(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-12-18
(45)【発行日】2023-12-26
(54)【発明の名称】安定な液体医薬製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20231219BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20231219BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20231219BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20231219BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20231219BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20231219BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20231219BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20231219BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20231219BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20231219BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20231219BHJP
A61M 5/28 20060101ALI20231219BHJP
A61M 5/20 20060101ALI20231219BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N ZNA
A61P37/02
A61K9/08
A61K47/12
A61K47/22
A61K47/26
A61K47/10
A61K47/36
A61K47/02
C12N15/13
C07K16/24
A61M5/28
A61M5/20
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2022086449
(22)【出願日】2022-05-26
(62)【分割の表示】P 2018565705の分割
【原出願日】2017-06-28
(65)【公開番号】P2022122941
(43)【公開日】2022-08-23
【審査請求日】2022-06-27
(31)【優先権主張番号】10-2016-0083039
(32)【優先日】2016-06-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(73)【特許権者】
【識別番号】511237689
【氏名又は名称】セルトリオン・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100084995
【弁理士】
【氏名又は名称】加藤 和詳
(72)【発明者】
【氏名】リー，ジュンウォン
(72)【発明者】
【氏名】ハン，ウォンヨン
(72)【発明者】
【氏名】キム，スジュン
(72)【発明者】
【氏名】オ，ジュンソク
(72)【発明者】
【氏名】キム，ソヨン
(72)【発明者】
【氏名】ホン，スヒョン
(72)【発明者】
【氏名】シン，ヨンギョン
【審査官】松浦 安紀子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１５／１７７０５７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１５－５１９３８２（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３９／３９５
Ａ６１Ｐ ３７／０２
Ａ６１Ｋ ９／０８
Ａ６１Ｋ ４７／１２
Ａ６１Ｋ ４７／２２
Ａ６１Ｋ ４７／２６
Ａ６１Ｋ ４７／１０
Ａ６１Ｋ ４７／３６
Ａ６１Ｋ ４７／０２
Ｃ１２Ｎ １５／１３
Ｃ０７Ｋ １６／２４
Ａ６１Ｍ ５／２８
Ａ６１Ｍ ５／２０
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ）９０～１４５ｍｇ／ｍｌのインフリキシマブ；（Ｂ）０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）の、ポリソルベートである界面活性剤；
（Ｃ）１～１０％（ｗ／ｖ）の、ソルビトール、マンニトール、スクロース、およびトレハロースからなる群より選択される１又は複数の糖；および
（Ｄ）１～５０ｍＭの、アセテートまたはヒスチジンを含む緩衝剤
を含む、安定な液体医薬製剤。
【請求項2】
（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０またはこれらのうち２以上の混合物を含む、請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項3】
（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート８０を含む、請求項１または請求項２に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項4】
ｐＨが４．０～５．５である、請求項１～３のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項5】
アスパラギン酸、リシン、アルギニンまたはこれらの混合物を含まない、請求項１～４のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項6】
ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４またはこれらの混合物を含まない、請求項１～５のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項7】
キレート剤を含まない、請求項１～６のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項8】
温度４０℃±２℃で１ヶ月後の粘度が０．５ｃｐ～１０．０ｃｐであるか、または温度５℃±３℃で６ヶ月後の粘度が０．５ｃｐ～５ｃｐである、請求項１～７のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項9】
皮下投与用である、請求項１～８のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項10】
使用前に再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップまたはこれらの両方を経ない、請求項１～９のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項11】
請求項１～８のうちいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤が充填されたプレフィルド・シリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）。
【請求項12】
請求項１１に記載のプレフィルド・シリンジがその内部に含まれた自動注射器（ａｕｔｏ－ｉｎｊｅｃｔｏｒ）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、安定な液体医薬製剤に関する。
【背景技術】
【0002】
腫瘍怪死因子－α（ＴＮＦ－α）は、全身性炎症に関与する細胞シグナル化タンパク質（サイトカイン）であり、急性期反応を形成するサイトカインのうちの一つである。ＴＮＦ－αは、敗血症、感染、自己免疫疾患および移植拒否を含む様々な疾患および障害に連関している。ＴＮＦ－αは免疫反応を促進し、これはリウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、成人クローン病、小児クローン病、乾癬、乾癬性関節炎などのような自己免疫異常と関連した多くの臨床的問題を引き起こす。このような異常は、ＴＮＦ－α阻害剤を用いることにより治療できる。
【0003】
インフリキシマブは、前記ＴＮＦ－α阻害剤の役割を果たすことのできるキメラモノクローナル抗体の一種である。該抗体を含む従来の製剤は凍結乾燥粉末に製造され、それを再溶解および希釈して各疾患の投与用法および容量に合わせて静脈に注射する方式であった。
【0004】
例えば、レミケードラベルは、インフリキシマブ、スクロース、ポリソルベート８０およびリン酸ナトリウムを含む凍結乾燥製剤を開示しており、静脈注射のために、凍結乾燥製剤に注射用水を追加する再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、および再溶解製剤を塩化ナトリウムを含む注射用食塩水で希釈するステップを開示している。
【0005】
しかし、前記のような従来の製剤の投与方式（凍結乾燥－＞再溶解－＞希釈－＞静脈投与）には多くの費用がかかり、煩わしく、頻繁な投与により患者の不便、拒否感および副作用が発生し、投与者が医療教育を受けた人に制限されるという問題点がある。
【0006】
アダリムマブも前記ＴＮＦ－α阻害剤の役割を果たすことのできるヒト型モノクローナル抗体の一種である。アダリムマブを含む液状剤形は、例えば、ヒュミララベルに開示されている。また、韓国公開特許公報第１０－２０１４－０１３４６８９号は、アダリムマブ、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０を含む液状剤形（実施例１）と、それを改良したものとして、アダリムマブ、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸、マンニトール、アルギニン、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０を含む液状剤形（実施例２）を開示している。
【0007】
しかし、前記液体医薬剤形のように、等張化剤としてＮａＣｌまたはＫＣｌを含む場合には沈殿およびゼラチン化のような問題が発生しうるし、抗体濃度が５０ｍｇ／ｍｌ程度に低い場合には投与回数および投与周期が制限される。
【0008】
したがって、前記従来の液体医薬製剤の問題点を解決することができ、ＴＮＦ－α阻害剤として抗体、特にインフリキシマブを含む安定な液体医薬製剤に対する必要性が在る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明の目的は、抗体を高含量で含み、且つ、低粘度を有する安定な液体医薬製剤を提供することにある。
【0010】
本発明の他の目的は、加速条件および苛酷条件における優れた安定性を基に長期間保管安定性に優れた液体医薬製剤を提供することにある。
【0011】
本発明のまた他の目的は、皮下投与が可能な安定な液体医薬製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明の一実施形態に係る安定な液体医薬製剤は、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む。
【0013】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体は、ＴＮＦ－αに結合する抗体を含むことができる。
【0014】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブまたはこれらの混合物を含むことができる。
【0015】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体は、キメラヒト－マウスＩｇＧモノクローナル抗体を含むことができる。
【0016】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0017】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0018】
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含むことができる。
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍｌであってもよい。
本発明の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍｌであってもよい。
【0019】
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマーまたはこれらの混合物を含むことができる。
【0020】
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０またはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。
【0021】
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート８０を含むことができる。
【0022】
本発明の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤の濃度は０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0023】
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖は単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類またはこれらのうち２以上の混合物を含み、（Ｃ）糖の誘導体は糖アルコール、糖酸またはこれらの混合物を含むことができる。
【0024】
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロースまたはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。
【0025】
本発明の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体の濃度は１～１０％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0026】
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、アセテートまたはヒスチジンを含むことができる。
【0027】
本発明の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤の含量は１～５０ｍＭであってもよい。
【0028】
本発明の一実施形態において、ｐＨは４．０～５．５であってもよい。
【0029】
本発明の一実施形態において、アスパラギン酸、リシン、アルギニンまたはこれらの混合物を含まなくてもよい。
【0030】
本発明の一実施形態において、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４またはこれらの混合物を含まなくてもよい。
【0031】
本発明の一実施形態において、キレート剤を含まなくてもよい。
【0032】
本発明の一実施形態において、４０℃±２℃で１ヶ月間保管した後に測定した粘度が０．５ｃｐ～１０ｃｐであるか、または５℃±３℃で６ヶ月間保管した後に測定した粘度が０．５ｃｐ～５ｃｐであってもよい。
【0033】
本発明の一実施形態に係る安定な液体医薬製剤は、（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）アセテートまたはヒスチジンを含む緩衝剤を含むことができる。
【0034】
本発明の一実施形態に係る安定な液体医薬製剤は、（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片９０～１４５ｍｇ／ｍｌ；（Ｂ）界面活性剤０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）；（Ｃ）糖またはその誘導体１～１０％（ｗ／ｖ）；および（Ｄ）アセテートまたはヒスチジンを含む緩衝剤１～５０ｍＭを含むことができる。
【0035】
本発明の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は皮下投与用であってもよい。
【0036】
本発明の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、使用前に再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップまたはこれらの全てを経なくてもよい。
【0037】
本発明の一実施形態に係るプレフィルド・シリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）は、前記安定な液体医薬製剤が充填される。
【0038】
本発明の一実施形態に係る自動注射器（ａｕｔｏ－ｉｎｊｅｃｔｏｒ）は、前記プレフィルド・シリンジがその内部に含まれる。
【発明の効果】
【0039】
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、抗体を高含量で含み、且つ、低粘度を有し、加速条件および苛酷条件における優れた安定性を基に長期間保管安定性に優れており、皮下投与が可能である。
【発明を実施するための形態】
【0040】
［安定な液体医薬製剤］
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む。
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む。
【0041】
本出願の明細書において、用語「含まない」とは、該当成分を全く含まないことを意味する。また、該用語は該当成分を実質的に含まないこと、すなわち、抗体の活性、液体医薬製剤の安定性および粘度に影響を与えない範囲で含むこと、例えば、液体医薬製剤の全体重量を基準に０～１％（ｗ／ｖ）、０～１ｐｐｍ（ｗ／ｖ）または０～１ｐｐｂ（ｗ／ｖ）で含むことを意味する。
【0042】
（Ａ）抗体またはその抗原結合断片
抗体は、２個の重鎖（Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎ）および２個の軽鎖（Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ）がジスルフィド結合により互いに連結されている４個のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子を示す。その他の変化した構造を有する自然発生抗体、例えば、ラクダ（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体もこの定義に含まれる。各々の重鎖は、重鎖可変領域および重鎖不変領域からなる。重鎖不変領域は、３個のドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域および軽鎖不変領域からなる。軽鎖不変領域は、１個のドメイン（ＣＬ）からなる。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、骨格領域（ＦＲ）と呼ばれるさらに保存された領域と共に配置された、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域にさらに細分できる。各々の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は３個のＣＤＲおよび４個のＦＲからなり、これらはアミノ末端からカルボキシ末端まで下記の順に配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
抗体は、２個の重鎖（Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎ）および２個の軽鎖（Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ）がジスルフィド結合により互いに連結されている４個のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子を示す。その他の変化した構造を有する自然発生抗体、例えば、ラクダ（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体もこの定義に含まれる。各々の重鎖は、重鎖可変領域および重鎖不変領域からなる。重鎖不変領域は、３個のドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域および軽鎖不変領域からなる。軽鎖不変領域は、１個のドメイン（ＣＬ）からなる。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、骨格領域（ＦＲ）と呼ばれるさらに保存された領域と共に配置された、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域にさらに細分できる。各々の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は３個のＣＤＲおよび４個のＦＲからなり、これらはアミノ末端からカルボキシ末端まで下記の順に配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【0043】
本発明の一実施形態において、抗体として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、一本鎖抗体、ハイブリッド抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはこれらの断片を含むことができる。キメラ抗体は、ある一種からの重鎖および軽鎖可変領域配列と他種からの不変領域配列とを含む抗体を意味する。本発明の一実施形態において、抗体として、キメラヒト－マウスＩｇＧモノクローナル抗体を含むことができる。キメラヒト－マウスＩｇＧモノクローナル抗体は、マウス重鎖および軽鎖可変領域とそれに結合されたヒト重鎖および軽鎖不変領域とからなる。キメラヒト－マウスＩｇＧモノクローナル抗体は、当該技術分野で公知の方法により製造することができる。例えば、インフリキシマブの場合、米国特許第６，２８４，４７１号に記載された方法により製造することができる。
【0044】
本発明の一実施形態において、抗体として、ＴＮＦ－αまたはＴＮＦ－αのエピトープに結合する抗体を含むことができる。ＴＮＦ－αまたはＴＮＦ－αのエピトープに結合する抗体として、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブまたはこれらの混合物を含むことができる。本発明の一実施形態において、抗体として、インフリキシマブを含むことができる。
【0045】
本発明の一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0046】
本発明の一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0047】
本発明の一実施形態において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含むことができる。
【0048】
抗体またはその抗原結合断片の濃度は、本発明に係る安定な液体医薬製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調節することができる。本発明の一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明の他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片の濃度は５０～２００ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のまた他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片の濃度は８０～１５０ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のまた他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片の濃度は９０～１４５ｍｇ／ｍｌであってもよい。本発明のまた他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片の濃度は１１０～１３０ｍｇ／ｍｌであってもよい。抗体またはその抗原結合断片の濃度がこの範囲内である場合、抗体またはその抗原結合断片の高含量に応じて投与容量および投与周期の自由度を高めることができ、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。
【0049】
（Ｂ）界面活性剤
界面活性剤の例としてはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などを含むが、これらに限定されるものではない。
界面活性剤の例としてはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などを含むが、これらに限定されるものではない。
【0050】
本発明の一実施形態において、前記界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート）を含むことができる。ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０またはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。本発明の一実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０またはこれらの混合物を含むことができる。本発明の他の実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート８０を含むことができる。
【0051】
本発明の一実施形態において、前記界面活性剤の濃度は、本発明に係る安定な液体医薬製剤の安定性および粘度に悪影響を及ぼさない範囲内で自由に調節することができる。例えば、界面活性剤の濃度は、０．００１～５％（ｗ／ｖ）、０．０１～１％（ｗ／ｖ）または０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよい。界面活性剤の濃度がこの範囲内である場合、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。
【0052】
（Ｃ）糖または糖の誘導体
糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類またはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。単糖類の例としてはグルコース、フルクトース、ガラクトースなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。二糖類の例としてはスクロース、ラクトース、マルトース、トレハロースなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。オリゴ糖の例としてはフラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖などが挙げられ、これらに制限されるものではない。多糖類の例としてはデンプン、グリコーゲン、セルロース、キチン、ペクチンなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。
糖は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類またはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。単糖類の例としてはグルコース、フルクトース、ガラクトースなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。二糖類の例としてはスクロース、ラクトース、マルトース、トレハロースなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。オリゴ糖の例としてはフラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナンオリゴ糖などが挙げられ、これらに制限されるものではない。多糖類の例としてはデンプン、グリコーゲン、セルロース、キチン、ペクチンなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。
【0053】
糖の誘導体は、糖アルコール、糖酸またはこれらの混合物を含むことができる。糖アルコールの例としてはグリセロール、エリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、ポリグリシトールなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。糖酸の例としてはアルドン酸（グリセリン酸など）、ウロソン酸（ノイラミン酸など）、ウロン酸（グルクロン酸など）、アルダル酸（酒石酸など）などが挙げられ、これらに制限されるものではない。
【0054】
本発明の一実施形態において、糖またはその誘導体として、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロースまたはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。
【0055】
本発明の一実施形態において、糖またはその誘導体の濃度は、本発明に係る液体医薬製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調節することができる。例えば、糖またはその誘導体の濃度は、０．１～３０％（ｗ／ｖ）、１～２０％（ｗ／ｖ）または１～１０％（ｗ／ｖ）であってもよい。糖またはその誘導体の濃度がこの範囲内である場合、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。
【0056】
（Ｄ）緩衝剤
緩衝剤は、酸やアルカリによるｐＨの変化を最小化する中和性物質であり、緩衝剤の例としては、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アセテート（ａｃｅｔａｔｅ）、スクシネート（ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、グルコネート（ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、グルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）、シトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）、ヒスチジン（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）などが挙げられる。本発明の一実施形態において、緩衝剤は、アセテートまたはヒスチジンを含むことができる。緩衝剤としてアセテートおよびヒスチジンを全て含む場合には安定性が低下しうる。
緩衝剤は、酸やアルカリによるｐＨの変化を最小化する中和性物質であり、緩衝剤の例としては、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アセテート（ａｃｅｔａｔｅ）、スクシネート（ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、グルコネート（ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、グルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）、シトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）、ヒスチジン（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）などが挙げられる。本発明の一実施形態において、緩衝剤は、アセテートまたはヒスチジンを含むことができる。緩衝剤としてアセテートおよびヒスチジンを全て含む場合には安定性が低下しうる。
【0057】
本発明の一実施形態において、緩衝剤は、アセテートを含むことができる。アセテートの例としては酢酸ナトリウム、酢酸亜鉛、酢酸アルミニウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウムなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。ｐＨ調節のために酸、例えば、酢酸をさらに含むことができる。緩衝剤としてアセテートを含むことが、ｐＨの調節および安定性の側面で最も好ましい。
【0058】
本発明の一実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジンを含むことができる。緩衝剤としてヒスチジンを用いる場合、ヒスチジン塩、例えば、ヒスチジンクロリド、ヒスチジンアセテート、ヒスチジンホスフェート、ヒスチジンスルフェートなどが含まれることができる。ｐＨ調節のために酸、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、硫酸などを含むことができる。
【0059】
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、シトレート（クエン酸塩）、ホスフェート（リン酸塩）またはこれらの混合物を含まなくてもよい。
【0060】
本発明の一実施形態において、緩衝剤（または緩衝剤の陰イオン）の含量は、本発明に係る液体医薬製剤の安定性および粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で自由に調節することができる。例えば、緩衝剤またはその陰イオンの含量は、１～５０ｍＭ、５～３０ｍＭまたは１０～２５ｍＭであってもよい。緩衝剤またはその陰イオンの含量がこの範囲内である場合、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。
【0061】
（Ｅ）ｐＨ
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬組成物のｐＨは、４．０～５．５または４．７～５．３であってもよい。ｐＨがこの範囲内である場合、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。ｐＨは、緩衝剤を用いて調節することができる。言い換えれば、緩衝剤を所定の含量で含む場合、別途のｐＨ調節剤がなくても前記範囲のｐＨを示すことができる。シトレート、ホスフェートまたはこれらの混合物を緩衝剤として用いる場合には、前記範囲のｐＨを示すのが難しいことがある。別途のｐＨ調節剤として酸（例えば、塩酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム）をさらに含む場合には、抗体の安定性が低下しうる。
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬組成物のｐＨは、４．０～５．５または４．７～５．３であってもよい。ｐＨがこの範囲内である場合、優れた長期間安定性および低粘度を示すことができる。ｐＨは、緩衝剤を用いて調節することができる。言い換えれば、緩衝剤を所定の含量で含む場合、別途のｐＨ調節剤がなくても前記範囲のｐＨを示すことができる。シトレート、ホスフェートまたはこれらの混合物を緩衝剤として用いる場合には、前記範囲のｐＨを示すのが難しいことがある。別途のｐＨ調節剤として酸（例えば、塩酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム）をさらに含む場合には、抗体の安定性が低下しうる。
【0062】
（Ｆ）その他の成分
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、アスパラギン酸、リシン、アルギニンまたはこれらの混合物を含まなくてもよい。これらのアミノ酸を含む場合、その製剤が固体状態になりうる。本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、前記３種のアミノ酸を除いた残りのアミノ酸のうち一つ以上を含むことができる。この場合、前記アミノ酸を５％（ｗ／ｖ）以内の範囲、例えば、０．００１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．００１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．１～５％（ｗ／ｖ）の範囲または０．１～１％（ｗ／ｖ）の範囲で含むことができる。
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、アスパラギン酸、リシン、アルギニンまたはこれらの混合物を含まなくてもよい。これらのアミノ酸を含む場合、その製剤が固体状態になりうる。本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、前記３種のアミノ酸を除いた残りのアミノ酸のうち一つ以上を含むことができる。この場合、前記アミノ酸を５％（ｗ／ｖ）以内の範囲、例えば、０．００１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．００１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．１～５％（ｗ／ｖ）の範囲または０．１～１％（ｗ／ｖ）の範囲で含むことができる。
【0063】
本発明の他の実施形態において、安定な液体医薬製剤は、タウリンを含むことができる。この場合、前記タウリンを５％（ｗ／ｖ）以内の範囲、例えば、０．００１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．００１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～５％（ｗ／ｖ）の範囲、０．０１～１％（ｗ／ｖ）の範囲、０．１～５％（ｗ／ｖ）の範囲または０．１～１％（ｗ／ｖ）の範囲で含むことができる。
【0064】
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、金属塩としてＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４などを含まなくてもよい。これらの金属塩を含む場合には、沈殿現象が発生し、その製剤がゼラチンの形状を有し、安定性が低下しうる。
【0065】
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含まなくてもよい。キレート剤を含む場合には、酸化率が増加しうる。
【0066】
本発明の一実施形態において、安定な液体医薬製剤は、保存剤を含まなくてもよい。保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチルアルコール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、ｍ－クレゾールなどが挙げられる。保存剤を含む場合には、安定性の改善に役に立たない。
【0067】
本発明の一実施形態において、本発明の安定な液体医薬製剤における抗体の活性、製剤の安定性および低粘度に悪影響を実質的に及ぼさない範囲内で当該技術分野で公知の添加剤をさらに含むことができる。例えば、水性担体、酸化防止剤またはこれらのうち２以上の混合物をさらに含むことができる。水性担体は、製薬上に許容され（ヒトに投与時に安全で無毒性であり）、液体医薬製剤の製造に有用な担体である。水性担体の例としては滅菌注射用水（ＳＷＦＩ）、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、滅菌塩水溶液、リンガー液、デキストロースなどが挙げられ、これらに制限されるものではない。酸化防止剤としてはアスコルビン酸などが挙げられ、これに制限されるものではない。
【0068】
（Ｇ）「安定な」液体医薬製剤
本発明の「安定な」液体医薬製剤における用語「安定な」とは、本発明に係る抗体が製造工程の間および／または保管／貯蔵時にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を実質的に保有することを意味する。抗体の安定性を測定する様々な分析学的技術は、当該技術分野において容易に利用することができる。
本発明の「安定な」液体医薬製剤における用語「安定な」とは、本発明に係る抗体が製造工程の間および／または保管／貯蔵時にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を実質的に保有することを意味する。抗体の安定性を測定する様々な分析学的技術は、当該技術分野において容易に利用することができる。
【0069】
物理的安定性は当該技術分野で公知の方法により評価することができ、このような方法は光（吸光または光学密度）のサンプル見掛けの減衰測定を含む。このような光の減衰測定は、製剤の濁度と関連する。また、物理的安定性に対して、高分子量成分の含量、低分子量成分の含量、無傷のタンパク質量、不溶性異物粒子数などを測定することができる。
【0070】
化学的安定性は、例えば、化学的に変化した形態の抗体を検出し定量することにより評価することができる。化学的安定性は、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価できる荷電変化（例えば、脱アミド化または酸化の結果として発生）を含む。化学的安定性に対して、電荷変異体（酸性または塩基性ピーク）などを測定することができる。
【0071】
生物学的活性は当該技術分野で公知の方法により評価することができ、例えば、ＥＬＩＳＡにより抗原結合アフィニティを測定することができる。
【0072】
本発明の一実施形態において、液体医薬製剤は、長期間安定することができる。
【0073】
本発明の一実施形態において、用語「安定な」液体医薬製剤は、次のうち一つ以上を満たす液体医薬製剤を意味する。
【0074】
濁度
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に分光光度計により測定した吸光度Ａ６００が０～０．０３００または０～０．０７００である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に分光光度計により測定した吸光度Ａ６００が０～０．０３００または０～０．０７００である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に分光光度計により測定した吸光度Ａ６００が０～０．０３００または０～０．０７００である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に分光光度計により測定した吸光度Ａ６００が０～０．０３００または０～０．０７００である液体医薬製剤；
【0075】
主成分の含量（メインピーク）
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した主成分が９８％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した主成分が９８～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した主成分が９８％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した主成分が９８～１００％である液体医薬製剤；
【0076】
高分子量成分（メインピーク（無傷のＩｇＧ）を基準に滞留時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）が前側であるピーク）
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分が０～１．００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分が０～１．００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分が０～１．００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分が０～１．００％である液体医薬製剤；
【0077】
低分子量成分（メインピーク（無傷のＩｇＧ）を基準に滞留時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）が後側であるピーク）
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した低分子量成分が０～０．４０％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した低分子量成分が０～０．４０％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した低分子量成分が０～０．４０％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＳＥ－ＨＰＬＣにより測定した低分子量成分が０～０．４０％である液体医薬製剤；
【0078】
無傷の免疫グロブリンＧの含量
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に非還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）が９４．０％～１００％である液体医薬製剤；
【0079】
無傷の重鎖および軽鎖の含量
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９９．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９９．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９８．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９８．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９９．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９９．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９８．０％～１００％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後に還元ＣＥ－ＳＤＳにより測定した無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）が９８．０％～１００％である液体医薬製剤；
【0080】
不溶性異物粒子数
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＨＩＡＣにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）数が０～１，０００個である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＨＩＡＣにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）数が０～１，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～３０，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～３０，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～２００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～２０
０個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で６週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～５００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で６週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～５００個である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＨＩＡＣにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）数が０～１，０００個である液体医薬製剤；
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＨＩＡＣにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）数が０～１，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～３０，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～３０，０００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～２００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～２０
０個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で６週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～５００個である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で６週間保管した後にＭＦＩにより測定した不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が０～５００個である液体医薬製剤；
【0081】
酸化率
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＬＣ－ＭＳにより測定した重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が０％～２．５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＬＣ－ＭＳにより測定した重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が０％～２．５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＬＣ－ＭＳにより測定した重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が０％～２．５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＬＣ－ＭＳにより測定した重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が０％～２．５％である液体医薬製剤；
【0082】
電荷変異体
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した酸性ピークが２０％～３５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した酸性ピークが２０％～３５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した塩基性ピークが３３％～４０％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した塩基性ピークが３３％～４０％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した酸性ピークが２０％～３５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した酸性ピークが２０％～３５％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した塩基性ピークが３３％～４０％である液体医薬製剤；
－温度４０℃±２℃、相対湿度７５±５％および密閉条件で４週間保管した後にＩＥＣ－ＨＰＬＣにより測定した塩基性ピークが３３％～４０％である液体医薬製剤；
【0083】
ＴＮＦ－α結合アフィニティ
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＥＬＩＳＡにより測定したＴＮＦ－α結合アフィニティが８０％～１２０％である液体医薬製剤；および
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＥＬＩＳＡにより測定したＴＮＦ－α結合アフィニティが８０％～１２０％である液体医薬製剤。
－温度５℃±３℃で１２ヶ月間保管した後にＥＬＩＳＡにより測定したＴＮＦ－α結合アフィニティが８０％～１２０％である液体医薬製剤；および
－温度５℃±３℃および密閉条件で１２ヶ月間保管した後にＥＬＩＳＡにより測定したＴＮＦ－α結合アフィニティが８０％～１２０％である液体医薬製剤。
【0084】
本発明の一実施形態において、温度４０℃±２℃で１ヶ月後に測定した粘度が０．５ｃｐ～１０．０ｃｐであってもよい。本発明の他の実施形態において、温度５℃±３℃で６ヶ月後に測定した粘度が０．５ｃｐ～５．０ｃｐであってもよい。
【0085】
［安定な液体医薬製剤の製造方法］
本発明の安定な液体医薬製剤は公知の方法により製造することができ、特定の方法に制限されるものではない。例えば、界面活性剤および糖またはその誘導体を含む溶液に緩衝剤を添加しつつｐＨを調節した後、該混合溶液に抗体を入れて液体医薬製剤を製造することができる。また、精製工程の最終ステップにおいて、一部の賦形剤を含む溶液を製造した後、残りの成分を添加して液体医薬製剤を製造することができる。例えば、精製工程の最終ステップにおいて、抗体、緩衝剤および糖またはその誘導体を含む溶液を製造した後、該溶液に界面活性剤を添加して液体医薬製剤を製造することができる。
本発明の安定な液体医薬製剤は公知の方法により製造することができ、特定の方法に制限されるものではない。例えば、界面活性剤および糖またはその誘導体を含む溶液に緩衝剤を添加しつつｐＨを調節した後、該混合溶液に抗体を入れて液体医薬製剤を製造することができる。また、精製工程の最終ステップにおいて、一部の賦形剤を含む溶液を製造した後、残りの成分を添加して液体医薬製剤を製造することができる。例えば、精製工程の最終ステップにおいて、抗体、緩衝剤および糖またはその誘導体を含む溶液を製造した後、該溶液に界面活性剤を添加して液体医薬製剤を製造することができる。
【0086】
また、前記製剤は、製造時に凍結乾燥工程を含まないか、または凍結乾燥工程を含んでもよい。
【0087】
凍結乾燥工程を含まない場合、例えば、本発明の液体医薬製剤を製造し滅菌などの処理後に直ちに密閉容器に入れることができる。
【0088】
凍結乾燥工程を含む場合、例えば、本発明の液体医薬製剤を製造し凍結乾燥した後、または本発明の液体医薬製剤を製造し凍結乾燥し保管／貯蔵した後、凍結乾燥および／または保管／貯蔵により除去または変形された成分を補充するかまたは交替して本発明に係る液体医薬製剤を製造することができる。また、本発明の液体医薬製剤のうち凍結乾燥および／または保管／貯蔵により除去または変形される成分が除外された成分のみを凍結乾燥した後、またはその成分のみを凍結乾燥し保管／貯蔵した後、前記除外された成分を添加して本発明に係る液体医薬製剤を製造することができる。
【0089】
［安定な液体医薬製剤の使用方法］
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を治療するのに用いられることができる。ＴＮＦαの活性が有害な疾病の例としては敗血症、自己免疫疾患、感染性疾患、移植、悪性癌、肺障害、腸障害、心臓障害などが挙げられ、これらに制限されるものではない。
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を治療するのに用いられることができる。ＴＮＦαの活性が有害な疾病の例としては敗血症、自己免疫疾患、感染性疾患、移植、悪性癌、肺障害、腸障害、心臓障害などが挙げられ、これらに制限されるものではない。
【0090】
本発明の一実施形態において、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病は、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、成人クローン病、小児クローン病、乾癬および乾癬性関節炎から選ばれる。
【0091】
本発明に係る安定な液体医薬製剤は、１回、数回または自己皮下投与用として用いられることができる。
【0092】
前記液体医薬製剤内の抗体をはじめとする他成分の濃度は上述した通りであり、液体医薬製剤の全体体積は０．２～２．０ｍｌであってもよい。
【0093】
前記液体医薬製剤の投与量および投与時期は疾病の種類、疾病の重症度および経過状態、患者の健康および治療に対する反応、および治療する医師の判断に応じて異なり、特定の投与量および投与時期に制限されるものではない。例えば、前記液体医薬製剤を含む一つまたは数個の製品を用いて抗体濃度を基準に１～１０ｍｇ／ｋｇを投与した後、同一または互いに異なる投与量を毎週、隔週、３週ごとに、毎月、２ヶ月または３ヶ月ごとに投与することができる。
【0094】
本発明の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、使用前に再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップまたはこれらの全てを経なくてもよい。
【0095】
［治療方法および安定化方法］
また、本発明は、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を有する患者に、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む安定な液体医薬製剤を投与することを含む、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を治療する方法を提供する。
また、本発明は、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を有する患者に、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む安定な液体医薬製剤を投与することを含む、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病を治療する方法を提供する。
【0096】
また、本発明は、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）緩衝剤を含む安定な液体医薬製剤を製造することを含む、抗体を液体医薬製剤内で安定化する方法を提供する。
【0097】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体は、ＴＮＦ－αに結合する抗体を含むことができる。
【0098】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブまたはこれらの混合物を含むことができる。
【0099】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体は、キメラヒト－マウスＩｇＧモノクローナル抗体を含むことができる。
【0100】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0101】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むことができる。
【0102】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含むことができる。
【0103】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ａ）抗体またはその抗原結合断片の濃度は１０～２００ｍｇ／ｍｌであってもよい。
【0104】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート、ポロキサマーまたはこれらの混合物を含むことができる。
【0105】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０またはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。
【0106】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤は、ポリソルベート８０を含むことができる。
【0107】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｂ）界面活性剤の濃度は０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0108】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖は単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類またはこれらのうち２以上の混合物を含み、（Ｃ）糖の誘導体は糖アルコール、糖酸またはこれらの混合物を含むことができる。
【0109】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体は、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、スクロースまたはこれらのうち２以上の混合物を含むことができる。
【0110】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｃ）糖またはその誘導体の濃度は１～１０％（ｗ／ｖ）であってもよい。
【0111】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤は、アセテートまたはヒスチジンを含むことができる。
【0112】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、（Ｄ）緩衝剤の含量は１～５０ｍＭであってもよい。
【0113】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤のｐＨは４．０～５．５であってもよい。
【0114】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、アスパラギン酸、リシン、アルギニンまたはこれらの混合物を含まなくてもよい。
【0115】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＮａＦ、ＫＢｒ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＳＣＮ、Ｋ２ＳＯ４またはこれらの混合物を含まなくてもよい。
【0116】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、キレート剤を含まなくてもよい。
【0117】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、保存剤を含まなくてもよい。
【0118】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、水性担体、酸化防止剤またはこれらのうち２以上の混合物をさらに含むことができる。
【0119】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、温度４０℃±２℃で１ヶ月後に測定した粘度が０．５ｃｐ～１０．０ｃｐであるか、または５℃±３℃で６ヶ月後に測定した粘度が０．５ｃｐ～５．０ｃｐであってもよい。
【0120】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片；（Ｂ）界面活性剤；（Ｃ）糖またはその誘導体；および（Ｄ）アセテートまたはヒスチジンを含む緩衝剤を含むことができる。
【0121】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域；および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインおよび配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片９０～１４５ｍｇ／ｍｌ；（Ｂ）界面活性剤０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）；（Ｃ）糖またはその誘導体１～１０％（ｗ／ｖ）；および（Ｄ）アセテートまたはヒスチジンを含む緩衝剤１～５０ｍＭを含むことができる。
【0122】
前記治療方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤を皮下に投与することができる。
【0123】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、使用前に再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）ステップ、希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）ステップまたはこれらの全てを経なくてもよい。
【0124】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記安定な液体医薬製剤は、使用前にプレフィルド・シリンジ（ｐｒｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）内に充填される。
【0125】
前記治療方法または安定化方法の一実施形態において、前記プレフィルド・シリンジは、使用前に自動注射器（ａｕｔｏ－ｉｎｊｅｃｔｏｒ）内に含まれる。
【0126】
［製品］
また、本発明は、前記安定な液体医薬製剤；および前記安定な液体医薬製剤を密閉した状態で収容する容器を含む製品を提供する。
また、本発明は、前記安定な液体医薬製剤；および前記安定な液体医薬製剤を密閉した状態で収容する容器を含む製品を提供する。
【0127】
前記安定な液体医薬製剤は上述した通りである。
【0128】
本発明の一実施形態において、前記容器はガラス、ポリマー（プラスチック）、金属などの物質からなることができ、これらに制限されるものではない。本発明の一実施形態において、前記容器は、瓶、バイアル、カートリッジ、注射器（プレフィルド・シリンジ、自動注射器）またはチューブであり、これらに制限されるものではない。本発明の一実施形態において、前記容器は、ガラスまたはポリマーバイアル、またはガラスまたはポリマープレフィルド・シリンジであってもよい。
【0129】
前記バイアル、カートリッジ、プレフィルド・シリンジ、自動注射器などの具体的な製品形態と前記安定な液体医薬製剤を前記バイアル、カートリッジ、プレフィルド・シリンジ、自動注射器などに充填する方法は、本発明が属する技術分野で通常の知識を有した者であれば容易に入手または実施することができる。例えば、米国特許第４，８６１，３３５号、第６，３３１，１７４号などは、プレフィルド・シリンジの具体的な製品形態および充填方法を開示している。例えば、米国特許第５，０８５，６４２号、第５，６８１，２９１号などは、自動注射器の具体的な製品形態および組み立て方法を開示している。前記バイアル、カートリッジ、プレフィルド・シリンジ、自動注射器などとして商用化された製品をそのまま用いるか、または前記安定な液体医薬製剤の物性、投与部位、投与量などを考慮して別途に注文製作した製品を用いることができる。
【0130】
本発明の一実施形態において、前記容器の内部にシリコーンオイルがコーティングされていなくてもよい。シリコーンオイルがコーティングされている場合には安定性が低下しうる。前記容器は、１回投与用または数回投与用の容器であってもよい。
【0131】
本発明の一実施形態において、前記製品は、前記安定な液体医薬製剤の使用方法、保管方法またはこれらの全てを提供する指示事項をさらに含むことができる。前記使用方法は、ＴＮＦ－αの活性が有害な疾病の治療法を含み、投与経路、投与量および投与時期を含むことができる。
【0132】
本発明の一実施形態において、前記製品は、商業的および使用者の観点で必要なその他の道具、例えば、針、注射器などを含むことができる。
【0133】
以下では本発明を実施例により詳細に説明する。下記の実施例は本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲が下記の実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【0134】
以下の実験例で用いられた抗体と関連し、市販中のＲｅｍｓｉｍａ Ｉｎｊ．（製造会社：セルトリオン）から精製されたインフリキシマブを用いた。
【0135】
以下の実験例で用いられた液体医薬製剤の物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性の測定方法として次のような方法を利用した。
【0136】
－濁度（Ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ）
ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計を用いて６００ｎｍにおける吸光度を測定した。
ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計を用いて６００ｎｍにおける吸光度を測定した。
【0137】
－主成分の含量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて主成分の含量（ｍａｉｎ ｐｅａｋ；％）を測定した。
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて主成分の含量（ｍａｉｎ ｐｅａｋ；％）を測定した。
【0138】
－高分子量成分の含量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて高分子量成分の含量（ｐｒｅ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて高分子量成分の含量（ｐｒｅ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
【0139】
－低分子量成分の含量
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて低分子量成分の含量（ｐｏｓｔ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣ）を用いて低分子量成分の含量（ｐｏｓｔ－ｐｅａｋ；％）を測定した。
【0140】
－無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）
非還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（Ｎｏｎ－Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ；ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ）を用いて無傷の免疫グロブリンＧの含量（％）を測定した。
非還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（Ｎｏｎ－Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ；ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ）を用いて無傷の免疫グロブリンＧの含量（％）を測定した。
【0141】
－無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）
還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ；Ｒ ＣＥ－ＳＤＳ）を用いて無傷の重鎖および軽鎖の含量（％）を測定した。
還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ－Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ；Ｒ ＣＥ－ＳＤＳ）を用いて無傷の重鎖および軽鎖の含量（％）を測定した。
【0142】
－不溶性異物粒子（Ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）の個数
実験例１～４：マイクロフローイメージング（Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ；ＭＦＩ）を用いて不溶性異物粒子数を測定した。
実験例５：光遮蔽型微粒子計数器（モデル名：ＨＩＡＣ ９７０３）を用いて不溶性異物粒子数を測定した。
実験例１～４：マイクロフローイメージング（Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ；ＭＦＩ）を用いて不溶性異物粒子数を測定した。
実験例５：光遮蔽型微粒子計数器（モデル名：ＨＩＡＣ ９７０３）を用いて不溶性異物粒子数を測定した。
【0143】
－酸化率（Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）
質量分析を通じた液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ）によりペプチドマッピング（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍａｐｐｉｎｇ）を通じて重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率（％）を測定した。
質量分析を通じた液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ）によりペプチドマッピング（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍａｐｐｉｎｇ）を通じて重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率（％）を測定した。
【0144】
－電荷変異体
イオン交換クロマトグラフィー－高性能液体クロマトグラフィー（Ｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＩＥＣ－ＨＰＬＣ）により酸性および塩基性ピーク（％）を測定した。
イオン交換クロマトグラフィー－高性能液体クロマトグラフィー（Ｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＩＥＣ－ＨＰＬＣ）により酸性および塩基性ピーク（％）を測定した。
【0145】
－ＴＮＦ－α結合アフィニティ
酵素結合免疫吸着分析法（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ）によりＴＮＦ－α結合アフィニティ（％）を測定した。
酵素結合免疫吸着分析法（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ）によりＴＮＦ－α結合アフィニティ（％）を測定した。
【0146】
－粘度
フローセル（Ｂ０５センサ型、５０μｍセル深さ）が取り付けられたマイクロキャピラリーレオメータ（見掛けせん断率の範囲：１０３～１０５ｓ－１）装置を用いて、２５℃±０．１℃で５００μｌシリンジに入れて測定した。
フローセル（Ｂ０５センサ型、５０μｍセル深さ）が取り付けられたマイクロキャピラリーレオメータ（見掛けせん断率の範囲：１０３～１０５ｓ－１）装置を用いて、２５℃±０．１℃で５００μｌシリンジに入れて測定した。
【0147】
実験例１：糖アルコールとＮａＣｌの比較；アセテート／ヒスチジン緩衝剤とシトレート／ホスフェート緩衝剤の比較；ｐＨ４～５．５とｐＨ６～７の比較
実験例１で用いられた液体医薬製剤と関連し、各緩衝液を各ｐＨに合わせて製造した後にソルビトールまたはＮａＣｌを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表１の試料を製造した。各成分の具体的な含量は表１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、該当化合物の分子／陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
実験例１で用いられた液体医薬製剤と関連し、各緩衝液を各ｐＨに合わせて製造した後にソルビトールまたはＮａＣｌを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表１の試料を製造した。各成分の具体的な含量は表１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、該当化合物の分子／陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
【0148】
【表1】
【0149】
実施例１～３および比較例１～８により製造された液体医薬製剤を４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で２週間保管した。その結果、ＮａＣｌを含有する全ての製剤（比較例１、２、４、５および７）は、沈殿およびゼラチンのような形状を示した。また、ソルビトールを含有するが、クエン酸ナトリウムを含む比較例３およびリン酸ナトリウムを含む比較例８もゼラチンのような形状を示した。
【0150】
ソルビトールを含有する製剤のうち実施例１、２、３および比較例６のみがゼラチン形状を示さず、これらに対して、５±３℃の温度で０週後、２週後、４週後の安定性、そして４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で２週後および４週後の安定性を測定し、その結果を表２～９に示す。
【0151】
濁度
【表2】
【0152】
表２より、ｐＨが４であり、緩衝剤としてアセテートを含む実施例１が濁度の面で最も優れることが分かり、特に４０℃で４週後にも吸光度が０．０３００以下であることが分かる。また、ｐＨが５．５であり、緩衝剤としてヒスチジンを含む実施例２～３も４０℃で４週後に吸光度が０．０７００以下であることが分かる。
【0153】
その反面、ｐＨが６であり、緩衝剤としてホスフェートを含む比較例６の場合は、４０℃で２週および４週後に濁度が顕著に増加したことが分かる。
【0154】
高分子量成分の含量
【表3】
【0155】
表３より、実施例１が全ての条件で高分子量成分を最も少なめに含むことが分かる。特に、実施例１が４０℃の温度で４週後に高分子量成分を１．０％以下で含むことが分かる。また、実施例２および３も４０℃の温度で４週後に高分子量成分を１．５％以下で含むことが分かる。
【0156】
無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）
【表4】
【0157】
表４より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に無傷の免疫グロブリンＧの含量が９４．０％以上として比較例６よりも高いことが分かる。
【0158】
無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）
【表5】
【0159】
表５より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に無傷の重鎖および軽鎖の含量が９８．０％以上として比較例６よりも高いことが分かる。
【0160】
酸化率（重鎖Ｍｅｔ ２５５）
【表6】
【0161】
表６より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が２．５％以下として比較例６よりも低いことが分かる。
【0162】
電荷変異体（酸性ピーク）
【表7】
【0163】
表７より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に酸性ピークが３５％以下として比較例６よりも低いことが分かり、これは酸性ピーク増加の主な原因である脱アミノ化が少なく起こる安定な剤形であることが分かる。
【0164】
電荷変異体（塩基性ピーク）
【表8】
【0165】
表８より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に塩基性ピークが３３％以上として比較例６よりも高いことが分かる。
【0166】
不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
【表9】
【0167】
表９より、実施例１～３が４０℃の温度で４週後に不溶性異物粒子（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）数が３０，０００個以下として比較例６よりも少ないことが分かる。
【0168】
実験例２：アミノ酸の影響
実験例２で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤とアミノ酸／タウリンを添加して表１０の試料を製造した。各成分の濃度は表１０に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
実験例２で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤とアミノ酸／タウリンを添加して表１０の試料を製造した。各成分の濃度は表１０に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
【0169】
【表10-1】
【表10-2】
【0170】
アスパラギン酸、ヒスチジン、リシンおよびアルギニンを各々添加した比較例９、１０、１１および１２の場合、５０±２℃で２４時間後に固体状態になった。
【0171】
残りのアミノ酸またはタウリンを含有する製剤に対して５±３℃および５０±２℃で２４時間後の安定性を各々測定したが、これらの間にそしてこれらと実施例１との間に大きな差はなかった。
【0172】
実験例３：タンパク質の濃度；界面活性剤の濃度；糖の種類
実験例３で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールまたはマンニトールまたはトレハロースまたはスクロースを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表１１の試料を製造した。各成分の含量は表１１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
実験例３で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールまたはマンニトールまたはトレハロースまたはスクロースを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表１１の試料を製造した。各成分の含量は表１１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
【0173】
【表11】
【0174】
前記製剤に対して、５±３℃の温度で０週後、２週後、４週後の安定性、そして４０±２℃の温度および７５±５％の相対湿度で２週後および４週後の安定性を測定し、その結果を表１２～１７に示す。
【0175】
タンパク質の濃度
高分子量成分の含量
高分子量成分の含量
【表12】
【0176】
表１２より、抗体濃度の上昇に応じて、高分子量成分が多くなるが、抗体濃度９０～１４５ｍｇ／ｍｌの範囲内で５℃および４０℃で４週後に高分子量成分が概して低いことが分かる。
【0177】
界面活性剤の濃度
不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
【表13】
【0178】
表１３より、界面活性剤０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）の範囲内で４０℃で４週後に不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が１０，０００個以下であることが分かる。
【0179】
糖の種類
主成分の含量（ｍａｉｎ ｐｅａｋ）
主成分の含量（ｍａｉｎ ｐｅａｋ）
【表14】
【0180】
表１４より、糖としてソルビトール、マンニトール、トレハロースまたはスクロースを用いた場合、４０℃で４週後に主成分の含量が９８％以上であることが分かる。
【0181】
電荷変異体（酸性ピーク）
【表15】
【0182】
表１５より、糖としてソルビトール、マンニトール、トレハロースまたはスクロースを用いた場合、４０℃で４週後に酸性ピークが３５％以下であることが分かる。
【0183】
不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
【表16】
【0184】
不溶性異物粒子数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
【表17】
【0185】
表１６および１７より、糖としてソルビトール、マンニトール、トレハロースまたはスクロースを用いた場合、４０℃で４週後に不溶性異物粒子数（１．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が１５，０００個以下であり、不溶性異物粒子数（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）が２００個以下であることが分かる。
【0186】
実験例４：界面活性剤の種類、キレート剤の影響
実験例４で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤または界面活性剤とキレート剤を添加して表１８の試料を製造した。各成分の含量は表１８に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
実験例４で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いて各ｐＨに合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤または界面活性剤とキレート剤を添加して表１８の試料を製造した。各成分の含量は表１８に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
【0187】
【表18】
【0188】
前記製剤に対して、５±３℃の温度、２５±２℃の温度／６０±５％の相対湿度、および４０±２℃の温度／７５±５％の相対湿度の条件および密閉条件で０週後、３週後、６週後の安定性を測定し、その結果を表１９～２０に示す。
【0189】
界面活性剤の種類
不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）
【表19】
【0190】
表１９より、界面活性剤としてポリソルベート８０を用いた実施例１３の場合、４０℃で６週後に不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は１００個以下として最も少なく、ポロキサマー１８８を用いた実施例１５の場合、４０℃で６週後に不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜１００．００μｍ）の個数は２，０００個以上として最も多いことが分かる。
【0191】
キレート剤（ＥＤＴＡ）の影響
酸化率（重鎖Ｍｅｔ ２５５）
酸化率（重鎖Ｍｅｔ ２５５）
【表20】
【0192】
表２０より、キレート剤（ＥＤＴＡ）を含む比較例１３～１５は、キレート剤（ＥＤＴＡ）を含まない実施例１３～１５に比べて、４０℃で６週後に重鎖Ｍｅｔ ２５５の酸化率が増加したことが分かる。
【0193】
実験例５：長期間安定性
実験例５で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いてｐＨ５．０に合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表２１の試料を製造した。各成分の含量は表２１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
実験例５で用いられた液体医薬製剤と関連し、酢酸ナトリウムを用いてｐＨ５．０に合わせて緩衝液を製造した後にソルビトールを添加し、それに抗体を添加し、界面活性剤を添加して表２１の試料を製造した。各成分の含量は表２１に記載された通りである。緩衝剤の濃度は、アセテート陰イオンの濃度を意味する。全体容量は１ｍｌであった。
【0194】
【表21】
【0195】
前記製剤に対して５±３℃の温度および密閉条件で０ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後の安定性を測定し、その結果を表２２～２７に示す。
【0196】
不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）
【表22】
【0197】
表２２より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後に不溶性異物粒子（１０．００μｍ≦、＜４００．００μｍ）数が１００個以下として低いことが分かる。
【0198】
無傷の免疫グロブリンＧの含量（Ｉｎｔａｃｔ ＩｇＧ％）
【表23】
【0199】
表２３より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後に無傷の免疫グロブリンＧの含量が９４％以上として高いことが分かる。
【0200】
無傷の重鎖および軽鎖の含量（Ｉｎｔａｃｔ ＨＣ＋ＬＣ％）
【表24】
【0201】
表２４より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後に無傷の重鎖および軽鎖の含量が９９％以上として高いことが分かる。
【0202】
高分子量成分の含量
【表25】
【0203】
表２５より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後に高分子量成分の含量が１．０％以下として低いことが分かる。
【0204】
低分子量成分の含量
【表26】
【0205】
表２６より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後に低分子量成分の含量が０．４％以下として低いことが分かる。
【0206】
ＴＮＦ－α結合アフィニティ
【表27】
【0207】
表２７より、実施例１６は、５℃で１２ヶ月後にＴＮＦ－α結合アフィニティが９５％以上として高いことが分かる。
【0208】
前記製剤に対して、４０±２℃の温度および密閉条件で０ヶ月後、０．５ヶ月後、１ヶ月後、２ヶ月後、３ヶ月後の粘度、および５±３℃の温度および密閉条件で６ヶ月後の粘度を測定し、その結果を表２８に示す。
【0209】
粘度（ｃＰ）
【表28】
【0210】
表２８より、実施例１６は、温度４０℃±２℃で１ヶ月後の粘度が８．０ｃｐとして低く維持されることが分かり、温度５℃±３℃で６ヶ月後の粘度が４．０ｃｐとして低く維持されることが分かる。
【配列表】