知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-02-15
(45)【発行日】2024-02-26
(54)【発明の名称】抗薬物抗体の形成に対するカテプシンＳ阻害剤の使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/41 20060101AFI20240216BHJP
A61K 31/4155 20060101ALI20240216BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240216BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20240216BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240216BHJP
C07D 403/12 20060101ALI20240216BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240216BHJP
【ＦＩ】
A61K31/41
A61K31/4155
A61K39/395 P
A61K45/06
A61P43/00 111
A61P43/00 121
C07D403/12
A61K45/00
【請求項の数】
22
(21)【出願番号】P 2021515158
(86)(22)【出願日】2019-09-18
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-06
(86)【国際出願番号】 EP2019074918
(87)【国際公開番号】W WO2020058297
(87)【国際公開日】2020-03-26
【審査請求日】2022-09-12
(31)【優先権主張番号】18195251.6
(32)【優先日】2018-09-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】591003013
【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】クライン，クリスティアン
(72)【発明者】
【氏名】コルブ，ファブリス・アラン・アンドレ
(72)【発明者】
【氏名】マンチェスター・ヤング，マリアンヌ
(72)【発明者】
【氏名】アーメド，サイエド・ソハイル
(72)【発明者】
【氏名】マトス・デ・アルメイダ・ベッサ，ジュリアナ
【審査官】松浦 安紀子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／１４４４８３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１２－５２４１１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５３３４０４（ＪＰ，Ａ）
【文献】THERON M. et al.，Frontiers in Immunology，2017年，Volume 8 Article 806
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ４５／００
Ａ６１Ｋ ３９／３９５
Ａ６１Ｋ ４５／０６
Ａ６１Ｐ ４３／００
Ｃ０７Ｄ ４０３／１２
Ａ６１Ｋ ３１／４１５５
Ａ６１Ｋ ３１／４１
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療薬による処置を受けている対象において、前記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤を含む医薬組成物であって、前記治療薬が生物学的薬剤であり、前記カテプシンＳ阻害剤が、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、
またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項2】
有効量のカテプシンＳ阻害剤を患者に投与することを含む、治療薬による処置を受けていて、それを必要とする前記患者における前記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法であって、前記治療薬が生物学的薬剤である、方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤を含む医薬組成物であって、前記カテプシンＳ阻害剤が、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、
またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項3】
対象における治療薬に対するＡＤＡの形成の予防または低減において使用するためのキットであって、カテプシンＳ阻害剤を含み、前記カテプシンＳ阻害剤は、有効量の前記カテプシンＳ阻害剤および前記治療薬の前記対象への投与を含む処置方法において使用され、前記治療薬が生物学的薬剤であり前記カテプシンＳ阻害剤が、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、
またはその薬学的に許容される塩である、キット。
【請求項4】
（ａ）治療薬と、（ｂ）カテプシンＳ阻害剤とを含み、
前記治療薬および前記カテプシンＳ阻害剤は、有効量の前記治療薬および前記カテプシンＳ阻害剤のそれを必要とする患者への投与を含む処置方法において使用される、請求項３に記載の使用するためのキット。
【請求項5】
前記カテプシンＳ阻害剤の最初の用量が前記治療薬の最初の用量の前に前記対象に投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項6】
前記方法が、（ａ）前記カテプシンＳ阻害剤の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｂ）任意選択で、前記治療薬が前記対象に投与される前に前記カテプシンＳ阻害剤の投与を継続するステップと、
（ｃ）前記治療薬の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｄ）前記対象への前記カテプシンＳ阻害剤および／または前記治療薬の投与を継続するステップと、
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項7】
前記カテプシンＳ阻害剤の前記最初の用量が、前記治療薬の前記最初の用量の前に、特に、前記治療薬の前記最初の用量の少なくとも１日～２週間前、特に、前記治療薬の前記最初の用量の少なくとも１日～１週間前、より特には、前記治療薬の前記最初の用量の１週間前に、前記対象に投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項8】
前記治療薬が、ＭＨＣ－ＩＩ抗原提示に依存しない、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項9】
前記ＡＤＡが、Ｔ細胞依存性免疫応答を介して産生される、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項10】
前記ＡＤＡが、Ｔヘルパー細胞依存性免疫応答を介して産生される、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項11】
前記ＡＤＡが、ＭＨＣ－ＩＩ依存性免疫応答によって産生される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項12】
前記治療薬が、抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項13】
前記治療薬が、免疫応答を誘導、増強または抑制する生物学的薬剤である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項14】
前記治療薬が、タンパク質、または、ベクターである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項15】
前記治療薬が、モノクローナル抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項16】
前記治療薬が、インターロイキン－２（ＩＬ－２ｖ）の改変変異体に連結された線維芽細胞活性化タンパク質－アルファ（ＦＡＰ）に対するヒトモノクローナル抗体からなる組換え融合タンパク質である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項17】
前記治療薬が、セルグツズマブアムナロイキンである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項18】
前記治療薬が、抗ＴＮＦアルファ抗体である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項19】
前記治療薬が、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項20】
前記カテプシンＳ阻害剤が、前記治療薬に対するＡＤＡの形成を低減または防止するのに十分な量で投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項21】
前記カテプシンＳ阻害剤が、５０ｍｇ／ｋｇ／日～４００ｍｇ／ｋｇ／日、特に７５ｍｇ／ｋｇ／日～２５０ｍｇ／ｋｇ／日、より特には１００ｍｇ／ｋｇ／日または２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【請求項22】
前記カテプシンＳ阻害剤が、２００ｍｇ／ｋｇ／日、特に１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の使用するための医薬組成物、または使用するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、特に、治療薬による処置を受けている対象において、治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤に関する。
【0002】
タンパク質ベースの生物学的薬剤、すなわち免疫調節薬は効果的な治療薬であり、免疫標的に対する特異性が高いため、過去数年間でその臨床応用は大幅に成長した（Ｌｅａｄｅｒ，Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ２００８，７（１）：２１－３９）。しかし、小分子と比較してその優れた有効性と安全性プロファイルに加えて、免疫原性を含むいくつかの有害反応がしばしば報告されている（Ｓａｔｈｉｓｈ，Ｓｅｔｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ２０１３，１２（４）：３０６－３２４；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ ａｎｄ Ｂｒｅｍｂｉｌｌａ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１８，１４（６）：５１３－５２３）。免疫原性は、無害である可能性があるが、有効性の喪失または低下、薬物動態の変化、注入反応、内因性タンパク質への交差反応性、および重症の場合はアナフィラキシー反応につながる可能性がある抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成を特徴とする（Ａｂｒａｍｏｗｉｃｚ，Ｃｒｕｓｉａｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９９２，３２７（１０）：７３６，Ｂａｕｄｏｕｉｎ，Ｃｒｕｓｉａｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２００３，７６（３）：４５９－４６３）。これらの望ましくない影響は、しばしば治療中止の理由であり、したがって、診療所でＡＤＡを軽減することを目的とした戦略の緊急の必要性を説明する。この目的のために、ＧａｚｙｖａのようなＢ細胞除去剤は、癌免疫療法（ＣＩＴ）処置と組み合わせて診療所で適用され、新規ＡＤＡ応答を抑制することが示されている。但し、ＣＩＴの作用機序におけるＢ細胞の役割は完全にはわかっていないため、Ｂ細胞の完全な除去は患者にとって望ましくない場合がある。
【0003】
哺乳類のカテプシンは、生物学的および病理学的現象の重要なステップに関与するシステイン型プロテアーゼである。カテプシンは、小分子で酵素活性を阻害することが可能であり、したがって製薬業界にとって興味深いため、扱いやすい薬物標的と見なされている（Ｂｒｏｍｍｅ，Ｄ．（２００１），’Ｐａｐａｉｎ－ｌｉｋｅ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ’，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２１，Ｕｎｉｔ ２１ ２；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．（２００５），’Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ’，Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ，１８（１０），６０５－１４）。
【0004】
カテプシンＳは、マクロファージや樹状細胞、平滑筋細胞などの抗原提示細胞で顕著に発現している。（Ｈｓｉｎｇ，Ｌ．Ｃ．ａｎｄ Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，Ａ．Ｙ．（２００５），’Ｔｈｅ ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｉｎ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ’，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ，２０７，２２９－４１；Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，Ａ．ａｎｄ Ｂｅｅｒｓ，Ｃ．（２００６），’Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ’，Ｅｒｎｓｔ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｒｅｓ Ｆｏｕｎｄ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ，（５６），８１－９５）カテプシンＳは正常な動脈組織では弱くしか発現しないが、アテローム硬化性の動脈では強いアップレギュレーションが見られる（Ｌｉｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２００６），’Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｒｕｍ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｅｓ’，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１８６（２），４１１－９；Ｓｕｋｈｏｖａ，Ｇ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８），’Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌａｓｔｏｌｙｔｉｃ ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ Ｓ ａｎｄ Ｋ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｍａ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ’，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１０２（３），５７６－８３）。
【0005】
前臨床データは、適切なマウスモデルで試験した場合、カテプシンＳ欠損マウスのアテローム性動脈硬化症の表現型が低下しているため、カテプシンＳの機能がアテローム性動脈硬化症にとって重要であることを示唆している。ＬＤＬ－Ｒｅｃ欠損マウスでは、脂質の蓄積が減少し、エラスチン線維の崩壊および慢性的な動脈の炎症が報告されている。ＡＰＯ Ｅ欠損マウスでは、急性プラーク破裂現象の有意な減少が報告された。慢性腎疾患がＣａｔＳ／Ｉｎ ＡＰＯ－Ｅ欠損マウスに導入されると、動脈および心臓弁の抗アテローム硬化性活性に加えて、加速された石灰化の強力な減少が見られる（Ａｉｋａｗａ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２００９），’Ａｒｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ａｏｒｔｉｃ ｖａｌｖｅ ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｂｏｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｅｌａｓｔｏｌｙｔｉｃ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ’，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１１９（１３），１７８５－９４；ｄｅ Ｎｏｏｉｊｅｒ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（２００９），’Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｂｏｔｈ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｍａｔｒｉｘ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ’，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２９（２），１８８－９４；Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２００６），’Ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｐｌａｑｕｅｓ’，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２６（４），８５１－６；Ｓｕｋｈｏｖａ，Ｇ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（２００３），’Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ＬＤＬ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ’，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１１１（６），８９７－９０６）。これは、カテプシンＳの潜在的な阻害剤が、細胞外マトリックスの崩壊を減らし、炎症誘発性状態を減らし、加速された石灰化とその後の臨床症状を減らすことによって、アテローム硬化性プラークを安定させることを示唆している。
【0006】
アテローム性動脈硬化症モデルに記載されているこれらの表現型は、カテプシンＳの既知の細胞機能と一致している。第一に、カテプシンＳは、プラークを安定化させる細胞外マトリックスの分解に関与している。特に、カテプシンＳは強力なエラスチン分解性活性を持ち、中性ｐＨでこれを発揮することができ、これは、カテプシンＳを他の全てのカテプシンと区別する機能である。第二に、カテプシンＳは、抗原プロセシング、特に抗原提示細胞（ＡＰＣ）の不変鎖の切断に関与する主要なプロテアーゼであり、アテローム硬化性組織の慢性炎症へのＴ細胞の寄与を低下させる。炎症の上昇は、さらなる酸化的およびタンパク質分解的組織損傷をもたらし、続いてプラークの不安定化をもたらす（Ｃｈｅｎｇ，Ｘ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．（２００４），’Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｌａｓｔｏｌｙｔｉｃ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ，ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ Ｓ ａｎｄ Ｋ，ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｏｉｎｔｉｍａ ｏｆ ｂａｌｌｏｏｎ－ｉｎｊｕｒｅｄ ｒａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｉｅｓ’，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１６４（１），２４３－５１；Ｄｒｉｅｓｓｅｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．（１９９９），’Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ’，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１４７（４），７７５－９０；Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，Ａ．ａｎｄ Ｂｅｅｒｓ，Ｃ．（２００６），’Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ’，Ｅｒｎｓｔ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｒｅｓ Ｆｏｕｎｄ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ，（５６），８１－９５）。
【0007】
Ｃａｔ Ｓ阻害剤の抗炎症性および抗エラスチン分解性の特性により、慢性閉塞性肺疾患の顕著な標的にもなる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ａ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２００９），’Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｉｎ ｏｚｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ’，Ｐｕｌｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，２２（１），２７－３２）。さらに、マトリックス分解におけるその細胞外機能のために、カテプシンＳの阻害は新生内膜形成および血管新生に影響を与える（Ｂｕｒｎｓ－Ｋｕｒｔｉｓ，Ｃ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２００４），’Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｂａｌｌｏｏｎ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ ｒａｂｂｉｔ’，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ，６２（３），６１０－２０；Ｃｈｅｎｇ，Ｘ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．（２００４），’Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｌａｓｔｏｌｙｔｉｃ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ，ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ Ｓ ａｎｄ Ｋ，ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｏｉｎｔｉｍａ ｏｆ ｂａｌｌｏｏｎ－ｉｎｊｕｒｅｄ ｒａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｉｅｓ’，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１６４（１），２４３－５１；Ｓｈｉ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２００３），’Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｉｍｐａｉｒｓ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｇｒｏｗｔｈ’，Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ，９２（５），４９３－５００；Ｗａｎｇ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．（２００６），’Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉａ ｍａｔｒｉｘ－ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ’，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８１（９），６０２０－９）。したがって、カテプシンＳの阻害剤は、いくつかの異なる疾患状況で有用である可能性がある。
【0008】
カテプシンＳは、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００９；１５（１９）のＲｏｂｅｒｔａ Ｅ．Ｂｕｒｄｅｎによって説明されているように、腫瘍の成長と腫瘍細胞の浸潤の減少にも役割を果たす。さらに、腎摘出されたカテプシンＳノックアウトマウスは、腎摘出された野生型マウスと比較した場合、動脈石灰化の有意な減少を示した。これは、カテプシンＳの阻害が、慢性腎臓病患者の心血管イベントの減少に有益な効果をもたらす可能性があることを示している（Ｅｌｅｎａ Ａｉｋａｗａ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００９，１７８５－１７９４）。
【0009】
驚くべきことに、ＣａｔＳ阻害剤によるカテプシンＳ（ＣａｔＳ）の阻害は、免疫原性化合物、特に免疫調節性抗体薬に対するＡＤＡ形成を減少または防止することを発見した。
【0010】
抗腫瘍免疫のサイクルにおける初期段階の１つは、ＭＨＣ－ＩまたはＭＨＣ－ＩＩ分子との関連で樹状細胞による腫瘍関連抗原の捕捉と提示である。したがって、癌免疫療法（ＣＩＴ）の場合、ＭＨＣ－ＩＩの成熟と抗原提示を抑制する化合物を使用することは直感に反するように思われる。それにもかかわらず、最近の研究では、広範囲の癌でアップレギュレートされたカテプシンが腫瘍の成長、浸潤、および転移に関連していることが示されている（Ｐｏｇｏｒｚｅｌｓｋａ，Ｚｏｌｎｏｗｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２０１８，８５－１０６；Ｔａｎ，Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１８，１１１－１２２）。これを考慮に入れると、ＣａｔＳ阻害剤によるカテプシンＳの阻害は、免疫調節性抗癌薬の活性を回復し、同時にカテプシンＳをダウンレギュレートすることにより、癌との闘いにおいて免疫調節薬とともに、相加効果を発揮することさえも可能である。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】アダリムマブの免疫化とカテプシンＳ阻害剤（破線）またはビヒクル（黒丸）の投与の前後にＥＬＩＳＡによって測定されたｈＩｇＧ１ Ｔｇマウスにおけるアダリムマブ特異的ＩｇＧ応答を表している。カテプシンＳ阻害剤は、ｈＩｇＧ１トランスジェニックマウスにおいてアダリムマブへのＡＤＡを減少させた。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。＊＊＊Ｐ＜０．００１
【図2】ＣＥＡ－ＩＬ２ｖによる免疫化とカテプシンＳ阻害剤（破線の記号）またはビヒクルの投与の前後にＥＬＩＳＡによって決定されたｈｌｇＧ１ Ｔｇマウス（図２Ａ）および野生型マウス（図２Ｂ）におけるＣＥＡ特異的ＩｇＧ応答を表している（塗りつぶされた記号）。カテプシンＳ阻害剤は、ｈＩｇＧトランスジェニックマウスにおいてＣＥＡ－ＩＬ２ｖへのＡＤＡを防ぎ、野生型マウスでそのレベルを減少させる。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。それぞれ、＊＊＊Ｐ＜０．０１および＊＊Ｐ＜０．００１
【図3】ＥＬＩＳＡによって経時的に（ｘ軸）測定された野生型マウスにおける高親和性ＮＰ特異的ＩｇＧ応答を表している。高用量のカテプシンＳ阻害剤（４０ｍｇ／ｋｇ／日）は、ビヒクルで処理した動物と比較して、ＮＰ特異的ＩｇＧレベルを有意に低下させる。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。＊＊＊Ｐ＜０．００１
【図4】アダリムマブ免疫化およびカテプシンＳ阻害剤（破線）またはビヒクル（黒丸）の投与前後のＥＬＩＳＡによって経時的に（ｘ軸）測定されたｈＩｇＧ１ Ｔｇマウスにおけるアダリムマブ特異的ＩｇＧ応答を表している。カテプシンＳ阻害剤は、ｈＩｇＧ１トランスジェニックマウスにおいてアダリムマブへのＡＤＡを減少させた。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。＊＊＊Ｐ＜０．００１
【図5】ＣＥＡ－ＩＬ２ｖによる免疫化とカテプシンＳ阻害剤（破線の記号）またはビヒクルの投与の前後にＥＬＩＳＡによって経時的に（ｘ軸）決定されたｈｌｇＧ１ Ｔｇマウス（図２Ａ）および野生型マウス（図２Ｂ）におけるＣＥＡ特異的ＩｇＧ応答を表している（塗りつぶされた記号）。カテプシンＳ阻害剤は、ｈＩｇＧトランスジェニックマウスにおいてＣＥＡ－ＩＬ２ｖへのＡＤＡを防ぎ、野生型マウスでそのレベルを低下させる。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。それぞれ、＊＊＊Ｐ＜０．００１および＊＊Ｐ＜０．０１
【図6】ｈｌｇＧ１ Ｔｇマウス（図６Ａ）および野生型マウス（図６Ｂ）で経時的に（ｘ軸）プロットされた血清（ｙ軸）中のＣＥＡ－ＩＬ２ｖのレベルを表している。カテプシンＳ阻害剤（破線の記号）およびビヒクル（塗りつぶされた記号）で処理された動物におけるＣＥＡ－ＩＬ２ｖ曝露が示されている。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。
【図7】ｈｌｇＧ１ Ｔｇマウス（ＡおよびＢ）およびの血液におけるＣＥＡ－ＩＬ２ｖのＰＤ効果を表している。ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋ＣＤ８ Ｔ細胞（ＡおよびＣ）およびＮＫ１．１＋ＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞（ＢおよびＤ）のパーセンテージは、経時的に（ｘ軸）ｙ軸に示されている。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。
【図8】ＥＬＩＳＡによって決定された野生型マウスにおけるマウス代替ＦＡＰ－ＯＸ４０に対するＩｇＧ応答を表している。ＦＡＰ（ＶＨＶＬ）に特異的なＡＤＡを図８Ａに示し、ＯＸ４０特異性ＡＤＡを図８Ｂに示す。カテプシンＳ阻害剤（破線の記号）は、野生型マウスのＡＤＡからＦＡＰ（Ａ）およびＯＸ４０（Ｂ）ドメインを防ぐ。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。＊＊＊Ｐ＜０．００１
【図9】ＰＤ－Ｌ１免疫化およびカテプシンＳ阻害剤の投与の前後にＥＬＩＳＡによって決定された野生型マウスにおけるマウス代替ＰＤ－Ｌ１に対するＩｇＧ応答を表している。カテプシンＳ阻害剤は、野生型マウスにおいてｍＰＤ－Ｌ１へのＡＤＡを有意に減少させた。示されているデータは、±１０匹のマウス／グループの平均ＳＥＭを表している。＊＊＊Ｐ＜０．００１
【発明を実施するための形態】
【0012】
「生物学的」という用語は、「生物学的薬剤」、「生物学的医薬品」、または「生物学的」と変更することができ、生物源において製造された、生物源から抽出された、または生物源から半合成された、任意の医薬品を指す。完全に合成された医薬品とは異なり、ワクチン、血液、血液成分、アレルギー誘発物質、体細胞、遺伝子治療、組織、組換え治療用タンパク質、細胞治療に使用される生細胞が含まれる。生物学的薬剤は、糖、タンパク質、核酸、またはこれらの物質の複雑な組み合わせで構成されている場合もあれば、生細胞や組織である場合もある。それら（またはそれらの前駆体または成分）は、生物源（ヒト、動物、植物、真菌または微生物）から単離されている。
【0013】
本明細書の「抗体」との用語は、最も広い意味で使用され、種々の抗体構造を包含し、限定されないが、所望な抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを含む。
【0014】
「完全長抗体」、「インタクト抗体」および「全抗体」との用語は、ネイティブ抗体構造に実質的に類似した構造を有する抗体を指すために、本明細書で相互に置き換え可能に用いられる。
【0015】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集合から得られる抗体を指す。すなわち、集合に含まれる個々の抗体が、同一であり、および／または同じエピトープに結合するが、但し、例えば、天然に存在する変異またはモノクローナル抗体製剤の製造中に生じる変異を含む、可能なバリアント抗体は除く。このようなバリアントは、一般的に、少量存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、修飾詞「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように構築されない。例えば、本発明に従うモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法および本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。
【0016】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、およびシングルドメイン抗体が挙げられる。ある特定の抗体フラグメントの総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖフラグメントの総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照。また、国際公開第９３／１６１８５号および米国特許第５，５７１，８９４号および第５，５８７，４５８号を参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期が長くなったＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照。ダイアボディとは、二価または二重特異性であることができる、２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディおよびテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に説明されている。シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部または軽鎖可変ドメインの全てまたは一部を含む抗体フラグメントである。特定の実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ。例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照）。抗体フラグメントは、限定されないが、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、および組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含め、種々の技術によって作られてもよい。
【0017】
「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖（「Ｆａｂ重鎖」）のＶＨおよびＣＨ１ドメインと、免疫グロブリンの軽鎖（「Ｆａｂ軽鎖」）のＶＬおよびＣＬドメインからなるタンパク質を指す。
【0018】
「二重特異性」との用語は、抗体が、少なくとも２つの別個の抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。典型的には、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部位を含み、それぞれが異なる抗原決定基に対して特異的である。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの抗原決定基（特に、２つの別個の細胞で発現する２つの抗原決定基）に同時に結合することができる。
【0019】
「Ｔ細胞二重特異性抗体」という用語は、標的細胞、例えば腫瘍細胞上の表面抗原、およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の活性化不変コンポーネント、例えば、Ｔ細胞を再標的化して標的細胞を殺すためのＣＤ３に同時に結合するように設計された二重特異性抗体である。したがって、Ｔ細胞二重特異性抗体は、Ｔ細胞の表面に見られる抗原決定基と抗原結合部分－抗原複合体を形成することができる抗原結合部分を有する。
【0020】
「ＢｉＴＥ」（二重特異性Ｔ細胞エンゲージメント）は、２つのｓｃＦｖ分子が柔軟なリンカーによって融合されている分子である（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、国際公開第２００５／０６１５４７号、国際公開第２００７／０４２２６１号、および国際公開第２００８／１１９５６７号、ＮａｇｏｒｓｅｎおよびＢａｕｅｒｌｅ、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３１７、１２５５－１２６０（２０１１）を参照）。
【0021】
「抗体－薬物複合体」（ＡＤＣ）という用語は、例えば、細胞毒性剤、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片）または放射性同位体などの１つまたは複数の治療薬に抱合された抗体を指す。抗体は典型的には、リンカーを使用して、治療薬の１つ以上に接続される。治療薬および薬剤およびリンカーの例を含む、ＡＤＣ技術の概観は、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ ６８：３－１９（２０１６）に記載されている。
【0022】
「組換え免疫毒素」は、表面抗原への結合、内在化、および細胞質ゾルへの毒素部分の送達を介して癌細胞を殺す抗体毒素キメラ分子である。
【0023】
「免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）」、したがって「免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ）」という用語は、特定の物質がヒトおよび他の動物の体内で免疫応答を誘発する能力を指す。言い換えれば、免疫原性は、体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する能力である。望まれる免疫原性と望まれない免疫原性を区別する必要がある。望まれる免疫原性は通常、ワクチンに関連しており、抗原（ワクチン）の注射は、生物を保護することを目的とした病原体（ウイルス、細菌など）に対する免疫応答を引き起こす。望まれない免疫原性は、治療薬（例：組換えタンパク質、またはモノクローナル抗体）に対する生物による免疫応答である。この反応は、処置の治療効果を不活性化し、場合によっては有害反応を誘発する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の産生につながります。
【0024】
「抗薬物抗体」または「ＡＤＡ」とは、治療薬に結合し、対象の血清濃度および治療薬の機能に影響を及ぼし得る抗体を指す。ＡＤＡの存在は、治療薬と抗体の間の免疫複合体の形成（中和、非中和、またはその両方）を通じて治療薬のクリアランスを増加させ、治療薬の半減期を短縮する可能性がある。さらに、治療薬の活性および有効性は、抗体が治療薬に結合することによって低下する可能性がある（特に、中和ＡＤＡの場合）。ＡＤＡはまた、アレルギー反応や過敏反応、および宿主タンパク質の中和などの他の有害事象と関連している可能性がある。
【0025】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、そのウイルス遺伝子が除去され、疾患を引き起こさない、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含む改変されたウイルスを指す。ｒＡＡＶなどのウイルスベクターは、タンパク質の機能を回復するために、欠損または変異した遺伝子を細胞に輸送することを目的としている。その反復構造の結果として、ウイルスベクターは中和抗体の生成を特徴とする体液性免疫を頻繁に誘発し、これが、ＡＡＶベクターによる遺伝子導入の成功に対する最も効果的な障壁である。
【0026】
「活性」という用語は、生物に対する薬物の有益な薬理学的活性を指す。したがって、本発明の文脈において、「治療薬の活性を増加させる」という表現は、特に、上記治療薬の有益な薬理学的活性の増加を指す。本発明において、活性の増加は、例えば、曝露の増加、半減期の増加、または生物学的利用率の増加に関連するか、またはそれらに起因する可能性がある。
【0027】
「生物学的利用率」という用語は、全身循環に到達する未変化の薬物の投与量の割合を指す。薬理学では、生物学的利用率は、薬物が作用部位に到達する速度と程度の測定値である。両方の定義は、本発明の文脈で使用することができる。
【0028】
本発明における物質または治療薬の「半減期」という用語は、上記物質または治療薬の半分が標的組織または循環から消失するのにかかる時間である。
【0029】
「曝露」という用語は、時間の関数としての体のコンパートメント（通常は血液）内の薬物の濃度を指す。
【0030】
阻害剤が、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている組織、システム、動物または人間の生物学的または医学的応答を誘発するそれぞれの化合物または組み合わせの量である「治療有効量」（または単に「有効量」）で患者に投与されることは自明である。
【0031】
本発明において有用なカテプシンＳ阻害剤の例は、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／１２１９１８号および国際公開第２０１７／１４４４８３号に記載されている。
【0032】
本発明による有利なカテプシンＳ阻害剤は、
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、または、
その薬学的に許容される塩である。
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、または、
その薬学的に許容される塩である。
【0033】
それらは、国際公開第２０１０／１２１９１８号および国際公開第２０１７／１４４４８３号に記載されている。それらを以下に示す。
【化1】
【0034】
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、本発明による特に有利なカテプシンＳ阻害剤である。
【0035】
本発明の大部分に利点をもたらす治療薬の中には、抗体、特に腫瘍学で使用される抗体、より特には免疫活性化化合物、例えば抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体、例えばアテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、ペンブロリズマブまたはニボルマブのようなチェックポイント阻害抗体を含む癌免疫療法剤である。
【0036】
Ｔ細胞二重特異性抗体、ＢｉＴＥ、サイトカイン、免疫サイトカインおよび免疫調節性抗体は、そのような治療薬の特定の例である。眼科（例えば、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、糖尿病（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、または炎症性および自己免疫疾患で使用される抗体もまた、本発明から恩恵を被る。
【0037】
本発明による治療薬の例としては、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））、バビツキシマブ、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標））ブリアンキヌマブ、カナキヌマブ（ＩＬＡＲＩＳ（登録商標））、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、シドフシツズマブ、シドツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレネズマブ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））、ダロツズマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標）、ＸＧＥＶＡ（登録商標））、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標））、エファリズマブ、エミシズマブ（ＨＥＭＬＩＢＲＡ（登録商標））、エプラツズマブ、エリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標））、イピリムマブ、イムガツズマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルムレツズマブ、マパツムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モガムリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ムロノマブ、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、ネシツムマブ（ＰＯＲＴＲＡＺＺＡ（登録商標））、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標））、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）／ＧＡＺＹＶＡＲＯ（登録商標））、オクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ（登録商標））、オロキズマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、オナツズマブ（ＭｅｔＭＡｂとも呼ばれる）、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペグ化インターフェロン（ＰＥＧＡＺＹＳ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ペキセリズマブ、プリリキシマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、ロバツムマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サリルマブ、セクキヌマブ、セリバンツマブ、シファリムマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、シプリズマブ、ソンツズマブ、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、トラリズマブ、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標））、ベドリズマブ（ＥＮＴＹＶＩＯ（登録商標））、ビシリズマブ、ザノリムマブ、およびザルツムマブがある。
【0038】
上記のリストおよび本出願書類の残りの部分では、説明のために商品名が括弧内に示されている。国際一般名称は、本発明による治療薬を定義し、したがって、本家製品のバイオシミラーもカバーすることが理解される。
【0039】
本発明による特定の治療薬は、本発明による特定の治療薬は、ＩｇＧ抗体、特にヒトＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体、特にヒト、ヒト化またはキメラＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ１抗体－薬物複合体、特にキメラＩｇＧ１抗体－薬物複合体、ＩｇＧ２抗体、特にヒトまたはヒト化ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ４抗体、特にヒトまたはヒト化ＩｇＧ４抗体、ＩｇＧ２／４抗体、特に、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ２／４抗体、Ｆａｂフラグメント、特にＩｇＧ ＦａｂフラグメントまたはＩｇＧ１ Ｆａｂフラグメント、特にヒト化ＩｇＧ Ｆａｂフラグメントまたはヒト化またはキメラＩｇＧ１ Ｆａｂフラグメント、ヒト化ＩｇＧ４－毒素複合体、ヒトモノクローナル抗毒素抗体、ヒト化ＩｇＧ４－毒素複合体または組換え免疫毒素である。
【0040】
抗体－薬物複合体は、本発明による特定の種類の治療薬である。
【0041】
本発明による特定の治療薬は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＴＮＦ－α、ＣＤ－５２、ＰＣＳＫ－９、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ－２５、ＢＬｙＳ、ＣＤ－１２５、ＶＥＧＦ、クロストリジウム・ディフィシル毒素Ｂ、ＣＤ－３０、ＩＬ－１７ＲＡ、ＩＬ－１β、ＰＤ－１、ＥＧＦＲ、ＣＤ－３８、ＲＡＮＫＬ、ＩＬ－４Ｒアルファ、補体Ｃ５、ＳＬＡＭＦ７、ファクターＶＩＩＩ、ＣＧＲＰＲ、ＣＧＲＰ、ＣＤ－３３、ＣＤ－４、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－５、ＣＣＲ４、ＣＤ－２２、ＶＬＡ－４、ＣＤ－２０、ＰＤＧＦＲ－アルファ、ＩｇＥ、ＲＳウイルスのＦタンパク質、ＨＥＲ－２、ＶＥＧＦ－Ａ、ＩＬ－１７ａ、ｃＣＬＢ８、ＩＬ－２３、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、インテグリン－アルファ４ｂ７、ＣＥＡまたはＣＤ３、に対する抗体である。
【0042】
本発明による特定の治療薬は、以下の抗体である：アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、アリロクマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ブレンツキシマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ、セミプリマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、デュピルマブ、デュピルマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エミシズマブ、エレヌマブ、エタネルセプト、エボロクマブ、フレマネズマブ、ガルカネズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゴリムマブ、イバリズマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、モガムリズマブ、モクセツモマブ、ナタリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オララタマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペンブロリズマブ、ペルツズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、レスリズマブ、リツキシマブ、セクキヌマブ、シルツキシマブ、チルドラキズマブ、トシリズマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、およびベドリズマブ。
【0043】
本発明による他の特定の治療薬は、例えば、インターフェロンガンマ、インターフェロンベータ、エリスロポエチン、抗血友病第ＶＩＩＩ因子、ＣＤ－２阻害剤、凝固第Ｘａ因子、インターフェロンベータ模倣薬、卵胞刺激ホルモン、ＧＬＰ－１アゴニスト、ｂ－グルコセレブロシダーゼ模倣薬、エリスロポエチン模倣薬、ＫＧＦ ｍｍｅｔｉｃ、インスリン模倣薬、酸性アルファ－グルコシダーゼ模倣物、Ｇ－ＣＳＦ模倣物、ＩＬ－１１模倣物、ＣＤ－８０／８６ブロッカー、代謝酵素、ＩＬ－２模倣薬、ｒｈＤＮＡｓｅ、創傷のフィブリンシーラントまたは直接トロンビン阻害剤などのタンパク質産物である。
【0044】
本発明による特定の治療薬は、以下のタンパク質である：Ａｌｔｅｐｌａｓｅ、Ｏｃｔｏｃｏｇ ａｌｆａ、Ａｌｅｆａｃｅｐｔ、Ａｎｄｅｘｘａ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｂｅｔａ－１ａ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｂｅｔａ－１ｂ、Ｕｒｏｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ、Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ、Ａｌｇｌｕｃｅｒａｓｅ、Ｉｄｕｒｓｕｌｆａｓｅ、Ｅｌｏｃｔａｔｅ、Ｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ、Ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ、Ｉｎｓｕｌｉｎ ｄｅｔｅｍｉｒ、Ａｌｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ａｌｆａ、Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ、Ｎｅｕｍｅｇａ、Ｂｅｌａｔａｃｅｐｔ、Ｐｅｇｖａｌｉａｓｅ、Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ、Ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｆａ、Ｒａｐｌｉｘａ、ＲｅＦａｃｔｏ、ＬｅｐｉｒｕｄｉｎまたはＡｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ。
【0045】
本発明によるさらに特定の治療薬は、例えば、組換えヒト酸性アスルファ－グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）、第ＶＩＩＩ因子またはインターフェロンベータのようなタンパク質補充療法である。
【0046】
アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））は、本発明で使用するための特定の治療薬である。関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性乾癬、化膿性汗腺炎、若年性特発性関節炎の処置に使用されている。アダリムマブは、ＴＮＦ阻害、抗炎症性、生物学的医薬品である。通常はＴＮＦα受容体に結合する腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦα）に結合し、自己免疫疾患の炎症反応を引き起こす。アダリムマブはＴＮＦαに結合することにより、この炎症反応を低減させる。ＴＮＦαは免疫系の一部でもあり、体を感染から保護するため、アダリムマブによる処置は感染のリスクを高める可能性がある。他のＴＮＦ阻害剤と同様に、関節リウマチなどの自己免疫疾患の処置に使用される免疫調節性薬である。これは、臨床試験における免疫原性の高い発生率と関連している（Ｂａｒｔｅｌｄｓ ＧＭ ｅｔ ａｌ、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ、２００７、９２１－９２６；Ｂａｒｔｅｌｄｓ ＧＭ ｅｔ ａｔ、ＪＡＭＡ、２０１１、１４６－１４６８）。それはマウスＴＮＦと交差反応して高いＡＤＡ応答をもたらし（Ｂｉｔｏｕｎ Ｓ ｅｔ ａｌ、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ、２０１８、１４６３－１４７０）、したがってアダリムマブは前臨床マウスモデルにおける本発明の有効性を実証するための適切なモデル化合物である。
【0047】
セルグツズマブアムナロイキン（ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ、ＲＧ７８１３）は、本発明で使用するための特定の治療薬である。これは、ＣＤ２５結合が消失された単一のＩＬ－２変異体（ＩＬ２ｖ）部分を含み、Ｆｃを介したエフェクター機能を欠く高親和性の二価癌胎児性抗原（ＣＥＡ）特異的抗体のＣ末端に融合した単量体ＣＥＡ標的免疫サイトカインである。これは、国際公開第２０１２／１０７４１７号および国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されている。
【0048】
Ｔ細胞活性化二重特異性抗体は、腫瘍細胞に対して細胞傷害性Ｔ細胞を関与させるように設計された新しいクラスの癌治療薬である。このような抗体が、Ｔ細胞上のＣＤ３と腫瘍細胞に発現する抗原に同時に結合すると、腫瘍細胞とＴ細胞の間に一時的な相互作用が生じ、Ｔ細胞の活性化とそれに続く腫瘍細胞の溶解が引き起こされる。それらは、本発明による特定の治療薬である。
【0049】
ＣＥＡ ＴＣＢ（ＲＧ７８０２、ＲＯ６９５８６８８、ｃｉｂｉｓａｔａｍａｂ）は、腫瘍細胞上のＣＥＡおよびＴ細胞上のＣＤ３εを標的とする二重特異性抗体を活性化する新規Ｔ細胞である。マウスモデルでは、ＣＥＡ ＴＣＢは強力な抗腫瘍活性を示し、腫瘍内Ｔ細胞浸潤の増加、ＩＦＮγ、ＴＮＦ、グランザイムＢなどの炎症誘発性サイトカインの放出の増加をもたらし、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路とその活性化をアップレギュレートする。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路の増加は、Ｔ細胞の活性化中にオンになる抑制経路の１つであるため、完全に活性化されたＴ細胞の兆候である。それは、本発明による特定の治療薬である。
【0050】
ＦＡＰ－ＯＸ４０（ＲＯ７１９４６９１）は、開発中の二重特異性抗体コンストラクトである。様々な固形腫瘍の間質細胞で高度に発現する線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）および活性化によって誘導されるＴ細胞特異的表面分子ＯＸ４０に同時に結合する。作用機序は、ＦＡＰ結合（腫瘍特異的ターゲティング）およびＯＸ４０発現腫瘍浸潤Ｔ細胞の刺激に依存している。したがって、患者の腫瘍細胞に対するＴ細胞性免疫応答（サイトカイン分泌、増殖）を増強する。それは、特に、国際公開第２０１７／０６０１４４号および国際公開第２０１９／０８６４９７号に記載されている。それは、配列番号１のアミノ酸配列を含む第１の重鎖と、配列番号２のアミノ酸配列を含む第２の重鎖と、それぞれが配列番号３のアミノ酸配列を含む４つの軽鎖を含む。それは、本発明による特定の治療薬である。実施例で使用されるマウス抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む第１の重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む第２の重鎖と、それぞれが配列番号６のアミノ酸配列を含む４つの軽鎖を含む。
【0051】
【表1-1】
【0052】
【表1-2】
【0053】
【表1-3】
【0054】
アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、商品名Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））は、タンパク質プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に対するＩｇＧ１アイソタイプの完全にヒト化され、操作されたモノクローナル抗体であり、本発明による特定の治療薬である。
【0055】
インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））は、両方とも高度に免疫原性であることが知られているため、本発明による特定の治療薬である。それらは、特にクローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎および関節リウマチ（インフリキシマブ）および関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎および若年性特発性関節炎（アダリムマブ）の処置に適応となる抗ＴＮＦアルファ抗体である。
【0056】
クローン病と潰瘍性大腸炎は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の主要な形態である。ＩＢＤは、特に若い患者に影響を与える重度の衰弱性疾患である。それは緊急性を伴う血性下痢、繰り返しの発赤、腹痛を引き起こす可能性があり、頻繁な外科的介入および入院を必要とする可能性がある。病気の負担には、腸穿孔、中毒性巨大結腸症、瘻孔、狭窄、不妊症、膿瘍および回腸瘻が含まれる。ＩＢＤの患者は、結腸癌のリスクが高く、うつ病、不安、自殺の増加、重度の倦怠感（４７％）、障害（３４％）、および慢性疼痛（３８％）の発生率が高い。
【0057】
現在利用可能なＩＢＤの処置には、インフリキシマブやアダリムマブなどの抗ＴＮＦアルファ抗体、ベドリズマブなどの抗α４β７インテグリン抗体、ウステキヌマブなどの抗ｐ４０抗体、トファシチニブなどのＪＡＫ１またはＪＡＫ３ｉ阻害剤、および治療薬としてのリサンキズマブなどの抗ＩＬ２３抗体が含まれる。
【0058】
しかし、広範な持続的寛解は観察されず、患者の１０～２０％のみが１年間の処置で寛解を維持している。上記の治療薬のいくつかの作用発現は遅く、最大１２週間かかる。深刻な感染症や悪性腫瘍のリスクの増加とともに、内視鏡的および組織学的治癒の割合が低いことが観察されている。さらに、現在の標準治療であるインフリキシマブとアダリムマブは高い免疫原性を示し、免疫原性の割合はそれぞれ最大５１％と２６％と報告されている。
【0059】
ＩＢＤを効率的に処置することは、結果として高いアンメットメディカルのままである。
【0060】
本発明によるカテプシンＳの投与は、上記治療薬による処置を受けている対象において、治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を減少または防止するので、カテプシンＳ阻害剤は、ＩＢＤの処置において特に有用である。
【0061】
本発明によるカテプシンＳ阻害剤、特に上記の２つの特定のカテプシンＳ阻害剤は、５０ｍｇ／ｋｇ／日～４００ｍｇ／ｋｇ／日、特に７５ｍｇ／ｋｇ／日～２５０ｍｇ／ｋｇ／日、より特には１００ｍｇ／ｋｇ／日または２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与され得る。
【0062】
本発明によるカテプシンＳ阻害剤、特に上記の２つの特定のカテプシンＳ阻害剤は、特に有利に、２００ｍｇ／ｋｇ／日、特に１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与される。
【0063】
１日２回１００ｍｇ／ｋｇは、特に上記の２つの特定のカテプシンＳ阻害剤について、本発明によるヒトにおけるカテプシンＳ阻害剤の最も安全で最も有効な用量として確立されている。実施例で採用された用量は、マウス種に適合されている。
【0064】
カテプシンＳ阻害剤の最初の用量が、治療薬の最初の用量の前に、特に、治療薬の最初の用量の少なくとも１日～２週間前、特に、治療薬の最初の用量の少なくとも１日～１週間前、より特には、治療薬の最初の用量の１週間前に、対象に有利に投与される。
【0065】
したがって、「治療薬による処置を受けている患者」という表現は、上記治療薬による処置を開始しようとしており、最初の用量の前にカテプシンＳ阻害剤が投与される患者を包含することが理解される。
【0066】
したがって、本発明は、特に次のものに関する：
【0067】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤；
【0068】
有効量のカテプシンＳ阻害剤を患者に投与することを含む治療薬による処置を受けていて、それを必要とする上記患者における上記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法；
【0069】
治療薬による処置を受けている患者における上記治療薬の活性を増加させる方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤であって、上記治療薬の活性が対象の免疫系によって低下している、カテプシンＳ阻害剤；
【0070】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬の活性を増加させるための方法であって、上記治療薬の活性が、上記患者への有効量のカテプシンＳ阻害剤の投与を含み、上記対象の免疫系によって低下している方法；
【0071】
治療薬による処置を受けている患者における上記治療薬の活性を増加させるための方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤であって、上記治療薬は、上記カテプシンＳ阻害剤の非存在下でより低い活性を有する、カテプシンＳ阻害剤；
【0072】
患者への有効量のカテプシンＳ阻害剤の投与を含む、治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬の活性を増加させるための方法であって、上記治療薬は、上記カテプシンＳ阻害剤の非存在下でより低い活性を有する、方法；
【0073】
治療薬による処置を受けている患者における上記治療薬の生物学的利用率を増加させるための方法で使用するためのカテプシンＳ阻害剤；
【0074】
患者への有効量のカテプシンＳ阻害剤の投与を含む治療薬による処置を受けていて、それを必要とする上記患者における上記治療薬の生物学的利用率を増加させるための方法；
【0075】
疾患を処置または予防するための方法であって、上記疾患に対する有効量の治療薬を、それを必要とする患者およびカテプシンＳ阻害剤に投与することを含み、上記カテプシンＳ阻害剤が、上記治療薬に対するＡＤＡの形成を低減または予防するのに十分な量で投与される、方法；
【0076】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための薬剤の製造におけるカテプシンＳ阻害剤の使用；
【0077】
有効量のカテプシンＳ阻害剤を患者に投与することを含む治療薬による処置を受けていて、それを必要とする上記患者における上記治療薬に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成を低減または予防するための方法；
【0078】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬の活性を増加させるための薬剤の製造におけるカテプシンＳ阻害剤の使用であって、上記治療薬の活性は、対象の免疫系によって低下している、使用；
【0079】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬の活性を増加させるための薬剤の製造におけるカテプシンＳ阻害剤の使用であって、上記治療薬は、上記カテプシンＳ阻害剤の非存在下でより低い活性を有する、使用；
【0080】
治療薬による処置を受けている対象において、上記治療薬の生物学的利用率を増加させるための薬剤の製造におけるカテプシンＳ阻害剤の使用；
【0081】
対象において、治療薬に対するＡＤＡの形成の予防または低減のためのキットであって、上記キットは、カテプシンＳ阻害剤と、上記カテプシンＳ阻害剤および上記治療薬の上記対象への投与を含む処置方法において、上記カテプシンＳ阻害剤を使用するための説明書と、を含む、キット；
【0082】
対象において、疾患の予防または処置のためのキットであって、上記キットは、治療薬と、カテプシンＳ阻害剤および上記治療薬の上記対象への投与を含む処置方法において上記治療薬を使用するための説明書と、を含む、本発明によるキット；
【0083】
（ａ）治療薬と、
（ｂ）カテプシンＳ阻害剤と、
（ｃ）有効量の上記治療薬および上記カテプシンＳ阻害剤のそれを必要とする患者への投与を含む処置方法において、上記治療薬および上記カテプシンＳ阻害剤を使用するための説明書と、を含む、キット；
（ｂ）カテプシンＳ阻害剤と、
（ｃ）有効量の上記治療薬および上記カテプシンＳ阻害剤のそれを必要とする患者への投与を含む処置方法において、上記治療薬および上記カテプシンＳ阻害剤を使用するための説明書と、を含む、キット；
【0084】
カテプシンＳ阻害剤が、治療薬に対するＡＤＡの形成を低減または防止するのに十分な量で投与される、本発明によるキット；
【0085】
ＩＢＤの処置に使用するためのカテプシンＳ阻害剤；
【0086】
有効量のカテプシンＳ阻害剤をそれを必要とする患者に投与することを含む、ＩＢＤの処置方法；
【0087】
治療薬による処置を受けている患者におけるＩＢＤの処置に使用するためのカテプシンＳ阻害剤；
【0088】
有効量のカテプシンＳ阻害剤をそれを必要とする患者に投与することを含み、上記患者が治療薬による処置を受けている、ＩＢＤの処置方法；
【0089】
カテプシンＳ阻害剤の最初の用量が治療薬の最初の用量の前に対象に投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0090】
本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキットであって、上記方法または説明書が、
（ａ）上記カテプシンＳ阻害剤の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｂ）任意選択で、治療薬が上記対象に投与される前に上記カテプシンＳ阻害剤の投与を継続するステップと、
（ｃ）上記治療薬の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｄ）上記対象への上記カテプシンＳ阻害剤および／または上記治療薬の投与を継続するステップと、を含む、カテプシンＳ阻害剤；
（ａ）上記カテプシンＳ阻害剤の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｂ）任意選択で、治療薬が上記対象に投与される前に上記カテプシンＳ阻害剤の投与を継続するステップと、
（ｃ）上記治療薬の最初の有効用量を対象に投与するステップと、
（ｄ）上記対象への上記カテプシンＳ阻害剤および／または上記治療薬の投与を継続するステップと、を含む、カテプシンＳ阻害剤；
【0091】
カテプシンＳ阻害剤の最初の用量が、治療薬の最初の用量の前に、特に、上記治療薬の最初の用量の少なくとも１日～２週間前、特に、上記治療薬の最初の用量の少なくとも１日～１週間前、より特には、上記治療薬の最初の用量の１週間前に、上記対象に投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0092】
カテプシンＳ阻害剤の最初の用量が治療薬の最初の用量と同じ日に前に対象に投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0093】
治療薬がＭＨＣ－ＩＩ抗原提示を妨害しない、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0094】
治療薬がＭＨＣ－ＩＩ抗原提示に依存しない、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0095】
ＡＤＡがＴ細胞依存性免疫応答を介して産生される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0096】
ＡＤＡがＴヘルパー細胞依存性免疫応答を介して産生される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0097】
ＡＤＡがＭＨＣ－ＩＩ依存性免疫応答によって産生される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0098】
ＡＤＡがＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体とＴ細胞受容体との間の同族の相互作用から産生される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0099】
治療薬が生物学的薬剤、特にタンパク質、より特にはポリペプチド、抗体、より特には二重特異性抗体、特にＴ細胞二重特異性抗体、抗体フラグメント、抗体－薬物複合体、ＢｉＴＥ、サイトカイン、または例えばＡＡＶベクターのような遺伝子治療ベクターである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0100】
治療薬が免疫活性化化合物、特にチェックポイント阻害抗体を含む癌免疫療法薬である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0101】
治療薬は、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブオラベルマブ、特にアテゾリズマブのような抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0102】
治療薬は、例えば、ニボルマブまたはペンブロリズマブのような抗ＰＤ－１抗体である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0103】
上記治療薬が、免疫応答を誘導、増強または抑制する生物学的薬剤である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0104】
治療薬が免疫原性である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0105】
治療薬が、癌、例えば、糖尿病、眼疾患、自己免疫疾患または炎症性疾患のような代謝性疾患の処置のために示される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0106】
治療薬が炎症性腸疾患の処置のために示される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0107】
治療薬がモノクローナル抗体、特にアレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））、バビツキシマブ、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標））ブリアンキヌマブ、カナキヌマブ（ＩＬＡＲＩＳ（登録商標））、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、シドフシツズマブ、シドツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレネズマブ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））、ダロツズマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標）、ＸＧＥＶＡ（登録商標））、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標））、エファリズマブ、エミシズマブ（ＨＥＭＬＩＢＲＡ（登録商標））、エプラツズマブ、エリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標））、イピリムマブ、イムガツズマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルムレツズマブ、マパツムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モガムリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ムロノマブ、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、ネシツムマブ（ＰＯＲＴＲＡＺＺＡ（登録商標））、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標））、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）／ＧＡＺＹＶＡＲＯ（登録商標））、オクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ（登録商標））、オロキズマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、オナツズマブ（ＭｅｔＭＡｂとも呼ばれる）、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペグ化インターフェロン（ＰＥＧＡＺＹＳ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ペキセリズマブ、プリリキシマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、ロバツムマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サリルマブ、セクキヌマブ、セリバンツマブ、シファリムマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（登録商標））、シプリズマブ、ソンツズマブ、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、トラリズマブ、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標））、ベドリズマブ（ＥＮＴＹＶＩＯ（登録商標））、ビシリズマブ、ザノリムマブ、およびザルツムマブから選択されるモノクローナル抗体である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0108】
前記治療薬が、インターロイキン－２（ＩＬ－２ｖ）の改変変異体に連結された線維芽細胞活性化タンパク質－アルファ（ＦＡＰ）に対するヒトモノクローナル抗体からなる組換え融合タンパク質である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0109】
治療薬はセルグツズマブアムナロイキンである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0110】
治療薬が抗ＴＮＦアルファ抗体である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0111】
治療薬がインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0112】
カテプシンＳ阻害剤が
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、または、
その薬学的に許容される塩である、カテプシンＳ阻害剤が本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、もしくは
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、または、
その薬学的に許容される塩である、カテプシンＳ阻害剤が本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0113】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミド、またはその薬学的に許容される塩である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0114】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0115】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））である、カテプシンＳ阻害剤が本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0116】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0117】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0118】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0119】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はセルグツズマブアムナロイキンである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0120】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はセルグツズマブアムナロイキンである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0121】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はＣＥＡ－ＴＣＢである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0122】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はＣＥＡ－ＴＣＢである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0123】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はＦＡＰ－ＯＸ４０である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0124】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はＦＡＰ－ＯＸ４０である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0125】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアテゾリズマブである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0126】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアテゾリズマブである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0127】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアテゾリズマブと組み合わせたＣＥＡ－ＴＣＢである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0128】
カテプシンＳ阻害剤が（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、治療薬はアテゾリズマブと組み合わせたＣＥＡ－ＴＣＢである、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0129】
カテプシンＳ阻害剤が、治療薬に対するＡＤＡの形成を低減または防止するのに十分な量で投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0130】
カテプシンＳ阻害剤が、５０ｍｇ／ｋｇ／日～４００ｍｇ／ｋｇ／日、特に７５ｍｇ／ｋｇ／日～２５０ｍｇ／ｋｇ／日、より特には１００ｍｇ／ｋｇ／日または２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0131】
カテプシンＳ阻害剤が２００ｍｇ／ｋｇ／日、特に１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与される、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0132】
カテプシンＳ阻害剤が２００ｍｇ／ｋｇ／日、特に１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与され、カテプシンＳ阻害剤は（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；および
【0133】
カテプシンＳ阻害剤が２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量、特に１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与され、カテプシンＳ阻害剤は、（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（５－メチル－テトラゾール－２－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドまたはその薬学的に許容される塩である、本発明による使用するためのカテプシンＳ阻害剤、方法、使用またはキット；
【0134】
上記の用量は遊離塩基に対して与えられる。塩が投与される場合、最終的に上記遊離塩基の用量が患者に利用可能になるように用量を調整するものとする。
【0135】
ＩＢＤの処置に使用するカテプシンＳ阻害剤において、患者は、インフリキシマブまたはアダリムマブのような抗ＴＮＦアルファ抗体、ベドリズマブのような抗α４β７インテグリン抗体、ウステキヌマブのような抗ｐ４０抗体、トファシチニブのようなＪＡＫ１またはＪＡＫ３ｉ阻害剤、またはリサンキズマブのような抗ＩＬ２３抗体、より具体的にはインフリキシマブまたはアダリムマブのような抗ＴＮＦアルファ抗体から選択される治療薬による処置を有利に受けている。
【0136】
ＩＢＤの処置方法において、カテプシンＳ阻害剤を、それを必要とする患者に投与することを含み、患者は、インフリキシマブまたはアダリムマブのような抗ＴＮＦアルファ抗体、ベドリズマブのような抗α４β７インテグリン抗体、ウステキヌマブのような抗ｐ４０抗体、トファシチニブのようなＪＡＫ１またはＪＡＫ３ｉ阻害剤、またはリサンキズマブのような抗ＩＬ２３抗体、より具体的にはインフリキシマブまたはアダリムマブのような抗ＴＮＦアルファ抗体から選択される治療薬による処置を有利に受けている。
【0137】
次に、本発明を、限定的な特徴を有しない以下の実施例によって説明する。
【実施例】
【0138】
実施例１：ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）およびＣＥＡ－ＩＬ２ｖに対するＡＤＡの緩和（２８日）
アダリムマブとＣＥＡ－ＩＬ２ｖはクリニックで免疫原性があることが知られている（Ｂａｒｔｅｌｄｓ，Ｋｒｉｅｃｋａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．ＪＡＭＡ ２０１１，３０５（１４）：１４６０－１４６８，ｖａｎ Ｓｃｈｏｕｗｅｎｂｕｒｇ，Ｒｉｓｐｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２０１３，９（３）：１６４－１７２）。
アダリムマブとＣＥＡ－ＩＬ２ｖはクリニックで免疫原性があることが知られている（Ｂａｒｔｅｌｄｓ，Ｋｒｉｅｃｋａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．ＪＡＭＡ ２０１１，３０５（１４）：１４６０－１４６８，ｖａｎ Ｓｃｈｏｕｗｅｎｂｕｒｇ，Ｒｉｓｐｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２０１３，９（３）：１６４－１７２）。
【0139】
アダリムマブは、マウスで免疫原性が高いことが示されている抗ＴＮＦα阻害抗体である。
【0140】
対照的に、ＣＥＡ－ＩＬ２ｖは、腫瘍学の適応症のための免疫調節薬である。
【0141】
免疫原性の評価には、前述のヒトＩｇＧ１免疫寛容マウスモデル（Ｂｅｓｓａ，Ｂｏｅｃｋｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２０１５，３２（７）：２３４４－２３５９）を使用した。このヒトＩｇＧトランスジェニックマウスは広範囲のヒトＩｇＧ１抗体（Ａｂｓ）に耐性があるため、このシステムで誘発されるＡＤＡ応答は、ヒトでＡＤＡを引き起こすと予想される誘発Ａｂ化合物の固有の免疫原性属性を反映していると見なされている。
【0142】
（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、抗原提示細胞によるＭＨＣＩＩの成熟と抗原提示を阻害することが知られているカテプシンＳ阻害剤である（ＷＯ ２０１０／１２１９１８；Ｔｈｅｒｏｎ，Ｂｅｎｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ．２０１７，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：８０６）。以下の実験で使用されている。
【0143】
免疫化
１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６野生型およびＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間（ｈ）の明期と１２時間の暗期のサイクルで、換気のサイクルおよび水と食物への自由なアクセスを備えた動物施設に収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＩＬ２ｖまたは７ｘ１０μｇのＨｕｍｉｒａ（アダリムマブ、Ａｂｂｖｉｅ Ｇｅｒｍａｎｙ ＧｍｂＨ）を、それぞれ０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に皮下注射した。カテプシンＳ阻害剤の投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。フードミックス（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）は、Ｈｕｍｉｒａで免疫化されたマウスに対して、最初の免疫化の１日前から２８日目まで毎日与えられた。ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ（ＲＯ６８９５８８２）で免疫化したマウスには、最初の免疫化の１週間前から２８日目まで毎日混合食品を投与した。－１２、７、１４、２８日目に、血液サンプルを採取した。
１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６野生型およびＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間（ｈ）の明期と１２時間の暗期のサイクルで、換気のサイクルおよび水と食物への自由なアクセスを備えた動物施設に収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＩＬ２ｖまたは７ｘ１０μｇのＨｕｍｉｒａ（アダリムマブ、Ａｂｂｖｉｅ Ｇｅｒｍａｎｙ ＧｍｂＨ）を、それぞれ０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に皮下注射した。カテプシンＳ阻害剤の投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。フードミックス（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）は、Ｈｕｍｉｒａで免疫化されたマウスに対して、最初の免疫化の１日前から２８日目まで毎日与えられた。ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ（ＲＯ６８９５８８２）で免疫化したマウスには、最初の免疫化の１週間前から２８日目まで毎日混合食品を投与した。－１２、７、１４、２８日目に、血液サンプルを採取した。
【0144】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡ（３．４２ｍｇ／ｍｌ、ＩＤ ８０３７）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡ（３．４２ｍｇ／ｍｌ、ＩＤ ８０３７）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0145】
【0146】
これらの結果は、カテプシンＳ阻害剤を与えられ、アダリムマブで免疫化された動物が、ビヒクルで処理された動物と比較して、ＡＤＡレベルの低下を示したことを示している（図１）。興味深いことに、この効果は後の時点およびより高い血清希釈でより顕著であり、カテプシンＳ阻害剤が後期に出現する高親和性抗体応答の阻害に優先的な効果があるか、免疫化の１日前ではＡＰＣによるある程度の抗原提示を予防するに不十分であったことを示唆している。
【0147】
我々の実験はまた、カテプシンＳ阻害剤による予防的処置（免疫化の７日前）が、ｈＩｇＧトランスジェニックマウスにおけるＣＥＡ－ＩＬ２ｖへのＡＤＡの完全な抑止をもたらすことを明らかにした（図２Ａ）。対照的に、ＡＤＡの部分的な減少のみが野生型（ＷＴ）マウスで達成された（図２Ｂ）。これは、ｈＩｇＧ Ｔｇマウス（抗イディオタイプＡＤＡのみ）と比較して、ＷＴ動物（抗Ｆｃおよび抗イディオタイプＡＤＡ）で誘発されたＡＤＡの全体的な大きさが大きいことによって説明される可能性がある。
【0148】
実施例２：Ｔ細胞依存性ＩｇＧ応答の抑止
ＮＰ－ＯＶＡＬによる免疫化
６～８週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。マウスに－２日目に２０μｇ／マウスのＮＰ－ＯＶＡＬ（卵白アルブミンに抱合した４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチルハプテン、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国、バッチ番号０６０３６８）をアジュバント（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ＃ｖａｃ－ａｌｕ－２５０）とともに両方の側面に、または２８日目にアジュバントなしで皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は０（ビヒクル）、１、１０、４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。カテプシンＳアンタゴニスト（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＮＰ－ＯＶＡＬ免疫化の２日前から３５日目まで、食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。－２、１、７、１２、２１、２８および３５日目に、尾からの血液サンプルをＢＤ ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブＳＳＴに採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
ＮＰ－ＯＶＡＬによる免疫化
６～８週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。マウスに－２日目に２０μｇ／マウスのＮＰ－ＯＶＡＬ（卵白アルブミンに抱合した４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチルハプテン、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国、バッチ番号０６０３６８）をアジュバント（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ＃ｖａｃ－ａｌｕ－２５０）とともに両方の側面に、または２８日目にアジュバントなしで皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は０（ビヒクル）、１、１０、４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。カテプシンＳアンタゴニスト（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＮＰ－ＯＶＡＬ免疫化の２日前から３５日目まで、食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。－２、１、７、１２、２１、２８および３５日目に、尾からの血液サンプルをＢＤ ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブＳＳＴに採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
【0149】
ＮＰ特異的ＩｇＧ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＮＰ（４）－ＢＳＡ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎ－５０５０Ｌ；１ｍｇ／ｍＬ）をＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中１μｇ／ｍＬでコーティングし、＋４℃で一晩インキュベートした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＮＰ特異的ＩｇＧの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＮＰ（４）－ＢＳＡ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎ－５０５０Ｌ；１ｍｇ／ｍＬ）をＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中１μｇ／ｍＬでコーティングし、＋４℃で一晩インキュベートした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＮＰ特異的ＩｇＧの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0150】
結果を図３に示す。
【0151】
カテプシンＳアンタゴニストの４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量は、ＮＰに対するＴ細胞依存性ＩｇＧ応答を効果的に抑止することができた。
【0152】
実施例３：ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）に対するＡＤＡの緩和（６３日）
免疫化
１５週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＨｕｍｉｒａ（アダリムマブ、Ａｂｂｖｉｅ Ｇｅｒｍａｎｙ ＧｍｂＨ）を、０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に交互に皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＨｕｍｉｒａ免疫化の１日前から２８日目まで、食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。－４、７、１４、２１、２８、４２、４９、および５６日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＢＤ ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブＳＳＴに採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
免疫化
１５週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＨｕｍｉｒａ（アダリムマブ、Ａｂｂｖｉｅ Ｇｅｒｍａｎｙ ＧｍｂＨ）を、０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に交互に皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＨｕｍｉｒａ免疫化の１日前から２８日目まで、食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。－４、７、１４、２１、２８、４２、４９、および５６日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＢＤ ＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブＳＳＴに採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
【0153】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡで、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡで、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0154】
結果を図４に示す。
【0155】
実施例４：ＣＥＡ－ＩＬ２ｖに対するＡＤＡの緩和（６３日）
免疫化
１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）およびＣ５７ＢＬ／６野生型混合性別は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＩＬ２ｖ（バッチ番号ＧＬＩ０１４４－０１）を、一次応答の場合は０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、記憶応答の場合は４９、５３、５６、および６０日目に注射した。ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ注射は、右脇腹または左脇腹の皮下に交互に行われた。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＣＥＡ－ＩＬ２ｖ免疫化の１週間前から一次反応の場合は２８日目まで、および記憶反応の場合は４２日目（ＣＥＡ－ＩＬ２ｖによる追加免疫の１週間前）から７８日目まで毎日食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して投与された。－１２、７、１４、２８、４２、５６、および６３日目に、投与前に尾から血液サンプルを採取した。血清およびＰＫサンプルには、Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブ１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）を使用した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。ＰＤサンプルにはＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ（登録商標）１００μｌ、リチウム－ヘパリンチューブ（カタログ番号２０．１２８２）を使用し、同じ日に測定するまで室温で保管した。
免疫化
１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）およびＣ５７ＢＬ／６野生型混合性別は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＩＬ２ｖ（バッチ番号ＧＬＩ０１４４－０１）を、一次応答の場合は０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、記憶応答の場合は４９、５３、５６、および６０日目に注射した。ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ注射は、右脇腹または左脇腹の皮下に交互に行われた。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＣＥＡ－ＩＬ２ｖ免疫化の１週間前から一次反応の場合は２８日目まで、および記憶反応の場合は４２日目（ＣＥＡ－ＩＬ２ｖによる追加免疫の１週間前）から７８日目まで毎日食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して投与された。－１２、７、１４、２８、４２、５６、および６３日目に、投与前に尾から血液サンプルを採取した。血清およびＰＫサンプルには、Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブ１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）を使用した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。ＰＤサンプルにはＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ（登録商標）１００μｌ、リチウム－ヘパリンチューブ（カタログ番号２０．１２８２）を使用し、同じ日に測定するまで室温で保管した。
【0156】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡで、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＨｕｍｉｒａまたはＣＥＡ－ＰＧＬＡＬＡで、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0157】
【0158】
実施例５：Ｔｇおよび野生型マウスにおけるＣＥＡ－ＩＬ２ｖ曝露
ＰＫ測定
Ｃ５６ＢＬ／６ ｈＩｇＧ ｔｇおよびＣＥＡ－ＩＬ２ｖで処理された野生型マウス（実施例４）からの血清サンプルを、非ＧＬＰ条件下で酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して分析した。ＥＬＩＳＡ法では、捕捉抗体（ｍＡｂ＜ＣＥＡ＞Ｍ－Ｂｉ）、キャリブレーター（ＲＯ６８９５８８２）、希釈血清サンプル、検出抗体（ｍＡｂ＜ＣＥＡ＞Ｍ－Ｄｉｇ）、および抗ジゴキシゲニン－ＰＯＤをストレプトアビジンコーティングマイクロタイタープレート（ＳＡ－ＭＴＰ）に連続して添加する。形成された固定化免疫複合体は、基質溶液ＡＢＴＳの添加によって検出される。色の強度は測光的に決定され、試験サンプル中の分析物濃度に比例していた。
ＰＫ測定
Ｃ５６ＢＬ／６ ｈＩｇＧ ｔｇおよびＣＥＡ－ＩＬ２ｖで処理された野生型マウス（実施例４）からの血清サンプルを、非ＧＬＰ条件下で酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して分析した。ＥＬＩＳＡ法では、捕捉抗体（ｍＡｂ＜ＣＥＡ＞Ｍ－Ｂｉ）、キャリブレーター（ＲＯ６８９５８８２）、希釈血清サンプル、検出抗体（ｍＡｂ＜ＣＥＡ＞Ｍ－Ｄｉｇ）、および抗ジゴキシゲニン－ＰＯＤをストレプトアビジンコーティングマイクロタイタープレート（ＳＡ－ＭＴＰ）に連続して添加する。形成された固定化免疫複合体は、基質溶液ＡＢＴＳの添加によって検出される。色の強度は測光的に決定され、試験サンプル中の分析物濃度に比例していた。
【0159】
【0160】
カテプシンＳ阻害剤は、ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ曝露を大幅に増加させ、延長する。
【0161】
ＰＤ測定
実施例４から、５０μｌのリチウムヘパリン全血を５ｍｌのポリスチレン丸底チューブ（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ、カタログ番号３５２０５８）および２ｍｌの新たに調製した１ｘ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）溶解バッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５５８９９）に移し、ＵｌｔｒａＰｕｒ（商標）蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１０９７７－０３５）を含む）を追加した。サンプルを完全にボルテックスし、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション時間後、チューブを３００ｇで５分間スピンダウンし、上清を除去し、細胞ペレットを２ｍｌ ＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０－０９４）＋２％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１００８２１４７）で除去した。チューブを３００ｇで５分間スピンダウンし、上清を除去した。ＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳで１：１００に希釈した１００μｌのＴｒｕＳｔａｉｎ ｆｃＸ（商標）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０１３２０）を細胞ペレットに加え、注意深くボルテックスし、室温で１５分間インキュベートした。マスターミックスは、１サンプルあたり、０．５μｌのＢＶ５１０抱合型抗マウスＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０３１３８）、０．４μｌのＰＥ－Ｃｙ５抱合型抗マウスＴＣＲｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０９２１０）、０．５μｌのＢＵＶ７３７抱合型抗マウスＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４２９８）、０．５μｌのＢＵＶ３９５抱合型抗マウスＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７８６）、０．５μｌのＢＶ６０５抱合型抗マウスＮＫＰ４６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４０６９）、およびサンプルあたり０．５μｌのＢＶ６０５抱合型抗マウスＮＫ１．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０８７４０）で調製した。３μｌのマスターミックスをサンプルに加えた。暗所で＋４℃で３０分間インキュベートした後、２ｍｌのＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳを添加し、チューブを３００ｇ、＋４℃でスピンダウンした。上清を除去し、ペレットを１５０μｌのＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳで再懸濁した。データは、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）サイトメーター上のＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアｖ８．０で取得し、ＦｌｏｗＪｏ（商標）Ｖ１０で分析した。
実施例４から、５０μｌのリチウムヘパリン全血を５ｍｌのポリスチレン丸底チューブ（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ、カタログ番号３５２０５８）および２ｍｌの新たに調製した１ｘ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）溶解バッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５５８９９）に移し、ＵｌｔｒａＰｕｒ（商標）蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１０９７７－０３５）を含む）を追加した。サンプルを完全にボルテックスし、室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション時間後、チューブを３００ｇで５分間スピンダウンし、上清を除去し、細胞ペレットを２ｍｌ ＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０－０９４）＋２％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１００８２１４７）で除去した。チューブを３００ｇで５分間スピンダウンし、上清を除去した。ＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳで１：１００に希釈した１００μｌのＴｒｕＳｔａｉｎ ｆｃＸ（商標）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０１３２０）を細胞ペレットに加え、注意深くボルテックスし、室温で１５分間インキュベートした。マスターミックスは、１サンプルあたり、０．５μｌのＢＶ５１０抱合型抗マウスＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０３１３８）、０．４μｌのＰＥ－Ｃｙ５抱合型抗マウスＴＣＲｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０９２１０）、０．５μｌのＢＵＶ７３７抱合型抗マウスＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４２９８）、０．５μｌのＢＵＶ３９５抱合型抗マウスＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７８６）、０．５μｌのＢＶ６０５抱合型抗マウスＮＫＰ４６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６４０６９）、およびサンプルあたり０．５μｌのＢＶ６０５抱合型抗マウスＮＫ１．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０８７４０）で調製した。３μｌのマスターミックスをサンプルに加えた。暗所で＋４℃で３０分間インキュベートした後、２ｍｌのＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳを添加し、チューブを３００ｇ、＋４℃でスピンダウンした。上清を除去し、ペレットを１５０μｌのＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳで再懸濁した。データは、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）サイトメーター上のＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアｖ８．０で取得し、ＦｌｏｗＪｏ（商標）Ｖ１０で分析した。
【0162】
【0163】
ＣＥＡ－ＩＬ２ｖの薬理学は、カテプシンＳ阻害剤で処置された動物で保存されている。
【0164】
実施例６：ＦＡＰ－ＯＸ４０に対するＡＤＡの緩和
免疫化
１０週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。１２．５ｍｇ／ｋｇのｍｕＦＡＰ－ＯＸ４０ｉＭａｂ（Ｐ１ＡＤ４３９６－００５）を１、４、８日目にグループ２（ｎ＝１０マウス）、１、４、８、１１、１５、１８、２２日目にそれぞれグループ３（ｎ＝１０マウス）に静脈内注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のｍｕＦＡＰ－ＯＸ４０ｉＭａｂ免疫化の１週間前から２３日目まで、グループ３に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ２には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２３日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
免疫化
１０週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。１２．５ｍｇ／ｋｇのｍｕＦＡＰ－ＯＸ４０ｉＭａｂ（Ｐ１ＡＤ４３９６－００５）を１、４、８日目にグループ２（ｎ＝１０マウス）、１、４、８、１１、１５、１８、２２日目にそれぞれグループ３（ｎ＝１０マウス）に静脈内注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のｍｕＦＡＰ－ＯＸ４０ｉＭａｂ免疫化の１週間前から２３日目まで、グループ３に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ２には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２３日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
【0165】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＦＡＰ（２８Ｈ１）－ＯＸ４０（４９Ｂ４）ＰＧＬＡＬＡ（Ｐ１ＡＤ４５２３）または抗ＯＸ４０ ｍｏＩｇＧ２ａ（Ｐ１ＡＤ４５６１）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのＦＡＰ（２８Ｈ１）－ＯＸ４０（４９Ｂ４）ＰＧＬＡＬＡ（Ｐ１ＡＤ４５２３）または抗ＯＸ４０ ｍｏＩｇＧ２ａ（Ｐ１ＡＤ４５６１）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0166】
【0167】
実施例７：ＰＤ－Ｌ１に対するＡＤＡの緩和
免疫化
１０週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。１０ｍｇ／ｋｇのｍｕＰＤ－Ｌ１（Ｐ１ＡＥ４９３０－００１）を１、８、１５日目にグループ４（ｎ＝１０マウス）に、１、８、１５、２２日目にグループ５（ｎ＝１０マウス）にそれぞれ静脈内注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のｍｕＰＤ－Ｌ１免疫化の１週間前から２３日目まで、グループ５に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ４には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２３日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
免疫化
１０週齢の雌マウスＣ５７ＢＬ／６は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ドイツ）から購入し、１２時間の明暗サイクル下で空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。１０ｍｇ／ｋｇのｍｕＰＤ－Ｌ１（Ｐ１ＡＥ４９３０－００１）を１、８、１５日目にグループ４（ｎ＝１０マウス）に、１、８、１５、２２日目にグループ５（ｎ＝１０マウス）にそれぞれ静脈内注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のｍｕＰＤ－Ｌ１免疫化の１週間前から２３日目まで、グループ５に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ４には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２３日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
【0168】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌの抗ｍｕＰＤ－Ｌ１（Ｐ１ＡＥ４９３０－００１）でそれぞれ、ＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩、コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌの抗ｍｕＰＤ－Ｌ１（Ｐ１ＡＥ４９３０－００１）でそれぞれ、ＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩、コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0169】
結果を図９に示す。
【0170】
実施例８：ＣＥＡ－ＴＣＢに対するＡＤＡの緩和
免疫化
１１～１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）混合性別（ｎ＝２０）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＴＣＢ（Ｐ１ＡＥ３５３６、ｈｕＣＥＡバインダーＣＨ１Ａ１Ａ／マウスＣＤ３バインダー２Ｃ１１）を、０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に交互に皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＣＥＡ－ＴＣＢ免疫化の１週間前からの２８日目まで、グループ２（ｎ＝１０）に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ１（ｎ＝１０）には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２８日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
免疫化
１１～１５週齢のマウスＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ｈＩｇＧ１、ｋ、ｌ）混合性別（ｎ＝２０）は、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）から購入し、１２時間の明暗サイクルで空調された部屋の動物施設で、豊かな環境と水と食べ物への自由なアクセスを備えたマクロロンボックスに収容した。７ｘ１０μｇのＣＥＡ－ＴＣＢ（Ｐ１ＡＥ３５３６、ｈｕＣＥＡバインダーＣＨ１Ａ１Ａ／マウスＣＤ３バインダー２Ｃ１１）を、０、４、７、１１、１４、１８、および２１日目に、右脇腹または左脇腹に交互に皮下注射した。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドの投与量は４０ｍｇ／ｋｇ／日だった。（２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－２－トリフルオロメチル－ベンゼンスルホニル］－１－（１－トリフルオロメチル－シクロプロパンカルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（１－シアノ－シクロプロピル）－アミドは、最初のＣＥＡ－ＴＣＢ免疫化の１週間前からの２８日目まで、グループ２（ｎ＝１０）に食品混合物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ、ドイツ）を介して毎日投与された。グループ１（ｎ＝１０）には、同時にＳｓｎｉｆｆから提供された固形飼料の食餌を与えた。－７、８、１５、および２８日目に、投与前に尾からの血液サンプルをＳａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏチューブの１，１ｍｌ Ｚゲル（カタログ番号４１．１３７８．００５）に採取した。３０分間静置した後、チューブを１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、－２０℃で保存した。
【0171】
ＡＤＡ測定
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのｈｕＣＥＡ ＩｇＧ ＰＧＬＡＬＡ（Ｐ１ＡＤ９４７７）またはｈｕ抗マウスＣＤ３（Ｐ１ＡＥ２７７９－００１－０１）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＣＥＡに対するＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。ＣＤ３バインダーに対するＡＤＡを検出するために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型ヤギ抗マウスＩｇＧ２ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－２０８）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ平底９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ウェルあたり１００μｌのｈｕＣＥＡ ＩｇＧ ＰＧＬＡＬＡ（Ｐ１ＡＤ９４７７）またはｈｕ抗マウスＣＤ３（Ｐ１ＡＥ２７７９－００１－０１）で、それぞれＮａＨＣＯ３ １００ｍＭバッファー中５μｇ／ｍＬで、＋４℃で一晩コーティングした。翌日、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ブロッキングのために、１００μｌのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを各ウェルに加え、ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートした。最初の未加工の丸底希釈プレートにおいて、血清をＰＢＳ＋１％ＦＢＳで１～５０に希釈し、続いて１～３の連続希釈ステップによって、ＰＢＳ＋１％ＦＢＳで７回希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、１００μｌの希釈血清を希釈プレートからＥＬＩＳＡプレートに移した。室温で２時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＣＥＡに対するＡＤＡの検出のために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型のヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－０７１）のウェルあたり１００μｌを添加した。ＣＤ３バインダーに対するＡＤＡを検出するために、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで１：２０００に希釈したアルカリホスファターゼ抱合型ヤギ抗マウスＩｇＧ２ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ カタログ番号１１５－０５５－２０８）のウェルあたり１００μｌを添加した。室温で１時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。すぐに使用できる基質Ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２２１２）１００μｌをウェルごとに添加し、室温で１０分間インキュベートした後、Ｖｅｒｓａｍａｘ ＥＬＩＳＡリーダーでエンドポイント測定として４０５ｎｍのＯＤを読み取った。
【0172】
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8A】
【図8B】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【配列表】