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特許7404303抗ＯＸ４０抗体及びその使用方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-15

(45)【発行日】2023-12-25

(54)【発明の名称】抗ＯＸ４０抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

C12N 15/13 20060101AFI20231218BHJP

C07K 16/28 20060101ALI20231218BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20231218BHJP

A61K 31/405 20060101ALI20231218BHJP

A61K 31/41 20060101ALI20231218BHJP

A61K 31/4188 20060101ALI20231218BHJP

A61K 31/4245 20060101ALI20231218BHJP

A61K 31/47 20060101ALI20231218BHJP

A61K 39/00 20060101ALI20231218BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20231218BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 1/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20231218BHJP

A61P 11/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 11/06 20060101ALI20231218BHJP

A61P 13/08 20060101ALI20231218BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20231218BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20231218BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20231218BHJP

A61P 37/02 20060101ALI20231218BHJP

A61P 37/06 20060101ALI20231218BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20231218BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

A61K31/405

A61K31/41

A61K31/4188

A61K31/4245

A61K31/47

A61K39/00 H

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K45/00

A61P1/00

A61P1/04

A61P11/00

A61P11/06

A61P13/08

A61P13/12

A61P17/00

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/06

A61P43/00 107

【請求項の数】 46

(21)【出願番号】P 2021066377

(22)【出願日】2021-04-09

(62)【分割の表示】P 2017557938の分割

【原出願日】2016-05-06

(65)【公開番号】P2021101736

(43)【公開日】2021-07-15

【審査請求日】2021-04-09

(31)【優先権主張番号】62/158,515

(32)【優先日】2015-05-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/161,198

(32)【優先日】2015-05-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/262,373

(32)【優先日】2015-12-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/323,458

(32)【優先日】2016-04-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】515124598

【氏名又は名称】アジェナスインコーポレイテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】516029470

【氏名又は名称】ルドウイグインスティテュートフォーキャンサーリサーチエルティーディー

(73)【特許権者】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアルスローン－ケタリングキャンサーセンター

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下夏樹

(72)【発明者】

【氏名】マルクファンダイク

(72)【発明者】

【氏名】エカテリーナブレオス－ニストロム

(72)【発明者】

【氏名】フォルカーシーベルト

(72)【発明者】

【氏名】ゲルトリッター

(72)【発明者】

【氏名】デイビッドスカエル

(72)【発明者】

【氏名】ダニエルヒルシュホルン－サイマーマン

(72)【発明者】

【氏名】タハメルゴウブ

(72)【発明者】

【氏名】ハオタン

(72)【発明者】

【氏名】デイビッドエー．サヴィツキー

(72)【発明者】

【氏名】ジェレミーワイト

(72)【発明者】

【氏名】ニコラスエス．ウィルソン

【審査官】山本匡子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１４－５２７８１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５３８０５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１４－５２６８９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１４－０１２００３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特許第６８６７９５５（ＪＰ，Ｂ２）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ１５／００－９０

Ｃ１２Ｑ１／００－３／００

Ｃ０７Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗体をコードする単離核酸分子であって、該抗体が、（ａ）ヒトＯＸ４０に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインであって、
ｉ）配列番号４のアミノ酸配列からなるＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、および
ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；並びに、
（ｂ）ヒト免疫細胞によって発現される抗原に特異的に結合しない、第２の抗原結合ドメイン
を含む、単離核酸分子。

【請求項2】

前記第１のＶＨが配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項3】

ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、およびそれらの組み合せからなる群から選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項4】

前記第１のＶＨが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項5】

前記ＶＬが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項6】

前記第２の抗原結合ドメインが、非ヒト抗原に特異的に結合する、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項7】

前記第２の抗原結合ドメインが、ウイルス抗原に特異的に結合する、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項8】

前記ウイルス抗原がＨＩＶ抗原である、請求項７に記載の単離核酸分子。

【請求項9】

前記第２の抗原結合ドメインが、ニワトリアルブミンまたは鶏卵リゾチームに特異的に結合する、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項10】

抗体をコードする単離核酸分子であって、該抗体が、
（ａ）ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインであって、第１の重鎖および軽鎖を含み、
ｉ）前記第１の重鎖が、配列番号４のアミノ酸配列からなるＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、
ｉｉ）前記軽鎖が、配列番号１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、
抗原結合ドメイン、並びに
（ｂ）第２の重鎖またはその断片
を含む、単離核酸分子。

【請求項11】

ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じヒトＯＸ４０のエピトープに特異的に結合する、請求項１０に記載の単離核酸分子。

【請求項12】

ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、およびそれらの組み合せからなる群から選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する、請求項１０に記載の単離核酸分子。

【請求項13】

前記第２の重鎖の断片がＦｃ断片である、請求項１０に記載の単離核酸分子。

【請求項14】

前記第１のＶＨが、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項15】

前記第１のＶＨが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項16】

前記第１のＶＨが、ヒトＩＧＨＶ３－７３生殖系列配列に由来するアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項17】

前記ＶＬが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項18】

前記ＶＬが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項19】

前記軽鎖が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項20】

前記軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項21】

前記ＶＬが、ヒトＩＧＫＶ２－２８生殖系列配列に由来するアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項22】

前記第１のＶＨおよびＶＬ配列が、それぞれ配列番号１６および１５のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項23】

前記重鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項24】

前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第２の抗原結合ドメインが、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含み、またはＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項25】

ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメイン、および前記第２の重鎖、またはその断片が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異、またはＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される同一の突然変異を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項26】

前記抗体がヒトＯＸ４０に対してアンタゴニスト性である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項27】

前記抗体が、ヒトＯＸ４０の活性を不活性化するか、低下させるか、または阻害する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項28】

前記抗体が、ヒトＯＸ４０のヒトＯＸ４０リガンドへの結合を阻害するか、または低下させる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項29】

前記抗体が、ヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻害するか、または低下させる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項30】

前記抗体が、ヒトＯＸ４０リガンドによって誘導されるヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻害するか、または低下させる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項31】

検出可能な標識をコードする核酸配列をさらに含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。

【請求項32】

請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離核酸分子と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項33】

対象のＴ細胞の拡大及びＴ細胞エフェクター機能の増強に使用するための、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離核酸分子を含む組成物、または請求項３２に記載の医薬組成物。

【請求項34】

対象における癌の治療に使用するための、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離核酸分子を含む組成物、または請求項３２に記載の医薬組成物であって、前記癌が非小細胞肺癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、および腎癌からなる群から選択される、組成物、または医薬組成物。

【請求項35】

インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害薬が前記対象に投与されることをさらに特徴とする、請求項３４に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項36】

前記阻害薬が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、及びＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項３５に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項37】

前記阻害薬がエパカドスタットである、請求項３６に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項38】

阻害剤がＦ００１２８７である、請求項３６に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項39】

阻害剤がインドキシモドである、請求項３６に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項40】

阻害剤がＮＬＧ９１９である、請求項３６に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項41】

ワクチンが前記対象に投与されることをさらに特徴とする、請求項３４に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項42】

前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体を形成している熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項４１に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項43】

前記熱ショックタンパク質がｇｐ９６タンパク質であり、かつ腫瘍関連抗原ペプチドと複合体を形成しており、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、請求項４２に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項44】

前記熱ショックタンパク質がｈｓｐ７０またはｈｓｃ７０タンパク質であり、かつ腫瘍関連抗原ペプチドと複合体を形成している、請求項４２に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項45】

チェックポイントターゲティング剤が前記対象に投与されることをさらに特徴とする、請求項３４に記載の組成物、または医薬組成物。

【請求項46】

前記チェックポイントターゲティング剤が、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、及びアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、請求項４５に記載の組成物、または医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は本明細書に
よって全体として参照により援用される（２０１６年５月５日に作成された前記ＡＳＣＩ
Ｉ複製物は、名称３６１７＿００３ＰＣ０４＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズが１２０，９２
７バイトである）。

【0002】

本開示は、ヒトＯＸ４０受容体（「ＯＸ４０」）に特異的に結合する抗体、かかる抗体
を含む組成物、並びにＯＸ４０に特異的に結合する抗体を作製及び使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

ヒト腫瘍成長の制御における自然及び適応免疫応答の寄与は十分に特徴付けられている
（ＶｅｓｅｌｙＭＤｅｔａｌ．，（２０１１）ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ
２９：２３５－２７１）。結果として、Ｔ細胞が発現する刺激受容体をアゴニスト抗体
で標的化したり、又は抑制性受容体を機能性アンタゴニストで標的化したりするなど、癌
療法のためにＴ細胞応答を増強することを目的とした抗体ベースの戦略が出現している（
ＭｅｌｌｍａｎＩｅｔａｌ．，（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ４８０：４８０－４８
９）。抗体介在性アゴニスト及びアンタゴニスト手法は、前臨床活性及び最近では臨床活
性を示している。Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、及びＮＫ細胞機能を調節
する重要な刺激受容体は、ＯＸ４０受容体である（ＯＸ４０、ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ
４、ＴＸＧＰ１Ｌ、ＡＣＴ３５、及びＡＣＴ－４としても知られる）（Ｓｕｇａｍｕｒａ
Ｋｅｔａｌ．，（２００４）ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ４：４２０－４３
１）。ＯＸ４０は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバーで
あり、ＯＸ４０を介したシグナル伝達は重要な免疫機能を調節し得る。

【0004】

ＯＸ４０は、コグネイトペプチドが負荷されたＭＨＣクラスＩ又はＩＩ分子を提示する
プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激後に抗原
特異的Ｔ細胞によって上方制御され得る（ＳｕｇａｍｕｒａＫｅｔａｌ．，（２０
０４）ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ４：４２０－４３１）。樹状細胞（ＤＣ）など
のＡＰＣは、成熟すると、刺激Ｂ７ファミリーメンバー（例えば、ＣＤ８０及びＣＤ８６
）、並びにＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）を含めたアクセサリー共刺激分子（Ｔ細胞免
疫応答の反応速度及び規模並びに有効な記憶細胞分化を整えることを促進する）を上方制
御する。特に、他の細胞型、例えば、Ｂ細胞、血管内皮細胞、マスト細胞、及び場合によ
り活性化Ｔ細胞も構成的及び／又は誘導的レベルのＯＸ４０Ｌを発現し得る（Ｓｏｒｏｏ
ｓｈＰｅｔａｌ．，（２００６）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１７６：５９７５－５９８
７）。ＯＸ４０：ＯＸ４０Ｌ共会合は、より高次の受容体三量体クラスター形成及び続く
シグナル伝達を駆動すると考えられている（ＣｏｍｐａａｎＤＭｅｔａｌ．，（２
００６）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１４：１３２１－１３３０）。

【0005】

腫瘍微小環境内のＴ細胞によるＯＸ４０発現がマウス及びヒト腫瘍組織で観察されてい
る（ＢｕｌｌｉａｒｄＹｅｔａｌ．，（２０１４）ＩｍｍｕｎｏｌＣｅｌｌＢ
ｉｏｌ９２：４７５－４８０及びＰｉｃｏｎｅｓｅＳｅｔａｌ．，（２０１４）
Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ６０：１４９４－１５０７）。ＯＸ４０は、従来のＴ細胞集団と
比べて腫瘍内の調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）集団に高度に発現し、それらの増殖状態に帰さ
れる特徴である（ＷａｉｇｈｔＪＤｅｔａｌ．，（２０１５）ＪＩｍｍｕｎｏｌ
１９４：８７８－８８２及びＢｕｌｌｉａｒｄＹｅｔａｌ．，（２０１４）Ｉｍ
ｍｕｎｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ９２：４７５－４８０）。初期の研究において、ＯＸ
４０アゴニスト抗体がマウスモデルにおいて腫瘍拒絶を誘発可能であることが実証された
（ＷｅｉｎｂｅｒｇＡＤｅｔａｌ．，（２０００）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６４：
２１６０－２１６９及びＰｉｃｏｎｅｓｅＳｅｔａｌ．，（２００８）ＪＥｘｐ
Ｍｅｄ２０５：８２５－８３９）。ヒトＯＸ４０シグナル伝達をアゴナイズするマウ
ス抗体も癌患者の免疫機能を増強することが示されている（ＣｕｒｔｉＢＤｅｔａ
ｌ．，（２０１３）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ７３：７１８９－７１９８）。
ＯＸ４０及びＯＸ４０Ｌ相互作用はまた、喘息／アトピー、脳脊髄炎、関節リウマチ、
大腸炎／炎症性腸疾患、移植片対宿主病（例えば、移植片拒絶反応）、非肥満糖尿病マウ
スにおける糖尿病、及びアテローム性動脈硬化症のマウスモデルを含め、炎症性及び自己
免疫性の疾患及び障害における免疫応答とも関連付けられている（ＣｒｏｆｔＭｅｔ
ａｌ．，（２００９）ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖ２２９（１）：１７３－１９１、及び
そこに引用される文献）。ＯＸ４０欠損及びＯＸ４０Ｌ欠損マウス、細胞増殖抑制薬を負
荷した抗ＯＸ４０リポソームの投与を受けたマウス、及び抗ＯＸ４０Ｌ遮断抗体又はヒト
免疫グロブリンのＦｃ部分と融合した組換えＯＸ４０でＯＸ４０及びＯＸ４０Ｌ相互作用
が遮断されたマウスにおいて、これらの疾患及び障害に関連する症候の低減が報告されて
いる（ＣｒｏｆｔＭｅｔａｌ．；ＢｏｏｔＥＰＪｅｔａｌ．，（２００５）
ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓＴｈｅｒ７：Ｒ６０４－６１５；ＷｅｉｎｂｅｒｇＡ
Ｄｅｔａｌ．，（１９９９）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６２：１８１８－１８２６）。
遮断抗ＯＸ４０Ｌ抗体による治療はまた、アカゲザル喘息モデルにおいてＴｈ２炎症を阻
害することも示された（ＣｒｏｆｔＭｅｔａｌ．；ＳｅｓｈａｓａｙｅｅＤｅ
ｔａｌ．，（２００７）ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１１７：３８６８－３８７８）
。加えて、ＯＸ４０Ｌの多型がループスと関連付けられている（ＣｒｏｆｔＭｅｔ
ａｌ．）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【文献】ＶｅｓｅｌｙＭＤｅｔａｌ．，（２０１１）ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ２９：２３５－２７１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

免疫応答の調節におけるヒトＯＸ４０の役割を所与として、本明細書には、ＯＸ４０に
特異的に結合する抗体及びＯＸ４０活性を調節するためのこれらの抗体の使用が提供され
る。

【課題を解決するための手段】

【0008】

一態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合す
る抗体が提供される。

【0009】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、配列番号１６のＶＨＣＤ
Ｒ１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１と、配列番号１６のＶＨＣＤＲ２を含むＶＨ
ＣＤＲ２と、配列番号１６のＶＨＣＤＲ３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号１５の
ＶＬＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１と、配列番号１５のＶＬＣＤＲ２
を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号１５のＶＬＣＤＲ３を含むＶＬＣＤＲ３とを含み
、ここで、各ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、Ｋａｂａｔ定義とＣｈｏ
ｔｈｉａ定義との組み合わせ、ＩＭＧＴ付番方式、ＡｂＭ定義、又はＣＤＲのコンタクト
定義に従い定義される。

【0010】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番
号４）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹ
ＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳ
ＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域と、
（ｂ）ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、ＭＱＡＬ
ＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含
む。

【0011】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＡ（
配列番号４７）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、ＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴ（配列番号
４８）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、ＴＳＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号４９
）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域と、（ｂ）ＱＳＬＬＨＳＮＧ
ＹＮＹ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、ＬＧＳ（配列番号４５）
のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号４６）のアミノ酸
配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む。

【0012】

一実施形態において、本抗体は、ヒト又はヒト由来フレームワーク領域を有する重鎖可
変領域を含む。

【0013】

一実施形態において、本抗体は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に由来
する重鎖可変フレームワーク領域を含み、前記アミノ酸配列はＩＧＨＶ３－７３^＊０１（
配列番号１９）を含む。

【0014】

一実施形態において、本抗体は、ヒト又はヒト由来フレームワーク領域を有する軽鎖可
変配列を含む。

【0015】

一実施形態において、本抗体は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に由来
する軽鎖可変フレームワーク領域を含み、前記アミノ酸配列はＩＧＫＶ２－２８^＊０１（
配列番号１８）を含む。

【0016】

一実施形態において、本抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列
を含む。

【0017】

一実施形態において、本抗体は、配列番号２１、２３、５１、及び５２からなる群から
選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番
号６０～６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む。

【0018】

一実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列
を含む。

【0019】

一実施形態において、本抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む。

【0020】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域
とを含み、重鎖可変領域は配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

【0021】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域
とを含み、軽鎖可変領域は配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

【0022】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、配列番号１６のアミノ酸配
列を含む重鎖可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0023】

一実施形態において、本抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号
２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号６０
のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0024】

一実施形態において、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号
２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号６１
のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0025】

一実施形態において、本抗体は、配列番号５１又は５２のアミノ酸配列を含む重鎖と、
配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。一実施形態において、本抗体は、配列
番号６２又は６３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
とを含む。

【0026】

一実施形態において、本抗体は重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。一実施形態におい
て、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、Ｉ
ｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される。一実施形態において、ＩｇＧ_１は非フ
コシル化ＩｇＧ_１である。一実施形態において、ＩｇＧ_１のアミノ酸配列はＮ２９７Ａ突
然変異を含む。一実施形態において、ＩｇＧ_１のアミノ酸配列は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９
Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。一実施形態にお
いて、ＩｇＧ_１のアミノ酸配列はＮ２９７Ｑ突然変異を含む。一実施形態において、Ｉｇ
Ｇ_４のアミノ酸配列はＳ２２８Ｐ突然変異を含む。一実施形態において、ＩｇＧ_２のアミ
ノ酸配列はＣ１２７Ｓ突然変異を含む。一実施形態において、重鎖定常領域は、配列番号
３２～３７、５３～５４、及び６４～７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
。一実施形態において、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλから
なる群から選択される。

【0027】

一実施形態において、本抗体はヒト抗体である。

【0028】

【0029】

一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。一実施形態において、本抗体はヒ
トＯＸ４０の活性を活性化するか、増強するか、又は誘導する。一実施形態において、本
抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導する。一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は
抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖はシグ
モイド用量反応曲線を示す。一実施形態において、本抗体は、抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞による
ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、又はこれらの組み
合わせの産生を誘導する。一実施形態において、本抗体は、抗ＣＤ３刺激末梢血単核細胞
（ＰＢＭＣ）によるＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－４
、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、又はこれらの組み合わせの産生を誘導する。一実施形態にお
いて、本抗体は、抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣによるＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－Ｃ
ＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３のこの産生は抗体の濃度
の実質的増加関数である。一実施形態において、本抗体は、抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣによる
ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３
の産生を誘導し、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０
、又はＩＬ－１３のこの産生は、シグモイド用量反応曲線を示す。一実施形態において、
本抗体はＳＥＡ刺激Ｔ細胞によるＩＬ－２の産生を誘導し、且つＳＥＡ刺激Ｔ細胞による
ＩＬ－１０の産生を抑制する。一実施形態において、本抗体はＳＥＡ刺激末梢血単核細胞
（ＰＢＭＣ）によるＩＬ－２産生を誘導し、且つＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２産生
を抑制する。一実施形態において、本抗体はＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２産生を誘
導し、このＩＬ－２産生は抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、本
抗体はＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生はシグモイド
用量反応曲線を示す。

【0030】

一実施形態において、本抗体は調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を軽減す
る。

【0031】

一実施形態において、本抗体はエフェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞との共培養によるＩ
Ｌ－２産生を誘導し、且つエフェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞との共培養によるＩＬ－１
０産生を抑制する。

【0032】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、ＧＳＡＭＨ（配列番号４）
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配
列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６
）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番
号１）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ
酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含
むＶＬＣＤＲ３とを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）
エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％ＣＯ
_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産
生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ
～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数である
。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０
．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μ
ｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭ
Ｃ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度におい
て例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価
を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（
ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイ
で評価することができる。一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、Ｇ
ＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡ
ＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳ
ＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳ
ＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ
（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号
３）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３とを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）と
の組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織
培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、
例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢ
ＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば
０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８
μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～
４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍ
ｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８、０
．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／ｍｌ
）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（例え
ば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例えば
５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価さ
れるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0033】

【0034】

一実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、ＧＳＡＭＨ（配列番号４）
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配
列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６
）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番
号１）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ
酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含
むＶＬＣＤＲ３とを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（
例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１
／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ
）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤ
ｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例
えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例え
ば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－
１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦ
Ｎγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下の
ステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃
度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．
７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗
体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステ
ップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ
、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電
気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳ
ｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキッ
ト（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッ
セイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０
μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、ＯＸ４０
に特異的に結合する抗体は、ＧＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤ
Ｒ１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む
ＶＨＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨＣ
ＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬ
ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、
ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３とを含み、この
抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との
組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培
養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ
－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測
されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えばＰＢ
ＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮ
γ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１つ以
上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、
ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍｌ～
５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍ
ｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）プ
レート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０、０
．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３．１
、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰＢＭ
Ｃを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ）上
清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－
ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例えば
ヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃ
ｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃ
ａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価されると
おり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0035】

【0036】

【0037】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも７０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも７０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0038】

【0039】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも７５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも７５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0040】

【0041】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも８０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも８０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0042】

【0043】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも８５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも８５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0044】

【0045】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも９０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも９０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0046】

【0047】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも９５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも９５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0048】

【0049】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例え
ば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２
産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、
０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍ
ｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μ
ｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数であ
る。ＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、
０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６
μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢ
ＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度にお
いて例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力
価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセ
イで評価することができる。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列
と少なくとも９８％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少
なくとも９８％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ
）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ
組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとお
り、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例
えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０
．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍ
ｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８
、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／
ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（
例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例
えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、
例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅ
ｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評
価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0050】

【0051】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0052】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0053】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0054】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0055】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0056】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0057】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下
のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の
濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０
．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合
抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するス
テップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ
β、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば
電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキ
ット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むア
ッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／
ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５
０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は
、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するＶＬドメインと、配
列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0058】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも７０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0059】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0060】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも７５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも７５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0061】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0062】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも８０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも８０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0063】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0064】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも８５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも８５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0065】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0066】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも９０％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも９０％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0067】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0068】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0069】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0070】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細
胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳ
Ｅ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、
細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ
３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍ
ｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ
_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し
、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測すること
によりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例え
ば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体
の濃度の実質的増加関数である。一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸
配列と少なくとも９８％の同一性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列
と少なくとも９８％の同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細
胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下の
ステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフル
オレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば
７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞
）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０
．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載される
プレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）
例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによ
ってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べ
るステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0071】

一実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一
性を有するＶＬドメインと、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を
有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在すると
きにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0072】

一実施形態において、抗体はヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、このＩ
ｇＧ_１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれ
らの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。一実施形態において、本抗体
はＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、このＩｇＧ_１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、Ｄ２６５
Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。

【0073】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、抗体と変異ＯＸ４０と
の間の結合が抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列との間の結合と比べて実質的に弱ま
っている抗体であり、この変異ＯＸ４０は、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、
Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるア
ミノ酸突然変異を除いて、配列番号５５の配列を含む。

【0074】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、抗体と変異ＯＸ４０と
の間の結合が抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列との間の結合と比べて実質的に弱ま
っている抗体であり、この変異ＯＸ４０は、アミノ酸突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６
２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａを除いて、配列番号５
５の配列を含む。

【0075】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、配列番号５５のヒトＯ
Ｘ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、
Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然
変異の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する
抗体である。

【0076】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体である。ヒトＯＸ４０に特
異的に結合する単離抗体であり、この抗体は、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合
と比較して、アミノ酸突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ
９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａの存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質へ
の結合の低下又は欠如を呈する。

【0077】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、６０、６２、８０、８
８、９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５
５の残基を含むヒトＯＸ４０配列のエピトープに特異的に結合する抗体である。

【0078】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、配列番号５５の残基５
８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５を含むヒトＯＸ４０配列のエピト
ープに特異的に結合する抗体である。

【0079】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、６０、６２、８０、８
８、９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５
５の少なくとも１つの残基に特異的に結合する抗体である。

【0080】

一実施形態において、抗体は、本明細書に提供される抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖
可変領域配列を含み、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖ断片からなる群
から選択される。

【0081】

【0082】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、（ａ）ヒトＯＸ４０に
特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｂ）ヒト免疫細胞が発現する抗原に特異
的に結合しない第２の抗原結合ドメインとを含む。

【0083】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、（ａ）Ｇ
ＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＲＩ
ＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ
２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３とを含
む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列
番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミ
ノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を
含むＶＬ－ＣＤＲ３とを含む第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一実施形態におい
て、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列
を含むＶＨと配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体と同じヒトＯＸ４０の
エピトープに特異的に結合する。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する
抗原結合ドメインは、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、
Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合
わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一の
タンパク質への結合の低下又は欠如を呈する。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異
的に結合する抗原結合ドメインはＶＨとＶＬとを含み、このＶＨは配列番号１６のアミノ
酸配列を含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメイン
はＶＨとＶＬとを含み、このＶＬは配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

【0084】

一実施形態において、第２の抗原結合ドメインは非ヒト抗原に特異的に結合する。一実
施形態において、第２の抗原結合ドメインはウイルス抗原に特異的に結合する。一実施形
態において、ウイルス抗原はＨＩＶ抗原である。一実施形態において、第２の抗原結合ド
メインはニワトリアルブミン又は鶏卵リゾチームに特異的に結合する。

【0085】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗体は、（ａ）ＧＳＡＭＨ（配
列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳ
ＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２と、ＧＩＹ
ＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３とを含む第１の重鎖
可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のア
ミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含
むＶＬ－ＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＬ－Ｃ
ＤＲ３とを含む第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一実施形態において、ヒトＯＸ
４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨと
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体と同じヒトＯＸ４０のエピトープに
特異的に結合する。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメ
インは、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ
８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる
群から選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質へ
の結合の低下又は欠如を呈する。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する
抗原結合ドメインはＶＨとＶＬとを含み、このＶＨは配列番号１６のアミノ酸配列を含む
。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインはＶＨとＶＬ
とを含み、このＶＬは配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

【0086】

一実施形態において、第２の重鎖はＦｃ断片である。

【0087】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号
１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％
同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結
合する抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態
において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、ヒトＩＧＨＶ３－７３
生殖系列配列に由来するアミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0088】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号
１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％
同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結
合する抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。一
実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１５
のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合す
る抗原結合ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態にお
いて、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５０のアミノ酸配
列を含む軽鎖を含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ド
メインは、ヒトＩＧＫＶ２－２８生殖系列配列に由来するアミノ酸配列を含むＶＬを含む
。

【0089】

一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ
配列番号１６及び１５に示されるＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施形態において、ヒトＯ
Ｘ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配
列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0090】

一実施形態において、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、Ｎ２９
７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される同一
の突然変異を含む。一実施形態において、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ド
メインは、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される
同一の突然変異を含む。一実施形態において、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合
ドメイン及び第２の重鎖又はその断片は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこ
れらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含む。一実施形態において
、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメイン及び第２の重鎖又はその断片は、Ｄ
２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変
異を含む。

【0091】

一実施形態において、本抗体はヒトＯＸ４０に対してアンタゴニスト性である。一実施
形態において、本抗体はヒトＯＸ４０の活性を不活性化するか、低下させるか、又は阻害
する。一実施形態において、本抗体はヒトＯＸ４０のヒトＯＸ４０リガンドへの結合を阻
害するか又は低下させる。一実施形態において、本抗体はヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻
害するか又は低下させる。一実施形態において、本抗体は、ヒトＯＸ４０リガンドによっ
て誘導されるヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻害するか又は低下させる。

【0092】

一実施形態において、本抗体は検出可能標識を含む。

【0093】

一実施形態において、本発明は、医薬として用いられる本発明の抗体に関する。

【0094】

一実施形態において、本発明は、診断薬として用いられる本発明の抗体に関する。

【0095】

一実施形態において、本発明は、試料中のＯＸ４０をインビトロ検出するための本発明
の抗体の使用に関する。一実施形態において、ＯＸ４０はヒトＯＸ４０である。

【0096】

一実施形態において、本発明は、インビトロでヒトＯＸ４０の活性を活性化するか、増
強するか、又は誘導するための本発明の抗体の使用に関する。一実施形態において、本抗
体はインビトロでＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導する。

【0097】

一態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合す
る抗体をコードする単離核酸分子が提供される。一実施形態において、本核酸分子は、本
明細書に提供される抗ＯＸ４０抗体の重鎖可変領域又は重鎖をコードする。一実施形態に
おいて、本核酸分子は、本明細書に提供される抗ＯＸ４０抗体の軽鎖可変領域又は軽鎖を
コードする。一実施形態において、本核酸分子は、本明細書に提供される抗ＯＸ４０抗体
の重鎖可変領域又は重鎖及びこの抗体の軽鎖可変領域又は軽鎖をコードする。一実施形態
において、本核酸分子は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードする
。一実施形態において、本核酸分子は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
をコードする。かかる核酸分子によってコードされる単離抗体も本明細書に提供される。

【0098】

一態様において、本明細書には、かかる核酸分子を含むベクターが提供される。

【0099】

一態様において、本明細書には、かかる核酸分子又はかかるベクターを含む宿主細胞が
提供される。一実施形態において、本宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモ
ナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトミセ
ス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６
、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、
Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細
胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養下のヒト細胞からなる群から選択される。

【0100】

一態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合す
る抗体を作製する方法が提供され、この方法は、かかる宿主細胞を、核酸分子が発現され
、及び抗体が産生されるように培養するステップを含む。

【0101】

一実施形態において、本発明は、医薬として用いられる本発明の抗体、本発明の核酸分
子、本発明のベクター、及び／又は本発明の宿主細胞に関する。

【0102】

一実施形態において、本発明は、診断薬として用いられる本発明の抗体、本発明の核酸
分子、本発明のベクター、及び／又は本発明の宿主細胞に関する。

【0103】

一実施形態において、本発明は、試料中のＯＸ４０をインビトロ検出するための本発明
の抗体、本発明の核酸分子、本発明のベクター、及び／又は本発明の宿主細胞の使用に関
する。一実施形態において、ＯＸ４０はヒトＯＸ４０である。

【0104】

【0105】

一態様において、本明細書には、本明細書に提供されるＯＸ４０に特異的に結合する抗
体を含む医薬組成物、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体をコー
ドする核酸分子、かかる核酸分子を含むベクター、又はかかる核酸分子若しくはベクター
を含む宿主細胞が提供される。

【0106】

一態様において、本明細書には、医薬として用いられる、本明細書に提供されるＯＸ４
０に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物、ＯＸ４０、例えばヒトＯＸ４０に特異的に
結合する抗体をコードする核酸分子、かかる核酸分子を含むベクター、又はかかる核酸分
子若しくはベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0107】

一態様において、本明細書には、診断薬として用いられる、本明細書に提供されるＯＸ
４０に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物、ＯＸ４０、例えばヒトＯＸ４０に特異的
に結合する抗体をコードする核酸分子、かかる核酸分子を含むベクター、又はかかる核酸
分子若しくはベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0108】

一態様において、本明細書には、対象の免疫応答を調節する方法が提供され、この方法
は、本明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、又は医薬組成物の有効量を
対象に投与するステップを含む。一実施形態において、本方法は、対象の免疫応答を増強
又は誘導する方法である。一実施形態において、免疫応答を調節することは、対象の免疫
応答を増強又は誘導することを含む。

【0109】

一態様において、本発明は、免疫応答を調節する方法に用いられる本発明の抗体、核酸
、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。

【0110】

一態様において、本発明は、免疫応答を増強又は誘導する方法に用いられる本発明の抗
体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、
本抗体はアゴニスト性である。

【0111】

一態様において、本発明は、対象の免疫応答を調節する方法に用いられる本発明の抗体
、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。

【0112】

一態様において、本発明は、対象の免疫応答を増強又は誘導する方法に用いられる本発
明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態にお
いて、本抗体はアゴニスト性である。

【0113】

一態様において、本発明は、対象の免疫応答を調節する方法であって、本発明の抗体、
核酸、ベクター、宿主細胞、又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含む方
法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関す
る。

【0114】

一態様において、本発明は、対象の免疫応答を増強又は誘導する方法であって、本発明
の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップ
を含む方法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成
物に関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0115】

一態様において、本明細書には、対象のＴ細胞拡大及びＴ細胞エフェクター機能を増強
する方法が提供され、この方法は、本明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細
胞、又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含む。

【0116】

一態様において、本発明は、Ｔ細胞拡大及びＴ細胞エフェクター機能を増強する方法に
用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。
一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0117】

一態様において、本発明は、対象のＴ細胞拡大及びＴ細胞エフェクター機能を増強する
方法に用いられる、本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に
関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0118】

一態様において、本発明は、対象のＴ細胞拡大及びＴ細胞エフェクター機能を増強する
方法であって、本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物の有効
量を対象に投与するステップを含む方法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿
主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性で
ある。

【0119】

一態様において、本明細書には、対象の癌を治療する方法が提供され、この方法は、本
明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、又は医薬組成物の有効量を対象に
投与するステップを含む。一部の実施形態において、癌は、黒色腫、腎癌、及び前立腺癌
からなる群から選択される。一部の実施形態において、癌は、黒色腫、腎癌、前立腺癌、
結腸癌、及び肺癌からなる群から選択される。一部の実施形態において、肺癌は非小細胞
肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。一例では、本方法は、チェックポイントターゲティング剤を
対象に投与するステップを更に含む。一例では、チェックポイントターゲティング剤は、
アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗Ｐ
Ｄ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、
アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗
ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、及びアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群
から選択される。

【0120】

一態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベク
ター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗体はアゴニ
スト性である。

【0121】

一態様において、本発明は、対象の癌を治療する方法に用いられる本発明の抗体、核酸
、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗体は
アゴニスト性である。

【0122】

一態様において、本発明は、対象の癌を治療する方法であって、本発明の抗体、核酸、
ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含む方
法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関す
る。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0123】

一態様において、本発明は、医薬として用いられる、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベク
ター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）チェックポイントターゲティング
剤に関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0124】

一態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる、（ａ）本発明の抗体、核
酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）チェックポイントターゲ
ティング剤に関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0125】

一態様において、本発明は、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／
又は医薬組成物、並びに（ｂ）チェックポイントターゲティング剤を含む医薬組成物、キ
ット又はキットオブパーツに関する。

【0126】

本明細書に記載されるとおりの抗体は、癌の治療用のＩＤＯ阻害薬と併用して使用する
ことができる。一実施形態において、本方法は、インドールアミン－２，３－ジオキシゲ
ナーゼ（ＩＤＯ）阻害薬を対象に投与するステップを更に含む。癌の治療に用いられる本
明細書に記載されるとおりのＩＤＯ阻害薬は、錠剤、丸薬又はカプセルなどの固形剤形の
医薬組成物で存在し、この医薬組成物はＩＤＯ阻害薬と薬学的に許容可能な賦形剤とを含
む。そのため、本明細書に記載されるとおりの抗体と本明細書に記載されるとおりのＩＤ
Ｏ阻害薬とは、別個の剤形として別個に、逐次的に又は同時に投与することができる。一
実施形態において、本抗体は非経口投与され、ＩＤＯ阻害薬は経口投与される。詳細な実
施形態において、この阻害薬は、エパカドスタット（ＩｎｃｙｔｅＣｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ）、Ｆ００１２８７（ＦｌｅｘｕｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、インドキシモド（
ＮｅｗＬｉｎｋＧｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋＧｅｎｅｔ
ｉｃｓ）からなる群から選択される。エパカドスタットについては、国際公開第２０１０
／００５９５８号パンフレット（あらゆる目的のために全体として参照により本明細書に
援用される）に記載されている。一実施形態において、阻害薬はエパカドスタットである
。別の実施形態において、阻害薬はＦ００１２８７である。別の実施形態において、阻害
薬はインドキシモドである。別の実施形態において、阻害薬はＮＬＧ９１９である。

【0127】

一態様において、本発明は、医薬として用いられる、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベク
ター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）ＩＤＯ阻害薬に関する。

【0128】

一態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる、（ａ）本発明の抗体、核
酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）ＩＤＯ阻害薬に関する。
一態様において、本発明は、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又
は医薬組成物、並びに（ｂ）ＩＤＯ阻害薬を含む組成物、キット又はキットオブパーツに
関する。

【0129】

本明細書に記載される抗体は、ワクチンと併用して使用することができる。詳細な実施
形態において、ワクチンは熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含み、
このＨＳＰＰＣは、１つ以上の抗原ペプチド（例えば、腫瘍関連抗原ペプチド）と複合体
を形成している熱ショックタンパク質（例えば、ｇｐ９６タンパク質、ｈｓｐ７０タンパ
ク質、又はｈｓｃ７０タンパク質）を含む。一実施形態において、熱ショックタンパク質
はｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体を形成する。一実施形態に
おいて、熱ショックタンパク質はｈｓｐ７０又はｈｓｃ７０タンパク質であり、腫瘍関連
抗原ペプチドと複合体を形成する。一実施形態において、熱ショックタンパク質はｇｐ９
６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体を形成し、ここで、ＨＳＰＰＣは、
対象から得られた腫瘍に由来する。一実施形態において、熱ショックタンパク質はｈｓｐ
７０又はｈｓｃ７０タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体を形成し、ここで
、ＨＳＰＰＣは、対象から得られた腫瘍に由来する。

【0130】

一態様において、本発明は、医薬として用いられる、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベク
ター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）ワクチンに関する。一実施形態に
おいて、本抗体はアゴニスト性である。

【0131】

一態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる、（ａ）本発明の抗体、核
酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、並びに（ｂ）ワクチンに関する。一実
施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0132】

一態様において、本発明は、（ａ）本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／
又は医薬組成物、並びに（ｂ）ワクチンを含む組成物、キット又はキットオブパーツに関
する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。

【0133】

一部の実施形態において、本開示は、癌の治療用医薬の製造における本明細書に記載さ
れるとおりの抗体の使用を提供する。特定の実施形態において、本開示は、癌の治療に用
いられる本明細書に記載されるとおりの抗体を提供する。特定の実施形態において、本開
示は、癌の治療用医薬の製造における本明細書に記載されるとおりの医薬組成物の使用を
提供する。特定の実施形態において、本開示は、癌の治療に用いられる本明細書に記載さ
れるとおりの医薬組成物を提供する。

【0134】

一態様において、本明細書には、対象の自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する
方法が提供され、この方法は、本明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、
又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含む。一部の実施形態において、疾
患又は障害は、移植片拒絶反応、脈管炎、喘息、関節リウマチ、皮膚炎、炎症性腸疾患、
ブドウ膜炎、及びループスからなる群から選択される。

【0135】

一態様において、本発明は、自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法に用い
られる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実
施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0136】

一態様において、本発明は、対象の自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法
に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する
。一実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0137】

一態様において、本発明は、対象の自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法
であって、本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物の有効量を
対象に投与するステップを含む方法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細
胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性で
ある。

【0138】

一態様において、本明細書には、対象の感染症を治療する方法が提供され、この方法は
、本明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、又は医薬組成物の有効量を対
象に投与するステップを含む。

【0139】

一態様において、本発明は、感染症を治療する方法に用いられる本発明の抗体、核酸、
ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗体はア
ゴニスト性である。一実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0140】

一態様において、本発明は、対象の感染症を治療する方法に用いられる本発明の抗体、
核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に関する。一実施形態において、本抗
体はアゴニスト性である。一実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0141】

一態様において、本発明は、対象の感染症を治療する方法であって、本発明の抗体、核
酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含
む方法に用いられる本発明の抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物に
関する。一実施形態において、本抗体はアゴニスト性である。一実施形態において、本抗
体はアンタゴニスト性である。

【0142】

本明細書に提供される方法の一実施形態において、対象はヒトである。

【0143】

一態様において、本明細書には、試料中のＯＸ４０を検出する方法が提供され、この方
法は、本明細書に提供される抗体に前記試料を接触させるステップを含む。

【0144】

一態様において、本明細書には、試料中のＯＸ４０をインビトロで検出する方法が提供
され、この方法は、本明細書に提供される抗体に前記試料を接触させるステップを含む。
一実施形態において、ＯＸ４０はヒトＯＸ４０である。

【0145】

一態様において、本明細書には、試料中のＯＸ４０をインビトロで検出する方法が提供
され、この方法は、本明細書に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は
医薬組成物に前記試料を接触させるステップを含む。一実施形態において、ＯＸ４０はヒ
トＯＸ４０である。

【0146】

一態様において、本明細書には、試料中のＯＸ４０のインビトロ検出のための本明細書
に提供される抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物の使用、好ましく
は本明細書に提供される抗体の使用が提供される。

【0147】

一態様において、本明細書には、対象のＯＸ４０の検出に用いられる本明細書に提供さ
れる抗体、核酸、ベクター、宿主細胞、及び／又は医薬組成物、好ましくは本明細書に提
供される抗体が提供される。一実施形態において、対象はヒトである。

【0148】

一態様において、本明細書には、本明細書に提供されるＯＸ４０に特異的に結合する抗
体、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体をコードする核酸分子、
かかる核酸分子を含むベクター、かかる核酸分子若しくはベクターを含む宿主細胞、又は
かかる抗体、核酸分子、ベクター、若しくは宿主細胞を含む医薬組成物と、ａ）検出試薬
、ｂ）ＯＸ４０抗原、ｃ）ヒト投与への使用若しくは販売の認可を反映する通知、又はｄ
）これらの組み合わせとを含むキットが提供される。

【図面の簡単な説明】

【0149】

【図1AB】図１Ａは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に対する抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｂは、非刺激及び（抗ＣＤ３抗体を使用した）刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｃは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１又はアイソタイプ対照の用量タイトレーションの結合を示すグラフである。図１Ｄは、ヒト非刺激血液由来免疫細胞集団に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を計測するヒストグラムの組である。図１Ｅは、活性化カニクイザル（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合のヒストグラムである。

【図1C】図１Ａは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に対する抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｂは、非刺激及び（抗ＣＤ３抗体を使用した）刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｃは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１又はアイソタイプ対照の用量タイトレーションの結合を示すグラフである。図１Ｄは、ヒト非刺激血液由来免疫細胞集団に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を計測するヒストグラムの組である。図１Ｅは、活性化カニクイザル（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合のヒストグラムである。

【図1DE】図１Ａは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に対する抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｂは、非刺激及び（抗ＣＤ３抗体を使用した）刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を示すヒストグラムの対である。図１Ｃは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９－１又はアイソタイプ対照の用量タイトレーションの結合を示すグラフである。図１Ｄは、ヒト非刺激血液由来免疫細胞集団に対するｐａｂ１９４９－１及びアイソタイプ対照の結合を計測するヒストグラムの組である。図１Ｅは、活性化カニクイザル（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））ＣＤ４＋Ｔ細胞に対するｐａｂ１９４９及びアイソタイプ対照の結合のヒストグラムである。

【図2AB】抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９（図２Ａ及び図２Ｃ）及びｐａｂ２０４４（図２Ｂ）の刺激がエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に及ぼす効果を評価する準最適ＣＤ３刺激アッセイの結果のグラフである。抗体ｐａｂ１９４９はヒトＩｇＧ_１抗体である。抗体ｐａｂ２０４４はｐａｂ１９４９と同じ重鎖可変領域及び同じ軽鎖を共有するが、ヒトＩｇＧ_４定常領域を含む。試験した各抗体について（図２ＡではＩｇＧ_１アイソタイプ対照、ｐａｂ１９４９、及び陽性対照としての抗ＣＤ２８抗体；及び図２ＢではＩｇＧ_４アイソタイプ対照、ｐａｂ２０４４、及び抗ＣＤ２８抗体）、細胞増殖（ＣＦＳＥ；ｘ軸）が示される。図２Ｃは、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９のタイトレーション（０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）及び抗体が準最適抗ＣＤ３刺激下でエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に及ぼす効果を示す折れ線グラフである。

【図2C】抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９（図２Ａ及び図２Ｃ）及びｐａｂ２０４４（図２Ｂ）の刺激がエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に及ぼす効果を評価する準最適ＣＤ３刺激アッセイの結果のグラフである。抗体ｐａｂ１９４９はヒトＩｇＧ_１抗体である。抗体ｐａｂ２０４４はｐａｂ１９４９と同じ重鎖可変領域及び同じ軽鎖を共有するが、ヒトＩｇＧ_４定常領域を含む。試験した各抗体について（図２ＡではＩｇＧ_１アイソタイプ対照、ｐａｂ１９４９、及び陽性対照としての抗ＣＤ２８抗体；及び図２ＢではＩｇＧ_４アイソタイプ対照、ｐａｂ２０４４、及び抗ＣＤ２８抗体）、細胞増殖（ＣＦＳＥ；ｘ軸）が示される。図２Ｃは、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９のタイトレーション（０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）及び抗体が準最適抗ＣＤ３刺激下でエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に及ぼす効果を示す折れ線グラフである。

【図3AB】種々の準最適濃度の抗ＣＤ３抗体及びＩＬ－２との併用で抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ１９４９－１によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαサイトカインの産生の代表的な分析結果である。図３Ａ～図３Ｃにおいて、異なる４ドナー：ドナーＫＭ、ドナーＴＭ、ドナーＧＳ、及びドナーＳＢからのＰＢＭＣを試験した。図３Ａ及び図３Ｂは、ドナーＳＢ（図３Ａ）及びドナーＧＳ（図３Ｂ）からのＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞内サイトカイン染色（ＩＦＮγ及びＴＮＦα）を示すプロットである。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照について、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞又はＴＮＦα＋単機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをプロットする（図３Ｃ）。図３Ｃに示されるパーセンテージは、３つの異なる抗ＣＤ３抗体濃度下で生じた最も高い応答に相当する。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。図３Ｄ、図３Ｅ、及び図３Ｆは、同様の準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナーＧＳのＰＢＭＣに由来する細胞において抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＴＮＦα＋ＣＤ４＋Ｔ細胞（図３Ｄ）、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｅ）、及びＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｆ）のパーセンテージを示すグラフの組である。

【図3C】種々の準最適濃度の抗ＣＤ３抗体及びＩＬ－２との併用で抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ１９４９－１によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαサイトカインの産生の代表的な分析結果である。図３Ａ～図３Ｃにおいて、異なる４ドナー：ドナーＫＭ、ドナーＴＭ、ドナーＧＳ、及びドナーＳＢからのＰＢＭＣを試験した。図３Ａ及び図３Ｂは、ドナーＳＢ（図３Ａ）及びドナーＧＳ（図３Ｂ）からのＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞内サイトカイン染色（ＩＦＮγ及びＴＮＦα）を示すプロットである。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照について、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞又はＴＮＦα＋単機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをプロットする（図３Ｃ）。図３Ｃに示されるパーセンテージは、３つの異なる抗ＣＤ３抗体濃度下で生じた最も高い応答に相当する。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。図３Ｄ、図３Ｅ、及び図３Ｆは、同様の準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナーＧＳのＰＢＭＣに由来する細胞において抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＴＮＦα＋ＣＤ４＋Ｔ細胞（図３Ｄ）、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｅ）、及びＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｆ）のパーセンテージを示すグラフの組である。

【図3D-F】種々の準最適濃度の抗ＣＤ３抗体及びＩＬ－２との併用で抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ１９４９－１によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαサイトカインの産生の代表的な分析結果である。図３Ａ～図３Ｃにおいて、異なる４ドナー：ドナーＫＭ、ドナーＴＭ、ドナーＧＳ、及びドナーＳＢからのＰＢＭＣを試験した。図３Ａ及び図３Ｂは、ドナーＳＢ（図３Ａ）及びドナーＧＳ（図３Ｂ）からのＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞内サイトカイン染色（ＩＦＮγ及びＴＮＦα）を示すプロットである。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照について、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞又はＴＮＦα＋単機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをプロットする（図３Ｃ）。図３Ｃに示されるパーセンテージは、３つの異なる抗ＣＤ３抗体濃度下で生じた最も高い応答に相当する。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。図３Ｄ、図３Ｅ、及び図３Ｆは、同様の準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナーＧＳのＰＢＭＣに由来する細胞において抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＴＮＦα＋ＣＤ４＋Ｔ細胞（図３Ｄ）、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｅ）、及びＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞（図３Ｆ）のパーセンテージを示すグラフの組である。

【図4A】ドナー１、２、４、５、７、８、９、及び１０のＰＢＭＣに由来する細胞を使用した準最適抗ＣＤ３刺激アッセイの結果を示すグラフの組である。ＩＦＮγ＋、ＴＮＦα＋、又はＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをある抗体濃度範囲のｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体に対してプロットする。

【図4B】ドナー１、２、４、５、７、８、９、及び１０のＰＢＭＣに由来する細胞を使用した準最適抗ＣＤ３刺激アッセイの結果を示すグラフの組である。ＩＦＮγ＋、ＴＮＦα＋、又はＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをある抗体濃度範囲のｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体に対してプロットする。

【図4C】ドナー１、２、４、５、７、８、９、及び１０のＰＢＭＣに由来する細胞を使用した準最適抗ＣＤ３刺激アッセイの結果を示すグラフの組である。ＩＦＮγ＋、ＴＮＦα＋、又はＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをある抗体濃度範囲のｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体に対してプロットする。

【図5A】図５Ａは、ドナーＳＢ及びドナーＧＳからのＰＢＭＣを使用した準最適抗ＣＤ３刺激アッセイで抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照がサイトカインパネル（ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、及びＩＬ－１３）の分泌に及ぼす効果を示す棒グラフの組である。健常ドナーからのＰＢＭＣを様々な準最適濃度の抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）、ＩＬ２（２０Ｕ／ｍｌ）、及び５μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照を使用して活性化し、刺激後４日（ＳＢ＃１Ａ）又は３日（ＳＢ＃１Ｂ、ＳＢ＃２、及びＧＳ）のいずれかにサイトカインを計測した。図５Ａのバーは、５μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体濃度で試験した全ての抗ＣＤ３濃度によって誘導された最も高いサイトカイン分泌を表す。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。図５Ｂ、図５Ｃ、及び図５Ｄは、準最適濃度の抗ＣＤ３抗体の存在下でドナーＧＳのＰＢＭＣに由来する細胞において様々な濃度のｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体によって誘導された分泌サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３）の量を示すグラフの組である。

【図5B-D】図５Ａは、ドナーＳＢ及びドナーＧＳからのＰＢＭＣを使用した準最適抗ＣＤ３刺激アッセイで抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照がサイトカインパネル（ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、及びＩＬ－１３）の分泌に及ぼす効果を示す棒グラフの組である。健常ドナーからのＰＢＭＣを様々な準最適濃度の抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）、ＩＬ２（２０Ｕ／ｍｌ）、及び５μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照を使用して活性化し、刺激後４日（ＳＢ＃１Ａ）又は３日（ＳＢ＃１Ｂ、ＳＢ＃２、及びＧＳ）のいずれかにサイトカインを計測した。図５Ａのバーは、５μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体濃度で試験した全ての抗ＣＤ３濃度によって誘導された最も高いサイトカイン分泌を表す。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。図５Ｂ、図５Ｃ、及び図５Ｄは、準最適濃度の抗ＣＤ３抗体の存在下でドナーＧＳのＰＢＭＣに由来する細胞において様々な濃度のｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体によって誘導された分泌サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３）の量を示すグラフの組である。

【図6A】準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナー１～１０のＰＢＭＣに由来する細胞においてｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＧＭ－ＣＳＦの量を示すグラフの組である。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図6B】準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナー１～１０のＰＢＭＣに由来する細胞においてｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＧＭ－ＣＳＦの量を示すグラフの組である。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図6C】準最適抗ＣＤ３刺激アッセイでドナー１～１０のＰＢＭＣに由来する細胞においてｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＧＭ－ＣＳＦの量を示すグラフの組である。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図7A】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－２の量を示す。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図7B】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－２の量を示す。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図7C】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－２の量を示す。ＥＣＬは電気化学発光を指す。

【図8A】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＴＮＦβの量を示す。

【図8B】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＴＮＦβの量を示す。

【図8C】図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＴＮＦβの量を示す。

【図9】１：３（Ｔｒｅｇ：Ｔｅｆｆ）の比で共培養した調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及びエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）において可溶性又は架橋（抗ＦｃＦ（ａｂ’）_２を使用した）のいずれかのｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体によって誘導されたＩＬ－２（図９Ａ）及びＩＬ－１０（図９Ｂ）の産生を示す棒グラフである。

【図10A-D】ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激時の初代ヒトＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０抗体の機能的活性を示すグラフである。一定濃度（１０μｇ／ｍｌ）又は種々の濃度の抗ＯＸ４０抗体又はアイソタイプ対照の非存在下又は存在下でヒトＰＢＭＣをＳＥＡで刺激し、ＩＬ－２又はＩＬ－１０サイトカイン分泌に関して分析した。試験した抗ＯＸ４０抗体には、ｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、及び参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５が含まれる。試験抗体に関して、１０μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体濃度におけるＩＬ－２（図１０Ａ）及びＩＬ－１０（図１０Ｂ）の倍数変化をプロットする。図１０Ｃ、図１０Ｄ、及び図１０Ｅは、異なるｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、又は参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５濃度におけるＩＬ－２産生の倍数変化を示す用量反応曲線である。統計的有意性は、アスタリスクによって示されるアイソタイプ対照試料と比較したスチューデントｔ検定によって決定した。エラーバーはトリプリケートリピートからの標準偏差を表す。図１０Ａの＊はｐ＜０．００１を表す。図１０Ｂの＊はｐ＜０．０１を表す。図１０Ｆは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体、又はＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＩＬ－２産生を示すグラフである。図１０Ｇは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションに応答したＩＬ－２産生を示すグラフである。

【図10EF】ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激時の初代ヒトＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０抗体の機能的活性を示すグラフである。一定濃度（１０μｇ／ｍｌ）又は種々の濃度の抗ＯＸ４０抗体又はアイソタイプ対照の非存在下又は存在下でヒトＰＢＭＣをＳＥＡで刺激し、ＩＬ－２又はＩＬ－１０サイトカイン分泌に関して分析した。試験した抗ＯＸ４０抗体には、ｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、及び参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５が含まれる。試験抗体に関して、１０μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体濃度におけるＩＬ－２（図１０Ａ）及びＩＬ－１０（図１０Ｂ）の倍数変化をプロットする。図１０Ｃ、図１０Ｄ、及び図１０Ｅは、異なるｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、又は参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５濃度におけるＩＬ－２産生の倍数変化を示す用量反応曲線である。統計的有意性は、アスタリスクによって示されるアイソタイプ対照試料と比較したスチューデントｔ検定によって決定した。エラーバーはトリプリケートリピートからの標準偏差を表す。図１０Ａの＊はｐ＜０．００１を表す。図１０Ｂの＊はｐ＜０．０１を表す。図１０Ｆは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体、又はＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＩＬ－２産生を示すグラフである。図１０Ｇは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションに応答したＩＬ－２産生を示すグラフである。

【図10G】ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激時の初代ヒトＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０抗体の機能的活性を示すグラフである。一定濃度（１０μｇ／ｍｌ）又は種々の濃度の抗ＯＸ４０抗体又はアイソタイプ対照の非存在下又は存在下でヒトＰＢＭＣをＳＥＡで刺激し、ＩＬ－２又はＩＬ－１０サイトカイン分泌に関して分析した。試験した抗ＯＸ４０抗体には、ｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、及び参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５が含まれる。試験抗体に関して、１０μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体濃度におけるＩＬ－２（図１０Ａ）及びＩＬ－１０（図１０Ｂ）の倍数変化をプロットする。図１０Ｃ、図１０Ｄ、及び図１０Ｅは、異なるｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、又は参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０４５濃度におけるＩＬ－２産生の倍数変化を示す用量反応曲線である。統計的有意性は、アスタリスクによって示されるアイソタイプ対照試料と比較したスチューデントｔ検定によって決定した。エラーバーはトリプリケートリピートからの標準偏差を表す。図１０Ａの＊はｐ＜０．００１を表す。図１０Ｂの＊はｐ＜０．０１を表す。図１０Ｆは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体、又はＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導されたＩＬ－２産生を示すグラフである。図１０Ｇは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションに応答したＩＬ－２産生を示すグラフである。

【図11】ＯＸ４０ＮＦ－κＢ－ルシフェラーゼレポーター細胞株を使用して可溶性の（可溶性条件、図１１Ａ）又は架橋した（複合体化条件、図１１Ｂ）ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体を試験したアッセイの結果である。試験した種々の抗体濃度に対する相対発光単位（ＲＬＵ）をプロットする。

【図12】ＯＸ４０を発現する標的細胞に抗体が結合したときＦｃγＲＩＩＩＡ（図１２Ａ）又はＦｃγＲＩＩＡ^Ｈ１３１変異体（図１２Ｂ）を発現するレポーター細胞を活性化するその能力に関して抗ＯＸ４０抗体を試験したレポーターアッセイの結果である。図１２Ａでは、種々のｐａｂ１９４９－１及びｐａｂ２０４４－１濃度に対するΔＲＬＵ値をプロットする。ΔＲＬＵは、抗ＯＸ４０抗体のＲＬＵからアイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いたものを表す。図１２Ｂでは、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ｐａｂ２１９３－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体、又はＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体の漸増濃度に対するＲＬＵ値をプロットする。

【図13AB】図１３Ａは、フローサイトメトリーによって計測したときの、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズによって活性化した健常ドナーのｎＴｒｅｇ、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞上のヒトＯＸ４０のΔＭＦＩを示す棒グラフである。ΔＭＦＩは抗ＯＸ４０抗体のＭＦＩからアイソタイプ対照のＭＦＩを差し引いたものを表す。使用した抗ＯＸ４０抗体は、ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＯＸ４０抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ：ＡＣＴ３５；カタログ：３５０００４；ロット：Ｂ１８１０９０）であった。図１３Ｂは、２人の健常ドナーの活性化ｎＴｒｅｇ及びエフェクターＴ細胞上のヒトＯＸ４０のΔＭＦＩを示す棒グラフである。細胞を市販の抗ＯＸ４０抗体（ＢＥＲ－ＡＣＴ３５クローン）又はアイソタイプ対照抗体で染色し、フローサイトメトリーを用いて分析した。図１３Ｃは、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）レポーター細胞株を使用して抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９を調べたグラフである。ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ／Ｖ多型）を過剰発現するジャーカットＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞を活性化初代ｎＴｒｅｇ及びエフェクターＴ細胞と共にｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照の存在下において３７℃で２０時間共培養した。２０時間後、ＦｃγＲＩＩＩＡ結合を表す相対発光単位（ＲＬＵ）を記録した。ΔＲＬＵは、抗ＯＸ４０抗体のＲＬＵからアイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いたものを表す。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。示されるデータは、３ドナーの細胞を使用した実験の代表である。図１３Ｄは図１３Ｃと同様であり、修正プロトコルを使用してｐａｂ１９４９－１を試験した研究の結果を示す。

【図13CD】図１３Ａは、フローサイトメトリーによって計測したときの、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズによって活性化した健常ドナーのｎＴｒｅｇ、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞上のヒトＯＸ４０のΔＭＦＩを示す棒グラフである。ΔＭＦＩは抗ＯＸ４０抗体のＭＦＩからアイソタイプ対照のＭＦＩを差し引いたものを表す。使用した抗ＯＸ４０抗体は、ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＯＸ４０抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ：ＡＣＴ３５；カタログ：３５０００４；ロット：Ｂ１８１０９０）であった。図１３Ｂは、２人の健常ドナーの活性化ｎＴｒｅｇ及びエフェクターＴ細胞上のヒトＯＸ４０のΔＭＦＩを示す棒グラフである。細胞を市販の抗ＯＸ４０抗体（ＢＥＲ－ＡＣＴ３５クローン）又はアイソタイプ対照抗体で染色し、フローサイトメトリーを用いて分析した。図１３Ｃは、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）レポーター細胞株を使用して抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９を調べたグラフである。ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ／Ｖ多型）を過剰発現するジャーカットＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞を活性化初代ｎＴｒｅｇ及びエフェクターＴ細胞と共にｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照の存在下において３７℃で２０時間共培養した。２０時間後、ＦｃγＲＩＩＩＡ結合を表す相対発光単位（ＲＬＵ）を記録した。ΔＲＬＵは、抗ＯＸ４０抗体のＲＬＵからアイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いたものを表す。エラーバーは標準偏差を表す（ｎ＝２）。示されるデータは、３ドナーの細胞を使用した実験の代表である。図１３Ｄは図１３Ｃと同様であり、修正プロトコルを使用してｐａｂ１９４９－１を試験した研究の結果を示す。

【図14AB】図１４Ａは、フローサイトメトリーによって計測したＯＸ４０の表面発現を示すヒストグラムの組である。健康ヒトドナー（ａ～ｃ、ｎ＝３）の血液又は非小細胞肺癌患者（ＮＳＣＬＣ）（ｄ～ｆ、ｎ＝３）の腫瘍組織から試料を収集した。細胞集団は、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５低、及びＦＯＸＰ３－）又はＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５高、及びＦＯＸＰ３＋）として定義した。図１４Ｂは、図１４Ａに示すものと同様の研究のヒストグラムの対であり、子宮内膜癌試料のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞、又はＴｒｅｇ細胞における表面ＯＸ４０発現を計測する。図１４Ｃは、様々な腫瘍型にわたるＴｒｅｇ細胞及びＴｅｆｆ細胞上のＯＸ４０発現を示す棒グラフである。図１４Ｄは、腫瘍関連ＣＤ４＋Ｔｅｆｆ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるＯＸ４０発現を要約する表である。「－」は陰性発現／発現欠如を表し、「＋」は弱い発現を表し、「＋＋」は中程度の発現を表し、及び「＋＋＋」は高発現を表す。

【図14C】図１４Ａは、フローサイトメトリーによって計測したＯＸ４０の表面発現を示すヒストグラムの組である。健康ヒトドナー（ａ～ｃ、ｎ＝３）の血液又は非小細胞肺癌患者（ＮＳＣＬＣ）（ｄ～ｆ、ｎ＝３）の腫瘍組織から試料を収集した。細胞集団は、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５低、及びＦＯＸＰ３－）又はＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５高、及びＦＯＸＰ３＋）として定義した。図１４Ｂは、図１４Ａに示すものと同様の研究のヒストグラムの対であり、子宮内膜癌試料のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞、又はＴｒｅｇ細胞における表面ＯＸ４０発現を計測する。図１４Ｃは、様々な腫瘍型にわたるＴｒｅｇ細胞及びＴｅｆｆ細胞上のＯＸ４０発現を示す棒グラフである。図１４Ｄは、腫瘍関連ＣＤ４＋Ｔｅｆｆ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるＯＸ４０発現を要約する表である。「－」は陰性発現／発現欠如を表し、「＋」は弱い発現を表し、「＋＋」は中程度の発現を表し、及び「＋＋＋」は高発現を表す。

【図14D】図１４Ａは、フローサイトメトリーによって計測したＯＸ４０の表面発現を示すヒストグラムの組である。健康ヒトドナー（ａ～ｃ、ｎ＝３）の血液又は非小細胞肺癌患者（ＮＳＣＬＣ）（ｄ～ｆ、ｎ＝３）の腫瘍組織から試料を収集した。細胞集団は、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５低、及びＦＯＸＰ３－）又はＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５高、及びＦＯＸＰ３＋）として定義した。図１４Ｂは、図１４Ａに示すものと同様の研究のヒストグラムの対であり、子宮内膜癌試料のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞、又はＴｒｅｇ細胞における表面ＯＸ４０発現を計測する。図１４Ｃは、様々な腫瘍型にわたるＴｒｅｇ細胞及びＴｅｆｆ細胞上のＯＸ４０発現を示す棒グラフである。図１４Ｄは、腫瘍関連ＣＤ４＋Ｔｅｆｆ細胞及びＴｒｅｇ細胞におけるＯＸ４０発現を要約する表である。「－」は陰性発現／発現欠如を表し、「＋」は弱い発現を表し、「＋＋」は中程度の発現を表し、及び「＋＋＋」は高発現を表す。

【図15A】カニクイザルＰＢＭＣに由来する細胞においてｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＧＭ－ＣＳＦの量を示すグラフの組である。Ｃｙｎｏ２及びＣｙｎｏ９は、独立した実験で試験した同じカニクイザルのＰＢＭＣを指すことに留意されたい。他のＰＢＭＣ試料は全て異なるカニクイザルドナーから収集した。

【図15B】カニクイザルＰＢＭＣに由来する細胞においてｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＧＭ－ＣＳＦの量を示すグラフの組である。Ｃｙｎｏ２及びＣｙｎｏ９は、独立した実験で試験した同じカニクイザルのＰＢＭＣを指すことに留意されたい。他のＰＢＭＣ試料は全て異なるカニクイザルドナーから収集した。

【図16A】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－１７の量を示す。

【図16B】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－１７の量を示す。

【図17A】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＴＮＦβの量を示す。

【図17B】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＴＮＦβの量を示す。

【図18A】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－５の量を示す。

【図18B】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－５の量を示す。

【図19A】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－１０の量を示す。

【図19B】図１５Ａ及び図１５Ｂと同様であり、ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションによって誘導された分泌ＩＬ－１０の量を示す。

【図20】ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激時の初代カニクイザルＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１の機能的活性を調べたアッセイの結果を示すグラフの対である。２匹のカニクイザルドナーのＰＢＭＣによって分泌されたＩＬ－２の量をｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーションに対してプロットする。

【図21】ヒトＯＸ４０アラニン突然変異体を発現する１６２４－５細胞に対するモノクローナル抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１及びｐａｂ１９２８の結合を要約する表である。

【発明を実施するための形態】

【0150】

本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、且つＯＸ４０活
性を調節する抗体（例えば、モノクローナル抗体）が提供される。例えば、一態様におい
て、本明細書には、ＯＸ４０に特異的に結合し、且つ１つ以上のＯＸ４０活性を増強する
か、誘導するか、又は増加させる抗体が提供される。例えば、別の態様において、本明細
書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、且つ１つ以上のＯＸ４０
活性を不活性化するか、低下させるか、又は阻害する抗体が提供される。具体的な実施形
態において、本抗体は単離されている。

【0151】

また、かかる抗体をコードする相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離核酸（ポリヌクレオ
チド）も提供される。更に、かかる抗体をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベ
クター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）が提供される。また、か
かる抗体を作製する方法も提供される。他の態様において、本明細書には、ＯＸ４０活性
を誘導するか、増加させるか、又は増強し、及び癌など、ある種の病態を治療するための
方法及び使用が提供される。更に、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性を不活性化す
るか、低下させるか、又は阻害し、及び炎症性又は自己免疫性疾患及び障害など、ある種
の病態を治療するための方法及び使用が提供される。関連する組成物（例えば、医薬組成
物）、キット、及び検出方法も提供される。

【0152】

５．１用語
本明細書で使用されるとき、用語「約」及び「近似的」は、数値又は数値範囲を修飾し
て用いられるとき、その値又は範囲よりも５％～１０％上方及び５％～１０％下方の偏差
が、記載される値又は範囲の意図された意味の範囲内に留まることを示す。

【0153】

本明細書で使用されるとき、例えば所与の実験において、又は複数回の実験からの平均
値を用いたとき、指定される定義域にわたってＡの増加に伴いＢが実質的に増加する場合
、ＢはＡ値の指定される定義域にわたってＡの「実質的増加関数」である。この定義は、
指定されるＡの値に対応するＢの値が、任意のより低いＡの値に対応するＢの値と比べて
最大１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、又は２０％低いことを許容する。

【0154】

本明細書で使用されるとき、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「抗体（ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ）」は専門用語であり、本明細書では同義的に使用することができ、ある抗
原と特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を指す。

【0155】

抗体には、例えば、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、リ
サーフェシング抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖及び２つの軽
鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖
二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、イントラボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、シングル
ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィ
ボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イデ
ィオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、二重特異性抗体、及び多重
特異性抗体が含まれ得る。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体はポリク
ローナル抗体集団を指す。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＤ、ＩｇＡ、又はＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、
ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、又はＩｇＡ_２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａ又は
ＩｇＧ_２ｂ）の免疫グロブリン分子であってよい。特定の実施形態において、本明細書に
記載される抗体はＩｇＧ抗体、又はそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、又は
ＩｇＧ_４）又はサブクラスである。具体的な実施形態において、本抗体はヒト化モノクロ
ーナル抗体である。別の具体的な実施形態において、本抗体は、例えば免疫グロブリンで
あるヒトモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗
体は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、又はＩｇＧ_４抗体である。

【0156】

本明細書で使用されるとき、用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結
合部位」、及び類似の用語は、抗体分子のうち、抗体分子に抗原に対するその特異性を付
与するアミノ酸残基（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む部分を指す。抗原結合
領域は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、又はハムスター）及びヒトなど、任意の動
物種に由来し得る。

【0157】

本明細書で使用されるとき、用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は同義的に使用さ
れ、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には、抗体間で配列が広範
に異なり、且つ特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に用いられる抗体の
一部分、概して軽鎖又は重鎖の一部分、典型的には成熟重鎖におけるアミノ末端約１１０
～１２０アミノ酸又は１１０～１２５アミノ酸及び成熟軽鎖における約９０～１１５アミ
ノ酸を指す。配列の変異性は相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中している一
方、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれ
る。いかなる特定の機構又は理論によっても拘束されることを望むものではないが、軽鎖
及び重鎖のＣＤＲが抗体の抗原との相互作用及び特異性に主として関与するものと考えら
れる。特定の実施形態において、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態におい
て、可変領域はげっ歯類又はマウスＣＤＲとヒトフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。
詳細な実施形態において、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。
特定の実施形態において、可変領域はげっ歯類又はマウスＣＤＲと霊長類（例えば、非ヒ
ト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。

【0158】

用語「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」は、抗体の軽鎖可変領域を指して同義的に使用され
る。

【0159】

用語「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」は、抗体の重鎖可変領域を指して同義的に使用され
る。

【0160】

用語「Ｋａｂａｔ付番」及び同様の用語は当該技術分野において認識されており、抗体
の重鎖及び軽鎖可変領域、又はその抗原結合部分のアミノ酸残基の付番方式を指す。特定
の態様において、抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ付番方式に従い決定することができる（例え
ば、ＫａｂａｔＥＡ＆ＷｕＴＴ（１９７１）ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃｉ１９
０：３８２－３９１及びＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ
，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈ
ａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１
－３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番方式を用いると、抗体重鎖分子内のＣＤＲ
は、典型的にはアミノ酸位置３１～３５（任意選択で３５の後に１つ又は２つの追加的な
アミノ酸（Ｋａｂａｔ付番スキームで３５Ａ及び３５Ｂと称される）が含まれ得る）（Ｃ
ＤＲ１）、アミノ酸位置５０～６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５～１０２（ＣＤ
Ｒ３）に存在する。Ｋａｂａｔ付番方式を用いると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的
にはアミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６（ＣＤＲ２）、及び
アミノ酸位置８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態において、本明細書
に記載される抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ付番スキームにより決定される。

【0161】

本明細書で使用されるとき、用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は同義的であり、
その当該技術分野で一般的な意味を有する。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接は関
与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用など、様々なエフェクター機能を呈し得る抗体部分
、例えば軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常
領域は、概して免疫グロブリン可変ドメインと比べてより保存されたアミノ酸配列を有す
る。

【0162】

本明細書で使用されるとき、用語「重鎖」は、抗体に関連して使用されるとき、定常ド
メインのアミノ酸配列に基づき任意の異なるタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（
δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指すことができ、これは、
ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含めた、そ
れぞれ抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスを生じさせる。

【0163】

本明細書で使用されるとき、用語「軽鎖」は、抗体に関連して使用されるとき、定常ド
メインのアミノ酸配列に基づき任意の異なるタイプ、例えば、カッパ（κ）又はラムダ（
λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野において周知である。具体的
な実施形態において、軽鎖はヒト軽鎖である。

【0164】

「結合親和性」は、概して、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パート
ナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強度を指す。特に指示がな
い限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗
体及び抗原）間の１：１相互作用を反映する固有結合親和性を指す。分子Ｘのそのパート
ナーＹに対する親和性は、概して解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表され得る。親和性は、限定
はされないが、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含め、当該技術分野
において公知の幾つもの方法で計測及び／又は表現することができる。Ｋ_Ｄはｋ_ｏｆｆ／
ｋ_ｏｎの商から計算され、一方、Ｋ_Ａはｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは
（例えば、抗原に対する抗体の）会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは（例えば、抗原に対す
る抗体の）解離を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）又はＫｉｎ
ＥｘＡなどの当業者に公知の技法によって決定することができる。

【0165】

本明細書で使用されるとき、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を
有するアミノ酸残基に置き換えられているものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファ
ミリーが当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（
例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グル
タミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、
スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン
、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分
枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシ
ン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。特
定の実施形態では、抗体のＣＤＲ内又はフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸残基
を同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えることができる。

【0166】

本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は専門用語であり、抗体が特異的に結合す
ることのできる抗原の限局的な領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続
するアミノ酸であってもよく（線状又は連続エピトープ）、又はエピトープは、例えば、
１つ又は複数のポリペプチドの２つ以上の非連続的な領域が一体となってもよい（立体、
非線状、不連続、又は非隣接エピトープ）。特定の実施形態において、抗体が結合するエ
ピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学的研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量
分析法（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析法）と併せた水素
／重水素交換、アレイベースのオリゴ－ペプチドスキャニングアッセイ、及び／又は突然
変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）により決定すること
ができる。Ｘ線結晶学については、当該技術分野における公知の方法のいずれを用いて結
晶化を達成してもよい（例えば、ＧｉｅｇｅＲｅｔａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ
ＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４）
：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９９０）ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ
１８９：１－２３；ＣｈａｙｅｎＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２６９
－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９７６）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５１：６
３００－６３０３）。抗体：抗原結晶は周知のＸ線回折技法を用いて研究することができ
、Ｘ－ＰＬＯＲなどのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる（Ｙ
ａｌｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，配布元ＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｉｍｕｌａｔ
ｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．；例えば、ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ
１１４＆１１５，ｅｄｓＷｙｃｋｏｆｆＨＷｅｔａｌ．，；米国特許出願公開第
２００４／００１４１９４号明細書を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇ
ｎｅＧ（１９９３）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａ
ｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：３７－６０；ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９７）Ｍｅｔ
ｈＥｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄＣａｒｔｅｒＣＷ；Ｒｏｖｅ
ｒｓｉＰｅｔａｌ．，（２０００）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉ
ｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５６（Ｐｔ１０）：１３１６－１３２３）。突然変異
誘発マッピング研究は、当業者に公知の任意の方法を用いて達成することができる。アラ
ニンスキャニング突然変異誘発法を含めた突然変異誘発法の説明については、例えば、Ｃ
ｈａｍｐｅＭｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７０：１３８
８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＢＣ＆ＷｅｌｌｓＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。具体的な実施形態において、抗体
のエピトープはアラニンスキャニング突然変異誘発研究を用いて決定される。

【0167】

本明細書で使用されるとき、用語「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する
」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」は、抗体の二関連して、類似の用
語であり、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子を（かかる結合が
当業者によって理解されるとおり）指す。例えば、ある抗原に特異的に結合する分子は、
他のペプチド又はポリペプチドに対して、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録
商標）、ＫｉｎＥｘＡ３０００機器（ＳａｐｉｄｙｎｅＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂ
ｏｉｓｅ，ＩＤ）、又は当該技術分野において公知の他のアッセイによって決定するとき
、概してより低い親和性で結合し得る。具体的な実施形態において、ある抗原に免疫特異
的に結合する分子は、その分子が別の抗原に非特異的に結合するときのＫ_Ａよりも少なく
とも２対数、２．５対数、３対数、４対数又はそれを超えて高いＫ_Ａでその抗原に結合す
る。抗ＯＸ４０抗原結合ドメインとヒト免疫細胞が発現する抗原に特異的に結合しない第
２の抗原結合ドメインとを有する抗体に関連して、用語「免疫特異的に結合する」、「免
疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」は、２つ以上
の抗原（即ち、ＯＸ４０及び第２の抗原結合ドメインに関連する抗原）に対して個別的な
特異性を有する抗体を指す。

【0168】

別の具体的な実施形態において、抗原に免疫特異的に結合する分子は、同様の結合条件
下で他のタンパク質と交差反応しない。別の具体的な実施形態において、抗原に免疫特異
的に結合する分子は他の非ＯＸ４０タンパク質と交差反応しない。具体的な実施形態にお
いて、本明細書には、別の無関係の抗原に対するよりも高い親和性でＯＸ４０に結合する
抗体が提供される。特定の実施形態において、本明細書には、例えばラジオイムノアッセ
イ、表面プラズモン共鳴、又は結合平衡除外アッセイによって計測したとき、別の無関係
の抗原に対するよりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５
％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はそれを超え
て高い親和性でＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合する抗体が提供される。具体的
な実施形態において、無関係の非ＯＸ４０タンパク質に対する本明細書に記載される抗Ｏ
Ｘ４０抗体の結合程度は、例えばラジオイムノアッセイによって計測したとき、ＯＸ４０
タンパク質に対する抗体の結合の１０％、１５％、又は２０％未満である。

【0169】

具体的な実施形態において、本明細書には、別のＯＸ４０種に対するよりも高い親和性
でヒトＯＸ４０に結合する抗体が提供される。特定の実施形態において、本明細書には、
例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、又は結合平衡除外アッセイによって
計測したとき、別のＯＸ４０種に対するよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、
３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％又はそれを
超えて高い親和性でヒトＯＸ４０に結合する抗体が提供される。具体的な実施形態におい
て、ヒトＯＸ４０に結合する本明細書に記載される抗体は、別のＯＸ４０タンパク質種に
対して、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、又は結合平衡除外アッセイ
によって計測したとき、ヒトＯＸ４０タンパク質に対する抗体の結合の１０％、１５％、
又は２０％未満で結合し得る。

【0170】

本明細書で使用されるとき、用語「ＯＸ４０受容体」又は「ＯＸ４０」又は「ＯＸ４０
ポリペプチド」は、限定はされないが、天然ＯＸ４０、ＯＸ４０のアイソフォーム、又は
ＯＸ４０の種間ＯＸ４０ホモログを含めたＯＸ４０を指す。ＯＸ４０は、腫瘍壊死因子受
容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＡＣＴ３５、ＣＤ１３４、ＩＭ
Ｄ１６、及びＴＸＧＰ１Ｌとしても知られる。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＢＣ１０
５０７０及びＢＣ１０５０７２がヒトＯＸ４０核酸配列を提供する。Ｒｅｆｓｅｑ番号Ｎ
Ｐ＿００３３１８．１がヒトＯＸ４０のアミノ酸配列を提供する。ヒトＯＸ４０の未成熟
アミノ酸配列は配列番号１７として提供される。ヒトＯＸ４０の成熟アミノ酸配列は配列
番号５５として提供される。ヒトＯＸ４０はＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅによってＧｅｎｅＩ
Ｄ：７２９３と指定される。ＲｅｆＳｅｑ番号ＸＭ＿００５５４５１２２．１及びＸＰ＿
００５５４５１７９．１は、それぞれ予想カニクイザルＯＸ４０核酸配列及びアミノ酸配
列を提供する。ヒトＯＸ４０の可溶性アイソフォームも報告されている（Ｔａｙｌｏｒ
Ｌｅｔａｌ．，（２００１）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ２５５：６７－
７２）。本明細書で使用されるとき、用語「ヒトＯＸ４０」は、配列番号５５のポリペプ
チド配列を含むＯＸ４０を指す。

【0171】

本明細書で使用されるとき、用語「ＯＸ４０リガンド」及び「ＯＸ４０Ｌ」は、腫瘍壊
死因子リガンドスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）を指す。ＯＸ４０Ｌは、
別名ＣＤ２５２、ＧＰ３４、ＴＸＧＰ１、及びＣＤ１３４Ｌとして知られる。ＧｅｎＢａ
ｎｋ（商標）受託番号Ｄ９０２２４．１及びＡＫ２９７９３２．１が例示的ヒトＯＸ４０
Ｌ核酸配列を提供する。ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００３３１７．１及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒ
ｏｔ受託番号Ｐ２３５１０－１がアイソフォーム１の例示的ヒトＯＸ４０Ｌアミノ酸配列
を提供する。ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００１２８４４９１．１及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ
受託番号Ｐ２３５１０－２がアイソフォーム２の例示的ヒトＯＸ４０Ｌアミノ酸配列を提
供する。ヒトＯＸ４０ＬはＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅによってＧｅｎｅＩＤ：７２９２と指
定される。詳細な実施形態において、ＯＸ４０Ｌは配列番号４２のヒトＯＸ４０Ｌアイソ
フォーム１又は配列番号４３のアイソフォーム２である。

【0172】

本明細書で使用されるとき、用語「宿主細胞」は、任意のタイプの細胞、例えば、初代
細胞、培養下の細胞、又は細胞株由来の細胞であってよい。具体的な実施形態において、
用語「宿主細胞」は、核酸分子がトランスフェクトされた細胞及びかかる細胞の子孫又は
潜在的子孫を指す。かかる細胞の子孫は、例えば後続の世代で起こり得る突然変異若しく
は環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みに起因して、核酸分子をトラ
ンスフェクトされた親細胞と同一ではないこともある。

【0173】

本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、対象への療法薬投与に関連して、所望
の予防又は治療効果を実現する療法薬の量を指す。有効量の例は以下の第５．５．１．３
節に提供される。

【0174】

本明細書で使用されるとき、用語「対象」と「患者」とは同義的に使用される。対象は
動物であってもよい。一部の実施形態において、対象は、非霊長類（例えば、雌ウシ、ブ
タ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等）又は霊長類（例えば、サル又はヒト）、最も好ましく
はヒトなどの哺乳動物である。一部の実施形態において、対象はカニクイザルである。特
定の実施形態において、かかる用語は非ヒト動物（例えば、ブタ、ウマ、雌ウシ、ネコ、
又はイヌなどの非ヒト動物）を指す。一部の実施形態において、かかる用語はペット又は
農業動物を指す。具体的な実施形態において、かかる用語はヒトを指す。

【0175】

本明細書で使用されるとき、試験抗体と第１の抗原との間の結合は、試験抗体と第１の
抗原との間の結合が、例えばフローサイトメトリー分析で計測したとき、試験抗体と第２
の抗原との間の結合と比べて少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、又は
８０％低下する場合、試験抗体と第２の抗原との間の結合と比べて「実質的に弱まってい
る」。

【0176】

２つの配列（例えば、アミノ酸配列又は核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は
また、数学的アルゴリズムを用いて達成することもできる。２つの配列の比較に利用され
る数学的アルゴリズムの具体的な非限定例は、ＫａｒｌｉｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳ
Ｆ（１９９３）ＰＮＡＳ９０：５８７３－５８７７にあるとおり修正した、Ｋａｒｌｉ
ｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ８７：２２６４－２２６８のア
ルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（
１９９０）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプロ
グラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチド
プログラムパラメータを例えばスコア＝１００、ワード長＝１２に設定して実施すること
により、本明細書に記載される核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。
ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータを例えばスコア５０、
ワード長＝３に設定して実施することにより、本明細書に記載されるタンパク質分子と相
同なアミノ酸配列を得ることができる。比較のためギャップ付きアラインメントを達成す
るには、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲ
ｅｓ２５：３３８９３４０２に記載されるとおりのギャップ付きＢＬＡＳＴを利用す
ることができる。或いは、ＰＳＩＢＬＡＳＴを用いて、分子間の距離関係を検出する反
復検索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴ、及びＰ
ＳＩＢｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えば、ＸＢＬ
ＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワ
ールドワイドウェブ、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ上の国立バイオテクノロジー情
報センター（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズム
の別の具体的な非限定例は、ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯ
Ｓ４：１１１７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライン
メントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）
に組み込まれている。アミノ酸配列の比較にＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡ
Ｍ１２０重み付け残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティー
を使用することができる。

【0177】

２つの配列間の同一性パーセントは、上記に記載されるものと同様の技法を、ギャップ
を許容して又は許容せずに用いて決定することができる。同一性パーセントの計算では、
典型的には完全な一致のみがカウントされる。

【0178】

本明細書で使用されるとき、用語「ヒト免疫細胞が発現する抗原に結合しない抗原結合
ドメイン」は、免疫応答において役割を果たす造血由来の任意のヒト細胞が発現する抗原
に抗原結合ドメインが結合しないことを意味する。免疫細胞には、Ｂ細胞及びＴ細胞など
のリンパ球；ナチュラルキラー細胞；並びに単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞
、好塩基球、及び顆粒球などの骨髄性細胞が含まれる。例えば、かかる結合ドメインであ
れば、ＯＸ４０、又はヒト免疫細胞が発現するＴＮＦ受容体スーパーファミリーの任意の
他のメンバーに結合しないであろう。しかしながら、抗原結合ドメインは、限定はされな
いが、他の生物及び非ヒトで発現する抗原（即ち、非ヒト抗原）；野生型ヒト細胞が発現
しない抗原；又はウイルス抗原、限定はされないが、ヒト細胞に感染しないウイルスの抗
原、又は非感染ヒト免疫細胞に存在しないウイルス抗原などの抗原に結合することができ
る。

【0179】

５．２抗体
ある具体的な態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異
的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体、例えば、キメラ、ヒト化、又はヒト抗
体など）が提供される。

【0180】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体はヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及びヒト
ＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体はヒ
トＣＤ４＋細胞及びカニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞に結合する。

【0181】

詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、表１に示されるとおりの、
（ａ）アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）を含むか、それか
らなるか、又はそれから本質的になるＶＬＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）を含むか、それからなるか、又はそれ
から本質的になるＶＬＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）を含むか、それからなるか、又は
それから本質的になるＶＬＣＤＲ３と
を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0182】

一部の実施形態において、本抗体は、本明細書に記載されるＶＬフレームワーク領域を
含む。具体的な実施形態において、本抗体は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク
領域（ＦＲ）を含む。

【0183】

別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、表２に示されるとおりの、
（ａ）アミノ酸配列ＧＳＡＭＨ（配列番号４）を含むか、それからなるか、又はそれから
本質的になるＶＨＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）を含むか、
それからなるか、又はそれから本質的になるＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）を含むか、それからなるか、又
はそれから本質的になるＶＨＣＤＲ３と
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0184】

一部の実施形態において、本抗体は、本明細書に記載されるＶＨフレームワークを含む
。具体的な実施形態において、本抗体は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域
を含む。

【0185】

【表1】

【0186】

【表2】

【0187】

【表3】

【0188】

【表4】

【0189】

具体的な実施形態において、本抗体は、表３に示される４つのＶＬフレームワーク領域
（ＦＲ）と表４に示される４つのＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。

【0190】

特定の実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的
に結合し、且つ例えば表１及び表２に示されるとおりの（即ち、配列番号１～６）、ｐａ
ｂ１９４９又はｐａｂ２０４４の軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ及び重鎖可変領域（ＶＨ）
ＣＤＲを含む抗体が提供される。特定の実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例
えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、且つ例えば表１及び表２に示されるとおりの（
即ち、配列番号１～６）、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４の軽鎖可変領域（ＶＬ）Ｃ
ＤＲ及び重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲと表３及び表４に示されるＶＬフレームワーク領域
及びＶＨフレームワーク領域とを含む抗体が提供される。

【0191】

詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、表１に示されるとおりのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及
びＶＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と表３に示されるＶＬフレームワーク領域
とを含む。

【0192】

特定の実施形態において、抗体は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に由
来する軽鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列はＩＧＫＶ２－２８^＊０１
（配列番号１８）のものである。

【0193】

詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、表２に示されるとおりのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及
びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と表４に示されるＶＨフレームワーク領域
とを含む。

【0194】

特定の実施形態において、本抗体は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に
由来する重鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列はＩＧＨＶ３－７３^＊０
１（配列番号１９）のものである。

【0195】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗
体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。具体的な実施形態におい
て、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体は、配列番号１５のアミ
ノ酸配列からなるか又はそれから本質的になるＶＬドメインを含む。

【0196】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体
は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。一部の実施形態において、
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体は、配列番号１６のアミノ酸
配列からなるか又はそれから本質的になるＶＨドメインを含む。

【0197】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体
はＶＨドメインとＶＬドメインとを含み、このＶＨドメイン及びＶＬドメインは、それぞ
れ配列番号１６及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体はＶＨドメインとＶＬドメインと
を含み、このＶＨドメイン及びＶＬドメインは、それぞれ配列番号１６及び配列番号１５
のアミノ酸配列からなるか又はそれから本質的になる。

【0198】

特定の態様において、本明細書に記載される抗体は、そのＶＬドメイン単独、又はその
ＶＨドメイン単独によるか、又はその３つのＶＬＣＤＲ単独、又はその３つのＶＨＣ
ＤＲ単独によって記載し得る。例えば、ヒト軽鎖又は重鎖ライブラリからそれぞれ相補的
軽鎖又は重鎖を同定して、元の抗体と同程度か又はそれより高い親和性を有するヒト化抗
体変異体を得ることによるマウス抗αｖβ３抗体のヒト化について記載しているＲａｄｅ
ｒＣｅｔａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ９５：８９１０－８９１５（全体として
参照により本明細書に援用される）を参照されたい。また、特定のＶＬドメイン（又はＶ
Ｈドメイン）を使用し且つ相補的可変ドメインに関してライブラリをスクリーニングする
ことによる特異的抗原に結合する抗体を作製する方法について記載しているＣｌａｃｋｓ
ｏｎＴｅｔａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８（全体と
して参照により本明細書に援用される）も参照されたい。このスクリーンにより、特定の
ＶＨドメインに対する１４個の新規パートナー及び特定のＶＬドメインに対する１３個の
新規パートナーが生じ、これらは、ＥＬＩＳＡによって決定するとき、強力な結合剤であ
った。また、特定のＶＨドメインを使用し且つ相補的ＶＬドメインに関してライブラリ（
例えば、ヒトＶＬライブラリ）をスクリーニングすることによる特異的抗原に結合する抗
体を作製する方法について記載しているＫｉｍＳＪ＆ＨｏｎｇＨＪ，（２００７）Ｊ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ４５：５７２－５７７（全体として参照により本明細書に援用さ
れる）も参照されたい。これらの選択されたＶＬドメイン使用して、次に追加の相補的（
例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択をガイドし得る。

【0199】

特定の態様において、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を参照するＣ
ｈｏｔｈｉａ付番スキームに従い決定することができる（例えば、ＣｈｏｔｈｉａＣ＆
ＬｅｓｋＡＭ，（１９８７），ＪＭｏｌＢｉｏｌ１９６：９０１－９１７；Ａｌ
－ＬａｚｉｋａｎｉＢｅｔａｌ．，（１９９７）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２７３：
９２７－９４８；ＣｈｏｔｈｉａＣｅｔａｌ．，（１９９２）ＪＭｏｌＢｉｏ
ｌ２２７：７９９－８１７；ＴｒａｍｏｎｔａｎｏＡｅｔａｌ．，（１９９０）
ＪＭｏｌＢｉｏｌ２１５（１）：１７５－８２；及び米国特許第７，７０９，２２
６号明細書を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ付番慣習を使用するとき、Ｃｈｏ
ｔｈｉａＣＤＲ－Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６～３２、３３、又は３４に位置し、Ｃ
ｈｏｔｈｉａＣＤＲ－Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２～５６に位置し、及びＣｈｏｔｈ
ｉａＣＤＲ－Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５～１０２に位置する一方、Ｃｈｏｔｈｉａ
ＣＤＲ－Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４～３４に位置し、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ－Ｌ
２ループは軽鎖アミノ酸５０～５６に位置し、及びＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ－Ｌ３ループ
は軽鎖アミノ酸８９～９７に位置する。Ｋａｂａｔ付番慣習を使用して付番したときのＣ
ｈｏｔｈｉａＣＤＲ～Ｈ１ループの終わりは、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で
異なる（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであ
る；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わる；３５Ａのみが存在する場
合、ループは３３で終わる；３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終
わる）。

【0200】

特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結
合し、且つｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬのＣｈｏｔｈｉａＶＬＣＤＲを
含む抗体が提供される。特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）に特異的に結合し、且つｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＨのＣｈｏｔｈ
ｉａＶＨＣＤＲを含む抗体が提供される。特定の態様において、本明細書には、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、且つｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４
４のＶＬのＣｈｏｔｈｉａＶＬＣＤＲを含み、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４の
ＶＨのＣｈｏｔｈｉａＶＨＣＤＲを含む抗体が提供される。特定の実施形態において
、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗体は１つ以上のＣＤＲを含み
、ここで、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。特定の
実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し
、且つＫａｂａｔＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａＣＤＲとの組み合わせを含む抗体が提供さ
れる。

【0201】

特定の態様において、抗体のＣＤＲは、ＬｅｆｒａｎｃＭ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃＭ－Ｐｅｔ
ａｌ．，（１９９９）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ２７：２０９－２１２に記
載されるとおりのＩＭＧＴ付番方式に従い決定することができる。ＩＭＧＴ付番スキーム
によれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６～３５位にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１～５７位にあり
、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３～１０２位にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７～３２位にあり、ＶＬ
－ＣＤＲ２は５０～５２位にあり、及びＶＬ－ＣＤＲ３は８９～９７位にある。詳細な実
施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、
且つＩＭＧＴ付番方式によって決定されるとおりの、例えば、ＬｅｆｒａｎｃＭ－Ｐ（
１９９９）前掲及びＬｅｆｒａｎｃＭ－Ｐｅｔａｌ．，（１９９９）前掲）に記載
されるとおりのｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体が提供される。

【0202】

特定の態様において、抗体のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍＲＭｅｔａｌ．，（
１９９６）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２６２：７３２－７４５に従い決定することができる
。例えば、ＭａｒｔｉｎＡ．“ＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕ
ｃｔｕｒｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＶａｒｉａｂｌｅＤｏｍａ
ｉｎｓ，” ｉｎＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ
ａｎｄＤｕｅｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照されたい。詳細な実施
形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合し、且
つＭａｃＣａｌｌｕｍＲＭｅｔａｌの方法によって決定されるとおりのｐａｂ１９
４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体が提供される。

【0203】

特定の態様において、抗体のＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ルー
プとの間の組み合わせに相当し、且つＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モ
デル化ソフトウェア（ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によ
って用いられているＡｂＭ超可変領域を参照するＡｂＭ付番スキームに従い決定すること
ができる。詳細な実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）
に特異的に結合し、且つＡｂＭ付番スキームによって決定されるとおりのｐａｂ１９４９
又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体が提供される。

【0204】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２、又はＣＤＲ３）及び／又はＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３）
領域に沿った１つ以上のＣＤＲの位置は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免
疫特異的結合が維持されている（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なく
とも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５
％維持されている）限り、１、２、３、４、５、又は６アミノ酸位置だけ異なってもよい
。例えば、一実施形態において、本明細書に記載される抗体のＣＤＲを定義する位置は、
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持されている（例えば、
実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくと
も８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持されている）限り、本明細書に記載
される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４）のＣＤＲ位置と比べてＣＤＲ
のＮ末端及び／又はＣ末端境界を１、２、３、４、５、又は６アミノ酸だけシフトするこ
とにより異なってもよい。別の実施形態において、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例
えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３）及び／又はＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ
２、又はＣＤＲ３）領域に沿った１つ以上のＣＤＲの長さは、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）に対する免疫特異的結合が維持されている（例えば、実質的に、例えば、少なく
とも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０
％、少なくとも９５％維持されている）限り、１、２、３、４、５アミノ酸、又はそれを
超えて異なってもよい（例えば、短くても又は長くてもよい）。

【0205】

一実施形態において、本明細書に記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬ
ＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及び／又はＶＨＣＤＲ３は、ＯＸ４０（
例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持されている（例えば、実質的に、
例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、
少なくとも９０％、少なくとも９５％維持されている）限り、本明細書に記載されるＣＤ
Ｒ（例えば、配列番号１～６）の１つ以上と比べて１、２、３、４、５アミノ酸又はそれ
を超えて短くてもよい。別の実施形態において、本明細書に記載されるＶＬＣＤＲ１、
ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及び／又はＶＨ
ＣＤＲ３は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持されてい
る（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０
％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持されている）限り、本
明細書に記載されるＣＤＲ（例えば、配列番号１～６）の１つ以上と比べて１、２、３、
４、５アミノ酸又はそれを超えて長くてもよい。別の実施形態において、本明細書に記載
されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ
Ｒ２、及び／又はＶＨＣＤＲ３のアミノ末端は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に
対する免疫特異的結合が維持されている（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％
、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なく
とも９５％維持されている）限り、本明細書に記載されるＣＤＲ（例えば、配列番号１～
６）の１つ以上と比較して１、２、３、４、５アミノ酸又はそれを超えて延長されてもよ
い。別の実施形態において、本明細書に記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、Ｖ
ＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及び／又はＶＨＣＤＲ３のカルボキ
シ末端は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持されている
（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％
、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持されている）限り、本明
細書に記載されるＣＤＲ（例えば、配列番号１～６）の１つ以上と比較して１、２、３、
４、５アミノ酸又はそれを超えて延長されてもよい。別の実施形態において、本明細書に
記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨ
ＣＤＲ２、及び／又はＶＨＣＤＲ３のアミノ末端は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に対する免疫特異的結合が維持されている（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５
０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少
なくとも９５％維持されている）限り、本明細書に記載されるＣＤＲ（例えば、配列番号
１～６）の１つ以上と比較して１、２、３、４、５アミノ酸又はそれを超えて短縮されて
もよい。一実施形態において、本明細書に記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、
ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及び／又はＶＨＣＤＲ３のカルボ
キシ末端は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持されてい
る（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０
％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持されている）限り、本
明細書に記載されるＣＤＲ（例えば、配列番号１～６）の１つ以上と比較して１、２、３
、４、５アミノ酸又はそれを超えて短縮されてもよい。当該技術分野において公知の任意
の方法、例えば本明細書に提供される「実施例」の節（第６節）に記載される結合アッセ
イ及び条件を用いて、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に対する免疫特異的結合が維持
されているかどうかを確かめることができる。

【0206】

具体的な態様において、本明細書には、抗体軽鎖及び重鎖、例えば別個の軽鎖及び重鎖
を含む抗体が提供される。軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載される
抗体の軽鎖はκ軽鎖である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体の軽鎖はλ軽鎖である。更に別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体の軽鎖はヒトκ軽鎖又はヒトλ軽鎖である。詳細な実施形態では、ＯＸ４０ポリペプチド（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が配列番号１５に示される配列を含む軽鎖であって、且つ軽鎖の定常領域がヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の詳細な実施形態では、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が配列番号１５に示される配列を含む軽鎖であって、且つ軽鎖の定常領域がヒトλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。具体的な実施形態では、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が配列番号１５に示される配列を含む軽鎖であって、且つ軽鎖の定常領域がヒトκ又はλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は当該技術分野において記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号明細書及びＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）前掲を参照されたい。

【0207】

詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0208】

重鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖は、アルファ
（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得
る。別の具体的な実施形態では、記載される抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ
（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含み得る。詳細な実施
形態では、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載さ
れる抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が配列番号１６に示される配列を含み得る重鎖
であって、重鎖の定常領域がヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む重鎖を
含む。具体的な実施形態では、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本
明細書に記載される抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が配列番号１６に示される配列
を含む重鎖であって、重鎖の定常領域が本明細書に記載される又は当該技術分野において
公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む重鎖を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は当該技
術分野において記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号明細書及びＫ
ａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）前掲を参照されたい。

【0209】

詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。詳細
な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に
記載される抗体は、配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形
態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載され
る抗体は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態におい
て、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は
、配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態において、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番
号５１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態において、ＯＸ４０（例
えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号６２に
示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒ
トＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号５２に示される
アミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４
０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号６３に示されるアミノ酸
配列を含む重鎖を含む。

【0210】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含むＶＬド
メイン及びＶＨドメインを含み、定常領域がＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、
又はＩｇＹ免疫グロブリン分子、又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、又
はＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態に
おいて、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載され
る抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメイ
ンを含み、定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、又はＩｇＹ免疫グロ
ブリン分子、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ
_１、及びＩｇＡ_２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａ及びＩｇＧ_２ｂ）の免
疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。詳細な実施形態において、定常領域
は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、又はＩｇＹ免疫グロブリン分子、任
意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ
_２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａ及びＩｇＧ_２ｂ）の免疫グロブリン分
子の定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0211】

別の具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結
合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含むＶ
Ｌドメイン及びＶＨドメインを含み、定常領域が、ヒトＩｇＧ_１（例えば、アロタイプＧ
１ｍ３、Ｇ１ｍ１７，１又はＧ１ｍ１７，１，２）、ヒトＩｇＧ_２、又はヒトＩｇＧ_４の
定常領域のアミノ酸配列を含む。詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ
４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意
のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、定常領域が、ヒトＩｇＧ_１
（アロタイプＧｌｍ３）の定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域の非限定的な例
は当該技術分野において記載されており、例えば、ＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（
１９９１）前掲を参照されたい。

【0212】

別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号２１
に示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば
、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号２０に示さ
れるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む
。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号２３
に示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば
、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号２０に示さ
れるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む
。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号５１
又は５２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。別の実施形態において、ＯＸ４０
（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、配列番号２
０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号６２又は６３に示されるアミノ酸配列を
含む重鎖とを含む。

【0213】

特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２ドメイン
（ヒトＩｇＧ_１の残基２３１～３４０）及び／又はＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基
３４１～４４７）及び／又はヒンジ領域（Ｋａｂａｔ付番方式（例えば、ＫａｂａｔのＥ
Ｕインデックス）に従う付番による））に１、２個、又はそれを超える突然変異（例えば
、アミノ酸置換）を導入して、血清中半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合及び／又は抗原
依存性細胞傷害など、抗体の１つ以上の機能特性を改変する。

【0214】

特定の実施形態では、例えば米国特許第５，６７７，４２５号明細書に記載されるとお
り、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に１、２個、又はそれを超える突然変異（
例えば、アミノ酸置換）を導入して、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数を改変する
（例えば、増加又は減少させる）。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域におけるシステイン残基
の数を改変すると、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリが促進され、又は抗体の安定性が
改変され得る（例えば、増加又は減少し得る）。

【0215】

一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２ドメイン
（ヒトＩｇＧ_１の残基２３１～３４０）及び／又はＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基
３４１～４４７）及び／又はヒンジ領域（Ｋａｂａｔ付番方式（例えば、ＫａｂａｔのＥ
Ｕインデックス）に従う付番による））に１、２個、又はそれを超える突然変異（例えば
、アミノ酸置換）を導入して、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化
Ｆｃ受容体）に対する抗体の親和性を増加又は低下させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親
和性を低下又は増加させる抗体のＦｃ領域の突然変異及びＦｃ受容体又はその断片へのか
かる突然変異の導入技法は当業者に公知である。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を改変
するために作製し得る抗体のＦｃ受容体における突然変異の例は、例えば、Ｓｍｉｔｈ
Ｐｅｔａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ１０９：６１８１－６１８６、米国特許第６
，７３７，０５６号明細書、及び国際公開第０２／０６０９１９号パンフレット；同第９
８／２３２８９号パンフレット；及び同第９７／３４６３１号パンフレット（これらは参
照により本明細書に援用される）に記載されている。

【0216】

具体的な実施形態では、ＩｇＧ定常ドメイン、又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは
Ｆｃ又はヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に１、２個、又はそれを超えるアミノ酸突然変異（
即ち、置換、挿入又は欠失）を導入して、抗体のインビボ半減期を改変する（例えば、低
下又は増加させる）。抗体のインビボ半減期を改変し得る（例えば、低下又は増加させ得
る）突然変異の例については、例えば、国際公開第０２／０６０９１９号パンフレット；
同第９８／２３２８９号パンフレット；及び同第９７／３４６３１号パンフレット；及び
米国特許第５，８６９，０４６号明細書、同第６，１２１，０２２号明細書、同第６，２
７７，３７５号明細書及び同第６，１６５，７４５号明細書を参照されたい。一部の実施
形態では、ＩｇＧ定常ドメイン、又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃ又はヒンジ
－Ｆｃドメイン断片）に１、２個又はそれを超えるアミノ酸突然変異（即ち、置換、挿入
、又は欠失）を導入して、抗体のインビボ半減期を減少させる。他の実施形態では、Ｉｇ
Ｇ定常ドメイン、又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃ又はヒンジ－Ｆｃドメイン
断片）に１、２個又はそれを超えるアミノ酸突然変異（即ち、置換、挿入又は欠失）を導
入して、抗体のインビボ半減期を増加させる。具体的な実施形態では、本抗体は第２の定
常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基２３１～３４０）及び／又は第３の定常（Ｃ
Ｈ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基３４１～４４７）（ＫａｂａｔのＥＵインデックス
（ＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）前掲）に従う付番による）に１つ以上
のアミノ酸突然変異（例えば、置換）を有し得る。具体的な実施形態において、本明細書
に記載される抗体のＩｇＧ_１の定常領域は、２５２位におけるメチオニン（Ｍ）からチロ
シン（Ｙ）への置換、２５４位におけるセリン（Ｓ）からスレオニン（Ｔ）への置換、及
び２５６位におけるスレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換（Ｋａｂａｔにあ
るとおりのＥＵインデックスに従い付番する）を含む。米国特許第７，６５８，９２１号
明細書（参照により本明細書に援用される）を参照されたい。「ＹＴＥ突然変異体」と称
されるこのタイプの突然変異ＩｇＧは、野生型バージョンの同じ抗体と比較して４倍増加
した半減期を呈することが示されている（Ｄａｌｌ’ＡｃｑｕａＷＦｅｔａｌ．，
（２００６）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８１：２３５１４－２４を参照されたい）。特
定の実施形態において、抗体は、２５１～２５７、２８５～２９０、３０８～３１４、３
８５～３８９、及び４２８～４３６位（ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデックスに従
い付番する）にアミノ酸残基の１、２、３個又はそれを超えるアミノ酸置換を含むＩｇＧ
定常ドメインを含む。

【0217】

更なる実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域に１、２個、又はそれを超えるアミ
ノ酸置換を導入して、抗体の１つ又は複数のエフェクター機能を改変する。例えば、アミ
ノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０及び３２２（Ｋａｂ
ａｔにあるとおりのＥＵインデックスに従い付番する）から選択される１つ以上のアミノ
酸を異なるアミノ酸残基に置き換えて、抗体がエフェクターリガンドに対して改変された
親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力は保持したままとなるようにし得る。親和性改
変の対象となるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１成分であり
得る。この手法は、米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０
号明細書に更に詳細に記載されている。一部の実施形態では、定常領域ドメインの欠失又
は不活性化（点突然変異又は他の手段による）により循環抗体のＦｃ受容体結合を低下さ
せて、それにより腫瘍局在を増加させ得る。定常ドメインを欠失又は活性化させて、それ
により腫瘍局在を増加させる突然変異の説明については、例えば、米国特許第５，５８５
，０９７号明細書及び同第８，５９１，８８６号明細書を参照されたい。特定の実施形態
では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入してＦｃ領
域上の潜在的グリコシル化部位を除去してもよく、これによりＦｃ受容体結合を低下させ
得る（例えば、ＳｈｉｅｌｄｓＲＬｅｔａｌ．，（２００１）ＪＢｉｏｌＣｈ
ｅｍ２７６：６５９１－６０４を参照されたい）。様々な実施形態において、本明細書
に記載される抗体の定常領域に、以下の突然変異のうちの１つ以上を作製し得る：Ｎ２９
７Ａ置換；Ｎ２９７Ｑ置換；Ｌ２３５Ａ置換及びＬ２３７Ａ置換；Ｌ２３４Ａ置換及びＬ
２３５Ａ置換；Ｅ２３３Ｐ置換；Ｌ２３４Ｖ置換；Ｌ２３５Ａ置換；Ｃ２３６欠失；Ｐ２
３８Ａ置換；Ｄ２６５Ａ置換；Ａ３２７Ｑ置換；又はＰ３２９Ａ置換（Ｋａｂａｔにある
とおりのＥＵインデックスに従い付番する）。特定の実施形態では、本明細書に記載され
る抗体の定常領域に、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から
選択される突然変異を作製し得る。

【0218】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、Ｎ２９７Ｑ又はＮ２９７Ａ
アミノ酸置換を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む。一実施形態において、本明細書に記
載される抗体は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択
される突然変異を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む。

【0219】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体の定常領域におけるアミノ酸残基
３２９、３３１、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸（Ｋａｂａｔにあるとお
りのＥＵインデックスに従い付番する）は、抗体が改変されたＣ１ｑ結合及び／又は低下
若しくは消失した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように異なるアミノ酸残基に置
き換えることができる。この手法については、米国特許第６，１９４，５５１号明細書（
Ｉｄｕｓｏｇｉｅｅｔａｌ）に更に詳細に記載されている。一部の実施形態では、本
明細書に記載される抗体のＣＨ２ドメインのＮ末端領域におけるアミノ酸位置２３１～２
３８内にある１つ以上のアミノ酸残基を改変して、それにより抗体の補体結合能力を改変
する。この手法については、国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに更に記載され
ている。特定の実施形態では、以下の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、
２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、
２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、
２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、
３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、
３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、
３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、
４３７、４３８、又は４３９（ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデックスに従い付番す
る）にある１つ以上のアミノ酸を突然変異させる（例えば、アミノ酸置換を導入する）こ
とにより、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域を修飾して、抗体が抗体依存性細胞傷害
（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を増加させ、及び／又はＦｃγ受容体に対する抗体の親和性
を増加させる。この手法については、国際公開第００／４２０７２号パンフレットに更に
記載されている。

【0220】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、２６７、３２８位、又はこれ
らの組み合わせ（ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデックスに従い付番する）に突然変
異（例えば、置換）を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む。特定の実施形態において、本
明細書に記載される抗体は、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、及びこれらの組み合わせからなる
群から選択される突然変異（例えば、置換）を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む。特定
の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ突然変異（
例えば、置換）を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む。特定の実施形態において、Ｓ２６
７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ突然変異（例えば、置換）を含むＩｇＧ_１の定常ドメインを含む本明細
書に記載される抗体は、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、又はＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃ
γＲＩＩＢに対して増加した結合親和性を有する。

【0221】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体はＩｇＧ_４抗体の定常領域を含み
、且つ重鎖のアミノ酸残基２２８におけるセリン（ＫａｂａｔにあるとおりのＥＵインデ
ックスに従い付番する）がプロリンに置換されている。

【0222】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体はＩｇＧ_２抗体の定常領域を含み
、且つ重鎖のアミノ酸残基１２７におけるシステイン（Ｋａｂａｔに従い付番する）がセ
リンに置換されている。

【0223】

フコース含量が低下した抗体は、例えばＦｃγＲＩＩＩＡなどのＦｃ受容体に対して増
加した親和性を有することが報告されている。従って、特定の実施形態において、本明細
書に記載される抗体は低下したフコース含量を有するか、又はフコース含量を有しない。
かかる抗体は、当業者に公知の技法を用いて作製することができる。例えば、フコシル化
能が欠損又は欠如した細胞において抗体を発現させることができる。具体的な例では、α
１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株
を使用して、フコース含量が低下した抗体を作製することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅ
ｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低下した抗体の作製に使用
し得るかかるシステムの一例である。或いは、フコース含量が低下した又はフコース含量
を有しない抗体は、例えば、（ｉ）フコシル化を妨げ又は低下させる条件下で細胞を培養
すること；（ｉｉ）翻訳後のフコース除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉ
ｉ）翻訳後の所望の炭水化物の付加、例えば非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後
；又は（ｉｖ）糖タンパク質の精製による、フコシル化されていないその抗体の選択によ
り、作製することができる。フコース含量を有しない又はフコース含量が低下したその抗
体を作製する方法については、例えば、ＬｏｎｇｍｏｒｅＧＤ＆Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ
Ｈ（１９８２）ＣａｒｂｏｈｙｄｒＲｅｓ１００：３６５－９２及びＩｍａｉ－Ｎｉ
ｓｈｉｙａＨｅｔａｌ．，（２００７）ＢＭＣＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４
を参照されたい。

【0224】

操作されたグリコフォームが、限定はされないがエフェクター機能の増強又は低下を含
めた種々の目的に有用であり得る。本明細書に記載される抗体に操作されたグリコフォー
ムを生成する方法としては、限定はされないが、例えば、ＵｍａｎｙａＰｅｔａｌ
．，（１９９９）ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６－１８０；Ｄａｖｉｅｓ
Ｊｅｔａｌ．，（２００１）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８
－２９４；ＳｈｉｅｌｄｓＲＬｅｔａｌ．，（２００２）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ
２７７：２６７３３－２６７４０；ＳｈｉｎｋａｗａＴｅｔａｌ．，（２００３
）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６－３４７３；ＮｉｗａＲｅｔａｌ．
，（２００４）ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１：６２４８－６２５５；Ｐｒｅｓｔ
ａＬＧｅｔａｌ．，（２００２）ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ３０：４
８７－４９０；ＫａｎｄａＹｅｔａｌ．，（２００７）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ
１７：１０４－１１８；米国特許第６，６０２，６８４号明細書；同第６，９４６，２
９２号明細書；及び同第７，２１４，７７５号明細書；米国特許出願公開第２００７／０
２４８６００号明細書；同第２００７／０１７８５５１号明細書；同第２００８／００６
００９２号明細書；及び同第２００６／０２５３９２８号明細書；国際公開第００／６１
７３９号パンフレット；同第０１／２９２２４６号パンフレット；同第０２／３１１１４
０号パンフレット；及び同第０２／３０９５４号パンフレット；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ
（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；及びＧｌｙｃｏ
ＭＡｂ（登録商標）グリコシル化操作技術（Ｇｌｙｃａｒｔｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されるものが挙げられる。例
えば、ＦｅｒｒａｒａＣｅｔａｌ．，（２００６）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏ
ｅｎｇ９３：８５１－８６１；国際公開第０７／０３９８１８号パンフレット；同第１
２／１３０８３１号パンフレット；同第９９／０５４３４２号パンフレット；同第０３／
０１１８７８号パンフレット；及び同第０４／０６５５４０号パンフレットも参照された
い。

【0225】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体のＦｃドメインの操作に用いられ
る技術は、Ｘｅｎｃｏｒ（Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）のＸｍａｂ（登録商標）技術である
。例えば、米国特許第８，３６７，８０５号明細書；同第８，０３９，５９２号明細書；
同第８，１２４，７３１号明細書；同第８，１８８，２３１号明細書；米国特許出願公開
第２００６／０２３５２０８号明細書；国際公開第０５／０７７９８１号パンフレット；
同第１１／０９７５２７号パンフレット；及びＲｉｃｈａｒｄｓＪＯｅｔａｌ．，
（２００８）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ７：２５１７－２５２７を参照されたい
。

【0226】

特定の実施形態において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＬ２３４、Ｌ２３５、及びＤ２６５位に
対応する位置にある本明細書に記載される抗体の定常領域におけるアミノ酸残基（ＥＵ付
番インデックスに従い付番する）は、それぞれＬ、Ｌ、及びＤでない。この手法について
は、国際公開第１４／１０８４８３号パンフレットに詳細に記載されている。詳細な実施
形態において、ヒトＩｇＧ１重鎖のＬ２３４、Ｌ２３５、及びＤ２６５位に対応するアミ
ノ酸は、それぞれＦ、Ｅ、及びＡ；又はＡ、Ａ、及びＡである。

【0227】

特定の実施形態において、本明細書に記載される任意の定常領域突然変異又は修飾が、
２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載される抗体の一方又は両方の重鎖定常領域に
導入されてもよい。

【0228】

別の詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載される抗体は軽鎖と重鎖とを含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号１～３に
示されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表１に掲載されるもの）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉ）重鎖は、配列番号４～６に
示されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表２に掲載されるもの）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトκ軽鎖の定
常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを更に含み；及び（ｉｖ）重鎖は、ヒ
トＩｇＧ_１（任意選択でＩｇＧ_１（アロタイプＧｌｍ３））重鎖の定常ドメインのアミノ
酸配列を含む定常重鎖ドメインを更に含む。

【0229】

別の詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載される抗体は軽鎖と重鎖とを含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号１５に示
されるアミノ酸を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉ）重鎖は、配列番号１６に示されるア
ミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトκ軽鎖の定常ドメインの
アミノ酸配列を含む定常ドメインを更に含み；及び（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ_１（任意
選択でＩｇＧ_１（アロタイプＧｌｍ３））重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常
ドメインを更に含む。

【0230】

別の詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載される抗体は軽鎖と重鎖とを含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号１～３に
示されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表１に掲載されるもの）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉ）重鎖は、配列番号４～６に
示されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表２に掲載されるもの）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトκ軽鎖の定
常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを更に含み；及び（ｉｖ）重鎖は、ヒ
トＩｇＧ_４重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを更に含む。

【0231】

【0232】

別の詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載される抗体は軽鎖と重鎖とを含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号１～３に
示されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表１に掲載されるもの）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉ）重鎖は、配列番号４～６に
示されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、
表２に掲載されるもの）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトκ軽鎖の定
常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを更に含み；及び（ｉｖ）重鎖は、ヒ
トＩｇＧ_２重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを更に含む。

【0233】

別の詳細な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載される抗体は軽鎖と重鎖とを含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号１５のア
ミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉ）重鎖は、配列番号１６のアミノ酸配列を
含むＶＨドメインを含み；（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトκ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列
を含む定常ドメインを更に含み；及び（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ_２重鎖の定常ドメイン
のアミノ酸配列を含む定常ドメインを更に含む。特定の実施形態において、軽鎖は配列番
号５０のアミノ酸配列を含み、且つ重鎖は配列番号５１のアミノ酸配列を含む。特定の実
施形態において、軽鎖は配列番号５０のアミノ酸配列を含み、且つ重鎖は配列番号６２の
アミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、軽鎖は配列番号２０のアミノ酸配列を含
み、且つ重鎖は配列番号５１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、軽鎖は配
列番号２０のアミノ酸配列を含み、且つ重鎖は配列番号６２のアミノ酸配列を含む。

【0234】

別の具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合す
る本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９７にＮからＡ又はＱへのアミノ
酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号２０のアミノ
酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９７に
ＮからＡ又はＱへのアミノ酸置換を有する配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（
ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0235】

別の具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合す
る本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２６７におけるＳからＥ、アミノ酸
位置３２８におけるＬからＦ、及びアミノ酸位置２６７におけるＳからＥとアミノ酸位置
３２８におけるＬからＦとの両方からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する配列番
号２１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを
含む。別の具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結
合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２６７におけるＳからＥ、アミ
ノ酸位置３２８におけるＬからＦ、及びアミノ酸位置２６７におけるＳからＥとアミノ酸
位置３２８におけるＬからＦとの両方からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する配
列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
とを含む。

【0236】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を呈する。具体的
な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、ナチュラルキラー細胞媒介性細胞枯渇を惹起する。具体的な実施
形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記
載される抗体は、ナチュラルキラー細胞による浸潤した腫瘍の治療に用いられる。具体的
な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を呈する。具体的な実施
形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記
載される抗体は、マクロファージ媒介性細胞枯渇を惹起する。具体的な実施形態において
、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体
は、マクロファージによる浸潤した腫瘍の治療に用いられる。具体的な実施形態において
、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体
は、腫瘍内調節性Ｔ細胞を選択的に枯渇させる。

【0237】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、ヒトフレームワーク領域であるか又はヒトフレームワー
ク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及び／又はＶＨドメインの
フレームワーク領域）を含む。ヒトフレームワーク領域の非限定的な例は当該技術分野に
おいて記載されており、例えば、ＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）前掲）
を参照されたい。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、霊長類（例え
ば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域であるか又は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フ
レームワーク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及び／又はＶＨ
ドメインのフレームワーク領域）を含む。

【0238】

例えば、典型的にはげっ歯類（例えば、マウス又はラット）由来の抗原特異的非ヒト抗
体のＣＤＲが相同ヒト又は非ヒト霊長類アクセプターフレームワークにグラフトされる。
一実施形態において、非ヒト霊長類アクセプターフレームワークは旧世界類人猿のもので
ある。具体的な実施形態において、旧世界類人猿アクセプターフレームワークは、パン・
トログロディテス（Ｐａｎｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）、パン・パニスクス（Ｐａｎｐ
ａｎｉｓｃｕｓ）又はゴリラ・ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａｇｏｒｉｌｌａ）のものである
。詳細な実施形態において、非ヒト霊長類アクセプターフレームワークはチンパンジー（
パン・トログロディテス（Ｐａｎｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ））のものである。詳細な実
施形態において、非ヒト霊長類アクセプターフレームワークは旧世界ザルアクセプターフ
レームワークである。具体的な実施形態において、旧世界ザルアクセプターフレームワー
クはマカク属（Ｍａｃａｃａ）のものである。特定の実施形態において、非ヒト霊長類ア
クセプターフレームワークはカニクイザル（マカカ・シノモルグス（Ｍａｃａｃａｃｙ
ｎｏｍｏｌｇｕｓ））に由来する。非ヒト霊長類フレームワーク配列については、米国特
許出願公開第２００５／０２０８６２５号明細書に記載されている。

【0239】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、前掲表３に示される本明細書に抗体に関して記載されるアミノ
酸配列を有する１、２個、又はそれを超えるＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。一
部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書
に記載される抗体は、前掲表４に示される本明細書に抗体に関して記載されるアミノ酸配
列を有する１、２個、又はそれを超えるＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的
な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に
記載される抗体は、前掲表３に示される本明細書に抗体に関して記載されるアミノ酸配列
を有する１、２個、又はそれを超えるＶＬフレームワーク領域と、前掲表４に示される本
明細書に抗体に関して記載されるアミノ酸配列を有する１、２個、又はそれを超えるＶＨ
フレームワーク領域とを含む。

【0240】

一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９個又はそれを超えるアミ
ノ酸突然変異（例えば、保存的アミノ酸置換などのアミノ酸置換）を含むｐａｂ１９４９
又はｐａｂ２０４４のアミノ酸配列（例えば、配列番号７～１０）を有するＶＬドメイン
の１、２、３、又は４個のフレームワーク領域及び／又はｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０
４４のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１～１４）を有するＶＨドメインのフレームワ
ーク領域を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的
に結合する本明細書に記載される抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９個又はそ
れを超えるアミノ酸突然変異（例えば、保存的アミノ酸置換などのアミノ酸置換）を含む
ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１～１４）を有
するＶＨドメインの１、２、３、又は４個のフレームワーク領域及び／又はｐａｂ１９４
９又はｐａｂ２０４４のアミノ酸配列（例えば、配列番号７～１０）を有するＶＬドメイ
ンのフレームワーク領域を含む。

【0241】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、本明細書の前掲表３に記載されるＶＬフレームワーク領域と少
なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも
９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワ
ーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）
に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書の前掲表４に記載されるＶＨ
フレームワーク領域と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なく
とも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性
を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。一部の実施形態において、ＯＸ４０（
例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書の前
掲表４に記載されるＶＨフレームワーク領域と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少
なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なく
とも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）と、本明細書の前掲表
３に記載されるＶＬフレームワーク領域と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なく
とも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも
９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。

【0242】

２つの配列（例えば、アミノ酸配列又は核酸配列）間の同一性パーセントの決定はまた
、数学的アルゴリズムを用いて達成することもできる。２つの配列の比較に利用される数
学的アルゴリズムの具体的な非限定例は、ＫａｒｌｉｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（
１９９３）ＰＮＡＳ９０：５８７３－５８７７にあるとおり修正した、Ｋａｒｌｉｎ
Ｓ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ８７：２２６４－２２６８のアルゴ
リズムである。かかるアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９
９０）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラ
ムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプロ
グラムパラメータを例えばスコア＝１００、ワード長＝１２に設定して実施することによ
り、本明細書に記載される核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬ
ＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータを例えばスコア５０、ワー
ド長＝３に設定して実施することにより、本明細書に記載されるタンパク質分子と相同な
アミノ酸配列を得ることができる。比較のためギャップ付きアラインメントを達成するに
は、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ
２５：３３８９３４０２に記載されるとおりのギャップ付きＢＬＡＳＴを利用するこ
とができる。或いは、ＰＳＩＢＬＡＳＴを用いて、分子間の距離関係を検出する反復検
索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ
Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳ
Ｔ及びＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワール
ドワイドウェブ、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ上の国立バイオテクノロジー情報セ
ンター（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別
の具体的な非限定例は、ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ
４：１１１７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメン
トソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組
み込まれている。アミノ酸配列の比較にＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１
２０重み付け残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティーを使
用することができる。

【0243】

【0244】

【0245】

【0246】

【0247】

【0248】

【0249】

【0250】

【0251】

【0252】

【0253】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結
合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、
例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤ
ｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％
ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサ
イトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－
１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα
、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は
、例えば、以下のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍ
ｌ）及び種々の濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍ
ｌ；又は０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）
のプレート結合抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４
日間培養するステップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、Ｔ
ＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の
産生を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キッ
ト（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌ
ｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するス
テップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ
、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３
μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。特定の実施形
態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載
される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメインのアミノ酸配列（例え
ば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なく
とも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性
を有するＶＬドメインを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗
体濃度が例えば０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ
、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、
例えば、以下のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ
）及び種々の濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ
；又は０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）の
プレート結合抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日
間培養するステップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮ
Ｆα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産
生を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅ
ｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステ
ップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0254】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結
合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、
例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤ
ｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％
ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサ
イトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－
１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα
、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は
、例えば、以下のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍ
ｌ）及び種々の濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍ
ｌ；又は０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）
のプレート結合抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４
日間培養するステップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、Ｔ
ＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の
産生を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キッ
ト（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌ
ｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するス
テップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば、０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ
、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３
μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。特定の実施形
態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載
される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミノ酸配列（例え
ば、配列番号１６）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なく
とも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性
を有するＶＨドメインを含み、この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体
（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における
例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例
えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ
－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗
体濃度が例えば０．７μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ
、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、
例えば、以下のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ
）及び種々の濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ
；又は０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）の
プレート結合抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日
間培養するステップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮ
Ｆα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産
生を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅ
ｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステ
ップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0255】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、（ｉ）ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメイン
のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少な
くとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくと
も９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０
４４のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少なくとも７０％、少な
くとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９
５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体は、
プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）との組み合わ
せで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅ
ｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されると
おり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えばＰＢＭＣ又は
Ｔ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ
－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１つ以上のサイ
トカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１
０、又はＩＬ－１３の産生は、例えば、以下のステップ：（ａ）プレート結合抗ＣＤ３抗
体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０、０．３、１、３、６、１
２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、
２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰＢＭＣを例えば３７℃及び
５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ）上清を収集し、１つ以上
のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、Ｉ
Ｌ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２
１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒ
ト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖ
ｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば、０．７
μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～
５０μｇ／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増
加関数である。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異
的に結合する本明細書に記載される抗体は、（ｉ）ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４の
ＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも
７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、
又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）ｐａｂ１９４９又
はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少なくとも
７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、
少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインとを含み、
この抗体は、プレート結合時、プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）
との組み合わせで、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組
織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ
）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって
計測されるとおり、例えば３７℃及び５％ＣＯ_２における例えば４日間の刺激時に例えば
ＰＢＭＣ又はＴ細胞において１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｉ
ＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、この１
つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－
２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．７μｇ／ｍ
ｌ～５０μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ～５０μｇ
／ｍｌ、又は６．３μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）プレート結合抗ＣＤ３抗体（例えば、０．８μｇ／ｍｌ）及び種々の濃度（例えば、０
、０．３、１、３、６、１２、２５、及び５０μｇ／ｍｌ；又は０、０．７、１．６、３
．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）のプレート結合抗体の存在下でＰ
ＢＭＣを例えば３７℃及び５％ＣＯ_２において例えば４日間培養するステップ；及び（ｂ
）上清を収集し、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を、例えば電気化学発光、例
えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ）又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（Ｍｅｓｏ
ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価され
るとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0256】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加さ
せ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチド
ＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエ
ステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密
に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレ
ート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及
び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７
℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ
４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合
を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価され
るとおり、例えば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍ
ｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例
えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９
４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少な
くとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９
０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含
み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞
を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ
）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細
胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３
抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ
）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２
で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、
例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することに
よりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、抗体が
２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在するときにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖
の増加が大きくなる。

【0257】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＬドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加さ
せ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μｇ／ｍｌ～２０
μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢
酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識する
ステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μ
ｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．
０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗
体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に
、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低
ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含
むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0258】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加さ
せ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチド
ＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエ
ステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密
に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレ
ート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及
び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７
℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ
４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合
を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価され
るとおり、例えば０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍ
ｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例
えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９
４９又はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少な
くとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９
０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含
み、この抗体は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞
を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ
）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細
胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３
抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ
）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２
で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、
例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することに
よりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、抗体が
２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在するときにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖
の増加が大きくなる。

【0259】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＶＨドメインのアミ
ノ酸配列（例えば、配列番号１６）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８
％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、この抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加さ
せ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．２μｇ／ｍｌ～２０
μｇ／ｍｌ、又は２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ
）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢
酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識する
ステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μ
ｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．
０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗
体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に
、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低
ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含
むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。

【0260】

【0261】

【0262】

別の態様において、本明細書には、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４
９又はｐａｂ２０４４）と同じ又は重複するＯＸ４０のエピトープ（例えば、ヒトＯＸ４
０のエピトープ）に結合する抗体が提供される。特定の実施形態において、抗体のエピト
ープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学的研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析
法（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析法）と併せた水素／重
水素交換、アレイベースのオリゴ－ペプチドスキャニングアッセイ、及び／又は突然変異
誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）により決定することがで
きる。Ｘ線結晶学については、当該技術分野における公知の方法のいずれを用いて結晶化
を達成してもよい（例えば、ＧｉｅｇｅＲｅｔａｌ．，（１９９４）ＡｃｔａＣ
ｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４）：３
３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９９０）ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ１８
９：１－２３；ＣｈａｙｅｎＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２６９－１
２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９７６）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５１：６３０
０－６３０３）。抗体：抗原結晶は周知のＸ線回折技法を用いて研究することができ、Ｘ
－ＰＬＯＲなどのコンピュータソフトウェアを使用して精密化し得る（ＹａｌｅＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，配布元ＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎ
ｃ．；例えば、ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ１１４＆１１５
，ｅｄｓＷｙｃｋｏｆｆＨＷｅｔａｌ．；米国特許出願公開第２００４／００１
４１９４号明細書）、及びＢＵＳＴＥＲ（ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９３）Ａｃｔａ
ＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：
３７－６０；ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９７）ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：
３６１－４２３，ｅｄＣａｒｔｅｒＣＷ；ＲｏｖｅｒｓｉＰｅｔａｌ．，（２
０００）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ
５６（Ｐｔ１０）：１３１６－１３２３を参照されたい）。突然変異誘発マッピング研
究は、当業者に公知の任意の方法を用いて達成し得る。アラニンスキャニング突然変異誘
発法を含めた突然変異誘発法の説明については、例えば、ＣｈａｍｐｅＭｅｔａｌ
．、（１９９５）前掲及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＢＣ＆ＷｅｌｌｓＪＡ（１９８９）
前掲を参照されたい。具体的な実施形態において、抗体のエピトープはアラニンスキャニ
ング突然変異誘発研究を用いて決定される。加えて、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）
の同じ又は重複するエピトープを認識してそれに結合する抗体は、イムノアッセイなどの
ルーチンの技法を用いて、例えばある抗体が別の抗体の標的抗原への結合を阻止する能力
を示すこと、即ち競合的結合アッセイにより同定することができる。競合結合アッセイは
また、２つの抗体があるエピトープに対して同様の結合特異性を有するかどうかの決定に
も用いることができる。競合的結合は、試験下の免疫グロブリンがＯＸ４０などの共通抗
原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。数
多くの種類の競合的結合アッセイが公知であり、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノ
アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競
合アッセイ（ＳｔａｈｌｉＣｅｔａｌ．，（１９８３）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙ
ｍｏｌ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋ
ｉｒｋｌａｎｄＴＮｅｔａｌ．，（１９８６）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３７：３６
１４－９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ
（ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓを参
照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（ＭｏｒｅｌＧＡｅｔ
ａｌ．，（１９８８）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２５（１）：７－１５を参照されたい
）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（ＣｈｅｕｎｇＲＣｅｔａｌ．，（１９９
０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６－５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈ
ａｕｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９０）ＳｃａｎｄＪＩｍｍｕｎｏｌ３２：７
７－８２）がある。典型的には、かかるアッセイは、固体表面に結合した精製抗原（例え
ば、ヒトＯＸ４０などのＯＸ４０）又はこれらの非標識試験免疫グロブリン及び標識参照
免疫グロブリンのいずれかを担持する細胞の使用を伴う。競合阻害は、試験免疫グロブリ
ンの存在下で固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することにより計測し得る。通
常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在するとき、それ
が共通抗原に対する参照抗体の特異的結合を少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６
０～６５％、６５～７０％、７０～７５％又はそれを超えて阻害することになる。競合結
合アッセイは、標識抗原又は標識抗体のいずれかを使用して数多くの異なるフォーマット
で構成することができる。このアッセイの一般的な形では、抗原が９６ウェルプレート上
に固定化される。次に、非標識抗体が標識抗体の抗原への結合を遮断する能力が、放射性
標識又は酵素標識を用いて計測される。更なる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ
Ｃｅｔａｌ．，（１９８３）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３０：２３０８－２３１５；
ＷａｇｅｎｅｒＣｅｔａｌ．，（１９８４）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ
６８：２６９－２７４；ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ５０：４８７２－４８７９；ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９２）
ＩｍｍｕｎｏｌＩｎｖｅｓｔ２１：５２３－５３８；ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ
．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１１：３９１－４０７及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＥｄＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ
ｅｄｉｔｏｒｓｓｕｐｒａ，ｐｐ．３８６－３８９を参照されたい。

【0263】

一実施形態において、競合アッセイは、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商
標））を用いて、例えば、ＡｂｄｉｃｈｅＹＮｅｔａｌ．，（２００９）Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍ３８６：１７２－１８０により記載されるものなどの「
インタンデム手法」によって実施され、これはＯＸ４０抗原をチップ表面、例えばＣＭ５
センサーチップ上に固定化し、次に抗ＯＸ４０抗体をチップ上に流すものである。抗体が
本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体と競合するかどうかを決定するため、最初に抗ＯＸ
４０抗体をチップ表面上に流して飽和を達成してから潜在的競合抗体を加える。次に競合
抗体の結合を決定し、非競合対照と比べて定量化することができる。

【0264】

特定の態様では、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイ（これは、標識抗原
又は標識抗体のいずれかを使用して、あらゆる異なるフォーマットで構成され得る）にお
いて２つの抗体が同一の又は立体的に重複するエピトープを認識するとき、競合結合アッ
セイを用いることにより、ある抗体が別の抗体、例えば参照抗体と本質的に同じエピトー
プ又は重複するエピトープに結合する抗体によって例えば用量依存的様式で競合的に遮断
されるかどうかを決定することができる。詳細な実施形態において、抗体は、本明細書に
記載される抗体（例えば、抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４）、又はそのキメラ若
しくはＦａｂ抗体、又は本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ
２０４４）のＶＨＣＤＲ及びＶＬＣＤＲを含む抗体との競合結合アッセイで試験する
ことができる。

【0265】

別の態様において、本明細書には、当業者に公知の又は本明細書に記載されるアッセイ
（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ又は表面プラズモン共鳴）を用いて決定するとき、Ｏ
Ｘ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への結合に関して本明細書に記載される抗体（例えば、
ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４）と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が提
供される。別の態様において、本明細書には、当業者に公知の又は本明細書に記載される
アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、又はサスペンションアレイ又は表面プラズ
モン共鳴アッセイ）を用いて決定するとき、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ
１９４９又はｐａｂ２０４４）がＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合するのを競合
的に（例えば、用量依存的様式で）阻害する抗体が提供される。詳細な実施形態において
、かかる競合的遮断抗体は、１つ以上のＯＸ４０活性を活性化するか、誘導するか、又は
増強する。具体的な態様において、本明細書には、当業者に公知の又は本明細書に記載さ
れるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、又はサスペンションアレイ又は表面プ
ラズモン共鳴アッセイ）を用いて決定するとき、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への
特異的結合に関して本明細書に記載されるアミノ酸配列（例えば、抗体ｐａｂ１９４９又
はｐａｂ２０４４のＶＬ及び／又はＶＨアミノ酸配列）を含む抗体と（例えば、用量依存
的様式で）競合する抗体が提供される。

【0266】

特定の実施形態において、本明細書には、本明細書に記載される抗体がＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）への結合に関して自己競合するのと同じ程度にＯＸ４０（例えば、ヒ
トＯＸ４０）への結合に関して本明細書に記載される抗体と競合する抗体が提供される。
一部の実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への結合に
関して本明細書に記載される抗体と競合する第１の抗体が提供され、この第１の抗体は、
以下のステップ：（ａ）容器内でＯＸ４０トランスフェクト細胞を非標識形態の第１の抗
体と共にインキュベートするステップ；及び（ｂ）容器に標識形態の本明細書に記載され
る抗体を加えて容器内の細胞をインキュベートするステップ；及び（ｃ）標識形態の本明
細書に記載される抗体と細胞との結合を検出するステップを含むアッセイにおいて結合に
関して競合する。特定の実施形態において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ
４０）への結合に関して本明細書に記載される抗体と競合する第１の抗体が提供され、こ
の競合は、ＯＸ４０への第１の抗体の結合の８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％
、又は９８％、又は８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％、又は８５％～９
５％）の低下として示される。

【0267】

具体的な態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への特異的
結合に関して、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと配列番号１
６に示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体と（例えば、用量依存的様
式で）競合する抗体が提供される。

【0268】

具体的な態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への特異的
結合に関して、（ｉ）表１に掲載されるＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤ
Ｒ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）表２に掲載
されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤ
Ｒ３を含むＶＨドメインとを含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が提
供される。

【0269】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）への特異的結合に関して配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメ
インと配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体によって
（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断されるものである。

【0270】

別の具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、（ｉ）表１に掲載され
るＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３
を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）表２に掲載されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインとを含む抗体によっ
て（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断されるものである。

【0271】

具体的な態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）への特異的
結合に関してｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４と同じエピトープに免疫特異的に結合す
る抗体が提供される。２つの抗体が同じエピトープに結合するかどうかは、当業者に公知
の又は本明細書に記載されるアッセイ（例えば、Ｘ線結晶学、質量分析法（例えば、液体
クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析法）と併せた水素／重水素交換、アラニ
ンスキャニング、ＥＬＩＳＡアッセイ等）を用いて決定することができる。

【0272】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ
２０４４が結合するエピトープ又はそのエピトープと重複するエピトープと同じエピトー
プに免疫特異的に結合する。

【0273】

別の具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、（ｉ）表１に掲載され
るＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３
を含むＶＬドメイン及び（ｉｉ）表２に掲載されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含む抗体と同じエ
ピトープに免疫特異的に結合する。

【0274】

ある具体的な態様において、本明細書に記載される抗体と変異ＯＸ４０との間の結合は
、この抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列との間の結合と比べて実質的に弱まり、こ
の変異ＯＸ４０は、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ
１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異（例えば
、置換）を除いて、配列番号５５の配列を含む。一部の実施形態において、変異ＯＸ４０
は、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａか
らなる群から選択される任意の１つの突然変異を除いて、配列番号５５の配列を含む。一
部の実施形態において、変異ＯＸ４０は、Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ
８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａからなる群から選択される任意の２、３、
４、５、６、又は７つの突然変異を除いて、配列番号５５の配列を含む。一部の実施形態
において、変異ＯＸ４０は、アミノ酸突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ
、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａを除いて、配列番号５５の配列を含む
。

【0275】

ある具体的な態様において、本明細書に記載される抗体は、６０、６２、８０、８８、
９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５５の
残基を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるヒトＯＸ４０配列のエピトー
プに特異的に結合する。一部の実施形態において、エピトープは、配列番号５５の６０、
６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５からなる群から選択される任意の１つの残基
を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。一部の実施形態において、エピ
トープは、配列番号５５の５８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５から
なる群から選択される任意の２、３、４、５、６、又は７つの残基を含むか、それから本
質的になるか、又はそれからなる。一部の実施形態において、エピトープは、配列番号５
５の残基５８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５を含むか、それから本
質的になるか、又はそれからなる。

【0276】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、６０、６２、８０、８８、
９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される残基を含むか、
それから本質的になるか、又はそれからなる配列番号５５のエピトープに特異的に結合す
る。一部の実施形態において、エピトープは、配列番号５５の６０、６２、８０、８８、
９３、９９、及び１１５からなる群から選択される任意の１つの残基を含むか、それから
本質的になるか、又はそれからなる。一部の実施形態において、エピトープは、配列番号
５５の５８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５からなる群から選択され
る任意の２、３、４、５、６、又は７つの残基を含むか、それから本質的になるか、又は
それからなる。一部の実施形態において、エピトープは、配列番号５５の残基５８、６０
、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５を含むか、それから本質的になるか、又は
それからなる。

【0277】

ある具体的な態様において、本明細書に記載される抗体は、６０、６２、８０、８８、
９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５５の
少なくとも１つの残基に特異的に結合する。一部の実施形態において、本明細書に記載さ
れる抗体は、配列番号５５の６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５からなる
群から選択される任意の１つの残基、又は任意の２、３、４、５、６、又は７つの残基に
特異的に結合する。一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、配列番号５
５の５８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５からなる群から選択される
任意の２、３、４、５、６、又は７つの残基に特異的に結合する。一部の実施形態におい
て、本明細書に記載される抗体は、配列番号５５の残基５８、６０、６２、８０、８８、
９３、９９、１１５に特異的に結合する。

【0278】

ある具体的な態様において、本明細書に記載される抗体は、配列番号５５のヒトＯＸ４
０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９
９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異
（例えば、置換）の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は
欠如を呈する。一部の実施形態において、このタンパク質は、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８
０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａからなる群から選択される任意の
１つの突然変異、又は任意の２、３、４、５、６、又は７つの突然変異を含むアミノ酸突
然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一である。一部の実施形態において、このタン
パク質は、Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、
及びＰ１１５Ａからなる群から選択される任意の２、３、４、５、６、又は７つの突然変
異を含むアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一である。一部の実施形態
において、このタンパク質は、突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８
８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａを含むアミノ酸置換の存在を除いて、配列番
号５５と同一である。

【0279】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体のエピトープは、抗体を作製する
ための免疫原として使用される。抗体を作製する方法については、例えば以下の第５．３
節を参照されたい。

【0280】

具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本
明細書に記載される抗体は、アゴニストとして機能する。

【0281】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される及び／又は当業者に公知の方法によ
って評価されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０
に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性と
比べてＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．
４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍
、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８
０倍、９０倍、又は１００倍増加させる。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、
ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載さ
れる及び／又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わない
か又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯ
Ｘ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性と比べてＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性を
少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、
５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、
９８％、又は９９％増加させる。ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性の非限定的な例
には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）シグナル伝達、細胞増殖、細胞生存、及びサイ
トカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及
び／又はＩＬ－１３）が含まれ得る。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒト
ＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ＯＸ４０（例えば、ヒ
トＯＸ４０）活性を誘導するか、増強するか、又は増加させる。具体的な実施形態におい
て、ＯＸ４０活性の増加は、以下の実施例に記載されるとおり評価される。

【0282】

特定の態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、ＯＸ４０を発現し且つＯＸ４０シグナル伝達に応答する細胞（
例えば、Ｔ細胞など、ＯＸ４０刺激及びＯＸ４０シグナル伝達に応答して増殖する細胞）
の細胞増殖を誘導するか、増強するか、又は増加させる。細胞増殖アッセイは、^３Ｈ－チ
ミジン取込みアッセイ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ、又は実施例２に記載されるようなＣＦ
ＳＥアッセイなど、当該技術分野において記載されており、当業者は容易に実施し得る。
具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤
（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテー
ト（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）に
よって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、フィト
ヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又
はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体などのＴ細胞マイトジ
ェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤による刺激のみのＴ細胞と比べて細胞増殖が増加する
。

【0283】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば
、^３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ又は以下の実施例２に記載さ
れるようなＣＦＳＥアッセイ）によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又
は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４
０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性刺激と比べて細胞増殖（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフ
ェクターＴ細胞などのＴ細胞）を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍
、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、
１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、
又は１００倍増加させる。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される又は当業
者に公知の方法（例えば、^３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ、又
は以下の実施例２に記載されるようなＣＦＳＥアッセイ）によって評価されるとおり、い
かなる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない
抗体）を伴う場合のＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性と比べて細胞増殖（例えば、
ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞などのＴ細胞）を少なくとも約５％、１０％、１５
％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５
％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％増加させる
。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞
増殖は、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば
１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によっ
て例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例え
ば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び
種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例え
ば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激す
るステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフ
ローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ
４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば０．２μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。具体的な実施形
態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載
される抗体はＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、例えば、
以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキ
シフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で
例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０
^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例え
ば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載
されるプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び
（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリ
ーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖
を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば、２μｇ／ｍｌ～２０μｇ
／ｍｌにおいて抗体の濃度の実質的増加関数である。具体的な実施形態において、ＯＸ４
０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体はＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば
０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエン
リッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（
ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例
えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２
、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例
えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例え
ば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細
胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで
評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。具体的な実施形態において、ＯＸ４
０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体はＣＤ４
＋Ｔ細胞増殖を増加させ、このＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば
２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）例えばエンリッ
チドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジ
ルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で例えば７分間標識するステップ；（ｂ）
綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えば
プレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例えば、０．００２、０．０２、０．２、２
、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載されるプレート結合抗体によって例えば
３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗
ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の
割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を調べるステップを含むアッセイで評価
されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（
例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、例えば、
以下のステップ：（ａ）例えばエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞を例えば１０μＭカルボキ
シフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）によって例えば３７℃で
例えば７分間標識するステップ；（ｂ）綿密に洗浄した後、細胞（例えば、１ウェル１０
^５細胞）を例えば３μｇ／ｍｌの例えばプレート結合抗ＣＤ３抗体及び種々の濃度（例え
ば、０．００２、０．０２、０．２、２、及び２０μｇ／ｍｌ）の例えば本明細書に記載
されるそのプレート結合抗体によって例えば３７℃及び５％ＣＯ_２で刺激するステップ；
及び（ｃ）例えば４日目に、細胞を例えば抗ＣＤ４抗体で染色し、例えばフローサイトメ
トリーによってＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞の割合を計測することによりＣＤ４＋Ｔ細胞
増殖を調べるステップを含むアッセイで評価されるとおり、抗体が２μｇ／ｍｌの濃度よ
りも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在するときにＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の増加が大きくなる。

【0284】

一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン（例えば、抗ＣＤ３抗体又はホ
ルボールエステル）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクタ
ーＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、^３Ｈ－チミジン
取込みアッセイ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ、又は以下の実施例２に記載されるようなＣＦ
ＳＥアッセイ）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェンによる刺激のみのＴ細胞
と比べて細胞増殖が少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．
５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５
倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍
増加する。一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に
結合する本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合
体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステート
アセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８
抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は
、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、^３Ｈ－チミジン取込みアッセ
イ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ、又は以下の実施例２に記載されるようなＣＦＳＥアッセイ
）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例え
ば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（Ｐ
ＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）による刺
激のみのＴ細胞と比べて細胞増殖が少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％
、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％増加する。具体的な実施形態に
おいて、細胞増殖は以下の実施例２に記載されるとおり評価される。具体的な実施形態に
おいて、５μｇ／ｍｌの本明細書に記載されるＯＸ４０抗体が、３μｇ／ｍｌ抗ＣＤ３抗
体で処理したヒトＣＤ４Ｔ細胞の増殖を少なくとも２０％増加させる。具体的な実施形
態において、５μｇ／ｍｌの本明細書に記載されるＯＸ４０抗体が、３μｇ／ｍｌ抗ＣＤ
３抗体で処理したヒトＣＤ４Ｔ細胞の増殖を少なくとも３０％増加させる。具体的な実
施形態において、５μｇ／ｍｌの本明細書に記載されるＯＸ４０抗体が、３μｇ／ｍｌ抗
ＣＤ３抗体で処理したヒトＣＤ４Ｔ細胞の増殖を少なくとも４０％増加させる。具体的
な実施形態において、５μｇ／ｍｌの本明細書に記載されるＯＸ４０抗体が、３μｇ／ｍ
ｌ抗ＣＤ３抗体で処理したヒトＣＤ４Ｔ細胞の増殖を少なくとも５０％増加させる。

【0285】

特定の態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明
細書に記載される抗体は、細胞（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞などのＴ
細胞）の生存を増加させる。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４
０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又
はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホル
ボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３
抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフ
ェクターＴ細胞）は、Ｔ細胞マイトジェンによる刺激のみのＴ細胞と比べて生存が増加す
る。細胞生存アッセイについては当該技術分野において記載されており（例えば、トリパ
ンブルー色素排除アッセイ）、当業者は容易に実施し得る。

【0286】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、細胞生存（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細
胞などのＴ細胞）を、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、トリパン
ブルー色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又は無
関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合の少なくとも
約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、
４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、
５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍増加させる。具体的な実施形態
において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載さ
れる抗体は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、トリパンブルー色
素排除アッセイ）によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又は無関係の抗
体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４０（例えば、
ヒトＯＸ４０）活性と比べて細胞生存（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞な
どのＴ細胞）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、
４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、９８％、又は９９％増加させる。

【0287】

一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン（例えば、抗ＣＤ３抗体又はホ
ルボールエステル）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクタ
ーＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、トリパンブルー
色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複
合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステー
トアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２
８抗体）による刺激のみのＴ細胞と比べて細胞生存が少なくとも約１．２倍、１．３倍、
１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、
７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍
、８０倍、９０倍、又は１００倍増加する。一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば
、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マ
イトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及
び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例
えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又は
ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例え
ば、トリパンブルー色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン
による刺激のみのＴ細胞と比べて細胞生存が少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％
、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％
、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％増加する。

【0288】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋エフ
ェクターＴ細胞）を活性化誘導性細胞死から保護する。

【0289】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される（実施例２など、以下の実施例を
参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わ
ないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合
のＯＸ４０Ｌ（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）刺激の存在下又は非存在下でのサイトカイン産
生と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、
ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７
５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％誘導し、又は増加させる。
具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される（実施例２など、以下の実施例を参
照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わな
いか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合の
ＯＸ４０Ｌ（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）刺激の存在下又は非存在下でのサイトカイン産生
と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、Ｉ
Ｌ－１０、及び／又はＩＬ－１３）を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．
５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９
倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０
倍、又は１００倍誘導又は増強する。

【0290】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤
（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテー
ト（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）に
よって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、本明細
書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ又は以下の実施例
に記載されるとおりのもの）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン又はＴ細胞
受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミ
リステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び
抗ＣＤ２８抗体）による刺激のみのＴ細胞と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２
、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）が少なくと
も約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％
、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％
、又は９９％増加する。一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に
免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細
胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボール
ミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及
び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクタ
ーＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッ
セイ又は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マ
イトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及
び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例
えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）による刺激のみのＴ細胞と比べてサイトカイン産
生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩ
Ｌ－１３）が少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、
３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２
０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍増加す
る。

【0291】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される（実施例２など、以下の実施例を
参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わ
ないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合
のＩＬ－２産生と比べてブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシン
Ａ（ＳＥＡ）刺激に応答したＩＬ－２産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍
、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８
倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍
、９０倍、又は１００倍増加させる。

【0292】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エン
テロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋
Ｔ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッ
セイ又は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によって評価されるとおり、ＳＥＡに
よる刺激のみのＴ細胞と比べてＩＬ－２産生が少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４
倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、
８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０
倍、９０倍、又は１００倍増加する。

【0293】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロ
トキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学
発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌ
ｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び
９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導
し、このＩＬ－２産生は、例えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体濃
度の実質的増加関数である。特定の実施形態において、ＳＥＡとの組み合わせで抗体によ
って誘導されるＩＬ－２産生は、例えば０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４
μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ
において抗体濃度の実質的増加関数である。別の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、
ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）との組み合わせで、例えばＰ
ＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例えば、以下のステップ：
（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、
０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍ
ｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３
７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）
清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／
ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）
によって計測するステップを含むアッセイで評価されるとおり、例えば０．０３２μｇ／
ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関数である。特定の実施形態におい
て、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗
体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）との
組み合わせで、例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、例
えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８、０．１６、０．
０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／ｍｌ）の抗体、及
び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（例えば、１ウェル
１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例えば５日間培養す
るステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、例えば電気化学発
光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価されるとおり、
例えば０．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μ
ｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ
～４μｇ／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌにおいて抗体濃度の実質的増加関
数である。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的
に結合する本明細書に記載される抗体は、抗体が０．０３２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０
μｇ／ｍｌの濃度で存在するときに、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度におけ
る例えば５日間の刺激時のブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシ
ンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）に応答したＩＬ－２産生が高くなる。詳細
な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細
書に記載される抗体は、抗体が０．１６μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で
存在するときに、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺
激時のブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例
えば、１００ｎｇ／ｍｌ）に応答したＩＬ－２産生が高くなる。

【0294】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロ
トキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）との組み合わせで、例えば電気化学
発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌ
ｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測されるとおり、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び
９７％湿度における例えば５日間の刺激時に例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導
し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ
／ｍｌのとき、シグモイド用量反応曲線を示す。特定の実施形態において、ＳＥＡとの組
み合わせで抗体によって誘導されたＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．１
６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ～２
０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍ
ｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌのとき、シグモイド用量反応曲線を示す。別の
実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書
に記載される抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ
（ＳＥＡ）との組み合わせで、例えばＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ
－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０．０３２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌのとき
、例えば、以下のステップ：（ａ）種々の濃度（例えば、２０、４、０．８、０．１６、
０．０３２、０．００６４、０．００１２８、及び０．０００２５６μｇ／ｍｌ）の抗体
、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（例えば、１ウ
ェル１０^５細胞）を例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例えば５日間培
養するステップ；及び（ｂ）清澄化した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、例えば電気化
学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａ
ｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって計測するステップを含むアッセイで評価されるとお
り、シグモイド用量反応曲線を示す。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒト
ＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）との組み合わせで、例えばＰＢＭ
ＣにおいてＩＬ－２産生を誘導し、このＩＬ－２産生は、抗ＯＸ４０抗体濃度が例えば０
．１６μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ
～２０μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌ～４μｇ
／ｍｌ、又は０．８μｇ／ｍｌ～４μｇ／ｍｌのとき、例えば、以下のステップ：（ａ）
種々の濃度（例えば、２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、０．０
０１２８、及び０．０００２５６μｇ／ｍｌ）の抗体、及び例えば１００ｎｇ／ｍｌのＳ
ＥＡの非存在下又は存在下でＰＢＭＣ（例えば、１ウェル１０^５細胞）を例えば３７℃、
５％ＣＯ_２、及び９７％湿度において例えば５日間培養するステップ；及び（ｂ）清澄化
した上清を収集し、ＩＬ－２の力価を、例えば電気化学発光、例えばヒトＴＨ１／ＴＨ２
１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）によっ
て計測するステップを含むアッセイで評価されるとおり、シグモイド用量反応曲線を示す
。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、抗体が０．０３２μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍ
ｌの濃度で存在するときに、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば
５日間の刺激時のブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（Ｓ
ＥＡ）（例えば、１００ｎｇ／ｍｌ）に応答したＩＬ－２産生が高くなる。詳細な実施形
態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載
される抗体は、抗体が０．１６μｇ／ｍｌの濃度よりも２０μｇ／ｍｌの濃度で存在する
ときに、例えば３７℃、５％ＣＯ_２、及び９７％湿度における例えば５日間の刺激時のブ
ドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（例えば、１
００ｎｇ／ｍｌ）に応答したＩＬ－２産生が高くなる。

【0295】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される（実施例２など、以下の実施例を
参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わ
ないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合
のＩＬ－１０産生と比べてブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシ
ンＡ（ＳＥＡ）刺激に応答したＩＬ－１０産生を少なくとも約５％、１０％、１５％、２
０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％低下させる。

【0296】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載される抗体の存在下でブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エン
テロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋
Ｔ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッ
セイ又は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によって評価されるとおり、ＳＥＡに
よる刺激のみのＴ細胞と比べてＩＬ－１０産生が少なくとも約５％、１０％、１５％、２
０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％低下する。

【0297】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば
、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーターアッセイ又は以下の実施例に記載さ
れるとおりのもの）によって評価されるとおり、活性化調節性Ｔ細胞に結合したとき、Ｃ
Ｄ１６、ＣＤ３２Ａ及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体に対
し、その抗体が活性化エフェクターＴ細胞に結合したときにＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ及びＣ
Ｄ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体に結合するよりも大きい程度に
（例えば、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍
、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、
４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍）結合する。具体的な
実施形態において、活性化Ｆｃガンマ受容体は、骨髄由来のエフェクター細胞及びリンパ
球由来のエフェクター細胞からなる群から選択される細胞上で発現する。詳細な実施形態
において、活性化Ｆｃガンマ受容体はＣＤ１６である。

【0298】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体は、活性化調節性Ｔ細胞に結合したとき、ＣＤ１６、ＣＤ３
２Ａ及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化を、その抗
体が活性化エフェクターＴ細胞に結合したときにＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ及びＣＤ６４から
なる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化を生じさせるよりも強力に生じさ
せる。詳細な実施形態において、活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化は、ＯＸ４０（例えば
、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体が活性化調節性Ｔ細
胞に結合したとき、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、Ｆｃガンマ
受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーターアッセイ又は以下の実施例に記載されるとおりの
もの）によって評価されるとおり、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結
合する本明細書に記載される抗体が活性化エフェクターＴ細胞に結合したときの活性化Ｆ
ｃガンマ受容体の活性化よりも少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、
２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１
０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又
は１００倍強力である。具体的な実施形態において、活性化Ｆｃガンマ受容体は、骨髄由
来のエフェクター細胞及びリンパ球由来のエフェクター細胞からなる群から選択される細
胞上で発現する。詳細な実施形態において、活性化Ｆｃガンマ受容体はＣＤ１６である。

【0299】

ある具体的な態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫
特異的に結合するアンタゴニスト抗体が提供される。

【0300】

ＯＸ４０シグナル伝達の活性化は、頂端のアダプタータンパク質を効率的に動員して細
胞内シグナル伝達を駆動する高次の受容体複合体を形成する受容体クラスター形成に依存
する。理論によって拘束されるものではないが、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は二価抗体ア
ーム（即ち、各々がＯＸ４０抗原に結合する２本の抗体アーム）を介して、及び／又はア
クセサリー骨髄系又はリンパ系細胞上のＦｃ－Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）共会合を介して受容
体クラスター形成を媒介し得る。結果的に、抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体を開発する１
つの手法は、ＯＸ４０への結合に関してＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）と競合する抗体
を選択し、Ｆｃ受容体に対する抗体のＦｃ領域の結合を減弱又は消失させ、及び／又は一
価抗体フォーマットを採用することである。一価抗体フォーマットには、構造的に一価の
抗体、限定はされないが、１つの抗原結合ドメインのみ（例えば、１本のＦａｂアームの
み）を含む抗ＯＸ４０抗体、又は重鎖と対をなすか、又は重鎖の断片（例えば、Ｆｃ断片
）と対をなすＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合する１つの抗原結合ドメインのみ
を含む抗体が含まれ得る。一価抗体フォーマットにはまた、機能的に一価の抗体、例えば
、ヒト免疫細胞が発現する抗原に結合しない第２の抗原結合ドメインと対をなすＯＸ４０
（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合する１つの抗原結合ドメインのみを含む抗体（即ち、こ
の抗体は２つの抗原結合ドメインを含むが、１つの抗原結合ドメインのみがＯＸ４０に結
合する）も含まれ得る。

【0301】

上記では、Ｆｃ受容体結合を低下させる、又は潜在的なグリコシル化部位を除去し得る
ＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域の突然変異の例が考察される。特定の実施形態において、Ｏ
Ｘ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるとおりの
抗体の重鎖定常領域は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｃ１２７Ｓ、Ｓ２２８Ｐ
、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。特定の実施形態に
おいて、この突然変異はＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの組み合わせ
である。特定の実施形態において、この突然変異はＣ１２７Ｓである。特定の実施形態に
おいて、この突然変異はＳ２２８Ｐである。一実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒ
トＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるとおりの抗体の重鎖定常領域
は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変
異を含む。特定の実施形態において、重鎖定常領域は、免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ
_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される。特定の実
施形態において、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンである。突然変異（例えば、置換
）を含有するヒト免疫グロブリンも本明細書ではヒト免疫グロブリンと称される。ある具
体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細
書に記載されるとおりの抗体は免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、このＩｇＧ
_１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの
組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。一態様において、ＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるとおりの抗体は免疫グ
ロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、このＩｇＧ_１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、Ｄ
２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含
む。ある具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合
する本明細書に記載されるとおりの抗体は免疫グロブリンＩｇＧ_２重鎖定常領域を含み、
このＩｇＧ_２重鎖定常領域のアミノ酸配列はＣ１２７Ｓ突然変異を含む。ある具体的な態
様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載
されるとおりの抗体は免疫グロブリンＩｇＧ_４重鎖定常領域を含み、このＩｇＧ_４重鎖定
常領域のアミノ酸配列はＳ２２８Ｐ突然変異を含む。特定の実施形態において、本抗体は
アンタゴニスト性である。

【0302】

ある具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるとおりの抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びｓｃ
Ｆｖ断片からなる群から選択され、このＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦ
ｖ断片は本明細書に記載されるとおりの抗ＯＸ４０抗原結合ドメイン又は抗体の重鎖可変
領域配列と軽鎖可変領域配列とを含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦ
ｖ断片は、限定はされないが、以下の第５．３節で考察するものを含め、当業者に公知の
任意の技法によって作製することができる。特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’
、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖ断片は、抗体のインビボ半減期を延長させる部分を更に
含む。この部分はまた、「半減期延長部分」とも称される。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ
’）_２、又はｓｃＦｖ断片のインビボ半減期を延長させることが当業者に公知の任意の部
分を使用することができる。例えば、半減期延長部分には、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブ
ミン、又はアルブミン結合タンパク質又は化合物が含まれ得る。ポリマーには、天然又は
合成の、任意選択で置換されている直鎖又は分枝鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン、
ポリオキシルアルキレン、多糖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、
ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デ
キストラン、グリコーゲン、又はその誘導体が含まれ得る。置換基には、１つ以上のヒド
ロキシ、メチル、又はメトキシ基が含まれ得る。特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖ断片は、半減期延長部分を付加するための１つ以上
のＣ末端アミノ酸を加えることにより修飾されてもよい。特定の実施形態において、半減
期延長部分はポリエチレングリコール又はヒト血清アルブミンである。特定の実施形態に
おいて、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖ断片はＦｃ領域に融合する。
特定の実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0303】

ある具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る抗体は１つの重鎖と１つの軽鎖とを含み（即ち、この抗体はいかなる追加の重鎖又は軽
鎖も含まず、単一の重鎖－軽鎖対を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる
）、この重鎖及び軽鎖は、本明細書に記載されるとおりの抗ＯＸ４０抗原結合ドメイン又
は抗体のそれぞれ重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。特定の実施形態におい
て、重鎖は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｃ１２７Ｓ、Ｓ２２８Ｐ、及びこれ
らの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。特定の実施形態において、こ
の突然変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの組み合わせである。
特定の実施形態において、この突然変異はＣ１２７Ｓである。特定の実施形態において、
この突然変異はＳ２２８Ｐである。特定の実施形態において、重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３
２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。特定の実施
形態において、重鎖は、免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、Ｉｇ
Ａ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される。特定の実施形態において、免疫グロブリ
ンはヒト免疫グロブリンである。特定の実施形態において、重鎖は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９
７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含むＩ
ｇＧ_１重鎖である。特定の実施形態において、重鎖は、Ｃ１２７Ｓ突然変異を含むＩｇＧ
_２重鎖である。特定の実施形態において、重鎖は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ_４重
鎖である。特定の実施形態において、重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びこれらの組み
合わせからなる群から選択される突然変異を含むＩｇＧ_１重鎖である。特定の実施形態に
おいて、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0304】

ある具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるとおりの抗体は、本明細書に記載されるとおりの、ＯＸ４０に結
合する第１の抗原結合ドメインと、本明細書に記載されるとおりの、ヒト免疫細胞が発現
する抗原に特異的に結合しない第２の抗原結合ドメイン（即ち、第２の抗原結合ドメイン
はヒト免疫細胞が発現するＯＸ４０又は任意の他の抗原に結合しない）とを含む。特定の
実施形態において、第１及び第２の抗原結合ドメインは相補的ＣＨ３ドメインを含む。例
えば、相補的ＣＨ３ドメインは、それぞれの抗原結合ドメインのホモ二量体化よりむしろ
、第１の抗原結合ドメインの重鎖と第２の抗原結合ドメインの重鎖との間のヘテロ二量体
化を優先的に生じさせる。相補的ＣＨ３ドメインの作製には、限定はされないが、Ｒｉｄ
ｇｗａｙＪＢＢｅｔａｌ．，（１９９６）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ９（７）：６
１７－６２１及びＭｅｒｃｈａｎｔＭｅｔａｌ．に記載されるとおりのノブイント
ゥホール技術を含め、当業者に公知の任意の技法を用いることができる。例えば、ノブイ
ントゥホール技術では、第１のＣＨ３ドメインにおいて小さいアミノ酸をより大きいアミ
ノ酸（即ち、「ノブ」）に置き換え、第２のＣＨ３ドメインにおいて大きいアミノ酸をよ
り小さいアミノ酸（即ち、「ホール」）に置き換える。従って、これらのＣＨ３ドメイン
を含むポリペプチドがノブとホールとの相互作用に基づき二量体化することができる。特
定の実施形態において、抗原結合ドメインの一方が、Ｔ３６６Ｙ及びＴ３６６Ｗからなる
群から選択される置換を含む第１のＩｇＧ_１ＣＨ３ドメインを含み、他方の抗原結合ド
メインが、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択さ
れる置換を含む第２のＩｇＧ_１ＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態において、第２
の抗原結合ドメインが結合する抗原は、天然でヒト免疫細胞によって発現されないもので
ある。特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣ
Ｄ８＋Ｔ細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び好
酸球からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する
抗原結合ドメインは第１のＶＨと第１のＶＬとを含み、且つ第２の抗原結合ドメインは第
２のＶＨと第２のＶＬとを含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０に特異的に結合する
抗原結合ドメインは第１の重鎖と第１の軽鎖とを含み、且つ第２の抗原結合ドメインは第
２の重鎖と第２の軽鎖とを含む。特定の実施形態において、本抗体は、第２の抗原結合ド
メインが非反応性の試料又は対象（即ち、第２の抗原結合ドメインが結合する抗原がその
試料又は対象に存在しない）に投与されるものである。特定の実施形態において、第２の
抗原結合ドメインは、ＯＸ４０を発現する細胞上の抗原に特異的に結合しない（例えば、
第２の抗原結合ドメインは、ＯＸ４０を発現する細胞が天然に発現する抗原に結合しない
）。特定の実施形態において、本抗体は、試料又は対象において一価抗体（即ち、抗ＯＸ
４０一価抗体）として機能し、ここで、抗体の第１の抗原結合ドメインはＯＸ４０に結合
し、一方、第２の抗原結合ドメインは試料又は対象において非反応性である（例えば、第
２の抗原結合ドメインが結合する抗原がその試料又は対象に存在しないため）。特定の実
施形態において、第２の抗原結合ドメインは非ヒト抗原（即ち、他の生物において発現し
、ヒトでは発現しない抗原）に特異的に結合する。特定の実施形態において、第２の抗原
結合ドメインはウイルス抗原に特異的に結合する。特定の実施形態において、ウイルス抗
原は、ヒトに感染しないウイルス（即ち、非ヒトウイルス）のものである。特定の実施形
態において、このウイルス抗原はヒト免疫細胞に存在しない（例えば、ヒト免疫細胞は、
そのウイルス抗原に関連するウイルスに非感染性である）。特定の実施形態において、ウ
イルス抗原はＨＩＶ抗原である。特定の実施形態において、第２の抗原結合ドメインはニ
ワトリアルブミン又は鶏卵リゾチームに特異的に結合する。特定の実施形態において、第
２の抗原結合ドメインは、野生型細胞（例えば、野生型ヒト細胞）が発現しない（即ち、
それに存在しない）抗原に特異的に結合する。特定の実施形態において、第２の抗原結合
ドメインは、正常細胞（例えば、野生型細胞、例えば野生型ヒト細胞）が発現しない（即
ち、それに存在しない）腫瘍関連抗原に特異的に結合する。特定の実施形態において、腫
瘍関連抗原は、ヒト細胞が発現しない（即ち、それに存在しない）。特定の実施形態にお
いて、第２の抗原結合ドメインの重鎖定常領域は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ
、Ｃ１２７Ｓ、Ｓ２２８Ｐ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される突然変異
を含む。特定の実施形態において、この突然変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５
Ａ、又はこれらの組み合わせである。特定の実施形態において、この突然変異はＣ１２７
Ｓである。特定の実施形態において、この突然変異はＳ２２８Ｐである。特定の実施形態
において、第２の抗原結合ドメインの重鎖定常領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこ
れらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。特定の実施形態において、
第１及び第２の抗原結合ドメインの重鎖定常領域は、免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２
、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される。特定の実施
形態において、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンである。特定の実施形態において、
第１及び第２の抗原結合ドメインの重鎖定常領域は同じアイソタイプである。特定の実施
形態において、第１の抗原結合ドメインが第１のＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、且つ第２
の抗原結合ドメインが第２のＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、ここで、第１及び第２の重鎖
定常領域は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの組み合わせからなる群
から選択される同一の突然変異を含む。特定の実施形態において、第１の抗原結合ドメイ
ンが第１のＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、且つ第２の抗原結合ドメインが第２のＩｇＧ_１
重鎖定常領域を含み、ここで、第１及び第２の重鎖定常領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ
、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含む。特定の実施
形態において、第１の抗原結合ドメインが第１のＩｇＧ_２重鎖定常領域を含み、且つ第２
の抗原結合ドメインが第２のＩｇＧ_２重鎖定常領域を含み、ここで、第１及び第２の重鎖
定常領域はＣ１２７Ｓ突然変異を含む。特定の実施形態において、第１の抗原結合ドメイ
ンが第１のＩｇＧ_４重鎖定常領域を含み、且つ第２の抗原結合ドメインが第２のＩｇＧ_４
重鎖定常領域を含み、ここで、第１及び第２の重鎖定常領域はＳ２２８Ｐ突然変異を含む
。特定の実施形態において、本抗体はアンタゴニスト性である。

【0305】

ある具体的な態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるとおりの抗体は、第１の重鎖及び第１の軽鎖と、及び第２の重鎖
又はその断片とを含む、ＯＸ４０に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む。特
定の実施形態において、第１及び第２の重鎖、又は第２の重鎖の断片は、相補的ＣＨ３ド
メインを含む。例えば、相補的ＣＨ３ドメインは、それぞれの重鎖のホモ二量体化よりむ
しろ、重鎖間におけるヘテロ二量体化を優先的に生じさせる。特定の実施形態において、
重鎖の一方が、Ｔ３６６Ｙ及びＴ３６６Ｗからなる群から選択される置換を含む第１のＩ
ｇＧ_１ＣＨ３ドメインを含み、且つ他方の重鎖が、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８
Ａ、Ｙ４０７Ｖからなる群から選択される置換を含む第２のＩｇＧ_１ＣＨ３ドメインを
含む。一部の実施形態において、第２の重鎖の断片はＦｃ断片である。特定の実施形態に
おいて、第２の重鎖又はその断片は、非ヒト抗原（即ち、他の生物で発現し、ヒトでは発
現しない抗原）に特異的に結合する抗原結合ドメインのものである。特定の実施形態にお
いて、第２の重鎖又はその断片は、ウイルス抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの
ものである。特定の実施形態において、このウイルス抗原はヒト免疫細胞に存在しない（
例えば、ヒト免疫細胞は、そのウイルス抗原に関連するウイルスに非感染性である）。特
定の実施形態において、ウイルス抗原はＨＩＶ抗原である。特定の実施形態において、第
２の重鎖又はその断片は、ニワトリアルブミン又は鶏卵リゾチームに特異的に結合する抗
原結合ドメインのものである。特定の実施形態において、第２の重鎖又はその断片は、野
生型細胞（例えば、野生型ヒト細胞）が発現しない（即ち、それに存在しない）抗原に特
異的に結合する抗原結合ドメインのものである。特定の実施形態において、第２の重鎖又
はその断片は、正常細胞（例えば、野生型細胞、例えば野生型ヒト細胞）が発現しない（
即ち、それに存在しない）腫瘍関連抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインのものであ
る。特定の実施形態において、腫瘍関連抗原は、ヒト細胞が発現しない（即ち、それに存
在しない）。特定の実施形態において、第２の重鎖又はその断片は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９
７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｃ１２７Ｓ、Ｓ２２８Ｐ、及びこれらの組み合わせからなる群から選
択される突然変異を含む。特定の実施形態において、この突然変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２
９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの組み合わせである。特定の実施形態において、この突
然変異はＣ１２７Ｓである。特定の実施形態において、この突然変異はＳ２２８Ｐである
。特定の実施形態において、第２の重鎖又はその断片は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及び
これらの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む。特定の実施形態において
、第１及び第２の重鎖定常領域は、免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、Ｉｇ
Ｇ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される。特定の実施形態において、免
疫グロブリンはヒト免疫グロブリンである。特定の実施形態において、第１及び第２の重
鎖定常領域は同じアイソタイプである。特定の実施形態において、第１及び第２の重鎖定
常領域はＩｇＧ_１定常領域であり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、又はこれらの
組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含む。特定の実施形態において、
第１及び第２の重鎖定常領域はＩｇＧ_１定常領域であり、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及び
これらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異を含む。特定の実施形態に
おいて、第１及び第２の重鎖定常領域はＩｇＧ_２重鎖定常領域であり、Ｃ１２７Ｓ突然変
異を含む。特定の実施形態において、第１及び第２の重鎖定常領域はＩｇＧ_４重鎖定常領
域であり、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含む。特定の実施形態において、本抗体はアンタゴニス
ト性である。

【0306】

ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインと第２の抗原
結合ドメイン又は第２の重鎖若しくはその断片のいずれかとを含む抗体に関する上記の態
様において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載される任意の抗ＯＸ４０配列を含み得
る。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗
原結合ドメインは、（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決
定領域（ＣＤＲ）１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミ
ノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列
を含むＶＨ－ＣＤＲ３とを含む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）ＲＳＳＱＳＬ
ＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮ
ＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２と、ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配
列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３とを含む第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ
）を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合
する抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１５のア
ミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体とＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）の同じエピトープ
に特異的に結合する。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特
異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較し
て、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及び
これらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番
号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する。特定の実施形態において、
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインはＶＨとＶＬと
を含み、このＶＨは配列番号１６のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインはＶＨとＶＬとを含
み、このＶＬは配列番号１５のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０
に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０
％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の
実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメ
インは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、ＯＸ
４０に結合する抗原結合ドメインは、ヒトＩＧＨＶ３－７３生殖系列配列（例えば、ＩＧ
ＨＶ３－７３^＊０１、例えば配列番号１９のアミノ酸配列を有するもの）に由来するアミ
ノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７
５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含
む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗
原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号３を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。特定の実施
形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメイン
は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０
（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２０のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含
む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗
原結合ドメインは、ヒトＩＧＫＶ２－２８生殖系列配列（例えば、ＩＧＫＶ２－２８^＊０
１、例えば配列番号１８のアミノ酸配列を有するもの）に由来するアミノ酸配列を含むＶ
Ｌを含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合
する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１６及び１５に示されるＶＨ及びＶＬ配列を
含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する
抗原結合ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態に
おいて、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、配
列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原結合ドメインは、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、
Ｄ２６５Ａ突然変異からなる群から選択される突然変異、又はこれらの組み合わせを含む
。特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する抗原
結合ドメインは、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びこれらの組み合わせからなる群から選択さ
れる突然変異を含む。

【0307】

特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、ＯＸ４０（例
えば、ヒトＯＸ４０）に対してアンタゴニスト性である。特定の実施形態において、本抗
体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）の活性を不活性化するか、低下させるか、又は阻
害する。特定の実施形態において、本抗体はＯＸ４０リガンド（例えば、ヒトＯＸ４０リ
ガンド）へのＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）の結合を阻害するか又は低下させる。特
定の実施形態において、本抗体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）シグナル伝達を阻害
するか又は低下させる。特定の実施形態において、本抗体は、ＯＸ４０リガンド（例えば
、ヒトＯＸ４０リガンド）によって誘導されるＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性（
例えば、ＯＸ４０シグナル伝達）を阻害するか又は低下させる。特定の実施形態において
、本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体はＴ細胞増殖を阻害するか又は低下させる。
特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体はＴ細胞増殖を阻害
するか又は低下させる。特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンタゴニスト
抗体はサイトカイン産生を阻害するか又は低下させる（例えば、刺激されたＴ細胞による
ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、又はこれらの組み
合わせの産生を阻害するか又は低下させる）。特定の実施形態において、本明細書に記載
されるアンタゴニスト抗体はＳＥＡ刺激Ｔ細胞によるＩＬ－２産生を阻害するか又は低下
させる。特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体はＯＸ４０
とＯＸ４０Ｌとの相互作用を遮断する（例えば、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０との互いの結合を
遮断し、例えばヒトＯＸ４０リガンドとヒトＯＸ４０との結合を遮断する））。

【0308】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載される及び／又は当業者に
公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例
えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）活性と比べてＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性を少なくとも約１．２倍、
１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５
倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０
倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍減少させる。特定の実施形態において、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタゴニ
スト抗体は、本明細書に記載される及び／又は当業者に公知の方法によって評価されると
おり、いかなる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結
合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性と比べてＯＸ４０（
例えば、ヒトＯＸ４０）活性を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０
％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０
％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％減少させる。ＯＸ４０（例えば、ヒト
ＯＸ４０）活性の非限定的な例には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）シグナル伝達、
細胞増殖、細胞生存、及びサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－
γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）が含まれ得る。特定の実施形態にお
いて、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される
アンタゴニスト抗体は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性を阻害するか、低下させ
るか、又は不活性化する。具体的な実施形態において、ＯＸ４０活性は、以下の実施例に
記載されるとおり評価される。

【0309】

特定の態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明
細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、ＯＸ４０を発現し且つＯＸ４０シグナル伝達に
応答する細胞（例えば、Ｔ細胞など、ＯＸ４０刺激及びＯＸ４０シグナル伝達に応答して
増殖する細胞）の細胞増殖を阻害するか、低下させるか、又は不活性化する。細胞増殖ア
ッセイは、^３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＢｒｄＵ取込みアッセイ、又は以下の実施例
に記載されるようなＣＦＳＥアッセイなど、当該技術分野において記載されており、当業
者は容易に実施し得る。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）
に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の存在下でＴ細胞マイ
トジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び
／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例え
ば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣ
Ｄ８^＋エフェクターＴ細胞）は、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボール
ミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及
び抗ＣＤ２８抗体などのＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤による刺激の
みのＴ細胞と比べて細胞増殖が減少する。

【0310】

特定の態様において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明
細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、細胞（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクター
Ｔ細胞などのＴ細胞）の生存を減少させる。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の
存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチ
ニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複
合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例え
ば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、Ｔ細胞マイトジェンによる刺激のみ
のＴ細胞と比べて生存が減少する。細胞生存アッセイについては当該技術分野において記
載されており（例えば、トリパンブルー色素排除アッセイ）、当業者は容易に実施し得る
。

【0311】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、細胞生存（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エ
フェクターＴ細胞などのＴ細胞）を、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例
えば、トリパンブルー色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴
わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場
合の少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３
．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３
０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍減少させる。具
体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本
明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方
法（例えば、トリパンブルー色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、いかなる抗
体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を
伴う場合のＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）活性と比べて細胞生存（例えば、ＣＤ４及
びＣＤ８エフェクターＴ細胞などのＴ細胞）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０
％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％減少させる。

【0312】

一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン（例えば、抗Ｃ
Ｄ３抗体又はホルボールエステル）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ
８^＋エフェクターＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、
トリパンブルー色素排除アッセイ）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン又は
Ｔ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボ
ールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗
体及び抗ＣＤ２８抗体）による刺激のみのＴ細胞と比べて細胞生存を少なくとも約１．２
倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍
、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、
６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍減少させる。一部の実施形態において、
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタ
ゴニスト抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フ
ィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）
、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激し
たＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、本明細書に記載され
る又は当業者に公知の方法（例えば、トリパンブルー色素排除アッセイ）によって評価さ
れるとおり、Ｔ細胞マイトジェンによる刺激のみのＴ細胞と比べて細胞生存を少なくとも
約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、
５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、
又は９９％減少させる。

【0313】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋及
びＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）を活性化誘導性細胞死から保護しない。

【0314】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載される（以下の実施例を
参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いかなる抗体も伴わ
ないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗体）を伴う場合
のＯＸ４０Ｌ（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）刺激の存在下又は非存在下でのサイトカイン産
生と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、
ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７
５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％阻害するか、低下させるか
、又は不活性化する。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に
免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載され
る（実施例２など、以下の実施例を参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価
されるとおり、いかなる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特
異的に結合しない抗体）を伴う場合のＯＸ４０Ｌ（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）刺激の存在
下又は非存在下でのサイトカイン産生と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、Ｔ
ＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）を少なくとも約
１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４
．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５
０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍阻害するか又は低下させる。

【0315】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の存在下でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容
体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリス
テートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗Ｃ
Ｄ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細
胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ又
は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によって評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジ
ェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又
はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗
ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）による刺激のみのＴ細胞と比べてサイトカイン産生（例
えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１
３）が少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、
４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、９８％、又は９９％減少する。一部の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒ
トＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の存在下
でＴ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘマグルチニン（
ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、又はＴＣＲ複合体刺
激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）によって刺激したＴ細胞（例えば、Ｃ
Ｄ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の
方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ又は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によっ
て評価されるとおり、Ｔ細胞マイトジェン又はＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィ
トヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、
又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）による刺激のみの
Ｔ細胞と比べてサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－
４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３）が少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍
、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８
倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍
、９０倍、又は１００倍減少する。

【0316】

具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体は、本明細書に記載される（実施例２など、
以下の実施例を参照されたい）又は当業者に公知の方法によって評価されるとおり、いか
なる抗体も伴わないか又は無関係の抗体（例えば、ＯＸ４０に免疫特異的に結合しない抗
体）を伴う場合のＩＬ－２産生と比べてブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エ
ンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激に応答したＩＬ－２産生を少なくとも約１．２倍、１．
３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、
６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、
７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍減少させる。

【0317】

特定の実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する
本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体の存在下でブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激によって刺激したＴ細胞（例えば、ＣＤ４
^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞）は、本明細書に記載される又は当業者に公知の方法（例えば、
ＥＬＩＳＡアッセイ又は以下の実施例に記載されるとおりのもの）によって評価されると
おり、ＳＥＡによる刺激のみのＴ細胞と比べてＩＬ－２産生が少なくとも約１．２倍、１
．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍
、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍
、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍減少する。

【0318】

抗ＯＸ４０抗体は、検出可能標識又は物質に融合又はコンジュゲート（例えば、共有結
合的又は非共有結合的に連結）されてもよい。検出可能標識又は物質の例としては、グル
コースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（^１２５Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、
硫黄（^３５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（
^９９Ｔｃ）などの放射性同位元素；ルミノールなどの発光標識；及びフルオレセイン及び
ローダミンなどの蛍光標識、及びビオチンが挙げられる。かかる標識抗体を使用すると、
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）タンパク質を検出することができる。例えば、以下の
第５．５．２節を参照されたい。

【0319】

５．３抗体産生
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する抗体は、当該技術分野にお
いて公知の任意の抗体合成方法、例えば、化学合成によるか、又は組換え発現技術によっ
て作製することができる。本明細書に記載される方法は、特に指示されない限り、分子生
物学、微生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレ
オチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、及び当該技術分野の技能の範囲内に
ある関連分野の従来技術を用いる。これらの技術については、例えば、本明細書に引用さ
れる参考文献に記載されており、文献に十全に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉ
ｓＴｅｔａｌ．，（１９８２）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂ
ｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＰｒｅｓｓ；ＳａｍｂｒｏｏｋＪｅｔａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ
Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰ
ｒｅｓｓ；ＳａｍｂｒｏｏｋＪｅｔａｌ．，（２００１）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣ
ｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏ
ｒ，ＮＹ；ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９
８７及び年次更新版）；ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７及び年次更新版）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）
（１９８４）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉ
ｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９
１）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔ
ｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ；ＢｉｒｒｅｎＢｅｔａｌ．，
（ｅｄｓ．）（１９９９）ＧｅｎｏｍｅＡｎａｌｙｓｉｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒ
ｅｓｓを参照されたい。

【0320】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＤＮＡ配列の例えば合成、
遺伝子操作による作成が関わる任意の手段によって調製され、発現し、作成され又は単離
された抗体（例えば、組換え抗体）である。特定の実施形態において、かかる抗体は、イ
ンビボで動物又は哺乳類（例えば、ヒト）の抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然には
存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列又はアミノ酸配列）を含む。

【0321】

特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的
に結合する抗体を作成する方法であって、本明細書に記載される細胞又は宿主細胞を培養
するステップを含む方法が提供される。特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（
例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する抗体を作成する方法であって、本明細書
に記載される細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌ
クレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を使用して抗体を発現させる（例えば、組換え発現
させる）ステップを含む方法が提供される。詳細な実施形態において、細胞は単離細胞で
ある。詳細な実施形態において、細胞に外因性ポリヌクレオチドが導入される。詳細な実
施形態において、本方法は、細胞又は宿主細胞から得られた抗体を精製するステップを更
に含む。

【0322】

ポリクローナル抗体を作製する方法は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｓ
ｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（２００
２）５ｔｈＥｄ．，ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＪｏｈｎＷｉ
ｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋのＣｈａｐｔｅｒ１１を参照されたい）
。

【0323】

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、組換え技術、及びファージディスプレイ
技術の使用、又はこれらの組み合わせを含めた、当該技術分野において公知の多様な技法
を用いて調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野において
公知のもの及び例えば、ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，２ｎｄｅｄ．１９８８）；ＨａｍｍｅｒｌｉｎｇＧ
Ｊｅｔａｌ．，ｉｎ：ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＴ－
ＣｅｌｌＨｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９
８１）に教示されるものを含め、ハイブリドーマ法を用いて作製することができる。用語
「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用されるとき、ハイブリドーマ技術によって作
製された抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載される抗
体を外因的に発現する宿主細胞から組換えによって作製することができる。

【0324】

具体的な実施形態において、「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用されるとき、
単一細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマ又は宿主細胞）によって産生さ
れた抗体であり、この抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ又は当該技術分野において公知の若し
くは本明細書に提供される実施例における他の抗原結合又は競合結合アッセイによって決
定するとき、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する。詳細な実施形
態において、モノクローナル抗体はキメラ抗体又はヒト化抗体であり得る。特定の実施形
態において、モノクローナル抗体は一価抗体又は多価（例えば、二価）抗体である。特定
の実施形態において、モノクローナル抗体はＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）_２断片であり得
る。本明細書に記載されるモノクローナル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒＧ＆Ｍｉｌｓ
ｔｅｉｎＣ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５に記載されるとおりのハイブリ
ドーマ方法によって作成することができ、又は例えば、ファージライブラリから例えば本
明細書に記載されるとおりの技法を用いて単離することができる。クローン細胞株及びそ
れが発現するモノクローナル抗体を調製する他の方法が、当該技術分野において周知であ
る（例えば、ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏ
ｇｙ，（２００２）５ｔｈＥｄ．，ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．、前掲のＣｈ
ａｐｔｅｒ１１を参照されたい）。

【0325】

ハイブリドーマ法を用いた特異抗体の作製及びスクリーニング方法はルーチンであり、
当該技術分野において周知である。例えば、ハイブリドーマ方法では、マウス又は他の適
切な宿主動物、例えば、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター又はマカクザルを免
疫して、免疫化に用いたタンパク質（例えば、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０））に特
異的に結合する抗体を産生する又はその産生能を有するリンパ球を誘発する。或いは、リ
ンパ球はインビトロで免疫されてもよい。次にリンパ球を好適な融合剤、例えばポリエチ
レングリコールを使用して骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄ
ｉｎｇＪＷ（Ｅｄ），ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐ
ｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓ
ｓ，１９８６））。加えて、ＲＩＭＭＳ（反復多重部位免疫化）法を用いて動物を免疫し
てもよい（ＫｉｌｐａｔｒｉｃｋＫＥｅｔａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａ１６：３８１－９（全体として参照により援用される））。

【0326】

一部の実施形態では、マウス（又はラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、
又はイヌなどの他の動物）を抗原（例えば、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０））で免疫
することができ、免疫応答が検出されると、マウス血清中に例えば抗原に特異的な抗体が
検出され、マウス脾臓を採取して脾細胞を単離する。次に脾細胞を周知の技法によって任
意の好適な骨髄腫細胞、例えばＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞
株ＳＰ２０の細胞と融合させてハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマを選択し、限
界希釈によってクローニングする。特定の実施形態では、免疫化マウスのリンパ節を採取
し、ＮＳ０骨髄腫細胞と融合させる。

【0327】

このように調製したハイブリドーマ細胞は、融合していない親骨髄腫細胞の成長又は生
存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含有する好適な培養培地に播種して成長させる
。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラー
ゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型
的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含むことになり（ＨＡＴ培地
）、これらの物質がＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。

【0328】

具体的な実施形態では、効率的に融合し、選択の抗体産生細胞による安定した高度な抗
体産生を補助し、且つＨＡＴ培地などの培地に感受性を示す骨髄腫細胞が用いられる。こ
れらの骨髄腫細胞株の中には、ＮＳ０細胞株などのマウス骨髄腫株、又はソーク研究所分
配センター（ＳａｌｋＩｎｓｔｉｔｕｔｅＣｅｌｌＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＣ
ｅｎｔｅｒ）、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭ
ＰＣ－１１マウス腫瘍に由来するもの、及びアメリカンタイプカルチャーコレクション（
ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、Ｒｏｃｋｖｉ
ｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能なＳＰ－２又はＸ６３－Ａｇ８．６５３細胞がある。
ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もヒトモノクローナル抗体の産生につい
て記載されている（ＫｏｚｂｏｒＤ（１９８４）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３３：３００
１－５；Ｂｒｏｄｅｕｒｅｔａｌ．，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＰ
ｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ
．５１－６３（ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７）
）。

【0329】

ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に
特異的なモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によっ
て産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野において公知の方法、例
えば免疫沈降によるか、又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合免疫吸着
アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定される。

【0330】

所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後
、それらのクローンを限界希釈手順によってサブクローニングし、標準方法によって成長
させることができる（ＧｏｄｉｎｇＪＷ（Ｅｄ），ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ、前掲）。この目的に好
適な培養培地としては、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ１６４０培地が挙げられる。
加えて、ハイブリドーマ細胞は動物において腹水腫瘍としてインビボで成長させてもよい
。

【0331】

サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ－セフ
ァロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフ
ィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地、
腹水、又は血清から好適に分離される。

【0332】

本明細書に記載される抗体は、当業者に公知の任意の技法によって生成することができ
る。例えば、本明細書に記載されるＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片は、パパイン（Ｆａｂ
断片の作製用）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２断片の作製用）などの酵素を使用して、免
疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により作製することができる。Ｆａｂ断片は、四
量体抗体分子の２本の同一のアームのうちの一方に対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメイ
ンと対をなす完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド
結合によって連結した、四量体抗体分子のうちの２本の抗原結合アームを含有する。

【0333】

更に、本明細書に記載される抗体はまた、当該技術分野において公知の様々なファージ
ディスプレイ方法を用いて生成することもできる。ファージディスプレイ方法では、タン
パク質をコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面上にタンパク質を
提示する。詳細には、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を動物ｃＤＮＡライ
ブラリ（例えば、罹患組織のヒト又はマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅する。ＶＨ及
びＶＬドメインをコードするＤＮＡをｓｃＦｖリンカーと共にＰＣＲによって組み換え、
ファージミドベクターにクローニングする。このベクターを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に電
気穿孔処理し、この大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）をヘルパーファージに感染させる。これらの
方法に用いられるファージは、典型的にはｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージであり、
ＶＨ及びＶＬドメインは通常ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩのいずれかと組換
えにより融合する。抗原、例えば標識抗原又は固体表面若しくはビーズに結合し若しくは
捕捉された抗原を用いて、特定の抗原に結合する抗体を発現するファージを選択又は同定
することができる。本明細書に記載される抗体の作成に用いることのできるファージディ
スプレイ方法の例としては、ＢｒｉｎｋｍａｎＵｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＩ
ｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１８２：４１－５０；ＡｍｅｓＲＳｅｔａｌ．，
（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔ
ｌｅｂｏｒｏｕｇｈＣＡｅｔａｌ．，（１９９４）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ
２４：９５２－９５８；ＰｅｒｓｉｃＬｅｔａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ１８
７：９－１８；ＢｕｒｔｏｎＤＲ＆ＢａｒｂａｓＣＦ（１９９４）ＡｄｖａｎＩｍ
ｍｕｎｏｌ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／英国特許第９１／００１１３４
号明細書；国際公開第９０／０２８０９号パンフレット、同第９１／１０７３７号パンフ
レット、同第９２／０１０４７号パンフレット、同第９２／１８６１９号パンフレット、
同第９３／１１２３６号パンフレット、同第９５／１５９８２号パンフレット、同第９５
／２０４０１号パンフレット、及び同第９７／１３８４４号パンフレット；及び米国特許
第５，６９８，４２６号明細書、同第５，２２３，４０９号明細書、同第５，４０３，４
８４号明細書、同第５，５８０，７１７号明細書、同第５，４２７，９０８号明細書、同
第５，７５０，７５３号明細書、同第５，８２１，０４７号明細書、同第５，５７１，６
９８号明細書、同第５，４２７，９０８号明細書、同第５，５１６，６３７号明細書、同
第５，７８０，２２５号明細書、同第５，６５８，７２７号明細書、同第５，７３３，７
４３号明細書、及び同第５，９６９，１０８号明細書に開示されるものが挙げられる。

【0334】

上記の参考文献に記載されるとおり、ファージ選択後、ファージから抗体コード領域を
単離し、それを使用してヒト抗体を含めた抗体を生成し、例えば、以下に記載するとおり
、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含めた任意の所望の宿主において
発現させることができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体を組み換
えにより作製する技法も、国際公開第９２／２２３２４号パンフレット；Ｍｕｌｌｉｎａ
ｘＲＬｅｔａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１２（６）：８６
４－９；ＳａｗａｉＨｅｔａｌ．，（１９９５）ＡｍＪＲｅｐｒｏｄＩｍｍ
ｕｎｏｌ３４：２６－３４；及びＢｅｔｔｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ２４０：１０４１－１０４３に開示されるものなど、当該技術分野において
公知の方法を用いて利用することができる。

【0335】

一態様において、抗体の生成には、ＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制
限部位を保護するフランキング配列を含むＰＣＲプライマーを使用して鋳型、例えばｓｃ
ＦｖクローンからＶＨ又はＶＬ配列を増幅し得る。当業者に公知のクローニング技術を利
用して、ＶＨ定常領域を発現するベクターにこのＰＣＲ増幅したＶＨドメインをクローニ
ングすることができ、及び例えばヒトκ又はλ定常領域など、ＶＬ定常領域を発現するベ
クターにこのＰＣＲ増幅したＶＬドメインをクローニングすることができる。ＶＨ及びＶ
Ｌドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることも
できる。次に、当業者に公知の技法を用いて、この重鎖転換ベクター及び軽鎖転換ベクタ
ーを細胞株にコトランスフェクトすると、抗体、例えばＩｇＧを発現する安定した又は一
過性の細胞株が生成される。

【0336】

キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。
例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウス又はラットモノクローナル
抗体の可変領域を含有し得る。キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野において公知で
ある。例えば、ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１２０２
－７；ＯｉＶＴ＆ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
４：２１４－２２１；ＧｉｌｌｉｅｓＳＤｅｔａｌ．，（１９８９）ＪＩｍｍｕ
ｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１－２０２；及び米国特許第５，８０７，７１５
号明細書、同第４，８１６，５６７号明細書、同第４，８１６，３９７号明細書、及び同
第６，３３１，４１５号明細書を参照されたい。

【0337】

ヒト化抗体は所定の抗原との結合能を有し、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配
列を有するフレームワーク領域と実質的に非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グ
ロブリン）のアミノ酸配列を有するＣＤＲとを含むものである。詳細な実施形態において
、ヒト化抗体はまた、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領
域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ
３、及びＣＨ４領域も含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩ
ｇＥを含めた任意の免疫グロブリンクラス、及びＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３及びＩｇ
Ｇ_４を含めた任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、限定はされ
ないが、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第２３９４００号明細書；国際公開第９１／０
９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０
，１０１号明細書、及び同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニヤリング又はリサーフ
ェシング（欧州特許第５９２１０６号明細書及び欧州特許第５１９５９６号明細書；Ｐａ
ｄｌａｎＥＡ（１９９１）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２８（４／５）：４８９－４９８
；ＳｔｕｄｎｉｃｋａＧＭｅｔａｌ．，（１９９４）ＰｒｏｔＥｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔａｌ．，（１９
９４）ＰＮＡＳ９１：９６９－９７３）、チェインシャッフリング（米国特許第５，５
６５，３３２号明細書）、及び例えば、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特
許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３／１７１０５号パンフレット；Ｔａｎ
Ｐｅｔａｌ．，（２００２）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６９：１１１９－２５；Ｃａ
ｌｄａｓＣｅｔａｌ．，（２０００）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１３（５）：３５
３－６０；ＭｏｒｅａＶｅｔａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ２０（３）：
２６７－７９；ＢａｃａＭｅｔａｌ．，（１９９７）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２
７２（１６）：１０６７８－８４；ＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔａｌ．，（１９９６）
ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ９（１０）：８９５９０４；ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａｌ
．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７
７ｓ；ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａｌ．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５５（８
）：１７１７－２２；ＳａｎｄｈｕＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ１５０（２）：４０９
－１０及びＰｅｄｅｒｓｅｎＪＴｅｔａｌ．，（１９９４）ＪＭｏｌＢｉｏｌ
２３５（３）：９５９－７３に開示される技法を含め、当該技術分野において公知の種
々の技法を用いて作製することができる。米国特許出願公開第２００５／００４２６６４
Ａ１号明細書（２００５年２月２４日）（参照により全体として本明細書に援用される
）も参照されたい。

【0338】

シングルドメイン抗体、例えば軽鎖を欠く抗体は、当該技術分野において周知の方法に
よって作製することができる。ＲｉｅｃｈｍａｎｎＬ＆ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓＳ（
１９９９）ＪＩｍｍｕｎｏｌ２３１：２５－３８；ＮｕｔｔａｌｌＳＤｅｔａ
ｌ．，（２０００）ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１（３）：２５３－
２６３；ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓＳ，（２００１）ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４（
４）：２７７－３０２；米国特許第６，００５，０７９号明細書；及び国際公開第９４／
０４６７８号パンフレット、同第９４／２５５９１号パンフレット及び同第０１／４４３
０１号パンフレットを参照されたい。

【0339】

更に、ＯＸ４０抗原に免疫特異的に結合する抗体は、次に、当業者に周知の技法を用い
て、抗原を「模倣」する抗イディオタイプ抗体の生成に利用することができる。（例えば
、ＧｒｅｅｎｓｐａｎＮＳ＆ＢｏｎａＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢＪ７（５）：
４３７－４４４；及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆＡ（１９９１）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４７
（８）：２４２９－２４３８を参照されたい）。

【0340】

詳細な実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体とＯＸ４０（例えば、
ヒトＯＸ４０）の同じエピトープに結合する本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体であ
る。詳細な実施形態において、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又は
ｐａｂ２０４４）のいずれか１つがＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合するのを（
例えば、用量依存的様式で）競合的に阻止する本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体で
ある。ヒト抗体は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて作製することができ
る。例えば、機能性の内因性免疫グロブリンの発現能を有しないが、ヒト免疫グロブリン
遺伝子は発現することができるトランスジェニックマウスを用いることができる。詳細に
は、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をランダムに、又は相同組換えにより
、マウス胚性幹細胞に導入することができる。或いは、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて
、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域をマウス胚性幹細胞に導入することができる
。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺
伝子座の導入とは別に、又はそれと同時に非機能性にすることができる。詳細には、Ｊ_Ｈ
領域のホモ接合性欠失が内因性抗体産生を妨げる。修飾された胚性幹細胞を拡大し、胚盤
胞にマイクロインジェクションしてキメラマウスを作製する。次にこのキメラマウスを繁
殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫を作製する。トランスジェニックマウスを通
常の方法によって選択の抗原、例えば抗原（例えば、ＯＸ４０）の全て又は一部で免疫す
る。これらの免疫したトランスジェニックマウスから、従来のハイブリドーマ法を用いて
抗原に特異的なモノクローナル抗体を得ることができる。トランスジェニックマウスが担
持するヒト免疫グロブリントランス遺伝子はＢ細胞分化中に再配列し、続いてクラススイ
ッチ及び体細胞突然変異を起こす。従って、かかる技法を用いると、治療上有用なＩｇＧ
、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体を作製することが可能である。このヒト抗体作製技術の
概要については、ＬｏｎｂｅｒｇＮ＆ＨｕｓｚａｒＤ（１９９５）ＩｎｔＲｅｖ
Ｉｍｍｕｎｏｌ１３：６５－９３を参照されたい。このヒト抗体及びヒトモノクローナ
ル抗体の作製技術並びにかかる抗体の作製プロトコルの詳細な考察については、例えば、
国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、同第９６／３４０９６号パンフレット及び
同第９６／３３７３５号パンフレット；及び米国特許第５，４１３，９２３号明細書、同
第５，６２５，１２６号明細書、同第５，６３３，４２５号明細書、同第５，５６９，８
２５号明細書、同第５，６６１，０１６号明細書、同第５，５４５，８０６号明細書、同
第５，８１４，３１８号明細書及び同第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。ヒ
ト抗体の産生能を有するマウスの例としては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎ
ｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許第６，０７５，１８１号明細書及び同第６，１５０，１８４号
明細書）、ＨｕＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／ＧｅｎＰｈａ
ｒｍ；米国特許第５，５４５，８０６号明細書及び同第５，５６９、８２５号明細書）、
ＴｒａｎｓＣｈｒｏｍｏＭｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭＭｏｕｓｅ（
商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。

【0341】

ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリ
ン配列に由来する抗体ライブラリを用いた上記に記載するファージディスプレイ方法を含
め、当該技術分野において公知の種々の方法によって作成することができる。米国特許第
４，４４４，８８７号明細書、同第４，７１６，１１１号明細書及び同第５，８８５，７
９３号明細書；及び国際公開第９８／４６６４５号パンフレット、同第９８／５０４３３
号パンフレット、同第９８／２４８９３号パンフレット、同第９８／１６６５４号パンフ
レット、同第９６／３４０９６号パンフレット、同第９６／３３７３５号パンフレット、
及び同第９１／１０７４１号パンフレットも参照されたい。

【0342】

一部の実施形態において、ヒト抗体はマウス－ヒトハイブリドーマを用いて作製するこ
とができる。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換したヒト末梢血
リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス－
ヒトハイブリドーマを作製することができ、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスク
リーニングすることにより、標的抗原（例えば、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０））に
免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。
かかる方法は公知であり、当該技術分野において記載されており、例えば、Ｓｈｉｎｍｏ
ｔｏＨｅｔａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４６：１９－２
３；ＮａｇａｎａｗａＹｅｔａｌ．，（２００５）ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ１４：２７－３１を参照されたい。

【0343】

５．３．１ポリヌクレオチド
特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）抗原に免疫特
異的に結合する本明細書に記載される抗体又はその断片（例えば、可変軽鎖領域及び／又
は可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及びベクター
、例えば、宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び哺乳類細胞）における組換え
発現用の、かかるポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。本明細書には、本明細
書に提供される抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、
並びにかかるポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、それらを宿主細胞、例えば
哺乳類細胞において効率的に発現させるための発現ベクターが提供される。

【0344】

本明細書で使用されるとき、「単離された」ポリヌクレオチド又は核酸分子は、核酸分
子の天然の供給源に（例えば、マウス又はヒトに）存在する他の核酸分子から分離されて
いるものである。更に、「単離された」核酸分子、例えばｃＤＮＡ分子は、他の細胞材料
、又は組換え技術によって産生される場合に培養培地を実質的に含まないか、又は化学的
に合成される場合に化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まないものであってよい
。例えば、語句「実質的に含まない」には、他の材料、例えば、細胞材料、培養培地、他
の核酸分子、化学的前駆体及び／又は他の化学物質が約１５％、１０％、５％、２％、１
％、０．５％、又は０．１％未満（詳細には約１０％未満）であるポリヌクレオチド又は
核酸分子の調製物が含まれる。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体を
コードする１つ又は複数の核酸分子は単離又は精製されている。

【0345】

詳細な態様では、本明細書には、ＯＸ４０ポリペプチド（例えば、ヒトＯＸ４０）に免
疫特異的に結合し、且つ本明細書に記載されるとおりのアミノ酸配列を含む抗体をコード
するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、並びにＯＸ４０ポリペプチドへの結合に
関してかかる抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合するか、又はかかる抗体と同じエ
ピトープに結合する抗体が提供される。

【0346】

特定の態様において、本明細書には、本明細書に記載される抗体の軽鎖又は重鎖をコー
ドするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。本ポリヌクレオチドは、
本明細書に記載される抗体のＶＬＦＲ及びＣＤＲ（例えば、表１及び表３を参照された
い）を含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み得る。本ポリヌクレオチドは、本明
細書に記載される抗体のＶＨＦＲ及びＣＤＲ（例えば、表２及び表４を参照されたい）
を含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み得る。具体的な実施形態において、本明
細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ
ドメインをコードする。具体的な実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオ
チドは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインをコードする。

【0347】

詳細な実施形態において、本明細書には、３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含む、例えば、本明細
書に記載される抗体のいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤ
Ｒ３（例えば、表１を参照されたい）を含有する抗ＯＸ４０抗体をコードするヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。具体的な実施形態において、本明細書には
、３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む、例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか１つのＶＨ
ＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、表２を参照されたい）を含
有するポリヌクレオチドが提供される。具体的な実施形態において、本明細書には、３つ
のＶＨ鎖ＣＤＲを含み、例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか１つのＶＬＣＤ
Ｒ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、表１を参照されたい）を含有し、
且つ３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む、例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか１つのＶ
ＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（例えば、表２を参照されたい）を
含有する抗ＯＸ４０抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供さ
れる。

【0348】

詳細な実施形態において、本明細書には、本明細書に記載されるアミノ酸配列（例えば
、表１及び表３を参照、例えばこれらの表に名指しで同定される特定の抗体のＶＬＣＤ
Ｒ及びＶＬＦＲ）を含むＶＬドメインを含む、例えばＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ
２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含有する抗ＯＸ４０抗体又はその断片をコードするヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。具体的な実施形態において、本明細
書には、本明細書に記載されるアミノ酸配列（例えば、表２及び表４を参照、例えば、こ
れらの表に名指しで同定される特定の抗体のＶＨＣＤＲ及びＶＨＦＲ）を含むＶＨド
メインを含む、例えばＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４
を含有する抗ＯＸ４０抗体又はその断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
オチドが提供される。

【0349】

特定の実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、本明細書に記載
されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）を含む軽鎖可変領域を含む本明細書に提供
される抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態において、本明細書に記載されるポリ
ヌクレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）を含む軽
鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４又はその
断片をコードするヌクレオチド配列を含む。

【0350】

特定の実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、本明細書に記載
されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）を含む重鎖可変領域を含む本明細書に提供
される抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯ
Ｘ４０）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態において、本明細書に記載されるポリ
ヌクレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）を含む重
鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４又はその
断片をコードするヌクレオチド配列を含む。

【0351】

特定の態様において、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列を有す
る１つ以上のＶＬＦＲ（例えば、表３を参照されたい）を含むＶＬドメインを含む本明
細書に記載される抗体又はその断片をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体はＯ
Ｘ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する。特定の態様において、ポリヌ
クレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列を有する１つ以上のＶＨＦＲ（例え
ば、表４を参照されたい）を含むＶＨドメインを含む本明細書に記載される抗体又はその
断片をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に免疫特異的に結合する。

【0352】

具体的な実施形態において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ヒトフレーム
ワーク領域であるフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及びＶＨドメインのフレー
ムワーク領域）を含む本明細書に記載される抗体又はその断片をコードするヌクレオチド
配列を含み、この抗体はＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する。特
定の実施形態において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、上記の第５．２節に
記載される抗体又はその断片（例えば、ＣＤＲ又は可変ドメイン）をコードするヌクレオ
チド配列を含む。

【0353】

具体的な態様において、本明細書には、軽鎖及び重鎖、例えば別個の軽鎖及び重鎖を含
む抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される。軽鎖に関し
て、具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、κ軽鎖をコード
するヌクレオチド配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌ
クレオチドは、λ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。更に別の具体的な実施形態
において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ヒトκ軽鎖又はヒトλ軽鎖を含む
本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。詳細な実施形態におい
て、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免
疫特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は軽鎖を含み、
及びＶＬドメインのアミノ酸配列が配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含んでもよく
、及び軽鎖の定常領域がヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の詳細な実施形態
において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０
）に免疫特異的に結合し、且つ軽鎖を含む抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、Ｖ
Ｌドメインのアミノ酸配列が配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含んでもよく、及び
軽鎖の定常領域がヒトλ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、ヒト定常領域配列
は、米国特許第５，６９３，７８０号明細書に記載されるものであってもよい。

【0354】

詳細な実施形態において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体をコードするヌク
レオチド配列を含み、この抗体は重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列が配列番号１
６に示されるアミノ酸配列を含んでもよく、及び重鎖の定常領域がヒトガンマ（γ）重鎖
定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0355】

特定の実施形態において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体（例えば、ＶＨド
メインが配列番号１６又はＶＬドメインが配列番号１５などのｐａ９１９４９又はｐａｂ
２０４４）のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインをコードする１つ又は複数のヌクレオ
チド配列を含む。

【0356】

更に別の具体的な実施形態において、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＯＸ
４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合する本明細書に記載される抗体をコー
ドするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列
を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、及び定常領域が、ヒトＩｇＧ_１（例えば、
アロタイプ１、１７、又は３）、ヒトＩｇＧ_２、又はヒトＩｇＧ_４の定常領域のアミノ酸
配列を含む。

【0357】

具体的な実施形態において、本明細書には、抗ＯＸ４０抗体又は本明細書において指定
されるそのドメイン（例えば、表１～表４を参照されたい）、例えば抗体ｐａｂ１９４９
又はｐａｂ２０４４をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが提供される
。

【0358】

また、本明細書には、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列による置換、
及びｍＲＮＡ不安定性エレメントの除去によって最適化された、抗ＯＸ４０抗体又はその
断片をコードするポリヌクレオチドも提供される。ｍＲＮＡにおけるコドン変化の導入及
び／又は阻害領域の除去による組換え発現のための抗ＯＸ４０抗体又はその断片（例えば
、軽鎖、重鎖、ＶＨドメイン、又はＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸の生成
方法は、例えば米国特許第５，９６５，７２６号明細書；同第６，１７４，６６６号明細
書；同第６，２９１，６６４号明細書；同第６，４１４，１３２号明細書；及び同第６，
７９４，４９８号明細書に記載される最適化方法を適宜応用することにより実施し得る。
例えば、ＲＮＡ内にある潜在的なスプライス部位及び不安定性エレメント（例えば、Ａ／
Ｔ又はＡ／Ｕリッチエレメント）を、核酸配列によってコードされるアミノ酸を変えるこ
となく突然変異させて、組換え発現用のＲＮＡの安定性を高めることができる。これらの
改変は遺伝子コードの縮重を利用するものであり、例えば、同一のアミノ酸に対する代替
コドンを使用する。一部の実施形態において、保存された突然変異、例えば元のアミノ酸
と同様の化学構造及び特性及び／又は機能を有する同様のアミノ酸をコードするように１
つ以上のコドンを変えることが望ましいこともある。

【0359】

特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体又はその断片（例えば
、ＶＬドメイン又はＶＨドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチド配列は、
本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体又はその断片（例えば、ＶＬドメイン又はＶＨドメ
イン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、
相補的）ポリヌクレオチドとハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態におい
て、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体又は断片をコードする最適化されたヌクレオチ
ド配列は、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体又はその断片をコードする最適化されて
いないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー条
件下でハイブリダイズする。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４
０抗体又はその断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載され
る抗ＯＸ４０抗体又はその断片をコードする最適化されていないヌクレオチド配列のアン
チセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー、中程度の又はより低いストリンジェ
ンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション
条件に関する情報は記載されており、例えば、米国特許出願公開第２００５／００４８５
４９号明細書（例えば、パラグラフ７２～７３）（参照により本明細書に援用される）を
参照されたい。

【0360】

当該技術分野において公知の任意の方法により、ポリヌクレオチドを得ることができ、
及びポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。本明細書に記載され
る抗体、例えば表１～表４に記載される抗体、及びこれらの抗体の修飾されたバージョン
をコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野において周知の方法を用いて決定するこ
とができ、即ち、その抗体をコードする核酸が生成されるような方法で、特定のアミノ酸
をコードすることが分かっているヌクレオチドコドンがアセンブルされる。抗体をコード
するかかるポリヌクレオチドは、化学的に合成したオリゴヌクレオチドからアセンブルす
ることができ（例えば、ＫｕｔｍｅｉｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１７：２４２－２４６に記載されるとおり）、これは、簡潔に言え
ば、抗体をコードする配列の各部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらの
オリゴヌクレオチドのアニーリング及びライゲーション、及び次にライゲートしたオリゴ
ヌクレオチドのＰＣＲ増幅を伴うものである。

【0361】

或いは、本明細書に記載される抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドは、当
該技術分野において周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング方法）を用い
て好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成することができる。例え
ば、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して、既
知の配列の３’末端及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣ
Ｒ増幅を実施することができる。かかるＰＣＲ増幅方法を用いることにより、抗体の軽鎖
及び／又は重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。かかるＰＣＲ増幅方法
を用いることにより、抗体の可変軽鎖領域及び／又は可変重鎖領域をコードする配列を含
む核酸を得ることができる。増幅した核酸を宿主細胞における発現用及び更なるクローニ
ング用のベクターにクローニングすると、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体を生成する
ことができる。

【0362】

特定の抗体又はその断片をコードする核酸を含有するクローンが利用可能でなく、しか
し、抗体分子又はその断片の配列が既知である場合、免疫グロブリン又は断片をコードす
る核酸は、化学的に合成することができ、又は好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライ
ブラリ、又は本明細書に記載される抗体の発現に選択されたハイブリドーマ細胞など、抗
体を発現する任意の組織又は細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリ、又はそれから単離
された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から、配列の３’末端及び５’末端にハイブリ
ダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅によるか、又は特定の遺伝子配列に特
異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用したクローニングにより、例えば、抗体をコー
ドするｃＤＮＡライブラリからｃＤＮＡクローンを同定することによって得ることができ
る。ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、次に、当該技術分野において周知の任意の方
法を用いて複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。

【0363】

本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例
えば、抗ＯＸ４０抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子との特異的結合能を有するオリ
ゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離し、配列決定することができ
る。ハイブリドーマ細胞はかかるＤＮＡの供給源として働き得る。単離後、このＤＮＡを
発現ベクターに置くことができ、次にそれを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細
胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯＧＳＳｙｓｔｅｍ
（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞）、又は本来免疫グロブリンタンパク質を産生しな
い骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトすることにより、組換え宿主細胞におけ
る抗ＯＸ４０抗体の合成が達成される。

【0364】

抗体の生成には、ＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護する
フランキング配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨ又
はＶＬ配列を増幅し得る。当業者に公知のクローニング技術を利用して、重鎖定常領域、
例えばヒトγ４定常領域を発現するベクターにこのＰＣＲ増幅したＶＨドメインをクロー
ニングすることができ、及び軽鎖定常領域、例えばヒトκ又はλ定常領域を発現するベク
ターにこのＰＣＲ増幅したＶＬドメインをクローニングすることができる。特定の実施形
態において、ＶＨ又はＶＬドメインの発現用のベクターは、ＥＦ－１αプロモーター、分
泌シグナル、可変ドメイン用のクローニング部位、定常ドメイン、及びネオマイシンなど
の選択マーカーを含む。ＶＨ及びＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つの
ベクターにクローニングすることもできる。次に、当業者に公知の技法を用いて、この重
鎖転換ベクター及び軽鎖転換ベクターを細胞株にコトランスフェクトすると、完全長抗体
、例えばＩｇＧを発現する安定した又は一過性の細胞株が生成される。

【0365】

ＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列をマウス配列の代
わりに置換することによるか、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペ
プチドのコード配列の全て又は一部を共有結合的につなぎ合わせることにより、修飾する
こともできる。

【0366】

また、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドと高ストリンジェンシ
ー、中程度の又はより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブ
リダイズするポリヌクレオチドも提供される。具体的な実施形態において、本明細書に記
載されるポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＶＨドメイン（例えば、配列番号１
６）及び／又はＶＬドメイン（例えば、配列番号１５）をコードするポリヌクレオチドと
高ストリンジェンシー、中程度の又はより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーシ
ョン条件下でハイブリダイズする。

【0367】

ハイブリダイゼーション条件については当該技術分野において記載されており、当業者
には周知である。例えば、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、６
×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中約４５℃におけるフィルタ結合ＤＮ
Ａへのハイブリダイゼーションと、続く０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中約５０～６５
℃における１回以上の洗浄を伴うものであってもよく；高度にストリンジェントな条件下
でのハイブリダイゼーションは、６×ＳＳＣ中約４５℃におけるフィルタ結合核酸へのハ
イブリダイゼーションと、続く０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中約６８℃における１回
以上の洗浄を伴うものであってもよい。他のストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でのハイブリダイゼーションが当業者に公知であって、記載されており、例えば、
ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏ
ｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ
ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄＪｏｈｎＷｉｌｅｙ
＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ６．３．１～６．３．６頁及び２．１０．３
頁を参照されたい。

【0368】

５．３．２細胞及びベクター
特定の態様において、本明細書には、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結
合する本明細書に記載される抗体を（例えば、組換え）発現する細胞（例えば、宿主細胞
）並びに関連するポリヌクレオチド及び発現ベクターが提供される。本明細書には、宿主
細胞、好ましくは哺乳類細胞における組換え発現のための抗ＯＸ４０抗体又は断片をコー
ドするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター
）が提供される。また、本明細書には、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体（例えば、
ヒト又はヒト化抗体）の組換え発現のためのかかるベクターを含む宿主細胞も提供される
。詳細な態様において、本明細書には、本明細書に記載される抗体を作製する方法が提供
され、この方法は、宿主細胞においてかかる抗体を発現させるステップを含む。

【0369】

ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体又は
その断片（例えば、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖）の組換え発現は、抗体又
は断片をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。本明細書に
記載される抗体又はその断片（例えば、重鎖又は軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌ
クレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターを当該技術分野において周知
の技法を用いた組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。従って、抗体又は抗体
断片（例えば、軽鎖又は重鎖）のコードヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを
発現させることによるタンパク質の調製方法が、本明細書に記載される。当業者に周知の
方法を用いて、抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）コード配列並びに適切な転写
及び翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法と
しては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ法、合成法、及びインビボ遺伝子組換えが挙げ
られる。また、プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載される抗体分子、
抗体の重鎖若しくは軽鎖、抗体若しくはその断片の重鎖若しくは軽鎖可変ドメイン、又は
重鎖若しくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供
される。かかるベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列
を含むことができ（例えば、国際公開第８６／０５８０７号パンフレット及び同第８９／
０１０３６号パンフレット；及び米国特許第５，１２２，４６４号明細書を参照されたい
）、及び抗体の可変ドメインを、全重鎖、全軽鎖、又は全重鎖及び全軽鎖の両方の発現の
ためかかるベクターにクローニングすることができる。

【0370】

発現ベクターは従来技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に移入することができ、次
に得られた細胞を従来技術によって培養することにより、本明細書に記載される抗体（例
えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）又はその断片を作製する
ことができる。従って、本明細書には、宿主細胞においてかかる配列を発現させるための
プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９
４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）又はその断片（例えば、その重鎖又は軽鎖
、又はその断片）をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が提供される。特定
の実施形態において、二重鎖抗体の発現には、以下に詳述するとおり、全免疫グロブリン
分子の発現のため宿主細胞において重鎖及び軽鎖の両方を個々にコードするベクターを発
現させることができる。特定の実施形態において、宿主細胞は、本明細書に記載される抗
体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）の重鎖及び軽鎖の
両方、又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な
実施形態において、宿主細胞は２つの異なるベクターを含有し、第１のベクターが、本明
細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体
）の重鎖又は重鎖可変領域、又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含み、且つ第
２のベクターが、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４
４のＣＤＲを含む抗体）の軽鎖又は軽鎖可変領域、又はその断片をコードするポリヌクレ
オチドを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞が、本明細書に記載される抗体（例え
ば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）の重鎖又は重鎖可変領域、
又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、且つ第２の宿
主細胞が、本明細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣ
ＤＲを含む抗体）の軽鎖又は軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベ
クターを含む。具体的な実施形態において、第１の細胞が発現する重鎖／重鎖可変領域が
第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と結び付くことにより、本明細書に記載される抗ＯＸ４
０抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）を形成する。
特定の実施形態において、本明細書には、かかる第１の宿主細胞とかかる第２の宿主細胞
とを含む宿主細胞集団が提供される。

【0371】

詳細な実施形態において、本明細書には、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体（例え
ば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）の軽鎖／軽鎖可変領域をコ
ードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗
体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）の重鎖／重鎖可変
領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含むベクター集団が提供さ
れる。

【0372】

種々の宿主－発現ベクター系を利用して、本明細書に記載される抗体分子（例えば、ｐ
ａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）を発現させることができる（例え
ば、米国特許第５，８０７，７１５号明細書を参照されたい）。かかる宿主－発現系は、
目的のコード配列の産生及び続く精製を可能にする媒体に相当し、しかしまた、適切なヌ
クレオチドコード配列で形質転換又はトランスフェクトされるとき、本明細書に記載され
る抗体分子をインサイチューで発現する細胞にも相当する。これらとしては、限定はされ
ないが、例えば、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミ
ドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．
ｃｏｌｉ）及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））；抗体コード配列を含有する組換え酵
母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ）ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ））；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現
ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有す
る組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タ
バコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染しているか、又は組換えプラスミド発現ベクター
（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、，コナミドリムシ（
Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）などの緑藻類）；又は哺乳類細
胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）又は哺乳
類ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシ
ニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現コンストラクトを担持する哺
乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣ
Ｋ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂ
ｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ
１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）が挙
げられる。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体（例えば、抗体ｐａｂ
１９４９又はｐａｂ２０４４のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）を発現させるための細
胞は、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯＧＳＳｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ
細胞である。詳細な実施形態において、本明細書に記載される抗体を発現させるための細
胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞株である。具体的な実施形態において、哺乳類発現ベク
ターはｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）又はｐｃＤＮＡ３．３である。詳細な実施形態において
、特に全組換え抗体分子を発現させるための大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ
）などの細菌細胞又は真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が、組換え抗体分子の発現に用い
られる。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間体初期遺伝子プロモーターエ
レメントなどのベクターと併せたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳
類細胞が抗体に有効な発現系である（ＦｏｅｃｋｉｎｇＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ
Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ４５：１０１－１０５；及びＣｏｃｋｅｔｔＭＩｅｔａ
ｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ８：６６２－６６７）。特定の実施形
態において、本明細書に記載される抗体はＣＨＯ細胞又はＮＳ０細胞によって産生される
。具体的な実施形態において、ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に免疫特異的に結合す
る本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモータ
ー、誘導性プロモーター又は組織特異的プロモーターによって調節される。

【0373】

細菌系では、発現させる抗体分子の意図される用途に応じて幾つもの発現ベクターを有
利に選択することができる。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のため、かかる抗体を
多量に作製しようとする場合、精製が容易である、高レベルの融合タンパク質産物の発現
を導くベクターが望ましいことになり得る。かかるベクターとしては、限定はされないが
、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現ベクターｐＵＲ２７８（ＲｕｅｔｈｅｒＵ＆Ｍｕｅｌｌ
ｅｒ－ＨｉｌｌＢ（１９８３）ＥＭＢＯＪ２：１７９１－１７９４）（ここで、抗
体コード配列を、融合タンパク質が作製されるように、個々にベクターへとｌａｃＺコ
ード領域と共にインフレームでライゲートすることができる）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏ
ｕｙｅＳ＆ＩｎｏｕｙｅＭ（１９８５）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ１３：３１０
１－３１０９；ＶａｎＨｅｅｋｅＧ＆ＳｃｈｕｓｔｅｒＳＭ（１９８９）ＪＢｉ
ｏｌＣｈｅｍ２４：５５０３－５５０９）などが挙げられる。例えば、ｐＧＥＸベク
ターもグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質としての外来
性ポリペプチドの発現に使用することができる。一般に、かかる融合タンパク質は可溶性
であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに対する吸着及び結合と、続く遊離
グルタチオンの存在下における溶出とによって溶解細胞から容易に精製することができる
。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物をＧＳＴ部分から放出させる
ことを可能にするためトロンビン又は第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計
される。

【0374】

昆虫系では、例えば、オートグラファカリフォルニカ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ
）をベクターとして使用して、外来性遺伝子を発現させることができる。このウイルスは
スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞で成
長する。抗体コード配列をウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々
にクローニングして、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の
制御下に置くことができる。

【0375】

哺乳類宿主細胞では、幾つものウイルスベースの発現系を利用することができる。発現
ベクターとしてアデノウイルスが使用される場合、目的の抗体コード配列をアデノウイル
ス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及びトリパルタイト（ｔｒｉｐａｒ
ｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲートすることができる。次にこのキメラ遺伝子をインビ
トロ又はインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイル
スゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅｌ又はＥ３）における挿入は、生存可能であり且
つ感染宿主において抗体分子の発現能を有する組換えウイルスをもたらし得る（例えば、
ＬｏｇａｎＪ＆ＳｈｅｎｋＴ（１９８４）ＰＮＡＳ８１：３６５５－３６５９を参
照されたい）。特定の開始シグナルも、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要
となり得る。これらのシグナルとしては、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列が挙げられる。
更には、挿入物全体の翻訳を確実にするため、開始コドンは所望のコード配列のリーディ
ングフレームとインフェーズ（ｉｎｐｈａｓｅ）でなければならない。これらの外因性
翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の、種々の起源であってよい。
発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等を含めること
によって増強し得る（例えば、ＢｉｔｔｅｒＧｅｔａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈ
ｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ１５３：５１６－５４４を参照されたい）。

【0376】

加えて、挿入された配列の発現を調節するか、又は遺伝子産物を所望の特定の方法で修
飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のかかる修
飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に
とって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシ
ング及び修飾に関して特徴的且つ特異的な機構を有する。適切な細胞株又は宿主系を選択
することにより、発現した外来性タンパク質の正しい修飾及びプロセシングを確実にする
ことができる。このため、一次転写物を適切にプロセシングし、グリコシル化し、且つ遺
伝子産物をリン酸化する細胞機構を有する真核生物宿主細胞を使用することができる。か
かる哺乳類宿主細胞としては、限定はされないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ
、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、
ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内因的に産生し
ないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、
ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１
０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨ
ｓＳ７８ＢｓＴ細胞が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗Ｏ
Ｘ４０抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）は、ＣＨ
Ｏ細胞などの哺乳類細胞において作製される。

【0377】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は低下したフコース含量を有す
るか、又はフコース含量を有しない。かかる抗体は、当業者に公知の技法を用いて作製す
ることができる。例えば、フコシル化の能力が欠損又は欠如した細胞において抗体を発現
させることができる。具体的な例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の
対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株を使用して、フコース含量が低下した抗体を作
製することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、
フコース含量が低下した抗体の作製に使用し得るかかるシステムの一例である。

【0378】

組換えタンパク質を長期にわたって高収率で産生させるには、安定発現細胞を生成する
ことができる。例えば、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体（例えば、ｐａｂ１９４９
又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体）を安定に発現する細胞株を操作することができ
る。具体的な実施形態において、本明細書に提供される細胞は、会合することにより本明
細書に記載される抗体（例えば、ｐａｂ１９４９又はｐａｂ２０４４のＣＤＲを含む抗体
）を形成する軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定に発現する。

【0379】

特定の態様において、ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用するよりむしろ
、宿主細胞を、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列
、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）によって制御されるＤＮＡ、及び選択可
能マーカーで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作
された細胞を強化培地で１～２日成長させることができ、次に選択培地に切り換える。組
換えプラスミド中の選択可能マーカーが選択に対する耐性を付与し、且つ細胞によるその
染色体へのプラスミドの安定した組み込み、成長によるフォーカス形成を可能にし、次に
それを細胞株にクローニングして拡大することができる。この方法を用いて、有利には、
本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体又はその断片を発現する細胞株を操作することがで
きる。かかる操作された細胞株は、抗体分子と直接又は間接的に相互作用する組成物のス
クリーニング及び評価に特に有用であり得る。

【0380】

幾つもの選択系を用いることができ、限定はされないが、単純ヘルペスウイルスチミジ
ンキナーゼ（ＷｉｇｌｅｒＭｅｔａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ１１（１）：２
２３－２３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂ
ａｌｓｋａＥＨ＆ＳｚｙｂａｌｓｋｉＷ（１９６２）ＰＮＡＳ４８（１２）：２０
２６－２０３４）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＬｏｗｙＩｅｔ
ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ２２（３）：８１７－８２３）遺伝子を、それぞれｔ
ｋ－、ｈｇｐｒｔ－又はａｐｒｔ－細胞において利用することができる。また、以下の遺
伝子について、代謝拮抗薬耐性も選択基準として用いることができる：ｄｈｆｒ（メトト
レキサート耐性を付与する）（ＷｉｇｌｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ
７７（６）：３５６７－３５７０；Ｏ’ＨａｒｅＫｅｔａｌ．，（１９８１）Ｐ
ＮＡＳ７８：１５２７－１５３１）；ｇｐｔ（ミコフェノール酸耐性を付与する）（Ｍ
ｕｌｌｉｇａｎＲＣ＆ＢｅｒｇＰ（１９８１）ＰＮＡＳ７８（４）：２０７２－２
０７６）；ｎｅｏ（アミノグリコシドＧ－４１８耐性を付与する）（ＷｕＧＹ＆Ｗｕ
ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ３：８７－９５；ＴｏｌｓｔｏｓｈｅｖＰ（
１９９３）ＡｎｎＲｅｖＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ３２：５７３－５９
６；ＭｕｌｌｉｇａｎＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９２６－９３２；及
びＭｏｒｇａｎＲＡ＆ＡｎｄｅｒｓｏｎＷＦ（１９９３）ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃ
ｈｅｍ６２：１９１－２１７；ＮａｂｅｌＧＪ＆ＦｅｌｇｎｅｒＰＬ（１９９３）
ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１１（５）：２１１－２１５）；及びｈｙｇｒｏ
（ハイグロマイシン耐性を付与する）（ＳａｎｔｅｒｒｅＲＦｅｔａｌ．，（１９
８４）Ｇｅｎｅ３０（１－３）：１４７－１５６）。組換えＤＮＡ技術分野において一
般に知られている方法をルーチンで適用して所望の組換えクローンを選択することができ
、かかる方法については、例えば、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．）
，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，
ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；ＫｒｉｅｇｌｅｒＭ，Ｇｅｎｅ
ＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａ
ｎｕａｌ，ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；及びＣｈａｐｔｅｒｓ
１２ａｎｄ１３，ＤｒａｃｏｐｏｌｉＮＣｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒ
ｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＪｏｈｎＷｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｅ－ＧａｒａｐｉｎＦｅｔａ
ｌ．，（１９８１）ＪＭｏｌＢｉｏｌ１５０：１－１４（全体として参照によって
本明細書に援用される）に記載されている。

【0381】

抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（レビューに
ついては、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎＣＲ＆ＨｅｎｔｓｃｈｅｌＣＣＧ，Ｔｈｅｕｓｅ
ｏｆｖｅｃｔｏｒｓｂａｓｅｄｏｎｇｅｎｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｆｏｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｏｎｅｄｇｅｎｅｓｉｎｍａ
ｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓｉｎＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現する
ベクター系中のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害薬レ
ベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピー数が増加することになる。増幅領域は抗体遺
伝子に関連付けられているため、抗体の産生も増加することになる（ＣｒｏｕｓｅＧＦ
ｅｔａｌ．，（１９８３）ＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ３：２５７－６６）。

【0382】

宿主細胞には、本明細書に記載される２つ以上の発現ベクター、重鎖由来のポリペプチ
ドをコードする第１のベクターと軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターと
をコトランスフェクトすることができる。これらの２つのベクターは同一の選択可能マー
カーを含有してもよく、これにより重鎖及び軽鎖ポリペプチドの等しい発現が可能となる
。宿主細胞には、異なる量の２つ以上の発現ベクターをコトランスフェクトすることがで
きる。例えば、宿主細胞には、以下の比：１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１
：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、
１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、又は１：５０のうちのいずれか１つの第１の
発現ベクターと第２の発現ベクターとをトランスフェクトすることができる。

【0383】

或いは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、且つその発現能を有する単一の
ベクターを使用してもよい。かかる状況では、過剰な無毒重鎖を回避するため、軽鎖は重
鎖よりも前に置かれるべきである（ＰｒｏｕｄｆｏｏｔＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ
３２２：５６２－５６５；及びＫｏｅｈｌｅｒＧ（１９８０）ＰＮＡＳ７７：２１
９７－２１９９）。重鎖及び軽鎖のコード配列はｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含み得る。
発現ベクターは単シストロン性又は多シストロン性であってもよい。多シストロン性核酸
コンストラクトは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える、又は２
～５、５～１０又は１０～２０個の範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードすることが
できる。例えば、二シストロン性核酸コンストラクトは、プロモーター、第１の遺伝子（
例えば、本明細書に記載される抗体の重鎖）、及び第２の遺伝子（例えば、本明細書に記
載される抗体の軽鎖）をこの順序で含み得る。かかる発現ベクターでは、両方の遺伝子の
転写がこのプロモーターによって駆動されることができ、一方、第１の遺伝子からのｍＲ
ＮＡの翻訳はｃａｐ依存性スキャニング機構によることができ、第２の遺伝子からのｍＲ
ＮＡの翻訳はｃａｐ非依存性機構、例えばＩＲＥＳによることができる。

【0384】

本明細書に記載される抗体分子が組換え発現によって作製されると、これを免疫グロブ
リン分子の精製に関して当該技術分野において公知の任意の方法、例えば、クロマトグラ
フィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性
によるもの、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心、溶解度差によるか、又
はタンパク質の精製に関する任意の他の標準的な技法により精製することができる。更に
、本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される又はその他、当該技術分野におい
て精製を促進することが公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。

【0385】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は単離又は精製されている。概
して、単離抗体とは、その単離抗体と異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含ま
ないものである。例えば、詳細な実施形態において、本明細書に記載される抗体の調製物
は細胞材料及び／又は化学的前駆体を実質的に含まない。語句「細胞材料を実質的に含ま
ない」には、それが単離され又は組換え産生される元となった細胞の細胞成分から抗体が
分離されている抗体の調製物が含まれる。従って、細胞材料を実質的に含まない抗体には
、異種タンパク質（本明細書では「夾雑タンパク質」とも称される）及び／又は抗体の変
異体、例えば異なる翻訳後修飾形態の抗体が約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１
％、０．５％、又は０．１％未満（乾燥重量基準）である抗体の調製物が含まれる。抗体
又は断片が組換えによって作製される場合、それはまた、概して培養培地も実質的に含ま
ず、即ち、培養培地がタンパク質調製物の容積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５
％、又は０．１％未満を占める。抗体又は断片が化学合成によって作製される場合、それ
は概して化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まず、即ち、それはタンパク質の合
成に関わる化学的前駆体又は他の化学物質と分離されている。従って、抗体又は断片のか
かる調製物は、目的の抗体又は断片以外の化学的前駆体又は化合物が約３０％、２０％、
１０％、又は５％（乾燥重量基準）未満である。具体的な実施形態において、本明細書に
記載される抗体は単離又は精製されている。

【0386】

５．４医薬組成物
本明細書には、生理学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）ＭａｃｋＰｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）中において所望の程度の純度を有する本明
細書に記載される抗体を含む組成物が提供される。許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤
は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントにとって非毒性である。

【0387】

本明細書に記載される医薬組成物は、ＯＸ４０活性の増強、誘導、又は活性化、並びに
癌又は感染症などの病態の治療において有用であり得る。本明細書に記載される方法によ
り治療し得る癌の例としては、限定はされないが、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、Ｂ細胞慢性
リンパ性白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ
細胞リンパ腫）、基底細胞癌、膀胱癌、芽細胞腫、脳転移、乳癌、バーキットリンパ腫、
癌腫（例えば、腺癌（例えば、胃食道接合部腺癌））、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌（
結腸癌及び直腸癌）、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、胃
食道接合部癌、消化管癌、膠芽腫（例えば、多形性膠芽腫、例えば、新しく診断されたも
の又は再発性）、神経膠腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、肝転移、ホジキン
及び非ホジキンリンパ腫、腎癌（例えば、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍）、喉頭癌、白血
病（例えば、慢性骨髄球性白血病、ヘアリー細胞白血病）、肝臓癌（例えば、肝癌及びヘ
パトーマ）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌）、リンパ芽球性リンパ腫、リ
ンパ腫、マントル細胞リンパ腫、転移性脳腫瘍、転移性癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄
腫）、神経芽細胞腫、眼メラノーマ、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌（例えば、膵管腺
癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性（例えば、去勢抵抗性）、転移性、転移性ホル
モン不応性（例えば、去勢抵抗性、アンドロゲン非依存性））、腎細胞癌（例えば、転移
性）、唾液腺癌、肉腫（例えば、横紋筋肉腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、転移
性黒色腫））、軟部組織肉腫、固形腫瘍、扁平上皮癌、滑膜肉腫、精巣癌、甲状腺癌、移
行上皮癌（尿路上皮細胞癌）、ぶどう膜黒色腫（例えば、転移性）、いぼ状癌、外陰癌、
及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症が挙げられる。一実施形態において、本
明細書に記載される方法により治療し得る癌の例としては、限定はされないが、進行性、
再発性、又は転移性固形腫瘍、リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫又は
バーキットリンパ腫）、乳癌、前立腺癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、結腸癌、黒色腫（例え
ば、転移性黒色腫）、子宮内膜癌、腎細胞癌、腎明細胞癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌
又は肺腺癌）、卵巣癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、胃癌（ｓｔｏ
ｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、子宮癌、褐色細胞腫、転移性皮膚扁平上皮癌（例えば、移植
患者における）、メルケル細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、神経内分泌腫瘍、骨由来腫瘍（
例えば、骨肉腫）、血管外皮細胞腫、遺伝的症候群（ＮＦ１又はＶＨＬ）に関連する腫瘍
、脊索腫、上衣腫、髄芽腫、胚細胞腫、小腸腫瘍、虫垂癌、及びウイルス関連腫瘍（例え
ば、カポジ肉腫）が挙げられる。本明細書に記載される医薬組成物は、一実施形態におい
て、医薬又は診断薬として用いられるものである。本明細書に記載されるアゴニスト抗体
を含む医薬組成物は、一実施形態において、癌を治療する方法に用いられるものである。

【0388】

本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体を含む本明細書に記載される医薬組成物は、
ＯＸ４０活性を低下させるか、阻害するか又は不活性化させ、及び炎症性若しくは自己免
疫性疾患若しくは障害又は感染症などの病態を治療するのに有用であり得る。本明細書に
記載されるアンタゴニスト抗体を含む医薬組成物は、一実施形態において、炎症性若しく
は自己免疫性疾患若しくは障害又は感染症を治療する方法に用いられるものである。

【0389】

本明細書に記載されるアンタゴニスト抗体を含む本明細書に記載される医薬組成物は、
ＯＸ４０活性を低下させるか、不活性化するか、又は阻害し、及び感染（ウイルス、細菌
、真菌及び寄生虫）、感染に関連するエンドトキシンショック、関節炎、関節リウマチ、
喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、炎症性腸
疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ペイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹
膜炎、乾癬、脈管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム病、関節炎、髄膜脳炎、
ブドウ膜炎、自己免疫性ブドウ膜炎、中枢及び末梢神経系の免疫介在性炎症性障害（多発
性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデスなど）及びギラン・バレー症候群など）、
皮膚炎、アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝炎、線維性胞隔炎、グレーブス病、ＩｇＡ腎症
、特発性血小板減少性紫斑病、メニエール病、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、サルコイド
ーシス、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、膵炎、外傷（外科的）、移植片対宿主病、移植片
拒絶反応、心筋梗塞並びにアテローム性動脈硬化症などの虚血性疾患を含めた心疾患（即
ち、心血管疾患）、血管内凝固、骨吸収、骨粗鬆症、骨関節炎、歯周炎、低酸症、視神経
脊髄炎、セリアック病、結合組織障害（例えば、ループス）、感染後炎症性障害（例えば
、ギラン・バレー症候群）、及び腫瘍随伴症候群からなる群から選択される病態を治療す
るのに有用であり得る。

【0390】

生体内投与に用いられる組成物は無菌であり得る。これは、例えば滅菌ろ過膜によるろ
過によって容易に達成される。

【0391】

５．５使用及び方法
５．５．１治療的使用及び方法
一態様において、本明細書には、対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応答を調節する方
法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に、本明細書に記載される抗ＯＸ
４０抗体、又はその組成物を投与するステップを含む。ある具体的な態様において、本明
細書には、対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応答を活性化するか、増強するか、又は誘
導する方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はそ
の組成物を投与するステップを含む。具体的な実施形態において、本明細書には、１つ以
上の免疫機能又は免疫応答を活性化するか又増強することが望ましい疾患を予防及び／又
は治療する方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に、本明細書に記載
される抗ＯＸ４０抗体又はその組成物を投与するステップを含む。特定の実施形態におい
て、本明細書には感染症を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要としている
対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組成物を投与するステップを含む。特定の実施形態におい
て、本明細書には癌を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象
に抗ＯＸ４０抗体又はその組成物を投与するステップを含む。癌は、黒色腫、腎癌、及び
前立腺癌からなる群から選択され得る。癌は、黒色腫、腎癌、前立腺癌、結腸癌、及び肺
癌からなる群から選択され得る。特定の実施形態において、本明細書には黒色腫を治療す
る方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組
成物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には腎癌を治療する
方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組成
物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には前立腺癌を治療す
る方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組
成物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には結腸癌を治療す
る方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組
成物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には肺癌を治療する
方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ４０抗体又はその組成
物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には非小細胞肺癌（Ｎ
ＳＣＬＣ）を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要としている対象に抗ＯＸ
４０抗体又はその組成物を投与するステップを含む。一例では、本方法は、チェックポイ
ントターゲティング剤を対象に投与するステップを更に含む。一例では、チェックポイン
トターゲティング剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗
体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニ
スト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡ
Ｍ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、及びアゴニスト抗
ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。特定の実施形態において、チェックポイントタ
ーゲティング剤はアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体である。特定の実施形態において、チェ
ックポイントターゲティング剤はアンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。特定の実施形
態において、チェックポイントターゲティング剤はアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体である。特
定の実施形態において、チェックポイントターゲティング剤はアゴニスト抗ＣＤ１３７抗
体である。

【0392】

特定の実施形態では、本明細書に開示される方法において抗ＰＤ－１抗体が使用される
。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉ
ｂｂによって開発された、ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ１１０６としても知られるニ
ボルマブである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏによっ
て開発された、ランブロリズマブ又はＭＫ－３４７５としても知られるペンブロリズマブ
である。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＣｕｒｅＴｅｃｈによって開発さ
れた、ＣＴ－０１１としても知られるピジリズマブである。特定の実施形態において、抗
ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発された、ＡＭＰ－５１４としても知ら
れるＭＥＤＩ０６８０である。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、Ｎｏｖａｒ
ｔｉｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＰＤＲ００１である。特定
の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌｓによって開発されたＲＥＧＮ２８１０である。特定の実施形態において、抗ＰＤ
－１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒによって開発されたＰＦ－０６８０１５９１である。特定の実
施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅによって開発されたＢＧＢ－Ａ３１
７である。特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ及びＴｅ
ｓａｒｏによって開発されたＴＳＲ－０４２である。特定の実施形態において、抗ＰＤ－
１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉによって開発されたＳＨＲ－１２１０である。

【0393】

本明細書に開示される治療方法において使用し得る抗ＰＤ－１抗体の更なる非限定的な
例が、以下の特許及び特許出願（これらは、あらゆる目的のために全体として参照により
本明細書に援用される）に開示されている：米国特許第６，８０８，７１０号明細書；米
国特許第７，３３２，５８２号明細書；米国特許第７，４８８，８０２号明細書；米国特
許第８，００８，４４９号明細書；米国特許第８，１１４，８４５号明細書；米国特許第
８，１６８，７５７号明細書；米国特許第８，３５４，５０９号明細書；米国特許第８，
６８６，１１９号明細書；米国特許第８，７３５，５５３号明細書；米国特許第８，７４
７，８４７号明細書；米国特許第８，７７９，１０５号明細書；米国特許第８，９２７，
６９７号明細書；米国特許第８，９９３，７３１号明細書；米国特許第９，１０２，７２
７号明細書；米国特許第９，２０５，１４８号明細書；米国特許出願公開第２０１３／０
２０２６２３Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１３／０２９１１３６Ａ１号明
細書；米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８Ａ１号明細書；米国特許出願公開
第２０１４／０３５６３６３Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００７５７
８３Ａ１号明細書；及び国際公開第２０１３／０３３０９１Ａ１号パンフレット；国
際公開第２０１５／０３６３９４Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１４／１７９６
６４Ａ２号パンフレット；国際公開第２０１４／２０９８０４Ａ１号パンフレット；
国際公開第２０１４／２０６１０７Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１５／０５８
５７３Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１５／０８５８４７Ａ１号パンフレット
；国際公開第２０１５／２００１１９Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１６／０１
５６８５Ａ１号パンフレット；及び国際公開第２０１６／０２０８５６Ａ１号パンフ
レット。

【0394】

特定の実施形態では、本明細書に開示される方法において抗ＰＤ－Ｌ１抗体が使用され
る。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発さ
れたアテゾリズマブである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ａｓｔｒａ
Ｚｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ及びＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたデュルバルマ
ブである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ及
びＰｆｉｚｅｒによって開発された、ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られるアベルマ
ブである。特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ
Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＭＤＸ－１１０５である。特定の実施形態において、
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ及びＧＳＫによって開発されたＡＭＰ－２２
４である。

【0395】

本明細書に開示される治療方法において使用し得る抗ＰＤ－Ｌ１抗体の非限定的な例は
、以下の特許及び特許出願（これらは、あらゆる目的のために全体として参照により本明
細書に援用される）に開示されている：米国特許第７，９４３，７４３号明細書；米国特
許第８，１６８，１７９号明細書；米国特許第８，２１７，１４９号明細書；米国特許第
８，５５２，１５４号明細書；米国特許第８，７７９，１０８号明細書；米国特許第８，
９８１，０６３号明細書；米国特許第９，１７５，０８２号明細書；米国特許出願公開第
２０１０／０２０３０５６Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００３／０２３２３２
３Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１３／０３２３２４９Ａ１号明細書；米国
特許出願公開第２０１４／０３４１９１７Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１４
／００４４７３８Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０２０３５８０Ａ１
号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０２２５４８３Ａ１号明細書；米国特許出願
公開第２０１５／０３４６２０８Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３５
５１８４Ａ１号明細書；及び国際公開第２０１４／１０００７９Ａ１号パンフレット
；国際公開第２０１４／０２２７５８Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１４／０５
５８９７Ａ２号パンフレット；国際公開第２０１５／０６１６６８Ａ１号パンフレッ
ト；国際公開第２０１５／１０９１２４Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１５／１
９５１６３Ａ１号パンフレット；国際公開第２０１６／０００６１９Ａ１号パンフレ
ット；及び国際公開第２０１６／０３０３５０Ａ１号パンフレット。

【0396】

特定の実施形態において、本明細書には、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ
性白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リ
ンパ腫）、基底細胞癌、膀胱癌、芽細胞腫、脳転移、乳癌、バーキットリンパ腫、癌腫（
例えば、腺癌（例えば、胃食道接合部腺癌））、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌（結腸癌
及び直腸癌）、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、胃食道接
合部癌、消化管癌、膠芽腫（例えば、多形性膠芽腫、例えば、新しく診断されたもの又は
再発性）、神経膠腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、肝転移、ホジキン及び非
ホジキンリンパ腫、腎癌（例えば、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍）、喉頭癌、白血病（例
えば、慢性骨髄球性白血病、ヘアリー細胞白血病）、肝臓癌（例えば、肝癌及びヘパトー
マ）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌）、リンパ芽球性リンパ腫、リンパ腫
、マントル細胞リンパ腫、転移性脳腫瘍、転移性癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、
神経芽細胞腫、眼メラノーマ、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌（例えば、膵管腺癌）、
前立腺癌（例えば、ホルモン不応性（例えば、去勢抵抗性）、転移性、転移性ホルモン不
応性（例えば、去勢抵抗性、アンドロゲン非依存性））、腎細胞癌（例えば、転移性）、
唾液腺癌、肉腫（例えば、横紋筋肉腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、転移性黒色
腫））、軟部組織肉腫、固形腫瘍、扁平上皮癌、滑膜肉腫、精巣癌、甲状腺癌、移行上皮
癌（尿路上皮細胞癌）、ぶどう膜黒色腫（例えば、転移性）、いぼ状癌、外陰癌、及びワ
ルデンシュトレームマクログロブリン血症からなる群から選択される癌を治療する方法が
提供される。特定の実施形態において、本明細書には、進行性、再発性、又は転移性固形
腫瘍、リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫又はバーキットリンパ腫）、
乳癌、前立腺癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、結腸癌、黒色腫（例えば、転移性黒色腫）、子
宮内膜癌、腎細胞癌、腎明細胞癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌又は肺腺癌）、卵巣癌、
胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ
）、子宮癌、褐色細胞腫、転移性皮膚扁平上皮癌（例えば、移植患者における）、メルケ
ル細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、神経内分泌腫瘍、骨由来腫瘍（例えば、骨肉腫）、血管
外皮細胞腫、遺伝的症候群（ＮＦ１又はＶＨＬ）に関連する腫瘍、脊索腫、上衣腫、髄芽
腫、胚細胞腫、小腸腫瘍、虫垂癌、及びウイルス関連腫瘍（例えば、カポジ肉腫）からな
る群から選択される癌を治療する方法が提供される。

【0397】

別の実施形態において、癌と診断された患者に対し、患者における１つ以上の免疫細胞
集団（例えば、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞などのＴ細胞エフェクター細胞）の増殖及
び／又はエフェクター機能を増加させるため抗ＯＸ４０抗体が投与される。

【0398】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、当該技術分野に
おいて周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、及び細胞増殖アッセイを
用いると、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体を投与されない対象の免疫機能と比べて
対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応答を少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なく
とも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５
％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少な
くとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２
５％、少なくとも２０％、又は少なくとも１０％、又は１０％～２５％、２５％～５０％
、５０％～７５％、又は７５％～９５％の範囲で活性化するか、又は増強するか、又は誘
導する。具体的な実施形態において、免疫機能はサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２、
ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－１３産生）である。
別の実施形態において、免疫機能はＴ細胞増殖／拡大であり、これは、例えばフローサイ
トメトリーにより、Ｔ細胞のマーカー（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、又はＣＤ８）を発現す
る細胞数を検出してアッセイすることができる。別の実施形態において、免疫機能は抗体
産生であり、これは、例えばＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。一部の実施
形態において、免疫機能はエフェクター機能であり、これは、例えば細胞傷害性アッセイ
又は当該技術分野において周知の他のアッセイによってアッセイすることができる。別の
実施形態において、免疫機能はＴｈ１応答である。別の実施形態において、免疫機能はＴ
ｈ２応答である。別の実施形態において、免疫機能はメモリー応答である。

【0399】

具体的な実施形態において、抗ＯＸ４０抗体によって増強又は誘導することのできる免
疫機能の非限定的な例は、エフェクターリンパ球の増殖／拡大（例えば、エフェクターＴ
リンパ球数の増加）、及びエフェクターリンパ球（例えば、エフェクターＴリンパ球）の
アポトーシスの阻害である。詳細な実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０
抗体によって増強又は誘導される免疫機能は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴ
ｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、α／βＴ細
胞、及びγ／δＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細
胞、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、マク
ロファージ、単球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、好塩基球又は多核白血球の数の増殖
／拡大又はその活性化である。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗
体は、リンパ球前駆体の増殖／拡大又は数を活性化するか又は増強する。一部の実施形態
において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、陰性対照（例えば、本明細書に記載
される抗ＯＸ４０抗体によって治療されず、それと共に培養されず、又はそれと接触して
いないそれぞれの細胞の数）と比べて、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２ヘ
ルパーＴ細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、α／βＴ細胞、及
びγ／δＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、腫
瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロフ
ァージ、単球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、好塩基球又は多核白血球の数をおよそ少
なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも
８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、
少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくと
も３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、又は少なくとも１
０％、又は１０％～２５％、２５％～５０％、５０％～７５％、又は７５％～９５％の範
囲で増加させる。

【0400】

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、ＩＤＯ（インドー
ルアミン－（２，３）－ジオキシゲナーゼ）及びＴＤＯ（トリプトファン２，３－ジオキ
シゲナーゼ）などの１つ又は複数の免疫調節酵素を標的とする化合物と併用して対象に投
与される。詳細な実施形態において、かかる化合物は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ
Ｃｏｒｐ）、Ｆ００１２８７（ＦｌｅｘｕｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、インドキシ
モド（ＮｅｗＬｉｎｋＧｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋＧｅ
ｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態において、化合物はエパカドスタ
ットである。別の実施形態において、化合物はＦ００１２８７である。別の実施形態にお
いて、化合物はインドキシモドである。別の実施形態において、化合物はＮＬＧ９１９で
ある。

【0401】

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、ワクチンと併用し
て対象に投与される。

【0402】

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、抗ＣＤ１３７抗体
、リツキシマブ、シクロホスファミド、化学療法、又は放射線療法と併用して対象に投与
される。

【0403】

一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、熱ショックタンパ
ク質ベースの腫瘍ワクチン又は熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンと併用して
対象に投与される。具体的な実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、熱ショックタンパク
質ベースの腫瘍ワクチンと併用して対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）
は、あらゆる種に遍在的に存在する高度に保存されたタンパク質ファミリーである。その
発現は、熱ショック又は他の形態の、毒素への曝露、酸化的ストレス若しくはグルコース
欠乏を含めたストレスの結果として極めて高いレベルに強力に誘導され得る。分子量によ
って５つのファミリーに分類されている：ＨＳＰ－１１０、－９０、－７０、－６０及び
－２８。ＨＳＰはマクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）の
交差提示経路を介して免疫原性ペプチドを送達し、Ｔ細胞活性化をもたらす。ＨＳＰは腫
瘍関連抗原ペプチドのシャペロン担体として機能し、腫瘍特異的免疫を誘導することが可
能な複合体を形成する。瀕死の腫瘍細胞から放出されると、このＨＳＰ－抗原複合体は抗
原提示細胞（ＡＰＣ）に取り込まれ、ここで、抗原が、ＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ分
子に結合するペプチドにプロセシングされて、抗腫瘍ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の活
性化がもたらされる。腫瘍調製物に由来するＨＳＰ複合体によって誘発された免疫は、各
対象の癌が発現するユニークな抗原ペプチドレパートリーを特異的に標的とする。

【0404】

熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的
に複合体化した熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰ
ＰＣは自然免疫応答及び適応免疫応答の両方を誘発する。具体的な実施形態において、こ
の抗原ペプチドは治療下の癌に対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣはＡＰＣによって膜受容
体（主にＣＤ９１）を介して又はＴｏｌｌ様受容体への結合によって効率的に捕捉される
。ＨＳＰＰＣのインターナリゼーションにより、ケモカイン及びサイトカイン産生を伴う
ＡＰＣの機能的成熟が起こり、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球並びにＴｈ１及びＴ
ｈ－２介在性免疫応答の活性化がもたらされる。一部の実施形態において、本明細書に開
示される方法に用いられるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体化したストレスタンパク
質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、又はｈｓｐ９０ファミリーからの１つ以上の熱ショックタ
ンパク質を含む。一部の実施形態において、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈ
ｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、又はこれらの
２つ以上の組み合わせを含む。

【0405】

具体的な実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、癌の治療のため熱ショックタンパク質
ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば熱ショックタンパク質ペプチド複合体－９６（Ｈ
ＳＰＰＣ－９６）と併用して対象に投与される。ＨＳＰＰＣ－９６は、抗原ペプチドと複
合体化した９６ｋＤａ熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ－
９６は、対象の腫瘍から製造される癌免疫療法薬であり、癌の抗原性「フィンガープリン
ト」を含む。一部の実施形態において、このフィンガープリントは、その特定の対象の特
異的癌細胞のみに存在するユニークな抗原を含み、ワクチンの注射が対象の免疫系を刺激
して、特異的癌フィンガープリントを有する任意の細胞を認識して攻撃することが意図さ
れる。

【0406】

一部の実施形態において、ＨＳＰＰＣ、例えばＨＳＰＰＣ－９６は、対象の腫瘍組織か
ら作製される。具体的な実施形態において、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は
、治療下の癌又はその転移のタイプの腫瘍から作製される。別の具体的な実施形態におい
て、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は、治療下の対象にとって自己である。一
部の実施形態において、腫瘍組織は非壊死腫瘍組織である。一部の実施形態において、少
なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４
、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、又は少な
くとも１０グラム）の非壊死腫瘍組織が、ワクチンレジメンの作製に使用される。一部の
実施形態において、外科的切除後、ワクチン製剤における使用前に非壊死腫瘍組織は凍結
される。一部の実施形態において、ＨＳＰＰＣ、例えばＨＳＰＰＣ－９６は、腫瘍組織か
ら精製技法によって単離され、ろ過され、及び注射ワクチン用に調製される。一部の実施
形態において、対象には６～１２用量のＨＳＰＰＣ、例えばＨＳＰＣＣ－９６が投与され
る。かかる実施形態において、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ－９６用量は、初めの４
用量が毎週投与され、次に追加の２～８用量が隔週で投与される。

【0407】

本明細書に記載される方法において使用し得るＨＳＰＰＣの更なる例が、以下の特許及
び特許出願（これらは、あらゆる目的のために全体として参照により本明細書に援用され
る）、米国特許第６，３９１，３０６号明細書、同第６，３８３，４９２号明細書、同第
６，４０３，０９５号明細書、同第６，４１０，０２６号明細書、同第６，４３６，４０
４号明細書、同第６，４４７，７８０号明細書、同第６，４４７，７８１号明細書及び同
第６，６１０，６５９号明細書に開示されている。

【0408】

一部の実施形態では、本発明は、医薬として用いられる本発明の抗体又は医薬組成物に
関する。一部の態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる本発明の抗体又
は医薬組成物に関する。一部の態様において、本発明は、対象の癌を治療する方法であっ
て、本発明の抗体又は医薬組成物の有効量を対象に投与するステップを含む方法に用いら
れる本発明の抗体又は医薬組成物に関する。一部の態様において、本発明は、医薬として
用いられる（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）チェックポイントターゲティン
グ剤に関する。一部の態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる（ａ）本
発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）チェックポイントターゲティング剤に関する。一部
の態様において、本発明は、（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）チェックポイ
ントターゲティング剤を含む組成物、キット又はキットオブパーツに関する。一態様にお
いて、本発明は、医薬として用いられる（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）Ｉ
ＤＯ阻害薬に関する。一部の態様において、本発明は、癌を治療する方法に用いられる（
ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）ＩＤＯ阻害薬に関する。一部の態様において
、本発明は、（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）ＩＤＯ阻害薬を含む組成物、
キット又はキットオブパーツに関する。一部の態様において、本発明は、医薬として用い
られる（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び（ｂ）ワクチンに関する。一部の態様にお
いて、本発明は、癌を治療する方法に用いられる（ａ）本発明の抗体又は医薬組成物及び
（ｂ）ワクチンに関する。一部の態様において、本発明は、（ａ）本発明の抗体又は医薬
組成物及び（ｂ）ワクチンを含む組成物、キット又はキットオブパーツに関する。癌を治
療する方法に用いられる抗体又は医薬組成物の好ましい実施形態において、抗体はアゴニ
スト性である。

【0409】

一態様において、本明細書に提供されるとおりの対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応
答を調節する方法は、対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応答を不活性化するか、低下さ
せるか、又は阻害する方法であり、この方法は、それを必要としている対象に、抗ＯＸ４
０アンタゴニスト抗体又はその組成物を投与するステップを含む。具体的な実施形態にお
いて、本明細書には、１つ以上の免疫機能又は免疫応答を不活性化するか、低下させるか
、又は阻害することが望ましい疾患を予防及び／又は治療する方法が提供され、この方法
は、それを必要としている対象に、本明細書に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体
又はその組成物を投与するステップを含む。特定の実施形態において、本明細書には、自
己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要と
している対象に抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体又はその組成物の有効量を投与するステッ
プを含む。特定の実施形態において、対象はヒトである。特定の実施形態において、疾患
又は障害は、感染（ウイルス、細菌、真菌及び寄生虫）、感染に関連するエンドトキシン
ショック、関節炎、関節リウマチ、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、骨盤内炎症性
疾患、アルツハイマー病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ペイロニー病、セ
リアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、脈管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿
病、ライム病、関節炎、髄膜脳炎、ブドウ膜炎、自己免疫性ブドウ膜炎、中枢及び末梢神
経系の免疫介在性炎症性障害（多発性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデスなど）
及びギラン・バレー症候群など）、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝炎、線維性
胞隔炎、グレーブス病、ＩｇＡ腎症、特発性血小板減少性紫斑病、メニエール病、天疱瘡
、原発性胆汁性肝硬変、サルコイドーシス、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、膵炎、外傷（
外科的）、移植片対宿主病、移植片拒絶反応、心筋梗塞並びにアテローム性動脈硬化症な
どの虚血性疾患を含めた心疾患（即ち、心血管疾患）、血管内凝固、骨吸収、骨粗鬆症、
骨関節炎、歯周炎、低酸症、視神経脊髄炎、セリアック病、結合組織障害（例えば、ルー
プス）、感染後炎症性障害（例えば、ギラン・バレー症候群）、及び腫瘍随伴症候群から
なる群から選択される。特定の実施形態において、疾患又は障害は、移植片拒絶反応、脈
管炎、喘息、関節リウマチ、皮膚炎、炎症性腸疾患、ブドウ膜炎、及びループスからなる
群から選択される。特定の実施形態において、本明細書における任意の方法（例えば、感
染症を治療する方法、又は自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法）が、本明
細書に記載されるとおりの抗体とチェックポイントターゲティング剤との対象への投与を
含む。特定の実施形態において、チェックポイントターゲティング剤は抗体（例えば、抗
ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＴＩＭ－
３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体
、又は抗ＯＸ４０抗体）である。特定の実施形態において、チェックポイントターゲティ
ング剤はアンタゴニスト抗体又はアゴニスト抗体である。特定の実施形態において、チェ
ックポイントターゲティング剤は抗ＰＤ－１抗体である。特定の実施形態において、チェ
ックポイントターゲティング剤は抗ＧＩＴＲ抗体である。特定の実施形態において、チェ
ックポイントターゲティング剤は抗ＣＤ１３７抗体である。

【0410】

別の実施形態において、自己免疫性又は炎症性疾患又は障害と診断された患者に対し、
患者における１つ以上の免疫細胞集団（例えば、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞などのＴ
細胞エフェクター細胞）の増殖及び／又はエフェクター機能を減少させるため抗ＯＸ４０
アンタゴニスト抗体が投与される。

【0411】

具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体は、
当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、及び細胞
増殖アッセイを用いると、本明細書に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体を投与さ
れない対象の免疫機能と比べて対象の１つ以上の免疫機能又は免疫応答を少なくとも９９
％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少な
くとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５
０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少
なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、又は少なくとも１０％、又は１
０％～２５％、２５％～５０％、５０％～７５％、又は７５％～９５％の範囲で不活性化
するか、又は低下させるか、又は阻害する。具体的な実施形態において、免疫機能はサイ
トカイン産生（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、及
び／又はＩＬ－１３産生）である。別の実施形態において、免疫機能はＴ細胞増殖／拡大
であり、これは、例えばフローサイトメトリーにより、Ｔ細胞のマーカー（例えば、ＣＤ
３、ＣＤ４、又はＣＤ８）を発現する細胞数を検出してアッセイすることができる。別の
実施形態において、免疫機能は抗体産生であり、これは、例えばＥＬＩＳＡによってアッ
セイすることができる。一部の実施形態において、免疫機能はエフェクター機能であり、
これは、例えば細胞傷害性アッセイ又は当該技術分野において周知の他のアッセイによっ
てアッセイすることができる。別の実施形態において、免疫機能はＴｈ１応答である。別
の実施形態において、免疫機能はＴｈ２応答である。別の実施形態において、免疫機能は
メモリー応答である。

【0412】

具体的な実施形態において、抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体によって低下させるか又は
阻害することのできる免疫機能の非限定的な例は、エフェクターリンパ球の増殖／拡大（
例えば、エフェクターＴリンパ球数の減少）、及びエフェクターリンパ球（例えば、エフ
ェクターＴリンパ球）のアポトーシスの刺激である。詳細な実施形態において、本明細書
に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体によって低下又は阻害される免疫機能は、Ｃ
Ｄ４^＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例え
ば、細胞傷害性Ｔリンパ球、α／βＴ細胞、及びγ／δＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質
細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２^＋Ｔ細胞、
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、マクロファージ、単球、樹状細胞、マスト細胞、好酸
球、好塩基球又は多核白血球の数の増殖／拡大又はその活性化である。一実施形態におい
て、本明細書に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体は、リンパ球前駆体の増殖／拡
大又は数を不活性化するか、又は低下させるか、又は阻害する。一部の実施形態において
、本明細書に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体は、陰性対照（例えば、本明細書
に記載される抗ＯＸ４０アンタゴニスト抗体によって治療されず、それと共に培養されず
、又はそれと接触していないそれぞれの細胞の数）と比べて、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば
、Ｔｈ１及びＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ
球、α／βＴ細胞、及びγ／δＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞
、メモリーＢ細胞、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（
ＮＫ細胞）、マクロファージ、単球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、好塩基球又は多核
白血球の数をおよそ少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくと
も９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％
、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なく
とも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０
％、又は少なくとも１０％、又は１０％～２５％、２５％～５０％、５０％～７５％、又
は７５％～９５％の範囲で減少させる。

【0413】

一部の態様において、本発明は、自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法に
用いられる本発明の抗体又は医薬組成物に関する。一態様において、本発明は、感染症を
治療する方法に用いられる本発明の抗体又は医薬組成物に関する。自己免疫性若しくは炎
症性疾患若しくは障害、又は感染症を治療する方法に用いられる抗体又は医薬組成物の好
ましい実施形態において、抗体はアンタゴニスト性である。

【0414】

５．５．１．１投与経路及び投薬量
本明細書に記載される抗体又は組成物は、非経口、皮下、静脈内、皮内、経皮、鼻腔内
、腫瘍内、及び腫瘍流入領域リンパ節への投与など、種々の経路によって対象に送達する
ことができる。一実施形態において、本抗体又は組成物は静脈内又は腫瘍内経路によって
投与される。

【0415】

病態の治療及び／又は予防において有効となり得る抗体又は組成物の量は疾患の性質に
依存することになり、標準的な臨床技術によって決定することができる。

【0416】

組成物中に用いられる正確な用量も投与経路、及び疾患の重症度に依存することになり
、専門家の判断及び各対象の状況に応じて決定されなければならない。例えば、有効用量
はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重及び健康を含む）、患者
がヒト又は動物か、投与されている他の薬物療法、又は治療が予防的又は療法的かによっ
ても異なり得る。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含めた非ヒ
ト哺乳動物も治療することができる。治療投薬量は、安全性及び有効性が最適となるよう
に最適にタイトレーションされる。

【0417】

特定の実施形態において、最適投薬量範囲の同定を促進するため、インビトロアッセイ
が用いられる。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られた用量反応曲線
から推定することができる。

【0418】

概して、ヒト抗体は、外来性ポリペプチドに対する免疫応答に起因して、他の種からの
抗体よりもヒト体内でより長い半減期を有する。従って、より低い投薬量のヒト抗体及び
より少ない頻度の投与が可能であることが多い。

【0419】

５．５．２検出及び診断的使用
本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体（例えば、第５．２節を参照されたい）を使用す
ることにより、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、又はウエスタンブ
ロッティングなどのイムノアッセイを含めた当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を
用いて生体試料中のＯＸ４０タンパク質レベルをアッセイすることができる。好適な抗体
アッセイ標識は当該技術分野において公知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標
識；ヨウ素（^１２５Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^３５Ｓ）、トリチウム（^３
Ｈ）、インジウム（^１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（^９９Ｔｃ）などの放射性同位元素
；ルミノールなどの発光標識；及びフルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識、及び
ビオチンが挙げられる。かかる標識は、本明細書に記載される抗体の標識に使用すること
ができる。或いは、本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体を認識する二次抗体を標識し、
これを抗ＯＸ４０抗体と組み合わせて用いることにより、ＯＸ４０タンパク質レベルを検
出してもよい。

【0420】

ＯＸ４０タンパク質の発現レベルのアッセイは、第１の生体試料中のＯＸ４０タンパク
質レベルを直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定又は推定することによる）、又は
相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによる
）、定性的又は定量的に計測又は推定することを含むものと意図される。第１の生体試料
中のＯＸ４０ポリペプチド発現レベルは、計測又は推定し、標準ＯＸ４０タンパク質レベ
ルと比較することができ、この標準は、障害を有しない個体から得られた第２の生体試料
から採取されるか、又は障害を有しない個体集団からのレベルを平均することによって決
定される。当該技術分野では理解されるであろうとおり、「標準」ＯＸ４０ポリペプチド
レベルが既知となれば、それを比較用の標準として繰り返し使用することができる。

【0421】

本明細書で使用されるとき、用語「生体試料」は、対象から得られた任意の生体試料、
細胞株、組織、又は潜在的にＯＸ４０を発現する細胞の他の供給源を指す。動物（例えば
、ヒト）から組織生検及び体液を入手する方法は、当該技術分野において周知である。生
体試料には、末梢単核血球が含まれる。

【0422】

本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は、当業者に周知の標準的であり且つ本記載に基
づくインビトロ及びインビボ適用を含め、予後判定、診断、モニタリング及びスクリーニ
ング適用に使用することができる。免疫系の状態及び／又は免疫応答のインビトロ評価及
び判定用の予後判定、診断、モニタリング及びスクリーニングアッセイ及びキットを利用
して予測、診断及びモニタすることにより、免疫系機能不全を有することが分かっている
か、又はそれを有する疑いがあるものを含めた患者試料を、又は予想される又は所望の免
疫系応答、抗原応答又はワクチン応答に関して判定してもよい。免疫系の状態及び／又は
免疫応答の評価及び判定はまた、ある薬物の臨床試験又は特定の化学療法剤若しくは抗体
の投与が（これらの組み合わせを含め）別の薬剤又は抗体と比べて患者に適合するかどう
かの決定においても有用である。この種の予後判定及び診断モニタリング及び評価では、
既に、乳癌におけるＨＥＲ２タンパク質に対する抗体（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標），
Ｄａｋｏ）が実際に利用されており、このアッセイはまた、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商
標）を使用した抗体療法に関する患者の判定にも用いられている。インビボ適用としては
、標的化細胞療法及び免疫系調節及び免疫応答の放射性イメージングが挙げられる。

【0423】

一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、生検試料の免疫組織化学において使用することが
できる。

【0424】

別の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体を使用してＯＸ４０レベル、又はその膜表面上にＯ
Ｘ４０を含有する細胞のレベルを検出し、次にそのレベルを特定の疾患症状に関係付ける
ことができる。本明細書に記載される抗ＯＸ４０抗体は検出可能標識又は機能性標識を有
し得る。蛍光標識が用いられる場合、現在利用可能な顕微鏡法及び蛍光活性化セルソータ
ー分析（ＦＡＣＳ）又は当該技術分野において公知の両方法の組み合わせ手順を利用して
特異的結合メンバーを同定し、及び定量化することができる。本明細書に記載される抗Ｏ
Ｘ４０抗体は蛍光標識を有することができる。例示的蛍光標識としては、例えば、反応性
及びコンジュゲート型プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン及びテキサス
レッド、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素及びＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。
抗ＯＸ４０抗体は、同位元素^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５７
Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１１７Ｌｕ、^１
^２１Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１９８Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１３Ｂｉ、^２２５
Ａｃ及び^１８６Ｒｅなどの放射性標識を有することができる。放射性標識が用いられる場
合、当該技術分野において公知の現在利用可能なカウント手順を利用してＯＸ４０（例え
ば、ヒトＯＸ４０）への抗ＯＸ４０抗体の特異的結合を同定し、定量化し得る。標識が酵
素である例では、検出は、当該技術分野において公知のとおりの現在利用されている比色
分析法、分光光度法、蛍光分光光度法、電流測定法又は気体定量法のいずれかによって達
成し得る。これは、抗体とＯＸ４０との間の複合体形成を可能にする条件下で試料又は対
照試料を抗ＯＸ４０抗体に接触させることにより実現し得る。抗体とＯＸ４０との間に形
成される任意の複合体が検出され、試料及び対照において比較される。本明細書に記載さ
れる抗体のＯＸ４０に対する特異的結合を踏まえると、その抗体を使用して細胞表面上の
ＯＸ４０発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載される抗体はまた、イム
ノアフィニティー精製によるＯＸ４０の精製にも使用することができる。

【0425】

また、本明細書には、例えば、ＯＸ４０又はＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ複合体の存在の程度
を定量分析するための、試験キットの形態で調製されてもよいアッセイシステムも含まれ
る。このシステム又は試験キットは、標識された構成成分、例えば標識された抗体と、１
つ以上の追加の免疫化学的試薬とを含み得る。キットに関する詳細については、例えば、
以下の第５．６節を参照されたい。

【0426】

一部の態様では、試料中のＯＸ４０をインビトロで検出する方法であって、前記試料を
抗体と接触させるステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の態様において、
本明細書には、試料中のＯＸ４０のインビトロ検出のための本明細書に提供される抗体の
使用が提供される。一態様において、本明細書には、対象におけるＯＸ４０の検出に用い
られる本明細書に提供される抗体又は医薬組成物が提供される。一態様において、本明細
書には、診断薬として用いられる本明細書に提供される抗体又は医薬組成物が提供される
。好ましい一実施形態において、本抗体は検出可能標識を含む。好ましい一実施形態にお
いて、ＯＸ４０はヒトＯＸ４０である。好ましい一実施形態において、対象はヒトである
。

【0427】

５．６キット
本明細書には、本明細書に記載される１つ以上の抗体又はそのコンジュゲートを含むキ
ットが提供される。具体的な実施形態において、本明細書には、本明細書に提供される１
つ以上の抗体など、本明細書に記載される医薬組成物の成分の１つ以上が充填された１つ
以上の容器を含む医薬パック又はキットが提供される。一部の実施形態において、本キッ
トには、本明細書に記載される医薬組成物と、本明細書に記載されるものなどの任意の予
防剤又は治療剤とが含まれる。特定の実施形態において、本キットには、Ｔ細胞マイトジ
ェン、例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）及び／又はホルボールミリステートアセ
テート（ＰＭＡ）など、又はＴＣＲ複合体刺激抗体、例えば抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８
抗体が含まれ得る。任意選択で、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用又は販売を規制す
る行政機関が指定する様式の通知がかかる容器と関連付けられてもよく、この通知は、そ
の機関によるヒト投与向けの製造、使用又は販売の認可を反映するものである。

【0428】

また、本明細書には、上記の方法において使用することのできるキットも提供される。
一実施形態において、キットは、１つ以上の容器に本明細書に記載される抗体、好ましく
は精製抗体を含む。具体的な実施形態において、本明細書に記載されるキットには、対照
として使用することのできる実質的に単離されたＯＸ４０抗原（例えば、ヒトＯＸ４０）
が含まれる。別の具体的な実施形態において、本明細書に記載されるキットは、ＯＸ４０
抗原と反応しない対照抗体を更に含む。別の具体的な実施形態において、本明細書に記載
されるキットには、ＯＸ４０抗原への抗体の結合を検出するための１つ以上の要素が含ま
れる（例えば、抗体が、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物又は発光化合物などの検出
可能な基質にコンジュゲートされてもよく、又は第１の抗体を認識する二次抗体を検出可
能な基質にコンジュゲートしてもよい）。具体的な実施形態において、本明細書に提供さ
れるキットは、組換え産生されるか又は化学的に合成されたＯＸ４０抗原を含み得る。キ
ットに提供されるＯＸ４０抗原はまた、固体支持体に結合されていてもよい。より具体的
な実施形態において、上述のキットの検出手段は、ＯＸ４０抗原が結合する固体支持体を
含む。かかるキットはまた、結合されていない、レポーターで標識された抗ヒト抗体又は
抗マウス／ラット抗体も含み得る。この実施形態において、ＯＸ４０抗原への抗体の結合
は、前記レポーター標識抗体の結合によって検出することができる。また、（ａ）本発明
の抗体又は医薬組成物、及び（ｂ）チェックポイントターゲティング剤、ＩＤＯ阻害薬及
び／又はワクチンを含むキット又はキットオブパーツも提供される。

【0429】

以下の例は、限定としてではなく、例示として提供される。

【実施例】

【0430】

本節（即ち、第６節）の例は、限定としてではなく、例示として提供される。

【0431】

６．１実施例１：ヒトＯＸ４０に対する新規抗体の生成
この例は、ヒトＯＸ４０に結合する抗体の生成及び特徴付けについて記載する。詳細に
は、この例は、ヒトＯＸ４０に特異的に結合し且つＴ細胞に対して共刺激効果を呈するヒ
ト抗体の生成について記載する。

【0432】

６．１．１ライブラリ生成
ＲｅｔｒｏｃｙｔｅＤｉｓｐｌａｙ（商標）ライブラリの生成が本明細書に記載され
る。ライブラリインサートの生成のため、２つの臍帯血試料に由来するＦＡＣＳで分取し
たＣＤ１９陽性ヒトＢリンパ球からフェノール／クロロホルムで全ＲＮＡを抽出した。各
臍帯血試料の全ＲＮＡ（１μｇ）を使用することにより、ＦｅｒｍｅｎｔａｓのＲｅｖｅ
ｒｔＡｉｄＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡ合成キット（カタログ番号Ｋ１６２１
及びＫ１６２２）を用いて第１鎖ｃＤＮＡを合成した。このｃＤＮＡからＰＣＲによって
抗体可変領域を増幅し、レトロウイルス発現ベクター（ｐＣＭＡ）にクローニングした。
続いてこれらのコンストラクトを使用してｐｒｅＢ細胞を形質導入し、Ｒｅｔｒｏｃｙｔ
ｅＤｉｓｐｌａｙ（商標）技術を用いて表面上に抗体を発現させた。このレトロウイル
ス発現ベクターは、５’及び３’ＬＴＲと、膜アンカーフラクション（ＩＧＨＧ１）を含
む免疫グロブリン定常領域（ＩＧＨＧ１又はＩＧＫＣ）と、ＣＤ４表面マーカー遺伝子と
を含んだ。

【0433】

軽鎖可変領域（ＶＬ）は、Ｖκファミリー特異的フォワードプライマー及びリバースプ
ライマー混合物を使用したセミネステッドＰＣＲによって増幅した。フォワードプライマ
ーがＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位を導入し、リバースプライマーがＥｃｏ４７ＩＩＩ
クローニング部位を導入した。

【0434】

重鎖可変領域（ＶＨ）は、ＶＨファミリー特異的フォワードプライマー及びリバースプ
ライマー混合物を使用したＰＣＲによって増幅した。フォワードプライマーがＨｉｎｄＩ
ＩＩクローニング部位を導入し、リバースプライマーがＥｃｏ４７ＩＩＩクローニング部
位を導入した。

【0435】

増幅したＶＨ及びＶκ領域を３７℃で一晩消化した。消化後、４００～４５０ｂｐのサ
イズのバンドが得られ、これをゲル精製した（Ｍａｃｈｅｒｅｙ＆Ｎａｇｅｌ，Ｎｕｃｌ
ｅｏＳｐｉｎＧｅｌａｎｄＰＣＲｃｌｅａｎ－ｕｐ）。

【0436】

重鎖可変領域のクローニングについては、コンストラクト３１８１（ｐＣＭＡ－Ｉｎｓ
ＸＣｇ（ｉｓｏ３）ｌｏｘＰ２－Ｉ－ｔｒ＿ｈｕＣＤ４－ｌｏｘＰ）をＨｉｎｄＩＩＩ
／Ｅｃｏ４７ＩＩＩによって３７℃で４時間消化し、８３６２ｂｐのサイズのバンドをゲ
ル精製した。κ軽鎖可変領域のクローニングについては、コンストラクト３２０４（ｐＣ
ＭＡ－ＩｎｓＸＣｋ－Ｉ－ＣＤ４）をＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩによって３７
℃で４時間消化し、７４６５ｂｐのサイズのバンドをゲル精製した。

【0437】

消化及び精製した抗体可変領域を適切な発現ベクターに１：３のベクター対インサート
比を用いてインフレームでライゲートした。各ＶＨ及びＶκファミリーを個別にレトロウ
イルス発現ベクターにライゲートし、沈殿によって１０倍濃縮した。沈殿したＶＨ及びＶ
κライゲーション反応物はまた、ライブラリ生成のため個別に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｄ
Ｈ１０Ｂ細胞に形質転換した。各ＶＨ及びＶκファミリーを個別にライゲートし、沈殿さ
せ、及び形質転換することにより、ライブラリが機能性生殖系列遺伝子の天然の分布を反
映することが可能になり、機能性生殖系列遺伝子の数がそれ程多くないファミリーと比較
して、多数の機能性生殖系列遺伝子を有するＶＨ又はＶκファミリーが最終的なライブラ
リにおいて高度に表現されることが確実となる。形質転換後、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細
胞を回収し、最終的なライブラリに組み合わせた。各ライブラリの品質は、診断的制限消
化及びシーケンシングデータの分析によって管理した。配列解析のデータから、ライブラ
リの多様性を計算した。

【0438】

６．１．２事前選択されたｐｒｅＢ細胞クローンからの重鎖及び軽鎖の回収
上記に記載したとおり生成したライブラリ材料を使用して、ＯＸ４０に対する結合親和
性が高い抗体を同定した。Ｂ細胞クローンを溶解させて、ゲノムＤＮＡに安定に組み込ま
れた挿入レトロウイルスベクターから当該技術分野において標準的なＰＣＲ方法を用いて
重鎖及び軽鎖可変領域を増幅した。続いて増幅された重鎖及び軽鎖可変領域を、ヒト重鎖
及び軽鎖定常領域を含有する哺乳類発現ベクターにクローニングした。続いてＤＮＡプラ
スミド調製物を使用してＣＨＯ細胞をトランスフェクトし、発現した抗体を、サスペンシ
ョンアレイ技術を用いて試験した。抗体重鎖及び軽鎖をＭｉｃｒｏｓｙｎｔｈ（Ｂａｌｇ
ａｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）においてシーケンシングした。

【0439】

６．１．３抗ＯＸ４０抗体の生物物理学的特徴付け
ｐａｂ１９４９と命名される抗体が選択され、これを以下に記載するとおり幾つものア
ッセイで特徴付けた。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９は、配列番号６０のアミノ酸配列を
含む重鎖と配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。抗体ｐａｂ１９４９は、定
常領域への可変領域のインフレームでのクローニングを容易にするＴ１０９Ｓ置換（即ち
、野生型軽鎖定常ドメインと比べて、１０９位のスレオニンのセリンによる置換）（Ｋａ
ｂａｔに従い付番）を軽鎖定常ドメインに含むヒトＩｇＧ_１抗体である。この突然変異は
、抗体の結合又は機能に影響を及ぼさない保存された修飾である。ｐａｂ１９４９－１と
呼ばれる野生型対応物（これは、Ｋａｂａｔに従い付番して１０９位にスレオニンを含む
）も生成した。抗体ｐａｂ１９４９－１は、配列番号６０の重鎖と配列番号２０の軽鎖と
を含むヒトＩｇＧ_１抗体である。

【0440】

６．１．３．１バイオレイヤー干渉法による親和性測定
ｐａｂ１９４９－１の親和性をバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定した。簡
潔に言えば、１×ＰＢＳを使用して組換えヒトＯＸ４０抗原（ＯＸ４０－Ｆｃ、Ｒ＆Ｄ）
を希釈することにより０．２μＭの１，０００μｌを得て、９６ウェルプレートに加えた
。ｐａｂ１９４９－１を５０ｎＭの濃度となるように１×ＰＢＳに希釈した。この５０ｎ
Ｍ溶液から１×ＰＢＳを使用してｐａｂ１９４９－１の６ポイント段階希釈物を調製する
ことにより５０ｎＭ～０．７８ｎＭの範囲の抗体希釈物を得て、ウェル当たり１００μｌ
のそれぞれの抗体段階希釈を９６ウェルプレートに加えた。製造者の指示に従い閾値を１
．０ｎｍとしてＯｃｔｅｔ（登録商標）の１６チャネルモードを用いてセンサをヒトＯＸ
４０抗原で２５℃において５分間被覆した。ブロックするため、０．５ｍｇ／ｍｌの非特
異的ＩｇＧ_１抗体を１０分間インキュベートした。ｐａｂ１９４９－１の段階抗体希釈物
が入ったプレートをＯｃｔｅｔ（登録商標）機器に置いた。製造者の指示に従いアッセイ
を行った。ＯＸ４０抗原に対するｐａｂ１９４９－１の結合及び解離は、それぞれ３分間
及び１０分間記録した。データはＯｃｔｅｔ（登録商標）データ分析ソフトウェアを使用
して分析しており、結果を表５に示す。

【0441】

【表5】

【0442】

６．１．３．２活性化ヒト又はカニクイザルＴ細胞への抗体結合
抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びｐａｂ１９４９－１のヒト又はカニクイザルＯＸ４
０への結合特性をフローサイトメトリーによって分析した。

【0443】

健常ドナーバフィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，
ＬＬＣ）からＦｉｃｏｌｌグラジエントで単離したヒトＰＢＭＣについて、磁気ベースの
分離（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を用いて手付かずのＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ
細胞をエンリッチした。次にエンリッチされたＴリンパ球集団を推奨される培養条件下で
ＣＤ３－ＣＤ２８拡大用エクスパンションビーズ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）に
よって５００ＵｒＩＬ－２（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）と共に３日間、その後は５０Ｕ
ｒＩＬ－２と共に活性化した。推奨される培養条件は、１０％ウシ胎仔血清、１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ－グルタミンを補足したＲＰＭＩ－１６４０培
地において３７℃及び５％ＣＯ_２で培養される細胞として定義された。活性化後、細胞を
ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）に希釈したＣＤ３（ＢＶ７１１、ＯＫＴ３）、
ＣＤ４（ＢＶ６０５、ＯＫＴ４）、ＣＤ８ａ（ＢＶ６５０、ＲＰＡ－Ｔ８）のコンジュゲ
ート抗体、及びプレコンジュゲート抗ＯＸ４０抗体又はアイソタイプ対照（両方ともＡｆ
ｌｕｏｒ４８８、１０μｇ／ｍｌ）を含有する表面抗体カクテルと共に４℃で３０分間イ
ンキュベートした。単染色コンペンセーションコントロール（ＣＤ４５－ＢＶ６５０、Ｃ
Ｄ４５－Ａｆｌｕｏｒ４８８、ＣＤ４５－ＢＶ６０５、及びＣＤ４５－ＢＶ７１１）のた
め、更なる試料を取っておいた。次に細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＦｏｒ
ｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した
。フローサイトメトリープロットは、ＦＡＣＳＤＩＶＡ及びＷＥＨＩＷｅａｓｅｌソ
フトウェアの組み合わせを用いて分析した。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９は活性化ヒト
ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に結合した（図１Ａ）。

【0444】

活性化Ｔ細胞への結合に関して一連の濃度のｐａｂ１９４９－１を試験して、用量反応
関係を特徴付けた。端的には、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を解凍してＰＢＳで洗浄
した。磁気ビーズ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）でＴ細胞のネガティブ単離を実施
し、精製されたＴ細胞をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに再懸濁し、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビー
ズによって３７℃及び５％ＣＯ_２で７２時間刺激した。これらの細胞を洗浄し、Ｆｃブロ
ッキング溶液（Ｔｒｕｓｔａｉｎ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって室温で１５分間ブロッ
クした。細胞を再び洗浄し、ｐａｂ１９４９－１の段階希釈物（１０～０．００００３μ
ｇ／ｍｌ）によって暗所で４℃において４５分間染色した。細胞を洗浄し、次に抗ＣＤ３
イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）（クローンＳＰ３４）及び抗ＣＤ４ブリリ
アントバイオレット（ＢＶ）５１０（クローンＯＫＴ４）を含む系列マーカー抗体で二次
抗体と共に染色してｐａｂ１９４９－１（抗κＩｇＧＰＥ）を検出した。細胞を洗浄し
、１．６％パラホルムアルデヒドで固定し、ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＦｏｒ
ｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して捕捉した。ｐａｂ１９４９－１は、刺激され
たＴ細胞にのみ結合し、しかし、非刺激Ｔ細胞には結合しないことを実証した（図１Ｂ）
。ｐａｂ１９４９－１の活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞への結合は用量依存的であった（図
１Ｃ）。

【0445】

次に、ｐａｂ１９４９－１の結合に関して幾つもの静止免疫細胞サブタイプを試験した
。ヒトＰＢＭＣを解凍してＰＢＳで洗浄した。死細胞を染色するため、赤外（ＩＲ）生死
判別色素を加え、遮光下室温で１５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、アミン色素
赤外（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって室温で１５分間染色した。細胞を
洗浄し、室温で１０分間Ｆｃブロックした（ＴｒｕｓｔａｉｎＦｃＸ，Ｂｉｏｌｅｇｅ
ｎｄ）。洗浄後、細胞を１μｇ／ｍｌのｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対
照と共に遮光下４℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、二次試薬（抗Ｆｃ
Ｆ（ａｂ’）ＰＥ、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｅＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ）で染色し、続いて、抗ＣＤ３フィコエリトリンシアニン７（ＰＥＣｙ７、ク
ローンＳＰ３４．２）、抗ＣＤ８ＢＶ５１０（クローンＳＫ１）、抗ＣＤ４ペリジニン
－クロロフィル－タンパク質複合体（ＰｅｒＣＰ）Ｃｙ５（クローンＬｙ２００）、及び
抗ＣＤ１４ＦＩＴＣ（クローンＴＵＫ４）を含む系列マーカー抗体で染色した。細胞を
洗浄し、１．６％パラホルムアルデヒドで固定して、ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ
Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して捕捉した。図１Ｄに示すとおり、抗
ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１は、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋
Ｔ細胞、ＣＤ２０＋Ｂ細胞、又はＣＤ３－ＣＤ２０－細胞への検出可能な結合を示さ
なかった。

【0446】

種交差反応性に関して試験するため、活性化カニクイザル（マカカ・ファスシキュラリ
ス（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））ＰＢＭＣを使用して細胞結合アッセイ
を実施した。簡潔に言えば、１０％熱失活ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ培地中、５％ＣＯ_２
加湿チャンバ内において３７℃で生存カニクイザルＰＢＭＣ（ＷｏｒｌｄｗｉｄｅＰｒ
ｉｍａｔｅｓＩｎｃ．）をコンカナバリンＡ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、５μｇ／
ｍｌ）及び組換えＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、２０Ｕ／ｍｌ）と共に３日間活性化した
。活性化後、細胞をヒトＦｃ－受容体ブロック（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と共に室温で１５
分間インキュベートして非特異的結合を減らした。この試料に抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９
４９又はヒトＩｇＧ_１アイソタイプ対照（１０μｇ／ｍｌ）を加え、４℃で３０分間イン
キュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄した後、ＡＰＣコンジュゲート抗ヒトκ抗体
並びにＣＤ４（ＢＶ６０５、ＯＫＴ４）及びＣＤ８ａ（ＰＥ、ＲＰＡ－Ｔ８）に特異的な
抗体をいずれも２．５μｇ／ｍｌで含有する抗体カクテルをＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２
ｍＭＥＤＴＡ、０．５％ＢＳＡ及びｐＨ７．２）で希釈し、各試料に加えて４℃で３０
分間インキュベートした。染色前に、単染色コンペンセーションコントロール（カニクイ
ザル反応性：ＣＤ４－ＢＶ６０５、ＣＤ４－ＰＥ、及びＣＤ４－ＡＰＣ）のため、更なる
試料を取っておいた。試料をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフロ
ーサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析した。図１Ｅに示すと
おり、ｐａｂ１９４９は活性化カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞に結合した。

【0447】

６．１．３．３ＯＸ４０抗体選択性アッセイ
ＴＮＦＲスーパーファミリーの他のメンバーに対するｐａｂ１９４９－１のＯＸ４０選
択性を、多重アッセイとしてサスペンションアレイ技術を用いて評価した。標準的なＮＨ
Ｓ－エステル化学を用いて幾つものＴＮＦＲファミリーメンバーをＬｕｍｉｎｅｘ（登録
商標）ミクロスフェアに化学的にカップリングした。ｐａｂ１９４９－１の精製材料をア
ッセイ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ１１１１２５８９００１）中に１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ
／ｍｌ及び１０００ｎｇ／ｍｌに希釈した。簡潔に言えば、２５μｌの各希釈物を暗所（
２０℃、６５０ｒｐｍ）で５μｌアッセイ緩衝液中の１５００個のＬｕｍｉｎｅｘ（登録
商標）ミクロスフェアと共に９６ハーフウェルフィルタプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，
ＭＡＢＶＮ１２５０）において１時間インキュベートした。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）
ミクロスフェア（ＬｕｍｉｎｅｘＣｏｒｐ、ＬＣ１０００１－０１、ＬＣ１０００５－
０１、ＬＣ１００１０－０１、ＬＣ１００１４－０１、ＬＣ１００１５－０１、ＬＣ１０
０１８－０１、ＬＣ１００２２－０１、ＬＣ１００２６－０１、ＬＣ１００５２－０１、
ＬＣ１００５３－０１及びＬＣ１００５５－０１）に、ＣＯＯＨビーズ表面とのアミンカ
ップリングによって組換えヒトＬＴＢＲ－Ｆｃ（ＡｃｒｏｓＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌ
ＴＲ－Ｈ５２５１）、抗ヒトＩｇＧ（Ｆ（ａｂ）_２特異的、ＪＩＲ、１０５－００６－０
９７）、組換えヒトＯＸ４０－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ、３３８８－ＯＸ）、組換
えヒトＧＩＴＲ－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ、６８９－ＧＲ）、組換えヒトＤＲ６－Ｆｃ（ＳｉｎｏＢ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０１７５－Ｈ０２Ｈ）、組換えヒトＤＲ３－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ、９４
３－Ｄ３）、組換えヒトＧＩＴＲ－Ｈｉｓ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１３６４３
－Ｈ０８Ｈ）、組換えヒトＴＷＥＡＫＲ－Ｆｃ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０
４３１－Ｈ０１Ｈ）、組換えヒトＯＸ４０－Ｈｉｓ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１
０４８１－Ｈ０８Ｈ）、組換えヒト４－１ＢＢ－Ｈｉｓ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ
、１００４１－Ｈ０８Ｈ）又は組換えヒトＢＡＦＦＲ－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ、１１６２－ＢＲ）
をカップリングした。１：３希釈系列（０．０８～５４０ｎｇ／ｍｌ）のデュプリケート
の２５μｌヒトＩｇＧ１標準（Ｓｉｇｍａ、Ｉ５１５４）を使用して標準曲線を生成した
。検出は、Ｒ－ＰＥ（２．５μｇ／ｍｌ；ＪＩＲ１０９－１１６－０９８、ＡｂＤＳｅ
ｒｏｔｅｃＲａｐｉｄＲＰＥ抗体コンジュゲーションキット、ＬＮＫ０２２ＲＰＥ）
で標識した６０μｌのヤギ抗ヒトＩｇＧＦ（ａｂ）_２を使用して、更に１時間のインキ
ュベーション時間（２０℃、６５０ｒｐｍ）で行った。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２０
０システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してプレートを分析した。４８μｌ試料容積中
ウェル当たりの合計１００ビーズをカウントした。ＰＥＭＦＩ値を使用して、上述の組
換えタンパク質への特異的又は非特異的結合を決定した。

【0448】

抗体ｐａｂ１９４９－１はヒトＯＸ４０への特異的結合を示し、試験濃度では、他のＴ
ＮＦＲファミリーメンバーへの有意な結合は観察されなかった（データは示さず）。

【0449】

６．２実施例２：抗ＯＸ４０抗体の機能的特徴付け
この例は、上記に記載した方法によって生成された抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及び
ｐａｂ１９４９－１がＯＸ４０のアゴニストとして機能する能力を実証する。抗体ｐａｂ
１９４９及びｐａｂ１９４９－１をアッセイし、初代ヒトＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞
を共刺激するそれらの能力を決定した。加えて、ヒトＩｇＧ_１抗体であるｐａｂ１９４９
及びｐａｂ１９４９－１をヒトＩｇＧ_４抗体、それぞれｐａｂ２０４４及びｐａｂ２０４
４－１に変換した。抗体ｐａｂ２０４４はｐａｂ１９４９と同じ重鎖可変領域及び同じ軽
鎖を共有するが、ヒトＩｇＧ_４定常領域を含む。抗体ｐａｂ２０４４は配列番号６１の重
鎖配列と配列番号５０の軽鎖配列とを含む。ｐａｂ１９４９と同様に、ｐａｂ２０４４は
、抗体の結合又は機能に影響しない保存的修飾であるＴ１０９Ｓ単一アミノ酸置換を軽鎖
定常領域に含み、クローニングを促進する。野生型対応物ｐａｂ２０４４－１は、Ｋａｂ
ａｔに従い付番して１０９位にスレオニンを含み、配列番号６１の重鎖配列と配列番号２
０の軽鎖配列とを含む。同様に、ｐａｂ１９４９及びｐａｂ１９４９－１はまた、ヒトＩ
ｇＧ_２抗体、それぞれｐａｂ２１９３及びｐａｂ２１９３－１にも変換した。抗体ｐａｂ
２１９３は配列番号６２の重鎖配列と配列番号５０の軽鎖配列とを含む。抗体ｐａｂ２１
９３－１は配列番号６２の重鎖配列と配列番号２０の軽鎖配列とを含む。幾つかのアッセ
イにおいて、ｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２０４４、ｐａｂ２０４４－
１、ｐａｂ２１９３、又はｐａｂ２１９３－１の機能活性を調べた。

【0450】

アッセイの幾つかにおいて、本発明の抗ＯＸ４０抗体のアゴニスト活性を参照抗体ｐａ
ｂ１７８４及びｐａｂ２０４５と比較した。抗体ｐａｂ１７８４は、米国特許第７，９６
０，５１５号明細書（本明細書において参照により援用される）に提供される抗体１１Ｄ
４の可変領域をベースとして生成された。ｐａｂ１７８４の重鎖は１１Ｄ４の重鎖可変領
域（配列番号２６）及び配列番号６５のヒトＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列を含む。ｐ
ａｂ１７８４の軽鎖は１１Ｄ４の軽鎖可変領域（配列番号２４）及び配列番号２５の定常
領域のアミノ酸配列を含む。

【0451】

抗体ｐａｂ２０４５は、国際公開第１３／０３８１９１号パンフレット（本明細書にお
いて参照により援用される）に提供される抗体２０Ｅ５の可変領域をベースとして生成さ
れた。ｐａｂ２０４５の重鎖は２０Ｅ５の重鎖可変領域（配列番号３０）及び配列番号６
５のヒトＩｇＧ_１定常領域のアミノ酸配列を含む。ｐａｂ２０４５の軽鎖は２０Ｅ５の軽
鎖可変領域（配列番号２８）及び配列番号４１の定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0452】

６．２．１抗ＯＸ４０抗体が抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に及ぼす効果
ｐａｂ１９４９がＴ細胞増殖に及ぼす効果を調べるため、健常ドナーバフィーコート（
ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＦｉｃｏｌｌグラ
ジエントで単離したヒトＰＢＭＣについて、磁気ベースの分離（ＳｔｅｍｃｅｌｌＴｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて手付かずのＣＤ４＋Ｔ細胞をエンリッチした。分裂細
胞内のカルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）色素の希
釈をモニタすることにより、細胞増殖を決定した（ＱｕａｈＢＪｅｔａｌ．，（２
００７）ＮａｔＰｒｏｔｏｃ，２（９）：２０４９－５６）。エンリッチドＣＤ４＋
Ｔ細胞を１０μＭＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ）によって３７℃で７分間標識した。綿密な洗浄後、１０％熱失活ＦＢＳを補足
したＲＰＭＩ１６４０培地中に細胞を１×１０^６細胞／ｍｌで懸濁した。５μｇ／ｍｌの
ｐａｂ１９４９、５μｇ／ｍｌのＩｇＧ１アイソタイプ対照、又は２μｇ／ｍｌの抗ＣＤ
２８抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のいずれかと共に、抗ＣＤ３抗体（３μｇ／
ｍｌ、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で予め被覆した平底９６ウェルプレートの各ウェ
ルに合計１００μｌ（１×１０^５細胞）を播種し、３７℃及び５％ＣＯ_２で培養した。５
日目に細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中２％ＦＢＳ）中０．５μｌ／ウェルのＰｅｒＣＰ
－Ｃｙ５．５標識抗ＣＤ４抗体によって４℃で３０分間染色し、ＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞
のパーセンテージをＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でフロー
サイトメトリーによって決定した。フローサイトメトリーデータはＦｌｏｗＪｏを使用し
て分析した。

【0453】

上記に記載したのと同様のアッセイを用いてｐａｂ２０４４の活性を評価し、ここで、
５μｇ／ｍｌのｐａｂ２０４４、５μｇ／ｍｌのＩｇＧ_４アイソタイプ対照（ｐａｂ２０
３１）、又は２μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８抗体（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のいずれ
かと共に、抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍｌ、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で予め被覆し
た９６ウェルプレートにＣＦＳＥ標識ＣＤ４＋Ｔ細胞を播種した。５日目にＣＦＳＥ低
ＣＤ４＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって決定した。

【0454】

図２Ａ及び図２Ｂは、抗ＯＸ４０抗体との共刺激によって誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞
増殖の代表的なフローサイトメトリー分析のヒストグラムであり、細胞数（Ｙ軸）及びＣ
ＦＳＥ標識ＣＤ４＋Ｔ細胞によって放出された蛍光レベル（Ｘ軸）を示す。ＣＦＳＥに
よって放出される蛍光レベルが減弱した細胞の割合の増加により、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖
の増強が示される。ＣＦＳＥ低ＣＤ４＋細胞のパーセンテージがヒストグラムに示され
る。ｐａｂ１９４９（図２Ａ）及びｐａｂ２０４４（図２Ｂ）は両方ともに、プレート結
合時、準最適濃度の抗ＣＤ３抗体で活性化した細胞に加えたとき、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖
を誘導した。

【0455】

次に、Ｔ細胞増殖の誘導におけるｐａｂ１９４９の用量反応を計測した。健常ドナーバ
フィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＦ
ｉｃｏｌｌグラジエントで単離したＰＢＭＣについて、磁気ベースの分離（Ｓｔｅｍｃｅ
ｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて手付かずのＣＤ４＋Ｔ細胞をエンリッチし
た。次にエンリッチドＣＤ４＋Ｔ細胞集団を１０μＭＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｃ
ＦＳＥ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって３７℃で７分間標識した。綿密
な洗浄後、１０％熱失活ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ１６４０培地中に細胞を１×１０^６／
ｍｌで懸濁した。種々の濃度のｐａｂ１９４９又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照と共に、抗
ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍｌ、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で予め被覆した平底９６ウ
ェルプレートの各ウェルに１００μｌ（１×１０^５）の細胞を播種し、３７℃及び５％Ｃ
Ｏ_２で培養した。４日目に細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中２％ＦＢＳ）中０．５μｌ／
ウェルのＡＰＣ標識抗ＣＤ４抗体によって４℃で３０分間染色し、ＣＦＳＥ低ＣＤ４＋
細胞のパーセンテージをＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でフ
ローサイトメトリーによって決定した。

【0456】

図２Ｃに示すとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９は、薬理学的に関連性のある抗体
濃度で高レベルのＴ細胞増殖を維持することが可能であった。ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、
０．２μｇ／ｍｌ～２０μｇ／ｍｌにおいてｐａｂ１９４９の濃度の実質的増加関数であ
った（図２Ｃ）。

【0457】

６．２．２抗ＯＸ４０抗体が抗ＣＤ３刺激ヒトＰＢＭＣサイトカイン産生に及ぼす効果
抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びｐａｂ１９４９－１のアゴニスト活性の更なるエビ
デンスとして、準最適抗ＣＤ３刺激下のサイトカイン産生を計測した。

【0458】

細胞内サイトカイン染色実験のため、健常ドナーバフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＦｉｃｏｌｌグラジエントで単離した
ヒトＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、実験当日に解凍した。細胞を細胞培養培地（ＲＰＭ
Ｉ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２）に再懸濁し、様々な準最適濃度のプレート
結合抗ＣＤ３抗体＋５μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照
ＩｇＧ_１抗体が入った９６ウェル培養プレートに加えた。これらの試料を３７℃及び５％
ＣＯ_２で３日間インキュベートした。活性化後、細胞内タンパク質輸送を阻害するため、
細胞をブレフェルジンＡ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い処理し
、試料を３７℃及び５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。インキュベーション後、細
胞を生死判別アミン色素（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で死細胞に関して染色
した。ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄した後、冷ＦＡＣＳ緩
衝液で希釈したＣＤ３（ＡＰＣＣｙ７、ＳＰ３４．２）、ＣＤ４（ＰｅｒｃＰＣｙ５
．５、Ｌ２００）、及びＣＤ８ａ（ＰＥＣｙ７、ＳＫ１）に特異的な抗体を含有する抗
体カクテルを各試料に加え、４℃で１０分間インキュベートした。細胞を固定し、細胞内
染色のためＣｙｔｏｆｉｘ－Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造
者の指示に従い透過処理した。ＩＦＮγ（Ａｌｅｘａ６４７、Ｂ２７）及びＴＮＦα（Ｐ
Ｅ、Ｍａｂ１１）に特異的な抗体でＰＢＭＣを染色し、室温で１０分間インキュベートし
た。染色前、マウスＩｇＧ抗体のκ軽鎖を結合するビーズを、単染色コンペンセーション
コントロールを使用して細胞の染色に使用する抗体で染色した。１×Ｐｅｒｍ－洗浄緩衝
液（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して試料を洗浄し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏフ
ローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。フローサイ
トメトリープロットはＦｌｏｊｏソフトウェアを使用して分析した。

【0459】

異なる４ドナーからのＰＢＭＣを試験した：ドナーＫＭ、ドナーＴＭ、ドナーＧＳ、及
びドナーＳＢ。全てのドナーについて、ｐａｂ１９４９はヒトＴ細胞に対する共刺激活性
を実証し、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞及び
ＴＮＦα＋単機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導した（図３Ａ、図３Ｂ
、及び図３Ｃ）。ドナーＧＳのＰＢＭＣでは、ｐａｂ１９４９はまた、ＩＦＮγ＋単機能
性Ｔ細胞の割合も増加させることが可能であった（図３Ｂ）。

【0460】

次に、上記に記載したものと同様の準最適抗ＣＤ３刺激アッセイにおいて、ドナーＧＳ
のＰＢＭＣに由来する細胞を使用して抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１の用量タイトレ
ーションを試験した。簡潔に言えば、ＰＢＭＣをプレート結合抗ＣＤ３抗体（０．８μｇ
／ｍｌ）及びプレート結合ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体（０、
０．３、１、３、６、１２、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及び５％ＣＯ_２で
４日間インキュベートした。活性化後、細胞内タンパク質輸送を阻害するため、細胞をブ
レフェルジンＡ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い処理し、試料を
３７℃及び５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＩ
ＴＣ生死判別アミン色素（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色して生細胞と死
細胞とを判別した。冷緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄した後、抗
ＣＤ３（ＡＰＣＣｙ７、ＳＰ３４．２）、抗ＣＤ４（ＰｅｒｃＰＣｙ５．５、Ｌ２０
０）、及び抗ＣＤ８ａ（ＰＥＣｙ７、ＳＫ１）を含有する抗体カクテルを各試料に加え
、４℃で１０分間インキュベートした。細胞を固定し、細胞内染色のためＣｙｔｏｆｉｘ
－Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い透過処理し
た。ＰＢＭＣを抗ＩＦＮγ抗体（Ａｌｅｘａ６４７、Ｂ２７）及び抗ＴＮＦα抗体（ＰＥ
、Ｍａｂ１１）で染色し、室温で１０分間インキュベートした。１×Ｐｅｒｍ－洗浄緩衝
液（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して試料を洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎｔｏフロ
ーサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して捕捉した。フローサイト
メトリープロットはＦｌｏｊｏソフトウェアを使用して分析した。図３Ｄ～図３Ｆに示さ
れるとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１は共刺激活性を実証し、ＴＮＦα＋Ｃ
Ｄ４＋Ｔ細胞、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＩＦＮγ＋
ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を用量依存的様式で増加させた。

【0461】

ある範囲用量のｐａｂ１９４９－１の共刺激活性について、上記に記載した準最適抗Ｃ
Ｄ３刺激アッセイにおいて追加のドナーのＰＢＭＣに由来する細胞を使用して更に試験し
た。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１及びＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体は０、０．７
、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌで試験した。抗ＯＸ４
０抗体ｐａｂ１９４９－１は、複数のドナーのＰＢＭＣにおいてＩＦＮγ＋及び／又はＴ
ＮＦα＋Ｔ細胞の割合を一貫して増加させた（図４Ａ～図４Ｃ）。

【0462】

特に、多くのドナーのＰＢＭＣについて、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１によって
誘導されたＩＦＮγ＋及び／又はＴＮＦα＋Ｔ細胞の割合は、試験した幅広い抗体濃度
にわたって抗体濃度の実質的増加関数であった（図３Ｄ～図３Ｆ及び図４Ａ～図４Ｃ）。

【0463】

抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９のアゴニスト活性を更に調べるため、サイトカインの分
泌量を計測した。健常ドナーバフィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐ
ｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＦｉｃｏｌｌグラジエントで単離したヒトＰＢＭＣを液体窒
素中に保存し、実験当日に解凍した。細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２
０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２）に再懸濁し、様々な準最適濃度のプレート結合抗ＣＤ３抗体＋５
μｇ／ｍｌの抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９又はアイソタイプ対照ＩｇＧ_１抗体が入った
９６ウェル培養プレートに加えた。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ_２でインキュベー
トし、４日後（ＳＢ＃１Ａ）又は３日後（ＳＢ＃１Ｂ、ＳＢ＃２、及びＧＳ）のいずれか
に細胞培養上清を回収した。ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、及びＩＬ－１
３の産生に関して、Ｖ－ＰＬＥＸＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＰａｎｅｌ１（ヒ
ト）キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を製造者の指示に従い使用し
て試料を試験した。

【0464】

図５Ａに示されるとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９は異なる２ドナー：ドナーＳ
Ｂ及びドナーＧＳからのヒトＰＢＭＣにおけるサイトカイン産生を共刺激した。ドナーＳ
ＢのＰＢＭＣのサイトカイン産生は２つの別個の実験で試験した：ＳＢ＃１Ａ及びＳＢ＃
１Ｂは、それぞれ刺激から４日後及び３日後にサイトカインを計測した第１の実験の結果
を示し；及びＳＢ＃２は、刺激から３日後にサイトカインを計測した第２の実験の結果を
示す。

【0465】

次に、上記に記載したものと同様の準最適抗ＣＤ３刺激アッセイにおいてドナーＧＳの
ＰＢＭＣに由来する細胞を使用して、ｐａｂ１９４９－１の用量タイトレーションによっ
て誘導されたサイトカイン分泌を調べた。端的には、ＰＢＭＣをプレート結合抗ＣＤ３抗
体（０．８μｇ／ｍｌ）及びプレート結合ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ
対照抗体（０、０．３、１、３、６、１２、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及
び５％ＣＯ_２で４日間インキュベートした。活性化後、細胞培養上清を回収し、ヒトＴＨ
１／ＴＨ２１０－Ｐｌｅｘ組織培養キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒ
ｙ）を使用してサイトカインを検出した。

【0466】

図５Ｂ～図５Ｄに示されるとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１はＴＮＦα、Ｉ
Ｌ－１０、及びＩＬ－１３産生を用量依存的様式で刺激した。

【0467】

サイトカイン分泌の誘導におけるｐａｂ１９４９－１の共刺激活性を、追加のドナーの
ＰＢＭＣに由来する細胞を使用して更に確かめた。簡潔に言えば、ＰＢＭＣをプレート結
合抗ＣＤ３抗体（０．８μｇ／ｍｌ）及びプレート結合ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１
アイソタイプ対照抗体（０、０．７、１．６、３．１、６．３、１２．５、２５、又は５
０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及び５％ＣＯ_２で４日間インキュベートした。活性化後、上
清に分泌されたサイトカインの量を非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット
（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して計測した。

【0468】

試験した全てのドナーについて、ｐａｂ１９４９－１はＧＭ－ＣＳＦ（図６Ａ～図６Ｃ
）、ＩＬ－２（図７Ａ～図７Ｃ）、及びＴＮＦβ（図８Ａ～図８Ｃ）の分泌を用量依存的
に増加させた。

【0469】

多くのドナーのＰＢＭＣについて、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１によって誘導さ
れたサイトカイン（ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＬ－１０、及びＩ
Ｌ－１３）の分泌は、幅広い抗体濃度にわたって抗体濃度の実質的増加関数であった（図
５Ｂ～図５Ｄ、図６Ａ～図６Ｃ、図７Ａ～図７Ｃ、及び図８Ａ～図８Ｃ）。

【0470】

６．２．３エフェクターＴ細胞：調節性Ｔ細胞共培養アッセイにおける抗ＯＸ４０抗体
の効果
次に、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１について、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）
：調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）共培養アッセイにおけるその活性を調べた。端的には、健常
ドナーバフィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ
）からＦｉｃｏｌｌグラジエントで単離したヒトＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、実験当
日に解凍した。調節性Ｔ細胞及びエフェクターＴ細胞を磁気ビーズ分離（それぞれＣＤ４
^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^{ｄｉｍ／－}調節性Ｔ細胞単離キットＩＩ及びＰａｎｔＴ細胞キ
ット、ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）によって単離した。次に調節性Ｔ細胞を抗ＣＤ
３／抗ＣＤ２８／抗ＣＤ２ビーズ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）と共に細胞培養培
地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ）中１：２（Ｔ細胞：ビーズ）の比でインキュベートするこ
とにより２日間活性化した。活性化後、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８／抗ＣＤ２ビーズ、可溶性
又は架橋（抗ＦｃＦ（ａｂ’）_２を使用、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒ
ｃｈ）ｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照（１０μｇ／ｍｌ）の存在下で
調節性Ｔ細胞及びエフェクターＴ細胞を９６ウェル培養プレートに１：３（Ｔｒｅｇ：Ｔ
ｅｆｆ）の比で加えた。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ_２で４日間インキュベートし
た。活性化後、上清を回収し、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍ
ｅｒ）を使用してＩＬ－１０又はＩＬ－２を計測した。

【0471】

このインビトロＴｅｆｆ：Ｔｒｅｇ共培養アッセイにおいて、アイソタイプ処理細胞と
比較したｐａｂ１９４９－１処理細胞によるＩＬ－２産生の増強（図９Ａ）及びＩＬ－１
０産生の低下（図９Ｂ）から明らかなとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１はＴｒ
ｅｇ細胞によるＴｅｆｆ細胞集団の抑制を軽減した。

【0472】

６．２．４ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ
）刺激時に抗ＯＸ４０抗体がヒトＰＢＭＣに及ぼす効果
ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後、
初代ヒトＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９及びｐａｂ１９４９－１の機能
的活性を更に評価した。ペニシリン、ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏ
ｎｅ）を補足したＲＰＭＩ１６４０中の凍結保存したＰＢＭＣ（１０^５細胞／ウェル）を
９６ウェルＮＵＮＣＬＯＮｄｅｌｔａ表面プレート（ＮＵＮＣ（商標））に加えた。一
定濃度（図１０Ａ及び図１０Ｂの１０μｇ／ｍｌ）又は種々の濃度（図１０Ｃ及び図１０
Ｄの２０、４、０．８、０．１６、０．０３２、０．００６４、及び０．００１２８μｇ
／ｍｌ；図１０Ｅの５０、１０、２、０．４、０．０８、０．０１６、及び０．００３２
μｇ／ｍｌ）の抗ＯＸ４０抗体又はアイソタイプ対照及び１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡ（Ｔ
ｏｘｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の非存在下又は存在下においてこれらの細胞を３
７℃、５％ＣＯ_２及び９７％湿度で５日間培養した。清澄化した上清を回収し、分析時ま
で－８０℃で保存した。ＩＬ－２及びＩＬ－１０について電気化学発光（ＭｅｓｏＳｃ
ａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を用いてサイトカインの力価を求めた。

【0473】

抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９はこの初代ヒトＰＢＭＣアッセイでアゴニスト活性を示
し、ＩＬ－２産生を誘導し（図１０Ａ）、及びＩＬ－１０産生を抑制した（図１０Ｂ）。
１０μｇ／ｍｌのｐａｂ１９４９によるＩＬ－２産生の増強は、参照抗ＯＸ４０抗体ｐａ
ｂ１７８４及びｐａｂ２０４５で観察されるものよりも優れていた（図１０Ａ）。図１０
Ｃ、図１０Ｄ、及び図１０Ｅは３つの独立した実験からの用量反応曲線であり、異なる濃
度のｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９－１、又は参照抗体ｐａｂ１７８４及びｐａｂ２０
４５による共刺激後のＩＬ－２の倍数変化を示す。抗体ｐａｂ１９４９及びｐａｂ１９４
９－１は参照抗体と異なる用量反応関係を呈し、薬理学的に関連性のある抗体濃度で高レ
ベルのＩＬ－２産生を誘導することが可能であった。ｐａｂ１９４９又はｐａｂ１９４９
－１によって誘導されたＩＬ－２産生は、幅広い抗体濃度（例えば、図１０Ｃ及び図１０
Ｄに示されるとおり０．０３２～２０μｇ／ｍｌ、又は図１０Ｅに示されるとおり０．０
０３２～５０μｇ／ｍｌ）にわたって抗体濃度の実質的増加関数であった。

【0474】

次に、上記に記載した初代ヒトＰＢＭＣアッセイにおいて、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４
９－１及びＩｇＧ_２抗体ｐａｂ２１９３－１の機能的活性を比較した。簡潔に言えば、９
６ウェルＮＵＮＣＬＯＮｄｅｌｔａ表面プレート中のＮｏｒｍｏｃｉｎ（商標）（Ｉｎ
ｖｉｖｏｇｅｎ、＃ａｎｔ－ｎｒ）及び１０％熱失活ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地に凍結保存ヒトＰ
ＢＭＣ（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）を１０^５細胞／ウェル
でプレーティングした。細胞を漸増濃度（５０、１０、２、０．４、０．０８、０．０１
６、及び０．００３２μｇ／ｍｌ）のｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２１９３－１、ＩｇＧ
_１アイソタイプ対照抗体、又はＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体、及び１００ｎｇ／ｍｌ
ＳＥＡスーパー抗原（ＴｏｘｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に３７℃、５％ＣＯ
_２、及び９７％湿度で５日間インキュベートした。清澄化した上清を回収し、分析時まで
－８０℃で保存した。ＩＬ－２の濃度をＥＬＩＳＡによって計測した。

【0475】

図１０Ｆに示すとおり、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４９－１及びＩｇＧ_２抗体ｐａｂ２１
９３－１は両方ともにヒトＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を誘導した。ｐａｂ１９４９－
１と同様に、ｐａｂ２１９３－１もＩＬ－２産生が抗体濃度の実質的増加関数である用量
反応関係を呈した。

【0476】

更に、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４９－１を無グリコシル化変異体ｐａｂ１９４９－１－
Ｎ２９７Ａと比較することにより、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１の機能的活性にお
けるＦｃγＲ相互作用の役割を調べた。ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａはｐａｂ１９４
９－１と重鎖可変領域及び軽鎖配列を共有するが、重鎖定常領域にＮ２９７Ａ置換（ＥＵ
付番方式によって付番）を含む。

【0477】

健常ドナーバフィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，
ＬＬＣ）からＦｉｃｏｌｌグラジエントで単離したヒトＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、
実験当日に解凍した。細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％熱失活ＦＢＳ）に再懸濁し
、１００ｎｇ／ｍｌＳＥＡ（ＴｏｘｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びｐａｂ１９
４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ、又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量
タイトレーション（０～５０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及び５％ＣＯ_２で５日間インキュ
ベートした。上清を回収し、次にＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌ
ｍｅｒ）を使用してＩＬ－２に関して試験した。

【0478】

図１０Ｇに示すとおり、ｐａｂ１９４９－１及びｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａは両
方ともにＳＥＡ刺激時にヒトＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を用量依存的様式で誘導した
。アスパラギン２９７（Ｎ２９７）における単一のＮ結合型グリコシル化部位の鍵となる
グリコシル化の存在がｐａｂ１９４９－１－Ｎ２９７Ａ変異抗体では失われ、そのためそ
のＦｃ断片のＦｃγＲへの結合の喪失につながる。この変異抗体は、野生型対応物と比較
してアゴニスト活性の低下を呈した。

【0479】

６．２．５アゴニスト抗ＯＸ４０抗体がＯＸ４０ＮＦ－κＢ－ルシフェラーゼレポー
ター細胞株に及ぼす効果
抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１がＴ細胞におけるシグナル伝達を媒介する能力を、
ヒトＯＸ４０ＮＦ－κＢ－ルシフェラーゼレポーター細胞株を使用して計測した。ジャ
ーカット細胞株を用いて生成したレポーター細胞をアッセイ培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢ
Ｓ＋ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン酸塩＋１μｇ／ｍｌピューロマイシン
）に再懸濁し、抗Ｆｃ試薬の存在下（複合体化条件）又は非存在下（可溶性条件）で様々
な濃度の可溶性ｐａｂ１９４９－１（０～６μｇ／ｍｌ）又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照
抗体と共にインキュベートした。プレートを３７℃及び５％ＣＯ_２で２時間インキュベー
トした。インキュベーション後、プレートを室温で平衡化し、次に等容積の室温のＮａｎ
ｏ－Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えた。ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２
１００を使用して発光を読み取った。

【0480】

架橋ｐａｂ１９４９－１のみがＯＸ４０ＮＦ－κＢ－ルシフェラーゼレポーター細胞
株の有意な活性化を誘導した（図１１Ｂ）。可溶性ｐａｂ１９４９－１はレポーター細胞
株の最小限の活性化を誘導し、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体は検出可能なレベルのルシ
フェラーゼ発現を誘導しなかった（図１１Ａ及び図１１Ｂ）。

【0481】

６．２．６アゴニスト抗ＯＸ４０抗体がＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡレポーター細胞株に
及ぼす効果
この例では、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡを発現するレポーター細胞株を、ヒトＯＸ４０
を発現する標的細胞と共に使用して、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４９－１及びＩｇＧ_４抗体
ｐａｂ２０４４－１がＯＸ４０と共会合し、Ｆｃガンマ受容体の活性化を介してシグナル
を送る能力を判定した。ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ／Ｖ多型）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を過
剰発現するジャーカットＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞をエフェクター細胞と
して使用した。抗体／抗原複合体（抗原が標的細胞の表面上に位置する）がエフェクター
細胞上のＦｃγＲＩＩＩＡに結合すると、プロモーター／レポーターコンストラクトにシ
グナルが送られ、ルシフェラーゼ遺伝子発現がもたらされる。

【0482】

可溶性ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ２０４４－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照、又はＩ
ｇＧ_２アイソタイプ対照（０～１０μｇ／ｍｌ）の用量タイトレーションの存在下でＯＸ
４０過剰発現細胞（ＰＨＡ活性化Ｈｕｔ１０２細胞）をＦｃγＲＩＩＩＡレポーター細胞
と共培養した。製造者の指示に従いレポーター細胞の活性化を評価し、相対発光単位（Ｒ
ＬＵ）を記録した。ΔＲＬＵは、抗ＯＸ４０抗体のＲＬＵからアイソタイプ対照のＲＬＵ
を差し引いたものとして計算した。図１２Ａに示すとおり、ＯＸ４０発現細胞との結合時
、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４９－１のみがＦｃγＲＩＩＩＡレポーター細胞を活性化させ
た。

【0483】

６．２．７アゴニスト抗ＯＸ４０抗体がＦｃガンマ受容体ＩＩＡレポーター細胞株に及
ぼす効果
次に、ＦｃγＲＩＩＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を発現するレポーター細胞株を標的細胞（ヒ
トＯＸ４０を発現するジャーカット細胞）と共に使用して、ＩｇＧ_１抗体ｐａｂ１９４９
－１及びｐａｂ１９４９－１－Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ並びにＩｇＧ_２抗体ｐａｂ２１９
３－１がＯＸ４０と共会合し、ＦｃγＲＩＩＡを介してシグナルを送る能力を判定した。
ｐａｂ１９４９－１－Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆはｐａｂ１９４９－１と重鎖及び軽鎖配列
を共有するが、重鎖定常領域にＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆ置換（ＥＵ付番方式によって付
番）を含む。

【0484】

高親和性１３１Ｈ／Ｈ多型を有するＦｃγＲＩＩＡ及びホタルルシフェラーゼの発現を
駆動するＮＦＡＴ応答エレメントを発現するジャーカット細胞をエフェクター細胞として
使用した。簡潔に言えば、２５μｌの標的細胞（６×１０^６細胞／ｍｌ）を２５μｌの段
階希釈抗体と９６ウェル白色アッセイプレートのデュプリケートウェルで混合した。試験
した抗体は、ｐａｂ１９４９－１、ｐａｂ１９４９－１－Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ｐａ
ｂ２１９３－１、ＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体、及びＩｇＧ_２アイソタイプ対照抗体で
あった。次に、２５μｌのエフェクター細胞（６×１０^６細胞／ｍｌ）を各ウェルに加え
ると、１：１のエフェクター対標的比が得られた。プレートを３７℃及び５％ＣＯ_２で２
０時間インキュベートした。このインキュベーション後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼ
アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を室温で解凍し、各ウェルに７５μｌを加えた。５～１
０分以内にＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）
を使用して発光を計測した。各試料の読み取りからバックグラウンド発光を減じ、調整後
相対発光単位（ＲＬＵ）を記録した。

【0485】

図１２Ｂに示すとおり、ＯＸ４０を発現する細胞への結合時、ＩｇＧ_２抗体ｐａｂ２１
９３－１がＦｃγＲＩＩＡ^Ｈ１３１の最も強力な活性化を示し、ｐａｂ１９４９－１－Ｓ
２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ及びｐａｂ１９４９－１がそれに続いた。

【0486】

６．２．８抗ＯＸ４０抗体と調節性Ｔ細胞又はエフェクターＴ細胞との相互作用
この例では、活性化天然調節性Ｔ細胞（ｎＴｒｅｇ）及びＴエフェクター（Ｔｅｆｆ）
細胞によるヒトＯＸ４０の発現を調べた。健常ドナーから単離したＰＢＭＣについて、磁
気ベースの分離を用いて手付かずのＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｔｅｆｆ）又はＣＤ４＋ＣＤ２
５＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞（ｎＴｒｅｇ）をエンリッチした。Ｔリンパ球を抗ＣＤ３
／ＣＤ２８カップリングビーズによって５００ＵｒＩＬ－２と共に４日間、及び５０Ｕ
ｒＩＬ－２と共に更に４日間活性化させた。活性化の８日後、Ｔ細胞を回収し、ＰＢＳ
中の固定可能な生死判別近赤外死細胞染色によって４℃で２０分間染色した。緩衝液（２
％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）中に希釈したＣＤ４（ＢＶ６０５、ＯＫＴ４）、ＣＤ８ａ（ＢＶ６
５０、ＲＰＡ－Ｔ８）、ＣＤ１２７（ＢＶ４２１、ＡＯ１９０５）、ＣＤ２５（ＡＰＣ、
Ｍ－Ａ２５１）、及びＯＸ－４０（ＰＥ、ＡＣＴ３５）に対するコンジュゲート抗体を含
有する表面抗体カクテルを各試料に加え、４℃で３０分間インキュベートした。次に細胞
を緩衝液で洗浄し、固定し、緩衝液中に希釈したＣＤ３（ＢＶ７１１、ＯＫＴ３）及びＦ
ｏｘｐ３（ＡＦ４８８、ＰＣＨ１０１）に対するコンジュゲート抗体を含有する細胞内抗
体カクテルで染色した。各Ｔ細胞集団から１つの試料についてはまた、マウス抗ヒトＩｇ
Ｇ１－ＰＥアイソタイプ対照を使用してＯＸ４０に関してｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍ
ｉｎｕｓｏｎｅ（ＦＭＯ）対照によっても染色した。試料をフローサイトメトリーによ
って分析した。ＰＥコンジュゲートＱｕａｎｔｉｂｒｉｔｅビーズを同時にランし、これ
を使用して製造者の指示どおりＯＸ４０受容体密度を定量化した。

【0487】

図１３Ａに示すとおり、活性化ｎＴｒｅｇ細胞上のヒトＯＸ４０の表面発現は活性化Ｃ
Ｄ４＋又はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞上のものよりも高かった。

【0488】

同様の試験において、２ドナーからの活性化ｎＴｒｅｇ及びＴｅｆｆを市販の抗ＯＸ４
０抗体（ＢＥＲ－ＡＣＴ３５クローン）又はアイソタイプ対照抗体で染色し、フローサイ
トメトリーによって分析した。デルタ平均蛍光強度（ΔＭＦＩ）は、抗ＯＸ４０抗体のＭ
ＦＩからアイソタイプ対照のＭＦＩを差し引いたものに相当する。結果を図１３Ｂに示す
。

【0489】

次に、上記に記載したＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）を発現するレポ
ーター細胞株を、記載されるとおり生成した活性化Ｔエフェクター（Ｔｅｆｆ）又はｎＴ
ｒｅｇ細胞と共に使用して、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９がＯＸ４０を共会合し、Ｆｃ
ガンマ受容体の活性化を介してシグナルを送る能力を判定した。抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１
９４９又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照を１０μｇ／ｍｌの出発最終濃度の３倍希釈物とし
て段階希釈した。デュプリケートウェルにおいて、Ｔｅｆｆ又はｎＴｒｅｇ細胞に２５μ
ｌの各抗体希釈物を加えた。ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ／Ｖ多型）を過剰発現するジャ
ーカットＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞を１：１のエフェクター対標的比で加
えた。プレートを２０時間インキュベートし、次にＢｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセ
イ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して分析した。各試料読み取りからバックグラウンド発
光（外側のブランクウェル）を減じ、調整後相対発光単位（ＲＬＵ）を記録した。抗ＯＸ
４０抗体のＲＬＵからアイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いたものに相当するΔＲＬＵを
図１３Ｃに示す。

【0490】

少し修正したプロトコルを用いて図１３Ｃに示す試験を繰り返した。端的には、健常ボ
ランティアからのバフィーコート（ＲｅｓｅａｒｃｈＢｌｏｏｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔ
ｓ）を使用して初代調節性Ｔ細胞及びエフェクターＴ細胞を単離した。両方のＴ細胞サブ
セットを磁気ビーズ分離（それぞれＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^{ｄｉｍ／－}調節性Ｔ細
胞単離キットＩＩ及びＰａｎｔＴ細胞キット、ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）によ
って精製し、次に細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ）中で細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ
２８／抗ＣＤ２ビーズ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ）と共に１：４（Ｔ細胞：ビ
ーズ）の比でインキュベートすることにより、７日間活性化した。可溶性ｐａｂ１９４９
－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体の用量タイトレーション（０～１０μｇ／ｍｌ）
の存在下で、活性化したＴｒｅｇ細胞又はＴｅｆｆ細胞を上記に記載したＦｃγＲＩＩＩ
Ａ発現ジャーカットＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共培
養した。レポーター細胞の活性化を製造者の指示に従い評価しており、ΔＲＬＵを図１３
Ｄに示す。

【0491】

活性化ｎＴｒｅｇと活性化ＣＤ４＋又はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞との間の表面Ｏ
Ｘ４０発現差と一致して（図１３Ａ及び図１３Ｂ）、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９（図
１３Ｃ）及びｐａｂ１９４９－１（図１３Ｄ）は活性化ｎＴｒｅｇ細胞を優先的に標識し
、レポーター細胞株においてＦｃγＲＩＩＩＡ依存性シグナル伝達を誘導した。

【0492】

ＯＸ４０の過剰発現が、腫瘍微小環境内に位置する調節性Ｔ細胞の特徴であったかどう
かを判定するため、健康ヒトドナーの血液（図１４Ａ、ａ～ｃ、ｎ＝３）又は非小細胞肺
癌（ＮＳＣＬＣ）患者の腫瘍組織（図１４Ａ、ｄ～ｆ、ｎ＝３）から単離したＴ細胞でＯ
Ｘ４０発現を比較した。免疫集団に対する抗体のバックグラウンド結合を除去するため、
全ての細胞を精製ＣＤ１６／３２抗体（１０μｇ／ｍｌ、室温で２０分間）と共にインキ
ュベートしてから、細胞表面抗体及び細胞内抗体を加えた。ＦｃＲブロック後、これらの
試料を全て、ＡＰＣコンジュゲート抗ＯＸ４０抗体（クローンＢｅｒ－ＡＣＴ３５）又は
アイソタイプ対照及び細胞表面抗体系列カクテル（ＣＤ３－ＦＩＴＣ、ＣＤ２５－ＰＥＣ
ｙ７、ＣＤ４－ＢＶ６５０及びＣＤ８ａ－ＰＥ）と共に氷上で４５分間インキュベートし
（各１μｇ／ｍｌ）、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、ＥＤＴＡ及び０．５％ＢＳＡ）で３回洗
浄し、続いて固定／透過処理し、パシフィックブルーコンジュゲートＦＯＸＰ３と共にイ
ンキュベートした（固定／透過処理及びインキュベーション氷上各４５分、１μｇ／ｍｌ
）。次にＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
）を使用して、染色した試料を分析した。図１４Ａの細胞集団は、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋
、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５低、ＦＯＸＰ３－）又はＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４
＋、ＣＤ８ａ－、ＣＤ２５高、ＦＯＸＰ３＋）として定義した。

【0493】

図１４Ａに示すとおり、ＯＸ４０表面発現はＮＳＣＬＣ患者の腫瘍組織から単離した調
節性Ｔ細胞で最も高く、健常ドナーからのＴｒｅｇ又は従来のＴ細胞では、検出可能なレ
ベルはほとんど又は全くなかった。

【0494】

他の腫瘍型について同様の分析を行った。端的には、凍結分離した腫瘍試料（Ｃｏｎｖ
ｅｒｓａｎｔ）又はＰＢＭＣをＡｕｔｏＭＡＣＳリンス溶液（洗浄緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎ
ｙｉＢｉｏｔｅｃ）中で解凍し、細胞をＦｃブロック（ＴｒｕｓｔａｉｎＦｃＸ、Ｂ
ｉｏｌｅｇｅｎｄ）した後、細胞表面染色した。細胞を洗浄緩衝液で洗浄し、抗ＣＤ３（
クローンＳＰ３４）、抗ＣＤ４（クローンＯＫＴ４）、抗ＣＤ８（クローンＳＫ１）、抗
ＣＤ２５（クローンＭＡ－２５１）、及び抗ＯＸ４０（クローンＢＥＲ－ＡＣＴ３５）を
含む系列マーカー抗体によって４℃で４５分間染色した。細胞を洗浄し、フォークヘッド
ボックスＰ３（ＦＯＸＰ３）／転写因子染色緩衝液セット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で
製造者の指示に従い透過処理した。透過処理後、細胞を抗ＦＯＸＰ３ｅＦｌｕｏｒ４５
０（クローンＰＣＨ１０１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。染色した試料をＢＤ
ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して捕捉し、
データを、Ｆｌｏｊｏソフトウェアを使用して分析した。

【0495】

卵巣癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、子宮内膜癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、非小細胞癌（ＮＳ
ＣＬＣ）、及び乳癌を含めた複数の腫瘍型からの試料が、腫瘍関連エフェクターＴ細胞と
比べて腫瘍関連調節性Ｔ細胞においてより高いＯＸ４０発現を実証した（図１４Ｂ、図１
４Ｃ、及び図１４Ｄ）。

【0496】

６．２．９抗ＯＸ４０抗体が抗ＣＤ３刺激カニクイザルＰＢＭＣサイトカイン産生に及
ぼす効果
次に、準最適抗ＣＤ３刺激アッセイを用いてカニクイザルＰＢＭＣに対する抗ＯＸ４０
抗体ｐａｂ１９４９－１のアゴニスト活性を調べた。簡潔に言えば、凍結カニクイザルＰ
ＢＭＣ（ＷｏｒｌｄＷｉｄｅＰｒｉｍａｔｅｓ）を液体窒素中に保存し、実験当日に
解凍した。細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍｌのＩＬ－２）に
再懸濁し、プレート結合抗ＣＤ３抗体（０．８μｇ／ｍｌ）及びプレート結合ｐａｂ１９
４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイプ対照抗体（０、０．８、１．６、３．１、６．３、１
２．５、２５、又は５０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及び５％ＣＯ_２で４日間インキュベー
トした。細胞培養上清を回収し、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（
ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して分泌サイトカインを調べた。

【0497】

抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１は、複数のカニクイザルのＰＢＭＣにおいてＧＭ－
ＣＳＦ（図１５Ａ及び図１５Ｂ）、ＩＬ－１７（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、ＴＮＦβ（図
１７Ａ及び図１７Ｂ）、ＩＬ－５（図１８Ａ及び図１８Ｂ）、及びＩＬ－１０（図１９Ａ
及び図１９Ｂ）の産生を用量依存的に増強した。

【0498】

６．２．１０ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥ
Ａ）刺激時に抗ＯＸ４０抗体がカニクイザルＰＢＭＣに及ぼす効果
ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後に
、ｐａｂ１９４９－１がカニクイザルＰＢＭＣを共刺激する能力を更に分析した。凍結カ
ニクイザルＰＢＭＣ（ＷｏｒｌｄＷｉｄｅＰｒｉｍａｔｅｓ）を液体窒素中に保存し
、実験当日に解凍した。細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％熱失活ＦＢＳ）に再懸濁
し、ＳＥＡ抗原（１００ｎｇ／ｍｌ）並びにｐａｂ１９４９－１又はＩｇＧ_１アイソタイ
プ対照抗体の用量タイトレーション０、０．８、１．６、３．１、６．３、１２．５、２
５、又は５０μｇ／ｍｌ）と共に３７℃及び５％ＣＯ_２で５日間インキュベートした。活
性化後、細胞培養上清を回収し、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）Ｖ－Ｐｌｅｘアッセイキット（
ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して分泌サイトカインを調べた。

【0499】

図２０Ａ及び図２０Ｂに示されるとおり、抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１は、２ド
ナーからのカニクイザルＰＢＭＣにおいてＩＬ－２産生を増加させた。

【0500】

６．３実施例３：抗ＯＸ４０抗体のエピトープマッピング
この例では、ｐａｂ１９４９及び参照抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９２８のエピトープをア
ラニンスキャニングによって分析した。抗体ｐａｂ１９２８は、米国特許出願公開第２０
１３／０２８０２７５号明細書（本明細書において参照により援用される）に提供される
抗体Ｈｕ１０６－１２２の可変領域に基づき生成した。ｐａｂ１９２８の重鎖はＨｕ１０
６－１２２の重鎖可変領域（配列番号５６）及び配列番号６５のヒトＩｇＧ１定常領域の
アミノ酸配列を含む。ｐａｂ１９２８の軽鎖はＨｕ１０６－１２２の軽鎖可変領域（配列
番号５７）及び配列番号２５の定常領域のアミノ酸配列を含む。従って重鎖は配列番号７
２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号５９のアミノ酸配列を含む。

【0501】

６．３．１エピトープマッピング－アラニンスキャニング
ｐａｂ１９４９－１及び参照抗体ｐａｂ１９２８の結合特性をアラニンスキャニングに
よって評価した。簡潔に言えば、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＱｕｉｋ
ＣｈａｎｇｅＨＴタンパク質エンジニアリングシステム（Ｇ５９０１Ａ）を使用して、
細胞外ドメインにアラニン置換を有するヒトＯＸ４０突然変異体を生成した。標準的なト
ランスフェクション技法と、続いて上記に記載したとおりの形質導入を用いて、ヒトＯＸ
４０突然変異体を１６２４－５細胞の表面上に発現させた。

【0502】

フローサイトメトリーにおけるポリクローナル抗ＯＸ４０抗体への結合から明らかなと
おりの、正しく折り畳まれたヒトＯＸ４０突然変異体を発現する細胞について、モノクロ
ーナル抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はｐａｂ１９２８に結合しなかったヒトＯＸ
４０突然変異体を発現する部分集団を更に選択した。非結合細胞集団から、特異的抗体結
合を呈した細胞を分取高速ＦＡＣＳ（ＦＡＣＳＡｒｉａＩＩ、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）によって分離した。抗体反応性又は非反応性細胞プールを再び組織培養で拡大し、
レトロウイルスによって形質導入した細胞は安定発現表現型のため、明確に検出可能な抗
ＯＸ４０抗体（ｐａｂ１９４９－１又はｐａｂ１９２８）非反応性細胞集団が得られる時
点まで、抗体特異的細胞選別及び組織培養拡大のサイクルを繰り返した。この抗ＯＸ４０
抗体非反応性細胞集団を最終的な単細胞選別ステップに供した。数日間の細胞拡大後、単
細胞選別された細胞を、ポリクローナル抗ＯＸ４０抗体への結合及びモノクローナル抗体
ｐａｂ１９４９－１又はｐａｂ１９２８への非結合に関してフローサイトメトリーを用い
て再び試験した。簡潔に言えば、個々のヒトＯＸ４０アラニン突然変異体を発現する１６
２４－５細胞をモノクローナル抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はｐａｂ１９２８と
共にインキュベートした。各抗体につき２つの抗体濃度を試験した（ｐａｂ１９４９－１
：２μｇ／ｍｌ及び０．５μｇ／ｍｌ；ｐａｂ１９２８：１．１μｇ／ｍｌ及び０．４μ
ｇ／ｍｌ）。ＡＰＣにコンジュゲートしたポリクローナル抗ＯＸ４０抗体（ＡＦ３３８８
、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を１：２０００で希釈した。Ｆｃ受容体ブロック（１：２０
０；ＢＤカタログ番号５５３１４２）を加え、これらの試料を４℃で２０分間インキュベ
ートした。洗浄後、検出に必要であれば細胞を二次抗ＩｇＧ抗体と共に（ＰＥコンジュゲ
ート型；ＢＤカタログ番号１０９－１１６－０９７）４℃で２０分間インキュベートした
。次に細胞を洗浄し、フローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用し
て捕捉した。

【0503】

表現型（ポリクローナル抗ＯＸ４０抗体＋、モノクローナル抗ＯＸ４０抗体－）を遺伝
子型と関係付けるため、単細胞選別したヒトＯＸ４０突然変異体のシーケンシングを実施
した。図２１は、ポリクローナル抗ＯＸ４０抗体とはなおも結合するが、モノクローナル
抗ＯＸ４０抗体ｐａｂ１９４９－１又はｐａｂ１９２８とは結合しないヒトＯＸ４０アラ
ニン突然変異体を示す表である。全ての残基はヒトＯＸ４０の成熟アミノ酸配列（配列番
号５５）に従い付番する。「＋」はフローサイトメトリー分析に基づいた結合を示し、「
－」は結合の喪失を示す。

【0504】

本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきでは
ない。実際、当業者には、前述の説明及び添付の図から、記載されているものに加えて本
発明の様々な変形形態が明らかになるであろう。かかる変形形態は、添付の特許請求の範
囲内に含まれることが意図される。

【0505】

本明細書に引用される参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）は、全て各個
別の参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）があらゆる目的のために全体とし
て参照により援用されることが具体的且つ個別的に示されたものとみなすのと同程度に、
全体として及びあらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【0506】

他の実施形態が以下の特許請求の範囲内にある。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、
（ａ）重鎖可変領域であって、
ＧＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と
、
ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む重鎖Ｃ
ＤＲ２と、
ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と
を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）軽鎖可変領域であって、
ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１
と、
ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、
ＭＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と
を含む軽鎖可変領域と
を含む単離抗体。
（項目２）
前記重鎖可変領域が配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目１に記載の抗体。
（項目３）
配列番号６０～６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む、項
目１又は２に記載の抗体。
（項目４）
前記軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含む、項目１～３のいずれか一項に
記載の抗体。
（項目５）
配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、項目１～４のいずれか一項に記載
の抗体。
（項目６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを
含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６のアミノ酸配列を含む、単離抗体。
（項目７）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを
含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含む、単離抗体。
（項目８）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含む単離抗体。
（項目９）
（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、項目８に記載の抗体。
（項目１０）
（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、項目８に記載の抗体。
（項目１１）
（ａ）配列番号６２又は６３のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、項目８に記載の抗体。
（項目１２）
重鎖及び／又は軽鎖定常領域を更に含む、項目１、２、４、又は６～８のいずれか一項
に記載の抗体。
（項目１３）
前記重鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、
ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなる群から選択される、項目１２に記載の抗体。
（項目１４）
前記ＩｇＧ_１が非フコシル化ＩｇＧ_１である、項目１３に記載の抗体。
（項目１５）
ＩｇＧ_１のアミノ酸配列がＮ２９７Ａ突然変異又はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれ
らの組み合わせからなる群から選択される突然変異を含む、項目１３に記載の抗体。
（項目１６）
ＩｇＧ_１のアミノ酸配列がＮ２９７Ｑ突然変異を含む、項目１３に記載の抗体。
（項目１７）
ＩｇＧ_４のアミノ酸配列がＳ２２８Ｐ突然変異を含む、項目１３に記載の抗体。
（項目１８）
ＩｇＧ_２のアミノ酸配列がＣ１２７Ｓ突然変異を含む、項目１３に記載の抗体。
（項目１９）
前記重鎖定常領域が、配列番号６４～７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含
む、項目１３に記載の抗体。
（項目２０）
前記軽鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλからなる群から選択さ
れる、項目１２～１９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２１）
ヒト抗体である、項目１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２２）
項目１～２１のいずれか一項に記載の抗体と同じヒトＯＸ４０のエピトープに結合する
単離抗体。
（項目２３）
アゴニスト性である、項目１～２２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２４）
ヒトＯＸ４０の活性を活性化するか、増強するか、又は誘導する、項目１～２３のいず
れか一項に記載の抗体。
（項目２５）
ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導する、項目１～２４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２６）
前記ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖が前記抗体の濃度の実質的増加関数である、項目２５に記載
の抗体。
（項目２７）
前記ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖がシグモイド用量反応曲線を示す、項目２５に記載の抗体。
（項目２８）
抗ＣＤ３刺激末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ
－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、又はこれらの組み合わせの産
生を誘導する、項目１～２７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２９）
抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣによるＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２
、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、前記ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生が前記抗体の前記濃度の実質
的増加関数である、項目１～２８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３０）
抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣによるＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２
、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生を誘導し、前記ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＦＮγ、Ｇ
Ｍ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、又はＩＬ－１３の産生がシグモイド用量反応曲線を
示す、項目１～２８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３１）
ＳＥＡ刺激末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ－２産生を誘導し、且つＳＥＡ刺激
ＰＢＭＣによるＩＬ－１０産生を抑制する、項目１～３０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３２）
ＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２産生を誘導し、前記ＩＬ－２産生が前記抗体の前記
濃度の実質的増加関数である、項目１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３３）
ＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２産生を誘導し、前記ＩＬ－２産生がシグモイド用量
反応曲線を示す、項目１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３４）
調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を軽減する、項目１～３３のいずれか一
項に記載の抗体。
（項目３５）
エフェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞との共培養によるＩＬ－２産生を誘導し、且つエフ
ェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞との共培養によるＩＬ－１０産生を抑制する、項目１～３
４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３６）
検出可能標識を更に含む、項目１～３５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目３７）
項目１～３６のいずれか一項に記載の抗体の前記重鎖可変領域又は重鎖をコードする単
離核酸分子。
（項目３８）
項目１～３６のいずれか一項に記載の抗体の前記軽鎖可変領域又は軽鎖をコードする単
離核酸分子。
（項目３９）
項目１～３６のいずれか一項に記載の抗体の前記重鎖可変領域又は重鎖と、項目１～３
６のいずれか一項に記載の抗体の前記軽鎖可変領域又は軽鎖とをコードする単離核酸分子
。
（項目４０）
配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードする、項目３７又は３９に記
載の単離核酸分子。
（項目４１）
配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする、項目３８又は３９に記
載の単離核酸分子。
（項目４２）
項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸分子を含む単離ベクター。
（項目４３）
項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸分子、項目４２に記載のベクター、又は項
目３７若しくは４０に記載の核酸を含む第１のベクター及び項目３８若しくは４１に記載
の核酸を含む第２のベクターを含む宿主細胞。
（項目４４）
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、ＣＨ
Ｏ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ
、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７
、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養下のヒト
細胞からなる群から選択される、項目４３に記載の宿主細胞。
（項目４５）
ヒトＯＸ４０に結合する抗体を作製する方法であって、項目４３又は４４に記載の宿主
細胞を、前記核酸分子が発現され、及び前記抗体が産生されるように培養するステップを
含む方法。
（項目４６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合し、且つ項目３７～４１のいずれか一項に記載の単離核酸
分子によってコードされる単離抗体。
（項目４７）
項目１～３６又は４６のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを
含む医薬組成物。
（項目４８）
項目１～３６又は４６のいずれか一項に記載の抗体、項目３７～４１のいずれか一項に
記載の核酸分子、項目４２に記載のベクター、又は項目４３若しくは４４に記載の宿主細
胞と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目４９）
対象の免疫応答を調節する方法であって、項目１～３６若しくは４６のいずれか一項に
記載の抗体、項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸分子、項目４２に記載のベクタ
ー、項目４３若しくは４４に記載の宿主細胞、又は項目４７若しくは４８に記載の医薬組
成物の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
（項目５０）
免疫応答を調節することが、前記対象の前記免疫応答を増強又は誘導することを含む、
項目４９に記載の方法。
（項目５１）
対象のＴ細胞拡大及びＴ細胞エフェクター機能を増強する方法であって、項目１～３６
若しくは４６のいずれか一項に記載の抗体、項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸
分子、項目４２に記載のベクター、項目４３若しくは４４に記載の宿主細胞、又は項目４
７若しくは４８に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
（項目５２）
対象の癌を治療する方法であって、項目１～３６若しくは４６のいずれか一項に記載の
抗体、項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸分子、項目４２に記載のベクター、項
目４３若しくは４４に記載の宿主細胞、又は項目４７若しくは４８に記載の医薬組成物の
有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
（項目５３）
前記癌が、黒色腫、腎癌、前立腺癌、結腸癌、及び肺癌からなる群から選択される、項
目５２に記載の方法。
（項目５４）
インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害薬を前記対象に投与す
るステップを更に含む、項目５２又は５３に記載の方法。
（項目５５）
前記阻害薬が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、及びＮＬＧ９１
９からなる群から選択される、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記阻害薬がエパカドスタットである、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記阻害薬がＦ００１２８７である、項目５５に記載の方法。
（項目５８）
前記阻害薬がインドキシモドである、項目５５に記載の方法。
（項目５９）
前記阻害薬がＮＬＧ９１９である、項目５５に記載の方法。
（項目６０）
前記対象にワクチンを投与するステップを更に含む、項目５２又は５３に記載の方法。
（項目６１）
前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体を形成している熱ショックタンパク質を含む熱
ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記熱ショックタンパク質がｇｐ９６タンパク質であり、且つ腫瘍関連抗原ペプチドと
複合体を形成しており、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、項目６１
に記載の方法。
（項目６３）
前記熱ショックタンパク質がｈｓｐ７０又はｈｓｃ７０タンパク質であり、且つ腫瘍関
連抗原ペプチドと複合体を形成している、項目６１に記載の方法。
（項目６４）
前記対象がヒトである、項目４９～６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
試料中のＯＸ４０を検出する方法であって、項目１～３６又は４６のいずれか一項に記
載の抗体に前記試料を接触させるステップを含む方法。
（項目６６）
項目１～３６若しくは４６のいずれか一項に記載の抗体、項目３７～４１のいずれか一
項に記載の核酸分子、項目４２に記載のベクター、項目４３若しくは４４に記載の宿主細
胞、又は項目４７若しくは４８に記載の医薬組成物と、ａ）検出試薬、ｂ）ＯＸ４０抗原
、ｃ）ヒト投与への使用若しくは販売の認可を反映する通知、又はｄ）これらの組み合わ
せとを含むキット。
（項目６７）
ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、前記ＩｇＧ_１重鎖定常領域のアミノ
酸配列が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群か
ら選択される突然変異又はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群
から選択される突然変異を含む、項目１２、１３、２０～２２、３６、又は４６のいずれ
か一項に記載の抗体。
（項目６８）
前記抗体と変異ＯＸ４０との間の結合が、前記抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列
との間の結合と比べて実質的に弱まり、前記変異ＯＸ４０が、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８
０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群
から選択されるアミノ酸突然変異を除いて、配列番号５５の配列を含む、項目１～３６又
は４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６９）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体と変異ＯＸ４０との間の
結合が、前記抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列との間の結合と比べて実質的に弱ま
り、前記変異ＯＸ４０が、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９
Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異を
除いて、配列番号５５の配列を含む、単離抗体。
（項目７０）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体と変異ＯＸ４０との間の
結合が、前記抗体と配列番号５５のヒトＯＸ４０配列との間の結合と比べて実質的に弱ま
り、前記変異ＯＸ４０が、アミノ酸突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、
Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａを除いて、配列番号５５の配列を含む、
単離抗体。
（項目７１）
配列番号５５のヒトＯＸ４０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ
、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から
選択されるアミノ酸突然変異の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合
の低下又は欠如を呈する、項目１～３６又は４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７２）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列
への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、
Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異の存在
を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する単離抗体。
（項目７３）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、配列番号５５のヒトＯＸ４０配列
への結合と比較して、アミノ酸突然変異Ｗ５８Ａ、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８
８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９９Ａ、及びＰ１１５Ａの存在を除いて、配列番号５５と同一のタン
パク質への結合の低下又は欠如を呈する単離抗体。
（項目７４）
６０、６２、８０、８８、９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群か
ら選択される配列番号５５の残基を含むヒトＯＸ４０配列のエピトープに特異的に結合す
る、項目１～３６又は４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７５）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、６０、６２、８０、８８、９３、
９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５５の残基を
含むヒトＯＸ４０配列のエピトープに特異的に結合する単離抗体。
（項目７６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、配列番号５５の残基５８、６０、
６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５を含むヒトＯＸ４０配列のエピトープに特異
的に結合する単離抗体。
（項目７７）
６０、６２、８０、８８、９３、９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群か
ら選択される配列番号５５の少なくとも１つの残基に特異的に結合する、項目１～３６又
は４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７８）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、６０、６２、８０、８８、９３、
９９、１１５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される配列番号５５の少なく
とも１つの残基に特異的に結合する単離抗体。
（項目７９）
配列番号５５の残基５８、６０、６２、８０、８８、９３、９９、及び１１５に特異的
に結合する、項目１～３６又は４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８０）
ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を含み、前記ＩｇＧ_１重鎖定常領域のアミノ
酸配列が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群か
ら選択される突然変異又はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群
から選択される突然変異を含む、項目６８～７９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８１）
項目１、２、４、６～８、２１、２２、又は６８～７９のいずれか一項に記載の重鎖可
変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であ
って、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びｓｃＦｖ断片からなる群から選択される
単離抗体。
（項目８２）
１つの重鎖及び１つの軽鎖を含む、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって
、前記重鎖及び軽鎖が、それぞれ項目１、２、４、６～８、２１、２２、又は６８～７９
のいずれか一項に記載の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む、単離抗体。
（項目８３）
ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域を更に含み、前記ＩｇＧ_１重鎖定常領域のア
ミノ酸配列が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる
群から選択される突然変異又はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからな
る群から選択される突然変異を含む、項目８２に記載の抗体。
（項目８４）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、
（ａ）ヒトＯＸ４０に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、
（ｂ）ヒト免疫細胞によって発現される抗原に特異的に結合しない第２の抗原結合ドメ
インと
を含む単離抗体。
（項目８５）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、
（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）
１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶ
Ｈ－ＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤ
Ｒ３とを含む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬ－
ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２と、Ｍ
ＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３とを含む第１の軽
鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む、項目８４に記載の抗体。
（項目８６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配
列を含むＶＨ及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じヒトＯＸ４０
のエピトープに特異的に結合する、項目８４に記載の抗体。
（項目８７）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号５５のヒトＯＸ４
０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９
９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異
の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する、項
目８４に記載の抗体。
（項目８８）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインがＶＨとＶＬとを含み、前記Ｖ
Ｈが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目８４に記載の抗体。
（項目８９）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインがＶＨとＶＬとを含み、前記Ｖ
Ｌが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、項目８４に記載の抗体。
（項目９０）
前記第２の抗原結合ドメインが非ヒト抗原に特異的に結合する、項目８４～８９のいず
れか一項に記載の抗体。
（項目９１）
前記第２の抗原結合ドメインがウイルス抗原に特異的に結合する、項目８４～８９のい
ずれか一項に記載の抗体。
（項目９２）
前記ウイルス抗原がＨＩＶ抗原である、項目９１に記載の抗体。
（項目９３）
前記第２の抗原結合ドメインがニワトリアルブミン又は鶏卵リゾチームに特異的に結合
する、項目８４～９０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９４）
ＯＸ４０に特異的に結合する単離抗体であって、
（ａ）第１の重鎖と軽鎖とを含む、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメイン
と、
（ｂ）第２の重鎖又はその断片と
を含む単離抗体。
（項目９５）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、
（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）
１と、ＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶ
Ｈ－ＣＤＲ２と、ＧＩＹＤＳＳＧＹＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤ
Ｒ３とを含む第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＶＬ－
ＣＤＲ１と、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２と、Ｍ
ＱＡＬＱＴＰＬＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３とを含む第１の軽
鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む、項目９４に記載の抗体。
（項目９６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配
列を含むＶＨ及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体と同じヒトＯＸ４０
のエピトープに特異的に結合する、項目９４に記載の抗体。
（項目９７）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号５５のヒトＯＸ４
０配列への結合と比較して、Ｎ６０Ａ、Ｒ６２Ａ、Ｒ８０Ａ、Ｌ８８Ａ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９
９Ａ、Ｐ１１５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸突然変異
の存在を除いて、配列番号５５と同一のタンパク質への結合の低下又は欠如を呈する、項
目９４に記載の抗体。
（項目９８）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインがＶＨとＶＬとを含み、前記Ｖ
Ｈが配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目９４に記載の抗体。
（項目９９）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインがＶＨとＶＬとを含み、前記Ｖ
Ｌが配列番号１５のアミノ酸配列を含む、項目９４に記載の抗体。
（項目１００）
前記第２の重鎖の前記断片がＦｃ断片である、項目９４～９９のいずれか一項に記載の
抗体。
（項目１０１）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配
列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一のアミノ酸配
列を含むＶＨを含む、項目８４～１００のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０２）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配
列を含むＶＨを含む、項目８４～１０１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０３）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、ヒトＩＧＨＶ３－７３生殖
系列配列に由来するアミノ酸配列を含むＶＨを含む、項目８４～１０１のいずれか一項に
記載の抗体。
（項目１０４）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１５のアミノ酸配
列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一のアミノ酸配
列を含むＶＬを含む、項目８４～１０３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０５）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列
を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、項目８４～１０４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０６）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号１５のアミノ酸配
列を含むＶＬを含む、項目８４～１０５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０７）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配
列を含む軽鎖を含む、項目８４～１０６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０８）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号５０のアミノ酸配
列を含む軽鎖を含む、項目８４～１０７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０９）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、ヒトＩＧＫＶ２－２８生殖
系列配列に由来するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、項目８４～１０３のいずれか一項に
記載の抗体。
（項目１１０）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１６及び
１５に示されるＶＨ及びＶＬ配列を含む、項目８４～１０２のいずれか一項に記載の抗体
。
（項目１１１）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメインが、配列番号６０のアミノ酸配
列を含む重鎖を含む、項目８４～１１０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１２）
前記第１の抗原結合ドメイン及び前記第２の抗原結合ドメインが、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９
７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突然変異又
はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される同一の突
然変異を含む、項目８４～９３又は１０１～１１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１３）
ヒトＯＸ４０に特異的に結合する前記抗原結合ドメイン及び前記第２の重鎖又はその断
片が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、及びこれらの組み合わせからなる群から選
択される同一の突然変異又はＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びこれらの組み合わせからなる
群から選択される同一の突然変異を含む、項目９４～１１１のいずれか一項に記載の抗体
。
（項目１１４）
ヒトＯＸ４０に対してアンタゴニスト性である、項目６７又は８０～１１３のいずれか
一項に記載の抗体。
（項目１１５）
ヒトＯＸ４０の活性を不活性化するか、低下させるか、又は阻害する、項目６７又は８
０～１１４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１６）
ヒトＯＸ４０のヒトＯＸ４０リガンドへの結合を阻害するか又は低下させる、項目６７
又は８０～１１５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１７）
ヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻害するか又は低下させる、項目６７又は８０～１１６の
いずれか一項に記載の抗体。
（項目１１８）
ヒトＯＸ４０リガンドによって誘導されるヒトＯＸ４０シグナル伝達を阻害するか又は
低下させる、項目６７又は８０～１１７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１９）
検出可能標識を更に含む、項目６７又は８０～１１８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２０）
項目６７又は８０～１１９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤
とを含む医薬組成物。
（項目１２１）
対象の免疫応答を調節する方法であって、項目１～３６若しくは４６、６７若しくは８
０～１１９のいずれか一項に記載の抗体又は項目１２０に記載の医薬組成物の有効量を前
記対象に投与するステップを含む方法。
（項目１２２）
免疫応答を調節することが、前記対象の前記免疫応答を低下させるか又は阻害すること
を含む、項目１２０に記載の方法。
（項目１２３）
対象の自己免疫性又は炎症性疾患又は障害を治療する方法であって、項目１～３６若し
くは４６、６７若しくは８０～１１９のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１８に記載
の医薬組成物の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法。
（項目１２４）
前記疾患又は障害が、移植片拒絶反応、脈管炎、喘息、関節リウマチ、皮膚炎、炎症性
腸疾患、ブドウ膜炎、及びループスからなる群から選択される、項目１２３に記載の方法
。
（項目１２５）
前記対象がヒトである、項目１２１～１２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２６）
対象の感染症を治療する方法であって、項目１～３６若しくは４６、６７若しくは８０
～１１９のいずれか一項に記載の抗体、項目３７～４１のいずれか一項に記載の核酸分子
、項目４２に記載のベクター、項目４３若しくは４４に記載の宿主細胞、又は項目４７、
４８若しくは１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与するス
テップを含む方法。
（項目１２７）
チェックポイントターゲティング剤を前記対象に投与するステップを更に含む、項目５
２又は５３に記載の方法。
（項目１２８）
前記チェックポイントターゲティング剤が、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴ
ニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ
－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタ
ゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗
体、及びアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、項目１２７に記載の方法
。
（項目１２９）
試料中のＯＸ４０を検出する方法であって、項目６７又は８０～１１９のいずれか一項
に記載の抗体に前記試料を接触させるステップを含む方法。
（項目１３０）
項目６７若しくは８０～１１９のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１８に記載の医
薬組成物と、ａ）検出試薬、ｂ）ＯＸ４０抗原、ｃ）ヒト投与への使用若しくは販売の認
可を反映する通知、又はｄ）これらの組み合わせとを含むキット。

【図1AB】