特許7404553２－［２－メチルアゼチジン－１－イル］－４－フェニル－６－（トリフルオロメチル）－ピリミジン化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-12-15
(45)【発行日】2023-12-25
(54)【発明の名称】２－［２－メチルアゼチジン－１－イル］－４－フェニル－６－（トリフルオロメチル）－ピリミジン化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 403/04 20060101AFI20231218BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20231218BHJP
C07D 403/14 20060101ALI20231218BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20231218BHJP
A61P 9/04 20060101ALI20231218BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20231218BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20231218BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20231218BHJP
【ＦＩ】
C07D403/04 CSP
A61K31/506
C07D403/14
A61P3/10
A61P9/04
A61P13/12
A61P1/16
A61P3/06
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2022548982
(86)(22)【出願日】2021-02-05
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-03
(86)【国際出願番号】 US2021016742
(87)【国際公開番号】W WO2021162943
(87)【国際公開日】2021-08-19
【審査請求日】2022-11-25
(31)【優先権主張番号】62/975,856
(32)【優先日】2020-02-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】ダーラム，ティモシー バレット
(72)【発明者】
【氏名】ハオ，ジュンリアン
(72)【発明者】
【氏名】ジョンストン，リチャード デュエイン
【審査官】高森 ひとみ
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１９－５００３８３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５２５３７０（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式【化1】
Ｒが、－ＯＨ、－ＮＨＣ（ＣＨ２ＯＨ）３、もしくは
【化2】
【請求項2】
前記化合物が、【化3】
【請求項3】
前記化合物が、【化4】
【請求項4】
請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項5】
請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、薬学的組成物。
【請求項6】
患者における２型糖尿病を治療するための、請求項４または５に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
患者における心不全を治療するための、請求項４または５に記載の薬学的組成物。
【請求項8】
患者における糖尿病性腎臓病を治療するための、請求項４または５に記載の薬学的組成物。
【請求項9】
患者における非アルコール性脂肪肝炎を治療するための、請求項４または５に記載の薬学的組成物。
【請求項10】
２型糖尿病を治療するための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項11】
心不全を治療するための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項12】
糖尿病性腎臓病を治療するための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項13】
非アルコール性脂肪肝炎を治療するための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項14】
薬学的組成物を調製するためのプロセスであって、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新規のケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）阻害剤化合物、この化合物を含む薬学的組成物、ならびに２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、心不全、糖尿病性腎臓病、および非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）などのある特定の状態を治療するためのこの化合物の使用に関する。
【0002】
フルクトキナーゼとも呼ばれるＫＨＫは、フルクトース代謝に関与する律速酵素である。これは、フルクトースのフルクトース－１－リン酸（Ｆ１Ｐ）へのリン酸化を触媒し、これにより細胞ＡＴＰレベルの付随的な枯渇を引き起こす。グルコースとは対照的に、フルクトース代謝は、フィードバック阻害を欠いており、それは、例えば、脂質形成、グルコース新生および酸化的リン酸化に関与する、下流の中間体の蓄積を引き起こす（Ｈａｎｎｏｕ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２８（２），５４４－５５５，２０１８）。これは、多くの重篤な代謝障害に関連する不利な代謝的な結果を有する。
【0003】
ＫＨＫは、エキソン３が異なるＫＨＫ－ＣおよびＫＨＫ－Ａからなる２つの代替的にスプライシングされたアイソフォームで存在する。ＫＨＫ－Ｃは、主として、肝臓、腎臓および腸において発現され、一方ＫＨＫ－Ａは、より広範に分布する。両方のアイソフォームを欠損したマウスは、フルクトース誘発性代謝症候群から完全に保護されている。しかし、ＫＨＫ－Ａのみを欠くマウスにおいては、有害な代謝作用が悪化する（Ｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ，ｅｔ ａｌ．；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０９（１１），４３２０－４３２５，２０１２）。
【0004】
いくつかの疫学的および実験的研究は、フルクトースの消費の増加、およびより正確には、フルクトース代謝の増加が、代謝症候群を含むある特定の障害の発症において、特にＴ２ＤＭ（Ｓｏｆｔｉｃ ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２７（１１），４０５９－４０７４，２０１７）、心不全（Ｍｉｒｔｓｃｈｉｎｋ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．；Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．，３９，２４９７－２５０５，２０１８）、糖尿病性腎臓病（Ｃｉｒｉｌｌｏ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２０，５４５－５５３，２００９）、およびＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ（Ｖｏｓ，Ｍ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．；Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，５７，２５２５－２５３１，２０１３）の発症に重要な役割を果たす可能性があることを報告している。ＫＨＫの標的阻害は、フルクトース代謝を制限し、多くの代謝障害のための効果的な治療の選択肢を提供することが期待される。
【0005】
ＵＳ２０１７／０１８３３２８（Ａ１）は、ＫＨＫ阻害剤としての置換３－アザビシクロ［３．１．０］へキサンについて開示している。近年公開されたデータは、ケトヘキソキナーゼ阻害剤ＰＦ－０６８３５９１９を６週間投与することにより、非アルコール性脂肪肝疾患を有する対象において、磁気共鳴画像法－プロトン密度脂肪分画により測定される場合、肝臓脂肪全体が減少することを示している（Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．ＥＡＳＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｖｅｒ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｎ°１Ｓ Ｖｏｌ．７０，Ａｐｒｉｌ ２０１９）。
【0006】
Ｔ２ＤＭ、心不全、糖尿病性腎臓病およびＮＡＳＨなどの、代謝症候群および関連する徴候のための代替的な治療の必要性が存在する。特に、強力なＫＨＫの阻害剤である化合物が必要とされている。有利な特性、例えば、１日１回投与をサポートするための良好な経口生物学的利用能を有するＫＨＫ阻害剤化合物が必要とされている。
【0007】
したがって、一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物であって、
式中、
Ｒが、－ＯＨ、－ＮＨＣ（ＣＨ２ＯＨ）３、もしくは
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化1】
Ｒが、－ＯＨ、－ＮＨＣ（ＣＨ２ＯＨ）３、もしくは
【化2】
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0008】
特定の実施形態では、Ｒが
である場合、－ＯＨ基は、互いに対してシス配置にある。
【化3】
【0009】
特定の実施形態では、化合物は、式Ｉａのものであるか、
またはその薬学的に許容される塩である。
【化4】
【0010】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、
、またはその薬学的に許容される塩である。
【化5】
【0011】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、
、またはその薬学的に許容される塩である。
【化6】
【0012】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、
、またはその薬学的に許容される塩である。
【化7】
【0013】
式Ｉは、式ＩａおよびＩｂを包含し、例えば、治療方法および治療用途における以下の式Ｉへの言及は、これらの下位式の各々およびすべてへの言及としても読まれる。
【0014】
一実施形態では、本発明はまた、Ｔ２ＤＭの治療を必要とする患者におけるそれを治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0015】
一実施形態では、本発明はまた、心不全の治療を必要とする患者におけるそれを治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0016】
一実施形態では、本発明はまた、糖尿病性腎症の治療を必要とする患者におけるそれを治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0017】
一実施形態では、本発明はまた、ＮＡＳＨの治療を必要とする患者におけるそれを治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0018】
一実施形態では、本発明は、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症（例えば糖尿病性網膜症）、心血管疾患、冠状動脈疾患、慢性腎臓病、および脂質異常症からなる群から選択される疾患の治療を必要とする患者におけるそれを治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法をさらに提供する。
【0019】
さらに、一実施形態では、本発明は、療法に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本発明は、Ｔ２ＤＭの治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本発明は、心不全の治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本発明は、糖尿病性腎臓病の治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本発明は、ＮＡＳＨの治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本発明はまた、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症（例えば糖尿病性網膜症）、心血管疾患、冠状動脈疾患、慢性腎臓病、または脂質異常症の治療に使用するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0020】
さらに、一実施形態では、本発明は、Ｔ２ＤＭを治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、心不全を治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、糖尿病性腎臓病を治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、ＮＡＳＨを治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本発明はまた、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、肥満、糖尿病合併症（例えば糖尿病性網膜症）、心血管疾患、冠状動脈疾患、慢性腎臓病、または脂質異常症を治療するための医薬を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0021】
一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、薬学的組成物をさらに提供する。一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、薬学的組成物を調製するためのプロセスをさらに提供する。
【0022】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【0023】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、哺乳動物を指す。好ましくは、患者は、ヒトである。
【0024】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者への単回または複数回用量の投与の際に、診断中または治療中の患者において所望の効果を提供する、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の量もしくは用量を指す。
【0025】
有効量は、既知の技法の使用によって、かつ同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者により決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、患者の人種；患者の大きさ、年齢、および健康状態全般；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の関与度または重症度の程度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬計画；併用薬の使用；ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多数の要因が考慮される。本発明の化合物は、体重１ｋｇあたり約０．１～約１５ｍｇの範囲内に収まる１日あたりの投薬量で有効である。
【0026】
本発明の化合物は、本化合物を生物学的に利用可能にする任意の経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような薬学的組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｐ．，「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。
【0027】
式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、本発明の治療方法および治療用途において使用されてもよく、ある特定の配置が好ましい。以下の選好が、本発明の治療方法、治療用途、および化合物の両方に適用可能であることが理解されるであろう。
【0028】
式Ｉの化合物には、
およびその薬学的に許容される塩が含まれる。
【化8】
【0029】
本発明は、すべての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む当該化合物の混合物を企図するが、式Ｉａの化合物、およびその薬学的に許容される塩が、特に好ましい。
【0030】
当業者は、個々のエナンチオマーを、式Ｉの化合物の合成における任意の好都合な時点で、選択的結晶化技術、キラルクロマトグラフィー（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」，Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）、または超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（例えば、Ｔ．Ａ．Ｂｅｒｇｅｒ，「Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｐｒｉｍｅｒ」，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｊｕｌｙ ２０１５を参照されたい）のような方法によって分離または分解し得る。
【0031】
式Ｉの化合物の薬物的に許容される塩は、例えば、当該技術分野で周知の標準的な条件下で、適切な溶媒中での式Ｉの化合物の適切な遊離塩基と適切な薬学的に許容される酸との反応によって形成され得る（例えば、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．；Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，４，４２７－４３５，２０００およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１－１９，１９７７を参照されたい）。
【0032】
式Ｉの化合物、またはその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製することができ、そのうちのいくつかを、以下のスキーム、調製、および実施例において説明する。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することができる。以下のスキームにおいて、すべての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義したとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、本発明をさらに説明するために以下のスキーム、調製および実施例を提供する。加えて、当業者は、当業者が調製することができる、対応する所望の立体化学的配置を有する出発材料または中間体を使用することによって、式Ｉの化合物を調製し得ることを理解する。
【0033】
ある特定の略語を以下のとおり定義する：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＣＤＭＴ」は２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジンを指し、「ＤＣＭ」は塩化メチレンまたはジクロロメタンを指し、「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥＬＳＤ」は蒸発光散乱検出器を指し、「ＥＳ／ＭＳ」はエレクトロスプレー質量分析を指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指し、「ｈ」は時間を指し、「ＨＡＴＵ」は１－［ｂｉｓ（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「Ｍｅ」はメチルを指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ＭＴＢＥ」はメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを指し、「ｍｉｎ」は分を指し、「ｍ／ｚ」は質量対電荷比を指し、「Ｐｈ」はフェニルを指し、「ＲＢＦ」は丸底フラスコを指し、「ＲＴ」は室温を指し、「ＳＣＸ」は選択的陽イオン交換を指し、「ｓｅ」は標準誤差を指し、「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し、「ＴＢＴＵ」は２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートを指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。
【化9】
【0034】
スキーム１は、式Ｉの化合物の一般的な調製を示す。ステップ１および２は、ワンポットで完了する。最初に、２，４－ジクロロ－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン（１）に、パラジウム触媒、炭酸ナトリウムなどの水性塩基、および（４－メトキシカルボニルフェニル）ボロン酸（２）との室温でのＳｕｚｕｋｉカップリングを施し、クロロピリミジン中間体（３）を得る。ステップ１からの反応混合物に、２－メチルアゼチジン（４）またはその塩を添加し、次いで、反応物を加熱して、エステル中間体（５）を得る（ステップ２）。ステップ３では、エステル中間体（５）を、水酸化ナトリウムで高温で加水分解して、実施例１の酸化合物を得る。最後に、ステップ４で、実施例１の酸化合物を適切なアミンとカップリングすることにより、式Ｉの代替化合物を調製する。ステップ４は、ＤＭＦ、ＥｔＯＡｃ／ＤＭＦ、もしくはＡＣＮ中のＨＡＴＵ；ＡＣＮ中のＴＢＴＵ；またはＴＨＦ中のＣＤＭＴを使用して達成することができる。
【0035】
調製および実施例
以下の調製および実施例は、本発明をさらに説明し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬および出発材料は、容易に入手可能であるか、または当業者によって容易に合成され得る。調製および実施例は、限定ではなく例示として記載されており、当業者によって様々な変更がなされ得ることを理解されたい。
以下の調製および実施例は、本発明をさらに説明し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬および出発材料は、容易に入手可能であるか、または当業者によって容易に合成され得る。調製および実施例は、限定ではなく例示として記載されており、当業者によって様々な変更がなされ得ることを理解されたい。
【0036】
ＬＣ－ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１１００液体クロマトグラフィーシステム上で実施する。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブおよび／またはネガティブモードで取得）は、ＥＬＳＤを有していても有していなくてもよいＨＰＬＣに接続された質量選択性検出器四重極質量分析計上で実施する。ＬＣ－ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ Ｃ１８ ２．０×５０ｍｍ ３．０μｍ、１１０Å；勾配：１．５分で５～９５％のＢ、次いで０．５分間９５％のＢ；カラム温度：５０℃＋／－１０℃；流速：１．２ｍＬ／分；注入量１μＬ；溶媒Ａ：０．１％のＨＣＯＯＨを含む脱イオン水；溶媒Ｂ：０．１％のギ酸を含むＡＣＮ；波長：２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ。ＨＰＬＣがＥＬＳＤを備えている場合、設定は、蒸発器温度４５℃、ネブライザ温度４０℃、およびガス流速１．６ＳＬＭである。代替のＬＣ－ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ｘＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８カラム ２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ；勾配：１．５分で５～９５％のＢ、次いで０．５０分間９５％のＢ；カラム温度：５０℃＋／－１０℃；流速１．２ｍＬ／分；注入量１μＬ；溶媒Ａ：１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３ ｐＨ９；溶媒Ｂ：ＡＣＮ；波長：２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ；ＥＬＳＤを有する場合：蒸発器温度４５℃、ネブライザ温度４０℃、およびガス流速１．６０ＳＬＭ。
【0037】
調製１
（２Ｓ）－１－ベンズヒドリル－２－メチル－アゼチジン［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホン酸塩
滴下漏斗、窒素注入口、および温度計アダプタを備えた２０００ｍＬの三つ口ＲＢＦを組み立てる。容器を窒素でパージし、（３Ｒ）－ブタン－１，３－ジオール（２５ｇ、２７７．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１２７ｍｌ、７３１ｍｍｏｌ）およびＡＣＮ（５５６ｍｌ）を添加する。－３０℃に冷却する。内部温度が－３５～－３０℃に維持されるように、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１０１ｍＬ、６０１ｍｍｏｌ）を３時間かけて滴下する。添加完了後、－３５～－３０℃で１０分間攪拌する。内部温度が－３５～－３０℃に維持されるように、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１．９ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下する。添加完了後、－３５～－３０℃で１０分間攪拌する。内部温度が－３５～－３０℃に維持されるように、ＤＩＰＥＡ（１２７ｍＬ、７３１ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下する。添加完了後、－３５～－３０℃で１０分間攪拌する。窒素下の別個のフラスコ中で、アミノジフェニルメタン（４８．０ｍＬ、２７０ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（４９ｍＬ、９３５ｍｍｏｌ）中に溶解し、得られた溶液を滴下漏斗に移す。内部温度が－２０～－３５℃に維持されるように、アミン溶液を冷トリフレートに４０分間かけて滴下する。添加完了後、－３５～－３０℃で３０分間攪拌する。反応物を水浴に移し、３０分間かけて徐々に加温する。浴を除去し、反応物を３０分間かけて室温に加温させる。容器を加熱マントルに移し、反応物を４５℃に３０分間加温し、次いで室温に冷却する。得られた混合物を１２００ｍＬの水中に注ぎ、トルエン（４００ｍＬ×３）で抽出する。抽出物を合わせ、水、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発器上で濃縮する。材料を真空下で一晩乾燥させる。残渣をＤＣＭ（４００ｍＬ）中に溶解する。フリット漏斗上にシリカパッドを調製し、それを１：１ヘプタン／ＥｔＯＡｃで平衡化する。生成物溶液をシリカパッド上に充填し、１６００ｍＬの１：１ヘプタン／ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を濃縮して、赤色の油を得る。油をＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）中に溶解し、フラスコを水浴（約１０℃）中に入れる。内部温度を２０℃未満に保ちながら、Ｌ（－）－カンファースルホン酸（６１．６ｇ、２６５ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加する。得られた混合物を１５分間攪拌し、次いで回転蒸発器上で濃縮して、褐色の泡状物を得る。泡状物を真空ポンプ上で２時間乾燥させる。泡状物を１３０ｍＬのＤＣＭ中に溶解する。滴下漏斗をフラスコに取り付ける。漏斗を使用して、１１００ｍＬのＥｔＯＡｃを攪拌溶液に徐々に添加する。得られた混合物を４０００ｍＬのビーカーに移し、大気に開放下、一晩攪拌する。ビーカーを氷浴中で１０分間冷却する。沈殿物を真空濾過によりフリット漏斗中に収集し、最小量の氷冷ＥｔＯＡｃで洗浄する。フリット上の固体を２時間乾燥させる。得られた白色の固体を最小量のＤＣＭ中に溶解し、２０００ｍＬのビーカーに移し、次いで透明な溶液が曇ってくるまで、 ＥｔＯＡｃで徐々に希釈する。懸濁液を、大気に開放しながら４時間攪拌する。固体を、フリット漏斗を使用して真空濾過により収集し、フリット上で一晩乾燥させて、表題化合物（１１１．８ｇ、２３８．０６ｍｍｏｌ、収率８６％）を白色の固体として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）：１０．５４－１０．４７（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，５Ｈ），７．４７－７．３７（ｍ，７Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６８－４．６１（ｍ，１Ｈ），３．９１－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｓ，８Ｈ），２．９９（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７７－２．６８（ｍ，１Ｈ），２．５１－２．４４（ｍ，４Ｈ），２．３０－２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８１（ｍ，２Ｈ），１．４２－１．２８（ｍ，３Ｈ），１．０８（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．７７（ｓ，４Ｈ）；＞９８％のｅｅ［ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ（１０ｃｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）、５ｍＬ／分、４０℃ 均一濃度の１０％のＥｔＯＨ（０．２％のｉＰｒＮＨ２）／ＣＯ２］。
（２Ｓ）－１－ベンズヒドリル－２－メチル－アゼチジン［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホン酸塩
【化10】
【0038】
調製２
［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホネート（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イウム塩
２２５０ｍＬのＰａｒｒ容器に、炭素（６．６２ｇ）上の２０重量％のＰｄ（ＯＨ）２を添加する。ボトルを窒素でパージし、２５０ｍＬのＭｅＯＨを添加する。得られた懸濁液に、２５０ｍＬのＭｅＯＨ中に溶解した（２Ｓ）－１－ベンズヒドリル－２－メチル－アゼチジン［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホン酸塩（１１１ｇ、２３６ｍｍｏｌ）を徐々に添加する。 容器を密封する。窒素、続いて水素でパージし、６０ＰＳＩに加圧する。反応容器を、Ｐａｒｒシェーカー装置において、室温で１５時間、激しく振とうする。容器を窒素でパージし、次いで反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。濾液を濃縮して、白色の固体を得、真空下で乾燥させる。固体を７８０ｍＬの１：１のＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ中に懸濁し、混合物を６５℃に２０時間加熱し、次いで室温に冷却し、一晩攪拌する。固体を濾過により収集する。固体を３８０ｍＬのＭＴＢＥ中に懸濁し、室温で２４時間攪拌する。白色の固体を濾過により収集して、表題化合物（４１．５ｇ、１３６．７８ｍｍｏｌ、収率５８％）を得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６－ＤＭＳＯ）：８．６８－８．５５（ｍ，１Ｈ），４．５１－４．４２（ｍ，１Ｈ），３．９１－３．７５（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６９－２．６１（ｍ，１Ｈ），２．５２－２．４６（ｍ，２Ｈ），２．２８－２．２２（ｍ，１Ｈ），２．１７－２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９６（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．８９－１．７９（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．３６－１．２６（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｓ，２Ｈ），０．７５（ｓ，２Ｈ）。
［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホネート（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イウム塩
【化11】
【0039】
調製３
４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸メチル
窒素下の２Ｌの三つ口ＲＢＦ中で、２，４－ジクロロ－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン（２５．００ｇ、１１２．９ｍｍｏｌ）、（４－メトキシカルボニルフェニル）ボロン酸（２１．３４ｇ、１１８．６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、１７０ｍＬ、３４０ｍｍｏｌ）、および１，４－ジオキサン（５００ｍＬ）を合わせる。室温で攪拌し、混合物に窒素を１０分間バブリングする。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１．５８５ｇ、２．２５８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加する。混合物を室温で２３時間攪拌する。懸濁液に、［（１Ｒ，４Ｓ）－７，７－ジメチル－２－オキソ－ノルボルナン－１－イル］メタンスルホネート（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イウム塩（３５．９７ｇ、１１８．６ｍｍｏｌ）を添加する。懸濁液を７５℃に１時間加熱する。熱源を取り外し、水（５００ｍＬ）を１０分間かけて滴下漏斗を介して添加する。混合物を室温に冷却させ、黄色の固体を濾過により分離する。材料を４５℃の真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物を黄色の固体（４１．７５ｇ、定量的収率） として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．３５－８．３２（ｍ，２Ｈ），８．１１－８．０８（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），４．６４－４．５７（ｍ，１Ｈ），４．１６－４．０６（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），２．５２－２．４５（ｍ，１Ｈ），２．０６－２．００（ｍ，１Ｈ），１．５４（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３５２（Ｍ＋Ｈ）。
４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸メチル
【化12】
【0040】
実施例１
４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸
窒素下の２ＬのＲＢＦ中で、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸メチル（４１．８０ｇ、１１５．４ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、１７３．１ｍＬ、３４６ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（４１８ｍＬ）、およびＴＨＦ（２０９ｍＬ）を慎重に合わせる。得られた混合物を７５℃に徐々に加温し、２時間攪拌し、次いで室温に冷却する。有機溶媒を真空中で除去する。水（４００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を添加する。得られた混合物を、真空濾過を使用してＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過する。有機層を分離する。塩基性水層を追加のＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で洗浄する。水層を、２ＭのＨＣｌを使用してｐＨ＝５に酸性化する。ＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣を真空下で乾燥し、次いでＴＨＦ（７５０ｍＬ）中に溶解し、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール（Ｓｉ－チオール）樹脂（２．５ｇ）を添加する。得られた混合物を４０℃で６時間攪拌し、室温に冷却し、濾過する。濾液を濃縮して、固体を得る。これを、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸メチル（７．９５ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）で開始する上記と本質的には同じ手順を使用して調製した材料と合わせる。合わせた材料を、ヘプタン：ＥｔＯＡｃの１０：１（ｖ／ｖ）溶液中で１時間攪拌する。固体を濾過により収集し、ヘプタンで洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物（３４．８ｇ、７５％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３８（Ｍ＋Ｈ）、３３６（Ｍ－Ｈ）。
４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸
【化13】
【0041】
実施例２
［（３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ジヒドロキシピロリジン－１－イル］－［４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝フェニル］メタノン
ステップ１－カップリング
カップリング方法Ａ：
窒素雰囲気下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１０ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（４．３９ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（３９．２ｍＬ）を充填する。ＤＩＰＥＡ（１２．１ｍＬ、６９．７ｍｍｏｌ）を徐々に添加する。得られた混合物を３℃に冷却し、攪拌しながらＨＡＴＵ（１６．６ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）を５分間かけて添加する。９０分間攪拌する。得られた反応物を、二塩基性リン酸カリウム水溶液（２Ｍ、１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とに分割する。有機相を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、塩化リチウム水溶液（１０質量％、２００ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して、粗製表題化合物（２１．４ｇ）を黄色の泡状物として得る。
［（３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ジヒドロキシピロリジン－１－イル］－［４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝フェニル］メタノン
【化14】
カップリング方法Ａ：
窒素雰囲気下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１０ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（４．３９ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（３９．２ｍＬ）を充填する。ＤＩＰＥＡ（１２．１ｍＬ、６９．７ｍｍｏｌ）を徐々に添加する。得られた混合物を３℃に冷却し、攪拌しながらＨＡＴＵ（１６．６ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）を５分間かけて添加する。９０分間攪拌する。得られた反応物を、二塩基性リン酸カリウム水溶液（２Ｍ、１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とに分割する。有機相を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、塩化リチウム水溶液（１０質量％、２００ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して、粗製表題化合物（２１．４ｇ）を黄色の泡状物として得る。
【0042】
カップリング方法Ｂ：
カップリング手順を、本質的にはカップリング方法Ａに記載のとおり実施するが、以下を除く：４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（２．１０ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）で開始し、反応溶媒としてのＥｔＯＡｃの使用を省き、ＤＭＦのみ（２１ｍＬ）を使用し、反応を二塩基性リン酸カリウム水溶液（２Ｍ）とＥｔＯＡｃの代わりに塩化リチウム水溶液（１０質量％、４２ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２１ｍＬ）とに分割することによってワークアップする。粗製表題化合物（２．６７ｇ）を黄色の泡状物として得る。
カップリング手順を、本質的にはカップリング方法Ａに記載のとおり実施するが、以下を除く：４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（２．１０ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）で開始し、反応溶媒としてのＥｔＯＡｃの使用を省き、ＤＭＦのみ（２１ｍＬ）を使用し、反応を二塩基性リン酸カリウム水溶液（２Ｍ）とＥｔＯＡｃの代わりに塩化リチウム水溶液（１０質量％、４２ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２１ｍＬ）とに分割することによってワークアップする。粗製表題化合物（２．６７ｇ）を黄色の泡状物として得る。
【0043】
カップリング方法Ｃ：
窒素下のＴＨＦ（１８ｍＬ）中の４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１．０３ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）とＣＤＭＴ（０．６９６ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）との４℃の攪拌混合物に、４－メチルモルホリン（０．４５３ｇ、０．４９４ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を室温で３０分間攪拌し、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．４５１ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６ｍＬ）、トリエチルアミン（０．９０７ｇ、１．２５ｍＬ、８．９６ｍｍｏｌ）、および４－メチルモルホリン（０．４５３ｇ、０．４９４ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）の懸濁液（これは、室温で攪拌することにより事前に調製した）を滴下する。得られた混合物を４℃で攪拌する。１時間後、さらに（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．０４３ｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温に加温する。２時間後、反応混合物を、焼結漏斗（３Å細孔径）を使用して減圧下で濾過する。揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、気流下で３０分間、および高真空下で一晩乾燥させる。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）とに分割する。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）で再度洗浄し、一晩かけて相を分解させる。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去して、粗製表題化合物（１．４４ｇ）を黄色の透明油として得る。
窒素下のＴＨＦ（１８ｍＬ）中の４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１．０３ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）とＣＤＭＴ（０．６９６ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）との４℃の攪拌混合物に、４－メチルモルホリン（０．４５３ｇ、０．４９４ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を室温で３０分間攪拌し、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．４５１ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６ｍＬ）、トリエチルアミン（０．９０７ｇ、１．２５ｍＬ、８．９６ｍｍｏｌ）、および４－メチルモルホリン（０．４５３ｇ、０．４９４ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）の懸濁液（これは、室温で攪拌することにより事前に調製した）を滴下する。得られた混合物を４℃で攪拌する。１時間後、さらに（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．０４３ｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温に加温する。２時間後、反応混合物を、焼結漏斗（３Å細孔径）を使用して減圧下で濾過する。揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、気流下で３０分間、および高真空下で一晩乾燥させる。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）とに分割する。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）で再度洗浄し、一晩かけて相を分解させる。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去して、粗製表題化合物（１．４４ｇ）を黄色の透明油として得る。
【0044】
カップリング方法Ｄ：
窒素下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１．９９ｇ、５．７９ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．８７５ｇ、６．０８ｍｍｏｌ）、およびＡＣＮ（１６ｍＬ）を充填し、次いでＤＩＰＥＡ（２．２５ｇ、３．０１ｍＬ、１７．４ｍｍｏｌ）を穏やかに添加する。混合物を室温で５分間攪拌し、次いでＨＡＴＵ（２．６４ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）を添加する。２５分間攪拌した後、すべての揮発性物質を減圧下で除去する。残渣を酢酸イソプロピル（２０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、２０ｍＬ×２）、水（２０ｍＬ）、炭酸ナトリウム水溶液（１Ｍ、２０ｍＬ）、および水（２０ｍＬ）で抽出する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去する。この物質をＭｅＴＨＦ（１８ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、１８ｍＬ）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去して、粗製表題化合物（１．５３ｇ）を黄色の泡状物として得る。
窒素下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（１．９９ｇ、５．７９ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（０．８７５ｇ、６．０８ｍｍｏｌ）、およびＡＣＮ（１６ｍＬ）を充填し、次いでＤＩＰＥＡ（２．２５ｇ、３．０１ｍＬ、１７．４ｍｍｏｌ）を穏やかに添加する。混合物を室温で５分間攪拌し、次いでＨＡＴＵ（２．６４ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）を添加する。２５分間攪拌した後、すべての揮発性物質を減圧下で除去する。残渣を酢酸イソプロピル（２０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、２０ｍＬ×２）、水（２０ｍＬ）、炭酸ナトリウム水溶液（１Ｍ、２０ｍＬ）、および水（２０ｍＬ）で抽出する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去する。この物質をＭｅＴＨＦ（１８ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、１８ｍＬ）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、すべての揮発性物質を減圧下で除去して、粗製表題化合物（１．５３ｇ）を黄色の泡状物として得る。
【0045】
カップリング方法Ｅ：
窒素雰囲気下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（８．６１ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（３．８ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）、およびＡＣＮ（７１ｍＬ）を充填する。ＤＩＰＥＡ（１３ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を徐々に添加する。得られた混合物を攪拌しながら、ＴＢＴＵ（９．０ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）を添加する。６分間攪拌する。すべての揮発性物質を真空中で除去する。残渣を２－メチルテトラヒドロフラン（８６ｍＬ）中に溶解し、塩酸（１Ｍ、８６ｍＬ×２）、水酸化ナトリウム（１Ｍ、８６ｍＬ×２）、および塩化リチウム（１０質量％、８６ｍＬ）で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中に溶解し、２回濃縮乾固して、粗製表題化合物（１０．３ｇ）を黄色の泡状物として得る。
窒素雰囲気下のＲＢＦに、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（８．６１ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｓ）－ピロリジン－３，４－ジオール塩酸塩（３．８ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）、およびＡＣＮ（７１ｍＬ）を充填する。ＤＩＰＥＡ（１３ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を徐々に添加する。得られた混合物を攪拌しながら、ＴＢＴＵ（９．０ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）を添加する。６分間攪拌する。すべての揮発性物質を真空中で除去する。残渣を２－メチルテトラヒドロフラン（８６ｍＬ）中に溶解し、塩酸（１Ｍ、８６ｍＬ×２）、水酸化ナトリウム（１Ｍ、８６ｍＬ×２）、および塩化リチウム（１０質量％、８６ｍＬ）で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（４３ｍＬ）中に溶解し、２回濃縮乾固して、粗製表題化合物（１０．３ｇ）を黄色の泡状物として得る。
【0046】
粗製表題化合物の別個のロットを、表１に示す出発材料の量およびカップリング方法を使用して調製する。表１で言及される出発材料は、４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸である。
【表1】
【0047】
ステップ２－精製
精製方法Ａ：
ロット１～６を合わせ、合わせた粗生成物を、ＥｔＯＡｃ中０～３％のＥｔＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の泡状物を得る。この物質をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中に溶解し、水（３７２ｍＬ）中の塩化リチウム（１０質量％）で３回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、黄色の固体を得る。固体をヘプタン（１７７ｍＬ）中で２時間粉砕し、濾過し、空気乾燥させ、次いで真空下で一晩乾燥させて、表題化合物（１４．６５ｇ、カップリングおよび精製ステップからの全収率８２％）を黄色の固体として得る。
精製方法Ａ：
ロット１～６を合わせ、合わせた粗生成物を、ＥｔＯＡｃ中０～３％のＥｔＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の泡状物を得る。この物質をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中に溶解し、水（３７２ｍＬ）中の塩化リチウム（１０質量％）で３回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、黄色の固体を得る。固体をヘプタン（１７７ｍＬ）中で２時間粉砕し、濾過し、空気乾燥させ、次いで真空下で一晩乾燥させて、表題化合物（１４．６５ｇ、カップリングおよび精製ステップからの全収率８２％）を黄色の固体として得る。
【0048】
精製方法Ｂ：
ロット７～１５を合わせ、合わせた粗生成物を、ＥｔＯＡｃ中０～１０％のＥｔＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の泡状物を得る。この材料を５％のアセトン／ヘプタン混合物（１６５ｍＬ）中で、６０℃で３０分間、次いで室温で６時間粉砕する。減圧下で濾過し、気流下で３０分間、次いで高真空下で乾燥させて、表題化合物（１５．８ｇ、カップリングおよび精製ステップからの全収率６４％）を結晶性の白色の粉末として得る。
ロット７～１５を合わせ、合わせた粗生成物を、ＥｔＯＡｃ中０～１０％のＥｔＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、黄色の泡状物を得る。この材料を５％のアセトン／ヘプタン混合物（１６５ｍＬ）中で、６０℃で３０分間、次いで室温で６時間粉砕する。減圧下で濾過し、気流下で３０分間、次いで高真空下で乾燥させて、表題化合物（１５．８ｇ、カップリングおよび精製ステップからの全収率６４％）を結晶性の白色の粉末として得る。
【0049】
実施例３
Ｎ－［２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル］－４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝ベンズアミド
４｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝安息香酸（７００ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を、バイアル中のＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解する。２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（２８０ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．２１ｇ、１．２１ｇ）、およびＤＩＰＥＡ（１．１ｍＬ、６．３ｍｍｏｌ）を添加する。バイアルを密封し、室温で１時間攪拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で２回洗浄し、次いで飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られた物質を、ＣＨ２Ｃｌ２中の０～１０％のＭｅＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィー、続いて水（０．１％のＴＦＡを含有）中の１０～１００％のＡＣＮ（０．１％のＴＦＡを含有）の勾配を使用する逆相クロマトグラフィーにより生成して、表題化合物（２８７ｍｇ、３１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４４１（Ｍ＋Ｈ）、４３９（Ｍ－Ｈ）。
Ｎ－［２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル］－４－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝ベンズアミド
【化15】
【0050】
アッセイ
ヒトＫＨＫ－ＣおよびヒトＫＨＫ－ＡについてのＫＨＫ酵素活性アッセイ
ＫＨＫ－ＣまたはＡ活性の阻害の固有の効力は、Ｆ１Ｐの産生を測定する酵素アッセイを使用して測定することができる。化合物をＤＭＳＯ中で調製し、１０点濃度曲線において試験して、２０μＭ～１．０２ｎＭの範囲で、９６ウェルプレート中に化合物の３倍段階希釈を作成する。酵素をアッセイバッファ［５０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１０ｍＭの塩化カリウム、１００ｍＭの塩化マグネシウム、２ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、０．０１％のｎ－オクチルグルコシド］中で調製し、化合物とともに室温で１５分間インキュベートする。反応を、基質濃度のフルクトース（ＫＨＫ－Ｃアッセイについては２５０μＭ、およびＫＨＫ－Ａアッセイについては１．２５ｍＭ）およびＡＴＰ（両アイソフォームについて１５０μＭ）を含有する１００μＬ容量で実施し、これを室温で２０分間さらにインキュベートする。次いで、反応を、０．２％のギ酸および１μｇ／ｍｌの１３Ｃ６－フルクトース－６－ホスフェート（１３Ｃ６－Ｆ６Ｐ）内部標準からなる停止バッファの添加によって停止する。プレートをＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析まで－２０℃で貯蔵する。
ヒトＫＨＫ－ＣおよびヒトＫＨＫ－ＡについてのＫＨＫ酵素活性アッセイ
ＫＨＫ－ＣまたはＡ活性の阻害の固有の効力は、Ｆ１Ｐの産生を測定する酵素アッセイを使用して測定することができる。化合物をＤＭＳＯ中で調製し、１０点濃度曲線において試験して、２０μＭ～１．０２ｎＭの範囲で、９６ウェルプレート中に化合物の３倍段階希釈を作成する。酵素をアッセイバッファ［５０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１０ｍＭの塩化カリウム、１００ｍＭの塩化マグネシウム、２ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、０．０１％のｎ－オクチルグルコシド］中で調製し、化合物とともに室温で１５分間インキュベートする。反応を、基質濃度のフルクトース（ＫＨＫ－Ｃアッセイについては２５０μＭ、およびＫＨＫ－Ａアッセイについては１．２５ｍＭ）およびＡＴＰ（両アイソフォームについて１５０μＭ）を含有する１００μＬ容量で実施し、これを室温で２０分間さらにインキュベートする。次いで、反応を、０．２％のギ酸および１μｇ／ｍｌの１３Ｃ６－フルクトース－６－ホスフェート（１３Ｃ６－Ｆ６Ｐ）内部標準からなる停止バッファの添加によって停止する。プレートをＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析まで－２０℃で貯蔵する。
【0051】
Ｆ１Ｐの定量化のためのＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析
３つのＨＰＬＣクォータナリポンプを備えたＡｇｉｌｅｎｔ ３００ ＲａｐｉｄＦｉｒｅ自動抽出システム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェース源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ６４９５三連四重極質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）に連結する。ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃシステムは、再使用可能なＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃ１８（タイプＣ）固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジ（Ｇ９２０５Ａ）を備えている。
３つのＨＰＬＣクォータナリポンプを備えたＡｇｉｌｅｎｔ ３００ ＲａｐｉｄＦｉｒｅ自動抽出システム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェース源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ６４９５三連四重極質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）に連結する。ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃシステムは、再使用可能なＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃ１８（タイプＣ）固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジ（Ｇ９２０５Ａ）を備えている。
【0052】
試料の充填および洗浄に使用される溶媒Ａは、酢酸を使用してｐＨ５．０にした６ｍＭのオクチルアミン（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ １２９４９５０００）である。試料の溶出に使用される溶媒Ｂは、０．１％の酸を含有するＡＣＮ中の２０％の水である。試料を、マルチウェルプレートから直接、真空下で収集ループ上へと１０μＬを吸引することによって連続的に分析する。１０μＬの試料をＣ１８カートリッジに充填し、溶媒Ａを１．２５ｍＬ／分の流速で使用して、５０００ミリ秒間洗浄する。次いで、保持された分析物を、溶媒Ｂを１．２５ｍＬ／分の流速で使用して、５０００ミリ秒間、質量分析計へ溶出させる。このシステムを、溶媒Ａを１．２５ｍＬ／分の流量で使用して、２０００ミリ秒間、再平衡化する。
【0053】
三連四重極質量分析計は、ＥＳＩ源を備え、分析物を、ネガティブモード［Ｍ－Ｈ］－で選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を使用してモニタリングする。Ｆ１Ｐを、ｍ／ｚ ２５９．０２／９６．９でモニタリングし、１３Ｃ６－フルクトース－６－ホスフェートを、ｍ／ｚ ２６４．９９／９７でモニタリングする。１３Ｃ６－フルクトース－６－ホスフェートを内部標準として使用して、Ｆ１Ｐの面積比値を計算する。
【0054】
実施例１～３の化合物を、本質的には上記のとおり試験した。
【表2】
【0055】
上記の表２に示す結果は、実施例１～３の化合物が、ＫＨＫ－ＣとＫＨＫ－Ａの両方の酵素活性を阻害することを実証している。
【0056】
ＫＨＫ細胞活性アッセイ
細胞ＫＨＫによるフルクトースのＦ１Ｐへの変換の阻害について、細胞アッセイを使用して効力を測定することができる。ＨｅｐＧ２肝細胞を、９６ウェル細胞培養プレート上で、増殖培地［ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）高グルコース、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩ ＦＢＳ）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン］中に播種し、３７℃のインキュベータ中で一晩付着させる。増殖培地を洗浄し、Ｇｉｂｃｏ ＯｐｔｉＭＥＭ １低減血清培地、０．１％のカゼイン、８．３３ｍＭのＤ－フルクトース－１３Ｃ６、および１００μＭ～０．００５１μＭ（１０点濃度曲線）の範囲の濃度の化合物からなるアッセイ培地と交換する。プレートを３７℃で３時間インキュベートし、その後、アッセイ培地を、細胞ウェルから吸引させる。次いで、８０％のＭｅＯＨ、２ｍＭの酢酸アンモニウム、および５０ｎｇ／ｍＬのフルクトース－６－ホスフェート－１３Ｃ６からなる停止溶液を、細胞に添加する。プレートをＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析（上記）まで－２０℃で貯蔵する。
細胞ＫＨＫによるフルクトースのＦ１Ｐへの変換の阻害について、細胞アッセイを使用して効力を測定することができる。ＨｅｐＧ２肝細胞を、９６ウェル細胞培養プレート上で、増殖培地［ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）高グルコース、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩ ＦＢＳ）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン］中に播種し、３７℃のインキュベータ中で一晩付着させる。増殖培地を洗浄し、Ｇｉｂｃｏ ＯｐｔｉＭＥＭ １低減血清培地、０．１％のカゼイン、８．３３ｍＭのＤ－フルクトース－１３Ｃ６、および１００μＭ～０．００５１μＭ（１０点濃度曲線）の範囲の濃度の化合物からなるアッセイ培地と交換する。プレートを３７℃で３時間インキュベートし、その後、アッセイ培地を、細胞ウェルから吸引させる。次いで、８０％のＭｅＯＨ、２ｍＭの酢酸アンモニウム、および５０ｎｇ／ｍＬのフルクトース－６－ホスフェート－１３Ｃ６からなる停止溶液を、細胞に添加する。プレートをＲａｐｉｄＦｉｒｅ ＭＳ分析（上記）まで－２０℃で貯蔵する。
【0057】
実施例１～３の化合物を、本質的には上記のとおり試験した。
【表3】
【0058】
上記の表３に示す結果は、実施例１～３の化合物が、ＨｅｐＧ２細胞においてフルクトースのＦ１Ｐへの代謝を阻害することを実証している。
【0059】
薬物動態アッセイのためのタンデム質量分析計を備えた液体クロマトグラフ（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法：内部標準を含有する１８０μＬのＭｅＯＨ：ＡＣＮ（１：１、ｖ／ｖ）を５０μＬの血漿に添加することによるタンパク質沈殿を使用して、試料を抽出する。次いで、試料をＭｅＯＨ：水（１：１、ｖ／ｖ）で希釈して、標準曲線の範囲内の濃度を得る。希釈された試料を、ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙインターフェースを備え、かつ陽イオンモードで操作されるＳｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００三連四重極質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／ＭＤＳ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用するＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析する。分析物を、ＥＣＨＥＬＯＮ Ｃ１８ ４ｕｍ ２０×２．１ｍｍカラムを使用して、クロマトグラフィーで分離する。ＬＣ条件は、水／１Ｍの重炭酸アンモニウム（２０００：１０、ｖ／ｖ）（移動相Ａ）、およびＭｅＯＨ／１Ｍの重炭酸アンモニウム（２０００：１０、ｖ／ｖ）（移動相Ｂ）である。
【0060】
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける薬物動態
実施例２および実施例３のインビボ薬物動態特性を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（絶食、ｎ＝３／投与経路）を使用して実証する。化合物を、ビヒクル中の単回経口（ＰＯ、３ｍｇ／ｋｇ、容量１０ｍＬ／ｋｇ）または静脈内（ＩＶ、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）用量により投与する。投与後０～最大２４時間の複数の時点で、各動物から血液を採取する。実施例２および３の血漿濃度を、上記のようにＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。
実施例２および実施例３のインビボ薬物動態特性を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（絶食、ｎ＝３／投与経路）を使用して実証する。化合物を、ビヒクル中の単回経口（ＰＯ、３ｍｇ／ｋｇ、容量１０ｍＬ／ｋｇ）または静脈内（ＩＶ、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）用量により投与する。投与後０～最大２４時間の複数の時点で、各動物から血液を採取する。実施例２および３の血漿濃度を、上記のようにＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。
【0061】
実施例２の場合、生物学的利用能は６５％であるが、ＩＶ投与は、平均半減期が６．４２時間であり、平均クリアランスが５．５７ｍＬ／分／ｋｇであることを明らかにした。実施例３の場合、生物学的利用能は６９％であるが、ＩＶ投与は、平均半減期が２．９５時間であり、平均クリアランスが１２．７ｍＬ／分／ｋｇであることを明らかにした。このデータは、実施例２および３がラットにおいて低い総クリアランスを有することを示し、最小限の初回通過抽出、高い経口バイオアベイラビリティ、および十分な平均半減期によって証明される長期の排泄を示唆している。
【0062】
イヌにおける薬物動態
実施例２および実施例３のインビボ薬物動態特性を、ビーグル犬（給餌、ｎ＝３）を使用して実証する。化合物を、ビヒクル中の単回経口（ＰＯ、２ｍｇ／ｋｇ、容量２ｍＬ／ｋｇ）または静脈内（ＩＶ、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）用量により投与する。投与後０～最大２４時間の複数の時点で、各動物から血液を採取する。実施例２および３の血漿濃度を、上記のようにＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。
実施例２および実施例３のインビボ薬物動態特性を、ビーグル犬（給餌、ｎ＝３）を使用して実証する。化合物を、ビヒクル中の単回経口（ＰＯ、２ｍｇ／ｋｇ、容量２ｍＬ／ｋｇ）または静脈内（ＩＶ、１ｍｇ／ｋｇ、容量１ｍＬ／ｋｇ）用量により投与する。投与後０～最大２４時間の複数の時点で、各動物から血液を採取する。実施例２および３の血漿濃度を、上記のようにＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。
【0063】
実施例２の場合、ＩＶ投与は、平均半減期が１１．３時間であり、平均クリアランスが２．１５ｍＬ／分／ｋｇであることを明らかにした。実施例３の場合、平均半減期は４．５２時間であり、生物学的利用能は、ＰＯ投与によって決定される場合、約９６％であるが、ＩＶ投与は、平均半減期が５．０７時間であり、平均クリアランスが４．７７ｍＬ／分／ｋｇであることを明らかにした。このデータは、実施例２および３がラットにおいて低い総クリアランスを有することを示し、最小限の初回通過抽出、高い経口バイオアベイラビリティ、および十分な平均半減期によって証明される長期の排泄を示唆している。