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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-01-29
(45)【発行日】2024-02-06
(54)【発明の名称】ＣＤＫ７を阻害するのに有用な化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 471/04 20060101AFI20240130BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20240130BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240130BHJP
【ＦＩ】
C07D471/04 108A
C07D471/04 CSP
A61K31/5377
A61P35/00
【請求項の数】
22
(21)【出願番号】P 2022572271
(86)(22)【出願日】2021-05-20
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-07
(86)【国際出願番号】 US2021033414
(87)【国際公開番号】W WO2021242602
(87)【国際公開日】2021-12-02
【審査請求日】2022-12-16
(31)【優先権主張番号】20382446.1
(32)【優先日】2020-05-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】フェルナンデス フィゲロア，マリア カルメン
(72)【発明者】
【氏名】ルメラス アマダー，ヴェンセスラオ
(72)【発明者】
【氏名】サンチェス－マルティネス，コンセプシオン
【審査官】宮田 透
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１６／１６０６１７（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１０／０３８４６５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／１４００７６（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ、Ａ６１Ｋ、Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式の化合物：【化1】
Ｘが、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、－ＣＦ２ＣＨ３、若しくは－ＣＦ３であり、
Ｙが、－ＣＨ＝ＣＨ２若しくは－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、
Ｚが、－ＣＨ（ＣＨ３）２若しくは－ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）である）、
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
前記化合物が、【化2】
【請求項3】
前記化合物が、【化3】
【請求項4】
前記化合物が、【化4】
【請求項5】
前記化合物が、【化5】
【請求項6】
前記化合物が、【化6】
【請求項7】
前記化合物が、【化7】
【請求項8】
前記薬学的に許容される塩が、塩酸塩である、請求項１～４又は６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
前記薬学的に許容される塩が、硫酸塩である、請求項１～４又は６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わせて含む、薬学的組成物。
【請求項11】
治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、患者の尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、及び神経膠腫から選択されるがんを治療するための薬学的組成物。
【請求項12】
前記がんが、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項13】
前記がんが、乳がんである、請求項１１又は１２に記載の薬学的組成物。
【請求項14】
前記患者からの生物学的試料が、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの機能喪失変異を含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項15】
前記患者からの生物学的試料が、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの機能喪失変異に対して試験の結果陽性である場合に、前記患者が治療のために選択される、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項16】
療法に使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
【請求項17】
尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫の治療に使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
【請求項18】
前記がんが、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんである、請求項１７に記載の使用のための化合物又は塩。
【請求項19】
前記がんが、乳がんである、請求項１７又は１８に記載の使用のための化合物又は塩。
【請求項20】
前記化合物が、患者からの生物学的試料を使用してインビトロアッセイを実施することによって決定される、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの不活性化変異を有する前記患者に投与される、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその塩。
【請求項21】
尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫を治療するための医薬品の製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項22】
前記がんが、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんからなる群から選択される、請求項２１に記載の使用。【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
サイクリン依存性キナーゼは、がん細胞の増殖及び調節されていない発がん性転写において重要である、主要なクラスのキナーゼである。ＣＤＫ７は、サイクリンＨ及びＭＡＴＩに結合して、細胞周期制御に関与する他のサイクリン活性化キナーゼをリン酸化することによってその機能を果たす三量体サイクリン活性化キナーゼを形成する、サイクリン依存性キナーゼである。この複合体は、細胞周期における２つの後続する相間の特異的な移行を制御する。ＣＤＫ７は、細胞周期の一時的制御と転写活性の両方に関係している。ＣＤＫ７は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのＲｂｐ１サブユニットのリン酸化による転写開始プロセスに関与している。制御されていない細胞増殖及び調節されていない転写はがんの特徴である。ＣＤＫ７の選択的な標的化は、活発な転写及び細胞周期進行を同時に阻害することによって利点を提供し得る。したがって、ＣＤＫ７は、がん、特に攻撃的で治療困難ながんの治療のための有望な標的である。
【0002】
ＣＤＫ７に対するいくつかの低分子阻害剤が文献に報告されている（例えば、ＷＯ２０１５／１５４０２２、ＷＯ２０１６／１４２８５５、ＷＯ２０１６／１６０６１７、ＷＯ２０１６／１９３９３９、及びＷＯ２０１７／０４４８５８を参照されたい）。しかしながら、既知のＣＤＫ７阻害剤は、ＣＤＫ７に特異的ではない可能性があり、がんなどの細胞増殖性障害を効果的に治療するために必要とされるほどにはまだ有用ではない。したがって、細胞増殖性障害を治療するための新しい選択的ＣＤＫ７阻害剤を提供する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【0003】
以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩、並びにその薬学的組成物が本明細書に提供される。この式において、Ｘは、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、－ＣＦ２ＣＨ３又は－ＣＦ３であり得、Ｙは、－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり得、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）であり得る。この式の化合物にはキラル中心が含まれており、ここに示すように、Ｒ－エナンチオマー型及びＳ－エナンチオマー型を提供する。
Ｘ、Ｙ、及びＺが上記のように定義されるＲ－エナンチオマー及びＳ－エナンチオマー、その薬学的に許容される塩、又はその薬学的組成物も本明細書で提供される。
【化1】
及びその薬学的に許容される塩、並びにその薬学的組成物が本明細書に提供される。この式において、Ｘは、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、－ＣＦ２ＣＨ３又は－ＣＦ３であり得、Ｙは、－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり得、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）であり得る。この式の化合物にはキラル中心が含まれており、ここに示すように、Ｒ－エナンチオマー型及びＳ－エナンチオマー型を提供する。
【化2】
Ｘ、Ｙ、及びＺが上記のように定義されるＲ－エナンチオマー及びＳ－エナンチオマー、その薬学的に許容される塩、又はその薬学的組成物も本明細書で提供される。
【0004】
尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫を治療するための、この式の化合物、その薬学的に許容される塩、及びその薬学的組成物を使用する方法も提供される。方法は、治療有効量のこの式の化合物又はその薬学的に許容される塩を、必要とする患者に投与することを含む。この方法はまた、患者からの生物学的試料中のＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの機能喪失変異の存在について試験することと、試料が機能喪失突然変異について陽性であると試験された場合に、治療有効量のこの式の化合物、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することと、を含み得る。本方法は、患者からの生物学的試料がＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子に少なくとも１つの機能喪失突然変異を含むという条件で、治療有効量のこの式の化合物、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを更に又は代替的に含むことができる。本方法は、追加的又は代替的に、患者からの生物学的試料がＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子の少なくとも１つの機能喪失突然変異に対して陽性であると試験された場合に、患者が治療に選択されるという条件で、治療有効量のこの式の化合物、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与すること含むことができる。
【0005】
療法に使用するための、この式の化合物、又はその薬学的に許容される塩も本明細書に提供される。また本明細書には、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫の治療で使用するための、この式の化合物、及びその薬学的に許容される塩が提供される。更なる例について、治療は、患者からの生物学的試料を使用してインビトロアッセイを行うことと、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、及びＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの不活性化変異の存在を決定することと、遺伝子のいずれかにおける少なくとも１つの不活性化変異が存在する場合に、患者に治療有効量のこの式の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することと、を含み得る。
【0006】
尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫の治療のための医薬品の製造における、この式の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用も提供される。この使用は、患者からの生物学的試料を使用してインビトロアッセイを行うことと、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ及びＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの不活性化変異の存在を決定することと、遺伝子のいずれかにおける少なくとも１つの不活性化変異が存在する場合に、患者に、治療有効量の、Ｒ－及びＳ－エナンチオマー型を含む、この式の化合物、又はその塩を投与することと、を含むことができる。
【0007】
説明
新規の選択的ＣＤＫ７阻害剤化合物が本明細書に記載される。これらの新しい化合物は、がん、特に転写が調節されていないがんの強力で効果的な治療に対する必要性に対処し得る。より具体的には、これらの新しい化合物は、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、及び／又は神経膠腫の強力で効果的な治療に対する必要性に対処し得る。
新規の選択的ＣＤＫ７阻害剤化合物が本明細書に記載される。これらの新しい化合物は、がん、特に転写が調節されていないがんの強力で効果的な治療に対する必要性に対処し得る。より具体的には、これらの新しい化合物は、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、及び／又は神経膠腫の強力で効果的な治療に対する必要性に対処し得る。
【0008】
本明細書に記載の化合物は、式（Ｉ）の化合物、
又はその薬学的に許容される塩である。式（Ｉ）において、Ｘは、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、－ＣＦ２ＣＨ３又は－ＣＦ３であり、Ｙは、－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）である。式（Ｉ）の具体例には、Ｘが－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、又は－ＣＦ２ＣＨ３であり、Ｙが－ＣＨ＝ＣＨ２であり、Ｚが－ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物が挙げられる。式（Ｉ）の更なる例には、Ｘが－ＣＦ３であり、Ｙが－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）である化合物が挙げられる。当業者は、式（Ｉ）によって記載されるような化合物、又はその薬学的に許容される塩がキラル中心を含み、その位置が上述の＊で示されることを理解するであろう。当業者はまた、キラル中心のカーン・インゴルド・プレローグ順位則（Ｒ）又は（Ｓ）指定が、キラル中心の周りの置換パターンに応じて変化することを理解するであろう。式Ｉの化合物のキラル中心は、式（ＩＩ）によって示されるＲ－エナンチオマー型及び式（ＩＩＩ）によって示されるＳ－エナンチオマー型を提供する。
Ｘ、Ｙ、及びＺが式（Ｉ）と同様に定義される式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩も本明細書で提供される。
【化3】
又はその薬学的に許容される塩である。式（Ｉ）において、Ｘは、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、－ＣＦ２ＣＨ３又は－ＣＦ３であり、Ｙは、－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）である。式（Ｉ）の具体例には、Ｘが－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨＦＣＨ３、又は－ＣＦ２ＣＨ３であり、Ｙが－ＣＨ＝ＣＨ２であり、Ｚが－ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物が挙げられる。式（Ｉ）の更なる例には、Ｘが－ＣＦ３であり、Ｙが－ＣＨ＝ＣＨ２又は－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、Ｚは－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２ ２Ｈ）である化合物が挙げられる。当業者は、式（Ｉ）によって記載されるような化合物、又はその薬学的に許容される塩がキラル中心を含み、その位置が上述の＊で示されることを理解するであろう。当業者はまた、キラル中心のカーン・インゴルド・プレローグ順位則（Ｒ）又は（Ｓ）指定が、キラル中心の周りの置換パターンに応じて変化することを理解するであろう。式Ｉの化合物のキラル中心は、式（ＩＩ）によって示されるＲ－エナンチオマー型及び式（ＩＩＩ）によって示されるＳ－エナンチオマー型を提供する。
【化4】
Ｘ、Ｙ、及びＺが式（Ｉ）と同様に定義される式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩も本明細書で提供される。
【0009】
特定のエナンチオマーは、キラル試薬で開始するか、又は立体選択的若しくは立体特異的合成技術によって調製され得る。代替的に、単一のエナンチオマーは、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物の合成における任意の好都合な時点で、標準的なキラルクロマトグラフィー又は結晶化技術によって、異なるキラル型の混合物から単離され得る。全ての個々のエナンチオマー、並びにラセミ体を含む式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）の化合物のエナンチオマーの混合物が、本明細書に含まれることが意図される。
【0010】
式（ＩＩ）の化合物の具体例（ＩＵＰＡＣ命名法名を含む）を以下に示す。
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－（１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；及び
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン。
【化5】
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化6】
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化7】
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化8】
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化9】
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－（１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；及び
【化10】
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン。
【0011】
式（ＩＩＩ）の化合物の具体例（ＩＵＰＡＣ命名法名を含む）を以下に示す。
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－（１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；及び
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン。
【化11】
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化12】
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化13】
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化14】
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；
【化15】
１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－（１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン；及び
【化16】
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｓ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン。
【0012】
いくつかの重水素化分子、例えば、Ｙが－Ｃ２Ｈ＝Ｃ２Ｈ２であり、Ｚが－Ｃ２Ｈ（ＣＨ３）（ＣＨ２
２Ｈ）である式（Ｉ）の化合物が本明細書に具体的に記載されている。他の重水素化分子が可能であり、開示された分子において水素が重水素によって置換され得る場合、本明細書に開示されると考えられる。
【0013】
本明細書に記載の化合物は反応して、薬学的に許容される塩を形成し得、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物の薬学的に許容される塩、並びに式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物の具体例が含まれることが意図されている。薬学的に許容される塩及びそれらを調製するための一般的な方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１）、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ １９７７を参照されたい）。有用な薬学的に許容される塩の特定の例には、塩酸塩及び硫酸塩が含まれるが、このリストは排他的であることを意図していない。
【0014】
本明細書に記載の化合物は、概して、幅広い用量範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの投与量は、約１ｍｇ～約２ｇの範囲内に入る。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物又は複数の化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、並びに患者の症状の重症度を含む、関連する状況に照らして、医師によって決定されることが理解されるであろう。
【0015】
本明細書に記載される化合物は、様々な経路によって投与され得る薬学的組成物として製剤化され得る。そのような薬学的組成物及びそれを調製するためのプロセスは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２００５）を参照されたい）。具体的には、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わされ得る。より具体的には、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）によって本明細書に記載される化合物は、薬学的組成物として製剤化され得る。更に、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、１つ以上の他の治療薬と組み合わされ得る。例えば、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、及び任意選択的に１つ以上の追加の治療薬と組み合わせた、がんの治療のための薬学的組成物の構成要素であり得る。本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載される方法で使用することができる。
【0016】
本明細書で使用される場合、「治療すること」（又は「治療する」若しくは「治療」）という用語は、既存の症状、状態、又は障害の進行又は重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、又は回復させることを指す。
【0017】
本明細書で使用される場合、「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には未制御の細胞増殖によって特徴付けられる患者の生理学的状態を指すか、又はこれを説明する。この定義には、良性及び悪性のがんが含まれる。「早期がん」又は「早期腫瘍」は、進行性若しくは転移性でないか、又はステージ０、Ｉ、若しくはＩＩのがんとして分類されるがんを意味する。がんの例としては、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【0018】
本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物を使用して、がんを治療する方法、特に調節されていない転写を伴うがんを治療する方法が提供される。そのような方法の１つは、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物を、必要とする患者に投与することを含む。本明細書に記載の組成物を使用して治療することができるがんの種類としては、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫が挙げられる。より具体的には、がんの種類は、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんであり得る。具体的には、がんは乳がんであり得る。これらの種類のがんは、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子の機能喪失変異と関連し得る。したがって、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子の機能喪失変異は、治療が必要な兆候であり得る。ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子のうちの１つ以上における機能喪失変異は、本明細書に記載の方法のうちの１つ以上による治療が有用であり得ることを示している可能性がある。
【0019】
患者における、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫を治療する別の方法は、患者からの生物学的試料においてＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子のうちのいずれかにおける少なくとも１つの機能喪失変異の存在を試験することと、生物学的試料がＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子のうちの１つ以上に機能喪失変異について陽性であると試験された場合に、患者に治療有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することと、を含む。
【0020】
患者における、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫を治療する更なる方法は、患者からの生物学的試料が、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子において少なくとも１つの機能喪失変異を含有するという条件で、患者に治療有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【0021】
患者における、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫を治療する追加の方法は、患者からの生物学的試料が、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子において少なくとも１つの機能喪失変異について陽性であると試験されたという条件で、患者に治療有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【0022】
本明細書に記載の方法では、生物学的試料は腫瘍試料であり得る。生物学的試料が得られる場合、この試料は、ゲノム／ＤＮＡ配列決定などの当業者に既知である方法を使用して分析され得る。この方法では、本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を最初に投与する前に、試料を患者から得ることができる。
【0023】
本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩はまた、治療に使用するためのものであり、特に調節されていない転写を伴うがんの治療に使用するためのものである。本明細書に記載されるように、調節されていない転写を伴うがんには、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫が挙げられる。より具体的には、がんの種類は、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんであり得る。具体的には、がんは乳がんであり得る。式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、患者からの生物学的試料を使用してインビトロアッセイを実施することによって決定されと、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子に少なくとも１つの不活性化変異を有する患者に投与される。生物学的試料は、腫瘍試料であり得、腫瘍試料は、ゲノム／ＤＮＡ配列決定などの当業者に既知である方法を使用して分析され得る。追加的に、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を最初に投与する前に、試料を患者から得ることができる。本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の治療における使用は、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子に少なくとも１つの不活性化変異を有することによって、患者が治療のために選択されることに基づくことができる。治療に使用される場合、本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～２ｇの用量で患者に投与され得る。
【0024】
本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩はまた、がんの治療用の医薬品の製造で使用され得る。本明細書に記載される医薬品を使用して治療することができるがんとしては、尿路上皮がん、子宮がん、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、肝胆がん、膵臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、血液がん、肉腫、皮膚がん、又は神経膠腫が挙げられる。より具体的には、がんの種類は、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、又は胃がんであり得る。具体的には、がんは乳がんであり得る。本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の医薬品の製造における使用はまた、患者からの生物学的試料を使用してインビトロアッセイを行うステップと、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、及びＲＢ１遺伝子における少なくとも１つの不活性化変異の存在を決定するステップと、遺伝子のいずれかにおける少なくとも１つの不活性化変異が存在する場合に、患者に治療有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップと、を含み得る。これらの用途では、生物学的試料は、腫瘍試料であり得、腫瘍試料は、ゲノム／ＤＮＡ配列決定などの当業者に既知である方法を使用して分析され得る。追加的に、これらの使用において、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を最初に投与する前に、試料を患者から得ることができる。これらの使用において、本明細書に記載される式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の治療における使用は、ＡＲＩＤ１Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、又はＲＢ１遺伝子に少なくとも１つの不活性化変異を有することによって、患者が治療のために選択されることに基づくことができる。また、これらの使用において、本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～２ｇの用量で患者に投与され得る。
【0025】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）化合物、又はその薬学的に許容される塩は、当該技術分野において既知の様々な手順、並びに以下の調製物及び実施例によって調製され得る。記載される経路の各々についての特定の合成ステップは、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）化合物、又はその薬学的に許容される塩を調製するために、異なる様式で、又は他のスキームからのステップと併せて、組み合わされ得る。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、及び結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。試薬及び出発材料は、当業者であれば容易に入手可能なものである。
【0026】
個々の異性体及びエナンチオマーは、例えば、選択的結晶化技術又はキラルクロマトグラフィーなどの方法によって、本明細書に記載の化合物の合成における任意の好都合な時点において、当業者により分離又は分割され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、及びＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）。
【0027】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）、及び式（ＩＩＩ）によって記載される化合物の合成に有用な中間体及びプロセスは、この記載に含まれることが意図されている。
【0028】
追加的に、本明細書に記載の特定の中間体は、１つ以上の保護基を含み得る。可変保護基は、実施される特定の反応条件及び特定の変換に応じて、出現ごとに同じ又は異なり得る。保護及び脱保護条件は、当業者に周知であり、文献（例えば、“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｂｙ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照されたい）に記載されている。
【0029】
以下の調製及び実施例は、本明細書に記載の方法及び化合物を例示するために提示される。
【0030】
調製物及び実施例
特定の略語は、次のように定義される：「１Ｈ ＮＭＲ」は、１Ｈ－核磁気共鳴を指し、「ｅｑ」は当量指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＮＣＳ」は、Ｎ－クロロスクシンイミドを指し、「ＮＩＳ」はＮ－ヨードスクシンイミドを指し、「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指し、「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し、「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指し、「２－ＭｅＴＨＦ」は、２－メチルテトラヒドロフランを指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ＵＶ」は紫外線を指し、「ＲＰ－ＬＣ／ＭＳ」は、逆相液体クロマトグラフィー質量分析法を指し、「ＥＳ／ＭＳ」は、エレクトロスプレー質量分析法を指し、「ＤＭＥＡ」はジメチルエタノールアミンを指し、「ＤＭＡＰ」はジメチルアミノピリジンを指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し、「ｅ．ｅ．」はエナンチオマー過剰を指し、「ｍｉｎ」は分を指し、「ｈ」は時間を指し、「ＡＴＰ」はアデノシン三リン酸を指し、「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し、「ＨＥＰＥＳ」は、（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）を指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＡＴＣＣ」は、アメリカンタイプカルチャーコレクションを指し、「ＲＴ」は室温を指し、「Ｒｔ」は保持時間を指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指し、「ＲＮＡａｓｅ」はリボヌクレアーゼを指し、「Ｈｉｓ」はヒスチジンを指す。
特定の略語は、次のように定義される：「１Ｈ ＮＭＲ」は、１Ｈ－核磁気共鳴を指し、「ｅｑ」は当量指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＮＣＳ」は、Ｎ－クロロスクシンイミドを指し、「ＮＩＳ」はＮ－ヨードスクシンイミドを指し、「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指し、「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し、「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指し、「２－ＭｅＴＨＦ」は、２－メチルテトラヒドロフランを指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ＵＶ」は紫外線を指し、「ＲＰ－ＬＣ／ＭＳ」は、逆相液体クロマトグラフィー質量分析法を指し、「ＥＳ／ＭＳ」は、エレクトロスプレー質量分析法を指し、「ＤＭＥＡ」はジメチルエタノールアミンを指し、「ＤＭＡＰ」はジメチルアミノピリジンを指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し、「ｅ．ｅ．」はエナンチオマー過剰を指し、「ｍｉｎ」は分を指し、「ｈ」は時間を指し、「ＡＴＰ」はアデノシン三リン酸を指し、「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し、「ＨＥＰＥＳ」は、（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）を指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＡＴＣＣ」は、アメリカンタイプカルチャーコレクションを指し、「ＲＴ」は室温を指し、「Ｒｔ」は保持時間を指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指し、「ＲＮＡａｓｅ」はリボヌクレアーゼを指し、「Ｈｉｓ」はヒスチジンを指す。
【0031】
【化17】
スキーム１は、化合物３の合成を示す。市販のキラルヒドロキシメチルモルホリン１は、適切な塩基を使用して ｐ－トルエンスルホネート２に変換され得る。次に、スルホネート２を、市販の４－アミノピペリジンによる求核置換によって置換して、キラルＮ－保護モルホリノピペリジン第一級アミン３が得られ得る。
【0032】
【化18】
スキーム２は、化合物８の合成を示す。ピリジルメタンイミン５は、市販のジフルオロエチルピリジン４を当該技術分野で周知の金属触媒（例えば、Ｐｄ）カップリング条件下でジフェニルメタンイミンで処理することにより合成され得る。イミン５は酸性条件下で脱保護され、２－アミノピリジン６が得られ得る。塩素の位置選択的付加は、好適な塩素化剤を使用してクロロピリジン７を供給することによって達成され得る。２－アミノピリジン７からのイミダゾピリジン８の合成は、環状縮合、転位、及び酸化的環化が挙げられるが、これらに限定されない、当業者に既知の様々な条件下で行われ得る。
【0033】
【化19】
スキーム３は、式Ａの化合物の合成を示す。イミダゾピリジン９のヨウ素化は、適切なヨウ素含有試薬（例えば、ＮＩＳ、Ｉ２）の処理により達成され、３－ヨードイミダゾピリジン１０を供給し得る。３－ヨードイミダゾピリジン１０のその後のカップリングは、イソプロペニルイミダゾピリジン１１を提供するための金属触媒（例えば、Ｐｄ、Ｎｉ）反応を含む、当業者に周知の様々な条件下で達成され得る。イソプロピルイミダゾピリジン１２は、Ｈ２ガス雰囲気下でＰｄ／Ｃを含むがこれに限定されない還元条件を使用して、イソプロペニルイミダゾピリジン１１から合成され得る。化合物１２の塩化アリールは、４－アミノピペリジン３で置換されて、アミノイミダゾピリジン１３が得られ得る。Ｎ－保護モルホリン１３の脱保護は、適切な強酸で処理して二級アミン１４を得ることによって達成され得る。式Ａのアクリルアミドは、二級アミン１４を塩基及び適切な酸塩化物で処理することによって形成され得る。
【0034】
【化20】
スキーム４は、式Ａ１の化合物の合成を示す。ヘテロアリールエノールエーテル１６は、適切なスズ試薬及び金属触媒作用を使用して、ヘテロアリールクロリド１５から合成され得る。エノールエーテル１６を適切な強酸水溶液で処理すると、ヘテロアリールケトン１７をもたらす。後続のメタノール誘導体１８への還元は、極性非プロトン性溶媒中の金属水素化物、水素化ホウ素塩、又はジボランなどの一連の還元剤を使用してもたらされ得る。二級アルコール１８は、ＤＡＳＴ、Ｄｅｏｘｏｆｌｕｏｒ、ＸｔａｌＦｌｕｏｒなどの適切なフッ素化試薬を使用してフッ化ベンジル１９に変換され得る。次いで、式Ａ１は、本質的にスキーム３に記載されるように調製され得る。
【0035】
【化21】
スキーム５は、式Ａ２の化合物の合成を示す。重水素化イソプロピルイミダゾピリジン２２は、高温で重水素の加圧雰囲気下で遷移金属触媒作用を使用して、イソプロペニルイミダゾピリジン２１から調製され得る。ヘテロアリールクロリド２２は、本質的にスキーム３に記載されているように、Ｎ－保護４－アミノピペリジンによる求核置換によって置換され、適切な強酸を使用して脱保護されて二級アミンになり得る。ピペリジン２４は、基本的にスキーム１に記載されているように、Ｎ－保護モルホリノスルホネート２で置換され、基本的にスキーム３に記載されているように、式Ａ２まで用いられ得る。
【0036】
【化22】
スキーム６は、本質的にスキーム３に記載されているように行われ得る式Ａ３の合成を示す。
【0037】
【化23】
スキーム７は、式Ａ４の化合物の合成を示す。２８の脱保護及びその後のＮ保護モルホリノスルホネート２による置換は、基本的にスキーム５に記載されているように行われ得る。エノールエーテルの付加、それに続く加水分解及び二級アルコール３３への還元は、基本的にスキーム４に記載されているように行われ得る。イソプロペニルイミダゾピリジン３３の還元は、基本的にスキーム３に記載されているように行われ得る。Ｎ－保護モルホリノ１８の脱保護及びアクリルアミド式Ａ４の形成は、基本的にスキーム３に記載されているように行われ得る。
【0038】
調製物１
Ｎ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニルメタンイミン
ジフェニルメタンイミン（９．５ｇ、５２ｍｍｏｌ）、（ｒａｃ）－２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル（４．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（１８．５ｇ、５７ｍｍｏｌ）を、トルエン（１７５ｍＬ）中の２－ブロモ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン（１０ｇ、４４ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．９８ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２でパージし、１００℃で加熱する。１６時間後、珪藻土のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄する。減圧下で溶媒を除去して、茶色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～３０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、Ｎ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニル－メタンイミンを得る。この調製の後、８．２ｇ（収率４９％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３（Ｍ＋Ｈ）。
Ｎ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニルメタンイミン
【化24】
ジフェニルメタンイミン（９．５ｇ、５２ｍｍｏｌ）、（ｒａｃ）－２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル（４．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（１８．５ｇ、５７ｍｍｏｌ）を、トルエン（１７５ｍＬ）中の２－ブロモ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン（１０ｇ、４４ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．９８ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２でパージし、１００℃で加熱する。１６時間後、珪藻土のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄する。減圧下で溶媒を除去して、茶色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～３０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、Ｎ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニル－メタンイミンを得る。この調製の後、８．２ｇ（収率４９％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３（Ｍ＋Ｈ）。
【0039】
調製物２
５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン
ＨＣｌ（ＩＰＡ中５Ｍ、１３ｍＬ、６７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１３４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１３４ｍＬ）中のＮ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニル－メタンイミン（８．６ｇ、２７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で１時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、残渣をヘキサン／ＭＴＢＥ（９：１）（５０ｍＬ）で超音波処理する。固形物をデカントし、より多くの溶媒混合物（２×５０ｍＬ）で洗浄する。固形物をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の２ＮのＮＨ３で処理する。減圧下で溶媒を蒸発させて、５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミンを得る。この調製の後、４．７７ｇ（収率９６％）を油状の白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５９（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．１０（ｄｄ，Ｊ＝０．９，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４９（ｍ，１Ｈ），６．４７（ｄｄ，Ｊ＝０．６，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｂｓ，２Ｈ），１．９３（ｔ，Ｊ＝１８Ｈｚ，３Ｈ）。
５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン
【化25】
ＨＣｌ（ＩＰＡ中５Ｍ、１３ｍＬ、６７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１３４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１３４ｍＬ）中のＮ－［５－（１，１－ジフルオロエチル）－２－ピリジル］－１，１－ジフェニル－メタンイミン（８．６ｇ、２７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で１時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、残渣をヘキサン／ＭＴＢＥ（９：１）（５０ｍＬ）で超音波処理する。固形物をデカントし、より多くの溶媒混合物（２×５０ｍＬ）で洗浄する。固形物をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の２ＮのＮＨ３で処理する。減圧下で溶媒を蒸発させて、５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミンを得る。この調製の後、４．７７ｇ（収率９６％）を油状の白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５９（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．１０（ｄｄ，Ｊ＝０．９，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４９（ｍ，１Ｈ），６．４７（ｄｄ，Ｊ＝０．６，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｂｓ，２Ｈ），１．９３（ｔ，Ｊ＝１８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0040】
調製３
３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン
ＡＣＮ（２６ｍＬ）中の５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン（１．５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＣＳ（１．３ｇ、９．８ｍｍｏｌ）を２０分かけて少しずつ加え、室温で３日間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（５０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＤＣＭ（５×３ｍＬ）に溶解し、カラムに充填する。最初にＤＣＭで洗浄し、次にＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中７ＭのＮＨ３（２５０ｍＬ）で溶出する。塩基性画分を蒸発させて、３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミンを得る。この調製に続いて、１．１７ｇ（収率８４％）を暗褐色の油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） １９３／１９５。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．１２－８．１１（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ），１．９６（ｔ，Ｊ＝１８Ｈｚ，３Ｈ）。
３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン
【化26】
ＡＣＮ（２６ｍＬ）中の５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン（１．５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＣＳ（１．３ｇ、９．８ｍｍｏｌ）を２０分かけて少しずつ加え、室温で３日間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（５０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＤＣＭ（５×３ｍＬ）に溶解し、カラムに充填する。最初にＤＣＭで洗浄し、次にＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中７ＭのＮＨ３（２５０ｍＬ）で溶出する。塩基性画分を蒸発させて、３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミンを得る。この調製に続いて、１．１７ｇ（収率８４％）を暗褐色の油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） １９３／１９５。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．１２－８．１１（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ），１．９６（ｔ，Ｊ＝１８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0041】
調製物４
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン（４．５ｇ、１９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（９５ｍＬ）溶液を２－クロロアセトアルデヒド（５５質量％、８．９ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を２．５時間還流する。ＥｔＯＨを蒸発させ、残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し、ＤＣＭ（２×８０ｍＬ）で抽出する。無水Ｎａ２ＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して暗褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～６０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４８ｇ（収率３６％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２１７／２１９。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．９５（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０６（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化27】
３－クロロ－５－（１，１－ジフルオロエチル）ピリジン－２－アミン（４．５ｇ、１９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（９５ｍＬ）溶液を２－クロロアセトアルデヒド（５５質量％、８．９ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を２．５時間還流する。ＥｔＯＨを蒸発させ、残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し、ＤＣＭ（２×８０ｍＬ）で抽出する。無水Ｎａ２ＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して暗褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～６０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４８ｇ（収率３６％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２１７／２１９。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．９５（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０６（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
【0042】
調製物５
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
ＡＣＮ（３４ｍＬ）中の８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．４８ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液にＮＩＳ（１．７ｇ、７．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌する。全ての揮発性物質を蒸発させ、粗物質を２－ＭｅＴＨＦ（３５０ｍＬ）に溶解し、１ＭのＮａ２Ｓ２Ｏ３（１×５０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍＬ）水溶液で洗浄する。無水Ｎａ２ＳＯ４で有機層を乾燥させ、濾過し、蒸発させて褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～３５％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．９ｇ（８１％収率）を明るい褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３４３／３４５。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．３６（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化28】
ＡＣＮ（３４ｍＬ）中の８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．４８ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液にＮＩＳ（１．７ｇ、７．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌する。全ての揮発性物質を蒸発させ、粗物質を２－ＭｅＴＨＦ（３５０ｍＬ）に溶解し、１ＭのＮａ２Ｓ２Ｏ３（１×５０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍＬ）水溶液で洗浄する。無水Ｎａ２ＳＯ４で有機層を乾燥させ、濾過し、蒸発させて褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～３５％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．９ｇ（８１％収率）を明るい褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３４３／３４５。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．３６（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
【0043】
調製物６
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（４３ｍＬ）に溶解する。Ｎ２で水（１６ｍＬ、１９．３ｍｍｏｌ）に１．２ＭのＫ２ＣＯ３を添加する。出口針で５分間、Ｎ２でパージする。２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１．２５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）及びＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．３ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加する。Ｎ２で５分間再度パージし、室温で２０時間撹拌する。揮発性物質を除去し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２２ｍＬ）と水（１１ｍＬ）に分配する。水層を２－ＭｅＴＨＦ（２２ｍＬ）で更に抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で有機物を乾燥させ、濾過し、全ての揮発性物質を蒸発させて褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～４０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４９ｇ（収率９０％）を明るい褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２５７／２５９。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．６１（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝０．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化29】
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（４３ｍＬ）に溶解する。Ｎ２で水（１６ｍＬ、１９．３ｍｍｏｌ）に１．２ＭのＫ２ＣＯ３を添加する。出口針で５分間、Ｎ２でパージする。２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１．２５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）及びＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．３ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加する。Ｎ２で５分間再度パージし、室温で２０時間撹拌する。揮発性物質を除去し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２２ｍＬ）と水（１１ｍＬ）に分配する。水層を２－ＭｅＴＨＦ（２２ｍＬ）で更に抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で有機物を乾燥させ、濾過し、全ての揮発性物質を蒸発させて褐色の油状物を得る。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～４０％勾配）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４９ｇ（収率９０％）を明るい褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２５７／２５９。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．６１（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝０．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ）。
【0044】
調製物７
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．４９ｇ、５．８０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４１ｍＬ）に溶解する。Ｎ２で白金（タイプ１２８Ｍ、５．３４％のＰｔ（乾燥重量基準）、水分５８％、１．０６ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加する。Ｈ２雰囲気（バルーン）下で８０分間撹拌する。１：１ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ混合物（１００ｍＬ）で溶出するケイソウ土のパッドを通して濾過する。減圧下で全ての揮発性物質を除去して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４７ｇ（収率９１％）を明るい黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２５９／２６１。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．５２（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１０（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化30】
８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．４９ｇ、５．８０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４１ｍＬ）に溶解する。Ｎ２で白金（タイプ１２８Ｍ、５．３４％のＰｔ（乾燥重量基準）、水分５８％、１．０６ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加する。Ｈ２雰囲気（バルーン）下で８０分間撹拌する。１：１ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ混合物（１００ｍＬ）で溶出するケイソウ土のパッドを通して濾過する。減圧下で全ての揮発性物質を除去して、８－クロロ－６－（１，１－ジフルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１．４７ｇ（収率９１％）を明るい黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２５９／２６１。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．５２（ｑ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１０（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【0045】
調製物８
６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
ＮＩＳ（７０．３ｇ、３０６ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（１．４Ｌ）中の６，８－ジクロロイミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５２．１ｇ、２７８．５ｍｍｏｌ）溶液に添加し、室温で３０時間撹拌する。懸濁液を濾過し、固形物をＡＣＮで洗浄する。空気流の下で乾燥させて、６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５４．４ｇ、収率６２％）を薄い褐色固形物として得る。減圧下で母液を蒸発させる。粗生成物を２－ＭｅＴＨＦ（５２０ｍＬ）に溶解し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２５％ｗ／ｖ）（５２０ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３（９％ｗ／ｖ）（５２０ｍＬ）で洗浄する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、３０．４ｇ（収率３５％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３１２／３１４。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）。
６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化31】
ＮＩＳ（７０．３ｇ、３０６ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（１．４Ｌ）中の６，８－ジクロロイミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５２．１ｇ、２７８．５ｍｍｏｌ）溶液に添加し、室温で３０時間撹拌する。懸濁液を濾過し、固形物をＡＣＮで洗浄する。空気流の下で乾燥させて、６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５４．４ｇ、収率６２％）を薄い褐色固形物として得る。減圧下で母液を蒸発させる。粗生成物を２－ＭｅＴＨＦ（５２０ｍＬ）に溶解し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２５％ｗ／ｖ）（５２０ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３（９％ｗ／ｖ）（５２０ｍＬ）で洗浄する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、３０．４ｇ（収率３５％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３１２／３１４。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）。
【0046】
調製物９
６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
高圧管に６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５４．９ｇ、１７５．７ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（１．１Ｌ）、水中の１．２ＭのＫ２ＣＯ３（４４０ｍＬ、５２７ｍｍｏｌ）を添加する。Ｎ２流で混合物をパージし（３回）、２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（３４．２ｇ、１９３ｍｍｏｌ）、Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（４．０６ｇ、４．３９ｍｍｏｌ）と再度パージした（３回）。混合物を５０℃で２６時間加熱する。減圧下で揮発性物質を除去する。残渣を２－ＭｅＴＨＦ（５５０ｍＬ）と水（２７５ｍＬ）に懸濁させる。有機相を分離させ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～４０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、還元下で濃縮して、６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、３６．４ｇ（収率８７％）を黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２２７／２２９。
６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化32】
高圧管に６，８－ジクロロ－３－ヨード－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５４．９ｇ、１７５．７ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（１．１Ｌ）、水中の１．２ＭのＫ２ＣＯ３（４４０ｍＬ、５２７ｍｍｏｌ）を添加する。Ｎ２流で混合物をパージし（３回）、２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（３４．２ｇ、１９３ｍｍｏｌ）、Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（４．０６ｇ、４．３９ｍｍｏｌ）と再度パージした（３回）。混合物を５０℃で２６時間加熱する。減圧下で揮発性物質を除去する。残渣を２－ＭｅＴＨＦ（５５０ｍＬ）と水（２７５ｍＬ）に懸濁させる。有機相を分離させ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～４０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、還元下で濃縮して、６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、３６．４ｇ（収率８７％）を黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２２７／２２９。
【0047】
調製物１０
６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２３．６ｇ、９８．７ｍｍｏｌ）、白金（１８．１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（５９２ｍＬ）の溶液を室温で、Ｈ２下７時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して混合物を濾過し、ＭｅＯＨですすぎ、減圧下で濃縮する。２８８ｍＬの水で粗物質を一晩トリチュレートする。焼結漏斗（３Åの孔径）を使用して、減圧下でフィルター処理する。空気流下及び高真空下で一晩乾燥させて、６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１４．９ｇ（収率６３％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２２９／２３１。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．９４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化33】
６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２３．６ｇ、９８．７ｍｍｏｌ）、白金（１８．１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（５９２ｍＬ）の溶液を室温で、Ｈ２下７時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して混合物を濾過し、ＭｅＯＨですすぎ、減圧下で濃縮する。２８８ｍＬの水で粗物質を一晩トリチュレートする。焼結漏斗（３Åの孔径）を使用して、減圧下でフィルター処理する。空気流下及び高真空下で一晩乾燥させて、６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１４．９ｇ（収率６３％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２２９／２３１。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．９４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【0048】
調製物１１
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
高圧管に６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．０ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１．９ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．２４ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、及び１，４－ジオキサン（２１ｍＬ）を添加する。溶液にＮ２を吹き込み、ＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．２４ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加する。管に蓋をして、反応混合物を、Ｎ２下で、１００℃にて２２時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、ＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄する。相を分離させ、水相をＭＴＢＥで抽出する（２回）。有機層を分離させ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより粗物質を精製する。適切な画分を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）を得る。アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、１．３７ｇ（収率６６％）を緑がかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．７４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．６８（ｍ，３Ｈ），３．４９－３．４１（ｍ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．８７－２．７９（ｍ，３Ｈ），２．４０－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．９０－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化34】
高圧管に６，８－ジクロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．０ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１．９ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．２４ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、及び１，４－ジオキサン（２１ｍＬ）を添加する。溶液にＮ２を吹き込み、ＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．２４ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加する。管に蓋をして、反応混合物を、Ｎ２下で、１００℃にて２２時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、ＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄する。相を分離させ、水相をＭＴＢＥで抽出する（２回）。有機層を分離させ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより粗物質を精製する。適切な画分を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）を得る。アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、１．３７ｇ（収率６６％）を緑がかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．７４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．６８（ｍ，３Ｈ），３．４９－３．４１（ｍ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．８７－２．７９（ｍ，３Ｈ），２．４０－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．９０－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【0049】
調製物１２
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
トリブチル（１－エトキシビニル）スタンナン（０．８６ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（０．５９ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、及びＸＰｈｏｓ－Ｐｄ Ｇ２（０．１５ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、トルエン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物をＮ２でパージし、９５℃で４時間撹拌する。室温まで冷却し、珪藻土のパッドを通して混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃですすぎ、減圧下で濃縮する。残渣を２－プロパノール（１９ｍＬ）に再溶解する。ＨＣｌ（水中０．２Ｍ）（１９ｍＬ）を添加し、室温で５．５時間撹拌する。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和する。ＥｔＯＡｃを添加して１０分間撹拌する。有機層を分離させ、追加のＥｔＯＡｃで水相を抽出する。有機層を分離させ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。最初にＤＣＭ：ヘキサン（５０％の均一濃度）で溶出し、次にＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％の勾配）で溶出するシリカゲルによって粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）を得る。アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．７６ｇ（収率６８％）を黄色の泡状固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．０４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２２－５．１６（ｍ，１Ｈ），４．０１－４．００（ｍ，３Ｈ），３．６３－３．５８（ｍ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．９７－２．８９（ｍ，３Ｈ），２．６２（ｓ，５Ｈ），２．４１－２．３４（ｍ，３Ｈ），２．１９－２．１１（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化35】
トリブチル（１－エトキシビニル）スタンナン（０．８６ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（０．５９ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、及びＸＰｈｏｓ－Ｐｄ Ｇ２（０．１５ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、トルエン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物をＮ２でパージし、９５℃で４時間撹拌する。室温まで冷却し、珪藻土のパッドを通して混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃですすぎ、減圧下で濃縮する。残渣を２－プロパノール（１９ｍＬ）に再溶解する。ＨＣｌ（水中０．２Ｍ）（１９ｍＬ）を添加し、室温で５．５時間撹拌する。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和する。ＥｔＯＡｃを添加して１０分間撹拌する。有機層を分離させ、追加のＥｔＯＡｃで水相を抽出する。有機層を分離させ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。最初にＤＣＭ：ヘキサン（５０％の均一濃度）で溶出し、次にＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％の勾配）で溶出するシリカゲルによって粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）を得る。アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．７６ｇ（収率６８％）を黄色の泡状固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．０４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２２－５．１６（ｍ，１Ｈ），４．０１－４．００（ｍ，３Ｈ），３．６３－３．５８（ｍ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．９７－２．８９（ｍ，３Ｈ），２．６２（ｓ，５Ｈ），２．４１－２．３４（ｍ，３Ｈ），２．１９－２．１１（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【0050】
調製物１３
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（４６０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下で０℃に冷却する。ＮａＢＨ４（０．０４ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。ＭｅＯＨで希釈し、水をゆっくりと添加する。有機溶媒を減圧下で除去する。残渣をＥｔＯＡｃ及び水で希釈する。有機層を合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を得る。この調製の後、０．４ｇ（収率８８％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３８（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．０９（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９７－３．８６（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，３Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），２．９４（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７２－２．５６（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２５（ｍ，３Ｈ），２．１３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．７４－１．６４（ｍ，４Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化36】
ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（４６０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下で０℃に冷却する。ＮａＢＨ４（０．０４ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。ＭｅＯＨで希釈し、水をゆっくりと添加する。有機溶媒を減圧下で除去する。残渣をＥｔＯＡｃ及び水で希釈する。有機層を合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を得る。この調製の後、０．４ｇ（収率８８％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３８（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．０９（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９７－３．８６（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，３Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），２．９４（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，３Ｈ），２．７２－２．５６（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２５（ｍ，３Ｈ），２．１３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．７４－１．６４（ｍ，４Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0051】
調製物１４
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
テフロン（登録商標）チューブに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（４０６ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（２．３ｍＬ）を、Ｎ２下で入れ、－７８℃に冷却する。ＴＥＡ（０．１ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）、トリメチルアミン三フッ化水素酸塩（０．２ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）、Ｘｔａｌｆｌｕｏｒｏ－Ｅ（２７９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を順次添加する。混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、室温に温め、２０時間撹拌する。混合物を氷冷し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水及びＤＣＭをゆっくり添加してクエンチする。水層をＤＣＭで更に抽出する。有機層を分離させ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～５％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．２３ｇ（収率６０％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化37】
テフロン（登録商標）チューブに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（４０６ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（２．３ｍＬ）を、Ｎ２下で入れ、－７８℃に冷却する。ＴＥＡ（０．１ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）、トリメチルアミン三フッ化水素酸塩（０．２ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）、Ｘｔａｌｆｌｕｏｒｏ－Ｅ（２７９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を順次添加する。混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、室温に温め、２０時間撹拌する。混合物を氷冷し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水及びＤＣＭをゆっくり添加してクエンチする。水層をＤＣＭで更に抽出する。有機層を分離させ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～５％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．２３ｇ（収率６０％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。
【0052】
調製物１５＆１６
異性体１－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
異性体２－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．２３ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を精製する。［計器：ＳＦＣ１０（セピアテック）；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ（２５×２ｃｍ、５ｕｍ）；移動相：ＣＯ２（Ａ）／ＩＰＡ（０．２％ＤＭＥＡ）（Ｂ）；溶出プログラム：４０％均一濃度のＢ；出口圧力：１００ｂａｒ；カラム温度：４０℃；流速：６５ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶにより、分離された両方のエナンチオマーが得る。
異性体１：この方法に従って、７２ｍｇのｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（収率１９％）を、褐色固形物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝１．３分、９２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。（キラル分析、Ｒｔ＝１．１分、ｅ．ｅ．＞９８％）。
異性体２：この方法に従って、１０５ｍｇのｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（収率２７％）を、褐色固形物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝１．３分、９０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。（キラル分析、Ｒｔ＝１．４分、ｅ．ｅ．＞９８％）。
調製物１５及び１６の異性体１及び異性体２エナンチオマーは分離されたが、アスタリスク位置での各エナンチオマーの特定のキラリティーは決定されなかった。
異性体１－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
異性体２－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化38】
ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．２３ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を精製する。［計器：ＳＦＣ１０（セピアテック）；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ（２５×２ｃｍ、５ｕｍ）；移動相：ＣＯ２（Ａ）／ＩＰＡ（０．２％ＤＭＥＡ）（Ｂ）；溶出プログラム：４０％均一濃度のＢ；出口圧力：１００ｂａｒ；カラム温度：４０℃；流速：６５ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶにより、分離された両方のエナンチオマーが得る。
異性体１：この方法に従って、７２ｍｇのｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（収率１９％）を、褐色固形物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝１．３分、９２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。（キラル分析、Ｒｔ＝１．１分、ｅ．ｅ．＞９８％）。
異性体２：この方法に従って、１０５ｍｇのｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（収率２７％）を、褐色固形物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝１．３分、９０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋Ｈ）。（キラル分析、Ｒｔ＝１．４分、ｅ．ｅ．＞９８％）。
調製物１５及び１６の異性体１及び異性体２エナンチオマーは分離されたが、アスタリスク位置での各エナンチオマーの特定のキラリティーは決定されなかった。
【0053】
調製物１７
異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
ジオキサン（０．３２ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌを、ＤＣＭ（１．３ｍＬ）中の異性体１－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（７２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（１０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＭｅＯＨに溶解し、カラムに充填し、ＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ３で溶出する。塩基性画分を蒸発させて異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、５５ｍｇ（収率９８％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）。
異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化39】
ジオキサン（０．３２ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌを、ＤＣＭ（１．３ｍＬ）中の異性体１－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（７２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（１０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＭｅＯＨに溶解し、カラムに充填し、ＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ３で溶出する。塩基性画分を蒸発させて異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、５５ｍｇ（収率９８％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）。
【0054】
実施例１
異性体１－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
塩化アクリロイル（０．００９ｍｌ、０．１１８ｍｍｏｌ）を異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（５６ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．０７ｍｌ、０．５２７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．３ｍＬ）に溶解し、混合物をこの温度で３０分間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、室温で５分間撹拌し、水を添加し、ＤＣＭで抽出する。有機相を分離して合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～６％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ラセミ化合物異性体１－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、白色固形物として２０ｍｇ（収率３１％）を得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．６２－６．６０（ｍ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０９－６．０７（ｍ，１Ｈ），５．７７－５．７４（ｍ，１Ｈ），５．７０－５．５５（ｍ，１Ｈ），４．６０－４．５６（ｍ，１Ｈ），４．０１－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．３４－３．３２（ｍ，５Ｈ），２．６６－２．６１（ｍ，７Ｈ），１．７５－１．６８（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｄｄ，Ｊ＝０．５，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
異性体１－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化40】
塩化アクリロイル（０．００９ｍｌ、０．１１８ｍｍｏｌ）を異性体１－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（５６ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．０７ｍｌ、０．５２７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．３ｍＬ）に溶解し、混合物をこの温度で３０分間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、室温で５分間撹拌し、水を添加し、ＤＣＭで抽出する。有機相を分離して合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～６％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、ラセミ化合物異性体１－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、白色固形物として２０ｍｇ（収率３１％）を得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．６２－６．６０（ｍ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０９－６．０７（ｍ，１Ｈ），５．７７－５．７４（ｍ，１Ｈ），５．７０－５．５５（ｍ，１Ｈ），４．６０－４．５６（ｍ，１Ｈ），４．０１－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．３４－３．３２（ｍ，５Ｈ），２．６６－２．６１（ｍ，７Ｈ），１．７５－１．６８（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｄｄ，Ｊ＝０．５，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【0055】
調製物１８
異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
ジオキサン（０．４ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌを、ＤＣＭ（１．８ｍＬ）中の異性体２－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（１０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＭｅＯＨに溶解し、カラムに充填し、ＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ３で溶出する。塩基性画分を蒸発させて異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、７５ｍｇ（収率９８％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）。
異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化41】
ジオキサン（０．４ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌを、ＤＣＭ（１．８ｍＬ）中の異性体２－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、ＳＣＸカラム（１０ｇ）：２容量のＭｅＯＨで残渣を精製する。粗物質をＭｅＯＨに溶解し、カラムに充填し、ＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ３で溶出する。塩基性画分を蒸発させて異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、７５ｍｇ（収率９８％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）。
【0056】
実施例２
異性体２－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
塩化アクリロイル（０．０１２ｍｌ、０．１５９ｍｍｏｌ）を異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（７５ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．０９８ｍＬ、０．７０６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．７ｍＬ）に溶解し、混合物をこの温度で３０分撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、室温で５分間撹拌し、水を添加し、ＤＣＭで抽出する。有機相を分離して合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～６％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、異性体２－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、２８ｍｇ（収率３３％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３７（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．６６－６．６１（ｍ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．７７－５．５７（ｍ，２Ｈ），４．６１－４．５７（ｍ，１Ｈ），４．００－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．３３－３．３２（ｍ，５Ｈ），２．６７－２．６２（ｍ，７Ｈ），１．７５－１．６８（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
異性体２－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化42】
塩化アクリロイル（０．０１２ｍｌ、０．１５９ｍｍｏｌ）を異性体２－６－（１－フルオロエチル）－３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（７５ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．０９８ｍＬ、０．７０６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．７ｍＬ）に溶解し、混合物をこの温度で３０分撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、室温で５分間撹拌し、水を添加し、ＤＣＭで抽出する。有機相を分離して合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～６％勾配）で溶出するシリカゲルにより粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、異性体２－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－［１－フルオロエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、２８ｍｇ（収率３３％）を薄い褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．３７（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．６６－６．６１（ｍ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．７７－５．５７（ｍ，２Ｈ），４．６１－４．５７（ｍ，１Ｈ），４．００－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．３３－３．３２（ｍ，５Ｈ），２．６７－２．６２（ｍ，７Ｈ），１．７５－１．６８（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【0057】
調製物１９
ｔｅｒｔ－ブチル４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート
高圧容器に、６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（３．４２ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（８４ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチル４－アミノピペリジン－１－カルボキシレート（３．０５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、及びナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３．６５ｇ、３８．０ｍｍｏｌ）を入れる。Ｎ２を溶液に吹き込み、Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（９４０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を添加する。得られた混合物に再度Ｎ２を吹き込み、チューブに蓋をして、反応混合物をＮ２下９５℃で２時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液を洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。混合物ＭＴＢＥ：ヘキサン（１０～６０％勾配）、続いてアセトン：ヘキサン（１０～４０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。減圧下で濃縮し、乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル ４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレートを得る。この調製の後、３．１６ｇ（収率６２．８％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３０．３Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７２－３．６２（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１２．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５８－１．３７（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル４－［（６－クロロ－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート
【化43】
高圧容器に、６，８－ジクロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（３．４２ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（８４ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチル４－アミノピペリジン－１－カルボキシレート（３．０５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、及びナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３．６５ｇ、３８．０ｍｍｏｌ）を入れる。Ｎ２を溶液に吹き込み、Ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（９４０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を添加する。得られた混合物に再度Ｎ２を吹き込み、チューブに蓋をして、反応混合物をＮ２下９５℃で２時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液を洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。混合物ＭＴＢＥ：ヘキサン（１０～６０％勾配）、続いてアセトン：ヘキサン（１０～４０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。減圧下で濃縮し、乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル ４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレートを得る。この調製の後、３．１６ｇ（収率６２．８％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３０．３Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７２－３．６２（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１２．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５８－１．３７（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。
【0058】
調製物２０
６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
ＴＦＡ（１２ｍＬ、１５８．７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート（２．９６ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、残渣をＭｅＯＨに溶解する。ＭｅＯＨで前処理したＳＣＸカートリッジ（５０ｇ）に溶液を充填する。ＭｅＯＨ及びＭｅＯＨ（７Ｎ ＮＨ３）で溶出する。真空中で塩基性画分を集めて濃縮し、６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、２．２ｇ（収率９８．９％）を緑色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），６．２６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝２９．７Ｈｚ，２Ｈ），３．５９－３．５３（ｍ，２Ｈ），２．９７－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔｄ，Ｊ＝１２．１，２．１Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，３Ｈ），１．９０－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．３７（ｍ，２Ｈ）。
６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化44】
ＴＦＡ（１２ｍＬ、１５８．７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート（２．９６ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、残渣をＭｅＯＨに溶解する。ＭｅＯＨで前処理したＳＣＸカートリッジ（５０ｇ）に溶液を充填する。ＭｅＯＨ及びＭｅＯＨ（７Ｎ ＮＨ３）で溶出する。真空中で塩基性画分を集めて濃縮し、６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、２．２ｇ（収率９８．９％）を緑色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），６．２６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝２９．７Ｈｚ，２Ｈ），３．５９－３．５３（ｍ，２Ｈ），２．９７－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔｄ，Ｊ＝１２．１，２．１Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，３Ｈ），１．９０－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．３７（ｍ，２Ｈ）。
【0059】
調製物２１
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
ＤＩＰＥＡ（４ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ）を、無水ＡＣＮ（２５ｍＬ）中の６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（２．２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（３．４ｇ、９．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加する。混合物を１００℃で一晩撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で揮発性物質を蒸発させる。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～１０％勾配）でフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。真空で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、２．１８ｇ（収率５９％）を明るい緑色半固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９０（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．８０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．０９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３４－５．２５（ｍ，３Ｈ），４．０２－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．５２（ｍ，３Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ），２．６９－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．２５（ｍ，３Ｈ），２．１３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．７５－１．６５（ｍ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化45】
ＤＩＰＥＡ（４ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ）を、無水ＡＣＮ（２５ｍＬ）中の６－クロロ－３－イソプロペニル－Ｎ－（４－ピペリジル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（２．２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（３．４ｇ、９．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加する。混合物を１００℃で一晩撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で揮発性物質を蒸発させる。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～１０％勾配）でフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。真空で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、２．１８ｇ（収率５９％）を明るい緑色半固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９０（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．８０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．０９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３４－５．２５（ｍ，３Ｈ），４．０２－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．５２（ｍ，３Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ），２．６９－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．２５（ｍ，３Ｈ），２．１３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．７５－１．６５（ｍ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ
【0060】
調製物２２
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
マイクロ波管に、トルエン（１７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．４２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）溶液、トリブチル（１－エトキシビニル）スズ（０．３９ｍＬ、１．１２ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４，’，６’－トリ－ｉ－プロピル－１，１’－ビフェニル）（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（７５ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）、及びＣｓＦ（０．２６ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物にＮ２を５分間吹き込み、管に蓋をして１００℃で３時間加熱する。室温まで冷却し、粗混合物にＥｔＯＡｃを添加し、珪藻土のパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃですすぐ。減圧下で揮発性物質を除去して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．７５７ｇ（粗物質）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２６（Ｍ＋Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化46】
マイクロ波管に、トルエン（１７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－クロロ－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．４２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）溶液、トリブチル（１－エトキシビニル）スズ（０．３９ｍＬ、１．１２ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４，’，６’－トリ－ｉ－プロピル－１，１’－ビフェニル）（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（７５ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）、及びＣｓＦ（０．２６ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物にＮ２を５分間吹き込み、管に蓋をして１００℃で３時間加熱する。室温まで冷却し、粗混合物にＥｔＯＡｃを添加し、珪藻土のパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃですすぐ。減圧下で揮発性物質を除去して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．７５７ｇ（粗物質）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２６（Ｍ＋Ｈ）。
【0061】
調製物２３
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
水中のＨＣｌ（４ｍＬ、０．２Ｍ）を、２－プロパノール（１．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．７２ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ、続いてＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。有機を分離し、水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＨ：ヘキサン（２０～５０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフで残渣を精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．２５ｇ（収率５８％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．５０（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），３．８９－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．４３（ｍ，４Ｈ），２．９０－２．７５（ｍ，３Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２８－２．１０（ｍ，４Ｈ），１．９７－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６５－１．５４（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化47】
水中のＨＣｌ（４ｍＬ、０．２Ｍ）を、２－プロパノール（１．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－エトキシビニル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．７２ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ、続いてＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。有機を分離し、水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＨ：ヘキサン（２０～５０％勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフで残渣を精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、０．２５ｇ（収率５８％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．５０（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），３．８９－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．４３（ｍ，４Ｈ），２．９０－２．７５（ｍ，３Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２８－２．１０（ｍ，４Ｈ），１．９７－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６５－１．５４（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）。
【0062】
調製物２４
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
ＮａＢＨ４（０．０４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（７．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．３９ｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌する。水、続いてＥｔＯＡｃを添加して、過剰のＮａＢＨ４を中和する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．３７６ｇ（粗物質、収率９４％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８３（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），５．５４－５．１８（ｍ，４Ｈ），４．７５－４．６９（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９０－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．５２－３．２７（ｍ，５Ｈ），２．９２－２．８８（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．１８－２．１５（ｍ，４Ｈ），２．０２－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．３６（ｍ，１４Ｈ）。
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化48】
ＮａＢＨ４（０．０４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（７．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（６－アセチル－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．３９ｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で１時間撹拌する。水、続いてＥｔＯＡｃを添加して、過剰のＮａＢＨ４を中和する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．３７６ｇ（粗物質、収率９４％）を褐色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．８３（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），５．５４－５．１８（ｍ，４Ｈ），４．７５－４．６９（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９０－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．５２－３．２７（ｍ，５Ｈ），２．９２－２．８８（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．１８－２．１５（ｍ，４Ｈ），２．０２－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．３６（ｍ，１４Ｈ）。
【0063】
調製物２５
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
Ｌｉｎｄｌａｒ触媒（０．２５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）中のパラジウム（１０質量％）を、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．２９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた混合物にＮ２を吹き込み、続いて真空とＨ２のサイクルを３回繰り返す。反応混合物をＨ２（１気圧）下、室温で５時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して反応混合物を濾過し、ＭｅＯＨで十分に洗浄する。減圧下で揮発性物質を除去し、乾燥させて、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．１８ｇ（収率５５．６％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），５．４３－５．４１（ｍ，１Ｈ），５．２７－５．２２（ｍ，１Ｈ），４．７２－４．６８（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．８５（ｍ，４Ｈ），３．５０－３．２７（ｍ，８Ｈ），３．２３－３．１６（ｍ，１Ｈ），２．９６－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．４０－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．２８（ｍ，２Ｈ），２．０３－２．００（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２９（ｍ，１４Ｈ）。
Ｒａｃ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化49】
Ｌｉｎｄｌａｒ触媒（０．２５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）中のパラジウム（１０質量％）を、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロペニル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（０．２９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた混合物にＮ２を吹き込み、続いて真空とＨ２のサイクルを３回繰り返す。反応混合物をＨ２（１気圧）下、室温で５時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して反応混合物を濾過し、ＭｅＯＨで十分に洗浄する。減圧下で揮発性物質を除去し、乾燥させて、ラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル］－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、０．１８ｇ（収率５５．６％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），５．４３－５．４１（ｍ，１Ｈ），５．２７－５．２２（ｍ，１Ｈ），４．７２－４．６８（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．８５（ｍ，４Ｈ），３．５０－３．２７（ｍ，８Ｈ），３．２３－３．１６（ｍ，１Ｈ），２．９６－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．４０－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．２８（ｍ，２Ｈ），２．０３－２．００（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２９（ｍ，１４Ｈ）。
【0064】
調製物２６
Ｒａｃ－１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール
ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を、ＤＣＭ（３ｍＬ）中のラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１６０ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で２時間撹拌する。減圧下で溶媒を蒸発させ、残渣をＳＣＸ（１０ｇカートリッジ）で精製し、ＭｅＯＨ（３ＣＶ）、次いでＭｅＯＨ中２ＮのＮＨ３（３ＣＶ）で溶出する。塩基性画分を合わせ、真空中で溶媒を除去して、ラセミ化合物の１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、１２０ｍｇ（収率８８％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１８－５．１１（ｍ，１Ｈ），４．７４－４．６５（ｍ，１Ｈ），３．７２－３．６３（ｍ，１Ｈ），３．５０－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．２３－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．９０－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．７０－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．４３－２．４１（ｍ，４Ｈ），２．０４－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２９（ｍ，１０Ｈ）。
Ｒａｃ－１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール
【化50】
ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を、ＤＣＭ（３ｍＬ）中のラセミ化合物のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（１６０ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で２時間撹拌する。減圧下で溶媒を蒸発させ、残渣をＳＣＸ（１０ｇカートリッジ）で精製し、ＭｅＯＨ（３ＣＶ）、次いでＭｅＯＨ中２ＮのＮＨ３（３ＣＶ）で溶出する。塩基性画分を合わせ、真空中で溶媒を除去して、ラセミ化合物の１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール（アスタリスクを付したキラル）を得る。この調製の後、１２０ｍｇ（収率８８％）を褐色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１８－５．１１（ｍ，１Ｈ），４．７４－４．６５（ｍ，１Ｈ），３．７２－３．６３（ｍ，１Ｈ），３．５０－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．２３－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．９０－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．７０－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．４３－２．４１（ｍ，４Ｈ），２．０４－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２９（ｍ，１０Ｈ）。
【0065】
実施例３
Ｒａｃ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
ＤＩＰＥＡ（１５６μＬ、０．８９４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（５ｍＬ）中のラセミ化合物の１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール（１２０ｍｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を０℃に冷却し、塩化プロパ－２－エノイル（２５μＬ、０．３０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）溶液を滴加する。得られた混合物を０℃で６０分間撹拌する。減圧下で溶媒を蒸発させる。反応混合物をＮａＨＣＯ３の飽和溶液で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～１０％の勾配）中ＮＨ３７Ｎで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を濃縮して、ｒａｃ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、７２ｍｇ（収率４７％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋Ｈ）。
Ｒａｃ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化51】
ＤＩＰＥＡ（１５６μＬ、０．８９４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（５ｍＬ）中のラセミ化合物の１－［３－イソプロピル－８－［［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］アミノ］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イル］エタノール（１２０ｍｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を０℃に冷却し、塩化プロパ－２－エノイル（２５μＬ、０．３０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）溶液を滴加する。得られた混合物を０℃で６０分間撹拌する。減圧下で溶媒を蒸発させる。反応混合物をＮａＨＣＯ３の飽和溶液で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～１０％の勾配）中ＮＨ３７Ｎで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を濃縮して、ｒａｃ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、７２ｍｇ（収率４７％）を黄色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋Ｈ）。
【0066】
実施例４＆５
異性体３：１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン、
異性体４：１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
ラセミ化合物－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジルの精製］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン（０．０７２ｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）をキラルクロマトグラフィーによって精製する。［機器：ＳＦＣ１０（Ｓｅｐｉａｔｅｃ）、カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ（２５ｃｍ×２ｃｍ、５ｕｍ）。移動相：ＣＯ２（Ａ）／ＭｅＯＨ（０．２％のＤＭＥＡ）（Ｂ）。溶出プログラム：均一濃度２０％。流量６５ｍＬ／分。充填量：９．９２分ごとに１５ｍｇを注入］により、両方の分離されたエナンチオマーを得る。
異性体３：１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン、
異性体４：１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化52】
ラセミ化合物－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジルの精製］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン（０．０７２ｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）をキラルクロマトグラフィーによって精製する。［機器：ＳＦＣ１０（Ｓｅｐｉａｔｅｃ）、カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ（２５ｃｍ×２ｃｍ、５ｕｍ）。移動相：ＣＯ２（Ａ）／ＭｅＯＨ（０．２％のＤＭＥＡ）（Ｂ）。溶出プログラム：均一濃度２０％。流量６５ｍＬ／分。充填量：９．９２分ごとに１５ｍｇを注入］により、両方の分離されたエナンチオマーを得る。
【0067】
異性体３：この方法に従って、１８．４ｍｇの１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン（収率２７％）を薄い黄色油状物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝０．８７分、０．９６％）。（キラル分析、Ｒｔ＝０．９２分、ｅ．ｅ．＞９８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．８２－６．７５（ｍ，１Ｈ），６．１５－６．１１（ｍ，２Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４７－５．３９（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７３－４．６７（ｍ，１Ｈ），４．４１－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．００－３．８６（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．４７（ｍ，３Ｈ），３．２５－３．２０（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，３Ｈ），２．４８－２．３３（ｍ，３Ｈ），２．３０－２．１７（ｍ，２Ｈ），１．９５－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２９（ｍ，９Ｈ）。
【0068】
異性体４：この方法に従って、２４．５ｍｇの１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［６－（１－ヒドロキシエチル）－３－イソプロピル－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン（収率３６．７％）を薄い黄色油状物として得た。（ＲＰ－ＬＣ／ＭＳによるアキラル純度、Ｒｔ＝０．８７分、０．９７％）。（キラル分析、Ｒｔ＝１．１６分、ｅ．ｅ．＞９０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：７．４７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，１６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１５－６．１１（ｍ，２Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４４－５．３９（ｍ，１Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７３－４．６７（ｍ，１Ｈ），４．４１－４．１４（ｍ，１Ｈ），３．９７－３．８０（ｍ，３Ｈ），３．２３－３．１３（ｍ，２Ｈ），２．９８－２．８５（ｍ，３Ｈ），２．４５－２．３３（ｍ，３Ｈ），２．２６－２．１４（ｍ，２Ｈ），１．９５－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．４７（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２９（ｍ，９Ｈ）。
【0069】
実施例４及び５の異性体３及び異性体４のエナンチオマーは分離されたが、アスタリスク位置における各エナンチオマーの特定のキラリティーは決定されなかった。
【0070】
実施例６
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホラン－２，４，６－トリオキシド（ＤＭＦ中５０％）（０．２５ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）及びＴＥＡ（０．２ｍＬ、１ｍｍｏｌ）中の２，３，３－トリデューテリオプロパ－２－エン酸（０．０２９ｇ、０．３８６３ｍｍｏｌ）（Ａｄｖ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃａｔａｌ．２０１８，３６０，２３０３に記載されるように調製）、及び３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に室温で添加し、混合物を２時間撹拌する。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液１ｍＬで反応混合物をクエンチし、ＭＴＢＥで抽出する（２回）。有機相を分離して合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮する。ＤＣＭ：（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ９／１）（０％の均一濃度）、次に勾配ＤＣＭ：（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ９／１）（０～６０％の勾配）で溶出することにより、粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、８５．６ｍｇ（収率５０％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８２（Ｍ＋Ｈ）。（アキラル Ｒｔ＝１．１２８分、１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．０２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．３４（ｓ，１Ｈ），６．１１－６．０３（ｍ，１Ｈ），４．４０－４．１２（ｍ，１Ｈ），４．００－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．２７（ｍ，３Ｈ），３．２２－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９０－２．８０（ｍ，３Ｈ），２．４１－２．４０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．１４（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８８（ｍ，２Ｈ），１．６３－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，６Ｈ）。
２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化53】
２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホラン－２，４，６－トリオキシド（ＤＭＦ中５０％）（０．２５ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）及びＴＥＡ（０．２ｍＬ、１ｍｍｏｌ）中の２，３，３－トリデューテリオプロパ－２－エン酸（０．０２９ｇ、０．３８６３ｍｍｏｌ）（Ａｄｖ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃａｔａｌ．２０１８，３６０，２３０３に記載されるように調製）、及び３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に室温で添加し、混合物を２時間撹拌する。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液１ｍＬで反応混合物をクエンチし、ＭＴＢＥで抽出する（２回）。有機相を分離して合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮する。ＤＣＭ：（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ９／１）（０％の均一濃度）、次に勾配ＤＣＭ：（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ９／１）（０～６０％の勾配）で溶出することにより、粗物質を精製する。減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させて、２，３，３－トリデューテリオ－１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、８５．６ｍｇ（収率５０％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８２（Ｍ＋Ｈ）。（アキラル Ｒｔ＝１．１２８分、１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．０２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．３４（ｓ，１Ｈ），６．１１－６．０３（ｍ，１Ｈ），４．４０－４．１２（ｍ，１Ｈ），４．００－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．２７（ｍ，３Ｈ），３．２２－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９０－２．８０（ｍ，３Ｈ），２．４１－２．４０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．１４（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８８（ｍ，２Ｈ），１．６３－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，６Ｈ）。
【0071】
調製物２７
８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
グローブボックスで、１，１’－ビス（ジ－Ｉ－プロピルホスフィノ）フェロセン（１，５－シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロボレート（０．１２４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を３つの撹拌棒を備えた１０～２０ｍＬのＢｉｏｔａｇｅチューブに均等に分割する。８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．８４ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２４ｍｌ）に溶解し、溶液を３本のバイアルに均等に分ける。バイアルにキャップをして、グローブボックスから取り出す。バイアルを（一緒に）オートクレーブに入れる。各バイアルに針を挿入して、ガスの流れを可能にする。オートクレーブを密閉し、最終圧力が８０ｐｓｉになるまで重水素で３回パージする。混合物を３時間４０分間撹拌する。オートクレーブをベントし、オレンジ色の溶液を含む３つのチューブを開く。ＥｔＯＡｃでフラスコに洗い流す。３つのチューブを結合し、減圧下で溶媒を除去する。残渣をＤＣＭに溶解し、ＥｔＯＡｃ：ＤＣＭの勾配（０～２０％の勾配）でシリカゲルにより精製する。減圧下で溶媒を除去して、８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、１．７２ｇ（収率９２％）を明るい黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：２６５／２６７。１Ｈ ＮＭＲ（３９９．８０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．９３－８．９２（ｍ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），１．３１－１．３０（ｍ，５Ｈ）。
８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化54】
グローブボックスで、１，１’－ビス（ジ－Ｉ－プロピルホスフィノ）フェロセン（１，５－シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロボレート（０．１２４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を３つの撹拌棒を備えた１０～２０ｍＬのＢｉｏｔａｇｅチューブに均等に分割する。８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（１．８４ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２４ｍｌ）に溶解し、溶液を３本のバイアルに均等に分ける。バイアルにキャップをして、グローブボックスから取り出す。バイアルを（一緒に）オートクレーブに入れる。各バイアルに針を挿入して、ガスの流れを可能にする。オートクレーブを密閉し、最終圧力が８０ｐｓｉになるまで重水素で３回パージする。混合物を３時間４０分間撹拌する。オートクレーブをベントし、オレンジ色の溶液を含む３つのチューブを開く。ＥｔＯＡｃでフラスコに洗い流す。３つのチューブを結合し、減圧下で溶媒を除去する。残渣をＤＣＭに溶解し、ＥｔＯＡｃ：ＤＣＭの勾配（０～２０％の勾配）でシリカゲルにより精製する。減圧下で溶媒を除去して、８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、１．７２ｇ（収率９２％）を明るい黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：２６５／２６７。１Ｈ ＮＭＲ（３９９．８０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：８．９３－８．９２（ｍ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），１．３１－１．３０（ｍ，５Ｈ）。
【0072】
調製物２８
ｔｅｒｔ－ブチル４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート
封管に８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（０．５０３ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル ４－アミノピペリジン－１－カルボキシレート（０．４１８ｇ、２．０９ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．６ｇ、６ｍｍｏｌ）、及び１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）を添加する。混合物をＮ２でパージした後、真空でパージする（３サイクル）。ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．１ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２－真空で再度パージし、チューブに蓋をして、混合物を９５℃で２．５時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、混合物をＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄する。有機相を分離し、ＭＴＢＥ（３Ｘ）で水層を抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、茶色油状物の残渣を得る。ＤＣＭ／Ｈｅｘ及びＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：１）（０～２％の勾配）で溶出するシリカゲルカートリッジによって残渣を精製する。適切な画分を収集し、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル ４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレートを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．５２ｇ（収率５５％）を黄色泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２９（Ｍ＋Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート
【化55】
封管に８－クロロ－３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（０．５０３ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル ４－アミノピペリジン－１－カルボキシレート（０．４１８ｇ、２．０９ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．６ｇ、６ｍｍｏｌ）、及び１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）を添加する。混合物をＮ２でパージした後、真空でパージする（３サイクル）。ｂｒｅｔｔｐｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．１ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２－真空で再度パージし、チューブに蓋をして、混合物を９５℃で２．５時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、混合物をＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄する。有機相を分離し、ＭＴＢＥ（３Ｘ）で水層を抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、茶色油状物の残渣を得る。ＤＣＭ／Ｈｅｘ及びＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：１）（０～２％の勾配）で溶出するシリカゲルカートリッジによって残渣を精製する。適切な画分を収集し、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル ４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレートを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．５２ｇ（収率５５％）を黄色泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２９（Ｍ＋Ｈ）。
【0073】
調製物２９
３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
ＴＦＡ（１．６ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート（０．５２４ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で３時間撹拌する。反応混合物を水（２０ｍＬ）で処理し、有機層を分離し、廃棄する。水層をＮａＨＣＯ３の飽和溶液で処理し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．２７ｇ（収率７８％）を黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ） ３２９（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．６８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３６－５．３２（ｍ，１Ｈ），３．６２－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．０４（ｍ，３Ｈ），１．５８－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３９（ｍ，５Ｈ）。
３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化56】
ＴＦＡ（１．６ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル）アミノ］ピペリジン－１－カルボキシレート（０．５２４ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で３時間撹拌する。反応混合物を水（２０ｍＬ）で処理し、有機層を分離し、廃棄する。水層をＮａＨＣＯ３の飽和溶液で処理し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．２７ｇ（収率７８％）を黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ） ３２９（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．６８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３６－５．３２（ｍ，１Ｈ），３．６２－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．０４（ｍ，３Ｈ），１．５８－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３９（ｍ，５Ｈ）。
【0074】
調製物３０
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
封管に、３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（０．２７ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（０．３６１ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、及びＡＣＮ（４ｍＬ）を添加する。得られたオレンジ色の溶液にＴＥＡ（０．２３ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）を添加する。フラスコに蓋をして、混合物を９５℃で２４時間加熱する。真空下で揮発性物質を除去し、残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で処理する。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２回）で抽出する。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％の勾配）で溶出するシリカゲルにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．３４ｇ（収率６９％）を赤みがかった固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２８（Ｍ＋Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化57】
封管に、３－（ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル）－Ｎ－（４－ピペリジル）－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（０．２７ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（０．３６１ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、及びＡＣＮ（４ｍＬ）を添加する。得られたオレンジ色の溶液にＴＥＡ（０．２３ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）を添加する。フラスコに蓋をして、混合物を９５℃で２４時間加熱する。真空下で揮発性物質を除去し、残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で処理する。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２回）で抽出する。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～３％の勾配）で溶出するシリカゲルにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、０．３４ｇ（収率６９％）を赤みがかった固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２８（Ｍ＋Ｈ）。
【0075】
調製物３１
３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
ＴＦＡ（０．８５５ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［－ｒａｃ－１．２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（３３８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた混合物を室温で１６時間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（２×１５ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、２２２ｍｇ（収率８２．３％）を赤みがかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２８（Ｍ＋Ｈ）。
３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化58】
ＴＦＡ（０．８５５ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［－ｒａｃ－１．２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）－イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（３３８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。得られた混合物を室温で１６時間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（２×１５ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、２２２ｍｇ（収率８２．３％）を赤みがかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２８（Ｍ＋Ｈ）。
【0076】
実施例７
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
ＴＥＡ（０．１９９ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ）、続いて塩化アクリロイル（０．０４８ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２．２ｍＬ）中の３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（２２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、０℃に冷却した。得られた混合物をこの温度で２０分間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液５ｍＬでクエンチし、ＤＣＭ（２回）で抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～４％勾配）で溶出するシリカゲルにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－塩－１－オンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、１０３ｍｇ（収率４５．３％）を赤みがかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：７．９６（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７３（ｍ，１Ｈ），６．３０－６．２２（ｍ，２Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４８－４．４５（ｍ，４Ｈ），４．０７－３．９６（ｍ，２Ｈ），３．６８－３．５６（ｍ，３Ｈ），３．１５－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．６７－２．４９（ｍ，４Ｈ），２．１３（ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７５－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３８（ｍ，５Ｈ）。
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化59】
ＴＥＡ（０．１９９ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ）、続いて塩化アクリロイル（０．０４８ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２．２ｍＬ）中の３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（２２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、０℃に冷却した。得られた混合物をこの温度で２０分間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液５ｍＬでクエンチし、ＤＣＭ（２回）で抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～４％勾配）で溶出するシリカゲルにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、揮発性物質を除去し、高真空下で乾燥させて、１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－［ｒａｃ－１，２－ジデューテリオ－１－メチル－エチル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－塩－１－オンを得る（アスタリスクを付したキラル）。この調製の後、１０３ｍｇ（収率４５．３％）を赤みがかった泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８２（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：７．９６（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７３（ｍ，１Ｈ），６．３０－６．２２（ｍ，２Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４８－４．４５（ｍ，４Ｈ），４．０７－３．９６（ｍ，２Ｈ），３．６８－３．５６（ｍ，３Ｈ），３．１５－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．６７－２．４９（ｍ，４Ｈ），２．１３（ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７５－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３８（ｍ，５Ｈ）。
【0077】
調製物３３
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
ＤＭＡＰ（５．６２ｇ、４６．１ｍｍｏｌ、０．１当量）、ＴＥＡ（１１２ｇ、１５４ｍＬ、１．１１ｍｏｌ、２．４当量）、及びｐ－トルエンスルホニルクロリド（１０５．４ｇ、５５３ｍｍｏｌ、１．２当量）を、ＴＨＦ（９２１ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（１００ｇ、４６１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を２３℃で２４時間撹拌する。９％のＮａＨＣＯ３水溶液（１１５１ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（５０６ｍＬ）で抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液（５０６ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣にヘプタン（１０００ｍＬ）を添加し、２４時間撹拌する。濾過し、ヘプタン（２×１５０ｍＬ）で洗浄し、空気流の下で１時間、１０ｍｂａｒの真空下、４５℃で一晩乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、１４７ｇ（収率８６％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
【化60】
ＤＭＡＰ（５．６２ｇ、４６．１ｍｍｏｌ、０．１当量）、ＴＥＡ（１１２ｇ、１５４ｍＬ、１．１１ｍｏｌ、２．４当量）、及びｐ－トルエンスルホニルクロリド（１０５．４ｇ、５５３ｍｍｏｌ、１．２当量）を、ＴＨＦ（９２１ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（１００ｇ、４６１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を２３℃で２４時間撹拌する。９％のＮａＨＣＯ３水溶液（１１５１ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（５０６ｍＬ）で抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液（５０６ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣にヘプタン（１０００ｍＬ）を添加し、２４時間撹拌する。濾過し、ヘプタン（２×１５０ｍＬ）で洗浄し、空気流の下で１時間、１０ｍｂａｒの真空下、４５℃で一晩乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、１４７ｇ（収率８６％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【0078】
調製物３４
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
圧力容器に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（８１．２ｇ、２１６ｍｍｏｌ）、ピペリジン－４－アミン（４３．３ｇ、４３３ｍｍｏｌ、２当量）、メチルエチルケトン（２１６ｍＬ）、及びＤＩＰＥＡ（５５．９ｇ、７５．５ｍＬ、４３３ｍｍｏｌ、２当量）を入れる。混合物を８０℃で４０時間撹拌する。加熱を止め、２３℃まで冷却し、ＭＴＢＥ（６４９ｍＬ）で希釈し、水（６４９ｍＬ）、５％クエン酸水溶液（６４９ｍＬ）で洗浄し、水相をＭＴＢＥ（６４９ｍＬ）で逆抽出する。１８ＭのＮａＯＨ水溶液（３５．３ｍＬ）で撹拌することにより、合わせた水相を塩基性化し、ＤＣＭ（３×６４９ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣をヘプタン（６４９ｍＬ）に２時間懸濁し、濾過し、真空で濃縮し、１０ｍＢａｒ下、４５℃で４８時間乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、４７．７ｇ（収率６９％）を無色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３００（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ１．３４－１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．７１－１．８５（ｍ，２Ｈ），２．００－２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３８（ｍ，１Ｈ），２．５０（ｄｄ，１Ｈ），２．５４－２．７４（ｍ，２Ｈ），２．８３－２．９９（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．７８－４．０４（ｍ，４Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化61】
圧力容器に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート（８１．２ｇ、２１６ｍｍｏｌ）、ピペリジン－４－アミン（４３．３ｇ、４３３ｍｍｏｌ、２当量）、メチルエチルケトン（２１６ｍＬ）、及びＤＩＰＥＡ（５５．９ｇ、７５．５ｍＬ、４３３ｍｍｏｌ、２当量）を入れる。混合物を８０℃で４０時間撹拌する。加熱を止め、２３℃まで冷却し、ＭＴＢＥ（６４９ｍＬ）で希釈し、水（６４９ｍＬ）、５％クエン酸水溶液（６４９ｍＬ）で洗浄し、水相をＭＴＢＥ（６４９ｍＬ）で逆抽出する。１８ＭのＮａＯＨ水溶液（３５．３ｍＬ）で撹拌することにより、合わせた水相を塩基性化し、ＤＣＭ（３×６４９ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣をヘプタン（６４９ｍＬ）に２時間懸濁し、濾過し、真空で濃縮し、１０ｍＢａｒ下、４５℃で４８時間乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、４７．７ｇ（収率６９％）を無色油状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３００（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ１．３４－１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．７１－１．８５（ｍ，２Ｈ），２．００－２．１８（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３８（ｍ，１Ｈ），２．５０（ｄｄ，１Ｈ），２．５４－２．７４（ｍ，２Ｈ），２．８３－２．９９（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．７８－４．０４（ｍ，４Ｈ）。
【0079】
調製物３５
８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
ＡＣＮ（１１６４ｍＬ）中の８－クロロ－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５１．４ｇ、２３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＩＳ（６９．５ｇ、３０３ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加し、混合物を２３℃で７２時間撹拌する。真空中で濃縮する。残渣を２－Ｍｅ－ＴＨＦ（５１４ｍＬ）に溶解し、２５％のＮａ２Ｓ２Ｏ３（５１４ｍＬ）水溶液、及び９％のＮａＨＣＯ３（３×５１４ｍＬ）水溶液で洗浄する。無水ＭｇＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、７１．３ｇ（収率８８％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３４６／３４８。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ７．５３（ｄ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｍ，１Ｈ）。
８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化62】
ＡＣＮ（１１６４ｍＬ）中の８－クロロ－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（５１．４ｇ、２３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＩＳ（６９．５ｇ、３０３ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加し、混合物を２３℃で７２時間撹拌する。真空中で濃縮する。残渣を２－Ｍｅ－ＴＨＦ（５１４ｍＬ）に溶解し、２５％のＮａ２Ｓ２Ｏ３（５１４ｍＬ）水溶液、及び９％のＮａＨＣＯ３（３×５１４ｍＬ）水溶液で洗浄する。無水ＭｇＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、７１．３ｇ（収率８８％）を白色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ３４６／３４８。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ７．５３（ｄ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｍ，１Ｈ）。
【0080】
調製物３６
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
Ｎ２下で、８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２５．１ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（４８３ｍＬ）、及び１．２ＭのＫ２ＣＯ３水溶液（１８０ｍＬ）の混合物を５分間脱気する。２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１４．１ｇ、７９．６ｍｍｏｌ、１．１当量）及びＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（１．６７ｇ、１．８１ｍｍｏｌ、０．０２５当量）を添加し、５分間脱気する。２３℃で２４時間撹拌する。真空中で濃縮し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２５１ｍＬ）に溶解し、水（１２５ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。シリカゲルクロマトグラフィー ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～５０％の勾配）によって残渣を精製し、８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１６．９ｇ（収率８５％）を薄い黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２６１／２６３。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ２．２２（ｍ，３Ｈ），５．４７（ｍ，１Ｈ），５．５１（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｍ，１Ｈ）。
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化63】
Ｎ２下で、８－クロロ－３－ヨード－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２５．１ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（４８３ｍＬ）、及び１．２ＭのＫ２ＣＯ３水溶液（１８０ｍＬ）の混合物を５分間脱気する。２－イソプロペニル－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１４．１ｇ、７９．６ｍｍｏｌ、１．１当量）及びＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（１．６７ｇ、１．８１ｍｍｏｌ、０．０２５当量）を添加し、５分間脱気する。２３℃で２４時間撹拌する。真空中で濃縮し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２５１ｍＬ）に溶解し、水（１２５ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。シリカゲルクロマトグラフィー ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０～５０％の勾配）によって残渣を精製し、８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、１６．９ｇ（収率８５％）を薄い黄色固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ） ２６１／２６３。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ２．２２（ｍ，３Ｈ），５．４７（ｍ，１Ｈ），５．５１（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｍ，１Ｈ）。
【0081】
調製物３７
８－クロロ－３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（３３．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）、白金（２０．１ｇ、２．３１ｍｍｏｌ、０．０２１当量）、及びＭｅＯＨ（６５９ｍＬ）の混合物を、Ｎ２下で脱気する。３回の真空サイクルを使用して、Ｎ２雰囲気をＨ２に置き換える。混合物を２３℃で８時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨですすぐ。真空中で濃縮する。シリカゲルクロマトグラフィー ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１０～７０％の勾配）によって残渣を精製し、８－クロロ－３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、２４．２ｇ（収率６５％）を黄色固形物として得た ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）２６３／２６５。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３３（ｄ，６Ｈ），３．５１（ｄｑ，１Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），８．９２（ｍ，１Ｈ）。
８－クロロ－３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン
【化64】
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（３３．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）、白金（２０．１ｇ、２．３１ｍｍｏｌ、０．０２１当量）、及びＭｅＯＨ（６５９ｍＬ）の混合物を、Ｎ２下で脱気する。３回の真空サイクルを使用して、Ｎ２雰囲気をＨ２に置き換える。混合物を２３℃で８時間撹拌する。珪藻土のパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨですすぐ。真空中で濃縮する。シリカゲルクロマトグラフィー ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１０～７０％の勾配）によって残渣を精製し、８－クロロ－３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジンを得る。この調製の後、２４．２ｇ（収率６５％）を黄色固形物として得た ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）２６３／２６５。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３３（ｄ，６Ｈ），３．５１（ｄｑ，１Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），８．９２（ｍ，１Ｈ）。
【0082】
調製物３８
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２２．７ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（３７．９ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．５ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２３．５ｇ、２３８ｍｍｏｌ、３当量）、及び１，４－ジオキサン（３９６ｍＬ）の混合物を、Ｎ２下で脱気する。ＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（４．５３ｇ、４．７５ｍｍｏｌ、０．０６当量）を添加し、混合物を５分間脱気する。１００℃で４８時間加熱する。２３℃に冷却し、真空中で濃縮し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２２７ｍＬ）に溶解し、水（１２７ｍＬ）で洗浄する。水相を２－ＭｅＴＨＦ（１１４ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６］－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、５９．７ｇ（純度７０％、収率１００％）を褐色ゴム状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２６（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３０（ｄ，６Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），１．５２－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．９５（ｍ，２Ｈ），２．０９－２．２９（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．４３（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．９４（ｍ，３Ｈ），３．２５－３．５８（ｍ，５Ｈ），３．６２－３．９２（ｍ，３Ｈ），６．０７（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｄ，１Ｈ），７．３４（ｄ，１Ｈ），８．０３（ｍ，１Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［（３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート
【化65】
８－クロロ－３－イソプロペニル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン（２２．７ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［（４－アミノ－１－ピペリジル）メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（３７．９ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．５ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２３．５ｇ、２３８ｍｍｏｌ、３当量）、及び１，４－ジオキサン（３９６ｍＬ）の混合物を、Ｎ２下で脱気する。ＢｒｅｔｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（４．５３ｇ、４．７５ｍｍｏｌ、０．０６当量）を添加し、混合物を５分間脱気する。１００℃で４８時間加熱する。２３℃に冷却し、真空中で濃縮し、残渣を２－ＭｅＴＨＦ（２２７ｍＬ）に溶解し、水（１２７ｍＬ）で洗浄する。水相を２－ＭｅＴＨＦ（１１４ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６］－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレートを得る。この調製の後、５９．７ｇ（純度７０％、収率１００％）を褐色ゴム状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２６（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３０（ｄ，６Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），１．５２－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．９５（ｍ，２Ｈ），２．０９－２．２９（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．４３（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．９４（ｍ，３Ｈ），３．２５－３．５８（ｍ，５Ｈ），３．６２－３．９２（ｍ，３Ｈ），６．０７（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｄ，１Ｈ），７．３４（ｄ，１Ｈ），８．０３（ｍ，１Ｈ）。
【0083】
調製物３９
３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
２－プロパノール中のＨＣｌ（５．５Ｍ、８６ｍＬ、６当量）を、２－プロパノール（４７６ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（５９．５ｇ、純度７０％、７９．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加する。混合物を９５℃で４時間加熱する。２３℃に冷却し、真空中で濃縮する。残渣を２－ＭｅＴＨＦ（４７６ｍＬ）に懸濁し、ＮａＯＨの２Ｍ水溶液（１９８ｍＬ）を添加し、２３℃で５分間撹拌する。珪藻土のパッドを通して濾過し、２－ＭｅＴＨＦですすぐ。有機相を２０％クエン酸水溶液（２×４７６ｍＬ）で抽出する。合わせた水相をＮａＯＨの１８．４Ｍ水溶液（４７６ｍＬ）で処理し、２－ＭｅＴＨＦ（２×４７６ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣を２３℃でＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール樹脂（４０～６３μｍ；充填量＝１．４６ｍｍｏｌ／ｇ；１０．８ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）で処理し、６５℃に１８時間加熱する。２３℃に冷却し、濾過し、真空中で濃縮して、３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、２７．２ｇ（収率７６％）をオレンジ色の固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２６（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３０（ｄ，６Ｈ），１．５１－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．９４（ｍ，２Ｈ），２．０７－２．２３（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．４２（ｍ，３Ｈ），２．５８－２．７６（ｍ，２Ｈ），２．７６－２．９２（ｍ，３Ｈ），３．２８－３．５９（ｍ，５Ｈ），３．６６－３．７８（ｍ，１Ｈ），６．０４（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｂｓ，１Ｈ），７．３４（ｂｓ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ）。
３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン
【化66】
２－プロパノール中のＨＣｌ（５．５Ｍ、８６ｍＬ、６当量）を、２－プロパノール（４７６ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－カルボキシレート（５９．５ｇ、純度７０％、７９．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加する。混合物を９５℃で４時間加熱する。２３℃に冷却し、真空中で濃縮する。残渣を２－ＭｅＴＨＦ（４７６ｍＬ）に懸濁し、ＮａＯＨの２Ｍ水溶液（１９８ｍＬ）を添加し、２３℃で５分間撹拌する。珪藻土のパッドを通して濾過し、２－ＭｅＴＨＦですすぐ。有機相を２０％クエン酸水溶液（２×４７６ｍＬ）で抽出する。合わせた水相をＮａＯＨの１８．４Ｍ水溶液（４７６ｍＬ）で処理し、２－ＭｅＴＨＦ（２×４７６ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残渣を２３℃でＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール樹脂（４０～６３μｍ；充填量＝１．４６ｍｍｏｌ／ｇ；１０．８ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）で処理し、６５℃に１８時間加熱する。２３℃に冷却し、濾過し、真空中で濃縮して、３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミンを得る。この調製の後、２７．２ｇ（収率７６％）をオレンジ色の固形物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４２６（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３０（ｄ，６Ｈ），１．５１－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．９４（ｍ，２Ｈ），２．０７－２．２３（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．４２（ｍ，３Ｈ），２．５８－２．７６（ｍ，２Ｈ），２．７６－２．９２（ｍ，３Ｈ），３．２８－３．５９（ｍ，５Ｈ），３．６６－３．７８（ｍ，１Ｈ），６．０４（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｂｓ，１Ｈ），７．３４（ｂｓ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ）。
【0084】
実施例８
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
ＴＥＡ（１６．３ｇ、２２．４ｍＬ、１６１ｍｍｏｌ、４当量）、及びＤＣＭ（３４ｍＬ）中の塩化アクリロイル（３．７９ｇ、３．４０ｍＬ、４０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、ＤＣＭ（２６８ｍＬ）中の３－イソプロピル－Ｎ－［１－［［（２Ｓ）－モルホリン－２－イル］メチル］－４－ピペリジル］－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－アミン（１７．７ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴加し、１５分間撹拌する。９％のＮａＨＣＯ３水溶液（１４２ｍＬ）を加え、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮する。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０～１０％の勾配）のシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オンを得る。この調製の後、１２．９ｇ（収率６７％）をベージュ色の泡状物として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４８０（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ） δ１．３０（ｄ，６Ｈ），１．５２－１．７１（ｍ，２Ｈ），１．８３－１．９５（ｍ，２Ｈ），２．１０－２．３０（ｍ，２Ｈ），２．３６－２．４６（ｍ，２Ｈ），２．７４－３．２３（ｍ，３Ｈ），３．３１－３．６０（ｍ，５Ｈ），３．７８－４．０２（ｍ，２Ｈ），４．０８－４．４７（ｍ，１Ｈ），５．７１（ｄ，１Ｈ），６．０６（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，１Ｈ），７．３９（ｄ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ）。
１－［（２Ｒ）－２－［［４－［［３－イソプロピル－６－（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－８－イル］アミノ］－１－ピペリジル］メチル］モルホリン－４－イル］プロパ－２－エン－１－オン
【化67】
【0085】
生物学的アッセイ
以下のアッセイは、本明細書に記載の化合物が、ＣＤＫ７活性の阻害剤であることを示す。またアッセイの結果により、本明細書に記載の化合物が、がん細胞におけるＣＤＫ７シグナル伝達を阻害することが示される。追加的に、本明細書に記載の化合物は、がん細胞株における増殖及びがんの異種移植腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を阻害する。
以下のアッセイは、本明細書に記載の化合物が、ＣＤＫ７活性の阻害剤であることを示す。またアッセイの結果により、本明細書に記載の化合物が、がん細胞におけるＣＤＫ７シグナル伝達を阻害することが示される。追加的に、本明細書に記載の化合物は、がん細胞株における増殖及びがんの異種移植腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を阻害する。
【0086】
「ＩＣ５０」は、その薬物について可能な最大阻害応答の５０％を生じる薬物の濃度、又は代替的に、受容体へのリガンド特異的結合の５０％置換を生じる薬物の濃度を指し、相対ＩＣ５０値は、蛍光ユニットを使用して、プレート上の「ＭＩＮ」及び「ＭＡＸ」対照に関して阻害パーセントを計算し、次いで１０点用量反応データを４パラメーターロジスティック式に当てはめることにより決定される。
【0087】
ＣＤＫ７及びＣＤＫ９キナーゼ活性アッセイ
これらのアッセイの目的は、本明細書に記載の化合物の、ＣＤＫ７／ＣｙｃｌｉｎＨ／Ｍａｔ１複合体のキナーゼ活性を阻害する能力を測定することである。本明細書に記載の化合物がＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対して何らかの親和性を示すかどうかを実証するために、生化学的アッセイは、化合物と酵素のプレインキュベーションなしで、又は３時間のプレインキュベーションをして行われる。機能アッセイにより、本明細書に記載の化合物がＣＤＫ７及びＣＤＫ９キナーゼ活性を阻害する能力を示すかどうかについての裏付けが提供される。以下のアッセイで使用される全てのリガンド、溶媒、及び試薬は、商業的供給源から容易に入手可能であるか、又は当業者によって容易に合成され得る。ＣＤＫ７及びＣＤＫ９についてのＩＣ５０の決定は、以下のように決定される。
これらのアッセイの目的は、本明細書に記載の化合物の、ＣＤＫ７／ＣｙｃｌｉｎＨ／Ｍａｔ１複合体のキナーゼ活性を阻害する能力を測定することである。本明細書に記載の化合物がＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対して何らかの親和性を示すかどうかを実証するために、生化学的アッセイは、化合物と酵素のプレインキュベーションなしで、又は３時間のプレインキュベーションをして行われる。機能アッセイにより、本明細書に記載の化合物がＣＤＫ７及びＣＤＫ９キナーゼ活性を阻害する能力を示すかどうかについての裏付けが提供される。以下のアッセイで使用される全てのリガンド、溶媒、及び試薬は、商業的供給源から容易に入手可能であるか、又は当業者によって容易に合成され得る。ＣＤＫ７及びＣＤＫ９についてのＩＣ５０の決定は、以下のように決定される。
【0088】
ＣＤＫ７／ＣｙｃｌｉｎＨ／ＭＡＴ１の阻害についての生化学的アッセイ
本明細書に記載の化合物のＩＣ５０活性は、ＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ及びペプチド基質の存在下で精製ヒト組換え酵素を使用した放射標識フィルター結合（ＦＢ）アッセイを使用して決定される。選択されるＡＴＰ濃度は、ＡＴＰに対する酵素Ｋｍ又はその付近である。
本明細書に記載の化合物のＩＣ５０活性は、ＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ及びペプチド基質の存在下で精製ヒト組換え酵素を使用した放射標識フィルター結合（ＦＢ）アッセイを使用して決定される。選択されるＡＴＰ濃度は、ＡＴＰに対する酵素Ｋｍ又はその付近である。
【0089】
反応は、９６ウェルポリスチレンプレート中で、１ウェル当たり２５μＬの最終容量で行われる。２０％ＤＭＳＯ中の５μＬの試験化合物、１０μＬの基質溶液（ＡＴＰ／３３ＰＡＴＰ及びＣＤＫ７／９）及び１０μＬの酵素溶液を混合する。基質溶液を、４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、２ｍＭのＤＴＴ及び２０ｍＭのＨＥＰＥＳのキナーゼ緩衝液中に希釈された、最終濃度１００μＭのＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ（ＮＥＮ １０μＣｉ／μＬ、３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）及び２５０μＭのＣＤＫ７／９ペプチド（（ＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＫＫＫＫ）（配列番号１））を得るように調製する。キナーゼ緩衝液中に希釈された最終濃度１ｎＭのＣＤＫ７／ＣｙｃｌｉｎＨ／Ｍａｔ１酵素［Ｐｒｏｑｉｎａｓｅ ０３６６－０３６０－４ Ｌｏｔ ００２）］で酵素溶液を調製する。試験化合物を２０％ＤＭＳＯで１：３に段階希釈して、２０μＭの開始濃度で１０点曲線を作成する。試験化合物を含まない２０％ＤＭＳＯ緩衝液単独を高対照（任意の阻害剤の非存在下での全活性）として用い、５００ｍＭ ＥＤＴＡを使用して酵素活性の非存在下でのバックグラウンドのレベルを決定する（低対照）。５μＬの化合物を１０μＬの酵素溶液と混合した後、プレートを２２℃で０又は１８０分間インキュベートする。その後、１０μＬの基質溶液を添加して反応を開始させ、２２℃で５０分間インキュベートする。反応を、８０μＬの冷１０％オルトリン酸溶液を添加することによって終了させる。フィルタープレート（不透明、無菌のフィルタープレート）を、各ウェルに１０μＬの１０％オルトリン酸溶液で予備洗浄する。１００μＬの混合物をホスホセルロースフィルターに移し、室温で４５分間インキュベートする。フィルタープレートを、フィルタープレートプロセッサーで２００μＬの０．５％オルトリン酸で３回洗浄する。３３Ｐｉの取り込み（「ｃｐｍ」の計数）は、各ウェルに８０μＬのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（商標）を添加し、１時間後にカウンターで読むことによって決定される。データは、ＧＥＮＥＤＡＴＡ ＳＣＲＥＥＮＥＲ（登録商標）ツールを介して処理される。データは、４パラメーター非線形ロジスティック式（４パラメーターロジスティック濃度－応答曲線）を使用して分析され、Ｙ＝ｂｏｔ＋［（ｔｏｐ－ｂｏｔ）／１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｓｌｏｐｅ］、式中、Ｙ＝阻害％、Ｘ＝ｙ阻害％をもたらす濃度、Ｂｏｔｔｏｍ＝曲線によって達成されるｙの最小値、Ｔｏｐ＝曲線によって達成されるｙの最大値、及びＳｌｏｐｅ＝ＩＣ５０での曲線の勾配。阻害％＝［（最大中央値－ｘ／最大中央値－最小中央値）］・１００
ＩＣ５０：所与の応答（リガンド結合、酵素応答）を５０％減少させる化合物の濃度。
ＩＣ５０：所与の応答（リガンド結合、酵素応答）を５０％減少させる化合物の濃度。
【0090】
実施例１、２、４、５、６、７、及び８に記載の化合物は、プレインキュベーションなしのＣＤＫ７において、それぞれ０．１２３μＭ、０．２５６μＭ、０．１５５μＭ、０．３６７μＭ、０．０６７４μＭ、０．０８４５μＭ、及び０．０６５６μＭのＩＣ５０を示す。実施例１、２、４、５、６、７、及び８とのＣＤＫ７酵素の３時間のプレインキュベーションの後、これらはそれぞれ、０．０１４３μＭ、０．０２６６μＭ、０．０１４３μＭ、０．０４１５μＭ、０．００３９６μＭ、０．００６２５μＭ、及び０．００５７４μＭのＩＣ５０を示す。これらのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８がＣＤＫ７を阻害することを示している。
【0091】
ＣＤＫ９／ＣｙｃｌｉｎＴ１キナーゼ活性の阻害についてのアッセイ：
阻害剤のＩＣ５０活性は、ＡＴＰ及びペプチド基質の存在下で精製ヒト組換え酵素を使用した放射標識フィルター結合（ＦＢ）アッセイを使用して決定される。選択されるＡＴＰ濃度は、ＡＴＰに対する酵素Ｋｍ又はその付近である。反応は、９６ウェルポリスチレンプレート中で、１ウェル当たり２５μＬの最終容量で行われる。２０％ＤＭＳＯ中の５μＬの試験化合物、１０μＬの基質溶液（ＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ及びＣＤＫ７／９）及び１０μＬの酵素溶液を混合する。基質溶液を、４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．００２５％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、１．５８ｍＭのＤＴＴ及び１５．８０ｍＭのＨＥＰＥＳのキナーゼ緩衝液中に希釈された、最終濃度１００μＭのＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ（ＮＥＮ １０ｕＣｉ／μＬ、３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）及び２００μＭのＣＤＫ７／９ペプチド（（ＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＫＫＫＫ）（配列番号１））を得るように調製する。キナーゼ緩衝液中に希釈された最終濃度７．５ｎＭのＣＤＫ９／ＣｙｃｌｉｎＴ１酵素［Ｐｒｏｑｉｎａｓｅ ０３７１－０３４５－１（Ｌｏｔ ００４）］で酵素溶液を調製する。試験化合物を２０％ＤＭＳＯで１：３に段階希釈して、２０μＭの開始濃度で１０点曲線を作成する。試験化合物を含まない２０％ＤＭＳＯ緩衝液単独を高対照（任意の阻害剤の非存在下での全活性）として用い、５００ｍＭ ＥＤＴＡを使用して酵素活性の非存在下でのバックグラウンドのレベルを決定する（低対照）。５μＬの化合物を１０μＬの酵素溶液と混合した後、プレートを２２℃で０又は１８０分間インキュベートする。その後、１０μＬの基質溶液を添加して反応を開始させ、２２℃で６０分間インキュベートする。反応を、８０μＬの冷１０％オルトリン酸溶液を添加することによって終了させる。フィルタープレート（不透明、無菌のフィルタープレート）を、１ウェル当たり１０μＬの１０％オルトリン酸溶液で予備洗浄する。１００μＬの混合物をホスホセルロースフィルターに移し、室温で４５分間インキュベートする。フィルタープレートを、フィルタープレートプロセッサーで２００μＬの０．５％オルトリン酸で３回洗浄する。８０μＬのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（商標）を各ウェルに添加し、１時間後にシンチレーションカウンターで読み取る。データは、ＧＥＮＥＤＡＴＡ ＳＣＲＥＥＮＥＲ（登録商標）ツールを介して処理される。データは、４パラメーター非線形ロジスティック式（４パラメーターロジスティック濃度－応答曲線）を使用して分析され、Ｙ＝ｂｏｔ＋［（ｔｏｐ－ｂｏｔ）／１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｓｌｏｐｅ］、式中、Ｙ＝阻害％、Ｘ＝ｙ阻害％をもたらす濃度、Ｂｏｔｔｏｍ＝曲線によって達成されるｙの最小値、Ｔｏｐ＝曲線によって達成されるｙの最大値、及びＳｌｏｐｅ＝ＩＣ５０での曲線の勾配。阻害％＝［（最大中央値－ｘ／最大中央値－最小中央値）］・１００ ＩＣ５０：所与の反応（リガンド結合、酵素反応）を５０％減少させる化合物の濃度。相対ＩＣ５０：化合物の最大応答の半分を与える濃度。
阻害剤のＩＣ５０活性は、ＡＴＰ及びペプチド基質の存在下で精製ヒト組換え酵素を使用した放射標識フィルター結合（ＦＢ）アッセイを使用して決定される。選択されるＡＴＰ濃度は、ＡＴＰに対する酵素Ｋｍ又はその付近である。反応は、９６ウェルポリスチレンプレート中で、１ウェル当たり２５μＬの最終容量で行われる。２０％ＤＭＳＯ中の５μＬの試験化合物、１０μＬの基質溶液（ＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ及びＣＤＫ７／９）及び１０μＬの酵素溶液を混合する。基質溶液を、４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．００２５％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、１．５８ｍＭのＤＴＴ及び１５．８０ｍＭのＨＥＰＥＳのキナーゼ緩衝液中に希釈された、最終濃度１００μＭのＡＴＰ／［３３Ｐ］ＡＴＰ（ＮＥＮ １０ｕＣｉ／μＬ、３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）及び２００μＭのＣＤＫ７／９ペプチド（（ＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＫＫＫＫ）（配列番号１））を得るように調製する。キナーゼ緩衝液中に希釈された最終濃度７．５ｎＭのＣＤＫ９／ＣｙｃｌｉｎＴ１酵素［Ｐｒｏｑｉｎａｓｅ ０３７１－０３４５－１（Ｌｏｔ ００４）］で酵素溶液を調製する。試験化合物を２０％ＤＭＳＯで１：３に段階希釈して、２０μＭの開始濃度で１０点曲線を作成する。試験化合物を含まない２０％ＤＭＳＯ緩衝液単独を高対照（任意の阻害剤の非存在下での全活性）として用い、５００ｍＭ ＥＤＴＡを使用して酵素活性の非存在下でのバックグラウンドのレベルを決定する（低対照）。５μＬの化合物を１０μＬの酵素溶液と混合した後、プレートを２２℃で０又は１８０分間インキュベートする。その後、１０μＬの基質溶液を添加して反応を開始させ、２２℃で６０分間インキュベートする。反応を、８０μＬの冷１０％オルトリン酸溶液を添加することによって終了させる。フィルタープレート（不透明、無菌のフィルタープレート）を、１ウェル当たり１０μＬの１０％オルトリン酸溶液で予備洗浄する。１００μＬの混合物をホスホセルロースフィルターに移し、室温で４５分間インキュベートする。フィルタープレートを、フィルタープレートプロセッサーで２００μＬの０．５％オルトリン酸で３回洗浄する。８０μＬのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（商標）を各ウェルに添加し、１時間後にシンチレーションカウンターで読み取る。データは、ＧＥＮＥＤＡＴＡ ＳＣＲＥＥＮＥＲ（登録商標）ツールを介して処理される。データは、４パラメーター非線形ロジスティック式（４パラメーターロジスティック濃度－応答曲線）を使用して分析され、Ｙ＝ｂｏｔ＋［（ｔｏｐ－ｂｏｔ）／１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｓｌｏｐｅ］、式中、Ｙ＝阻害％、Ｘ＝ｙ阻害％をもたらす濃度、Ｂｏｔｔｏｍ＝曲線によって達成されるｙの最小値、Ｔｏｐ＝曲線によって達成されるｙの最大値、及びＳｌｏｐｅ＝ＩＣ５０での曲線の勾配。阻害％＝［（最大中央値－ｘ／最大中央値－最小中央値）］・１００ ＩＣ５０：所与の反応（リガンド結合、酵素反応）を５０％減少させる化合物の濃度。相対ＩＣ５０：化合物の最大応答の半分を与える濃度。
【0092】
実施例１、２、４、５、６、７、及び８に記載の化合物は、プレインキュベーションなしのＣＤＫ９について（３時間のプレインキュベーション）、それぞれ１．７７μＭ、３．１８μＭ、８．０５μＭ、７．１３μＭ、１．６１μＭ、２．０３μＭ、及び２．１４μＭのＩＣ５０を示す。これらのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８がＣＤＫ９活性を強力に阻害しないことを示している。
【0093】
まとめると、上記のアッセイからのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８の化合物がＣＤＫ９よりもＣＤＫ７を選択的に阻害することを実証している。
【0094】
ＣＤＫ７及びＣＤＫ９の細胞メカニズムアッセイ
これらのアッセイの目的は、本明細書に記載の化合物の、インビトロでがん細胞におけるＣＤＫ７及びＣＤＫ９のシグナル伝達を阻害する能力を測定することである。
これらのアッセイの目的は、本明細書に記載の化合物の、インビトロでがん細胞におけるＣＤＫ７及びＣＤＫ９のシグナル伝達を阻害する能力を測定することである。
【0095】
ホスホ－カルボキシル末端ドメイン（Ｒｂｐ２）（Ｓｅｒ２）ｐ－ＣＴＤ（Ｓ２）細胞ベースのＡｃｕｍｅｎアッセイ
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Å培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。次いで、細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで最初に可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ホスホＣＴＤ Ｓｅｒ２ Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ５０９５－１００）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Å培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。次いで、細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで最初に可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ホスホＣＴＤ Ｓｅｒ２ Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ５０９５－１００）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。
【0096】
翌日、細胞を、ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の二次抗体（１：２０００希釈、ヤギ抗ウサギＩｇＭ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（商標）４８８）５０μＬ／ウェルとともに室温で１時間インキュベートする。ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄した後、５０μｇ／ｍＬのＲＮＡａｓｅ１００μＬ及びＰＢＳ中の１：１０００のヨウ化プロピジウム希釈物を各ウェルに添加する。プレートを密封し、ベンチ上で室温で１時間インキュベートする（光から保護する）。プレートをＡｃｕｍｅｎのＦＬ２（平均強度）、及びＦＬ３（全強度）で分析する。蛍光プレートを、ＡＣＵＭＥＮ ＥＸＰＬＯＲＥＲ（商標）［ＴＴＰ ＬＡＢＴＥＣＨ ＬＴＤによって製造されたレーザー走査蛍光マイクロプレートサイトメーター］を用いて走査して、セリン２における抗ホスホカルボキシル末端ドメイン（ｐＣＴＤ）を測定する。画像分析は、陽性細胞を同定するための細胞蛍光シグナルに基づく。ｐＣＴＤ（Ｓ２）陽性細胞は、閾値を超える５００～５３０の平均強度によって同定される。ヨウ化プロピジウム／ＤＮＡからの５７５～６４０の全強度を使用して、個々の細胞を同定する。アッセイ出力は、％ｐＣＴＤ陽性細胞である。
【0097】
ＩＣ５０は、ＧＥＮＥ ＤＡＴＡ（商標）を使用して各出力について４パラメーターロジスティックにカーブフィッティングすることにより決定される。実施例１、２、４、５、６、７、及び８に記載の化合物は、ｐｈｏｓｐｈｏＣＴＤ（Ｓ２）に対して、それぞれ５．７３μＭ、６．３６μＭ、３．７１μＭ、７．７９μＭ、３．７９μＭ、２．９２μＭ、及び２．５９μＭのＩＣ５０を示す。これらのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８が細胞中のＣＤＫ９を強力に阻害しないことを示している。
【0098】
ホスホ－カルボキシル末端ドメイン（Ｒｂｐ２）（Ｓｅｒ５）ｐ－ＣＴＤ（Ｓ５）細胞ベースのＡｃｕｍｅｎアッセイ
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Ａ培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。また細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ホスホＣＴＤ Ｓｅｒ５ Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号Ａ３００－６５５Ａ）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Ａ培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。また細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ホスホＣＴＤ Ｓｅｒ５ Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号Ａ３００－６５５Ａ）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。
【0099】
翌日、細胞を、ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の二次抗体（１：２０００希釈、ヤギ抗ウサギＩｇＭ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（商標）４８８）５０μＬ／ウェルとともに室温で１時間インキュベートする。ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄した後、５０μｇ／ｍＬのＲＮＡａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）１００μＬ及びＰＢＳ中の１：１０００のヨウ化プロピジウム希釈物を各ウェルに添加する。プレートを密封し、ベンチ上で室温で１時間インキュベートする（光から保護する）。プレートをＡｃｕｍｅｎのＦＬ２（平均強度）、及びＦＬ３（全強度）で分析する。蛍光プレートを、ＡＣＵＭＥＮ ＥＸＰＬＯＲＥＲ（商標）［ＴＴＰ ＬＡＢＴＥＣＨ ＬＴＤによって製造されたレーザー走査蛍光マイクロプレートサイトメーター］を用いて走査して、セリン５における抗ホスホカルボキシル末端ドメイン（ｐＣＴＤ）を測定する。画像分析は、陽性細胞を同定するための細胞蛍光シグナルに基づく。ｐＣＴＤ（Ｓ５）陽性細胞は、閾値を超える５００～５３０の平均強度によって同定される。ヨウ化プロピジウム／ＤＮＡからの５７５～６４０の全強度を使用して、個々の細胞を同定する。アッセイ出力は、％ｐＣＴＤ陽性細胞である。ＩＣ５０は、ＧＥＮＥ ＤＡＴＡ（商標）を使用して各出力について４パラメーターロジスティックにカーブフィッティングすることにより決定される。
【0100】
実施例１、２、４、５、６、７、及び８に記載の化合物は、ｐＣＴＤ Ｓｅｒ５に対して、それぞれ０．１６１μＭ、０．１６２μＭ、０．０５５１μＭ、０．１１８μＭ、０．０１５９μＭ、０．０７１７μＭ、及び０．０２６２μＭのＩＣ５０を示す。これらのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８がＣＤＫ７細胞活性を阻害することを示している。
【0101】
ｃＭｙｃ細胞ベースのＡｃｕｍｅｎアッセイ
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Å培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。次いで、細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０μＭ～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。また細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ｃＭｙｃ抗体［Ｙ６９］Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ３２０７２）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。翌日、細胞を、ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の二次抗体（１：２０００希釈、ヤギ抗ウサギＩｇＭ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（商標）４８８）５０μＬ／ウェルとともに室温で１時間インキュベートする。ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄した後、５０μｇ／ｍＬのＲＮＡａｓｅ１００μＬ及びＰＢＳ中の１：１０００のヨウ化プロピジウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）希釈物を各ウェルに添加する。プレートを密封し、ベンチ上で室温で１時間インキュベートする（光から保護する）。プレートをＡｃｕｍｅｎのＦＬ２（平均強度）、及びＦＬ３（全強度）で分析する。蛍光プレートを、ＡＣＵＭＥＮ ＥＸＰＬＯＲＥＲ（商標）［ＴＴＰ ＬＡＢＴＥＣＨ ＬＴＤによって製造されたレーザー走査蛍光マイクロプレートサイトメーター］を用いて走査して、セリン５における抗ホスホカルボキシル末端ドメイン（ｐＣＴＤ）を測定する。画像分析は、陽性細胞を同定するための細胞蛍光シグナルに基づく。ｐＣＴＤ（Ｓ５）陽性細胞は、閾値を超える５００～５３０の平均強度によって同定される。ヨウ化プロピジウム／ＤＮＡからの５７５～６４０の全強度を使用して、個々の細胞を同定する。アッセイ出力は、％ｐＣＴＤ陽性細胞である。ＩＣ５０は、ＧＥＮＥ ＤＡＴＡ（商標）を使用して各出力について４パラメーターロジスティックにカーブフィッティングすることにより決定される。
ＨＣＴ１１６細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮａＰｙｒ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＭｃＣｏｙの５Å培地修飾培地中で培養し、１００μＬ容量中の１ウェル当たり５，０００細胞の密度で９６ウェル平底プレート中で平板培養する（７０％コンフルエントになる前に）。次いで、細胞を、細胞培養インキュベーター（５％ＣＯ２、９５％相対湿度（ＲＨ）、及び３７℃）で一晩インキュベートし、プレートに付着させる。翌朝、細胞に化合物が投与される。化合物阻害剤を、０．６％ＤＭＳＯを含有する培地中に６０μＭで可溶化する。続いて、化合物連続希釈物（１：３）を、６０μＭ～０．００３μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、連続希釈プレートから１００μＬの培地を付着させた細胞を含有するアッセイプレートに５０μＬを添加することで投与し、最終化合物濃度が２０μＭ～０．００１μＭの範囲で投与されて、最終ＤＭＳＯ濃度０．２％を生じる。最高点については０．２％のＤＭＳＯを含有する培地を使用し、最低点については、０．２％のＤＭＳＯを含有する増殖培地中の０．８３μＭの最終濃度に希釈した対照化合物を使用する。化合物を投与した後、細胞プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。増殖培地を注意深く除去し、１００μＬの４％パラホルムアルデヒドを室温で３０分間添加することにより細胞を固定する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞透過のために室温で１５分間１００μＬの冷ＭｅＯＨとともにインキュベートする。また細胞をＰＢＳ（各１００μＬ）で２回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で３０分間ブロックする。１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に希釈した１：１０００一次抗体（抗ｃＭｙｃ抗体［Ｙ６９］Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ３２０７２）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。翌日、細胞を、ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の二次抗体（１：２０００希釈、ヤギ抗ウサギＩｇＭ ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（商標）４８８）５０μＬ／ウェルとともに室温で１時間インキュベートする。ＰＢＳ（１００μＬ／ウェル）で３回洗浄した後、５０μｇ／ｍＬのＲＮＡａｓｅ１００μＬ及びＰＢＳ中の１：１０００のヨウ化プロピジウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）希釈物を各ウェルに添加する。プレートを密封し、ベンチ上で室温で１時間インキュベートする（光から保護する）。プレートをＡｃｕｍｅｎのＦＬ２（平均強度）、及びＦＬ３（全強度）で分析する。蛍光プレートを、ＡＣＵＭＥＮ ＥＸＰＬＯＲＥＲ（商標）［ＴＴＰ ＬＡＢＴＥＣＨ ＬＴＤによって製造されたレーザー走査蛍光マイクロプレートサイトメーター］を用いて走査して、セリン５における抗ホスホカルボキシル末端ドメイン（ｐＣＴＤ）を測定する。画像分析は、陽性細胞を同定するための細胞蛍光シグナルに基づく。ｐＣＴＤ（Ｓ５）陽性細胞は、閾値を超える５００～５３０の平均強度によって同定される。ヨウ化プロピジウム／ＤＮＡからの５７５～６４０の全強度を使用して、個々の細胞を同定する。アッセイ出力は、％ｐＣＴＤ陽性細胞である。ＩＣ５０は、ＧＥＮＥ ＤＡＴＡ（商標）を使用して各出力について４パラメーターロジスティックにカーブフィッティングすることにより決定される。
【0102】
実施例１、２、４、５、６、７、及び８に記載の化合物は、ｃＭｙｃに対して、０．０８２μＭ、０．０９４７μＭ、０．０３８μＭ、０．１４μＭ、０．００７９１μＭ、０．０１３８μＭ、及び０．０２４５μＭの相対ＩＣ５０を示す。これらのデータは、実施例１、２、４、５、６、７、及び８が、ＨＣＴ１１６細胞におけるｃＭｙｃの転写を阻害することを示している。
【0103】
選択性プロファイリング実験：ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ＳｃａｎＭａｘ
この研究の目的は、実施例８の化合物のインビトロ選択性プロファイルを作成することである。選択性に対処するために、ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）スクリーニングプラットフォームを使用して、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎで４６８個のヒトキナーゼのパネルで実施例８の化合物を試験する。ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）スクリーニングプラットフォームは、新規かつ独自開発の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）活性部位特異的競合結合アッセイを、試験化合物と４５０を超えるヒトキナーゼ及び疾患関連変異体バリアントとの間の相互作用を定量的に測定するために用いる。ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）アッセイはＡＴＰを必要としないため、ＡＴＰ濃度に依存する可能性があるＩＣ５０値とは対照的に、真の熱力学的相互作用親和性を報告する。
この研究の目的は、実施例８の化合物のインビトロ選択性プロファイルを作成することである。選択性に対処するために、ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）スクリーニングプラットフォームを使用して、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎで４６８個のヒトキナーゼのパネルで実施例８の化合物を試験する。ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）スクリーニングプラットフォームは、新規かつ独自開発の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）活性部位特異的競合結合アッセイを、試験化合物と４５０を超えるヒトキナーゼ及び疾患関連変異体バリアントとの間の相互作用を定量的に測定するために用いる。ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）アッセイはＡＴＰを必要としないため、ＡＴＰ濃度に依存する可能性があるＩＣ５０値とは対照的に、真の熱力学的相互作用親和性を報告する。
【0104】
キナーゼ活性部位に結合して固定化リガンドへのキナーゼの結合を直接（立体的に）又は間接的に（アロステリックに）阻害する化合物は、固体支持体に捕捉されるキナーゼの量を減らすであろう。しかしながら、キナーゼに結合しない化合物は、固体支持体に捕捉されるキナーゼの量に影響を及ぼさない。化合物活性を、会合したＤＮＡ標識を検出するｑＰＣＲ法を使用して対照試料と比較して試験試料に捕捉されたキナーゼの量を測定することによって監視する。ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）スクリーニングプラットフォームの詳細については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ．ｃｏｍで見出すことができる。
【0105】
４６８キナーゼパネルへの結合を監視するためのアッセイをＤｉｓｃｏｖｅｒＸ（登録商標）Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）で行う。実施例８は、２０μＭ、２μＭ、及び０．２μＭの最終濃度で試験される。キナーゼをｑＰＣＲ検出のためにＤＮＡでタグ付けする。ストレプトアビジンコーティング磁気ビーズをビオチン化低分子リガンドで室温で３０分間処理して、キナーゼアッセイ用のアフィニティー樹脂を得る。リガンドビーズを過剰量のビオチンでブロックし、ブロッキング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ ＳｅａＢｌｏｃｋ、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、及び１ｍＭのＤＴＴ）で洗浄して結合していないリガンドを除去し、非特異的結合を減少させる。結合反応物を、１×結合緩衝液（２０％ＳｅａＢｌｏｃｋ、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、及び６ｍＭのＤＴＴ）中で、キナーゼ、リガンド結合アフィニティービーズ、及び試験化合物を組み合わせることによって構築する。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中４０倍ストックとして調製し、アッセイに直接希釈する。全ての反応を、０．０２ｍｌの最終体積でポリプロピレン３８４ウェルプレートで行う。アッセイプレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートし、アフィニティービーズを洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０）で洗浄する。その後、ビーズを溶出緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、０．５μＭ非ビオチン化親和性リガンド）中に再懸濁し、振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。溶出液中のキナーゼ濃度をｑＰＣＲによって測定する。
【0106】
一次スクリーニング結合相互作用の結果を「対照に対する％」として報告し、ここで、数値が小さいほど、マトリックス内のヒットが強いことを示す。
％Ｃｔｒｌの計算：
陰性対照＝ＤＭＳＯ（１００％Ｃｔｒｌ）
陽性対照＝対照化合物（０％Ｃｔｒｌ）
％Ｃｔｒｌの計算：
【数1】
陰性対照＝ＤＭＳＯ（１００％Ｃｔｒｌ）
陽性対照＝対照化合物（０％Ｃｔｒｌ）
【0107】
実施例８の化合物は、４６８タンパク質キナーゼパネルに対して優れた選択性を示した。ＣＤＫ７は、実施例８の化合物の０．２μＭ濃度で３５％未満の対照活性を示す唯一のキナーゼであった。具体的には、実施例８の化合物は、ＣＤＫ７に対して約４％の対照活性（すなわち、約９６％の阻害）を示した。
【0108】
細胞増殖アッセイ
表１のデータは、実施例１の化合物が特定の腫瘍細胞株の増殖及び生存率を阻害することを示している。細胞株を、１ウェル当たり１００μＬの増殖培地中、１ウェル当たり細胞５０００個の密度で、白色の９６ウェル細胞培養プレートにプレーティングする。細胞株及び培地の情報については表１を参照されたい。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートする。翌日、試験化合物の連続希釈物を、化合物をＤＭＳＯ中に１：３で１０点で希釈することによって調製する。ＤＭＳＯプレートは最終濃度の１０００倍である。ＣＤＫ７阻害剤に加えて、ＤＭＳＯ単独カラムが最大増殖対照として含まれ、１０μＭスタウロスポリン最終カラムが最大増殖阻害対照として含まれる。次いで、１０００×ＤＭＳＯプレートからウェル当たり２μＬをＯＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ、カタログ番号３１９８５－０７０）１９８μＬに添加することによって１０倍希釈プレートを調製する。１×最終濃度のために、１ウェル当たり１００μＬの増殖培地を含有する細胞プレートに、１０×ＯＭＥＭプレートから１ウェル当たり１１μＬを添加することによって、指示された化合物で細胞を処理する。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２のインキュベーターに戻す。化合物添加の６日又は７日後、ＨＣＣ１８０６又はＡ２７８０細胞については、プレートをインキュベーターから取り出し、室温に平衡化させる。ＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（登録商標）試薬を室温で解凍し、次いで１バイアルのアッセイ緩衝液を１バイアルの基質と混合することにより調製し、穏やかに回転させて混合する。次いで、ＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（登録商標）試薬を細胞プレートに１００μＬ／ウェルで添加し、Ｔｉｔｅｒ Ｐｌａｔｅ Ｓｈａｋｅｒ上にスピード設定２で室温で１５分間置く。振盪機上で１５分間インキュベートした後、Ｗａｌｌａｃ ＶＩＣＴＯＲ ２（商標）を使用して、１ウェル当たり１秒間発光を読み取る。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアを用いて、非線形回帰及びシグモイド用量反応曲線を使用して半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を計算する。
表１のデータは、実施例１の化合物が特定の腫瘍細胞株の増殖及び生存率を阻害することを示している。細胞株を、１ウェル当たり１００μＬの増殖培地中、１ウェル当たり細胞５０００個の密度で、白色の９６ウェル細胞培養プレートにプレーティングする。細胞株及び培地の情報については表１を参照されたい。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートする。翌日、試験化合物の連続希釈物を、化合物をＤＭＳＯ中に１：３で１０点で希釈することによって調製する。ＤＭＳＯプレートは最終濃度の１０００倍である。ＣＤＫ７阻害剤に加えて、ＤＭＳＯ単独カラムが最大増殖対照として含まれ、１０μＭスタウロスポリン最終カラムが最大増殖阻害対照として含まれる。次いで、１０００×ＤＭＳＯプレートからウェル当たり２μＬをＯＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ、カタログ番号３１９８５－０７０）１９８μＬに添加することによって１０倍希釈プレートを調製する。１×最終濃度のために、１ウェル当たり１００μＬの増殖培地を含有する細胞プレートに、１０×ＯＭＥＭプレートから１ウェル当たり１１μＬを添加することによって、指示された化合物で細胞を処理する。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２のインキュベーターに戻す。化合物添加の６日又は７日後、ＨＣＣ１８０６又はＡ２７８０細胞については、プレートをインキュベーターから取り出し、室温に平衡化させる。ＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（登録商標）試薬を室温で解凍し、次いで１バイアルのアッセイ緩衝液を１バイアルの基質と混合することにより調製し、穏やかに回転させて混合する。次いで、ＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（登録商標）試薬を細胞プレートに１００μＬ／ウェルで添加し、Ｔｉｔｅｒ Ｐｌａｔｅ Ｓｈａｋｅｒ上にスピード設定２で室温で１５分間置く。振盪機上で１５分間インキュベートした後、Ｗａｌｌａｃ ＶＩＣＴＯＲ ２（商標）を使用して、１ウェル当たり１秒間発光を読み取る。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアを用いて、非線形回帰及びシグモイド用量反応曲線を使用して半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を計算する。
【表1】
【0109】
これらのデータは、実施例Ｉの化合物が乳房及び卵巣を含む種々の組織からのがん細胞株のインビトロ増殖を用量依存的に阻害することを示している。
【0110】
異種移植腫瘍モデル
このアッセイの目的は、実施例１の化合物に応答する腫瘍体積の減少を測定することである。試験化合物のインビボでの有効性を評価するために、複数の異種移植腫瘍モデルが利用される。手短に言えば、１：１ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）混合物（総体積０．２ｍＬ）中の２．５×１０６個の腫瘍細胞を、雌性無胸腺ヌードマウス（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｈａｒｌａｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に皮下注射する。腫瘍を約３００～５００ｍｍ３の所望の大きさに到達させた後、動物は、有効性試験のための５のグループに無作為に分けられる。試験化合物は、指示された用量及び計画で強制経口投与（ＰＯ）により投与される。腫瘍増殖及び体重を経時的にモニターして、有効性及び毒性の徴候を評価する。
このアッセイの目的は、実施例１の化合物に応答する腫瘍体積の減少を測定することである。試験化合物のインビボでの有効性を評価するために、複数の異種移植腫瘍モデルが利用される。手短に言えば、１：１ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）混合物（総体積０．２ｍＬ）中の２．５×１０６個の腫瘍細胞を、雌性無胸腺ヌードマウス（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｈａｒｌａｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に皮下注射する。腫瘍を約３００～５００ｍｍ３の所望の大きさに到達させた後、動物は、有効性試験のための５のグループに無作為に分けられる。試験化合物は、指示された用量及び計画で強制経口投与（ＰＯ）により投与される。腫瘍増殖及び体重を経時的にモニターして、有効性及び毒性の徴候を評価する。
【0111】
試験化合物は、精製水（ＨＥＣ）中の１％ヒドロキシエチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、０．０５％消泡剤中に製剤化され、表２に示す用量で経口胃管栄養法（最終容量０．２ｍＬ）で投与される。試験化合物は、毎週製剤化され、４℃で保存される。ビヒクルは、１用量当たり０．２ｍＬの容量を使用して上記で用いたスケジュールに従って対照群に投与される。マウスに経口胃管栄養法により投与し、腫瘍試料を終了時に収集し、－８０℃で保存する。
【0112】
腫瘍サイズ及び体重を記録し、隔週で分析する。
【0113】
実施例１の化合物は、ヒトがん異種移植モデルにおいて有意な抗腫瘍活性を示す（表２）。
【表2】
【0114】
デルタＴ／Ｃ％は、処置群におけるエンドポイント腫瘍体積がベースライン腫瘍体積にあるか、又は超える場合に算出する。式は１００×（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｃ０）である。ここで、Ｔ及びＣは、それぞれ処置群又は対照群における平均エンドポイント腫瘍体積である。Ｔ０及びＣ０は、これらの群における平均ベースライン腫瘍体積である。
【0115】
本明細書に開示された特定の代表的な化合物、材料、及び方法ステップのみが具体的に説明されているが、化合物、材料、及び方法ステップの他の組み合わせも、具体的に列挙されていない場合でも、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。したがって、ステップ、要素、構成要素、又は構成成分の組み合わせが、本明細書で明示的に言及され得るが、明示的に述べられていない場合でも、ステップ、要素、構成要素、及び構成成分の他の組み合わせが含まれる。本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語及びその変形は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語及びその変形と同義的に使用され、オープンで非限定的な用語である。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、様々な実施形態を説明するために本明細書で使用されているが、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の代わりに、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語を使用して、より具体的な実施形態を提供することができ、かつ開示されている。