特許 7432190 抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するための、データの取得方法およびキット

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-02-07

(45)【発行日】2024-02-16

(54)【発明の名称】抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するための、データの取得方法およびキット

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20240208BHJP

   C12Q 1/06 20060101ALI20240208BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

C12Q1/06

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2021032046

(22)【出願日】2021-03-01

(65)【公開番号】P2022133139

(43)【公開日】2022-09-13

【審査請求日】2023-02-09

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 ・ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｎｐｒ２．１２１００ 掲載日 令和２年３月１２日

(73)【特許権者】

【識別番号】521088343

【氏名又は名称】山▲崎▼ 勝彦

(73)【特許権者】

【識別番号】521088790

【氏名又は名称】武田 雅俊

(73)【特許権者】

【識別番号】521088354

【氏名又は名称】長谷川 智則

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】山▲崎▼ 勝彦

(72)【発明者】

【氏名】武田 雅俊

(72)【発明者】

【氏名】長谷川 智則

【審査官】大瀧 真理

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１５／０８２９２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開２００５－２７８４９０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００４－２０８５４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５１８８１６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１８－５３３７４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１８－１８４３５３（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０１８４２４２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】中国特許出願公開第１１０９８８３５１（ＣＮ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３３／４８ － ３３／９８

Ｃ１２Ｑ １／０６

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験体から採取された試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質を検出する検出工程を有し、
上記検出工程では、上記試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が、３５．８０ｎｇ／ｍＬ以上であるか否かを検出する、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【請求項2】

上記試料は血清、尿、血漿、または脳脊髄液である、請求項１に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【請求項3】

上記大うつ病患者は、食欲異常、および／または、興味の喪失の症状を示す大うつ病患者である、請求項１または２に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【請求項4】

上記検出工程で検出されたインターロイキン６レセプタータンパク質の検出結果を、重回帰分析にて処理する、データ取得工程を有する、請求項１～３の何れか１項に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するための、データの取得方法およびキットに関する。

【背景技術】

【0002】

大うつ病（Major Depressive Disorder：ＭＤＤ）は、全ての疾患および障害の中で最も高い、障害調整生命年（Disability-Adjusted Life Year：ＤＡＬＹ）に対する疾病負荷値を有する。つまり、大うつ病は、社会に対して大きな負担をかける疾患である。

【0003】

近年、大うつ病の病因として、免疫の炎症プロセスが関与していることが明らかになりつつある。例えば、免疫の炎症プロセスに関与するサイトカインである、インターロイキン６（ＩＬ－６）および腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）等が抑うつ症状の誘発に関与することが示唆されている（非特許文献１～５参照）。

【0004】

上述した状況にあって、現在、大うつ病の治療方法の開発が強く求められている。大うつ病の治療方法の１つとして、抗うつ薬が挙げられる。抗うつ薬としては、例えば、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（Selective Serotonin Reuptake Inhibitor：ＳＳＲＩ）、および、セロトニン－ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（Serotonin-Noradrenaline reuptake inhibitor：ＳＮＲＩ）等を挙げることができる。

【0005】

しかしながら、大うつ病の患者の中には、抗うつ薬による治療に対して抵抗性がある患者が多く存在し、これらの患者には抗うつ薬による治療は有効ではない。抗うつ薬による治療が有効でない患者に対しては、増強薬の投与、電気けいれん療法、および／または、経頭蓋磁気刺激などの、別の治療が必要となる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【文献】Grygiel-Gorniak B et al., Cytokine secretion and the risk of depression development in patients with connective tissue diseases. Psychiatry Clin Neurosci., 2019; 73: 302-316

【文献】Connor TJ et al., Depression. Stress and immunological activation: the role of cytokines in depressive disorders. Life Sci., 1998; 62: 583-606

【文献】Dantzer R. O’Connor JC et al., From inflammation to sickness and depression: when the immune system subjugates the brain. Nat Rev Neurosci., 2008; 9: 46-56

【文献】Dowlati Y et al., A meta-analysis of cytokines in major depression. Biol Psychiatry., 2010; 67: 446-457

【文献】Zhang H et al., Peripheral interleukin-6 administration increases extracellular concentration of serotonin and the evoked release of serotonin in the rat striatum. Neurochem Int., 2001; 38: 303-308

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかしながら、従来技術では、抗うつ薬による治療に対して抵抗性がある患者を、抗うつ薬の投与前に識別することができないという問題がある。

【0008】

抗うつ薬による治療に対して抵抗性がある患者を抗うつ薬の投与前に識別することができなければ、患者にとって有効ではない治療を長く続けることになり、その結果、患者にとって有効な治療を開始する時期が遅れるのみならず、患者にとって不要な経済的負担を強いることになる。

【0009】

本発明の一態様は、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するための、データの取得方法およびキットを提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

上記の課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、抗うつ薬による治療に対して抵抗性がある患者から採取された試料は、抗うつ薬による治療によって症状が寛解した患者から採取された試料と比較して、試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が有意に高いことを見出し、本発明を完成させるに至った。

【0011】

免疫の炎症プロセスには、様々なタンパク質が関与する。後述する実施例で実証するように、これらのタンパク質の中でも、インターロイキン６および腫瘍壊死因子－α等は抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのバイオマーカーとして機能せず、インターロイキン６レセプターこそが抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのバイオマーカーとして機能するということは、大きな発見であった。

【0012】

本発明の一実施形態は、以下の態様を含む：
〔１〕被験体から採取された試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質を検出する検出工程を有する、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【0013】

〔２〕上記試料は血清、尿、血漿、または脳脊髄液である、〔１〕に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【0014】

〔３〕上記検出工程では、上記試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が、３５．８０ｎｇ／ｍＬ以上であるか否かを検出する、〔１〕または〔２〕に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【0015】

〔４〕上記大うつ病患者は、食欲異常、および／または、興味の喪失の症状を示す大うつ病患者である、〔１〕～〔３〕の何れかに記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【0016】

〔５〕上記検出工程で検出されたインターロイキン６レセプタータンパク質の検出結果を、重回帰分析にて処理する、データ取得工程を有する、〔１〕～〔４〕の何れかに記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法。

【0017】

〔６〕インターロイキン６レセプタータンパク質を検出するための物品を備えている、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのキット。

【発明の効果】

【0018】

本発明の一態様によれば、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するための、データの取得方法およびキットを提供することができる。

【0019】

本発明の一態様によれば、主観的な指標（例えば、患者の感情、行動など）ではなく、インターロイキン６レセプタータンパク質という客観的な指標に基づいて、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができる。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】上段、中段、および下段は、各々、治療抵抗性の患者群、および症状が寛解した患者群における血清中における、ｓＩＬ－６Ｒ、ＴＮＦ－α、および、ＩＬ－６の濃度の分布を示す図である。

【図2】ｓＩＬ－６Ｒ、ＴＮＦ－α、および、ＩＬ－６に関するＲＯＣ分析の結果を示す図である。

【図3】ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６の各カテゴリーのスコアと、血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度との相関を示す図である。

【図4】バリマックス回転後の２次元で表された因子をプロットした図である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明の一実施形態について説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態および実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態および実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上（Ａを含みかつＡより大きい）Ｂ以下（Ｂを含みかつＢより小さい）」を意図する。

【0022】

〔１．抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法〕
「抗うつ薬抵抗性」を広く定義するのか、または、狭く定義するのかに応じて、患者が抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者に該当するか否かの判定が異なる。例えば、緩やかに抵抗性を定義する立場に立てば、１種類の抗うつ薬による治療を行っても症状の寛解が得られない場合に、抵抗性と判断され得る。一方、厳密に抵抗性を定義する立場に立てば、２種類の抗うつ薬による治療、および、当該治療に続く増強療法を行っても症状の寛解が得られない場合に、抵抗性と判断され得る。一例では、２種類以上の抗うつ薬を少なくとも１２週間投与しても症状の寛解が得られない患者を、「抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者」と定義し、一方、１種類または２種類の抗うつ薬を服用した後に症状の寛解が得られる患者を、「症状の寛解が得られる大うつ病患者」と定義する場合があるが、これに限定されない。

【0023】

本発明の一実施形態に係る抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法は、被験体から採取された試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質を検出する検出工程を有する。当該検出工程は、被験体から採取された試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質を検出および定量する工程であってもよい。

【0024】

上記抗うつ薬としては、限定されない。上記抗うつ薬としては、例えば、選択的セロトニン再取り込み阻害薬、セロトニン－ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、三環系抗うつ薬、四環系抗うつ薬、ノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬、非定型抗精神病薬、セロトニン再取り込み阻害・セロトニン受容体調節剤を挙げることができる。

【0025】

上記大うつ病患者は、特定の症状を示す患者であり得る。当該症状として、例えば、食欲異常（abnormality of appetite）、興味の喪失（loss of interest）、不眠症（insomnia）、悲しい気持ち（sorrowful feelings）、集中力の低下（decrease in concentration）、自己の見方（view of self）、死または自殺についての考え（thought of death or suicide）、エネルギーレベル（energy level）、落ち着かない、または、落ち着かない感じ（feeling slowed down or restless）、または、これらの２つ以上の組み合わせ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または、９つ）、を挙げることができる。

【0026】

後述する実施例に示すように、上述した症状のうち、食欲異常の症状を示す大うつ病患者、および、興味の喪失の症状を示す大うつ病患者では、他の症状を示す大うつ病患者と比較して、試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が著しく高い。それ故に、上記大うつ病患者は、食欲異常、および／または、興味の喪失の症状を示す患者であることが好ましい。当該構成であれば、より正確に抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができる。

【0027】

上記被験体としては、限定されない。当該被験体は、大うつ病の主な治療対象であるヒトであってもよく、大うつ病の研究などに用いられる実験動物であってもよい。当該被験体として、例えば、ヒト、および、非ヒト動物（例えば、サル、チンパンジー、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ）を挙げることができる。

【0028】

上記試料としては、限定されない。当該試料として、例えば、血清、尿、血漿、および脳脊髄液を挙げることができる。容易に採取でき、かつ、容易に検出工程に供することができるという観点から、上記試料の中では、血清が好ましい。

【0029】

インターロイキン６レセプターは、膜結合型インターロイキン６レセプター、および、可溶性インターロイキン６レセプターに大別することができる。膜結合型インターロイキン６レセプターは、様々な細胞の細胞膜に結合した状態で存在する。一方、可溶性インターロイキン６レセプターは、血清、尿、血漿、および脳脊髄液の中に可溶化した状態で存在する。

【0030】

上記検出工程にて検出されるインターロイキン６レセプタータンパク質は、可溶性インターロイキン６レセプタータンパク質であってもよく、膜結合型インターロイキン６レセプタータンパク質であってもよいが、より正確に抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができるという観点から、可溶性インターロイキン６レセプタータンパク質であることが好ましい。

【0031】

上記検出工程は、公知の方法によって行われ得、当該方法は限定されない。上記検出工程は、例えば、イムノアッセイ（例えば、エンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ）、または、ウエスタンブロットによって行われ得、より具体的に、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-linked immunosorbent assay）によって行われ得る。これらの方法であれば、被験体から採取された試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の量を精度高く定量することができるとともに、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を精度高く識別することができる。

【0032】

上記検出工程では、抗インターロイキン６レセプター抗体（例えば、抗可溶性インターロイキン６レセプター抗体、および、抗膜結合型インターロイキン６レセプター抗体）が用いられ得る。

【0033】

上記抗インターロイキン６レセプター抗体は、抗インターロイキン６レセプター抗体の全体を含むもの、抗インターロイキン６レセプター抗体の全体からなるもの、抗インターロイキン６レセプター抗体の断片を含むもの、または、抗インターロイキン６レセプター抗体の断片からなるものであってもよい。例えば、抗インターロイキン６レセプター抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または、これらの断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、または、Ｆｖ）であってもよい。抗インターロイキン６レセプター抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、または、これらの断片であってもよい。

【0034】

キメラ抗体とは、定常領域がヒトの抗体の定常領域に置き換えられている抗体を意図する。キメラ抗体は、周知方法にしたがって作製され得る（例えば、欧州特許公開公報ＥＰ０１２５０２３を参照）。

【0035】

ヒト化抗体とは、Ｈ鎖およびＬ鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ：complementarity determining region）以外がヒトの抗体の構造に置き換えられている抗体を意図する。

【0036】

ヒト抗体とは、ヒトの抗体生産に関与する遺伝子が導入されたトランスジェニック動物を用いて作製された抗体を意図する（例えば、欧州特許公開公報ＥＰ０５４６０７３を参照）。

【0037】

Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、および、Ｆｖは、抗体の全体をプロテアーゼ（例えば、パパイン、または、ペプシン）によって分解し、必要に応じて、分解物を更に還元することによって得ることができる。また、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、および、Ｆｖは、抗体を生産するハイブリドーマから、これらのｃＤＮＡを単離し、当該ｃＤＮＡを発現ベクターに挿入し、当該発現ベクターを宿主に導入することによって得ることができる。この場合には、抗体フラグメントは、抗体フラグメントと別のタンパク質との融合タンパク質として得ることもできる。

【0038】

上記抗インターロイキン６レセプター抗体は、周知の方法（例えば、（１）ＨａｒＬｏｗら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）」、および、（２）岩崎ら、「単クローン抗体 ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ、講談社（１９９１）」）にしたがって作製することができる。勿論、インターロイキン６レセプター抗体として、市販の抗体を用いることも可能である。

【0039】

モノクローナル抗体は、当該分野において周知の方法（例えば、（１）ハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５－４９７（１９７５））、（２）トリオーマ法、（３）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４，７２（１９８３））、および、（４）ＥＢＶ－ハイブリドーマ法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７－９６（１９８５）））にしたがって作製することができる。

【0040】

上記検出工程では、試料（例えば、血清）中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が、所定の濃度以上であるか否かを検出することが好ましい。なお、当該「所定の濃度」としては、「抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者」と「症状の寛解が得られる大うつ病患者」とを区別するための閾値を採用すればよい。

【0041】

例えば、被験体から採取された試料（例えば、血清）中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が所定の濃度以上である場合には、当該被験体を「抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者」として識別することができる。一方、被験体から採取された試料（例えば、血清）中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が所定の濃度未満である場合には、当該被験体を「症状の寛解が得られる大うつ病患者」として識別することができる。

【0042】

上記「所定の濃度（閾値）」としては、限定されないが、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の識別特異度を高める観点からは、例えば、３５．８０ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることが好ましく、３７．００ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることがより好ましく、４０．００ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることが更に好ましい。上記構成であれば、より正確に、かつ、より客観的に抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができる。

【0043】

抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の識別感度を高める観点からは、例えば、３５．８０ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることが好ましく、３５．００ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることがより好ましく、３４．００ｎｇ（インターロイキン６レセプタータンパク質）／ｍＬ（試料）であることが更に好ましい。上記構成であれば、より高感度で抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができる。

【0044】

このように感度および特異度の観点から、当業者は、その目的に合わせて抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の識別のための閾値を容易に決定することができる。つまり、特異度よりも感度を優先する場合には閾値を低く設定し、感度よりも特異度を優先する場合には閾値を高く設定する。

【0045】

また、上述の閾値は、任意の測定系を用いてインターロイキン６レセプタータンパク質濃度を測定した値であり、例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ヒトＩＬ－６ｓＲイムノアッセイを用いて測定することによって得られた値である。同一の試料を異なる測定系で測定した場合、インターロイキン６レセプタータンパク質濃度の測定値は、測定系間で若干の誤差が生じる場合がある。閾値は、例えば複数の測定系で得られる数値範囲内とすることも可能である。

【0046】

本発明のある実施形態に係る抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法は、大うつ病の重症度を客観的に把握するためのデータを取得する、データ取得工程をさらに有する。

【0047】

上記データ取得工程では、上述の検出工程で得られたインターロイキン６レセプタータンパク質濃度に基づいて、所望の統計分析を行い、大うつ病の重症度を把握するためのデータを取得することが挙げられる。例えば、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６スコアの説明変数として、インターロイキン６レセプタータンパク質のみを抽出した重回帰分析などを行うことによって、大うつ病の重症度を把握するデータ取得が可能である。

【0048】

〔２．抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのキット〕
本発明の一実施形態に係る抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのキットは、インターロイキン６レセプタータンパク質を検出するための物品を備えている。

【0049】

上記物品は、インターロイキン６レセプタータンパク質の検出に用い得るものであればよく、具体的な構成は限定されない。当該物品としては、例えば、インターロイキン６レセプタータンパク質に結合し得る物品が挙げられ、より具体的に、抗インターロイキン６レセプタータンパク質抗体を挙げることができる。

【0050】

上記抗インターロイキン６レセプタータンパク質抗体は、上述した〔１．抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法〕にて説明した抗体であり得る。当該抗体については既に説明したので、ここでは、その説明を省略する。

【0051】

上記キットは、上述した〔１．抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのデータの取得方法〕にて説明した検出工程を行うためのキットであり得、例えば、イムノアッセイ用キット（例えば、エンザイムイムノアッセイ用キット、ラジオイムノアッセイ用キット、蛍光イムノアッセイ用キット）、または、ウエスタンブロット用キットであり得、より具体的に、ＥＬＩＳＡ用キットであり得る。

【0052】

上記キットに備えられている物品（例えば、抗インターロイキン６レセプタータンパク質抗体など）は、支持体上に固定化された形態（例えば、アレイ、マイクロアレイ）のものであってもよい。この場合、上記支持体の材質、大きさ、および、形状などは限定されず、所望の材質、大きさ、および、形状であり得る。当該構成であれば、簡便に抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別することができる。

【0053】

本発明の一実施形態に係る抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者を識別するためのキットは、インターロイキン６レセプタータンパク質を検出および定量するための更なる構成を備えていてもよい。当該構成としては、（ｉ）抗インターロイキン６レセプタータンパク質抗体に結合する二次抗体、および、（ｉｉ）抗インターロイキン６レセプタータンパク質抗体に捕捉されたインターロイキン６レセプタータンパク質に結合する二次抗体を挙げることができる。

【0054】

上記二次抗体は、放射性同位体、酵素、蛍光物質、または、発酵物質によって標識化された二次抗体であり得る。当該構成であれば、より正確に、インターロイキン６レセプタータンパク質を検出および定量することができる。

【0055】

〔３．その他〕
本発明の一実施形態は、以下の態様をも含み得る：
＜１＞試料（例えば、被験体から採取された試料）中のインターロイキン６レセプタータンパク質を検出する検出工程を有する、抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の診断方法。

【0056】

＜２＞上記試料は血清、尿、血漿、または脳脊髄液である、＜１＞に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の診断方法。

【0057】

＜３＞上記検出工程では、上記試料中のインターロイキン６レセプタータンパク質の濃度が、３５．８０ｎｇ／ｍＬ以上であるか否かを検出する、＜１＞または＜２＞に記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の診断方法。

【0058】

＜４＞上記大うつ病患者は、食欲異常、および／または、興味の喪失の症状を示す大うつ病患者である、＜１＞～＜３＞の何れかに記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の診断方法。

【0059】

＜５＞上記検出工程で検出されたインターロイキン６レセプタータンパク質の検出結果を、重回帰分析にて処理する、データ取得工程を有する、＜１＞～＜４＞の何れかに記載の抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者の診断方法。

【実施例】

【0060】

〔１．実験方法〕
（１－１．定義）
本実験では、２種類以上の抗うつ薬（具体的に、選択的セロトニン再取り込み阻害薬、セロトニン－ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、三環系抗うつ薬、四環系抗うつ薬、およびノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬から選択される２種類以上）を少なくとも１２週間投与しても症状の寛解が得られない患者を、「抗うつ薬抵抗性の大うつ病患者」（換言すれば、治療抵抗性：Treatment-resistant）と定義した。一方、上述した抗うつ薬の１種類または２種類を服用した後に症状の寛解が得られる患者を、「症状の寛解が得られる大うつ病患者」（換言すれば、寛解：Remitted）と定義した。

【0061】

簡易抑うつ症状尺度（ＱＩＤＳ－ＳＲ１６）のスコアが５点以下の症状は、うつ病の１７項目ハミルトン評価尺度（ＨＲＳＤ１７）のスコアが７点以下の症状に相当する。そこで、ＱＩＤＳ－ＳＲ１６のスコアが５点以下の場合に、寛解と定義した。

【0062】

（１－２．実験デザイン）
２０１８年９月から２０１８年１２月までの間に受診した患者の中で、診断および統計マニュアル－５（ＤＳＭ－５（登録商標））に従って、精神病症状を伴わないＭＤＤと診断された患者から血液サンプルを採取した。それぞれの患者について、採血の時点で、治療抵抗性であるのか、寛解であるかの判断がなされた。

【0063】

実験結果を明確なものとするために、症状が寛解した患者の選択に当たっては、最初の治療から当該実験への登録までに大うつ病の再発を示さなかった患者に限定した。実験対象の患者は、２０～８０歳であって、かつ、妊娠も授乳もしていない患者とした。また、（ｉ）双極性障害、精神病性障害、強迫性障害、または、摂食障害の診断を受けた患者、（ｉｉ）てんかんの病歴を有する患者、（ｉｉ）主要な医学的障害および神経学的障害を有する患者、および、（ｉｖ）薬物もしくはアルコールに対する依存症、または、これらを乱用する患者は、本実験の対象から除外した。関節リウマチまたは橋本病などによって炎症状態の患者も、本実験の対象から除外した。

【0064】

この実験は、ヘルシンキ宣言（１９８９）に従って行われた。また、この実験は、医療法人健翔会（Ｎｏ．１２０１－０５－００５７０８）の臨床研究倫理委員会によってレビューされ、承認された。患者／参加者は、書面によるインフォームドコンセントの手続きを経て、この実験に参加した。

【0065】

（１－３．生物学的測定）
ＩＬ－６およびＴＮＦ－αの測定のために、５ｍＬのＥＤＴＡ（Ethylenediaminetetraacetic acid）を含む真空採血管に血液を収集し、ｓＩＬ－６Ｒ（可溶性インターロイキン６レセプタータンパク質）の測定のために、寒天ベースの真空採血管に血液を収集した。収集した血液を、４℃で冷蔵保存した。

【0066】

各タンパク質の測定は、ｓＩＬ－６ＲについてはＳＲＬ社にて、ＩＬ－６およびＴＮＦ－αについてはLSI Medience社にて行った。具体的に、４℃で冷蔵保存した血液を１５００ｇで５分間の遠心分離にかけ、分離された血清を、分析まで、－８０℃で冷凍保存した。

【0067】

ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、および、ｓＩＬ－６Ｒの測定に当たっては、それぞれ、ＱｕａｎｔｉＧｌｏ（登録商標） ＥＬＩＳＡヒトＩＬ－６イムノアッセイ、ＱｕａｎｔｉＧｌｏ（登録商標）ヒトＴＮＦ－α化学発光イムノアッセイ第２世代、および、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ヒトＩＬ－６ｓＲイムノアッセイを使用した。ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、および、ｓＩＬ－６Ｒの血清中の濃度の正常範囲は、それぞれ、≦２．４１ｐｇ／ｍＬ、≦１．７９ｐｇ／ｍＬ、および、１４～４６ｎｇ／ｍＬである。

【0068】

（１－４．統計分析）
ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、および、ｓＩＬ６－Ｒの血清中の濃度について、治療抵抗性の患者と、症状が寛解した患者との間で比較検討を行った。グループ間の差異は、ＩＢＭ ＳＰＳＳによって分析した。データを、平均±ＳＥＭとして示し、Ｐ＜.０５の場合に、統計的に有意な差があるものと見なした。

【0069】

受信者動作特性分析（ＲＯＣ分析）を行った。曲線下面積（ＡＵＣ）が０．７よりも大きい場合に、難治性および寛解を区別する上で、実験対象のタンパク質が有効であると結論付けた。

【0070】

ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６スコアを従属変数とし、他方、実験対象のタンパク質の血清中の濃度を独立変数として、変数増減法（ステップワイズ法）により、ＳＰＳＳを用いて重回帰分析を行った。また、血清中のｓＩＬ－６Ｒ濃度と、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６スコアの各カテゴリーとの間で、相関分析を行った。さらに、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６のカテゴリー間の相関係数行列に基づいて、因子分析を行った。

【0071】

〔２．結果〕
合計２５人の治療抵抗性の患者、および、１７人の症状が寛解した患者を、実験に登録した。女性の割合は、治療抵抗性の患者では５２．０％、症状が寛解した患者では６４．７％であった。平均年齢は、それぞれ、５２．４±２．０歳、および、５３．６±２．０歳であった。

【0072】

患者の特性については、治療抵抗性の患者と、症状が寛解した患者との間で、有意な差異は認められなかった（表１）。

【0073】

【表1】

【0074】

血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度は、治療抵抗性の患者では、３７．６ｎｇ／ｍＬ（９５％信頼区間［ＣＩ］ ３４．０～４１．２ｎｇ／ｍＬ）であり、症状が寛解した患者では、３１．１ｎｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ ２７．５～３４．６ｎｇ／ｍＬ）であって、治療抵抗性の患者における血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度は、症状が寛解した患者における血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度よりも有意に高かった（図１の上段を参照）。

【0075】

血清中のＴＮＦ－αの濃度は、治療抵抗性の患者では、２．２３ｐｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ １．４４～３．０２ｐｇ／ｍＬ）であり、症状が寛解した患者では、１．９０ｐｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ １．２１～２．５８ｐｇ／ｍＬ）であって、両者の間に有意差が認められなかった（図１の中段を参照）。

【0076】

血清中のＩＬ－６の濃度は、治療抵抗性の患者では、１．７９ｐｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ １．１１～２．４８ｐｇ／ｍＬ）であり、症状が寛解した患者では、１．４１ｐｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ ０．８５～１．９７ｐｇ／ｍＬ）であって、両者の間に有意差が認められなかった（図１の下段を参照）。

【0077】

なお、図１では、各タンパク質の血清中の濃度を、箱ひげ図として表示している。ボックスの中央の線は、濃度の中央値を表わす。ボックスの上部の線と、ボックスの下部の線とは、それぞれ、上部と下部との四分位数を表わす。ひげの上端と下端とは、それぞれ、濃度の最大値と最小値とを表わす。箱ひげ図から外れた値は、「星印」、「丸印」にて表示されている。なお、図１中の用語は、それぞれ以下を表す；Treatment-resistant：治療抵抗性の患者群、Remitted:症状が寛解した患者群、Treatment_Response:治療応答性。

【0078】

ＲＯＣ分析では、血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度のみが、有意なＡＵＣ（＝０．７８９）を示し、当該ＡＵＣは、測定されたタンパク質の中で最高であった（図２を参照）。当該ＲＯＣ分析に基づいて、治療抵抗性の患者と、症状が寛解した患者とを区別するためのｓＩＬ－６Ｒの濃度のカットオフ値は３５．８０ｎｇ／ｍＬであることが分かった。また、その場合の感度と特異度とは、それぞれ０．６８と０．７１とであった。

【0079】

なお、図２では、ＡＵＣ値は、ｓＩＬ－６Ｒ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６について、それぞれ０．７８９（Ｐ＝．００９）、０．５７２（Ｐ＝．４３４）、および、０．５９１（Ｐ＝．３２４）。帰無仮説において、ＡＵＣは０．５である。なお、図２中の用語は、それぞれ以下を表す；Sensitivity：感度、Specificity:特異度。

【0080】

重回帰分析では、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６スコアの説明変数として、ｓＩＬ－６Ｒのみを抽出した（図３を参照）。決定係数（＝０．２７８）は高くないため、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６の各カテゴリーのスコアと、血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度とについて、相関分析を行った。その結果、ｓＩＬ－６Ｒの濃度と、食欲異常および興味の喪失に関連するスコアとの間に、特に有意な相関が検出された（表２を参照）。

【0081】

なお、図３では、ＱＩＤＳ－ＳＲ_１６スコア＝０．４２０×［ｓＩＬ６－Ｒの濃度］－５．１２３として、回帰方程式が得られた。なお、図３中の用語は、それぞれ以下を表す；Normal：正常、Light:軽度、Middle：中程度、Severity：重度、Greatly Severity：著しく重度。

【0082】

【表2】

【0083】

悲しい気持ち（カテゴリー２）と、死または自殺についての考え（カテゴリー６）とは、血清中のｓＩＬ－６Ｒの濃度との相関係数が比較的低く、これら二つのカテゴリーは因子分析において互いに近くにプロットされた（図４を参照）。

【0084】

なお、図４では、主成分分析によって、２つの要素が抽出された。なお、図４中の用語はそれぞれ以下を表す；Factor-1、Factor-2、：因子－１、因子－２、Category_１～９：カテゴリー１～９。

【産業上の利用可能性】

【0085】

本発明は、大うつ病患者の診断および治療、並びに、大うつ病の研究（例えば、大うつ病の発症メカニズムの研究）に利用することができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】