知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-22
(45)【発行日】2024-01-30
(54)【発明の名称】微生物感染症の治療および／または予防用グルコン酸誘導体
(51)【国際特許分類】
A61K 31/191 20060101AFI20240123BHJP
A61K 31/365 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/366 20060101ALI20240123BHJP
A61K 31/765 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/12 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20240123BHJP
A61K 9/70 20060101ALI20240123BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240123BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20240123BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20240123BHJP
A61P 13/00 20060101ALI20240123BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20240123BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240123BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240123BHJP
A61P 17/10 20060101ALI20240123BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20240123BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240123BHJP
C07C 59/105 20060101ALI20240123BHJP
C07D 307/33 20060101ALI20240123BHJP
C07D 309/30 20060101ALI20240123BHJP
C08G 63/06 20060101ALI20240123BHJP
A01N 37/36 20060101ALN20240123BHJP
A01N 43/08 20060101ALN20240123BHJP
A01N 43/16 20060101ALN20240123BHJP
A01P 3/00 20060101ALN20240123BHJP
【ＦＩ】
A61K31/191
A61K31/365
A61K31/366
A61K31/765
A61K9/06
A61K9/08
A61K9/10
A61K9/12
A61K9/20
A61K9/70 401
A61P31/04
A61P1/02
A61P11/02
A61P13/00
A61P15/02
A61P17/00
A61P17/00 101
A61P17/02
A61P17/10
A61P17/14
A61P27/02
C07C59/105
C07D307/33 335
C07D309/30 D
C08G63/06
A01N37/36
A01N43/08 H
A01N43/16 B
A01P3/00
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2020519028
(86)(22)【出願日】2018-10-05
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-12-17
(86)【国際出願番号】 EP2018077129
(87)【国際公開番号】W WO2019068862
(87)【国際公開日】2019-04-11
【審査請求日】2021-10-04
(31)【優先権主張番号】17195192.4
(32)【優先日】2017-10-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】518324821
【氏名又は名称】ジェディア バイオテック エービー
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】エラーヴィク，ウルフ
(72)【発明者】
【氏名】スターナー，オロフ
(72)【発明者】
【氏名】ストレブンズ，ヘレナ
(72)【発明者】
【氏名】マナー，ソフィー
【審査官】鳥居 福代
(56)【参考文献】
【文献】特開２００７－０７７１５０（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２００８／００５８４２１（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５０１７４１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００７－０７７１５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】New Food Industry，Vol.47, No.3，2005年，p.45-54
【文献】Research in Microbiology，2014年，Vol.165，p.549-558
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
Ａ０１Ｎ
Ａ０１Ｐ
Ｃ０７Ｃ
Ｃ０７Ｄ
Ｃ０８Ｇ
Ｃ１２Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ガードネレラ・バジナリス、ジンジバリス菌、大腸菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、化膿性連鎖球菌、Ｃ群β型溶血連鎖球菌、Ｇ群β型溶血連鎖球菌、および／またはストレプトコッカス・アガラクチアからなる群より選択される細菌による細菌感染症の治療および／または予防における使用のための、式ＸＸ：【化1】
【化2】
前記医薬組成物が、少なくとも５重量％の式ＸＸ、ＸＩＸまたはＸＸＩの前記化合物を含み、式ＸＸ、ＸＩＸまたはＸＸＩの前記化合物が、前記医薬組成物中で唯一の抗菌剤である、医薬組成物。
【請求項2】
前記化合物が、式ＸＩＸまたは式ＸＸである、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項3】
前記細菌感染症が、泌尿生殖器感染症である、請求項１または２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項4】
前記細菌感染症が、腟感染症である、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項5】
前記細菌感染症が、細菌性腟症である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項6】
前記感染症が、ａ．皮膚炎および／または湿疹、例えば脂漏性皮膚炎；
ｂ．皮膚炎または湿疹の二次感染症；
ｃ．アクネおよび／またはざ瘡様状態、例えば酒さ、口周囲皮膚炎または眼窩周囲皮膚炎；
ｄ．フルンケル症；
ｅ．カルブンケル症；
ｆ．毛包炎；
ｇ．膿痂疹；
ｈ．丹毒；
ｉ．歯周炎；
ｊ．Ａ群またはＢ群連鎖球菌多耐性細菌のコロニー形成に続発する感染症、例えば前記コロニー形成が、口腔、鼻内または肛門生殖器である；
ｋ．肛囲溶連菌皮膚炎；
ｌ．間擦疹性の皮膚炎；
ｍ．爪囲炎；
ｎ．感染皮膚創傷の感染症；
ｏ．陥入爪または足の疱疹に続発し、糖尿病性足創傷と関連する、二次感染症；
ｐ．動物咬傷後に生じる二次感染症；
ｑ．虫刺され、蚊咬傷、ダニ咬傷、遊走性紅斑または皮膚良性リンパ腺腫後に生じる二次感染症；
ｒ．単純ヘルペスの二次感染症、例えば口腔単純ヘルペスまたは生殖器単純ヘルペス；帯状疱疹または水痘帯状疱疹の二次感染症；
ｓ．眼瞼炎；
ｔ．結膜炎；
ｕ．腟炎；および
ｖ．子宮頸管炎
からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項7】
前記感染症が、ヒトにおける感染症である、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項8】
前記感染症が、妊婦における感染症である、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項9】
細菌性腟症、ここで、前記細菌性腟症は、ガードネレラ・バジナリス、ジンジバリス菌、大腸菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、化膿性連鎖球菌、Ｃ群β型溶血連鎖球菌、Ｇ群β型溶血連鎖球菌、および／またはストレプトコッカス・アガラクチアにより引き起こされる、の治療で使用するための式ＸＸ：【化3】
【化4】
前記医薬組成物が、少なくとも５重量％の式ＸＸ、ＸＩＸまたはＸＸＩの前記化合物を含み、式ＸＸ、ＸＩＸまたはＸＸＩの前記化合物が、前記医薬組成物中で唯一の抗菌剤である、医薬組成物。
【請求項10】
前記化合物が、下記グルコノ－δ－ラクトン（式ＸＩＸ）である、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。【化5】
【請求項11】
ガードネレラ・バジナリス感染症、ジンジバリス菌感染症、大腸菌感染症、緑膿菌感染症、アシネトバクター・バウマンニ感染症、化膿性連鎖球菌感染症、Ｃ群β型溶血連鎖球菌感染症、Ｇ群β型溶血連鎖球菌感染症、および／またはストレプトコッカス・アガラクチア感染症からなる群より選択される細菌感染症の治療および／または予防で使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物はオリゴマー／ポリマーを含み、前記オリゴマー／ポリマーは、式ＸＸ：【化6】
【化7】
【請求項12】
前記オリゴマーまたはポリマーが乳酸に由来する構造をさらに含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記医薬組成物が、１０～９５重量％など、１５～９５重量％など、２０～９０重量％など、４０～９５重量％など、４０～９５重量％など、５０～９５重量％などの、５～９９重量％の式ＸＸの前記化合物または前記ラクトンを含む；および／または前記医薬組成物が、５重量％以下などの、１０重量％以下の水を含む、
請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項14】
前記医薬組成物が、タンポン、バギトリウム（ｖａｇｉｔｏｒｉｕｍ）、腟エアロゾル、腟カップ、膣ゲル、膣挿入物、膣パッチ、膣リング、膣スポンジ、膣坐剤、膣クリーム、膣エマルション、膣フォーム、膣ローション、膣軟膏、膣粉末、膣シャンプー、膣溶液、膣スプレー、膣懸濁剤、膣錠、膣ロッド、膣ディスク、膣デバイス、およびこれらの任意の組み合わせとしての処方のための、または前記医薬組成物が、タンポン、生理用ナプキン、尿漏れ防止パッドもしくはおむつ、またはパンティーライナー等の、衛生用品上への適用のための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項15】
ガードネレラ・バジナリス、ジンジバリス菌、大腸菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、化膿性連鎖球菌、Ｃ群β型溶血連鎖球菌、Ｇ群β型溶血連鎖球菌、および／またはストレプトコッカス・アガラクチアからなる群より選択される細菌により引き起こされる細菌性外陰腟炎により引き起こされる、早産の防止における使用のための式ＸＸ：【化8】
【化9】
【請求項16】
前記医薬組成物が、経膣で投与される、請求項１５に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための、式Ｉの化合物に関する。さらに、本発明は、バイオフィルム形成の防止および／または低減のための方法にも関する。
【背景技術】
【0002】
抗菌剤は、感染症の患者の治療のため過去７０年間にわたり使用されてきた。１９４０年代以降、これらの薬物は感染症の疾病およびそれによる死亡を大きく低減してきた。しかし、これらの薬物は広範に、長期間にわたり使用されてきたので、死滅させるために抗菌剤が設計されている感染微生物は、それらの剤に順応してきた。その結果、医薬は効果的でなくなり、病原菌は体内で生き残り、他人に伝播するリスクが増大している。
【0003】
抗菌剤耐性は、増加の一途をたどる細菌、寄生生物、ウイルスおよび真菌に起因する一連の感染症の効果的予防および治療を脅かす。
【0004】
従って、抗菌剤耐性は、全ての政府部門および社会全体にわたって対策を必要とする地球規模の公衆衛生に対する一段と深刻な脅威となっている。
【0005】
全てのクラスの微生物は耐性を発達させる：真菌は抗真菌剤耐性を発達させ、ウイルスは抗ウイルス剤耐性を発達させ、原虫は抗原虫剤耐性を発達させ、細菌は抗生物質耐性を発達させる。
【0006】
抗生物質耐性に関する問題は、共通の現象である。治療に耐性のある真菌の感染は、新たに出現する公衆衛生上の問題である。全体として、抗真菌耐性はまだ、比較的珍しいが、これらの感染症のさらなる耐性の発生を防止しかつ蔓延を防ぐためにもっと多くの方策が講じられない限り、この問題はおそらく発展し続けるであろう。ほとんどの抗真菌剤耐性は、カンジダ種で発生するが、アスペルギルス属などの他の型の真菌の耐性も新たな問題となっている。
【0007】
真菌は、それらが感染するヒト宿主と同様に真核生物であるので、抗真菌薬物開発に採用可能な重複しない標的はほんの僅かしかない。従って、抗真菌剤はほとんどが、少数の代謝経路を標的とする薬物に限定される。
【0008】
抗菌剤の１つの標的は、微生物の発生過程の産物であるバイオフィルムである。バイオフィルムは、相互に付着しかつ自製の細胞外ポリマーマトリックスにより取り囲まれる微生物細胞により形成される。バイオフィルムの形成は、特に有害な環境中で、細菌および真菌が生活環境に適合するための生存戦略である。細胞がバイオフィルムモードの成長に切り替わる場合、細胞は、行動の表現型シフトを受け、その際、多数の遺伝子が特異的に制御される。バイオフィルムは、多くの異なる種類の微生物、例えば、細菌、古細菌、原虫、真菌および藻類を含み得る。
【0009】
バイオフィルムは、８０％の微生物感染症に関連していると推定されており、バイオフィルム中での微生物の成長は、それらの抗菌剤への耐性を強化し得る。さらに、バイオフィルム細菌は、浮遊細胞に比べて抗生物質に対し最大で１０００倍高い寛容性および／または耐性がある。
【0010】
ほとんどの真菌では、菌糸は主要な栄養生長モードであり、ひとまとめにして菌糸体と呼ばれる。例えば、カンジダ・アルビカンスの毒性は、浮遊細胞から菌糸への変換により媒介される。菌糸型、すなわち、糸状細胞は、上皮細胞を破壊する細胞傷害性ペプチド毒素であるカンジダリジンにより媒介される、組織を侵害し炎症を誘導する能力を有する（Ｍｏｙｅｓ ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６，５３２，６４）。
【0011】
抗菌剤耐性は、原発性感染において問題であるだけでなく、二次感染においても問題である。感染症の予防および治療のための効果的抗菌剤がなければ、臓器移植、癌化学療法、糖尿病管理および大部分の手術などの医療処置は、極めてリスクが高くなる。さらに、真菌感染症は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核または化学療法剤受けている患者などの、免疫無防備状態の患者の罹患および死亡の主要な原因の１つになっている。高い認識および治療戦略にもかかわらず、臨床現場で使用される抗真菌薬物に対する耐性の高頻度の発生は、真菌症の犠牲者の増大の一因である。
従って、新規抗菌剤に対する新たな必要が存在する。
従って、新規抗菌剤に対する新たな必要が存在する。
【発明の概要】
【0012】
本発明者らは、バイオフィルム形成を防止および／または低減するための方法を開発した。バイオフィルム形成が低減または防止されると、個々の微生物細胞は、もはや表面に付着できない。従って、さらなる感染は防止され、もはやバイオフィルムを形成しない微生物細胞は、廃棄される。本発明者らは、式Ｉ：
の化合物またはそのラクトン
（式中、
Ｒは、Ｈ、－アルキル、－Ｃ（Ｏ）アルキルおよびフェニルからなる群より選択され；
Ｒ’は、－ＯＲ、－Ｈおよびハロゲンからなる群から独立に選択され；および
ｎは、整数１、２または３である）
による治療が、真菌種のバイオフィルムの存在を低減し、いくつかの真菌種に対し細胞傷害性作用を有することを示した。さらに、本発明者らは、式Ｉの化合物が抗菌薬として有用であることを示した。
【化1】
（式中、
Ｒは、Ｈ、－アルキル、－Ｃ（Ｏ）アルキルおよびフェニルからなる群より選択され；
Ｒ’は、－ＯＲ、－Ｈおよびハロゲンからなる群から独立に選択され；および
ｎは、整数１、２または３である）
による治療が、真菌種のバイオフィルムの存在を低減し、いくつかの真菌種に対し細胞傷害性作用を有することを示した。さらに、本発明者らは、式Ｉの化合物が抗菌薬として有用であることを示した。
【0013】
従って、一態様では、本発明は、式Ｉの化合物または微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。但し、微生物感染症が真菌感染症である場合には、式Ｉの化合物は式（ＸＩＶ）：
の化合物またはそのラクトンではない。
【化2】
【0014】
一実施形態では、本発明は、細菌感染症または真菌および細菌混合感染症の治療で使用されるグルコノ－δ－ラクトンに関する。
【0015】
別の態様では、本発明は、バイオフィルム形成の防止および／または低減のための方法に関し、方法は、式Ｉの化合物の投与を含む。
【0016】
さらなる態様では、本発明は、早産の防止で使用する式Ｉの化合物に関する。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】種々の酸で処理したカンジダ・アルビカンスの正規化バイオフィルム形成を示す図である。ＧｌｙＡ＝グリセリン酸（ｐＨ＝７）、ＸＡ＝キシロン酸（ｐＨ＝７）、ＣＡ＝クエン酸（ｐＨ＝４．６）、ＧＡ＝グルコン酸（ｐＨ＝６．５）、ＬＡ＝乳酸（ｐＨ＝４．９）。バイオフィルムは２４時間後に測定した。
【図2】蒸留水（中空円）、ｐＨ４緩衝液（中実四角）、ｐＨ５緩衝液（中空四角）、およびｐＨ７緩衝液（中実円）中でのグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）の加水分解における旋光の変化を示す図である。
【図3】ｐＨ２．６～６．６のリン酸緩衝液（中空円、点線）またはグルコノ－δ－ラクトン（中実四角、実線）を含む最少培地中のカンジダ・アルビカンスの正規化バイオフィルム形成を示す図である。バイオフィルムは２４時間後に測定し、染色はクリスタルバイオレットで実施した。
【図4】（Ａ）は、ラクトン化／オリゴマー化ＧＡで処理したカンジダ・アルビカンスの正規化バイオフィルム形成を示す図である。ラクトン化／オリゴマー化グルコン酸のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を１時間毎（異なる時間間隔で）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を２４時間後に測定した。（Ｂ）は、ラクトン化／オリゴマー化ＧＡで処理したカンジダ・グラブラタの正規化バイオフィルム形成を示す図である。ラクトン化／オリゴマー化グルコン酸のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を１時間毎（異なる時間間隔で）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を２４時間後に測定した。
【図5】（Ａ）は、グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）で処理したカンジダ・アルビカンスの正規化バイオフィルム形成を示す図である。ＧＤＡのペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を１、２、３、４、５、６および２４時間後に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を２４時間後に測定した。（Ｂ）は、ＧＤＡで処理したカンジダ・グラブラタの正規化バイオフィルム形成を示す図である。ＧＤＡのペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を１、２、３、４、５、６および２４時間後に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を２４時間後に測定した。
【図6】（Ａ）は、種々の濃度のグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）で２４時間処理後のＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタのバイオフィルムの生存率を示す図である。バイオフィルム染色は、ＸＴＴを用いて実施した。光学密度は、４８５ｎｍで測定した。斜線のバーは、Ｃ．アルビカンスのデータを示す。中実黒色のバーは、Ｃ．グラブラタのデータを示す。（Ｂ）は、種々の濃度のＧＤＡで４８時間処理後のＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタのバイオフィルムの生存率を示す図である。バイオフィルム染色は、ＸＴＴを用いて実施した。光学密度は、４８５ｎｍで測定した。斜線は、Ｃ．アルビカンスのデータを示す。中実黒色のバーは、Ｃ．グラブラタのデータを示す。
【図7】Ｃ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの成熟バイオフィルムに対するグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）の効果を示す。成熟バイオフィルム（４８時間成長）をＧＤＡと共に３７℃で５時間インキュベートした後、段階希釈した細胞をＹＰＤプレート上に播種し細胞生存を推定した。
【図8】（Ａ）は、未処理Ｃ．アルビカンスの最少培地ｐＨ７．０中でのバイオフィルム発生のマイクロ流体試験を示す。未処理細胞は、主に菌糸を形成する。（Ｂ）は、ｘ５０最終濃度ｐＨ３．８でグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）の加水分解物を含む最少培地中で処理したＣ．アルビカンスのバイオフィルム発生のマイクロ流体試験を示す。ＧＤＡの添加はＣ．アルビカンスを、菌糸としてではなく、主に酵母型として成長させた。
【図9】種々のｐＨ（２．６～６．６）を有する培地を得るために、リン酸緩衝液（中実四角）、クエン酸（中空四角）、乳酸（中実三角）、グルコン酸（中実円）またはグルコノ－δ－ラクトン（中空円）のいずれかで処理した大腸菌Ｋ１２のバイオフィルム形成を示す図である。バイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色した。
【発明を実施するための形態】
【0018】
化合物
一態様では、本発明は、式Ｉ：
の化合物またはそのラクトンを含む、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための医薬組成物に関し、式中、
Ｒは、Ｈ、－アルキル、－Ｃ（Ｏ）アルキルおよびフェニルからなる群より選択され；
Ｒ’は、－ＯＲ、－Ｈおよびハロゲンからなる群から独立に選択され；および
ｎは、整数１、２または３であり、
但し、微生物感染症が真菌感染症である場合、式Ｉの化合物は式（ＸＩＶ）の化合物：
またはそのラクトンではない。
一態様では、本発明は、式Ｉ：
【化3】
Ｒは、Ｈ、－アルキル、－Ｃ（Ｏ）アルキルおよびフェニルからなる群より選択され；
Ｒ’は、－ＯＲ、－Ｈおよびハロゲンからなる群から独立に選択され；および
ｎは、整数１、２または３であり、
但し、微生物感染症が真菌感染症である場合、式Ｉの化合物は式（ＸＩＶ）の化合物：
【化4】
【0019】
一実施形態では、アルキルはＣ１～Ｃ２０脂肪族鎖である。本明細書で使用される場合、用語の「脂肪族鎖」は、非芳香族炭化水素を指す。上記脂肪族鎖は、直鎖、分岐および／または環状であってよい。上記脂肪族鎖は、飽和または不飽和の環状であってよい。上記脂肪族鎖では、１個または複数の水素が、１個または複数のベンゼン部分を含む芳香族部分により置換されてもよい。
【0020】
一実施形態では、アルキルは、Ｃ１～Ｃ２０脂肪族鎖であり、１個または複数の水素が－ＯＨ、＝Ｏ、またはフェニルで任意に置換され、また、１個または複数の脂肪族鎖のＣＨ２基がＯ、Ｓ、またはＮＨで任意に置換される。脂肪族鎖の１個または複数のＣＨ２基がＯ、Ｓ、またはＮＨで任意に置換されるアルキルの非限定的例は、エーテル、チオエーテルおよび第三級アミンである。一実施形態では、アルキルは、Ｃ１～Ｃ２０脂肪族鎖、例えば、Ｃ１～Ｃ１５脂肪族鎖、Ｃ１～Ｃ１０脂肪族鎖、Ｃ１～Ｃ５脂肪族鎖など；Ｃ５～Ｃ２０脂肪族鎖、例えば、Ｃ５～Ｃ１５脂肪族鎖、Ｃ５～Ｃ１０脂肪族鎖など；Ｃ１０～Ｃ２０脂肪族鎖、例えば、Ｃ１０～Ｃ１５脂肪族鎖などである。好ましい実施形態では、アルキルは、メチル、エチル、およびプロピルからなる群から選択される。
【0021】
一実施形態では、少なくとも１個のＲ’は－ＯＲである。一実施形態では、少なくとも２個、例えば、少なくとも３個、例えば、少なくとも４個、例えば、少なくとも５個、例えば、少なくとも６個のＲ’はＯＲである。好ましい実施形態では、Ｒ’は－ＯＲである。
【0022】
一実施形態では、少なくとも１個のＲ’は－ＯＨである。別の実施形態では、１個のＲ’は－Ｈであり、例えば、２個以下のＲ’は－Ｈである。好ましい実施形態では、Ｒ’は－Ｈである。
【0023】
一実施形態では、－ＯＲはアセテートまたはラクテートである。
【0024】
水溶液では、式Ｉによる化合物は、対応するラクトン、例えば、δ－ラクトンおよびγ－ラクトンと平衡状態にある。一実施形態では、式Ｉの化合物は、それらのラクトンである。上記ラクトンは、好ましくは、δ－ラクトンまたはγ－ラクトンであり得る。
【0025】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記からなる群から選択される。
【化5】
【0026】
別の実施形態では、式Ｉの化合物は、下記からなる群から選択される。
【化6】
【0027】
好ましい実施形態では、ｎは２である。
【0028】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記である。
【化7】
【0029】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記式ＸＶの化合物である。
【化8】
【0030】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記からなる群から選択される。
【化9】
【0031】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記からなる群から選択される。
【化10】
【0032】
一実施形態では、化合物ＸＩＸ、ＸＸおよびＸＸＩは、水溶液中で平衡状態にある。
【0033】
好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、下記グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ、式ＸＩＸである。
【化11】
【0034】
別の実施形態では、化合物は、グルコノ－δ－ラクトン（式ＸＩＸ）ではない。従って、一態様では、本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物に関し、但し、式Ｉの化合物はグルコノ－δ－ラクトン（式ＸＩＸ）ではない。
【0035】
一実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物に関し、但し、式Ｉの化合物の化合物が式ＸＩＸの化合物の場合には、微生物感染症は真菌感染症ではない。
【0036】
一実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物に関し、但し、式Ｉの化合物の化合物が式ＸＩＸの化合物の場合には、微生物感染症は泌尿生殖器真菌感染症ではない。
【0037】
一実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物に関し、但し、式Ｉの化合物の化合物が式ＸＩＸの化合物の場合には、微生物感染症は外陰膣カンジダ症ではない。
【0038】
一実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物に関し、但し、微生物感染症が泌尿生殖器真菌感染症の場合には、式Ｉの化合物は、式ＸＩＶの化合物ではない。
【0039】
一実施形態では、化合物は、式Ｉの化合物のアセタールである。一実施形態では、化合物のオキソ基は、対応するアセタールであり、すなわち、式Ｉの化合物は下記からなる群より選択される。
【化12】
【0040】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、下記からなる群から選択される。
【化13】
【0041】
ポリマー／オリゴマー
一実施形態では、式Ｉの化合物は、オリゴマー化されてオリゴマーを形成する。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、重合されてポリマーを形成する。
一実施形態では、式Ｉの化合物は、オリゴマー化されてオリゴマーを形成する。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、重合されてポリマーを形成する。
【0042】
一実施形態では、オリゴマーまたはポリマーは、１種の式Ｉの化合物を含み、すなわち、オリゴマーまたはポリマーは、ホモオリゴマー／ポリマーであり、ここで１種の式Ｉの化合物はモノマーである。別の実施形態では、オリゴマーまたはポリマーは、混合オリゴマー／ポリマーであり、すなわち、ヘテロオリゴマー／ポリマーである。一実施形態では、オリゴマーは、少なくとも２種の異なる式Ｉの化合物を含む。
【0043】
一実施形態では、オリゴマーまたはポリマーは、乳酸をさらに含み、すなわち、乳酸オリゴマー／ポリマーである。
【0044】
一実施形態では、式Ｉの２種の化合物は連結されて二量体を形成する。一実施形態では、二量体は、２種の式ＸＩＶの化合物を含む。一実施形態では、二量体は、２種の異なる式Ｉの化合物を含む。
【0045】
感染症
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物または微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。一実施形態では、本発明は、細菌感染症または真菌および細菌混合感染症の治療で使用されるグルコノ－δ－ラクトンに関する。
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物または微生物感染症の治療および／または予防で使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。一実施形態では、本発明は、細菌感染症または真菌および細菌混合感染症の治療で使用されるグルコノ－δ－ラクトンに関する。
【0046】
一実施形態では、微生物感染症は泌尿生殖器感染症である。一実施形態では、 微生物感染症は腟感染症である。
【0047】
一実施形態では、感染症は哺乳動物の感染症であり、すなわち、上記治療を必要としている対象は哺乳動物である。好ましくは、哺乳動物はヒトである。一実施形態では、ヒトは女性である。上記女性は、妊婦の女性であり得る。
【0048】
一実施形態では、感染症は皮膚炎および／または湿疹である。上記皮膚炎および／または湿疹は、脂漏性皮膚炎であり得る。感染症はまた、上記皮膚炎または湿疹の二次感染症であり得る。
【0049】
本明細書で使用される場合、「二次感染症」という用語は、根本原因の続発症または合併症を指す。上記根本原因は原発性感染症であり得る。
【0050】
一実施形態では、感染症は全ての重症度のアクネ、または酒さ、口周囲または眼窩周囲皮膚炎などのざ瘡様状態である。
【0051】
一実施形態では、感染症はフルンケル症、カルブンケル症または毛包炎である。
【0052】
一実施形態では、感染症は口唇炎である。上記口唇炎は、口角口唇炎である。
【0053】
一実施形態では、感染症は顔、頭皮、胴体および／または鼠径部の感染症である。感染症は、上記領域での感染皮膚創傷の感染症であり得る。感染症はまた、身体の皮下脂肪中に位置し得る。
【0054】
一実施形態では、感染症は膿痂疹または丹毒である。
【0055】
一実施形態では、感染症は足の感染症である。上記足の感染症は、糖尿病性足創傷に付随し得る。一実施形態では、足の感染症は、陥入爪または足の疱疹に続発する。
【0056】
一実施形態では、感染症は動物咬傷後に生ずる二次感染症である。上記動物は昆虫であり得る。一実施形態では、感染症は虫刺され、蚊咬傷、ダニ咬傷、遊走性紅斑または皮膚良性リンパ腺腫の後に生ずる二次感染症である。
【0057】
一実施形態では、感染症は、単純ヘルペス、皮膚科学的、口腔もしくは生殖器の二次感染症、または帯状疱疹または水痘帯状疱疹の二次感染症である。
【0058】
一実施形態では、感染症は、火傷または切り傷などの、皮膚の損傷の二次感染症である。
【0059】
一実施形態では、感染症は、真菌性、細菌性または混合眼瞼炎である。
【0060】
一実施形態では、感染症は結膜炎である。
【0061】
一実施形態では、感染症は腟炎または子宮頸管炎である。
【0062】
一実施形態では、感染症は腟トリコモナスに起因する。一実施形態では、感染症はトリコモナス症である。
【0063】
一実施形態では、微生物感染症は、真菌感染症、細菌感染症ならびに真菌および細菌混合感染症からなる群より選択される。
【0064】
細菌感染症
いくつかの実施形態では、微生物感染症は細菌感染症である。一実施形態では、微生物感染症は真菌および細菌混合感染症である。
いくつかの実施形態では、微生物感染症は細菌感染症である。一実施形態では、微生物感染症は真菌および細菌混合感染症である。
【0065】
一実施形態では、細菌感染症は歯周炎である。
【0066】
一実施形態では、細菌感染症は細菌性腟症である。
【0067】
一実施形態では、細菌感染症は、ガードネレラ・バジナリス感染症、トラコーマ病原体感染症、淋菌感染症、梅毒トレポネーマ（梅毒）感染症、アトポビウム・バギナエ感染症、プレボテラ種感染症、モビルンカス種感染症、ペプトストレプトコッカス種感染症、ポルフィロモナス種感染症、マイコプラズマ・ホミニス感染症、バクテロイデス種感染症、ウレアプラズマ・ウレアリチカム感染症、連鎖球菌種感染症、腸内細菌科感染症、腸球菌感染症、ブドウ球菌種感染症、緑膿菌感染症、アシネトバクター・バウマンニ感染症、化膿性連鎖球菌感染症、ストレプトコッカス・アガラクチア感染症、Ｃ群およびＧ群β型溶血連鎖球菌感染症および／またはジンジバリス菌感染症からなる群より選択される。
【0068】
一実施形態では、感染症は、Ａ群またはＢ群連鎖球菌または多耐性細菌の口腔、鼻内または肛門生殖器コロニー形成に続発する。
【0069】
一実施形態では、感染症は肛囲溶連菌皮膚炎である。
【0070】
真菌および細菌混合感染症
一実施形態では、上記微生物感染症は真菌および細菌混合感染症である。上記真菌および細菌混合感染症の細菌成分は、本明細書で定義の細菌感染症の通りであり得る。上記真菌および細菌混合感染症の真菌成分は、本明細書で定義の真菌感染の通りであり得る。一実施形態では、真菌および細菌混合感染症の上記真菌成分は、カンジダ症である。
一実施形態では、上記微生物感染症は真菌および細菌混合感染症である。上記真菌および細菌混合感染症の細菌成分は、本明細書で定義の細菌感染症の通りであり得る。上記真菌および細菌混合感染症の真菌成分は、本明細書で定義の真菌感染の通りであり得る。一実施形態では、真菌および細菌混合感染症の上記真菌成分は、カンジダ症である。
【0071】
上記真菌および細菌混合感染症は、間擦疹性の皮膚炎または爪囲炎であり得る。
【0072】
真菌感染症
いくつかの実施形態では、微生物感染症は真菌感染症である。一実施形態では、 微生物感染症は細菌および真菌混合感染症である。一実施形態では、上記真菌感染症は真菌症である。上記真菌症は、皮膚糸状菌症、カンジダ症、コクシジオイデス症、ヒストプラスマ症、ブラストミセス症、パラコクシジオイデス症、スポロトリコーシス、クロモミコーシスおよびフェオミコーシス性膿瘍、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、接合菌症、および菌腫からなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、微生物感染症は真菌感染症である。一実施形態では、 微生物感染症は細菌および真菌混合感染症である。一実施形態では、上記真菌感染症は真菌症である。上記真菌症は、皮膚糸状菌症、カンジダ症、コクシジオイデス症、ヒストプラスマ症、ブラストミセス症、パラコクシジオイデス症、スポロトリコーシス、クロモミコーシスおよびフェオミコーシス性膿瘍、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、接合菌症、および菌腫からなる群から選択され得る。
【0073】
好ましい実施形態では、真菌症はカンジダ症である。上記カンジダ症は、外陰および腟のカンジダ症；皮膚および爪のカンジダ症；泌尿生殖器および胃腸部位のカンジダ症；カンジダ性口内炎；乳房および乳頭カンジダ症；肺カンジダ症；カンジダ性髄膜炎；カンジダ性心内膜炎；およびカンジダ性敗血症からなる群から選択され得る。
【0074】
一実施形態では、真菌症は皮膚糸状菌症である。上記皮膚糸状菌症は、爪白癬；足指爪真菌症；鼡径部白癬；足白癬；手白癬；白癬性毛瘡；石綿状癬；頭部白癬；体部白癬；渦状癬；および股部白癬からなる群から選択され得る。
【0075】
一実施形態では、真菌感染症は、カンジダ種感染症、例えば、カンジダ・アルビカンス感染症、カンジダ・クルセイ感染症、カンジダ・グラブラタ感染症、カンジダ・トロピカリス感染症；白癬菌種感染症、例えば、トリコフィトン・ベルコースム感染症、紅色白癬菌感染症、紫色白癬菌感染症、トリコフィトン・トンズランス感染症；および小胞子菌種感染症、例えば、イヌ小胞子菌感染症；アスペルギルス感染症およびマラセチア感染症からなる群より選択される。
【0076】
一実施形態では、感染症は出芽酵母に起因する。
【0077】
一実施形態では、真菌症は癜風である。
【0078】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＩＸの化合物ではなく、かつ真菌感染症は、泌尿生殖器真菌感染症ではない。
【0079】
別の実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＩＸの化合物ではなく、かつ真菌感染症は、外陰膣カンジダ症ではない。
【0080】
さらに別の実施形態では、真菌感染症は、泌尿生殖器真菌感染症ではなく、かつ式Ｉの化合物は、下記の化合物ではない。
【化14】
【0081】
ウイルス感染症
一実施形態では、微生物感染症はウイルス感染症である。一実施形態では、ウイルス感染症はＨＩＶである。
一実施形態では、微生物感染症はウイルス感染症である。一実施形態では、ウイルス感染症はＨＩＶである。
【0082】
処方
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療で使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。一実施形態では、医薬組成物は、タブレット、口腔内崩壊錠（または口腔内溶解錠（ＯＤＴ））、トローチ剤、ガム、チューインガム、クリーム、ローション、ゲル、乳剤、溶液剤、発泡剤、軟膏、噴霧剤、懸濁うがい薬、口内洗浄剤、含嗽液剤、口内浴、マニキュア液、皮膚貼付剤またはシャンプーとして処方される。一実施形態では、上記溶液は、包帯、手当用品および／または湿布での使用に適する。
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症の治療で使用するための式Ｉの化合物を含む医薬組成物に関する。一実施形態では、医薬組成物は、タブレット、口腔内崩壊錠（または口腔内溶解錠（ＯＤＴ））、トローチ剤、ガム、チューインガム、クリーム、ローション、ゲル、乳剤、溶液剤、発泡剤、軟膏、噴霧剤、懸濁うがい薬、口内洗浄剤、含嗽液剤、口内浴、マニキュア液、皮膚貼付剤またはシャンプーとして処方される。一実施形態では、上記溶液は、包帯、手当用品および／または湿布での使用に適する。
【0083】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１０重量％など、少なくとも１５重量％など、少なくとも２０重量％など、少なくとも２５重量％など、少なくとも３０重量％など、少なくとも４０重量％など、少なくとも５０重量％など、少なくとも６０重量％などの、少なくとも５重量％の式（Ｉ）の化合物を含む。
【0084】
一実施形態では、医薬組成物は、先行請求項のいずれか１つの使用のためであり、医薬組成物は、９５重量％程度など、９０重量％程度など、８５重量％程度など、８０重量％程度など、７５重量％程度などの、９９重量％程度の式（Ｉ）の化合物を含む。
【0085】
一実施形態では、医薬組成物は、１０～９５重量％など、１５～９５重量％など、２０～９０重量％など、４０～９５重量％など、４０～９５重量％など、５０～９５重量％などの、５～９９重量％の式（Ｉ）の化合物を含む。
【0086】
一実施形態では、医薬組成物は、５重量％程度などの、１０重量％程度の水を含む。
【0087】
本明細書で使用される場合、「抗菌剤（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｇｅｎｔ）」は、当該技術分野において既知である微生物（例示的微生物は細菌、真菌、ウイルスおよび他の病原体などの微生物を含む）の成長を減らすまたはなくすまたは阻害することができる薬剤を指す。同様に、用語の「抗真菌剤」は、真菌の成長を減らすまたはなくすまたは阻害することができる薬剤を指し、用語の「抗菌薬（ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｇｅｎｔ）」は、細菌の成長を減らすまたはなくすまたは阻害することができる薬剤を指す。
【0088】
一実施形態では、医薬組成物は、１種または複数の抗真菌剤をさらに含む。一実施形態では、本発明は、１種または複数の微生物感染症の治療方法に関し、方法は、式Ｉの化合物および抗菌剤の、それを必要としている個体への同時投与を含む。一実施形態では、上記抗菌剤は、抗真菌剤または抗菌薬である。上記抗真菌剤は、ミコナゾール、テルコナゾール、イソコナゾール、フェンチコナゾール、フルコナゾール、ナイスタチン、ケトコナゾール、クロトリマゾール、ブトコナゾール、エコナゾール、チオコナゾール、イトラコナゾール、５－フルオロウラシル、およびメトロニダゾールからなる群から選択される。
【0089】
一実施形態では、医薬組成物は、１種または複数の抗菌薬をさらに含む。抗生物質は、細菌感染症の治療および予防で使用される抗菌剤の１種である。上記抗菌薬は、クリンダマイシン、テトラサイクリン、アモキシシリン、アンピシリン、エリスロマイシン、ドキシサイクリン、ロメフロキサシン、ノルフロキサシン、アフロキサム、シプロフロキサシン、アジスロマイシン、およびセフロトキシンからなる群から選択され得る。
【0090】
一実施形態では、医薬組成物は、ステロイドをさらに含む。上記ステロイドはコルチゾンであり得る。
【0091】
一実施形態では、医薬組成物は、タンポン、バギトリウム（ｖａｇｉｔｏｒｉｕｍ）、腟エアロゾル、腟カップ、膣ゲル、膣挿入物、膣パッチ、膣リング、膣スポンジ、膣坐剤、膣クリーム、膣エマルション、膣フォーム、膣ローション、膣軟膏、膣粉末、膣シャンプー、膣溶液、膣スプレー、膣懸濁剤、膣錠、膣ロッド、膣ディスク、膣デバイス、およびこれらの任意の組み合わせとして処方されるか、または医薬組成物は、タンポン、生理用ナプキン、尿漏れ防止パッドもしくはおむつ、またはパンティーライナー等の、衛生用品上に存在する。
【0092】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１日１回、例えば、少なくとも１日２回、例えば、１日３回の投与に適する。
【0093】
一実施形態では、医薬組成物は、２日おき程度など、週１回程度などの、隔日程度の投与に適する。
【0094】
一実施形態では、医薬組成物は、６日程度の投与に適する。
【0095】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも２週間など、少なくとも３週間など、少なくとも４週間などの、少なくとも１週間にわたる投与に適する。
【0096】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１週間にわたる少なくとも１日１回の投与に適する。
【0097】
一実施形態では、医薬組成物は、式Ｉによる化合物を、少なくとも４時間にわたるなど、少なくとも６時間にわたるなど、少なくとも２４時間にわたるなど、長期間にわたり放出するように処方される。
【0098】
バイオフィルム形成の防止および／または低減のための方法
一態様では、本発明は、バイオフィルム形成の防止および／または低減のための方法に関し、方法は、式Ｉの化合物の投与を含む。本明細書で使用される場合、用語の「バイオフィルム」は、微生物の凝集体を指し、その凝集体では、微生物細胞が相互におよび／または表面に付着している。これらの付着細胞は多くの場合、例えば、細胞外ＤＮＡ、タンパク質、およびポリサッカライドを含む、細胞外のポリマー物質のマトリックスで覆われている。バイオフィルム中で成長する微生物細胞は多くの場合、同じ生物の浮遊細胞とは生理学的に異なる。
一態様では、本発明は、バイオフィルム形成の防止および／または低減のための方法に関し、方法は、式Ｉの化合物の投与を含む。本明細書で使用される場合、用語の「バイオフィルム」は、微生物の凝集体を指し、その凝集体では、微生物細胞が相互におよび／または表面に付着している。これらの付着細胞は多くの場合、例えば、細胞外ＤＮＡ、タンパク質、およびポリサッカライドを含む、細胞外のポリマー物質のマトリックスで覆われている。バイオフィルム中で成長する微生物細胞は多くの場合、同じ生物の浮遊細胞とは生理学的に異なる。
【0099】
このようなバイオフィルムは、任意の生体表面または非生体表面上に形成され得る。一実施形態では、バイオフィルムは、哺乳動物中または哺乳動物上のバイオフィルムである。
【0100】
一実施形態では、バイオフィルムは、インプラントまたはプロテーゼのバイオフィルムである。本明細書で使用される場合、用語「インプラントまたはプロテーゼ」は、体の部位のための人工の代用品、および機能的、美容的、または治療目的のために組織中に挿入される物質を指す。インプラントまたはプロテーゼは、義手および義足の場合のように機能的であり得、または義眼の場合のように美容的であり得る。全ての外科的に身体中に挿入または移植されるインプラントは、治療的に使用される傾向がある。
【0101】
上記インプラントまたはプロテーゼは、カテーテル、末梢静脈カテーテル、中心静脈カテーテル、心臓弁、補助人工心臓、冠動脈ステント、神経外科的心室シャント、埋め込み型神経学的刺激剤、関節プロテーゼ、骨折固定用具、膨脹性陰茎インプラント、乳房インプラント、人工内耳、眼内レンズ、歯科用インプラント、喉頭摘出術用インプラント、気管開口用インプラント、人工喉頭、顎運動用インプラント、鼓膜切開術用インプラント、および歯インプラントからなる群から選択される。
【0102】
早産の防止で使用するための方法
一実施形態では、微生物感染症は細菌性外陰腟炎である。子宮頸部熟化または頸管不全により、上記感染症は、子宮に移動し、絨毛羊膜炎およびこれに続いて早産を引き起こす場合がある。腟炎または子宮頸管炎などの過剰の炎症は、絨毛羊膜炎の顕在化がない場合でも、プロスタグランジン産生を介して早発収縮および早産を引き起こし得ることを裏付ける証拠が存在する。早産新生児はその後、未熟児の新生児免疫不全に起因する侵襲的細菌感染症；肺炎、髄膜炎または敗血症に遭遇する可能性がある。特にＡ群およびＢ群連鎖球菌および多耐性細菌は、乳幼児での重篤な周産期感染症および新しく出産した女性での分娩後の子宮内膜炎を生じる場合があり、かつ新生児および母体両方の重篤な罹患率および死亡率の原因であり得る。
一実施形態では、微生物感染症は細菌性外陰腟炎である。子宮頸部熟化または頸管不全により、上記感染症は、子宮に移動し、絨毛羊膜炎およびこれに続いて早産を引き起こす場合がある。腟炎または子宮頸管炎などの過剰の炎症は、絨毛羊膜炎の顕在化がない場合でも、プロスタグランジン産生を介して早発収縮および早産を引き起こし得ることを裏付ける証拠が存在する。早産新生児はその後、未熟児の新生児免疫不全に起因する侵襲的細菌感染症；肺炎、髄膜炎または敗血症に遭遇する可能性がある。特にＡ群およびＢ群連鎖球菌および多耐性細菌は、乳幼児での重篤な周産期感染症および新しく出産した女性での分娩後の子宮内膜炎を生じる場合があり、かつ新生児および母体両方の重篤な罹患率および死亡率の原因であり得る。
【0103】
別の実施形態では、微生物感染症は外陰膣カンジダ症である。早産新生児は、特に新生児集中治療室において、細菌感染症より高い罹患率および死亡率を生ずる最も重篤な院内感染症の１種である侵襲的カンジダ感染症に遭遇する可能性がある。
【0104】
従って、一態様では、本発明は、早産の防止で使用するための式Ｉの化合物に関する。さらに好ましい実施形態では、上記化合物は、経膣投与される。化合物は、タンポン、バギトリウム（ｖａｇｉｔｏｒｉｕｍ）、腟エアロゾル、腟カップ、膣ゲル、膣挿入物、膣パッチ、膣リング、膣スポンジ、膣坐剤、膣クリーム、膣エマルション、膣フォーム、膣ローション、膣軟膏、膣粉末、膣シャンプー、膣溶液、膣スプレー、膣懸濁剤、膣錠、膣ロッド、膣ディスク、膣デバイス、およびこれらの任意の組み合わせとして処方され得るか、または化合物は、タンポン、生理用ナプキン、尿漏れ防止パッドもしくはおむつ、またはパンティーライナー等の、衛生用品上に存在する。
【0105】
実施例
実施例１：種々のヒドロキシル化カルボン酸の効果
バイオフィルム形成アッセイ
酵母菌株（表１）を、完全培地ＹＰＤ（０．５％酵母エキス、１％ペプトン、２％グルコース）中または０．５％硫酸アンモニウム、０．２％グルコースおよび１００ｍＭのＬ－プロリンを補充したＹＮＢ（アミノ酸および硫酸アンモニウム不含酵母窒素ベース、ＦＯＲＭＥＤＩＵＭＴＭ（商標）、ＣＹＮ０５０５）からなる最少培地中にて３７℃で成長させた。必要に応じ、２％寒天を用いて培地を固化させた。液体最少培地（０．５％硫酸アンモニウム、０．２％グルコースおよび１００ｍＭのＬ－プロリンを補充したＹＮＢ（アミノ酸および硫酸アンモニウム不含酵母窒素ベース、ＦＯＲＭＥＤＩＵＭＴＭ（商標）、ＣＹＮ０５０５））をバイオフィルムアッセイに使用した（バイオフィルム培地）。
実施例１：種々のヒドロキシル化カルボン酸の効果
バイオフィルム形成アッセイ
酵母菌株（表１）を、完全培地ＹＰＤ（０．５％酵母エキス、１％ペプトン、２％グルコース）中または０．５％硫酸アンモニウム、０．２％グルコースおよび１００ｍＭのＬ－プロリンを補充したＹＮＢ（アミノ酸および硫酸アンモニウム不含酵母窒素ベース、ＦＯＲＭＥＤＩＵＭＴＭ（商標）、ＣＹＮ０５０５）からなる最少培地中にて３７℃で成長させた。必要に応じ、２％寒天を用いて培地を固化させた。液体最少培地（０．５％硫酸アンモニウム、０．２％グルコースおよび１００ｍＭのＬ－プロリンを補充したＹＮＢ（アミノ酸および硫酸アンモニウム不含酵母窒素ベース、ＦＯＲＭＥＤＩＵＭＴＭ（商標）、ＣＹＮ０５０５））をバイオフィルムアッセイに使用した（バイオフィルム培地）。
【0106】
バイオフィルムに対するｐＨの影響に関する実験では、ｐＨ値（２．６～６．６）を、最終濃度０．２５Ｍの種々のリン酸カリウム緩衝液を使って、またはクエン酸、乳酸およびグルコン酸をバイオフィルム培地に添加することにより得た。
【表1】
【0107】
バイオフィルムを、いくつかの修正を加えて［Ｋ．Ｓｃｈｅｒｚ ｅｔ ａｌ．，Ｇ３（Ｂｅｔｈｅｓｄａ），２０１４，４，１６７１－１６８０．Ｉ．Ｓｅｒｒａｎｏ－Ｆｕｊａｒｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．２０１５；２０１５：７８３６３９］に記載のようにして、液体培養で測定した。バイオフィルムアッセイの前に、酵母培養物を液体ＹＰＤ培地中で定常期（ＯＤ６００：１１～１７２）まで２４時間成長させた後、細胞を遠心分離（１６９９ｇ）によりペレット化し、滅菌水で洗浄し、細胞を試験バイオフィルム培地（０．５％硫酸アンモニウム、０．２％グルコースおよび１００ｍＭのＬ－プロリンｐＨ７．０を補充したＹＮＢ（アミノ酸および硫酸アンモニウム不含の酵母窒素ベース））中に最終濃度０．２ＯＤ６００／ｍｌの濃度でさらに接種し、９６ウェル平底ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）培養プレート、ＣＬＳ３５９６－５０ＥＡ）中にて３７℃サーモスタットで７２時間インキュベートした。所定の時点で、クリスタルバイオレット（ＨＴ９０１－８ＦＯＺ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を最終濃度０．０５％で培地に加え、さらに総バイオマスを測定した。細胞染色の２４時間後に、プレートウェルを２００μｌの水で４回洗浄して浮遊細胞を除去した後、バイオフィルムを乾燥し、２００μｌの９６％エタノールに溶解した。総バイオマスおよびクリスタルバイオレットバイオフィルム染色測定値をＯＤ５６０で、ＦＬＵＯｓｔａｒ ＯＰＴＩＭＡプレートリーダー、ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨを用いて実施した。クリスタルバイオレットバイオフィルム測定値を総バイオマスに対し正規化した（ＯＤ５６０バイオフィルム／ＯＤ５６０総バイオマス）。
【0108】
種々のヒドロキシル化カルボン酸の効果
種々のヒドロキシル化カルボン酸の効果を低濃度で比較するために、バイオフィルム形成を０．０６重量％のグリセリン酸、キシロン酸、クエン酸、グルコン酸、および乳酸の添加の２４時間後に非緩衝条件下で測定した。結果を表２および図１に示す。
種々のヒドロキシル化カルボン酸の効果を低濃度で比較するために、バイオフィルム形成を０．０６重量％のグリセリン酸、キシロン酸、クエン酸、グルコン酸、および乳酸の添加の２４時間後に非緩衝条件下で測定した。結果を表２および図１に示す。
【表2】
【0109】
表２から認められるように、グルコン酸が最も効果のある化合物であり、乳酸およびクエン酸がそれに続く。乳酸をグルコン酸で置換することにより、５０％超少ないバイオフィルム形成が得られた（対照の６％対１３％）。バイオフィルム形成が低ｐＨに極めて敏感であること、および乳酸およびクエン酸に比較してグルコン酸のみが中等度のｐＨの低下をもたらすことを考えると、結果は興味深いものである。
【0110】
実施例２：種々のｐＨでのカンジダ・アルビカンスのバイオフィルム形成
バイオフィルム形成の防止におけるグルコン酸の効果をさらに評価するために、種々のｐＨでのグルコン酸、乳酸およびクエン酸に対するバイオフィルム形成を測定した（実施例１で記載のように）。
バイオフィルム形成の防止におけるグルコン酸の効果をさらに評価するために、種々のｐＨでのグルコン酸、乳酸およびクエン酸に対するバイオフィルム形成を測定した（実施例１で記載のように）。
【0111】
表３から認められるように、グルコン酸はカンジダ・アルビカンスのバイオフィルム形成に対し強力な効果を示し、一方で乳酸およびクエン酸からの効果は、それほど明白でない。さらに、グルコン酸は、少なくとも約６までのｐＨでも強力な効果を示すが、乳酸およびクエン酸で認められる効果は、ｐＨ５で既に減少し始める。加えて、グルコン酸は、ｐＨ２．６でバイオフィルム形成の完全な消失をもたらす。データを表３にまとめる。
【表3】
【0112】
実施例３：種々のｐＨでのカンジダ・グラブラタのバイオフィルム形成
カンジダ・グラブラタは、カンジダ・アルビカンスに比べて、処理が遙かに複雑である。しかし、より長い、すなわち、７２時間の処理によりグルコン酸で明確な効果が得られる（表４）。
カンジダ・グラブラタは、カンジダ・アルビカンスに比べて、処理が遙かに複雑である。しかし、より長い、すなわち、７２時間の処理によりグルコン酸で明確な効果が得られる（表４）。
【表4】
【0113】
これらの結果に基づいて、グルコン酸は乳酸およびクエン酸に比べて、カンジダによるバイオフィルム形成を標的にすることにおいて優れた効果を有すると結論付けられた。乳酸およびクエン酸について観察された効果と対照的に、グルコン酸について観察された効果は、単なるｐＨ関連効果ではない。効果は、ｐＨ６でも存在する。
【0114】
従って、グルコン酸は、バイオフィルム形成の低減により示されるように、抗真菌化合物として有用であると結論付けられる。この化合物は、生理学的におよび薬学的に許容可能である。従って、グルコン酸は、外陰膣カンジダ症の治療で使用するための医薬製剤を提供するために有用である。
【0115】
実施例４：グルコン酸誘導体の調製
グルコン酸のラクトン化／オリゴマー化
グルコン酸（ＧＡ）（Ｈ２Ｏ中の５０重量％、４ｇ）を開放バイアルに注ぎ込み、１２０℃に加熱した。２４時間後、混合物を室温に冷却し、そこで混合物は固化した。
グルコン酸のラクトン化／オリゴマー化
グルコン酸（ＧＡ）（Ｈ２Ｏ中の５０重量％、４ｇ）を開放バイアルに注ぎ込み、１２０℃に加熱した。２４時間後、混合物を室温に冷却し、そこで混合物は固化した。
【0116】
グルコン酸（ＧＡ）の水溶液の組成を分析するために、ＧＡ（Ｈ２Ｏ中の５０重量％）をＤＭＳＯ－ｄ６中に溶解し、１Ｈ－および１３Ｃ－ＮＭＲにより分析した。ラクトン化／オリゴマー化グルコン酸（上記参照）をＤＭＳＯ－ｄ６に溶解し、１Ｈ－および１３Ｃ－ＮＭＲにより分析した。表５参照。
【表5】
【0117】
ＧＡは、長時間の脱水時に、種々のラクトンならびにオリゴマー化物質の錯体混合物を形成すると結論付けられた。
【0118】
実施例５：グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）の加水分解
水溶液中で、グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）は、グルコン酸（ＧＡ、ＣＡＳ５２６－９５－４）と平衡状態にある。ＧＤＡ（２００ｍｇ）を蒸留Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ｐＨ４緩衝液、ｐＨ５緩衝液、またはｐＨ７緩衝液に３７℃で加えた。旋光およびｐＨの経時変化を測定した。旋光、３７℃で測定、ナトリウムＤ線、Ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ、経路長＝１０ｃｍ。ＧＤＡの旋光は約６６°である。グルコン酸の旋光は約５°である［Ｄ．Ｔ．Ｓａｗｙｅｒ，Ｊ．Ｂ．Ｂａｇｇｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５９，８１，５３０２－５３０６］。
水溶液中で、グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）は、グルコン酸（ＧＡ、ＣＡＳ５２６－９５－４）と平衡状態にある。ＧＤＡ（２００ｍｇ）を蒸留Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ｐＨ４緩衝液、ｐＨ５緩衝液、またはｐＨ７緩衝液に３７℃で加えた。旋光およびｐＨの経時変化を測定した。旋光、３７℃で測定、ナトリウムＤ線、Ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ、経路長＝１０ｃｍ。ＧＤＡの旋光は約６６°である。グルコン酸の旋光は約５°である［Ｄ．Ｔ．Ｓａｗｙｅｒ，Ｊ．Ｂ．Ｂａｇｇｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５９，８１，５３０２－５３０６］。
【0119】
この実験は、ＧＤＡが、ＧＤＡとＧＡの混合物へとゆっくり加水分解することを示す（図２）。平衡はｐＨ依存性であり、適切なＧＤＡ濃度が、全ての緩衝条件で存在する。
【0120】
実施例６：グルコン酸（ＧＡ）を用いるインビボ条件モデルでのバイオフィルム形成
ラクトン化／オリゴマー化グルコン酸（１．３ｇ、２回繰り返し試料）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ／オルト－リン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を毎時間（１、２、３、４、５、６および２４時間）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地（前出参照）で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を、上述のように２４時間後に測定した。図４Ａからわかるように、放出ＧＡは、カンジダ・アルビカンスのバイオフィルム形成量を顕著に低減する。さらに、ペレットの加水分解は、少なくとも最大６時間の間、おそらくさらに長く、防止効果を提供するのに十分に遅いように見える。効果はカンジダ・グラブラタではそれほど顕著ではない（図４Ｂ）。データを表６にまとめる。
ラクトン化／オリゴマー化グルコン酸（１．３ｇ、２回繰り返し試料）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ／オルト－リン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を毎時間（１、２、３、４、５、６および２４時間）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地（前出参照）で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を、上述のように２４時間後に測定した。図４Ａからわかるように、放出ＧＡは、カンジダ・アルビカンスのバイオフィルム形成量を顕著に低減する。さらに、ペレットの加水分解は、少なくとも最大６時間の間、おそらくさらに長く、防止効果を提供するのに十分に遅いように見える。効果はカンジダ・グラブラタではそれほど顕著ではない（図４Ｂ）。データを表６にまとめる。
【表6】
【0121】
実施例７：グルコノ－δ－ラクトンを用いるインビボ条件モデルでのバイオフィルム形成
グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）（２．５ｇ、２回繰り返し試料）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４／オルトリン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を一定の時点（１、２、３、４、５、６および２４時間）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地（前出参照）で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を、上述のように２４時間後に測定した。図５Ａからわかるように、放出ＧＤＡは、Ｃ．アルビカンスのバイオフィルム形成量を顕著に低減する。さらに、ペレットの加水分解は、少なくとも最大２４時間の間、おそらくさらに長く、防止効果を提供するのに十分に遅いように見える。効果はＣ．グラブラタではそれほど顕著ではない（図５Ｂ）。
グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）（２．５ｇ、２回繰り返し試料）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４／オルトリン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料（４ｍＬ）を一定の時点（１、２、３、４、５、６および２４時間）に採取し、新規緩衝液（４ｍＬ）を加えた。試料をバイオフィルム培地（前出参照）で５０倍に希釈し、バイオフィルム形成量を、上述のように２４時間後に測定した。図５Ａからわかるように、放出ＧＤＡは、Ｃ．アルビカンスのバイオフィルム形成量を顕著に低減する。さらに、ペレットの加水分解は、少なくとも最大２４時間の間、おそらくさらに長く、防止効果を提供するのに十分に遅いように見える。効果はＣ．グラブラタではそれほど顕著ではない（図５Ｂ）。
【表7】
【0122】
結果は、Ｃ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタ両方のバイオフィルム形成は、ＧＤＡの存在下で顕著に低減されたことを示している。バイオフィルム形成の低減に加えて、ＧＤＡは、Ｃ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの成熟バイオフィルムの生存率に影響を与え得る。
【0123】
実施例８：グルコノ－δ－ラクトンで処理したＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの成熟バイオフィルムの生存率
種々の濃度および種々の時間でのグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）で処理後のＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタのバイオフィルムの生存率を、ＸＴＴでの細胞の染色により評価した。ＸＸＴは、細胞の生存率、および細胞傷害性の定量化のための比色分析法である。このアッセイは、テトラゾリウム塩ＸＴＴの切断に基づくものであり、この変換は生存細胞でのみ起こる。成熟バイオフィルムを、ＧＤＡに２４時間曝露した。次に細胞をＰＢＳで２回洗浄し、その後、ＸＴＴ反応混合物を添加した。３０分後に、光学密度を４８５ｎｍで測定した。
種々の濃度および種々の時間でのグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）で処理後のＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタのバイオフィルムの生存率を、ＸＴＴでの細胞の染色により評価した。ＸＸＴは、細胞の生存率、および細胞傷害性の定量化のための比色分析法である。このアッセイは、テトラゾリウム塩ＸＴＴの切断に基づくものであり、この変換は生存細胞でのみ起こる。成熟バイオフィルムを、ＧＤＡに２４時間曝露した。次に細胞をＰＢＳで２回洗浄し、その後、ＸＴＴ反応混合物を添加した。３０分後に、光学密度を４８５ｎｍで測定した。
【0124】
ＸＴＴアッセイは、インキュベーションの２４時間後に既に、Ｃ．グラブラタについて生存率の大きな減少を示した（図６Ａ）。効果はＣ．アルビカンスではあまり明確ではなかったが、４８時間後には明確に認められた（図６Ｂ）。
【0125】
さらに、Ｃ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの成熟バイオフィルム（ＹＮＢ、０．２％グルコース、１００ｍＭプロリン中で４８時間成長）を種々の濃度（０．０５～０．５ｇ／ｍｌ）のＧＤＡと共に３７℃でインキュベートした。この目的のために、バイオフィルム培地（ＹＮＢ、０．２％グルコース、１００ｍＭプロリン）を取り除き、ＧＤＡを加え、これを０．０５、０．１、０．２および０．５ｇ／ｍｌの濃度で水中に溶解した。ＧＤＡとの５時間または７３時間のインキュベーション後に、５μｌの細胞を段階希釈（１：１０～１：１０００）で寒天培地ＹＰＤ上に播種して、細胞生存を推定した。播種細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、目視で分析した。水で処理した成熟バイオフィルム由来の細胞を対照として使用した。ＧＤＡはＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの細胞生存率を、特に高濃度で、低下させることが明らかになった。０．２および０．５ｇ／ｍｌの濃度では、インキュベーションの５時間後に、Ｃ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタの両方の細胞生存率は約１００倍低下した。０．５ｇ／ｍｌのＧＤＡとのインキュベーションの７３時間後に、Ｃ．アルビカンスの細胞生存率は、約１０００倍低下した（データは示さず）。Ｃ．グラブラタは、ＧＤＡに対しより感受性が高いことが明らかになった（図７）。
【0126】
実施例９：バイオフィルム発生のマイクロ流体試験
Ｃ．アルビカンス細胞形態を監視するために、我々は、顕微鏡およびマイクロ流体技術も使ってバイオフィルム発生の調査をした。酵母細胞を接種後、菌糸がバイオフィルム培地（１００ｍＭのプロリンおよび０．２％のグルコース、ｐＨ７．０を補充したＹＮＢ）中のインキュベーションの最初の１時間以内に形成し始めた。図８Ａは、５時間後の未処理細胞を示す。グルコノ－δ－ラクトン（２．５ｇ）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４／オルトリン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料を１時間後に採取し、バイオフィルム培地で５０倍希釈し、Ｃ．アルビカンスに加えた。５時間後に、ほとんどの処理細胞は、浮遊性であった（図８Ｂ）。
Ｃ．アルビカンス細胞形態を監視するために、我々は、顕微鏡およびマイクロ流体技術も使ってバイオフィルム発生の調査をした。酵母細胞を接種後、菌糸がバイオフィルム培地（１００ｍＭのプロリンおよび０．２％のグルコース、ｐＨ７．０を補充したＹＮＢ）中のインキュベーションの最初の１時間以内に形成し始めた。図８Ａは、５時間後の未処理細胞を示す。グルコノ－δ－ラクトン（２．５ｇ）のペレットをｐＨ３．７１の緩衝液（０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４／オルトリン酸、１０ｍＬ）に３７℃で加えた。試料を１時間後に採取し、バイオフィルム培地で５０倍希釈し、Ｃ．アルビカンスに加えた。５時間後に、ほとんどの処理細胞は、浮遊性であった（図８Ｂ）。
【0127】
実施例１０：グルコノ－δ－ラクトンの存在下での種々のカンジダ種の生存率
試験した他のカンジダ種もまたグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）に対し感受性が高かった（すなわち、ＸＴＴアッセイを用いる細胞生存率尺度、実施例８参照）。しかし、それらは種々のレベルの感度を示した。カンジダ・アルビカンスＳＣ５３１４は、最も低い感受性を示し、カンジダ・クルセイシリコーン分離株Ａ４－１は、最も高い感受性を示した。ＧＤＡに曝露された細胞は浸透圧安定化剤（０．５Ｍスクロース）を補充した培地に比べて、およびこれらの培地に対する未処理細胞に比較して、カルコフロールホワイトを含む培地でより低い生存率を有したので、ＧＤＡ－毒性は、細胞壁損傷を介して媒介される。表３は、ＧＤＡにより示される定性的効果をまとめる。
試験した他のカンジダ種もまたグルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）に対し感受性が高かった（すなわち、ＸＴＴアッセイを用いる細胞生存率尺度、実施例８参照）。しかし、それらは種々のレベルの感度を示した。カンジダ・アルビカンスＳＣ５３１４は、最も低い感受性を示し、カンジダ・クルセイシリコーン分離株Ａ４－１は、最も高い感受性を示した。ＧＤＡに曝露された細胞は浸透圧安定化剤（０．５Ｍスクロース）を補充した培地に比べて、およびこれらの培地に対する未処理細胞に比較して、カルコフロールホワイトを含む培地でより低い生存率を有したので、ＧＤＡ－毒性は、細胞壁損傷を介して媒介される。表３は、ＧＤＡにより示される定性的効果をまとめる。
【表8】
【0128】
結論として、（ｉ）ＧＤＡはＣ．アルビカンスおよびＣ．グラブラタにより形成された成熟バイオフィルムを破壊できる、（ｉｉ）ＧＤＡへの曝露時に、Ｃ．アルビカンスは酵母型に転換し、同時に、Ｃ．グラブラタの生存率は低下する、（ｉｉｉ）効果は、他の株、すなわち、Ｃ．トロピカリスおよびＣ．クルセイでも明確である。
【0129】
実施例１１：グルコン酸（ＧＡ）の乳酸（ＬＡ）とのコオリゴマー化
ＬＡ：ＧＡ（４：１モル比）
ＤＬ－乳酸（５６３ｍｇ、６．２６ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．５ｍＬ、１．５７ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
ＬＡ：ＧＡ（４：１モル比）
ＤＬ－乳酸（５６３ｍｇ、６．２６ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．５ｍＬ、１．５７ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
【0130】
ＬＡ：ＧＡ（８：１モル比）
ＤＬ－乳酸（５６９ｍｇ、６．３２ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．２５ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
ＤＬ－乳酸（５６９ｍｇ、６．３２ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．２５ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
【0131】
ＬＡ：ＧＡ（１６：１モル比）
ＤＬ－乳酸（５６５ｍｇ、６．２８ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
ＤＬ－乳酸（５６５ｍｇ、６．２８ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、１３０℃に加熱した。４時間後、温度を１４０℃に上げた。合計２７時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
【0132】
ＬＡ：ＧＡ（１０：１モル比、直接混合）
ＤＬ－乳酸（１ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、減圧下で１３０℃に加熱した。合計２２時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時にほぼ完全に固体になった。
ＤＬ－乳酸（１ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびＤ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を試験チューブ中で混合し、減圧下で１３０℃に加熱した。合計２２時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時にほぼ完全に固体になった。
【0133】
ＬＡ：ＧＡ（１０：１モル比、５時間予熱）
ＤＬ－乳酸（１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を１３０℃で減圧下にて予熱した。５時間後、Ｄ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。減圧下にて１３０℃でさらに１６時間後、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
ＤＬ－乳酸（１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を１３０℃で減圧下にて予熱した。５時間後、Ｄ－グルコン酸（水中５０％、０．３５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。減圧下にて１３０℃でさらに１６時間後、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化した。
【0134】
ＧＡ中の１重量％ＣＡ
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（２０ｍｇ、１重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（２０ｍｇ、１重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
【0135】
ＧＡ中の５重量％ＣＡ
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（１０５ｍｇ、５重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（１０５ｍｇ、５重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
【0136】
ＧＡ中の１０重量％ＣＡ
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（２２２ｍｇ、１０重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
Ｄ－グルコン酸（水中５０％、４ｇ）およびクエン酸一水和物（２２２ｍｇ、１０重量％）を試験チューブ中で混合し、１２０℃に加熱した。合計１５時間後に、反応混合物を室温にした。上記反応混合物は、冷却時に固化しなかった。
【0137】
これらの結果から、我々は、いずれも液体である純粋なグルコン酸または乳酸と異なり、グルコン酸は乳酸とオリゴマー化して固体を形成できることを示す。
【0138】
実施例１２：グルコノ－δ－ラクトンおよび糖酸の大腸菌に対する効果
成長条件
菌株大腸菌Ｋ１２をバイオフィルム試験に用いた。この株を、ＬＢ培地上、３７℃で維持した。バイオフィルムを合成培地Ｍ９（ｘ１ Ｍ９最小塩（Ｓｉｇｍａ Ｍ６０３０）、２ｍＭのＭｇＳＯ４、０．１ｍＭのＣａＣｌ２および０．２％グルコース）中で調査し、この培地は、種々のｐＨ（２．６～６．６）を得るために、リン酸緩衝液、クエン酸、乳酸、グルコン酸、またはグルコノ－δ－ラクトンを含んだ。
成長条件
菌株大腸菌Ｋ１２をバイオフィルム試験に用いた。この株を、ＬＢ培地上、３７℃で維持した。バイオフィルムを合成培地Ｍ９（ｘ１ Ｍ９最小塩（Ｓｉｇｍａ Ｍ６０３０）、２ｍＭのＭｇＳＯ４、０．１ｍＭのＣａＣｌ２および０．２％グルコース）中で調査し、この培地は、種々のｐＨ（２．６～６．６）を得るために、リン酸緩衝液、クエン酸、乳酸、グルコン酸、またはグルコノ－δ－ラクトンを含んだ。
【0139】
バイオフィルム
大腸菌Ｋ１２（ＯＤ６００：約５．０）の一晩の培養物を滅菌水で洗浄し、種々のｐＨを有する種々の化合物の最終濃度０．２ＯＤ／ｍｌのＭ９培地に播種した。バイオフィルム発生を９６ウェル平底ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）培養プレート、ＣＬＳ３５９６－５０ＥＡ）で調査した。バイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色した。
大腸菌Ｋ１２（ＯＤ６００：約５．０）の一晩の培養物を滅菌水で洗浄し、種々のｐＨを有する種々の化合物の最終濃度０．２ＯＤ／ｍｌのＭ９培地に播種した。バイオフィルム発生を９６ウェル平底ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）培養プレート、ＣＬＳ３５９６－５０ＥＡ）で調査した。バイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色した。
【0140】
バイオフィルム実験中（２４～４８時間）に、菌株は、リン酸緩衝液を補充したｐＨ６．１およびｐＨ６．６のＭ９培地中でのみ、そのバイオマスを増大した（２～３倍）（図９）。バイオマスは、他の培地では少なく、我々は、培地のｐＨの低下と共に細菌バイオマスの減少を観察した。酸（クエン酸、乳酸、グルコン酸）、およびグルコノ－δ－ラクトンは、成長に対して阻害効果を有した。成長阻害に加えて、培地のｐＨの低下は、バイオフィルム形成の低減をもたらした。最低量のバイオフィルムは、グルコン酸を補充した培地で観察された。バイオフィルム阻害で２番目に効果的なのは、乳酸であり、次がグルコノ－δ－ラクトンであった。リン酸培地に比べて、グルコン酸培地上のバイオフィルムは、ｐＨ２．６で３８倍少なく、また、ｐＨ３．０で１５倍少なかった。ｐＨ６．６では、グルコン酸および乳酸はバイオフィルムを約２倍低下させた。ｐＨ２．６のグルコノ－δ－ラクトンは、バイオフィルム形成を、２４時間で１４．２倍、および４８時間で３０倍、低下させた。
【0141】
培地のｐＨの低下は、大腸菌バイオフィルム発生に対して明確な効果があり、これは、殺菌効果に関係していると思われる（より少ないバイオフィルムは、より少ないバイオマスを伴う）。
【0142】
実施例１３：ガードネレラ・バジナリス、ラクトバチルス・クリスパタス、およびラクトバチルス・イナースに対するグルコノ－δ－ラクトンのＭＩＣ試験
株
ガードネレラ・バジナリスＣＣＵＧ３７１７
ラクトバチルス・クリスパタスＣＣＵＧ４４１２８
ラクトバチルス・イナースＣＣＵＧ４４０２５
株
ガードネレラ・バジナリスＣＣＵＧ３７１７
ラクトバチルス・クリスパタスＣＣＵＧ４４１２８
ラクトバチルス・イナースＣＣＵＧ４４０２５
【0143】
接種材料の調製
ガードネレラ・バジナリス、ラクトバチルス・イナース、およびラクトバチルス・クリスパタスをＣＣＵＧ（Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｏｔｈｅｎｂｕｒｇ）で起眠した。継代培養プレートをＧ．バジナリス用にチョコレート－ＧＬプレート上に、およびラクトバチルス種用にＭ．Ｒ．Ｓ．寒天プレート上に５％ＣＯ２、３６℃で作製した。接種材料を継代培養プレートから調製した。コロニーを５ｍｌの試験培地を含む培養チューブに播種し、約１０個の直径３ｍｍのガラスビーズと共に２分間ボルテックスした。コロニーを、溶液の濁度が０．４～０．５のＯＤ４７５になるまで採取した。細菌溶液を位相差光学顕微鏡検査でｘ４０でチェックして、細胞が分散されたことを確認した。各細菌懸濁液をその試験培地で、１～３ｘ１０６ＣＦＵ／ｍｌに等しい、１：１００に希釈した。微生物溶液を、接種材料の調製中２０℃で保存した。
ガードネレラ・バジナリス、ラクトバチルス・イナース、およびラクトバチルス・クリスパタスをＣＣＵＧ（Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｏｔｈｅｎｂｕｒｇ）で起眠した。継代培養プレートをＧ．バジナリス用にチョコレート－ＧＬプレート上に、およびラクトバチルス種用にＭ．Ｒ．Ｓ．寒天プレート上に５％ＣＯ２、３６℃で作製した。接種材料を継代培養プレートから調製した。コロニーを５ｍｌの試験培地を含む培養チューブに播種し、約１０個の直径３ｍｍのガラスビーズと共に２分間ボルテックスした。コロニーを、溶液の濁度が０．４～０．５のＯＤ４７５になるまで採取した。細菌溶液を位相差光学顕微鏡検査でｘ４０でチェックして、細胞が分散されたことを確認した。各細菌懸濁液をその試験培地で、１～３ｘ１０６ＣＦＵ／ｍｌに等しい、１：１００に希釈した。微生物溶液を、接種材料の調製中２０℃で保存した。
【0144】
微量希釈調製およびＭＩＣ試験
試験物質溶液を無菌Ｈ２Ｏ中の１ｇ／ｍｌで無菌調製した。第１のウェルの列を１００μｌの物質で満たし、その後、２倍希釈を８ステップで垂直に実施した。対照を含めた：ｉ）各株成長対照（＋対照）＝抗菌剤（ＡＭ）不含試験培地中のそれぞれの微生物、ｉｉ）成長対照なし（－対照）＝試験培地および試験した最高濃度の物質、これは、物質が単独で試験培地の色の変化を生じないことを確認するためである、ｉｉｉ）各株に対するゲンタマイシン対照。
試験物質溶液を無菌Ｈ２Ｏ中の１ｇ／ｍｌで無菌調製した。第１のウェルの列を１００μｌの物質で満たし、その後、２倍希釈を８ステップで垂直に実施した。対照を含めた：ｉ）各株成長対照（＋対照）＝抗菌剤（ＡＭ）不含試験培地中のそれぞれの微生物、ｉｉ）成長対照なし（－対照）＝試験培地および試験した最高濃度の物質、これは、物質が単独で試験培地の色の変化を生じないことを確認するためである、ｉｉｉ）各株に対するゲンタマイシン対照。
【0145】
次に、１００μｌの微生物を加え、プレートを５００ｒｐｍで３０秒間、静かに振盪した後、５％ＣＯ２に設定したＣＯ２インキュベーター中で３５℃、９０％ＲＨでインキュベートした。播種の４８および７２時間後に、ＯＤを測定し、目視評価を行った。ｐＨも、全希釈物に対し測定した。ｎ＝１、ｐＨ＝６．８～７．１。
【0146】
ＭＩＣ試験微量希釈アッセイを３回繰り返して行って、５％ＣＯ２で４８時間インキュベート後のＧ．バジナリス（ＣＡＭＨＢ）およびＬ．クリスパタス（ＩｓｏＳ－Ｍ．Ｒ．Ｓ．）に対する、および嫌気性条件下で１２０時間培養したＬ．イナースに対するＧＤＡのＭＩＣ値を評価した（表７）。
【表9】
【0147】
ガードネレラ・バジナリスに対するＧＤＡの最小阻止濃度（ＭＩＣ）値は、ラクトバチルス・イナースおよびラクトバチルス・クリスパタスに対するＧＤＡのＭＩＣ値より遙かに小さい。従って、ＧＤＡは、無害性のラクトバチルス・イナースおよびラクトバチルス・クリスパタスに対するよりも、ガードネレラ・バジナリスに対して効率的である。
【0148】
実施例１４：大腸菌、表皮ブドウ球菌、スタフィロコッカス・エピデルミディス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、化膿性連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、Ｃ群およびＧ群β型溶血連鎖球菌ならびにジンジバリス菌に対するＧＤＡのＭＩＣ試験。
株
好気性菌：
大腸菌ＣＣＵＧ３２７４／ＡＴＣＣ１０５３６
表皮ブドウ球菌ＣＣＵＧ２３１１８
黄色ブドウ球菌ＣＣＵＧ１５９１５／ＡＴＣＣ２９２１３
緑膿菌（ＰＡＯ１）ＣＣＵＧ５６４８９／ＡＴＣＣ１５６９２
アシネトバクター・バウマンニＣＣＵＧ５７０３５
選好性好気性菌：
化膿性連鎖球菌ＣＣＵＧ４７８０３／ＡＴＣＣ７００２９４
ストレプトコッカス・アガラクチアＣＣＵＧ２９３７６
β型溶血連鎖球菌 Ｃ群連鎖球菌 ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｓｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ＣＣＵＧ４２１１
β型溶血連鎖球菌 Ｇ群連鎖球菌 ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｓｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ＣＣＵＧ７９７５
嫌気性菌：
ジンジバリス菌ＣＣＵＧ２５８９３／ＡＴＣＣ３３２７７
株
好気性菌：
大腸菌ＣＣＵＧ３２７４／ＡＴＣＣ１０５３６
表皮ブドウ球菌ＣＣＵＧ２３１１８
黄色ブドウ球菌ＣＣＵＧ１５９１５／ＡＴＣＣ２９２１３
緑膿菌（ＰＡＯ１）ＣＣＵＧ５６４８９／ＡＴＣＣ１５６９２
アシネトバクター・バウマンニＣＣＵＧ５７０３５
選好性好気性菌：
化膿性連鎖球菌ＣＣＵＧ４７８０３／ＡＴＣＣ７００２９４
ストレプトコッカス・アガラクチアＣＣＵＧ２９３７６
β型溶血連鎖球菌 Ｃ群連鎖球菌 ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｓｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ＣＣＵＧ４２１１
β型溶血連鎖球菌 Ｇ群連鎖球菌 ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｓｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ ＣＣＵＧ７９７５
嫌気性菌：
ジンジバリス菌ＣＣＵＧ２５８９３／ＡＴＣＣ３３２７７
【0149】
接種材料の調製
全ての株をマイクロバンクから起眠し、画線培養し、継代培養プレートを作製した。好気性菌をＴＳＡプレート上に、選好性好気性菌を馬血プレート上に、および嫌気性菌をＦＡＡプレート上に作製。試験全体を通して、好気性菌を、好気性条件下で、選好性好気性菌を５％ＣＯ２下で、および嫌気性菌を厳格な嫌気性条件下で、３７℃で培養した。試験時に、好気性菌および選好性好気性菌について１８～２４時間寒天プレートから選択した白金耳量のコロニーを、直径３ｍｍの１０個のガラスビーズを含む１０ｍｌのチューブ中の５ｍｌの生理食塩水中に懸濁させた。
全ての株をマイクロバンクから起眠し、画線培養し、継代培養プレートを作製した。好気性菌をＴＳＡプレート上に、選好性好気性菌を馬血プレート上に、および嫌気性菌をＦＡＡプレート上に作製。試験全体を通して、好気性菌を、好気性条件下で、選好性好気性菌を５％ＣＯ２下で、および嫌気性菌を厳格な嫌気性条件下で、３７℃で培養した。試験時に、好気性菌および選好性好気性菌について１８～２４時間寒天プレートから選択した白金耳量のコロニーを、直径３ｍｍの１０個のガラスビーズを含む１０ｍｌのチューブ中の５ｍｌの生理食塩水中に懸濁させた。
【0150】
嫌気性菌を、Ｃｏｎｃｅｐｔ４００に懸濁し、希釈剤は、ヘミン（５μｇ／ｍｌ）、ビタミンＫ１（１μｇ／ｍｌ）、および溶解馬血（５％）を補充した還元Ｂｒｕｃｅｌｌａブロスであった。その後、細胞懸濁液を１分間強くボルテックスして、混濁懸濁剤を得た。各好気性菌および選好性好気性菌の懸濁液を、分光光度計を用いて４７５ｎｍのＯＤを０．２８になるように調節した。この値は、ほとんどの種で１～３ｘ１０８ＣＦＵ／ｍｌに対応する。嫌気性菌については、培地中の血液の使用に起因して、ＯＤ測定が困難であることが明らかになった。従って、これを、０．５マクファーランド標準と等しくなるように懸濁させ、接種材料の細胞密度をプレートカウントでチェックした。好気性菌および選好性好気性菌を、生理食塩水で１０倍にさらに希釈し、接種材料濃度を１．５～３．０ｘ１０７ＣＦＵ／ｍｌにした。嫌気性菌を、希釈せずに、そのまま直接使用した。種々の好気性および選好性好気性細菌懸濁液を９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに移した。Ａ．バウマンニ、大腸菌、および緑膿菌をプレートの１列目に配置し、ブドウ球菌種を２列目に配置し、選好性好気性菌を３列目に配置した。嫌気性菌を２５ｍｌのマルチチャンネルピペットリザーバーに移した。
【0151】
微量希釈調製およびＭＩＣ試験
微量希釈調製およびＭＩＣ試験を、実施例１３の場合のように実施した。
ＭＩＣ微量希釈アッセイを３回繰り返して行って、グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）のＭＩＣ値を評価した（表１０）。
微量希釈調製およびＭＩＣ試験を、実施例１３の場合のように実施した。
ＭＩＣ微量希釈アッセイを３回繰り返して行って、グルコノ－δ－ラクトン（ＧＤＡ）のＭＩＣ値を評価した（表１０）。
【表10】
【0152】
大腸菌、表皮ブドウ球菌、スタフィロコッカス・エピデルミディス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、化膿性連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、Ｃ群およびＧ群β型溶血連鎖球菌ならびにジンジバリス菌に対するＧＤＡの最小阻止濃度（ＭＩＣ）は通常、ラクトバチルス・イナースおよびラクトバチルス・クリスパタス（実施例１３）に対するＧＤＡのＭＩＣ値より小さい。従って、ＧＤＡは、無害性のラクトバチルス・イナースおよびラクトバチルス・クリスパタスに対するよりも、これらの病原体に対してより効率的である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図9】