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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-29
(45)【発行日】2024-02-06
(54)【発明の名称】ビタミンＥならびにがん治療用組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4745 20060101AFI20240130BHJP
A61K 31/136 20060101ALI20240130BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240130BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20240130BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240130BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240130BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4745
A61K31/136
A61K47/22
A61K47/20
A61P35/00
A61P43/00 121
【請求項の数】
38
(21)【出願番号】P 2021539137
(86)(22)【出願日】2020-01-06
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-14
(86)【国際出願番号】 US2020012423
(87)【国際公開番号】W WO2020142782
(87)【国際公開日】2020-07-09
【審査請求日】2022-08-09
(31)【優先権主張番号】62/788,332
(32)【優先日】2019-01-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】507264860
【氏名又は名称】ユニバーシティ・オブ・バーモント・アンド・ステイト・アグリカルチュラル・カレッジ
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＶＥＲＭＯＮＴ ＡＮＤ ＳＴＡＴＥ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ
(73)【特許権者】
【識別番号】521292870
【氏名又は名称】アールエス・オンコロジー，エルエルシー
(73)【特許権者】
【識別番号】504018057
【氏名又は名称】ウェイク・フォレスト・ユニバーシティ・ヘルス・サイエンシーズ
【氏名又は名称原語表記】Ｗａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100188374
【弁理士】
【氏名又は名称】一宮 維幸
(72)【発明者】
【氏名】カニフ，ブライアン
(72)【発明者】
【氏名】フライクマン，グレゴリー
(72)【発明者】
【氏名】ネルソン，キンバリー・ジョンソン
【審査官】新熊 忠信
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１０１４４５８０３（ＣＮ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２０１３／０１６４３７９（ＵＳ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００２／１０２４００（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１０／００５５２９（ＷＯ，Ａ２）
【文献】米国特許第０３５５１５５４（ＵＳ，Ａ）
【文献】米国特許第０３９１６０２７（ＵＳ，Ａ）
【文献】国際公開第２００２／０６６０４６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】PLoS ONE，2015年，Vol.10, No.5, e0127310，pp.1-27
【文献】Theranostics，2018年01月01日，Vol.8, No.2，pp.464-485
【文献】Drug Delivery，2017年，Vol.24, No.1，pp.1831-1842
【文献】Oncotarget，2014年，Vol.5, No.22，pp.11365-11380
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４
Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９
Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２
Ａ６１Ｐ ３５／００
Ａ６１Ｐ ４３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
がんの処置における使用のための、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む、組成物。
【請求項2】
ゲンチアナバイオレット（ＧＶ）をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項6】
組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
がん細胞を含む細胞の集団において細胞生存率を低減するための医薬組成物であって、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含み、複数のがん細胞における生存率を低減させるのに十分な量で、がん細胞を含む細胞の集団をＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳと接触させるステップを含む方法において使用されることを特徴とする、医薬組成物。
【請求項9】
ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、複数のがん細胞における生存率の低減において相乗効果を有する、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
接触させるステップが、がん細胞をゲンチアナバイオレット（ＧＶ）と接触させるステップをさらに含む、請求項８または９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
接触させるステップが、チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む組成物を、がん細胞に送達するステップを含む、請求項８から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、組成物の一部として送達され、組成物が、１つまたは複数の薬学的に許容される担体をさらに含んでもよく、組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含んでもよい、請求項８から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
がん細胞が、対象中に存在し、接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶを、対象に投与するステップを含む、請求項８から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
投与するステップが、全身投与を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
全身投与が、腸内投与および非経口投与の１つまたは複数を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
２４時間で投与されるＴＳの量が、１０ｎｇ～５ｇの範囲である、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
２４時間で投与されるＧＶの量が、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項18】
２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、１０ｎｇ～３０ｇの範囲である、請求項１３から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項19】
２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、複数回投与で投与される、請求項１３から１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項20】
２４時間、複数回投与で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの総量が、０．０１ｇ～５００ｇの範囲である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項21】
接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む、請求項８から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項22】
ＧＶを含む組成物と接触させるステップをさらに含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、請求項２１または２２に記載の医薬組成物。
【請求項24】
組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項25】
組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、請求項２１から２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項26】
１つまたは複数の組成物が、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項27】
がん細胞が、悪性中皮腫細胞を含む、請求項８から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項28】
がん細胞が、卵巣がん細胞を含む、請求項８から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項29】
対象が、哺乳動物であり、ヒトであってもよい、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項30】
がん細胞が、肺の胸膜、腹膜、心膜、および精巣鞘膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、請求項１３から２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項31】
がん細胞が、卵巣、腹腔、腹腔液、および腹膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、請求項１３から２６、２８、および２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項32】
対象が、胸膜滲出を呈するがんを有する、請求項１３から３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項33】
対象が、卵巣がんを有する、請求項１３から３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項34】
対象が、悪性中皮腫を有する、請求項１３から３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項35】
投与するステップが、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶの、対象の体腔への注入を含む、請求項１３から３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項36】
注入の手段が、カテーテルを使用して対象の腔に組成物を投与するステップを含む、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項37】
投与が、対象に提供される一次処置である、請求項１３から３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項38】
対象が、さらに、外科レジメン、放射線療法レジメン、および化学療法レジメンの１つまたは複数を施される、請求項１３から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【0001】
本出願は、２０１９年１月４日に出願された米国仮特許出願第６２／７８８，３３２号の米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づく利益を主張し、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【0002】
本発明は、部分的に、がんを処置するための組成物および方法に関するものであり、当該方法は、ビタミンＥを含む組成物の投与を含む。
【背景技術】
【0003】
様々ながんのための処置は、がんを有する対象において、がん細胞を死滅させる薬剤の投与を含むことができる。現在のがん処置は、がん細胞を死滅させ、がん患者に安全に投与することができる、比較的少ない化合物または薬剤に限定されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
本発明の一態様によると、がん細胞を含む細胞の集団において細胞生存率を低減するための方法が提供され、当該方法は、複数のがん細胞における生存率の統計的に有意な低減に十分な条件下および期間、がん細胞を含む細胞集団をチオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、方法はまた、がん細胞を含む細胞集団を提供することを含む。特定の実施形態では、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳは、複数のがん細胞における生存率の低減において相乗効果を有する。いくつかの実施形態では、接触させるステップは、がん細胞をゲンチアナバイオレット（ＧＶ）と接触させるステップをさらに含む。特定の実施形態では、接触させるステップは、チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む組成物を、がん細胞に送達するステップを含む。いくつかの実施形態では、チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳは、組成物の一部として送達され、組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体をさらに含んでもよく、組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含んでもよい。特定の実施形態では、がん細胞は、対象中に存在し、接触させるステップは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶを、対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、投与するステップは、全身投与を含む。いくつかの実施形態では、全身投与は、腸内投与および非経口投与の１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、２４時間で投与されるＴＳの量は、１０ｎｇ～５ｇの範囲である。いくつかの実施形態では、２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量は、１０ｎｇ～５００ｇの範囲である。いくつかの実施形態では、対象に単回用量で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量は、多くとも３０ｇである。いくつかの実施形態では、ビタミンＥ－ＴＰＧＳは、２４時間当たり１、２、３、４、５、またはそれ以上の回数で投与される。いくつかの実施形態では、２４時間の期間に投与されるＧＶの量は、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、ＴＳ、ビタミンＥ－ＴＰＧＳ、およびＧＶの１つまたは複数の量は、各々独立して、１つまたは複数の２４時間の期間内およびその各々の間で選択される。特定の実施形態では、接触させるステップは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む。特定の実施形態では、接触させるステップは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む。特定の実施形態では、接触させるステップは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む。いくつかの実施形態では、方法はまた、ＧＶを含む組成物と接触させるステップを含む。いくつかの実施形態では、組成物におけるＴＳのモル濃度は、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である。特定の実施形態では、組成物におけるＧＶのモル濃度は、１０ｎＭ～５００μＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の組成物は、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む。いくつかの実施形態では、がん細胞は、悪性中皮腫細胞を含む。特定の実施形態では、がん細胞は、卵巣がん細胞を含む。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物であり、ヒトであってもよい。いくつかの実施形態では、がん細胞は、肺の胸膜、腹膜、心膜、および精巣鞘膜の１つまたは複数において、対象中に位置している。特定の実施形態では、がん細胞は、卵巣、腹腔、腹腔液、および腹膜の１つまたは複数において、対象中に位置している。いくつかの実施形態では、対象は、胸膜（ｐｌｕｒａｌ）滲出を伴うがんを有する。特定の実施形態では、対象は、卵巣がんを有する。特定の実施形態では、対象は、悪性中皮腫を有する。いくつかの実施形態では、本発明の組成物を投与する手段は、対象の体腔への注入を含む。いくつかの実施形態では、注入は、カテーテルを使用して対象の腔に組成物を投与するステップを含むことを意味する。いくつかの実施形態では、投与は、対象に提供される一次処置を含む。いくつかの実施形態では、対象は、さらに、外科レジメン、放射線療法レジメン、および化学療法レジメンの１つまたは複数を施される。ビタミンＥ－ＴＰＧＳは、本明細書ではＶｉｔＥおよびＶｉｔＥ－ＴＰＧＳとも言われる。特定の実施形態では、ビタミンＥは、ビタミンＥ－ＴＰＧＳである。
【0005】
本発明の別の態様によると、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、またはビタミンＥ－ＴＰＧＳのその機能性誘導体を含む組成物が、提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む。いくつかの実施形態では、組成物はまた、ゲンチアナバイオレット（ＧＶ）、またはＧＶのその機能性誘導体を含む。いくつかの実施形態では、組成物はまた、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。特定の実施形態では、組成物におけるＴＳのモル濃度は、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物におけるＧＶまたはＧＶの機能性誘導体のモル濃度は、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳまたはビタミンＥ－ＴＰＧＳの機能性誘導体のモル濃度は、１０ｎＭ～１４０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳまたはビタミンＥ－ＴＰＧＳの機能性誘導体のモル濃度は、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物はまた、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数を含む。ビタミンＥ－ＴＰＧＳは、本明細書ではＶｉｔＥおよびＶｉｔＥ－ＴＰＧＳとも言われる。特定の実施形態では、ビタミンＥは、ビタミンＥ－ＴＰＧＳである。
【図面の簡単な説明】
【0006】
【図1】図１は、ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳにより４８時間処置したＬＰ９およびＨＭ細胞の感受性を評価した、試験の結果を示すグラフである。ＬＰ９細胞は、非腫瘍形成性の不死化中皮腫細胞である。ＨＭ細胞は、悪性中皮腫細胞である。
【図2A】図２Ａは、ＴＳ、または５％のＶｉｔＥ（３３ｍＭ）－ＴＰＧＳ／０．９％のＮａＣｌで希釈したＴＳで処理した、ＬＰ９細胞の感受性を示すグラフを提供する。ＩＣ５０は、ＴＳ単独で、またはＶｉｔＥ－ＴＰＧＳと組み合わせて、計算した。グラフは、生存率、対、Ｌｏｇ［ＴＳ］μＭを示す。
【図2B】図２Ｂは、ＴＳ、または５％のＶｉｔＥ（３３ｍＭ）－ＴＰＧＳ／０．９％のＮａＣｌで希釈したＴＳで処置した、ＨＭ細胞の感受性を示すグラフを提供する。ＩＣ５０は、ＴＳ単独で、またはＶｉｔＥ－ＴＰＧＳと組み合わせて、計算した。グラフは、生存率、対、Ｌｏｇ［ＴＳ］μＭを示す。
【図3】図３は、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍のルシフェラーゼ画像化により評価された腫瘍量を示すヒストグラムを提供する。ＴＳ／ＧＶ処置した動物は、３５ＤＰＩで、対照動物と比較して、約５０％小さい腫瘍を有した。（＊ ｐ＜０．０５、＊＊＊ ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、群間のＴｕｋｅｙ多重比較検定を伴う二元配置ＡＮＯＶＡ。群当たり、Ｎ＝６匹の動物）。
【発明を実施するための形態】
【0007】
がん細胞を、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳ（本明細書でＶｉｔＥおよびＶｉｔＥ－ＴＰＧＳとも言われる）を含む組成物と接触させることが、ＴＳ投与の殺がん細胞の有効性を高めることが今般決定された。がん細胞を、ＶｉｔＥを伴う溶液中のＴＳに接触させることが、ＶｉｔＥの不在下でがん細胞をＴＳと接触させることと比較する場合に、ＴＳの抗がん治療効果を増強することを、ここで同定している。１つまたは複数のがん細胞をＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物と接触させることが、ＴＳの殺がん細胞の効能を向上させることがここで見出されており、これは、がん治療剤としてＴＳの有用性を高める。特定の理論により拘束されるつもりはないが、がん細胞に対するＴＳの向上した活性は、ＶｉｔＥを含む溶液の場合、ＴＳの高い利用可能性に起因し得るので、溶液中のＴＳからのより高い殺がん細胞活性を可能にする。ゆえに、同量のＴＳは、ＶｉｔＥが存在しない場合より、ＶｉｔＥが存在する場合の方が高い殺がん細胞の効能を有することができる。ＶｉｔＥを含む溶液中の場合の向上したＴＳ殺細胞活性の別の利点は、殺がん細胞のより高い効能により、より低用量のＴＳを対象に投与する能力である。ＶｉｔＥ中のＴＳの高い活性は、より低量のＴＳの投与を可能にし、これは、毒性および／または他の望ましくない効果のような副作用を低減することができる。任意でＧＶおよびＴＬＫ－１９９のような別のがん治療用化合物の１つまたは複数を投与することと組み合わせて、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物を投与することは、ＶｉｔＥを含むことのない同じ処置と比較して、ＴＳおよび治療用化合物の殺がん細胞の効果の相乗効果をもたらす。ＴＳおよびＶｉｔＥ ＴＳを含む溶液を投与すること、ならびに、任意で、１つまたは複数の追加のがん治療用化合物をがん細胞および／またはがんを有する対象に投与することは、ＶｉｔＥを含まない溶液で投与されるＴＳの場合に起こるよりも多くのがん細胞死が処置に起因して起こる、相乗的な処置の効果をもたらすことが見出された。本発明の特定の態様は、１つまたは複数のがん細胞を、がんに対する処置方法としてＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物と接触させることを含む。本発明の追加の実施形態は、１つまたは複数のがん細胞をＶｉｔＥ中のＴＳと接触させることを含み、１つまたは複数のがん細胞を、限定されないが、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、または、別のがん治療用化合物のような、別のがん治療用化合物と接触させて、細胞、組織、もしくは対象においてがんを処置することも含む。
【0008】
チオストレプトンは、限定されないが、ブリアマイシン、チアクチン、アラニンアミド、ＨＲ４Ｓ２０３Ｙ１８などを含む、他の名称としても知られている、抗生物質化合物である。本発明の方法および組成物の特定の実施形態で使用されるＶｉｔＥは、ビタミンＥ－ＴＰＧＳであり、これは、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールスクシネートであり、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネートとも言われる。本明細書で使用される場合、用語ＶｉｔＥは、用語ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳと互換的に使用される。他のビタミンＥ化合物または修飾型はまた、本発明の特定の実施形態でのＴＳを含む溶液で利用することができる。ゲンチアナバイオレット（ＧＶ）は、クリスタルバイオレットおよびメチルバイオレットしても知られているが、抗細菌特性、抗真菌特性、抗寄生虫特性（ａｎｔｉ－ｈｅｌｍｉｎｉｔｈｉｃ）、抗トリパノソーマ特性、抗血管新生特性、および抗腫瘍特性を有する、トリフェニルメタン染料である。ＴＬＫ－１９９、化学名：（Ｓ）－エチル２－アミノ－５－（（（Ｒ）－３－（ベンジルチオ）－１－（（（Ｓ）－２－エトキシ－２－オキソ－１－フェニルエチル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－５－オキソペンタノエートはまた、エザチオスタット塩酸塩としても知られている。ＴＬＫ－１９９は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）のような骨髄障害に対する処置として使用されている。
【0009】
本発明は、部分的に、がん細胞を、ＶｉｔＥを含む組成物中のＴＳと接触させて、細胞、組織、および対象におけるがんを処置する方法に関連する。本発明の特定の方法で使用されるいくつかの組成物は、例えばＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物であるが、１つまたは複数の標的化剤または送達剤を含む。本発明の特定の実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物での処置は、１つまたは複数のがん細胞を、１つまたは複数の薬剤と接触させることを含み、接触は、接触させたがん細胞の１つまたは複数の死滅をもたらす。特定の態様では、本発明は、ＴＳおよびＶｉｔＥ、ならびにＧＶ、ＴＬＫ－１９９、標的化剤、およびがん治療用化合物の１つまたは複数を含む組成物を提供する。本発明の特定の態様では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、対象に投与され、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、標的化剤、およびがん治療用化合物の１つまたは複数を含む、１つまたは複数の組成物もまた、対象に投与される。本発明の特定の態様では、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物、およびＴＬＫ－１９９を含む組成物を含む組合せをがん細胞に投与して、がんを処置する。本発明の特定の実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物、ならびに、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む少なくとも１つの組成物の組合せをがん細胞に投与して、がんを処置する。
【0010】
本発明の分子、化合物、組成物、および方法は、がんを有するか、またはがんを有するリスクがあるとみなされる対象を処置するのに使用することができる。ゆえに、本発明の方法および化合物は、細胞および対象においてがんを処置するのに有用である。ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物を使用して処置し得る細胞は、限定されないが、がん細胞を含む。本発明の方法、化合物、または１つまたは複数の組成物を使用して処置されるがん細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏであり得る。ｉｎ ｖｉｖｏ細胞は、対象中に存在する。本明細書で使用される場合、用語「１つまたは複数」とは、細胞に言及して使用される場合、単一の細胞または複数の細胞を意味する。複数の細胞は、その間の全ての整数を含む、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、またはそれ以上の細胞を含む。本発明のいくつかの態様では、１つまたは複数の細胞は、細胞培養において存在するか、または対象中に存在する。複数の細胞は、均一か、または不均質な細胞のセットであり得る。本明細書で使用される場合、均一な複数の細胞とは、目的の１つまたは複数の細胞特性が、複数において、細胞の全てで同様である、複数の細胞を意味する。均一な複数の細胞が、細胞の各々が、同様である、例えばがん細胞であるという、目的の１つまたは複数の特性を有することに基づいて、均一であるとみなすことができるが、細胞は、全く同一である必要はなく、目的の特性以外の特徴または特性が、複数の異なる細胞で異なり得ることは理解されよう。本発明の特定の態様では、複数の細胞は、対象中に存在する。
【0011】
本明細書で使用される場合、対象とは、限定されないが、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、および、非ヒト霊長類、例えばサルを含む、脊椎動物を意味する。本発明の特定の態様では、対象は、家畜動物、野生動物、または農業動物であり得る。ゆえに、本発明は、ヒトおよび非ヒト対象において、疾患または状態を処置するのに使用することができる。例えば、本発明の方法および組成物は、獣医学的適用、ならびに、ヒトの予防および処置レジメンで使用することができる。本発明のいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。本発明のいくつかの実施形態では、対象は、１つまたは複数のがんを有する。いくつかの実施形態では、対象は、胸膜滲出を示すが、本明細書で、胸膜滲出を「呈する」とも言われる。
【0012】
ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、限定されないが、悪性中皮腫、卵巣がん、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頚部がん、咽頭がん、口腔がん、膵がん、腎がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、頭頚部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、消化器がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、末梢神経系（ＰＮＳ）がん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液腺がんを含む、がんの１種または複数種を処置するために、細胞、組織、および／または対象に投与することができる。特定の実施形態では、がん細胞は、卵巣、腹腔、腹腔液、および腹膜の１つまたは複数において、対象中に位置している。本発明の方法および組成物のいくつかの実施形態は、胸膜滲出を呈するがんまたは腫瘍を処置するために使用することができる。
【0013】
ＴＳおよびＶｉｔＥの組成物は、限定されないが、胸膜細胞、腹膜細胞、真皮細胞、胸部組織細胞、卵巣細胞、中皮腫細胞、筋肉細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、臓器細胞、間葉細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン細胞、神経膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ系細胞、骨髄細胞、赤血球系細胞、心筋細胞、肝細胞、星状膠細胞、希突起膠細胞、および脂肪細胞を含む、多くの異なる種類の細胞を処置するために、利用および投与することができる。本発明の特定の態様では、細胞を、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物と接触させることを伴うか、または伴わずに、細胞をＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物と接触させることを含む方法により処置された細胞は、がん細胞であり得、がんは、前述のがん、または他の当該技術分野で公知のがんもしくは新生物のいずれかであり得る。本発明のいくつかの態様では、がんは、悪性中皮腫であり、本発明の特定の実施形態では、がんは、卵巣がんである。
【0014】
本発明の特定の態様では、複数のがん細胞は、空間的に互いに近接するがん細胞を含む腫瘍を含む。本発明のいくつかの態様では、複数の細胞は、空間的に互いに近接していないかもしれず、例えば、これらは、対象中に存在し得るが、対象の２つ以上の異なる空間領域、組織、および／または臓器に空間的に分離し得る。本発明のいくつかの態様では、複数のがん細胞は、原発性がんおよび続発性がん（例えば、転移）の１つもしくは複数；１つもしくは複数の原発性がん；ならびに／または、１つもしくは複数の続発性がんを含む。本明細書で使用される場合、原発性がんは、初期に発生するがんに言及して使用され、続発性がんは、原発性がんから離脱し、対象において異なる組織または臓器に移動し、そこに存在するがん細胞を含む。続発性がん由来のがん細胞は、発生する原発性がんと同じがんの種類であり得る。特定の実施形態では、対象は、２つ以上のがんの種類を有し得る。本発明の特定の実施形態では、がん細胞は、転移性がん細胞である。
【0015】
本発明の方法および組成物が適用され得る対象の非限定例は、１つまたは複数のがんと診断されたか、１つまたは複数のがんを有すると疑いがあるか、または、１つまたは複数のがんを有するリスクがある対象である。本発明の方法は、細胞を、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物と接触させることを伴うか、または伴わずに、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物を投与することを含む方法を使用する処置時に、がんと診断されており、（１）１つまたは複数のがんに対する処置を受けている、（２）１つまたは複数のがんに対する処置を受けたことがある、および／または、（３）１つまたは複数のがんに対する処置を施される可能性がある、対象に適用することができる。
【0016】
本発明のいくつかの態様では、対象は、１つまたは複数のがんを有するか、または発症するリスクがある。本発明のいくつかの態様では、対象は、原発性がんを有するか、または発症するリスクがある。本発明のいくつかの態様では、対象は、続発性がんを有するか、または発症するリスクがある。原発性がんまたは続発性がんを発症するリスクのある対象は、それぞれ原発性がんまたは続発性がんを発症する対照のリスクと比較して、がんを発症する確率が高い。本発明のいくつかの実施形態では、リスクのレベルは、リスクの対照レベルと比較して、統計的に有意であり得る。リスクのある対象は、例えば、遺伝学的異常を有する、対象（その存在が、がんを発症する高い可能性に対する相関関係を有することを示す）；原発性がんに対する処置（例えば、限定されないが、原発性腫瘍の除去）を受けたが、続発性がん、および／もしくは転移および／もしくは別の種類のがんのリスクがあるとみなされる対象；本発明のがん処置以外のがん処置を受けた対象；１つもしくは複数のがんの家族歴および／もしくは個人の既往歴を有する対象；アスベストのような薬剤、化学毒性、もしくは活性に曝露する対象；ならびに／または、がんに対して以前処置して、明らかに寛解している対象を含むことができる。
【0017】
ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物を対象に投与することも伴うか、または伴わずに、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物を対象に投与することを含む処置の有効性を決定し、対照値と比較することができる。対照値は、所定値であり得、様々な形態を取ることができる。対照値は、中央値または平均値のような単一のカットオフ値であり得る。対照値は、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物を対象に投与することも伴うか、または伴わずに、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物で対象を処置していない、細胞の群またはがんを有する個体の群のような、比較群に基づいて確立することができる。別の比較群は、がんの既往を有する対象の群、およびこのような既往を有さない対象の群であり得る。所定値は、選択される特定の集団に依存する。したがって、選択される所定値は、個体または細胞が入る分類を考慮し得る。適切な範囲および分類は、当業者により通常の実験だけで選択することができる。本明細書で使用される場合、「効果的」および「有効性」とは、がんを有するが、本発明の同じ方法での組成物で処置されない対照と比較して、本発明の方法で処置される場合のがん細胞死が統計的に有意に高いことを意味する。本発明の方法を使用して、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物を対象に投与することも伴うか、または伴わずに、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物で処置した対象における細胞死のレベルは、同じ治療用組合せで処置していない対照対象と比較することができ、有効性とは、死滅するがん細胞の数が統計的に有意に増加することを意味する。いくつかの実施形態では、本発明の処置の結果、死滅する細胞の数は、ゼロより大きく、本発明の特定の実施形態では、本発明の処置の結果、死滅する細胞の数は、本発明の方法においてＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物で処置しない対照で死滅する、がん細胞の数の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、５０、１００、１０００、１０，０００倍超である。
【0018】
本発明による対照が、所定値に加えて、実験材料で並列試験される材料のサンプルであり得ることは理解されよう。例は、実験サンプルで並列試験される製造を通して生成される、対照集団由来のサンプルまたは対照サンプルを含み；また、対照は、限定されないが、本発明の処置を含む、がん処置の前、間、または後の対象由来のサンプルであり得る。
【0019】
処置
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置した」、または「処置すること」とは、がんに対して使用される場合、対象ががんを発症する可能性を低減する予防的処置を言うことができ、また、がんを除去もしくは改善する、がんがより進行する（例えば、転移する、拡散する、拡大するなど）ことを防ぐ、および／または、療法を伴わない進行と比較して、がんの進行を緩徐にするために、対象ががんを発症した後の処置を言うこともできる。
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置した」、または「処置すること」とは、がんに対して使用される場合、対象ががんを発症する可能性を低減する予防的処置を言うことができ、また、がんを除去もしくは改善する、がんがより進行する（例えば、転移する、拡散する、拡大するなど）ことを防ぐ、および／または、療法を伴わない進行と比較して、がんの進行を緩徐にするために、対象ががんを発症した後の処置を言うこともできる。
【0020】
本発明の特定の実施形態では、がん細胞を、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数と接触させることも伴うか、または伴わずに、がん細胞をＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物と接触させることは、ＴＳおよびＶｉｔＥ組成物と接触させない細胞に対して、がん細胞の死滅の可能性を高める。
【0021】
投与戦略
ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、単独で、または、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別の治療剤、標的化剤、および標識化剤の１つまたは複数と組み合わせて、投与することができる。ＴＳおよびＶｉｔＥは、単一の医薬組成物で投与されるが、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別のがん治療用化合物、標的化剤、および標識化剤のような他の薬剤は、１つまたは複数の別個の組成物で投与することができる。ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、がんの位置、投与の所望のタイミング、対象およびがんの状態などのような因子に依存する、単一の投与手段を使用して、または２回以上の投与手段を使用して、対象に投与することができる。本発明のいくつかの態様では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別の治療剤、標的化剤、および標識化剤を含む組成物とは別個の組成物であり、２つ以上の異なる組成物は、その投与が部分的にまたは完全に重複するレジメンを使用して、同時に投与することができるか、または順次投与することができる。本発明のいくつかの態様では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９の２つまたは３つが、同時に投与することができ、本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９の２つまたは３つが、投与時に、異なる組成物に存在することは理解されよう。非限定例では、本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、およびＴＬＫ－１９９は、１つの医薬組成物に存在し、共に対象に投与され、ＧＶは、同時に、または、対象に投与されるＶｉｔＥ中のＴＳおよびＴＬＫ－１９９と異なる時間のいずれかで送達される、異なる医薬組成物に存在する。ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９を投与する相乗効果は、単一組成物での投与を必要としない。別の非限定例では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、およびＴＬＫ－１９９は、同じ医薬組成物で提供され、対象に共に投与され、ＧＶは、処置の一部として対象に投与されない。
ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、単独で、または、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別の治療剤、標的化剤、および標識化剤の１つまたは複数と組み合わせて、投与することができる。ＴＳおよびＶｉｔＥは、単一の医薬組成物で投与されるが、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別のがん治療用化合物、標的化剤、および標識化剤のような他の薬剤は、１つまたは複数の別個の組成物で投与することができる。ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、がんの位置、投与の所望のタイミング、対象およびがんの状態などのような因子に依存する、単一の投与手段を使用して、または２回以上の投与手段を使用して、対象に投与することができる。本発明のいくつかの態様では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、別の治療剤、標的化剤、および標識化剤を含む組成物とは別個の組成物であり、２つ以上の異なる組成物は、その投与が部分的にまたは完全に重複するレジメンを使用して、同時に投与することができるか、または順次投与することができる。本発明のいくつかの態様では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９の２つまたは３つが、同時に投与することができ、本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９の２つまたは３つが、投与時に、異なる組成物に存在することは理解されよう。非限定例では、本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、およびＴＬＫ－１９９は、１つの医薬組成物に存在し、共に対象に投与され、ＧＶは、同時に、または、対象に投与されるＶｉｔＥ中のＴＳおよびＴＬＫ－１９９と異なる時間のいずれかで送達される、異なる医薬組成物に存在する。ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、およびＴＬＫ－１９９を投与する相乗効果は、単一組成物での投与を必要としない。別の非限定例では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、およびＴＬＫ－１９９は、同じ医薬組成物で提供され、対象に共に投与され、ＧＶは、処置の一部として対象に投与されない。
【0022】
本発明の処置方法のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳは、１つまたは複数の他の治療剤および処置も投与される、がんを有する対象に投与される。ゆえに、例えば、ＶｉｔＥ中のＴＳの投与は、化学療法剤とともに行うことができ、化学療法剤の殺がん細胞の効能を向上することができる。化学療法剤の非限定例は、タキサン、アントラサイクリン、白金系薬物、代謝拮抗薬、塩基類似体、ヌクレオシド類似体、ヌクレオチド類似体、抗葉酸薬、メトトレキセート、アルカノイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、サイトキサン、エベロリムス、およびメトホルミンである。本発明の特定の態様では、本発明の方法および組成物でのＶｉｔＥ中のＴＳは、標的化剤および標識化剤のような他の分子とともに提供され、本発明の処置方法で使用される。標的化剤または標識化剤は、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、または別のがん治療用化合物と結合することができ、限定されないが、共有結合を介するような当該技術分野に公知の手段を使用して本発明の処置方法に含まれる。本発明のいくつかの態様では、標的化剤または標識化剤は、製造される際にＴＳに組み込まれるか、または通常の化学的な製造方法を使用して、製造後に添加することができる。
【0023】
本発明のいくつかの態様で有用な標的化剤は、真皮細胞、卵巣組織細胞、胸膜細胞、腹膜細胞、胸部組織細胞、筋肉細胞、幹細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、臓器細胞、間葉細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン細胞、神経膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ系細胞、骨髄細胞、赤血球系細胞、心筋細胞、肝細胞、星状膠細胞、希突起膠細胞、卵母細胞、または脂肪細胞のような、処置される具体的な細胞に対して、ＶｉｔＥ中のＴＳを指向させるか、または指向するのを助ける標的化剤であり、本発明の特定の実施形態では、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を指向させるか、または指向するのを助ける標的化剤である。本発明のいくつかの態様で有用な特定の標的化剤は、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、または別のがん治療用化合物のような化合物を、ミトコンドリアのような細胞小器官に指向させるか、または指向するのを助ける薬剤であり得る。
【0024】
選択する標的化剤は、がんの性質に依存する。いくつかの例では、薬剤の組合せを、１つまたは複数の胸膜領域、肺細胞、腹膜領域、腹膜細胞、真皮細胞、胸部組織細胞、筋肉細胞、循環細胞、結合組織細胞、幹細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、臓器細胞、間葉細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン細胞、神経膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ系細胞、骨髄細胞、赤血球系細胞、心筋細胞、肝細胞、星状膠細胞、希突起膠細胞、卵母細胞、および脂肪細胞に対して標的化することが望ましい可能性がある。当業者は、通常の方法を使用して、本発明の実施形態において、適した標的化剤を認識し、選択および使用することができる。本発明の特定の実施形態で有用な標的化剤の非限定例は、細胞透過性ペプチド、細胞内部移行剤、配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、ペグ化リポソーム、アクアソーム、生物分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、および他の標的化ポリペプチドである。
【0025】
本発明は、いくつかの態様では、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数をミトコンドリアに標的化する薬剤を含む。本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中に存在するＴＳは、ミトコンドリア標的化剤に関連する（例えば、結合する）。ミトコンドリア標的化剤の非限定例は、グラミンジンＳ系ミトコンドリア標的化剤、ミトコンドリア標的化ペプチド、ミトコンドリアに移動するナノ粒子、およびミトコンドリアに対するリポソーム系送達システム、カルニチン－アシルカルニチントランスロカーゼシステムを利用する薬剤、シトクロム、およびリンゴ酸デヒドロゲナーゼである。ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つ、２つまたは３つを細胞のミトコンドリアに標的化する、本発明の方法で使用することができるミトコンドリア標的化剤の非限定例は、トリフェニルホスホニウム（ＴＰＰ）である。本発明のいくつかの実施形態で使用することができる標的化シグナルの追加例は、Ｄｉｅｋｅｒｔ，Ｋ．ら、ＰＮＡＳ（１９９９）第９６巻、第２１号、１１７５２～１１７５７頁；Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １７７７（２００８）１０２８～１０３１頁；Ａｄｄｙａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、（１９９７）第１３９巻、第３号、５８９～５９９頁；Ｄｅｌ Ｇａｉｚｏ，Ｖ．ら、（２００３）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌ、第８０巻、１７０～１８０頁に記載され、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【0026】
標識化剤は、本発明の方法、化合物、および組成物の特定の実施形態で使用して、本発明の方法の実施形態を使用して投与される細胞および組織において、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および他のがん治療用化合物の１つまたは複数の位置を決定することができ、また、投与される処置化合物の細胞、組織、または細胞小器官の位置を評価するのに使用することができる。酵素標識、染料、放射標識、蛍光標識などのような標識化剤と結合および利用する手順は、当該技術分野で周知されている。
【0027】
本発明の組成物、化合物、および方法は、がんを処置するための他の手順と組み合わせた利用により向上することができる。いくつかの例では、処置手順は、医薬および／または外科手術、放射線療法などのような、別の治療剤の投与または処置を含み得る。ゆえに、本発明のいくつかの実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物の投与は、がんを処置するための別の療法を施す前、同時、または後の１つまたは複数で実行する。ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物の投与を含む、本発明の処置方法は、前がん、異形成、腫瘍、転移、寛解、再発などを含む、がんの任意のステージで使用することができる。本発明の方法はまた、対象でのがんの進行を緩徐にするまたは停止するのに成功しなかった、最小限しか成功しなかった、および／またはもはや成功しない、１つまたは複数の他の抗がん薬、化学療法、外科手術、または放射方法で以前処置された対象に対して使用することができる。
【0028】
有効量
ＴＳおよびＶｉｔＥは、がんを処置する有効量で、細胞または対象に投与される。「がんを処置する有効量」とは、所望の生物学的効果を実現するのに必要または十分な量である。例えば、本発明の方法でのＴＳおよびＶｉｔＥの有効量は、（ｉ）がんの進行を緩慢化または停止すること；（ｉｉ）複数のがん細胞を死滅させること；および（ｉｉｉ）がんの１つまたは複数の症状を後退させることの１つまたは複数を行うのに必要な量である。本発明のいくつかの態様によると、有効量は、投与される場合、がんの予防、がんの転移の予防、およびがんの処置の１つまたは複数を含む、対象における所望の治療応答をもたらす、単独での、または、がんに対する別の医薬もしくは処置と組み合わせるかのいずれかでの、ＶｉｔＥ中のＴＳの量である。本発明のいくつかの態様では、所望の生物学的効果は、複数のがん細胞の死滅；がんに起因する症状の改善およびまたは絶対的な除去；例えば、対象が、がんを有していないか、またはがんの存在、レベルもしくは腫瘍サイズ、転移、および重症度の１つまたは複数が、低減することを示す診断検査により示されるように、がんの部分的または完全な抑止の１つまたは複数であり得る。
ＴＳおよびＶｉｔＥは、がんを処置する有効量で、細胞または対象に投与される。「がんを処置する有効量」とは、所望の生物学的効果を実現するのに必要または十分な量である。例えば、本発明の方法でのＴＳおよびＶｉｔＥの有効量は、（ｉ）がんの進行を緩慢化または停止すること；（ｉｉ）複数のがん細胞を死滅させること；および（ｉｉｉ）がんの１つまたは複数の症状を後退させることの１つまたは複数を行うのに必要な量である。本発明のいくつかの態様によると、有効量は、投与される場合、がんの予防、がんの転移の予防、およびがんの処置の１つまたは複数を含む、対象における所望の治療応答をもたらす、単独での、または、がんに対する別の医薬もしくは処置と組み合わせるかのいずれかでの、ＶｉｔＥ中のＴＳの量である。本発明のいくつかの態様では、所望の生物学的効果は、複数のがん細胞の死滅；がんに起因する症状の改善およびまたは絶対的な除去；例えば、対象が、がんを有していないか、またはがんの存在、レベルもしくは腫瘍サイズ、転移、および重症度の１つまたは複数が、低減することを示す診断検査により示されるように、がんの部分的または完全な抑止の１つまたは複数であり得る。
【0029】
典型的には、ＶｉｔＥ中のＴＳの有効量は、盲検研究において対照集団に対する試験集団の有効用量を確立する臨床試験で決定される。いくつかの実施形態では、有効量は、所望の応答をもたらす量、例えば、がんを減少させる；がんを有する細胞および／または対象において、がんの寛解を維持する量である。ゆえに、がんを処置する有効量は、投与される場合、対象において、複数のがん細胞の細胞死を、ＶｉｔＥ中のＴＳを投与せずに対象または組織で起こるがん細胞死のレベルより高いレベルまで、上昇させる量であり得る。がんを処置する場合、本発明の処置への所望の応答は、細胞、組織、および／または対象でのがんの１つまたは複数の症状または生理学的特性を低減または除去することができる。低減または除去は、一時的であり得るか、または永久的であり得る。がんの状態は、公知の方法を使用してモニタリングすることができる。本発明のいくつかの態様では、がんの処置への所望の応答は、がんの発症を遅延または予防すること、がんの進行を緩徐化、遅延、または停止すること、がんの寛解を維持することなどを含み得る。
【0030】
本発明の処置方法でＶｉｔＥを含む溶液で投与されるＴＳの有効量はまた、細胞または対象に対するＶｉｔＥ中のＴＳの投与の生理学的効果、例えば、投与後のがん細胞死の増加、がんの減少などを評価することにより決定することができる。本明細書では、用語「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇ）」および「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ」」とは、１つまたは複数のがん細胞を処置することに言及して使用される場合、１つまたは複数のがん細胞を、ＶｉｔＥ化合物を含む溶液中に存在するＴＳと接触させることを意味する。本発明の処置方法のいくつかの実施形態では、また、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を、ＶｉｔＥ中のＴＳを投与される対象に投与することを含む。本発明の特定の実施形態では、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数は、医薬組成物の一部である。本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳは、医薬組成物の一部である。本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物、ならびに、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療剤の１つまたは複数を含む１つまたは複数の組成物は、１つ、２つ、または３つの異なる医薬組成物の一部として投与することができ、ここで、組成物の各々の投与の手法は、１つまたは複数のがん細胞を、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および／または他のがん治療用化合物と接触させることに適している。本発明の医薬組成物のいくつかの実施形態はまた、薬学的に許容される担体を含む。ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および他のがん治療用化合物の１つまたは複数が、別個の医薬組成物の一部である場合、医薬組成物の各々が、しかし、同じ薬学的に許容される担体を含み得るが、必要がないことは理解されよう。
【0031】
ＶｉｔＥ中のＴＳ、ならびに／または、ＶｉｔＥ中のＴＳとＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療剤の１つもしくは複数との組合せの効能を決定するのに適したアッセイは、当業者に知られており、処置への応答のレベル、ならびに対象に投与される化合物の組合せの量および投与量を測定するのに利用することができる。ＶｉｔＥ中のＴＳの量、ならびに、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療剤の１つもしくは複数の量は、少なくとも部分的に、このような測定に基づいて修正することができる。本発明のがん処置への応答の測定の非限定例は、がん診断検査、病期分類、腫瘍測定、スキャンなどを含む。処置の量は、例えば、投与される医薬組成物の量の増減、投与される医薬組成物の変更、投与経路の変更、投与のタイミングの変更、非限定例として化学療法剤があげられる別の治療剤の投与の変更などの１つまたは複数により変化させ得る。有効量は、処置される特定のがん、処置される対象の年齢および身体状況；がんの病期および重症度、処置の期間、前療法、同時療法、または差し迫った療法（もしあれば）の性質、投与の具体的な経路、ならびに、保健従事者の知識および専門知識内の追加の因子で変化する。例えば、限定することを意図していないが、ＴＳの有効量は、送達させる手法、ならびに、ＧＶまたはＴＬＫ－１９９もまた、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む医薬組成物に含まれるか否かに依存し得る。本発明のいくつかの態様では、がん治療方法は、ＶｉｔＥ中のＴＳの対象への１回または複数回の投与を含み得ること、および、対象に、ＶｉｔＥ中に存在しないＴＳを含む１つまたは複数の追加の組成物を投与し得るが、そうする必要はないことが理解されよう。
【0032】
がんの処置用のＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数の投与を伴うか、または伴わない、ＶｉｔＥ中のＴＳの有効量は、含まれる具体的な化合物、化合物の送達の様式、および処置が、単独で、または別の治療剤もしくは化合物と組み合わせて使用されるか否かに依存して変化し得る。任意の特定の適用のための有効量はまた、処置されるがん、投与される特定の化合物、対象のサイズ、またはがんの重症度のような因子に依存して変化し得る。当業者は、過度の実験を必要とせずに、本発明の特定の化合物の有効量を経験的に決定することができる。化合物効力、相対的生物学的利用能、患者の体重、有害な副作用の重症度、および、処置した対象において実質的に望ましくない毒性を引き起こさず、対象においてがんを処置するのに有効である、効果的な予防的または治療的な処置レジメンを計画し、利用する、投与の好ましい様式のような因子を考慮して、本明細書で提供される教示と組み合わせて、当業者は、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含むか、または含まないＶｉｔＥ中のＴＳを選んで投与することができる。
【0033】
医薬組成物の投与量、ならびに／または、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ならびに／もしくは、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数の投与量は、特に任意の合併症の事象において、個別の健康管理提供者または獣医が調節することができる。
【0034】
いくつかの実施形態では、対象に単回投与で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量は、３０ｇ以下である。いくつかの実施形態では、ビタミンＥ－ＴＰＧＳは、２４時間当たり１、２、３、４、５、またはそれ以上の回数で投与される。いくつかの実施形態では、２４時間の期間に投与されるＧＶの量は、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、ＴＳ、ビタミンＥ－ＴＰＧＳ、およびＧＶの１つまたは複数の量は、各々独立して、１つまたは複数の２４時間の期間内およびその各々の間で選択される。特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、方法はまた、ＧＶを含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、組成物のＴＳのモル濃度は、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である。特定の実施形態では、組成物のＧＶのモル濃度は、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物のビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、１０ｎＭ～１４５ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物のビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物のビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、少なくとも１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００ｎＭ、１０，０００ｎＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、または１６０ｍＭである。本発明の併用処置方法での使用のために、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および／または別のがん治療剤の各々の治療有効量は、独立して、決定され、典型的には、１日または複数日に、１日に１用量または複数用量の投与で、０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．２ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇで変化する。
【0035】
いくつかの実施形態では、２４時間で投与されるＴＳの量は、１０ｎｇ～１ｇの範囲である。いくつかの実施形態では、２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量は、１０ｎｇ～５００ｇの範囲である。いくつかの実施形態では、対象に単回用量で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量は、３０ｇ以下である。いくつかの実施形態では、ビタミンＥ－ＴＰＧＳは、２４時間当たり１、２、３、４、５、またはそれ以上の回数で投与される。いくつかの実施形態では、２４時間の期間に投与されるＧＶの量は、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、ＴＳ、ビタミンＥ－ＴＰＧＳ、およびＧＶの１つまたは複数の量は、各々独立して、１つまたは複数の２４時間の期間内およびその各々の間で選択される。
【0036】
特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。特定の実施形態では、接触させることは、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、方法はまた、ＧＶを含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、組成物のＴＳのモル濃度は、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である。特定の実施形態では、組成物のＧＶのモル濃度は、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物のビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、組成物のビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度は、少なくとも１０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００ｎＭ、１０，０００ｎＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、または１６０ｍＭである。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の組成物は、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む。
【0037】
投与される絶対量は、同時処置、投与回数、ならびに、年齢、身体状況、サイズ、および体重を含む個別の対象のパラメーターを含む、様々な因子に依存する。当業者に周知の因子が存在し、通常の実験だけで対処することができる。いくつかの実施形態では、最大用量、すなわち、信頼できる医学的判定による最高安全用量は、使用することができる。薬物送達の経路（直接投与、対、全身）に依存して、臨床投与に対する薬物の濃度は、変化する。本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ中に可溶化したＴＳを含む組成物でのＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの百分率は、最大で０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％であり得、与えられた範囲内の全ての百分率を含む。本発明のいくつかの態様では、がんを処置するために対象に投与される組成物は、５％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ可溶化ＴＳを含む。本発明の方法のいくつかの実施形態では、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）はまた、対象に投与される１つまたは複数の組成物に含まれる。
【0038】
ＶｉｔＥ中のＴＳの複数回投与もまた、企図される。いくつかの例では、ＶｉｔＥ中のＴＳは、少なくとも毎日、隔日、毎週、隔週、毎月などに、１回、２回、３回、またはそれ以上の回数、対象に投与される。用量は、１日に１回、または１日に２回以上、例えば、２４時間の期間に２回、３回またはそれ以上の回数、投与することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、１日に０回、１回、またはそれ以上の回数、１週間に１、２、３、４、５、６、７日間、対象に投与される。非限定例として、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む本発明の組成物は、１週間で、第１日に１回、第２日に０回、第３日に２回、第４日および第５日に０回、ならびに第６日および第７日に１回、投与することができる。投与スケジュールは、対象の必要性に基づいて決定することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、またはそれ以上の週数の間、その週の１またはそれ以上の週の１日または数日に１回または複数回の頻度で対象に投与される。ＴＳおよびＶｉｔＥを含む本発明の組成物の投与のスケジュールは、規則的または不規則な投与頻度を含むことができ、頻度は、限定されないが、状態の重症度などのようなパラメーターに基づいて決定することができる。
【0039】
本発明の医薬組成物は、単独で、互いを組み合わせて、および／または、他の薬物療法、もしくはがんを有する対象に投与される他の処置レジメンと組み合わせて、投与することができる。本発明の実施形態で使用される医薬組成物は、好ましくは、無菌であり、対象への投与に適した重量または体積の単位において、接触させたがん細胞を死滅させること、および所望の治療応答を生じさせることの１つまたは複数を行うのに有効量のＶｉｔＥ中のＴＳの組合せを含有する。
【0040】
対象に投与されるＴＳおよびＶｉｔＥを含む医薬組成物の投与は、異なるパラメーターにしたがって、特に、使用される投与の様式および対象の状態にしたがって選ぶことができる。他の因子は、所望の期間の処置を含み得る。対象における応答が、適用された初期用量で不十分である場合、より高い用量（または、異なった、より局在化した送達経路による効果的により高い用量）は、患者の許容性が許容する程度まで利用することができる。
【0041】
投与方法
ＶｉｔＥ中のＴＳに対する様々な投与経路が利用可能である。選択される特定の送達様式は、処置される特定の状態および治療効能に必要な投与量に依存する。本発明の方法は、一般的に言うと、臨床的に許容されない有害作用を起こさずに効果的なレベルの処置を引き起こす任意の様式を意味する、医学的に許容される投与の任意の様式を使用して実施することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳの組成物は、経口、経腸、粘膜、経皮、および／または非経口経路を介して投与される。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、胸膜内、腹腔内、および胸骨内の注射または注入技術を含む。他の経路は、限定されないが、鼻（例えば、胃－経鼻管を介して）、皮膚、膣、直腸、および舌下を含む。本発明の送達経路は、髄腔内、心室内、または頭蓋内を含み得る。
ＶｉｔＥ中のＴＳに対する様々な投与経路が利用可能である。選択される特定の送達様式は、処置される特定の状態および治療効能に必要な投与量に依存する。本発明の方法は、一般的に言うと、臨床的に許容されない有害作用を起こさずに効果的なレベルの処置を引き起こす任意の様式を意味する、医学的に許容される投与の任意の様式を使用して実施することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳの組成物は、経口、経腸、粘膜、経皮、および／または非経口経路を介して投与される。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、胸膜内、腹腔内、および胸骨内の注射または注入技術を含む。他の経路は、限定されないが、鼻（例えば、胃－経鼻管を介して）、皮膚、膣、直腸、および舌下を含む。本発明の送達経路は、髄腔内、心室内、または頭蓋内を含み得る。
【0042】
本発明の方法のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物を、細胞および／または対象に投与する手段は、組成物を対象の体腔に注入する、および／または、対象の体腔を組成物で洗浄するために、カテーテルを使用することを含む。本発明の特定の実施形態で使用することができるカテーテルの例は、限定されないが、胸膜内カテーテル、および腹膜内カテーテルを含む。非限定例では、胸膜内カテーテルは、１またはそれ以上の用量のＶｉｔＥ中のＴＳを含む本発明の組成物を、胸膜滲出を呈する対象の胸膜腔に投与するのに使用される。別の非限定例では、卵巣がんを有する対象は、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む本発明の組成物を、腹膜内カテーテルを使用して腹膜腔に投与することができる。
【0043】
本発明のいくつかの実施形態では、ＴＳおよびＶｉｔＥを含む組成物、または、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および／もしくは別のがん治療用化合物を含む１つもしくは複数の組成物は、徐放性マトリックス内に配置し、対象でのマトリックスの配置により投与することができる。本発明のいくつかの態様では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療剤の１つまたは複数は、具体的な細胞、または、非限定例がミトコンドリアである細胞小器官を標的化する送達薬剤でコーティングされたナノ粒子を使用して、細胞および／または対象に投与することができる。
【0044】
ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数は、製剤において投与することができ、これは、薬学的に許容される溶液で投与することができ、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝化剤、保存剤、相溶性担体、補助剤、および任意の他の治療成分を通常、含有することができる。本発明の方法によると、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および他のがん治療用化合物の１つまたは複数は、１つまたは複数の医薬組成物で投与することができる。一般に、医薬組成物は、本発明の化合物、および薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体は、当業者に周知されており、独立して、通常の方法を使用して、選択および利用することができる。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される担体とは、活性成分の生物学的活性の有効性、例えば、がん細胞を死滅させるＶｉｔＥ中のＴＳの能力に干渉しない、非毒性材料を意味する。
【0045】
薬学的に許容される担体は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当該技術分野で周知の他の材料を含むことができる。例示的な薬学的に許容される担体は、米国特許第５，２１１，６５７号に記載され、他は、当業者に知られている。このような調製剤は、塩、緩衝化剤、保存剤、相溶性担体、および任意の他の治療剤を通常、含有することができる。医学的に使用される場合、塩は、薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、都合よく使用して、薬学的に許容されるその塩を調製することができ、本発明の範囲から除外するものではない。このような薬理学的および薬学的に許容される塩は、限定されないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製されるものを含む。また、薬学的に許容される塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩として調製することができる。
【0046】
本発明のいくつかの実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数は、組織に直接的に投与される。いくつかの実施形態では、化合物が投与される組織は、がんが存在するか、または存在するもしくは発生する可能性がある組織である。直接的な組織投与は、対象の組織を、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む溶液で洗浄することにより達成することができる。このような溶液は、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含み得るが、必要はない。洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）手段を使用する投与はまた、洗浄（ｌａｖａｇｅ）とも言われ、溶液が、対象のがん細胞と接触する手法において、ＶｉｔＥ中のＴＳを含有する溶液を対象に流すことにより、ＶｉｔＥ中のＴＳを対象に送達することを含むことができる。対象の組織とＶｉｔＥ中のＴＳとの接触は、列挙した範囲の時間内の各整数を含む、少なくとも０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０、４２０、またはそれ以上の分間のような期間、維持することができる。がん細胞をＶｉｔＥ中のＴＳと接触させることはまた、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物の直接注射、または他の当該技術分野で公知の手段を使用して達成することができる。本発明のいくつかの実施形態では、処置方法は、胸膜内洗浄を使用して、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物を、対象に投与することを含む。本発明の併用処置が、対象の細胞をＶｉｔＥ中のＴＳと接触させることを含み得、また、洗浄手段を使用し、別の手段を使用して対象の細胞をＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、または別のがん治療用化合物の別の１つと接触させて、対象の細胞をＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数と接触させ、その非限定例は、ＩＶ投与、徐放性投与などである。ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物は、１回で投与することができるか、あるいは、複数回投与で投与することができる。１回または複数回で投与する場合、ＶｉｔＥ中のＴＳは、各時間に同じ経路で、または１つもしくは複数の異なる投与経路を使用して投与することができる。例えば、第１回（または最初の数回）の投与は、罹患組織に直接行い、その後は全身に投与してよい。
【0047】
ＶｉｔＥ中のＴＳが全身投与される本発明の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ組成物は、注射による、例えば、ボーラス注射または連続注入による、非経口投与用に製剤化することができる。注射用の製剤は、添加された保存剤を含むか、または含まない、単位剤形、例えば、アンプルまたは多回用量の容器で提示され得る。医薬組成物は、油性または水性ビヒクルにおいて、懸濁剤、溶液、または乳剤などの形態を取り得、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散化剤のような製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有することができる。
【0048】
非経口投与用の調製剤は、無菌の水性もしくは非水性溶液、懸濁剤、または乳剤を含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射用有機エステルである。水性担体は、水、アルコール性／水性溶液、乳剤、または懸濁剤を含み、生理食塩水および緩衝化媒体を含む。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸化リンゲルまたは不揮発性油を含む。静脈内ビヒクルは、液体および栄養補充剤、電解質補充剤（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などを含む。保存剤および他の添加物質はまた、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどのように存在し得る。より低用量は、静脈内投与のような他の形態の投与に起因する。対象における応答が、適用された初期用量で不十分である場合、より高い用量（または、異なった、より局在化した送達経路による効果的により高い用量）は、患者の許容性が許容する程度まで利用することができる。１日当たりの多回用量は、必要に応じて、ＶｉｔＥ中のＴＳの適切な全身または局所のレベルを達成するのに使用することができる。
【0049】
本発明のいくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物、ならびに／または、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療用化合物の１つまたは複数を含む組成物のような、本発明の組成物の投与において使用することができる。薬物送達に対してナノ粒子を使用するための方法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｃｈｏｉ，Ｙ．Ｈ．およびＨａｎ，Ｈ．Ｊ．、Ｐｈａｒｍ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１８）４８：４３～６０頁；Ｏｎｏｕｅ，Ｓ．ら（２０１４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎａｎｏｍｅｄ．９：１０２５～１０３７頁；ならびに、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ａ．ら（２０１１）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、１２月２３日：１２（１）３９～５０頁を参照し、その各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0050】
さらに他の実施形態では、送達ビヒクルは、生体適合性ミクロ粒子または哺乳動物レシピエントへの移植に適したインプラントである。本方法にしたがって有用である例示的な生体分解性インプラントは、多くの出版物に記載されており、例えば、Ｓｏｎｇ，Ｒ．ら、Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ２０１８年：１２ ３１１７～３１４５頁；Ｕｌｅｒｙ，Ｂ．ら、Ｊ Ｐｏｌｙｍ Ｓｃｉ Ｂ Ｐｏｌｙｍ Ｐｈｙｓ．２０１１年６月１５日；４９（１２）：８３２～８６４頁を参照し（その各々は、参照により本明細書に組み込まれる）、それらは、医薬化合物を投与するための生体適合性、生物分解性ポリマーマトリックスを記載する。このような送達手段は、当該技術分野で周知であり、対象において本発明の化合物の持続放出を達成するのに使用することができ、分解するためではなく、むしろ、長い期間にわたる拡散により放出するために選択され得る。
【0051】
非生物分解性および生物分解性の両方のポリマーマトリックスは、限定されないが、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、または別のがん治療用化合物を含む、本発明の治療用化合物を、細胞および／または対象に送達するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、マトリックスは、生物分解性であり得る。マトリックスポリマーは、天然または合成ポリマーであり得る。ポリマーは、一般に約数時間から１年またはそれ以上にわたって放出が望まれる期間に基づいて選択することができる。典型的には、数時間と３～１２か月との間の範囲の期間にわたる放出は、使用することができる。ポリマーは、任意で、水中のその重量の最大で約９０％を吸収することができるヒドロゲルの形態であり、さらに、任意で、多価イオンまたは他のポリマーと架橋されている。
【0052】
本発明の特定の実施形態では、ＶｉｔＥ中のＴＳ、および／または、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、もしくは別のがん治療用化合物の１つまたは複数は、拡散により、またはポリマーマトリックスの分解により、生体分解性インプラントを使用して送達することができる。このような使用のための例示的な合成ポリマーは、当該技術分野で周知されている。生物分解性ポリマーおよび非生物分解性ポリマーは、当該技術分野で公知の方法を使用する本発明の方法で使用される、治療用化合物の送達で使用することができる。生体分解性ヒドロゲルのような生体接着性ポリマーはまた、本発明のがん処置方法の実施形態に対して、ＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および／または別のがん治療用化合物の１つまたは複数を送達するのに使用することができる。追加の適した送達システムは、時限放出性、遅延放出性、または持続放出性の送達システムを含み得る。このようなシステムは、１つまたは複数のＶｉｔＥ中のＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、および別のがん治療剤の反復投与を避けることができ、これは、対象および健康管理提供者に対する利便性を高める。多くの種類の放出送達システムは、利用することができ、当業者に周知されている。加えて、ポンプ系のハードウエア送達システムは、使用することができ、そのいくつかは、移植に適合している。
【0053】
長期的な持続放出インプラントの使用は、対象の予防的な処置、および再発がんを発症するリスクのある対象に特に適している。長期的な放出とは、本明細書で使用される場合、インプラントが、少なくとも３０日、６０日、９０日、またはそれより長く、治療レベルの有効成分を送達するために構築および配置されることを意味する。長期的な持続放出インプラントは、当業者に周知であり、上述の放出システムのいくつかを含む。
【0054】
本発明の治療方法の実施形態での使用のための治療用製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の程度の純度を有するＴＳ、ＧＶ、および／またはＴＬＫ－１９９化合物を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第２１版（２００６）］と混合することにより、保管のために調製することができる。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、利用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、限定されないが、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸のような、緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む、抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンのような、タンパク質；ポリビニルピロリドンのような、親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンのような、アミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、他の炭水化物；ＥＤＴＡのような、キレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールのような、糖類；ナトリウムのような、塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような、非イオン性界面活性剤を含む。本発明の方法の一実施形態での１つまたは複数のがん治療用化合物の送達のための製剤の非限定例は、限定されないが、ＴＳ、ＧＶ、ＴＬＫ－１９９、ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、ＤＭＳＯ、生理食塩水、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ－ＥＬ、デキストロース、および塩化ナトリウムの１つまたは複数を含む。
【0055】
効能の決定およびアッセイ
本発明の特定の態様は、がんの処置において、ＶｉｔＥを含む溶液中のＴＳの効能を評価する方法を含む。このような方法は、ＶｉｔＥ中のＴＳと接触させたがん試験細胞での効果を、ＶｉｔＥ中のＴＳと接触させていない実質的に類似した対照のがん細胞の状態と比較することを含み得る。限定されないが、がん細胞死の高い可能性のような所望の効果の１つまたは複数での変化は、がんの処置に対するＶｉｔＥ中のＴＳの有効性を示す。本発明のいくつかの実施形態では、アッセイ方法は、対象から生物学的なサンプルを得ること、サンプルをＶｉｔＥ中のＴＳと接触させること、および、細胞の応答（例えば、細胞死の高い可能性など）を評価することを含み得る。試験細胞の応答は、対照のがん細胞と比較することができる。本明細書で使用される場合、生物学的なサンプルは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの生物学的なサンプルであり得るか、またはｉｎ ｖｉｖｏで検出される（例えば、得られた）サンプルであり得る。本明細書で使用される場合、生物学的なサンプルは、細胞サンプル、組織サンプル、血液サンプル、体液サンプル、細胞内サンプルなどであり得る。生物学的なサンプルは、細胞、組織、または細胞小器官を含み得、限定されないが、真皮細胞、胸膜腔由来の細胞、腹膜腔由来の細胞、卵巣組織細胞、胸部組織細胞、筋肉細胞、循環細胞、結合組織細胞、幹細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、臓器細胞、間葉細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン細胞、神経膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ系細胞、骨髄細胞、赤血球系細胞、心筋細胞、肝細胞、星状膠細胞、希突起膠細胞、卵母細胞、および脂肪細胞のような細胞を含み得る。本発明のいくつかの実施形態では、生物学的なサンプルは、１つまたは複数のがん細胞を含み得る。
本発明の特定の態様は、がんの処置において、ＶｉｔＥを含む溶液中のＴＳの効能を評価する方法を含む。このような方法は、ＶｉｔＥ中のＴＳと接触させたがん試験細胞での効果を、ＶｉｔＥ中のＴＳと接触させていない実質的に類似した対照のがん細胞の状態と比較することを含み得る。限定されないが、がん細胞死の高い可能性のような所望の効果の１つまたは複数での変化は、がんの処置に対するＶｉｔＥ中のＴＳの有効性を示す。本発明のいくつかの実施形態では、アッセイ方法は、対象から生物学的なサンプルを得ること、サンプルをＶｉｔＥ中のＴＳと接触させること、および、細胞の応答（例えば、細胞死の高い可能性など）を評価することを含み得る。試験細胞の応答は、対照のがん細胞と比較することができる。本明細書で使用される場合、生物学的なサンプルは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの生物学的なサンプルであり得るか、またはｉｎ ｖｉｖｏで検出される（例えば、得られた）サンプルであり得る。本明細書で使用される場合、生物学的なサンプルは、細胞サンプル、組織サンプル、血液サンプル、体液サンプル、細胞内サンプルなどであり得る。生物学的なサンプルは、細胞、組織、または細胞小器官を含み得、限定されないが、真皮細胞、胸膜腔由来の細胞、腹膜腔由来の細胞、卵巣組織細胞、胸部組織細胞、筋肉細胞、循環細胞、結合組織細胞、幹細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、臓器細胞、間葉細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、ニューロン細胞、神経膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ系細胞、骨髄細胞、赤血球系細胞、心筋細胞、肝細胞、星状膠細胞、希突起膠細胞、卵母細胞、および脂肪細胞のような細胞を含み得る。本発明のいくつかの実施形態では、生物学的なサンプルは、１つまたは複数のがん細胞を含み得る。
【0056】
がんを評価するアッセイは、限定されないが、（１）対象におけるがんの処置において、ＶｉｔＥ中のＴＳを投与することを含む処置の効能を特徴付けること；（２）ＶｉｔＥ中のＴＳを投与すること、ならびに、１つまたは複数の化合物、化学療法剤、放射線処置、外科的処置、および他の処置を投与することを含む、併用療法を評価すること、（３）ＶｉｔＥ中のＴＳの決定した効能の少なくとも一部に基づいて、がんに対する処置を選択すること；ならびに、（４）対象におけるがんの処置の少なくとも一部として、ＶｉｔＥ中のＴＳを対象に投与することを含み得る。ゆえに、対象は、特徴付けることができ、処置レジメンは、モニタリングすることができ、処置は、選択することができ、疾患状態は、本発明の方法の実施形態を使用してより良好に理解することができる。
【0057】
本発明は、いくつかの態様では、ＶｉｔＥ中のＴＳを含む組成物を、がん細胞および／または対象に投与することを含む、処置の効能を決定する、様々なアッセイを含む。細胞、組織、対象、および（例えば、対象由来、培養内などの）サンプルにおいて、本発明の処置方法の効能を決定するのに有用である、本発明の方法は、限定されないが、がん細胞死などを決定する診断アッセイを含む。がんを処置するＶｉｔＥ中のＴＳの効能の評価は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、例えば、細胞培養、細胞サンプル、細胞懸濁液などで行うことができるか、または、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、周知のがん診断評価および追跡方法を使用して生きている対象で行うことができる。
【0058】
当業者に理解される通り、処置の評価はまた、がんの症状または臨床的エンドポイントの評価に基づくことができ、このような評価は、本発明の方法に関連して使用して、がんの状態、および／またはがんに対する本発明の処置の効能を評価することができる。
【0059】
以下の実施例は、本発明の実施の具体的な例を説明するために提供され、本発明の範囲を限定することを意図しない。当業者には明らかなように、本発明は、様々な組成物および方法での適用を見出すであろう。
【実施例】
【0060】
実施例１
試験を実行して、チオストレプトン（ＴＳ）、またはビタミンＥ－ＴＰＧＳ（ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）に希釈したＴＳと接触させた場合、培養の中皮腫（ＬＰ９）および悪性中皮腫（ＨＭ）細胞の細胞生存率の効果を試験した。
試験を実行して、チオストレプトン（ＴＳ）、またはビタミンＥ－ＴＰＧＳ（ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）に希釈したＴＳと接触させた場合、培養の中皮腫（ＬＰ９）および悪性中皮腫（ＨＭ）細胞の細胞生存率の効果を試験した。
【0061】
チオストレプトンは、水溶液に難溶性であるので、当該化合物の臨床使用を制限する。試験を実行して、ＴＳを可溶化する、いくつかの異なる溶液の能力を決定した（実施例４を参照）。結果は、５％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの溶液が、ミリモル濃度にＴＳを可溶化したことを示し、本溶液を、さらなる試験で使用して、ＴＳ活性が本製剤を使用した細胞培養において保持されるか否かを決定した。
【0062】
方法
示された細胞株を、９６ウェルプレートにプレーティングし、終夜吸着させた。翌日、試験化合物を、完全組織培養培地の細胞での複製ウェル内で順次希釈した。ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを、０．９％のＮａＣｌで０．０２５％（ｗ／ｖ）の出発濃度から順次希釈し、ＬＰ９またはＨＭ細胞を添加した（図１）。ＤＭＳＯに溶解したＴＳを、細胞培養培地中で２０μＭの出発濃度まで希釈し、順次希釈したか、または、１．５ｍＭのＴＳ／ＤＭＳＯ／５％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ（３３ｍＭ）／０．９％のＮａＣｌ溶液から２０μＭのＴＳ／０．０６％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの出発濃度まで希釈し、ＬＰ９またはＨＭ細胞について順次希釈した（図２）。細胞を、クリスタルバイオレットで残留細胞を染色することによる細胞生存率の間接的読み取りを使用して細胞数を決定する前の４８時間、試験化合物でインキュベートした。細胞の５０％が生存していない、阻害濃度（ＩＣ５０）を、試験化合物に対して決定した。
示された細胞株を、９６ウェルプレートにプレーティングし、終夜吸着させた。翌日、試験化合物を、完全組織培養培地の細胞での複製ウェル内で順次希釈した。ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを、０．９％のＮａＣｌで０．０２５％（ｗ／ｖ）の出発濃度から順次希釈し、ＬＰ９またはＨＭ細胞を添加した（図１）。ＤＭＳＯに溶解したＴＳを、細胞培養培地中で２０μＭの出発濃度まで希釈し、順次希釈したか、または、１．５ｍＭのＴＳ／ＤＭＳＯ／５％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ（３３ｍＭ）／０．９％のＮａＣｌ溶液から２０μＭのＴＳ／０．０６％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの出発濃度まで希釈し、ＬＰ９またはＨＭ細胞について順次希釈した（図２）。細胞を、クリスタルバイオレットで残留細胞を染色することによる細胞生存率の間接的読み取りを使用して細胞数を決定する前の４８時間、試験化合物でインキュベートした。細胞の５０％が生存していない、阻害濃度（ＩＣ５０）を、試験化合物に対して決定した。
【0063】
結果
ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳは、正常な中皮細胞（ＬＰ９）および悪性中皮腫（ＨＭ）細胞の両方に対して、細胞毒性があるかを決定した（図１）。ＨＭ細胞は、ＬＰ９中皮細胞と比較して、ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳでは高い細胞毒性を示した（ＬＰ９細胞でのＩＣ５０ ０．００１４％、対、ＨＭ細胞でのＩＣ５０ ０．０００６％）。ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳで希釈したＴＳは、ＴＳ単独と比較して、ＬＰ９およびＨＭ細胞に対してより高い細胞毒性があった（図２）。加えて、ＨＭ細胞は、ＬＰ９細胞よりＴＳへの感受性が高かったが、これは、いずれの細胞株においてもＴＳをＶｉｔＥ－ＴＰＧＳと組み合わせた場合に維持されることが一貫して観察された治療ウインドウである。
ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳは、正常な中皮細胞（ＬＰ９）および悪性中皮腫（ＨＭ）細胞の両方に対して、細胞毒性があるかを決定した（図１）。ＨＭ細胞は、ＬＰ９中皮細胞と比較して、ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳでは高い細胞毒性を示した（ＬＰ９細胞でのＩＣ５０ ０．００１４％、対、ＨＭ細胞でのＩＣ５０ ０．０００６％）。ＶｉｔＥ－ＴＰＧＳで希釈したＴＳは、ＴＳ単独と比較して、ＬＰ９およびＨＭ細胞に対してより高い細胞毒性があった（図２）。加えて、ＨＭ細胞は、ＬＰ９細胞よりＴＳへの感受性が高かったが、これは、いずれの細胞株においてもＴＳをＶｉｔＥ－ＴＰＧＳと組み合わせた場合に維持されることが一貫して観察された治療ウインドウである。
【0064】
実施例２
実施例１で概説した試験を、追加の細胞株でも実施する。結果は、実施例１で見られた結果を裏付ける。
実施例１で概説した試験を、追加の細胞株でも実施する。結果は、実施例１で見られた結果を裏付ける。
【0065】
実施例３
マウス実験を実行して、ｉｎ ｖｉｖｏでのＭＭ細胞をＴＳおよびＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの組合せと接触させることにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの悪性中皮腫（ＭＭ）細胞および腫瘍増殖の効果を試験する。
マウス実験を実行して、ｉｎ ｖｉｖｏでのＭＭ細胞をＴＳおよびＶｉｔＥ－ＴＰＧＳの組合せと接触させることにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの悪性中皮腫（ＭＭ）細胞および腫瘍増殖の効果を試験する。
【0066】
実施例４
本試験を実行して、下記に詳述されるように様々な製剤化システムにおいて、試験物質の固有溶解度を決定した。記載した試験では、試験物質は、チオストレプトン（ＴＳ）であった。
本試験を実行して、下記に詳述されるように様々な製剤化システムにおいて、試験物質の固有溶解度を決定した。記載した試験では、試験物質は、チオストレプトン（ＴＳ）であった。
【0067】
方法
本方法は、所望の製剤混合物での２４時間のインキュベーションの後、平衡溶解度を測定した。各製剤混合物での試験物質の溶解度を、所望の溶媒中の試験物質の溶液の注射により得られるＬＣ／ＭＳスペクトルのＡＵＣの、参照規格溶液のＡＵＣに対する比較により測定した。試験を、活性医薬成分（ＡＰＩ）とも言われる、試験物質としてＴＳで実行した。参照溶液は、どの時点でも新たに作製した。次いで、データを計算して、時間の関数として、残留する％試験物質を得た。手順方法は、以下の通りであった：
１）活性医薬成分（ＡＰＩ）の原液は、１０ｍＭで１，４－ジオキサンにおいて調製した。
本方法は、所望の製剤混合物での２４時間のインキュベーションの後、平衡溶解度を測定した。各製剤混合物での試験物質の溶解度を、所望の溶媒中の試験物質の溶液の注射により得られるＬＣ／ＭＳスペクトルのＡＵＣの、参照規格溶液のＡＵＣに対する比較により測定した。試験を、活性医薬成分（ＡＰＩ）とも言われる、試験物質としてＴＳで実行した。参照溶液は、どの時点でも新たに作製した。次いで、データを計算して、時間の関数として、残留する％試験物質を得た。手順方法は、以下の通りであった：
１）活性医薬成分（ＡＰＩ）の原液は、１０ｍＭで１，４－ジオキサンにおいて調製した。
【0068】
２）原料の１９個の２００μｌの部分を、１９個の透明な５００μｌの微小遠心管内に分注し、溶媒を、窒素流により除去した。１９個の管には、１～１９の番号を付けた。
３）原料の５個の２００μｌの部分を、５個の透明な２００μｌの微小遠心管内に分注し、溶媒を、窒素流により除去した；これらの管には、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｓ４、およびＳ５を付け、ＬＣ／ＭＳによる量子化のために保管した。
３）原料の５個の２００μｌの部分を、５個の透明な２００μｌの微小遠心管内に分注し、溶媒を、窒素流により除去した；これらの管には、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｓ４、およびＳ５を付け、ＬＣ／ＭＳによる量子化のために保管した。
【0069】
４）ビヒクルを、共溶媒のためにｗ／ｗ基準で、および塩のためにモル基準で調製した。
５）２００μＬの各ビヒクルを、そのビヒクルに対応する適切な微小遠心管１～１９に導入した。ＡＰＩの最終濃度は、１０ｍＭであった。これらは、試験サンプルであった。
５）２００μＬの各ビヒクルを、そのビヒクルに対応する適切な微小遠心管１～１９に導入した。ＡＰＩの最終濃度は、１０ｍＭであった。これらは、試験サンプルであった。
【0070】
６）サンプル管１～１９を、３０分間超音波処理した後、２４時間撹拌した。
７）容器を、遠心分離し、５０μｌの上清を除去し、ＬＣ／ＭＳ解析のために３５０μｌのアセトニトリルで希釈した。これらを、試験サンプルとした。
７）容器を、遠心分離し、５０μｌの上清を除去し、ＬＣ／ＭＳ解析のために３５０μｌのアセトニトリルで希釈した。これらを、試験サンプルとした。
【0071】
８）微小遠心管Ｓ１～Ｓ５を、２００μｌのアセトニトリルおよび２００μｌの１，４－ジオキサンを管に添加することにより、解析の直前に再構成し、３０分間超音波処理した。これらを、スタンダードとした。
【0072】
９）解析前に、２４個の全ての管を遠心分離した。
１０）サンプル管１～１９から５０μｌの透明な上清を除去し、ＬＣ／ＭＳ解析のために３５０μｌのアセトニトリルで希釈した。
１０）サンプル管１～１９から５０μｌの透明な上清を除去し、ＬＣ／ＭＳ解析のために３５０μｌのアセトニトリルで希釈した。
【0073】
１１）スタンダード管Ｓ１～Ｓ５から１００μｌの透明な上清を除去し、ＬＣ／ＭＳ解析のために３００μｌのアセトニトリルで希釈した。
１２）ＬＣを、以下の設定にしたがって実施した：
ａ）ブランク、ｂ）スタンダード１、ｃ）サンプル１～５、ｄ）スタンダード２、ｅ）サンプル６～１０、ｆ）スタンダード３、ｇ）サンプル１１～１５、ｈ）スタンダード４、ｉ）サンプル１６～１９、ｊ）スタンダード５。
１２）ＬＣを、以下の設定にしたがって実施した：
ａ）ブランク、ｂ）スタンダード１、ｃ）サンプル１～５、ｄ）スタンダード２、ｅ）サンプル６～１０、ｆ）スタンダード３、ｇ）サンプル１１～１５、ｈ）スタンダード４、ｉ）サンプル１６～１９、ｊ）スタンダード５。
【0074】
１３）量子化（Quantization）は、原液からのＡＵＣとの比較に基づき、相対的であった。
結果
スタンダードを、ＬＣ／ＭＳおよび２５４ｎｍでのＵＶスペクトル、蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）にかけ、親ピーク（４５７、Ｍ＋Ｈ）に対する抽出イオンクロマトグラムを統合して、各時点のＡＵＣを得た。各時点について、新たに調製したスタンダードを使用した。このデータを使用して、残留する試験物質の％を計算した（表１に示される）。
結果
スタンダードを、ＬＣ／ＭＳおよび２５４ｎｍでのＵＶスペクトル、蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）にかけ、親ピーク（４５７、Ｍ＋Ｈ）に対する抽出イオンクロマトグラムを統合して、各時点のＡＵＣを得た。各時点について、新たに調製したスタンダードを使用した。このデータを使用して、残留する試験物質の％を計算した（表１に示される）。
【0075】
【表1】
【0076】
考察
試験は、試験物質が、水溶液、ならびに様々な有機溶媒で、かなり低い溶解度を呈したことを示した。試験物質（ＴＳ）は、１，４－ジオキサンおよびクロロホルムに溶けやすいことが見出されたことに加えて、いくつかの良好な賦形剤混合物は、生理食塩水と比較して、相対溶解度が高いことが見出された。３つの最良のものは、以下のように同定された：生理食塩水における３０％でのＣａｐｒｙｏｌ９０、生理食塩水における５％でのＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、生理食塩水における２０％でのＧｅｌｕｃｉｒｅ４４／１４、および生理食塩水における１０％でのＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ。さらなる試験を、ＴＳを含むＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して、細胞株で実行した。また、高い溶解度が、より多くの量のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用することにより（最大２０％の量を使用している）、または生理食塩水中のＴＰＧＳを含む共溶媒を使用することにより、達成可能であったことを見出された。
試験は、試験物質が、水溶液、ならびに様々な有機溶媒で、かなり低い溶解度を呈したことを示した。試験物質（ＴＳ）は、１，４－ジオキサンおよびクロロホルムに溶けやすいことが見出されたことに加えて、いくつかの良好な賦形剤混合物は、生理食塩水と比較して、相対溶解度が高いことが見出された。３つの最良のものは、以下のように同定された：生理食塩水における３０％でのＣａｐｒｙｏｌ９０、生理食塩水における５％でのＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、生理食塩水における２０％でのＧｅｌｕｃｉｒｅ４４／１４、および生理食塩水における１０％でのＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ。さらなる試験を、ＴＳを含むＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して、細胞株で実行した。また、高い溶解度が、より多くの量のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用することにより（最大２０％の量を使用している）、または生理食塩水中のＴＰＧＳを含む共溶媒を使用することにより、達成可能であったことを見出された。
【0077】
実施例５
試験を実行して、中皮腫のマウスモデルにおける賦形剤としてＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して、チオストレプトン（ＴＳ）およびゲンチアナバイオレット（ＧＶ）の週１回の注射の活性を試験した。この実験の第一目標は、ＤＭＳＯのみを有する標準的な製剤と比較して、賦形剤としてＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して週１回の注射で投与した時の、ＴＳ／ＧＶのｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞毒性を決定することであった。加えて、悪性中皮腫（ＭＭ）腫瘍を有する動物および有さない動物において、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ製剤を受ける動物で重量変化をモニタリングして、毒性プロファイルを調査した。
試験を実行して、中皮腫のマウスモデルにおける賦形剤としてＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して、チオストレプトン（ＴＳ）およびゲンチアナバイオレット（ＧＶ）の週１回の注射の活性を試験した。この実験の第一目標は、ＤＭＳＯのみを有する標準的な製剤と比較して、賦形剤としてＶｉｔＥ－ＴＰＧＳを使用して週１回の注射で投与した時の、ＴＳ／ＧＶのｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞毒性を決定することであった。加えて、悪性中皮腫（ＭＭ）腫瘍を有する動物および有さない動物において、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ製剤を受ける動物で重量変化をモニタリングして、毒性プロファイルを調査した。
【0078】
方法
オスのＦＯＸ－Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスを、ＨＭ悪性中皮腫（ＨＭ－Ｌｕｃ）腫瘍細胞を発現する２５０万のルシフェラーゼを含む、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により注射し、腫瘍を２週間、生着させた。動物を、６匹の動物の４群に分けた：
群：
１．１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳビヒクル対照
２．２％のＶｉｔＥ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳビヒクル対照、［１３ｍＭで使用されるＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、注射毎にマウス当たり４ｍｇの送達されたＶｉｔＥ－ＴＰＧＳをもたらす］
３．２０ｍｇ／ｋｇのＴＳ＋２ｍｇ／ｋｇのＧＶ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳ
４．２０ｍｇ／ｋｇのＴＳ＋２ｍｇ／ｋｇのＧＶ／２％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳ
腫瘍の生着の２週間後、腫瘍を、ルシフェリンのｉ．ｐ．注射に続いて、ＩＶＩＳ生動物撮像装置を使用して月曜日毎に撮影した。ビヒクルまたは薬物溶液（２００μＬ）を、４．５週間、火曜日毎にｉ．ｐ．注射した。動物は、トータルで４回の薬物注射を受けた。ビヒクル対照群での著しい体重減少により、動物を、腫瘍注射の４２日後に回収した。
オスのＦＯＸ－Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスを、ＨＭ悪性中皮腫（ＨＭ－Ｌｕｃ）腫瘍細胞を発現する２５０万のルシフェラーゼを含む、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により注射し、腫瘍を２週間、生着させた。動物を、６匹の動物の４群に分けた：
群：
１．１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳビヒクル対照
２．２％のＶｉｔＥ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳビヒクル対照、［１３ｍＭで使用されるＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ、注射毎にマウス当たり４ｍｇの送達されたＶｉｔＥ－ＴＰＧＳをもたらす］
３．２０ｍｇ／ｋｇのＴＳ＋２ｍｇ／ｋｇのＧＶ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳ
４．２０ｍｇ／ｋｇのＴＳ＋２ｍｇ／ｋｇのＧＶ／２％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ／１．５％のＤＭＳＯ／ＰＢＳ
腫瘍の生着の２週間後、腫瘍を、ルシフェリンのｉ．ｐ．注射に続いて、ＩＶＩＳ生動物撮像装置を使用して月曜日毎に撮影した。ビヒクルまたは薬物溶液（２００μＬ）を、４．５週間、火曜日毎にｉ．ｐ．注射した。動物は、トータルで４回の薬物注射を受けた。ビヒクル対照群での著しい体重減少により、動物を、腫瘍注射の４２日後に回収した。
【0079】
結果
注射後日数（ＤＰＩ）１４、２１、２８、および３５でのルシフェリンのｉ．ｐ．注射、および生動物撮像に続いて、動物において腫瘍を可視化した。ＤＰＩ２１、２８、および３５は、試験化合物の１回、２回、または３回の週１回の注射の後の腫瘍サイズに相当する。薬物注射を開始する前（ＤＰＩ１４）では、生動物撮像により評価したように、群間の腫瘍サイズに著しい差はなかった。ＤＭＳＯおよびＶｉｔＥ対照群の両方での腫瘍は、実験の期間にわたって類似した速度で成長した（図３）。腫瘍サイズは、ＶｉｔＥビヒクル対照動物と比較して、第２１日、第２８日、および第３５日にＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥを受けた動物で著しく小さかった。３５ＤＰＩでは、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ動物は、ＤＭＳＯ対照動物と比較して、著しく小さい腫瘍を示し始めた。ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥを受ける動物での腫瘍の増殖は、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯを受ける動物と比較して、より遅い速度で成長したが（ＤＰＩ１４～２８）、これは、二元配置ＡＮＯＶＡ統計解析により、統計的有意差に達しなかった。統計的に有意ではなかったが、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ群の腫瘍は、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ群と比較して、２８ＤＰＩで、約５０％小さく、統計的有意差に達すると予想される動物数が増大した。
注射後日数（ＤＰＩ）１４、２１、２８、および３５でのルシフェリンのｉ．ｐ．注射、および生動物撮像に続いて、動物において腫瘍を可視化した。ＤＰＩ２１、２８、および３５は、試験化合物の１回、２回、または３回の週１回の注射の後の腫瘍サイズに相当する。薬物注射を開始する前（ＤＰＩ１４）では、生動物撮像により評価したように、群間の腫瘍サイズに著しい差はなかった。ＤＭＳＯおよびＶｉｔＥ対照群の両方での腫瘍は、実験の期間にわたって類似した速度で成長した（図３）。腫瘍サイズは、ＶｉｔＥビヒクル対照動物と比較して、第２１日、第２８日、および第３５日にＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥを受けた動物で著しく小さかった。３５ＤＰＩでは、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ動物は、ＤＭＳＯ対照動物と比較して、著しく小さい腫瘍を示し始めた。ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥを受ける動物での腫瘍の増殖は、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯを受ける動物と比較して、より遅い速度で成長したが（ＤＰＩ１４～２８）、これは、二元配置ＡＮＯＶＡ統計解析により、統計的有意差に達しなかった。統計的に有意ではなかったが、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ群の腫瘍は、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ群と比較して、２８ＤＰＩで、約５０％小さく、統計的有意差に達すると予想される動物数が増大した。
【0080】
およそ３５ＤＰＩで、対照群の動物は、動物の身体検査により評価されるように、腫瘍量に屈する徴候（すなわち、黄疸の出現の徴候）、および著しい体重減少（図４）を示し始めた。４１ＤＰＩで、対照群およびＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ群の全ての動物は、著しく体重が減少し、４２ＤＰＩで、実験を終了する必要がある不調の著しい徴候を示した。ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ群の動物は、実験を通して著しい体重減少は示さず、本製剤が、より長期的なＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存試験に好適であることを示した（図４）。
【0081】
動物を、過剰量のイソフルランおよび頚椎脱臼により殺処分した後、臓器（肺、肝臓、腎臓）および残留した腫瘍塊を採取した。液体窒素中での急速凍結か、パラホルムアルデヒド中での固定かまたは細胞培養／腫瘍オルガノイドの増殖のための処理の前に、腫瘍を計量し、（体積を）測定した。
【0082】
ＤＭＳＯ対照群の動物は、目に見える黄疸を有し、多くの対照動物は、本モデルでの侵略的腫瘍増殖を示す、横隔膜への１５～６０％の腫瘍侵襲を有する。全ての群は、腔に血性腹水を伴う少なくとも１匹の動物を有する。肝臓のいくつかの「ばち状（clubbing）」も、全ての群で観察された。対照マウスにおける横隔膜侵襲に関わらず、任意の群に特異的であることが肉眼で観察されず、全ての群での腫瘍量が、最も観察される臨床症状の原因であったことを示唆した。
【0083】
ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯおよびＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ処置動物由来の外科的に切除される腫瘍は、対照と比較して、統計的有意差に達さなかったが、それぞれ、腫瘍塊において２５％および３３％の低減を示した（図５）。この傾向は、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ製剤と比較して、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥ製剤の高い活性を支持する。
【0084】
考察および結論
１．５％のＤＭＳＯ／２％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ溶液中のＴＳ／ＧＶの週１回の投与は、中皮腫の固定時間点の異種移植マウスモデルにおける腫瘍進行を示した。ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥは、腫瘍移植を伴うか、または伴わない動物に、４．５週間にわたって４回投与した場合、限定的な毒性（体重減少、ひどい組織損傷）を示した。これらの結果は、卵巣および中皮腫のマウスモデルを使用する今後のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存試験におけるＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥの使用を支持する。加えて、これらのデータは、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥが、中皮腫のマウスモデルにおいて活性を保持し、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ製剤と比較して、効力が高くなり、標的外の毒性が低くなり、医院において進めるのに適切な製剤であるという、説得力のある証拠を提供する。
１．５％のＤＭＳＯ／２％のＶｉｔＥ－ＴＰＧＳ溶液中のＴＳ／ＧＶの週１回の投与は、中皮腫の固定時間点の異種移植マウスモデルにおける腫瘍進行を示した。ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥは、腫瘍移植を伴うか、または伴わない動物に、４．５週間にわたって４回投与した場合、限定的な毒性（体重減少、ひどい組織損傷）を示した。これらの結果は、卵巣および中皮腫のマウスモデルを使用する今後のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存試験におけるＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥの使用を支持する。加えて、これらのデータは、ＴＳ／ＧＶ／ＶｉｔＥが、中皮腫のマウスモデルにおいて活性を保持し、ＴＳ／ＧＶ／ＤＭＳＯ製剤と比較して、効力が高くなり、標的外の毒性が低くなり、医院において進めるのに適切な製剤であるという、説得力のある証拠を提供する。
【0085】
等価物
本発明のいくつかの実施形態が、本明細書で説明および図示されているが、当業者は、本明細書に記載された、機能を実行するため、ならびに／または、結果および／もしくは利点の１つもしくは複数を得るための様々な他の手段ならびに／または構造を容易に想到し、このような変形および／または修正の各々は、本発明の範囲内にあると考えられる。より一般には、当業者は、本明細書中に記載される全てのパラメーター、寸法、材料および配置が、例示的であると意図されており、実際のパラメーター、寸法、材料および／または配置が、本発明の教示が使用される具体的な適用（複数可）に依存することを容易に理解されよう。当業者は、通常の実験だけを使用して、本明細書に記載された、本発明の具体的な実施形態との多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。したがって、前述の実施形態が、例のみとして提示され、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本発明が、具体的に記載され、請求された以外の方法で実施することができることは理解されるべきである。本発明は、本明細書に記載された、各個別の特徴、システム、物質、材料、および／または方法を対象とする。加えて、２つ以上のこのような特徴、システム、物質、材料、および／または方法のいずれかの組合せは、このような特徴、システム、物質、材料、および／または方法が相互に矛盾しない場合、本発明の範囲内に含まれる。
本発明のいくつかの実施形態が、本明細書で説明および図示されているが、当業者は、本明細書に記載された、機能を実行するため、ならびに／または、結果および／もしくは利点の１つもしくは複数を得るための様々な他の手段ならびに／または構造を容易に想到し、このような変形および／または修正の各々は、本発明の範囲内にあると考えられる。より一般には、当業者は、本明細書中に記載される全てのパラメーター、寸法、材料および配置が、例示的であると意図されており、実際のパラメーター、寸法、材料および／または配置が、本発明の教示が使用される具体的な適用（複数可）に依存することを容易に理解されよう。当業者は、通常の実験だけを使用して、本明細書に記載された、本発明の具体的な実施形態との多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。したがって、前述の実施形態が、例のみとして提示され、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本発明が、具体的に記載され、請求された以外の方法で実施することができることは理解されるべきである。本発明は、本明細書に記載された、各個別の特徴、システム、物質、材料、および／または方法を対象とする。加えて、２つ以上のこのような特徴、システム、物質、材料、および／または方法のいずれかの組合せは、このような特徴、システム、物質、材料、および／または方法が相互に矛盾しない場合、本発明の範囲内に含まれる。
【0086】
全ての定義は、本明細書に定義され、使用される場合、辞書の定義、参照により組み込まれた文献での定義、および／または、定義された用語の通常の意味よりも優先すると理解されるべきである。
【0087】
不定冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、そうでないと明確に示されない限りは、「少なくとも１つ」を意味するものと理解されるべきである。
【0088】
成句「および／または」は、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、そのように結合した要素、すなわち、ある場合においては接合的に存在し、他の場合においては離接的に存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味するものと理解されるべきである。そうでないと明確に示されない限り、具体的に同定されたそれらの要素に関係するか否かに関わらず、「および／または」節により具体的に同定された要素以外の他の要素が任意で存在し得る。
【0089】
本出願で引用または参照される全ての参考文献、特許および特許出願、ならびに出版物は、その全体をここに参照により本明細書に組み込まれる。
発明の態様
［態様１］チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む、組成物。
［態様２］ゲンチアナバイオレット（ＧＶ）をさらに含む、態様１に記載の組成物。
［態様３］ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、態様１または２に記載の組成物。
［態様４］組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、態様１から３のいずれかに記載の組成物。
［態様５］組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、態様２に記載の組成物。
［態様６］組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、態様１から５のいずれかに記載の組成物。
［態様７］薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、態様１から６のいずれかに記載の組成物。
［態様８］がん細胞を含む細胞の集団において細胞生存率を低減するための方法であって、複数のがん細胞における生存率の統計的に有意な低減に十分な条件下および期間、がん細胞を含む細胞の集団をチオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳと接触させるステップを含む、方法。
［態様９］がん細胞を含む細胞の集団を提供するステップをさらに含む、態様８に記載の方法。
［態様１０］ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、複数のがん細胞における生存率の低減において相乗効果を有する、態様８または９に記載の方法。
［態様１１］接触させるステップが、がん細胞をゲンチアナバイオレット（ＧＶ）と接触させるステップをさらに含む、態様８から１０のいずれかに記載の方法。
［態様１２］接触させるステップが、チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む組成物を、がん細胞に送達するステップを含む、態様８から１１のいずれかに記載の方法。
［態様１３］チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、組成物の一部として送達され、組成物が、１つまたは複数の薬学的に許容される担体をさらに含んでもよく、組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含んでもよい、態様８から１２のいずれかに記載の方法。
［態様１４］がん細胞が、対象中に存在し、接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶを、対象に投与するステップを含む、態様８から１３のいずれかに記載の方法。
［態様１５］投与するステップが、全身投与を含む、態様１４に記載の方法。
［態様１６］全身投与が、腸内投与および非経口投与の１つまたは複数を含む、態様１５に記載の方法。
［態様１７］２４時間で投与されるＴＳの量が、１０ｎｇ～５ｇの範囲である、態様１４から１６のいずれかに記載の方法。
［態様１８］２４時間で投与されるＧＶの量が、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である、態様１４から１７のいずれかに記載の方法。
［態様１９］２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、１０ｎｇ～３０ｇの範囲である、態様１４から１８のいずれかに記載の方法。
［態様２０］２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、複数回投与で投与される、態様１４から１９のいずれかに記載の方法。
［態様２１］２４時間、複数回投与で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの総量が、０．０１ｇ～５００ｇの範囲である、態様２０に記載の方法。
［態様２２］接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む、態様８から２１のいずれかに記載の方法。
［態様２３］ＧＶを含む組成物と接触させるステップをさらに含む、態様２２に記載の方法。
［態様２４］組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、態様２２または２３に記載の方法。
［態様２５］組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、態様２３に記載の方法。
［態様２６］組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、態様２２から２５のいずれかに記載の方法。
［態様２７］１つまたは複数の組成物が、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、態様２２から２６のいずれかに記載の方法。
［態様２８］がん細胞が、悪性中皮腫細胞を含む、態様８から２７のいずれかに記載の方法。
［態様２９］がん細胞が、卵巣がん細胞を含む、態様８から２７のいずれかに記載の方法。
［態様３０］対象が、哺乳動物であり、ヒトであってもよい、態様１４に記載の方法。
［態様３１］がん細胞が、肺の胸膜、腹膜、心膜、および精巣鞘膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、態様１４から３０のいずれかに記載の方法。
［態様３２］がん細胞が、卵巣、腹腔、腹腔液、および腹膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、態様１４から２７、２９、および３０のいずれかに記載の方法。
［態様３３］対象が、胸膜滲出を呈するがんを有する、態様１４から３２のいずれかに記載の方法。
［態様３４］対象が、卵巣がんを有する、態様１４から３３のいずれかに記載の方法。
［態様３５］対象が、悪性中皮腫を有する、態様１４から３３のいずれかに記載の方法。
［態様３６］投与するステップが、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶの、対象の体腔への注入を含む、態様１４から３５のいずれかに記載の方法。
［態様３７］注入の手段が、カテーテルを使用して対象の腔に組成物を投与するステップを含む、態様３６に記載の方法。
［態様３６］投与が、対象に提供される一次処置を含む、態様１４から３５のいずれかに記載の方法。
［態様３７］対象が、さらに、外科レジメン、放射線療法レジメン、および化学療法レジメンの１つまたは複数を施される、態様１４から３６のいずれかに記載の方法。
発明の態様
［態様１］チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む、組成物。
［態様２］ゲンチアナバイオレット（ＧＶ）をさらに含む、態様１に記載の組成物。
［態様３］ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含む、態様１または２に記載の組成物。
［態様４］組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、態様１から３のいずれかに記載の組成物。
［態様５］組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、態様２に記載の組成物。
［態様６］組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、態様１から５のいずれかに記載の組成物。
［態様７］薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、態様１から６のいずれかに記載の組成物。
［態様８］がん細胞を含む細胞の集団において細胞生存率を低減するための方法であって、複数のがん細胞における生存率の統計的に有意な低減に十分な条件下および期間、がん細胞を含む細胞の集団をチオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳと接触させるステップを含む、方法。
［態様９］がん細胞を含む細胞の集団を提供するステップをさらに含む、態様８に記載の方法。
［態様１０］ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、複数のがん細胞における生存率の低減において相乗効果を有する、態様８または９に記載の方法。
［態様１１］接触させるステップが、がん細胞をゲンチアナバイオレット（ＧＶ）と接触させるステップをさらに含む、態様８から１０のいずれかに記載の方法。
［態様１２］接触させるステップが、チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む組成物を、がん細胞に送達するステップを含む、態様８から１１のいずれかに記載の方法。
［態様１３］チオストレプトンおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳが、組成物の一部として送達され、組成物が、１つまたは複数の薬学的に許容される担体をさらに含んでもよく、組成物が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をさらに含んでもよい、態様８から１２のいずれかに記載の方法。
［態様１４］がん細胞が、対象中に存在し、接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶを、対象に投与するステップを含む、態様８から１３のいずれかに記載の方法。
［態様１５］投与するステップが、全身投与を含む、態様１４に記載の方法。
［態様１６］全身投与が、腸内投与および非経口投与の１つまたは複数を含む、態様１５に記載の方法。
［態様１７］２４時間で投与されるＴＳの量が、１０ｎｇ～５ｇの範囲である、態様１４から１６のいずれかに記載の方法。
［態様１８］２４時間で投与されるＧＶの量が、１０ｎｇ～２００ｍｇの範囲である、態様１４から１７のいずれかに記載の方法。
［態様１９］２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、１０ｎｇ～３０ｇの範囲である、態様１４から１８のいずれかに記載の方法。
［態様２０］２４時間で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの量が、複数回投与で投与される、態様１４から１９のいずれかに記載の方法。
［態様２１］２４時間、複数回投与で投与されるビタミンＥ－ＴＰＧＳの総量が、０．０１ｇ～５００ｇの範囲である、態様２０に記載の方法。
［態様２２］接触させるステップが、ＴＳおよびビタミンＥ－ＴＰＧＳを含む１つまたは複数の組成物と接触させるステップを含む、態様８から２１のいずれかに記載の方法。
［態様２３］ＧＶを含む組成物と接触させるステップをさらに含む、態様２２に記載の方法。
［態様２４］組成物におけるＴＳのモル濃度が、１０ｎＭ～５０００μＭの範囲である、態様２２または２３に記載の方法。
［態様２５］組成物におけるＧＶのモル濃度が、１０ｎＭ～１０ｍＭの範囲である、態様２３に記載の方法。
［態様２６］組成物におけるビタミンＥ－ＴＰＧＳのモル濃度が、１０ｎＭ～１３２ｍＭの範囲である、態様２２から２５のいずれかに記載の方法。
［態様２７］１つまたは複数の組成物が、薬学的に許容される担体および賦形剤の１つまたは複数をさらに含む、態様２２から２６のいずれかに記載の方法。
［態様２８］がん細胞が、悪性中皮腫細胞を含む、態様８から２７のいずれかに記載の方法。
［態様２９］がん細胞が、卵巣がん細胞を含む、態様８から２７のいずれかに記載の方法。
［態様３０］対象が、哺乳動物であり、ヒトであってもよい、態様１４に記載の方法。
［態様３１］がん細胞が、肺の胸膜、腹膜、心膜、および精巣鞘膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、態様１４から３０のいずれかに記載の方法。
［態様３２］がん細胞が、卵巣、腹腔、腹腔液、および腹膜の１つまたは複数において、対象中に位置している、態様１４から２７、２９、および３０のいずれかに記載の方法。
［態様３３］対象が、胸膜滲出を呈するがんを有する、態様１４から３２のいずれかに記載の方法。
［態様３４］対象が、卵巣がんを有する、態様１４から３３のいずれかに記載の方法。
［態様３５］対象が、悪性中皮腫を有する、態様１４から３３のいずれかに記載の方法。
［態様３６］投与するステップが、チオストレプトン（ＴＳ）およびビタミンＥ－ＴＰＧＳ、ならびに任意でＧＶの、対象の体腔への注入を含む、態様１４から３５のいずれかに記載の方法。
［態様３７］注入の手段が、カテーテルを使用して対象の腔に組成物を投与するステップを含む、態様３６に記載の方法。
［態様３６］投与が、対象に提供される一次処置を含む、態様１４から３５のいずれかに記載の方法。
［態様３７］対象が、さらに、外科レジメン、放射線療法レジメン、および化学療法レジメンの１つまたは複数を施される、態様１４から３６のいずれかに記載の方法。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
