特許 7413619 フルオキセチンとビタミンＤ３またはその誘導体を含有する組成物およびその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-01-05

(45)【発行日】2024-01-16

(54)【発明の名称】フルオキセチンとビタミンＤ３またはその誘導体を含有する組成物およびその用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/593 20060101AFI20240109BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20240109BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240109BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20240109BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20240109BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240109BHJP

   A61K 31/138 20060101ALI20240109BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240109BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240109BHJP

【ＦＩ】

A61K31/593

A61K9/06

A61K9/08

A61K9/107

A61K9/12

A61K9/14

A61K31/138

A61P17/00

A61P43/00 121

【請求項の数】 12

(21)【出願番号】P 2021570410

(86)(22)【出願日】2020-05-07

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-28

(86)【国際出願番号】 CN2020088902

(87)【国際公開番号】W WO2020238570

(87)【国際公開日】2020-12-03

【審査請求日】2022-01-25

(31)【優先権主張番号】201910450610.4

(32)【優先日】2019-05-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】517194771

【氏名又は名称】ナンジン ルーイン ルンゼ バイオファーマシューティカル テクノロジー カンパニー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002860

【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シャン，ジン

(72)【発明者】

【氏名】ヂョン，フゥイ

(72)【発明者】

【氏名】ポン，ジーシェン

(72)【発明者】

【氏名】ユエ，ユンユン

(72)【発明者】

【氏名】ヂョウ，リャンリャン

(72)【発明者】

【氏名】ヂュ，ジュンイー

【審査官】愛清 哲

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５００２４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１０６６６７９０３（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１０８９６９５１２（ＣＮ，Ａ）

【文献】特開平０８－０９２０９９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開昭６０－１７４７０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】Therapeutic effects of vitamin D as adjunctive therapy to fluoxetine in patients with major depressive disorder，Aust N Z J Psychiatry，2013年，47(3)，pp.271-5，doi: 10.1177/0004867412465022

【文献】Up-regulation of melanin synthesis by the antidepressant fluoxetine，Exp Dermatol，2012年，21(8)，pp.635-7，doi: 10.1111/j.1600-0625.2012.01531.x

【文献】Regulation of melanin synthesis of B16 mouse melanoma cells by 1 alpha, 25-dihydroxyvitamin D3 and retinoic acid，Cancer Res，1985年，45(4)，pp.1474-8

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

フルオキセチン並びにビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上を含むことを特徴とする、低色素性疾患の治療及び／又は緩和のための組成物。

【請求項2】

前記フルオキセチンは、フルオキセチンラセミ体、Ｒ－フルオキセチン又はその薬学的に許容される塩から選択されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記フルオキセチンとビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上との重量比は、１０以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記フルオキセチンとビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上との重量比は、２０以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記フルオキセチンとビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上との重量比は、５００以下であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記フルオキセチンとビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上との重量比は、４００以下であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記フルオキセチンとビタミンＤ３、カルシポトリオール、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上との重量比は、２００以下であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項１～請求項７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

請求項１～請求項８のいずれか１項に記載の組成物の、低色素性疾患の治療および／または緩和のための医薬品の製造における使用。

【請求項10】

前記低色素性疾患は、白斑、白髪、白色粃糠疹、貧血性母斑又は色素失調症から選択されることを特徴とする請求項９に記載の使用。

【請求項11】

請求項１～請求項８のいずれか１項に記載の組成物を含むことを特徴とする、低色素性疾患の治療及び／又は緩和のための製剤。

【請求項12】

前記製剤は、クリーム、軟膏、ゲル、エアゾール、スプレー、パウダー、溶液剤、芳香水、スピリッツ剤、グリセリン剤、可溶性ゲル剤、懸濁液剤、乳液剤、コーティング剤、ペースト剤、ローション、塗布剤及びチンキ剤から選択されることを特徴とする請求項１１に記載の製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、低色素性疾患の治療および／または緩和のための薬剤の技術分野に関し、より具体的に、フルオキセチンとビタミンＤ３またはその誘導体を含む組成物、および低色素性疾患の治療および／または緩和のための薬剤の製造への用途、ならびに前記組成物を含む医薬製剤に関する。

【背景技術】

【0002】

低色素性疾患とは、例えば、白斑、白髪、白斑性粃糠疹、貧血性母斑など、皮膚の局所的な色素脱失を主な臨床症状とする一般的な皮膚疾患であり、白斑と白髪は最も一般的なものである。白斑は、子供や青年の時期によく見られ、皮膚の色素沈着が局所的または広範囲に失われることを臨床的な特徴とする色素脱失性の皮膚疾患である。白髪とは、髪の毛が全体的または部分的に白くなることであり、先天性と後天性の二種類に分類される。先天性の白髪は家族歴を有することが多く、後天性の白髪は、老人性の白髪と、青少年や中年の人に見られる早期白髪の２種類がある。低色素性疾患は、皮膚や髪の毛におけるメラニン細胞が失われたり、メラニンの合成が機能しなくなったりすることが主な表現である。皮膚におけるメラニンは、主に表皮の基底層にあるメラニン細胞に存在しており、皮膚の表皮は胚の外胚葉に由来し、主にケラチノサイト（表皮細胞の約８０～９０％）、非ケラチノサイト（樹状細胞とも呼ばれ、主にメラニン細胞により構成され、表皮細胞の約２～３％を占めている）、ランゲルハンス細胞、メルケル細胞により構成されている。メラニン細胞は、主に皮膚の基底層、目の虹彩、毛包などの部位に存在し、特に表皮に最も広く分布している。表皮の基底層にあるメラニン細胞の総数は２０億個であり、表皮に存在するメラニン細胞は、肌の色を決定し、及び紫外線のダメージから肌を守る重要な役割を果たしている。そのため、表皮のメラニン細胞がダメージを受けたり、メラニン合成の機能が異常になったりすると、皮膚の色素異常又は白斑、白髪、母斑、メラノーマなどの疾患が起こる（非特許文献１）。

【0003】

特許文献１及び２には、色素喪失疾患の治療にフルオキセチンを用いることが開示され、主に、フルオキセチンがＢ１６Ｆ１０細胞及び人々の正常な皮膚色素細胞におけるメラニンの合成を促進し、メラニン合成に関連するタンパク質の発現量の増加を促進できることが記載されている。また、フルオキセチンをＣ５７ＢＬ／６マウスに経口で投与し、メラニン合成に必要な皮膚色素合成に関連するタンパク質の発現を促進させることができる。また、色素喪失疾患に対してフルオキセチンを用いることが初めて提案されている。フルオキセチンを２０ｍｇ／ｋｇ経口で投与し、正常なマウスの皮膚に着色を促進できることが報告されており、この原因としては皮膚における５－ＨＴ１Ａ受容体の発現を調節することに関連していると考えられる（非特許文献２）。また、２．６ｍｇ／ｋｇのフルオキセチンの経口で投与し、皮膚における５－ＨＴ１Ａ受容体および５－ＨＴ２Ａ受容体を調節することにより、慢性的な予測不可能なストレスと慢性的な拘束力のあるストレスによる誘発されたＣ５７ＢＬ／６マウスの背側色素脱失皮膚の低色素化（非特許文献３）を改善することができる。特許文献３には、フルオキセチンを外用剤として０．１％ｇ／ｇの規格で白斑の治療に用いられることが開示されている。上記の特許および文献は、フルオキセチンが所定量（２．６ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ）で色素喪失疾患の治療の用途を有することを示している。

【0004】

臨床研究では、白斑患者のビタミンＤおよびその代謝物である１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３）の濃度が健康者に比べて低く、白斑の発症に関連する可能性があることが発見された（非特許文献４）。白斑患者は自己抗体Ｉｇが高
発現になると、補体溶解や細胞障害作用によってメラニン細胞が破壊されて白斑が形成されることがある。１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３は、自己抗体の産生を抑制することにより、メラニン細胞に対する自己抗体の破壊作用を軽減することができる（非特許文献５）。また、ビタミンＤ３誘導体のカルシポトリオールは、メラニン細胞のオートファジーを制御することにより、メラニン細胞のデンドライトに影響し、酸化ストレスによるメラニン細胞に対するダメージを軽減する（非特許文献６）。研究の結果から、皮膚の微小環境がメラニン細胞の機能に影響を与えることができ、カルボフランが免疫細胞の機能を調節することによりメラニン細胞の生存環境を改善し、メラニン細胞のアポトーシスやメラニン合成機能の喪失を回避できることは示唆された。白斑の治療に関するコンセンサス（２０１８年版）では、白斑の治療にビタミンＤ３誘導体の使用が推奨されており（非特許文献７及び非特許文献８）、その代表的なものがタカルシトールとカルシポトリオールであるが、その臨床の適応症状は乾癬である。カルシポトリオールは、１９９１年にレオ（Ｌｅｏ）社が乾癬の外用薬として初めて販売したものである。レオ社は２００２年にカルシポトリオール塗布剤（商品名：ダーレックス、規格：５０μｇ／ｍｌ（約５０μｇ／ｇ））とカルシポトリオール軟膏（規格：５０μｇ／ｇ）でそれぞれに中国市場に進入した。

【0005】

カルシポトリオール（１０－９－１０－５ ｍｏｌ／Ｌ）、即ち、約４．１３ｘ１０－４－４．１３μｇ／ｇは、正常なメラニン細胞におけるメラニン合成を促進することが報道されている（非特許文献９）。しかし、乾癬の治療中にカルシポトリオール軟膏（５０μｇ／ｇ）を顔面に使用した場合、発疹や潮紅などの副作用や血中カルシウム濃度が上昇するリスクがあるという臨床報告がある（非特許文献１０）。また、フルオキセチン（２０ｍｇ／日）の臨床使用では、長期内服時に不眠、眠気、自殺、神経障害などの副作用が起こりやすい（非特許文献１１）。特許文献４は、フルオキセチンと漢方薬の併用による白斑の治療方法を開示している。

【0006】

本発明の発明者は、長期にわたる鋭意研究の結果、フルオキセチンとビタミンＤ３誘導体を併用し、白斑の治療に用い、優れた相乗効果が得られ、また、フルオキセチンとカルシポトリオールの単剤投与量を減少し、単剤の臨床副作用を回避することが可能であることを発見した。

【0007】

フルオキセチンとビタミンＤ３誘導体とを併用し、メラニン合成を促進することができ、ビタミンＤ３誘導体やフルオキセチンを単独使用する場合に比べ、優れた効果が得られ、治療効果を高めるのみならず、ビタミンＤ３誘導体またはフルオキセチンの投与量を減らし、有害な副作用の発生を抑えることができる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【文献】中国特許ＺＬ２０１１１０４０３１７３．４

【文献】カナダ特許公開ＣＡ２８７７４２３Ａ

【文献】米国特許ＵＳ９，８３３，４２４Ｂ２

【文献】中国特許公開１０７３７５４２８Ａ

【非特許文献】

【0009】

【文献】Ｗａｎｇ Ｘｉａｏｙａｎ， Ｗａｎｇ Ｔｉｎｇｌｉｎ， Ｚｈｏｕ Ｃｈｅｎｇ， ｅｔ ａｌ． 中国６省・市における白斑の疫学調査［Ｊ］． 中国皮膚科学会誌、２０１０年、４３（７）：４６３－４６６

【文献】Ｌｉａｏ Ｓ， Ｓｈａｎｇ Ｊ， Ｔｉａｎ Ｘ， ｅｔ ａｌ． Ｕｐ‐ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｌａｎｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ［Ｊ］． Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２０１２， ２１（８）：６３５－６３７

【文献】Ｚｈｏｕ Ｌ， Ｃａｉ Ｍ ， Ｒｅｎ Ｙ ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ５－ＨＴ１Ａ／２Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｏｕｓｅ ｓｋｉｎ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１８， ９２（３）：２２２－２２９

【文献】Ｇｕ Ｗｅｎ Ｔａｏ， Ｘｕ ｈｕｉ， Ｍａ Ｈｏｎｇ， ｅｔ ａｌ． 白斑患者における血清２５－ヒドロキシビタミンＤ値の検出とカボトリオール治療の有効性［Ｊ］。臨床皮膚科学会誌、２０１６（８）：５７２－５７４

【文献】Ｓｏｎｇ Ｗｅｎ Ｔｉｎｇ，Ｚｈａｏ Ｇｕａｎｇ． 白斑と自己免疫の研究の進展［Ｊ］．中国美容医療，２０１１，２０（２）：３２７－３３０

【文献】Ｇｏｎｇ Ｑ， Ｌｉ Ｘ， Ｓｕｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ ｕｎｄｅｒ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ： Ｉｓ ｉｔ ａ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｏｒ？［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１５，７７（２）：１１７－１２４

【文献】Ｚｈａｎｇ Ｑｉａｎ．軽度から中等度の白斑に対するタカルシトール軟膏とカルシポトリオール軟膏の系統的評価［Ｊ］．プライマリ・ケア医学会フォーラム、２０１８（１４）

【文献】Ｇｕ Ｗｅｎ Ｔａｏ， Ｘｕ ｈｕｉ， Ｍａ Ｈｏｎｇ， ｅｔ ａｌ．白斑患者における血清２５－ヒドロキシビタミンＤ値の検出とカボトリオール治療の有効性観察［Ｊ］。臨床皮膚科学会誌、２０１６（８）：５７２－５７４

【文献】Ｔａｎｇ Ｌｕｙａｎ， Ｆｕ Ｗｅｎｗｅｎ， Ｚｈａｎｇ Ｙｏｎｇ， ｅｔ ａｌ． メラニン細胞のメラニン合成に及ぼすカボトリオールの影響［Ｊ］。中国皮膚科学会誌， ２００９， ４２（１１）：７７１－７７３

【文献】Ｋｈｕｌｌａｒ Ｇ ， Ｋａｎｗａｒ Ａ Ｊ ， Ｓｉｎｇｈ Ｓ ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｏｐｉｃａｌ ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ ｏｉｎｔｍｅｎｔ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＮＢ－ＵＶＢ ｖｓ． ＮＢ ‐ ＵＶＢ ａｌｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｖｉｔｉｌｉｇｏ： ａ ２４‐ｗｅｅｋ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｒｉｇｈｔ－ｌｅｆｔ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ， ２０１４， ２９（５）：９２５－９３２

【文献】Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄ Ｍ， Ｐｉｌｌａｎｓ Ｐ Ｉ． Ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｐｙｒａｍｉｄａｌ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ．［Ｊ］． Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １９８９， １４６（１０）：１３５２－３

【文献】Ｈｕａｎｇ Ｊｉ Ｈａｎ， Ｈｕａｎｇ Ｘｉａｏ Ｈｕｉ， Ｃｈｅｎ Ｚｈｉ Ｙａｎｇ， ｅｔ ａｌ． 薬理試験における動物間および動物－ヒト間の等価用量換算［Ｊ］。中国臨床薬理と治療、２００４年、９（９）：１０６９－１０７２

【文献】Ｙｕａｎ Ｓｈｏｕ Ｊｕｎ． 多剤併用の薬効和算の数理と相乗拮抗作用の定量計算法［Ｍ］． 江蘇省鳳凰科学技術出版社，２０１６，初版

【発明の概要】

【0010】

本発明の発明者は、フルオキセチンとビタミンＤ３またはその誘導体とを併用することにより、両者の毒性を有効に低減することができると同時に、フルオキセチンは、ビタミンＤ３及びその誘導体と協働し、用量依存的にメラニン合成の増加を促進し、用量依存的にチロシナーゼ活性の上昇を促進することができることを発見し、そのため、メラニン合成の低下による低色素性疾患の治療又は改善に用いられる。白斑患者はビタミンＤ３レベルが低下すると、５－ＨＴレベルが低下する。フルオキセチンは５－ＨＴ再取り込み阻害剤であり、フルオキセチンとビタミンＤ３およびその誘導体を併用することにより、体内における５－ＨＴレベルを正常レベルに回復させることができる。本発明者は、所定用量のフルオキセチン（０．０１－１０ｍｇ／ｇ）とカルシポトリオール（０．５－５０μｇ／ｇ）を併用すると、相乗効果が生じ、メラニン合成促進効果は、フルオキセチンおよびカルシポトリオールをそれぞれ単独使用する場合より優れ、フルオキセチンとカルシポトリオールを別々に使用する場合の薬効より優れていることを発見した。このように、色素喪失疾患の臨床治療においてカルシポトリオールとフルオキセチンを併用することにより、薬効を高めるのみならず、薬効を維持したまま、用量を減少し、副作用を軽減することができる。

【0011】

よって、本発明の目的は、フルオキセチンとビタミンＤ３（ビタミンＤ３）またはその誘導体との組成物、前記組成物は低色素性疾患の治療または緩和のための薬剤の製造への用途、ならびに前記組成物を含む医薬製剤を提供することである。

【0012】

本発明の構成は以下の通りである。

【0013】

本発明の１つの態様は、フルオキセチン及びビタミンＤ３又はその誘導体を含む組成物であり、前記組成物は低色素性疾患の治療及び／又は緩和のために使用される。

【0014】

好ましくは、前記フルオキセチンとビタミンＤ３又はその誘導体との重量比は、１０以上、好ましくは２０以上である。

【0015】

好ましくは、前記フルオキセチンとビタミンＤ３又はその誘導体との重量比は、５００以下、好ましくは４００以下、より好ましくは２００以下である。

【0016】

好ましくは、前記フルオキセチンは、フルオキセチンラセミ体、Ｒ－フルオキセチン又はその薬学的に許容される塩から選択される。

【0017】

好ましくは、前記ビタミンＤ３又はその誘導体は、ビタミンＤ３、カルシポトリオール

、カルシポトリオール

、カルシトリオール及びタカルシトールから選ばれる１種又は２種以上である。

【0018】

前記組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含むが、ただし、その賦形剤が本発明の目的を損なわないことを条件とする。例示の実例として、乳化剤、酸化防止剤、湿潤剤、保湿剤、界面活性剤、高分子化合物、ｐＨ調整剤、金属イオン錯化剤、投射剤、溶剤、液体グリース等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0019】

前記組成物が賦形剤を含む場合、前記フルオキセチンの含有量は、組成物の０．０１～１０ｍｇ／ｇ、好ましくは組成物の０．０１～５ｍｇ／ｇ、より好ましくは組成物の０．１～１ｍｇ／ｇである。

【0020】

好ましくは、前記ビタミンＤ３又はその誘導体の含有量は、組成物の０．００５～５００μｇ／ｇ、好ましくは組成物の０．５～２５０μｇ／ｇ、より好ましくは組成物の５～５０μｇ／ｇである。

【0021】

本発明の他の態様は、低色素性疾患の治療および／または緩和のための医薬品の製造への上記組成物の用途である。

【0022】

前記低色素性疾患は、メラニン合成の低下に起因する疾患であり、白斑、白髪、白色粃糠疹、貧血性母斑又は色素失調症等から選択されるものである。

【0023】

本発明の他の態様は、上記組成物を含む製剤である。

【0024】

前記製剤は、クリーム、軟膏、ゲル、エアゾール、スプレー、パウダー、溶液剤、芳香水、チンキ剤、スピリッツ剤、グリセリン剤、可溶性ゲル剤、懸濁液剤、乳液剤、塗布剤、コーティング剤、ペースト剤、ローション、塗布剤及びチンキ剤から選択される。

【0025】

本発明の他の態様は、低色素性疾患を治療する方法であり、上記組成物又は上記組成物からなる製剤を局所投与により皮膚に塗布する手段を含む。

【0026】

好ましくは、前記組成物または前記組成物からなる製剤において、前記フルオキセチンの濃度は、組成物の０．０１～１０ｍｇ／ｇ、好ましくは組成物の０．０１～５ｍｇ／ｇ組成物、より好ましくは組成物の０．１～１ｍｇ／ｇである。

【0027】

前記低色素性疾患は、メラニン合成の低下に起因する疾患であり、白斑、白髪、白色粃糠疹、貧血性母斑又は色素失調症等から選択される。

【0028】

本発明に記載された組成物におけるＲ－フルオキセチンおよびビタミンＤ３またはその誘導体は、互いに協働し、互いの毒性を軽減し、メラニン合成を促進し、チロシナーゼ活性を増加させることができる。従って、低色素性疾患の治療および／または緩和に有効である。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1】図１は、実施例１、実施例２、実施例３、実施例４、実施例５、実施例６および実施例７の実験の一部を示すフローチャートである。

【図2】図２は、実施例１において、フルオキセチン、ビタミンＤ３、カルシポトリオール、及びタカルシトールを単独で用いた場合の、ゼブラフィッシュの生存率に対する影響を示すグラフである。

【図3】図３は、実施例２の２．１部分にフルオキセチンと、濃度の異なるビタミンＤ３とを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図4】図４は、実施例２の２．２部分にフルオキセチンと、濃度の異なるカルシポトリオールとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図5】図５は、実施例２の２．３部分にフルオキセチンと、濃度の異なるタカルシトールとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図6】図６は、実施例２の２．４部分にビタミンＤ３と、濃度の異なるフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図7】図７は、実施例２の２．５部分にカルシポトリオールと、濃度の異なるフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図8】図８は、実施例２の２．６部分にタカルシトールと、濃度の異なるフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響を示すグラフである。

【図9】図９は、実施例３の３．１部分にフルオキセチンを単独用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響を示すグラフである。

【図10】図１０は、実施例３の３．１部分にフルオキセチンを単独使用した場合の投与量と効果の関係を示すフィッティング・グラフである。

【図11】図１１は、実施例３の３．２部分にフルオキセチンを単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響を示すグラフである。

【図12】図１２は、実施例４の４．１部分にビタミンＤ３を単独用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響を示すグラフである。

【図13】図１３は、実施例４の４．１部分にビタミンＤ３を単独用いた場合の投与量と効果の関係を示すフィッティング・グラフである。

【図14】図１４は、実施例４の４．２部分にカルシポトリオールを単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響を示すグラフである。

【図15】図１５は、実施例５の５．１部分にカルシポトリオールを単独用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響を示すグラフである。

【図16】図１６は、実施例５の５．１部分にカルシポトリオールを単独用いた場合の投与量と効果の関係を示すフィッティング・グラフである。

【図17】図１７は、実施例５の５．２部分にカルシポトリオールを単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響を示すグラフである。

【図18】図１８は、実施例６の６．１部分にフルオキセチンとビタミンＤ３とを併用した場合に、フルオキセチンとビタミンＤ３との比率の違いにより、ゼブラフィッシュのメラニンへの影響を示すグラフである。

【図19】図１９は、実施例６の６．２部分に併用グループにおけるビタミンＤ３濃度を横軸とした予想加算効果と実効果を示すグラフである。

【図20】図２０は、実施例７の７．１部分に併用グループにおけるカルシポトリオール濃度を横軸とした予想加算効果と実効果を示すグラフである。

【図21】図２１は、実施例８の８．４部分にフルオキセチンクリーム、カルシポトリオールクリーム、フルオキセチンクリーム＋カルシポトリオールクリーム、フルオキセチンカルシポトリオール配合クリームがロジンパラフィンワックスによる物理的脱毛のハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）モデルにおけるＣ５７ＢＬ／６マウス背部の皮膚色に対する影響の効果を示すグラフである。

【図22】図２２は、実施例８の８．４部分にフルオキセチンクリーム、カルシポトリオールクリーム、フルオキセチンクリーム＋カルシポトリオールクリーム、フルオキセチンカルシポトリオール配合クリームがロジンパラフィンワックスによる物理的脱毛のハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）モデルにおけるＣ５７ＢＬ／６マウスの背部皮膚における毛包のＨＥ染色に対する影響の効果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0030】

以下、添付された図面を参照しながら本発明の具体的な実施例を詳しく説明するが、これらの図面は本発明の具体的な実施例を説明するものであり、本発明を限定するものではない。以下の実施例において、特に明記していない限り、フルオキセチンはフルオキセチンラセミ体塩酸塩およびＲ－フルオキセチン塩酸塩を指す。以下の実施例および添付図面において、Ｆｌｕがフルオキセチンの略称であり、ＶＤ３がビタミンＤ３の略称であり、Ｃａｌがカルシポトリオールの略称であり、Ｔａｌがタカルシトールの略称である。実施例にゼブラフィッシュとマウスの実験での投与量を臨床使用量の０．０１と０．０８１に換算し、即ち、実施例にゼブラフィッシュにおけるフルオキセチンの用量範囲は０．１～１００μｇ／ｍｌであり、０．０１～１０ｍｇ／ｍｌまたは０．０１～１０ｍｇ／ｇの臨床用量に換算される。具体的な換算方法は参考文献（非特許文献１２）を参照されたい。実施例におけるＣ５７ＢＬ／６マウスは、揚州大学実験動物センターから購入したものである。ゼブラフィッシュの成魚は国家ゼブラフィッシュリソースセンターから購入したものであり、胚が実験室内で自ら培養されたものである。フルオキセチンは浙江普洛家庭薬
有限会社から購入したものであり、カルシポトリオールは上海易勢化工有限会社から購入したものであり、ビタミンＤ３、ＰＴＵ及びタカルシトールはＳｉｇｍａ会社から購入したものである。

【実施例】

【0031】

実施例１：
１．１フルオキセチン、ビタミンＤ３、カルシポトリオール、及びタカルシトールを単独で用いた場合の、ゼブラフィッシュの生存率に対する影響、及びゼブラフィッシュの受精で得られた胚を以下のようにグループ分けをする。

【0032】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0033】

ＰＴＵ（１－フェニル－２－チオ尿素、ＰＴＵが可逆的チロシナーゼ阻害剤である）３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で３５時間に発育するまで培養した後に、ゼブラフィッシュ胚を精製水に入れ、２５時間に培養を続けてゼブラフィッシュ生存率を観察する。

【0034】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン処理グループ：純水の代わりに０．１、１、１０、１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液をそれぞれ使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0035】

ＰＴＵ３５時間＋カルシポトリオール処理グループ：純水の代わりに０．００５、０．０５、０．５、５μｇ／ｍｌの濃度のカルシポトリオール水溶液をそれぞれ使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0036】

ＰＴＵ３５時間＋タカルシトール処理グループ：純水の代わりに０．００５、０．０５、０．５、５μｇ／ｍｌの濃度のタカルシトール水溶液をそれぞれ使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0037】

ＰＴＵ３５時間＋ビタミンＤ３処理グループ：純水の代わりに０．００５、０．０５、０．５、５μｇ／ｍｌの濃度のビタミンＤ３水溶液をそれぞれ使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。結果は図２に示す通りであり、Ｃｏｎｔｒｏｌと比較すると、＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す。

【0038】

図２に示すように、ビタミンＤ３は５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、ＩＣ５０＝ ４．５μｇ／ｍｌ。カルシポトリオールは５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、ＩＣ５０＝ ３．５μｇ／ｍｌ。タカルシトールは５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、ＩＣ５０＝ ４．０μｇ／ｍｌ。フルオキセチンは１００μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな影響を有し、ＩＣ５０＝ ８９．７μｇ／ｍｌ。

【0039】

実施例２：
２．１フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のビタミンＤ３とを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0040】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0041】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0042】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0043】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液を使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0044】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）＋ビタミンＤ３（０．００５～０．５μｇ／ｍｌ）処理グループ：１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液に、０．００５、０．０５、０．５μｇ／ｍｌの濃度のビタミンＤ３をそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0045】

結果は図３に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃＃はＰ＜０．０１を示し、＃＃＃はＰ＜０．００１を示す。

【0046】

図３に示すように、フルオキセチンは１００μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、ビタミンＤ３の添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、ビタミンＤ３とフルオキセチンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるフルオキセチンの毒性を低減できることを示唆している。

【0047】

２．２フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のカルシポトリオールとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0048】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0049】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0050】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0051】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液を使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0052】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）＋カルシポトリオール（０．００５～０．５μｇ／ｍｌ）処理グループ：１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液に、０．００５、０．０５、０．５μｇ／ｍｌの濃度のカルシポトリオールをそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0053】

結果は図４に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃＃はＰ＜０．０１を示し、＃＃＃はＰ＜０．００１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0054】

図４に示すように、フルオキセチンは１００μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、カルシポトリオールの添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、カルシポトリオールとフルオキセ
チンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるフルオキセチンの毒性を低減できることを示唆している。

【0055】

２．３フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のタカルシトールとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0056】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0057】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0058】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0059】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液を使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0060】

ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）＋タカルシトール（０．００５～０．５μｇ／ｍｌ）処理グループ：１００μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチン水溶液に、０．００５、０．０５、０．５μｇ／ｍｌの濃度のタカルシトールをそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0061】

結果は図５に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、フルオキセチン（１００μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃はＰ＜０．０５を示し、＃＃はＰ＜０．０１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0062】

図５に示すように、フルオキセチンは１００μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、タカルシトールの添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、タカルシトールとフルオキセチンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるフルオキセチンの毒性を低減できることを示唆している。

【0063】

２．４ビタミンＤ３（５μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0064】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0065】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0066】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0067】

ＰＴＵ３５時間＋ビタミンＤ３（５μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに５μｇ／ｍｌの濃度のビタミンＤ３水溶液を使用した以外に、実施例１におけるＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0068】

ＰＴＵ３５時間＋ビタミンＤ３（５μｇ／ｍｌ）＋フルオキセチン（０．１～１０μｇ／ｍｌ）処理グループ：５μｇ／ｍｌの濃度のビタミンＤ３水溶液に、０．１、１、１０μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチンをそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋
ビタミンＤ３（５μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0069】

結果は図６に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ビタミンＤ３（５μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃＃はＰ＜０．０１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0070】

図６に示すように、ビタミンＤ３は５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、フルオキセチンの添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、ビタミンＤ３とフルオキセチンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるビタミンＤ３の毒性を低減できることを示唆している。

【0071】

２．５カルシポトリオール（５μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0072】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0073】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0074】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0075】

ＰＴＵ３５時間＋カルシポトリオール（５μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに５μｇ／ｍｌの濃度のカルシポトリオール水溶液を使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0076】

ＰＴＵ３５時間＋カルシポトリオール（５μｇ／ｍｌ）＋フルオキセチン（０．１～１０μｇ／ｍｌ）処理グループ：５μｇ／ｍｌの濃度のカルシポトリオール水溶液に、０．１、１、１０μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチンをそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋カルシポトリオール（５μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0077】

結果は図７に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、カルシポトリオール（５μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃＃＃はＰ＜０．００１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0078】

図７に示すように、カルシポトリオールは５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、フルオキセチンの添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、カルシポトリオールとフルオキセチンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるカルシポトリオールの毒性を低減できることを示唆している。

【0079】

２．６タカルシトール（５μｇ／ｍｌ）と異なる濃度のフルオキセチンとを併用した場合のゼブラフィッシュの生存率への影響

【0080】

ゼブラフィッシュ胚は以下のようにグループ分けをする。

【0081】

正常対照グループ：即ち、薬物を投与しないグループ

【0082】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：実施例１のＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作を行う。

【0083】

ＰＴＵ３５時間＋タカルシトール（５μｇ／ｍｌ）処理グループ：純水の代わりに５μｇ／ｍｌの濃度のタカルシトール水溶液を使用した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0084】

ＰＴＵ３５時間＋タカルシトール（５μｇ／ｍｌ）＋フルオキセチン（０．１～１０μｇ／ｍｌ）処理グループ：５μｇ／ｍｌの濃度のタカルシトール水溶液に、０．１、１、１０μｇ／ｍｌの濃度のフルオキセチンをそれぞれに更に加えた以外に、上記ＰＴＵ３５時間＋タカルシトール（５μｇ／ｍｌ）処理グループと同様の操作をした。

【0085】

結果は図８に示す通りであり、ＰＴＵ３５時間処理と比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、タカルシトール（５μｇ／ｍｌ）処理グループと比較すると、＃＃＃はＰ＜０．００１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0086】

図８に示すように、タカルシトールは５μｇ／ｍｌの用量で、ゼブラフィッシュの生存率に対して明らかな抑制効果を有し、フルオキセチンの添加量の増加に伴いゼブラフィッシュの死亡率が徐々に減少する。この結果は、タカルシトールとフルオキセチンとを併用することにより、ゼブラフィッシュにおけるカルシポトリオールの毒性を低減できることを示唆している。

【0087】

実施例３：
３．１フルオキセチンを単独用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響

【0088】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0089】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水に６０時間までに培養した。

【0090】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0091】

フルオキセチン（０．１、０．４、１．６、６．４、２５．６μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．１， ０．４， １．６， ６．４， ２５．６μｇ／ｍｌのフルオキセチン水溶液でそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。ＮａＯＨ溶解法を用いてゼブラフィッシュのメラニン定量分析が行われ、各ゼブラフィッシュのグループを集めて余分な水分を吸い取り、１００μｌのＰＢＳを加え、氷浴中で１分間の超音波処理を行い、その後、４℃、１２，０００ ｒ／ｍｉｎの遠心分離が１０分間に行われ、得られた上清をタンパク質定量（ＢＣＡ法）に用い、総タンパク含有量を算出する。下層のメラニン沈殿を１００μｌのＮａＯＨ（１０％ＤＭＳＯ含有）に加え、８０℃の水浴で２時間溶解させる。完全に溶解したメラニンを８０μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに加え、波長４０５ｎｍで吸光度を測定し、タンパク質１ｍｇあたりのメラニン含有量を算出する。すべての実験は３回繰り返され、すべてのデータは一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）にかけ、その後にターキーテストも実施される。正常対照グループと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、＃はＰ＜０．０５を示し、＃＃はＰ＜０．０１を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0092】

図９に示すように、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処理グループのメラニン含有量は明らかに減少しており、ＰＴＵがゼブラフィッシュに色素脱失を引き起こ
すことを示した。ＰＴＵ３５時間処理グループと比べて、フルオキセチン（６．４～２５．６μｇ／ｍｌ）を投与すると、用量依存的にゼブラフィッシュのメラニン含有量の増加が促進できる。表１は、フルオキセチンを単独使用する際に（０．１～２５．６μｇ／ｍｌ）ゼブラフィッシュのメラニン合成に対する有効率を計算した結果を示す。図１０はフルオキセチンを単独使用した場合の用量と効果の関係を示す。

【0093】

【表1】

【0094】

３．２フルオキセチンを単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響

【0095】

Ｌ－ＤＯＰＡ法を利用してゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性の測定が行われる。Ｌ－ＤＯＰＡ法によるゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性の測定は以下の通りである。実施例３の３．１の遠心分離の後に得られた上清を、ＢＣＡ法によるタンパク質定量を行い、タンパク質の濃度を算出した。１０μｇのタンパク質を含む体積を９６ウェルプレートに添加し、ＰＢＳ （０．１ Ｍ， ｐＨ ６．８） で１００μｌまでに定量し、その後、０．１％ ｇ／ｍｌのＬ－ＤＯＰＡを１００μｌ添加し、濃度ごとに３つの化合物ウェルを設置し、遮光して３７℃で６０分間インキュベートし、波長４７５ｎｍでＯＤ値を測定した。すべての実験は３回に繰り返され、すべてのデータは一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）にかけ、その後にターキーテストも実施される。正常対照グループと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、＃＃＃はＰ＜０．００１を示し、＃＃はＰ＜０．０１を示し、＃はＰ＜０．０５を示し、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0096】

図１１の結果によると、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処理グループでのチロシナーゼ活性は明らかに低下し、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、フルオキセチン（１．６－２５．６μｇ／ｍｌ）は用量依存的にゼブラフィッシュにおけるチロシナーゼ活性を増加させることができる。

【0097】

実施例４：
４．１ビタミンＤ３を単独用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響

【0098】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0099】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水に６０時間までに培養した。

【0100】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵ
の含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0101】

ビタミンＤ３（０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌのビタミンＤ３水溶液でそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。メラニン含有量の測定方法について、実施例３における３．１部分を参照されたい。正常対照グループと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0102】

図１２に示すように、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処理グループのメラニン含有量は明らかに減少し、ＰＴＵがゼブラフィッシュに色素脱失を引き起こすことを証明した。ＰＴＵ３５時間処理グループと比べて、ビタミンＤ３（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）を投与すると、ゼブラフィッシュのメラニン含有量の増加を多少促進できるが、いずれも明らかな差異が存在しない。表２は、ビタミンＤ３を単独使用する際に（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）ゼブラフィッシュ胚のメラニン合成に対する有効率を計算した結果を示す。図１３はビタミンＤ３の量と効果との関係を多項式でフィットした結果を示す。

【0103】

【表2】

【0104】

４．２ビタミンＤ３を単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響

【0105】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0106】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水に６０時間までに培養した。

【0107】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0108】

ビタミンＤ３（０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌのビタミンＤ３水溶液でそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0109】

チロシナーゼ活性の測定方法について、実施例３における３．２部分を参照されたい。正常対照グループと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0110】

実験結果：図１４の結果によると、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処
理グループでのゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性は明らかに低下し、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ビタミンＤ３の投与量（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）は、ゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性に対して明らかな影響はない。

【0111】

実施例５：
５．１カルシポトリオールを単独で用いた場合のゼブラフィッシュのメラニン含有量への影響

【0112】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0113】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水に６０時間までに培養した。

【0114】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0115】

カルシポトリオール（０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌのカルシポトリオール水溶液でそれぞれ２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。メラニン含有量の測定方法について、実施例３における３．１部分を参照されたい。正常対照グループと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0116】

実験結果：図１５に示すように、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処理グループのメラニン含有量は明らかに減少しており、ＰＴＵがゼブラフィッシュに色素脱失を引き起こすことを示した。ＰＴＵ３５時間処理グループと比べて、カルシポトリオール（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）を投与しても、ゼブラフィッシュのメラニン含有量の増加に明らかな影響はない。表３は、カルシポトリオールを単独使用する際に（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）ゼブラフィッシュのメラニン合成に対する有効率を計算した結果を示す。図１６はカルシポトリオールの量と効果の関係を多項式でフィットした結果を示す。

【0117】

【表3】

【0118】

５．２カルシポトリオールを単独用いた場合のゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性への影響

【0119】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0120】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水
に６０時間までに培養した。

【0121】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0122】

カルシポトリオール（０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．００５、０．０２、０．０８、０．３２、１．２８μｇ／ｍｌのカルシポトリオール水溶液でそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0123】

チロシナーゼ活性の測定方法について、実施例３における３．２部分を参照されたい。Ｃｏｎｔｒｏｌと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ｎｓ はＰ＞０．０５を示す。

【0124】

図１７の結果によると、正常対照グループと比較すると、ＰＴＵ３５時間処理グループでのゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性は明らかに低下し、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、カルシポトリオールの投与量（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）は、ゼブラフィッシュのチロシナーゼ活性に対して明らかな影響はない。

【0125】

実施例６：
６．１異なる比率のフルオキセチンとビタミンＤ３とを併用した場合のゼブラフィッシュのメラニン合成への影響

【0126】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0127】

正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）：ゼブラフィッシュの受精後に得られた胚を精製水に６０時間までに培養した。

【0128】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0129】

フルオキセチン＋ビタミンＤ３（０．００５μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．４μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、０．２μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、０．１μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、０．０５μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、０．０２５μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、を含む水溶液にそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0130】

メラニン含有量の測定方法について、実施例３における３．１部分を参照されたい。Ｃｏｎｔｒｏｌと比較すると、＊＊＊はＰ＜０．００１を示す、ＰＴＵ３５時間処理グループと比較すると、ｎｓ はＰ＞０．０５を示し、＃はＰ＜０．０５を示す。

【0131】

図１８に示すように、フルオキセチンとビタミンＤ３を５：１、１０：１、２０：１、４０：１、８０：１でゼブラフィッシュに投与したところ、２０：１の時に明らかな差異が見られた。従って、以下の実施例において、フルオキセチンとビタミンＤ３の比率を２０：１として検討した。

【0132】

６．２フルオキセチンとビタミンＤ３とを併用した場合のゼブラフィッシュのメラニン合成への影響

【0133】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0134】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0135】

フルオキセチン＋ビタミンＤ３（０．１＋０．００５、０．４＋０．０２、１．６＋０．０８、６．４＋０．３２、２５．６＋１．２８μｇ／ｍｌ＋μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．１μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、０．４μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．０２μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、１．６μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．０８μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、６．４μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．３２μｇ／ｍｌのビタミンＤ３、２５．６μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋１．２８μｇ／ｍｌのビタミンＤ３の水溶液にそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0136】

メラニン含有量の測定方法について、実施例３における３．１部分を参照されたい。

【0137】

表４は、フルオキセチンとビタミンＤ３をそれぞれ単独使用する場合、及びフルオキセチンとビタミンＤ３とを併用した場合のゼブラフィッシュのメラニン合成に対する有効率を示す。等価用量換算により得られたフルオキセチンとビタミンＤ３の予想加算効果をそれぞれ表５と表６に示す。ビタミンＤ３の投与量を横軸とし、予想加算効果と実際の効果を図１９に示す。フルオキセチンとビタミンＤ３の併用は、予想される加算効果より実際の加算効果の方が大きい。結果を分析したところ、表７に示すように、フルオキセチン（０．１～２５．６μｇ／ｍｌ）とビタミンＤ３（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）は使用量範囲において加算効果を有する。

【0138】

【表4】

【0139】

【表5】

【0140】

【表6】

【0141】

【表7】

【0142】

実施例７：
７．１フルオキセチンとカルシポトリオールとを併用した場合のゼブラフィッシュのメラニン合成への影響

【0143】

ゼブラフィッシュは以下のようにグループ分けをする。

【0144】

ＰＴＵ３５時間処理グループ：６時間発育したゼブラフィッシュ胚を０．２ｍＭ ＰＴＵの含有水溶液で２９時間に培養し、３５時間に発育するまで培養した後に、前記胚を精製水に入れ、胚が６０時間発育するまでに２５時間培養を継続する。

【0145】

フルオキセチン＋カルシポトリオール（０．１＋０．００５、０．４＋０．０２、１．６＋０．０８、６．４＋０．３２、２５．６＋１．２８μｇ／ｍｌ＋μｇ／ｍｌ）処理グループ：３５時間に発育された前記胚を０．１μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．００５μｇ／ｍｌのカルシポトリオール、０．４μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．０２μｇ／ｍｌのカルシポトリオール、１．６μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．０８μｇ／ｍｌのカルシポトリオール、６．４μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋０．３２μｇ／ｍｌのカルシポトリオール、２５．６μｇ／ｍｌのフルオキセチン＋１．２８μｇ／ｍｌのカルシポトリオールの水溶液にそれぞれに２５時間に培養した以外に、上記ＰＴＵ３５時間処理グループと同様の操作をした。

【0146】

メラニン含有量の測定方法について、実施例３における３．１部分を参照されたい。

【0147】

表８は、フルオキセチンとカルシポトリオールをそれぞれ単独使用する場合、及びフルオキセチンとカルシポトリオールとを併用した場合のゼブラフィッシュのメラニン合成に対する有効率を示す。等価用量換算で得られたフルオキセチンとカルシポトリオールの予想加算効果をそれぞれに表９と表１０に示す。カルシポトリオールの濃度を横軸とし、予想加算効果と実際の効果を図２０に示す。フルオキセチンとカルシポトリオールの併用は、
予想加算効果より実際の効果の方が大きい。結果を分析したところ、表１１に示すように、フルオキセチン（０．１～２５．６μｇ／ｍｌ）とカルシポトリオール（０．００５～１．２８μｇ／ｍｌ）は使用量範囲において加算効果を有する。

【0148】

【表8】

【0149】

【表9】

【0150】

【表10】

【0151】

【表11】

【0152】

実施例８：
８．１． フルオキセチンカルシポトリオール配合クリームの調製方法
フルオキセチン ０．１％ （ｇ／ｇ）
カルシポトリオール ０．００５％ （ｇ／ｇ）
ＤＬ－α－トコフェロール ０．０３％ （ｇ／ｇ）
ステアリン酸 ２．５％ （ｇ／ｇ）
オクタデカノール １０．５％ （ｇ／ｇ）
ＳＤＳ ０．５％ （ｇ／ｇ）
グリセリン １０％ （ｇ／ｇ）
プロピレングリコール ３％ （ｇ／ｇ）
流動パラフィン ８％ （ｇ／ｇ）
精製水 ６５．３６５％ （ｇ／ｇ）

【0153】

上記の測定値は、いずれもが重量パーセントで表示している。まず、オクタデカノール、ステアリン酸、流動パラフィンを８０℃以上に加熱して保温し、溶液Iとして液状に溶か
す。次に、ＳＤＳ、グリセリン、プロピレングリコール、トコフェロール、精製水を８０℃以上に加熱し、溶液IIとした。２００メッシュでふるい分けたフルオキセチンとカルシポトリオールをI液に順次に添加し、真空引き、約３０分間に攪拌しながら乳化し、その
後に攪拌しながら乳化して冷却させ、約３５℃まで冷却し、攪拌・乳化を停止し、パッケージに充填する。

【0154】

８．２． ０．１％ｇ／ｇのフルオキセチンクリームの調製方法
フルオキセチン ０．１％ （ｇ／ｇ）
ＤＬ－α－トコフェロール ０．０３％ （ｇ／ｇ）
ステアリン酸 ２．５％ （ｇ／ｇ）
オクタデカノール １０．５％ （ｇ／ｇ）
ＳＤＳ ０．５％ （ｇ／ｇ）
グリセリン １０％ （ｇ／ｇ）
プロピレングリコール ３％ （ｇ／ｇ）
流動パラフィン ８％ （ｇ／ｇ）
精製水 ６５．３７０％ （ｇ／ｇ）

【0155】

上記の測定値は、いずれもが重量パーセントで表示している。オクタデカノール、ステアリン酸、流動パラフィンを８０℃以上に加熱して保温し、溶液Iとして液状に溶かす。次
に、ＳＤＳ、グリセリン、プロピレングリコール、トコフェロール、精製水を８０℃以上に加熱し、溶液IIとした。２００メッシュでふるい分けたフルオキセチンをI液に添加し
、真空引き、約３０分間に攪拌しながら乳化し、その後に攪拌しながら乳化して冷却させ、約３５℃まで冷却し、攪拌・乳化を停止し、パッケージに充填する。

【0156】

８．３． ０．００５％のカルシポトリオールクリームの調製方法
カルシポトリオール ０．００５％ （ｇ／ｇ）
ＤＬ－α－トコフェロール ０．０３％ （ｇ／ｇ）
ステアリン酸 ２．５％ （ｇ／ｇ）
オクタデカノール １０．５％ （ｇ／ｇ）
ＳＤＳ ０．５％ （ｇ／ｇ）
グリセリン １０％ （ｇ／ｇ）
プロピレングリコール ３％ （ｇ／ｇ）
流動パラフィン ８％ （ｇ／ｇ）
精製水 ６５．４６５％ （ｇ／ｇ）

【0157】

上記の測定値は、いずれもが重量パーセントで表示している。まず、オクタデカノール、ステアリン酸、流動パラフィンを８０℃以上に加熱して保温し、溶液Iとして液状に溶か
す。次に、ＳＤＳ、グリセリン、プロピレングリコール、トコフェロール、精製水を８０℃以上に加熱し、溶液IIとした。２００メッシュでふるい分けたカルシポトリオールをＩ
液に添加し、真空引き、約３０分間に攪拌しながら乳化し、その後に攪拌しながら乳化して冷却させ、約３５℃まで冷却し、攪拌・乳化を停止し、パッケージに充填する。

【0158】

８．４．フルオキセチンカルシポトリオール配合クリームがＣ５７ＢＬ／６マウスのメラニン合成への影響

【0159】

上記調製された０．１ｇ／ｇのフルオキセチンクリームと０．００５ｇ／ｇのカルシポトリオールクリーム、及び０．１ｇ／ｇのフルオキセチンと０．００５ｇ／ｇのカルシポトリオールクリームの配合クリームを利用して、ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）モデルにおけるＣ５７ＢＬ／６マウスのメラニン合成への影響を検討した。

【0160】

健康な６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６雄マウス７０匹を１週間に飼育した後に、体重別に、（１）正常対照グループ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、（２）ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）モデルグループ（Ｍｏｄｅｌ）、（３）ブランクマトリックスグループ（Ｍａｔｒｉｘ）、（４）０．１ｇ／ｇフルオキセチンクリームグループ、（５）０．００５ｇ／ｇカルシポトリオールクリームグループ、（６）０．１％ｇ／ｇ フルオキサチンクリームと０．００５ｇ／ｇ カルシポトリオールクリーム時間別投与グループ、 （７） ０．１％ｇ／ｇ フルオキセチンと０．００５％ｇ／ｇ カルシポトリオール配合クリームグループ、（８） メチシリングループ（重慶華邦医薬有限公司より購入）にランダムに分けた。各軟膏はいずれもが１６．３５ｍｇ／ｃｍ２の用量で投与されている。ロジンパラフィンワックスによる背中脱毛後 の（１）正常対照グループは無処理で対処する。（２）モデルグループには２．５％ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）ゲルを朝塗りして１０日後に投与を開始する、モデルグループに２．５％ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）のみを投与した。（３） マトリックスグループは、午前中にハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）を塗布した後に、午後にブランクマトリックスを塗布した。（４） ０．１％フルオキセチンクリームグループは午後に０．１％ｇ／ｇ フルオキセチンクリームを塗布した。（５） ０．００５ｇ／ｇカルシポトリオールクリームグループは午後にカルシポトリオールクリームを塗布した。（６） グループは、先に０．１％ｇ／ｇ フルオキサチンを塗布した１２時間後に、０．００５ｇ／ｇカルシポトリオールを塗布した。（７） 配合クリームの塗布量は１６．２５ ｍｇ／ｃｍ２
の配合クリームである。（８） メチシリングループは、０．１ ｍｌのメチシリンを塗布し，Ｃ５７ＢＬ／６マウスの皮膚を脱毛時から毎日に背部を写真撮影して観察し、メチシリン投与３０日後にマウスを頸部処し，背部の皮膚を採取して４％パラホルムアルデヒドで固定してからＨＥ切開を実施した。

【0161】

外観観察およびＨＥ染色の結果は図２１と図２２に示す。正常対照グループと比べて、ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）モデルグループでは、背中の肌色が著しく低下し、毛包におけるメラニンも減少している。マトリックスグループはモデルグループと同等であった。フルオキセチンクリームグループでは、マトリックスグループに比べ、背中の肌の色が明らかに濃くになり、毛根におけるメラニン量も増加している。また、カルシポトリオールクリームグループでは、肌の色が若干黒くなっており、マトリックスグループに比べ、毛根におけるメラニンが増加している。フルオキセチンクリームとカルシポトリオールクリームを時間別に別々に使用した場合、肌色と毛包におけるメラニンが増加したが、フルオキセチンクリーム単独使用とカルシポトリオールクリーム単独使用の時と比較すると、肌色と毛包におけるメラニンは大きな変化がなかった。一方、皮膚背部の色および毛包メラニンの含有量は、フルオキセチングループおよびカルシポトリオールクリームを単独使用グループに比べて、配合クリームグループの方が明らかに強くなっている。効果はフルオキセチンクリームとカルシポトリオールクリームの時間別投与よりも強い。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】