特許7417322神経変性疾患及び／又はその臨床的状態を抑制及び／又は治療するための組成物及び方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-10
(45)【発行日】2024-01-18
(54)【発明の名称】神経変性疾患及び／又はその臨床的状態を抑制及び／又は治療するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/404 20060101AFI20240111BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240111BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240111BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240111BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240111BHJP
C07D 209/40 20060101ALN20240111BHJP
【ＦＩ】
A61K31/404
A61P25/00
A61P25/16
A61P25/28
A61P43/00 111
C07D209/40
【請求項の数】
4
(21)【出願番号】P 2022524720
(86)(22)【出願日】2020-11-03
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-18
(86)【国際出願番号】 IB2020060319
(87)【国際公開番号】W WO2021090172
(87)【国際公開日】2021-05-14
【審査請求日】2022-07-20
(31)【優先権主張番号】62/930,022
(32)【優先日】2019-11-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】519373648
【氏名又は名称】シーケー・リジョン・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000800
【氏名又は名称】デロイトトーマツ弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】チェ，ガン－ヨル
(72)【発明者】
【氏名】ユン，ミンギュン
(72)【発明者】
【氏名】イ，ソン－フン
【審査官】安藤 倫世
(56)【参考文献】
【文献】韓国公開特許第１０－２０１８－０１１９９４１（ＫＲ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／０２７２３９（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１８／１９４３０９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／８８６７７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００５／０４１９５４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１１－５２９８７３（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１３／１４２８１７（ＷＯ，Ａ２）
【文献】特表２００９－５２３１２５（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１２／０６５０６５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０８８６７７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００２－５４１２４４（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００５／１０７４６６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０２２－５０５０５７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５１５６１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】Chem. Biol.，2003年，10(12)，1255-1266，doi: 10.1016/j.chembiol.2003.11.010
【文献】J. Mol. Graph. Model.，2016年，65，100-107，doi: 10.1016/j.jmgm.2016.03.001
【文献】European Journal of Medicinal Chemistry，2006年，41，373-378，doi: 10.1016/j.ejmech.2005.10.018
【文献】GSK3βとグリオーマ，Neuro-Oncologyの進歩，2018年，25(1)，1-9，DOI: 10.11452/neurooncology.25.1_1
【文献】Journal of Molecular Graphics and Modelling，2015年，61，231-242，doi: 10.1016/j.jmgm.2015.07.010
【文献】J. Med. Chem.，2004年，47(4)，935-946，doi: 10.1021/jm031016d
【文献】Int. J. Obes.，2014年，38(8)，1044-1052，doi: 10.1038/ijo.2013.209
【文献】J. Med. Chem.，2017年，60，4949-4962，DOI: 10.1021/acs.jmedchem.7b00324
【文献】Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2017年，27，5122-5125，doi: 10.1016/j.bmcl.2017.10.069
【文献】Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2014年，58(2)，995-1004，DOI: 10.1128/AAC.02094-13
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の化１に示される化合物を含む、又は、前記化合物およびその製薬学的に許容される水和物、塩、代謝産物もしくは担体を含む、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び疾患又は関連する臨床的状態のうち少なくとも一方の状態を治療する方法で使用するための製薬学的組成物。【化1】
【請求項2】
経口、局所、鼻腔、非経口、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋内、腫瘍内、又は肺伝達によって対象体に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
神経変性疾患又は関連する臨床的状態は、認知症、アルツハイマー病、及びパーキンソン病から選ばれた少なくとも一つの疾患を含むことを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
神経変性疾患又は関連する臨床的状態は、パーキンソン病であることを特徴とする、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１９年１１月４日に出願された米国仮出願第６２／９３０，０２２号に基づいた優先権主張出願であり、該当の出願の明細書に開示された全ての内容は本出願に援用される。
本出願は、２０１９年１１月４日に出願された米国仮出願第６２／９３０，０２２号に基づいた優先権主張出願であり、該当の出願の明細書に開示された全ての内容は本出願に援用される。
【0002】
技術分野
本明細書に開示された多様な様態及び実施形態は、神経変性疾患と関連する状態／疾患又はそれと関連する臨床的状態のモデリング、治療、治療に対する耐性の低減、予防、及び診断に関する。実施形態は、組成物および本明細書に開示された組成物の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を備える、状態／疾患を治療するための方法を含む。他の実施形態は、対象体でのＧＬＰ－１の活性を変更及び／又は増進させるための方法を含む。
本明細書に開示された多様な様態及び実施形態は、神経変性疾患と関連する状態／疾患又はそれと関連する臨床的状態のモデリング、治療、治療に対する耐性の低減、予防、及び診断に関する。実施形態は、組成物および本明細書に開示された組成物の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を備える、状態／疾患を治療するための方法を含む。他の実施形態は、対象体でのＧＬＰ－１の活性を変更及び／又は増進させるための方法を含む。
【背景技術】
【0003】
アルツハイマー病（ＡＤ）及びパーキンソン病（ＰＤ）を含む神経変性疾患は、高齢者層で罹患することがあり、高齢化社会と共に、患者の数が幾何級数的に増加し得る。若い人達にとって、神経変性疾患の早期発病は珍しいことではない。高齢者達に最も多く見られる形態の認知症であるアルツハイマー病は、記憶、認知、性格、及び他の機能を撹乱させる不可逆的な脳の変性を引き起こし、結果として、完全な脳機能障害によって死亡に至ることがある。遺伝的要因と、食事、活動、喫煙、外傷性脳損傷、糖尿病及び他の医学的疾患を含む環境的要因とが、このような形態の疾患の発病リスクに影響する。パーキンソン病は、認知症の最も多く見られる形態であり、記憶及び学習能力、日常機能及び人生の質に影響を及ぼす認知不全及び行動変化に特徴を持つ。パーキンソン病は、脳でドーパミンを生成するニューロンの主な損失に要因があるとされている。
【0004】
一部の研究は、アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患の発生にグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）が関与するということを報告した。ＧＬＰ－１は、神経及び認知機能に影響を及ぼし得るだけでなく、ブドウ糖の代謝に対する調節効果にも影響を及ぼすことがある。認知損傷のメカニズムは、脳インスリン信号伝逹の損傷、アミロイド代謝の変化、終末糖化産物の蓄積、及び酸化ストレスを含むものと推定される。アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患は、その制御過程を含む過程が複雑であるため、新たな治療法の開発が強く要求されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
ＧＬＰ－１の陰性調節剤としてのＣＸＸＣ５の投与によってアルツハイマー病及び／又はパーキンソン病を有する対象体の脳におけるＣＸＸＣ５が想定以上に過剰発現していることを考慮すると、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース（ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ界面）を阻害することによってこれらの疾患を改善できる化合物を開発することは魅力的な目的となる。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明の一の様態は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する化合物、及びこれを用いて対象体のアルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患に影響を及ぼす方法及び／又は神経変性疾患を治療するための方法を含む。
【0007】
本出願の実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療するための組成物及び方法に関する。特定の実施形態において、ここで開示された組成物及び方法は、治療法の一つ以上の副作用の抑制を含む。他の実施形態は、対象体での活性ＧＬＰ－１の発現の抑制に少なくとも部分的に起因する、神経変性疾患に寄与する疾患として診断された、又はそのような状態を有する対象体を治療するための組成物及び方法に関する。
【0008】
第１様態において、ここに開示された組成物は、対象体でのＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース、すなわち、ＸＸＣフィンガータンパク質５（ＣＸＸＣ５）とディシブルド（ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ）（ＤＶＬ）との間のインターフェースを阻害することによって作用し得る少なくとも一つの製剤を含む。一部の実施形態において、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する少なくとも一つの製剤は、ディシブルド（ＤＶＬ）及び／又はＤＶＬ結合モチーフのＰＤＺドメインと結合する少なくとも一つの製剤、少なくとも一つのＧＳＫ３β阻害剤、少なくとも一つのＧＬＰ－１類似体、及び／又は少なくとも一つのＧＬＰ－１受容体作動薬（ａｇｏｎｉｓｔ）、又はこれらの組み合わせを含む。
【0009】
第１実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化１（式Ｉ）の化合物を含む。
【0010】
【化1】
【0011】
前記式において、Ｘは、Ｒ１に選択的に置換されたＯ又はＮである。
【0012】
ここで、Ｒ１は、水素、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、又は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アリール、又はベンジルに選択的に置換されたアルコキシであるか、水素、アルキル、アルケニル、又は、ブチル、アルケニル、ハロアルキル、アリール、又はベンジルに置換されたアルコキシである。
【0013】
Ｒ２は、水素、ニトロ、ハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、又はカルボキシである。
【0014】
Ｒ３は、水素、ニトロ、ハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、又はカルボキシでるか、水素、フッ素、ヨウ素、アスタチン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、ＯＣＦ３、エトキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、ハロアルコキシ、カルボキシ、臭素、又は塩素である。ここで、Ｒ３が臭素又は塩素である場合、Ｒ４は水素でなく、Ｒ３が塩素である場合、Ｒ４は塩素でない。
【0015】
Ｒ４は、水素、ニトロ、ハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、又はカルボキシであるか、水素、ニトロ、フッ素、臭素、ヨウ素、アスタチン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、又はカルボキシである。；及び／又は、Ｒ４が塩素であるとき、Ｒ３は、水素又はニトロでなく、
【0016】
Ｒ５は、水素、ニトロ、ハロゲン、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、又はカルボキシである。
【0017】
第２実施形態は、第１実施形態の化合物にかかり、ＸがＯである化合物を含む。
【0018】
第３実施形態は、第１実施形態の化合物にかかり、ＸがＮであり、Ｒ１がヒドロキシ、又は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アリール、又はベンジルに選択的に置換されたアルコキシ、又は、Ｒ１が水素、アルキル、アルケニル、又は、ブチル、アルケニル、ハロアルキル、アリール、又はベンジルに置換されたアルコキシである化合物を含む。
【0019】
第４実施形態は、第１乃至第３実施形態のうちいずれか一つの化合物にかかり、Ｒ１がアルキル、アルケニル、ハロアルキル、アリール、又はベンジルに選択的に置換されたアルコキシである化合物を含む。
【0020】
【0021】
第６実施形態は、第１乃至第５実施形態のうちいずれか一つの化合物にかかり、下記の化２の化合物を含む少なくとも一つの化合物を含む。
【0022】
【化2】
【0023】
第７実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化３（式ＩＩ）の化合物を含む。
【0024】
【化3】
【0025】
前記式において、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、又は化４である。
【0026】
【化4】
【0027】
Ｒ１１のそれぞれは、Ｒ１２に置換された、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルケニル、Ｎ、ジイミド、であり、化５に示される化合物の少なくとも一つである。
【0028】
【化5】
【0029】
あるいは、Ｒ１１は、下記化６に示される化合物の少なくとも一つである。
【0030】
【化6】
【0031】
Ｒ１２は、化７のうちのいずれか一つである。
【0032】
【化7】
【0033】
Ｒ１３は、水素、又は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキルである。
【0034】
Ｒ１４のそれぞれ、Ｒ１５のそれぞれ、及びＲ１６のそれぞれは、独立して水素；ハロゲン；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアルコキシに選択的に置換されたハロアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルコキシ；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルケニル；又は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキニルである。
【0035】
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、独立して炭素、窒素、酸素、又は硫黄である。
【0036】
第８実施形態は、第７実施形態にかかり、Ｒ１１がＲ１２にそれぞれ置換されたＮ又はジイミドである化合物を含む。
【0037】
第９実施形態は、第７乃至第８実施形態のうちいずれか一つにかかり、Ｒ１１が下記の化合物のうちいずれか一つである化合物を含む：
【0038】
【化8】
【0039】
第１０実施形態は、第７乃至第９実施形態のうちいずれか一つに係る化合物を含み、化合物は下記の化９に示される化合物のいずれか一つである。
【0040】
【化9】
【0041】
第１１実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化１０（式ＩＩＩ）の化合物を含む。
【0042】
【化10】
【0043】
前記式において、Ｒ１７のそれぞれは、独立して水素；ハロゲン；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアルコキシに選択的に置換されたハロアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルコキシ；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルケニル；又は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキニルである。
【0044】
Ｘ４及びＸ５は、独立して窒素、酸素、又は硫黄である。
【0045】
第１２実施形態は、第１１実施形態にかかり、Ｒ１７のそれぞれが独立してハロゲン又はヒドロキシである化合物を含む。
【0046】
第１３実施形態は、第１１乃至第１２実施形態のうちいずれか一つに係る化合物を含み、化合物は下記の化１１に示される化合物である。
【0047】
【化11】
【0048】
第１４実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化１２（式ＩＶ）の化合物を含む。
【0049】
【化12】
【0050】
前記式において、Ｒ１８のそれぞれ及びＲ１９は、独立して水素；ヒドロキシ；ハロゲン；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアルコキシに選択的に置換されたハロアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルコキシ；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルケニル；又は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキニルである。
【0051】
第１５実施形態は、第１４実施形態にかかり、Ｒ１９が水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキルである化合物を含む。
【0052】
第１６実施形態は、第１４乃至第１５実施形態のうちいずれか一つにかかり、Ｒ１８のそれぞれが独立して水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、アルケニル、又はハロアルキルである化合物を含む。
【0053】
第１７実施形態は、第１４乃至第１６実施形態のうちいずれか一つに係る化合物を含み、化合物は下記の化１３に示される化合物である。
【0054】
【化13】
【0055】
第１８実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化１４（式Ｖ）の化合物を含む。
【0056】
【化14】
【0057】
前記式において、Ｒ'のそれぞれ及びＲ''のそれぞれは、独立して水素；ハロゲン；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアルコキシに選択的に置換されたハロアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルコキシ；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルケニル；又は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキニルである。
【0058】
第１９実施形態は、第１８実施形態にかかり、Ｒ'のそれぞれ及びＲ''のそれぞれが独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、アルコキシ、又はハロアルキルである化合物を含む。
【0059】
第２０実施形態は、第１８乃至第１９実施形態のうちいずれか一つに係る化合物を含み、化合物は下記の化１５に示される化合物である。
【0060】
【化15】
【0061】
第２１実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患又は関連する臨床的状態を治療する方法で使用するための化１６（式ＶＩ）の化合物を含む。
【0062】
【化16】
【0063】
前記式において、Ｒ２０のそれぞれ及びＲ２１のそれぞれは、独立して水素；ハロゲン；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアルコキシに選択的に置換されたハロアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、又は、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたカルボニルに選択的に置換されたアルキル；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルコキシ；水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルケニル；又は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、又はハロアルキルに選択的に置換されたアルキニルである。
【0064】
第２２実施形態は、第２１実施形態にかかり、Ｒ２０のそれぞれ及びＲ２１のそれぞれが独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、カルボキシル、又はハロアルキルである化合物を含む。
【0065】
第２３実施形態は、第２１乃至第２２実施形態のうちいずれか一つに係る化合物を含み、化合物は下記の化１７に示される化合物である。
【0066】
【化17】
【0067】
第２４実施形態は、第１乃至第２３実施形態のうちいずれか一つに係る化合物のうち少なくとも一つを含み、前記化合物は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用、及び／又はＣＸＸＣ５及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの活性を阻害又は低減する。また（及び／又は）、前記化合物は、対象体でのＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増加又は増進する。また（及び／又は）、神経変性疾患又は類似する状態は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及びギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）のうち少なくとも一つの状態、又はこれらを含む少なくとも一つの状態を含む。
【0068】
第２５実施形態は、上述した実施形態のうちいずれか一つに係る化合物のうち少なくとも一つを含み、前記化合物は、ＤＶＬにある結合部位に対してＣＸＸＣ５と直接競争し、ＤＶＬに直接結合し、及び／又はＤＶＬのＰＺＤドメインに直接結合することによってＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用を阻害又は低減する。
【0069】
第２６実施形態は、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は製薬学的に許容されるその水和物、塩、代謝産物、又は担体を含む製薬学的組成物を含む。
【0070】
第２様態において、本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された組成物のうちいずれかの少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む少なくとも一つの臨床的状態を治療する方法を含む。対象体は、アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患又はその類似する状態から選択される状態、及び／又はこれらを含む臨床的状態と診断され得る。特定の実施形態において、本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された組成物のうちいずれか複数の化合物の治療的有効容量を対象体に投与する段階をさらに含む。
【0071】
第２７実施形態は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用、及び／又はＣＸＸＣ５及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの活性を阻害又は低減する少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階、及び／又はＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増進する少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階、及び／又は第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む、神経変性疾患又は類似する状態を治療する方法を含む。
【0072】
第２８実施形態は、第２７実施形態に係る方法を含むとともに、さらに、対象体におけるＣＸＸＣ５の上向き調節された発現を検出する段階を含む。これらの実施形態と一貫して、対象体の血液、血液単核細胞、中枢神経系、及び／又は脳でＣＸＸＣ５の上向き調節された発現が検出され得る。
【0073】
第２９実施形態は、第２７乃至第２８実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含み、さらに、神経変性疾患又は類似する状態に対する危険のある対象体を確認する段階を含む。
【0074】
第３０実施形態は、第２７乃至第２９実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第30実施形態において、前記神経変性疾患又は類似する状態は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）から選ばれた、又はこれらを含む少なくとも一つの状態を含む。
【0075】
第３１実施形態は、第２７乃至第３０実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３１実施形態において、前記対象体は、非正常的ＧＬＰ－１水準、脂質プロファイル、インスリン抵抗性、及び／又は血中グルコース水準を示す。
【0076】
第３２実施形態は、第２７乃至第３１実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３２実施形態において、前記対象体は、肥満、糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、及び／又はパーキンソン病（ＰＤ）と診断される。
【0077】
第３３実施形態は、第２７乃至第３２実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３３実施形態において、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害し、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用を阻害し、ＣＸＸＣ５及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの活性を阻害し、及び／又はＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増進する少なくとも一つの製剤は、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む。
【0078】
第３４実施形態は、第３３実施形態に係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３４実施形態において、前記方法は、ＧＳＫ３β阻害剤、Ｗｎｔ／β－カテニン経路の阻害剤、ＧＬＰ－１類似体、ＧＬＰ－１受容体作動薬、体重減量薬、及び／又は糖尿薬から選ばれた、又はこれらを含む少なくとも一つの追加製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を投与する段階をさらに含む。これらの実施形態と一貫して、少なくとも一つの追加製剤は、オルリスタット、ロルカセリン、フェンテルミン－トピラマート、ナルトレキソン－ブプロピオン、リラグルタイド、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、スルホニルウレア、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ＤＰＰ－４阻害剤、インスリン類似体、α－グルコシダーゼ阻害剤、ＳＧＬ Ｔ２阻害剤、シタグリプチン、メトホルミン、ロシグリタゾン、オカリバ、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＭＧＬ－３１９６、ＧＲ－ＭＤ－０２、アラムコール、ＧＬＰ－１類似体、及び／又はＧＬＰ－１受容体作動薬を含む。
【0079】
第３５実施形態は、第２７乃至第３４実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３５実施形態において、前記対象体は、人間の大人、人間の子供、及び／又は動物である。
【0080】
第３６実施形態は、第２７乃至第３５実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３５実施形態において、少なくとも一つの製剤及び／又は少なくとも一つの追加製剤は、経口、鼻腔、皮下、又は静脈内経路において投与される。
【0081】
第３７実施形態は、第２７乃至第３６実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３７実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約５ｍｇ乃至約２０００ｍｇ程度であり、化合物の容量は、少なくとも１日１回対象体に投与される。一部の実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約１０ｍｇ乃至約１９００ｍｇ；約１５ｍｇ乃至約１８００ｍｇ；約１５ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約２０ｍｇ乃至約１６００ｍｇ；約２５ｍｇ乃至約１５００ｍｇ；約３０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約５０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約５０ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約３００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約５００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約１０００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１２００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１５００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約１０ｍｇ乃至約３０ｍｇ；約１５００ｍｇ乃至約２０００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約２００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。これらの実施形態と一貫して、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約１ｍｇ／ｍ２乃至約１５００ｍｇ／ｍ２；約１０ｍｇ／ｍ２乃至約１０００ｍｇ／ｍ２；約２０ｍｇ／ｍ２乃至約８００ｍｇ／ｍ２；約１０ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約８００ｍｇ／ｍ２乃至約１２００ｍｇ／ｍ２；約５０ｍｇ／ｍ２乃至約５００ｍｇ／ｍ２；約５００ｍｇ／ｍ２乃至約１０００ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１２０ｍｇ／ｍ２；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。
【0082】
第３８実施形態は、第２７乃至第３６実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第３８実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ乃至約２００ｍｇ程度であり、該容量の化合物は、少なくとも１日１回対象体に投与される。一部の実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約８０ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約６０ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約８０ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．１ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．１ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．２ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．２ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．５ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約２００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。これらの実施形態のうち一部において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約１００ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約８０ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約２５ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約１００ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約８０ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１２０ｍｇ／ｍ２；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。
【0083】
第３様態において、本出願によって提供された方法は、治療法の副作用を低減及び／又は抑制し、前記方法は、対象体でＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害又は低減し、及び／又はＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増進する少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階、及び／又は第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む。第３様態において、前記対象体は、薬物療法、手術治療、及び／又はこれらの組み合わせから選ばれた少なくとも一つの治療法を受けており、前記対象は、治療法の結果として少なくとも一つの副作用を示す。これらの実施形態と一貫して、副作用は、薬物耐性、再発、炎症、又はこれらの任意の組み合わせを含み得るが、これらに制限されるのではない。
【0084】
第３９実施形態は、代謝性及び／又は神経変性疾患又は状態を有すると疑われる、又は有すると知られている対象体から血液、細胞、又は組織のサンプルを提供する段階及びサンプルでのＣＸＸＣ５及び／又はβ－カテニンの上向き調節を検出し、及び／又はＧＬＰ－１の下向き調節を検出する段階を含む、一つ以上の神経変性マーカーを検出する方法を含む。
【0085】
第４０実施形態は、第３９実施形態に係る方法を含む。第４０実施形態において、前記神経変性疾患又は類似する状態は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）から選ばれた、又はこれらを含む少なくとも一つの状態を含む。
【0086】
上述した実施形態の全部と一貫して、対象体の血液、脳及び／又は中枢神経系でのＣＸＸＣ５が代謝性及び／又は神経変性疾患を有さないと知られている正常対象体と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、及び／又は約１０００％、又はこれらの任意の組み合わせだけ過剰発現され；及び／又は対象体の血液、脳及び／又は中枢神経系でのＣＸＸＣ５が代謝性及び／又は神経変性疾患を有さないと知られている正常対象体と比較して、少なくとも約１．５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約５０倍、及び／又は約１００倍、又はこれらの任意の組み合わせだけ過剰発現される。
【0087】
第４１実施形態は、第３９又は第４０実施形態に係る方法のうち少なくとも一つを含み、さらに、第２７乃至第３８実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの方法を用いて対象体を治療する段階を含む。
【0088】
第４２実施形態は、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物、又はその製薬学的に許容される塩、又はその代謝産物の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に提供する段階を含む、対象体でのＧＬＰ－１の活性を増進する方法を含み；及び／又は、少なくとも一つの化合物の有効容量は、ＧＬＰ－１の活性及び／又はＧＬＰ－１の発現を増進する。
【0089】
第４３実施形態は、対象体が人間、動物、細胞、及び／又は組織である第４２実施形態に係る方法を含む。
【0090】
第４４実施形態は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用、及び／又はＣＸＸ５及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの活性を阻害又は低減する少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階；及び／又は第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む、治療法に対する耐性を低減する方法を含む。
【0091】
第４５実施形態は、第４４実施形態に係る方法を含む。第４５実施形態において、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の相互作用を阻害する、及び／又はＣＸＸＣ５及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの活性を阻害する少なくとも一つの製剤は、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む。
【0092】
第４６実施形態は、第４４乃至第４５実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含む。第４６実施形態において、前記対象体は、手術、体重減量、健康な食餌、身体活動、インスリン療法、及び／又は医薬／薬物療法を含むが、これらに制限されない少なくとも一つの治療養生法で以前に治療されたり又は現在治療中であり；及び／又は、前記対象体は、少なくとも部分的に対象体での活性ＧＬＰ－１の抑制された発現により、神経変性疾患に寄与する疾患と診断されたり、又はそのような状態を有する。
【0093】
第４７実施形態は、第４４乃至第４６実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含む。第４７実施形態において、前記対象体は、オルリスタット、ロルカセリン、フェンテルミン－トピラマート、ナルトレキソン－ブプロピオン、リラグルタイド、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、スルホニルウレア、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ－４）阻害剤、インスリン類似体、α－グルコシダーゼ阻害剤、ＳＧＬ Ｔ２阻害剤、シタグリプチン、メトホルミン、ロシグリタゾン、オカリバ、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＭＧＬ－３１９６、ＧＲ－ＭＤ－０２、アラムコール、ＧＬＰ－１類似体、及び／又はＧＬＰ－１受容体作動薬を用いて過去に治療を受けていた、あるいは現在治療中である。
【0094】
第４８実施形態は、本明細書に開示された前述の方法のうちいずれか一つを行うためのキットを含む。キットの構成要素は、本明細書に開示された製剤／組成物のうち一つ以上の製剤／組成物、試薬、容器、装置及び／又はキット取扱説明書を含むが、これらに制限されるのではない。
【0095】
第４９実施形態は、第４８実施形態に係るキットを含み、前記製剤／組成物のうち一つ以上の製剤／組成物が第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む。
【0096】
第５０実施形態は、第２７乃至第４７実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第５０実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約５ｍｇ乃至約２０００ｍｇ程度であり、化合物の容量は、少なくとも１日１回対象体に投与される。一部の実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約１０ｍｇ乃至約１９００ｍｇ；約１５ｍｇ乃至約１８００ｍｇ；約１５ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約２０ｍｇ乃至約１６００ｍｇ；約２５ｍｇ乃至約１５００ｍｇ；約３０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約５０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約５０ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約３００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約５００ｍｇ乃至約８００ｍｇ；約５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約１０００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１２００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１５００ｍｇ乃至約１７００ｍｇ；約１０ｍｇ乃至約１０００ｍｇ；約１０ｍｇ乃至約３０ｍｇ；約１５００ｍｇ乃至約２０００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約２００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。これらの実施形態と一貫して、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約１ｍｇ／ｍ２乃至約１５００ｍｇ／ｍ２；約１０ｍｇ／ｍ２乃至約１０００ｍｇ／ｍ２；約２０ｍｇ／ｍ２乃至約８００ｍｇ／ｍ２；約１０ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約８００ｍｇ／ｍ２乃至約１２００ｍｇ／ｍ２；約５０ｍｇ／ｍ２乃至約５００ｍｇ／ｍ２；約５００ｍｇ／ｍ２乃至約１０００ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１２０ｍｇ／ｍ２；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。
【0097】
第５１実施形態は、第２７乃至第４７実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第５１実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ乃至約２００ｍｇ程度であり、化合物の容量は、少なくとも１日１回対象体に投与される。一部の実施形態において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約８０ｍｇ；約０．０１ｍｇ乃至約６０ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約８０ｍｇ；約０．０５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．１ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．１ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．２ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．２ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約０．５ｍｇ乃至約１００ｍｇ；約０．５ｍｇ乃至約５０ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約２００ｍｇ；約１００ｍｇ乃至約１５０ｍｇ；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。これらの実施形態のうち一部において、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物の治療的有効容量は、約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約１００ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約８０ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約０．０１ｍｇ／ｍ２乃至約２５ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約１００ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約８０ｍｇ／ｍ２；約０．０５ｍｇ／ｍ２乃至約５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１５０ｍｇ／ｍ２；約８０ｍｇ／ｍ２乃至約１２０ｍｇ／ｍ２；及び／又はこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに制限されるのではない。
【0098】
第５２実施形態は、対象体の神経変性疾患の存在を測定する方法を含み、前記方法は、基準値と比較して、対象体の血液、脳及び／又は中枢神経系で上昇したＣＸＸＣ５遺伝子の発現水準及び／又はＣＸＸＣ５タンパク質の発現水準を分析する段階を含む。
【0099】
第５３実施形態は、第５２実施形態に係る方法を含む。第５３実施形態において、神経変性疾患は認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）から選ばれた、又はこれらを含む少なくとも一つの状態を含む
【0100】
第５４実施形態は、第５２又は第５３実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含む。第５４実施形態において、基準値は代謝性及び／又は神経変性疾患を有さないと知られている正常対象体でのＣＸＸＣ５遺伝子の発現水準又はＣＸＸＣ５タンパク質の発現水準である
【0101】
第５５実施形態は、第５２乃至第５４実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含み、準値と比較して、対象体の血液、脳、及び／又は中枢神経系、白色脂肪組織、膵臓、及び／又は腸で減少したＧＬＰ－１遺伝子の発現水準及び／又はＧＬＰ－１タンパク質の発現水準を分析する段階をさらに含む。
【0102】
第５６実施形態は、第５２乃至第５５実施形態のうちいずれか一つに係る方法を含む。第５６実施形態において、ＣＸＸＣ５遺伝子の発現水準及び／又はＣＸＸＣ５タンパク質の発現水準は、基準値と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、及び／又は約１０００％、又はこれらの任意の組み合わせだけ上昇し；及び／又は、ＣＸＸＣ５遺伝子の発現水準及び／又はＣＸＸＣ５タンパク質の発現水準は、基準値と比較して、少なくとも約１．５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約５０倍、及び／又は約１００倍、又はこれらの任意の組み合わせだけ上昇する。
【0103】
第５７実施形態は、第５２乃至第５６実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含み、第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物及び／又は第２６実施形態に係る少なくとも一つの組成物を含む少なくとも一つの製剤とＣＸＸＣ５とを接触させる段階をさらに含む。
【0104】
第５８実施形態は、第５２乃至第５７実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含み、対象体の脳及び／又は中枢神経系でのＣＸＸＣ５の存在を検出する段階をさらに含む。
【0105】
第５９実施形態は、第５２乃至第５８実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含み、第２７乃至第３８実施形態及び第５０乃至第５１実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの方法を用いて対象体を治療する段階をさらに含む。
【0106】
第６０実施形態は、第５２乃至第５９実施形態のうちいずれか一つに係る方法のうち少なくとも一つを含む。第６０実施形態において、対象体は細胞、動物、又は人間を含む。これらの実施形態と一貫して、細胞は、脂肪細胞、血液単核細胞、及び／又は神経細胞を含むことができる。
【0107】
第６１実施形態は、神経変性疾患又は関連する臨床的状態の治療用医薬の製造で使用される第１乃至第２５実施形態のうちいずれか一つに係る少なくとも一つの化合物又はその製薬学的に許容される水和物、塩、代謝産物、又は担体を含む組成物の使用を含む。
【0108】
第６２実施形態において、組成物は経口、局所、鼻腔、非経口、癌周辺、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋内、腫瘍内、又は肺伝達によって対象体に投与される任意の前述した実施形態の方法又は使用を含む。
【0109】
第６３実施形態は第６１又は第６２実施形態の用途を含む。第６３実施形態において、神経変性疾患又は関連する臨床的状態は認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）から選ばれた、又はこれらを含む少なくとも一つの状態を含む。
【図面の簡単な説明】
【0110】
下記の各図面は、本明細書の一部を形成し、特定の実施形態をさらに証明するために含まれる。一部の実施形態は、これらの図面のうち一つ以上を単独で又は提示された特定の実施形態の詳細な説明と共に参照することによってさらによく理解され得る。
【0111】
【図1A】正常かつ健康な対照群と治療されていないステージ１のパーキンソン病（ＰＤ）患者との間の末梢血中のＧＬＰ－１及びＣＸＸＣ５のｍＲＮＡ発現水準の比較を示したグラフである（平均±ｓ．ｅ．ｍ．、ｎ＝４、＊Ｐ＜０．０５ ａｎｄ ＊＊＊Ｐ＜０．０００５）。
【図1B】正常かつ健康な対照群と治療されていないステージ１のアルツハイマー病（ＡＤ）患者との間の末梢血中のＧＬＰ－１及びＣＸＸＣ５のｍＲＮＡ発現水準の比較を示したグラフである（平均±ｓ．ｅ．ｍ．、ｎ＝１３、＊Ｐ＜０．０５）。
【図1C】アルツハイマー病モデル形質転換マウスのＣＸＸＣ５の発現に対する抗糖尿病薬物であるピオグリタゾンの効果を示したグラフである（平均±ｓ．ｅ．ｍ．、ｎ＝７、＊Ｐ＜０．０５）。
【図2A】高脂肪食餌（ＨＦＤ）又は正常食餌（ＮＣＤ）中であったマウスの多様な種類の組織（ｅｐｉＷＡＴ、ＢＡＴ、肝臓、筋肉、膵臓、腸、脾臓、腎臓及び心臓）の相対的ＧＬＰ－１ ｍＲＮＡ発現を示したグラフである。
【図2B】高脂肪食餌（ＨＦＤ）を進行したＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスのｅｐｉＷＡＴのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準を示したグラフである。
【図2C】賦形剤、Ａ３３３４、及びシタグリプチンで治療されたＮＣＤ－マウス及びＨＦＤ－マウスのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準を示したグラフである。
【図3A】高脂肪食餌（ＨＦＤ）を進行したＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図3B】高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）によって誘導された糖尿病Ｃｘｘｃ５＋／＋マウス及び高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ＳＴＺによって誘導された糖尿病Ｃｘｘｃ５－／－マウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図4A】賦形剤、Ａ３３３４、及びシタグリプチンで治療されたＮＣＤ－マウス及びＨＦＤ－マウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図4B】賦形剤、Ａ３３３４、及びシタグリプチンで治療された高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ＳＴＺによって誘導された糖尿病マウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図5】高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ＣＣｌ４によって誘導されたＮＡＳＨ Ｃｘｘｃ５＋／＋マウス及び高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ＣＣｌ４によって誘導されたＮＡＳＨ Ｃｘｘｃ５－／－マウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図6A】ＮＣＤ－マウス（「ＣＨｏｗ」）、及び賦形剤、Ａ３３３４、Ａ３０５１、セロンセルチブ、及びオカリバで治療された高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、ＳＴＺによって誘導されたＮＡＳＨマウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図6B】ＮＣＤ－マウス（「ＣＨｏｗ」）、及び賦形剤、Ａ３３３４、Ａ３０５１、セロンセルチブ、オカリバ（「ＯＣＡ」）、及びＡ３４８６を処理した高脂肪食餌（ＨＦＤ）－給与された、メチオニン－コリン欠乏食餌（ＭＣＤ）によって誘導されたＮＡＳＨマウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を示したグラフである。
【図7A】非分化状態（「+ｂＦＧＦ」）及び分化された状態（「－ｂＦＧＦ」）を示したラット神経幹細胞（ＮＳＣ）の写真である。非分化ＮＳＣは、１０ｎｇ／ｍｌ ｂＦＧＦ（「+ｂＦＧＦ」）を含有する培養培地中に維持された。
【図7B】多様な濃度（０μＭ、１μＭ、５μＭ、及び１０μＭ）のＡ３０５１で治療時の形態変化を示したラット神経幹細胞（ＮＳＣ）の写真である。非分化ＮＳＣは、１０ｎｇ／ｍｌ ｂＦＧＦを含有する培養培地中に維持された。
【図8A】Ｈ４野生型（ＷＴ）細胞（対照群細胞）及びＨ４／ＳＷＥ細胞（ＡＰＰスェーデン突然変異神経膠腫Ｈ４セルライン）のβ－カテニン、ＣＸＸＣ５及び非活性形態のＧＳＫ３β（ｐ－ＧＳＫ３β）の発現を示したウェスタンブロットである。
【図8B】Ｈ４ ＷＴ及びＨ４／ＳＷＥ細胞のβ－カテニン、ＣＸＸＣ５及びｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）の相対的発現水準を示したグラフである。
【図9A】ＤＭＳＯ（対照群）、Ａ３３３４、Ａ３０５１、Ａ４７３３、Ａ４７３５、インディルビン、インディルビン－３'－オキシム（Ｉ３０）、６－ブロモインディルビン－３'－オキシム（ＢＩＯ）で治療されたＨ４／ＳＷＥ細胞及びＨ４ ＷＴ細胞のβ－カテニン、ＣＸＸＣ５及びｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）及びα－チューブリンの水準を示したウェスタンブロットである。
【図9B】ＤＭＳＯ、Ａ３３３４、Ａ３０５１、Ａ４７３３、Ａ４７３５、インディルビン、Ｉ３０、ＢＩＯで治療されたＨ４／ＳＷＥ細胞及びＨ４ ＷＴ細胞のβ－カテニンの水準及び偏在化を示した免疫細胞化学イメージである。ここで緑色信号はβ－カテニンの発現を示し、青色信号は、４'，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した核を示す。
【図10】ＤＭＳＯ、Ａ３３３４、Ａ３０５１、Ａ４７３３、Ａ４７３５、インディルビン、Ｉ３０、ＢＩＯで治療されたＨ４／ＳＷＥ細胞及びＨ４ ＷＴ細胞で分泌されたヒトアミロイドβ－４２の水準を示したヒトＡβ－４２酵素－結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）である。
【図11】本明細書に開示されたインディルビン類似体の各例の化学構造を示す図である。
【図12】本明細書に開示されたインディルビン類似体の各例の化学構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0112】
定義
「約」という用語は、値プラス又はマイナス１０パーセントの範囲を意味し、例えば、約１．０は、０．９から１．１までの値を含む。
「約」という用語は、値プラス又はマイナス１０パーセントの範囲を意味し、例えば、約１．０は、０．９から１．１までの値を含む。
【0113】
「ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース」という用語は、ＣＸＸＣ５（ＣＸＸＣフィンガータンパク質５）とＤＶＬ（ディシブルド）との間の相互作用及び／又は結合を意味し、これは、当業界に公知となっている生物学的活性を誘導することができる。相互作用及び／又は結合は、対象体内でＣＸＸＣ５－ＤＶＬ経路を活性化できる物理的又は化学的相互作用であってよい。ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースは複合体の形態で存在することができる。
【0114】
「ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの阻害剤」という用語は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの機能及び／又は活性を変更、又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースに立体形態的変化を誘導する製剤を意味する。ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの阻害剤の各例は、ＣＸＸＣ５とＤＶＬとの間の結合／分離を変更する製剤及び／又はＣＸＸＣ５－ＤＶＬ複合体の組み立て／機能を阻害する製剤を含むが、これらに制限されるのではない。
【0115】
「神経変性疾患又は類似する状態」という用語は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）を含むことができるが、これらに制限されるのではない。
【0116】
「代謝性疾患又は類似する状態」という用語は、代謝障害、代謝症侯群、肥満、高血圧、高血糖、高血清中性脂肪、高尿酸血症、脂肪肝、多嚢胞性卵巣症侯群、勃起不全、黒色表皮腫、２型糖尿病、低アディポネクチン血症、肝硬変症、門脈圧亢進症、心血管疾患、冠状動脈疾患、脂肪異栄養症、脂質異常症、肝脂肪変性、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び／又は非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）を含むことができるが、これらに制限されるのではない。
【0117】
「製薬学的に許容される」という用語は、哺乳類及び／又は動物、及びさらに具体的に、人間で使用するために米国ＦＤＡ又はＥＭＡなどの政府規制機関によって承認された、又は承認可能な、又は米国薬典又は他の一般的に認められる薬典に登録されたものを意味する。
【0118】
「製薬学的に許容される賦形剤」又は「製薬学的に許容される担体」という用語は、他の意味で言及又は他の意味が内包されない限り、製剤に含まれ得る活性成分以外の他の任意の成分を説明するために使用される。担体の選択は、投与方式、溶解度及び安定性に対する担体の影響、及び剤形の性質などの各要因に大きく左右されることがある。
【0119】
「製薬学的組成物」という用語は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの治療的活性阻害剤又はＧＳＫβの治療的活性阻害剤、及びＣＸＸＣ－ＤＶＬインターフェースの阻害剤及び／又はＧＳＫβの阻害剤と共に対象体に投与される少なくとも一つの製薬学的に許容される賦形剤／担体を意味する。
【0120】
「対象体」という用語は、人間（大人及び／又は子供）、動物、家畜、細胞、及び／又は組織を意味する。
【0121】
「治療的有効量」という用語は、疾患、又は疾患の臨床的症状のうち少なくとも一つの治療のために対象体に投与されたとき、疾患又はその症状の治療に影響を及ぼすのに十分なＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの阻害剤、本明細書に開示された少なくとも一つの化合物、ＧＬＰ－１類似体、ＧＬＰ－１受容体作動薬又はＧＳＫβの阻害剤の量を意味する。「治療的有効量」という用語は、例えば、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの阻害剤、疾患及び／又は疾患の症状、疾患及び／又は疾患又は障害の症状の重症度、治療される対象体の年齢、体重及び／又は健康状態、及び主治医の判断によって変わることがある。
【0122】
「治療的有効容量」という用語は、対象体の疾患又は障害の効果的な治療を提供する容量を意味する。治療的有効容量は、化合物ごとに及び対象体ごとに変わることがあり、対象体の状態及び／又は投与経路などの各要因に左右されることがある。
【0123】
「治療法」という用語は、手術、体重減量、健康な食餌、身体活動、インスリン療法、及び／又は医薬／薬物療法を含み得るが、これらに制限されない。一部の実施形態において、医薬／薬物療法は、オルリスタット、ロルカセリン、フェンテルミン－トピラマート、ナルトレキソン－ブプロピオン、リラグルタイド、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、スルホニルウレア、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ＤＰＰ－４阻害剤、インスリン類似体、α－グルコシダーゼ阻害剤、ＳＧＬ Ｔ２阻害剤、シタグリプチン、メトホルミン、ロシグリタゾン、オカリバ、セロンセルチブ、エラフィブラノール、セニクリビロック、ＭＧＬ－３１９６、ＧＲ－ＭＤ－０２、アラムコール、ＧＬＰ－１類似体、及び／又はＧＬＰ－１受容体作動薬を含む少なくとも一つの製剤による１回以上の治療を含むが、これらに制限されるのではない。
【0124】
任意の疾患又は状態を「治療する」又は「治療」という用語は、疾患又は疾患の臨床的症状のうち少なくとも一つを好転、緩和、中断、又は改善すること、疾患又は疾患の臨床的症状のうち少なくとも一つの危険を減少させること、疾患又は疾患の臨床的症状のうち少なくとも一つの進行を抑制すること、又は疾患又は疾患の臨床的症状のうち少なくとも一つの発生危険を減少させることを意味する。一部の実施形態において、「治療する」又は「治療」という用語は、疾患を身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）又は生理学的に（例えば、身体的変数の安定化）、又は二つの方式で抑制すること、及び対象体の識別可能な又は識別不可能な少なくとも一つの身体的変数を抑制することを意味する。特定の実施形態において、「治療する」又は「治療」という用語は、対象体が疾患の症状を未だに経験していないか又は示していないとしても、疾患又は状態が発症またはそのような素因にあり得る対象体における疾患又は状態の開始又はその少なくとも一つ以上の症状の発症を遅延させることを意味する。
【0125】
詳細な説明
新規技術の原理に対する理解を深めるために、好ましい実施形態のそれぞれが参照され、それぞれを説明するために特定の言語が使用される。しかし、新規技術の範囲に対する制限が意図されておらず、新規技術の属する当業界の当業者に通常起こり得ると考慮される新規技術の原理に対する変更、変形及び追加用途は、本発明及び請求項の範囲内に含まれる。
新規技術の原理に対する理解を深めるために、好ましい実施形態のそれぞれが参照され、それぞれを説明するために特定の言語が使用される。しかし、新規技術の範囲に対する制限が意図されておらず、新規技術の属する当業界の当業者に通常起こり得ると考慮される新規技術の原理に対する変更、変形及び追加用途は、本発明及び請求項の範囲内に含まれる。
【0126】
神経変性疾患は、神経機能の消失又は減少により、運動調節、認知、知覚、感覚機能及び自律神経系などの多様なシステムに発生する機能障害と関連する複合的な病理学的状態を有する。神経変性疾患は、長い期間、その状態を正常に治療できる薬物又は他のインターベンション（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）は何らない不治の複雑な状態と見なされていた。現在のアプローチは、人々が精神機能を維持し、行動症状を管理し、疾患の症状を遅延させることを援助することに重点を置いている。よって、全身性病理学的過程を標的にして、神経変性疾患の全般的な状態を改善する効果的な薬物は現在までに存在していない。
【0127】
代謝性疾患は、肥満、動脈硬化性脂質異常症、インスリン抵抗性及び２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）発病の増加した危険と関連する複合的な病理学的状態を有する。非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝臓に蓄積された脂肪によって肝臓に生じた炎症及び損傷として特定することができる。病気にかかった多くの患者達は、肥満、２型糖尿病、耐糖能障害、脂質異常症及び／又は代謝性疾患を示す。ＮＡＳＨの発病率は、肥満の増加と共に全世界的に増加しているが、その病理学的メカニズムは詳しく理解されていない。
【0128】
最近の研究において、アルツハイマー病（ＡＤ）及び／又はパーキンソン病（ＰＤ）がインスリン抵抗性及び２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）と関連する複合的な病理学的状態を有することが示唆されている。Ｔ２ＤＭを伴う全身のインスリン抵抗性は、パーキンソン病と関連する場合があり、パーキンソン病に罹患する患者は、通常、脳のインスリン抵抗性を誘発し得る耐糖能障害を示す。Ｔ２ＤＭの病理生理学的特徴と知られている高インスリン血症及びインスリン抵抗性も、認知損傷に有意な影響を及ぼすものと証明された。また、損傷したインスリン信号伝逹は、α－シヌクレイン蓄積及びミトコンドリア機能障害と関連するだけでなく、損傷した認知、不安及びうつ病性障害などのパーキンソン病の患者から見える行動異常とも関連していた。認知損傷のメカニズムは、脳のインスリン信号伝逹の損傷、アミロイド代謝の変化、終末糖化産物の蓄積、及び酸化ストレスを含むと仮定される。また、一部の研究において、インスリン信号伝逹経路がパーキンソン病で何らかの役割をすることができ、糖尿病と神経変性疾患との間に連関性があり得ることが確認された。
【0129】
老人達に最も多く見られる形態の認知症であるアルツハイマー病は、記憶、認知、性格、及び他の機能を撹乱させる非可逆的な脳の変性であり、結果として、完全な脳機能障害によって死亡に至るようになる。パーキンソン病は、認知症の最も多く見られる形態であり、記憶及び学習能力、日常機能及び人生の質に影響を及ぼす認知不全と行動変化とを特徴とする。パーキンソン病は、脳でドーパミンを生成するニューロンの主な損失によってもたらされ得る。
【0130】
グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）は、プログルカゴン遺伝子に由来する３０－アミノ酸長さのペプチドホルモンであり、食物が十二指腸に入り込むとき、小腸の末端で分泌される。ＧＬＰ－１受容体は、脳の中枢神経系で発見されて拡散され、刺激を受けたときに、細胞生存を増進させ、神経保護を促進する。ＧＬＰ－１は、神経及び認知機能だけでなく、ブドウ糖代謝に対する調節効果にも影響を及ぼす。よって、ＧＬＰ－１受容体作動薬が神経変性疾患の治療のための薬物として考慮されたが、全身性病理学的過程を標的にして、神経変性疾患の全般的な状態を改善する効果的な薬物は未だに利用できない。
【0131】
ＣＸＸＣフィンガータンパク質５（ＣＸＸＣ５）は、Ｗｎｔ／β－カテニン信号伝逹の陰性調節剤であり、細胞質でディシブルド（ＤＶＬ）のＰＤＺドメインとの相互作用を通じて機能する。ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ相互作用の阻害は、骨粗鬆症、縦方向への骨の成長、皮膚の傷、及びＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹の活性化を通じた脱毛を含むＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹を伴ういくつかの病理生理学的表現型を改善した。
【0132】
本明細書に開示されたように、ＣＸＸＣ５発現は、アルツハイマー病及び／又はパーキンソン病と診断された患者の脳組織で驚くほど増加した。また、Ｗｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子ＧＬＰ－１によって、アルツハイマー病及び／又はパーキンソン病に罹患する患者の脳組織でＣＸＸＣ５過剰発現を伴うβ－カテニン信号伝逹の非活性化によって抑制されることが明らかになった。また、ＧＬＰ－１、ＴＣＦ７Ｌ２、及びＦＯＳＬ１などのＷｎｔ／β－カテニン経路標的遺伝子は、ＡＤ及び／又はＰＤと診断された患者において抑制されることが明らかになった。Ｃｘｘｃ５－／－マウスは、ＡＤ及び／又はＰＤを含む神経変性疾患の何ら表現型も発生させなかった。本明細書に開示された結果は、ＣＸＸＣ５が神経変性疾患の発生に寄与することを示唆する。よって、本発明は、制限ではないが、ＡＤ及び／又はＰＤを含む神経変性疾患の治療につながり得るＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの新規機能を提供する。
【0133】
本明細書に開示された実施形態は、対象体の神経変性疾患と関連する状態及び／又は疾患及び／又は関連する臨床的状態を治療するための組成物及び方法に関する。特定の実施形態において、本明細書に開示された組成物及び方法は、治療法の副作用の抑制に関する。他の実施形態は、神経変性疾患と診断された、又は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）に関連する状態を有する対象体を治療するための組成物及び方法に関する。
【0134】
本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された化合物及び／又は組成物のうちいずれか一つの少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む、臨床的状態を治療する方法を含む。対象体は、神経変性疾患又は類似する状態から選ばれた、及び／又はそれを含む臨床的状態と診断され得る。特定の実施形態において、本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された化合物及び／又は組成物のうちいずれか一つの複数の治療的有効容量を対象体に投与する段階をさらに含む。
【0135】
一部の実施形態において、本明細書に開示された組成物は、対象体のＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する少なくとも一つの製剤を含む。これらの実施形態と一貫して、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する少なくとも一つの製剤は、本明細書に開示された少なくとも一つの化合物を含む。一部の実施形態において、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する少なくとも一つの製剤は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースの立体形態を物理的に及び／又は化学的に破壊することができる。一部の実施形態において、本明細書に開示された少なくとも一つの化合物は、対象体において、ＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増進する。
【0136】
製薬学的組成物
本発明によって提供された製薬学的組成物は、対象体に適宜投与するための組成物を提供するために、一つ以上の製薬学的に許容される適切な量の賦形剤と共に、本明細書に開示された一つ以上の組成物の治療的有効量を含むことができる。適切な製薬学的賦形剤は、当業界に公知となっている。
本発明によって提供された製薬学的組成物は、対象体に適宜投与するための組成物を提供するために、一つ以上の製薬学的に許容される適切な量の賦形剤と共に、本明細書に開示された一つ以上の組成物の治療的有効量を含むことができる。適切な製薬学的賦形剤は、当業界に公知となっている。
【0137】
経口投与に適した本発明の製薬学的組成物は、それぞれ予め定められた量の活性成分を含有するカプセル、カシェ、錠剤又はロゼンジなどを個別単位として；粉末又は顆粒であってよく；シロップ、エリクシール又は水薬などの水性液体又は非水性液体中の溶液又は懸濁液であってよく；又は水中油滴型液体エマルジョン又は油中水滴型液体エマルジョンであってよい。また、組成物は、ボーラス、練り薬、又はペーストであってもよい。錠剤は、活性成分を製薬学的に許容される担体と共に圧縮又は成形することによって製造され得る。圧縮錠剤は、例えば、結合剤、非活性希釈剤、潤滑剤、崩壊剤及び／又は表面活性剤と混合し、粉末又は顆粒などの自由流動形態の活性成分を適切な機械で圧縮することによって製造することができる。成形錠剤は、非活性液体希釈剤で濡らした粉末形態の活性成分の混合物を適切な機械で成形することによって製造することができる。錠剤は、選択的にコーティング又は分割線が表示されてよく、活性成分の遅延又は制御放出を提供するように製剤化されてよい。
【0138】
非経口投与に適した本発明の製薬学的組成物は、水性及び非水性滅菌注射溶液を含み、また、抗酸化剤、バッファー、静菌剤及び受益者の血液と等張性組成物で作る溶液、及び、例えば、懸濁剤及び増粘剤を含有し得る水性及び非水性滅菌懸濁液を含むことができる。製剤は、単一単位容量又は多重容量容器に存在することができ、使用前の滅菌液体担体の添加を要する凍結乾燥状態で保管され得る。
【0139】
製薬学的に許容される塩は、哺乳類に使用するのに安全且つ効果的であり、所望の治療活性を有する本発明によって提供された化合物の塩を含む。製薬学的に許容される塩は、本発明によって提供された化合物に存在する酸性又は塩基性の塩を含む。製薬学的に許容される酸付加塩は、制限されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（すなわち、１，１'－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエ酸））塩を含む。開示された特定の化合物は、多様なアミノ酸と共に製薬学的に許容される塩を形成することができる。適切な塩基塩は、制限されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、及びジエタノールアミン塩を含む。本明細書に説明された方法を実施するために使用され得る一部の製薬学的に許容される塩に対する追加情報に対して、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，６６ Ｊ． ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩ．１－１９（１９７７），Ｈａｙｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．９４，Ｎｏ．１０，Ｏｃｔ．２００５，ｐｇｓ．２１１１－２１２０などの論文を参照することができる。
【0140】
一部の実施形態において、組成物は、製薬学的に許容される潤滑剤を含有することができる。製薬学的に許容される潤滑剤は、製薬学的組成物の成分が共に凝集し、開示された組成物を生成するペレットプレスに付着することを防止する。また、潤滑剤は、組成物とダイプレスの壁との間の摩擦が少ない状態でペレットの形成、及びペレットプレスからの排出が行われるようにする。一部の実施形態において、潤滑剤は、加工特徴を改善するために、例えば、組成物の可撓性を増加させ、破損を減少させることを援助するために製薬学的組成物に添加される。
【0141】
開示された製薬学的組成物に使用することができる潤滑剤の種類は多様であってよい。一部の実施形態において、製薬学的に許容される潤滑剤は、滑石、シリカ、植物性ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ベヘン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、ミネラルオイル、ポリエチレングリコール、フマル酸ステアリルナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、植物性オイル、ステアリン酸亜鉛及びこれらの組み合わせから選ばれる。一部の実施形態において、製薬学的に許容される潤滑剤はステアリン酸である。
【0142】
開示された製薬学的組成物に使用することができる賦形剤の種類は多様であってよい。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、結合剤、充填剤及びこれらの組み合わせから選ばれる。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、アスコルビン酸、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドンＫ－３０（ポビドンＫ－３０）、モノステアリン酸グリセリル（ＧＭＳ）又はモノステアリン酸塩グリセリル、ベヘン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、糖、デキストラン、トウモロコシ澱粉、リン酸水素カルシウム、リン酸水素カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、ラクトース、微細結晶質セルロースを含むセルロース、マンニトール、塩化ナトリウム、乾燥澱粉、予備ゼラチン化された澱粉、圧縮可能な糖、マンニトール、ラクトース一水和物、澱粉、リン酸水素カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、粉末セルロース、微細結晶質セルロース、ラクトース、グルコース、プラクトース、スクロース、マンノース、デキストロース、ガラクトース、相応する糖アルコール及び他の糖アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、及び上述したもののうちいずれかの組み合わせから選ばれる。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、ポビドンＫ－３０とも言うポリビニルピロリドンＫ－３０である。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、平均分子量（ＭＷ）が４０，０００であるポビドンＫ－３０とも言うポリビニルピロリドンＫ－３０である（ＣＡＳ ９００３－３９－８）。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、モノステアリン酸グリセリル（ＧＭＳ）又はモノステアリン酸塩グリセリル、ベヘン酸グリセリル及びパルミトステアリン酸グリセリルから選ばれる。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤は、モノステアリン酸グリセリル（ＧＭＳ）又はモノステアリン酸塩グリセリルである。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤はベヘン酸グリセリルである。一部の実施形態において、製薬学的に許容される賦形剤はパルミトステアリン酸グリセリルである。
【0143】
一部の実施形態において、抗酸化剤は、開示された組成物の他の成分の酸化を防止する。酸化は、例えば、自由ラジカルが生成される滅菌の間に起きることがある。抗酸化剤又は自由ラジカルスカベンジャーの添加は、酸化を有意に減少させ、組成物を対象体で使用することをさらに製薬学的に許容可能にする。
【0144】
開示された製薬学的組成物に使用することができる抗酸化剤の種類は多様であってよい。一部の実施形態において、抗酸化剤は、メチルパラベン及びその塩、プロピルパラベン及びその塩、ビタミンＥ、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、没食子酸プロピル、亜硫酸塩、アスコルビン酸（Ｌ－アスコルビン酸、また、アスコルビン酸のＬ－鏡像異性体、ビタミンＣを含む。）、安息香酸ナトリウム、クエン酸、シクロデキストリン、過酸化物スカベンジャー、安息香酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩、連鎖停止剤（例えば、チオール及びフェノール）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、及びこれらの組み合わせから選ばれる。
【0145】
使用又は治療方法
本明細書に開示された方法及び組成物は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース及び／又はＧＳＫβの阻害剤が治療的恩恵を提供すると知られている、又はそうであると後で発見される神経変性疾患、障害、状態、及び症状で苦しむ対象体を治療するために使用されることができる。
本明細書に開示された方法及び組成物は、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェース及び／又はＧＳＫβの阻害剤が治療的恩恵を提供すると知られている、又はそうであると後で発見される神経変性疾患、障害、状態、及び症状で苦しむ対象体を治療するために使用されることができる。
【0146】
一部の実施形態において、本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された組成物のうちいずれかの少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む、神経変性疾患又はその臨床的状態を治療する方法を含む。対象体は、認知症、アルツハイマー病（ＡＤ）、血管性認知症、老人性認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ又はルー・ゲーリック病とも言う）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、仮性球麻痺、遺伝性痙性対麻痺（ＨＳＰ）、小脳性運動失調、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び／又はギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）から選択される状態、及び／又は薬物治療、療法及び／又は手術治療と関連し、それによって誘導された、又はそれに対して既に耐性を有する他の任意の状態、又はこれらを含む臨床的状態と診断され得る。一部の実施形態において、本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された組成物のうちいずれかの少なくとも一つの追加の治療的有効容量を対象体に投与する段階をさらに含む。一部の実施形態において、本明細書に開示された組成物のうちいずれかの少なくとも一つの治療的有効容量は、経口、非経口、皮下、静脈内、吸入及び／又は経皮方式で投与できる。
【0147】
他の実施形態は、対象体でＣＸＸＣ５－ＤＶＬインターフェースを阻害する、及び／又はＧＬＰ－１の発現及び／又は活性を増進する少なくとも一つの製剤の少なくとも一つの治療的有効容量を対象体に投与する段階を含む、治療法の副作用を低減する方法を含んでよく；対象体は、薬物治療、手術、療法を含む少なくとも一つの治療法の移行を受けており、対象体は、治療法から由来した少なくとも一つの副作用を示す。これらの実施形態と一貫して、副作用は薬物耐性及び／又は再発を含み得るが、これらに制限されない。
【0148】
キット
追加の様態において、本発明によってキットが提供され、このようなキットは、一つ以上の製薬学的組成物、容器内で滅菌されたそれぞれの組成物、対象体に製薬学的組成物を投与するための手段、及び取扱説明書を含む。
追加の様態において、本発明によってキットが提供され、このようなキットは、一つ以上の製薬学的組成物、容器内で滅菌されたそれぞれの組成物、対象体に製薬学的組成物を投与するための手段、及び取扱説明書を含む。
【0149】
一部の実施形態は、本明細書に開示された方法を行うためのキットを含む。このようなキットは、典型的に臨床的状態を治療するために必要な二つ以上の構成要素を含む。キットの構成要素は、制限されないが、本明細書に説明された一つ以上の製剤／組成物、試薬、容器、装置及び／又はキット取扱説明書を含む。よって、本明細書において説明された組成物及び方法は、本明細書に説明された予め包装されたキットを用いて行うことができる。
【実施例】
【0150】
下記の各実施例は、本発明の多様な様態を例示する。本発明の範囲を逸脱しない範囲で、材料及び方法に対して多くの変形が実施可能であることが当業者にとって明白であろう。
【0151】
ＣＸＸＣ５－タイプのジンクフィンガータンパク質５（ＣＸＸＣ５）は、ディシブルド（Ｄｖｌ）結合を通じて機能するＷｎｔ／β－カテニン経路の陰性フィードバック調節剤である。ＣＸＸＣ５は、特定の病理生理学的状態で再生成組織リモデリングを伴う多様な病理生理学的役割を行う。しかし、神経変性疾患の進行過程でのＣＸＸＣ５の役割は未だに明らかになっていない。本発明において、ＣＸＸＣ５がＡＤ及び／又はＰＤ患者の脳組織及び／又は末梢血で高度に発現され、ＧＬＰ－１などのＷｎｔ／β－カテニン標的遺伝子の発現が減少することが予想もせずに発見された。
【0152】
本明細書に開示されたように、制限されないが、Ａ３３３４及び／又はＡ３０５１を含むＣＸＸＣ－ＤＶＬタンパク質－タンパク質相互作用（ＰＰＩ）を妨害する低分子が確認され、ＡＤ及びＰＤと診断された患者のＧＬＰ－１の発現及び活性を改善できる潜在的薬物が特性化された。各インディルビン誘導体は、ＣＸＸＣ５によるこの経路の陰性フィードバック機能の解除を通じて、ＧＬＰ－１を含む代謝を伴うＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子の活性化によってこのような機能を発揮する。よって、本発明は、対象体でＧＬＰ－１を誘導／活性化し、神経幹細胞をドーパミン生成神経細胞に分化し、そして、ＡＤ及びＰＤを含む神経変性疾患を治療するにおいて本明細書に開示されたインディルビン類似体の用途に関する。
【0153】
生物情報学データ分析
ＧＥＯデータベースの分子経路遺伝子セット空間でＣＸＸＣ５及びＧＬＰ－１ ｍＲＮＡ発現の交差－種比較を行い、二つのヒトのパーキンソン病及びヒト／マウスのアルツハイマー病トランスクリプトームデータセットでＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ－Ｔ検定によって統計的に有意な調節障害が定義された（正常（ｎ＝４）対パーキンソン病患者（ｎ＝４）対象体、正常（ｎ＝１３）対アルツハイマー病患者（ｎ＝１３）対象体、及び対照群（ｎ＝７）対ピオグリタゾン（ｎ＝７））。
ＧＥＯデータベースの分子経路遺伝子セット空間でＣＸＸＣ５及びＧＬＰ－１ ｍＲＮＡ発現の交差－種比較を行い、二つのヒトのパーキンソン病及びヒト／マウスのアルツハイマー病トランスクリプトームデータセットでＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ－Ｔ検定によって統計的に有意な調節障害が定義された（正常（ｎ＝４）対パーキンソン病患者（ｎ＝４）対象体、正常（ｎ＝１３）対アルツハイマー病患者（ｎ＝１３）対象体、及び対照群（ｎ＝７）対ピオグリタゾン（ｎ＝７））。
【0154】
血液化学
心臓穿刺によってマウスの全血液を収集した。３０分間血液を凝固させた後、３，０００×ｇで３０分間遠心分離することによって上澄み液を獲得し、活性ＧＬＰ－１の濃度を測定した。ＥＬＩＳＡ分析キットを用いて血清活性ＧＬＰ－１（７－３６）を評価した。
心臓穿刺によってマウスの全血液を収集した。３０分間血液を凝固させた後、３，０００×ｇで３０分間遠心分離することによって上澄み液を獲得し、活性ＧＬＰ－１の濃度を測定した。ＥＬＩＳＡ分析キットを用いて血清活性ＧＬＰ－１（７－３６）を評価した。
【0155】
定量的実時間重合酵素連鎖反応（ＰＣＲ）
製造者の指針に従い、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて粉砕された組織粉末から総ＲＮＡを抽出した。この総ＲＮＡ ２μｇを用いてＭ－ＭＬＶ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で逆転写を行った。合成されたｃＤＮＡを１００ｎｇ／μｌの濃度に希釈した。Ｒｏｔｏｒ－ｇｅｎｅ Ｑ実時間ＰＣＲサイクラー（Ｑｉａｇｅｎ）でＳＹＢＲ緑色試薬（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて定量的ＰＣＲ分析を行った。このとき、条件は、９５℃１０分、その後、９５℃５秒、６０℃１５秒の４０サイクルであった。比較Ｃｔ法（ΔΔＣｔ）を用いてｍＲＮＡ水準の相対的定量値を推定した。Ｇｌｐ－１ ｍＲＮＡ値をＧＡＰＤＨに対して正規化した。
製造者の指針に従い、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて粉砕された組織粉末から総ＲＮＡを抽出した。この総ＲＮＡ ２μｇを用いてＭ－ＭＬＶ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で逆転写を行った。合成されたｃＤＮＡを１００ｎｇ／μｌの濃度に希釈した。Ｒｏｔｏｒ－ｇｅｎｅ Ｑ実時間ＰＣＲサイクラー（Ｑｉａｇｅｎ）でＳＹＢＲ緑色試薬（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて定量的ＰＣＲ分析を行った。このとき、条件は、９５℃１０分、その後、９５℃５秒、６０℃１５秒の４０サイクルであった。比較Ｃｔ法（ΔΔＣｔ）を用いてｍＲＮＡ水準の相対的定量値を推定した。Ｇｌｐ－１ ｍＲＮＡ値をＧＡＰＤＨに対して正規化した。
【0156】
神経幹細胞（ＮＳＣ）培養
Ｅ１４．５ラットの前脳からＮＳＣを抽出し、ｂＦＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）１０ｎｇ／ｍｌを含有する培地で培養することによって未分化状態に維持した。未分化ＮＳＣ（１×１０５）を各化合物（１０μＭ）で処理し、２４時間後に細胞の黒白イメージを画像化することによって細胞の形態を評価した。
Ｅ１４．５ラットの前脳からＮＳＣを抽出し、ｂＦＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）１０ｎｇ／ｍｌを含有する培地で培養することによって未分化状態に維持した。未分化ＮＳＣ（１×１０５）を各化合物（１０μＭ）で処理し、２４時間後に細胞の黒白イメージを画像化することによって細胞の形態を評価した。
【0157】
動物
Ｃｘｘｃ５－／－マウスの生成は前述の通り説明された。Ｃｘｘｃ５異形接合マウスを４世代にわたって交配し、同腹の野生型及びＣｘｘｃ５－／－マウスを獲得し、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに維持した。６週齢のＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスに８週間ＨＦＤを給与した。野生型の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯＡＴＥＣＨ、韓国ソウル）には、脂肪６０％カロリーで構成されたＨＦＤ（研究食餌、Ｄ１２４９２）を８週間給与した。インスリン抵抗性を検証するためのマウスモデルが成功的に確立され、禁食状態のブドウ糖数値をＯｎｅ Ｔｏｕｃｈ Ｕｌｔｒａ血糖計（ＬｉｆｅＳｃａｎ）で評価した。その次に、８週目及び１２週目に禁食状態のブドウ糖数値が１６．７ｍｍｏｌ／Ｌを超えるＨＦＤ－給与マウスのそれぞれにＡ３３３４（２５ｍｇ ｋｇ－１）、シタグリプチン（５０ｍｇ ｋｇ－１）、又はメトホルミン（１００ｍｇ ｋｇ－１）を５日間毎日経口投与した。薬物の除去後、マウスを３週間高脂肪食餌（ＨＦＤ）状態に維持した。膵臓再生をモニタリングするために、６週齢のＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスに前記のようにＨＦＤを給与した。４週間食餌療法を行った後、マウスにＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）を１週間腹腔内注射し、対照群には食塩水を注射した。２週後、Ｃｘｘｃ５＋／＋マウスにＡ３３３４又はＡ３０５１（２５ｍｇ ｋｇ－１）及びシタグリプチン（５０ｍｇ ｋｇ－１）を４週間経口胃管栄養法によって毎日投与した。
Ｃｘｘｃ５－／－マウスの生成は前述の通り説明された。Ｃｘｘｃ５異形接合マウスを４世代にわたって交配し、同腹の野生型及びＣｘｘｃ５－／－マウスを獲得し、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに維持した。６週齢のＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスに８週間ＨＦＤを給与した。野生型の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯＡＴＥＣＨ、韓国ソウル）には、脂肪６０％カロリーで構成されたＨＦＤ（研究食餌、Ｄ１２４９２）を８週間給与した。インスリン抵抗性を検証するためのマウスモデルが成功的に確立され、禁食状態のブドウ糖数値をＯｎｅ Ｔｏｕｃｈ Ｕｌｔｒａ血糖計（ＬｉｆｅＳｃａｎ）で評価した。その次に、８週目及び１２週目に禁食状態のブドウ糖数値が１６．７ｍｍｏｌ／Ｌを超えるＨＦＤ－給与マウスのそれぞれにＡ３３３４（２５ｍｇ ｋｇ－１）、シタグリプチン（５０ｍｇ ｋｇ－１）、又はメトホルミン（１００ｍｇ ｋｇ－１）を５日間毎日経口投与した。薬物の除去後、マウスを３週間高脂肪食餌（ＨＦＤ）状態に維持した。膵臓再生をモニタリングするために、６週齢のＣｘｘｃ５＋／＋及びＣｘｘｃ５－／－マウスに前記のようにＨＦＤを給与した。４週間食餌療法を行った後、マウスにＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）を１週間腹腔内注射し、対照群には食塩水を注射した。２週後、Ｃｘｘｃ５＋／＋マウスにＡ３３３４又はＡ３０５１（２５ｍｇ ｋｇ－１）及びシタグリプチン（５０ｍｇ ｋｇ－１）を４週間経口胃管栄養法によって毎日投与した。
【0158】
Ｄｖｌ－ＣＸＸＣ５試験管内の結合分析
Ｄｖｌ－ＣＸＸＣ５試験管内の結合分析のために、５ｍｇ／ｍｌの精製されたＤｖｌ ＰＤＺドーパミン１００μｌを９６－ウェルＭａｘｉｂｉｎｄｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ（ＳＰＬ）に添加し、４℃のチャンバー（Ｃｈａｍｂｅｒ）で一晩中インキュベートした(ｉｎｃｕｂａｔｅｄ)。ＰＢＳで洗浄した後、１０μＭ ＰｏｌｙＲ－ＤＢＭ３７を各ウェル（ｗｅｌｌ）に添加し、室温で３時間にわたってインキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、ＰＢＳ中の１μＭ、５μＭ、及び１０μＭ Ａ３３３４ １００μｌを各ウェルに添加し、室温で１時間にわたってインキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、各ウェルの蛍光をＦｌｕｏｒｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダー（ＢＧＭ Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて測定した。スクリーニングに使用されたＡ３３３４は、ハン・ギュンヒ博士（延世大学校、韓国ソウル）によって設計及び合成された。
Ｄｖｌ－ＣＸＸＣ５試験管内の結合分析のために、５ｍｇ／ｍｌの精製されたＤｖｌ ＰＤＺドーパミン１００μｌを９６－ウェルＭａｘｉｂｉｎｄｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ（ＳＰＬ）に添加し、４℃のチャンバー（Ｃｈａｍｂｅｒ）で一晩中インキュベートした(ｉｎｃｕｂａｔｅｄ)。ＰＢＳで洗浄した後、１０μＭ ＰｏｌｙＲ－ＤＢＭ３７を各ウェル（ｗｅｌｌ）に添加し、室温で３時間にわたってインキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、ＰＢＳ中の１μＭ、５μＭ、及び１０μＭ Ａ３３３４ １００μｌを各ウェルに添加し、室温で１時間にわたってインキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、各ウェルの蛍光をＦｌｕｏｒｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダー（ＢＧＭ Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて測定した。スクリーニングに使用されたＡ３３３４は、ハン・ギュンヒ博士（延世大学校、韓国ソウル）によって設計及び合成された。
【0159】
ウェスタンブロット分析
Ｈ４及びＨ４／ＳＷＥ細胞をモルタルと乳棒で粉砕した後、ＲＩＰＡバッファー（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ７．２、０．１％ ＳＤＳ、１．０％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１％デオキシコール酸ナトリウム、及び５ｍＭ ＥＤＴＡ）で溶解した。サンプルを６－１２％ ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で分離し、ＰＲＯＴＲＡＮニトロセルロース膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ Ｃｏ．）上に移した。５％無脂肪乾燥脱脂乳及び０．０７％（ｖｏｌ／ｖｏｌ） Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳで膜を遮断し、β－カテニン（１：１，０００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、ＣＸＸＣ５（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）に特異的な抗体と共にインキュベートした。次に、膜をホースラディッシュペルオキシダーゼ－コンジュゲート抗－ウサギ（１：５，０００、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）又は抗－マウス（１：５０００、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）ＩｇＧ ２次抗体と共にインキュベートした。発光イメージ分析機ＬＡＳ－３０００（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いて増進した化学発光（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってタンパク質バンドを視覚化した。Ｍｕｌｔｉ－Ｇａｕｇｅ Ｖ３．０ソフトウェア（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いてウェスタンブロットバンドを分析した。
Ｈ４及びＨ４／ＳＷＥ細胞をモルタルと乳棒で粉砕した後、ＲＩＰＡバッファー（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ７．２、０．１％ ＳＤＳ、１．０％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１％デオキシコール酸ナトリウム、及び５ｍＭ ＥＤＴＡ）で溶解した。サンプルを６－１２％ ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で分離し、ＰＲＯＴＲＡＮニトロセルロース膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ Ｃｏ．）上に移した。５％無脂肪乾燥脱脂乳及び０．０７％（ｖｏｌ／ｖｏｌ） Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳで膜を遮断し、β－カテニン（１：１，０００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、ＣＸＸＣ５（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）に特異的な抗体と共にインキュベートした。次に、膜をホースラディッシュペルオキシダーゼ－コンジュゲート抗－ウサギ（１：５，０００、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）又は抗－マウス（１：５０００、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）ＩｇＧ ２次抗体と共にインキュベートした。発光イメージ分析機ＬＡＳ－３０００（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いて増進した化学発光（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってタンパク質バンドを視覚化した。Ｍｕｌｔｉ－Ｇａｕｇｅ Ｖ３．０ソフトウェア（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いてウェスタンブロットバンドを分析した。
【0160】
免疫細胞化学分析
各化合物を用いて処理されたＨ４又はＨ４／ＳＷＥ細胞をＰＢＳで洗浄し、室温で１５分間ＰＢＳ中に含まれる４％（ｗｔ／ｖｏｌ）パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）に固定した。次に、細胞をＰＢＳで洗浄し、１５分間ＰＢＳ中に含まれる０．１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ） Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で透過した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を３０分間ＰＢＳ中に含まれる１０％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と共にインキュベートし、その次に、４℃で一晩中β－カテニン（１：１００；ＢＤ）に特異的な抗体と共にインキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、１時間にわたり室温でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８－コンジュゲートＩｇＧ ２次抗体（１：４００；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）と共にインキュベートした。細胞核を１０分間ＤＡＰＩで対比染色し、染色されたサンプルをＬＳＭ５１０ ＭＥＴＡ顕微鏡で検査した。
各化合物を用いて処理されたＨ４又はＨ４／ＳＷＥ細胞をＰＢＳで洗浄し、室温で１５分間ＰＢＳ中に含まれる４％（ｗｔ／ｖｏｌ）パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）に固定した。次に、細胞をＰＢＳで洗浄し、１５分間ＰＢＳ中に含まれる０．１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ） Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で透過した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を３０分間ＰＢＳ中に含まれる１０％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と共にインキュベートし、その次に、４℃で一晩中β－カテニン（１：１００；ＢＤ）に特異的な抗体と共にインキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、１時間にわたり室温でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８－コンジュゲートＩｇＧ ２次抗体（１：４００；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）と共にインキュベートした。細胞核を１０分間ＤＡＰＩで対比染色し、染色されたサンプルをＬＳＭ５１０ ＭＥＴＡ顕微鏡で検査した。
【0161】
ヒトＡβ４２ ＥＬＩＳＡ分析
Ｈ４又はＨ４／ＳＷＥ細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ）で培養し、５％ＣＯ２及び９５％空気加湿雰囲気中で合流点まで成長させた。１０％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中で６－ウェルプレートに細胞を播種し、これを一晩中密着させた。細胞を２４時間にわたり各化合物（１μＭ～２０μＭ）で処理し、これを培地１ｍｌに収集した。プロテアーゼによるアミロイドβの変性を避けるためにプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＰＩＣ）でサンプルを処理し、３分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。実験は、ヒトＡβ４２ ＥＬＩＳＡキットプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の指針に従って行われた。分泌されたアミロイドβの量は、総タンパク質濃度を測定して正規化した。
Ｈ４又はＨ４／ＳＷＥ細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ）で培養し、５％ＣＯ２及び９５％空気加湿雰囲気中で合流点まで成長させた。１０％ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中で６－ウェルプレートに細胞を播種し、これを一晩中密着させた。細胞を２４時間にわたり各化合物（１μＭ～２０μＭ）で処理し、これを培地１ｍｌに収集した。プロテアーゼによるアミロイドβの変性を避けるためにプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＰＩＣ）でサンプルを処理し、３分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。実験は、ヒトＡβ４２ ＥＬＩＳＡキットプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の指針に従って行われた。分泌されたアミロイドβの量は、総タンパク質濃度を測定して正規化した。
【0162】
統計分析
データは、平均±標準偏差（ＳＤ）として表示される。統計分析は、対応のない両側ｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ ｔｗｏ ｔａｉｌｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）を用いて行われた。アスタリスクは、統計的に有意な差を示す（＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００５）。
データは、平均±標準偏差（ＳＤ）として表示される。統計分析は、対応のない両側ｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ ｔｗｏ ｔａｉｌｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）を用いて行われた。アスタリスクは、統計的に有意な差を示す（＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００５）。
【0163】
５，６－ジクロロインディルビン－３'－メトキシム（Ａ３０５１）
【0164】
【化18】
【0165】
５－メトキシルインディルビン－３'－オキシム（Ａ３３３４）
【0166】
【化19】
【0167】
インディルビン－３'－オキシム（Ｉ３Ｏ又はＩＯ）
【0168】
【化20】
【0169】
６－ブロモインディルビン－３'－オキシム（ＢＩＯ）
【0170】
【化21】
【0171】
インディルビン
【0172】
【化22】
【0173】
５，６－ジクロロインディルビン－３'－プロピルオキシム（Ａ３４８６）
【0174】
【化23】
【0175】
５，６－クロロインディルビン－３'－ベンジルオキシム（Ａ３５３８）
【0176】
【化24】
【0177】
（Ｚ）－５'－ブロモ－６'－ニトロ－[２，３'－ビインドリニリデン]－２'，３－ジオン（Ａ２７８５）
【0178】
【化25】
【0179】
６－ニトロ－５－トリフルオロメトキシインディルビン－３'－メトキシム（Ａ２７９４）
【0180】
【化26】
【0181】
５－トリフルオロメトキシインディルビン－３'－エチルオキシム（Ａ４７３３）
【0182】
【化27】
【0183】
５－トリフルオロメトキシインディルビン－３'－ベンジルオキシム（Ａ４７３５）
【0184】
【化28】
【0185】
ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ相互作用を阻害する化合物のスクリーニング
ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ相互作用を阻害した低分子を先に確認するために、既に説明された試験管内の結合分析によって化学ライブラリ（２，２８０個の化合物：ＣｈｅｍＤｉｖから１，０００個及びＳｉｇｍａＬＯＰＡＣから１，２８０個）をスクリーニングした。例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＣＸＸＣ５ ｉｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ－ｆｅｅｄｂａｃｋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．２２，９１２－９２０を参照する。すなわち、精製されたＤＶＬ－ＰＤＺドメイン５ｍｇ／ｍｌを１６時間にわたって４℃で９６－ウェルＭａｘｉｂｉｎｄｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ（ＳＰＬ、韓国ソウル）の各ウェルでインキュベートした。各ウェルに１０μＭ ＦＩＴＣ－タグＰＴＤ－ＤＢＭＰを添加した後、化学ライブラリの各化合物又は対照群（ＤＭＳＯ）を３０μＭの最終濃度でウェルに処理した。Ｆｌｕｏｒｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダー（ＢＧＭ Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ、ドイツのオルテンベルク）を用いて蛍光強度を測定し、「（「化合物－処理されたグループ」－「ブランク」）／（「ＤＭＳＯ－処理されたグループ」－「ブランク」）＊１００」に示されるように正規化した。
ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ相互作用を阻害した低分子を先に確認するために、既に説明された試験管内の結合分析によって化学ライブラリ（２，２８０個の化合物：ＣｈｅｍＤｉｖから１，０００個及びＳｉｇｍａＬＯＰＡＣから１，２８０個）をスクリーニングした。例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＣＸＸＣ５ ｉｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ－ｆｅｅｄｂａｃｋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．２２，９１２－９２０を参照する。すなわち、精製されたＤＶＬ－ＰＤＺドメイン５ｍｇ／ｍｌを１６時間にわたって４℃で９６－ウェルＭａｘｉｂｉｎｄｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ（ＳＰＬ、韓国ソウル）の各ウェルでインキュベートした。各ウェルに１０μＭ ＦＩＴＣ－タグＰＴＤ－ＤＢＭＰを添加した後、化学ライブラリの各化合物又は対照群（ＤＭＳＯ）を３０μＭの最終濃度でウェルに処理した。Ｆｌｕｏｒｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａマイクロプレートリーダー（ＢＧＭ Ｌａｂ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ、ドイツのオルテンベルク）を用いて蛍光強度を測定し、「（「化合物－処理されたグループ」－「ブランク」）／（「ＤＭＳＯ－処理されたグループ」－「ブランク」）＊１００」に示されるように正規化した。
【0186】
ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ（ＰＺＤ－ＤＶＬ－ＰＴＤ－ＤＢＭＰ（ＦＩＴＣ）相互作用を９０％以上抑制する初期的中化合物として１９個の化合物を選択し、Ｗｎｔ／β－カテニン経路を活性化する能力を、染色体内にｐＴＯＰＦｌａｓｈリポーターを潜伏させているＨＥＫ２９３細胞を用いて確認した。これらの化合物のうちＢＩＯ及びＩ３０を含むインディルビン類似体が確認された。高－処理量スクリーニング結果の概要が表１に提供される。
【0187】
【表1】
【0188】
【表2】
【0189】
インディルビン類似体化合物（＃８及び＃１２；表２）がＣＸＸＣ５－ＤＶＬ阻害剤として繰り返して確認され、リポーター分析を用いたＷｎｔ／β－カテニン経路の活性の有効性を示した。機能的に改善された化合物を得るために、インディルビン－３'－オキシム（Ｉ３０）（＃１２；表２）の構造に基づいたインディルビンバックボーンのＲ１及びＲ２部位にある官能基を置換することによって約６０個のインディルビン誘導体を新たに合成した。新たに合成された各インディルビン誘導体が表３－５に提示され、これらの化合物の構造を図１１及び図１２に示す。
【0190】
【表3】
【0191】
【表4】
【0192】
【表5】
【0193】
Ｗｎｔ／β－カテニン経路は、病理学的過程で一定の役割をはたし、その反応遺伝子は、代謝性疾患のための治療標的として使用され得る。ＣＸＸＣ５－タイプのジンクフィンガータンパク質５（ＣＸＸＣ５）は、ディシブルド（Ｄｖｌ）結合を通じて機能するＷｎｔ／β－カテニン経路の陰性調節剤である。本明細書に提供されたように、神経変性疾患でのＣＸＸＣ５の機能的役割及びＣＸＸＣ５とＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹との間の関係がヒト脳組織、血液、及びマウスモデルで調査された。ＣＸＸＣ５は、ＡＤ及び／又はＰＤ患者の脳及び中枢神経系で過剰発現される。
【0194】
高脂肪食餌（ＨＦＤ）が給与されたＣｘｘｃ５－／－マウスでは、ＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子の相対的ｍＲＮＡ発現が増加した。これらの結果は、神経変性疾患の治療のための治療標的としてＣＸＸＣ５を提示する。ＣＸＸＣ５－Ｄｖｌ相互作用を阻害する低分子は、ＨＦＤ－給与されたＣｘｘｃ５－／－マウスで観察された通りに表現型を回復した。本明細書に開示された化合物及び／又は組成物のうち少なくとも一つの投与は、ＨＦＤ－給与されたマウスの血清活性ＧＬＰ－１水準を増加させた。ＤＤＰ－４阻害剤であるシタグリプチンの効果と異なり、血清活性ＧＬＰ－１水準の増加は、ＨＦＤ－給与された、ＳＴＺ－誘導された糖尿病マウスで有意にさらに高かった。総合すると、Ｄｖｌ結合の低分子－媒介妨害によるＣＸＸＣ５活性の阻害は、ＡＤ及びＰＤを含む神経変性疾患の治療のための潜在的な治療接近方式であり得る。
【0195】
アルツハイマー病及び／又はパーキンソン病と診断された患者の脳で上昇したＣＸＸＣ５水準及び減少したＧＬＰ－１水準
図１Ａ－１Ｂを参照すると、ＣＸＸＣ５の発現は、ＡＤ又はＰＤと診断された患者の末梢血又は血液単核細胞で有意に増加したが、これらの患者でのＧＬＰ－１の発現は、健康な対照群より有意にさらに低かった。ＣＥＢＰα／ＰＰＡＲβを制御するように設計された糖尿病薬物であるピオグリタゾンはＣＸＸＣ５の発現を抑制したが、これは、神経変性疾患でＣＸＸＣ５過剰発現による阻害効果が糖尿病を制御することによって抑制され得ることを示す（図１Ｃ）。総合すると、これらの結果は、ＧＬＰ－１発現がＣＸＸＣ５過剰発現によって抑制され得ることを提示し、これは、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ ＰＰＩのメカニズムによってＷｎｔ／β－カテニン経路を阻害する。
図１Ａ－１Ｂを参照すると、ＣＸＸＣ５の発現は、ＡＤ又はＰＤと診断された患者の末梢血又は血液単核細胞で有意に増加したが、これらの患者でのＧＬＰ－１の発現は、健康な対照群より有意にさらに低かった。ＣＥＢＰα／ＰＰＡＲβを制御するように設計された糖尿病薬物であるピオグリタゾンはＣＸＸＣ５の発現を抑制したが、これは、神経変性疾患でＣＸＸＣ５過剰発現による阻害効果が糖尿病を制御することによって抑制され得ることを示す（図１Ｃ）。総合すると、これらの結果は、ＧＬＰ－１発現がＣＸＸＣ５過剰発現によって抑制され得ることを提示し、これは、ＣＸＸＣ５－ＤＶＬ ＰＰＩのメカニズムによってＷｎｔ／β－カテニン経路を阻害する。
【0196】
ＧＬＰ－１ｍＲＮＡ発現は、正常Ｃｈｏｗ食餌（ＮＣＤ）が給与されたマウスと比較して、ＨＦＤが給与されたマウスの副睾丸白色脂肪組織（ｅｐｉＷＡＴ）、膵臓、及び腸でさらに低い。
図２Ａ－２Ｃを参照すると、ｅｐｉＷＡＴでのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準は、正常Ｃｈｏｗ食餌（ＮＣＤ）中のＣｘｘｃ５＋／＋マウスと比較して、Ｃｘｘｃ５＋／＋マウスに高脂肪食餌（ＨＦＤ）が給与されたときに減少した。Ｃｘｘｃ５－／－マウスにＨＦＤを給与したときは、ｅｐｉＷＡＴでのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準が回復された（図２Ｂ）。Ａ３３３４治療は、ＨＦＤ－給与されたＣｘｘｃ５－／－マウスで観察された通りに表現型を回復させたが、シタグリプチン治療はそうでなかった（図２Ｃ）。
図２Ａ－２Ｃを参照すると、ｅｐｉＷＡＴでのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準は、正常Ｃｈｏｗ食餌（ＮＣＤ）中のＣｘｘｃ５＋／＋マウスと比較して、Ｃｘｘｃ５＋／＋マウスに高脂肪食餌（ＨＦＤ）が給与されたときに減少した。Ｃｘｘｃ５－／－マウスにＨＦＤを給与したときは、ｅｐｉＷＡＴでのＧＬＰ－１及び他のＷｎｔ／β－カテニン信号伝逹標的遺伝子（Ｔｃｆ７ｌ２、Ａｘｉｎ２、Ｄｖｌ１、Ｗｉｓｐ１、及びＦｏｓｌ１）の相対的発現水準が回復された（図２Ｂ）。Ａ３３３４治療は、ＨＦＤ－給与されたＣｘｘｃ５－／－マウスで観察された通りに表現型を回復させたが、シタグリプチン治療はそうでなかった（図２Ｃ）。
【0197】
血清活性ＧＬＰ－１水準は、Ｃｘｘｃ５－／－ＨＦＤ－マウス又はＳＴＺ誘導されたＣｘｘｃ５－／－ＨＦＤ－マウスで回復された。
糖尿病は、主要代謝性疾患の一つであり、スルホニルウレア、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＰＰＡＲγ作動薬、ＤＰＰ４阻害剤、及びビグアナイドを含む現在臨床的に利用可能な薬物は、膵臓、腸、筋肉、及び肝臓などの末梢インスリン標的組織に作用することによって血中ブドウ糖水準を制御することができる。食餌－誘導された肥満及び糖尿病モデルで抑制されたＷｎｔ／β－カテニン経路を回復させる薬物候補のうち一例であるＡ３３３４は、主要な抗－糖尿病薬物であるＤＰＰ４阻害剤シタグリプチン及びビグアナイド医薬メトホルミン（データは図示せず）と類似する一時的な初期効果を示した。図３Ａ－３Ｂを参照すると、ＨＦＤによって誘導された低い血清活性ＧＬＰ－１水準は、Ｃｘｘｃ５－／－マウスとＳＴＺ－誘導された糖尿病Ｃｘｘｃ５－／－マウスで全て回復された。ＨＦＤ－マウス及びＳＴＺ－誘導された糖尿病ＨＦＤ－マウスに対するＡ３３３４治療は、二つの場合のいずれにおいても、ＮＣＤが給与されたマウスと類似する水準まで血清活性ＧＬＰ－１水準を回復させた。ＤＰＰ４阻害によってＧＬＰ－１を安定化するように設計された抗糖尿病薬物であるシタグリプチンが陽性対照群として使用された。Ａ３３３４治療は、シタグリプチン治療で観察された効果と比較して、血液血清で活性ＧＬＰ－１発現を有意に回復（増加）させた。
糖尿病は、主要代謝性疾患の一つであり、スルホニルウレア、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＰＰＡＲγ作動薬、ＤＰＰ４阻害剤、及びビグアナイドを含む現在臨床的に利用可能な薬物は、膵臓、腸、筋肉、及び肝臓などの末梢インスリン標的組織に作用することによって血中ブドウ糖水準を制御することができる。食餌－誘導された肥満及び糖尿病モデルで抑制されたＷｎｔ／β－カテニン経路を回復させる薬物候補のうち一例であるＡ３３３４は、主要な抗－糖尿病薬物であるＤＰＰ４阻害剤シタグリプチン及びビグアナイド医薬メトホルミン（データは図示せず）と類似する一時的な初期効果を示した。図３Ａ－３Ｂを参照すると、ＨＦＤによって誘導された低い血清活性ＧＬＰ－１水準は、Ｃｘｘｃ５－／－マウスとＳＴＺ－誘導された糖尿病Ｃｘｘｃ５－／－マウスで全て回復された。ＨＦＤ－マウス及びＳＴＺ－誘導された糖尿病ＨＦＤ－マウスに対するＡ３３３４治療は、二つの場合のいずれにおいても、ＮＣＤが給与されたマウスと類似する水準まで血清活性ＧＬＰ－１水準を回復させた。ＤＰＰ４阻害によってＧＬＰ－１を安定化するように設計された抗糖尿病薬物であるシタグリプチンが陽性対照群として使用された。Ａ３３３４治療は、シタグリプチン治療で観察された効果と比較して、血液血清で活性ＧＬＰ－１発現を有意に回復（増加）させた。
【0198】
血清活性ＧＬＰ－１水準は、ＣＣｌ４誘導されたＣｘｘｃ５－／－ＨＦＤ－マウスで回復された。
図５を参照すると、ＮＡＳＨマウスモデルでＨＦＤ及びＣＣｌ４誘導された血清活性ＧＬＰ－１水準の抑制が、ＣＸＸＣ５ノックアウトマウスでは回復された。Ａ３３３４又はＡ３０５１治療は、血液血清で活性ＧＬＰ－１発現を有意に回復（増加）させ、ＣＸＸＣ５ノックアウトによって観察された効果を擬態した。しかし、セロンセルチブ及びオカリバ治療は何ら効果も示さなかった（図６Ａ－６Ｂ）。
図５を参照すると、ＮＡＳＨマウスモデルでＨＦＤ及びＣＣｌ４誘導された血清活性ＧＬＰ－１水準の抑制が、ＣＸＸＣ５ノックアウトマウスでは回復された。Ａ３３３４又はＡ３０５１治療は、血液血清で活性ＧＬＰ－１発現を有意に回復（増加）させ、ＣＸＸＣ５ノックアウトによって観察された効果を擬態した。しかし、セロンセルチブ及びオカリバ治療は何ら効果も示さなかった（図６Ａ－６Ｂ）。
【0199】
Ａ３０５１は、ラット神経幹細胞（ＮＳＣ）の神経分化を誘導した。
図７Ａ－７Ｂを参照すると、ＮＳＣがＥ１４マウス胚から分離され、ｂＦＧＦ及びＥＧＦで補充された維持培地に維持された。異なる濃度のＡ３０５１で処理し、神経分化を誘導した。明視野光学顕微鏡を用いてインディルビン類似体３０５１を処理した後、２４時間で細胞の形態をキャプチャーした。
図７Ａ－７Ｂを参照すると、ＮＳＣがＥ１４マウス胚から分離され、ｂＦＧＦ及びＥＧＦで補充された維持培地に維持された。異なる濃度のＡ３０５１で処理し、神経分化を誘導した。明視野光学顕微鏡を用いてインディルビン類似体３０５１を処理した後、２４時間で細胞の形態をキャプチャーした。
【0200】
ＡＰＰスウェーデン突然変異神経膠腫Ｈ４セルラインで上昇したＣＸＸＣ５水準及び減少したβ－カテニン水準
図８Ａ－８Ｂを参照すると、アルツハイマー病の早期発病を引き起こすアミロイド前駆体タンパク質のスウェーデン突然変異（Ｋ５９５Ｎ／Ｍ５９６Ｌ）を有するＨ４／ＳＷＥ細胞（ＡＰＰ－ｓｗｅ）を用いてＣＸＸＣ５及びβ－カテニンの発現を確認した。ウェスタンブロット分析は、Ｈ４／ＳＷＥセルラインがＨ４ ＷＴセルラインよりβ－カテニン、ＧＳＫ３β非活性形態（ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９））のさらに低い発現水準、及びＣＸＸＣ５のさらに高い発現水準を有することを示した。
図８Ａ－８Ｂを参照すると、アルツハイマー病の早期発病を引き起こすアミロイド前駆体タンパク質のスウェーデン突然変異（Ｋ５９５Ｎ／Ｍ５９６Ｌ）を有するＨ４／ＳＷＥ細胞（ＡＰＰ－ｓｗｅ）を用いてＣＸＸＣ５及びβ－カテニンの発現を確認した。ウェスタンブロット分析は、Ｈ４／ＳＷＥセルラインがＨ４ ＷＴセルラインよりβ－カテニン、ＧＳＫ３β非活性形態（ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９））のさらに低い発現水準、及びＣＸＸＣ５のさらに高い発現水準を有することを示した。
【0201】
Ａ３０５１及びＡ３３３４を含むいくつかのインディルビン類似体化合物は、Ｈ４／ＳＷＥ細胞でβ－カテニンの水準及び核転座を増加させた。
図９Ａ－９Ｂを参照すると、Ｈ４／ＳＷＥ細胞は、Ｈ４ ＷＴ細胞と比較してさらに低いβ－カテニン発現を示した。Ａ３３３４、Ａ３０５１、インディルビン、Ｉ３Ｏ、及びＢＩＯを含むいくつかの化合物は、ウェスタンブロット分析によって示したように、Ｈ４／ＳＷＥ細胞で低下したβ－カテニンの水準を回復させ、ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）を増加させた（図９Ａ）。また、Ａ３３３４及びＡ３０５１は、これらの細胞でＣＸＸＣ５の水準を減少させた（図９Ａ）。また、免疫細胞化学分析は、いくつかのインディルビン類似体化合物、特に、Ａ３３３４及びＡ３０５１がＨ４／ＳＷＥ細胞でβ－カテニンの核転座を増加させたことを証明した（図９Ｂ）。
図９Ａ－９Ｂを参照すると、Ｈ４／ＳＷＥ細胞は、Ｈ４ ＷＴ細胞と比較してさらに低いβ－カテニン発現を示した。Ａ３３３４、Ａ３０５１、インディルビン、Ｉ３Ｏ、及びＢＩＯを含むいくつかの化合物は、ウェスタンブロット分析によって示したように、Ｈ４／ＳＷＥ細胞で低下したβ－カテニンの水準を回復させ、ｐ－ＧＳＫ３β（Ｓ９）を増加させた（図９Ａ）。また、Ａ３３３４及びＡ３０５１は、これらの細胞でＣＸＸＣ５の水準を減少させた（図９Ａ）。また、免疫細胞化学分析は、いくつかのインディルビン類似体化合物、特に、Ａ３３３４及びＡ３０５１がＨ４／ＳＷＥ細胞でβ－カテニンの核転座を増加させたことを証明した（図９Ｂ）。
【0202】
Ａ３０５１及びＡ３３３４は、Ｈ４／ＳＷＥ細胞で上昇したＡβ４２分泌を抑制した。
図１０を参照すると、Ａ３０５１及びＡ３３３４、特にＡ３０５１治療は、Ｈ４／ＳＷＥ細胞でＡβ４２の分泌を阻害した。
図１０を参照すると、Ａ３０５１及びＡ３３３４、特にＡ３０５１治療は、Ｈ４／ＳＷＥ細胞でＡβ４２の分泌を阻害した。
【0203】
新規技術を図面及び上述した説明で詳細に例示して説明したが、これは、特性の制限でない例示として見なされ、好ましい実施形態を示して説明したものに過ぎなく、新規技術の思想内に含まれる全ての変化及び変形が保護されなければならないことが理解される。また、新規技術は、具体的な例、理論的論証、説明、及び例示を用いて例示したが、これらの例示及び伴われた論議は、決して技術を制限するものと解釈してはならない。本出願で参照した全ての特許、特許出願及び参照した文章、科学論文、刊行物などは、本明細書の明示的教示と矛盾しない程度まで、その全体が参考として本明細書に統合される。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【図12】
