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▶ シャンシー・ミコ・テクノロジー・リミテッド・カンパニーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-02-19
(45)【発行日】2024-02-28
(54)【発明の名称】二重特異性融合ポリペプチド化合物
(51)【国際特許分類】
C07K 7/08 20060101AFI20240220BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20240220BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240220BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20240220BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240220BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240220BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20240220BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240220BHJP
【ＦＩ】
C07K7/08 ZNA
A61K38/10
A61P19/02
A61P19/08
A61P19/10
A61P29/00 101
A61P1/02
A61P35/00
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2022558554
(86)(22)【出願日】2021-04-20
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-18
(86)【国際出願番号】 CN2021088266
(87)【国際公開番号】W WO2022052471
(87)【国際公開日】2022-03-17
【審査請求日】2022-10-11
(31)【優先権主張番号】202010946404.5
(32)【優先日】2020-09-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】518042143
【氏名又は名称】シャンシー・ミコ・テクノロジー・カンパニー・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100122644
【弁理士】
【氏名又は名称】寺地 拓己
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ツイチン
【審査官】牧野 晃久
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５０２３４６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５００９９０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００８－５０５６１４（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ ７／００－ ７／６６
Ａ６１Ｋ ３８／００－ ３８／５５
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される構造を有するポリペプチド化合物、又はその薬学的に許容される塩：
Ｙ－ＩＤ－Ｘ 式（Ｉａ）又は
Ｘ－ＩＤ－Ｙ 式（Ｉｂ）
（式中、Ｙは、カルシウム感知受容体作動薬であり、
ＩＤは、分子内のジスルフィド結合であり、
Ｘは、骨形成成長ペプチド様ペプチド、または骨髄間葉系幹細胞刺激剤であり、
Ｙは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、前記ペプチド鎖Ｙのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、および
Ｘは、式（ＩＩＩａ）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、
Ｘａａ １ －Ｘａａ ２ －Ｘａａ ３ －Ｘａａ ４ －Ｘａａ ５ －Ｘａａ ６ （ＩＩＩａ）
式中、Ｘａａ １ は、チロシンであり、
Ｘａａ ２ は、システイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、およびヒスチジンからなる群から選択され、
Ｘａａ ３ は、フェニルアラニン、およびチロシンからなる群から選択され、
Ｘａａ ４ はグリシンであり、
Ｘａａ ５ はグリシンであり、
Ｘａａ ２ がシステインである場合、Ｘａａ ６ は存在せず、
Ｘａａ ２ が２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、およびヒスチジンからなる群から選択される場合、Ｘａａ ６ はシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は遊離しているか又は化学的修飾されている、または
Ｘは、式（ＩＩＩｃ）で示される構造を有する環状ペプチドであり、
Ｃｙｃｌｏ （Ｘａａ １ －Ｘａａ ２ －Ｘａａ ３ －Ｘａａ ４ －Ｘａａ ５ －Ｘａａ ６ ） （ＩＩＩｃ）
式中、Ｘａａ １ は、チロシンであり、
Ｘａａ ２ は、アルギニン、およびグリシンからなる群から選択され、
Ｘａａ ３ は、フェニルアラニンであり、
Ｘａａ ４ は、グリシンであり、
Ｘａａ ５ は、グリシンであり、
Ｘａａ ６ は、システインであり、Ｘａａ １ のアミノ基がＸａａ ６ のカルボキシ基とペプチド結合を形成する）。
【請求項2】
前記Ｘ又はＹのアミノ末端の化学的修飾は、アシル化、スルホニル化、アルキル化及びＰＥＧ化からなる群から選択され、前記Ｘ又はＹのカルボキシ末端の化学的修飾は、アミド化、スルホニル化及びＰＥＧ化からなる群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド化合物。
【請求項3】
前記アミノ末端の化学的修飾は、アセチル化、ベンゾイル化、又はスルホニル化され、前記アミノ末端のアルキル化はＣ１－６アルキル化又はアラルキル化であり、前記カルボキシ末端の化学的修飾はカルボキシ基におけるＯＨがＮＨ２又はスルホンアミドで置換される、請求項２に記載のポリペプチド化合物。
【請求項4】
前記分子内ジスルフィド結合は、ＸにおけるシステインとＹにおけるシステインとの間に形成されている、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物。
【請求項5】
Ｘは、下記の配列番号２～配列番号６、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１５～配列番号１８からなる群から選択されるペプチド鎖である、請求項１に記載のポリペプチド化合物：
（１）配列番号２
Ｈ２Ｎ-Ｌ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（２）配列番号３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（３）配列番号４
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（４）配列番号５
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（５）配列番号６
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（６）配列番号１２
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｈｉｓ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（７）配列番号１３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｐｒｏ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（８）配列番号１５
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（９）配列番号１６
Ｃｙｃｌｏ（Ｌ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１０）配列番号１７
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｃｙｓ）、および
（１１）配列番号１８
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｔｙｒ）。
【請求項6】
下記の配列番号７～配列番号１１、配列番号２１、配列番号２２、及び配列番号２４～配列番号２７のうちの１つのポリペプチド化合物、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載のポリペプチド化合物：（１）配列番号７
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
（１１）配列番号２７
【化11】
【請求項7】
カルシウム感知受容体作動薬効果及び／又は骨形成成長ペプチド様効果を発揮する医薬品の製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物の使用。
【請求項8】
医薬品の製造における請求項１～６のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物の使用において、前記医薬品は、副甲状腺ホルモン上昇疾患、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、パジェット病、変形性関節症、関節リウマチ、骨軟化症、軟骨石灰化症、軟骨無形成症、骨軟骨炎、嚢胞性骨形成不全症、先天性低ホスファターゼ症、線維性病変、線維性骨異形成症、多発性骨髄腫、溶骨性骨病変、人工関節周囲の骨溶解、歯周病、骨粗鬆症、骨代謝回転異常、高代謝回転型骨病変、慢性腎臓病－骨ミネラル代謝異常（ＣＫＤ－ＭＢＤ）およびそれらの組合せからなる群から選択される疾患を予防及び／又は治療するために用いられる、使用。
【請求項9】
前記副甲状腺ホルモン上昇疾患は、原発性副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進、三次性副甲状腺機能亢進である、請求項８に記載の使用。
【請求項10】
前記二次性副甲状腺機能亢進は、慢性腎臓病の血液透析及び／又は腹膜透析によって引き起こされる副甲状腺ホルモン上昇である、請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【相互参照】
【0001】
本願は、発明の名称が「二重特異性融合ポリペプチド化合物」である、２０２０年０９月１０日に中国特許庁へ提出された中国特許出願２０２０１０９４６４０４．５に基づく優先権を主張し、その全内容は、全体として援用により本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【0002】
本発明は、医薬品の技術分野に属し、具体的には、副甲状腺ホルモン上昇類疾患及び/又は血液系関連疾患を治療するために用いられる二重特異性融合ポリペプチド化合物、及び該化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0003】
中国では、慢性腎臓病（ＣＫＤ）の発生率が１０．８％に達し、そのうち末期腎不全による尿毒症の患者の割合が１％～２％であり、約１３８万人である。腎不全の症状には、貧血やアシドーシス、カリウム、ナトリウム、リン、カルシウムの代謝障害などが含まれる。末期腎不全による尿毒症の患者に対する維持透析治療では、副甲状腺ホルモンレベルの上昇類疾患の二次疾患、例えば、よく見られる長期合併症である二次性副甲状腺機能亢進（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｈｙｐｅｒｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ、ＳＨＰＴ）が引き起こされることがある。
【0004】
二次性副甲状腺機能亢進とは、慢性腎不全、腸吸収不良症候群、ファンコニ症候群及び尿細管性アシドーシス、ビタミンＤ欠乏又は抵抗などの状況で、副甲状腺は、長時期にわたって低血中リンカルシウム、低血中マグネシウム、又は高血中リンの刺激を受けて過剰なＰＴＨを分泌して、血中カルシウム、血中マグネシウムを向上させるか或いは血中リンを減少しようとする一種の慢性的な代償性の臨床症状を指す。ＳＨＰＴの進行は、骨疾患、軟部組織の石灰化及び血管の石灰化を引き起こし、患者の発症率と死亡率に悪影響を及ぼす恐れがある。
【0005】
従来、ＳＨＰＴ治療案には、手術、介入、および活性型ビタミンＤ、従来のリン吸着剤、及びシナカルセトを主に用いた薬物療法が含まれる。活性型ビタミンＤは、現在、ＳＨＰＴの治療に最も広く用いられている薬剤であり、ビタミンＤ受容体アゴニストとも呼ばれ、ＶＤＲに作用してＰＴＨ合成を減少させて治療効果を達成する最も慣用されている薬剤であるが、低カルシウム血症及び高リン血症を引き起こすリスクがあり、悪化した軟組織石灰化及び血管石灰化につながる可能性がある。
【0006】
カルシウム感知受容体（ｃａｌｃｉｕｍ-ｓｅｎｓｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣａＳＲ）の機能の発見は、カルシウム感知受容体作動薬の発見の基になっている。研究によると、ＣａＳＲは、幾つかの細胞型によって発現されるＧタンパク質共役受容体であり、細胞外カルシウムイオン（Ｃａ２＋）濃度の変動を検出し、ＰＴＨ分泌を変化させることで反応するものである。ＣａＳＲは、Ｃａ２＋を介して活性化され、小胞輸送を阻害することにより数秒から数分以内にＰＴＨ分泌を阻害し、また、この過程は受容体のプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）リン酸化作用によって調節される。また、ＣａＳＲは、骨芽細胞及び腎臓でも発現され、腎臓で腎臓のＣａ２＋排泄を調節する。１９９６年に成功に開発された、カルシウム構造模倣薬であるカルシウム受容体作動薬（ｃａｃｉｍｉｍｅｔｉｃｓ）は、ＣａＲ膜貫通ドメインに作用し、カルシウム親和性を向上させ、カルシウム用量－反応曲線を左にシフトさせ、高イオンカルシウムと類似する一連のシグナル反応を産生するように副甲状腺細胞を「欺い」て、ＣａＳＲを活性化し、ＰＴＨの合成と分泌を阻害し、最後に血中カルシウムと血中リンの降下を引き起こすことができる。
【0007】
カルシウム感知受容体作動薬（ｃａｌｃｉｍｉｍｅｔｉｃｓ）は、副甲状腺細胞への細胞外カルシウムイオンの作用を模倣するかひいては強化することがことができる。カルシウム感知受容体（ｃａｌｃｉｕｍ ｓｅｎｓｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣａＳＲ）の作動薬（例えば、シナカルセット：ｃｉｎａｃａｌｃｅｔ）は、ＳＨＰＴの治療に用いられ、効果が良好である。シナカルセットは、ＣａＳＲに対してアロステリック活性化作用を産生することができる。また、シナカルセットは、長期培養したヒト副甲状腺細胞を直接阻害する効果を示し、副甲状腺細胞の増殖周期を調節し、それにより副甲状腺の体積に影響を与えることができることが発見され、そのため、現在、「可逆性・化学性副甲状腺の摘出」とも呼ばれており、臨床研究のホットスポットとなっている。シナカルセットは、ＰＴＨを効果的に低下させるだけでなく、過形成性副甲状腺の体積も減少させることができ、それにより副甲状腺摘出術の目的を達成すると考えられている。日本や他の国では、この薬のリストにより副甲状腺摘出術の割合が明らかに減少した。一般には、シナカルセットは、耐性が良好で、２つのよく見られる有害反応が低カルシウム血症及び胃腸管の副作用である。なお、カルシウム感知受容体作動薬は、副甲状腺功能亢進症を治療するのに用いられる際に、主に副甲状腺ホルモンのレベルを低下させることで働き、貧血などの慢性腎不全の合併症には改善作用を示さない。
【0008】
上記の現状を鑑みて、ＳＨＰＴの治療は大きく進行してきたが、依然としてミネラル骨代謝障害が完全かつ継続的に直されなく、ＳＨＰＴ患者の少なくとも半数においては病状が適切に制御されていなく、また、従来のＳＨＰＴ治療薬は、腎不全に関連する貧血の症状を改善することができない。ＳＨＰＴの治療は、所望の目標に至らないので、さらなる研究が必要とされる。治療効果がより高く、副作用がより少ない副甲状腺ホルモンのレベルを低下させる化合物を続いて開発するのは、二次性副甲状腺機能亢進および腎不全の治療にとって重要な意味がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
一態様では、本発明は、活性二重特異性融合ポリペプチド化合物を提供することを目的とする。本発明により提供される活性ポリペプチド化合物は、二重標的作用活性を有し、２つの異なる面で調節又は治療の作用を発揮することができる。また、本発明により開示される活性ポリペプチド化合物は、カルシウム感知受容体に結合し、そしてカルシウム感知受容体を活性化して副甲状腺素のレベルを低下させることができるとともに、オステオゲニック成長ペプチド様作用を生じることもできる。
【課題を解決するための手段】
【0010】
上記の本発明の目的を実現するために、本発明は、以下の技術案を採用する。
本発明は、まず、下記の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される構造又はその薬学的に許容される塩である活性二重特異性融合ポリペプチド化合物、を提供する。
Ｙ－ＩＤ－Ｘ 式（Ｉａ）、又は
Ｘ－ＩＤ－Ｙ 式（Ｉｂ）
式中、Ｙは、カルシウム感知受容体作動薬であり、
ＩＤは、ＸとＹを連結する分子内のジスルフィド結合又はリンカーであり、
Ｘは、オステオゲニック成長ペプチド様ペプチド、間葉系幹細胞刺激剤である。
本発明は、まず、下記の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される構造又はその薬学的に許容される塩である活性二重特異性融合ポリペプチド化合物、を提供する。
Ｙ－ＩＤ－Ｘ 式（Ｉａ）、又は
Ｘ－ＩＤ－Ｙ 式（Ｉｂ）
式中、Ｙは、カルシウム感知受容体作動薬であり、
ＩＤは、ＸとＹを連結する分子内のジスルフィド結合又はリンカーであり、
Ｘは、オステオゲニック成長ペプチド様ペプチド、間葉系幹細胞刺激剤である。
【0011】
いくつかの実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における前記Ｙは、下記の式（ＩＩａ）又は式（ＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を有するペプチド鎖である。
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）、
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ７は、システイン、ホモシステイン、又はＳ－メチルシステインであり、
Ｘａａ８は、アラニン、又はアルギニンであり、
Ｘａａ９は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、アルギニン、アラニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、アラニンであり、
Ｘａａ１３は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
前記ペプチド鎖Ｙのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）、
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ７は、システイン、ホモシステイン、又はＳ－メチルシステインであり、
Ｘａａ８は、アラニン、又はアルギニンであり、
Ｘａａ９は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、アルギニン、アラニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、アラニンであり、
Ｘａａ１３は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
前記ペプチド鎖Ｙのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
【0012】
本発明の実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるペプチド鎖ＹにおけるＸａａ９、Ｘａａ１０、Ｘａａ１１、Ｘａａ１３は、独立して、２，３－ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，４－ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、オルニチン及びホモアルギニンから選択される一つまたは複数であることが可能である。Ｘａａ１１及びＸａａ１３は、正に帯電したアミノ酸残基である。
【0013】
幾つかの別実施形態において、前記Ｙは、下記の式（ＩＩａ）、又は（ＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を有するペプチド鎖である。
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）、
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ７は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、又はＳ－メチル－Ｄ－システインであり、
Ｘａａ８は、Ｄ－アラニン、又はＤ－アルギニンであり、
Ｘａａ９は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、Ｄ－アラニンであり、
Ｘａａ１３は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
また、前記ペプチド鎖Ｙのアミノ基端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシ基端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）、
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ７は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、又はＳ－メチル－Ｄ－システインであり、
Ｘａａ８は、Ｄ－アラニン、又はＤ－アルギニンであり、
Ｘａａ９は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、Ｄ－アラニンであり、
Ｘａａ１３は、Ｄ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
また、前記ペプチド鎖Ｙのアミノ基端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシ基端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
【0014】
本発明の具体的な実施例において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における前記ペプチド鎖Ｙにおけるアミノ酸は、Ｄ－型アミノ酸である。
【0015】
本発明の幾つかの具体的な実施例において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における前記Ｙは、配列番号１で示される構造のポリペプチド：Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２（配列番号１）である。
【0016】
いくつかの実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における前記Ｘは、下記の式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を有するペプチド鎖である。
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）、
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４はグリシンであるか、Ｘａａ５はグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）、
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４はグリシンであるか、Ｘａａ５はグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
【0017】
幾つかのより具体的な実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における前記Ｘは、式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を有するペプチド鎖である。
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）、
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ１は、Ｌ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４はグリシンであるか、Ｘａａ５はグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）、
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）、
式中、Ｘａａ１は、Ｌ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４はグリシンであるか、Ｘａａ５はグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されている。
【0018】
いくつかの実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるペプチド鎖ＸにおけるＸａａ１は、Ｌ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、Ｘａａ２は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであり、Ｘａａ３はＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、Ｘａａ４－Ｘａａ５はアミノ基で置換されたＣ１－１２アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、Ｘａａ６が存在しない。或いは、ペプチド鎖ＸにおけるＸａａ１はＬ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、Ｘａａ２はＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、Ｘａａ３はＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、Ｘａａ４－Ｘａａ５はアミノ基で置換されたＣ１－１２アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、Ｘａａ６はＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである。
【0019】
幾つかの別実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるペプチド鎖ＸにおけるＸａａ４－Ｘａａ５は、アミノ基で置換されたＣ１－８アルキルモノカルボン酸で置き換えられている。これらの実施形態において、Ｘａａ４－Ｘａａ５がアミノ基で置換されたアルキルモノカルボン酸で置き換えられていることは、Ｘａａ４－Ｘａａ５がアミノ基で置換されたアルキルモノカルボン酸で直接に置換され、アミノ基で置換されたアルキルモノカルボン酸がそのアミノ基を介してＸａａ３のカルボキシ基とアミド結合を形成し、アミノ基で置換されたアルキルモノカルボン酸におけるカルボキシ基がペプチド鎖Ｘのカルボキシ基端となるか、又はアミノ基で置換されたアルキルモノカルボン酸がそのカルボキシ基を介してＸａａ６のアミノ基とアミド結合を形成することである。
【0020】
また、幾つかの別実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるＸは、下記の式（ＩＩＩｃ）及び（ＩＩＩｄ）で示される構造を有する環状ペプチドである。
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６） （ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１） （ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する。
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６） （ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１） （ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する。
【0021】
別の幾つかの具体的な実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるＸは、式（ＩＩＩｃ）及び（ＩＩＩｄ）で示される構造を有する環状ペプチドである。
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６）（ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１）（ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、Ｌ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、又は、グリシン、又はＤ－プロリンであり、
Ｘａａ３は、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、又はＤ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、又はＤ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、グリシン、又はＤ－プロリンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、又はＤ－ホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する。
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６）（ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ（Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１）（ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、Ｌ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、Ｌ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、又は、グリシン、又はＤ－プロリンであり、
Ｘａａ３は、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、又はＤ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、又はＤ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、グリシン、又はＤ－プロリンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、又はＤ－ホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成する。
【0022】
本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物における環状ペプチドＸは、酵素分解に効果的に抵抗することができるので、安定性が向上し、そして生体利用率及び代謝安定性が改善される。
【0023】
本発明の幾つかの具体的な実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるＸは、下記の配列番号２～配列番号６及び配列番号１２～配列番号１８で示される構造を有するペプチド鎖である。
（１）配列番号２
Ｈ２Ｎ-Ｌ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（２）配列番号３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（３）配列番号４
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（４）配列番号５
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ、
（５）配列番号６
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（６）配列番号１２
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｈｉｓ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（７）配列番号１３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｐｒｏ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（８）配列番号１４
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（９）配列番号１５
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１０）配列番号１６
Ｃｙｃｌｏ（Ｌ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１１）配列番号１７
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｃｙｓ）
（１２）配列番号１８
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｔｙｒ）。
（１）配列番号２
Ｈ２Ｎ-Ｌ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（２）配列番号３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（３）配列番号４
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ、
（４）配列番号５
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ、
（５）配列番号６
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（６）配列番号１２
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｈｉｓ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（７）配列番号１３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｐｒｏ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（８）配列番号１４
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（９）配列番号１５
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１０）配列番号１６
Ｃｙｃｌｏ（Ｌ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１１）配列番号１７
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｃｙｓ）
（１２）配列番号１８
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｔｙｒ）。
【0024】
いくつかの実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物におけるＩＤは、ＸとＹとの間に形成した分子内ジスルフィド結合、又はリンカーである。
Ｘのシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインと、Ｙのシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとの間に、前記分子内ジスルフィド結合が形成される。
前記リンカーはアミノ基置換Ｃ１－８アルキル酸、ポリエチレングリコールポリマー鎖、又は１～１０個のアミノ酸からなるペプチドセグメントであり、前記ペプチドセグメントにおけるアミノ酸はプロリン、アルギニン、アラニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、グルタミン、アスパラギン及びグリシンから選ばれる。本発明の幾つかの具体的な実施形態において、前記リンカーは、（１）（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ） ｎ（ここで、ｎは０、１、２、又は３である）（２）Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ、又は（３）Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、（４）４－アミノ酪酸又は６－アミノカプロン酸、（５）（ＰＥＧ）ｍ（ここで、ｍは１、２、３、４、又は５である）である。
Ｘのシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインと、Ｙのシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとの間に、前記分子内ジスルフィド結合が形成される。
前記リンカーはアミノ基置換Ｃ１－８アルキル酸、ポリエチレングリコールポリマー鎖、又は１～１０個のアミノ酸からなるペプチドセグメントであり、前記ペプチドセグメントにおけるアミノ酸はプロリン、アルギニン、アラニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、グルタミン、アスパラギン及びグリシンから選ばれる。本発明の幾つかの具体的な実施形態において、前記リンカーは、（１）（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ） ｎ（ここで、ｎは０、１、２、又は３である）（２）Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ、又は（３）Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、（４）４－アミノ酪酸又は６－アミノカプロン酸、（５）（ＰＥＧ）ｍ（ここで、ｍは１、２、３、４、又は５である）である。
【0025】
幾つかの実施形態において、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物では、Ｎ末端(アミノ基端)、Ｃ末端（カルボキシ基端）、又はその両末端でペプチド修飾を行うことができる。前記ペプチド鎖Xとペプチド鎖Yのアミノ基端の化学的修飾には、アシル化、スルホニル化、アルキル化及びPEG化の修飾が含まれる。前記ペプチド鎖Xとペプチド鎖Yのカルボキシ基端の化学的修飾には、アミド化、スルホニル化及びPEG化の修飾が含まれる。本発明の幾つかの具体的な実施形態において、前記アミノ基端の化学的修飾は、アミノ基がアセチル化、ベンゾイル化又はスルホニル化されることであり、また、前記アミノ基端のアルキル化は、C1-6アルキル化又はアラルキル化されることであり、また、前記カルボキシ基端の化学的修飾は、カルボキシ基におけるOHがNH2で置換されるか、又は被スルホンアミド置換される。本発明の幾つかの具体的な実施形態において、アセチル化及びアミド化を通じてＮ末端及びＣ末端で修飾されている。
【0026】
本発明の具体的な実施形態において、本発明に係る式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される二重特異性融合ポリペプチド化合物は、下記の配列番号７～配列番号１１及び配列番号１９～配列番号２７のうちの１つの化合物、又はその薬学的に許容される塩である。
（１）配列番号７
（２）配列番号８
（３）配列番号９
（４）配列番号１０
（５）配列番号１１
（６）配列番号１９
（７）配列番号２０
（８）配列番号２１
（９）配列番号２２
（１０）配列番号２３
（１１）配列番号２４
（１２）配列番号２５
（１３）配列番号２６
（１４）配列番号２７
上記の構造においては、「Ａｃ」はアセチル基のエンドキャッピング基であり、「ＮＨ２」は、アミドエンドキャッピング基である。
（１）配列番号７
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【化14】
【0027】
本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物には、前記ポリペプチド化合物の各アミノ酸の側鎖基で化学的な修飾により改造して得られた誘導体がさらに含まれる。前記誘導体は、ポリペプチド化合物におけるシステインが持つチオール基から形成したチオエーテル、チオグリコシドであるか、又はそれがシステイン又はシステイン含有ペプチドと形成したジスルフィド結合含有化合物である。
或いは、前記誘導体は、ポリペプチド化合物におけるチロシンが持つフェノール性ヒドロキシ基から形成したエステル系、エーテル系、グリコシド系化合物である。
或いは、前記誘導体は、ポリペプチド化合物と金属イオンとからなる複合体、錯体又はキレートである。
或いは、前記誘導体は、チロシン、フェニルアラニンが持つフェニル環が置換された後に形成した誘導体である。
或いは、前記誘導体は、前記ポリペプチド化合物から形成した水和物又は溶媒和物である。
或いは、前記誘導体は、ポリペプチド化合物におけるチロシンが持つフェノール性ヒドロキシ基から形成したエステル系、エーテル系、グリコシド系化合物である。
或いは、前記誘導体は、ポリペプチド化合物と金属イオンとからなる複合体、錯体又はキレートである。
或いは、前記誘導体は、チロシン、フェニルアラニンが持つフェニル環が置換された後に形成した誘導体である。
或いは、前記誘導体は、前記ポリペプチド化合物から形成した水和物又は溶媒和物である。
【0028】
なお、本発明に開示される二重特異性融合ポリペプチド化合物の他の変異体、特に、保存性アミノ酸を置換することのみで得られた任意の変異体も本発明の範囲内に含まれることに留意されたい。
【0029】
本発明で提供される二重特異性融合ポリペプチド化合物は、遊離ポリペプチドの形態又は塩の形態で存在することができる。いくつかの実施形態において、前記塩とは、薬学的に許容される塩を指す。本発明の「薬学的に許容される塩」は、従来の化学的方法で親化合物、塩基性または酸性部分から合成することができる。一般的には、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態と化学量論的量の適切な塩基(例えば、Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ、又はＫの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など)とを反応させる、又はこれらの化合物の遊離塩基形態と化学量論的量の適切な酸とを反応させることにより調製することができる。
【0030】
本発明で提供される二重特異性融合ポリペプチド化合物は、構造を接続することにより構築され、マルチターゲット作用を有する活性ポリペプチドに属し、カルシウム感知受容体（ＣａｓＲ）を活性化するだけでなく、オステオゲニック成長ペプチド様効果も有する。
【0031】
二重ターゲット作用に基づいて構築した活性ポリペプチド化合物は、単一標ターゲットのポリペプチドに対して、複数の効果を発揮することができる。（１）カルシウム感知受容体を活性化し、細胞内シグナル伝達経路を通じて血漿副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）のレベルを低下させ、また、骨芽細胞表面のカルシウム感知受容体を介して、分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を活性化し、それにより刺激骨芽細胞の増殖と分化を刺激し、破骨細胞において破骨細胞の分化とアポトーシスを引き起こすことにより破骨細胞の骨吸収作用を阻害する効果、（２）オステオゲニック成長ペプチド受容体を活性化し、骨芽細胞と線維芽細胞の増殖を刺激し、骨の石灰化を促進し、骨の形成を促進する効果。
【0032】
本発明は、医薬品の製造における前記の二重特異性融合ポリペプチド化合物及び前記の医薬組成物の使用をさらに提供する。本発明で提供される二重特異性融合ポリペプチド化合物は、副甲状腺ホルモン上昇類疾患、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、パジェット病、変形性関節症、関節リウマチ、骨軟化症、軟骨石灰化症、軟骨無形成症、骨軟骨炎、嚢胞性骨形成不全症、先天性低ホスファターゼ症、線維性病変、線維性骨異形成症、多発性骨髄腫、溶骨性骨病変、人工関節周囲の骨溶解、歯周病、骨粗鬆症、骨代謝回転異常、高代謝回転型骨病変、又は慢性腎臓病－ミネラルおよび骨病気（ＣＫＤ－ＭＢＤ）うちの少なくとも一種を予防及び／又は治療することができる。前記副甲状腺ホルモン上昇類疾患は、原発性副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進、三次性副甲状腺機能亢進であることが好ましい。前記二次性副甲状腺機能亢進は、慢性腎臓病の血液透析及び／又は腹膜透析によって引き起こされる副甲状腺ホルモン上昇であることが好ましい。
【0033】
本発明で提供される二重特異性融合ポリペプチド化合物は、正常の副甲状腺ホルモン（ＰＨＴ）のレベルを有意に低下させ、血清リンレベルを向上させ、血清カルシウムレベルを低下させることができ、低カルシウム血症、低リン血症、及び／又は副甲状腺ホルモン上昇による疾患を予防及び／又は治療するために用いることができる。
【0034】
本発明は、慢性腎臓病（即ち、ステージ１～４）に関連する副甲状腺機能亢進症を罹患している患者において血中ＰＴＨのレベルを低下させることにより該疾患を治療即ち改善または予防する方法、を提供する。該方法は、ＰＴＨのレベルを低下させて副甲状腺の作動を抑制するために、これを必要とする患者に投薬することを含む。
【0035】
薬力学的活性試験で使用される薬物は、アミノ酸配列如配列番号７～１１のいずれか一項に記載されているポリペプチド化合物である。
【0036】
別の一態様では、本発明は、本発明に係る二重特異性融合ポリペプチド化合物を含む医薬組成物をさらに提供する。前記医薬組成物は、任意選択的に、薬学的に許容される添加物、賦形剤、担体及び溶剤のうちの少なくとも一種をさらに含む。
【0037】
本発明の「薬学的に許容される」とは、物質または組成物が製剤を含む他の成分及び／又はその治療に用いられる哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合しなければならないことを指す。
【0038】
本発明の「薬学的に許容される添加物」は、投与剤形又は医薬組成物の一貫性に関連する薬学的に許容される材料、混合物又は溶媒を意味する。各添加物は混合する際に、患者に投与する際に本発明に開示される化合物の薬能を大幅に低下させる相互作用、及び薬学的に許容されない医薬組成物をもたらす相互作用を回避するために、医薬組成物の他の成分と適合しなければならない。
【0039】
別段の説明がない限り、本発明で使用される全ての専門用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明に関する全ての特許及び刊行物は、援用によりその全体が本発明に組み込まれる。
【0040】
「任意選択」又は「任意選択的」という用語は、後で説明するイベント又は状況が起こる可能性があるが必ず起こるわけではないことを意味し、該説明には、該イベント又は状況が起こる場合又は起こらない場合が含まれる。
【0041】
「天然アミノ酸」という用語は、自然に存在する２０種類全てのアミノ酸を表す。「非天然アミノ酸」という用語は、Ｌ－アミノ酸を対応するＤ－アミノ酸で置き換え、例えばＤ－ＡｌａでＬ－Ａｌａを置き換えること、又は以下のルートによりＬ又はＤアミノ酸及びアミノアルキル酸への適切な修飾を行うことを意味する。
【0042】
「α」炭素上の絶対「Ｓ」配置は、通常「Ｌ」型又は天然型配置と呼ばれる。「α」炭素上の「Ｒ」配置は、通常「Ｄ」型アミノ酸と呼ばれる。２つの「α－置換基」（例えば、水素又はメチル）が同じである場合、アミノ酸がＧｌｙ又はＡｉｂであり、かつキラルではない。
【0043】
本発明に用いられる「アミノ酸」とは、天然及び非天然アミノ酸を指す。アミノ酸の立体配置は接頭辞「Ｌ－」、又は「Ｄ－」（アキラルなグリシンを除く）を含む三文字のコードで示される。例えば、Ｌ型のアミノ酸は、アラニン（「Ｌ－Ａｌａ」又は「Ａ」）、アルギニン（「Ｌ－Ａｒｇ」又は「Ｒ」）、アスパラギン（「Ｌ－Ａｓｎ」又は「Ｎ」）、アスパラギン酸（「Ｌ－Ａｓｐ」又は「Ｄ」）、システイン（「Ｌ－Ｃｙｓ」又は「Ｃ」）、グルタミン（「Ｌ－Ｇｌｎ」又は「Ｑ」）、グルタミン酸（「Ｌ－Ｇｌｕ」又は「Ｅ」）、グリシン（「Ｇｌｙ」又は「Ｇ」）、ヒスチジン（「Ｌ－Ｈｉｓ」又は「Ｈ」）、イソロイシン（「Ｌ－Ｉｌｅ」又は「Ｉ」）、ロイシン（「Ｌ－Ｌｅｕ」又は「Ｌ」）、リジン（「Ｌ－Ｌｙｓ」又は「Ｋ」）、メチオニン（「Ｌ－Ｍｅｔ」又は「Ｍ」）、フェニルアラニン（「Ｌ－Ｐｈｅ」又は「Ｆ」）、プロリン（「Ｌ－Ｐｒｏ」又は「Ｐ」）、セリン（「Ｌ－Ｓｅｒ」又は「Ｓ」）、スレオニン（「Ｌ－Ｔｈｒ」又は「Ｔ」）、トリプトファン（「Ｌ－Ｔｒｐ」又は「Ｗ」）、チロシン（「Ｌ－Ｔｙｒ」又は「Ｙ」）、及びバリン（「Ｌ－Ｖａｌ」又は「Ｖ」）がある。Ｌ－ノルロイシンとＬ－ノルバリンは、それぞれ（ＮＬｅｕ）及び（ＮＶａｌ）で表す。１９種類の自然に存在するキラルアミノ酸は、相応するＤ－異性体を有し、接頭辞「Ｄ－」を含む三文字の略語：アラニン（「Ｄ－Ａｌａ」又は「ａ」）、アルギニン（「Ｄ－Ａｒｇ」又は「ｒ」）、アスパラギン（「Ｄ－Ａｓｎ」又は「ａ」）、アスパラギン酸（「Ｄ－Ａｓｐ」又は「ｄ」）、システイン（「Ｄ－Ｃｙｓ」又は「ｃ」）、グルタミン（「Ｄ－Ｇｌｎ」又は「ｑ」）、グルタミン酸（「Ｄ－Ｇｌｕ」又は「ｅ」）、ヒスチジン（「Ｄ－Ｈｉｓ」又は「ｈ」）、イソロイシン（「Ｄ－Ｉｌｅ」又は「ｉ」）、ロイシン（「Ｄ－Ｌｅｕ」又は「ｌ」）、リジン（「Ｄ－Ｌｙｓ」又は「ｋ」）、メチオニン（「Ｄ－Ｍｅｔ」又は「ｍ」）、フェニルアラニン（「Ｄ－Ｐｈｅ」又は「ｆ」）、プロリン（「Ｄ－Ｐｒｏ」又は「ｐ」）、セリン（「Ｄ－Ｓｅｒ」又は「ｓ」）、スレオニン（「Ｄ－Ｔｈｒ」又は「ｔ」）、トリプトファン（「Ｄ－Ｔｒｐ」又は「ｗ」）、チロシン（「Ｄ－Ｔｙｒ」又は「ｙ」）、及びバリン（「Ｄ－Ｖａｌ」又は「ｖ」）で示される。
【0044】
本発明のアミノ酸の表記は、配置が明記されていない場合、アミノ酸の名称又は３文字のコードのみで表れるアミノ酸はＬ－異性体及びＤ－異性体を含む。非天然アミノ酸の名称の前に接頭辞「Ｌ」又は「Ｄ」が付く場合、それが表す単一の配置を指す。例えば、「アラニン」又は「Ａｌａ」がＤ－Ａｌａ及びＬ－Ａｌａ、「システイン」又は「Ｃｙｓ」がＤ－Ｃｙｓ及びＬ－Ｃｙｓ、ホモシステインがＤ－ホモシステイン及びＬ－ホモシステインを表す。
【0045】
通常、「アミノ酸残基」はペプチド、ポリペプチド又はタンバク質のモノサブユニットに関して使用され、通常、「アミノ酸」は遊離分子に関して使用されるが、本発明では、「アミノ酸」及び「アミノ酸残基」という用語が交換可能に使用される。
【0046】
２つのアミノ酸してが互いに連結して１つのペプチド結合を形成するが、複数個のアミノ酸が互いに連結して複数個のペプチド結合を形成する。多個のアミノ酸が互いに連結して形成された複数個のペプチド結合を含有する一本の鎖状構造は、「ペプチド鎖」又は「ペプチドセグメント」と呼ばれる。本明細書で用いられる「ペプチド」及び「ポリペプチド」とは、分子サイズに関係なく、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基鎖から構成されるポリマーを指す。本発明における「ペプチド」及び「ポリペプチド」という用語が交換可能に使用される。
【0047】
別段の明記がない限り、ペプチド配列は、アミノ基末端（Ｎ末端）からカルボキシル末端（Ｃ末端）の順に示される。
【0048】
本発明で使用される「リンカー」という用語は、ポリペプチドフラグメントＸとポリペプチドフラグメントＹを連結するために用いられる連結フラグメントであり、その自身がペプチド鎖Ｘ及びペプチド鎖Ｙの生理活性に影響を与えない条件を満足すれば、その長さ及び構造に制限がない。リンカーは、２つのペプチドセグメントに一定のスペース間隔を提供するできるため、互いに干渉することなく正確に折りたたむようになる。さらに、リンカーは、２つのペプチドセグメントが相互作用の可能性を提供し、同士間の相乗作用を促進する。リンカーは、疎水性リンカー、柔軟な親水性リンカー、及びペプチドフラグメントリンカーがある。本発明における疎水性リンカーは、主に、４－アミノ酪酸や６－アミノカプロン酸などのアミノアルカン酸類である。親水性リンカーとしてよく使用されるのは、例えば、（ＰＥＧ）ｍ（ここで、ｍは１、２、３、４、又は５である）などのＰＥＧポリマーである。ペプチドフラグメントリンカーは１～１０個のアミノ酸からなるペプチドフラグメントである。調製の便利さなどの点から、リンカーは、制限酵素切断部位を含み、長さが１～１０個のアミノ酸のポリペプチドフラグメントである。いくつかの実施形態において、リンカーは、長さが２～８個のアミノ酸であるフラグメントである。また、いくつかの実施形態において、リンカーは、長さが３個のアミノ酸であるフラグメントである。本発明の実施形態において、リンカーを構成するアミノ酸は、プロリン、アルギニン、フェニルアラニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、グルタミン、アスパラギン及びグリシンから選択される。本発明の実際の調製実施例においては、前記リンカーは、Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｓｅｒ－Ｌ－Ｇｌｙ、（Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｓｅｒ）２、（Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｓｅｒ）３、又はＬ－Ｓｅｒ－Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｓｅｒ－Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｓｅｒであった。前記のリンカーは、２つの部分のペプチド鎖を分離し、同士間の立体障害効果を低減する。また、リンカーは生体内で加水分解することができ、各ペプチドセグメントが活性効果を発揮するのに有利である。
【0049】
本発明で使用される「カルシウム感知受容体作動薬」という用語は、「カルシウム模倣剤」、カルシウム感知受容体活性剤とも呼ばれ、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ドメイン、又は細胞内ドメイン（ＩＣＤｓ）に結合し、副甲状腺細胞の細胞表面に発見されたＣａＳＲを活性化し、そして細胞シグナル経路を活性化し、ＰＴＨの合成と分泌を阻害することを実現できる物質を指す。カルシウム感知受容体作動薬は、小分子化合物又はポリペプチド分子とすることができる。カルシウム感知受容体作動薬には、ＮＰＳ Ｒ－５６８、ＮＰＳ Ｒ－４６７に代表される第1世代のフェニルアルキルアミン系カルシウム感知受容体作動薬、シナカルセトに代表されるフェニルアルキルアミン系カルシウム感知受容体作動薬、エテルカルセチドに代表される第３世代のポリペプチド系カルシウム感知受容体作動薬、及び類似な活性を有する他の活性ポリペプチドが含まれるが、これらに限られなく、例えば、本発明に係る化合物におけるペプチド鎖Ｙが挙げられる。
【0050】
オステオゲニック成長ペプチド様ペプチド（オステオゲニック成長ペプチド受容体活性剤）とは、オステオゲニック成長ペプチド受容体シグナル経路を活性化し、骨芽細胞の増殖と分化を促進し、骨髄造血幹細胞や間葉系幹細胞の分裂と増殖を刺激することができ、また、造血幹細胞における自己回復能力を維持し、巨核球の成長を抑制することができる物質を指す。骨形成成長ペプチドは、ＭＡＰキナーゼ、Ｓｒｃ及びＲｈｏＡ経路を活性化することができる。ＭＡＰ経路が活性化されると、有糸分裂が増加し、骨芽細胞、骨髓造血幹細胞、間葉系幹細胞に対する分裂及び増殖効果を有する。それに対して、Ｓｒｃ及びＲｈｏＡ経路が活性化されると、骨芽細胞の内因性オステオゲニック成長ペプチドの自己分泌発現を調節し、塩基ホスファターゼの分泌を促進し、Ｉ型コラーゲン、オステオカルシン、Ｃｂｆα１ ｍＲＮＡの転写をアップレギュレートし、カルシウム塩の沈着と基質の石灰化を促進し、骨形成を促進し、骨折治癒を加速し、骨密度を増加することが可能になる。オステオゲニック成長ペプチド様ペプチドには、免疫応答性ＯＧＰが含まれ、具体的には、遊離ＯＧＰ、ＯＧＰ（１０～１４）、組換えＯＧＰ及びＯＧＰ－骨形成成長ペプチド結合タンパク質（ＯＧＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ＯＧＰＢＰ）、及びそれと類似の活性を有する天然又は人工合成ポリペプチドなどの化合物が含まれるが、これらに限定されなく、例としては、本発明に係る化合物におけるペプチド鎖Ｘである。
【0051】
間葉系幹細胞刺激剤、間葉系幹細胞は、骨髓間質細胞とも呼ばれる。間葉系幹細胞は、骨髓中の造血幹細胞（ＨＳＣ）に対する機械的な支持作用を有し、また、造血を調節するさまざまなサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＬＩＦ、Ｍ－ＣＳＦ及びＳＣＦなど）を分泌して造血を支持することもでき、さらに、骨形成系細胞、線維芽細胞、網状細胞、脂肪細胞及び内皮細胞へ分化できる潜在的な分化能力を持つ。間葉系幹細胞刺激剤とは、造血を調節するサイトカインを分泌する刺激を間葉系幹細胞に与え、そして造血機能を促進することができ、かつ／又は間葉系幹細胞を増殖と分化に誘導できる物質を指す。間葉系幹細胞刺激剤には、免疫応答性ＯＧＰが含まれ、具体的には、遊離ＯＧＰ、ＯＧＰ（１０～１４）、組換えＯＧＰ及びＯＧＰ－骨形成成長ペプチド結合タンパク質（ＯＧＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ＯＧＰＢＰ）、及びそれと類似の活性を有する天然又は人工合成ポリペプチドなどの化合物が含まれるが、これらに限定されなく、例としては、本発明に係る化合物におけるペプチド鎖Ｘである。
【0052】
本発明で使用される用語「アルキル基」又は「アルキル」とは、１～２０個の炭素原子を含む飽和直鎖または分岐鎖の一価炭化水素基を指し、ここで、前記アルキル基は、任意選択的に１個又は複数個の本発明に記載されている置換基で置換されることができる。特に詳細な説明のない限り、アルキル基は１～２０個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルキル基は１～１２個の炭素原子を含有する。幾つかの別実施形態において、アルキル基は２～１２個の炭素原子を含有する。幾つかの別実施形態において、アルキル基は１～６個の炭素原子を含有する。幾つかの別実施形態において、アルキル基は２～６個の炭素原子を含有する。また、幾つかの別実施形態において、アルキル基は１～４個の炭素原子を含有する。さらに、いくつかの実施形態において、アルキル基は１～３個の炭素原子を含有する。前記アルキル基は、任意選択的に１個又は複数個の本発明に記載されている置換基で置換されることができる。
【0053】
本明細書に用いられる「チオール含有基」又は「チオール含有部分」は、硫黄－水素結合（－ＳＨ）を含み、かつ生理学的条件下で別のスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を形成することができる官能基を意味する。本発明では、他のチオール基とジスルフィド結合を形成できるチオール基は「活性チオール基」と呼ばれる。
【0054】
ペプチド治療剤は、ペプチド酵素の攻撃を受けやすいものである。エキソペプチダーゼは、通常にペプチド若しくはタンバク質のアミノ末端又はカルボキシル末端からアミノ酸残基を切断する非特異的酵素である。アミノ酸配列内で切断を行うエンドペプチダーゼも、非特異的なものである可能性がある。ただし、エンドペプチダーゼは、特定のアミノ基配列（認識部位）を認識し、認識部位又はそれらの部位の近くでペプチドを切断する場合が多い。従って、タンパク質分解から保護するために化合物への修飾を行うことが企図されている。ペプチドをタンパク質分解から保護するための１つのアプローチは、化学的修飾又はペプチドのアミノ末端及び／又はカルボキシル末端に対する「キャッピング（ｃａｐｐｉｎｇ）」が挙げられる。
【0055】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドセグメントのＮ端（Ｎ末端）及びＣ端（Ｃ末端）は、遊離することができる。Ｃ末端が遊離である場合、置換基が付加されないか又は「－ＯＨ」で表される。Ｎ末端が遊離である場合、置換基が付加されないか又は「Ｈ」で表される。別の幾つかの具体的な実施形態において、本発明のペプチドセグメントは、化学的に修飾されてもよい。
【0056】
本発明で使用される「化学的修飾」又は「キャッピング」という用語は、交換可能に使用され、化合物の一端または両端へ共有結合修飾により保護基を導入することを指す。適切な保護基は、ペプチドの生物活性を低下させることがなく、ペプチド末端をキャップするのに役立つ。チオール基含有アミノ酸を含め、前記化合物のアミノ末端、又はカルボキシル末端、或いはその両端に位置する任意の残基を化学的に修飾することができる。
【0057】
いくつかの実施形態において、アセチル化により化合物のアミノ末端が化学的修飾されてＮ－アセチル基ペプチドが生じる（本発明に記載されている構造又は式中で「Ａｃ－」として表される）。幾つかの別実施形態において、アミド化により前記ペプチドのカルボキシル末端が化学的修飾されてＣ末端に第一級カルボキサミド（本明細書に記載されているペプチド配列、構造又は式中で「－ＮＨ２」として表される）が生じる。いくつかの実施形態において、それぞれアセチル化とアミド化によりアミノ基末端とカルボキシル末端の両端が化学的修飾される。ただし、他のエンドキャッピング基が使用する可能もである。例えば、アミノ基末端は、アセチル基やベンゾイル基などの基でアシル化することでキャップするか、天然又は非天然アミノ酸、例えば、アセチル基でキャップされたβ－アラニンでキャップするか、ベンジルやブチルなどの基でアルキル化することでキャップするか、或いはスルホニル化してスルホンアミドを形成することでキャップすることができる。同様に、カルボキシル末端は、エステル化されるか、又は二級アミド及びアシルスルホンアミドへ変換することができる。いくつかの実施形態において、アミノ基末端又はカルボキシル末端にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を連結するための部位が含まれてもよい。即ち、アミノ末端又はカルボキシル末端は、適切に官能化されたＰＥＧと反応することで化学的に修飾されてもよい。「ＰＥＧ」とは、ポリエチレングリコールを指す。
【0058】
本発明に係る「副甲状腺ホルモン上昇類疾患」とは、慢性腎臓病の血液透析及び／又は腹膜透析に起因した副甲状腺ホルモンが正常範囲よりもその以上に上昇したことによる疾患を指す。副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、主に脊椎動物におけるカルシウムとリンの代謝を調節するし、血中カルシウムレベルの増加や血中リンレベルの減少を促進する機能として働く。ＰＴＨ上昇類疾患には、副甲状腺機能亢進及び副甲状腺ホルモンのレベルの増加に引き起こされる低カルシウム血症、低リン血症、骨格脱灰、尿路結石、腎臓損傷、神経筋興奮性の低下、心血管系疾患などが含まれる。
【0059】
上記の「副甲状腺機能亢進」とは、原発性、二次性、および三次性副甲状腺機能亢進を指す。副甲状腺機能亢進は、原発性、二次性、三次性副甲状腺機能亢進に具体的に分類される。原発性副甲状腺機能亢進症では、副甲状腺の成長が実際に自主的（ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ）であり、通常に副甲状腺腺腫などの腫瘍に起因し、不可逆的であり得る。該腺腫は、通常、ビタミンＤ受容体を示さずに天然ホルモン型のビタミンＤである１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３への抵抗を示している。二次性副甲状腺機能亢進では、例えば、１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３の欠乏及び／又は抵抗に関連する副甲状腺過形成は、通常にホルモン代謝作用への抵抗に起因し、適応性があり、また、可逆的である。二次性副甲状腺機能亢進は、腎症、骨軟化症、腸吸収不良症候群の患者に発生する。
【0060】
三次性副甲状腺機能亢進は、生物学的機能亢進の副甲状腺が自主的増殖の状態になっていることで特徴付けされる。三次性副甲状腺機能亢進は、二次性副甲状腺機能亢進を患う患者に発生し得る。この場合、二次性副甲状腺機能亢進に関連する可逆的過形成は不可逆的な成長欠如に転換し、該増加した組織はビタミンＤ受容体を有している。副甲状腺機能亢進症のすべての形態では、骨損失やミネラル含有量の減少などの骨異常が存在するのが一般であり、腎臓の損傷が存在し得る。従って、副甲状腺機能亢進は、カルシウム、リン、骨の異常な代謝によっても特徴づけられる。
【0061】
本発明に係る化合物は、単一の活性試薬として投与することができ、または、同じ又は類似の治療活性を有しかつそれらの併用投与に対して安全かつ有効的であると確認された他の化合物を含む他の治療剤と併用して投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【0062】
【発明を実施するための形態】
【0063】
以下、特定の実施例を参照して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の実施形態は、これらに限定されない。本発明の実施例は、本発明を説明するために提供されるものであり、本発明を限定するものではないので、本発明の方法を前提とした本発明に対する任意の改良も本発明の保護範囲に属するものとする。一般的に、本発明の化合物は、本発明に係る方法により製造することができ、当業者も、公知の方法を用いて、順序又は順序の異なる合成工程を選択して、本発明に係る構造を有するポリペプチド化合物を生成することができる。以下の反応態様及び実施例は、本発明の内容をさらに例示するために使用される。
【0064】
本発明に係るポリペプチド化合物は、組換え法および合成法によって調製することができる。本発明の実施例では、本発明に記載されている生理学的効果を有する人工的に合成したポリペプチド化合物を使用した。
【0065】
本発明に記載されているポリペプチド化合物は、固相合成法（ＳＰＰＳ）、液相合成法及び酵素合成法で調製することができることが当業者であれば分かる。このなる調製仕方によって得られた本発明に係るポリペプチド化合物は、いずれも本発明の範囲内のものに属する。例えば、ポリペプチド化合物が固相合成法により調製されることが一般的である。前記の固相合成には、ポリスチレン-スチレン架橋樹脂、ポリアクリルアミド、ポリエチレン－エチレングリコール系樹脂などの従来樹脂を選択することができる。例としては、王氏樹脂（Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ）、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＣＴＣ、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｌｉｎｋｅｒ ＭＢＨＡ樹脂が挙げられる。樹脂は、連結順番に従って選択される。
【0066】
例えば、まず、カルボキシ基端のアミノ酸のカルボキシ基と高分子固相担体とを共有結合により連結し、α－アミノ基の保護基としてＦｍｏｃ、Ｂｏｃ又はＣＢｚを使用でき、Ｃ末端からＮ末端へ所定の順で脱保護、縮合、再脱保護、縮合の繰り返し過程を経て、保護基を有するペプチド鎖樹脂を得、そして、樹脂を切断しかつ保護基を除去する工程を経て、所望のペプチドセグメントを得ることができる。また、アミノ基端のアミノ酸のアミノ基と高分子固相担体を共有結合で連結し、逆の順序で合成し、Ｎ末端からＣ末端へ所定の順に従って脱保護、縮合、再脱保護、縮合の繰り返されるプロセスを経つことで、保護基を有するペプチド鎖樹脂を得、そして、樹脂を切断し、保護基を除去するステップを経つことで、所望のペプチドセグメントを得ることもできる。ポリペプチド化合物を固相合成により調整する場合、選択された樹脂の種類に応じて、カルボキシル末端が遊離しているポリペプチドを得ることができ、カルボキシル末端がアミド化修飾されたペプチド鎖を得ることもできる。
【0067】
本発明では、不溶性ポリマー支持体（樹脂）上でペプチドのＣ末端から段階的にペプチド鎖を合成する。いくつかの実施形態においては、アミド結合、エステル結合又はエーテル結合を形成することでペプチドのＣ末端アミノ酸を樹脂上に掛けるように、合成を開始する。このアプローチにより、Ｃ末端がぞれぞれアミド、カルボン酸、またはアルコールであるペプチド鎖を最終的に放出することが可能となる。
【0068】
Ｆｍｏｃに基づくＳＰＰＳでは、Ｃ末端のアミノ酸及び合成に使用される他のすべてのアミノ酸のα-アミノおよび側鎖官能基（存在する場合）を、区別して保護（直交保護）することが必要であり、それにより、合成過程において適切な塩基（例えば、２０％ピペリジン溶液）を利用して、ペプチドを樹脂から時期尚早に切断するか又は側鎖保護基（一般、酸感受性保護基で保護されている）を脱保護することがなく、α－アミノ保護基を選択的に除去することができる。アミノ酸のカルボキシ基を活性エステルに活性化して、それと樹脂のＮ末端に掛けたアミノ酸のブロックされていないα－アミノ基と反応させることにより、アミノ酸のカップリングを行った。各カップリングと脱保護の後、ペプチド－樹脂を過剰な溶媒（例えば、ＤＭＦ、ＤＣＭ及びジエチルエーテル）で洗浄する。所望のペプチド配列を合成するまで、α－アミノの脱保護とカップリングの順を繰り返た。その後、適切な溶解液（通常、側鎖反応を制限するための適切なスカベンジャーの存在下で行われる）を使用して樹脂からペプチドを切断し、その同時に側鎖官能基が脱保護される。得られたペプチドを、逆相ＨＰＬＣにより最終的に精製する。
【0069】
ポリペプチド化合物の構造を同定する際には、ＱＥ同定解析、質量分析法タンバク質Ｎ末端配列解析、ポリペプチドタンバク質Ｎ－端配列解析を使用して一次構造を確認し、円二色性スキャン分析を使用して二次構造を決定する。
【0070】
本発明の実施例のポリペプチド化合物のＱＥ同定解析は、エンドプロテイナーゼ（一般にはＴｒｙｐｓｉｎ）を使用してタンバク質ポリペプチドサンプルを酵素加水分解し、次に、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（ｎａｎｏＬＣ－ＱＥ）を使用して酵素加水分解後のサンプルを分析する。最後に、ＭＡＳＣＯＴなどの質量分析マッチングソフトウェアを使用してＬＣ／ＭＳ／ＭＳデータを分析することで、標的タンバク質ポリペプチド分子の定性的な同定情報を取得する。
【0071】
本発明の実施例のポリペプチド化合物の質量分析法によるタンバク質Ｎ末端の配列解析に用いられる実験方法は、それぞれトリプシン、キモトリプシン及びＧｌｕ－Ｃ酵素を使用してタンバク質を酵素加水分解し、次に、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（Ｘｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ ＱＴｏｆ、ｗａｔｅｒｓ）を使用して酵素加水分解後のペプチドセグメントサンプルを分析する。
【0072】
本発明の実施例のポリペプチド化合物のポリペプチドタンバク質Ｎ－端の配列解析では、自動タンバク質ポリペプチドシークエンシング装置により試験サンプルのＮ末端配列を分析することである。ソフトウェアＰＰＳＱ Ａｎａｌｙｓｉｓで、サンプル名称、サンプル番号、測定サイクル数、メソッドファイル選択を設定し、設定が完了した後に測定を開始した。データ及びスペクトルの処理は、ＰＰＳＱで生じた生データとスペクトルをＰＰＳＱ ＤａｔａＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇソフトウェアによってピークを識別し、対応するスペクトルを導出する。
【0073】
本発明の実施例のポリペプチド化合物の初歩構造を決定するには、質量分析法を使用して検出を行い、高分解能質量分析法を使用してタンパク質の相対分子量を測定し、ポリペプチドの相対分子量の情報を正確かつ確実に得た。
【0074】
以下の略語が本発明で使用されている。
ｒ．ｔ：室温
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｈ２Ｏ：水
ＣＨ３ＣＮ：アセトニトリル
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＨＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
Ｆｍｏｃ：９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル基
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基
ｔ－Ｂｕ：ｔ－ブチル
Ｔｒｔ：トリチル基
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＮＭＰ：１－メチルピロリジン－２－オン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＴ：エタンジチオール
ＴＡ：チオアニソール
ＰｙＢＯＰ：１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート
ｒ．ｔ：室温
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｈ２Ｏ：水
ＣＨ３ＣＮ：アセトニトリル
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＨＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
Ｆｍｏｃ：９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル基
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基
ｔ－Ｂｕ：ｔ－ブチル
Ｔｒｔ：トリチル基
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＮＭＰ：１－メチルピロリジン－２－オン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＴ：エタンジチオール
ＴＡ：チオアニソール
ＰｙＢＯＰ：１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート
【実施例】
【0075】
調製実施例
実施例１：活性ポリペプチド（配列番号１０）の調製
実施例１：活性ポリペプチド（配列番号１０）の調製
【0076】
【化15】
【0077】
（１）ペプチドセグメントＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２（配列番号１で示されるポリペプチド配列）の調製は、Ｃ末端からＮ末端へ合成を行った。
（１－１）樹脂の前処理：Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ樹脂を秤量し、２５０ｍＬの反応試験管に入れ、ＤＣＭで樹脂を膨潤させてＤＭＦで洗浄した後、ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて脱保護を行い、ＤＭＦで洗浄し、ニンヒドリンをすっかり引き出し、樹脂の色を検出したところ、樹脂は紫がかった黒色であった。
（１－２）Ｓ１アミノ酸の連結：Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ及びＰｙＢＯＰをを秤量しＤＭＦで溶解した後、ＤＩＥＡを加えた。窒素を導入して、撹拌しながら１．５～３時間反応させた。反応終了後、樹脂をニンヒドリンで検出したところ、樹脂が無色透明であり、反応が終わったことが示される。溶剤をすっかり引き出した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて２０～３０分間脱保護した。脱保護終了後、試薬をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、溶剤をすっかり引き出した。ニンヒドリンで樹脂の色を検出したところ、樹脂は紫がかった黒色であり、次のステップに進んだ。
（１－３）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ２アミノ酸を連結した。
（１－４）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ３アミノ酸を連結した。続いて、ステップ（１－４）を２回繰り返し、Ｓ４およびＳ５アミノ酸Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨを連結した。
（１－５）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ６アミノ酸を連結した。
（１－６）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（ｔｒｔ）－ＯＨを秤量し、Ｓ７アミノ酸を連結した。
（１－７）Ｎ－端アセチル化：ＤＭＦを５－１５℃まで冷却し、そして、無水酢酸とピリジンを加えて混合溶剤１を調製した。ステップ（１－６）で得られた樹脂を冷却し、そこに調製した混合溶剤１を加えた。添加終了後、温度を制御しながら１～２時間反応させた。ニンヒドリンで検出した樹脂の色が無色透明となった後、溶剤をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄した後溶剤をすっかり引き出した。
（１－８）樹脂の収縮：反応試験管にメタノールを加えて樹脂を収縮させ、ＤＣＭで樹脂を膨潤させ、収縮を２～４回繰り返し、その後、収縮後の樹脂を真空乾燥箱オーブンに入れて乾燥させた。
（１－９）ペプチドセグメントの切断：１５５ｍＬ ＴＦＡ、８ｍＬ ＴＩＳ（トリイソプロピルシラン）、４．１２ｍＬ ＥＤＴ（エタンジチオール）、２ｍＬ ＴＡ（チオアニソール）、４．１２ｍＬ水および２ｍＬアニソールをよく混合して溶解液を調製した。ペプチドセグメントの切断終了後、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下で溶剤を除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２の粗製品のペプチドを得た。
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ９３０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
（１－１）樹脂の前処理：Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｒｅｓｉｎ樹脂を秤量し、２５０ｍＬの反応試験管に入れ、ＤＣＭで樹脂を膨潤させてＤＭＦで洗浄した後、ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて脱保護を行い、ＤＭＦで洗浄し、ニンヒドリンをすっかり引き出し、樹脂の色を検出したところ、樹脂は紫がかった黒色であった。
（１－２）Ｓ１アミノ酸の連結：Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ及びＰｙＢＯＰをを秤量しＤＭＦで溶解した後、ＤＩＥＡを加えた。窒素を導入して、撹拌しながら１．５～３時間反応させた。反応終了後、樹脂をニンヒドリンで検出したところ、樹脂が無色透明であり、反応が終わったことが示される。溶剤をすっかり引き出した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて２０～３０分間脱保護した。脱保護終了後、試薬をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、溶剤をすっかり引き出した。ニンヒドリンで樹脂の色を検出したところ、樹脂は紫がかった黒色であり、次のステップに進んだ。
（１－３）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ２アミノ酸を連結した。
（１－４）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ３アミノ酸を連結した。続いて、ステップ（１－４）を２回繰り返し、Ｓ４およびＳ５アミノ酸Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨを連結した。
（１－５）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨを秤量し、ステップ（１－２）に示す工程でＳ６アミノ酸を連結した。
（１－６）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（ｔｒｔ）－ＯＨを秤量し、Ｓ７アミノ酸を連結した。
（１－７）Ｎ－端アセチル化：ＤＭＦを５－１５℃まで冷却し、そして、無水酢酸とピリジンを加えて混合溶剤１を調製した。ステップ（１－６）で得られた樹脂を冷却し、そこに調製した混合溶剤１を加えた。添加終了後、温度を制御しながら１～２時間反応させた。ニンヒドリンで検出した樹脂の色が無色透明となった後、溶剤をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄した後溶剤をすっかり引き出した。
（１－８）樹脂の収縮：反応試験管にメタノールを加えて樹脂を収縮させ、ＤＣＭで樹脂を膨潤させ、収縮を２～４回繰り返し、その後、収縮後の樹脂を真空乾燥箱オーブンに入れて乾燥させた。
（１－９）ペプチドセグメントの切断：１５５ｍＬ ＴＦＡ、８ｍＬ ＴＩＳ（トリイソプロピルシラン）、４．１２ｍＬ ＥＤＴ（エタンジチオール）、２ｍＬ ＴＡ（チオアニソール）、４．１２ｍＬ水および２ｍＬアニソールをよく混合して溶解液を調製した。ペプチドセグメントの切断終了後、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下で溶剤を除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２の粗製品のペプチドを得た。
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ９３０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0078】
（２）ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ａｉｂ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨ（配列番号５で示されるポリペプチド配列）の調製には、Ｃ末端からＮ末端へ合成を行った。
（２－１）樹脂の前処理：２－ＣＴＣ樹脂を秤量し、ＤＣＭで樹脂を膨潤させた。
（２－２）Ｓ８アミノ酸の連結：Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを秤量しＤＣＭで溶解し、ＤＩＥＡを加えた。得られた混合物を反応試験管に加え、窒素を導入して、撹拌しながら１～３時間反応させた後、メタノールとＤＩＥＡとの混合溶液（ＤＩＥＡ：メタノール（ｖ／ｖ）＝１：９）を加えて、反応を１０～２０分間ブロックさせた。溶剤をすっかり引き出した後、樹脂をＤＣＭ、続いてＤＭＦで洗浄した。ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて２０～３０分間脱保護した。脱保護終了後、試薬をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄して溶剤をすっかり引き出した。ニンヒドリンで検出した樹脂の色が紫がかった黒色であり、次のステップに進んだ。
（２－３）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ９アミノ酸を連結した。ステップ（２－３）を繰り返して、Ｓ１０アミノ酸Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを連結した。
（２－４）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ１１アミノ酸を連結した。
（２－５）Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ１２アミノ酸を連結した。
（２－６）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを秤量し、Ｓ１３アミノ酸を連結した。
（２－７）（１－８）で示す工程で樹脂の収縮を行った。
（２－８）ペプチドセグメントの切断：１５５ｍＬ ＴＦＡ、８ｍＬ ＴＩＳ、４．１２ｍＬ ＥＤＴ、２ｍＬ ＴＡ、４．１２ｍＬ水および２ｍＬアニソールを均一に混合して溶解液を調製した。ペプチドセグメントの切断終了後、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下で溶剤を除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ａｉｂ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨの粗製品のペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ６３１．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
ペプチドセグメントの切断を完了し、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下でを溶剤除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、また、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントを得た。
（２－１）樹脂の前処理：２－ＣＴＣ樹脂を秤量し、ＤＣＭで樹脂を膨潤させた。
（２－２）Ｓ８アミノ酸の連結：Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを秤量しＤＣＭで溶解し、ＤＩＥＡを加えた。得られた混合物を反応試験管に加え、窒素を導入して、撹拌しながら１～３時間反応させた後、メタノールとＤＩＥＡとの混合溶液（ＤＩＥＡ：メタノール（ｖ／ｖ）＝１：９）を加えて、反応を１０～２０分間ブロックさせた。溶剤をすっかり引き出した後、樹脂をＤＣＭ、続いてＤＭＦで洗浄した。ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加えて２０～３０分間脱保護した。脱保護終了後、試薬をすっかり引き出し、ＤＭＦで樹脂を洗浄して溶剤をすっかり引き出した。ニンヒドリンで検出した樹脂の色が紫がかった黒色であり、次のステップに進んだ。
（２－３）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ９アミノ酸を連結した。ステップ（２－３）を繰り返して、Ｓ１０アミノ酸Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを連結した。
（２－４）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ１１アミノ酸を連結した。
（２－５）Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨを秤量し、（１－２）で示す工程でＳ１２アミノ酸を連結した。
（２－６）Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを秤量し、Ｓ１３アミノ酸を連結した。
（２－７）（１－８）で示す工程で樹脂の収縮を行った。
（２－８）ペプチドセグメントの切断：１５５ｍＬ ＴＦＡ、８ｍＬ ＴＩＳ、４．１２ｍＬ ＥＤＴ、２ｍＬ ＴＡ、４．１２ｍＬ水および２ｍＬアニソールを均一に混合して溶解液を調製した。ペプチドセグメントの切断終了後、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下で溶剤を除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ａｉｂ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨの粗製品のペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ６３１．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
ペプチドセグメントの切断を完了し、サンドコアファンネルでろ過し、減圧下でを溶剤除去した後、残りの液体にメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを加えて低温度で結晶化させた。遠心分離で結晶化溶液を除去し、また、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルで沈殿物を洗浄し、２５℃～３５℃下で真空乾燥させて、ペプチドセグメントを得た。
【0079】
（３）連結：実施例１のステップ（１－９）で調製された粗製品のペプチドＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２および実施例１のステップ（２－８）で調製された粗製品のペプチドＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ａｉｂ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨを秤量し精製水を加えて溶解した後、ＤＭＳＯを加えて反応させ、均一に混合した後、２０℃～３０℃に維持しながら撹拌して反応させた。ＨＰＬＣは反応の終わりを検出し、ポリペプチド（配列番号１０）の溶液を得た。
【0080】
（４）精製：実施例１のステップ（３）で得られたペプチドの粗溶液を０．４５μｍフィルターメンブレンでろ過した後、１０μｍのＣ－１８シリカゲルを充填した２０ｍｍ×１５０ｍｍカラムを使用して分取ＨＰＬＣで精製し、検出波長を２２０ｎｍである。移動相Ａを０．１％ＴＦＡとし、移動相Ｂをアセトニトリルとし、グラジエント溶離後、ポリペプチドを含有する生成物の画分を収集した。純度が９５．８％であった。収集した画分を合わせて、減圧下で溶剤を除去した後、ポリペプチド化合物を凍結乾燥した。得られた最終生成物を分析型ＲＰ－ＨＰＬＣ（保持時間）およびＬＣ－ＭＳより同定した。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １５５８．５［Ｍ＋Ｈ］＋。ＱＥにより同定解析したところ、得られたポリペプチド化合物の配列が配列番号に１０示す。
実施例２：活性ポリペプチド（配列番号１１）の調製
実施例２：活性ポリペプチド（配列番号１１）の調製
【0081】
【化16】
【0082】
（１）ペプチドセグメントＨ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨ（配列番号６で示されるポリペプチド配列）の調製：実施例１におけるステップ（２）の製造方法に従って、２－ＣＴＣ樹脂を使用し、順にＦｍｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを連結し、ペプチドセグメントＨ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨ粗製品のペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ７０２．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0083】
（２）連結：実施例１ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２および実施例２ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＨ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯＨを秤量し、精製水を加えて溶解した後、ＤＭＳＯを加えて反応させた。ＨＰＬＣは反応の終了を検出し、ポリペプチド（配列番号１１）の溶液を得た。
【0084】
（３）精製：実施例１のステップ（４）の方法により、フリーズドライポリペプチド化合物を調製した。得られた最終生成物を分析型ＲＰ－ＨＰＬＣ（保持時間）およびＬＣ－ＭＳより同定した。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １６２９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。ＱＥにより同定解析したところ、得られたポリペプチド化合物の配列が配列番号に１１示す。
実施例３：活性ポリペプチド（配列番号７）の調製
実施例３：活性ポリペプチド（配列番号７）の調製
【0085】
【化17】
【0086】
（１）ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｌ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｌ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ（配列番号２で示されるポリペプチド配列）の調製：実施例１におけるステップ（２）の製造方法に従って、２－ＣＴＣ樹脂を使用し、順にＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを連結し、ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｌ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｌ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨの粗製品ペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５４６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0087】
（２）連結：実施例１ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２および実施例３ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＨ２Ｎ－Ｌ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｌ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨを秤量し、精製水を加えて溶解した後、そしてＤＭＳＯを加えて反応させた。ＨＰＬＣは反応の終了を検出し、ポリペプチド（配列番号７）の溶液を得た。
【0088】
（３）精製：実施例１のステップ（４）の方法によりフリーズドライポリペプチド化合物を調製した。得られた最終生成物を分析型ＲＰ－ＨＰＬＣ（保持時間）およびＬＣ－ＭＳより同定した。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１４７３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。ＱＥにより同定解析したところ、得られたポリペプチド化合物の配列が配列番号に７示す。
実施例４：活性ポリペプチド（配列番号８）の調製
実施例４：活性ポリペプチド（配列番号８）の調製
【0089】
【化18】
【0090】
（１）ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ（配列番号３で示されるポリペプチド配列）の調製：実施例１におけるステップ（２）の製造方法に従って、２－ＣＴＣ樹脂を使用し、順にＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを連結し、ペプチドセグメントＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ粗製品のペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５４６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0091】
（２）連結：実施例１ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２および実施例４ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ（９０ｍｇ）を秤量し、精製水を加えて溶解した後、そしてＤＭＳＯを加えて反応させ、均一に混合した後３０℃～４０℃に保持しながら、撹拌して１０時間反応させた。ＨＰＬＣは反応の終了を検出し、ポリペプチド（配列番号８）の溶液を得た。
【0092】
（３）精製：実施例１のステップ（４）の方法によりフリーズドライポリペプチド化合物を調製した。得られた最終生成物を分析型ＲＰ－ＨＰＬＣ保持時間）およびＬＣ－ＭＳ より同定した。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １４７３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。ＱＥにより同定解析したところ、得られたポリペプチド化合物の配列が配列番号に８示すようなものであった。
実施例5：活性ポリペプチド（配列番号9）の調製
実施例5：活性ポリペプチド（配列番号9）の調製
【0093】
【化19】
【0094】
（１）ペプチドセグメントＨ２Ｎ －Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ （配列番号４で示されるポリペプチド配列）の調製：実施例１におけるステップ（２）の製造方法に従って、２－ＣＴＣ樹脂を使用し、順にＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔ－Ｂｕ）－ＯＨを連結し、ペプチドセグメントＨ２Ｎ －Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ粗製品のペプチドを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５４６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0095】
（２）連結：た実施例１ステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＡｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－ＮＨ２および実施例５のステップ（１）で調製された粗製品のペプチドＨ２Ｎ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨを秤量し、精製水を加えて溶解した後、そしてＤＭＳＯを加えて反応させた。ＨＰＬＣは反応の終了を検出し、ポリペプチド（配列番号９）の溶液を得た。
【0096】
（３）精製：実施例１のステップ（４）の方法によりフリーズドライポリペプチド化合物を調製した。得られた最終生成物を分析型ＲＰ－ＨＰＬＣ（保持時間）およびＬＣ－ＭＳより同定した。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １４７３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。ＱＥにより同定解析したところ、得られたポリペプチド化合物の配列が配列番号に９示す。
実施例６
実施例６
【0097】
上記の調製過程に従って、固相合成法を使用し、順にアミノ酸を連結し、Ｘペプチド鎖とＹペプチド鎖をそれぞれ調製し、最後、実施例１における連結方法に従って、チオール基縮合により、Ｘ鎖とＹ鎖を連結し、以下の配列番号１９～配列番号２２で示されるポリペプチド化合物を調製した。必要とされるアミノ酸原料はいずれも市販されている。
【0098】
（１）配列番号１９
（２）配列番号２０
（３）配列番号２１
（４）配列番号２２
【化20】
【化21】
【化22】
【化23】
【0099】
以上のポリペプチド化合物の他に、ポリペプチド化合物におけるＸ鎖の部分は、そのアミノ基末端とカルボキシル末端を連結して、環状ペプチドを調製することもできる。まず、実施例１における配列番号５と同じ又は類似の固相合成方法により、カルボキシル末端およびアミノ基末端が遊離しているＸ鎖を調製した。その後、適切なｐＨ下で、（Ｂｏｃ）２Ｏと反応させ、選択的にアミノ基を保護し、活性エステル法によりカルボキシ基端をｐ－ニトロフェノールエステルに調製し、ＴＦＡでアミノ酸のＢｏｃ保護基を除去し、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３と０．１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３を塩基とし、ジオキサンを溶剤とし、室温下で反応させ、２０％程度の収率で環状ペプチドＸを得た。
【0100】
最後、実施例１におけるペプチド鎖の連結方法に従って、環状ペプチドＸとＹ鎖をジスルフィド結合により連結し、以下の配列番号２３～配列番号２７で示されるポリペプチド化合物を得た。
（５）配列番号２３
（６）配列番号２４
（７）配列番号２５
（８）配列番号２６
（９）配列番号２７
效果実施例
（５）配列番号２３
【化24】
【化25】
【化26】
【化27】
【化28】
【0101】
（１）正常ラットの血清Ｃａ、ＰおよびＰＴＨに対する単回静脈内注射の効果
試験方法：体重２５０～２８０ｇのＳＰＦグレードのＳＤラットをランダムに７群分け、６群の投与群と１群のブランク対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ＝生理食塩水）であった。試験サンプルは生理食塩水で溶液を調製して投与し、被験化合物を０．５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇおよび４．５ｍｇ／ｋｇの投与量でそれぞれ単回尾静脈内（１ｍＬ／ｋｇ）に注射した。投与前の０時間、投与後の４、８および１６時間で血清カルシウム（ｍｍｏｌ／Ｌ）とリンのレベル（ｍｍｏｌ／Ｌ）を検出した。
試験方法：体重２５０～２８０ｇのＳＰＦグレードのＳＤラットをランダムに７群分け、６群の投与群と１群のブランク対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ＝生理食塩水）であった。試験サンプルは生理食塩水で溶液を調製して投与し、被験化合物を０．５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇおよび４．５ｍｇ／ｋｇの投与量でそれぞれ単回尾静脈内（１ｍＬ／ｋｇ）に注射した。投与前の０時間、投与後の４、８および１６時間で血清カルシウム（ｍｍｏｌ／Ｌ）とリンのレベル（ｍｍｏｌ／Ｌ）を検出した。
【0102】
データ処理：ｇｒａｐｈｐａｄ６．０ソフトウェアを使用して、各グループおよび各時点でのＰＴＨ、カルシウム、リンの濃度を統計的に分析した。
【0103】
実験結果：各群のラットの血中カルシウムレベルの変化の実験結果を下表１に、ラットの血中リンレベルの変化の実験結果を下表２に示す。
【0104】
【表1】
【0105】
表１から分かるように、本発明の実施例１～２で調製されたポリペプチドを正常ラットに単回尾静脈ボーラス注射により投与し、投与後の４時点、８時点および１６時間でそれぞれサンプルを採取し、投与前（０ｈ）と比べて、各投与量の投与群のラットの血中カルシウムレベルが０、４、８、１６時間で有意に減少した（Ｐ≦０．０１）。
【0106】
【表2】
【0107】
表２から分かるように、本発明の実施例１～２で調製されたポリペプチドを正常ラットに単回尾静脈ボーラス注射により投与し、血中リン濃度を増加させる効果を有した。投与前（０ｈ）と比べて、低投与量群（０．５ｍｇ／ｋｇおよび１．５ｍｇ／ｋｇ）ではラットの血中リンレベルが０～４時間に上昇し、かつ４時間で最高に上昇し、また、高投与量群（４．５ｍｇ／ｋｇ）では、０～８時間に上昇し、かつ８時間で最高に上昇した。
【0108】
（２）被験化合物のカルシウムセンサー受容体ＣＡＳＲカルシウム模倣剤の活性測定
ＣａＳＲ活性化実験において、均一系時間分解螢光（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ－Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ、ＨＴＲＦ）ＩＰ－１（ｍｙｏＩｎｏｓｉｔｏｌ １ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）競合法により、ＣａＳＲに対する実施例１のポリペプチドの効果を検出した。実験結果、実施例１のポリペプチドはＣａＳＲアゴニストの一種であり、１．２ｍＭのＣａ２＋濃度下でＨＥＫ２９３－ＣａＳＲ細胞株に対して有意なアゴニスト活性を示し、ＥＣ５０が８４．６８ｕＭであったこと、および、Ｃａ２＋が存在しなかった場合、ＨＥＫ２９３－ＣａＳＲ細胞株に対するアゴニスト活性が弱く、ＥＣ５０が９７９．６０ｕＭであったことが示された。このように、実施例１のポリペプチドがＣａＳＲを活性化する効果を有し、また、この活性化過程にＣａ２＋の相乗作用が必要である。
ＣａＳＲ活性化実験において、均一系時間分解螢光（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ－Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ、ＨＴＲＦ）ＩＰ－１（ｍｙｏＩｎｏｓｉｔｏｌ １ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）競合法により、ＣａＳＲに対する実施例１のポリペプチドの効果を検出した。実験結果、実施例１のポリペプチドはＣａＳＲアゴニストの一種であり、１．２ｍＭのＣａ２＋濃度下でＨＥＫ２９３－ＣａＳＲ細胞株に対して有意なアゴニスト活性を示し、ＥＣ５０が８４．６８ｕＭであったこと、および、Ｃａ２＋が存在しなかった場合、ＨＥＫ２９３－ＣａＳＲ細胞株に対するアゴニスト活性が弱く、ＥＣ５０が９７９．６０ｕＭであったことが示された。このように、実施例１のポリペプチドがＣａＳＲを活性化する効果を有し、また、この活性化過程にＣａ２＋の相乗作用が必要である。
【0109】
（３）５／６の腎摘出ラットの血漿ＰＴＨに対する被験化合物の効果
雄のＳＤラットを選択し、偽手術群と５／６腎摘出群（５／６Ｎｘ）に分けた。腎摘出群のラットに対して、５／６腎摘出術を行い、二次性副甲状腺機能亢進症ラットモデルの誘発を加速するために手術の２週間後に高リン食を与えた。高リン飼料を３週間与えた後、モデル化したラットを選択し、５／６Ｎｘ群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）、陽性対照薬のエテルカルセチド（３．０ｍｇ／ｋｇ）、実施例１の化合物（０．５、１．０、２．０、４．０ｍｇ／ｋｇ）という６つの群にランダムに分けた。皮下注射投与を毎週３回、連続６週間行った。それぞれ初回投与前、初回投与後、及び２、４、６週目の投与４時間後に、ラットから採血し、血漿と血清を分離し、各時点の血漿中のＰＴＨ含有量を検出した。
雄のＳＤラットを選択し、偽手術群と５／６腎摘出群（５／６Ｎｘ）に分けた。腎摘出群のラットに対して、５／６腎摘出術を行い、二次性副甲状腺機能亢進症ラットモデルの誘発を加速するために手術の２週間後に高リン食を与えた。高リン飼料を３週間与えた後、モデル化したラットを選択し、５／６Ｎｘ群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）、陽性対照薬のエテルカルセチド（３．０ｍｇ／ｋｇ）、実施例１の化合物（０．５、１．０、２．０、４．０ｍｇ／ｋｇ）という６つの群にランダムに分けた。皮下注射投与を毎週３回、連続６週間行った。それぞれ初回投与前、初回投与後、及び２、４、６週目の投与４時間後に、ラットから採血し、血漿と血清を分離し、各時点の血漿中のＰＴＨ含有量を検出した。
【0110】
【表3】
【0111】
５／６腎摘出群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）と比べて、実施例１（１．０、２．０、４．０ｍｇ／ｋｇ）投与群および陽性薬のエテルカルセチド（３．０ｍｇ／ｋｇ）のラットは、初回投与、連続投与の２、４、６週目の異なる時点で、投与４時間後、ラット血漿中のＰＴＨ含有量が有意に減少し、血漿ＰＴＨの減少が９０％以上と高かった。
【0112】
（４）実施例１のポリペプチドオステオゲニック成長ペプチド様活性の実証
ＣｙＱＵＡＮＴ細胞増殖検出キットを使用して、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１ Ｓｕｂｃｌｏｎｅ４および線維芽細胞ＮＩＨ／３Ｔ３に対する実施例１のポリペプチドのインビトロでの増殖効果を測定した。実験では、骨形成成長ペプチドＯＧＰを陽性対照として使用した。実施例１のポリペプチドとＯＧＰを以下の濃度として１０－８ｍｏｌ／Ｌ、１０－９ｍｏｌ／Ｌ、１０－１０ｍｏｌ／Ｌ、１０－１１ｍｏｌ／Ｌ、１０－１２ｍｏｌ／Ｌ、１０－１３ｍｏｌ／Ｌ、１０－１４ｍｏｌ／Ｌ、１０－１５ｍｏｌ／Ｌ、１０－１６ｍｏｌ／Ｌ調製した。細胞受試プレートの各ウェルから１００μＬの培地を廃棄し、２×ＣｙＱｕａｎｔ検出試薬を調製し、各ウェルに１００μＬの試薬を加え、細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターインキュベートに６０分間置いた。蛍光値はボトムリーディングモードで読み取た。励起発光波長が４８０／５３５ｎｍであった。
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（化合物ウェルの読取データ － ブランク対照ウェルの読取データ）／（基本対照ウェルの読取データ － ブランク対照ウェルの読取データ）×１００
ＣｙＱＵＡＮＴ細胞増殖検出キットを使用して、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１ Ｓｕｂｃｌｏｎｅ４および線維芽細胞ＮＩＨ／３Ｔ３に対する実施例１のポリペプチドのインビトロでの増殖効果を測定した。実験では、骨形成成長ペプチドＯＧＰを陽性対照として使用した。実施例１のポリペプチドとＯＧＰを以下の濃度として１０－８ｍｏｌ／Ｌ、１０－９ｍｏｌ／Ｌ、１０－１０ｍｏｌ／Ｌ、１０－１１ｍｏｌ／Ｌ、１０－１２ｍｏｌ／Ｌ、１０－１３ｍｏｌ／Ｌ、１０－１４ｍｏｌ／Ｌ、１０－１５ｍｏｌ／Ｌ、１０－１６ｍｏｌ／Ｌ調製した。細胞受試プレートの各ウェルから１００μＬの培地を廃棄し、２×ＣｙＱｕａｎｔ検出試薬を調製し、各ウェルに１００μＬの試薬を加え、細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターインキュベートに６０分間置いた。蛍光値はボトムリーディングモードで読み取た。励起発光波長が４８０／５３５ｎｍであった。
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（化合物ウェルの読取データ － ブランク対照ウェルの読取データ）／（基本対照ウェルの読取データ － ブランク対照ウェルの読取データ）×１００
【0113】
図１実験データは、１０－８から１０－１３Ｍの実施例１のポリペプチドは、骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１ Ｓｕｂｃｌｏｎｅ ４細胞の増殖を有意に刺激することができ、１０－８から１０－１６ＭのＯＧＰより増殖効果が顕著であった、ことを示す。実施例１のポリペプチドは、１０－８Ｍで線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３の増殖を有意に刺激することができ、その有効量が１０－８ＭのＯＧＰのそれに匹敵する。
【0114】
（５）アデニン強制経口投与ラットの皮質骨粗鬆症に対する実施例1のポリペプチドの効果
Ｙｏｋｏｚａｗｚ法を参照しながら、ＳＤラットにアデニン強制経口投与を行って慢性腎不全の動物モデルを確立し、高リン食を与えて二次性副甲状腺機能亢進症モデルを共に誘発し、実験が終了するまでこのように餌を与えていた。血漿中のＰＴＨの含有量に基づいてモデルラット化されたラットをスクリーニングした。ＰＴＨ含有量および体重に従って、モデルラット化されたラットを、生理食塩水群、エテルカルセチド（３．０ｍｇ／ｋｇ、生理食塩水に溶解した）、実施例１（１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、生理食塩水に溶解した）という５つの群にランダムに分け、毎週３回、連続６週間、ラットあたりに１．０ｍｌ／ｋｇで、皮下注射を行った。６週間後、ラットの左大腿骨を採取し、筋肉と結合組織を取り除き、大腿骨を４％ホルマリン溶液に入れ、２４時間後に、Ｍｉｃｒｏ ＣＴスキャンを実行し、データ分析を完了した。
Ｙｏｋｏｚａｗｚ法を参照しながら、ＳＤラットにアデニン強制経口投与を行って慢性腎不全の動物モデルを確立し、高リン食を与えて二次性副甲状腺機能亢進症モデルを共に誘発し、実験が終了するまでこのように餌を与えていた。血漿中のＰＴＨの含有量に基づいてモデルラット化されたラットをスクリーニングした。ＰＴＨ含有量および体重に従って、モデルラット化されたラットを、生理食塩水群、エテルカルセチド（３．０ｍｇ／ｋｇ、生理食塩水に溶解した）、実施例１（１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、生理食塩水に溶解した）という５つの群にランダムに分け、毎週３回、連続６週間、ラットあたりに１．０ｍｌ／ｋｇで、皮下注射を行った。６週間後、ラットの左大腿骨を採取し、筋肉と結合組織を取り除き、大腿骨を４％ホルマリン溶液に入れ、２４時間後に、Ｍｉｃｒｏ ＣＴスキャンを実行し、データ分析を完了した。
【0115】
【表4】
【0116】
アデニン誘発したＳＨＰＴラット模型ラットは、皮質骨粗鬆化が発生し、皮質骨多孔性が有意に増加した。アデニンモデル群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）のラットと比べて、実施例１投与群ラットの皮質骨多孔性が有意に減少した（表４に示している）。実施例１のポリペプチドを６週間連続投与すると、アデニン誘発したＳＨＰＴラットの皮質骨多孔性を有意に低減し、皮質骨密度を向上させることができ、その效果がエテルカルセチドよりも優れた。
【0117】
以上の内容は、好適な具体実施形態と合わせて本発明に対するさらなる詳細な説明である。本発明の具体的な実施がこれらの説明のみに限られると認めるのは不適切である。当業者にとって、本発明の思想を逸脱することなく、若干の簡単な推論又は置換を行うこともでき、これらも本発明の保護範囲に属するものと見なすべきである。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［項目１］下記の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される構造、又はその薬学的に許容される塩であるポリペプチド化合物。
Ｙ－ＩＤ－Ｘ 式（Ｉａ）又は
Ｘ－ＩＤ－Ｙ 式（Ｉｂ）
（式中、Ｙは、カルシウム感知受容体作動薬であり、
ＩＤは、ＸとＹを結合する分子内のジスルフィド結合又はリンカーであり、
Ｘは、オステオゲニック成長ペプチド様ペプチド、骨髄間葉系幹細胞刺激剤である。）
［項目２］前記Ｙは、下記の式（ＩＩａ）又は式（ＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）
式中、Ｘａａ７は、システイン、ホモシステイン、又はＳ－メチルシステインであり、
Ｘａａ８は、アラニン、又はアルギニンであり、
Ｘａａ９は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、アルギニン、アラニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、アラニンであり、
Ｘａａ１３は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
前記ペプチド鎖Ｙのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、
Ｘａａ８は、好ましくＤ－アラニン、又はＤ－アルギニンであり、
Ｘａａ９は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、好ましくＤ－アラニンであり、
Ｘａａ１３は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンである、項目１に記載のポリペプチド化合物。
［項目３］前記Ｘは、下記の式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４がグリシンであるか、Ｘａａ５がグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５がアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられ、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、
又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は遊離しているか又は化学的修飾されており、
Ｘａａ１は、好ましくＬ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、好ましくＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、好ましくＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、好ましくグリシンであり、Ｘａａ５はグリシンであり、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しないことが好ましく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであることが好ましい、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
［項目４］Ｘは、式（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）で示される構造を有する環状ペプチドであり、
Ｃｙｃｌｏ （Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６） （ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ （Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１） （ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン若しくはホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又は、Ｘａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ１は、好ましくＬ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、好ましくＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、好ましくＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、好ましくグリシンであり、Ｘａａ５はグリシンであり、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しないこと好ましく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであること好ましい、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
［項目５］前記Ｘ又はＹのアミノ基端の化学的修飾には、アシル化、スルホニル化、アルキル化及びＰＥＧ化による修飾が含まれ、前記Ｘ又はＹのカルボキシ基端の化学的修飾には、アミド化、スルホニル化及びＰＥＧ化による修飾が含まれる項目１～４のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物。
［項目６］前記アミノ基端の化学的修飾はアミノ基がアセチル化、ベンゾイル化、又はスルホニル化され、前記アミノ基端のアルキル化はＣ１－６アルキル化又はアラルキル化であり、前記カルボキシ基端の化学的修飾はカルボキシ基におけるＯＨがＮＨ２又はスルホンアミドで置換される、項目５に記載のポリペプチド化合物。
［項目７］前記ＩＤは、ＸとＹの間に形成された分子内ジスルフィド結合又はリンカーであり、
前記分子内ジスルフィド結合は、Ｘにおけるシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとＹにおけるシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとの間に形成されており、
前記リンカーは、アミノ基置換Ｃ１－８アルキル酸、ポリエチレングリコールポリマー鎖、又は１～１０個のアミノ酸からなるペプチドセグメントであり、前記ペプチドセグメントにおけるアミノ酸はプロリン、アルギニン、アラニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、グルタミン、アスパラギン及びグリシンから選ばれ、
又は、前記リンカーは、
（１）（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは０、１、２、又は３である）、
（２）Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ、
（３）Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、
（４）４－アミノ酪酸又は６－アミノカプロン酸、
（５）（ＰＥＧ）ｍ（ここで、ｍは１、２、３、４、又は５である）である、項目１～６のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物。
［項目８］Ｘは、下記の配列番号２～配列番号６及び配列番号１２～配列番号１８で示される構造を有するペプチド鎖である、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
（１）配列番号２
Ｈ２Ｎ-Ｌ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（２）配列番号３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（３）配列番号４
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（４）配列番号５
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（５）配列番号６
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（６）配列番号１２
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｈｉｓ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（７）配列番号１３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｐｒｏ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（８）配列番号１４
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（９）配列番号１５
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１０）配列番号１６
Ｃｙｃｌｏ（Ｌ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１１）配列番号１７
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｃｙｓ）
（１２）配列番号１８
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｔｙｒ）
［項目９］下記の配列番号７～配列番号１１及び配列番号１９～配列番号２７のうちの１つのポリペプチド化合物、又はその薬学的に許容される塩である、項目１に記載のポリペプチド化合物。
（１）配列番号７
（２）配列番号８
（３）配列番号９
（４）配列番号１０
（５）配列番号１１
（６）配列番号１９
（７）配列番号２０
（８）配列番号２１
（９）配列番号２２
（１０）配列番号２３
（１１）配列番号２４
（１２）配列番号２５
（１３）配列番号２６
（１４）配列番号２７
［項目１０］カルシウム感知受容体作動薬効果及び／又は骨形成成長ペプチド様効果を発揮する医薬品の製造における、項目１～９のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物の使用。
［項目１１］医薬品の製造における項目１～９のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物の使用において、
前記医薬品は、副甲状腺ホルモン上昇類疾患、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、パジェット病、変形性関節症、関節リウマチ、骨軟化症、軟骨石灰化症、軟骨無形成症、骨軟骨炎、嚢胞性骨形成不全症、先天性低ホスファターゼ症、線維性病変、線維性骨異形成症、多発性骨髄腫、溶骨性骨病変、人工関節周囲の骨溶解、歯周病、骨粗鬆症、骨代謝回転異常、高代謝回転型骨病変、慢性腎臓病－ミネラルおよび骨病気（ＣＫＤ－ＭＢＤ）のうちの少なくとも一種の疾患を予防及び／又は治療するために用いられ、
前記副甲状腺ホルモン上昇類疾患は、原発性副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進、三次性副甲状腺機能亢進であることが好ましく、
前記二次性副甲状腺機能亢進は、慢性腎臓病の血液透析及び／又は腹膜透析によって引き起こされる副甲状腺ホルモン上昇であることが好ましい、使用。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［項目１］下記の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で示される構造、又はその薬学的に許容される塩であるポリペプチド化合物。
Ｙ－ＩＤ－Ｘ 式（Ｉａ）又は
Ｘ－ＩＤ－Ｙ 式（Ｉｂ）
（式中、Ｙは、カルシウム感知受容体作動薬であり、
ＩＤは、ＸとＹを結合する分子内のジスルフィド結合又はリンカーであり、
Ｘは、オステオゲニック成長ペプチド様ペプチド、骨髄間葉系幹細胞刺激剤である。）
［項目２］前記Ｙは、下記の式（ＩＩａ）又は式（ＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｘａａ９－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３ 式（ＩＩａ）
Ｘａａ１３－Ｘａａ１２－Ｘａａ１１－Ｘａａ１０－Ｘａａ９－Ｘａａ８－Ｘａａ７ 式（ＩＩｂ）
式中、Ｘａａ７は、システイン、ホモシステイン、又はＳ－メチルシステインであり、
Ｘａａ８は、アラニン、又はアルギニンであり、
Ｘａａ９は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、アルギニン、アラニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、アラニンであり、
Ｘａａ１３は、アルギニン、リジン、又はヒスチジンであり、
前記ペプチド鎖Ｙのアミノ末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｙのカルボキシル末端は、遊離しているか又は化学的修飾されており、
Ｘａａ８は、好ましくＤ－アラニン、又はＤ－アルギニンであり、
Ｘａａ９は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１０は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１１は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンであり、
Ｘａａ１２は、好ましくＤ－アラニンであり、
Ｘａａ１３は、好ましくＤ－アルギニン、Ｄ－リジン、又はＤ－ヒスチジンである、項目１に記載のポリペプチド化合物。
［項目３］前記Ｘは、下記の式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド鎖であり、
Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６ （ＩＩＩａ）
Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１ （ＩＩＩｂ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４がグリシンであるか、Ｘａａ５がグリシンであるか、又はＸａａ４－Ｘａａ５がアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられ、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、
又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン又はホモシステインであり、
前記ペプチド鎖Ｘのアミノ末端は遊離しているか又は化学的修飾されており、前記ペプチド鎖Ｘのカルボキシル末端は遊離しているか又は化学的修飾されており、
Ｘａａ１は、好ましくＬ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、好ましくＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、好ましくＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、好ましくグリシンであり、Ｘａａ５はグリシンであり、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しないことが好ましく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであることが好ましい、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
［項目４］Ｘは、式（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）で示される構造を有する環状ペプチドであり、
Ｃｙｃｌｏ （Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｘａａ４－Ｘａａ５－Ｘａａ６） （ＩＩＩｃ）
Ｃｙｃｌｏ （Ｘａａ６－Ｘａａ５－Ｘａａ４－Ｘａａ３－Ｘａａ２－Ｘａａ１） （ＩＩＩｄ）
式中、Ｘａａ１は、チロシン、ホモチロシン、又は３－クロロチロシンであり、
Ｘａａ２は、システイン、ホモシステイン、Ｓ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンであり、
Ｘａａ３は、フェニルアラニン、トリプトファン、又はチロシンであり、
Ｘａａ４は、グリシンであり、
Ｘａａ５は、グリシンであり、
Ｘａａ２がシステイン又はホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しなく、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ５のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又はＸａａ５のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ２がＳ－メチルシステイン、２－アミノイソ酪酸、アルギニン、プロリン、グリシン、ホモアルギニン、リジン、シクロヘキシルアラニン、サルコシン、ノルロイシン、又はヒスチジンである場合、Ｘａａ６がシステイン若しくはホモシステインであり、Ｘａａ１のアミノ基とＸａａ６のカルボキシ基とがペプチド結合を形成するか、又は、Ｘａａ６のアミノ基とＸａａ１のカルボキシ基とがペプチド結合を形成し、
Ｘａａ１は、好ましくＬ－チロシン、Ｄ－チロシン、Ｄ－ホモチロシン、又は３－クロロ－Ｄ－チロシンであり、
Ｘａａ２は、好ましくＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンであり、
Ｘａａ３は、好ましくＬ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－トリプトファン、Ｄ－チロシン、又はＬ－チロシンであり、
Ｘａａ４は、好ましくグリシンであり、Ｘａａ５はグリシンであり、又はＸａａ４－Ｘａａ５はアミノ基置換Ｃ１－２０アルキルモノカルボン酸で置き換えられており、
Ｘａａ２がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインである場合、Ｘａａ６が存在しないこと好ましく、
Ｘａａ２がＳ－メチル－Ｄ－システイン、２－アミノイソ酪酸、Ｄ－アルギニン、Ｌ－アルギニン、Ｌ－プロリン、Ｄ－プロリン、グリシン、Ｄ－ヒスチジン、又はＬ－シクロヘキシルアラニンである場合、Ｘａａ６がＬ－システイン、Ｄ－システイン、Ｄ－ホモシステイン、又はＬ－ホモシステインであること好ましい、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
［項目５］前記Ｘ又はＹのアミノ基端の化学的修飾には、アシル化、スルホニル化、アルキル化及びＰＥＧ化による修飾が含まれ、前記Ｘ又はＹのカルボキシ基端の化学的修飾には、アミド化、スルホニル化及びＰＥＧ化による修飾が含まれる項目１～４のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物。
［項目６］前記アミノ基端の化学的修飾はアミノ基がアセチル化、ベンゾイル化、又はスルホニル化され、前記アミノ基端のアルキル化はＣ１－６アルキル化又はアラルキル化であり、前記カルボキシ基端の化学的修飾はカルボキシ基におけるＯＨがＮＨ２又はスルホンアミドで置換される、項目５に記載のポリペプチド化合物。
［項目７］前記ＩＤは、ＸとＹの間に形成された分子内ジスルフィド結合又はリンカーであり、
前記分子内ジスルフィド結合は、Ｘにおけるシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとＹにおけるシステイン、ホモシステイン又はＳ－メチルシステインとの間に形成されており、
前記リンカーは、アミノ基置換Ｃ１－８アルキル酸、ポリエチレングリコールポリマー鎖、又は１～１０個のアミノ酸からなるペプチドセグメントであり、前記ペプチドセグメントにおけるアミノ酸はプロリン、アルギニン、アラニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、グルタミン、アスパラギン及びグリシンから選ばれ、
又は、前記リンカーは、
（１）（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは０、１、２、又は３である）、
（２）Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ、
（３）Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、
（４）４－アミノ酪酸又は６－アミノカプロン酸、
（５）（ＰＥＧ）ｍ（ここで、ｍは１、２、３、４、又は５である）である、項目１～６のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物。
［項目８］Ｘは、下記の配列番号２～配列番号６及び配列番号１２～配列番号１８で示される構造を有するペプチド鎖である、項目１又は２に記載のポリペプチド化合物。
（１）配列番号２
Ｈ２Ｎ-Ｌ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（２）配列番号３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｌ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（３）配列番号４
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｃｙｓ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＯＨ
（４）配列番号５
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（５）配列番号６
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（６）配列番号１２
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｈｉｓ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（７）配列番号１３
Ｈ２Ｎ-Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ｐｒｏ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ-ＯＨ
（８）配列番号１４
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ａｉｂ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（９）配列番号１５
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｄ－Ａｒｇ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１０）配列番号１６
Ｃｙｃｌｏ（Ｌ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｌ－Ｃｙｓ）
（１１）配列番号１７
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｔｙｒ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｃｙｓ）
（１２）配列番号１８
Ｃｙｃｌｏ（Ｄ－Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｐｈｅ-Ｇｌｙ-Ｄ－Ｔｙｒ）
［項目９］下記の配列番号７～配列番号１１及び配列番号１９～配列番号２７のうちの１つのポリペプチド化合物、又はその薬学的に許容される塩である、項目１に記載のポリペプチド化合物。
（１）配列番号７
【化29-1】
【化29-2】
【化29-3】
【化29-4】
【化29-5】
【化29-6】
【化29-7】
【化29-8】
【化29-9】
【化29-10】
【化29-11】
【化29-12】
【化29-13】
【化29-14】
［項目１１］医薬品の製造における項目１～９のいずれか一項に記載のポリペプチド化合物の使用において、
前記医薬品は、副甲状腺ホルモン上昇類疾患、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、パジェット病、変形性関節症、関節リウマチ、骨軟化症、軟骨石灰化症、軟骨無形成症、骨軟骨炎、嚢胞性骨形成不全症、先天性低ホスファターゼ症、線維性病変、線維性骨異形成症、多発性骨髄腫、溶骨性骨病変、人工関節周囲の骨溶解、歯周病、骨粗鬆症、骨代謝回転異常、高代謝回転型骨病変、慢性腎臓病－ミネラルおよび骨病気（ＣＫＤ－ＭＢＤ）のうちの少なくとも一種の疾患を予防及び／又は治療するために用いられ、
前記副甲状腺ホルモン上昇類疾患は、原発性副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進、三次性副甲状腺機能亢進であることが好ましく、
前記二次性副甲状腺機能亢進は、慢性腎臓病の血液透析及び／又は腹膜透析によって引き起こされる副甲状腺ホルモン上昇であることが好ましい、使用。
【図1】
【配列表】