特許 7406253 免疫回避性ベクターおよび遺伝子療法のための使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-19

(45)【発行日】2023-12-27

(54)【発明の名称】免疫回避性ベクターおよび遺伝子療法のための使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/864 20060101AFI20231220BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20231220BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20231220BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20231220BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20231220BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20231220BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20231220BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231220BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20231220BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231220BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20231220BHJP

【ＦＩ】

C12N15/864 100Z

C12N15/12 ZNA

C12N15/113 Z

C12N7/01

A61P7/00

A61P13/02

A61P25/00

A61P43/00 105

A61K35/76

A61K48/00

C07K14/705

【請求項の数】 33

(21)【出願番号】P 2020538958

(86)(22)【出願日】2019-01-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-04-30

(86)【国際出願番号】 US2019013361

(87)【国際公開番号】W WO2019140311

(87)【国際公開日】2019-07-18

【審査請求日】2022-01-07

(31)【優先権主張番号】62/616,167

(32)【優先日】2018-01-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/768,779

(32)【優先日】2018-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】520254059

【氏名又は名称】カメレオン バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ウィンズロウ， ジェニン

【審査官】田ノ上 拓自

(56)【参考文献】

【文献】特表２００２－５１８０５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００１－５１２１４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００２－５１４３８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１６／００６７２２８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２００６／１３８６７０（ＷＯ，Ａ２）

【文献】特表２００８－５０４８２１（ＪＰ，Ａ）

【文献】www.moleculartherapy.org, 2012年，vol.20 no.5，p.960-971，doi:10.1038/mt.2011.303

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ１２Ｎ ７／０１

Ａ６１Ｐ ２５／００

Ａ６１Ｐ １３／０２

Ａ６１Ｐ ７／００

Ａ６１Ｋ ３５／７６

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ｃ０７Ｋ １４／７０５

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

エンベロープに囲まれたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子を含む、エンベロープがあるＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶ粒子が、異種導入遺伝子をコードする核酸を含み、前記エンベロープが、脂質二重層と、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１とを含み、前記エンベロープがあるＡＡＶ粒子が、前記脂質二重層に前記ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１がない同じ型のエンベロープがあるＡＡＶ粒子と比較して、低下した免疫原性を有する、エンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項2】

前記ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１のうち１種または両方が、膜貫通ドメインを含む、請求項１に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項3】

前記エンベロープが、標的化分子をさらに含む、請求項１または２に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項4】

前記標的化分子が、前記エンベロープがあるベクターに細胞特異性または組織特異性を付与する、請求項３に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項5】

前記１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、請求項３または４に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項6】

前記エンベロープが、前記ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする１種または複数の外因性核酸を含む細胞由来の細胞膜の部分を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項7】

前記異種導入遺伝子が、
ａ）ポリペプチド；
ｂ）治療核酸；または
ｃ）１種または複数の遺伝子編集用生成物
をコードする、請求項１～６のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項8】

前記異種導入遺伝子が、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）、レチノイドイソメロヒドロラーゼ（ＲＰＥ６５）、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、全脈絡膜萎縮タンパク質（ＣＨＭ）、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたは副腎白質ジストロフィータンパク質（ＡＬＤ）をコードする、請求項７に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項9】

前記治療核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである、請求項７に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項10】

前記異種導入遺伝子が、１種または複数の遺伝子編集用生成物をコードする、請求項７に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項11】

前記１種または複数の遺伝子編集用生成物が、ＲＮＡガイドヌクレアーゼ、ガイド核酸および／またはドナー核酸である、請求項１０に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項12】

前記ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項13】

前記ＡＡＶが、逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含み、前記ＡＡＶカプシドおよび前記ＡＡＶ ＩＴＲが、同じＡＡＶ血清型または異なるＡＡＶ血清型に由来する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項14】

前記異種導入遺伝子が、ヒト第ＩＸ因子またはヒト第ＶＩＩＩ因子をコードし、前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、請求項１～１３のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項15】

前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、請求項１～１４のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項16】

対象に単回用量として投与されると、対象に投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ型のエンベロープがないＡＡＶ粒子を同じ量でかつ同じ条件下で投与することによって生じる導入遺伝子発現と比較して、約２０％または約５０％またはそれよりも多く増加させる、請求項１～１５のいずれかに記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子。

【請求項17】

前記異種導入遺伝子を送達するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子と、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物。

【請求項18】

細胞または対象に導入遺伝子を送達するための医薬の製造において使用するための、請求項１～７のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子を含む組成物または請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

対象における疾患または障害の処置において使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子を含む組成物。

【請求項20】

前記対象が、ヒトである、請求項１８または１９に記載の組成物。

【請求項21】

前記疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ニーマン・ピック病またはベータサラセミアである、請求項１９または２０に記載の組成物。

【請求項22】

前記疾患または障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、請求項１９または２０に記載の組成物。

【請求項23】

前記対象に、２またはそれよりも多い用量の前記エンベロープがあるＡＡＶ粒子で、各用量の間が１日間またはそれよりも長い間隔で投与されることを特徴とする、請求項１９に記載の組成物。

【請求項24】

請求項１～１６のいずれかに記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子を産生する方法であって、
ａ）エンベロープがあるＡＡＶ粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養するステップであって、前記ウイルス産生細胞が、
ｉ）膜結合型ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする、核酸、
ｉｉ）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸、
ｉｉｉ）導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸、および
ｉｖ）ＡＡＶヘルパー機能
を含む、ステップと、
ｂ）前記エンベロープがあるＡＡＶ粒子を収集するステップと
を含む方法。

【請求項25】

膜結合型ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞に一過性に導入される、あるいは膜結合型ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞において安定に維持される、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

膜結合型ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞において安定に維持される、請求項２４または２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ウイルス産生細胞が、１種または複数の標的化分子をコードする核酸を含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記標的化分子が、前記エンベロープがあるｒＡＡＶ粒子に細胞特異性または組織特異性を付与する、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記標的化分子が、抗体である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／または前記ＡＡＶウイルスゲノムをコードする前記核酸が、産生細胞系に一過性に導入される、あるいは前記産生細胞系において安定に維持される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／または前記ＡＡＶウイルスゲノムをコードする前記核酸が、前記産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記異種導入遺伝子を送達するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のエンベロープがあるＡＡＶ粒子または請求項１７に記載の組成物を含むキット。

【請求項33】

使用のための指示をさらに含む、請求項３２に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１８年１月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／６１６，１６７号、および２０１８年１１月１６日に出願された米国特許仮出願第６２／７６８，７７９号の優先権の利益を主張するものであり、これらの開示全体は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける次の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピューター可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７７４３９２０００１４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１９年１月１１日、サイズ：２９ＫＢ）。
発明の分野

【0003】

本開示は、全般的には、免疫原性が低下した、遺伝子療法のための改善されたベクターに関する。

【背景技術】

【0004】

ＡＡＶ遺伝子療法臨床試験は、ＡＡＶを安全に使用して、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）（Meliani et al. (2017) Blood Advances, 1(23): 2019-31）、血友病Ｂ（Nathwani et al. (2011) N Engl J Med, 365: 2357-65）、およびＲＰＥ６５遺伝子における変異に起因する遺伝性網膜疾患（Simonelli et al. (2010) Molecular Therapy, 18(3): 643-650）を含むいくつかの単一遺伝子疾患に関する疾患表現型を反転することができることを示した。有望なヒト臨床試験データに加えて、ＡＡＶ遺伝子療法を使用した有望な前臨床データのさらなる例も存在する；例えば、ミオチューブラリンミオパチー（Myotubularin Myopathy）（Childers et al. (2014) Sci Transl Med, 6: 220ra10）。肯定的な臨床および前臨床データにもかかわらず、組換えＡＡＶおよび／または新たに発現される治療タンパク質に対し生成される免疫応答は、依然として、単一遺伝子障害を処置するためのＡＡＶ遺伝子療法のより広汎な使用に対する障壁である（Mingozzi et al. (2013) Blood, 122(1): 23-36；Chermule et al. (1999) Gene Therapy; 6, 1574-1583；Masat et al. (2013) Discov Med, 15(85): 379-389）。

【0005】

ＡＡＶに基づく遺伝子療法は、治癒的となる見込みがあることが明らかになったが、単単回処置の長寿命を巡って疑問がある。治療タンパク質のＡＡＶ媒介性送達が、最大３年間機能することの証拠があるが（Nathwani et al. (2014) N Engl J Med, 371: 1994-2004）、生涯にわたる導入遺伝子発現は未だ証明されておらず、一部の事例では、見込みがない。ＡＡＶに基づくベクターは、細胞染色体に組み込まれない二本鎖ＤＮＡループ構造であるエピソームエレメントとして持続する。この理由から、ＡＡＶゲノムは、細胞が分裂する際に複製および分裂せず、細胞分裂によって希釈され得る。延長期にわたる導入遺伝子発現を保証するために、ＡＡＶ遺伝子療法の研究者らは、ゆっくり分裂するまたは全く分裂しない細胞型を標的とした；例えば、筋肉細胞、肝臓細胞またはニューロン細胞。したがって、ＡＡＶに送達される治療遺伝子が、患者の生涯にわたって発現されるかについては不明である。低年齢の小児の筋肉細胞は、小児が成長する際に、成体筋肉細胞よりも多くの細胞分裂を起こすため、これは、脊髄性筋萎縮症等、低年齢の小児が罹患する生命を脅かす疾患において特にあてはまる。臨床データは、治療遺伝子のＡＡＶ送達が、定義されるＳＭＡ疾患エンドポイントを改善し得ることを示唆するが、発現レベルが、小児の一生にわたって維持されそうにない。実際に、ゆっくり分裂するまたは分裂しない細胞のためにＡＡＶ遺伝子療法を受ける成人であっても、形質導入された細胞におけるＡＡＶゲノムの希釈により、患者の生涯にわたる治療タンパク質レベルの低下を経験する可能性がある。したがって、追加的な用量のＡＡＶ遺伝子療法産物を送達できることが有利となるであろう。

【0006】

ＡＡＶ遺伝子療法に対する宿主免疫応答は、依然として、ＡＡＶ遺伝子療法をより広く使用することができるようになる前に克服しなければならない障害物である。ＡＡＶは、天然に存在するウイルスであるため、患者集団の部分は、様々なＡＡＶ血清型に対する既存の抗体を有する。例えば、最も一般的な血清型であるＡＡＶ２に対する既存の抗体は、集団の最大６０％において見出すことができる（Chiermule et al (1999) Gene Therapy; 6, 1574-1583）。他のＡＡＶ血清型は、あまり一般的ではないが、全組織型の標的化には利用することができない；例えば、ＡＡＶ５は、肝臓に優先的に感染し、ＡＡＶ８は、筋肉細胞を優先的に標的とする（Asokan et al. (2012) Molecular Therapy, 20 (4) 699-708）。ＡＡＶに対する既存の抗体を回避しつつ、特異的な組織に選択的に標的化され得る次世代ＡＡＶベクターは、潜在的な患者集団を増加させ、複数の疾患標的のためのベクターに取り組むための単一の製造プラットフォームの使用を可能にするであろう。

【0007】

ＡＡＶ遺伝子療法に対する宿主免疫応答は、カプシド特異的適応免疫応答により、第２の用量の産物の投与を妨げる。その上、治療タンパク質の新規発現に対するＴ細胞応答は、ＡＡＶ遺伝子療法産物の有効性を低下させ得る（Mingozzi et al. (2013) Blood, 122(1): 23-36）。

【0008】

ＡＡＶ療法における宿主免疫応答の作用を低下させるための試みが為された。例えば、エンベロープがあるＡＡＶ（enveloped-AAV）（「ｅｘｏ－ＡＡＶ」としても公知）は、エンベロープがないＡＡＶ（non-enveloped AAV）よりも有効であることが示され、これは、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでベクターを排除する抗ＡＡＶ抗体の能力からある程度までベクターを遮蔽することによるものと考えられる（Gyorgy et al. (2014) Biomaterials, 35(26): 7598-7609；Hudry et al. (2016) Gene Ther, Apr,23(4): 380-92；ＵＳ２０１３／０２０５５９）。また、ＣＴＬＡ－４－Ｉｇと共にＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２をコードするＡＡＶの共投与が、導入遺伝子発現を延長し、より少ない導入遺伝子応答性Ｔ細胞をもたらすことのいくつかの証拠がある（Adriouch et al. (2011) Front Microbiol, 2:199）。本発明は、チェックポイント免疫モジュレート分子と組み合わせて、エンベロープがあるＡＡＶ技術を使用して、エフェクターベクターを作製して、免疫応答および投与制限を低下させ、治療遺伝子の反復投与を容易にする。

【0009】

また、依然として、宿主免疫応答の作用を最小化しつつ、導入遺伝子送達および発現を改善する、新たなウイルスベクターおよび方法の必要がある。
特許出願および刊行物を含む、本明細書に引用されているあらゆる参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0010】

【文献】Meliani et al. (2017) Blood Advances, 1(23): 2019-31

【文献】Nathwani et al. (2011) N Engl J Med, 365: 2357-65

【文献】Childers et al. (2014) Sci Transl Med, 6: 220ra10

【文献】Mingozzi et al. (2013) Blood, 122(1): 23-36

【文献】Chermule et al. (1999) Gene Therapy; 6, 1574-1583

【文献】Masat et al. (2013) Discov Med, 15(85): 379-389

【文献】Nathwani et al. (2014) N Engl J Med, 371: 1994-2004

【文献】Chiermule et al (1999) Gene Therapy; 6, 1574-1583

【文献】Asokan et al. (2012) Molecular Therapy, 20 (4) 699-708

【文献】Gyorgy et al. (2014) Biomaterials, 35(26): 7598-7609

【文献】Hudry et al. (2016) Gene Ther, Apr,23(4): 380-92

【文献】Adriouch et al. (2011) Front Microbiol, 2:199

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

エンベロープに囲まれたベクター粒子を含むエンベロープがあるウイルスベクターであって、ベクター粒子が、導入遺伝子を含み、エンベロープが、１種または複数の免疫抑制分子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターが本明細書に提供される。エンベロープがあるウイルスベクターと、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物も提供される。

【0012】

エンベロープがあるウイルスベクターを細胞または対象に投与するステップを含む、細胞または対象に導入遺伝子を送達する方法と共に、エンベロープがあるウイルスベクターを対象に投与することにより、対象における疾患または障害を処置する方法も提供される。

【0013】

エンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、（ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏで）培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、１種または複数の（one or more one or more）膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、（ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとを含む方法がさらに提供される。

【0014】

一部の態様では、本発明は、エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物であって、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープ（envelop）に囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子を含む、組成物を提供する。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫エフェクター分子がないベクターと比較して、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫インヒビターを刺激する。他の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫刺激分子を阻害する。一部の実施形態では、エンベロープは、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子を含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子として、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８またはＶＩＳＴＡのうち１種または複数が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、エンベロープは、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、エンベロープは、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける標的化分子をさらに含む。一部の実施形態では、標的化分子は、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する。一部の実施形態では、標的化分子は、抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗体８Ｄ７である。一部の実施形態では、１種または複数の標的化分子は、膜貫通ドメインを含む。

【0015】

上述の態様および実施形態の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ウイルス粒子を含む。一部の実施形態では、ウイルス粒子は、ウイルスカプシドおよびウイルスゲノムを含む。一部の実施形態では、ウイルスゲノムは、１種または複数の異種導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、ポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、治療ポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ（ornithine transcarbomylase）、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤである。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、治療核酸をコードする。一部の実施形態では、治療核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイム（RNAzyme）またはＤＮＡザイムである。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする。一部の実施形態では、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物は、ＣＡＳヌクレアーゼおよび／または１種もしくは複数のガイド配列および／または１種もしくは複数のドナー配列である。

【0016】

上述の態様および実施形態の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９または（r）ＡＡＶ１０由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶ ＩＴＲは、同じ血清型または異なる血清型に由来する。

【0017】

上述の態様および実施形態の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスに由来する。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、非複製型である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、非組込み型である。

【0018】

一部の実施形態では、本発明は、上に記載されている組成物のいずれかと、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。

【0019】

一部の態様では、本発明は、個体に導入遺伝子を送達する方法であって、エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物を個体に投与するステップを含み、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープに囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子を含み、ウイルス粒子が、導入遺伝子を含むウイルスゲノムを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、疾患または障害を有する個体を処置する方法であって、エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物を、それを必要とする個体に投与するステップを含み、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープに囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子を含み、ウイルス粒子が、治療導入遺伝子を含むウイルスゲノムを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫エフェクター分子がないベクターと比較して、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫インヒビターを刺激する。他の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫刺激分子を阻害する。一部の実施形態では、エンベロープは、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子を含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子は、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８またはＶＩＳＴＡのうち１種または複数を含む。一部の実施形態では、エンベロープは、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２を含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、エンベロープは、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける標的化分子をさらに含む。一部の実施形態では、標的化分子は、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する。一部の実施形態では、標的化分子は、抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗体８Ｄ７である。一部の実施形態では、１種または複数の標的化分子は、膜貫通ドメインを含む。

【0020】

上述の方法の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ウイルス粒子を含む。一部の実施形態では、ウイルス粒子は、ウイルスカプシドおよびウイルスゲノムを含む。一部の実施形態では、ウイルスゲノムは、１種または複数の異種導入遺伝子を含む。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、ポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、治療ポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤである。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、治療核酸をコードする。一部の実施形態では、治療核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである。一部の実施形態では、異種導入遺伝子は、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする。一部の実施形態では、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物は、ＣＡＳヌクレアーゼおよび／または１種もしくは複数のガイド配列および／または１種もしくは複数のドナー配列である。

【0021】

上述の方法の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶ ＩＴＲは、同じ血清型または異なる血清型に由来する。

【0022】

上述の方法の一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスに由来する。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、非複製型である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、非組込み型である。

【0023】

上述の方法の一部の実施形態では、組成物は、エンベロープがあるウイルスベクターと、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である。

【0024】

上述の方法の一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、疾患または障害は、単一遺伝子疾患である。一部の実施形態では、疾患または障害は、ミオチューブラリンミオパチー（myotobularin myopathy）、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症またはベータサラセミア（beta thalessemia）である。

【0025】

一部の態様では、本発明は、免疫原性が低下したエンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる１種または複数の膜結合型免疫エフェクター機能をコードする核酸を含む、ステップと、ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫インヒビターを刺激する。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能は、免疫刺激分子を阻害する。一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子は、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８またはＶＩＳＴＡのうち１種または複数を含む。一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸は、ウイルス産生細胞に一過性に導入される。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸は、ウイルス産生細胞において安定に維持される。一部の実施形態では、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸は、ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる。

【0026】

上述の方法の一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける１種または複数の標的化分子をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、標的化分子は、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する。一部の実施形態では、標的化分子は、抗体である。一部の実施形態では、抗体は、抗体８Ｄ７である。一部の実施形態では、１種または複数の標的化分子は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、１種または複数の標的化分子をコードする核酸は、ウイルス産生細胞に一過性に導入される。一部の実施形態では、１種または複数の標的化分子をコードする核酸は、ウイルス産生細胞において安定に維持される。一部の実施形態では、１種または複数の分子標的化分子（molecule targeting molecule）をコードする核酸は、ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる。

【0027】

上述の方法の一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、エンベロープがあるＡＡＶベクターである。一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、ａ）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸と、ｂ）導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸と、ｃ）ＡＡＶヘルパー機能とを含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系に一過性に導入される。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系において安定に維持される。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる。一部の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、２個のＡＡＶ ＩＴＲを含む。一部の実施形態では、１種または複数のＡＡＶヘルパー機能は、プラスミド、アデノウイルス、細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のうち１種または複数によってもたらされる。一部の実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能は、アデノウイルスＥ１Ａ機能、アデノウイルスＥ１Ｂ機能、アデノウイルスＥ２Ａ機能、アデノウイルスＥ４機能およびアデノウイルスＶＡ機能のうち１種または複数を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能は、ＨＳＶ ＵＬ５機能、ＨＳＶ ＵＬ８機能、ＨＳＶ ＵＬ５２機能およびＨＳＶ ＵＬ２９機能のうち１種または複数を含む。

【0028】

上述の方法の一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである。一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、ａ）レンチウイルスｇａｇ遺伝子をコードする核酸、ｂ）レンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする核酸、ｃ）導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含むレンチウイルス移入ベクターをコードする核酸を含み、３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部は、異種調節エレメント、プライマー結合部位、ＧＡＧ遺伝子の全体または一部、セントラルポリプリントラクト、ＧＡＧ配列における合成停止コドン、ｒｅｖ応答性エレメント、およびｅｎｖスプライスアクセプターによって置き換えられる。

【0029】

上述の方法の一部の実施形態では、エンベロープがあるベクターは、さらに精製される。

【0030】

一部の態様では、本発明は、本明細書に記載されている組成物のいずれかを含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、使用のための指示（instructions for use）をさらに含む。

【0031】

一部の態様では、本発明は、本明細書に記載されている方法のいずれかに従った、それを必要とする個体への核酸の送達における使用のための組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されている方法のいずれかに従った、それを必要とする個体に対して疾患または障害の処置における使用のための組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする個体に核酸を送達するための医薬の製造における、本明細書に記載されている組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本発明は、疾患または障害を有する個体を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載されている組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、疾患または障害は、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症またはベータサラセミアである。

【0032】

一部の態様では、本発明は、本明細書に記載されている組成物を含む製造品を提供する。

【0033】

本発明の次の詳細な説明に記載されている通り、追加的な組成物および方法が提供される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
エンベロープに囲まれたウイルス粒子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターであって、前記ウイルス粒子が、異種導入遺伝子を含み、前記エンベロープが、脂質二重層および１種または複数の免疫抑制分子を含む、エンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２）
前記エンベロープがあるウイルスが、前記脂質二重層に免疫抑制分子がない同じ型のベクターと比較して、低下した免疫原性を有する、項目１に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目３）
前記１種または複数の免疫抑制分子が、１種または複数の免疫チェックポイントタンパク質を含む、項目１または２に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目４）
前記１種または複数の免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、項目１～３のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目５）
前記エンベロープが、２種もしくはそれよりも多い、３種もしくはそれよりも多い、または４種もしくはそれよりも多い異なる免疫抑制分子を含む、または２種もしくはそれよりも多い、３種もしくはそれよりも多い、または４種もしくはそれよりも多い異なるチェックポイントタンパク質を含む、項目１～４のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目６）
前記エンベロープが、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１；ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２；ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、項目１～５のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目７）
前記免疫抑制分子のうち１種または複数が、膜貫通ドメインを含む、項目１～６のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目８）
前記エンベロープが、標的化分子をさらに含む、項目１～７のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目９）
前記標的化分子が、前記エンベロープがあるベクターに細胞特異性または組織特異性を付与する、項目８に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１０）
前記標的化分子が、抗体である、項目９に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１１）
前記１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、項目８～１０のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１２）
前記エンベロープが、前記１種または複数の免疫抑制分子をコードする１種または複数の外因性核酸を含む細胞由来の細胞膜の部分を含む、項目１～１１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１３）
前記ウイルス粒子が、ウイルスカプシドおよびウイルスゲノムを含み、前記ウイルスゲノムが、前記異種導入遺伝子を含む、項目１２に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１４）
前記異種導入遺伝子が、ポリペプチドをコードする、項目１３に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１５）
前記異種導入遺伝子が、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする、項目１４に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１６）
前記異種導入遺伝子が、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、生存運動ニューロンタンパク質（ＳＭＮ）、レチノイドイソメロヒドロラーゼ（ＲＰＥ６５）、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、全脈絡膜萎縮タンパク質（ＣＨＭ）、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたは副腎白質ジストロフィータンパク質（ＡＬＤ）をコードする、項目１３に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１７）
前記異種導入遺伝子が、治療核酸をコードする、項目１３に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１８）
前記治療核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである、項目１７に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目１９）
前記異種導入遺伝子が、１種または複数の遺伝子編集用生成物をコードする、項目１３に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２０）
前記１種または複数の遺伝子編集用生成物が、ＲＮＡガイドヌクレアーゼ、ガイド核酸および／またはドナー核酸である、項目１９に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２１）
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を含む、項目１～２０のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２２）
前記ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む、項目２１に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２３）
前記ＡＡＶが、逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含み、前記ＡＡＶカプシドおよび前記ＡＡＶ ＩＴＲが、同じＡＡＶ血清型または異なるＡＡＶ血清型に由来する、項目２１または２２に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２４）
前記エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＩＸ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶであり、前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、項目１または２１～２３のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２５）
前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、項目１または２１～２４のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２６）
前記エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶであり、前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、項目１または２１～２３のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２７）
前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、項目２６に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２８）
前記ウイルス粒子が、レンチウイルスベクターを含む、項目１～２０のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目２９）
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである、項目２８に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目３０）
対象に単回用量として投与されると、対象に投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ型のエンベロープがないウイルスベクターを同じ量でかつ同じ条件下で投与することによって生じる導入遺伝子発現と比較して、約５０％またはそれよりも多く増加させる、項目１～２９のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目３１）
対象に単回用量として投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、前記免疫抑制分子がない同じ型のエンベロープがあるウイルスベクターを同じ量で同じ条件下で投与することによって生じる導入遺伝子発現と比較して、約２０％またはそれよりも多く増加させる、項目１～３０のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクター。
（項目３２）
項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターと、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物。
（項目３３）
細胞または対象に導入遺伝子を送達する方法であって、前記細胞または対象に、項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目３４）
前記対象が、前記導入遺伝子の送達および発現によって処置することができる疾患または状態を有する、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
対象における疾患または障害を処置する方法であって、前記対象に、項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目３６）
前記対象が、ヒトである、項目３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記疾患または障害が、単一遺伝子疾患である、項目３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ニーマン・ピック病またはベータサラセミアである、項目３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記疾患または障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、項目３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記対象が、血友病Ｂを有し、前記エンベロープがあるウイルスベクターが、第ＩＸ因子をコードする異種導入遺伝子を含むＡＡＶを含み、前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、項目３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記対象が、血友病Ａを有し、前記エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶを含み、前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、項目３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、項目４０または４１に記載の方法。
（項目４３）
前記対象に、２またはそれよりも多い用量の前記エンベロープがあるウイルスベクターを、各用量の間が１日間またはそれよりも長い間隔で投与するステップを含む、項目３３～４２のいずれかに記載の方法。
（項目４４）
項目１～３１のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、
ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養するステップであって、前記ウイルス産生細胞が、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、
ｂ）前記エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップと
を含む方法。
（項目４５）
前記ウイルス産生細胞が、前記膜結合型免疫抑制分子をコードする外因性核酸を含む、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記ウイルス産生細胞が、前記膜結合型免疫抑制分子をコードする異種核酸を含む、項目４４または４５に記載の方法。
（項目４７）
前記膜結合型免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、項目４４～４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記膜結合型免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、項目４４～４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記ウイルス産生細胞が、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする異種核酸を含む、項目４４～４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞に一過性に導入される、項目４４～４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞において安定に維持される、項目４４～４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする前記核酸が、前記ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記ウイルス産生細胞が、１種または複数の標的化分子をコードする核酸を含む、項目４４～５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープがあるＡＡＶベクターである、項目４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記ウイルス産生細胞が、
ｃ）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸、
ｄ）導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸、ならびに
ｅ）ＡＡＶヘルパー機能
を含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／または前記ＡＡＶウイルスゲノムをコードする前記核酸が、産生細胞系に一過性に導入される、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／または前記ＡＡＶウイルスゲノムをコードする前記核酸が、前記産生細胞系において安定に維持される、項目５５に記載の方法。
（項目５８）
ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／または前記ＡＡＶウイルスゲノムをコードする前記核酸が、前記産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
１種または複数のＡＡＶヘルパー機能が、プラスミド、アデノウイルス、細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のうち１種または複数によってもたらされる、項目４４～５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
ＡＡＶヘルパー機能が、アデノウイルスＥ１Ａ機能、アデノウイルスＥ１Ｂ機能、アデノウイルスＥ２Ａ機能、アデノウイルスＥ４機能およびアデノウイルスＶＡ機能のうち１種または複数を含む、項目４４～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
ＡＡＶヘルパー機能が、ＨＳＶ ＵＬ５機能、ＨＳＶ ＵＬ８機能、ＨＳＶ ＵＬ５２機能およびＨＳＶ ＵＬ２９機能のうち１種または複数を含む、項目４４～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記エンベロープがあるウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、項目４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記ウイルス産生細胞が、
ｆ）レンチウイルスｇａｇ遺伝子をコードする核酸、
ｇ）レンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする核酸、
ｈ）導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含むレンチウイルス移入ベクターをコードする核酸を含み、前記３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部が、異種調節エレメント、プライマー結合部位、前記ＧＡＧ遺伝子の全体または一部、セントラルポリプリントラクト、ＧＡＧ配列における合成停止コドン、ｒｅｖ応答性エレメント、およびｅｎｖスプライスアクセプターによって置き換えられる、項目６２または６３に記載の方法。
（項目６５）
前記エンベロープがあるベクターが、さらに精製される、項目４４～６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物を含むキット。
（項目６７）
使用のための指示をさらに含む、項目６６に記載のキット。
（項目６８）
対象への核酸の送達における使用のための、項目１～３１のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物。
（項目６９）
対象における疾患または障害の処置における使用のための、項目１～３１のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物。
（項目７０）
項目３３～４３のいずれかに記載の方法に従った対象への核酸の送達における使用のための、項目６８または６９に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは組成物。
（項目７１）
それを必要とする個体に核酸を送達するための医薬の製造における、項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物の使用。
（項目７２）
疾患または障害を有する個体を処置するための医薬の製造における、項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物の使用。
（項目７３）
前記疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ニーマン・ピック病またはベータサラセミアである、項目７２に記載の使用。
（項目７４）
前記疾患または障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、項目７３に記載の使用。
（項目７５）
項目１～３１のいずれか一項に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは項目３２に記載の組成物を含む製造品。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】図１は、エフェクターベクターの例示的な概略図を示す。この特定例では、ＡＡＶベクターには、エンベロープがあるウイルス粒子の表面で免疫エフェクター機能と共に細胞標的化機能を提示するように操作された細胞膜にエンベロープがある。

【0035】

【図2】図２は、例示的なエフェクター分子を示す。

【0036】

【図3】図３は、イベイダー（EVADER）ベクターのエンベロープにおけるマウスＰＤＬ１（左パネル）およびマウスＣＴＬＡ４の存在を示す。ＦＡＣＳヒストグラムは、抗マウスＰＤＬ１抗体または抗マウスＣＴＬＡ－４抗体で染色されたエンベロープがあるＡＡＶおよびイベイダーベクターを示す。エンベロープがあるＡＡＶヒストグラムが、エフェクターベクターヒストグラムに重ね合わされて、精製されたベクターのより高いレベルのＰＤＬ－１またはＣＴＬＡ－４染色を示す。エフェクターベクターは、エンベロープがあるＡＡＶベクターよりも高いレベルの、ＰＤＬ－１およびＣＴＬＡ－４の両方を有する。イベイダーは、エフェクターベクターである。

【0037】

【図4】図４は、初回注射後３および６週間でのマウスにおけるヒトＦＩＸレベルを示すグラフを示す。３週間雌マウスについて：^＊ｐ＝０．０３６；^＊＊ｐ＋０．００２；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。３週間雄マウスについて：^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。６週間雌マウスについて：ｓｔｄ 対 イベイダーｐ＝０．０００２；ｅｘｏ 対 イベイダーｐ＝０．０００６。イベイダーは、ｍＥＶ－ＡＡＶ－ｈＦＩＸである。Ｅｘｏは、エンベロープがあるＡＡＶである。

【0038】

【図5】図５は、３および６週目のマウス由来の血清における抗ＡＡＶ８ ＩｇＧ抗体の力価のグラフを示す。

【0039】

【図6】図６は、３および６週目のＡＡＶ８に対する中和抗体の力価のグラフを示す。

【0040】

【図7】図７は、３および６週目の雄または（of）雌マウスの肝臓由来のベクターゲノムコピー数（ＶＧＣＮ）を描写するグラフを示す。

【0041】

【図8】図８は、３および６週目の組み合わせた雄および雌マウスの肝臓由来のベクターゲノムコピー数（ＶＧＣＮ）を描写するグラフを示す。

【0042】

【図9】図９は、統計解析を含む、６週目の組み合わせた雄および雌マウスの肝臓由来のベクターゲノムコピー数（ＶＧＣＮ）を描写するグラフを示す。

【発明を実施するための形態】

【0043】

エンベロープに部分的にまたは完全に囲まれたウイルス粒子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターであって、エンベロープが、脂質二重層、およびチェックポイント免疫下方調節因子等の１種または複数の免疫抑制性分子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターが本明細書に提供される。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルス（例えば、ＡＡＶまたはレンチウイルス）は、ウイルス産生細胞膜からの「出芽」によって産生される。エンベロープは、産生細胞膜の部分を含むため、産生細胞膜に包埋された免疫モジュレート分子は、したがって、エンベロープがあるウイルスに移動される。次のセクションに詳細に記載されている通り、エンベロープがあるウイルスベクターは、細胞または対象への核酸（導入遺伝子）の送達に有用であり、宿主に生成された免疫応答に対し抵抗性であると考えられる。エンベロープがあるウイルスベクターならびにその使用および産生のための方法は、次のセクションに詳細に記載されている。
Ｉ．一般技法

【0044】

本明細書に記載または参照されている技法および手順は、一般に十分に理解されており、例えば、Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook et al., 4^th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2012)；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., 2003); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.)；PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds., 1995)；Antibodies, A Laboratory Manual (Harlow and Lane, eds., 1988)；Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications (R.I. Freshney, 6^th ed., J. Wiley and Sons, 2010)；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., Academic Press, 1998)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, Plenum Press, 1998)；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., J. Wiley and Sons, 1993-8)；Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds., 1996)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994)；Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., J. Wiley and Sons, 2002)；Immunobiology (C.A. Janeway et al., 2004)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)；およびCancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 2011)に記載されている広く利用されている方法論等、従来の方法論を使用して当業者によって一般的に用いられている。
ＩＩ．定義

【0045】

本明細書を解釈する目的のため、他に断りがなければ次の定義が適用される。適切な場合は常に、単数形で使用されている用語は、複数形も含み、逆もまた同じである。下に表記されるいずれかの定義が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文書と矛盾する場合、表記されている定義が優先するものとする。

【0046】

本明細書で使用される場合、単数形形態「１つの（a）」、「１つの（an）」および「その（the）」は、他に指示がなければ複数形の参照を含む。

【0047】

１つまたは複数の項目のリストがその後に続く用語「少なくとも１つ」の使用（例えば、「ＡおよびＢのうち少なくとも１つ」）は、本明細書で他に指示がなければまたは文脈によって明らかに相反しない限り、列挙されている項目から選択される１つの項目（ＡまたはＢ）または列挙されている項目のうち２つもしくはそれよりも多くのいずれかの組合せ（ＡおよびＢ）を意味するものと解釈されるべきである。

【0048】

本明細書に記載されている本開示の態様および実施形態は、斯かる態様および実施形態「を含む」、「からなる」および「から本質的になる」ものを含むことが理解される。

【0049】

本明細書に記載されているあらゆる組成物、および本明細書に記載されている組成物を使用したあらゆる方法のため、組成物は、列挙されている構成成分もしくはステップを含むことができる、または列挙されている構成成分もしくはステップ「から本質的になる」もしくは「からなる」ことができる。組成物が、列挙されている構成成分「から本質的になる」と記載される場合、組成物は、列挙されている構成成分を含有し、開示されている方法に実質的に影響を与えない他の構成成分を含有することができるが、明確に列挙されている構成成分以外の、開示されている方法に実質的に影響を与えるいかなる他の構成成分も含有しない；または、組成物が、開示されている方法に実質的に影響を与える、列挙されているもの以外の余分な構成成分を含有する場合、組成物は、開示されている方法に実質的に影響を与えるのに十分な濃度もしくは量の余分な構成成分を含有しない。方法が、列挙されているステップ「から本質的になる」と記載される場合、方法は、列挙されているステップを含有し、開示されている方法に実質的に影響を与えない他のステップを含有することができるが、方法は、明確に列挙されているステップ以外の、開示されている方法に実質的に影響を与えるいかなる他のステップも含有しない。非限定的な具体例として、組成物が、構成成分「から本質的になる」と記載される場合、組成物は、開示されている組成物または方法の特性に実質的に影響を与えない、いずれかの量の薬学的に許容される担体、媒体または希釈剤および他の斯かる構成成分をその上含有することができる。

【0050】

用語「約」は、本明細書で使用される場合、本技術分野の当業者であれば容易に公知となる、それぞれの値に関する通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」ある値またはパラメーターの参照は、当該の値またはパラメーターそれ自体を対象にする実施形態を含む（および記載する）。

【0051】

用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書で使用される場合、いずれかの長さのポリマー形態のヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、またはこれらの組合せを指す。よって、この用語として、一本鎖、二本鎖もしくは多重鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリンおよびピリミジン塩基または他の天然の、化学的もしくは生化学的に改変された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーが挙げられるがこれらに限定されない。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基（ＲＮＡまたはＤＮＡに典型的に見出すことができるような）、または改変もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。その代わりに、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホロアミデート（phosphoramidate）等、合成サブユニットのポリマーを含むことができ、よって、オリゴデオキシヌクレオシドホスホロアミデート（Ｐ－ＮＨ２）または混合ホスホロアミデート－ホスホジエステルオリゴマーとなることができる。加えて、相補鎖を合成し、適切な条件下で鎖をアニーリングすることにより、またはＤＮＡポリメラーゼと適切なプライマーを使用して相補鎖をｄｅ ｎｏｖｏ合成することにより、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド産物から二本鎖ポリヌクレオチドを得ることができる。

【0052】

用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すように互換的に使用されており、いずれか特定の最小または最大の長さに限定されるものではない。アミノ酸残基の斯かるポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有することができ、そのようなものとして、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられるがこれらに限定されない。全長タンパク質およびその断片の両方が、この定義によって包含される。この用語は、ポリペプチドの発現後改変、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本発明の目的のため、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限りにおいて、ネイティブ配列に対し、欠失、付加および置換（一般に、保存的な性質）等の改変を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘発による等、計画的である場合がある、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅による誤りによる等、偶発的である場合がある。

【0053】

「ウイルスベクター」は、少なくとも１または２個の反復配列（例えば、ＡＡＶのための逆位末端反復配列（ＩＴＲ）またはレンチウイルスのための長鎖末端反復配列（ＬＴＲ））によって挟まれる、１個または複数の異種配列（すなわち、ウイルス起源でない核酸配列）を含むポリヌクレオチドベクターを指す。異種核酸は、「カセット」として送達されるべき「ペイロード」と称することができ、多くの場合、少なくとも１または２個の反復配列（例えば、ＡＡＶのための逆位末端反復配列（ＩＴＲ）またはレンチウイルスのための長鎖末端反復配列（ＬＴＲ））によって挟まれる。斯かるウイルスベクターは、宿主細胞中に存在する場合、宿主細胞が必須機能をもたらす限り、複製され、感染性ウイルス粒子へとパッケージングされ得る。ウイルスベクターが、より大型のポリヌクレオチド（例えば、染色体中、またはクローニングもしくはトランスフェクションに使用されるプラスミド等の別のベクター中）に取り込まれる場合、ウイルスベクターは、ウイルス複製およびパッケージング機能の存在下で複製およびカプシド形成によって「レスキュー」され得る「プロベクター」と称することができる。ウイルスベクターは、ウイルスカプシドへとパッケージングされて、「ウイルス粒子」を生成することができる。ある観点では、ウイルス粒子は、ウイルスゲノムおよび異種核酸ペイロードと合わせたウイルスカプシドを指す。

【0054】

「異種」は、これが比較されるまたはこれが導入もしくは取り込まれる実体の残りとは遺伝子型的に別個の実体に由来することを意味する。例えば、異なる細胞型へと遺伝子操作技法によって導入されるポリヌクレオチドは、異種ポリヌクレオチドである（そして、発現される場合、異種ポリペプチドをコードすることができる）。同様に、ウイルスベクターに取り込まれる細胞の配列（例えば、遺伝子またはその部分）は、ベクターに関して異種ヌクレオチド配列である。異種核酸は、これが比較されるまたはこれが導入もしくは取り込まれる実体の残りとは遺伝子型的に別個の実体に由来する核酸を指すことができる。異種を使用して、これが導入される種にとって非ネイティブである他の生物学的構成成分（例えば、タンパク質）を指すこともできる。例えば、異種核酸から細胞において発現されるタンパク質は、細胞に関して異種タンパク質となる。遺伝子操作技法によって細胞または生物に導入される核酸は、細胞または生物にとって異種または相同であるかに関係なく、細胞または生物にとって「外因性」とみなすことができる。よって、例えば、ベクターを使用して、ヒト遺伝子の追加的なコピーをヒト細胞に導入することができる。細胞に導入される遺伝子は、相同（ネイティブ）核酸配列を含有する場合があるとしても、細胞にとって外因性であろう。

【0055】

「単離された」分子（例えば、核酸またはタンパク質）または細胞は、その天然環境の構成成分から同定され分離された、および／または回収されたことを意味する。

【0056】

「操作された」または「遺伝子操作された」などの用語は、人為的に遺伝子改変された（例えば、研究室技法を使用して）または斯かる遺伝子改変に起因する、生物学的材料を指すように使用されている。

【0057】

本明細書で使用される場合、「処置」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のため、有益なまたは所望の臨床結果として、検出可能であれ検出不能であれ、症状の軽減、疾患の程度の縮小、安定化された（例えば、悪化していない）疾患状態、疾患の拡散（例えば、転移）の防止、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の寛解または緩和、および軽快（部分的であれ完全であれ）が挙げられるがこれらに限定されない。「処置」は、処置を受けていない場合に予想される生存期間と比較した、生存期間の延長を意味することもできる。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「予防的処置」は、個体が、障害を有するまたは有するリスクがあることが公知であるまたはそうであると疑われるが、障害の症状を呈していないまたは最小の症状を呈した場合の、処置を指す。予防的処置を受けている個体は、症状の開始に先立ち処置することができる。

【0059】

「有効量」は、臨床結果（例えば、症状の寛解、および臨床エンドポイントの達成など）を含む有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１回または複数の投与において投与することができる。疾患状態の観点から、有効量は、疾患の寛解、安定化、または発症遅延に十分な量である。

【0060】

本明細書に記載されている構造的および機能的特徴のいずれかに関して、これらの特徴を決定する方法が当技術分野で公知である。
ＩＩＩ．ベクター

【0061】

エンベロープに部分的にまたは完全に囲まれたウイルス粒子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターであって、エンベロープが、脂質二重層および１種または複数の免疫抑制性分子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターが本明細書に提供される。エフェクターベクターの概略的描写を図１に示す。一部の実施形態では、本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、エンベロープがない、またはエンベロープに免疫抑制分子を含むように操作されていないエンベロープを有する、同じエンベロープがあるベクターよりも有効におよび／またはそれよりも効率的に核酸導入遺伝子ペイロードを送達することができる。

【0062】

一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルス粒子は、ネイティブウイルス粒子と比較して、ウイルス粒子に対して免疫を低下させるために操作される。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルス粒子は、導入遺伝子産物をコードするネイティブウイルス粒子を含むベクターと比較して、ウイルス導入遺伝子産物に対して免疫を低下させるために操作される。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルス粒子は、その典型的なネイティブ状態でエンベロープがない；例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子およびアデノウイルス粒子。他の実施形態では、エンベロープが、ウイルス粒子および／またはウイルス導入遺伝子産物に対する免疫をモジュレートするように操作される場合、ネイティブウイルス粒子は、エンベロープがある；例えば、レトロウイルスおよびヘルペスウイルス。

【0063】

例えば、一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象に単回用量として（例えば、２×１０^１１～２×１０^１２ｖｇ／ｋｇ）投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ条件下における同じ型のエンベロープがないウイルスベクター（例えば、同じ導入遺伝子、同じ対象、同じ用量および投与経路等であり、唯一の差がベクターである）の投与によって生じるレベルと比較して、約５０％またはそれよりも多く（約７５％もしくはそれよりも多く、約１００％もしくはそれよりも多く、約１２５％もしくはそれよりも多く、約１５０％もしくはそれよりも多く、約１７５％もしくはそれよりも多く、またはさらには約２００％もしくはそれよりも多く）増加させる。

【0064】

また、一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象に単回用量として（例えば、２×１０^１１～２×１０^１２ｖｇ／ｋｇ）投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ条件下における免疫抑制分子がない同じ型のエンベロープがあるウイルスベクター（宿主細胞が、免疫抑制分子を発現するように操作されなかったこと以外は同じ型の産生細胞から産生される）（例えば、同じ導入遺伝子、同じ対象、同じ用量および投与経路等であり、唯一の差がベクターである）の投与によって生じるレベルと比較して、約２０％またはそれよりも多く（約５０％もしくはそれよりも多く、約７５％もしくはそれよりも多く、約１００％もしくはそれよりも多く、約１２５％もしくはそれよりも多く、約１５０％もしくはそれよりも多く、約１７５％もしくはそれよりも多く、またはさらには約２００％もしくはそれよりも多く）増加させる。

【0065】

本明細書に提供される免疫抑制分子を含むエンベロープがあるベクターが、可溶性免疫抑制分子（例えば、ＣＴＬＡ４／Ｉｇ、アバタセプト）の投与に起因する全体的免疫抑制を最小化することがさらに考えられる。一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象、特に、ヒトへの有効量（例えば、２×１０^１１ｖｇ／ｋｇの用量または５×１０^１１ｖｇ／ｋｇの用量）での投与後に、循環する総抗ＩｇＧ抗体の増加、または抗原特異的抗体、もしくは投与されるベクター由来以外の抗原によって刺激される活性化ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の増加に従って投与後２～３週間以内に測定される、１０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ４／Ｉｇ（または、一部の実施形態では、２ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ４／Ｉｇ）の単一投与によって引き起こされる全体的免疫抑制よりも低い全体的免疫抑制を引き起こす。

【0066】

いずれか特定の理論または作用機構に制約されることは望まないが、本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、宿主免疫応答を抑制することにより、および／または宿主に生成される免疫応答の作用からベクターを遮蔽することにより、ベクターまたはウイルス導入遺伝子産物に対する宿主免疫応答の作用を回避すると考えられる。例えば、本発明のベクターは、宿主によって産生されるベクター中和抗体の数を低下させることができる、またはウイルスの中和におけるこのような抗体の有効性を低下させることができる。同様に、本発明のベクターは、ウイルス導入遺伝子産物に対する宿主に産生される抗体の数を低下させることができる、または導入遺伝子産物の発現の阻害におけるこのような抗体の有効性を低下させることができる。また、本発明のベクターは、導入遺伝子発現増加をもたらす、従来の遺伝子療法ベクターに典型的に関連する炎症を低下させることができる。

【0067】

よって、一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、ネイティブもしくはエンベロープがないウイルス粒子と比較して、または同じ型だが、エンベロープに免疫抑制分子を含むように操作されていないエンベロープを有するエンベロープがあるウイルス粒子と比較して、宿主における低下した免疫原性を有する。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、ネイティブもしくはエンベロープがないウイルス粒子を含む同じ型のベクターと比較して、または同じ型だが、エンベロープに免疫抑制分子を含むように操作されていないエンベロープを有するエンベロープがあるウイルス粒子と比較して、ウイルス導入遺伝子産物に対する宿主免疫を低下させる。
（Ａ）ウイルスベクター

【0068】

エンベロープがあるウイルスをもたらすように脂質二重層と会合することができるいずれかのウイルスベクターを使用することができる。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子およびアデノウイルス粒子等、そのネイティブ状態で典型的にエンベロープがないタイプである。他の実施形態では、ネイティブウイルス粒子は、レトロウイルスおよびヘルペスウイルス等、典型的にエンベロープがあるタイプのウイルス粒子である。

【0069】

一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶウイルス粒子を含む。ＡＡＶは、パルボウイルスファミリーのメンバーであり、エンベロープがあるウイルスとして代表的には使用されていない。導入遺伝子の送達に適したいずれかのＡＡＶベクターを使用することができる。ＡＡＶ粒子は、いずれかの血清型由来のＡＡＶカプシドタンパク質およびＡＡＶウイルスゲノムを含むことができる。ＡＡＶ血清型として、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＡＡＶウイルス粒子は、同じ血清型由来のＡＡＶウイルスカプシドおよびＡＡＶウイルスゲノムを含む。他の実施形態では、ＡＡＶウイルスゲノムおよびＡＡＶカプシドは、異なる血清型のものである。例えば、ＡＡＶウイルスカプシドは、ＡＡＶ６ウイルスカプシドであってよく、ＡＡＶウイルスゲノムは、ＡＡＶ２ウイルスゲノムであってよい。一部の実施形態では、ＡＡＶは、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）である。一部の実施形態では、ベクターは、ＡＡＶ８またはＡＡＶ２／８ベクター、特に、ｓｃＡＡＶ８またはｓｃＡＡＶ２／８）である。

【0070】

一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、レンチウイルス粒子を含む。ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスおよびネコ免疫不全ウイルスが挙げられるがこれらに限定されない、導入遺伝子送達に適したいずれかのレンチウイルスを使用することができる。典型的に、レンチウイルスベクターは、非複製型である。レンチウイルスベクターは、組込み型または非組込み型レンチウイルスベクターとなることができる。一部の実施形態では、レンチウイルスゲノムは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ遺伝子を欠く。一部の実施形態では、レンチウイルスゲノムは、異種導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含み、３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部は、除去されるまたは異種調節エレメントによって置き換えられる。

【0071】

ウイルス粒子、特に、ウイルスゲノムは、送達されるべき異種核酸（例えば、導入遺伝子）を含む（「ペイロード」）、または空ベクターとなることができる。送達されるべき核酸の特定の性質は、所望の最終使用に依存し、本発明のエンベロープがあるベクターは、いずれか特定の使用またはペイロードに限定されない。一部の実施形態では、ペイロード核酸は、生物学的タンパク質、例えば、第ＶＩＩＩ因子（例えば、ヒトＦ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ２ＶＦ４５）、Ｂ－ドメイン欠失（ＢＤＤ）ヒト第ＶＩＩＩ因子遺伝子のＳＱ－ＦＶＩＩＩバリアント（Lind et al., 1995 Eur J Biochem. Aug 15;232(1):19-27））または他の公知バリアント）、第ＩＸ因子（例えば、ヒト第ＩＸ因子ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ００７４０；またはヒト第ＩＸ因子（Ｒ３３８Ｌ）「Ｐａｄｕａ」（Monahan et al., 2015 Hum Gene Ther., 26(2): 69-81、または他の公知バリアント）、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤを発現する。一部の実施形態では、ペイロード核酸配列は、配列番号１のヒト第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列をコードする、または配列番号１のアミノ酸配列に由来する。一部の実施形態では、ペイロード核酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するヒト第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列をコードする。一部の実施形態では、ペイロード核酸配列は、配列番号１のヒト第ＩＸ因子アミノ酸配列をコードする。一部の実施形態では、ペイロード核酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するヒト第ＩＸ因子アミノ酸配列をコードする。他の実施形態では、ペイロード核酸は、レポーター分子、例えば、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼまたはベータ－ガラクトシダーゼをコードする。また他の実施形態では、ペイロード核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイム等、治療核酸をコードする。また他の実施形態では、ペイロード核酸は、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９、ＣＰＦ１等）、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼのためのガイド核酸、ドナー核酸、またはこれらの一部の組合せ等、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする。

【0072】

異種核酸は、組織特異的プロモーターとなり得る、適したプロモーターの制御下に置くことができる。例えば、ベクターが、肝臓に送達されるべきである場合、肝臓特異的プロモーター（例えば、肝臓特異的ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター）。所与の適用に適切となり得るような他の調節因子エレメントが含まれていてもよい。
（Ｂ）免疫抑制分子を有する操作されたエンベロープ

【0073】

本明細書に提供されるウイルスベクターのエンベロープは、ウイルス粒子を部分的にまたは完全に囲む脂質二重層を含む。天然に存在するまたは合成（人工）の脂質二重層を含む、いかなる脂質二重層を使用することもできる。合成脂質二重層は、例えば、リポソームを含む。天然に存在する脂質二重層は、エキソソーム、微小小胞体（例えば、脱落小胞（shedding vesicle）またはエクトソーム）などを含む、当技術分野で公知の細胞外小胞（ＥＶ）の様々な型のいずれかを含む。例えば、ベクターのエンベロープの脂質二重層は、産生細胞、特に、同じ型の操作されていない産生細胞と比較して１種または複数の免疫抑制分子を過剰発現するように操作された産生細胞から「出芽」した細胞膜の部分によってもたらされ得る。斯かる脂質二重層は、これが脱落した箇所の細胞膜の部分を含む。一部の実施形態では、脂質二重層は、エンドソーム関連タンパク質（Ａｌｉｘ、Ｔｓｇ１０１およびＲａｂタンパク質）；テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ５３およびＣＤ３７）；脂質ラフト関連タンパク質（グリコシルホスファチジルイシトールおよびフロチリン）、および／またはコレステロール、スフィンゴミエリンおよび／またはグリセロリン脂質を含む脂質を含む。一部の実施形態では、脂質二重層は、エキソソーム脂質二重層（例えば、脂質二重層は、エキソソームである）、特に、本明細書に記載されている１種または複数の免疫抑制分子を過剰発現するように操作された産生細胞のエキソソーム脂質二重層である（すなわち、産生細胞から脱落した、別段、産生細胞に由来するもしくは産生細胞によって産生された）。

【0074】

いかなる細胞型も、ＥＶをもたらすことができるが、腫瘍細胞の不死化に寄与する作用因子（例えば、遺伝要素）による混入の可能性のため、また、発癌性もしくは他の面で対象にとって有害となり得るため、時に、本発明の文脈において、産生細胞としての腫瘍細胞の使用を避けることが有利である。よって、一部の実施形態では、脂質二重層は、非腫瘍エキソソーム脂質二重層等、非腫瘍ＥＶ脂質二重層である（例えば、脂質二重層は、ＥＶまたはエキソソームが、腫瘍細胞に起源を持たないことを意味する、非腫瘍エキソソーム等、非腫瘍ＥＶに由来する）。他の実施形態では、脂質二重層は、２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３またはＨＥＫ２９３Ｔ）由来のＥＶ脂質二重層（例えば、エキソソーム脂質二重層またはエキソソーム）、特に、本明細書に記載されている１種または複数の免疫抑制分子を過剰発現するように操作された２９３細胞等、非腫瘍産生細胞由来のＥＶ脂質二重層（例えば、エキソソーム脂質二重層またはエキソソーム）である（すなわち、産生細胞から脱落した、別段、産生細胞に由来するもしくは産生細胞によって産生された）。

【0075】

エンベロープは、免疫抑制分子も含む。免疫抑制分子は、いずれかの様式で、エンベロープの脂質二重層と会合することができる。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、脂質二重層内にまたはその表面に包埋される。例えば、免疫抑制分子は、天然または合成のいずれかにより、脂質二重層に組み込む膜貫通ドメインを含むことができる。膜貫通ドメインは、当技術分野で公知であり、ＰＤＧＲ膜貫通ドメインが挙げられるがこれに限定されない。膜貫通ドメインを取り込む方法（例えば、融合タンパク質を生成することにより）は、当技術分野で公知である。

【0076】

免疫抑制分子は、エンベロープがない、または免疫抑制分子を含有するように操作されていないエンベロープを有する同じベクターと比較して、本発明のエンベロープがあるベクターに対する宿主免疫応答を低下させるいずれかの分子であり得る。免疫抑制分子として、免疫インヒビターを刺激もしくは上方調節することによる、または免疫刺激分子および／または活性化因子を阻害もしくは下方調節することによる、または免疫抑制分子がないエンベロープがあるベクターと比較してエンベロープがあるウイルスベクターの免疫原性を他の仕方で低下させることによる等、いずれかの機構によって宿主の免疫機能を下方調節する分子（例えば、タンパク質）が挙げられるがこれらに限定されない。免疫抑制分子として、免疫チェックポイント受容体およびリガンドが挙げられるがこれらに限定されない。免疫抑制分子の非限定的な例として、例えば、ＣＴＬＡ－４およびそのリガンド（例えば、Ｂ７－１およびＢ７－２）、ＰＤ－１およびそのリガンド（例えば、ＰＤＬ－１およびＰＤＬ－２）、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３およびそのリガンド（例えば、ＧＡＬ９）、ＴＩＧＩＴおよびそのリガンド（例えば、ＣＤ１５５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ならびにＢＴＬＡおよびそのリガンド（例えば、ＨＶＥＭ）が挙げられる。前述のチェックポイント分子のいずれかの活性断片および誘導体；前述のチェックポイント分子のいずれかに対するアゴニスト抗体等、前述のチェックポイント分子のいずれかのアゴニスト；抗ＣＤ２８抗体等、免疫刺激受容体（共刺激受容体）もしくはそのリガンドを遮断する抗体；または免疫チェックポイント分子の免疫機能を模倣するペプチドも含まれる。図２に説明されている通り、所望の免疫抑制分子が、膜貫通ドメインをネイティブに含まない程度まで、キメラ分子発現およびそのリガンドまたは受容体への結合の維持に必要となり得る、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、必要に応じて、全長細胞内ドメインまたはいずれかの最小細胞間ドメインのいずれかとを含むキメラ分子を作製することにより、免疫抑制分子は、脂質二重層に包埋するように操作することができる。エフェクター分子の膜貫通ドメインおよび細胞間ドメインは、免疫グロブリンＦｃ受容体ドメイン（またはその膜貫通領域）または発現およびリガンド結合活性の維持に必要な他のいずれかの機能的ドメインを含むことができる。

【0077】

エンベロープは、いずれか１種または複数の異なる型の免疫抑制分子を含むことができる；しかし、一部の実施形態では、エンベロープは、２種またはそれよりも多い異なる免疫抑制分子（例えば、３種もしくはそれよりも多い異なる免疫抑制分子、４種もしくはそれよりも多い異なる免疫抑制分子、またはさらには５種もしくはそれよりも多い異なる免疫抑制分子）の組合せを含む。よって、例えば、一部の実施形態では、エンベロープは、２種またはそれよりも多い異なる免疫チェックポイント分子（例えば、３種もしくはそれよりも多い異なる免疫チェックポイント分子、４種もしくはそれよりも多い異なる免疫チェックポイント分子、またはさらには５種もしくはそれよりも多い異なる免疫チェックポイント分子）、必要に応じて、ＣＴＬＡ－４およびそのリガンド（例えば、Ｂ７－１およびＢ７－２）、ＰＤ－１およびそのリガンド（例えば、ＰＤＬ－１およびＰＤＬ－２）、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３およびそのリガンド（例えば、ＧＡＬ９）、ＴＩＧＩＴおよびそのリガンド（例えば、ＣＤ１５５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡならびにＢＴＬＡおよびそのリガンド（例えば、ＨＶＥＭ）；前述のチェックポイント分子のいずれかの活性断片および誘導体；前述のチェックポイント分子のいずれかに対するアゴニスト抗体等、前述のチェックポイント分子のいずれかのアゴニスト；抗ＣＤ２８抗体等、免疫刺激受容体（共刺激受容体）もしくはそのリガンドを遮断する抗体；または免疫チェックポイント分子の免疫機能を模倣するペプチドから選択される、２種またはそれよりも多い（例えば、３種もしくはそれよりも多い、４種もしくはそれよりも多い、またはさらには５種もしくはそれよりも多い）分子の組合せを含む。一部の実施形態では、エンベロープは、単独で、または最大４種の異なる分子の組合せで、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはこれらのいずれかの組合せ、または他の免疫抑制性分子を含む。一部の実施形態では、エンベロープは、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ－４および抗ＣＤ２８、ＰＤ－１およびＶＩＳＴＡ、Ｂ７－１およびＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－１およびＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－１およびＰＤ－１、Ｂ７－１およびＶＩＳＴＡ、Ｂ７－１および抗ＣＤ２８、Ｂ７－２およびＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－２およびＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－２およびＰＤ－１、Ｂ７－２およびＶＩＳＴＡ、Ｂ７－２および抗ＣＤ２８、ＰＤ－１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１および抗ＣＤ－２８、ＶＩＳＴＡおよび抗ＣＤ２８、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１および抗ＣＤ－２８、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２および抗ＣＤ－２８、またはＶＩＳＴＡおよび抗ＣＤ２８を含む。一部の実施形態では、エンベロープは、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、膜貫通ドメインを含む、またはこれを含むように操作されている。ベクターにおいて使用される免疫抑制分子は、ベクターが投与されるべき哺乳動物の種のものとなるべきである。よって、ヒトにおける使用のため、免疫抑制分子のヒトオルソログを使用するべきであり、このタンパク質は、本分野で周知である。特定の実施形態では、エンベロープに含まれる免疫抑制分子は、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含む、これから本質的になる、またはこれからなる。例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５２０５．２によって同定されるタンパク質によって、ヒトＣＴＬＡ－４が提供され、例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５４８６２．１によって同定されるタンパク質によってＰＤ－Ｌ１が提供される。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ－４分子である（またはこれに由来する）。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、配列番号３のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＴＬＡ－４分子である（またはこれに由来する）。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＰＤＬ－１分子である（またはこれに由来する）。一部の実施形態では、免疫抑制分子は、配列番号４のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含むＰＤＬ－１分子である（またはこれに由来する）。

【0078】

エンベロープは、いずれか適した量または濃度の免疫抑制分子を含むことができる。一部の実施形態では、エンベロープは、免疫抑制分子を含有するように操作されていない同じエンベロープがあるベクターと比較して、導入遺伝子の送達および発現の改善に十分な量の免疫抑制分子を含む。エンベロープがあるベクターを産生する方法に関連してさらに詳細に説明される通り、ネイティブ宿主細胞と比較して免疫抑制分子を過剰発現するように宿主（産生株）細胞を操作することにより、エンベロープに十分な濃度の免疫抑制分子を含む、エンベロープがあるベクターを提供することができる。よって、一部の実施形態では、本明細書に提供されるベクターのエンベロープは、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ宿主細胞から産生される同じエンベロープがあるベクターよりも多い量で、免疫抑制分子のうち１種または複数（または全種）を含む。例えば、本明細書に提供されるベクターのエンベロープは、一部の実施形態では、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ宿主細胞から産生される同じエンベロープがあるベクターよりも多い、約２倍もしくはそれよりも多く、約３倍もしくはそれよりも多く、約５倍もしくはそれよりも多く、約１０倍もしくはそれよりも多く、約２０倍もしくはそれよりも多く、約５０倍もしくはそれよりも多く、またはさらには約１００倍もしくはそれよりも多く（例えば、約１０００倍またはそれよりも多く）の量で、免疫抑制分子のうち１種または複数（または全種）を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ宿主細胞よりも約２倍もしくはそれよりも多く、約３倍もしくはそれよりも多く、約５倍もしくはそれよりも多く、約１０倍もしくはそれよりも多く、約２０倍もしくはそれよりも多く、約５０倍もしくはそれよりも多く、またはさらには約１００倍もしくはそれよりも多く（例えば、約１０００倍またはそれよりも多く）、免疫抑制分子のうち１種または複数（または全種）を過剰発現するように操作される。上に説明されている通り、一部の実施形態では、宿主細胞は、免疫抑制分子を過剰発現するように操作された非腫瘍宿主細胞であり、エンベロープは、免疫抑制分子を過剰発現するように操作された非腫瘍細胞由来の非腫瘍エキソソーム脂質二重層等、非腫瘍ＥＶ脂質二重層を含む。特定の実施形態では、脂質二重層は、免疫抑制分子を過剰発現するように操作された２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、またはＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＨＥＫ２９３Ｔ等、そのいずれかの変形形態、等）由来のＥＶ脂質二重層（例えば、エキソソーム脂質二重層またはエキソソーム）である。ベクター表面（例えば、ベクターエンベロープ中）における免疫抑制分子の量は、当技術分野で公知の様々な技法のいずれかを使用して決定することができる。例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、ベクターの表面における斯かる分子の量を測定し、異なるベクターにおける斯かる分子の相対量を決定することができる。

【0079】

本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、いずれか適した粒径を有することができる。典型的に、エンベロープがあるウイルス粒子は、製造業者のプロトコールに従ってＮＡＮＯＳＩＧＨＴ（商標）ＮＳ３００（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用して測定される場合、約８０～１２０ｎｍ（例えば、約９０～１１５ｎｍ）等、約７５～１５０ｎｍの範囲内の平均粒径を有し、約５０～３００ｎｍ等、約３０～６００ｎｍの範囲内のサイズを有する。ンベロープがあるウイルスベクターはそれぞれ、単一エンベロープ内に単一カプシドまたは複数カプシドを含むことができる。
（Ｃ）他のエンベロープ部分

【0080】

本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、異なる機能をもたらすために、所望の通りエンベロープに追加的な部分をさらに含むことができる。例えば、エンベロープは、ベクターを所望の細胞型または組織型に向ける膜表面タンパク質、例えば、所望の細胞型上のリガンドまたは受容体に特異的に結合する分子を含有するように操作することができる。ＡＡＶ等、一部のウイルスベクターでは、ベクターの細胞特異性または組織特異性は、少なくとも一部には、ウイルスの血清型によって決定することができる。所望の細胞型上のリガンドまたは受容体に結合するエンベロープ結合型標的化部分（例えば、標的化タンパク質）を含有するように本明細書に提供されるベクターを操作することにより、ベクターは、ＡＡＶ血清型特異性のみに依拠する場合と比較して、より正確な標的化と共に、細胞型のより幅広い選択を目標とするための選択肢を可能にする。例えば、ヒト第ＩＸ因子タンパク質を使用して血友病Ｂを処置するために、ベクターのエンベロープは、肝臓細胞表面に特異的にまたは優先的に発現された表面タンパク質に特異的にまたは優先的に結合する部分を含むように操作することができる（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）に特異的に結合する膜結合型抗原結合ドメイン（例えば、クローン８Ｄ７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓのドメイン）等のタンパク質）。ベクターの所望の目的地に応じて、異なる細胞型または組織型を標的とする他の標的化分子を使用することができる。非限定的な例として、肝臓、筋肉、心臓、脳（例えば、ニューロン、グリア細胞、アストロサイト等）、腎臓、肺、膵臓、胃、腸、骨髄、血液細胞（例えば、白血球、リンパ球、赤血球）、卵巣、子宮、精巣、またはいずれかの型の幹細胞のうち１種または複数が挙げられる。ベクターを産生する方法に関連してさらに詳細に説明される通り、高レベルの膜結合型標的化部分を発現するように宿主細胞（産生細胞）を操作することにより、斯かるベクターエンベロープを提供することができる。よって、一部の実施形態では、本発明は、エンベロープを含むウイルスベクターであって、エンベロープが、免疫抑制分子および標的化分子を含む、ウイルスベクターを提供する。

【0081】

エンベロープがあるウイルスベクターは、ベクターの有効性もしくは効率を改善する、または産生を改善する追加的なエレメントをさらに含むことができる。例えば、産生細胞におけるテトラスパニンＣＤ９の外因性発現は、ベクター性能を劣化させることなく、ベクター産生を改善することができる（Shiller et al., Mol Ther Methods Clin Dev, (2018) 9:278-287）。よって、ベクターは、エンベロープにＣＤ９を含むことができる。しかし、一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、対象への核酸の送達におけるベクターの効率もしくは有効性を有意に損なう、ベクターをヒトにおける使用（例えば、ＦＤＡ規制下での）に不適なものとする、またはベクター産生を実質的に損なう、エレメントを実質的にまたは完全に含まない。
ＩＶ．適用および使用方法

【0082】

本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、細胞または対象への核酸（導入遺伝子）の送達および発現に有用である。よって、本発明は、細胞または対象にエンベロープがあるウイルスベクターを投与することにより、細胞または対象に核酸（導入遺伝子）を送達する方法を提供する。

【0083】

一部の実施形態では、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクターは、同じ型のエンベロープがないウイルスベクター、または同じ型だが免疫抑制分子を含むように操作されたエンベロープがない、エンベロープがあるウイルスベクターよりも有効にまたは効率的に、細胞または対象に核酸（導入遺伝子）を送達することができる。一部の実施形態では、より有効なまたは効率的な送達は、細胞または対象における、標的細胞当たりのより多いウイルスゲノムコピー、および／または導入遺伝子産物のより高い発現（適用できる場合は）をもたらす。例えば、一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象に投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ条件下における同じ型のエンベロープがないウイルスベクター（例えば、同じ導入遺伝子、同じ対象、同じ用量および投与経路等であり、唯一の差がベクターである）の投与によって生じるレベルと比較して、約５０％またはそれよりも多く（約７５％もしくはそれよりも多く、約１００％もしくはそれよりも多く、約１２５％もしくはそれよりも多く、約１５０％もしくはそれよりも多く、約１７５％もしくはそれよりも多く、またはさらには約２００％もしくはそれよりも多く）増加させる。また、一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象に投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ条件下における免疫抑制分子がない同じ型のエンベロープがあるウイルスベクター（宿主細胞が、免疫抑制分子を発現するように操作されなかったこと以外は同じ型の産生細胞から産生される）（例えば、同じ導入遺伝子、同じ対象、同じ用量および投与経路等であり、唯一の差がベクターである）の投与によって生じるレベルと比較して、約２０％またはそれよりも多く（約５０％もしくはそれよりも多く、約７５％もしくはそれよりも多く、約１００％もしくはそれよりも多く、約１２５％もしくはそれよりも多く、約１５０％もしくはそれよりも多く、約１７５％もしくはそれよりも多く、またはさらには約２００％もしくはそれよりも多く）増加させる。

【0084】

それに加えてまたはその代わりに、免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクターの一部の実施形態は、ベクターまたは導入遺伝子産物に対する宿主免疫応答、または導入遺伝子送達および／または発現における宿主免疫応答の影響を低下させると考えられる。よって、一部の実施形態では、本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、ベクターの反復投与および／または所与のウイルス型（例えば、特定の血清型のＡＡＶ）に対する既存の免疫を有する対象の投与を可能にする。したがって、一態様では、方法は、エンベロープがあるウイルスベクターに含有される同じ型のウイルスに以前に曝露された対象（ネイティブウイルスへの天然の曝露による、またはウイルスベクターの事前投与による）、またはウイルスに対する既存の免疫を他の理由で有する対象（例えば、ウイルスに対する既存の抗体を有する患者）への、エンベロープがあるウイルスベクターの投与を含む。よって、方法は、適した時間間隔によって隔てられたエンベロープがあるウイルスベクターの用量の２回またはそれよりも多い別々の投与（例えば、少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間もしくは１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、またはさらには少なくとも１年間もしくはそれよりも長い期間によって隔てられた、エンベロープがあるウイルスベクターの用量の２回またはそれよりも多い投与）を含む反復投与スケジュールで、対象にエンベロープがあるウイルスベクターを投与するステップを含むことができる。

【0085】

ベクターは、免疫抑制分子を含むが、ベクターの用量における免疫抑制分子の総量は、典型的に、可溶性免疫抑制剤として投与される場合に使用されるであろう免疫抑制分子の用量未満となる。よって、例えば、ＣＴＬＡ４／Ｉｇは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で免疫抑制剤として使用することができる。しかし、一部の実施形態では、ベクターの単回用量（例えば、２×１０^１１ｖｇ／ｋｇまたはさらには５×１０^１１ｖｇ／ｋｇ）は、約５ｍｇ／ｋｇ未満、約２ｍｇ／ｋｇ未満、約１ｍｇ／ｋｇ未満またはさらには約０．５ｍｇ／ｋｇ未満（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ未満）等、はるかに少ない免疫抑制剤（例えば、膜結合型ＣＴＬＡ４）を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に提供される免疫抑制分子を含むエンベロープがあるベクターは、可溶性免疫抑制剤（例えば、ＣＴＬＡ４／Ｉｇ、アバタセプト）の投与に起因する全体的免疫抑制を最小化する。一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、循環する総抗ＩｇＧ抗体の増加、または抗原特異的抗体または投与されるベクターに由来する抗原以外の抗原によって刺激される活性化ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の増加に従って、投与後２～３週間以内に測定される場合、エンベロープに免疫抑制分子を含むエンベロープがあるウイルスベクター（例えば、エンベロープがあるＡＡＶ）は、対象、特に、ヒトへの有効量での投与後に（例えば、２×１０^１１ｖｇ／ｋｇの用量または５×１０^１１ｖｇ／ｋｇの用量）、１０ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ４／Ｉｇ（または一部の実施形態では、２ｍｇ／ｋｇ ＣＴＬＡ４／Ｉｇ）の単一投与によって引き起こされる全体的免疫抑制よりも低い全体的免疫抑制を引き起こす。

【0086】

エンベロープがあるウイルスベクターは、いずれかの究極的な最終目的のため、細胞または対象に核酸（導入遺伝子）を送達するために投与することができる。一部の実施形態では、この最終目的は、研究目的のため、またはタンパク質の産生もしくは他の生物学的産生プロセスのため、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞において導入遺伝子を発現させることとし得る。他の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、個体における疾患または障害の処置に使用される。疾患または障害は、核酸または導入遺伝子の送達および（該当する場合）発現による処置に対して感受性があるいずれかの疾患または障害となることができる。一部の実施形態では、疾患または障害は、単一遺伝子疾患である。一部の実施形態では、疾患または障害は、リソソーム蓄積症である。一部の実施形態では、疾患または障害は、糖原病である。一部の実施形態では、疾患または障害は、ヘモグロビン障害である。一部の実施形態では、疾患または障害は、筋骨格障害である。一部の実施形態では、疾患または障害は、ＣＮＳ疾患または障害である。一部の実施形態では、疾患または障害は、心臓疾患または脳卒中を含む心血管障害である。一部の実施形態では、疾患は、がんである。

【0087】

疾患のより具体的な、説明的だが非限定的な例として、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病ＡおよびＢ、ニーマン・ピック病（例えば、ニーマン・ピックＡ、ニーマン・ピックＢ、ニーマン・ピックＣ）、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、糖原病、ポンペ病、ウィルソン病、シトルリン血症１型、ＰＫＵ（フェニルケトン尿症）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ベータサラセミアを含むヘモグロビン障害、中枢神経系障害、ならびに筋骨格障害が挙げられる。よって、方法の一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、斯かる疾患もしくは障害を有する、または疾患もしくは障害を発症するリスクがある（例えば、疾患もしくは障害に関する変異を有する、または疾患もしくは障害の家族歴を有する）対象に投与される。さらに、疾患または障害の処置に使用される場合、エンベロープがあるウイルスベクターは、その発現が対象の疾患を処置する、ペイロード核酸を含む。非限定的な例として、核酸は、次のうち１種または複数をコードすることができる：第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤ。

【0088】

方法は、疾患の処置または他のいずれかの目的のために、細胞または対象への治療核酸の送達に使用することもできる。一部の実施形態では、治療核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである。

【0089】

１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする核酸を細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで送達するために、エンベロープがあるウイルスベクターを使用する方法も提供される。一部の実施形態では、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物は、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１）、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼのための１種もしくは複数のガイド配列、および／または１種もしくは複数のドナー配列である。

【0090】

前述の方法のいずれかにおいて、細胞は、いずれかの型の細胞、特に、哺乳動物細胞またはヒト細胞であり得る。対象は、ヒト、非ヒト霊長類、または齧歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター）、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジを含む他の哺乳動物、カエル、または鳥類等、いずれかの対象であってよい。

【0091】

前述の処置方法のいずれかにおいて、治療有効量のエンベロープがあるウイルスベクターが、いずれか適した投与経路によって対象に投与される。有効な用量および投与経路は、適応症に依存し、開業医によって決定することができる。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、全身性に；例えば、静脈内に、動脈内に、腹腔内に、皮下に、経口にまたは吸入によって送達される。他の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、組織（例えば、臓器、腫瘍等）に直接的に送達される、またはＣＮＳ（例えば、くも膜下腔内に、脊髄へと、脳室、視床下部、下垂体、大脳、小脳等、脳の特異的な部分に、等）に投与される。

【0092】

エンベロープがあるウイルスベクターは、エンベロープがあるウイルスベクターと、食塩水等の薬学的に許容される担体等の適切な担体とを含む組成物の一部として使用することができる。ウイルスベクター組成物の製剤化に適した担体、製剤化緩衝剤（formulation buffer）および他の賦形剤は、当技術分野で公知であり、本発明に提供される組成物に適用可能である。

【0093】

特定の実施形態では、血友病Ｂを処置する方法であって、処置を必要とする対象に、本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターを投与するステップを含み、異種導入遺伝子が、ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質（例えば、ヒト第ＩＸ因子ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ００７４０；ヒト第ＩＸ因子（Ｒ３３８Ｌ）「Ｐａｄｕａ」（Monahan et al., (2015) Hum Gene Ther., 26(2):69-81）または他の公知バリアント）をコードし、ウイルスベクターのエンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含む操作された脂質二重層である、方法が提供される。さらに特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８もしくはＡＡＶ２／８、またはｓｃＡＡＶ８もしくはｓｃＡＡＶ２／８）であり、必要に応じて、エンベロープは、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソーム（例えば、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）由来のエキソソーム）によってもたらされる。一部の実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、配列番号２のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＴＬＡを含むまたはこれに由来する。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４は、配列番号３のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤＬ－１は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＰＤＬ－１を含むまたはこれに由来する。一部の実施形態では、ＰＤＬ－１は、配列番号４のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、肝臓に送達され、異種導入遺伝子は、肝臓特異的プロモーターを含む。一部の実施形態では、ベクターは、静脈内に、必要に応じて、肝動脈へと投与される。一部の実施形態では、ベクターは、対象の体重１キログラム当たり２×１０^１１～２×１０^１２ベクターゲノム（ｖｇ）（例えば、対象の体重１キログラム当たり２×１０^１１～８×１０^１１または３×１０^１１～６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ））の用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、２またはそれよりも多い用量（例えば、３もしくはそれよりも多い用量、４もしくはそれよりも多い用量、または５もしくはそれよりも多い用量）を、用量の間が少なくとも１日間（少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間もしくは１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、またはさらには少なくとも１年間もしくはそれよりも長い期間）の間隔で投与するステップを含む。

【0094】

別の特定の実施形態では、血友病Ａを処置する方法であって、処置を必要とする対象に、本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターを投与するステップを含み、異種導入遺伝子が、ヒト第ＶＩＩＩ因子（例えば、ヒトＦ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ２ＶＦ４５）、Ｂ－ドメイン欠失（ＢＤＤ）ヒトＦ８遺伝子のＳＱ－ＦＶＩＩＩバリアント（Lind et al., (1995) Eur J Biochem. Aug 15;232(1):19-27）または他の公知バリアント）をコードし、ウイルスベクターのエンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含む操作された脂質二重層である、方法が提供される。さらに特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８もしくはｓｃＡＡＶ８、またはｓｃＡＡＶ８もしくはｓｃＡＡＶ２／８）であり、必要に応じて、エンベロープは、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された宿主細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）から産生されたエキソソームによってもたらされる。一部の実施形態では、ヒト第ＶＩＩＩ因子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、または配列番号１のアミノ酸配列に由来する。一部の実施形態では、ヒト第ＶＩＩＩ因子は、配列番号１のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＴＬＡを含むまたはこれに由来する。一部の実施形態では、ＣＴＬＡ－４は、配列番号３のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤＬ－１は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＰＤＬ－１を含むまたはこれに由来する。一部の実施形態では、ＰＤＬ－１は、配列番号４のアミノ酸配列に対し約８０％、８５％、９０％または９９％のいずれかよりも高い同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、肝臓に送達され、異種導入遺伝子は、肝臓特異的プロモーターを含む。一部の実施形態では、ベクターは、静脈内に、必要に応じて、肝動脈へと投与される。一部の実施形態では、ベクターは、対象の体重１キログラム当たり２×１０^１１～２×１０^１２ベクターゲノム（ｖｇ）（例えば、対象の体重１キログラム当たり２×１０^１１～８×１０^１１または３×１０^１１～６×１０^１１ベクターゲノム（ｖｇ））の用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、２またはそれよりも多い用量（例えば、３もしくはそれよりも多い用量、４もしくはそれよりも多い用量、または５もしくはそれよりも多い用量）を、用量の間が少なくとも１日間（少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間もしくは１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、またはさらには少なくとも１年間もしくはそれよりも長い期間）の間隔で投与するステップを含む。
ＶＩ．製造

【0095】

本明細書に提供されるエンベロープがあるウイルスベクターは、いずれか適した方法によって産生することができる。非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１３／０２０５５９によって提供される。

【0096】

特に有利な一方法は、ベクターのエンベロープに含まれることが所望される免疫抑制分子を過剰発現するように操作された産生細胞系からエンベロープがあるベクターを産生するステップが関与する。よって、（ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、（ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとによって、本明細書に記載されている通り、免疫抑制分子を含むエンベロープを有するエンベロープがあるウイルスベクターを調製する方法が本明細書に提供される。
（Ａ）産生細胞操作

【0097】

ウイルスベクターにおいて使用されるべきウイルスの従来の産生に適したいずれかの産生細胞を使用して、本発明のエンベロープがあるウイルスベクターを産生することができる。適した産生細胞として、２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＨＥＫ２９３Ｔなど）およびＨｅｌａ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。産生細胞は、いずれか適した方法によって、所望の免疫抑制分子を発現するように操作することができる。本発明の一部の実施形態では、免疫抑制分子は、安定にまたは一過性に、産生細胞への免疫抑制分子をコードする外因性核酸（例えば、プラスミドまたは他のベクター）のトランスフェクションによって発現される。斯かる外因性核酸の発現によって、産生細胞は、免疫抑制分子をコードする外因性核酸をトランスフェクトされていない同じ産生細胞と比較して、免疫抑制分子を過剰発現し、ひいては、産生細胞から出芽するエンベロープがあるウイルスは、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ産生細胞から出芽するエンベロープがあるウイルスと比較して、増加した量の免疫抑制分子を有する。一部の実施形態では、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ宿主細胞よりも約２倍もしくはそれよりも多く、約３倍もしくはそれよりも多く、約５倍もしくはそれよりも多く、約１０倍もしくはそれよりも多く、約２０倍もしくはそれよりも多く、約５０倍もしくはそれよりも多く、またはさらには約１００倍もしくはそれよりも多く免疫抑制分子を過剰発現するように操作された宿主細胞。

【0098】

免疫抑制分子の発現は、構成的プロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）等のプロモーターによって駆動され得る。一部の実施形態では、エフェクター分子をコードする遺伝子の後に、エフェクター分子コード領域下流のポリアデニル化シグナル（例えば、ヘモグロビンポリアデニル化シグナル）が続く。一部の実施形態では、イントロンが、プロモーターの下流に挿入される。例えば、プロモーターの下流のヘモグロビン由来人工イントロンを用いて、エフェクター分子産生を増加させることができる。一過性トランスフェクションのための方法として、リン酸カルシウムトランスフェクションが挙げられるがこれに限定されない。単一のまたは組み合わせた免疫モジュレーターを発現する安定した細胞系を産生するための方法として、レトロウイルス遺伝子移入またはコンカテマートランスフェクションと、それに続く選択が挙げられるがこれらに限定されない（Throm et al. (2009) Blood, 113(21): 5104-5110）。産生細胞は、エンベロープがあるベクターにおいて所望され得る通り、個々の免疫抑制分子を発現するように、または免疫抑制分子の異なる組合せを発現するように、この仕方で操作される。産生細胞は、生産性を増加させるように、当技術分野で公知の他の仕方で操作することもできる。例えば、産生細胞は、テトラスパニンＣＤ９を過剰発現するように操作して、ベクター産生を改善することができる（Shiller et al., (2018) Mol Ther Methods Clin Dev, 9:278-287）。
（Ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターの産生

【0099】

本明細書に記載されているエンベロープがあるベクターは、いずれか適した技法によって、操作された産生細胞から産生することができる。使用される特定の技法は、エンベロープがあるウイルスベクターにおいて使用されるウイルスの型に依存する。例えば、エンベロープがあるＡＡＶベクターは、ウイルス産生遺伝子（例えば、Ｒｅｐ／Ｃａｐおよびヘルパー遺伝子）をコードするプラスミドまたは他の発現ベクターと、ＡＡＶ ＩＴＲおよびペイロード核酸を含むプラスミドまたは他の構築物とをコトランスフェクトすることにより産生することができる。トランスフェクションは、リン酸カルシウムトランスフェクション、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）トランスフェクションを使用することによる、またはＨＳＶに基づく産生系を使用することによる等、いずれかの様式で達成することができる（Booth et al. (2004) Gene Ther, 11(10):829-837）。ＡＡＶの場合、ウイルス遺伝子として、ＡＡＶ２ ＩＴＲに挟まれたＡＡＶ２、５、６、８または９構造遺伝子ＲｅｐおよびＣａｐ、ならびに必要なヘルパーウイルス遺伝子を挙げることができるがこれらに限定されない（Ayuso et al. (2014) Hum Gene Ther, 25:977-987）。産生は、血清ありまたはなしの接着または懸濁産生系（adherent or suspension production system）を使用することによる等、いずれか適した様式で行うことができる（Ayuso et al. (2014) Hum Gene Ther, 25:977-987；Xiao et al. (1998), J Virol, 72(3): 2224-2232；Ryu et al. (2013) Mol Ther, Volume 21.B、この方法は、必要に応じて、次の改変を含むことができる：塩化セシウムまたはイオジキサノール勾配精製に先立ち、清澄化された収集された上清が、親和性精製カラムにおいて使用されて、エンベロープがあるウイルスを富化する）。エンベロープがあるウイルスベクターが、本明細書に記載されている標的化部分を含む場合、標的化部分は、単離／精製に役立つ親和性リガンドとして使用することができる。エンベロープがあるＡＡＶベクターを産生するための他の方法が、公知であり、産生細胞が、所望の免疫抑制分子を過剰発現するように操作されるのであれば、異なる型のエンベロープがあるウイルス（例えば、エンベロープがあるレンチウイルス）を産生するための方法と同様に使用することができる。レンチウイルスに基づくベクターの場合、必要なウイルス遺伝子は、同様の精製方法を使用して、複数プラスミドをコトランスフェクトすることにより供給される。

【0100】

ベクターは、経験的に決定される期間の後に収集され、次いで、使用される精製がウイルスからエンベロープを除去しない限り、当技術分野で公知の様々な技法のいずれかを使用して精製される。精製技法として、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィーおよび接線流濾過を挙げることができるがこれらに限定されない。連続的超遠心分離を含む超遠心分離を使用して、エンベロープがあるウイルスベクターを精製することができる。

【0101】

産生細胞１リットル当たりの産生されるエンベロープがあるウイルスベクターの量は、様々な方法を使用して増加させることができる。そのような方法として、発酵中の産生細胞への、アポトーシスを抑制するまたは細胞分裂を中断する分子の添加を挙げることができるがこれらに限定されない。産生細胞膜の脂質組成を変更する分子または化合物を使用して、１リットル当たりのベクター産生を増加させることもできる。その上、エキソソーム産生を増加させる化合物または分子は、膜融合性分子（membrane fusigenic molecule）を含む。

【0102】

よって、一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されているエンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、（ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、（ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとを含む方法を提供する。エンベロープがあるウイルスベクターは、本発明のエンベロープがあるウイルスベクターに関する、本明細書に記載されている特色およびエレメントのいずれかを有することができる。さらに、産生細胞は、以前のセクションに記載されている特色およびエレメントのいずれかを有することができ、エンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法は、例えば、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸で産生細胞を形質転換することにより、産生細胞を提供するステップをさらに含むことができる。一部の実施形態では、宿主細胞は、免疫抑制分子を過剰発現するように操作されていない同じ宿主細胞よりも約２倍もしくはそれよりも多く、約３倍もしくはそれよりも多く、約５倍もしくはそれよりも多く、約１０倍もしくはそれよりも多く、約２０倍もしくはそれよりも多く、約５０倍もしくはそれよりも多く、またはさらには約１００倍もしくはそれよりも多く、免疫抑制分子を過剰発現するように操作される（例えば、免疫抑制分子をコードする１種または複数の外因性核酸を含む）。一部の実施形態では、宿主細胞は、２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３Ｆ等）等、非腫瘍細胞である。

【0103】

エンベロープがあるウイルスベクターの収集は、培養されたウイルス産生細胞の培養液からエンベロープがあるウイルスを単離するステップを含むことができる。収集は、ウイルスからエンベロープを除去しないいずれかの方法によって行うことができる。よって、例えば、収集は、超遠心分離または他の適した方法による、細胞培養物からのエンベロープがあるウイルスの分離を含むことができる。方法は、好ましくは、洗浄剤の使用を避ける。さらに、産生細胞の溶解は、培養物中にエンベロープがないウイルスを放出するため、方法は、好ましくは、エンベロープがあるウイルスの収集に先立つ産生細胞の溶解を最小化するまたは避ける。

【0104】

一部の実施形態では、エンベロープがあるウイルスベクターは、エンベロープがあるＡＡＶベクターであり、ウイルス産生細胞は、（ｉ）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸、（ｉｉ）導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸、ならびに（ｉｉｉ）ＡＡＶヘルパー遺伝子をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系に一過性に導入される。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系において安定に維持される。一部の実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸は、産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる。一部の実施形態では、ＡＡＶゲノムは、２個のＡＡＶ ＩＴＲを含む（例えば、ウイルスゲノムは、ＡＡＶ ＩＴＲによって挟まれる異種導入遺伝子を含む）。一部の実施形態では、１種または複数のＡＡＶヘルパー機能は、プラスミド、アデノウイルス、細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のうち１種または複数によってもたらされる。一部の実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能は、アデノウイルスＥ１Ａ機能、アデノウイルスＥ１Ｂ機能、アデノウイルスＥ２Ａ機能、アデノウイルスＥ４機能およびアデノウイルスＶＡ機能のうち１種または複数を含む。一部の実施形態では、１種または複数のＡＡＶヘルパー機能は、宿主細胞ゲノムに安定に組み込まれ、他のＡＡＶヘルパー機能は、一過性に送達される。例えば、一部の実施形態では、ＡＡＶエンベロープがあるベクターは、アデノウイルスＥ１ＡおよびＥ１Ｂ機能を発現する２９３細胞において調製される。他のヘルパー機能は、例えば、プラスミドまたは複製欠損アデノウイルスによって一過性に送達される。一部の実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能は、ＨＳＶ ＵＬ５機能、ＨＳＶ ＵＬ８機能、ＨＳＶ ＵＬ５２機能およびＨＳＶ ＵＬ２９機能のうち１種または複数を含む。

【0105】

一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されているエンベロープがあるレンチウイルスベクターを産生する方法であって、（ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、（ｂ）エンベロープがあるレンチウイルスベクターを収集するステップとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである。一部の実施形態では、ウイルス産生細胞は、（ａ）レンチウイルスｇａｇ遺伝子をコードする核酸、（ｂ）レンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする核酸、（ｃ）導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含むレンチウイルス移入ベクターをコードする核酸を含み、３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部は、異種調節エレメントまたは次に記載されているものによって置き換えられる（Ryu et al. (2013) Mol Ther 2013, Volume 21.B.；Meliani et al. (2015) Hum Gene Ther Methods, 26:45-53）。
ＶＩ．キット

【0106】

本発明は、本発明の方法に従って、本明細書に記載されているエンベロープがあるウイルスベクターを細胞または対象に投与するためのキットも提供する。キットは、本発明のいずれかのエンベロープがあるウイルスベクターを含むことができる。例えば、キットは、本明細書に記載されているエンベロープがあるＡＡＶベクターまたはエンベロープがあるレンチウイルスベクターを含むことができる。

【0107】

一部の実施形態では、キットは、エフェクターベクター送達のための指示をさらに含む。本明細書に記載されているキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および本明細書に記載されているいずれかの方法を行うための指示を備える添付文書を含む、商業的および利用者の観点から望ましい他の材料をさらに含むことができる。適した包装材料が含まれていてもよく、これは、例えば、バイアル（密閉されたバイアル等）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはビニール袋）などを含む、当技術分野で公知のいずれかの包装材料であってよい。このような製造品は、さらに滅菌および／または密閉することができる。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載されている方法および／またはエフェクターベクターのいずれかを使用して、本明細書に記載されている疾患または障害（disease disorder）を処置するための指示を含む。キットは、個体への注射に適した薬学的に許容される担体、ならびに緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および哺乳動物に注射を行うための指示を備える添付文書のうち１種または複数を含むことができる。

【0108】

一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載されている緩衝剤および／または薬学的に許容される賦形剤のうち１種または複数をさらに含有する（例えば、REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N.J. 1991に記載されている通り)。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載されている１種または複数の薬学的に許容される賦形剤、担体、溶液および／または追加的な成分を含む。本明細書に記載されているキットは、単回単位投薬量または複数回剤形（multidosage form）において包装することができる。キットの内容物は一般に、無菌として製剤化され、凍結乾燥することができる、または実質的に等張の溶液として提供することができる。
例示的な実施形態

【0109】

次の実施形態は、単に、本明細書に提供される組成物および方法をさらに説明する目的で提示されており、本発明を限定するものではない：

【0110】

実施形態１．エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物であって、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープに囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子（すなわち、免疫抑制分子）を含む、組成物。

【0111】

実施形態２．免疫エフェクター機能が、免疫エフェクター分子がないベクターと比較して、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる、実施形態１に記載の組成物。

【0112】

実施形態３．免疫エフェクター機能が、免疫インヒビターを刺激する、実施形態１または２に記載の組成物。

【0113】

実施形態４．免疫エフェクター機能が、免疫刺激分子を阻害する、実施形態１または２に記載の組成物。

【0114】

実施形態５．エンベロープが、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子を含む、実施形態１～４のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0115】

実施形態６．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、実施形態１～５のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0116】

実施形態７．エンベロープが、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、実施形態１～６のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0117】

実施形態８．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態１～７のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0118】

実施形態９．エンベロープが、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける標的化分子をさらに含む、実施形態１～８のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0119】

実施形態１０．標的化分子が、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する、実施形態９に記載の組成物。

【0120】

実施形態１１．標的化分子が、抗体である、実施形態１０に記載の組成物。

【0121】

実施形態１２．抗体が、抗体８Ｄ７である、実施形態１１に記載の組成物。

【0122】

実施形態１３．１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態９～１２のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0123】

実施形態１４．ウイルスベクターが、ウイルス粒子を含む、実施形態１～１３のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0124】

実施形態１５．ウイルス粒子が、ウイルスカプシドおよびウイルスゲノム、またはレトロウイルス等のエンベロープがあるカプシドおよびウイルスゲノムを含む、実施形態１４に記載の組成物。

【0125】

実施形態１６．ウイルスゲノムが、１種または複数の異種導入遺伝子を含む、実施形態１５に記載の組成物。

【0126】

実施形態１７．異種導入遺伝子が、ポリペプチドをコードする、実施形態１６に記載の組成物。

【0127】

実施形態１８．異種導入遺伝子が、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする、実施形態１７に記載の組成物。

【0128】

実施形態１９．治療ポリペプチドが、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤである、実施形態１８に記載の組成物。

【0129】

実施形態２０．異種導入遺伝子が、治療核酸をコードする、実施形態１６に記載の組成物。

【0130】

実施形態２１．治療核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである、実施形態２０に記載の組成物。

【0131】

実施形態２２．異種導入遺伝子が、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする、実施形態１６に記載の組成物。

【0132】

実施形態２３．１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物が、ＣＡＳヌクレアーゼおよび／または１種もしくは複数のガイド配列および／または１種もしくは複数のドナー配列である、実施形態２２に記載の組成物。

【0133】

実施形態２４．ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたはレンチウイルスベクターである、実施形態１～２３のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0134】

実施形態２５．ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、実施形態１～２４のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0135】

実施形態２６．ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む、実施形態２５に記載の組成物。

【0136】

実施形態２７．ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含む、実施形態２５または２６に記載の組成物。

【0137】

実施形態２８．ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶ ＩＴＲが、同じ血清型または異なる血清型に由来する、実施形態２７に記載の組成物。

【0138】

実施形態２９．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１～２４に記載の組成物。

【0139】

実施形態３０．レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスに由来する、実施形態２９に記載の組成物。

【0140】

実施形態３１．レンチウイルスベクターが、非複製型である、実施形態２９または３０に記載の組成物。

【0141】

実施形態３２．レンチウイルスベクターが、非組込み型である、実施形態２９～３０のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0142】

実施形態３３．実施形態１～３２のいずれか一実施形態に記載の組成物と、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【0143】

実施形態３４．個体に導入遺伝子を送達する方法であって、エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物を個体に投与するステップを含み、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープに囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子を含み、ウイルス粒子が、導入遺伝子を含むウイルスゲノムを含む、方法。

【0144】

実施形態３５．疾患または障害を有する個体を処置する方法であって、エンベロープがあるウイルスベクターを含む組成物を、それを必要とする個体に投与するステップを含み、エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープに囲まれたベクター粒子を含み、エンベロープが、免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子を含み、ウイルス粒子が、治療導入遺伝子を含むウイルスゲノムを含む、方法。

【0145】

実施形態３６．免疫エフェクター機能が、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる、実施形態３４または３５に記載の方法。

【0146】

実施形態３７．免疫エフェクター機能が、免疫インヒビターを刺激する、実施形態３４～３６のいずれか一実施形態に記載の組成物。

【0147】

実施形態３８．免疫エフェクター機能が、免疫刺激分子を阻害する、実施形態３４～３６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0148】

実施形態３９．エンベロープが、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子を含む、実施形態３４～３８のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0149】

実施形態４０．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、実施形態３４～３９のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0150】

実施形態４１．エンベロープが、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、実施形態３４～４０のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0151】

実施形態４２．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態３４～４１のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0152】

実施形態４３．エンベロープが、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける標的化分子をさらに含む、実施形態３４～４２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0153】

実施形態４４．標的化分子が、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する、実施形態４３に記載の方法。

【0154】

実施形態４５．標的化分子が、抗体である、実施形態４４に記載の方法。

【0155】

実施形態４６．抗体が、抗体８Ｄ７である、実施形態４５に記載の方法。

【0156】

実施形態４７．１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態４３～４６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0157】

実施形態４８．異種導入遺伝子が、ポリペプチドをコードする、実施形態３４～４７のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0158】

実施形態４９．異種導入遺伝子が、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする、実施形態４８に記載の方法。

【0159】

実施形態５０．治療ポリペプチドが、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、ＳＭＮ、ＲＰＥ６５、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、ＣＨＭ、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたはＡＬＤである、実施形態４９に記載の方法。

【0160】

実施形態５１．異種導入遺伝子が、治療核酸をコードする、実施形態３４～４７のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0161】

実施形態５２．治療核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである、実施形態５１に記載の方法。

【0162】

実施形態５３．異種導入遺伝子が、１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物をコードする、実施形態５２に記載の方法。

【0163】

実施形態５４．１種または複数の遺伝子編集遺伝子産物が、ＣＡＳヌクレアーゼおよび／または１種もしくは複数のガイド配列および／または１種もしくは複数のドナー配列である、実施形態３４～５３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0164】

実施形態５５．ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたはレンチウイルスベクターである、実施形態３４～５４のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0165】

実施形態５６．ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、実施形態３４～５５のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0166】

実施形態５７．ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む、実施形態５６に記載の方法。

【0167】

実施形態５８．ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶウイルスゲノムを含む、実施形態５６または５７に記載の方法。

【0168】

実施形態５９．ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶ ＩＴＲが、同じ血清型または異なる血清型に由来する、実施形態５８に記載の方法。

【0169】

実施形態６０．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態３４～５５に記載の方法。

【0170】

実施形態６１．レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスに由来する、実施形態６０に記載の方法。

【0171】

実施形態６２．レンチウイルスベクターが、非複製型である、実施形態６０または６１に記載の方法。

【0172】

実施形態６３．レンチウイルスベクターが、非組込み型である、実施形態６０～５２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0173】

実施形態６４．組成物が、エンベロープがあるウイルスベクターと、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である、実施形態３４～６３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0174】

実施形態６５．個体が、ヒトである、実施形態３４～６４のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0175】

実施形態６６．疾患または障害が、単一遺伝子疾患である、実施形態３５に記載の方法。

【0176】

実施形態６７．疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症またはベータサラセミアである、実施形態３５に記載の方法。

【0177】

実施形態６８．免疫原性が低下したエンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、ａ）エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞を培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる、１種または複数の膜結合型免疫エフェクター機能をコードする核酸を含む、ステップと、ｂ）エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとを含む方法。

【0178】

実施形態６９．免疫エフェクター機能が、エンベロープがあるベクターの免疫原性を低下させる、実施形態６８に記載の方法。

【0179】

実施形態７０．免疫エフェクター機能が、免疫インヒビターを刺激する、実施形態６８または６９に記載の方法。

【0180】

実施形態７１．免疫エフェクター機能が、免疫刺激分子を阻害する、実施形態６８または６９に記載の方法。

【0181】

実施形態７２．ウイルス産生細胞が、免疫インヒビターを刺激する分子および免疫刺激分子を阻害する分子をコードする核酸を含む、実施形態６８～７１のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0182】

実施形態７３．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、実施形態６８～７２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0183】

実施形態７４．ウイルス産生細胞が、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡをコードする核酸を含む、実施形態６８～７３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0184】

実施形態７５．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態６８～７４のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0185】

実施形態７６．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞に一過性に導入される、実施形態６８～７５のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0186】

実施形態７７．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞において安定に維持される、実施形態６８～７６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0187】

実施形態７８．免疫エフェクター機能をもたらす１種または複数の分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる、実施形態７７に記載の方法。

【0188】

実施形態７９．ウイルス産生細胞が、ベクターを１種または複数の細胞型に向ける１種または複数の標的化分子をコードする核酸を含む、実施形態６８～７８のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0189】

実施形態８０．標的化分子が、エンベロープがあるベクターに組織特異性を付与する、実施形態７９に記載の方法。

【0190】

実施形態８１．標的化分子が、抗体である、実施形態８０に記載の方法。

【0191】

実施形態８２．抗体が、抗体８Ｄ７である、実施形態７１に記載の方法。

【0192】

実施形態８３．１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態７９～８２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0193】

実施形態８４．１種または複数の標的化分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞に一過性に導入される、実施形態７９～８３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0194】

実施形態８５．１種または複数の標的化分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞において安定に維持される、実施形態７９～８４のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0195】

実施形態８６．１種または複数の分子標的化分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる、実施形態８５に記載の方法。

【0196】

実施形態８７．エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープがあるＡＡＶベクターである、実施形態６８～８６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0197】

実施形態８８．ウイルス産生細胞が、ａ）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸、ｂ）導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸、ならびにｃ）ＡＡＶヘルパー機能を含む、実施形態８７に記載の方法。

【0198】

実施形態８９．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系に一過性に導入される、実施形態８８に記載の方法。

【0199】

実施形態９０．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系において安定に維持される、実施形態８８に記載の方法。

【0200】

実施形態９１．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる、実施形態９０に記載の方法。

【0201】

実施形態９２．ｒＡＡＶゲノムが、２個のＡＡＶ ＩＴＲを含む、実施形態８８～９１のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0202】

実施形態９３．１種または複数のＡＡＶヘルパー機能が、プラスミド、アデノウイルス、細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸、または単純ヘルペスウイルス（herpes simples virus）（ＨＳＶ）のうち１種または複数によってもたらされる、実施形態８８～９２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0203】

実施形態９４．ＡＡＶヘルパー機能が、アデノウイルスＥ１Ａ機能、アデノウイルスＥ１Ｂ機能、アデノウイルスＥ２Ａ機能、アデノウイルスＥ４機能およびアデノウイルスＶＡ機能のうち１種または複数を含む、実施形態８８～９３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0204】

実施形態９５．ＡＡＶヘルパー機能が、ＨＳＶ ＵＬ５機能、ＨＳＶ ＵＬ８機能、ＨＳＶ ＵＬ５２機能およびＨＳＶ ＵＬ２９機能のうち１種または複数を含む、実施形態８８～９３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0205】

実施形態９６．エンベロープがあるウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態６８～８６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0206】

実施形態９７．レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである、実施形態９６に記載の方法。

【0207】

実施形態９８．ウイルス産生細胞が、ａ）レンチウイルスｇａｇ遺伝子をコードする核酸、ｂ）レンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする核酸、ｃ）導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含むレンチウイルス移入ベクターをコードする核酸を含み、３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部が、異種調節エレメントによって置き換えられる、実施形態９６または９７に記載の方法。

【0208】

実施形態９９．エンベロープがあるベクターが、さらに精製される、実施形態６８～９８のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0209】

実施形態１００．実施形態１～３３のいずれか一実施形態に記載の組成物を含むキット。

【0210】

実施形態１０１．使用のための指示をさらに含む、実施形態１００に記載のキット。

【0211】

実施形態１０２．実施形態３４～６７に記載の方法に従った、それを必要とする個体への核酸の送達における使用のための組成物。

【0212】

実施形態１０３．実施形態３４～６７に記載の方法に従った、それを必要とする個体における疾患または障害の処置における使用のための組成物。

【0213】

実施形態１０４．それを必要とする個体に核酸を送達するための医薬の製造における、実施形態１～３３のいずれか一実施形態に記載の組成物の使用。

【0214】

実施形態１０５．疾患または障害を有する個体を処置するための医薬の製造における、実施形態１～３３のいずれか一実施形態に記載の組成物の使用。

【0215】

実施形態１０６．疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症またはベータサラセミアである、実施形態１０５に記載の使用。

【0216】

実施形態１０７．実施形態１～３３のいずれか一実施形態に記載の組成物を含む製造品。

【0217】

実施形態１０８．エンベロープに囲まれたウイルス粒子を含む、エンベロープがあるウイルスベクターであって、ウイルス粒子が、異種導入遺伝子を含み、エンベロープが、脂質二重層および１種または複数の免疫抑制分子を含む、エンベロープがあるウイルスベクター。

【0218】

実施形態１０９．エンベロープがあるウイルスが、脂質二重層に免疫抑制分子がない同じ型のベクターと比較して、低下した免疫原性を有する、実施形態１０８に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0219】

実施形態１１０．１種または複数の免疫抑制分子が、１種または複数の免疫チェックポイントタンパク質を含む、実施形態１０８または１０９に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0220】

実施形態１１１．１種または複数の免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、実施形態１０８～１１０のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0221】

実施形態１１２．エンベロープが、２種もしくはそれよりも多い、３種もしくはそれよりも多い、または４種もしくはそれよりも多い異なる免疫抑制分子を含む；または２種もしくはそれよりも多い、３種もしくはそれよりも多い、または４種もしくはそれよりも多い異なるチェックポイントタンパク質を含む、実施形態１０８～１１１のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0222】

実施形態１１３．エンベロープが、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１；ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２；ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ；ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ；またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、実施形態１０８～１１２のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0223】

実施形態１１４．免疫抑制分子の１種または複数が、膜貫通ドメインを含む、実施形態１０８～１１３のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0224】

実施形態１１５．エンベロープが、標的化分子をさらに含む、実施形態１０８～１１４のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0225】

実施形態１１６．標的化分子が、エンベロープがあるベクターに細胞特異性または組織特異性を付与する、実施形態１１５に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0226】

実施形態１１７．標的化分子が、抗体である、実施形態１１６に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0227】

実施形態１１８．１種または複数の標的化分子が、膜貫通ドメインを含む、実施形態１１５～１１７のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0228】

実施形態１１９．エンベロープが、１種または複数の免疫抑制分子をコードする１種または複数の外因性核酸を含む細胞由来の細胞膜の部分を含む、実施形態１０８～１１８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0229】

実施形態１２０．ウイルス粒子が、ウイルスカプシドおよびウイルスゲノムを含み、ウイルスゲノムが、異種導入遺伝子を含む、実施形態１１９に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0230】

実施形態１２１．異種導入遺伝子が、ポリペプチドをコードする、実施形態１２０に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0231】

実施形態１２２．異種導入遺伝子が、治療ポリペプチドまたはレポーターポリペプチドをコードする、実施形態１２１に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0232】

実施形態１２３．異種導入遺伝子が、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ミオチューブラリン、生存運動ニューロン（survival motor neuron）タンパク質（ＳＭＮ）、レチノイドイソメロヒドロラーゼ（retinoid isomerohydrolase）（ＲＰＥ６５）、ＮＡＤＨ－ユビキノンオキシドレダクターゼ鎖４、全脈絡膜萎縮タンパク質（Choroideremia protein）（ＣＨＭ）、ハンチンチン、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、酸性ベータ－グルコシダーゼ、アルファ－グルコシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、β－グロビン、γ－グロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼまたは副腎白質ジストロフィータンパク質（ＡＬＤ）をコードする、実施形態１２２に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0233】

実施形態１２４．異種導入遺伝子が、治療核酸をコードする、実施形態１２０に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0234】

実施形態１２５．治療核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡザイムまたはＤＮＡザイムである、実施形態１２４に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0235】

実施形態１２６．異種導入遺伝子が、１種または複数の遺伝子編集用生成物をコードする、実施形態１２０に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0236】

実施形態１２７．１種または複数の遺伝子編集用生成物が、ＲＮＡガイドヌクレアーゼ、ガイド核酸および／またはドナー核酸である、実施形態１２６に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0237】

実施形態１２８．ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を含む、実施形態１０８～１２７のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0238】

実施形態１２９．ＡＡＶベクターが、ヒトＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１またはＡＡＶ１２由来のカプシドを含む、実施形態１２８に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0239】

実施形態１３０．ＡＡＶが、逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含むＡＡＶ ウイルスゲノムを含み、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶ ＩＴＲが、同じＡＡＶ血清型または異なるＡＡＶ血清型に由来する、実施形態１２８または１２９に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0240】

実施形態１３１．エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＩＸ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶであり、エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、実施形態１０８または１２８～１３０のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0241】

実施形態１３２．エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、実施形態１０８または１２８～１３１のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0242】

実施形態１３３．エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶであり、エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、実施形態１０８または１２８～１３０のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0243】

実施形態１３４．エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、実施形態１３３に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0244】

実施形態１３５．ウイルス粒子が、レンチウイルスベクターを含む、実施形態１０８～１２７のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0245】

実施形態１３６．レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである、実施形態１３５に記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0246】

実施形態１３７．対象に単回用量として投与されると、対象に投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、同じ型のエンベロープがないウイルスベクターを同じ量でかつ同じ条件下で投与することによって生じる導入遺伝子発現と比較して、約５０％またはそれよりも多く増加させる、実施形態１０８～１３６のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0247】

実施形態１３８．対象に単回用量として投与してから３週間後の導入遺伝子発現レベルを、免疫抑制分子がない同じ型のエンベロープがあるウイルスベクターを同じ量で同じ条件下で投与することによって生じる導入遺伝子発現と比較して、約２０％またはそれよりも多く増加させる、実施形態１０８～１３７のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクター。

【0248】

実施形態１３９．実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターと、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む組成物。

【0249】

実施形態１４０．細胞または対象に導入遺伝子を送達する方法であって、細胞または対象に、実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【0250】

実施形態１４１．対象が、導入遺伝子の送達および発現によって処置することができる疾患または状態を有する、実施形態１４０に記載の方法。

【0251】

実施形態１４２．対象における疾患または障害を処置する方法であって、対象に、実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【0252】

実施形態１４３．対象が、ヒトである、実施形態１４０～１４２のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0253】

実施形態１４４．疾患または障害が、単一遺伝子疾患である、実施形態１４１～１４３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0254】

実施形態１４５．疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ニーマン・ピック病またはベータサラセミアである、実施形態１４１～１４３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0255】

実施形態１４６．疾患または障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、実施形態１４１～１４３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0256】

実施形態１４７．対象が、血友病Ｂを有し、エンベロープがあるウイルスベクターが、第ＩＸ因子をコードする異種導入遺伝子を含むＡＡＶを含み、エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、実施形態１４１～１４３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0257】

実施形態１４８．対象が、血友病Ａを有し、エンベロープがあるウイルスベクターが、ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードする異種導入遺伝子を含むエンベロープがあるＡＡＶを含み、エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含有するように操作されたエキソソームである、実施形態１４１～１４３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0258】

実施形態１４９．エンベロープが、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を過剰発現するように操作された産生細胞に由来するエキソソームである、実施形態１４７または１４８に記載の方法。

【0259】

実施形態１５０．対象に、２またはそれよりも多い用量のエンベロープがあるウイルスベクターを、各用量の間が１日間またはそれよりも長い間隔で投与するステップを含む、実施形態１４０～１４９のいずれかに記載の方法。

【0260】

実施形態１５１．実施形態１０８～１３８のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターを産生する方法であって、エンベロープがあるウイルス粒子を生成する条件下で、ウイルス産生細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養するステップであって、ウイルス産生細胞が、１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸を含む、ステップと、エンベロープがあるウイルスベクターを収集するステップとを含む方法。

【0261】

実施形態１５２．ウイルス産生細胞が、膜結合型免疫抑制分子をコードする外因性核酸を含む、実施形態１５１に記載の方法。

【0262】

実施形態１５３．ウイルス産生細胞が、膜結合型免疫抑制分子をコードする異種核酸を含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。

【0263】

実施形態１５４．膜結合型免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＧＡＬ９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡまたはＨＶＥＭのうち１種または複数を含む、実施形態１５１～１５３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0264】

実施形態１５５．膜結合型免疫抑制分子が、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡおよびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２およびＶＩＳＴＡ、またはＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡを含む、実施形態１５１～１５３のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0265】

実施形態１５６．ウイルス産生細胞が、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１をコードする異種核酸を含む、実施形態１５１～１５５のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0266】

実施形態１５７．１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞に一過性に導入される、実施形態１５１～１５６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0267】

実施形態１５８．１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞において安定に維持される、実施形態１５１～１５６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0268】

実施形態１５９．１種または複数の膜結合型免疫抑制分子をコードする核酸が、ウイルス産生細胞のゲノムに組み込まれる、実施形態１５８に記載の方法。

【0269】

実施形態１６０．ウイルス産生細胞が、１種または複数の標的化分子をコードする核酸を含む、実施形態１５１～１５９のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0270】

実施形態１６１．エンベロープがあるウイルスベクターが、エンベロープがあるＡＡＶベクターである、実施形態１５１～１６０のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0271】

実施形態１６２．ウイルス産生細胞が、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする核酸、導入遺伝子および少なくとも１個のＩＴＲを含むＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸、ならびにＡＡＶヘルパー機能を含む、実施形態１６１に記載の方法。

【0272】

実施形態１６３．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系に一過性に導入される、実施形態１６２に記載の方法。

【0273】

実施形態１６４．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系において安定に維持される、実施形態１６２に記載の方法。

【0274】

実施形態１６５．ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、および／またはＡＡＶウイルスゲノムをコードする核酸が、産生細胞系のゲノムに安定に組み込まれる、実施形態１６４に記載の方法。

【0275】

実施形態１６６．１種または複数のＡＡＶヘルパー機能が、プラスミド、アデノウイルス、細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のうち１種または複数によってもたらされる、実施形態１５１～１６５のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0276】

実施形態１６７．ＡＡＶヘルパー機能が、アデノウイルスＥ１Ａ機能、アデノウイルスＥ１Ｂ機能、アデノウイルスＥ２Ａ機能、アデノウイルスＥ４機能およびアデノウイルスＶＡ機能のうち１種または複数を含む、実施形態１５１～１６６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0277】

実施形態１６８．ＡＡＶヘルパー機能が、ＨＳＶ ＵＬ５機能、ＨＳＶ ＵＬ８機能、ＨＳＶ ＵＬ５２機能およびＨＳＶ ＵＬ２９機能のうち１種または複数を含む、実施形態１５１～１６６のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0278】

実施形態１６９．エンベロープがあるウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１５１～１６０のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0279】

実施形態１７０．レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルスまたはネコ免疫不全ウイルスである、実施形態１６９に記載の方法。

【0280】

実施形態１７１．ウイルス産生細胞が、レンチウイルスｇａｇ遺伝子をコードする核酸、レンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする核酸、導入遺伝子、５’長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）および３’ＬＴＲを含むレンチウイルス移入ベクターをコードする核酸を含み、３’ＬＴＲのＵ３領域の全体または一部が、異種調節エレメント、プライマー結合部位、ＧＡＧ遺伝子の全体または一部、セントラルポリプリントラクト、ＧＡＧ配列における合成停止コドン、ｒｅｖ応答性エレメント、およびｅｎｖスプライスアクセプターによって置き換えられる、実施形態１６９または１７０に記載の方法。

【0281】

実施形態１７２．エンベロープがあるベクターが、さらに精製される、実施形態１５１～１７１のいずれか一実施形態に記載の方法。

【0282】

実施形態１７３．実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物を含むキット。

【0283】

実施形態１７４．使用のための指示をさらに含む、実施形態１７３に記載のキット。

【0284】

実施形態１７５．対象への核酸の送達における使用のための、実施形態１０８～１３８のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物。

【0285】

実施形態１７６．対象における疾患または障害の処置における使用のための、実施形態１０８～１３８のいずれかに記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物。

【0286】

実施形態１７７．実施形態１４０～４３のいずれかに記載の方法に従った、対象への核酸の送達における使用のための、実施形態１７５または１７６に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは組成物。

【0287】

実施形態１７８．それを必要とする個体に核酸を送達するための医薬の製造における、実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物の使用。

【0288】

実施形態１７９．疾患または障害を有する個体を処置するための医薬の製造における、実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物の使用。

【0289】

実施形態１８０．疾患または障害が、ミオチューブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症、レーバー先天黒内障、血友病Ａ、血友病Ｂ、全脈絡膜萎縮、ハンチントン病、バッテン病、レーバー遺伝性視神経症、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠乏症、ポンペ病、ファブリー病、シトルリン血症１型、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、副腎白質ジストロフィー、鎌状赤血球症、ニーマン・ピック病またはベータサラセミアである、実施形態１７９に記載の使用。

【0290】

実施形態１８１．疾患または障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、実施形態１８０に記載の使用。

【0291】

実施形態１８２．実施形態１０８～１３８のいずれか一実施形態に記載のエンベロープがあるウイルスベクターまたは実施形態１３９に記載の組成物を含む製造品。

【実施例】

【0292】

（実施例１）
抗ＡＡＶ免疫応答の低下の決定
細胞において一連の実験を行って、本発明を実証する。ＡＡＶ陽性個体から精製されたＰＢＭＣを使用した混合リンパ球反応（ＭＬＲ）は、エフェクターベクターが、血清型がマッチしたエンベロープがないベクターと比較して、どの程度カプシド特異的免疫応答を低下することができるか決定するためのものである。同様に、ＭＬＲが使用されて、エフェクターベクターが、エンベロープがないベクターと比較して、治療タンパク質に対するＴ細胞応答を阻害することができるか検査する。この第２のＭＬＲは、次の通りに行う：抗原提示細胞は先ず、治療タンパク質とインキュベートし、次いで、エフェクターベクターまたは血清型がマッチしたエンベロープがないベクターの存在下で、ＰＢＭＣ（ＴおよびＢ細胞を含有）を添加する。Ｔ細胞活性化は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２５＋（ＩＬ２Ｒ）およびＦｏｘＰ３＋を含む総Ｔ細胞を計数するためのＦＡＣＳ解析を使用して測定される。中和抗体アッセイは、抗ＡＡＶカプシド抗体に関して陽性を検査した個体由来の血清を使用して行われる。アッセイは、Meliani et al. (2015) Hum Gene Ther Methods, 26:45-53に記載されている通りに行われる。
（実施例２）
ベクター産生

【0293】

ベクターを発現するようにＡＡＶ産生プラスミドをトランスフェクトした産生細胞を使用して、ＡＡＶを産生した。エンベロープがあるＡＡＶは、細胞膜（エンベロープ）の部分と共に、培養培地中に脱落しれ、エンベロープを除去しない方法により、これを培養培地から収集した。産生細胞を溶解して、エンベロープがないウイルス粒子を収集することにより、エンベロープがないＡＡＶを得た。

【0294】

さらに詳細には、Simonelli et al. (2010) Molecular Therapy, 18(3): 643-650に記載されている通り、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において、標準（エンベロープがない）ＡＡＶ（結果および図において「標準」または「ｓｔｄ」ベクターと称される）およびエンベロープがあるＡＡＶベクター（結果および図において「ｅｘｏ」ベクターと称される）を産生した。同じＡＡＶ産生プラスミドを両方のベクター型のためのものであった。ベクターゲノムプラスミド（ｐＡＡＶ．ＭＣＳ．ｃｂ．Ｈｕ ＦＩＸ）は、Nathwani et al. (2011) N Engl J Med, 365: 2357-65に記載されているヒト第ＩＸ因子遺伝子を含有した。パッケージングおよびヘルパープラスミドは、以前に使用された（同上）プラスミドであった。Melaini et al. (2017) Blood Advances, 1(23): 2019-31に記載されているＰＥＩを使用して、産生プラスミドを２９３Ｔ細胞にトランスフェクトし、Nathwani et al. (2011) N Engl J Med, 365: 2357-65に記載されている通りに精製した。２９３Ｔ産生細胞の２４×１５０ｍｍ組織培養ディッシュから、これらの調製物（prep）を生成した。

【0295】

産生細胞培養物を遠心分離し、上清から産生細胞を分離した。２ステップ超遠心分離を使用して、上清からエンベロープがあるＡＡＶを単離および精製し、ＰＢＳに再懸濁し、約１００ｎｍの平均粒径を有するエンベロープがあるＡＡＶ粒子の集団をもたらした。細胞溶解緩衝液に細胞を溶解し、続いて標準イオジキサノール勾配プロトコール（Melaini et al. (2017) Blood Advances, 1(23): 2019-31）を使用して精製することにより、産生細胞から標準（エンベロープがない）ＡＡＶを採取した。プロトコールおよびベクター収量の追加的な詳細を表１に示す。

【表1】

【0296】

プロデューサーＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＡＡＶ産生プラスミドのほかにｐＣＭＶ．ｍＣＴＬＡ－４およびｐＣＭＶ．ｍＰＤＬ－１発現ベクターでコトランスフェクトしたことを除いて、エンベロープがあるＡＡＶに使用される方法と同じ方法を使用して、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１を含むエンベロープを有するエンベロープがあるベクター（結果および図において、「イベイダー」もしくは「エフェクター」ベクターとして、または命名「ＥＦ」と称される）を２バッチで産生した。ｐＣＭＶ．ｍＣＴＬＡ－４は、ＣＭＶプロモーターによって駆動されるマウスＣＴＬＡ－４ ｃＤＮＡ配列を含有する（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ＃ＭＧ５０５０３－ＵＴ）。ｐＣＭＶ．ｍＰＤＬ－１は、ＣＭＶプロモーターによって駆動されるマウスＰＤＬ－１ ｃＤＮＡ配列を含有する（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ＃ＭＧ５００１０－Ｍ）。２４×１５０ｍｍ組織培養ディッシュの総計２個の調製物を調製した。プロトコールおよびベクター収量の追加的な詳細を表１に示す。

【0297】

精製されたベクターが、エンベロープを有するか確認するために、抗ＣＤ９抗体を使用してウエスタンブロットを行った。ＣＤ９は、産生された細胞に由来するエンベロープの存在を示すためのマーカーとして使用される。エンベロープがあるＡＡＶおよびイベイダーベクターの両方が、約２５ＫＤａの予測されるサイズのＣＤ９を含有した。予想される通り、標準（エンベロープがない）ＡＡＶ８－ＦＩＸは、ＣＤ９の非存在によって証明される通り、エンベロープ構成成分を含有しなかった。

【0298】

蛍光標識抗体：抗マウスＣＴＬＡ－４（抗ＣＴＬＡ－４ ＰＥＣｙ７、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ１３４０９０）および抗マウスＰＤＬ－１（抗ＰＤＬ－１－ＰＥ－Ａ、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ２１３４８０）を使用したビーズに基づくＦＡＣＳ解析を使用して、イベイダーおよびエンベロープがあるＡＡＶにおけるマウスＣＴＬＡ－４およびＰＤＬ－１のレベルを定量した。ＦＡＣＳ解析は、イベイダーベクターが、図３に示す通り、表面に高レベルのＣＴＬＡ－４およびＰＤＬ－１の両方（それぞれ８３．６％および７５．３％）を有することを明らかにし、各図における右へのイベイダーヒストグラムシフトは、粒子の大部分が、エンベロープがあるＡＡＶと比較して、それぞれＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１が陽性であることを示す。
（実施例３）
マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子移入

【0299】

次の実施例は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子移入のための、実施例２において産生されるベクターの使用を説明する。

【0300】

Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（７匹の雄および７匹の雌）に、１×１０^９個のベクターゲノムを静脈内注射した。投与群は、１）ＰＢＳのみ（媒体対照）、２）ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ、３）Ｅｘｏ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸおよび４）ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸを含んだ。

【0301】

投与後３週目に、マウスを出血させ、（ａ）ヒトＦＩＸレベル（ＶｉｓｕＬｉｚｅ（商標）第ＩＸ因子（ＦＩＸ）抗原キット、Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、（ｂ）抗ＡＡＶ８ ＩｇＧを使用したＥＬＩＳＡによるＡＡＶ８結合抗体（ＢＡｂ）、および（ｃ）中和抗体アッセイ（Meliani et al. (2015) Hum Gene Ther Methods, 26:45-53）を使用したＡＡＶ８中和抗体（ＮＡｂ）に関して解析した。ｉｎ－ｖｉｔｒｏ中和アッセイを使用して、検査ＡＡＶベクターが標的細胞に感染するのを防止する抗体の力価を測定する。簡潔に説明すると、アッセイは、最適化された感染多重度（ＭＯＩ）の、ルシフェラーゼ等のレポーター遺伝子を含有する検査ベクターを、検査抗体の系列希釈物と共にインキュベートし、次いで、ベクターを許容標的細胞に感染させるステップを伴う。２４時間後に感染細胞由来の蛍光の量を測定し、中和抗体の力価を示す。試料の中和力価は、ルシフェラーゼ発現の５０％またはそれを超える阻害が測定される最初の希釈度として決定される。

【0302】

また、投与後３週目に、各群から２匹の雄および２匹の雌マウスを屠殺し、ｑＰＣＲにより細胞当たりのベクターゲノムコピー数（ＶＧＣＮ）に関して動物の肝臓を解析した。製造業者の指示に従ってＭａｇｎａ Ｐｕｒｅ ９６ ＤＮＡおよびウイルスＮＡ小体積キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ ＩＮ）を使用して、臓器全体から組織ＤＮＡを抽出した。ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７９００ ＨＴ配列検出器（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によるＴａｑＭａｎリアルタイムＰＣＲによって、ベクターゲノムコピー数を定量した。正規化群（normalizer）としてマウスタイチン遺伝子を使用した。定量に使用したプライマーおよびプローブを次に示す：

【化1】

【0303】

次に、残っている動物（投与３週間後）に、１×１０^１０ｖｇの、用量群毎に最初に投与した同じＡＡＶベクターを投与した。６週目に、マウスを再度出血させ、同じプロトコールによって、ヒトＦＩＸレベル、ＡＡＶ８結合抗体（ＢＡｂ）およびＡＡＶ８中和抗体（ＮＡｂ）に関して解析した。次に、残っている全動物を屠殺し、先のプロトコールを使用して、ｑＰＣＲにより細胞当たりのベクターゲノムに関して動物の肝臓を解析した。

【0304】

対照動物と比較した第ＩＸ因子（ＦＩＸ）の血中レベルの増加は、遺伝子移入および発現成功を示し、対照動物は、ベクターではなくＰＢＳを受けた。図４に示す通り、ＦＩＸの血中レベルは、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸで処置したマウスにおいて、標準のエンベロープがあるウイルスまたはエンベロープがないウイルスで処置したマウスよりも有意に高かった。これは、３週間および６週間時点の両方で観察された。雄および雌マウスにおける第ＩＸ因子レベルの間の差は、雄マウスが従来より、肝臓において、雌マウスよりも高い効率でＡＡＶベクターをトランスフェクトされるという、十分に確立された動物モデルアーチファクトによる。形質導入効率におけるこの性別に基づく差は、マウスモデルのアーチファクトであり、ヒトでは生じない。この目的のため、雄マウスのみのデータを考慮する。ＰＢＳを受けた対照マウス由来の３および６週目の間の第ＩＸ因子レベルにおける変動は、検出限界に近いアッセイの日毎の変動性によるものであった。ＰＢＳおよび標準ＡＡＶの両方を受けた群におけるマウスは、約０．１μｇ／ｍＬである、３週目に匹敵する第ＩＸ因子レベルを示した。３週目に、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ処置マウスにおけるレベルは、標準のエンベロープがないＡＡＶで処置したマウスよりも約２２倍高く、エンベロープに免疫抑制分子がないエンベロープがあるＡＡＶよりも約５．６倍高かった。同様に、６週目に、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ処置マウスにおけるＦＩＸレベルは、標準のエンベロープがないＡＡＶで処置したマウスよりも約２０倍高く、エンベロープに免疫抑制分子がないエンベロープがあるＡＡＶよりも約５倍高かった。これらの結果は、エンベロープに免疫抑制分子を含むイベイダーベクターが、標準ＡＡＶまたは標準エンベロープがあるＡＡＶと比較して、ｉｎ ｖｉｖｏで有意に増強された第ＩＸ因子遺伝子発現をもたらしたことを実証する。

【0305】

図７～図９は、屠殺した動物の肝臓における細胞当たりのウイルスゲノムの数を示す。この場合もまた、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ処置マウスは、６週間時点における他の処置群と比較して、肝臓におけるより多い数のウイルスゲノムを示し、標準ＡＡＶと比較して、形質導入におけるより大きい効率を示す。

【0306】

図５および図６は、処置マウスの血液における総ＡＡＶ結合抗体および中和ＡＡＶ抗体のレベルを示す。ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸで処置したマウスが、他のベクターで処置したマウスよりも高い抗体レベルを有したことが観察された。エンドトキシンは、抗体産生および炎症の両方の強力な刺激因子であり、抗体産生レベルの観察される増加を引き起こし得るため、エンドトキシンレベルに関してベクターを解析した（ＴＯＸＩＮＳＥＮＳＯＲ（商標）発色ＬＡＬエンドトキシンアッセイキット、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）。結果を表２に表記する。表２における結果から、標準ＡＡＶ８－ＦＩＸマウスが受けた用量に対するエンドトキシンの量を正規化することにより、マウスに投与したエンドトキシンの量を計算した。用量１および２のために投与した相対エンドトキシンレベルは同様であったため、第１の用量のための相対量のみを図４に示す。ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸベクターで処置したマウスは、標準ＡＡＶ８－ｈＦＩＸベクターと比較して、動物当たり用量当たり約３００倍高いエンドトキシンレベルを受け、ｅｘｏ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸで処置したマウスは、標準ＡＡＶ８－ＦＩＸで処置したマウスと比較して、動物当たり用量当たり約５０倍高いエンドトキシンレベルを受けたことが計算された。よって、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ処置マウスにおけるより高い抗体価が、本実験におけるエンドトキシンレベル増加が原因である可能性がある。

【表2】

【0307】

ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸ処置マウスにおけるＢＡｂおよびＮＡｂレベルの増加にもかかわらず、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸベクターは、他の全処置群と比較して、ｈＦＩＸ導入遺伝子を送達し、ＦＩＸ発現を有意に増加させることができた。これは、ＥＶ－ＡＡＶ８－ｈＦＩＸベクターのエンベロープにおける免疫抑制分子の存在が、導入遺伝子発現に有意なプラスの効果を有することを示唆する。

【0308】

本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書で他に指示がなければ、範囲内に収まる別々の値のそれぞれを個々に参照する簡便な方法となることが単に意図され、別々の値のぞれぞれは、あたかも本明細書に個々に列挙されているかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているあらゆる方法は、本明細書で他に指示がなければまたは文脈によって明らかに相反しなければ、いずれか適した順序で行うことができる。本明細書に提供されるありとあらゆる例または例示的な言葉遣い（例えば、「等」）の使用は、開示される主題の理解をより容易にすることが単に意図され、他に主張がなければ、本開示の範囲に限定を課すものではない。本明細書における言葉遣いは、いずれか請求されていないエレメントを、本明細書に開示されている主題の実施に必須のものとして示すと解釈するべきではない。

【0309】

作業の最良の形態を含む実施形態が本明細書に記載されている。このような実施形態の変形形態は、当業者であれば、前述の記載を読むことにより明らかとなることができ、斯かる変形形態は、出願人によって企図される。したがって、開示は、適用法令によって許容される、本明細書に添付されている特許請求の範囲に列挙されている主題のあらゆる改変形態および均等物を含む。さらに、そのあらゆる可能な変形形態における上述のエレメントのいずれかの組合せが、本明細書で他に指示がなければまたは文脈によって明らかに相反しなければ、本開示によって包含される。
配列
ヒトＦ８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ２ＶＦ４５）、Ｂ－ドメイン欠失（ＢＤＤ）のＳＱ－ＦＶＩＩＩバリアント

【化2-1】

【化2-2】

ヒト第ＩＸ因子ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ００７４０

【化3-1】

【化3-2】

ヒトＣＴＬＡ－４：ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５２０５．２

【化4】

ヒトＰＤＬ－１：ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５４８６２．１

【化5】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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