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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-02-27
(45)【発行日】2024-03-06
(54)【発明の名称】皮膚疾患の予防、改善または治療用医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 35/74 20150101AFI20240228BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240228BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240228BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240228BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240228BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240228BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240228BHJP
C12N 1/20 20060101ALI20240228BHJP
【ＦＩ】
A61K35/74 A
A61P17/00
A61P17/04
A61P17/06
A61P29/00
A61P37/02
A61P37/08
C12N1/20 E ZNA
【請求項の数】
15
(21)【出願番号】P 2020571188
(86)(22)【出願日】2020-02-03
(86)【国際出願番号】 JP2020003957
(87)【国際公開番号】W WO2020162405
(87)【国際公開日】2020-08-13
【審査請求日】2022-08-03
(31)【優先権主張番号】P 2019017882
(32)【優先日】2019-02-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２９年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、「革新的先端研究開発支援事業インキュベートタイプ（ＬＥＡＰ）」「腸内細菌株カクテルを用いた新規医薬品の創出」委託研究開発、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02845
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02846
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02847
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02848
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02849
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02850
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02851
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02852
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02853
(73)【特許権者】
【識別番号】503359821
【氏名又は名称】国立研究開発法人理化学研究所
(73)【特許権者】
【識別番号】598121341
【氏名又は名称】慶應義塾
(74)【代理人】
【識別番号】110001070
【氏名又は名称】弁理士法人エスエス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】伊東 可寛
(72)【発明者】
【氏名】本田 賢也
(72)【発明者】
【氏名】天谷 雅行
(72)【発明者】
【氏名】川上 英良
【審査官】川合 理恵
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／０１７３８９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１８－５１５４８８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００６－３４２１４７（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／１５６９１６（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記（ａ）を有効成分とし、アンピシリン感受性である細菌がS. cohniiの生菌である、皮膚炎または乾癬の治療、改善または予防用医薬組成物。（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体
【請求項2】
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記S. cohniiの１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列であるか、
または配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列に対して少なくとも９０％以上の配列同一性を有する配列からなる、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記S. cohniiが、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の一以上の種から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記アンピシリン感受性である細菌が、ヒトに由来する細菌である、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記皮膚炎が、アトピー性皮膚炎である、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記皮膚炎が、ＩＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎である、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記皮膚炎が、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎である、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記皮膚炎が、イミキモドにより惹起される皮膚炎である、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
S. cohniiを培養して得られる生菌を有効成分として取得する工程、および前記生菌を有効量含む医薬組成物を調製する工程を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項11】
有効成分として、アンピシリン感受性である細菌の生菌を含み、前記アンピシリン感受性である細菌がS. cohniiである、皮膚炎または乾癬治療剤。
【請求項12】
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、請求項１１に記載の皮膚炎または乾癬治療剤。
【請求項13】
皮膚炎または乾癬の治療用医薬を製造するためのアンピシリン感受性である細菌の生菌の使用であって、前記細菌がS. cohniiである、使用。
【請求項14】
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、請求項１３に記載の使用。
【請求項15】
グルココルチコイド応答遺伝子の発現を亢進させる、受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、またはＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３で特定される、S. cohniiに属する細菌株。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、皮膚疾患の予防、改善または治療用医薬組成物等に関する。
【背景技術】
【0002】
ヒトや動物などでは、皮膚や粘膜など外界と接する部分には一定の微生物群が存在することが知られており、このような細菌群は常在細菌叢（norma1 bacterial flora）と称される。常在細菌叢に含まれる細菌の種類や割合は、生物種、個体、身体箇所によって様々である。また、このような常在細菌叢が、宿主の恒常性や免疫応答に対して非常に大きな役割を果たしており、消化管や皮膚などにおける常在細菌叢の変化が様々な炎症や疾患と関連するということが近年明らかになりつつある。
【0003】
アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis；AD）は強いかゆみと発疹が繰り返しあらわれる皮膚疾患であるが、その発症機構については明確には判っておらず、また複数の要因が関連しているとされている。アトピー性皮膚炎等の皮膚に異常が生じる皮膚疾患は、痒みなどの身体的苦痛はもとより、身体的外観の悪化の原因となり、患者のＱＯＬを低下させるため、皮膚疾患を改善できる方策が広く求められている。
【0004】
ここで、アトピー性皮膚炎の患者においては、皮膚における「常在細菌叢の擾乱」（dysbiosis)が見られることが報告されている。アトピー性皮膚炎の患者の皮膚における常在細菌叢においては、健康な人間の皮膚における常在細菌叢よりも黄色ブドウ球菌(スタフィロコッカス・アウレウス：Staphylococcus aureus)の割合が高いことが知られており、当該細菌の増殖が病勢と関連することが報告されている。例えば、アトピー性皮膚炎病態マウスにおいて、病勢が落ち着いた状態の皮膚においては、別のStaphylococcus属の細菌（以下、属名としてS.と略記される場合がある）が常在細菌叢において優位となり、また、これらの細菌の一部はS. aureusに対する抗菌ペプチドを産生していることが報告されている（非特許文献１）。
【0005】
さらに非特許文献２においては、出生後早期におけるブドウ球菌の皮膚への定着が、アトピー性皮膚炎発症リスクの低下と相関することが報告されており、生後１２ヶ月の皮膚炎非発症児の皮膚の細菌叢においてはStaphylococcus cohniiやStaphylococcus epidermidis（表皮ブドウ球菌）が優位であること、表皮ブドウ球菌は病原菌に対する宿主の免疫応答を惹起することが知られている。しかし、皮膚常在細菌叢と宿主やその皮膚疾患等との関係や皮膚常在細菌叢が皮膚疾患に与える影響や機序など、いまだ不明な点が多い。
【0006】
表皮における顆粒層の最外層（ＳＧ１）に発現する膜貫通型タンパク質であるＴｍｅｍ７９は、トランスゴルジ装置と共局在するタンパク質であり、細胞外へのタンパク質や脂質の輸送と関連して働くタンパク質である。Ｔｍｅｍ７９が変異を起こしたマウスは皮膚において異常な角質層が形成され、皮膚炎を自然発症することが報告されている（非特許文献３）。また、アイルランド人の遺伝子多型解析において、Ｔｍｅｍ７９の遺伝子多型とアトピー性皮膚炎との関連が知られている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【文献】Antimicrobials from human skin commensal bacteria protect against Staphylococcus aureus and are deficient in atopic dermatitis (Sci. Transl. Med. 2017 Feb 22; 9(378)).
【文献】Skin microbiome before development of atopic dermatitis: Early colonization with commensal staphylococci at 2 months is associated with a lower risk of atopic dermatitis at 1 year（J. Allergy Clin. Immunol. 2017 Jan; 139(1): 166-172）
【文献】日本臨床免疫学会会誌 37(4), p.370b, 2014
【文献】Tmem79/Matt is the matted mouse gene and is a predisposing gene for atopic dermatitis in human subjects (J. Allergy Clin. Immunol. 2013 Nov; 132(5):1121-9)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は、Ｔｍｅｍ７９ノックアウトモデルマウス(以下、「Ｔｍｅｍ７９-/-マウス」または「Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス」と称す)の皮膚を解析することで皮膚の菌叢による皮膚炎への影響を検討し、皮膚炎に対して抑制的な菌を同定し、そのような菌に由来する医薬組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0009】
発明者らはＴｍｅｍ７９ＫＯマウスの、皮膚炎が惹起される過程において、宿主の免疫応答や炎症が抑制される場面に優位となる菌を絞り込み、皮膚常在菌の一種であるStaphylococcus属(ブドウ球菌属)の細菌が皮膚炎に対して予防、改善または治療的効果を有することを明らかにした。さらにこれらの菌は宿主に作用し、宿主におけるグルココルチコイド遺伝子発現を亢進することを見出した。
【0010】
すなわち、本発明は例えば以下の［１］～［８０］を提供する。
[１]
下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
[２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[１]に記載の医薬組成物。
[３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[１]または[２]に記載の医薬組成物。
[４]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[１]～[３]のいずれかに記載の医薬組成物。
[５]
前記アンピシリン感受性である細菌の１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、
配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、
または配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列に対して少なくとも９０％以上の配列同一性を有する配列からなる、[１]～[４]のいずれかに記載の医薬組成物。
[６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、受託号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７の一以上から選択される、[１]～[５]のいずれかに記載の医薬組成物。
[７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. cohniiである、[１]～[６]のいずれかに記載の医薬組成物。
[８]
前記S. cohniiの１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、
配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列であるか、
または配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列に対して少なくとも９０％以上の配列同一性を有する配列からなる、[７]に記載の医薬組成物。
[９]
前記S. cohniiが、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の一以上の種から選択される、[７]または[８]に記載の医薬組成物。
[１０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、ヒトに由来する細菌である、[１]～[９]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、生菌、死菌またはそれらの混合物である、[１]～[１０]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１２]
皮膚疾患治療、改善または予防用である、[１]～[１１]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１３]
前記皮膚疾患が、皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１４]
前記皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１５]
前記皮膚疾患が、ＩＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１６]
前記皮膚疾患が、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１７]
前記皮膚疾患が、イミキモドにより惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１８]
前記皮膚疾患が、乾癬である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１９] 前記皮膚疾患が、皮膚自己免疫疾患である、[１２]に記載の医薬組成物。
[２０]
[１]～[１９]のいずれかに記載の医薬組成物の製造方法。
[２１]
アンピシリン感受性である細菌が含まれる、皮膚疾患の治療用、皮膚疾患の改善用、皮膚疾患の予防用、前記細菌の増殖用、および皮膚の状態の改善用から選択される少なくとも一以上の用途に用いられる、活性化剤。
[２２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[２１]に記載の活性化剤。
[２３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[２１]または[２２]に記載の活性化剤。
[２４]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[２１]～[２３]のいずれかに記載の活性化剤。
[２５]
有効成分としてステロイド生合成関連タンパク質をさらに含む、[２１]～[２４]のいずれかに記載の活性化剤。
[２６]
前記ステロイド生合成関連タンパク質がスクアレン合成酵素である、[２５]に記載の活性化剤。
[２７]
有効成分として抗S. aureus抗体を含む、アンピシリン感受性である細菌の活性化剤。
[２８]
有効成分として、抗S. aureus抗体、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む、S. aureusの抑制剤。
[２９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[２８]に記載のS. aureusの抑制剤。
[３０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[２８]または[２９]に記載のS. aureusの抑制剤。
[３１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[２８]～[３０]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[２８]～[３１]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３３]
有効成分として抗S. aureus抗体を含む、[２８]～[３２]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３４]
有効成分として、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む、皮膚疾患治療剤。
[３５]
前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌である、[３４]に記載の皮膚疾患治療剤。
[３６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[３４]または[３５]に記載の皮膚疾患治療剤。
[３７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[３４]～[３６]のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
[３８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[３４]～[３７]のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
[３９]
抗S. aureus抗体、ならびにアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を塗布する、S. aureusの増殖抑制方法。
[４０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[３９]に記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[３９]または[４０]に記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[３９]～[４１]のいずれかに記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[３９]～[４２]のいずれかに記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４４]
S.cohniiの細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を塗布する、S. aureusの増殖抑制方法。
[４５]
アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を用いる、グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[４５]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[４５]または[４６]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[４５]～[４７]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. cohniiおよびS.lentusの一以上である、[４５]～[４８]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５０]
前記グルココルチコイド応答遺伝子がＦｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３から選択される一以上である[４５]～[４９]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５１]
前記グルココルチコイド応答遺伝子がステロイド生合成関連タンパク質をコードする遺伝子である、[４５]～[５０]のいずれかに記載に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５２]
前記ステロイド生合成関連タンパク質がスクアレン合成酵素である、[５１]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５３]
皮膚疾患を有する生物の、皮膚に存在する菌叢の分析方法。
[５４]
前記皮膚疾患を有する生物が、Ｔｍｅｍ７９-/-マウスである、[５３]に記載の菌叢の分析方法。
[５５]
前記皮膚疾患を有する生物が、ＳＰＦ（specific pathogen free）動物である、[５３]または[５４]に記載の菌叢の分析方法。
[５６]
皮膚疾患を有する生物のための治療方法の選択を補助するための方法であって、
（１）前記生物の疾患部位から採取した皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率を算出する工程、
（２）前記比率が基準値より高い場合において下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする医薬組成物を選択する工程、
を含む治療方法の選択を補助するための方法。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
[５７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[５６]に記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[５８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[５６]または[５７]に記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[５９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[５６]～[５８]のいずれかに記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[６０]
前記基準値が、（ｉ）前記皮膚疾患を有する生物と同種の生物であって、皮膚疾患を有さない個体の皮膚検体中におけるS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率の平均値または（ｉｉ）前記皮膚疾患を有する生物の疾患部位以外から採取した皮膚検体中におけるS. aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率である、[５６]～[５９]のいずれかに記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[６１]
皮膚疾患を有する生物における皮膚疾患の治療についての補助情報を取得する方法であって、
（１）前記皮膚疾患を有する生物であって皮膚疾患治療前の生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、
（２）皮膚疾患治療後の前記生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、
（３）工程（１）で測定した前記比率と、工程（２）で測定した前記比率とを比較する工程、
を含む補助情報を取得する方法。
[６２]
皮膚疾患の治療における使用のための抗S. aureus抗体および／またはステロイド生合成関連タンパク質。
[６３]
皮膚疾患の治療用医薬を製造するための、抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上の使用。
[６４]
抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法。
[６５]
皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[６５]に記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[６５]または[６６]に記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[６５]～[６７]のいずれかに記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６９]
皮膚疾患の治療における使用のためのS. cohniiの菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[７０]
皮膚疾患の治療用医薬を製造するためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上の使用。
[７１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[７０]に記載の使用。
[７２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[７０]または[７１]に記載の使用。
[７３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[７０]～[７２]のいずれかに記載の使用。
[７４]
前記細菌がS. cohniiである、[７０]～[７３]のいずれかに記載の使用。
[７５]
アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法。
[７６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[７５]に記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[７５]または[７６]に記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[７５]～[７７]のいずれかに記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７９]
前記細菌が、S. cohniiである、[７５]～[７８]のいずれかに記載の皮膚疾患を治療する方法。
[８０]
受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、またはＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３で特定される、S. cohniiに属する細菌株。
[１]
下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
[２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[１]に記載の医薬組成物。
[３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[１]または[２]に記載の医薬組成物。
[４]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[１]～[３]のいずれかに記載の医薬組成物。
[５]
前記アンピシリン感受性である細菌の１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、
配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、
または配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列に対して少なくとも９０％以上の配列同一性を有する配列からなる、[１]～[４]のいずれかに記載の医薬組成物。
[６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、受託号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７の一以上から選択される、[１]～[５]のいずれかに記載の医薬組成物。
[７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. cohniiである、[１]～[６]のいずれかに記載の医薬組成物。
[８]
前記S. cohniiの１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、
配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列であるか、
または配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列に対して少なくとも９０％以上の配列同一性を有する配列からなる、[７]に記載の医薬組成物。
[９]
前記S. cohniiが、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の一以上の種から選択される、[７]または[８]に記載の医薬組成物。
[１０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、ヒトに由来する細菌である、[１]～[９]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、生菌、死菌またはそれらの混合物である、[１]～[１０]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１２]
皮膚疾患治療、改善または予防用である、[１]～[１１]のいずれかに記載の医薬組成物。
[１３]
前記皮膚疾患が、皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１４]
前記皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１５]
前記皮膚疾患が、ＩＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１６]
前記皮膚疾患が、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１７]
前記皮膚疾患が、イミキモドにより惹起される皮膚炎である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１８]
前記皮膚疾患が、乾癬である、[１２]に記載の医薬組成物。
[１９] 前記皮膚疾患が、皮膚自己免疫疾患である、[１２]に記載の医薬組成物。
[２０]
[１]～[１９]のいずれかに記載の医薬組成物の製造方法。
[２１]
アンピシリン感受性である細菌が含まれる、皮膚疾患の治療用、皮膚疾患の改善用、皮膚疾患の予防用、前記細菌の増殖用、および皮膚の状態の改善用から選択される少なくとも一以上の用途に用いられる、活性化剤。
[２２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[２１]に記載の活性化剤。
[２３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[２１]または[２２]に記載の活性化剤。
[２４]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[２１]～[２３]のいずれかに記載の活性化剤。
[２５]
有効成分としてステロイド生合成関連タンパク質をさらに含む、[２１]～[２４]のいずれかに記載の活性化剤。
[２６]
前記ステロイド生合成関連タンパク質がスクアレン合成酵素である、[２５]に記載の活性化剤。
[２７]
有効成分として抗S. aureus抗体を含む、アンピシリン感受性である細菌の活性化剤。
[２８]
有効成分として、抗S. aureus抗体、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む、S. aureusの抑制剤。
[２９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[２８]に記載のS. aureusの抑制剤。
[３０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[２８]または[２９]に記載のS. aureusの抑制剤。
[３１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[２８]～[３０]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[２８]～[３１]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３３]
有効成分として抗S. aureus抗体を含む、[２８]～[３２]のいずれかに記載のS. aureusの抑制剤。
[３４]
有効成分として、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む、皮膚疾患治療剤。
[３５]
前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌である、[３４]に記載の皮膚疾患治療剤。
[３６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[３４]または[３５]に記載の皮膚疾患治療剤。
[３７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[３４]～[３６]のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
[３８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[３４]～[３７]のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
[３９]
抗S. aureus抗体、ならびにアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を塗布する、S. aureusの増殖抑制方法。
[４０]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[３９]に記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[３９]または[４０]に記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[３９]～[４１]のいずれかに記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S.cohniiである、[３９]～[４２]のいずれかに記載のS. aureusの増殖抑制方法。
[４４]
S.cohniiの細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を塗布する、S. aureusの増殖抑制方法。
[４５]
アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を用いる、グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[４５]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[４５]または[４６]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[４５]～[４７]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[４９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. cohniiおよびS.lentusの一以上である、[４５]～[４８]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５０]
前記グルココルチコイド応答遺伝子がＦｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３から選択される一以上である[４５]～[４９]のいずれかに記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５１]
前記グルココルチコイド応答遺伝子がステロイド生合成関連タンパク質をコードする遺伝子である、[４５]～[５０]のいずれかに記載に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５２]
前記ステロイド生合成関連タンパク質がスクアレン合成酵素である、[５１]に記載のグルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法。
[５３]
皮膚疾患を有する生物の、皮膚に存在する菌叢の分析方法。
[５４]
前記皮膚疾患を有する生物が、Ｔｍｅｍ７９-/-マウスである、[５３]に記載の菌叢の分析方法。
[５５]
前記皮膚疾患を有する生物が、ＳＰＦ（specific pathogen free）動物である、[５３]または[５４]に記載の菌叢の分析方法。
[５６]
皮膚疾患を有する生物のための治療方法の選択を補助するための方法であって、
（１）前記生物の疾患部位から採取した皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率を算出する工程、
（２）前記比率が基準値より高い場合において下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする医薬組成物を選択する工程、
を含む治療方法の選択を補助するための方法。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
[５７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[５６]に記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[５８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[５６]または[５７]に記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[５９]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[５６]～[５８]のいずれかに記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[６０]
前記基準値が、（ｉ）前記皮膚疾患を有する生物と同種の生物であって、皮膚疾患を有さない個体の皮膚検体中におけるS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率の平均値または（ｉｉ）前記皮膚疾患を有する生物の疾患部位以外から採取した皮膚検体中におけるS. aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率である、[５６]～[５９]のいずれかに記載の、治療方法の選択を補助するための方法。
[６１]
皮膚疾患を有する生物における皮膚疾患の治療についての補助情報を取得する方法であって、
（１）前記皮膚疾患を有する生物であって皮膚疾患治療前の生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、
（２）皮膚疾患治療後の前記生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、
（３）工程（１）で測定した前記比率と、工程（２）で測定した前記比率とを比較する工程、
を含む補助情報を取得する方法。
[６２]
皮膚疾患の治療における使用のための抗S. aureus抗体および／またはステロイド生合成関連タンパク質。
[６３]
皮膚疾患の治療用医薬を製造するための、抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上の使用。
[６４]
抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法。
[６５]
皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[６５]に記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[６５]または[６６]に記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[６５]～[６７]のいずれかに記載の細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[６９]
皮膚疾患の治療における使用のためのS. cohniiの菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物。
[７０]
皮膚疾患の治療用医薬を製造するためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上の使用。
[７１]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[７０]に記載の使用。
[７２]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[７０]または[７１]に記載の使用。
[７３]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[７０]～[７２]のいずれかに記載の使用。
[７４]
前記細菌がS. cohniiである、[７０]～[７３]のいずれかに記載の使用。
[７５]
アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法。
[７６]
前記アンピシリン感受性である細菌が、フシジン酸耐性菌である、[７５]に記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７７]
前記アンピシリン感受性である細菌が、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）である、[７５]または[７６]に記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７８]
前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される、[７５]～[７７]のいずれかに記載の皮膚疾患を治療する方法。
[７９]
前記細菌が、S. cohniiである、[７５]～[７８]のいずれかに記載の皮膚疾患を治療する方法。
[８０]
受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、またはＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３で特定される、S. cohniiに属する細菌株。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、特定の皮膚常在菌に由来する医薬組成物により皮膚疾患を制御することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
以下、図中のＳＰＦ ＷＴは本明細書中のＳＰＦ－ＷＴと同義である。同様に、ＳＰＦ Ｔｍｅｍ７９-/-はＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-と、ＧＦ Ｔｍｅｍ７９-/-はＧＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-と、ＧＦ ＷＴはＧＦ－ＷＴと同義である。
【図3B】図３ＢはＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚を用いて行った細菌叢のメタ１６Ｓ解析の結果および臨床スコアを用いたスピアマンの相関解析の結果および皮膚炎増悪（臨床スコア高）と逆相関のある菌の一覧である。
【図6】図６ＡはＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウス、ＳＰＦ－ＷＴマウス、ＧＦ(無菌：germ-free)環境下におけるＴｍｅｍ７９-/-マウス（ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウス）、およびＧＦ-ＷＴマウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化を示したグラフである。図６Ｂおよび図６Ｃは、各マウスにおけるＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞中のγδＴ細胞およびＣＤ４Ｔ細胞の割合をそれぞれ示したグラフである。
【図7】図７ＡはＲＡＧ２ノックアウト（Ｒａｇ２-/-）かつＴｍｅｍ７９-/-マウス（獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９-/-マウス）およびＲａｇ２+/-かつＴｍｅｍ７９-/-マウスにおける皮膚を用いた臨床スコアの経時的変化を示したグラフである。図７Ｂは各マウスの皮膚をＨｉｓｔｏ染色による病理組織検査の顕微鏡像を示したものである。
【図8】図８Ａは実験フローを示した模式図である。図８ＢはS. aureus、 S. epidermidisまたはStaphylococcus lentus(S. lentus)により作製したノトバイオートＴｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化を示したグラフである。
【図9】図９Ａは実験フローを示した模式図である。図９Ｂは抗生物質（ＡＢｘ）であるアンピシリン（Ａｍｐ）またはフシジン酸（ＦＡ）を接種したＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化を示したグラフである。図９Ｃは各抗生物質を含む培地中で皮膚から採取した細菌を培養したときの各培地の写真であり、図９ＤおよびＥは各細菌のコロニー数をそれぞれ示したグラフである。
【図10】図１０Ａは実験フローを示した模式図である。図１０ＢおよびＣはS. aureus、Corynebacterium mastitidis（C.mastitidis）、またはS. cohniiを接種したＧＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウスまたはＧＦ－ＷＴマウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化をそれぞれ示すグラフである。
【図11】図１１Ａは実験フローを示した模式図である。図１１Ｂ～Ｄは、あらかじめＧＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚にS. cohniiまたはS. epidermidisを接種し、該接種後１４日目にS. aureusを接種したときの、各マウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化、並びに、S. aureus接種後２１日目における頸部リンパ節（ＣＬＮ）の重さ、およびS. aureusの菌量をそれぞれ示したグラフである。図１１Ｅは、各マウスの皮膚をＨｉｓｔｏ染色した病理組織の顕微鏡像である。左図はS. aureus接種２１日後におけるマウス皮膚の顕微鏡像、中図はS. aureusに先だってS. cohniiを接種したマウス皮膚の顕微鏡像、左図はS. aureusに先だってS. epidermidisを接種したマウスの顕微鏡像である。。
【図12】図１２Ａは実験フローを示した模式図である。図１２ＢはＧＦ－Ｔｍｅｍ７９-/-マウスにS. aureusを接種後５、６、７、１２、１３および１４日目にS. cohnii またはS. epidermidisを接種したマウスの皮膚における臨床スコアの経時的変化を示したグラフであり、図１２ＣおよびＤはS. aureus接種後２１日目の頸部リンパ節の重さおよびS. aureusの菌量をそれぞれ示したグラフである。
【図13】図１３はS. cohnii、C.mastitidisまたはS. aureusを接種した各ノトバイオートＴｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚から抽出したtotal RNAを用いたRNA-sequencing解析の結果である。
【図14】図１４はS. cohnii、C.mastitidisまたはS. aureusを接種した各ノトバイオートＴｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚から抽出したtotal RNAを用いて行ったエンリッチメント解析の結果である。
【図15】図１５はS. cohniiを接種したノトバイオートＴｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚から抽出したtotal RNAを用いた遺伝子発現カスケード解析(Upstream analysis)の結果である。
【図17】図１７Ａ～ＣはS. aureus、S. cohnii、S. epidermidis、およびS. lentusを接種した各ノトバイオートＴｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚から抽出したtotal RNAを逆転写し、得られたcDNAを用いてｑＰＣＲを行うことで、グルココルチコイド応答遺伝子Ｆｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３の発現量をそれぞれ測定した結果である。
【図19】図１９Ａは実験フローを示した模式図である。図１９Ｂ～Ｄはイミキモドクリーム（ＩＭＱ）を塗布したＧＦ－ＷＴ（ＧＦ Ｂ６Ｎ）マウスに対して、既存のS. cohnii株である２Ａ１（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、以下の図で同じ）、および新規に単離したS. cohnii株である７Ｂ１（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、配列番号１、以下の図で同じ）、７Ｃ１（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、配列番号３、以下の図で同じ）、および７Ｆ１（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、以下の図で同じ）を接種したときの、耳の肥厚、リンパ節（ｄＬＮ）の重さ、およびＦＡＣＳによる好中球の数をそれぞれ計測した結果である。
【図20】図２０Ａは実験フローを示した模式図である。図２０ＢはノトバイオートＧＦ Ｔｍｅｍ７９-/-マウスの皮膚に、S. cohnii由来の細菌株である、２Ａ１および７Ｃ１を接種し、該接種後１４日目にS. aureusを接種したときの臨床スコアの経時的変化、図２０ＣおよびＤはS. aureusを接種後２１日目の頸部リンパ節の重さ、およびS. aureusの菌量をそれぞれ示したグラフである。
【図22】図２２Ａは実験フローを示した模式図である。図２２ＢおよびＣはイミキモドクリーム（ＩＭＱ）を塗布したＧＦ－ＷＴマウスの炎症に対するスクアレンの効果を耳の腫脹およびリンパ節腫脹に基づいて検証した結果である。
【図23】図２３Ａは実験フローを示した模式図である。図２３ＢおよびＣはイミキモドクリームを塗布したＳＰＦ－ＷＴマウスの炎症に対するヒト由来のS. cohnii １０Ｂ１株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３、配列番号７）の炎症抑制効果を、耳の腫脹およびリンパ節腫脹の程度に基づいて検証した結果である。
【図24】図２４Ａは実験フローを示した模式図である。図２４ＢはS. cohnii、S. epidermidis、またはそれらの併用によるS. aureus依存性炎症抑制効果について臨床スコアを用いて検証した結果であり、図２４Ｃは頸部リンパ節腫脹の程度に基づいて検証した結果である。
【図25】図２５ＡはS. cohnii、S. epidermidis、またはそれらの併用によるS. aureus依存性炎症予防効果について臨床スコアを用いて検証した結果であり、図２５Ｂはリンパ節腫脹の程度に基づいて検証した結果である。
【図26】図２６Ａ～ＣはＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに、S. aureusのみ、S. aureusおよびS. cohnii、S. aureusおよびS. epidermidis、ならびにS. aureus、S. cohniiおよびS. epidermidisの接種をそれぞれ行い、それぞれの菌量変化について観察したものである。
【発明を実施するための形態】
【0013】
本発明の「医薬組成物」は、下記（ａ）～（ｄ）から選択される少なくとも一以上を有効成分とする、医薬組成物である。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
前記アンピシリン感受性である細菌は、さらにフシジン酸耐性菌でもあることが好ましい。また、前記アンピシリン感受性である細菌は、Staphylococcus属の細菌であることが好ましい。ただし、Staphylococcus属の細菌としては、S. aureusではないことが好ましい。すなわち、前記アンピシリン感受性である細菌としては、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）が特に好ましい様態として挙げられる。なお、本明細書においては、「医薬組成物」以外の発明についても記載しているが、前記「医薬組成物」以外の発明においても、アンピシリン感受性である細菌が記載されている場合には、アンピシリン感受性である細菌としては前記の細菌が好ましい。また、前記「医薬組成物」以外の発明としては、さらに医薬部外品や化粧品等も含まれるが、当該医薬部外品や化粧品の成分として、前記アンピシリン感受性である細菌、好ましくは前記アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）が含まれ得る。
＜アンピシリン感受性である細菌＞
前記アンピシリン感受性である細菌は、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、S. cohniiまたはS.lentusから選択されることがより好ましく、S. cohniiが選択されることが最も好ましい。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
前記アンピシリン感受性である細菌は、さらにフシジン酸耐性菌でもあることが好ましい。また、前記アンピシリン感受性である細菌は、Staphylococcus属の細菌であることが好ましい。ただし、Staphylococcus属の細菌としては、S. aureusではないことが好ましい。すなわち、前記アンピシリン感受性である細菌としては、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）が特に好ましい様態として挙げられる。なお、本明細書においては、「医薬組成物」以外の発明についても記載しているが、前記「医薬組成物」以外の発明においても、アンピシリン感受性である細菌が記載されている場合には、アンピシリン感受性である細菌としては前記の細菌が好ましい。また、前記「医薬組成物」以外の発明としては、さらに医薬部外品や化粧品等も含まれるが、当該医薬部外品や化粧品の成分として、前記アンピシリン感受性である細菌、好ましくは前記アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）が含まれ得る。
＜アンピシリン感受性である細菌＞
前記アンピシリン感受性である細菌は、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、S. cohniiまたはS.lentusから選択されることがより好ましく、S. cohniiが選択されることが最も好ましい。
【0014】
また、前記アンピシリン感受性である細菌の別の態様としては、Bacteroides sp. SA-11、Lactobacillus reuteri、Clostridium sp. Clone-16、Lactobacillus johnsonii、およびStaphylococcus arlettaeの一以上の種から選択される細菌が挙げられる。前記細菌や、S. cohniiは後述の実験例３で示したように、皮膚炎増悪（臨床スコア高）と負の相関を示していることから、これらの細菌もS. cohniiと同様に皮膚炎症に対して抑制的な効果を示すことが推測される。
【0015】
なお、前記細菌は二以上の種から選択されてもよいし、一種のみを選択してもよい。
また前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなることが好ましく、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であることが特に好ましい。
また前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなることが好ましく、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であることが特に好ましい。
【0016】
本発明の医薬組成物においては、前記細菌が、マウス由来の細菌またはヒト由来の細菌であることが好ましく、具体的には、マウス由来の細菌である、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８（配列番号１）、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０（配列番号２）、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１（配列番号３）、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２（配列番号４）、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５（配列番号６）、およびＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７（配列番号７）、ならびにヒト由来の細菌である受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３（配列番号５）から選択される一以上の株であることが好ましい。上記細菌はそれぞれ２０１８年１２月２５日（原寄託日）に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）において寄託されている。
＜Ｓ．ｃｏｈｎｉｉ＞
前記Ｓ．ｃｏｈｎｉｉは、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９以上％の配列同一性を有する配列からなることが好ましく、また１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～５のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
＜Ｓ．ｃｏｈｎｉｉ＞
前記Ｓ．ｃｏｈｎｉｉは、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～５のいずれか一つにて示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９以上％の配列同一性を有する配列からなることが好ましく、また１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～５のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
【0017】
本発明の医薬組成物においては、前記S. cohniiが、マウス由来のS. cohniiである、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８(配列番号１)、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０(配列番号２)、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１(配列番号３)、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２(配列番号４)、またはヒト由来のS. cohniiである受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３(配列番号５)の各株から選択される一以上の種であることが好ましい。また、前記S. cohniiはヒト由来の株であることが好ましく、したがって前記S. cohniiは前記ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３であることが最も好ましい。
【0018】
前記アンピシリン感受性である細菌は生菌であっても死菌であってもよく、また生菌と死菌の混合物であってもよく、前記アンピシリン感受性細菌が死菌である場合には、死滅する前、すなわち生菌の時点で、アンピシリン感受性細菌である。また、前記アンピシリン感受性細菌が死菌である場合には、死滅する前、すなわち生菌の時点で、フシジン酸耐性菌であることが好ましい。
＜医薬組成物＞
本発明の医薬組成物は上述したように、アンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物である。
＜医薬組成物＞
本発明の医薬組成物は上述したように、アンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物である。
【0019】
前記医薬組成物は、皮膚疾患の治療、改善または予防用に用いられることが好ましい。
前記皮膚疾患は皮膚炎であることが好ましく、アトピー性皮膚炎、IＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎、またはイミキモドにより惹起される皮膚炎であることが特に好ましい。
前記皮膚疾患は皮膚炎であることが好ましく、アトピー性皮膚炎、IＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎、またはイミキモドにより惹起される皮膚炎であることが特に好ましい。
【0020】
また、前記皮膚疾患は乾癬であってもよく、前記皮膚疾患は皮膚自己免疫疾患であってもよい。皮膚に起こり得る自己免疫疾患としては特に限定はされないが、具体的には、例えば、エリテマトーデス、皮膚筋炎、強皮症、シェーングレン症候群、水疱症等を挙げることができる。なお、「治療」には、症状の寛解および回復ならびに進行や悪化の抑制などが含まれ、「改善」には症状の緩和または軽減などが含まれ、「予防」には、疾患の新規発症の予防および再発の予防が含まれる。
【0021】
本発明に係る医薬組成物は、前記有効成分のいずれか一つを含有していてもよいし、二以上を含有していてもよい。さらに前記医薬組成物はアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択されるものをそのまま用いてもよいし、適宜、必要に応じて他の成分、例えば剤型に応じた製薬学的に許容される担体または添加剤や、皮膚疾患の治療または予防にとって有効な前記特定の有効成分以外の成分などをさらに含有していてもよい。すなわち、本発明に係る医薬品は、それらの成分を含有する医薬組成物として調製することができる。
【0022】
前記医薬組成物の剤型は、皮膚疾患を抑制することができるようであれば特に限定されるものではない。例えば、前記医薬組成物を塗布または貼付して投与するためには外用剤として調製することが好ましく、前記医薬組成物を経口投与するためには内服薬として調製することも可能である。
【0023】
医薬組成物の処方・投与対象となる動物種には、ヒトおよびヒト以外の哺乳動物が包含される。ヒト以外の哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ネコ、イヌ、ブタ、サルなど、ヒトの疾患のモデル動物として一般的に用いられている哺乳動物や、愛玩用の哺乳動物（ペット）が挙げられる。したがって、医薬組成物は、ヒトに投与するために製剤化されたものであってもよいし、ヒト以外の哺乳動物に投与するために製剤化されたものであってもよい。
【0024】
医薬組成物の投与に係る様態は、目的とする治療、改善または予防の効果が得られるようであれば特に限定されるものではない。すなわち、投与形態、投与回数、投与期間（頻度）および１回あたりの有効成分の投与量は、用いる有効成分の種類や対象となる皮膚疾患の容態のほか、投与対象の年齢、体重、投与経路、薬物動態などを考慮しながら、適切に調整することができる。特に本発明では、皮膚常在細菌叢における各細菌の数または分布比率などの情報を把握しながら投与に係る様態を調節してもよい。
【0025】
例えば投与対象がマウスの場合、体重当たりの投与量は１×１０4～１×１０8ＣＦＵ／ｇであることが好ましく、５×１０3～１×１０7ＣＦＵ／ｇであることがより好ましく、１×１０4～１×１０7ＣＦＵ／ｇであることが特に好ましい。投与回数としては１～２０回であることが好ましく、１～１０回であることがより好ましい。投与期間および頻度としては一日一回以上であることが好ましく、さらに２週間以上投与を続けることが好ましい。ヒトに対する有効成分量等の投与形態は、モデル動物に対する投与実験などを通じて適切に調整することが可能である。また、皮膚常在細菌叢における各細菌の数や各細菌の分布比率などを計測することによって、本発明に関する医薬組成物を投与する皮膚疾患患者を決定すること、皮膚疾患の改善薬または治療薬の効果をモニタリングすることも可能である。
＜医薬組成物の製造方法＞
本発明の一様態としては、前記医薬組成物の製造方法が挙げられる。
＜医薬組成物の製造方法＞
本発明の一様態としては、前記医薬組成物の製造方法が挙げられる。
【0026】
本発明の医薬組成物は上述したように、アンピシリン感受性である細菌等の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物である。したがって、前記医薬組成物は、用いる細菌またはその破砕物を適宜濃度において懸濁すること、当該細菌を培養することによって培養上清を抽出すること、当該細菌から所望の有効成分を適宜方法によって抽出すること、または当該細菌またはその破砕物、並びに培養上清から代謝物を分離すること等の手法を含む手段によって有効成分を取得し、さらに、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、等張化剤、乳化剤、甘味料、香料、着色料などから選ばれる担体または添加剤と、前述したような有効成分とを混合して成形するなど、一般的な製造方法により製造することができるが、これに限定されるものではなく、菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物を取得できる方法であれば、該方法を含む手段によって製造することができる。
＜活性化剤＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性細菌である細菌が含まれる活性化剤が挙げられる。当該細菌はフシジン酸耐性菌でもあることが好ましく、前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く)であることがより好ましい。さらに前記細菌はS. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、S. cohniiであることが最も好ましい。
＜活性化剤＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性細菌である細菌が含まれる活性化剤が挙げられる。当該細菌はフシジン酸耐性菌でもあることが好ましく、前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く)であることがより好ましい。さらに前記細菌はS. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、S. cohniiであることが最も好ましい。
【0027】
前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなるものが好ましく、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
【0028】
また、当該細菌はマウス由来の細菌である、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７、またはヒト由来の細菌である受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の各株から選択される一以上の株であることが好ましい。また、前記細菌は、前述の＜S. cohnii＞の項目で記載したものであることも好ましい。
【0029】
当該活性化剤は、上述したようなアンピシリン感受性である細菌が有する皮膚疾患の治療用、皮膚疾患の改善用、皮膚疾患の予防用、前記細菌の増殖用、および皮膚の状態の改善用等の用途に用いられるが特に限定されるものではない。当該活性化剤は、皮膚疾患の治療に関する効果、皮膚疾患の改善に関する効果、皮膚疾患の予防に関する効果、前記細菌が増殖する効果、および皮膚の状態の改善効果から選択される少なくとも一以上の効果を有し、それらの効果により、例えば、前記医薬組成物、医薬部外品、または化粧品の成分として使用することができる。
【0030】
当該活性化剤としては、有効成分としてさらにステロイド生合成関連タンパク質を含むものであることが好ましい。ここでステロイド生合成関連タンパク質とはステロイドの生合成に関与するタンパク質（酵素）を総称し、当該ステロイド生合成関連タンパク質としては、ステロイドの中間体であるスクアレンの合成に関与するタンパク質であることが好ましい。したがって前記ステロイド生合成関連タンパク質はスクアレン合成酵素であることが好ましい。
【0031】
また、アンピシリン感受性である細菌の効果を活性化させる効果を奏する活性化剤としては、有効成分として抗S. aureus抗体を含むものであることが好ましい。
なお、細菌の増殖が起きているかどうかは、例えば皮膚擦過サンプル中の細菌数（ＣＦＵ／ｇ）を一般的な手法を用いて測定してそれが平常時（健常者の測定値）よりも統計学的に有意に高いか否かを判定するなど、公知の手法によって決定することができる。
＜S. aureusの抑制剤＞
本発明の他の一様態としては、S. aureusの抑制剤が挙げられる。当該抑制剤の有効成分はS. aureusの増殖を抑制する作用を持つものであれば特に限定されるものではないが、S. aureusに対して物理的または化学的に作用して当該細菌を分解または溶解させることで該細菌を死滅させる物質を当該抑制剤として用いることは、当該細菌の菌体の分解により宿主に炎症作用を惹起させて皮膚炎をより悪化させる可能性を含んでおり、望ましくない。よって、有効成分としては、生体の免疫機構によってS. aureusを攻撃し死滅させる、抗S. aureus抗体を含むものであることが好ましく、またアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含むものが好ましい。さらに、前記抗S. aureus抗体ならびにアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物のいずれか一種のみを有効成分として含むものでもよいし、抗S. aureus抗体またはアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を共に有効成分として含むものでもよい。また、前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性菌であることがさらに好ましく、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましい。例えば、具体的には前記アンピシリン感受性である細菌は、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、特にS.cohniiであることがさらに好ましい。また、前記有効成分は抗S. aureus抗体であることも好ましい。前記S. aureusの抑制剤におけるS. aureusの増殖を抑制する作用が奏する具体的な効果としては、皮膚疾患の治療、改善又は予防的効果を活性化する効果や当該細菌が増殖する効果、皮膚の状態の改善効果等が挙げられるが特に限定されるものではない。当該効果によって前記S. aureusの抑制剤は、例えば、前記医薬組成物、医薬部外品、または化粧品の成分として使用することができる。
＜皮膚疾患治療剤＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む皮膚疾患治療剤が挙げられる。前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性であることが好ましく、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましい。そのような細菌としては、具体的には、例えば、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、なかでも S. cohniiを選択することがさらに好ましい。
なお、細菌の増殖が起きているかどうかは、例えば皮膚擦過サンプル中の細菌数（ＣＦＵ／ｇ）を一般的な手法を用いて測定してそれが平常時（健常者の測定値）よりも統計学的に有意に高いか否かを判定するなど、公知の手法によって決定することができる。
＜S. aureusの抑制剤＞
本発明の他の一様態としては、S. aureusの抑制剤が挙げられる。当該抑制剤の有効成分はS. aureusの増殖を抑制する作用を持つものであれば特に限定されるものではないが、S. aureusに対して物理的または化学的に作用して当該細菌を分解または溶解させることで該細菌を死滅させる物質を当該抑制剤として用いることは、当該細菌の菌体の分解により宿主に炎症作用を惹起させて皮膚炎をより悪化させる可能性を含んでおり、望ましくない。よって、有効成分としては、生体の免疫機構によってS. aureusを攻撃し死滅させる、抗S. aureus抗体を含むものであることが好ましく、またアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含むものが好ましい。さらに、前記抗S. aureus抗体ならびにアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物のいずれか一種のみを有効成分として含むものでもよいし、抗S. aureus抗体またはアンピシリン感受性細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を共に有効成分として含むものでもよい。また、前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性菌であることがさらに好ましく、フシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましい。例えば、具体的には前記アンピシリン感受性である細菌は、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、特にS.cohniiであることがさらに好ましい。また、前記有効成分は抗S. aureus抗体であることも好ましい。前記S. aureusの抑制剤におけるS. aureusの増殖を抑制する作用が奏する具体的な効果としては、皮膚疾患の治療、改善又は予防的効果を活性化する効果や当該細菌が増殖する効果、皮膚の状態の改善効果等が挙げられるが特に限定されるものではない。当該効果によって前記S. aureusの抑制剤は、例えば、前記医薬組成物、医薬部外品、または化粧品の成分として使用することができる。
＜皮膚疾患治療剤＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む皮膚疾患治療剤が挙げられる。前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性であることが好ましく、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましい。そのような細菌としては、具体的には、例えば、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、なかでも S. cohniiを選択することがさらに好ましい。
【0032】
前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つに示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなるものが好ましく、また１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
【0033】
また、当該細菌はマウス由来の細菌である、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７、またはヒト由来の細菌である受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の各株から選択される一以上の株であることが好ましい。また、前記細菌は、前述の＜S. cohnii＞の項目で記載したものであることも好ましい。
＜S. aureusの増殖抑制方法＞
本発明の他の一様態としては、抗S. aureus抗体、ならびにアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む物質を用いることによる、S. aureusの増殖抑制方法が挙げられる。前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性菌でもあることが好ましく、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがより好ましい。具体的には、例えば、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、S. cohniiであることが最も好ましい。より好ましい様態としては、例えば、S.cohniiの細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を患部に塗布する、S. aureusの増殖抑制方法が挙げられる。
＜S. aureusの増殖抑制方法＞
本発明の他の一様態としては、抗S. aureus抗体、ならびにアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を含む物質を用いることによる、S. aureusの増殖抑制方法が挙げられる。前記アンピシリン感受性である細菌はフシジン酸耐性菌でもあることが好ましく、アンピシリン感受性かつフシジン酸耐性菌であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがより好ましい。具体的には、例えば、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、S. cohniiであることが最も好ましい。より好ましい様態としては、例えば、S.cohniiの細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を患部に塗布する、S. aureusの増殖抑制方法が挙げられる。
【0034】
前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つに示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなるものが好ましく、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
【0035】
また、当該細菌はマウス由来の細菌である、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７、またはヒト由来の細菌である受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の各株から選択される一以上の株であることが好ましい。また、前記細菌は、前述の＜S. cohnii＞の項目で記載したものであることも好ましい。
【0036】
具体的な様態としては、例えば、皮膚疾患を有する生体の皮膚の病変部に対して、前記物質を塗布または適当な担体とともに貼付することが挙げられる。
＜グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性の細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を用いる、グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法が挙げられる。前記アンピシリン感受性菌はフシジン酸耐性菌であることが好ましく、Staphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがより好ましい。具体的には、例えば、、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、S. cohniiおよびS. lentusの一以上であることがより好ましい。また、前記グルココルチコイド応答遺伝子はＦｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３の一以上であることが好ましい。また、前記グルココルチコイド応答遺伝子はステロイド生合成関連タンパク質をコードする遺伝子であることも好ましく、またこの場合当該ステロイド生合成関連タンパク質はスクアレン合成酵素であることが好ましい。
＜グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法＞
本発明の他の一様態としては、アンピシリン感受性の細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を用いる、グルココルチコイド応答遺伝子の転写亢進方法が挙げられる。前記アンピシリン感受性菌はフシジン酸耐性菌であることが好ましく、Staphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがより好ましい。具体的には、例えば、、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが好ましく、S. cohniiおよびS. lentusの一以上であることがより好ましい。また、前記グルココルチコイド応答遺伝子はＦｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３の一以上であることが好ましい。また、前記グルココルチコイド応答遺伝子はステロイド生合成関連タンパク質をコードする遺伝子であることも好ましく、またこの場合当該ステロイド生合成関連タンパク質はスクアレン合成酵素であることが好ましい。
【0037】
当技術分野において公知のいくつかの方法を用いて、グルココルチコイド応答遺伝子の転写産物を増やすことができる。典型的には上記細菌の構成成分等を対象となる動物等に塗布することで当該遺伝子の転写を亢進させてもよいし、前記細菌から抽出した核酸を用いて調製した組換え発現ベクターを対象となる動物等に投与することで当該遺伝子の転写を亢進させてもよい。
＜菌叢の分析方法＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患を有する生物の、皮膚に存在する菌叢の分析方法が挙げられる。当該方法としては通常皮膚の菌叢を分析する方法として用いられる方法であるなら特に限定はされず、例えば綿棒等で対象となる生物の皮膚を擦過したものを適当な培地で培養する等の手法によって行われる。また対象となる生物種としては特に限定されず、ヒトまたはヒト以外の動物から選択することができる。
＜菌叢の分析方法＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患を有する生物の、皮膚に存在する菌叢の分析方法が挙げられる。当該方法としては通常皮膚の菌叢を分析する方法として用いられる方法であるなら特に限定はされず、例えば綿棒等で対象となる生物の皮膚を擦過したものを適当な培地で培養する等の手法によって行われる。また対象となる生物種としては特に限定されず、ヒトまたはヒト以外の動物から選択することができる。
【0038】
前記皮膚疾患を有する生物として、ヒト以外の動物を選択する場合には、例えば、皮膚疾患モデル動物を選択することができる。前記皮膚疾患モデル動物としては具体的にはＴｍｅｍ７９-/-マウス（Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス）を挙げることができる。また、前記皮膚疾患モデル動物としては、ＳＰＦ（specific pathogen free）動物が好適であり、典型的にはＳＰＦ Ｔｍｅｍ７９-/-マウス（ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス）が最も好適に選択されうる。また、ヒトを選択する場合に関しては、例えば、皮膚疾患を罹患した患者を選択することができる。
【0039】
また、前記皮膚疾患として具体的には、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ＩＦＮ－α産生促進剤により惹起される皮膚炎、イミダゾキノリン誘導体を含む製剤により惹起される皮膚炎、イミキモドにより惹起される皮膚炎、乾癬、または皮膚自己免疫疾患を挙げることができる。
＜治療方法の選択を補助するための方法＞
本発明の菌叢の分析方法を用いる一様態として、皮膚疾患を有する生物のための治療方法の選択を補助するための方法であって、（１）前記生物の疾患部位から採取した皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率を算出する工程、（２）前記比率が基準値より高い場合において、下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物を選択する工程を含む方法が挙げられる。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
前記基準値としては、（ｉ）前記皮膚疾患を有する生物と同種の生物であって、皮膚疾患を有さない個体（前記皮膚疾患を有する生物がヒトの場合は健常人）の皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率の平均値または（ｉｉ）皮膚疾患を有する生物の疾患部以外から採取した皮膚検体中におけるS. aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率などを用いることができる。
＜治療方法の選択を補助するための方法＞
本発明の菌叢の分析方法を用いる一様態として、皮膚疾患を有する生物のための治療方法の選択を補助するための方法であって、（１）前記生物の疾患部位から採取した皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率を算出する工程、（２）前記比率が基準値より高い場合において、下記（ａ）～（ｄ）から選択される一以上を有効成分とする、医薬組成物を選択する工程を含む方法が挙げられる。
（ａ）アンピシリン感受性である細菌の菌体または該細菌の構成成分
（ｂ）アンピシリン感受性である細菌の培養上清または該培養上清からの精製物
（ｃ）アンピシリン感受性である細菌の抽出物
（ｄ）アンピシリン感受性である細菌の代謝物
前記基準値としては、（ｉ）前記皮膚疾患を有する生物と同種の生物であって、皮膚疾患を有さない個体（前記皮膚疾患を有する生物がヒトの場合は健常人）の皮膚検体中のS.aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率の平均値または（ｉｉ）皮膚疾患を有する生物の疾患部以外から採取した皮膚検体中におけるS. aureusの皮膚常在細菌叢に占める比率などを用いることができる。
【0040】
前記アンピシリン感受性菌はフシジン酸耐性菌であることが好ましく、フシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがより好ましい。具体的には、例えば、S. epidermidis、 S. capitis、 S.lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましく、S. cohniiであることが最も好ましい。
【0041】
この方法によれば、例えば、医師以外の人間が皮膚疾患を有する生物の疾患部位から採取した皮膚検体中の比率を算出し、当該比率を任意の基準値と比較した結果やいずれの医薬組成物を選択することが好ましいかについての情報を補助情報として医師に提供することができ、医師は当該補助情報を用いて、実際に行うべき治療方法、例えばどの医薬組成物をどのような量や剤型で投与することなどを判断することができる。
＜補助情報を取得する方法＞
本発明の菌叢の分析方法を用いる一様態として、皮膚疾患を有する生物における皮膚疾患の治療についての補助情報を取得する方法が挙げられる。前記方法は、（１）皮膚疾患を有する生物であって皮膚疾患治療前の生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、（２）皮膚疾患治療後の前記生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、（３）工程（１）で測定した前記比率と、工程（２）で測定した前記比率と比較する工程を含む。この方法によれば、例えば、医師以外の人間が治療前後の皮膚常在細菌叢におけるS.aureusの比率を算出・比較した結果を治療の補助情報として医師に提供することができ、医師は当該補助情報を用いて、行った皮膚疾患治療の経過、例えば病状の改善・増悪などを判断することができる。
＜抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患の治療における使用のための抗S. aureus抗体および／またはステロイド生合成関連タンパク質、皮膚疾患の治療用医薬を製造するための抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される１以上の使用、さらに抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法が含まれる。また、皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物も本発明のさらなる一様態として挙げられる。この場合前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌であることが好ましく、前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましく、具体的には例えば、前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましい。
＜補助情報を取得する方法＞
本発明の菌叢の分析方法を用いる一様態として、皮膚疾患を有する生物における皮膚疾患の治療についての補助情報を取得する方法が挙げられる。前記方法は、（１）皮膚疾患を有する生物であって皮膚疾患治療前の生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、（２）皮膚疾患治療後の前記生物から採取した皮膚検体中の皮膚常在細菌叢における、S.aureusの比率を算出する工程、（３）工程（１）で測定した前記比率と、工程（２）で測定した前記比率と比較する工程を含む。この方法によれば、例えば、医師以外の人間が治療前後の皮膚常在細菌叢におけるS.aureusの比率を算出・比較した結果を治療の補助情報として医師に提供することができ、医師は当該補助情報を用いて、行った皮膚疾患治療の経過、例えば病状の改善・増悪などを判断することができる。
＜抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患の治療における使用のための抗S. aureus抗体および／またはステロイド生合成関連タンパク質、皮膚疾患の治療用医薬を製造するための抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される１以上の使用、さらに抗S. aureus抗体およびステロイド生合成関連タンパク質から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法が含まれる。また、皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物も本発明のさらなる一様態として挙げられる。この場合前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性菌であることが好ましく、前記アンピシリン感受性である細菌がフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることがさらに好ましく、具体的には例えば、前記アンピシリン感受性である細菌が、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択されることが特に好ましい。
【0042】
前記抗S. aureus抗体はS. aureusに特異的に結合するものであれば特に限定はされず、例えば、いずれのアイソタイプの抗体を用いてもよいが、特にＩｇＧ抗体（免疫グロブリンＧ）が好適に用いられる。また、前記抗S. aureus抗体は、S. aureusに特異的に結合可能であれば、天然の抗体のように全長を有するものである必要はなく、抗体断片または誘導体、キメラ抗体（ヒト化抗体等）であってもよい。また、バイスペシフィック抗体や、リンカーを介して抗体にペイロードを結合させた抗体薬物複合体(Antibody-Drug Conjugate; ADC)等の多機能抗体であってもよい。なお、抗体を産生する動物（免疫動物）の種類は特に限定されず、従来と同様、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ヒツジなどから選択すればよい。
【0043】
前記ステロイド生合成関連タンパク質はステロイドの生合成に関与するタンパク質を総称するものであり、本発明においてはスクアレンが好適に用いられる。
＜治療における使用、治療用医薬の製造のための使用、および治療する方法＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物が挙げられ、前記アンピシリン感受性である細菌はフジシン酸耐性菌であることが好ましく、さらにフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることが好ましい。具体的には、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが好ましく、S. cohniiの細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが特に好ましい。
＜治療における使用、治療用医薬の製造のための使用、および治療する方法＞
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患の治療における使用のためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物が挙げられ、前記アンピシリン感受性である細菌はフジシン酸耐性菌であることが好ましく、さらにフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることが好ましい。具体的には、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが好ましく、S. cohniiの細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが特に好ましい。
【0044】
本発明のさらに他の一様態としては、皮膚疾患の治療用医薬を製造するためのアンピシリン感受性である細菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上の使用が挙げられ、前記アンピシリン感受性である細菌はフジシン酸耐性菌であることが好ましく、さらにフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることが好ましい。具体的には、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが好ましく、特にS. cohniiの細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上の使用が特に好ましい。
【0045】
本発明のさらに他の一様態としては、アンピシリン感受性菌の菌体、ならびに該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、および代謝物から選択される一以上を患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法が挙げられ、前記アンピシリン感受性である細菌はフジシン酸耐性菌であることが好ましく、さらにフシジン酸耐性であるStaphylococcus属の細菌（S. aureusを除く）であることが好ましい。具体的には、S. epidermidis、 S. capitis、 S. lentus、 S. caprae、 S. saccharolyticus、 S. warneri、 S. pasteuri、 S. haemolyticus、 S. homonis、 S. lugdunesis、 S. auricularis、 S. saprophyticus、 S. cohnii、 S. xylosus、 およびS. siinulansの一以上の種から選択される細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物であることが好ましく、特にS. cohniiの細菌の菌体、該細菌の構成成分、培養上清、該培養上清からの精製物、抽出物、または代謝物から選択される一以上から選択されるものを患者に投与することにより皮膚疾患を治療する方法を用いることが好ましい。
【0046】
前記皮膚疾患の治療における使用、皮膚疾患の治療用医薬を製造するための使用、または皮膚疾患を治療する方法における前記細菌は、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示される配列であるか、または配列番号１～７のいずれか一つに示される配列に対して９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％以上の配列同一性を有する配列からなるものが好ましく、１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子配列が、配列番号１～７のいずれか一つにて示されるものであることが特に好ましい。
【0047】
また、当該細菌はマウス由来の細菌である、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４５、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４７、またはヒト由来の細菌である受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３の各株から選択される一以上の株であることが好ましい。また、前記細菌は、前述の＜S. cohnii＞の項目で記載したものであることも好ましい。
＜細菌株＞
本発明のさらに他の一様態としては、受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、またはＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３のいずれかで特定される、S. cohniiに属する細菌株が挙げられる。
＜細菌＞
前記アンピシリン感受性である細菌とは別の態様である、本発明の細菌としては、Methylobacterium sp. RD4.1、Methylobacterium sp. SKJH-1、Mesorhizobium alhagi、Sphingomonas sp. MK355、Sphingomonas sp. AC83、Pantoea sp. lan5、Weissella cibaria、Bradyrhizobium sp. STM 3843、Lactococcus lactis、Afipia genosp.1、Methylobacterium populi、Sediminibacterium sp. IV-37、Bradyrhizobium sp. Aust13C、Pelomonas saccharophila、Bradyrhizobium sp. Shinshu-th2、Methylobacterium sp. BF15、およびBradyrhizobium sp. BTAi1の一以上の種から選択される細菌が挙げられる。前記細菌や、S. cohniiは後述の実験例３で示したように、皮膚炎増悪（臨床スコア高）と負の相関を示していることから、これらの細菌もS. cohniiと同様に皮膚炎症に対して抑制的な効果を示すことが推測される。このため、前記＜アンピシリン感受性である細菌＞で挙げた細菌と同様の各種用途に使用することができる。
＜細菌株＞
本発明のさらに他の一様態としては、受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２８４８、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５０、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５１、ＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５２、またはＮＩＴＥ ＢＰ－０２８５３のいずれかで特定される、S. cohniiに属する細菌株が挙げられる。
＜細菌＞
前記アンピシリン感受性である細菌とは別の態様である、本発明の細菌としては、Methylobacterium sp. RD4.1、Methylobacterium sp. SKJH-1、Mesorhizobium alhagi、Sphingomonas sp. MK355、Sphingomonas sp. AC83、Pantoea sp. lan5、Weissella cibaria、Bradyrhizobium sp. STM 3843、Lactococcus lactis、Afipia genosp.1、Methylobacterium populi、Sediminibacterium sp. IV-37、Bradyrhizobium sp. Aust13C、Pelomonas saccharophila、Bradyrhizobium sp. Shinshu-th2、Methylobacterium sp. BF15、およびBradyrhizobium sp. BTAi1の一以上の種から選択される細菌が挙げられる。前記細菌や、S. cohniiは後述の実験例３で示したように、皮膚炎増悪（臨床スコア高）と負の相関を示していることから、これらの細菌もS. cohniiと同様に皮膚炎症に対して抑制的な効果を示すことが推測される。このため、前記＜アンピシリン感受性である細菌＞で挙げた細菌と同様の各種用途に使用することができる。
【実施例】
【0048】
次に本発明について実験例を示してさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
なお、本実施例で使用したクローン名、由来、菌種、受託番号、配列番号を下記表１に示す。各細菌はそれぞれ２０１８年１２月２５日（原寄託日）に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）において寄託されている。
なお、本実施例で使用したクローン名、由来、菌種、受託番号、配列番号を下記表１に示す。各細菌はそれぞれ２０１８年１２月２５日（原寄託日）に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）において寄託されている。
【0049】
【表1】
【0050】
［作製例１］
＜Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの作製＞
UC DAVISリポジトリのＫＯＭＰ （knock out mouse project) (https://www.komp.org/）から、Project ID:CSD74985、Allele:Tmem79tm1Wtsi DeletionのマウスＥＳ細胞を取得した。FIMRe機関の凍結マウスリソースの個体化サービス（RIKEN BRC）（http://mus.brc.riken.jp/ja/mailnews/20080605#mn/20080604#2）にて、該変異細胞をキメラマウスに個体化した。得られた変異個体と、Ｃ５７／ＢＬ６Ｎマウスの交配を繰り返し、ホモ接合体のＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを得た。Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの同定は、ＰＣＲによる変異Ｔｍｅｍ７９遺伝子の確認、および目視による皮膚状態の差異比較に基づいて行った。
＜Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの作製＞
UC DAVISリポジトリのＫＯＭＰ （knock out mouse project) (https://www.komp.org/）から、Project ID:CSD74985、Allele:Tmem79tm1Wtsi DeletionのマウスＥＳ細胞を取得した。FIMRe機関の凍結マウスリソースの個体化サービス（RIKEN BRC）（http://mus.brc.riken.jp/ja/mailnews/20080605#mn/20080604#2）にて、該変異細胞をキメラマウスに個体化した。得られた変異個体と、Ｃ５７／ＢＬ６Ｎマウスの交配を繰り返し、ホモ接合体のＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを得た。Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの同定は、ＰＣＲによる変異Ｔｍｅｍ７９遺伝子の確認、および目視による皮膚状態の差異比較に基づいて行った。
【0051】
［実験例１］
(Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける皮膚炎臨床スコア)
作製例１で作製したＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを作成し、ＳＰＦ(Specific pathogen free)環境下で飼育した（ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス）。
(Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける皮膚炎臨床スコア)
作製例１で作製したＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを作成し、ＳＰＦ(Specific pathogen free)環境下で飼育した（ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス）。
【0052】
ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスおよびコントロール（ＳＰＦ－ＷＴマウス）について、紅斑、浮腫、びらん、乾燥の４項目に関して、それぞれ０：正常、１：軽度、２：中等度、３：重度の４段階で各臨床スコアを評価した。４項目の臨床スコアの合計値を用いて皮膚における炎症の程度を評価した。臨床スコアの変化の様子を図１に示す。図中、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスは「ＳＰＦ Ｔｍｅｍ７９-/-」と、ＳＰＦ－ＷＴマウスは「ＳＰＦ ＷＴ」と記載している。ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスは二峰性の皮膚炎を発症することがわかる。
【0053】
［実験例２］
(ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの病変部における菌叢変化)
上述したようにＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおいては二峰性の皮膚炎を引き起こすが、特に病期の後半においては頸部を中心に皮膚炎が広がっている様子が観察された。
(ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの病変部における菌叢変化)
上述したようにＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおいては二峰性の皮膚炎を引き起こすが、特に病期の後半においては頸部を中心に皮膚炎が広がっている様子が観察された。
【0054】
ＰＢＳに浸漬させた綿棒を用いて生後各時期のＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚の病変部を擦過することで収集した皮膚サンプルを用いて細菌叢のメタ１６Ｓ解析を行なうことで菌種の特定や菌種組成の解析を行った。結果を図２に示す。
【0055】
ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの菌叢においては、皮膚炎の増悪に伴いS. aureusの発現が増加しており、また、皮膚炎が一時抑制される５－６週齢では、S. cohniiの割合が大きくなっていることが判った。一方で野生型マウス（ＳＰＦ－ＷＴ）の皮膚においては、S. aureusはほとんど検出されなかった。
【0056】
［実験例３］
（臨床スコアと菌叢分布）
上記と同様の手法で取得したＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚サンプルの菌叢解析（メタ１６ｓ解析)を行い（図３Ａ）、その結果および当該マウスの臨床スコアを用いてスピアマンの相関解析を行った。結果を図３Ｂに示す。
（臨床スコアと菌叢分布）
上記と同様の手法で取得したＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚サンプルの菌叢解析（メタ１６ｓ解析)を行い（図３Ａ）、その結果および当該マウスの臨床スコアを用いてスピアマンの相関解析を行った。結果を図３Ｂに示す。
【0057】
S. aureusは皮膚炎増悪（臨床スコア高）と強い正の相関を示していることがわかる。その一方で、S. cohniiは負の相関を示しており、S. cohniiが皮膚炎症に対して抑制的な効果を示すことが示唆された。また、S. cohniiと同様に、Bacteroides sp. SA-11、Lactobacillus reuteri、Methylobacterium sp. RD4.1、Methylobacterium sp. SKJH-1、Mesorhizobium alhagi、Sphingomonas sp. MK355、Sphingomonas sp. AC83、Clostridium sp. Clone-16、Pantoea sp. lan5、Weissella cibaria、Bradyrhizobium sp. STM 3843、Lactococcus lactis、Afipia genosp.1、Lactobacillus johnsonii、Methylobacterium populi、Staphylococcus arlettae、Sediminibacterium sp. IV-37、Bradyrhizobium sp. Aust13C、Pelomonas saccharophila、Bradyrhizobium sp. Shinshu-th2、Methylobacterium sp. BF15、Bradyrhizobium sp. BTAi1も負の相関を示していることから、これらも本発明の皮膚炎症に対して抑制的な効果を示すことが推測される。
【0058】
相関係数や有意差検定はGraphPad Prism software with two-tailed unpaired Student's t-test.を用いて算出した。
［実験例４］
（ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス遺伝子解析）
１～１５週齢のＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとＳＰＦ－ＷＴマウスの皮膚から実験例２と同様の手法で皮膚サンプルを取得し、ＲＮＡ－ｓｅｑ遺伝子発現によるPathway解析を行った。結果を図４に示す。ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスは上記臨床スコアの増加（皮膚炎の悪化）に伴って、様々な免疫応答に関する遺伝子発現が亢進しており、S. cohniiの割合が高く皮膚炎が一時軽減する５～６週齢の時期では、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスのサイトカイン受容体シグナルやＴ細胞受容体シグナルなどの免疫応答に関与する遺伝子発現が抑制されていた。
［実験例４］
（ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス遺伝子解析）
１～１５週齢のＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとＳＰＦ－ＷＴマウスの皮膚から実験例２と同様の手法で皮膚サンプルを取得し、ＲＮＡ－ｓｅｑ遺伝子発現によるPathway解析を行った。結果を図４に示す。ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスは上記臨床スコアの増加（皮膚炎の悪化）に伴って、様々な免疫応答に関する遺伝子発現が亢進しており、S. cohniiの割合が高く皮膚炎が一時軽減する５～６週齢の時期では、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスのサイトカイン受容体シグナルやＴ細胞受容体シグナルなどの免疫応答に関与する遺伝子発現が抑制されていた。
【0059】
ＩＬ－１７Ａは、線維芽細胞や上皮細胞、血管内皮細胞、マクロファージなど広範囲にわたる細胞に作用して、ＩＬ－６やＴＮＦ－αといった炎症性サイトカインやケモカインの誘導、好中球の遊走などに関与することによって炎症を誘導するインターロイキンである。
【0060】
また、生後１０～１２週齢のＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスおよびＳＰＦ－ＷＴマウスの皮膚と頚部リンパ節Ｔ細胞を用いたＦＡＣＳ解析の結果（図５）から、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚およびリンパ節の双方においてＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞が増加していることが確認された。
【0061】
以上の結果からは、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスが二峰性の皮膚炎を起こすこと、および皮膚炎に伴って細胞レベルおよび遺伝子レベルでの免疫応答が引き起こされること、および皮膚およびリンパ節の双方において免疫反応が惹起していることが確認された。
【0062】
また、臨床スコアの評価によると、ＧＦ(無菌：germ-free)環境下におけるＴｍｅｍ７９ＫＯマウス（ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス）、ＧＦ(無菌：germ-free)環境下における野生型マウス（ＧＦ－ＷＴマウス）、およびＳＰＦ－ＷＴマウスの皮膚炎発症は抑制されており（図６Ａ）、これらのマウスの皮膚においては、γδＴ細胞母集団（＝ＣＤ３＋ｇｄＴＣＲ細胞）中のＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞）の誘導（図６Ｂ）、またはＣＤ４Ｔ細胞（＝ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＴＣＲβ細胞）中のＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞の誘導はみられなかった（図６Ｃ）。
（獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの解析）
Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとＲａｇ２ＫＯマウス（The Jackson Laboratory）とを交配して獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス（Ｒａｇ２-/-Ｔｍｅｍ７９-/-マウス）を作製した。
（獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの解析）
Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとＲａｇ２ＫＯマウス（The Jackson Laboratory）とを交配して獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス（Ｒａｇ２-/-Ｔｍｅｍ７９-/-マウス）を作製した。
【0063】
実験例１と同様の手法で臨床スコアの取得を行い(図７Ａ)、さらに１０～１２週齢のマウス皮膚における病理組織検査を行った(図７Ｂ）。
臨床スコアからも病理組織検査の結果からも、獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスはＴｍｅｍ７９ＫＯマウスで観察される後半の皮膚炎の発症が抑制されていることがわかり、Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの二峰性皮膚炎の後半の増悪には獲得免疫が重要な役割を果たすことが示唆された。
臨床スコアからも病理組織検査の結果からも、獲得免疫不全Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスはＴｍｅｍ７９ＫＯマウスで観察される後半の皮膚炎の発症が抑制されていることがわかり、Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの二峰性皮膚炎の後半の増悪には獲得免疫が重要な役割を果たすことが示唆された。
【0064】
［作製例２］
（ノトバイオート（gnotobiote）マウスの作成）
１ｍＬのＰＢＳ（Phosphate buffered saline) またはＢＨＩ（Brain heart infusion ）に浸漬した綿棒でＳＰＦマウスの皮膚を擦過して採取した皮膚組織を、複数の培地（マンニット食塩卵黄付加寒天培地やトリプチックソイ寒天培地など）を用いて好気下で培養し、取得した単一コロニーの１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を解読し菌種を同定することで、S. aureus、S. epidermidis、およびS. lentusを単離した。なお、ここで単離したS. aureusは株名：BP-02846であり、S. epidermidisは株名BP-02845であり、およびS. lentusは株名BP-02847である。
（ノトバイオート（gnotobiote）マウスの作成）
１ｍＬのＰＢＳ（Phosphate buffered saline) またはＢＨＩ（Brain heart infusion ）に浸漬した綿棒でＳＰＦマウスの皮膚を擦過して採取した皮膚組織を、複数の培地（マンニット食塩卵黄付加寒天培地やトリプチックソイ寒天培地など）を用いて好気下で培養し、取得した単一コロニーの１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を解読し菌種を同定することで、S. aureus、S. epidermidis、およびS. lentusを単離した。なお、ここで単離したS. aureusは株名：BP-02846であり、S. epidermidisは株名BP-02845であり、およびS. lentusは株名BP-02847である。
【0065】
前記単離したそれぞれの菌をそれぞれＢＨＩで一晩培養し、菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整した培養液をＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚へ綿棒で塗布することで単一菌の接種を行った。
【0066】
［実験例５］
（ノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける皮膚炎の誘導）
作製例２で作製したS. aureus、S. epidermidisまたはS. lentusにより作製したノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを用いて、皮膚常在菌によって当該皮膚炎は誘導され得るか、あるいは当該皮膚炎を誘導するのは特定の菌のみなのかについて、検討を行った。
（ノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける皮膚炎の誘導）
作製例２で作製したS. aureus、S. epidermidisまたはS. lentusにより作製したノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスを用いて、皮膚常在菌によって当該皮膚炎は誘導され得るか、あるいは当該皮膚炎を誘導するのは特定の菌のみなのかについて、検討を行った。
【0067】
コントロールとしては、ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとco-house（共棲）させたＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウス（Conventionalizedマウス）を用いた。
Conventionalizedマウスと菌量が２．０×１０6ＣＦＵのS. aureusを塗布したノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスは皮膚炎を発症する一方、菌量が２．０×１０6ＣＦＵのS. epidermidisまたはS. lentusを塗布したノトバイオートＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスではいずれも明らかな皮膚炎の誘導はみられなかった。結果を図８Ｂに示す。
Conventionalizedマウスと菌量が２．０×１０6ＣＦＵのS. aureusを塗布したノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスは皮膚炎を発症する一方、菌量が２．０×１０6ＣＦＵのS. epidermidisまたはS. lentusを塗布したノトバイオートＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスではいずれも明らかな皮膚炎の誘導はみられなかった。結果を図８Ｂに示す。
【0068】
この結果からは、S. epidermidisまたはS. lentusを除く、特定の菌のみが皮膚炎を惹起しうる可能性が示唆された。
［実験例６］
（S. cohniiの炎症抑制効果－１）
続いてＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける他の細菌による影響を検証した。
［実験例６］
（S. cohniiの炎症抑制効果－１）
続いてＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおける他の細菌による影響を検証した。
【0069】
ＳＰＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに対してアンピシリン(ナカライテスク株式会社)またはフシジン酸(Sigma社)を２００ｍｇ／ｍＬで飲水に懸濁して投与し、臨床スコアを経時的に取得した。
【0070】
フシジン酸を投与したマウスにおいては皮膚炎の程度が軽減したが、アンピシリンを投与したマウスにおいては皮膚炎の軽減は観察されなかった（図９Ｂ）。
さらに両抗生物質によるS. aureusおよびS. cohniiの抗生物質に対する感受性の検証を行った。S. aureusは、アンピシリンおよびフシジン酸のいずれによっても増殖が抑制される（図９ＣおよびＤ）。一方、S. cohniiはアンピシリンにより増殖が有意に抑制されるが、フシジン酸によっては増殖の抑制は引き起こされないことがわかった（図９ＣおよびＥ）。
さらに両抗生物質によるS. aureusおよびS. cohniiの抗生物質に対する感受性の検証を行った。S. aureusは、アンピシリンおよびフシジン酸のいずれによっても増殖が抑制される（図９ＣおよびＤ）。一方、S. cohniiはアンピシリンにより増殖が有意に抑制されるが、フシジン酸によっては増殖の抑制は引き起こされないことがわかった（図９ＣおよびＥ）。
【0071】
これらの結果からはS. cohniiがアンピシリンには感受性を持つが、フシジン酸には耐性を持つこと、フジシン酸により皮膚炎の悪化が抑制されることから、S. cohniiなどのアンピシリン感受性かつフジシン酸耐性菌には皮膚炎の悪化を抑制する効果を有すると推測した。
【0072】
［実験例７］
（S. cohniiの炎症抑制効果－２）
S. aureus、C.mastitidis、または S. cohniiの培養液について菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整し、ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスまたはＧＦ－ＷＴマウスに接種した。いずれの細菌もＧＦ－ＷＴマウスにおいては皮膚炎を起こさなかったが（図１０Ｃ）、ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおいてはS. aureusまたはC. mastitidisは皮膚炎を惹起する一方で、S. cohniiは皮膚炎を起こさなかった（図１０Ｂ）。
（S. cohniiの炎症抑制効果－２）
S. aureus、C.mastitidis、または S. cohniiの培養液について菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整し、ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスまたはＧＦ－ＷＴマウスに接種した。いずれの細菌もＧＦ－ＷＴマウスにおいては皮膚炎を起こさなかったが（図１０Ｃ）、ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにおいてはS. aureusまたはC. mastitidisは皮膚炎を惹起する一方で、S. cohniiは皮膚炎を起こさなかった（図１０Ｂ）。
【0073】
［実験例８］
（皮膚炎に対するブドウ球菌の予防効果）
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにS. cohnii、S. epidermidisの培養液について、菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したものをそれぞれ接種し、当該接種の１４日後にS. aureusを接種した。
（皮膚炎に対するブドウ球菌の予防効果）
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにS. cohnii、S. epidermidisの培養液について、菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したものをそれぞれ接種し、当該接種の１４日後にS. aureusを接種した。
【0074】
臨床スコアによるとS. cohniiまたはS. epidermidisの予防接種は、S. aureusによる炎症を抑えることが確認された（図１１Ｂ）。
S. aureus接種２１日後における頸部リンパ節腫脹も、臨床スコアと同様に、S. cohniiまたはS. epidermidisの予防投与によって抑制された（図１１Ｃ）。
S. aureus接種２１日後における頸部リンパ節腫脹も、臨床スコアと同様に、S. cohniiまたはS. epidermidisの予防投与によって抑制された（図１１Ｃ）。
【0075】
一方で同時期におけるS. aureusの菌量は各群で有意な差はみられなかった（図１１Ｄ）。
また、各マウスの皮膚を用いて、ＨＥ染色を行うことで病理組織検査を行った。染色像からはS. cohniiまたはS. epidermidisの予防投与によって明らかに皮膚炎が抑制されることが明らかとなった（図１１Ｅ）。
また、各マウスの皮膚を用いて、ＨＥ染色を行うことで病理組織検査を行った。染色像からはS. cohniiまたはS. epidermidisの予防投与によって明らかに皮膚炎が抑制されることが明らかとなった（図１１Ｅ）。
【0076】
［実験例９］
（皮膚炎に対するブドウ球菌の治療効果）
さらにブドウ球菌による、S. aureusによる皮膚炎への治療的効果を検証した。
（皮膚炎に対するブドウ球菌の治療効果）
さらにブドウ球菌による、S. aureusによる皮膚炎への治療的効果を検証した。
【0077】
菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したS. aureusの培養液を接種したＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに対してS. conhii またはS. epidermidisの培養液についてそれぞれ菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したもの、S. aureus接種の５、６、７、１２、１３、および１４日後に接種した。各時点における臨床スコアを測定するとともに、S. aureus接種２１日後における頸部リンパ節の腫脹およびS. aureusの菌量を確認した。実験例８と同様にS. cohniiの投与によって、臨床スコアは軽減し（図１２Ｂ）、頸部リンパ節の腫脹も抑制されていることがわかった（図１２Ｃ）。また、同様にS. aureusの菌量に明らかな差は観察されなかった（図１２Ｄ）。
【0078】
［実験例１０］
（S. cohniiによる遺伝子発現解析）
上記実験例におけるマウスにおけるS. cohnii等の影響を検討するため、ノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚から抽出したtotal RNAを用いてHiSeq（登録商標；イルミナ株式会社）によりRNA-sequencing解析を施行した。
（S. cohniiによる遺伝子発現解析）
上記実験例におけるマウスにおけるS. cohnii等の影響を検討するため、ノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚から抽出したtotal RNAを用いてHiSeq（登録商標；イルミナ株式会社）によりRNA-sequencing解析を施行した。
【0079】
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスとS. aureus、C. masititisまたはS. cohniiを用いて作製した各ノトバイオートマウスとＧＦ－Ｔｍｅｍ７９との各遺伝子の発現量の比をlog fold changeで示す（図１３）。
【0080】
S. cohniiで作製したノトバイオートマウスにおいて、１５個の発現変動遺伝子(differentially expressed genes；DEGs)が同定され、うち５つがS. cohnii特異的に発現が亢進している遺伝子であった。さらにＦｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、Ｆａｍ１０７ａ、Ｈｉｆ３ａなど、グルココルチコイド応答遺伝子として知られるものがS. cohnii特異的に発現亢進することが確認できた。
【0081】
また、前記発現変動遺伝子に関する転写因子に係るエンリッチメント解析の結果においても、S. cohniiで作製したノトバイオートマウスにおいて、グルココルチコイド受容体（ＧＣＲ）が最も強く遺伝子発現していることがわかった（図１４）。
【0082】
前記RNA-sequencing解析において、S. cohniiで作製したノトバイオートマウスにおける特異的発現変動遺伝子の発現原因となる上流遺伝子を解析するためＩＰＡ（登録商標）(Ingenuity Pathway Analysis ; Qiagen社)を用いて遺伝子発現カスケード解析(Upstream analysis)を行った。結果を図１５に示す。
【0083】
その結果、グルココルチコイドなどのステロイドがS. cohniiの遺伝子発現パターンの上流として特異的に検出された。グルココルチコイドは強い抗炎症作用および免疫抑制作用をもつ、免疫系との関係の深いステロイドホルモンである。
【0084】
さらに、前記RNA-sequencing解析データを用いてpathway解析を施行した。S. cohniiノトバイオートマウスにおいてはテルペノイド（ステロイドの前駆体）合成やCYP450（ステロイド代謝に関与）のpathwayが亢進することが判った（図１６）。
【0085】
以上、S. cohnii等で作製したノトバイオートマウスを用いた複数の遺伝子発現解析の結果から、S. cohniiはグルココルチコイド反応により免疫を促進することで皮膚炎症に対して抑制的に働く可能性が示唆される。
【0086】
［実験例１１］
（グルココルチコイド遺伝子の発現亢進）
S. aureus、S. cohnii、S. epidermidis、およびS. lentusを用いたノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚におけるグルココルチコイド応答遺伝子として知られる３つの遺伝子Ｆｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３の発現量について解析を行った。
（グルココルチコイド遺伝子の発現亢進）
S. aureus、S. cohnii、S. epidermidis、およびS. lentusを用いたノトバイオートＴｍｅｍ７９ＫＯマウスの皮膚におけるグルココルチコイド応答遺伝子として知られる３つの遺伝子Ｆｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６、およびＴｓｃ２２ｄ３の発現量について解析を行った。
【0087】
それぞれのマウスの皮膚サンプルをNS-360D (Microtec Co., Ltd, Chiba, Japan)を用いてホモジェナイズし、２．２ｍｇ／ｍＬ Proteinase K (Takara 9034) を加えて５５℃で１０分培養したものからTotal RNAを抽出し、SuperScript（登録商標）III First-Strand Synthesis System (Thermo Fisher) で逆転写することでｃＤＮＡを取得した（Ｚｂｔｂ１６、Ｆｋｂｐ５、およびＴｓｃ２２ｄ３ についてはPrimePCR SYBR(登録商標) Green Assay (Biorad)のプライマー（配列非公開）を、ＧＡＰＤＨについてはforward：5'-cctcgtcccgtagacaaaatg-3'（配列番号１０）およびreverse：5'-tctccactttgccactgcaa-3'（配列番号１１）をプライマーとして用いた）。
【0088】
Thunderbird SYBR qPCR Mix (TOYOBO) とLightCycler 480 II (Roche)でｑＰＣＲを行い、それぞれの遺伝子発現量を測定した。取得した測定値をＧＡＰＤＨの遺伝子量で補正したグラフを図１７に示す。
【0089】
その結果、S. cohnii、およびS. lentusはこれらの遺伝子の発現を亢進することが確認された（図１７Ａ～Ｃ）。
グルココルチコイド受容体のレポーターアッセイとして、GAL4 Reporter, Luciferase, HEK293 Cell Line （グルココルチコイドレセプター情報伝達経路測定用細胞株）に濁度 ＯＤ（６００）で０．６に菌量を調整したS.cohniiまたはS.aureusを各ウェルに加えて２４時間培養し、ONE-Step luciferase assay system (BPS Bioscience #60690-1)を用いて発光量を測定することで、ＧＡＬ４レポーターアッセイを行った。細胞にS. cohniiを加えて培養することで、グルココルチコイド情報伝達経路が活性化していることがわかる。結果を図１８に示す。
グルココルチコイド受容体のレポーターアッセイとして、GAL4 Reporter, Luciferase, HEK293 Cell Line （グルココルチコイドレセプター情報伝達経路測定用細胞株）に濁度 ＯＤ（６００）で０．６に菌量を調整したS.cohniiまたはS.aureusを各ウェルに加えて２４時間培養し、ONE-Step luciferase assay system (BPS Bioscience #60690-1)を用いて発光量を測定することで、ＧＡＬ４レポーターアッセイを行った。細胞にS. cohniiを加えて培養することで、グルココルチコイド情報伝達経路が活性化していることがわかる。結果を図１８に示す。
【0090】
一方でS. aureusでは当該活性が亢進している様子は確認できなかった。
［実験例１２］
（S. cohniiの新規単離株の炎症抑制効果）
上述の実験例においてはS. cohniiは、作製例２と同様の手法で単離した株名：BP-02848を用いている。他株のS. cohniiについてもBP-02848と同様の効果があることを確認するため、マウス皮膚から新規に単離したS. cohnii株である、BP-02850、BP-02851、BP-02852を用いて以下の実験を行った。
［実験例１２］
（S. cohniiの新規単離株の炎症抑制効果）
上述の実験例においてはS. cohniiは、作製例２と同様の手法で単離した株名：BP-02848を用いている。他株のS. cohniiについてもBP-02848と同様の効果があることを確認するため、マウス皮膚から新規に単離したS. cohnii株である、BP-02850、BP-02851、BP-02852を用いて以下の実験を行った。
【0091】
代表的な乾癬様皮膚炎の誘発モデルとしてイミキモド（imiquimod: IMQ)誘導性モデルが知られている(van der Fits, et al., J Immunol. 2009 May 1;182(9):5836-45）。
ＧＦ－ＷＴマウスの耳にイミキモド(製剤名；ベセルナクリーム、持田製薬株式会社）を５０ｍｇ／匹、１日１回、５連日間塗布した。最初の２日間についてはS. cohniiまたはS. epidermidisを２．０×１０7ＣＦＵ／匹で１日１回、綿棒で同時に接種した。
ＧＦ－ＷＴマウスの耳にイミキモド(製剤名；ベセルナクリーム、持田製薬株式会社）を５０ｍｇ／匹、１日１回、５連日間塗布した。最初の２日間についてはS. cohniiまたはS. epidermidisを２．０×１０7ＣＦＵ／匹で１日１回、綿棒で同時に接種した。
【0092】
イミキモドによる耳の腫脹およびリンパ節腫脹の双方の抑制、好中球の減少の程度は各株によって異なっていた。それぞれの結果を図１９Ｂ～Ｄに示す。
［実験例１３］
（S. cohniiの新規単離株のS. aureus惹起性皮膚炎の予防効果）
S. cohniiの株、BP-02848およびBP-02851を接種したＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスへ、当該接種の１４日後に菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したS. aureusの培養液を接種した。臨床スコアを鑑みると、BP-02848およびBP-02851株の両者とも皮膚炎の改善効果を有していることが示されており、また、各マウスの頸部リンパ節腫脹においても両株により腫脹は抑制されていた（図２０ＢおよびＣ）。なお、臨床スコアおよび頸部リンパ節の腫脹の程度はいずれも各株によって異なっていた。
［実験例１３］
（S. cohniiの新規単離株のS. aureus惹起性皮膚炎の予防効果）
S. cohniiの株、BP-02848およびBP-02851を接種したＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスへ、当該接種の１４日後に菌量を２．０×１０6ＣＦＵに調整したS. aureusの培養液を接種した。臨床スコアを鑑みると、BP-02848およびBP-02851株の両者とも皮膚炎の改善効果を有していることが示されており、また、各マウスの頸部リンパ節腫脹においても両株により腫脹は抑制されていた（図２０ＢおよびＣ）。なお、臨床スコアおよび頸部リンパ節の腫脹の程度はいずれも各株によって異なっていた。
【0093】
しかしながらS. aureusの接種から２１日後、当該菌の菌量にはいずれのマウスにおいても明らかな差はみられなかった（図２０Ｄ）。
［実験例１４］
（ステロイド生合成関連遺伝子の発現）
実験例１０において、S. cohniiで作製したノトバイオートマウスにおいて、グルココルチコイド受容体（ＧＣＲ）が最も強く遺伝子発現していることが示された。
［実験例１４］
（ステロイド生合成関連遺伝子の発現）
実験例１０において、S. cohniiで作製したノトバイオートマウスにおいて、グルココルチコイド受容体（ＧＣＲ）が最も強く遺伝子発現していることが示された。
【0094】
ここで、グルココルチコイドはステロイドの一種であることから、発明者らはステロイドの生合成に関連している遺伝子に着目した。ＮＣＢＩに登録されているS. aureus、S. cohnii、およびS. epidermidisの全ゲノムについて、ステロイド生合成関連遺伝子の有無を比較した。その結果、他の酵素遺伝子は３菌に共通して発現していたが、スクアレン合成酵素（ファルネシル二リン酸ファルネシルトランスフェラーゼ（ＦＤＦＴ１）遺伝子、KEGG ID:K00801）はS. cohniiのみにおいて発現している事が分かった（図２１）。
【0095】
KEGG Reference Pathwayによれば、解糖系からテルペノイド骨格が生合成され、ＦＤＦＴ１の作用を経てスクアレンが誘導されたのち、その下流の様々なステロイド骨格の生理活性物質が合成される。言い換えれば、ＦＤＦＴ１はステロイド生合成カスケードのキー遺伝子の一つでありＦＤＦＴ１が無ければ、糖代謝からステロイド骨格の生理活性物質を合成できないと考えられ、このことにより抗炎症効果を奏する生理活性物質が産生されない。
【0096】
以上、S. cohniiが産生するスクアレンにより、抗炎症効果を奏する生理活性物質を産生するためのカスケードが惹起され、S. cohniiによる炎症緩和作用が誘導されると考えられる。
【0097】
［実験例１５］
（スクアレンによる炎症抑制効果）
実験例１４の結果を裏付けるため、スクアレン投与がS. cohniiと同様に炎症を抑制するか、また、ミフェプリストン投与によりその炎症抑制効果が阻害されるか、について検討した。
（スクアレンによる炎症抑制効果）
実験例１４の結果を裏付けるため、スクアレン投与がS. cohniiと同様に炎症を抑制するか、また、ミフェプリストン投与によりその炎症抑制効果が阻害されるか、について検討した。
【0098】
ＧＦ－ＷＴマウスの耳にイミキモド(ベセルナクリーム 持田製薬）を５０ｍｇ／匹、１日１回、５連日間塗布した。
最初の３日間についてはS. cohniiを２．０×１０7ＣＦＵ／匹で１日１回、綿棒で接種するか、スクアレン（株式会社Sigma、S3626-10ML）を２００μｌ／匹で、マウスの耳に５連日間（１日１回）塗布した。さらにマウスの他の一群においては、実験期間においてはミフェプリストン(Sigma-Aldrich社、M8046-1G)を２１０μｇ／ｍＬで自由飲水投与した。
最初の３日間についてはS. cohniiを２．０×１０7ＣＦＵ／匹で１日１回、綿棒で接種するか、スクアレン（株式会社Sigma、S3626-10ML）を２００μｌ／匹で、マウスの耳に５連日間（１日１回）塗布した。さらにマウスの他の一群においては、実験期間においてはミフェプリストン(Sigma-Aldrich社、M8046-1G)を２１０μｇ／ｍＬで自由飲水投与した。
【0099】
S. cohnii接種でイミキモド惹起性の炎症（耳の腫脹およびリンパ節腫脹）は抑制され、さらに当該抑制はミフェプリストンによって阻害されることが確認できた。また、同様にS. cohnii接種の代わりにスクアレン塗布を行ったマウスにおいても、S. cohniiと同程度のイミキモド惹起性の炎症の抑制が認められ、またミフェプリストンによる抑制効果阻害も同様に確認された。結果を（図２２ＢおよびＣ）に示す。
【0100】
［実験例１６］
(ヒト由来S. cohniiによる炎症抑制効果)
本発明者らの解析により上記で用いたマウス由来のS. cohnii株 BP-02848がヒトに対しても同様の抗炎症効果を有する事が認められた。
(ヒト由来S. cohniiによる炎症抑制効果)
本発明者らの解析により上記で用いたマウス由来のS. cohnii株 BP-02848がヒトに対しても同様の抗炎症効果を有する事が認められた。
【0101】
そこで、次にヒト由来のS. cohnii株が同様に抗炎症効果を有するかどうかの検証を行った。
健常者ボランティアの皮膚からのS. cohniiの単離は、理化学研究所「ヒト皮膚細菌叢の網羅的解析」番号H27-1にて承認されたプロトコールに基づいて行った。具体的にはＰＢＳを浸漬した綿棒で、健常者ボランティアの額部皮膚を擦り、付着物を１ｍＬのＰＢＳに再分散させて菌液とし、マンニット食塩培地（日水製薬株式会社、05236）に菌液を塗布して培養し、形成されたコロニーから得た単離菌株に対する１６ＳｒＤＮＡ解析に基づいて、ヒト由来のS. cohnii 株BP-02853を同定した。
健常者ボランティアの皮膚からのS. cohniiの単離は、理化学研究所「ヒト皮膚細菌叢の網羅的解析」番号H27-1にて承認されたプロトコールに基づいて行った。具体的にはＰＢＳを浸漬した綿棒で、健常者ボランティアの額部皮膚を擦り、付着物を１ｍＬのＰＢＳに再分散させて菌液とし、マンニット食塩培地（日水製薬株式会社、05236）に菌液を塗布して培養し、形成されたコロニーから得た単離菌株に対する１６ＳｒＤＮＡ解析に基づいて、ヒト由来のS. cohnii 株BP-02853を同定した。
【0102】
前記ヒト由来のS. cohnii 株BP-02853を、ＳＰＦ－ＷＴマウスに投与することで、抗炎症効果を検討した。
ＳＰＦ－ＷＴマウスの耳にイミキモド(ベセルナクリーム 持田製薬）を５０ｍｇ／匹、１日１回、５連日間塗布した。
ＳＰＦ－ＷＴマウスの耳にイミキモド(ベセルナクリーム 持田製薬）を５０ｍｇ／匹、１日１回、５連日間塗布した。
【0103】
最初の３日間についてはS. cohnii（マウス由来株BP-02848またはヒト由来株BP-02853）またはS. epidermidisを２．０×１０7ＣＦＵ／匹で１日１回、綿棒で接種した。
S. cohnii株BP-02853の接種で、BP-02848と同程度に炎症の程度やリンパ節腫脹が抑えられた（図２３ＢおよびＣ）。
S. cohnii株BP-02853の接種で、BP-02848と同程度に炎症の程度やリンパ節腫脹が抑えられた（図２３ＢおよびＣ）。
【0104】
［実験例１７］
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用によるS. aureus依存性炎症抑制効果)
S. aureusを２．０×１０7ＣＦＵ／匹でＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに接種した。接種日から５日、６日、７日、１２日、１３日、および１４日後に、２）S. cohniiのみ、３）S. epidermidisのみ、３）S. cohniiおよびS. epidermidisの接種をそれぞれ２．０×１０7ＣＦＵ／匹で行った(S. cohniiおよびS. epidermidisはそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつで計４×１０6ＣＦＵ／匹で接種した）（図２４Ａ）。なお、１）はポジティブコントロールでありS. aureusのみの接種しかしておらず、５）無接種のものはネガティブコントロールであり、いずれの菌も接種していない。
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用によるS. aureus依存性炎症抑制効果)
S. aureusを２．０×１０7ＣＦＵ／匹でＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに接種した。接種日から５日、６日、７日、１２日、１３日、および１４日後に、２）S. cohniiのみ、３）S. epidermidisのみ、３）S. cohniiおよびS. epidermidisの接種をそれぞれ２．０×１０7ＣＦＵ／匹で行った(S. cohniiおよびS. epidermidisはそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつで計４×１０6ＣＦＵ／匹で接種した）（図２４Ａ）。なお、１）はポジティブコントロールでありS. aureusのみの接種しかしておらず、５）無接種のものはネガティブコントロールであり、いずれの菌も接種していない。
【0105】
臨床スコアによるとS. cohniiまたはS. epidermidisをそれぞれ単独で接種したものについては、S. aureusによる炎症を抑えることが確認された。また、S. cohniiおよびS. epidermidisを併用接種したものについてはそれぞれを単独接種したものに比べてS. aureusによる炎症がさらに抑制されることが確認された（図２４Ｂ）。
【0106】
またS. aureus接種２１日後における頸部リンパ節腫脹も、臨床スコアと同様に、S. cohniiまたはS. epidermidisの予防投与によって抑制された（図２４Ｃ）。
［実験例１８］
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用によるS. aureus依存性炎症予防効果)
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにS. cohniiのみ、S. epidermidisのみ、ならびにS. cohniiおよびS. epidermidisをそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつ皮膚に接種した(S. cohniiおよびS. epidermidisはそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつで計４×１０6ＣＦＵ／匹で接種した）。接種の２週間後に、S. aureusを２×１０6ＣＦＵ／匹ずつ皮膚に接種した。経時的に観測した結果から得られた臨床スコアを図２５Ａに、S. aureusの接種から２１日後の頸部リンパ節の重量を図２５Ｂに示す。
［実験例１８］
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用によるS. aureus依存性炎症予防効果)
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスにS. cohniiのみ、S. epidermidisのみ、ならびにS. cohniiおよびS. epidermidisをそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつ皮膚に接種した(S. cohniiおよびS. epidermidisはそれぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹ずつで計４×１０6ＣＦＵ／匹で接種した）。接種の２週間後に、S. aureusを２×１０6ＣＦＵ／匹ずつ皮膚に接種した。経時的に観測した結果から得られた臨床スコアを図２５Ａに、S. aureusの接種から２１日後の頸部リンパ節の重量を図２５Ｂに示す。
【0107】
臨床スコアによると、S. cohniiまたはS. epidermidisを単独で事前接種したものおよび、S. cohniiおよびS. epidermidisを併用して事前接種したものについては、S. aureusによる炎症が抑制されることが確認された（図２５Ａ）。
【0108】
またS. aureus接種２１日後における頸部リンパ節腫脹も、臨床スコアと同様に、S. cohniiまたはS. epidermidisの事前接種によって抑制されており、さらにS. cohniiおよびS. epidermidisを併用して事前接種したものについては単独接種したものよりもさらに頸部リンパ節腫脹は抑制されていた（図２５Ｂ）。
【0109】
［実験例１９］
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用による菌量変化)
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに、S. aureusのみ、S. aureusおよびS. cohnii、S. aureusおよびS. epidermidis、ならびにS. aureusとS. cohniiおよびS. epidermidisの接種を２．０×１０7ＣＦＵ／匹でそれぞれ行い、２１日後に菌量の測定を行った。S. aureusおよびS. cohniiならびにS. aureusおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいてはS. aureusのみを接種したマウスに比べてS. aureusの菌量について有意な差は見られなかったが、S. aureusとともにS. cohniiおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいてはS. aureusの菌量が有意に減少しれいることがわかった（図２６Ａ）。なお、いずれのマウスにおいてもS. aureus、S. cohnii、およびS. epidermidisを併せたtotalの菌量については差が見られなかった（図２６Ｂ）。さらに解析を行うと、S. aureusとともにS. cohniiおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいては他のブドウ球菌属に対してS. aureusの割合が有意に低いことが判った（図２６Ｃ）。なお、S. aureusとともにS. cohniiまたはS. epidermidisを単独接種したマウスにおいてはS. aureusの菌量はS. aureusのみを接種した場合と比較してそれほど差はみられなかった。
(ヒト由来S. cohniiおよびS. epidermidisの併用による菌量変化)
ＧＦ－Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスに、S. aureusのみ、S. aureusおよびS. cohnii、S. aureusおよびS. epidermidis、ならびにS. aureusとS. cohniiおよびS. epidermidisの接種を２．０×１０7ＣＦＵ／匹でそれぞれ行い、２１日後に菌量の測定を行った。S. aureusおよびS. cohniiならびにS. aureusおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいてはS. aureusのみを接種したマウスに比べてS. aureusの菌量について有意な差は見られなかったが、S. aureusとともにS. cohniiおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいてはS. aureusの菌量が有意に減少しれいることがわかった（図２６Ａ）。なお、いずれのマウスにおいてもS. aureus、S. cohnii、およびS. epidermidisを併せたtotalの菌量については差が見られなかった（図２６Ｂ）。さらに解析を行うと、S. aureusとともにS. cohniiおよびS. epidermidisを接種したマウスにおいては他のブドウ球菌属に対してS. aureusの割合が有意に低いことが判った（図２６Ｃ）。なお、S. aureusとともにS. cohniiまたはS. epidermidisを単独接種したマウスにおいてはS. aureusの菌量はS. aureusのみを接種した場合と比較してそれほど差はみられなかった。
【0110】
［実験例２０］
(皮膚ＦＡＣＳ解析)
S. cohniiの局所的ステロイドメタボリズムの効果を解析するため、無菌Ｂ６Ｎ ＷＴ８週齢のマウスに、２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）、ヒト由来S. cohnii（１０Ｂ１）、マウス由来S. aureus（１Ｄ１）をそれぞれ背部に接種した。投与から４週間後に皮膚を採取してＴ細胞についてＦＡＣＳ解析を行った。図２７は各マウスにおける菌量およびＦＡＣＳ解析の結果である。
(皮膚ＦＡＣＳ解析)
S. cohniiの局所的ステロイドメタボリズムの効果を解析するため、無菌Ｂ６Ｎ ＷＴ８週齢のマウスに、２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）、ヒト由来S. cohnii（１０Ｂ１）、マウス由来S. aureus（１Ｄ１）をそれぞれ背部に接種した。投与から４週間後に皮膚を採取してＴ細胞についてＦＡＣＳ解析を行った。図２７は各マウスにおける菌量およびＦＡＣＳ解析の結果である。
【0111】
S. cohnii（２Ａ１、７Ｃ１、１０Ｂ１）は炎症性免疫細胞であるＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞を誘導しない一方、S. aureus（１Ｄ１）では野生型マウスにおいてもＩＬ－１７Ａ産生Ｔ細胞が誘導されている。またＦｏｘｐ３＋ＣＤ４Ｔ細胞であらわされるＴｒｅｇ細胞の誘導はS. cohniiでは変化が見られず、S. aureusでは減少していた。
【0112】
これらから、野生型マウスにおいてS. cohniiの接種は炎症性Ｔ細胞の誘導は見られないこと、S. cohniiによる炎症抑制効果はTreg細胞誘導とは別の機序と考えられました。
［実験例２１］
(糖質コルチコイドの検出－１）
更にコルチコイドについて詳細な解析を行うために無菌Ｂ６Ｎ ＷＴ８週齢のマウスに、それぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）、ヒト由来S. cohnii（１０Ｂ１）、マウス由来S. aureus（１Ｄ１）を接種して２８日後の背部皮膚および頸部皮膚を用いてGC-MS脂肪酸解析を行った。コルチコステロンに関してはS. cohnii、特にマウス由来S. cohnii（２Ａ１）を接種したマウスについては背部および頸部の両方において無処理のマウスより有意に多く検出された。一方コルチコステロンの前駆体であるプロゲステロンに関してはいずれのマウスの背部、頸部ともに有意な差は見られなかった（図２８）。
［実験例２１］
(糖質コルチコイドの検出－１）
更にコルチコイドについて詳細な解析を行うために無菌Ｂ６Ｎ ＷＴ８週齢のマウスに、それぞれ２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）、ヒト由来S. cohnii（１０Ｂ１）、マウス由来S. aureus（１Ｄ１）を接種して２８日後の背部皮膚および頸部皮膚を用いてGC-MS脂肪酸解析を行った。コルチコステロンに関してはS. cohnii、特にマウス由来S. cohnii（２Ａ１）を接種したマウスについては背部および頸部の両方において無処理のマウスより有意に多く検出された。一方コルチコステロンの前駆体であるプロゲステロンに関してはいずれのマウスの背部、頸部ともに有意な差は見られなかった（図２８）。
【0113】
［実験例２２］
(糖質コルチコイドの検出－２）
Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの頸部に２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）を接種して２８日後の頸部皮膚について、実験例２１と同様にＧＣ－ＭＳ脂肪酸解析を行った。実験例２１と同様にコルチコステロンおよびプロゲステロンの解析結果を図２９に示す。コルチコステロンに関してはマウス由来S. cohnii（２Ａ１）を接種したマウスについては頸部において無処理のマウスより有意に多く検出された。一方コルチコステロンの前駆体であるプロゲステロンに関してはいずれのマウスにおいても有意な差は見られなかった（図２９）。
（考察）
上述した実験例等の結果から、本研究では、皮膚常在菌の一種であるS. cohniiやS. epidermidis等が皮膚炎に対して予防的、治療的効果を有することを明らかにした。さらにこれらの菌は宿主に作用し、宿主の皮膚におけるグルココルチコイド応答遺伝子の活性を亢進すること、特にスクアレン合成酵素が皮膚炎抑制効果を有する菌に特異的に発現していることを見出した。
(糖質コルチコイドの検出－２）
Ｔｍｅｍ７９ＫＯマウスの頸部に２×１０6ＣＦＵ／匹のマウス由来S. cohnii（２Ａ１）、マウス由来S. cohnii（７Ｃ１）を接種して２８日後の頸部皮膚について、実験例２１と同様にＧＣ－ＭＳ脂肪酸解析を行った。実験例２１と同様にコルチコステロンおよびプロゲステロンの解析結果を図２９に示す。コルチコステロンに関してはマウス由来S. cohnii（２Ａ１）を接種したマウスについては頸部において無処理のマウスより有意に多く検出された。一方コルチコステロンの前駆体であるプロゲステロンに関してはいずれのマウスにおいても有意な差は見られなかった（図２９）。
（考察）
上述した実験例等の結果から、本研究では、皮膚常在菌の一種であるS. cohniiやS. epidermidis等が皮膚炎に対して予防的、治療的効果を有することを明らかにした。さらにこれらの菌は宿主に作用し、宿主の皮膚におけるグルココルチコイド応答遺伝子の活性を亢進すること、特にスクアレン合成酵素が皮膚炎抑制効果を有する菌に特異的に発現していることを見出した。
【0114】
上述したような作用機序に基づいてS. cohnii等、特定の皮膚常在菌により皮膚炎の増悪を制御することが可能になると考えられ、このことは皮膚炎の治療用、改善用、予防用の医薬の創薬または皮膚用の医薬部外品や化粧品の開発ならびに新たな治療方法の開発へと進展する可能性が考えられる。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【配列表】