特許 7445695 長期活性型ポリペプチドならびに当該ポリペプチドの製造方法および投与方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-02-28

(45)【発行日】2024-03-07

(54)【発明の名称】長期活性型ポリペプチドならびに当該ポリペプチドの製造方法および投与方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/27 20060101AFI20240229BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240229BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240229BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240229BHJP

   A61P 5/06 20060101ALI20240229BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240229BHJP

   C07K 14/61 20060101ALN20240229BHJP

【ＦＩ】

A61K38/27 ZNA

A61K47/12

A61K47/02

A61K9/08

A61P5/06

A61K47/64

C07K14/61

【請求項の数】 19

(21)【出願番号】P 2022052919

(22)【出願日】2022-03-29

(62)【分割の表示】P 2019236267の分割

【原出願日】2014-10-21

(65)【公開番号】P2022088521

(43)【公開日】2022-06-14

【審査請求日】2022-03-30

(31)【優先権主張番号】14/059,134

(32)【優先日】2013-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】14/309,496

(32)【優先日】2014-06-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】508233526

【氏名又は名称】オプコ バイオロジクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001379

【氏名又は名称】弁理士法人大島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ファレス、フアド

(72)【発明者】

【氏名】フィマ、ウディ エヤル

【審査官】三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１３／０１８０９８（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３８／２７

Ｃ０７Ｋ １４／６１

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００－ ４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００－ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

医薬製剤を含むシリンジを製造する方法であって、
前記医薬製剤は、対象に０．２５～０．６６ｍｇ／（体重）ｋｇ／週の投与量で投与され、前記対象は、成長ホルモン欠乏症を有するヒト小児であり、前記方法は、
（ａ）シリンジを準備するステップと、
（ｂ）ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のアミノ末端に、絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を１つ付加し、かつ前記ｈＧＨのカルボキシ末端に絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを２つ一列に付加することにより、前記ｈＧＨを改変した改変ｈＧＨを得るステップと、
（ｃ）前記ステップ（ｂ）の前記改変ｈＧＨと、緩衝剤および等張化剤とを混合するステップであって、混合により医薬製剤を生成する、該混合するステップと、
（ｄ）前記医薬製剤をシリンジに充填するステップとを含み、
前記医薬製剤は、成長ホルモン欠乏症を有する前記対象に週１回投与することにより、前記成長ホルモン欠乏症を有するヒト小児である前記対象においてＳＤＳ値で±２の範囲である正常治療範囲内にインスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）のレベルを上昇させるための医薬製剤であるか、ヒト小児である前記対象においてＳＤＳ値で±２の範囲である正常治療範囲内にインスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）のレベルを維持するための医薬製剤であるか、またはヒト小児である前記対象においてＳＤＳ値で±２の範囲である正常治療範囲内にインスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）のレベルを上昇させ、かつ維持するための医薬製剤のいずれかであることを特徴とする方法。

【請求項2】

請求項１に記載の方法であって、
既定量の前記改変ｈＧＨを有する、週１回投与形態の前記改変ｈＧＨを製剤化するステップをさらに含むことを特徴とする方法。

【請求項3】

請求項１または２に記載の方法であって、
前記緩衝剤が、１０ｍＭクエン酸であることを特徴とする方法。

【請求項4】

請求項１～３のいずれか１項に記載の方法であって、
前記等張化剤が、１４７ｍＭ塩化ナトリウムであることを特徴とする方法。

【請求項5】

請求項１～４のいずれか１項に記載の方法であって、
前記混合するステップ（ｃ）において、４～７．２のｐＨで混合が行われることを特徴とする方法。

【請求項6】

請求項５に記載の方法であって、
前記混合するステップ（ｃ）において、６．２～６．７のｐＨで混合が行われることを特徴とする方法。

【請求項7】

請求項１～６のいずれか１項に記載の方法であって、
前記改変ｈＧＨの少なくとも１つのＣＴＰの配列が、配列番号１８のアミノ酸配列からなることを特徴とする方法。

【請求項8】

請求項１～７のいずれか１項に記載の方法であって、
前記改変ｈＧＨの少なくとも１つのＣＴＰが、グリコシル化されていることを特徴とする方法。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか１項に記載の方法であって、
前記改変ｈＧＨの少なくとも１つのＣＴＰが、共有結合のリンカーを介して前記ｈＧＨに結合されることを特徴とする方法。

【請求項10】

請求項９に記載の方法であって、
前記共有結合のリンカーが、ペプチド結合であることを特徴とする方法。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法であって、
前記改変ｈＧＨのアミノ酸配列が、配列番号３９の２７番目から３０１番目のアミノ酸からなる配列であることを特徴とする方法。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法であって、
前記改変ｈＧＨが、配列番号４５の８９番目から９１３番目の核酸からなる配列によってコードされることを特徴とする方法。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法であって、
前記ヒト小児である前記対象におけるＩＧＦ－１レベルの前記正常治療範囲が、ＳＤＳ値で±１．５の範囲であることを特徴とする方法。

【請求項14】

請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法であって、
前記ＩＧＦ－１レベルは、前記正常治療範囲内に２週間～６週間の期間維持されることを特徴とする方法。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法であって、
前記医薬製剤は、前記対象に０．２５ｍｇ／（体重）ｋｇ／週の投与量で投与されることを特徴とする方法。

【請求項16】

請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法であって、
前記医薬製剤は、前記対象に０．４８ｍｇ／（体重）ｋｇ／週の投与量で投与されることを特徴とする方法。

【請求項17】

請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法であって、
前記医薬製剤は、前記対象に０．６６ｍｇ／（体重）ｋｇ／週の投与量で投与されることを特徴とする方法。

【請求項18】

請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法であって、
前記医薬製剤は、注射を介して前記対象に投与されることを特徴とする方法。

【請求項19】

請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法であって、
前記ヒト小児である前記対象が、成長ホルモン療法を必要とすることを特徴とする方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

ＣＴＰ改変（修飾）ヒト成長ホルモンポリペプチド、ならびに当該ポリペプチドを含有する医薬製剤および医薬組成物、ならびに当該ポリペプチドの製造方法および使用方法が開示される。

【背景技術】

【0002】

ポリペプチドは、血液、肝臓または腎臓における変性または酵素分解に影響を受けやすい。そのため、ポリペプチドは通常、数時間の短い循環半減期を有している。その安定性の低さのために、ペプチド製剤は多くの場合、活性ペプチドの有効血漿濃度を維持するために持続的な頻度で送達される。さらに、ペプチド製剤は通常、点滴により投与されるため、頻繁なペプチド製剤の投与は対象にとって非常に不便である。

【0003】

たとえば短い血清半減期等の、好ましくない薬物動態によって、それ以外は有望な多くの薬剤候補の薬剤開発が阻まれている。血清半減期は、分子の実験的な特性であり、可能性のある新規の各薬剤に対し、実験により測定されなければならない。たとえば、低分子量ポリペプチド製剤の場合には、腎ろ過等の生理学的クリアランス機構により必要とされる投薬レジメンの費用または頻度によって、薬剤を治療レベルに維持することは非現実的である。逆に、薬剤またはその代謝物が毒性の副作用を有している場合には、長い血清半減期は望ましいものではない。

【0004】

ゆえに、治療用ポリペプチドの薬理学的有効性を高く維持しながら、その半減期を延長させるような技術が必要とされている。そのような望ましいペプチド製剤はまた、対象に投与された際の血清安定性の強化、高い活性、および望ましくない免疫反応を誘導する可能性が低いという要求にも合致しなければならない。本発明は、高い薬理学的有効性を維持し、ならびに血清安定性を増強させ、高い活性を有し、および対象に望ましくない免疫反応を誘導する可能性を低下させながら、半減期が延長されたＣＴＰ改変ペプチドを提供することにより、この要求に対応するものである。

【発明の概要】

【0005】

１つの実施形態において、本発明は、医薬製剤であって、緩衝剤と、等張化剤と、成長ホルモンならびに該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）および成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなるＣＴＰ改変ポリペプチドとを含む医薬製剤に関する。１つの実施形態において、成長ホルモンはヒト成長ホルモンである。１つの実施形態において、等張化剤は塩化ナトリウムである。１つの実施形態において、等張化剤は１４７ｍＭの塩化ナトリウムである。１つの実施形態において、当該製剤は液体製剤である。１つの実施形態において、当該製剤のｐＨは約６．２～６．４である。

【0006】

１つの実施形態において、本発明は、成長ホルモン欠乏症を有する対象に、週に１回投与するための製剤に関する。他の実施形態においては、当該対象は、成人である。他の実施形態においては、当該対象は、成長ホルモン欠乏症の成人である。他の実施形態においては、当該対象は、小児である。他の実施形態においては、当該対象は、成長ホルモン欠乏症の小児である。他の実施形態においては、本発明は、成長ホルモン欠乏症を有する対象に、週に１回投与するための医薬製剤を作製する方法に関するものであり、当該方法は、
ａ．当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを付加させることにより、成長ホルモンを改変するステップと、
ｂ．上記ステップａで改変された成長ホルモンと、当該緩衝剤、および当該等張化剤を、６．２～６．４のｐＨで混合するステップと、
ｃ．当該製剤をシリンジに予め充填するステップと
を含む。

【0007】

１つの実施形態において、本発明は、ＣＴＰ改変ポリペプチドを含有する、成長ホルモン欠乏症を有する対象に、週に１回投与するための医薬組成物に関するものであり、当該ＣＴＰ改変ポリペプチドは、成長ホルモン、および当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなる。１つの実施形態において、当該成長ホルモンは、ヒト成長ホルモンである。他の実施形態においては、当該対象は、成人である。他の実施形態においては、当該対象は、成長ホルモン欠乏症の成人である。他の実施形態においては、当該対象は、小児である。他の実施形態においては、当該対象は、成長ホルモン欠乏症の小児である。

【0008】

１つの実施形態において、本発明は、本発明の医薬製剤または本発明の医薬組成物を含む週１回投与製剤に関するものである。

【0009】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書に開示される製剤をシリンジに充填する方法に関するものであり、当該方法は、
ａ．既定量のＣＴＰ改変ｈＧＨを有する、週１回投与形態の当該ＣＴＰ改変ｈＧＨを製剤化するステップと、
ｂ．当該製剤をシリンジに充填するステップと
を含む。

【0010】

本発明の他の特性および利点は、以下の詳細な実施例および図面から明らかである。しかしながら、当該詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示唆するものであり、解説の目的のためにのみ提示され、本発明の主旨および範囲内での様々な改変および修飾が、本明細書から当業者には明らかであることを理解されたい。

【0011】

以下の図面は、本明細書の一部を形成するものであり、本開示のさらなる態様をより説明するために含まれ、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これら図面の１つ以上を参照することにより、それら発明はさらに理解されうる。特許または特許出願書類は、少なくとも１つのカラーで出願された図面を含有している。カラー図面（複数含む）を伴う当該特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要な料金の支払いにより、当局から提供される。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】ＭＯＤ－４０２０（配列番号３６）、ＭＯＤ－４０２１（配列番号３７）、ＭＯＤ－４０２２（配列番号３８）、ＭＯＤ－４０２３（配列番号３９）、およびＭＯＤ－４０２４（配列番号４０）の分子量および識別番号を示すウェスタンブロットである。ＰＡＧＥ ＳＤＳゲルはブロッティングされ、および抗ｈＧＨモノクローナル抗体を用いて染色された。写真は、同種の市販されている野生型ｈＧＨ、ＭＯＤ－７０２０－４変異体が、抗ｈＧＨ抗体により認識されることを示している。

【図2】本発明のＧＨ－ＣＴＰポリペプチド投与後の下垂体切除ラットの体重増加を示す棒グラフである。

【図3】（１）ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ ｐＣＩ－ｄｈｆｒプラスミドのマップ、および（２）ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの構造タンパク質式の２つのスキームを含む。

【図4】ラット（投与量／経路あたり、ｎ＝３～６）における、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰもしくはＧＨの単回ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．投与後の、平均血漿ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰまたはＧＨの濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示すグラフである。

【図5】ＧＨの毎日投与（０．１ｍｇ／Ｋｇ／日）と比較した、下垂体切除ラットにおける、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ（０．４、０．８、および４ｍｇ／Ｋｇ）の単回ｓ．ｃ．投与後の平均体重増加増分を示すグラフである（投与量あたり、ｎ＝１０）。

【図6】ラットにおいて、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの単回投与後の曲線下面積が、体重増加と関連することを示すグラフである。

【図7】毎日のＧＨ投与（０．１ｍｇ／Ｋｇ／日）と比較した、下垂体切除ラットにおける、４日ごとのＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ（０．４、０．８、および４ｍｇ／Ｋｇ）の単回ｓ．ｃ．投与後の体重増加増分を示すグラフである（投与量あたり、ｎ＝１０）。

【図8】ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよび市販ｈＧＨのＳＣ注射後の、下垂体切除ラットにおけるｈＧＨ血清濃度を示すグラフである。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ ０．６ｍｇ／Ｋｇもしくは１．８ｍｇ／Ｋｇの単回投与、またはＢｉｏｔｒｏｐｉｎ ０．３５ｍｇ／Ｋｇもしくは１．０５ｍｇ／Ｋｇの単回投与は、下垂体切除ラットに対し皮下注射され、ＰＫ／ＰＤプロファイルが測定された。注射後の血清ｈＧＨは、特異的ＥＬＩＳＡキットを用いて測定された。

【図9】ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよび市販ｈＧＨのＳＣ注射後の、下垂体切除ラットにおけるＩＧＦ－１血清レベルを示すグラフである。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ ０．６ｍｇ／Ｋｇもしくは１．８ｍｇ／Ｋｇの単回投与、またはＢｉｏｔｒｏｐｉｎ ０．３５ｍｇ／Ｋｇもしくは１．０５ｍｇ／Ｋｇの単回投与は、下垂体切除ラットに対し皮下注射され、ＰＫ／ＰＤプロファイルが測定された。注射後の血清ＩＧＦ－１は、特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて測定された。

【図10】第ＩＩ相試験デザインの図を示す。

【図11】４回目の毎週投与後のＩＧＦ－１ ＳＤＳを示す。全てのコホート。

【図12】成長ホルモン欠乏症の成人に対する、ＭＯＤ－４０２３の皮下投与後のＩＧＦ－１血漿濃度における、基準からの平均変化を示す（第Ｉ相；４回目注射後）。

【図13】４か月の延長試験の間における、平均ＩＧＦ－１レベル（投与後４日目に測定された）を示す（５２名の患者）。

【図14】ＭＯＤ－４０２３の第ＩＩ相臨床試験の概略図である。

【図15A】毎週の平均ＭＯＤ－４０２３ ＰＫプロファイルを示すグラフである。

【図15B】毎日の平均ｈＧＨ ＰＫプロファイルを示すグラフである。

【図16】ＭＯＤ－４０２３ 小児第二相、６か月平均ＩＧＦ－１ ＳＤＳプロファイルを示すグラフである。

【図17】ＭＯＤ－４０２３ 小児第二相、各最終投与量での２週目の間における、ＩＧＦ－１ ＢＰ－３プロファイルを示すグラフである。

【図18】ＭＯＤ－４０２３ 小児第二相－６か月平均ＩＧＦ－１ ＢＰ－３プロファイルを示すグラフである。

【図19】６か月の処置を完了した全ての患者に対する、ＭＯＤ－４０２３小児第ＩＩ相 ＨＶ結果の６か月の年率換算の身長発育速度を示すグラフである。

【図20A】ＭＯＤ－４０２３小児第ＩＩ相前臨床ＨＶ ＳＤＳ結果を示すグラフである。

【図20B】６か月 ＨＶ ＳＤＳ結果を示すグラフである。

【図21】各最終投与量でのＭＯＤ－４０２３小児第ＩＩ相－ＰＤ（ＩＧＦ－１ ＳＤＳ）プロファイルを示すグラフである。

【図22】Δ身長ＳＤＳを示すグラフである。

【図23】最終投与量での基準からのＭＯＤ－４０２３小児第ＩＩ相－ＩＧＦ－１変化を示すグラフである。

【図24】１０ｍＭクエン酸、１４７ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ６）において産生された非ＧＭＰバッチおよびＧＭＰバッチを示す表である。

【図25A】－２０℃でのクローン２ ＭＯＤ－４０２３ ＲＰ－ＨＰＬＣ安定性を示すグラフである。

【図25B】５℃でのクローン２ ＭＯＤ－４０２３ ＲＰ－ＨＰＬＣ安定性を示すグラフである。

【図26】２５℃でのクローン２ ＭＯＤ－４０２３ ＲＰ－ＨＰＬＣの安定性を示すグラフである。

【図27A】－２０℃でのクローン２８（Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ）安定性を示すグラフである（ＲＰ－ＨＰＬＣ）。

【図27B】５℃でのクローン２８（Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ）安定性を示すグラフである（ＲＰ－ＨＰＬＣ）。

【図28A】２５℃でのクローン２８（Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ）安定性を示すグラフである（ＲＰ－ＨＰＬＣ）。

【図28B】５℃でのクローン２およびクローン２８の安定性プロファイルの比較を示すグラフである（ＲＰ－ＨＰＬＣ）。

【図29】Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣ）からＲｅｎｔｓｃｈｌｅｒ（ＲＢ）への、ＭＯＤ－４０２３製造の移転を示す表である。

【図30A】図３０は、Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒ（ＲＢ）とＸｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣＬＸ）－主要ピークの間のＲＰ－ＨＰＬＣ安定性結果における差異を示すグラフである。

【図30B】ＧＭＰ１の主要ピーク安定性結果を示す表である（ＲＢ）。

【図30C】ＸＣＬＸの主要ピーク安定性結果を示す表である（ＲＢで検証された）。

【図31A】Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒ（ＲＢ）とＸｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣＬＸ）－ピーク３の間のＲＰ－ＨＰＬＣ安定性結果における差異を示すグラフである。

【図31B】ＧＭＰ１のピーク３安定性結果を示す表である（ＲＢ）。

【図31C】ＸＣＬＸのピーク３安定性結果を示す表である（ＲＢで検証された）。

【図32A】Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒ（ＲＢ）とＸｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣＬＸ）－ピーク５の間のＲＰ－ＨＰＬＣ安定性結果における差異を示すグラフである。

【図32B】ＧＭＰ１のピーク５安定性結果を示す表である（ＲＢ）。

【図32C】ＸＣＬＸのピーク５安定性結果を示す表である（ＲＢで検証された）。

【図33A】２５℃で３か月後の、ＣＲＰ－ＨＰＬＣ、バッチＧＭＰ Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘの安定性結果を示すグラフである。ピーク７は、ＸＣマテリアルでは観察されなかった。

【図33B】Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒでの、バッチＧＭＰ－１、ＲＰ－ＨＰＬＣの安定性結果を示すグラフである。ＸＣマテリアルでは観察されなかったピーク７が、２５℃、２週後に現れている。

【図34】２５℃、３か月後のＲＰ－ＨＰＬＣ安定性ＧＭＰ－１を示すグラフである。矢印は、ＸＣマテリアルでは観察されなかった新たなピーク（７）を指している。

【図35A】ＭＯＤ－４０２３バッチのＩＥＦプロファイルを示す。ｐＩ値３．５～４．２の範囲に、類似したバンドパターンが存在する。１つのＸＣＬＸバッチにおいて、高ｐＩ境界に、微かなアイソフォームがわずかに存在する。ＲＢバッチにおいては、低ｐＩ境界に、微かなアイソフォームが多く存在する。

【図35B】ＲＢおよびＸＣＬＸからの安定性結果（ＩＥＦ）を示す（２５℃で３か月）。ＸＣＬＸ試料において、より多くの拡散したバンドがある。

【図36A】主要ピーク％に対する、高温の効果を示す。

【図36B】ピーク％に対する、高温の効果を示す。ピーク３の形成は、温度に依存しており、高温でより加速される。

【図36C】ピーク％に対する、高温の効果を示す。ピーク５の形成は、温度に依存しており、高温でより加速される。

【図36D】ピーク％に対する、高温の効果を示す。

【図37A】主要ピーク％に対するｐＨの効果を示す。

【図37B】ピーク％に対するｐＨの効果を示す。ピーク３：ｐＨ＝４で５日間まで、およびｐＨ＝１２で２時間までインキュベーションした後、ピーク％における変化はない。

【図37C】ピーク％に対するｐＨの効果を示す。ピーク５：ｐＨ＝４、６時間までインキュベーションした後、ピーク％における変化はない。しかし、６時間後、急激なピーク％の増加が観察された。ｐＨ＝１２、２時間のインキュベーションでは、ピークは消失している。

【図37D】ピーク％に対するｐＨの効果を示す。

【図38】Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒでの強制分解実験を示す（クローン２８）。自然状態（上方）およびストレス下（下方）のＭＯＤ－４０２３の製剤原料の拡大図を重ね合わせた。非ストレス下試料に対しては、ピークはＬＯＱを下回っているため、ＭＯＤ－４０２３製剤原料における関連体５の解析のために、ＭＯＤ－４０２３（ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ）の製剤原料のストレス下試料（６５℃で約３日）が調製された。

【図39】ＲＰ－ＨＰＬＣ関連体に対するｐＨの効果を示す。検証試料：ＲＢ－４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝５．９；ＲＢ－１０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＸＣＬＸ－４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本出願は、２０１３年１０月２１日に出願された米国特許出願公開番号ＵＳ－２０１４－０１１３８６０－Ａ１の優先権を主張するものであり、および２０１４年６月１９日に出願された米国特許出願番号１４／３０９，４９６の優先権を主張するものである。これら出願は、その全体において、参照により本明細書に援用される。

【0014】

１つの実施形態において、本発明は、緩衝剤、等張化剤、ならびに、成長ホルモン、および当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなるＣＴＰ改変ポリペプチドを含有する医薬製剤に関する。

【0015】

１つの実施形態において、本発明は、成長ホルモン欠乏症を有する対象に対し、週１回投与するための製剤に関する。他の実施形態において、当該対象は、成人である。他の実施形態において、当該対象は、成長ホルモン欠乏症の成人である。他の実施形態において、当該対象は、小児である。他の実施形態において、当該対象は、小児成長ホルモン欠乏症である。他の実施形態において、本発明は、成長ホルモン欠乏症を有する対象に週１回投与するための医薬製剤を製造する方法に関するものであり、当該方法は、
ａ．当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を１つ、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを２つ付加することにより、成長ホルモンを改変するステップと、
ｂ．上記ステップａの当該改変成長ホルモンと、当該緩衝剤、および当該等張化剤を、６．２～６．４のｐＨで混合するステップと、
ｃ．当該製剤をシリンジに予め充填するステップと
を含む。

【0016】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書に開示される製剤をシリンジに充填する方法に関するものであり、当該方法は、
ａ．既定量のＣＴＰ改変ｈＧＨを有する、週１回投与形態の当該ＣＴＰ改変ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を製剤化するステップと、
ｂ．当該製剤をシリンジに充填するステップと
を含む。

【0017】

１つの実施形態において、本発明は、長期活性型ポリペプチド、ならびに当該ポリペプチドの製造方法および使用方法を開示する。他の実施形態において、長期活性型ポリペプチドは、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含有する。他の実施形態において、ＣＴＰは、それらから誘導されたタンパク質またはペプチドの分解に対する保護剤として作用する。他の実施形態において、ＣＴＰは、それらから誘導されたタンパク質またはペプチドの循環半減期を延長させる。一部の実施形態において、ＣＴＰは、それらから誘導されたタンパク質またはペプチドの有効性を増強させる。

【0018】

他の実施形態において、「ＣＴＰペプチド」、「カルボキシ末端ペプチド」、「ＣＴＰ配列」、および「絨毛性ゴナドトロピンＣ末端ペプチド」は、本明細書において相互交換可能に用いられる。他の実施形態において、カルボキシ末端ペプチドは、全長ＣＴＰである。他の実施形態において、カルボキシ末端ペプチドは、断片化ＣＴＰである。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0019】

他の実施形態において、「シグナル配列」および「シグナルペプチド」は、本明細書において、相互交換可能に用いられる。他の実施形態において、ヌクレオチドに関連した場合の「配列」とは、コード部分を指し得る。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0020】

他の実施形態において、「対象のペプチド」および「対象のポリペプチド配列」は、本明細書において相互交換可能に用いられる。他の実施形態において、対象のペプチドは、全長タンパク質である。他の実施形態において、対象のペプチドは、タンパク質断片である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0021】

他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドからなるポリペプチドを含有する医薬製剤が開示される。他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、および１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドの当該アミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなるポリペプチドを含有する医薬製剤が開示される。他の実施形態において、当該医薬製剤はさらに、緩衝剤および等張化剤を含有する。他の実施形態において、緩衝剤は１０ｍＭのクエン酸であり、等張化剤は１４７ｍＭのＮａＣｌである。１つの実施形態において、当該製剤のｐＨは約６．０である。他の実施形態において、当該製剤のｐＨは約６．２である。他の実施形態において、当該製剤のｐＨは約６．４である。他の実施形態において、当該製剤のｐＨは約６．０～６．４の範囲である。１つの実施形態において、緩衝剤は１０ｍＭのクエン酸であり、等張化剤は１４７ｍＭのＮａＣｌであり、およびｐＨは６．０である。他の実施形態において、当該製剤は液体製剤である。

【0022】

他の実施形態において、本明細書により、本明細書に開示される医薬製剤を含む週１回投与製剤が開示される。

【0023】

他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドからなるポリペプチドを含有する医薬組成物が開示される。他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド、および１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドの当該アミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなるポリペプチドを含有する医薬組成物が開示される。

【0024】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰを含有する成長ホルモンは、ＣＴＰを有していない同じ成長ホルモンと比較し、高いｉｎ ｖｉｖｏ生物活性を有している。他の実施形態において、そのアミノ末端に付加されたＣＴＰを少なくとも１つ、およびそのカルボキシ末端に付加されたＣＴＰを少なくとも２つ、含有する成長ホルモンは、ＣＴＰを有していない同じ成長ホルモンと比較し、高いｉｎ ｖｉｖｏ生物活性を有している。他の実施形態において、そのアミノ末端に付加されたＣＴＰを１つ、およびそのカルボキシ末端に付加されたＣＴＰを２つ、含有する成長ホルモンは、ＣＴＰを有していない同じ成長ホルモンと比較し、高いｉｎ ｖｉｖｏ生物活性を有している。

【0025】

他の実施形態において、対象のポリペプチド配列に付加された、絨毛性ゴナドトロピンのカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）配列を少なくとも２つ含有するポリペプチド（ここで、当該少なくとも２つのＣＴＰ配列のうちの第一のＣＴＰ配列は、対象のポリペプチド配列のアミノ末端に付加され、および当該少なくとも２つのＣＴＰ配列の第二のＣＴＰ配列は、対象のポリペプチドのカルボキシ末端に付加されている）が開示される。他の実施形態において、当該カルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）配列は、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのものである。

【0026】

他の実施形態において、対象はヒト対象である。１つの実施形態において、ヒト対象は成長ホルモン欠乏症である。１つの実施形態において、対象は成長ホルモン欠乏症である。他の実施形態において、対象はペットである。他の実施形態において、対象は哺乳類である。他の実施形態において、対象は家畜である。他の実施形態において、対象はイヌである。他の実施形態において、対象はネコである。他の実施形態において、対象はサルである。他の実施形態において、対象はウマである。他の実施形態において、対象はウシである。他の実施形態において、対象はマウスである。他の実施形態において、対象はラットである。１つの実施形態において、対象は男性である。他の実施形態において、対象は女性である。他の実施形態において、対象は成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）の成人である。他の実施形態において、対象は思春期前成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）の小児である。本明細書において、ＭＯＤ－４０２３（ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ）の様々な投与量により、成長期前の小児において、優れた追いつき成長応答がもたらされた（実施例１０を参照のこと）。

【0027】

他の実施形態において、「対象のポリペプチド配列」という文言は、たとえば生物活性を含有するポリペプチド等の任意のポリペプチド配列を指す。他の実施形態において、ペプチドは、グリコシル化されている。他の実施形態において、ペプチドは、非グリコシル化されている。循環半減期の延長により利益を得るポリペプチドの例としては、限定されないが、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターフェロン、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、およびグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）が挙げられる。１つの実施形態において、ポリペプチドは、成長ホルモン（ＧＨ）である。他の実施形態において、ポリペプチドは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）である。

【0028】

１つの実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰ－成長ホルモン－ＣＴＰ－ＣＴＰの構造は、リンカーを介して少なくとも１つのＣＴＰ単位に連結された成長ホルモンまたはその活性断片を含有する。１つの実施形態において、リンカーは、ペプチド結合である。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰ－成長ホルモン－ＣＴＰ－ＣＴＰの構造は、ペプチド結合を介して少なくとも１つのＣＴＰ単位に連結された成長ホルモンまたはその活性断片を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰ－成長ホルモン－ＣＴＰ－ＣＴＰは、ペプチド結合を介して追加のＣＴＰに連結されている、少なくとも１つのＣＴＰにペプチド結合を介して連結された成長ホルモンまたはその活性断片を含有する。他の実施形態に置いて、その成長ホルモン断片、ならびにＣＴＰ単位および／またはその断片を含有する、本明細書に開示されるポリペプチドは、ペプチド結合を介して相互に連結されている。他の実施形態において、１つの核酸分子は、成長ホルモンおよび／またはその断片、ならびにＣＴＰ単位および／またはその断片を含有する、本明細書に開示されるポリペプチドをコードする。

【0029】

他の実施形態において、カルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）は、リンカーを介して対象のポリペプチド配列に付加されている。他の実施形態において、少なくとも１つのＣＴＰが、任意選択的に、リンカーを介して対象の当該ポリペプチド配列に付加されている。他の実施形態において、ＣＴＰ配列を対象のポリペプチド配列に連結するリンカーは、共有結合である。他の実施形態において、ＣＴＰ配列を対象のポリペプチド配列に連結するリンカーは、ペプチド結合である。他の実施形態において、ＣＴＰ配列を対象のポリペプチド配列に連結するリンカーは、置換ペプチド結合である。他の実施形態において、カルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）配列は、配列番号４８に記述される配列から選択されるアミノ酸配列を含有する。

【0030】

他の実施形態において、配列番号４８は、以下のアミノ酸（ＡＡ）配列を含有する：ＤＰＲＦＱＤＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＱ（配列番号４８）。

【0031】

他の実施形態において、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＨ）のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）は、タンパク質に融合されている。他の実施形態において、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＨ）のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）は、当該タンパク質のペプチドに融合されている。１つの実施形態において、タンパク質またはそのペプチドは、成長ホルモンである。１つの実施形態において、タンパク質またはそのペプチドは、ヒト成長ホルモンである。他の実施形態において、ヒトｈＣＧのカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）は、糖タンパク質に融合されている。他の実施形態において、ｈＣＧのカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）は、糖タンパク質ホルモンに融合されている。他の実施形態において、ｈＣＧのＣＴＰは、糖タンパク質ホルモンから誘導されたペプチドに融合されている。一部の実施形態において、糖タンパク質ホルモンには、ＥＰＯ、ＦＳＨ、またはＴＳＨ、およびそれらから誘導されたペプチドが含まれる。

【0032】

一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端の両方のＣＴＰ配列により、タンパク質分解に対する防御が増強される。一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端の両方のＣＴＰにより、付加されたタンパク質の半減期が延長される。

【0033】

一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、タンパク質分解に対する防御が増強される。一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、付加されたタンパク質の半減期が延長される。一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、付加されたタンパク質の活性が増強される。

【0034】

一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該アミノ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、当該付加タンパク質の分解に対する保護が増強される。一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該アミノ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、当該付加タンパク質の半減期が延長される。一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該ポリペプチドのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該アミノ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、当該付加タンパク質の活性が増強される。

【0035】

一部の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端の両方のＣＴＰ配列により、成長ホルモンの分解に対する防御が増強される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ単位により、クリアランスに対する防御が増強される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ単位により、クリアランス時間が延長される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ単位により、成長ホルモンのＣ_ｍａxが増強される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ単位により、成長ホルモンのＴ_ｍａｘが増強される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ単位により、Ｔ_１／２が延長される。

【0036】

一部の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端および当該成長ホルモンのカルボキシ末端の両方のＣＴＰ配列により、当該改変成長ホルモンの半減期が延長される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の少なくとも１つのＣＴＰ配列、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端の少なくとも２つのＣＴＰ配列により、当該改変成長ホルモンの半減期が延長される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の１つのＣＴＰ配列、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端の２つのＣＴＰ配列により、当該付加成長ホルモンの半減期が延長される。他の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端の１つのＣＴＰ配列、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に一列に配置された２つのＣＴＰ配列により、当該改変成長ホルモンの半減期が延長される。

【0037】

一部の実施形態において、ポリペプチドのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該成長ホルモンのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、成長ホルモンの分解に対する防御が増強される。一部の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該成長ホルモンのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、当該成長ホルモンの半減期が延長される。一部の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端のＣＴＰ配列、当該成長ホルモンのカルボキシ末端のＣＴＰ配列、および当該カルボキシ末端のＣＴＰ配列に一列に付加された少なくとも１つの追加ＣＴＰ配列により、当該成長ホルモンの生物活性が増強される。

【0038】

１つの実施形態において、当該少なくとも１つのＣＴＰの配列は、配列番号１７および配列番号１８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。他の実施形態において、本発明のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）ペプチドは、配列番号１７に記述されるヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸１１２位から１４５位のアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１８に記述されるヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸１１８位から１４５位のアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、当該ＣＴＰ配列はまた、ヒト絨毛性ゴナドトロピンの１１２～１１８位の間の任意の位置から始まり、１４５位で終わる。一部の実施形態において、当該ＣＴＰ配列ペプチドは、２８、２９、３０、３１、３２、３３または３４アミノ酸の長さであり、および当該ＣＴＰアミノ酸配列の１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７または１１８位で始まる。

【0039】

他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、天然型ＣＴＰから１～５の保存的アミノ酸置換により異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である（米国特許第５，７１２，１２２号に記載）。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、１つの保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰから異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、２つの保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰから異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、３つの保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰから異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、４つの保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰから異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドは、５つの保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰから異なっている絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも７０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも８０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも９０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも９５％相同である。

【0040】

他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドＤＮＡ配列は、天然型ＣＴＰ ＤＮＡ配列またはそのペプチド ＤＮＡ配列に対し、少なくとも７０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドＤＮＡ配列は、天然型ＣＴＰ ＤＮＡ配列またはそのペプチド ＤＮＡ配列に対し、少なくとも８０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドＤＮＡ配列は、天然型ＣＴＰ ＤＮＡ配列またはそのペプチド ＤＮＡ配列に対し、少なくとも９０％相同である。他の実施形態において、本発明のＣＴＰペプチドＤＮＡ配列は、天然型ＣＴＰ ＤＮＡ配列またはそのペプチド ＤＮＡ配列に対し、少なくとも９５％相同である。

【0041】

１つの実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが、断片化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうち両方が、断片化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうち２つが、断片化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうち２以上が、断片化されている。他の実施形態において、すべての絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸が、断片化されている。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１０アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１１アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１２アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１３アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１４アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１５アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最初の１６アミノ酸を含有する。１つの実施形態において、断片化ＣＴＰは、配列番号４３の最後の１４アミノ酸を含有する。

【0042】

１つの実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の少なくとも１つが、グリコシル化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の両方が、グリコシル化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の２つが、グリコシル化されている。他の実施形態において、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の２以上が、グリコシル化されている。他の実施形態において、すべての絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列が、グリコシル化されている。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ配列は、少なくとも１つのグリコシル化部位を含有する。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ配列は、２つのグリコシル化部位を含有する。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ配列は、３つのグリコシル化部位を含有する。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ配列は、４つのグリコシル化部位を含有する。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0043】

一部の実施形態において、本発明に従う「相同性」は、欠失、挿入または置換変異体（そのアミノ酸置換を含む）、およびその生物学的に活性なポリペプチド断片も包含する。

【0044】

一部の実施形態において、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、本発明の教示に従い使用される。一部の実施形態において、ｈＧＨタンパク質のアミノ末端およびカルボキシ末端の両方へのＣＴＰ配列の付加により、有効性の増加がもたらされる（図２、３、５、７および９）。一部の実施形態において、ｈＧＨタンパク質のアミノ末端およびカルボキシ末端の両方へのＣＴＰ配列の付加により、ｉｎ ｖｉｖｏ活性の延長がもたらされる。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ－ｈＧＨポリペプチドは、配列番号３９～４１に記述される。

【0045】

本明細書において、下垂体切除ラット（成長ホルモンが分泌されない）における、ＣＴＰ－ｈＧＨ投与後の成長増加が示される。さらに本明細書において、思春期前成長ホルモン欠乏症の小児における、当該患者の追いつき成長と良く相関した成長増加が示された（本明細書の実施例１０を参照）。

【0046】

１つの実施形態において、思春期前成長ホルモン欠乏症の小児の、正常な成長回復を達成させる方法が開示され、当該方法は、本明細書に開示されるＣＴＰ改変成長ホルモンを含有する医薬組成物の投与が含まれる。他の実施形態において、思春期前成長ホルモン欠乏症の小児の、成長回復を達成させる方法が開示され、当該方法は、本明細書に開示されるＣＴＰ改変成長ホルモンを含有する医薬組成物の投与が含まれる。

【0047】

１つの実施形態において、「ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）」という文言は、ｈＧＨ活性（すなわち、成長を刺激する）を示す、たとえばＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｐ０１２４１（配列番号４７）に記述されるポリペプチドを指す。

【0048】

他の実施形態において、「ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）」とは、ｈＧＨ活性（すなわち、成長を刺激する）を示す、たとえばＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｐ０１２４１に記述されるポリペプチドを指す。他の実施形態において、本発明の「ＧＨ」はまた、ホモログを指す。他の実施形態において、本発明方法および組成物のＧＨアミノ酸配列は、本明細書に記述されるＧＨ配列に対し少なくとも５０％相同である（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ （ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔＰソフトウェア（デフォルトパラメータを使用）を用いて決定される）。他の実施形態において、当該相同性割合は、６０％である。他の実施形態において、当該相同性割合は、７０％である。他の実施形態において、当該相同性割合は、８０％である。他の実施形態において、当該相同性割合は、９０％である。他の実施形態において、当該相同性割合は、少なくとも９５％である。他の実施形態において、当該相同性割合は、９５％超である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0049】

本発明の例示的なＣＴＰ－ＧＨポリペプチドおよびＣＴＰ－ｈＧＨポリペプチドは、配列番号３９、配列番号４０、および配列番号４１に記述される。

【0050】

他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する成長ホルモン（ＧＨ）ペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0051】

他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0052】

１つの実施形態において、本発明により、対象における、成長ホルモンの投与頻度を減少させる方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより対象における成長ホルモンの投与頻度を低下させることを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0053】

他の実施形態において、本発明により、対象における成長ホルモンの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより対象における成長ホルモンの投与頻度が減少することを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0054】

他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドを含有する製剤が開示され、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなり、当該製剤は安定性が増加している。１つの実施形態において、当該製剤は少なくとも１年間安定である。他の実施形態において、当該製剤は少なくとも２年間安定である。

【0055】

１つの実施形態において、本発明により、ＧＨ治療の必要がある対象を治療する方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより対象における成長ホルモンの投与頻度を減少させるステップを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0056】

他の実施形態において、本発明により、対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを上昇させる方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを上昇させるステップを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0057】

他の実施形態において、本発明により、対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを維持させる方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与するステップを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなり、それにより対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルが維持される。他の実施形態において、ＩＧＦ－１のレベルは、本明細書に詳述される既定の範囲に維持される。

【0058】

他の実施形態において、本発明により、対象において、インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを既定範囲内に増加させ、および維持する方法が開示され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰ、からなるポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを既定範囲内に上昇させかつ維持するステップを含み、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0059】

他の実施形態において、当該既定範囲は、本明細書に開示されるＣＴＰ改変成長ホルモンを投与することにより達成される治療投与量範囲である。他の実施形態において、当該既定範囲は、ＩＧＦ－１の正弦関数的ＣｍａｘおよびＣｔｒｏｕｇｈが、本明細書に詳述されるＣＴＰ改変成長ホルモンの連続投与後に維持される範囲である（実施例１５を参照）。他の実施形態において、当該既定範囲は、対象において優れた応答性を伴い、および投与量調節の必要性が最小限である、本明細書に開示されるＣＴＰ改変成長ホルモンの連続的投与に対する治療投与量範囲である。他の実施形態において、当該既定範囲は、正常であるとみなされる個人におけるＩＧＦ－１のレベルと同等の範囲である。他の実施形態において、当該既定範囲は、正常な個人における、ＩＧＦ－１のレベル／値の正常な範囲である。さらに他の実施形態において、当該既定範囲は、ＩＧＦ－１ ＳＤＳ値が±２ ＳＤＳ内である場合に、正常範囲内である。

【0060】

他の実施形態において、本発明方法により、骨の成長を刺激するための、本明細書に記述される任意のＣＴＰ改変ＧＨペプチドが提供される。

【0061】

他の実施形態において、本発明方法により、骨の成長を刺激するための、本明細書に記述される任意のＣＴＰ改変ＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。

【0062】

他の実施形態において、本発明の結合型成長ホルモンは、非改変成長ホルモンと同様の様式で用いられる。他の実施形態において、本発明の結合型成長ホルモンは、循環半減期および血漿滞留時間が増加し、クリアランスが低下し、ならびにｉｎ ｖｉｖｏ臨床活性が上昇している。他の実施形態において、本明細書に開示される結合型成長ホルモンの特性の改善によって、これら結合型は、非改変成長ホルモンよりも少ない頻度で投与される。他の実施形態において、本明細書に開示される結合型成長ホルモンは、週１回ないし２週に１回投与される。他の実施形態において、本明細書に開示される結合型成長ホルモンは、２週に１回ないし３週に１回投与される。他の実施形態において、本明細書に開示される結合型成長ホルモンは、１日に１回ないし週に３回投与される。他の実施形態において、投与頻度の減少により、患者のコンプライアンスが改善され、それにより、治療転帰が改善し、ならびに患者の生活の質が改善される。他の実施形態において、ポリ（エチレングリコール）に連結された従来の成長ホルモン結合型と比較し、本発明の結合型の分子量およびリンカー構造を有する成長ホルモンＣＴＰ結合型は、有効性が改善され、安定性が改善され、ＡＵＣレベルが上昇し、循環半減期が延長されていることが見出された。他の実施形態において、ポリ（エチレングリコール）に連結された従来の成長ホルモン結合型と比較し、本発明の結合型の分子量およびリンカー構造を有する成長ホルモンは、有効性が改善され、安定性が改善され、ＡＵＣレベルが上昇し、循環半減期が延長されていることが見出された。他の実施形態において、結合型成長ホルモンの治療有効量は、ｉｎ ｖｉｖｏで計測可能な予測生物活性に必要な結合型ホルモンの量である。他の実施形態において、本発明の教示に従い使用される成長ホルモンは、高い有効性を示す。一部の実施形態において、成長ホルモンのアミノ末端およびカルボキシ末端の両方へのＣＴＰ配列の付加により、ｉｎ ｖｉｖｏ活性の延長がもたらされる。

【0063】

他の実施形態において、結合型成長ホルモンの治療有効量は、治療される疾患の正確な型、治療される患者の状態、ならびに、当該組成物中の他の成分等の因子に従い決定される。他の実施形態において、結合型成長ホルモンの治療有効量は、０．０１～１０μｇ／ｋｇ体重であり、週１回投与される。他の実施形態において、結合型成長ホルモンの治療有効量は、０．１～１μｇ／ｋｇ体重であり、週１回投与される。他の実施形態において、結合型成長ホルモンを含有する医薬組成物は、様々な手段によるヒト患者への投与に対し有効な濃度で製剤化される。

【0064】

他の実施形態において、成長ホルモンは、当業者に公知の任意の成長ホルモンである。他の実施形態において、成長ホルモンは、ヒト成長ホルモンである。他の実施形態において、成長ホルモンは、非ヒト成長ホルモンである。他の実施形態において、成長ホルモンのヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列は、遺伝子バンクデータベースで入手可能である。他の実施形態において、成長ホルモンは、ホモログである。他の実施形態において、ホモログとは、欠失、挿入または置換変異体（そのアミノ酸置換を含む）、およびそれらの生物学的に活性なポリペプチド断片も指す。

【0065】

他の実施形態において、成長ホルモンは、エクソン２、３、４またはそれらの任意の組み合わせを失っているｈＧＨ変異体である。他の実施形態において、成長ホルモンは、シグナルペプチドを含有する。他の実施形態において、成長ホルモンは、シグナル開裂部位を含有する。他の実施形態において、本発明のＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、組み換えＧＨを含有する。

【0066】

他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の質を維持するための、本発明のＧＨペプチドが提供される。

【0067】

他の実施形態において、本発明方法により、骨の質を維持するための、本発明のＧＨペプチドが提供される。

【0068】

他の実施形態において、本発明方法により、骨の質を維持するための、本発明のＧＨ－ＣＴＰ核酸配列が提供される。

【0069】

他の実施形態において、本発明方法により、消耗性疾患を治療するための、本明細書に開示される任意のＣＴＰ改変ＧＨペプチドが提供される。

【0070】

他の実施形態において、本発明方法により、消耗性疾患を治療するための、本明細書に開示されるＣＴＰ改変ＧＨペプチドのいずれかをコードする核酸配列が提供される。

【0071】

他の実施形態において、本発明方法により、心臓機能を増加させるための、本明細書に開示される任意のＣＴＰ改変ＧＨペプチドが提供される。

【0072】

他の実施形態において、本発明方法により、心臓機能を増加させるための、本明細書に開示されるＣＴＰ改変ＧＨペプチドのいずれかをコードする核酸配列が提供される。

【0073】

他の実施形態において、本発明方法により、脂肪分解を増加させるための、本明細書に開示されるＧＨペプチドが提供される。

【0074】

他の実施形態において、本発明方法により、脂肪分解を増加させるための、本明細書に開示されるＣＴＰ改変ＧＨペプチドのいずれかをコードする核酸配列が提供される。

【0075】

他の実施形態において、本発明方法により、液体平衡を改善するための、本明細書に開示される任意のＣＴＰ改変ＧＨペプチドが提供される。

【0076】

他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＡＡＡ７２２６０で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＡＡＫ６９７０８で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＣＡＡ０１４３５で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＣＡＡ０１３２９で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＣＡＡ００３８０で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＡＡＡ７２５５５で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＮＰ＿０００５０６．２で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＮＰ＿０７２０５３．１で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＮＰ＿０７２０５４．１で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＮＰ＿０７２０５５．１で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。他の実施形態において、本発明の成長ホルモンは、アクセッション番号ＮＰ＿０７２０５６．１で寄託された遺伝子バンクアミノ酸配列を含有する。

【0077】

他の実施形態において、本発明方法により、液体平衡を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、液体平衡を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、液体平衡を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、液体平衡を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、液体平衡を改善するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする配列番号４６の核酸が提供される。

【0078】

他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0079】

他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を治療するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0080】

他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0081】

他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、骨粗しょう症を抑制するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0082】

他の実施形態において、本発明方法により、運動能力を改善するための、本発明のＧＨペプチドが提供される。

【0083】

他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0084】

他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、肺機能を改善するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0085】

他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0086】

他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、免疫を改善するための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0087】

他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0088】

他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、重要臓器を再成長させるための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0089】

他の実施形態において、本発明方法により、幸福感を増加させるための、本発明のＧＨペプチドが提供される。

【0090】

他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号２３に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３６に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３７に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する配列番号３８に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、配列番号３９に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、配列番号４０に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、配列番号４１に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有する、配列番号４２に記述されるＧＨペプチドが提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨペプチドが提供される。

【0091】

他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するＧＨペプチドをコードする核酸配列が提供される。１つの実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４４の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、Ｎ末端に１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドを含有するＧＨペプチドをコードする、配列番号４５の核酸が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、レム睡眠を回復させるための、ＧＨペプチド、およびＮ末端上の１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端上の２つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをコードする、配列番号４６の核酸が提供される。

【0092】

他の実施形態において、本発明方法により、本明細書に記述されるＧＨタンパク質をコードする核酸配列が提供される。他の実施形態において、本発明方法により、筋肉の成長を刺激するための、心臓機能を増加させるための、骨の成長を刺激するための、筋肉の完全性を維持するための、筋代謝の平衡を保つための、筋肉の増強を誘導するための、新たな筋肉増強を誘導するための、骨重量を増強させるための、骨粗しょう症に関連した症状を治療するための、消耗性疾患を治療するための、脂肪分解を増加させるための、液体平衡を改善するための、骨粗しょう症を治療するための、肺機能を改善するための、免疫を改善するための、重要臓器を再成長させるための、幸福感を増加させるための、ＲＥＭ睡眠を回復させるための、またはそれらの任意の組み合わせのための、ＣＴＰにより改変されたｈＧＨを含有するポリペプチドをコードする核酸配列が提供される。

【0093】

一部の実施形態において、本発明の「相同性」とは、欠失、挿入、または置換変異体（そのアミノ酸置換を含む）、およびその生物学的に活性なポリペプチド断片も包含する。１つの実施形態において、置換変異体は、ｈＧＨの６５位のグルタミンがバリンに置換されたものである［Ｇｅｌｌｅｒｆｏｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｎａｌ １９８９， ７：１７３－８３］。

【0094】

他の実施形態において、本明細書に開示される成長ホルモンをコードする核酸分子は、当業者に公知の成長ホルモンのうちの任意のアミノ酸配列をコードする。他の実施形態において、本明細書に開示される成長ホルモンをコードする核酸分子は、ｈＧＨをコードする。他の実施形態において、成長ホルモンをコードする核酸分子は、アクセッション番号ＮＭ＿０００５１５．３のもと寄託された遺伝子バンク核酸配列を含有する。他の実施形態において、成長ホルモンをコードする核酸分子は、アクセッション番号ＮＭ＿０２２５５９．２のもと寄託された遺伝子バンク核酸配列を含有する。他の実施形態において、成長ホルモンをコードする核酸分子は、アクセッション番号ＮＭ＿０２２５６０．２のもと寄託された遺伝子バンク核酸配列を含有する。他の実施形態において、成長ホルモンをコードする核酸分子は、アクセッション番号ＮＭ＿０２２５６１．２のもと寄託された遺伝子バンク核酸配列を含有する。他の実施形態において、成長ホルモンをコードする核酸分子は、アクセッション番号ＮＭ＿０２２５６２．２のもと寄託された遺伝子バンク核酸配列を含有する。

【0095】

１つの実施形態において、ホモログはまた、欠失、挿入または置換変異体（そのアミノ酸置換を含む）、およびその生物学的に活性なポリペプチドも指す。

【0096】

他の実施形態において、対象のポリペプチド配列は、ｈＧＨである。他の実施形態において、対象のポリペプチド配列は、任意の改変体を含む、ペプチドまたはタンパク質である。

【0097】

他の実施形態において、本発明方法により、消耗性疾患、ＡＩＤＳ、悪液質、またはｈＧＨ欠乏症の治療のための、Ｎ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチド、およびＣ末端に少なくとも１つのＣＴＰアミノ酸ペプチドをさらに有するｈＧＨが提供される。

【0098】

１つの実施形態において、本発明は、獣医学分野において用いられる。１つの実施形態において、本発明は、ヒトのコンパニオンとして飼育されている家畜用哺乳類（たとえば、イヌ、ネコ、ウマ）、高い商業的価値を有する家畜用哺乳類（たとえば、乳牛、肉牛、競技用動物）、高い科学的価値を有する家畜用哺乳類（たとえば、絶滅危惧種の飼育動物または野生動物）、または他の価値を有する家畜用哺乳類の治療を提供する。

【0099】

一部の実施形態において、ＣＴＰ配列の改変は、用いられる投与量が少なくて済むという利点がある。

【0100】

一部の実施形態において、本明細書の「ポリペプチド」とは、天然型ポリぺプチド（分解産物、合成的に合成されたポリペプチド、または組み換えポリペプチドのいずれか）、およびペプチド模倣体（典型的には、合成ポリペプチド）、ならびにペプトイドおよびセミペプトイド（ポリペプチドアナログであり、一部の実施形態においては、当該ポリペプチドが、体内でより安定となる改変、または細胞へより浸透できる改変が為されている）を包含する。

【0101】

一部の実施形態において、改変には、限定されないが、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾、ポリペプチド結合修飾（限定されないが、ＣＨ２－ＮＨ、ＣＨ２－Ｓ、ＣＨ２－Ｓ＝Ｏ、Ｏ＝Ｃ－ＮＨ、ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ＝Ｃ－ＮＨ、ＣＨ＝ＣＨまたはＣＦ＝ＣＨを含む）、主鎖修飾、および残基修飾が含まれる。ペプチド模倣化合物の作製方法は当分野に公知であり、たとえば、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ， Ｃ．Ａ． Ｒａｍｓｄｅｎ Ｇｄ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １７．２， Ｆ． Ｃｈｏｐｌｉｎ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ （１９９２）、に詳述されている（本明細書に完全に記述されているように、参照により援用される）。この点に関するさらなる詳細は、以下に提示される。

【0102】

一部の実施形態において、ポリペプチド内のポリペプチド結合（－ＣＯ－ＮＨ－）は、置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、Ｎメチル化結合（－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＯ－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、エステル結合（－Ｃ（Ｒ）Ｈ－Ｃ－Ｏ－Ｏ－Ｃ（Ｒ）－Ｎ－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、ケトメチレン結合（－ＣＯ－ＣＨ２－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、α－アザ結合（－ＮＨ－Ｎ（Ｒ）－ＣＯ－）（ここでＲは任意のアルキル（たとえば、メチル）である）、カルバ結合（－ＣＨ２－ＮＨ－）、により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、ヒドロキシエチレン結合（－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、チオアミド結合（－ＣＳ－ＮＨ－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、オレフィン二重結合（－ＣＨ＝ＣＨ－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、レトロアミド結合（－ＮＨ－ＣＯ－）により置換されている。一部の実施形態において、ポリペプチド結合は、ポリペプチド誘導体（－Ｎ（Ｒ）－ＣＨ２－ＣＯ－）により置換されており、ここで、Ｒは、炭素原子上に天然型で存在する「正常な」側鎖である。一部の実施形態において、これら改変は、ポリペプチド鎖に沿った任意の結合で、およびいくつかの結合（２～３の結合）で同時にも発生する。

【0103】

一部の実施形態において、たとえばＴｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ等のポリペプチドの天然型芳香族アミノ酸は、たとえばフェニルグリシン、ＴＩＣ、ナフチルエラニン（Ｎｏｌ）、Ｐｈｅの環メチル化誘導体、Ｐｈｅのハロゲン化誘導体、またはｏ－メチル－Ｔｙｒ等の合成非天然型酸と置換される。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、１以上の改変アミノ酸、または１以上の非アミノ酸単量体（たとえば、脂肪酸、複合糖質等）を含む。

【0104】

１つの実施形態において、「アミノ酸」または「アミノ酸」は、２０の天然型アミノ酸（それらアミノ酸はしばしば、ｉｎ ｖｉｖｏで翻訳後に修飾されている（たとえば、ヒドロキシプロリン、ホスホセリン、およびホスホスレオニン等を含む））；および他の稀なアミノ酸（限定されないが、２－アミノアジピン酸、ヒドロキシリシン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン、およびオルニチンを含む）、を含むものと理解されている。１つの実施形態において、「アミノ酸」は、Ｄ－アミノ酸およびＬ－アミノ酸の両方を含む。

【0105】

一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、可溶性形態のポリペプチドを必要とする治療に用いられる。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、１以上の非天然型または天然型の極性アミノ酸（限定されないが、セリンおよびスレオニンを含み、それらは、そのヒドロキシル含有側鎖によりポリペプチドの可溶性を上昇させることができる）を含有する。

【0106】

一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、直鎖状形態で利用されるが、当業者であれば、環化反応がポリペプチドの特性に酷く干渉しない場合には、当該ポリペプチドの環状形態もまた利用され得ることを認識するであろう。

【0107】

一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、たとえば標準的な固相合成技術を用いて生化学的に合成される。一部の実施形態において、これら生化学的方法としては、排他的固相合成法、部分的固相合成法、フラグメント縮合、または伝統的な溶液合成法が挙げられる。一部の実施形態において、これら方法は、ポリペプチドが比較的短い（約５～１５ｋＤａ）場合、および／または組み換え技術により製造できない場合（すなわち、核酸配列によりコードされない）に用いられ、ゆえに、異なる化学的性質を含有する。

【0108】

一部の実施形態において、固相ポリペプチド合成法は、当業者に公知であり、Ｊｏｈｎ Ｍｏｒｒｏｗ Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｊａｎｉｓ Ｄｉｌｌａｈａ Ｙｏｕｎｇ， Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ （２ｎｄ Ｅｄ．， Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９８４）に詳細に記述されている。一部の実施形態において、合成ポリペプチドは、予備的高速液体クロマトグラフィ［Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ Ｔ． （１９８３） Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ． ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ． Ｎ．Ｙ．］により精製され、その組成物は、当業者公知のアミノ酸配列解析を介して確認される。

【0109】

一部の実施形態において、組み換えタンパク質技術を用いて、本発明のポリペプチドが作製される。一部の実施形態において、組み換えタンパク質技術は、比較的長いポリペプチド（たとえば、１８～２５超のアミノ酸）の作製に用いられる。一部の実施形態において、組み換えタンパク質技術は、本発明ポリペプチドの大量作製に用いられる。一部の実施形態において、組み換え技術は、Ｂｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， （１９８７） Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １５３：５１６－５４４、Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １８５：６０－８９、Ｂｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｎａｔｕｒｅ ３１０：５１１－５１４、Ｔａｋａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ． （１９８７） ＥＭＢＯ Ｊ． ６：３０７－３１１， Ｃｏｒｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ． （１９８４） ＥＭＢＯ Ｊ． ３：１６７１－１６８０およびＢｒｏｇｌｉ ｅｔ ａｌ， （１９８４） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３、Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ． （１９８６） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６：５５９－５６５、ならびにＷｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ， １９８８， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ， Ｓｅｃｔｉｏｎ ＶＩＩＩ， ｐｐ ４２１－４６３に記述されている。

【0110】

１つの実施形態において、本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを用いて合成される。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、シス制御配列（たとえばプロモーター配列）の転写制御を含有する発現ベクターへとライゲートされる。一部の実施形態において、シス制御配列は、本発明ポリペプチドの構造的発現の管理に適している。一部の実施形態において、シス制御配列は、本発明ポリペプチドの組織特異的発現の管理に適している。一部の実施形態において、シス制御配列は、本発明ポリペプチドの誘導性発現の管理に適している。

【0111】

一部の実施形態において、本発明ポリペプチドを発現するポリヌクレオチドは、配列番号４４、４５および４６に記述されている。

【0112】

一部の実施形態において、本発明での使用に適した組織特異的プロモーターとしては、特定の細胞群で機能する配列が挙げられ、たとえば、限定されないが、肝臓特異的なアルブミンプロモーター［Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， （１９８７） Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． １：２６８－２７７］、リンパ特異的プロモーター［Ｃａｌａｍｅ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ａｄｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４３：２３５－２７５］；特にＴ細胞受容体のプロモーター［Ｗｉｎｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， （１９８９） ＥＭＢＯ Ｊ． ８：７２９－７３３］、およびイムノグロブリンプロモーター［Ｂａｎｅｒｊｉ ｅｔ ａｌ． （１９８３） Ｃｅｌｌ ３３７２９－７４０］、たとえばニューロフィラメントプロモーター［Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：５４７３－５４７７］等のニューロン特異的プロモーター、膵臓特異的プロモーター［Ｅｄｌｕｎｃｈ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：９１２－９１６］、またはたとえば乳清プロモーター（米国特許第４，８７３，３１６号および欧州特許出願公開第２６４，１６６号）等の乳腺特異的プロモーターが挙げられる。本発明での使用に適した誘導性プロモーターとしては、たとえば、テトラサイクリン誘導性プロモーター（Ｓｒｏｕｒ， Ｍ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．， ２００３． Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈａｅｍｏｓｔ． ９０： ３９８－４０５）が挙げられる。

【0113】

１つの実施形態において、「ポリヌクレオチド」とは、単離され、ＲＮＡ配列、相補的ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノムポリヌクレオチド配列、および／または複合ポリヌクレオチド配列（たとえば、上述の組み合わせ）の形態で提供される、一本鎖または二本鎖核酸配列を指す。

【0114】

１つの実施形態において、「相補的ポリヌクレオチド配列」とは、逆転写酵素または任意の他のＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼを用いて、メッセンジャーＲＮＡの逆転写から得られる配列を指す。１つの実施形態において、当該配列は、次いで、ＤＮＡポリメラーゼを用いてｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで増幅されても良い。

【0115】

１つの実施形態において、「ゲノムポリヌクレオチド配列」とは、染色体から誘導（単離）された配列を指し、染色体の連続的な部分を表す。

【0116】

１つの実施形態において、「複合ポリヌクレオチド配列」とは、少なくとも部分的に相補的であり、および少なくとも部分的にゲノム性である、配列を指す。１つの実施形態において、複合配列は、本発明のポリペプチドをコードするために必要とされるいくつかのエクソン配列、ならびにそれらの間に挟まれるイントロン配列を含んでも良い。１つの実施形態において、イントロン配列は、任意の源（他の遺伝子を含む）のものであっても良く、典型的には、保存的スプライシングシグナル配列を含有する。１つの実施形態において、イントロン配列は、シス作用発現制御エレメントを含む。

【0117】

１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドはさらに、本発明ポリペプチドの分泌のためのシグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有する。一部の実施形態において、シグナル配列としては、限定されないが、たとえば配列番号１９に記述されるＥＰＯに対する内因性シグナル配列、または配列番号２６に記述されるＩＦＮ－β１に対する内因性シグナル配列が挙げられる。他の実施形態において、シグナル配列は、ＣＴＰ配列のＮ末端にあり、当該ＣＴＰ配列は同様に対象のポリペプチド配列のＮ末端にある；たとえば、当該配列は、（ａ）シグナル配列－（ｂ）ＣＴＰ－（ｃ）対象の配列－（ｄ）任意選択的に１以上の追加ＣＴＰ配列。他の実施形態において、１以上のＣＴＰ配列は、対象のポリペプチド配列のシグナル配列と、その対象のポリペプチド配列の間に挿入されており、それにより、対象の野生型配列に割り込む。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。

【0118】

他の実施形態において、成長ホルモンはさらにシグナルペプチドを含有する。一部の実施形態において、シグナル配列としては、限定されないが、内因性シグナルペプチドが挙げられる。一部の実施形態において、シグナル配列としては、任意の公知の成長ホルモン（複数含む）の内因性シグナル配列が挙げられる。他の実施形態において、本発明ポリペプチドおよび本発明方法により、以下のアミノ酸配列：ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡ（配列番号４９）を含有するシグナルペプチドをさらに有する成長ホルモンが提供される。

【0119】

１つの実施形態において、発現および分泌の後、シグナルペプチドは前駆タンパク質から開裂され、それにより成熟タンパク質が得られる。

【0120】

一部の実施形態において、本発明ポリヌクレオチドは、当業者公知の方法および手順を用いたＰＣＲ法を用いて作製される。一部の実施形態において、当該手順は、２つの異なるＤＮＡ配列解析の連結を含む（たとえば、"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ"， ｅｄｓ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９２を参照）。

【0121】

１つの実施形態において、本発明ポリヌクレオチドは、発現ベクター（すなわち、核酸構築物）の間に挿入され、組み換えポリペプチドを発現する。１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、原核細胞での複製および統合にこのベクターを適合させる追加の配列を含有する。１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、真核細胞での複製および統合にこのベクターを適合させる追加の配列を含有する。１つの実施形態において、本発明の発現ベクターは、原核細胞および真核細胞の両方における複製および統合にこのベクターを適合させるシャトルベクターを含有する。一部の実施形態において、クローニングベクターは、転写開始配列および翻訳開始配列（たとえば、プロモーター、エンハンサー）、ならびに転写終結および翻訳終結（たとえば、ポリアデニル化シグナル）を含有する。

【0122】

１つの実施形態において、様々な原核細胞または真核細胞が宿主発現システムとして用いられ、本発明ポリペプチドが発現される。一部の実施形態において、これらとしては、限定されないが、たとえば組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクター（ポリペプチドコード配列を含有する）を用いて形質転換された細菌等の微生物；酵母発現ベクター（ポリペプチドコード配列を含有する）を用いて形質転換された酵母；組み換えウイルス発現ベクター（たとえば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染させた植物細胞システム、またはたとえばＴｉプラスミド（ポリペプチドコード配列を含有する）等の組み換えプラスミド発現ベクターで形質転換された植物細胞システムが挙げられる。

【0123】

一部の実施形態において、非細菌性発現システムを用いて（たとえば、ＣＨＯ細胞等の哺乳類発現システム）、本発明ポリペプチドが発現される。１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドを哺乳類細胞において発現させるために用いられる発現ベクターは、ＣＭＶプロモーターおよびネオマイシン耐性遺伝子を含有するｐＣＩ－ＤＨＦＲベクターである。ある実施形態に従う、ｐＣＩ－ｄｈｆｒベクターの構造は、実施例１および図３に記述されている。

【0124】

一部の実施形態において、本発明の細菌システムにおいて、発現されるポリペプチドに意図される用途に基づき、多くの発現ベクターが優先して選択される。１つの実施形態においては、大量のポリペプチドが望ましい。１つの実施形態において、場合により、疎水性シグナル配列（タンパク質産物の精製が容易な細菌のペリプラズムまたは培養培地中へと発現産物を誘導する）との融合物として、タンパク質産物の高レベル発現を誘導するベクターが望ましい。１つの実施形態において、ある融合タンパク質は、ポリペプチドの回収を補助するための特定の開裂部位を用いて操作される。１つの実施形態において、そのような操作に適合可能なベクターとしては、限定されないが、大腸菌発現ベクターのｐＥＴシリーズが挙げられる［Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １８５：６０－８９ （１９９０）］。

【0125】

１つの実施形態において、酵母発現システムが用いられる。１つの実施形態において、構造プロモーターまたは誘導プロモーターを含有する多くのベクターを酵母で用いることができる（米国特許第５，９３２，４４７号に記述される）。他の実施形態においては、外来性ＤＮＡ配列の酵母染色体への統合を促進するベクターが用いられる。

【0126】

１つの実施形態において、本発明の発現ベクターはさらに、たとえば配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）等の１つのｍＲＮＡから数種のタンパク質の翻訳が可能となるような追加のポリヌクレオチド配列、およびプロモーター－キメラポリペプチドのゲノム統合のための配列を含有しても良い。

【0127】

一部の実施形態において、哺乳類発現ベクターとしては、限定されないが、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／－）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能）、ｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能）、ｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶおよびｐＢＫ－ＣＭＶ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅから入手可能）、ｐＴＲＥＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能）ならびにそれらの誘導体が挙げられる。

【0128】

一部の実施形態において、たとえばレトロウイルス等の真核細胞ウイルス由来の制御エレメントを含有する発現ベクターが本発明により用いられる。ＳＶ４０ベクターは、ｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２を含む。一部の実施形態において、ウシパピローマウイルス由来のベクターとしては、ｐＢＶ－１ＭＴＨＡが挙げられ、Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒウイルス由来のベクターとしては、ｐＨＥＢＯおよびｐ２Ｏ５が挙げられる。他の例示的なベクターとしては、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ^＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ^＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、および、ＳＶ－４０早期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳腺腫瘍プロモーター、Ｒｏｕｓ肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）プロモーター、または真核細胞での発現に有効であることが示されている他のプロモーターの制御下でのタンパク質の発現が可能な任意の他のベクターが挙げられる。

【0129】

一部の実施形態においては、たとえば水平感染および標的特異性等の利点ゆえに、本発明ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ発現には組み換えウイルスベクターが有用である。１つの実施形態において、水平感染は、たとえば、レトロウイルス等のライフサイクルに備わっているものであり、１つの感染細胞が多くの子孫ビリオンを生み出し、それらが放出され、隣の細胞へと感染するプロセスである。１つの実施形態において、その結果、広範な範囲で急速に感染が発生し、その大部分が当初は元々のウイルス粒子により感染していなかった部分である。１つの実施形態において、水平に広がることができないウイルスベクターが作製される。１つの実施形態において、この特性は、限局的な数の標的細胞にのみ特定の遺伝子を導入することが目的の場合に有用でありうる。

【0130】

１つの実施形態において、本発明の発現ベクターを細胞に導入するために、様々な方法を用いることができる。そのような方法は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992)、in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Md. (1989)、Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995)、Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995)、Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988)および Gilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986]に概略されており、たとえば、安定的トランスフェクションまたは一過性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、および組み換えウイルスベクターを用いた感染が挙げられる。さらに、陽性－陰性選択法に関しては、米国特許第５，４６４，７６４号および第５，４８７，９９２号を参照のこと。

【0131】

一部の実施形態において、ウイルスの感染性により、より高いトランスフェクション効率が得られるため、ウイルス感染による核酸の導入は、他の方法（たとえばリポフェクションおよびエレクトロポレーション等）を超えるいくつかの利点が得られる。

【0132】

１つの実施形態において、本発明ポリペプチドはまた、上述の任意の適切な投与様式を用いて個体に投与された核酸構築物から発現され得ることを認識されたい（すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療）。１つの実施形態において、核酸構築物は、適切な遺伝子送達ビヒクル／方法を介して、適切な細胞へと導入され（たとえばトランスフェクション、形質導入、相同組み換え等）、および必要に応じて発現システムへと導入され、次いで、当該改変細胞は、培養で増殖され、個体へと戻される（すなわち、ｅｘ－ｖｉｖｏ遺伝子治療）。

【0133】

１つの実施形態において、植物発現ベクターが用いられる。１つの実施形態において、ポリペプチドコード配列の発現は、多くのプロモーターにより誘導される。一部の実施形態において、たとえばＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡプロモーターおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーター等のウイルスプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３１０：５１１－５１４ （１９８４）］、またはＴＭＶに対する外皮タンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ６：３０７－３１１ （１９８７）］が用いられる。他の実施形態において、たとえばＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット［Ｃｏｒｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ３：１６７１－１６８０ （１９８４）；およびＢｒｏｇｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３ （１９８４）］またはヒートショックプロモーター（たとえば、大豆ｈｓｐ１７．５－Ｅまたは１７．３－Ｂ）［Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６：５５９－５６５ （１９８６）］等の植物プロモーターが用いられる。１つの実施形態において、構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、および他の当業者公知の技術を用いて、植物細胞へ導入される。たとえば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ， Ｓｅｃｔｉｏｎ ＶＩＩＩ， ｐｐ ４２１－４６３ （１９８８）］を参照のこと。たとえば昆虫宿主細胞システムや哺乳類宿主細胞システム等の他の発現システムも当分野公知であり、本発明に用いることができる。

【0134】

挿入されたコード配列（ポリペプチドをコードしている）の転写および翻訳に必須な要素を含有する以外にも、本発明の発現用構築物は、発現されたポリペプチドの安定性、産生、精製、収率および活性を最適化するために操作された配列を含むことができることを認識されたい。

【0135】

一部の実施形態において、様々な方法を用いて本発明の発現ベクターを宿主細胞システムへと導入しても良い。一部の実施形態において、そのような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８９， １９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍｄ． （１９８９）中、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ， Ｍｉｃｈ． （１９９５）、Ｖｅｇａ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ Ｍｉｃｈ． （１９９５）、Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ， Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ， Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ． （１９８８）、およびＧｉｌｂｏａ ｅｔ ａｔ． ［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４ （６）： ５０４－５１２， １９８６］に概略されており、たとえば、安定的トランスフェクションまたは一過性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーションおよび組み換えウイルスベクターを用いた感染等を含んでもよい。さらに、陽性－陰性選択法に関しては、米国特許第５，４６４，７６４号および第５，４８７，９９２号を参照のこと。

【0136】

一部の実施形態において、形質転換細胞は、多量の組換えポリペプチドの発現が可能となる有効な条件下で培養される。一部の実施形態において、有効な培養条件としては、限定されないが、タンパク質産生が可能となる有効培地、バイオリアクター、温度、ｐＨ、および酸素条件が挙げられる。１つの実施形態において、有効培地とは、細胞が培養され、本発明の組み換えポリペプチドを産生する任意の培地を指す。一部の実施形態において、培地は、通常、同化可能な炭素、窒素、およびリン酸源、ならびに適切な塩、ミネラル、金属および他の栄養源（たとえばビタミン類）を有する水性溶液を含む。一部の実施形態において、本発明の細胞は、標準的な発酵バイオリアクター、振とうフラスコ、試験管、マイクロタイターディッシュ、およびペトリプレート中で培養されても良い。一部の実施形態において、培養は、組み換え細胞に適した温度、ｐＨ、および酸素含量で行われる。一部の実施形態において、培養条件は、当業者の専門的知識の範囲内にある。

【0137】

一部の実施形態において、産生に用いられたベクターおよび宿主システムに応じて得られた本発明のポリペプチドは、組換え宿主細胞内に留まっているか、発酵培地へ分泌されているか、２つの細胞膜の間の空間に分泌されているか（たとえば、大腸菌の細胞周辺腔）；または細胞もしくはウイルス膜の外部表面上に留められている。

【0138】

１つの実施形態において、既定時間の培養を行った後に組み換えポリペプチドの回収が行われる。

【0139】

１つの実施形態において、本明細書に用いられる「組み換えポリペプチドの回収」という文言は、当該ポリペプチドを含有する発酵培地全体を回収することを指し、必ずしも分離または精製の追加工程を暗示するものではない。

【0140】

１つの実施形態において、本発明のポリペプチドは様々な標準的タンパク質精製技術（たとえば、限定されないが、アフィニティクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、ろ過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィ、ゲルろ過クロマトグラフィ、逆相クロマトグラフィ、コンカナバリンＡクロマトグラフィ、クロマト分画および分別可溶化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）等）を用いて精製される。

【0141】

１つの実施形態において、回収を促進するために、発現されたコード配列は、本発明のポリペプチドをコードし、および開裂可能な部分と融合するよう操作されていても良い。１つの実施形態において、融合タンパク質は、当該ポリペプチドが容易にアフィニティクロマトグラフィにより単離されるよう設計されていても良い（たとえば、当該開裂部分に特異的なカラム上への固定により単離される）。１つの実施形態において、開裂部位は、当該ポリペプチドと当該開裂可能部分の間に組み込まれており、当該ポリペプチドは、この部位で当該融合タンパク質を特異的に開裂する適切な酵素または剤を用いた処置により、クロマトグラフィカラムから放出されても良い［たとえば、Ｂｏｏｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｌｅｔｔ． １９：６５－７０ （１９８８）；および Ｇａｒｄｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６５：１５８５４－１５８５９ （１９９０）を参照］。

【0142】

１つの実施形態において、本発明のポリペプチドは、「実質的に純粋」な形態で回収される。

【0143】

１つの実施形態において、「実質的に純粋」という文言は、本明細書に開示される応用において、当該タンパク質の有効的使用が可能となる純度を指す。

【0144】

１つの実施形態において、本発明のポリペプチドはまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏ発現システムを用いて合成されても良い。１つの実施形態において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ合成法は、当分野に公知であり、当該システムの構成要素は市販されている。

【0145】

一部の実施形態において、組み換えポリペプチドは、合成および精製され；それらの治療有効性は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで分析されても良い。１つの実施形態において、組み換えＤＮＡ技術を用いてＣＴＰにより改変されたＧＨの製造が行われる。

【0146】

一部の実施形態において、組み換えポリペプチドは、合成および精製され；それらの治療有効性は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれかで分析されても良い。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰにより改変された組み換えＧＨの結合活性は、様々な分析法を用いて確定されてもよい。

【0147】

１つの実施形態において、本発明は、ＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰポリペプチドを含有する。１つの実施形態において、組み換えＤＮＡ技法が、ＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰポリペプチドの製造に用いられる。１つの実施形態において、本発明は、ＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰポリペプチドを含有する。１つの実施形態において、実施例１および図１に示される、組み換えＤＮＡ技法が、ＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの製造に用いられる。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰポリペプチド、またはＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰポリペプチドの治療有効性は、ｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで分析される。１つの実施形態において、本発明のＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰポリペプチド、またはＣＴＰ－ＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰポリペプチドの治療有効性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれかで分析される。１つの実施形態において、本発明の組み換えＧＨポリペプチドの結合活性は、Ｎｂ２（プロラクチン依存性ラットリンパ腫細胞株（ＥＣＡＣＣ Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋ））またはＦＣＤ－Ｐ１マウス細胞株（従前にヒト成長ホルモン受容体をトランスフェクトされている）を用いて測定される。１つの実施形態において、これら受容体へのＧＨの結合により、細胞増殖（１つの実施形態において、ＧＨ活性の機能として、ＭＴＴ細胞染色のレベルにより測定される）が誘導される。１つの実施形態において、ｉｎ ｖｉｖｏ活性は、処置された成長ホルモン欠乏症動物における経時的な体重増加を測定することにより推定される。

【0148】

１つの実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを含有するポリペプチドの治療有効量を対象に投与し、それにより対象における成長と体重増加を誘導することを含む、対象における成長または体重増加を誘導する方法が提供される。

【0149】

他の実施形態において、本発明により、ポリペプチドをコードする核酸からなるポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの治療有効量を非ヒト対象に投与し、それにより非ヒト対象における成長または体重増加を誘導することを含む、非ヒト対象における成長または体重増加を誘導する方法が提供され、当該ポリペプチドは、非ヒト成長ホルモン、当該非ヒト成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該非ヒト成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなり、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0150】

他の実施形態において、本発明により、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを含有するポリペプチドの治療有効量を対象に投与し、それにより対象における体重減少を誘導する、または体脂肪を減少させることを含む、対象における体重減少を誘導する方法または体脂肪を減少させる方法が提供される。１つの実施形態において、当該対象は、肥満である。他の実施形態において、当該対象は、太りすぎである。

【0151】

他の実施形態において、本発明により、ポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの治療有効量を非ヒト対象に投与し、それにより非ヒト対象における成長または体重増加を誘導することを含む、非ヒト対象における体脂肪を減少させる方法が提供され、当該ポリヌクレオチドは、非ヒト成長ホルモン、当該非ヒト成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該非ヒト成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなり、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0152】

他の実施形態において、本発明により、対象における脂肪沈着を減少させる方法が提供される。他の実施形態において、本発明により、対象における筋肉の量を増加させる方法が提供される。他の実施形態において、本発明により、対象における筋肉の成長を促進する方法が提供される。他の実施形態において、本発明により、筋肉と脂肪の比率を増加させる方法が提供される。他の実施形態において、本発明により、ボディマスインデックス（ＢＭＩ）またはＱｕｅｔｅｌｅｔインデックスを低下させる方法が提供される。

【0153】

他の実施形態において、成長は、体重増加により測定される。他の実施形態において、成長は、身長増加により測定される。他の実施形態において、成長は、体重増加により測定される。他の実施形態において、成長は、筋肉量の増加により測定される。他の実施形態において、成長は、体重増加により測定される。他の実施形態において、成長は、骨量の増加により測定される。他の実施形態において、成長は、体重増加により測定される。他の実施形態において、成長は、筋肉量の増加により測定される。他の実施形態において、体重増加は、骨量および／または筋肉量の増加によるものである。他の実施形態において、成長は、当業者公知の任意の既知の測定単位により測定される。

【0154】

一部の実施形態において、本発明のヒト成長ホルモンポリペプチドは、たとえば発育不全疾患、ＡＩＤＳ消耗、加齢、ＨＩＶ感染対象の免疫機能不全、異化疾患、外科手術からの回復、うっ血性心筋症、肝移植、肝切除後の肝臓再生、慢性腎不全、腎性骨ジストロフィー、骨粗しょう症、軟骨形成不全／軟骨低形成症、骨格形成異常、慢性炎症または栄養障害疾患（たとえばクローン病）、短腸症候群、若年性慢性関節炎、嚢胞性線維症、男性不妊、Ｘ染色体性低リン酸塩血症性くる病、ダウン症、二分脊椎、ヌーナン症候群、肥満、筋力低下、および線維筋痛等の成長と体重に関連した疾患を有する対象を治療するために用いられても良い。一部の実施形態において、本発明のインターフェロンポリペプチドは、たとえば有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、カポジ肉腫（ＫＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性Ｃ型肝炎（ＣＨＣ）、尖圭コンジローム（ＣＡ）、慢性Ｂ型肝炎、悪性メラノーマ、濾胞性非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性肉芽腫性疾患、非定型抗酸菌複合体（ＭＡＣ）、肺線維症、および骨粗しょう症等の様々な疾患を有する対象を治療するために用いられる。

【0155】

１つの実施形態において、本発明のポリペプチドは、それ自体が個体に提供されても良い。１つの実施形態において、本発明のポリペプチドは、薬学的に受容可能な担体と混合されている場合には、医薬組成物の一部として個体に提供されても良い。

【0156】

１つの実施形態において、「医薬組成物」とは、本明細書に開示される１以上の活性成分と、たとえば生理学的に適切な担体および賦形剤等の他の化学的成分との調製物を指す。医薬組成物の目的は、生物体への化合物投与を容易にすることである。

【0157】

１つの実施形態において、「活性成分」とは、生物学的効果の要因となる、対象のポリペプチド配列を指す。

【0158】

一部の実施形態において、本発明の任意の組成物は、いかなる形態であれ、対象のタンパク質に結合されたＣＴＰ配列を少なくとも２つ含有する。１つの実施形態において、本発明により、混合調製物が提供される。１つの実施形態において、「混合調製物」とは、上述に定義される組み合わせのパートナーが、独立して、または異なる量の組み合わせパートナーを用いて異なる一定の組み合わせの使用により、投与されうる（すなわち、同時に、共に、別々に、または連続して投与されうる）という意味では、特に「複数部分のキット」を定義するものである。一部の実施形態において、次いで、複数部分のキットの部分は、同時に、または時間をずらして投与されても良い（すなわち、複数部分のキットの任意の部分に対し、異なる時点で、および等しい時間間隔または異なる時間間隔で、投与されても良い）。一部の実施形態において、組み合わせパートナーの総量の比率は、当該混合調製物中で処理されても良い。１つの実施形態において、混合調製物は、治療される患者亜群の必要性に対処するために、または特定の疾患、疾患の重篤度、年齢、性別もしくは体重によって異なる必要性がある１人の患者の必要性に対処するために、変化しても良く、当業者により容易に行うことができる。

【0159】

１つの実施形態において、「生理学的に受容可能な担体」および「薬学的に受容可能な担体」は、相互交換可能に用いられ、生物体に対し顕著な刺激を与えることなく、および投与される化合物の生物活性および特性を損うことのない担体または希釈剤を指す。アジュバントは、これら文言に含まれる。１つの実施形態において、薬学的に受容可能な担体に含まれる成分のうちの１つは、たとえば、有機媒体および水性媒体の両方における広範な溶解性を有する生体適合性ポリマーであるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である（Ｍｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９７９））。

【0160】

１つの実施形態において、「賦形剤」とは、活性成分の投与をさらに促進するために医薬組成物に添加される不活性な物質を指す。１つの実施形態において、賦形剤としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、ならびにある種のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールが挙げられる。

【0161】

薬剤の処方および投与の技術に関しては、"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，" Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡの最新版に見出される（参照により本明細書に援用される）。

【0162】

１つの実施形態において、適切な投与経路としては、たとえば、経口、直腸内、経粘膜、経鼻、腸内、または非経口送達（筋肉内、皮下、および髄内注射を含む）、ならびにくも膜下注射、直接脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射、または眼球内注射が挙げられる。

【0163】

１つの実施形態において、たとえば患者身体の特定領域への調製物の直接注射を介して、調製物は、全身ではなく局所に投与される。

【0164】

１つの実施形態において、医薬製剤または医薬組成物は、注射を介して対象に投与され、シリンジまたはＰＥＮデバイスを用いて投与がなされる。

【0165】

他の実施形態において、本発明のＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～５０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～２５マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、５０～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１０～５０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、５ミリグラム（ｍｇ）／１ｍｌ溶液、１０ｍｇ／１ｍｌ溶液、または２０ｍｇ／１ｍｌ溶液、または４０ｍｇ／１ｍｌ溶液の用量で投与される。

【0166】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、週１回投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、週に２回投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、週に３度、投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、２週に１回投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、１７日ごとに１回投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、１～９０マイクログラム／０．１～５ｍｌ溶液の用量で、筋肉内（ＩＭ）注射、皮下（ＳＣ）注射、または静脈内（ＩＶ）注射により、１９日ごとに１回投与される。１つの実施形態において、投与は筋肉内（ＩＭ）注射により行われる。１つの実施形態において、投与は皮下（ＳＣ）注射により行われる。１つの実施形態において、投与は静脈内（ＩＶ）注射により行われる。

【0167】

様々な実施形態の投与範囲が、本発明に予期される。本発明のポリペプチドの投与量は、１つの実施形態において、０．０５～８０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．０５～５０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、０．１～２０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．１～１０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．１～５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．５～５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．５～５０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５～８０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、３５～６５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、３５～６５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、２０～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４０～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４５～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４０～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、６０～１２０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１２０～２４０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４０～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、２４０～４００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４５～６０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１５～２５ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５～１０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５５～６５ｍｇ／日の範囲である。

【0168】

１つの実施形態において、投与量は、２０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、３０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、４０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、５０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、６０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、７０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、８０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、９０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は、１００ｍｇ／日である。

【0169】

本発明のＣＴＰにより改変されたＧＨの投与量は、１つの実施形態において、０．００５～１００ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１つの実施形態において、０．００５～５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．０１～５０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．１～２０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．１～１０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．０１～５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．００１～０．０１ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．００１～０．１ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．１～５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．５～５０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．２～１５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、０．８～６５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１～５０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５～１０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、８～１５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１０～２０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、２０～４０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、６０～１２０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１２～４０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、４０～６０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５０～１００ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１～６０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１５～２５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５～１０ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、５５～６５ｍｇ／週の範囲である。他の実施形態において、投与量は、１～５ｍｇ／週の範囲である。

【0170】

他の実施形態において、対象に与えられるＧＨの投与量は、対象の同じ群（たとえば、小児、高齢者、男性、女性、ＧＨ欠乏症、特定の国籍等）の参照対象に与えられる標準的投与量の５０％である。他の実施形態において、投与量は、対象の特定の群の対象に与えられる投与量の３０％である。他の実施形態において、投与量は、対象の特定の群に与えられる投与量の４５％である。他の実施形態において、投与量は、対象の特定の群の対象に与えられる投与量の１００％である。

【0171】

他の実施形態において、投与量は、１～５ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は、２ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は、４ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は、１．２ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は、１．８ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は、およそ本明細書に記述される投与量である。

【0172】

他の実施形態において、投与量は、１～５ｍｇ／投与である。他の実施形態において、投与量は、２ｍｇ／投与である。他の実施形態において、投与量は、４ｍｇ／投与である。他の実施形態において、投与量は、１．２ｍｇ／投与である。他の実施形態において、投与量は、１．８ｍｇ／投与である。１つの実施形態において、組成物は、週１回投与される。他の実施形態において、組成物は、２週に１回投与される。他の実施形態において、組成物は、毎月投与される。他の実施形態において、組成物は、毎日投与される。

【0173】

１つの実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、液体製剤形態で製剤化される。

【0174】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、鼻内投与形態で製剤化される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、注射用投与形態で製剤化される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．０００１ｍｇ～０．６ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．００１ｍｇ～０．００５ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．００５ｍｇ～０．０１ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．０１ｍｇ～０．３ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．２ｍｇ～０．６ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。

【0175】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１～１００マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１０～８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、２０～６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１０～５０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、４０～８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１０～３０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、３０～６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。

【0176】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、０．２ｍｇ～２ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、２ｍｇ～６ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、４ｍｇ～１０ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、５ｍｇ～１５ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。

【0177】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、筋肉内に注射される（筋肉内注射）。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、皮膚の下に注射される（皮下注射）。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、筋肉内に注射される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、皮膚の下に注射される。

【0178】

他の実施形態において、本発明方法は、その必要のある対象に対し、ＣＴＰにより改変されたＧＨを提供し、それにより成長ホルモン療法の使用におけるコンプライアンスを上昇させることを含む、ＧＨ治療の使用におけるコンプライアンスを上昇させることを含む。

【0179】

他の実施形態において、たとえば本発明のＣＴＰにより改変されたＧＨ等の５０，０００ダルトン未満の分子量のタンパク製剤は、一般的に、ｉｎ ｖｉｖｏで短命な種類であり、数時間の短い循環半減期を有している。他の実施形態において、皮下経路での投与により、一般的に、循環中へゆっくりと放出される。他の実施形態において、本発明のＣＴＰ改変ポリペプチドは、たとえばＧＨ等の５０，０００ダルトン未満の分子量のタンパク質製剤の半減期を延長させる。他の実施形態において、本発明のＣＴＰ改変ポリペプチドは、長期間、インターフェロンの有益効果を持続させることができる。

【0180】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するＣＴＰ改変ポリペプチドの免疫原性は、単離ＧＨと等しい。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するＣＴＰ改変ポリペプチドの免疫原性は、単離ＧＨと同等である。他の実施形態において、ＣＴＰペプチドを用いた、本明細書に開示されるＧＨの改変により、ＧＨの免疫原性が低下する。他の実施形態において、ＧＨを含有するＣＴＰ改変ポリペプチドは、単離ＧＨタンパク質と同様の活性である。他の実施形態において、ＧＨを含有するＣＴＰ改変ポリペプチドは、単離ＧＨよりも活性が高い。他の実施形態において、ＧＨを含有するＣＴＰ改変ポリペプチドは、生物活性の低下を最小化させながら、分解に対する成長ホルモンの防御能力を最大化させる。

【0181】

他の実施形態において、本発明方法は、ＧＨ治療の必要がある慢性疾患に罹患した対象のコンプライアンスを増加させることを含む。他の実施形態において、本発明方法は、上述のようにＣＴＰを用いてＧＨを改変することにより、ＧＨの投与頻度を低下させることができる。他の実施形態において、コンプライアンスという用語は、順守を含む。他の実施形態において、本発明方法は、ＧＨの投与頻度を低下させることにより、ＧＨ治療の必要のある対象のコンプライアンスを増加させることを含む。他の実施形態において、ＧＨの投与頻度の低下は、ＣＴＰ改変ＧＨをより安定化させるＣＴＰ改変により達成される。他の実施形態において、ＧＨの投与頻度の低下は、成長ホルモンのＴ_１／２を延長した結果として達成される。他の実施形態において、ＧＨの投与頻度の低下は、ＧＨのクリアランス時間の延長の結果として達成される。他の実施形態において、成長ホルモンの投与頻度の低下は、成長ホルモンのＡＵＣ測定値の増加の結果として達成される。

【0182】

他の実施形態において、本発明により、非ヒト対象における体脂肪を低下させる方法が提供され、当該方法は、ポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの治療有効量を当該対象に投与し、それにより非ヒト対象における成長または体重増加を誘導することを含み、当該ポリヌクレオチドは、非ヒト成長ホルモン、当該非ヒト成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該非ヒト成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなり、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0183】

他の実施形態において、本発明により、ヒト対象における、インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）レベルを増加させる方法が提供され、当該方法は、成長ホルモン、当該成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰを含有するポリペプチドの治療有効量を当該対象に投与し、それにより当該対象におけるＩＧＦ－１のレベルを増加させることを含む。

【0184】

他の実施形態において、本発明により、非ヒト対象におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）のレベルを増加させる方法が提供され、当該方法は、ポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの治療有効量を非ヒト対象に投与し、それにより非ヒト対象における成長または体重増加を誘導することを含み、当該ポリヌクレオチドは、非ヒト成長ホルモン、当該非ヒト成長ホルモンのアミノ末端に付加された１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）、および当該非ヒト成長ホルモンのカルボキシ末端に付加された２つの絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰからなり、ここで、当該ポリペプチドは、任意選択的に、当該１つのＣＴＰのアミノ末端に付加されたシグナルペプチドからなる。

【0185】

１つの実施形態において、ヒト対象におけるＩＧＦ－１レベルの増加は、１型糖尿病、２型糖尿病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、別名「ルー・ゲーリック病」）、重度の火傷、および筋強直性筋ジストロフィー（ＭＭＤ）の治療、予防または抑制に有効でありうる。

【0186】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨを含有するポリペプチドは、２日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、３日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、４日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、５日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、６日に１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、週１回対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、７～１４日ごとに１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１０～２０日ごとに１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、５～１５日ごとに１回、対象に投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、１５～３０日ごとに１回、対象に投与される。

【0187】

他の実施形態において、投与量は５０～５００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は５０～１５０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は１００～２００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は１５０～２５０ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は２００～３００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は２５０～４００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は３００～５００ｍｇ／日の範囲である。他の実施形態において、投与量は３５０～５００ｍｇ／日の範囲である。

【0188】

１つの実施形態において、投与量は２０ｍｇ／日である。１つの実施形態において、投与量は３０ｍｇ／日である。１つの実施形態において、投与量は４０ｍｇ／日である。１つの実施形態において、投与量は５０ｍｇ／日である。１つの実施形態において、投与量は０．０１ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は０．１ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は１ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は０．５３０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は０．０５ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は５０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は１０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は２０－７０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は５ｍｇ／日である。

【0189】

他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／２日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／３日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／４日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／５日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／６日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／９日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／１１日である。他の実施形態において、投与量は１～９０ｍｇ／１４日である。

【0190】

他の実施形態において、成長ホルモンの投与量は１０～５０ｍｇ／日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／２日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／３日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／４日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／５日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／６日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／週である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／９日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／１１日である。他の実施形態において、投与量は１０～５０ｍｇ／１４日である。

【0191】

１つの実施形態において、経口投与は、錠剤、カプセル、トローチ剤、チュアブル錠、懸濁液、エマルション等を含む単位投与剤型を含有する。そのような単位投与剤型は、所望される化合物（複数含む）の安全で有効な量を含有し、それら各々は、１つの実施形態において、約０．７または３．５ｍｇ～約２８０ｍｇ／７０ｋｇであり、または他の実施形態においては、約０．５または１０ｍｇ～約２１０ｍｇ／７０ｋｇである。経口用の単位投与剤型の調製に適した薬学的に受容可能な担体は、当分野に公知である。一部の実施形態において、錠剤は、多くの場合、不活性な希釈剤（たとえば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよびセルロース）；結合剤（たとえばデンプン、ゼラチンおよびスクロース）；崩壊剤（たとえばデンプン、アルギン酸およびクロスカルメロース）；潤滑剤（たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、および滑石）として標準的な薬学的に適合性のあるアジュバントを含有する。１つの実施形態において、たとえば二酸化シリコン等の流動促進剤を用いて、粉末混合物の流動特性を改善しても良い。１つの実施形態において、外観用に、たとえばＦＤ＆Ｃ色素等の着色剤を添加しても良い。たとえばアステルパーム、サッカリン、メントール、ペパーミント、および果実フレーバー等の甘味料および香味剤は、チュアブル錠のアジュバントに有用である。一般的に、カプセルは、上述の１以上の固形希釈剤を含有する。一部の実施形態において、担体成分の選択は、味、コスト、および保存性等の二次的な考察事項に依存し、それらは本発明の目的に対し重要ではなく、当業者により容易に実施される。

【0192】

１つの実施形態において、経口投与型製剤は、所定の放出プロファイルを含有する。１つの実施形態において、本発明の経口投与型製剤は、徐放性の錠剤、カプセル、トローチ剤、またはチュアブル錠を含有する。１つの実施形態において、本発明の経口投与型製剤は、持続放出性の錠剤、カプセル、トローチ剤、またはチュアブル錠を含有する。１つの実施形態において、本発明の経口投与型製剤は、即時放出型の錠剤、カプセル、トローチ剤、およびチュアブル錠を含有する。１つの実施形態において、経口投与型製剤は、当業者公知の薬学的に活性な成分の所望される放出プロファイルに従い、製剤化される。

【0193】

一部の実施形態において、経口組成物は、液体溶液、エマルション、懸濁液等を含有する。一部の実施形態において、そのような組成物の調製に適した薬学的に受容可能な担体は、当分野に公知である。一部の実施形態において、液体経口組成物は、所望される化合物（複数含む）を約０．０１２％～約０．９３３％、または他の実施形態においては、約０．０３３％～約０．７％、含有する。

【0194】

一部の実施形態において、本発明方法における使用のための組成物は、溶液またはエマルションを含有し、それらは、一部の実施形態において、本発明化合物、および任意選択的に局所経鼻投与を目的とした他の化合物の安全で有効な量を含有する水性溶液またはエマルションである。一部の実施形態において、組成物は、対象化合物を約０．０１％～約１０．０％ ｗ／ｖ、より好ましくは約０．１％～約２．０％、含有し、それらは経鼻経路による化合物の全身送達に用いられる。

【0195】

他の実施形態において、医薬組成物は、液体調製物の静脈内注射、動脈内注射、または筋肉内注射により投与される。一部の実施形態において、液体製剤は、溶液、懸濁液、分散液、エマルション、油等を含有する。１つの実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与され、そのため、静脈内投与に適した剤型で処方される。他の実施形態において、医薬組成物は動脈内投与され、そのため、動脈内投与に適した剤型で処方される。他の実施形態において、医薬組成物は筋肉内投与され、そのため、筋肉内投与に適した剤型で処方される。

【0196】

他の実施形態において、医薬組成物は、身体表面に対し局所的に投与され、そのため、局所投与に適した剤型で処方される。適切な局所用製剤は、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、ドロップ等を含有する。局所投与に対して、本発明化合物は、追加の適切な治療剤（複数含む）と混合され、調製され、および、生理学的に受容可能な希釈剤において溶液、懸濁液またはエマルションとして、薬学的担体と共に、または薬学的担体無しで、適用される。

【0197】

１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、当分野公知の方法により製造される（たとえば、標準的な混合、溶解、粒状化、糖衣錠化、粉末化、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥法を用いる）。

【0198】

１つの実施形態において、本発明に従う使用のための医薬組成物は、薬学的に用いることができ、調製物への活性成分の処理を容易にする、賦形剤および補助剤を含む、生理学的に受容可能な担体を１つ以上用いて、標準的な様式で製剤化される。１つの実施形態において、製剤化は、選択された投与経路に基づいている。

【0199】

１つの実施形態において、本発明の注射剤は、水性溶液で製剤化される。１つの実施形態において、本発明の注射剤は、たとえばハンクス液、リンゲル液、または生理学的な塩緩衝液等の、生理学的に適合可能な緩衝液において製剤化される。一部の実施形態において、経粘膜投与に対しては、浸透されるバリアに対し適切な浸透剤が、製剤化に用いられる。そのような浸透剤は、当分野に一般的に公知である。

【0200】

１つの実施形態において、本明細書に開示される調製物は、たとえば、ボーラス注射または持続点滴等による、非経口投与用に製剤化される。一部の実施形態において、注射用製剤は、たとえばアンプル中の、または任意選択的に添加保存料と共に複数回投与容器中の単位投与剤型で提供される。一部の実施形態において、組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルの懸濁液、溶液またはエマルションであり、たとえば懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤等の処方剤を含有する。

【0201】

また、組成物は、一部の実施形態において、たとえば塩化ベンザルコニウムおよびチメロサール等の保存料；たとえばエデト酸ナトリウム等のキレート剤；たとえばリン酸、クエン酸および酢酸等の緩衝剤；たとえば塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール等の等張化剤；たとえばアスコルビン酸、アセチルシスチン、メタ重亜硫酸塩等の抗酸化剤；芳香剤；セルロースおよびその誘導体を含む、たとえばポリマー等の粘性調整剤；およびポリビニルアルコールを含有し、ならびに必要に応じてこれら水性組成物のｐＨを調節するための酸および塩基を含有する。当該組成物はまた、一部の実施形態において、局所麻酔薬または他の活性物質を含有する。当該組成物は、スプレー、ミスト、ドロップ等として用いても良い。

【0202】

一部の実施形態において、非経口投与用の医薬組成物は、水溶液の形態で、活性調製物の水性溶液を含む。さらに、一部の実施形態において、活性成分の懸濁液は、適切な油性または水性ベースの注射用懸濁液として調製される。適切な親油性溶媒またはビヒクルは、一部の実施形態において、たとえばゴマ油等の脂肪油、またはたとえばオレイン酸エチル、トリグリセリドまたはリポソーム等の合成脂肪酸エステルを含む。一部の実施形態において、水性注射用懸濁液は、たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストラン等の懸濁液の粘性を高める物質を含有する。他の実施形態において、懸濁液はまた、適切な安定化剤、または当該調製物が高濃度溶液となるように活性成分の溶解性を高める剤を含有する。

【0203】

他の実施形態において、活性化合物は、小胞、特にリポソーム中で送達されても良い（Ｌａｎｇｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３ （１９９０）； Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， Ｌｏｐｅｚ－ Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．）， Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ３５３－３６５ （１９８９）； Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ， 同書、ｐｐ． ３１７－３２７を参照のこと）。

【0204】

他の実施形態において、制御放出システムで送達される医薬組成物は、静脈内点滴、埋め込み型浸透圧ポンプ、経皮貼布、シリンジ、リポソーム、または他の投与様式に対して製剤化される。１つの実施形態において、ポンプが用いられる（Ｌａｎｇｅｒ、上述； Ｓｅｆｔｏｎ， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０１ （１９８７）； Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７ （１９８０）； Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４ （１９８９）を参照のこと）。他の実施形態において、高分子材料が用いられても良い。さらに他の実施形態において、制御放出システムは、治療標的の近傍（すなわち、脳であり、全身投与量のほんの一部のみを必要とする）に設置されても良い（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上述、ｖｏｌ． ２， ｐｐ． １１５－１３８ （１９８４）を参照のこと）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ （Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３ （１９９０））による概説に検討されている。

【0205】

一部の実施形態において、活性成分は、適切なビヒクル（たとえば、使用前に滅菌され、発熱物質が含まれていない水性溶液等）を用いた構築用の粉末形態である。組成物は、一部の実施形態において、噴霧および吸入投与に対して製剤化される。他の実施形態において、組成物は、添付された噴霧化剤と共に容器中に含まれる。

【0206】

１つの実施形態において、本発明の調製物は、たとえばココアバターまたは他のグリセリド等の標準的な座薬ベースを用いて、たとえば座薬または停留浣腸等の直腸組成物中で製剤化される。

【0207】

１つの実施形態において、本発明の調製物は、シリンジまたはＰｅｎデバイスを介した注射に対する液体製剤で製剤化される。一部の実施形態において、本発明に関連した使用に適した医薬組成物は、意図される目的を達成するために有効な量で活性成分が含有される組成物を含む。一部の実施形態において、治療有効量とは、疾患の症状を予防、緩和もしくは改善する、または治療される対象の生存期間を延長させるために有効な活性成分の量を意味する。

【0208】

１つの実施形態において、治療有効量の決定は、当業者の能力の範囲内にある。

【0209】

１つの実施形態において、本明細書に開示される製剤はまた、たとえば塩化ベンザルコニウムおよびチメロサール等の保存料；たとえばエデト酸ナトリウム等のキレート剤；たとえばリン酸、クエン酸および酢酸等の緩衝剤；たとえば塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール等の等張化剤；たとえばアスコルビン酸、アセチルシスチン、メタ重亜硫酸塩等の抗酸化剤；芳香剤；セルロースおよびその誘導体を含む、たとえばポリマー等の粘性調整剤；およびポリビニルアルコールを含有し、ならびに必要に応じてこれら水性組成物のｐＨを調節するための酸および塩基を含有する。当該組成物はまた、局所麻酔薬または他の活性物質を含有する。当該組成物は、スプレー、ミスト、ドロップ等として用いても良い。

【0210】

薬学的に受容可能な担体またはその成分として供されることができる物質の例の一部は、たとえばラクトース、グルコース、およびスクロース等の糖類；たとえばコーンスターチ、およびポテトスターチ等のスターチ類；セルロースおよびその誘導体（たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロース等）；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；滑石；たとえばステアリン酸およびステアリン酸マグネシウム等の固形潤滑剤；硫酸カルシウム；たとえばピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブオイル、コーン油、およびカカオ脂等の植物油；ポリエチレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール等のポリオール類；アルギン酸；たとえばＴｗｅｅｎ（登録商標）ブランドの乳化剤等の乳化剤；ラウリル硫酸ナトリウム等の湿潤化剤；着色剤；香味剤；錠剤化剤、安定化剤；抗酸化剤；保存料；発熱物質の無い水；等張生理食塩水；およびリン酸緩衝溶液である。当該化合物と併せて用いられる薬学的に受容可能な担体の選択は、基本的に、化合物が投与される方法により決定される。もし対象化合物が注射される場合、１つの実施形態において、薬学的に受容可能な担体は、約７．４に調製されたｐＨ、血液適合性のある懸濁化剤を伴う滅菌生理食塩水である。

【0211】

さらに、当該製剤は、結合剤（たとえば、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアーガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン等）、崩壊剤（たとえば、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、二酸化シリコン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアーガム、デンプングリコール酸ナトリウム等）、様々なｐＨおよびイオン強度の緩衝剤（たとえば、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、酢酸、リン酸等）、たとえばアルブミンまたはゼラチン等の表面への吸着を防ぐための添加剤、洗剤（たとえば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８、胆汁酸塩等）、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤（たとえば、ラウリル硫酸ナトリウム等）、透過促進剤、可溶化剤（たとえばグリセロール、ポリエチレングリセロール等）、抗酸化剤（たとえば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシアニソール等）、安定化剤（たとえば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、粘性増強剤（たとえば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム等）、甘味料（たとえば、アスパルテーム、クエン酸等）、保存料（たとえば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン等）、潤滑剤（たとえば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、フローエイド（ｆｌｏｗ－ａｉｄｓ）（たとえば、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（たとえば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル等）、乳化剤（たとえば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等）、ポリマーコーティング（たとえば、ポロキサマ―またはポロキサミン等）、コーティングおよびフィルム形成剤（たとえば、エチルセルロース、アクリル酸、ポリメタクリレート）および／またはアジュバントを含有する。

【0212】

シロップ、エリキシル、エマルションおよび懸濁剤に対する典型的な担体成分としては、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体スクロース、ソルビトールおよび水が挙げられる。懸濁液に対しては、典型的な懸濁化剤として、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース（たとえば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）、ＲＣ－５９１）、トラガカント、およびアルギン酸ナトリウムが挙げられる；典型的な湿潤剤としては、レシチンおよびポリエチレンオキシドソルビタン（たとえば、ポリソルベート８０）が挙げられる。典型的な保存料としては、メチルパラベンおよび安息香酸ナトリウムが挙げられる。他の実施形態において、経口用液体組成物はまた、たとえば上述の甘味料、香味料、および着色料等の成分を１つ以上含有する。

【0213】

本明細書に開示される製剤はまた、たとえばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ハイドロゲル等のポリマー化合物の粒子状調製物内への、または粒子調製物上への活性マテリアルの組み込み、またはリポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層小胞もしくは多層小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト上への活性マテリアルの組み込みを含む。そのような組成物は、物理的状態、可溶性、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与える。

【0214】

また、本発明により、ポリマー（たとえばポロキサマ―またはポロキサミン等）で覆われた粒子状組成物が包含され、および組織特異的受容体、リガンド、もしくは抗原に対する抗体に連結された化合物、または組織特異的受容体のリガンドに連結された化合物が包含される。

【0215】

一部の実施形態において、化合物は、たとえばポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、またはポリプロリン等の水溶性ポリマーの共有結合的付加により改変される。他の実施形態において、改変化合物は、静脈注射後、同等の非改変化合物よりも血中で大幅に長い半減期を示す。１つの実施形態において、改変は、水性溶液中の化合物の溶解性も上昇させ、凝集を除去し、当該化合物の物理的および化学的安定性を増強させ、および当該化合物の免疫原性および反応性を大きく低下させる。他の実施形態において、所望されるｉｎ ｖｉｖｏ生物活性は、そのようなポリマー化合物の、非改変化合物よりも低頻度の投与により得られ、または低い投与量で得られる。

【0216】

一部の実施形態において、有効量または有効投与量の調製物は、最初にｉｎ ｖｉｔｒｏ分析から推定されうる。１つの実施形態において、投与量は、動物モデルにおいて策定され、当該情報を用いて、ヒトにおける有用投与量のより正確な決定がなされる。

【0217】

１つの実施形態において、本明細書に記述される活性成分の毒性および治療有効性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順により決定されうる。１つの実施形態において、これらｉｎ ｖｉｔｒｏおよび細胞培養分析および動物実験から得られたデータは、ヒトでの使用に対する投与量範囲の策定に用いられる。１つの実施形態において、投与量は、用いられる投与剤型、および用いられる投与経路により変化する。１つの実施形態において、正確な剤型、投与経路、および投与量は、患者の状態を鑑み、個々の医師により選択されうる［たとえば、Ｆｉｎｇｌ， ｅｔ ａｌ．， （１９７５）"Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"， Ｃｈ． １ ｐ．１を参照のこと］。

【0218】

１つの実施形態において、治療される疾患の重症度および反応性に応じて、投与は、単回投与であってもよく、または数日から数週、治療効果が得られるまで、もしくは病的状態が減縮するまで継続する一連の治療を伴う複数回投与であっても良い。

【0219】

１つの実施形態において、投与される組成物または製剤の量はもちろん、治療される対象、障害の重症度、投与様式、処方する医師の判断等に基づきうる。

【0220】

１つの実施形態において、適合性のある薬学的な担体中で製剤化される本発明の調製物を含有する組成物はまた、適切な容器中で調製、配置され、および指定された状態の治療に関するラベルを貼られる。

【0221】

他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、全身投与を介して投与される。他の実施形態において、本明細書に開示される成長ホルモンは、静脈内注射、筋肉内注射、または皮下注射により投与される。他の実施形態において、ＣＴＰにより改変されたＧＨは、複合的な有機賦形剤および安定化剤（たとえば非イオン性表面活性剤（すなわち、界面活性剤）、様々な糖類、有機ポリオール類および／またはヒト血清アルブミン等）と組み合わされた、凍結乾燥（すなわち、凍結され、乾燥された）調製物である。他の実施形態において、医薬組成物は、注射用滅菌水中に本明細書に開示されるＣＴＰにより改変された凍結乾燥ＧＨを含有する。他の実施形態において、医薬組成物は、注射用滅菌ＰＢＳ中に、開示される凍結乾燥成長ホルモンを含有する。他の実施形態において、医薬組成物は、注射用滅菌０．９％ ＮａＣｌ中に、開示される凍結乾燥成長ホルモンを含有する。

【0222】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物はさらに、たとえばヒト血清アルブミン、ポリオール類、糖類、およびアニオン性表面活性安定化剤等の複合担体を含有するように製剤化される。たとえば、国際公開第８９／１０７５６号（Ｈａｒａら－ポリオールおよびｐ－ヒドロキシ安息香酸エステルを含有）を参照のこと。他の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に開示される成長ホルモンを含有し、さらに、ラクトビオン酸および酢酸／グリシン緩衝剤を含有するように製剤化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、インターフェロン組成物の水溶解性を増加させるアミノ酸（たとえばアルギニンまたはグルタミン酸）を含有するよう製剤化される。他の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変された凍結乾燥ＧＨを含有し、さらに、グリシンまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、緩衝剤（たとえば酢酸）、および等張化剤（たとえば、ＮａＣｌ）を含有するよう製剤化される。他の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変された凍結乾燥ＧＨを含有し、さらに、リン酸緩衝剤、グリシン、およびＨＳＡを含有するよう製剤化される。

【0223】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ｐＨ約４～７．２の緩衝溶液におかれた場合に、安定化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ｐＨ約６～６．４の緩衝溶液に置かれた場合に、安定化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ｐＨ約６．０の緩衝溶液に置かれた場合に、安定化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ｐＨ約６．２の緩衝溶液に置かれた場合に、安定化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ｐＨ約６．４の緩衝溶液に置かれた場合に、安定化される。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、安定化剤としてアミノ酸、および一部の場合においては塩（もし当該アミノ酸が荷電側鎖を含有していない場合）を用いて安定化される。１つの実施形態において、当該医薬組成物は、室温で安定化される。他の実施形態において、当該医薬組成物は、４℃で安定化される。他の実施形態において、当該医薬組成物は、５℃で安定化される。他の実施形態において、当該医薬組成物は、－２０℃で安定化される。１つの実施形態において、当該医薬組成物は、少なくとも３か月間、安定化される。１つの実施形態において、当該医薬組成物は、少なくとも６か月間、安定化される。１つの実施形態において、当該医薬組成物は、少なくとも１年間、安定化される。１つの実施形態において、当該医薬組成物は、少なくとも２年間、安定化される。

【0224】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、アミノ酸重量で約０．３％～約５％の安定化剤を含有する液体組成物中で製剤化される。

【0225】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、投薬精度および製品安全性を提供する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、注射適用における使用に対し、生物学的に活性で、安定した液体製剤を提供する。他の実施形態において、当該医薬組成物は、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変された非凍結乾燥ＧＨを含有する。

【0226】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、液体状態で長期間、保管が可能であり、投与前の保管および輸送が簡易な液体製剤を提供する。

【0227】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、マトリクス物質とし固体脂質を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する注射用医薬組成物は、マトリクス物質として固体脂質を含有する。他の実施形態において、スプレー凝固による脂質マイクロ粒子の製造は、Ｓｐｅｉｓｅｒ ａｎｄ ａｌ．， Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ８ （１９９１） ４７－５４に記述されており、その後、経口投与用の脂質ナノペレットが続く（Ｓｐｅｉｓｅｒ、欧州特許第０１６７８２５号（１９９０））。他の実施形態において、使用される脂質は、身体に対し良好な耐容性である（たとえば、非経口栄養用エマルション中に存在する脂肪酸から構成されるグリセリド）。

【0228】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、リポソームの形態である（Ｊ． Ｅ． Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈｓ ａｎｄ ａｌ．， Ｐｈａｒｍ．／ｎｄ． ５６ （１９９４） ２６７－ ２７５）。

【0229】

他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ポリマーマイクロ粒子を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する注射用医薬組成物は、ポリマーマイクロ粒子を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、ナノ粒子を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、リポソームを含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、脂質エマルションを含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、マイクロスフィアを含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、脂質ナノ粒子を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、両親媒性脂質を含有する脂質ナノ粒子を含有する。他の実施形態において、本明細書に開示されるＣＴＰにより改変されたＧＨを含有する医薬組成物は、薬剤、脂質マトリクス、および界面活性剤を含有する脂質ナノ粒子を含有する。他の実施形態において、当該脂質マトリクスは、少なくとも５０％ｗ／ｗのモノグリセリド含量を有する。

【0230】

１つの実施形態において、本発明の組成物は、パックまたはディスペンサー装置（たとえば、ＦＤＡ承認のキット）中に存在しており、それらは、活性成分を含有する単位投与剤型を１以上含有する。１つの実施形態において、たとえば、パックは、金属箔またはプラスチック箔（たとえばブリスターパック）を含有する。１つの実施形態において、パックまたはディスペンサー装置は、投与に関する説明書が添付されている。１つの実施形態において、パックまたはディスペンサー装置は、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定された形態で、当該容器に関連した注意書きが収められており、当該注意書きは、ヒトもしくは獣医学的適用、または組成物の形態に関する当局による承認を反映しているものである。そのような注意書きは、１つの実施形態において、処方薬に関し、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎにより承認されたラベルであり、または承認された製品添付文書である。

【0231】

１つの実施形態において、本発明のＣＴＰにより改変されたＧＨは、各剤それ自身を用いた治療と比較し、改善された治療効果を得るために、追加の活性剤と共に個体に提供されても良いことを認識されたい。他の実施形態において、併用療法に関連した有害な副作用を最小化するための手段（たとえば、投与および補助剤の選択）がとられる。

【0232】

本発明のさらなる目的、利点、および新たな特性は、以下の実施例を検証することで、当業者には明らかであり、それらは限定の意図ではない。さらに、上述され、以下の請求項において請求されている本発明の様々な実施形態および態様の各々は、以下の実施例において、実験的な立証を得ている。

【実施例】

【0233】

概して、本明細書に用いられている命名法および本発明に用いられている実験手法は、分子学的技術、生化学的技術、微生物学的技術および組み換えＤＮＡ技術を含む。そのような技術は文献中にすべて説明されている。たとえば、"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ" Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， （１９８９）；"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ" Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｒ． Ｍ．， ｅｄ． （１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ"，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍａｒｙｌａｎｄ （１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，"Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ"，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，"Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ"，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ）"Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ"， Ｖｏｌｓ． １－４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；第４，６８３，２０２号；第４，８０１，５３１号；第５，１９２，６５９号、および第５，２７２，０５７号に記述される技法；"Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ"， Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ， Ｊ． Ｅ．， ｅｄ． （１９９４）；"Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ － Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ" ｂｙ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ， Ｎ． Ｙ． （１９９４）， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ" Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ． Ｅ．， ｅｄ． （１９９４）； Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ），"Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ"（８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ， Ｎｏｒｗａｌｋ， ＣＴ （１９９４）； Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ （ｅｄｓ），"Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ"，Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８０）；利用可能なイムノアッセイは、特許および科学文献に詳述されており、たとえば、米国特許第３，７９１，９３２号；第３，８３９，１５３号；第３，８５０，７５２号；第３，８５０，５７８号；第３，８５３，９８７号；第３，８６７，５１７号；第３，８７９，２６２号；第３，９０１，６５４号；第３，９３５，０７４号；第３，９８４，５３３号；第３，９９６，３４５号；第４，０３４，０７４号；第４，０９８，８７６号；第４，８７９，２１９号；第５，０１１，７７１号、および第５，２８１，５２１号；"Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ" Ｇａｉｔ， Ｍ． Ｊ．， ｅｄ． （１９８４）；"Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ" Ｈａｍｅｓ， Ｂ． Ｄ．， ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｓ． Ｊ．， ｅｄｓ． （１９８５）；"Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ" Ｈａｍｅｓ， Ｂ． Ｄ．， ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｓ． Ｊ．， ｅｄｓ． （１９８４）；"Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ" Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｒ． Ｉ．， ｅｄ． （１９８６）；"Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ" ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， （１９８６）；"Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ"Ｐｅｒｂａｌ， Ｂ．， （１９８４） ａｎｄ"Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ" Ｖｏｌ． １－３１７， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；"ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ： Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ"， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ （１９９０）； Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，"Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ － Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ" ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）（これらすべては参照により援用される）を参照のこと。他の一般的な参照文献は、本明細書全体を通じて提示されている。

【0234】

実施例１
ｈＧＨ構築物の作製
材料と方法
４つのｈＧＨクローン（２０ｋＤタンパク質の変異体）が合成された。当該４つの変異体由来のｈＧＨ配列を含有するＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片を、真核生物発現ベクターｐＣＩ－ｄｈｆｒ（従前に、ＸｂａＩ－ＮｏｔＩを用いて切断されている）にライゲートした。当該４クローン由来のＤＮＡ（４０１－０、１、２、３および４）が調製された。２２ｋＤタンパク質由来の他のｈＧＨ部分クローン（１－２４２ｂｐ）もまた合成された（０６０６１１４）。プライマーは、Ｓｉｇｍａ－Ｇｅｎｏｓｙｓで合成された。本発明のｈＧＨ－ＣＴＰポリペプチドを作製するために用いられたプライマー配列を、以下の表１に要約する。

表１

【0235】

４０２－０－ｐ６９－１（ｈＧＨ）配列番号３６の構築：ＭＯＤ－４０２０は、以下に記述される実験において対照として使用されるために調製された、野生型組換えヒト成長ホルモン（ＣＴＰ無し）である。

【0236】

ＰＣＲ反応を３回行った。第一の反応は、プライマー２５およびプライマー３２^Ｒ、および鋳型として０６０６１１４のプラスミドＤＮＡ（ｈＧＨ１－２４２ｂｐの部分クローン）を用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、２４５ｂｐの産物が形成された。

【0237】

第二の反応は、プライマー３３およびプライマー４^Ｒ、および鋳型として４０１－０－ｐ５７－２のプラスミドＤＮＡを用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、５４２ｂｐの産物が形成された。

【0238】

最後の反応は、プライマー２５および４^Ｒ、および鋳型として上述の２つの反応の産物の混合物を用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、７０５ｂｐの産物が形成され、ＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＫ２０００－０１）へとライゲートされた。ｈＧＨ－０配列を含有するＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片は、真核細胞発現ベクターｐＣＩ－ｄｈｆｒへとライゲートされた。ベクターは、ＤＧ－４４ ＣＨＯ細胞へとトランスフェクトされた。細胞は、タンパク質フリー培地中で増殖された。

【0239】

４０２－１－ｐ８３－５ （ｈＧＨ－ＣＴＰ）－配列番号３７、および４０２－２－ｐ７２－３（ｈＧＨ－ＣＴＰｘ２）－配列番号３８の構築：ＭＯＤ－４０２１は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＣＴＰ）のベータ鎖のＣ末端ペプチドの１コピーに融合された組換えヒト成長ホルモンである。ＭＯＤ－４０２１のＣＴＰカセットは、Ｃ末端に付加された（１カセット）。ＭＯＤ－４０２２は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＣＴＰ）のベータ鎖のＣ末端ペプチドの２コピーに融合された組換えヒト成長ホルモンである。ＭＯＤ－４０２２の２つのＣＴＰカセットは、Ｃ末端に付加された（２カセット）。

【0240】

ｈＧＨ－ＣＴＰおよびｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの構築は、ｈＧＨ－０の構築と同様に行われた。ｐＣＩ－ｄｈｆｒ－４０１－１－ｐ２０－１（ｈＧＨ^＊－ｃｔｐ）、およびｐＣＩ－ｄｈｆｒ－４０１－２－ｐ２１－２（ｈＧＨ^＊－ｃｔｐ ｘ２）は、第二のＰＣＲ反応の鋳型として用いられた。

【0241】

ＭＯＤ－４０２１およびＭＯＤ－４０２２は、ＤＧ－４４ ＣＨＯ細胞中で発現された。細胞は、タンパク質フリー培地中で増殖された。ｈＧＨは２２ＫｄのＭＷを有しており、一方で、「ＣＴＰカセット」は、総分子量の８．５Ｋｄに相当するため、ＭＯＤ－４０２１の分子量は、約３０．５Ｋｄとなる（図１を参照）。ＭＯＤ－４０２２の分子量は約３９Ｋｄである（図１を参照）。

【0242】

４０２－３－ｐ８１－４（ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ）－配列番号３９、および４０２－４－ｐ８２－９（ＣＴＰ^＊ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ）－配列番号４０の構築：ＭＯＤ－４０２３は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＣＴＰ）のベータ鎖のＣ末端ペプチドの３コピーに融合された組換えヒト成長ホルモンである。ＭＯＤ－４０２３の３つのＣＴＰカセットは、Ｎ末端（１カセット）およびＣ末端（２カセット）の両方に付加された。ＭＯＤ－４０２４は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＣＴＰ）のベータ鎖のＣ末端ペプチドの１つの不完全コピーと２つの完全コピーに融合された組換えヒト成長ホルモンである。ＭＯＤ－４０２４の不完全ＣＴＰカセットは、Ｎ末端に付加され、２つのＣＴＰカセットはＣ末端に付加された（２カセット）。

【0243】

ＰＣＲ反応を３回行った。第一の反応は、プライマー２５およびプライマー３２^Ｒ、および鋳型としてｐ４０１－３－ｐ１２－５または４０１－４－ｐ２２－１のプラスミドＤＮＡを用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、２６５または２２０ｂｐの産物が形成された。第二の反応は、プライマー３４およびプライマー３７^Ｒ、および鋳型としてＴＡ－ｈＧＨ－２－ｑ６５－１のプラスミドＤＮＡを用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、６９５ｂｐの産物が形成された。最後の反応は、プライマー２５、および３７^Ｒ、および鋳型として上述の２つの反応の産物の混合物を用いて行い；ＰＣＲ増幅の結果、９３８または８９１ｂｐの産物が形成され、当該産物はＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＫ２０００－０１）へとライゲートされた。ｈＧＨ配列を含有するＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片は、我々の真核細胞発現ベクターｐＣＩ－ｄｈｆｒへとライゲートされた（図３）。

【0244】

ＭＯＤ－４０２３およびＭＯＤ－４０２４は、ＤＧ－４４ ＣＨＯ細胞で発現された。細胞は、タンパク質フリー培地中で増殖された。ＭＯＤ－４０２３の分子量は約４７．５Ｋｄであり（図１を参照）、ＭＯＤ－４０２４の分子量は約４３．２５Ｋｄである（図１）。

【0245】

４０２－６－ｐ９５ａ－８（ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ）－配列番号４１の構築：ｈＧＨ－６の構築は、ｈＧＨ－３の構築と同様の方法で行われた。ｐＣＩ－ｄｈｆｒ－４０２－１－ｐ８３－５（ｈＧＨ－ｃｔｐ）が、第二のＰＣＲ反応の鋳型として用いられた。

【0246】

４０２－５－ｐ９６－４（ＣＴＰ－ｈＧＨ）－配列番号４２の構築：ＰＣＲ反応は、プライマー２５、およびプライマー３９^Ｒ、および鋳型としてｐＣＩ－ｄｈｆｒ－ｃｔｐ－ＥＰＯ－ｃｔｐ（４０２－６－ｐ９５ａ－８）のプラスミドＤＮＡを用いて行われ；ＰＣＲ増幅の結果、７６３ｂｐの産物が形成され、当該産物はＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＫ２０００－０１）へとライゲートされた。ｃｔｐ－ｈＧＨ配列を含有するＸｂａＩ－ＮｏｔＩ断片は、我々の真核細胞発現ベクターｐＣＩ－ｄｈｆｒへとライゲートされ、４０２－５－ｐ９６－４クローンを得た。

【0247】

実施例２
本発明のｈＧＨ－ＣＴＰポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ生物活性試験
以下の実験は、市販の組換えヒトＧＨおよびＭＯＤ－４０２０と比較した、ｈＧＨ－ＣＴＰポリペプチドの長時間作用型生物活性の可能性を検証するために行われた。

【0248】

材料と方法
メスの脳下垂体切除ラット（６０～１００ｇ）に、週１回２１．７μｇのｈＧＨ－ＣＴＰポリペプチドのＳ．Ｃ．投与、または、１日１回５μｇの対照の市販ｒｈＧＨのＳ．Ｃ．投与を行った。

【0249】

処置の前、最初の投与の２４時間後、および、その後２１日目に実験が終了するまで１日おきに、全ての動物で体重を計測した。各点は、当該群の平均体重増加割合を表している（０日目の体重－最終日の体重／０日目の体重）。平均体重増加は、１日１回の市販ｈＧＨ投与に対して標準化された。処置スケジュールを、表２に要約する。

表２

【0250】

結果
結果を図２に要約する。これら結果から、ＭＯＤ－４０２３（配列番号３９）およびＭＯＤ－４０２４（配列番号４０）は、市販のｒｈＧＨ（１００％の体重増加誘導）と比較し、１２０％を超える体重増加を誘導したことが示された。

【0251】

結論
２１．７μｇのＭＯＤ－４０２３（配列番号３９）、およびＭＯＤ－４０２４（配列番号４０）の週１回投与を３回行う（１、７、および１３日目に投与）ことにより、下垂体切除ラットにおいて、市販ｒｈＧＨ（１３日間、５μｇの投与量で１日１回投与され、同じ蓄積投与量で投与された）と比較し、３０％高い体重増加を誘導した。

【0252】

実施例３
ＣＴＰ改変ＧＨの薬物動態試験
単回投与薬物動態実験をＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおいて行った。すべての動物実験は、Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔ， ｔｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従い、ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｉｇｅｎｅ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｌｔｄの管理および承認のもと、行われた。ラットは、ケージに１匹ずつ、または２匹ずつのいずれかで、１２時間の明暗サイクルの室内において飼育された。水（市から供給）および非保証のラットの餌は、継続的に与えられた。

【0253】

ラットにおけるＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよびＧＨの薬物動態を比較するために、４群のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（２７０～２９０ｇ）（１群あたり３～６匹のオスラット）が準備された。ラットはランダムに４つの処置群に割り当てられた（表３を参照）。ラットは、ＧＨ（５０μｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．）もしくはＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ（１０８μｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．）の単回ｓ．ｃ．注射または単回ｉ．ｖ．注射を投与された。イソフルラン麻酔科で採取された投与前試料を除き、血液採取は、非麻酔下の動物で行われた。表１１に記載される時点で、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの血漿濃度のＥＬＩＳＡ解析のために、ＥＤＴＡコートされた微量採血管で、血液試料（およそ０．２５ｍｌ）が採取された。各試料を採取した後、血液は、等量の滅菌０．９％生理食塩水で置換された。遠心および血漿採取の前に、試料は氷上で１時間まで保存された。血漿試料は、解析まで約－２０℃で保存された。

表３ ラット薬物動態試験の実験デザイン

【0254】

ヒト成長ホルモンの検出に特異的な市販のサンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を、ラット血漿試料の評価に用いた。このキットは、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ形式を用いて血漿中のヒト成長ホルモンを検出する。このキットは、当初、ラット血漿中のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの濃度を測定するために用いられた。これら血漿試料に対し、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ標準曲線（１．２～１００ｎｇ／ｍｌ）を用いて、ラット血漿中のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの濃度をこの曲線から内挿した。

【0255】

標準的な薬物動態パラメータ（クリアランス（ＣＬまたはＣＬ／Ｆ）、分布容積（ＶｄまたはＶｄ／Ｆ）、半減期（ｔ_１／２）、血漿中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最高血漿濃度（Ｃ_ｍａｘ）、および最高血漿中濃度到達時間（Ｔ_ｍａｘ）を含む）は、モデリングプログラムＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ， ｖｅｒｓｉｏｎ ３．１）を用いた非コンパートメント解析により、血漿アルブトロピンまたはＧＨ濃度／時間の曲線から得られた。血漿ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰまたはＧＨ濃度データは、この解析に対し、均一に重みづけがされた。ＡＵＣは、ｉ．ｖ．データに対しては、対数線形台形解析を用いて算出され、ｓ．ｃ．データに対しては、リニア－アップ／ログ－ダウン（ｌｉｎｅａｒ－ｕｐ／ｌｏｇ－ｄｏｗｎ）台形法を用いて算出された。各ラット（ｓ．ｃ．アルブトロピンデータは除く）またはサルに対する血漿濃度プロファイルは個々に解析され、薬物動態パラメータに対する平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ．）の値は、表４および図４に示す。

【0256】

ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰは、２７５のアミノ酸と１２以下のＯ結合型糖質の一本鎖タンパク質である。構造は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のベータ鎖のＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）の３つのコピーが付加された改変ヒト成長ホルモン（Ｓｏｍａｔｒｏｐｉｎ）；Ｎ末端に１つのコピーおよびＣ末端に２つのコピー（一列に配置）からなる。ヒト成長ホルモンは、１９１アミノ酸から構成される。ＣＴＰは、２８のアミノ酸および４つのＯ結合型糖鎖から構成される。

【0257】

実施例４
ＳＤラットにおけるＣＴＰ改変ＧＨの薬物動態
ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの薬物動態を評価し、市販のｈＧＨ（Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎ）と比較した。

【0258】

表４．Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよびＧＨ（Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎ）の単回ｉ．ｖ．投与および単回ｓ．ｃ．投与後の平均薬物動態パラメータ

【0259】

データの統計的解析
血清試料の解析は、各試料に対する具体的な濃度レベルを測定するために行われた。濃度および時点データは、ＷｉＮｏｎＬｉｎ非コンパートメント解析を用いて処理された。

【0260】

測定されたパラメータは以下である：ＡＵＣ、ＭＲＴ、ｔ_１／２、Ｃｍａｘ、およびＴｍａｘ。図４は、ラットにおける、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰまたはＧＨの単回ｉ．ｖ．投与またはｓ．ｃ．投与後の、ＧＨ濃度と比較したＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ血漿濃度（ｐｇ／ｍｌ）の包括的薬物動態プロファイルを示す（投与量／経路あたり、ｎ＝３～６）。

【0261】

５０μｇ／ｋｇの単回ｓ．ｃ．注射後の、ＳＤラット血液からのＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰクリアランスは、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎのクリアランス、およびＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰのクリアランスよりも有意に低かった。対応する算出半減期およびＡＵＣは以下である：

Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎ
Ｔ_１／２ １．７時間、ＡＵＣ ４１時間^＊ｎｇ／ｍＬ
ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ
Ｔ_１／２ ８．５時間、ＡＵＣ ４２４時間^＊ｎｇ／ｍＬ
ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ
Ｔ_１／２ ９．０時間、ＡＵＣ ６８０時間^＊ｎｇ／ｍＬ

【0262】

結論：
ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰは、他の６変異体からの最終候補として選出された。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰは、生物活性および薬物動態の観点から優れた性能を示した。

【0263】

実施例５
ＣＴＰ改変ＧＨの単回投与／反復投与に対する体重増加解析（ＷＧＡ）
３～４週齢の下垂体切除（両耳間法）のオスのラットは、ＣＲＬ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。３週間の術後順応期間、ラットは検査され、週に２回体重を測定され、不完全な下垂体切除術を受けたとみなされる動物（偽手術を受けたラットの体重増加と類似した体重増加により証明される）を排除した。不完全な下垂体切除を受けたラットは本実験から排除された。実験時、下垂体切除ラットの平均体重は７０～９０ｇであった。これは、ｈＧＨに対する標準的なＵＳＰおよびＥＰバイオアッセイである。下垂体切除されたラット（下垂体が除去されているラット）は、体重を増加させる能力が失われている。これらラットへのｈＧＨの注射（およびＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの注射）により、体重が増加する。所定の期間および所定のｈＧＨ注射量と共に計測された体重の増加に基づき、ｈＧＨ（およびＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ）の特異的活性が決定される。ラットは、０．４、０．８および４ｍｇ／Ｋｇの単回ｓ．ｃ．投与、または３週間、４日ごとの０．６および１．８ｍｇ／Ｋｇの反復ｓ．ｃ．投与のいずれかを与えられた。全ての動物の個々の体重は、最初の投与の前、その後は２日毎、または死亡時および安楽死の前に、ランダムに測定される。

【0264】

単回投与および反復投与の体重増加分析
下垂体切除ラットにおける、異なるＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ投与パターン後の全体重増加応答を比較した結果を、図５に示す。結果から、ｈＧＨ－ＣＴＰの０．４および０．８ｍｇ／Ｋｇ／日の単回注射は、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎの０．１ｍｇ／Ｋｇ／日を４回、毎日注射することと等しかったことが示される。ｈＧＨ－ＣＴＰ効果のピークは、２日後であった。

【0265】

図６はさらに、ラットにおいて、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの単回注射の後、曲線下面積が体重増加と相関していることを示している。従って、得られたデータから、体重増加は、累積ＡＵＣと密接に相関していることが示される。

【0266】

４日ごとのｈＧＨ－ＣＴＰ構築物の投与は、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎの毎日投与と同じく体重増加を促進する（図７に示される）。ヒトにおけるｈＧＨの半減期は、ラットにおける半減期よりも５倍長いと予測されており、このことから、ヒトにおける、単回投与に対するピーク効果の可能性は１０日後であることが示唆される。これら結果は、ヒトにおいては、ｈＧＨ－ＣＴＰ構築物のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰを週１回または週２回投与することを裏付けるものである。

【0267】

実施例６
ＣＴＰ改変ＧＨの薬力学／薬物動態学的実験
３～４週齢の下垂体切除（両耳間法）のオスのラットは、ＣＲＬ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。３週間の術後順応期間、ラットは検査され、週に２回体重を測定され、不完全な下垂体切除術を受けたとみなされる動物（偽手術を受けたラットの体重増加と類似した体重増加により証明される）を排除した。不完全な下垂体切除を受けたラットは本実験から排除された。実験時、下垂体切除ラットおよび偽手術ラットの平均体重は、それぞれ、７０および１５０ｇであった。

【0268】

ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ、ビヒクル、ヒト成長ホルモンＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰを用いてラットに単回ｓ．ｃ．投与され、またはヒト成長ホルモン（２０μｇ／ラット）が、０．２ｍｌ／ラットの投与量でｓ．ｃ．投与された。ＧＨの投与量は０．３５および１．０５μｇ／Ｋｇであり、０．６および１．８μｇ／ＫｇのＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ投与量に相当するＧＨの量と等モルの成長ホルモンの投与量であった。処置群を表５に要約する。投与後、ＩＧＦ－１解析のための血漿試料は、表５に記述される時点で得た。試料は、市販のＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＩＧＦ－１濃度に対し解析を行った。

表５ 下垂体切除ラット実験の処理スケジュール

【0269】

非コンパートメント薬物動態解析は、各群の平均血清中濃度時間曲線に対して行われた。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ Ｃｍａｘは、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎ Ｃｍａｘよりも有意に高かった。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの終末相半減期は、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎよりも６倍高かった。

【0270】

表６：下垂体切除ラットにおける、単回皮下投与後のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよびＢｉｏｔｒｏｐｉｎの薬物動態パラメータ推定値

【0271】

ＡＵＣ_０～ｔおよびＡＵＣ_０～∞は、非常に類似しており、このことから、当該試料採取期間が薬物動態プロファイルの特徴解析に適切であったことが示唆された。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰのＡＵＣは、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎよりも１０倍高かった。さらに、Ｃｍａｘは多くの場合、投与量に比例し、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰに関しては、ＢｉｏｔｒｏｐｉｎのＣｍａｘよりも２倍高かった。しかしながら、図８に示されるように、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰのＴｍａｘは８時間であり、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎは０．５時間であった。そして終末相半減期は、投与量のレベルで変化しなかった。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰのＴ_１／２は、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎよりも６．８倍長かった。

【0272】

ＧＨの間接作用は、主に、インスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－１）（成長ホルモンに反応し、肝臓および他の組織から分泌されるホルモン）により調節されている。成長ホルモンの成長促進作用の大部分は、実際には、標的細胞に対するＩＧＦ－１の作用によるものである。従って、ＣＴＰ－ｈＧＨ構築物であるＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの、下垂体切除ラットにおける、ＩＧＦ－１血清レベルに対する効果が測定された。図９に、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよび市販ｈＧＨのＳＣ投与後の下垂体切除ラットにおけるＩＧＦ－１血清レベルの結果を示す。

【0273】

ＰＫ／ＰＤプロファイルを測定するための、下垂体切除ラットに対するＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ ０．６もしくは１．８ｍｇ／Ｋｇの単回投与、またはＢｉｏｔｒｏｐｉｎ ０．３５もしくは１．０５ｍｇ／Ｋｇの単回投与は、皮下注射で行われた。注射後の血清ＩＧＦ－１は、特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて測定された。

【0274】

ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ注射後のＩＧＦ－１累積血清レベルは、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎの注射後よりも有意に高かった。Ｃｍａｘは多くの場合、投与量に比例し、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰに関しては、ＢｉｏｔｒｏｐｉｎのＣｍａｘよりも３～４倍高かった。ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰのＴｍａｘは、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｎの２０～２４時間と比較し、３６～４８時間であった。結論として、血清中の高いｈＧＨレベルおよび長い滞留により、ＩＧＦ－１レベルの有意な増加がもたらされた。

【0275】

実施例７
ＣＴＰ改変ＧＨの糖質含量およびシアル酸含量
Ｏ－グリカンの解析は、Ｐｒｏｚｙｍｅキットに基づいている。Ｏ－グリカンは、タンパク質から化学的および酵素的に開裂され、ペーパークロマトグラフィを用いてペプチドから分離される。Ｏ－グリカンプールの配列解析は、連続酵素消化（エキソグリコシダーゼ）の後、ＨＰＬＣ解析（標準と比較）により行われる。

【0276】

配列解析を用いた糖プロファイリング
糖プロファイリングは、Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｔｄ．により行われた。２つの試料（ＥＮ６４８およびＲＳ０７０８）は、三連の放出を介して採取され、および各放出物はまた、ＨＰＬＣにより三重に解析された。ＥＮ６４８およびＲＳ０７０８の三連の試料３００μｇ、および陽性対照フェツイン（ｆｅｔｕｉｎ）（２５０μｇ）を加えたクエン酸／塩化ナトリウム緩衝液の一つの試料１００μｌ、および陰性対照の水１００μｌを、１０，０００Ｄａの分子量カットオフ膜を用いた遠心により超ろ過し、緩衝液と水を交換し、次いで、Ｏ－モード条件下でヒドラジン分解を介して採取された（６０℃で６時間）。放出されたグリカンは、再度Ｎ－アセチル化され、ＬｕｄｇｅｒＣｌｅａｎ ＣＥＸカートリッジにより浄化された。次いで、放出グリカンの分注物を、２－アミノベンザミド（２ＡＢ）を用いて標識し、Ｌｕｄｇｅｒ Ｃｌｅａｎ Ｓカートリッジを用いて浄化し、ＬｕｄｇｅｒＳｅｐ－Ｎ２ ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣにより解析した。

【0277】

単糖含量
中性単糖の解析には、グリカンを、その構成する単糖成分にまで加水分解する必要がある。加水分解は、そのままの糖タンパク質試料に対し、Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｔｄ，により行われた。具体的には、５０μｇの、損なわれていない糖タンパク質を、酸加水分解し、２－ＡＢ（２－アミノベンザミド）で標識し、逆相ＨＰＬＣカラムに流した。この方法は、Ｎ結合型およびＯ結合型を含む糖タンパク質上に存在する全てのグリカンを加水分解する。

【0278】

シアル酸プロファイリング
２つの試料（ＥＮ６４８およびＲＳ０７０８）および緩衝液対照を解析した。シアル酸解析には、単糖の弱酸放出後にＤＭＢフルオロフォア標識およびＬｕｄｇｅｒＳｅｐ－Ｒ１カラム上でのＨＰＬＣ解析が必要となる。５０μｇの損なわれていない糖タンパク質を、各解析に対し酸加水分解した。

【0279】

ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの糖解析

表７ グリカン解析。構造割り当ておよびピーク面積割合は、ＨＰＬＣおよび酵素アレイ消化に基づいている。

【0280】

単糖プロファイルから、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰ糖タンパク質試料はＯ型グリカンを主に含有していることが示唆される。この主要Ｏ－グリカンピークは、シアル化コア１（Ｎｅｕ５Ａｃα２－３Ｇａｌβ１－３ＧａｌＮＡｃ）である。この主要シアル酸はＮｅｕ５Ａｃであり、いくつかの小さなピークが存在していることから、３～４％のジアセチル化シアル酸Ｎ－アセチル－９－Ｏ－アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５、９Ａｃ２）、および１％未満のＮ－グリコリルノイラミン酸の存在が示唆される。

【0281】

実施例８
アカゲザルにおける、ＣＴＰ改変ＧＨの薬物動態解析／毒物動態解析
各動物に対する血清中濃度時間曲線が作成された。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎプロフェッショナルバージョン５．２．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｍｔ Ｖｉｅｗ ＣＡ．）を用いて非コンパートメント解析が行われた。推定薬物動態パラメータ以下の表８に示す。

【0282】

表８：アカゲザルにおける、単回皮下注射後の非コンパートメント解析から得られた、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの薬物動態パラメータ（平均±ＳＤ）の推定値

【0283】

ＡＵＣ_０～ｔおよびＡＵＣ_０～∞は、非常に類似していたことから、試料採取期間は、薬物動態プロファイルの特徴解析に適していたことが示唆される。Ｃｍａｘは、投与量に比例した。Ｔｍａｘは、高用量で遅くなった。Ｔｍａｘは、低用量群においては全ての動物に対し４時間であったが、高用量群では８または２４時間であった。終末相半減期は、当該２つの用量群で類似している。

【0284】

ＡＵＣは、投与量におおよそ比例していたが、高用量の場合には比例的ＡＵＣよりもやや大きく、低用量の場合と比較し、ＣＬ／ＦおよびＶｚ／Ｆに対しやや低い推定値が出された。もしＣＬおよびＶｚが高用量で低い場合、または、Ｆが低用量で低い場合を言及するのは難しい。当該群の間には重複があり、このことがＣＬ／ＦとＶｚ／Ｆにおける重要な差異を表すかどうかは疑わしい。

【0285】

当該モデルにより推定された薬物動態パラメータは、非コンパートメント解析から得られたパラメータと酷似していた。吸収および排出半減期を、以下の表９に示す。

【0286】

表９：アカゲザルにおける、薬物動態モデルから得られた、皮下注射後のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの吸収および排出の半減期の推定値（平均±ＳＤ）。

【0287】

データは、排出速度が、低用量群でややＴ_１／２ ｅｌが長いが、当該群の間でかなり類似していることを示す。しかしながら、吸収は、１．８ｍｇ／ｋｇの皮下投与と比較し、９０ｍｇ／ｋｇの皮下投与後で５倍超、遅延している。非コンパートメント解析の場合のように、モデルは、高用量で遅延Ｔｍａｘを示した。

【0288】

ＧＨの補充は、小児および成人のＧＨ欠乏の治療に有効であるが、長期間にわたる毎日の注射という不便さにより、ある患者群においては医師によりその使用が制限され、ならびに投薬過誤のリスク、介護人の数、治療コストおよび服薬不履行が増す。たとえば所定のＧＨ投与レジメンに従わない場合の影響を理解していない小人症の小児等のある群においては、ＧＨ療法から最適な利益を得るためのコンプライアンスの必要性は特に重要である。ＧＨ欠乏性の小児はＧＨ治療を継続的に必要としながら成人することから、毎日のＧＨ注射とそのコンプライアンスに替わる、より適した代替法を見出すという課題は、さらに重要性を増している。毎日の治療の必要性は、組換えＧＨが短い血漿半減期であることが主な原因であり、ＧＨの徐放性形態の開発へと至っている（Ｒｅｉｔｅｒ ＥＯ． Ａｔｔｉｒｅ ＫＭ．， Ｍａｓｈｉｎｇ ＴＪ． Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ＢＬ． Ｋｅｍｐ ＳＦ． Ｎｅｏｌｉｔｈ ＲＢ． Ｆｏｒｄ ＫＭ． ａｎｄ Ｓａｎｇｅｒ Ｐ． Ａ ｍｕｌｔｉｍｅｍｂｅｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ＧＨ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｉｖｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＧＨ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ． ８６ （２００１）， ｐｐ． ４７００-４７０６．）。

【0289】

本明細書に開示される組み換えヒト成長ホルモン－ＣＴＰ融合タンパク質であるＧＨ－ＣＴＰは、ラットにおいて、ＧＨよりも長期間の薬物動態プロファイルを有している。このユニークな薬物動態プロファイルにより、成長ホルモン欠乏ラットにおいて、断続的なＧＨ－ＣＴＰ投与で、薬力学的効果を得ることが可能となる（それぞれ、成長と血漿ＩＧＦ－１レベルの上昇により証明される）。

【0290】

ＧＨ－ＣＴＰは、ラットにｓ．ｃ．投与された際、ＧＨと比較し優れた薬物動態プロファイルをもたらす。ＧＨと比較し、ＧＨ－ＣＴＰの血漿クリアランスにおいて顕著な差異が存在する。具体的には、ｓ．ｃ．投与後、ＧＨよりも６倍超遅くＧＨ－ＣＴＰは血漿からクリアランスされる。ｓ．ｃ．投与後のラットにおける、ＧＨ－ＣＴＰの終末相半減期および平均滞留時間は、ＧＨよりも約６倍長かった。さらに、ｓ．ｃ．投与後のＣ１／Ｆは、ＧＨよりも、ＧＨ－ＣＴＰの方が１０倍低い。

【0291】

ラットにおける薬物動態的利点が、薬力学的利点へと転換されるか否かを検証する目的で、ＧＨ－ＣＴＰが、毎日よりも低い頻度の投与レジメンで、ＧＨ欠乏下垂体切除ラットにおいて成長を刺激しうるかどうかを、等モルのＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰおよびＧＨの投与量レベルで検証した。ＧＨ－ＣＴＰの単回ＳＣ注射により、漸増的な体重増加（ｉｎｃｒｅｍｅｎｔａｌ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ）が促進され、それはＧＨの４回の毎日の連続的な注射と等しいものであった。さらに、４日毎のＧＨ－ＣＴＰの投与スケジュールは、ＧＨを超える体重増加の増強を示した。

【0292】

下垂体切除ラットにおける、ＧＨと比較し、ＧＨ－ＣＴＰの薬力学的に長い循環時間により、単回ｓ．ｃ．注射後、長期間のＩＧＦ－１応答（血漿中で測定される）が得られる。下垂体切除ラットにおいて、ＧＨ－ＣＴＰの単回皮下投与により、用量依存性に循環ＩＧＦ－１濃度が増加した。最も高いアルブトロピン（ａｌｂｕｔｒｏｐｉｎ）投与量で、ＩＧＦ－１濃度は、単回投与後７５時間もの長い間、基準を超えて上昇していた。ゆえに、ＧＨ－ＣＴＰの単回投与による循環時間の延長は、ＧＨの単回投与を超える薬力学的な大幅な改善をもたらし、これにより、標準的なＧＨ治療レジメンと比較し低い投与頻度で、類似の成長促進効果が得られる可能性が増した。

【0293】

ＣＴＰ改変ｈＧＨの単回投与（アカゲザルで９０ｍｇ／ｋｇ、およびラットで１８０ｍｇ／ｋｇ）は、両種において良好な耐容性であった。ラットおよび霊長類の間の相対成長係数はおよそＸ２である（これら動物におけるタンパク質の予想クリアランスに基づいている）。産業的に受け入れられている治療用タンパク質の半減期に対する外挿モデルは、両種の間で増加している（ＦＤＡ Ｇｕｉｄａｎｃｅ）。霊長類におけるＣＴＰ改変ｈＧＨ ９０ｍｇ／ｋｇは、ラットにおける１８０ｍｇ／ｋｇよりもやや良いＰＫプロファイルを有している。ゆえに、ヒトへの相対成長外挿からは、毎週、または２週に１回の投与が支持される。

【0294】

ＣＴＰ－ＧＨ構築物を使用する本発明の主旨は、市販のＧＨ組換え製品と比較し投与頻度を下げることである。Ｎｕｔｒｏｐｉｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標）は、小児における使用が承認されたＧＨの徐放型製剤である；しかし、ヒストリカルコントロールとの比較により、１年および２年成長率は、ＧＨで治療された小児（１年成長率 １０．１±２．８ｃｍ／年）よりも、Ｎｕｔｒｉｐｉｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標）を投与された小児（１年成長率８．２±１．８ｃｍ／年）において有意に低い（ｐ＜０．００１）ことが明らかとなった（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ＢＬ， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｐｅｄｉａｔｒ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ． １５ （２００２）， ｐｐ． ７１５-７２２．）。皮下投与されたＮｕｔｒｏｐｉｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標）の局所作用は、小瘤、紅斑、注射部位の疼痛、頭痛および嘔吐が含まれる。ラットおよびサルの両方における前臨床毒性試験では、ビヒクルと比較し、ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰのｓ．ｃ．投与で局所反応は生じなかったことが示されている。より低頻度なＧＨ投与剤型に対する医学的必要性を鑑みると、ラットにおける本試験のＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの薬理学的特性は、本製品が、毒性および患者のコンプライアンスの観点からも好ましいことが示唆される。ラットｎｉｏｋｅｒｕＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの持続的な活性は、現在は毎日の投与を行うことで得られている治療効果を、断続的な投与のみで得られる剤としての利用可能性を裏付けるものである。

【0295】

実施例９
ヒト成長ホルモンの長期活性ＣＴＰ改変型（ｈＧＨ－ＣＴＰ）は、成長ホルモン欠乏症の成人において非常に有効であった－第ＩＩ相臨床試験
ランダム化、非盲検の第ＩＩ相臨床試験が行われ、現在、成長ホルモンを毎日投与されている患者において、週１回または月２回のいずれかで投与されるｈＧＨ－ＣＴＰの安全性、耐容性、薬物動態、および薬力学的特性が評価された。試験は、６つの国において、多施設で行われた。試験の３つの主要なコホートでは、ｈＧＨ－ＣＴＰ（成長ホルモン欠乏症の成人患者が、７日間にわたり毎日投与剤型で投与されていた市販ｈＧＨ累積投与量等量の３０％、４５％または１００％を含有する）（それぞれ、「３０％」コホート、「４５％」コホート、および「１００％」コホートと呼称される）は週１回、単回投与された。データは、３９人の患者（各コホート１３人）の結果を反映している。２名の女性が、各コホートに含まれていた。

【0296】

当該３つの主要コホートに加え、第ＩＩ相の正式な試験の枠外で行われる、実験的な４番目のコホートに、成長ホルモン欠乏症の成人を登録した。実験的第４コホートの患者は、２週に１回、ｈＧＨ－ＣＴＰの単回投与（成長ホルモン欠乏症の成人の患者が、毎日投与剤型で２週間にわたり投与される市販品の累積投与量の５０％を含有する）を受けた。

【0297】

週１回、ｈＧＨ－ＣＴＰの投与を受けた３つの主要コホートに対する有効性は、７日間にわたり（本試験治療の最終週の間）、毎日、望ましい治療範囲内にあるインスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）のレベルを測定することにより決定された。望ましい治療範囲は、年齢群および性別で階層化された、健常群で予測される平均ＩＧＦ－１レベルから、＋２～－２の標準偏差の間と定義される。さらに、試験で、正常範囲内にある患者の分散を観察する目的で、標準偏差±１．５のより狭い範囲内にあるＩＧＦ－１レベルを測定した。

【0298】

結果：
表１０は、最終治療週の間に測定された、男性に対する、正常治療範囲（±２ ＳＤ）内にある日の平均割合、より狭い正常治療範囲（±１．５ ＳＤ）内にある日の平均割合、およびＩＧＦ－１の平均Ｃｍａｘ（最も高い濃度レベル）を含むものである（正常群の平均ＩＧＦ－１レベルからの標準偏差で表されている）。

表１０：ヒト第ＩＩ相臨床試験の結果

【0299】

２ｍｇ／週のｈＧＨ－ＣＴＰ（成人患者が通常、初期治療用量として処方される、１週の累積ｈＧＨ用量の５０％を含有する）が、成人の第ＩＩＩ相において、男性および女性に対する開始用量として定義される可能性が高い。

【0300】

安全性および／または耐容性の問題に関する証拠はなく、およびｈＧＨ－ＣＴＰが高用量で用いられた際に、患者において、過剰なレベルまたは正常範囲を超えるレベルのＩＧＦ－１を誘導した兆候もなかった。

【0301】

第ＩＩ相－ＩＧＦ－１ 要約及び展望
ＭＯＤ－４０２３ 第ＩＩ相試験のデザインおよび目的：
ＣＴＰ－ｈＧＨ－ＣＴＰ－ＣＴＰの毎週投与レジメンを確認する２つのステージの第ＩＩ相試験が完了した（図１０を参照）。試験は、これまで毎日ｈＧＨ治療を受け、ＭＯＤ－４０２３投与の前の毎日の治療で正常化されたとみなされた（正常範囲（±２ＳＤＳ）内のＩＧＦ－１ ＳＤＳレベルにより反映されている）成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）患者において行われたスイッチオーバー実験であった。本試験のステージＩは、ＭＯＤ－４０２３の４回目の投与後、週間の全薬物動態－薬力学的（ＰＫ－ＰＤ）解析により支持される、４週の投与量発見試験（４度の注射）であった。本部分の主要な目的は、ＩＧＦ－１レベルが既定範囲内に維持される治療投与量の範囲を特定することであった。他の目的は、３つの異なる投与量／乗数でのＭＯＤ－４０２３のＰＫ－ＰＤプロファイルを評価すること、および用量依存性応答を確認することであった。本試験の第二のステージ（ステージＩＩ）は、１６週間のＭＯＤ－４０２３治療および用量漸増期間であった。ステージＩＩへと続けた患者はすべて、同じＭＯＤ－４０２３投与量レベル（患者個人に最適化された、累積ｒ－ｈＧＨ週投与量の６１．７％）で開始されたが、モニターされたＩＧＦ－１レベルに基づき、その投与量を改変することも出来た。

【0302】

本試験の最初の部分では、ＭＯＤ－４０２３の週レジメン後の最初の反応を評価するため、週累積ｈＧＨの割合に基づいて、用量が投与されていた。たとえば、５５％コホートにランダム割り当てされた患者（１ｍｇ／日のｈＧＨを投与されている）は、週ベースで、１_ｍｇ ^＊７_日 ^＊０．５５の用量のＭＯＤ－４０２３を投与された。

【0303】

結果
本試験の主要有効性エンドポイントは、ステージＩの間、最後の用量投与後から、ＩＧＦ－１レベルが正常範囲内にある平均期間であった（時間で表される）。最終解析において、当該週の間、ほとんどの患者のＩＧＦ－１レベルは、まる１週間、正常範囲内であった（表１１）。最終時点で特定のＳＤＳ範囲内にあった患者は、１６８時間の期間に割り当てられた。Ｃｍａｘで＋２ ＳＤＳを超える患者はおらず、このことから、過剰なＩＧＦ－１レベルではなかったことが示唆される。男性の８５％（２８／３３）が、正常範囲（±２ ＳＤＳ）内の平均ＩＧＦ－１ ＳＤＳであった（図１１）。３つ全てのコホートの、±正常範囲内にあるＩＧＦ－レベルの平均期間は、有意差は示さず、すべての平均期間は、互いに１標準偏差内であった。

【0304】

表１１：ステージＩの間、４回目の用量投与後から、ＩＧＦ－１が±２ ＳＤＳ内にある期間

【0305】

予想されたように、ｈＧＨ週投与量の３７％の投与では、ＩＧＦ－１ ＳＤＳ値は正常範囲の低い部分となり、正常範囲内にある期間も短かった。正常範囲内にある期間により反映される、ＩＧＦ－１レベルの有意な改善は、高用量（累積ｈＧＨ週投与量の５５％）が投与された場合に認められた。

【0306】

基準と比較した、ＩＧＦ－１の用量依存性応答を、図１２に示す。図１２に示される結果から、ＩＧＦ－１レベルはＭＯＤ－４０２３用量依存性に増加し、ＩＧＦ－１の週プロファイルの調節が可能であるという見解が支持される。さらに、ＩＧＦ－１値の基準からの平均変化は、投与後１２０～１６８時間で、基準値に戻っており、このことから、正常化された成長ホルモン欠乏症の成人（ＧＨＤＡ）群において、ＩＧＦ－１のトラフ濃度は、悪化することなく、安定であることが示唆される（図１２）。

【0307】

毎日の治療を受けていた、正常化された患者の、平均ＩＧＦ－１露出を表すＣａｖｇ（ＡＵＣ／時間）を、同じ患者が毎週ＭＯＤ－４０２３で治療された場合と比較した（それぞれ、ＡＵＣ ０～２４／２４時間と、ＡＵＣ ０～１６８／１６８時間）。累積ｈＧＨ週投与量の５５～１２３．４％の週投与により、同等のＩＧＦ－１露出がもたらされる（Ｃａｖｇにより反映される）、一方で、週投与量の３７％で治療された患者に対してはＣａｖｇの低下が観察され、相対的に低い週投与量によるものであるという我々の予測と一致した（表１２および１３）。

【0308】

表１２：ＭＯＤ－４０２３の投与前、成長ホルモン欠乏症の成人に対するｒ－ｈＧＨの皮下投与後のＩＧＦ－１の薬力学的パラメータの要約（ステージ１；４週）

【0309】

表１３：成長ホルモン欠乏症の成人に対するＭＯＤ－４０２３の皮下投与後のＩＧＦ－１の薬力学的パラメータの要約（ステージ１；４週）

【0310】

第ＩＩ相ステージＩのＰＤ解析に基づき、以下が結論づけられた：１）実験目的は患者のＩＧＦ－１レベルを最適化すること、すなわちＩＧＦ－１ ＳＤＳ値を０に標的化すること（ＩＧＦ－１ ＳＤＳ最適化は、比較的長い用量設定期間が必要となるため）ではなかったが、ＭＯＤ－４０２３の週投与に対する治療投与量範囲が確立された；ｈＧＨの毎日投与の週累積の約５６％～１２３％。２）ＭＯＤ－４０２３の毎週投与後のＩＧＦ－１プロファイルが比較的平坦であり、ＣｍａｘとＣｔｒｏｕｇｈの間はかなり小さな差であることが反映されている。３）平均週ＩＧＦ－１露出を表すＣａｖｇ（ＡＵＣ ０～１６８／１６８時間）は、４日目の値と相関していた。それゆえ、ＭＯＤ－４０２３投与後４日目を、ＩＧＦ－１レベルのモニタリングの日として選択した。

【0311】

第ＩＩ相ステージＩＩ（４か月延長）の結果と展望：
週投与ＭＯＤ－４０２３の、長期間、最適用量で正常範囲内にＩＧＦ－１を維持する能力は、試験の第二部の間に検討した（ステージＩＩ－４か月延長期間；図１０）。本試験においては、第一のステージと同じ患者群に、彼らのｈＧＨ週投与量の６１．７％を投与し、ＩＧＦ－１は２週毎にモニターした。患者の大部分は試験期間を通じて正常範囲内にＩＧＦ－１ ＳＤＳ値を維持した（投与後４日目に測定）。正常範囲を下回るＩＧＦ－１レベルを示した患者はさらに用量設定し、彼らのＭＯＤ－４０２３投与量を増加させた（診察と連携）。

【0312】

正常範囲を下回るＩＧＦ－１ ＳＤＳ値を有する少数の患者に対しては、さらなる用量設定を必要としたが、ＩＧＦ－１ ＳＤＳの著しい改善を示したことから、ＩＧＦ－１プロファイルはＭＯＤ－４０２３投与量の増加／減少により最適化されうることが示される。優れた反応性であり、最小限の投与量調整が必要とされた（図１３に示され、以下の表１４に要約される）。

表１４：ステージＩＩの間に必要とされた投与量調整の要約

【0313】

４日目のＩＧＦ－１ ＳＤＳ値（Ｃａｖｇと相関している）に基づくと、本試験のステージＩと比較し、ＩＧＦ－１レベルの有意な改善が個々の患者に見られた。この結果はさらに、最適なＩＧＦ－１レベルおよびプロファイルに到達するためには調節期間が必要であるという見解に支持される。女性は、ｈＧＨ（同様にＭＯＤ－４０２３）補充治療に対し感受性が低いことが知られており、通常、高用量が必要であり、用量設定に長期間を要する。さらに、４日目に測定されるＩＧＦ－１ ＳＤＳレベルは、４か月の延長期間の間、正常範囲内に類似した値で一定に維持されており、このことから、ＭＯＤ－４０２３は、週レジメンで投与され得ることが示唆される。ＭＯＤ－４０２３の連続投与後、４日目のＩＧＦ－１レベルの主要な減少は見られなかったことから、ＣｍａｘおよびＣｔｒｏｕｇｈの、ＩＧＦ－１の「正弦関数的」振る舞いは、本試験の間、維持されており、再度、ＭＯＤ－４０２３の週レジメンが裏付けられた。

【0314】

結論として、ＭＯＤ－４０２３は、ＧＨＤの治療に現在のところ必要とされている膨大な回数の投与を不要とするであろう。本試験の結果は、ＭＯＤ－４０２３が、週１回の投与で、好ましい安全性プロファイルを維持しながら評価される臨床有効エンドポイントに到達できることを示している。低頻度投与を要するＧＨ治療レジメンは、コンプライアンスを改善し、全体的な転帰を改善する可能性を秘めている。

【0315】

ゆえに、得られたＩＧＦ－１プロファイルおよび第ＩＩ相安全性および耐容性試験の結果に基づき、第ＩＩＩ相試験に対する推奨される投与頻度および投与量は以下である：各患者に対し最適化された、累積ｈＧＨ週投与量の６１．７％を含有するＭＯＤ－４０２３の週１回の投与。

【0316】

実施例１０
ヒト成長ホルモンのＣＴＰ改変型（ｈＧＨ－ＣＴＰ）の投与により、思春期前の小児の成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）の薬物動態が改善された。
ランダム化、非盲検の第ＩＩ相臨床試験が行われ、市販の標準的な組換えヒト成長ホルモンの毎日投与に対する、３つのＭＯＤ－４０２３投与量の安全性、耐容性、薬物動態、および薬力学的特性を評価した。試験は、６か月のスクリーニングと２つの積極的治療期間から構成された：６か月の治療期間は、ＰＫ／ＰＤサンプリングとその後の追加の６か月の連続的な反復投与期間を含む（図１４に概略を示す）。第二の目的は、思春期前の小児の成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）における、３つの異なる投与量のＭＯＤ－４０２３の薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）プロファイルを評価すること、および安全性と有効性に基づき、引き続く第３相試験に対するＭＯＤ－４０２３の最適投与量を選択することであった。

【0317】

まだ投薬を受けていない患者に対し、ＭＯＤ－４０２３の割り当て投与量を漸増させながら導入するために、段階的な投与量の増加が行われた。３つのＭＯＤ－４０２３投与量のうちの１つを投与されるようにランダム化されたすべての患者は、低用量ＭＯＤ－４０２３（０．２５ｍｇ／ｋｇ）で、２週間、治療を開始された。その後、患者の投与量割り当てに基づき、最終割り当て投与量に達するまで、２週間毎に次の投与レベルまで投与量が増加された。

表１５：投与量コホート

【0318】

標的投与量の第二の用量の投与の後で、限定された（群に基づいた）ＰＫおよびＰＤサンプリングが、表１６に記述されるように行われた。

表１６：ＭＯＤ－４０２３コホートに対する、投与量増加スキーム

【0319】

ＭＯＤ－４０２３投与量コホートに割り当てられた患者は、３つのブロックのうちの１つにコホート内で割り当てられ、以下の表１７に従い、限定ＰＫ／ＰＤサンプリングを受けた（１週間にわたり、患者ごとに４回のサンプリング）。

表１７：ＭＯＤ－４０２３群のＰＫおよびＰＤサンプリングスキーム

【0320】

コホート１に割り当てられた患者は、２回目のＭＯＤ－４０２３の投与後、限定ＰＫ／ＰＤサンプリングを受け（Ｖ２ａ－ｇ－２週目）、６週目の投与を受けた４日後、１回のビジットのためにメディカルセンターへと戻った（Ｖ４ｈ）。

【0321】

コホート２に割り当てられた患者は、２週目の投与を受けた４日後、１回のビジットのためにメディカルセンターに戻り（Ｖ２ｈ）、ＭＯＤ－４０２３の４回目の投与後、限定ＰＫ／ＰＤサンプリングを受け（４週目：割り当てられた投与レベルでの２回目の投与；Ｖ３ａ－ｇ）、６週目の投与を受けた４日後、１回のビジットのためにメディカルセンターに戻った。

【0322】

コホート３に割り当てられた患者は、２週目および４週目の投与を受けた４日後、１回のビジットのためにメディカルセンターを訪れ（Ｖ２ｈ、およびＶ３ｈ）、ＭＯＤ－４０２３の６回目の投与を受けた後、限定サンプリングを受けた（６週目：割り当てられた投与レベルでの２回目の投与、Ｖ４ａ－ｇ）。

【0323】

ビジット２ａおよび２ｈ、３ａおよび３ｈ、ならびに４ａおよび４ｈで、患者は医師の診察を受け、バイタルサイン、ＡＥ、局所耐容性、併用薬、グルコース代謝のパラメータ（空腹時血糖およびインスリン；Ｖ４でのみＨｂＡ１Ｃ）、他のホルモンレベル（ＴＳＨ、ｆＴ４、Ｔ３、コルチゾール）、通常の安全性生化学検査および血液検査（ビジット２ａおよび２ｈ、４ａおよび４ｈ）、患者の身長と体重、脂質代謝のパラメータ、ならびにＩＧＦ－１およびＩＧＦＢＰ－３血清レベルの検査を受けた。

【0324】

Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎコホートに割り当てられた患者（コホート４）は、２週目および６週目の治療の間に、ビジット２および４のためにメディカルセンターに戻った。以下の手順が行われた：医師の診察、バイタルサイン、ＡＥ、局所耐容性、併用薬、グルコース代謝のパラメータ（空腹時血糖およびインスリン；Ｖ４でのみＨｂＡ１Ｃ）、他のホルモンレベル（ＴＳＨ、ｆＴ４、Ｔ３、コルチゾール）、通常の安全性生化学検査および血液検査、患者の身長と体重、脂質代謝のパラメータ、ＩＧＦ－１およびＩＧＦ－１ ＢＰ－３血清レベル（図１７）。

【0325】

さらに、８回目のＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎ投与の後（２週目の投与の開始時）、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎコホートに割り当てられた患者は、３つのブロックのうちの１つにランダム化され、以下の表１８に従い、限定ＰＫ／ＰＤサンプリングを受けた（２４時間にわたり、患者ごとに４回のサンプリング）。

表１８：Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ群のＰＫおよびＰＤサンプリングスキーム（ビジット２）

【0326】

試験の最初の６週の後、全ての患者は、月ごとに病院を訪れた（１０、１４、１８、２２および２６週目）。ＭＯＤ－４０２３投与量コホート（コホート１～３）に割り当てられた患者は、ＭＯＤ－４０２３、ＩＧＦ－１およびＩＧＦＢＰ－３のレベルを取得し、および通常の安全性評価を行うために、ＭＯＤ－４０２３投与の４日後に戻るよう依頼された。さらに、投与の５か月後、ＭＯＤ－４０２３投与に割り当てられた患者は、ＭＯＤ－４０２３およびＰＤ（ＩＧＦ－１およびＩＧＦ－１ＢＰ－３）試料のトラフレベルを取得するため、投与前の午前中にメディカルセンターに戻るよう依頼された。Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ投与コホート（コホート４）に割り当てられた患者は、関連投与週の間の任意の日に戻るよう依頼された。

【0327】

結果：
以下の表１９に、全ての患者の実験デモグラフィックを示す。

表１９ 第２相試験 基準デモグラフィック

【0328】

投薬を受けていないＧＨＤに、最終的に投与された量での投与ＭＯＤ－４０２３の平均ＰＫプロファイルを図１５に示し、ＰＫパラメータは以下の表２０に示す。

表２０ 平均ＰＫパラメータの比較

【0329】

予測されたように、週１回投与されたＭＯＤ－４０２３は、半減期の延長を示し、毎日投与のｈＧＨと比較し、８倍長いことが示された。さらに用量依存性応用が観察された（各ＭＯＤ－４０２３投与量のＡＵＣ値に反映されている）。

【0330】

用量依存性応答は、ＭＯＤ－４０２３が毎週投与されている最初の６か月の間、維持されていた（データは示さず）。

【0331】

ｈＧＨ活性に対するサロゲートマーカーとして実証されているＩＧＦ－１はまた、過剰なレベル（＞２ＳＤＳ、図２１）にはならずに週の大半の間、標的値（－２を超える身長ＳＤスコア［ＳＤＳ］）を維持しながら用量依存性のレベルで増加した（図２３）。ＩＧＦ－１ ＳＤＳレベルは、試験の最初の６か月の間、２ＳＤＳを超えるような過剰レベルに達することなく、用量依存性に適度に上昇し続けた（図１６）。

【0332】

ｈＧＨ処置群（コホート４）はまた、ＭＯＤ－４０２３の２つの最も高いコホートで見られた傾向と非常に類似したＩＧＦ－１ ＳＤＳ値の上昇を示した。さらに、ＩＧＦ－１ ＢＰ３の値はまた、ＭＯＤ－４０２３の投与で用量依存性に増加し、およそ１５週目で定常状態に達した（それぞれ図１７および図１８）。これらをまとめると、ＩＧＦ－１およびＩＧＦ１ＢＰ３の２つの薬力学的プロファイルにより、ＭＯＤ－４０２３の週１回投与は、７日間毎日の投与を類似の投与量範囲で置き換えることが出来ることが確認された。

【0333】

身長発育速度は、投与前、およびＭＯＤ－４０２３の週１投与またはｈＧＨの毎日投与の６か月後にモニターされた。全てのコホートで優れた成長応答が得られ、異なるコホート間に統計的有意差は無かった（表２１および図１９）ことから、ＭＯＤ－４０２３の週１投与は、ｈＧＨの毎日投与のように適切に成長させうることがさらに確認された。

表２１ ＭＯＤ－４０２３ ６か月の年率換算身長成長速度－６か月の治療を終えた全ての患者

【0334】

並行して、身長成長速度ＳＤＳのすぐれた上昇もまた得られた（表２２、表２３、および図２０）。最終的に、デルタ身長ＳＤＳは、患者の身長の遅れの取り戻しと優れた相関を示した（図２２）。

【0335】

表２２：ＭＯＤ－４０２３ Ｐｅｄ．第２相－試験前ＨＶ ＳＤＳ結果

表２３：ＭＯＤ－４０２３ Ｐｅｄ．第２相－６か月ＨＶ ＳＤＳ結果

【0336】

結論
全ての投与量が、良い成長の遅れの取り戻し反応をもたらした。予備的な統計解析でコホート間の統計的有意差は示されなかったが、限られたコホート当たりの患者数であったこと、および比較的重度のＧＨＤ患者であったことに関し、何らかの限界がある。

【0337】

実施例１１
ＭＯＤ－４０２３の製剤化開発
タンパク質：ＭＯＤ－４０２３は、皮下投与のための長期活性型組み換えヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）である。ＭＯＤ－４０２３は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のベータ鎖のＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）の３つのコピーが融合されたｈＧＨからなる；ＣＴＰは、４つのＯ－グリコシル化部位を有しており、ゆえに、当該タンパク質は、最大で１２のＯ結合型糖質を有する２７５アミノ酸の一本鎖である。当該タンパク質は、産生クローンからＣＨＯ細胞で製造される。

【0338】

産生クローン：クローン＃２は、第Ｉ相の早期毒性試験および第ＩＩ相（成人）に用いられた親クローンであった。このクローンのＤＳおよびＤＰに対する安定性データでは、－２０℃および５℃で、２年までの間、利用可能である。新たな産生クローン（クローン＃２８）への転換は、生産性およびクローンの安定性を改善するために行われた。クローン＃２８ ＤＰは、長期毒性試験および小児の第ＩＩ相試験で使用され、全てのさらなる臨床活動および市販品の製造に用いられる。このクローンのＤＰに対する安定性データでは、－２０℃および５℃で、１年までの間、利用可能である。

【0339】

製造ＣＭＯ：ＭＯＤ－４０２３の製造は、早期ステージでＸｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＵＳＡ）により行われ、第ＩＩ相まで非臨床試験で使用された。当該方法は、Ｒｅｎｔｓｃｈｌｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ（ＲＢ）（ドイツ）に移転された。２つのＧＭＰバッチは、ＲＢですでに作成された。

【0340】

追加情報
物理化学的特性－
高度にグリコシル化され、負電荷を帯びている（ｐＩ＝３～４．５）
密度：１．０２１６ｇ／ｍｌ
水性溶液で可溶性
ＤＳおよびＤＰの両方に対する液体製剤：１０ｍＭクエン酸、１４７ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６
ＤＳの最終濃度：４０ｍｇ／ｍｌ
ＤＰの最終濃度：５、１０、２０および４０ｍｇ／ｍｌ
初期梱包－
２Ｒバイアル（Ｓｃｈｏｔｔ）
ストッパー（Ｗｅｓｔ）
アルミニウムシール（Ｗｅｓｔ）
将来的な初期梱包－ＰＥＮ Ｄｅｖｉｃｅ

【0341】

剤型最適化の目標
ＭＯＤ－４０２３の安定な液体製剤を開発する：
１．第一の目標：バイアル中、５℃で２年間の安定性
２．第二の目標：カートリッジ内、５℃で２年間の安定性
必要とされる解析試験
ＲＰ－ＨＰＬＣ（認証された方法）
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ（認証された方法）
ＣＺＥ（ＴＢＤ）（確立された方法）
予定
安定性データに基づき、２５℃、２週間を用いて、５℃での製品安定性を予測し、包括的マトリックス製剤試験のための初期評価を可能とする。

【0342】

安定性データ
データは、１０ｍＭクエン酸、１４７ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６で製造された非ＧＭＰおよびＧＭＰバッチを示す（図２４）。また、データは、ＭＯＤ－４０２３クローン２が、２０ｍｇ／ｍ中、２４か月間、５℃で安定であること、および５ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌで類似の安定性プロファイルであることを示す（図２５Ａおよび図２５Ｂを参照）。さらに、ＭＯＤ－４０２３クローン２は、室温で３か月間安定である（図２６を参照）。ＭＯＤ－４０２３クローン２８は、２０ｍｇ／ｍｌまたは４０ｍｇ／ｍｌで１２か月間、５℃で安定である；ＤＰ主要ピーク規格＞８８％（図２７Ａおよび図２７Ｂ）。ＭＯＤ－４０２３クローン２８は、室温で少なくとも１か月間、安定である（図２８Ａ）。

【0343】

クローン２８とクローン２（５℃で２４か月安定）の間の類似性に基づき、Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣ）で製造されたクローン２８は、５℃で２４か月安定であることが予測される；ＤＰ主要ピーク規格＞８８％（図２８Ｂ）。

【0344】

ＭＯＤ－４０２３の製造
Ｘｃｅｌｌｅｒｅｘ（ＸＣ）とＲｅｎｔｓｃｈｌｅｒ（ＲＢ）のＤＳの間は、Ｔ＝０で同等のプロファイルである（図２９）。図３０～３４は、ＸＣとＲＢの間の安定性における差異を示す。等電点電気泳動法（ＩＥＦ）により、３．５～４．２の範囲のｐＩ値で、類似のバンドパターンがあることが示される。あるＸＣバッチで、高ｐＩ境界に微かなアイソフォームがわずかに存在し、あるＲＢバッチにおいては、低ｐＩ境界に微かなアイソフォームがより多く存在する（図３５Ａ）。さらに、ＲＢ試料と比較し、ＸＣ試料において、より多くの拡散したバンドが存在する（図３５Ｂ）。

【0345】

さらなる観察により、両ピーク（３および５－以下のピーク定義を参照）の形成は、温度依存性であり、高温で加速されることが示された（図３６Ａ～図３６Ｄ）。さらに、ｐＨ＝４で最大５日間、およびｐＨ＝１２で最大２時間のインキュベーション後、ピーク３の割合に変化は無く（図３７Ｂ、図３７Ｄ）、ならびにｐＨ＝４、最大６時間のインキュベーション後、ピークの割合に変化は無かった。しかし、６時間後、ピーク割合に急激な増加がみられた；最大２時間のｐＨ１２インキュベーションで、ピークは消失する（図３７Ａ～図３７Ｄ）。

【0346】

ＲＢでの強制分解試験（クローン２８）
非ストレス下試料に関しては、ピークは、ＬＯＱを下回っているため、ＭＯＤ－４０２３製剤原料中の関連体５の解析のために、ＭＯＤ－４０２３製剤原料のストレス下試料（約３日間、６５℃）を調製した。

ＲＰ－ＨＰＬＣ関連体に対するｐＨの効果を検証するために、３つの試料を試験した：
ＲＢ－４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝５．９
ＲＢ－１０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２
ＸＣ－４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２

結果は、図３８および図３９に示す。

【0347】

関連体ピーク（１～７）の単離および特徴解析－Ｍ－Ｓｃａｎ
ピーク１－脱アミド化ＭＯＤ－４０２３の酸化
ピーク２－ＭＯＤ－４０２３の脱アミド化
ピーク３－ＭＯＤ－４０２３の部分的酸化
ピーク５－ＭＯＤ４０２３．ジスルフィドのアミノ酸残基１６７と１６８の間、およびアミノ酸残基１７１と１７２の間のペプチド結合の開裂
ピーク６およびピーク７－断片化形態

【0348】

結論（図２４～３９を参照）
安定性
クローン２由来製品は、５℃で最大２年間、安定である。

【0349】

ＸＣで製造されたクローン２８由来製品は、クローン２と類似のプロファイルを有し、５℃で少なくとも１年間、安定である。

【0350】

ＲＢで製造されたクローン２８由来製品は、関連体（主にピーク５）の形成が多く、および従前には観察されなかった新たなピーク（ピーク７）が形成され、異なる安定性プロファイルを有している。

【0351】

従前の試験において、ピーク３とピーク５は、主要ピークと類似のＭｗを有し、ＭＯＤ－４０２３バンドに相当する抗ｈＧＨと反応することが示された。

【0352】

両ピーク：３と５は温度依存性である（ピーク割合は、温度が上昇すると増加する）。

【0353】

－２０℃および５℃でのインキュベーションの間、ＨＭＷ形態の割合に変化はなかった。

【0354】

異なる温度（５、２５、３７、５０、および６５℃）でのＲＢ製品ＧＭＰ１の安定性（２週間のインキュベーション後）から、ピーク７の形成は、２５℃および３７℃で増加するが、５０℃および６５℃では観察されないことが示された。

【0355】

ＲＢサンプルを１０分間、６５℃でインキュベーションし、その後、２５℃でインキュベーションすると、ピーク７の形成が消失した（２５℃で２週間後）。

【0356】

添付の図面を参照し、本発明の好ましい実施形態を記述したが、本発明は当該実施形態に限定されず、および添付のクレームに定義される本発明の範囲または主旨から逸脱することなく、当業者により様々な変化および改変が本発明にもたらされうることを理解されたい。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25A】

【図25B】

【図26】

【図27A】

【図27B】

【図28A】

【図28B】

【図29】

【図30A】

【図30B】

【図30C】

【図31A】

【図31B】

【図31C】

【図32A】

【図32B】

【図32C】

【図33A】

【図33B】

【図34】

【図35A】

【図35B】

【図36A】

【図36B】

【図36C】

【図36D】

【図37A】

【図37B】

【図37C】

【図37D】

【図38】

【図39】

【配列表】

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