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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-05
(45)【発行日】2024-01-16
(54)【発明の名称】蛍光標識剤、及び蛍光色素
(51)【国際特許分類】
G01N 21/64 20060101AFI20240109BHJP
C09K 11/06 20060101ALI20240109BHJP
C07F 7/02 20060101ALI20240109BHJP
C07F 5/06 20060101ALI20240109BHJP
C07F 7/18 20060101ALI20240109BHJP
【ＦＩ】
G01N21/64 F
C09K11/06 640
C07F7/02 Z
C07F5/06 E
C07F7/18 X
【請求項の数】
4
(21)【出願番号】P 2020099441
(22)【出願日】2020-06-08
(65)【公開番号】P2021193353
(43)【公開日】2021-12-23
【審査請求日】2023-04-03
(73)【特許権者】
【識別番号】000222118
【氏名又は名称】東洋インキＳＣホールディングス株式会社
(72)【発明者】
【氏名】山本 竜太郎
(72)【発明者】
【氏名】横倉 梨乃
(72)【発明者】
【氏名】皆嶋 英範
【審査官】吉田 将志
(56)【参考文献】
【文献】特開２０２０－０２３６７６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００７－０１６２０３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０５－１６３４３９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０６－２００１７７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１７－１０５８０５（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ２１／６４
Ｃ０９Ｋ １１／０６
Ｃ０７Ｆ ７／０２
Ｃ０７Ｆ ５／０６
Ｃ０７Ｆ ７／１８
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（１）で表される蛍光色素を含む蛍光標識剤。一般式（１）
【化1】
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
【請求項2】
リン脂質集積型蛍光標識剤である、請求項１に記載の蛍光標識剤。
【請求項3】
一般式（１）のＲ１７が－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである、請求項１または２に記載の蛍光標識剤。
【請求項4】
一般式（２）で表される化合物。一般式（２）
【化2】
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Ｚ－（Ｌ１）n－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、蛍光標識剤と、それに用いられる蛍光色素に関する。
【背景技術】
【0002】
バイオイメージングは、生体内分子や細胞、生体組織の動態及び機能を可視化する技術であり、生体内分子・細胞機能の解明や創薬の研究等、生物学、医学の研究領域で幅広く活用されている。中でも蛍光バイオイメージングは、現象の動的な観察、多色観察、高感度観察が可能な手法である。
【0003】
蛍光バイオイメージングは、標的物質と特異的に結合する、あるいは、標的部位に集積する蛍光色素を用い、その蛍光色素に光を照射した際に色素が発する蛍光を検出することにより、標的を可視化する手法である。
【0004】
蛍光色素の細胞集積性を高める手段として、例えば特許文献１では、蛍光分子にリン脂質構造を導入した蛍光色素が開発されている。これにより、蛍光色素が細胞膜上に良好に固定化され、高い蛍光標識能を示す。
【0005】
特許文献１、特許文献２および特許文献３に記載の細胞膜集積型蛍光色素は吸収・蛍光波長を可視域に持つ。しかしながら、可視域の吸収波長を持つ蛍光色素では、タイムラプスイメージング中に励起光によって細胞損傷を引き起こすため、長期観察のための蛍光色素として適切でない。また可視光は、生体内物質や生体中の水による、光の吸収・散乱が大きいため、生体組織下や臓器内部のイメージングに適用できない等の制約があった。
【0006】
上述の課題は、近赤外領域の光を用いることで解決できる。近赤外蛍光色素は、シアニンを基本骨格としたものが広く利用されている。しかし、シアニン骨格は光照射により生じる活性酸素により分解しやすいため、蛍光観察中に色素が退色してしまうという課題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】ＷＯ ２００６／０９３２５２ 号公報
【文献】ＷＯ ２０１０／１３２４２８ 号公報
【文献】ＵＳ ２０１２／０１２８５９６ 号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明が解決しようとする課題は、リン脂質への集積性が高く、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）イメージングに用いる蛍光標識剤に適した蛍光強度を有する蛍光色素を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、前記諸問題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、上記課題を解決するための優れた蛍光色素を見出し、本発明をなしたものである。
【0010】
すなわち、本発明は、一般式（１）で表される蛍光色素を含む蛍光標識剤に関する。
一般式（１）
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Z－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Z－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
一般式（１）
【化1】
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Z－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Z－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
【0011】
また、本発明は、リン脂質集積型蛍光標識剤である、前記蛍光標識剤に関する。
【0012】
また、本発明は、一般式（１）のＲ１７が－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである、前記蛍光標識剤に関する。
【0013】
また、本発明は、一般式（２）で表される化合物に関する。
一般式（２）
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
一般式（２）
【化2】
（Ｒ１～Ｒ１６は、それぞれ独立に、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換のアルケニル基、置換もしくは無置換の複素環基、－ＡＢ、－ＳＯ３Ｍ２、－ＣＯＯＭ３、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１～Ｒ１６は、隣接する置換基同士が互いに連結して、環を形成してもよい。Ａは、１６族元素を表す。Ｂは、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のシクロアルキル基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｍ２、Ｍ３はそれぞれ独立に１価のカチオンを表す。
Ｒ１７は、それぞれ独立に、水酸基、ハロゲン元素、置換または無置換のアルコキシ基、置換または無置換のアリールオキシ基、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ１８Ｒ１９、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ２０、－ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ２１、－ＯＳｉＲ２２Ｒ２３Ｒ２４、－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘを表す。Ｒ１８及びＲ１９は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２０は、水素原子、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２１は、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｒ２２～Ｒ２４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。
Ｍ1は、２価～５価の金属原子を表し、Ｍ1が２価の金属原子である場合はｎは０であり、Ｍ1が３価の金属原子である場合はｎは１であり、Ｍ1が４価の金属原子である場合はｎは２である。
ただし、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘである。
Ｚは直接結合、－Ｏ－、－ＯＰ（＝Ｏ）Ｌ２－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＯＳ（＝Ｏ）２－、－ＯＳｉＬ３Ｌ４－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－を表す。Ｌ１は、直接結合、置換もしくは無置換のアルキレン基、置換もしくは無置換のアリーレン基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｘはリン脂質の残基を表す。Ｌ２は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換のアルコキシ基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。Ｌ３、Ｌ４は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換のアルキル基、置換もしくは無置換のアリール基、置換もしくは無置換の複素環基を表す。）
【発明の効果】
【0014】
本発明によって、リン脂質への集積性が高く、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）およびイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）イメージングに用いる蛍光標識剤に適した蛍光強度を有する蛍光色素を提供することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【発明を実施するための形態】
【0016】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の蛍光標識剤は、一般式（１）で表される化合物を含む。一般式（１）で表され
る化合物は、フタロシアニン色素骨格を有する蛍光色素である。
一般式（１）
本発明の蛍光標識剤は、一般式（１）で表される化合物を含む。一般式（１）で表され
る化合物は、フタロシアニン色素骨格を有する蛍光色素である。
一般式（１）
【化1】
【0017】
アルキル基としては、直鎖状または分岐鎖状のアルキル基が挙げられる。具体例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ドデシル基、オクタデシル基、イソプロピル基、イソブチル基、イソペンチル基、２－エチルヘキシル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ｔｅｒｔ－オクチル基、ネオペンチル基等を挙げることができる。アルキル基の炭素数は１～３０の範囲内であることが好ましい。
【0018】
上記アルキル基における置換基としては、フッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ニトロ基、ホルミル基、シアノ基、カルボキシル基等の他、上述したアルキル基、後述するアリール基、シクロアルキル基、複素環基が挙げられる。また、構造の一部が、アミド結合（－ＮＨＣＯ－）やエステル結合（－ＣＯＯ－）、エーテル結合（－Ｏ－）、ウレア結合（－ＮＨＣＯＮＨ－）、ウレタン結合（－ＮＨＣＯＯ－）で置換されている場合、その置換部分も「置換基」として含めるものとする。
【0019】
したがって、置換アルキル基としては、上記の置換基で置換されたアルキル基を意味する。一つ又は二つ以上の置換基で置換されたものであっても良い。例えば、ハロゲン原子で置換されたアルキル基の具体例としては、トリフルオロメチル基、２，２，２－トリフルオロエチル基、－（ＣＦ２）４ＣＦ３、－（ＣＦ２）５ＣＦ３、－（ＣＦ２）６ＣＦ３、－（ＣＦ２）７ＣＦ３、－（ＣＦ２）８ＣＦ３、トリクロロメチル基２，２－ジブロモエチル基等を挙げることができる。
【0020】
また、アミド結合で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ（－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、－(ＣＨ２)５－ＮＨＣＯ－（ＣＨ２）１１－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ(－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ３) ３等を挙げることができる。アミド結合で置換されたアルキル基の炭素数は、２～３０の範囲内であることが好ましい。
【0021】
また、エステル結合で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ（－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、－(ＣＨ２)５－ＣＯＯ－（ＣＨ２）１１－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ－(ＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３) ２等を挙げることができる。エステル結合で置換されたアルキル基の炭素数は、２～３０の範囲内であることが好ましい。
【0022】
また、エーテル結合で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ３、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－ＣＨ３（ここでｎは１から８の整数である）、－（ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－ＣＨ３（ここでｍは１から５の整数である）、－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ３－、－ＣＨ２－ＣＨ－（ＯＣＨ３）２等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。エーテル結合で置換されたアルキル基の炭素数は、２～３０の範囲内であることが好ましい。
【0023】
また、ウレア結合（－ＮＨＣＯＮＨ－）で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－ＮＨＣＯＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、－（ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＮＨ）ｎ－ＣＨ３（ここでｎは１から８の整数である）、－（ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＮＨ）ｍ－ＣＨ３（ここでｍは１から５の整数である）、－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨＣＯＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ３－、－ＣＨ２－ＣＨ－（ＮＨＣＯＮＨＣＨ３）２等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。エーテル結合で置換されたアルキル基の炭素数は、２～３０の範囲内であることが好ましい。
【0024】
また、ウレタン結合で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ（－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、－(ＣＨ２)５－ＮＨＣＯＯ－（ＣＨ２）１１－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ－(ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ３) ２等を挙げることができる。エステル結合で置換されたアルキル基の炭素数は、２～３０の範囲内であることが好ましい。
【0025】
また、アミド結合（－ＮＨＣＯ－）、エステル結合（－ＣＯＯ－）、およびエーテル結合（－Ｏ－）、ウレア結合（－ＮＨＣＯＮＨ－）、ウレタン結合（－ＮＨＣＯＯ－）のうち２種以上の置換基で置換されたアルキル基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３を挙げることができる。アミド結合（－ＮＨＣＯ－）、エステル結合（－ＣＯＯ－）、エーテル結合（－Ｏ－）、ウレア結合（－ＮＨＣＯＮＨ－）、およびウレタン結合（－ＮＨＣＯＯ－）のうち２種以上の置換基で置換されたアルキル基の炭素数は、３～３０の範囲内であることが好ましい。
【0026】
シクロアルキル基としては、シクロペンチル基、シクロへキシル基、２，５－ジメチルシクロペンチル基、４－ｔｅｒｔ－プチルシクロヘキシル基等が挙げられる。また、シクロアルキル基の炭素数は５～１２の範囲内であることが好ましい。置換シクロアルキル基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。
【0027】
アルケニル基としては、直鎖状または分岐鎖状のアルケニル基が挙げられる。アルケニル基はその構造中に一つの二重結合を一般的に指すが、本明細書においては複数の二重結合を有するものもアルケニル基に含めるものとする。具体例としては、ビニル基、１－プロペニル基、アリル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、イソプロペニル基、イソブテニル基、１－ペンテニル基、２－ペンテニル基、３－ペンテニル基、４－ペンテニル基、１－ヘキセニル基、２－ヘキセニル基、３－ヘキセニル基、４－ヘキセニル基、１，３－ブタジエニル基等を挙げることができる。アルケニル基の炭素数は２～１８の範囲内であることが好ましい。置換アルケニル基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。
【0028】
アリール基としては、単環または縮合多環のアリール基が挙げられる。例えば、フェニル基、１－ナフチル基、２－ナフチル基、ｐ－ビフェニル基、ｍ－ビフェニル基、２－アントリル基、９－アントリル基、２－フェナントリル基、３－フェナントリル基、９－フェナントリル基、２－フルオレニル基、３－フルオレニル基、９－フルオレニル基、１－ピレニル基、２－ピレニル基、３－ペリレニル基、ｏ－トリル基、ｍ－トリル基、ｐ－トリル基、４－メチルビフェニル基、ターフェニル基、４－メチル－１－ナフチル基、４－ｔｅｒｔ－ブチル－１－ナフチル基、４－ナフチル－１－ナフチル基、６－フェニル－２－ナフチル基、１０－フェニル－９－アントリル基、スピロフルオレニル基、２－ベンゾシクロブテニル基等が挙げられる。アリール基の炭素数は６～１８の範囲内であることが好ましい。
置換アリール基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。
置換アリール基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。
【0029】
複素環基としては、脂肪族複素環基や芳香族複素環基が挙げられる。具体例としては、ピリジル基、ピラジル基、ピペリジノ基、ピラニル基、モルホリノ基、アクリジニル基等が挙げられる。また、下記構造式で表される基も挙げられる。複素環基の炭素数は、４～１２であることが好ましい。環員数は、５～１３であることが好ましい。
【0030】
【化4】
【0031】
置換複素環基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。例えば、複素環基３－メチルピリジル基、Ｎ－メチルピペリジル基、Ｎ－メチルピローリル基等が挙げられる。
【0032】
アルコキシ基としては、直鎖状または分岐鎖状のアルコキシル基が挙げられる。具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ネオペンチルオキシ基、２，３－ジメチル－３－ペンチルオキシ基、ｎ－へキシルオキシ基、ｎ－オクチルオキシ基、ステアリルオキシ基、２－エチルへキシルオキシ基等が挙げられる。アルコキシル基の炭素数は１～６の範囲内であることが好ましい。置換アルコキシル基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。
【0033】
置換アルコキシ基の置換基としては、上述したアルキル基における置換基と同じ置換基が挙げられる。具体例としては、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、２，２，２－トリフルオロエトキシ基、２，２，３，３－テトラフルオロプロポキシ基、２，２－ビス（トリフルオロメチル）プロポキシ基、２－エトキシエトキシ基、２－ブトキシエトキシ基、２－ニトロプロポキシ基、ベンジルオキシ基等が挙げられる。
【0034】
アリールオキシ基としては、単環または縮合多環のアリールオキシ基が挙げられる。具体例としては、フェノキシ基、ｐ－メチルフェノキシ基、ナフチルオキシ基、アンスリルオキシ基等が挙げられる。アリールオキシ基は、単環のアリールオキシ基が好ましい。また、炭素数６～１２のアリールオキシ基が好ましい。
【0035】
置換アリールオキシ基の置換基としては、上述したアリール基における置換基と同じ置換基が挙げられる。例えば、ｐ－ニトロフェノキシ基、ｐ－メトキシフェノキシ基、２，４－ジクロロフェノキシ基、ペンタフルオロフェノキシ基、２－メチル－４－クロロフェノキシ基等が挙げられる。
【0036】
アルキレン基としては、アルキル基から一つの水素原子を除いた二価の基が挙げられる。
置換もしくは無置換のアルキレン基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－等が挙げられる。
置換もしくは無置換のアルキレン基の具体例としては、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－等が挙げられる。
【0037】
アリーレン基としては、アリール基から一つの水素原子を除いた二価の基が挙げられる。置換もしくは無置換のアリーレン基の具体例としては、下記構造式で表される基が挙げられる。
【0038】
【化5】
【0039】
第１６族元素としては、酸素、硫黄、セレン、テルル等が挙げられる。この内、酸素、硫黄、セレンが好ましく、合成の容易さや安定性の点で酸素、硫黄がより好ましい。
【0040】
Ｍ１の２価の金属原子としては、Ｍg、Ｃu、Ｚn等が挙げられる。３価の金属原子としては、Ａｌ、Ｇａ、Ｉｎ等が挙げられる。４価の金属原子としては、Ｓｉ、Ｍｎ、Ｓｎ、Ｃｒ、Ｚｒ等が挙げられる。蛍光強度の観点からは、Ｍｇ、Ａｌ、Ｓｉ、Ｚｎが好ましく、耐光性の観点からは、Ａｌ、Ｓｉがより好ましい。
【0041】
リン脂質としては、特に限定されないが、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジルコリン類、ホスファチジルセリン類、スフィンゴミエリン類、セラミドホスホリルエタノールアミン類、１，２－ジミリストイル－１，２－デオキシホスファチジルコリン類、又はプラスマロゲン類などを採用できる。
これらのリン脂質における脂肪酸残基は特に限定されない。例えば、炭素数１２～２０個程度の飽和又は不飽和の脂肪酸残基を１個又は２個有するリン脂質を用いることができ、具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等の脂肪酸由来のアシル基を１個又は２個以上有するリン脂質を用いることができる。
これらのリン脂質における脂肪酸残基は特に限定されない。例えば、炭素数１２～２０個程度の飽和又は不飽和の脂肪酸残基を１個又は２個有するリン脂質を用いることができ、具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等の脂肪酸由来のアシル基を１個又は２個以上有するリン脂質を用いることができる。
【0042】
リン脂質の残基とは、リン脂質の親水性末端にあるアミノ基または第4級アンモニウム基から水素原子または置換基を除いた残基を表す。
【0043】
一般式（１）において、Ｒ１～Ｒ１７の少なくとも１つは－Z－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘであり、Ｒ１７が－Ｚ－Ｌ１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｘであることが好ましい。
【0044】
本発明の蛍光標識剤は、生化学研究から医療診断までの幅広い分野におけるバイオイメージング用蛍光標識として応用可能であり、例えば、遺伝子診断分野、免疫診断分野、医療開発分野、再生医療分野、環境試験分野、バイオテクノロジー分野、蛍光検査等における蛍光標識等として使用することができる。
【0045】
なかでも、本発明の蛍光標識剤は、リン脂質集積型蛍光標識剤として好適に使用できる。リン脂質集積型蛍光標識剤は、細胞膜の染色、エクソソームの追跡、ドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）のためのリポソームイメージングなどにおける蛍光標識剤として好適に使用できる。
【0046】
本発明の蛍光色素の濃度は特に限定されないが、例えば、細胞を扱う場合、細胞の機能障害や増殖阻害等への影響から、濃度は低い方が好ましく、本発明の蛍光色素の濃度は１００μＭ以下であることが好ましい。
【0047】
本発明における蛍光標識剤は、本発明の蛍光色素を含有していれば、必要に応じてその他の成分を含有していてもよい。その他の成分としては、例えば、水や有機溶剤、両親媒性物質等が挙げられる。
【0048】
本発明の蛍光色素のうち、フタロシアニンの合成方法としては特に限定されないが、例えば、フタロニトリル誘導体を原料として公知の方法でアルミニウムフタロシアニンを合成した後、対応する軸成分とジメチルスルホキシド溶媒中で加熱撹拌することで得ることができる。
【0049】
原料であるフタロニトリル誘導体が非対称の構造である場合、得られるフタロシアニンは置換基の位置が異なる異性体の混合物として得られる。本明細書においては、異性体の構造のうち一例を示す。
【0050】
本発明の蛍光色素の具体例としては、以下の蛍光色素が挙げられるが、本発明の蛍光色素はこれらに限定されない。
【0051】
【表1】
【実施例】
【0052】
以下に、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。なお、実施例中「部」とは、「質量部」を表す。
【0053】
[製造例１]
＜化合物A－１の製造方法＞
スルホラン２００部、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）１５．７部に１，３－ジイミノイソインドリン５部および四塩化ケイ素８．８部を加え、１６０～１７０℃で８時間加熱撹拌後、室温（２５℃）まで冷却した。メタノール２００部を加え、析出した沈澱を濾別して、メタノール：水（質量比４：１）混合溶液で洗浄後、乾燥して、収率６３．６％で表２に示す化合物Ａ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝５７５．９９（理論値５７５．９７）に分子イオンピークが検出され、表２に示す化合物Ａ－１の構造を有することが同定された。
＜化合物A－１の製造方法＞
スルホラン２００部、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）１５．７部に１，３－ジイミノイソインドリン５部および四塩化ケイ素８．８部を加え、１６０～１７０℃で８時間加熱撹拌後、室温（２５℃）まで冷却した。メタノール２００部を加え、析出した沈澱を濾別して、メタノール：水（質量比４：１）混合溶液で洗浄後、乾燥して、収率６３．６％で表２に示す化合物Ａ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝５７５．９９（理論値５７５．９７）に分子イオンピークが検出され、表２に示す化合物Ａ－１の構造を有することが同定された。
【0054】
[製造例２～５]
＜化合物A－２～A－５の製造方法＞
化合物A－１の製造方法で使用した１，３－ジイミノイソインドリンを、表２に示すイソインドリン誘導体に変更した以外は、化合物A－１の製造と同様にして、表２に示す化合物A－２～A－５をそれぞれ製造した。尚、イソインドリン誘導体は、化合物A－１の製造における１，３－ジイミノイソインドリンと同モル量使用した。得られた化合物Ａ－２～Ａ－５の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表２に示した構造を有することが確認された。表２にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物A－２～A－５の製造方法＞
化合物A－１の製造方法で使用した１，３－ジイミノイソインドリンを、表２に示すイソインドリン誘導体に変更した以外は、化合物A－１の製造と同様にして、表２に示す化合物A－２～A－５をそれぞれ製造した。尚、イソインドリン誘導体は、化合物A－１の製造における１，３－ジイミノイソインドリンと同モル量使用した。得られた化合物Ａ－２～Ａ－５の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表２に示した構造を有することが確認された。表２にマススペクトルの分析結果を示した。
【0055】
【表2】
【0056】
[製造例６]
＜化合物A－６の製造方法＞
キノリン５０部および無水塩化アルミニウム１部の溶液にアンモニアガスを導入し、フタロニトリルを５部添加した。１８０℃で７時間反応させた。これを室温まで冷却した後、メタノール２００部と１０％塩酸水溶液２００部を加え、析出した固体をろ取し、水２００部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率８６．０％で表３に示す化合物Ａ－６を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝５７５．９９（理論値５７５．９７）に分子イオンピークが検出され、表３に示す化合物Ａ－６の構造を有することが同定された。
＜化合物A－６の製造方法＞
キノリン５０部および無水塩化アルミニウム１部の溶液にアンモニアガスを導入し、フタロニトリルを５部添加した。１８０℃で７時間反応させた。これを室温まで冷却した後、メタノール２００部と１０％塩酸水溶液２００部を加え、析出した固体をろ取し、水２００部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率８６．０％で表３に示す化合物Ａ－６を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝５７５．９９（理論値５７５．９７）に分子イオンピークが検出され、表３に示す化合物Ａ－６の構造を有することが同定された。
【0057】
[製造例７～１０]
＜化合物A－７～A－１０の製造方法＞
化合物A－７の製造方法で使用したフタロニトリルを、表３に示すフタロニトリル誘導体に変更した以外は、化合物A－６の製造と同様にして、表３に示す化合物A－７～A－１０をそれぞれ製造した。尚、フタロニトリル誘導体は、化合物A－６の製造におけるフタロニトリルと同モル量使用した。得られた化合物Ａ－７～Ａ－１０の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表３に示した構造を有することが確認された。表３にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物A－７～A－１０の製造方法＞
化合物A－７の製造方法で使用したフタロニトリルを、表３に示すフタロニトリル誘導体に変更した以外は、化合物A－６の製造と同様にして、表３に示す化合物A－７～A－１０をそれぞれ製造した。尚、フタロニトリル誘導体は、化合物A－６の製造におけるフタロニトリルと同モル量使用した。得られた化合物Ａ－７～Ａ－１０の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表３に示した構造を有することが確認された。表３にマススペクトルの分析結果を示した。
【0058】
【表3】
【0059】
[製造例１１]
＜化合物Ｂ－１の製造方法＞
化合物Ａ－１を１部と３－アミノプロピルジメチルエトキシシラン０．６部をピリジンに溶解させ、１１５℃で３時間還流した。エバポレーターでピリジンを除去した後、エタノール１０部と水５０部の混合溶液を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率５４．５％で表４に示す化合物B－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝８０６．１５（理論値８０６．１４）に分子イオンピークが検出され、表４に示す化合物B－１の構造を有することが同定された。
＜化合物Ｂ－１の製造方法＞
化合物Ａ－１を１部と３－アミノプロピルジメチルエトキシシラン０．６部をピリジンに溶解させ、１１５℃で３時間還流した。エバポレーターでピリジンを除去した後、エタノール１０部と水５０部の混合溶液を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率５４．５％で表４に示す化合物B－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝８０６．１５（理論値８０６．１４）に分子イオンピークが検出され、表４に示す化合物B－１の構造を有することが同定された。
【0060】
[製造例１２～２０]
＜化合物Ｂ－２～Ｂ－１０の製造方法＞
化合物Ｂ－１の製造方法で使用した化合物Ａ－１を、表４示す化合物Ａ－２～Ａ－１０に変更した以外は、化合物Ａ－１の製造と同様にして、表４に示す化合物Ｂ－２～Ｂ－１０をそれぞれ製造した。尚、化合物Ａ－２～Ａ－１０は、化合物Ｂ－１の製造における化合物Ａ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｂ－２～Ｂ－１０の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表４に示した構造を有することが確認された。表４にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物Ｂ－２～Ｂ－１０の製造方法＞
化合物Ｂ－１の製造方法で使用した化合物Ａ－１を、表４示す化合物Ａ－２～Ａ－１０に変更した以外は、化合物Ａ－１の製造と同様にして、表４に示す化合物Ｂ－２～Ｂ－１０をそれぞれ製造した。尚、化合物Ａ－２～Ａ－１０は、化合物Ｂ－１の製造における化合物Ａ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｂ－２～Ｂ－１０の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表４に示した構造を有することが確認された。表４にマススペクトルの分析結果を示した。
【0061】
【表4】
【0062】
[製造例２１]
＜化合物Ｃ－１の製造方法＞
化合物Ａ－１を０．７部と４－アミノ酪酸０．４部をジメチルスルホキシド５０部に溶解させ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン０．３部を添加した後、９０℃で５時間反応させた。これを室温まで冷却した後、水１００部と食塩１０部を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率４０．２％で表５に示す化合物Ｃ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝７４５．８３（理論値７４５．８５）に分子イオンピークが検出され、表５に示す化合物Ｃ－１の構造を有することが同定された。
＜化合物Ｃ－１の製造方法＞
化合物Ａ－１を０．７部と４－アミノ酪酸０．４部をジメチルスルホキシド５０部に溶解させ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン０．３部を添加した後、９０℃で５時間反応させた。これを室温まで冷却した後、水１００部と食塩１０部を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率４０．２％で表５に示す化合物Ｃ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝７４５．８３（理論値７４５．８５）に分子イオンピークが検出され、表５に示す化合物Ｃ－１の構造を有することが同定された。
【0063】
[製造例２２～２４]
＜化合物Ｃ－２～Ｃ－４の製造方法＞
化合物Ｃ－１の製造方法で使用した化合物Ａ－１と４－アミノ酪酸を、表５に示す化合物Ａと軸配位子に変更した以外は、化合物Ｃ－１の製造と同様にして、表５に示す化合物Ｃ－２～Ｃ－４をそれぞれ製造した。尚、化合物Aおよび軸配位子は、化合物Ｃ－１の製造における化合物A－１および４－アミノ酪酸と同モル量使用した。得られた化合物Ｃ－２～Ｃ－４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表５に示した構造を有することが確認された。表５にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物Ｃ－２～Ｃ－４の製造方法＞
化合物Ｃ－１の製造方法で使用した化合物Ａ－１と４－アミノ酪酸を、表５に示す化合物Ａと軸配位子に変更した以外は、化合物Ｃ－１の製造と同様にして、表５に示す化合物Ｃ－２～Ｃ－４をそれぞれ製造した。尚、化合物Aおよび軸配位子は、化合物Ｃ－１の製造における化合物A－１および４－アミノ酪酸と同モル量使用した。得られた化合物Ｃ－２～Ｃ－４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表５に示した構造を有することが確認された。表５にマススペクトルの分析結果を示した。
【0064】
【表5】
【0065】
[製造例２５]
＜化合物Ｄ－１の製造方法＞
クロロホルム６部に化合物Ｂ－１を４部、無水コハク酸を１部溶解させた。これにトリエチルアミンを３部加え、室温で２時間攪拌した。エバポレーターでクロロホルムを除去した後、水５部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率７２．８％で表６に示す化合物Ｄ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝１００６．２８（理論値１００６．２８）に分子イオンピークが検出され、表６に示す化合物Ｄ－１の構造を有することが同定された。
＜化合物Ｄ－１の製造方法＞
クロロホルム６部に化合物Ｂ－１を４部、無水コハク酸を１部溶解させた。これにトリエチルアミンを３部加え、室温で２時間攪拌した。エバポレーターでクロロホルムを除去した後、水５部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率７２．８％で表６に示す化合物Ｄ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝１００６．２８（理論値１００６．２８）に分子イオンピークが検出され、表６に示す化合物Ｄ－１の構造を有することが同定された。
【0066】
[製造例２６～３８]
＜化合物Ｄ－２～Ｄ～１４の製造方法＞
化合物Ｄ－１の製造方法で使用した化合物Ｂ－１を、化合物Ｂ－２～Ｂ－１０、化合物Ｃ－１～Ｃ－４のいずれかに変更した以外は、化合物Ｄ－１の製造と同様に、表６に示す化合物Ｄ－２～Ｄ－１４をそれぞれ製造した。尚、化合物Ｂ－２～Ｂ－１０、化合物Ｃ－１～Ｃ－４は、化合物Ｂ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｄ－２～Ｄ－１４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表６に示した構造を有することが確認された。表６にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物Ｄ－２～Ｄ～１４の製造方法＞
化合物Ｄ－１の製造方法で使用した化合物Ｂ－１を、化合物Ｂ－２～Ｂ－１０、化合物Ｃ－１～Ｃ－４のいずれかに変更した以外は、化合物Ｄ－１の製造と同様に、表６に示す化合物Ｄ－２～Ｄ－１４をそれぞれ製造した。尚、化合物Ｂ－２～Ｂ－１０、化合物Ｃ－１～Ｃ－４は、化合物Ｂ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｄ－２～Ｄ－１４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表６に示した構造を有することが確認された。表６にマススペクトルの分析結果を示した。
【0067】
【表6】
【0068】
[製造例３９]
＜化合物Ｅ－１の製造方法＞
化合物A－１を０．５部と（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸０．２９部をジメチルスルホキシド２０部に溶解させ、８０℃で８時間反応させた。これを室温まで冷却した後、水５０部と食塩１０部を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率７４．４％で０．４６部の表７に示す化合物Ｅ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝９６７．９４（理論値９６７．９２）に分子イオンピークが検出され、表７に示す化合物Ｅ－１の構造を有することが同定された。
＜化合物Ｅ－１の製造方法＞
化合物A－１を０．５部と（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸０．２９部をジメチルスルホキシド２０部に溶解させ、８０℃で８時間反応させた。これを室温まで冷却した後、水５０部と食塩１０部を加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率７４．４％で０．４６部の表７に示す化合物Ｅ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝９６７．９４（理論値９６７．９２）に分子イオンピークが検出され、表７に示す化合物Ｅ－１の構造を有することが同定された。
【0069】
[製造例３９～４２]
＜化合物Ｅ－２～Ｅ－４の製造方法＞
化合物Ｅ－１の製造方法で使用した化合物A－１と（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸を、表７に示す化合物Aと軸配位子に変更した以外は、化合物Ｅ－１の製造と同様にして、表７に示す化合物Ｅ－２～Ｅ－４をそれぞれ製造した。尚、化合物Aおよび軸配位子は、化合物Ｅ－１の製造における化合物Ｅ－１および（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸と同モル量使用した。得られた化合物Ｆ－２～Ｆ－４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表７に示した構造を有することが確認された。表７にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物Ｅ－２～Ｅ－４の製造方法＞
化合物Ｅ－１の製造方法で使用した化合物A－１と（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸を、表７に示す化合物Aと軸配位子に変更した以外は、化合物Ｅ－１の製造と同様にして、表７に示す化合物Ｅ－２～Ｅ－４をそれぞれ製造した。尚、化合物Aおよび軸配位子は、化合物Ｅ－１の製造における化合物Ｅ－１および（２－カルボキシエチル）フェニルホスフィン酸と同モル量使用した。得られた化合物Ｆ－２～Ｆ－４の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表７に示した構造を有することが確認された。表７にマススペクトルの分析結果を示した。
【0070】
【表7】
【0071】
[製造例４３]
＜化合物Ｆ－１の製造方法＞
脱水N，N－ジメチルホルムアミド７０００部に化合物D－1を４７部、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミドを１６部、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を３１部溶解させ、窒素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。水を１００００部加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率５１．４％で表８に示す化合物Ｆ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝１２００．４１（理論値１２００．４３）に分子イオンピークが検出され、表８に示す化合物Ｆ－１の構造を有することが同定された。
＜化合物Ｆ－１の製造方法＞
脱水N，N－ジメチルホルムアミド７０００部に化合物D－1を４７部、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミドを１６部、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を３１部溶解させ、窒素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。水を１００００部加え、析出した固体をろ取し、水５０部で洗浄を行った。８０℃で乾燥させ、収率５１．４％で表８に示す化合物Ｆ－１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝１２００．４１（理論値１２００．４３）に分子イオンピークが検出され、表８に示す化合物Ｆ－１の構造を有することが同定された。
【0072】
[製造例４４～６０]
＜化合物Ｆ－２～Ｆ－１８の製造方法＞
化合物Ｆ－１の製造方法で使用した化合物Ｄ－１を、化合物Ｄ－２～Ｄ－１４、Ｅ－１～Ｅ－４のいずれかに変更した以外は、化合物Ｆ－１の製造と同様に、表８に示す化合物Ｆ－２～Ｆ－１８をそれぞれ製造した。尚、化合物Ｄ－２～Ｄ－１４、Ｅ－１～Ｅ－４は、化合物Ｄ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｆ－２～Ｆ－１８の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表８に示した構造を有することが確認された。表８にマススペクトルの分析結果を示した。
＜化合物Ｆ－２～Ｆ－１８の製造方法＞
化合物Ｆ－１の製造方法で使用した化合物Ｄ－１を、化合物Ｄ－２～Ｄ－１４、Ｅ－１～Ｅ－４のいずれかに変更した以外は、化合物Ｆ－１の製造と同様に、表８に示す化合物Ｆ－２～Ｆ－１８をそれぞれ製造した。尚、化合物Ｄ－２～Ｄ－１４、Ｅ－１～Ｅ－４は、化合物Ｄ－１と同モル量使用した。得られた化合物Ｆ－２～Ｆ－１８の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表８に示した構造を有することが確認された。表８にマススペクトルの分析結果を示した。
【0073】
【表8】
【0074】
［実施例１］
＜蛍光色素１の製造方法＞
クロロホルム３０００部に化合物Ｆ－１を１０部溶解させた。これに１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（DPPE）１１．５部とジイソプロピルアミノエタノール１部を溶解させたクロロホルム４０００部を少しずつ加えた。室温で３日攪拌した。エバポレーターでクロロホルムを留去した後、粗製物を中圧分取液体クロマトグラフ（バイオタージ製フラッシュ自動精製システム、Ｉｓｏｒｅｌａ Ｏｎｅ）を用いて逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、収率７５．８％で表１に示す蛍光色素１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝２３５４．２１（理論値２３５４．２０）に分子イオンピークが検出され、表１に示す蛍光色素１の構造を有することが同定された。
＜蛍光色素１の製造方法＞
クロロホルム３０００部に化合物Ｆ－１を１０部溶解させた。これに１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（DPPE）１１．５部とジイソプロピルアミノエタノール１部を溶解させたクロロホルム４０００部を少しずつ加えた。室温で３日攪拌した。エバポレーターでクロロホルムを留去した後、粗製物を中圧分取液体クロマトグラフ（バイオタージ製フラッシュ自動精製システム、Ｉｓｏｒｅｌａ Ｏｎｅ）を用いて逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、収率７５．８％で表１に示す蛍光色素１を得た。質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）により分析した結果ｍ／ｚ＝２３５４．２１（理論値２３５４．２０）に分子イオンピークが検出され、表１に示す蛍光色素１の構造を有することが同定された。
【0075】
[実施例２～２１]
＜蛍光色素２～２１の製造方法＞
蛍光色素１の製造方法で使用した化合物Ｆ－１とDPPEを、表９に示す化合物Ｆ－２～Ｆ－１８とリン脂質に変更し、蛍光色素１の製造と同様にして、表１に示す蛍光色素２～２１をそれぞれ製造した。化合物Ｆ－１～Ｆ－１８は、蛍光色素１の製造における化合物Ｆ－１と同モル量使用した。リン脂質は、蛍光色素１の製造におけるDPPEと同モル量使用した。得られた蛍光色素２～２１の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表１に示した構造を有することが確認された。表９にマススペクトルの分析結果を示した。
＜蛍光色素２～２１の製造方法＞
蛍光色素１の製造方法で使用した化合物Ｆ－１とDPPEを、表９に示す化合物Ｆ－２～Ｆ－１８とリン脂質に変更し、蛍光色素１の製造と同様にして、表１に示す蛍光色素２～２１をそれぞれ製造した。化合物Ｆ－１～Ｆ－１８は、蛍光色素１の製造における化合物Ｆ－１と同モル量使用した。リン脂質は、蛍光色素１の製造におけるDPPEと同モル量使用した。得られた蛍光色素２～２１の構造は、質量分析装置（ＴＯＦ－ＭＳ：ブルカー・ダルトニクス社製 ａｕｔｏｆｌｅｘＩＩ）によって同定し、表１に示した構造を有することが確認された。表９にマススペクトルの分析結果を示した。
【0076】
【表9】
【0077】
[実施例２２]
＜蛍光標識剤１の作製＞
ジメチルスルホキシド１０部に蛍光色素１を０．０００４７部溶解した。０．２μｍナイロン製メンブレンフィルターでろ過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で１００倍希釈し、蛍光色素１を含む蛍光標識剤１を作製した。
＜蛍光標識剤１の作製＞
ジメチルスルホキシド１０部に蛍光色素１を０．０００４７部溶解した。０．２μｍナイロン製メンブレンフィルターでろ過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で１００倍希釈し、蛍光色素１を含む蛍光標識剤１を作製した。
【0078】
[実施例２３～４２]
＜蛍光標識剤２～２１の作製＞
蛍光標識剤１の作製で使用した蛍光色素１を蛍光色素２～２１に変更し、蛍光標識剤２～２１をそれぞれ作製した。ただし、蛍光色素２～２１は蛍光色素１と同モル量使用した。
＜蛍光標識剤２～２１の作製＞
蛍光標識剤１の作製で使用した蛍光色素１を蛍光色素２～２１に変更し、蛍光標識剤２～２１をそれぞれ作製した。ただし、蛍光色素２～２１は蛍光色素１と同モル量使用した。
【0079】
[比較例１～１０]
＜蛍光標識剤２２～３１の作製＞
蛍光標識剤１の作製で使用した蛍光色素１を化合物Ａ－１～Ａ－１０に変更し、比較例１～１０である蛍光標識剤２２～３１をそれぞれ作製した。ただし、化合物１～１０は蛍光色素１と同モル量使用した。
＜蛍光標識剤２２～３１の作製＞
蛍光標識剤１の作製で使用した蛍光色素１を化合物Ａ－１～Ａ－１０に変更し、比較例１～１０である蛍光標識剤２２～３１をそれぞれ作製した。ただし、化合物１～１０は蛍光色素１と同モル量使用した。
【0080】
＜蛍光標識剤の細胞毒性評価＞
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤と、リファレンスとして１％ジメチルスルホキシドを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＤＭＳＯ培地溶液）をそれぞれ添加した。これをインキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。各ｗｅｌｌにセルカウンティングキット－８（同仁化学製）を１０μＬずつ添加し、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で１時間静置した。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製、ＳＰＡＲＫ）を用いて、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。リファレンスの吸光度を１として各々の蛍光標識剤の吸光度の相対値を算出し、下記の基準に基づいて評価した。評価が〇であれば細胞毒性を示さないといえる。尚、蛍光標識剤の吸光度の相対値を算出際には、測定した吸光度からセルカウンティングキット－８（同仁化学製）添加前の吸光度を差し引いた値を用いた。
〇：０．９以上
×：０．９未満
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤と、リファレンスとして１％ジメチルスルホキシドを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＤＭＳＯ培地溶液）をそれぞれ添加した。これをインキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。各ｗｅｌｌにセルカウンティングキット－８（同仁化学製）を１０μＬずつ添加し、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で１時間静置した。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製、ＳＰＡＲＫ）を用いて、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。リファレンスの吸光度を１として各々の蛍光標識剤の吸光度の相対値を算出し、下記の基準に基づいて評価した。評価が〇であれば細胞毒性を示さないといえる。尚、蛍光標識剤の吸光度の相対値を算出際には、測定した吸光度からセルカウンティングキット－８（同仁化学製）添加前の吸光度を差し引いた値を用いた。
〇：０．９以上
×：０．９未満
【0081】
以下、評価結果を表１０中の「細胞毒性」に示す。
【0082】
＜蛍光標識剤の蛍光強度評価＞
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤を添加し、インキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製、ＳＰＡＲＫ、励起波長６７０ｎｍ（バンド幅：４０ｎｍ）、測定波長７４０ｎｍ（バンド幅：４０ｎｍ））を用いて、表１７に示す蛍光波長の範囲内での蛍光強度評価を行い、下記の基準に基づいて評価した。実施例２２～４２は、比較例１～１０に比べ蛍光強度が高く、ＤＰＰＥ基の導入によって細胞集積能が向上していることが確認された。
３：１０００以上
２：２００以上～１０００未満
１：２００未満
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤を添加し、インキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製、ＳＰＡＲＫ、励起波長６７０ｎｍ（バンド幅：４０ｎｍ）、測定波長７４０ｎｍ（バンド幅：４０ｎｍ））を用いて、表１７に示す蛍光波長の範囲内での蛍光強度評価を行い、下記の基準に基づいて評価した。実施例２２～４２は、比較例１～１０に比べ蛍光強度が高く、ＤＰＰＥ基の導入によって細胞集積能が向上していることが確認された。
３：１０００以上
２：２００以上～１０００未満
１：２００未満
【0083】
図１に蛍光標識剤１、及び２２の蛍光強度評価結果を示す。
【0084】
以下、評価結果を表１０中の「蛍光強度」に示す。
【0085】
＜細胞の視認性評価＞
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤を添加し、インキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。適切な波長の励起フィルターおよび蛍光フィルターを設置した蛍光顕微鏡（キーエンス社製、ＢＺ－Ｘ８００、励起波長７１０ｎｍ（バンド幅：７５ｎｍ）、測定波長８１０ｎｍ（バンド幅：９０ｎｍ））を用いて、細胞の暗視野像と蛍光像を観察し、下記の基準に基づいて評価した。蛍光顕微鏡観察の結果から、実施例２２～４２は比較例１～１０に比べ明瞭に細胞標識できていることから、ＤＰＰＥ基の導入によって細胞集積能が向上していることが確認された。
〇：明瞭
×：不明瞭
ヒト類上皮がん細胞Ａ４３１を９６ウェルプレートに播種（１×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、１０％Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）および１％ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２含有Ａｉｒ、加湿環境）内で２４時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例２２～４２、比較例１～１０にて作製した蛍光標識剤を添加し、インキュベーター内に１時間静置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄した。適切な波長の励起フィルターおよび蛍光フィルターを設置した蛍光顕微鏡（キーエンス社製、ＢＺ－Ｘ８００、励起波長７１０ｎｍ（バンド幅：７５ｎｍ）、測定波長８１０ｎｍ（バンド幅：９０ｎｍ））を用いて、細胞の暗視野像と蛍光像を観察し、下記の基準に基づいて評価した。蛍光顕微鏡観察の結果から、実施例２２～４２は比較例１～１０に比べ明瞭に細胞標識できていることから、ＤＰＰＥ基の導入によって細胞集積能が向上していることが確認された。
〇：明瞭
×：不明瞭
【0086】
【0087】
以下、評価結果を表１０中の「視認性」に示す。
【0088】
【表10】
【図1】
【図2】
【図3】
