特許 7420410 抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-01-15

(45)【発行日】2024-01-23

(54)【発明の名称】抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/068 20060101AFI20240116BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240116BHJP

   A61K 31/05 20060101ALN20240116BHJP

【ＦＩ】

A61K36/068

A61P27/02

A61K31/05

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2022149436

(22)【出願日】2022-09-20

(65)【公開番号】P2023059239

(43)【公開日】2023-04-26

【審査請求日】2022-09-20

(31)【優先権主張番号】110138183

(32)【優先日】2021-10-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

(73)【特許権者】

【識別番号】509186410

【氏名又は名称】光晟生物科技股▲分▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000578

【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】▲黄▼何興

(72)【発明者】

【氏名】呂春美

(72)【発明者】

【氏名】許庭源

(72)【発明者】

【氏名】陳伯易

【審査官】堂畑 厚志

(56)【参考文献】

【文献】特開２０２０－１４１５９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００７－００００６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０２０－０２９４４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１９／０００８９１１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】OUYANG, Xinli et al.，Mechanisms of blue light-induced eye hazard and protective measures: a review，Biomedicine & Pharmacotherapy，2020年10月，Volume 130, 110577，p. 1-8

【文献】ZHANG, Ming-Liang et al.，Extraction and anti-oxidative activity of yellow pigment from Cordyceps militaris，MYCOSYSTEMA，2018年，vol. 37, no. 6，p. 761-771

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｐ ２７／０２

Ａ６１Ｐ ３９／０６

Ａ６１Ｋ

Ｇｏｏｇｌｅ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用であって、前記サナギタケ子実体抽出物は、エタノール濃度が６２．９％のエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を８８．３分の抽出時間で抽出して獲得されるものであることを特徴とする、サナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項2】

前記薬物は、サナギタケ子実体抽出物を需要個体に経口投与するためのものであることを特徴とする、請求項１に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項3】

前記の需要個体はマウス個体であり、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１０～１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、２～３０日間連続して投与されることを特徴とする、請求項２に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項4】

前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、２０ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～２２日間連続して需要個体に投与されることを特徴とする、請求項３に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項5】

前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり１～３回の頻度で需要個体に連続して投与されることを特徴とする、請求項３に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項6】

前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり２回の頻度で需要個体に連続して投与されることを特徴とする、請求項５に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項7】

前記の需要個体はヒト個体であり、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～６０日間連続して需要個体に投与されることを特徴とする、請求項２に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項8】

前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１～３ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～２２日間連続して需要個体に投与されることを特徴とする、請求項７に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項9】

前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり１～３回の頻度で需要個体に連続して投与されることを特徴とする、請求項７に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【請求項10】

前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり２回の頻度で需要個体に連続して投与されることを特徴とする、請求項９に記載のサナギタケ子実体抽出物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、サナギタケ子実体抽出物の使用に関するもので、特に、抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用に関するものである。

【背景技術】

【0002】

可視光線とは人の目で見える電磁波であり、可視光線に相当する電磁波の波長は約３８０～７５０ｎｍである。そのうち、ブルーライト（blue light）とは一般的に波長が３８０～５００ｎｍの可視光線であり、具体的な区別として、波長が３８０～４１０ｎｍの紫色光（violet light）、波長が４１０～４５５ｎｍの青紫色光（blue-violet light）と波長が４５５～５００ｎｍの青緑色光（blue-turquoise light）を含む。紫色光と青紫色光は波長が短くて、高エネルギーをもつので、目に対して損傷を引き起こす可能性があり、有害ブルーライト（harmful blue light）と称される。

【0003】

ブルーライトは角膜（cornea）と水晶体（lens）を通して網膜（retina）に達することができ、且つ過去の研究により、ブルーライトは視力に対する影響を齎すことがあり、さらに目が早老になってしまうことが証明された。例えば、過度にブルーライトに曝す場合、目の痛み或いは刺激（sore or irritated eyes）、集中力の低下（difficulty focusing）などのデジタル眼精疲労（digital eye strain）、または、老人性黄斑変性（age-related macular degeneration）などの網膜損傷（retina damage）に至ってしまうことがある。

【0004】

一般的には、日常生活にブルーライトの来源として太陽光、蛍光灯、ＬＥＤ及びテレビ、タブレットとスマートフォンのディスプレイなどを含む。そのうち、ディスプレイからのブルーライトに曝す量が少ないが、人の目とディスプレイの距離が比較的に近く、そして人が目でディスプレイを注視する時間も多い。そのため、ブルーライトによる目に対する損傷を避けるように、ディスプレイフィルタ（screen filter）、パソコン用メガネ（computer glasses）、反射防止レンズ（anti-reflective lenses）などの抗ブルーライト商品が開発された。

【0005】

サナギタケ（Cordyceps militaris）はノムシタケ科（familyCordycipitaceae）に属する真菌の一つであり、ノムシタケ属（genusCordyceps）の模式種である。サナギタケの活性成分は性欲の促進、抗炎症、抗酸化、抗老化、抗腫瘍／抗癌／抗白血病、抗悪性腫瘍の増殖、抗悪性腫瘍の転移、免疫調節、そして細菌、真菌、ウイルスなどの微生物に対する抵抗、抗繊維症、血糖の降下、血中脂質の降下、抗血管新生、抗疲労に対して有利な効果を有し、さらに、神経、肝臓、腎臓などの器官の保護にも役に立っている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】台湾公告第Ｉ４５９９５３号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

近年、多種のサナギタケの培養技術が既に開発されている。例えば、特許文献１に開示された内容のように、サナギタケを、動物性蛋白（牛乳、肉汁の抽出物、牛胎児血清、魚粉、魚介エキス、カイコの蛹、イトミミズ）、植物性蛋白、腸内有益菌の発酵液（乳酸菌発酵液、真菌発酵液）、漢方薬の抽出物等を含むＰＣＢ（plate count broth）培地に接種した後、２０～２４℃、９０ｒｐｍの条件で３～７日振盪培養を行った後、米、玄米、或いは燕麦等を含む穀物培地に再接種する。そして、１８～２５℃、７０～９０％の湿度で暗黒環境（光照強度約０Ｌux）にて３～７日培養してから、１８～２５℃、７０～９０％の湿度で光照環境（光照強度５００Ｌux以上、照射時間が毎日８～１５時間）にて５０日培養する。これにより、獲得したサナギタケ子実体は成長が速く、そして、抽出したサナギタケ子実体の抽出物に含まれるコルジヤピン（cordycepin）の含有量も高い。しかしながら、上記の方法で獲得したサナギタケ子実体の抽出物は抗ブルーライト損傷効果に用いられるかどうか未知である。これに鑑みて、依然として、抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用を提供する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は、上記の課題を解決するために、抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられるサナギタケ子実体抽出物の使用を提供する。
本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、抗ブルーライト損傷効果を向上するための薬物を製造するのに用いられることができる、また、前記サナギタケ子実体抽出物はエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を抽出して獲得されるものである。

【0009】

よって、本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、サナギタケ子実体抽出物が含有する活性成分（例えば、サナギタケ黄素III等のサナギタケカロテノイド）により、需要個体の網膜に位置する光受容細胞を保護し、それらの光受容細胞のアポトーシスを避けるため、有害ブルーライト（一般的には波長が３８０～５００ｎｍの高エネルギー可視光線を指す）の照射による網膜変性を防止して、ひいては抗ブルーライト損傷効果の薬物の製造を用いられることができるという効果を有する。

【0010】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、サナギタケ子実体抽出物はエタノール濃度が２０％以上のエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を抽出して獲得することができる。よって、サナギタケ子実体抽出物が含有するサナギタケカロテノイドは効率的にエタノール水溶液に溶出され（例えば、サナギタケカロテノイドを２０～１００分内大量に溶出させることができ、且つサナギタケ子実体抽出物の１ｋｇにつき、２００ｍｇ以上のサナギタケカロテノイドを含有する）、繰り返して抽出することなく、サナギタケ子実体抽出物を獲得する方法の製造過程を最適化する効果を有する。

【0011】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、サナギタケ子実体抽出物はエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を４０～１００分の抽出時間で抽出して獲得することができる。よって、サナギタケ子実体抽出物が含有するサナギタケカロテノイドは効率的にエタノール水溶液に溶出させ、サナギタケ子実体抽出物の１ｋｇにつき含有するサナギタケカロテノイドが５００ｍｇ以上に達するようにし、サナギタケ子実体抽出物を獲得する方法の製造過程を最適化する効果を有する。

【0012】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、サナギタケ子実体抽出物はエタノール濃度が６２．９％のエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を８８．３分の抽出時間で抽出して獲得することができる。よって、サナギタケ子実体抽出物が含有するサナギタケカロテノイドは効率的にエタノール水溶液に溶出され、サナギタケ子実体抽出物の１ｋｇにつき含有するサナギタケカロテノイドが６９０ｍｇ以上に達するようにし、サナギタケ子実体抽出物を獲得する方法の製造過程を最適化する効果を有する。

【0013】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物が需要個体に経口投与される。よって、使用者はサナギタケ子実体抽出物を便利的に摂取することができ、使用者の服薬コンプライアンス（drug compliance）の向上に役に立つ効果を有する。

【0014】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１０～１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、２～３０日間連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【0015】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、２０ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～２２日間連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【0016】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～６０日間連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【0017】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１～３ｍｇ／ｋｇ体重であり、７～２２日間連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【0018】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり１～３回の頻度で連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【0019】

本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、また、前記のサナギタケ子実体抽出物は１日当たり２回の頻度で連続して投与される。よって、サナギタケ子実体抽出物は優れた光受容細胞の保護能力を有し、視感度及び視覚の対比感度の低下を防ぐことができる。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】サナギタケ黄素IIIの化学構造式を示す。

【図2】試験（Ａ）において、異なる抽出時間で抽出したサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイドの総含有量の変化の折れ線グラフを示す。

【図3】試験（Ｂ）において、異なるエタノール濃度のエタノール水溶液により、抽出したサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイドの総含有量の変化の折れ線グラフを示す。

【図4】試験（Ｃ）において、エタノール水溶液のエタノール濃度と抽出時間を反応変数とし、そして獲得したサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイドの総含有量を反応値とし、応答曲面法のモデル予測により得られた三次元曲面反応図を示す。

【図5】試験（Ｅ）において、液体クロマトグラフィータンデム質量分析計の分析結果を示す。

【図6】試験（Ｆ）において、網膜光損傷モデルマウスを形成するのに用いられるＬＥＤ光源が発する白光の分光写真を示す。

【図7】試験（Ｆ）において、試験の１日目に、第Ｆ１～Ｆ５組のマウスの外顆粒層領域においてアポトーシスを行う光受容細胞の数の柱状グラフを示す。Mann-Whitney U検定により分析を行った。“＃”は第Ｆ１組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＊”は第Ｆ２組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＄”は第Ｆ５組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）。

【図8】（図面代用写真）試験（Ｆ）において、試験の１日目の第Ｆ１組のマウスのＴＵＮＥＬ測定分析結果であり、“ONL”は外顆粒層（outer nuclear layer）の領域を示し、且つ“INL”は内顆粒層（inner nuclear layer）の領域を示す。

【図9】（図面代用写真）試験（Ｆ）において、試験の１日目に第Ｆ５組のマウスのＴＵＮＥＬ測定分析結果であり、“ONL”は外顆粒層の領域を示し、且つ“INL”は内顆粒層の領域を示す。

【図10】試験（Ｇ）において、試験の第-５～１５日の間の、第Ｆ１～Ｆ５組のマウスの視感度の閾値の変化の折れ線グラフを示す。

【図11】試験（Ｇ）において、試験の１５日目の、第Ｆ１～Ｆ５組のマウスの視感度の閾値の柱状グラフを示す。Mann-Whitney U検定により分析を行った。“＃”は第Ｆ１組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＊”は第Ｆ２組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＄”は第Ｆ５組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）。

【図12】試験（Ｈ）において、試験の１５日目の、第Ｆ１～Ｆ５組のマウスの視覚の対比感度の閾値の変化折れ線グラフを示す。

【図13】試験（Ｈ）において、試験の１５日目の、第Ｆ１～Ｆ５組のマウスの視覚の対比感度の視程指数の柱状グラフを示す。Mann-Whitney U検定により分析を行った。“＃”は第Ｆ１組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＊”は第Ｆ２組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＄”は第Ｆ５組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）。

【図14】試験（Ｉ）において、試験の１６日目の、第Ｆ１～Ｆ５組のマウス外顆粒層領域において光受容細胞の細胞核の数の柱状グラフを示す。Mann-Whitney U検定により分析を行った。“＃”は第Ｆ１組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＊”は第Ｆ２組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）；“＄”は第Ｆ５組に対して有意差を有したことを表す（p＜0.05）。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明の実施の一形態について、以下、図面を参照して説明する。

【0022】

本発明のサナギタケ子実体抽出物はエタノール水溶液により、サナギタケ子実体試料を抽出して獲得することができる。例を挙げると、操作者は１０ｇのサナギタケ子実体試料と１００～１０００ｍｌのエタノール水溶液（例えば、エタノール濃度が２０％以上のエタノール水溶液）を混合し、４０～７０℃の温度で２０～１００分で還流抽出することができる。抽出効率を向上させるために、還流抽出を行うと同時に、超音波振盪（振動数４０ kHz）を行ってもよい。前記工程により得たサナギタケ子実体粗抽出液のろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後、サナギタケ子実体抽出物を獲得することができる。

【0023】

サナギタケ子実体試料は、台湾公告第Ｉ４５９９５３号に掲示された方法により、培養して獲得したサナギタケ子実体であってもよい。詳しく言うと、予め動物性蛋白（牛乳、肉汁の抽出物、牛胎児血清、魚粉、魚介エキス、カイコの蛹、イトミミズ）、植物性蛋白、腸内有益菌の発酵液（乳酸菌発酵液、真菌発酵液）、漢方薬の抽出物等を含むＰＣＢ（plate count broth）培地を使用して、２０～２４℃、９０ｒｐｍの条件で３～７日に振盪培養を行って、サナギタケ菌糸体を獲得し、そのサナギタケ菌糸体を、米、玄米、或いは燕麦等を含む穀物培地に接種し、そして、１８～２５℃、７０～９０％の湿度で暗黒環境（光照強度約０Ｌux）にて３～７日に培養してから、１８～２５℃、７０～９０％の湿度で光照環境（光照強度５００Ｌux以上、照射時間が毎日８～１５時間）にて５０日培養して、サナギタケ子実体試料を獲得することができる。

【0024】

好ましくは、操作者はエタノール水溶液によりサナギタケ子実体試料の抽出を行う前に、予めサナギタケ子実体試料を乾燥させてサナギタケ乾燥物を獲得することができ（サナギタケ乾燥物の含水量が１５％より低い）、また、サナギタケ子実体試料は予め粉砕する（例えば、粒径が０．４ｍｍ以下に粉砕する）ことができ、これにより、サナギタケ子実体試料がエタノール水溶液と接触する表面積を増やすことで、効率的に抽出することができる。

【0025】

本発明の実施例では、１００ｇの前記のサナギタケ子実体試料と１０００ｍｌのエタノール水溶液（エタノール濃度が６２．９％のエタノール水溶液）を混合し、７０℃の温度で還流抽出を８８．３分行う。そして、還流抽出を行うと同時に、超音波設備（ＤＣ－１００Ｈ、ＤＥＬＴＡ ＵＬＴＲＡＳＯＮＩＣ社より購入）で超音波振盪（振動数４０ kHz）を行い、ろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後、最終的に約５ｇのサナギタケ子実体抽出物を獲得する。

【0026】

前記工程によって獲得したサナギタケ子実体抽出物はカロテノイド（carotenoid、以下サナギタケカロテノイドと称する）を豊富に含有し、それらのサナギタケカロテノイドのうち、水に不溶性の油溶性カロテノイドのほか、水に可溶性の水溶性カロテノイド（water-soluble carotenoid）も含む。その中に、主に図１に示すような化学構造を有するサナギタケ黄素III（cordyxanthin III，2, 3, 2’, 3’-tetradehydro-18, 17’, 18’-trinor-ε,ε-carotene-5, 5’, -diol）が含まれ（サナギタケ子実体抽出物におけるサナギタケカロテノイドの総量に対して約３５％を占める）、そして、同様にカロテノイドに属するルテイン（β,ε-carotene-3,3’-diol，lutein）と比較すると、サナギタケ黄素IIIのメチル基（methyl group）の数が少なく、サナギタケ黄素IIIが優れる水溶解度を有するので、需要個体に投与されるとき、需要個体が吸収し易く、ひいては需要個体の体内にサナギタケ黄素IIIの生物活性（bioactivity）が発揮し易い。

【0027】

前記工程によって獲得したサナギタケ子実体抽出物は需要個体に投与されることができ、サナギタケ子実体抽出物の活性成分（例えば、サナギタケ黄素III等のサナギタケカロテノイド）が需要個体の網膜に位置する光受容細胞（photoreceptor cell）を保護し、それらの光受容細胞のアポトーシスを避けるため、有害ブルーライト（一般的には波長が３８０～５００ｎｍの高エネルギー可視光線を指す）の照射による網膜変性（retinal degeneration）を防止して、ひいては抗ブルーライト損傷効果の薬物の製造に用いられることができるという効果を有する。サナギタケ子実体抽出物は医薬的に許容可能なキャリアとさらに組み合わせて、医薬組成物として形成されることができ、そして、サナギタケ子実体抽出物は例えば錠剤、カプセル剤、粉薬、粒剤または液剤等、いかなる投与に便利な形式として製造されてもよく、或いはサナギタケ子実体抽出物を他の食品または飲料と組み合わせて食用に適合な食品の様態で生物体に経口投与されることができる。

【0028】

また、需要個体はマウスである場合、サナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１０～１００ｍｇ／ｋｇ体重で需要個体に投与することができ、投与量が１日当たり、２０ｍｇ／ｋｇ体重で需要個体に投与することが好ましい。そして、サナギタケ子実体抽出物は２～３０日間連続して需要個体に投与することができ、好ましくは７～２２日間連続して需要個体に投与する。さらに、サナギタケ子実体抽出物は１日当たり１～３回の頻度で連続して投与することができ、好ましくは１日当たり２回の頻度で連続して投与する。

【0029】

なお、体表面積（body surface area、略称BSA）の投与量転換（dose translation）の式（“Dose translation from animal to human studies revisited”学術雑誌論文、Reagan-Shaw et al. (２００８),《FASEB Journal》を参照する）によってさらに前記の投与量を算出し、需要個体がヒトである場合、サナギタケ子実体抽出物の投与量は１日当たり、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重で需要個体に投与することができ、投与量が１日当たり、１～３ｍｇ／ｋｇ体重で需要個体に投与することが好ましい。そして、サナギタケ子実体抽出物は７～６０日間連続して需要個体に投与することができ、好ましくは７～２２日間連続して需要個体に投与する。さらに、サナギタケ子実体抽出物は１日当たり１～３回の頻度で連続して投与することができ、好ましくは１日当たり２回の頻度で連続して投与することが判明する。

【0030】

本発明のサナギタケ子実体抽出物は、豊富なサナギタケカロテノイドを含み、且つその中にサナギタケ黄素III等のサナギタケカロテノイドも含まれることを証明するために、以下に示す試験を行った。

【0031】

（Ａ）抽出条件の最適化（一）

【0032】

本試験において、エタノール濃度が６５％のエタノール水溶液を抽出剤として、５５℃の温度で上記のような方法で獲得したサナギタケ子実体試料を還流抽出し、抽出時間はそれぞれ２０、４０、６０、８０、１００分であり、且つ、還流抽出を行うと同時に、超音波設備により超音波振盪（振動数４０ kHz）を行い、そして、抽出したサナギタケ子実体抽出物はろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後、分光測色器により４４５ｎｍの波長の吸光度を測定し、サナギタケカロテノイドの総含有量を算出した（“Metabolic Responses of Carotenoid and Cordycepin Biosynthetic Pathways in Cordyceps militaris under Light-Programming Exposure through Genome-Wide Transcriptional Analysis”学術雑誌論文、Thananusak et al. (２０２０),《Biology》を参照）。

【0033】

図２に示すように、抽出時間が２０～１００分の範囲であれば、ナギタケ子実体試料からサナギタケカロテノイドを抽出することができ、抽出時間が６０～１００分であることが好ましい。

【0034】

（Ｂ）抽出条件の最適化（二）

【0035】

本試験において、エタノール濃度がそれぞれ２０％、４０％、６０％、８０％及び９５％であるエタノール水溶液を抽出剤として、６０℃の温度で上記のような方法で獲得したサナギタケ子実体試料を還流抽出し、抽出時間は５０分であり、且つ、還流抽出を行うと同時に、超音波設備により超音波振盪（振動数４０ kHz）を行い、そして、抽出したサナギタケ子実体抽出物はろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後、上記の分光測色法によりサナギタケカロテノイドの総含有量を獲得した。

【0036】

図３に示すように、エタノール濃度が２０％以上であれば、ナギタケ子実体試料からサナギタケカロテノイドを抽出することができ、エタノール濃度が４０％以上であるエタノール水溶液が優れた効果を有した。

【0037】

（Ｃ）抽出条件の最適化（三）

【0038】

続いて、使用したエタノール水溶液のエタノール濃度と抽出時間を反応変数（response variable）として、そして獲得したサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイドの総含有量を反応値（response）として、応答曲面法（response surface methodology，RSM）のモデル予測を行い、各反応変数の統計結果が変数分析法（analysis of variance，ANOVA）によって得た結果を表１のように示し、且つその結果の三次元曲面反応図を図４のように示した。

【0039】

【表1】

【0040】

表１と図４の結果を参照すると、Design Expert 8.0ソフトウェアの分析により、エタノール濃度６２．９％であるエタノール水溶液で抽出を行い、且つ抽出時間は８８．３分の場合、最大量のサナギタケカロテノイドを含むサナギタケ子実体抽出物を獲得できることが判明し、且つサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイド濃度が６９０．８ｍｇ／ｋｇであると予測された。

【0041】

（Ｄ）抽出条件の最適化（四）

【0042】

本試験において、エタノール濃度が６２．９％であるエタノール水溶液を抽出剤として、６５℃の温度で上記のような方法で獲得したサナギタケ子実体試料を還流抽出し、抽出時間は８８．３分であり、且つ、還流抽出を行うと同時に、超音波設備により超音波振盪（振動数４０ kHz）を行い、そして、抽出したサナギタケ子実体抽出物はろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後、分光測色器によりサナギタケカロテノイドの総含有量を獲得した。そして、上記の最適条件により獲得したサナギタケ子実体抽出物のサナギタケカロテノイド濃度が６９１．７±１．５ mg/kgであると判明し、上記の予測結果に相似した。

【0043】

（Ｅ）サナギタケカロテノイドの同定

【0044】

本試験において、エタノール濃度が６２．９％であるエタノール水溶液を抽出剤として、６５℃の温度で還流抽出８８．３分を行い、且つ、還流抽出を行うと同時に、超音波設備により超音波振盪（振動数４０ kHz）を行い、そして、ろ過、減圧濃縮、冷凍乾燥を経た後のサナギタケ子実体抽出物を、メタノールに溶解させ、サナギタケ子実体抽出物の濃度が１ｍｇ／ｍｌになるようにした後、液体クロマトグラフィータンデム質量分析計（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS）により同定を行った。

【0045】

詳しく言うと、サナギタケカロテノイドを含む留分（fraction）を収集した後、質量検出器（MSD-TRAP-XCT）を用いて分離液を分析した。正電荷モード質量検出器のパラメーターとしては、イオンスプレー電圧（ion spray voltage，IS）は４５００Ｖであり、霧化気体圧力（nebulizer gas pressure）は１２ｐｓｉであり、窒素カーテン圧力（nitrogen curtain gas pressure）は１０ｐｓｉであり、加熱器温度（heater temperature）は４５０℃であり、衝突誘起解離（collision induced dissociation，CID）気体圧力は６ｐｓｉであった。

【0046】

図５に示すように、サナギタケ子実体抽出物の分析結果により、５２３ｍ／ｚにて信号が示されることが判明したので、サナギタケ子実体抽出物の水溶性サナギタケカロテノイドが、少なくとも分子量（molecular weight）が５２２Ｄａの水溶性サナギタケカロテノイドを含むと推断し、よく知られているサナギタケ黄素（“Composition and Characterization of Cordyxanthins from Cordyceps militaris fruit bodies”学術雑誌論文、Dong et al. (２０１３),《Journal of Functional Foods》を参照する）と比較すると、サナギタケ子実体抽出物の水溶性サナギタケカロテノイドのうち、主にサナギタケ黄素IIIであることが判明した。

【0047】

そして、サナギタケ子実体抽出物は生体の体内に網膜に位置する光受容細胞を保護し、有害ブルーライトの照射による網膜変性（retinal degeneration）を防止して、ひいては抗ブルーライト損傷効果の薬物の製造を用いられることができることを証明するために、上記の最適条件により獲得したサナギタケ子実体抽出物を使用して試験を行った。２４ｍｇのサナギタケ子実体抽出物を８００μLのキャリア溶液に溶解させ、キャリア溶液が５０重量％の水、２０重量％のポリエチレングリコール４００（polyethylene glycol ４００，ＰＥＧ４００）及び３０重量％のプロパントリオール（glycerol）を含み、さらに、ＰＨ値が１１以上となるように、１０μLの水酸化ナトリウム水溶液（濃度は１２Ｎである）を加えた。オーバーナイトで振盪させた後、さらに３５～４０μLの塩酸水溶液（濃度は４Ｎである）により、ｐＨ値が７～７．５となるように調整しておいた。

【0048】

（Ｆ）網膜光損傷モデルマウスの準備

【0049】

以下の試験において、８～１４周齢のＩＣＲ（BLTW：CD1）マウス（BioLASCO Taiwan Co.,Ltdより購入）を採用し、温度が２３±２℃、湿度が５５±７％である飼育室に飼育し、且つ食物及び水を自由に取れるようにし、且つ表２に示すようにマウスをそれぞれＦ１～Ｆ５組に分けた（各４匹）。

【0050】

【表2】

【0051】

試験の１～５日目に、１日当たり２回の頻度（毎日の午後５時と朝９時）で経管摂食（oral gavage）によりキャリア溶液（第Ｆ１、Ｆ２組）、低剤量のルテイン粉末（第Ｆ３組）、高剤量のルテイン粉末（第Ｆ４組）、サナギタケ子実体抽出物（第Ｆ５組）それぞれを上記マウスに経口投与した。また、試験の０日目に、第Ｆ２～Ｆ５組のマウスを箱に置き、その箱を錫箔により包み、上方にＬＥＤ光源が設置された。ＬＥＤ光源は１４０００～２００００Luxの光通量の白光を発することができ、その白光の分光写真（spectrogram）は図６に示した（波長が３８０～５００ｎｍの有害ブルーライトは可視光線の光通量の約２７．１％を占め、即ち約３８００～５５００Luxである）。ＬＥＤ光源の白光により、第Ｆ２～Ｆ５組のマウスに対して４～５時間の光照射処理を行い、それらのマウスの網膜の光受容細胞（photoreceptor cell）がアポトーシス（apoptosis）を発生させ、ひいては網膜光損傷モデル（light-induced retinal damage model）マウスが形成された。

【0052】

さらに、試験の０～１５日目に、依然として１日当たり２回の頻度でキャリア溶液（第Ｆ１、Ｆ２組）、低剤量のルテイン粉末（第Ｆ３組）、高剤量のルテイン粉末（第Ｆ４組）、サナギタケ子実体抽出物（第Ｆ５組）それぞれを上記マウスに経口投与した。

【0053】

（Ｆ）アポトーシスの分析結果

【0054】

試験の１日目（第Ｆ２～Ｆ５組のマウスに対して２４時間の光照射処理を行った）に、上記の第Ｆ１～Ｆ５組のマウスを犠牲にした後、早めにマウスの目を取り、そして目を固定液で固定した。固定した目を石蝋（paraffin）で包み、垂直切片をした。外顆粒層（outer nuclear layer，ONL）の領域を含む切片を選択し、ＴＵＮＥＬ測定（terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) dUTP nick and labeling assay）を行い、即ち末端デオキシヌクレオチド転移酵素（terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）で、ブロモデオキシウリジン（bromodeoxyridine，BrdU）或いは緑色螢光蛋白質（green fluorescent protein，GFP）等の標記物により標記したデオキシウリジン３リン酸（2’-deoxyuridine 5’-triphosphate，dUTP）を、断裂ＤＮＡが生成した３’-ヒドロキシ基粘着末端（3’-OH sticky end）に混ぜて、そして抗体によりその標記物を認識し染色した。これにより、各組マウス切片のＤＮＡ断片（DNA fragmentation）を標記して外顆粒層領域においてアポトーシスを行う光受容細胞の数を計算することができる。

【0055】

図７に示すように、光照射処理は大量な光受容細胞がアポトーシスを行うことに至り（第Ｆ２組）、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させることによりアポトーシスを行う光受容細胞の数の減少に役に立った（第Ｆ５組）。且つ、その効果は予め低剤量のルテイン粉末或いは高剤量のルテイン粉末を摂取させることより、明らかに優れていた（第Ｆ３、Ｆ４組）。第Ｆ３、Ｆ５組のＴＵＮＥＬ染色分析結果はそれぞれ図８、９に示した。

【0056】

以下に述べる視感度（visual acuity，VA）及び視覚の対比感度（visual contrast sensitivity function，VCSF）等の試験は動物の視運動反射（optomotor reflex，OMR）に基づいて行うものであった。各試験の閾値は受験マウスの視野（visual field）が刺激グレーチング（stimulus grating）が現れたときに、受験したマウスの反射的頭部移動（reflexive head movement）により決定されるものであった。詳しく言うと、受験マウスを高い台の上に乗せて、高い台の前方にディスプレイを設置し、マウスとディスプレイとの距離は１５ｃｍであり、マウスの視野は１１０×９０°を遮蔽した。ディスプレイは刺激グレーチングを表示し、受験マウスの視運動反射を誘発するのに用いられた（刺激グレーチングは相同幅及び相同間隔距離を有する複数の垂直グレーチングである）。操作者は受験マウスの頭部及び体の反射運動（即ち、受験マウスの頭部及び体は刺激グレーチングと共に移動する）を記録し、受験マウスの閾値を獲得した。

【0057】

（Ｇ）視感度試験

【0058】

試験を行う前の５日目（第-５日）、試験の０日目（光照射処理を行った後）及び５、１０、１５日目にそれぞれ視感度試験を行った。

【0059】

視感度試験において、操作者はディスプレイの刺激グレーチングの対比を１００％に設定し、ディスプレイは０．０３３、０．０５５、０．０８２、０．１６２、０．３２８及び０．４３７の周期／度（cycle per decree，cpd）の空間頻度（spatial frequency）、及び１秒当たり１２度（°）の固定回転速度（constant rotational speed）により、水平に浮んで移動して全画面矩形波（full-screen square wave）からなる間歇性刺激（episodic stimulus）を表示した。刺激グレーチングが始まった後、上記反射運動が刺激グレーチングと同調しなくなるまで、操作者が受験マウスの頭部及び体の反射運動を記録した（即ち、受験マウスの頭部及び体は刺激グレーチングと共に移動するかどうかを記録する）。これにより、１００％の対比にて受験マウスの閾値を獲得した。

【0060】

図１０に示すように、光照射処理を行った後、第Ｆ２～Ｆ５組のマウスの視感度は損傷を受けたが、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させた第Ｆ５組のマウスの視感度損傷が比較的に低かった（第０日）。１５日を経た後、予め低剤量又は高剤量のルテインを摂取させた第Ｆ３、Ｆ４組のマウスでも、予めにサナギタケ子実体抽出物を摂取させた第Ｆ５組のマウスでも、視感度の閾値が向上したが、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させた第Ｆ５組のマウスが優れた回復効果を有した。

【0061】

続いて図１１に示すように、例えば１５日目の試験結果により、光照射処理は受験マウスの視感度を破壊した（第Ｆ２組）。そして、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させることにより受験マウスの視感度の回復に役に立ち（第Ｆ５組）、且つ、予めに低剤量又は高剤量のルテインを摂取させること（第Ｆ３、Ｆ４組）と比べ、明らかに優れた効果を有した。

【0062】

（Ｈ）視覚の対比感度試験

【0063】

試験の１５日目に視覚の対比感度試験を行った。

【0064】

視覚の対比感度試験において、操作者はディスプレイの刺激グレーチングの対比をそれぞれ１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び１００％等の異なったレベルに設定し、そして上記の試験を繰り返した。これにより、受験マウスが１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％及び１００％等の対比における閾値を獲得した。よって、図１２のような視覚の対比感度曲線（VSCF curve）を描くことができ、そして視覚の対比感度曲線下の面積に基づいて、図１３に示した視覚の対比感度の視程指数（VSCF visibility index）を算出した。

【0065】

図１２、１３に示すように、光照射処理は受験マウスの視覚の対比感度曲線を縮小させ、視覚の対比感度の視程指数を低下させ（第Ｆ２組）、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させることにより受験マウスの視感度の視程指数の回復に役に立ち（第Ｆ５組）、且つ、予め低剤量又は高剤量のルテインを摂取させること（第Ｆ３、Ｆ４組）と比べ、明らかに優れた効果を有した。

【0066】

（Ｉ）組織染色結果の分析

【0067】

試験の１６日目に、上記第Ｆ１～Ｆ５組のマウスを犠牲した後、早めにマウスの目を取り、そして目を固定液で固定した。固定した目を石蝋（paraffin）で包み、垂直切片をした（厚さは５μｍである）。外顆粒層及び内顆粒層の領域を含む切片を選択し、ヘマトキシリン-エオジン染色（hematoxylin and eosin stain，H&E stain）を行い、視神経頭との距離が０．４～０．６ｍｍである細胞核の数を算定した。

【0068】

図１４に示すように、光照射処理は光受容細胞の死亡に至らせ、染色できた細胞核の数が下がり（第Ｆ２組）、予めサナギタケ子実体抽出物を摂取させることにより光受容細胞の死亡を緩和することに役に立ち、染色された細胞核の数を向上させ（第Ｆ５組）、且つ、予め低剤量のルテインを摂取させること（第Ｆ３組）と比べ、明らかに優れた効果を有したが、高剤量のルテインを摂取させること（第Ｆ４組）とは有意差はなかった。

【0069】

綜合すると、本発明のサナギタケ子実体抽出物の使用は、サナギタケ子実体抽出物が含有する活性成分（例えば、サナギタケ黄素III等のサナギタケカロテノイド）により、需要個体の網膜に位置する光受容細胞を保護し、それらの光受容細胞のアポトーシスを避けるため、有害ブルーライト（一般的には波長が３８０～５００ｎｍの高エネルギー可視光線を指す）の照射による網膜変性を防止して、ひいては抗ブルーライト損傷効果の薬物の製造を用いられることができるという効果を有する。

【0070】

本発明は、その精神と必須の特徴事項から逸脱することなく他のやり方で実施することができる。従って、本明細書に記載した好ましい実施形態は例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】