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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-02-16
(45)【発行日】2024-02-27
(54)【発明の名称】グルコース感受性インスリンおよびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/62 20060101AFI20240219BHJP
A61K 38/28 20060101ALI20240219BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240219BHJP
A61K 47/59 20170101ALI20240219BHJP
C07D 259/00 20060101ALI20240219BHJP
【ＦＩ】
C07K14/62 ZNA
A61K38/28
A61P3/10
A61K47/59
C07D259/00
【請求項の数】
6
(21)【出願番号】P 2021515203
(86)(22)【出願日】2019-09-18
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-06
(86)【国際出願番号】 EP2019074987
(87)【国際公開番号】W WO2020058322
(87)【国際公開日】2020-03-26
【審査請求日】2022-09-16
(31)【優先権主張番号】18195490.0
(32)【優先日】2018-09-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】19176911.6
(32)【優先日】2019-05-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】519331637
【氏名又は名称】ノヴォ・ノルディスク・リサーチ・センター・オックスフォード・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】トーマス・ホゥ－イェンセン
(72)【発明者】
【氏名】アリス・レイヴン・マドセン
(72)【発明者】
【氏名】トーマス・クルーゼ
(72)【発明者】
【氏名】ペル・サウエルベルク
(72)【発明者】
【氏名】アンソニー・マレー
(72)【発明者】
【氏名】アンソニー・ピーター・デイヴィス
(72)【発明者】
【氏名】アンドリュー・マイケル・チャップマン
【審査官】坂崎 恵美子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１０／１０７５２０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１８－５１３８４３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２０－５１１５３３（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １４／６２
Ａ６１Ｋ ３８／２８
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
インスリン誘導体であって、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体、グルコース模倣体、および下記の式Ｍ１のマクロサイクルＭ：
【化1】
【化2】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す）
を含むインスリン誘導体であり、
ヒトインスリン類似体は、ヒトインスリンと比較して５個未満の変異を含み、かつ、インスリン活性を有するインスリン類似体であり、
グルコース模倣体は、グルコシドであり、
（ｉ）マクロサイクルが、リンカーを介して、ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、またはｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基に結合し、
リンカーが、
ａ）下記の式Ｌ１のリンカー：
【化3】
式中、Ｙが、ＣＨ ２ －、（ＣＨ ２ ＣＨ ２ ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ ２ －であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す）；および
ｂ）下記の式Ｌ３のリンカー：
【化4】
式中、Ｗは、ＣＨ ２ －、（ＣＨ ２ ＣＨ ２ ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ ２ －であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す）
から選択され、
（ｉｉ－１）グルコース模倣体が、リンカーを介して、ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、またはｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基に結合し、
リンカーが、下記の式Ｌ２のリンカー：
“－（ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ－） ｑ －（ＣＨ ２ ） ｒ －Ｃ（Ｏ）－＃
（式中、ｑは、１または２であり、
式中、ｒは、１または２であり、
式中、“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す）
であるか、または
（ｉｉ－２）二つのグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位にあるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基またはイプシロンアミノ基に結合した三価リンカーを介して、結合し、
リンカーが、
ａ）
【化5】
ｂ）
【化6】
（ｉｉ－３）二つのグルコース模倣体が各々、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基および前記イプシロンアミノ基にそれぞれ結合した二価リンカーを介して、結合し、
リンカーが、下記の式Ｌ６および式Ｌ７：
【化7】
【化8】
式中、＃ １ は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボキシル酸基への結合点を示し、かつ
式中、＃ ２ は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基への結合点を示す）
で示される、
インスリン誘導体。
【請求項2】
前記グルコース模倣体が、β－Ｄ－グルコピラノシドである、請求項１に記載のインスリン誘導体。
【請求項3】
以下：
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
の群から選択される、インスリン誘導体。
【請求項4】
糖尿病の治療を必要とする患者における糖尿病の治療および／または予防のための医薬組成物であって、請求項１～３のいずれか一項に記載の治療有効量のインスリン誘導体を、薬学的に許容可能な賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【請求項5】
請求項１～３のいずれか一項に記載のインスリン誘導体を含む医薬。
【請求項6】
糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群）の治療および／または予防で使用するための、請求項５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
グルコースはヒトのエネルギー恒常性において最も重要な成分であり、また制御されていない血糖は糖尿病の特徴である。糖尿病治療の主な目的は、血糖値を正常値に調節することであり、またインスリンは、この目的のために最も有効な薬剤である。しかしながら、インスリンを使用するグルコースの調節は、高血糖と低血糖との間の困難なバランスである。現代の血糖モニターを用いてさえも、低血糖は一般的に発生しており、様々なグルコース感受性インスリン送達システムが、機械的システム（ポンプ／センサー）または分子送達システムの両方の形態で状況の改善を試みて立案されている。したがって、グルコース調節生物活性（例えば、低血糖値におけるインスリンのより弱いグルコース低下活性）を有する、糖尿病関連ペプチドおよびタンパク質薬剤を配備することが有利であることになる。
【0002】
グルコース感受性インスリン生物活性は、グルコース結合要素に加えて、血糖と競合するグルコース結合要素を結合する結合パートナーを有するインスリンを配備することによって達成することができ、そしてそれ故に、活性状態と不活性状態との間の平衡におけるインスリンフォールディングを制御する（国際特許公開公報第２０１６１４９２２２号、同第２０１０１０７５２０号）。インスリン誘導体上のグルコース結合要素が、同じインスリン上の結合パートナーを結合するとき、インスリンは、不活性または弱い活性の立体構造を獲得する。血糖値が増加するとともに、インスリン誘導体上の結合パートナーはグルコース結合剤から変位し、インスリンの立体構造が活性状態に変化する。
【0003】
こうしたシステムは、何らかの形態でグルコース結合剤を組み込む必要がある。これが、小分子グルコース結合剤の新規設計の試みをもたらした。しかしながら、他の炭水化物との構造上の差異は非常に微妙であるため、水中での合理的な親和性および選択性を有してグルコースを結合することは、非常に困難な課題である。
【発明の概要】
【0004】
本発明は、グルコース感受性インスリン誘導体を提供する。本発明のインスリン誘導体は、マクロサイクルＭ、グルコース模倣体、およびヒトインスリンまたはその類似体を含む。マクロサイクルＭは、式Ｍ１で示され、
【0005】
【化1】
【0006】
【化2】
【0007】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
【0008】
本発明のインスリン誘導体に含まれるマクロサイクルは、水性媒体中のグルコースに対して極めて高い親和性を示す。さらに、本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、他の構造的に類似した糖類（例えば、マンノースまたはフルクトース）に優るグルコースに対する前例のない選択性のレベルを示す。
【0009】
理論に束縛されるものではないが、インスリン誘導体上のマクロサイクルＭがグルコース模倣体を同じインスリン上で結合すると、インスリンは不活性または弱い活性の立体構造を獲得すると考えられる。血糖値が増加するとともに、インスリン誘導体上のグルコース模倣体はマクロサイクルＭから変位し、インスリンの立体構造が活性状態に変化する。図１は、概略的な形態の原理を図示する（図１のインスリンにおける置換の位置を文字通りに解釈するべきではない）。
【0010】
一態様では、本発明は、投与後に、グルコース濃度の関数としてインスリンを活性化する、インスリン誘導体の提供に関する。
【0011】
一態様では、本発明は、例えば、グルコースが約３ｍＭ未満のレベルの低血糖レベルの状況中に、低い活性／可用性を有する、または活性／可用性を持たないインスリン誘導体の提供に関する。
【0012】
一態様では、本発明は、例えば、グルコースが約１０ｍＭを上回る高血糖レベルに応答して、高い活性／可用性を有するインスリン誘導体の提供に関する。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】図１は、グルコース感受性インスリン誘導体（Ｇｍ＝グルコース模倣体、Ｇ＝グルコース）の概略図である。グルコース感受性インスリン生物活性は、グルコース結合要素に加えて、血糖と競合するグルコース結合要素を結合する結合パートナー（グルコース模倣体、グルコシドなど）を有するインスリンを配備することによって達成することができ、そしてそれ故に、活性状態と不活性状態との間の平衡におけるインスリンフォールディングを制御する。
【図3】白丸：３８０ｎｍでの測定された強度対Ｄ－グルコース濃度。破線：実験データ（１：１の結合モデル）に適合した等温線。計算したＫａ＝１４７５１．４８±６３７．３ Ｍ－１。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明は、グルコース依存性の様式でインスリン受容体を活性化するグルコース感受性化合物に関する。
【0015】
本発明の一態様では、本発明は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体、グルコース模倣体、およびグルコース結合剤を含むグルコース感受性インスリン誘導体に関する。
【0016】
本発明の一態様では、グルコース結合剤は、マクロサイクルＭである。本発明の一態様では、マクロサイクルＭは、式Ｍ１で示され、
【0017】
【化3】
【0018】
【化4】
【0019】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
【0020】
別の態様では、本発明は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体、二つのグルコース模倣体、および二つのグルコース結合剤を含むグルコース感受性インスリン誘導体に関する。
【0021】
一般的な定義
「化合物」という用語は、分子実体を指すために本明細書で使用され、それ故に「化合物」は、各化合物または化合物の群に対して定義される最小限の要素以外の異なる構造要素を有してもよい。化合物が定義された構造および／または機能的要素を含む限り、化合物はポリペプチドまたはその誘導体であってもよいということになる。「化合物」という用語はまた、本明細書の薬学的に関係のある形態を包含することも意味し、すなわち、本発明は、本明細書で定義される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、アミド、もしくはエステルにも関する。
「化合物」という用語は、分子実体を指すために本明細書で使用され、それ故に「化合物」は、各化合物または化合物の群に対して定義される最小限の要素以外の異なる構造要素を有してもよい。化合物が定義された構造および／または機能的要素を含む限り、化合物はポリペプチドまたはその誘導体であってもよいということになる。「化合物」という用語はまた、本明細書の薬学的に関係のある形態を包含することも意味し、すなわち、本発明は、本明細書で定義される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、アミド、もしくはエステルにも関する。
【0022】
「ペプチド」または「ポリペプチド」という用語は、例えば、本発明の文脈で使用される場合、アミド（またはペプチド）結合によって相互接続された一連のアミノ酸を含む化合物を指す。特定の実施形態では、ペプチドは、ペプチド結合によって相互接続されたアミノ酸から成る。
【0023】
「類似体」という用語は一般に、配列が参照アミノ酸配列と比較したときに一つ以上のアミノ酸変化を有するペプチドを指す。ある特定の変化を「含む」類似体は、それらの参照配列と比較したときにさらなる変化を含んでもよい。特定の実施形態では、類似体は、特定の変化を「有する」または「含む」。他の特定の実施形態では、類似体は、変化「から成る」。「から成る」または「から成っている」という用語が類似体に関連して使用される場合、例えば、類似体が、特定のアミノ酸変異の群から成るか、または成っている場合、当然のことながら、特定のアミノ酸変異は、類似体における唯一のアミノ酸変異である。対照的に、特定のアミノ酸変異の群を「含む」類似体は、追加的な変異を有してもよい。「類似体」はまた、Ｎ末端位置および／もしくはＣ末端位置におけるアミノ酸の伸長、並びに／またはＮ末端位置および／もしくはＣ末端位置におけるアミノ酸の切断も含んでもよい。
【0024】
一般に、アミノ酸残基は、それらの完全な名称、それらの１文字コード、および／またはそれらの３文字コードによって特定されてもよい。これら三つのやり方は、完全に均等である。
【0025】
「誘導体」という用語は一般に、化学修飾によって、特に一つ以上の置換基の共有結合によって、天然ペプチドまたはその類似体から調製されてもよい化合物を指す。
【0026】
「アミノ酸」という用語は、タンパク質原性（または天然）アミノ酸（その中でも、２０個の標準アミノ酸）だけでなく、非タンパク質原性（または非天然）アミノ酸も含む。タンパク質原性アミノ酸は、タンパク質の中へと天然に組み込まれるものである。標準アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるアミノ酸である。非タンパク質原性アミノ酸は、タンパク質中に見出されないか、または標準細胞機構によって産生されないかのいずれかである（例えば、それらは、翻訳後修飾に供されていない場合がある）。
【0027】
以下では、光学異性体が記載されていない本発明のペプチドの各アミノ酸は、（別段の指定がない限り）Ｌ異性体を意味すると理解されるべきである。アミノ酸は、アミノ基およびカルボン酸基、ならびに任意選択で、しばしば側鎖と呼ばれる一つ以上の追加の基を含有する分子である。
【0028】
以下では、光学異性体が記載されていない本発明のペプチドの各炭水化物は、（別段の指定がない限り）Ｄ異性体を意味すると理解されるべきである。
【0029】
本明細書で使用される場合、「（１－４Ｃ）アルキル」という用語は、１～４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐アルキル基を包含する。
【0030】
本明細書で使用される場合、「（１－４Ｃ）アルコキシ」という用語は、１～４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐アルコキシ基を包含する。
【0031】
本明細書上記の化学式で使用される実線および破線は、例示目的のみのために使用されていることが容易に理解されるであろう（すなわち、本発明の化合物の相対的配向を表示するため）。これらは、示される化合物の絶対的な構成（すなわち、立体化学）を指すものではない。
【0032】
同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の性質もしくは配列またはそれらの原子の空間における配置が異なる化合物は、「異性体」と呼ばれる。空間におけるそれらの原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いの鏡像ではない立体異性体は、「ジアステレオマー」と呼ばれ、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は、「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物が非対称な中心を有する場合、例えば、それが四つの異なる基に結合している場合、一対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その非対称中心の絶対的構成によって特徴付けることができ、またカーンおよびプレログのＲ配列規則およびＳ配列規則によって、または分子が偏光された光の平面を回転させる様式によって説明することができ、かつ右旋性または左旋性として指定することができる（すなわち、それぞれ（＋）または（－）異性体として）。キラル化合物は、個別のエナンチオマーとして、またはその混合物としてのいずれかで存在することができる。等しい比率のエナンチオマーを含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【0033】
本発明の化合物は、一つ以上の非対称な中心を持っていてもよく、したがってこうした化合物を、個々の（Ｒ）－または（Ｓ）－立体異性体として、またはそれらの混合物として生成することができる。別途示されていない限り、明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の説明または命名は、個々のエナンチオマーおよびそのラセミ体またはその他の混合物の両方を含むことが意図されている。立体化学の決定および立体異性体の分離の方法は、当技術分野で周知であり（“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１」の第４章の考察を参照）、例えば、光学活性出発物質からの合成またはラセミ体の分割による。本発明の化合物の一部は、幾何異性体中心（Ｅ-およびＺ－異性体）を有してもよい。本発明は、糖認識の能力を有するすべての光学、ジアステレオ異性体、および幾何異性体およびその混合物を包含することが理解されるべきである。
【0034】
本発明のある特定のマクロサイクル化合物は、溶媒和された形態だけでなく溶媒和されていない形態（例えば、水和された形態など）で存在してもよいことも理解されるべきである。本発明が、糖認識の能力を有するすべてのこうした溶媒和された形態を包含することが理解されるべきである。ある特定の化合物は、多型を呈する場合があり、また本発明は糖認識の能力を有するすべてのこうした形態を包含することも理解されるべきである。
【0035】
本発明のマクロサイクル化合物は、多数の異なる互変異性体で存在してもよく、また特定の式の化合物への参照は、こうしたすべての形態を含む。疑義を避けるために付言すると、化合物がいくつかの互変異性体のうちの一つにおいて存在することができ、かつ一つのみが具体的に説明または示されている場合には、すべての他の化合物は、それにもかかわらず所与の式によって受け入れられる。互変異性体の例としては、ケト形態、エノール形態、およびエノラート形態、例えば、以下の互変異性対：ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、およびニトロ／アシニトロにおけるものが挙げられる。
【0036】
アミン機能を含有する化合物はまた、Ｎ－オキシドも形成してもよい。アミン機能を含有する所与の式の化合物に対する本明細書での言及は、Ｎ－オキシドも含む。化合物がいくつかのアミン機能を含有する場合、一つ以上の窒素原子は酸化されてＮ－オキシドを形成してもよい。Ｎ－オキシドの特定の例は、三級アミンのＮ－オキシドまたは窒素含有複素環の窒素原子である。Ｎ－オキシドは、過酸化水素または過酸（例えば、ペルオキシカルボン酸）などの酸化剤で、対応するアミンを処理することによって形成することができる（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｂｙ Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ， ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ｐａｇｅｓを参照）。より具体的には、Ｎ－オキシドは、Ｌ．Ｗ．Ｄｅａｄｙ（Ｓｙｎ．Ｃｏｍｍ．１９７７，７，５０９～５１４）の手順によって作製することができ、ここでアミン化合物は、例えばジクロロメタンなどの不活性溶媒中で、ｍ－クロロペルオキシ安息香酸（ｍＣＰＢＡ）と反応する。
【0037】
インスリン
本明細書で使用される場合、「ヒトインスリン」という用語は、その構造および特性が周知のヒトインスリンホルモンを意味する。ヒトインスリンは、Ａ鎖およびＢ鎖と称される二つのポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は、２１個のアミノ酸のペプチドであり、Ｂ鎖は、３０個のアミノ酸のペプチドであり、二つの鎖は、ジスルフィド架橋によって接続され、第一の架橋は、Ａ鎖の７位におけるシステインとＢ鎖の７位におけるシステインとの間であり、また第二の架橋は、Ａ鎖の２０位におけるシステインとＢ鎖の１９位におけるシステインとの間である。第三の架橋は、Ａ鎖の６位におけるシステインとＡ鎖の１１位におけるシステインとの間に存在する。
本明細書で使用される場合、「ヒトインスリン」という用語は、その構造および特性が周知のヒトインスリンホルモンを意味する。ヒトインスリンは、Ａ鎖およびＢ鎖と称される二つのポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は、２１個のアミノ酸のペプチドであり、Ｂ鎖は、３０個のアミノ酸のペプチドであり、二つの鎖は、ジスルフィド架橋によって接続され、第一の架橋は、Ａ鎖の７位におけるシステインとＢ鎖の７位におけるシステインとの間であり、また第二の架橋は、Ａ鎖の２０位におけるシステインとＢ鎖の１９位におけるシステインとの間である。第三の架橋は、Ａ鎖の６位におけるシステインとＡ鎖の１１位におけるシステインとの間に存在する。
【0038】
ヒトインスリンＡ鎖は、以下の配列、ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号１）を有する一方、Ｂ鎖は、以下の配列、ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ（配列番号２）を有する。
【0039】
人体では、このホルモンは、プレペプチド－Ｂ－Ａｒｇ Ａｒｇ－Ｃ－Ｌｙｓ Ａｒｇ－Ａ（式中、Ｃは、３１個のアミノ酸の接続ペプチドである）の構成にある、２４個のアミノ酸のプレペプチドに続いて８６個のアミノ酸を含むプロインスリンから成る一本鎖前駆体プロインスリン（プレプロインスリン）として合成される。Ａｒｇ－ＡｒｇおよびＬｙｓ－Ａｒｇは、Ａ鎖およびＢ鎖からの接続ペプチドの切断のための切断部位である。
【0040】
本発明による「インスリン」は、本明細書では、ヒトインスリン、またはブタインスリンもしくはウシインスリンなどの別の種からのインスリンとして理解されるべきである。
【0041】
「インスリンペプチド」、「インスリン化合物」、または「インスリン」という用語は、本明細書で使用される場合、インスリン活性を有する、ヒトインスリンまたはその類似体もしくは誘導体のいずれかであるペプチドを意味する。
【0042】
インスリン類似体
本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリンの一つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基によって置換されており、かつ／または一つ以上のアミノ酸残基がインスリンから欠失しており、かつ／または一つ以上のアミノ酸残基がインスリンに付加および／もしくは挿入されている、修飾ヒトインスリンを意味する。
本明細書で使用される場合、「インスリン類似体」という用語は、インスリンの一つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基によって置換されており、かつ／または一つ以上のアミノ酸残基がインスリンから欠失しており、かつ／または一つ以上のアミノ酸残基がインスリンに付加および／もしくは挿入されている、修飾ヒトインスリンを意味する。
【0043】
本明細書で使用される場合、「修飾」という用語は、置換、欠失、および付加（挿入を含む）を意味する。本明細書で使用される場合、「変異」という用語は、ヒトインスリンの配列内のアミノ酸の置換または欠失を意味する。変異という用語は、ヒトインスリンの配列への付加、伸長、または延長を含まない。インスリン分子における変異は、鎖（ＡまたはＢ）、位置、および天然アミノ酸残基を置換するアミノ酸残基に対する１文字コードまたは３文字コードを記載して示される。
【0044】
一実施形態では、インスリン類似体は、ヒトインスリンと比較して１０個未満のアミノ酸変異を含み、代替的に、ヒトインスリンと比較して９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個未満の変異を含む。本明細書で使用される場合、インスリン類似体に対する任意の変異は、インスリンペプチド単独に対する変異を意味し、インスリンペプチド／類似体に結合されたいかなる連結基も含まない。
【0045】
「ｄｅｓＢ３０」または「Ｂ（１－２９）」は、Ｂ３０アミノ酸を欠く天然インスリンＢ鎖またはその類似体を意味し、また「Ａ（１－２１）」は、天然インスリンＡ鎖を意味する。それ故に、例えば、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは、Ｂ鎖の３０位におけるアミノ酸が欠失しているヒトインスリン類似体である。
【0046】
本明細書では、「Ａ１」、「Ａ２」、および「Ａ３」などの用語は、インスリンのＡ鎖のそれぞれ１位、２位、および３位など（Ｎ末端から数えて）におけるアミノ酸を表す。同様に、Ｂ１、Ｂ２、およびＢ３などの用語は、インスリンのＢ鎖のそれぞれ１位、２位、および３位など（Ｎ末端から数えて）におけるアミノ酸を示す。アミノ酸に対して１文字コードを使用して、Ａ２１Ａ、Ａ２１Ｇ、およびＡ２１Ｑなどの用語は、Ａ２１位におけるアミノ酸がそれぞれＡ、Ｇ、およびＱであることを指定する。アミノ酸に対して３文字コードを使用すると、対応する表現は、それぞれＡ２１Ａｌａ、Ａ２１Ｇｌｙ、およびＡ２１Ｇｌｎである。
【0047】
本明細書では、「アミノ酸残基」という用語は、形式上、ヒドロキシ基がカルボキシ基から除去されており、かつ／または形式上、水素原子がアミノ基から除去されている、アミノ酸である。
【0048】
ｄｅｓＢ３０を含むヒトインスリン類似体を、インスリン誘導体の実施例で使用した。しかしながら、インスリン類似体の他の耐性変異、組み合わせ、変異数、配列延長／切断なども同様に、本発明を例示するために使用することが可能である。こうしたインスリン類似体の例は、Ｂ２８Ｄヒトインスリン、Ｂ２８Ｋ Ｂ２９Ｐヒトインスリン、およびＢ３Ｋ Ｂ２９Ｅヒトインスリンである。
【0049】
一態様では、本発明のインスリン類似体は、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号１のＡ鎖および配列番号３のＢ鎖）を含む。
【0050】
一態様では、本発明のインスリン類似体は、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号１のＡ鎖および配列番号３のＢ鎖）を含む。
【0051】
インスリン誘導体
【0052】
本明細書で使用される場合、「インスリン誘導体」または「インスリン類似体の誘導体」という用語は、グルコース模倣体およびマクロサイクルが結合されるヒトインスリンまたはその類似体（インスリン類似体）を指す。言い換えれば、本発明のインスリン誘導体は、ヒトインスリンまたはその類似体、マクロサイクル、およびグルコース模倣体を含む。
【0053】
一態様では、本発明のインスリン誘導体は、ヒトインスリンまたはその類似体、少なくとも一つのマクロサイクル、および少なくとも一つのグルコース模倣体を含む。
【0054】
別の態様では、本発明のインスリン誘導体は、少なくとも二つのマクロサイクル、および少なくとも二つのグルコース模倣体を含む。
【0055】
別の態様では、本発明のインスリン誘導体は、二つのマクロサイクル、および二つのグルコース模倣体を含む。
【0056】
一態様では、マクロサイクルおよびグルコース模倣体はそれぞれ、リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に各々結合されてもよい。一態様では、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点は、
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジンのイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基、から選択される。
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジンのイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基、から選択される。
【0057】
一態様では、マクロサイクルおよびグルコース模倣体は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体上の同じ結合点に結合しない。
【0058】
マクロサイクル
本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、グルコースに対して高い親和性を示す。本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、他の構造的に類似した糖類（例えば、マンノース）に優るグルコースに対する選択性を示す。
本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、グルコースに対して高い親和性を示す。本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、他の構造的に類似した糖類（例えば、マンノース）に優るグルコースに対する選択性を示す。
【0059】
本発明のインスリン誘導体内に含まれるマクロサイクルは、式Ｍ１：
【0060】
【化5】
【0061】
【化6】
【0062】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
【0063】
一態様では、Ｒ１とＲ２とは同一である。一態様では、Ｒ１およびＲ２は－ＯＨである。別の態様では、Ｒ１およびＲ２は以下のものである。
【0064】
【化7】
【0065】
【化8】
【0066】
一態様では、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は同一である。さらなる態様では、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９はエチルである。
【0067】
グルコース模倣体
本明細書で使用される場合、「グルコース模倣体」という用語は、グルコースと構造的に類似し、かつマクロサイクルＭに結合する化合物を指す。言い換えれば、グルコース模倣体は、マクロサイクルＭに対して親和性を有する。
本明細書で使用される場合、「グルコース模倣体」という用語は、グルコースと構造的に類似し、かつマクロサイクルＭに結合する化合物を指す。言い換えれば、グルコース模倣体は、マクロサイクルＭに対して親和性を有する。
【0068】
一態様では、本発明のインスリン誘導体に含まれるグルコース模倣体は、グルコシドである。さらなる態様では、本発明のインスリン誘導体に含まれるグルコース模倣体は、１－置換β－Ｄ－グルコピラノシドである。
【0069】
リンカー
本発明によるインスリン誘導体は、マクロサイクルＭとヒトインスリン類似体との間のリンカー、および／またはヒトインスリン類似体とグルコース模倣体との間のリンカーをさらに含んでもよい。
本発明によるインスリン誘導体は、マクロサイクルＭとヒトインスリン類似体との間のリンカー、および／またはヒトインスリン類似体とグルコース模倣体との間のリンカーをさらに含んでもよい。
【0070】
本発明の文脈では、リンカーは、マクロサイクルおよびグルコース模倣体をそれぞれヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に共有結合するために使用される化学部分または残基である。それ故に、用語「－リンカー－」は、インスリン誘導体の化学単位を意味することが意図され、これは、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のアミノ酸残基に、およびマクロサイクルまたはグルコース模倣体にそれぞれ共有結合している。
【0071】
結合点に応じて、リンカー末端の反応性は変化する場合がある。リンカーは、問題の産物に応じて、様々な形態を有してもよい。
【0072】
マクロサイクルをヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に共有結合するために使用されるリンカーは、グルコース模倣体をヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に共有結合するために使用されるリンカーとは異なっていてもよい。
【0073】
一実施形態では、リンカーは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ－を含み、式中、ｐは１～５の整数である。
【0074】
一実施形態では、リンカーは－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２ＣＨ２－トリアゾール－ＰｈＣＨ２である。一実施形態では、リンカーは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－である。
【0075】
ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体とマクロサイクルおよびグルコース模倣体とのそれぞれ間の結合を生成するために、異なる長さおよび組成物を有する代替的なリンカーを採用することが可能である。
【0076】
一態様では、マクロサイクルＭは、下記の式Ｌ１のリンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に結合される。
【0077】
【化9】
式中、Ｙは、ＣＨ２－、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ２－であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示し、
グルコース模倣体は、リンカーを介して、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基に結合され、前記リンカーは式Ｌ２で示され、
【0078】
【化10】
式中、ｒは、１または２であり、
式中、“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す。
【0079】
第二の態様では、インスリン誘導体は、二つのグルコース模倣体および式Ｍ１の二つのマクロサイクルＭを含み、二つのマクロサイクルは、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に結合され、かつ二つのグルコース模倣体は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるアルファカルボン酸基および／またはリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基に結合される。二つのグルコース模倣体は、三価リンカーを介して、ヒトインスリンもしくはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基もしくはイプシロンアミノ基に結合されてもよく、または二つのグルコース模倣体の各々は、ヒトインスリンもしくはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位における、それぞれ、リジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基およびイプシロンアミノ基に結合された二価リンカーを介して、結合されてもよい。
【0080】
一態様では、二つのマクロサイクルＭをヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に連結する三価リンカーは、式Ｌ３で示され、
【0081】
【化11】
式中、Ｗは、ＣＨ２－、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ２－であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す。
【0082】
一態様では、二つのグルコース模倣体をヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基に連結する三価リンカーは、式Ｌ４で示され、
【0083】
【化12】
式中、＃１は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボキシル酸基への結合点を示す。
【0084】
一態様では、二つのグルコース模倣体をヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基に連結する三価リンカーは、式Ｌ５で示され、
【0085】
【化13】
式中、＃２は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基への結合点を示す。
【0086】
一態様では、二つのグルコース模倣体をヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基およびイプシロンアミノ基にそれぞれ連結する二価リンカーは、それぞれ式Ｌ６およびＬ７で示され、
【0087】
【化14】
【0088】
【化15】
式中、＃１は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボキシル酸基への結合点を示し、かつ
式中、＃２は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基への結合点を示す。
【0089】
ヒトインスリンおよびインスリン類似体の生成
ポリペプチド、例えば、インスリンの生成は、当技術分野で周知である。インスリンまたはインスリン類似体は、例えば、古典的なペプチド合成、例えば、ｔ－ＢｏｃもしくはＦｍｏｃ化学または他の十分に確立した技法を使用する固相ペプチド合成によって生成されてもよい（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９を参照）。インスリンまたはインスリン類似体はまた、類似体をコードするＤＮＡ配列を含有し、かつ好適な栄養培地内で、インスリン類似体の発現を許容する条件下で、インスリン類似体を発現する能力を有する宿主細胞を培養することを含む方法によって生成されてもよい。ヒトインスリンおよびヒトインスリン類似体の生成では、いくつかの組み換え方法が使用されてもよい。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）および出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの微生物におけるインスリンの生成に使用されてもよい方法の例は、例えば、国際特許公開公報第２００８／０３４８８１号に開示されている。
ポリペプチド、例えば、インスリンの生成は、当技術分野で周知である。インスリンまたはインスリン類似体は、例えば、古典的なペプチド合成、例えば、ｔ－ＢｏｃもしくはＦｍｏｃ化学または他の十分に確立した技法を使用する固相ペプチド合成によって生成されてもよい（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９を参照）。インスリンまたはインスリン類似体はまた、類似体をコードするＤＮＡ配列を含有し、かつ好適な栄養培地内で、インスリン類似体の発現を許容する条件下で、インスリン類似体を発現する能力を有する宿主細胞を培養することを含む方法によって生成されてもよい。ヒトインスリンおよびヒトインスリン類似体の生成では、いくつかの組み換え方法が使用されてもよい。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）および出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの微生物におけるインスリンの生成に使用されてもよい方法の例は、例えば、国際特許公開公報第２００８／０３４８８１号に開示されている。
【0090】
典型的には、インスリンまたはインスリン類似体は、例えば、欧州特許第１２４６８４５号または国際特許公開公報第２００８／０３４８８１号に開示される周知の技法によって、問題のインスリン類似体またはその前駆体をコードするＤＮＡ配列を、好適な宿主細胞内で発現させることによって生成される。
【0091】
インスリンまたはインスリン類似体は、細胞培養培地から回収され、そしてクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシング、およびサイズ排除）、電気泳動手順（例えば、調製用等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、較差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈殿））、または抽出を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の様々な手順によって精製されてもよい（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｊ．－Ｃ．Ｊａｎｓｏｎ ａｎｄ Ｌａｒｓ Ｒｙｄｅｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照）。好ましくは、インスリンまたはインスリン類似体は、抗インスリン類似体抗体カラム上で親和性クロマトグラフィーによって精製される。高速液体クロマトグラフィーなどの従来の化学的精製手段によって、追加的な精製は達成されてもよい。クエン酸バリウム沈殿を含む他の精製方法が、当技術分野で公知であり、また本明細書に記載の［インスリンまたはインスリン類似体の精製に適用されてもよい（例えば、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｒ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，１９８２を参照）。
【0092】
医薬組成物
本発明はまた、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、アミド、もしくはエステル、および一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤（複数可）を含む医薬組成物にも関する。こうした組成物は、当技術分野で公知のとおりに調製されてもよい。
本発明はまた、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、アミド、もしくはエステル、および一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤（複数可）を含む医薬組成物にも関する。こうした組成物は、当技術分野で公知のとおりに調製されてもよい。
【0093】
「賦形剤」という用語は、活性治療成分（複数可）以外の任意の成分を幅広く指す。賦形剤は、不活性物質、非活性物質、および／または医薬的に活性でない物質であってもよい。賦形剤は、例えば、担体、希釈剤、希釈剤、錠剤補助剤として様々な目的を果たす場合があり、かつ／または活性物質の投与および／もしくは吸収を改善するように機能する場合がある。賦形剤の非限定的な例は、溶媒、希釈剤、緩衝液、防腐剤、等張性調節剤、キレート剤および安定剤である。様々な賦形剤を伴った薬学的に活性成分の製剤化は、当技術分野において公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば、第２１版（２００５）および任意のその後の版）を参照）。
【0094】
本発明の組成物は、液体製剤、すなわち、水を含む水性製剤の形態であってもよい。液体製剤は、溶液または懸濁液であってもよい。別の方法として、これは、固形製剤、例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥した組成物であってもよい。
【0095】
本発明の医薬組成物は、治療剤などの第二の活性成分をさらに含んでもよく、これは併用療法の場合に投与を単純化する場合がある。
【0096】
薬学的適応
糖尿病
「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）」または「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」という用語には、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病（妊娠中）、および高血糖症を引き起こす他の状態が含まれる。この用語は、膵臓が産生するインスリンの量が不十分であるか、または身体の細胞がインスリンに適切に応答できず、それ故に細胞がグルコースを吸収するのを妨げる、代謝障害に対して使用される。結果として、グルコースは、血液中に蓄積する。
糖尿病
「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）」または「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」という用語には、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病（妊娠中）、および高血糖症を引き起こす他の状態が含まれる。この用語は、膵臓が産生するインスリンの量が不十分であるか、または身体の細胞がインスリンに適切に応答できず、それ故に細胞がグルコースを吸収するのを妨げる、代謝障害に対して使用される。結果として、グルコースは、血液中に蓄積する。
【0097】
インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）および若年発症糖尿病とも呼ばれる１型糖尿病は、通常は絶対的インスリン欠乏をもたらすＢ細胞破壊によって引き起こされる。
【0098】
非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）および成人発症糖尿病としても知られる、２型糖尿病は、主なインスリン抵抗性、それ故に相対的なインスリン欠乏および／またはインスリン抵抗性を伴う主なインスリン分泌不全に関連している。
【0099】
他の適応
一実施形態では、本発明による化合物は、ストレス誘発性高血糖症を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、または１型糖尿病の治療または予防のための医薬の調製に使用される。
一実施形態では、本発明による化合物は、ストレス誘発性高血糖症を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、または１型糖尿病の治療または予防のための医薬の調製に使用される。
【0100】
別の実施形態では、本発明による化合物は、２型糖尿病における疾患の進行を遅延または予防するための医薬として使用される。
【0101】
本発明の一実施形態では、化合物は、ストレス誘発性高血糖症を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、または１型糖尿病の治療または予防のための医薬として使用するためのものである。
【0102】
さらなる実施形態では、本発明は、ストレス誘発性高血糖症を含む高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、または１型糖尿病の治療または予防のための方法に関し、方法は、こうした治療を必要としている患者に、こうした治療のための有効量の本発明による化合物を投与することを含む。
【0103】
投与の方法
「治療」という用語は、参照される疾患、障害、または状態の予防および最小化の両方を含むことを意味する（すなわち、「治療」は、文脈によって別段の指示がないか、または明確に矛盾しない限り、本発明の化合物または本発明の化合物を含む組成物の予防的投与および治療的投与の両方を指す。
「治療」という用語は、参照される疾患、障害、または状態の予防および最小化の両方を含むことを意味する（すなわち、「治療」は、文脈によって別段の指示がないか、または明確に矛盾しない限り、本発明の化合物または本発明の化合物を含む組成物の予防的投与および治療的投与の両方を指す。
【0104】
投与の経路は、本発明の化合物を体内の所望のまたは適切な場所に、例えば非経口的に（皮下、筋肉内、または静脈内など）効果的に輸送する任意の経路であってもよい。あるいは、本発明の化合物は、経口、肺、直腸内、経皮、口腔内、舌下、または経鼻で投与することができる。
【0105】
非経口投与については、本発明の化合物は、公知のインスリンの製剤と類似的に製剤化される。さらに、非経口投与については、本発明の化合物は、公知のインスリンの投与と類似的に投与され、医師は、この手順に精通している。
【0106】
投与される本発明の化合物の量、本発明の化合物を投与する頻度の決定、および任意選択で別の抗糖尿病化合物と一緒に、どの本発明の化合物（複数可）を投与するかの選択は、糖尿病の治療に精通している医師と相談して決定される。
【0107】
本発明は、以下の非限定的実施形態によってさらに説明される：
【0108】
１． インスリン誘導体であって、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体、グルコース模倣体、および式Ｍ１のマクロサイクルＭを含むインスリン誘導体
【0109】
【化16】
【0110】
【化17】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す。
【0111】
２． インスリン誘導体が、式Ｍ１の二つのグルコース模倣体と二つのマクロサイクルＭとを含む、実施形態１に記載のインスリン誘導体。
【0112】
３． Ｒ１およびＲ２が以下のものである、実施形態１～２のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0113】
【化18】
【0114】
４． Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の各々がエチルである、実施形態１～３のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0115】
５． マクロサイクルおよびグルコース模倣体がそれぞれ、任意選択的なリンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点が、
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基、から選択され、
マクロサイクルおよびグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体上の同じ結合点に結合されていないことを条件とする、実施形態１～４のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基、から選択され、
マクロサイクルおよびグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体上の同じ結合点に結合されていないことを条件とする、実施形態１～４のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0116】
６． マクロサイクルＭが、リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、前記リンカーが、
＊－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－トリアゾール－ＰｈＣＨ２－＃であり、
式中、ｍは、１～５の整数であり、
＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点である、実施形態１～５のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
＊－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２ＣＨ２－トリアゾール－ＰｈＣＨ２－＃であり、
式中、ｍは、１～５の整数であり、
＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点である、実施形態１～５のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0117】
７． グルコース模倣体が、リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、前記リンカーが、
“－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－＃であり、
式中、ｎは、０～５の整数であり、
“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点である、実施形態１～６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
“－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）－＃であり、
式中、ｎは、０～５の整数であり、
“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点である、実施形態１～６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0118】
８． ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体が、ヒトインスリン類似体ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである、実施形態１～７のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0119】
９． グルコース模倣体が、β－Ｄ－グルコピラノシドである、実施形態１～８のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0120】
１０． インスリン誘導体が、
実施例１のＢ１－マクロサイクルＢ２９－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン８と、
実施例２のＢ１－マクロサイクルＡ１－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２と、
実施例３のＢ２９－マクロサイクルＡ１－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１３と、
実施例４のＢ１－ビス－マクロサイクルＢ２９－ビス－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１４と、から選択される、実施形態１～９のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
実施例１のＢ１－マクロサイクルＢ２９－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン８と、
実施例２のＢ１－マクロサイクルＡ１－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２と、
実施例３のＢ２９－マクロサイクルＡ１－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１３と、
実施例４のＢ１－ビス－マクロサイクルＢ２９－ビス－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１４と、から選択される、実施形態１～９のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0121】
１１． 糖尿病の治療を必要とする患者における糖尿病の治療のための医薬組成物であって、実施形態１～１０のいずれか一つに記載の治療有効量のインスリン誘導体を、薬学的に許容可能な賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【0122】
１２． 医薬として使用するための、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【0123】
１３． 糖尿病を有する患者の治療において使用するための、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【0124】
本発明は、以下の非限定的実施形態によってなおさらに説明される。
【0125】
１４． ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体、グルコース模倣体、および式Ｍ１のマクロサイクルを含むインスリン誘導体であって、
【0126】
【化19】
【0127】
【化20】
式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、水素、ハロゲン、（１－４Ｃ）アルキルおよび（１－４Ｃ）アルコキシから独立して選択され、
式中、Ｒ３は、式Ｍ１のマクロサイクルの結合点を示す、インスリン誘導体。
【0128】
１５． グルコース模倣体が、グルコシドである、実施形態１４に記載のインスリン誘導体。
【0129】
１６． グルコース模倣体が、β－Ｄ－グルコピラノシドである、実施形態１５に記載のインスリン誘導体。
【0130】
１７． Ｒ１およびＲ２が－ＯＨである、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0131】
１８． Ｒ１およびＲ２が以下のものである、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0132】
【化21】
【0133】
１９． Ｒ１およびＲ２が以下のものである、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0134】
【化22】
【0135】
２０． Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の各々がエチルである、実施形態１４～１９のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0136】
２１． マクロサイクルおよびグルコース模倣体がそれぞれ、任意選択的なリンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点が、
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基と、から選択され、
マクロサイクルおよびグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体上の同じ結合点に結合されていないことを条件とする、実施形態１～４のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
ａ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＡ鎖の１位におけるアミノ酸残基のアルファアミノ基、
ｂ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基、および
ｃ）ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基またはアルファカルボン酸基と、から選択され、
マクロサイクルおよびグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体上の同じ結合点に結合されていないことを条件とする、実施形態１～４のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0137】
２２． マクロサイクルが、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に結合され、かつ二つのグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基に結合される、実施形態２１に記載のインスリン誘導体。
【0138】
２３． マクロサイクルＭが、リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、上記のリンカーが、式Ｌ１で示され、
【0139】
【化23】
式中、Ｙは、ＣＨ２－、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ２－であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す、実施形態２２に記載のインスリン誘導体。
【0140】
２４． グルコース模倣体が、リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体に結合され、前記リンカーが、式Ｌ２で示され、
“－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）ｑ－（ＣＨ２）ｒ－Ｃ（Ｏ）－＃
式中、ｑは、１または２であり、
式中、ｒは、１または２であり、
式中、“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す、実施形態２３に記載のインスリン誘導体。
“－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）ｑ－（ＣＨ２）ｒ－Ｃ（Ｏ）－＃
式中、ｑは、１または２であり、
式中、ｒは、１または２であり、
式中、“は、グルコース模倣体への結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す、実施形態２３に記載のインスリン誘導体。
【0141】
２５． ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体が、ヒトインスリン類似体ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである、実施形態１４～２４のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0142】
２６． インスリン誘導体が、
実施例１のＩＮＳ１
実施例１のＩＮＳ１
【0143】
【化24】
実施例５のＩＮＳ９と、
実施例８のＩＮＳ１８と、
実施例９のＩＮＳ２１と、
実施例１２のＩＮＳ２８と、
実施例１４のＩＮＳ３０と、
実施例１８のＩＮＳ３４と、
実施例１９のＩＮＳ３５と、
実施例２０のＩＮＳ３６と、
実施例２１のＩＮＳ３７と、
実施例２２のＩＮＳ３８と、の群から選択される、実施形態２５に記載のインスリン誘導体。
【0144】
２７． インスリン誘導体が、二つのグルコース模倣体と式Ｍ１の二つのマクロサイクルＭとを含む、実施形態１４～２２のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0145】
２８． 二つのマクロサイクルが、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に結合される、実施形態２７に記載のインスリン誘導体。
【0146】
２９． 二つのマクロサイクルＭが、三価リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の１位におけるアルファアミノ基に結合され、前記リンカーが、式Ｌ３で示され、
【0147】
【化25】
式中、Ｗは、ＣＨ２－、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－）、または－Ｐｈ－ｐａｒａ－ＣＨ２－であり、
式中、＊は、マクロサイクルＭへの結合点を示し、かつ
式中、＃は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体への結合点を示す、実施形態２８に記載のインスリン誘導体。
【0148】
３０． 二つのグルコース模倣体が、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基および／またはイプシロンアミノ基に結合される、実施形態２９に記載のインスリン誘導体。
【0149】
３１． 二つのグルコース模倣体が、三価リンカーを介してヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基またはイプシロンアミノ基に結合され、
前記リンカーが、
ａ）
前記リンカーが、
ａ）
【0150】
【化26】
ｂ）
【0151】
【化27】
または、二つのグルコース模倣体が各々、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボン酸基およびイプシロンアミノ基にそれぞれ結合された二価リンカーを介して結合され、
前記リンカーが、式Ｌ６および式Ｌ７で示され、
【0152】
【化28】
【0153】
【化29】
式中、＃１は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のアルファカルボキシル酸基への結合点を示し、かつ
式中、＃２は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体のＢ鎖の２９位におけるリジン（Ｋ）のイプシロンアミノ基への結合点を示す、実施形態３０に記載のインスリン誘導体。
【0154】
３２． ヒトインスリンまたはヒトインスリン類似体が、ヒトインスリン類似体ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである、実施形態２７～３１のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0155】
３３． インスリン誘導体が、
実施例１０のＩＮＳ２２と、
実施例１３のＩＮＳ２９と、
実施例１６のＩＮＳ３２と、
実施例１７のＩＮＳ３３と、の群から選択される実施形態３２に記載のインスリン誘導体。
実施例１０のＩＮＳ２２と、
実施例１３のＩＮＳ２９と、
実施例１６のＩＮＳ３２と、
実施例１７のＩＮＳ３３と、の群から選択される実施形態３２に記載のインスリン誘導体。
【0156】
３４． インスリン誘導体が、実施例２５のＩＮＳ４１である、実施形態１４に記載のインスリン誘導体。
【0157】
３５． インスリン誘導体が、実施例３のＩＮＳ５である、実施形態１４に記載のインスリン誘導体。
【0158】
３６． インスリン誘導体が、実施例２のＩＮＳ４である、実施形態１に記載のインスリン誘導体。
【0159】
３７． インスリン誘導体が、インスリン受容体に結合する能力を有する、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0160】
３８． インスリン誘導体が、２０ｍＭのグルコースの存在下において、グルコースが存在しないときより高いインスリン受容体親和性を有する、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0161】
３９． インスリン誘導体が、２０ｍＭのグルコースの存在下において、グルコースが存在しないときより少なくとも２倍高いインスリン受容体親和性を有する、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0162】
４０． 糖尿病の治療を必要とする患者における糖尿病の治療および／または予防のための医薬組成物であって、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載の治療有効量のインスリン誘導体を、薬学的に許容可能な賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【0163】
４１． 医薬として使用するための、実施形態４０の医薬組成物。
【0164】
４２． 糖尿病の治療および／または予防において使用するための、実施形態４０の医薬組成物。
【0165】
４３． 医薬として使用するための、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0166】
４４． 糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群）の治療および／または予防で使用するための、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0167】
４５． 糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群）の治療および／または予防のための方法で使用するための、実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体。
【0168】
４６． 糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、およびメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群）の治療および／または予防のための方法であって、それを必要とする患者への有効量の実施形態１４～３６のいずれか一つに記載のインスリン誘導体の投与を含む、方法。
【0169】
［実施例］
化学構造は、化学名が曖昧でない限り、すべての最終生成物について、および中間生成物についても示されている。最終生成物および一部の中間体は、それらの構造に加えて、以下のセクションで化学名とともにリストされる。しかしながら、これらの化学名は、生成物を明確に定義する完全な化学名ではなく、また読み易くするためにのみ提供される。ＰＥＧリンカーのナンバリングに使用される命名法は文献によって異なり、本明細書では、ＰＥＧ３は、三つのエチレン基を有するＰＥＧリンカーを示し、ＰＥＧ４は、四つのエチレン基を有するＰＥＧリンカーを示す、などとしている。
化学構造は、化学名が曖昧でない限り、すべての最終生成物について、および中間生成物についても示されている。最終生成物および一部の中間体は、それらの構造に加えて、以下のセクションで化学名とともにリストされる。しかしながら、これらの化学名は、生成物を明確に定義する完全な化学名ではなく、また読み易くするためにのみ提供される。ＰＥＧリンカーのナンバリングに使用される命名法は文献によって異なり、本明細書では、ＰＥＧ３は、三つのエチレン基を有するＰＥＧリンカーを示し、ＰＥＧ４は、四つのエチレン基を有するＰＥＧリンカーを示す、などとしている。
【0170】
材料および方法
略語リスト
ＣＶ カラム体積
ＤＢＵ １，８－ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデカ７－エン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ 炭酸９－フルオレニルメチルＮ－スクシンイミジル
ＨＢＴＵ ２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＮＳｕ Ｍ－ヒドロキシスクシンイミド
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＮＭＰ Ｎ－メチル－ピロリドン
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速クロマトグラフィー
ＴＥＭＰＯ （２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＨＰＴＡ トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン
略語リスト
ＣＶ カラム体積
ＤＢＵ １，８－ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデカ７－エン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ 炭酸９－フルオレニルメチルＮ－スクシンイミジル
ＨＢＴＵ ２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＮＳｕ Ｍ－ヒドロキシスクシンイミド
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＮＭＰ Ｎ－メチル－ピロリドン
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速クロマトグラフィー
ＴＥＭＰＯ （２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＨＰＴＡ トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン
【0171】
ビルディングブロックの調製
【0172】
化合物１の調製
【0173】
【化30】
１Ｈ ＮＭＲ： （５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９４（ｓ、１Ｈ）、８．１４（ｄｄ、Ｊ＝１７．７、８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０１－７．９３（ｍ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．８７－７．６８（ｍ、６Ｈ）、７．６８－７．６１（ｍ、１Ｈ）、７．５４（ｄｔ、Ｊ＝１１．５、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３４（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．４６（ｓ、２Ｈ）、４．４４（ｓ、２Ｈ）、４．３１（ｓ、１Ｈ）、３．４０（ｓ、７Ｈ）、３．０３（ｓ、７Ｈ）、２．５０（ｓ、４Ｈ）。
【0174】
化合物２ａの調製
【0175】
【化31】
【0176】
ＮａＨ（３．８０９ｇ、０．０９５ｍｏｌ、鉱油中６０％）をシュレンク管（１００ｍＬ）に添加し、窒素下に定置した。３×２５ｍＬの６０～８０℃の石油エーテルで、固体を洗浄することにより、鉱油を除去した。洗浄したＮａＨを、無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）中に懸濁し、そして氷浴中で冷却しながら約１０分間激しく攪拌した。固体トリフルオロアセトアミド（１６．１４７ｇ、０．１４３ｍｏｌ）を、窒素向流下で少しずつ添加した。混合物を５分間攪拌した後、室温まで温めた。気体の放出が完全に停止したら（１時間以内）、固体１，３，５－トリブロモメチル－２，４，６－トリエチルベンゼン（７．００ｇ、０．０１６ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を窒素向流下で少しずつ添加し、そして得られた白色懸濁液を室温で攪拌した。約１８時間後、懸濁液を０．５ＭのＨＣｌ（１５０ｍＬ）の中へと注ぎ、そして淡いオレンジ色の沈殿物をフリット上で収集した。固体を水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、次いで真空下で一晩乾燥させた（約１０－２ｍｂａｒ）。オフホワイトの固体（７．９１０ｇ、０．０１５ｍｏｌ、９３％）。中間体アセトアミド（４．９０ｇ、０．００９ｍｏｌ）を、メタノール（３８．６ｍＬ）および水（３８．６ｍＬ）中に溶解した。ＮａＯＨ（１．０５ｇ、３．１５０ｍｏｌ）を添加し、反応混合物を攪拌して、６５℃で約１８時間攪拌した。固体Ｂｏｃ２Ｏ（７．２８７ｇ、０．０３３ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．５３４ｍＬ、０．０２６ｍｏｌ）を追加し、そして反応物を周囲温度でさらに４時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、そして飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）、１ＭのＮａＯＨ（２００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮乾固し、結果として得られた粗生成物をＭＰＬＣ（Ｂｉｏｔａｇｅ、ＤＣＭ中０～５０％ＭｅＯＨを用いる）によって精製した。無色固体２ａ（４．８２０ｇ、０．００９ｍｏｌ、９６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ｍ．ｂｒ ４．３３（９Ｈ、ＡｒＣＨ ２ ＮＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、ＮＨ）、ｑ． ２．７１（６Ｈ、３ＪＨＨ＝７．５Ｈｚ、ＡｒＣＨ ２ＣＨ３）、ｓ． １．４４（２７Ｈ、ＣＯ２Ｃ（ＣＨ ３）３）、ｔ． １．１９（９Ｈ、３ＪＨＨ＝７．５Ｈｚ、ＡｒＣＨ２ＣＨ ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １５５．５（ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、１４３．９、１３２．６（Ａｒ）、７９．７（ＣＯ２ Ｃ（ＣＨ３）３）、３８．９ ＡｒＣＨ２ＮＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、２８．６（ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、２３．０（ＡｒＣＨ２ＣＨ３）、１６．７（ＡｒＣＨ２ ＣＨ３）。
１Ｈ ＮＭＲ（４５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ｍ．ｂｒ ４．３３（９Ｈ、ＡｒＣＨ ２ ＮＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、ＮＨ）、ｑ． ２．７１（６Ｈ、３ＪＨＨ＝７．５Ｈｚ、ＡｒＣＨ ２ＣＨ３）、ｓ． １．４４（２７Ｈ、ＣＯ２Ｃ（ＣＨ ３）３）、ｔ． １．１９（９Ｈ、３ＪＨＨ＝７．５Ｈｚ、ＡｒＣＨ２ＣＨ ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １５５．５（ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、１４３．９、１３２．６（Ａｒ）、７９．７（ＣＯ２ Ｃ（ＣＨ３）３）、３８．９ ＡｒＣＨ２ＮＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、２８．６（ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３）、２３．０（ＡｒＣＨ２ＣＨ３）、１６．７（ＡｒＣＨ２ ＣＨ３）。
【0177】
化合物２ｂの調製
【0178】
【化32】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、トルエン－ｄ６）δ ｓ． ３．９３（６Ｈ、ＡｒＣＨ ２ＮＣＯ）、ｍ． ２．５１－２．３７（６Ｈ、ＡｒＣＨ ２ＣＨ３）、ｍ． ０．９６－０．８６（９Ｈ、ＡｒＣＨ２ＣＨ ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、トルエン－ｄ６）１４３．２、１３２．６（Ａｒ）、１２４．０（ＮＣＯ）、４０．４（ＡｒＣＨ２ＮＣＯ）、２２．８（ＡｒＣＨ ２ＣＨ３）、１６．０（ＡｒＣＨ２ＣＨ ３）。
【0179】
【化33】
【0180】
化合物３の調製
化合物１（３．３０８ｇ、５．４４３ｍｍｏｌ）および無水ＤＩＰＥＡ（１．２７０ｍＬ、７．２５８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。１１－アジド－３，６，９－トリオキサンウンデカン－１－アミン（１．０００ｍＬ、４．５３６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。室温で１６時間攪拌した後、反応混合物を真空下で濃縮して、褐色の残渣を得た。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、５０％～１００％のＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出した。画分を含有する生成物を組み合わせ、かつ蒸発乾固して、無色の無定形の固体３（２．５０ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、８０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ： （４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．７４（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．６０（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．４５（ｓ、１Ｈ、ＡｒＨ）、７．３８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．０５（ｓ、１Ｈ、ＡｒＨ）、６．８４（ｓ、１ＨＡｒＨ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１ＨＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ２）、４．４９（ｓ、１Ｈ、Ｆｌｕ－ＣＨ２）、４．１８（ｓ、２Ｈ、Ｆｌｕ－ＯＣＨ２）、３．６８－３．４５（ｍ、１４Ｈ、ＯＣＨ２）、３．２７（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２ＨＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ２）、１．３４（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ、Ｎ３ＣＨ２）。
化合物１（３．３０８ｇ、５．４４３ｍｍｏｌ）および無水ＤＩＰＥＡ（１．２７０ｍＬ、７．２５８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。１１－アジド－３，６，９－トリオキサンウンデカン－１－アミン（１．０００ｍＬ、４．５３６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。室温で１６時間攪拌した後、反応混合物を真空下で濃縮して、褐色の残渣を得た。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、５０％～１００％のＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出した。画分を含有する生成物を組み合わせ、かつ蒸発乾固して、無色の無定形の固体３（２．５０ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、８０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ： （４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．７４（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．６０（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．４５（ｓ、１Ｈ、ＡｒＨ）、７．３８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、２Ｈ、ＡｒＨ）、７．０５（ｓ、１Ｈ、ＡｒＨ）、６．８４（ｓ、１ＨＡｒＨ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１ＨＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ２）、４．４９（ｓ、１Ｈ、Ｆｌｕ－ＣＨ２）、４．１８（ｓ、２Ｈ、Ｆｌｕ－ＯＣＨ２）、３．６８－３．４５（ｍ、１４Ｈ、ＯＣＨ２）、３．２７（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２ＨＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ２）、１．３４（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ、Ｎ３ＣＨ２）。
【0181】
化合物４の調製
【0182】
【化34】
１Ｈ ＮＭＲ： （４００ＭＨｚ、（ＣＤＣｌ３）： δ １．４３（ｓ、８１Ｈ、Ｃ（２６）Ｈ３）、１．９５（ｍ、１８Ｈ、Ｃ（２３）Ｈ２）、２．１１（ｔ，
Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ、Ｃ（１８）Ｈ２）、２．１７（ｍ、１８Ｈ、Ｃ（２２）Ｈ２）、２．２５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ、Ｃ（１９）Ｈ２）、４．２７（ｍ、３Ｈ、Ｃ（７）ＨおよびＮＨ２）、４．４７（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ｃ（８）Ｈ２）、６．０８（ｓ、３Ｈ、ＮＨ）、６．７６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ、Ｃ（１３）Ｈ）、７．２６－７．３１（ｍ、２Ｈ、Ｃ（４）Ｈ）、７．３８（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ、Ｃ（３）Ｈ）、７．５７－７．６９（ｍ、２Ｈ、Ｃ（５）Ｈ）、７．７１（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ、Ｃ（２）Ｈ）、７．７５（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、３Ｈ、Ｃ（２）Ｈ）、７．７８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ、Ｃ（１５）Ｈ）、８．５４（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）
１３Ｃ ＮＭＲ： （１００ＭＨｚ、（ＣＤＣｌ３）：δ２８．０（Ｃ２６）、２９．８（Ｃ２２）、２９．９（Ｃ２３）、３１．８（Ｃ１９）、３２．２（Ｃ１８）、４７．２（Ｃ７）、５３．４（Ｃ１７）、５７．４（Ｃ２１）、６７．３（Ｃ８）、８０．６（Ｃ２５）１１６．６（Ｃ１２）、１１９．９（Ｃ２），１２２．６（Ｃ１０）、１２４．６（Ｃ１４）、１２５．３（Ｃ４）、１２６．０（Ｃ１５）、１２６．８（Ｃ１３）、１２７．０（Ｃ５）、１２７．６（Ｃ３）、１４１．３（Ｃ１）、１４３．８（Ｃ６）、１４５．３（Ｃ１１）、１５４．９（Ｃ９）、１６６．６（Ｃ１６）、１７２．７（Ｃ２４）、１７３．１（Ｃ２０）；
ＩＲ：λｍａｘ（ｃｍ－１）２９７７、２９６３、１７５２、１７２３、１６８９、１６３７、１５３５、１３６７、１２４２、１１５１、１０９８、８４４；
ＨＲＭＳ： （ＥＳＩ＋）実測値［Ｍ＋２Ｎａ］２＋： ９２１．０２５２。
【0183】
化合物５ａの調製
【0184】
【化35】
【0185】
化合物５ｂの調製
【0186】
【化36】
【0187】
化合物６ａの調製
【0188】
【化37】
１Ｈ ＮＭＲ： （４００ＭＨｚ、（ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０２－７．４６（１９Ｈ、ｂｒ．ｍ、ＡｒＨ）、７．４６－７．１１（１４Ｈ、ｂｒ．ｍ、ＡｒＨ）、４．６０－４．３０（１２Ｈ、ｂｒ．ｍ、ＮＨＣＨ２ＰｈおよびＦｍｏｃＨ）、４．１９（３Ｈ、ｂｒ．ｓ、ＮＨＣＨ２ＰｈおよびＦｍｏｃＨ），３．７１－３．５５（１４Ｈ、ｍ、ＰＥＧＣＨ２）、３．３３（２Ｈ、ｍ、ＰＥＧＣＨ２）、２．８５（６Ｈ、ｂｒ．ｓ、ＣＨ２）、２．３５－１．８６（９６Ｈ、ｍ，デンドリマーＣＨ２）、１．４２（１６２Ｈ、ｓ、ＣＨ３）、１．２３（９Ｈ、ｂｒ．ｓ、ＣＨ３）；
ＨＲＭＳ： （ＥＳＩ＋）Ｃ２４４Ｈ３５２Ｎ２１Ｏ５７Ｎａ３ ２＋に対する計算値：１５２０．８４０７、実測値［Ｍ＋３Ｎａ］３＋： １５２０．８３９５。
【0189】
化合物６ｂの調製
【0190】
【化38】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．９１（ｓ、２Ｈ）、７．４１（ｓ、７Ｈ）、７．３８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．４８（ｓ、６Ｈ）、３．７１－３．５５（ｍ、１４Ｈ）、３．５１（ｔ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．９６－２．７２（ｍ、６Ｈ）、２．２８－２．１３（ｍ、４８Ｈ）、２．１３－２．０３（ｍ、１２Ｈ）、２．０１－１．８３（ｍ、３６Ｈ）、１．４２（ｓ、１６２Ｈ）、１．３１－１．１５（ｍ、９Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７５．５、１７４．４、１７０．２、１７０．１、１５８．０、１５７．９、１４５．１、１４１．８、１４１．４、１３３．９、１３２．８、１３２．３、１２９．９、１２９．７、１２４．９、１２４．５、１１８．９、１１８．４、１１７．３、１１７．０、８１．６、７１．６、７１．５、７１．３、７１．１、７０．６、５９．３、５８．７、５１．７、４０．９、３９．３、３２．５、３２．２、３０．７、３０．４、２８．４、２３．９、１７．０。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋３Ｈ］３＋ Ｃ１９９Ｈ３２８Ｎ２１Ｏ５１に対する必要とされる計算値：１２７６．１２３９、実測値：１２７６．１３０５。
【0191】
化合物６ｃの調製
【0192】
【化39】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ８．０９－７．８６（ｍ、６Ｈ）、７．６４（ｄｄ、Ｊ＝８．６、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４４（ｓ、６Ｈ）、４．５７－４．２４（ｍ、１２Ｈ）、３．６９－３．５４（ｍ、１２Ｈ）、３．５３－３．４５（ｍ、２Ｈ）、３．３４－３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．０７－２．８２（ｍ、６Ｈ）、２．８０－２．６８（ｍ、６Ｈ）、２．３３－２．０４（ｍ、６０Ｈ）、２．０４－１．８０（ｍ、３６Ｈ）、１．４１（ｓ、１６２Ｈ）、１．２８－１．１１（ｍ、１８Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．３、１７４．２、１７３．１、１６８．３、１６８．０、１５７．１、１５６．０、１５５．９、１４３．２、１４３．２、１４３．１、１３５．８、１３５．４、１３３．０、１３３．０、１３２．７、１３２．５、１２９．９、１２９．２、１２８．８、１２８．１、１２４．７、１２４．６、１２１．０、１２０．９、８０．３、７０．３、７０．３、７０．２、７０．０、６９．８、６９．３、５８．１、５７．５、５７．４、５０．４、３９．６、３７．６、３７．４、３１．１、３０．９、３０．９、２９．４、２９．１、２７．１、２２．３、１５．５、１５．４、１５．３。
ＨＲＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］３＋ Ｃ２１７Ｈ３４９Ｎ２４Ｏ５４に対する必要とされる計算値：１３８５．１７６８、実測値：１３８５．１８２４。
【0193】
化合物６ｄの調製
【0194】
【化40】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ中の重水素化リン酸緩衝液）δ ７．７８－７．６０（ｍ、６Ｈ）、７．５２－７．４１（ｍ、３Ｈ）、７．３３（ｓ、３Ｈ）、４．５５－４．０７（ｍ、１２Ｈ）、３．７０－３．３８（ｍ、１４Ｈ）、３．２４（ｔ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．０２－２．９４（ｍ、１Ｈ）、２．８１－２．４６（ｍ、１２Ｈ）、２．２６－２．１１（ｍ、１２Ｈ）、２．１０－１．８６（ｍ、４８Ｈ）、１．８６－１．６３（ｍ、３６Ｈ）、１．２３－０．７９（ｍ、１８Ｈ）。
【0195】
化合物７ａの調製
【0196】
【化41】
【0197】
化合物７ａを、化合物５ｂおよび化合物２ｂを使用して化合物６ａと類似の様式で調製した。
【0198】
化合物７ｂの調製
【0199】
【化42】
【0200】
化合物７ｂを、化合物７ａを使用して化合物６ｂと類似の様式で調製した。
【0201】
化合物７ｃの調製
【0202】
【化43】
【0203】
化合物７ｃを、化合物７ｂを使用して化合物６ｃと類似の様式で調製した。
【0204】
化合物７ｄの調製
【0205】
【化44】
【0206】
Ｏ－スクシンイミジルＰＥＧ－β－Ｄ－グルコピラノシドカルボキシレート８の調製
【0207】
【化45】
【0208】
Ｏ－２，３，４，６－テトラアセチル－ジエチレングリコール－β－Ｄ－グルコピラノシド９の調製
【0209】
【化46】
【0210】
Ｏ－ペルアセチル－ジエチレングリコール－β－グルコピラノシドカルボン酸１０の調製
【0211】
【化47】
【0212】
Ｏ－スクシンイミジルＯ－ペルアセチル－ジエチレングリコール－ベータ－グルコピラノシドカルボキシレート１１の調製
【0213】
【化48】
【0214】
Ｄ－グルコピラノシド－１－ＰＥＧ４－アジド１２の調製
【0215】
【化49】
【0216】
化合物１３の調製
【0217】
【化50】
【0218】
化合物１４の調製
【0219】
【化51】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．３５（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、６Ｈ）、３．６７－３．５５（ｍ、１２Ｈ）、３．５１（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．３１（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．８６（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、６Ｈ）、２．２３（ｄｄ、Ｊ＝９．５、６．５Ｈｚ、１２Ｈ）、２．０５（ｄｄ、Ｊ＝９．５、６．５Ｈｚ、１２Ｈ）、１．４１（ｓ、５４Ｈ）、１．２２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、９Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．６、１７０．４、１７０．３、１５８．１、１４５．２、１４２．０、１３３．９、１３３．５、１２９．５、１２５．０、１２５．０、１１８．５、１１８．４、１１７．１、８１．８、７１．６、７１．５、７１．３、７１．１、７０．６、５９．３、５１．７、４９．８、４０．９、４０．３、３９．３、３０．８、３０．６、２８．４、２３．９、１６．９。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ Ｃ９１Ｈ１４１Ｎ１５Ｏ２１に対する必要とされる計算値：８９０．０２１３、実測値：８９０．０２０６。
【0220】
化合物１５の調製
【0221】
【化52】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ８．０１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．９２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．８８（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．６２（ｓ、２Ｈ）、７．５８－７．５１（ｍ、３Ｈ）、４．５５－４．３０（ｍ、１２Ｈ）、３．６４－３．５２（ｍ、１２Ｈ）、３．５３－３．４８（ｍ、２Ｈ）、３．４６－３．３６（ｍ、２Ｈ）、２．９２－２．８１（ｍ、６Ｈ）、２．７８－２．６６（ｍ、６Ｈ）、２．２９－２．２０（ｍ、１２Ｈ）、２．１１－２．０４（ｍ、１２Ｈ）、１．４３（ｓ、５４Ｈ）、１．１８（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１８Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．６、１６９．７、１５８．４、１５８．３、１５７．２、１４４．５、１３６．８、１３４．３、１３３．９、１３１．５、１３０．２、１２９．９、１２９．５、１２５．６、１２５．５、１２５．２、１２２．３、８１．７、７１．７、７１．５、７１．４、７１．３、７１．１、７０．６、５９．５、５１．７、４０．９、３８．８、３８．７、３０．８、３０．６、２８．４、２４．２、２３．６、１６．６。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ Ｃ１０９Ｈ１６２Ｎ１８Ｏ２４に対する必要とされる計算値：１０５４．１０２１、実測値：１０５４．１０２８。
【0222】
化合物１６の調製
【0223】
【化53】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ、１００ｍＭのリン酸緩衝液および２ｍＭのＤＭＦを有する）δ ７．９１－７．２２（ｍ、９Ｈ）、４．３２（ｂｒ．ｓ、１２Ｈ）、３．７２－３．３２（ｍ、１４Ｈ）、３．２１（ｓ、２Ｈ）、２．６２（ｂｒ．ｓ、１２Ｈ）、２．０４（ｂｒ．ｓ、１２Ｈ）、１．９１（ｂｒ．ｓ、１２Ｈ）、１．０４（ｂｒ．ｓ、１８Ｈ）。
【0224】
化合物１７の調製
【0225】
【化54】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．９７（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．８７－７．５６（ｍ、４Ｈ）、７．５６－７．１７（ｍ、５Ｈ）、６．７９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９（ｓ、２Ｈ）、４．２７（ｓ、１Ｈ）、３．７０－３．５９（ｍ、８Ｈ）、３．５４（ｑ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．３５－３．２５（ｍ、２Ｈ）。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２８Ｈ３１Ｎ６Ｏ５に対する必要とされる計算値：５３１．２３５１、実測値：５３１．２３６２。
【0226】
化合物１８の調製
【0227】
【化55】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４＋ＣＤＣｌ３）δ ７．３６－７．２９（ｍ、３Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０７（ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、６Ｈ）、３．６９－３．６０（ｍ、８Ｈ）、３．５４（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．３４（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８５（ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）、２．３０－２．２１（ｍ、１２Ｈ）、２．１１－２．０２（ｍ、１２Ｈ）、１．４３（ｓ、５４Ｈ）、１．２３（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、９Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４＋ＣＤＣｌ３）δ １７４．５、１７０．１、１７０．０、１６９．９、１５７．９、１５７．８、１４４．９、１４１．６、１４１．５、１３３．６、１３３．１、１３３．０、１３２．１、１２９．５、１２９．４、１２５．０、１２４．９、１１８．５、１１８．４、１１６．９、１１６．９、８１．８、７１．３、７１．２、７０．９、７０．５、５９．１、５９．０、５１．５、４０．７、３９．２、３０．８、３０．７、３０．５、２８．４、２３．７、１６．９。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ Ｃ８９Ｈ１３７Ｎ１５Ｏ２０に対する必要とされる計算値：８６８．００８２、実測値：８６８．００８５。
【0228】
化合物１９の調製
【0229】
【化56】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ８．０３（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９９－７．９１（ｍ、３Ｈ）、７．８９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．６５（ｓ、２Ｈ）、７．５９（ｄｄ、Ｊ＝８．６、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．５５（ｄｄ、Ｊ＝８．６、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．５４－４．３５（ｍ、１２Ｈ）、３．６８－３．６２（ｍ、６Ｈ）、３．６０（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．３５（ｔ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．９４－２．８３（ｍ、６Ｈ）、２．８３－２．７１（ｍ、６Ｈ）、２．３３－２．２３（ｍ、１２Ｈ）、２．１２－２．０６（ｍ、１２Ｈ）、１．４５（ｓ、５４Ｈ）、１．２３－１．１６（ｍ、１８Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．６、１６９．８、１６９．７、１５８．４、１５８．３、１５７．３、１４４．５、１３６．９、１３４．３、１３３．９、１３３．９、１３１．５、１３０．４、１３０．０、１２９．６、１２５．６、１２５．５、１２２．６、１２２．４、８１．７、７１．５、７１．５、７１．１、７０．７、５９．５、５１．７、４０．９、３８．８、３８．７、３０．８、３０．６、２８．４、２３．６、１６．６、１６．６。
ＨＲＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ Ｃ１０７Ｈ１５８Ｎ１８Ｏ２３に対する必要とされる計算値：１０３１．５８７４、実測値：１０３１．５８８９。
【0230】
化合物２０の調製
【0231】
【化57】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ、１００ｍＭのリン酸緩衝液および２ｍＭのＤＭＦを有する）δ ８．０７－７．２０（ｍ、９Ｈ）、４．２７（ｓ、１２Ｈ）、３．６１－３．３３（ｍ、１０Ｈ）、３．１９（ｓ、２Ｈ）、２．５５（ｓ、１２Ｈ）、２．０３（ｓ、１２Ｈ）、１．９０（ｓ、１２Ｈ）、１．００（ｓ、１８Ｈ）。
【0232】
化合物２１、Ｇ１マクロサイクルプロピルアジドの調製
【0233】
【化58】
【0234】
ステップ１：化合物２１ａの調製
【0235】
【化59】
【0236】
ステップ２：化合物２１ｂの調製
【0237】
【化60】
【0238】
【化61】
【0239】
ステップ３：化合物２１ｃの調製
化合物６ｂにより、化合物２１ｂ（１．１７ｇ、０．５０３ｍｍｏｌ）から作製された。生成物を、オフホワイトの無定形の固体化合物２１ｃ（０．７０２ｇ、０．４２３ｍｍｏｌ、８４％）として単離した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．３６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．５０（ｓ、６Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．８８（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、２．３１－２．２０（ｍ、１２Ｈ）、２．１２－２．０１（ｍ、１２Ｈ）、１．８５（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、５４Ｈ）、１．２４（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、９Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．６、１７０．４、１７０．４、１５８．１、１５８．１、１４５．１、１４２．０、１４１．９、１３３．９、１３３．５、１３２．４、１２９．７、１２９．５、１２５．０、１２５．０、１１８．５、１１８．３、１１７．０、８１．８、５９．３、５０．２、３９．３、３８．３、３０．８、３０．６、２９．８、２８．３、２３．９、１６．９。ＨＲＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ８６Ｈ１３０Ｎ１５Ｏ１８に対する必要とされる計算値：１６６０．９７１８、実測値：１６６０．９７２３。
化合物６ｂにより、化合物２１ｂ（１．１７ｇ、０．５０３ｍｍｏｌ）から作製された。生成物を、オフホワイトの無定形の固体化合物２１ｃ（０．７０２ｇ、０．４２３ｍｍｏｌ、８４％）として単離した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．３６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．５０（ｓ、６Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．８８（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、２．３１－２．２０（ｍ、１２Ｈ）、２．１２－２．０１（ｍ、１２Ｈ）、１．８５（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、５４Ｈ）、１．２４（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、９Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７４．６、１７０．４、１７０．４、１５８．１、１５８．１、１４５．１、１４２．０、１４１．９、１３３．９、１３３．５、１３２．４、１２９．７、１２９．５、１２５．０、１２５．０、１１８．５、１１８．３、１１７．０、８１．８、５９．３、５０．２、３９．３、３８．３、３０．８、３０．６、２９．８、２８．３、２３．９、１６．９。ＨＲＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ８６Ｈ１３０Ｎ１５Ｏ１８に対する必要とされる計算値：１６６０．９７１８、実測値：１６６０．９７２３。
【0240】
ステップ４：化合物２１ｄの調製
【0241】
【化62】
【0242】
ステップ５：化合物２１、Ｇ１マクロサイクルプロピルアジドの調製
【0243】
【化63】
【0244】
化合物２２、Ｇ２マクロサイクルＰＥＧ３アジドの調製
【0245】
【化64】
【0246】
ステップ１：化合物２２ａの調製
【0247】
【化65】
【0248】
ステップ２：化合物２２ｂの調製
【0249】
【化66】
【0250】
ステップ３：化合物２２ｃの調製
【0251】
【化67】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ ７．３９（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｓ、６Ｈ）、３．６７－３．６２（ｍ、８Ｈ）、３．５４（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．３４（ｔ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．８９（ｑ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、６Ｈ）、２．２７－２．２２（ｍ、１２Ｈ）、２．２１－２．１５（ｍ、３６Ｈ）、２．１２－２．０７（ｍ、１２Ｈ）、１．９９－１．８８（ｍ、３６Ｈ）、１．４３（ｓ、１６２Ｈ）、１．２５（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、９Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、メタノール－ｄ４）δ １７５．５、１７４．４、１７０．３、１７０．１、１５８．０、１５８．０、１４５．２、１４１．９、１４１．５、１３３．９、１３２．９、１３２．４、１２９．９、１２９．７、１２４．９、１２４．５、１１８．９、１１８．４、１１７．４、１１７．１、８１．７、７１．５、７１．４、７１．１、７０．７、５９．４、５８．７、５１．７、４０．９、３９．３、３２．５、３２．２、３０．７、３０．５、２８．４、２３．９、１７．０。ＨＲＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］３＋ Ｃ１９７Ｈ３２４Ｎ２１Ｏ５０に対する必要とされる計算値：１２６１．４４８５、実測値：１２６１．４５０９。
【0252】
ステップ４：化合物２２ｄの調製
【0253】
【化68】
【0254】
ステップ５：化合物２２の調製
【0255】
【化69】
【0256】
化合物２３ Ｇ２マクロサイクルＰＥＧ５アジドの調製
【0257】
【化70】
【0258】
ステップ１：化合物２３ａの調製
【0259】
【化71】
【0260】
ステップ２：化合物２３ｂの調製
【0261】
【化72】
【0262】
ステップ３：化合物２３ｃの調製
【0263】
【化73】
【0264】
ステップ４：化合物２３ｄの調製
【0265】
【化74】
ＨＲＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］３＋ Ｃ２１９Ｈ３５０Ｎ２４Ｏ５５に対する必要とされる計算値：１４００．５２０９、実測値：１４００．５２３２。
【0266】
ステップ５：化合物２３の調製
【0267】
【化75】
【0268】
化合物２４、Ｇ１マクロサイクルＰＥＧ５アジドの調製
【0269】
【化76】
【0270】
ステップ１：化合物２４ａの調製
【0271】
【化77】
【0272】
ステップ２：化合物２４ｂの調製
【0273】
【化78】
【0274】
ステップ３：化合物２４ｂの調製
【0275】
【化79】
【0276】
ステップ４：化合物２４、Ｇ１マクロサイクルＰＥＧ５アジドの調製
【0277】
【化80】
【0278】
化合物２５、Ｇ０マクロサイクルＰＥＧ４アジドの調製
【0279】
【化81】
【0280】
ステップ１：化合物２５ａの調製
【0281】
【化82】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ）δ ７．８３（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．７２（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．１５（ｓ、１Ｈ）、４．３０（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、４．２６（ｓ、２Ｈ）、１．５０（ｓ、１０Ｈ）、１．３５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、４Ｈ）。
【0282】
ステップ２：化合物２５ｂの調製
【0283】
【化83】
【0284】
ステップ３：化合物２５ｃの調製
【0285】
【化84】
【0286】
ステップ４：化合物２５ｄの調製
【0287】
【化85】
【0288】
ステップ５：化合物２５ｅの調製
【0289】
【化86】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．１８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．０４（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｓ、２Ｈ）、７．８３（ｓ、１Ｈ）、７．５９－７．５２（ｍ、３Ｈ）、７．５０（ｓ、２Ｈ）、７．４６（ｓ、１Ｈ）、６．４８－６．４２（ｍ、３Ｈ）、６．３６－６．２７（ｍ、３Ｈ）、４．３３－４．２１（ｍ、１６Ｈ）、２．８３－２．７１（ｍ、６Ｈ）、２．６８－２．５８（ｍ、６Ｈ）、１．２８（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、６Ｈ）、１．１１（ｔｄ、Ｊ＝７．３、６．９、２．４Ｈｚ、１８Ｈ）。ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５９Ｈ７１Ｎ１２Ｏ１２ ＋に対する必要とされる計算値：１１３９．５、実測値：１１３９．５。
【0290】
ステップ６：化合物２５ｆの調製
【0291】
【化87】
【0292】
ステップ７：化合物２５、Ｇ０マクロサイクルＰＥＧ４アジドの調製
【0293】
【化88】
【0294】
本発明のインスリン誘導体の調製
【0295】
実施例１：Ｂ１－ベンジル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＢ２９－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ１の調製
【0296】
【化89】
【0297】
実施例１のインスリン誘導体ＩＮＳ１は、下記に記載されるように調製される。
【0298】
ステップ１：Ｂ１－４－エチニル－ベンジルｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２の調製（スキーム１）
【0299】
【化90】
【0300】
ステップ２：ＩＮＳ３の調製（スキーム２）
【0301】
【化91】
【0302】
上記で調製されたようなマクロサイクル－ＰＥＧ－アジド６ｄは、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解され、そして不活性雰囲気（窒素）下で、酢酸を使用してｐＨ７．８に調節された２Ｍトリエチルアミン中に溶解されたアルキンインスリンＩＮＳ２（スキーム１、１当量）と反応し、触媒としてＣｕＩ（０．１当量）およびリガンドとしてトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ、２当量）と反応する。反応にＬＣＭＳが続き、そして生成物ＩＮＳ３（スキーム２）は、実施例１のステップ１に記載されるようにＲＰ－ＨＰＬＣを使用して単離される。
【0303】
ステップ３：化合物ＩＮＳ１の調製
【0304】
【化92】
【0305】
実施例２：Ｂ１－ベンジル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＡ１－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ４の調製
【0306】
【化93】
【0307】
実施例３：Ｂ２９－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＡ１－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ５の調製
【0308】
【化94】
【0309】
実施例４：Ｂ１－ベンジル－３，５－ビス－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＢ２９－ベンゾイル－３，５－メチルアミノ－ビス－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ６の調製
【0310】
【化95】
【0311】
【化96】
【0312】
Ｂ１－３，５－ビス－エチニル－ベンジルｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは、３，５－ビス－エチニル－ベンズアルデヒドおよびｄｅｓＢ３０ヒトインスリンから、化合物ＩＮＳ２の調製と類似して還元アルキル化によって生成される（スキーム４）。ビス－アルキンＩＮＳ７を、化合物ＩＮＳ３について記載したような条件下でマクロサイクルアジド６ｄと反応させ、反応にＬＣＭＳが続き、そして中間体ＩＮＳ８を、実施例１のステップ１に記載したようにＲＰ－ＨＰＬＣを使用して単離する。活性エステルグルコシド８は、３，５－ビス－アミノメチル－安息香酸と反応する。精製された生成物は、グルコシド８について記載したようにスクシンイミジルエステルとして活性化され、そしてＩＮＳ３について記載したようにｐＨ１０．５でインスリン中間体ＩＮＳ８と反応する。反応にＬＣＭＳが続き、そして実施例４のＢ１－ビス－マクロサイクルＢ２９－ビス－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ６が、実施例１のステップ１に記載されるようにＲＰ－ＨＰＬＣを使用して単離される。
【0313】
実施例５：Ｂ１－ベンジル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＢ２９－アセチルエチレングリコール－Ｄ－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ９の調製
【0314】
【化97】
【0315】
ステップ１：ＩＮＳ２を、ｐＨ１１の氷浴上で０．１ＭのＮａ２ＣＯ３中に溶解し、そしてＴＨＦ中の活性エステル１１で１０分間処理した。ＩＮＳ１０を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１５６４．２５［Ｍ＋４Ｈ］４＋、計算値１５６４．２４。
【0316】
【化98】
【0317】
ステップ２：ＩＮＳ１０を、３３％のＭｅＯＨで０．２ＭのＫ２ＣＯ３中に溶解し、そして３０分間攪拌した。ＩＮＳ１１を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１５２２．２１［Ｍ＋４Ｈ］４＋、計算値１５２２．２１。
【0318】
【化99】
【0319】
ステップ３：ＩＮＳ１１（４．１ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ）およびマクロサイクルアジド６ｄ（３．５７９ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ）を、２ＭのＥｔ３Ｎ／ＣＨ３ＣＯＯＨ水性緩衝液ｐＨ７（０．６ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０．３ｍＬ）中に溶解し、水（０．３ｍＬ）でさらに希釈し、そして混合物を脱気した。 混合物を、ＴＨＰＴＡ（０．０１５ｍｇ、５ｍｏｌ％）で、およびスパチュラ先端量のＣｕＩで処理し、１０分間放置した。ＩＮＳ９を、実施例１の記載と同様のＨＰＬＣによって単離し、ＬＣＭＳの測定値は１８４６．８［Ｍ＋５Ｈ］５＋、計算値は１８４７．０であった。
【0320】
実施例８：Ｂ１－メチル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９－ＰＥＧ４－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ１８の調製
【0321】
【化100】
【0322】
ステップ１：ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン（１．７１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、０．１ＭのＡｃＯＨ／水（５ｍＬ）＋ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解した。プロピナル（２９ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間攪拌し、次いでより多くのプロピナル（１５ｍｇ）で処理し、３０分間攪拌した。ＤＭＦ中のアルファ－ピコリンボラン（１９２ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を１時間攪拌した。ＩＮＳ１９を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１４３６．８［Ｍ＋４Ｈ］４＋、計算値１４３７．１。
【0323】
【化101】
【0324】
【化102】
【0325】
ステップ３：ＩＮＳ２０（１１ｍｇ、１．８ｕｍｏｌ）およびマクロサイクルアジド６ｄ（８．３ｍｇ、２．４ｕｍｏｌ）を、２ＭのトリエタノールアミンｐＨ７．０（０．４ｍＬ）＋ＤＭＳＯ（０．８ｍＬ）中に溶解した。ＴＨＰＴＡ（０．２３６ｍｇ、０．５４ｕｍｏｌ）を添加し、そして混合物を慎重に脱気した。ＣｕＩ（０．００３ｍｇ、０．０１８ｕｍｏｌ）を添加し、そして混合物を９０分間攪拌した。ＩＮＳ１８を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１８４３．５［Ｍ＋５Ｈ］５＋、計算値１８４３．４。
【0326】
実施例９：Ｂ１－ベンジル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＢ２９－アセチルジエチレングリコール－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２１の調製
【0327】
【化103】
【0328】
実施例１０：Ｂ１－ベンジル－３，５－ビス－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９－Ｎε－プロパノイル、Ｃα－アミノメチル－ビス－トリアゾリル－ＰＥＧ４－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２２の調製
【0329】
【化104】
【0330】
【化105】
【0331】
ステップ２：ＩＮＳ２３（３００ｍｇ、５２ｕｍｏｌ）を、０．１ＭのＮａ２ＣＯ３緩衝液ｐＨ１１（１５ｍＬ）内に溶解し、そしてＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解されたＯ－スクシンイミジルペンチネート（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ｐｅｎｔｙｎａｔｅ）（１０．１ｍｇ、５１ｕｍｏｌ）で処理した。反応を１時間放置し、ＩＮＳ２４を実施例１に記載されるようにＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１４５６．６［Ｍ＋４Ｈ］４＋、計算値１４５６．９。
【0332】
【化106】
【0333】
ステップ３：ＩＮＳ２４（９７ｍｇ、１７ｕｍｏｌ）を、ＩＮＳ３について記載したようにＴＨＰＴＡおよびＣｕＩを使用して化合物１２（１２．７ｍｇ、３３ｕｍｏｌ）と反応させた。ＩＮＳ２５を、実施例１に記載したようにＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１６４７．４［Ｍ＋４Ｈ］４＋、計算値１６４７．６。
【0334】
【化107】
【0335】
ステップ４：ＩＮＳ２５（８５ｍｇ、１３ｕｍｏｌ）を、５０％のアセトニトリル／水（１．２ｍＬ）中に溶解し、そして３，５－ジエチニルベンズアルデヒド（３．１ｍｇ、２１ｕｍｏｌ）で処理した。ｐＨを、０．１ＭのＮａ２ＣＯ３を使用して４に調節した。ＮａＣＮＢＨ３（４ｍｇ、６５ｕｍｏｌ）を添加し、そして混合物を一晩放置した。ＩＮＳ２６を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１３４５．７［Ｍ＋５Ｈ］５＋、計算値１３４５．９。
【0336】
【化108】
【0337】
ステップ５：ＩＮＳ２６（２４ｍｇ、４ｕｍｏｌ））、化合物１６（２０ｍｇ、１１ｕｍｏｌ）、ＴＨＰＴＡ（１ｍｇ）、およびメチル－β－Ｄ－グリコピラノシド（２０ｍｇ）を、２ＭのＥｔ３Ｎ／ＡｃＯＨ（１ｍＬ）＋ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解し、そして脱気した。スパチュラ先端量のＣｕＩで処理し、２時間放置した。ＩＮＳ２２を、実施例１の記載と同様にＨＰＬＣによって単離した。ＬＣＭＳの測定値１７１１．５［Ｍ＋６Ｈ］６＋、計算値１７１１．７。
【0338】
実施例１１：Ｂ１－ベンジル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ２マクロサイクルＢ２９－アセチル－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２７の調製
【0339】
【化109】
【0340】
実施例１２：Ｂ１－メチル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ３－Ｇ１マクロサイクルＢ２９－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２８の調製
【0341】
【化110】
【0342】
実施例１３：Ｂ１－ベンジル－３，５－ビス－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９－Ｃα－エチレンジアミン－メチルトリアゾリル－ＰＥＧ４－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ２９
【0343】
【化111】
【0344】
実施例１４：Ｂ１－メチル－４－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３０
【0345】
【化112】
【0346】
実施例１５：Ｂ１－メチル－４－トリアゾリル－プロピル－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－アセチル－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３１
【0347】
【化113】
【0348】
実施例１６：Ｂ１－ベンジル－３，５－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－ベンゾイル－３，５－トリアゾリル－ＰＥＧ４－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３２
【0349】
【化114】
【0350】
実施例１７：Ｂ１－ベンジル－３，５－トリアゾリル－プロピル－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－Ｂ２９－ベンゾイル－３，５－トリアゾリル－ＰＥＧ４－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３３
【0351】
【化115】
【0352】
実施例１８：Ｂ１－メチル－トリアゾリル－プロピル－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３４
【0353】
【化116】
【0354】
実施例１９：Ｂ１－プロパノイル－トリアゾリル－ＰＥＧ３－Ｇ２マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３５
【0355】
【化117】
【0356】
実施例２０：Ｂ１－プロパノイル－トリアゾリル－ＰＥＧ５－Ｇ２マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３６
【0357】
【化118】
【0358】
実施例２１：Ｂ１－メチル－トリアゾリル－ＰＥＧ５－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３７
【0359】
【化119】
【0360】
実施例２２：Ｂ１－メチル－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ０マクロサイクルＢ２９Ｎε－ＰＥＧ３－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３８
【0361】
【化120】
【0362】
実施例２３：Ｂ１－メチル－トリアゾリル－ＰＥＧ４－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎεアセチル－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ３９
【0363】
【化121】
【0364】
実施例２４：Ｂ１－メチル－トリアゾリル－ＰＥＧ３－Ｇ１マクロサイクルＢ２９Ｎε－アセチル－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ４０
【0365】
【化122】
【0366】
実施例２５：Ｂ２９－プロパニオール－トリアゾリル－プロピル－Ｇ１マクロサイクルＡ１－アセチル－グリコシドｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＩＮＳ４１
【0367】
【化123】
【0368】
グルコース感受性インスリン受容体活性化
【0369】
実施例２６：蛍光滴定によるマクロサイクルのグルコース親和性
所与のマクロサイクルの光学特性（蛍光）は、非結合状態とグルコース結合状態との間で変化する。マクロサイクルを、関連するグルコース濃度範囲内でグルコースで滴定し、かつシステムの蛍光の変化を測定することは、それ故にグルコース結合に対する結合曲線を与えることができ、これはグルコース結合定数Ｋａ（および変位定数Ｋｄ）を決定するために使用することができる。
所与のマクロサイクルの光学特性（蛍光）は、非結合状態とグルコース結合状態との間で変化する。マクロサイクルを、関連するグルコース濃度範囲内でグルコースで滴定し、かつシステムの蛍光の変化を測定することは、それ故にグルコース結合に対する結合曲線を与えることができ、これはグルコース結合定数Ｋａ（および変位定数Ｋｄ）を決定するために使用することができる。
【0370】
すべての溶液を、１０ｍＭのリン酸緩衝液溶液を使用してｐＨ７．４に維持した。滴定は、３１０ｎｍの励起波長を有するＨｏｒｉｂａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｄｕｅｔｔａ蛍光分光計を使用して実施し、かつ３２０～５５０ｎｍからの放射をモニタリングした。励起および放射スリット幅／バンド幅を５ｎｍに設定した。すべての点は、０．５秒の積分時間および５つの蓄積を使用して取得された。
【0371】
溶液１－化合物６ｄの原液：
２ｍｇの化合物６ｄ（Ｍｗ＝３５４０ｇ／ｍｏｌ）を５．６ｍＬの超高純度Ｈ２Ｏ（ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＰＢ）中に溶解した。化合物６ｄの純度を、Ｄ２Ｏ中のＤＭＦの公知の濃度を内部標準として使用して、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって以前にアッセイした。純度を８０％（４０μＭ）で較正した。次いで、これを４倍に希釈して、化合物６ｄの１０μＭの溶液を得た。
２ｍｇの化合物６ｄ（Ｍｗ＝３５４０ｇ／ｍｏｌ）を５．６ｍＬの超高純度Ｈ２Ｏ（ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＰＢ）中に溶解した。化合物６ｄの純度を、Ｄ２Ｏ中のＤＭＦの公知の濃度を内部標準として使用して、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって以前にアッセイした。純度を８０％（４０μＭ）で較正した。次いで、これを４倍に希釈して、化合物６ｄの１０μＭの溶液を得た。
【0372】
溶液２－Ｄ－グルコースおよび化合物６ｄの原液：
Ｄ－グルコース（１８８．１６ｍｇ）を１ｍＬの１０ｍＭのＰＢ中に溶解し、そして一晩静置して、αアノマーとβアノマーとの平衡化を可能にした。これは逐次的に希釈されて、２０ｍＭのＤ－グルコースの原液を得た。この溶液の２５０μＬを、２５０μＬの化合物６ｄ原液と組み合わせて、１０ｍＭのＤ－グルコース／５μＭの化合物６ｄを得た。
Ｄ－グルコース（１８８．１６ｍｇ）を１ｍＬの１０ｍＭのＰＢ中に溶解し、そして一晩静置して、αアノマーとβアノマーとの平衡化を可能にした。これは逐次的に希釈されて、２０ｍＭのＤ－グルコースの原液を得た。この溶液の２５０μＬを、２５０μＬの化合物６ｄ原液と組み合わせて、１０ｍＭのＤ－グルコース／５μＭの化合物６ｄを得た。
【0373】
３ｍＬのキュベット内で、１５００μＬの溶液１を、１５００μＬの１０ｍＭのリン酸緩衝液で希釈して、５μＭの溶液を得た。これを溶液２で滴定した。滴定剤溶液（溶液２）の各添加に対して、添加の前に等価体積をキュベットから除去して、セル体積を一定（３０００μＬ）に保持した。各添加物を１分間攪拌し、次いで攪拌を停止して、試料が取得前に平衡化するために１分間置いた。添加量（単位μＬ）：０、１０、１０、１０、１０、１０、２０、２０、５０、１００、１００。
【0374】
【0375】
計算値Ｋａ＝１４７５１．４８±６３７．３ Ｍ－１、Ｋｄ化合物６ｄ＝１／１４７５１Ｍ－１＝６８ｕＭ。
グルコース親和性は、以下に対して同様に測定された。
化合物２１、Ｋｄ＝８９ｕＭ
化合物２２、Ｋｄ＝１３２ｕＭ
化合物２３、Ｋｄ＝７８ｕＭ
化合物２４、Ｋｄ＝１３１ｕＭ
グルコース親和性は、以下に対して同様に測定された。
化合物２１、Ｋｄ＝８９ｕＭ
化合物２２、Ｋｄ＝１３２ｕＭ
化合物２３、Ｋｄ＝７８ｕＭ
化合物２４、Ｋｄ＝１３１ｕＭ
【0376】
マクロサイクルはすべて、どのリンカーが備えられているかにかかわらず、１００ｕＭ（Ｋｄ）付近の親和性でグルコースに結合する。
【0377】
実施例２７：グルコースの非存在下または存在下でのヒトインスリン受容体（ｈＩＲ－Ａ）に対する親和性を決定するためのアッセイ
インスリン誘導体のグルコース感受性を測定するために、ヒトインスリン受容体に対するインスリン誘導体の親和性を、グルコースが存在しない状態で、または２０ｍＭのグルコースが存在する状態で測定した。
インスリン誘導体のグルコース感受性を測定するために、ヒトインスリン受容体に対するインスリン誘導体の親和性を、グルコースが存在しない状態で、または２０ｍＭのグルコースが存在する状態で測定した。
【0378】
インスリン受容体の調製
ヒトインスリン受容体Ａ（ｈＩＲ－Ａ）を過剰発現させるＢＨＫ細胞を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、および１０％のグリセロール中に溶解させた。クリアになった細胞溶解物を、９０分間、小麦胚細胞凝集素（ＷＧＡ）－アガロース（小麦胚芽由来レクチン－アガロース、Ｌ１３９４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてバッチ吸収した。受容体を２０体積の５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で洗浄し、その後、受容体を５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．５Ｍのｎ－アセチルグルコサミン、および１０％グリセロールで溶出した。すべての緩衝液は、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＧｍｂＨ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有する。
ヒトインスリン受容体Ａ（ｈＩＲ－Ａ）を過剰発現させるＢＨＫ細胞を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、および１０％のグリセロール中に溶解させた。クリアになった細胞溶解物を、９０分間、小麦胚細胞凝集素（ＷＧＡ）－アガロース（小麦胚芽由来レクチン－アガロース、Ｌ１３９４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてバッチ吸収した。受容体を２０体積の５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で洗浄し、その後、受容体を５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．５Ｍのｎ－アセチルグルコサミン、および１０％グリセロールで溶出した。すべての緩衝液は、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＧｍｂＨ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有する。
【0379】
シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）結合アッセイ
ＳＰＡ ＰＶＴ抗マウスビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．４、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ－２０から成るＳＰＡ結合緩衝液中で希釈した。ＳＰＡビーズをＩＲ特異性抗体８３－７および可溶化半精製ｈＩＲ－Ａを用いてインキュベートした。５０００ｃｐｍの１２５Ｉ－（Ｔｙｒ３１）－インスリン（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）の１０％の結合を達成するように受容体濃度を調節した。冷たいリガンドの希釈系列を９６ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅに添加し、続いてトレーサー（１２５Ｉ－インスリン、５０００ｃｐｍ／ウェル）および最後に受容体／ＳＰＡ混合物を添加した。グルコース感受性を試験するために、結合実験を、２０ｍＭグルコースの非存在下または存在下で設定した。プレートを２２℃で２２．５時間穏やかに揺動させ、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＴｏｐＣｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で計数した。ヒトインスリンと比較した類似体に対する相対親和性を計算し、そして相対親和性の０から２０ｍＭグルコースへの増加は、類似体のグルコース感受性（ＨＩＲグルコース因子）に反映された。実験は、１．５％のヒト血清アルブミンの存在下で実施された。
ＳＰＡ ＰＶＴ抗マウスビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．４、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ－２０から成るＳＰＡ結合緩衝液中で希釈した。ＳＰＡビーズをＩＲ特異性抗体８３－７および可溶化半精製ｈＩＲ－Ａを用いてインキュベートした。５０００ｃｐｍの１２５Ｉ－（Ｔｙｒ３１）－インスリン（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）の１０％の結合を達成するように受容体濃度を調節した。冷たいリガンドの希釈系列を９６ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅに添加し、続いてトレーサー（１２５Ｉ－インスリン、５０００ｃｐｍ／ウェル）および最後に受容体／ＳＰＡ混合物を添加した。グルコース感受性を試験するために、結合実験を、２０ｍＭグルコースの非存在下または存在下で設定した。プレートを２２℃で２２．５時間穏やかに揺動させ、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＴｏｐＣｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で計数した。ヒトインスリンと比較した類似体に対する相対親和性を計算し、そして相対親和性の０から２０ｍＭグルコースへの増加は、類似体のグルコース感受性（ＨＩＲグルコース因子）に反映された。実験は、１．５％のヒト血清アルブミンの存在下で実施された。
【0380】
データを表１に示す。
【0381】
結果は、本発明のインスリン誘導体（一つの位置におけるグルコース結合剤マクロサイクルに加えて、別の位置におけるグルコシドで構成されたグルコース感受性スイッチを有するインスリン）が、グルコースが存在しないときよりも２０ｍＭのグルコースの存在下でより高いインスリン受容体親和性を有することを示す。ＩＮＳ２７、ＩＮＳ３１、ＩＮＳ３９、およびＩＮＳ４０は、最も弱いグルコース感受性を示し、リンカーの長さがインスリンコンジュゲートのグルコース感受性に影響を及ぼすことを実証している。
【0382】
【表1】
【0383】
本発明のある特定の特徴が本明細書に例示および記載されているが、ここで、多くの修正、置換、変更、および同等物が当業者に想到されるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の真の趣旨の範囲内にあるこうしたすべての修正および変更を網羅することを意図していることが理解されるべきである。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】