特許 7432751 抗ウイルス剤としての５－（４－アミノピロロ［２，１－Ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-02-07

(45)【発行日】2024-02-16

(54)【発明の名称】抗ウイルス剤としての５－（４－アミノピロロ［２，１－Ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07F 9/6558 20060101AFI20240208BHJP

   A61K 31/688 20060101ALI20240208BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240208BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240208BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240208BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20240208BHJP

   C07B 61/00 20060101ALN20240208BHJP

【ＦＩ】

C07F9/6558 CSP

A61K31/688 ZNA

A61P11/00

A61P11/06

A61P31/14

A61P31/20

C07B61/00 300

【請求項の数】 57

(21)【出願番号】P 2022549448

(86)(22)【出願日】2021-02-17

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-04

(86)【国際出願番号】 US2021018415

(87)【国際公開番号】W WO2021168008

(87)【国際公開日】2021-08-26

【審査請求日】2022-08-17

(31)【優先権主張番号】62/977,969

(32)【優先日】2020-02-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】500029420

【氏名又は名称】ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】チョン， ビョン－クウォン

(72)【発明者】

【氏名】ドーフラー， エドワード

(72)【発明者】

【氏名】シーゲル， ダスティン エス．

(72)【発明者】

【氏名】スティーブンス， アンドリュー シー．

(72)【発明者】

【氏名】ヴィエイラ， ティアゴ

【審査官】中村 政彦

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５３３９０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１７－５０２９２５（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１６／０６９８２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１８－５３１２２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１９／０５３６９６（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｆ ９／００

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ａ６１Ｐ １１／００

Ａ６１Ｐ ３１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉの化合物、

【化43】

又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

治療有効量の請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、医薬製剤。

【請求項3】

Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、組成物。

【請求項4】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、請求項３に記載の組成物。

【請求項6】

Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、組成物。

【請求項7】

前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、組成物。

【請求項9】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項11】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項12】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項13】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項14】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項８に記載の組成物。

【請求項15】

Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、組成物。

【請求項16】

前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。

【請求項18】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、請求項１７に記載の方法。

【請求項20】

Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。

【請求項21】

前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う
ための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。

【請求項23】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項25】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項26】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項27】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項28】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項２２に記載の方法。

【請求項29】

Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。

【請求項30】

前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項32】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、請求項３１に記載の使用。

【請求項33】

前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、請求項３１に記載の使用。

【請求項34】

Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項35】

前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、請求項３４に記載の使用。

【請求項36】

Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項37】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、請求項３６に記載の使用。

【請求項38】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、請求項
３６に記載の使用。

【請求項39】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、請求項３６に記載の使用。

【請求項40】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、請求項３６に記載の使用。

【請求項41】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、請求項３６に記載の使用。

【請求項42】

前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項３６に記載の使用。

【請求項43】

Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項44】

前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、請求項４３に記載の使用。

【請求項45】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含み、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、組成物。

【請求項46】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための組成物であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含み、前記呼吸器状態が、喘息である、組成物。

【請求項47】

前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、請求項４５又は４６に記載の組成物。

【請求項48】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とし、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、方法。

【請求項49】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とし、前記呼吸器状態が、喘息である、方法。

【請求項50】

前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、請求項４８又は４９に記載の方法。

【請求項51】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化のヒトにおける治療又は予防のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、使用。

【請求項52】

ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化のヒトにおける治療又は予防のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用であて、
前記呼吸器状態が、喘息である、使用。

【請求項53】

前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、請求項５１又は５２に記載の使用。

【請求項54】

式Ｉ－６の化合物を作製する方法であって、

【化47】

（ｉ）式Ｉ－７の化合物：

【化48】

及び
（ｉｉ）式Ｉ－５の化合物：

【化49】

を、ＮｄＣｌ_３及びテトラブチルアンモニウムクロリドの存在下で反応させることを含み、式中、Ｒが、ヒドロキシル保護基である、方法。

【請求項55】

Ｒが、ベンジル基である、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

Ｒが、シリル保護基である、請求項５４に記載の方法。

【請求項57】

Ｒが、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）である、請求項５６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年２月１８日に出願された米国特許仮出願第６２／９７７，９６９号に対する優先権の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
（０００１．１）
（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年２月１７日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１３０７－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、１，５３７バイトのサイズである。

【背景技術】

【0002】

Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルスは、多くの一般的なヒト及び動物疾患に関与するマイナスセンス一本鎖ＲＮＡウイルスである。Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスは、ヒト呼吸器合胞体ウイルス（human respiratory syncytial virus、ＨＲＳＶ）及びヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓを含む。ほとんど全ての子供は、２歳の誕生日までにＨＲＳＶ感染症を有するであろう。ＨＲＳＶは、乳児期及び小児期における下気道感染症の主な原因であり、感染者の０．５％～２％が入院を必要とする。

【0003】

ＨＲＳＶ感染症を防ぐ現在利用可能なワクチンはない。モノクローナル抗体パリビズマブは、免疫予防に利用可能であるが、その使用は、高リスクの乳児、例えば、早産児又は先天性の心臓疾患若しくは肺疾患のいずれかを有する乳児に制限され、一般的な使用のための費用は、法外に高いことが多い。更に、ヌクレオシド類似体リバビリンは、ＨＲＳＶ感染症を治療するために唯一の抗ウイルス剤として承認されているが、有効性が限られている。したがって、抗Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ治療薬が必要とされている。

【0004】

慢性心臓、肺疾患、又は免疫抑制されるものを有する高齢者及び成人もまた、重度ＨＲＳＶ疾患を発症するリスクが高い（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｒｓｖ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）。特に、慢性閉塞性肺障害（chronic obstructive pulmonary disorder、ＣＯＰＤ）などの慢性呼吸器疾患を有する患者は、急性呼吸器悪化を発症するリスクが高い。急性呼吸器悪化は、罹患率、死亡率、及びＣＯＰＤ患者の生活の質の低下の主な原因である（Ｆｒｉｃｋｍａｎｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．２０１２ Ｓｅｐ．２（３）：１７６－１８５）。

【0005】

ＣＯＰＤ患者の呼吸器悪化の約半分～３分の２は、ウイルス感染症によるものである。そのような呼吸器悪化に関与するいくつかの一般的なウイルス病原体には、ＨＲＳＶ、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ（human metapneumovirus、ＨＭＰＶ）、及びヒトライノウイルス（human rhinovirus、ＨＲＶ）が含まれるが、これらに限定されない。感染性悪化を有するＣＯＰＤ患者は、一般に、より長い入院期間を経験し、非感染性悪化を有する患者よりも重度の肺機能障害に苦しむ（Ｆｒｉｃｋｍａｎｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．２０１２ Ｓｅｐ．２（３）：１７６－１８５）。
有効であり、許容可能な毒性プロファイルを有する、ＨＲＳＶ感染症などのＰｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療に有用な新しい抗ウイルス剤への必要性が依然としてある。
２０１５年５月１４日に公開された国際公開第２０１５／０６９９３９号は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｎａｅウイルス感染症の治療に有用な化合物を開示している。国際公開第２０１５／０６９９３９号は、とりわけ、以下の式の化合物、又はその薬学的に許容される塩に関し、

【化1】

式中、
Ｒ^１が、Ｈ又はＦであり、
Ｒ^２が、Ｈ又はＦであり、
Ｒ^３が、ＯＨ又はＦであり、
Ｒ^４が、ＣＮ、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、Ｃ_２～Ｃ_４アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_４アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_４シクロアルキル、アジド、ハロゲン、又はＣ_１～Ｃ_２ハロアルキルであり、
Ｒ^６が、ＯＨであり、
Ｒ^５が、Ｈ、並びに

【化2】

の群から選択され、
式中、
ｎ’が、１、２、３、及び４から選択され、
Ｒ^８が、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、－Ｏ－Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、ベンジル、－Ｏ－ベンジル、－ＣＨ_２－Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル、及びＣＦ_３から選択され、
Ｒ^９が、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、

【化3】

から選択され、
Ｒ^１０が、Ｈ及びＣＨ_３から選択され、
Ｒ^１１が、Ｈ又はＣ_１～Ｃ_６アルキルから選択され、
Ｒ^１２が、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、ベンジル、Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキル、及び－ＣＨ_２－Ｃ_３～Ｃ_６シクロアルキルから選択される。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】国際公開第２０１５／０６９９３９号

【非特許文献】

【0007】

【文献】Ｆｒｉｃｋｍａｎｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．２０１２ Ｓｅｐ．２（３）：１７６－１８５

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

一実施形態では、本開示は、式Ｉの化合物、

【化4】

又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0009】

別の実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬製剤を提供する。

【0010】

別の実施形態では、本開示は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。

【0011】

別の実施形態では、本開示は、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。

【0012】

別の実施形態では、本開示は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。

【0013】

別の実施形態では、本開示は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。

【0014】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。

【0015】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。

【0016】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。

【0017】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。

【0018】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＰｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【0019】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＰｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【0020】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【0021】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【0022】

別の実施形態では、本開示は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0023】

別の実施形態では、本開示は、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0024】

別の実施形態では、本開示は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0025】

別の実施形態では、本開示は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0026】

別の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含み、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。

【0027】

別の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含み、呼吸器状態は、喘息である。

【0028】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。

【0029】

別の実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供し、呼吸器状態は、喘息である。

【0030】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。

【0031】

別の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供し、呼吸器状態は、喘息である。

【0032】

別の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。

【0033】

別の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、呼吸器状態は、喘息である。

【0034】

別の実施形態では、本開示は、医療療法で使用するための本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0035】

別の実施形態では、本開示は、式Ｉ－１１の化合物を作製する方法を提供し、

【化5】

この方法は、
（ｉ）式Ｉ－７の化合物：

【化6】

及び
（ｉｉ）式Ｉ－１２の化合物：

【化7】

を、ＮｄＣｌ_３及びテトラブチルアンモニウムクロリドの存在下で反応させることを含み、式中、Ｒが、ヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、ベンジル基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、シリル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（tert-butyldimethylsilyl、ＴＢＳ）基である。

【0036】

別の実施形態では、本開示は、式Ｉ－６の化合物を作製する方法を提供し、

【化8】

この方法は、
（ｉ）式Ｉ－７の化合物：

【化9】

及び
（ｉｉ）式Ｉ－５の化合物：

【化10】

を、ＮｄＣｌ_３及びテトラブチルアンモニウムクロリドの存在下で反応させることを含み、式中、Ｒが、ヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、ベンジル基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、シリル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）基である。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】式Ｉ及び６の化合物を含む３ドナーにおけるＮＨＢＥのインビトロでの細胞内三リン酸塩形成の測定値を示す。

【0038】

【図2】式Ｉの化合物並びに化合物２及び６を含むＰＢＭＣにおけるインビトロでの細胞内三リン酸塩形成の測定値を示す。

【0039】

【図3】式Ｉの化合物及び化合物６についてのカニクイザル薬物動態データを示す。

【発明を実施するための形態】

【0040】

以下の説明は、本開示が、特許請求される主題の例示として考慮されるべきであり、添付の特許請求の範囲を、例示される特定の実施形態に限定することを意図したものではない、との理解のもとに行われる。本開示全体を通して使用される見出しは便宜上のものであり、決して特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。いずれかの見出しの下に例示される実施形態を、他のいずれかの見出しの下で例示される実施形態と組み合わせることができる。

【0041】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
Ｉ．概論

【0042】

本開示は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症などのウイルス感染症、ウイルス感染症、並びにＰｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ、及び他のウイルス感染症を含むが、これらに限定されない他のウイルス感染症の治療のための２’，３’－ヒドロキシ－４’－シアノヌクレオシド類似体を提供する。
ＩＩ．定義

【0043】

「本開示の化合物」は、式Ｉの化合物を指す。

【0044】

「薬学的有効量」は、所望の治療的又は薬学的結果を提供する、本開示の化合物の製剤又はその組み合わせにおける量を指す。

【0045】

「薬学的に許容される賦形剤」には、ヒト又は家畜における使用が許容されるものとして米国食品医薬品局によって承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、風味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、又は乳化剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0046】

本明細書で使用する場合、「治療」又は「治療する」又は「治療すること」とは、有益な又は所望の結果を得るためのアプローチを指す。本開示の目的のために、有益な又は所望の結果としては、症状の緩和及び／又は症状の程度の減少、及び／又は疾患若しくは状態と関連する症状の悪化の予防が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、「治療」又は「治療する」は、以下のａ）疾患若しくは状態を阻害すること（例えば、疾患若しくは状態から生じる１つ以上の症状を減少させること、及び／又は疾患若しくは状態の程度を減少させること）、ｂ）疾患又は状態と関連する１つ以上の症状の発症を遅延又は停止すること（例えば、疾患又は状態を安定化すること、疾患又は状態の悪化又は進行を遅延すること）、及びｃ）疾患又は病態を緩和すること、例えば、臨床症状を退縮させること、疾患状態を改善すること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を高めること、及び／又は生存期間を延長することのうちの１つ以上を含む。

【0047】

「予防」は、ウイルス感染症に罹患している患者における臨床疾患の進行を予防又は遅延させることを指す。

【0048】

「呼吸器状態」は、ウイルス感染症、アレルギー性鼻炎、鼻血症、鼻漏、乳頭鼻炎、経鼻性炎症、全てのタイプの喘息、慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease、ＣＯＰＤ）、慢性若しくは急性気管支狭窄、慢性気管支炎、小気道閉塞、肺気腫、慢性好酸球性肺炎、成人呼吸困難症候群、他の薬物療法に起因する気道過敏性の悪化、肺血管疾患（肺動脈高血圧症を含む）、急性肺損傷症、気管支拡張症、副鼻腔炎、アレルギー性結膜炎、特発性肺線維症、又はアトピー性皮膚炎、特に喘息又はアレルギー性鼻炎又はアトピー性皮膚炎又はアレルギー性結膜炎によって引き起こされる呼吸器感染症などの疾患又は状態を指す。

【0049】

「呼吸器状態の悪化」は、ウイルス感染症によって誘発される悪化を指す。代表的なウイルス感染症には、呼吸器合胞体ウイルス（respiratory syncytial virus、ＲＳＶ）、ライノウイルス、及びｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓが含まれるが、これらに限定されない。

【0050】

本明細書で使用される場合、「治療有効量」又は「有効量」は、疾患を治療するために対象に投与された場合、疾患のそのような治療を行うのに十分な化合物の量を含む、所望の生物学的又は医学的応答を誘発するのに有効な量を指す。有効量は、化合物、疾患、及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などに応じて変動する。有効量は、ある範囲の量を含むことができる。当該技術分野において理解されるように、有効量は、１回以上の用量であってもよく、すなわち、所望の治療エンドポイントを達成するために単回用量又は複数回用量が必要とされてもよい。有効量は、１つ以上の治療剤を投与する文脈において考えることができ、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併用して、望ましい若しくは有益な結果が達成され得るか、又は達成される場合に、有効量で投与されるとみなされ得る。任意の共投与される化合物の好適な用量は、任意選択的に、化合物の併用作用（例えば、相加効果又は相乗効果）によって低下され得る。

【0051】

本明細書で使用される場合、「共投与」は、単位投与量の１つ以上の追加の治療剤の投与前又は投与後の、単位投与量の本明細書に開示される化合物の投与を指し、例えば、１つ以上の追加の治療剤の投与の数秒、数分、又は数時間以内の、本明細書に開示される化合物の投与を指す。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の化合物の単位用量を最初に投与し、続いて数秒又は数分以内に、１つ以上の追加の治療剤の単位用量を投与する。代替的に、他の実施形態では、１つ以上の追加の治療剤の単位用量を最初に投与し、続いて数秒又は数分以内に、本開示の化合物の単位用量を投与する。いくつかの実施形態では、本開示の化合物の単位用量を最初に投与し、続いて数時間（例えば、１～１２時間）後に、１つ以上の追加治療剤の単位用量を投与する。他の実施形態では、１つ以上の追加治療剤の単位用量を最初に投与し、続いて、数時間（例えば、１～１２時間）後に、本開示の化合物の単位用量を投与する。本明細書に開示される化合物と１つ以上の追加の治療剤との共投与は、概して、本明細書に開示される化合物と１つ以上の追加の治療剤との、治療有効量の各剤が患者の体内に存在するような、同時投与又は連続投与を指す。

【0052】

本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、多形、及びプロドラッグも提供される。「薬学的に許容される」又は「生理学的に許容される」は、獣医学的又はヒトの薬学的使用に好適な医薬組成物を調製するのに有用である化合物、塩、組成物、剤形、及び他の物質を指す。

【0053】

本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容される塩として、又は適切な場合には、遊離塩基として調製及び／又は製剤化され得る。薬学的に許容される塩は、遊離塩基の所望の薬理学的活性を有する化合物の遊離塩基形態の非毒性塩である。これらの塩は、無機又は有機の酸又は塩基に由来し得る。例えば、塩基性窒素を含有する化合物は、化合物を無機酸又は有機酸と接触させることによって、薬学的に許容される塩として調製され得る。薬学的に許容される塩の非限定的な例には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、二硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素、リン酸二水素、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、オキサル酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン－１，４－二酸塩、ヘキシン－１，６－二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、プロピルスルホン酸塩、ベシル酸塩、キシレンスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ－ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、及びマンデル酸塩が含まれる。他の好適な薬学的に許容される塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，２００６に見出される。

【0054】

本明細書に開示される化合物の「薬学的に許容される塩」の例にはまた、アルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム及びＮＸ_４ ^＋（Ｘは、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル）などの適切な塩基に由来する塩も含まれる。ナトリウム塩又はカリウム塩などの塩基付加塩も含まれる。

【0055】

本明細書に記載の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、異性体、若しくは混合物もまた提供され、ここで、炭素原子に結合した１～ｎ個の水素原子は、重水素原子又はＤによって置き換えられ得、ｎは、分子中の水素原子の数である。当該技術分野で既知であるように、重水素原子は、水素原子の非放射性同位体である。そのような化合物は、代謝に対する耐性を高めることができ、したがって、哺乳動物に投与される場合、本明細書に記載の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、異性体、若しくは混合物の半減期を増加させるのに有用であり得る。例えば、Ｆｏｓｔｅｒ，「Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，５（１２）：５２４－５２７（１９８４）を参照されたい。そのような化合物は、当該技術分野で周知の手段によって、例えば、１個以上の水素原子が重水素によって置き換えられている出発物質を用いることによって合成される。

【0056】

開示された化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素、及びヨウ素の同位体、例えば、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^１２３Ｉ、及び^１２５Ｉが含まれる。陽電子放出同位体での置換、例えば、^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１５Ｏ及び^１３Ｎは、基質受容体占有率を調べるための陽電子放出トポグラフィ（Positron Emission Topography、ＰＥＴ）研究において有用であり得る。式Ｉの同位体標識化合物は、概して、以前に用いられた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、当業者に既知の従来技法によって、又は後述の実施例に記載されるものと類似したプロセスによって調製され得る。

【0057】

本明細書に開示される実施形態の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、１つ以上の不斉中心、例えば、キラル炭素及びリン原子を含み得、したがって、絶対立体化学に関して、（Ｒ）－若しくは（Ｓ）－として、又はアミノ酸については（Ｄ）－若しくは（Ｌ）－として定義され得るエナンチオマー、ジアステレオマー、及び他の立体異性体形態を生じさせ得る。本開示は、全てのそのような可能な異性体、並びにそれらのラセミ体形態及び光学的に純粋な形態を含むことを意味する。光学活性な（＋）及び（－）、（Ｒ）－及び（Ｓ）－、又は（Ｄ）－及び（Ｌ）－異性体は、キラルシントン若しくはキラル試薬を使用して調製され得るか、又は従来の技術、例えば、クロマトグラフィ及び分別結晶化を使用して分割され得る。個々のエナンチオマーの調製／単離のための従来の技術は、好適な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、あるいは例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィ（high pressure liquid chromatography、ＨＰＬＣ）を使用してラセミ化合物（又は塩若しくは誘導体のラセミ化合物）の分割を含む。化合物がそれらのキラル形態で表される場合、実施形態は、特定のジアステレオマー的又はエナンチオマー的に濃縮された形態を包含するが、これらに限定されないことが理解される。キラリティが特定されていないが存在する場合、実施形態は、特定のジアステレオマー的若しくはエナンチオマー的に濃縮された形態、又はそのような化合物のラセミ若しくはスカレミック混合物のうちのいずれかを対象とすることが理解される。本明細書で使用される場合、「スカレミック混合物」は、１：１以外の比での立体異性体の混合物である。

【0058】

「ラセミ体」は、エナンチオマーの混合物を指す。混合物は、等しい又は等しくない量の各エナンチオマーを含み得る。

【0059】

「立体異性体（stereoisomer）」及び「立体異性体（stereoisomers）」は、１つ以上の立体中心のキラリティが異なる化合物を指す。立体異性体には、エナンチオマー及びジアステレオマーが含まれる。化合物は、１つ以上の不斉中心又は非対称置換を有する二重結合を有し、したがって、個々の立体異性体として、又は混合物として産生され得る場合、立体異性体形態で存在し得る。別段の指示がない限り、本明細書は、個々の立体異性体並びに混合物を含むことを意図している。立体化学の決定及び立体異性体の分離のための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２の第４章を参照されたい）。

【0060】

「互変異性体」は、エノール－ケト及びイミン－エナミン互変異性体などのプロトンの位置が異なる化合物の代替形態、又はピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾール、及びテトラゾールなどの環－ＮＨ－及び環＝Ｎ－の両方に結合した環原子を含有するヘテロアリール基の互変異性形態を指す。

【0061】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

【0062】

本明細書で使用される場合、「溶媒和物」は、溶媒と化合物との相互作用の結果を指す。本明細書に記載の化合物の塩の溶媒和物も提供される。本明細書に記載の化合物の水和物も提供される。

【0063】

本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」は、ヒト体内への投与の際に、いくつかの化学的経路又は酵素経路に従って活性薬物に変換される、薬物の誘導体を指す。
ＩＩＩ．化合物

【0064】

本開示は、式Ｉの化合物、

【化11】

又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0065】

本明細書に記載の式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩のインビボ代謝産物もまた、そのような生成物が先行技術と比べて新規かつ非自明である限り、本明細書の範囲内である。そのような生成物は、例えば、主に酵素プロセスによる投与化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などをもたらし得る。したがって、その代謝産物を得るのに十分な期間、化合物を哺乳動物と接触させることを含むプロセスによって産生された新規かつ非自明の化合物が含まれる。そのような生成物は、典型的には、放射標識（例えば、^１４Ｃ若しくは^３Ｈ）化合物を調製すること、それを検出可能な用量（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ超）で非経口的に、ラット、マウス、モルモット、サルなどの動物、又はヒトに投与すること、代謝が発生するのに十分な時間（典型的には約３０秒～３０時間）を与えること、及び尿、血液、又は他の生物学的試料からその変換産物を単離することによって同定される。これらの生成物は、標識されているため、容易に単離することができる（他のものは、代謝産物中で生存するエピトープに結合することができる抗体の使用によって単離される）。代謝産物構造は、従来の様式で、例えば、ＭＳ又はＮＭＲ分析によって決定される。一般に、代謝産物の分析は、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同じ方式で行われる。変換産物は、インビボで別途見出されない限り、それ自体の抗ウイルス活性を有しない場合でも、式Ｉの化合物の治療的投与のための診断アッセイにおいて有用である。

【0066】

より低いＥＣ_５０値を有する化合物、又はその薬学的に許容される塩を発見することが望ましい目標である。ＥＣ_５０値、最大有効性の５０％を達成するアッセイにおける化合物の濃度を指す。より低いＥＣ_５０を有する化合物は、より高いＥＣ_５０を有する化合物と比較して、より低い化合物濃度と同様の有効性を達成する。したがって、薬物開発には、より低いＥＣ_５０が一般に好ましい。

【0067】

更に、高い選択性指数（selectivity index、ＳＩ）を有する化合物、又はその薬学的に許容される塩を発見することが望ましい。ＳＩは、所与のＡＶＡ値をＴＯＸ（毒性）値（ＡＶＡ／ＴＯＸ）に分割することによって、細胞傷害性と抗ウイルス活性（ＡＶＡ）との間のウィンドウを測定する比である。ＳＩ比が高いほど、薬物は、所与のウイルス感染に対するインビボでの治療中、理論的により効果的かつ安全となる。理想的な薬物は、非常に高い濃度でのみ細胞傷害性であり、非常に低い濃度で抗ウイルス活性を有し、したがって、高いＳＩ値（高ＡＶＡ／低ＴＯＸ）をもたらし、それによって、その細胞傷害性濃度を十分に下回る濃度で標的ウイルスを除去することができる（Ｈｕｍａｎ Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ ＨＨＶ－６Ａ，ＨＨＶ－６Ｂ＆ＨＨＶ－７（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２０１４，Ｃｈａｐｔｅｒ １９，Ｐａｇｅｓ ３１１－３３１）。

【0068】

良好な物理的及び／又は化学的安定性を有する化合物、又はその薬学的に許容される塩を発見することも望ましい。化合物の全体的な安定性の増加は、体内の循環時間の増加を提供することができる。劣化が少ないほど、安定した化合物をより低用量で投与し、依然として有効性を維持することができる。また、分解が少ないほど、化合物の分解からの副生成物に関する懸念が少ない。薬物のより高い安定性は、代謝されることなく、標的細胞により多くの薬物が利用可能であることを意味する。

【0069】

改善された薬物動態及び／又は薬力学的プロファイル、並びに長い半減期を有する化合物、又はその薬学的に許容される塩を発見することが更に望ましい。これは良好な生物学的利用能及び高い全身曝露につながる可能性があるため、薬物が中等度又は低いクリアランス及び長い半減期を有することが有利である。クリアランスを低減し、化合物の半減期時間を増加させることは、有効性に必要な１日用量を低減し、したがって、より良好な有効性及び安全性プロファイルをもたらし得る。したがって、改善された薬物動態及び／又は薬力学的プロファイル、並びに長い半減期は、より良好な患者コンプライアンスを提供することができる。

【0070】

溶解度が改善された化合物を開発することも望ましい。より低い溶解度化合物は、多くの場合、不十分な吸着及び生物学的利用能を特徴とする。低溶解度化合物はまた、一般に、製剤化が困難であり、開発コスト及び／又は時間の増加につながる開発課題に直面している。

【0071】

標的細胞及び／又は組織において選択的代謝を受けることができるプロドラッグ化合物を開発することが更に望ましい。標的細胞／組織における選択的代謝は、活性代謝物が標的細胞／組織に送達されることを確実にし、それによって有効性の増加をもたらす。これはまた、より低い用量要件及び副作用につながり得る。

【0072】

有利なことに、式Ｉの化合物は、国際公開第２０１５／０６９９３９号に記載されている構造的に関連する化合物（ここでは、化合物１及び２として指定された後）と比較して、改善された特性を示す。

【化12】

ＩＶ．医薬製剤

【0073】

いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩（活性成分）、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬製剤を提供する。本明細書では、治療有効量の式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、及び／又はエステル、並びに薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬製剤も提供される。

【0074】

本明細書に記載の式Ｉの化合物は、従来の実施に従って選択される従来の担体及び賦形剤と共に製剤化される。錠剤は、賦形剤、滑剤、充填剤、結合剤等を含有する。水性製剤は、無菌形態で調製され、経口投与以外による送達が意図される場合、概して等張となる。全ての製剤は、任意選択的に、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（１９８６）に記載されているものなどの賦形剤を含有する。賦形剤としては、アスコルビン酸及び他の酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸等の炭水化物を挙げることができる。製剤のｐＨは、約３～約１１の範囲であるが、通常は約７～１０である。

【0075】

活性成分を単独で投与することが可能であるが、それらを医薬製剤として提示することが好ましい場合がある。獣医学的使用とヒトでの使用との両方のための製剤は、１つ以上の許容可能な担体及び任意選択的に他の治療成分、特に本明細書で考察される追加の治療成分と共に、上記で定義されるように、活性成分を含む。担体は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して生理的に無害であるという意味で「許容可能」である必要がある。

【0076】

製剤は、便利に単位剤形で提示され得、薬学の分野において周知の方法のうちのいずれかによって調製され得る。技法及び製剤は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に見出される。そのような方法は、活性成分を、１つ以上の副成分を構成する担体と会合させるステップを含む。概して、製剤は、活性成分を、液体担体若しくは微細に分割された固体担体又はその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで、必要に応じて生成物を成形することによって調製される。

【0077】

経口投与に好適な製剤は、各々が所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェ、若しくは錠剤などの別個の単位として、粉末若しくは顆粒として、水性若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油型液体エマルジョン若しくは油中水型液体エマルジョンとして提示され得る。活性成分はまた、ボーラス、舐剤、又はペーストとして投与されてもよい。

【0078】

錠剤は、任意選択的に、１つ以上の副成分と共に圧縮又は成形することによって作製される。圧縮錠剤は、任意選択的に結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、表面活性剤、又は分散剤と混合された、粉末又は顆粒などの自由流動性形態で活性成分を好適な機械で圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末活性成分の混合物を、好適な機械で成形することによって作製され得る。錠剤は、任意選択的にコーティング又はスコアリングされてもよく、任意選択的に、そこから活性成分の徐放又は制御放出を提供するように製剤化される。

【0079】

眼又は他の外部組織、例えば、口及び皮膚の感染症の場合、製剤は、好ましくは、活性成分を、例えば、０．０７５～２０％ｗ／ｗ（例えば０．６％ｗ／ｗ、０．７％ｗ／ｗなど、０．１％ｗ／ｗの増分で０．１％～２０％の範囲の活性成分を含む）、好ましくは０．２～１５％ｗ／ｗ、最も好ましくは０．５～１０％ｗ／ｗの量で含有する局所軟膏又はクリームとして適用される。軟膏に製剤化される場合、活性成分は、パラフィン系又は水混和性軟膏基剤のいずれかで用いられ得る。代替的に、活性成分は、水中油型クリーム基剤を有するクリームに製剤化され得る。

【0080】

必要に応じて、クリーム基剤の水相は、例えば、少なくとも３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン１，３－ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）などの２つ以上のヒドロキシル基、並びにそれらの混合物を有するアルコールを含み得る。局所製剤は、望ましくは、皮膚又は他の患部を通して活性成分の吸収又は浸透を増強する化合物を含み得る。そのような皮膚浸透促進剤の例としては、ジメチルスルホキシド及び関連する類似体が挙げられる。

【0081】

エマルジョンの油性相は、既知の様式で既知の成分から構成され得る。相は、単に乳化剤（そうでなければエマルジョンとして知られる）を含み得るが、望ましくは、少なくとも１つの乳化剤と脂肪又は油との混合物、又は脂肪及び油の両方との混合物を含む。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。いくつかの実施形態では、油及び脂肪の両方が含まれ得る。一緒に、安定剤を含むか又は含まない乳化剤は、いわゆる乳化ワックスを構成し、ワックスは、油及び脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を構成する。

【0082】

製剤における使用に好適なエマルジョン及びエマルジョン安定剤としては、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレート、及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。

【0083】

製剤の好適な油又は脂肪の選択は、所望の化粧品特性を達成することに基づく。クリームは、好ましくは、チューブ又は他の容器からの漏れを回避するために好適な稠度を有する非油性、非染色及び洗浄可能な製品であるべきである。直鎖又は分岐鎖、一又は二塩基性アルキルエステル、例えばジイソアジペート、ステアリン酸イソセチル、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２－エチルヘキシル、又はＣｒｏｄａｍｏｌ ＣＡＰとして知られる分岐鎖エステルのブレンドを使用してもよい。これらは、必要な特性に応じて単独で、又は組み合わせて使用され得る。代替的に、白色軟質パラフィン及び／又は液体パラフィン又は他の鉱油などの高融点脂質が使用される。

【0084】

本明細書の医薬製剤は、１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤、及び任意選択的に他の治療剤と共に、活性成分を含む。活性成分を含有する医薬製剤は、意図される投与方法に好適な任意の形態であり得る。例えば、経口使用に使用される場合、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性若しくは油懸濁液、分散性粉末若しくは顆粒、エマルジョン、硬質若しくは軟質カプセル、液剤、シロップ又はエリキシル剤を調製することができる。経口使用を目的とする組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野で既知の任意の方法に従って調製され得、そのような組成物は、口当たりのよい調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、及び保存剤を含む１つ以上の薬剤を含有し得る。錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤が許容される。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；トウモロコシデンプン、又はアルギン酸などの造粒剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン、又はアカシアなどの結合剤；並びにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクなどの潤滑剤であり得る。錠剤は、コーティングされていない場合があるか、又は胃腸管内での崩壊及び吸着を遅延させ、それによって長期間にわたって持続的作用を提供するためのマイクロカプセル化を含む既知の技術によってコーティングされ得る。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質は、単独で、又はワックスと共に用いられ得る。

【0085】

経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、リン酸カルシウム又はカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセルとして、又は活性成分が水又はピーナッツ油、液体パラフィン若しくはオリーブ油などの油媒体と混合される軟質ゼラチンカプセルとして提示され得る。

【0086】

水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合して活性物質を含有する。そのような賦形剤としては、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガムなどの懸濁剤、並びに天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）などの分散剤又は湿潤剤、アルキレンオキシドと脂肪酸（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）との縮合生成物、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール（例えば、ヘプタデカチエチレンオキシセタノール）との縮合生成物、エチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステルとの縮合生成物、及びヘキシトール無水物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が挙げられる。水性懸濁液はまた、エチル又はｎ－プロピルｐ－ヒドロキシ－安息香酸塩などの１つ以上の防腐剤、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、及びスクロース又はサッカリンなどの１つ以上の甘味剤を含有し得る。

【0087】

油懸濁液は、ピーナッツ油、オリーブ油、ゴマ油若しくはココナッツ油などの植物油中、又は液体パラフィンなどの鉱油中に活性成分を懸濁することによって製剤化され得る。経口懸濁液は、蜜蝋、硬質パラフィン、又はセチルアルコールなどの増粘剤を含有し得る。上記のような甘味剤、及び香味剤を添加して、口当たりのよい経口調製物を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤の添加によって保存され得る。

【0088】

水の添加による水性懸濁液の調製に好適な分散性粉末及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び１つ以上の防腐剤と混合して活性成分を提供する。好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤は、上記に開示されたものによって例示される。追加の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤及び着色剤も存在し得る。

【0089】

医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であり得る。油相は、オリーブ油又はピーナッツ油などの植物油、液体パラフィンなどの鉱油、又はこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤としては、アカシアガム及びトラガカントガムなどの天然に存在するガム、ダイズレシチンなどの天然に存在するホスファチド、脂肪酸に由来するエステル又は部分エステル、及びモノオレイン酸ソルビタンなどのヘキシトール無水物、並びにモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどのこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物が挙げられる。エマルジョンはまた、甘味剤及び香味剤を含有し得る。シロップ剤及びエリキシル剤は、グリセロール、ソルビトール、又はスクロースなどの甘味剤と共に製剤化され得る。そのような製剤はまた、粘滑剤、防腐剤、香味剤、又は着色剤を含有し得る。

【0090】

医薬組成物は、滅菌注射用水性又は油性懸濁液などの滅菌注射用又は静脈内調製物の形態であり得る。この懸濁液は、上述されている好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、既知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用又は静脈内調製物はまた、１，３－ブタン－ジオール中の溶液などの非毒性の非経口的に許容される希釈剤若しくは溶媒中の滅菌注射用溶液若しくは懸濁液であり得るか、又は凍結乾燥粉末として調製され得る。用いられ得る許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。更に、滅菌固定油は、従来、溶媒又は懸濁媒体として用いられ得る。この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無溶剤固定油を用いることができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸も同様に注射剤の調製に使用され得る。

【0091】

単一剤形を産生するために担体物質と組み合わされてもよい活性成分の量は、治療される宿主及び特定の投与様式に応じて変化するであろう。例えば、ヒトへの経口投与を目的とした徐放性製剤は、総組成物の約５～約９５％（重量：重量）まで変化し得る適切かつ簡便な量の担体物質とのおよそ１～１０００ｍｇの活性物質化合物を含み得る。医薬組成物は、投与のために容易に測定可能な量を提供するように調製することができる。例えば、静脈内注入を目的とした水溶液は、約３０ｍＬ／時間の速度で好適な体積の注入が起こり得るために、溶液１ミリリットル当たり約３～５００μｇの活性成分を含有し得る。

【0092】

眼への局所投与に好適な製剤はまた、有効成分が好適な担体、特に活性成分の水性溶媒に溶解又は懸濁される点眼薬を含む。活性成分は、好ましくは、０．５～２０％、有利には０．５～１０％、特に約１．５％ｗ／ｗの濃度でそのような製剤中に存在する。

【0093】

口内での局所投与に好適な製剤には、風味を付けた主成分、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアなどの不活性な主成分中に活性成分を含むパステル剤、並びに好適な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュが含まれる。

【0094】

直腸投与用の製剤は、例えば、カカオバター又はサリチル酸塩を含む好適な基剤を有する坐剤として提示され得る。

【0095】

肺内又は経鼻投与に好適な製剤は、例えば、０．１～５００ミクロンの範囲、例えば０．５、１、３０、３５などの粒径を有し、これは、経鼻通路を通る吸入によって、又は口を通る吸入によって投与される。好適な製剤としては、活性成分の水性又は油性溶液が挙げられる。エアロゾル又は乾燥粉末投与に好適な製剤は、従来の方法に従って調製することができ、以下に記載されるように、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ感染症の治療又は予防においてこれまで使用された化合物などの他の治療剤と共に送達され得る。

【0096】

別の実施形態は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ感染症及び関連する可能性のある細気管支炎を治療するのに好適な、式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、新規、有効、安全、非刺激性、及び生理学的に適合性である吸入可能な組成物を提供する。非限定的な例示的な薬学的に許容される塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、又はリン酸塩を含む無機酸塩であり、肺刺激を引き起こす可能性が低い。いくつかの実施形態では、吸入可能な製剤は、約１～約５μｍの空気動力学的直径の質量中央値（mass median aerodynamic diameter、ＭＭＡＤ）を有する粒子を含むエアロゾル中で気管支内空間に送達される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、噴霧器、加圧定量噴霧式吸入器（pressurized metered dose inhalerm、ｐＭＤＩ）、又は乾燥粉末吸入器（dry powder inhaler、ＤＰＩ）を使用してエアロゾル送達用に製剤化される。

【0097】

噴霧器の非限定的な例としては、霧化、ジェット、超音波、加圧された振動多孔質プレート、又は適応エアロゾル送達技術を利用するそれらの噴霧器（Ｄｅｎｙｅｒ，Ｊ．Ａｅｒｏｓｏｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２０１０，２３ Ｓｕｐｐ １，Ｓ１－Ｓ１０）を含む同等の噴霧器が挙げられる。ジェット噴霧器は、空気圧を利用して液体溶液をエアロゾル液滴に破壊する。超音波噴霧器は、液体を小さなエアロゾル液滴に剪断する圧電結晶によって機能する。加圧噴霧システムは、小さな細孔を通して圧力下で溶液を押し出してエアロゾル液滴を生成する。振動多孔質プレートデバイスは、急速な振動を利用して、液体の流れを適切な液滴サイズに剪断する。

【0098】

いくつかの実施形態では、噴霧用の製剤は、式Ｉの化合物の製剤を必要とされるＭＭＡＤの粒子にエアロゾル化することができる噴霧器を使用して、主に約１μｍ～約５μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾル中で気管支内空間に送達される。最適に治療的に有効であり、上気道及び全身的な副作用を回避するために、エアロゾル化された粒子の大部分は、約５μｍ超のＭＭＡＤを有してはならない。エアロゾルが５μｍより大きいＭＭＡＤを有する多数の粒子を含有する場合、粒子は上気道に堆積され、下気道の炎症部位及び気管支狭窄の部位に送達される薬物の量を減少させる。エアロゾルのＭＭＡＤが約１μｍよりも小さい場合、粒子は吸入空気中に懸濁したままであり、続いて呼気の間に吐き出される傾向を有する。

【0099】

本明細書の方法に従って製剤化及び送達される場合、噴霧用のエアロゾル製剤は、治療有効用量の式Ｉの化合物を、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ感染症を治療するのに十分なＰｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ感染症の部位に送達する。投与される薬物の量は、治療有効用量の式Ｉの化合物の送達の効率を反映するように調整されなければならない。いくつかの実施形態では、水性エアロゾル製剤と噴霧化、ジェット、加圧、振動多孔質プレート、又は超音波噴霧器との組み合わせは、噴霧器に応じて、その気道への式Ｉの化合物の投与された用量の少なくとも約２０～約９０％、例えば、約７０％の送達を可能にする。いくつかの実施形態では、活性化合物の少なくとも約３０～約５０％が送達される。いくつかの実施形態では、約７０～約９０％の活性化合物が送達される。

【0100】

別の実施形態では、式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩は、乾燥吸入可能な粉末として送達される。化合物は、乾燥粉末製剤として気管支内に投与されて、乾燥粉末又は計量用量吸入器を使用して、化合物の微粒子を気管支内空間に有効に送達する。ＤＰＩによる送達のために、式Ｉの化合物は、粉砕スプレー乾燥、臨界流体加工、又は溶液からの沈殿によって、主に約１μｍ～約５μｍのＭＭＡＤを有する粒子に加工される。約１μｍ～約５μｍのＭＭＡＤで粒径を生成することができる媒体粉砕、ジェット粉砕及びスプレー乾燥デバイス及び手順は、当該技術分野において周知である。一実施形態では、賦形剤は、必要なサイズの粒子に加工する前に、式Ｉの化合物に添加される。別の実施形態では、賦形剤は、例えば、賦形剤としてラクトースを使用することによって、薬物粒子の分散を助けるために必要なサイズの粒子とブレンドされる。

【0101】

粒径測定は、当該技術分野で周知のデバイスを使用して行われる。例えば、計量用量及び乾燥粉末吸入器内のエアロゾルのためのデバイスを特徴とするように、米国薬局方第６０１章で具体的に引用されたものなどの多段アンダーソンカスケードインパクター又は他の好適な方法。

【0102】

いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、乾燥粉末吸入器又は他の乾燥粉末分散デバイスなどのデバイスを使用して、乾燥粉末として送達される。乾燥粉末吸入器及びデバイスの非限定的な例としては、米国特許第５，４５８，１３５号、同第５，７４０，７９４号、同第５７７５３２０号、同第５，７８５，０４９号、同第３，９０６，９５０号、同第４，０１３，０７５号、同第４，０６９，８１９号、同第４，９９５，３８５号、同第５，５２２，３８５号、同第４，６６８，２１８号、同第４，６６７，６６８号、同第４，８０５，８１１号及び同第５，３８８，５７２号に開示されているものが挙げられる。乾燥粉末吸入器の２つの主要な設計がある。１つの設計は、薬物のためのリザーバがデバイス内に配置され、患者がある用量の薬物を吸入チャンバに追加する計量デバイスである。第２の設計は、各個々の用量が別個の容器内で製造されている工場計量デバイスである。両方のシステムは、１μｍ及び約５μｍのＭＭＡＤの小さい粒子への薬物の製剤化に依存し、しばしば、限定されないが、ラクトースなどのより大きい賦形剤粒子との共製剤化を伴う。薬物粉末を吸入チャンバに入れ（デバイス計測又は工場計量投与量の破損のいずれかによって）、患者の吸気流は、デバイスから口腔内への粉末を加速させる。粉末経路の非層流特徴は、賦形剤－薬物凝集体を分解させ、大きな賦形剤粒子の質量は、喉の後部でそれらの圧入を引き起こし、一方、より小さい薬物粒子は、肺の深部に堆積される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるいずれかのタイプの乾燥粉末吸入器を使用して乾燥粉末として送達され、この場合、任意の賦形剤を除く乾燥粉末のＭＭＡＤは、主に１μｍ～約５μｍの範囲である。

【0103】

別の実施形態では、式Ｉの化合物は、計量用量吸入器を使用して乾燥粉末として送達される。計量用量吸入器及びデバイスの非限定的な例としては、米国特許第５，２６１，５３８号、同第５，５４４，６４７号、同第５，６２２，１６３号、同第４，９５５，３７１号、同第３，５６５，０７０号、同第３，３６１３０６号及び同第６，１１６，２３４号に開示されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩は、計量用量吸入器を使用して乾燥粉末として送達され、この場合、任意の賦形剤を除く乾燥粉末のＭＭＡＤは、主に約１～５μｍの範囲である。

【0104】

膣内投与に好適な製剤は、当該技術分野において適切であることが知られているような担体の活性成分に加えて、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡体又はスプレー製剤として提示され得る。

【0105】

非経口投与に好適な製剤には、製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にする抗酸化剤、緩衝液、バクテリオスタット及び溶質を含有し得る水性及び非水性滅菌注入溶液、並びに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。

【0106】

製剤は、単位用量又は多用量容器、例えば密封アンプル及びバイアルで提示され、使用直前に、滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保管され得る。即時注射溶液及び懸濁液は、前述の種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。例示的な単位投与量製剤は、活性成分の本明細書の上記に列挙したような１日用量若しくは単位１日サブ用量、又はそれらの適切な画分を含有するものである。

【0107】

特に上述の成分に加えて、製剤は、問題の製剤のタイプに関して当該技術分野において従来の他の薬剤を含み得、例えば、経口投与に好適なものは、香味剤を含み得ることを理解されたい。

【0108】

そのための獣医学的担体と共に上記で定義される、少なくとも１つの活性成分を含む獣医学的組成物が更に提供される。

【0109】

獣医学的担体は、組成物を投与する目的で有用な物質であり、そうでなければ獣医技術において不活性であるか又は許容可能であり、活性成分と適合性がある固体、液体又はガス状の物質であり得る。これらの獣医学的組成物は、経口、非経口又は任意の他の所望の経路によって投与され得る。

【0110】

いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、制御放出医薬製剤（「制御放出製剤」）を提供するように製剤化され、式Ｉの化合物の放出は、より少ない頻度の投与を可能にするか、又は所与の活性成分の薬物動態又は毒性プロファイルを改善するように制御及び調節される。

【0111】

有効な用量の活性成分は、少なくとも治療されている状態の性質、毒性、化合物が予防的に（低用量）又は活動性ウイルス感染症、送達方法、及び医薬製剤に対して使用されているかどうかに依存し、従来の用量漸増研究を使用して臨床医によって決定される。１日当たり約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、１日当たり約０．０１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重であると予想され得る。いくつかの実施形態では、有効用量は、１日当たり約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇ体重であり、例えば、典型的には、１日当たり約０．０５～約０．５ｍｇ／ｋｇ体重である。例えば、体重およそ７０ｋｇの成人に対する１日候補用量は、１ｍｇ～１０００ｍｇ、例えば、５ｍｇ～５００ｍｇの範囲であり、単回又は複数回用量の形態を取り得る。
Ｖ．投与経路

【0112】

式Ｉの化合物（本明細書では活性成分とも称される）は、適切な任意の適切な経路によって投与することができる。好適な経路には、経口、直腸、経鼻、局所（口腔及び舌下を含む）、経皮、膣及び非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）等が含まれる。好ましい経路は、例えば、レシピエントの状態によって変化し得ることが理解されよう。

【0113】

本開示の化合物は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、又は少なくとも約１２ヶ月以上など、所望の期間又は持続時間にわたって、有効な投与計画に従って個体に投与され得る。一変形例では、化合物は、個体の寿命まで必要な期間にわたって毎日又は断続的なスケジュールで投与される。

【0114】

本開示の化合物の投与量又は投与頻度は、投与医師の判断に基づいて、治療の過程にわたって調整され得る。

【0115】

化合物は、個体（例えば、ヒト）に有効量で投与され得る。いくつかの実施形態では、化合物を１日１回投与する。

【0116】

化合物は、経口又は非経口（例えば、静脈内）投与などの任意の有用な経路及び手段によって投与することができる。化合物の治療有効量は、１日当たり約０．００００１ｍｇ／ｋｇ体重～１日当たり約１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば１日当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重～１日当たり約１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は例えば１日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重～１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ体重、又は例えば１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ体重、又は例えば１日当たり約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重～１日当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、又は例えば１日当たり約０．３ｇ～約３０ｍｇ、又は例えば１日当たり約３０ｇ～約３００ｇを含み得る。

【0117】

本開示の化合物は、本開示の化合物の任意の投与量（例えば、１ｍｇ～１０００ｍｇの化合物）で１つ以上の追加の治療剤と組み合わせることができる。治療有効量は、１用量当たり約１ｍｇ～１用量当たり約１０００ｍｇ、例えば１用量当たり約５０ｍｇ～１用量当たり約５００ｍｇ、又は例えば１用量当たり約１００ｍｇ～１用量当たり約４００ｍｇ、又は例えば１用量当たり約１５０ｍｇ～１用量当たり約３５０ｍｇ、又は例えば１用量当たり約２００ｍｇ～１用量当たり約３００ｍｇを含み得る。本開示の化合物の他の治療有効量は、１用量当たり約１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、又は約５００ｍｇである。本開示の化合物の他の治療有効量は、１用量当たり約１００ｍｇ、又は１用量当たり約１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、４５０、又は約５００ｍｇである。単回投与は、毎時間、毎日、又は毎週投与することができる。例えば、単回投与は、１、２、３、４、６、８、１２、１６時間毎に１回、又は２４時間毎に１回投与することができる。単回投与はまた、１、２、３、４、５、６日毎に１回、又は７日毎に１回投与することもできる。単回投与はまた、１、２、３週間毎に１回、又は４週間毎に１回投与することもできる。いくつかの実施形態では、単回用量は、１週間毎に１回投与され得る。単回投与は、毎月１回投与することもできる。

【0118】

本開示の化合物の他の治療有効量は、１用量当たり約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は約１００ｍｇである。

【0119】

本開示の化合物の投薬の頻度は、個々の患者の必要性によって決定され、例えば、１日当たり１回、又は１日当たり２回、又はそれ超であり得る。ウイルス感染症を治療するために必要である限り、化合物の投与は継続する。例えば、化合物は、ウイルスに感染しているヒトに、２０日～１８０日の期間、又は例えば、２０日～９０日の期間、又は例えば、３０日～６０日間の期間にわたって投与することができる。

【0120】

投与は、患者が、本開示の化合物の１日用量を受ける数日以上の期間に続いて、患者が化合物の１日用量を受けない数日以上の期間で断続的であり得る。例えば、患者は、ある用量の化合物を１日おきに又は１週間当たり３回受けることができる。更に一例として、患者は、ある用量の化合物を１～１４日間の期間にわたって毎日受けることができ、続いて７～２１日の期間の間、患者はある用量の化合物を受けず、続いてその後の期間（例えば、１～１４日）の間、患者は再び１日用量の化合物を受ける。化合物の投与、続いて化合物の非投与の交互の期間は、患者を治療するために臨床的に必要とされるように繰り返され得る。

【0121】

一実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上（例えば、１、２、３、４つ、１若しくは２つ、１～３つ、又は１～４つ）の追加の治療剤と組み合わせて、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。

【0122】

一実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上（例えば、１、２、３、４つ、１若しくは２つ、１～３つ、又は１～４つ）の追加の治療剤と組み合わせて含むキットが提供される。

【0123】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、１、２、３、４つ以上の追加の治療剤と組み合わされる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、２つの追加の治療剤と組み合わされる。他の実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、３つの追加の治療剤と組み合わされる。更なる実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、４つの追加の治療剤と組み合わされる。１、２、３、４以上の追加の治療剤は、同じ部類の治療剤から選択される異なる治療剤であってもよく、及び／又は異なる部類の治療剤から選択してもよい。

【0124】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物が本明細書に記載の１つ以上の追加の治療剤と組み合わされる場合、組成物の成分は、同時又は連続レジメンとして投与される。連続的に投与される場合、組み合わせは、２回以上の投与で投与されてもよい。

【0125】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、例えば経口投与のための固体剤形として、患者への同時投与のための単位剤形において１つ以上の追加の治療剤と組み合わされる。

【0126】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、１つ以上の追加の治療剤と共に投与される。

【0127】

本開示の化合物の効果を延長するために、多くの場合、皮下又は筋肉内注射からの化合物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性が乏しい結晶質又は非晶質物質の液体懸濁液の使用によって達成され得る。化合物の吸収速度はその溶解速度に依存し、次に、結晶サイズ及び結晶形態に依存し得る。代替的に、非経口投与された化合物形態の遅延吸収は、化合物を油性ビヒクルに溶解又は懸濁することによって達成される。注射可能なデポー形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に、化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。化合物対ポリマーの比、及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、化合物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射可能製剤はまた、体組織と適合性のあるリポソーム又はマイクロエマルジョン製剤中に化合物を封入することによっても調製される。
ＶＩ．併用療法

【0128】

本明細書で提供される式Ｉの化合物及び組成物はまた、ウイルス感染症、例えば、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、又はＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療のための他の活性治療剤と組み合わせて使用される。
Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅの治療のための併用療法

【0129】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、他の活性治療剤と組み合わせて使用される。Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療の場合、好ましくは、他の活性治療剤は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症、特に呼吸器合胞体ウイルス感染症及び／又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症に対して活性である。ＲＳＶに対するこれらの他の活性治療剤の非限定的な例は、リバビリン、パリビズマブ、モタビズマブ、ＲＳＶ－ＩＧＩＶ（ＲｅｓｐｉＧａｍ（登録商標））、ＭＥＤＩ－５５７、Ａ－６０４４４（ＲＳＶ６０４としても知られる）、ＭＤＴ－６３７、ＢＭＳ－４３３７７１、ＡＬＮ－ＲＳＶ０、ＡＬＸ－０１７１、及びそれらの混合物である。呼吸器合胞体ウイルス感染症に対して活性な他の活性治療剤の他の非限定的な例としては、ＡＫ－０５２９などの呼吸器合胞体ウイルスタンパク質Ｆ阻害剤；ＲＶ－５２１、ＡＬＸ－５２１、ＡＬＸ－０１７１、ＪＮＪ－５３７１８６７８、ＢＴＡ－５８５、及びプレサトビル；ルミシタビン及びＡＬＳ－８１１２などのＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；抗Ｇタンパク質ｍＡｂなどの抗ＲＳＶ Ｇタンパク質抗体；ニタゾキサニドなどのウイルス複製阻害剤が挙げられる。

【0130】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、ＭＶＡ－ＢＮ ＲＳＶ、ＲＳＶ－Ｆ、ＭＥＤＩ－８８９７、ＪＮＪ－６４４００１４１、ＤＰＸ－ＲＳＶ、ＳｙｎＧＥＭ、ＧＳＫ－３３８９２４５Ａ、ＧＳＫ－３００３８９－１Ａ、ＲＳＶ－ＭＥＤＩ δＭ２－２ワクチン、ＶＲＣ－ＲＳＶＲＧＰ０８４－００ＶＰ、Ａｄ３５－ＲＳＶ－ＦＡ２、Ａｄ２６－ＲＳＶ－ＦＡ２、及びＲＳＶ融合糖タンパク質サブユニットワクチンを含むがこれらに限定されない、ＲＳＶの治療又は予防のためのワクチンであり得る。

【0131】

ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染に対して活性な他の活性治療剤の非限定的な例としては、ＤＡＳ－１８１などのシアリダーゼモジュレータ、ＡＬＳ－８１１２などのＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、及びＥＶ－０４６１１３などのＭｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症の治療のための抗体が挙げられる。

【0132】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、ｍＲＮＡ－１６５３及びｒＨＭＰＶ－Ｐａワクチンを含むがこれらに限定されないｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症の治療又は予防のためのワクチンであり得る。
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅの治療のための併用療法

【0133】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、他の活性治療剤と組み合わせて使用される。Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療の場合、好ましくは、他の活性治療剤は、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症、特にエンテロウイルス感染症に対して活性である。これらの他の活性治療剤の非限定的な例は、プレコナリル、ＢＴＡ－７９８（バペンダビル）、並びにＷｕら（米国特許第７，０７８，４０３号）及びＷａｔｓｏｎ（米国特許第７，１６６，６０４号）によって開示される他の化合物などのカプシド結合阻害剤；ＤＡＳ－１８１などの融合シアリダーゼタンパク質；ＶＶＸ－００３及びＡＺＮ－００１などのキャプシドタンパク質ＶＰ１阻害剤；ＣＷ－３３などのウイルスプロテアーゼ阻害剤；ＧＳＫ－４８０及びＧＳＫ－５３３などのホスファチジルイノシトール４キナーゼβ阻害剤；抗ＥＶ７１抗体である。

【0134】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、ＥＶ７１ワクチン、ＴＡＫ－０２１、及びＥＶ－Ｄ６８アデノベクターベースのワクチンを含むがこれらに限定されない、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療又は予防のためのワクチンであり得る。
呼吸器感染のための併用療法

【0135】

Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ及びＰｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルスの感染症の多くは、呼吸器感染症である。したがって、呼吸器症状及び感染症の後遺症を治療するために使用される追加の活性治療薬は、式Ｉの化合物と組み合わせて使用され得る。追加の薬剤は、好ましくは経口投与されるか、又は直接吸入によって投与される。例えば、ウイルス呼吸器感染症の治療のために式Ｉの化合物と組み合わせた追加の治療剤には、気管支拡張剤及びコルチコステロイドが含まれるが、これらに限定されない。
糖質コルチコイド

【0136】

１９５０年に喘息療法として最初に導入された糖質コルチコイド（Ｃａｒｒｙｅｒ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ，２１，２８２－２８７，１９５０）は、依然としてこの疾患に対して最も強力で一貫した効果的な療法であるが、それらの作用機序はまだ完全には理解されていない（Ｍｏｒｒｉｓ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７５（１ Ｐｔ）１－１３，１９８５）。残念ながら、経口糖質コルチコイド療法は、体幹肥満、高血圧、緑内障、グルコース不耐性、白内障形成の加速、骨ミネラル損失、及び心理的効果などの望ましくない副作用と関連しており、それらの全ては、長期治療剤としての使用を制限する（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，１０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）。全身的な副作用に対する解決策は、ステロイド薬を炎症の部位に直接送達することである。経口ステロイドの重度の悪影響を軽減するために、吸入コルチコステロイド（inhaled corticosteroid、ＩＣＳ）が開発されている。式Ｉの化合物と組み合わせて使用され得るコルチコステロイドの非限定的な例は、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、ロテプレドノール、エタボン酸ロテプレドノール、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、フルドロコルチゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、ベタメタゾン、ジプロプリオン酸ベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオコルチン－２１－ブチラート、フルメタゾン、ピバル酸フルメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸ハロベタソール、フロン酸モメタゾン、フルチカゾン、ＡＺＤ－７５９４、シクレソニド；又はその薬学的に許容される塩である。
抗炎症剤

【0137】

抗炎症カスケード機序を介して作用する他の抗炎症剤もまた、ウイルス呼吸器感染症の治療のために式Ｉの化合物と組み合わせて追加の治療剤として有用である。ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ－４、ＰＤＥ－５、若しくはＰＤＥ－７特異的）、転写因子阻害剤（例えば、ＩＫＫ阻害によりＮＦκＢを遮断する）、又はキナーゼ阻害剤（例えば、Ｐ３８ ＭＡＰ、ＪＮＫ、ＰＩ３Ｋ、ＥＧＦＲ若しくはＳｙｋを遮断する）のような「抗炎症シグナル伝達モジュレータ」（この文書ではＡＩＳＴＭと称される）を適用することは、これらの小分子が限定数の一般的な細胞内経路、すなわち抗炎症治療介入にとって重大なポイントであるシグナル伝達経路を標的とするため、炎症を止めるための論理的アプローチである（Ｐ．Ｊ．Ｂａｒｎｅｓ，２００６によるレビューを参照されたい）。これらの非限定的な追加の治療剤としては、５－（２，４－ジフルオロ－フェノキシ）－１－イソブチル－１Ｈ－インダゾール－６－カルボン酸（２－ジメチルアミノ－エチル）－アミド（Ｐ３８ Ｍａｐキナーゼ阻害剤ＡＲＲＹ－７９７）、３－シクロプロピルメトキシ－Ｎ－（３，５－ジクロロ－ピリジン－４－イル）－４－ジフルオロメトキシ－ベンズアミド（ＰＤＥ－４阻害剤Ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ）、４－［２－（３－シクロペンチルオキシ－４－メトキシフェニル）－２－フェニル－エチル］－ピリジン（ＰＤＥ－４阻害剤ＣＤＰ－８４０）、Ｎ－（３，５－ジクロロ－４－ピリジニル）－４－（ジフルオロメトキシ）－８－［（メチルスルホニル）アミノ］－１－ジベンゾフランカルボキサミド（ＰＤＥ－４阻害剤Ｏｇｌｅｍｉｌａｓｔ）、Ｎ－（３，５－ジクロロ－ピリジン－４－イル）－２－［１－（４－フルオロベンジル）－５－ヒドロキシ－１Ｈ－インドール－３－イル］－２－オキソ－アセトアミド（ＰＤＥ－４阻害剤ＡＷＤ １２－２８１）、８－メトキシ－２－トリフルオロメチル－キノリン－５－カルボン酸（３，５－ジクロロ－１－オキシ－ピリジン－４－イル）－アミド（ＰＤＥ－４阻害剤Ｓｃｈ ３５１５９１）、４－［５－（４－フルオロフェニル）－２－（４－メタンスルフィニル－フェニル）－１Ｈ－イミダゾール－４－イル］－ピリジン（Ｐ３８阻害剤ＳＢ－２０３８５０）、４－［４－（４－フルオロ－フェニル）－１－（３－フェニル－プロピル）－５－ピリジン－４－イル－１Ｈ－イミダゾール－２－イル］－ブタ－３－イン－１－オール（Ｐ３８阻害剤ＲＷＪ－６７６５７）、４－シアノ－４－（３－シクロペンチルオキシ－４－メトキシ－フェニル）－シクロヘキサンカルボン酸２－ジエチルアミノ－エチルエステル（シロミラスト、ＰＤＥ－４阻害剤の２－ジエチル－エチルエステルプロドラッグ）、（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－［７－メトキシ－６－（３－モルホリン－４－イル－プロポキシ）－キナゾリン－４－イル］－アミン（ゲフィニブ、ＥＧＦＲ阻害剤）、及び４－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－Ｎ－［４－メチル－３－（４－ピリジン－３－イル－ピリミジン－２－イルアミノ）－フェニル］－ベンズアミド（イマチニブ、ＥＧＦＲ阻害剤）。
β２－アドレナリン受容体アゴニスト気管支拡張剤

【0138】

式Ｉの化合物を有する、ホルモテロール、アルブテロール、又はサルメテロールなどの吸入β２－アドレナリン受容体アゴニスト気管支拡張剤を含む組み合わせもまた、呼吸器ウイルス感染症の治療に有用な好適であるが非限定的な組み合わせである。

【0139】

ＩＣＳを有するホルモテロール又はサルメテロールなどの吸入β２－アドレナリン受容体アゴニスト気管支拡張剤の組み合わせもまた、気管支狭窄及び炎症（それぞれＳｙｍｂｉｃｏｒｔ（登録商標）及びＡｄｖａｉｒ（登録商標））の両方を治療するために使用される。式Ｉの化合物と共にこれらのＩＣＳ及びβ２－アドレナリン受容体アゴニストの組み合わせを含む組み合わせもまた、呼吸器ウイルス感染症の治療に有用な好適であるが非限定的な組み合わせである。

【0140】

β２アドレナリン受容体アゴニストの他の例は、ベドラドリン、ビランテロール、インダカテロール、オロダテロール、ツロブテロール、ホルモテロール、アベジテロール、サルブタモール、アルホルモテロール、レバルブテロール、フェノテロール、及びＴＤ－５４７１である。
抗コリン薬

【0141】

肺気管支狭窄の治療又は予防の場合、抗コリン薬が役立つ可能性があり、したがって、ウイルス呼吸器感染症の治療のために式Ｉの化合物と組み合わせて追加の治療剤として有用である。これらの抗コリン薬としては、ムスカリン受容体（特にＭ３サブタイプの）が挙げられるが、これらに限定されず、これはＣＯＰＤにおけるコリン作動性トーンの制御に対するヒトにおける治療有効性を示している（Ｗｉｔｅｋ，１９９９）。１－｛４－ヒドロキシ－１－［３，３，３－トリス－（４－フルオロ－フェニル）－プロピオニル］－ピロリジン－２－カルボニル｝－ピロリジン－２－カルボン酸（１－メチル－ピペリジン－４－イルメチル）－アミド、３－［３－（２－ジエチルアミノ－アセトキシ）－２－フェニル－プロピオニルオキシ］－８－イソプロピル－８－メチル－８－アゾニア－ビシクロ［３．２．１］オクタン（イプラトロピウム－Ｎ，Ｎ－ジエチルグリシネート）、１－シクロヘキシル－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－カルボン酸１－アザ－ビシクロ［２．２．２］オクタ－３－イルエステル（ソリフェナシン）、２－ヒドロキシメチル－４－メタンスルフィニル－２－フェニル－酪酸１－アザ－ビシクロ［２．２．２］オクタ－３－イルエステル（レバトロパート）、２－｛１－［２－（２，３－ジヒドロ－ベンゾフラン－５－イル）－エチル］－ピロリジン－３－イル｝－２，２－ジフェニル－アセトアミド（ダリフェナシン）、４－アゼパン－１－イル－２，２－ジフェニル－ブチルアミド（ブゼピド）、７－［３－（２－ジエチルアミノ－アセトキシ）－２－フェニル－プロピオニルオキシ］－９－エチル－９－メチル－３－オキサ－９－アゾニア－トリシクロ［３．３．１．０２，４］ノナン（オキシトロピウム－Ｎ，Ｎ－ジエチルグリシネート）、７－［２－（２－ジエチルアミノ－アセトキシ）－２，２－ジ－チオフェン－２－イル－アセトキシ］－９，９－ジメチル－３－オキサ－９－アゾニア－トリシクロ［３．３．１．０２，４］ノナン（チオトロピウム－Ｎ，Ｎ－ジエチルグリシネート）、ジメチルアミノ酢酸２－（３－ジイソプロピルアミノ－１－フェニル－プロピル）－４－メチル－フェニルエステル（トルテロジン－Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシネート）、３－［４，４－ビス－（４－フルオロ－フェニル）－２－オキソ－イミダゾリジン－１－イル］－１－メチル－１－（２－オキソ－２－ピリジン－２－イル－エチル）－ピロリジニウム、１－［１－（３－フルオロ－ベンジル）－ピペリジン－４－イル］－４，４－ビス－（４－フルオロ－フェニル）－イミダゾリジン－２－オン、１－シクロオクチル－３－（３－メトキシ－１－アザ－ビシクロ［２．２．２］オクタ－３－イル）－１－フェニル－プロパ－２－イン－１－オール、３－［２－（２－ジエチルアミノ－アセトキシ）－２，２－ジ－チオフェン－２－イル－アセトキシ］－１－（３－フェノキシ－プロピル）－１－アゾニア－ビシクロ［２．２．２］オクタン（アクリジニウム－Ｎ，Ｎ－ジエチルグリシネート）、又は（２－ジエチルアミノ－アセトキシ）－ジ－チオフェン－２－イル－酢酸１－メチル－１－（２－フェノキシ－エチル）－ピペリジン－４－イルエステル、レベフェナシン、臭化グリコピロニウム、臭化ウメクリジニウム、臭化チオトロピウム、臭化アクリジニウム、臭化ベンシクロキジウム。
粘液溶解剤

【0142】

本明細書で提供される式Ｉの化合物及び組成物はまた、呼吸器感染症の感染及び症状の両方を治療するために粘液溶解剤と組み合わされ得る。粘液溶解剤の非限定的な例は、アンブロキソールである。同様に、式Ｉの化合物は、呼吸器感染症の感染及び症状の両方を治療するために去痰薬と組み合わされてもよい。去痰薬の非限定的な例は、グアイフェネシンである。

【0143】

噴霧性高張生理食塩水は、肺疾患を有する患者における小気道の即時及び長期クリアランスを改善するために使用される（Ｋｕｚｉｋ，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２００７，２６６）。したがって、式Ｉの化合物はまた、特に、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が細気管支炎を併発する場合に、噴霧性高張生理食塩水と組み合わされてもよい。式Ｉの化合物と高張生理食塩水との組み合わせはまた、上で考察された追加の薬剤のうちのいずれかを含み得る。一実施形態では、約３％の噴霧性高張生理食塩水が使用される。
ＣＯＰＤの治療のための併用療法

【0144】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、他の活性治療剤と組み合わせて使用される。ＣＯＰＤの呼吸器悪化の治療の場合、他の活性治療剤は、ＣＯＰＤに対する他の活性剤を含む。これらの他の活性治療剤の非限定的な例としては、ベンラリズマブ、メポリズマブなどの抗ＩＬ５抗体；ＡＺＤ－７９８６（ＩＮＳ－１００７）などのジペプチジルペプチダーゼＩ（ＤＰＰ１）阻害剤；シプロフロキサシン塩酸塩などのＤＮＡジャイレース阻害剤／トポイソメラーゼＩＶ阻害剤；ＲＰＬ－５５４などのＭＤＲ関連タンパク質４／ホスホジエステラーゼ（phosphodiesterase、ＰＤＥ）３及び４阻害剤；イバカフトール、ＱＢＷ－２５１などのＣＦＴＲ刺激剤；ＲＢｘ－１００１７６０９’アデノシンＡ１受容体アンタゴニストなどのＭＭＰ－９／ＭＭＰ－１２阻害剤、例えば、ＰＢＦ－６８０；ＳＢ－０１０などのＧＡＴＡ３転写因子阻害剤；ＡＳＭ－０２４などのムスカリン受容体モジュレータ／ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト；ＢＩＯ－１１００６などのＭＡＲＣＫＳタンパク質阻害剤；マシチニブなどのキットチロシンキナーゼ／ＰＤＧＦ阻害剤；ロフルミラスト、ＣＨＦ－６００１などのホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）４阻害剤；ネミラリシブなどのホスホイノシチド－３キナーゼδ阻害剤；ＴＡ－２７０などの５－リポキシゲナーゼ阻害剤；コハク酸バテフェンテロール、ＡＺＤ－８８７、臭化イプラトロピウムなどのムスカリン受容体アンタゴニスト／β２アドレナリン作動性アゴニスト；ＴＲＮ－１５７；エルドステインなどのエラスターゼ阻害剤；ＦＰ－０２５などのメタロプロテアーゼ－１２阻害剤；タデキニグαなどのインターロイキン１８リガンド阻害剤；ＣＫ－２１２７１０７などの骨格筋トロポニン活性化剤；アクマピモド（acumapimod）などのｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＣＮＴＯ－６７８５などのＩＬ－１７受容体修飾因子；ダニリキシンなどのＣＸＣＲ２ケモカインアンタゴニスト；ＰＯＬ－６０１４などの白血球エラスターゼ阻害剤；ＧＳＫ－２２５６２９４などのエポキシドヒドロラーゼ阻害剤；ＣＨＦ－６３３３などのＨＮＥ阻害剤；アビプタジルなどのＶＩＰアゴニスト；ＲＶ－１７２９などのホスホイノシチド－３キナーゼδ／γ阻害剤；ＡＰＬ－１などの補体Ｃ３阻害剤、及びＡＭ－２１１などのＧタンパク質共役受容体－４４アンタゴニスト。

【0145】

活性治療剤の他の非限定的な例としては、ブデソニド、脂肪細胞、一酸化窒素、ＰＵＲ－１８００、ＹＬＰ－００１、ＬＴ－４００１、アジスロマイシン、ガムネックス、ＱＢＫＰＮ、ピルビン酸ナトリウム、ＭＵＬ－１８６７、マンニトール、ＭＶ－１３０、ＭＥＤＩ－３５０６、ＢＩ－４４３６５１、ＶＲ－０９６、ＯＰＫ－００１８、ＴＥＶ－４８１０７、ドキソフィリン、ＴＥＶ－４６０１７、ＯｌｉｇｏＧ－ＣＯＰＤ－５／２０、Ｓｔｅｍｐｅｕｃｅｌ（登録商標）、ＺＰ－０５１、リジンアセチルサリチレートが挙げられる。

【0146】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、ＭＶ－１３０及びＧＳＫ－２８３８４９７Ａを含むがこれらに限定されない、ＣＯＰＤに対して活性であるワクチンであり得る。
デングの治療のための併用療法

【0147】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、他の活性治療剤と組み合わせて使用される。Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療の場合、好ましくは、他の活性治療剤は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症、特にデング感染症に対して活性である。これらの他の活性治療剤の非限定的な例は、ＧＢＶ－００６などの宿主細胞因子モジュレータ；フェンレチニド ＡＢＸ－２２０、ＢＲＭ－２１１；セルゴシビルなどのα－グルコシダーゼ１阻害剤；モジパファントなどの血小板活性化因子受容体（platelet activating factor receptor、ＰＡＦＲ）アンタゴニスト；ＦＸ－０６などのカドヘリン－５／第Ｉａ因子モジュレータ；ＪＮＪ－８３５９などのＮＳ４Ｂ阻害剤；ＡＢＸ－２０２などのウイルスＲＮＡスプライシングモジュレータ；ＮＳ５ポリメラーゼ阻害剤；ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤；及びＴＬＲモジュレータである。

【0148】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、ＴｅｔｒａＶａｘ－ＤＶ、Ｄｅｎｇｖａｘｉａ（登録商標）、ＤＰＩＶ－００１、ＴＡＫ－００３、生弱毒化デングワクチン、四価デング熱ワクチン、四価ＤＮＡワクチン、ｒＤＥＮ２δ３０－７１６９、及びＤＥＮＶ－１ ＰＩＶを含むがこれらに限定されない、デングの治療又は予防のためのワクチンであり得る。
エボラの治療のための併用療法

【0149】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、他の活性治療剤と組み合わせて使用される。Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療の場合、好ましくは、他の活性治療剤は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症、特にマールブルグウイルス、エボラウイルス、及びＣｕｅｖａウイルス感染症に対して活性である。これらの他の活性治療剤の非限定的な例は、リバビリン、パリビズマブ、モタビズマブ、ＲＳＶ－ＩＧＩＶ（ＲｅｓｐｉＧａｍ（登録商標））、ＭＥＤＩ－５５７、Ａ－６０４４４、ＭＤＴ－６３７、ＢＭＳ－４３３７７１、アミオダロン、ドロネダロン、ベラパミル、エボラ回復期血漿（Ebola Convalescent Plasma、ＥＣＰ）、ＴＫＭ－１００２０１、ＢＣＸ４４３０（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－２－（４－アミノ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－７－イル）－５－（ヒドロキシメチル）ピロリジン－３，４－ジオール）、ＴＫＭ－エボラ、Ｔ－７０５一リン酸塩、Ｔ－７０５二リン酸塩、Ｔ－７０５三リン酸塩、ＦＧＩ－１０６（１－Ｎ，７－Ｎ－ビス［３－（ジメチルアミノ）プロピル］－３，９－ジメチルキノリノ［８，７－ｈ］キノロン－１，７－ジアミン）、ｒＮＡＰｃ２、ＯＳ－２９６６、ブリンシドフォビル、レムデシビル；

【0150】

ガリデシビル、ファビピラビル（Ｔ－７０５又はアビガンとしても知られる）、ＪＫ－０５などのＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；ＧＭＶ－００６などの宿主細胞因子モジュレータ；ＦＸ－０６などのカドヘリン－５／第Ｉａ因子モジュレータ；並びにＲＥＧＮ－３４７０－３４７１－３４７９及びＺＭａｐｐなどのエボラの治療のための抗体である。

【0151】

エボラに対して活性な他の非限定的な活性治療剤には、α－グルコシダーゼ１阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、ＣＤ２９アンタゴニスト、樹状ＩＣＡＭ－３結合ノンインテグリン１阻害剤、エストロゲン受容体アンタゴニスト、第ＶＩＩ因子アンタゴニストＨＬＡクラスＩＩ抗原モジュレータ、宿主細胞因子モジュレータ、インターフェロンαリガンド、中性αグルコシダーゼＡＢ阻害剤、ニーマン－Ｐｉｃｋ Ｃ１タンパク質阻害剤、核タンパク質阻害剤、ポリメラーゼ共因子ＶＰ３５阻害剤、セリンプロテアーゼ阻害剤、組織因子阻害剤、ＴＬＲ－３アゴニスト、ウイルスエンベロープ糖タンパク質阻害剤、及びエボラウイルス侵入阻害剤（ＮＰＣ１阻害剤）が含まれる。

【0152】

いくつかの実施形態では、他の活性治療剤は、エボラの治療又は予防のためのワクチンであり得、ＶＲＣ－ＥＢＯＡＤＣ０７６－００－ＶＰ、アデノウイルス系エボラワクチン、ｒＶＳＶ－ＥＢＯＶ、ｒＶＳＶＮ４ＣＴ１－ＥＢＯＶＧＰ、ＭＶＡ－ＢＮ Ｆｉｌｏ＋Ａｄ２６－ＺＥＢＯＶレジメン、ＩＮＯ－４２１２、ＶＲＣ－ＥＢＯＤＮＡ０２３－００－ＶＰ、ＶＲＣ－ＥＢＯＡＤＣ０６９－００－ＶＰ、ＧａｎＥｖａｃ－ｃｏｍｂｉワクチン、ＳＲＣ ＶＢベクター、ＨＰＩＶ３／ＥｂｏＧＰワクチン、ＭＶＡ－ＥＢＯＺ、エボラ組換え糖タンパク質ワクチン、Ｖａｘａｒｔアデノウイルスベクター５系エボラワクチン、ＦｉｌｏＶａｘワクチン、ＧＯＶＸ－Ｅ３０１、及びＧＯＶＸ－Ｅ３０２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0153】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、特定のＲＮＡ配列と塩基対二重鎖を形成することによって翻訳プロセスを干渉するように設計された合成アンチセンスオリゴヌクレオチド類似体である、ホスホルアミデートモルホリノオリゴマー（phosphoramidate morpholino oligomer、ＰＭＯ）と組み合わせて使用され得る。ＰＭＯの例としては、ＡＶＩ－７２８７、ＡＶＩ－７２８８、ＡＶＩ－７５３７、ＡＶＩ－７５３９、ＡＶＩ－６００２及びＡＶＩ－６００３が挙げられるが、これらに限定されない。

【0154】

本明細書で提供される化合物及び組成物はまた、非経口流体（デキストロース生理食塩水及び乳酸リンゲル液を含む）並びに栄養、抗生物質（メトロニダゾール及びセファロスポリン抗生物質、例えば、セフトリアキソン及びセフロキシムを含む）並びに／又は抗真菌予防、解熱及び鎮痛薬、制吐薬（メトクロプラミドなど）及び／又は下痢止め薬、ビタミン及びミネラルサプリメント（ビタミンＫ及び硫酸亜鉛を含む）、抗炎症剤（イブプロフェンなど）、鎮痛薬、並びに抗マラリア薬（アルテメテル及びアルテスナート－ルメファントリン併用療法を含む）、腸チフス（シプロフロキサシンなどのキノロン抗生物質、アジスロマイシンなどのマクロリド抗生物質、セフトリアキソンなどのセファロスポリン抗生物質、若しくはアンピシリンなどのアミノペニシリンを含む）、あるいは細菌性赤痢などの患者集団における他の一般的な疾患のための薬物療法を含む、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症を有する患者に提供される一般的なケアとの併用が意図される。
ＶＩＩ．ウイルス感染症を治療する方法

【0155】

本開示は、式Ｉの化合物を使用して、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ＨＲＶ、ｈＭＰＶ、エボラ、ジカ、ウェストナイル、デング、ＨＣＶ、及びＨＢＶなどの様々な疾患を治療するための化合物を提供する。
Ｐｎｕｅｍｏｖｉｒｉｄａｅ

【0156】

いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルスに感染した個体（例えば、ヒト）に投与することを含む、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症を治療するための方法を提供する。Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルスには、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び他のＰｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルスが含まれるが、これらに限定されない。

【0157】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルスには、呼吸器合胞体ウイルス及びヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である。

【0158】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＰｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である。

【0159】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である。

【0160】

いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、呼吸器合胞体ウイルスに感染した個体（例えば、ヒト）に投与することを含む、ＲＳＶ感染症を治療するための方法を提供する。典型的には、個体は、慢性呼吸器合胞体ウイルス感染症に罹患しているが、ＲＳＶに急性感染した人々を治療することは、本開示の範囲内である。

【0161】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を個体（例えば、ヒト）に投与することを含む、ＲＳＶ複製を阻害する方法が提供される。

【0162】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＲＳＶ感染症と関連するウイルス負荷を低減するための方法を提供し、この方法は、ＲＳＶに感染した個体（例えば、ヒト）に治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、治療有効量は、個体におけるＲＳＶウイルス負荷を低減するのに十分である。

【0163】

本明細書でより十分に説明されるように、本開示の化合物は、１つ以上の追加の治療剤を、ＲＳＶに感染した個体（例えば、ヒト）に投与することができる。追加の治療剤は、本開示の化合物と同時に、又は本開示の化合物の投与前若しくは投与後に、感染した個体（例えば、ヒトに）に投与することができる。

【0164】

いくつかの実施形態では、ＲＳＶ感染症の治療又は予防に使用するための本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が提供される。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ感染症を治療又は予防するための医薬品の製造のために、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が提供される。

【0165】

本明細書でより十分に説明されるように、本開示の化合物は、１つ以上の追加の治療剤を、ＲＳＶに感染した個体（例えば、ヒト）に投与することができる。更に、いくつかの実施形態では、ＲＳＶを治療又は予防するために使用される場合、本開示の化合物は、ＲＳＶ併用薬、ＲＳＶワクチン、ＲＳＶ ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、免疫調節剤、ｔｏｌｌ様受容体（toll-like receptor、ＴＬＲ）モジュレータ、インターフェロンα受容体リガンド、ヒアルロニダーゼ阻害剤、呼吸器合胞体表面抗原阻害剤、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ｉｐｉ４）阻害剤、シクロフィリン阻害剤、ＲＳＶウイルス侵入阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド標的化ウイルスｍＲＮＡ、短干渉ＲＮＡ（short interfering RNA、ｓｉＲＮＡ）及びｄｄＲＮＡｉエンドヌクレアーゼモジュレータ、リボヌクレオチド還元酵素阻害剤、ＲＳＶ Ｅ抗原阻害剤、共有結合閉環状ＤＮＡ（covalently closed circular DNA、ｃｃｃＤＮＡ）阻害剤、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト、ＲＳＶ抗体、ＣＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、チモシンアゴニスト、サイトカイン、ヌクレオタンパク質モジュレータ、レチノイン酸誘導性遺伝子１刺激因子、ＮＯＤ２刺激因子、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（phosphatidylinositol 3-kinase、ＰＩ３Ｋ）阻害剤、インドレアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（indoleamine-2,3-dioxygenase、ＩＤＯ）経路阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、組換えチモシンα－１アゴニスト、ブルトン型チロシンキナーゼ（bruton's tyrosine kinase、ＢＴＫ）阻害剤、ＫＤＭ阻害剤、ＲＳＶ複製阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、及び他のＲＳＶ薬物からなる群から選択される、１つ以上（例えば、１、２、３、４つ以上）の追加の治療剤と共に投与され得る。
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ

【0166】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルスは、ヘルパンギーナ、無菌髄膜炎、風邪様症候群（ヒトライノウイルス感染症）、非麻痺性ポリオ様症候群、流行性胸膜痛（一般的には流行中に発生する急性、発熱性、感染性疾患）、手足口病、小児及び成人膵炎、並びに重篤な心筋炎を含む、混成群の感染症を引き起こすエンテロウイルスである。いくつかの実施形態では、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトライノウイルス感染症である。

【0167】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＰｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトライノウイルス感染症である。

【0168】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ヒトライノウイルス感染症である。
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ

【0169】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。代表的なＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルスには、デング、黄熱、ウェストナイル、ジカ、日本脳炎ウイルス、Ｃ型肝炎（Hepatitis C、ＨＣＶ）、及びＢ型肝炎（Hepatitis B、ＨＢＶ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、デングウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、黄熱ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ウェストナイルウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ジカウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、日本脳炎ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である。

【0170】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、デングウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、黄熱ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ウェストナイルウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ジカウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である。

【0171】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、デングウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、黄熱ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ウェストナイルウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、ジカウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である。
Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ

【0172】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。代表的なＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルスには、エボラ及びマールブルグが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、エボラウイルス感染症である。

【0173】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。いくつかの実施形態では、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、エボラウイルス感染症である。

【0174】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症は、エボラウイルス感染症である。
ＶＩＩＩ．ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防の方法

【0175】

式Ｉの化合物はまた、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用することもできる。

【0176】

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含み、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓの投与によって引き起こされる。

【0177】

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法を提供し、この方法は、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含み、呼吸器状態は、喘息である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる。

【0178】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓの投与によって引き起こされる。

【0179】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法を提供し、呼吸器状態は、喘息である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる。

【0180】

いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓの投与によって引き起こされる。

【0181】

いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおけるウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防のための医薬品の製造のための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供し、呼吸器状態は、喘息である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる。

【0182】

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、呼吸器状態は、慢性閉塞性肺疾患である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓの投与によって引き起こされる。

【0183】

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、呼吸器状態は、喘息である。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる。

【実施例】

【0184】

ＩＸ．（実施例）
略語
ある特定の略語及び頭字語は、実験の詳細を説明する際に使用される。これらのほとんどは当業者によって理解されるが、以下の表は、これらの略語及び頭字語の多くのリストを含む。

【表1】

【0185】

化合物及び中間体は、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ １０ｕ Ｃ１８ １１０Å ＡＸＩＡ ２５０×２１．２ｍｍカラム、０．１％ ＴＦＡを含む３０～７０％のアセトニトリル／水勾配）に供することができる。いくつかの化合物は、この分取ＨＰＬＣプロセス後にＴＦＡ塩として得られる。
Ａ．中間体
中間体１．

【化13】

【0186】

反応器１に、３－Ｏ－ベンジル－４－（ヒドロキシメチル）－１，２－Ｏ－イソプロピリデン－α－Ｄ－リボフラノース（１２５ｇ、４０２ｍｍｏｌ、１．０当量）を充填する。ＴＨＦ（６２５ｍＬ、５体積）、続いて臭化ベンジル（１０６ｍＬ、２．２当量）を充填する。ジャケットを０℃に設定する。Ｔ_ｉｎｔを１０℃未満に保持する様式で、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中４０重量％、４５０ｍＬ、２．２当量）を充填する。添加が完了した後、ジャケットを１５℃に設定し、６０分間撹拌する。ＴＬＣ（８０％ヘキサン中の２０％酢酸エチル）によって反応を監視し、モリブデン酸アンモニウムセリウム（ceric ammonium molybdate、ＣＡＭ）で染色する。ジャケットを５℃に設定する。酢酸（７０ｍＬ、２．５当量）を水（１Ｌ、８体積）に溶解する。Ｔ_ｉｎｔを１５℃未満に保持する様式で、水溶液を反応に充填し、相を分離させる。下部水層を反応器２に排出する。反応器１の内容物を約５０％濃縮する。ＭＴＢＥ（１．２５Ｌ、１０体積）を反応器２に充填する。１５分間撹拌し、層を分離させる。下部水層を排出し、廃棄する。反応器２の内容物を反応器１に充填する。１４％ブライン溶液（１Ｌ、８体積）を反応器１に充填する。１５分間撹拌し、下部水層を排出する。有機物を約５０％濃縮する。内容物をメタノール（３×８体積）で共蒸発させる。中間体１を約４体積に濃縮し、次のステップにそのまま使用する。
中間体２．

【化14】

【0187】

粗中間体１（１９７ｇ、４０２ｍｍｏｌ、１当量）を含有する反応器１に、メタノール（１Ｌ、５体積）、ジオキサン（１２０ｍＬ、１．２当量）中の４Ｍ ＨＣｌ、及び濃硫酸（１．１ｍＬ、０．０５当量）を充填する。周囲温度で２時間撹拌する。ＴＬＣ（３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン）によって反応を監視し、ＣＡＭ染色する。５Ｍ ＫＯＨ溶液をｐＨ＞７（１００ｍＬ、１．２５当量）になるまでゆっくりと充填する。反応混合物を約２体積に濃縮する。酢酸エチル（１Ｌ、５体積）を充填する。水（１Ｌ、５体積）を充填する。１５分間撹拌する。下部水層を反応器２に排出する。酢酸エチル（１Ｌ、５体積）を反応器２に充填し、１５分間撹拌する。下部水層を排出し、廃棄する。残りの反応器２の内容物を反応器１に充填する。反応器１の内容物を約３体積に濃縮する。ＭＴＢＥ（４００ｍＬ、２体積）を反応器１に充填する。硫酸ナトリウム（４００ｇ、２Ｓ）を充填し、１５分間撹拌する。固体を濾別し、ケーキをＭＴＢＥ（２００ｍＬ、１体積）で洗浄する。有機物を反応器１に充填する。約３体積に濃縮する。ＴＨＦ（４００ｍＬ、２体積）を充填し、約３体積に濃縮する。ＴＨＦ（４００ｍＬ、２体積）を充填し、約３体積に濃縮して、中間体２を得る。３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン中約０．１及び０．４のＲ_ｆ。
中間体３．

【化15】

【0188】

粗中間体２（１８６ｇ、４０２ｍｍｏｌ）を含有する反応器１に、ＴＨＦ（１Ｌ、５体積）及び臭化ベンジル（６０ｍＬ、１．２５当量）を充填する。ジャケットを５℃に設定する。Ｔ_ｉｎｔを２０℃未満に保持する様式で、ＮａＨＭＤＳ ４０重量％（２４５ｍＬ、１．２５当量）を充填する。ジャケットを１５℃に設定し、６０分間撹拌する。ＴＬＣ（３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン）によって反応の進行を監視し、ＣＡＭ染色する。ジャケットを０℃に設定する。酢酸（４６ｍＬ、２当量）を水（１Ｌ、５体積）に取り込む。Ｔ_ｉｎｔを１５℃未満に保持する様式で、水溶液を反応器１に充填する。ジャケットを１５℃に設定し、１５分間撹拌する。相を分離させ、下部水層を反応器２に排出する。ＭＴＢＥ（１Ｌ、５体積）を反応器２に充填し、１５分間撹拌する。反応器１を約５０％濃縮する。相を反応器２内で分離させ、下部水層を排出し、廃棄する。反応器２の内容物を反応器１に充填する。１４％ブライン溶液（１Ｌ、５体積）を充填する。１５分間撹拌する。下部水層を排出し、廃棄する。粗中間体３（３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン中約０．８のＲ_ｆ）を約１体積に濃縮し、次のステップにそのまま使用する。
中間体４．

【化16】

【0189】

ジャケットが２０℃に設定された状態で、中間体３（２２２ｇ、４０１ｍｍｏｌ）を含有する反応器１に、水（２２２ｍＬ、１Ｖｏｌ）を充填する。Ｔ_ｉｎｔを３０℃未満に保持する様式で、ＴＦＡ（６６７ｍＬ、３体積）を充填する。２０℃で２４時間撹拌する。ＴＬＣ（３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン）によって監視し、ＣＡＭ染色する。反応器１の内容物を約２体積に濃縮する（５５０ｍＬの溶媒を除去）。ＭＴＢＥ（１．５Ｌ、７体積）を充填する。ジャケットを１０℃に設定する。Ｔ_ｉｎｔを２５℃未満に保持する様式で、５Ｍ ＮａＯＨ（６００ｍＬ、７．５体積）をｐＨ＞６まで充填する。ガス放出を最小限に抑える様式で、５重量％のＮａＨＣＯ_３（１．１Ｌ、５体積）を充填する。１５分間撹拌する。下部水層を排出し、廃棄する。１４％ブライン溶液（１．１Ｌ、５体積）を充填する。１５分間撹拌する。下部水層を排出し、廃棄する。ＭＴＢＥ層を約４．５体積に濃縮し、次のステップにそのまま使用する。中間体４ ３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン中約０．５のＲ_ｆ。
中間体５．

【化17】

【0190】

ＭＴＢＥ ４．５体積中の粗中間体４（２１６ｇ、４０１ｍｍｏｌ）を含有する－５℃に設定された反応器１に、ＴＥＭＰＯ（０．６ｇ、０．０１当量）及びＫＢｒ（４．５３ｇ、０．１当量）を充填する。Ｋ_２ＨＰＯ_４ ^＊３Ｈ_２Ｏ（８７ｇ、１当量）を水（１．５体積）に溶解する。反応器に充填する。Ｔ_ｉｎｔを１０℃未満に保持する様式で（約５０分）、８．２５％の漂泊溶液（４２５ｍＬ、１．３５当量）を充填する。ジャケットを５℃に設定し、１時間撹拌する。ＴＬＣ（３０％酢酸エチル、７０％ヘキサン）によって反応を監視し、ＣＡＭ染色する。チオ硫酸ナトリウム（３０ｇ、０．５当量）を水（３１０ｍＬ、１．５体積）に溶解する。Ｔ_ｉｎｔを１５℃未満に保持する様式で、反応器１に充填する。ジャケットを１５℃に設定する。１５分間撹拌する。ＫＩストリップを使用して、漂白剤の消費について試験する。下部水層を排出し、廃棄する。１Ｓ硫酸ナトリウムを充填し、１５分間撹拌する。固体を濾別し、ケーキを１体積のＭＴＢＥで洗浄する。油に濃縮し、ヘキサン中２５Ｓシリカ０～５０％酢酸エチルを使用したシリカゲルクロマトグラフィにより４５分間にわたって精製して、３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５，５－ビス（（ベンジルオキシ）メチル）ジヒドロフラン－２（３Ｈ）－オン（中間体５）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ７．４０－７．２４（ｍ，１８Ｈ），７．２４－７．１９（ｍ，２Ｈ），４．８７－４．７４（ｍ，２Ｈ），４．７４－４．６８（ｍ，２Ｈ），４．６１－４．３９（ｍ，６Ｈ），３．８３－３．６６（ｍ，４Ｈ）。
中間体６．

【化18】

【0191】

反応器１に、中間体７（５０．８３ｇ、１９５．５ｍｍｏｌ、１．１１当量）、続いてＴＨＦ（５体積）。反応器１のジャケットを０℃に設定する。反応器２に、中間体５（９４．８４ｇ、１７６．１ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＴＨＦ（５体積）、及びＴＨＦ（２９０ｍＬ、１７０ｍｍｏｌ、１当量）中の０．６Ｍ ＬａＣｌ_３ ^＊２ＬｉＣｌを充填する。反応器２を周囲温度で３０分間撹拌する。反応器１に、Ｔ_ｉｎｔを５℃未満に保持する様式で、ＴＭＳ－Ｃｌ（２５．１ｍＬ、１９７．２ｍｍｏｌ、１．１２当量）を充填する。１５分間撹拌する。反応器１のジャケットを－１０℃に設定し、Ｔ_ｉｎｔを０℃未満に保持する様式で、ＴＨＦ（１８５ｍＬ、３７０ｍｍｏｌ、２．１当量）中の２．０Ｍ ＰｈＭｇＣｌを充填する。１５分間撹拌する。反応器１及び２のジャケットを－２０℃に設定する。反応器１に、Ｔ_ｉｎｔを－１５℃未満に保持する様式で、ＴＨＦ（１００ｍＬ、１９９ｍｍｏｌ、１．１３当量）中の２．０Ｍ ｉＰｒＭｇＣｌを充填する。－１５℃で１５分間撹拌する。Ｔ_ｉｎｔを－１５℃未満に保持する様式で、反応器１の内容物を反応器２に移す。－１５℃で６０分間撹拌する。Ｔ_ｉｎｔを２０℃未満に保持する様式で、水（５体積）中の酢酸（６６ｍＬ、１１４５ｍｍｏｌ、６．５当量）を反応器２に充填する。反応器２のジャケットを２０℃に設定する。１５分間撹拌する。層を分離する。反応器２に、酢酸イソプロピル（４体積）及び水（３体積）を充填する。５分間撹拌する。層を分離し、有機物を０．５Ｍ ＨＣｌ（２体積）で洗浄する。層を分離し、有機物を２×５体積の１０重量％ ＫＨＣＯ_３（水性）で洗浄する。有機物を１４％ブライン溶液（５体積）で洗浄する。層を分離し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させる。固体を濾別し、液を濃縮して次のステップにはめ込まれる中間体６を得る。
ＵＰＬＣ／ＭＳ ｔ_Ｒ＝３．７５９及び３．８２５分、ＭＳ ｍ／ｚ＝６７３．３３［Ｍ＋１］；
ＵＰＬＣ／ＭＳシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ １．７μＭ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ
溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水
勾配：２％ ＡＣＮ ０～０．５分。２％ ＡＣＮ－９８％ ＡＣＮ ０．５分～３．０分。９８％ ＡＣＮ ３分～４分。９８％ ＡＣＮ～２％ ＡＣＮ ４分～４．５分。２％ ＡＣＮ ４．５分～５分。
流量：０．５ｍＬ／分
質量範囲：１００～１２００
中間体６の代替合成。

【化19】

【0192】

反応器１に、中間体７（５．９０ｇ、２２．７ｍｍｏｌ、１．１１当量）、続いてＴＨＦ（５体積）。反応器１のジャケットを０℃に設定する。反応器２に、無水ＮｄＣｌ_３（５．１ｇ、２０．４ｍｍｏｌ、１当量）、ＴＢＡＣｌ（６．１ｇ、２２．１ｍｍｏｌ、１．０８当量）、及びＴＨＦ（１０体積）を充填する。反応器２のジャケットを９０℃に設定する。蒸留してＴＨＦの約５０％を取り除き、内容物を共沸乾燥させる。中間体５（１１ｇ、２０．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を反応器２に充填し、周囲温度で３０分間撹拌する。反応器１に、Ｔ_ｉｎｔを５℃未満に保持する様式で、ＴＭＳ－Ｃｌ（２．９ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ、１．１２当量）を充填する。１５分間撹拌する。反応器１のジャケットを－１０℃に設定し、Ｔ_ｉｎｔを０℃未満に保持する様式で、ＴＨＦ（２２．２ｍＬ、４４．３ｍｍｏｌ、２．１当量）中の２．０Ｍ ＰｈＭｇＣｌを充填する。１５分間撹拌する。反応器１及び２のジャケットを－２０℃に設定する。反応器１に、Ｔ_ｉｎｔを－１５℃未満に保持する様式で、ＴＨＦ（１１．５ｍＬ、１９９ｍｍｏｌ、１．１３当量）中の２．０Ｍ ｉＰｒＭｇＣｌを充填する。－１５℃で１５分間撹拌する。Ｔ_ｉｎｔを－１５℃未満に保持する様式で、反応器１の内容物を反応器２に移す。－１５℃で６０分間撹拌する。Ｔ_ｉｎｔを２０℃未満に保持する様式で、水（５体積）中の酢酸（６６ｍＬ、１１４５ｍｍｏｌ、６．５当量）を反応器２に充填する。反応器２のジャケットを２０℃に設定する。１５分間撹拌する。層を分離する。反応器２に、酢酸イソプロピル（４体積）及び水（３体積）を充填する。５分間撹拌する。層を分離し、有機物を０．５Ｍ ＨＣｌ（２体積）で洗浄する。層を分離し、有機物を２×５体積の１０重量％ ＫＨＣＯ_３（水性）で洗浄する。有機物を１４％ブライン溶液（５体積）で洗浄する。層を分離し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させる。固体を濾別し、液を濃縮して、次のステップにはめ込まれる中間体６を得る。
ＵＰＬＣ／ＭＳ ｔ_Ｒ＝３．７５９及び３．８２５分、ＭＳ ｍ／ｚ＝６７３．３３［Ｍ＋１］
ＵＰＬＣ／ＭＳシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ １．７μＭ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ
溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水
勾配：２％ ＡＣＮ ０～０．５分。２％ ＡＣＮ－９８％ ＡＣＮ ０．５分～３．０分。９８％ ＡＣＮ ３分～４分。９８％ ＡＣＮ～２％ ＡＣＮ ４分～４．５分。２％ ＡＣＮ ４．５分～５分。
流量：０．５ｍＬ／分
質量範囲：１００～１２００
中間体８．

【化20】

【0193】

反応器に、ＤＣＭ（１０体積）中の中間体６（約１１８ｇ、１７６ｍｍｏｌ）を充填する。ジャケットを－２０℃に設定する。トリエチルシラン（７３ｍＬ、４５６ｍｍｏｌ、２．６当量）を充填する。Ｔ_ｉｎｔを－１５℃未満に保持する様式で、ジエチルエーテル（７２ｍＬ、２６３．１ｍｍｏｌ、１．５当量）中４６．５質量％の三フッ化ホウ素を充填する。３０分間撹拌する。ジャケットを０℃に設定する。Ｔ_ｉｎｔを２０℃未満に保持する様式で、５Ｍ ＮａＯＨ（１７５ｍＬ、８７７ｍｍｏｌ、５体積）を充填する。ジャケットを２０℃に設定する。水（１０体積）を充填する。層を分離する。有機物層を濃縮する。水層を酢酸エチル（２×５体積）で逆抽出する。有機物を合わせ、１４％ブライン（８体積）で洗浄する。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。中間体８を、シリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン中５０～１００％酢酸エチル）によって単離する。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｂｒｓ，２Ｈ），７．３７－７．１４（ｍ，２０Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６１－４．４３（ｍ，８Ｈ），４．３４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．６４（ｍ，３Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。
ＵＰＬＣ／ＭＳ ｔ_Ｒ＝３．９１９分、ＭＳ ｍ／ｚ＝６５７．３２［Ｍ＋１］
ＵＰＬＣ／ＭＳシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ １．７μＭ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ
溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水
勾配：２％ ＡＣＮ ０～０．５分。２％ ＡＣＮ－９８％ ＡＣＮ ０．５分～３．０分。９８％ ＡＣＮ ３分～４分。９８％ ＡＣＮ～２％ ＡＣＮ ４分～４．５分。２％ ＡＣＮ ４．５分～５分。
流量：０．５ｍＬ／分
質量範囲：１００～１２００
中間体９．

【化21】

【0194】

窒素パージされた丸底フラスコに、中間体８（２１．７ｇ、３３ｍｍｏｌ、１当量）を充填する。ＴＨＦ（３体積）、２，２－ジメトキシプロパン（３体積）、及びｐＴｓＯＨ（６．６ｇ、３４．６ｍｍｏｌ、１．０５当量）を充填する。ドライアイス浴中で冷却する。１０％ Ｐｄ／Ｃを充填する。排気し、水素で３回バックフィルする。周囲温度及び圧力で撹拌する。飽和ＮａＨＣＯ_３（水性）でｐＨ＞７にクエンチする。触媒を濾別し、ケーキをメタノール（２．５体積）で洗浄する。酢酸エチル（１０体積）とブライン（１０体積）とに分配する。層を分離し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させる。固体を濾別し、濃縮して中間体９を得、これを次のステップにはめ込む。
ＵＰＬＣ／Ｍｓ ｔ_Ｒ＝２．５８０分、ＭＳ ｍ／ｚ＝４７７．１４［Ｍ＋１］
ＵＰＬＣ／ＭＳシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ １．７μＭ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ
溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水
勾配：２％ ＡＣＮ ０～０．５分。２％ ＡＣＮ－９８％ ＡＣＮ ０．５分～３．０分。９８％ ＡＣＮ ３分～４分。９８％ ＡＣＮ～２％ ＡＣＮ ４分～４．５分。２％ ＡＣＮ ４．５分～５分。
流量：０．５ｍＬ／分
質量範囲：１００～１２００
中間体１０．

【化22】

【0195】

丸底フラスコに、中間体９（１２．３ｇ、３２．７ｍｍｏｌ、１当量）、ＴＨＦ（１０体積）、及びジ－ｔｅｒｔ－ブチル－ジカルボネート（１４．４ｇ、６５．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を充填する。ＤＭＡＰ（１０．１ｇ、８１．７ｍｍｏｌ、２．５当量）を少量ずつ充填して、ガス放出及び発熱を最小限に抑える。６０分間撹拌して、モノ及びビス－Ｂｏｃの混合物を生成する。反応物を約５０％濃縮する。ＭＴＢＥ（１０体積）及び２．０Ｍ ＨＣｌ（３．５体積）を充填する。層を分離する。水溶液を酢酸エチル（１０体積）で逆抽出する。有機物を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ_３（水性）で洗浄する。有機物を濃縮する。メタノール（１０体積）を粗混合物に充填し、続いてＫＯＨ（３．６７ｇ、２．０当量）を充填する。ビス－Ｂｏｃがモノ－Ｂｏｃに変換されるまで撹拌する。反応物を濃縮する。酢酸エチル（１０体積）と水（１０体積）とに分配する。層を分離し、濃縮する。メタノール（８体積）を粗製物に充填し、続いてｐＴｓＯＨ（６．５ｇ、３４．２ｍｍｏｌ、１．０５当量）を充填する。周囲温度で撹拌する。５．２５％ ＮａＨＣＯ_３（水性）（８０ｍＬ、５２ｍｍｏｌ、１．５当量）でクエンチする。約２５％濃縮し、一晩撹拌する。固体を濾別し、ケーキをＭＴＢＥ（８体積）で洗浄する。真空オーブン内で乾燥させて、中間体１０を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １０．４５（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７９－４．７４（ｍ，２Ｈ），４．４５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３－３．４６（ｍ，３Ｈ），３．４０－３．３０（ｍ，１Ｈ），１．５０（ｓ，１２Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ）。
ＵＰＬＣ／ＭＳ ｔ_Ｒ＝２．７６７分、ＭＳ ｍ／ｚ＝４３７．１７［Ｍ＋１］
ＵＰＬＣ／ＭＳシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ １．７μＭ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ
溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水
勾配：２％ ＡＣＮ ０～０．５分。２％ ＡＣＮ－９８％ ＡＣＮ ０．５分～３．０分。９８％ ＡＣＮ ３分～４分。９８％ ＡＣＮ～２％ ＡＣＮ ４分～４．５分。２％ ＡＣＮ ４．５分～５分。
流量：０．５ｍＬ／分
質量範囲：１００～１２００
中間体１１．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－（（ベンジルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン－２－オール

【化23】

【0196】

生成物を、国際公開第２０１５／０６９９３９号に従って調製した。例えば、国際公開第２０１５／０６９９３９号の４３～４５ページは、（国際公開第２０１５／０６９９３９号において化合物１ｄとして同定された）この化合物を調製するためのプロセスを提供する。代替的に、それを以下のように調製した。

【化24】

【0197】

リトリートカーブオーバーヘッド撹拌機、熱電対、及びＮ_２バブラーを備えた円筒型反応器に、無水ＮｄＣｌ_３（６０．００ｇ、２３９ｍｏｌ、１．００当量）、ｎ－Ｂｕ_４ＮＣｌ（７１．５１ｇ、２３９ｍｍｏｌ、１．０当量）、及びＴＨＦ（９００ｇ）を充填した。得られた混合物を、９０℃のジャケット温度を使用して、Ｎ_２パッド下、周囲温度で約４５０ｍＬに濃縮した。ＴＨＦ（５００ｇ）を充填し、蒸留を繰り返した（２回）。混合物を２２℃に冷却し、中間体１２（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－（（ベンジルオキシ）メチル）ジヒドロフラン－２（３Ｈ）－オン）（１００．０２ｇ、２３９ｍｍｏｌ、１．００当量）を充填した。３０分後、混合物を－２０℃まで冷却し、保持した。別個の反応フラスコにおいて、ヨードピロロトリアジン中間体７（６８．５２ｇ、２６４ｍｍｏｌ、１．１０当量）及びＴＨＦ（６０１ｇ）を合わせ、０℃まで冷却した。ＴＭＳＣｌ（２８．６４ｇ、２６４ｍｍｏｌ、１．１０当量）をゆっくりと添加し、約３０分後、混合物を１０℃まで冷却した。ＰｈＭｇＣｌ（ＴＨＦ中２．０Ｍ、２７０．００ｇ、５．１８ｍｍｏｌ、２．１７当量）をゆっくりと添加し、混合物を約３０分間撹拌し、－２０℃まで冷却した。ｉ－ＰｒＭｇＣｌ（ＴＨＦ中２．０Ｍ、１３１．１３ｇ、２６９ｍｍｏｌ、１．１３当量）をゆっくりと添加した。約２時間後、グリニャール反応混合物を、カニューレを介して、ラクトン／ＮｄＣｌ_３／ｎＢｕ_４ＮＣｌ／ＴＨＦ混合物に移し、混合物を約２０℃で撹拌した。約１６時間後、水（４４０ｇ）中の酢酸（１００ｇ）の溶液を添加し、混合物を２２℃まで温めた。^ｉＰｒＯＡｃ（３３１ｇ）を添加し、層を分離した。有機層を１０％ ＫＨＣＯ_３（水性）（２×５００ｇ）及び１０％ ＮａＣｌ（水性）（５００ｇ）で洗浄した。有機層を約４５０ｍＬに濃縮し、^ｉＰｒＯＡｃ（８７０ｇ）を充填した。有機混合物を水（２×５００ｇ）で洗浄し、約４５０ｍＬに濃縮した。^ｉＰｒＯＡｃ（４３５ｇ）を充填し、混合物を約４５０ｍＬに濃縮した。混合物を濾過し、残渣を１２９ｇの^ｉＰｒＯＡｃで前方にすすいだ。濾液を約２５０ｍＬに濃縮し、ＭＴＢＥ（５４９ｇ）を充填し、混合物を２２℃に調整した。種結晶（０．１５ｇ）を充填し、続いてｎ－ヘプタン（２３０ｍＬ）を充填し、混合物を０℃まで冷却した。固体を濾過によって単離し、ＭＴＢＥ／ｎ－ヘプタン混合物（１１３ｇ／３０ｇ）で前方にすすいだ。得られた固体を真空下、３５℃で乾燥させて、中間体１１（収率７９％及びＬＣ純度９９．９２％）を得た。
中間体１３．（３ａＳ，４Ｒ，６Ｓ，６ａＳ）－６－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－４－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロフロ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－カルボニトリル

【化25】

【0198】

生成物を、国際公開第２０１５／０６９９３９号に従って調製した。例えば、国際公開第２０１５／０６９９３９号の１２７～１３８ページは、（国際公開第２０１５／０６９９３９号において化合物１４ｋとして同定された）この化合物を調製するためのプロセスを提供する。

【0199】

代替的に、中間体１０を上記のように調製し、次いで、国際公開第２０１５／０６９９３９号に記載されているように中間体１３に変換した（国際公開第２０１５／０６９９３９号の１３３～１３８ページに記載される、国際公開第２０１５／０６９９３９号における化合物１４ｆの国際公開第２０１５／０６９９３９号における化合物１４ｋへの変換）。

【0200】

代替的に、中間体１１を上記のように調製し、次いで、国際公開第２０１５／０６９９３９号に記載されているように中間体１３に変換した（国際公開第２０１５／０６９９３９号の４５～４６ページ及び１２７～１３８ページに記載される、国際公開第２０１５／０６９９３９号における化合物１ｄの国際公開第２０１５／０６９９３９号における化合物１４ｋへの変換）。
中間体１４．（３ａＳ，４Ｒ，６Ｓ，６ａＳ）－６－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－４－（ヒドロキシメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロフロ［３，４－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－カルボニトリル

【化26】

【0201】

中間体１３（８．４１ｇ、１８．８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に取り込んだ。ＴＨＦ（２８．３１ｍＬ、２８．３１ｍｍｏｌ）中のＴＢＡＦ １．０Ｍを周囲温度で一度に添加した。周囲温度で１０分間撹拌した。反応は、ＬＣＭＳによって完了したと決定された。反応混合物を水でクエンチし、有機物を減圧下で除去した。粗製物をＥｔＯＡｃとブラインとに分配した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで洗浄した。有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾別し、溶媒を減圧下で除去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィ１２０ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２中０～１０％のＣＨ_３ＯＨによって精製して、生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．７６分、ＭＳ ｍ／ｚ＝３３２．１４［Ｍ＋１］；ＬＣシステム：Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｅｌａ １２５０ ＵＨＰＬＣ。ＭＳシステム：Ｔｈｅｒｍｏ ＬＣＱ Ｆｌｅｅｔ；カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６μ ＸＢ－Ｃ１８ １００Ａ、５０×３．００ｍｍ。溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水。勾配：１．８ｍＬ／分で０分～２．４分 ２～１００％ ＡＣＮ、２．４分～２．８０分 １００％ ＡＣＮ、２．８分～２．８５分 １００％～２％ ＡＣＮ、２．８５分～３．０分 ２％ ＡＣＮ。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ７．８７－７．８０（ｍ，３Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝６．１，１．７Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）。
中間体１５．（Ｓ）－シクロヘキシル２－アミノプロパノエート塩酸塩

【化27】

【0202】

Ｌ－アラニン（５ｇ、５６．１２ｍｍｏｌ）及びシクロヘキサノール（５６ｇ、５６１ｍｍｏｌ）の混合物にＴＭＳＣｌ（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を約７０℃で約１５時間撹拌し、約８０℃で真空中で濃縮し、トルエンで共蒸発させ、ヘキサンに溶解し、約室温で撹拌し、その間に固体を沈殿させた。固体を濾過によって収集し、濾過ケーキをヘキサン中５％のＥｔＯＡｃで数回洗浄し、高真空下で約１５時間乾燥させて生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．７６（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｔｔ，Ｊ＝８．７，３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｐ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），１．８４（ｄｄ，Ｊ＝９．９，５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，５Ｈ），１．５７－１．４２（ｍ，３Ｈ），１．３２（ｍ，３Ｈ）。
中間体１６．（２Ｓ）－シクロヘキシル２－（（（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート

【化28】

【0203】

中間体１５（３．４ｇ、１６．３７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（４５ｍＬ）に溶解し、－７８℃まで冷却し、ジクロロリン酸フェニル（２．４５ｍＬ、１６．３７ｍｍｏｌ）を素早く添加した。トリエチルアミン（４．５４ｍＬ、３２．７４ｍｍｏｌ）を－７８℃で６０分かけて添加し、次いで、４－ニトロフェノール（２２７７ｍｇ、１６．３７ｍｍｏｌ）を一度に添加した。トリエチルアミン（２．２７ｍＬ、１６．３７ｍｍｏｌ）を－７８℃で６０分かけて添加した。得られた混合物を、－７８℃で２時間撹拌し、塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈し、水で２回及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン中０～２０％のＥｔＯＡｃ）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．２２（ｍ，２Ｈ），７．４６－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．２９－７．０９（ｍ，３Ｈ），４．７６（ｍ，１Ｈ），４．２０－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｍ，１Ｈ），１．８７－１．６４（ｍ，４Ｈ），１．５４（ｍ，２Ｈ），１．４６－１．１８（ｍ，７Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ－２．９４，－３．００。ＭＳ ｍ／ｚ＝４４９（Ｍ＋Ｈ）^＋。
Ｂ．化合物
実施例１．（２Ｓ）－シクロヘキシル２－（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（式Ｉａ）の調製

【化29】

【0204】

ＤＭＦ（４ｍＬ）中の中間体１４（９９ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、中間体１６（２０１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、及びＭｇＣｌ_２（４３ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。得られた混合物を室温で１５時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｉｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４ｕ Ｈｙｄｒｏ－ＲＲ ８０Å １５０×３０ｍｍカラム、１０～１００％アセトニトリル／水勾配）によって精製して中間体を得、これをＡＣＮ（３ｍＬ）に溶解し、ｃ－ＨＣｌ（０．１ｍＬ）を添加した。得られた混合物を５０℃で２時間撹拌し、冷却し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｉｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４ｕ Ｈｙｄｒｏ－ＲＲ ８０Å １５０×３０ｍｍカラム、１０～８０％アセトニトリル／水勾配）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ７．８０（ｓ，０．５Ｈ），７．７８（ｓ，０．５Ｈ），７．４２－７．０５（ｍ，５Ｈ），６．８４（ｍ，１Ｈ），６．７３（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｍ，２Ｈ），４．５７－４．２５（ｍ，３Ｈ），３．８６（ｍ，１Ｈ），１．９１－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．６１－１．０９（ｍ，９Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ３．３。ＭＳ ｍ／ｚ＝６０１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0205】

ジアステレオマーの分離。生成物をキラル分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＡ、１５０×４．６ｍｍ、ヘプタン７０％エタノール３０％）によって精製した。
実施例２．シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（式Ｉｂ）の調製

【化30】

【0206】

実施例１の第１の溶出ジアステレオマー：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ７．７８（ｓ，１Ｈ），７．３４－７．２３（ｍ，２Ｈ），７．１９－７．１０（ｍ，３Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｔｄ，Ｊ＝８．８，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５３－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄｑ，Ｊ＝９．４，７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．６２（ｍ，４Ｈ），１．５８－１．２０（ｍ，９Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ３．３１。
実施例３．シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（式Ｉ）の調製

【化31】

【0207】

実施例１の第２の溶出ジアステレオマー：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ７．８０（ｓ，１Ｈ），７．３７－７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２６－７．１３（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７１－４．５６（ｍ，２Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４５－４．３０（ｍ，２Ｈ），３．９７－３．７７（ｍ，１Ｈ），１．８０－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．５５－１．２１（ｍ，９Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ３．３１。
実施例４．イソプロピル（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３）の合成。

【化32】

【0208】

（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－３，４－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－２－カルボニトリルを、国際公開第２０１５／０６９９３９号に従って調製した。例えば、国際公開第２０１５／０６９９３９号の４３～５４ページは、国際公開第２０１５／０６９９３９号において化合物１として同定された化合物を調製するためのプロセスを提供する。

【0209】

（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－３，４－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－２－カルボニトリル（０．１４９ｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦに取り込み、濃縮した。得られた残渣を高真空下で１．５時間置いた。次いで、残渣をＮＭＰ（４ｍＬ）に溶解し、次いでＴＨＦ（１ｍＬ）を添加した。この溶液を氷浴中で冷却し、ＴＨＦ（０．７６７ｍＬ、０．７６７ｍｍｏｌ）中のｔｅｒｔ－ＢｕＭｇＣｌの１Ｍ溶液を添加し、白色の沈殿物を形成させた。５分後、冷浴を除去し、混合物を音波処理して沈殿物固体を分散させ、反応物を室温で１０分間撹拌した。ＴＨＦ（０．９ｍＬ）中の中間体イソプロピル（（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（０．２５１ｇ、０．６１４ｍｍｏｌ；国際公開第２０１１／１２３６６８号）を添加した。反応物を室温で撹拌し、進行をＬＣ／ＭＳによって監視した。１時間４５分後、反応物を氷浴中で冷却し、氷ＡｃＯＨ（０．２５ｍＬ）の添加によってクエンチした。氷浴を除去して、撹拌を室温で５分間続けた。揮発性物質を蒸発によって除去し、生成物をＨＰＬＣによって残渣から単離した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４，アスタリスク（^＊）が付いた化学シフトは、第２の異性体上に存在する関連プロトンのシフトを示す）δ ７．８１（ｓ，０．４１Ｈ），７．７９^＊（ｓ，０．５９Ｈ），７．３６－７．１２（ｍ，５Ｈ），６．８５（ｍ，１Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ），４．９７－４．８５（ｍ，１Ｈ），４．６３（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．３２（ｍ，３Ｈ），３．８５（ｍ，１Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２０^＊（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ），１．１６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ３．３０（ｓ）。ＭＳ ｍ／ｚ＝５６１．０３［Ｍ＋１］。
実施例５．（Ｓ）－イソプロピル２－（（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（化合物４）の合成。

【0210】

（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－３，４－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－２－カルボニトリルを、実施例４に記載されているように調製した。

【0211】

イソプロピル（（Ｓ）－（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネートを、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，１８１２－１８２５に記載されているように調製した。

【0212】

（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－３，４－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－２－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）及びイソプロピル（（Ｓ）－（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（８４ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中で混合した。塩化マグネシウム（３６ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を５０℃で加熱した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７５μＬ，０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を５０℃で４．５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸水溶液（１０ｍＬ）、次いでブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物をＳｉＯ_２カラムクロマトグラフィ（４ｇ ＳｉＯ_２ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標） ＨＰ Ｇｏｌｄ Ｃｏｌｕｍｎ、０～２～５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ７．７９（ｓ，１Ｈ），７．３６－７．２５（ｍ，２Ｈ），７．２５－７．１２（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９１－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４５－４．３０（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｄｑ，Ｊ＝１０．０，７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ３．３１。ＭＳ ｍ／ｚ＝５６１．０［Ｍ＋１］，５５９．０［Ｍ－１］。
実施例６．（２Ｓ）－ペンタン－３－イル２－（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（化合物５）の合成。

【化33】

【0213】

（Ｓ）－ペンタン－３－イル２－アミノプロパノエート塩酸塩。Ｌ－アラニネート（５ｇ、５６．１２ｍｍｏｌ）及び３－ヒドロキシペンタン（５０ｍＬ）の混合物に、ＴＭＳＣｌ（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を７０℃で１５時間撹拌し、８０℃で回転蒸発器で濃縮した。得られた固体をヘキサン中５％のＥｔＯＡｃで粉砕し、濾過し、ヘキサン中５％のＥｔＯＡｃで数回洗浄し、高真空下で一晩乾燥させて中間体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．７９（ｓ，３Ｈ），４．８３（ｐ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｐ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），１．７２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．６７－１．５２（ｍ，４Ｈ），０．８８（ｔｄ，Ｊ＝７．５，１．７Ｈｚ，６Ｈ）。

【化34】

【0214】

（２Ｓ）－ペンタン－３－イル２－（（（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート。（Ｓ）－ペンタン－３－イル２－アミノプロパノエート塩酸塩（１．００ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）を、塩化メチレン（１５ｍＬ）に懸濁し、－７８℃に冷却し、ジクロロリン酸フェニル（０．７６ｍＬ、５．１１ｍｍｏｌ）を素早く添加した。トリエチルアミン（１．４２ｍＬ、１０．２２ｍｍｏｌ）を－７８℃で３０分かけて添加し、得られた混合物を－７８℃で３０分間撹拌した。次いで、４－ニトロフェノール（７１１ｍｇ、５．１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、トリエチルアミン（０．７１ｍＬ、５．１１ｍｍｏｌ）を－７８℃で３０分かけて添加した。混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン中０～２０％のＥｔＯＡｃ）によって精製して、（２Ｓ）－ペンタン－３－イル２－（（（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ８．２２（ｍ，２Ｈ），７．４６－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．３１－７．１４（ｍ，３Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ），４．２７－４．０４（ｍ，１Ｈ），３．９８－３．７７（ｍ，１Ｈ），１．７２－１．４５（ｍ，４Ｈ），１．４２（ｍ，３Ｈ），０．８４（ｍ，６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ－２．９９，－３．０６。ＭＳ ｍ／ｚ＝４３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【化35】

【0215】

（２Ｓ）－ペンタン－３－イル２－（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート。ＤＭＦ（３ｍＬ）中の中間体１４（６６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）－ペンタン－３－イル２－（（（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（１７０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、及びＭｇＣｌ_２（２８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０８７ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。得られた混合物を６０℃で１５時間撹拌し、ＨＰＬＣ（水中０～１００％のＡＣＮ）によって精製して中間体を得、これをＡＣＮ（３ｍＬ）に溶解し、Ｃ－ＨＣｌ（０．１ｍＬ）を添加した。得られた混合物を５０℃で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｉｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４ｕ Ｈｙｄｒｏ－ＲＲ ８０Å １５０×３０ｍｍカラム、５～１００％アセトニトリル／水勾配）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ７．７９（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．０７（ｍ，５Ｈ），６．８４（ｍ，１Ｈ），６．７３（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ），４．７６－４．５９（ｍ，２Ｈ），４．５４－４．４０（ｍ，２Ｈ），４．３４（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．４２（ｍ，４Ｈ），１．２７（ｍ，３Ｈ），０．９１－０．７５（ｍ，６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ３．３７，３．２９。ＭＳ ｍ／ｚ＝５８９（Ｍ＋Ｈ）^＋。
実施例７．２－エチルブチル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アラニネート（化合物６）の合成。

【化36】

【0216】

２－エチルブチル（（Ｓ）－（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）（ホスホリル）－Ｌ－アラニネートを、国際公開第２０１６／０６９８２５号に記載されているように調製した。

【0217】

中間体１４（７００ｍｇ、２．１１３ｍｍｏｌ）、２－エチルブチル（（Ｓ）－（４－ニトロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（９９８ｍｇ、２．２１８ｍｍｏｌ）、及び塩化マグネシウム（３０２ｍｇ、３．１６９ｍｍｏｌ）の混合物に、テトラヒドロフラン（８．５ｍＬ）を室温で添加し、続いてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９２ｍＬ、５．２８２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５０℃で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を飽和塩化ナトリウム溶液及びジクロロメタンで希釈した。層を分割し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をＳｉＯ_２カラムクロマトグラフィ（８０ｇ ＳｉＯ_２ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標） ＨＰ Ｇｏｌｄ Ｃｏｌｕｍｎ、１００％ジクロロメタン－溶出液としてジクロロメタン中１４％メタノール）によって精製した。得られた純粋な物質を無水アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却し、続いて濃塩酸（４ｍＬ、４８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。１時間後、反応混合物を氷浴中で冷却し、水で希釈した。溶液を３Ｎ水酸化ナトリウムで中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残渣を、ＳｉＯ_２カラムクロマトグラフィ（４０ｇ ＳｉＯ_２ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）ＨＰ Ｇｏｌｄ Ｃｏｌｕｍｎ、１００％ジクロロメタン－ジクロロメタン中２０％メタノール）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ７．８０（ｓ，１Ｈ），７．３８－７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２７－７．１３（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．２９（ｍ，３Ｈ），４．０４－３．８２（ｍ，３Ｈ），１．４３（ｄｑ，Ｊ＝１２．５，６．１Ｈｚ，１Ｈ），１．３７－１．２３（ｍ，７Ｈ），０．８４（ｔｄ，Ｊ＝７．５，１．１Ｈｚ，６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ２．７３。ＭＳ ｍ／ｚ＝６０３［Ｍ＋１］。
実施例８．２－エチルブチル（（Ｒ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物７）の合成。

【化37】

【0218】

この化合物を、国際公開第２０１５／０６９９３９号からの実施例３４のＳｐ及びＲｐジアステレオマーの分解によって調製した。国際公開第２０１５／０６９９３９号からの実施例３４を、キラル分取ＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－Ｈ、３０％イソクラティックエタノール）によって、国際公開第２０１５／０６９９３９号からの実施例３４の第１の溶出ジアステレオマーとしての化合物７に精製した：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ７．７８（ｓ，１Ｈ），７．３２－７．２４（ｍ，２Ｈ），７．１９－７．１０（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５４－４．４３（ｍ，２Ｈ），４．３６（ｍ，１Ｈ），４．０７－３．８４（ｍ，３Ｈ），１．５３－１．４２（ｍ，１Ｈ），１．３８－１．２４（ｍ，７Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ ３．２６（ｓ）。ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝５．０６８分；ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＩＩ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、２．６ｕ １１０Ａ、１００×４．６ｍｍ；溶媒：Ａ：０．１％ ＴＦＡを含む水、Ｂ：０．１％ ＴＦＡを含むアセトニトリル；勾配：１．５ｍＬ／分で８．５分勾配を有する２～９８％Ｂ。
実施例９．エチル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－５－（４－アミノピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）－２－シアノ－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物８）の合成。
エチル（（Ｓ）－（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート

【化38】

【0219】

ＤＣＭ（１５ｍＬ）中のＬ－アラニンエチルエステル－ＨＣｌ（６３１ｍｇ、２．４６５ｍｍｏｌ）の溶液に、フェニルホスホロジクロリダート（０．３６８ｍＬ、２．４６５ｍｍｏｌ）を－７８℃で一度に添加し、トリエチルアミン（０．６８ｍＬ、４．９３ｍｍｏｌ）を－７８℃で５分かけて滴加した。得られた混合物を、ドライアイス浴の除去後に３０分間撹拌し、次いで－７８℃まで冷却した。ペンタフルオロフェノール（４５４ｍｇ、２．４６５ｍｍｏｌ）を一度に添加し、トリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４６５ｍｍｏｌ）を－７８℃で５分かけて添加した。得られた混合物を、ドライアイス浴の除去後に１時間撹拌し、次いでＤＣＭで希釈し、ブラインで洗浄し、真空中で濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン中０～６０％のＥｔＯＡｃ）によって精製してジアスティオマー混合物を得、これにジイソプロピルエーテル（４ｍＬ）を添加した。懸濁液を音波処理し、濾過した。濾過ケーキの^１Ｈ ＮＭＲは、それが３：１比の混合物であることを示した。ジイソプロピルエーテル（５ｍＬ）を濾過ケーキに添加し、懸濁液を７０℃で透明な溶液になるまで加熱した。加熱浴を除去すると、針状結晶が形成し始め、１０分後に混合物を濾過し、濾過ケーキを高真空下で３０分間乾燥させて、Ｓｐ異性体を得た。

【0220】

ジアステレオマー混合物：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．４３－７．３０（ｍ，２Ｈ），７．３２－７．１７（ｍ，３Ｈ），４．２９－４．１１（ｍ，３Ｈ），３．９４（ｍ，１Ｈ），１．５２－１．４２（ｍ，３Ｈ），１．２８ （ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。

【0221】

Ｓｐ異性体：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．５０－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３２－７．２１（ｍ，３Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１７－３．９８（ｍ，３Ｈ），１．３７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ－０．５１。^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ－１５５．４８－－１５５．７６（ｍ），－１６２．７３（ｔｄ，Ｊ＝２１．３，３．７Ｈｚ），－１６５．０２－－１６５．８４（ｍ）。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝４４０．５（Ｍ－エチル＋Ｈ），ｔ_Ｒ＝１．５７分；ＬＣシステム：Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｅｌａ １２５０ ＵＨＰＬＣ；ＭＳシステム：Ｔｈｅｒｍｏ ＬＣＱ Ｆｌｅｅｔ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６μ、ＸＢ－Ｃ１８ １００Ａ、５０×３．０ｍｍ；溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水；勾配：１８００μｌ／分で、０分～１．８分２～１００％アセトニトリル、１．８分～１．８５分１００％～２％アセトニトリル、１．８５分～２．００分２％ ＡＣＮ。

【化39】

【0222】

ＴＨＦ（６ｍＬ）中の中間体１４（１５０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、エチル（（Ｓ）－（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（２９８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、及びＭｇＣｌ_２（６５ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２０ｍＬ、１．１３ｍｍｏｌ）を滴加した。得られた混合物を５０℃で２時間撹拌し、冷却し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥させ、真空中で濃縮し、アセトニトリル（６ｍＬ）に再溶解し、ｃ－ＨＣＬ（０．３ｍＬ）を氷浴中で添加した。得られた混合物を氷浴中で１時間及び室温で１時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３（２ｍＬ）で処理し、ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １０μ Ｃ１８ １１０Å、２５０×３０ｍｍカラム、２５分の実行で５～７０％アセトニトリル／水勾配）によって精製して、生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ７．８０（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２５－７．１４（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１１－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝９．９，７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．２５（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ３．２６。ＬＣＭＳ：ＭＳ ｍ／ｚ＝５４７．１２［Ｍ＋１］；ｔ_Ｒ＝０．７６分；ＬＣシステム：Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｅｌａ １２５０ ＵＨＰＬＣ；ＭＳシステム：Ｔｈｅｒｍｏ ＬＣＱ Ｆｌｅｅｔ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６μ、ＸＢ－Ｃ１８ １００Ａ、５０×３．０ｍｍ；溶媒：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル、０．１％ギ酸を含む水；勾配：１８００μｌ／分で、０分～１．８分 ２～１００％アセトニトリル、１．８分～１．８５分 １００％～２％アセトニトリル、１．８５分～２．００分 ２％ ＡＣＮ。ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝４．０３分；ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＩＩ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、２．６ｕ １１０Ａ、１００×４．６ｍｍ；溶媒：Ａ：０．１％ ＴＦＡを含む水、Ｂ：０．１％ ＴＦＡを含むアセトニトリル；勾配：１．５ｍＬ／分で８．５分勾配を有する２～９８％Ｂ。
Ｃ．生物学的実施例
実施例１０．ＤＥＮＶ Ｐｏｌ ＩＣ_５０

【0223】

配列５’－（ＵＣＡＧ）２０（ＵＣＣＡＡＧ）１４（ＵＣＡＧ）２０－３’（配列番号１）を有する２４４ヌクレオチドの二次無構造ヘテロポリマーＲＮＡ（secondary structureless heteropolymeric RNA、ｓｓｈＲＮＡ）を、ＤＥＮＶ２－ＮＳ５ポリメラーゼアッセイにおいて５’－ＣＵＧ－３’プライマーと共にテンプレートとして使用した。２００ｎＭから開始した化合物の６つの２倍希釈物を阻害剤対照なしで９６ウェルプレートに播種した。１００ｎＭのＤＥＮＶ２ ＮＳ５を、４０ｍＭのトリス－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＤＴＴ、０．２単位／μＬのＲＮａｓｉｎ Ｐｌｕｓ ＲＮａｓｅ阻害剤、２００ｎｇ／μＬのｓｓｈＲＮＡ、２０μＭのＣＵＧ、及び２ｍＭのＭｇＣｌ２を含有する反応混合物中、室温で５分間プレインキュベートした。酵素混合物を化合物希釈物に添加し、２０μＭの３つの天然ＮＴＰ＋２μＭの類似体：１：１００ α－３３Ｐ－ＮＴＰを含有する塩基整合した競合天然ＮＴＰを含有する混合物の添加によって反応を開始した。３０℃で９０分後、５μＬの反応混合物をＤＥ８１陰イオン交換紙にスポットした。濾紙をＮａ_２ＨＰＯ_４（１２５ｍＭ、ｐＨ９）で３回、５分間洗浄し、水及びエタノールですすいだ後、空気乾燥させ、ホスホイメージャに曝露した。合成ＲＮＡは、Ｔｙｐｈｏｏｎ Ｔｒｉｏ Ｉｍａｇｅｒ及びＩｍａｇｅ Ｑｕａｎｔ ＴＬソフトウェアを使用して定量化し、反応速度は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０を使用した線形回帰によって計算した。ＩＣ_５０値は、用量応答（可変勾配）式（４パラメータロジスティック方程式）を使用し、非線形回帰分析によってＰｒｉｓｍで計算する：Ｙ＝底部＋（上部－底部）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ_５０－Ｘ）^＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））。
実施例１１．ＲＳＶ ＲＮＰ調製

【0224】

ＲＳＶリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を、Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（Ｍａｓｏｎ，Ｓ．，Ｌａｗｅｔｚ，Ｃ．，Ｇａｕｄｅｔｔｅ，Ｙ．，Ｄｏ，Ｆ．，Ｓｃｏｕｔｅｎ，Ｅ．，Ｌａｇａｃｅ，Ｌ．，Ｓｉｍｏｎｅａｕ，Ｂ．ａｎｄ Ｌｉｕｚｚｉ，Ｍ．（２００４）Ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ＲＮＡ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３２，４７５８－４７６７）から修飾された方法から調製した。ＨＥｐ－２細胞を、ＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）中の７．１×１０^４細胞／ｃｍ^２の密度で播種し、３７℃（５％ ＣＯ_２）で一晩付着させた。付着後、細胞を３５ｍＬのＭＥＭ＋２％ ＦＢＳ中でＲＳＶ Ａ２（ＭＯＩ＝５）に感染させた。感染後２０時間で、培地を２μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤで補足したＭＥＭ＋２％ ＦＢＳで置き換え、３７℃に１時間戻した。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、３５ｍＬのＰＢＳ＋２５０μｇ／ｍＬ溶解レシチンで１分間処理した後、全ての液体を吸引した。細胞を１．２ｍＬの緩衝液Ａ［５０ｍＭの酢酸トリス（ｐＨ８．０）、１００ｍＭの酢酸カリウム、１ｍＭのＤＴＴ及び２μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤ］中に廃棄することによって採取し、１８ゲージ針（１０回）を繰り返し通過させることによって溶解した。細胞溶解物を氷上に１０分間置き、次いで４℃で１０分間、２４００ｇで遠心分離した。上清（Ｓ１）を除去し、ペレット（Ｐ１）を、１％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００で補足した６００μＬの緩衝液Ｂ［１０ｍＭ ＴＲＩＳ酢酸塩（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ酢酸カリウム及び１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２］中で、１８ゲージ針（１０回）を繰り返し通過させることによって破壊した。再懸濁したペレットを氷上に１０分間置き、次いで４℃で１０分間、２４００ｇで遠心分離した。上清（Ｓ２）を除去し、ペレット（Ｐ２）を、０．５％デオキシコール酸塩及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ４０で補足した６００μＬの緩衝液Ｂ中で破壊した。再懸濁したペレットを氷上に１０分間置き、次いで４℃で１０分間、２４００ｇで遠心分離した。濃縮ＲＳＶ ＲＮＰ複合体を含有する上清（Ｓ３）画分を収集し、タンパク質濃度を２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定した。分割量のＲＳＶ ＲＮＰ Ｓ３画分を－８０℃で保存した。
実施例１２．ＲＳＶ ＲＮＰアッセイ

【0225】

転写反応は、３０μＬの反応緩衝液［５０ｍＭのＴＲＩＳ－酢酸塩（ｐＨ８．０）、１２０ｍＭの酢酸カリウム、５％のグリセロール、４．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、３ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのエチレングリコール－ビス（エチルエーテル）－四酢酸（ethyleneglycol-bis(ethylether)-tetraacetic acid、ＥＧＴＡ）、５０μｇ／ｍＬのＢＳＡ、２．５Ｕ ＲＮａｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰ、ＣＴＰ、及び１．５ｕＣｉ［α－３２Ｐ］ＮＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）］中に２５μｇの粗ＲＳＶ ＲＮＰ複合体を含有していた。転写アッセイで使用される放射性標識ヌクレオチドは、ＲＳＶ ＲＮＰ転写の阻害について評価されているヌクレオチド類似体に一致するように選択された。冷たい競合ＮＴＰを、そのＫｍの半分の最終濃度で添加した（ＡＴＰ＝２０μＭ、ＧＴＰ＝１２．５μＭ、ＵＴＰ＝６μＭ及びＣＴＰ＝２μＭ）。３つの残りのヌクレオチドを１００μＭの最終濃度で添加した。

【0226】

ヌクレオチド類似体がＲＳＶ ＲＮＰ転写を阻害したかどうかを決定するために、５倍増分で６ステップの連続希釈を使用して化合物を添加した。３０℃で９０分間インキュベートした後、ＲＮＰ反応を３５０μＬのＱｉａｇｅｎ ＲＬＴ溶解緩衝液で停止させ、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ９６キットを使用してＲＮＡを精製した。精製ＲＮＡを、６５℃で１０分間、ＲＮＡ試料充填緩衝液（Ｓｉｇｍａ）中で変性し、２Ｍホルムアルデヒドを含有する１．２％アガロース／ＭＯＰＳゲルで実行した。アガロースゲルを乾燥させ、Ｓｔｏｒｍホスホイメージャスクリーンに曝露し、Ｓｔｏｒｍホスホイメージャ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して開発した。全放射性標識転写物を５０％（ＩＣ_５０）低減した化合物の濃度を、２つの複製の非線形回帰分析によって計算した。
実施例１３．ＤＥＮＶ－２ ｍｏＤＣ ＥＣ_５０

【0227】

ヒト単球由来樹状細胞（monocyte-derived dendritic cell、ｍｏＤＣ）は、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－４（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を含有するヒトＭｏ－ＤＣ分化培地で培養されたＣＤ１４＋単球（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）に由来した。７日目に、ｍｏＤＣを機械的破壊によって採取し、洗浄し、無血清ＲＰＭＩに懸濁した。ｍｏＤＣを、３７℃で穏やかに撹拌しながら無血清ＲＰＭＩ中で２時間、ＭＯＩ＝０．１でＶｅｒｏ由来のデング２、ニューギニア株（New Guinea strain、ＮＧＣ）に感染させた。細胞を洗浄し、１０％の血清含有ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、ピルビン酸ナトリウム、ＮＥＡＡ、ペニシリン－ストレプトマイシンで補足）に再懸濁した。１０＾５細胞を９６ウェルプレートで３回播種し、化合物を段階的用量で分配した（Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ Ｄ３００デジタルディスペンサ）。全てのウェルを０．２５％ ＤＭＳＯに対して正規化した。４８時間で、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、全ての上清を除去した。ＲＮＥａｓｙ ９６プレート（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出し、ＸＬＴ ｃＤＮＡ ５×Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＱｕａｎｔａＢｉｏ）を使用して第１鎖ｃＤＮＡを生成するために使用した。ｃＤＮＡをＤＥＮＶ２ウイルス及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現に特異的なＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲ二重反応においてテンプレートとして使用した。ＥＣ_５０値は、Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを使用して、陽性対照を含むが化合物陰性対照を含まないウェルに対して正規化した。
実施例１４．ＤＥＮＶ－２ Ｈｕｈ－７ ＥＣ_５０

【0228】

Ｈｕｈ７（ヒト肝癌７）細胞を、１０％ ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ完全培地中で維持した。アッセイの日に、細胞をトリプシン処理し（０．１％トリプシン－ＥＤＴＡ）、洗浄し、デング血清型２ニューギニアＣ（ＮＧＣ）株を有する無血清ＤＭＥＭで２時間、ＭＯＩ＝０．１で３７℃で穏やかに撹拌しながら感染させた。２時間後、細胞を無血清培地で洗浄し、１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、ピルビン酸ナトリウム、ＮＥＡＡ、ペニシリン－ストレプトマイシンで補足）に懸濁した。１０＾５細胞を９６ウェルプレートで３回播種し、化合物を段階的用量で分配した（Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ Ｄ３００デジタルディスペンサ）。全てのウェルを０．２５％ ＤＭＳＯに対して正規化した。４８時間で、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、全ての上清を除去した。ＲＮＥａｓｙ ９６プレート（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出し、ＸＬＴ ｃＤＮＡ ５×Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＱｕａｎｔａＢｉｏ）を使用して第１鎖ｃＤＮＡを生成するために使用した。ｃＤＮＡをＤＥＮＶ２ウイルス及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現に特異的なＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲ二重反応においてテンプレートとして使用した。ＥＣ_５０値は、Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを使用して、陽性対照を含むが化合物陰性対照を含まないウェルに対して正規化した。
実施例１５．ＤＥＮＶ－２ Ｈｕｈ－７ Ｒｅｐ ＥＣ_５０

【0229】

３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，カタログ番号７８１０９１）において、化合物を、８つの化合物（４複製）又は４０化合物の用量反応形式（３複製）で、ウェル当たり２００ｎｌで音響的に移した。試験した全てのプレートについて、バラピラビル、ＧＳ－５７３４、及びＮＩＴＤ００８は、陽性阻害対照として、０％阻害、ＤＭＳＯのみの陰性対照ウェルと共に含まれた。化合物の添加に続いて、ＤＥＮＶ２レプリコン構築物を含有するＨｕｈ－７細胞を標準細胞培養手順、続いて採取し、ｇｅｎｔｉｃｉｎを含まないｃＤＭＥＭから構成される細胞培養培地中の１．２５Ｅ５細胞／ｍＬの濃度に調整した。次いで、４０μＬの細胞ストックを、５，０００細胞／ウェルの最終細胞密度で各ウェルに添加した。細胞及び化合物混合物を、３７℃／５％ ＣＯ_２で４８時間インキュベートした。細胞を採取する前に、ＥｎｄｕＲｅｎ生細胞基質（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ６４８１）を、３．４ｍｇを１００μＬのＤＭＳＯに懸濁することによって調製して、６０ｍＭのストック溶液を生成した。次いで、ストック溶液を予熱したｃＤＭＥＭで１：２００に希釈し、１０ｕＬのこの希釈溶液を３８４ウェルプレートの各ウェルに添加した。次いで、プレートを５００ｒｐｍで短時間遠心分離し、プレートシェーカー上に２分間置いた。混合後、プレートを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎルミノメータ上で発光を測定する前に、７℃／５％ ＣＯ_２で１．５時間インキュベートした。レプリコンシグナルの阻害率は、０％及び１００％阻害対照に対して試験された各濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、レプリコンシグナルを５０％阻害した化合物の有効濃度として４－パラメトリック非線形回帰によって決定された。
実施例１６．ＲＳＶ ＨＥｐ－２ ＥＣ_５０

【0230】

ＲＳＶに対する抗ウイルス活性は、ＨＥｐ－２細胞における感染性細胞変性細胞保護アッセイを使用して決定される。このアッセイでは、ウイルス感染及び／又は複製を阻害する化合物は、細胞生存率試薬を使用して定量化され得るウイルス誘発性細胞殺傷に対する細胞保護効果を生じる。本明細書で使用される技法は、公開文献に記載されている方法の新規の適応である（Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２００７，５１（９）：３３４６－５３）。

【0231】

ＨＥｐ－２細胞は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＩ）から入手し、１０％ウシ胎仔血清及びペニシリン／ストレプトマイシンで補足したＭＥＭ培地中で維持する。細胞を週に２回継代し、サブコンフルエント段階で保持する。ＲＳＶ株Ａ２（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ）の市販のストックを、化合物試験の前に滴定して、ＨＥｐ－２細胞において望ましい細胞変性効果を生成するウイルスストックの適切な希釈を決定する。

【0232】

抗ウイルス試験のために、ＨＥｐ－２細胞を大きな細胞培養フラスコで、完全にではないが、ほぼコンフルエンシまで増殖させる。試験される化合物は、プレート標準化用量応答形式当たり８又は４０試料のいずれかで、３８４ウェル化合物希釈プレート内のＤＭＳＯ中で予め希釈される。各試験化合物の３倍連続希釈増分をプレート内で調製し、試験試料を、ウェル当たり１００ｎＬの音響移送装置（Ｅｃｈｏ，Ｌａｂｃｙｔｅ）を介して細胞培養アッセイ３８４ウェルプレートに移す。各化合物希釈物を、単一又は四連の試料中で乾燥アッセイプレートに移し、アッセイの準備ができるまで保存する。陽性及び陰性対照を、垂直ブロック（１カラム）でプレートの両端の反対側に配置する。

【0233】

続いて、感染性混合物を、５０，０００／ｍＬの密度で細胞を滴定することによって以前に決定されたウイルスストックの適切な希釈を使用して調製し、２０μＬ／ウェルを、オートメーション（ｕＦｌｏｗ、Ｂｉｏｔｅｋ）を介して化合物を含む試験プレートに添加する。各プレートには、それぞれ０％及び１００％のウイルス阻害標準を作成するために、陰性対照及び陽性対照（各々１６複製）が含まれる。ＲＳＶでの感染後、プレートを３７℃の細胞培養インキュベータ内で４日間インキュベートする。インキュベーション後、細胞生存率試薬、Ｃｅｌｌ ＴｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）をアッセイプレートに添加し、これを短時間インキュベートし、全てのアッセイプレートで発光読み取り値を測定する（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）。ＲＳＶ誘発性細胞変性効果、阻害率は、残りの細胞生存率のレベルから決定される。これらの数は、０％及び１００％阻害対照に対する各試験濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、ＲＳＶ誘発性細胞変性効果を５０％阻害する濃度として非線形回帰によって決定される。様々な強力な抗ＲＳＶツール化合物を、抗ウイルス活性の陽性対照として使用する。
実施例１７．ＲＳＶ ＮＨＢＥ ＥＣ_５０

【0234】

正常なヒト気管支上皮（normal human bronchial epithelial、ＮＨＢＥ）細胞は、Ｌｏｎｚａ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－２５４０）から購入し、気管支上皮増殖培地（Bronchial Epithelial Growth Media、ＢＥＧＭ）（Ｌｏｎｚａ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－３１７０）で培養した。細胞を１週間当たり１～２回継代して、８０％未満のコンフルエンシを維持した。ＮＨＢＥ細胞を、培養中６継代後に廃棄した。

【0235】

ＲＳＶ Ａ２抗ウイルスアッセイを実施するために、ＮＨＢＥ細胞を、ＢＥＧＭ中のウェル当たり７，５００細胞の密度で９６ウェルプレートに播種し、３７℃で一晩付着させた。付着後、１００μＬの細胞培養培地を除去し、Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ Ｄ３００デジタルディスペンサを使用して、３倍連続希釈化合物を添加した。ＤＭＳＯの最終濃度を０．０５％に対して正規化した。化合物の添加に続いて、ＮＨＢＥ細胞を、ＢＥＧＭ中１×１０^４．５組織培養感染用量／ｍＬの力価で１００μＬのＲＳＶ Ａ２を添加することによって感染させた後、３７℃で４日間インキュベートした。次いで、ＮＨＢＥ細胞を２５℃に平衡化させ、１００μＬの培養培地を除去し、１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬を添加することによって細胞生存率を決定した。混合物を２５℃で１０分間インキュベートし、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ発光プレートリーダーで定量化した。
実施例１８．ＲＳＶ ＨＡＥ ＥＣ_５０

【0236】

ＨＡＥ細胞は、空気－液体界面で培養され、空気に曝露される頂端側及び媒体と接触している基底側を有する。実験の前に、ＨＡＥを寒天ベースの出荷用パッケージから取り出し、１ｍｌのＨＡＥアッセイ培地（ＡＩＲ－１００－ＭＭ、Ｍａｔｔｅｋ Ｃｏｒｐ）中で３７℃／５％ ＣＯ２に一晩順応させた。ＨＡＥは、頂端面を４００μＬのＰＢＳで（直接ピペッティング方法を利用するか、又はＰＢＳを含有するトラフを通して各トランスウェルを実行することによってかのいずれかで）２回洗浄して、粘液層を除去することによって、感染のために調製した。頂端室からＰＢＳを排出し、吸収性物質上に穏やかにタップして、可能な限り多くのＰＢＳを除去した。洗浄後、細胞を４倍連続希釈化合物を含有する新鮮なＨＡＥ維持培地に移し、細胞単層の基底側に送達し、ＨＡＥアッセイ培地中の１００μＬの１：６００希釈のＲＳＶ Ａ株Ａ２ １０００×ストック（ＡＢ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ、カタログ番号１０－１２４－０００）に、５％ ＣＯ２中３７℃で３時間、頂部に感染させた。ウイルス接種物を除去し、細胞の頂端面を、前述のいずれかの方法を使用してＰＢＳで３回洗浄した。次いで、細胞を化合物の存在下、３７℃で３日間培養した。インキュベーション後、ＭａｇＭＡＸ－９６ウイルスＲＮＡ単離キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，カタログ番号ＡＭ１８３６）を使用してＨＡＥ細胞から全ＲＮＡを抽出し、細胞内ＲＳＶ ＲＮＡをリアルタイムＰＣＲによって定量化した。およそ２５ｎｇの精製ＲＮＡを、０．９μＭのＲＳＶ Ｎ順方向及びＲＳＶ Ｎ逆方向プライマー、０．２μＭのＲＳＶ Ｎプローブ及び１× Ｔａｑｍａｎ ＲＮＡ－Ｃｔ１－ステップキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ，カタログ番号４３９２９３８）を含有するＰＣＲ反応混合物に添加した。ＲＮＡレベルは、Ｔａｑｍａｎ ＧＡＰＤＨ対照プライマーセット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，カタログ番号４０２８６９）を使用して正規化した。ＲＳＶ Ａ２ ＨＡＥ抗ウイルスアッセイで使用されるリアルタイムＰＣＲプライマー及びプローブ：ＲＳＶ Ｎ順方向ＣＡＴＣＣＡＧＣＡＡＡＴＡＣＡＣＣＡＴＣＣＡ（配列番号２）、ＲＳＶ Ｎ逆方向ＴＴＣＴＧＣＡＣＡＴＣＡＴＡＡＴＴＡＧＧＡＧＴＡＴＣＡＡ（配列番号３）、ＲＳＶ ＮプローブＦＡＭ－ＣＧＧＡＧＣＡＣＡＧＧＡＧＡＴ－ＢＨＱ（配列番号４）。
実施例１９．ＨＲＶ１６ ＨｅＬａ ＥＣ_５０

【0237】

１０％の熱不活性化ＦＢＳ及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有する完全なＤＭＥＭ培地で培養されたＨ１－ＨｅＬａ細胞を、化合物投与及び感染の１日前に３０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。各化合物の抗ウイルス活性を３回測定した。化合物を、感染の直前にＨＰ３００デジタルディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して、連続３倍希釈で細胞培養物に直接添加した。プレートをＢＳＬ－２コンテインメントに移し、滴定によって以前に決定し、細胞培養培地中で調製したウイルスストックの適切な希釈を、細胞及び連続希釈化合物を含む試験プレートに添加した。各プレートには、６ウェルの感染した未処理細胞及び６ウェルの非感染細胞が含まれ、それぞれ０％及び１００％ウイルス阻害対照として機能した。感染後、試験プレートを、３３℃／５％ ＣＯ_２に設定した組織培養インキュベータ内で９６時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｈ１－ＨｅＬａ細胞をインキュベーションから除去し、２５℃に平衡化させた。１００μＬの培養培地を除去し、１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬を添加することによって細胞生存率を決定した。混合物を２５℃で１０分間、シェーカー上でインキュベートし、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ発光プレートリーダーで定量化した。ウイルス感染の阻害率は、０％及び１００％阻害対照に対して、試験された各濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、細胞変性効果を５０％阻害した化合物の有効濃度として４－パラメトリック非線形回帰によって決定された。
実施例２０．ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａ ＥＣ_５０

【0238】

１０％の熱不活性化ＦＢＳ及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有する完全なＲＰＭＩ １６４０で培養されたＨ１－ＨｅＬａ細胞を、化合物投与及び感染の１日前に５０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。各化合物の抗ウイルス活性を３回測定した。化合物を、感染の直前にＨＰ３００デジタルディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して、連続３倍希釈で細胞培養物に直接添加した。プレートをＢＳＬ－２コンテインメントに移し、１００μＬのＨＲＶ１ａウイルスストックの１／４０００希釈を、細胞及び連続希釈化合物を含有する各ウェルに添加した。各プレートには、６ウェルの感染した未処理細胞及び６ウェルの５μＭのルピントリビルを含有する細胞が含まれ、それぞれ０％及び１００％ウイルス阻害対照として機能した。感染後、試験プレートを、３７℃／５％ ＣＯ_２に設定した組織培養インキュベータ内で９６時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｈ１－ＨｅＬａ細胞をインキュベーションから除去し、２５℃に平衡化させた。１００μＬの培養培地を除去し、１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬を添加することによって細胞生存率を決定した。混合物を２５℃で１０分間、シェーカー上でインキュベートし、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ発光プレートリーダーで定量化した。ウイルス感染の阻害率は、０％及び１００％阻害対照に対して、試験された各濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、細胞変性効果を５０％阻害した化合物の有効濃度として４－パラメトリック非線形回帰によって決定された。
実施例２１．ＨＲＶ１４ ＨｅＬａ ＥＣ_５０

【0239】

１０％の熱不活性化ＦＢＳ及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有する完全なＲＰＭＩ １６４０で培養されたＨ１－ＨｅＬａ細胞を、化合物投与及び感染の１日前に５０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。各化合物の抗ウイルス活性を３回測定した。化合物を、感染の直前にＨＰ３００デジタルディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して、連続３倍希釈で細胞培養物に直接添加した。プレートをＢＳＬ－２コンテインメントに移し、１００μＬのＨＲＶ１４ウイルスストックの１／４０００希釈を、細胞及び連続希釈化合物を含有する各ウェルに添加した。各プレートには、６ウェルの感染した未処理細胞及び６ウェルの５μＭのルピントリビルを含有する細胞が含まれ、それぞれ０％及び１００％ウイルス阻害対照として機能した。感染後、試験プレートを、３７℃／５％ ＣＯ_２に設定した組織培養インキュベータ内で９６時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｈ１－ＨｅＬａ細胞をインキュベーションから除去し、２５℃に平衡化させた。１００μＬの培養培地を除去し、１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬を添加することによって細胞生存率を決定した。混合物を２５℃で１０分間、シェーカー上でインキュベートし、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ発光プレートリーダーで定量化した。ウイルス感染の阻害率は、０％及び１００％阻害対照に対して、試験された各濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、細胞変性効果を５０％阻害した化合物の有効濃度として４－パラメトリック非線形回帰によって決定された。
実施例２２．ＨＲＶｃ１５及びＨＲＶｃ２５ ＨｅＬａ ＥＣ_５０

【0240】

第１に、ＨＲＶレプリコンＲＮＡを調製する。５ｕｇのＤＮＡテンプレート（ＨＲＶｃ１５又はＨＲＶｃ２５）を、ＮＥＢ緩衝液－３中の２μＬのＭｌｕＩ酵素により、２５μＬの最終体積で３７℃で３時間線形化する。インキュベーション後、線形化されたＤＮＡをＰＣＲ精製カラムで精製し、以下の条件を使用して、以下のインビトロ転写を行った：１０μＬのＲｉｂｏＭＡＸ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｔ７ ２×緩衝液、１～８μＬの線形ＤＮＡテンプレート（１μｇ）、０～７μＬのヌクレアーゼ不含水、２μＬの酵素ミックスＴ７ ｅｘｐｒｅｓｓ。２０μＬの最終体積を混合し、３７℃で３０分間インキュベートする。インキュベーション後、１μＬのＲＱ１ ＲＮａｓｅ不含ＤＮａｓｅを添加し、混合物を３７℃で１５分間インキュベートする。次いで、得られたＲＮＡをＭｅｇａＣｌｅａｒキット（Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１１８３５－０３０）で精製し、５０μＬの溶出緩衝液で９５℃で２回溶出する。１０％の熱不活性化ＦＢＳ及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有する完全ＲＰＭＩ １６４０培地で培養されたＨ１－ＨｅＬａ細胞を、トランスフェクションの１日前に、２Ｅ６細胞／フラスコの濃度でＴ－２２５フラスコに播種し、３７℃／５％ ＣＯ_２で一晩インキュベートする。トランスフェクションの日に、標準細胞培養プロトコル後に細胞をトリプシン処理し、ＰＢＳで２回洗浄する。洗浄後、細胞をＰＢＳ中の１Ｅ７細胞／ｍＬの濃度で再懸濁し、懸濁液を湿潤氷上で保存する。エレクトロポレーションを使用して、レプリコンＲＮＡをＨ１－ＨｅＬａ細胞に導入する。それぞれ１０μｇのレプリコンｃ１５又は１μｇのｃ２５レプリコンＲＮＡを含有する１０μＬの最終体積を、４ｍｍのエレクトロポレーションキュベットにピペットで移す。Ｈ１－ＨｅＬａ細胞ストックを穏やかに回転させることによって混合し、０．５ｍＬの以前に調製した細胞ストックを、レプリコンＲＮＡを含有するキュベットに移す。合わせた溶液をフリックして混合する。混合後、以下の設定：９００Ｖ、２５ｕＦ、無限抵抗、１パルスを使用して、細胞を直ちにエレクトロポレーションする。キュベットを氷上で１０分間静置する。１０分間のインキュベーション後、エレクトロポレーション当たり１０％の熱不活性化ＦＢＳを含有する、１９ｍＬの周囲温度のフェノールレッド不含及び抗生物質不含ＲＰＭＩ １６４０を添加する。１５０μＬ（４Ｅ４細胞）のエレクトロポレーションされた細胞懸濁液を、ウェル当たり９６ウェルの透明底の白色細胞培養プレートに播種し、２５℃で３０分間インキュベートする。化合物を、ＨＰ３００デジタルディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して、連続３倍希釈で細胞培養物に直接添加し、３回試験した。化合物の添加に続いて、プレートを３３℃で４８時間インキュベートする。次いで、Ｒｅｎｉｌｌａ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムによって、レプリコン活性を測定する。シグナル定量化の前に、プレートをインキュベータから除去し、５０ｕＬを各ウェルから除去した後、２５℃に平衡化させる。製造業者のプロトコルに従い、緩衝液に対して１：１００希釈のＲｅｎｉｌｌａ－Ｇｌｏ基質を調製し、１００ｕＬのＲｅｎｉｌｌ－Ｇｌｏルシフェラーゼミックスを各ウェルに添加する。次いで、プレートを穏やかに撹拌しながら２５℃で２０分間インキュベートし、ルシフェラーゼシグナルを、ＥｎＶｉｓｉｏｎルシフェラーゼ定量化リーダーを使用して０．１秒の検出設定で決定する。レプリコン阻害の阻害率は、実験に含まれた０％及び１００％阻害対照に対して試験された各濃度について計算され、各化合物についてのＥＣ_５０値は、ルシフェラーゼシグナルを５０％阻害した化合物の有効濃度として４－パラメトリック非線形回帰によって決定された。
実施例２３．ＨＣＶ Ｒｅｐ １Ｂ及び２Ａ ＥＣ_５０及びＣＣ_５０

【0241】

化合物を３８４ウェルプレートで１：３希釈の１０ステップで連続希釈した。全ての連続希釈物を、同じ３８４ウェルプレート内の化合物当たり４複製で行った。１００μＭのＨＣＶプロテアーゼ阻害剤ＩＴＭＮ－１９１を、ＨＣＶ複製の１００％阻害の対照として添加し、一方で１０ｍＭのピューロマイシンを１００％細胞傷害性の対照として含めた。黒色ポリスチレン３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ）の各ウェルに、２０００個の懸濁ＨＣＶレプリコン細胞を含有する９０μＬの細胞培養培地（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎを含まない）をＢｉｏｔｅｋ μＦｌｏｗワークステーションで添加した。細胞培養プレートへの化合物移動の場合、化合物連続希釈プレートからの０．４μＬの化合物溶液を、Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸワークステーションで細胞培養プレートに移した。最終アッセイウェルのＤＭＳＯ濃度は、０．４４％であった。プレートを３７℃で３日間、５％ ＣＯ_２及び湿度８５％でインキュベートした。ＨＣＶレプリコンアッセイは、同じウェルから細胞傷害性及び抗レプリコン活性の両方を評価することができるマルチプレックスアッセイであった。ＣＣ_５０アッセイを最初に行った。３８４ウェル細胞培養プレート内の培地を吸引し、ウェルを、Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬＸ４０５プレートワッシャーを使用して、各々１００μＬのＰＢＳで４回洗浄した。１×ＰＢＳ中の４００ｎＭカルセインＡＭ（Ａｎａｓｐｅｃ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を含有する体積５０μＬの溶液を、Ｂｉｏｔｅｋ μＦｌｏｗワークステーションでプレートの各ウェルに添加した。プレートを室温で３０分間インキュベートした後、蛍光シグナル（励起４９０ｎｍ、発光５２０ｎｍ）をＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定した。ＥＣ_５０アッセイを、ＣＣ_５０アッセイと同じウェルで行った。３８４ウェル細胞培養プレート中のカルセイン－ＰＢＳ溶液を、Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬＸ４０５プレートワッシャーで吸引した。体積２０μＬのＤｕａｌ－Ｇｌｏルシフェラーゼ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を、Ｂｉｏｔｅｋ μＦｌｏｗワークステーションでプレートの各ウェルに添加した。プレートを室温で１０分間インキュベートした。Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ Ｓｔｏｐ＆Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）及びＤｕａｌ－Ｇｌｏ Ｓｔｏｐ＆Ｇｌｏ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）の１：１００混合物を含有する体積２０μＬの溶液を、Ｂｉｏｔｅｋ μＦｌｏｗワークステーションでプレートの各ウェルに添加した。次いで、プレートを室温で１０分間インキュベートした後、発光シグナルをＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定した。
実施例２４．ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼ（ＰＯＬＲＭＴ）の阻害

【0242】

全ての反応混合物は、５０ｍＭのトリス－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）、０．２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、２ｍＭのＤＴＴ、０．０５ｍｇ／ｍｌの活性化された魚類精子ＤＮＡ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１．３μＣｉ［α－^３３Ｐ］ｄＴＴＰ（３，０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）、並びに各々２μＭのｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、及びＴＴＰを含有していた。最適な酵素濃度は、酵素濃度（［Ｅ］）対活性の線形範囲にあるように選択され、反応時間は、基質の１０％が消費されたことを確実にするように選択された。全ての反応を３７℃で実行した。ミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼ（ＰＯＬＲＭＴ）の阻害を、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、及び１０ｍＭのＭｇＣｌ_２を含有する緩衝液中にＰＯＬＲＭＴ軽鎖プロモーター領域及びミトコンドリア転写因子Ａ（ｍｔＴＦＡ）（１００ｎＭ）、及びｍｔ－ＴＦＢ２（２０ｎＭ）を含有する２０ｎＭのテンプレートプラスミド（ｐＵＣ１８－ＬＳＰ）でプレインキュベートされた２０ｎＭのＰＯＬＲＭＴを使用して評価した。反応物を３２℃まで加熱し、各々２．５μＭの４つの天然ＮＴＰ及び１．５μＣｉの［^３３Ｐ］ＧＴＰを添加することによって開始した。３２℃で３０分間インキュベートした後、定量化のために処理される前に、反応物をＤＥ８１紙にスポットした。
実施例２５．ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼ（ＰＯＬＲＭＴ）による単一ヌクレオチドの組み込み

【0243】

ＭＴＣＮ緩衝液（５０ｍＭのＭＥＳ、２５ｍＭのトリス－ＨＣｌ、２５ｍＭのＣＡＰＳ、及び５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５）、２００ｎＭの５’－^３２Ｐ－Ｒ１２／Ｄ１８、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、及び３７６ｎＭのＰＯＬＲＭＴの混合物を、３０℃で１分間プレインキュベートした。５００μＭ（最終）の天然のＮＴＰ又はＮＴＰ類似体の添加によって反応を開始した。選択された時点で、反応混合物を除去し、１００ｍＭのＥＤＴＡ、８０％のホルムアミド、及びブロモフェノールブルーを含有するゲル充填緩衝液でクエンチし、６５℃で５分間加熱した。試料を２０％ポリアクリルアミドゲル（８Ｍ尿素）上で実行し、生成物の形成を、Ｔｙｐｈｏｏｎ Ｔｒｉｏ Ｉｍａｇｅｒ及びＩｍａｇｅ Ｑｕａｎｔ ＴＬソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して定量化した。ｍｔ ＲＮＡ ｐｏｌによる単一ヌクレオチド組み込みの速度は、単一指数式：［Ｒ１３］＝Ａ（１－ｅ^－ｋｔ）を使用して生成物形成をフィッティングすることによって計算され、［Ｒ１３］は、形成された伸長生成物の（ｎＭ単位の）量を表し、ｔは、反応時間を表し、ｋは、観察された速度を表し、Ａは、指数関数の振幅を表す。

【表2】

全ての値はｎＭ単位。

【表3】

全ての値はｎＭ単位。

【表4】

全ての値はｎＭ単位。

【表5】

全ての値はｎＭ単位。

【表6】

全ての値はｎＭ単位。

【表7】

全ての値はｎＭ単位。

【0244】

表５～７に見られるように、式Ｉの化合物は、化合物１と比較して、ＲＳＶ抗ウイルスアッセイ（Ｈｅｐ－２及びＮＨＢＥ）においてより強力である（それぞれ約４．０及び４．４より強力）。式Ｉの化合物はまた、化合物１と比較して、ＨＲＶに対して（ＨＲＶ１６ ＨｅＬａ、ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａ、及びＨＲＶ１４ ＨｅＬａアッセイにおいて）より強力である（それぞれ約４．２、５１．１、及び１２．８倍より強力）。同様に、式Ｉの化合物は、化合物１よりもデングに対して（Ｄｅｎｖ ｈｕｈ７ Ｒｅｐアッセイにおいて）より強力である（約２５．０倍より強力）。

【0245】

同様に、式Ｉの化合物はまた、ＨＡＥアッセイにおいて化合物２に対してより高い抗ＲＳＶ活性を示す（Ｍｉｒａｂｅｌｌｉ，Ｃ．ｅｔ ａｌ Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２０１８，７３，１８２３－１８２９）（約８．１倍より強力）。式Ｉの化合物はまた、化合物２と比較して、複数のＨＲＶ抗ウイルスアッセイにおいて（ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａ、ＨＲＶ１４ ＨｅＬａ、及びＨＲＶ１５ Ｒｅｐアッセイにおいて）より強力である（ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａアッセイにおいて約１２．１倍強力、ＨＲＶ１４ ＨｅＬａアッセイにおいて約２．２倍強力、及びＨＲＶ１５ Ｒｅｐアッセイにおいて約２．３倍より強力）。式Ｉの化合物は、デング抗ウイルスアッセイにおいて更により強力である（ＤＥＮＶ ｈｕｈ７ Ｒｅｐアッセイにおいて約１．９倍より強力）。同様に、式Ｉの化合物は、ＨＣＶ抗ウイルスアッセイにおける化合物２に対してより強力である（ＨＣＶ Ｒｅｐ １Ｂにおいて約３．５倍及びＨＣＶ Ｒｅｐ ２Ａにおいて１．４倍）。
実施例２６．構造的に関連する化合物３～５と比較した、式Ｉの化合物のＲＳＶ効力。

【0246】

式Ｉの化合物は、とりわけ、エステル基のシクロヘキシル基（以下の構造において^＊で示される位置）を特徴とする。

【化40】

【0247】

式Ｉの化合物及び化合物３～５の効力（以下に示される構造）を、上記のアッセイに従って測定した。化合物３～５の構造は、分岐エステルにおいて環状環を欠いていること（以下の構造において^＊によって示される位置）を除いて、式Ｉの化合物と同等である。これらの実験の結果を以下の表８に要約する。

【化41】

【表8】

全ての値はｎＭ単位。

【0248】

上記の表８において見られるように、式Ｉの化合物は、ＲＳＶ及びＨＲＶ抗ウイルスアッセイにおいて、化合物３（ＲＳＶ Ｈｅｐ－２アッセイにおいて約５倍、ＲＳＶ ＮＨＢＥアッセイにおいて約９．３倍、ＨＲＶ１６ ＨｅＬａアッセイにおいて約６．２倍、ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａアッセイにおいて約９１．９倍、及びＨＲＶ１４ ＨｅＬａアッセイにおいて約２３．２倍）、４（ＲＳＶ Ｈｅｐ－２において約３．９倍、ＲＳＶ ＮＨＢＥアッセイにおいて約７．１倍、及びＨＲＶ１６ Ｈｅｌａアッセイにおいて約４．３倍）、並びに５（ＲＳＶ Ｈｅｐ－２アッセイにおいて約１９．８倍、ＲＳＶ ＮＨＢＥアッセイにおいて約１０．０倍、ＨＲＶ１６ ＨｅＬａアッセイにおいて約１３．８倍、ＨＲＶ１Ａ ＨｅＬａアッセイにおいて約２０３．１、及びＨＲＶ１４ ＨｅＬａアッセイにおいて約４４．０倍）に対してより強力であり、これらの各々は、分岐エステルにおいて環状シクロヘキシル基を欠いている。したがって、式Ｉの化合物は、化合物３～５と比較して改善された特性を示し、分岐アルキル基を有するが、エステル基においてシクロヘキシル基を欠いている。
実施例２７．式Ｉａ、式Ｉｂの化合物、並びに化合物２、６、７、及び８の化合物と比較した、式Ｉの化合物の効力。

【0249】

式Ｉの化合物、並びに構造的に関連する式Ｉａ及び式Ｉｂの化合物と化合物２、６、７、及び８の効力を、上記のアッセイに従って測定した。式Ｉａ、式Ｉｂ、６、７、及び８の化合物の構造を以下に示し、その結果を以下の表９に要約する。

【化42】

【表9】

全ての値はｎＭ単位。

【0250】

上記の表９のＥＣ_５０データは、ＲＳＶアッセイ及びＨＲＶアッセイの両方において、ＰにＳ立体化学を有する式Ｉの化合物が、ＰにＲ立体中心を有する式Ｉｂの化合物よりも著しく強力であることを示す。具体的には、式Ｉの化合物は、ＲＳＶ ＨＥｐ－２アッセイにおいて式Ｉｂの化合物よりも３１．１倍強力であり、ＲＳＶ ＮＨＢＥアッセイにおいて５．１より強力である。同様に、式Ｉの化合物は、ＨＲＶ１６ ＨｅＬａアッセイにおいて式Ｉｂの化合物よりも２．９倍強力である。

【0251】

対照的に、Ｐにおける立体化学のみが異なる化合物６及び７の効力は（化合物６はＰにＳ立体化学を有し、化合物７はＲ立体化学を有する）、式Ｉ及び式Ｉｂの化合物ほど異なっていない。化合物６は、ＲＳＶ ＨＥｐ－２アッセイにおいて化合物７よりも４．８倍強力であり、ＨＲＶ１６ ＨｅＬａアッセイにおいて１．４倍強力である。ＲＳＶ ＮＨＢＥアッセイにおいて、化合物６は、化合物７に対してわずか０．７倍強力である。
実施例２８．ＨＥｐ－２及びＭＴ－４細胞傷害性アッセイ

【0252】

式Ｉの化合物、並びに化合物１、２、及び６の細胞傷害性は、他の細胞型について前述されたものと同様の様式で、細胞生存率試薬を使用して、非感染細胞において決定された（Ｃｉｈｌａｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２００８，５２（２）：６５５－６５）。ＨＥｐ－２（１．５×１０３細胞／ウェル）及びＭＴ－４（２×１０３細胞／ウェル）細胞を３８４ウェルプレートに播種し、１５ｎＭ～１００，０００ｎＭの範囲の３倍連続希釈化合物を含む適切な培地でインキュベートした。細胞を３７℃で４～５日間培養した。インキュベーション後、細胞を２５℃に平衡化させ、細胞生存率を、Ｃｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬を添加することによって決定した。混合物を１０分間インキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して発光シグナルを定量化した。未処理細胞及び２μＭのピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で処理した細胞は、それぞれ１００％及び０％の細胞生存率対照として機能する。細胞生存率のパーセントは、０％及び１００％対照に対して試験された各化合物濃度について計算され、ＣＣ_５０値は、細胞生存率を５０％低減する化合物濃度として非線形回帰によって決定された。
実施例２９．ＮＨＢＥ及びＳＡＥＣ細胞傷害性アッセイ

【0253】

正常なヒト気管支上皮（ＮＨＢＥ）細胞は、Ｌｏｎｚａ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－２５４０）から購入し、気管支上皮増殖培地（ＢＥＧＭ）（Ｌｏｎｚａ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－３１７０）で培養した。製造元のプロトコルに従って、細胞を１週間当たり１～２回継代して、８０％未満のコンフルエンシを維持した。ＮＨＢＥ細胞を、培養中５継代後に廃棄した。

【0254】

ヒト小気道上皮細胞（Human Small Airway Epithelial cell、ＳＡＥＣ）は、Ｌｏｎｚａ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－２５４７）から購入し、補足した小気道上皮細胞増殖培地（Small Airway Epithelial Cell Growth Medium、ＳＡＧＭ）（ｌｏｎｚａ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，カタログ番号ＣＣ－３１１８）で培養した。製造元のプロトコルに従って、細胞を１週間当たり１～２回継代して、８０％未満のコンフルエンシを維持した。ＳＡＥＣ細胞を、培養中５継代後に廃棄した。

【0255】

式Ｉの化合物、並びに化合物１、２、及び６の５０％細胞傷害性濃度（ＣＣ_５０）を決定するために、ＮＨＢＥ又はＳＡＥＣ細胞を、２００μＬのＢＥＧＭ又はＳＡＧＭ中、ウェル当たり１０，０００細胞の密度で透明底の黒壁９６ウェルプレートに播種し、３７℃で一晩付着させた。付着後、３倍連続希釈化合物を、Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ Ｄ３００デジタルディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して３回添加した。ＤＭＳＯの最終濃度を１．０％に対して正規化した。化合物の添加後、ＮＨＢＥ又はＳＡＥＣ細胞を３７℃で５日間インキュベートした。次いで、ＮＨＢＥ又はＳＡＥＣ細胞を２５℃に平衡化させ、１００μＬの培養培地を除去し、１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を添加することによって、細胞生存率を決定した。混合物を２５℃で１０分間インキュベートし、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ発光プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で定量化した。バックグラウンド発光シグナルを差し引いた、１．０％のＤＭＳＯのみの対照ウェルに対する正規化によって生存率の値を決定した。
実施例３０．ＰＨＨ細胞傷害性アッセイ

【0256】

式Ｉの化合物、並びに化合物１、２、及び６の３倍連続希釈物を、５０又は１００μＭの濃度で開始して、９６ウェルプレートで２回調製した。新鮮なヒト肝細胞を、Ｇｅｌｔｒｅｘオーバーレイを有するＭａｔｒｉｇｅｌオーバーレイ又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｄｕｒｈａｍ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ、カタログ番号ＨＭＦＹ９６）を用いてＢｉｏＩＶＴ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ、カタログ番号Ｆ／Ｍ９１５６５）から９６ウェルプレートフォーマットで順序付けた。ドナープロファイルは、アルコール消費が最小限である４～６５歳に制限された。ＰＨＨ細胞を、化合物で処理した後、湿度９０％の５％ ＣＯ_２インキュベータ内で３７℃で、ベンダーによって供給された補助剤を添加した完全培地で４～２４時間回復させた。連続希釈化合物及び完全培地を、０．５％に等しい最終量のＤＭＳＯで５日間毎日置き換えた（１３０μＬ／ウェル）。５日目に、培地をアッセイプレートから除去し、各ウェルに添加された１００μＬのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ、カタログ番号Ｇ７５７３）の添加によって、細胞生存率を決定した。室温で５～１０分間のインキュベーション後、発光シグナルをＶｉｃｔｏｒ発光プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で定量化した。
実施例３１．ＰＲＰＴ細胞傷害性アッセイ

【0257】

式Ｉの化合物、並びに化合物１、２、及び６のＰＲＰＴ細胞傷害性アッセイを、以下の化合物プロトコルを使用して行った。

【0258】

凍結保存されたヒト初代腎近位尿細管上皮細胞（primary renal proximal tubule epithelial cell、ＰＲＰＴＥＣ）を、ＬｉｆｅＬｉｎｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ、カタログ番号ＦＣ－００１３）から入手し、ヒト腎臓の組織から単離した。細胞を、Ｔ７５フラスコ中のＲｅｎａＬｉｆｅ完了培地（ＬｉｆｅＬｉｎｅ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ、カタログ番号ＬＬ－００２５）で凍結保存されたバイアルから３～４日間培養した後、９０％コンフルエンス後に細胞をアッセイプレートに播種した。ＰＲＰＴＥＣ細胞を、ウェル当たり１６０ｍＬの最終体積で、コラーゲンコーティングした９６ウェルプレートに、ウェル当たり５×１０３細胞の密度で播種した。翌日、ＨＰ Ｄ３００ディスペンサ（Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して、化合物ストック濃度よりも２００倍低い濃度から始まるプログラム、及び０．５％に等しい一定量のＤＭＳＯで２回の１：３倍希釈で、化合物を細胞プレートに直接添加した。５日間のインキュベーション後、培養培地を除去し、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ生存率試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ、カタログ番号Ｇ７５７３）のウェル当たり１００ｍＬの添加によって測定し、発光シグナルを発光プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で定量化した。
実施例３２．ＧＡＬＨＥＰＧ２細胞傷害性アッセイ

【0259】

式Ｉの化合物、並びに化合物１、２、及び６を、ガラクトース適合ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓癌細胞株）における細胞傷害性について、ハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。

【0260】

細胞を培地（ＤＭＥＭ（１１９６６）、１０％ ＦＢＳ、１％ ＮＥＡＡ、０．２％ガラクトース、１％ピルビン酸塩、１％ Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ ＰＳＧ）で１６．６Ｋ細胞／ｍＬに希釈し、９０ｕＬ／ウェルで３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングアッセイプレートに播種し、３７℃及び５％ ＣＯ２のインキュベータに入れた。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈した（１：３）。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。細胞播種の２４時間後、３８４チャンネルピペッターを使用して、化合物プレートからアッセイプレートに０．４ｕＬを移動させた。アッセイプレートをインキュベータに戻した。５日後、２０ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを添加する前に、アッセイプレートを８０ｕＬ／ウェルのＰＢＳで洗浄した。アッセイプレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取った。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義された。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。
実施例３３．ＧＡＬＰＣ３細胞傷害性アッセイ

【0261】

化合物を、ガラクトース適合ＰＣ３細胞（ヒト前立腺癌細胞株）における細胞傷害性について、ハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。細胞を培地（ＤＭＥＭ（１１９６６）、１０％ ＦＢＳ、１％ ＮＥＡＡ、０．２％ガラクトース、１％ピルビン酸塩、１％ Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ ＰＳＧ）で１６．６Ｋ細胞／ｍＬに希釈し、９０ｕＬ／ウェルで３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングアッセイプレートに播種し、３７℃及び５％ ＣＯ_２のインキュベータに入れた。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈した（１：３）。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。細胞播種の２４時間後、３８４チャンネルピペッターを使用して、化合物プレートからアッセイプレートに０．４ｕＬを移動させた。アッセイプレートをインキュベータに戻す。５日後、２０ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを添加する前に、アッセイプレートを８０ｕＬ／ウェルのＰＢＳで洗浄した。アッセイプレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取る。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義される。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。
実施例３４．Ｈｕｈ－７細胞傷害性アッセイ

【0262】

化合物をＨｕｈ７細胞（肝癌細胞株）における細胞傷害性のハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。細胞を培地（ＤＭＥＭ（１５－０１８－ＣＭ）、１０％ ＦＢＳ、１％ ＮＥＡＡ、１％ ＰＳＧ）で１６．６Ｋ細胞／ｍＬに希釈し、９０ｕＬ／ウェルで３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングアッセイプレートに播種し、３７℃及び５％ ＣＯ２のインキュベータに入れた。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈した（１：３）。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。細胞播種の２４時間後、３８４チャンネルピペッターを使用して、化合物プレートからアッセイプレートに０．４ｕＬを移動させた。アッセイプレートをインキュベータに戻した。５日後、２０ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを添加する前に、アッセイプレートを８０ｕＬ／ウェルのＰＢＳで洗浄した。アッセイプレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取った。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義された。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。
実施例３５．ＭＲＣ５細胞傷害性アッセイ

【0263】

化合物を、ＭＲＣ５細胞（ヒト胎児肺線維芽細胞株）における細胞傷害性のハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。細胞を培地（ＭＥＭ（１０－０１０－ＣＭ）、１０％ ＦＢＳ、１％ ＰＳＧ）で１６．６Ｋ細胞／ｍＬに希釈し、９０ｕＬ／ウェルで３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングアッセイプレートに播種し、３７℃及び５％ ＣＯ_２のインキュベータに入れた。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈した（１：３）。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。細胞播種の２４時間後、３８４チャンネルピペッターを使用して、化合物プレートからアッセイプレートに０．４ｕＬを移動させた。アッセイプレートをインキュベータに戻した。５日後、２０ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを添加する前に、アッセイプレートを８０ｕＬ／ウェルのＰＢＳで洗浄した。アッセイプレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取った。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義された。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。
実施例３６．ＮＲＶＭ新生児ラット心筋細胞の細胞傷害性アッセイ

【0264】

化合物を、新たに採取された新生児ラット心筋細胞（neonatal rat cardiomyocytes、ＮＲＶＭ）に対する細胞傷害性について、ハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。細胞を培地（ＤＭＥＭ＋１０％ ＦＢＳ＋１％ ＰＳＧ＋１％ ＮＥＡＡ）で２５，０００細胞／ｍＬに希釈し、３８４ウェル細胞アッセイプレートでウェル当たり９０ｕｌで播種し、化合物添加前に３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈（１：３）することによって調製した。４００ｎＬ／ウェルの化合物を、Ｂｉｏｃｅｌ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を介して細胞アッセイプレートに移した。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。５日後、プレートをＢｉｏｔｅｋプレート洗浄機で１００ｕｌ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄し、２０ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを各ウェルに添加した。プレートを１０分インキュベートし、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義された。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。
実施例３７．ＰＢＭＣ細胞傷害性アッセイ

【0265】

化合物を、凍結保存されたヒトＰＢＭＣにおける細胞傷害性について、ハイスループット３８４ウェルアッセイフォーマットで試験した。化合物を、３８４ウェルプレート中の１００％ ＤＭＳＯ中で４回連続希釈した（１：３）。音響ディスペンサを使用して、３１０ｎＬの化合物をアッセイプレートに移した。ＤＭＳＯ及び２ｍＭのピューロマイシンは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として含まれた。細胞を培地（ＲＰＭＩ＋１０％ ＦＢＳ＋１％ ＰＳＧ＋１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ＋１％ピルビン酸塩＋０．１％ ＢＭｅ）で７２Ｋ細胞／ｍＬに希釈し、３７℃及び５％ ＣＯ_２のインキュベータ内で４時間静置した後、７０ｕＬ／ウェルでプレスポットされたアッセイプレートに播種した。５日後、２５ｕＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏをアッセイプレートに添加した。ＣＣ_５０値は、発光シグナルで測定されるように、成長の５０％阻害をもたらす化合物濃度として定義された。ＣＣ_５０値を、一部位用量応答モデルを使用して、Ａｃｃｏｒｄ（オンラインツール）において計算して、シグモイド曲線フィットを生成した。

【表10】

全ての値はｎＭ単位。

【0266】

上記の表は、式Ｉの化合物が、化合物１、２、６、及び８と比較して、複数の細胞株（ＮＨＢＥ、ＳＡＥＣ、Ｈｕｈ－７、ＮＲＶＭ、ＰＢＭＣ、ＰＨＨ、及びＰＲＰＴ）にわたってより良好な二次細胞傷害性プロファイルを示すことを示す。
実施例３８．血漿安定性アッセイ

【0267】

血漿安定性のために、化合物をカニクイザル又はヒト血漿中２μＭで、３７℃で最大４時間インキュベートした。所望の時点で、インキュベーションからのアリコートを、内部標準で補足された９体積の１００％アセトニトリルを添加することによってクエンチした。最後の収集後、試料を３０００ｇで３０分間遠心分離し、上清を、トリプル四重極質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）に結合した液体クロマトグラフィによる分析のために等量の水を含有する新しいプレートに移した。データ（分析物対内部標準ピーク面積比）を半対数スケールでプロットし、指数関数的フィットを使用してフィッティングした。半減期（Ｔ_１／２）は、一次速度論を仮定して決定された。
実施例３９．Ｓ９画分における安定性アッセイ

【0268】

Ｓ９の安定性のために、化合物を、ＮＡＤＰＨ及びＵＤＰＧＡ（第Ｉ相及び第ＩＩ相補因子、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下で、３７℃で最大９０分間、カニクイザル又はヒト肝Ｓ９画分中２μＭでインキュベートした。化合物の添加後の所望の時点で、試料を、内部標準、５０％アセトニトリル、及び２５％メタノールを含有する９体積の水溶液でクエンチした。試料プレートを３０００ｇで３０分間遠心分離し、１０μＬの得られた溶液をＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。データ（分析物対内部標準ピーク面積比）を半対数スケールでプロットし、指数関数的フィットを使用してフィッティングした。半減期（Ｔ_１／２）は、一次速度論を仮定して決定された。

【表11】

【0269】

上記の表におけるデータは、式Ｉの化合物が、２、６、及び７の化合物よりも高い半減期（ヒト及びカニクイザルｈｅｐＳ９並びにヒト及びカニクイザル血漿）を有することを示す。
実施例４０．熱力学的溶解度アッセイ

【0270】

化合物の熱力学的溶解度は、リン酸緩衝生理食塩水溶液（ｐＨ７．４）及び１０ｍＭ塩酸（ｐＨ２．０）中の室温で決定された。過剰な固体化合物を使用して、化合物の水性試料を飽和させた。チューブを１０００ｒｐｍに設定した撹拌機上に置き、一定の撹拌下で４日間維持した。撹拌後、過剰な固体が全てのチューブに存在したことが確認された。チューブを１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離して過剰な固体を除去し、上清を新しいバイアルに移した。濃度分析をＵＰＬＣによって決定し、内部標準に対して定量化した。

【表12】

【0271】

上記の表に見られるように、式Ｉの化合物は、化合物２及び６よりもｐＨ２及び７の両方でより高い溶解度を有する。
実施例４１．ＮＨＢＥのインビトロでの細胞内三リン酸塩形成

【0272】

インビトロでの細胞内三リン酸塩形成を、以下のプロトコルを使用して、式Ｉの化合物及び化合物６について測定した。正常なヒト気管支気道上皮細胞（ＮＨＢＥ）（２５万細胞／ウェル）を、１０μＭの化合物と２６時間連続的にインキュベートした。選択された時点（２、４、６、及び２６時間）で、細胞外培地をウェルから除去し、細胞を２ｍＬの氷冷０．９％通常生理食塩水で２回洗浄し、１００ｎＭの２－クロロ－アデノシン－５’－三リン酸塩（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を内部標準として０．５ｍＬの氷冷７０％メタノールに抽出した。試料を－２０℃で一晩保存して、ヌクレオチド抽出を促進し、１５，０００×ｇで１５分間遠心分離し、次いで上清をＭｉＶａｃ Ｄｕｏ濃縮器（Ｇｅｎｅｖａｃ，Ｇａｒｄｉｎｅｒ，ＮＹ）で乾燥させるために清浄なチューブに移した。次いで、乾燥試料を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析するために、水中の１０ｍＭのジメチルヘキシルアミン（ＤＭＨＡ）を含む３ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ５．０）を含む移動相Ａで再構成した。これらの実験の結果を図１に示す。
実施例４２．ＰＢＭＣのインビトロでの細胞内三リン酸塩形成アッセイ

【0273】

インビトロでの細胞内三リン酸塩形成を、以下のプロトコルを使用して、式Ｉの化合物、並びに化合物２及び６について測定した。新たに単離されたＰＢＭＣは健康なドナーに由来し、実験の開始前に培養培地（Ｌ－グルタイミンを含むＲＰＭＩ １１６４）中の５００万細胞／ｍＬの濃度に懸濁した。１０ｍＬのＰＢＭＣアリコートを、キャップを緩めた５０ｍＬのコニカルチューブに移し、化合物を２μＭの最終濃度まで添加した。次いで、１ｍＬのアリコートを、試料当たり２４ウェルプレートのウェルに移した。ＰＢＭＣ－化合物混合物を、穏やかに撹拌しながら３７℃／５％ ＣＯ_２で２時間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを５０００ＲＰＭで３分間回転させ、細胞ペレットを乱すことなく上清を吸引した。即時分析を受けている試料について、試料を予冷した１×トリス緩衝生理食塩水に再懸濁し、０．５ｍＬのｎｙｏｓｉｌ Ｍ２５を含有する１．５ｍＬのコニカルチューブに移した。次いで、試料／油のアリコートを１３，０００ＲＰＭで１分間回転させた。遠心分離後、油層を乱すことなく、全ての培地をチューブから吸引した。油層の上に水を添加し、回転／吸引プロセスを繰り返し、続いて追加の水洗浄を行った。第２の洗浄ステップの後、全ての油及び水を除去し、細胞ペレットをドライアイスで急速凍結し、更に処理するまで－８０℃で保存した。即時分析を受けていない試料を無血清培養培地で２回洗浄し、１ｍＬの培養培地に再懸濁し、それらが前述のプロトコルによって処理されるまで３７ｃ／５％ ＣＯ_２でインキュベートした。各ＰＢＭＣ試料を、５００μＬのドライアイス冷抽出緩衝液（７０％メタノール、内部標準として０．５μＭのクロロ－アデノシン三リン酸塩を含む）で処理した。上記の溶液を５分間ボルテックスし、次いで２０，０００×ｇで２０分間遠心分離した。上清を清浄な１．５ｍＬのエッペンドルフバイアルに移し、遠心分離蒸発器に装填した。乾燥させたら、試料を８０μＬの移動相Ａで再構成し、２０，０００×ｇで２０分間遠心分離し、上清を分析のためにＨＰＬＣ注入バイアルに移した。１０μＬのアリコートをＳｃｉｅｘ ６５００ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。ＰＢＭＣの標準較正曲線を、試料当たりの化合物のｐｍｏｌに基づいて構築した。次いで、各試料からの値を試料中の細胞の総数で除算して、百万個の細胞当たりのｐｍｏｌを得る。次いで、細胞当たり０．２ｐＬの細胞内体積を使用して、マイクロモル濃度を導出した。これらの実験の結果を図２に示す。

【0274】

図１及び図２に見られるように、式Ｉの化合物は、化合物２及び／又は６と比較して、ＮＨＢＥにおいて等しいか、又はより良いインビトロでの細胞内ＮＴＰ（ヌクレオチド三リン酸塩）形成を示すが、ＰＢＭＣにおいて低いことを示す。これは、式Ｉの化合物が、化合物２及び／又は６と比較して、ＰＢＭＣに対してＮＨＢＥ（標的細胞型）においてより選択的な代謝を受けることを示唆している。
実施例４３．動物薬物動態アッセイ

【0275】

式Ｉ及び６の化合物についての動物ＰＫ研究を、以下の化合物プロトコルを使用して行った。体重３～６ｋｇの動物を、研究の生命部分に使用した。試験物品は、ｐＨ３の水中の１２％カプチゾールの水溶液として、１０ｍｇ／ｋｇ体重で、３０分間にわたって定速注入によって雄カニクイザルに静脈内投与した。投与後０．２５、０．５、１、１．５、２、４、８、及び２４時間で血漿試料を収集し、投与後２時間及び２４時間でＰＢＭＣ試料を収集した。

【0276】

血液試料（およそ１ｍＬ）を、Ｋ_２ＥＤＴＡを含む予め冷却した収集チューブに収集し、４℃で遠心分離して血漿を分離した。ＰＢＭＣ収集のために、およそ８ｍＬの血液試料を室温で、単離のためにヘパリンナトリウムを含有するＣＰＴバキュテイナチューブに収集した。各末端収集では、動物を麻酔し、動物が生存している間に肺を採取した。収集した肺を、除去直後に液体窒素中で瞬間凍結させた。

【0277】

薬物動態研究からの血漿試料は、内部標準として５－ヨード結節を含有する７５％の最終濃度にアセトニトリルを添加することによってタンパク質沈殿に供された。血漿試料中の分析物を、０．２％ギ酸を含有する移動相と、２５０μＬ／分の流量で２％～１００％アセトニトリルの直線勾配とを使用して、７分間にわたって４μｍの１５０×２ｍｍのＳｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ－ＲＰカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）で分離した。５．１～５０００ｎＭのブランク血漿で覆われた濃度で調製された８つの点標準曲線であり、０．９９のＲ２値を超える直線性を示した。２０％以内の正確性及び精度を確保するために、血漿中の１２０及び３，０００ｎＭの別個の調製された品質管理試料を、各試料セットの開始及び終了時に分析した。

【0278】

各ＰＢＭＣ試料を、７０％メタノール中の６７ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ethylenediamine tetraacetic acid、ＥＤＴＡ）を含有する５００μＬの抽出緩衝液で、０．５μＭのクロロ－アデノシン三リン酸塩を内部標準として用いて処理した。抽出緩衝液をドライアイス上で冷却した。上記の溶液を５分間ボルテックスし、次いで２０，０００×ｇで２０分間遠心分離した。上清を清浄な１．５ｍＬのエッペンドルフバイアルに移し、遠心分離蒸発器に装填した。乾燥させたら、試料を８０μＬの１ｍＭのリン酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ＝７）で再構成し、２０，０００×ｇで２０分間遠心分離し、上清を分析のためにＨＰＬＣ注入バイアルに移した。１０μＬのアリコートを、ＡＰＩ ５０００ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。代謝産物の細胞内濃度を計算するために、各試料中の細胞の総数を、総ＤＮＡカウント法を使用して決定した（Ｂｅｎｅｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｕｓｉｎｇ ａ ＤＮＡ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ．２００４ Ｊｕｌｙ １；３３０（１）：１７２－４）。ＰＢＭＣの標準較正曲線を、試料当たりの化合物のｐｍｏｌに基づいて構築した。次いで、各試料からの値を試料中の細胞の総数で除算して、百万個の細胞当たりのｐｍｏｌを得た。次いで、細胞当たり０．２ｐＬの細胞内体積を使用して、マイクロモル濃度を導出した。

【0279】

肺試料は、より小さい断片に切片化し、ドライアイス上に保持された予め秤量された１５ｍＬのコニカルチューブに分配することによって調製された。氷冷抽出緩衝液（０．５μＭのクロロ－アデノシン三リン酸塩を内部標準として含む７０％メタノール中の０．１％のＫＯＨ及び６７ｍＭのエチレンジアミン四酢酸、約２ｍＬ）を、約０．５ｇの各肺試料に添加した。混合物を、使い捨ての硬組織ホモジナイザープローブ（Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を用いて、Ｏｍｎｉ－Ｔｉｐ ＴＨ（商標）を使用して迅速に均質化した。ホモジネートのアリコートを、０．２μｍの９６ウェルポリプロピレンフィルタープレート（Ｖａｒｉａｎ Ｃａｐｔｉｖａ（商標））を使用することによって濾過した。濾液を蒸発乾固させ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析の前に等量の１ｍＭリン酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ＝７）で再構成した。

【0280】

ヌクレオシド三リン酸塩の定量化は、イオン対合ヌクレオチド検出ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用した。分析物は、１０ｍＭのジメチルヘキシルアミン（ＤＭＨ）を含む３ｍＭのリン酸アンモニウム（ｐＨ５）を含有するイオン対合緩衝液、及び１０％～５０％のアセトニトリルからの多段線状勾配を使用して、２．５μｍの２．０×５０ｍｍのＬｕｎａ Ｃ１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）によって１６０μＬ／分の流量で１１分間にわたって分離した。ブランクマトリックスで調製された７点標準曲線は、２４．０～１７，５００ｎＭの濃度をカバーし、Ｒ^２値０．９９の過剰で直線性を示した。

【0281】

これらの実験の結果を図３及び以下の表に示す。

【表13】

【0282】

見られるように、式Ｉの化合物は、カニクイザルＰＫ研究においてより高い肺ＮＴＰ濃度及びより低いＰＢＭＣ ＮＴＰ濃度を示す。これは、化合物６と比較して、式Ｉの化合物が、ＰＢＭＣに対して肺組織においてより選択的な代謝を受けることを示す。

【0283】

上述の発明は、理解を明確にするために、説明及び例示としてある程度詳細に説明されているが、当業者であれば、特定の変更及び修正が添付の特許請求の範囲の範囲内で実施され得ることを理解するであろう。加えて、本明細書に提供される各参照は、各参照が参照により個別に組み込まれているかのように、その全体が参照により組み込まれる。本出願と、本明細書に提供される参照との間に矛盾が存在する場合、本出願が支配するものとする。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
式Ｉの化合物、

【化43】

又はその薬学的に許容される塩。
(項目２)
治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、医薬製剤。
(項目３)
Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、前記ヒトに投与することを含む、方法。
(項目４)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、項目３に記載の方法。
(項目５)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、項目３に記載の方法。
(項目６)
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、前記ヒトに投与することを含む、方法。
(項目７)
前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、項目６に記載の方法。
(項目８)
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、前記ヒトに投与することを含む、方法。
(項目９)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１０)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１１)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１２)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１３)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１４)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、項目８に記載の方法。
(項目１５)
Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行う方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、前記ヒトに投与することを含む、方法。
(項目１６)
前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、項目１５に記載の方法。
(項目１７)
Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。
(項目１８)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、項目１７に記載の方法。
(項目１９)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、項目１７に記載の方法。
(項目２０)
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。
(項目２１)
前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、項目２０に記載の方法。
(項目２２)
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。
(項目２３)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２４)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２５)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２６)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２７)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２８)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、項目２２に記載の方法。
(項目２９)
Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とする、方法。
(項目３０)
前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、項目２９に記載の方法。
(項目３１)
Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
(項目３２)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、項目３１に記載の使用。
(項目３３)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、項目３１に記載の使用。
(項目３４)
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
(項目３５)
前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、項目３４に記載の使用。
(項目３６)
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
(項目３７)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目３８)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目３９)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目４０)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目４１)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目４２)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、項目３６に記載の使用。
(項目４３)
Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症のヒトにおける治療のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。
(項目４４)
前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、項目４３に記載の使用。
(項目４５)
Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目４６)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス感染症である、項目４５に記載の化合物。
(項目４７)
前記Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ感染症である、項目４５に記載の化合物。
(項目４８)
Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目４９)
前記Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症である、項目４８に記載の化合物。
(項目５０)
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目５１)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、デングウイルス感染症である、項目５０に記載の化合物。
(項目５２)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、黄熱ウイルス感染症である、項目５０に記載の化合物。
(項目５３)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ウェストナイルウイルス感染症である、項目５０に記載の化合物。
(項目５４)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、ジカウイルス感染症である、項目５０に記載の化合物。
(項目５５)
Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症の治療を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目５６)
前記Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、エボラウイルス感染症である、項目５５に記載の化合物。
(項目５７)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルス感染症である、項目５５に記載の使用。
(項目５８)
前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス感染症が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、項目５５に記載の使用。
(項目５９)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を前記ヒトに投与することを含み、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、方法。
(項目６０)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための方法であって、治療有効量の項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を前記ヒトに投与することを含み、前記呼吸器状態が、喘息である、方法。
(項目６１)
前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、項目５９又は６０に記載の方法。
(項目６２)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とし、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、方法。
(項目６３)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うための医薬品を製造するための方法であって、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩が使用されることを特徴とし、前記呼吸器状態が、喘息である、方法。
(項目６４)
前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、項目６２又は６３に記載の方法。
(項目６５)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化のヒトにおける治療又は予防のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、使用。
(項目６６)
ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化のヒトにおける治療又は予防のための医薬品の製造のための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用であて、前記呼吸器状態が、喘息である、使用。
(項目６７)
前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、項目６５又は６６に記載の使用。
(項目６８)
前記呼吸器状態が、慢性閉塞性肺疾患である、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目６９)
前記呼吸器状態が、喘息である、ウイルス感染症による呼吸器状態の悪化の治療又は予防を必要とするヒトにおいてそれを行うことに使用するための、項目１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
(項目７０)
前記ウイルス感染症が、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、又はｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓによって引き起こされる、項目６８又は６９に記載の使用。
(項目７１)
式Ｉ－１１の化合物を作製する方法であって、

【化44】

（ｉ）式Ｉ－７の化合物：

【化45】

及び
（ｉｉ）式Ｉ－１２の化合物：

【化46】

を、ＮｄＣｌ _３ 及びテトラブチルアンモニウムクロリドの存在下で反応させることを含み、式中、Ｒが、ヒドロキシル保護基である、方法。
(項目７２)
Ｒが、ベンジル基である、項目７１に記載の方法。
(項目７３)
Ｒが、シリル保護基である、項目７１に記載の方法。
(項目７４)
Ｒが、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）である、項目７３に記載の方法。
(項目７５)
式Ｉ－６の化合物を作製する方法であって、

【化47】

（ｉ）式Ｉ－７の化合物：

【化48】

及び
（ｉｉ）式Ｉ－５の化合物：

【化49】

を、ＮｄＣｌ _３ 及びテトラブチルアンモニウムクロリドの存在下で反応させることを含み、式中、Ｒが、ヒドロキシル保護基である、方法。
(項目７６)
Ｒが、ベンジル基である、項目７５に記載の方法。
(項目７７)
Ｒが、シリル保護基である、項目７５に記載の方法。
(項目７８)
Ｒが、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）である、項目７７に記載の方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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