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特許7433684疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-02-09
(45)【発行日】2024-02-20
(54)【発明の名称】疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法
(51)【国際特許分類】
C07C 69/36 20060101AFI20240213BHJP
C07C 69/92 20060101ALI20240213BHJP
C07C 235/48 20060101ALI20240213BHJP
C07H 21/02 20060101ALI20240213BHJP
C07H 21/04 20060101ALI20240213BHJP
【ＦＩ】
C07C69/36
C07C69/92 CSP
C07C235/48
C07H21/02
C07H21/04
【請求項の数】
7
(21)【出願番号】P 2023085573
(22)【出願日】2023-05-24
【審査請求日】2023-05-31
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】397074172
【氏名又は名称】塩野フィネス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110001427
【氏名又は名称】弁理士法人前田特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】藤村 一真
(72)【発明者】
【氏名】木村 元紀
【審査官】早川 裕之
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１０－２７５２５４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０２０－０１１９３２（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１２／１５７７２３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１７／０８６３９７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／２２７６１８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Asian J. Chem.，2014年，26，6364-6366
【文献】Tetrahedron Lett.，2010年，51，240-243
【文献】Nucleosides & Nucleotides，1996年，15，1871-1889
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｃ
Ｃ０７Ｆ
Ｃ０７Ｈ ２１／
Ｃ０７Ｄ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に用いられる疑似固相保護基であって、一般式（１ｗｏ）で表され、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造を有する、疑似固相保護基。
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１ｗｏ）
（一般式（１ｗｏ）中、－ＯＭはヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基を示し、Ｍは水素原子（Ｈ）又はアルカリ金属原子を示し、
ａ）Ｘは炭素数２～１２のアルキレン基、－（ＣＨ ２ ） ｐ －Ｏ－（ＣＨ ２ ） ｐ －基（ｐは２～６の整数を示す）若しくはアリーレン基（炭素数１～３のアルキレン基で置換されていてもよい）；Ｙはエーテル結合、－ＯＣＯ－若しくは－ＮＲＣＯ－（Ｎは窒素原子を示し、ＲはＨ又は炭素数１～６のアルキル基を示す）；かつＺは炭素数１０～３０のアルコキシ基２個若しくは３個が結合されたジ若しくはトリアルコキシフェニル基、若しくは炭素数１０～３０のアルコキシ基２個若しくは３個が結合されたジ若しくはトリアルコキシアルキル基を示す、又は
ｂ）Ｘ及びＹは単結合；かつＺは炭素数１０～３０のアルコキシ基２個若しくは３個が結合されたジ若しくはトリアルコキシアルキル基を示す。）
【請求項2】
疑似固相保護基の結合により、３’位ヒドロキシ基が保護されたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体であって、疑似固相保護基が請求項１に記載の疑似固相保護基である、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体。
【請求項3】
請求項２に記載のオリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基が選択的に脱保護されたオリゴアミダイト前駆体を製造する方法であって、上記オリゴヌクレオチド保護体と、求核剤及び塩基とを混合することにより、該オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基を選択的に除去する選択的脱保護工程を備える、オリゴアミダイト前駆体の製造方法。
【請求項4】
上記求核剤は、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、メタノール、エチレングリコール、１，１０－デカンジチオール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール及び２－アミノフェノールからなる群より選択される少なくとも一種を含む、請求項３に記載のオリゴアミダイト前駆体の製造方法。
【請求項5】
上記塩基は、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン、ピリジン及びリン酸水素二カリウムからなる群より選択される少なくとも一種を含む、請求項３又は４に記載のオリゴアミダイト前駆体の製造方法。
【請求項6】
請求項２に記載のオリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基が選択的に脱保護されたオリゴアミダイト前駆体を製造する方法であって、上記オリゴヌクレオチド保護体と、脂肪族アミノアルコールとを混合することにより、該オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基を選択的に除去する選択的脱保護工程を備える、オリゴアミダイト前駆体の製造方法。
【請求項7】
上記脂肪族アミノアルコールは、２－（メチルアミノ）エタノール、２－［（ヒドロキシメチル）アミノ］エタノール及びジエタノールアミンからなる群より選択される少なくとも一種を含む、請求項６に記載のオリゴアミダイト前駆体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【0002】
一般に、オリゴヌクレオチドの製造方法として、自動合成装置を使用したホスホロアミダイト法による固相合成法が最も汎用されている。近年、核酸医薬の開発増加に伴い、原薬成分であるオリゴヌクレオチドを大量に製造する方法に対する需要が高まっているが、固相合成法では１回の製造スケールの限界が数キログラム程度であるため、より大量製造が可能な方法として液相合成法の開発が進められている。
【0003】
液相合成法として、従来の課題であった精製操作の煩雑さを解消するため、疑似固相保護基を用いたオリゴヌクレオチド保護体の製造方法が提案されている（例えば特許文献１～３）。また近年では、目的のオリゴヌクレオチドに対して鎖長がＮ－１およびＮ＋１の副生成物を低減する目的で、予め調製した２量体（２ｍｅｒ）以上のオリゴアミダイトを縮合に用いるブロック合成法が開発されている（例えば先行文献４）。
【0004】
ここで、オリゴアミダイトの前駆体となる核酸塩基やリン酸基が保護されたオリゴアミダイト前駆体を合成するためには、疑似固相保護基を除去する選択的脱保護工程が必要になる（例えば非特許文献１や特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】特開２０１０－２７５２５４号公報
【文献】国際公開第２０１２／１５７７２３号
【文献】国際公開号２０１７／０８６３９７号
【文献】国際公開第２０２０／２２７６１８号
【文献】特開２０２０－０１１９３２号公報
【非特許文献】
【0006】
【文献】Y. Matsuno, et al., Org. Lett., 2016, 18, 800-803
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかしながら、特許文献１～３に記載の液相合成方法では、オリゴアミダイト前駆体の合成（疑似固相保護基の選択的脱保護）については触れられていない。
【0008】
特許文献４に記載の２ｍｅｒ以上のオリゴアミダイトを用いたオリゴヌクレオチド保護体のブロック合成法では、３’末端側のビルディングブロックは疑似固相保護基を使用して合成しているのに対し、５’末端側のビルディングブロック（オリゴアミダイト）の合成には疑似固相保護基ではなく、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ基）が使用されており、選択的脱保護により高い収率でオリゴアミダイト前駆体を得るためには、危険なフッ化水素酸を過剰量使用しなければならない。また、ＴＢＤＭＳ基はＲＮＡ合成の際に２’位ヒドロキシ基の保護基として一般的に使用されているが、その場合は３’位ヒドロキシ基を保護したＴＢＤＭＳ基の選択的脱保護が困難であるため、２’位ヒドロキシ基がＴＢＤＭＳ基で保護されたＲＮＡ型のオリゴアミダイト合成には適用できないと考えられる。
【0009】
非特許文献１に記載の工程では、Ｐｄ触媒を用いる接触還元により疑似固相保護基の除去が行われているが、毒性のある重金属や危険な水素ガスを使用しなければならない。また、この工程では２０～４０時間程度の長時間を要する。特許文献５に記載の工程では、水素化ホウ素リチウムを用いて疑似固相保護基の選択的脱保護が行われているが、水素化ホウ素リチウムは空気中の水分により失活するため取り扱いに注意が必要であり、水と反応して水素ガスを発生するため、火災や発泡による吹きこぼれなどの事故を招く危険性がある。また、２’位にフッ素やメトキシ基、ＴＢＤＭＳ基で保護されたヒドロキシ基などの置換基を有するＲＮＡの合成では、選択的脱保護の収率は５３～６７％であり、収率に課題が認められる。
【0010】
このように、従来の疑似固相保護基では、オリゴアミダイトの前駆体となる核酸塩基やリン酸基が保護されたオリゴアミダイト前駆体を合成するために必要な疑似固相保護基の選択的脱保護工程において、重金属や水素ガス、水素化ホウ素リチウムなどの有害または危険な試薬を使用する必要があるため、大量製造を実施するには取り扱いの点で課題が存在し、改善が求められている。
【0011】
本開示は斯かる点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に用いられ、取り扱い容易な化合物を用いて選択的に脱保護可能な疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0012】
核酸医薬品の原薬であるオリゴヌクレオチドを製造する技術として、大量製造を目的とした疑似固相保護基を用いる液相合成法と、副生成物の低減を目的としたブロック合成法という、これら２つの技術を組み合わせることで、より純度の高いオリゴヌクレオチドの大量製造が可能になると考えられるが、その実現にはオリゴアミダイト前駆体の大量製造法を確立する必要がある。そこで、本発明者らは、オリゴアミダイト前駆体の大量製造を目的として、オリゴヌクレオチド保護体の核酸塩基やリン酸基の保護基を損なうことなく、選択的に除去可能な疑似固相保護基の研究を進めた結果、取り扱いの容易な求核剤と塩基の組み合わせ又は特定の脂肪族アミノアルコールを用いて選択的に脱保護可能な疑似固相保護基を見出した。
【0013】
本開示は、具体的には以下のとおりである。本開示の疑似固相保護基は、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に用いられる疑似固相保護基であって、一般式（１）：ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１）
（一般式（１）中、－ＯＭはヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基を示し、Ｍは水素原子（Ｈ）又はアルカリ金属原子を示し、Ｗは酸素原子（Ｏ）、硫黄原子（Ｓ）又はＮＲ（Ｎは窒素原子を示し、ＲはＨ又は炭素数１～６のアルキル基を示す）を示し、Ｘは単結合、炭素数１～１２のアルキレン基（エーテル結合（－Ｏ－）を有していてもよい）、アリーレン基（炭素数１～３のアルキレン基で置換されていてもよい）又は２価の複素環基を示し、Ｙは単結合、エーテル結合、－ＯＣＯ－、－ＮＲＣＯ－（Ｒは上記と同じ）、－ＣＯ－又は－ＳＣＯ－を示し、Ｚは炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基又はアルコキシアルキル基を示す。）
で表され、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造を有する。
（一般式（１）中、－ＯＭはヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基を示し、Ｍは水素原子（Ｈ）又はアルカリ金属原子を示し、Ｗは酸素原子（Ｏ）、硫黄原子（Ｓ）又はＮＲ（Ｎは窒素原子を示し、ＲはＨ又は炭素数１～６のアルキル基を示す）を示し、Ｘは単結合、炭素数１～１２のアルキレン基（エーテル結合（－Ｏ－）を有していてもよい）、アリーレン基（炭素数１～３のアルキレン基で置換されていてもよい）又は２価の複素環基を示し、Ｙは単結合、エーテル結合、－ＯＣＯ－、－ＮＲＣＯ－（Ｒは上記と同じ）、－ＣＯ－又は－ＳＣＯ－を示し、Ｚは炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基又はアルコキシアルキル基を示す。）
で表され、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造を有する。
【0014】
本開示のヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体は、疑似固相保護基の結合により、３’位ヒドロキシ基が保護されたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体であって、疑似固相保護基が上記疑似固相保護基である。
【0015】
本開示のオリゴアミダイト前駆体の製造方法は、上記オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基が選択的に脱保護されたオリゴアミダイト前駆体を製造する方法であって、上記オリゴヌクレオチド保護体と、求核剤及び塩基とを混合することにより、該オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基を選択的に除去する選択的脱保護工程を備える。上記求核剤は、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、メタノール、エチレングリコール、１，１０－デカンジチオール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール及び２－アミノフェノールからなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい。上記塩基は、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン、ピリジン及びリン酸水素二カリウムからなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい。
【0016】
また、本開示のオリゴアミダイト前駆体の製造方法は、上記オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基が選択的に脱保護されたオリゴアミダイト前駆体を製造する方法であって、上記オリゴヌクレオチド保護体と、脂肪族アミノアルコールとを混合することにより、該オリゴヌクレオチド保護体から上記疑似固相保護基を選択的に除去する選択的脱保護工程を備える。上記脂肪族アミノアルコールは、２－（メチルアミノ）エタノール、２－［（ヒドロキシメチル）アミノ］エタノール及びジエタノールアミンからなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい。
【発明の効果】
【0017】
以上説明したように、本開示によれば、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に用いられ、取り扱い容易な化合物を用いて選択的に脱保護可能な疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下、本実施の形態を詳細に説明する。以下の好ましい実施形態の説明は、本質的に例示に過ぎず、本発明、その適用物或いはその用途を制限することを意図するものでは全くない。
【0019】
＜疑似固相保護基＞
本実施形態に係る疑似固相保護基は、従来の疑似固相保護基と同様に、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に使用される。疑似固相保護基は、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合して、当該３’位ヒドロキシ基を保護する保護基をいう。
本実施形態に係る疑似固相保護基は、従来の疑似固相保護基と同様に、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に使用される。疑似固相保護基は、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合して、当該３’位ヒドロキシ基を保護する保護基をいう。
【0020】
本実施形態に係る疑似固相保護基は、一般式（１）：
［化１］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１）
で表される（以下「疑似固相保護基（１）」とも称する）。疑似固相保護基（１）は、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造「ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ」を有する。疑似固相保護基（１）は、３’位ヒドロキシ基との結合部位側の分子末端にシュウ酸構造を有する点で、従来の疑似固相保護基とは構造が異なる。そして、当該分子末端にシュウ酸構造を有する疑似固相保護基（１）と、特定の化合物（以下「脱保護剤」とも称する）との組み合わせにより、疑似固相保護基（１）の選択的脱保護という所望の効果が得られる。なお、従来の疑似固相保護基は、同条件（脱保護剤との組み合わせ）では脱保護されない。
［化１］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１）
で表される（以下「疑似固相保護基（１）」とも称する）。疑似固相保護基（１）は、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造「ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ」を有する。疑似固相保護基（１）は、３’位ヒドロキシ基との結合部位側の分子末端にシュウ酸構造を有する点で、従来の疑似固相保護基とは構造が異なる。そして、当該分子末端にシュウ酸構造を有する疑似固相保護基（１）と、特定の化合物（以下「脱保護剤」とも称する）との組み合わせにより、疑似固相保護基（１）の選択的脱保護という所望の効果が得られる。なお、従来の疑似固相保護基は、同条件（脱保護剤との組み合わせ）では脱保護されない。
【0021】
また、疑似固相保護基（１）は、オリゴヌクレオチド合成の一般的な全脱保護条件においても脱保護される。さらに、疑似固相保護基（１）は、当該全脱保護条件において、従来の疑似固相保護基よりも速やかに脱保護される。これらより、疑似固相保護基（１）は、オリゴヌクレオチド合成に好適に利用可能である。
【0022】
一般式（１）において、シュウ酸構造の一端を構成する「－ＯＭ」はヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基を示す。
【0023】
「Ｍ」は水素原子（Ｈ）又はアルカリ金属原子を示す。アルカリ金属の種類は特に限定されず、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウム、フランシウム等が挙げられる。好ましくはカリウムである。
【0024】
一般式（１）において、シュウ酸構造の他端を構成する「Ｗ」は酸素原子（Ｏ）、硫黄原子（Ｓ）又はＮＲを示す。「Ｎ」は窒素原子を示す。「Ｒ」はＨ又は炭素数１～６のアルキル基を示す（以下同様）。「Ｗ」の中では、「Ｏ」が好ましい。
【0025】
炭素数１～６のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基が挙げられる。炭素数１～６のアルキル基の中では、炭素数１～６の直鎖状アルキル基が好ましく、メチル基がより好ましい。なお、－Ｗ－Ｘ－（ＷはＮＲを示す）で２価の複素環（ヘテロ環）基を形成してもよい。
【0026】
一般式（１）において、「Ｘ」（－Ｘ－）は単結合；２価の基として炭素数１～１２のアルキレン基（エーテル結合（－Ｏ－）を有していてもよい）、アリーレン基（炭素数１～３のアルキレン基で置換されていてもよい）又は２価の複素環基を示す。
【0027】
炭素数１～１２のアルキレン基は、例えば、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、イソブチレン基、ｔｅｒｔ－ブチレン基、ｓｅｃ－ブチレン基、ペンチレン基、イソペンチレン基、ネオペンチレン基、ヘキシレン基、イソへキシレン基、３－メチルペンチレン基、ヘプチレン基、オクチレン基、ノニレン基、デシレン基、ウンデシレン基、ドデシレン基等の直鎖状又は分枝鎖状アルキレン基が挙げられる。
【0028】
エーテル結合を有する炭素数１～１２のアルキレン基は、－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－基（エーテル結合を有するジアルキレン基）で示される。ｐは１～６の整数を示し、好ましくは１～３の整数である。例えば、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－基（エーテル結合を有するジエチレン基）等が挙げられる。
【0029】
アリーレン基は、単環式又は２環式～６環式の芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ジヒドロフェナントレン又はフルオレン等）から、環を構成する炭素原子に直接結合する水素原子２個を除いた基である。例えばフェニレン基（－Ｃ６Ｈ４－）等が挙げられる。
【0030】
炭素数１～３のアルキレン基で置換された（炭素数１～３のアルキレン基を有する）アリーレン基は、上記の環を構成する炭素原子に直接結合する水素原子２個を炭素数１～３のアルキレン基でそれぞれ置換した基である。例えば－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ６Ｈ４－（ＣＨ２）ｑ－基（ジメチレン基置換フェニレン基、キシレンのメチル基がメチレン基に置換された基）等が挙げられる。ｑは１～３の整数を示す。
【0031】
２価の複素環基は、単環式又は２環式～６環式の複素環式化合物（例えば、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピロリジン、ピぺリジン、ピペラジン等）から、環を構成する原子（好ましくは炭素原子及び／又は窒素原子）に直接結合する水素原子２個を除いた基である。例えば、２価のピペリジン環構造含有基（以下「－（ｐｉｐｅｒｉ）－」とも称する）、２価のピペラジン環構造含有基（以下「－（ｐｉｐｅｒａ）－」とも称する）等が挙げられる。なお、２価のピペラジン環構造含有基は、－Ｗ－Ｘ－（ＷはＮＲを示す）で構成されていてもよい（以下「－Ｎ（ｐｉｐｅｒａ）－」とも称する）。
【0032】
一般式（１）において、「Ｙ」（－Ｙ－）は単結合；２価の基としてエーテル結合（－Ｏ－）、－ＯＣＯ－（－ＯＣ（＝Ｏ）－）、－ＮＲＣＯ－（－（Ｒ）ＮＣ（＝Ｏ）－）、－ＣＯ－（－Ｃ（＝Ｏ）－）又は－ＳＣＯ－（－ＳＣ（＝Ｏ）－）を示す。
【0033】
一般式（１）において、「Ｚ」（－Ｚ）は炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基又はアルコキシアルキル基を示す。
【0034】
炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基は、ベンゼン環を構成する炭素原子に直接結合する水素原子を炭素数１０～３０のアルコキシ基で置換したフェニル基を示す。例えば、アルコキシ基２個が結合されたジアルコキシフェニル基、アルコキシ基３個が結合されたトリアルコキシフェニル基等が挙げられる。この中では、トリアルコキシフェニル基が好ましい。
【0035】
炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシアルキル基は、炭素数１～６の直鎖状又は分枝鎖状アルキル基（上記と同じ）を構成する炭素原子に直接結合する水素原子を炭素数１０～３０のアルコキシ基で置換したアルキル基を示す。例えば、アルコキシメチル基、アルコキシエチル基、アルコキシプロピル基、ジアルコキシイソプロピル基、アルコキシブチル基、アルコキシペンチル基、アルコキシヘキシル基が挙げられる。この中では、アルコキシ基２個が結合されたジアルコキシイソプロピル基が好ましい。
【0036】
疑似固相保護基（１）の中では、
・一般式（１ｗｏ）：
［化２］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１ｗｏ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｎ）：
［化３］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１ｗｎ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎ）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｏ）は、ＷがＯを示すシュウ酸エステル構造を有する。疑似固相保護基（１ｗｎ）は、ＷがＮＲを示すシュウ酸アミド構造を有する。
・一般式（１ｗｏ）：
［化２］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１ｗｏ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｎ）：
［化３］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ－Ｘ－Ｙ－Ｚ （１ｗｎ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎ）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｏ）は、ＷがＯを示すシュウ酸エステル構造を有する。疑似固相保護基（１ｗｎ）は、ＷがＮＲを示すシュウ酸アミド構造を有する。
【0037】
シュウ酸エステル構造の疑似固相保護基（１ｗｏ）の中では、
・一般式（１ｗｏｘｅ）：
［化４］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－Ｙ－Ｚ （ｐは１～６の整数を示す） （１ｗｏｘｅ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｅ）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘｐ）：
［化５］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ６Ｈ４－（ＣＨ２）ｑ－Ｙ－Ｚ （ｑは１～３の整数を示す） （１ｗｏｘｐ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｐ）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘ－）：
［化６］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ－Ｚ （１ｗｏｘ－）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘ－）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘｈ）：
［化７］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ｐｉｐｅｒｉ）－Ｙ－Ｚ （１ｗｏｘｈ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｈ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｏｘａ）：
［化８］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｒ－Ｙ－Ｚ （ｒは１～１２の整数を示す。但し、Ｙは－ＯＣＯ－及び－ＮＲＣＯ－を除く。） （１ｗｏｘａ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘａ）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｏｘｅ）では、Ｘが「エーテル結合を有するジアルキレン基」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘｐ）では、Ｘが「ジアルキレン基置換フェニレン基」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘ－）では、Ｘが「単結合」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘｈ）では、Ｘが「２価のピペリジン環構造含有基」（２価の複素環基）を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘａ）では、Ｘが「炭素数１～１２のアルキレン基」を示し、Ｙが－ＯＣＯ－及び－ＮＲＣＯ－以外の基を示す。
・一般式（１ｗｏｘｅ）：
［化４］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－Ｙ－Ｚ （ｐは１～６の整数を示す） （１ｗｏｘｅ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｅ）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘｐ）：
［化５］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ６Ｈ４－（ＣＨ２）ｑ－Ｙ－Ｚ （ｑは１～３の整数を示す） （１ｗｏｘｐ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｐ）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘ－）：
［化６］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｙ－Ｚ （１ｗｏｘ－）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘ－）」とも称する）、
・一般式（１ｗｏｘｈ）：
［化７］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ｐｉｐｅｒｉ）－Ｙ－Ｚ （１ｗｏｘｈ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘｈ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｏｘａ）：
［化８］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ＣＨ２）ｒ－Ｙ－Ｚ （ｒは１～１２の整数を示す。但し、Ｙは－ＯＣＯ－及び－ＮＲＣＯ－を除く。） （１ｗｏｘａ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｏｘａ）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｏｘｅ）では、Ｘが「エーテル結合を有するジアルキレン基」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘｐ）では、Ｘが「ジアルキレン基置換フェニレン基」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘ－）では、Ｘが「単結合」を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘｈ）では、Ｘが「２価のピペリジン環構造含有基」（２価の複素環基）を示す。疑似固相保護基（１ｗｏｘａ）では、Ｘが「炭素数１～１２のアルキレン基」を示し、Ｙが－ＯＣＯ－及び－ＮＲＣＯ－以外の基を示す。
【0038】
シュウ酸アミド構造の疑似固相保護基（１ｗｎ）の中では、
・一般式（１ｗｎｘｈ）：
［化９］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ｐｉｐｅｒａ）－Ｙ－Ｚ （１ｗｎｘｈ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎｘｈ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｎｘ－）：
［化１０］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ－Ｙ－Ｚ （１ｗｎｘ－）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎｘ－）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｎｘｈ）では、－Ｗ－Ｘ－（ＷはＮＲを示す）が「２価のピペラジン環構造含有基」（２価の複素環基）を示す。疑似固相保護基（１ｗｎｘ－）では、Ｘが「単結合」を示す。
・一般式（１ｗｎｘｈ）：
［化９］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ｐｉｐｅｒａ）－Ｙ－Ｚ （１ｗｎｘｈ）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎｘｈ）」とも称する）及び
・一般式（１ｗｎｘ－）：
［化１０］
ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ－Ｙ－Ｚ （１ｗｎｘ－）
で表される基（以下「疑似固相保護基（１ｗｎｘ－）」とも称する）が好ましい。疑似固相保護基（１ｗｎｘｈ）では、－Ｗ－Ｘ－（ＷはＮＲを示す）が「２価のピペラジン環構造含有基」（２価の複素環基）を示す。疑似固相保護基（１ｗｎｘ－）では、Ｘが「単結合」を示す。
【0039】
疑似固相保護基（１）の具体的化合物を以下の表１に示す。なお、表１中の番号は、括弧書きで記載した番号以外、以下の実施例に記載の化合物の番号に対応する。
【0040】
【表1】
【0041】
表１に示す疑似固相保護基（１）の具体的化合物の中では、化合物５、４７、５３、５８、６５、６６及び６７が好ましく、化合物５、４７、５３、５８、６６及び６７がより好ましく、化合物５、４７、５３及び５８がさらに好ましく、化合物５及び５３がさらに一層好ましい。
【0042】
＜疑似固相保護基の製造方法＞
疑似固相保護基（１）の製造方法は、特に限定されず、一般に公知の方法を用いて合成される。具体的な合成方法としては、例えば以下の実施例に記載の方法が挙げられる。
疑似固相保護基（１）の製造方法は、特に限定されず、一般に公知の方法を用いて合成される。具体的な合成方法としては、例えば以下の実施例に記載の方法が挙げられる。
【0043】
＜ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体＞
ヌクレオシド保護体とは、３’位ヒドロキシ基に疑似固相保護基が結合されたヌクレオシド（１量体）をいう。オリゴヌクレオチド保護体とは、３’位ヒドロキシ基に擬似固相保護基が結合されたヌクレオシド保護体又は３’位ヒドロキシ基に擬似固相保護基が結合されたオリゴヌクレオチド（その５’位ヒドロキシ基）に、ホスホロアミダイトを反応させることで、別のヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド（その３’位ヒドロキシ基）がリン酸含有基を介して複数結合された２量体以上の結合体をいう。なお、ホスホロアミダイトとは、ヌクレオシドホスホロアミダイト（１量体）又はオリゴヌクレオチドホスホロアミダイト（２量体以上）をいい、リン原子に、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位と、シアノエトキシ基と、ジイソプロピルアミノ基等のジアルキルアミノ基とが結合された化合物をいう。また、オリゴヌクレオチド保護体の製造方法を以下「伸長反応サイクル」とも称する。
ヌクレオシド保護体とは、３’位ヒドロキシ基に疑似固相保護基が結合されたヌクレオシド（１量体）をいう。オリゴヌクレオチド保護体とは、３’位ヒドロキシ基に擬似固相保護基が結合されたヌクレオシド保護体又は３’位ヒドロキシ基に擬似固相保護基が結合されたオリゴヌクレオチド（その５’位ヒドロキシ基）に、ホスホロアミダイトを反応させることで、別のヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド（その３’位ヒドロキシ基）がリン酸含有基を介して複数結合された２量体以上の結合体をいう。なお、ホスホロアミダイトとは、ヌクレオシドホスホロアミダイト（１量体）又はオリゴヌクレオチドホスホロアミダイト（２量体以上）をいい、リン原子に、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位と、シアノエトキシ基と、ジイソプロピルアミノ基等のジアルキルアミノ基とが結合された化合物をいう。また、オリゴヌクレオチド保護体の製造方法を以下「伸長反応サイクル」とも称する。
【0044】
ここで、本実施形態に係るヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体は、３’位ヒドロキシ基が疑似固相保護基（１）の結合により保護されている。なお、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の５’位ヒドロキシ基は後述する一時保護基の結合により保護されている。また、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の２’位は、水素原子（２’－デオキリボース）又は後述する基本保護基の結合により保護されていてもよい水酸基（リボース）であり、メトキシ基、２－メトキシエトキシ基又はハロゲンで置換されていてもよい。２量体以上のオリゴヌクレオチド保護体の場合、２’位は同一であってもよく、それぞれ異なっていてもよい。２’位は４’位と架橋されていてもよい（２’位と４’位とが架橋したリボース）。この場合、２’位と４’位とは、（２’位）－Ｏ－Ａ－（４’位）という結合を形成する。Ａは、例えば、炭素数１～６のアルキレン基（途中の炭素原子が酸素原子又はアルキル基が結合した窒素原子と置換されていてもよい）等が挙げられる。また、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の核酸塩基（そのアミノ基、カルボニル基、ヒドロキシ基もしくはチオール基）、及びオリゴヌクレオチド保護体のリン酸基（リン酸ジエステル結合のヒドロキシ基、又はチオリン酸ジエステル結合のヒドロキシ基もしくはチオール基）は基本保護基の結合により保護されている。なお、「核酸塩基」は、核酸の合成に使用されるものであれば特に制限されず、例えば、シトシル基、ウラシル基、チミニル基、アデニル基、グアニル基等の天然型塩基；５－フルオロウラシル基、５－メチルシトシル基、８－オキソグアニル基、ヒポキサンチニル基等の修飾塩基等が挙げられる。
【0045】
一時保護基は、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の５’位ヒドロキシ基を保護する保護基をいい、伸長反応サイクルにおいて脱保護される保護基をいう。脱保護された５’位ヒドロキシ基は、伸長反応サイクルにおいて、ホスホロアミダイトとの結合に利用される。一時保護基は疑似固相保護基（１）とは構造が異なり、そのため一時保護基の機能も疑似固相保護基（１）とは異なる。なお、一時保護基は、特に限定されず、従来公知の保護基を適用できる。一時保護基としては、例えば、４，４’－ジメトキシトリチル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基等が挙げられる。
【0046】
基本保護基は、ヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の核酸塩基中の各基、及びオリゴヌクレオチド保護体のリン酸基中の各基を保護する保護基をいい、伸長反応サイクルにおいて脱保護されない保護基をいう。なお、基本保護基は、必要に応じてヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体の２’位ヒドロキシ基を保護する。基本保護基は疑似固相保護基（１）とは構造が異なり、そのため基本保護基の機能も疑似固相保護基（１）とは異なる。なお、基本保護基は、特に限定されず、従来公知の保護基を適用できる。核酸塩基中のアミノ基の保護基としては、例えば、アセチル基、ベンゾイル基、イソブチリル基、ジメチルホルムアミジル基、フェノキシアセチル基、４－イソプロピルフェノキシアセチル基等が挙げられる。リン酸基中のリン酸ジエステル結合のヒドロキシ基、又はチオリン酸ジエステル結合のヒドロキシ基もしくはチオール基の保護基としては、例えば、シアノエチル基、アリル基、メチル基等が挙げられる。２’位ヒドロキシ基の保護基としては、例えば、アセチル基、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、トリイソプロピルシロキシメチル基、４，４’－ジメトキシトリチル基等が挙げられる。
【0047】
＜オリゴヌクレオチド保護体の製造方法（伸長反応サイクル）＞
オリゴヌクレオチド保護体の伸長反応サイクルは、保護工程と、合成工程とを備える。当該サイクルは、必要に応じて上記以外の工程（その他の工程）を含んでいてもよい。
オリゴヌクレオチド保護体の伸長反応サイクルは、保護工程と、合成工程とを備える。当該サイクルは、必要に応じて上記以外の工程（その他の工程）を含んでいてもよい。
【0048】
（保護工程）
保護工程では、５’位ヒドロキシ基が一時保護基で保護されたヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に、疑似固相保護基（１）を結合する（以下「疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド」とも称する）。なお、保護工程で得られる疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシドはヌクレオシド保護体である。換言すると、ヌクレオシド保護体の製造方法は保護工程のみを備える。
保護工程では、５’位ヒドロキシ基が一時保護基で保護されたヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に、疑似固相保護基（１）を結合する（以下「疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド」とも称する）。なお、保護工程で得られる疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシドはヌクレオシド保護体である。換言すると、ヌクレオシド保護体の製造方法は保護工程のみを備える。
【0049】
（合成工程）
合成工程では、疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの５’位ヒドロキシ基に結合された一時保護基を除去して脱保護した後、その５’位ヒドロキシ基にホスホロアミダイトを結合し、亜リン酸エステルを酸化又は硫化する。
合成工程では、疑似固相保護基（１）結合ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの５’位ヒドロキシ基に結合された一時保護基を除去して脱保護した後、その５’位ヒドロキシ基にホスホロアミダイトを結合し、亜リン酸エステルを酸化又は硫化する。
【0050】
上記一連の工程により、２量体のオリゴヌクレオチド保護体が合成される。なお、合成工程はサイクル数（オリゴヌクレオチド保護体の鎖長）に応じて繰り返し実施すればよい。例えば、上記一連の工程をｎ回繰り返す方法（当該一連の工程を同じ順序で連続的に液中にて行う方法等）、所定の長さを有するｎ量体のホスホロアミダイトを用いてそれらをｍ量体のヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体に結合させる方法等により、２量体以上である（ｎ＋ｍ）量体、即ちより高次のオリゴヌクレオチド保護体が合成される。なお、伸長反応サイクルの具体的な方法は、以下の実施例に記載の方法等が挙げられる。
【0051】
ここで、本実施形態に係るヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体では、取り扱い容易な脱保護剤の使用により、一時保護基及び基本保護基は脱保護せずに、疑似固相保護基（１）だけを脱保護できる。疑似固相保護基（１）が有する機能（選択的脱保護能）は、一時保護基及び基本保護基は有しない。このように、疑似固相保護基（１）と脱保護剤との組み合わせにより、オリゴヌクレオチド保護体から疑似固相保護基（１）を選択的に脱保護できるため、疑似固相保護基（１）及びそれが結合されたオリゴヌクレオチド保護体は、オリゴアミダイト前駆体の製造にも好適に利用可能である。
【0052】
＜オリゴアミダイト前駆体の製造方法＞
オリゴアミダイト前駆体とは、オリゴヌクレオチド保護体の３’位ヒドロキシ基に結合された疑似固相保護基（１）が除去されたものをいう。
オリゴアミダイト前駆体とは、オリゴヌクレオチド保護体の３’位ヒドロキシ基に結合された疑似固相保護基（１）が除去されたものをいう。
【0053】
本実施形態に係るオリゴアミダイト前駆体の製造方法は、本実施形態に係るオリゴヌクレオチド保護体から疑似固相保護基（１）を選択的に脱保護することで、オリゴアミダイト前駆体を得る方法をいう。オリゴアミダイト前駆体の製造方法は、選択的脱保護工程を備える。当該製造方法は、必要に応じて上記以外の工程（その他の工程）を含んでいてもよい。
【0054】
（選択的脱保護工程）
選択的脱保護工程では、オリゴヌクレオチド保護体と脱保護剤とを混合することにより、オリゴヌクレオチド保護体から、その３’位ヒドロキシ基に結合された疑似固相保護基（１）を選択的に除去する。
選択的脱保護工程では、オリゴヌクレオチド保護体と脱保護剤とを混合することにより、オリゴヌクレオチド保護体から、その３’位ヒドロキシ基に結合された疑似固相保護基（１）を選択的に除去する。
【0055】
〔脱保護剤〕
《第１のオリゴアミダイト前駆体の製造方法》
第１のオリゴアミダイト前駆体の製造方法では、脱保護剤として、取り扱い容易な求核剤と塩基とを組み合わせたものが用いられる。
《第１のオリゴアミダイト前駆体の製造方法》
第１のオリゴアミダイト前駆体の製造方法では、脱保護剤として、取り扱い容易な求核剤と塩基とを組み合わせたものが用いられる。
【0056】
〔求核剤〕
求核剤は、例えば、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、メタノール、エチレングリコール、１，１０－デカンジチオール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール、２－アミノフェノール等が挙げられる。求核剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される求核剤からなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。求核剤の中では、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、メタノール、エチレングリコール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール及び２－アミノフェノールが好ましく；２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、メタノール及びエチレングリコールがより好ましく；メタノール及びエチレングリコールがさらに好ましい。選択的脱保護工程における求核剤の当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは１～１００当量、より好ましくは５～５０当量である。
求核剤は、例えば、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、メタノール、エチレングリコール、１，１０－デカンジチオール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール、２－アミノフェノール等が挙げられる。求核剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される求核剤からなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。求核剤の中では、２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、メタノール、エチレングリコール、２－アニリノエタノール、２－アミノベンジルアルコール及び２－アミノフェノールが好ましく；２－シアノエタノール、２－ブロモエタノール、メタノール及びエチレングリコールがより好ましく；メタノール及びエチレングリコールがさらに好ましい。選択的脱保護工程における求核剤の当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは１～１００当量、より好ましくは５～５０当量である。
【0057】
〔塩基〕
塩基は、例えば、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン、ピリジン、リン酸水素二カリウム等が挙げられる。塩基は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される塩基からなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。塩基の中では、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン及びリン酸水素二カリウムが好ましく；トリエチルアミン、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン及びリン酸水素二カリウムがより好ましく；トリエチルアミン、４－ジメチルアミノピリジン及び４－ピロリジノピリジンがさらに好ましい。選択的脱保護工程における塩基の当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは０．００１～３当量、より好ましくは０．００１～１.５当量である。
塩基は、例えば、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン、ピリジン、リン酸水素二カリウム等が挙げられる。塩基は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される塩基からなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。塩基の中では、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－メチルイミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン及びリン酸水素二カリウムが好ましく；トリエチルアミン、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン及びリン酸水素二カリウムがより好ましく；トリエチルアミン、４－ジメチルアミノピリジン及び４－ピロリジノピリジンがさらに好ましい。選択的脱保護工程における塩基の当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは０．００１～３当量、より好ましくは０．００１～１.５当量である。
【0058】
求核剤と塩基の好ましい組み合わせとしては、２－シアノエタノールと、トリエチルアミン、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン及びリン酸水素二カリウムの少なくとも一種との組み合わせ；メタノールと４－ピロリジノピリジンとの組み合わせ；エチレングリコールと４－ピロリジノピリジンとの組み合わせ等が挙げられる。
【0059】
《第２のオリゴアミダイト前駆体の製造方法》
第２のオリゴアミダイト前駆体の製造方法では、脱保護剤として、取り扱い容易な脂肪族アミノアルコールが用いられる。
第２のオリゴアミダイト前駆体の製造方法では、脱保護剤として、取り扱い容易な脂肪族アミノアルコールが用いられる。
【0060】
〔脂肪族アミノアルコール〕
脂肪族アミノアルコールは、例えば、２－（メチルアミノ）エタノール、２－［（ヒドロキシメチル）アミノ］エタノール、ジエタノールアミン等が挙げられる。脂肪族アミノアルコールは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される脂肪族アミノアルコールからなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。脂肪族アミノアルコールの中では、２－（メチルアミノ）エタノールが好ましい。選択的脱保護工程における脂肪族アミノアルコールの当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは１～５当量、より好ましくは１～３当量である。
脂肪族アミノアルコールは、例えば、２－（メチルアミノ）エタノール、２－［（ヒドロキシメチル）アミノ］エタノール、ジエタノールアミン等が挙げられる。脂肪族アミノアルコールは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい（例示される脂肪族アミノアルコールからなる群より選択される少なくとも一種を含んでいてもよい）。脂肪族アミノアルコールの中では、２－（メチルアミノ）エタノールが好ましい。選択的脱保護工程における脂肪族アミノアルコールの当量は、疑似固相保護基（１）に対して、好ましくは１～５当量、より好ましくは１～３当量である。
【0061】
選択的脱保護工程では、オリゴヌクレオチド保護体と脱保護剤とを溶媒中で混合する。溶媒は、オリゴヌクレオチド保護体と脱保護剤に対する溶解度の高い低極性溶媒が好ましく、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２－ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒；ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン等の芳香族系溶媒；酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル系溶媒；ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、オクタン、ノナン、シクロヘキサン等の脂肪族系溶媒；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒が挙げられる。溶媒は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【0062】
選択的脱保護工程における反応温度は好ましくは５～４０℃程度である。選択的脱保護工程における反応時間は、好ましくは２４時間以内であり、２０時間以内、１０時間以内、８時間以内、５時間以内、３時間以内、１時間以内、３０分以内、１０分以内等短いほど好ましい。なお、当該反応時間は、選択的脱保護の収率（オリゴアミダイト前駆体の生成率）が好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上の時点をいう。
【0063】
以上の選択的脱保護工程により、オリゴヌクレオチド保護体からオリゴアミダイト前駆体が得られる。選択的脱保護工程は、オリゴヌクレオチド保護体の伸長反応サイクルにおける保護工程及び合成工程と組み合わせて、一連の工程としてもよい。選択的脱保護工程の具体的な方法は、以下の実施例に記載の方法等が挙げられる。
【0064】
以上詳述したように、本実施形態に係る疑似固相保護基（１）は、オリゴヌクレオチド合成の一般的な全脱保護条件において、従来の疑似固相保護基よりも速やかに脱保護されるため、オリゴヌクレオチド合成に利用可能である。なお、疑似固相保護基（１）は、液相合成において極性溶媒（アセトニトリル、メタノール等）を添加することで、ろ過等によりアミダイトモノマー等の副原料と簡便に分離できる。また、本実施形態に係る疑似固相保護基（１）、疑似固相保護基（１）を有するオリゴヌクレオチド保護体、オリゴヌクレオチド保護体を用いたオリゴアミダイト前駆体の製造方法によれば、選択的脱保護工程で使用する脱保護剤として、従来の重金属、水素ガス、水素化ホウ素リチウム等の有害又は危険な試薬を使用せずに、取り扱い容易な求核剤と塩基とを組み合わせたもの又は脂肪族アミノアルコールを用いて、疑似固相保護基（１）を選択的に除去可能であるため、オリゴアミダイト前駆体の大量製造に好適に利用できる。したがって、疑似固相保護基（１）は、オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの大量製造法を確立する上で有用である。
【0065】
＜その他の実施形態＞
上記実施形態に係る疑似固相保護基（１）、それを用いたオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法は、ＤＮＡ合成だけでなく、ＲＮＡ合成（例えば２’位ヒドロキシ基がＴＢＤＭＳ基で保護されたＲＮＡ型のオリゴアミダイト合成）にも適用できる。
上記実施形態に係る疑似固相保護基（１）、それを用いたオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法は、ＤＮＡ合成だけでなく、ＲＮＡ合成（例えば２’位ヒドロキシ基がＴＢＤＭＳ基で保護されたＲＮＡ型のオリゴアミダイト合成）にも適用できる。
【実施例】
【0066】
以下に、本開示を実施例に基づいて説明する。なお、本開示は、以下の実施例に限定されるものではなく、以下の実施例を本開示の趣旨に基づいて変形、変更することが可能であり、それらを本開示の範囲から除外するものではない。
【0067】
（ＮＭＲスペクトル）
１Ｈ、１３Ｃ及び３１Ｐ－ＮＭＲスペクトルはブルカー・バイオスピン社製AVANCE III 400Nano-Bay（１Ｈ：４００ＭＨｚ、１３Ｃ：１００ＭＨｚ、３１Ｐ：１６２ＭＨｚ）でそれぞれ測定した。内部標準物質にテトラメチルシラン（１Ｈ及び１３Ｃ：０ｐｐｍ）又はリン酸トリエチル（３１Ｐ：０．２０ｐｐｍ）を用いた。
１Ｈ、１３Ｃ及び３１Ｐ－ＮＭＲスペクトルはブルカー・バイオスピン社製AVANCE III 400Nano-Bay（１Ｈ：４００ＭＨｚ、１３Ｃ：１００ＭＨｚ、３１Ｐ：１６２ＭＨｚ）でそれぞれ測定した。内部標準物質にテトラメチルシラン（１Ｈ及び１３Ｃ：０ｐｐｍ）又はリン酸トリエチル（３１Ｐ：０．２０ｐｐｍ）を用いた。
【0068】
（質量分析）
質量分析は日本電子社製JMS-S3000で測定した。
質量分析は日本電子社製JMS-S3000で測定した。
【0069】
（略記の説明）
・ＴＨＦ:テトラヒドロフラン
・ＭＴＢＥ：ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
・ＨＢＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム３－オキシドヘキサフルオロフォスファート
・ＣＯＭＵ：（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロフォスファート
・ＢＴＴ：５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール
・ＴＢＨＰ：ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド。
・ＴＨＦ:テトラヒドロフラン
・ＭＴＢＥ：ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
・ＨＢＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム３－オキシドヘキサフルオロフォスファート
・ＣＯＭＵ：（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロフォスファート
・ＢＴＴ：５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール
・ＴＢＨＰ：ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド。
【0070】
実施例１（疑似固相保護基の前駆体の合成）：化合物３の合成
【0071】
【化1】
【0072】
工程１－１：化合物２の合成
窒素雰囲気下、化合物１（12.0 g、65.2 mmol）、１－ブロモオクタデカン（71.6 g、215 mmol）、炭酸カリウム（54.0 g、391 mmol）及びヨウ化ナトリウム（977 mg、6.52 mmol）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（230 g）に懸濁させ、85 ℃で18時間撹拌した。反応液を水（1300 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体を水とメタノールで洗浄し、化合物２のｗｅｔ晶（89.0 g）を微褐色固体として得た。得られたｗｅｔ晶は、そのまま次工程に使用した。なお、ｗｅｔ晶とは、晶析し、母液と分離した後、乾燥前の結晶をいい、乾燥後の結晶であるｄｒｙ晶とは区別される。
窒素雰囲気下、化合物１（12.0 g、65.2 mmol）、１－ブロモオクタデカン（71.6 g、215 mmol）、炭酸カリウム（54.0 g、391 mmol）及びヨウ化ナトリウム（977 mg、6.52 mmol）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（230 g）に懸濁させ、85 ℃で18時間撹拌した。反応液を水（1300 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体を水とメタノールで洗浄し、化合物２のｗｅｔ晶（89.0 g）を微褐色固体として得た。得られたｗｅｔ晶は、そのまま次工程に使用した。なお、ｗｅｔ晶とは、晶析し、母液と分離した後、乾燥前の結晶をいい、乾燥後の結晶であるｄｒｙ晶とは区別される。
【0073】
工程１－２：化合物３の合成
窒素雰囲気下、化合物２のｗｅｔ晶（89.0 g）をメタノール（9.8 g）とＴＨＦ（290 g）の混液に懸濁させ、室温で24 %水酸化ナトリウム水溶液（54.1 g、325 mmol）を加えて、16.5時間還流した。常圧濃縮でTHF（143 g）を留去した後、室温で濃塩酸（48 g）を加えた。反応液を水（670 g）とアセトニトリル（1000 g）の混液に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体を水とアセトニトリルで洗浄後、35 ℃で減圧乾燥し、化合物３（63.6 g、化合物１からの収率105 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.55（m, 90H）, 1.68-1.90（m, 6H）, 3.92-4.15（m, 6H）, 7.32（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 22.9, 26.1, 26.1, 29.2, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 30.4, 32.0, 69.4, 73.6, 108.9, 123.7, 143.5, 153.0, 171.1。
窒素雰囲気下、化合物２のｗｅｔ晶（89.0 g）をメタノール（9.8 g）とＴＨＦ（290 g）の混液に懸濁させ、室温で24 %水酸化ナトリウム水溶液（54.1 g、325 mmol）を加えて、16.5時間還流した。常圧濃縮でTHF（143 g）を留去した後、室温で濃塩酸（48 g）を加えた。反応液を水（670 g）とアセトニトリル（1000 g）の混液に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体を水とアセトニトリルで洗浄後、35 ℃で減圧乾燥し、化合物３（63.6 g、化合物１からの収率105 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.55（m, 90H）, 1.68-1.90（m, 6H）, 3.92-4.15（m, 6H）, 7.32（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 22.9, 26.1, 26.1, 29.2, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 30.4, 32.0, 69.4, 73.6, 108.9, 123.7, 143.5, 153.0, 171.1。
【0074】
実施例２（疑似固相保護基（ジエチレングリコール型）の合成）：化合物５の合成
【0075】
【化2】
【0076】
工程２－１：化合物４の合成
窒素雰囲気下、化合物３（20.0 g、21.6 mmol）、ジエチレングリコール（34.4 g、324 mmol）及びＮ－メチルイミダゾール（3.54 g、43.1 mmol）をＴＨＦ（190 g）に懸濁させ、室温でＨＢＴＵ（12.3 g、32.4 mmol）と４－ジメチルアミノピリジン（526 mg、4.31 mmol）を加え、室温にて46時間撹拌した。反応液をアセトニトリル（680 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物４（21.0 g、収率96.2 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.55（m, 90H）, 1.70-1.85（m, 6H）, 3.58-3.70（m, 2H）, 3.72-3.80（m, 2H）, 3.80-3.88（m, 2H）, 3.94-4.10（m, 6H）, 4.39-4.54（m, 2H）, 7.26（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 61.8, 64.0, 69.2, 69.3, 72.4, 73.5, 108.1, 124.5, 142.6, 152.9, 166.5。
窒素雰囲気下、化合物３（20.0 g、21.6 mmol）、ジエチレングリコール（34.4 g、324 mmol）及びＮ－メチルイミダゾール（3.54 g、43.1 mmol）をＴＨＦ（190 g）に懸濁させ、室温でＨＢＴＵ（12.3 g、32.4 mmol）と４－ジメチルアミノピリジン（526 mg、4.31 mmol）を加え、室温にて46時間撹拌した。反応液をアセトニトリル（680 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物４（21.0 g、収率96.2 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.55（m, 90H）, 1.70-1.85（m, 6H）, 3.58-3.70（m, 2H）, 3.72-3.80（m, 2H）, 3.80-3.88（m, 2H）, 3.94-4.10（m, 6H）, 4.39-4.54（m, 2H）, 7.26（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 61.8, 64.0, 69.2, 69.3, 72.4, 73.5, 108.1, 124.5, 142.6, 152.9, 166.5。
【0077】
工程２－２：化合物５の合成
窒素雰囲気下、塩化オキサリル（7.50 g、59.1 mmol）のジクロロメタン（100 g）溶液に、化合物４（20.0 g、19.7 mmol）のジクロロメタン（200 g）溶液を室温にて15分で滴下し、室温で30分撹拌した。室温にて、反応液を10 %炭酸水素カリウム水溶液（158 g）とジクロロメタン（52 g）の混液に10分で滴下し、析出した固体をろ過した。得られた固体を水及びジクロロメタンで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物５（20.6 g、収率92.8 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-0.98（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.62-1.85（m, 6H）, 3.65-3.85（m, 4H）, 3.85-4.05（m, 6H）, 4.06-4.29（m, 2H）, 4.31-4.57（m, 2H）, 7.17（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.2, 26.3, 29.4, 29.6, 29.6, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 30.5, 32.0, 63.8, 69.0, 69.3, 69.4, 73.5, 108.5, 124.5, 142.9, 152.9, 162.2, 165.0, 166.4。
窒素雰囲気下、塩化オキサリル（7.50 g、59.1 mmol）のジクロロメタン（100 g）溶液に、化合物４（20.0 g、19.7 mmol）のジクロロメタン（200 g）溶液を室温にて15分で滴下し、室温で30分撹拌した。室温にて、反応液を10 %炭酸水素カリウム水溶液（158 g）とジクロロメタン（52 g）の混液に10分で滴下し、析出した固体をろ過した。得られた固体を水及びジクロロメタンで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物５（20.6 g、収率92.8 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-0.98（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.62-1.85（m, 6H）, 3.65-3.85（m, 4H）, 3.85-4.05（m, 6H）, 4.06-4.29（m, 2H）, 4.31-4.57（m, 2H）, 7.17（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.2, 26.3, 29.4, 29.6, 29.6, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 30.5, 32.0, 63.8, 69.0, 69.3, 69.4, 73.5, 108.5, 124.5, 142.9, 152.9, 162.2, 165.0, 166.4。
【0078】
実施例３（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物１０の合成
【0079】
【化3】
【0080】
工程３－１：化合物７（ヌクレオシド保護体）の合成
窒素雰囲気下、化合物５（9.00 g、7.99 mmol）、化合物６（5.66 g、10.4 mmol）、２，６－ルチジン（3.00 g、28.0 mmol）及び４－ジメチルアミノピリジン（195 mg、1.60 mmol）をＴＨＦ（71 g）に懸濁させ、室温でＣＯＭＵ（9.25 g、21.6 mmol）を加えて室温にて3時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（320 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物７（12.1 g、収率93.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.15-1.55（m, 93H）, 1.68-1.89（m, 6H）, 2.41-2.70（m, 2H）, 3.41-3.60（m, 2H）, 3.74-3.92（m, 10H）, 3.93-4.09（m, 6H）, 4.20-4.28（m, 1H）, 4.37-4.55（m, 4H）, 5.49-5.64（m, 1H）, 6.42-6.55（m, 1H）, 6.79-6.91（m, 4H）, 7.20-7.35（m, 9H）, 7.35-7.44（m, 2H）, 7.56-7.67（m, 1H）, 8.33（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 11.7, 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.7, 55.3, 63.5, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 78.3, 83.5, 84.3, 87.3, 108.1, 111.8, 113.4, 124.4, 127.3, 128.1, 128.1, 130.0, 130.1, 135.0, 135.1, 135.2, 142.6, 144.1, 150.1, 152.8, 157.0, 157.0, 158.8, 158.8, 163.3, 166.4。
窒素雰囲気下、化合物５（9.00 g、7.99 mmol）、化合物６（5.66 g、10.4 mmol）、２，６－ルチジン（3.00 g、28.0 mmol）及び４－ジメチルアミノピリジン（195 mg、1.60 mmol）をＴＨＦ（71 g）に懸濁させ、室温でＣＯＭＵ（9.25 g、21.6 mmol）を加えて室温にて3時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（320 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物７（12.1 g、収率93.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.15-1.55（m, 93H）, 1.68-1.89（m, 6H）, 2.41-2.70（m, 2H）, 3.41-3.60（m, 2H）, 3.74-3.92（m, 10H）, 3.93-4.09（m, 6H）, 4.20-4.28（m, 1H）, 4.37-4.55（m, 4H）, 5.49-5.64（m, 1H）, 6.42-6.55（m, 1H）, 6.79-6.91（m, 4H）, 7.20-7.35（m, 9H）, 7.35-7.44（m, 2H）, 7.56-7.67（m, 1H）, 8.33（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 11.7, 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.7, 55.3, 63.5, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 78.3, 83.5, 84.3, 87.3, 108.1, 111.8, 113.4, 124.4, 127.3, 128.1, 128.1, 130.0, 130.1, 135.0, 135.1, 135.2, 142.6, 144.1, 150.1, 152.8, 157.0, 157.0, 158.8, 158.8, 163.3, 166.4。
【0081】
工程３－２：化合物８の合成
窒素雰囲気下、化合物７（11.6 g、7.19 mmol）のジクロロメタン（290 g）溶液に、室温でピロール（1.68 g、25.0 mmol）とジクロロ酢酸（1.86 g、14.4 mmol）を加えて、室温にて2時間撹拌した。２，６－ルチジン（1.93 g、18.0 mmol）を加えた後、反応液をアセトニトリル（430 g）に加えて析出した固体をろ過し、固体をアセトニトリルで洗浄した。室温で減圧乾燥し、化合物８（9.32 g、収率98.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.20-1.55（m, 90H）, 1.65-1.87（m, 6H）, 1.87-1.98（m, 3H）, 2.37-2.64（m, 2H）, 3.75-4.10（m, 12H）, 4.13-4.21（m, 1H）, 4.40-4.54（m, 4H）, 5.35-5.45（m, 1H）, 6.14-6.24（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.44-7.52（m, 1H）, 8.59（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 12.6, 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.7, 62.5, 63.7, 66.0, 68.2, 69.2, 69.3, 73.6, 77.9, 84.7, 86.9, 108.1, 111.5, 124.6, 136.8, 142.3, 150.3, 152.8, 157.0, 157.0, 163.4, 166.4。
窒素雰囲気下、化合物７（11.6 g、7.19 mmol）のジクロロメタン（290 g）溶液に、室温でピロール（1.68 g、25.0 mmol）とジクロロ酢酸（1.86 g、14.4 mmol）を加えて、室温にて2時間撹拌した。２，６－ルチジン（1.93 g、18.0 mmol）を加えた後、反応液をアセトニトリル（430 g）に加えて析出した固体をろ過し、固体をアセトニトリルで洗浄した。室温で減圧乾燥し、化合物８（9.32 g、収率98.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.20-1.55（m, 90H）, 1.65-1.87（m, 6H）, 1.87-1.98（m, 3H）, 2.37-2.64（m, 2H）, 3.75-4.10（m, 12H）, 4.13-4.21（m, 1H）, 4.40-4.54（m, 4H）, 5.35-5.45（m, 1H）, 6.14-6.24（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.44-7.52（m, 1H）, 8.59（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 12.6, 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.7, 62.5, 63.7, 66.0, 68.2, 69.2, 69.3, 73.6, 77.9, 84.7, 86.9, 108.1, 111.5, 124.6, 136.8, 142.3, 150.3, 152.8, 157.0, 157.0, 163.4, 166.4。
【0082】
工程３－３：化合物１０の合成
窒素雰囲気下、化合物８（4.40 g、3.35 mmol）、化合物９（3.92 g、4.70 mmol）及びモレキュラーシーブ３Ａ（0.80 g）をジクロロメタン（44 g）に懸濁させ、室温でＢＴＴ（752 mg、4.69 mmol）を加えて、室温にて2時間撹拌した。室温で5.1 M ＴＢＨＰ／ｎ－デカン溶液（1.32 mL、6.70 mmol）を加えて2時間撹拌した後、反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（200 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物１０（6.46 g、収率93.5 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.95（m, 9H）, 2.30-2.60（m, 3H）, 2.62-2.84（m, 2H）, 2.90-3.06（m, 1H）, 3.34-3.59（m, 2H）, 3.72-3.92（m, 10H）, 3.94-4.07（m, 6H）, 4.11-4.53（m, 10H）, 5.09-5.23（m, 1H）, 5.38-5.55（m, 1H）, 6.14-6.35（m, 2H）, 6.79-6.93（m, 4H）, 7.19-7.42（m, 13H）, 7.45-7.56（m, 2H）, 7.56-7.66（m, 1H）, 7.84-7.98（m, 2H）, 8.07-8.19（m, 1H）, 8.63-9.00（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.66, -1.57。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2082.2052。
窒素雰囲気下、化合物８（4.40 g、3.35 mmol）、化合物９（3.92 g、4.70 mmol）及びモレキュラーシーブ３Ａ（0.80 g）をジクロロメタン（44 g）に懸濁させ、室温でＢＴＴ（752 mg、4.69 mmol）を加えて、室温にて2時間撹拌した。室温で5.1 M ＴＢＨＰ／ｎ－デカン溶液（1.32 mL、6.70 mmol）を加えて2時間撹拌した後、反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（200 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物１０（6.46 g、収率93.5 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.95（m, 9H）, 2.30-2.60（m, 3H）, 2.62-2.84（m, 2H）, 2.90-3.06（m, 1H）, 3.34-3.59（m, 2H）, 3.72-3.92（m, 10H）, 3.94-4.07（m, 6H）, 4.11-4.53（m, 10H）, 5.09-5.23（m, 1H）, 5.38-5.55（m, 1H）, 6.14-6.35（m, 2H）, 6.79-6.93（m, 4H）, 7.19-7.42（m, 13H）, 7.45-7.56（m, 2H）, 7.56-7.66（m, 1H）, 7.84-7.98（m, 2H）, 8.07-8.19（m, 1H）, 8.63-9.00（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.66, -1.57。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2082.2052。
【0083】
実施例４（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物１１の合成
【0084】
【化4】
【0085】
窒素雰囲気下、化合物１０（1.00 g、0.485 mmol）、エチレングリコール（452 mg、6.28 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（14.4 mg、97.2 μmol）を含むＴＨＦ（6.5 g）溶液を、室温で3時間撹拌した。反応液をＭＴＢＥ（21 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をＭＴＢＥで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物１１（417 mg、収率86.7 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+1013.3062。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+1013.3062。
【0086】
実施例５（Ｃ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物１６の合成
【0087】
【化5】
【0088】
工程５－１：化合物１３（ヌクレオシド保護体）の合成
窒素雰囲気下、化合物５（10.0 g、8.88 mmol）、化合物１２（9.57 g、15.1 mmol）、２，６－ルチジン（1.90 g、17.7 mmol）及び４－ジメチルアミノピリジン（217 mg、1.78 mmol）をＴＨＦ（79 g）に懸濁させ、室温でＣＯＭＵ（9.51 g、22.2 mmol）を加えて室温にて2時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（220 g）と水（280 g）の混液に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物１３（13.4 g、収率88.5 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 9H）, 1.18-1.55（m, 90H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 2.33-2.49（m, 1H）, 2.89-3.05（m, 1H）, 3.45-3.60（m, 2H）, 3.74-3.82（m, 6H）, 3.82-3.92（m, 4H）, 3.94-4.08（m, 4H）, 4.32-4.41（m, 1H）, 4.42-4.54（m, 4H）, 5.42-5.58（m, 1H）, 6.30-6.41（m, 1H）, 6.78-6.94（m, 4H）, 7.20-7.42（m, 12H）, 7.48-7.58（m, 2H）, 7.59-7.66（m, 1H）, 7.80-7.99（m, 2H）, 8.07-8.21（m, 1H）, 8.66（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 39.3, 55.2, 55.2, 63.0, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 77.5, 84.3, 87.2, 87.3, 96.4, 108.1, 113.4, 113.4, 124.5, 127.2, 127.5, 128.0, 128.1, 129.1, 130.0, 130.0, 133.0, 133.2, 135.0, 135.1, 142.5, 143.9, 144.3, 152.8, 156.9, 156.9, 158.8, 158.8, 162.2, 166.4。
窒素雰囲気下、化合物５（10.0 g、8.88 mmol）、化合物１２（9.57 g、15.1 mmol）、２，６－ルチジン（1.90 g、17.7 mmol）及び４－ジメチルアミノピリジン（217 mg、1.78 mmol）をＴＨＦ（79 g）に懸濁させ、室温でＣＯＭＵ（9.51 g、22.2 mmol）を加えて室温にて2時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（220 g）と水（280 g）の混液に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物１３（13.4 g、収率88.5 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 9H）, 1.18-1.55（m, 90H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 2.33-2.49（m, 1H）, 2.89-3.05（m, 1H）, 3.45-3.60（m, 2H）, 3.74-3.82（m, 6H）, 3.82-3.92（m, 4H）, 3.94-4.08（m, 4H）, 4.32-4.41（m, 1H）, 4.42-4.54（m, 4H）, 5.42-5.58（m, 1H）, 6.30-6.41（m, 1H）, 6.78-6.94（m, 4H）, 7.20-7.42（m, 12H）, 7.48-7.58（m, 2H）, 7.59-7.66（m, 1H）, 7.80-7.99（m, 2H）, 8.07-8.21（m, 1H）, 8.66（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 39.3, 55.2, 55.2, 63.0, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 77.5, 84.3, 87.2, 87.3, 96.4, 108.1, 113.4, 113.4, 124.5, 127.2, 127.5, 128.0, 128.1, 129.1, 130.0, 130.0, 133.0, 133.2, 135.0, 135.1, 142.5, 143.9, 144.3, 152.8, 156.9, 156.9, 158.8, 158.8, 162.2, 166.4。
【0089】
工程５－２：化合物１４の合成
工程３－２の方法に従って、化合物１３（12.0 g、7.04 mmol）から化合物１４（9.66 g、収率98.0 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1.69-1.87（m, 6H）, 2.49-2.63（m, 1H）, 2.69-2.80（m, 1H）, 3.79-4.07（m, 12H）, 4.26-4.32（m, 1H）, 4.42-4.52（m, 4H）, 5.41-5.51（m, 1H）, 6.18-6.30（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.46-7.69（m, 4H）, 7.83-7.96（m, 2H）, 8.22-8.33（m, 1H）,8.85（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 38.2, 63.4, 63.7, 66.0, 68.2, 69.2, 69.3, 73.6, 78.0, 85.6, 88.9, 97.0, 108.1, 124.6, 127.6, 129.1, 132.9, 133.3, 142.3, 145.7, 152.8, 157.0, 157.0, 162.5, 166.4。
工程３－２の方法に従って、化合物１３（12.0 g、7.04 mmol）から化合物１４（9.66 g、収率98.0 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1.69-1.87（m, 6H）, 2.49-2.63（m, 1H）, 2.69-2.80（m, 1H）, 3.79-4.07（m, 12H）, 4.26-4.32（m, 1H）, 4.42-4.52（m, 4H）, 5.41-5.51（m, 1H）, 6.18-6.30（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.46-7.69（m, 4H）, 7.83-7.96（m, 2H）, 8.22-8.33（m, 1H）,8.85（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 38.2, 63.4, 63.7, 66.0, 68.2, 69.2, 69.3, 73.6, 78.0, 85.6, 88.9, 97.0, 108.1, 124.6, 127.6, 129.1, 132.9, 133.3, 142.3, 145.7, 152.8, 157.0, 157.0, 162.5, 166.4。
【0090】
工程５－３：化合物１６の合成
工程３－３の方法に従って、化合物１４（4.00 g、2.86 mmol）及び化合物１５（3.43 g、4.00 mmol）から化合物１６（5.82 g、収率93.9 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1.67-1.87（m, 6H）, 2.30-2.47（m, 1H）, 2.61-2.98（m, 4H）, 3.17-3.35（m, 1H）, 3.37-3.56（m, 2H）, 3.69-3.90（m, 10H）, 3.93-4.07（m, 6H）, 4.15-4.54（m, 10H）, 5.25-5.39（m, 1H）, 5.41-5.56（m, 1H）, 6.19-6.33（m, 1H）, 6.43-6.59（m, 1H）, 6.72-6.85（m, 4H）, 7.15-7.32（m, 9H）, 7.33-7.41（m, 2H）, 7.43-7.66（m, 7H）, 7.77-7.92（m, 2H）, 7.95-8.10（m, 3H）, 8.14-8.26（m, 1H）, 8.60-8.69（m, 1H）, 8.70-8.98（m, 1H）, 9.00-9.18（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.32, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2195.2462。
工程３－３の方法に従って、化合物１４（4.00 g、2.86 mmol）及び化合物１５（3.43 g、4.00 mmol）から化合物１６（5.82 g、収率93.9 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.96（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1.67-1.87（m, 6H）, 2.30-2.47（m, 1H）, 2.61-2.98（m, 4H）, 3.17-3.35（m, 1H）, 3.37-3.56（m, 2H）, 3.69-3.90（m, 10H）, 3.93-4.07（m, 6H）, 4.15-4.54（m, 10H）, 5.25-5.39（m, 1H）, 5.41-5.56（m, 1H）, 6.19-6.33（m, 1H）, 6.43-6.59（m, 1H）, 6.72-6.85（m, 4H）, 7.15-7.32（m, 9H）, 7.33-7.41（m, 2H）, 7.43-7.66（m, 7H）, 7.77-7.92（m, 2H）, 7.95-8.10（m, 3H）, 8.14-8.26（m, 1H）, 8.60-8.69（m, 1H）, 8.70-8.98（m, 1H）, 9.00-9.18（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.32, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2195.2462。
【0091】
実施例６（Ｃ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物１７の合成
【0092】
【化6】
【0093】
実施例４の方法に従って、化合物１６（1.00 g、0.460 mmol）、エチレングリコール（428 mg、6.90 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（10.2 mg、68.8 μmol）から化合物１７（475 mg、収率94.8 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 2.20-2.34（m, 1H）, 2.61-2.91（m, 4H）, 3.10-3.30（m, 1H）, 3.35-3.54（m, 2H）, 3.69-3.80（m, 6H）, 4.11-4.59（m, 7H）, 5.26-5.39（m, 1H）, 6.15-6.26（m, 1H）, 6.43-6.58（m, 1H）, 6.73-6.85（m, 4H）, 7.16-7.30（m, 7H）, 7.33-7.63（m, 9H）, 7.80-7.91（m, 2H）, 7.96-8.05（m, 2H）, 8.05-8.15（m, 1H）, 8.17-8.27（m, 1H）, 8.59-8.69（m, 1H）, 8.93-9.42（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.06, -0.95。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+1126.3422。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 2.20-2.34（m, 1H）, 2.61-2.91（m, 4H）, 3.10-3.30（m, 1H）, 3.35-3.54（m, 2H）, 3.69-3.80（m, 6H）, 4.11-4.59（m, 7H）, 5.26-5.39（m, 1H）, 6.15-6.26（m, 1H）, 6.43-6.58（m, 1H）, 6.73-6.85（m, 4H）, 7.16-7.30（m, 7H）, 7.33-7.63（m, 9H）, 7.80-7.91（m, 2H）, 7.96-8.05（m, 2H）, 8.05-8.15（m, 1H）, 8.17-8.27（m, 1H）, 8.59-8.69（m, 1H）, 8.93-9.42（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.06, -0.95。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+1126.3422。
【0094】
実施例７（Ａ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物２２の合成
【0095】
【化7】
【0096】
工程７－１：化合物１９（ヌクレオシド保護体）の合成
工程３－１の方法に従って、化合物５（3.00 g、2.66 mmol）及び化合物１８（2.00 g、3.04 mmol）から化合物１９（3.65 g、収率79.5 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 6H）, 1.14-1.40（m, 84H）, 1.40-1.55（m, 6H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 2.60-2.69（m, 1H）, 3.12-3.26（m, 1H）, 3.43-3.55（m, 2H）, 3.71-3.82（m, 6H）, 3.82-3.94（m, 4H）, 3.94-4.10（m, 6H）, 4.32-4.44（m, 1H）, 4.44-4.55（m, 4H）, 5.62-5.74（m, 1H）, 6.47-6.57（m, 1H）, 6.73-6.88（m, 4H）, 7.16-7.35（m, 9H）, 7.36-7.43（m, 2H）, 7.49-7.58（m, 2H）, 7.58-7.67（m, 1H）, 7.97-8.10（m, 2H）, 8.19（s, 1H）, 8.71（brs, 1H）, 9.03（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.4, 55.2, 63.3, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 78.1, 84.0, 84.7, 86.8, 108.1, 113.2, 123.4, 124.4, 127.0, 127.9, 128.0, 128.1, 128.9, 130.0, 130.0, 130.8, 132.8, 133.6, 135.4, 135.4, 141.4, 142.6, 144.3, 149.6, 151.5, 152.7, 152.9, 156.8, 157.1, 158.61, 158.6, 164.5, 166.4。
工程３－１の方法に従って、化合物５（3.00 g、2.66 mmol）及び化合物１８（2.00 g、3.04 mmol）から化合物１９（3.65 g、収率79.5 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 6H）, 1.14-1.40（m, 84H）, 1.40-1.55（m, 6H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 2.60-2.69（m, 1H）, 3.12-3.26（m, 1H）, 3.43-3.55（m, 2H）, 3.71-3.82（m, 6H）, 3.82-3.94（m, 4H）, 3.94-4.10（m, 6H）, 4.32-4.44（m, 1H）, 4.44-4.55（m, 4H）, 5.62-5.74（m, 1H）, 6.47-6.57（m, 1H）, 6.73-6.88（m, 4H）, 7.16-7.35（m, 9H）, 7.36-7.43（m, 2H）, 7.49-7.58（m, 2H）, 7.58-7.67（m, 1H）, 7.97-8.10（m, 2H）, 8.19（s, 1H）, 8.71（brs, 1H）, 9.03（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.4, 55.2, 63.3, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 78.1, 84.0, 84.7, 86.8, 108.1, 113.2, 123.4, 124.4, 127.0, 127.9, 128.0, 128.1, 128.9, 130.0, 130.0, 130.8, 132.8, 133.6, 135.4, 135.4, 141.4, 142.6, 144.3, 149.6, 151.5, 152.7, 152.9, 156.8, 157.1, 158.61, 158.6, 164.5, 166.4。
【0097】
工程７－２：化合物２０の合成
工程３－２の方法に従って、化合物１９（2.50 g、1.45 mmol）から化合物２０（1.91 g、収率92.7 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 6H）, 1.16-1.39（m, 84H）, 1.41-1.53（m, 6H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.50-2.65（m, 1H）, 3.20-3.35（m, 1H）, 3.81-4.07（m, 12H）, 4.31-4.40（m, 1H）, 4.40-4.56（m, 4H）, 5.65-5.77（m, 1H）, 6.35-6.45（m, 1H）, 7.26（s, 2H）, 7.49-7.58（m, 2H）, 7.58-7.67（m, 1H）, 7.99-8.09（m, 2H）, 8.16（s, 1H）, 8.79（s, 1H）, 9.14（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 34.5, 63.2, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.3, 73.6, 79.2, 86.8, 87.6, 108.1, 124.4, 124.6, 127.9, 128.9, 133.0, 133.4, 142.6, 142.7, 150.4, 150.6, 152.2, 152.9, 156.9, 157.1, 164.5, 166.4。
工程３－２の方法に従って、化合物１９（2.50 g、1.45 mmol）から化合物２０（1.91 g、収率92.7 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 6H）, 1.16-1.39（m, 84H）, 1.41-1.53（m, 6H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.50-2.65（m, 1H）, 3.20-3.35（m, 1H）, 3.81-4.07（m, 12H）, 4.31-4.40（m, 1H）, 4.40-4.56（m, 4H）, 5.65-5.77（m, 1H）, 6.35-6.45（m, 1H）, 7.26（s, 2H）, 7.49-7.58（m, 2H）, 7.58-7.67（m, 1H）, 7.99-8.09（m, 2H）, 8.16（s, 1H）, 8.79（s, 1H）, 9.14（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 34.5, 63.2, 63.8, 66.1, 68.3, 69.2, 69.3, 73.6, 79.2, 86.8, 87.6, 108.1, 124.4, 124.6, 127.9, 128.9, 133.0, 133.4, 142.6, 142.7, 150.4, 150.6, 152.2, 152.9, 156.9, 157.1, 164.5, 166.4。
【0098】
工程７－３：化合物２２の合成
工程３－３の方法に従って、化合物２０（1.50 g、1.05 mmol）及び化合物２１（1.24 g、1.40 mmol）から化合物２２（2.00 g、収率87.0 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.78-0.98（m, 9H）, 0.98-1.54（m, 96H）, 1.67-1.88（m, 6H）, 2.36-2.51（m, 1H）, 2.52-2.96（m, 5H）, 3.20-3.49（m, 3H）, 3.70-3.79（m, 6H）, 3.80-3.90（m, 4H）, 3.94-4.55（m, 16H）, 5.20-5.38（m, 1H）, 5.69-5.83（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.44-6.56（m, 1H）, 6.72-6.85（m, 4H）, 7.11-7.30（m, 9H）, 7.31-7.39（m, 2H）, 7.40-7.53（m, 2H）, 7.53-7.64（m, 1H）, 7.66-7.73（m, 1H）, 7.83-8.04（m, 2H）, 8.22-8.34（m, 1H）, 8.74-8.88（m, 1H）, 9.13-9.34（m, 1H）, 11.80-12.12（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.54, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2201.2564。
工程３－３の方法に従って、化合物２０（1.50 g、1.05 mmol）及び化合物２１（1.24 g、1.40 mmol）から化合物２２（2.00 g、収率87.0 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.78-0.98（m, 9H）, 0.98-1.54（m, 96H）, 1.67-1.88（m, 6H）, 2.36-2.51（m, 1H）, 2.52-2.96（m, 5H）, 3.20-3.49（m, 3H）, 3.70-3.79（m, 6H）, 3.80-3.90（m, 4H）, 3.94-4.55（m, 16H）, 5.20-5.38（m, 1H）, 5.69-5.83（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.44-6.56（m, 1H）, 6.72-6.85（m, 4H）, 7.11-7.30（m, 9H）, 7.31-7.39（m, 2H）, 7.40-7.53（m, 2H）, 7.53-7.64（m, 1H）, 7.66-7.73（m, 1H）, 7.83-8.04（m, 2H）, 8.22-8.34（m, 1H）, 8.74-8.88（m, 1H）, 9.13-9.34（m, 1H）, 11.80-12.12（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.54, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2201.2564。
【0099】
実施例８（Ａ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物２３の合成
【0100】
【化8】
【0101】
実施例４の方法に従って、化合物２２（1.00 g、0.459 mmol）、エチレングリコール（427 mg、6.88 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（10.2 mg、68.8 μmol）から化合物２３（507 mg、収率99.6 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.02-1.19（m, 6H）, 2.38-3.15（m, 7H）, 3.24-3.34（m, 2H）, 3.68-3.80（m, 6H）, 3.96-4.52（m, 6H）, 4.87-5.06（m, 1H）, 5.17-5.47（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.41-6.55（m, 1H）, 6.70-6.85（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 9H）,7.41-7.55（m, 2H）, 7.55-7.71（m, 2H）, 7.85-8.06（m, 2H）, 8.20-8.44（m, 1H）, 8.72-8.87（m, 1H）, 9.11-9.32（m, 1H）, 9.50-10.14（m, 1H）, 11.87-12.09（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -0.94。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1132.3650。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.02-1.19（m, 6H）, 2.38-3.15（m, 7H）, 3.24-3.34（m, 2H）, 3.68-3.80（m, 6H）, 3.96-4.52（m, 6H）, 4.87-5.06（m, 1H）, 5.17-5.47（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.41-6.55（m, 1H）, 6.70-6.85（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 9H）,7.41-7.55（m, 2H）, 7.55-7.71（m, 2H）, 7.85-8.06（m, 2H）, 8.20-8.44（m, 1H）, 8.72-8.87（m, 1H）, 9.11-9.32（m, 1H）, 9.50-10.14（m, 1H）, 11.87-12.09（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -0.94。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1132.3650。
【0102】
実施例９（Ｇ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物２８の合成
【0103】
【化9】
【0104】
工程９－１：化合物２５（ヌクレオシド保護体）の合成
工程５－１の方法に従って、化合物５（9.00 g、7.99 mmol）及び化合物２４（7.67 g、12.0 mmol）から化合物２５（12.6 g、収率91.9 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 12H）, 1.00-1.06（m, 3H）, 1.16-1.53（m, 90H）, 1.66-1.84（m, 6H）, 1.89-1.99（m, 1H）, 2.52-2.63（m, 1H）, 3.12-3.35（m, 2H）, 3.41-3.53（m, 1H）, 3.71-3.90（m, 10H）, 3.92-4.07（m, 6H）, 4.20-4.30（m, 1H）, 4.41-4.55（m, 4H）, 5.62-5.75（m, 1H）, 6.09-6.18（m, 1H）, 6.73-6.88（m, 4H）, 7.13-7.39（m, 9H）, 7.43-7.52（m, 2H）, 7.78（s, 1H）, 8.11（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 18.9, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.2, 37.2, 55.2, 63.4, 64.0, 66.2, 68.3, 69.3, 69.3, 73.6, 77.9, 83.7, 84.4, 86.5, 108.2, 113.3, 113.3, 122.3, 124.3, 127.2, 128.00, 128.1, 129.1, 129.9, 135.4, 135.7, 137.7, 142.8, 144.6, 147.3, 148.0, 152.9, 155.4, 156.9, 157.1, 158.8, 166.7, 178.4。
工程５－１の方法に従って、化合物５（9.00 g、7.99 mmol）及び化合物２４（7.67 g、12.0 mmol）から化合物２５（12.6 g、収率91.9 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 12H）, 1.00-1.06（m, 3H）, 1.16-1.53（m, 90H）, 1.66-1.84（m, 6H）, 1.89-1.99（m, 1H）, 2.52-2.63（m, 1H）, 3.12-3.35（m, 2H）, 3.41-3.53（m, 1H）, 3.71-3.90（m, 10H）, 3.92-4.07（m, 6H）, 4.20-4.30（m, 1H）, 4.41-4.55（m, 4H）, 5.62-5.75（m, 1H）, 6.09-6.18（m, 1H）, 6.73-6.88（m, 4H）, 7.13-7.39（m, 9H）, 7.43-7.52（m, 2H）, 7.78（s, 1H）, 8.11（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 18.9, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.2, 37.2, 55.2, 63.4, 64.0, 66.2, 68.3, 69.3, 69.3, 73.6, 77.9, 83.7, 84.4, 86.5, 108.2, 113.3, 113.3, 122.3, 124.3, 127.2, 128.00, 128.1, 129.1, 129.9, 135.4, 135.7, 137.7, 142.8, 144.6, 147.3, 148.0, 152.9, 155.4, 156.9, 157.1, 158.8, 166.7, 178.4。
【0105】
工程９－２：化合物２６の合成
工程３－２の方法に従って、化合物２５（11.0 g、6.44 mmol）から化合物２６（9.13 g、収率100 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.96（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 96H）, 1.67-1.89（m, 6H）, 2.45-2.59（m, 1H）, 2.66-2.80（m, 2H）, 2.99-3.13（m, 1H）, 3.81-4.08（m, 12H）, 4.23-4.33（m, 1H）, 4.40-4.57（m, 4H）, 5.54-5.67（m, 1H）, 6.16-6.24（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.87（s, 1H）, 9.02（brs, 1H）, 12.16（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 18.9, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.2, 37.4, 82.8, 63.9, 66.2, 68.3, 69.3, 69.3, 73.6, 78.8, 85.8, 86.2, 108.2, 122.5, 124.4, 131.3, 138.6, 142.6, 147.1, 147.8, 152.9, 155.1, 157.0, 157.1, 166.6。
工程３－２の方法に従って、化合物２５（11.0 g、6.44 mmol）から化合物２６（9.13 g、収率100 %）を白灰色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.96（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 96H）, 1.67-1.89（m, 6H）, 2.45-2.59（m, 1H）, 2.66-2.80（m, 2H）, 2.99-3.13（m, 1H）, 3.81-4.08（m, 12H）, 4.23-4.33（m, 1H）, 4.40-4.57（m, 4H）, 5.54-5.67（m, 1H）, 6.16-6.24（m, 1H）, 7.25（s, 1H）, 7.87（s, 1H）, 9.02（brs, 1H）, 12.16（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 18.9, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 36.2, 37.4, 82.8, 63.9, 66.2, 68.3, 69.3, 69.3, 73.6, 78.8, 85.8, 86.2, 108.2, 122.5, 124.4, 131.3, 138.6, 142.6, 147.1, 147.8, 152.9, 155.1, 157.0, 157.1, 166.6。
【0106】
工程９－３：化合物２８の合成
工程３－３の方法に従って、化合物２６（4.00 g、2.84 mmol）及び化合物２７（2.96 g、3.97 mmol）から化合物２８（5.24 g、収率87.0 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.97（m, 9H）, 1.06-1.53（m, 96H）, 1.68-1.89（m, 9H）, 2.31-2.81（m, 3H）, 3.24-3.59（m, 3H）, 3.72-3.93（m, 10H）, 3.93-4.06（m, 6H）, 4.10-4.55（m, 9H）, 4.61-4.83（m, 1H）, 5.03-5.26（m, 1H）, 5.48-5.79（m, 1H）, 6.12-6.24（m, 1H）, 6.28-6.51（m, 1H）, 6.76-6.94（m, 4H）, 7.13-7.43（m, 11H）, 7.43-7.61（m, 1H）, 7.65-7.85（m, 1H）, 8.37-9.08（m, 1H）, 9.98-10.38（m, 1H）, 11.94-12.41（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -2.96, -2.35。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2088.2350。
工程３－３の方法に従って、化合物２６（4.00 g、2.84 mmol）及び化合物２７（2.96 g、3.97 mmol）から化合物２８（5.24 g、収率87.0 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.97（m, 9H）, 1.06-1.53（m, 96H）, 1.68-1.89（m, 9H）, 2.31-2.81（m, 3H）, 3.24-3.59（m, 3H）, 3.72-3.93（m, 10H）, 3.93-4.06（m, 6H）, 4.10-4.55（m, 9H）, 4.61-4.83（m, 1H）, 5.03-5.26（m, 1H）, 5.48-5.79（m, 1H）, 6.12-6.24（m, 1H）, 6.28-6.51（m, 1H）, 6.76-6.94（m, 4H）, 7.13-7.43（m, 11H）, 7.43-7.61（m, 1H）, 7.65-7.85（m, 1H）, 8.37-9.08（m, 1H）, 9.98-10.38（m, 1H）, 11.94-12.41（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -2.96, -2.35。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2088.2350。
【0107】
実施例１０（Ｇ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物２９の合成
【0108】
【化10】
【0109】
実施例４の方法に従って、化合物２８（1.00 g、0.484 mmol）、エチレングリコール（451 mg、6.27 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（14.3 mg、96.5 μmol）から化合物２９（450 mg、収率93.4 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.09-1.23（m, 6H）, 1.34-1.46（m, 3H）, 2.26-2.91（m, 7H）, 3.27-3.54（m, 2H）, 3.67-3.84（m, 6H）, 4.04-4.52（m, 6H）, 4.67-4.87（m, 1H）, 5.02-5.16（m, 1H）, 6.14-6.42（m, 2H）, 6.73-6.90（m, 4H）, 7.13-7.39（m, 9H）, 7.45-7.58（m, 1H）, 7.83-7.97（m, 1H）, 9.51-10.85（m, 2H）, 12.14-12.51（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -2.51, -2.02。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1019.3275。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.09-1.23（m, 6H）, 1.34-1.46（m, 3H）, 2.26-2.91（m, 7H）, 3.27-3.54（m, 2H）, 3.67-3.84（m, 6H）, 4.04-4.52（m, 6H）, 4.67-4.87（m, 1H）, 5.02-5.16（m, 1H）, 6.14-6.42（m, 2H）, 6.73-6.90（m, 4H）, 7.13-7.39（m, 9H）, 7.45-7.58（m, 1H）, 7.83-7.97（m, 1H）, 9.51-10.85（m, 2H）, 12.14-12.51（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -2.51, -2.02。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1019.3275。
【0110】
実施例１１（４量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物３３の合成
【0111】
【化11】
【0112】
工程１１－１：化合物３０の合成
工程３－２の方法に従って、化合物１０（17.0 g、8.25 mmol）から化合物３０（14.3 g、収率98.6 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.77-0.99（m, 9H）, 1.17-1.55（m, 90H）, 1.68-1.98（m, 9H）, 2.39-2.68（m, 3H）, 2.73-2.90（m, 3H）, 3.73-4.10（m, 12H）, 4.21-4.57（m, 10H）, 5.14-5.32（m, 1H）, 5.42-5.60（m, 1H）, 6.07-6.32（m, 2H）, 7.19-7.34（m, 3H）, 7.42-7.68（m, 4H）, 7.83-8.00（m, 2H）, 8.20-8.37（m, 1H）, 8.93-9.57（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -1.44。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1780.0669。
工程３－２の方法に従って、化合物１０（17.0 g、8.25 mmol）から化合物３０（14.3 g、収率98.6 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.77-0.99（m, 9H）, 1.17-1.55（m, 90H）, 1.68-1.98（m, 9H）, 2.39-2.68（m, 3H）, 2.73-2.90（m, 3H）, 3.73-4.10（m, 12H）, 4.21-4.57（m, 10H）, 5.14-5.32（m, 1H）, 5.42-5.60（m, 1H）, 6.07-6.32（m, 2H）, 7.19-7.34（m, 3H）, 7.42-7.68（m, 4H）, 7.83-8.00（m, 2H）, 8.20-8.37（m, 1H）, 8.93-9.57（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -1.44。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1780.0669。
【0113】
工程１１－２：化合物３１の合成
工程３－３の方法に従って、化合物３０（13.0 g、7.39 mmol）及び化合物２７（7.71 g、10.4 mmol）から化合物３１（17.5 g、収率97.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.96（m, 9H）, 1.17-1.53（m, 90H）, 1.68-1.97（m, 12H）, 2.27-2.57（m, 3H）, 2.60-2.98（m, 7H）, 3.33-3.56（m, 2H）, 3.72-3.90（m, 10H）, 3.94-4.07（m, 6H）, 4.10-4.56（m, 15H）, 5.10-5.27（m, 2H）, 5.46-5.62（m, 1H）, 6.00-6.42（m, 3H）, 6.78-6.91（m, 4H）, 7.18-7.40（m, 12H）, 7.43-7.74（m, 5H）, 7.82-8.12（m, 3H）, 8.97-9.71（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.86, -1.77, -1.72, -1.70, 1.60, -1.54, -1.50, -1.44。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2439.2739。
工程３－３の方法に従って、化合物３０（13.0 g、7.39 mmol）及び化合物２７（7.71 g、10.4 mmol）から化合物３１（17.5 g、収率97.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.96（m, 9H）, 1.17-1.53（m, 90H）, 1.68-1.97（m, 12H）, 2.27-2.57（m, 3H）, 2.60-2.98（m, 7H）, 3.33-3.56（m, 2H）, 3.72-3.90（m, 10H）, 3.94-4.07（m, 6H）, 4.10-4.56（m, 15H）, 5.10-5.27（m, 2H）, 5.46-5.62（m, 1H）, 6.00-6.42（m, 3H）, 6.78-6.91（m, 4H）, 7.18-7.40（m, 12H）, 7.43-7.74（m, 5H）, 7.82-8.12（m, 3H）, 8.97-9.71（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.86, -1.77, -1.72, -1.70, 1.60, -1.54, -1.50, -1.44。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2439.2739。
【0114】
工程１１－３：化合物３２の合成
工程３－２の方法に従って、化合物３１（14.0 g、5.79 mmol）から化合物３２（11.8 g、収率95.9 %）を灰白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.93（m, 12H）, 2.33-2.96（m, 10H）, 3.74-3.93（m, 6H）, 3.94-4.08（m, 6H）, 4.15-4.55（m, 15H）, 5.13-5.31（m, 2H）, 5.44-5.62（m, 1H）, 5.98-6.28（m, 3H）, 7.18-7.33（m, 2H）, 7.38-7.67（m, 5H）, 7.82-8.13（m, 3H）, 9.24-10.00（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.66, -1.60, -1.57, -1.55, -1.46, -1.41。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2137.1420。
工程３－２の方法に従って、化合物３１（14.0 g、5.79 mmol）から化合物３２（11.8 g、収率95.9 %）を灰白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.97（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.93（m, 12H）, 2.33-2.96（m, 10H）, 3.74-3.93（m, 6H）, 3.94-4.08（m, 6H）, 4.15-4.55（m, 15H）, 5.13-5.31（m, 2H）, 5.44-5.62（m, 1H）, 5.98-6.28（m, 3H）, 7.18-7.33（m, 2H）, 7.38-7.67（m, 5H）, 7.82-8.13（m, 3H）, 9.24-10.00（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.66, -1.60, -1.57, -1.55, -1.46, -1.41。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2137.1420。
【0115】
工程１１－４：化合物３３の合成
工程３－３の方法に従って、化合物３２（4.00 g、1.89 mmol）及び化合物１５（2.27 g、2.65 mmol）から化合物３３（5.20 g、収率94.9 %）を黄褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：d 0.78-0.97（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1,67-2.12（m, 12H）, 2.32-2.96（m, 13H）, 3.09-3.27（m, 1H）, 3.34-3.52（m, 2H）, 3.68-4.08（m, 16H）, 4.15-4.56（m, 20H）, 5.09-5.39（m, 2H）, 5.43-5.60（m, 1H）, 5.97-6.23（m, 3H）, 6.44-6.59（m, 1H）, 6.69-6.86（m, 4H）, 7.11-7.66（m, 20H）, 7.80-8.29（m, 6H）, 8.59-8.74（m, 1H）, 9.21-10.21（m, 4H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.78 - -1.26（m）。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2909.3931。
工程３－３の方法に従って、化合物３２（4.00 g、1.89 mmol）及び化合物１５（2.27 g、2.65 mmol）から化合物３３（5.20 g、収率94.9 %）を黄褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：d 0.78-0.97（m, 9H）, 1.16-1.56（m, 90H）, 1,67-2.12（m, 12H）, 2.32-2.96（m, 13H）, 3.09-3.27（m, 1H）, 3.34-3.52（m, 2H）, 3.68-4.08（m, 16H）, 4.15-4.56（m, 20H）, 5.09-5.39（m, 2H）, 5.43-5.60（m, 1H）, 5.97-6.23（m, 3H）, 6.44-6.59（m, 1H）, 6.69-6.86（m, 4H）, 7.11-7.66（m, 20H）, 7.80-8.29（m, 6H）, 8.59-8.74（m, 1H）, 9.21-10.21（m, 4H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.78 - -1.26（m）。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2909.3931。
【0116】
実施例１２（４量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物３４の合成
【0117】
【化12】
【0118】
窒素雰囲気下、化合物３３（1.00 g、0.346 mmol）、メタノール（333 mg、10.4 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（5.13 mg、34.6 μmol）のジクロロメタン（6.9 g）溶液を、室温で2時間撹拌した。反応液をカラムクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ジクロロメタン-メタノール）で精製することにより、化合物３４（493 mg、収率78.3 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3/CD3OD 97/3 [v/v]）：δ 1.75-1.97（m, 6H）, 2.19-2.98（m, 13H）, 3.09-3.24（m, 1H）, 3.43-3.53（m, 2H）, 3.68-3.86（m, 6H）, 3.99-4.60（m, 17H）, 5.07-5.42（m, 3H）, 6.04-6.29（m, 3H）, 6.47-6.59（m, 1H）, 6.70-6.88（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 11H）, 7.41-7.71（m, 7H）, 7.88-8.14（m, 5H）, 8.16-8.25（m, 1H）, 8.63-8.73（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.68 - -1.18（m）。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1840.4892。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3/CD3OD 97/3 [v/v]）：δ 1.75-1.97（m, 6H）, 2.19-2.98（m, 13H）, 3.09-3.24（m, 1H）, 3.43-3.53（m, 2H）, 3.68-3.86（m, 6H）, 3.99-4.60（m, 17H）, 5.07-5.42（m, 3H）, 6.04-6.29（m, 3H）, 6.47-6.59（m, 1H）, 6.70-6.88（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 11H）, 7.41-7.71（m, 7H）, 7.88-8.14（m, 5H）, 8.16-8.25（m, 1H）, 8.63-8.73（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.68 - -1.18（m）。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1840.4892。
【0119】
実施例１３（硫化型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物３５の合成
【0120】
【化13】
【0121】
窒素雰囲気下、化合物８（3.00 g、2.14 mmol）、化合物９（2.57 g、3.00 mmol）及びモレキュラーシーブ３Ａ（0.60 g）をジクロロメタン（29 g）に懸濁させ、室温でＢＴＴ（480 mg、3.00 mmol）を加えて、室温にて3時間撹拌した。15 ℃に冷却後、ビス(フェニルアセチル)ジスルフィド（1.30 g、4.30 mmol）を加えて室温に昇温し2.5時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（130 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物３５（4.58 g、収率97.9 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.79-0.98（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.28-2.44（m, 1H）, 2.58-3.00（m, 4H）, 3.10-3.34（m, 1H）, 3.37-3.57（m, 2H）, 3.71-3.92（m, 10H）, 3.93-4.08（m, 6H）, 4.09-4.58（m, 10H）, 5.37-5.57（m, 2H）, 6.25-6.39（m, 1H）, 6.43-6.60（m, 1H）, 6.74-6.89（m, 4H）, 7.15-7.34（m, 9H）, 7.35-7.44（m, 2H）, 7.44-7.70（m, 7H）, 7.77-7.94（m, 2H）, 7.98-8.15（m, 3H）, 8.16-8.31（m, 1H）, 8.60-9.30（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ 68.50, 68.65。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2211.2168。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.79-0.98（m, 9H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.28-2.44（m, 1H）, 2.58-3.00（m, 4H）, 3.10-3.34（m, 1H）, 3.37-3.57（m, 2H）, 3.71-3.92（m, 10H）, 3.93-4.08（m, 6H）, 4.09-4.58（m, 10H）, 5.37-5.57（m, 2H）, 6.25-6.39（m, 1H）, 6.43-6.60（m, 1H）, 6.74-6.89（m, 4H）, 7.15-7.34（m, 9H）, 7.35-7.44（m, 2H）, 7.44-7.70（m, 7H）, 7.77-7.94（m, 2H）, 7.98-8.15（m, 3H）, 8.16-8.31（m, 1H）, 8.60-9.30（m, 3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ 68.50, 68.65。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2211.2168。
【0122】
実施例１４（硫化型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物３６の合成
【0123】
【化14】
【0124】
実施例４の方法に従って、化合物３５（1.00 g、0.457 mmol）、エチレングリコール（425 mg、6.85 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（10.1 mg、68.1 mmol）から化合物３６（433 mg、収率84.6 %）を微黄色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 2.17-2.36（m, 1H）, 2.62-2.87（m, 4H）, 3.01-3.17（m, 1H）, 3.36-3.57（m, 2H）, 3.72-3.83（m, 6H）, 4.08-4.58（m, 7H）, 5.36-5.52（m, 1H）, 6.17-6.30（m, 1H）, 6.44-6.61（m, 1H）, 6.74-6.87（m, 4H）, 7.15-7.33（m, 7H）, 7.34-7.67（m, 9H）, 7.77-7.91（m, 2H）, 7.95-8.07（m, 2H）, 8.14-8.31（m, 2H）, 8.60-8.68（m, 1H）, 8.83-9.60（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ 68.58, 68.81。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1142.3201。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 2.17-2.36（m, 1H）, 2.62-2.87（m, 4H）, 3.01-3.17（m, 1H）, 3.36-3.57（m, 2H）, 3.72-3.83（m, 6H）, 4.08-4.58（m, 7H）, 5.36-5.52（m, 1H）, 6.17-6.30（m, 1H）, 6.44-6.61（m, 1H）, 6.74-6.87（m, 4H）, 7.15-7.33（m, 7H）, 7.34-7.67（m, 9H）, 7.77-7.91（m, 2H）, 7.95-8.07（m, 2H）, 8.14-8.31（m, 2H）, 8.60-8.68（m, 1H）, 8.83-9.60（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ 68.58, 68.81。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1142.3201。
【0125】
実施例１５（アリル型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物３８の合成
【0126】
【化15】
【0127】
窒素雰囲気下、化合物３７（1.55 g、2.45 mmol）、アリルテトライソプロピルホスホロジアミダイト（770 mg、2.67 mmol）のジクロロメタン（10 g）溶液に、室温で４，５－ジシアノイミダゾール（288 mg、2.44 mmol）を加えて、室温にて1時間撹拌した（以下「反応液３７」とも称する）。化合物８（2.00 g、1.52 mmol）及びモレキュラーシーブ３Ａ（0.40 g）をジクロロメタン（6.0 g）に懸濁させ、室温で反応液３７とＢＴＴ（440 mg、2.75 mmol）を加えて、室温にて1.5時間撹拌した。室温で5.0 M ＴＢＨＰ／ｎ－デカン溶液（762 μL、3.80 mmol）を加えて2時間撹拌した後、反応液をろ過し、ろ液をアセトニトリル（90 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物３８（2.71 g、収率86.9 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.78-0.96（m, 9H）, 1.15-1.54（m, 90H）, 1.65-1.98（m, 9H）, 2.26-2.63（m, 3H）2.87-3.06（m, 1H）, 3.36-3.35（m, 2H）, 3.71-3.91（m, 10H）, 3.93-4.08（m, 6H）, 4.12-4.67（m, 10H）, 5.04-5.52（m, 3H）, 5.80-6.00（m, 1H）, 6.21-6.40（m, 2H）, 6.78-6.94（m, 4H）, 7.19-7.42（m, 13H）, 7.46-7.70（m, 3H）, 7.79-8.02（m, 2H）, 8.05-8.27（m, 1H）, 8.28-9.06（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -0.91, -0.65。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2069.2169。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.78-0.96（m, 9H）, 1.15-1.54（m, 90H）, 1.65-1.98（m, 9H）, 2.26-2.63（m, 3H）2.87-3.06（m, 1H）, 3.36-3.35（m, 2H）, 3.71-3.91（m, 10H）, 3.93-4.08（m, 6H）, 4.12-4.67（m, 10H）, 5.04-5.52（m, 3H）, 5.80-6.00（m, 1H）, 6.21-6.40（m, 2H）, 6.78-6.94（m, 4H）, 7.19-7.42（m, 13H）, 7.46-7.70（m, 3H）, 7.79-8.02（m, 2H）, 8.05-8.27（m, 1H）, 8.28-9.06（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -0.91, -0.65。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2069.2169。
【0128】
実施例１６（アリル型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物３９の合成
【0129】
【化16】
【0130】
窒素雰囲気下、化合物３８（1.00 g、0.488 mmol）、メタノール（469 mg、14.6 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（10.9 mg、73.5 μmol）のジクロロメタン（9.7 g）溶液を、室温で3時間撹拌した。反応液をカラムクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ジクロロメタン-アセトン）で精製することにより、化合物３９（393 mg、収率82.2 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.80-1.95（m, 3H）, 2.08-2.54（m, 3H）, 2.91-3.13（m, 1H）, 3.38-3.58（m, 2H）, 3.66-3.86（m, 6H）, 4.00-4.69（m, 7H）, 4.98-5.44（m, 3H）, 5.82-6.00（m, 1H）, 6.16-6.35（m, 2H）, 6.78-6.95（m, 4H）, 7.18-7.47（m, 11H）, 7.47-7.67（m, 3H）, 7.84-8.01（m, 2H）, 8.04-8.21（m, 1H）, 8.52-9.49（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.38, -0.03。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1000.3106。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.80-1.95（m, 3H）, 2.08-2.54（m, 3H）, 2.91-3.13（m, 1H）, 3.38-3.58（m, 2H）, 3.66-3.86（m, 6H）, 4.00-4.69（m, 7H）, 4.98-5.44（m, 3H）, 5.82-6.00（m, 1H）, 6.16-6.35（m, 2H）, 6.78-6.95（m, 4H）, 7.18-7.47（m, 11H）, 7.47-7.67（m, 3H）, 7.84-8.01（m, 2H）, 8.04-8.21（m, 1H）, 8.52-9.49（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.38, -0.03。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1000.3106。
【0131】
実施例１７（ＲＮＡ型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物４４の合成
【0132】
【化17】
【0133】
工程１７－１：化合物４１（ＲＮＡ型のヌクレオシド保護体）の合成
工程３－１の方法に従って、化合物５（5.00 g、4.44 mmol）及び化合物４０（4.28 g、6.22 mmol）から化合物４１（6.72 g、収率86.2 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.16-1.55（m, 90H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 3.36（s, 3H）, 3.40-3.50（m, 1H）, 3.57-3.67（m, 1H）, 3.75-3.93（m, 10H）, 3.95-4.08（m, 6H）, 4.39-4.54（m, 5H）, 4.96-5.08（m, 1H）, 5.58-5.66（m, 1H）, 6.09-6.17（m, 1H）, 6.78-6.87（m, 4H）, 7.17-7.37（m, 10H）, 7.39-7.47（m, 2H）, 7.48-7.65（m, 3H）, 7.98-8.08（m, 1H）, 8.19（s, 1H）, 8.69（brs, 1H）, 9.02（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 32.0, 55.2, 59.6, 55.2, 59.6, 62.8, 63.8, 66.2, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 73.9, 80.9, 81.7, 87.1, 108.1, 113.3, 123.6, 124.4, 127.1, 127.9, 128.0, 128.1, 130.0, 130.0, 132.9, 133.6, 135.3, 135.4, 142.1, 142.6, 144.3, 149.6, 151.9, 152.8, 152.8, 156.4, 156.9, 158.7, 164.5, 166.4。
工程３－１の方法に従って、化合物５（5.00 g、4.44 mmol）及び化合物４０（4.28 g、6.22 mmol）から化合物４１（6.72 g、収率86.2 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.16-1.55（m, 90H）, 1.66-1.89（m, 6H）, 3.36（s, 3H）, 3.40-3.50（m, 1H）, 3.57-3.67（m, 1H）, 3.75-3.93（m, 10H）, 3.95-4.08（m, 6H）, 4.39-4.54（m, 5H）, 4.96-5.08（m, 1H）, 5.58-5.66（m, 1H）, 6.09-6.17（m, 1H）, 6.78-6.87（m, 4H）, 7.17-7.37（m, 10H）, 7.39-7.47（m, 2H）, 7.48-7.65（m, 3H）, 7.98-8.08（m, 1H）, 8.19（s, 1H）, 8.69（brs, 1H）, 9.02（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 32.0, 55.2, 59.6, 55.2, 59.6, 62.8, 63.8, 66.2, 68.3, 69.2, 69.4, 73.5, 73.9, 80.9, 81.7, 87.1, 108.1, 113.3, 123.6, 124.4, 127.1, 127.9, 128.0, 128.1, 130.0, 130.0, 132.9, 133.6, 135.3, 135.4, 142.1, 142.6, 144.3, 149.6, 151.9, 152.8, 152.8, 156.4, 156.9, 158.7, 164.5, 166.4。
【0134】
工程１７－２：化合物４２の合成
工程３－２の方法に従って、化合物４１（6.20 g、3.53 mmol）から化合物４２（5.05 g、収率98.4 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.69-1.86（m, 6H）, 3.27（s, 3H）, 3.77-3.92（m, 5H）, 3.95-4.08（m, 7H）, 4.41-4.57（m, 5H）, 4.81-4.92（m, 1H）, 5.74-5.85（m, 1H）, 5.89-5.98（m, 1H）, 6.30（brs, 1H）, 7.27（s, 1H）, 7.50-7.68（m, 3H）, 7.99-8.08（m, 2H）, 8.11（s, 1H）, 8.81（brs, 1H）, 9.12（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 59.8, 62.9, 63.8, 66.2, 68.3, 69.3, 69.4, 73.5, 75.0, 81.1, 85.4, 89.4, 108.2, 124.4, 124.7, 127.9, 129.0, 133.1, 133.3, 142.6, 143.4, 150.4, 150.5, 152.2, 152.9, 156.4, 157.0, 164.4, 166.4。
工程３－２の方法に従って、化合物４１（6.20 g、3.53 mmol）から化合物４２（5.05 g、収率98.4 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.69-1.86（m, 6H）, 3.27（s, 3H）, 3.77-3.92（m, 5H）, 3.95-4.08（m, 7H）, 4.41-4.57（m, 5H）, 4.81-4.92（m, 1H）, 5.74-5.85（m, 1H）, 5.89-5.98（m, 1H）, 6.30（brs, 1H）, 7.27（s, 1H）, 7.50-7.68（m, 3H）, 7.99-8.08（m, 2H）, 8.11（s, 1H）, 8.81（brs, 1H）, 9.12（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 59.8, 62.9, 63.8, 66.2, 68.3, 69.3, 69.4, 73.5, 75.0, 81.1, 85.4, 89.4, 108.2, 124.4, 124.7, 127.9, 129.0, 133.1, 133.3, 142.6, 143.4, 150.4, 150.5, 152.2, 152.9, 156.4, 157.0, 164.4, 166.4。
【0135】
工程１７－３：化合物４４の合成
工程３－３の方法に従って、化合物４２（4.50 g、3.09 mmol）及び化合物４３（3.73 g、4.33 mmol）から化合物４４（6.51 g、収率94.5 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.04-0.18（m, 6H）, 0.80-0.97（m, 18H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.47-2.74（m, 2H）, 3.32-3.70（m, 5H）, 3.73-3.92（m, 10H）, 3.94-4.59（m, 16H）, 4.85-5.06（m, 2H）, 5.18-5.29（m, 1H）, 5.59-5.71（m, 1H）, 5.92-6.14（m, 2H）, 6.78-6.90（m, 4H）, 7.16-7.38（m, 12H）, 7.45-7.65（m, 3H）, 7.78-7.88（m, 1H）, 7.98-8.10（m, 1H）, 8.15-8.26（m, 1H）, 8.76-8.86（m, 1H）, 8.87-9.12（m, 1H）, 9.24-9.40（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.32, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2252.2939。
工程３－３の方法に従って、化合物４２（4.50 g、3.09 mmol）及び化合物４３（3.73 g、4.33 mmol）から化合物４４（6.51 g、収率94.5 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.04-0.18（m, 6H）, 0.80-0.97（m, 18H）, 1.17-1.54（m, 90H）, 1.68-1.87（m, 6H）, 2.47-2.74（m, 2H）, 3.32-3.70（m, 5H）, 3.73-3.92（m, 10H）, 3.94-4.59（m, 16H）, 4.85-5.06（m, 2H）, 5.18-5.29（m, 1H）, 5.59-5.71（m, 1H）, 5.92-6.14（m, 2H）, 6.78-6.90（m, 4H）, 7.16-7.38（m, 12H）, 7.45-7.65（m, 3H）, 7.78-7.88（m, 1H）, 7.98-8.10（m, 1H）, 8.15-8.26（m, 1H）, 8.76-8.86（m, 1H）, 8.87-9.12（m, 1H）, 9.24-9.40（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.32, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2252.2939。
【0136】
実施例１８（ＲＮＡ型の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物４５の合成
【0137】
【化18】
【0138】
実施例１６の方法に従って、化合物４４（1.00 g、0.448 mmol）、メタノール（431 mg、13.5 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（6.64 mg、44.8 μmol）から化合物４５（432 mg、収率82.9 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.03-0.20（m, 6H）, 0.75-0.96（m, 9H）, 2.48-2.78（m, 2H）, 3.41-3.68（m, 5H）, 3.72-3.87（m, 6H）, 3.95-4.60（m, 9H）, 4.84-4.99（m, 1H）, 5.22-5.31（m, 1H）, 5.98-6.08（m, 1H）, 6.10-6.22（m, 1H）, 6.77-6.92（m, 4H）, 7.17-7.41（m, 10H）, 7.45-7.65（m, 3H）, 7.78-7.89（m, 1H）, 7.98-8.11（m, 1H）, 8.17-8.31（m, 1H）, 8.75-8.88（m, 1H）, 9.33-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -0.91, -0.80。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1183.3982。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.03-0.20（m, 6H）, 0.75-0.96（m, 9H）, 2.48-2.78（m, 2H）, 3.41-3.68（m, 5H）, 3.72-3.87（m, 6H）, 3.95-4.60（m, 9H）, 4.84-4.99（m, 1H）, 5.22-5.31（m, 1H）, 5.98-6.08（m, 1H）, 6.10-6.22（m, 1H）, 6.77-6.92（m, 4H）, 7.17-7.41（m, 10H）, 7.45-7.65（m, 3H）, 7.78-7.89（m, 1H）, 7.98-8.11（m, 1H）, 8.17-8.31（m, 1H）, 8.75-8.88（m, 1H）, 9.33-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -0.91, -0.80。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1183.3982。
【0139】
実施例１９（疑似固相保護基（変形例１）の合成）：化合物４７の合成
【0140】
【化19】
【0141】
工程１９－１：化合物４６の合成
ジエチレングリコールをエチレングリコールに変更したこと以外は工程２－１の方法に従って、化合物３（10.0 g、10.8 mmol）及びエチレングリコール（10.0 g、161 mmol）から化合物４６（10.2 g、収率97.0 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.67-1.88（m, 6H）, 3.90-4.10（m, 8H）, 4.41-4.51（m, 2H）, 7.26（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 61.7, 66.8, 69.4, 69.5, 73.6, 108.6, 124.4, 143.1, 153.0, 167.0。
ジエチレングリコールをエチレングリコールに変更したこと以外は工程２－１の方法に従って、化合物３（10.0 g、10.8 mmol）及びエチレングリコール（10.0 g、161 mmol）から化合物４６（10.2 g、収率97.0 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.16-1.54（m, 90H）, 1.67-1.88（m, 6H）, 3.90-4.10（m, 8H）, 4.41-4.51（m, 2H）, 7.26（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.4, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 61.7, 66.8, 69.4, 69.5, 73.6, 108.6, 124.4, 143.1, 153.0, 167.0。
【0142】
工程１９－２：化合物４７の合成
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（2.74 g、21.6 mmol）及び化合物４６（7.00 g、7.20 mmol）から化合物４７（6.59 g、収率84.8 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.83-0.93（m, 9H）, 1.16-1.50（m, 90H）, 1.61-1.79（m, 6H）, 3.80-4.02（m, 6H）, 4.22-4.56（m, 4H）, 7.16（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.2, 26.3, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.9, 29.9, 29.9, 30.5, 32.0, 62.2, 63.4, 69.4, 73.5, 108.5, 124.0, 143.0, 152.9, 162.1, 165.2, 166.5。
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（2.74 g、21.6 mmol）及び化合物４６（7.00 g、7.20 mmol）から化合物４７（6.59 g、収率84.8 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.83-0.93（m, 9H）, 1.16-1.50（m, 90H）, 1.61-1.79（m, 6H）, 3.80-4.02（m, 6H）, 4.22-4.56（m, 4H）, 7.16（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.2, 26.3, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.9, 29.9, 29.9, 30.5, 32.0, 62.2, 63.4, 69.4, 73.5, 108.5, 124.0, 143.0, 152.9, 162.1, 165.2, 166.5。
【0143】
実施例２０（Ａ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）：化合物５０の合成
【0144】
【化20】
【0145】
工程２０－１：化合物４８（ヌクレオシド保護体）の合成
工程５－１の方法に従って、化合物４７（8.00 g、7.40 mmol）及び化合物１８（5.84 g、8.88 mmol）から化合物４８（11.7 g、収率93.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.16-1.53（m, 90H）, 1.65-1.87（m, 6H）, 2.68-2.80（m, 1H）, 3.13-3.27（m, 1H）, 3.41-3.56（m, 2H）, 3.72-3.82（m, 6H）, 3.94-4.06（m, 6H）, 4.35-4.42（m, 1H）, 4.55-4.72（m, 4H）, 5.64-5.74（m, 1H）, 6.45-6.56（m, 1H）, 6.73-6.86（m, 4H）, 7.16-7.33（m, 9H）, 7.35-7.42（m, 2H）, 7.50-7.66（m, 3H）, 7.98-8.08（m, 2H）, 8.18（s, 1H）, 8.70（brs, 1H）, 8.94（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.3, 55.2, 62.0, 63.3, 64.8, 69.2, 73.5, 78.2, 84.0, 84.7, 86.9, 108.2, 113.2, 123.4, 123.9, 127.0, 127.8, 128.0, 128.9, 130.0, 130.0, 132.8, 133.6, 135.3, 135.4, 141.4, 142.8, 144.3, 149.6, 151.5, 152.7, 152.9, 156.7, 157.0, 158.6, 158.6, 164.5, 166.1。
工程５－１の方法に従って、化合物４７（8.00 g、7.40 mmol）及び化合物１８（5.84 g、8.88 mmol）から化合物４８（11.7 g、収率93.8 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.16-1.53（m, 90H）, 1.65-1.87（m, 6H）, 2.68-2.80（m, 1H）, 3.13-3.27（m, 1H）, 3.41-3.56（m, 2H）, 3.72-3.82（m, 6H）, 3.94-4.06（m, 6H）, 4.35-4.42（m, 1H）, 4.55-4.72（m, 4H）, 5.64-5.74（m, 1H）, 6.45-6.56（m, 1H）, 6.73-6.86（m, 4H）, 7.16-7.33（m, 9H）, 7.35-7.42（m, 2H）, 7.50-7.66（m, 3H）, 7.98-8.08（m, 2H）, 8.18（s, 1H）, 8.70（brs, 1H）, 8.94（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.4, 31.9, 37.3, 55.2, 62.0, 63.3, 64.8, 69.2, 73.5, 78.2, 84.0, 84.7, 86.9, 108.2, 113.2, 123.4, 123.9, 127.0, 127.8, 128.0, 128.9, 130.0, 130.0, 132.8, 133.6, 135.3, 135.4, 141.4, 142.8, 144.3, 149.6, 151.5, 152.7, 152.9, 156.7, 157.0, 158.6, 158.6, 164.5, 166.1。
【0146】
工程２０－２：化合物４９の合成
工程３－２の方法に従って、化合物４８（10.0 g、5.94 mmol）から化合物４９（7.95 g、収率97.0 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-1.85（m, 6H）, 2.48-2.62（m, 1H）, 3.21-3.36（m, 1H）, 3.87-4.09（m, 8H）, 4.32-4.40（m, 1H）, 4.53-4.74（m, 4H）, 5.70-5.79（m, 1H）, 6.28-6.40（m, 1H）, 7.26（brs, 1H）, 7.51-7.59（m, 2H）, 7.60-7.67（m, 1H）, 8.00-8.06（m, 2H）, 8.10（s, 1H）, 8.80（s, 1H）, 9.05（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 37.5, 61.9, 63.2, 64.7, 69.3, 73.6, 79.3, 86.9, 87.6, 108.2, 123.9, 124.6, 127.9, 129.0, 133.0, 133.4, 142.6, 142.8, 150.5, 150.5, 152.2, 152.9, 156.7, 157.1, 164.5, 166.0。
工程３－２の方法に従って、化合物４８（10.0 g、5.94 mmol）から化合物４９（7.95 g、収率97.0 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-1.85（m, 6H）, 2.48-2.62（m, 1H）, 3.21-3.36（m, 1H）, 3.87-4.09（m, 8H）, 4.32-4.40（m, 1H）, 4.53-4.74（m, 4H）, 5.70-5.79（m, 1H）, 6.28-6.40（m, 1H）, 7.26（brs, 1H）, 7.51-7.59（m, 2H）, 7.60-7.67（m, 1H）, 8.00-8.06（m, 2H）, 8.10（s, 1H）, 8.80（s, 1H）, 9.05（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 30.3, 31.9, 37.5, 61.9, 63.2, 64.7, 69.3, 73.6, 79.3, 86.9, 87.6, 108.2, 123.9, 124.6, 127.9, 129.0, 133.0, 133.4, 142.6, 142.8, 150.5, 150.5, 152.2, 152.9, 156.7, 157.1, 164.5, 166.0。
【0147】
工程２０－３：化合物５０の合成
工程３－３の方法に従って、化合物４９（7.30 g、5.29 mmol）及び化合物２１（6.21 g、7.39 mmol）から化合物５０（10.7 g、収率94.9 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 9H）, 0.97-1.54（m, 97H）, 1.67-1.86（m, 6H）, 2.33-2.48（m, 1H）, 2.52-2.97（m, 6H）, 3.19-3.52（m, 3H）, 3.66-3.81（m, 6H）, 3.91-4.75（m, 16H）, 5.19-5.38（m, 1H）, 5.67-5.84（m, 1H）, 5.99-6.12（m, 1H）, 6.40-6.55（m, 1H）, 6.68-6.84（m, 4H）, 7.12-7.63（m, 14H）, 7.66-7.75（m, 1H）, 7.84-8.03（m, 2H）, 8.22-8.33（m, 1H）, 8.74-8.86（m, 1H）, 9.03-9.29（m, 1H）, 9.41-9.80（m, 1H）, 11.71-12.27（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.50, -1.19。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+2157.2363。
工程３－３の方法に従って、化合物４９（7.30 g、5.29 mmol）及び化合物２１（6.21 g、7.39 mmol）から化合物５０（10.7 g、収率94.9 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.94（m, 9H）, 0.97-1.54（m, 97H）, 1.67-1.86（m, 6H）, 2.33-2.48（m, 1H）, 2.52-2.97（m, 6H）, 3.19-3.52（m, 3H）, 3.66-3.81（m, 6H）, 3.91-4.75（m, 16H）, 5.19-5.38（m, 1H）, 5.67-5.84（m, 1H）, 5.99-6.12（m, 1H）, 6.40-6.55（m, 1H）, 6.68-6.84（m, 4H）, 7.12-7.63（m, 14H）, 7.66-7.75（m, 1H）, 7.84-8.03（m, 2H）, 8.22-8.33（m, 1H）, 8.74-8.86（m, 1H）, 9.03-9.29（m, 1H）, 9.41-9.80（m, 1H）, 11.71-12.27（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.50, -1.19。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+2157.2363。
【0148】
実施例２１（Ａ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）：化合物２３の合成
【0149】
【化21】
【0150】
実施例４の方法に従って、化合物５０（1.00 g、0.468 mmol）、エチレングリコール（436 mg、7.02 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（6.94 mg、46.8 μmol）から化合物２３（485 mg、収率93.3 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.02-1.19（m, 6H）, 2.38-3.15（m, 6H）, 3.24-3.34（m, 2H）, 3.68-3.80（m, 6H）, 3.96-4.52（m, 6H）, 4.87-5.06（m, 1H）, 5.17-5.47（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.41-6.55（m, 1H）, 6.70-6.85（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 9H）,7.41-7.55（m, 2H）, 7.55-7.71（m, 2H）, 7.85-8.06（m, 2H）, 8.20-8.44（m, 1H）, 8.72-8.87（m, 1H）, 9.11-9.32（m, 1H）, 9.50-10.14（m, 1H）, 11.87-12.09（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -0.94。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1132.3650。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.02-1.19（m, 6H）, 2.38-3.15（m, 6H）, 3.24-3.34（m, 2H）, 3.68-3.80（m, 6H）, 3.96-4.52（m, 6H）, 4.87-5.06（m, 1H）, 5.17-5.47（m, 1H）, 6.01-6.13（m, 1H）, 6.41-6.55（m, 1H）, 6.70-6.85（m, 4H）, 7.12-7.41（m, 9H）,7.41-7.55（m, 2H）, 7.55-7.71（m, 2H）, 7.85-8.06（m, 2H）, 8.20-8.44（m, 1H）, 8.72-8.87（m, 1H）, 9.11-9.32（m, 1H）, 9.50-10.14（m, 1H）, 11.87-12.09（m, 1H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.57, -0.94。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1132.3650。
【0151】
実施例２２（疑似固相保護基（変形例２）の合成）:化合物５３の合成
【0152】
【化22】
【0153】
工程２２－１：化合物５２の合成
窒素雰囲気下、１－オクタデカノール（2.46 g、9.09 mmol）、水酸化カリウム（532 mg、9.48 mmol）、トルエン（7.6 g）及び水（1.0 g）の混合物を加熱還流下2時間撹拌し、ディーンスタークトラップで水を除去した後、ｎ－テトラブチルアンモニウムブロミド（139 mg、0.431 mmol）、化合物５１（0.400 g、4.32 mmol）及びＴＨＦ（3.8 g）を加え40 ℃で16時間撹拌した。反応液に10 %塩化アンモニウム水溶液を加え分液し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、得られた有機層に無水硫酸ナトリウムを加え、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣に窒素雰囲気下、１－オクタデカノール（1.05 g、3.88 mmol）及びジクロロメタン（90 g）を加え、10 ℃に冷却後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（123 mg、0.867 mmol）を加えた。10 ℃にて3時間撹拌後、5 %炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水層をジクロロメタンで再抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄後、得られた有機層に無水硫酸ナトリウムを加え、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して得られた固体をイソプロピルアルコールで洗浄し、室温で減圧乾燥することで化合物５２（1.29 g、収率50.0 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 6H）, 1.16-1.39（m, 60H）, 1.49-1.67（m, 4H）, 2.44-2.51（m, 1H）, 3.37-3.54（m, 8H）, 3.89-4.00（m, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 69.5, 71.7, 71.8。
窒素雰囲気下、１－オクタデカノール（2.46 g、9.09 mmol）、水酸化カリウム（532 mg、9.48 mmol）、トルエン（7.6 g）及び水（1.0 g）の混合物を加熱還流下2時間撹拌し、ディーンスタークトラップで水を除去した後、ｎ－テトラブチルアンモニウムブロミド（139 mg、0.431 mmol）、化合物５１（0.400 g、4.32 mmol）及びＴＨＦ（3.8 g）を加え40 ℃で16時間撹拌した。反応液に10 %塩化アンモニウム水溶液を加え分液し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、得られた有機層に無水硫酸ナトリウムを加え、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣に窒素雰囲気下、１－オクタデカノール（1.05 g、3.88 mmol）及びジクロロメタン（90 g）を加え、10 ℃に冷却後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（123 mg、0.867 mmol）を加えた。10 ℃にて3時間撹拌後、5 %炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水層をジクロロメタンで再抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄後、得られた有機層に無水硫酸ナトリウムを加え、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して得られた固体をイソプロピルアルコールで洗浄し、室温で減圧乾燥することで化合物５２（1.29 g、収率50.0 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.81-0.95（m, 6H）, 1.16-1.39（m, 60H）, 1.49-1.67（m, 4H）, 2.44-2.51（m, 1H）, 3.37-3.54（m, 8H）, 3.89-4.00（m, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 69.5, 71.7, 71.8。
【0154】
工程２２－２：化合物５３の合成
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（1.15 g、9.06 mmol）及び化合物５２（1.80 g、3.01 mmol）から化合物５３（1.91 g、収率90.1 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-1.00（m, 6H）, 1.13-1.39（m, 56H）, 1.45-1.65（m, 4H）, 1.73-2.01（m, 4H）, 3.28-3.66（m, 8H）, 4.85-5.05（m, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 25.9, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 31.9, 68.6, 72.0, 74.4, 157.1, 157.6。
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（1.15 g、9.06 mmol）及び化合物５２（1.80 g、3.01 mmol）から化合物５３（1.91 g、収率90.1 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-1.00（m, 6H）, 1.13-1.39（m, 56H）, 1.45-1.65（m, 4H）, 1.73-2.01（m, 4H）, 3.28-3.66（m, 8H）, 4.85-5.05（m, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 14.1, 22.7, 25.9, 26.1, 29.3, 29.4, 29.4, 29.6, 29.6, 29.7, 29.7, 29.7, 31.9, 68.6, 72.0, 74.4, 157.1, 157.6。
【0155】
実施例２３（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）:化合物５６の合成
【0156】
【化23】
【0157】
工程２３－１：化合物５４（ヌクレオシド保護体）の合成
工程３－１の方法に従って、化合物５３（2.00 g、2.83 mmol）及び化合物６（2.32 g、4.26 mmol）から化合物５４（2.60 g、収率76.9 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.16-1.45（m, 63H）, 1.49-1.60（m, 4H）, 2.43-2.68（m, 2H）, 3.35-3.59（m, 6H）, 3.64（d, 4H, J= 5.2Hz）, 3.80（s, 6H）, 4.20-4.28（m, 1H）, 5.27（sext, 1H, J= 5.2 Hz）, 5.51-5.62（m, 1H）, 6.43-6.53（m, 1H）, 6.79-6.92（m, 4H）, 7.20-7.42（m, 7H）, 7.59-7.66（m, 1H）, 8.24（s, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 11.6, 14.1, 22.7, 26.0, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 37.7, 55.3, 63.5, 68.7, 71.8, 75.2, 78.1, 83.6, 84.3, 87.3, 111.7, 113.4, 127.3, 128.1, 128.1, 130.0, 130.1, 135.0, 135.1, 135.2, 144.1, 150.1, 156.6, 157.2, 158.8, 158.8, 163.3。
工程３－１の方法に従って、化合物５３（2.00 g、2.83 mmol）及び化合物６（2.32 g、4.26 mmol）から化合物５４（2.60 g、収率76.9 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.16-1.45（m, 63H）, 1.49-1.60（m, 4H）, 2.43-2.68（m, 2H）, 3.35-3.59（m, 6H）, 3.64（d, 4H, J= 5.2Hz）, 3.80（s, 6H）, 4.20-4.28（m, 1H）, 5.27（sext, 1H, J= 5.2 Hz）, 5.51-5.62（m, 1H）, 6.43-6.53（m, 1H）, 6.79-6.92（m, 4H）, 7.20-7.42（m, 7H）, 7.59-7.66（m, 1H）, 8.24（s, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 11.6, 14.1, 22.7, 26.0, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 37.7, 55.3, 63.5, 68.7, 71.8, 75.2, 78.1, 83.6, 84.3, 87.3, 111.7, 113.4, 127.3, 128.1, 128.1, 130.0, 130.1, 135.0, 135.1, 135.2, 144.1, 150.1, 156.6, 157.2, 158.8, 158.8, 163.3。
【0158】
工程２３－２：化合物５５の合成
工程３－２の方法に従って、化合物５４（2.40 g、2.01 mmol）から化合物５５（1.76 g、収率98.3 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.17-1.38（m, 60H）, 1.48-1.61（m, 4H）, 1.94（d, 3H, J= 1.2 Hz）, 2.43-2.70（m, 2H）, 3.37-3.53（m, 4H）, 3.64 （d, 4H, J= 5.2 Hz）, 3.90-4.01（m, 2H）, 4.19-4.25（m, 1H）, 5.29（sext, 1H, J= 5.2 Hz）, 5.48-5.56（m, 1H）, 6.16-6.23（m, 1H）, 7.43（d, 1H, J= 1.2 Hz）, 8.21（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 12.6, 14.1, 22.7, 26.0, 29.4, 29.5, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 36.7, 62.6, 69.7, 71.8, 75.2, 76.7, 77.7, 84.7, 87.2, 111.5, 136.7, 150.1, 156.7, 157.3, 163.2。
工程３－２の方法に従って、化合物５４（2.40 g、2.01 mmol）から化合物５５（1.76 g、収率98.3 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 0.80-0.95（m, 6H）, 1.17-1.38（m, 60H）, 1.48-1.61（m, 4H）, 1.94（d, 3H, J= 1.2 Hz）, 2.43-2.70（m, 2H）, 3.37-3.53（m, 4H）, 3.64 （d, 4H, J= 5.2 Hz）, 3.90-4.01（m, 2H）, 4.19-4.25（m, 1H）, 5.29（sext, 1H, J= 5.2 Hz）, 5.48-5.56（m, 1H）, 6.16-6.23（m, 1H）, 7.43（d, 1H, J= 1.2 Hz）, 8.21（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3）：δ 12.6, 14.1, 22.7, 26.0, 29.4, 29.5, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 31.9, 36.7, 62.6, 69.7, 71.8, 75.2, 76.7, 77.7, 84.7, 87.2, 111.5, 136.7, 150.1, 156.7, 157.3, 163.2。
【0159】
工程２３－３：化合物５６の合成
工程３－３の方法に従って、化合物５５（1.30 g、1.46 mmol）及び化合物９（1.70 g、2.04 mmol）から化合物５６（2.00 g、収率83.7 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ0.83-0.94（m, 6H）, 1.18-1.37（m, 60H）, 1.48-1.60（m, 4H）, 1.86-1.98（m, 3H）, 2.31-3.05（m, 6H）, 3.35-3.56（m,6H）, 3.59-3.70（m, 4H）, 3.73-3.86（m, 6H）, 4.09-4.46（m, 6H）, 5.08-5.21（m, 1H）, 5.23-5.34（m, 1H）, 5.36-5.52（m, 1H）, 6.20-6.36（m, 2H）, 6.79-6.93（m, 4H）, 7.20-7.40（m, 11H）, 7.47-7.66（m, 3H）, 7.82-7.96（m,2H）, 8.06-8.88（m,3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.61, -1.59。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1663.8936。
工程３－３の方法に従って、化合物５５（1.30 g、1.46 mmol）及び化合物９（1.70 g、2.04 mmol）から化合物５６（2.00 g、収率83.7 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ0.83-0.94（m, 6H）, 1.18-1.37（m, 60H）, 1.48-1.60（m, 4H）, 1.86-1.98（m, 3H）, 2.31-3.05（m, 6H）, 3.35-3.56（m,6H）, 3.59-3.70（m, 4H）, 3.73-3.86（m, 6H）, 4.09-4.46（m, 6H）, 5.08-5.21（m, 1H）, 5.23-5.34（m, 1H）, 5.36-5.52（m, 1H）, 6.20-6.36（m, 2H）, 6.79-6.93（m, 4H）, 7.20-7.40（m, 11H）, 7.47-7.66（m, 3H）, 7.82-7.96（m,2H）, 8.06-8.88（m,3H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.61, -1.59。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1663.8936。
【0160】
実施例２４（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）:化合物１１の合成
【0161】
【化24】
【0162】
実施例４の方法に従って、化合物５６（1.00 g、0.609 mmol）、エチレングリコール（567 mg、9.13 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（13.5 mg、91.1 μmol）から化合物１１（485 mg、収率80.4 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1013.3062。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1013.3062。
【0163】
実施例２５（疑似固相保護基（変形例３）の合成）:化合物５８の合成
【0164】
【化25】
【0165】
工程２５－１：化合物５７の合成
窒素雰囲気下、化合物３（13.0 g、14.0 mmol）、２－（メチルアミノ）エタノール（3.16 g、42.1 mmol）及びＮ－メチルイミダゾール（3.46 g、42.1 mmol）をＴＨＦ（120 g）に懸濁させ、室温でＨＢＴＵ（7.97 g、21.0 mmol）を加え、室温にて3時間撹拌した。反応液をアセトニトリル（330 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物５７（13.0 g、収率93.9 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.82-0.94（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-1.84（m, 6H）, 3.06（brs, 3H）, 3.56-3.72（m, 2H）, 3.77-3.91（m, 2H）, 3.94-4.02（m, 6H）, 6.63（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 38.6, 51.7, 61.2, 69.5, 73.5, 106.3, 110.8, 118.5, 124.3, 130.6, 139.9, 153.2, 173.3。
窒素雰囲気下、化合物３（13.0 g、14.0 mmol）、２－（メチルアミノ）エタノール（3.16 g、42.1 mmol）及びＮ－メチルイミダゾール（3.46 g、42.1 mmol）をＴＨＦ（120 g）に懸濁させ、室温でＨＢＴＵ（7.97 g、21.0 mmol）を加え、室温にて3時間撹拌した。反応液をアセトニトリル（330 g）に加えて析出した固体をろ過した。得られた固体をアセトニトリルで洗浄後、室温で減圧乾燥し、化合物５７（13.0 g、収率93.9 %）を微黄白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.82-0.94（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-1.84（m, 6H）, 3.06（brs, 3H）, 3.56-3.72（m, 2H）, 3.77-3.91（m, 2H）, 3.94-4.02（m, 6H）, 6.63（s, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.1, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 38.6, 51.7, 61.2, 69.5, 73.5, 106.3, 110.8, 118.5, 124.3, 130.6, 139.9, 153.2, 173.3。
【0166】
工程２５－２：化合物５８の合成
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（4.84 g、38.1 mmol）及び化合物５７（12.5 g、12.7 mmol）から化合物５８（13.7 g、収率98.6 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.52（m, 90H）, 1.65-1.82（m, 6H）, 2.93（brs, 3H）, 3.57-3.75（m, 2H）, 3.83-3.99（m, 6H）, 4.15-4.33（m, 2H）, 6.55（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.3, 26.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 29.9, 29.9, 30.5, 32.0, 38.1, 46.4, 61.7, 69.5, 73.5, 105.9, 130.8, 139.6, 153.2, 162.3, 165.5, 171.9。
工程２－２の方法に従って、塩化オキサリル（4.84 g、38.1 mmol）及び化合物５７（12.5 g、12.7 mmol）から化合物５８（13.7 g、収率98.6 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.80-0.95（m, 9H）, 1.15-1.52（m, 90H）, 1.65-1.82（m, 6H）, 2.93（brs, 3H）, 3.57-3.75（m, 2H）, 3.83-3.99（m, 6H）, 4.15-4.33（m, 2H）, 6.55（brs, 2H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 14.1, 22.7, 26.3, 26.4, 29.4, 29.6, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 29.8, 29.8, 29.9, 29.9, 30.5, 32.0, 38.1, 46.4, 61.7, 69.5, 73.5, 105.9, 130.8, 139.6, 153.2, 162.3, 165.5, 171.9。
【0167】
実施例２６（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体の合成）: 化合物６１の合成
【0168】
【化26】
【0169】
工程２６－１：化合物５９（ヌクレオシド保護体）の合成
工程３－１の方法に従って、化合物５８（10.0 g、9.13 mmol）及び化合物６（6.96 g、12.8 mmol）から化合物５９（12.4 g、収率85.7 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 93H）, 1.68-1.83（m, 6H）, 2.41-2.66（m, 2H）, 3.04-3.13（m, 3H）, 3.42-3.58（m, 2H）, 3.71-3.89（m, 8H）, 3.89-4.05（m, 6H）, 4.18-4.25（m, 1H）, 4.40-4.64（m, 2H）, 5.51-5.58（m, 1H）, 6.38-6.47（m, 1H）, 6.56-6.62（m, 2H）, 6.79-6.88（m, 4H）, 7.19-7.34（m, 7H）, 7.34-7.42（m, 2H）, 7.53-7.59（m, 1H）, 8.38（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 11.7, 14.1, 22.7, 26.2, 29.4, 29.5, 29.7, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 37.8, 55.3, 63.6, 64.9, 69.5, 73.5, 78.2, 83.6, 84.5, 87.5, 106.0, 111.8, 113.5, 127.3, 128.1, 128.2, 130.1, 130.1, 130.6, 135.1, 135.2, 135.2, 139.8, 144.2, 150.2, 153.3, 156.9, 159.0, 159.0, 163.3, 172.0。
工程３－１の方法に従って、化合物５８（10.0 g、9.13 mmol）及び化合物６（6.96 g、12.8 mmol）から化合物５９（12.4 g、収率85.7 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 93H）, 1.68-1.83（m, 6H）, 2.41-2.66（m, 2H）, 3.04-3.13（m, 3H）, 3.42-3.58（m, 2H）, 3.71-3.89（m, 8H）, 3.89-4.05（m, 6H）, 4.18-4.25（m, 1H）, 4.40-4.64（m, 2H）, 5.51-5.58（m, 1H）, 6.38-6.47（m, 1H）, 6.56-6.62（m, 2H）, 6.79-6.88（m, 4H）, 7.19-7.34（m, 7H）, 7.34-7.42（m, 2H）, 7.53-7.59（m, 1H）, 8.38（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 11.7, 14.1, 22.7, 26.2, 29.4, 29.5, 29.7, 29.7, 29.7, 29.8, 30.4, 32.0, 37.8, 55.3, 63.6, 64.9, 69.5, 73.5, 78.2, 83.6, 84.5, 87.5, 106.0, 111.8, 113.5, 127.3, 128.1, 128.2, 130.1, 130.1, 130.6, 135.1, 135.2, 135.2, 139.8, 144.2, 150.2, 153.3, 156.9, 159.0, 159.0, 163.3, 172.0。
【0170】
工程２６－２：化合物６０の合成
工程３－２の方法に従って、化合物５９（11.0 g、6.95 mmol）から化合物６０（8.70 g、収率88.6 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.84-0.92（m, 9H）, 1.16-1.51（m, 90H）, 1.68-1.84（m, 6H）, 1.88-1.93（m, 3H）, 2.39-2.47（m, 1H）, 2.59-2.69（m, 1H）, 3.06-3.12（m, 3H）, 3.75-4.02（m, 10H）, 4.15-4.21（m, 1H）, 4.45-4.61（m, 2H）, 5.50-5.55（m, 1H）, 6.09-6.15（m, 1H）, 6.57-6.62（m, 2H）, 7.38-7.43（m, 1H）, 8.57（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 12.4, 14.1, 22.7, 26.2, 29.4, 29.5, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 30.4, 32.0, 36.7, 62.5, 64.4, 69.5, 73.6, 84.8, 87.5, 106.0, 111.5, 130.6, 137.0, 139.8, 150.3, 153.3, 156.9, 157.0, 163.4, 172.1。
工程３－２の方法に従って、化合物５９（11.0 g、6.95 mmol）から化合物６０（8.70 g、収率88.6 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.84-0.92（m, 9H）, 1.16-1.51（m, 90H）, 1.68-1.84（m, 6H）, 1.88-1.93（m, 3H）, 2.39-2.47（m, 1H）, 2.59-2.69（m, 1H）, 3.06-3.12（m, 3H）, 3.75-4.02（m, 10H）, 4.15-4.21（m, 1H）, 4.45-4.61（m, 2H）, 5.50-5.55（m, 1H）, 6.09-6.15（m, 1H）, 6.57-6.62（m, 2H）, 7.38-7.43（m, 1H）, 8.57（brs, 1H）。
13C-NMR（100 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 12.4, 14.1, 22.7, 26.2, 29.4, 29.5, 29.7, 29.7, 29.8, 29.8, 30.4, 32.0, 36.7, 62.5, 64.4, 69.5, 73.6, 84.8, 87.5, 106.0, 111.5, 130.6, 137.0, 139.8, 150.3, 153.3, 156.9, 157.0, 163.4, 172.1。
【0171】
工程２６－３：化合物６１の合成
工程３－３の方法に従って、化合物６０（2.80 g、2.19 mmol）及び化合物９（2.48 g、2.97 mmol）から化合物６１（4.11 g、収率93.0 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-2.00（m, 9H）, 2.27-2.80（m, 4H）, 2.90-3.02（m, 1H）, 3.02-3.15（m, 3H）, 3.42-3.54（m, 2H）, 3.67-4.72（m, 22H）, 5.09-5.19（m, 1H）, 5.42-5.53（m, 1H）, 6.16-6.29（m, 2H）, 6.57-6.63（m, 2H）, 6.82-6.89（m, 4H）, 7.21-7.39（m, 11H）, 7.44-7.52（m, 2H）, 7.55-7.62（m, 1H）, 7.89-7.96（m, 2H）, 8.05-8.12（m, 1H）, 8.69-9.11（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ -1.70, -1.59。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2051.2039。
工程３－３の方法に従って、化合物６０（2.80 g、2.19 mmol）及び化合物９（2.48 g、2.97 mmol）から化合物６１（4.11 g、収率93.0 %）を微褐白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ 0.81-0.95（m, 9H）, 1.15-1.53（m, 90H）, 1.68-2.00（m, 9H）, 2.27-2.80（m, 4H）, 2.90-3.02（m, 1H）, 3.02-3.15（m, 3H）, 3.42-3.54（m, 2H）, 3.67-4.72（m, 22H）, 5.09-5.19（m, 1H）, 5.42-5.53（m, 1H）, 6.16-6.29（m, 2H）, 6.57-6.63（m, 2H）, 6.82-6.89（m, 4H）, 7.21-7.39（m, 11H）, 7.44-7.52（m, 2H）, 7.55-7.62（m, 1H）, 7.89-7.96（m, 2H）, 8.05-8.12（m, 1H）, 8.69-9.11（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3, 50 ℃）：δ -1.70, -1.59。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 2051.2039。
【0172】
実施例２７（Ｔ末端の２量体のオリゴヌクレオチド保護体からの疑似固相保護基の選択的脱保護）:化合物１１の合成
【0173】
【化27】
【0174】
実施例４の方法に従って、化合物６１（1.00 g、0.493 mmol）、エチレングリコール（428 mg、6.90 mmol）及び４－ピロリジノピリジン（17.5 mg、0.118 mmol）から化合物１１（430 mg、収率88.1 %）を白色固体として得た。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1013.3062。
1H-NMR（400 MHz, CDCl3）：δ 1.86-1.90（m, 3H）, 2.17-2.50（m, 3H）, 2.67-2.80（m, 2H）, 2.95-3.09（m, 1H）, 3.40-3.54（m, 2H）, 3.74-3.84（m, 6H）, 4.04-4.45（m, 6H）, 4.46-4.61（m, 1H）, 5.03-5.22（m, 1H）, 6.16-6.30（m, 2H）, 6.80-6.92（m, 4H）, 7.20-7.44（m, 11H）, 7.45-7.54（m, 2H）, 7.54-7.64（m, 1H）, 7.89-8.02（m, 2H）, 8.05-8.16（m, 1H）, 9.06-9.84（m, 2H）。
31P-NMR（162 MHz, CDCl3）：δ -1.94, -1.13。
MALDI-TOF/MS：[M+Na]+ 1013.3062。
【0175】
実施例２８（選択的脱保護速度の比較）：化合物６の生成
【0176】
【化28】
【0177】
化合物５９、化合物６２及び化合物６３について、以下に示す選択的脱保護条件における反応進行速度（化合物６の生成率）の比較を行った。その結果を以下の表に示す。なお、化合物６２は、特許文献３に記載の化合物１を上記の化合物６に変更したこと以外は、特許文献３に記載の実施例１７における工程２ 化合物３２の合成に準じて、同様の方法で合成した。化合物６３は、特許文献５に記載の実施例１－１、１－２、２－１に準じて、同様の方法で合成した。また、化合物６の生成率は、以下に示す超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）条件に基づいて測定された各化合物のピーク面積値を用いて、以下に示す数式（１）により求めた。
【0178】
［数］
化合物６の生成率＝（化合物６のピーク面積値）／[（化合物５９、化合物６２又は化合物６３のピーク面積値）＋（化合物６のピーク面積値）]×１００ （１）。
化合物６の生成率＝（化合物６のピーク面積値）／[（化合物５９、化合物６２又は化合物６３のピーク面積値）＋（化合物６のピーク面積値）]×１００ （１）。
【0179】
《選択的脱保護条件》
窒素雰囲気下、各化合物（化合物５９、化合物６２又は化合物６３）（30.0 μmol）、エチレングリコール（450 μmol）及び４－ピロリジノピリジン（15.0 μmol）を含むＴＨＦ（0.45 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
窒素雰囲気下、各化合物（化合物５９、化合物６２又は化合物６３）（30.0 μmol）、エチレングリコール（450 μmol）及び４－ピロリジノピリジン（15.0 μmol）を含むＴＨＦ（0.45 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
【0180】
《ＵＨＰＬＣ条件》
・カラム：Acquity UPLC BEH C18（φ2.1×100 mm, 1.7 μm）
・流速：0.25 mL/min
・移動相A：100 mmol/L トリエチルアミン酢酸緩衝液
・移動相B：ＴＨＦ／アセトニトリル＝60/40
・移動相A/B＝60/40→（12 min）→0/100（8 min）→（0.1 min）→60/40（10.9 min）
・カラム温度：30 ℃
・検出方法：UV（λ＝260 nm）
・保持時間：化合物５９（RT 15.3 min）、化合物６２（RT 15.3 min）、化合物６３（RT 15.6 min）、化合物６（RT 4.1 min）。
・カラム：Acquity UPLC BEH C18（φ2.1×100 mm, 1.7 μm）
・流速：0.25 mL/min
・移動相A：100 mmol/L トリエチルアミン酢酸緩衝液
・移動相B：ＴＨＦ／アセトニトリル＝60/40
・移動相A/B＝60/40→（12 min）→0/100（8 min）→（0.1 min）→60/40（10.9 min）
・カラム温度：30 ℃
・検出方法：UV（λ＝260 nm）
・保持時間：化合物５９（RT 15.3 min）、化合物６２（RT 15.3 min）、化合物６３（RT 15.6 min）、化合物６（RT 4.1 min）。
【0181】
【表2】
【0182】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基（化合物５９）は、求核剤と塩基とを組み合わせた選択的脱保護条件において、従来の疑似固相保護基（化合物６２、化合物６３）よりも速やかに脱保護されることが確認された。
【0183】
実施例２９（全脱保護速度の比較）：化合物６の生成
【0184】
【化29】
【0185】
化合物５９（実施例２８参照）、化合物６３（実施例２８参照）及び化合物６４について、以下に示すオリゴヌクレオチド合成の一般的な全脱保護条件における反応進行速度（化合物６の生成率）の比較を行った。その結果を以下の表に示す。なお、化合物６４は、特許文献２に記載の実施例１に準じて、同様の方法で合成した。また、化合物６の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
【0186】
《全脱保護条件》
窒素雰囲気下、各化合物（化合物５９、化合物６３又は化合物６４）（50.0 μmol）、28 %アンモニア水（2.0 mL）、エタノール（0.5 mL）及びＴＨＦ（0.5 mL）を、反応温度35 ℃で所定時間撹拌した。
窒素雰囲気下、各化合物（化合物５９、化合物６３又は化合物６４）（50.0 μmol）、28 %アンモニア水（2.0 mL）、エタノール（0.5 mL）及びＴＨＦ（0.5 mL）を、反応温度35 ℃で所定時間撹拌した。
【0187】
【表3】
【0188】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基（化合物５９）は、オリゴヌクレオチド合成の一般的な全脱保護条件において、従来の疑似固相保護基（化合物６３、化合物６４）よりも速やかに脱保護されることが確認された。このように、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基（化合物５９）は、本条件で脱保護が進行したことから、オリゴヌクレオチド合成に利用可能であることが確認された。
【0189】
実施例３０（選択的脱保護反応（条件）の検討）：化合物１１の生成
【0190】
【化30】
【0191】
シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基で保護されたオリゴヌクレオチド保護体から、３’末端に結合した疑似固相保護基のみを選択的に脱保護する条件を検討した。本実施例では、化合物１０を用い、塩基及び求核種の種類、並びにこれらの当量を検討した。
【0192】
（実施例３０－１）塩基種の検討
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、各塩基種に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。なお、保持時間は、化合物１０（RT 15.1 min）、化合物１１（RT 4.3 min）である。また、上記数式（１）において、化合物６を化合物１１に、化合物５９、化合物６２又は化合物６３を化合物１０に変更して算出した。
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、各塩基種に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。なお、保持時間は、化合物１０（RT 15.1 min）、化合物１１（RT 4.3 min）である。また、上記数式（１）において、化合物６を化合物１１に、化合物５９、化合物６２又は化合物６３を化合物１０に変更して算出した。
【0193】
《選択的脱保護条件》
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、以下の表に示す各塩基（72.9 μmol）及び２－シアノエタノール（725 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、以下の表に示す各塩基（72.9 μmol）及び２－シアノエタノール（725 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
【0194】
【表4】
【0195】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基で保護されたオリゴヌクレオチド保護体から、３’位に結合された疑似固相保護基のみを選択的に脱保護する反応において、種々の塩基で反応が進行することが確認された。
【0196】
（実施例３０－２）塩基当量の検討
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、塩基当量に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、塩基当量に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
【0197】
《選択的脱保護条件》
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、塩基としてトリエチルアミン（以下の表に示す塩基当量）及び２－シアノエタノール（725 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、塩基としてトリエチルアミン（以下の表に示す塩基当量）及び２－シアノエタノール（725 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
【0198】
【表5】
【0199】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基で保護されたオリゴヌクレオチド保護体から、３’位に結合された疑似固相保護基のみを選択的に脱保護する反応において、塩基を反応基質である化合物１０（オリゴヌクレオチド保護体）に対して１当量以下（例えば０．５当量）または１当量以上（例えば１～３当量）を用いた条件で、反応が進行することが確認された。
【0200】
（実施例３０－３）求核種の検討
化合物１０（50.0 mg、24.3 μmol）、４－ジメチルアミノピリジン（1.48 mg、12.1 μmol）及び以下の表に示す各求核種を含むＴＨＦ（330 mg）溶液を25 ℃で撹拌し、求核種の種類に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
化合物１０（50.0 mg、24.3 μmol）、４－ジメチルアミノピリジン（1.48 mg、12.1 μmol）及び以下の表に示す各求核種を含むＴＨＦ（330 mg）溶液を25 ℃で撹拌し、求核種の種類に対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
【0201】
【表6】
【0202】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基で保護されたオリゴヌクレオチド保護体から、３’位に結合された疑似固相保護基のみを選択的に脱保護する反応において、種々の求核種で反応が進行することが確認された。
【0203】
（実施例３０－４）脂肪族アミノアルコールの検討
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、各脂肪族アミノアルコールに対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
化合物１０について以下に示す選択的脱保護条件で反応を行い、各脂肪族アミノアルコールに対する化合物１１の生成率を比較した。その結果を以下の表に示す。なお、化合物１１の生成率は、実施例２８と同様の方法により求めた。
【0204】
《選択的脱保護条件》
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、以下の表に示す各脂肪族アミノアルコール（26.7 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
窒素雰囲気下、化合物１０（24.3 μmol）、以下の表に示す各脂肪族アミノアルコール（26.7 μmol）を含むＴＨＦ（0.4 mL）溶液を、反応温度25 ℃で所定時間撹拌した。
【0205】
【表7】
【0206】
この結果から、シュウ酸エステル構造を有する疑似固相保護基で保護されたオリゴヌクレオチド保護体から、３’位に結合された疑似固相保護基のみを選択的に脱保護する反応において、種々の脂肪族アミノアルコールで反応が進行することが確認された。
【要約】
【課題】オリゴヌクレオチド又はオリゴアミダイトの製造に用いられ、取り扱い容易な化合物を用いて選択的に脱保護可能な疑似固相保護基、それを用いたヌクレオシド保護体又はオリゴヌクレオチド保護体、オリゴアミダイト前駆体の製造方法を提供する。
【解決手段】疑似固相保護基は一般式（１）：ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ－Ｘ－Ｙ－Ｚ（－ＯＭはヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基；ＭはＨ又はアルカリ金属原子；ＷはＯ、Ｓ又はＮＲ；Ｘは単結合、炭素数１～１２のアルキレン基、アリーレン基又は２価の複素環基；Ｙは単結合、エーテル結合、－ＯＣＯ－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯ－又は－ＳＣＯ－；Ｚは炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基又はアルコキシアルキル基を示す。）で表され、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造を有する。
【選択図】なし
【解決手段】疑似固相保護基は一般式（１）：ＭＯ－（Ｏ＝）Ｃ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｗ－Ｘ－Ｙ－Ｚ（－ＯＭはヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する結合基；ＭはＨ又はアルカリ金属原子；ＷはＯ、Ｓ又はＮＲ；Ｘは単結合、炭素数１～１２のアルキレン基、アリーレン基又は２価の複素環基；Ｙは単結合、エーテル結合、－ＯＣＯ－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯ－又は－ＳＣＯ－；Ｚは炭素数１０～３０のアルコキシ基を有するアルコキシフェニル基又はアルコキシアルキル基を示す。）で表され、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３’位ヒドロキシ基に結合する分子末端にシュウ酸構造を有する。
【選択図】なし