特許 7411983 抗炎症剤、プレフィルドシリンジ、及び、キット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-28

(45)【発行日】2024-01-12

(54)【発明の名称】抗炎症剤、プレフィルドシリンジ、及び、キット

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/132 20060101AFI20240104BHJP

   A61K 31/785 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20240104BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20240104BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240104BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240104BHJP

【ＦＩ】

A61K31/132

A61K31/785

A61K47/36

A61K47/38

A61K9/06

A61P29/00

A61P43/00 111

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2019154679

(22)【出願日】2019-08-27

(65)【公開番号】P2021031454

(43)【公開日】2021-03-01

【審査請求日】2022-07-27

(73)【特許権者】

【識別番号】301023238

【氏名又は名称】国立研究開発法人物質・材料研究機構

(72)【発明者】

【氏名】西口 昭広

【審査官】田澤 俊樹

(56)【参考文献】

【文献】特表２００２－５１０６１８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００８－５３９２６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１６－０１４０６０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４

４７／００－４７／６９

９／００－９／７２

Ａ６１Ｐ １／００－４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗炎症剤であって、
分子量が３００～２０００であり、３級アミノ基を有するポリエチレンイミンを有効成分として含有する、抗炎症剤。

【請求項2】

前記ポリエチレンイミンの分子量が３００～１２００である請求項１に記載の抗炎症剤。

【請求項3】

前記ポリエチレンイミンの分子量が３００～１０００である請求項１に記載の抗炎症剤。

【請求項4】

前記ポリエチレンイミンの分子量が３００～６００である請求項１に記載の抗炎症剤。

【請求項5】

前記ポリエチレンイミンが分岐鎖状である、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗炎症剤。

【請求項6】

更にゲル化剤を含有する請求項１～５のいずれか１項に記載の抗炎症剤。

【請求項7】

前記ゲル化剤が、ヒアルロン酸又はその誘導体である、請求項６に記載の抗炎症剤。

【請求項8】

更に架橋剤を含有する請求項７に記載の抗炎症剤。

【請求項9】

前記架橋剤が、スルホン化セルロースである、請求項８に記載の抗炎症剤。

【請求項10】

更に水を含有する請求項１～９のいずれか１項に記載の抗炎症剤。

【請求項11】

マクロファージに作用して炎症性サイトカインの産生を抑制する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗炎症剤。

【請求項12】

請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗炎症剤と、前記抗炎症剤が収容されたシリンジと、を有するプレフィルドシリンジ。

【請求項13】

キットであって、
分子量が３００～２０００であり、３級アミノ基を有するポリエチレンイミンと、
ゲル化剤とを備え、
使用時に混合して前記ポリエチレンイミンを含有するゲルを調製するためのキット。

【請求項14】

さらに、水を備える、請求項１３に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗炎症剤、プレフィルドシリンジ、及び、キットに関する。

【背景技術】

【0002】

超高齢社会に突入した我が国において、急性、及び、慢性炎症疾患に対する治療法の開発がより一層望まれる。炎症反応は、感染等の外的因子に対する生体防御システムである一方で、関節炎、動脈硬化、褥瘡、及び、がん等の疾患との関連性が知られている。

【0003】

炎症を抑制する薬剤として、ステロイド、及び、非ステロイド系の薬剤、並びに、抗体医薬等が使用されるが、副腎不全、感染症、骨粗しょう症、及び、自己免疫疾患等の副作用が問題であり、また、薬剤の安定性、並びに、開発コスト、及び、製造コストに課題があった。

【0004】

そのため、より安全性が高く、かつ、抗炎症性を有する薬剤の研究が進められている。例えば、ステロイドを内包したハイドロゲル（非特許文献１）、抗炎症性を示す多糖類（非特許文献２）、及び、抗炎症効果を示す高分子量ヒアルロン酸（非特許文献３）等が提案されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【文献】Ｕｒｉ Ｓｏｉｂｅｒｍａｎ， Ｓｉｖａ Ｐ． Ｋａｍｂｈａｍｐａｔｉ， Ｔｏｎｙ Ｗｕ， Ｍａｎｏｊ Ｋ． Ｍｉｓｈｒａ， Ｙｕｍｉｎ Ｏｈ， Ｒｉｓｈｉ Ｓｈａｒｍａ， Ｊｉａｎｇｘｉａ Ｗａｎｇ， Ａｂｄｕｌ Ｅｌａｈ Ａｌ Ｔｏｗｅｒｋｉ， Ｓａｍｕｅｌ Ｙｉｕ， Ｗａｌｔｅｒ Ｊ． Ｓｔａｒｋ， Ｒａｎｇａｒａｍａｎｕｊａｍ Ｍ． Ｋａｎｎａｎ， Ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ－ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｇｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ． Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， １２５， ３８－５３ （２０１７）．

【文献】Ｈｏｎｇ Ｃｈｅｎ， Ｊｉａｎ Ｓｕｎ， Ｊｕｎ Ｌｉｕ， Ｙａｒｕｎ Ｇｏｕ， Ｘｉｎ Ｚｈａｎｇ， Ｘｉａｏｎａｎ Ｗｕ， Ｒｕｉ Ｓｕｎ， Ｓｉｘｕｅ Ｔａｎｇ， Ｊｕａｎ Ｋａｎ， Ｃｈｕｎｌｕ Ｑｉａｎ， Ｎｉａｎｆｅｎｇ Ｚｈａｎｇ， Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｊｉｎ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｌｋａｌｉ－ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｐｕｒｐｌｅ ｓｗｅｅｔ ｐｏｔａｔｏ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， １３１， ４８４－４９４ （２０１９）

【文献】Ｊａｍｉｅ Ｅ． Ｒａｙａｈｉｎ， Ｊａｓｏｎ Ｓ． Ｂｕｈｒｍａｎ， Ｙｕ Ｚｈａｎｇ， Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｊ． Ｋｏｈ， Ｒｉｃｈａｒｄ Ａ． Ｇｅｍｅｉｎｈａｒｔ， Ｈｉｇｈ ａｎｄ ｌｏｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． ＡＣＳ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， １， ４８１‐４９３ （２０１５）．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

非特許文献１に記載されたステロイドを内包したハイドロゲルは、ステロイドの徐放速度を制御することが難しく、ステロイドに由来する副作用が問題である。
非特許文献２に記載されたような天然物より単離した多糖類は抗炎症性を示すものもあるが、その効果は弱く、また、大量生産することは困難である。
非特許文献３に記載された高分子量体のヒアルロン酸は低分子量体と比較して抗炎症性を示すが、その効果は微弱で、不十分である。

【0007】

そこで、本発明は、ステロイド化合物を含有しなくとも十分な抗炎症作用を奏する、言い換えれば、優れた安全性、及び、優れた抗炎症性を有する抗炎症剤を提供することを課題とする。また、本発明は、プレフィルドシリンジ、及び、キットを提供することも課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意検討した結果、以下の構成により上記課題を達成することができることを見出した。

【0009】

［１］ エチレンジアミン、及び、分子量が１００～２０００であるポリエチレンイミンからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、抗炎症剤。
［２］ 上記ポリエチレンイミンの分子量が１００～１２００である［１］に記載の抗炎症剤。
［３］ 上記ポリエチレンイミンの分子量が２００～１０００である［１］に記載の抗炎症剤。
［４］ 分子量が２００～１０００であるポリエチレンイミンを含有する［１］に記載の抗炎症剤。
［５］ 上記ポリエチレンイミンが分岐鎖状である、［１］～［４］のいずれかに記載の抗炎症剤。
［６］ 更にゲル化剤を含有する［１］～［５］のいずれかに記載の抗炎症剤。
［７］ 上記ゲル化剤が、ヒアルロン酸又はその誘導体である、［６］に記載の抗炎症剤。
［８］ 更に架橋剤を含有する［７］に記載の抗炎症剤。
［９］ 上記架橋剤が、スルホン化セルロースである、［８］に記載の抗炎症剤。
［１０］ 更に水を含有する［１］～［９］のいずれかに記載の抗炎症剤。
［１１］ マクロファージに作用して炎症性サイトカインの産生を抑制する、［１］～［１０］のいずれかに記載の抗炎症剤。
［１２］ ［１］～［１０］のいずれかに記載の抗炎症剤と、上記抗炎症剤が収容されたシリンジと、を有するプレフィルドシリンジ。
［１３］ エチレンジアミン、及び、分子量が１００～２０００であるポリエチレンイミンからなる群より選択される少なくとも１種の化合物と、ゲル化剤とを備え、使用時に混合して上記化合物を含有するゲルを調製するためのキット。
[１４] 更に水を備える[１３]に記載のキット。

【発明の効果】

【0010】

本発明によれば、優れた安全性、及び、優れた抗炎症性を有する抗炎症剤を提供できる。また、本発明によれば、プレフィルドシリンジ、及び、キットも提供できる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】種々の分子量のポリエチレンイミンの抗炎症効果の測定結果である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下、本発明について詳細に説明する。
以下に記載する構成要件の説明は、本発明の代表的な実施形態に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に制限されるものではない。
なお、本明細書において、「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。

【0013】

[抗炎症剤]
本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、エチレンジアミン、及び、分子量が１００～２０００であるポリエチレンイミン（以下、「特定ポリエチレンイミン」ともいう。）からなる群より選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する、抗炎症剤である。

【0014】

抗炎症剤における上記化合物の含有量としては、用法、用量に応じて適宜定めればよく、効果の得られる範囲であれば特に制限されないが、一般に抗炎症剤の全質量に対して、０．００１～９９．９９９質量％が好ましい。なお、抗炎症剤は、上記化合物の１種を単独で含有してもよく、２種以上を含有していてもよい。抗炎症剤が、２種以上の上記化合物を含有する場合には、その合計含有量が上記数値範囲内であることが好ましい。

【0015】

本明細書においてポリエチレンイミンとは、アミンと上記アミンに結合した－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる繰り返し単位を有する化合物を意味し、上記繰り返し単位は、下記式１で表される。

【化1】

【0016】

式１中、Ｘ^１は水素原子、又は、Ａ１で表される基を表す。式Ａ１中、Ｘ^２及びＸ^３はそれぞれ独立に水素原子、又は、Ａ１で表される基を表し、＊は結合位置を表す。
ポリエチレンイミンは、直鎖状、すなわち、－ＣＨ_２ＣＨ_２－ＮＨ－で表される繰り返し単位のみから構成されていてもよいし、分岐鎖状であってもよいが、より優れた本発明の効果を有する抗炎症剤が得られる点で、分岐鎖状であることが好ましい。

【0017】

ポリエチレンイミンとしては特に制限されないが、例えば、以下の式で表される化合物が挙げられる。

【化2】

【0018】

上記ポリエチレンイミンは公知の合成方法により合成可能である。具体的には、例えば、エチレンジアミン、及び／又は、ジエチレントリアミン等に、塩酸、硫酸、又は、パラトルエンスルホン酸等の酸触媒下でエチレンイミンを反応させればよい。
また、ポリエチレンイミンとしては市販品を使用することもできる。市販品としては、エポミン（登録商標）ＳＰシリーズ（日本触媒製）、Ｌｕｐａｓｏｌシリーズ（ＢＡＳＦ社製）、及び、ＬＵＧＡＬＶＡＮ－Ｇ１５０００（ＢＡＳＦ社製）等が挙げられる。

【0019】

ポリエチレンイミンは、分子中に、少なくとも１級アミノ基、及び、２級アミノ基を有する。ポリエチレンイミンが更に３級アミノ基を有する場合、分岐鎖状となる。なお、本明細書において分岐鎖状のポリエチレンイミンには、１級アミノ基と３級アミノ基とからなるデンドリマー形態のポリエチレンイミンも含まれる。

【0020】

ポリエチレンイミン中における１級アミノ基の含有量としては特に制限されないが、１級アミノ基、２級アミノ基、及び、３級アミノ基の全体に対して１～９９モル％であるのが好ましい。
なお、ポリエチレンイミン中における、１級アミノ基、２級アミノ基、及び、３級アミノ基の比率は、例えば、^１３Ｃ－ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）法、又は、赤外分光法で測定して求められる。
また、このような分岐鎖状のポリエチレンイミンは、公知の方法によりエチレンイミンを開環重合して得られる。

【0021】

特定ポリエチレンイミンは、分子量が１００～２０００であり、１００～１２００が好ましく、２００～１０００が好ましい。なお、本明細書において、ポリエチレンイミンの分子量は、平均分子量を意味し、沸点上昇法、又は、粘度法により測定される分子量を意味する。ポリエチレンイミンの分子量が２０００以上だと、所望の抗炎症性が得られず、１２００以下だと、より優れた抗炎症効果が得られ、１０００以下だと更に優れた抗炎症効果が得られる。また、ポリエチレンイミンの分子量が２００以上だと、より優れた抗炎症効果が得られる。

【0022】

特定ポリエチレンイミンの分子量分散度としては特に制限されないが、一般に、１．１～１．５が好ましい。

【0023】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、エチレンジアミン、及び、特定ポリエチレンイミンからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含有していればよく、より優れた効果を有する抗炎症剤が得られる点で、分子量が２００～１０００であるポリエチレンイミンを含有することがより好ましく、分子量が２００～１０００である分岐鎖状のポリエチレンイミンを含有することが更に好ましい。

【0024】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、後述する実施例で示したとおり、マクロファージに作用して炎症性サイトカインの産生を抑制する作用を有する。

【0025】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、皮膚外用剤として使用されることができ、上記用途において許容可能な媒質又は基材を含有して剤形化されてもよい。これは、局所適用に適した全ての剤形として、例えば、溶液、ゲル、固体、練りこねた無水生成物、水相に油相を分散させて得られたエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、及び、微細顆粒球等の形態で、クリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレー、及び、コンシーラースティック等として提供されてもよい。

【0026】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、溶媒、溶解剤、濃縮剤、ゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤、芳香剤、界面活性剤、乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、及び、親水性又は親油性活性剤を含有してもよい。

【0027】

また、本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、薬学組成物として経口又は非経口投与剤に剤形化してもよい。非経口投与剤としては、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、及び、皮下等に投与されてよい。

【0028】

上記非経口投与のための剤形としては、注射製剤、フィラー、点滴剤、軟膏、ローション、スプレー、懸濁化剤、油剤、及び、坐剤等が挙げられる。本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、ゲル化剤、架橋剤、界面活性剤、賦形剤、着色料、香辛料、保存料、安定化剤、緩衝剤、懸濁化剤、及び、その他の補助剤を含有してもよい。

【0029】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、ゲル化剤を含有していてもよい。ゲル化剤を含有すると、注射製剤とした際の取り扱い性が向上する。ゲル化剤としては特に制限されないが、例えば、グアーガム、ローカストビーンガム、クィーンスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、タラガム、タマリンド、ファーセレラン、カラヤガム、トロロアオイ、キャラガム、トラガントガム、ペクチン、ペクチン酸及びナトリウム塩等の塩、アルギン酸及びナトリウム塩等の塩、マンナン；コメ、トウモロコシ、バレイショ、コムギ等のデンプン；キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、カードラン、ヒアルロン酸及びその誘導体並びにその塩、ザンサンガム、プルラン、ジェランガム、キチン、キトサン、寒天、カッソウエキス、コンドロイチン硫酸塩、カゼイン、コラーゲン、ゼラチン、アルブミン；メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びそのナトリウム等の塩、メチルヒドロキシプロピルセルロース、セルロース硫酸ナトリウム、ジアルキルジメチルアンモニウム硫酸セルロース、結晶セルロース、セルロース末等のセルロース及びその誘導体；可溶性デンプン、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシプロピルデンプン、メチルデンプン等のデンプン系高分子、塩化ヒドロキシプロピルトリモニウムデンプン、オクテニルコハク酸トウモロコシデンプンアルミニウム等のデンプン誘導体；アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等アルギン酸誘導体；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン・ビニルアルコール共重合体、ポリビニルメチルエーテル；ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン共重合体；（メタクリロイルオキシエチルカルボキシベタイン／メタクリル酸アルキル）コポリマー、（アクリレーツ／アクリル酸ステアリル／メタクリル酸エチルアミンオキシド）コポリマー等の両性メタクリル酸エステル共重合体；（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマー、（アクリル酸アルキル／ジアセトンアクリルアミド）コポリマー、（アクリル酸アルキル／ジアセトンアクリルアミド）コポリマーＡＭＰ；ポリ酢酸ビニル部分けん化物、マレイン酸共重合体；ビニルピロリドン・メタクリル酸ジアルキルアミノアルキル共重合体；アクリル樹脂アルカノールアミン；ポリエステル、水分散性ポリエステル；ポリアクリルアミド；ポリアクリル酸エチル等のポリアクリル酸エステル共重合体、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸及びそのナトリウム塩等の塩、アクリル酸・メタアクリル酸エステル共重合体；アクリル酸・メタアクリル酸アルキル共重合体；ポリクオタニウム－１０等のカチオン化セルロース、ポリクオタニウム－７等のジアリルジメチルアンモニウムクロリド・アクリルアミド共重合体、ポリクオタニウム－２２等のアクリル酸・ジアリルジメチルアンモニウムクロリド共重合体、ポリクオタニウム－３９等のアクリル酸・ジアリルジメチルアンモニウムクロリド・アクリルアミド共重合体、アクリル酸・カチオン化メタアクリル酸エステル共重合体、アクリル酸・カチオン化メタアクリル酸アミド共重合体、ポリクオタニウム－４７等のアクリル酸・アクリル酸メチル・塩化メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウム共重合体、塩化メタクリル酸コリンエステル重合体；カチオン化オリゴ糖、カチオン化デキストラン、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド等のカチオン化多糖類；ポリエチレンイミン；カチオンポリマー；ポリクオタニウム－５１等の２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンの重合体及びメタクリル酸ブチル共重合体等との共重合体；アクリル樹脂エマルション、ポリアクリル酸エチルエマルション、ポリアクリルアルキルエステルエマルション、ポリ酢酸ビニル樹脂エマルション、天然ゴムラテックス、合成ラテックス等の高分子エマルション；ニトロセルロース；ポリウレタン類及び各種共重合体；各種シリコーン類；アクリル－シリコーングラフト共重合体等のシリコーン系各種共重合体；各種フッ素系高分子；１２－ヒドロキシステアリン酸及びその塩；パルミチン酸デキストリン、ミリスチン酸デキストリン等のデキストリン脂肪酸エステル；無水ケイ酸、煙霧状シリカ（超微粒子無水ケイ酸）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸ナトリウムマグネシウム、金属石鹸、ジアルキルリン酸金属塩、ベントナイト、ヘクトライト、有機変性粘土鉱物、ショ糖脂肪酸エステル、フラクトオリゴ糖脂肪酸エステル等が挙げられる。

【0030】

なかでも、後述する実施例に示すとおり、得られる抗炎症剤の細胞に対する毒性がより低くなる、又は、より優れた抗炎症作用を有する観点で、ゲル化剤としては、ヒアルロン酸又はその誘導体が好ましい。

【0031】

また、本発明の実施形態に抗炎症剤がゲル化剤を含有する場合、更に、架橋剤を含有していてもよい。架橋剤は得られるゲルの力学強度を向上させることができる。

【0032】

架橋剤としては特に制限されないが、例えば、以下の式で表されるスルホン化セルロースを用いてもよい。

【化3】

【0033】

上記式中、ｋ、ｍ、及び、ｎは、各繰り返し単位のモル％を表し、特に制限されないが、ｋは２５～９５モル％が好ましく、４０～９０モル％がより好ましい。ｍは４～７０モル％が好ましく、７～６０モル％がより好ましい。ｎは１～７０モル％が好ましく、１０～３０モル％がより好ましい。

【0034】

上記スルホン化セルロースは、下記式に示すグルコース単位の３位と４位の間が開環されて、スルホン化された構造を含むセルロースである。

【0035】

【化4】

【0036】

上式は、水中等においてスルホン基（－ＳＯ_３Ｈ）が解離された状態を示し、対カチオンはＮａ^＋に限定されずプロトン、Ｋ^＋等であってよい。

【0037】

スルホン化セルロースは、例えばＨｅｎｒｉｋｋｉ Ｌｉｉｍａｔａｉｎｅｎら，Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（２０１３）２０：７４１-７４９に記載された下記式に示す経路で合成することができる。

【化5】

先ず、原料セルロースを水に分散させ、分散液を得る。上記分散液に、セルロース中のグルコース単位の量（ｋ）を１００モル％としたときに５０～２００モル％の過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）を添加し、遮光しながら、４０～６０℃で２～６時間撹拌することによって、アルデヒド化セルロースを生成する。

【0038】

次に減圧濾過によって未反応物を含む水溶液を除去し、超純水で洗浄する操作を数回繰り返した後に凍結乾燥することで、アルデヒド化セルロースの乾燥粉末を得る。上記式において、ｋの初期値を１００モル％としたときに、ｍは１～８０モル％、好ましくは１０～５０モル％である。

【0039】

アルデヒド基の量は、水酸化ナトリウム水溶液を用いた導電率測定による中和滴定により求めることができ、０．５～８ミリモル／ｇ、好ましくは１～７ミリモル／ｇ、より好ましくは１～５ミリモル／ｇである。

【0040】

原料セルロースとしては、例えば、針葉樹系パルプ、広葉樹系パルプ、綿系パルプ等の植物、動物等から得られたセルロース、これらを用いた紙、古紙等を用いることができる。

【0041】

次いで、アルデヒド化セルロースを超純水に分散させ、ピロ亜硫酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_５）を、アルデヒド基量を１００モル％として２０～２００モル％、好ましくは５０～１５０モル％で添加して、室温で１２～２４時間、攪拌しながら反応させる。生成物を遠心分離により回収し、超純水等で洗浄して未反応物を除去して精製した後、超音波ホモジナイザーによって１０～３０分間程度ホモジナイズすることによって、スルホン化セルロースのナノファイバー（「ｓＣＮＦ」と略す場合がある）を得ることができる。収率は、約８０～９０％である。

【0042】

ｓＣＮＦは生分解性である。本発明において「生分解性」は３７℃のｐ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で、１日で１質量％以上分解したことにより確認した。この生分解性は、原料セルロースのグルコース単位の量（ｋ）の初期値を１００モル％としたとき、ｍ＋ｎ、即ち開環された単位が、少なくとも１モル％、好ましくは１０～５０モル％であることによるものと考えられる。また、ｓＣＮＦは開環単位を有することによって、Ｘ線回折測定による結晶化度が２０～７０％であり、９０％程度の結晶化度を有する原料セルロースに比べて低い。

【0043】

また、本発明の実施形態に係る抗炎症剤は、溶媒を含有してもよい。溶媒としては特に制限されないが、水、水と任意の割合で混和する有機溶媒、及び、これらの混合溶媒が好ましく、水がより好ましい。上記有機溶媒としては例えば、アルコール類（多価アルコールを含む）等が挙げられる。

【0044】

また、本発明の実施形態に係る抗炎症剤がゲル化剤を含有する場合、更に、その他の成分を含有していてもよく、デリバリーしたい各種薬剤、及び、タンパク質等を配合し、これらの局所デリバリー担体、又は、徐放性デリバリー担体として使用してもよい。
薬剤としては、例えば抗炎症薬、抗血栓薬、抗生物質、線維芽細胞増殖因子、血管内皮細胞増殖因子、及び、肝細胞増殖因子等の成長因子が挙げられる。
また、ワクチンとして、ウイルスや癌の抗原タンパク質を担持することで、ワクチンキャリアとして使用してもよい。

【0045】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤の製造方法としては特に制限されず、すでに説明した各成分を混合すればよい。混合方法としては特に制限されないが、溶媒中に他の固体成分を分散、溶解させてもよく、固体同士を混合してもよい。固体同士を混合する場合、混合前に各成分の固体を粉砕してもよい。粉砕する方法としては特に制限されないが、例えば、湿式粉砕法が挙げられる。湿式粉砕法としては、ボールミリング、及び、ホモジナイザー粉砕等が挙げられる。

【0046】

また、本発明の実施形態に係る抗炎症剤をシリンジに充填して静置することにより、抗炎症剤がプレフィルドされたプレフィルドシリンジを製造することができる。

【0047】

このようにして得られるプレフィルドシリンジは、中に含まれる注射製剤（抗炎症剤）を、シリンジのプランジャーロッドを押し込み注射針から排出させるだけで、流動性を示すため、そのままスムーズに注射針から排出させることが可能であるうえ、抗炎症剤の保存安定性にも優れる。なお、本発明は、当該プレフィルドシリンジを備えたキットも包含する。

【0048】

本発明の実施形態に係る抗炎症剤の有効成分（すでに説明した化合物）の投与容量は、投与される対象の年齢、性別、体重、病履状態及びその重症度、投与経路又は処方者の判断によって異なる。このような因子に基づいて適当な容量の決定は、当業者の水準内にあり、その１日の投与容量は、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には５ｍｇ／ｋｇ／日～５０ｍｇ／ｋｇ／日になり得るが、これらに限定されるものではない。

【実施例】

【0049】

以下に実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す実施例により限定的に解釈されるべきものではない。

【0050】

（ＴＮＦ－αの産生抑制）
３×１０^４個のマウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を９６ウェルプレートに播種し、２４時間予備培養した。培地で１００μｇ／ｍＬに調製したポリエチレンイミンに、ＬＰＳ（リポ多糖）を添加し１００ｎｇ／ｍＬとした。この溶液を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。なお、試料としては、エチレンジアミン（図中、「ＰＥＩ６０」と記載した。）、分子量が１５０の「ＰＥＩ１５０」（トリス（２－アミノエチル）アミンの純度９０％以上）、分子量が３００の「ＰＥＩ３００」、分子量が６００の「ＰＥＩ６００」、分子量が１２００の「ＰＥＩ１２００」、及び、分子量が１００００の「ＰＥＩ１００００」を用いた。
また、コントロールとして、培地のみを加えたサンプル（コントロール）とＬＰＳとを１００ｎｇ／ｍＬで添加したサンプルを用いた。

【0051】

培養後、上清を回収し、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によって、上清中に含まれている炎症性サイトカインの一種である腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）の濃度を定量した。その結果、ＬＰＳのみを添加した場合はＴＮＦ－αが３４６ｐｇ／ｍＬ産生されるのに対して、ＰＥＩ３００を同時に添加することによって、２倍以上ＴＮＦ－αの産生を抑制することができた。ＰＥＩ１２００も同様に高い抗炎症効果を示した。一方で、ＰＥＩ１００００はＴＮＦ－αが検出限界以下であった。

【0052】

この原因として、ＰＥＩ１００００の有する細胞毒性が考えられたため、細胞生存率をＷＳＴ－８アッセイによって評価した。その結果、ＰＥＩ１００００は高い細胞毒性を有することがわかった。結果を図１にまとめて示した。

【0053】

図１の結果から、分子量が１００～２０００であるＰＥＩ６００は、ＰＥＩ１００００と比較してより優れた抗炎症作用を有し、分子量が２００～１２００であるＰＥＩ６００は、ＰＥＩ１５０と比較して更に優れた抗炎症効果を有し、分子量が２００～１０００であるＰＥＩ６００は、ＰＥＩ１２００と比較して特に優れた抗炎症効果を有することがわかった。

【0054】

なお、図１中、Ａ表は、ＴＮＦ－αの産生量（単位：ｐｇ/ｍL）を表しており、Ｂ表はＷＳＴ－８アッセイによる細胞生存率を表しており、Ｃ表はＡ表及びＢ表の結果から計算された１×１０^４個の細胞当たりのＴＮＦ－αの産生量（単位：ｐｇ／１×１０^４ｃｅｌｌｓ）を表している。なお、図１中「－」は検出限界以下だった（抗炎症効果が得られなかった）ことを示している。

【0055】

（ＩＬ－６の産生抑制）
３×１０^４個のマウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を９６ウェルプレートに播種し、２４時間予備培養した。培地で１００μg/ｍLに調製したポリエチレンイミン（分子量３００の「ＰＥＩ３００」）に、ＬＰＳを添加し１００ｎｇ／ｍＬとした。この溶液を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。コントロールとして、培地のみを加えたサンプル（コントロール）とＬＰＳとを１００ｎｇ／ｍＬで添加したサンプルを用いた。
培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによって、上清中に含まれている炎症性サイトカインであるインターロイキン－６（ＩＬ－６）の濃度を定量した。その結果、コントロールと比較して、ポリエチレンイミンを用いた場合ＩＬ－６の産生量が半分以下に低下し、優れた抗炎症効果が確認された。

【図1】