▶ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズの特許一覧
特許7449864エバンスブルー誘導体の化学結合体ならびに前立腺癌を標的とするための放射線療法および造影剤としてのその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-03-06
(45)【発行日】2024-03-14
(54)【発明の名称】エバンスブルー誘導体の化学結合体ならびに前立腺癌を標的とするための放射線療法および造影剤としてのその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 403/12 20060101AFI20240307BHJP
A61K 31/4025 20060101ALI20240307BHJP
A61K 31/704 20060101ALI20240307BHJP
A61K 31/337 20060101ALI20240307BHJP
A61K 31/4745 20060101ALI20240307BHJP
A61K 31/4188 20060101ALI20240307BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20240307BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240307BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20240307BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240307BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240307BHJP
A61K 51/04 20060101ALI20240307BHJP
A61K 101/02 20060101ALN20240307BHJP
A61K 103/10 20060101ALN20240307BHJP
A61K 103/20 20060101ALN20240307BHJP
A61K 103/40 20060101ALN20240307BHJP
A61K 103/30 20060101ALN20240307BHJP
A61K 103/00 20060101ALN20240307BHJP
【ＦＩ】
C07D403/12 CSP
A61K31/4025
A61K31/704
A61K31/337
A61K31/4745
A61K31/4188
A61K33/24
A61P35/00
A61P13/08
A61P43/00 121
A61K39/395 T
A61K51/04 200
A61K51/04 100
A61K101:02
A61K103:10
A61K103:20
A61K103:40
A61K103:30
A61K103:00
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2020543529
(86)(22)【出願日】2019-02-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-06-03
(86)【国際出願番号】 US2019019140
(87)【国際公開番号】W WO2019165200
(87)【国際公開日】2019-08-29
【審査請求日】2021-12-28
(31)【優先権主張番号】62/633,648
(32)【優先日】2018-02-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】514144836
【氏名又は名称】ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ
(74)【代理人】
【識別番号】100106002
【弁理士】
【氏名又は名称】正林 真之
(74)【代理人】
【識別番号】100120891
【弁理士】
【氏名又は名称】林 一好
(74)【代理人】
【識別番号】100165157
【弁理士】
【氏名又は名称】芝 哲央
(74)【代理人】
【識別番号】100126000
【弁理士】
【氏名又は名称】岩池 満
(72)【発明者】
【氏名】チェン シャオユアン
(72)【発明者】
【氏名】ウェイス オリット ジェイコブソン
【審査官】宮田 透
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／１９６８０６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開２０１４－０５１４４２（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１０／０４５５９８（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１９／０７０２３６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／２０９７９５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０４６５０２１７（ＣＮ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１７／１９２８７４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Martina Benesova et al.，Preclinical Evaluation of a Tailor-Made DOTA-Conjugated PSMA Inhibitor with Optimized Linker Moiety for Imaging and Endoradiotherapy of Prostate Cancer，Journal of Nuclear Medicine ，2015年，56(6)，914-920，DOI: 10.2967/jnumed.114.147413
【文献】Zhantong Wang et al.，Radioligand Therapy of Prostate Cancer with a Long-Lasting Prostate-Specific Membrane Antigen Targeting Agent 90Y-DOTA-EB-MCG，Bioconjugate Chemistry ，2018年，29(7)，2309-2315，DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.8b00292
【文献】Zhantong Wang et al.，Single Low-Dose Injection of Evans Blue Modified PSMA-617 Radioligand Therapy Eliminates Prostate-Specific Membrane Antigen Positive Tumors，Bioconjugate Chemistry ，2018年，29(9)，3213-3221，DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.8b00556
【文献】Cindy J. Choy et al.，177Lu-Labeled Phosphoramidate-Based PSMA Inhibitors: The Effect of an Albumin Binder on Biodistribution and Therapeutic Efficacy in Prostate Tumor-Bearing Mice，Theranostics ，2017年，7(7)，1928-1939，DOI: 10.7150/thno.18719
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ、Ａ６１Ｋ、Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉ【化1】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、およびＣ１～Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択され；
Ｒ１２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、またはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
Ｌ１は、－（ＣＨ２）ｍ－であり、ｍは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ３は、－（ＣＨ２）ｐ－であり、ｐは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ４は、－（ＣＨ２）ｑ－であり、ｑは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｒ１３は、
【化2】
Ｒ１４は、
【化3】
の化合物またはその薬学的に許容可能な溶媒和物もしくは塩、またはそのような塩の溶媒和物。
【請求項2】
Ｌ１が－ＮＨ（ＣＯ）－であり、Ｒ１およびＲ４がそれぞれメチルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２がそれぞれ水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｒ１４が【化4】
【請求項4】
Ｒ１４が放射性核種をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
前記放射性核種が１８Ｆ、７６Ｂｒ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、または１３１Ｉである、請求項４に記載の化合物。
【請求項6】
Ｒ１３が【化5】
【請求項7】
Ｒ１３が放射性核種をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
前記放射性核種が６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、８９Ｚｒ、９９Ｔｃ、１５３Ｓｍ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、１７７Ｌｕまたは２２３Ｒａである、請求項７に記載の化合物。
【請求項9】
前記放射性核種が８６Ｙ、９０Ｙ、または１７７Ｌｕである、請求項８に記載の化合物。
【請求項10】
前記式Ｉの化合物が式ＩＩ：【化6】
の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項11】
前記化合物が【化7】
【化8】
【請求項12】
前記化合物が【化9】
【請求項13】
請求項１に記載の化合物を薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項14】
前記薬学的に許容される担体が、結合剤、緩衝剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、香味剤、流動促進剤、滑沢剤、保存剤、安定剤、界面活性剤、錠剤化剤、および湿潤剤、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
哺乳動物における前立腺癌の処置または診断に使用するための、任意に１つ以上の追加の活性成分と組み合わせた、請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記１つ以上の追加の活性成分が、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カンプトテシン、テモゾロミド、アバスチン、ハーセプチン、アービタックス、およびそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年２月２２日に出願された米国仮出願第６２／６３３，６４８号に対する優先権およびその利益を主張するものであり、その全体が参考として本出願中に取り入れられている。
本出願は、２０１８年２月２２日に出願された米国仮出願第６２／６３３，６４８号に対する優先権およびその利益を主張するものであり、その全体が参考として本出願中に取り入れられている。
【0002】
本発明は、エバンスブルー色素の官能化された誘導体に関し、より詳細には、前立腺癌を標的とするための放射線療法および造影剤として有用であるエバンスブルー色素の官能化された誘導体に関する。
【背景技術】
【0003】
前立腺癌は、世界中の男性で最も頻度の高い悪性腫瘍である。前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、前立腺腫瘍細胞によって特異的に発現することが示されている表面分子である。ＰＳＭＡ発現量は、病期およびホルモン不応性癌と相関する。ほとんどのＰＳＭＡ発現は前立腺癌に限定されているようであるが、脳、腎臓、唾液腺、および小腸でも低レベルの発現が検出され得る。また、この抗原は、複数の他の癌の新生血管腫瘍血管によって発現していることが示された。
【0004】
ＰＳＭＡの発現は前立腺癌および転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の進行期で実質的に増加するため、抗原は造影および治療的処置のための普及した標的となっている。ＰＳＭＡの独特の特性は、ワクチン、特異的抗体、薬物結合抗体、および放射線療法を含む、疾患の療法として抗原を標的とする複数の戦略につながった。
【0005】
ヒト患者では、１７７Ｌｕで標識した抗ＰＳＭＡ抗体が有効な剤であることが示されたが、おそらく血中半減期（日）が長いため、骨髄および血液学的毒性の問題がいくつかあった。細胞内エピトー（ＰＳＭの７Ｅ１１）を標的とする１１１Ｉｎで放射性同位元素標識した抗ＰＳＭＡ抗体カプロマブペンデチド（ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ；ＥＵＳＡ Ｐｈａｒｍａ）は、米国食品医薬品局によって承認された。しかしながら、ＰＳＭＡの細胞内ドメインの限られた入手性と共に抗体の大きな分子構造は、生存腫瘍病変の検出の非常に低い率および診断／放射線療法成功後の偽陽性所見をもたらした。
【0006】
ＰＳＭＡは、Ｎ－アセチルアスパルチルグルタミン酸塩（ＮＡＡＧ）の加水分解を介して神経伝達物質グルタミン酸塩およびＮ－アセチルアスパラギン酸塩（ＮＡＡ）を産生する神経ペプチダーゼであるＮ－アセチル－Ｌ－アスパルチル－Ｌ－グルタミン酸ペプチダーゼＩと高い相同性を示すことが報告されている。この発見は、亜リン酸エステル、カルバミン酸塩または尿素のような種々の構造モチーフに基づく種々のクラスの小分子の設計および開発につながった。尿素ベースのリガンドは、造影および放射線療法において最も成功している。ＰＳＭＡ尿素ベースのリガンドは、結合モチーフ（そのうちグルタミン酸－尿素－リシン［Ｇｌｕ－尿素－Ｌｙｓ］が最も広く使用されている骨格である）、リンカー、および放射性同位元素標識を有する部分（放射性同位元素標識のためのキレート剤分子）の３つの成分からなる。ＰＳＭＡに結合すると、リガンドは細胞内に取り込まれる。細胞内では、エンドソームの再利用により沈着が増大し、増加した腫瘍の取り込み、貯留、およびその後の診断手順のための高い画質、および治療的適用のための高い局所線量につながる。しかしながら、他の小分子ベースの造影トレーサーと同様に、これらのＰＳＭＡリガンドは循環からの迅速なクリアランスを示し、これは注射後早期に低いバックグラウンドを与え、前立腺癌腫瘍における蓄積を有意に制限する。
【0007】
１７７Ｌｕのようなベータ発光体で標識した前立腺癌患者において、ＰＳＭＡを標的とするいくつかの小分子を評価した。最も一般的に使用される低分子１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ－６１７は、現在多くの国で臨床評価段階にある。ほとんどの臨床試験の患者における通常の処置は、最大３サイクルの１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ－６１７で構成されていた。利用可能なデータが限られていることから、一部の患者では数週間程度に限定した７０％～８０％までの部分的応答率が示唆されている。奨励すべきことに、ステージ１～２の血液毒性ならびに散発的に軽度の口腔乾燥および疲労のみが副作用として報告されたが、薬物候補の長期毒性は尚未知である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
しかしながら、現在までのところ、ＰＳＭＡ小分子は、診断／治療剤として米国食品医薬品局によって承認されていない。そのため、前立腺癌の処置に有効かつ安全な小分子が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0009】
一態様において、本発明は、式Ｉ
式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、およびＣ１～Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択され；
Ｒ１２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、またはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
Ｌ１は、－（ＣＨ２）ｍ－であり、ｍは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ３は、－（ＣＨ２）ｐ－であり、ｐは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ４は、Ｃ１～Ｃ６０結合基であり、任意に－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２ －、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、または－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－を含み、各々のＲは、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は、キレート基であり；
Ｒ１４は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合できる基である、
の化合物またはその薬学的に許容可能なエステル、アミド、溶媒和物もしくは塩、またはそのようなエステルもしくはアミドの塩、またはそのようなエステルアミドの溶媒和物、または塩を対象とする。
【化1】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、およびＣ１～Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択され；
Ｒ１２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、またはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
Ｌ１は、－（ＣＨ２）ｍ－であり、ｍは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ３は、－（ＣＨ２）ｐ－であり、ｐは、０～１２の整数であり、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、個々に－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で置き換えられ得；
Ｌ４は、Ｃ１～Ｃ６０結合基であり、任意に－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２ －、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、または－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－を含み、各々のＲは、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は、キレート基であり；
Ｒ１４は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合できる基である、
の化合物またはその薬学的に許容可能なエステル、アミド、溶媒和物もしくは塩、またはそのようなエステルもしくはアミドの塩、またはそのようなエステルアミドの溶媒和物、または塩を対象とする。
【0010】
別の態様では、本発明は、上記の化合物の１つを含む医薬組成物を対象とし、該化合物は、薬学的に許容される担体と一緒に、放射性核種をさらに含む。
【0011】
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物において前立腺癌を処置または診断する方法を対象とし、上に記載した化合物の１つの治療有効量を、任意に１つ以上の追加の活性成分と組み合わせて、前記哺乳動物に投与するステップを含む。
【0012】
これらの態様および他の態様は、本発明の以下の詳細な記載を読むと明らかになるであろう。
【0013】
本発明の以下の説明は、以下の図と併せてより良好に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【発明を実施するための形態】
【0015】
用語
化合物は、標準命名法を用いて記載した。別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。
化合物は、標準命名法を用いて記載した。別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。
【0016】
用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、数量の制限を示すものではなく、むしろ、引用された項目の少なくとも１つの存在を意味する。用語「または」は、「および／または」を意味する。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、制限のない用語として解釈されるべきである（すなわち、「含むがこれに限定されない」を意味する）。
【0017】
値の範囲の列挙は、本明細書中で他に示されない限り、当該範囲内に入る各々の別々の値を個々に参照する簡潔な方法として役立つように単に意図されており、各々の別々の値は、あたかも本明細書中で個別に列挙されたかのように、明細書中に組み込まれる。すべての範囲の終点は当該範囲内に含まれ、独立して組み合わせ可能である。
【0018】
本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中で他に示されない限り、または文脈によって他に明確に矛盾しない限り、適当な順序で実施することができる。任意のおよび全ての例、または例示的な言語（例えば、「例えば」）の使用は、単に本発明をより良好に例示することを意図しており、他に主張しない限り、本発明の範囲に制限をもたらさない。明細書中のいかなる言語も、本明細書中で使用される本発明の実施に必須であるいかなる主張されていない要素をも示すものと解釈してはならない。別に定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本開示の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。
【0019】
さらに、開示は、列挙された請求項の１つ以上からの１つ以上の限定、要素、節、および記述用語が別の請求項に導入される、全ての変形、組み合わせ、および順列を包含する。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、同一の基礎の請求項に従属する任意の他の請求項において見られる１つ以上の限定を含むように修正され得る。要素がリストとして提示される場合、例えば、マーカッシュグループフォーマットでは、要素の各サブグループも開示され、任意の要素（複数可）をグループから除去することができる。
【0020】
すべての化合物は、化合物中に存在する原子の可能なすべての同位体を含むと理解される。同位体には、原子番号は同じだが質量数が異なる原子が含まれ、重同位体および放射性同位体が含まれる。一般的な例によって、および限定されずに、水素の同位体にはトリチウムおよび重水素が含まれ、炭素の同位体には１１Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃが含まれる。したがって、本明細書に開示される化合物は、化合物の構造中またはそれに結合した置換基として、重同位体または放射性同位体を含むことができる。有益な重同位体または放射性同位体の例としては、１８Ｆ、１５Ｎ、１８Ｏ、７６Ｂｒ、１２５Ｉおよび１３１Ｉが含まれる。
【0021】
式Ｉおよび式ＩＩは、式Ｉおよび式ＩＩのすべての薬学的に許容可能な塩を含む。
【0022】
制限のない用語「含む」は、「本質的に～からなる」および「～からなる」という中間用語および閉じた用語を含む。
【0023】
「置換された」という用語は、指定された原子の通常の原子価を超えない限り、指定された原子または基上の任意の１つ以上の水素が、指定された基からの選択で置き換えられることを意味する。置換基および／または変数の組合せは、そのような組合せが安定な化合物または有用な合成中間体をもたらす場合にのみ許容される。安定な化合物または安定な構造は、反応混合物からの単離、およびその後の有効な治療剤への処方を生き残るのに十分にロバストである化合物を示すことを意味する。
【0024】
２つの文字または符号の間にないダッシュ（「－」）を用いて、置換基の結合点を示す。
【0025】
「アルキル」は、分枝鎖および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を含み、特定数の炭素原子、一般に１個から約８個の炭素原子を有する。本明細書で使用される「Ｃ１～Ｃ６アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有するアルキル基を示す。他の実施形態は、１～８個の炭素原子、１～４個の炭素原子または１もしくは２個の炭素原子を有するアルキル基、例えばＣ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ４アルキル、およびＣ１～Ｃ２アルキルを含む。本明細書でＣ０～Ｃｎのアルキルを別の基、例えば－Ｃ０～Ｃ２アルキル（フェニル）と組み合わせて使用する場合、示された基、この場合フェニルは、単一の共有結合（Ｃ０アルキル）によって直接的に結合されているか、または指定された数の炭素原子、この場合１、２、３、または４個の炭素原子を有するアルキル鎖によって結合されているかのいずれかである。アルキルは、－Ｏ－Ｃ０～Ｃ４アルキル（Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル）のようなヘテロ原子のような他の基を介して結合させることもできる。アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、３－メチルブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、およびｓｅｃ－ペンチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【0026】
「アルコキシ」は、酸素架橋（－Ｏ－）によって置換される基に共有結合した示された数の炭素原子を有する、上で定義されたようなアルキル基である。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソ－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、２－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ｎ－ペントキシ、２－ペントキシ、３－ペントキシ、イソ－ペントキシ、ネオ－ペントキシ、ｎ－ヘキソキシ、２－ヘキソキシ、３－ヘキソキシ、および３ －メチルペントキシが挙げられるが、これらに限定されない。同様に、「アルキルチオ」または「チオアルキル」基は、それが硫黄架橋（－Ｓ－）によって置換されている基に共有結合している指定された数の炭素原子を有する、上記で定義されたアルキル基である。同様に、「アルケニルオキシ」、「アルキニルオキシ」、および「シクロアルキルオキシ」は、それが酸素架橋（－Ｏ－）によって置換されている基に共有結合した各例において、アルケニル、アルキニル、およびシクロアルキル基を指す。
【0027】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味し、ここでは、重同位体および放射性同位体を含む、同じものの全ての同位体を含むと定義される。有益なハロ同位体の例としては、１８Ｆ、７６Ｂｒ、および１３１Ｉが挙げられる。追加的な同位体は、当業者によって容易に認識されるであろう。
【0028】
「ハロアルキル」とは、特定の数の炭素原子を有し、１以上のハロゲン原子で置換され、一般に最大許容数のハロゲン原子までの分枝鎖および直鎖アルキル基の両方を意味する。ハロアルキルの例としては、限定されるわけではないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、２－フルオロエチル、およびペンタ－フルオロエチルが挙げられる。
【0029】
「ハロアルコキシ」は、酸素架橋（アルコールラジカルの酸素）を通して結合した上記定義のハロアルキル基である。
【0030】
「ペプチド」とは、アミド結合（ペプチド結合とも呼ばれる）を介して互いに結合したアミノ酸の鎖である分子を意味する。
【0031】
「医薬組成物」とは、式Ｉの化合物または塩のような少なくとも１つの活性剤、および担体のような少なくとも１つの他の物質を含む組成物を意味する。医薬組成物は、ヒトまたは非ヒト薬物に関する米国食品医薬品局の製造管理および品質管理に関する基準（ＧＭＰ）基準に適合している。
【0032】
「担体」とは、活性化合物が投与される希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを意味する。「薬学的に許容される担体」は、一般的に安全、無毒性であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないものでもなく、獣医学的使用ならびにヒトの薬学的使用に許容される担体を含む、医薬組成物を調製するのに有用である物質、例えば、賦形剤、希釈剤、またはビヒクルを意味する。「薬学的に許容される担体」とは、そのような担体の１つおよび１つより多くの両方を含む。
【0033】
「患者」とは、医学的処置を必要とするヒトまたは非ヒト動物を意味する。医学的処置は、疾患または障害または診断的処置などの既存の状態の処置を含むことができる。いくつかの実施形態において、患者は、ヒト患者である。
【0034】
「提供する」とは、付与、投与、販売、配布、移動（利益の有無は問わない）、製造、配合、または調剤を意味する。
【0035】
「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、あらゆる疾患症状を測定可能に減少させ、疾患進行を遅らせ、または疾患回帰を引き起こすのに十分な量で、活性化合物を患者に提供することを意味する。特定の実施形態では、疾患の処置は、患者が疾患の症状を呈する前に開始されてもよい。
【0036】
医薬組成物の「治療有効量」とは、患者に投与された場合に、症状の改善、疾患進行の減少、または疾患回帰を引き起こすような治療上の利益を提供するのに有効な量を意味する。
【0037】
「治療化合物」とは、疾患の診断または処置に使用できる化合物を意味する。化合物は、小分子、ペプチド、タンパク質、または他の種類の分子であり得る。
【0038】
有意な変化とは、スチューデントのＴ検定のような統計学的有意性の標準的なパラメトリック検定で統計学的に有意であるあらゆる検出可能な変化であり、ｐ＜０．０５である。
【0039】
化学的記述
式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、立体中心、立体軸などの１つ以上の不斉元素、例えば不斉炭素原子を含んでいてもよく、その結果、当該化合物は種々の立体異性体形態で存在し得る。これらの化合物は、例えば、ラセミ体または光学活性形態であり得る。２つ以上の不斉元素を有する化合物の場合、これらの化合物は、さらにジアステレオマーの混合物であってもよい。不斉中心を有する化合物については、純粋な形態の全ての光学異性体およびそれらの混合物を、包含する。これらの状況では、単一の鏡像異性体、すなわち光学活性形態は、不斉合成、光学的に純粋な前駆体からの合成、またはラセミ体の分割によって得ることができる。ラセミ体の分割はまた、例えば、分割剤の存在下での結晶化のような従来の方法によって、または、例えばキラルＨＰＬＣカラムを使用するクロマトグラフィーによって達成することができる。それらを得るために使用される方法にかかわらず、全ての形態が本明細書で考えられる。
式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、立体中心、立体軸などの１つ以上の不斉元素、例えば不斉炭素原子を含んでいてもよく、その結果、当該化合物は種々の立体異性体形態で存在し得る。これらの化合物は、例えば、ラセミ体または光学活性形態であり得る。２つ以上の不斉元素を有する化合物の場合、これらの化合物は、さらにジアステレオマーの混合物であってもよい。不斉中心を有する化合物については、純粋な形態の全ての光学異性体およびそれらの混合物を、包含する。これらの状況では、単一の鏡像異性体、すなわち光学活性形態は、不斉合成、光学的に純粋な前駆体からの合成、またはラセミ体の分割によって得ることができる。ラセミ体の分割はまた、例えば、分割剤の存在下での結晶化のような従来の方法によって、または、例えばキラルＨＰＬＣカラムを使用するクロマトグラフィーによって達成することができる。それらを得るために使用される方法にかかわらず、全ての形態が本明細書で考えられる。
【0040】
活性剤の全ての形態（例えば、溶媒和物、光学異性体、鏡像異性体形態、多形体、遊離化合物および塩）は、単独または組み合わせのいずれかで使用され得る。
【0041】
用語「キラル」は、鏡像パートナーの非重ね合わせ性の特性を有する分子を指す。
【0042】
「立体異性体」とは、化学構造は同一であるが、空間における原子または基の配置に関しては異なる化合物である。
【0043】
「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラリティーの中心をもち、分子が互いの鏡像ではない立体異性体である。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、例えば、キラルＨＰＬＣカラムを用いて、電気泳動、分割剤の存在下での結晶化、またはクロマトグラフィーのような高分解能分析手順下で分離することができる。
【0044】
「鏡像異性体」とは、化合物の２つの立体異性体を指し、それらは互いに重ね合わせることができない鏡像である。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、これらは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択性または立体特異性がなかった場合に存在し得る。
【0045】
本明細書で使用される立体化学の定義および規約は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ならびにＥｌｉｅｌ，Ｅ．およびＷｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物が光学活性形態で存在し、すなわちそれらは面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する場合、接頭語ＤおよびＬまたはＲおよびＳを使用して、そのキラル中心（複数可）に関する分子の絶対的配置を示す。接頭語ｄおよびｌまたは（＋）および（－）は、化合物による平面偏光の回転の符号を表すために使用され、（－）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。接頭語（＋）またはｄを有する化合物は、右旋性である。
【0046】
「ラセミ混合物」または「ラセミ体」は、光学活性を含まない、２つの鏡像異性体種の等モル（または５０：５０）混合物である。ラセミ混合物は、化学反応またはプロセスで立体選択性または立体特異性がなかった場合に存在し得る。
【0047】
「キレート基」または「キレート剤」は、通常金属イオンである単一の中心原子に２つ以上の別々の配位結合を形成することができるリガンド基である。本明細書に開示されるキレート基は、複数のＮ、Ｏ、またはＳヘテロ原子を有し、２つ以上のヘテロ原子が同一の金属イオンに結合を形成することを可能にする構造を有する有機基である。
【0048】
「薬学的に許容可能な塩」は、親化合物がそれらの無機および有機の、無毒、酸または塩基付加塩を作ることによって修飾される開示された化合物の誘導体を含む。本化合物の塩は、従来の化学的方法により塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を適当な塩基（Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ、またはＫ水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）の化学量論量と反応させることによって、またはこれらの化合物の遊離塩基形態を適当な酸の化学量論量と反応させることによって調製することができる。このような反応は、典型的に、水中または有機溶媒中、あるいは２種の混合物中で行われる。一般に、実際的であれば、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体を使用する。本化合物の塩にはさらに、化合物および化合物塩の溶媒和物が含まれる。
【0049】
薬学的に許容される塩の例は、限定するものではないが、アミンのような塩基性残基の鉱物酸または有機酸の塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩または有機塩などを含む。薬学的に許容される塩は、従来の無毒性塩、および、例えば、無毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の第四アンモニウム塩を含む。例えば、従来の無毒性酸塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導される塩；および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、メシル酸、エスシル酸、ベシル酸、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）ｎ－ＣＯＯＨ（式中ｎは０～４である）などの有機酸から調製される塩が挙げられる。追加の適切な塩の一覧は、例えば、Ｇ．Ｓｔｅｆｆｅｎ Ｐａｕｌｅｋｕｈｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００７，５０，６６６５およびＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ ＳｔａｈｌおよびＣａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ、編者、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００２中に見出され得る。
【0050】
実施形態
本発明の態様は、以下に示す式Ｉの化合物、または薬学的に許容可能なエステル、アミド、溶媒和物、またはその塩、あるいはかかるエステルもしくはアミドの塩、またはかかるエステルアミドもしくは塩の溶媒和物を有するエバンスブルー色素の化学結合体を包含する：
本発明の態様は、以下に示す式Ｉの化合物、または薬学的に許容可能なエステル、アミド、溶媒和物、またはその塩、あるいはかかるエステルもしくはアミドの塩、またはかかるエステルアミドもしくは塩の溶媒和物を有するエバンスブルー色素の化学結合体を包含する：
【化2】
【0051】
式Ｉにおいて、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、およびＣ１～Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択される。Ｒ１２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、またはＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。Ｒ１３は、キレート基である。Ｒ１４は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合可能な基である。
【0052】
式Ｉはまた、－（ＣＨ２）ｍ－であり、式中ｍが０～１２の整数である結合基Ｌ１、－（ＣＨ２）ｎ－であり、式中ｎが０～１２の整数である結合基Ｌ２、および－（ＣＨ２）ｐ－であり、式中ｐが０～１２の整数である結合基Ｌ３を含むことができる。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３の各々において、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない限り、－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－で個々に置き換えられ得る。
【0053】
いくつかの実施形態において、結合基Ｌ１～Ｌ３は、ポリエチレングリコール部分－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－を含む。
【0054】
式Ｉの実施形態では、Ｌ１は－ＮＨ（ＣＯ）－である。式Ｉの別の実施形態では、Ｌ２は－（ＣＨ２）４－ＮＨ（ＣＯ）－（ＣＨ２）２－である。式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｌ３は－ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ２－である。
【0055】
式Ｉはまた、Ｃ１～Ｃ６０結合基であり、任意に－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－を含み、各々のＲはＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである結合基Ｌ４を含み得る。一実施形態において、Ｌ４は、ｑが０～１２の整数である－（ＣＨ２）ｑ－を含むことができ、各々のＣＨ２は、２つの隣り合うＣＨ２基が置き換えられない場合には、－Ｏ－、－ＮＨ（ＣＯ）－または－（ＣＯ）－ＮＨ－と個々に置き換えられ得る。
【0056】
式Ｉのさらに別の実施形態において、Ｒ１およびＲ４は、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、およびＣ１～Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択される。
【0057】
式Ｉのさらに別の実施形態において、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、各々水素である。
【0058】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１およびＲ４は、Ｃ１～Ｃ６アルキルから独立して選択される。
【0059】
式Ｉのさらに別の実施形態において、Ｒ１およびＲ４は、各々メチルである。
【0060】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１２は水素である。
【0061】
Ｒ１３は、キレート基であり得る。いくつかの実施形態において、キレート基は、ＮＯＴＡ基、ＤＯＴＡ基、メルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ３）、ジピコリルアミンエタン酸（ＤＰＡ）、シクロデキストリン、クラウンエーテル、もしくはポルフィリンなどの大環状部分であってもよく、または１，４，７－トリアザヘプタン－１，４，７，７－四酢酸基（ＤＴＰＡ）などの直鎖部分であってもよいが、これらに限定されない。これらの化合物およびいくつかの他の化合物および基の化学構造を、以下に示す。
【化3】
【0062】
記号
は、付着の点を示す。
【化4】
【0063】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１３は、
クラウンエーテル、シクロデキストリン、またはポルフィリンから選択される。
【化5】
【0064】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１３は、
であり得る。
【化6】
【0065】
Ｒ１４のリガンドは、疾患を処置することができるリガンドから誘導される基、または疾患を診断するために使用することができるリガンドから誘導される基であってもよい。一実施形態において、Ｒ１４は、
を含むことができる。
【化7】
【0066】
別の実施形態では、Ｒ１４は、
を含むことができる。
【化8】
【0067】
さらに別の実施形態では、Ｒ１４は、
を含むことができる。
【化9】
【0068】
リガンドから誘導されるＲ１４と表示された基は、式Ｉの一部としてまだ結合している間に生物学的作用を引き起こすかもしれない。あるいは、リガンドから誘導されるＲ１４と表示された基は、式Ｉから、例えば酵素によって切断され得る。リガンドは、標的細胞または組織に結合することが可能であるリガンドであってもよく、例えば、リガンドは、腫瘍に結合することが可能であり得る。結合は、共有結合または非共有結合を介することができる。
【0069】
いくつかの実施形態において、Ｒ１４は、治療化合物から誘導される基であってもよい。治療化合物は、治療的特性を有する任意の化合物であってよく、小分子治療的分子、ペプチド性薬物、またはタンパク質ベースの治療薬を包含し得る。例えば、一実施形態では、Ｒは、前立腺癌を処置または診断するその能力について選択される。Ｒ１４は、天然の治療的分子、またはその治療的に活性な断片であり得ることを理解すべきである。
【0070】
いくつかの実施形態において、Ｒ１４は、１８Ｆ、７６Ｂｒ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、または１３１Ｉなどの放射性核種をさらに含む。放射性核種を含むＲ１４の有用な置換基の例は、
である。
【化10】
【0071】
式Ｉで表される化合物は：
であり得る。
【化11】
【化12】
【0072】
前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を発現する腫瘍に対して向けられる放射性核種療法は、臨床において前立腺癌腫瘍の処置に有効であることが証明されている。最近、多くの造影トレーサーおよび放射線療法剤が開発されている。ヒト患者では、１７７Ｌｕで標識した抗ＰＳＭＡ抗体が有効であることが示されたが、血中での半減期（日）が長いためと思われる骨髄および血液学的毒性がいくらか認められた。ＰＳＭＡを標的とするいくつかの小分子もまた、１７７Ｌｕのようなベータ放射体で標識された前立腺癌患者において評価された。最も一般的なものは、１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ－６１７であり、それは、多くの国で臨床評価段階にある。ほとんどの臨床試験の患者における通常の処置は、最大３サイクルの１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ－６１７で構成されていた。上述のように、入手可能な限られたデータから、一部の患者では数週間程度の短期間に限定した７０％～８０％までの部分的応答率が示唆されている。奨励すべきことに、ステージ１～２の血液学的毒性ならびに散発的に軽度の口腔乾燥および疲労のみが、副作用として報告されており、長期毒性はまだ未知である。
【0073】
本発明者らは、尿路を通してよりゆっくりと清澄化し、同時に、血液循環半減期を増加させ、腫瘍におけるより高い標的蓄積を有する化学的類似体を調製することにより、ＰＳＭＡ放射線療法の有効性を改善することに着手した。この目標は、（（（Ｒ－）－１－カルボキシ－２－メルカプトエチル）カルバモイル）－Ｌ－グルタミン酸から誘導される残基を含む、一般的な臨床的に使用されるリガンドの、エバンスブルー類似体（ＥＢ）への共役、それが循環する血清アルブミンに可逆的に結合して、ＰＳＭＡに対する親和性および特異性を保持した放射性医薬品を提供することによって達成されている。提案された変形は、血中半減期を有意に増加させ、腫瘍取り込みを増加させ、より効果的な抗腫瘍放射線療法をもたらし、ＰＳＭＡ陽性腫瘍を有する患者の療法を改善し得る。
【0074】
新たに設計した分子は、共役した標的リガンドの高い内部移行率も保持し、したがってＰＳＭＡ陽性腫瘍で有意に高い蓄積を示した。新規なＥＢ－ＰＳＭＡ誘導体を、治療用の純粋なβ放射体、９０Ｙ、１７７Ｌｕおよび他のもので標識した結果、ＰＳＭＡ異種移植モデルを有するマウスの腫瘍応答および生存率が改善され、リガンド自体と比較した場合、長期的な有効性を有した。このアプローチは、ＰＳＭＡを含む腫瘍を有する患者に対して、より効果的な処置戦略を提供し得る。
【0075】
いくつかの実施形態において、式ＩのＲ１３基は、さらに、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、８９Ｚｒ、９９Ｔｃ、１５３Ｓｍ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａなどの放射性核種を含む。いくつかの実施形態において、Ｒ１３に含まれる放射性核種は、８６Ｙ、９０Ｙ、または１７７Ｌｕである。放射性核種は、キレート化によって、または化学技術において公知の従来の共有結合もしくはイオン結合のような他の手段によって、Ｒ１３に結合され得る。放射性核種は、例えばＰＥＴ造影のような造影または走査のような適当な目的であり得、式Ｉの化合物はＰＥＴ造影剤であり得る。放射性核種は、患者処置、例えば放射線処置の目的に好適であり得、式Ｉの化合物は前立腺癌の処置のための剤であってもよい。
【0076】
別の態様では、本発明は、以下に例示する式ＩＩの化合物、または薬学的に許容可能なエステル、アミド、溶媒和物、もしくはそれらの塩、またはかかるエステルもしくはアミドの塩、またはかかるエステルアミドもしくは塩の溶媒和物を有するエバンスブルー色素の化学結合体を包含する：
【化13】
【0077】
式ＩＩにおいて、Ｒ１３はキレート基であり、Ｒ１４は前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合可能な基である。
【0078】
式ＩＩはまた、－（ＣＨ２）ｎ－であり、式中ｎは０～１２の整数である結合基Ｌ２；およびＣ１～Ｃ６０結合基であり、２つの隣り合うＣＨ２群が置換されない場合には、任意に－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（Ｒ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）－を含み、各ＲはＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである結合基Ｌ４を含み得る。
【0079】
いくつかの実施形態において、結合基Ｌ１～Ｌ４は、ポリエチレングリコール部分－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－を含む。
【0080】
一実施形態では、Ｌ２は－（ＣＨ２）４－ＮＨ（ＣＯ）－（ＣＨ２）２－であり、Ｌ４－Ｒ１４は
である。
【化14】
【0081】
別の実施形態では、Ｌ２は－（ＣＨ２）４－ＮＨ（ＣＯ）－（ＣＨ２）２－であり、Ｌ４－Ｒ１４は
である。
【化15】
【0082】
式Ｉの化合物について与えられたＲ１４の実施形態の説明は、式ＩＩの化合物にも適用される。また、式ＩＩのＲ１３および／またはＲ１４は、上記の放射性核種をさらに含むことができ、式Ｉの化合物について与えられた放射性核種実施形態の記載は、式ＩＩの化合物にも適用される。
【0083】
いくつかの実施形態において、開示中の新規な分子は、アルブミン結合モチーフとしての切断型エバンスブルードメイン、放射性核種で標識するためのキレート剤、スペーサー、リンカーとしてのマレイミドから誘導される残基、および生体分子結合モチーフを含む。
【0084】
医薬製剤
式への言及は、全ての下位式への言及を含み、例えば、式Ｉは、式ＩＩの化合物を含む。本明細書中に開示される化合物は、そのままの化学物質として投与することができるが、好ましくは、医薬組成物として投与される。したがって、本発明は、式Ｉの化合物などの化合物または化合物の薬学的に許容される塩を少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物を包含する。医薬組成物は、唯一の活性剤として式Ｉの化合物または塩を含むことができるが、少なくとも１つの追加の活性剤を含むことが望ましい。特定の実施形態において、医薬組成物は、単位剤形中に約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１００ｍｇ～約８００ｍｇ、または約２００ｍｇ～約６００ｍｇの式Ｉの化合物、および任意に約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１００ｍｇ～約８００ｍｇ、または約２００ｍｇ～約６００ｍｇの追加の活性剤を含有する剤形である。医薬組成物はまた、式Ｉの化合物などの化合物、および追加の活性剤のモル比を含み得る。例えば、医薬組成物は、式Ｉの化合物に対する追加の活性剤の約０．５：１、約１：１、約２：１、約３：１または約１．５：１～約４：１のモル比を含むことができる。
式への言及は、全ての下位式への言及を含み、例えば、式Ｉは、式ＩＩの化合物を含む。本明細書中に開示される化合物は、そのままの化学物質として投与することができるが、好ましくは、医薬組成物として投与される。したがって、本発明は、式Ｉの化合物などの化合物または化合物の薬学的に許容される塩を少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物を包含する。医薬組成物は、唯一の活性剤として式Ｉの化合物または塩を含むことができるが、少なくとも１つの追加の活性剤を含むことが望ましい。特定の実施形態において、医薬組成物は、単位剤形中に約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１００ｍｇ～約８００ｍｇ、または約２００ｍｇ～約６００ｍｇの式Ｉの化合物、および任意に約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１００ｍｇ～約８００ｍｇ、または約２００ｍｇ～約６００ｍｇの追加の活性剤を含有する剤形である。医薬組成物はまた、式Ｉの化合物などの化合物、および追加の活性剤のモル比を含み得る。例えば、医薬組成物は、式Ｉの化合物に対する追加の活性剤の約０．５：１、約１：１、約２：１、約３：１または約１．５：１～約４：１のモル比を含むことができる。
【0085】
本明細書に開示される化合物は、経口的に、局所的に、非経口的に、吸入または噴霧によって、舌下的に、経皮的に、頬投与を介して、直腸的に、点眼液として、または他の手段によって、従来の薬学的に許容可能な担体を含む投与単位製剤で投与され得る。医薬組成物は、任意の薬学的に有用な形態として、例えば、エアロゾル、クリーム、ゲル、丸剤、カプセル、錠剤、シロップ、経皮パッチ、または点眼剤として処方され得る。錠剤およびカプセル剤のようないくつかの剤形は、適切な量の活性成分、例えば、所望の目的を達成するための有効な量を含む適切なサイズの単位用量に細分される。
【0086】
担体は、賦形剤および希釈剤を含み、処置される患者への投与に適するようにするために、十分に高い純度および十分に低い毒性を有しなければならない。担体は不活性であってもよく、またはそれ自体の医薬的利益を有することができる。化合物と共に使用される担体の量は、化合物の単位用量当たりの投与のための実用量の物質を提供するのに十分である。
【0087】
担体の組としては、結合剤、緩衝剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、香味剤、流動促進剤、潤滑剤、保存剤、安定剤、界面活性剤、錠剤化剤、および湿潤剤が挙げられるが、これらに限定されない。担体の中には、１つ以上の組に挙げることができるものもあり、例えば、植物油は、いくつかの処方物において潤滑剤として、他の処方物においては希釈剤として使用することができる。薬学的に許容される担体の例としては、糖、デンプン、セルロース、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、および植物油が挙げられる。任意の活性剤は、医薬組成物中に含まれ得、それは、本発明の化合物の活性を実質的に妨害しない。
【0088】
医薬組成物／組合せは、経口投与のために処方することができる。これらの組成物は、式Ｉの化合物の０．１～９９重量％（ｗｔ．％）および通常式Ｉの化合物の少なくとも約５ｗｔ．％を含有する。いくつかの実施形態は、式Ｉの化合物の約２５ｗｔ％～約５０ｗｔ％または約５ｗｔ％～約７５ｗｔ％を含有する。
【0089】
処置方法
式Ｉの化合物、ならびに当該化合物を含む医薬組成物は、癌などの疾患の診断または処置に有用である。本発明によれば、前立腺癌を処置する方法は、そのような処置を必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を提供することを含む。一実施形態では、患者は哺乳動物であり、より具体的にはヒトである。当業者に理解されるであろうように、本発明はまた、コンパニオンアニマル、例えばネコ、イヌ、および家畜動物のような非ヒト患者を処置する方法も包含する。
式Ｉの化合物、ならびに当該化合物を含む医薬組成物は、癌などの疾患の診断または処置に有用である。本発明によれば、前立腺癌を処置する方法は、そのような処置を必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を提供することを含む。一実施形態では、患者は哺乳動物であり、より具体的にはヒトである。当業者に理解されるであろうように、本発明はまた、コンパニオンアニマル、例えばネコ、イヌ、および家畜動物のような非ヒト患者を処置する方法も包含する。
【0090】
医薬組成物の治療有効量は、好ましくは、疾患または状態の症状を軽減または改善するのに十分な量である。前立腺癌の場合、例えば、治療有効量は、高血糖を減少または改善するのに十分な量であり得る。本明細書に記載される化合物または医薬組成物の治療有効量はまた、患者に投与された場合、式Ｉの化合物の十分な濃度を提供するであろう。十分な濃度は、好ましくは、障害を予防または克服するために必要な患者の体内の化合物の濃度である。そのような量は、実験的に、例えば、化合物の血中濃度をアッセイすることによって、または理論的に、バイオアベイラビリティを計算することによって確認することができる。
【0091】
本発明によれば、本明細書に開示される処置の方法は、式Ｉの化合物の特定の投与量を患者に提供することを含む。約０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日～約１４０ｍｇ／ｋｇ体重／日の各化合物の用量レベルは、上記の状態の処置に有用である（１患者当たり１日当たり約０．５ｍｇ～約７ｇ／日）。単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる化合物の量は、処置される患者および投与の特定の様式に依存して変化するであろう。投薬単位形態は、一般に、約１ｍｇ～約５００ｍｇの各活性化合物を含むであろう。特定の実施形態において、式Ｉの化合物２５ｍｇ～５００ｍｇ、または２５ｍｇ～２００ｍｇを、患者に毎日提供する。投与の頻度はまた、使用される化合物および処置される特定の疾患に依存して変化し得る。しかしながら、ほとんどの疾患および障害の処置のために、１日４回以下の投薬計画を使用することができ、特定の実施形態では、１日１回または２回の投薬計画を使用する。
【0092】
しかしながら、あらゆる特定の患者についての特定の投与レベルは用いる特定の化合物の活性、年令、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与の時間、投与の経路および排泄の速度、薬物の組合せおよび療法を受けている特定の疾患の程度を含めた各種の因子に依存することが理解されよう。
【0093】
式Ｉの化合物は、前立腺癌のような疾患および状態を処置または予防するために単独で投与してもよく（すなわち、投与計画の唯一の治療剤）、または別の活性剤と併用して投与してもよい。式Ｉの１つ以上の化合物は、抗癌細胞毒性剤のような１つ以上の他の活性剤の投与計画と協調して投与され得る。一実施形態では、哺乳動物における前立腺癌を処置または診断する方法は、治療有効量の式Ｉの化合物を、任意に１つ以上の追加の活性成分と組み合わせて、前記哺乳動物に投与することを含む。
【0094】
当業者に認識されるように、本明細書で提供される処置の方法は、ウマおよび家畜、例えば畜牛、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタなどを処置するためのような獣医学的適用、ならびにイヌおよびネコなどのペット（コンパニオンアニマル）を含む、ヒト以外の哺乳動物の処置にも有用である。
【0095】
診断または研究用途のためには、多種多様な哺乳動物が、適当な対象であり、げっ歯動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、およびブタ、例えば近交系ブタなどを含むであろう。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断および研究適用のようなｉｎ ｖｉｔｒｏ適用のためには、上記対象の体液（例えば、血液、血漿、血清、細胞間質液、唾液、糞便、および尿）ならびに細胞および組織試料が、使用に適しているであろう。
【0096】
一実施形態では、本発明は、そのような処置を必要としていると同定された患者における前立腺癌を処置する方法を提供し、当該方法は、式Ｉの化合物の有効量を患者に提供することを含む。本明細書で提供される式Ｉの化合物は、単独で、または１つ以上の他の活性剤との併用で投与され得る。
【0097】
別の実施形態では、前立腺癌を処置する方法は、式Ｉの化合物を、追加の化合物の少なくとも１つが活性剤である１つ以上の追加の化合物と組み合わせて、そのような処置を必要とする患者に投与することをさらに含み得る。１つ以上の追加化合物は、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、カンプトテシン、テモゾロミド、アバスチン、ハーセプチン、アービタックスなどの抗癌治療化合物を含む追加の治療化合物を含み得る。
【0098】
本発明の組成物は、多くの小分子および生物製剤が、高い収率および高い純度で一段階で容易に修飾され得るという利点を提供する。ＥＢ部分のアルブミンとの結合が比較的強いため、ｉｎ ｖｉｖｏの生体内分布を容易に制御して、ＥＢ部分およびリンカーの数を調整することができる。さらに、ＥＢ部分の相対的に小さいサイズは、小分子または生物製剤の生物学的機能に対するいかなる干渉の可能性も低下させる。ＥＢ部分に結合したＮＯＴＡまたはＤＯＴＡなどのキレート剤の添加は、放射性核種などのさらなる基の容易な添加を可能にし、それは、本分子が造影剤および／または放射性治療剤として作用することを可能にし得る。したがって、本発明は、高い有効性を有する、長時間持続性および長時間作用性の治療剤および造影剤を開発するための効率的なシステムを提供する。
【実施例】
【0099】
本発明は、以下の実施例によってさらに詳細に記載される。他に特に明記しない限り、すべての部およびパーセンテージは重量によるものであり、すべての温度は摂氏度である。
【0100】
略語
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＯＴＡ １，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸
Ｆｍｏｃ フルオレオキシカルボニルクロリド
ＨＡＴＵ １－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ－ＭＳ 液体クロマトグラフィー／質量分析
ＰＥＴ ポジトロン放出断層撮影
ＲＴ 室温
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＯＴＡ １，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸
Ｆｍｏｃ フルオレオキシカルボニルクロリド
ＨＡＴＵ １－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ－ＭＳ 液体クロマトグラフィー／質量分析
ＰＥＴ ポジトロン放出断層撮影
ＲＴ 室温
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
【0101】
一般的な方法
Ｂｏｃ－リシン－Ｆｍｏｃアミノ酸は、ＡｐｐＴｅｃｈから購入した。ＤＯＴＡ－ＮＨＳエステル）は、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓから購入した。その他の溶媒および化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。
Ｂｏｃ－リシン－Ｆｍｏｃアミノ酸は、ＡｐｐＴｅｃｈから購入した。ＤＯＴＡ－ＮＨＳエステル）は、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓから購入した。その他の溶媒および化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。
【0102】
化学的純度は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８カラム（５μｍ、４．６０×１５０ｍｍ）を用いた分析高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で、２つの勾配系、すなわち、系１－溶媒Ａ、Ｈ２Ｏ中の０．１％のＴＦＡの９５％および溶媒Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）の５％から出発して５分間、３０分間で溶媒Ｂの６５％に増加し、次いで１ｍＬ／分の流速で５分間で９０％に増加する勾配、系２－溶媒Ａ（５０ｍＭのＮＨ４ＯＡｃ）および溶媒Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）を使用する系１と同じ勾配で測定した。紫外線（ｕｖ）吸光度を、２５４および６００ｎｍでモニターした。９５％の溶媒Ａ（Ｈ２Ｏ中０．１％のＴＦＡ）および５％の溶媒Ｂ（ＣＨ３ＣＮ）の勾配系を用いて５分間Ｂｉｏｔａｇｅ系（Ｃ－１８、ＳＮＡＰ １２０ｇ）で化合物を精製し、流量４０ｍＬ／分で６６分で溶媒Ｂの６５％に増加させた。
【0103】
ＬＣ－ＭＳ分析は、報告された手順（１）と同様に行った。８６ＹＣｌ３は、ＮＩＨサイクロトロン施設から取得した。９０ＹＣｌ３はＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒから購入した。１７７ ＬｕＣｌ３は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｓｓｏｕｒｉ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅａｃｔｏｒ（ＭＵＲＲ）から購入した。
【0104】
実施例１：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ （ＤＭＥＢ）の合成
ステップ１～２：トリシンＬｙｓ－Ｂｏｃの合成
Ｂｏｃ－リシン－Ｆｍｏｃアミノ酸１．１ｇ（１当量）および無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１０ｍＬ）を入れた１００ｍＬの丸フラスコに、アルゴン下にＨＡＴＵ（０．９４ｇ、１．０５当量）を加えた。この混合物を、室温（ＲＴ）で１０～１５分間撹拌した。次に、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４ｍＬ、１０当量）を加え、続いて１０ｍＬのＤＭＦ中のトリシン（０．７５ｇ、１．５当量）を加えた。反応混合物を、一晩撹拌した。系１（保持時間３２．３分）を用いて、分析ＨＰＬＣにより所望の生成物への変換を評価した。油真空ポンプを用いた回転蒸発器により溶媒を除去した。残りの油を、５～１０ｍＬのＤＭＦに再溶解し、次いで２０％のピペリシン（ｖ／ｖ）を加えた。混合物をＲＴで１５～２０間撹拌し、Ｆｍｏｃの脱保護を分析的ＨＰＬＣ系１（保持時間１８．７分）への注入により評価した。上記の勾配系を用いてＢｉｏｔａｇｅ系上で粗混合物を精製し、採取した純粋な所望の画分を凍結乾燥した。望まれるトリシンＬｙｓ－Ｂｏｃの化学的純度は９５％を上回り、収率は６８～７２％の範囲の白色粉末であった。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝４３９．１８（ｍ／ｚ）、計算値：４４０．２。
ステップ１～２：トリシンＬｙｓ－Ｂｏｃの合成
【化16】
【0105】
ステップ３：ＤＯＴＡ－トリシンＬｙｓ－Ｂｏｃの合成
トリシンＬｙｓ－Ｂｏｃ（０．５２ｇ、１当量）を、５ｍＬのＤＭＦに溶解した。次に、２～３ｍＬのＤＭＦ中のＤＯＴＡ－ＮＨＳエステル（１ｇ、１．１当量）を加え、続いてＤＩＰＥＡ（１ｍＬ、５当量）を加えた。混合物を、ＲＴで２～３時間撹拌した。分析的ＨＰＬＣ系１（保持時間１８．１分）上で所望の生成物への変換を評価した。Ｂｉｏｔａｇｅ系上で精製を行い、採取した純粋な所望の画分を凍結乾燥して、化学的純度が９５％を超える白色粉末の収率７６％を得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝８２５．５（ｍ／ｚ）、計算値：８２６．４。
【化17】
【0106】
ステップ４：ＤＯＴＡ－トリシンＬｙｓの合成
ＤＯＴＡ－Ｔｏｌ－Ｌｙｓ－Ｂｏｃに５ｍＬのそのままのＴＦＡを添加した。混合物を、ＲＴで１５～２０分間インキュベートした。次にＴＦＡを蒸発乾固し、水を加えた。分析的ＨＰＬＣ系１は、Ｂｏｃの脱保護（保持時間１０．４分）を確認した。水との混合物を凍結乾燥して、８０％を超える化学収率で純粋な所望の生成物を得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝７２５．２（ｍ／ｚ）、計算値：７２６．４。
【化18】
【0107】
ステップ５：ＤＯＴＡ－トリシンＬｙｓ－マレイミドの合成
ＤＯＴＡ－トリシンＬｙｓ－Ｂｏｃ（０．５７ｇ、１当量）を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）５ｍＬに溶解した。次に、３ｍＬのＤＭＳＯ中の３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（０．２３ｇ、１．１当量）を加え、続いてトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、０．５６ｍＬ、５当量）を加えた。混合物を、ＲＴで２時間撹拌した。分析的ＨＰＬＣにより、所望の生成物への完全な変換が確認された（保持時間１４．０分）。Ｂｉｏｔａｇｅ系上で精製を行い、採取した純粋な所望の画分を凍結乾燥して、化学的純度が９５％を超える白色粉末の収率７６％を得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝８７６．４（ｍ／ｚ）、計算値：８７７．４。
【化19】
【0108】
ステップ６：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ（ＤＭＥＢ）の合成
ＤＯＴＡ－トリシンＬｙｓ－マレイミド（０．５ｇ）を、１ｍＬのＣＨ３ＣＮおよび１ｍＬのＨ２Ｏに、ガラスバイアル中で溶解した。次に、３０％ＨＣｌ３当量（０．０６２ｇ、０．０５４ｍＬ）を、Ｈ２Ｏ１ｍＬに加えた。溶液を氷水中で冷却し、数分後にＨ２Ｏ１ｍＬ中の冷ＮａＮＯ２溶液（３当量、０．１２ｇ）を加えた。粗混合物を、氷中で３０分間撹拌した。溶液は黄色に変わり、これはジアゾニウム塩の生成を示す。
【化20】
【0109】
上記ジアゾニウム塩溶液を、１ｍＬのＨ２Ｏ中の１－アミノ－８－ナフトール－２，４－ジスルホン酸一ナトリウム塩（１当量、０．２ｇ）および重炭酸ナトリウム（４～５当量、０．２ｇ）を含むガラスバイアルに、少量ずつ加えた。混合物を氷中で更に１時間撹拌し、ＤＭＥＢの生成を、分析的ＨＰＬＣ系２（保持時間１６．８分）により分析した。Ｂｉｏｔａｇｅ系上で精製を行い、採取した純粋な所望の画分を凍結乾燥して、化学的純度９０％超の白色粉末の収率６０％を得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１２０６．２（ｍ／ｚ）、計算値：１２０７．７。
【0110】
実施例２：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ（ＤＭＥＢ）の代替の合成
ステップ１：エバンスブルーアミン（ＥＢ－ＮＨ２）の調製
２－トリシン（４．３ｇ）および塩化メチレン（４０ｍｌ）を含む１００ｍｌの丸底フラスコに、ジ－ｔ－ブチルジカーボネート（４．４ｇ）を加えた。混合物を、室温で一晩撹拌した。反応を濃縮し、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－Ｂｏｃ－２－トリシン３．２ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］＋＝３１３．４１３５（ｍ／ｚ）、計算値：３１２．１８３８。
ステップ１：エバンスブルーアミン（ＥＢ－ＮＨ２）の調製
２－トリシン（４．３ｇ）および塩化メチレン（４０ｍｌ）を含む１００ｍｌの丸底フラスコに、ジ－ｔ－ブチルジカーボネート（４．４ｇ）を加えた。混合物を、室温で一晩撹拌した。反応を濃縮し、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－Ｂｏｃ－２－トリシン３．２ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］＋＝３１３．４１３５（ｍ／ｚ）、計算値：３１２．１８３８。
【化21】
【0111】
Ｎ－Ｂｏｃ－２－トリシン（０．４６ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を、ガラスバイアル中でアセトニトリル（１０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、次いで塩酸（０．３Ｍ、１５ｍｌ）を加えた。冷亜硝酸ナトリウム溶液（５ｍｌ水中０．３１ｇ）を滴加し、２０分間撹拌し、溶液は明るい黄色に変色した。この溶液を、水（２０ｍｌ）中の１－アミノ－８－ナフトール－２，４－ジスルホン酸一ナトリウム塩（０．５９ｇ）および重炭酸ナトリウム（０．４９ｇ）を含む別のガラスバイアルに、０℃で滴加した。反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと見なされ、反応は、さらに精製することなく凍結乾燥されて、Ｂｏｃ－ＥＢ生成物を提供した。［Ｍ－Ｈ］－＝５４１．４４２５、計算値：５４２．０９３０。
【化22】
【0112】
Ｂｏｃ ＥＢ生成物を、８０％のＴＦＡ、１０％の１，２－エタンジチオールおよび１０％のチオアニソールの溶液に加え、反応が完了するまで撹拌した。この混合物を水（１００ｍｌ）で希釈し、Ｃ－１８クロマトグラフィーカートリッジ（３×１５ｃｍ）に装填した。カラムを水、次に８０％エタノールで洗浄して、所望の生成物を溶出した。溶離液中で溶媒を蒸発させた後、８０％純度の生成物ＥＢ－ＮＨ２を０．６ｇ得た。少量の生成物を、ＨＰＬＣでさらに精製した。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ－Ｈ］－＝５４１．４４２５、計算値：５４２．０９３０。
【化23】
【0113】
ステップ２：ＥＢ－Ｌｙｓ－Ｂｏｃの合成
Ｂｏｃ－Ｌｙｓ－Ｆｍｏｃアミノ酸（３．６当量）の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（２～３ｍＬ）に、アルゴン下に（１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ，４．２当量）を加えた。この溶液を、室温（ＲＴ）で１０分間撹拌した。次に、１０当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加え、続いて５～７ｍＬのＤＭＦ中のＥＢ－ＮＨ２を加えた。反応は、ＲＴで一晩撹拌した。ＥＢ－ＮＨ２のＥＢ結合および保護Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－Ｂｏｃへの変換を、分析的ＨＰＬＣ系１を用いてモニターした。ＥＢ－ＮＨ２の保持時間は７．７分であり、共役ＥＢ保護Ｌｙｓは１１分であった。変換完了後、２０％のピペリシン（ｖ／ｖ）を添加し、反応をさらに１時間撹拌した。ＤＭＦを高真空油ポンプで除去し、反応をメタノール／Ｈ２Ｏ（２：１）に再溶解し、Ｂｉｏｔａｇｅ系上で精製した。採取したＨＰＬＣ画分を、分析的ＨＰＬＣ上に再注入して、９０％を超える純度を測定し、さらに凍結乾燥した。ＥＢ－Ｌｙｓ－Ｂｏｃ保持時間（ｒ．ｔ．）は、８．３分（系１）または２３．２分（系２）であった。ＬＣ－ＭＳ分析により、７６９［ＭＨ］－の質量が確認された。
【化24】
【0114】
ステップ３：ＤＯＴＡ－ＥＢ－Ｌｙｓ－Ｂｏｃの合成
ＥＢ－Ｌｙｓ－ＢｏｃとＤＯＴＡ－ビス（ｔ－Ｂｕエステル）との間の反応は、上記の条件と同様に行われた。分析的ＨＰＬＣ系２は、純度９０％超、これと共にｒ．ｔ．２９．３分および質量１１６７［ＭＨ］－を確認した。
【化25】
【0115】
ステップ４：ＤＯＴＡ－ＥＢ－Ｌｙｓの合成
脱保護は、チオアニソール：１，２－エタンジチオール：アニソール：ＴＦＡ（５：３：２：９０）を用いてＲＴで行った。脱保護の完了を、ＨＰＬＣ（１７．１分のｒ．ｔ．）でモニターした。ＴＦＡを、精製前にアルゴン流によって除去した。ＤＯＴＡ－ＥＢ－Ｌｙｓを、Ｂｉｏｔａｇｅ系上で精製した。ＬＣ－ＭＳ分析では、９５４［ＭＨ］－の質量を確認した。
【化26】
【0116】
ステップ５：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ（ＤＭＥＢ）の合成
ＤＯＴＡ－ＥＢ－Ｌｙｓを、０．５ｍＬのＤＭＦに溶解した。次に、１．２６当量のトリメチルアミンを加え、続いて０．２ｍＬのＤＭＦ中の１．２６当量の３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルを加えた。反応は、ＲＴで２時間撹拌した。Ｈｉｇｇｉｎｓカラム上で精製を行った。分析的ＨＰＬＣ注入（系２）は、純度９０％超、これと共にｒ．ｔ．１７．４分および質量１１０５［ＭＨ］－を示した。
【化27】
【0117】
実施例３：ＰＳＭＡ－６１７－ＳＨの合成
ｔ－Ｂｕ－ＰＳＭＡ－６１７－アミンは、ＣＳ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．から購入した。ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート）は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。ＰＳＭＡ－６１７は、以下のように３ステップで合成した。
ｔ－Ｂｕ－ＰＳＭＡ－６１７－アミンは、ＣＳ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．から購入した。ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート）は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。ＰＳＭＡ－６１７は、以下のように３ステップで合成した。
【0118】
ステップ１：ＰＳＭＡ－６１７－Ｓ－アセチルの合成
ｔ－Ｂｕ－ＰＳＭＡ－６１７－アミン（６５ｍｇ、１当量）を、無水ＤＭＳＯ１ｍＬに溶解した。次に、０．４ｍＬのＤＭＳＯ中のＳＡＴＡ１．１当量（２１ｍｇ）を加え、続いてＤＩＰＥＡ、５当量（０．０７４ｍＬ）を加えた。混合物をＲＴで２～３時間撹拌し、勾配系１および流量１２ｍＬ／ｍｉｎを用いてＨｉｇｇｉｎｓカラム（Ｃ－１８．５μｍ，２５０×２０ｍｍ）上で精製した。採取した画分を凍結乾燥した。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝８８２．５（ｍ／ｚ）、計算値：８８３．４。
【化28】
【0119】
ステップ２～３：ＰＳＭＡ－６１７－ＳＨの合成
ＰＳＭＡ－Ｓ－アセチルは、ＲＴで１０～２０分間そのままのＴＦＡを用いて脱保護した。分析的ＨＰＬＣ系１により脱保護を確認した後、ＴＦＡを蒸発乾固した。次に、ヒドロキシルアミン（ＨＣｌ塩）７０ｍｇおよびＥＤＴＡ２０ｍｇを、ｐＨ９．４のホウ酸緩衝液３ｍｌに加えた。混合物の最終ｐＨはｐＨ紙で測定すると６付近であった。混合物をＲＴで１時間撹拌し、上記のようにＨｉｇｇｉｎｓカラム上で精製した。採取した画分を凍結乾燥した。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝７２８．２４（ｍ／ｚ）、計算値：７２９．３。
【化29】
【0120】
実施例４：ＭＣＧ－ＳＨの合成
ＭＣＧ－ＳＨは、Ｂａｎｅｒｊｅｅ Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅｃｈｍｅｔｉｕｍ－９９ｍ－ ａｎｄ Ｒｈｅｎｉｕｍ－Ｌａｂｅｌｅｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＳＭＡ），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１（１５），４５０４－４５１７に記載された手順に従って調製した。
ＭＣＧ－ＳＨは、Ｂａｎｅｒｊｅｅ Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅｃｈｍｅｔｉｕｍ－９９ｍ－ ａｎｄ Ｒｈｅｎｉｕｍ－Ｌａｂｅｌｅｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＳＭＡ），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１（１５），４５０４－４５１７に記載された手順に従って調製した。
【0121】
実施例５Ａ：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７の合成
ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ（ＤＭＥＢ、２３ｍｇ、１当量）は、ＰＢＳ中の０．１％のＮａ－アスコルベートの２ｍｌの脱気した溶液（ｗ／ｖ）に溶解した。ＤＭＳＯ０．１ｍＬ中のＰＳＭＡ－６１７－ＳＨ（１４．６ｍｇ、１．０５当量）を添加した。この溶液をＲＴで１～２時間撹拌し、Ｈｉｇｇｉｎｓカラム上で精製した。採取した画分を凍結乾燥して、３７ｍｇのＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７を得、化学的純度は９５％超であった。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１９３６．３（ｍ／ｚ）、９６７．６（ｍ／２）。
【化30】
【0122】
実施例５Ｂ：ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７相同体の合成
ＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７相同体は、上記実施例５Ａに記載のように、ＰＳＭＡ－６１７相同体をＤＯＴＡ－マレイミド－ＥＢで、０．１％のアスコルビン酸ＮａのＰＢＳ溶液の存在下で処理することによって調製した。
【化31】
【0123】
ＰＳＭＡ－６１７相同体を、ｔ－Ｂｕ－ＰＳＭＡ－６１７－アミンの３－（トリチルチオ）プロピオン酸との、実施例３のステップ１に記載の条件下での反応、続いて得られたトリチル誘導体のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での加溶媒分解により調製した。
【0124】
実施例６：ＤＯＴＡ－ＭＣＧの合成
ＪＨＵおよびＤＯＴＡ－マレイミドからＭＣＧ－ＳＨを用いてＥＢ－ＭＣＧを合成した。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１５０１．５（ｍ／ｚ）、７４９．５（ｍ／２）。
ＪＨＵおよびＤＯＴＡ－マレイミドからＭＣＧ－ＳＨを用いてＥＢ－ＭＣＧを合成した。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１５０１．５（ｍ／ｚ）、７４９．５（ｍ／２）。
【化32】
【0125】
実施例７：ＥＢ－ＭＣＧの合成
ＥＢ－ＭＣＧは、ＪＨＵからのＭＣＧ－ＳＨを使用して、ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７について上述したのと同じ方法で合成された。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１５０１．５（ｍ／ｚ）、７４９．５（ｍ／２）。
ＥＢ－ＭＣＧは、ＪＨＵからのＭＣＧ－ＳＨを使用して、ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７について上述したのと同じ方法で合成された。ＬＣ－ＭＳ：［ＭＨ］－＝１５０１．５（ｍ／ｚ）、７４９．５（ｍ／２）。
【化33】
【0126】
実施例８：化合物の標識
４～１０μＬの８６ＹＣｌ３、９０ＹＣｌ３または１７７ＬｕＣｌ３のいずれかを、０．５ｍｌの０．４Ｍの酢酸アンモニウム、ＰＨ５．６で希釈した。次に、選択されたリガンド（ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、ＥＢ－ＭＣＧ、ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７またはＤＯＴＡ－ＭＣＧ）０．１ｍｇを添加し、８０℃で３０分間反応を混合した。生成物の純度は、ｉＴＬＣプレート（Ｆｉｓｈｅｒ）および０．１Ｍのクエン酸、ｐＨ５を現像溶媒として用い、ｒａｄｉｏ－ＴＬＣ（ＡＲ－２０００ Ｂｉｏｓｃａｎスキャナー）によりアッセイした。遊離の放射性同位体、約０．９のＲｆ；所望の標識したリガンドのＲｆは、約０．１であった。
４～１０μＬの８６ＹＣｌ３、９０ＹＣｌ３または１７７ＬｕＣｌ３のいずれかを、０．５ｍｌの０．４Ｍの酢酸アンモニウム、ＰＨ５．６で希釈した。次に、選択されたリガンド（ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、ＥＢ－ＭＣＧ、ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７またはＤＯＴＡ－ＭＣＧ）０．１ｍｇを添加し、８０℃で３０分間反応を混合した。生成物の純度は、ｉＴＬＣプレート（Ｆｉｓｈｅｒ）および０．１Ｍのクエン酸、ｐＨ５を現像溶媒として用い、ｒａｄｉｏ－ＴＬＣ（ＡＲ－２０００ Ｂｉｏｓｃａｎスキャナー）によりアッセイした。遊離の放射性同位体、約０．９のＲｆ；所望の標識したリガンドのＲｆは、約０．１であった。
【0127】
実施例９：細胞培養
ＰＳＭＡ高レベルを発現するように操作したＰＳＭＡ＋ ＰＣ３ ＰＩＰ細胞（ヒト転移性［骨］前立腺癌－Ｄｒ．Ｍａｒｔｉｎ Ｐｏｍｅｒ，ＪＨＵによって本発明者らに提供された）およびＰＳＭＡ ＰＣ３（低いＰＳＭＡレベル）細胞を、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ／１００μｇ／ｍＬ）を添加したＲＰＭＩ １６４０培地中で、５％のＣＯ２中で空気中で３７℃で培養した。
ＰＳＭＡ高レベルを発現するように操作したＰＳＭＡ＋ ＰＣ３ ＰＩＰ細胞（ヒト転移性［骨］前立腺癌－Ｄｒ．Ｍａｒｔｉｎ Ｐｏｍｅｒ，ＪＨＵによって本発明者らに提供された）およびＰＳＭＡ ＰＣ３（低いＰＳＭＡレベル）細胞を、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ／１００μｇ／ｍＬ）を添加したＲＰＭＩ １６４０培地中で、５％のＣＯ２中で空気中で３７℃で培養した。
【0128】
実施例１０：８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７の細胞取り込みおよび内部化
アッセイの２４時間前に、１０５個のＰＣ３－ＰＩＰ細胞／ウェルを、２４ウェルプレートに分布させた。細胞をＰＢＳでＸ２洗浄し、次いで１８．５ＫＢｑ／ウェルの８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７または８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧを、１％（ｗ／ｖ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有する培地０．５ｍＬ中に添加した。各示された時点で、細胞をＰＢＳでＸ２洗浄し、０．１ＭのＮａＯＨで溶解した。内在化は、０．５ｍＬの酸性緩衝液（５０ｍＭのグリシン、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．８）と共に１分間インキュベートし、Ｘ２洗浄し、溶解することにより、膜結合トレーサーを除去した後に測定した。細胞溶解物の放射能を、γ－カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。細胞取り込みおよび細胞内移行値は、加えた放射能のパーセントとして標準化した。各時点を、３つ１組で測定した。遮断試験のために、放射能と共に、１０μｇの標識していないリガンドを、ウェルに加えた。
アッセイの２４時間前に、１０５個のＰＣ３－ＰＩＰ細胞／ウェルを、２４ウェルプレートに分布させた。細胞をＰＢＳでＸ２洗浄し、次いで１８．５ＫＢｑ／ウェルの８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７または８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧを、１％（ｗ／ｖ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有する培地０．５ｍＬ中に添加した。各示された時点で、細胞をＰＢＳでＸ２洗浄し、０．１ＭのＮａＯＨで溶解した。内在化は、０．５ｍＬの酸性緩衝液（５０ｍＭのグリシン、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．８）と共に１分間インキュベートし、Ｘ２洗浄し、溶解することにより、膜結合トレーサーを除去した後に測定した。細胞溶解物の放射能を、γ－カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。細胞取り込みおよび細胞内移行値は、加えた放射能のパーセントとして標準化した。各時点を、３つ１組で測定した。遮断試験のために、放射能と共に、１０μｇの標識していないリガンドを、ウェルに加えた。
【0129】
実施例１１：標的放射線治療後の病理組織学的染色
上記の各群からの腫瘍組織を、種々の時点で採取し、Ｚ－ＦＩＸ（Ａｎａｔｅｃ Ｌｔｄ）で室温で凍結または保存した。厚さ１０μｍの切片を、クライオマイクロトームを用いてスライド上にマウントした。Ｋｉ－６７、ＴＵＮＥＬおよびＨ＆Ｅ染色は、本発明者らの以前の研究に従って実施した（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．“Ｎｏｖｅｌ‘Ａｄｄ－Ｏｎ”Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ Ｃｏｎｆｅｒｓ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｓ Ｄｒｕｇｓ ｔｏ ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７，５８（４），５９０－５９７を参照）。Ｋｉ６７陽性核の数を、スライド当たり５～６視野、各マウスについて５スライドおよび群当たり３マウスに関して視覚計数により分析した。定量は、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて行った。
上記の各群からの腫瘍組織を、種々の時点で採取し、Ｚ－ＦＩＸ（Ａｎａｔｅｃ Ｌｔｄ）で室温で凍結または保存した。厚さ１０μｍの切片を、クライオマイクロトームを用いてスライド上にマウントした。Ｋｉ－６７、ＴＵＮＥＬおよびＨ＆Ｅ染色は、本発明者らの以前の研究に従って実施した（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．“Ｎｏｖｅｌ‘Ａｄｄ－Ｏｎ”Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ Ｃｏｎｆｅｒｓ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｓ Ｄｒｕｇｓ ｔｏ ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７，５８（４），５９０－５９７を参照）。Ｋｉ６７陽性核の数を、スライド当たり５～６視野、各マウスについて５スライドおよび群当たり３マウスに関して視覚計数により分析した。定量は、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて行った。
【0130】
実施例１２：腫瘍モデル
動物プロトコルは、ＮＩＨ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＡＣＵＣ）により承認された。雄の無胸腺ヌード／ヌードマウス（５～６週）（Ｅｎｖｉｇｏ）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｓｉｇｍａ）１：１中のＰＣ３－ＰＩＰまたはＰＣ３細胞のいずれかの５×１０６個の細胞を右肩に接種した。
動物プロトコルは、ＮＩＨ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＡＣＵＣ）により承認された。雄の無胸腺ヌード／ヌードマウス（５～６週）（Ｅｎｖｉｇｏ）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｓｉｇｍａ）１：１中のＰＣ３－ＰＩＰまたはＰＣ３細胞のいずれかの５×１０６個の細胞を右肩に接種した。
【0131】
実施例１３：生体内分布
４８時間の時点での最終スキャンの後、腫瘍、心臓、肺、肝臓、脾臓、胃、腸、膵臓、腎臓、筋肉、骨および血液を、安楽死させたマウスから採取し、秤量し、ガンマカウンターで測定した。結果は、組織１ｇ当たりの注射した投与のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として標準化される。
４８時間の時点での最終スキャンの後、腫瘍、心臓、肺、肝臓、脾臓、胃、腸、膵臓、腎臓、筋肉、骨および血液を、安楽死させたマウスから採取し、秤量し、ガンマカウンターで測定した。結果は、組織１ｇ当たりの注射した投与のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として標準化される。
【0132】
実施例１４：８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７の腫瘍取り込み
ＰＥＴアッセイは、腫瘍体積が約２００～３５０ｍｍ３に達したとき、腫瘍細胞接種後１４～１７日で実施された。マウスに、０．５ｎｍｏｌ（高い比活性）の８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝５、ＰＣ３－ＰＩＰ；ｎ＝５、ＰＣ３）または８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧ（ｎ＝５、ＰＣ３－ＰＩＰ；ｎ＝５、ＰＣ３）のいずれかを静脈内注射し、注射後１、４、２４および４８時間に１０～２０分間スキャンした（ｐ．ｉ．）。ＰＥＴ検査は、Ｎａｎｏｓｃａｎ ＰＥＴ／ＣＴ（Ｍｅｄｉｓｏ）およびＩｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）スキャナーで取得した。３Ｄ秩序化サブセット期待最大アルゴリズムを用いて画像を再構成し、ＡＳＩＰＲＯ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いてＲＯＩを描出し、校正係数を乗じて、臓器（腫瘍および腎臓）における％注射用量／ｍＬ（平均値または最大値）を与えた。仮定では、１ｍＬの密度は１ｇの組織（肺については除外）に等しい。
ＰＥＴアッセイは、腫瘍体積が約２００～３５０ｍｍ３に達したとき、腫瘍細胞接種後１４～１７日で実施された。マウスに、０．５ｎｍｏｌ（高い比活性）の８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝５、ＰＣ３－ＰＩＰ；ｎ＝５、ＰＣ３）または８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧ（ｎ＝５、ＰＣ３－ＰＩＰ；ｎ＝５、ＰＣ３）のいずれかを静脈内注射し、注射後１、４、２４および４８時間に１０～２０分間スキャンした（ｐ．ｉ．）。ＰＥＴ検査は、Ｎａｎｏｓｃａｎ ＰＥＴ／ＣＴ（Ｍｅｄｉｓｏ）およびＩｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）スキャナーで取得した。３Ｄ秩序化サブセット期待最大アルゴリズムを用いて画像を再構成し、ＡＳＩＰＲＯ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いてＲＯＩを描出し、校正係数を乗じて、臓器（腫瘍および腎臓）における％注射用量／ｍＬ（平均値または最大値）を与えた。仮定では、１ｍＬの密度は１ｇの組織（肺については除外）に等しい。
【0133】
実施例１５～１７：８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧ、８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７および８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧの腫瘍取り込み
８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧ、８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、および８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧの腫瘍取り込みは、前述の例の８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７について記載されている手順に従って決定された。
８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧ、８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、および８６Ｙ－ＥＢ－ＭＣＧの腫瘍取り込みは、前述の例の８６Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７について記載されている手順に従って決定された。
【0134】
実施例１８：マウスにおけるＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７による放射線治療
ＰＣ３－ＰＩＰ異種移植片において腫瘍治療試験を実施して、９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、１７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７対生理食塩水および９０Ｙ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７または１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７の静脈内注射（複数可）の治療効果を評価した。この試験は、Ｐｃ３－ＰＩＰ異種移植片の接種７日後に開始され、その際全てのマウスは、約１００～１５０ｍｍ３の腫瘍体積を有していた。マウスを、以下のようにいくつかのグループに分けた；（１）生理食塩水（ｎ＝４）、（２）７．４ＭＢｑ ９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（３）３．７ＭＢｑ ９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（３）１８．５ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（４）７．４ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（５）７．４ＭＢｑ ９０Ｙ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）および１８．５ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）。マウスには、０日目（処置の開始）に単回注射を行った。すべての生きているマウスを、５０日間モニターした。マウスの体重および腫瘍体積を、実験を通して３～７日ごとにモニターした。腫瘍体積の計算に用いた式は、Ｖ＝幅２×長さ／２であった。
ＰＣ３－ＰＩＰ異種移植片において腫瘍治療試験を実施して、９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７、１７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７対生理食塩水および９０Ｙ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７または１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７の静脈内注射（複数可）の治療効果を評価した。この試験は、Ｐｃ３－ＰＩＰ異種移植片の接種７日後に開始され、その際全てのマウスは、約１００～１５０ｍｍ３の腫瘍体積を有していた。マウスを、以下のようにいくつかのグループに分けた；（１）生理食塩水（ｎ＝４）、（２）７．４ＭＢｑ ９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（３）３．７ＭＢｑ ９０Ｙ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（３）１８．５ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（４）７．４ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＥＢ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）、（５）７．４ＭＢｑ ９０Ｙ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）および１８．５ＭＢｑ １７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＰＳＭＡ－６１７（ｎ＝６）。マウスには、０日目（処置の開始）に単回注射を行った。すべての生きているマウスを、５０日間モニターした。マウスの体重および腫瘍体積を、実験を通して３～７日ごとにモニターした。腫瘍体積の計算に用いた式は、Ｖ＝幅２×長さ／２であった。
【0135】
研究所ＡＣＵＣによって定義された終点基準は、１５％を超える体重減少、１８００ｍｍ３超の腫瘍体積、腫瘍の活性な潰瘍、または疼痛もしくは不安を示す異常行動であった。これらの定義はＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ解析にも同様に用いた。
【0136】
実施例１９：マウスにおけるＥＢ－ＭＣＧおよびＤＯＴＡ－ＭＣＧによる放射線療法
ＥＢ－ＭＣＧ／ＤＯＴＡ－ＭＣＧ誘導体を用いた実験は、前の実施例で述べた手順と同様に行った。
ＥＢ－ＭＣＧ／ＤＯＴＡ－ＭＣＧ誘導体を用いた実験は、前の実施例で述べた手順と同様に行った。
【0137】
本発明の概念は、例示的な原理および実施形態の観点から記載されているが、当業者は、以下の特許請求の範囲により定義される本開示の範囲および精神から逸脱することなく、記載されるものに代えて、変形がなされ、等価物が代用され得ることを認識するであろう。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
