知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-23
(45)【発行日】2024-01-31
(54)【発明の名称】呼吸器疾患の予防、改善又は治療用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/223 20060101AFI20240124BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240124BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240124BHJP
A61P 11/10 20060101ALI20240124BHJP
A61P 31/16 20060101ALI20240124BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20240124BHJP
【ＦＩ】
A61K31/223
A61P11/06
A61P11/00
A61P11/10
A61P31/16
A23L33/10
【請求項の数】
6
(21)【出願番号】P 2022530206
(86)(22)【出願日】2020-11-24
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-27
(86)【国際出願番号】 KR2020016654
(87)【国際公開番号】W WO2021107547
(87)【国際公開日】2021-06-03
【審査請求日】2022-05-23
(31)【優先権主張番号】10-2019-0154651
(32)【優先日】2019-11-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(73)【特許権者】
【識別番号】522203282
【氏名又は名称】マイクロエックス カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＭＩＣＲＯＸ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】イ、ホン グ
(72)【発明者】
【氏名】ハン、ミョン グァン
(72)【発明者】
【氏名】ホン、キ ボム
(72)【発明者】
【氏名】イ、ジ フン
(72)【発明者】
【氏名】ユ、ジ フン
(72)【発明者】
【氏名】イ、チュソク
(72)【発明者】
【氏名】イム、ソニョン
(72)【発明者】
【氏名】ソン、ファ リョン
【審査官】長部 喜幸
(56)【参考文献】
【文献】特表２００６－５１５８３２（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００８／０３８７７１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開平１０－１０１５７６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０００－２４７８７７（ＪＰ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０１１２０９５９（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０６９７０１６３（ＣＮ，Ａ）
【文献】Nutrients，2019年04月，Vol.11，831 (page 1-18)
【文献】J. Agric. Food Chem.，2019年04月，Vol.67，pp.4915-4922
【文献】Amino Acids，2018年，Vol.51，pp.451-462
【文献】The Journal of Immunology，2012年，Vol.189, No.11，pp.5139-5146
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式２で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物を有効成分として含むことを特徴とする、呼吸器疾患の予防又は治療用薬学的組成物であって：【化1】
Ｒ ｂ 及びＲ ｈ が、それぞれ独立的に、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ ｊ であり；
Ｒ ｉ が、Ｈ、メチル基、エチル基又はベンジル基であり；
Ｒ ｊ がメチル基であり；
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、膿胸及び肺膿瘍からなる群より選択された一つ以上である、薬学的組成物。
【請求項2】
前記化合物は、下記化合物で構成された群から選択された一つ以上であることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物：【化2】
【請求項3】
前記慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎又は肺気腫のうち一つ以上の症状を示すことを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項4】
下記化学式２で表示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含むことを特徴とする、呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物であって：【化3】
Ｒ ｂ 及びＲ ｈ が、それぞれ独立的に、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ ｊ であり；
Ｒ ｉ が、Ｈ、メチル基、エチル基又はベンジル基であり；
Ｒ ｊ がメチル基であり；
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、膿胸及び肺膿瘍からなる群より選択された一つ以上である、食品組成物。
【請求項5】
前記化合物は、下記化合物で構成された群から選択された一つ以上であることを特徴とする、請求項４に記載の食品組成物。【化4】
【請求項6】
下記化学式２で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物の呼吸器疾患治療用薬剤を生産するための使用であって：【化5】
Ｒ ｂ 及びＲ ｈ が、それぞれ独立的に、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ ｊ であり；
Ｒ ｉ が、Ｈ、メチル基、エチル基又はベンジル基であり；
Ｒ ｊ がメチル基であり；
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、膿胸及び肺膿瘍からなる群より選択された一つ以上である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新規な化合物を有効成分として含む呼吸器疾患の予防、改善又は治療用組成物に関する。
【0002】
本出願は、２０１９年１１月２７日に出願された大韓民国特許出願第１０－２０１９－０１５４６５１に基づく優先権の利益を主張し、当該出願の明細書及び図面に開示されたすべての内容は本出願に援用される。
【背景技術】
【0003】
喘息は、慢性疾患のうち一つであって、気道のアレルギー炎症による気道過敏性と気道平滑筋の収縮による咳を伴う呼吸困難が主な症状として現われる。疾患は、しばしば気管支の平滑筋系の痙攣を起こし、上気道及び下気道の両方に影響を及ぼす。喘息は、その症状の重症度によって多様な類型が存在する。例えば、軽症喘息は、呼吸困難又は咳があるか又はないなどの症状で定義され、中等度の喘息は、喘鳴及び呼吸困難で定義され、咳及び喀痰排出があるか又はないことがあるが、一般的に、日常活動や睡眠を妨害する。最後に、重症喘息は、呼吸困難による無能力を特徴とし、苦しむ患者は通常、正常的に飲食物を摂取したり眠ったりすることができず、不安感に苛まれ脱力の症状を示す。このように症状を示す喘息は、全世界的に３億人の患者が存在し、喘息による死亡者数は、毎年２５，０００人に至る。
【0004】
一方、慢性閉塞性肺疾患（Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ、ＣＯＰＤ）は、気道が狭くなる肺疾患の一群であって、肺に流入及び排出される空気の流れが制限されて呼吸困難を引き起こす。呼吸器疾患の一環である喘息とは異なり、気流の制限は可塑性が不良であり、一般的に時間の経過によって漸進的に悪化する。前記ＣＯＰＤは、肺気腫及び慢性閉塞性気管支炎のような主な症状を示す。
【0005】
前記肺気腫では、多数の気嚢の間の壁が損傷しその形態の変形が起きて垂れることになり、このような損傷により連続的な気嚢の間の損傷が誘導されることになる。また、前記慢性閉塞性気管支炎では、気道の内層が持続的な刺激により炎症が誘発され、内層が厚くなり、これによって厚い粘液が気道に形成されて呼吸困難に至るようになる。
【0006】
前記慢性気管支炎及び肺気腫は、最も一般的には、喫煙により引き起こされ、ＣＯＰＤを有する患者の約９０％が現在喫煙をしているか、又は過去に喫煙経歴がある者であった。喫煙者の約５０％が慢性気管支炎を発生させるが、喫煙者の１５％のみに無能力気流閉鎖が発生する。しかし、ＣＯＰＤは、人間にのみ限って発病するのではなく、その他の哺乳動物、例えば、ウマも同様にＣＯＰＤを病むことが知られている。
【0007】
前記ＣＯＰＤは、死亡及び障害の重要な原因であって、アメリカ及びヨーロッパで４番目の主要死亡原因であるだけでなく、アジアでも発病率が非常に高いのが実情である。治療指針は、疾患による罹患率及び死亡率を減少させることを助けるために早期発見及び禁煙プログラムの実施を勧奨するが、前記ＣＯＰＤは早期発見が難しく、疾病がかなり進行した段階において完治を誘導し得る薬物がいまだ存在しないという限界点が存在する。
【0008】
前記喘息の場合、その症状の程度によって吸入型ステロイド及びβ２刺激薬（β２－ａｇｎｏｉｓｔｓ）が広く用いられているが、約２０％の患者では調節が効かず、３～５％の患者では、高濃度のステロイド及びβ２刺激薬により全く治療できない。特に、このような吸入型治療剤は、高濃度でステロイドを長期間投与する方法であるので、変声、口腔カビ感染及びホルモンの不均衡などのような副作用が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
上記した問題を解決するために、本発明の目的は、本発明による新規な化合物を有効成分として含む呼吸器疾患の予防、改善又は治療用組成物を提供することである。
【0010】
しかし、本発明が達成しようとする技術的課題は、上記で言及した課題に制限されず、言及しなかったまた他の課題は、以下の記載から本発明が属する技術分野において通常の知識を有した者に明確に理解されるべきである。
【課題を解決するための手段】
【0011】
したがって、本発明は、下記化学式１で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
【0012】
【化1】
Ｒｃ～Ｒｆは、それぞれ独立的に、Ｈ又はＣ１―Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立的に、Ｈ、Ｃ１―Ｃ６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｋ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｌ２－Ｒｌであり；
Ｒｉは、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｊ及びＲｋは、それぞれ独立的に、Ｃ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｌは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基又は核原子数５～２０個の非芳香族縮合多環基であり;
Ｌ２は、直接結合又はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり；
前記Ｒｉのアルキル基は、１種以上のＣ６－Ｃ１２アリール基で置換されるか非置換され、複数個の置換基で置換される場合、これらは互いに同一であるか異なり；
＊は、キラル中心である。
【0013】
本発明の一具体例において、前記化合物は、＊で表示されるキラル中心を基準として、Ｌ体（Ｌ ｆｏｒｍ）であってもよいが、これに制限されるものではない。
【0014】
本発明の他の具現例において、前記化学式１で表示される化合物は、下記化学式２で表示され得るが、これに制限されるものではない。
【0015】
【化2】
Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立的に、Ｈ、Ｃ１―Ｃ６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｋ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｌ２－Ｒｌであり；
Ｒｉは、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｊ及びＲｋは、それぞれ独立的に、Ｃ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｌは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基又は核原子数５～２０個の非芳香族縮合多環基であり;
Ｌ２は、直接結合又はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり；
前記Ｒｉのアルキル基は、１種以上のＣ６－Ｃ１２アリール基で置換されるか非置換され、複数個の置換基で置換される場合、これらは互いに同一であるか異なり；
＊は、キラル中心である。
【0016】
本発明のまた他の具現例において、前記化合物は、下記化合物で構成された群から選択された一つ以上であってもよいが、これに制限されるものではない。
【0017】
【化3】
【0018】
本発明のまた他の具現例において、前記呼吸器疾患は、咳又は痰を伴う風邪、インフルエンザ、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気管支腺腫、孤立性肺結節、肺結核、膿胸、肺膿瘍及び肺の組織球増殖症からなる群より選択された一つ以上であってもよいが、これに制限されるものではない。
【0019】
本発明のまた他の具現例において、前記慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎又は肺気腫のうち一つ以上の症状を示すものであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0020】
また、本発明は、前記化学式１で表示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物を提供する。
【0021】
また、本発明は、前記化学式１で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物の呼吸器疾患治療用薬剤を生産するための用途を提供する。
【0022】
また、本発明は、前記化学式１で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物を含む薬学的組成物を個体に投与する段階を含む呼吸器疾患の予防又は治療方法を提供する。
【0023】
また、本発明は、前記化学式１で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物を含む薬学的組成物の呼吸器疾患の予防又は治療用途を提供する。
【発明の効果】
【0024】
本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質の活性化を誘導することによって、ｐ３８／ＣＫ２α／ＮＦ－ｋＢ順序で行われる細胞シグナル伝達を遮断して呼吸器疾患から発生する炎症反応を非常に効果的に抑制する効果を有する。したがって、本発明による前記新規な化合物を経口投与する方式で呼吸器疾患の予防、改善又は治療が可能である。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図8】図８は、本発明の一実施例によるＭＫＰ－１タンパク質に特異的なｓｉＲＮＡを処理したとき、ＭＫＰ－１タンパク質、ｐ３８タンパク質及びｃＰＬＡ２タンパク質の発現及び活性化レベルをウエスタンブロット分析によって確認した結果を示す。
【図12】図１２は、本発明の一実施例によるＭＫＰ－１タンパク質に特異的なｓｉＲＮＡを処理したとき、気管支内に存在する免疫細胞数をディフ－クイック（Ｄｉｆｆ－Ｑｕｉｋ）染色によって顕微鏡で観察して測定した結果を示す。
【図13】図１３は、本発明の一実施例によるＭＫＰ－１タンパク質に特異的なｓｉＲＮＡを処理したとき、気管支内に存在するサイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３）の発現レベルをＥＬＩＳＡによって測定した結果を示す。
【図17】は、本発明の一実施例による慢性閉塞性肺疾患マウスでエラスチンの発現レベルをウエスタンブロット分析によって確認した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0026】
［発明を実施するための最良の形態］
本発明の一具現例では、呼吸器疾患の予防、改善又は治療用組成物を提供する。
本発明の一具現例では、呼吸器疾患の予防、改善又は治療用組成物を提供する。
【0027】
本発明の前記組成物は、下記化学式１で表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、水和物及び溶媒和物から選択される化合物を有効成分として含む：
【0028】
【化4】
【0029】
本発明の前記化学式１で、
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立的に、Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｊであり；
Ｒｃ～Ｒｆは、それぞれ独立的に 、Ｈ又はＣ１―Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立的に、Ｈ、Ｃ１―Ｃ６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｋ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｌ２－Ｒｌであり；
Ｒｉは、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｊ及びＲｋは、それぞれ独立的に、Ｃ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｌは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基又は核原子数５～２０個の非芳香族縮合多環基であり；
Ｌ２は、直接結合又はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり；
前記Ｒｉのアルキル基は、１種以上のＣ６－Ｃ１２アリール基で置換されるか非置換され、複数個の置換基で置換される場合、これらは互いに同一であるか異なり；
＊は、キラル中心である。
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立的に、Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｊであり；
Ｒｃ～Ｒｆは、それぞれ独立的に 、Ｈ又はＣ１―Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立的に、Ｈ、Ｃ１―Ｃ６アルキル基、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｋ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｌ２－Ｒｌであり；
Ｒｉは、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｊ及びＲｋは、それぞれ独立的に、Ｃ１－Ｃ６アルキル基であり；
Ｒｌは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基又は核原子数５～２０個の非芳香族縮合多環基であり；
Ｌ２は、直接結合又はＣ１－Ｃ６アルキレン基であり；
前記Ｒｉのアルキル基は、１種以上のＣ６－Ｃ１２アリール基で置換されるか非置換され、複数個の置換基で置換される場合、これらは互いに同一であるか異なり；
＊は、キラル中心である。
【0030】
本発明の前記「アルキル基」は、直鎖又は分枝鎖であってもよく、飽和１価炭化水素ラジカルを意味し、前記アルキルは、本発明に記載する一つ以上の置換体で任意に置換されるか、置換されなくてもよい。本発明の前記アルキル基は、炭素数は１～６であるものであって、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ－ブチル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基又はヘキシル基などであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0031】
本発明の前記「アルキレン基」は、－ＣｎＨ２ｎ－アルケインの両端の炭素原子から水素原子が一つずつ抜けた形態であって、直鎖又は分枝鎖であってもよいが、前記アルキレン基は、本発明に記載する一つ以上の置換体で任意に置換されるか、置換されなくてもよい。本発明の前記アルキレン基は、炭素数は１～６であるものであって、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、イソプロピレン基、ブチレン基、ｔ－ブチレン基、ｎ－ブチレン基、イソブチレン基、ｓｅｃ－ブチレン基又はヘキシレン基などであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0032】
本発明の前記「アリール基」は、別に言及しない限り、融合又は非融合された一つ以上の芳香族環を有する、炭素数６～１２個の単環又は多環式の環状炭素システムを指称し、アリール基の例としては、フェニル基、ハロフェニル基、テトラヒドロナフチル、インデニル、アンドラセニル、ベンジル基、ハロベンジル基、ナフチル基又はビアリール基などであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0033】
本発明の前記「非芳香族縮合多環基」は、２以上の環が互いに縮合されており、環形成原子として炭素数５個～２０個の炭素を含み、分子全体が非芳香族性（ｎｏｎ－ａｒｏｍａｔｉｃｉｔｙ）を有するグループを意味する。前記非芳香族縮合多環基の例としては、フルオレニルなどであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0034】
本発明の前記「置換されるか」とは、前記アルキル基に存在する１個以上の水素がＣ１－Ｃ１２アリール基で置換されることであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0035】
本発明の前記「キラル中心」とは、４個の異なる置換基が付いている炭素原子を意味するものであって、キラル中心を基準として分子が鏡相と同じではないため重ならない場合、キラル性がある化合物であると判別できる。このようなキラル性は、ＣＯＲＮ規則によってキラル中心の炭素周辺にカルボキシル基、置換基、アミノ基の順序が時計方向である場合、Ｄ型で示し得、反時計方向である場合、Ｌ型で示し得る。
【0036】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立的に、Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｊであってもよい。
【0037】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒｃ～Ｒｆは、それぞれ独立的に、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキル基であってもよいが、より好ましくは、前記Ｒｃ～Ｒｆは、全てＨであってもよい。
【0038】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒｇ及びＲｈのうちいずれか一つは、Ｈであり、残りの一つは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒｋ又は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｌ２－Ｒｌであってもよい。
【0039】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒｉは、Ｃ１－Ｃ３アルキル基であってもよく、最も好ましくは、メチル基又はエチル基であってもよい。前記Ｒｉのアルキル基は、１種以上のＣ６－Ｃ１２アリール基で置換され得、より好ましくは、前記Ｒｉのアルキル基のいずれか一つの水素がフェニル基で置換されたものであってもよい。
【0040】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒｊ及びＲｋは、それぞれ独立的に、Ｃ１－Ｃ３アルキル基であり、より好ましくは、メチル基又はエチル基であってもよい。
【0041】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｒｌは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基又は核原子数５～２０個の非芳香族縮合多環基であってもよく、より好ましくは、フェニル基又はフルオレン基であってもよい。
【0042】
本発明の好ましい一実施例で、前記Ｌ２は、Ｃ１－Ｃ６アルキレン基であり、より好ましくは、Ｃ１－Ｃ３アルキレン基であってもよく、最も好ましくは、メチレン基又はエチレン基であってもよい。
【0043】
本発明の好ましい一実施例で、前記＊は、キラル中心であって、前記化合物は、＊で表示されるキラル中心を基準として、Ｌ体（Ｌ ｆｏｒｍ）であってもよい。
【0044】
本発明の前記化合物は、下記化学式２で表示される化合物であってもよい：
【0045】
【化5】
前記Ｒａ、Ｒｂ及びＲｇ～Ｒｌ、Ｌ２及び＊それぞれの定義は、前記化学式１での定義と同一である。
【0046】
本発明の前記化合物は、下記化合物で構成された群から選択される少なくとも一つであってもよい：
【化6】
【0047】
本発明の前記呼吸器疾患は、咳又は痰を伴う風邪、インフルエンザ、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気管支腺腫、孤立性肺結節、肺結核、膿胸、肺膿瘍及び肺の組織球増殖症からなる群より選択された一つ以上であってもよいが、これに制限されるものではない。
【0048】
本発明の前記慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎又は肺気腫のうち少なくともいずれか一つの症状を示すものであってもよいが、これに制限されるものではない。
【0049】
本発明の前記組成物は、呼吸器疾患が発生した目的とする個体に経口投与する場合にも毒性が存在しないので、ステロイド薬物の噴霧による声の変調のような副作用なしに呼吸器疾患を非常に効果的に治療することができる。
【0050】
本発明の前記組成物は、薬学的組成物又は食品組成物として用いられ得る。
【0051】
また、本発明は、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物の薬学的に許容可能な塩を提供する。薬学的に許容可能な塩は、人体への毒性が低く、母化合物の生物学的活性と物理化学的性質に悪影響を与えてはならない。薬学的に許容可能な塩は、薬学的に許容可能な遊離酸と化学式１又は化学式２の塩基化合物の酸付加塩などが可能であるが、これに制限されない。
【0052】
適合する酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、グルコン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。酸付加塩は、通常の方法、例えば、化合物を過量の酸水溶液に溶解させ、その塩をメタノール、エタノール、アセトン又はアセトニトリルのような水混和性有機溶媒を用いて沈澱させて製造することができる。また、同モル量の化合物及び水中の酸又はアルコールを加熱した後、前記混合物を蒸発させて乾燥させるか、又は析出された塩を吸引濾過させて製造することができる。
【0053】
適合する塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属及びアンモニウムなどを含むことができるが、これに制限されるものではない。アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩は、例えば、化合物を過量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解し、非溶解化合物塩を濾過した後に濾液を蒸発、乾燥させて得ることができる。このとき、金属塩としては、特に、ナトリウム、カリウム又はカルシウム塩を製造することが製薬上適合し、また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例えば、硝酸銀）と反応させて得ることができる。
【0054】
本発明の前記塩は、通常的な方法で製造され得る。例えば、上記した化学式１又は化学式２の化合物をメタノール、エタノール、アセトン、１，４－ジオキサンのような水と混ざる溶媒に溶かした後、遊離酸又は遊離塩基を加えた後に結晶化させて製造することができる。
【0055】
本発明の前記化合物には、それ以外にも、化学式１又は化学式２の化合物の水和物又は溶媒和物形態も本発明の範囲に含まれ得る。
【0056】
本発明の組成物内の前記化合物の含量は、疾患の症状、症状の進行程度、患者の状態などによって適切に調節可能であり、例えば、全体組成物重量を基準として０．０００１～９９．９重量％又は０．００１～５０重量％であってもよいが、これに限定されるものではない。前記含量比は、溶媒を除去した乾燥量を基準とした値である。
【0057】
本発明による薬学的組成物は、薬学的組成物の製造に通常的に用いる適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含むことができる。前記賦形剤は、例えば、希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、吸着剤、保湿剤、フィルム－コーティング物質及び制御放出添加剤からなる群より選択された一つ以上であってもよい。
【0058】
本発明による薬学的組成物は、それぞれ通常の方法によって散剤、顆粒剤、徐放性顆粒剤、腸溶性顆粒剤、液剤、点眼剤、エリキシル剤、乳剤、懸濁液剤、酒精剤、トローチ剤、芳香水剤、リモナーデ剤、錠剤、徐放性錠剤、腸溶性錠剤、舌下錠、硬カプセル剤、軟カプセル剤、徐放性カプセル剤、腸溶性カプセル剤、丸剤、チンキ剤、軟調エキス剤、乾燥エキス剤、流エキス剤、注射剤、カプセル剤、灌流液、硬膏剤、ローション剤、パスタ剤、噴霧剤、吸入剤、パッチ剤、滅菌注射溶液又はエアロゾールなどの外用剤などの形態で剤形化して用いられ得、前記外用剤は、クリーム、ゲル、パッチ、噴霧剤、軟膏剤、硬膏剤、ローション剤、リニメント剤、パスタ剤又はカタプラスマ剤などの剤形を有することができる。本発明の目的上、線維症が肺のような呼吸器に発生した場合には、有効成分がターゲット器官に予防又は治療に適合する収率で到達し得るように吸入投与用で剤形化されることが好ましい。
【0059】
本発明による薬学的組成物に含まれ得る担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、オリゴ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油が挙げられる。
【0060】
製剤化する場合には、一般的に用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調剤される。
【0061】
本発明による錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤の添加剤として、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ澱粉、コムギ澱粉、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、ジマンニトール、沈降炭酸カルシウム、合成ケイ酸アルミニウム、リン酸一水素カルシウム、硫酸カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、精製ラノリン、微結晶セルロース、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カオリン、尿膜、コロイド性シリカゲル、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣ １９２８、ＨＰＭＣ ２２０８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０、プロピレングリコール、カゼイン、乳酸カルシウム、プリモゲルなど賦形剤；ゼラチン、アラビアガム、エタノール、寒天パウダー、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ブドウ糖、精製水、カゼインナトリウム、グリセリン、ステアリン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、微結晶セルロース、デキストリン、ヒドロキシセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシメチルセルロース、精製セラック、澱粉糊、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの結合剤が用いられ得、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トウモロコシ澱粉、寒天パウダー、メチルセルロース、ベントナイト、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クエン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、無水ケイ酸、１－ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、イオン交換樹脂、酢酸ポリビニル、ホルムアルデヒド処理カゼイン及びゼラチン、アルギン酸、アミロース、グアーガム（Ｇｕａｒ ｇｕｍ）、重曹、ポリビニルピロリドン、リン酸カルシウム、ゲル化澱粉、アラビアガム、アミロペクチン、ペクチン、ポリリン酸ナトリウム、エチルセルロース、白糖、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、ジソルビトール液、軽質無水ケイ酸などの崩壊剤；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、水素添加植物油（Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ）、タルク、石松子、カオリン、ワセリン、ステアリン酸ナトリウム、カカオ油、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸マグネシウム、ポリエチレングリコール ４０００、６０００、流動パラフィン、水素添加大豆油（Ｌｕｂｒｉ ｗａｘ）、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸亜鉛、ラウリル硫酸ナトリウム、酸化マグネシウム、マクロゴ－ル（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、合成ケイ酸アルミニウム、無水ケイ酸、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーンオイル、パラフィンオイル、ポリエチレングリコール脂肪酸エーテル、澱粉、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ｄｌ－ロイシン、軽質無水ケイ酸などの滑沢剤；が用いられ得る。
【0062】
本発明による液剤の添加剤としては、水、希塩酸、希硫酸、クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸スクロース類、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル類（ツイーンエステル）、ポリオキシエチレンモノアルキルエーテル類、ラノリンエーテル類、ラノリンエステル類、酢酸、塩酸、アンモニア水、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、プロラミン、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどが用いられ得る。
【0063】
本発明によるシロップ剤には、白糖の溶液、他の糖類あるいは甘味剤などが用いられ得、必要に応じて、芳香剤、着色剤、保存剤、安定剤、懸濁化剤、乳化剤、粘稠剤などが用いられ得る。
【0064】
本発明による乳剤には、精製水が用いられ得、必要に応じて、乳化剤、保存剤、安定剤、芳香剤などが用いられ得る。
【0065】
本発明による懸濁剤には、アカシア、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＨＰＭＣ １８２８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０など懸濁化剤が用いられ得るが、必要に応じて、界面活性剤、保存剤、安定剤、着色剤、芳香剤が用いられ得る。
【0066】
本発明による注射剤には、注射用蒸溜水、０．９％塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース＋塩化ナトリウムの注射液、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、乳酸加リンゲル液、エタノール、プロピレングリコール、非揮発性油－ゴマ油、綿実油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、安息香酸ベンゼンのような溶剤；安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、尿膜、ウレタン、モノエチル酢酸アミド、ブタゾリジン、プロピレングリコール、ツイン類、ニジョンチン酸アミド、ヘキサミン、ジメチル酢酸アミドのような溶解補助剤；弱酸及びその塩（酢酸と酢酸ナトリウム）、弱塩基及びその塩（アンモニア及び酢酸アンモニウム）、有機化合物、タンパク質、アルブミン、ペプトン、ガム類のような緩衝剤；塩化ナトリウムのような等張化剤；重亜硫酸ナトリウム（ＮａＨＳＯ３）、二酸化炭素ガス、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）、亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ３）、窒素ガス（Ｎ２）、エチレンジアミンテトラ酢酸のような安定剤；亜硫酸水素ナトリウム０．１％、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、チオウレア、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、アセトン重亜硫酸ナトリウムのような硫酸化剤；ベンジルアルコール、クロロブタノール、塩酸プロカイン、ブドウ糖、グルコン酸カルシウムのような無痛化剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ツイン８０、モノステアリン酸アルミニウムのような懸濁化剤を含むことができる。
【0067】
本発明による坐剤には、カカオ脂、ラノリン、ウイテプソル、ポリエチレングリコール、グリセロゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸とオレイン酸の混合物、スバナル（Ｓｕｂａｎａｌ）、綿実油、落花生油、ヤシ油、カカオバター＋コレステロール、レシチン、ラネットワックス、モノステアリン酸グリセロール、ツイン又はスパン、イムハウゼン（Ｉｍｈａｕｓｅｎ）、モノレン（モノステアリン酸プロピレングリコール）、グリセリン、アデプスソリダス（Ａｄｅｐｓ ｓｏｌｉｄｕｓ）、ブチラムテゴ－Ｇ（Ｂｕｙｔｙｒｕｍ Ｔｅｇｏ－Ｇ）、セベスファーマ１６（Ｃｅｂｅｓ Ｐｈａｒｍａ １６）、ヘキサライドベース９５、コトマ（Ｃｏｔｏｍａｒ）、ヒドロコート ＳＰ、Ｓ－７０－ＸＸＡ、Ｓ－７０－ＸＸ７５（Ｓ－７０－ＸＸ９５）、ヒドロコート（Ｈｙｄｒｏｋｏｔｅ）２５、ヒドロコート７１１、イドロポスタル（Ｉｄｒｏｐｏｓｔａｌ）、マサエストラリウム（Ｍａｓｓａ ｅｓｔｒａｒｉｕｍ、Ａ、ＡＳ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｔ）、マサ－ＭＦ、マスポール、マスポール－１５、ネオスポスタル－エン、パラマウント－Ｂ、スポシロ（ＯＳＩ、ＯＳＩＸ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ）、坐剤基剤ＩＶタイプ（ＡＢ、Ｂ、Ａ、ＢＣ、ＢＢＧ、Ｅ、ＢＧＦ、Ｃ、Ｄ、２９９）、スポスタル（Ｎ、Ｅｓ）、ウェコビ（Ｗ、Ｒ、Ｓ、Ｍ、Ｆｓ）、テスタートリグリセリド基剤（ＴＧ－９５、ＭＡ、５７）のような基剤が用いられ得る。
【0068】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記抽出物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）又はラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も用いられる。
【0069】
経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく用いられる単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に多様な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが用いられ得る。
【0070】
本発明による薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明において「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスクの割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量レベルは、患者疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時使用される薬物を含む要素及びその他医学分野でよく知られた要素によって決定され得る。
【0071】
本発明による薬学的組成物は、個別治療剤で投与するか他の治療剤と併用して投与され得、従来の治療剤とは順次又は同時に投与され得、単一又は多重投与され得る。上述した要素を全て考慮して副作用なしに最小限の量で最大効果が得られる量を投与することが重要であり、これは、本発明が属する技術分野において通常の技術者により容易に決定され得る。
【0072】
本発明の薬学的組成物は、個体に多様な経路で投与され得る。投与のすべての方式は、予想され得るが、例えば、経口服用、皮下注射、腹腔投与、静脈注射、筋肉注射、脊髓周囲空間（硬膜内）注射、舌下投与、頬粘膜投与、直腸内挿入、膣内挿入、眼球投与、耳投与、鼻腔投与、吸入、口又は鼻を通じた噴霧、皮膚投与、経皮投与などによって投与され得る。
【0073】
本発明の薬学的組成物は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別、体重及び疾患の重症度などの多くの関連因子とともに活性成分である薬物の種類によって決定される。
【0074】
本発明で「個体」とは、疾病の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、ヒト又は非ヒトである霊長類、マウス（ｍｏｕｓｅ）、ラット（ｒａｔ）、イヌ、ネコ、ウマ及びウシなどの哺乳類であってもよいが、これに制限されるものではない。
【0075】
本発明で「投与」とは、任意の適切な方法で個体に所定の本発明の組成物を提供することを意味する。
【0076】
本発明で「予防」とは、目的とする疾患の発病を抑制するか遅延させる全ての行為を意味し、「治療」とは、本発明による薬学的組成物の投与により目的とする疾患とそれによる代謝異常症が好転するかよく変更される全ての行為を意味し、「改善」とは、本発明による組成物の投与により目的とする疾患と関連されたパラメータ、例えば、症状の程度を減少させる全ての行為を意味する。
【0077】
また、本発明は、前記化合物を含む食品組成物を提供することができる。
【0078】
本発明の前記化合物を食品添加物で用いる場合、前記化合物をそのまま添加するか他の食品又は食品成分とともに用いることができ、通常的な方法によって適切に用いることができる。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康又は治療的処置）によって適切に決定され得る。一般的に、食品又は飲料の製造時、本発明の前記化合物は、原料に対して１５重量％以下又は１０重量％以下の量で添加され得る。しかし、健康及び衛生を目的とするか又は健康調節を目的とする長期間の摂取の場合、前記量は前記範囲以下であり得、安全性の面で何らの問題がないので、有効成分は前記範囲以上の量でも用いることができる。
【0079】
前記食品の種類には、特別な制限はない。前記物質を添加し得る食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料、茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などがあり、通常的な意味での健康機能食品を全て含む。
【0080】
本発明による健康飲料組成物は、通常の飲料のように様々な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖及び果糖のようなモノサッカライド、マルトース及びスクロースのようなジサッカライド、デキストリン及びシクロデキストリンのようなポリサッカライド、及びキシリトール、ソルビトール及びエリスリトールなどの糖アルコールである。甘味剤としては、ソーマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤や、サッカリン、アスパルテームのような合成甘味剤などを用いることができる。前記天然炭水化物の割合は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり一般的に約０．０１～０．２０ｇ又は約０．０４～０．１０ｇである。
【0081】
前記の外に本発明の組成物は、様々な営養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含有することができる。その他に本発明の組成物は、天然果物ジュース、果物ジュース飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立的に又は組み合わせて用いることができる。このような添加剤の割合は、あまり重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１～０．２０重量部の範囲で選択することが一般的である。
【0082】
また、本発明の組成物は、化粧料組成物の形態で提供され得る。
【0083】
前記化粧料組成物は、化粧水、栄養ローション、栄養エッセンス、マッサージクリーム、美容入浴添加剤、ボディローション、ボディミルク、バスオイル、ベビーオイル、ベビーパウダー、シャワーゲル、シャワークリーム、サンスクリーンローション、サンスクリーンクリーム、サンタンクリーム、スキンローション、スキンクリーム、紫外線遮断用化粧品、クレンジングミルク、脱毛剤化粧用、フェイス及びボディローション、フェイス及びボディクリーム、皮膚美白クリーム、ハンドローション、ヘアローション、化粧用クリーム、ジャスミンオイル、浴用石鹸、液体ソープ、美容石鹸、シャンプー、手洗浄剤（ハンドクリーナー）、薬用石鹸非医療用、クリーム石鹸、フェイシャルウォッシュ、全身洗浄剤、頭皮洗浄剤、ヘアリンス、化粧石鹸、歯牙美白用ゲル、歯磨き剤などの形態で製造され得る。本発明の組成物は、化粧料組成物の製造に通常的に用いる溶媒や、適切な担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。
【0084】
本発明の前記化粧料組成物内にさらに追加され得る溶媒の種類は特に限定しないが、例えば、水、食塩水、ＤＭＳＯ又はこれらの組み合わせを用いることができる。また、担体、賦形剤又は希釈剤としては、精製水、オイル、ワックス、脂肪酸、脂肪酸アルコール、脂肪酸エステル、界面活性剤、保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、増粘剤、抗酸化剤、粘度安定化剤、キレート剤、緩衝剤、低級アルコールなどが含まれるが、これに制限されるものではない。また、必要に応じて、美白剤、保湿剤、ビタミン、紫外線遮断剤、香水、染料、抗生剤、抗バクテリア剤、抗真菌剤を含むことができる。
【0085】
本発明の前記オイルとしては、水素化植物性油、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、ヤシ油、ホホバ油、アボカド油が用いられ得、ワックスとしては、密蝋、鯨蝋、カルナバ、カンデリラ、モンタン、セレシン、液体パラフィン、ラノリンが用いられ得る。
【0086】
本発明の前記脂肪酸としては、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレイン酸が用いられ得、脂肪酸アルコールとしては、セチルアルコール、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、パンテノール、ラノリンアルコール、ステアリルアルコール、ヘキサデカノールが用いられ得、脂肪酸エステルとしては、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレートが用いられ得る。界面活性剤としては、当業界で知られている陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤及び非イオン性界面活性剤が使用可能であり、できるだけ天産物由来の界面活性剤が好ましい。その外にも化粧品分野で広く知られている保湿剤、増粘剤、抗酸化剤などを含むことができ、これらの種類と量は当業界で公知の内容による。
【0087】
本願の明細書全体において、ある部分がある構成要素を「含む」との用語は、特に反対となる記載がない限り、他の構成要素を除外することではなく他の構成要素をさらに含むことができることを意味する。本願の明細書全体で用いられる程度の用語「約」、「実質的に」などは、言及された意味に固有の製造及び物質許容誤差が提示されるとき、その数値で又はその数値に近接した意味で用いられ、本発明の理解を助けるために正確であるか絶対的な数値が言及された開示内容を非良心的な侵害者が不当に用いることを防止するために用いられる。本願の明細書全体で用いられる程度の用語「～（する）段階」又は「～の段階」は、「～のための段階」を意味しない。
【0088】
本願の明細書全体において、マーカッシュ形式の表現に含まれた「これらの組み合わせ」の用語は、マーカッシュ形式の表現に記載した構成要素からなる群より選択される一つ以上の混合又は組み合わせを意味するものであって、前記構成要素からなる群より選択される一つ以上を含むことを意味する。
【0089】
本願の明細書全体において、「Ａ及び／又はＢ」の記載は、「Ａ又はＢ、又はＡ及びＢ」を意味する。
【0090】
以下、実施例を通じて本発明をより詳しく説明する。ただし、これら実施例は、本発明をより具体的に説明するためのものに過ぎず、本発明の要旨によって本発明の範囲がこれら実施例によって制限されないということは、当業界において通常の知識を有した者において自明である。
【実施例】
【0091】
＜製造例１～１６＞新規な化合物の合成
【0092】
下記製造工程１～８に記載された工程によって、下記表１に列挙された製造例１～１６を合成した。
【0093】
【表1-1】
【0094】
【表1-2】
【0095】
【表1-3】
【0096】
＜製造工程１＞
【化7】
【0097】
＜製造工程２＞
【化8】
【0098】
＜製造工程３＞
【化9】
【0099】
＜製造工程４＞
【化10】
【0100】
＜製造工程５＞
【化11】
【0101】
＜製造工程６＞
【化12】
【0102】
＜製造工程７＞
【化13】
【0103】
＜製造工程８＞
【化14】
【0104】
＜製造例１＞ベンジル２－アセトアミド－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（Ｂｅｎｚｙｌ ２－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0105】
１００ｍｌのジメチルホルムアミド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ；ＤＭＦ）に２－アセトアミド－５－アミノ－５－オキソペンタン酸（２－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ（２６．６ｍｍｏｌ））とベンジルブロミド（１．５ｅｑ）を入れて常温で撹拌させた。その後、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－７－エン（１，８－Ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ[５．４．０]ｕｎｄｅｃ－７－ｅｎｅ；ＤＢＵ（１．２ｅｑ））を入れた後に、滴下完了後に室温（Ｒｏｏｍ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）で２４時間の間撹拌させた。反応が終結すると、水を用いて反応を終了させ、ジクロロメタンを追加で付加して有機層を抽出した。前記有機層を塩水で洗浄した後に亜硫酸ナトリウムで水分を除去し、溶媒を減圧蒸溜して得た残渣をヘキサンと酢酸エチルを用いて再結晶して、目的化合物である製造例１を収得した（製造工程１参照）。
【0106】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．４３－７．２７（ｍ、５Ｈ）、５．１９（ｓ、２Ｈ）、４．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．１、５．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．３６－２．２４（ｍ、２Ｈ）、２．２６－２．１２（ｍ、１Ｈ）、２．００（ｓ、３Ｈ）、１．９９－１．８５（ｍ、１Ｈ）
【0107】
＜製造例２＞ベンジル２，５－ジアセトアミド－５－オキソペンタノエート（ｂｅｎｚｙｌ ２，５－ｄｉａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔ）
【0108】
マイクロウエーブチューブに前記有機製造例１（２３．０ｍｍｏｌ）、アセトアルデヒド（３．０ｅｑ）及び塩酸（０．００１ｅｑ）を入れ、５０Ｗ、１２０℃条件で３０分間撹拌させた。その後、酢酸エチルと水を用いて有機層を抽出した後、塩水で前記有機層を洗浄して亜硫酸ナトリウムを用いて水分を除去した。その後、残っている溶媒を減圧蒸溜して最終的に得られた残渣をＭＰＬＣを用いて分離及び精製する過程を通じて製造例２を収得した（製造工程１参照）。
【0109】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．６３（ｓ、１Ｈ）、８．３０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．４７－７．２３（ｍ、５Ｈ）、５．１７－５．０６（ｍ、２Ｈ）、４．２７（ｄｄｄ、Ｊ＝９．３、７．５、５．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０－２．３８（ｍ、２Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．０７－１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８５（ｓ、３Ｈ）、１．８３－１．７３（ｍ、１Ｈ）
【0110】
＜製造例３＞２，５－ジアセトアミド－５－オキソペンタン酸（２，５－ｄｉａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）
【0111】
５ｍｌのメタノールに前記製造例２（４．０６ｍｍｏｌ）を溶かした後、Ｐｄ／Ｃ（活性化炭素に吸着させたパラジウム）０．２ｇを追加で入れ、前記混合物を水素下で２４時間の間撹拌させた。反応が終結した後、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）で前記反応液を濾過した後に減圧蒸溜する過程を通じて製造例３（ＤＮ２０４３６０）を収得した（製造工程１参照）。
【0112】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．６４（ｓ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１５（ｔｄ、Ｊ＝８．９、５．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．５６－２．４６（ｍ、２Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、２．０６－１．８９（ｍ、１Ｈ）、１．８４（ｓ、３Ｈ）、１．８０－１．６４（ｍ、１Ｈ）
【0113】
＜製造例４＞エチル２，５－ジアセトアミド－５－オキソペンタノエート（ｅｔｈｙｌ ２，５－ｄｉａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0114】
２，５－ジアセトアミド－５－オキソペンタン酸（０．２ｍｍｏｌ）をエタノールに十分に溶かした後、０℃で１０分間撹拌させ、１．２ｅｑの塩化チオニル（ＳＯＣｌ２）を追加で入れた。その後、前記反応物を２０分間常温で撹拌させた後、２時間の間６０℃で撹拌させた。反応が終結したら、水を添加した後、ジクロロメタンを追加で入れて有機層を抽出した。前記有機層を塩水で洗浄した後に亜硫酸ナトリウムを用いて水分を除去し、溶媒を減圧蒸溜して得た残渣をＰｒｅｐ ＨＰＬＣで分離及び精製して製造例４を得た（製造工程２参照）。
【0115】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．３０（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｓ、１Ｈ）、６．７１（ｓ、１Ｈ）、４．２６－４．１１（ｍ、１Ｈ）、４．１４－３．９４（ｍ、２Ｈ）、２．３４－２．２７（ｍ、２Ｈ）、１．９８－１．８８（ｍ、１Ｈ）、１．８５（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．７０（ｍ、４Ｈ）、１．２２－１．１２（ｍ、３Ｈ）
【0116】
＜製造例５＞メチル２－アセトアミド－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ２－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0117】
２５ｍｌのメタノールに２－アセトアミド－５－アミノ－５－オキソペンタン酸（５．３１ｍｍｏｌ）を溶かした後、１．０５ｅｑの塩化アセチルをゆっくり滴下し、２４時間の間常温で撹拌させた。反応が終結したら、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）溶液を入れ、溶媒を減圧蒸溜して得た残渣をＭＰＬＣで分離及び精製して製造例５を収得した（製造工程３参照）。
【0118】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．４９（ｓ、１Ｈ）、６．１５（ｓ、１Ｈ）、５．３６（ｓ、１Ｈ）、４．６０（ｔｄ、J＝８．７、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．４９－２．２６（ｍ、２Ｈ）、２．２６－２．１１（ｍ、１Ｈ）、２．１３－１．８３（ｍ、４Ｈ）
【0119】
＜製造例６＞メチル２，５－ジアセトアミド－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ２，５－ｄｉａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0120】
６ｍｌのアセトニトリルとメチルクロリドが１：５割合で混合された溶液にアセトアルデヒド（０．３ｍｍｏｌ）、前記製造例５（１．２ｅｑ）及びＣｕＢｒ（０．０５ｅｑ）を入れ、常温で１５分間撹拌させた。その後に、１．５ｅｑのＮ－ブロモスクシンイミド（Ｎ－Ｂｒｏｍｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を入れ、２４時間の間常温で撹拌させた。反応が終決すると、酢酸エチルと水を用いて有機層を抽出し、前記有機層を塩水で洗浄した後、亜硫酸ナトリウムを用いて水分を除去した。その後、溶媒を減圧蒸溜して得た残渣をＭＰＬＣで分離及び精製して製造例６（ＤＮ２０５８９０）を収得した（製造工程３参照）。
【0121】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ４．５８－４．３２（ｍ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、２．７５－２．４２（ｍ、２Ｈ）、２．２９－２．０７（ｍ、４Ｈ）、２．０７－１．８０（ｍ、４Ｈ）
【0122】
＜製造例７＞ベンジル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（ｂｅｎｚｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0123】
２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタン酸（２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を開始物質として、前記製造例１と同一の方法で合成して製造例７を収得した（製造工程４参照）。
【0124】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７７（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５７（ｔ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３－７．１４（ｍ、９Ｈ）、５．７７（ｓ、１Ｈ）、５．６４（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．３１（ｓ、１Ｈ）、５．１９（ｑ、Ｊ＝１２．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）、４．２１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．２４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．９９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）
【0125】
＜製造例８＞ベンジル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アセトアミド－５－オキソペンタノエート（ｂｅｎｚｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0126】
前記製造例７を用い、前記製造例６と同一の方法で合成して製造例８（ＤＮ２０５７０１）を収得した（製造工程４参照）。
【0127】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９９（ｓ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５７（ｔ、Ｊ＝１６．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４９－７．１９（ｍ、９Ｈ）、５．５０（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．１９（ｑ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．４２（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、４．２１（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５４－２．４８（ｍ、１Ｈ）、２．３５－２．２７（ｍ、４Ｈ）、２．０５－１．９１（ｍ、１Ｈ）
【0128】
＜製造例９＞メチル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0129】
２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタン酸を開始物質として、前記製造例５と同一の方法で合成して製造例９を収得した（製造工程５参照）。
【0130】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．８２－７．７５（ｍ、２Ｈ）、７．７２－７．５４（ｍ、２Ｈ）、７．４２-７．２４（ｍ、４Ｈ）、４．４５－４．３１（ｍ、２Ｈ）、４．２９－４．２１（ｍ、２Ｈ）、３．８１－３．５８（ｍ、４Ｈ）、２．３６－２．２９（ｍ、２Ｈ）、２．２２－２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．９９－１．８４（ｍ、１Ｈ）
【0131】
＜製造例１０＞メチル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アセトアミド－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0132】
前記製造例９を用い、前記製造例６と同一の方法で合成して製造例１０（ＤＮ２０５８０７）を収得した（製造工程５参照）。
【0133】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．７３（ｓ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５８（ｔ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３０（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、９．９Ｈｚ、２Ｈ）、５．６２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．４２（ｔ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ、３Ｈ）、４．２１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７－２．１６（ｍ、４Ｈ）、１．９８（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、７．４Ｈｚ、１Ｈ）
【0134】
＜製造例１１＞エチル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタノエート（ｅｔｈｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｍｉｎｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0135】
２５ｍｌのエタノールに２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アミノ－５－オキソペンタン酸（２．７１ｍｍｏｌ）を溶かした後、１．０５ｅｑの塩化アセチルをゆっくり滴下し、２４時間の間常温で撹拌させた。反応が終決すると、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）溶液を入れ、溶媒を減圧蒸溜して得た残渣をＭＰＬＣで分離及び精製して製造例１１を収得した（製造工程６参照）。
【0136】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．７０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．６３－７．４５（ｍ、２Ｈ）、７．２９（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．３７－４．１８（ｍ、２Ｈ）、４．１８－３．９５（ｍ、４Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．０５（ｄｔ、Ｊ＝１３．３、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．８１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、８．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．２８－１．０１（ｍ、３Ｈ）
【0137】
＜製造例１２＞エチル２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－アセトアミド－５－オキソペンタノエート（ｅｔｈｙｌ ２－（（（（９Ｈ－ｆｌｕｏｒｅｎ－９－ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0138】
前記製造例１１を用い、前記製造例６と同一の方法で合成して製造例１２を収得した（製造工程６参照）。
【0139】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．８２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．７１（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．４１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．５０－４．３０（ｍ、２Ｈ）、４．３０－４．０６（ｍ、４Ｈ）、２．６３（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８－２．１２（ｍ、４Ｈ）、１．９５（ｄｔ、Ｊ＝１６．０、７．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．４０－１．１５（ｍ、２Ｈ）
【0140】
＜製造例１３＞ベンジル５－アミノ－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（ｂｅｎｚｙｌ ５－ａｍｉｎｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0141】
５－アミノ－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（５－ａｍｉｎｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を開始物質として、前記製造例１と同一の方法で合成して製造例１３を収得した（製造工程７参照）。
【0142】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．５７－７．０６（ｍ、１０Ｈ）、５．９５－５．５３（ｍ、２Ｈ）、５．４１（ｓ、１Ｈ）、５．２３－４．９９（ｍ、４Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．２５（ｔ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．１０－１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８６－１．７９（ｍ、１Ｈ）
【0143】
＜製造例１４＞ベンジル５－アセトアミド－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（ｂｅｎｚｙｌ ５－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0144】
前記製造例１３を用い、前記製造例６と同一の方法で合成して製造例１４（ＤＮ２０５８９１）を収得した（製造工程７参照）。
【0145】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３９（ｓ、１Ｈ）、７．６８－６．９０（ｍ、１０Ｈ）、５．５６（ｄ、J＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７－４．９６（ｍ、４Ｈ）、４．４６（ｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７３－２．４０（ｍ、２Ｈ）、２．３５－２．１１（ｍ、４Ｈ）、２．０７－１．８３（ｍ、１Ｈ）
【0146】
＜製造例１５＞メチル５－アミノ－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ５－ａｍｉｎｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0147】
５－アミノ－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（５－ａｍｉｎｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）を開始物質として、前記製造例５と同一の方法で合成して製造例１５を収得した（製造工程８参照）。
【0148】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．５８－６．９９（ｍ、５Ｈ）、５．２０－５．００（ｍ、２Ｈ）、４．２２（ｄｄ、Ｊ＝９．１、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．７４（ｓ、３Ｈ）、２．３３（ｔ、J＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．１６（ｄｔ、Ｊ＝１３．０、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．９３（ｄｔ、Ｊ＝２２．１、７．８Ｈｚ、１Ｈ）
【0149】
＜製造例１６＞メチル５－アセトアミド－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（ｍｅｔｈｙｌ ５－ａｃｅｔａｍｉｄｏ－２－（（（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）ａｍｉｎｏ）－５－ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ）
【0150】
前記製造例１５を用い、前記製造例６と同一の方法で合成して製造例１６を収得した（製造工程８参照）。
【0151】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．６５－７．１６（ｍ、５Ｈ）、５．２０－４．９８（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｄｄ、Ｊ＝９．３、５．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．７４（ｓ、３Ｈ）、２．６３（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．２９－２．０７（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、８．１Ｈｚ、１Ｈ）
【0152】
＜準備例１＞実験動物の飼育
特定の病原体がない８週齢の雌Ｃ５６ＢＬ／６マウス（Ｏｒｉｅｎｔ Ｂｉｏ Ｋｏｒｅａ Ｉｎｃ．、大韓民国）を気流式無菌実験台に収容し、標準固形飼料を所望するままに（ａｄ ｌｉｂｉｔｕｍ）供給する条件で飼育した。下の実験が行われるとき、前記マウスは７－８週齢に該当するようにし、すべての実験動物は全北大学校医科大学の実験動物の管理及び利用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｏｎｂｕｋ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ）により承認されたプロトコルによって管理されるようにした。
特定の病原体がない８週齢の雌Ｃ５６ＢＬ／６マウス（Ｏｒｉｅｎｔ Ｂｉｏ Ｋｏｒｅａ Ｉｎｃ．、大韓民国）を気流式無菌実験台に収容し、標準固形飼料を所望するままに（ａｄ ｌｉｂｉｔｕｍ）供給する条件で飼育した。下の実験が行われるとき、前記マウスは７－８週齢に該当するようにし、すべての実験動物は全北大学校医科大学の実験動物の管理及び利用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｏｎｂｕｋ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ）により承認されたプロトコルによって管理されるようにした。
【0153】
＜実験方法１＞喘息及び慢性閉塞性肺疾患誘発動物モデルの製作
喘息誘発動物モデルの製作：図１に示したように、２０μｇの卵黄（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ；ＯＶＡ、ｇｒａｄｅ Ｖ、シグマアルドリッチ、アメリカ）を１．０ｍｇの水酸化アルミニウムアジュバント（ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ａｄｊｕｖａｎｔ、Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ；Ｐｉｅｒｃｅアメリカ）と混合して、実験開始日（０日）と、実験開始日から１４日目（１４日）に腹腔内に注射する過程を通じて１次チャレンジを行った。また、実験開始日から２１日及び２８日に、マウスをプラスチック箱（Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ（Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｃｈａｍｂｅｒ；２４．５ｃｍ×４０．５ｃｍ×１５．０ｃｍ）に入れ、超音波ネブライザー（ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ、ＮＥ－Ｕ１２；ｏｕｔｐｕｔ ０．８ｍＬ／ｍｉｎ；Ｏｍｒｏｎ、日本）を用いて１．５％の卵黄を気化させて３０分間前記箱に注入する過程を通じてマウスが気化された卵黄を吸入し得るようにした（２次チャレンジ）。
喘息誘発動物モデルの製作：図１に示したように、２０μｇの卵黄（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ；ＯＶＡ、ｇｒａｄｅ Ｖ、シグマアルドリッチ、アメリカ）を１．０ｍｇの水酸化アルミニウムアジュバント（ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ａｄｊｕｖａｎｔ、Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ；Ｐｉｅｒｃｅアメリカ）と混合して、実験開始日（０日）と、実験開始日から１４日目（１４日）に腹腔内に注射する過程を通じて１次チャレンジを行った。また、実験開始日から２１日及び２８日に、マウスをプラスチック箱（Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ（Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｃｈａｍｂｅｒ；２４．５ｃｍ×４０．５ｃｍ×１５．０ｃｍ）に入れ、超音波ネブライザー（ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ、ＮＥ－Ｕ１２；ｏｕｔｐｕｔ ０．８ｍＬ／ｍｉｎ；Ｏｍｒｏｎ、日本）を用いて１．５％の卵黄を気化させて３０分間前記箱に注入する過程を通じてマウスが気化された卵黄を吸入し得るようにした（２次チャレンジ）。
【0154】
慢性閉塞性肺疾患誘発動物モデルの製作：図２に示したように、１０％ＤＭＳＯ溶液５０μｌに５μｇのタバコ抽出物（全羅北道井邑市呼吸器毒性試験センター）及び０．２５μｇのＬＰＳを混合した混合液を製造した。その後、前記混合液を実験開始日から３０日又は６０日の間一日に１回ずつ前記準備例１のマウスに鼻腔投与した。ここで、対照群は、生理食塩水のみを鼻腔内投与した群と、１０％のＤＭＳＯ溶液５０μｌに０．２５μｇのＬＰＳのみを混合した溶液を投与した群に設定した。
【0155】
＜実験方法２＞気管支洗浄液の収集
マウスを麻酔させた後、気道に細い管を挿入し、０．２ｍｌの生理食塩水が満たされた注射器を用いてピストン過程を繰り返して気管支洗浄液を収得した。実験にすぐ使用しない場合には、－７０℃で前記過程を通じて収得した気管支洗浄液を保管した。
マウスを麻酔させた後、気道に細い管を挿入し、０．２ｍｌの生理食塩水が満たされた注射器を用いてピストン過程を繰り返して気管支洗浄液を収得した。実験にすぐ使用しない場合には、－７０℃で前記過程を通じて収得した気管支洗浄液を保管した。
【0156】
＜実験方法３＞気管支洗浄液内に存在する炎症細胞の観察
前記実験方法２で収得した気管支洗浄液５０μｌをサイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）に用いられるスライドに入れ、３０分間遠心分離した。その後、ディフ－クイック（Ｄｉｆｆ－Ｑｕｉｋ）染色を行い、顕微鏡を用いて炎症細胞（好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）及び好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ））を観察した。
前記実験方法２で収得した気管支洗浄液５０μｌをサイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）に用いられるスライドに入れ、３０分間遠心分離した。その後、ディフ－クイック（Ｄｉｆｆ－Ｑｕｉｋ）染色を行い、顕微鏡を用いて炎症細胞（好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）及び好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ））を観察した。
【0157】
＜実験方法４＞気管支洗浄液内に存在するサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の測定
前記実験方法２で収得した気管支洗浄液内のサイトカインが存在するレベルは、ＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。ここで、ＴＮＦ－α、ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３それぞれに特異的に製作されたＥＬＩＳＡキットを用いた。
前記実験方法２で収得した気管支洗浄液内のサイトカインが存在するレベルは、ＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。ここで、ＴＮＦ－α、ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３それぞれに特異的に製作されたＥＬＩＳＡキットを用いた。
【0158】
＜実験方法５＞気管支の過敏反応の確認方法
前記実験方法１で製作されたマウスに４５ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ）を腹腔に注射して麻酔させた後、気道を切開して１８ゲージの針を挿入した。その後、前記針をコンピュータと連結された小さなサイズの動物用呼吸器に連結した後、分当たり１５０回の呼吸数でコンピュータシステムを調節した。その後、エアロゾール形態のメタコリン（ｍｅｔｈａｃｈｏｌｉｎｅ）を５．０～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で徐々に増加させながらマウスが吸入し得るようにしながら気道反応を測定してＲｒｓ数値で示した。
前記実験方法１で製作されたマウスに４５ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ）を腹腔に注射して麻酔させた後、気道を切開して１８ゲージの針を挿入した。その後、前記針をコンピュータと連結された小さなサイズの動物用呼吸器に連結した後、分当たり１５０回の呼吸数でコンピュータシステムを調節した。その後、エアロゾール形態のメタコリン（ｍｅｔｈａｃｈｏｌｉｎｅ）を５．０～５０ｍｇ／ｍｌの濃度で徐々に増加させながらマウスが吸入し得るようにしながら気道反応を測定してＲｒｓ数値で示した。
【0159】
＜実験方法６＞肺組織の染色
前記実験方法１で製作されたマウスの組織を摘出して１０％のホルマリン溶液に入れ、２４時間の間反応させてパラフィンブロックを製造した。その後、前記パラフィンブロックを３μｍのサイズに切片化し、スライドに付着させた後、ヘマトキシリン－エオジンＩＨＥ（ｈｅａｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ ＩＨＥ）染色を行い、顕微鏡を通じて観察した。ここで、炎症の程度は、気道及び血管周囲の炎症程度を０～３の点数で示した。
０：炎症細胞がない場合
１：気道及び血管周囲に炎症細胞がたまに観察される場合
２：大部分の気道及び血管周囲が薄い１～５個程度の炎症細胞帯により取り囲まれている場合
３：大部分の気道及び血管周囲が厚い炎症細胞（５個以上）帯により取り囲まれている場合
前記実験方法１で製作されたマウスの組織を摘出して１０％のホルマリン溶液に入れ、２４時間の間反応させてパラフィンブロックを製造した。その後、前記パラフィンブロックを３μｍのサイズに切片化し、スライドに付着させた後、ヘマトキシリン－エオジンＩＨＥ（ｈｅａｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ ＩＨＥ）染色を行い、顕微鏡を通じて観察した。ここで、炎症の程度は、気道及び血管周囲の炎症程度を０～３の点数で示した。
０：炎症細胞がない場合
１：気道及び血管周囲に炎症細胞がたまに観察される場合
２：大部分の気道及び血管周囲が薄い１～５個程度の炎症細胞帯により取り囲まれている場合
３：大部分の気道及び血管周囲が厚い炎症細胞（５個以上）帯により取り囲まれている場合
【0160】
＜実験方法７＞タンパク質の発現レベルの測定方法
前記実験方法１で製作されたマウスの組織を摘出した後、細胞レベルに細かく砕いた。その後、前記細胞からタンパク質分解抑制剤が含まれた細胞溶解バッファーによって細胞溶解物を収得した。前記細胞溶解物を遠心分離してタンパク質を収得した後、前記細胞から得られた同等の量のタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥにそれぞれローディングして電気泳動した。電気泳動が完了した前記ゲルに存在するタンパク質をＰＶＤＦ膜に移した。前記ＰＶＤＦ膜を洗浄した後、ＴＢＳ－Ｔ緩衝液に５％の脱脂粉乳が含まれたブロッキング緩衝液に入れて常温で培養した。その後、３％のＢＳＡが含まれたＴＢＳ－Ｔ緩衝液に１：１，０００希釈された抗体と前記ＰＶＤＦ膜を室温で培養した。その後、ＰＶＤＦ膜をＴＢＳ－Ｔ緩衝液で洗浄し、ＨＲＰが結合したＩｇＧが含まれた希釈液とともに常温で１時間培養した。ＴＢＳ－Ｔ緩衝液を用いて前記ＰＶＤＦ膜を３回洗浄し、ＥＣＬウエスタンブロット検出試薬を用いて視覚化及び定量化した。
前記実験方法１で製作されたマウスの組織を摘出した後、細胞レベルに細かく砕いた。その後、前記細胞からタンパク質分解抑制剤が含まれた細胞溶解バッファーによって細胞溶解物を収得した。前記細胞溶解物を遠心分離してタンパク質を収得した後、前記細胞から得られた同等の量のタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥにそれぞれローディングして電気泳動した。電気泳動が完了した前記ゲルに存在するタンパク質をＰＶＤＦ膜に移した。前記ＰＶＤＦ膜を洗浄した後、ＴＢＳ－Ｔ緩衝液に５％の脱脂粉乳が含まれたブロッキング緩衝液に入れて常温で培養した。その後、３％のＢＳＡが含まれたＴＢＳ－Ｔ緩衝液に１：１，０００希釈された抗体と前記ＰＶＤＦ膜を室温で培養した。その後、ＰＶＤＦ膜をＴＢＳ－Ｔ緩衝液で洗浄し、ＨＲＰが結合したＩｇＧが含まれた希釈液とともに常温で１時間培養した。ＴＢＳ－Ｔ緩衝液を用いて前記ＰＶＤＦ膜を３回洗浄し、ＥＣＬウエスタンブロット検出試薬を用いて視覚化及び定量化した。
【0161】
ここで、前記ウエスタンブロットでは、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）、カスパーゼ－３（ｃａｓｐａｓｅ－３）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ＭＫＰ－１、ｐ－ｃＰＬＡ、ｐ－ｐ３８、ＮＦ－κＢ（ｐ６５）、ＣＫ２α、ＧＡＰＤＨ又はβ－アクチンに特異的な抗体を用いた。
【0162】
＜実験方法８＞ＲＮＡ干渉（ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）の実施
ＭＫＰ－１タンパク質を暗号化するＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）（以下、「ＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡ」という）及び対照ｓｉＲＮＡストランド（ｓｔｒａｎｄｓ）をサンタクルーズ（アメリカ）から購入した。製造社で提供する指針に従いｉｎ ｖｉｖｏ－ジェットポリエチレンイミン（ｉｎ ｖｉｖｏ－ｊｅｔ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｉｍｉｎｅ；ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を用いてマウスにｓｉＲＮＡを伝逹（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）した。具体的に、５％グルコース溶液にＭＫＰ―１ ｓｉＲＮＡを添加させた２００μｌの混合溶液を室温で２０分間反応させた。その後、マウスを犠牲にする２４時間前に尾静脈に注射した。ＭＫＰ―１ ｓｉＲＮＡの干渉に対する効果は、肺組織でＭＫＰ―１タンパク質の発現レベルをウエスタンブロット分析によって確認した。
ＭＫＰ－１タンパク質を暗号化するＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）（以下、「ＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡ」という）及び対照ｓｉＲＮＡストランド（ｓｔｒａｎｄｓ）をサンタクルーズ（アメリカ）から購入した。製造社で提供する指針に従いｉｎ ｖｉｖｏ－ジェットポリエチレンイミン（ｉｎ ｖｉｖｏ－ｊｅｔ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｉｍｉｎｅ；ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を用いてマウスにｓｉＲＮＡを伝逹（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）した。具体的に、５％グルコース溶液にＭＫＰ―１ ｓｉＲＮＡを添加させた２００μｌの混合溶液を室温で２０分間反応させた。その後、マウスを犠牲にする２４時間前に尾静脈に注射した。ＭＫＰ―１ ｓｉＲＮＡの干渉に対する効果は、肺組織でＭＫＰ―１タンパク質の発現レベルをウエスタンブロット分析によって確認した。
【0163】
＜実験方法９＞統計処理
前記記載した実験方法の全ての実験は、最小３回実施し、一グループ当たりマウスは３～５匹を用いた。統計的分析資料は平均標準偏差で表現し、統計的比較はｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡとフィッシャーテスト（Ｆｉｓｈｅｒ ｔｅｓｔ）を用いて行った。各群の間の有意な差は、ｕｎｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ－テストを用いて決定し、Ｐ値の有意レベルは、０．０５未満とした。
前記記載した実験方法の全ての実験は、最小３回実施し、一グループ当たりマウスは３～５匹を用いた。統計的分析資料は平均標準偏差で表現し、統計的比較はｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡとフィッシャーテスト（Ｆｉｓｈｅｒ ｔｅｓｔ）を用いて行った。各群の間の有意な差は、ｕｎｐａｉｒｅｄ Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ ｔ－テストを用いて決定し、Ｐ値の有意レベルは、０．０５未満とした。
【0164】
＜実験結果１＞喘息で気道に流入された炎症細胞抑制効果の確認
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミン（α、δ－ＮＡ－Ｄ－Ｇ）を実験開始日から毎日５０、１００又は２００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与した後、前記実験方法３の方法によって気道に流入された好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）及び好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ）細胞数を測定し、その結果を図３の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。このとき、好中球及び好酸球は、それぞれ２次チャレンジ後１０時間（好中球）又は４８時間（好酸球）で測定した。
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミン（α、δ－ＮＡ－Ｄ－Ｇ）を実験開始日から毎日５０、１００又は２００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与した後、前記実験方法３の方法によって気道に流入された好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）及び好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ）細胞数を測定し、その結果を図３の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。このとき、好中球及び好酸球は、それぞれ２次チャレンジ後１０時間（好中球）又は４８時間（好酸球）で測定した。
【0165】
ここで、前記α、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンは、下記化学式３で表示された通りである：
【0166】
【化15】
【0167】
図３の（Ａ）に示したように、５０～２００μｇ／ｋｇ／日の濃度で製造例３を前記マウスに注入したとき、好中球及び好酸球が気道内に流入されることを非常に効果的に抑制した。特に、製造例３は、好酸球と比較して好中球を５０μｇ／ｋｇ／日の濃度から非常に効果的に抑制した。
【0168】
しかし、図３の（Ｂ）に示したように、α、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを投与した場合には、濃度と関係なく気道に好中球及び好酸球が流入されることを抑制しなかった。
【0169】
前記結果を通じて、本発明による製造例の化合物は、好中球及び好酸球が気道内に流入されることを非常に効果的に抑制して喘息を治療し得ることが分かる。また、製造例の化合物が「Ｄ」体（Ｄ ｆｏｒｍ）である場合には、好中球及び好酸球の気道内流入を抑制し得ないことが分かる。
【0170】
＜実験結果２＞喘息で気道に存在するサイトカインの発現レベル抑制効果の確認
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを２次エアウエイチャレンジ３０分以前に１００、２００、４００又は８００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ２４時間以後に、前記実験方法４に記載した方法によってＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３が存在するレベルを測定し、その結果を図４の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを２次エアウエイチャレンジ３０分以前に１００、２００、４００又は８００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ２４時間以後に、前記実験方法４に記載した方法によってＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３が存在するレベルを測定し、その結果を図４の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
【0171】
図４の（Ａ）に示したように、２００μｇ／ｋｇ／日の濃度で製造例３を投与した時から製造例３の投与によってＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３が存在するレベルが著しく抑制された。
【0172】
しかし、図４の（Ｂ）に示したように、α、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを投与した場合には、濃度に関係なくサイトカインが存在するレベルを抑制しなかった。
【0173】
前記結果を通じて、本発明による製造例の化合物を経口投与する場合、Ｔｈ２サイトカインに該当するＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３が存在するレベルを著しく抑制することによって、好酸球を通じた気道炎症、気管支過敏反応及びＩｇＥ抗体の生産を非常に効果的に抑制し得ることが分かる。また、製造例の化合物が「Ｄ」体である場合には、炎症性サイトカインを抑制し得ないことが分かる。
【0174】
＜実験結果３＞喘息で気管支過敏反応の抑制効果の確認
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを２次エアウエイチャレンジ３０分以前に２００又は４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ４８時間以後に、前記実験方法５に記載した方法で気管支過敏反応を測定し、その結果を図５の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）又はα、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを２次エアウエイチャレンジ３０分以前に２００又は４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ４８時間以後に、前記実験方法５に記載した方法で気管支過敏反応を測定し、その結果を図５の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
【0175】
図５の（Ａ）に示したように、製造例３を２００又は４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与したとき、メタコリンの濃度が増加するにもかかわらずＲｒｓ値が著しく抑制されることが分かる。
【0176】
しかし、図５の（Ｂ）に示したように、α、δＮ－アセチル－Ｄ－グルタミンを投与した場合には、製造例３で現われたＲｒｓが抑制される効果が現われないことを確認した。
【0177】
前記結果を通じて、本発明による製造例の化合物を経口投与する場合、喘息による気管支過敏反応を非常に効果的に抑制し得ることが分かる。また、製造例の化合物が「Ｄ」体である場合には、気管支過敏反応を抑制し得ないことが分かる。
【0178】
＜実験結果４＞喘息で肺組織炎症抑制効果の確認
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）を２次チャレンジ３０分以前に２００又は４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ４８時間以後に、前記実験方法６に記載した方法で肺組織を染色した後、その炎症程度点数を測定し、その結果を図６の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
前記実験方法１で喘息が誘発されたマウスに、製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）を２次チャレンジ３０分以前に２００又は４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で経口投与し、２次チャレンジ４８時間以後に、前記実験方法６に記載した方法で肺組織を染色した後、その炎症程度点数を測定し、その結果を図６の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。
【0179】
図６の（Ａ）及び（Ｂ）に示したように、２次チャレンジで卵黄を投与した群（ＯＶＡ）では、気道周囲に多くの炎症細胞が集まっており、気管支も狭くなって気管支周囲に血管が形成されて炎症点数（ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ）が３であった。しかし、２００μｇ／ｋｇ／日の製造例３を投与した群（ＯＶＡ＋α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ（２００μｇ／ｋｇ／日））及び４００μｇ／ｋｇ／日の製造例３を投与した群（ＯＶＡ＋α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ（４００μｇ／ｋｇ／日））では、炎症程度が著しく抑制されて点数がそれぞれ２点又は１点まで低くなった。
【0180】
前記結果を通じて、本発明による製造例の化合物を経口投与する場合、喘息による肺組織に発生する炎症を非常に効果的に抑制し得ることが分かる。
【0181】
＜実験結果５＞喘息反応抑制と関連された細胞シグナル伝達の確認
＜５－１＞ＭＫＰ－１タンパク質、ｐ３８タンパク質及びｃＰＬＡ２タンパク質の発現及び活性化レベルの確認
＜５－１＞ＭＫＰ－１タンパク質、ｐ３８タンパク質及びｃＰＬＡ２タンパク質の発現及び活性化レベルの確認
【0182】
前記実験方法１で記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）後、１０分及び３０分にＭＫＰ－１、ｐ－ｃＰＬＡ、ｐ－ｐ３８及びＧＡＰＤＨタンパク質が存在するレベルを前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図７に示した。ここで、２００、５００又は１０００μｇ／ｋｇ／日の濃度で製造例３を毎日経口投与した。
【0183】
図７に示したように、喘息が誘導されたマウスの肺組織で２次チャレンジを行った後、１０分後からＭＫＰ－１タンパク質が存在するレベルが増加した。このようなＭＫＰ－１タンパク質の増加は、製造例３の濃度に依存的に一層著しく増加した。一方、ｐ－ｃＰＬＡ及びｐ－ｐ３８タンパク質が存在するレベルは、製造例３の濃度に依存的に減少した。
【0184】
前記結果を通じて、本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質が存在するレベルを増加させ、ｃＰＬＡ及びｐ３８タンパク質のリン酸化を抑制することが分かる。
【0185】
＜５－２＞ＭＫＰ－１抑制によるリン酸化抑制効果の確認
前記＜５－１＞で確認された製造例３のｃＰＬＡ及びｐ３８のリン酸化抑制効果がＭＫＰ―１に依存的であるか否かを確認するために、前記実施例＜５－１＞と同一の条件で、前記実験方法８に記載したようにＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡを処理し、前記実験方法７に記載した方法によってタンパク質が存在するレベルを測定し、その結果を図８に示した。ここで、対照群として前記実験方法８に記載したように、ＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡの代わりに対照ｓｉＲＮＡストランドを処理した。
前記＜５－１＞で確認された製造例３のｃＰＬＡ及びｐ３８のリン酸化抑制効果がＭＫＰ―１に依存的であるか否かを確認するために、前記実施例＜５－１＞と同一の条件で、前記実験方法８に記載したようにＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡを処理し、前記実験方法７に記載した方法によってタンパク質が存在するレベルを測定し、その結果を図８に示した。ここで、対照群として前記実験方法８に記載したように、ＭＫＰ－１ ｓｉＲＮＡの代わりに対照ｓｉＲＮＡストランドを処理した。
【0186】
図８に示したように、ＭＫＰ－１タンパク質は、ｓｉＲＮＡを処理したとき、製造例３を投与したにもかかわらず、ＭＫＰ－１タンパク質が存在するレベルが増加せず、ｃＰＬＡ２及びｐ３８のリン酸化レベルが増加された。
【0187】
前記結果を通じて、本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質の発現レベルを増加させ、また、ｐ３８及びｃＰＬＡ２のリン酸化を非常に効果的に抑制することが分かる。
【0188】
＜５－３＞ＭＫＰ－１タンパク質に依存的なＣＫ２／ＮＦ－ｋＢ活性化抑制有無の確認
本発明の新規化合物がＭＫＰ－１タンパク質がｐ３８のリン酸化を抑制することによって、ＣＫ２αタンパク質がＮＫ－κＢタンパク質をリン酸化して活性化させる機序によって気管支内に炎症が誘発される現象を抑制し得るか否かに対して確認した。
本発明の新規化合物がＭＫＰ－１タンパク質がｐ３８のリン酸化を抑制することによって、ＣＫ２αタンパク質がＮＫ－κＢタンパク質をリン酸化して活性化させる機序によって気管支内に炎症が誘発される現象を抑制し得るか否かに対して確認した。
【0189】
具体的に、前記実験方法１に記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）し、１時間が経った後に肺を摘出して、前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図９の（Ａ）に示した。また、ＮＫ－κＢに依存的なサイトカインに該当するＴＮＦ－αが存在するレベルを前記実験方法４に記載した方法によってＥＬＩＳＡを行い、その結果を図９の（Ｂ）に示した。ここで、４００μｇ／ｋｇ／日の濃度で製造例３を毎日経口投与した。
【0190】
図９の（Ａ）及び（Ｂ）に示したように、卵黄注射によってＣＫ２αタンパク質が存在するレベルが増加した。これによって、ＮＦ－ｋＢタンパク質とＴＮＦ－αが存在するレベルも著しく増加した（図９の（Ａ）及び（Ｂ）の左側で二番目コラム）。しかし、製造例３を投与した場合、ＣＫ２αタンパク質が存在するレベルが減少した。これによって、ＮＦ－ｋＢ及びＴＮＦ－αが存在するレベルが減少した（図９の（Ａ）及び（Ｂ）の左側で５番目コラム）。このように、ＣＫ２α、ＮＦ－κＢ及びＴＮＦ－αが存在するレベルを減少させる製造例３の効果は、ＭＫＰ－１に特異的なｓｉＲＮＡを処理したときには現れなかった。
【0191】
前記結果を通じて、本発明による新規化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質によってＣＫ２αタンパク質の発現レベルを抑制し、これによって、ＮＦ－κＢ及びＴＮＦ－αが存在するレベルを非常に効果的に抑制することによって、呼吸器疾患を非常に効果的に治療し得ることが分かる。
【0192】
＜５－４＞ＣＫ２αタンパク質とｐ３８nの上下位関係の確認
前記実験方法１に記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）し、１時間又は２時間が経った後に肺を摘出して、前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図１０に示した。ここで、ｐ３８抑制剤であるＳＢ２０２１９０を毎日投与した。
前記実験方法１に記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）し、１時間又は２時間が経った後に肺を摘出して、前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図１０に示した。ここで、ｐ３８抑制剤であるＳＢ２０２１９０を毎日投与した。
【0193】
図１０に示したように、ｐ３８抑制剤であるＳＢ２０２１９０を投与した場合に、２次チャレンジを行って１時間及び２時間が経った後に全てＣＫ２αタンパク質が存在するレベルが減少した。
【0194】
前記結果を通じて、ＣＫ２αタンパク質は、ｐ３８の上位に存在するタンパク質であることが分かる。
【0195】
＜５－５＞ＣＫ２αタンパク質の抑制によるＮＦ－κＢ活性化抑制効果の確認
前記実験方法１に記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）し、３０分又は６０分が経った後に肺を摘出して、前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図１１の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。また、ＮＫ－κＢに依存的なサイトカインに該当するＴＮＦ－αが存在するレベルを前記実験方法４に記載した方法によってＥＬＩＳＡを行い、その結果を図１１の（Ｂ）に示した。ここで、ＣＫ２αタンパク質の抑制剤であるＴＢＢｔを毎日投与した。
前記実験方法１に記載した方法によって２次チャレンジ（卵黄注射）し、３０分又は６０分が経った後に肺を摘出して、前記実験方法７に記載した方法によって測定し、その結果を図１１の（Ａ）及び（Ｂ）に示した。また、ＮＫ－κＢに依存的なサイトカインに該当するＴＮＦ－αが存在するレベルを前記実験方法４に記載した方法によってＥＬＩＳＡを行い、その結果を図１１の（Ｂ）に示した。ここで、ＣＫ２αタンパク質の抑制剤であるＴＢＢｔを毎日投与した。
【0196】
図１１の（Ａ）及び（Ｂ）に示したように、ＣＫ２αタンパク質の抑制剤を投与する場合、ＮＦ－κＢタンパク質が存在するレベルが３０分及び６０分で減少した。また、ＮＦ－κＢにより調節されるＴＮＦ－αタンパク質が存在するレベルも減少した。
【0197】
前記結果を通じて、本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質の活性化を誘導することによって、ｐ３８／ＣＫ２α／ＮＦ－κＢ順序からなる細胞シグナル伝達を遮断して呼吸器疾患で発生する炎症反応を非常に効果的に抑制し得ることが分かる。
【0198】
＜５－６＞ＭＫＰ－１タンパク質の抑制による喘息抑制効果消滅の確認
前記＜５－２＞に記載した方法によってＭＫＰ－１に特異的なｓｉＲＮＡを処理し、前記実験結果１～３に記載した方法と同一に炎症細胞数、サイトカイン発現レベル、気管支内過敏反応程度及び肺組織の炎症程度を確認し、その結果を図１２～１５に示した。
前記＜５－２＞に記載した方法によってＭＫＰ－１に特異的なｓｉＲＮＡを処理し、前記実験結果１～３に記載した方法と同一に炎症細胞数、サイトカイン発現レベル、気管支内過敏反応程度及び肺組織の炎症程度を確認し、その結果を図１２～１５に示した。
【0199】
図１２～１５に示したように、製造例３を投与した場合には、好中球及び好酸球の細胞数が減少し、サイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３）の発現レベルが減少し、肺組織の炎症程度が抑制された。しかし、製造例３に追加でＭＫＰ－１に特異的なｓｉＲＮＡを処理した場合には、減少した好中球及び好酸球の細胞数が増加し、サイトカインの発現レベルも増加し、肺組織の炎症緩和効果も消えた。
【0200】
前記結果を通じて、本発明による新規な化合物の喘息抑制効果は、ＭＫＰ－１タンパク質の発現レベルを増加させることによって誘導されることが分かる。
【0201】
整理すると、図１６に示したように、本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質の発現レベルを増加させることによって、ｐ３８タンパク質の活性と、ＰＬＡ２タンパク質の活性を抑制し、ｐ３８／ＣＫ２α／ＮＦ－κＢ順序によって進行される細胞シグナル伝達を通じて発現されるサイトカイン（ＴＮＦ－α、ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３）の発現レベルを抑制し、エイコサノイドによって誘導される炎症反応を抑制することによって、気管支内に発生する炎症反応を非常に効果的に抑制し得る。
【0202】
＜実験結果６＞慢性閉塞性肺疾患で増加するタンパク質の発現レベル抑制効果の確認
前記実験方法１に記載した方法によってマウスで慢性閉塞性肺疾患（ＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＯＰＤ）を３０日間誘導しながら、２５０μｇ／ｋｇ／日の製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）を後半１５日間経口投与した群（３０）；又はＣＯＰＤを６０日間誘導しながら２５０μｇ／ｋｇ／日の製造例３を後半３０日間経口投与した群（６０）で、前記実験方法７に記載した方法によってウエスタンブロット分析を行い、エラスチン、コラーゲン及びカスパーゼ－３タンパク質が存在するレベルを測定して、その結果を図１７及び図１８に示した。
前記実験方法１に記載した方法によってマウスで慢性閉塞性肺疾患（ＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＯＰＤ）を３０日間誘導しながら、２５０μｇ／ｋｇ／日の製造例３（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）を後半１５日間経口投与した群（３０）；又はＣＯＰＤを６０日間誘導しながら２５０μｇ／ｋｇ／日の製造例３を後半３０日間経口投与した群（６０）で、前記実験方法７に記載した方法によってウエスタンブロット分析を行い、エラスチン、コラーゲン及びカスパーゼ－３タンパク質が存在するレベルを測定して、その結果を図１７及び図１８に示した。
【0203】
図１７及び図１８に示したように、ＣＯＰＤを３０日及び６０日誘導したとき、エラスチン、コラーゲン及びカスパーゼ－３タンパク質が存在するレベルが増加したが（ＣＯＰＤ）、これは製造例３を投与したとき（ＣＯＰＤ＋α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ）、そのタンパク質が存在するレベルが陰性対照群（ｓａｌｉｎｅ）レベルに減少した。
【0204】
前記結果を通じて、本発明による新規な化合物は、経口投与したときにＣＯＰＤで増加するエラスチン、コラーゲン及びカスパーゼ－３タンパク質の発現レベルを著しく抑制するので、喘息だけでなく、ＣＯＰＤを非常に効果的に治療し得ることが分かる。
【0205】
＜実験結果７＞新規化合物の呼吸器内炎症反応抑制効果の確認
前記実験結果１～３に記載した方法と同一に炎症細胞数、サイトカイン発現レベル及び気管支内過敏反応程度を確認し、その結果を図１９～２１に示した。ここで、本発明で製造された他の化合物の同等の効果を確認するために、製造例３の代わり製造例２（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｂｎ）、製造例４（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｅｔ）又は製造例６（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｍｅ）を毎日経口投与した。
前記実験結果１～３に記載した方法と同一に炎症細胞数、サイトカイン発現レベル及び気管支内過敏反応程度を確認し、その結果を図１９～２１に示した。ここで、本発明で製造された他の化合物の同等の効果を確認するために、製造例３の代わり製造例２（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｂｎ）、製造例４（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｅｔ）又は製造例６（α、δ－ＮＡ－Ｌ－Ｇ－Ｍｅ）を毎日経口投与した。
【0206】
図１９～２１に示したように、製造例２、製造例４及び製造例６も製造例３と同様に、好中球及び好酸球の細胞数が減少し、サイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３）の発現レベルが減少し、肺組織で発生する気管支内過敏反応も抑制された。
【0207】
前記結果を通じて、同一の骨格をコアで共有している製造例は、製造例３と同一に呼吸器内炎症反応を非常に効果的に抑制し得ることが分かる。
【0208】
以上、本発明の内容の特定の部分を詳しく説明したが、当業界の通常の知識を有した者において、このような具体的技術は、好ましい実施様態に過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されない点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物によって定義される。
【産業上の利用可能性】
【0209】
本発明による新規な化合物は、ＭＫＰ－１タンパク質の活性化を誘導することによって、ｐ３８／ＣＫ２α／ＮＦ－κＢ順序からなる細胞シグナル伝達を遮断して呼吸器疾患で発生する炎症反応を非常に効果的に抑制する効果を有する。したがって、本発明による前記新規な化合物を経口投与する方式で呼吸器疾患の予防、改善又は治療が可能なので、産業上利用可能性がある。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
