５００に固定されている部分以外の部分であれば特に限られないが、当該ファイバー担体１０の両端部１０ａ，１０ｂが当該支持部材５００に固定されている場合には、当該両端部１０ａ，１０ｂの間の部分である中央部１０ｃを当該基材表面１１０上に配置する。ファイバー担体１０の基材表面１１０に配置される部分（例えば、中央部１０ｃ）の少なくとも一部（例えば、液滴３０が付着する部分）は、当該基材表面１１０に接して配置されることが好ましい。

【0124】

また、各々の一部が支持部材５００に固定され、他の一部が基材表面１１０上に配置された、複数のファイバー担体１０を用意することとしてもよい。この場合、複数のファイバー担体１０は、平行に延びるよう支持部材５００に固定されることが好ましい。

【0125】

具体的に、図２Ａ～図２Ｈに示す例では、各々の両端部１０ａ，１０ｂが支持部材５００に固定され、中央部１０ｃが基材表面１１０上に配置された、複数（３つ）のファイバー担体１０が使用されている。また、複数（３つ）のファイバー担体１０は、互いに平行に支持部材５００に固定されている。なお、複数のファイバー担体１０は、互いに離間して支持部材５００に固定されている。

【0126】

このような本方法においては、ハイドロゲル高分子及び細胞２０を含む細胞含有ゲル体４０を付着させるファイバー担体１０と、当該ファイバー担体１０が固定された支持部材５００と、を含む、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体製造用キット（以下、「本キット」という）が好ましく使用される。

【0127】

本キットは、図２Ａ及び図３Ａに示すように、各々にハイドロゲル高分子及び細胞２０を含む細胞含有ゲル体４０を付着させる複数のファイバー担体１０と、当該複数のファイバー担体１０が互いに離間して固定された支持部材５００と、を含むこととしてもよい。

【0128】

本方法においては、まず、複数のファイバー担体１０が固定された支持部材５００を用意する。図２Ａ及び図３Ａに示す例において、支持部材５００は、ファイバー担体１０の一対の端部１０ａ，１０ｂを固定する一対の固定部５１０ａ，５１０ｂと、当該一対の固定部５１０ａ，５１０ｂの間に形成された開口部５２０と、を含む。この例において、開口部５２０は、貫通穴として形成されているが、有底穴として形成されてもよい。また、図２Ａ及び図３Ａに示す例において、支持部材５００の一対の固定部５１０ａ，５１０ｂは、連結部５３０により連結されている。すなわち、支持部材５００は、枠状に形成されている。

【0129】

次いで、図２Ｂ及び図３Ｂに示すように、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０を基材１００の表面１１０上に配置する。すなわち、支持部材５００と別体に形成された基材１００を、当該支持部材５００と組み合わせて用いる。

【0130】

具体的に、図２Ｂ及び図３Ｂに示す例では、支持部材５００の開口部５２０（図２Ａ及び図３Ａ）に基材１００を配置することにより、当該開口部５２０内で、ファイバー担体１０（具体的には、当該ファイバー担体１０の中央部１０ｃ）を当該基材１００の表面１１０上に配置する。

【0131】

すなわち、支持部材５００及び基材１００は、当該支持部材５００の開口部５２０に当該基材１００を配置することで、当該支持部材５００に固定されたファイバー担体１０が当該基材１００の表面１１０上に配置されるようなサイズ及び形状で形成されている。

【0132】

この点、本方法で使用される本キットは、ファイバー担体１０及び支持部材５００に加えて、気相２００中、その表面１１０上に、当該支持部材５００に固定された当該ファイバー担体１０が配置されるとともに、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０が形成される、基材１００をさらに含むこととしてもよい。

【0133】

この場合、本キットは、複数のファイバー担体１０と、当該複数のファイバー担体１０が互いに離間して固定された支持部材５００とに加えて、その表面１１０に、各々が当該複数のファイバー担体１０の１つに付着した複数の細胞含有ゲル体４０が形成される基材１００をさらに含むこととしてもよい。

【0134】

そして、本方法では、上記（２）において、気相２００中、基材表面１１０上で、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着し、ハイドロゲル高分子と分散された細胞２０とを含む液滴３０を形成し、上記（３）において、気相２００中、当該基材表面１１０上で、当該液滴３０をゲル化させて、当該支持部材５００に固定されたファイバー担体１０と当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０とを含むファイバー担体－細胞含有ゲル複合体５０を得る。

【0135】

本方法は、ファイバー担体１０が固定された支持部材５００を用いる場合、当該支持部材５００に固定された当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０を当該基材表面１１０から脱離させることをさらに含むこととしてもよい。

【0136】

すなわち、図２Ｄ～図２Ｅ及び図３Ｄ～図３Ｅに示すように、気相２００中、基材表面１１０上で、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０を形成して複合体５０を得た後、当該ファイバー担体１０を当該支持部材５００に固定したまま、当該ファイバー担体１０に付着した当該細胞含有ゲル体４０を、当該基材表面１１０から脱離させる。この場合、複合体５０は、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着し、基材表面１１０から脱離した（例えば、気相中又は液相中に浮いた状態の）細胞含有ゲル体４０を含むこととなる。

【0137】

本方法においては、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養することとしてもよい。

【0138】

すなわち、図２Ｆ～図２Ｇ及び図３Ｆ～図３Ｇに示すように、支持部材５００に固定された複数のファイバー担体１０の各々に付着した複数の細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養する。

【0139】

具体的に、図２Ｆ～図２Ｇ及び図３Ｆ～図３Ｇに示す例では、支持部材５００に固定された各ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０を培養容器４００内の培養液４１０中に浸漬し、当該培養液４１０中で浮いた状態の当該細胞含有ゲル体４０内で、細胞２０を培養する。

【0140】

より具体的に、図２Ｆ～図２Ｇ及び図３Ｆ～図３Ｇに示す例では、細胞含有ゲル体４０と、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０のうち少なくとも当該細胞含有ゲル体４０が付着している部分とが、培養液４１０に浸漬されている。この例においては、支持部材５００に固定された複合体５０の全体が培養液４１０に浸漬されている。また、ファイバー担体１０が固定されている支持部材５００の固定部５１０ａ，５１０ｂも培養液４１０に浸漬されている。ただし、これらの例に限られず、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０が培養液中に配置されていればよい。

【0141】

本方法は、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養して、細胞凝集塊６０を形成することとしてもよい。すなわち、図２Ｆ～図２Ｇ及び図３Ｆ～図３Ｇに示す例では、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０内で第一の細胞２１及び第二の細胞２２を培養して、当該第一の細胞２１の凝集塊６１及び当該第二の細胞２２の凝集塊６２を形成している。

【0142】

支持部材５００に固定されたファイバー担体１０に付着した細胞凝集塊６０を形成する場合、図２Ｆ～図２Ｇ及び図３Ｆ～図３Ｇに示すように、分散された細胞２０を含む培養開始時の細胞含有ゲル体４０（図２Ｆ及び図３Ｆ）に比べて、培養後の、細胞凝集塊６０を含む細胞含有ゲル体４０（図２Ｇ及び図３Ｇ）は、収縮して、その体積が減少してもよい。

【0143】

本方法において、１つのファイバー担体１０に付着した複数の細胞含有ゲル体４０を含む複合体５０を形成する場合、本方法は、当該複合体５０の当該１つのファイバー担体１０を切断して、１つのファイバー担体片１１（自由端である端部１１ａ，１１ｂを有する当該ファイバー担体１０の一部）と、当該１つのファイバー担体片１１に付着した１つの細胞含有ゲル体４０（当該ファイバー担体１０に付着していた複数の細胞含有ゲル体４０の１つ）とを含む、ファイバー担体－細胞含有ゲル複合体片５１（当該複数の細胞含有ゲル体４０を含む複合体５０の一部）を得ることをさらに含むこととしてもよい。

【0144】

具体的に、図２Ｈ及び図３Ｈに示す例では、複合体５０に含まれる、支持部材５００に固定された１つのファイバー担体１０のうち、互いに離間した複数の細胞含有ゲル体４０の間の部分を切断して、複合体片５１を得る。

【0145】

より具体的に、支持部材５００に固定された１つのファイバー担体１０のうち、当該１つのファイバー担体１０に付着した隣接した細胞含有ゲル体４０の間の部分（当該隣接した細胞含有ゲル体４０を連結する部分）を切断することにより、当該隣接する細胞含有ゲル体４０の一方と、当該ファイバー担体１０の一部である１つのファイバー担体片１１とを含む複合体片５１が得られる。なお、切断により単離された複合体片５１に含まれるファイバー担体片１１の両端部１１ａ，１１ｂは自由端になる。

【0146】

なお、図２Ｈ及び図３Ｈに示す例では、３つの複合体５０の各々から複合体片５１が１つずつ形成される様子を示しているが、当該３つの複合体５０の各々は細胞含有ゲル体４０を３つずつ含むことから、支持部材５００に固定されたファイバー担体１０をさらに切断することにより、最大で９つの複合体片５１が得られる。すなわち、複数の複合体５０の一部又は全部について、１つの複合体５０に含まれる、所定数の細胞含有ゲル体４０が付着したファイバー担体１０を切断して、当該所定数の複合体片５１を得ることとしてもよい。

【0147】

なお、ファイバー担体１０が支持部材５００に固定されている場合、当該支持体５００に固定されたファイバー担体１０を切断するが、これに限られず、例えば、支持部材５００を使用しない場合には、複数の細胞含有ゲル体４０が付着した、自由端である両端部１０ａ，１０ｂを有するファイバー担体１０を切断することとしてもよい。

【0148】

複数の細胞含有ゲル体４０が付着した１つのファイバー担体１０を切断するタイミングは、図２Ｈ及び図３Ｈに示すように、当該細胞含有ゲル体４０内で細胞２０を培養した後、特に、細胞凝集塊６０が形成された後であることが好ましいが、これに限られず、例えば、当該細胞含有ゲル体４０内における細胞２０の培養中の任意のタイミングであってもよいし、当該細胞含有ゲル体４０内における細胞２０の培養の開始前であってもよい。

【0149】

本方法によれば、ファイバー担体１０と、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０とを含む複合体５０が簡便に製造される。本方法により製造される複合体５０は、１つのファイバー担体１０と、ハイドロゲル高分子及び細胞２０を含み当該１つのファイバー担体に付着した１つの細胞含有ゲル体４０とを含むことが好ましい。

【0150】

細胞含有ゲル体４０を１つだけ含む複合体５０は、上述のとおり、１つのファイバー担体１０に液滴３０又は液滴連結体３３を１つだけ付着させゲル化させることにより製造されてもよいし、又は、複数の細胞含有ゲル体４０が互いに離間して付着した１つのファイバー担体１０を切断して形成された複合体片５１であってもよい。すなわち、複数の細胞含有ゲル体４０が付着した１つのファイバー担体１０を切断する場合、本方法は、複合体５０として、複合体片５１を製造する方法であることとしてもよい。

【0151】

複合体５０において、各細胞含有ゲル体４０は、上述のとおり、細胞凝集塊６０を含むこととしてもよい。本方法により製造される複合体５０は、１つのファイバー担体１０と、各々がハイドロゲル高分子及び細胞２０を含む、互いに離間して当該１つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体４０と、を含むこととしてもよい。

【0152】

また、上述のとおり、複合体５０において、細胞含有ゲル体４０は、第一のハイドロゲル高分子及び第一の細胞２１を含む第一のゲル部４１と、第二のハイドロゲル高分子及び第二の細胞２２を含む第二のゲル部４２とを含むこととしてもよい。

【0153】

この場合、第一のゲル部４１は、第一の細胞凝集塊６１を含み、第二のゲル部４２は、第二の細胞凝集塊６２を含むこととしてもよい。さらに、細胞含有ゲル体４０は、第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とが連結して形成された細胞凝集塊連結体６３を含むこととしてもよい。

【0154】

複合体５０において、第一の細胞２１と第二の細胞２２との組み合わせは、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせであることとしてもよい。この場合、複合体５０に含まれる細胞含有ゲル体４０は、第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とを含むことが好ましく、当該第一の細胞凝集塊６１と第二の細胞凝集塊６２とが連結して形成された細胞凝集塊連結体６３を含むことが好ましく、生体に移植した場合に発毛する能力を有する当該細胞凝集塊連結体６３を含むことが特に好ましい。

【0155】

複合体５０に含まれる１つのファイバー担体１０は、支持部材５００に固定されていることとしてもよく、この場合、その両端１０ａ，１０ｂが支持部材５００に固定されていることが好ましい。

【0156】

本方法により製造される複合体５０は、ファイバー担体１０を含むという特徴を利用して、様々な用途に適用される。すなわち、例えば、複合体５０の細胞含有ゲル体４０が生体への移植用細胞を含む場合には、当該複合体５０は、移植片として利用される。すなわち、本方法は、移植用複合体５０の製造方法であることとしてもよい。複合体５０が移植される生体は、ヒトであってもよいし、非ヒト動物であってもよいが、ヒトであることが好ましい。

【0157】

複合体５０において、ファイバー担体１０は、細胞含有ゲル体４０を輸送するための担体として効果的に利用される。すなわち、例えば、微小な細胞含有ゲル体４０を生体の移植部位まで輸送する際、利用者は、当該細胞含有ゲル体４０に付着したファイバー担体１０をピンセット等の器具で把持することにより、当該細胞含有ゲル体４０を簡便且つ確実に輸送することができる。

【0158】

複合体５０の細胞含有ゲル体４０が、毛包組織由来の細胞又は腺組織由来の細胞（例えば、上皮系細胞及び／又は間葉系細胞）を含む場合、当該複合体５０は、毛包組織又は腺組織を再生させるため、生体に移植することができる。この場合、ファイバー担体１０は、当該ファイバー担体１０に付着した細胞含有ゲル体４０に含まれる細胞２０が増殖し、及び／又は遊走するための担体としての役割を果たすことが期待される。

【0159】

本方法により製造された複合体５０を生体に移植して、その移植部位から毛を生やす場合（例えば、複合体５０の細胞含有ゲル体４０が、上皮系細胞及び／又は間葉系細胞、好ましくは上皮系細胞の凝集塊及び／又は間葉系細胞の凝集塊、特に好ましくは上皮系細胞の凝集塊と間葉系細胞の凝集塊とが連結して形成された毛包原基を含む場合）、当該生体は特に限られず、ヒトであってもよいし、非ヒト動物であってもよいが、ヒトであることが好ましい。この場合、複合体５０は、生体に移植した場合に発毛する能力を有する毛髪再生用移植片である。複合体５０の生体への移植は、当該生体の皮膚への移植であることが好ましい。皮膚への移植は、例えば、皮下移植であってもよいし、皮内移植であってもよい。すなわち、複合体５０は、皮膚（例えば、頭皮）への移植片であることとしてもよい。

【0160】

複合体５０の製造及びその生体への移植は、医学的用途であってもよいし、研究用途であってもよい。すなわち、例えば、脱毛を伴う疾患の治療又は予防のために、当該疾患を患っている又は患う可能性のあるヒト患者に移植する目的で複合体５０を製造し、当該複合体５０を当該ヒト患者に移植することとしてもよい。

【0161】

脱毛を伴う疾患は、特に限られないが、例えば、男性型脱毛症（Ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ Ａｌｏｐｅｃｉａ：ＡＧＡ）、女子男性型脱毛症（Ｆｅｍａｌｅ Ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ Ａｌｏｐｅｃｉａ：ＦＡＧＡ）、分娩後脱毛症、びまん性脱毛症、脂漏性脱毛症、粃糠性脱毛症、牽引性脱毛症、代謝異常性脱毛症、圧迫性脱毛症、円形脱毛症、神経性脱毛症、抜毛症、全身性脱毛症、及び症候性脱毛症からなる群より選択される１以上であることとしてもよい。

【0162】

また、例えば、脱毛を伴う疾患の治療又は予防に使用され得る物質の探索、及び／又は当該疾患の機構に関与する物質の探索のために、複合体５０を製造し、又は当該複合体５０を非ヒト動物に移植することとしてもよい。

【0163】

なお、複合体５０を生体に移植した後、当該複合体５０に含まれるファイバー担体１０は除去される。すなわち、例えば、移植された複合体５０から延び出るファイバー担体１０をピンセット等の器具を用いて引き抜くことにより、当該ファイバー担体１０を除去することができる。また、複合体５０の移植後、当該複合体５０のファイバー担体１０が自然に抜け落ちることもある。また、ファイバー担体１０が生体分解性材料で構成されている場合には、移植後、当該ファイバー担体１０は、加水分解等によって分解され、除去される。

【0164】

次に、本実施形態に係る具体的な実施例について説明する。

【実施例1】

【0165】

［細胞の調製］
胎齢１８日のＣ５７ＢＬ／６マウス胎児より背部の皮膚組織を採取し、中尾らが報告した方法（Koh-ei Toyoshima et al. Nature Communication, 3, 784, 2012）を一部改変して、ディスパーゼ処理を４℃で１時間、３０ｒｐｍ震盪条件で行い、当該皮膚組織の上皮層と間葉層とを分離した。その後、上皮層に１００Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼ処理を１時間２０分施し、さらにトリプシン処理を１０分施し、最終的に４０μｍメッシュセルストレイナーを通過した、分散された上皮系細胞を得た。また、間葉層には１００Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼ処理を１時間２０分施し、最終的に４０μｍメッシュセルストレイナーを通過した、分散された間葉系細胞を得た。

【0166】

［複合体の製造］
基材表面として、直径６ｃｍの培養用ディッシュの蓋の内側の撥水性表面を使用した。ファイバー担体としては、長さ約５ｃｍ～１０ｃｍに切断した医療用の縫合糸（直径約５０μｍ、ナイロン製又はシルク製）を使用した。そして、基材表面に、複数のファイバー担体を平行に配置した。

【0167】

第一のハイドロゲル高分子及び第二のハイドロゲル高分子として、コラーゲン（コラーゲンＴｙｐｅＩ－Ａ、新田ゼラチン株式会社製）を使用した。また、第一の細胞として間葉系細胞を使用し、第二の細胞として上皮系細胞を使用した。

【0168】

すなわち、コラーゲンの水溶液中に間葉系細胞を１×１０^４ｃｅｌｌｓ／２μＬの濃度で分散して、コラーゲンを含む当該間葉系細胞の懸濁液を調製した。同様に、コラーゲンの水溶液中に上皮系細胞を１×１０^４ｃｅｌｌｓ／２μＬの濃度で分散して、コラーゲンを含む当該上皮系細胞の懸濁液を調製した。

【0169】

そして、まず、空気中、基材表面に配置された各ファイバー担体上に、間葉系細胞の懸濁液を２μＬずつ滴下し、各々が、コラーゲン及び分散された間葉系細胞を含み１つのファイバー担体に付着した、複数の第一の液滴を形成した。

【0170】

次いで、空気中、基材表面に配置された各ファイバー担体上の第一の液滴に連結する位置に、上皮系細胞の懸濁液を２μＬずつ滴下し、各々が、コラーゲン及び分散された上皮系細胞を含み、１つの第一の液滴と連結し、１つのファイバー担体に付着した複数の第二の液滴を形成した。

【0171】

こうして、各々が、１つのファイバー担体上で１つの第一の液滴と１つの第二の液滴とが連結して形成され、当該１つのファイバー担体に付着した、複数の液滴連結体を得た。

【0172】

さらに、基材表面上で各ファイバー担体に付着した液滴連結体を３０分間、３７℃でインキュベーションすることにより、当該液滴連結体をゲル化させた。こうして、各々が、１つのファイバー担体と、当該１つのファイバー担体に付着した１つの細胞含有ゲル体とを含む、複数の複合体を得た。

【0173】

その後、基材表面上の複合体を培養液中に浸漬し、ピペッティングで当該培養液を流動させることにより、当該複合体（ファイバー担体及び細胞含有ゲル体）を当該基材表面１１０から脱離させた。

【0174】

脱離させた複合体を培養液（混合培地（ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）＋ＫＧ2＋１０％ウシ胎児血清＋１％ペニシリン））に浮遊させ、当該複合体の細胞含有ゲル体内で間葉系細胞及び上皮系細胞を３日間培養した。

【0175】

［結果］
図４Ａ及び図４Ｂには、それぞれ培養１日目（Ｄａｙ１）及び培養３日目（Ｄａｙ３）の時点における複合体の位相差顕微鏡写真を示す。図５Ａ及び図５Ｂには、それぞれ培養１日目（Ｄａｙ１）及び培養３日目（Ｄａｙ３）の時点における複合体の蛍光顕微鏡写真を示す。

【0176】

なお、図５Ａ及び図５Ｂは、それぞれ図４Ａ及び図４Ｂに対応している。また、図５Ａ及び図５Ｂにおいて、間葉系細胞は第一の蛍光試薬（Vybrant（商標） DiI Cell-Labeling Solution、Invitrogen（商標））により染色されて赤色の蛍光として検出され、上皮系細胞は第二の蛍光試薬（Vybrant（商標） DiO Cell-Labeling Solution、Invitrogen（商標））により染色されて緑色の蛍光として検出された。

【0177】

図４Ａ及び図５Ａに示すように、培養１日目の複合体は、１つのファイバー担体と、細胞含有ゲル体とを含み、当該細胞含有ゲル体は、分散された間葉系細胞と分散された上皮系細胞とを含んでいた。

【0178】

一方、図４Ｂ及び図５Ｂに示すように、培養３日目の複合体の１つのファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体は、互いに連結した間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とを含んでいた。

【0179】

また、間葉系細胞の凝集塊及び上皮系細胞の凝集塊は、ファイバー担体の一部の外周を覆っていた。すなわち、複合体において、ファイバー担体は、間葉系細胞の凝集塊及び上皮系細胞の凝集塊を貫通するように延びていた。

【0180】

また、３日間の培養によって、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体は顕著に収縮した。すなわち、培養３日目の細胞含有ゲル体の体積は、培養開始時及び培養１日目の細胞含有ゲル体の体積に比べて顕著に減少した。

【実施例2】

【0181】

［細胞の調製］
上述の実施例１と同様にして、間葉系細胞及び上皮系細胞を調製した。

【0182】

［複合体の製造］
上述の実施例１と同様にして、長さ約５ｍｍ～１０ｍｍの医療用縫合糸（直径約５０μｍ、ナイロン製、株式会社夏目製作所製）からなる１つのファイバー担体と、当該１つのファイバー担体に付着した１つの細胞含有ゲル体とを含む複合体を製造した。複合体の細胞含有ゲル体は、間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とが連結して形成された細胞凝集塊連結体を含んでいた。

【0183】

［複合体の移植］
上述のようにして製造した複合体を、ヌードマウスの皮下に移植した。すなわち、まず、複数の複合体の各々において、細胞凝集塊連結体に含まれる間葉系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の一方の自由端、及び、当該細胞凝集塊連結体に含まれる上皮系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の他方の自由端のうち、当該間葉系細胞の凝集塊から延び出る当該一方の自由端を切断した。

【0184】

一方、ヌードマウスにイソフルラン吸引麻酔を施し、その背部をイソジンで消毒した。続いてＶランスマイクロメス（日本アルコン株式会社製）を用いて、ヌードマウスの皮膚表皮層から真皮層下部に至る移植創を複数形成した。

【0185】

そして、各複合体の上皮系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の自由端をピンセットで把持し、複数の移植創の各々に、当該ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体を含む複合体を１つずつ注入した。すなわち、各移植部において、間葉系細胞の凝集塊が皮膚の内側に配置され、上皮系細胞の凝集塊が当該皮膚の外側に配置され、当該上皮系細胞の凝集塊から延び出るファイバー担体の自由端が、当該皮膚の外側まで延び出るよう、複合体を移植した。複合体の移植後、各移植部から延び出るファイバー担体の脱離を防止するため、移植部をサージカルテープで覆った。なお、動物の飼育及び動物実験は横浜国立大学動物実験委員会の指針を遵守して行った。

【0186】

また、比較として、ファイバー担体を用いないこと以外は同一の方法で製造した、間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とが連結して形成された細胞凝集塊連結体を含む細胞含有ゲル体を同様にヌードマウスの皮下に移植した。

【0187】

［結果］
図６Ａ及び図６Ｂには、移植後３週間が経過した時点における、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体の移植部位、及び、ファイバー担体に付着していない細胞含有ゲル体のみの移植部位の写真をそれぞれ示す。

【0188】

図６Ａ及び図６Ｂに示すように、ファイバー担体の有無にかかわらず、細胞含有ゲル体の移植部位に発毛が確認された（図中の矢印）。しかしながら、図６Ｂに示すように、細胞含有ゲル体のみを移植した場合には、移植部位から生えた毛は皮下に留まり、皮膚を貫通した発毛は確認されなかった。

【0189】

これに対し、図６Ａに示すように、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体を移植した場合には、移植部位から皮膚を貫通した複数の毛が生えていた。なお、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体を移植した場合において、ヌードマウスへの複合体の移植後７日目に移植部からサージカルテープを除去したが、その翌日には当該ファイバー担体は、抜け落ちた。

【実施例3】

【0190】

［細胞の調製］
上述の実施例１と同様にして、間葉系細胞及び上皮系細胞を調製した。

【0191】

［複合体の製造］
支持部材に固定された複数のファイバー担体を用意した。まず、図２Ａ及び図３Ａに示すような、枠状の支持部材を作製した。すなわち、中央部に正方形状の貫通穴が形成された枠状にＰＤＭＳを硬化させて、枠状のＰＤＭＳ製支持部材を作製した。次いで、この支持部材の中央の貫通穴に正方形状（３ｃｍ×３ｃｍ）の樹脂製プレートを配置した。このプレートの表面は撥水性であった。

【0192】

その後、支持部材の対向する一対の固定部に４対の切り込みを形成し、各対の切り込みに、長さ約７０ｍｍの医療用縫合糸（直径約５０μｍ、ナイロン製、株式会社夏目製作所製）からなる１つのファイバー担体の両端部を差し込み固定した。なお、支持部材の外にはみ出たファイバー担体の自由端は、当該支持部材の裏側に固定した。こうして、各々の両端部が支持部材に固定され、各々の中央部が撥水性表面上に配置された、平行に配置された４つのファイバー担体を用意した。

【0193】

次いで、空気中、撥水性表面に配置された各ファイバー担体の４か所に、間葉系細胞の懸濁液を２μＬずつ滴下し、各ファイバー担体について、各々がコラーゲン及び分散された間葉系細胞を含み、互いに離間して１つのファイバー担体に付着した、４つの第一の液滴を形成した。

【0194】

その後、空気中、撥水性表面に配置された各ファイバー担体の各第一の液滴に連結する位置に、上皮系細胞の懸濁液を２μＬずつ滴下し、各ファイバー担体について、各々がコラーゲン及び分散された上皮系細胞を含み、１つの第一の液滴と連結し、互いに離間して１つのファイバー担体に付着した４つの第二の液滴を形成した。

【0195】

こうして、各ファイバー担体について、各々が、１つの第一の液滴と１つの第二の液滴とが連結して形成され、互いに離間して１つのファイバー担体に付着した、４つの液滴連結体を得た。

【0196】

さらに、撥水性表面上で、支持部材に固定された各ファイバー担体に付着した液滴連結体を３０分間、３７℃でインキュベーションすることにより、当該液滴連結体をゲル化させた。

【0197】

こうして、各々が、支持部材に固定された１つのファイバー担体と、互いに離間して当該１つのファイバー担体に付着した４つの細胞含有ゲル体とを含む、４つの複合体を得た。

【0198】

その後、各ファイバー担体及び当該ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体を、撥水性表面から脱離させた。すなわち、撥水性表面上の４つの複合体を培養液中に浸漬し、ピペットチップの先端を用いて各複合体のファイバー担体及び細胞含有ゲル体を当該撥水性表面から脱離させた。

【0199】

次いで、４つの細胞含有ゲルが付着した各ファイバー担体の両端を、支持部材の切り込みに沿って上方にスライドさせることにより、当該各ファイバー担体を、当該支持部材に固定したまま、培養液中に浮いた状態で保持した。こうして、各ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体を、培養液中、浮いた状態に保持した。

【0200】

そして、支持部材に固定された各ファイバー担体に付着し、且つ、培養液（混合培地（ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）＋ＫＧ2＋１０％ウシ胎児血清＋１％ペニシリン））中で浮いた状態の細胞含有ゲル体内で、間葉系細胞及び上皮系細胞を３日間培養した。

【0201】

［結果］
図７には、空気中、撥水性の基材表面上で形成した、支持部材に固定されたファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体の写真を示す。図７に示すように、支持部材には４つのファイバー担体が固定され、各ファイバー担体には、４つの細胞含有ゲル体が固定された。

【0202】

図８Ａ及び図８Ｂには、それぞれ培養１日目（Ｄａｙ１）及び培養３日目（Ｄａｙ３）の時点における複合体の光学顕微鏡写真を示す。図８Ａに示すように、培養１日目の各複合体は、１つのファイバー担体と、各々が分散された間葉系細胞と分散された上皮系細胞とを含み、互いに離間して当該１つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体と、を有していた。

【0203】

一方、図８Ｂに示すように、培養３日目の各複合体は、１つのファイバー担体と、各々が、互いに連結した間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とを含み、互いに離間して当該１つのファイバー担体に付着した複数の細胞含有ゲル体と、を有していた。

【0204】

また、３日間の培養によって、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体は顕著に収縮した。すなわち、培養３日目の複合体の細胞含有ゲル体の体積は、培養開始時及び培養１日目の複合体の細胞含有ゲル体の体積に比べて顕著に減少した。

【0205】

図９Ａ及び図９Ｂには、それぞれ培養開始直後（Ｄａｙ０）及び培養３日目（Ｄａｙ３）の時点における複合体の位相差顕微鏡写真を示す。図１０Ａ及び図１０Ｂには、それぞれ培養開始直後（Ｄａｙ０）及び培養３日目（Ｄａｙ３）の時点における複合体の蛍光顕微鏡写真を示す。

【0206】

なお、図１０Ａ及び図１０Ｂは、それぞれ図９Ａ及び図９Ｂに対応している。また、図１０Ａ及び図１０Ｂにおいて、間葉系細胞は第一の蛍光試薬（Vybrant（商標） DiI Cell-Labeling Solution、Invitrogen（商標））により染色されて赤色の蛍光として検出され、上皮系細胞は第二の蛍光試薬（Vybrant（商標） DiO Cell-Labeling Solution、Invitrogen（商標））により染色されて緑色の蛍光として検出された。

【0207】

図９Ａ及び図１０Ａに示すように、培養開始直後の複合体は、１つのファイバー担体と、分散された間葉系細胞と分散された上皮系細胞とを含み、当該１つのファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体と、を有していた。

【0208】

一方、図９Ｂ及び図１０Ｂに示すように、培養３日目の複合体は、１つのファイバー担体と、当該１つのファイバー担体に付着し、互いに連結した間葉系細胞の凝集塊と上皮系細胞の凝集塊とを含む細胞含有ゲル体と、を有していた。

【0209】

また、間葉系細胞の凝集塊及び上皮系細胞の凝集塊は、ファイバー担体の一部の外周を覆っていた。すなわち、複合体において、ファイバー担体は、間葉系細胞の凝集塊及び上皮系細胞の凝集塊を貫通するように延びていた。

【0210】

また、３日間の培養によって、ファイバー担体に付着した細胞含有ゲル体は顕著に収縮した。すなわち、培養３日目の細胞含有ゲル体の体積は、培養開始時の細胞含有ゲル体の体積に比べて顕著に減少した。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図3H】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】