特許 7418151 アンティリス・ブルネラリア（Ａｎｔｈｙｌｌｉｓ ｖｕｌｎｅｒａｒｉａ）の地上部のアルコール抽出物、それを得る方法、およびそれを含む化粧品または医薬品組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-01-11

(45)【発行日】2024-01-19

(54)【発明の名称】アンティリス・ブルネラリア（Ａｎｔｈｙｌｌｉｓ ｖｕｌｎｅｒａｒｉａ）の地上部のアルコール抽出物、それを得る方法、およびそれを含む化粧品または医薬品組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9789 20170101AFI20240112BHJP

   A61K 36/48 20060101ALI20240112BHJP

   A61P 17/00 20060101ALN20240112BHJP

   A61Q 19/02 20060101ALN20240112BHJP

   A61K 127/00 20060101ALN20240112BHJP

   A61K 133/00 20060101ALN20240112BHJP

   A61K 135/00 20060101ALN20240112BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61K36/48

A61P17/00

A61Q19/02

A61K36/48

A61K127:00

A61K133:00

A61K135:00

A61K36/48

A61K36/48

【請求項の数】 15

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2018232956

(22)【出願日】2018-12-12

(65)【公開番号】P2019112391

(43)【公開日】2019-07-11

【審査請求日】2021-04-21

【審判番号】

【審判請求日】2022-06-21

(31)【優先権主張番号】17306870.1

(32)【優先日】2017-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

【早期審理対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】508283406

【氏名又は名称】シャネル パフュームズ ビューテ

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100128761

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 恭子

(72)【発明者】

【氏名】トリビオ，アリクス

(72)【発明者】

【氏名】ワインバーグ，リオネル

(72)【発明者】

【氏名】ルリソン，アニー

(72)【発明者】

【氏名】ジレ，マエヴァ

(72)【発明者】

【氏名】ボーイソー－カディオ エマニュエル

(72)【発明者】

【氏名】ルジューン フランソワ

【合議体】

【審判長】瀬良 聡機

【審判官】野田 定文

【審判官】齊藤 真由美

(56)【参考文献】

【文献】特開２００３－１１３０３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１７－１０５７６１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

A61K 8/00- 8/99

A61Q 1/00-90/00

A61K36/00

A61P17/00

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＫＯＳＭＥＴ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

Ｍｉｎｔｅｌ ＧＮＰＤ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物であって、
ａ）少なくとも１種のＣ _１ ～Ｃ _４ 一価アルコールで、５０℃から７０℃の間の温度で、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から前記溶媒を除去し、次いで、ジオールまたは水とジオールとの混合物中に最終希釈するステップ
を含む方法によって得ることができる、抽出物。

【請求項2】

前記ステップａ）の前記抽出が、５０℃から６０℃の間の温度で、２から６時間の間の時間、実施されることを特徴とする、請求項１に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項3】

前記地上部が、花、葉、茎、およびこれらの混合物から選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項4】

前記ステップａ）が２回実施されることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項5】

前記ステップｂ）の前記デカントが、２℃から３０℃の間の温度で、１２時間から３０時間の間の時間、実施されることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項6】

前記ステップａ）で得られた前記混合物が、デカントの前記ステップｂ）の前に、メッシュサイズが５０μｍから１００μｍのスクリーンで篩い分けされることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項7】

前記ステップｃ）とｄ）との間に、ｃ）で得られた前記濾液を活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで、前記退色させた濾液を濾過する１つまたはいくつかのステップを加えることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項8】

前記ステップｄ）の前記除去が蒸発によって行われ、次いで、前記最終希釈が１，３－プロパンジオール中で実施されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項9】

前記方法が、濾過するステップｅ）を実施することを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項10】

ａ）予め乾燥され細かく砕かれたアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の花、葉、および茎の混合物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第１の抽出を行うステップ、
ａ’）ステップａ）で得られた生成物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第２の抽出を行い、５０μｍから１００μｍで篩い分けするステップ、
ｂ）ａ）およびａ’）で得られた濾液の混合物を、２℃から３０℃の間の温度で少なくとも１２時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られた前記デカントされた混合物を濾過して、濾液を得るステップ、
－ ｃ）で得られた前記濾液を活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで
－ 前記退色させた濾液を閾値１μｍまで濾過するステップ、および
ｄ）蒸発により得られた前記濾液から前記エタノールを除去し、次いで、水／１，３－プロパンジオールの混合物中に最終希釈するステップ、
ｅ）濾過閾値４μｍまで濾過するステップ
を含む方法によって得ることができることを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。

【請求項11】

アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出する方法であって、
ａ）少なくとも１種のＣ _１ ～Ｃ _４ 一価アルコールで、５０℃から７０℃の間の温度で、前記アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から前記溶媒を除去し、次いで、ジオールまたは水とジオールとの混合物中に最終希釈するステップ
を含む、方法。

【請求項12】

皮膚色を統一および／または色素による障害を補正するための、請求項１から９のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用。

【請求項13】

脱色素剤、および／またはホワイトニング剤、および／またはライトニング剤および／またはメラニン合成阻害剤としての請求項１から９のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用。

【請求項14】

化粧品としてまたは薬学的に許容される媒体中に、請求項１から９のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物を含む化粧品または皮膚科用組成物。

【請求項15】

局所的投与に適していることを特徴とする、請求項１４に記載の化粧品または皮膚科用組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部の抽出物、それを得る方法、それを含む化粧品または医薬品組成物、および種々な化粧品への使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒトの皮膚の色は、種々な要因、特に季節、人種および性別によって決まる。ヒトの皮膚の色は、主に、メラノサイトにより生成されたメラニンの性質および濃度によって決定される。メラノサイトは、特定の細胞小器官であるメラノソームを介してメラニンを合成する、特殊化された樹状細胞である。さらに、人生のさまざまな期間に、皮膚およびさらにとりわけ手に不均質性を与える、黒っぽいおよび／またはさらに色づいた斑点が見られる人がいる。これらの斑点は皮膚の表面に存在するケラチノサイト中のかなりな濃度のメラニンにもよる。

【0003】

効果的な、害のない局所的脱色素物質の使用は、妊娠中（「妊娠マスク」または肝斑）またはエストロゲンとプロゲスチンの併用の避妊中に起こる特発性黒皮症などのメラノサイトの活動過多による局所的な色素沈着過剰、光線性黒子と呼ばれる茶色の年齢斑などの良性のメラノサイトの活動過多および増殖による限局性色素沈着過剰、おそらくは光増感または損傷後の瘢痕形成による偶発的な色素沈着過剰、ならびに白斑のような特定の白質皮膚の処置のために、特に求められている。損傷を受けた皮膚を再着色することができない後者（皮膚に白斑を与える傷跡になり得る瘢痕形成）の場合、皮膚全体に均質な白い皮膚色を与えるために、残存する正常な皮膚の領域の脱色素を履行する。

【0004】

ある物質が、メラニン形成が起こる表皮メラノサイトの生命力に直接作用する場合、および／またはある物質が、メラニン形成に関与する酵素の一つを阻害することによって、またはメラニンの合成連鎖、すなわち、ブロックすることができ、したがって脱色素を確実にする連鎖の化合物の一つの構造類似体としてそれ自体を挿入することによって、メラニンの生合成におけるステップの一つに干渉する場合、その物質は脱色素または抗脱色素であると認識される。

【0005】

最近、色素沈着とセストリン遺伝子ファミリー（ＳＥＳＮ）、特にＳＥＳＮ１とＳＥＳＮ２との間の関連性が確立された。実際、欧州特許出願公開第２０１５／０７２０８０号明細書で出願人により確立されたように、紫外線に曝露されたメラノサイトではそれらの遺伝子発現レベルが変更されていた。さらに、多くの科学出版物は、ＳＥＳＮも酸化ストレスによって誘発される損傷の制限に介入することを示している。

【0006】

脱色素に最も高頻度に使用される化粧品物質は、より特定すると、アスコルビン酸およびアスコルビルグルコシドを含むその誘導体、ならびに特定の植物抽出物（特に甘草（liquorice））である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【文献】欧州特許出願公開第２０１５／０７２０８０号明細書

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

しかし、効果的で、天然由来で、忍容性の良好な、ヒトの皮膚の新しいホワイトニング剤が依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0009】

この点において、特定の方法で得られたアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、メラノサイトのメラニン合成を減少させるその作用を介して、色素沈着および皮膚の色合いの統一に関して興味深い作用を有することを出願人はこのほど見つけた。実際、実施例で示したように、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、興味深い化粧品特性を有し、特にメラノサイトおよびケラチノサイト中でのＳＥＳＮ２の発現誘導により、皮膚のホワイトニング作用を可能にした。そのＳＥＳＮ２の発現誘導における作用は、加齢による皮膚の変質の予防および／または減弱も可能にする。

【0010】

したがって、本発明は、第１の態様によれば、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物であって、
ａ）少なくとも１種のアルコール溶媒で、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から溶媒を除去し、次いで、別のアルコール溶媒中に最終希釈するステップ
を含む方法によって得ることができる、アルコール抽出物に関する。
したがって、本出願においては、このような抽出物を本発明による抽出物と呼ぶ。

【0011】

本発明は、また、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出する方法であって、
ａ）少なくとも１種のアルコール溶媒で、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から溶媒を除去し、次いで、別のアルコール溶媒中に最終希釈するステップ
を含む、方法にも関する。

【0012】

本発明は、また、化粧品としてまたは薬学的に許容される媒体中に、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物を含む化粧品または皮膚科用組成物に関する。化粧品としてまたは薬学的に許容される媒体という用語は、皮膚、粘膜および付属物に適合する媒体を意味する。好ましくは、本発明による化粧品または皮膚科用組成物は局所投与に適している。

【0013】

したがって、本発明による抽出物を得る方法は、
ａ）少なくとも１種のアルコール溶媒で、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から溶媒を除去し、次いで、別のアルコール溶媒中に最終希釈するステップ
を含む。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】実施例３のＳＥＳＮ２の遺伝子発現におけるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の効果を示す図である。

【図2】実施例４の培養中のヒトメラノサイト中でのメラニン合成に対するアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の効果を示す図である。

【図3】実施例４の培養中のヒトメラノサイト中でのメラニン合成に対するアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の効果（アンティリスで処理した細胞の溶解物の外観）を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

実施された原材料はアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部から構成される。

【0016】

アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）は、またブルネラリア、アルプスのお茶、砂地のクローバーとも呼ばれ、マメ（Fabaceae）科の、一年生または多年生の短命な草本の植物である。地被植物として広がる、高さ２０から６０ｃｍの低い植物である。絹のような毛で覆われたダークグリーンの葉の密集したロゼットを有する。その花部は黄色がかったオレンジで、頂部にまとまっており、全てがガクであり、５月から８月に見られ、より高い標高では９月まで見られる。しばしば海岸および乾いた大草原、山芝生および森林地域の日当たりのよい場所で育つ好光性種である。３，２００ｍまでの広い標高幅を持ち、寒さおよび干ばつに対する高い抵抗力を有する。

【0017】

早い成長および深く根付く根茎により、表土の迅速な安定化を確実にする。先駆植物であり、有機材料に乏しい基質を使用することができ、傷んだ土地に入植して定住できる。すべてのマメ科（Fabaceae）と同様に、空気から窒素を固定するその能力は、土を早く肥やすことができるので、他の植物の成長を促進する。

【0018】

次のような沢山の亜種が存在する、
・アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria L.）亜種 アルペストリス（キット）（alpestris）（Kit.）Ａｓｃｈ．＆Ｇｒ．
・アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria L.）亜種 ボシィ（bocsii）
・アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria L.）亜種 マリティマ（maritima）
・アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria L.）亜種 ルブリフォリア（rubrifolia）
・アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria L.）亜種 ブルネラリア（vulneraria）

【0019】

本発明による使用されるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部は、一般的に花、葉、茎、およびこれらの混合物から選択される。好ましくは、使用される地上部はアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の花、葉、および茎の混合物である。好ましくは、これらの地上部は前もって乾燥され、次いで、一般的な方法で、好ましくは、２ｃｍより小さいサイズの粉状を得るために、粉砕して粉々にされた。

【0020】

ステップａ）で、地上部は、例えば、
－ Ｃ₁～Ｃ₄一価アルコール、例えばメタノール、エタノールまたはイソプロパノール、および
－ ジオール、例えばプロピレングリコール、１，３－プロパンジオールまたはジプロピレングリコール
から選択される１種または数種のアルコール溶媒による抽出に供される。

【0021】

好ましくは、アルコール溶媒は２から４個の炭素原子を含む一価アルコールであり、さらに好ましくはエタノールである。

【0022】

抽出は一般的に、温度範囲が、例えば、周囲温度から８０℃において、およそ３０分から８時間の時間、先に言及した１種または数種の溶媒中に地上部を浸すまたはこれを溶媒中で穏やかに撹拌することによって実施される。好ましくは、ステップａ）の抽出は、４０℃から６０℃の間の温度で、２から６時間の間の時間、実施される。

【0023】

特に、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）／アルコール溶媒の重量比は、１／１から１／２０の間であり、好ましくは１／１０である。

【0024】

特定の実施形態によれば、ステップａ）の抽出は２回実施される。

【0025】

ステップａ）で得られた混合物は、次いで、少なくとも１０時間デカントされ、これはステップｂ）である。好ましくは、ステップｂ）のインキュベーションは、２℃から３０℃の間の温度で、１２時間から３０時間の間の時間、実施される。さらに好ましくは、デカントは好ましくは４から２０℃の間の温度で、終夜、好ましくは１２時間から１５時間実施される。

【0026】

ステップａ）で得られた混合物は、植物残渣を除去するために、デカントのステップｂ）の前に篩い分けしてもよい。有利には、篩い分けは５０μｍから１００μｍの間のメッシュサイズのスクリーンで実施される。

【0027】

ステップｂ）の終わりに得られたデカントされた混合物は、次いで、不溶性物質を除去するために濾過され、これはステップｃ）である。好ましくは、ｂ）で得られた抽出物の濾過は４μｍの膜で実施される。好ましくは透明の液体濾液が得られる。

【0028】

最後に、液体濾液に存在する溶媒を除去し、次いで、濾液の残りは別のアルコール溶媒で希釈され、これはステップｄ）である。ステップｄ）で使用されたアルコール溶媒は、ステップａ）で使用されたアルコール溶媒とは異なるため、「他のアルコール溶媒」と呼ばれる。この制限を考慮して、アルコール溶媒は一般的に、ステップａ）のものと同じ群、例えばＣ₁～Ｃ₄一価アルコールおよびジオールから選択される。

【0029】

好ましくは、ステップｄ）での溶媒除去は蒸発によって行われる。好ましくは、最終希釈はジオール、好ましくは１，３－プロパンジオール中で実施される。特に、最終希釈は、水と１，３－プロパンジオールとの混合物によって実施されてもよい。例えば、１，３－プロパンジオール８０％、水１０％から構成される溶媒の混合物を粉体１０％（重量／重量）に添加する。濾液の可溶化を促進するために、エタノールを添加し、蒸発によって除去してもよい。

【0030】

好ましくは、ステップｃ）とｄ）との間に、ｃ）で得られた濾液を退色させるステップを加える。退色は、濾液中に存在するクロロフィルおよびキサントフィルのような色素を活性炭上に吸着させることで実施されてもよく、この退色のステップの後に、得られた退色させた濾液を、特に濾過閾値１μｍまで濾過媒体上で濾過する１つまたはいくつかのステップが続いてもよい。

【0031】

特定の実施形態によれば、本発明による方法はさらに、特に濾過閾値４μｍまで濾過するステップｅ）を実施する。

【0032】

好ましくは、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、
ａ）予め乾燥され細かく砕かれたアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の花、葉、および茎の混合物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第１の抽出を行い、５０μｍから１００μｍで篩い分けするステップ、
ａ’）ステップａ）で得られた生成物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第２の抽出を行い、次いで、１００μｍで篩い分けするステップ
ｂ）ａ）およびａ’）で得られた濾液の混合物を、２℃から３０℃の間の温度で少なくとも１２時間かけてデカントするステップ
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過して濾液を得るステップ、
－ ｃ）で得られた濾液を活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで
－ 退色させた濾液を濾過閾値１μｍまで濾過するステップ
および
ｄ）蒸発により得られた濾液からエタノールを除去し、次いで、１，３－プロパンジオール中に、好ましくは水／１，３－プロパンジオールの混合物中に最終希釈するステップ
ｅ）濾過閾値４μｍまで濾過するステップ
を含む方法によって得ることができる。

【0033】

有利には、本発明による実施された抽出物は透明色である。

【0034】

また、前記抽出物は、それらが濃縮された形態のとき、通常エマルジョンの形の化粧品または皮膚科用組成物において、活性を得るために必要な濃度で遭遇する製剤の問題を起こすことなく、また、通常の方法によって得られた植物抽出物に反して濃い色を有することなく使用することができる、十分に濃縮された形態を有する。

【0035】

したがって、本発明による抽出物は、化粧品または皮膚科用組成物の調製に直接使用することができる。

【0036】

後の態様によれば、本発明は、皮膚色を統一および／または色素による障害を補正するための、脱色素剤、および／またはホワイトニング剤、および／またはライトニング剤としての、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用に関する。

【0037】

実際、有利には、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、メラニンの合成を減少することを可能にする、生理的メカニズムに関していくつかの興味ある作用を有することが解った。

【0038】

したがって、本発明は、さらに特定すると、メラニン合成阻害剤としての、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用に関する。

【0039】

有利には、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、メラノサイトおよび／またはケラチノサイト中でのＳＥＳＮ２の発現に関して有利な活性を有することがわかった。

【0040】

本発明は、また、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の、メラノサイトおよび／またはケラチノサイト中でのＳＥＳＮ２の発現の活性剤としての使用にも関する。

【0041】

本発明は、また、さらに好ましくは、特にメラニン合成の阻害作用による、皮膚の脱色素および／またはホワイトニングのための、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用に関する。

【0042】

本発明は、さらには、酸化防止剤および／または皮膚の微小循環を改善する作用剤としての、ならびに／あるいは加齢による皮膚の変質の予防および／または減弱のための、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用に関する。

【0043】

本発明は、また、後の態様によれば、化粧品としてまたは薬学的に許容される媒体中に、本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物を含む化粧品または皮膚科用組成物に関する。好ましくは、前記抽出物は、組成物の総重量に対して、０．００１から１０％の割合で、特に、組成物の総重量に対して、０．０１から１０％の割合で、さらに好ましくは０．１から１０％の割合で、化粧品または皮膚科用組成物中に存在する。前記化粧品または皮膚科用組成物は、特に局所投与に適している。

【0044】

有利には、前記化粧品または皮膚科用組成物は、粉末、エマルジョン、マイクロエマルジョンン、ナノエマルジョン、サスペンション、ローション、クリーム、水性または水性アルコールジェルの溶液、泡、セラム、エアゾールのための溶液または分散液、または脂質の小胞の分散液の形状を有することができる。

【0045】

エマルジョンの場合、これは油中水型または水中油型のエマルジョンであってもよい。

【0046】

本発明による化粧品または皮膚科用組成物は、種々な成分および投与形態に従って選択される溶媒を含んでもよい。

【0047】

例として、水（さらに好ましくはミネラル除去した水）、エタノールのようなアルコール、あるいはエトキシジグリコールのようなジエチレングリコールのエーテルまたはジエチレングリコールのモノメチルエーテルについて言及することができる。

【0048】

前記化粧品組成物は、また、少なくとも１種のこの分野内の通常の添加物、例えば、軟化剤または保湿剤、ゲル化および／または増粘剤、界面活性剤、オイル、活性剤、着色剤、防腐剤、酸化防止剤、活性剤、有機または無機粉体、日焼け止めおよび香料から選択される、少なくとも１つの化合物を含んでもよい。

【0049】

特に、前記組成物は、以下を含有してもよい。
－ 例えばグリセリン、グリコール、ＫＦ６０１１（信越化学工業株式会社）の名前で販売されているような水溶性シリコーン、およびレスプランタホホバ（Ｒｅｓ ｐｈａｒｍａ）の名前で販売されているような水溶性ホホバから選択できる、１種または数種の軟化剤または保湿剤。
前記軟化剤または保湿剤は、組成物の総重量に対して、およそ０から３０％、さらに好ましくは２から１０重量％の含有量で組成物中に存在することができる。
－ 例えば、セルロース誘導体、植物由来のガム（グアー、イナゴマメ（carob）、アルギン酸塩、カラギーナン、ペクチン）、微生物由来のゴム（キサンタン）、粘土（ラポナイト）、ＩＮＣＩ名によって特定される材料「アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム／ＶＰ コポリマー」および「アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム／メタクリル酸ベヘネス－２５ コポリマー」（例えば、Ｃｌａｒｉａｎｔ によってＡｒｉｓｔｏｆｌｅｘ ＡＶＣおよびＨＭＢの名前で販売されているような材料）から選択できる、水性相の１種または数種のゲル化および／または増粘剤。
前記ゲル化および／または増粘剤は、組成物の総重量に対しておよそ０から１０重量％の含有量で、組成物中に存在する。
－ 組成物の総重量に対しておよそ０から８％の含有量で、さらに好ましくは０．５から３重量％の含有量で組成物中に存在してもよい、１種または数種の界面活性剤、さらに好ましくは非イオン性である界面活性剤。
－ １種または数種の、一般に揮発性または不揮発性、炭化水素と呼ばれる周囲温度において液体の脂肪物質、またはシリコーン、直鎖、環状、分枝油、例えばイソドデカン、シクロペンタジメチルシロキサン、ジメチコン、イソノニルイソノナノエートまたはテトラステアリン酸ペンタエリスリチルであり、さらに好ましくは組成物の総重量に対して０からおよそ１０％の割合で、さらに好ましくは０．５から５重量％の割合である。
－ 例えばビタミン、微量元素、アラントイン、植物タンパク質、植物抽出物、水和剤、老化防止剤、酸化防止剤、発光を引き立てる作用剤、および後者の混合物から選択される。特に、活性剤はバニラプラニフォリアフルーツの水、ナイアシンアミド、ヒアルロン酸およびこれらの誘導体、酵母エキスおよび後者の混合物から選択される、生物学的活性を有する、天然または合成由来の１種または数種の活性剤。
－ 例えば、ポンソー二ナトリウム塩、アリザリングリーン二ナトリウム塩、キノリンイエロー、アマランス三ナトリウム塩、タルトラジン二ナトリウム塩、ローダミン一ナトリウム塩、フクシン二ナトリウム塩またはキサントフィルである１種または数種の水溶性着色剤であり、さらに好ましくは組成物の総重量に対して０からおよそ２重量％の割合である。

【0050】

化粧品において一般的に使用される他の添加物は、本発明による組成物中に存在してもよく、特に防腐剤、酸化防止剤、香料が当該技術分野においてよく知られている。

【0051】

当業者は、これら可能な添加物全てから、組成物がその特性のすべてを保持するような方法で、組成物に添加されるこれらの性質ならびに使用量を選択できる。

【実施例】

【0052】

本発明を、以下の実施例によって非限定的な方法で示す。
[実施例１]
本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の調製
本発明によるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物は、
ａ）予め乾燥され細かく砕かれたアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の花、葉、および茎の混合物を、エタノールで６０℃の温度で少なくとも２時間かけて第１の抽出を行い、５０μｍから１００の間で篩い分けして濾液１を得るステップ、
ａ’）ステップａ）の篩い分けの間に残った穀粒上で、ステップａ）で得られた生成物を、エタノールで６０℃の温度で少なくとも２時間かけて第２の抽出を行い、次いで、植物残渣を除去するために５０μｍから１００μｍで混合物を篩い分けして濾液２を得るステップ、
ｂ）ａ）およびａ’）で得られた濾液１と２との混合物を、２℃から２５℃の間の温度で終夜（少なくとも１２時間）デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を、閾値１μｍまで濾過して、濾液を得るステップ、
－ ｃ）で得られた濾液を活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで
－ 退色させた濾液を閾値１μｍまで濾過するステップ、および
ｄ）蒸発により得られた濾液からエタノールを除去し、次いで、水／１，３－プロパンジオールの混合物１２％／８８％中に最終希釈するステップ、
ｅ）濾過閾値４μｍまで濾過するステップ
を含む、方法によって調製される。

【0053】

[実施例２]
通常のヒトケラチノサイトにおけるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の細胞毒性の試験
プロトコール
若年ドナー由来の正常なヒト表皮ケラチノサイト（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）をほぼ７５％のコンフルエンスになるまで、９６ウェルプレートで培養した。次いで、小細胞を種々の濃度のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物と共に、各濃度３連で、４８時間インキュベートした。細胞毒性は、無色／黄色のテトラゾリウム塩を濃茶色に着色したホルマゾン誘導体に還元する生細胞の能力に基づく、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して評価した。細胞をテトラゾリウムと共に３７℃で３０分間インキュベートし、形成されたホルマゾンの吸光度を４９０ｎｍで読み取った。

【0054】

結果
アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の細胞毒性を０．１から０．０１２５％の間の種々な濃度で評価した。（下記表１）

【0055】

【表1】

【0056】

アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物は、試験されたすべての濃度においてケラチノサイトに対して毒性はなかった。

【0057】

したがって、これらの濃度を２つ細胞型（ケラチノサイトおよびメラノサイト）に対する以下の実験で使用する。

【0058】

[実施例３]
ＳＥＳＮ２の遺伝子発現におけるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の効果の評価
プロトコール
ケラチノサイトおよびメラノサイトは、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の以下の濃度での２４時間処理の前に、ほぼ７５％のコンフルエンスまで、６ウェルプレートで培養した。
－ ０．１％
－ ０．０５％

【0059】

総ＲＮＡは、メーカーのプロトコールに従ってＲＮｅａｓｙ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，ｃａｔ＃７４１８２）を用いて抽出し、分光光度測定（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＧＯ）によって定量し、ｉＳｃｒｉｐｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｋｉｔ （Ｂｉｏｒａｄ，ｃａｔ＃１７０８８４０）を使用してｃＤＮＡ中にレトロ転写した。

【0060】

次いで、標準化のために、適切なＴａｑｍａｎプローブ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびハウスキーピング遺伝子に関係するプローブを使用してＳＥＳＮ２の遺伝子発現を分析するために、ｃＤＮＡをリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ，Ｂｉｏｒａｄ、ＣＦＸ９６）に使用した。

【0061】

結果は、対照条件に対する処理条件のＳＥＳＮ２発現の「倍率変化」として表す。

【0062】

結果
２つの細胞型において、ケラチノサイトでは最大およそｘ３．０４、メラノサイトでは最大およそｘ１．２８ＳＥＳＮ２発現（ドナーおよび依存用量、図１に示す）の誘導が認められる。

【0063】

したがって、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物は、ストレス応答、細胞外マトリックスのリモデリング、光老化、色素沈着の調節に、したがって、皮膚の恒常性維持に効果的な成分であると結論することができる。

【0064】

[実施例４]
培養中のヒトメラノサイト中でのメラニン合成に対するアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の効果の決定
プロトコール
メラノサイトを最大５０％のコンフルエンスになるまで６ウェルプレートで培養した。

【0065】

細胞を、種々な濃度のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物（実施例１で試験された、０．１から０．０１２５％の範囲の無毒な濃度）と共に、２連で、２日毎に活性物質を再生処理して、５日間インキュベートした。次いで、細胞を溶解させ、メラニンをＮａＯＨ１Ｍ中、６０℃で１時間、可溶化させた。

【0066】

細胞内メラニンを抽出するために、細胞をＮａＯＨ１Ｍで溶解させ、１２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、清澄な上澄み液の吸光度を４９０ｎｍで測定した。メラニンの含有量は、５９５ｎｍ（Ｂｉｏｒａｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ、Ｂｉｏｒａｄ）でのウェル当たりの総タンパク質に対して標準化した。

【0067】

メラニンの合成の阻害おけるが広く証明されているコウジ酸を陽性対照として使用した。

【0068】

結果
図２に示す結果は、１００％に設定された非処理対照に対する％として示す。

【0069】

メラニンは、表皮のメラノサイトによって合成されるヒトの皮膚の発色団であり、主に皮膚の色の原因である。皮膚の色素沈着におけるアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物の可能な効果を、処理細胞および非処理細胞におけるメラニンの化学的定量によって評価した。

【0070】

０．１％の濃度のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物は、非処理細胞に比較して、メラノサイトのメラニン含有量を３１±１．２％阻害した。

【0071】

この試験によって、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）のアルコール抽出物は、培養メラノサイトのメラニンの含有量を調整し、したがって皮膚の色素沈着レベルを減少し得る（したがって、脱色素剤としての作用）との結論に至る。

【0072】

視覚的には、アンティリスで処理した細胞の溶解物の外観は対照細胞より、明らかに明るい（図３に示す）。

【0073】

[実施例５]
化粧品組成物

【0074】

【表2】

【0075】

【表3】

【0076】

これらの組成物は毎日、朝および／または夕方、皮膚に塗布することができる。
なお、本発明には、以下の実施形態が包含されるものとする。
［１］アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物であって、
ａ）少なくとも１種のアルコール溶媒で、アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から前記溶媒を除去し、次いで、別のアルコール溶媒中に最終希釈するステップ
を含む方法によって得ることができる、抽出物。
［２］前記ステップａ）の前記アルコール溶媒が、１から４個の炭素原子を含む一価アルコール、好ましくはエタノールであることを特徴とする、前記［１］に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［３］前記ステップａ）の前記抽出が、４０℃から６０℃の間の温度で、２から６時間の間の時間、実施されることを特徴とする、前記［１］または［２］に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［４］前記地上部が、花、葉、茎、およびこれらの混合物から選択されることを特徴とする、前記［１］から［３］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［５］前記ステップａ）が２回実施されることを特徴とする、前記［１］から［４］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［６］前記ステップｂ）の前記デカントが、２℃から３０℃の間の温度で、１２時間から３０時間の間の時間、実施されることを特徴とする、前記［１］から［５］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［７］前記ステップａ）で得られた前記混合物が、デカントの前記ステップｂ）の前に、好ましくはメッシュサイズが５０μｍから１００μｍのスクリーンで篩い分けされることを特徴とする、前記［１］から［６］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［８］前記ステップｃ）とｄ）との間に、ｃ）で得られた前記濾液を好ましくは活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで、前記退色させた濾液を濾過する１つまたはいくつかのステップを加えることを特徴とする、前記［１］から［７］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［９］前記ステップｄ）の前記除去が蒸発によって行われ、次いで、前記最終希釈が１，３－プロパンジオール中で実施されることを特徴とする、前記［１］から［８］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［１０］前記方法が、濾過するステップｅ）を実施することを特徴とする、前記［１］から［８］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［１１］ａ）予め乾燥され細かく砕かれたアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の花、葉、および茎の混合物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第１の抽出を行うステップ、
ａ’）ステップａ）で得られた生成物を、エタノールで、５０℃から７０℃の間の温度で２時間から５時間かけて第２の抽出を行い、５０μｍから１００μｍで篩い分けするステップ、
ｂ）ａ）およびａ’）で得られた濾液の混合物を、２℃から３０℃の間の温度で少なくとも１２時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られた前記デカントされた混合物を濾過して、濾液を得るステップ、
－ ｃ）で得られた前記濾液を活性炭への吸着により退色させるステップ、次いで
－ 前記退色させた濾液を閾値１μｍまで濾過するステップ、および
ｄ）蒸発により得られた前記濾液から前記エタノールを除去し、次いで、１，３－プロパンジオール中に、好ましくは水／１，３－プロパンジオールの混合物中に最終希釈するステップ、
ｅ）濾過閾値４μｍまで濾過するステップ
を含む方法によって得ることができることを特徴とする、前記［１］から［１０］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物。
［１２］アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出する方法であって、
ａ）少なくとも１種のアルコール溶媒で、前記アンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部を抽出するステップ、
ｂ）ａ）で得られた混合物を少なくとも１０時間デカントするステップ、
ｃ）ｂ）で得られたデカントされた混合物を濾過するステップ、および
ｄ）得られた濾液から前記溶媒を除去し、次いで、別のアルコール溶媒中に最終希釈するステップ
を含む、方法。
［１３］皮膚色を統一および／または色素による障害を補正するための、前記［１］から［１０］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用。
［１４］脱色素剤、および／またはホワイトニング剤、および／またはライトニング剤および／またはメラニン合成阻害剤としての前記［１］から［１０］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物の化粧品への使用。
［１５］化粧品としてまたは薬学的に許容される媒体中に、前記［１］から［１０］のいずれか一項に記載のアンティリス・ブルネラリア（Anthyllis vulneraria）の地上部のアルコール抽出物を含む化粧品または皮膚科用組成物。
［１６］局所的投与に適していることを特徴とする、前記［１５］に記載の化粧品または皮膚科用組成物。

【図1】

【図2】

【図3】