特許 7423511 ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１結合物質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-01-19

(45)【発行日】2024-01-29

(54)【発明の名称】ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１結合物質

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20240122BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240122BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240122BHJP

   C07K 14/56 20060101ALI20240122BHJP

   C07K 14/565 20060101ALI20240122BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240122BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240122BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240122BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240122BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20240122BHJP

   A61K 38/21 20060101ALI20240122BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240122BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240122BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240122BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240122BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12 ZNA

C07K16/28

C07K19/00

C07K14/56

C07K14/565

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K38/20

A61K38/21

A61K38/17

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K39/395 U

A61P35/00

A61P35/02

A61P31/00

A61P37/06

A61P37/02

A61P43/00 121

A61K47/68

【請求項の数】 20

(21)【出願番号】P 2020507585

(86)(22)【出願日】2018-08-08

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-10-22

(86)【国際出願番号】 US2018045743

(87)【国際公開番号】W WO2019032663

(87)【国際公開日】2019-02-14

【審査請求日】2021-08-06

(31)【優先権主張番号】62/542,921

(32)【優先日】2017-08-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】519287378

【氏名又は名称】オリオンズ バイオサイエンス インコーポレイテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】519287389

【氏名又は名称】オリオンズ バイオサイエンス ビーブイ

(74)【代理人】

【識別番号】100084995

【弁理士】

【氏名又は名称】加藤 和詳

(72)【発明者】

【氏名】クレイ、ニコライ

(72)【発明者】

【氏名】タベルニエ、ジャン

(72)【発明者】

【氏名】ザベアウ、レナルト

(72)【発明者】

【氏名】デプラ、エリク

【審査官】斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／０７７３８２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／０７７８９３（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ

Ｃ０７Ｋ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３０１、２８７、２９０、３００、３０５、３０６、および３０９のうちの１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１結合物質であって、
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３０１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号１９９または１８１のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２５９または２６０のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２６８のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号２８７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号１９６または１７８のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２４１または２４２のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２６８のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号２９０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号１９９または１８１のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２４５または２４６のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２６８のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３００と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号１９９または１８１のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２４５または２４６のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２６８のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３０５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号２０６または１８９のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２６３または２６４のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２７７のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３０６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号２０１または１８３のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２４９または２５０のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２７２のアミノ酸配列からなる、または
配列番号８６の、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列を含まない配列番号３０９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記ＰＤ－Ｌ１結合物質は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分をさらに含み、ここで、ＣＤＲ１が、配列番号１９９または１８１のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ２が、配列番号２４５または２４６のアミノ酸配列からなり；ＣＤＲ３が、配列番号２６８のアミノ酸配列からなる、
前記ＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項2】

前記少なくとも１つの標的化部分が、単一ドメイン抗体である、請求項１に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項3】

前記少なくとも１つの標的化部分が、Ｖ_ＨＨまたはヒト化Ｖ_ＨＨを含む、請求項２に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項4】

インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも改変されていてもよい、１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項5】

１つまたは複数の追加の標的化部分を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のＰＤ
－Ｌ１結合物質。

【請求項6】

前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原または免疫細胞上の抗原を認識し、前記１つまたは複数の追加の標的化部分はそれぞれ腫瘍抗原または免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、請求項５に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項7】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項６に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項8】

細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、請求項１～７のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項9】

ＰＤ－Ｌ１を認識してＰＤ－Ｌ１に結合し、その活性を機能的に調節するかあるいはその活性を機能的に調節しない、請求項１～８のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする組換え核酸。

【請求項11】

請求項１０に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。

【請求項12】

請求項１～９に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質、ならびに
インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも改変されていてもよいシグナル伝達物質
を含むキメラを含む、癌の治療または予防における使用のための医薬。

【請求項13】

前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌、口内、および咽頭を含む）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む））、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１２に記載の医薬。

【請求項14】

請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質を含む、癌、感染症、免疫異常、または自己免疫疾患のうちの少なくとも１つの治療における使用のための医薬。

【請求項15】

（ａ）請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質；および
（ｂ）野生型ＩＦＮα２に比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮα２
を含むキメラタンパク質であって、
少なくとも１つの標的化部分および改変シグナル伝達物質が、１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、
キメラタンパク質。

【請求項16】

前記改変ヒトＩＦＮα２が、位置Ｒ１２０、Ｍ１４８、Ｒ１４９、およびＬ１５３に１つまたは複数の変異を含む、請求項１５に記載のキメラタンパク質。

【請求項17】

前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａからなる群から選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項１６に記載のキメラタンパク質。

【請求項18】

（ａ）請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質；および
（ｂ）野生型ＩＦＮβに比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮβ
を含むキメラタンパク質であって、
少なくとも１つの標的化部分および改変シグナル伝達物質が、１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、
キメラタンパク質。

【請求項19】

前記改変ヒトＩＦＮβが、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を含む、請求項１８に記載のキメラタンパク質。

【請求項20】

前記改変ヒトＩＦＮβが、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、およびＲ１５２Ｇからなる群から選択される１つまたは複数の変異を含む、請求項１９に記載のキメラタンパク質。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年８月９日出願の米国特許仮出願第６２／５４２，９２１号の利益および優先権を主張する。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

発明の分野
本発明は、一部は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を結合する結合物質および治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。

【0003】

電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ－０３４ＰＣ＿ＳＴ２５、作成日付：２０１８年８月８日、ファイルサイズ：８２７ＫＢ）。

【背景技術】

【0004】

身体の免疫系を癌の方向に向け直すための免疫療法が開発されている。免疫療法は、化学療法および放射線療法などの他の治療方式が欠く、細胞特異性の利点をもたらす。従って、免疫に基づく療法の効力を高めるための方法は、臨床的に有益であり得る。例えば、共刺激または共抑制シグナルをもたらす免疫チェックポイント分子は、腫瘍細胞に対するＴ細胞免疫応答の調節において中心的な役割を果たす。

【0005】

しかし、例えば、ヤーボイ、キイトルーダ、およびオプジーボの承認に至った臨床試験を含む、チェックポイント分子を標的とする物質に対する患者の著しい応答にもかかわらず、チェックポイント阻害療法などの免疫療法は、圧倒的多数の患者ではまだ成功していない。さらに未だに、多くの免疫療法では、治療のための患者の治療濃度域を大きく狭めかつ患者を他の疾患によりかかりやすくする、副作用が併発する。

【0006】

したがって、最小限の副作用にしながら癌に対する標的療法を提供できる、改善された免疫療法薬の必要性が残されている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

種々の態様では、本発明は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分を有する結合物質に関する。種々の実施形態では、これらの結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合し、これを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）。種々の実施形態では、これらの結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合するが、これを機能的に調節しない（例えば、部分的にまたは完全に中和しない）。したがって、種々の実施形態では、本発明の結合物質は、例えば、ＰＤ－１発現細胞またはＰＤ－Ｌ１発現細胞にＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を介してシグナル伝達させつつそのＰＤ－１発現細胞またはＰＤ－Ｌ１発現細胞を目的の部位に直接または間接的に動員するのに使用される（すなわち、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の結合は、目的の部位でのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１シグナル伝達を低減せず排除しない）。ある実施形態では、標的化部分は単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）である。

【0008】

種々の実施形態では、本発明の結合物質は、シグナル伝達物質、例えば、限定されないが、活性を弱めるように改変され得るインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。種々の実施形態では、結合物質は、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）に結合する追加の標的化部分を含む。ある実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）は、腫瘍細胞上に存在する。別の実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）は、免疫細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、本発明の結合物質は、免疫細胞、（例えば、樹状細胞）を、作用の部位（例えば、非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明の結合物質は、樹状細胞による抗原（例えば、腫瘍抗原）の提示を促進する。

【0009】

種々の実施形態では、本発明の結合物質は、癌、感染症、免疫異常、ならびに他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の治療で使用され、さらに本発明は、治療の様々な方法を包含する。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、実施例１に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１ ＡｃＴａｆｅｒｏｎのクローニング方法の概略図を示す。

【図2】図２は、ＰＤ－Ｌ１（上段パネル）またはＰＤ－１（下段パネル）ＡｃＴａｆｅｒｏｎの遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞への結合を示す。

【図3】図３は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のｐＳＴＡＴ１の状態により評価したＰＤ－１標的化を示す。データは、非刺激ｐＳＴＡＴ１平均蛍光強度（ＭＦＩ）のパーセンテージとしてプロットされる。

【図4】図４は、遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞中のｐＳＴＡＴ１の状態により評価したＰＤ－１標的化を示す。ｐＳＴＡＴ１細胞パーセンテージがプロットされている。

【図5】図５は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞中のｐＳＴＡＴ１の状態により評価したＰＤ－Ｌ１標的化を示す。データは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）のプロットである。

【図6】図６は、遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞へのＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの結合を示す。データは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）のプロットである。

【図7A】図７Ａは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ３であった。

【図7B】図Ｂは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ２７（図７Ｂ）であった。

【図7C】図７Ｃは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ９７であった。

【図7D】図７Ｄは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ９９であった。

【図7E】図７Ｅは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ１７６であった。

【図7F】図７Ｆは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、２ＬＩＧ１８９であった。

【図7G】図７Ｇは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。ルシフェラーゼ活性は、過剰（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの存在下または非存在下で、段階希釈のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡＦＮにより誘導された。試験したＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、３ＬＩＧ８であった。

【図8】図８は、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）でのアテゾリズマブ－ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ａｔｅ－ＡＦＮ；すなわち、Ａｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔ）の生物活性を示すグラフである。生物活性は、過剰（５０μｇ／ｍｌ）のアテゾリズマブ（ａｔｅ）の存在下または非存在下で、段階希釈のａｔｅ－ＡＦＮにより誘導したルシフェラーゼ活性により測定された。

【図9】図９は、ヒト化免疫系を有するマウスでのＲＬ腫瘍モデルにおける２ＬＩＧ９９ベースＡＦＮのインビボ抗腫瘍活性を示すグラフである。

【図10A】図１０Ａは、ヒトＰＤ－１または空のベクターを遺伝子導入し、段階希釈の１０２Ｃ３ ＡＦＮ（図１０Ａ）で刺激したＨｅｋ２９３Ｔ細胞中のｐＳＴＡＴ１を示すグラフである。ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージがグラフでプロットされている。

【図10B】図１０Ｂは、ヒトＰＤ－１または空のベクターを遺伝子導入し、段階希釈の１０２Ｃ１２ ＡＦＮ（図１０Ｂ）で刺激したＨｅｋ２９３Ｔ細胞中のｐＳＴＡＴ１を示すグラフである。ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージがグラフでプロットされている。

【図10C】図１０Ｃは、ヒトＰＤ－１または空のベクターを遺伝子導入し、段階希釈の野生型ＩＦＮａ２で刺激したＨｅｋ２９３Ｔ細胞中のｐＳＴＡＴ１を示すグラフである。ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージがグラフでプロットされている。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明は、一部は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識し、それに結合する結合物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。いくつかの実施形態では、本発明の結合物質は、１つまたは複数の標的化部分および／または１種類または複数種類のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合タンパク質の一部である。種々の実施形態では、これらの結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合し、これを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）。いくつかの実施形態では、これらの結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合するが、これを機能的に調節しない。

【0012】

本発明は、結合物質を含む医薬組成物および、癌、自己免疫疾患、および／または神経変性疾患を含む、種々の疾患の治療におけるそれらの使用をさらに提供する。

【0013】

ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質
種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を機能的に調節することなくＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。

【0014】

ＰＤ－１および表面抗原分類２７９（ＣＤ２７９）としても知られるプログラム細胞死タンパク質１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージ上で主に発現される細胞表面受容体である。ＰＤ－１は、そのリガンド（ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２）の結合時に、抗原受容体シグナル伝達を負に制御することが示されている。ＰＤ－１は、免疫系の下方制御およびＴ細胞炎症活性の抑制による自己寛容の促進において重要な役割を果たす。ＰＤ－１は、リガンド結合に関与するＩｇ可変型（Ｖ型）ドメインおよびシグナル伝達分子の結合に関与する細胞質側末端を含むＩ型膜貫通型糖タンパク質である。ＰＤ－１の細胞質側末端は、２つのチロシンベースシグナル伝達モチーフである、ＩＴＩＭ（免疫受容抑制性チロシンモチーフ）およびＩＴＳＭ（免疫受容体チロシン依存性スイッチモチーフ）を含む。

【0015】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、ＰＤ－１上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ－１上に存在する１つまたは複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＰＤ－１上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ－１上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0016】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、ヒトＰＤ－１の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、任意の形態のヒトＰＤ－１に結合し得る。ある実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、リン酸化型のＰＤ－１に結合する。

【0017】

ある実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、ヒトＰＤ－１上に存在する１つまたは複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ヒトＰＤ－１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0018】

別の実施形態では、ヒトＰＤ－１は、アミノ末端シグナルペプチドを含まない配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0019】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、特異的に結合できる標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、抗体である標的化部分を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、Ｖ_Ｈ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0020】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットである標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１結合物質は、次の標的化部分を含む：単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。

【0021】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体である標的化部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導されるか、またはＶＨＨは設計されたＶＨＨであってもよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。

【0022】

ある実施形態では、ＰＤ－１結合物質はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。

【0023】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示の完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0024】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0025】

種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＣＤＲ１配列は、下記から選択される：ＧＦＳＭＤＹＹＡＩＡ（配列番号２）；ＧＦＳＶＤＹＹＡＩＡ（配列番号３）；ＧＧＦＮＲＶＳＹＭＧ（配列番号４）；ＧＩＩＫＳＩＮＦＭＧ（配列番号５）；ＧＦＩＬＤＹＹＧＩＧ（配列番号６）；ＧＬＳＬＤＹＤＧＶＧ（配列番号７）；ＧＲＴＦＳＳＬＧＭＧ（配列番号８）；ＧＦＡＦＧＳＹＤＭＧ（配列番号９）；ＧＦＳＦＧＮＮＤＭＳ（配列番号１０）；ＩＨＡＭＧ（配列番号１１）；ＩＮＡＭＡ（配列番号１２）；ＳＧＴＭＧ（配列番号１３）；ＧＳＩＡＳＩＨＡＭ（配列番号１４）；ＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧ（配列番号１５）；ＦＹＧＭＧ（配列番号１６）；ＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧ（配列番号１７）；ＹＹＡＩＡ（配列番号１８）；ＶＳＹＭＧ（配列番号１９）；ＩＮＦＭＧ（配列番号２０）；ＳＬＧＭＧ（配列番号２１）；ＳＹＤＭＧ（配列番号２２）；およびＮＮＤＭＳ（配列番号２３）。

【0027】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＣＤＲ２配列は、下記から選択される：ＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴ（配列番号２４）；ＳＶＴＳＧＧＥＩ（配列番号２５）；ＳＴＴＳＤＧＲＴ（配列番号２６）；ＣＩＳＳＳＤＧＳＴ（配列番号２７）；ＡＩＡＷＮＧＡＳＴ（配列番号２８）；ＧＩＮＳＧＧＲＩＴ（配列番号２９）；ＡＩＮＳＧＧＧＳＴ（配列番号３０）；ＡＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧ（配列番号３１）；ＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）；ＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３）；ＡＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＬＫＧ（配列番号３４）；ＬＩＳＷＳＧＧＳＴＹＹＥＤＳＶＫＧ（配列番号３５）；ＳＩＰＷＳＧＧＲＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６）；ＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹ（配列番号３７）；ＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹ（配列番号３８）；ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９）；ＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹ（配列番号４０）；ＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹ（配列番号４１）；ＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹＹＶＡＳＶＫＧ（配列番号４２）；ＳＶＴＳＧＧＥＩＴ（配列番号４３）；ＳＶＴＳＧＧＥＩＴＩＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）；ＳＶＴＳＧＧＥＩＴＶＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５）；ＳＴＴＳＤＧＲＴＴ（配列番号４６）；ＳＴＴＳＤＧＲＴＴＶＡＤＳＶＫＧ（配列番号４７）；ＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹ（配列番号４８）；ＡＩＡＷＮＧＡＳＴＹ（配列番号４９）；ＡＩＡＷＮＧＡＳＴＹＹＴＥＳＶＫＧ（配列番号５０）；ＧＩＮＳＧＧＲＩＴＤ（配列番号５１）；ＧＩＮＳＧＧＲＩＴＤＹＡＤＳＶＴＧ（配列番号５２）；ＡＩＮＳＧＧＧＳＴＹ（配列番号５３）；およびＡＩＮＳＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４）。

【0028】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＣＤＲ３配列は、下記から選択される：ＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＶＭＤＹ（配列番号５５）；ＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＩＭＤＹ（配列番号５６）；ＮＡＤＩＷＶＳＤＡＲＭＹＮＹ（配列番号５７）；ＮＡＤＩＷＬＰＳＤＲＭＹＮＹ（配列番号５８）；ＡＴＡＴＬＣＤＧＧＩＷＧＹ（配列番号５９）；ＡＡＳＧＬＧＳＶＶＶＴＡＮＥＹＤＹ（配列番号６０）；ＡＱＧＤＲＳＳＷＨＹＹＧＭＤＹ（配列番号６１）；ＡＴＫＳＤＰＭＴＮＥＹＤＬ（配列番号６２）；ＤＲＡＥＳＳＷＹＤＹ（配列番号６３）；ＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹ（配列番号６４）；ＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹ（配列番号６５）；ＤＲＡＱＳＳＷＹＤＹ（配列番号６６）；ＤＲＶＤＳＮＷＹＤＹ（配列番号６７）；ＫＥＲＳＴＧＷＤＦＡＳ（配列番号６８）；およびＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹ（配列番号６９）。

【0029】

種々の代表的実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
２ＰＤ２３
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＭＤＹＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＩＳＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹＹＶＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＶＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７０）；
２ＰＤ２６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＭＤＹＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＩＳＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹＹＶＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＴＡＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＶＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７１）；
２ＰＤ９０
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＳＶＤＹＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＩＳＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹＹＶＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＩＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７２）；
２ＰＤ－１０６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＳＭＤＹＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＩＳＣＩＴＧＳＤＦＭＶＤＴＹＹＶＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＡＨＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＶＲＳＴＡＮＴＬＣＰＳＨＹＳＶＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７３）；
２ＰＤ－１６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＦＮＲＶＳＹＭＧＷＹＲＱＡＰＧＴＫＲＥＬＶＡＳＶＴＳＧＧＥＩＴＩＡＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＧＬＫＰＥＤＧＡＴＹＷＣＮＡＤＩＷＶＳＤＡＲＭＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７４）；
２ＰＤ７１
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＦＮＲＶＳＹＭＧＷＹＲＱＡＰＧＳＫＲＥＬＶＡＳＶＴＳＧＧＥＩＴＶＡＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＮＫＮＴＬＹＬＱＭＮＧＬＫＰＥＤＧＡＴＹＷＣＮＡＤＩＷＶＳＤＡＲＭＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７５）；
２ＰＤ－１５２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＩＫＳＩＮＦＭＧＷＹＲＱＰＰＧＴＫＲＥＬＶＡＳＴＴＳＤＧＲＴＴＶＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＩＹＬＥＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＷＣＮＡＤＩＷＬＰＳＤＲＭＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７６）；
２ＰＤ－１２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＩＬＤＹＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＬＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＨＣＡＴＡＴＬＣＤＧＧＩＷＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７７）；
３ＰＤ５５
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＥＧＳＧＬＳＬＤＹＤＧＶＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＧＮＡＬＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＴＬＣＤＧＧＩＷＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号７８）；
３ＰＤ８２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＩＬＤＹＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＬＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＴＬＣＤＧＧＩＷＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号：７９）；
２ＰＤ８
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＲＴＦＳＳＬＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＳＡＩＡＷＮＧＡＳＴＹＹＴＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＴＤＴＡＶＹＦＣＡＡＳＧＬＧＳＶＶＶＴＡＮＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号８０）；
２ＰＤ２７
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＬＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＳＡＩＡＷＮＧＡＳＴＹＹＴＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＴＤＴＡＶＹＦＣＡＡＳＧＬＧＳＶＶＶＴＡＮＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号８１）；
２ＰＤ８２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＴＴＳＧＦＡＦＧＳＹＤＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＰＥＷＶＳＧＩＮＳＧＧＲＩＴＤＹＡＤＳＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＤＲＳＳＷＨＹＹＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号８２）；または
３ＰＤ３６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＧＮＮＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＮＳＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＫＳＤＰＭＴＮＥＹＤＬＷＧＸＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号８３）。

【0030】

種々の代表的実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号８４）を含まない配列番号７０～配列番号８３から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0031】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号８５）を含まない配列番号７０～８３（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0032】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、ＡＡＡリンカーを含まない配列番号７０～８３（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号８６）を含まない配列番号７０～８３（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0034】

種々の代表的実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
１０２Ｃ３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲＡＥＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１２４６）；または
１０２Ｃ１２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１２４７）。

【0035】

種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、米国特許出願公開第２０１７／０１３７５１７号に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一例として、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、米国特許出願公開第２０１７／０１３７５１７号中の次の配列のうちの１つを含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８８）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号８９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＱＶＱＶＳＳ（配列番号９０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号９１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号９２）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号９３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳ（配列番号９４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号９５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号９６）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号９８）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳ（配列番号９９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号１００）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号１０１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０２）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＳＳＡ（配列番号１０４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１０５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳＡ（配列番号１０６）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳＡ（配列番号１０７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳＡ（配列番号１０８）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１０９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳＡ（配列番号１１０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳＡ（配列番号１１１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳＡ（配列番号１１２）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１１３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１１４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳＡ（配列番号１１５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳＡ（配列番号１１６）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳＡ（配列番号１１７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１１８）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１１９）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２２）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１２３）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１２４）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＱＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２６）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＰＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２７）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＰＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２８）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＱＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２９）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＥＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３１）；および
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号１３２）。

【0036】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、位置１、１１、１４，５２ａ、７３、７４、８３、８９、１００ａ、１１０、および１１２（Ｋａｂａｔナンバリングによる）に１つまたは複数の置換を有する配列番号８７～１３２から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、位置１のアミノ酸はＥまたはＤである。いくつかの実施形態では、位置１１のアミノ酸はＬまたはＶである。いくつかの実施形態では、位置１４のアミノ酸はＡまたはＰである。いくつかの実施形態では、位置５２ａのアミノ酸はＷまたはＶである。いくつかの実施形態では、位置７３のアミノ酸はＮ、Ｓ、ＰまたはＱである。いくつかの実施形態では、位置７４のアミノ酸はＡまたはＳである。いくつかの実施形態では、位置８３のアミノ酸はＫまたはＲである。いくつかの実施形態では、位置８９のアミノ酸はＴ、Ｖ、ＩまたはＬである。いくつかの実施形態では、位置１００ａのアミノ酸はＷまたはＦである。いくつかの実施形態では、位置１１０のアミノ酸はＴ、Ｋ、またはＱである。いくつかの実施形態では、位置１１２のアミノ酸はＳ、Ｋ、またはＱである。

【0037】

種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、国際公開第２０１７／０８７５８７号に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。一例として、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、国際公開第２０１７／０８７５８７号中の次の配列のうちの１つを含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＦＳＦＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＱＥＦＶＡＤＩＲＴＳＡＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＥＭＳＧＩＳＧＷＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１３３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号１３５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳ（配列番号１３６）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号１３７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号１３８）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号１３９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳ（配列番号１４０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号１４１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号１４２）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳ（配列番号１４４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳ（配列番号１４５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳ（配列番号１４６）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳ（配列番号１４７）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４８）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＴＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１５０）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１５１）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳＡ（配列番号１５２）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳＡ（配列番号１５３）；
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＣＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１５５）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＱＶＳＳＡ（配列番号１５６）；
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１５９）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＫＶＳＳＡ（配列番号１６０）；
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＫＳＡ（配列番号１６２）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＱＳＡ（配列番号１６３）；
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６８）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１６９）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＮＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＴＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＴＩＧＧＳＬＳＲＳＳＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ（配列番号１７０）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７１）；
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＱＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７２）；および
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＶＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＰＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＦＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７３）。

【0038】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、位置１、１１、１４，５２ａ、７３、７４、８３、８９、１００ａ、１１０、および１１２（Ｋａｂａｔナンバリングによる）に１つまたは複数の置換を有する配列番号１３３～１７３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、位置１のアミノ酸はＥまたはＤである。いくつかの実施形態では、位置１１のアミノ酸はＬまたはＶである。いくつかの実施形態では、位置１４のアミノ酸はＡまたはＰである。いくつかの実施形態では、位置５２ａのアミノ酸はＷまたはＶである。いくつかの実施形態では、位置７３のアミノ酸はＮ、Ｓ、ＰまたはＱである。いくつかの実施形態では、位置７４のアミノ酸はＡまたはＳである。いくつかの実施形態では、位置８３のアミノ酸はＫまたはＲである。いくつかの実施形態では、位置８９のアミノ酸はＴ、Ｖ、ＩまたはＬである。いくつかの実施形態では、位置１００ａのアミノ酸はＷまたはＦである。いくつかの実施形態では、位置１１０のアミノ酸はＴ、Ｋ、またはＱである。いくつかの実施形態では、位置１１２のアミノ酸はＳ、Ｋ、またはＱである。

【0039】

種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＰＤ－１結合物質の任意の天然のまたは合成の類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＰＤ－１結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0040】

種々の実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合物質をさらに提供する。プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）は、表面抗原分類２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）としても知られ、免疫系の抑制に大きな役割を果たすと推測されている１型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－ＬIは、ＬＰＳおよびＧＭ－ＣＳＦ処理に応答してマクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）上で、ならびにＴＣＲおよびＢ細胞受容体シグナル伝達時にＴ細胞およびＢ細胞上で発現上昇される。

【0041】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ１上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ－Ｌ１上に存在する１つまたは複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＰＤ－Ｌ１上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＰＤ－Ｌ１上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0042】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、ヒトＰＤ－Ｌ１の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、任意の形態のヒトＰＤ－Ｌ１に結合し得る。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、リン酸化型のＰＤ－Ｌ１に結合する。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、アセチル化型のＰＤ－Ｌ１に結合する。

【0043】

ある実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、ヒトＰＤ－Ｌ１上に存在する１つまたは複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ヒトＰＤ－Ｌ１は、下記のアミノ酸配列（下線はシグナルペプチド）を含む：

【化1】

【0044】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、特異的結合ができる標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、抗体である標的化部分を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、Ｖ_Ｈ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0045】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットである標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質は、次の標的化部分を含む：単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー；ミクロボディ；アプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。

【0046】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体である標的化部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物からから誘導するか、またはＶＨＨは設計によるＶＨＨであってもよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。

【0047】

ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。

【0048】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示的な完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0049】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0050】

種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ ＣＤＲ１配列は、下記から選択される：ＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧ（配列番号１７７）；ＧＴＩＦＳＩＮＨＭＤ（配列番号１７８）；ＧＦＴＦＤＤＹＧＭＳ（配列番号１７９）；ＧＦＴＬＤＹＹＡＩＮ（配列番号１８０）；ＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤ（配列番号１８１）；ＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳ（配列番号１８２）；ＧＫＩＦＳＧＮＤＭＧ（配列番号１８３）；ＧＦＴＦＮＤＹＡＭＳ（配列番号１８４）；ＧＦＮＬＤＰＹＡＩＡ（配列番号１８５）；ＧＦＴＦＴＡＹＡＭＳ（配列番号１８６）；ＧＦＴＦＤＹＹＡＩＧ（配列番号１８７）；ＧＦＮＬＤＰＹＡＩＧ（配列番号１８８）；ＥＳＩＦＳＩＥＡＭＧ（配列番号１８９）；ＧＲＴＦＳＩＳＡＭＧ（配列番号１９０）；ＹＹＡＩＧ（配列番号１９１）；ＹＹＡＫＣ（配列番号１９２）；ＱＹＤＶＧ（配列番号１９３）；ＮＳＡＭＧ（配列番号１９４）；ＤＳＩＶＳ（配列番号１９５）；ＩＮＨＭＤ（配列番号１９６）；ＤＹＧＭＳ（配列番号１９７）；ＹＹＡＩＮ（配列番号１９８）；ＩＮＲＭＤ（配列番号１９９）；ＳＹＧＭＳ（配列番号２００）；ＧＮＤＭＧ（配列番号２０１）；ＤＹＡＭＳ（配列番号２０２）；ＰＹＡＩＡ（配列番号２０３）；ＡＹＡＭＳ（配列番号２０４）；ＰＹＡＩＧ（配列番号２０５）；ＩＥＡＭＧ（配列番号２０６）；およびＩＳＡＭＧ（配列番号２０７）。

【0052】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ ＣＤＲ２配列は、下記から選択される：ＩＳＳＳＤＧＳＴＹ（配列番号２０８）；ＩＴＳＤＧＦＰＴ（配列番号２０９）；ＩＲＷＮＧＧＳＴＮ（配列番号２１０）；ＩＴＳＤＧＴＰＴ（配列番号２１１）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２１２）；ＩＴＳＧＧＩＴＤ（配列番号２１３）；ＩＴＳＤＧＴＰＴ（配列番号２１４）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２１５）；ＩＲＳＮＧＧＹＴＮ（配列番号２１６）；ＩＳＳＳＤＶＧＴＹ（配列番号２１７）；ＩＮＳＳＤＧＳＴＹ（配列番号２１８）；ＩＳＧＳＤＳＳＴＹ（配列番号２１９）；ＩＳＳＳＤＶＧＴＹ（配列番号２２０）；ＩＴＳＤＧＴＰＴ（配列番号２２１）；ＩＴＳＤＧＴＰＡ（配列番号２２２）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２２３）；ＩＳＳＧＤＧＳＫＹ（配列番号２２４）；ＩＳＳＳＤＶＧＴＹ（配列番号２２５）；ＩＦＧＧＧＦＴＮ（配列番号２２６）；ＩＴＳＧＧＩＴＤ（配列番号２２７）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２２８）；ＩＴＳＤＧＴＰＴ（配列番号２２９）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２３０）；ＩＳＳＳＤＶＧＴＹ（配列番号２３１）；ＩＴＷＳＧＧＳＴＳ（配列番号２３２）；ＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２３３）；ＩＲＳＮＧＧＹＴＮ（配列番号２３４）；ＳＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３５）；ＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３６）；ＣＩＳＧＧＤＮＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３７）；ＦＳＳＳＧＧＲＴＩＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２３８）；ＲＩＴＧＧＧＬＩＡＹＴＤＳＶＫＧ（配列番号２３９）；ＧＩＳＮＧＧＴＩＫＹＡＥＳＶＬＧ（配列番号２４０）；ＬＩＴＳＤＧＦＰＴ（配列番号２４１）；ＬＩＴＳＤＧＦＰＴＹＡＤＳＡＫＧ（配列番号２４２）；ＡＩＲＷＮＧＧＳＴＮ（配列番号２４３）；ＡＩＲＷＮＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４４）；ＬＩＴＳＤＧＴＰＴ（配列番号２４５）；ＬＩＴＳＤＧＴＰＴＹＡＤＳＡＫＧ（配列番号２４６）；ＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳ（配列番号２４７）；ＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４８）；ＩＩＴＳＧＧＩＴＤ（配列番号２４９）；ＩＩＴＳＧＧＩＴＤＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２５０）；ＧＩＲＳＮＧＧＹＴＮ（配列番号２５１）；ＧＩＲＳＮＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５２）；ＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹ（配列番号２５３）；ＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５４）；ＣＩＮＳＳＤＧＳＴＹ（配列番号２５５）；ＣＩＮＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５６）；ＣＩＳＧＳＤＳＳＴＹ（配列番号２５７）；ＣＩＳＧＳＤＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５８）；ＬＩＴＳＤＧＴＰＡ（配列番号２５９）；ＬＩＴＳＤＧＴＰＡＹＡＤＳＡＫＧ（配列番号２６０）；ＣＩＳＳＧＤＧＳＫＹ（配列番号２６１）；ＣＩＳＳＧＤＧＳＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２６２）；ＡＩＦＧＧＧＦＴＮ（配列番号２６３）；ＡＩＦＧＧＧＦＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２６４）；ＡＩＴＷＳＧＧＳＴＳ（配列番号２６５）；およびＡＩＴＷＳＧＧＳＴＳＹＴＤＳＶＫＧ（配列番号２６６）。

【0053】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、下記から選択される：ＤＧＷＳＳＣＲＨＧＩＮＥＹＬＹＷ（配列番号２６７）；ＳＳＧＶＹＮＹＷ（配列番号２６８）；ＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＰＲ（配列番号２６９）；ＳＧＷＲＬＣＲＰＴＤＥＹＤＹＳＹＷ（配列番号２７０）；ＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷ（配列番号２７１）；ＲＤＲＴＩＷＷ（配列番号２７２）；ＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＹＰ（配列番号２７３）；ＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷ（配列番号２７４）；ＤＧＷＲＤＣＴＷＳＮＥＹＡＹＷ（配列番号２７５）；ＴＧＷＲＴＣＲＧＬＮＥＹＤＹＷ（配列番号２７６）；ＤＬＶＳＧＳＳＲＬＹＤＹＷ（配列番号２７７）；ＭＧＲＴＮＹＧＶＩＹＤＰＮＭＹＮＹＷ（配列番号２７８）；ＳＧＷＲＬＣＲＰＴＤＥＹＤＹＬＹＷ（配列番号２７９）；ＳＱＡＰＩＴＩＡＴＭＭＫＰＦＹＤＹ（配列番号２８０）；ＲＨＧＧＰＬＴＶＥＹＦＦＤＹ（配列番号２８１）；ＧＧＷＫＹＣＳＧＹＤＰＥＹＩＹ（配列番号２８２）；ＤＷＹＬＮＳＹ（配列番号２８３）；ＩＮＳＲＤＧ（配列番号２８４）；およびＲＱＹ（配列番号２８５）。

【0054】

種々の代表的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
２ＬＩＧ２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＮＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＷＳＳＣＲＨＧＩＮ－ＥＹＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２８６）；
または
２ＬＩＧ３
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＨＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＦＰＴＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２８７）；
または
２ＬＩＧ１６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＲＷＮＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡ－ＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＰＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２８８）；
または
２ＬＩＧ２２
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＮＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＳＧＷＲＬＣＲＰＴＤＥＹＤＹＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２８９）；
または
２ＬＩＧ２７
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＶＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＴＰＴＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９０）；
または
２ＬＩＧ２９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡ－ＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９１）；
または
２ＬＩＧ３０
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＫＩＦＳＧＮＤＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＧＩＩＴＳＧＧＩＴＤＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＭＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＭＲＤＲＴＩＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９２）；
または
２ＬＩＧ３４
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＴＰＴＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９３）；
または
２ＬＩＧ３５
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＴＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡ－ＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９４）；
または
２ＬＩＧ４８
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＲＳＮＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡ－ＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＹＰＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９５）；
または
２ＬＩＧ６５
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＬＤＰＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９６）；
または
２ＬＩＧ８５
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＡＹＡＭＳＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＮＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＨＣＡＴＤＧＷＲＤＣＴＷＳＮＥＹＡＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９７）；
または
２ＬＩＧ８６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＧＳＤＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＶＲＤＮＡＱＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＶＴＧＷＲＴＣＲＧＬＮＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９８）；
または
２ＬＩＧ８９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＬＤＰＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号２９９）；
または
２ＬＩＧ９７
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＥＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＴＰＴＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３００）；
または
２ＬＩＧ９９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＴＰＡＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０１）；
または
２ＬＩＧ１０９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＫＴＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０２）；
または
２ＬＩＧ１２７
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＬＤＰＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＧＤＧＳＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＭＳＲＤＮＡＫＫＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０３）；
または
２ＬＩＧ１３９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＮＬＤＰＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０４）；
または
２ＬＩＧ１７６
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＳＩＦＳＩＥＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＦＧＧＧＦＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＮＲＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＤＬＶＳＧＳＳＲＬＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０５）；
または
２ＬＩＧ１８９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＫＩＦＳＧＮＤＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＧＩＩＴＳＧＧＩＴＤＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＭＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＭＲＤＲＴＩＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０６）；
または
３ＬＩＧ３
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＮＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＷＳＳＣＲＨＧＩＮＥＹＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０７）；
または
３ＬＩＧ７
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＹＹ－ＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０８）；
または
３ＬＩＧ８
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＴＩＦＳＩＮＲＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＴＳＤＧＴＰＴＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＫＴＶＳＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＶＳＳＧＶＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３０９）；
または
３ＬＩＧ９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１０）；
または
３ＬＩＧ１８
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＬＤＰＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＶＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＹＹＹＣＳＤＹＰＨＰＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１１）；
または
３ＬＩＧ２０
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＸＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＩＳＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＳＧＧＳＴＳＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＭＧＲＴＮＹＧＶＩＹＤＰＮＭＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１２）；
または
３ＬＩＧ２８
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＮＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＳＧＷＲＬＣＲＰＴＤＥＹＤＹＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１３）；
または
３ＬＩＧ２９
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＭＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＰＥＷＶＳＡＩＤＳＧＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＳＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１４）；
または
３ＬＩＧ３０
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＴＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＲＳＮＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＱＧＹＹＣＳＧＹＧＣＹＰＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１５）；
または
３ＬＩＧ３３
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＥＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＮＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＷＳＳＣＲＨＧＩＮＥＹＬＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１６）。

【0055】

種々の例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号８４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号８５）を含まない配列番号２８６～３１６（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＡＡＡリンカーを含まない配列番号２８６～３１６（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号８６）を含まない配列番号２８６～３１６（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0059】

種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＰＤ－Ｌ１結合物質の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0060】

種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含む標的化部分を含む。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれかに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含む標的化部分を含み得る。

【0061】

種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに関して１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに関して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。

【0062】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0063】

「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種類の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0064】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。

【0065】

本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。

【0066】

種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。

【0067】

種々の実施形態では、アミノ酸変異は、標的化部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってもよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、標的化部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってもよい。

【0068】

アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において、周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。

【0069】

種々の実施形態では、変異は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の能力を実質的に低下させず、さらにＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。

【0070】

種々の実施形態では、ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー型を含む）に対する本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）により特徴付けられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意のその他の天然のまたは合成類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に、約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫ_Ｄで結合する標的化部分を含む。

【0071】

種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、目的の抗原、すなわち、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を結合するが機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和）しない標的化部分を含む。例えば、種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の標的化部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害するかあるいは中和する）しない。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の標的化部分は、生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。

【0072】

種々の実施形態では、これらの結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合し、かつこれを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）。

【0073】

ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１種類または複数種類のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分および１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。

【0074】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それによりキメラまたは融合タンパク質の活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は野生型の形態で拮抗性であり、そのアンタゴニスト活性を弱める１つまたは複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１つまたは複数の変異も有する（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。

【0075】

したがって、種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の改変（例えば、変異）を有する改変された（変異した）型のシグナル伝達物質である。種々の実施形態では、変異は改変シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性のうちの１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変（例えば、変異）形態での同じシグナル伝達物質を比較して）、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。

【0076】

本明細書に記載のように、物質は、１つまたは複数の改変、例えば、変異により、向上した安全性を有し得る。種々の実施形態では、向上した安全性は、本キメラタンパク質がより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。

【0077】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する活性化作用を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするかあるいは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するアンタゴナイズ活性を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１つまたは複数の変異に起因して拮抗性であり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）、また、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１つまたは複数のその受容体に対するその結合親和性または活性を低減する、または１つまたは複数のその受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異も有する。

【0078】

いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数の標的化部分（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分）の結合により回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数の標的化部分の活性により実質的に回復可能でない。

【0079】

種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて、副作用におけるこの低減が観察される。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、標的化部分（単数または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。

【0080】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１つまたは複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがってより制御されたオンターゲット治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。

【0081】

いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、標的化部分（ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分または本明細書に記載の任意のその他の標的化部分）を用いて実質的に回復可能ではない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、標的化部分を用いて回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療作用部位から離れて治療キメラタンパク質を隔離するのを低減するかあるいは無くするので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償するための高用量の本発明のキメラタンパク質の必要性を無くする。このような投与量を低減する能力は、さらに副作用の可能性を低くする。

【0082】

種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数のその受容体に対し、シグナル伝達物質に、親和性、例えば、結合（例えば、Ｋ_Ｄ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、Ｋ_Ａおよび／またはＥＣ_５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、Ｋ_Ｉおよび／またはＩＣ_５０として測定可能である）を低減、実質的に低減、または除去する１つまたは複数の変異を含む。種々の実施形態では、免疫調節薬の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。

【0083】

改変シグナル伝達物質が１つの受容体に対し結合を低減しかつ第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。

【0084】

種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１つまたは複数の変異を含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体に対する標的化部分の結合親和性より低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにさせる１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体と標的化部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化されたオンターゲット効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。

【0086】

受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0087】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数である。

【0088】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えば、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＬ３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１－２２５；ａｎｄ Ｏｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４－２０）。

【0089】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。

【0090】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。

【0091】

本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において、周知である。したがって、種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0092】

種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のうちのいずれかのアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0093】

種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、本明細書の他の場所で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。種々の実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。

【0094】

本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１つまたは複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介される（例えば、アゴニズムまたはアンタゴニズム）受容体に対する低減された親和性および／または活性が存在する。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱状態の結果として）受容体に対する親和性および／または活性が実質的に低減または除去される変異を有する。改変シグナル伝達物質の受容体、例えば、本明細書に記載のサイトカイン、成長因子、およびホルモンのうちの１つの受容体は当技術分野において既知である。

【0095】

受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９１号および国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。治療受容体に対する親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0096】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質のＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの受容体、ＴＧＦベータ受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体に対する親和性および／または活性を低減させる１つまたは複数の変異を含む。

【0097】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において既知であり、限定されないが、ＩＬ２（ベータサブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、および同様に、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体が挙げられる。例示Ｉ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。

【0098】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種のサブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。この受容体ファミリーは、限定されないが、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、および組織因子に対する受容体を含む。例示ＩＩ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＩＦＮα受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮβ受容体、ＩＦＮγ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。

【0099】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通型構造を有し、シグナル伝達のためにＧタンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられる。代表的ケモカイン受容体には、限定されないが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。

【0100】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を作成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを取り囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。代表的腫瘍壊死因子受容体ファミリーとしては、下記が挙げられる：ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、破骨細胞分化抑制因子（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。ある実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）またはＴＮＦ－Ｒ１である。別の実施形態では、ＴＮＦＲファミリーメンバーは、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）またはＴＮＦ－Ｒ２である。

【0101】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦベータ受容体である。ＴＧＦベータ受容体は、１回膜貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦベータ受容体としては、限定されないが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられる。

【0102】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンとの構造的相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられる。

【0103】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当該技術分野において周知である。２０のサブファミリーに分類される約５８個の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在する。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、ＦＧＦ受容体およびそれらの種々のアイソフォーム、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられる。

【0104】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンαである。このような実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0105】

変異型のインターフェロンαは、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号３１７のアミノ酸配列を有するアレル型ＩＦＮα２ａである。

【0106】

ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号３１８（アミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａと異なる）のアミノ酸配列を有するアレル型のＩＦＮα２ｂである。

【0107】

いくつかの実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体（ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂ）は、位置１４４～１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３に、１つまたは複数のアミノ酸の変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５－３３に記載されている。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0108】

いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0109】

いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0110】

いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つまたは複数の変異を含む。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体は、野生型ＩＦＮα２活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮα２は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＡＲ２に対する活性は保持される。

【0111】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１つまたは複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能とする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１つまたは複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。

【0113】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0114】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＦＮβである。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはＩＦＮβのフラグメントを包含する。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、任意の種由来のＩＦＮβを包含する。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のマウスＩＦＮβを含む。ある実施形態では、キメラタンパク質は、改変型のヒトＩＦＮβを含む。ヒトＩＦＮβは、１６６個のアミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量を有するポリペプチドである。ヒトＩＦＮβのアミノ酸配列は、配列番号３１９である。

【0115】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβのグリコシル化型であるＩＦＮβ１ａである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮβは、Ｍｅｔ－１欠失およびＣｙｓ－１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトＩＦＮβであるＩＦＮβ１ｂである。

【0116】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、Ｉ９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、およびＲ１２４に１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、Ｉ９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、およびＲ１２４Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７ＧおよびＲ７１Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ８８ＧおよびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ９２Ｇ、Ｉ９５Ａ、およびＮ９６Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３ＧおよびＲ１２４Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、およびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、およびＹ９２Ｓ変異を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、およびＹ１５５Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ１５５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２ＧおよびＲ２７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２ＡおよびＲ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ１５１ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：Ｃ１７ＳまたはＣ１７Ａと組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。

【0119】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１つまたは複数の次の変異を有する：本明細書で記載の他のＩＦＮβ変異と組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。

【0120】

ヒトＩＦＮβの結晶構造は既知であり、Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ，９４（２２）：１１８１３－１１８１８に記載されている。特に、ヒトＩＦＮβの構造は、５つのαヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）およびこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ）を含むことが示された。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅヘリックスおよび／またはＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ中に、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減させる１つまたは複数の変異を有する。代表的変異は、国際公開第２０００／０２３１１４号および米国特許出願公開第２０１５００１１７３２号に記載されている。これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１５、１６、１８、１９、２２、および／または２３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置２８～３０、３２、および３３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置３６、３７、３９、および４２にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置６４および６７にアラニン置換を含み、位置６８にセリン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置７１～７３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置９２、９６、９９、および１００にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１２８、１３０、１３１、および１３４にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。代表的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１４９、１５３、１５６、および１５９にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0121】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0122】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＷ２２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ２７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0123】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0124】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0125】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ３２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ３５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0126】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0127】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0128】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ７１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0129】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0130】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0131】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＦ６７での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0132】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ８８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0133】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＩ９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0134】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0135】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＹ９２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＩ９５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＮ９６での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0136】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0137】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0138】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号１８８およびＫ１２３での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１２４での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0139】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0140】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0141】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＬ１５１での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0142】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0143】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＶ１４８での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0144】

いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号３１９およびＹ１５５での変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。

【0145】

いくつかの実施形態では、本発明は、（１）配列番号３１９のアミノ酸配列および位置Ｗ２２に変異を有し、変異は脂肪族疎水性残基である改変ＩＦＮβ；および（ｂ）１つまたは複数の標的化部分を含むキメラタンパク質に関し、上記標的化部分は、目的の抗原または受容体（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１）に特異的に結合する認識ドメインを含み、改変ＩＦＮβおよび標的化部分は、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、およびＶから選択される脂肪族疎水性残基である。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異はＧである。

【0146】

追加の代表的ＩＦＮβ変異体は、国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号で提供される。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0147】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0148】

ＩＦＮγは、ＩＩ型クラスのインターフェロンの唯一のメンバーである。ＩＦＮγは、主にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞により自然免疫応答の一部として産生される。ＩＦＮγは、ＣＤ４ Ｔｈ１およびＣＤ８細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エフェクターＴ細胞、マクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞によっても産生される。活性化されたＩＦＮγは、二量体を形成し、ＩＦＮγ受容体１およびＩＦＮγ受容体２サブユニットからなるヘテロダイマー受容体（すなわち、ＩＦＮγまたはＩＦＮγＲ）を介して作用する。ＩＦＮγ受容体１は、主要なリガンド結合サブユニットであり、一方、ＩＦＮγ受容体２は、シグナル伝達に必要であり、また、ＩＦＮγ受容体１のそのリガンドに対する親和性を高める。ＩＦＮγ二量体の受容体に対する結合は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路活性化し、種々の生物学的作用を誘発する。

【0149】

種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、改変型のＩＦＮγをシグナル伝達物質として含む。種々の実施形態では、ＩＦＮγは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはＩＦＮγのフラグメントを包含する。種々の実施形態では、ＩＦＮγは、任意の種由来のＩＦＮγを包含する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、改変型のマウスＩＦＮγを含む。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、改変型のヒトＩＦＮγを含む。

【0150】

ヒトＩＦＮγは、１６６個のアミノ酸残基を含むポリペプチドである。ある実施形態では、ヒトＩＦＮγは、配列番号３２０のアミノ酸配列を有する。

【0151】

本明細書で使用される場合、ヒトＩＦＮγはまた、Ｎ末端シグナルペプチドのない成熟ヒトＩＦＮγを指す。この実施形態では、成熟ヒトＩＦＮγは、１４３個のアミノ酸を含み、配列番号３２１のアミノ酸配列を有する。

【0152】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮγは、グリコシル化型のヒトＩＦＮγである。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮγは、非グリコシル化型のヒトＩＦＮγである。

【0153】

ＩＦＮγの配列は、当技術分野において既知である種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγの既知の野生型アミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0154】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、配列番号３２０のアミノ酸配列を有するヒトＩＦＮγと少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、配列番号３２１のアミノ酸配列を有するヒトＩＦＮγと少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0156】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。

【0157】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0158】

「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種類の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0159】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。

【0160】

本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。

【0161】

種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。

【0162】

種々の実施形態では、ＩＦＮγは、１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、変異は改変ＩＦＮγが、非変異型、例えば、野生型形態のＩＦＮγに比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性のうちの１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。例えば、非変異型、例えば、野生型のＩＦＮγに比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減した特定の生物活性などの１つまたは複数の弱められた活性は、ＩＦＮγ受容体などの治療受容体に対するものであり得る。結果として、種々の実施形態では、変異は、改変可溶性物質が、非変異型、例えば、野生型ＩＦＮγに比べて、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。

【0163】

種々の実施形態では、ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１およびＩＦＮγ受容体２サブユニットを含むＩＦＮγ受容体などの治療受容体に対するその結合親和性および／または活性を低減する変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、野生型ＩＦＮγにより与えられる活性は、治療受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型ＩＦＮγは、治療受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、治療受容体に対する活性化作用を低減するように改変されたＩＦＮγをもたらす。

【0164】

いくつかの実施形態では、治療受容体（例えば、ＩＦＮγ受容体）に対する低減された親和性および／または活性は、標的化部分の結合により回復可能である。他の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性および／または活性は、標的化部分への結合により実質的に回復され得ない。種々の実施形態では、本発明の治療キメラタンパク質は、ＩＦＮγが治療受容体に対する結合親和性および／または活性を弱める変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減する。種々の実施形態では、これは、例えば、野生型ＩＦＮγで観察される副作用を低減する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。

【0165】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγに、１つまたは複数の治療受容体（例えば、ＩＦＮγ受容体）に対して、弱められたまたは低減された親和性および／または活性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能な）を持たせる１つまたは複数の変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性および／または活性は、治療受容体からの活性および／またはシグナル伝達の減弱化を可能にする。

【0166】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１サブユニットに対するその結合または親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１サブユニットに対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１サブユニットに対する結合に関与するアミノ酸残基で１つまたは複数の変異を有するヒトＩＦＮγである。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１サブユニットとの境界に位置するアミノ酸で１つまたは複数の変異を有するヒトＩＦＮγである。種々の実施形態では、１つまたは複数の変異は、限定されないが、Ｑ１、Ｖ５、Ｅ９、Ｋ１２、Ｈ１９、Ｓ２０、Ｖ２２、Ａ２３、Ｄ２４、Ｎ２５、Ｇ２６、Ｔ２７、Ｌ３０、Ｋ１０８、Ｈ１１１、Ｅ１１２、Ｉ１１４、Ｑ１１５、Ａ１１８、Ｅ１１９、およびＫ１２５から選択されるアミノ酸の位置に存在する（それぞれ、Ｎ末端シグナル配列を欠いている野生型ヒトＩＦＮγである配列番号３２１を基準にして）。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｆ、Ｄ２４Ｇ、Ｇ２６Ｑ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される置換である（それぞれ、配列番号３２１を基準にして）。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異は、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ｄ２４Ｇ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される置換である。

【0167】

ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、変異Ａ２３ＧおよびＤ２４Ｇを含む。別の実施形態では、改変ＩＦＮγは、変異Ｉ１１４ＡおよびＡ１１８Ｇを含む。さらなる実施形態では、改変ＩＦＮγは、変異Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ａ２３Ｆ、およびＧ２６Ｑを含む。

【0168】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、１つまたは複数の次記変異を有する：残基Ａ２３の欠失、残基Ｄ２４の欠失、Ｓ２０Ｉ置換、Ａ２３Ｖ弛緩、Ｄ２１Ｋ置換およびＤ２４Ａ置換。

【0169】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体２サブユニットに対するその結合または親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異を有する。

【0170】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１およびＩＦＮγ受容体２サブユニットの両方に対するその結合または親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異を有する。

【0171】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１に対するその結合または親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異、およびＩＦＮγ受容体２に対する結合またはその親和性および／または生物活性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このような改変ＩＦＮγを有するキメラタンパク質は、標的選択的ＩＦＮγ受容体１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮγ受容体１活性は、標的化部分を介する標的化により回復可能である）。

【0172】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγ受容体１に対するその結合または親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異、およびＩＦＮγ受容体１に対する結合またはその親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このような改変ＩＦＮγを有するキメラタンパク質は、標的選択的ＩＦＮγ受容体１および／またはＩＦＮγ受容体１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮγ受容体１およびＩＦＮγ受容体２活性は、標的化部分を介する標的化により回復可能である）。

【0173】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、Ｃ末端で短縮化されている。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、Ｃ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。このような実施形態では、成熟ＩＦＮγは、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端短縮化を含み得る。ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、５個のアミノ酸のＣ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、７個のアミノ酸のＣ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、１４個のアミノ酸のＣ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、１５個のアミノ酸のＣ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。ある実施形態では、改変ＩＦＮγは、１６個のアミノ酸のＣ末端の欠失を有する配列番号３２１のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮγである。本発明で利用し得るＣ末端短縮化を有するさらなる改変ＩＦＮγは、Ｈａｅｌｅｗｙｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９９７），３２４：５９１－５９５およびＬｕｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．（１９９１）４：３３５－３４１に記載されている。これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0174】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、例えば、Ｒａｎｄａｌ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ９：１５５－１６３およびＲａｎｄａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．７：１０５７－１０６０に記載されているように、単鎖ＩＦＮγである。これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、単鎖ＩＦＮγは、Ｃ末端で第２のＩＦＮγ鎖のＮ－末端に連結された第１のＩＦＮγ鎖を含む。種々の実施形態では、第１と第２のＩＦＮγ鎖は、本明細書で他の場所で記載のように、リンカーにより連結される。

【0175】

いくつかの実施形態では、第１のＩＦＮγ鎖は、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端短縮化を含む。ある実施形態では、第１のＩＦＮγ鎖は、約２４個のアミノ酸残基のＣ末端短縮化を含む。いくつかの実施形態では、第２のＩＦＮγは、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、または約５個のアミノ酸残基のＮ末端短縮化を含む。ある実施形態では、第２のＩＦＮγ鎖は、約３個のアミノ酸残基のＮ末端短縮化を含む。いくつかの実施形態では、第２のＩＦＮγ鎖は、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端短縮化を含む。種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、本明細書の別の場所で記載のように、Ｑ１、Ｖ５、Ｅ９、Ｋ１２、Ｈ１９、Ｓ２０、Ｖ２２、Ａ２３、Ｄ２４、Ｎ２５、Ｇ２６、Ｔ２７、Ｌ３０、Ｋ１０８、Ｈ１１１、Ｅ１１２、Ｉ１１４、Ｑ１１５、Ａ１１８、Ｅ１１９、およびＫ１２５の位置に１つまたは複数のアミノ酸変異を有する。種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｆ、Ｄ２４Ｇ、Ｇ２６Ｑ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される１つまたは複数の置換を含む。種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ｄ２４Ｇ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される１つまたは複数の置換を含む。種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、Ａ２３ＧおよびＤ２４Ｇ置換を含む。種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、Ｉ１１４ＡおよびＡ１１８Ｇ置換を含む。別の実施形態では、変異は、Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ａ２３Ｆ、およびＧ２６Ｑである。

【0176】

種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、本明細書で開示の１つまたは複数の置換を含み、さらに第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、本明細書で開示のＣ末端短縮化を含む。

【0177】

種々の実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮγ鎖は、１つまたは複数の本明細書で開示の置換および本明細書で開示のＣ末端短縮化を含む。

【0178】

ヒトＩＦＮγの結晶構造は既知であり、例えば、Ｅａｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：６９８－７０２に記載されている。特に、ヒトＩＦＮγの構造は、６個のαヘリックスのコアおよびＣ末端領域における延長されたアンフォールド配列を含むことが示された。種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、治療受容体（例えば、ＩＦＮγ受容体）に対するその結合親和性および／または生物活性を低減する１つまたは複数のヘリックス中の１つまたは複数の変異を有する。

【0179】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、野生型ＩＦＮγに比較して、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の治療受容体（例えば、ＩＦＮγ受容体またはそのＩＦＮγ受容体１およびＩＦＮγ受容体２サブユニットのうちのいずれか１つ）に対する親和性および／または生物活性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性および／または生物活性は、野生型ＩＦＮγに比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。

【0180】

種々の実施形態では、改変ＩＦＮγは、例えば、野生型ＩＦＮγに比べて、ＩＦＮγの内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１つまたは複数の変異を含む。

【0181】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγは、ＩＦＮγに受容体に対する親和性および／または生物活性を低減させる１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮγの受容体に対する結合親和性および／または生物活性は、標的化部分のその受容体に対する結合親和性および／または生物活性より低い。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性の差異は、同じ細胞上の改変ＩＦＮγ／受容体と標的化部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性の差異は、改変ＩＦＮγが、局在化されたオンターゲット効果を有し、さらに野生型ＩＦＮγで観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。

【0182】

受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0183】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はコンセンサスインターフェロンである。コンセンサスインターフェロンは、いくつかのヒト非アレルＩＦＮαサブタイプの配列を走査し、それぞれ対応する位置で最も高頻度に観察されるアミノ酸を割り当てることにより、生成される。コンセンサスインターフェロンは、１６６個のアミノ酸のうちの２０個でＩＦＮα２ｂとは異なり（８８％相同性）、ＩＦＮβとの比較は、３０％を超えるアミノ酸位置で同一性を示す。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。

【0184】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２３のアミノ酸配列を含み、これは、配列番号３２２のアミノ酸配列とは、１つのアミノ酸だけ異なり、すなわち、配列番号３２３は、配列番号３２２の最初のメチオニン残基を欠いている。

【0185】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、改変型のコンセンサスインターフェロン、すなわち、コンセンサスインターフェロンバリアントをシグナル伝達物質として含む。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、機能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはコンセンサスインターフェロンのフラグメントを包含する。

【0186】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、同第５，５４１，２９３号、および同第８，４９６，９２１号で開示されるコンセンサスインターフェロンバリアントから選択される。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例えば、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、および同第５，５４１，２９３号で開示のような、ＩＦＮ－ＣＯＮ２またはＩＦＮＣＯＮ３のアミノ酸配列を含み得る。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮ－ＣＯＮ_２のアミノ酸配列、配列番号３２４を含む。

【0187】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮ－ＣＯＮ_３のアミノ酸配列、配列番号３２５を含む。

【0188】

ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第８，４９６，９２１号で開示のバリアントのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例えば、コンセンサスバリアントは、配列番号３２６のアミノ酸配列を含み得る。

【0189】

別の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み得る。

【0190】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ペグ化され得、すなわち、ＰＥＧ部分を含む。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号３２７のＳ１５６Ｃの位置で結合されたＰＥＧ部分を含み得る。

【0191】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変インターフェロンは、ヒトＩＦＮα２ａのバリアントであり、配列番号３２８の配列の位置４１の近傍へのＡｓｐの挿入により配列番号３２９が得られ（これはＩＦＮα２ａ配列に対する配列の再番号割当をもたらす）、次の変異Ａｒｇ２３Ｌｙｓ、Ｌｅｕ２６Ｐｒｏ、Ｇｌｕ５３Ｇｌｎ、Ｔｈｒ５４Ａｌａ、Ｐｒｏ５６Ｓｅｒ、Ａｓｐ８６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１０４Ｔｈｒ、Ｇｌｙ１０６Ｇｌｕ、Ｔｈｒ１１０Ｇｌｕ、Ｌｙｓ１１７Ａｓｎ、Ａｒｇ１２５Ｌｙｓ、およびＬｙｓ１３６Ｔｈｒを有する。コンセンサスインターフェロンについて記載する本明細書の全ての実施形態は、同様に、この遺伝子改変インターフェロンに該当する。

【0192】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。

【0193】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0194】

種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。

【0195】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、１つまたは複数の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、変異はコンセンサスインターフェロンバリアントが、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロン（例えば、配列番号３２５または３２６のアミノ酸配列を有するコンセンサスインターフェロン）に比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性のうちの１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。例えば、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロンに比べて、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減した特定の生物活性などの１つまたは複数の弱められた活性は、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するものであり得る。結果として、種々の実施形態では、変異は、コンセンサスインターフェロンバリアントが、非変異型、例えば、野生型のコンセンサスインターフェロンに比べて、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。

【0196】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減する変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンにより与えられる活性は、治療受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、コンセンサスインターフェロンは、治療受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、治療受容体に対し低減された活性化作用を有するコンセンサスインターフェロンバリアントをもたらす。

【0197】

いくつかの実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性または活性は、標的化部分の結合により回復可能である。他の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性または活性は、標的化部分への結合により実質的に回復され得ない。種々の実施形態では、本発明の治療Ｆｃベースキメラタンパク質は、コンセンサスインターフェロンバリアントが、治療受容体に対する結合親和性または活性を弱める変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、これは、例えば、野生型コンセンサスインターフェロンで観察される副作用を低減する。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。

【0198】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、コンセンサスインターフェロンバリアントが、１つまたは複数の治療受容体に対する弱められたまたは低減された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能な）を有するようにさせる１つまたは複数の変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性は、治療受容体からの活性および／またはシグナル伝達の減弱化を可能にする。

【0199】

種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。一実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。

【0200】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１活性は、標的化部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。

【0201】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異、およびＩＦＮＡＲ１に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質は、標的選択的ＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ２活性は、標的化部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。

【0202】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する１つまたは複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなコンセンサスインターフェロンバリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２活性は、標的化部分、例えば、ＳＩＲＰαを介する標的化により回復可能である）。

【0203】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２６を基準にして、位置１４５～１５５、例えば、アミノ酸位置１４９、１５０および／または１５４に、１つまたは複数のアミノ酸の変異を有するように改変されている。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２６を基準にして、位置１４５～１５５、例えば、アミノ酸位置１４９、１５０および／または１５４に、１つまたは複数のアミノ酸の変異を有するように改変され、場合により、置換は疎水性であり、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから選択される。いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロン変異体は、配列番号３２３を基準にして、Ｍ１４９Ａ、Ｒ１５０Ａ、およびＬ１５４Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む。

【0204】

いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２３を基準にして、アミノ酸位置１２１（すなわち、Ｋ１２１）に変異を有するように改変されている。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号３２３を基準にして、Ｋ１２１Ｅ変異を含む。

【0205】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理学的であるが病的でもある血管新生において重要な役割を果たし、血管透過性を調節し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞に対して成長因子として作用できる、強力な成長因子である。さらなる機能は、特に、マクロファージ系統および内皮細胞の細胞遊走の刺激を含む。少なくとも３個の受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３）に加えて、ＶＥＧＦ成長因子ファミリーのいくつかのメンバーが存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、２種以上のＶＥＧＦＲタイプを結合し活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を結合し、一方、ＶＥＧＦ－Ｃは、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３を結合できる。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２活性化は、血管新生を調節し、ＶＥＧＦＲ３活性化は、リンパ脈管新生に関与する。大部分の血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ２の活性化から生成される。ＶＥＧＦＲ１活性化は、血管新生の負の役割と関連する可能性があることが報告された。ＶＥＧＦＲ１シグナル伝達は、腫瘍の骨髄由来ＶＥＧＦＲ１陽性細胞を介したインビボ進行にも重要である（骨中の転移前微小環境の形成の一因となる）ことも報告された。治療抗体を指向する／治療抗体を中和するＶＥＧＦ－Ａをベースにしたいくつかの治療法が、主に、血管新生に依存する種々のヒト腫瘍の治療での使用のために開発されてきた。しかし、これらは、副作用がないわけではない。これは、これらが一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると驚くべきことではない。従って、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管系内皮細胞）に対するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ）／ＶＥＧＦＲ２阻害を制限することが望ましいであろう。

【0206】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－ＥおよびＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１２１ｂ、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１６５ｂ、ＶＥＧＦ_１８９、およびＶＥＧＦ_２０６などの種々のＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームを含むこれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷治癒方法または虚血関連疾患の治療で使用される（理論に束縛されることを意図するものではないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ２の効果により媒介されて）。種々の実施形態では、癌および炎症促進性活性と関連するＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合が回避される。種々の実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）は、デコイ受容体として機能し、そのため、この受容体に対する親和性を実質的に低減または除去し、治療薬の隔離を回避する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0207】

血管新生促進治療法はまた、種々の疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）において重要であり、ＶＥＧＦベース治療薬を含む。ＶＥＧＦＲ２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞上で作用する）。ＶＥＧＦＲ１は、炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を生じ、血管過多透過性に関連する炎症をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ１の活性化はまた、腫瘍微小環境形成に関連する骨髄を活性化できる。従って、ＶＥＧＦＲ２活性化に対し選択性があるＶＥＧＦベース治療薬は、この場合には望ましいであろう。さらに、例えば、内皮細胞を特異的に標的とする細胞が望ましいであろう。

【0208】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的な）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合する標的化部分を介して腫瘍血管系内皮細胞を標的にする場合、このような構築物は、このようなマーカー陽性細胞上で特異的にＶＥＧＦＲ２活性化を阻害するが、標的細胞へ向かう途上および標的細胞上では（活性が除去された場合）ＶＥＧＦＲ１を活性化せず、従って、例えば、炎症反応の誘導を無くする。これは、ＶＥＧＦ－Ａ中和療法に比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生薬療法を提供することになろう。

【0209】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞への標的化により、いくつかの実施形態では、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ１が関連する炎症反応誘導を生じることなく、血管新生を促進する。従って、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ２ならびにＶＥＧＦＲ１の全身性活性化に起因する副作用の実質的に低減されたリスクを有する、標的化血管新生促進効果を有するであろう。

【0210】

ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号３３０のアミノ酸を有するＶＥＧＦ_１６５である。

【0211】

別の例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号３３１のアミノ酸配列を有するＶＥＧＦ_１６５ｂである。

【0212】

これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸Ｉ８３に変異を有する（例えば、Ｉ８３での置換変異、例えば、Ｉ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、またはＩ８３Ｈ）。理論に束縛されることを意図するものではないが、このような変異は、低減された受容体結合親和性を生じ得ると考えられている。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0213】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦαである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）上の２つの別々の膜受容体に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。受容体活性化に応答して、全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた、ＴＮＦＲ１と同様に、多様な作用に関連し、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦ標的化および活性に対する制御が重要であることに留意されたい。

【0214】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって、癌の治療法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の治療のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦα物質を含む。

【0215】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異のみを有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の治療において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴ_ｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってインビボでのＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに支持する。

【0216】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔ_ｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。

【0217】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦにより）自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、ＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により、変更されたアポトーシス／生存シグナルを有する。いくつかの実施形態では、キメラは、細胞死（アポトーシス）／生存シグナル特性の不均衡の根底にある、ＮＦκＢ経路での損傷または変更および、場合により特定の死誘導シグナルに対する変更された感受性（例えば、ＴＮＦＲ２活性化）を有する自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。

【0218】

いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースキメラは、種々の自己免疫疾患、特に、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む疾患に対する追加の治療用途を有する。

【0219】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、配列番号３３２のアミノ酸配列を有する。

【0220】

このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0221】

いくつかの実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変ヒトＴＮＦα部分は、アミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、Ａ１４５、およびＥ１４６のうちの１つまたは複数に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ ＧＩ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９Ｓ、Ｒ３２Ｇ、Ｒ３２Ｗ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｓ８６Ｔ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｙ８７Ｈ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、Ｅ１４６Ｋ、およびＳ１４７Ｄから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆ、およびＹ８７Ｈから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｅ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７ＨおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＳ８６Ｔ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２ＷおよびＥ１４６Ｋ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｌ２９ＳおよびＲ３２Ｗ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｄ１４３ＮおよびＡ１４５Ｒ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ａ１４５Ｔ、およびＳ１４７Ｄ変異を有する。

【0222】

いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、改変ＴＮＦα物質は、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１つまたは複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0223】

いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のような受容体選択性をもたらす変異を有する。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６のうちの１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｒ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７のうちの１つまたは複数に対するものである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄのうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄのうちの１つまたは複数である。

【0224】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ＬＴβ（ＬＴα１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0225】

ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、配列番号３３３のアミノ酸配列を有する。

【0226】

このような実施形態では、改変可溶性物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６～１１３に変異を含み得、これが、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変可溶性物質は、アミノ酸位置１０６～１１３に１つまたは複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変可溶性物質は、位置１０６～１１３に、約１～約３個のアミノ酸の挿入を有する。

【0227】

いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、単鎖トリマー型であり得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0228】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。

【0229】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。

【0230】

ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、配列番号３３４のアミノ酸配列を有する。

【0231】

このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０、Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４およびＨ２７０～Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング；上記参照）。

【0232】

いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ２に特異的に結合し得る。代表的変異は、アミノ酸位置Ｙ１８９、Ｒ１９１、Ｑ１９３、Ｈ２６４、Ｉ２６６、およびＤ２６７のうちの１つまたは複数に変異を含む。例えば、変異は、Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６ＬおよびＤ２６７Ｑのうちの１つまたは複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｙ１８９Ｑ、Ｒ１９１Ｋ、Ｑ１９３Ｒ、Ｈ２６４Ｒ、Ｉ２６６ＬおよびＤ２６７Ｑを含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２に対するその親和性および／または活性を実質的に低減する１つまたは複数の変異を含み得る。このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＴＲＩＬ－Ｒ１に特異的に結合し得る。代表的変異には、アミノ酸位置Ｇ１３１、Ｒ１４９、Ｓ１５９、Ｎ１９９、Ｋ２０１、およびＳ２１５のうちの１つまたは複数の変異が挙げられる。例えば、変異は、Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄのうちの１つまたは複数であり得る。ある実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、変異Ｇ１３１Ｒ、Ｒ１４９Ｉ、Ｓ１５９Ｒ、Ｎ１９９Ｒ、Ｋ２０１Ｈ、およびＳ２１５Ｄを含む。さらなるＴＲＡＩＬ変異は、例えば、Ｔｒｅｂｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１０３５に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0234】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦαである。このような実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0235】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＧＦβである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、これは、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を選択する。同様に、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＬＡＰは、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、このようなキメラは、カムラチ・エンゲルマン病、または不適切なＴＧＦβシグナル伝達に関連する他の疾患において使用される。

【0236】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３のうちの１つまたは複数に対し、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３のうちの１つまたは複数に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0237】

いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0238】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１αまたはＩＬ１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ１物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって、治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。

【0239】

ある実施形態では、野生型ＩＬ１βは、配列番号３３５のアミノ酸配列を有する。

【0240】

ＩＬ１は、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、ＩＦＮγおよびＩＬ４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ１はまた、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８^＋ Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ１受容体は、ＩＬ１Ｒ１およびＩＬ１Ｒ２を含む。ＩＬ１Ｒ１への結合およびＩＬ１Ｒ１を介したシグナル伝達は、それによりＩＬ１が多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。ＩＬ１Ｒ２は、デコイ受容体として機能でき、それにより、ＩＬ１Ｒ１を介した相互作用およびシグナル伝達のためのＩＬ１の利用可能性を減らす。

【0241】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果としての必要なＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を治療する方法で使用される。

【0242】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、ＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達は回復可能でなく、また、ＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果として必要とされるＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法で使用される。

【0243】

このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２～５４の欠失を有し、これは、Ｉ型ＩＬ１Ｒに対して、低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ１βを産生する。例えば、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１つまたは複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、ＧＩ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ１β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１つまたは複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。

【0244】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαおよび／またはＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変ＩＬ２がＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対し拮抗的である場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８^＋ Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴ_ｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ２ＲαよりもＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのＩＬ２副作用を回避させる。また、ＩＬ２ベースキメラは、例えば、改変ＩＬ２が、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対してアンタゴニスト（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）である場合、自己免疫疾患の治療に有用である。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８^＋ Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴ_ｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔ_ｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫障害の治療に使用される。

【0245】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞を指向する本明細書に記載の標的化部分を有し、改変ＩＬ２物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ２Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞活性を標的とし、通常、Ｔ_ｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ２に比べて、高められた免疫刺激効果を有し（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）、一方で、ＩＬ２に関連する全身毒性を除去または低減する。

【0246】

ある実施形態では、野生型ＩＬ２は、配列番号３３６のアミノ酸配列を有する。

【0247】

このような実施形態では、改変ヒトＩＬ２物質は１つまたは複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２の位置（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２の位置（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５の位置（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）に有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ２物質は、野性型ＩＬ２と比べて、高親和性ＩＬ２受容体に対して低減された親和性を有し、中間的親和性ＩＬ２受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられる。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0248】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、およびＥ６２に１つまたは複数の変異を有する。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａのうちの１つまたは複数を含み得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｃ１２５で変異を含み得る。例えば、Ｃ１２５Ｓであってよい。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、Ｃａｒｍｅｎａｔｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９０：６２３０－６２３８に記載されているように、ＩＬ２Ｒαに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含むが、Ｔｒｅｇ細胞を含まない、エフェクター細胞の増殖を誘導できる。いくつかの実施形態では、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、および／またはＥ６２に変異を有する改変ＩＬ２物質は、野生型ＩＬ２物質よりも少ない毒性である。ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、腫瘍学において用途が見出され得る。

【0249】

他の実施形態では、改変ＩＬ２物質は、例えば、国際公開第２０１６／０２５３８５号に記載されているように、ＩＬ２Ｒβに対して実質的に低減された親和性および／または活性を有し得る。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導し得るが、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞の増殖を誘導し得ない。ＩＬ２Ｒβに対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を含むキメラタンパク質は、例えば、自己免疫疾患の治療で用途が見出され得る。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ２物質は、アミノ酸位置Ｎ８８、Ｄ２０、および／またはＡ１２６に１つまたは複数の変異を有し得る。例えば、改変ＩＬ２物質は、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆのうちの１つまたは複数を含み得る。

【0250】

種々の実施形態では、改変ＩＬ２物質は、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を含み得る。例えば、変異は、Ｄ１０９ＣまたはＣ１２５Ｓであってよい。いくつかの実施形態では、Ｄ１０９またはＣ１２５に変異を有する改変ＩＬ２は、ＰＥＧ部分への結合のために利用され得る。

【0251】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。

【0252】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ４を特異的に結合する。２型ＩＬ４受容体は、ＩＬ１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0253】

ある実施形態では、野生型ＩＬ４は、配列番号３３７のアミノ酸配列を有する。

【0254】

このような実施形態では、改変ＩＬ４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ４物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持するが、その他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0255】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ６である。ＩＬ６は、リガンド結合ＩＬ６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ６はまた、可溶性型のＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）にも結合し得、これは、ＩＬ６Ｒの細胞外の部分である。ｓＩＬ６Ｒ／ＩＬ６複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し、したがって、再ミエリン化による神経再生に重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0256】

ある実施形態では、野生型ＩＬ６は、ＩＬ６（成熟型、野生型）（配列番号３３８）のアミノ酸配列を有する。

【0257】

このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ６物質は、ＩＬ６Ｒαに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0258】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0259】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0260】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0261】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）およびＩＬ１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）またはＩＬ１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0262】

ある実施形態では、野生型ＩＬ１３は、ＩＬ１３（成熟型、野生型）（配列番号３３９）のアミノ酸配列を有する。

【0263】

このような実施形態では、改変ＩＬ１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１つまたは複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0264】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ１８Ｒα２型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0265】

ある実施形態では、野生型ＩＬ１８は、ＩＬ１８（野生型）（配列番号３４０）のアミノ酸配列を有する。

【0266】

このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ１８物質は、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ１２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１つまたは複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、ＧＩ：５４６９６６５０、ヒトＩＬ１８配列に基づいてナンバリング）。

【0267】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。

【0268】

ある実施形態では、野生型ＩＬ３３は、配列番号３４１のアミノ酸配列を有する。

【0269】

このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ３３物質は、Ｉ１１３～Ｙ１２２、Ｓ１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７およびＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１つまたは複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。

【0270】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、強力な成長因子のファミリーである。メンバーは、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものを含む。ＥＧＦファミリー受容体は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を含む。これらは、ホモダイマーおよび／またはヘテロダイマー受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、種々の受容体サブタイプに対して、他と異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロダイマーサブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは、類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４と結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負方向への調節は、大きな治療上の観点から関心がもたれている。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、ＥＧＦＲシグナル伝達が主要な成長促進シグナルを構成する種々の癌の治療で関心がもたれている。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定されないが、放射線療法を含む種々の癌療法の主要な副作用）における治療上の観点から関心が持たれている。

【0271】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４のうちの１つまたは複数に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、その受容体の活性が、弱められる様式でアンタゴナイズされる。このような実施形態は、例えば、癌の治療で使用される。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であるが－大抵の場合、副作用があり、その理由は、それらがあまり選択的でないためである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、弱められた拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達は、ＥＧＦの受容体を標的とする他の物質より、オンターゲットであり、少ない副作用を有する。

【0272】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対し実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。標的化部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１つまたは複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が達成されるであろう－阻害関連副作用に関連する可能性のある他の受容体サブタイプを関与させず。従って、身体中の全ての細胞型のＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、このような構築物は、副作用の低減された細胞選択的（例えば、受容体の増幅、過剰発現などよる活性化ＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物作用を提供するであろう。

【0273】

いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用する他のサブタイプに対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。標的化部分を介した特定の標的細胞に対する標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。このような構築物は、いくつかの実施形態では、副作用が低減された創傷の治療（創傷治癒の促進）、特に慢性状態の治療および治療薬局所投与以外の適用（例えば、全身性創傷治癒）のために使用される。

【0274】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体に対する弱められた応答は、糖尿病、肥満症、代謝障害などの制御を可能にし、同時に、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体から離すことにより、癌促進性作用を回避する。

【0275】

ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子－Ｉまたはインスリン様増殖因子－ＩＩ（ＩＧＦ１またはＩＧＦ２）である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＧＦ１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が、弱められる形式でアンタゴナイズされることを可能にする。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨げない。種々の実施形態では、これは、癌治療に適用される。種々の実施形態では、本物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療に対し耐性を生じるのを防止し得る。

【0276】

一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のうちのいずれかの改変または変異シグナル伝達物質と共に、（ｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分および（ｉｉ）腫瘍細胞を指向する標的化部分を有する。

【0277】

一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のうちのいずれかの改変または変異インターフェロンと共に、（ｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤マーカーを指向する標的化部分を有する。

【0278】

種々の実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１３５９－６５、に開示のものを含む。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、細胞型特異的に細胞死を誘導するのに利用し得る。このような実施形態では、毒素は改変されて、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載のように、効果を弱めるために毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。

【0279】

シグナル伝達物質との多重特異的キメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書に記載の１種類または複数種類のシグナル伝達物質および／または１つまたは複数の追加の標的化部分のキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、１種類または複数種類のシグナル伝達物質およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分および／または１つまたは複数の追加の標的化部分を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。

【0280】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、多重特異的であり、すなわち、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、２つ以上の標的、例えば、抗原、または受容体、またはエピトープを認識して結合する認識ドメインを有する２つ以上の標的化部分を有する。このような実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、同じ抗原上または異なる抗原上の２個以上のエピトープを認識して結合する認識ドメインを有する２つ以上の標的化部分を含み得る。種々の実施形態では、このような多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、向上した結合力および／または改善された選択性などの有利な性質を示す。ある実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、２つの標的化部分を含み、二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上の２個のエピトープに結合し、それを認識する。

【0281】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、それぞれの標的化部分が本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である２つ以上の標的化部分を含む。ある実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種類のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを含む１種類の抗体または抗体誘導体を含む。

【0282】

種々の実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、異なる抗原または受容体を標的とする２つ以上の標的化部分を有し、１つの標的化部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、標的化部分はその抗原または受容体を低親和性または結合力で結合する（例えば、その他の標的化部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で結合することを含み、例えば、結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えば、より低い親和性または結合力の標的化部分はその抗原または受容体に中～高ｎＭまたは低～中μＭの範囲のＫ_Ｄで結合し得るが、より高い親和性または結合力の標的化部分は、中～高ｐＭまたは低～中ｎＭの範囲のＫ_Ｄで結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、無差別の抗原または受容体を指向する減弱化標的化部分を含み、これは、目的の細胞に対する標的化を改善し（例えば、その他の標的化部分を介して）かつ治療用の標的にされないものを含む、複数細胞型間にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で無差別の抗原または受容体に結合することによる）。

【0283】

本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、当該技術分野において既知の方法を使用して構築し得る。例えば、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、例えば、アミノ酸残基と、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４，１５１７－１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のような有機誘導体化試薬とを反応させることにより、化学架橋により構築され得る。別の例示的実施形態では、２つ以上の標的化部分を含む多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、遺伝子融合、すなわち、個別の標的化部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする、単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、国際公開第９６／３４１０３号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、リンカーを用いて構築され得る。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結され得る（または逆もまた同様）。使用し得る代表的リンカーは、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の成分は、リンカーを使用せずに、相互に直接連結される。

【0284】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１および１つまたは複数の免疫細胞上に見つけた１つまたは複数の抗原を認識して、それらに結合する。免疫細胞には、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含め得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、直接または間接的に１つまたは複数の免疫細胞を効果的に動員する。

【0285】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１および腫瘍細胞上に見つけた１つまたは複数の抗原を認識して、それらに結合する。これらの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、免疫細胞を直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞（例えば、ＣＴＬ）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。

【0286】

いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞のバランスを変化させることができ、または免疫細胞のバランスを変化させることを含む方法において使用される。例えば、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、臨床的に重要な部位の免疫細胞の比率を、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、好中球、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。

【0287】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、腫瘍細胞を直接または間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１つまたは複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、腫瘍およびＣＤ８陽性免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上で、それらのそれぞれの抗原と相互作用する２つの標的化部分によって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に直接または間接的に動員する。

【0288】

腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびにその他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群と関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0289】

腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。

【0290】

腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの腫瘍抗原を結合する標的化部分を含む。

【0291】

いくつかの実施形態では、存在する多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍細胞上のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１ならびに抗原を認識し、それに結合する。

【0292】

種々の実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とする標的化部分を有する。

【0293】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、Ｔ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、直接または間接的にＴ細胞を動員する。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＯ^＋）；ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；ＣＤ８^＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ１５Ｒ^＋）；ＣＤ６２Ｌ^＋ エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ ＣＤ６２Ｌ^－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^－ ＣＤ６２Ｌ^－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８^＋ エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（^＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（^－）ＣＤ２５（^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋およびＣＣＲ５^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ１２Ｒ^＋、ＩＦＮγＲ^＋、ＣＸＣＲ３^＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋およびＣＣＲ８^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ４Ｒ^＋、ＩＬ３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ１Ｒ^＋）；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ^＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（^－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ２、ＩＬ４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。

【0294】

目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ１３Ｒα１、ＩＬ１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的Ｔ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。

【0295】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるＣＤ８に対する標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0296】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＣＤ８に対するＶＨＨを含む。

【0297】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号３４２または配列番号３４３から選択される。

【0298】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号３４４または配列番号３４５から選択される。

【0299】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号３４６または配列番号３４７または配列番号３４８から選択される。

【0300】

種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、次の配列：Ｒ３ＨＣＤ２７（配列番号３４９）またはＲ３ＨＣＤ１２９（配列番号３５０）またはＲ２ＨＣＤ２６（配列番号３５１）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0301】

種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、後述のようにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。

【0302】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号３５２～配列番号４２０から選択される。

【0303】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号４２１～配列番号４８９から選択される。

【0304】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号４９０～配列番号５５８から選択される。

【0305】

種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、１ＣＤＡ７（配列番号５５９）または１ＣＤＡ１２（配列番号５６０）または１ＣＤＡ１４（配列番号５６１）または１ＣＤＡ１５（配列番号５６２）または１ＣＤＡ１７（配列番号５６３）または１ＣＤＡ１８（配列番号５６４）または１ＣＤＡ１９（配列番号５６５）または１ＣＤＡ２４（配列番号５６６）または１ＣＤＡ２６（配列番号５６７）または１ＣＤＡ２８（配列番号５６８）または１ＣＤＡ３７（配列番号５６９）または１ＣＤＡ４３（配列番号５７０）または１ＣＤＡ４５（配列番号５７１）または１ＣＤＡ４７（配列番号５７２）または１ＣＤＡ４８（配列番号５７３）または１ＣＤＡ５８（配列番号５７４）または１ＣＤＡ６５（配列番号５７５）または１ＣＤＡ６８（配列番号５７６）または１ＣＤＡ７３（配列番号５７７）または１ＣＤＡ７５（配列番号５７８）または１ＣＤＡ８６（配列番号５７９）または１ＣＤＡ８７（配列番号５８０）または１ＣＤＡ８８（配列番号５８１）または１ＣＤＡ８９（配列番号５８２）または１ＣＤＡ９２（配列番号５８３）または１ＣＤＡ９３（配列番号５８４）または２ＣＤＡ１（配列番号５８５）または２ＣＤＡ５（配列番号５８６）または２ＣＤＡ２２（配列番号５８７）または２ＣＤＡ２８（配列番号５８８）または２ＣＤＡ６２（配列番号５８９）または２ＣＤＡ６８（配列番号５９０）または２ＣＤＡ７３（配列番号５９１）または２ＣＤＡ７４（配列番号５９２）または２ＣＤＡ７５（配列番号５９３）または２ＣＤＡ７７（配列番号５９４）または２ＣＤＡ８１（配列番号５９５）または２ＣＤＡ８７（配列番号５９６）または２ＣＤＡ８８（配列番号５９７）または２ＣＤＡ８９（配列番号５９８）または２ＣＤＡ９１（配列番号５９９）または２ＣＤＡ９２（配列番号６００）または２ＣＤＡ９３（配列番号６０１）または２ＣＤＡ９４（配列番号６０２）または２ＣＤＡ９５（配列番号６０３）または３ＣＤＡ３（配列番号６０４）または３ＣＤＡ８（配列番号６０５）または３ＣＤＡ１１（配列番号６０６）または３ＣＤＡ１８（配列番号６０７）または３ＣＤＡ１９（配列番号６０８）または３ＣＤＡ２１（配列番号６０９）または３ＣＤＡ２４（配列番号６１０）または３ＣＤＡ２８（配列番号６１１）または３ＣＤＡ２９（配列番号６１２）または３ＣＤＡ３１（配列番号６１３）または３ＣＤＡ３２（配列番号６１４）または３ＣＤＡ３３（配列番号６１５）または３ＣＤＡ３７（配列番号６１６）または３ＣＤＡ４０（配列番号６１７）または３ＣＤＡ４１（配列番号６１８）または３ＣＤＡ４８（配列番号６１９）または３ＣＤＡ５７（配列番号６２０）または３ＣＤＡ６５（配列番号６２１）または３ＣＤＡ７０（配列番号６２２）または３ＣＤＡ７３（配列番号６２３）または３ＣＤＡ８３（配列番号６２４）または３ＣＤＡ８６（配列番号６２５）または３ＣＤＡ８８（配列番号６２６）または３ＣＤＡ９０（配列番号６２７）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0306】

種々の代表的実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号８４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0307】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号８５）を含まない配列番号５５９～６２７（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0308】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、ＡＡＡリンカーを含まない配列番号５５９～６２７（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0309】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号８６）を含まない配列番号５５９～６２７（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号に記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号の表０．１、表０．２、表０．３、および／または図１Ａ～１２Ｉに記載のアミノ酸配列を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８標的化部分は、配列番号６２８、配列番号６２９、または配列番号６３０で提供される、配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ１および／または配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ２および／または配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ３および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ１および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ２および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ３を含む。

【0310】

種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣＤ８を指向する標的化部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＣＤ８を指向する標的化部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0311】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、Ｂ細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的にＢ細胞を動員する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的Ｂ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。

【0312】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ナチュラルキラー細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞を、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的に動員する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｒ１ａｌｐｈａ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的ＮＫ細胞抗原を結合する標的化部分を含む。

【0313】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、マクロファージ／単球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージ／単球を直接または間接的に、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に動員する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－ｇａｎｎｎａＲ２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－１ＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ ４、ＩＬ１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌ ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲ１／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ－１が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的マクロファージ／単球抗原を結合する標的化部分を含む。

【0314】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、樹状細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に樹状細胞を動員する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ１２／Ｉ Ｌ２３ｐ４０、４－アミノ－１，８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ Ｒｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＥＣ２０５、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＤＥＣ２０５、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的ＤＣ抗原を結合する標的化部分を含む。

【0315】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるＣｌｅｃ９Ａに対する標的化部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を意味する。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。

【0316】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つを含む可変ドメインを有するＣｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨを含む。

【0317】

例示的実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号６３１～配列番号６５０から選択される。

【0318】

例示的実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号６５１～配列番号６７２から選択される。

【0319】

例示的実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号６７３～配列番号６８７；またはＬＧＲ；またはＶＩＫから選択される。

【0320】

種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：Ｒ２ＣＨＣＬ８（配列番号６８８）；Ｒ１ＣＨＣＬ５０（配列番号６８９）；Ｒ１ＣＨＣＬ２１（配列番号６９０）；Ｒ２ＣＨＣＬ８７（配列番号６９１）；Ｒ２ＣＨＣＬ２４（配列番号６９２）；Ｒ２ＣＨＣＬ３８（配列番号６９３）；Ｒ１ＣＨＣＬ１６（配列番号６９４）；Ｒ２ＣＨＣＬ１０（配列番号６９５）；Ｒ１ＣＨＣＬ３４（配列番号６９６）；Ｒ１ＣＨＣＬ８２（配列番号６９７）；Ｒ２ＣＨＣＬ３（配列番号６９８）；Ｒ２ＣＨＣＬ６９（配列番号６９９）；Ｒ１ＣＨＣＬ５６（配列番号７００）；Ｒ２ＣＨＣＬ３２（配列番号７０１）；Ｒ２ＣＨＣＬ４９（配列番号７０２）；Ｒ２ＣＨＣＬ５３（配列番号７０３）；Ｒ２ＣＨＣＬ２２（配列番号７０４）；Ｒ２ＣＨＣＬ２５（配列番号７０５）；Ｒ２ＣＨＣＬ１８（配列番号７０６）；Ｒ１ＣＨＣＬ２３（配列番号７０７）；Ｒ１ＣＨＣＬ２７（配列番号７０８）；Ｒ２ＣＨＣＬ１３（配列番号７０９）；Ｒ２ＣＨＣＬ１４（配列番号７１０）；Ｒ２ＣＨＣＬ４２（配列番号７１１）；Ｒ２ＣＨＣＬ４１（配列番号７１２）；Ｒ２ＣＨＣＬ９４（配列番号７１３）；またはＲ２ＣＨＣＬ２７（配列番号７１４）。

【0321】

種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、後述のように少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。

【0322】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、配列番号７１５～配列番号７８０から選択される。

【0323】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、配列番号７８１～配列番号８４６から選択される。

【0324】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、配列番号８４７～配列番号９１２から選択される。

【0325】

種々の例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、次記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：１ＬＥＣ７（配列番号９１３）。

【0326】

種々の例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＨＨＨＨＨＨ：配列番号８４）を含まない上記配列のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

【0327】

いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、ＨＡタグ（すなわち、ＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ；配列番号８５）を含まない配列番号９１３～９７８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0328】

いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、ＡＡＡリンカーを含まない配列番号９１３～９７８（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0329】

いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分は、ＡＡＡリンカー、ＨＡタグ、および末端ヒスチジンタグ配列（すなわち、ＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号８６）を含まない配列番号９１３～９７８（上記で提供）から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0330】

ある実施形態では、標的化部分は、Ｔｕｌｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１６；１（７）：ｅ８７１０２で開示の抗Ｃｌｅｃ９Ａ抗体を含む。この文献の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0331】

種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣｌｅｃ９Ａを指向する標的化部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａを指向する標的化部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0332】

種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を含む標的化部分を含む。例えば、キメラタンパク質は、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）であるアミノ酸配列を含む標的化部分を含み得る。

【0333】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球から選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）を特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つまたは複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に動員する。

【0334】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、巨核球および／または血小板関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的巨核球および／または血小板抗原を結合する標的化部分を含む。

【0335】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、赤血球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの例示的赤血球抗原を結合する標的化部分を含む。

【0336】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、マスト細胞関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらのマスト細胞抗原を結合する標的化部分を含む。

【0337】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、好塩基球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの好塩基球抗原を結合する標的化部分を含む。

【0338】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、好中球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの好中球抗原を結合する標的化部分を含む。

【0339】

いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、好酸球関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの好酸球抗原を結合する標的化部分を含む。

【0340】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、当業者に既知の任意の適切な抗原または受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（α_Ｖβ_３）、Ｅ－セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数のこれらの抗原を結合する標的化部分を含む。

【0341】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。

【0342】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。

【0343】

非限定的例であるが、種々の実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、（ｉ）ＣＤ８；（ｉｉ）Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲのうちの１つまたは複数を指向する標的化部分を含み、および／または（ｉｉｉ）標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの改変（例えば、変異体）シグナル伝達物質と協調して、腫瘍細胞を指向する。

【0344】

種々の実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書の他の場所で開示のＰＤ－１結合ＶＨＨとは別に、ＰＤ－１を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合物質は、本明細書で開示の１種類または複数種類のシグナル伝達物質と共に、１種類または複数種類の下記で開示のＰＤ－１結合物質を含む。

【0345】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４，ＵＳ ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７９のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号９８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0346】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルマブ（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ－１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびその他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号９８１のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号９８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0347】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５～１８：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５（配列番号９８３）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号９８４）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号９８５）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号９８６）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および／または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０～２４：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号９８７）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号９８８）；米国特許出願公開第２００８号／００２５９８０の配列番号２２（配列番号９８９）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号９９０）；または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号９９１）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0348】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２を含む重鎖を含む。

【0349】

ある実施形態では、標的化部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）を含む。

【0350】

ある実施形態では、標的化部分は、ｐｄ－ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４を含み、これは、国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（配列番号９９２）を含む標的化ドメインおよび／または国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（配列番号９９３）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質を含み得る。

【0351】

ある実施形態では、標的化部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のうちのいずれかの他のペプチドを含む。例えば、標的化部分は、配列番号９９４の次記配列を有するＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得る：
ＳＮＴＳＥＳＦＫ（ＳＮＴＳＥＳＦ）ＦＲＶＴＱＬＡＰＫＡＱＩＫＥ－ＮＨ２

【化2】

【0352】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0353】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号９９８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0354】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0355】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－１を指向するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７～３５１：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号１００１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号１００２）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号１００３）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号１００４）；または米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号１００５）を含む。

【0356】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１標的化部分は、位置１１、３７、４４、４５、４７、８３、８４、１０３、１０４、および１０８（Ｋａｂａｔナンバリングによる）に１つまたは複数の置換を有する配列番号１００１～１００５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、位置１１のアミノ酸はＬ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、またはＷである。いくつかの実施形態では、位置３７のアミノ酸はＦ、Ｙ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４４のアミノ酸はＧ、Ｅ、Ａ、Ｄ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＬである。いくつかの実施形態では、位置４５のアミノ酸はＬ、Ｒ、Ｃ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４７のアミノ酸はＷ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、またはＹである。いくつかの実施形態では、位置８３のアミノ酸はＲ、Ｋ、Ｎ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｑ、またはＴである。いくつかの実施形態では、位置８４のアミノ酸はＰ、Ａ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置１０３のアミノ酸はＷ、Ｐ、Ｒ、またはＳ；位置１０４のＧまたはＤである。いくつかの実施形態では、位置１０８のアミノ酸はＱ、Ｌ、またはＲである。

【0357】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントのうちのいずれか１種類を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５～２９：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号１００６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号１００７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号１００８）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号１００９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号１０１０）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０～３３：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号１０１１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号１０１２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号１０１３）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号１０１４）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0358】

種々の実施形態では、本多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択されるＰＤ－１を指向する１つまたは複数の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。

【0359】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ１を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合物質は、本明細書で開示の１種類または複数種類のシグナル伝達物質と共に、１種類または複数種類の下記で開示のＰＤ－１結合物質を含む。

【0360】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ－Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１およびＣＤ８０受容体に対する結合を阻止する。本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１５のアミノ酸配列を含む重鎖および／または配列番号１０１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0361】

例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号１０１７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号１０１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0362】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１９のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１０２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0363】

ある実施形態では、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２１のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１０２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0364】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0365】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0366】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0367】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0368】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0369】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0370】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0371】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0372】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0373】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0374】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0375】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0376】

ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0377】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0378】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0379】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のうちのいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４～３８：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号１０５３）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号１０５４）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号１０５５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号１０５６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号１０５７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９～４２：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号１０５８）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号１０５９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号１０６０）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号１０６１）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0380】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号１０６２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0381】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号１０６４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0382】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号１０６６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号１０６７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0383】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号１０６８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号１０６９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0384】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号１０７０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７（配列番号１０７１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0385】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号１０７２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号１０７３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0386】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号１０７４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号１０７５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0387】

ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、標的化部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号１０７６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号１０７７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0388】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８：国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号１０７８）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号１０７９）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号１０８０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号１０８１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号１０８２）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号１０８３）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号１０８４）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号１０８５）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号１０８６）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６：国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号１０８７）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号１０８８）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号１０８９）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号１０９０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号１０９１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号１０９２）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号１０９３）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号１０９４）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号１０９５）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0389】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６：国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号１０９６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号１０９７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号１０９８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号１０９９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号１１００）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号１１０１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号１１０２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号１１０３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号１１０４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号１１０５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号１１０６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号１１０７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８：国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号１１０８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号１１０９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号１１１０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号１１１１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号１１１２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号１１１３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号１１１４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号１１１５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号１１１６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号１１１７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号１１１８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号１１１９）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0390】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８、５０、８２、および８６：国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号１１２０）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号１１２１）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号１１２２）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号１１２３）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８：国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号１１２４）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４６（配列番号１１２５）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号１１２６）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号１１２７）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号１１２８）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号１１２９）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号１１３０）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号１１３１）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号１１３２）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0391】

ある実施形態では、標的化部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号１１３３）のアミノ酸配列を含む重鎖領域；および／または国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号１１３４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0392】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されているように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－４１２２、ＣＮＣＭ Ｉ－４０８０およびＣＮＣＭ Ｉ－４０８１により入手可能なハイブリドーマから得ることができるいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0393】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ１抗体を指向するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４～３９９：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号１１３５）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号１１３６）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号１１３７）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号１１３８）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号１１３９）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号１１４０）を含む。

【0394】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１標的化部分は、位置１１、３７、４４、４５、４７、８３、８４、１０３、１０４、および１０８（Ｋａｂａｔナンバリングによる）に１つまたは複数の置換を有する配列番号１１３５～１１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、位置１１のアミノ酸はＬ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、またはＷである。いくつかの実施形態では、位置３７のアミノ酸はＦ、Ｙ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４４のアミノ酸はＧ、Ｅ、Ａ、Ｄ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＬである。いくつかの実施形態では、位置４５のアミノ酸はＬ、Ｒ、Ｃ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４７のアミノ酸はＷ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、またはＹである。いくつかの実施形態では、位置８３のアミノ酸はＲ、Ｋ、Ｎ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｑ、またはＴである。いくつかの実施形態では、位置８４のアミノ酸はＰ、Ａ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置１０３のアミノ酸はＷ、Ｐ、Ｒ、またはＳ；位置１０４のＧまたはＤである。いくつかの実施形態では、位置１０８のアミノ酸はＱ、Ｌ、またはＲである。

【0395】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ２を指向する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドに選択的に結合する１つまたは複数の標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。

【0396】

ある実施形態では、標的化部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ２を指向するＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９～４５５：米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号１１４１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号１１４２）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号１１４３）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号１１４４）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号１１４５）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号１１４６）；または米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号１１４７）を含む。

【0397】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ２標的化部分は、位置１１、３７、４４、４５、４７、８３、８４、１０３、１０４、および１０８（Ｋａｂａｔナンバリングによる）に１つまたは複数の置換を有する配列番号１１４１～１１４７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、位置１１のアミノ酸はＬ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、またはＷである。いくつかの実施形態では、位置３７のアミノ酸はＦ、Ｙ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４４のアミノ酸はＧ、Ｅ、Ａ、Ｄ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、またはＬである。いくつかの実施形態では、位置４５のアミノ酸はＬ、Ｒ、Ｃ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置４７のアミノ酸はＷ、Ｌ、Ｆ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、またはＹである。いくつかの実施形態では、位置８３のアミノ酸はＲ、Ｋ、Ｎ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｑ、またはＴである。いくつかの実施形態では、位置８４のアミノ酸はＰ、Ａ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、またはＶである。いくつかの実施形態では、位置１０３のアミノ酸はＷ、Ｐ、Ｒ、またはＳ；位置１０４のＧまたはＤである。いくつかの実施形態では、位置１０８のアミノ酸はＱ、Ｌ、またはＲである。

【0398】

種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２標的化部分は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。

【0399】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ２ ＣＤＲ１配列は、配列番号１１４８～配列番号１１５４から選択される。

【0400】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ２ ＣＤＲ２配列は、配列番号１１５５～配列番号１１６１から選択される。

【0401】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ２ ＣＤＲ３配列は、配列番号１１６２～配列番号１１６８から選択される。

【0402】

ある実施形態では、標的化部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のうちのいずれか１種類の抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３～４７：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号１１６９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号１１７０）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号１１７１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号１１７２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号１１７３）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８～５１：米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号１１７４）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号１１７５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号１１７６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号１１７７）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0403】

種々の実施形態では、本発明の標的化部分は、本明細書で開示の配列のうちのいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のうちのいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。

【0404】

種々の実施形態では、本発明の標的化部分は、本明細書で開示のＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれの組み合わせを含み得る。

【0405】

ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するかあるいは標的にする追加の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００号で開示されている。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0406】

種々の実施形態では、本技術の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、シグナル調節タンパク質α－１（ＳＩＲＰ１α）に対する標的化部分を含む。ＳＩＲＰ１α（ＳＩＲＰαとしても知られる）は、阻害性（ＳＩＲＰα）、活性化（ＳＩＲＰβ）、非シグナル伝達性（ＳＩＲＰγ）および可溶性（ＳＩＲＰδ）のメンバーを包含する細胞免疫受容体ファミリーに属する。ＳＩＲＰ１αは、主に、マクロファージ、顆粒球、骨髄細胞（ＤＣ）、マスト細胞、および造血幹細胞を含むそれらの前駆物質で発現される。ＳＩＲＰ１αは、広範に発現される膜貫通型糖タンパク質ＣＤ４７と相互作用して食作用を調節する抑制性受容体として作用する。特に、標的細胞上に発現されるＣＤ４７によるマクロファージ上のＳＩＲＰ１αの結合は、標的細胞の食作用を負に調節する抑制シグナルを生成する。

【0407】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分である。

【0408】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、単球上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分である。

【0409】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＴＡＭ上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分である。

【0410】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、限定されないが、ｃＤＣ２およびｐＤＣを含む樹状細胞上のＳＩＲＰ１αを特異的に認識して結合する標的化部分である。

【0411】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを認識する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＳＩＲＰ１α上に存在する１つまたは複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＳＩＲＰ１α上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＳＩＲＰ１α上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識できる特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0412】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１αはヒトＳＩＲＰ１αである。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、任意の形態のヒトＳＩＲＰ１αに結合し得る。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、モノマー型のＳＩＲＰ１αに結合する。別の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ダイマー型のＳＩＲＰ１αに結合する。

【0413】

ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ヒトＳＩＲＰ１α上に存在する１つまたは複数のエピトープを認識する認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、シグナルペプチド配列を有するヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列を有する代表的ヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドは、配列番号１１７８である。

【0414】

ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、シグナルペプチド配列のないヒトＳＩＲＰ１αを認識する認識ドメインを含む。シグナルペプチド配列のない代表的ヒトＳＩＲＰ１αポリペプチドは、配列番号１１７９である。

【0415】

ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム２（配列番号１１８０）をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。

【0416】

ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ヒトＳＩＲＰ１αアイソフォーム４（配列番号１１８１）をコードするポリペプチドを認識する認識ドメインを含む。

【0417】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的結合の可能な任意のタンパク質ベース物質であり得る。ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、抗体を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、Ｖ_Ｈ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0418】

いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＳＩＲＰ１α標的化部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；アフィマー、デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、または合成分子である。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。

【0419】

一実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来のＶＨＨ、または設計されたＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。

【0420】

ある実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。

【0421】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＹは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えば、ＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0422】

例えば、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、ＶＨＨ、または融合タンパク質のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合する抗体またはこれらの誘導体を含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合するラクダ類重鎖抗体（ＶＨＨ）である。

【0423】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを認識およびそれに結合することが既知である、重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のうちのいずれかの組み合わせを含み得る。

【0424】

種々の実施形態では、本技術は、本明細書で記載のＳＩＲＰ１α標的化部分の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、ホモログおよびオルソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図している。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。

【0425】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを認識し、それに結合することが既知のうちのいずれかの標的化部分配列に対して１つまたは複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、ＳＩＲＰ１αを認識し、それに結合することが既知のうちのいずれかの標的化部分配列に対して、１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、２０個、３０個、４０個、または５０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および短縮化から独立に選択され得る。

【0426】

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0427】

「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性の類似性に基づいて行われ得る。２０種類の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0428】

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。

【0429】

本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。

【0430】

種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。

【0431】

種々の実施形態では、アミノ酸変異は、標的化部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中にあってもよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、標的化部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中にあってもよい。

【0432】

アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において、周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。

【0433】

種々の実施形態では、変異は、ＳＩＲＰ１αを特異的に認識し、それに結合するＳＩＲＰ１α標的化部分の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＳＩＲＰ１αに特異的に結合するＳＩＲＰ１α標的化部分の能力を実質的に低下させず、また、ＳＩＲＰ１αを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。

【0434】

種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、目的の抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αを結合するが機能的に調節しない。例えば、種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、抗原を標的とするのみであり、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害するかあるいは中和することを）しない。種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。

【0435】

他の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、目的の抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αを結合し機能的に調節する。例えば、種々の実施形態では、ＳＩＲＰ１α標的化部分は、抗原、すなわち、ＳＩＲＰ１αを標的とし、さらに、抗原が有する生物学的作用を機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に阻害または中和する）。このような結合は、機能的調節と共に、本発明のキメラタンパク質がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的に動員するのに用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。

【0436】

種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、例えばＤＣ上で、ＸＣＲ１に特異的に結合する抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＸＣＬ１の全体または一部を含む抗原認識ドメインを有する標的化部分を含む。

【0437】

種々の実施形態では、多重特異的ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する標的化部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。

【0438】

いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識する標的化部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。

【0439】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１つまたは複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは、浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉し、ＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明のキメラタンパク質により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、標的化部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。

【0440】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１つまたは複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、標的化部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、組織が必要に応じ伸縮し、その後、元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、標的化部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１つまたは複数のエピトープを認識する。

【0441】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種類または複数種類のＥＣＭタンパク質を認識する。

【0442】

ある実施形態では、標的化部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種類のメンバー：テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシン－Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中に順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動に関連付けられる。アイソフォームバリアントはまた、特にテネイシン－Ｃに対して存在する。２７種を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、標的化部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン－Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン－Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、テネイシンタンパク質上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。

【0443】

ある実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能にする糖タンパク質である。インテグリンに結合時には、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、標的化部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、癌細胞を含む疾患細胞にキメラタンパク質を標的化するのに使用し得る。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このような標的化部分は、腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞にキメラタンパク質を標的化するのに使用し得る。

【0444】

ある実施形態では、標的化部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見つかることが多い、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成され、これにより、フィブリンを重合させる。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブリン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。

【0445】

ある実施形態では、標的化部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ラミニン上の１つまたは複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。

【0446】

ある実施形態では、標的化部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、ラミニンと、基底膜中のコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。種々の実施形態では、標的化部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。

【0447】

種々の実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つまたは複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つまたは複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１つまたは複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。

【0448】

種々の実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のうちのいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、標的化部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、標的化部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。

【0449】

種々の実施形態では、標的化部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。

【0450】

種々の実施形態では、標的化部分は、アテローム斑と関連する１種類または複数種類の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維－脂質（線維－脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ－ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ－ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ－ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種類または複数種類の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出される ＤＮＡまたはＲＮＡである。

【0451】

種々の実施形態では、標的化部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種類または複数種類の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在する１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、標的化部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、標的化部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種類または複数種類の非細胞構造を認識し、これに結合する。

【0452】

リンカーおよび官能基
種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１つまたは複数の官能基、残基、または部分を含み得る。種々の実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のうちのいずれかのシグナル伝達物質または標的化部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、１つまたは複数の望ましい特性または官能基を本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に付与する。このような官能基およびそれらをＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。

【0453】

種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、別の物質と複合化および／または融合して、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどのうちの１つまたは複数と融合または複合化され得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体フラグメントと融合または複合化され得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ－末端またはＣ末端に融合され得る。種々の実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載の１種類または複数種類の物質に融合され、この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0454】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を伸ばし、および／またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合タンパク質の免疫原性を低減する。例えば、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの任意の好適な形態のペグ化が通常用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１－５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３－４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介した部位特異的なペグ化が使用される（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１－７７０（２００３）を参照されたい、この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、このために、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質中の天然のシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＰＥＧの結合のための１つまたは複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾されるか、またはＰＥＧの結合のための１つまたは複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において既知の技術を使用してＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。

【0455】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分には、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。

【0456】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１つまたは複数の検出可能なラベルまたはその他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において、既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識した本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（これ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよびその他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイ）ならびにインビボ診断および画像処理の目的に使用し得る。

【0457】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分には、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に結合または遺伝的に融合されたタグが含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、単一タグまたは複数タグを含み得る。例えば、タグは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質のＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１またはいずれか他の腫瘍抗原などの目的抗原に対する結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３～５アミノ酸長さ、５～８アミノ酸長さ、８～１２アミノ酸長さ、１２～１５アミノ酸長さ、または１５～２０アミノ酸長さである。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質はＨｉｓタグを含む。

【0458】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、金属または金属カチオンのうちの１つをキレートするためのキレート化基を含む。好適なキレート化基は、例えば、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。

【0459】

いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の一部である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を、結合対のもう一方の半分に結合した別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の結合を介して、連結し得る。例えば、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をビオチンに複合化させ、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化させた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化される診断システムにおいて、このような結合ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を、例えば、レポーターとして用い得る。例えば、このような結合対を使用して、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を医薬品目的に好適な担体などの担体に結合し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。また、このような結合対を使用して、治療活性薬剤を、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に連結し得る。

【0460】

いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、必要に応じ、１つまたは複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、結合領域および／または標的化部分をそれぞれ連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、シグナル伝達物質および標的化部分をそれぞれ連結する（または２つ以上の標的化部分の場合、シグナル伝達物質を標的化部分のうちの１つに連結する）リンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分をＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。

【0461】

いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、標的化部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、トリマーを生じる２つのリンカーを含み得る）。

【0462】

本発明は、種々のリンカー配列の使用を意図する。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されている経験的リンカーである。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９ ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計し得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。

【0463】

いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長を超える。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長超であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。

【0464】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、標的化部分とシグナル伝達物質のそれらの受容体への効果的結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカー長さは、１つの標的化部分とシグナル伝達物質の同じ細胞上の受容体への効果的結合、ならびにその他の標的化部分の別の細胞への効果的結合を可能にする。細胞対の例は、本明細書の他の場所で提供される。

【0465】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、少なくとも、同じ細胞上の１つの標的化部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離に等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の１つの標的化部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離の、少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または、それを超える。

【0466】

いくつかの実施形態では、あるリンカーは２つの標的化部分を相互に連結し、このリンカーは短い長さを有し、また、あるリンカーは標的化部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２つの標的化部分を連結するリンカーより長い。例えば、２つの標的化部分を連結するリンカーと、標的化部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーの間のアミノ酸長さの差異は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。

【0467】

種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎであり、式中、ｎは、約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（配列番号１１８２～１１８９）である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９０）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１８２）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号１１８２～１１８５）、（Ｇｌｙ）_８（配列番号１１９１）、（Ｇｌｙ）_６（配列番号１１９２）、（ＥＡＡＡＫ）_ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号１１９３～１１９５）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号１１９６～１１９９）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１１９６）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４Ａ（配列番号１２００）、ＰＡＰＡＰ（配列番号１２０１）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１２０２）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１２０３）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１２０４）、および（ＸＰ）_ｎ；Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーは（ＧＧＳ）_ｎ（ｎ＝１～２０）（配列番号１２０５～配列番号１２２４）である。いくつかの実施形態では、リンカーはＧである。いくつかの実施形態では、リンカーはＡＡＡである。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（ｎ＝９～２０）（配列番号１２２５～１２３６）である。

【0468】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号１２３７）、ＧＳＥＳＧ（配列番号１２３８）、ＧＳＥＧＳ（配列番号１２３９）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号１２４０）、および４アミノ酸間隔毎にランダムに配置されたＧ、Ｓ、およびＥのリンカーのうちの１つまたは複数である。

【0469】

いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の最初の位置を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリプロリン二重らせん体を含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸を含む（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）その特有の延長されたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により、他のサブクラスとは異なり、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせん体を形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠くに離れており、より大きな可撓性を分子に与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジは、他のサブクラスに比べて、そのより高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。

【0470】

結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コア部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、Ｃ_Ｈ１のカルボキシル末端～運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣ_Ｈ２ドメインのアミノ末端に繋がり、Ｃ_Ｈ２中の残基を含む（前出文献）。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は、配列番号１２４１を含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１、または２、または３個の上部ヒンジ部、コア部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。

【0471】

必要に応じ、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は抗体Ｆｃ領域に連結されてよく、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメインの片方または両方、および場合によりヒンジ部を含む。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを調製できる。

【0472】

いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。

【0473】

種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を特定の細胞型または部位に標的化するように機能し得る。

【0474】

ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の改変および産生
種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＶＨＨである標的化部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の調製法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶ_ＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶ_ＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶ_ＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化Ｖ_ＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたはその他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製し、続けて、こうして得られた拡散を発現させることにより；および／または（８）前述の１つまたは複数の任意の組み合わせにより。

【0475】

ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を指向する天然の重鎖抗体のＶ_ＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶ_ＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種をＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１分子で適切に免疫化する（すなわち、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化する）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対するＶ_ＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する天然のＶ_ＨＨドメインは、ラクダ科の動物Ｖ_ＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種類または複数種類のスクリーニング技術を使って、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１、またはその少なくとも１つの部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、国際公開第００／４３５０７号に記載のランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理Ｖ_ＨＨライブラリーから得られたＶ_ＨＨライブラリーなどの未処理Ｖ_ＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対するＶ_ＨＨ配列を得る別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫化し（すなわち、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化し）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得て、その後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対するＶ_ＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。

【0476】

ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、「ヒト化された」、すなわち、天然のＶ_ＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、ヒトの従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１つまたは複数のアミノ酸残基で置換することによるＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られたヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶ_ＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって、出発材料として天然のＶ_ＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。

【0477】

ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、「ラクダ化」、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶ_ＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１つまたは複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ－ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置に、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）の位置に挿入されるいくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するかあるいは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）～（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。

【0478】

種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶ_ＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１つまたは複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施することができる。この核酸は、その後、本発明の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶ_ＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、目的の本発明のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて新規に合成できる。また、天然のＶ_ＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶ_ＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るその他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１つまたは複数の天然のＶＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）中の１つまたは複数の部分、１つまたは複数の天然のＶ_ＨＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）中の１つまたは複数の部分、および／または１つまたは複数の合成または半合成配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸を得るように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。

【0479】

本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を産生する方法は、本明細書に記載されている。例えば、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結し、目的のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

【0480】

本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする核酸を、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞に、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする遺伝子を発現させるのを可能とする条件下で増殖させることができる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。

【0481】

特定の発現および精製条件は、用いられる発現系に応じて変化する。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。

【0482】

本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、タンパク質の発現を許容する条件下で、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする発現ベクターを形質導入した宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグまたはクロマトグラフィーにより、当該技術分野において周知の技術を用いて精製できる。ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質はＨｉｓタグを含む。ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質はＨｉｓタグおよびＨｉｓタグの切断を可能にするタンパク分解部位を含む。

【0483】

したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。

【0484】

種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含むキメラタンパク質は、例えば、患者中でインビボ発現され得る。例えば、種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含むキメラタンパク質は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含むキメラタンパク質をコードする核酸の形態で投与され得る。種々の実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質またはＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含むキメラタンパク質は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち、１種類または複数種類の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号で見出される１つまたは複数の修飾を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’－Ｏ－メチル－Ｕのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の１種類または複数種類のキメラタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。種々の実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レオウイルス、はしか、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクシニアの形態である。

【0485】

薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）は、無機酸もしくは有機酸と反応できる、充分に塩基性の官能基を有し、または無機酸もしくは有機酸と反応できる、カルボキシル基を有して、薬学的に許容可能な塩を形成できる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含む。これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0486】

薬学的に許容可能な塩としては、非限定的例であるが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボキシレート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。

【0487】

「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などが挙げられる。

【0488】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。

【0489】

医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含む医薬組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のうちのいずれか他の治療薬を含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態では、本発明は、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と本明細書に記載のうちのいずれか他の治療薬との組み合わせを含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与することができる。このような組成物は必要に応じ、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。

【0490】

種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のうちのいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤のそのほかの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる。

【0491】

本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適する他の任意の形態をとってよい。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態に処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態に処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。

【0492】

必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含み得る。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたは送達装置を使って送達することができる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたは送達担体で同時送達できる。

【0493】

本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種類または複数種類の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬と、液体担体、微粉化固相担体、または両方とを均一に、完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、それに続く当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化すること）により調製される。

【0494】

種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。

【0495】

投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的または全身性であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、１部には、病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は本明細書で記載のうちのいずれかの薬剤の血流中への放出をもたらす。

【0496】

一実施形態では、本明細書で記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりの良い製剤を提供するために、１種類または複数種類の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料、着色料および保存剤を含み得る。さらに、タブレットまたは丸薬形態では、組成物をコートして、消化管での崩壊および吸収を遅らせることにより長期間にわたり持続作用を可能とすることができる。本明細書に記載のうちのいずれかのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を運ぶ浸透圧的に活性な物質を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤し、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、基本的に０次の送達プロファイルを提供することができる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も使用することができる。経口組成物には、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。活性化合物に加えて、懸濁剤は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガント、など、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。

【0497】

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてよく、これは、使用直前に、無菌の注入可能媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当該技術分野において、既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。

【0498】

静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。

【0499】

本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）を作製することができる。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に入れることができる。

【0500】

本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて、１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放を可能にするために有用であり、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供することができる。本明細書に記載されたものを含む当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分と共に使用する上で容易に選択することができる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。

【0501】

有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激できる。

【0502】

別の実施形態では、徐放系を、治療される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、中の概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。

【0503】

医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。

【0504】

投与および投与量
本発明により投与されるＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および／または本明細書に記載のうちのいずれかの治療薬の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わることは理解されよう。当業者なら、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の作用を変え得る多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種類または複数種類の別々の投与量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。

【0505】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および／または本明細書に記載のうちのいずれかの治療薬の好適な投与量は、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。

【0506】

ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および／または本明細書に記載のうちのいずれかの治療薬の個々の投与量は、例えば、単位剤形当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含む単位剤形で投与できる。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。

【0507】

一実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および／または本明細書に記載のうちのいずれかの治療薬は、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。

【0508】

本発明の特定の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および／または本明細書に記載のうちのいずれかの治療薬を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与されてよい。

【0509】

併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬と共に同時投与される。同時投与は、同時または順次であってよい。

【0510】

一実施形態では、追加の治療薬および本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語の「同時に」は、追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質が約６０分程度、例えば、約３０分程度、約２０分程度、約１０分程度、約５分程度、または約１分程度の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含む製剤）または別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を含む第２の製剤）の同時投与により行うことが可能である。

【0511】

同時投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の薬理学的活性が時間経過と共に重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語の「順次に」は、追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質との逐次投与の間の時間間隔を、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて間隔を開ける、約２週間を超えて間隔を開ける、または約１ヶ月を越えて間隔を開けることができる。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１結合物質のうちのいずれかを、最初に投与してよい。

【0512】

同時投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。

【0513】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、別の治療薬と同時投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および追加の治療薬は、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。

【0514】

いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と化学療法剤とのこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の治療に使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ、エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン、アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）、カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）、ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む、ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート、エスペラマイシン、ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デメコルチ ン、ジアジクオン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（例えば、Ｔ２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（アラ－Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル、ジェムザール（ゲムシタビン）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ナベルビン（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａならびに上述のうちのいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、治療の方法は、放射線の使用をさらに含み得る。さらに、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含み得る。

【0515】

したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および化学療法剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、化学療法剤を用いる治療を受けている患者に対するＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ挿入剤、例えば、限定されないが、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンである。ある実施形態では、ＤＮＡ挿入剤は、ドキソルビシンである。

【0516】

例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ドキソルビシンと同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、ドキソルビシンと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質とドキソルビシンとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質とドキソルビシンの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質およびドキソルビシンは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、配列番号３１７または配列番号３１８に対して、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置に１つまたは複数の変異を含む。

【0517】

いくつかの実施形態では、本発明は、１種類または複数種類の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２のうちの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２のうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ニボルマブ（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌのうちの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌのうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと組み合わされる（必要に応じ、ニボルマブ、リリルマブ、およびウレルマブのうちの１つまたは複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つまたは複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａのうちの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌のうちの１つまたは複数の治療のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。

【0518】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質およびチェックポイント阻害剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、チェックポイント阻害剤を用いる治療を受けている患者に対するＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、およびＣＴＬＡ－４（本明細書に記載の抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＰＤ－Ｌ２、および抗ＣＴＬＡ－４物質のうちのいずれかを含む）のうちの１つまたは複数を標的とする物質である。いくつかの実施形態ではチェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）のうちの１つまたは複数である。ある実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１に対する抗体である。

【0519】

例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と抗ＰＤ－Ｌ１抗体との同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と抗ＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、配列番号３１７または配列番号３１８に準拠して、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置に１つまたは複数の変異を含む。

【0520】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質および免疫抑制剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫抑制剤を用いる治療を受けている患者に対するＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与に関する。ある実施形態では、免疫抑制剤は、ＴＮＦである。

【0521】

例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＴＮＦと同時投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍または癌の治療での使用において、ＴＮＦと同時投与されると相乗的に作用する。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質とＴＮＦとの同時投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質とＴＮＦの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質およびＴＮＦは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、配列番号３１７または配列番号３１８に準拠して、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなどのように、１４８、１４９および１５３の位置に１つまたは複数の変異を含む。

【0522】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍または癌の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、血液系腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、固形腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質とＣＡＲ Ｔ細胞との使用は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞分裂を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＣＡＲ Ｔ細胞増のアナジーを防止する。

【0523】

種々の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、抗原（例えば、腫瘍抗原）、例えば、限定されないが、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ、Ｌ１－ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ－１、ＩＬ１３Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６ Ｅ６（ＨＰＶ－１６ Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびに当該技術分野において周知のその他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞を含む。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0524】

代表的ＣＡＲ Ｔ細胞療法としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ－４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ）、ＣＤ－１９ Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ ｃｅｌｌｓ（眠れる森の美女細胞）（Ｚｉｏｐｈａｒｍ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ－３０２（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ－１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0525】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、限定されないが、３－インターフェロン、酢酸グラチラマー、Ｔ－インターフェロン、ＩＦＮβ２（米国特許出願公開第２００２／００２５３０４号）、スピロゲルマニウム（例えば、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジメチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジエチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジプロピル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、およびＮ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジブチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン）、ビタミンＤ類似体（例えば、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、（例えば、米国特許第５，７１６，９４６号を参照））、プロスタグランジン（例えば、ラタノプロスト、ブリモニジン、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３、例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５２５号を参照）、テトラサイクリンと誘導体（例えば、ミノサイクリンおよびドキシサイクリン、例えば、米国特許出願公開第２００２／００２２６０８号を参照）、ＶＬＡ－４結合抗体（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０２５２７号を参照）、副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾン、メチルプレドニソン、２－クロロデオキシアデノシン、ミトキサントロン、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、フマレート、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、および チザニジン塩酸塩を含むＭＳ治療薬のうちの１つまたは複数と組み合わせて多発性硬化症（ＭＳ）の治療方法で使用される。

【0526】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、ＭＳの１つまたは複数の症状または副作用を治療する１種類または複数種類の治療薬と組み合わせて使用される。このような薬剤としては、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドクセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｌｏｉｎ）、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、プロパンテリンブロミド、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0527】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１種類または複数種類の本明細書に記載の疾患修飾治療薬（ＤＭＴ）（例えば、表Ａの物質）と組み合わせて多発性硬化症の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数種類の開示結合物質を含まない場合の、１つまたは複数の本明細書に記載の類ＤＭＴ（例えば、下表に挙げた物質）と比べて、改善された治療効果を提供する。ある実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と１種類または複数種類のＤＭＴの組み合わせは、相乗的治療効果をもたらす。

【表1】

【表2】

【表3】

【表4】

【0528】

ＭＳ疾患進行は、疾患進行の最初期段階で、最も激しく、最も多くの損害を与え得る。したがって、例えば、コストと副作用緩和を考慮した多くの償還方針および医療業務とは逆に、例えば、いわゆる二次治療として、最も強力なＤＭＴを用いて治療を開始することが患者の長期疾患状態にとって最も有益である可能性がある。いくつかの実施形態では、患者は二次治療と組み合わせたＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与計画により治療される。このような組み合わせを用いて、１種類または複数種類の二次治療の副作用プロファイルが低減される。いくつかの実施形態では、この組み合わせを用いて、１種類または複数種類の二次治療の投与頻度用量が低減される。例えば、組み合わせた場合、上記表に列挙された物質の用量を、約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％低減し得、および／または投与頻度を通常の半分、または通常の１／３に、または例えば、毎日から隔日もしくは毎週に、隔日から毎週もしくは２週毎に、毎週から２週毎もしくは毎月に、等々減らせ得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、より都合のよい治療計画を可能にすることにより、患者のアドヒアランスを高める。さらに、いくつかのＤＭＴは、例えば、ミトキサントロンに対する生涯の投与量限度として、１４０ｍｇ／ｍ^２の生涯累積投与量、または２、３年の治療に厳密に制限されるべきことが示唆されている。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を補充し、このＤＭＴのより低い用量またはより少ない頻度の投与を可能にすることにより、患者のミトキサントロンへの接触が維持される。

【0529】

いくつかの実施形態では、患者は、１種類または複数種類のＤＭＴでの治療を受けていない未処置患者であり、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質が二次治療の副作用を和らげるために使用される。したがって、未処置患者は、疾患の最初に、二次治療の長期間の効果から利益を得ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、二次治療の使用の前のエントリー治療として使用される。例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質が、第一の約３ヶ月の治療期間投与されて疾患を安定化し、その後患者は二次薬剤の維持療法に移行され得る。

【0530】

未処置患者は、１種類または複数種類のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者に比べて、治療に応答する可能性が大きいと一般に考えられる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１種類または複数種類のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者に使用される。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、１種類または複数種類のＤＭＴを受けたことがありかつおそらく失敗した患者の治療効果を高め、これらの患者が未処置患者のように応答することを可能にし得る。

【0531】

いくつかの実施形態では、患者は１種類または複数種類のＤＭＴを受けたことがあるか受けているが、十分に応答していない。例えば、患者は１種類または複数種類のＤＭＴに対し、不応性であるか、または応答が不十分であり得る。いくつかの実施形態では、患者は、テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（ＧＥＮＺＹＭＥ））；インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（ＢＩＯＧＥＮ ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（ＢＡＹＥＲ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．）；酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（ＴＥＶＡ ＮＥＵＲＯＳＣＩＥＮＣＥ）；インターフェロンβ１ｂ（ＥＸＴＡＶＩＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯＲＰ．）；フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯＲＰ．）；アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（ＧＥＮＺＹＭＥ）；ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（ＥＭＤ ＳＥＲＯＮＯ）；ペグ化インターフェロンβ１ａ（ＰＬＥＧＲＩＤＹ（ＢＩＯＧＥＮ ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ａ（ＲＥＢＩＦ（ＥＭＤ ＳＥＲＯＮＯ，ＩＮＣ．）；フマル酸ジメチル（ＢＧ－１２）（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（ＢＩＯＧＥＮ ＩＤＥＣ）；およびナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（ＢＩＯＧＥＮ ＩＤＥＣ）のうちの１つまたは複数に対し、不応性であるか、または応答が不十分である。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、患者における１種類または複数種類のＤＭＴの治療効果をもたらし、したがって、ＤＭＴに対する非応答性を低減または除去する。例えば、これは、より高い用量または頻度での１種類または複数のＤＭＴを用いる治療から患者を免れさせ得る。

【0532】

より侵攻性の疾患の患者では、１つの手法は、誘導治療モデルであり、この場合、強力な効力があるが安全性の懸念の強い治療を最初に投与し、続いて、維持療法を行う。このようなモデルの例は、アレムツズマブによる最初の治療に続けて、ＩＦＮβ、ＧＡ、またはＢＧ－１２による治療を含み得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質を用いて、療法を維持療法に切り替える必要性をなくす。いくつかの実施形態では、二次治療を含み、１種類または複数種類の開示結合物質を、１種類または複数のＤＭＴに対する維持療法として用いる。いくつかの実施形態では、１種類または複数の開示結合物質を、例えば、一次治療などの、誘導療法での第一の治療として用い、続けて維持療法として別のＤＭＴを用いる。

【0533】

いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質を、約３ヶ月の初期治療期間の間投与して疾患を安定させ、その後患者を一次治療薬による維持療法に移行し得る。

【0534】

種々の実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質を用いて、限定されないが、本明細書で開示のうちのいずれかの物質を含む、ＤＭＴの１種類または複数種類の副作用を低減する。例えば、１種類または複数種類の開示結合物質は、１種類または複数のＤＭＴの用量を節約可能にし、したがって、より少ない副作用とする投与計画で使用し得る。例えば、いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＡＵＢＡＧＩＯまたは関連物質の１種類または複数の副作用を低減させ得る。この副作用は、毛髪菲薄化、下痢、インフルエンザ、悪心、異常な肝臓検査および手または足の異常な痺れまたは刺痛（知覚異常）、白血球のレベル（感染症のリスクの増大の可能性）；血圧の増大；および重篤な肝障害を含み得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＡＶＯＮＥＸまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応および心臓障害を含む１種類または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＢＥＴＡＳＥＲＯＮまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＣＯＰＡＸＯＮＥまたは関連物質の、注射部位反応、血管拡張（血管の拡張）；胸部痛；不安症、胸部痛、動悸、息切れおよび顔面紅潮を含む注射直後の反応を含む、１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＥＸＴＡＶＩＡまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＧＩＬＥＮＹＡまたは関連物質の、頭痛、インフルエンザ、下痢、背部痛、肝臓酵素上昇、咳、最初の投与後の遅い心拍数、感染症、および眼の膨潤を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、発疹、頭痛、発熱、鼻詰まり、悪心、尿路感染症、疲労、不眠、上気道感染症、じん麻疹、そう痒、甲状腺障害、真菌感染、関節、四肢および背中の痛み、下痢、嘔吐、顔面紅潮、および輸注反応（悪心、じん麻疹、そう痒、不眠、悪寒、顔面紅潮、疲労、息切れ、味覚の変化、消化障害、眩暈、疼痛を含む）を含むＬＥＭＴＲＡＤＡまたは関連物質の１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ノバントロンまたは関連物質の、投与の２４時間後の緑色尿；感染症、骨髄抑制（疲労、紫斑、低血液細胞数）、悪心、毛髪菲薄化、膀胱感染症、口のびらん、および深刻な肝障害および心臓障害を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＰＬＥＧＲＩＤＹまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応および心臓障害を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＲＥＢＩＦまたは関連物質の、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、肝障害、うつ、アレルギー反応、および低赤血球数または白血球数を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、ＴＥＣＦＩＤＥＲＡまたは関連物質の、顔面紅潮（熱またはそう痒の感覚、皮膚の紅潮）、消化管障害（悪心、下痢、腹痛）、発疹、尿中タンパク、肝酵素の上昇；および血中のリンパ球（白血球）数の減少を含む１種類または複数種類の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種類または複数種類の開示結合物質は、頭痛、疲労、尿路感染症、うつ、気道感染症、関節痛、胃もたれ、腹部不快感、下痢、腟炎、腕または脚部痛、発疹、輸注の２時間以内のアレルギー性反応または過敏症反応（眩暈、発熱、発疹、そう痒、悪心、顔面紅潮、低血圧、呼吸困難、胸部痛）を含むＴＹＳＡＢＲＩまたは関連物質の１種類または複数種類の副作用を低減し得る。

【0535】

いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種類または複数種類のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0536】

限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、これは、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌剤であり、これは、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。

【0537】

限定されないが、自己免疫疾患適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルβ－メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β－メタゾンベンゾエート、β－メタゾンジプロピオネート、β－メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0538】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないようにして、任意のタイプの分子の、組成物への共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のうちのいずれかを既知の技術、例えば、限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などを使って行うことができる。

【0539】

さらにその他の実施形態では、本明細書に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、例示的実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。

【0540】

本明細書で記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をこのように翻訳後修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば、蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。

【0541】

細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の細胞傷害薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。

【0542】

さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ１２またはＩＬ２）、ＩＬ１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合体形成して、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４１９（１９８０））。

【0543】

他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質に安定に結合される。このような放射性核種としては、例えば、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８などのβ放射体、およびアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５などのα放射体が挙げられる。

【0544】

検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0545】

治療方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、および炎症性疾患または状態を含む、種々の疾患および障害を治療する用途がある。

【0546】

さらに、本発明の物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の治療、または治療用の薬物の製造において使用し得る。

【0547】

いくつかの実施形態では、本発明は、癌の治療、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る任意の制御されない細胞増殖を指し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。元の位置から移動し重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす場合がある。転移は、原発腫瘍部位のものとは異なる癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の播種から生ずる。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。

【0548】

治療され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。

【0549】

種々の実施形態では、本発明は、癌の治療のための改変シグナル伝達物質をさらに含むキメラの一部であるＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を提供する。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、腫瘍を大きく低減および／または除去する。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質は、他の抗癌剤、例えば、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、および免疫抑制剤と併せて対象に投与されると、腫瘍を大きく低減および／または除去する。種々の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と他の抗癌剤の組み合わせは、腫瘍サイズを相乗的に低減するおよび／または腫瘍細胞を除去する。

【0550】

種々の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の標的化部分および１種類または複数種類の改変シグナル伝達物質を含むキメラの一部であるＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質を用いる癌併用療法に関する。したがって、本発明は、例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する標的化部分および１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質および抗癌剤と組み合わせたその使用を提供する。

【0551】

例えば、種々の実施形態では、本発明は、限定されないが、本明細書に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質と、ヒトインターフェロンアルファ２を含むＩＦＮアルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質とのキメラを含む癌の併用療法剤に関する。

【0552】

いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の治療、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0553】

種々の実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患、結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種類または複数種類の炎症性疾患または状態を治療または予防するために使用される。

【0554】

種々の実施形態では、本発明の組成物は、ＭＳ、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、およびその他の自己免疫疾患などの１種類または複数種類の自己免疫疾患および／または神経変性疾患または状態の治療または予防に使用される。

【0555】

種々の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を治療または予防するために用いられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患および／または神経変性疾患は、ＭＳ（限定されないが、本明細書に記載のサブタイプを含む）、アルツハイマー病（限定されないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定されないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤誘発性パーキンソニズム、レヴィー小体型痴呆、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定されないが、突発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病（Ｈｉｒａｍａｙａ ｄｉｓｅａｓｅ））から選択される。

【0556】

キット
本発明はまた、本明細書に記載のうちのいずれかのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の投与（例えば、追加の治療薬を含み、または含まず）のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種類の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種類の医薬組成物を含む。

【0557】

キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を治療する目的のために構成される。

【0558】

使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は、通常、癌の治療などの望まれる治療結果を達成するために、キットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。

【0559】

キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは、無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。

【0560】

定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種類）または２つ以上（２種類以上）を意味し得る。

【0561】

さらに、参照数値表示に関連して使われる用語の「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大で１０％を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５～５５の範囲を含む。

【0562】

「有効量」という用語は、医学的使用に関連して使用される場合、測定できるほどの目的の疾患の治療、予防、または発病速度の低下をもたらすのに効果的である量である。

【0563】

本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「減少され」ている。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は減少され、かついくつかの下流の出力値は減少されるが、他のものは増加し得る。

【0564】

逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「増加され」る。

【0565】

本明細書において、参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まない本発明の技術のその他の実施形態を排除するものではない。

【0566】

ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わりに記載することができる。

【0567】

本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。

【0568】

治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を治療するために、目的の生理的な効果を生み出すのに十分な量または目的の結果を達成することができる量を意味する。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患のうちの１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくす、および障害または疾患の症状を回復させるのに十分な量を含んでよい。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。

【0569】

有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は、最初は、例えば、細胞培養アッセイを含むインビトロアッセイから推測することができる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度を達成するように動物モデルで処方することができる。記載の組成物の血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターすることができる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調節できる。

【0570】

特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。

【0571】

本明細書で使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の治療のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の治療のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。

【実施例】

【0572】

本明細書では、場合により、インターフェロンベースキメラに言及するために、用語の「ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」（ＡＦＮ）が使われる。

【0573】

下記の実施例では、特に断りのない限り、ＩＦＮ対する変異は、ヒトＩＦＮα２に対するものである。

【0574】

実施例１．単一特異性ヒトキメラのヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１標的化の効率
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体を含むヒトＡｃＴａｆｅｒｏｎアルファによる標的化の効率を、ＳＴＡＴ１リン酸化のＦＡＣＳベース定量化により調べた。具体的には、標的化を、一次末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞（ＰＤ－１標的化について）、またはヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－３２１（ＰＤ－Ｌ１標的化について）で分析した。以下の抗体を使用した：
抗ＰＤ－１抗体：
－Ｐｅｍ：ペムブロリズマブ／キイトルーダ（Ｍｅｒｃｋ）
－Ｎｉｖ：ニボルマブ／オプジーボ（ＢＭＳ）
抗ＰＤ－Ｌ１抗体：
－Ａｔｅ：アテゾリズマブ／テセントリク／ＭＰＤＬ３２８０（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）
－Ｄｕｒ：デュルバルマブ／ＭＥＤＩ４７３６（Ｃｅｌｇｅｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）
－Ａｖｅ：アベルマブ／ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ／Ｐｆｉｚｅｒ）
－Ｂｍｓ：ＢＭＳ－９３６５５９／ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ）

【0575】

これらの抗体の配列は、本明細書の別の場所に記載されている。抗ＰＤ－Ｌ１ ＢＭＳ－９３６５５９／ＭＤＸ－１１０５抗体に関しては特に、この抗体の可変ドメインを、一般的なヒトＩｇＧにグラフト化した。したがって、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１２４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0576】

可変ドメインのヒトＩｇＧへの生着後に、次の重鎖および軽鎖配列が得られた：
重鎖：配列番号１２４４
軽鎖：配列番号１２４５

【0577】

種々の抗体重鎖を、ｐＭＴＷ発現ベクター中でフレキシブル２０＊ＧＧＳリンカーを介してｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９配列（例えば、Ｒ１４９Ａ変異を有するヒトＩＦＮα２）に遺伝的に融合した（得られたベクター：ｐＭＴＷ－ＳＩｇＫ－重鎖－（ＧＧＳ）_２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）_９）。軽鎖を同じベクターに挿入した（得られたベクター：ｐＭＴＷ－ＳＩｇＫ－軽鎖）。クローニング方法を模式的に図１に示す。ＰＤ－Ｌ１ ＡＦＮを、標準的プロトコルに従い２５Ｋ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）を用いるＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３Ｆ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中での両方のプラスミドの一時的遺伝子導入により産生した。培地を採取し、細胞を遠心分離により除去し、濾過滅菌した。組換えタンパク質を、製造業者の説明書に従いＮｉ Ｅｘｃｅｌ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて試料から除去した。

【0578】

遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞へのＰＤ－Ｌ１ Ａｂ－ＡＦＮの結合
Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞に、リン酸カルシウムを用いて膜結合型のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を遺伝子導入した。遺伝子導入の２日後に、細胞を再懸濁し、ＰＤ－Ｌ１ Ａｂ－ＡＦＮ（ＦＡＣＳ緩衝液：２％ＦＢＳ；０．５ｍＭ ＥＤＴＡを補充したＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）と４℃で２時間インキュベートした。２回の洗浄後に、細胞をＦＩＴＣ標識ＴＨＥ ＨＩＳ抗体（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；４℃で１時間）とインキュベートした。結合を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ測定器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。図２中のデータは、ＰＤ－Ｌ１ ＡＦＮがＰＤ－Ｌ１遺伝子導入細胞に選択的に結合し、一方でＰＤ－１ ＡＦＮがＰＤ－１発現細胞のみに結合したことを示す。

【0579】

ＰＤ－１標的化：末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のｐＳＴＡＴ１
健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いる密度勾配遠心分離により単離した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中０．５ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、ＦＩＴＣ結合抗ヒトＰＤ－１（クローンＰＤ－１．３．１．３；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄剤後に、細胞を段階希釈ＰＤ－１ Ａｂ－ＡＦＮを用いて３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後に、細胞を抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。図３のデータは、ペムブロリズマブおよびニボルマブ結合ＡｃＴａｆｅｒｏｎはＰＤ－１陽性ＰＢＭＣ中でＳＴＡＴ１をリン酸化できたが、ＰＤ－１陰性ＰＢＭＣ中ではリン酸化できなかったことを示す。

【0580】

ＰＤ－１標的化：遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞中のｐＳＴＡＴ１
Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞に、リン酸カルシウムを用いてヒトＰＤ－１または空のベクターを遺伝子導入した。２日後に、細胞を再懸濁し、段階希釈ＰＤ－１ ＡＦＮで刺激した（１５分、３７℃）。ｐＳＴＡＴ１を上述のように定量化した。図４のデータは、ＰＤ－１ Ａｂ ＡＦＮが、ＰＤ－１発現Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞ではＳＴＡＴ１リン酸化を効率的に誘導するが、モック遺伝子導入細胞ではリン酸化を誘導しないことを示す。

【0581】

ＰＤ－Ｌ１標的化：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞中のｐＳＴＡＴ１
ＭＤＡ－ＭＢ－３２１細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地中で、ＰＤ－（Ｌ）１ ＡＦＮを用いて３７℃で１５分間刺激した。刺激後、ｐＳＴＡＴ１を上述のように定量化した。ＰＤ－Ｌ１結合ＡＦＮは、ＳＴＡＴ１を効率的にリン酸化でき、それによりＰＤ－Ｌ１標的化作用を示すが、ＰＤ－１結合ＡＦＮはそうではなかった（図５）。

【0582】

実施例２．ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対し特異的なＶＨＨの構築と評価
ＥＬＩＳＡアッセイを、ＰＤ－１抗原に対して本明細書の別の場所で記載のように行って種々のＰＤ－１ ＶＨＨの結合親和性を評価した。ＰＤ－１ ＶＨＨの親和性を、以下の表１に表す（列Ａ／対照を参照）：

【表5】

【0583】

ＰＤ－Ｌ１抗原に対して本明細書で記載のように種々のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの結合親和性も同様に、ＥＬＩＳＡにより評価した。ＰＤ－１ ＶＨＨの親和性を、以下の表２に示す（列Ａ／対照を参照）；

【表6】

【0584】

ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞への結合も調べた。具体的には、ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞をＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ（２μｇ／ｍｌ；４℃で２時間）およびＦＩＴＣ標識抗ヒス抗体（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ；４℃で１時間）で染色した。結合を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ測定器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。結合アッセイの試験結果を図６に示す。

【0585】

実施例３．ヒトＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ＡｃＴａｆｅｒｏｎの特性評価
抗ヒトＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの、ＰＤ－１との相互作用を阻害するそれらの能力についての最初のスクリーニング後に、次のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨをさらなる特性評価用に選択した：２ＬＩＧ３（配列番号２８７）、２ＬＩＧ２７（配列番号２９０）、２ＬＩＧ９７（配列番号３００）、２ＬＩＧ９９（配列番号３０１）、３ＬＩＧ８（配列番号３０９）、２ＬＩＧ１８９（配列番号３０６）、および２ＬＩＧ１７６（配列番号３０５）。

【0586】

ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ：２ＬＩＧ３、２ＬＩＧ２７、２ＬＩＧ９７、２ＬＩＧ９９、３ＬＩＧ８、２ＬＩＧ１８９、および２ＬＩＧ１７６をｐＨＥＮ６Ｃ発現ベクター中で次のようにクローン化した：ｐＨＥＮ６Ｃ－ＰｅｌＢ－ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ－（Ｈｉｓ）_６。タンパク質をＩＰＴＧ刺激により大腸菌中で一晩産生し、製造業者の説明書に従いＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いてペリプラズム抽出物から精製した。

【0587】

ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用に対するＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの効果を、プレート結合アッセイで試験した。ＰＤ－Ｌ１の組換え細胞外ドメインを、そのＣ末端ＦＬＡＧタグおよびＭ２抗ＦＬＡＧ Ａｂ（Ｓｉｇｍａ）を用いて、Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）上に一晩固定した。プレートをブロッキングし（ＰＢＳ＋０．１％カゼイン）、段階希釈ＶＨＨの存在下または非存在下でｈＰＤ－１－ｈＦｃ融合タンパク質（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）とインキュベートした。洗浄後、結合ＰＤ－１を、ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）結合抗ヒトＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅａｓｅａｒｃｈ）およびＴＭＢペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ）を用いて測定した。

【0588】

ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨのヒトおよびカニクイザルＰＤ－Ｌ１に対する親和性を、バイオレイヤー干渉法：Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて測定した。ＶＨＨをペンタ－Ｈｉｓ（ＨＩＳ１Ｋ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上に固定し、段階希釈ヒトＰＤ－Ｌ１－ＦｃまたはカニクイザルＰＤ－Ｌ１－Ｆｃタンパク質（両方とも、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌから入手）中に浸漬した。親和性を、Ｏｃｔｅｔソフトウェア（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて計算した。

【0589】

表３は、試験した全てのＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨがＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用を強力に抑制できたことを示す。さらに、全てのＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、ヒトおよびカニクイザルＰＤ－Ｌ１に対し類似の結合親和性を示した。

【表7】

【0590】

ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ（すなわち、２ＬＩＧ３、２ＬＩＧ２７、２ＬＩＧ９７、２ＬＩＧ９９、３ＬＩＧ８、２ＬＩＧ１８９、および２ＬＩＧ１７６）を次に、ｐＨＥＮ６ｃ発現ベクター中でＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）フォーマットにクローン化した（すなわち、ｐＨＥＮ６ｃ－ＰｅｌＢ－ＰＤ－Ｌ１＿ＶＨＨ－（ＧＧＳ）_２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）_６）、式中、ＰＤ－Ｌ１＿ＶＨＨは、２ＬＩＧ３、２ＬＩＧ２７、２ＬＩＧ９７、２ＬＩＧ９９、３ＬＩＧ８、２ＬＩＧ１８９、および２ＬＩＧ１７６から選択される）。タンパク質を、ＩＰＴＧ刺激により大腸菌中で一晩産生し、製造業者の説明書に従いＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いてペリプラズム抽出物から精製した。

【0591】

生物活性を、親ＨＬ１１６細胞（ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーターを安定に遺伝子導入したＩＦＮ応答性細胞株）で測定した。細胞を一晩播種し、過剰量（２０μｇ／ｍｌ）の対応するＶＨＨの存在下または非存在下（この後者は、非標的化状況を模倣する）で、段階希釈ＰＤ－Ｌ１ ＡＦＮで６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。

【0592】

図７Ａ～Ｇに示すように、ＡｃＴａｆｅｒｏｎとしてフォーマットされた全てのＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨは、ＨＬ１１６細胞中でＩＦＮルシフェラーゼレポーターを誘導することができた。ＡｃＴａｆｅｒｏｎ活性の特異性を、ＩＦＮ部分に連結されないそれぞれのＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの過剰量の存在下でルシフェラーゼレポーター活性を比較することにより評価した（図７Ａ～Ｇ参照）。

【0593】

実施例４．ヒトＰＤ－Ｌ１抗体ＡｃＴａｆｅｒｏｎのインビトロ効力
ＰＤ－Ｌ１標的化モノクローナル抗体であるモノクローナル抗体アテゾリズマブ（Ａｔｅ）を、標的細胞に対するインターフェロン活性の特異性を評価するための試料として選択した。

【0594】

アテゾリズマブをＩｎＶｉｖｏｇｅｎから入手した。アテゾリズマブ＿ｈＩＦＮａ２（Ｒ１４９Ａ）（Ａｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔ）を次のようにして生成した：Ａｂ重鎖を、ｐＭＴＷ発現ベクター中でフレキシブル２０＊ＧＧＳリンカーを介してｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９配列に遺伝的に融合した（得られたベクター：ｐＭＴＷ－ＳＩｇＫ－重鎖－（ＧＧＳ）_２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）_９）。軽鎖を同じベクターにクローン化した（得られたベクター：ｐＭＴＷ－ＳＩｇＫ－軽鎖）。両方のプラスミドを、製造者ガイドラインに従ってＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に同時遺伝子導入した。得られたＡｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔを、Ｎｉセファロースｅｘｃｅｌ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて培地から精製した。Ａｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔの効果を、特異性を示すために過剰量のアテゾリズマブ（Ａｔｅ）（５０μｇ／ｍｌ）を使って前の実施例３で記載した同じアッセイを用いてインビトロで実証した（図８参照）。

【0595】

図８は、Ａｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔがＨＬ１１６細胞中でＩＦＮルシフェラーゼレポーターを誘導できたことを示す。Ａｔｅ－ＩＦＮａ２ｍｕｔ活性の特異性を、ＩＦＮ部分に連結されないアテゾリズマブ（Ａｔｅ）の過剰量の存在下でルシフェラーゼレポーター活性を比較することにより評価した。

【0596】

実施例５．ヒトＰＤ－Ｌ１抗体ＡｃＴａｆｅｒｏｎのインビボ効力
ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ２ＬＩＧ９９を、ヒトＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）のインビボ抗腫瘍効力を評価するために選択した。

【0597】

ヒト化免疫系を有するマウスでのヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞株（ＲＬ）腫瘍モデル：ヒト化免疫系を有するマウスを次記のプロトコルに従って生成した。単核球を、ＨＬＡ－Ａ２＋ヒト臍帯血試料からＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐを用いる密度勾配遠心分離後に収集した。その後、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）をＭＡＣＳ技術により単離し、ＦＡＣＳを用いてＣＤ３４＋純度およびＣＤ３＋混入について検査した。次に、８０％を超える純度のＣＤ３４含有ＨＳＣを２～３日齢の１００ｃＧｙの骨髄破壊的照射処理を受けたＮＳＧマウスの肝内に注入した。ＨＳＣ注入後８～１２週で、ヒト細胞生着を、ＦＡＣＳを用いてｐａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅヒトおよびマウスＣＤ４５マーカーで分析し、総生存血中のリンパ球の５％を超えるヒトＣＤ４５細胞を有するマウスを、腫瘍埋め込みのために選択した。ＨＳＣ注入の１２週後に、マウスの皮下に２ｘ１０^６個のＲＬ腫瘍細胞を注射した。５日後、マウスをＦｌｔ３Ｌの腹膜注入により１８日目まで毎日治療した。ＰＢＳ（対照）または２ＬＩＧ９９ベースＡＦＮ（すなわち、ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａに連結された２ＬＩＧ９９を含むＡＦＮ）による治療を、腫瘍注射の９日目（腫瘍が約１０ｍｍ^２のサイズに到達した時点）より病変周囲への投与により開始した。

【0598】

図９に示すように、２ＬＩＧ９９ベースＡＦＮは、インビボで抗腫瘍効果を有した。

【0599】

実施例６．ヒトＰＤ－１ ＡｃＴａｆｅｒｏｎのインビトロ効力
ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）のヒトＰＤ－１（プログラム死１）標的化の効率を、ＦＡＣＳにおけるＰＤ－１または空のベクター遺伝子導入Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞中のＳＴＡＴ１リン酸化の定量化により調べた。

【0600】

下記の２種類の異なるＰＤ－１ ＶＨＨを分析のために選択した：
１０２Ｃ３：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲＡＥＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１２４６）；および
１０２Ｃ１２：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１２４７）。

【0601】

これらのＰＤ－１ ＶＨＨをＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）に挿入した：ＡＦＮをｐＨＥＮ６ｃ発現ベクター中で次のようにクローン化した：ｐＨＥＮ６Ｃ－ＰｅｌＢ－ＰＤ－１＿ＶＨＨ－（ＧＧＳ）_２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）_６（ＰＤ－１＿ＶＨＨは、１０２Ｃ３または１０２Ｃ１２；すなわち、１０２Ｃ３ ＡＦＮおよび１０２Ｃ１２ ＡＦＮである）。 タンパク質を、ＩＰＴＧ刺激により大腸菌中で一晩産生し、製造業者の説明書に従いＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いてペリプラズム抽出物から精製した。

【0602】

Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞に、標準的リン酸カルシウム技術を用いて空のベクターまたはヒトＰＤ－１発現プラスミドを遺伝子導入した。遺伝子導入の２日後に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、段階希釈の１０２Ｃ３ ＡＦＮまたは１０２Ｃ１２ ＡＦＮまたは野生型ＩＦＮａ２（陽性対照）を用い、３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後に、細胞を抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ）を用いて分析した。

【0603】

ｐＳＴＡＴ１陽性細胞のパーセンテージをＦＡＣＳで定量化し、濃度の関数としてプロットした。図１０Ａ～Ｃは、１０２Ｃ３ ＡＦＮおよび１０２Ｃ１２ ＡＦＮが、ＰＤ－１発現Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞のＳＴＡＴ１リン酸化を効率的に誘導するが、モック遺伝子導入細胞では遙かに少ない程度にしか誘導しないことを示す。これは、ＰＤ－１およびモック遺伝子導入ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対し等しく活性である野生型ＩＦＮａ２とは対照的である。

【0604】

等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。

【0605】

当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。

【0606】

参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0607】

本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。

【0608】

本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用できる。
本発明の態様は以下を含む。
［付記１］
配列番号３０１、２８７、２９０、３００、３０５、３０６、および３０９のうちの１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２］
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含むＰＤ－Ｌ１結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号１９９、１８１、１７８、１８３、１８９、１９６、２０１、および２０６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号２５９、２６０、２４１、２４２、２４５、２４６、２６３、および２６４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；ならびに
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号２６８、２７２、および２７７のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
ＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記３］
前記標的化部分が、単一ドメイン抗体である、付記１または２に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記４］
前記標的化部分が、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨを含む、付記３に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記５］
１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、付記１～４のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記６］
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも任意に改変されていてもよい、付記５に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記７］
１種類または複数種類の追加のシグナル伝達物質を含む、付記１～６のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記８］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原を認識し、任意に腫瘍抗原を機能的に調節してもよい、付記７に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記９］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が免疫細胞上の抗原を認識し、任意に免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、付記８に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１０］
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、付記９に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１１］
細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、付記１～１０のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１２］
ＰＤ－Ｌ１を認識してＰＤ－Ｌ１に結合し、その活性を実質的に機能的に調節するかあるいはその活性を実質的に機能的に調節しない、付記１～１１のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１３］
付記１～１２のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする組換え核酸組成物。
［付記１４］
付記１３に記載の核酸を含む宿主細胞。
［付記１５］
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含むＰＤ－１結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号２～２３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号２４～５４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号５５～６９のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
ＰＤ－１結合物質。
［付記１６］
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含むＰＤ－Ｌ１結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号１７７～２０７のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号２０８～２６６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号２６７～２８５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
ＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１７］
前記標的化部分が、単一ドメイン抗体である、付記１５または１６に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１８］
前記標的化部分が、Ｖ _Ｈ Ｈ、ヒト化Ｖ _Ｈ Ｈ、またはラクダ化Ｖ _Ｈ Ｈを含む、付記１７に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記１９］
配列番号７０～８３、１２４６、または１２４７のうちの１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、付記１８に記載のＰＤ－１結合物質。
［付記２０］
配列番号２８６～３１６のうちの１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、付記１８に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２１］
１種類または複数種類のシグナル伝達物質を含む、付記１５～２０のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２２］
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択され、これらはいずれも任意に改変されていてもよい、付記２１に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２３］
１つまたは複数の追加の標的化部分を含む、付記１５～２２のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２４］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が腫瘍抗原を認識し、任意に腫瘍抗原を機能的に調節してもよい、付記２３に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２５］
前記１つまたは複数の追加の標的化部分が免疫細胞上の抗原を認識し、任意に免疫細胞上の抗原を機能的に調節してもよい、付記２４に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２６］
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、付記２５に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２７］
細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞にまたは腫瘍環境に動員する、付記１５～２６のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２８］
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識して結合し、その活性を実質的に機能的に調節するかあるいはその活性を実質的に機能的に調節しない、付記１５～２７のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記２９］
付記１５～２８のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質をコードする組換え核酸組成物。
［付記３０］
付記２９に記載の核酸を含む宿主細胞。
［付記３１］
癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数を有する患者における使用に適している、付記１５～２８のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記３２］
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とする抗原または受容体認識ドメインを含む標的化部分ならびにインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子のうちの１つまたは複数から選択されるシグナル伝達物質を含むキメラの有効量を、投与を必要とする患者に投与することを含む、癌を治療または予防するための方法。
［付記３３］
前記シグナル伝達物質が、改変されている、付記３２に記載の方法。
［付記３４］
前記ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質が、付記１～１２または付記１５～２８のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質である、付記３２または付記３３に記載の方法。
［付記３５］
前記ＰＤ－１結合物質が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号２～２３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号２４～５４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号５５～６９のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
付記３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
［付記３６］
前記ＰＤ－Ｌ１結合物質が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの標的化部分を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が、配列番号１７７～２０７のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；
（ｂ）ＣＤＲ２が、配列番号２０８～２６６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み；および
（ｃ）ＣＤＲ３が、配列番号２６７～２８５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
付記３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
［付記３７］
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖のうちの１つまたは複数から選択される、付記３２～３６のいずれか１項に記載の方法。
［付記３８］
癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数の治療における使用のための付記１～３７のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質。
［付記３９］
癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１つまたは複数を治療するための薬物の製造のための付記１～３８のいずれか１項に記載のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１結合物質の使用。
［付記４０］
（ａ）付記１～１２または１６～２８のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質；および
（ｂ）野生型ＩＦＮα２に比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮα２
を含むキメラタンパク質であって、
前記標的化部分および前記改変シグナル伝達物質が、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記４１］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、位置Ｒ１２０、Ｍ１４８、Ｒ１４９、およびＬ１５３に１つまたは複数の変異を含む、付記４０に記載のキメラタンパク質。
［付記４２］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１つまたは複数の変異を含む、付記４０に記載のキメラタンパク質。
［付記４３］
前記改変ヒトＩＦＮα２が、Ｒ１２０Ｅ変異と、Ｒ１４９ＡまたはＬ１５３Ａ変異のいずれかとを含む、付記４０に記載のキメラタンパク質。
［付記４４］
（ａ）付記１～１２または付記１６～２８のいずれか１項に記載のＰＤ－Ｌ１結合物質；および
（ｂ）野生型ＩＦＮβに比べて改善された安全性を付与する１つまたは複数の変異を有する改変ヒトＩＦＮβ
を含むキメラタンパク質であって、
前記標的化部分および前記改変シグナル伝達物質が、任意に１つまたは複数のリンカーにより連結されていてもよい、キメラタンパク質。
［付記４５］
前記改変ヒトＩＦＮβが、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１つまたは複数の変異を含む、付記４４に記載のキメラタンパク質。
［付記４６］
前記改変ヒトＩＦＮβが、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇから選択される１つまたは複数の変異を含む、付記４５に記載のキメラタンパク質。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【配列表】

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