特許 7424961 血液脳関門を通過する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-01-22

(45)【発行日】2024-01-30

(54)【発明の名称】血液脳関門を通過する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240123BHJP

   C07K 14/475 20060101ALI20240123BHJP

   C07K 14/52 20060101ALI20240123BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240123BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240123BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240123BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 9/12 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 9/14 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 15/19 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 15/55 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240123BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20240123BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C07K14/475

C07K14/52

C07K14/705

C07K16/28

C07K16/46

C07K19/00

C12N5/10

C12N9/12

C12N9/14

C12N15/13

C12N15/19

C12N15/55

C12N15/63 Z

C12N15/85 Z

【請求項の数】 21

(21)【出願番号】P 2020191070

(22)【出願日】2020-11-17

(62)【分割の表示】P 2018080118の分割

【原出願日】2016-06-24

(65)【公開番号】P2021036893

(43)【公開日】2021-03-11

【審査請求日】2020-12-01

【審判番号】

【審判請求日】2022-08-16

(31)【優先権主張番号】P 2015144379

(32)【優先日】2015-06-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000228545

【氏名又は名称】ＪＣＲファーマ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100176773

【弁理士】

【氏名又は名称】坂西 俊明

(72)【発明者】

【氏名】薗田 啓之

(72)【発明者】

【氏名】高橋 健一

【合議体】

【審判長】長井 啓子

【審判官】田中 耕一郎

【審判官】鶴 剛史

(56)【参考文献】

【文献】特開平５－５００９４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１４－５１４３１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１３／１７７０６２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１５／００９９６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１４／１０５８１０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１２／０７５０３７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． ［ｏｎｌｉｎｅ］，２０１４年，Ｖｏｌ．９， Ｎｏ．４，ｅ９６３４０ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４００５７６５／ｐｄｆ／ｐｏｎｅ．００９６３４０．ｐｄｆ

【文献】Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．，１９９６年，Ｖｏｌ．２７８， Ｎｏ．３，ｐｐ．１４９１－１４９８

【文献】Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．，２０１５年 ２月，Ｖｏｌ．１２， Ｎｏ．２，ｐｐ．２０７－２２２

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N 15/00

ＰｕｂＭｅｄ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト化抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と、該抗体の重鎖のＮ末端側に結合した他の蛋白質Ａのアミノ酸配列とを含んでなる，融合蛋白質であって，該抗体の軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域が，以下の（１）～（２）からなる群より選ばれるものである，融合蛋白質：
（１）軽鎖の可変領域が，配列番号１９１のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ１として配列番号１６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号２０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号２０５のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ１として配列番号８８のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号９０のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号９２のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（２）軽鎖の可変領域が，配列番号１９１のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ１として配列番号１６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号２０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号２０５のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ１として配列番号８９のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号９０のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号９２のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの。

【請求項2】

ヒト化抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と、該抗体の重鎖のＮ末端側に結合した他の蛋白質Ａのアミノ酸配列とを含んでなる，融合蛋白質であって，該抗体が，次の（１）～（４）からなる群より選ばれるものである，融合蛋白質：
（１）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（２）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（３）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，及び
（４）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９５のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの。

【請求項3】

ヒト化抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と、該抗体の重鎖のＮ末端側に結合した他の蛋白質Ａのアミノ酸配列とを含んでなる，融合蛋白質であって，該抗体が，次の（１）～（８）からなる群より選ばれるものである，融合蛋白質：
（１）該抗体の軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（２）該抗体の軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（３）該抗体の軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（４）該抗体の軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（５）該抗体の軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（６）該抗体の軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（７）該抗体の軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，及び
（８）該抗体の軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの。

【請求項4】

該抗体がヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域及びサルトランスフェリン受容体の細胞外領域の双方に対して親和性を有するものである，請求項１～３の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項5】

該抗体がヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１×１０^－８Ｍ以下であり，サルトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が５×１０^－８Ｍ以下のものである，請求項４に記載の融合蛋白質。

【請求項6】

該抗体がＦａｂ抗体，Ｆ（ａｂ’）_２抗体，又はＦ（ａｂ’）抗体である，請求項１～５の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項7】

該抗体がｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），ｓｃＦ（ａｂ’）_２及びｓｃＦｖからなる群から選ばれる一本鎖抗体である，請求項１～５の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項8】

該抗体の軽鎖と重鎖とがリンカー配列を介して結合している，請求項７に記載の融合蛋白質。

【請求項9】

該抗体の軽鎖と重鎖とが，軽鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して結合している，請求項７に記載の融合蛋白質。

【請求項10】

該抗体の重鎖と軽鎖とが，重鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して結合している，請求項７に記載の融合蛋白質。

【請求項11】

該リンカー配列が，８～５０個のアミノ酸残基からなるものである，請求項８～１０の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項12】

該リンカー配列が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，配列番号３，配列番号４，及び配列番号５の各アミノ酸配列，及び，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続したものに相当するアミノ酸配列からなる群より選ばれるものである，請求項１１に記載の融合蛋白質。

【請求項13】

該他の蛋白質Ａが，該重鎖のＮ末端側においてリンカー配列を介して結合しているものである，請求項１～１２の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項14】

該リンカー配列が，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである，請求項１３に記載の融合蛋白質。

【請求項15】

該リンカー配列が，１個のグリシン、１個のセリン、アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列、及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１４に記載の融合蛋白質。

【請求項16】

該他の蛋白質Ａが，ヒト由来の蛋白質である，請求項１～１５の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項17】

該他の蛋白質Ａが，神経成長因子（ＮＧＦ），リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，及びその他の抗体医薬からなる群から選択されるものである，請求項１～１６の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項18】

該他の蛋白質Ａがリソソーム酵素であり，該リソソーム酵素が，α－Ｌ－イズロニダーゼ，グルコセレブロシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アリルスルファターゼＡ，α－Ｌ－フコシダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ，α－ガラクトシダーゼＡ，β－グルクロニダーゼ，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１，トリペプチジルペプチダーゼ－１，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１及びＣＬＮ２からなる群から選択されるものである，請求項１～１６の何れか一項に記載の融合蛋白質。

【請求項19】

請求項１～１８の何れか一項に記載の融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする，ＤＮＡ断片。

【請求項20】

請求項１９に記載のＤＮＡ断片を組み込んでなる，発現ベクター。

【請求項21】

請求項２０に記載の発現ベクターで形質転換された哺乳動物細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は，血中に投与して中枢神経系（ＣＮＳ）において機能させるべき化合物（蛋白質，低分子化合物等）が血液脳関門を通過できるようにするために，それらの化合物と結合させて用いる抗ヒトトランスフェリン受容体抗体，その製造法及びその使用法に関する。

【背景技術】

【0002】

脳室周囲器官（松果体，脳下垂体，最後野等）を含む幾つかの領域を除き脳の大半の組織に血液を供給する毛細血管は，筋肉等その他の組織に存在する毛細血管と異なり，その内皮を形成している内皮細胞同士が強固な細胞間接合によって密着し合っている。そのため，血液から脳への物質の受動輸送が妨げられ，例外はあるものの，脂溶性の高い物質，又は分子量が小さく（２００～５００ダルトン以下）且つ生理ｐＨ付近において電気的に中性な物質以外，毛細血管から脳へ移行しにくい。このような，脳内の毛細血管内皮を介した，血液と脳の組織液との間での物質交換を制限する機構は，血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）と呼ばれている。また，血液脳関門は，脳のみならず，脳及び脊髄を含む中枢神経系の組織液と血液との間の物質交換をも制限している。

【0003】

血液脳関門の存在により，中枢神経系の細胞の大半は，血中のホルモン，リンホカイン等の物質の濃度変動の影響を受けることなく，その生化学的な恒常性が保たれる。

【0004】

しかしながら，血液脳関門の存在は，薬剤開発の上で問題を提起する。例えば，α－Ｌ－イズロニダーゼの欠損に起因する遺伝性代謝疾患であるムコ多糖症Ｉ型（ハーラー症候群）に対しては，組換えα－Ｌ－イズロニダーゼを静脈内補充する酵素補充療法が，その治療法として行われているが，ハーラー症候群において認められる顕著な中枢神経系（ＣＮＳ）の異常に対しては，酵素が血液脳関門を通過できないことから有効でない。

【0005】

中枢神経系において作用させるべきそのような蛋白質等の高分子物質に血液脳関門を通過させるための方法が，種々開発されている。例えば，神経成長因子の場合，これを内包させたリポソームを脳内毛細血管の内皮細胞の細胞膜と融合させることにより，血液脳関門を通過させる方法が試みられているが，実用化に至っていない（非特許文献１）。α－Ｌ－イズロニダーゼの場合，１回当たりに投与される酵素の量を増加させてその血中濃度を高めることにより，血液脳関門における酵素の受動輸送を高める試みが行われ，ハーラー症候群の動物モデルを用いて，この手法により中枢神経系（ＣＮＳ）の異常が緩解することが示されている（非特許文献２）。

【0006】

また，血液脳関門を回避し，高分子物質を髄腔内又は脳内に直接投与する試みも行われている。例えば，ハーラー症候群（ムコ多糖症Ｉ型）の患者の髄腔内にヒトα－Ｌ－イズロニダーゼを投与する方法（特許文献１），ニーマン－ピック病の患者の脳室内にヒト酸スフィンゴミエリナーゼを投与する方法（特許文献２），ハンター症候群のモデル動物の脳室内にイズロン酸２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）を投与する方法（特許文献３）が報告されている。このような手法によれば，確実に中枢神経系に薬剤を作用させることができると考えられる一方，侵襲性が極度に高いという問題がある。

【0007】

血液脳関門を通して高分子物質を脳内に到達させる方法として，脳内毛細血管の内皮細胞上に存在する膜蛋白質と親和性を持つように高分子物質を修飾する方法が種々報告されている。脳内毛細血管の内皮細胞上に存在する膜蛋白質としては，インスリン，トランスフェリン，インスリン様成長因子（ＩＧＦ－Ｉ，ＩＧＦ－ＩＩ），ＬＤＬ，レプチン等の化合物に対する受容体が挙げられる。

【0008】

例えば，神経成長因子（ＮＧＦ）をインスリンとの融合蛋白質の形で合成し，インスリン受容体との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４～６）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）を抗インスリン受容体抗体との融合蛋白質の形で合成し，インスリン受容体との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４及び７）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）をトランスフェリンとの融合蛋白質の形で合成し，トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献８）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）を抗トランスフェリン受容体抗体（抗ＴｆＲ抗体）との融合蛋白質の形で合成し，ＴｆＲとの結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４及び９）。

【0009】

抗ＴｆＲ抗体を用いた技術について更にみると，抗ＴｆＲ抗体と結合させることにより薬剤に血液脳関門を通過させる技術において，一本鎖抗体を使用できることが報告されている（非特許文献３）。また，ｈＴｆＲとの解離定数が比較的大きい抗ｈＴｆＲ抗体（低親和性抗ｈＴｆＲ抗体）が，薬剤をして血液脳関門を通過させる技術において，好適に利用できることが報告されている（特許文献１０及び１１，非特許文献４）。更には，ｈＴｆＲとの親和性がｐＨ依存的に変化する抗ＴｆＲ抗体が，薬剤に血液脳関門を通過させるためキャリアとして使用できることが報告されている（特許文献１２，非特許文献５）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【文献】特表２００７－５０４１６６号公報

【文献】特表２００９－５２５９６３号公報

【文献】特開２０１２－６２３１２号公報

【文献】米国特許５１５４９２４号公報

【文献】特開２０１１－１４４１７８号公報

【文献】米国特許２００４／０１０１９０４号公報

【文献】特表２００６－５１１５１６号公報

【文献】特開Ｈ０６－２２８１９９号公報

【文献】米国特許５９７７３０７号公報

【文献】ＷＯ２０１２／０７５０３７

【文献】ＷＯ２０１３／１７７０６２

【文献】ＷＯ２０１２／１４３３７９

【非特許文献】

【0011】

【文献】Ｘｉｅ Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，１０５，１０６－１９（２００５）

【文献】Ｏｕ Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ．，１１１，１１６－２２（２０１４）

【文献】Ｌｉ ＪＹ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．，１２，７８７－９６（１９９９）

【文献】Ｂｉｅｎ－Ｌｙ Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．，２１１，２３３－４４（２０１４）

【文献】Ｓａｄａ Ｈ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ．，９，Ｅ９６３４０（２０１４）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

上記背景の下で，本発明の目的は，血中に投与して中枢神経系において機能させるべき化合物（蛋白質，低分子化合物等）が血液脳関門を通過できるようにするために，それらの化合物と結合させて用いることのできる抗ＴｆＲ抗体，その製造法及び使用法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0013】

上記目的に向けた研究において，本発明者らは，鋭意検討を重ねた結果，本明細書において詳述する抗体作製法により得た，ｈＴｆＲの細胞外領域を認識する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体（抗ｈＴｆＲ抗体）が，これを生体内に投与したとき効率よく血液脳関門を通過することを見出し，本発明を完成した。すなわち，本発明は以下を提供する。

【0014】

１．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）ＣＤＲ１に配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号１０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（２）ＣＤＲ１に配列番号１１又は配列番号１２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１３若しくは配列番号１４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号１５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（３）ＣＤＲ１に配列番号１６又は配列番号１７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１８若しくは配列番号１９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号２０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（４）ＣＤＲ１に配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号２３若しくは配列番号２４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号２５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（５）ＣＤＲ１に配列番号２６又は配列番号２７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号２８若しくは配列番号２９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号３０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（６）ＣＤＲ１に配列番号３１又は配列番号３２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号３３若しくは配列番号３４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号３５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（７）ＣＤＲ１に配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号３８若しくは配列番号３９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号４０のアミノ酸配列を含む，アミノ酸配列；
（８）ＣＤＲ１に配列番号４１又は配列番号４２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号４３若しくは配列番号４４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号４５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（９）ＣＤＲ１に配列番号４６又は配列番号４７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号４８若しくは配列番号４９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号５０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１０）ＣＤＲ１に配列番号５１又は配列番号５２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号５３若しくは配列番号５４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号５５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１１）ＣＤＲ１に配列番号５６又は配列番号５７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号５８若しくは配列番号５９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号６０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１２）ＣＤＲ１に配列番号６１又は配列番号６２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号６３若しくは配列番号６４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号６５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１３）ＣＤＲ１に配列番号６６又は配列番号６７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号６８若しくは配列番号６９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号７０のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１４）ＣＤＲ１に配列番号７１又は配列番号７２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号７３若しくは配列番号７４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを含み，且つＣＤＲ３に配列番号７５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
２．上記１の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）ＣＤＲ１に配列番号６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号１０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（２）ＣＤＲ１に配列番号１１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号１５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（３）ＣＤＲ１に配列番号１６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号２０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（４）ＣＤＲ１に配列番号２１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号２３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号２５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（５）ＣＤＲ１に配列番号２６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号２８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号３０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（６）ＣＤＲ１に配列番号３１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号３３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号３５のアミノ酸配列を，それぞれ含む，アミノ酸配列；
（７）ＣＤＲ１に配列番号３６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号３８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号４０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（８）ＣＤＲ１に配列番号４１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号４３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号４５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（９）ＣＤＲ１に配列番号４６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号４８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号５０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１０）ＣＤＲ１に配列番号５１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号５３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号５５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１１）ＣＤＲ１に配列番号５６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号５８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号６０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１２）ＣＤＲ１に配列番号６１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号６３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号６５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１３）ＣＤＲ１に配列番号６６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号６８のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号７０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；及び
（１４）ＣＤＲ１に配列番号７１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号７３のアミノ酸配列を，且つＣＤＲ３に配列番号７５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列。
３．軽鎖の可変領域のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記１又は２の何れかの軽鎖のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列とそれぞれ８０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
４．軽鎖の可変領域のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記１又は２の何れかの軽鎖のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列とそれぞれ９０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
５．上記１又は２の何れかの軽鎖のＣＤＲの少なくとも１つにおいて，これを構成するアミノ酸配列中１～５個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
６．上記１又は２の何れかの軽鎖のＣＤＲ少なくとも１つにおいて，これを構成するアミノ酸配列中１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
７．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の重鎖の可変領域のアミノ酸配列が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）ＣＤＲ１に配列番号７６又は配列番号７７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号７８又は配列番号７９のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号８０又は配列番号８１のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（２）ＣＤＲ１に配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号８４又は配列番号８５のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（３）ＣＤＲ１に配列番号８８又は配列番号８９のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号９２又は配列番号９３のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（４）ＣＤＲ１に配列番号９４又は配列番号９５のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号９６又は配列番号９７のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号９８又は配列番号９９のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（５）ＣＤＲ１に配列番号１００又は配列番号１０１のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１０２又は配列番号１０３のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１０４又は配列番号１０５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（６）ＣＤＲ１に配列番号１０６又は配列番号１０７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１０８のアミノ酸配列又は配列番号２７８のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１０９又は配列番号１１０のアミノ酸配列を含むものであるアミノ酸配列；
（７）ＣＤＲ１に配列番号１１１又は配列番号１１２のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１１３又は配列番号１１４のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１１５又は配列番号１１６のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（８）ＣＤＲ１に配列番号１１７又は配列番号１１８のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１１９のアミノ酸配列又は配列番号２７９のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１２０又は配列番号１２１のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（９）ＣＤＲ１に配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１２４又は配列番号１２５のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１２６又は配列番号１２７のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１０）ＣＤＲ１に配列番号１２８又は配列番号１２９のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１３０又は配列番号１３１のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１３２又は配列番号１３３のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１１）ＣＤＲ１に配列番号１３４又は配列番号１３５のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１３６又は配列番号１３７のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１３８又は配列番号１３９のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１２）ＣＤＲ１に配列番号１４０又は配列番号１４１のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１４２又は配列番号１４３のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１４４又は配列番号１４５のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；
（１３）ＣＤＲ１に配列番号１４６又は配列番号１４７のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２に配列番号１４８又は配列番号１４９のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３に配列番号１５０又は配列番号１５１のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列；及び
（１４）ＣＤＲ１が配列番号１５２又は配列番号１５３のアミノ酸配列を含み，ＣＤＲ２が配列番号１５４又は配列番号１５５のアミノ酸配列を含み，且つＣＤＲ３が配列番号１５６又は配列番号１５７のアミノ酸配列を含むものである，アミノ酸配列。
８．上記７の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の重鎖の可変領域のアミノ酸配列が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）ＣＤＲ１に配列番号７６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号７８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号８０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（２）ＣＤＲ１に配列番号８２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号８４のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号８６のアミノ酸配列，をそれぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（３）ＣＤＲ１に配列番号８８のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号９０のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号９２のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（４）ＣＤＲ１に配列番号９４のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号９６のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号９８のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（５）ＣＤＲ１に配列番号１００のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１０２のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１０４のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（６）ＣＤＲ１に配列番号１０６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１０８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１０９のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（７）ＣＤＲ１に配列番号１１１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１１３のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１１５のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（８）ＣＤＲ１に配列番号１１７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１１９のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１２０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（９）ＣＤＲ１に配列番号１２２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１２４のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１２６のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１０）ＣＤＲ１に配列番号１２８のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１３０のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１３２のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１１）ＣＤＲ１に配列番号１３４のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１３６のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１３８のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１２）ＣＤＲ１に配列番号１４０のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１４２のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１４４のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列；
（１３）ＣＤＲ１に配列番号１４６のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１４８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１５０のアミノ酸配列を，それぞれ含むものであるアミノ酸配列；及び
（１４）ＣＤＲ１に配列番号１５２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２に配列番号１５４のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３に配列番号１５６のアミノ酸配列を，それぞれ含むものである，アミノ酸配列。
９．重鎖の可変領域のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記７又は８の何れかの重鎖のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列とそれぞれ８０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１０．重鎖の可変領域のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記７又は８の何れかの重鎖のＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列とそれぞれ９０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１１．上記７又は８の何れかの重鎖のＣＤＲの少なくとも１つにおいて、これを構成するアミノ酸配列中，１～５個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１２．上記７又は８の何れかの重鎖のＣＤＲの少なくとも１つにおいて、これを構成するアミノ酸配列中，１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１３．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号１０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号７６又は配列番号７７のアミノ酸配を，ＣＤＲ２として配列番号７８又は配列番号７９のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号８０又は配列番号８１のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（２）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１１又は配列番号１２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１３若しくは配列番号１４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号１５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号８４又は配列番号８５のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（３）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１６又は配列番号１７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１８若しくは配列番号１９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号２０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号８８又は配列番号８９のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号９２又は配列番号９３のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（４）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号２３若しくは配列番号２４のアミノ酸配列，又はＡｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号２５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号９４又は配列番号９５のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号９６又は配列番号９７のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号９８又は配列番号９９のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（５）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号２６又は配列番号２７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号２８若しくは配列番号２９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号３０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１００又は配列番号１０１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１０２又は配列番号１０３のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１０４又は配列番号１０５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（６）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号３１又は配列番号３２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号３３若しくは配列番号３４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号３５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１０６又は配列番号１０７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１０８のアミノ酸配列又は配列番号２７８のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１０９又は配列番号１１０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（７）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号３８若しくは配列番号３９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号４０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１１１又は配列番号１１２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１１３又は配列番号１１４のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１１５又は配列番号１１６のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（８）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号４１又は配列番号４２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号４３若しくは配列番号４４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号４５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域がＣＤＲ１として配列番号１１７又は配列番号１１８のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１１９のアミノ酸配列又は配列番号２７９のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１２０又は配列番号１２１のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（９）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号４６又は配列番号４７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号４８若しくは配列番号４９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号５０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１２４又は配列番号１２５のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１２６又は配列番号１２７のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１０）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号５１又は配列番号５２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号５３若しくは配列番号５４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号５５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１２８又は配列番号１２９のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１３０又は配列番号１３１のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１３２又は配列番号１３３のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１１）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号５６又は配列番号５７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号５８若しくは配列番号５９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号６０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１３４又は配列番号１３５のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１３６又は配列番号１３７のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１３８又は配列番号１３９のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１２）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号６１又は配列番号６２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号６３若しくは配列番号６４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号６５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１４０又は配列番号１４１のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１４２又は配列番号１４３のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１４４又は配列番号１４５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１３）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号６６又は配列番号６７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号６８若しくは配列番号６９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号７０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１４６又は配列番号１４７のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１４８又は配列番号１４９のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１５０又は配列番号１５１のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；及び
（１４）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号７１又は配列番号７２のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号７３若しくは配列番号７４のアミノ酸配列を，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒを，及びＣＤＲ３として配列番号７５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１として配列番号１５２又は配列番号１５３のアミノ酸配列を，ＣＤＲ２として配列番号１５４又は配列番号１５５のアミノ酸配列を，及びＣＤＲ３として配列番号１５６又は配列番号１５７のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの。
１４．上記１３の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域が，以下の（１）～（１４）からなる群より選ばれるものである，抗体：
（１）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号６，ＣＤＲ２に配列番号８，及びＣＤＲ３に配列番号１０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号７６，ＣＤＲ２に配列番号７８，及びＣＤＲ３に配列番号８０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（２）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１１，ＣＤＲ２に配列番号１３，及びＣＤＲ３に配列番号１５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号８２，ＣＤＲ２に配列番号８４，及びＣＤＲ３に配列番号８６のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（３）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１６，ＣＤＲ２に配列番号１８，及びＣＤＲ３に配列番号２０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号８８，ＣＤＲ２に配列番号９０，及びＣＤＲ３に配列番号９２のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（４）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号２１，ＣＤＲ２に配列番号２３，及びＣＤＲ３に配列番号２５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号９４，ＣＤＲ２に配列番号９６，及びＣＤＲ３に配列番号９８のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（５）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号２６，ＣＤＲ２に配列番号２８，及びＣＤＲ３に配列番号３０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１００，ＣＤＲ２に配列番号１０２，及びＣＤＲ３に配列番号１０４のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（６）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号３１，ＣＤＲ２に配列番号３３，及びＣＤＲ３に配列番号３５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１０６，ＣＤＲ２に配列番号１０８，及びＣＤＲ３に配列番号１０９のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（７）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号３６，ＣＤＲ２に配列番号３８，及びＣＤＲ３に配列番号４０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１１１，ＣＤＲ２に配列番号１１３，及びＣＤＲ３に配列番号１１５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（８）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号４１，ＣＤＲ２に配列番号４３，及びＣＤＲ３に配列番号４５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１１７，ＣＤＲ２に配列番号１１９，及びＣＤＲ３に配列番号１２０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（９）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号４６，ＣＤＲ２に配列番号４８，及びＣＤＲ３に配列番号５０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１２２，ＣＤＲ２に配列番号１２４，及びＣＤＲ３に配列番号１２６のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１０）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号５１，ＣＤＲ２に配列番号５３，及びＣＤＲ３に配列番号５５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１２８，ＣＤＲ２に配列番号１３０，及びＣＤＲ３に配列番号１３２のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１１）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号５６，ＣＤＲ２に配列番号５８，及びＣＤＲ３に配列番号６０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１３４，ＣＤＲ２に配列番号１３６，及びＣＤＲ３に配列番号１３８のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１２）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号６１，ＣＤＲ２に配列番号６３，及びＣＤＲ３に配列番号６５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１４０，ＣＤＲ２に配列番号１４２，及びＣＤＲ３に配列番号１４４のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；
（１３）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号６６，ＣＤＲ２に配列番号６８，及びＣＤＲ３に配列番号７０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１４６，ＣＤＲ２に配列番号１４８，及びＣＤＲ３に配列番号１５０のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの；及び
（１４）軽鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号７１，ＣＤＲ２に配列番号７３，及びＣＤＲ３に配列番号７５のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなり，且つ重鎖の可変領域が，ＣＤＲ１に配列番号１５２，ＣＤＲ２に配列番号１５４，及びＣＤＲ３に配列番号１５６のアミノ酸配列を，それぞれ含んでなるもの。
１５．軽鎖及び重鎖のそれぞれにおけるＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記１３又は１４の軽鎖と重鎖の組合せの何れかにおける軽鎖及び重鎖のそれぞれのＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１６．軽鎖及び重鎖のそれぞれにおけるＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列が，上記１３又は１４の軽鎖と重鎖の組合せの何れかにおける軽鎖及び重鎖のそれぞれのＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の各アミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１７．上記１３又は１４の軽鎖と重鎖の組合せの何れかにおける軽鎖及び重鎖のそれぞれにつき，ＣＤＲの少なくとも１つにおいて，これを構成するアミノ酸配列中１～５個が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１８．上記１３又は１４の軽鎖と重鎖の組合せの何れかにおける軽鎖及び重鎖のそれぞれにつき，ＣＤＲの少なくとも１つにおいて，これを構成するアミノ酸配列中１～３個が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
１９．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１５８，配列番号１５９，配列番号１６０，配列番号１６１，配列番号１６２，及び配列番号１６３のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が，配列番号１６６，配列番号１６７，配列番号１６８，配列番号１６９，配列番号１７０，及び配列番号１７１のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２０．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１７４，配列番号１７５，配列番号１７６，配列番号１７７，配列番号１７８，及び配列番号１７９のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が，配列番号１８２，配列番号１８３，配列番号１８４，配列番号１８５，配列番号１８６，及び配列番号１８７のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２１．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１９０，配列番号１９１，配列番号１９２，配列番号１９３，配列番号１９４，及び配列番号１９５のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が，配列番号２０４，配列番号２０５，配列番号２０６，配列番号２０７，配列番号２０８，及び配列番号２０９のアミノ酸配列からなる群より選ばれる何れかのアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２２．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，次の（１）～（６）からなる群より選ばれるものである，抗体。
（１）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号１７１のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（２）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１７９のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号１８７のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（３）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（４）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（５）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの，及び
（６）該抗体の軽鎖の可変領域が配列番号１９５のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含んでなるもの。
２３．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，以下の（１）～（１０）からなる群より選ばれるものである，抗体。
（１）該抗体の軽鎖が配列番号１６４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号１７２のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（２）該抗体の軽鎖が配列番号１８０のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号１８８のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（３）該抗体の軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（４）該抗体の軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（５）該抗体の軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（６）該抗体の軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（７）該抗体の軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（８）該抗体の軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，
（９）該抗体の軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの，及び
（１０）該抗体の軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含んでなり，且つ該抗体の重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含んでなるもの。
２４．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体との間に，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列に関して，それぞれ８０％以上の相同性を有するものである，抗体。
２５．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体との間に，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列に関して，それぞれ９０％以上の相同性を有するものである，抗体。
２６．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を構成するアミノ酸配列中，１～１０個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗体。
２７．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を構成するアミノ酸配列中，１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
２８．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖の可変領域のアミノ酸配列を構成するアミノ酸配列中，１～１０個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗体。
２９．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖の可変領域のアミノ酸配列を構成するアミノ酸配列中，１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗体。
３０．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列の各々を構成するアミノ酸配列中，それぞれ１～１０個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗体。
３１．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，上記１９～２３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列の各々を構成するアミノ酸配列中，それぞれ１～３個のアミノ酸が置換，欠失又は付加したものである，抗体。
３２．上記１～３１の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，ヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域及びサルトランスフェリン受容体の細胞外領域の双方に対して親和性を有するものである，抗体。
３３．上記３２の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，ヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１×１０^－８Ｍ以下であり，サルトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が５×１０^－８Ｍ以下のものである，抗体。
３４．Ｆａｂ抗体，Ｆ（ａｂ’）_２抗体，又はＦ（ａｂ’）抗体である，上記１～３３の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
３５．ｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），ｓｃＦ（ａｂ’）_２及びｓｃＦｖからなる群から選ばれる一本鎖抗体である，上記１～３３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
３６．上記３５の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，その軽鎖と重鎖とがリンカー配列を介して結合しているものである，抗体。
３７．上記３５の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，その軽鎖と重鎖とが，軽鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して結合しているものである，抗体。
３８．上記３５の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，その重鎖と軽鎖とが，重鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して結合しているものである，抗体。
３９．上記３６～３８の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該リンカー配列が，８～５０個のアミノ酸残基からなるものである，抗体。
４０．上記３９の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該リンカー配列が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，配列番号３，配列番号４，及び配列番号５の各アミノ酸配列，及び，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続したものに相当するアミノ酸配列からなる群より選ばれるものである，抗体。
４１．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と，その軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合した他の蛋白質Ａのアミノ酸配列とを含んでなる，融合蛋白質。
４２．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質であって，該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であり，該他の蛋白質Ａが，該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものである，融合蛋白質。
４３．該他の蛋白質Ａが，該軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカー配列を介して結合しているものである，上記４１又は４２の融合蛋白質。
４４．該リンカー配列が，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである，上記４３の融合蛋白質。
４５．該リンカー配列が，１個のグリシン、１個のセリン、アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列、及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるものである，上記４４の融合蛋白質。
４６．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と，その重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合した他の蛋白質Ａのアミノ酸配列とを含んでなる，融合蛋白質。
４７．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質であって，該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が、上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であり，該他の蛋白質Ａが，該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものである，融合蛋白質。
４８．該他の蛋白質Ａが，該重鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカー配列を介して結合しているものである，上記４６又は４７の融合蛋白質。
４９．該リンカー配列が，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである，上記４８の融合蛋白質。
５０．該リンカー配列が，該リンカー配列が，１個のグリシン、１個のセリン、アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列、及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるものである，，上記４８の融合蛋白質。
５１．該他の蛋白質Ａが，ヒト由来の蛋白質である，上記４１～５０の何れかの融合蛋白質。
５２．該他の蛋白質Ａが，神経成長因子（ＮＧＦ），リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，及びその他の抗体医薬からなる群から選択されるものである，上記４１～５１の何れかの融合蛋白質。
５３．該他の蛋白質Ａがリソソーム酵素であり，該リソソーム酵素が，α－Ｌ－イズロニダーゼ，イズロン酸－２－スルファターゼ，グルコセレブロシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アリルスルファターゼＡ，α－Ｌ－フコシダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ，α－ガラクトシダーゼＡ，β－グルクロニダーゼ，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１，トリペプチジルペプチダーゼ－１，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１及びＣＬＮ２からなる群から選択されるものである，上記４１～５１の何れかの融合蛋白質。
５４．該他の蛋白質Ａが，イズロン酸－２－スルファターゼである，上記４１～５１の何れかの融合蛋白質。
５５．該他の蛋白質Ａが，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼである上記５０の融合蛋白質であって，以下の（１）～（３）から選択されるものである融合蛋白質：
（１）該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖が配列番号１６４のアミノ酸配列を有するものであり，該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖がそのＣ末端側で，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼと結合しており，全体として配列番号２４７で示されるアミノ酸配列を有するものである，融合蛋白質；
（２）該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖が配列番号１８０のアミノ酸配列を有するものであり，該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖がそのＣ末端側で，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼと結合しており，全体として配列番号２４９で示されるアミノ酸配列を有するものである，融合蛋白質；及び
（３）該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖が，配列番号１９６のアミノ酸配列を有するものであり，該ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖が，そのＣ末端側で，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼと結合しており，全体として配列番号２５１で示されるアミノ酸配列を有するものである，融合蛋白質。
５６．該他の蛋白質Ａが，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼである上記５０の融合蛋白質であって，以下の（１）～（３）から選択されるものである融合蛋白質：
（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と，配列番号１７２のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２４６で示されるヒトイズロン酸－２－スルファターゼが結合したものとを含む，融合蛋白質；
（２）配列番号１８０のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と，配列番号１８８のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２４６で示されるヒトイズロン酸－２－スルファターゼが結合したものとを含む，融合蛋白質；及び
（３）配列番号１９６のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と，配列番号２１０のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に，リンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２４６で示されるヒトイズロン酸－２－スルファターゼが結合したものとを含む，融合蛋白質。
５７．該他の蛋白質Ａが，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼである上記５０の融合蛋白質であって，以下の（１）～（３）から選択されるものである融合蛋白質：
（１）該ヒトイズロン酸－２－スルファターゼがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２４７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）該ヒトイズロン酸－２－スルファターゼがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２４９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）該ヒトイズロン酸－２－スルファターゼがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２５１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの。
５８．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体のアミノ酸配列をコードする，ＤＮＡ断片。
５９．上記４１～５７の何れかの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする，ＤＮＡ断片。
６０．上記５８又は５９のＤＮＡ断片を組み込んでなる，発現ベクター。
６１．上記６０の発現ベクターで形質転換された哺乳動物細胞。
６２．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体該の軽鎖及び／又は重鎖の何れかに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるべき低分子量の薬理活性物質を結合させたものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体－薬理活性物質複合体。
６３．該薬理活性物質が，抗ガン剤，アルツハイマー病治療剤，パーキンソン病治療剤，ハンチントン病治療剤，統合失調症治療剤，うつ症治療剤，多発性硬化症治療剤，筋委縮性側索硬化症治療剤，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍の治療剤，脳障害を伴うリソソーム病の治療剤，糖原病治療剤，筋ジストロフィー治療剤，脳虚血治療剤，プリオン病治療剤，外傷性の中枢神経系障害の治療剤，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤，脳外科手術後の回復に用いる薬剤，脊椎外科手術後の回復に用いる薬剤，ｓｉＲＮＡ，アンチセンスＤＮＡ，及びペプチドからなる群から選択される何れかのものである，上記６２の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
６４．他の蛋白質Ａ又は低分子量の薬理活性物質に血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるための，上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の使用。
６５．中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，該疾患状態に対する生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させることによる上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の使用。
６６．中枢神経系の疾患の治療方法であって，該疾患に対する生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の治療上有効量を，上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体分子との結合体の形態で当該疾患を有する患者に血中投与することを含む，治療方法。
６７．ヒトイズロン酸－２－スルファターゼに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるための，上記５４～５７の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の使用。
６８．ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，上記５４～５７の何れかの融合蛋白質の使用。
６９．ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患の治療方法であって，上記５４～５７の何れかの融合蛋白質の治療上有効量を，当該疾患を有する患者に血中投与することを含む，治療方法。

【発明の効果】

【0015】

本発明は，生理活性や薬理活性を有する蛋白質や低分子量の物質でありながら，血液脳関門を殆ど又は全く通過できないため，従来は血中投与では利用できなかった諸々の物質について，それらを血液脳関門通過可能な形態にすることができ，従って，中枢神経系の疾患状態の治療のための，血中投与用の新たな薬剤とすることを可能にする。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの大脳皮質の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）は抗ｈＴｆＲ抗体番号１を投与，（ｃ）抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与，（ｄ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図2】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの海馬の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）抗ｈＴｆＲ抗体番号１を投与，（ｃ）抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与，（ｄ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図3】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの小脳の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）抗ｈＴｆＲ抗体番号１を投与，（ｃ）抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与，（ｄ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図4】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの脳以外の各種臓器へのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の蓄積量を示す図。縦軸は，各臓器の湿重量当たりのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の量（μｇ／ｇ湿重量）を示す。白バーは左から順に，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を，それぞれ投与、黒バーは，トラスツズマブ（ハーセプチンＴＭ）を投与したサルの各臓器での蓄積量を示す。ＮＤは未測定を意味する。

【図5】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの大脳皮質の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図6】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの海馬の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図7】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの小脳のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図8】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの延髄の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図9】カニクイザルに単回静脈内投与した後の，脳組織へのＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体及びｒｈＩ２Ｓ蓄積量を示す図。縦軸は，脳組織の湿重量当たりのＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体及びｒｈＩ２Ｓの量（μｇ／ｇ湿重量）を示す。網掛けバーはカニクイザルの脳組織におけるｒｈＩ２Ｓの蓄積量を示す。横線バーはカニクイザルの脳組織におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の蓄積量を示す。縦線分は標準偏差を示す。

【図10】ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体又はｒｈＩ２Ｓを静注したＩ２Ｓ遺伝子ノックアウトマウス（Ｉ２Ｓ－ＫＯマウス）における各種臓器中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の量を示すグラフ。（ａ）脳，（ｂ）肝臓，（ｃ）肺，（ｄ）心臓。各グラフとも，バーは左から順に，野生型マウス（ＷＴ），コントロール群（非投与群），０．５ｍｇ／ｋｇ投与群，１．０ｍｇ／ｋｇ投与群，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群。縦軸は，各臓器の乾燥重量当たりのＧＡＧ量（μｇ／ｇ乾燥重量）を示す。また，縦線分は標準偏差を，＊＊はコントロール群を対照としたＤｕｎｎｅｔ検定でＰ＜０．０１であることを示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明において，「抗体」の語は，主としてヒト抗体，マウス抗体，ヒト化抗体，ヒト抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体，及びマウス抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体のことをいうが，特定の抗原に特異的に結合する性質を有するものである限り，これらに限定されるものではなく，また，抗体の動物種にも特に制限はない。

【0018】

本発明において，「ヒト抗体」の語は，その蛋白質全体がヒト由来の遺伝子にコードされている抗体のことをいう。遺伝子の発現効率を上昇させる等の目的で，元のヒトの遺伝子に，元のアミノ酸配列に変化を与えることなく変異を加えた遺伝子にコードされる抗体も，「ヒト抗体」に含まれる。また，ヒト抗体をコードする２つ以上の遺伝子を組み合わせて，あるヒト抗体の一部を，他のヒト抗体の一部に置き換えた抗体も，「ヒト抗体」に含まれる。ヒト抗体は，免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎの略称）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。免疫グロブリン軽鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。免疫グロブリン重鎖の３箇所のＣＤＲも，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。あるヒト抗体のＣＤＲを，他のヒト抗体のＣＤＲに置き換えることにより，ヒト抗体の抗原特異性，親和性等を改変した抗体も，ヒト抗体に含まれる。

【0019】

本発明において，元のヒト抗体の遺伝子を改変することにより，元の抗体のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えた抗体も，「ヒト抗体」に含まれる。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸で置換する場合，置換するアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，ヒト抗体である。アミノ酸を付加させる場合，元の抗体のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個のアミノ酸を付加する。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，ヒト抗体である。変異を加えた抗体のアミノ酸配列は，元の抗体のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を示し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは９５％以上の相同性を示し，更により好ましくは９８％以上の相同性を示すものである。従って，本発明において「ヒト由来の遺伝子」というときは，ヒト由来の元の遺伝子に加えて，これに改変を加えることにより得られる遺伝子も含まれる。

【0020】

元の抗体のアミノ酸配列と変異を加えた抗体のアミノ酸配列との相同性は，周知の相同性計算アルゴリズムを用いて容易に算出することができる。例えば，そのようなアルゴリズムとして，ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５，４０３－１０，（１９９０）），ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎの類似性検索法（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ．，８５，２４４４，（１９８８）），ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ．，２，４８２－９，（１９８１））等がある。

【0021】

「マウス抗体」というときは，その蛋白質全体がマウス由来の遺伝子にコードされる抗体と同一のアミノ酸配列からなる抗体のことをいう。従って，遺伝子の発現効率を上昇させる等の目的で，元のマウスの遺伝子に，元のアミノ酸配列に変化を与えることなく変異を加えた遺伝子にコードされる抗体も，「マウス抗体」に含まれる。また，マウス抗体をコードする２つ以上の遺伝子を組み合わせて，あるマウス抗体の一部を，他のマウス抗体の一部に置き換えた抗体も，マウス抗体に含まれる。マウス抗体は，免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）有する。免疫グロブリン軽鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。免疫グロブリン重鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。例えば，あるマウス抗体のＣＤＲを，他のマウス抗体のＣＤＲに置き換えることにより，マウス抗体の抗原特異性，親和性等を改変した抗体も，マウス抗体に含まれる。

【0022】

本発明において，元のマウス抗体の遺伝子を改変することにより，元の抗体のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えた抗体も，「マウス抗体」に含まれる。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換する場合，置換するアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，マウス抗体である。アミノ酸を付加する場合，元の抗体のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個のアミノ酸を付加する。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，マウス抗体である。変異を加えた抗体のアミノ酸配列は，元の抗体のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは９５％以上の相同性を示し，更により好ましくは９８％以上の相同性を示すものである。従って，本発明において「マウス由来の遺伝子」というときは，マウス由来の元の遺伝子に加えて，これに改変を加えることにより得られる遺伝子も含まれる。

【0023】

本発明において，「ヒト化抗体」の語は，可変領域の一部（例えば，特にＣＤＲの全部又は一部）のアミノ酸配列がヒト以外の哺乳動物由来であり，それ以外の領域がヒト由来である抗体のことをいう。例えば，ヒト化抗体として，ヒト抗体を構成する免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を，他の哺乳動物のＣＤＲによって置き換えることにより作製された抗体が挙げられる。ヒト抗体の適切な位置に移植されるＣＤＲの由来となる他の哺乳動物の生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，又はヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウス及びラットであり，例えばマウスである。

【0024】

本発明において，「キメラ抗体」の語は，２つ以上の異なる種に由来する，２つ以上の異なる抗体の断片が連結されてなる抗体のことをいう。

【0025】

ヒト抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体とは，ヒト抗体の一部がヒト以外の哺乳動物の抗体の一部によって置き換えられた抗体である。抗体は，以下に説明するＦｃ領域，Ｆａｂ領域及びヒンジ部とからなる。このようなキメラ抗体の具体例として，Ｆｃ領域がヒト抗体に由来する一方でＦａｂ領域が他の哺乳動物の抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又は他の哺乳動物の抗体のいずれかに由来する。逆に，Ｆｃ領域が他の哺乳動物に由来する一方でＦａｂ領域がヒト抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又は他の哺乳動物の抗体のいずれに由来してもよい。逆に，Ｆｃ領域が他の哺乳動物に由来する一方でＦａｂ領域がヒト抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。この場合もヒンジ部は，ヒト抗体又は他の哺乳動物の抗体のいずれに由来してもよい。

【0026】

また，抗体は，可変領域と定常領域とからなるということもできる。キメラ抗体の他の具体例として，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_ｌ）がヒト抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）が他の哺乳動物の抗体に由来するもの，逆に，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_ｌ）が他の哺乳動物の抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がヒト抗体に由来するものも挙げられる。ここで，他の哺乳動物の生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，又はヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウスである。

【0027】

マウス抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体とは，マウス抗体の一部がマウス以外の哺乳動物の抗体の一部に置き換えられた抗体である。このようなキメラ抗体の具体例として，Ｆｃ領域がマウス抗体に由来する一方でＦａｂ領域が他の哺乳動物の抗体に由来するキメラ抗体や，逆に，Ｆｃ領域が他の哺乳動物に由来する一方でＦａｂ領域がマウス抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ここで，他の哺乳動物の生物種は，マウス以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，ラット，ウサギ，ウマ，ヒト以外の霊長類であり，より好ましくはヒトである。

【0028】

ヒト抗体とマウス抗体のキメラ抗体は，特に，「ヒト／マウスキメラ抗体」という。ヒト／マウスキメラ抗体には，Ｆｃ領域がヒト抗体に由来する一方でＦａｂ領域がマウス抗体に由来するキメラ抗体や，逆に，Ｆｃ領域がマウス抗体に由来する一方でＦａｂ領域がヒト抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又はマウス抗体のいずれかに由来する。ヒト／マウスキメラ抗体の他の具体例として，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_ｌ）がヒト抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がマウス抗体に由来するもの，逆に，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_ｌ）がマウス抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がヒト抗体に由来するものも挙げられる。

【0029】

抗体は，本来，２本の免疫グロブリン軽鎖と２本の免疫グロブリン重鎖の計４本のポリペプチド鎖からなる基本構造を有する。但し，本発明において，「抗体」というときは，この基本構造を有するものに加え，
（１）１本の免疫グロブリン軽鎖と１本の免疫グロブリン重鎖の計２本のポリペプチド鎖からなるものや，以下に詳述するように，
（２）免疫グロブリン軽鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に免疫グロブリン重鎖を結合させてなるものである一本鎖抗体，及び
（３）免疫グロブリン重鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に免疫グロブリン軽鎖を結合させてなるものである一本鎖抗体も含まれる。また，
（４）本来の意味での抗体の基本構造からＦｃ領域が欠失したものであるＦａｂ領域からなるもの及びＦａｂ領域とヒンジ部の全部若しくは一部とからなるもの（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）及びＦ（ａｂ’）_２を含む）も，本発明における「抗体」に含まれる。

【0030】

ここでＦａｂとは，可変領域とＣ_Ｌ領域（軽鎖の定常領域）を含む１本の軽鎖と，可変領域とＣ_Ｈ１領域（重鎖の定常領域の部分１）を含む１本の重鎖が，それぞれに存在するシステイン残基同士でジスルフィド結合により結合した分子のことをいう。Ｆａｂにおいて、重鎖は、可変領域とＣ_Ｈ１領域（重鎖の定常領域の部分１）に加えて、更にヒンジ部の一部を含んでもよいが、この場合のヒンジ部は、ヒンジ部に存在して抗体の重鎖どうしを結合するシステイン残基を欠くものである。Ｆａｂにおいて、軽鎖と重鎖とは、軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ領域）に存在するシステイン残基と、重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ１領域）又はヒンジ部に存在するシステイン残基との間で形成されるジスルフィド結合により結合する。Ｆａｂは，ヒンジ部に存在して抗体の重鎖どうしを結合するシステイン残基を欠いているので，１本の軽鎖と１本の重鎖とからなる。Ｆａｂを構成する軽鎖は，可変領域とＣ_Ｌ領域を含む。Ｆａｂを構成する重鎖は，可変領域とＣ_Ｈ１領域からなるものであってもよく，可変領域，Ｃ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部を含むものであってもよい。但しこの場合，ヒンジ部で２本の重鎖の間でジスルフィド結合が形成されないように，ヒンジ部は重鎖間を結合するシステイン残基を含まないように選択される。Ｆ（ａｂ’）においては，その重鎖は可変領域とＣ_Ｈ１領域に加えて、重鎖どうしを結合するシステイン残基を含むヒンジ部の全部または一部を含む。Ｆ（ａｂ’）_２は２つのＦ（ａｂ’）が互いのヒンジ部に存在するシステイン残基どうしでジスルフィド結合により結合した分子のことをいう。また，複数の抗体が直接又はリンカーを介して結合してなるニ量体，三量体等の重合体も，抗体である。更に，これらに限らず，免疫グロブリン分子の一部を含み，且つ，抗原に特異的に結合する性質を有するものは何れも，本発明でいう「抗体」に含まれる。即ち，本発明において免疫グロブリン軽鎖というときは，免疫グロブリン軽鎖に由来し，その可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有するものが含まれる。また，免疫グロブリン重鎖というときは，免疫グロブリン重鎖に由来し，その可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有するものが含まれる。従って，可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有する限り，例えば，Ｆｃ領域が欠失したものも，免疫グロブリン重鎖である。

【0031】

また、ここでＦｃ又はＦｃ領域とは、抗体分子中の、Ｃ_Ｈ２領域（重鎖の定常領域の部分２）、及びＣ_Ｈ３領域（重鎖の定常領域の部分３）からなる断片を含む領域のことをいう。

【0032】

更には，本発明において，「抗体」というときは，
（５）上記（４）で示したＦａｂ，Ｆ（ａｂ’）又はＦ（ａｂ’）_２を構成する軽鎖と重鎖を，リンカー配列を介して結合させて，それぞれ一本鎖抗体としたｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），及びｓｃＦ（ａｂ’）_２も含まれる。ここで，ｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），及びｓｃＦ（ａｂ’）_２にあっては，軽鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に重鎖を結合させてなるものでもよく，また，重鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に軽鎖を結合させてなるものでもよい。更には，軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域をリンカー配列を介して結合させて一本鎖抗体としたｓｃＦｖも，本発明における抗体に含まれる。ｓｃＦｖにあっては，軽鎖の可変領域のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に重鎖の可変領域を結合させてなるものでもよく，また，重鎖の可変領域のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に軽鎖の可変領域を結合させてなるものでもよい。

【0033】

更には，本明細書でいう「抗体」には，完全長抗体，上記（１）～（５）に示されるものに加えて，上記（４）及び（５）を含むより広い概念である、完全長抗体の一部が欠損したものである抗原結合性断片（抗体フラグメント）のいずれの形態も含まれる。

【0034】

「抗原結合性断片」の語は，抗原との特異的結合活性の少なくとも一部を保持している抗体の断片のことをいう。結合性断片の例としては，例えば上記（４）及び（５）に示されるものに加えて，Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）_２，可変領域（Ｆｖ），重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを適当なリンカーで連結させた一本鎖抗体（ｓｃＦｖ），重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むポリペプチドの二量体であるダイアボディ，ｓｃＦｖの重鎖（Ｈ鎖）に定常領域の一部（Ｃ_Ｈ３）が結合したものの二量体であるミニボディ，その他の低分子化抗体等を包含する。但し，抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。また，これらの結合性断片には，抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理したもののみならず，遺伝子工学的に改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。

【0035】

本発明において，「一本鎖抗体」というときは，免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列が結合してなり，特定の抗原に特異的に結合することのできる蛋白質をいう。例えば、上記（２）、（３）及び（５）に示されるものは一本鎖抗体に含まれる。また，免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列が結合してなり，特定の抗原に特異的に結合することのできる蛋白質も，本発明における「一本鎖抗体」である。免疫グロブリン重鎖のＣ末端側にリンカー配列を介して免疫グロブリン軽鎖が結合した一本鎖抗体にあっては，通常，免疫グロブリン重鎖は，Ｆｃ領域が欠失している。免疫グロブリン軽鎖の可変領域は，抗体の抗原特異性に関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）を３つ有している。同様に，免疫グロブリン重鎖の可変領域も，ＣＤＲを３つ有している。これらのＣＤＲは，抗体の抗原特異性を決定する主たる領域である。従って，一本鎖抗体には，免疫グロブリン重鎖の３つのＣＤＲが全てと，免疫グロブリン軽鎖の３つのＣＤＲの全てとが含まれることが好ましい。但し，抗体の抗原特異的な親和性が維持される限り，ＣＤＲの１個又は複数個を欠失させた一本鎖抗体とすることもできる。

【0036】

一本鎖抗体において，免疫グロブリンの軽鎖と重鎖の間に配置されるリンカー配列は，好ましくは２～５０個，より好ましくは８～５０個，更に好ましくは１０～３０個，更により好ましくは１２～１８個又は１５～２５個，例えば１５個若しくは２５個のアミノ酸残基から構成されるペプチド鎖である。そのようなリンカー配列は，これにより両鎖が連結されてなる抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲに対する親和性を保持する限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンのみ又はグリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が２～１０回，あるいは２～５回繰り返された配列を含むものである。例えば，免疫グロブリン重鎖の可変領域の全領域からなるアミノ酸配列のＣ末端側に，リンカー配列を介して免疫グロブリン軽鎖の可変領域を結合させる場合，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）の３個が連続したものに相当する計１５個のアミノ酸を含むリンカー配列が好適である。

【0037】

本発明において，「ヒトトランスフェリン受容体」又は「ｈＴｆＲ」の語は，配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する膜蛋白質をいう。本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，その一実施態様において，配列番号１で示されるアミノ酸配列中Ｎ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの部分（ｈＴｆＲの細胞外領域）に対して特異的に結合するものであるが，これに限定されない。また，本発明において「サルトランスフェリン受容体」又は「サルＴｆＲ」の語は，特に，カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）由来の配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する膜蛋白質である。本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，その一実施態様において，配列番号２で示されるアミノ酸配列の中Ｎ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの部分（サルＴｆＲの細胞外領域）に対しても結合するものであるが，これに限定されない。

【0038】

ｈＴｆＲに対する抗体の作製方法としては，ｈＴｆＲ遺伝子を組み込んだ発現ベクターを導入した細胞を用いて，組換えヒトトランスフェリン受容体（ｒｈＴｆＲ）を作製し，このｒｈＴｆＲを用いてマウス等の動物を免疫して得る方法が一般的である。免疫後の動物からｈＴｆＲに対する抗体産生細胞を取り出し，これとミエローマ細胞とを融合させることにより，抗体産生能を有するハイブリドーマ細胞を作製することができる。

【0039】

また，マウス等の動物より得た免疫系細胞を体外免疫法によりｒｈＴｆＲで免疫することによっても，ｈＴｆＲに対する抗体を産生する細胞を取得できる。体外免疫法を用いる場合，その免疫系細胞が由来する動物種に特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，モルモット，イヌ，ネコ，ウマ，及びヒトを含む霊長類であり，より好ましくは，マウス，ラット及びヒトであり，更に好ましくはマウス及びヒトである。マウスの免疫系細胞としては，例えば，マウスの脾臓から調製した脾細胞を用いることができる。ヒトの免疫系細胞としては，ヒトの末梢血，骨髄，脾臓等から調製した細胞を用いることができる。ヒトの免疫系細胞を体外免疫法により免疫した場合，ｈＴｆＲに対するヒト抗体を得ることができる。

【0040】

体外免疫法により免疫系細胞を免疫した後，細胞をミエローマ細胞と融合させることにより，抗体産生能を有するハイブリドーマ細胞を作製することができる。また，免疫後の細胞からｍＲＮＡを抽出してｃＤＮＡを合成し，このｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ反応により免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を増幅し，これらを用いて人工的に抗体遺伝子を再構築することもできる。

【0041】

上記方法により得られたままのハイブリドーマ細胞には，ｈＴｆＲ以外の蛋白質を抗原として認識する抗体を産生する細胞も含まれる。また，抗ｈＴｆＲ抗体を産生するハイブリドーマ細胞の全てが，ｈＴｆＲに対して高親和性示す抗ｈＴｆＲ抗体を産生するとも限らない。

【0042】

同様に，人工的に再構築した抗体遺伝子には，ｈＴｆＲ以外の蛋白質を抗原として認識する抗体をコードする遺伝子も含まれる。また，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の全てが，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗ｈＴｆＲ抗体をコードする等の所望の特性を備えるとも限らない。

【0043】

従って，上記で得られたままのハイブリドーマ細胞から，所望の特性（ｈＴｆＲに対する高親和性等）を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択するステップが必要となる。また，人工的に再構築した抗体遺伝子にあっては，当該抗体遺伝子から，所望の特性（ｈＴｆＲに対する高親和性等）を有する抗体をコードする遺伝子を選択するステップが必要となる。ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体（高親和性抗体）を産生するハイブリドーマ細胞，又は高親和性抗体をコードする遺伝子を選択する方法として，以下に詳述する方法が有効である。なお，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体とは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものであり，より好ましくは１×１０^－９Ｍ以下のものであり，更に好ましくは１×１０^－１０以下のものであり，尚も更に好ましくは１×１０^－１１以下のものである。例えば好適なもとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－９Ｍであるもの，１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－１０であるものを挙げることができる。

【0044】

例えば，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択する場合，組換えｈＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，ハイブリドーマ細胞の培養上清を添加し，次いで組換えｈＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，プレートに添加したハイブリドーマ細胞の培養上清に含まれる抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持される抗体の量が多くなる。従って，プレートに保持された抗体の量を測定し，より多くの抗体が保持されたプレートに対応するハイブリドーマ細胞を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞株として選択することができる。この様にして選択された細胞株から，ｍＲＮＡを抽出してｃＤＮＡを合成し，このｃＤＮＡを鋳型として，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片をＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することもできる。

【0045】

上記の人工的に再構築した抗体遺伝子から，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択する場合は，一旦，人工的に再構築した抗体遺伝子を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターをホスト細胞に導入する。このとき，ホスト細胞として用いる細胞としては，人工的に再構築した抗体遺伝子を組み込んだ発現ベクターを導入することにより抗体遺伝子を発現させることのできる細胞であれば原核細胞，真核細胞を問わず特に限定はないが，ヒト，マウス，チャイニーズハムスター等の哺乳動物由来の細胞が好ましく，特にチャイニーズハムスター卵巣由来のＣＨＯ細胞，又はマウス骨髄腫に由来するＮＳ／０細胞が好ましい。また，抗体遺伝子をコードする遺伝子を組み込んで発現させるために用いる発現ベクターは，哺乳動物細胞内に導入させたときに，該遺伝子を発現させるものであれば特に限定なく用いることができる。発現ベクターに組み込まれた該遺伝子は，哺乳動物細胞内で遺伝子の転写の頻度を調節することができるＤＮＡ配列（遺伝子発現制御部位）の下流に配置される。本発明において用いることのできる遺伝子発現制御部位としては，例えば，サイトメガロウイルス由来のプロモーター，ＳＶ４０初期プロモーター，ヒト伸長因子－１アルファ（ＥＦ－１α）プロモーター，ヒトユビキチンＣプロモーター等が挙げられる。

【0046】

このような発現ベクターが導入された哺乳動物細胞は，発現ベクターに組み込まれた上述の人工的に再構築した抗体を発現するようになる。このようにして得た，人工的に再構築した抗体を発現する細胞から，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を産生する細胞を選択する場合，組換えｈＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，組換えｈＴｆＲに細胞の培養上清を接触させ，次いで，組換えｈＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，細胞の培養上清に含まれる抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持された抗体の量が多くなる。従って，プレートに保持された抗体の量を測定し，より多くの抗体が保持されたプレートに対応する細胞を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞株として選択することができ，ひいては，ｈＴｆＲに対して高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。このようにして選択された細胞株から，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することができる。

【0047】

上記の人工的に再構築した抗体遺伝子からの，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の選択は，人工的に再構築した抗体遺伝子を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを大腸菌に導入し，この大腸菌を培養して得た培養上清又は大腸菌を溶解させて得た抗体を含む溶液を用いて，上述のハイブリドーマ細胞を選択する場合と同様の方法で，所望の遺伝子を有する大腸菌を選択することによってもできる。選択された大腸菌株は，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を発現するものである。この細胞株から，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。大腸菌の培養上清中に抗体を分泌させる場合には，Ｎ末端側に分泌シグナル配列が結合するように抗体遺伝子を発現ベクターに組み込めばよい。

【0048】

高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択する他の方法として，上述の人工的に再構築した抗体遺伝子にコードされた抗体をファージ粒子上に保持させて発現させる方法がある。このとき，抗体遺伝子は，一本鎖抗体をコードする遺伝子として再構築される。抗体をファージ粒子上に保持する方法は，国際公開公報（ＷＯ１９９７／０９４３６，ＷＯ１９９５／１１３１７）等に記載されており，周知である。人工的に再構築した抗体遺伝子にコードされた抗体を保持するファージから，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を保持するファージを選択する場合，組換えｈＴｆＲを，プレートに添加して保持させた後，ファージを接触させ，次いでプレートから組換えｈＴｆＲと結合していないファージを除去し，プレートに保持されたファージの量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，ファージ粒子上に保持された抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持されたファージの量が多くなる。従って，プレートに保持されたファージの量を測定し，より多くのファージが保持されたプレートに対応するファージ粒子を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生するファージ粒子として選択することができ，ひいては，ｈＴｆＲに対して高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。このようにして選択されたファージ粒子から，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することができる。

【0049】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞等の細胞，又は，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を有するファージ粒子からｃＤＮＡ又はファージＤＮＡを調製し，これを鋳型として，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖，又は抗ｈＴｆＲ抗体である一本鎖抗体の，全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法等により増幅して単離することができる。同様にして，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法等により増幅して単離することもできる。

【0050】

この高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子の全てまたはその一部を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを用いて哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換し，得られた形質転換細胞を培養することにより，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生させることができる。単離された抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の塩基配列から抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列を翻訳し，このアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を人工的に合成することもできる。ＤＮＡ断片を人工的に合成する場合，適切なコドンを選択することにより，ホスト細胞における抗ｈＴｆＲ抗体の発現量を増加させることができる。

【0051】

元の抗ｈＴｆＲ抗体にアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えるために，単離されたＤＮＡ断片に含まれる抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子に，適宜変異を加えることもできる。変異を加えた後の抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。アミノ酸配列に変異を加えることにより，抗ｈＴｆＲ抗体と結合する糖鎖の数，糖鎖の種類を改変し，生体内における抗ｈＴｆＲ抗体の安定性を増加させること等もできる。

【0052】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子に変異を加える場合にあっては、変異を加えた後の遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。軽鎖の可変領域にアミノ酸を付加させる場合，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。特に，ＣＤＲのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。ＣＤＲのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。アミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0053】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子に変異を加える場合にあっては，変異を加えた後の遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。重鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。重鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。重鎖の可変領域にアミノ酸を付加させる場合，重鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の重鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。特に，ＣＤＲのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。ＣＤＲのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。アミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0054】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域への変異と，上記の抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域への変異とを組み合わせて，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と重鎖の可変領域の両方に変異を加えることもできる。

【0055】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列中のアミノ酸の他のアミノ酸への置換としては，例えば，酸性アミノ酸であるアスパラギン酸とグルタミン酸との相互の置換，アミド型アミノ酸であるアスパラギンとグルタミンとの相互の置換，塩基性アミノ酸であるリシンとアルギニンとの相互の置換，分枝アミノ酸であるバリン，ロイシン及びイソロイシンとの相互の置換，脂肪族アミノ酸であるグリシンとアラニンとの相互の置換，ヒドロキシアミノ酸であるセリンとトレオニンとの相互の置換，芳香族アミン酸であるフェニルアラニンとチロシンとの相互の置換等が挙げられる。

【0056】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合において，当該アミノ酸を介して抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとを融合させたときは，当該アミノ酸はリンカーの一部を構成する。抗ｈＴｆＲ抗体を他の蛋白質Ａと融合させたときに，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの間に配置されるリンカーについては後に詳述する。

【0057】

上記の方法等によって選択されたｈＴｆＲに対して比較的高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞を培養して得られる抗ｈＴｆＲ抗体，及び，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を発現させて得られる抗ｈＴｆＲ抗体は，そのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を導入することにより所望の特性を有する抗体に改変させることもできる。抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への変異の導入は，そのアミノ酸配列に対応する遺伝子に変異を加えることによって行われる。

【0058】

抗ｈＴｆＲ抗体は，その抗体の可変領域のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えることにより，抗体のｈＴｆＲに対する親和性を適宜調整することができる。例えば，抗体と抗原との親和性が高く，水性液中での解離定数が著しく低い場合，これを生体内に投与したときに，抗体が抗原と解離せず，その結果，機能上の不都合が生じる可能性がある。このような場合に，抗体の可変領域に変異を導入することにより，解離定数を，元の抗体の２～５倍，５～１０倍，１０～１００倍等と段階的に調整し，目的に合致した最も好ましい抗体を獲得し得る。逆に，当該変異の導入により，解離定数を，元の抗体の１／２～１／５倍，１／５～１／１０倍，１／１０～１／１００倍等と段階的に調整することもできる。

【0059】

抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への置換，欠失，付加等の変異の導入は，例えば，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を鋳型にして，ＰＣＲ等の方法により，遺伝子の塩基配列の特定の部位に変異を導入するか，又はランダムに変異を導入することにより行うことができる。

【0060】

抗体とｈＴｆＲとの親和性の調整を目的とした，抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への変異の導入は，例えば，一本鎖抗体である抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子をファージミドに組み込み，このファージミドを用いてカプシド表面上に一本鎖抗体を発現させたファージを作製し，変異原等を作用させることにより一本鎖抗体をコードする遺伝子上に変異を導入させながらファージを増殖させ，増殖させたファージから，所望の解離定数を有する一本鎖抗体を発現するファージを，上述の方法により選択するか，又は一定条件下で抗原カラムを用いて精製することにより，得ることができる。

【0061】

上記の高親和性抗体を産生する細胞を選択する方法により得られる，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体は，好ましくは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１×１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは１×１０^－９Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１×１０^－１０以下のものであり，尚も更に好ましくは１×１０^－１１以下のものである。例えば好適なもとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－９Ｍであるもの，１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－１０であるものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。一旦得られた抗体は，変異を導入する等して，所望の特性を有するように適宜改変することができる。

【0062】

上記の高親和性抗体を産生する細胞を選択する方法により得られる，相対的に高い親和性を有する抗体から，サルＴｆＲに対する親和性を有する抗体を選択することにより，ヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有する抗体を得ることができる。サルＴｆＲに対する親和性を有する抗体は，例えば，遺伝子組換え技術を用いて作製した組換えサルＴｆＲを用いたＥＬＩＳＡ法により選択することができる。このＥＬＩＳＡ法では，組換えサルＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，抗ｈＴｆＲ抗体を接触させ，次いで組換えサルＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する。組換えサルＴｆＲに対する親和性が高いほどプレートに保持される抗体の量が多くなるので，より多くの抗体が保持されたプレートに対応する抗体を，サルＴｆＲに親和性を有する抗体として選択することができる。なお，ここでいう「サル」とは，好ましくはヒトを除く真猿類に分類されるものであり，より好ましくはオナガザル科に分類されるものであり，更に好ましくはマカク属に分類されるものであり，例えば，カニクイザル又はアカゲザルであり，特にカニクイザルは，評価に用いる上で都合が良い。

【0063】

ヒト及びサルのｈＴｆＲのいずれにも親和性を有する抗体は，この抗体を投与したときの生体内での動態を，サルを用いて観察できるという有利な効果を有する。例えば，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体を利用して医薬を開発する場合，当該医薬の薬物動態試験をサルを用いて実施できるため，当該医薬の開発を著しく促進することができる。

【0064】

ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体であって，ヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有する抗体は，実施例７に記載の方法により測定されるサルＴｆＲとの解離定数が，好ましくは５×１０^－８Ｍ以下のものであり，より好ましくは２×１０^－８Ｍ以下のものであり，更に好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのもの，１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0065】

上記の高親和性抗体を産生する細胞を選択する方法により得られた，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体は，ヒト以外の動物の抗体である場合，ヒト化抗体とすることができる。ヒト化抗体とは，抗原に対する特異性を維持しつつ，ヒト以外の動物の抗体の可変領域の一部（例えば，特にＣＤＲの全部又は一部）のアミノ酸配列によってヒト抗体の適切な領域を置き換えて（移植して）得られる抗体である。例えば，ヒト化抗体として，ヒト抗体を構成する免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を，他の哺乳動物のＣＤＲで置き換えた抗体が挙げられる。ヒト抗体に組み込まれるＣＤＲが由来する生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，ヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウス及びラットであり，更に好ましくはマウスである。

【0066】

ヒト化抗体の作製法は，当該技術分野で周知であり，ウインター（Ｗｉｎｔｅｒ）らが考案した，ヒト抗体の可変領域にある相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲで置き換える方法（ＶｅｒｈｏｅｙｅｎＭ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．，２３９，１５３４－１５３６，（１９８８））に基づくものが，最も一般的である。ここで，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲのみならず，ＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しているＣＤＲ外の領域のアミノ酸配列により，アクセプターとなるヒト抗体の対応する箇所を置き換えることが，ドナー抗体の持つ本来の活性を再現するために必要である場合があることも周知である（Ｑｕｅｅｎ Ｃ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ．，８６，１００２９－１００３３，（１９８９）。ここで，ＣＤＲ外の領域は，フレームワーク領域（ＦＲ）ともいう。

【0067】

つまり，ヒト化抗体の作製は，ヒト抗体の可変領域のＣＤＲ（と場合によりその周辺のＦＲ）に代えて，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲ（と場合によりその周辺のＦＲ）を移植する作業を含む。この作業において，元となるヒト抗体の可変領域のフレームワーク領域は，生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベース等から得ることができる。例えば，ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は，「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットにおいてｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで入手可能）から選択することができる。この他，公表された文献，例えば「Ｋａｂａｔ ＥＡ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健福祉省，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，（１９９１）」，「Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ＩＭ．，Ｊ． ｆｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２２７，７７６－９８，（１９９２）」，「Ｃｏｘ ＪＰＬ．，Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：８２７－８３６，（１９９４）」等に記載されたＤＮＡ配列及びアミノ酸配列から選択することもできる。

【0068】

以上のように，ヒト化抗体において，元のヒト抗体の可変領域に移植される非ヒト哺乳動物の抗体の領域は，一般に，ＣＤＲそれ自体，又はＣＤＲとの周辺のＦＲを含む。但し，ＣＤＲとともに移植されるＦＲも，ＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しており，実質的に抗体の相補性を決定する機能を有すると考えられることから，本発明において「ＣＤＲ」の語は，ヒト化抗体を作製する場合に，非ヒト哺乳動物の抗体からヒト化抗体に移植される，又は移植され得る領域をいう。即ち，一般にＦＲとされる領域であっても，それがＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しており，実質的に抗体の相補性を決定する機能を有していると考えられるものである限り，本発明においてはＣＤＲに含める。

【0069】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，これを静脈注射等により生体内に投与した場合，脳内の毛細血管の内皮細胞上に存在するｈＴｆＲに効率良く結合することができる。ｈＴｆＲと結合した抗体は，エンドサイトーシス，トランスサイトーシス等の機構により血液脳関門を通過して脳内に取り込まれる。従って，脳内で機能させるべき蛋白質，低分子化合物等を，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，これらの物質に効率良く血液脳関門を通過させて脳内に到達させることができる。また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に，または少なくともこれらのいずれかに到達できる。そして，大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞へ到達することも予想される。従って，これら組織又は細胞に作用する蛋白質，低分子化合物等を，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，これら組織又は細胞に到達させることができる。

【0070】

通常であれば血液脳関門を通過することができず，そのため静脈内投与では脳内で生理的，薬理的な作用を殆ど又は全く発揮できない物質（蛋白質，低分子化合物等）を，血中から脳内に到達させそこで作用を発揮させる上で，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，有効な手段となり得る。特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に，または少なくともこれらのいずれかに到達する。そして，大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞へ到達することも予想される。従って，それらの物質を本発明の抗ｈＴｆＲ抗体分子と結合した形として静脈内投与等により血中投与することにより，これら脳の組織又は細胞においてそれらの作用を発揮させ又は強化することが可能となる。

【0071】

抗ｈＴｆＲ抗体とそのような物質（蛋白質，低分子化合物等）とを結合させる方法としては，非ペプチドリンカー又はペプチドリンカーを介して結合させる方法がある。非ペプチドリンカーとしては，ポリエチレングリコール，ポリプロピレングリコール，エチレングリコールとプロピレングリコールとの共重合体，ポリオキシエチル化ポリオール，ポリビニルアルコール，多糖類，デキストラン，ポリビニルエーテル，生分解性高分子，脂質重合体，キチン類，及びヒアルロン酸，又はこれらの誘導体，若しくはこれらを組み合わせたものを用いることができる。ペプチドリンカーは，ペプチド結合した１～５０個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖若しくはその誘導体であって，そのＮ末端とＣ末端が，それぞれ抗ｈＴｆＲ抗体又は蛋白質，低分子化合物等のいずれかと共有結合を形成することにより，抗ｈＴｆＲ抗体と蛋白質，低分子化合物等とを結合させるものである。

【0072】

非ペプチドリンカーとしてＰＥＧを用いて本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と所望の他の蛋白質Ａとを結合させたものは，特に，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質という。抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質は，抗ｈＴｆＲ抗体とＰＥＧを結合させて抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧを作製し，次いで抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧと他の蛋白質Ａとを結合させることにより製造することができる。又は，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質は，他の蛋白質ＡとＰＥＧとを結合させて蛋白質－ＰＥＧを作製し，次いで蛋白質－ＰＥＧと抗ｈＴｆＲ抗体を結合させることによっても製造することができる。ＰＥＧを抗ｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質Ａと結合させる際には，カーボネート，カルボニルイミダゾール，カルボン酸の活性エステル，アズラクトン，環状イミドチオン，イソシアネート，イソチオシアネート，イミデート，又はアルデヒド等の官能基で修飾されたＰＥＧが用いられる。これらＰＥＧに導入された官能基が，主に抗ｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質Ａ分子内のアミノ基と反応することにより，ＰＥＧとｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質Ａが共有結合する。このとき用いられるＰＥＧの分子量及び形状に特に限定はないが，その平均分子量（ＭＷ）は，好ましくはＭＷ＝５００～６００００であり，より好ましくはＭＷ＝５００～２００００である。例えば，平均分子量が約３００，約５００，約１０００，約２０００，約４０００，約１００００，約２００００等であるＰＥＧは，非ペプチドリンカーとして好適に使用することができる。抗ｈＴｆＲ抗体と所望の低分子化合物を結合させる場合も同様である。

【0073】

例えば，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧは，抗ｈＴｆＲ抗体とアルデヒド基を官能基として有するポリエチレングリコール（ＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤ）とを，該抗体に対するＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤのモル比が１１，１２．５，１５，１１０，１２０等になるように混合し，これにＮａＣＮＢＨ３等の還元剤を添加して反応させることにより得られる。次いで，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧを，ＮａＣＮＢＨ_３等の還元剤の存在下で，他の蛋白質Ａと反応させることにより，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質が得られる。逆に，先に他の蛋白質ＡとＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤとを結合させて蛋白質－ＰＥＧを作製し，次いで蛋白質－ＰＥＧと抗ｈＴｆＲ抗体を結合させることによっても，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質を得ることができる。

【0074】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとは，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，リンカー配列を介して又は直接に，それぞれ他の蛋白質ＡのＮ末端又はＣ末端をペプチド結合により結合させることもできる。このように抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとを結合させてなる融合蛋白質は，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖をコードするｃＤＮＡの３’末端側又は５’末端側に，直接又はリンカー配列をコードするＤＮＡ断片を挟んで，他の蛋白質ＡをコードするｃＤＮＡがインフレームで配置されたＤＮＡ断片を，哺乳動物細胞用の発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを導入した哺乳動物細胞を培養することにより，得ることができる。この哺乳動物細胞には，他の蛋白質ＡをコードするＤＮＡ断片を重鎖と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用の発現ベクターも，同じホスト細胞に導入され，また，他の蛋白質ＡをコードするＤＮＡ断片を軽鎖と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用の発現ベクターも，同じホスト細胞に導入される。抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとを結合させた融合蛋白質は，他の蛋白質ＡをコードするｃＤＮＡの５’末端側又は３’末端側に，直接，又はリンカー配列をコードするＤＮＡ断片を挟んで，１本鎖抗ｈＴｆＲ抗体をコードするｃＤＮＡを連結したＤＮＡ断片を，（哺乳動物細胞，酵母等の真核生物又は大腸菌等の原核生物細胞用の）発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを導入したこれらの細胞中で発現させることにより，得ることができる。

【0075】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＣ末端側に他の蛋白質Ａを結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質Ａが，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のＣ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0076】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に他の蛋白質Ａを結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質Ａが，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のＣ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0077】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＮ末端側に他の蛋白質Ａを結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質Ａが，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のＮ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0078】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側に他の蛋白質Ａを結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質Ａが，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のＮ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0079】

このとき抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの間に配置されるリンカー配列は，好ましくは１～５０個，より好ましくは１～１７個，更に好ましくは１～１０個，更により好ましくは１～５個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖であるが，抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべき他の蛋白質Ａによって，リンカー配列を構成するアミノ酸の個数は，１個，２個，３個，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，２７個等と適宜調整できる。そのようなリンカー配列は，これにより連結された抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲとの親和性を保持し，且つ当該リンカー配列により連結された他の蛋白質Ａが，生理的条件下で当該蛋白質の生理活性を発揮できる限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものである。例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列を含むものが挙げらられる。１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を有するものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列をを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0080】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質において，抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合，免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とは，一般にリンカー配列を介して，結合される。このとき，ｈＴｆＲに対する抗ｈＴｆＲ抗体の親和性が保持される限り，軽鎖由来のアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に重鎖由来のアミノ酸配列が結合してもよく，またこれとは逆に，重鎖由来のアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に軽鎖由来のアミノ酸配列が結合してもよい。

【0081】

免疫グロブリンの軽鎖と重鎖の間に配置されるリンカー配列は，好ましくは２～５０個，より好ましくは８～５０個，更に好ましくは１０～３０個，更により好ましくは１２～１８個又は１５～２５個，例えば１５個若しくは２５個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖である。そのようなリンカー配列は，これにより両鎖が連結されてなる抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲと親和性を保持し且つ当該抗体に結合した他の蛋白質Ａが，生理的条件下でその生理活性を発揮できる限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンから又はグリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が２～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列をを含むものである。リンカー配列の好ましい一態様として，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が３個連続してなる１５個のアミノ酸からなる配列を含むものが挙げられる。

【0082】

抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質ＡのＣ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなる第１のリンカー配列を介して，一本鎖抗体が結合したものが例示できる。ここで用いられる，一本鎖抗体の好ましい一態様として，配列番号２０５に記載のアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体重鎖の可変領域のＣ末端に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が３個連続してなる計１５個のアミノ酸からなる第１のリンカー配列を介して，配列番号１９１に記載のアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖の可変領域が結合したものである，配列番号２７７に記載のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。

【0083】

抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合におけるこのような融合蛋白質は，例えば，融合蛋白質をコードする塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターで哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。

【0084】

なお，本発明において，１つのペプチド鎖に複数のリンカー配列が含まれる場合，便宜上，各リンカー配列はＮ末端側から順に，第１のリンカー配列，第２のリンカー配列というように命名する。

【0085】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質ＡのＣ末端側に，Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖の可変領域とＣ_Ｈ１領域を含む領域を融合させたものが挙げられる。このときＣ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部が含まれてもよいが，当該ヒンジ部は重鎖間のジスフィルド結合を形成するシステイン残基を含まない。

【0086】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき他の蛋白質Ａに特に限定はないが，生体内において生理活性を発揮し得るものであり，特に，脳内に到達させてその機能を発揮させるべきものであるにも拘らず，そのままでは血液脳関門を通過することができないため，静脈内投与では脳内で機能させることが期待できない蛋白質である。そのような蛋白質としては，例えば，神経成長因子（ＮＧＦ）や，α－Ｌ－イズロニダーゼ，イズロン酸－２－スルファターゼ，グルコセレブロシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アリルスルファターゼＡ，α－Ｌ－フコシダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ，α－ガラクトシダーゼＡ，β－グルクロニダーゼ，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ（ＰＰＴ１），トリペプチジルペプチダーゼ－１，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１，ＣＬＮ２等のリソソーム酵素が挙げられる。

【0087】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた神経成長因子（ＮＧＦ）は，アルツハイマー病の痴ほう症治療薬として，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたα－Ｌ－イズロニダーゼはハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群における中枢神経障害治療剤として，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたイズロン酸－２－スルファターゼはハンター症候群における中枢神経障害治療剤として，グルコセレブロシダーゼはゴーシェ病における中枢神経障害治療剤として，βガラクトシダーゼはＧＭ１－ガングリオシドーシス１～３型における中枢神経障害治療剤として，ＧＭ２活性化蛋白質はＧＭ２－ガングリオシドーシスＡＢ異型における中枢神経障害治療剤として，β－ヘキソサミニダーゼＡはサンドホフ病及びティサックス病における中枢神経障害治療剤として，β－ヘキソサミニダーゼＢはサンドホフ病における中枢神経障害治療剤として，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼはＩ－細胞病における中枢神経障害治療剤として，α－マンノシダーゼはα－マンノシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，β－マンノシダーゼはβ－マンノシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，ガラクトシルセラミダーゼはクラッベ病における中枢神経障害治療剤として，サポシンＣはゴーシェ病様蓄積症における中枢神経障害治療剤として，アリルスルファターゼＡは異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）における中枢神経障害治療剤として，α－Ｌ－フコシダーゼはフコシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，アスパルチルグルコサミニダーゼはアスパルチルグルコサミン尿症における中枢神経障害治療剤として，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼはシンドラー病及び川崎病における中枢神経障害治療剤として，酸性スフィンゴミエリナーゼはニーマン・ピック病における中枢神経障害治療剤として，α－ガラクトシダーゼＡはファブリー病における中枢神経障害治療剤として，β－グルクロニダーゼはスライ症候群における中枢神経障害治療剤として，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ及びＮ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼはサンフィリッポ症候群における中枢神経障害治療剤として，酸性セラミダーゼはファーバー病における中枢神経障害治療剤として，アミロ－１，６－グルコシダーゼはコリ病（フォーブス・コリ病）における中枢神経障害治療剤として，シアリダーゼはシアリダーゼ欠損症における中枢神経障害治療剤として，アスパルチルグルコサミニダーゼはアスパルチルグルコサミン尿症における中枢神経障害治療剤として，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１（ＰＰＴ－１）は，神経セロイドリポフスチン症又はＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病における中枢神経障害治療剤として，トリペプチジルペプチダーゼ－１（ＴＰＰ－１）は，神経セロイドリポフスチン症又はＪａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病における中枢神経障害治療剤として，ヒアルロニダーゼ－１はヒアルロニダーゼ欠損症における中枢神経障害治療剤として，ＣＬＮ１及び２はバッテン病における中枢神経障害治療剤として使用できる。特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に到達し、又大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞にも到達すると予想されるので，これら組織又は細胞において薬効を機能させるべき蛋白質と融合させることにより，その蛋白質の薬効を強化し得る。但し，医薬用途はこれらの疾患に限られるものではない。

【0088】

その他，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させて薬効を発揮できる蛋白質としては，リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，及びその他の抗体医薬等が挙げられる。

【0089】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたリソソーム酵素はリソソーム病における中枢神経障害治療剤として，ＣＮＴＦは筋委縮性側索硬化症の治療剤として，ＧＤＮＦ，ニューロトロフィン３及びニューロトロフィン４／５は脳虚血の治療剤として，ＧＤＮＦはパーキンソン病の治療剤として，ニューレグリン１は統合失調症の治療剤として，エリスロポエチン及びダルベポエチンは脳虚血の治療剤として，ｂＦＧＦ及びＦＧＦ２は外傷性の中枢神経系障害の治療剤，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復に，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体及び抗ＢＡＣＥ抗体はアルツハイマー病の治療剤として，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，及び抗ＨＥＲ２抗体は脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍の治療剤として，ＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体は脳虚血及び脳炎症性疾患の治療剤として使用できる。

【0090】

アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン病等の神経変性疾患，統合失調症，うつ症等の精神障害，多発性硬化症，筋委縮性側索硬化症，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍，脳障害を伴うリソソーム病，糖原病，筋ジストロフィー，脳虚血，脳炎症性疾患，プリオン病，外傷性の中枢神経系障害等の疾患に対する治療剤は，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質Ａとなり得る。また，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤も，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質Ａとなり得る。更には，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復にも用いることができる薬剤も，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質Ａとなり得る。

【0091】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき他の蛋白質Ａとして，上記の蛋白質の天然型（野生型）のものに加えて，天然型（野生型）のこれら蛋白質の１個又は複数個のアミノ酸が，他のアミノ酸へ置換，欠失等された類似物も，これら蛋白質としての機能を完全に又は部分的に有する限り，これら蛋白質に含まれる。アミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。アミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせて，所望の類似物とすることもできる。更には，天然型（野生型）の蛋白質又はその類似物のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，１個又は複数個のアミノ酸が付加されたものも，これら蛋白質としての機能を完全に又は部分的に有する限り，これら蛋白質に含まれる。このとき付加されるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせて，所望のこれら蛋白質の類似物とすることもできる。

【0092】

なお，これら他の蛋白質Ａに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，これら蛋白質を抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，これら蛋白質と抗ｈＴｆＲ抗体との間に位置することとなった場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0093】

天然型のヒトＩ２Ｓ（ｈＩ２Ｓ）は，配列番号２４６で示される５２５個のアミノ酸から構成されるリソソーム酵素の一種である。本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のヒトＩ２Ｓを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，
（１）軽鎖が配列番号１６４に記載のアミノ酸配列からなり且つＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してヒトＩ２Ｓが結合した重鎖が配列番号２４７に記載のアミノ酸配列からなるもの，
（２）軽鎖が配列番号１８０に記載のアミノ酸配列からなり且つＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してヒトＩ２Ｓが結合した重鎖が配列番号２４９に記載のアミノ酸配列からなるもの，及び
（３）軽鎖が配列番号１９６に記載のアミノ酸配列からなり且つＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してヒトＩ２Ｓが結合した重鎖が配列番号２５１に記載のアミノ酸配列からなるものが例示できる。

【0094】

本発明において，「ヒトＩ２Ｓ」又は「ｈＩ２Ｓ」の語は，特に天然型のｈＩ２Ｓと同一のアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓをいうが，これに限らず，Ｉ２Ｓ活性を有するものである限り，天然型のｈＩ２Ｓのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＩ２Ｓに含まれる。ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＩ２Ｓにアミノ酸を付加させる場合，ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＩ２Ｓのアミノ酸配列は，元のｈＩ２Ｓのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0095】

なおここで，ｈＩ２ＳがＩ２Ｓ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＩ２Ｓが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＩ２Ｓが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＩ２Ｓが変異を加えたものである場合も同様である。

【0096】

抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＩ２Ｓの融合蛋白質は，例えば，配列番号２４９で示されるアミノ酸配列をコードする配列番号２５０で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号１８０で示されるアミノ酸配列を有する，抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードする配列番号１８１で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はハンター病の治療剤，特にハンター病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。

【0097】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はヒトＩ２Ｓに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＩ２Ｓとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0098】

上記のごとく抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＩ２Ｓの融合蛋白質を例示したが，抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＩ２Ｓの融合蛋白質の好ましい実施形態において，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列は，抗体がｈＴｆＲに対する特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。但し，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，好ましくは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１×１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは１×１０^－９Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１×１０^－１０以下である。例えば，好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－９Ｍであるもの，１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－１０Ｍであるものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体がサルＴｆＲに対しても親和性を有するものである場合，実施例７に記載の方法により測定される抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲとの解離定数は，好ましくは５×１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは２×１０^－８Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのもの，１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0099】

抗ｈＴｆＲ抗体には，抗ｈＴｆＲ抗体に他の蛋白質Ａを結合させるのと同じ手法により，比較的短いペプチド鎖を結合させることもできる。抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべきペプチド鎖は，そのペプチド鎖が所望の生理活性を有するものである限り限定はなく，例えば，各種蛋白質の生理活性を発揮する領域のアミノ酸配列を有するペプチド鎖が挙げられる。ペプチド鎖の鎖長は特に限定はないが，好ましくは２～２００個のアミノ酸から構成されるものであり，例えば５～５０個のアミノ酸から構成されるものである。

【0100】

抗ｈＴｆＲ抗体に低分子物質を結合させる場合，候補となる低分子物質に特に限定はないが，脳内に到達させてその機能を発揮させるべきものであるにも拘わらず，そのままでは血液脳関門を通過できないため，静脈内投与では脳内で機能させることが期待できない低分子物質である。例えば，係る低分子物質として，シクロフォスファミド，イホスファミド，メルファラン，ブスルファン，チオテバ，ニムスチン，ラニムスチン，ダカルバシン，プロカルバシン，テモゾロマイド，カルムスチン，ストレプトゾトシン，ペンダムスチン，シスプラチン，カルボプラチン，オキサリプラチン，ネダプラチン，５－フルオロウラシル，スルファジアジン，スルファメトキサゾール，メトトレキセート，トリメトプリム，ピリメタミン，フルオロウラシル，フルシトシン，アザチオプリン，ペントスタチン，ヒドロキシウレア，フルダラビン，シタラビン，ゲムシタビン，イリノテカン，ドキソルビシン，エトポシド，レポフロキサシン，シプロフロキサシン，ビンブラスチン，ビンクリスチン，パクリタキセル，ドデタキセル，マイトマイシンＣ，ドキソルビシン，エピルビシン等の抗ガン剤を挙げることができる。その他，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき低分子物質としてｓｉＲＮＡ，アンチセンスＤＮＡ，短いペプチドが挙げられる。

【0101】

抗ｈＴｆＲ抗体と低分子物質を結合させる場合，低分子物質は軽鎖又は重鎖の何れか一方のみに結合させてもよく，また，軽鎖と重鎖の各々に結合させてもよい。また，抗ｈＴｆＲ抗体は，ｈＴｆＲに対する親和性を有するものである限り，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列，及び／又は重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列を含むものであってよい。

【0102】

アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン病等の神経変性疾患，統合失調症，うつ症等の精神障害，多発性硬化症，筋委縮性側索硬化症，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍，脳障害を伴うリソソーム病，糖原病，筋ジストロフィー，脳虚血，脳炎症性疾患，プリオン病，外傷性の中枢神経系障害等の疾患に対する治療剤は，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。また，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤も，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。更には，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復にも用いることができる薬剤も，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。

【0103】

抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト以外の動物のものである場合，これをヒトに投与したときに，当該抗体に対する抗原抗体反応を惹起し，好ましくない副作用が生じるおそれが高い。ヒト以外の動物の抗体は，ヒト化抗体とすることでそのような抗原性を減少でき，ヒトに投与したときの抗原抗体反応に起因する副作用の発生を抑制できる。また，サルを用いた実験によれば，ヒト化抗体は，マウス抗体と比較して，血中でより安定であることが報告されており，治療効果をそれだけ長期間持続させることができると考えられる。抗原抗体反応に起因する副作用の発生は，抗ｈＴｆＲ抗体としてヒト抗体を用いることによっても抑制することができる。

【0104】

抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト化抗体又はヒト抗体である場合について，以下に更に詳しく説明する。ヒト抗体の軽鎖には，λ鎖とκ鎖がある。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する軽鎖は，λ鎖とκ鎖のいずれであってもよい。また，ヒトの重鎖には，γ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖及びε鎖があり，それぞれ，ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇＥに対応している。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する重鎖は，γ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖及びε鎖のいずれであってもよいが，好ましくはγ鎖である。更に，ヒトの重鎖のγ鎖には，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖があり，それぞれ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３及びＩｇＧ４に対応している。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する重鎖がγ鎖である場合，そのγ鎖は，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖のいずれであってもよいが，好ましくは，γ１鎖又はγ４鎖である。抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト化抗体又はヒト抗体であり，且つＩｇＧである場合，ヒト抗体の軽鎖はλ鎖とκ鎖のいずれでもあってもよく，ヒト抗体の重鎖は，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖のいずれであってもよいが，好ましくは，γ１鎖又はγ４鎖である。例えば，好ましい抗ｈＴｆＲ抗体の一つの態様として，軽鎖がλ鎖であり重鎖がγ１鎖であるものが挙げられる。

【0105】

抗ｈＴｆＲ抗体がヒト化抗体又はヒト抗体である場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとは，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介して又は直接に，他の蛋白質ＡのＣ末端（又はＮ末端）を，それぞれペプチド結合により結合させることができる。他の蛋白質Ａを抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側（又はＣ末端側）に結合させる場合，抗ｈＴｆＲ抗体のγ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖又はε鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介し又は直接に，他の蛋白質ＡのＣ末端（又はＮ末端）が，ペプチド結合によりそれぞれ結合される。抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＮ末端側（又はＣ末端側）に他の蛋白質Ａを結合させる場合，抗ｈＴｆＲ抗体のλ鎖とκ鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介し又は直接に，他の蛋白質ＡのＣ末端（又はＮ末端）が，ペプチド結合によりそれぞれ結合される。但し，抗ｈＴｆＲ抗体が，Ｆａｂ領域からなるもの又はＦａｂ領域とヒンジ部の全部若しくは一部とからなるもの（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦ（ａｂ’））の場合，他の蛋白質Ａは，Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）_２及びＦ（ａｂ’）を構成する重鎖又は軽鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介して又は直接に，そのＣ末端（又はＮ末端）をペプチド結合によりそれぞれ結合させることができる。

【0106】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＣ末端側に他の蛋白質Ａを結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0107】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に他の蛋白質Ａを結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0108】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＮ末端側に他の蛋白質Ａを結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0109】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側に他の蛋白質Ａを結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質Ａとは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0110】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの間にリンカー配列を配置する場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの間に配置されるリンカー配列は，好ましくは１～５０個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖であるが，抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべき他の蛋白質Ａによって，リンカー配列を構成するアミノ酸の個数は，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個等と適宜調整される。そのようなリンカー配列は，当該リンカー配列により連結された抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとが，それぞれの機能（ｈＴｆＲに対する親和性，及び生理的条件下での活性又は機能）を保持している限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むるものが，リンカー配列として好適に用いることができる。

【0111】

なおここで，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させた他の蛋白質Ａが，当該他の蛋白質Ａの生理的条件下での活性又は機能を保持しているというとき又は単に活性を有するというときは，天然型である他の蛋白質Ａが本来有する活性に対して，３％以上の活性又は機能を保持していることをいう。但し，その活性又は機能は，天然型の他の蛋白質Ａが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させた他の蛋白質Ａが変異を加えたものである場合も同様である。

【0112】

本発明における，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の更なる具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端側に，Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，他の蛋白質Ａを融合させたものが挙げられる。

【0113】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質ＡのＣ末端側に，Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖の可変領域とＣ_Ｈ１領域を含む領域を融合させたものが挙げられる。このときＣ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部が含まれてもよいが，当該ヒンジ部は，重鎖間のジスフィルド結合を形成するシステイン残基を含まない。

【0114】

抗ｈＴｆＲ抗体のｈＴｆＲに対する特異的親和性は，主に抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列に依存する。それらＣＤＲのアミノ酸配列は，抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲに対する特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。但し，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，好ましくは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものであり，より好ましくは１×１０^－９Ｍ以下のものであり，更に好ましくは１×１０^－１０以下のものであり，尚も更に好ましくは１×１０^－１１以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－９Ｍであるもの，１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－１０であるものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体がサルＴｆＲに対しても親和性を有するものである場合，実施例７に記載の方法により測定される抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲとの解離定数は，好ましくは５×１０^－８Ｍ以下のものであり，より好ましくは２×１０^－８Ｍ以下のものであり，更に好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのもの，１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0115】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態として，抗体の軽鎖のＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号１０のアミノ酸配列，
（２）ＣＤＲ１として配列番号１１又は配列番号１２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３若しくは配列番号１４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号１５のアミノ酸配列，
（３）ＣＤＲ１として配列番号１６又は配列番号１７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１８若しくは配列番号１９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号２０のアミノ酸配列，
（４）ＣＤＲ１として配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号２３若しくは配列番号２４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号２５のアミノ酸配列，
（５）ＣＤＲ１として配列番号２６又は配列番号２７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号２８若しくは配列番号２９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号３０のアミノ酸配列，
（６）ＣＤＲ１として配列番号３１又は配列番号３２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号３３若しくは配列番号３４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号３５のアミノ酸配列，
（７）ＣＤＲ１として配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号３８若しくは配列番号３９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｎ－Ｔｈ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号４０のアミノ酸配列，
（８）ＣＤＲ１として配列番号４１又は配列番号４２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号４３若しくは配列番号４４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号４５のアミノ酸配列，
（９）ＣＤＲ１として配列番号４６又は配列番号４７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号４８若しくは配列番号４９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号５１又は配列番号５２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号５３若しくは配列番号５４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号５５のアミノ酸配列，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号５６又は配列番号５７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号５８若しくは配列番号５９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号６０のアミノ酸配列，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号６１又は配列番号６２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号６３若しくは配列番号６４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号６５のアミノ酸配列，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号６６又は配列番号６７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号６８若しくは配列番号６９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号７０のアミノ酸配列，
（１４）ＣＤＲ１として配列番号７１又は配列番号７２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号７３若しくは配列番号７４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号７５のアミノ酸配列。

【0116】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体のより具体的な実施形態として，抗体の軽鎖のＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号６，ＣＤＲ２として配列番号８，及びＣＤＲ３として配列番号１０に記載のアミノ酸配列，
（２）ＣＤＲ１として配列番号１１，ＣＤＲ２として配列番号１３，及びＣＤＲ３として配列番号１５に記載のアミノ酸配列，
（３）ＣＤＲ１として配列番号１６，ＣＤＲ２として配列番号１８，及びＣＤＲ３として配列番号２０に記載のアミノ酸配列，
（４）ＣＤＲ１として配列番号２１，ＣＤＲ２として配列番号２３，及びＣＤＲ３として配列番号２５に記載のアミノ酸配列，
（５）ＣＤＲ１として配列番号２６，ＣＤＲ２として配列番号２８，及びＣＤＲ３として配列番号３０に記載のアミノ酸配列，
（６）ＣＤＲ１として配列番号３１，ＣＤＲ２として配列番号３３，及びＣＤＲ３として配列番号３５に記載のアミノ酸配列，
（７）ＣＤＲ１として配列番号３６，ＣＤＲ２として配列番号３８，及びＣＤＲ３として配列番号４０に記載のアミノ酸配列，
（８）ＣＤＲ１として配列番号４１，ＣＤＲ２として配列番号４３，及びＣＤＲ３として配列番号４５に記載のアミノ酸配列，
（９）ＣＤＲ１として配列番号４６，ＣＤＲ２として配列番号４８，及びＣＤＲ３として配列番号５０に記載のアミノ酸配列，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号５１，ＣＤＲ２として配列番号５３，及びＣＤＲ３として配列番号５５に記載のアミノ酸配列，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号５６，ＣＤＲ２として配列番号５８，及びＣＤＲ３として配列番号６０に記載のアミノ酸配列，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号６１，ＣＤＲ２として配列番号６３，及びＣＤＲ３として配列番号６５に記載のアミノ酸配列，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号６６，ＣＤＲ２として配列番号６８，及びＣＤＲ３として配列番号７０に記載のアミノ酸配列，
（１４）ＣＤＲ１として配列番号７１，ＣＤＲ２として配列番号７３，及びＣＤＲ３として配列番号７５に記載のアミノ酸配列。

【0117】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態として，抗体の重鎖のＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号７６又は配列番号７７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号７８又は配列番号７９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号８０又は配列番号８１のアミノ酸配列，
（２）ＣＤＲ１として配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号８４又は配列番号８５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列，
（３）ＣＤＲ１として配列番号８８又は配列番号８９のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号９２又は配列番号９３のアミノ酸配列，
（４）ＣＤＲ１として配列番号９４又は配列番号９５のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号９６又は配列番号９７のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号９８又は配列番号９９のアミノ酸配列，
（５）ＣＤＲ１として配列番号１００又は配列番号１０１のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１０２又は配列番号１０３のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１０４又は配列番号１０５のアミノ酸配列，
（６）ＣＤＲ１として配列番号１０６又は配列番号１０７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１０８のアミノ酸配列又は配列番号２７８のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１０９又は配列番号１１０のアミノ酸配列，
（７）ＣＤＲ１として配列番号１１１又は配列番号１１２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１１３又は配列番号１１４のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１１５又は配列番号１１６のアミノ酸配列，
（８）ＣＤＲ１として配列番号１１７又は配列番号１１８のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１１９のアミノ酸配列又は配列番号２７９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１２０又は配列番号１２１のアミノ酸配列，
（９）ＣＤＲ１として配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１２４又は配列番号１２５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１２６又は配列番号１２７のアミノ酸配列，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号１２８又は配列番号１２９のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３０又は配列番号１３１のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１３２又は配列番号１３３のアミノ酸配列，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号１３４又は配列番号１３５のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３６又は配列番号１３７のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１３８又は配列番号１３９のアミノ酸配列，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号１４０又は配列番号１４１のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１４２又は配列番号１４３のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１４４又は配列番号１４５のアミノ酸配列，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号１４６又は配列番号１４７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１４８又は配列番号１４９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１５０又は配列番号１５１のアミノ酸配列，及び
（１４）ＣＤＲ１として配列番号１５２又は配列番号１５３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１５４又は配列番号１５５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１５６又は配列番号１５７のアミノ酸配列。

【0118】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体のより具体的な実施形態として，抗体の重鎖のＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号７６，ＣＤＲ２として配列番号７８，及びＣＤＲ３として配列番号８０に記載のアミノ酸配列，
（２）ＣＤＲ１として配列番号８２，ＣＤＲ２として配列番号８４，及びＣＤＲ３として配列番号８６に記載のアミノ酸配列，
（３）ＣＤＲ１として配列番号８８，ＣＤＲ２として配列番号９０，及びＣＤＲ３として配列番号９２に記載のアミノ酸配列，
（４）ＣＤＲ１として配列番号９４，ＣＤＲ２として配列番号９６，及びＣＤＲ３として配列番号９８に記載のアミノ酸配列，
（５）ＣＤＲ１として配列番号１００，ＣＤＲ２として配列番号１０２，及びＣＤＲ３として配列番号１０４に記載のアミノ酸配列，
（６）ＣＤＲ１として配列番号１０６，ＣＤＲ２として配列番号１０８，及びＣＤＲ３として配列番号１０９に記載のアミノ酸配列，
（７）ＣＤＲ１として配列番号１１１，ＣＤＲ２として配列番号１１３，及びＣＤＲ３として配列番号１１５に記載のアミノ酸配列，
（８）ＣＤＲ１として配列番号１１７，ＣＤＲ２として配列番号１１９，及びＣＤＲ３として配列番号１２０に記載のアミノ酸配列，
（９）ＣＤＲ１として配列番号１２２，ＣＤＲ２として配列番号１２４，及びＣＤＲ３として配列番号１２６に記載のアミノ酸配列，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号１２８，ＣＤＲ２として配列番号１３０，及びＣＤＲ３として配列番号１３２に記載のアミノ酸配列，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号１３４，ＣＤＲ２として配列番号１３６，及びＣＤＲ３として配列番号１３８記載のアミノ酸配列，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号１４０，ＣＤＲ２として配列番号１４２，及びＣＤＲ３として配列番号１４４に記載のアミノ酸配列，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号１４６，ＣＤＲ２として配列番号１４８，及びＣＤＲ３として配列番号１５０に記載のアミノ酸配列，及び
（１４）ＣＤＲ１として配列番号１５２，ＣＤＲ２として配列番号１５４，及びＣＤＲ３として配列番号１５６に記載のアミノ酸配列。

【0119】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい軽鎖と重鎖の組み合わせとしては，ＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号８又は配列番号９のアミノ酸配列，又は酸配列Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号７６若しくは配列番号７７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号７８又は配列番号７９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号８０又は配列番号８１のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（２）ＣＤＲ１として配列番号１１又は配列番号１２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列（Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ），及びＣＤＲ３として配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号８４又は配列番号８５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（３）ＣＤＲ１として配列番号１６又は配列番号１７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１８若しくは配列番号１９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号８８又は配列番号８９のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号９２又は配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（４）ＣＤＲ１として配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号２３若しくは配列番号２４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号９４又は配列番号９５のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号９６又は配列番号９７のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号９８又は配列番号９９のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（５）ＣＤＲ１として配列番号２６又は配列番号２７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号２８若しくは配列番号２９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１００又は配列番号１０１のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１０２又は配列番号１０３のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１０４又は配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（６）ＣＤＲ１として配列番号３１又は配列番号３２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号３３若しくは配列番号３４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１０６又は配列番号１０７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１０８又は配列番号２７８のアミノ酸配列のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１０９又は配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（７）ＣＤＲ１として配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号３８若しくは配列番号３９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１１１又は配列番号１１２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１１３又は配列番号１１４のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１１５又は配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（８）ＣＤＲ１として配列番号４１又は配列番号４２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号４３若しくは配列番号４４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１１７又は配列番号１１８のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１１９のアミノ酸配列又は配列番号２７９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１２０又は配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（９）ＣＤＲ１として配列番号４６又は配列番号４７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号４８若しくは配列番号４９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１２２又は配列番号１２３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１２４又は配列番号１２５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１２６又は配列番号１２７のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号５１又は配列番号５２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号５３若しくは配列番号５４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｌａ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号５５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１２８又は配列番号１２９のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３０又は配列番号１３１のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１３２又は配列番号１３３のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号５６又は配列番号５７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号５８若しくは配列番号５９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１３４又は配列番号１３５のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１３６又は配列番号１３７のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１３８又は配列番号１３９のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号６１又は配列番号６２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号６３若しくは配列番号６４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１４０又は配列番号１４１のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１４２又は配列番号１４３のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１４４又は配列番号１４５のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号６６又は配列番号６７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号６８若しくは配列番号６９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１４６又は配列番号１４７のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１４８又は配列番号１４９のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１５０又は配列番号１５１のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，及び
（１４）ＣＤＲ１として配列番号７１又は配列番号７２のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号７３若しくは配列番号７４のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ，及びＣＤＲ３として配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１５２又は配列番号１５３のアミノ酸配列，ＣＤＲ２として配列番号１５４又は配列番号１５５のアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として配列番号１５６又は配列番号１５７のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ。

【0120】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の軽鎖と重鎖の組み合わせの具体的態様としては，ＣＤＲが以下に示す（１）～（１４）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）ＣＤＲ１として配列番号６，ＣＤＲ２として配列番号８，及びＣＤＲ３として配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号７６，ＣＤＲ２として配列番号７８，及びＣＤＲ３として配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（２）ＣＤＲ１として配列番号１１，ＣＤＲ２として配列番号１３，及びＣＤＲ３として配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号８２，ＣＤＲ２として配列番号８４，及びＣＤＲ３として配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（３）ＣＤＲ１として配列番号１６，ＣＤＲ２として配列番号１８，及びＣＤＲ３として配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号８８，ＣＤＲ２として配列番号９０，及びＣＤＲ３として配列番号９２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（４）ＣＤＲ１として配列番号２１，ＣＤＲ２として配列番号２３，及びＣＤＲ３として配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号９４，ＣＤＲ２として配列番号９６，及びＣＤＲ３として配列番号９８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（５）ＣＤＲ１として配列番号２６，ＣＤＲ２として配列番号２８，及びＣＤＲ３として配列番号３０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１００，ＣＤＲ２として配列番号１０２，及びＣＤＲ３として配列番号１０４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（６）ＣＤＲ１として配列番号３１，ＣＤＲ２として配列番号３３，及びＣＤＲ３として配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１０６，ＣＤＲ２として配列番号１０８，及びＣＤＲ３として配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（７）ＣＤＲ１として配列番号３６，ＣＤＲ２として配列番号３８，及びＣＤＲ３として配列番号４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１１１，ＣＤＲ２として配列番号１１３，及びＣＤＲ３として配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（８）ＣＤＲ１として配列番号４１，ＣＤＲ２として配列番号４３，及びＣＤＲ３として配列番号４５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１１７，ＣＤＲ２として配列番号１１９，及びＣＤＲ３として配列番号１２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（９）ＣＤＲ１として配列番号４６，ＣＤＲ２として配列番号４８，及びＣＤＲ３として配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１２２，ＣＤＲ２として配列番号１２４，及びＣＤＲ３として配列番号１２６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１０）ＣＤＲ１として配列番号５１，ＣＤＲ２として配列番号５３，及びＣＤＲ３として配列番号５５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１２８，ＣＤＲ２として配列番号１３０，及びＣＤＲ３として配列番号１３２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１１）ＣＤＲ１として配列番号５６，ＣＤＲ２として配列番号５８，及びＣＤＲ３として配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１３４，ＣＤＲ２として配列番号１３６，及びＣＤＲ３として配列番号１３８記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１２）ＣＤＲ１として配列番号６１，ＣＤＲ２として配列番号６３，及びＣＤＲ３として配列番号６５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１４０，ＣＤＲ２として配列番号１４２，及びＣＤＲ３として配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，
（１３）ＣＤＲ１として配列番号６６，ＣＤＲ２として配列番号６８，及びＣＤＲ３として配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１４６，ＣＤＲ２として配列番号１４８，及びＣＤＲ３として配列番号１５０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ，及び
（１４）ＣＤＲ１として配列番号７１，ＣＤＲ２として配列番号７３，及びＣＤＲ３として配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号１５２，ＣＤＲ２として配列番号１５４，及びＣＤＲ３として配列番号１５６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖の組み合わせ。

【0121】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体の好ましい実施形態として，配列番号２１８～配列番号２４５で示されるマウス抗ヒトＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列をＣＤＲとして用いて作製されたヒト化抗体を挙げることができる。ヒト化抗体は，これらマウス抗ヒトＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を，ヒト抗体の適切な位置に置き換えることにより作製される。

【0122】

例えば，配列番号２１８に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２１９に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０５番目の任意の連続した３個以上又は７個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0123】

また例えば，配列番号２２０に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２２１に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１１２番目の任意の連続した３個以上又は１４個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0124】

更に，例えば，配列番号２２２に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３９番目の任意の連続した３個以上又は１１個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５５番目～６１番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９４番目～１０２番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２２３に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０７番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0125】

更に，例えば，配列番号２２４に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２２５に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１１１番目の任意の連続した３個以上又は１３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0126】

更に，例えば，配列番号２２６に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９５番目の任意の連続した３個以上又は７個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２２７に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０７番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0127】

更に，例えば，配列番号２２８に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２２９に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～６５番目の任意の連続した３個以上又は７個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９６番目～１０１番目の任意の連続した３個以上又は４個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0128】

更に，例えば，配列番号２３０に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２３１に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０９番目の任意の連続した３個以上又は１１個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0129】

更に，例えば，配列番号２３２に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２３３に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～６５番目の任意の連続した３個以上又は７個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９６番目～１０１番目の任意の連続した３個以上又は４個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0130】

更に，例えば，配列番号２３４に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２３５に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0131】

更に，例えば，配列番号２３６に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２３７に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０９番目の任意の連続した３個以上又は１１個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0132】

更に，例えば，配列番号２３８に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２３９に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０７番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0133】

更に，例えば，配列番号２４０に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２４１に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０８番目の任意の連続した３個以上又は１０個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0134】

更に，例えば，配列番号２４２に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３４番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５０番目～５６番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８９番目～９７番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２４３に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０７番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0135】

更に，例えば，配列番号２４４に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２４番目～３３番目の任意の連続した３個以上又は５個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として４９番目～５５番目の任意の連続した３個以上又は６個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として８８番目～９６番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の軽鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の軽鎖とすることができ，配列番号２４５に記載のアミノ酸配列において，ＣＤＲ１として２６番目～３５番目の任意の連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，ＣＤＲ２として５１番目～６６番目の任意の連続した３個以上又は８個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列，及びＣＤＲ３として９７番目～１０７番目の任意の連続した３個以上又は９個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列により，ヒト抗体の重鎖の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を置き換えたものを，ヒト化抗体の重鎖とすることができる。こうして得られたヒト化抗体の軽鎖と重鎖を組み合わせてヒト化抗体を作製することができる。

【0136】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体の好ましい実施形態としては，以下に示す（１）～（３）に記載のアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（１）抗ｈＴｆＲ抗体であって，軽鎖の可変領域が，配列番号１５８，配列番号１５９，配列番号１６０，配列番号１６１，配列番号１６２，及び配列番号１６３で示されるアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号１６６，配列番号１６７，配列番号１６８，配列番号１６９，配列番号１７０，及び配列番号１７１で示されるアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる，抗ｈＴｆＲ抗体，
（２）抗ｈＴｆＲ抗体であって，軽鎖の可変領域が，配列番号１７４，配列番号１７５，配列番号１７６，配列番号１７７，配列番号１７８，及び配列番号１７９の何れかのアミノ酸配列を含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号１８２，配列番号１８３，配列番号１８４，配列番号１８５，配列番号１８６，及び配列番号１８７の何れかのアミノ酸配列を含んでなる，抗ｈＴｆＲ抗体，
（３）抗ｈＴｆＲ抗体であって，軽鎖の可変領域が，配列番号１９０，配列番号１９１，配列番号１９２，配列番号１９３，配列番号１９４，及び配列番号１９５で示されるアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号２０４，配列番号２０５，配列番号２０６，配列番号２０７，配列番号２０８及び配列番号２０９で示されるアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる，抗ｈＴｆＲ抗体。

【0137】

配列番号１５８，配列番号１５９，配列番号１６０，配列番号１６１，配列番号１６２，及び配列番号１６３に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号６又は７，ＣＤＲ２に配列番号８又は９，及びＣＤＲ３に配列番号１０のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１５８～１６２に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0138】

配列番号１６６，配列番号１６７，配列番号１６８，配列番号１６９，配列番号１７０，及び配列番号１７１に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号７６又は７７，ＣＤＲ２に配列番号７８又は７９，及びＣＤＲ３に配列番号８０又は８１のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１６６～１７１に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0139】

配列番号１７４，配列番号１７５，配列番号１７６，配列番号１７７，配列番号１７８，及び配列番号１７９に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号１１又は１２，ＣＤＲ２に配列番号１３又は１４，及びＣＤＲ３に配列番号１５のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１７４～１７９に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0140】

配列番号１８２，配列番号１８３，配列番号１８４，配列番号１８５，配列番号１８６，及び配列番号１８７に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号８２又は８３，ＣＤＲ２に配列番号８４又は８５，及びＣＤＲ３に配列番号８６又は８７のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１８２～１８７に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0141】

配列番号１９０，配列番号１９１，配列番号１９２，配列番号１９３，配列番号１９４，及び配列番号１９５に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号１６又は１７，ＣＤＲ２に配列番号１８又は１９，及びＣＤＲ３に配列番号２０のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１９０～１９５に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0142】

配列番号２０４，配列番号２０５，配列番号２０６，配列番号２０７，配列番号２０８及び配列番号２０９に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１に配列番号８８又は８９，ＣＤＲ２に配列番号９０又は９１，及びＣＤＲ３に配列番号９２又は９３のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号２０４～２０９に記載の重鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0143】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体のより具体的な実施形態としては，
軽鎖の可変領域が配列番号１６３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号１７１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号１７９のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号１８７のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号１９１のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号１９３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号１９４のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含むもの，及び
軽鎖の可変領域が配列番号１９５のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号２０５のアミノ酸配列を含むもの
が挙げられる。

【0144】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体のより具体的な実施形態としては，
軽鎖が配列番号１６４のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号１７２のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号１８８のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号１９８のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２００のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含むもの，及び
軽鎖が配列番号２０２のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１２のアミノ酸配列を含むもの
が挙げられる。

【0145】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態を上記のごとく例示した。これらの抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖は，その可変領域のアミノ酸配列に，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＴｆＲの親和性を所望なものに調整等する目的で，適宜，置換，欠失，付加等の変異を加えることができる。

【0146】

軽鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個である。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0147】

軽鎖の可変領域にアミノ酸を付加する場合，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0148】

特に，軽鎖の各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0149】

軽鎖の各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中にアミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個，更により好ましくはのアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0150】

重鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個である。重鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0151】

重鎖の可変領域にアミノ酸を付加させる場合，重鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の重鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0152】

特に，重鎖の各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0153】

重鎖の各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中にアミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個，更により好ましくは１個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0154】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸の他のアミノ酸への置換としては，例えば，酸性アミノ酸であるアスパラギン酸とグルタミン酸との相互の置換，アミド型アミノ酸であるアスパラギンとグルタミンとの相互の置換，塩基性アミノ酸であるリシンとアルギニンとの相互の置換，分枝アミノ酸であるバリン，ロイシン及びイソロイシンとの相互の置換，脂肪族アミノ酸であるグリシンとアラニンとの相互の置換，ヒドロキシアミノ酸であるセリンとトレオニンとの相互の置換，芳香族アミン酸であるフェニルアラニンとチロシンとの相互の置換等が挙げられる。

【0155】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体を他の蛋白質Ａと融合させたときに，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質Ａとの間に位置することとなった場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0156】

上記に例示したｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体を含む抗体の好ましい実施形態において，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列は，抗体がｈＴｆＲに対する特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。但し，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，好ましくは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１×１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは１×１０^－９Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１×１０^－９Ｍ以下であるものであり，尚も更に好ましくは１×１０^－９Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－９Ｍであるもの，１×１０^－１３Ｍ～１×１０^－１０Ｍであるものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体がサルＴｆＲに対しても親和性を有するものである場合，実施例７に記載の方法により測定される抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲとの解離定数は，好ましくは５×１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは２×１０^－８Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１×１０^－８Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのもの，１×１０^－１３Ｍ～２×１０^－８Ｍのものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0157】

上記の具体的な実施形態として示したｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体と，他の蛋白質Ａとの融合蛋白質の具体的な実施形態としては，他の蛋白質Ａが，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ），ヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ），ヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ），ヒトＰＰＴ－１（ｈＰＰＴ－１），ヒトＴＰＰ－１（ｈＴＰＰ－１），ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ），ヒトＴＮＦα受容体（ｈＴＮＦαＲ），及びヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）であるものが挙げられる。
他の蛋白質ＡがｈＩ２Ｓである融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＩ２Ｓがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２４７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＩ２Ｓがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２４９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＩ２Ｓがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２５１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0158】

ここで，上記（１）において配列番号２４７に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は配列番号１７２で示されるものである。つまり，上記（１）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号１６４のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号１７２のアミノ酸配列を含むものである。上記（２）において配列番号２４９に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は配列番号１８８で示されるものである。つまり，上記（２）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号１８８のアミノ酸配列を含むものである。上記（３）において配列番号２５１に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は配列番号２１０で示されるものである。つまり，上記（３）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号１９６のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号２１０のアミノ酸配列を含むものである。

【0159】

他の蛋白質Ａがヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＥＰＯがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＥＰＯがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＥＰＯがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0160】

ここで，上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＥＰＯとｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0161】

ヒト化抗体とｈＥＰＯのより具体的な実施形態としては，ｈＥＰＯがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２５７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0162】

なお，本発明において，「ヒトＥＰＯ」又は「ｈＥＰＯ」の語は，特に配列番号２５６で示される天然型のｈＥＰＯと同一のアミノ酸配列を有するｈＥＰＯのことをいうが，これに限らず，ＥＰＯ活性を有するものである限り，天然型のｈＥＰＯのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＥＰＯに含まれる。ｈＥＰＯのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＥＰＯのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＥＰＯにアミノ酸を付加させる場合，ｈＥＰＯのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＥＰＯのアミノ酸配列は，元のｈＥＰＯのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。天然型のｈＥＰＯに変異を加えたものとしてはダルベポエチンが挙げられる。

【0163】

他の蛋白質ＡがヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＲＳＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＡＲＳＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＡＲＳＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0164】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＡＲＳＡとｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0165】

ヒト化抗体とｈＡＲＳＡのより具体的な実施形態としては，ｈＡＲＳＡがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２６０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0166】

なお，本発明において，「ヒトＡＲＳＡ」又は「ｈＡＲＳＡ」の語は，特に配列番号２５９で示される天然型のｈＡＲＳＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＡＲＳＡのことをいうが，これに限らず，ＡＲＳＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＡＲＳＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＡＲＳＡに含まれる。ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＡＲＳＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＡＲＳＡのアミノ酸配列は，元のｈＡＲＳＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0167】

他の蛋白質ＡがヒトＰＰＴ－１（ｈＰＰＴ－１）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＰＰＴ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＰＰＴ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＰＰＴ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0168】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＰＰＴ－１とｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0169】

ヒト化抗体とｈＰＰＴ－１のより具体的な実施形態としては，ｈＰＰＴ－１がリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２６３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0170】

なお，本発明において，「ヒトＰＰＴ－１」又は「ｈＰＰＴ－１」の語は，特に配列番号２６２で示される天然型のｈＰＰＴ－１と同一のアミノ酸配列を有するｈＰＰＴ－１のことをいうが，これに限らず，ＰＰＴ－１活性を有するものである限り，天然型のｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＰＰＴ－１に含まれる。ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＰＰＴ－１にアミノ酸を付加させる場合，ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列は，元のｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0171】

他の蛋白質ＡがヒトＴＰＰ－１（ｈＴＰＰ－１）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＴＰＰ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＴＰＰ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＴＰＰ－１がペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0172】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＴＰＰ－１とｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0173】

ヒト化抗体とｈＴＰＰ－１のより具体的な実施形態としては，ｈＴＰＰ－１がリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２６６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0174】

なお，本発明において，「ヒトＴＰＰ－１」又は「ｈＴＰＰ－１」の語は，特に配列番号２６５で示される天然型のｈＴＰＰ－１と同一のアミノ酸配列を有するｈＴＰＰ－１のことをいうが，これに限らず，ＴＰＰ－１活性を有するものである限り，天然型のｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＴＰＰ－１に含まれる。ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＴＰＰ－１にアミノ酸を付加させる場合，ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列は，元のｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0175】

他の蛋白質Ａがヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＩＤＵＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＩＤＵＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＩＤＵＡがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0176】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＩＤＵＡとｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0177】

ヒト化抗体とｈＩＤＵＡのより具体的な実施形態としては，ｈＩＤＵＡがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２６９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0178】

なお，本発明において，「ヒトＩＤＵＡ」又は「ｈＩＤＵＡ」の語は，特に配列番号２６８で示される天然型のｈＩＤＵＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＩＤＵＡのことをいうが，これに限らず，ＩＤＵＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＩＤＵＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＩＤＵＡに含まれる。ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＩＤＵＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＩＤＵＡのアミノ酸配列は，元のｈＩＤＵＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0179】

他の蛋白質ＡがヒトＴＮＦα受容体（ｈＴＮＦαＲ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，

【0180】

（１）ｈＴＮＦαＲがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＴＮＦαＲがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＴＮＦαＲがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0181】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＴＮＦαＲとｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0182】

ヒト化抗体とｈＴＮＦαＲのより具体的な実施形態としては，ｈＴＮＦαＲがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0183】

なお，本発明において，「ヒトＴＮＦαＲ」又は「ｈＴＮＦαＲ」の語は，特に配列番号２７１で示される天然型のｈＴＮＦαＲと同一のアミノ酸配列を有するｈＴＮＦαＲのことをいうが，これに限らず，ｈＴＮＦαＲとしての活性又は機能を有するものである限り，天然型のｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＴＮＦαＲに含まれる。ｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＴＮＦαＲにアミノ酸を付加させる場合，ｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列は，元のｈＴＮＦαＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0184】

他の蛋白質ＡがヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＳＧＳＨがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるもの，
（２）ｈＳＧＳＨがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるもの，及び
（３）ｈＳＧＳＨがペプチド結合を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列が配列番号２１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0185】

上記（１）～（３）のいずれにおいても，ｈＳＧＳＨとｈＴｆＲの重鎖とは，直接又はリンカー配列を介してペプチド結合することができる。つまり，上記（１）～（３）のいずれにおいても，「ペプチド結合を介して」の語は，「直接又はリンカー配列を介して」と同義である。ここで用いられるリンカー配列は，１～５０個のアミノ酸残基からなるものである。そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。

【0186】

ヒト化抗体とｈＳＧＳＨのより具体的な実施形態としては，ｈＳＧＳＨがリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号２７５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号１９６で示されるもの，が例示できる。

【0187】

なお，本発明において，「ヒトＳＧＳＨ」又は「ｈＳＧＳＨ」の語は，特に配列番号２７４で示される天然型のｈＳＧＳＨと同一のアミノ酸配列を有するｈＳＧＳＨのことをいうが，これに限らず，ＳＧＳＨ活性を有するものである限り，天然型のｈＳＧＳＨのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＳＧＳＨに含まれる。ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＳＧＳＨにアミノ酸を付加させる場合，ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個アミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＳＧＳＨのアミノ酸配列は，元のｈＳＧＳＨのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0188】

なおここで，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させた他の蛋白質Ａが，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ），ヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ），ヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ），ヒトＰＰＴ－１（ｈＰＰＴ－１），ヒトＴＰＰ－１（ｈＴＰＰ－１），ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ），ヒトＴＮＦα受容体（ｈＴＮＦαＲ），及びヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）のいずれかである場合において，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させた他の蛋白質Ａが，当該他の蛋白質Ａの生理的条件下での活性又は機能を保持しているというとき又は単に活性又は機能を有するというときは，対応する天然型のこれら蛋白質が本来有する活性又は機能に対して，３％以上の活性又は機能を保持していることをいう。但し，その活性又は機能は，対応する天然型のこれら他の蛋白質Ａが本来有する活性又は機能に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたこれらの他の蛋白質Ａが変異を加えたものである場合も同様である。

【0189】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させることにより，中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の治療上有効量を，中枢神経系の疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与された生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0190】

特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ）と結合させることにより，ｈＩ２Ｓに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＩ２Ｓと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，ハンター症候群の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＩ２Ｓと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0191】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ）と結合させることにより，ｈＥＰＯに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，脳虚血に伴う中枢神経系の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＥＰＯと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳虚血に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，脳虚血の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＥＰＯと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。ヒトエリスロポエチンをヒトダルベポエチンに代えても同様のことがいえる。

【0192】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ）と結合させることにより，ｈＡＲＳＡに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＡＲＳＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，該疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＡＲＳＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0193】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトＰＰＴ－１（ｈＰＰＴ－１）と結合させることにより，ｈＰＰＴ－１に血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，神経セロイドリポフスチン症又はＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＰＰＴ－１と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，神経セロイドリポフスチン症又はＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，これらの疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＰＰＴ－１と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0194】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトＴＰＰ－１（ｈＴＰＰ－１）と結合させることにより，ｈＴＰＰ－１に血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，神経セロイドリポフスチン症又はＪａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＰＰＴ－１と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，神経セロイドリポフスチン症又はＪａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，これらの疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＴＰＰ－１と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0195】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）と結合させることにより，ｈＩＤＵＡに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＩＤＵＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，これらの疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＩＤＵＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0196】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトＴＮＦα受容体（ｈＴＮＦαＲ）と結合させることにより，ｈＴＮＦαＲに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，脳虚血又は脳炎症性疾患に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＴＮＦαＲと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳虚血又は脳炎症性疾患に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，これら疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＴＮＦαＲと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0197】

また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）と結合させることにより，ｈＳＧＳＨに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，サンフィリッポ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＳＧＳＨと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，サンフィリッポ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，これら疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＳＧＳＨと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。

【0198】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等は，血中に投与して中枢神経系（ＣＮＳ）において薬効を発揮させるべき薬剤として使用することができる。かかる薬剤は，一般に点滴静脈注射等による静脈注射，皮下注射，筋肉注射により患者に投与されるが，投与経路には特に限定はない。

【0199】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等は，薬剤として，凍結乾燥品，又は水性液剤等の形態で医療機関に供給することができる。水性液剤の場合，薬剤を，安定化剤，緩衝剤，等張化剤を含有する溶液に予め溶解したものを，バイアル又は注射器に封入した製剤として供給できる。注射器に封入された製剤は，一般にプレフィルドシリンジ製剤と呼称される。プレフィルドシリンジ製剤とすることにより，患者自身による薬剤の投与を簡易にすることができる。

【0200】

水性液剤として供給される場合，水性液剤に含有される抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等の濃度は，用法用量によって適宜調整されるべきものであるが，例えば１～４ｍｇ／ｍＬである。また，水性液剤に含有される安定化剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，非イオン性界面活性剤が好適に使用できる。このような非イオン性界面活性剤としては，ポリソルベート，ポロキサマー等を単独で又はこれらを組合せて使用できる。ポリソルベートとしてはポリソルベート２０，ポリソルベート８０が，ポロキサマーとしてはポロキサマー１８８（ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール）が特に好適である。また，水性液剤に含有される非イオン性界面活性剤の濃度は，０．０１～１ｍｇ／ｍＬであることが好ましく，０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬであることがより好ましく，０．１～０．５ｍｇ／ｍＬであることが更に好ましい。安定化剤として，ヒスチジン，アルギニン，メチオニン，グリシン等のアミノ酸を使用することもできる。安定化剤として使用する場合の，水性液剤に含有されるアミノ酸の濃度は，０．１～４０ｍｇ／ｍＬであることが好ましく，０．２～５ｍｇ／ｍＬであることがより好ましく，０．５～４ｍｇ／ｍＬであることが更に好ましい。水性液剤に含有される緩衝剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，リン酸塩緩衝剤が好ましく，特にリン酸ナトリウム緩衝剤が好ましい。緩衝剤としてリン酸ナトリウム緩衝剤を使用する場合の，リン酸ナトリウムの濃度は，好ましくは０．０１～０．０４Ｍである。また，緩衝剤によって調整される水性液剤のｐＨは，好ましくは５．５～７．２である。水性液剤に含有される等張化剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，塩化ナトリウム，マンニトールを単独で又は組み合わせて等張化剤として好適に使用できる。

【実施例】

【0201】

以下，実施例を参照して本発明を更に詳細に説明するが，本発明が実施例に限定されることは意図しない。

【0202】

〔実施例１〕ｈＴｆＲ発現用ベクターの構築
ヒト脾臓Ｑｕｉｃｋ Ｃｌｏｎｅ ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）を鋳型として，プライマーｈＴｆＲ５’（配列番号２１４）及びプライマーｈＴｆＲ３’（配列番号２１５）を用いて，ＰＣＲによりヒトトランスフェリン受容体（ｈＴｆＲ）をコードする遺伝子断片を増幅させた。増幅させたｈＴｆＲをコードする遺伝子断片を，ＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＭｌｕＩとＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，ｐＣＩ－ｎｅｏ（ｈＴｆＲ）と名付けた。次いで，このベクターを，ＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化して，ｈＴｆＲをコードする遺伝子断片を切り出し，国際公開公報（ＷＯ２０１２／０６３７９９）に記載された発現ベクターであるｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込むことにより，ｈＴｆＲ発現用ベクターであるｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏ（ｈＴｆＲ）を構築した。

【0203】

〔実施例２〕組換えｈＴｆＲの作製
エレクトロポレーション法により，ＣＨＯ－Ｋ１細胞にｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏ（ｈＴｆＲ）を導入した後，メチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）及びピューロマイシンを含むＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて細胞の選択培養を行い，組換えｈＴｆＲ発現細胞を得た。この組換えｈＴｆＲ発現細胞を培養して，組換えｈＴｆＲを調製した。

【0204】

〔実施例３〕組換えｈＴｆＲを用いたマウスの免疫
実施例２で調製した組換えｈＴｆＲを抗原として用いてマウスを免疫した。免疫は，マウスに抗原を静脈内投与又は腹腔投与内して行った。

【0205】

〔実施例４〕ハイブリドーマの作製
最後に細胞を投与した日の約１週間後にマウスの脾臓を摘出してホモジナイズし，脾細胞を分離した。得られた脾細胞をマウスミエローマ細胞株（Ｐ３．Ｘ６３．Ａｇ８．６５３）とポリエチレングリコール法を用いて細胞融合させた。細胞融合終了後，（１Ｘ）ＨＡＴサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及び１０％ Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むＲＰＭＩ１６４０培地に細胞を懸濁させ，細胞懸濁液を９６ウェルプレート２０枚に２００μＬ／ウェルずつ分注した。炭酸ガス培養器（３７℃，５％ＣＯ_２）で細胞を１０日間培養した後，各ウェルを顕微鏡下で観察し，単一のコロニーが存在するウェルを選択した。

【0206】

各ウェルの細胞がほぼコンフルエントになった時点で培養上清を回収し，これをハイブリドーマの培養上清として，以下のスクリーニングに供した。

【0207】

〔実施例５〕高親和性抗体産生細胞株のスクリーニング
組換えｈＴｆＲ溶液（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５～９．６）で希釈して５μｇ／ｍＬの濃度に調整し，これを固相溶液とした。固相溶液を，Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐＴＭ ｆｌａｔ－ｂｏｔｔｏｍ ９６ウェルプレート（基材：ポリスチレン， Ｎｕｎｃ社製）の各ウェルに５０μＬずつ添加した後，プレートを室温で１時間静置し，組換えｈＴｆＲをプレートに吸着させて固定した。固相溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬの洗浄液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した後，各ウェルにブロッキング液（１％ ＢＳＡを含有するＰＢＳ）を２００μＬずつ添加し，プレートを室温で１時間静置した。

【0208】

ブロッキング液を捨て，各ウェルを２５０μＬの洗浄液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した後，各ウェルにハイブリドーマの培養上清を５０μＬずつ添加し，プレートを室温で１時間静置し，培養上清に含まれるマウス抗ｈＴｆＲ抗体を組換えｈＴｆＲに結合させた。このとき，コントロールとして，マウス抗ｈＴｆＲ抗体を産生しないハイブリドーマの培養上清をウェルに５０μＬ添加したものを置いた。また，各培養上清を加えたウェルの横のウェルに，ハイブリドーマの培養用培地を５０μＬ添加したものを置き，これをモックウェルとした。測定はｎ＝２で実施した。次いで，溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬの洗浄液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。

【0209】

上記の各ウェルに１００μＬのＨＲＰ標識ヤギ抗マウスイムノグロブリン抗体溶液（プロメガ社）を添加し，プレートを室温で１分間静置した。次いで，溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬの洗浄液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。次いで，各ウェルに５０μＬの発色用基質液ＴＭＢ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（プロメガ社）を添加し，室温で１０～２０分間静置した。次いで，各ウェルに１００μＬの停止液（２Ｎ硫酸）を添加した後，プレートリーダーを用いて各ウェルの４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。各培養上清及びコントロールの２つのウェルの平均値をとり，これらの平均値から，各培養上清及びコントロール毎に置いた２つのモックウェルの平均値をそれぞれ減じたものを測定値とした。

【0210】

高い測定値を示したウェルに添加した培養上清に対応する１４種類のハイブリドーマ細胞を，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体（高親和性抗ｈＴｆＲ抗体）を産生する細胞株（高親和性抗体産生細胞株）として選択した。これら１４種の細胞株を，クローン１株～クローン１４株と番号付けた。また，クローン１株～クローン１４株が産生する抗ｈＴｆＲ抗体を，それぞれ抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４とした。

【0211】

〔実施例６〕高親和性抗ｈＴｆＲ抗体の可変領域のアミノ酸配列の解析
実施例５で選択したクローン１株～クローン１４株からｃＤＮＡを調製し，これらのｃＤＮＡを鋳型として抗体の軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子を増幅させた。増幅させた遺伝子の塩基配列を翻訳し，各細胞株の産生する抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の抗体のそれぞれについて，軽鎖及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列を決定した。

【0212】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１は，軽鎖の可変領域に配列番号２１８に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２１９に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号６又は７，ＣＤＲ２に配列番号８又は９，及びＣＤＲ３に配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号７６又は７７，ＣＤＲ２に配列番号７８又は７９，及びＣＤＲ３に配列番号８０又は８１に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0213】

抗ｈＴｆＲ抗体番号２は，軽鎖の可変領域に配列番号２２０に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２２１に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１１又は１２，ＣＤＲ２に配列番号１３又は１４，及びＣＤＲ３に配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号８２又は８３，ＣＤＲ２に配列番号８４又は８５，及びＣＤＲ３に配列番号８６又は８７に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0214】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３は，軽鎖の可変領域に配列番号２２２に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２２３に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１６又は１７，ＣＤＲ２に配列番号１８又は１９，及びＣＤＲ３に配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号８８又は８９，ＣＤＲ２に配列番号９０又は９１，及びＣＤＲ３に配列番号９２又は９３に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0215】

抗ｈＴｆＲ抗体番号４は，軽鎖の可変領域に配列番号２２４に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２２５に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号２１又は２２，ＣＤＲ２に配列番号２３又は２４，及びＣＤＲ３に配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号９４又は９５，ＣＤＲ２に配列番号９６又は９７，及びＣＤＲ３に配列番号９８又は９９に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0216】

抗ｈＴｆＲ抗体番号５は，軽鎖の可変領域に配列番号２２６に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２２７に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号２６又は２７，ＣＤＲ２に配列番号２８又は２９，及びＣＤＲ３に配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１００又は１０１，ＣＤＲ２に配列番号１０２又は１０３，及びＣＤＲ３に配列番号１０４又は１０５に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0217】

抗ｈＴｆＲ抗体番号６は，軽鎖の可変領域に配列番号２２８に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２２９に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号３１又は３２，ＣＤＲ２に配列番号３３又は３４，及びＣＤＲ３に配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１０６又は１０７，ＣＤＲ２に配列番号１０８又は２７８，及びＣＤＲ３に配列番号１０９又は１１０に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0218】

抗ｈＴｆＲ抗体番号７は，軽鎖の可変領域に配列番号２３０に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２３１に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号３６又は３７，ＣＤＲ２に配列番号３８又は３９，及びＣＤＲ３に配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１１１又は１１２，ＣＤＲ２に配列番号１１３又は１１４，及びＣＤＲ３に配列番号１１５又は１１６に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0219】

抗ｈＴｆＲ抗体番号８は，軽鎖の可変領域に配列番号２３２に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２３３に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号４１又は４２，ＣＤＲ２に配列番号４３又は４４，及びＣＤＲ３に配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１１７又は１１８，ＣＤＲ２に配列番号１１９又は２７９，及びＣＤＲ３に配列番号１２０又は１２１に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0220】

抗ｈＴｆＲ抗体番号９は，軽鎖の可変領域に配列番号２３４に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２３５に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号４６又は４７，ＣＤＲ２に配列番号４８又は４９，及びＣＤＲ３に配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１２２又は１２３，ＣＤＲ２に配列番号１２４又は１２５，及びＣＤＲ３に配列番号１２６又は１２７に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0221】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１０は，軽鎖の可変領域に配列番号２３６に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２３７に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号５１又は５２，ＣＤＲ２に配列番号５３又は５４，及びＣＤＲ３に配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１２８又は１２９，ＣＤＲ２に配列番号１３０又は１３１，及びＣＤＲ３に配列番号１３２又は１３３に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0222】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１１は，軽鎖の可変領域に配列番号２３８に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２３９に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号５６又は５７，ＣＤＲ２に配列番号５８又は５９，及びＣＤＲ３に配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１３４又は１３５，ＣＤＲ２に配列番号１３６又は１３７，及びＣＤＲ３に配列番号１３８又は１３９に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0223】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１２は，軽鎖の可変領域に配列番号２４０に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２４１に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号６１又は６２，ＣＤＲ２に配列番号６３又は６４，及びＣＤＲ３に配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１４０又は１４１，ＣＤＲ２に配列番号１４２又は１４３，及びＣＤＲ３に配列番号１４４又は１４５に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0224】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１３は，軽鎖の可変領域に配列番号２４２に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２４３に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号６６又は６７，ＣＤＲ２に配列番号６８又は６９，及びＣＤＲ３に配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１４６又は１４７，ＣＤＲ２に配列番号１４８又は１４９，及びＣＤＲ３に配列番号１５０又は１５１に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0225】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１４は，軽鎖の可変領域に配列番号２４４に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号２４５に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号７１又は７２，ＣＤＲ２に配列番号７３又は７４，及びＣＤＲ３に配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１５２又は１５３，ＣＤＲ２に配列番号１５４又は１５５，及びＣＤＲ３に配列番号１５６又は１５７に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0226】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の，軽鎖及び重鎖の可変領域に含まれるアミノ酸配列の配列番号を，表１にまとめて示す。

【0227】

【表1】

【0228】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の，軽鎖の可変領域のＣＤＲ１～３と重鎖の可変領域のＣＤＲ１～３に含まれるアミノ酸配列の配列番号を，表２にまとめて示す。但し，表２は各ＣＤＲのアミノ酸配列を例示するものであり，各ＣＤＲのアミノ酸配列は表２に記載のアミノ酸配列に限られるものではなく，これらのアミノ酸配列を含む領域のアミノ酸配列，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとし得ると考えられる。

【0229】

【表2】

【0230】

〔実施例７〕抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定は，バイオレイヤー干渉法（ＢｉｏＬａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ：ＢＬＩ）を用いた生体分子相互作用解析システムであるＯｃｔｅｔＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ社，ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて実施した。バイオレイヤー干渉法の基本原理について，簡単に説明する。センサーチップ表面に固定された生体分子の層（レイヤー）に特定波長の光を投射したとき，生体分子のレイヤーと内部の参照となるレイヤーの二つの表面から光が反射され，光の干渉波が生じる。測定試料中の分子がセンサーチップ表面の生体分子に結合することにより，センサー先端のレイヤーの厚みが増加し，干渉波に波長シフトが生じる。この波長シフトの変化を測定することにより，センサーチップ表面に固定された生体分子に結合する分子数の定量及び速度論的解析をリアルタイムで行うことができる。測定は，概ねＯｃｔｅｔＲＥＤ９６に添付の操作マニュアルに従って実施した。ヒトＴｆＲとしては，Ｎ末端にヒスチジンタグが付加した，配列番号１に示されるアミノ酸配列の中でＮ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの，ｈＴｆＲの細胞外領域のアミノ酸配列を有する組換えヒトＴｆＲ（ｒヒトＴｆＲ：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）を用いた。サルＴｆＲとしては，Ｎ末端にヒスチジンタグが付加した，配列番号２に示されるアミノ酸配列の中でＮ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの，カニクイザルのＴｆＲの細胞外領域のアミノ酸配列を有する組換えサルＴｆＲ（ｒサルＴｆＲ：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）を用いた。

【0231】

実施例５で選択したクローン１株～クローン１４株を，それぞれ細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，（１Ｘ）ＨＡＴサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及び１０％ Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むＲＰＭＩ１６４０培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清を，予め１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積３倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＧカラム（カラム体積：１ｍＬ，ＧＥヘルスケア社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液によりカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着した抗体を溶出させ，溶出画分を採取した。溶出画分を１ＭＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整した。これを抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の精製品としてとして以下の実験に用いた。

【0232】

精製した各抗体（抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号１４）を，それぞれＨＢＳ－Ｐ＋（１５０ｍＭ ＮａＣｌ，５０μＭ ＥＤＴＡ及び０．０５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ）で２段階希釈し，０．７８１２５～５０ｎＭ（０．１１７～７．５μｇ／ｍＬ）の７段階の濃度の抗体溶液を調製した。この抗体溶液をサンプル溶液とした。ｒヒトＴｆＲとｒサルＴｆＲとを，それぞれＨＢＳ－Ｐ＋で希釈し，２５μｇ／ｍＬの溶液を調製し，それぞれｒヒトＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液及びｒサルＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液とした。

【0233】

上記２段階希釈して調製したサンプル溶液を，９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ， ｂｌａｃｋ（ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ社）に２００μＬ／ウェルずつ添加した。また，上記調製したｒヒトＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液及びｒサルＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液を，所定のウェルにそれぞれ２００μＬ／ウェルずつ添加した。ベースライン，解離用及び洗浄用のウェルには，ＨＢＳ－Ｐ＋を２００μＬ／ウェルずつ添加した。再生用のウェルには，１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ， ｐＨ１．７を２００μＬ／ウェルずつ添加した。活性化用のウェルには，０．５ｍＭ ＮｉＣｌ２溶液を２００μＬ／ウェルずつ添加した。このプレートと，バイオセンサー（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ／Ｎｉ－ＮＴＡ：ＦｏｒｔｅＢｉｏ社，ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆＰａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を，ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６の所定の位置に設置した。

【0234】

ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６を下記の表３に示す条件で作動させてデータを取得後，ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６付属の解析ソフトウェアを用いて，結合反応曲線を１：１結合モデルあるいは２：１結合モデルにフィッティングし，抗ｈＴｆＲ抗体と，ｒヒトＴｆＲ及びｒサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）を測定し，解離定数（Ｋｄ）算出した。なお，測定は２５～３０℃の温度下で実施した。

【0235】

【表3】

【0236】

表４に抗ｈＴｆＲ抗体番号１～１４（表中，抗体番号１～１４にそれぞれ対応）のヒトＴｆＲに対する会合速度定数（ｋ_ｏｎ）及び解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（ｋ_Ｄ）を示す。

【0237】

【表4】

【0238】

表５に抗ｈＴｆＲ抗体番号１～１４（表中，抗体番号１～１４にそれぞれ対応）のサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋ_ｏｎ）及び解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（ｋ_Ｄ）を示す。

【0239】

【表5】

【0240】

抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲへの親和性の測定の結果，全ての抗体で，ヒトＴｆＲとの解離定数は１×１０^－８Ｍ以下であり，抗体番号１０を除く１３種類の抗体ではヒトＴｆＲとの解離定数は１×１０^－９Ｍ以下であり，特に抗体番号３，８，１３及び１４では，ヒトＴｆＲとの解離定数が１×１０^－１２Ｍ以下であった（表４）。これらの結果は，１４種類の抗体が全てヒトＴｆＲと高い親和性を有する抗体であることを示す。次いで，抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲへの親和性の測定の結果をみると，全ての抗体で，サルＴｆＲとの解離定数は５×１０^－８Ｍ以下であり，特に，抗体番号１及び３では，サルＴｆＲとの解離定数が１×１０^－１２Ｍ以下であった（表５）。これらの結果は，１４種類の抗体が全てヒトＴｆＲのみならずサルＴｆＲとも高い親和性を有する抗体であることを示す。

【0241】

〔実施例７－２〕抗ｈＴｆＲ抗体のマウスを用いた脳移行評価
次いで，抗ｈＴｆＲ抗体番号１～９及び１１～１４の１３種類の抗体について，各抗体がＢＢＢを通過して脳内に移行することを，マウストランスフェリン受容体の細胞外領域をコードする遺伝子をヒトトランスフェリン受容体遺伝子の細胞外領域をコードする遺伝子に置換したｈＴｆＲノックインマウス（ｈＴｆＲ－ＫＩマウス）を用いて評価した。ｈＴｆＲ－ＫＩマウスは，概ね下記の方法で作製した。また，抗ｈＴｆＲ抗体としては，実施例７に記載の抗体の精製品を用いた。

【0242】

細胞内領域がマウスｈＴｆＲのアミノ酸配列であり，細胞外領域がヒトｈＴｆＲのアミノ酸配列であるキメラｈＴｆＲをコードするｃＤＮＡの３’側に，ｌｏｘＰ配列で挟み込んだネオマイシン耐性遺伝子を配置した，配列番号２５３で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を化学的に合成した。このＤＮＡ断片を，５’アーム配列として配列番号２５４で示される塩基配列，３’アーム配列として配列番号２５５で示される塩基配列を有するターゲッティングベクターに，常法により組み込み，これをマウスＥＳ細胞にエレクトロポレーション法により導入した。遺伝子導入後のマウスＥＳ細胞を，ネオマイシン存在下で選択培養し，ターゲッティングベクターが相同組換えにより染色体に組み込まれたマウスＥＳ細胞を選択した。得られた遺伝子組換えマウスＥＳ細胞を，ＩＣＲマウスの８細胞期胚（宿主胚）へ注入し，精管結紮を行ったマウスとの交配によって得られた偽妊娠マウス（レシピエントマウス）に移植した。得られた産仔（キメラマウス）について毛色判定を行い，ＥＳ細胞が生体の形成に高効率で寄与した個体，すなわち全体毛に対する白色毛の占める比率の高い個体を選別した。このキメラマウス個体をＩＣＲマウスと掛け合わせてＦ１マウスを得た。白色のＦ１マウスを選別し，尻尾の組織より抽出したＤＮＡを解析し，染色体上でマウストランスフェリン受容体遺伝子がキメラｈＴｆＲに置き換わっているマウスをｈＴｆＲ－ＫＩマウスとした。

【0243】

上記１３種類の抗ｈＴｆＲ抗体を，Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ_２（同仁化学研究所）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）により蛍光標識した。このＦＩＴＣ蛍光標識した１３種類の抗ｈＴｆＲ抗体を含むＰＢＳ溶液をそれぞれ調製した。この抗体溶液を，投与される抗ｈＴｆＲ抗体の用量が３ｍｇ／ｋｇとなるように，それぞれ１匹のｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄，１０～１２週齢）に静脈注射した。また，コントロールとして，同様にして調製したＦＩＴＣ蛍光標識したマウスＩｇＧ１（シグマ社）を含むＰＢＳ溶液を，３ｍｇ／ｋｇの用量で１匹のｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄，１０～１２週齢）に静脈注射した。静脈注射してから約８時間後に生理食塩液で全身灌流し，脳（大脳と小脳を含む部分）を採取した。摘出した脳の重量（湿重量）を測定した後，Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加して脳組織をホモジネートした。ホモジネートを遠心して上清を回収し，上清中に含まれるＦＩＴＣ蛍光標識した抗体の量を以下の方法で測定した。まず，抗ＦＩＴＣ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ社）をＨｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｐｌａｔｅ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１０μＬずつ添加し，１時間静置してプレートに固定させた。次いで，各ウェルにＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５０μＬずつ添加し，１時間振盪してプレートをブロッキングした。次いで，各ウェルに脳組織のホモジネートの上清を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｏａｔ） （Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒを用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知のＦＩＴＣ蛍光標識した抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，脳のグラム重量（湿重量）当たりに含まれる抗体の量（脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）を算出した。その結果を表５－２に示す。

【0244】

コントロールと比較して，抗ｈＴｆＲ抗体番号１～９及び１１～１４の抗体の脳組織中の濃度は，いずれも２５倍以上であった。抗ｈＴｆＲ抗体番号５及び６では，その濃度がコントロールと比較して１００倍以上であり，特に抗ｈＴｆＲ抗体番号６では約１６０倍にまで達した。これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体番号１～９及び１１～１４の抗体が，ＢＢＢを積極的に通過して脳内に移行する性質を有することを示すものである。

【0245】

【表5-2】

【0246】

〔実施例８〕抗ｈＴｆＲ抗体のサルを用いた薬物動態解析
抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３の抗体を，それぞれ，５．０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与８時間後に生理食塩液で全身潅流を実施した。また，陰性対照として，抗ｈＴｆＲ抗体を非投与の１匹の個体を同様に全身潅流した。潅流後，延髄を含む脳組織を摘出した。この脳組織を用いて，以下の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定及び免疫組織化学染色を行った。また，抗ｈＴｆＲ抗体としては，実施例７に記載の抗体の精製品を用いた。

【0247】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，概ね以下の手順で行った。採取した組織を，脳組織を大脳，小脳，海馬及び延髄に分けてから，それぞれＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を含むＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ（和光純薬工業株式会社）でホモジネートし遠心して上清を回収した。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃγ ｐＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）をＨｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｐｌａｔｅ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１０μＬずつ添加し，１時間静置してプレートに固定した。次いで，各ウェルにＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５０μＬずつ添加し，１時間振盪し，プレートをブロッキングした。次いで，各ウェルに脳組織のホモジネートの上清を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆａｂ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＳＵＬＦＯ－Ｔａｇ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を２５μＬずつ添加し，０．５時間振盪した。各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知の抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，各脳組織のグラム重量（湿重量）当たりに含まれる抗体の量（脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）を算出した。

【0248】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表６に示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号３の抗体ともに，大脳，小脳，海馬及び延髄での蓄積が認められたが，その量は，抗ｈＴｆＲ抗体番号１＜抗ｈＴｆＲ抗体番号３＜抗ｈＴｆＲ抗体番号２と，抗ｈＴｆＲ抗体番号１で最も少なく，抗ｈＴｆＲ抗体番号２で最も多かった。ｈＴｆＲ抗体番号２では，抗ｈＴｆＲ抗体番号１と比較して，大脳で約４．３倍，小脳で約６．６倍，海馬で約４．６倍，及び延髄で約２倍の，抗体の蓄積が認められた。これらの結果は，これら３種類の抗体が血液脳関門を通過して脳組織に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0249】

【表6】

【0250】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色は，概ね以下の手順で行った。ティシューテッククライオ３ＤＭ（サクラファインテック株式会社）を用いて，採取した組織を－８０℃にまで急速冷凍し，組織の凍結ブロックを作製した。この凍結ブロックを４μｍに薄切後，ＭＡＳコートスライドガラス（松浪ガラス株式会社）に貼り付けた。組織薄片に４％パラホルムアルデヒド（和光純薬工業株式会社）を４℃で５分間反応させ，組織薄片をスライドガラス上に固定した。続いて，組織薄片に０．３％過酸化水素水を含むメタノール溶液（和光純薬工業株式会社）を３０分間反応させ，内因性ペルオキシダーゼを失活させた。次いでスライドガラスをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳに３０分間室温で反応させてブロッキングした。次いで，組織薄片にＭｏｕｓｅ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を１時間室温で反応させた。組織薄片を，ＤＡＢ基質（３，３’－ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で発色させ，マイヤー・ヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ社）で対比染色を行い，脱水，透徹した後に封入し，光学顕微鏡で観察した。

【0251】

図１に大脳皮質の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳皮質では，血管の特異的な染色が確認された（それぞれ図１ｂ～ｄ）。特に，抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与したサルと抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳皮質（それぞれ図１ｃ及び図１ｄ）では，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。なお，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの大脳皮質では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図１ａ）。

【0252】

図２に海馬の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳では，血管の特異的な染色が確認された（それぞれ図２ｂ～ｄ）。特に，抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与したサルと抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの海馬（それぞれ図２ｃ及び図２ｄ）では，神経様細胞にも特異的な染色が確認され，更に，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。なお，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの海馬では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図２ａ）。

【0253】

図３に小脳の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号１～抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの小脳では，血管の特異的な染色が確認された（それぞれ図３ｂ～ｄ）。特に，抗ｈＴｆＲ抗体番号２を投与したサルと抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの小脳（それぞれ図３ｃ及び図３ｄ）では，プルキンエ細胞にも特異的な染色が確認された。なお，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの小脳では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図３ａ）。

【0254】

以上の大脳，海馬及び小脳の免疫組織化学染色の結果から，抗ｈＴｆＲ抗体番号１は脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへは結合することができるが，抗ｈＴｆＲ抗体番号２及び３と比較して脳実質への移行する量は比較的少ないと考えられた。一方で，抗ｈＴｆＲ抗体番号２及び３は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへ結合することができ，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで取り込まれることがわかった。

【0255】

〔実施例９〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の作製
表１に示す抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３の軽鎖及び重鎖の可変領域に含まれるアミノ酸配列のヒト化を試みた。抗ｈＴｆＲ抗体番号１については，配列番号１５８～配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された軽鎖の可変領域と，配列番号１６６～配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された重鎖の可変領域を得た。抗ｈＴｆＲ抗体番号２については，配列番号１７４～配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された軽鎖の可変領域と，配列番号１８２～配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された重鎖の可変領域を得た。抗ｈＴｆＲ抗体番号３については，配列番号１９０～配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された軽鎖の可変領域と，配列番号２０４～配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された重鎖の可変領域を得た。

【0256】

〔実施例１０〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の構築
上記の抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３について，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域を含む，軽鎖及び重鎖の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を人工的に合成した。このとき，軽鎖の全長をコードする遺伝子の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入した。また，重鎖の全長をコードする遺伝子の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入した。なお，ここで導入したリーダーペプチドは，ヒト化抗体の軽鎖及び重鎖をホスト細胞である哺乳動物細胞で発現させたときに，軽鎖及び重鎖が細胞外に分泌されるように，分泌シグナルとして機能するものである。

【0257】

抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖については，可変領域に配列番号１６３で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１６４で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖）の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号１６５）を合成した。抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖については，可変領域に配列番号１７１で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１７２で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖）の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号１７３）を合成した。配列番号１７３で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ１である。

【0258】

抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖については，可変領域に配列番号１７９で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１８０で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖）の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号１８１）を合成した。抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖については，可変領域に配列番号１８７で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１８８で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖）の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号１８９）を合成した。配列番号１８９で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ１である。

【0259】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，可変領域に配列番号１９１で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１９６で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号１９７）を合成した。抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，可変領域に配列番号２０５で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２１０で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２１１）を合成した。配列番号２１１で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ１である。

【0260】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，可変領域に配列番号１９３で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号１９８で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号１９９）と，可変領域に配列番号１９４で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２００で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２０１）と，可変領域に配列番号１９５で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２０２で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２０３）も合成した。

【0261】

更に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，可変領域に配列番号２０５で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２１２で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２１３）を合成した。この配列番号２１３で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ４である。

【0262】

〔実施例１１〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体発現ベクターの構築
ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｎｕｃベクター（インビトロジェン社）を，ＫｐｎＩとＮｃｏＩで消化し，ＥＦ－１αプロモーターおよびその第一イントロンを含む領域を切り出し，これをＴ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端化処理した。ｐＣＩ－ｎｅｏ（インビトロジェン社）を，ＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで消化して，ＣＭＶのエンハンサー／プロモーターおよびイントロンを含む領域を切除した後に，Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端化処理した。これに，上記のＥＦ－１αプロモーターおよびその第一イントロンを含む領域を挿入して，ｐＥ－ｎｅｏベクターを構築した。ｐＥ－ｎｅｏベクターを，ＳｆｉＩおよびＢｓｔＸＩで消化し，ネオマイシン耐性遺伝子を含む約１ｋｂｐの領域を切除した。ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋）（インビトロジェン社）を鋳型にしてプライマーＨｙｇ－Ｓｆｉ５’（配列番号２１６）およびプライマーＨｙｇ－ＢｓｔＸ３’（配列番号２１７）を用いて，ＰＣＲ反応によりハイグロマイシン遺伝子を増幅した。増幅したハイグロマイシン遺伝子を，ＳｆｉＩおよびＢｓｔＸＩで消化し，上記のネオマイシン耐性遺伝子を切除したｐＥ－ｎｅｏベクターに挿入して，ｐＥ－ｈｙｇｒベクターを構築した。

【0263】

ｐＥ－ｈｙｇｒベクター及びｐＥ－ｎｅｏベクターをそれぞれＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化した。実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号１６５）と重鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号１７３）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，それぞれｐＥ－ｈｙｇｒベクターとｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ１）とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ１）として以下の実験に用いた。

【0264】

同様に，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号１８１）と重鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号１８９）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，それぞれｐＥ－ｈｙｇｒベクターとｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ２），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ２）として以下の実験に用いた。

【0265】

更に同様に，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖コードするＤＮＡ断片（配列番号１９７）と重鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２１１）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，それぞれｐＥ－ｈｙｇｒベクターとｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）として以下の実験に用いた。

【0266】

更に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号１９９），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２０１），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２０３）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｈｙｇｒベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入し，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－３），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－４）を構築した。

【0267】

更に同様に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４をコードするＤＮＡ断片（配列番号２１３）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入し，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を構築した。

【0268】

〔実施例１２〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体発現用細胞の構築
ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を，下記の方法により，ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いて，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ１）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ１）で形質転換した。細胞の形質転換は概ね以下の方法で行った。５×１０^５個のＣＨＯ－Ｋ１細胞をＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地（ライフテクノロジー社）を添加した３．５ｃｍ培養ディッシュに播種し，３７℃，５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培地をＯｐｔｉ－ＭＥＭ^ＴＭ Ｉ培地（ライフテクノロジー社）に交換し，細胞を５×１０^６細胞／ｍＬの密度となるように懸濁した。細胞懸濁液１００μＬを採取し，これにＯｐｔｉ－ＭＥＭ^ＴＭ Ｉ培地で１００μｇ／ｍＬに希釈したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ１）及びｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ１）プラスミドＤＮＡ溶液を５μＬずつ添加した。ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いて，エレクトロポレーションを実施し，細胞にプラスミドを導入した。細胞を，３７℃，５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した後，０．５ｍｇ／ｍＬのハイグロマイシン及び０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を添加したＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で選択培養した。

【0269】

次いで，限界希釈法により，１ウェルあたり１個以下の細胞が播種されるように，９６ウェルプレート上に選択培養で選択された細胞を播種し，各細胞が単クローンコロニーを形成するように約１０日間培養した。単クローンコロニーが形成されたウェルの培養上清を採取し，培養上清中のヒト化抗体含量をＥＬＩＳＡ法にて調べ，ヒト化抗体高発現細胞株を選択した。

【0270】

このときのＥＬＩＳＡ法は概ね以下の方法で実施した。９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに，ヤギ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体溶液を０．０５Ｍ炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ９．６）で４μｇ／ｍＬに希釈したしたものを１００μＬずつ加え，室温で少なくとも１時間静置して抗体をプレートに吸着させた。次いで，リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を添加したもの（ＰＢＳ－Ｔ）で各ウェルを３回洗浄後，Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｂｌｏｃｋ （ＰＢＳ） Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を各ウェルに２００μＬずつ加えてプレートを室温で３０分静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後，ＰＢＳに０．５％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したもの（ＰＢＳ－ＢＴ）で適当な濃度に希釈した培養上清又はヒトＩｇＧ標準品を，各ウェルに１００μＬずつ加え，プレートを室温で少なくとも１時間静置した。プレートをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後，ＰＢＳ－ＢＴで希釈したＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧポリクロ－ナル抗体溶液を，各ウェルに１００μＬずつ加え，プレートを室温で少なくとも１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄後，リン酸－クエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を含む０．４ｍｇ／ｍＬ ｏ－フェニレンジアミンを１００μＬずつ各ウェルに加え，室温で８～２０分間静置した。次いで，１ｍｏｌ／Ｌ硫酸を１００μＬずつ各ウェルに加えて反応を停止させ，９６ウェルプレートリーダーを用いて，各ウェルの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。高い測定値を示したウェルに対応する細胞を，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の高発現細胞株とした。これを抗体番号１発現株とした。

【0271】

同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ２）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ２）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の高発現細胞株を得た。これを抗体番号２発現株とした。

【0272】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３発現株とした。

【0273】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－２発現株とした。

【0274】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－３発現株とした。

【0275】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－４）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－４発現株とした。

【0276】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３（ＩｇＧ４）発現株とした。

【0277】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－２（ＩｇＧ４）発現株とした。

【0278】

〔実施例１３〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の精製
実施例１２で得られた抗体番号１発現株，抗体番号２発現株，抗体番号３発現株，抗体番号３－２発現株，抗体番号３－３発現株及び抗体番号３－４発現株を，それぞれ細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む５倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，予め１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積３倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積：１ｍＬ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液によりカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したヒト化抗体を溶出させ，溶出画分を採取した。溶出画分に１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加して中和して，これを抗体の精製品とした。

【0279】

ここで，抗体番号１発現株の培養上清から精製された抗体を，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１とした。抗体番号２発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２とした。抗体番号３発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３とした。抗体番号３－２発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２とした。抗体番号３－３発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３とした。また，抗体番号３－４発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４とした。

【0280】

また，実施例１２で得られた抗体番号３（ＩｇＧ４）発現株，及び抗体番号３－２（ＩｇＧ４）発現株についても上記と同様に培養して，その培養上清から，それぞれ精製されたヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を得た。これら２種の抗体は，実施例１５に記載されたサルを用いた薬物動態解析に用いた。

【0281】

〔実施例１４〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
実施例１３で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法で測定した。表７にヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３－４（表中，Ｎｏ．１～３－４にそれぞれ対応）のヒトＴｆＲに対する会合速度定数（ｋ_ｏｎ）及び解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（ｋ_Ｄ）を示す。

【0282】

【表7】

【0283】

表８にヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３－４（表中，抗体番号１～３－４にそれぞれ対応）のサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋ_ｏｎ）及び解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（ｋ_Ｄ）を示す。

【0284】

【表8】

【0285】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１～３－４のヒトＴｆＲへの親和性の測定の結果，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１，２，３，及び３－４抗体で，ヒトＴｆＲとの解離定数は１×１０^－１２Ｍ未満であった（表７）。また，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２及び３－３のヒトＴｆＲとの解離定数は，それぞれ２．３９×１０^－１１Ｍと２．０９×１０^－１１Ｍであった。一方，これら抗体に対応するヒト化前の抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲとの解離定数は，抗体番号１については５．０９×１０^－１２Ｍであり，抗体番号２については１．１２×１０^－１１Ｍであり，抗体番号３については１×１０^－１２Ｍ未満であった（表４）。これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲへの高い親和性が，抗体をヒト化する前後で維持されることを示すものであり，抗ｈＴｆＲ抗体番号４～１４についても，抗体をヒト化した後も，ヒトＴｆＲへの親和性が維持され得ることを示すものである。

【0286】

次いで，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲへの親和性の測定の結果をみると，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１は，抗体をヒト化する前後で解離定数は１×１０^－１２Ｍ未満と親和性が維持され，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２も，ヒト化前の解離定数が４．１８×１０^－１１Ｍであったものが，ヒト化後の解離定数は７．５５×１０^－１１Ｍと親和性が維持された（表５，表８）。一方，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３～３－４は，ヒト化前のこれら抗体に対応する抗ｈＴｆＲ抗体番号３のサルＴｆＲとの解離定数が１×１０^－１２Ｍ未満であったものが，ヒト化後は２．６０×１０^－１０Ｍ～１．９１×１０^－９Ｍと，サルＴｆＲへの親和性の低下が観察された。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３では，サルＴｆＲへの親和性の低下が観察されたものの，これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲへの高い親和性は，抗体をヒト化する前後で喪失することなく概ね維持されることを示すものであり，抗ｈＴｆＲ抗体番号４～１４についても，抗体をヒト化した後も，サルＴｆＲへの親和性が維持され得ることを示すものである。

【0287】

〔実施例１５〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のサルを用いた薬物動態解析
ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の４種の抗体を用いて，サルを用いた薬物動態解析を行った。なお，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３は重鎖がＩｇＧ１であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖を可変領域はそのままにしてＩｇＧ４としたものである。また，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２は重鎖がＩｇＧ１であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の重鎖を可変領域はそのままにしてＩｇＧ４としたものである。これら４種の抗体を，それぞれ，５．０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与前，投与後２分，３０分，２時間，４時間及び８時間後に末梢血を採取し，採血後に全身潅流を実施した。また，陰性対照として，ＨＥＲ２蛋白に対するヒト化抗体であるトラスツズマブ（ハーセプチンＴＭ，中外製薬）を，同様にして一匹の個体に投与し，投与前，投与後２分，３０分，２時間，４時間及び８時間後に末梢血を採取し，採血後に全身潅流を実施した。潅流後，延髄を含む脳組織，脊髄組織及びその他の組織（肝臓，心臓，脾臓及び骨髄を含む）を摘出した。この脳組織，脊髄組織及びその他の組織を用いて，以下のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定及び免疫組織化学染色を行った。

【0288】

組織中及び末梢血中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，概ね以下の手順で行った。なお，脳については採取した組織を，大脳皮質，小脳，海馬及び延髄に分けてからヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定を行った。採取した組織を，それぞれＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を含むＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ（和光純薬工業株式会社）でホモジネートし遠心して上清を回収した。末梢血については血清を分離した。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃγ ｐＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）をＨｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｐｌａｔｅ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１０μＬずつ添加し，１時間静置して固相化した。次いで，各ウェルにＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５０μＬずつ添加し，１時間振盪し，プレートをブロッキングした。次いで，各ウェルにホモジネートの上清又は血清を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅＩｇＧ Ｆａｂ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＳＵＬＦＯ－Ｔａｇ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を２５μＬずつ添加し，０．５時間振盪した。各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒを用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知の抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，各組織中及び末梢血中に含まれる抗体の量を算出した。濃度の測定は各サンプルにつき３回繰り返し行った。

【0289】

脳組織及び脊髄組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表９に示す。

【0290】

【表9】

【0291】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の抗体ともに，大脳皮質，小脳，海馬，延髄及び脊髄での蓄積が認められた（表９）。その量は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３では，陰性対照のトラスツズマブ（ハーセプチンＴＭ）と比較して，大脳皮質で約８２倍，小脳で約６８倍，海馬で約９２倍，延髄で約５４倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約１２８倍，小脳で約８０倍，海馬で約１３６倍，延髄で約６３倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約７９倍，小脳で約６６倍，海馬で約１０６倍，延髄で約５４倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約９３倍，小脳で約６３倍，海馬で約１１７倍，延髄で約６６倍，脊髄で約３．２倍であった（表１０）。これらの結果は，これら４種のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，血液脳関門を通過して脳組織に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0292】

【表10】

【0293】

次いで，肝臓，心臓，脾臓及び骨髄の各組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を図４に示す。肝臓，及び脾臓では，４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体及び陰性対照のトラスツズマブのいずれにおいても蓄積が認められたが，その量はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とトラスツズマブで同等であった。心臓では，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が陰性対照のトラスツズマブと比較して，蓄積量が多い傾向にあったが，その量は陰性対照の１．５倍～２．８倍程度に留まった。骨髄では，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，陰性対照のトラスツズマブと比較して，顕著に蓄積量が多い傾向にあり，その量は陰性対照の３．５～１６倍であった。骨髄へのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の蓄積は，造血器官である骨髄ではＴｆＲの発現量が多く，ＴｆＲと結合することにより多くのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が陰性対照と比較して蓄積したためと考えられる。これらのデータは，これら４種のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，中枢神経系である大脳，小脳，海馬及び延髄に特異的に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0294】

次いで，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の血中動態の測定結果を表１１に示す。４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体は，陰性対照のトラスツズマブと同様に，投与後８時間においても血中濃度が６０μｇ／ｍＬ以上の高値を示し，血中で安定であることが示された。

【0295】

【表11】

【0296】

脳組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色は，概ね以下の手順で行った。ティシューテッククライオ３ＤＭ（サクラファインテック株式会社）を用いて，採取した組織を－８０℃にまで急速冷凍し，凍結ブロックを４μｍに薄切後，ＭＡＳコートスライドガラス（松浪ガラス株式会社）に貼り付けた。組織薄片に４％パラホルムアルデヒド（和光純薬工業株式会社）を４℃で５分間反応させ，組織薄片をスライドガラス上に固定した。続いて，組織薄片に０．３％過酸化水素水を含むメタノール溶液（和光純薬工業株式会社）を３０分間反応させ，内因性ペルオキシダーゼを失活させた。次いでスライドガラスをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳに３０分間室温で反応させブロッキングした。次いで，組織薄片にＭｏｕｓｅ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１時間室温で反応させた。組織薄片を，ＤＡＢ基質（３，３’－ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で発色させ，マイヤー・ヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ社）で対比染色を行い，脱水，透徹した後に封入し，光学顕微鏡で観察した。

【0297】

図５に大脳皮質のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの大脳皮質では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図５ｂ～ｅ）。特に，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与したサルの大脳皮質（図５ｃ）では，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの大脳皮質では染色は認められず，図５ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図５ａ）。

【0298】

図６に海馬のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの海馬では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図６ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの海馬では染色は認められず，図６ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図６ａ）。

【0299】

図７に小脳のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの小脳では，血管及びプルキンエ細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図７ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの小脳では染色は認められず，図７ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図７ａ）。

【0300】

図８に延髄のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの延髄では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図８ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの延髄では染色は認められず，図８ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図８ａ）。

【0301】

実施例８の大脳及び小脳の免疫組織化学染色の結果からは，ヒト化前のマウス抗体である抗ｈＴｆＲ抗体番号１は脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへは結合することができるが，脳実質への移行する量は少ないと考えられた。一方で，ヒト化前のマウス抗体である抗ｈＴｆＲ抗体番号２及び３は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへは結合することができ，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで，取り込まれることを示すものであった。

【0302】

この実施例１５の大脳，海馬，小脳及び延髄の免疫組織化学染色の結果からは，実験に供した抗ｈＴｆＲ抗体番号３をヒト化して得られた４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへ結合し，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに大脳皮質においては神経様細胞にまで，海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで，延髄においては神経様細胞に取り込まれることがわかった。

【0303】

〔実施例１６〕ｈＩ２Ｓ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体融合蛋白質発現用細胞の作製
ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｎｕｃベクター（インビトロジェン社）を，ＫｐｎＩとＮｃｏＩで消化し，ＥＦ－１αプロモーターおよびその第一イントロンを含む領域を切り出し，これをＴ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端化処理した。ｐＣＩ－ｎｅｏ（インビトロジェン社）を，ＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで消化して，ＣＭＶのエンハンサー／プロモーターおよびイントロンを含む領域を切除した後に，Ｔ４ ＤＮＡ ポリメラーゼで平滑末端化処理した。これに，上記のＥＦ－１αプロモーターおよびその第一イントロンを含む領域を挿入して，ｐＥ－ｎｅｏベクターを構築した。ｐＥ－ｎｅｏベクターを，ＳｆｉＩおよびＢｓｔＸＩで消化し，ネオマイシン耐性遺伝子を含む約１ｋｂｐの領域を切除した。ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋）（インビトロジェン社）を鋳型にしてプライマーＨｙｇ－Ｓｆｉ５’（配列番号２１６）およびプライマーＨｙｇ－ＢｓｔＸ３’（配列番号２１７）を用いて，ＰＣＲ反応によりハイグロマイシン遺伝子を増幅した。増幅したハイグロマイシン遺伝子を，ＳｆｉＩおよびＢｓｔＸＩで消化し，上記のネオマイシン耐性遺伝子を切除したｐＥ－ｎｅｏベクターに挿入して，ｐＥ－ｈｙｇｒベクターを構築した。

【0304】

配列番号１７２で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号２４６で示されるアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号２４８で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２４７で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＩ２Ｓが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－１）を構築した。

【0305】

配列番号１８８で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号２４６で示されるアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号２５０で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２４９で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＩ２Ｓが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－２）を構築した。

【0306】

配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号２４６で示されるアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号２５２で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２５１で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＩ２Ｓが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３）を構築した。

【0307】

ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を，実施例１２に記載方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－１）と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ１）で形質転換し，ｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株１とした。この細胞株が発現するｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体１とした。

【0308】

同様に，ＣＨＯ細胞を，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－２）と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ２）で形質転換し，ｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株２とした。この細胞株が発現するｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体２とした。

【0309】

更に同様に，ＣＨＯ細胞を，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３）と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３とした。この細胞株が発現するｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３とした。

【0310】

〔実施例１７〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の製造
Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を，以下の方法で製造した。実施例１６で得たｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株１，２，及び３を，それぞれ細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積：１ｍＬ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を溶出させた。このＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いでアミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0311】

このようにして製造したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性は，例えば実施例７に記載の方法により測定することができる。また，静脈内投与したときのＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の薬物動態解析は，例えば実施例８に記載の方法により測定することができる。また，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の薬効は，例えばハンター症候群のモデルマウスであるイズロン酸２－スルファターゼ遺伝子ノックアウトマウス（Ｉ２Ｓ－ＫＯマウス）に，実施例７－２に記載のｈＴｆＲ－ＫＩマウスを掛け合わせて得られるＩ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ ＫＩマウスに，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を静脈注射し，脳内に蓄積したグリコサミノグリカンの減少量を測定することにより評価できる。

【0312】

〔実施例１８〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の脳移行評価１
実施例１７で製造したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３の精製品を，１ｍｇ／ｋｇの用量で，実施例７－２に記載の方法で作製したｈＴｆＲ－ＫＩマウスに静脈注射した（Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群）。コントロールとして組換えｈＩ２Ｓ（ｒｈＩ２Ｓ）を，１ｍｇ／ｋｇの用量でｈＴｆＲ－ＫＩマウスに静脈注射した（コントロール群）。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群ついては１５匹，コントロール群については３匹のｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄性，１５～１８週齢）に投与を行った。ここで用いたｒｈＩ２Ｓは，公知の手法である国際特許公報（ＷＯ２０１２／１０２９９８）に記載の方法に準じて製造した。なお，ｒｈＩ２Ｓとして，医療用医薬品として販売されているエラプレース（登録商標）を用いることもできる。

【0313】

Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群については，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３投与後，１５分後，１時間後，４時間後，８時間後，及び２４時間後に，それぞれ３匹のマウスを生理食塩液で全身灌流処理し，脳（大脳及び小脳）を採取した。コントロール群については，ｒｈＩ２Ｓ投与１時間後に，生理食塩液で全身灌流処理してから脳（大脳及び小脳）を採取した。摘出した大脳及び小脳の重量（湿重量）を測定した後，大脳及び小脳を，Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でホモジネートし，遠心後の上清を回収した。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群については，ホモジネート上清中に含まれるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の量を，コントロール群については，ホモジネート上清中に含まれるｒｈＩ２Ｓの量をそれぞれ実施例２０及び実施例２１に記載のＥＣＬ法により測定し，脳のグラム重量（ｇ湿重量）当たりに含まれる，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の量（脳組織中のＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）及びｒｈＩ２Ｓの量（脳組織中のｒｈＩ２Ｓの濃度）を算出した。その結果を表１２に示す。

【0314】

投与１時間後の脳組織中のＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体とｒｈＩ２Ｓの濃度は，それぞれ０．３６８±０．０１９μｇ／ｇ湿重量及び０．００１３４±０．００２３２μｇ／ｇ湿重量であり，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度はｒｈＩ２Ｓの濃度の約２７０倍に達した。この結果は，通常は血液脳関門をほとんど通過せず脳組織中に移行することのないｒｈＩ２Ｓを，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，血液脳関門を通過させて脳組織中に移行させることができることを示すものである。また，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の脳組織中の濃度は，投与後わずか１５分で０．２６３±０．０３８μｇ／ｇ湿重量と，投与１時間後のｒｈＩ２Ｓの脳組織中の濃度の約２００倍に達した。この結果は，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，ｈＩ２Ｓを速やかに脳組織中に移行させることができることを示すものである。

【0315】

【表12】

【0316】

〔実施例１９〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の脳移行評価２
実施例１７で製造したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３の精製品を５ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与した（Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群）。同様にして，ｒｈＩ２Ｓを５ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与した（ｒｈＩ２Ｓ群）。ここで用いたｒｈＩ２Ｓは，公知の手法である国際特許公報（ＷＯ２０１２／１０２９９８）に記載の方法に準じて製造した。なお，ｒｈＩ２Ｓとして，医療用医薬品として販売されているエラプレース（登録商標）を用いることもできる。各群とも２匹のサルに投与を行った。投与８時間後に各群とも全身潅流を実施した。潅流後，頸髄を含む脳組織を摘出した。摘出した脳組織を，大脳皮質，小脳，海馬，及び頸髄に分けてから，各脳組織をＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でホモジネートし，遠心後の上清を回収した。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体投与群については，ホモジネートの上清中に含まれるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の量を，コントロール群については，ホモジネートの上清中に含まれるｒｈＩ２Ｓの量をそれぞれ実施例２０及び２１に記載のＥＣＬ法により測定した。測定値から，大脳皮質，小脳，海馬，及び頸髄のグラム重量（ｇ湿重量）当たりに含まれる，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の量（これら脳組織中のＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）及びｒｈＩ２Ｓの量（これら脳組織中のｒｈＩ２Ｓの濃度）を算出した。その結果を図９に示す。

【0317】

大脳皮質におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度は約０．２２μｇ／ｇであるのに対し，ｒｈＩ２Ｓでは０．０３５μｇ／ｇであった。小脳におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度は約０．１８μｇ／ｇであるのに対し，ｒｈＩ２Ｓでは０．０２μｇ／ｇであった。海馬におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度は約０．２５μｇ／ｇであるのに対し，ｒｈＩ２Ｓでは０．０１７μｇ／ｇであった。また，頸髄におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度は約０．１５μｇ／ｇであるのに対し，ｒｈＩ２Ｓでは０．０３９μｇ／ｇであった。すなわち，大脳皮質，小脳，海馬，及び頸髄において，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度は，ｒｈＩ２Ｓの濃度の，それぞれ，約６．３倍，約９．０倍，約１４．７倍，及び約３．８倍の値を示した。これらの結果は，ｈＩ２Ｓを抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，積極的に血液脳関門を通過させて効率良く脳内にｈＩ２Ｓを到達させることができること示すものである。特に，海馬におけるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度がｒｈＩ２Ｓと比較して約１２．５倍に及ぶことは，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を投与することによって，特に海馬においてＩ２Ｓ活性を発揮させ得ることを示すものである。ハンター症候群の患者の脳障害は，通常のｒｈＩ２Ｓを用いた酵素補充療法では，ｒｈＩ２Ｓがほとんど血液脳関門を通過できないことから改善されない。一方，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体は血液脳関門を通過することから，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を投与することにより大脳皮質，海馬，小脳等の脳組織中にＩ２Ｓ活性を補充することができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体（特に，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３）は，ハンター症候群の患者の脳内にＩ２Ｓ活性を補充するための治療薬として使用することができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体（特に，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３）を投与することにより，通常のｒｈＩ２Ｓを用いた酵素補充療法では困難な，ハンター症候群の患者の脳障害の予防及び治療が可能である。特に，海馬に障害を有するハンター症候群の患者への治療薬として有望である。

【0318】

〔実施例２０〕ＥＣＬ法によるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の定量
ストレプトアビジンでコートされたプレートであるＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄ Ｐｌａｔｅ ９６ｗｅｌｌ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに，１５０μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加して１時間静置し，プレートをブロッキングした。ビオチン標識抗体であるＡｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ Ｋａｐｐａ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ Ｇｏａｔ ＩｇＧ Ｂｉｏｔｉｎ（Ｍｏｎｋｅｙ Ａｂｓｏｒｂｅｄ）（ＩＢＬ社）を，ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより０．５μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ＳＵＬＦＯ標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体をＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより１．０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ビオチン標識抗体及びＳＵＬＦＯ標識抗体の希釈溶液を各２５μＬと，２５μＬの各検体とを混合し，１時間インキュベートし，これを抗体反応試料とした。

【0319】

ブロッキング後のプレートの各ウェルを，２００μＬのＰＢＳ－Ｔ（シグマ社）で洗浄した後，各ウェルに抗体反応試料を２５μＬずつ添加し，１時間インキュベートした。インキュベート後，プレートの各ウェルを２００μＬのＰＢＳ－Ｔで洗浄し，次いで，Ｒｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知のＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各試料の測定値を内挿することによりＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を定量した。

【0320】

なお，ここで用いた抗ヒトＩ２Ｓ抗体は，公知の手法である国際特許公報（ＷＯ２０１２／１０２９９８）に記載の方法に準じて製造したｒｈＩ２Ｓを抗原としてマウスを免疫して得たモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は複数のものを得た。ＳＵＬＦＯ標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体として，抗ヒトＩ２Ｓ抗体を，ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ ＮＨＳ－Ｅｓｔｅｒ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってＳＵＬＦＯ標識して作製したものを使用した。

【0321】

〔実施例２１〕ＥＣＬ法によるｈＩ２Ｓの定量
ストレプトアビジンでコートされたプレートであるＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄ Ｐｌａｔｅ ９６ｗｅｌｌ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに，１５０μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加して１時間静置し，プレートをブロッキングした。ビオチン標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体を，ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより０．５μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ＳＵＬＦＯ標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体をＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより１．０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ビオチン標識抗体及びＳＵＬＦＯ標識抗体の希釈溶液を各２５μＬと，２５μＬの検体とを混合し，１時間インキュベートし，これを抗体反応試料とした。

【0322】

ブロッキング後のプレートの各ウェルを，２００μＬのＰＢＳ－Ｔ（シグマ社）で洗浄した後，各ウェルに抗体反応試料を２５μＬずつ添加し，１時間インキュベートした。インキュベート後，プレートの各ウェルを２００μＬのＰＢＳ－Ｔで洗浄し，次いで，Ｒｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知のｈＩ２Ｓの標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各試料の測定値を内挿することによりｒｈＩ２Ｓを定量した。

【0323】

なお，ここで用いた抗ヒトＩ２Ｓ抗体は，公知の手法である国際特許公報（ＷＯ２０１２／１０２９９８）に記載の方法に準じて製造したｒｈＩ２Ｓを抗原としてマウスを免疫して得たモノクローナル抗体である。ＳＵＬＦＯ標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体として，抗ヒトＩ２Ｓ抗体を，ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ ＮＨＳ－Ｅｓｔｅｒ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってＳＵＬＦＯ標識して作製したものを使用した。また，ビオチン標識抗ヒトＩ２Ｓ抗体として，ＳＵＬＦＯ標識に用いたものとは別の抗ヒトＩ２Ｓ抗体を，Ｂｉｏｔｉｎ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ_２（同仁化学研究所）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってビオチン標識して作製したものを使用した。

【0324】

〔実施例２２〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の薬効評価
ｈＩ２Ｓ活性を遺伝的に欠失しているハンター症候群の患者の臓器に蓄積することが知られているグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の濃度を測定することにより，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の薬効を評価した。実施例１７で製造したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３の精製品を，０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇの用量でＩ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスに静脈注射した（０．５ｍｇ／ｋｇ投与群，１．０ｍｇ／ｋｇ投与群，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群）。投与は週１回の頻度で４週間行い，初回の投与から４週目にマウスを麻酔下放血により安楽死させ，脳，肝臓，肺及び心臓を摘出した。摘出した各臓器を凍結乾燥機（ＥＹＥＬＡ社）で凍結乾燥して破砕後，乾燥重量を測定した。各臓器の乾燥品に，乾燥重量１００ｍｇに対し１ｍＬの０．５Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）を添加して約１００℃で１０分間加熱した。次いで，５０ｍｇ／ｍＬのアクチナーゼＥ溶液（科研製薬社）を乾燥重量５０ｍｇに対し１ｍｇのアクチナーゼＥ添加量となるように添加して，約６０℃で１６時間インキュベートして蛋白質を分解させた後，約１００℃で１０分加熱した。１５，０００ｒｐｍで１０分遠心分離を実施し，上清を回収した。上清中に含まれるＧＡＧの量をＷｉｅｓｌａｂＴＭ ｓＧＡＧ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｋｉｔ（ＥＵＲＯ－ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＡ社）を用いて測定し，各臓器のグラム重量（ｇ乾燥重量）当たりに含まれる，ＧＡＧの量を算出した。なお，コントロール群としてＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のＩ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスを置いた。また同時に，野生型マウスの各臓器におけるＧＡＧの濃度を測定した。また，この実験は，各測定群につきＩ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄雌，１９－２５週齢）を３匹ずつ用いて行った。また，野生型マウスについては，雄雌，１９－２５週齢のもの３匹を用いた。

【0325】

その結果を図１０に示す。脳，肝臓，肺及び心臓ともに，投与したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の用量依存的に，ＧＡＧの濃度が有意に低下することが観察された（図１０ａ～ｄ）。

【0326】

脳についてみると，コントロール群では脳組織中のＧＡＧの濃度は約２．６６μｇ／ｇであったが，脳組織中のＧＡＧの濃度は，０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群で，それぞれ約２．２３μｇ／ｇ，約２．１５μｇ／ｇ，約２．１０μｇｇと用量依存的に低下した（図１０ａ）。Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの脳組織内における異常なＧＡＧ量は，コントロール群の脳組織中のＧＡＧの濃度（約２．６６μｇ／ｇ）から野生型マウスの脳組織中のＧＡＧの濃度（約１．７６μｇ／ｇ）を差し引いた約０．９０μｇ／ｇとすることができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することにより，Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの脳組織中で異常に蓄積したＧＡＧのそれぞれ約４８％，約５７％，及び約６２％が，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体により分解されたということができる。この結果は，ハンター症候群の患者にＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を投与することにより，患者の脳組織中に異常に蓄積したＧＡＧを分解，除去でき得ることを示すものであり，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体（特に，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３）が，ＧＡＧ若しくはその断片の蓄積等を原因とするハンター症候群の患者でみられる脳の病変を予防及び治療する効果を発揮し得ることを示すものである。

【0327】

肝臓ついてみると，コントロール群では肝臓組織中のＧＡＧの濃度は約１０．３μｇ／ｇであったが，肝臓組織中のＧＡＧの濃度は，０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群で，それぞれ約２．２μｇ／ｇ，約２．０μｇ／ｇ，約１．９μｇ／ｇと用量依存的に低下した（図１０ｂ）。Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの肝臓組織内における異常なＧＡＧ量は，コントロール群の肝臓組織中のＧＡＧの濃度（約１０．３μｇ／ｇ）から野生型マウスの肝臓組織中のＧＡＧの濃度（約０．３μｇ／ｇ）を差し引いた約１０μｇ／ｇとすることができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を０．５～２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することにより，Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの肝臓組織中で異常に蓄積したＧＡＧの８０％以上が，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体により分解されたということができる。

【0328】

肺についてみると，コントロール群では肺組織中のＧＡＧの濃度は約１０．５μｇ／ｇであったが，肺組織中のＧＡＧの濃度は，０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群で，それぞれ約７．８μｇ／ｇ，約６．７μｇ／ｇ，約５．７μｇ／ｇと用量依存的に低下した（図１０ｃ）。Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの肺組織内における異常なＧＡＧ量は，コントロール群の肺組織中のＧＡＧの濃度（約１０．５μｇ／ｇ）から野生型マウスの肺組織中のＧＡＧの濃度（約１．５μｇ／ｇ）を差し引いた約９．０μｇ／ｇとすることができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することにより，Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの肺組織中で異常に蓄積したＧＡＧのそれぞれ約３０％，約４２％，及び約５３％が，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体により分解されたということができる。

【0329】

心臓についてみると，コントロール群では心臓組織中のＧＡＧの濃度は約４．６μｇ／ｇであったが，心臓組織中のＧＡＧの濃度は，０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇ投与群で，それぞれ約２．２μｇ／ｇ，約２．０μｇ／ｇ，約１．５μｇ／ｇと用量依存的に低下した（図１０ｄ）。Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの心臓組織中における異常なＧＡＧ量は，コントロール群の心臓組織中のＧＡＧの濃度（約４．６μｇ／ｇ）から野生型マウスの心臓組織中のＧＡＧの濃度（約０．８μｇ／ｇ）を差し引いた約３．８μｇ／ｇとすることができる。従って，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を０．５ｍｇ／ｋｇ，１．０ｍｇ／ｋｇ，及び２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することにより，Ｉ２Ｓ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスの心臓組織中で異常に蓄積したＧＡＧのそれぞれ約６３％，約７０％，及び約８１％が，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体により分解されたということができる。

【0330】

上記の肝臓，肺及び心臓についての結果は，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体が脳組織内のＧＡＧに加えて，その他の臓器・器官に蓄積したＧＡＧをも分解することを示すものである。すなわち，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体（特に，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３）をハンター症患者に対する酵素補充療法の薬剤として投与したときに，患者の脳を含めた全身の臓器・器官に酵素を補充できることを示すものである。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体は，静脈内投与によって，脳を含めた全身の臓器・器官に酵素を補充できること示すものである。

【0331】

〔実施例２３〕ＧＡＧの測定法
ＧＡＧの測定は，Ｗｉｅｓｌａｂ^ＴＭ ｓＧＡＧ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｋｉｔ（ＥＵＲＯ－ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＡ社）を用いて，添付の操作マニュアルに従って，概ね以下の方法で実施した。検体，または標準液（ブランクは水）を各５０μＬずつ１．５ｍＬチューブに採取した。ＧｕＨＣｌ溶液を５０μＬずつ各チューブに加え，室温で１５分間反応させた。ＳＡＴ溶液を５０μＬずつ各チューブに加え，室温で１５分間反応させた。水：ＳＡＴ溶液：Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ ｓｔｏｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ＝９：５：１の混合液を調製し，調製した混合液を各チューブに７５０μＬずつ加え，室温で１５分間反応させた。この反応液を１２５００ｇで１５分遠心して，上清を取り除いた。ＤＭＳＯを各チューブに５００μＬずつ加え，室温で１５分間，振とうして混和させた後に，１２５００ｇで１５分遠心分離し上清を取り除いた。Ｇｕ－Ｐｒｏｐ溶液を各チューブに５００μＬずつ加え，室温で１５分間，振とうして混和した。この混和後の溶液を，９６穴プレートの各ウェルへ２００μＬずつ分注し，プレートリーダーで各ウェルの６００ｎｍにおける吸光度を測定した。既知濃度のＧＡＧ溶液の測定値から検量線を作成し，これに各試料の測定値を内挿してＧＡＧ濃度を定量した。

【0332】

〔実施例２４〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と各種生理活性ペプチドとの融合蛋白質の製造
以上の実施例２２までの実験により，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたヒトＩ２Ｓが血液脳関門を通過して脳組織中に到達し，Ｉ２Ｓ活性を脳内で発揮することが示された。そこで，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と各種生理活性ペプチドとの融合蛋白質を作製し，これらの融合蛋白質がＢＢＢを通過して脳組織内に到達するか否かを検討した。ここで，生理活性ペプチドとしては，ヒトエリスロポエチン，ヒトアリルスルファターゼＡ，ヒトＰＰＴ－１，ヒトＴＰＰ－１，ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ，ヒトＴＮＦα受容体，及びヒトＮ－ｓｕｌｐｈｏｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｓｕｌｐｈｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ヘパランＮ－スルファターゼ）をヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と結合させる生理活性ペプチドとして選択した。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とそれぞれの生理活性ペプチドとの融合蛋白質を発現させるための発現ベクター，及びこれら融合蛋白質は，以下の実施例２５～３１に記載の方法で調製した。

【0333】

〔実施例２５〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトエリスロポエチンとの融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２５６で示されるアミノ酸配列を有するヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２５８で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２５７で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＥＰＯが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＥＰＯ）を構築した。

【0334】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＥＰＯ）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＥＰＯとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＥＰＯとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0335】

ｈＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＥＰＯ－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0336】

〔実施例２６〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトアリルスルファターゼＡとの融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２５９で示されるアミノ酸配列を有するヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２６１で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２６０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＡＲＳＡが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥｎｅｏ（ＨＣ－ｈＡＲＳＡ）を構築した。

【0337】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＡＲＳＡ）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＡＲＳＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＡＲＳＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0338】

ｈＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0339】

〔実施例２７〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＰＰＴ－１との融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２６２で示されるアミノ酸配列を有するヒトＰＰＴ－１（ｈＰＰＴ－１）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２６４で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２６３で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＰＰＴ－１が結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＰＰＴ－１）を構築した。

【0340】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＰＰＴ－１）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＰＰＴ－１ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＰＰＴ－１とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0341】

ｈＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0342】

〔実施例２８〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＴＰＰ－１との融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２６５で示されるアミノ酸配列を有するヒトＴＰＰ－１（ｈＴＰＰ－１）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２６７で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２６６で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴＰＰ－１が結合した融合蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＴＰＰ－１）を構築した。

【0343】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＴＰＰ－１）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＴＰＰ－１とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＴＰＰ－１とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0344】

ｈＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0345】

〔実施例２９〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトα－Ｌ－イズロニダーゼとの融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２６８で示されるアミノ酸配列を有するヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２７０で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２６９で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＩＤＵＡが結合した融合蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＩＤＵＡ）を構築した。

【0346】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＩＤＵＡ）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＩＤＵＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＩＤＵＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0347】

ｈＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0348】

〔実施例３０〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＴＮＦα受容体との融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２７１で示されるアミノ酸配列を有するヒトＴＮＦα受容体（ｈＴＮＦαＲ）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２７３で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２７２で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴＮＦαＲが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＴＮＦαＲ）を構築した。

【0349】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＴＮＦαＲ）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＴＮＦαＲとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＴＮＦαＲとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0350】

ｈＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したｈＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0351】

〔実施例３１〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とヒトヘパランＮ－スルファターゼとの融合蛋白質の製造法
配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号２７４で示されるアミノ酸配列を有するヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）を結合させた蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む，配列番号２７６で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号２７５で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側にリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＳＧＳＨが結合した融合蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＳＧＳＨ）を構築した。

【0352】

ＣＨＯ細胞を，実施例１２に記載の方法により，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ｈＳＧＳＨ）及び実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＳＧＳＨとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株とした。この細胞株が発現するｈＳＧＳＨとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体とした。

【0353】

ｈＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株を，細胞濃度が約２×１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎＡカラム（カラム体積１ｍＬ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲを溶出させた。このＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲを含む溶出液のｐＨを，１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いで，アミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。これをＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品とした。

【0354】

〔実施例３２〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と各種生理活性ペプチドとの融合蛋白質の脳移行評価
実施例２５～実施例３１で得た，ＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体，ＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体，ＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体及びＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体の精製品を，それぞれ３ｍｇ／ｋｇの用量でｈＴｆＲ－ＫＩマウスに単回静脈内投与した。また，コントロールとして，ヒトイムノグロブリン製剤（人免疫グロブリングロブリン筋注「ベネシス」，田辺三菱製薬株式会社）を３ｍｇ／ｋｇの用量でｈＴｆＲ－ＫＩマウス（１７－２８週齢）に単回静脈注射した。それぞれの融合蛋白質及びコントロールの投与につき，ｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄雌，１７－２８週齢）を１匹ずつ用いた。

【0355】

静脈注射してから投与８時間後に生理食塩水で全身潅流を実施し，潅流後，各マウスの脳組織を摘出した。次いで摘出した脳組織をＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でホモジネートし，遠心後の上清を回収した。回収したホモジネートの上清に含まれる融合蛋白質の濃度を，以下に示す方法で測定した。なお，ビオチン標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体は，ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体（Ｂｅｔｈｙｌ社）を，Ｂｉｏｔｉｎ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ_２（同仁化学研究所）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってビオチン標識して作製したものを使用した。また，ＳＵＬＦＯ標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体は，ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体（Ｂｅｔｈｙｌ社）を，ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ ＮＨＳ－Ｅｓｔｅｒ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってＳＵＬＦＯ標識して作製したものを使用した。

【0356】

Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄ Ｐｌａｔｅ ９６ ｗｅｌｌ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに，１５０μＬのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加して１時間静置し，プレートをブロッキングした。ビオチン標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体を，ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより０．５μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ＳＵＬＦＯ標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体を，ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳにより１．０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。ビオチン標識抗体及びＳＵＬＦＯ標識抗体の希釈溶液を各２５μＬと，２５μＬの各検体とを混合し，１時間インキュベートし，これを抗体反応試料とした。

【0357】

ブロッキング後のプレートの各ウェルを，２００μＬのＰＢＳ－Ｔ（シグマ社）で洗浄した後，各ウェルに抗体反応試料を２５μＬずつ添加し，１時間インキュベートした。インキュベート後，プレートの各ウェルを２００μＬのＰＢＳ－Ｔで洗浄し，次いで，Ｒｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各試料の測定値を内挿することにより，脳組織のグラム重量（ｇ湿重量）当たりに含まれる，それぞれの融合蛋白質の量（脳組織中のそれぞれの融合蛋白質についての濃度）を算出した。その結果を表１３に示す。

【0358】

コントロールとしておいたヒトイムノグロブリンの脳組織中の濃度を１としたときの，脳組織中におけるＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体，ＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体，ＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体，ＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体及びＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度の相対値は，それぞれ，４．３３，３．３９，４．８７，６．４８，５．６２，７．４４，及び２．２４であり，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたこれらの生理活性ペプチドが，積極的に脳組織中に移行することが示された。すなわち，これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させることにより，通常では血液脳関門を通過することのないこれらの生理活性蛋白質を，血液脳関門を通過させて脳組織中に到達させることができることを示すものである。

【0359】

つまり，ＥＰＯ－抗ｈＴｆＲ抗体は脳虚血の治療剤として，ＡＲＳＡ－抗ｈＴｆＲ抗体はアリルスルファターゼＡは異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）における中枢神経障害治療剤として，ＰＰＴ－１－抗ｈＴｆＲ抗体は神経セロイドリポフスチン症又はＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病における中枢神経障害治療剤として，ＴＰＰ－１－抗ｈＴｆＲ抗体は神経セロイドリポフスチン症又はＪａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病における中枢神経障害治療剤として，ＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体はハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群における中枢神経障害治療剤として，ＳＧＳＨ－抗ｈＴｆＲ抗体はサンフィリッポ症候群における中枢神経障害治療剤として，ＩＤＵＡ－抗ｈＴｆＲ抗体はハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群における中枢神経障害治療剤として，ＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体は脳虚血及び脳炎症性疾患の治療剤として，それぞれ使用できることを示すものである。またこれらに限らず，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させることにより，通常では血液脳関門を通過することのない所望の生理活性蛋白質を，血液脳関門を通過させて脳組織中に到達させることができることを示すものである。

【0360】

【表13】

【産業上の利用可能性】

【0361】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，これと融合させることにより，所望の生理活性蛋白質，低分子物質等を血液脳関門を通過させることができるので，中枢神経系において作用させるべき生理活性蛋白質，低分子物質等を脳内に送達する手段を提供するものとして有用性が高い。

【符号の説明】

【0362】

１ 血管
２ 脳実質
３ 神経様細胞
４プルキンエ細胞

【配列表フリーテキスト】

【0363】

配列番号３：リンカー例１のアミノ酸配列
配列番号４：リンカー例２のアミノ酸配列
配列番号５：リンカー例３のアミノ酸配列
配列番号６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号２０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号２２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号２３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号２４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号２５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号２７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号２８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号２９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号３０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号３２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号３３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号３４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号３５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号３７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号３８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号３９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号４０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号４２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号４３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号４４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号４５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号４７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号４８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号４９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号５０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号５１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号５２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号５３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号５４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号５５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号５６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号５７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号５８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号５９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号６０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号６１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号６２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号６３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号６４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号６５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号６６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号６７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号６８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号６９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号７０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号７１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号７２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号７３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号７４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号７５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号７６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号７７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号７８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号７９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号８０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号８１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号８２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号８３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号８４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号８５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号８６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号８７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号８８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号８９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号９０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号９１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号９２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号９３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号９４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号９５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号９６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号９７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号９８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号９９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１００：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１０１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１０２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１０３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１０４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１０５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１０６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１０７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１０８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１０９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１１０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１１１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１１２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１１３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１１４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１１５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１１６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１１７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１１８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１１９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号１２０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１２１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１２２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１２３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１２４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１２５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１２６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１２７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１２８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１２９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１３０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１３１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１３２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１３３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１３４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１３５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１３６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１３７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１３８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１３９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１４０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１４１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１４２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１４３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１４４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１４５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１４６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１４７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１４８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１４９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１５０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１５１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１５２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１５３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１５４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１５５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１５６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１５７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１５８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１５９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１６０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号１６１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号１６２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号１６３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号１６４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列，合成配列
配列番号１６５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号１６６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１６７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１６８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号１６９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号１７０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号１７１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号１７２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む重鎖のアミノ酸配列
配列番号１７３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列６を含む重鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号１７４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１７５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１７６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号１７７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号１７８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号１７９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号１８０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１８１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む塩基配列，合成配列
配列番号１８２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１８３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１８４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号１８５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号１８６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号１８７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号１８８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む重鎖のアミノ酸配列
配列番号１８９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号２の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む重鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む塩基配列，合成配列
配列番号１９０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１９１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１９２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号１９３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号１９４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号１９５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号１９６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１９７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号１９８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列４を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号１９９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列４を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２００：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列５を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２０１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列５を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２０２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む，可変領域として
配列番号２０３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２０４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号２０５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号２０６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号２０７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号２０８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号２０９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号２１０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖のアミノ酸配列
配列番号２１１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖のアミノ酸配列コードする塩基配列，合成配列
配列番号２１２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列
配列番号２１３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２１４：プライマーｈＴｆＲ５’，合成配列
配列番号２１５：プライマーｈＴｆＲ３’，合成配列
配列番号２１６：プライマーＨｙｇ－Ｓｆｉ５’，合成配列
配列番号２１７：プライマーＨｙｇ－ＢｓｔＸ３’，合成配列
配列番号２１８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２１９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号４の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号５の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２２９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号７の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号９の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１０の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２３９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１１の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１２の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号１４の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号２４７：抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖（ヒト化６）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２４８：抗ｈＴｆＲ抗体番号１の重鎖（ヒト化６）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２４９：抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖（ヒト化６）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２５０：抗ｈＴｆＲ抗体番号２の重鎖（ヒト化６）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２５１：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２５２：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２５３：キメラｈＴｆＲをコードするｃＤＮＡの３’側にｌｏｘＰ配列で挟み込んだネオマイシン耐性遺伝子を配置したＤＮＡの塩基配列，合成配列
配列番号２５４：ターゲッティングベクターの５’アームの塩基配列，合成配列
配列番号２５５：ターゲッティングベクターの３’アームの塩基配列，合成配列
配列番号２５７：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＥＰＯとの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２５８：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＥＰＯとの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２６０：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＡＲＳＡとの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２６１：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＡＲＳＡとの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２６３：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＰＰＴ－１との融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２６４：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＰＰＴ－１との融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２６６：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＴＰＰ－１との融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２６７：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＴＰＰ－１との融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２６９：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩＤＵＡとの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２７０：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩＤＵＡとの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２７２：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＴＮＦαＲとの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２７３：抗ｈＴｆＲα抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＴＮＦαＲとの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２７５：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＳＧＳＨとの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号２７６：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＳＧＳＨとの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２７７：一本鎖抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列
配列番号２７８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号６の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号２７９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号８の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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