特許 7440663 長時間作用型ＧＬＰ－１およびグルカゴン受容体デュアルアゴニスト

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-02-19

(45)【発行日】2024-02-28

(54)【発明の名称】長時間作用型ＧＬＰ－１およびグルカゴン受容体デュアルアゴニスト

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/605 20060101AFI20240220BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240220BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 38/26 20060101ALI20240220BHJP

【ＦＩ】

C07K14/605 ZNA

A61K38/16

A61K47/60

A61P3/04

A61P3/10

A61K38/26

【請求項の数】 8

(21)【出願番号】P 2022565840

(86)(22)【出願日】2021-04-15

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-03

(86)【国際出願番号】 KR2021004747

(87)【国際公開番号】W WO2021221359

(87)【国際公開日】2021-11-04

【審査請求日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】10-2020-0052923

(32)【優先日】2020-04-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】513131590

【氏名又は名称】ドン－ア エスティ カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110003579

【氏名又は名称】弁理士法人山崎国際特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100173978

【弁理士】

【氏名又は名称】朴 志恩

(74)【代理人】

【識別番号】100118647

【弁理士】

【氏名又は名称】赤松 利昭

(74)【代理人】

【識別番号】100123892

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 忠雄

(74)【代理人】

【識別番号】100169993

【弁理士】

【氏名又は名称】今井 千裕

(72)【発明者】

【氏名】ヤン、チェ－スン

(72)【発明者】

【氏名】イ、キュン－ソク

(72)【発明者】

【氏名】チェ、ユ－ナ

(72)【発明者】

【氏名】キム、テ－ヒョン

(72)【発明者】

【氏名】ジュン、イル－フン

(72)【発明者】

【氏名】リュ、チェ－リム

(72)【発明者】

【氏名】イ、デ－ヨン

【審査官】上條 のぶよ

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１９／０３５６７２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】RSC Advances，2020年01月29日，Vol.10，p.4725-4732

【文献】Endocrinology，2009年，Vol.150, No.4，p.1712-1721

【文献】Journal of Medicinal Chemistry，2015年，Vol.58，p.7370-7380

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １４／６０５

Ａ６１Ｋ ３８／１６

Ａ６１Ｋ ４７／６０

Ａ６１Ｐ ３／０４

Ａ６１Ｐ ３／１０

Ａ６１Ｋ ３８／２６

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式Ｉで表されるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体。
＜化学式Ｉ＞
Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘ_１－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｉｂ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｘ２－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ（配列番号１４）
（前記式中、
Ｘ_１は、官能化されたＬｙｓであって、その側鎖に［（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）アセトイル）_２］－［γ－グルタミル］－［オクタデカノイル］（［（２－（２－（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈｏｘｙ）ａｃｅｔｏｙｌ）_２］－［ｇａｍｍａ ｇｌｕｔａｍｙｌ］－［ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｙｌ］）が結合している形態であり；
Ｘ_２は、官能化されたＬｙｓであって、その側鎖に親油性脂質またはスペーサ－親油性脂質またはポリマー性部分－スペーサ－親油性脂質またはスペーサ－ポリマー性部分－スペーサ－親油性脂質が結合している形態であり；
前記親油性脂質は、下記構造式（１）または（２）であり、

前記ポリマー性部分は、１～３個の２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）アセトイル（２－（２－（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈｏｘｙ）ａｃｅｔｏｙｌ）であり；
前記スペーサは、ｒ－ＧｌｕまたはＬｙｓである。）

【請求項2】

前記スペーサがＬｙｓの場合、アミノ酸残基のアミン基が親油性脂質またはポリマー性部分と共有結合されることを特徴とする、請求項１に記載のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体。

【請求項3】

前記スペーサがｒ－Ｇｌｕの場合、α－アミノ基が親油性脂質またはポリマー性部分と共有結合されることを特徴とする、請求項１に記載のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体。

【請求項4】

前記アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、下記構造の化合物１～７からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体。
化合物１

（式中、アミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸配列である）、

化合物２

（式中、アミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸配列である）、
化合物３

（式中、アミノ酸配列は、配列番号４のアミノ酸配列である）、
化合物４

（式中、アミノ酸配列は、配列番号５のアミノ酸配列である）、
化合物５

（式中、アミノ酸配列は、配列番号６のアミノ酸配列である）、
化合物６

（式中、アミノ酸配列は配列番号７のアミノ酸配列である）、
化合物７

（式中、アミノ酸配列は配列番号８のアミノ酸配列である）、
（式中、アミノ酸の略語は、Ａｌａ（Ａ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）である。）

【請求項5】

有効成分として請求項１に記載の化学式Ｉで表されるオキシントモジュリンペプチド類似体と、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む肥満及び過体重によって惹起または特徴付けられる病態の予防又は治療用医薬組成物。

【請求項6】

注射剤形で用いられることを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

有効成分として請求項１に記載の化学式Ｉで表されるオキシントモジュリンペプチド類似体と、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む肥満及び過体重を伴う非インシュリン依存型糖尿病の治療又は予防用医薬組成物。

【請求項8】

注射剤形で用いられることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体デュアルアゴニストの薬物動力学的活性を改善したアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体、並びにこれを含む肥満及び過体重、またはこれを伴う非インシュリン依存型糖尿病の予防又は治療に用いることができる医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

代謝性疾患（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）とは、ブドウ糖、脂肪、タンパク質などの代謝異常に起因する疾病であって、主にブドウ糖および脂肪代謝の異常から誘発される、癌、糖尿病、骨代謝疾患、脂肪肝、肥満、心血管系疾患などを通称するものである。２００１年に報告された米国の全国コレステロール教育プログラム（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ；ＮＣＥＰ）のａｄｕｌｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐａｎｅｌ ＩＩＩ（ＡＴＰＩＩＩ）または２０１２年に発表された国際糖尿病連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ；ＩＤＦ）による代謝性疾患の診断基準は、次のとおりである。(1)胴回りが男性で１０２または９４ｃｍ（それぞれＮＣＥＰまたはＩＤＦ）、女性で８８または８０ｃｍ（それぞれＮＣＥＰまたはＩＤＦ）以上の腹部肥満、(2)中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）１５０ｍｇ／ｄＬ以上の高中性脂肪血症、(3)ＨＤＬコレステロールが男性で４０ｍｇ／ｄＬ、女性で５０ｍｇ／ｄＬ以下、(4)血圧１３０／８５ｍｍＨｇ以上の高血圧、または(5)空腹時血糖（ｆａｓｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ）１１０ｍｇ／ｄＬ以上などの５つの危険因子のうち三つ以上を示す場合、代謝性疾患に分類することができる。

【0003】

世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ；ＷＨＯ）によれば、全世界の肥満有病率は、１９８０年から２０１４年の間に２倍以上増加したし、２０１４年には１８歳以上の成人の中で３９％（男性３８％、女性４０％）が過体重、１３％（男性１１％、女性１５％）が肥満であった。このような肥満及び過体重の根本的な原因には、カロリー摂取と消費との間のエネルギーの不均衡が挙げられ、脂肪が多くエネルギー密度が高い食事および現代社会における仕事の性格、交通手段の変化、都市化の増加などによる身体活動の低下が肥満の危険因子とされている。

【0004】

また、肥満に伴う疾患のうち、糖尿もその有病率が速やかに増加する趨勢にあり、１８歳以上の成人の中で１９８０年に４．７％から２０１５年に８．５％に上昇した。糖尿病有病率は、中産階級と低所得国で一層速やかに増えており、失明、腎不全、心臓まひ、脳卒中などの主要原因となる。

【0005】

グルカゴンは、膵膓のα細胞から生産されるホルモンであって、一般にブドウ糖新生合成及び肝臓に蓄えられているグリコーゲンを分解して血糖を上昇させる役割を果たす。蓄えられたグリコーゲンが枯渇すると、グルカゴンは肝臓及び腎臓でブドウ糖を再合成して食欲抑制に供し、かつ、蓄えられている中性脂肪（Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）を脂肪酸に分解させてエネルギー消費量を増加させることで、体重減少に影響を与えるものと知られている（Ｄｉａｂｅｔｅｓ．ｃｏ．ｕｋ．ｔｈｅ ｇｌｏｂａｌ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ， Ａｎｉｍ Ｓｃｉ Ｊ．２０１６；８７（９）：１０９０－１０９８）。

【0006】

ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）は、グルカゴン誘導体の一つであって、血糖を減少させる役目をするペプチドホルモンである。食後に小腸のＬ－細胞から分泌され、半減期が２分未満と非常に短く、ブドウ糖によって分泌が増加すれば膵膓のβ細胞からインシュリン分泌を誘導することにより、究極的に血糖を調節し且つβ細胞の機能を改善させる役目をするものと報告されている。また、グルカゴン分泌阻害、 空っぽの胃の抑制、飲食物の摂取を減少させる機能を有する（Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ．２００７；８７（４）：１４０９－１４３９）。

【0007】

Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋのリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）は、２型糖尿病及び肥満適応症向けに開発された治療剤であって、１日１回注射されるヒトＧＬＰ－１誘導体である。リラグルチドは、長時間作用型ＧＬＰ－１受容体アゴニストであって、内因性ＧＬＰ－１と同一の受容体に結合してインシュリン分泌を促進させることにより血糖を調節して食欲を減少させて体重増加を抑えるとともに、中性脂肪を低める作用をし、２型糖尿病向けとしてはビクトーザ（Ｖｉｃｔｏｚａ）、肥満向けとしてはサクセンダ（Ｓａｘｅｎｄａ）という商品名で、米国及びヨーロッパで発売された（Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｔｈｅｒ．２０１５；１３（７）：７５３－７６７）。リラグルチドのほかにも、エキセナチド（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）、リキシセナチド（Ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ）、アルビグルチド（Ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ）、デュラグルチド（Ｄｕｌａｇｌｕｔｉｄｅ）、セマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）などが糖尿病治療剤として開発された。しかし、これらのＧＬＰ－１受容体アゴニストの副作用としては、吐き気、嘔吐及び食欲減少、頭痛、便秘、及び腹部膨満感の発生などが報告されている（Ｋｏｒｅａｎ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；８７（１）：９－１３）。

【0008】

オキシントモジュリンは、グルカゴンの前駆体であるプログルカゴン（ｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ）に由来するペプチドであって、グルカゴンの完全な２９個のアミノ酸配列を含む３７個のアミノ酸ペプチドで構成されており、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体にいずれも結合する二重作用を有する。オキシントモジュリンは、非臨床実験で餌料摂取量、体重減少及びエネルギー消費増加、並びに糖代謝を向上させるものと報告されたことがあり（Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００９；５８（１０）：２２５８－２２６６）、臨床試験においても、過体重及び肥満患者に１日３回ずつ、４週間皮下投与をしたとき、平均２．３ｋｇの体重減少を示し（Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００５；５４：２３９０－２３９５）、プラシボ群との対比較における有意なインシュリン分泌及び血糖減少の効果も確認されたし（Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２０１３；６２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ａ４８）、また他の臨床試験では、オキシントモジュリンの持続的な注入による嘔吐や食欲促進などの副作用なしにエネルギー摂取を減少させることが確認されることにより（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ。２００３；８８：４６９６－４７０１）、オキシントモジュリンは、血糖調節、飲食物摂取の減少、満腹感増進などの機能を示すことができるから、肥満治療及び血糖調節を目的とする新しい治療法として脚光を浴びている（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．２０１４；３：２４１－２５１）。

【0009】

しかし、オキシントモジュリンは、ＧＬＰ－１と同様に、ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ－ＩＶ；ＤＰＰ－ＩＶ）によって切断されて生体内で不安定に極めて短い半減期を有する（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００３；２７８：２２４１８－２２４２３）。

【0010】

したがって、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体にバランスよく選択的に結合して薬理学的・治療学的側面からオキシントモジュリンの作用を長期間持続させるとともに各ホルモンペプチドの副作用を克服することができるＤＰＰ－ＩＶ耐性オキシントモジュリン誘導体に対する研究が報告されており（Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００９；５８（１０）：２２５８－２２６６）、メルク社（Ｍｅｒｃｋ）、ジーランド社（Ｚｅａｌａｎｄ）、メディミューン社（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、韓美薬品など多くの会社で先導物質に対する開発が進行中にある。

【0011】

大韓民国特許出願第２０１７－０１０３７９８号及び大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号には、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体に対して二重作用を有するアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体が開示されている。前記従来の技術に記載されているアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の中で、化合物３は内因性ホルモンオキシントモジュリンよりもＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体に対する優れた効能（ｐｏｔｅｎｃｙ）（ＥＣ５０＜１０ｐＭ）を有し、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体への活性に優れており、マウスのｉｎ ｖｉｖｏ１週間体重減少の評価において、対照物質であるリラグルチドよりも優れた体重減少効果を示す物質である。

【0012】

本発明者らは、前記化合物３を商業化するために開発する過程で、マウス薬動力学評価を行ったところ、半減期は３．３時間であって、メディミューン社（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）のＭＥＤＩ０３８２の半減期４．０時間と類似した半減期を有することを確認した（表６、図１）。ＭＥＤＩ０３８２は、現在１日１回注射剤として臨床研究を遂行中の物質であって、前記化合物３は、ＭＥＤＩ０３８２の半減期と比較時、１日１回注射剤形に開発可能であろう。しかし、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体デュアルアゴニストの１日１回剤形は、毎日注射を通じて投与しなければならないので、煩わしさと負担が存在する。

【0013】

したがって、本発明者らは、薬効を維持しつつ生体内半減期を増加させて便宜性を増大させることができるように、週１回注射剤形で投与することができる長時間作用型アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の開発が必要であることを認識した。

【0014】

本発明者らは、前記必要性に整合する長時間作用型ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体デュアルアゴニストの開発を研究した結果、大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号に開示されているアシル化されたオキシントモジュリンペプチド類似体である化合物３を改良して、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体への二重活性化能（ｄｕａｌ ＧＬＰ－１Ｒ／ＧｌｕｃａｇｏｎＲ ａｇｏｎｉｓｍ）を有し、代謝安定性を増大させて生体内半減期が長い長時間作用型アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を開発することにより、週１回注射剤形で投与することができる本発明を完成するに至った。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0015】

本発明の目的は、生体内半減期が増大したＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体への二重活性化能を有するアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を提供することであり、本発明の他の目的は、前記アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む肥満及び過体重、もしくは肥満または過体重を伴う非インシュリン依存型糖尿病によって惹起または特徴付けられる病態の予防又は治療用医薬組成物を提供することであり、本発明の別の目的は、前記アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を有効成分として含む週１回投与可能な注射剤形を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0016】

上記の課題を解決するために、本発明は下記化学式Ｉで表される新規のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を提供する。
＜化学式Ｉ＞
Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘ_１－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｉｂ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｘ２－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ（配列番号１４）
前記式中、
Ｘ_１は、官能化されたＬｙｓであって、その側鎖に［（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）アセトイル）_２］－［γ－グルタミル］－［オクタデカノイル］（［（２－（２－（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈｏｘｙ）ａｃｅｔｏｙｌ）_２］－［ｇａｍｍａ ｇｌｕｔａｍｙｌ］－［ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｙｌ］）が結合している形態であり；
Ｘ_２は、官能化されたＬｙｓであって、その側鎖に親油性脂質またはスペーサ－親油性脂質またはポリマー性部分－スペーサ－親油性脂質またはスペーサ－ポリマー性部分－スペーサ－親油性脂質が結合している形態であり；
親油性脂質は、下記構造式（１）または（２）であり、

ポリマー性部分は、１～３個の２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）アセトイル（２－（２－（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｅｔｈｏｘｙ）ａｃｅｔｏｙｌ）であり；
スペーサは、ｒ－ＧｌｕまたはＬｙｓである。

【0017】

本発明において、アミノ酸は、下記略語を併記した；
Ａｌａ（Ａ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）。

【0018】

本発明における用語「オキシントモジュリン（ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ）」とは、グルカゴンの前駆体であるプレグルカゴンから作られるペプチドを意味し、野生型のオキシントモジュリンは、ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ（配列番号１）のアミノ酸配列を有する。

【0019】

本発明におけるＸ_２の構成要素のうちの一つである親油性脂質は、脂質末端のアシル基がＬｙｓ側鎖またはスペーサのアミン基とアミドとの結合の形態で付着することができ、炭化水素鎖の末端炭素がカルボン酸の形態である場合、Ｃ１４～Ｃ１８飽和炭化水素鎖を含み、炭化水素鎖の末端炭素がアミノカルボン酸の形態である場合、Ｃ１８飽和炭化水素鎖を含む。

【0020】

スペーサはｒ－ＧｌｕまたはＬｙｓであり、スペーサがＬｙｓである場合にはアミノ酸残基のアミン基が、スペーサがｒ－Ｇｌｕである場合にはα－アミノ基が親油性脂質またはポリマー性部分と共有結合され得る。

【0021】

特定の理論によってその解釈を制限するわけではないが、前記化学式ＩのＸ_１のアシル化は、ペプチドのα螺旋構造を安定化させてＧＬＰ－１受容体または／及びグルカゴン受容体においてその選択性や薬理上の効能を増加させるものとみなされ（ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０１６；１１：３２４－３２８）、Ｘ_２を含む７個のアミノ酸末端は、（ＥＹＥＸ_２ＥＹＥ）血流内でアルブミンと結合することで、本発明の化合物が血流内の多様な分解酵素の基質として反応することを防止し、生体内半減期を向上させるものとみなされる（Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７；８：１６０９２）。

【0022】

前記化学式Ｉのペプチドの具現例には、化合物１（配列番号２）、化合物２（配列番号３）、化合物３（配列番号４）、化合物４（配列番号５）、化合物５（配列番号６）、化合物６（配列番号７）、化合物７（配列番号８）である。

【0023】

本発明の前記アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、その構造に存在する任意のアミン基の酸付加塩や任意のカルボキシ基のカルボン酸塩またはそのアルカリ付加塩として提供されることができる。

【0024】

また、本発明は、前記アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を有効成分とし、薬学的に許容可能な賦形剤を含む肥満及び過体重、または肥満または過体重を伴う非インシュリン依存型糖尿病の予防及び治療用医薬組成物に関するものである。

【0025】

本発明の用語「予防」とは、目的とする疾患の発病を抑制又は遅延させるすべての行為を意味する。また、本発明の用語「治療」とは、発生した疾病の症状を軽減、改善または緩和させるすべての行為を意味する。

【0026】

本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、グルカゴン受容体及びＧＬＰ－１受容体に対するデュアルアゴニストであって、飲食物摂取におけるＧＬＰ－１の効果と、脂肪代謝及びエネルギー消費におけるグルカゴンの効果の両方を示すので、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む肥満及び過体重の予防及び治療用医薬組成物は、過度に蓄積された脂肪の除去と飲食物摂取抑制との組み合わせられた効果を通じて、体重の調節において医学的に有利な効果を誘導することができる。

【0027】

また、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、血糖を減少させて肥満または過体重を伴う糖尿病の予防又は治療に用いられることができる。特に、肥満を伴う非インシュリン依存型糖尿病である２型糖尿病の治療に用いられることができる。特定の理論によってその解釈を制限するわけではないが、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、グルカゴン誘導体の一つであって血糖を減少させる役目をするＧＬＰ－１受容体への活性が高いため、究極的に血糖調節に有用である。

【0028】

したがって、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、肥満、病的肥満、術前病的肥満、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、肥満誘発性睡眠時無呼吸症候群、肥満を伴う糖尿病の治療及び予防などのような、過体重によって惹起または特徴付けられる任意の病態の直接または間接治療法の一環として単独で投与されるか、もしくは他の関連薬剤と併用投与されることができる。また、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、体重による効果の結果であるか、これに関連している可能性がある病態、例えば代謝症侯群、高血圧、動脈硬化誘発性脂質異常症、粥上動脈硬化症、動脈硬化症、冠状動脈心臓疾患、または脳卒中の予防のために単独で投与されるか、または他の関連薬剤と併用投与されることができる。

【0029】

また、本発明は、アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を有効成分として含む週１回投与可能な注射剤形を提供する。

【0030】

本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む注射剤形は、緩衝剤、保存剤、無痛化剤、可溶化剤、等張化剤、安定化剤などを混合して使用することができ、単位投薬アンプルまたは多数回投薬形態で製造することができる。

【0031】

本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号に記載されたアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体よりも、改善された薬動力学（生体内半減期）を示す。そのため、本発明で改善された生体内半減期は、１日１回注射剤の短所を克服した週１回注射剤のような長時間作用型ペプチド類似体であって、使い勝手を向上させることができる。

【0032】

さらに、本発明における「投与」とは、適切な方法で患者に治療用途の物質を導入することを含み、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、薬物が目的の組職に到逹して目的とする効能を奏することができる限り、多様な剤形の形態で多様な経路を介して投与されることができる。すなわち、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与のほかにも、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与などが可能であり、その剤形および投与方法が限定されない。

【0033】

本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、薬剤学的に許容可能な担体を含むことができる。薬剤学的に許容される担体は、経口投与時には結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料などを使うことができ、局所投与用の場合には、基剤、賦形剤、滑剤、保存剤などを多様に使うことができ、担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシア、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムまたは鉱物油などが挙げられる。

【0034】

本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含む医薬組成物は、注射剤形の以外にも、前述した担体と混合して多様に製造されることができる。例えば、経口投与時には錠剤、トローチ、カプセル、エリクサー、サスペンション、シロップ、ウェハーなどの形態で製造することができ、それ以外にも溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性製剤などに剤形化してもよい。

【0035】

本発明による投与量または服用量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、排泄率及び疾患の重症度によってその範囲が様々であり、成人を基準とする投与量は、１日当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇであることができる。

【発明の効果】

【0036】

本発明は、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体の両者ともに対して活性を有し、生体内半減期が増大した長時間作用型アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を提供する。特に、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、野生型オキシントモジュリンだけでなく、従来のアシル化されたオキシントモジュリンペプチド類似体（大韓民国特許出願第１０－２０１８－００９５７１７号、アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体）に比べて、生体内半減期が非常に優れるという特徴を有している。

【0037】

したがって、本発明は、生体内半減期が増大した長時間作用型アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を含めて週１回注射可能なので、１日１回注射剤の短所である毎日注射を打たなければならないという煩わしさと負担を克服し、使い勝手を向上させることができるのみならず、一次的に、肥満または過体重によって惹起または特徴付けられる病態の予防又は治療に有用に適用でき、ひいては、肥満または過体重を伴う非ンシュリン依存性糖尿の予防又は治療に用いられることができる。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物１、化合物２または化合物７のマウスにおける１週間繰り返し体重減少の薬効評価の結果を示すグラフであって、図１ａは体重減少の結果、図１ｂは累積飼料摂取量の結果を示すグラフである。

【図2】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物３のマウスにおける１週間繰り返し体重減少の薬効評価の結果を示すグラフであって、図２ａは体重減少の結果、図２ｂは累積飼料摂取量の結果を示すグラフである。

【図3】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物４、化合物５または化合物６のマウスにおける１週間繰り返し体重減少の薬効評価の結果を示すグラフであって、図３ａは体重減少の結果、図３ｂは累積飼料摂取量の結果を示すグラフである。

【図4】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のマウスにおける単回投与後の薬動力学の結果を示すグラフである。

【図5】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のサルにおける単回投与後の薬動力学の結果を示すグラフである。

【図6】本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のマウスにおける耐糖能改善効果の検証結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0039】

以下、本発明に対するより具体的な内容を下記実施例及び実験例によって説明する。これらの実施例は、本発明に対する理解を助けるためのものに過ぎず、如何なる意味であれ、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の合成
本発明の一部のアミノ酸が含まれたペプチドと定型的なペプチド配列は、商業化されたペプチド合成会社、例えば米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙ社やＢａｃｈｅｍ社、または韓国のＡｎｙｇｅｎ社を通じて合成及び購買可能である。

【0040】

本発明でアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を合成するために、全自動合成装置であるｐｒｏｔｅｉｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製のＳｙｍｐｈｏｍｙ Ｘ（合成スケール：０．１ｍｍｏｌ）モデルを利用して合成し、本発明によって合成されたアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物１（配列番号２）～化合物７（配列番号８）の構造は、表１及び表２に示した。具体的な合成過程は、次の通りである。

【0041】

Ｆｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ（１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（ｎ－ｍｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ）（２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（７ｍｌ）の混合液をＦｍｏｃ脱保護レジン（ｒｅｓｉｎ）に入れて、室温で１時間撹拌させる。反応液を排出させ、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－Ｄｉｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｎａｍｉｄｅ）７ｍｌで２回洗浄する。２０％ピぺリジン（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）ＤＭＦ溶液（５ｍｌ）でＦｍｏｃ脱保護（ｃｌｅａｖａｇｅ）反応を室温で５分２回行った後、ＤＭＦ（７ｍｌ）で６回洗浄する。この過程を、全自動合成装置を用いて繰り返しながらアミノ酸をカップリング（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）させる。

【0042】

Ｌｙｓ側鎖の合成は、Ｆｍｏｃ－Ｋ（ｄｄｅ）－ＯＨまたはＦｍｏｃ－Ｋ（Ａｌｌｏｃ）－ＯＨを用いてカップリングし、最後のＨｉｓは、Ｂｏｃ－Ｈｉｓ（ｔｒｔ）－ＯＨを用いてカップリングする。官能化されたＬｙｓ側鎖の合成は、２％ヒドララジン（ｈｙｄｒａｌａｚｉｎｅ）またはテトラキス（ｔｅｔｒａｋｉｓ）（トリフェニルホスフィン）パラジウム）（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）ｐａｌｌａｄｉｕｍ（０）を用いて保護化されたｄｄｅまたはＡｌｌｏｃを脱保護後、目的とする側鎖部分（ＰＥＧ２、ｒＥ、Ｋ、Ｃ１４～１８の２価酸など）をカップリングさせる。

【0043】

前記で得られたペプチドレジン（ｐｅｐｔｉｄｅ－ｒｅｓｉｎ）０．１ｍｍｏｌに試薬（Ｒｅａｇｅｎｔ）Ｋ（トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、水、チオアニソール（ｔｈｉｏａｎｉｓｏｌｅ）、１，２－エタンジチオール（８７．５、５．０、５．０、２．５））溶液８ｍｌを５～１０℃に冷却した後に入れて室温で２～３時間撹拌させる。ドレン（ｄｒａｉｎ）後、少量のＴＦＡでレジンを洗浄し、余液を合わせてジエチルエーテル１００ｍｌに入れて結晶化させた後、生成された固体を濾過して粗（ｃｒｕｄｅ）ペプチドを得る。得られた粗ペプチドを分取（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）ＨＰＬＣで精製して目的化合物を得る。

【0044】

分子量分析は島津製作所製のＡＸＩＭＡ Ａｓｓｕｒａｎｃｅ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを利用し、マトリックスはＣＨＣＡ（α－Ｃｙａｎｏ－４－ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）を用いた。

【0045】

【表1】

【0046】

【表2】

【0047】

＜比較例１＞アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の合成
本発明との比較のために、構造的に類似性を有するアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を実施例１の方法で合成した。下記比較例の化合物８は、大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号に記載されている化合物３であって、Ｃ－末端の７個アミノ酸（ＥＹＥＸ２ＥＹＥ）を有さないペプチド類似体であり、比較例の化合物９は、比較例の化合物８に文献（ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０１６；１１：３２４－３２８）で言及したリガンド（ｌｉｇａｎｄ）を導入したペプチド類似体であり、比較例の化合物１０と比較例の化合物１１は、Ｘ２の親油性脂質であって、それぞれＣ１４とＣ１６の炭素鎖の末端にアミノカルボキシル基を有するペプチド類似体であり、比較例の化合物１２は、Ｘ２の親油性脂質であって、Ｃ１６がポリマー性部分として連結されたペプチド類似体である。前記比較例の化合物８～比較例の化合物１２の構造は、表３及び表４に示した。

【0048】

【表3】

【0049】

【表4】

【0050】

＜実験例１＞ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体の活性化能の検証
細胞にヒトＧＬＰ－１またはグルカゴン受容体を一時的に過発現させて、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体が受容体を活性化させることで増加する環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）が、順次に環状アデノシン一リン酸反応性プローモーター（ＣＲＥ）を活性化させると、その以後に増加するルシフェラーゼの活性度を各受容体活性化に対する効能の意味で評価した。

【0051】

陽性対照薬物としては、内因性リガンドＧＬＰ－１またはグルカゴンをそれぞれの評価に用い、比較例としては、前記化合物の比較例８～１２のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体を合成してこれを比較例とした。

【0052】

細胞は、中国ハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ－Ｋ１）にヒトＧＬＰ－１またはグルカゴン発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ社製）をホタルルシフェラーゼ（ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）またはレニラルシフェラーゼ（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）の発現を誘導し得るそれぞれのプラスミドＤＮＡとともにリポフェクタミンプラス試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉａｍｉｎｅ Ｐｌｕｓ ｒｅａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて前記細胞に一時的にトランスフェクションさせた。３時間のトレンスフェクション後、１０％小胎児血清（ＦＢＳ）を含む栄養培地（α－ＭＥＭ）に交換した。翌日に、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体及び０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むα－ＭＥＭ培地に交換し、６時間後、細胞が浸漬されている培地と同量の二重ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｄｕａｌ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ ｒｅａｇｅｎｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を加えて連続的にホタルルシフェラーゼ及びレニルラルシフェラーゼの活性を測定した。ホタルルシフェラーゼ活性をレニルラルシフェラーゼ活性に補正してトレンスフェクションに対する効率を算出した。

【0053】

受容体の活性化能は、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体に対する多重濃度評価を実施して本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のＧＬＰ－１またはグルカゴンの最大効能に対する相対的活性化度（％）を求めて５０％活性化を示す濃度（ＥＣ_５０）を、非線形回帰分析を利用して算出した値を表５に示した。

【0054】

【表5】

【0055】

同実験を通じて、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の化合物は、野生型オキシントモジュリンと同様に、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体に対する二重活性を示していることが分かり、最大効能（ｅｆｆｉｃａｃｙ）の側面から内因性ホルモンであるＧＬＰ－１及びグルカゴンが有する十分な活性を示した。

【0056】

＜実験例２＞本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の１週間繰り返し体重減少の薬効評価
本実験は、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の体重減少の薬効を確認するために、雄の実験用マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ｍｏｕｓｅ）に高脂肪を含有している食餌を供給し、高脂肪食餌によって肥満が誘導されたマウスを利用して、実験前の体重によって群分離後に評価した。本発明の実施例のうち、化合物１、化合物２及び化合物７は、それぞれ０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬが含有された滅菌注射用蒸溜水に３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量となるように調製し、表６に記載のように１日１回総７日間皮下注射した。毎日１回一定した時間に体重及び飼料摂取量を測定して、初期体重対比ペプチド類似体の経時的な体重減少の薬効を確認し、その結果を図１ａ及び図１ｂに示した。

【0057】

【表6】

【0058】

同実験の結果、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物１、化合物２及び化合物７は、初期体重対比それぞれ－４４．９％、－２６．９％、及び－６．８％の有意な体重変化が観察されたし、累積飼料消費量は、ｖｅｈｉｃｌｅ対照群対比それぞれ７５％、４６％、及び１０％減少した。

【0059】

＜実験例３＞本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の１週間繰り返し体重減少の薬効評価
本実験は、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の体重減少の効果を確認するために、雄の実験用マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ｍｏｕｓｅ）に高脂肪を含有している食餌を供給し、高脂肪食餌によって肥満が誘導されたマウスを利用して実験前の体重によって群分離後に評価した。本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のうち、化合物３は、０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬが含有された滅菌注射用蒸溜水に３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量となるように調製した後、表９に記載のように、１日１回総７日間皮下注射した。毎日１回一定した時間に体重及び飼料摂取量を測定して初期体重対比経時的な体重減少の薬効を確認し、その結果を図２ａ及び図２ｂに示した。

【0060】

【表7】

【0061】

同実験の結果、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物３を注射した群の体重は、初期数値対比－１６．１％の有意な変化が観察され、累積飼料消費量は、ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照群対比４０％水準に減少した。

【0062】

＜実験例４＞本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の１週間繰り返し体重減少の薬効評価
本実験は、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の体重減少の薬効を確認するために、雄の実験用マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ｍｏｕｓｅ）に高脂肪を含有している食餌を供給し、高脂肪食餌によって肥満が誘導されたマウスを利用して実験前の体重によって群を分離した後に評価した。本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のうち、化合物４、化合物５または化合物６は、それぞれ０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬが含有された滅菌注射用蒸溜水に３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量となるように調製し、表８に記載のように、１日１回総７日間皮下注射した。毎日１回一定した時間に体重及び飼料摂取量を測定して初期体重対比アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の経時的な体重減少の薬効を確認し、その結果を図３ａ及び図３ｂに示した。

【0063】

【表8】

【0064】

同実験の結果、本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物４、化合物５及び化合物６は、初期体重対比それぞれ－２４．３％、－３０．３％、及び－２６．９％の有意な体重変化が観察されたし、累積飼料消費量は、ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照群対比それぞれ６７％、８３％及び７５％減少した。

【0065】

＜実験例５＞単回のマウスにおける薬動力学の評価
本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体に対するマウス薬動力学の評価のためにＩＣＲマウスを用いた。本発明によって製造されたアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物１、化合物２、化合物３、または化合物７を、０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ ＥＬが含有された滅菌注射用蒸溜水に３０ｎｍｍｏｌ／ｋｇ用量となるように調製した後、ＩＣＲマウスに皮下注射し、投与後に指定された時間に採血して血漿薬物濃度の分析を通じて薬動力学指標を算出し、その結果を表９及び図４に示した。

【0066】

【表9】

【0067】

前記表９及び図４から分かるように、実験の結果、本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の４種（化合物１、化合物２、化合物３、化合物７）は、比較例の化合物８（大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号の化合物３）及び比較例ＭＥＤＩ０３８２対比６時間以上の長い半減期を示しており、新規のアルブミンリガンドの導入による化学的安定性の改善を通じて単一アシル化されたオキシントモジュリンペプチド類似体の比較例の化合物８よりも遥かに半減期が改善されたことを確認した。

【0068】

その上、比較例の化合物８の半減期は、１日１回注射剤として開発中の比較例ＭＥＤＩ０３８２の半減期と類似し、このことから、比較例の化合物８は１日１回注射剤としてのみ開発が可能であるということを確認することができる。これに対し、本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の４種は、比較例の化合物８よりも改善されたＰＫ半減期を示し、週１回注射剤として開発されたＳｅｍａｇｌｕｔｉｄｅと類似した半減期を示した。よって、前記本発明のアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、週１回剤形の長時間作用型薬物として開発が可能な物質であることを確認した。

【0069】

＜実験例６＞単回のサルにおける薬動力学評価
本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体のサルにおける薬動力学の評価のために、カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）を用いた。本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６または化合物７を、０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬが含有された滅菌注射用蒸溜水に１００ｎｍｏｌ／ｋｇ用量となるように調製した後、カニクイザルに単回皮下注射し、投与後に指定された時間に採血して血漿薬物濃度の分析を通じて薬動力学指標を算出し、その結果を表１０及び図５に示した。

【0070】

【表10】

【0071】

前記表１０及び図５から分かるように、同実験の結果、本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の７種（化合物１～７）は、比較例の化合物の４種及び１日１回注射剤として開発中の比較例のＭＥＤＩ０３８２対比１２時間以上の長い半減期を示し、新規のアルブミンリガンドの導入による化学的安定性の改善を通じて、遥かに半減期が改善されたことを確認した。特に、化合物３及び化合物７は、サルＰＫ半減期が２４時間以上で週１回注射剤として開発されたＳｅｍａｇｌｕｔｉｄｅと類似した半減期を示し、週１回剤形の長時間作用型薬物への開発が可能な物質である。

【0072】

比較例の化合物９は、比較例の化合物８（大韓民国特許出願第２０１８－００９５７１７号の化合物３）に、文献（Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１７；８：１６０９２）で言及したアルブミンリガンドを導入したペプチド類似体であって、半減期が１２時間未満であったし、このことから、文献のアルブミンリガンドの導入だけでは長時間作用型（ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ）ペプチド類似体を開発することができないことが分かる。

【0073】

ペプチド類似体の骨格番号３４のＬｙｓ側鎖に、末端がアミノカルボキシル基の形態の親油性脂質を有する比較例の化合物１０、比較例の化合物１１、化合物７は、それぞれ、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８の炭素鎖長を有している。化合物７は、半減期の時間が２４時間以上であるのに対し、比較例の化合物１０及び比較例の化合物１１は、１２時間未満を示し、親油性脂質の末端がアミノカルボキシ基である場合、炭素鎖長がＣ１８である場合にのみ長い半減期を有することが分かる。

【0074】

ペプチド類似体の骨格番号３４のＬｙｓ側鎖に、末端がカルボキシル基の形態の親油性脂質を有する化合物１、化合物２、化合物３は、それぞれ、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８の炭素鎖長を有している。これらの物質は、いずれも１２時間以上の半減期を示し、特に、化合物３は２４時間以上の半減期を示した。長い半減期を有するために、親油性脂質の末端は、カルボキシ基置換体を有することが好ましく、炭素鎖長が長いほどより良い効果を奏する。

【0075】

ペプチド類似体の骨格番号３４のＬｙｓ側鎖に、親油性脂質がスペーサとポリマー性部分との組み合わせにより結合した化合物４、化合物５、化合物６は、比較例の物質と比較して、半減期時間が１２時間～２４時間未満で長い半減期を示したのに対し、比較例の物質１２は、親油性脂質がポリマー性部分として連結されるにもかかわらず、１２時間未満のより短い半減期を示した。ポリマー性部分が半減期に与える影響よりも、親油性脂質の末端の影響の方が大きいことが分かる。

【0076】

＜実験例７＞マウスにおける耐糖能改善効果の検証
本実験は、雄の実験用マウス（ＩＣＲ ｍｏｕｓｅ）に、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の耐糖能改善効果を、食後血糖調節能改善効果の意味で評価した。実験用マウスを実験前日に絶食させた後、本発明の実施例によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物２、化合物３または化合物７を、０．１％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬを含有する滅菌注射用蒸溜水に調製して、ブドウ糖投与６時間前に皮下注射した。アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の注射６時間後にブドウ糖溶液を経口投与し、ブドウ糖溶液投与直前及びブドウ糖溶液投与後２時間の間指定された時間に尾静脈を介して全血の血糖を測定した。その結果は、経時的な血糖曲線の曲線下面積（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ；ＡＵＣ）を算出してビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照群の血糖ＡＵＣ対比アシル化オキシントモジュリンペプチド類似体の血糖ＡＵＣを百分率で算出し、その結果を図６に示した。

【0077】

図６から分かるように、同実験の結果、本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体である化合物２、化合物３または化合物７は、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ用量でグルコース対照群対比、それぞれ４２．１％、２６．７％または３３．９％の有意な血糖ＡＵＣ減少を示した。本発明によるアシル化オキシントモジュリンペプチド類似体は、化学的安定性による半減期の改善とともに、ＧＬＰ－１及びグルカゴン受容体への活性を通じて血糖改善及び体重減少に有効であることが分かる。

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【図3a】

【図3b】

【図4】

【図5】

【図6】

【配列表】

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