特許 7450592 癌治療におけるＦＧＦＲ２阻害剤単独または免疫刺激剤との組み合わせ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-07

(45)【発行日】2024-03-15

(54)【発明の名称】癌治療におけるＦＧＦＲ２阻害剤単独または免疫刺激剤との組み合わせ

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240308BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240308BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240308BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240308BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240308BHJP

   A61P 15/14 20060101ALI20240308BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240308BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240308BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20240308BHJP

   C07K 14/71 20060101ALI20240308BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240308BHJP

   C12Q 1/6841 20180101ALI20240308BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240308BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240308BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240308BHJP

   C12N 15/52 20060101ALN20240308BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K38/17

A61K47/64

A61K47/60

A61K45/06 ZNA

A61P35/00

A61P13/10

A61P1/04

A61P43/00 121

A61P37/04

A61P15/14

C07K19/00

C07K16/00

C07K16/30

C07K14/71

C07K14/705

C12Q1/6841 Z

G01N33/53 Y

G01N33/53 M

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/52 Z

【請求項の数】 10

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2021195960

(22)【出願日】2021-12-02

(62)【分割の表示】P 2018526590の分割

【原出願日】2016-11-22

(65)【公開番号】P2022046480

(43)【公開日】2022-03-23

【審査請求日】2021-12-24

(31)【優先権主張番号】62/258,731

(32)【優先日】2015-11-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/314,174

(32)【優先日】2016-03-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/379,094

(32)【優先日】2016-08-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】515302853

【氏名又は名称】ファイヴ プライム セラピューティクス インク

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ピアース， クリステン

(72)【発明者】

【氏名】パワーズ， ジェニン

(72)【発明者】

【氏名】パレンシア， セルバンド

(72)【発明者】

【氏名】シコルスキ， ロバート

(72)【発明者】

【氏名】ゴーダッシ， マジッド

(72)【発明者】

【氏名】クリシュナン， カルティーク

【審査官】平井 裕彰

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１５／０１７６００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１５／１１２９００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５３４９２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１３／１５４２０６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特許第７３４９７８７（ＪＰ，Ｂ２）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ３９／００～３９／４４

４５／００

Ａ６１Ｐ １／００～４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者からの腫瘍試料において、胃癌又は膀胱癌がＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを腫瘍試料の細胞における２＋又は３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）シグナルにより決定することによって、非フコシル化抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を用いた治療に対して応答する胃癌又は膀胱癌患者を同定することを助けるための方法であって、
治療が、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することをさらに含み、
前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、方法。

【請求項2】

少なくとも１０％の腫瘍細胞、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、又は５０％の腫瘍細胞が、２＋又は３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

試料において、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されているかどうかを決定することを更に含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

ａ）癌が、胃癌であって、かつ、癌が少なくとも１０％の腫瘍細胞において２＋若しくは３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する；
ｂ）癌が胃癌であって、かつ、癌が少なくとも１０％の腫瘍細胞において３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有する；
ｃ）癌が胃癌であって、癌が少なくも１０％の腫瘍細胞において３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ ＩＨＣシグナルを有し、かつＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されている；
ｄ）癌が胃癌であって、癌が少なくも１０％の腫瘍細胞において３＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂＩ ＨＣシグナルを有し、かつＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されていない；
ｅ）癌が胃癌であって、かつ癌が少なくも１０％の腫瘍細胞において２＋のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂＩ ＨＣシグナルを有する；
ｈ）癌が膀胱癌であって、かつ癌が２０又はそれ以上のＨスコアを有する；
ｉ）癌が膀胱癌であって、かつ癌が１０～１９のＨスコアを有する；又は
ｊ）癌が膀胱癌であって、かつ癌が１０未満のＨスコアを有する、
請求項１～３の何れか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、以下の特性の１つ以上を有する：
ａ．ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに、ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに対するよりも高い親和性で結合する、又はヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない；
ｂ．ヒトＦＧＦ２のヒトＦＧＦＲ２に対する結合を阻害する；
ｃ．ヒトＦＧＦ７のヒトＦＧＦＲ２に対する結合を阻害する；
ｄ.マウス腫瘍モデルにおけるヒト腫瘍の増殖を阻害する；
ｅ．ＡＤＣＣ活性を誘発する；並びに
ｆ.対照と比較して、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋陽性Ｔ細胞、ＣＤ４＋陽性Ｔ細胞、ＣＤ８＋陽性Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる、
請求項１～４の何れか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、
ａ．配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；又は
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１～５の何れか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、ヒト化されているか、又はＦａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２から選択される抗原結合断片である、請求項５又は６に記載の方法。

【請求項8】

前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、以下の特性の１つ以上を有する：
ａ．Ａｓｎ２９７位のフコースを欠いている；
ｂ．κ軽鎖定常領域を含む；
ｃ．Ａｓｎ２９７位でフコシル化された同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する；並びに
ｄ．Ａｓｎ２９７位でフコシル化された同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する、
請求項６又は７に記載の方法。

【請求項9】

治療が、前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、１０、１５、２０、２５、若しくは３０ｍｇ／ｋｇの用量、又は、６～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、若しくは６～１５ｍｇ／ｋｇ等のそれらのｍｇ／ｋｇ用量のいずれか２つで囲まれた範囲の用量で投与することを含む、請求項１～８の何れか一項に記載の方法。

【請求項10】

胃癌又は膀胱癌患者が非フコシル化抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を用いた治療に応答するかどうかを決定するためのキットであって、キットが、患者からの腫瘍試料において、胃癌又は膀胱癌がＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定するための薬剤を含み、治療が、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することをさらに含み、前記抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、以下の３つの米国特許仮出願：２０１５年１１月２３日に出願された米国特許仮出願第６２／２５８，７３１号、２０１６年３月２８日に出願された同第６２／３１４，１７４号、及び２０１６年８月２４日に出願された同第６２／３７９，０９４号の利益を主張するものであり、当該出願は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、電子形式における配列表と一緒に出願されている。配列表は、２０１６年１１月１７日に作成され、１０３，５１７バイトのサイズである「２０１６－１１－１７＿０１１３４－００４６－００ＰＣＴ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と題されたファイルとして提供されている。電子形式の配列表の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0003】

本出願は、癌の治療における線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）阻害剤の使用、場合によっては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤などの免疫刺激剤との組み合わせに関する。

【背景技術】

【0004】

線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーメンバーは、様々な程度で異なるＦＧＦＲに結合する異なるＦＧＦにより、４種の公知のチロシンキナーゼ受容体である線維芽細胞増殖因子受容体１～４（ＦＧＦＲ１～４）、及びそれらのアイソフォームに結合する（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：１５６９４，２００６）。ヒトＦＧＦＲ２のタンパク質配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋローカスＡＦ４８７５５３に提供されている。各ＦＧＦＲは、３種の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、一回膜貫通へリックス、及び細胞内触媒キナーゼドメインからなる（Ｍｏｈａｍｍａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｓ，１６：１０７，２００５）。ＦＧＦは、主に受容体のＤ２及びＤ３における領域を介して受容体に結合する。Ｄ１及びＤ２の間のリンカーには、「アシッド・ボックス（ａｃｉｄ ｂｏｘ）」（ＡＢ）と呼ばれる連続した酸性アミノ酸のストレッチがある。Ｄ１及びＡＢを含む領域は、リガンドへの結合により緩和される、受容体の自己制御に関与すると考えられている。

【0005】

ＦＧＦＲは、様々なアイソフォームをもたらす、そのｍＲＮＡの複数の選択的スプライシングにより特徴づけられる（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１５２９２，１９９６；ＦＧＦＲ２及びそのアイソフォームについてＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｐ２１８０２及びアイソフォームＰ２１８０２－１からＰ２１８０２－２０も参照されたい）。とりわけ、３種全てのＩｇドメインを含むフォーム（αアイソフォーム）、またはＤ１を含まず、Ｄ２及びＤ３ドメインの２種のＩｇドメインのみを含むフォーム（βアイソフォーム）がある。ＦＧＦＲ１～ＦＧＦＲ３において、全てのフォームが、ＩＩＩａと示されるＤ３の前半部分を含むが、２つの代替的エクソンがＤ３の後半部分に使用されることができ、これにより、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃフォームが得られる。ＦＧＦＲ２について、これらは、それぞれ、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ（または、単にＦＧＦＲ２ｂ及びＦＧＦＲ２ｃ）と示され；対応するベータフォームは、ＦＧＦＲ２（ベータ）ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２（ベータ）ＩＩＩｃと示される。ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ（Ｋ－ｓａｍ－Ｉとも示される）は、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の両方によく結合するもののＫＧＦファミリーメンバーには結合しないが、ＦＧＦＲ２（Ｋ－ｓａｍ－ＩＩとも示される）のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂフォームは、ＦＧＦ１及びＫＧＦファミリーメンバー（ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０、及びＦＧＦ２２）の両方に対し高親和性受容体である（Ｍｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２４６，１９９２）。実に、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂが、ＫＧＦファミリーメンバーに対する唯一の受容体であり（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）、そのため、ＫＧＦＲと示されている。

【0006】

ＦＧＦＲ及びそのアイソフォームは、様々な組織において、異なる発現をする。ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ（ならびに、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ３のＩＩＩｂフォーム）は、上皮組織に発現するが、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃは、間葉組織に発現する（Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６０７６，１９９２；Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）。これらの受容体の特定のＦＧＦリガンドは、反対の発現パターンを有する。従って、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ１０、及びＦＧＦ２２を含むＫＧＦサブファミリーメンバーはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂのみに結合し（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｏｐ．ｃｉｔ．）、かつ、間葉組織に発現し、よって、上皮細胞のパラクラインエフェクターであってもよい（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）。一方、ＦＧＦ４サブファミリーメンバーＦＧＦ４～６は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合し、かつ、上皮及び間葉系の両方において発現し、よって、オートクラインまたはパラクライン機能のいずれかを有していてもよい。ＦＧＦＲ２のアイソフォーム及びそのリガンドの発現パターンのために、ＦＧＦＲ２は、上皮－間葉相互作用における役割を果たし（Ｆｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２０３：２２３，１９９５）、そのため、マウスにおけるＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂのノックアウトが、胚性の欠陥及び死亡を引き起こす（Ｄｅ Ｍｏｅｒｌｏｏｚｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２７：４８３，２０００）。

【0007】

ＫＧＦ（ＦＧＦ７）及びＫＧＦＲ（ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ）は、多くの膵癌において、過剰発現しており（Ｉｓｈｉｗａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５３：２１３，１９９８）、それらの共発現は、予後の悪さと相関している（Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７０：１９６４，２００７）。ＦＧＦＲ２遺伝子の体細胞突然変異は、子宮内膜（子宮）癌の大規模パネルの１２％に見出され、様々な試験ケースにおいて、腫瘍細胞生存のために必須あった（Ｄｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：８７１３，２００８）。２種の腫瘍において、ＦＧＦＲ２突然変異は、アペール症候群に関連する、同じＳ２５２Ｗ置換であることが見出された。ＦＧＦＲ２の増幅と過剰発現は、予後が著しく悪い、未分化型びまん性胃癌と関連し、小分子化合物によるＦＧＦＲ２活性の阻害は、そのような癌細胞の増殖を強く阻害した（Ｋｕｎｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：２３４０，２００８；Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３１：１５３０，２００６）。

【0008】

ＦＧＦＲ２の阻害剤は、抗体及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤドメインまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子を含んでもよい。例えば、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号には、例えば、ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合するが、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃにあまりよく結合しないかまたは結合しない、及びその逆も同様である、モノクローナル抗体が記載されている。米国特許公開第２０１５－００５０２７３Ａ１号には、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する、ある特定の非フコシル化抗体が記載されている。米国特許公開第ＵＳ２０１３－０３２４７０１Ａ１号には、例えば、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃの細胞外ドメイン及び融合パートナーを含む、特定のＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子が記載されている。追加のＦＧＦＲ ＥＣＤ融合分子が、米国特許第８，３３８，５６９Ｂ２号に記載されている。

【0009】

癌の遺伝子変化は、抗腫瘍免疫を媒介することができる多様なセットの抗原を提供する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した抗原認識によってＴ細胞応答が開始され、これは、活性化シグナルと阻害シグナルの間のバランスによって調節される。阻害シグナル、すなわち、「免疫チェックポイント」とは、自己免疫を防止することにより正常組織に重要な役割を果たす。免疫チェックポイントタンパク質の上方調節により、癌は抗腫瘍免疫を回避することができ得る。２つの免疫チェックポイントタンパク質は、臨床癌免疫療法、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）及びプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）の焦点となっている。抗ＣＴＬＡ－４抗体及び抗ＰＤ－１抗体は、転移性黒色腫の治療のために承認されており、他の癌について現在臨床試験中である。ＰＤ－１のリガンドに向けた抗ＰＤ－Ｌ１抗体についても、現在臨床開発中である。

【0010】

ＦＧＦＲシグナル伝達の阻害は、抗腫瘍免疫を改善し、乳癌の転移を損なうことが報告されている（例えば、Ｔ．Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．１４３：４３５－４４６（２０１４）を参照されたい）。抗ＦＧＦＲ２抗体は、例えば、胃癌のモデルでも試験されている。しかしながら、ＦＧＦＲ２阻害剤をＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤などの免疫チェックポイント阻害剤と同時投与することが腫瘍モデルにおける治療をさらに改善させるかどうかは未知であった。本明細書の発明者らは、ＦＧＦＲ２阻害抗体とＰＤ－１阻害抗体の組み合わせが、マウス乳房腫瘍モデルにおいて少なくとも相加効果を示すことを実証した。本発明者らは、ＦＧＦＲ２阻害抗体のみによる治療が、マウス乳房腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１発現細胞、ＮＫ細胞、ならびにＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の増加につながり、腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加をもたらすことをさらに示す。加えて、単独で与えられたＦＧＦＲ２阻害剤は、ヒト膀胱癌対象にも恩恵を与えている。本明細書の結果は、総合すれば、ＦＧＦＲ２阻害剤が腫瘍微小環境を変化させることで、単独またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤と組み合わせて殺腫瘍免疫応答を増強し得ることを示している。

【発明の概要】

【0011】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤と組み合わせて、抗ＦＧＦＲ２抗体またはＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子などのＦＧＦＲ２阻害剤を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－１融合分子、またはＰＤ－１ポリペプチドなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、「他の免疫刺激剤との組み合わせ」と題された以下の節に記載の薬剤の１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを認識する抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂよりも低い親和性で結合する、またはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ、及び、Ｆｃドメイン、アルブミン、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの融合パートナーを含むＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤がＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＰＤ－１ポリペプチドであるが、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＰＤ－１融合分子である。

【0012】

本明細書に記載の方法及び組成物の実施形態のいずれかでは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、以下の特徴を有してもよい。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）から選択される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、融合分子である。いくつかの実施形態では、融合分子は、ＡＭＰ－２２４である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＡＵＲ－０１２などのＰＤ－１ポリペプチドである。

【0013】

抗ＰＤ－１抗体を伴う本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、抗ＰＤ－１抗体は、ヒト化抗体であってもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、抗ＰＤ－１抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２から選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、抗ＰＤ－１抗体は、キメラ抗体であってもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、抗ＰＤ－１抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、抗ＰＤ－１抗体は、ＩｇＧであってもよい。本明細書に記載の方法のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２であってもよい。

【0014】

本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤は、以下の特徴を有してもよい。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＦＧＦＲ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体（本明細書で、αＦＧＦＲ２ｂとも表記される）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりも高い親和性で結合する、またはあるいは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦＧＦ２及び／またはＦＧＦ７のＦＧＦＲ２への結合を阻害する。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載される、モノクローナル抗体ＧＡＬ－ＦＲ２１、ＧＡＬ－ＦＲ２２、またはＧＡＬ－ＦＲ２３の重鎖及び軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３アミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、その重鎖可変ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号５のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号２のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３のアミノ酸配列を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び（ｖｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖可変ドメインが、配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３９のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖可変ドメインが、配列番号４３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いている。いくつかの実施形態では、抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、インビトロ及び／またはインビボでの増強されたＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害性）活性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、対照と比較して（例えば、ＦＧＦＲ２を標的にしない対照抗体と比較して）、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる。

【0020】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子などのＦＧＦＲ２ ＥＣＤである。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、Ｆｃドメイン、アルブミン、またはＰＥＧなどの融合パートナーを含んでもよい。

【0021】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２、ならびに活性化突然変異を有するＦＧＦＲ２突然変異体、例えば、いくつかの癌細胞で見られるＦＧＦＲ２－Ｓ２５２Ｗ突然変異に結合することができる。

【0022】

ＦＧＦＲ２抗体を伴う本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ヒト化抗体であってもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２から選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、キメラ抗体であってもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＧであってもよい。本明細書に記載の方法のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってもよい。

【0023】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２０、または３０ｍｇ／ｋｇの用量で、またはこれらの用量のいずれか２つで囲まれた範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、もしくは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、またはこれらの用量のいずれか２つで囲まれた範囲、例えば、０．５～１０ｍｇ／ｋｇの範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、１、２、３、４、または５週間に少なくとも１回投与される。

【0024】

いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の存在下または不在下のいずれかで、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される。例えば、過剰発現は、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定されてもよい。

【0025】

いくつかの実施形態では、癌は、胃癌、乳癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌（胃食道接合部腺癌を含む）、及び子宮内膜癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、外科手術、化学療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせから選択される治療後の再発または進行である。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーである。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤療法を予め受けている。

【0026】

いくつかの実施形態では、癌の治療方法は、白金剤、パクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、ドセタキセル、ゲムシタビン、カペシタビン、イリノテカン、エピルビシン、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ、ロイコボリン、フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、及びドキソルビシン塩酸塩から選択される少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、白金剤は、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンから選択される。いくつかの実施形態では、癌の治療方法は、パクリタキセルを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、癌の治療方法は、シスプラチン及び／または５－ＦＵを投与することをさらに含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、同時または順次に投与される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び免疫刺激剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の用量の免疫刺激剤をＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に投与する。いくつかの実施形態では、対象は、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に完全な免疫刺激剤療法過程を受けた。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、第２の免疫刺激剤療法過程中に投与される。いくつかの実施形態では、対象が、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの用量の免疫刺激剤を受けた。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの用量の免疫刺激剤は、ＦＧＦＲ２阻害剤と同時に投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の用量のＦＧＦＲ２阻害剤を免疫刺激剤の投与前に投与する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫刺激剤の投与前に少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの用量のＦＧＦＲ２阻害剤を受けてもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの用量のＦＧＦＲ２阻害剤は、免疫刺激剤と同時に投与される。

【0028】

いくつかの実施形態では、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の投与は、腫瘍増殖の付加的または相乗的阻害のいずれかをもたらす。いくつかの実施形態では、モデルは、乳癌モデルである。いくつかの実施形態では、モデルは、４Ｔ１細胞を含む。

【0029】

上記実施形態の方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせは、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を少なくとも１週、１０日間、または２週間の期間にわたって、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害し得る。上記実施形態の方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤と免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせの対象への投与は、対象における少なくとも１つの腫瘍体積を、例えば、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、または１年の期間にわたって少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少し得る。

【0030】

上記実施形態の方法のいずれかでは、異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤の投与は、対照と比較して、腫瘍組織中のＮＫｐ４６＋細胞などのＮＫ細胞の増加、ＰＤ－Ｌ１発現細胞の増加、Ｆ４８０＋マクロファージなどのマクロファージの増加、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の１つ以上の増加、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加を、少なくとも１日、少なくとも４日、少なくとも１週、少なくとも１０日、または少なくとも２週の期間にわたって、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％示し得る。いくつかの実施形態では、マウス同系腫瘍モデルは、４Ｔ１乳腺腫瘍モデルである。いくつかの実施形態では、対照は、モデルにおける腫瘍増殖を阻害しないビヒクルまたはＩｇ－Ｆｃ分子または別の化合物である。

【0031】

また、本明細書で提供されるのは、癌を有する対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、及び／またはＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞及び／またはマクロファージの数を増加させる方法、及び／または、前段落に記載されるＦＧＦＲ２抗体のいずれかなどのＦＧＦＲ２阻害抗体の有効量を、癌を有する対象に投与することを含む、前記対象の腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる方法である。対照と比較して、腫瘍組織中のＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の１つ以上の増加、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加は、少なくとも１日、少なくとも４日、少なくとも１週、少なくとも１０日、または少なくとも２週の期間にわたって、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の特性の１つ以上を有してもよい：（ａ）Ａｓｎ２９７位でフコースを欠いている；（ｂ）κ軽鎖定常領域を含む；（ｃ）ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む；（ｄ）Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性をインビトロで有する；及び（ｅ）Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、対照と比較して（例えば、ＦＧＦＲ２を標的にしない対照抗体と比較して）、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象における腫瘍増殖を阻害する、または少なくとも１つの腫瘍体積を減少させる。いくつかの実施形態では、対象が、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌（胃食道接合部腺癌を含む）、及び子宮内膜癌を罹患している。いくつかの実施形態では、方法は、ＦＧＦＲ２抗体の投与後、対象から少なくとも１つの腫瘍試料を得て、試料中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、及び／またはＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を決定すること、ならびに、これらの種類の細胞の１つ以上の数がＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対してまたは対象由来の非腫瘍試料に対して増加している場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＦＧＦＲ２抗体の投与後、対象から少なくとも１つの腫瘍試料を得て、試料中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を決定すること、及び、比がＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対してまたは対象からの非腫瘍試料に対して増加している場合、少なくとも１つを対象に投与することをさらに含む。これらの方法のうちの少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、少なくとも１つのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、前段落に記載されるもの、または「他の免疫刺激剤との組み合わせ」と題された以下の節に記載されるもののいずれかであってもよい。いくつかの実施形態では、患者は、ＦＧＦＲ２阻害剤、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及び少なくとも１つの他の免疫刺激剤の組み合わせを投与してもよい。

【0032】

また、本明細書で提供されるのは、ＦＧＦＲ２阻害剤を対象に投与すること、及び、対象が、対照に対して、例えば、ＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対して、または対象からの非腫瘍試料に対して、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数が増加していると判断される場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法である。また、本明細書で提供されるのは、ＦＧＦＲ２阻害剤を対象に投与すること、及び、対象が、対照に対して、例えば、ＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対して、または対象からの非腫瘍試料に対して、リンパ系細胞対骨髄系細胞の比が増加していると判断される場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法である。そのような方法では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び免疫刺激剤は、前段落に記載されるもの、または「他の免疫刺激剤との組み合わせ」と題された以下の節に記載されるもののいずれかであってもよい。さらに、ＦＧＦＲ２及び免疫刺激剤の投与は、少なくとも１用量のＦＧＦＲ２阻害剤が投与されるまで免疫刺激剤の投与を開始しない前述の方法に従ってもよい。そのような場合、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞、リンパ系、及び／または骨髄系細胞の数を決定する試験は、例えば、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与開始後であるが、ＦＧＦＲ２と免疫刺激剤の併用投与の開始前に行ってもよい。

【0033】

本明細書に記載のＦＧＦＲ２阻害剤のいずれか、及び本明細書に記載の免疫刺激剤のいずれかを含む組成物も提供される。そのような組成物では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤は、別々の容器もしくは同じ容器の別々の区画に位置してもよく、またはあるいは、同じ容器もしくは区画に一緒に混合されてもよい。そのような組成物は、例えば、上述の癌のいずれなど癌の治療に使用してもよい。いくつかの実施形態では、癌の治療で使用するための説明書などの取扱説明書も含み得る。

【0034】

また、本明細書で提供されるのは、ＦＧＦＲ２阻害剤を投与することを含み、阻害剤は、増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦＧＦＲ２抗体である、癌対象の腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１つ以上の数を増加させる方法である。いくつかのそのような実施形態では、免疫刺激剤は、ＦＧＦＲ２抗体と共に投与されない。いくつかのそのような実施形態では、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２抗体の投与は、対照と比較して、腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の１つ以上の数を増加させる、及び／または腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる。いくつかのそのような実施形態では、対象は、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌（胃食道接合部腺癌を含む）、または子宮内膜癌、例えば、膀胱癌を罹患している。

【0035】

上記方法では、ＦＧＦＲ２抗体は、以下の特性の１つ以上を有してもよいＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体であり得る：（ａ）ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりも高い親和性で結合する、またはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない；（ｂ）ＦＧＦ２及び／またはＦＧＦ７のヒトＦＧＦＲ２への結合を阻害する；（ｃ）マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおけるヒト腫瘍の増殖を阻害する；（ｄ）ＡＤＣＣ活性を誘発する；（ｅ）増強されたＡＤＣＣ活性を有する；及び（ｆ）非フコシル化される。

【0036】

上記方法のいくつかの実施形態では、、ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；ならびに軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0037】

場合によっては、ＦＧＦＲ２抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＦＧＦＲ２抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＦＧＦＲ２抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含み、及び／またはＦＧＦＲ２抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＦＧＦＲ２抗体の重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＦＧＦＲ２抗体の軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＦＧＦＲ２抗体の重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、及び／またはＦＧＦＲ２抗体の軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＦＧＦＲ２抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒトである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２から選択される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、以下の特性の１つ以上を有する：（ａ）Ａｓｎ２９７位でフコースを欠いている；（ｂ）κ軽鎖定常領域を含む；（ｃ）ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む；（ｄ）Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性をインビトロで有する；及び（ｅ）Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、対照と比較して（例えば、ＦＧＦＲ２を標的にしない対照抗体と比較して）、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる。

【0038】

この概要節に記載される方法または使用のいずれかでは、癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子の増幅の存在下または不在下のいずれかでＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現すると予め判断されていてもよい。あるいは、この概要節に記載される方法または使用のいずれかでは、方法は、癌がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうか判断する、及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子が腫瘍細胞で増幅されるかどうか判断するために、例えば、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に対象の癌を試験することをさらに含んでもよい。いずれの場合でも、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂは、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって任意に決定されてもよく、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、例えば、ＦＧＦＲ２遺伝子座及びＦＧＦＲ２遺伝子が位置する染色体１０セントロメアのプローブを用いて、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって任意に決定されてもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１０％の腫瘍細胞、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の２以上の比は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を示す。

【0039】

患者が胃癌または膀胱癌を罹患しているいくつかの実施形態では、対象は、以下のプロファイルの１つを有すると予め決定されていてもよく、またはあるいは、治療方法は、患者がＦＧＦＲ２発現／遺伝子増幅に対して以下のプロファイルの１つに適合するかどうかを決定することを含み、以下のプロファイルは、治療に対して期待される応答性のレベルを示し得る：ａ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｂ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル、ならびにＦＧＦＲ２遺伝子の増幅；ｃ）胃癌対象の場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子を増幅せずに、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｄ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋または２＋のＩＨＣシグナル；ｅ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナル；ｆ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナル；ｇ）膀胱癌対象の場合には、２０を超えるＨスコア；ｈ）膀胱癌対象の場合には、１０～１９のＨスコア；ｉ）膀胱癌対象の場合には、１０未満のＨスコア。

【0040】

本開示は、上述のＦＧＦＲ２阻害剤、治療、及び使用のいずれかに対する応答性を決定する方法も提供する。そのような方法は、癌がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうか判断する、及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子が腫瘍細胞で増幅されるかどうか判断するために、対象の癌を試験することを含んでもよい。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって任意に決定されてもよく、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、例えば、ＦＧＦＲ２遺伝子座及びＦＧＦＲ２遺伝子が位置する染色体１０セントロメアのプローブを用いて、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって任意に決定されてもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１０％の腫瘍細胞、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルは、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の２以上の比は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を示す。

【0041】

患者が胃癌または膀胱癌を罹患しているいくつかの実施形態では、方法は、患者の癌が、治療またはＦＧＦＲ２阻害剤組成物に対する応答性を示し得る以下のカテゴリーの１つに該当するかどうかを決定することを含んでもよい：ａ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｂ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル、ならびにＦＧＦＲ２遺伝子の増幅；ｃ）胃癌対象の場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子を増幅せずに、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｄ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋または２＋のＩＨＣシグナル；ｅ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナル；ｆ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナル；ｇ）膀胱癌対象の場合には、２０を超えるＨスコア；ｈ）膀胱癌対象の場合には、１０～１９のＨスコア；ｉ）膀胱癌対象の場合には、１０未満のＨスコア。

【0042】

上記の一般的な説明及び以下の詳細な説明はいずれも、単なる例示及び説明のためのものであり、特許請求の範囲を限定するものではないことを理解されたい。本明細書で使用される節の見出しは、組織的な目的のみのためであり、記載される主題をいかようにも限定することを意図していない。特許出願及び刊行物を含む本明細書で引用する全ての参考文献は、任意の目的のために参照によりそれら全体を本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】Ｉｇ－Ｆｃ対照、配列番号６～１１の重鎖及び軽鎖ＨＶＲを含む、非フコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体（抗ＦＧＦＲ２）、またはエフェクター機能を排除するために、アミノ酸２９７位でＮがＱで置換された（その突然変異の描写について以下の配列表における配列番号１２を参照）以外は同じアミノ酸配列を有する抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体（抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑ）で処置後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける移植乳腺４Ｔ１腫瘍細胞体積の変化を示す。図１ａ及び図１ｂの両方に示すように、抗ＦＧＦＲ２抗体のみが、４Ｔ１腫瘍増殖阻害を示した。統計的有意性（Ｐ＜０．０５＝^＊；Ｐ＜０．０１＝^＊＊；Ｐ＜０．００１＝^＊＊＊；Ｐ＜０．００１＝^＊＊＊＊）は、一元配置分散分析の後、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定によって決定された。

【図2a】１日目、ビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２の単回投与処置の１日後（図２ａ及び２ｃ）、または４日目、０日目及び３日目にビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２を与えた２つの処置の２番目の１日後（図２ｂ及び２ｄ）のいずれかにおける、細胞核のＤＡＰＩ染色と比較した、ＮＫｐ４６（図２ａ～２ｂ）またはＰＤ－Ｌ１（図２ｃ～２ｄ）のいずれかの存在について４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。各画像を異なる腫瘍から撮影し、１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。抗ＦＧＦＲ２による処置は、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較して、４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させ（図２ａ～２ｂ）、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較してＰＤ－Ｌ１＋細胞の数を増加させた（図２ｃ～２ｄ）。

【図2b】１日目、ビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２の単回投与処置の１日後（図２ａ及び２ｃ）、または４日目、０日目及び３日目にビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２を与えた２つの処置の２番目の１日後（図２ｂ及び２ｄ）のいずれかにおける、細胞核のＤＡＰＩ染色と比較した、ＮＫｐ４６（図２ａ～２ｂ）またはＰＤ－Ｌ１（図２ｃ～２ｄ）のいずれかの存在について４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。各画像を異なる腫瘍から撮影し、１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。抗ＦＧＦＲ２による処置は、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較して、４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させ（図２ａ～２ｂ）、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較してＰＤ－Ｌ１＋細胞の数を増加させた（図２ｃ～２ｄ）。

【図2c】１日目、ビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２の単回投与処置の１日後（図２ａ及び２ｃ）、または４日目、０日目及び３日目にビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２を与えた２つの処置の２番目の１日後（図２ｂ及び２ｄ）のいずれかにおける、細胞核のＤＡＰＩ染色と比較した、ＮＫｐ４６（図２ａ～２ｂ）またはＰＤ－Ｌ１（図２ｃ～２ｄ）のいずれかの存在について４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。各画像を異なる腫瘍から撮影し、１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。抗ＦＧＦＲ２による処置は、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較して、４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させ（図２ａ～２ｂ）、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較してＰＤ－Ｌ１＋細胞の数を増加させた（図２ｃ～２ｄ）。

【図2d】１日目、ビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２の単回投与処置の１日後（図２ａ及び２ｃ）、または４日目、０日目及び３日目にビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２を与えた２つの処置の２番目の１日後（図２ｂ及び２ｄ）のいずれかにおける、細胞核のＤＡＰＩ染色と比較した、ＮＫｐ４６（図２ａ～２ｂ）またはＰＤ－Ｌ１（図２ｃ～２ｄ）のいずれかの存在について４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。各画像を異なる腫瘍から撮影し、１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。抗ＦＧＦＲ２による処置は、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較して、４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させ（図２ａ～２ｂ）、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較してＰＤ－Ｌ１＋細胞の数を増加させた（図２ｃ～２ｄ）。

【図3】４日目のマウス４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数に対する抗ＦＧＦＲ２暴露の効果の分析を示す。抗ＦＧＦＲ２による処置は、ビヒクル対照と比較して、腫瘍におけるＮＫ細胞を増加させ、ｔ検定によるＰは、＜０．０５であった。

【図4】Ｉｇ－Ｆｃ対照、抗ＰＤ－１抗体、非フコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体（抗ＦＧＦＲ２と指定）による処置後、及び抗ＰＤ－１抗体と非フコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体の併用処置後の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける移植乳腺４Ｔ１腫瘍体積の変化を示す。各グラフでは、腫瘍体積を平均ｍｍ^３＋／－ＳＥＭで示す。図４ａに示すように、抗ＦＧＦＲ２（１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ）及び抗ＰＤ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ）の組み合わせは、１８日目まで、対照及びいずれかの抗体のみと比較して、４Ｔ１腫瘍の増殖の有意な阻害をもたらした。図４ｂに示すように、腫瘍移植後の１８日目に、組み合わせは、Ｉｇ－Ｆｃ対照または抗ＰＤ１抗体と比較して、４Ｔ１腫瘍における増殖の統計的に有意な阻害を示した。統計的有意性は、一元配置分散分析の後、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定によって決定された。

【図5】１日目（図５ａ）、ビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２もしくは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑの単回投与処置の１日後、または４日目、０日目及び３日目にビヒクル対照もしくは抗ＦＧＦＲ２を与えた２つの処置の２番目の１日後（図５ｂ）のいずれかにおける、ＮＫｐ４６細胞またはＰＤ－Ｌ１＋細胞またはＣＤ３＋Ｔ細胞のいずれかの存在について４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。各画像を異なる腫瘍から撮影し、１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。抗ＦＧＦＲ２による処置は、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較して、４Ｔ１腫瘍におけるＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させ、１日目及び４日目の両方において、ビヒクルと比較してＰＤ－Ｌ１＋細胞の数を増加させ、目に見える細胞の数は、１日目よりも４日目に多かった。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、抗ＦＧＦＲ２による処置後の４日目までに腫瘍にも浸潤した。

【図6-1】細胞核のＤＡＰＩ染色に隣接する、治療プロトコルの４日目のＣＤ３＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図６ａ）またはＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図６ｂ）の存在について、４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。画像は、抗ＦＧＦＲ２による処置が、ビヒクル対照、及び抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑによる処置と比較して、４日目までに腫瘍組織中の３種類全てのＴ細胞の数の増加をもたらしたことを示す。

【図6-2】細胞核のＤＡＰＩ染色に隣接する、治療プロトコルの４日目のＣＤ３＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図６ａ）またはＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図６ｂ）の存在について、４Ｔ１腫瘍細胞の染色の結果を示す。画像は、抗ＦＧＦＲ２による処置が、ビヒクル対照、及び抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑによる処置と比較して、４日目までに腫瘍組織中の３種類全てのＴ細胞の数の増加をもたらしたことを示す。

【図7】それぞれ、１日目及び４日目の４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋生単細胞のパーセンテージとして処置群ごとに提供する。図に示すように、抗ＦＧＦＲ２群は、４日目までのビヒクル対照及び抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ群の両方と比較して、ＣＤ３＋Ｔ細胞のパーセンテージの増加を示した。また、増加は、Ｐ≦０．０１を示す^＊＊記号で示すように、スチューデントＴ検定に従って統計的に有意であった。

【図8】それぞれ、１日目及び４日目の４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋生単細胞のパーセンテージとして処置群ごとに提供する。図に示すように、抗ＦＧＦＲ２群は、４日目までのビヒクル対照及び抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ群の両方と比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージの増加を示した。また、増加は、Ｐ≦０．０１を示す^＊＊記号で示すように、スチューデントＴ検定に従って統計的に有意であった。

【図9】それぞれ、１日目及び４日目の４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析の結果を示す。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４５＋生単細胞のパーセンテージとして処置群ごとに提供する。図に示すように、抗ＦＧＦＲ２群は、４日目までのビヒクル対照及び抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ群の両方と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージの増加を示した。また、増加は、Ｐ≦０．５を示す^＊記号で示すように、スチューデントＴ検定に従って統計的に有意であった。

【図10-1】４日目での４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析のさらなる結果を示す。図１０ａでは、ＮＫｐ４６＋細胞は、ＣＤ４５＋生単細胞のパーセンテージとして処置群ごとに提供する。図は、スチューデントＴ検定に従って、他の群と比較して、抗ＦＧＦＲ２群におけるＮＫｐ４６＋細胞の統計的に有意な増加を示し、ここで、^＊は、Ｐ≦０．５を示し、^＊＊は、Ｐ≦０．０１を示し、^＊＊＊は、Ｐ≦０．００１を示す。図１０ｂ及び１０ｃは、骨髄系細胞は抗ＦＧＦＲ２群において有意に減少するが、リンパ系細胞は有意に増加することを示すため、他の群と比較して、リンパ系細胞対骨髄系細胞の比は、抗ＦＧＦＲ２による処置後の４日目に増加することを示す。

【図10-2】４日目での４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析のさらなる結果を示す。図１０ａでは、ＮＫｐ４６＋細胞は、ＣＤ４５＋生単細胞のパーセンテージとして処置群ごとに提供する。図は、スチューデントＴ検定に従って、他の群と比較して、抗ＦＧＦＲ２群におけるＮＫｐ４６＋細胞の統計的に有意な増加を示し、ここで、^＊は、Ｐ≦０．５を示し、^＊＊は、Ｐ≦０．０１を示し、^＊＊＊は、Ｐ≦０．００１を示す。図１０ｂ及び１０ｃは、骨髄系細胞は抗ＦＧＦＲ２群において有意に減少するが、リンパ系細胞は有意に増加することを示すため、他の群と比較して、リンパ系細胞対骨髄系細胞の比は、抗ＦＧＦＲ２による処置後の４日目に増加することを示す。

【図11】ビヒクル対照（上パネル）、抗ＦＧＦＲ２抗体（中パネル）、または抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑ抗体（下パネル）による処置後１日目または４日目のマウス同系腫瘍モデルにおける４Ｔ１腫瘍組織の染色を示す。画像は、Ｆ４８０＋マクロファージの腫瘍組織への浸潤を見つけるための抗Ｆ４８０抗体での染色、及び細胞核の対応するＤＡＰＩ染色を示す。図から分かるように、抗ＦＧＦＲ２の処置後、Ｆ４８０＋マクロファージは、対照と比較して（４日目の上及び中パネルと比較して）、はるかに多数である。対照と抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑパネルの間の差は、（４日目の上及び下パネルを比較して）観察されなかった。１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。

【図12】様々な抗体：対照抗体（Ｆｃ－Ｇ１抗体）（上パネル）、ウサギ抗アシアロＧＭ１抗体－ＮＫｐ４６細胞の数を減少させることを意図した（２番目のパネル）、抗ＦＧＦＲ２抗体（３番目のパネル）、及び抗ＦＧＦＲ２抗体＋抗アシアロＧＭ１抗体の組み合わせ（下パネル）による処置後の４日目のマウス同系腫瘍モデルにおける４Ｔ１腫瘍組織の染色を示す。組織を、ＮＫｐ４６の試薬またはＤＡＰＩで染色し、細胞核を染色した（それぞれ、左及び右パネル）。抗アシアロＧＭ１抗体を１．２５ｍｇ／ｋｇで投与し、抗ＦＧＦＲ２抗体を１０ｍｇ／ｋｇで投与した。１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。４つの異なるＮＫｐ４６染色パネルで分かるように、抗アシアロＧＭ１抗体は、腫瘍組織中のＮＫｐ４６細胞で枯渇したが、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＮＫｐ４６細胞の数を増加させた（上及び３番目の左パネルを比較）。抗アシアロＧＭ１抗体と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２抗体は、（対照と比較していないが）抗アシアロＧＭ１抗体のみと比較して、ＮＫｐ４６細胞の数を増加させた。これは、ＮＫｐ４６細胞が競合抗体の存在によって枯渇している場合でも、抗ＦＧＦＲ２抗体が、腫瘍組織中のＮＫｐ４６細胞の数を増加させることができることを示す（上、２番目、及び下の左パネルを比較）。

【図13】対照抗体（Ｆｃ－Ｇ１抗体）（上パネル）、ウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（２番目のパネル）、抗ＦＧＦＲ２抗体（３番目のパネル）、及び抗ＦＧＦＲ２抗体＋抗アシアロＧＭ１抗体の組み合わせ（下パネル）による処置後の４日目のマウス同系腫瘍モデルにおける、ＣＤ３＋Ｔ細胞の染色、及び４Ｔ１腫瘍組織の細胞核の対応するＤＡＰＩ染色を示す。抗アシアロＧＭ１抗体を１．２５ｍｇ／ｋｇで投与し、抗ＦＧＦＲ２抗体を１０ｍｇ／ｋｇで投与した。１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。図の４つの左パネルを比較することで分かるように、抗ＦＧＦＲ２抗体による処置は、腫瘍組織中のＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させたが、抗アシアロＧＭ１抗体と一緒に投与した場合には増加しなかった。

【図14】対照抗体（Ｆｃ－Ｇ１抗体）（上パネル）、ウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（２番目のパネル）、抗ＦＧＦＲ２抗体（３番目のパネル）、及び抗ＦＧＦＲ２抗体＋抗アシアロＧＭ１抗体の組み合わせ（下パネル）による処置後の４日目のマウス同系腫瘍モデルにおける、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞の染色、及び４Ｔ１腫瘍組織の細胞核の対応するＤＡＰＩ染色を示す。抗アシアロＧＭ１抗体を１．２５ｍｇ／ｋｇで投与し、抗ＦＧＦＲ２抗体を１０ｍｇ／ｋｇで投与した。１０倍対物レンズを用いて画像を収集した。図の４つの左パネルを比較することで分かるように、抗ＦＧＦＲ２抗体による処置は、腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞の数を増加させたが、抗アシアロＧＭ１抗体と一緒に投与した場合には増加しなかった。

【図15】リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗アシアロＧＭ１抗体、または抗ＦＧＦＲ２と抗アシアロＧＭ１抗体の組み合わせの接種後のマウスにおける４Ｔ１同所性腫瘍の増殖を示す。図１５ａは、接種後１２日目及び１５日目の腫瘍体積を示す。図１５ｂは、接種後１５日目の個々のマウスにおける腫瘍体積のプロットを示す。図は、スチューデントＴ検定に従って、対照及び抗アシアロＧＭ１群と比較して、抗ＦＧＦＲ２群における腫瘍体積の統計的に有意な減少を示し、ここで、^＊は、Ｐ≦０．５を示し、^＊＊は、Ｐ≦０．０１を示し、ならびに抗ＦＧＦＲ２抗体のみを受けた群と、抗ＦＧＦＲ２と抗アシアロＧＭ１抗体の組み合わせを受けた群の間の腫瘍体積の統計的に有意な変化を示す。

【図16-1】ビヒクル対照または抗ＦＧＦＲ２抗体の接種後の、腫瘍細胞による接種後２７日目までのＳＣＩＤマウスにおける４Ｔ１同所性腫瘍の増殖を示す。図１６ａは、経時的な腫瘍体積を示す。グラフの下の矢印は、接種後１２日目及び１５日目のビヒクルまたは２０ｍｇ／ｋｇ抗ＦＧＦＲ２抗体のいずれかの投与を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２抗体下の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｂは、接種後１９日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、２つの群の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｃは、接種後２３日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、２つの群の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｄは、接種後２７日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。

【図16-2】ビヒクル対照または抗ＦＧＦＲ２抗体の接種後の、腫瘍細胞による接種後２７日目までのＳＣＩＤマウスにおける４Ｔ１同所性腫瘍の増殖を示す。図１６ａは、経時的な腫瘍体積を示す。グラフの下の矢印は、接種後１２日目及び１５日目のビヒクルまたは２０ｍｇ／ｋｇ抗ＦＧＦＲ２抗体のいずれかの投与を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２抗体下の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｂは、接種後１９日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、２つの群の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｃは、接種後２３日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。アスタリスク（^＊）は、Ｐ≦０．５レベルでのスチューデントＴ検定に従って、２つの群の腫瘍増殖間の統計的に有意な差を示す。図１６ｄは、接種後２７日目の各群の個々のマウスにおける腫瘍体積を示す。

【発明を実施するための形態】

【0044】

定義
特に明示しない限り、本発明に関連して使用する科学用語及び技術用語は、当業者に一般に理解される意味を有するものとする。また、文脈からそうでないことが求められない限り、単数形には複数形が含まれ、複数形には単数形が含まれるものとする。

【0045】

組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織の培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、ならびに精製法に関連して使用される代表的な技法は、当該技術分野において公知である。多くのそのような技法及び手順は、とりわけ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））に記載されている。さらに、化学合成、化学分析、薬学的な調製、処方、及び送達、ならびに患者の治療のための代表的な技法も当該技術分野において公知である。

【0046】

本出願において、「または」の使用は、特に指定のない限り「及び／または」を意味する。多項従属請求項に関して、「または」の使用は、複数の先行する独立請求項または従属請求項を択一的にのみ引用する。また、「要素」または「構成要素」などの用語は、特に指定のない限り、１つのユニットを含む要素及び構成要素と複数のサブユニットを含む要素及び構成要素との双方を包含する。

【0047】

以下の用語は、本開示に従って使用する場合、他に指示がない限り以下の意味を有すると理解されるものとする。

【0048】

用語「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」とは、区別なく使用してもよく、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／または非天然のヌクレオチドを含んでもよく、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含んでもよいが、これらに限定されない。「核酸配列」とは、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。

【0049】

用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」とは、アミノ酸残基のポリマーを指すのに区別なく用いられ、最短の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含んでもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、トリマー、及び多量体を含んでもよいが、これらに限定されない。完全長タンパク質及びその断片の両方が、定義により含まれる。その用語は、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化などのポリペプチドの発現後修飾も含む。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」とは、タンパク質が所望の活性を維持する範囲で、天然型の配列に対する欠失、付加、置換（天然では通常保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異形成による意図的なものであってもよく、または、タンパク質を産生する宿主の突然変異もしくはＰＣＲ増幅時のエラーによる偶発的なものであってもよい。

【0050】

「ＦＧＦＲ２」とは、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、及びＩＩＩｃスプライシングフォームなどの、その代替的にスプライシングされたフォームのいずれかを含む、線維芽細胞増殖因子受容体２を指す。用語「ＦＧＦＲ２」とは、野生型ＦＧＦＲ２及び天然突然変異型、例えば、いくつかの癌細胞で見られるＦＧＦＲ２－Ｓ２５２ＷなどのＦＧＦＲ２活性化突然変異型を包含する。「ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ」または「ＦＧＦＲ２ｂ」とは、区別なく用いられ、線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂスプライシングフォームを指す。例示的なヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、２０１３年７月７日付ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０７５２５９．４に示される。非限定的な例示的な成熟ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂアミノ酸配列は、配列番号１で示される。「ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ」または「ＦＧＦＲ２ｃ」とは、区別なく用いられ、線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｃスプライシングフォームを指す。例示的なヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃは、２０１３年７月７日付ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３２．３に示される。非限定的な例示的な成熟ヒトＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃアミノ酸配列は、配列番号１２で示される。

【0051】

「ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ」とは、天然及び遺伝子操作されたその変異体を含む、ＦＧＦＲ２の細胞外ドメインを指す。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤの非限定例としては、配列番号１３～２３、２９、及び３２が挙げられる。「ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子」とは、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及び融合パートナー、例えば、Ｆｃドメイン、アルブミン、またはＰＥＧを含む分子を指す。融合パートナーは、例えば、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤのＮ末端もしくはＣ末端に、または内部の位置で共有結合されてもよい。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子の非限定例としては、配列番号３０、３１、及び３３が挙げられる。

【0052】

「ＦＧＦＲ２阻害剤」は、ＦＧＦ１、ＦＧＦ７、及び／またはＦＧＦ２などのそのリガンドの１つ以上へのＦＧＦＲ２の結合を阻害するＦＧＦＲ２、例えば、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子に結合する抗体などの分子を指す。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２、ならびに活性化突然変異を有するＦＧＦＲ２突然変異体、例えば、ＦＧＦＲ２－Ｓ２５２Ｗに結合することができる。

【0053】

本明細書で使用する場合、用語「免疫刺激剤」とは、共刺激分子を含む、免疫刺激分子のアゴニストとして作用すること、または共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニストとして作用することのいずれかによって、免疫系を刺激する分子を指す。免疫刺激剤は、抗体もしくは抗体断片、他のタンパク質、もしくはワクチンなどの生物製剤であってもよく、または小分子薬であってもよい。

【0054】

用語「プログラム細胞死タンパク質１」及び「ＰＤ－１」とは、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫阻害性受容体を指す。ＰＤ－１は、インビボでは以前に活性化されたＴ細胞上で主に発現され、２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２とに結合する。本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ－１」とは、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、ｈＰＤ－１の変異体、アイソフォーム、及び種ホモログ、ならびにｈＰＤ－１と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。完全なｈＰＤ－１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３の下に見出すことができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１は、配列番号３４（シグナル配列を含む前駆体）または配列番号３５（シグナル配列を含まない成熟型）のアミノ酸配列を有するヒトＰＤ－１である。

【0055】

用語「プログラム細胞死１リガンド１」及び「ＰＤ－Ｌ１」とは、ＰＤ－１への結合の際にＴ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方調節するＰＤ－１（他方は、ＰＤ－Ｌ２である）のための２つの細胞表面糖タンパク質リガンドの１つを指す。本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ－Ｌ１」とは、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－Ｌ１の変異体、アイソフォーム、及び種ホモログ、ならびにｈＰＤ－Ｌ１と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。完全なｈＰＤ－Ｌ１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ９ＮＺＱ７の下に見出すことができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、配列番号３７（シグナル配列を含む前駆体）または配列番号３８（シグナル配列を含まない成熟型）のアミノ酸配列を有するヒトＰＤ－Ｌ１である。

【0056】

用語「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤」とは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を破壊する部分を指す。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１に結合することにより、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を阻害する。いくつかの実施形態では、阻害剤はＰＤ－Ｌ２にも結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。非限定的な例示的なＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤としては、ＰＤ－１に結合する抗体；ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体；ＡＭＰ－２２４などのＰＤ－１融合分子；及びＡＵＲ－０１２などのＰＤ－１ポリペプチドが挙げられる。

【0057】

用語「ＰＤ－１を阻害する抗体」とは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合することによって、ＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１シグナル伝達を阻害する抗体を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を阻害する抗体は、ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２の、ＰＤ－１への結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を阻害する抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する。ＰＤ－Ｌ１に結合するＰＤ－１を阻害する抗体を、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と呼ぶことができる。ＰＤ－１に結合するＰＤ－１を阻害する抗体を、抗ＰＤ－１抗体と呼ぶことができる。

【0058】

ＦＧＦＲ２抗体、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ、及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子を参照すると、リガンド「の結合を遮断する」または「の結合を阻害する」という用語は、ＦＧＦ１またはＦＧＦ２などのＦＧＦＲ２とＦＧＦＲ２リガンドの相互作用を阻害する能力を指す。そのような阻害は、例えば、ＦＧＦＲ２上の重複結合部位、及び／またはリガンド親和性を変化させる抗体により誘導されたＦＧＦＲ２の立体配座の変化のため、または、例えば、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子の場合、ＦＧＦＲ２リガンドへの結合に競合することによって、リガンド結合との直接干渉を含む、任意の機序を介して生じ得る。

【0059】

抗ＰＤ－１抗体、及びＰＤ－１融合分子、またはポリペプチドを参照すると、ＰＤ－Ｌ１、及びその文法上の変異体などのリガンド「の結合を遮断する」または「の結合を阻害する」という用語は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１などのＰＤ－１リガンドの相互作用を阻害する能力を指す。そのような阻害は、例えば、ＰＤ－１上の重複結合部位、及び／またはリガンド親和性を変化させる抗体により誘導されたＰＤ－１の立体配座の変化のため、または、ＰＤ－１リガンドとの結合に競合することによって、リガンド結合との直接干渉を含む、任意の機序を介して生じ得る。

【0060】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」とは、重鎖の少なくとも超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３と、軽鎖のＬ１、Ｌ２、及びＬ３とを含む分子であって、抗原に結合することができる分子を指す。用語「抗体」とは、限定されるものではないが、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２などの、抗原に結合することができる断片を含む。用語「抗体」とはまた、限定されるものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体も含む。小分子薬、二重特異性抗体及び多重特異性抗体などの他の分子にコンジュゲートした抗体も含む。

【0061】

用語「重鎖可変領域」とは、重鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域はまた、少なくともＦＲ１の一部及び／または少なくともＦＲ４の一部を含む。

【0062】

用語「重鎖定常領域」とは、少なくとも３つのＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３の重鎖定常ドメインを含む領域を指す。非限定的例示的な重鎖定常領域は、γ、δ、及びαを含む。非限定的例示的な重鎖定常領域は、ε及びμを含む。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体が、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体が、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体が、ＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体が、ＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体が、ＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに分類され得る。例えば、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１（γ_１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ_２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ_３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ_４定常領域を含む）抗体を含むがこれらに限定されず；ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ１（α_１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α_２定常領域を含む）抗体を含むがこれらに限定されず；ＩｇＭ抗体は、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むがこれに限定されない。

【0063】

用語「重鎖」とは、リーダー配列を伴うかまたは伴わずに、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、少なくとも重鎖定常領域の一部を含む。用語「完全長重鎖」とは、リーダー配列を伴うかまたは伴わずに、重鎖可変領域、及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0064】

用語「軽鎖可変領域」とは、軽鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３、及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１及び／またはＦＲ４を含む。

【0065】

用語「軽鎖定常領域」とは、軽鎖定常ドメインＣ_Ｌを含む領域を指す。非限定的例示的な軽鎖定常領域は、λ及びκを含む。

【0066】

用語「軽鎖」とは、リーダー配列を伴うかまたは伴わずに、少なくとも軽鎖可変領域を含む、ポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、少なくとも軽鎖定常領域の一部を含む。用語「完全長軽鎖」とは、リーダー配列を伴うかまたは伴わずに、軽鎖可変領域、及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0067】

用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」とは、配列が超可変であるか、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、Ｖ_Ｈに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶ_Ｌに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最高であり、及び／または抗原認識に関与している。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）。）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４～３４、Ｌ２の５０～５６、Ｌ３の８９～９７、Ｈ１の３１～３５Ｂ、Ｈ２の５０～６５、及びＨ３の９５～１０２に生じる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。超可変領域（ＨＶＲ）、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）との用語は両方とも、抗原結合領域を形成する可変領域の部分を指す。

【0068】

「親和性」または「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。いくつかの実施形態では、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋ_ｄ）で表すことができる。

【0069】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲｓ）に結合した、分泌されたＩｇが、細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、続いてサイトトキシンにより標的細胞を殺傷することを可能にする、細胞傷害の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号または米国特許第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞を含む。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）において開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｆｃ領域アミノ酸が改変された追加的抗体、及び増強されたまたは低下したＡＤＣＣ活性は、例えば、米国特許第７，９２３，５３８号及び米国特許第７，９９４，２９０号に記載されている。

【0070】

アッセイで使用されるそのような抗体及び親抗体の量が本質的に同じである場合、「増強されたＡＤＣＣ活性」を有する抗体は、親抗体と比較して、インビトロまたはインビボでＡＤＣＣの媒介に関してより有効な抗体を指し、抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的態様において異なる。いくつかの実施形態では、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣ活性は、米国公開番号２０１５－００５０２７３－Ａ１に開示されるようなインビトロのＡＤＣＣアッセイを使用して決定されるが、例えば、動物モデルなどの、他のアッセイまたはＡＤＣＣ活性を決定するための方法が企図される。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体はまた、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。

【0071】

「ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性」とは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する、親抗体より高い親和性を有する抗体を指し（いくつかの例では、Ｃｄ１６ａとも呼ばれる）、抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的態様において異なる。いくつかの実施形態では、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体は、非フコシル化されている。ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性を決定するための、任意の好適な方法が、使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、米国公開番号２０１５－００５０２７３－Ａ１に記載される方法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体はまた、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。

【0072】

本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」とは、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの可変領域、及び第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域、及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域、及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのラット可変領域、及び少なくとも１つのマウス定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体の全ての可変領域は、第１の種に由来し、キメラ抗体の全ての定常領域は、第２の種に由来する。

【0073】

本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」とは、非ヒト可変領域のフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域に由来する対応するアミノ酸と置換された、抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域、またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２などである。

【0074】

本明細書で使用する場合、「ヒト抗体」とは、ヒトで産生された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物、例えば、Ｘｅｎｏマウス（登録商標）で産生された抗体、及びインビトロ法、例えば、ファージディスプレイを用いて選択される抗体であって、抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づく抗体を指す。

【0075】

「非フコシル化」抗体または「フコースを欠く」抗体は、定常領域のグリコシル化においてフコースを欠いている、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ抗体を指す。最大２Ｇａｌ残基により終了される主要なフコシル化二分岐複合オリゴ糖グリコシル化のように、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）で生じる。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いている。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量によって、Ｇ０、Ｇ１（α１，６またはα１，３）またはＧ２グリカン残基と規定される。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１：４４－５３（２００３）を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．Ｈ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１４：２０１－２０７（１９９７）に記載されている。抗体の集団内で、集団の抗体の＜５％がＡｓｎ２９７でフコースを含む場合に、抗体は、非フコシル化されていると考えられる。

【0076】

「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、以下のものが挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞の活性化。

【0077】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲｓ）に結合した、分泌されたＩｇが、細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、続いてサイトトキシンにより標的細胞を殺傷することを可能にする、細胞傷害の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号または米国特許第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞を含む。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）において開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｆｃ領域アミノ酸が改変された追加的抗体、及び増強されたまたは低下したＡＤＣＣ活性は、例えば、米国特許第７，９２３，５３８号及び米国特許第７，９９４，２９０号に記載されている。

【0078】

アッセイで使用されるそのような抗体及び親抗体の量が本質的に同じである場合、「増強されたＡＤＣＣ活性」を有する抗体は、親抗体と比較して、インビトロまたはインビボアッセイでＡＤＣＣの媒介に関してより有効な抗体を指し、ここで、抗体及び親抗体は、ＡＤＣＣ活性を変えるように設計された少なくとも１つの構造変化を除いて同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体及び親抗体は、Ｆｃドメインにおける突然変異、例えば、親抗体がフコシル化されている場合に非フコシル化を引き起こすアミノ酸置換を除いて同じアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示されるインビトロのＡＤＣＣアッセイを使用して決定されるが、例えば、動物モデルなどの、他のアッセイまたはＡＤＣＣ活性を決定するための方法が企図される。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。

【0079】

「ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性」とは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する、親抗体より高い親和性を有する抗体を指し（いくつかの例では、Ｃｄ１６ａとも呼ばれる）、抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的態様において異なる。いくつかの実施形態では、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体は、非フコシル化されている。ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性を決定するための、任意の好適な方法が、使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、本明細書に記載される方法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。

【0080】

用語「リーダー配列」とは、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進する、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。哺乳動物細胞からポリペプチドを移動する際に、リーダー配列を切断して成熟タンパク質を形成してもよい。リーダー配列は、天然でも合成でもよく、またリーダー配列は、それらを付与するタンパク質に対して異種でも同種でもよい。非限定的な例示的なリーダー配列には、異種タンパク質に由来するリーダー配列も含まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、リーダー配列を欠いている。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも１つのリーダー配列を含み、これは、天然抗体リーダー配列及び異種リーダー配列から選択してもよい。

【0081】

用語「ベクター」とは、クローン化ポリヌクレオチドを含有するように操作することができるポリヌクレオチド、または宿主細胞で増殖させることができるポリヌクレオチドを表すために使用される。ベクターは、以下の要素のうちの１つ以上を含んでもよい：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ以上の調節配列（例えば、プロモーター及び／またはエンハンサー）、及び／または１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質抵抗性遺伝子、及び比色分析に使用することができる遺伝子、例えば、β－ガラクトシダーゼ）。用語「発現ベクター」とは、宿主細胞で目的のポリペプチドを発現するために使用するベクターを指す。

【0082】

「宿主細胞」とは、ベクターもしくは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントにすることができる、またはそれらのレシピエントにされている細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞としては、霊長類または非霊長類の動物細胞などの哺乳動物細胞、酵母などの真菌細胞、植物細胞、及び昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞としては、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ社）、ならびに２９３細胞及びＣＨＯ細胞及びそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３－６Ｅ細胞及びＤＧ４４細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0083】

本明細書で使用する場合、用語「単離された」とは、自然界で典型的には認められる構成要素のうちの少なくとも一部から分離した分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の構成要素のうちの少なくとも一部から分離されている場合に、「単離された」とみなされる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、それを産生した細胞からポリペプチドを含有する上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、自然界で典型的にはより大きいポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ）の中に認められるが、これらのより大きいポリペプチドの一部でないときに、または、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、ポリヌクレオチドが産生された細胞の構成要素のうちの少なくとも一部から分離しているときに、「単離された」とみなされる。従って、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが自然界でそのベクター中で認められない限り、「単離された」とみなすことができる。

【0084】

用語「上昇したレベル」とは、癌または本明細書に記載の他の状態に罹患していない個体または複数の個体などの、対照中の同じ組織と比較して対象の特定の組織中でのタンパク質のレベルがより高いことを意味する。上昇したレベルは、タンパク質の、発現の増加、安定性の増加、分解の減少、分泌の増加、クリアランスの減少などの任意の機構の結果であってもよい。

【0085】

タンパク質または細胞型に対して、「減少させる」（ｒｅｄｕｃｅ／ｒｅｄｕｃｅｓ）または「増加させる」（ｉｎｃｒｅａｓｅ／ｉｎｃｒｅａｓｅｓ）は、対象の特定の組織中、例えば、腫瘍中のタンパク質または細胞型のレベルを少なくとも１０％変化させることを意味する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの薬剤は、対象の特定の組織中、例えば、腫瘍中のタンパク質または細胞型のレベルを、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％増加または減少させる。いくつかの実施形態では、タンパク質または細胞型のレベルは、ＦＧＦＲ２もしくはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの薬剤と接触させる前のタンパク質のレベルに対して、または対照処置のレベルに対して減少または増加している。

【0086】

用語「対象」及び「患者」とは、本明細書において、ヒトを指して区別なく使用される。いくつかの実施形態では、齧歯類、真猿類、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類スポーツ動物、及び哺乳類ペットを含むがこれらに限定されない他の哺乳動物を治療する方法も提供される。

【0087】

本明細書で使用する場合、用語「試料」とは、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／または生理学的な特徴に基づいて特徴付けられる、定量化される、及び／または同定される、細胞実体及び／または他の分子実体を含む対象から得られるかまたは対象に由来する組成物を指す。例示的な試料は、組織試料である。

【0088】

用語「癌」とは、制御不能な細胞増殖、抑制不能な細胞成長、及びアポトーシスによる減少した細胞死に関連する悪性増殖性疾患を指す。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより具体的な非限定的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌（胃食道接合部腺癌を含む）、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞非小細胞肺癌を含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び種々の種類の頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌を含む）が挙げられる。

【0089】

いくつかの実施形態では、癌は、胃癌（胃食道癌を含む）である。いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌である。本明細書で定義される膀胱癌は、膀胱癌（ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）（ＵＢＣ）、及び尿路上皮癌（ＵＣ）としても知られる移行上皮癌（ＴＣＣ）、ならびに膀胱に発生する非移行上皮癌などの疾患の形態を含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むが、いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２増幅を含まない。いくつかの実施形態では、増幅が生じる場合、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）の比が＞３である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０の比が≧２である。他の実施形態では、しかしながら、ＦＧＦＲ２レベルは、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０の比が１～２であり、これは、ＦＧＦＲ２が増幅されないことを示す。いくつかの実施形態では、突然変異または転座は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を引き起こし得る。遺伝子増幅は、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーションアッセイ（ＦＩＳＨ）を用いて決定してもよい。

【0091】

いくつかの実施形態では、癌がＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む場合、癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを大幅に過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍以上多い正規化レベルでＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。

【0092】

いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂタンパク質過剰発現などのＦＧＦＲ２を含むが、いくつかの他の実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂタンパク質過剰発現を含まない。ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂタンパク質過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）などの抗体ベース方法を含むが、これらに限定されない当該技術分野の任意の適切な方法によって決定されてもよい。いくつかの実施形態では、ＩＨＣ染色は、当該技術分野の方法に従って採点される。用語「ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂタンパク質過剰発現」及び「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現」などは、そのような上昇したレベルの原因（すなわち、上昇したレベルが、翻訳の増加及び／またはタンパク質の分解の減少、他の機序、または機序の組み合わせの結果であるかどうか）に関わらず、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂタンパク質の上昇したレベルを意味する。

【0093】

ＩＨＣによるＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現のレベルは、腫瘍試料にＩＨＣスコアを０～３のスケールで与えることによって決定されてもよい。本明細書で、「０」のスコアは、反応性が観察されない場合、または腫瘍細胞の＜１０％でしか膜反応性がない場合に与えられ；「１＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において微かなまたは僅かな知覚膜反応性がある場合、または細胞が膜の一部にのみ反応性である場合に与えられ；「２＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において弱～中程度の完全な側底膜または横膜反応性がある場合に与えられ；及び「３＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において強い完全な側底膜または横膜反応性がある場合に与えられる。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の１＋、２＋、または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、ＩＨＣによる腫瘍細胞の３＋染色は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現を示す。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを大幅に過剰発現する。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍以上多い正規化レベルでＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、過剰発現は、ｍＲＮＡ過剰発現である。いくつかの実施形態では、過剰発現は、タンパク質過剰発現である。

【0094】

本明細書で使用する場合、「治療」とは、目的が、標的化された病状または障害を防止する、または減速させる（少なくする）ことである、治療的処置と予防的または保存的手段との両方を指す。ある特定の実施形態では、用語「治療」とは、ヒトを含む哺乳動物における疾患のための治療剤の任意の投与または適用を包含し、疾患または疾患の進行を阻害する、または減速させること；例えば、縮小を引き起こす、または失われた、失われる、もしくは欠陥している機能を回復させる、もしくは修復することにより、疾患を部分的または完全に軽減すること；非効率的なプロセスを刺激すること；または重症度が減少した疾患安定期を引き起こすことを含む。用語「治療」とはまた、任意の表現型特性の重症度を減少させること、及び／またはその特性の発生率、程度、もしくは尤度を減少させることも含む。治療を必要とするものは、既に障害を有するもの、ならびに障害を有する傾向があるもの、または障害を防止すべきであるものを含む。

【0095】

用語「有効量」または「治療的有効量」とは、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。ある特定の実施形態では、有効量は、所望の治療的または予防的結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。本発明のＦＧＦＲ２阻害剤及び／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の治療的有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重などの因子、ならびに抗体または複数の抗体が個体において所望の応答を惹起する能力に応じて変化してもよい。治療的有効量は、治療的に有益な作用が抗体または複数の抗体の任意の毒性作用または有害作用を上回る量を包含する。いくつかの実施形態では、「有効量」という表現は、癌を治療するのに有効である抗体の量を指す。

【0096】

１つ以上のさらなる治療剤「との組み合わせ」投与は、任意の順序での、同時の（並行した）、及び連続した（順次的な）投与を含む。

【0097】

「薬学的に許容される担体」とは、治療剤とともに用いられ、対象に投与される「薬学的組成物」を共に構成する、当該技術分野で一般的な毒性のない固体、半固体、もしくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、配合助剤、または担体を指す。薬学的に許容される担体は、レシピエントに対し、その使用される用量及び濃度において非毒性であり、かつ、製剤の他の成分と適合性を有する。薬学的に許容される担体は、使用される製剤のために好適である。例えば、治療剤を経口投与する場合、担体は、ゲルカプセルであってもよい。治療剤を皮下投与する場合、担体は、理想的には皮膚に対して非刺激性であり、注射部位反応を発生させない。

【0098】

追加の定義を以下のセクションで提供する。

【0099】

例示的なＦＧＦＲ２阻害剤
本明細書に記載の方法及び組成物のＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２抗体、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ、またはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子であってもよい。

【0100】

例示的なＦＧＦＲ２抗体
ＦＧＦＲ２抗体を伴う本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体であってもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されてもよい。本明細書に記載の組成物または方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＧであってもよい。本明細書に記載の方法のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３であってもよい。

【0101】

例示的なＦＧＦＲ２抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合するよりも低い親和性で結合する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない。

【0102】

本明細書の実施形態で使用するための例示的なＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる、２０１２年１月２４日に発行された米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されるＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１抗体である。米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３及び１４は、参照により本明細書に組み込まれる、ＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１の可変領域及び完全長の成熟抗体鎖のアミノ酸配列を示す。抗体ＨｕＧＡＬ－ＦＲ２１の重鎖可変領域配列は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３において下線で示される。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態で使用され得る追加の抗体には、ある特定の非フコシル化ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を記載し、かつ、参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１５－００５０２７３－Ａ１号に記載されるものが含まれる。

【0103】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ；例えば、ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0104】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域を含む少なくとも１つの重鎖及び重鎖定常領域の少なくとも一部、ならびに軽鎖可変領域を含む少なくとも１つの軽鎖及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、各重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの重鎖、ならびに、各軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0105】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、前述のような６つのＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0106】

一態様では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む６つのＨＶＲを含むＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0107】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0108】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0109】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0110】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含むＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号４において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0111】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含むＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号５において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号４のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0112】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、及び配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含み、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含むＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号４において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号５において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含み；ならびにＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0113】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、上記で提供された実施形態のいずれかにあるＶＨ、及び上記で提供された実施形態のいずれかにあるＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号４及び配列番号５であるＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0114】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含むＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２におけるＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0115】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号３において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体軽鎖は、配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0116】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列、及び配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、そのようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに結合せずに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号３において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の（すなわち、ＦＲ内の）領域で生じる。必要に応じて、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２におけるＶＨ配列を含み、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体軽鎖は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３におけるＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含み；かつ軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0117】

追加の例示的なＦＧＦＲ２抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されるＧＡＬ－ＦＲ２２及びＧＡＬ－ＦＲ２３抗体である。ＧＡＬ－ＦＲ２２の軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、特許第８，１０１，７２３Ｂ２号において配列番号７及び８として提供されるが、ＫａｂａｔＣＤＲ、ならびに軽鎖及び重鎖可変領域は、参照により本明細書に組み込まれる、その特許の図１６にも提供される。ＧＡＬ－ＦＲ２１、ＧＡＬ－ＦＲ２２、及びＧＡＬ－ＦＲ２３を産生しているハイブリドーマは、米国菌培養収集所、私書箱１５４９、マナッサ、ＶＡ、ＵＳＡ、２０１０８に、それぞれ、ＡＴＣＣ番号９５８６（２００８年１１月６日）、ＡＴＣＣ番号９５８７（２００８年１１月６日）、及びＡＴＣＣ番号９４０８（２００８年８月１２日）として寄託している。従って、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、これら３つのハイブリドーマ株の１つから得られた抗体のアミノ酸配列を含む抗体である。

【0118】

ＧＡＬ－ＦＲ２２の重鎖及び軽鎖可変領域は、配列番号３９及び４３としても本明細書に示されているが、ＫａｂａｔＣＤＲは、配列番号４０～４２及び４４～４６として本明細書に示されている。従って、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び（ｖｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖可変ドメインが、配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３９のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖可変ドメインが、配列番号４３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列に少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0120】

非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体、例えば、前述のようなＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠いた炭水化物構造を有する（すなわち、非フコシル化抗体）。すなわち、抗体は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７でのフコースを欠いているＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。

【0121】

本明細書で、抗体は、複数のそのような抗体が少なくとも９５％の非フコシル化抗体を含む場合、非フコシル化されているとみなされる。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に結合する全糖構造体の総量に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）を計算することにより決定されてもよい。抗体におけるフコースを検出する非限定的な例示的な方法としては、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析（例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６を参照されたい）、蛍光標識された遊離オリゴ糖のＨＰＬＣ法（例えば、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｎ－Ｇｌｙｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄｏｔｈｅｒｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓｕｓｉｎｇ ＵＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，” Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（２０１２）；Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ，１４：６０１－６０８（１９９６）；Ｔａｋａｈａｓｉ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．，７２０：２１７－２２５（１９９６）を参照されたい）、蛍光標識された遊離オリゴ糖のキャピラリー電気泳動法（例えば、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７１：５１８５－５１９２（１９９９）を参照されたい）、及び単糖組成物測定のための、パルスドアンペロメトリ検出を伴うＨＰＬＣ（例えば、Ｈａｒｄｙ，ｅｔ ａｌ．，ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍ．，１７０：５４－６２（１９８８）を参照されたい）が挙げられる。

【0122】

Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）で約２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが；しかしながら、所与の抗体配列では、Ａｓｎ２９７は、２９７位の±３残基上流または下流のアミノ酸に位置してもよく、すなわち、抗体の軽微な配列変異に起因して、２９４位と３００位の間に位置してもよい。本明細書に記載のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体において、Ａｓｎ２９７は、次の配列、

に見出され、かつ、下記配列の表で、配列番号２に太字及び下線で示される。

【0123】

フコシル化変異体は、ＡＤＣＣ機能を改善させてもよい。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する出版物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，特に実施例１１）、及び機能的アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８を欠く細胞株などのノックアウト細胞株、例えば、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。

【0124】

本明細書のＦＧＦＲ２抗体はまた、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された、二分岐オリゴ糖を有してもよい。このような抗体は、フコシル化を減少させ、及び／またはＡＤＣＣ機能を改善していてもよい。そのような抗体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する。このような抗体は、ＣＤＣ機能が改善されていてもよい。このような抗体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。

【0125】

本発明のいくつかの実施形態では、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体は、フコースを含む同じアミノ酸配列を有する抗体より効果的に、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣを媒介する。一般的に、ＡＤＣＣ活性は、米国特許公開第２０１５－００５０２７３Ａ１号に開示されるインビトロＡＤＣＣアッセイを用いて決定されてもよいが、例えば、動物モデルなどにおけるＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法も考えられる。

【0126】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体は、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む抗体は、非フコシル化されている。

【0127】

ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子などのＦＧＦＲ２ ＥＣＤである。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、ポリマー、ポリペプチド、親油性部分、及びスクシニル基などの融合パートナーを含んでもよい。例示的なポリペプチド融合パートナーとしては、血清アルブミン及び抗体Ｆｃドメインが挙げられる。さらなる例示的なポリマー融合パートナーとしては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール、例えば、分枝鎖及び／または直鎖を有するポリエチレングリコールが挙げられる。ある特定の例示的な融合パートナーとしては、限定されるものではないが、免疫グロブリンＦｃドメイン、アルブミン、及びポリエチレングリコールが挙げられる。ある特定の例示的なＦｃドメインのアミノ酸配列を配列番号２４～２６に示す。

【0128】

例示的なＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子としては、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０１４１２３号に記載されるものが挙げられる。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂまたはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ ＢＣＤのものを含む、天然のＥＣＤアミノ酸配列を含んでもよい。あるいは、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、Ｃ末端から数えて１つ以上及び最大２２個のアミノ酸残基がＣ末端欠失しているＦＧＦＲ２ ＥＣＤを含んでもよく、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤは、そのＦＧＦリガンド結合活性のうちの少なくとも１つを保持している。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤは、Ｃ末端で最大２２個のアミノ酸が欠失している。いくつかの実施形態では、欠失は、天然の完全長ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂのアミノ酸残基３５７で、または天然の完全長ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃのアミノ酸残基３５９で、バリン残基まで拡張していないかまたはバリン残基を含まない。

【0129】

例えば、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むが、アミノ酸残基が、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端から欠失しており、得られた分子は、ＦＧＦ２に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、配列番号１４のアミノ酸配列に対応するが、最後の３つのカルボキシ末端アミノ酸残基であるＹＬＥが欠失している配列番号１５のアミノ酸配列を含む。そのような変異体のさらなる例としては、天然のＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂまたはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ配列と比較して、Ｃ末端の４個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号１６）、Ｃ末端の５個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号１７）、Ｃ末端の８個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号１８）、Ｃ末端の９個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号１９）、Ｃ末端の１０個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号２０）、Ｃ末端の１４個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号２１）、Ｃ末端の１５個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号２２）、Ｃ末端の１６個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号２３）、Ｃ末端の１７個のアミノ酸残基を欠失させたもの（配列番号２４）が挙げられる。上記のＦＧＦＲ２ ＥＣＤ断片のいずれかは、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子を形成するために、上述の融合パートナーのいずれかと結合していてもよい。

【0130】

ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ配列内の少なくとも１つのアミノ酸は、ポリペプチド中のその部位におけるグリコシル化を防止するように突然変異している。グリコシル化され得る非限定的な例示的なＦＧＦＲ２ ＥＣＤアミノ酸は、配列番号２８のＮ６２、Ｎ１０２、Ｎ２０７、Ｎ２２０、Ｎ２４４、Ｎ２７６、Ｎ２９７、及びＮ３１０を含む。

【0131】

追加の例示的なＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子としては、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１０／０１７１９８に記載されるものが挙げられる。本明細書で挙げられるのは、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤの「酸ボックス」領域において突然変異があるＦＧＦＲ２ ＥＣＤ及びＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子である。そのようなＦＧＦＲ２ ＥＣＤ酸性領域ムテインは、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子のいずれかとして使用してもよい。ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ２ショート酸ボックスの代わりにＦＧＦＲ１ショート酸ボックスを含む。例えば、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ残基１１１～１１８（配列番号２８）は、ＦＧＦＲ１ ＥＣＤ残基１０５～１１２（配列番号２９）と置き換えられてもよい。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、配列番号３１～３４のいずれかのアミノ酸配列を含む。また、配列番号３０などの「酸ボックス」突然変異体ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ配列のいずれかは、上述のＣ末端欠失ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ配列（配列番号１５～２４）のいずれかと組み合わせてもよく、１つ以上の融合分子（例えば、配列番号３２～３４）に任意に結合してもよい。

【0132】

ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを欠いている。ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤは、天然のＦＧＦＲ２シグナルペプチド及び／または異種シグナルペプチド、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ４由来のものから選択され得る、少なくとも１つのシグナルペプチドを含む。

【0133】

ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子の場合、融合パートナーは、ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに結合させることができる。ある特定の実施形態では、ポリペプチド及び融合パートナーは、共有結合している。融合パートナーもポリペプチド（「融合パートナーポリペプチド」）である場合、ポリペプチド及び融合パートナーポリペプチドは、連続するアミノ酸配列の一部であり得る。そのような場合、ポリペプチド及び融合パートナーポリペプチドは、ポリペプチドと融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列から単一のポリペプチドとして翻訳させてもよい。ある特定の実施形態では、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ酸性領域ムテインと融合パートナーの間に「ＧＳ」リンカーを含有する。ある特定の実施形態では、ポリペプチド及び融合パートナーは、他の手段を介して、例えば、ペプチド結合以外の化学結合などを介して共有結合している。ある特定の実施形態では、ポリペプチド及び融合パートナーは、非共有結合している。ある特定のそのような実施形態では、それらは、例えば、結合対を使用して結合させてもよい。例示的な結合対としては、限定されるものではないが、ビオチン及びアビジンまたはストレプトアビジン、抗体及びその抗原などが挙げられる。

【0134】

例示的なＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤
例示的なＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤としては、抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－１を阻害する抗体が挙げられる。そのような抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ならびに本明細書で考察される重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲを含む抗体であってもよい。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤としては、ＡＭＰ－２２４などの、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する融合分子、及びＰＤ－Ｌ１に結合するためにＰＤ－１と競合し得るＡＵＲ－０１２などの阻害ＰＤ－１ポリペプチドも挙げられる。

【0135】

例示的なＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体
ＰＤ－１は、活性化されたＴ及びＢ細胞によって発現される重要な免疫チェックポイント受容体であり、免疫抑制を媒介する。ＰＤ－１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、及びＢＴＬＡを含む、ＣＤ２８ファミリーの受容体のメンバーである。ＰＤ－１のための２つの細胞表面糖タンパク質リガンド、プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）、及びプログラム死リガンド－２（ＰＤ－Ｌ２）が同定されている。これらのリガンドは、抗原提示細胞ならびに多くのヒト癌上で発現され、ＰＤ－１への結合の際にＴ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方調節することが示されている。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害は、前臨床モデルにおいて強力な抗腫瘍活性を媒介する。

【0136】

高い親和性でＰＤ－１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体（ＨｕＭＡｂ）が、米国特許第８，００８，４４９号に開示されている。他の抗ＰＤ－１ ｍＡｂは、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号、及び同第８，３５４，５０９号、ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載されている。米国特許第８，００８，４４９号に開示された抗ＰＤ－１ ＨｕＭＡｂの各々は、（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを使用する表面プラズモン共鳴により決定された場合、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＰＤ－１に結合する；（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン－γ産生を増加させる；（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる；（ｆ）ヒトＰＤ－１及びカニクイザルＰＤ－１に結合する；（ｇ）ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２の、ＰＤ－１への結合を阻害する；（ｈ）抗原特異的記憶応答を刺激する；（ｉ）抗体応答を刺激する；及び／または（ｊ）インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。本発明で使用可能な抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗体を含み、前記特徴（ａ）～（ｊ）の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つを示す。

【0137】

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブ（「オプジーボ（登録商標）」としても知られ、以前は５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６またはＯＮＯ－４５３８と指称された）は、ＰＤ－１リガンド（ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２）との相互作用を選択的に阻止することで、抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤抗体である（米国特許第８，００８，４４９号；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２（９）：８４６－５６）。

【0138】

別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（「ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）」、ランブロリズマブ及びＭＫ－３４７５としても知られる）は、ヒト細胞表面受容体ＰＤ－１（プログラム死－１またはプログラム細胞死－１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，９００，５８７号に記載され、アドレス：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝６９５７８９によるサイトもまた参照されたい（最終アクセス：２０１４年１２月１４日）。ペンブロリズマブは、再発性または難治性黒色腫の治療のために、ＦＤＡにより承認されている。

【0139】

他の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８（以前はＡＭＰ－５１４）であり、これは、ＰＤ－１受容体に対するモノクローナル抗体である。ＭＥＤＩ０６０８は、例えば、米国特許第８，６０９，０８９Ｂ２号またはインターネットサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝７５６０４７に記載されている（最終アクセス２０１４年１２月１４日）。

【0140】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）であり、これは、ヒト化モノクローナル抗体である。ピディリズマブは、米国特許第８，６８６，１１９Ｂ２号またはＷＯ２０１３／０１４６６８Ａ１号に記載されている。

【0141】

本開示の方法において使用し得る抗ＰＤ－１抗体はまた、ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、ヒトＰＤ－１への結合についてニボルマブと交差競合する、単離された抗体を含む（例えば、米国特許第８，００８，４４９号；ＷＯ２０１３／１７３２２３号を参照されたい）。抗原への結合について抗体が交差競合する能力は、これらの抗体が抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合抗体が当該特定エピトープ領域に結合するのを立体的に妨げることを示す。これらの交差競合抗体は、ＰＤ－１の同じエピトープ領域へ結合する事実により、ニボルマブに極めて類似する機能的特性を有すると予測される。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーのような標準的ＰＤ－１結合アッセイにおいてニボルマブに対して交差競合する能力に基づき、容易に同定できる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３号を参照されたい）。

【0142】

ある特定の実施形態では、ニボルマブとヒトＰＤ－１の結合について交差競合する、またはヒトＰＤ－１のニボルマブと同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与のために、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体であってもよく、またはヒト化もしくはヒト抗体であってもよい。

【0143】

本発明の方法で使用し得る抗ＰＤ－１抗体は、上記抗体の抗原結合部分も含む。例としては、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；及び（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片が挙げられる。

【0144】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である非限定的な例示的な融合分子は、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である非限定的な例示的なポリペプチドは、ＡＵＲ－０１２である。

【0145】

例示的な抗体定常領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦＧＦＲ２または抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。

【0146】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む抗体が選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、Ｎ２９７は、フコシル化されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0147】

明示的に述べられない限りまたは当業者に公知でない限り、本明細書及び請求項を通じて、免疫グロブリン重鎖における残基のナンバリングは、本明細書に参照として明示的に引用される、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）におけるＥＵインデックスのものである。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧｌ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。

【0148】

ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、野生型ＩｇＧまたは野生型抗体のＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する変異体Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において２つ以上のアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域において３つ以上のアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、本明細書に記載の少なくとも１つ、２つ、または３つ以上のＦｃ領域アミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、本明細書の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性を有するであろう。ある特定の実施形態では、本明細書の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約９０％の相同性を有するであろう。ある特定の実施形態では、本明細書の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約９５％の相同性を有するであろう。

【0149】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。

【0150】

抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合する炭水化物を変えることができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ－結合により一般的に結合した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、ならびにフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体を作成するために行われ得る。

【0151】

抗体はまた、アミノ末端リーダー伸長を有し得る。例えば、アミノ末端リーダー配列の１つ以上のアミノ酸残基は、抗体の任意の１つ以上の重鎖または軽鎖のアミノ末端に存在する。例示的なアミノ末端リーダー伸長は、抗体の一方または両方の軽鎖に存在する、３つのアミノ酸残基、ＶＨＳを含むまたはからなる。

【0152】

ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボまたは血清半減期は、例えば、変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与されるトランスジェニックマウス、ヒト、または非ヒト霊長類において評価することができる。例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）も参照されたい。

【0153】

例示的なキメラ抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＦＧＦＲ２または抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0154】

非限定的な例示的なキメラ抗体としては、本明細書に記載の重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３、及び／または軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含むＦＧＦＲ２またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のいずれかに対するキメラ抗体を含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものであるである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0156】

上述のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体を対象とした特定の治療方法に依存し得る。従って、いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むキメラ抗体が選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むキメラ抗体が選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、Ｎ２９７は、フコシル化されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0157】

例示的なヒト化抗体
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に結合するヒト化抗体が使用される。ヒト化抗体は、治療用抗体に対する免疫応答をもたらし、かつ治療の効果を低下させることができる、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）を、低下させまたは除去するので、ヒト化抗体は、治療用分子として有効である。

【0158】

ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低下させるために、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したまま、ヒト化される。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲまたはＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）から対応する残基に置換されている。

【0159】

ヒト化抗体、及びヒト化抗体を作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５－３４（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフティングを記載）；Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（「表面再構成」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（「ＦＲシャフリング」を記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（ＦＲシャフリングに対する「ガイデッド・セレクション（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載）にさらに記載されている。

【0160】

ヒト化に使用されてもよいヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６を参照されたい）を使用して選択されるフレームワーク領域；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３を参照されたい）；及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。

【0161】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。

【0162】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、Ｎ２９７は、フコシル化されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0163】

ヒト抗体
ヒトＦＧＦＲ２またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体は、任意の適切な方法によって作製することができる。非限定的な例示的な方法としては、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスでヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照されたい。

【0164】

非限定的な例示的な方法としては、ファージディスプレイライブラリーを使用してヒト抗体を作製することも挙げられる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１０４９４を参照されたい。

【0165】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものであるである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域におけるＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0166】

いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むヒト抗体が選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むヒト抗体が選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、Ｎ２９７は、フコシル化されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0167】

例示的な抗体コンジュゲート
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体は、標識及び／または細胞傷害性剤にコンジュゲートされる。本明細書で使用する場合、標識は、抗体の検出を促進する、及び／または抗体が結合する分子の検出を促進する部分である。非限定的な例示的な標識としては、限定されるものではないが、放射性同位体、蛍光基、酵素基、化学蛍光基、ビオチン、エピトープタグ、金属結合性タグなどが挙げられる。当業者は、意図される用途に応じて適切な標識を選択することができる。

【0168】

本明細書で使用する場合、細胞傷害性剤は、１つ以上の細胞の増殖能を低減させる部分である。細胞が増殖しにくくなると、例えば、細胞がアポトーシスを受けるか、そうでなければ死滅する、細胞が細胞周期を進行できない、及び／または分裂しない、細胞が分化するなどの理由で、細胞は増殖能を低減させる。非限定的な例示的な細胞傷害性剤としては、限定されるものではないが、放射性同位体、毒素、及び化学療法剤が挙げられる。当業者は、意図される用途に応じて適切な細胞傷害性を選択することができる。

【0169】

いくつかの実施形態では、標識及び／または細胞傷害性剤は、インビトロで化学的方法を用いて抗体にコンジュゲートされる。コンジュゲーションの非限定的な例示的な化学的方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（以前はＰｉｅｒｃｅ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）、ＳＡＣＲＩ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｃａｌｇａｒｙ、Ｃａｎａｄａ）、ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ（Ｒａｌｅｉｇｈ、Ｎｃ）などから市販されているサービス、方法、及び／または試薬が挙げられる。いくつかの実施形態では、標識及び／または細胞傷害性剤がポリペプチドである場合、標識及び／または細胞傷害性剤は、少なくとも１つの抗体鎖を有する同じ発現ベクターから発現され、抗体鎖に融合された標識及び／または細胞傷害剤を含むポリペプチドを産生することができる。当業者であれば、意図される用途に応じて標識及び／または細胞傷害性剤を抗体にコンジュゲートさせるための適切な方法を選択することができる。

【0170】

抗体をコードする核酸分子
抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。

【0171】

いくつかのそのような実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとして、１つの核酸分子または２つの別個の核酸分子から発現される。いくつかの実施形態では、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドは、一緒に連結された重鎖及び軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0172】

いくつかの実施形態では、抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳された場合、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上で議論されるように、リーダー配列は、天然の重鎖もしくは軽鎖リーダー配列であってもよく、または別の異種リーダー配列であってもよい。

【0173】

核酸分子は、当該技術分野で慣用の組み換えＤＮＡ技術を用いて構築することができる。いくつかの実施形態では、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクターである。

【0174】

抗体の発現及び産生
ベクター
抗体重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。抗体重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。このようなベクターとしては、限定されるものではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリペプチドの一部として発現される。

【0175】

いくつかの実施形態では、第１のベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（同様のモル量または類似の質量の量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、第１のベクターと第２のベクターが５：１～１：５の間のモル比または質量比で、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて１：１と１：５の間の質量比が使用される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターについて１：２の質量比が使用される。

【0176】

いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来の細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載される。

【0177】

いくつかの実施形態では、ヒトを含む動物における抗体重鎖及び／または抗体軽鎖のインビボ発現のためにベクターが選択される。いくつかのそのような実施形態では、ポリペプチドの発現は、組織特異的様式で機能するプロモーターの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／０７６２８８に記載されている。

【0178】

宿主細胞
様々な実施形態では、抗体重鎖及び／または軽鎖は、原核細胞、例えば、細菌細胞において；または真核細胞において、例えば（酵母のような）真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などにおいて発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術分野で公知の手順に従って実施され得る。ポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ７細胞を含む）；２９３細胞（２９３－６Ｅ細胞を含む）；ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ及びＤＧ４４細胞を含む）；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；及びＮＳＯ細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体重鎖及び／または軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国公開番号ＵＳ２００６／０２７００４５（Ａ１）を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核宿主細胞は、抗体重鎖及び／または軽鎖に対する所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生された同じポリペプチドよりも高いレベルのシアル化を有するポリペプチドを産生する。

【0179】

１つ以上の核酸の所望の宿主細胞への導入は、限定されるものではないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含む任意の方法によって達成することができる。非限定的な例示的な方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞において一過性にまたは安定的にトランスフェクトされ得る。

【0180】

いくつかの実施形態では、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子で遺伝子操作またはトランスフェクトされた動物において、１つ以上のポリペプチドをインビボで産生させることができる。

【0181】

抗体の精製
抗体は、任意の適切な方法によって精製することができる。そのような方法としては、限定されるものではないが、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられる。適切な親和性リガンドには、抗体定常領域に結合する抗原及びリガンドが含まれる。例えば、定常領域に結合し、抗体を精製するために、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを使用することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルまたはフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するのに適している。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術分野で公知である。

【0182】

抗体の無細胞産生
いくつかの実施形態では、抗体は無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載される。

【0183】

治療的組成物及び方法
癌の治療方法
いくつかの実施形態では、有効量の本明細書に記載のＦＧＦＲ２阻害剤を投与することを含む、癌を治療するための方法が提供される。いくつかのそのような実施形態は、ＦＧＦＲ２阻害剤を投与することを含み、阻害剤が増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦＧＦＲ２抗体である、癌対象の腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１つ以上の数を増加させる方法を含む。いくつかのそのような実施形態では、免疫刺激剤は、ＦＧＦＲ２抗体と一緒に投与されない。

【0184】

いくつかの他の実施形態では、有効量のＦＧＦＲ２阻害剤及び有効量の少なくとも１つの免疫刺激剤を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。例示的な実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、順次投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量のＦＧＦＲ２阻害剤を、少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の投与前に投与する。いくつかの実施形態では、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量、または少なくとも１０用量の少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤をＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に投与する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の最終投与を、ＦＧＦＲ２阻害剤の初回投与の少なくとも１、２、３、５、もしくは１０日、または１、２、３、５、１２、または２４週間前に投与する。いくつかの他の実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤の最終投与を、少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の初回投与の少なくとも１、２、３、５、もしくは１０日、または１、２、３、５、１２、または２４週間前に投与する。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤療法を受けたかまたは受けており、ＦＧＦＲ２阻害剤は、治療レジメンに加えられる。

【0185】

いくつかの実施形態では、癌は、胃癌、乳癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌（胃食道接合部腺癌を含む）、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び種々の種類の頭頸部癌から選択される。いくつかの実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌または肺扁平上皮癌腫である。いくつかの実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病または慢性リンパ性白血病である。いくつかの実施形態では、乳癌は、浸潤性乳癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣漿液性嚢胞腺癌である。いくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎臓腎淡明細胞癌である。いくつかの実施形態では、大腸癌は、結腸腺癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、膀胱尿路上皮癌腫である。いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌、子宮頸癌（例えば、扁平上皮細胞子宮頸癌）、頭頸部扁平上皮癌腫、直腸腺癌、非小細胞肺癌、子宮内膜癌、前立腺腺癌、大腸癌、卵巣癌（例えば、漿液性上皮性卵巣癌）、及び黒色腫から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、胃癌（胃食道癌を含む）または膀胱癌（例えば、移行上皮癌、尿路上皮癌としても知られる）である。

【0186】

いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むが、いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２増幅を含まない。いくつかの実施形態では、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して、例えば、ＦＧＦＲ２遺伝子座及び染色体１０セントロメアに対するプローブで遺伝子増幅を評価する。いくつかの実施形態では、増幅が生じる場合、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）の比が＞３である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０の比が≧２である。他の実施形態では、しかしながら、ＦＧＦＲ２レベルは、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０の比が１～２であり、これは、ＦＧＦＲ２が増幅されないことを示す。

【0187】

いくつかの実施形態では、癌がＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む場合、癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを大幅に過剰発現する。いくつかの実施形態では、癌は、遺伝子増幅を含まないが、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍以上多い正規化レベルでＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを大幅に過剰発現する。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、遺伝子増幅を含まないが、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２増幅を含む胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃ発現の正規化レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍以上多い正規化レベルでＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＧＵＳＢに正規化される。いくつかの実施形態では、胃癌または膀胱癌は、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂを過剰発現するが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まない。いくつかの実施形態では、過剰発現は、ｍＲＮＡ過剰発現である。いくつかの実施形態では、過剰発現は、タンパク質過剰発現である。いくつかの実施形態では、点突然変異または転座は、ＦＧＦＲ２の過剰発現を引き起こし得る。ＦＧＦＲ２種の発現レベルは、例えば、ＩＨＣを用いて決定してもよい。

【0189】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される。例えば、過剰発現は、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定されてもよい。例えば、いくつかのそのような実施形態では、癌は、胃癌であり、治療される患者は、例えば、少なくとも１０％の腫瘍細胞中（例えば、細胞膜中）で、ＦＧＦＲ２ｂに対して３＋のＩＨＣシグナルを有してもよい。いくつかの実施形態では、胃癌患者は、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋または３＋シグナルを有してもよい。いくつかの実施形態では、胃癌患者は、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で少なくとも１＋シグナルを有してもよい。

【0190】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２過剰発現は、「Ｈスコア」として報告されてもよい。例えば、いくつかのそのような実施形態では、腫瘍は、膀胱癌腫瘍である。Ｈスコアを決定するため、最初の膜染色強度は、例えば、ＩＨＣを介して固定視野で細胞について決定し、０、１＋、２＋、または３＋のスコアを得てもよく、Ｈスコアは、以下の式を用いて算出することができる：１×（１＋のＩＨＣ強度で視覚化した細胞の％）＋２×（２＋のＩＨＣ強度で視覚化した細胞の％）＋３×（３＋のＩＨＣ強度で視覚化した細胞の％）。理論的には、Ｈスコアは、０～３００の範囲に広がってもよく、視野中の全細胞が３＋のＩＨＣ染色を有する場合、３００に等しい。いくつかの実施形態では、治療される患者は、＞２０、例えば、＞３０、＞４０、＞５０、もしくは＞１００、または２０～３００、２０～１００、２０～５０、２０～４０、もしくは２０～３０の範囲のＦＧＦＲ２、例えば、ＦＧＦＲ２ｂ（例えば、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ）の開始Ｈスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、＞１０のＨスコアを有し、または１０～２０もしくは１５～２０の範囲内である。他の実施形態では、患者は、０～１０のＨスコアを有し、これは、ＦＧＦＲ２過剰発現の欠如を示し得る。いくつかのそのような実施形態では、患者は、膀胱癌患者である。

【0191】

いくつかの実施形態では、癌は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現し、及び／または
ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を運ぶことがすでに決定されている。他の実施形態では、本明細書の方法はまず、治療を行う前にＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現とＦＧＦＲ２遺伝子増幅状態のいずれかまたは両方を評価する。さらに、本開示は、癌患者におけるＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を評価することを含む、ＦＧＦＲ２阻害剤のいずれかに対する応答性を決定する方法、上述の治療及び使用を提供する。

【0192】

患者が胃癌または膀胱癌を罹患しているいくつかの実施形態では、方法は、患者の癌が、治療またはＦＧＦＲ２阻害剤組成物に対する応答性を示し得る以下のカテゴリーの１つに該当するかどうかを決定することを含んでもよい：ａ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｂ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル、ならびにＦＧＦＲ２遺伝子の増幅；ｃ）胃癌対象の場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子を増幅せずに、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナル；ｄ）胃癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋または２＋のＩＨＣシグナル；ｅ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナル；ｆ）膀胱癌対象の場合には、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナル；ｇ）膀胱癌対象の場合には、２０を超えるＨスコア；ｈ）膀胱癌対象の場合には、１０～１９のＨスコア；ｉ）膀胱癌対象の場合には、１０未満のＨスコア。

【0193】

本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に「不十分なレスポンダー」である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーである対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に以前に応答していてもよく、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤にあまり応答しなくなっていてもよく、または対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に応答したことがなくてもよい。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答とは、標準用量のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の後に改善することが期待される状態の態様が改善しない、及び／または標準用量より多く投与された場合にのみ改善が生じることを意味する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーは、標準用量を少なくとも２週間、少なくとも３つ週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、または少なくとも１２週間受けた後にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答を経験したかまたは経験している。「標準」用量は、医療専門家によって決定され、対象の年齢、体重、健康歴、疾患の重篤度、投与頻度などに依存し得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーは、抗ＰＤ－１抗体及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対する不十分な応答を経験したかまたは経験している。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーは、ＡＭＰ－２２４に対する不十分な応答を経験したかまたは経験している。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーは、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択されるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する不十分な応答を経験したかまたは経験している。

【0194】

上記実施形態の方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤と少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせは、マウス腫瘍モデルおける腫瘍増殖を少なくとも１週、１０日間、または２週間の期間にわたって、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害し得る。上記実施形態の方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせの対象への投与は、対象における少なくとも１つの腫瘍体積を、例えば、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、または１年の期間にわたって少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少し得る。

【0195】

ＦＧＦＲ２抗体は、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１発現細胞、マクロファージ、ならびにＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の数を増加させ、腫瘍におけるリンパ系細胞対骨髄系細胞の比も増加させる
上記実施形態の方法のいずれかでは、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与は、異種移植または同系腫瘍モデルなどのマウス腫瘍モデルから採取した腫瘍における対照と比較して、ＮＫｐ４６＋細胞などのＮＫ細胞の増加、ＰＤ－Ｌ１発現細胞の増加、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の増加、マクロファージの増加、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加を少なくとも１日、４日、１週、１０日、または２週の期間にわたって、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％示し得る。いくつかの実施形態では、マウス腫瘍モデルは、４Ｔ１腫瘍モデルである。

【0196】

本明細書の実施例で提供されるデータは、非フコシル化抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体によるマウス同系腫瘍モデルの処置は、腫瘍増殖を阻害しながら、ネズミ腫瘍組織中のＮＫｐ４６＋細胞の数を増加させることを示す。Ｎ２９７に突然変異を有し、ＡＤＣＣ活性が欠如している抗体（抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑ）による同様の処置は、ＮＫ細胞の増加を示さず、腫瘍増殖に影響を与えなかった（以下の実施例２ａ～ｂを参照）。

【0197】

本明細書の実施例で提供されるデータは、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体によるマウス同系モデルの処置が、腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞の数を増加させることも示す（実施例２ａを参照）。これは、ＦＧＦＲ２阻害剤を癌治療のためのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤とうまく組み合わせることができ、特許請求された組み合わせが、腫瘍体積または腫瘍増殖の阻害と組み合わせて少なくとも付加的効果、場合によっては、相乗的効果を有し得ることを示唆している。さらに、本明細書のデータは、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体によるマウス同系腫瘍モデルの処置が、腫瘍組織中のＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞の数も増加させ、リンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させることを示す。エフェクター機能を防ぐように設計された、Ｎ２９７Ｑ突然変異を含有するＦＧＦＲ２抗体ではそのような結果は観察されなかった（実施例２ｂを参照）。本明細書のさらなるデータは、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体によるマウス同系腫瘍モデルの処置が、腫瘍組織中のマクロファージの数も増加させることを示す（実施例２ｃを参照）。これらのデータは、非フコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体で観察された腫瘍増殖の阻害が、ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性によって一部促進されることを示唆している。加えて、データは、このＡＤＣＣ活性が、腫瘍内にＴ細胞の浸潤をもたらし得る、腫瘍中のＰＤ－Ｌ１発現細胞を増加させ得ることを示唆している。リンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加は、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体が、腫瘍微小環境を変化させることで、単剤として、ならびにＰＤ－１阻害剤と組み合わせて使用した場合に、強力な抗腫瘍活性を有し得ることをさらに示唆している。

【0198】

従って、また、本明細書で含まれるのは、有効量のＦＧＦＲ２阻害剤、例えば、ＦＧＦＲ２抗体、例えば、ＦＧＦＲ２増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体を対象に投与することを含む、前記対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる方法である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２抗体を投与する場合、抗体は、非フコシル化されており、例えば、Ｎ２９７位で非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、増加は、対照、例えば、処置前の腫瘍組織または非腫瘍組織と比較した場合、少なくとも１日、４日、１週、１０日、または２週の期間後に観察され得、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の増加であり得る。ＦＧＦＲ２阻害剤は、例えば、本明細書の他の箇所に記載される投与条件下で投与されてもよい。

【0199】

また、本明細書で含まれるのは、有効量の、ＡＤＣＣ活性、例えば、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体を対象に投与することを含む、前記対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる方法である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｎ２９７位での非フコシル化により増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態では、増加は、対照、例えば、処置前の腫瘍組織または非腫瘍組織と比較した場合、少なくとも１日、４日、１週、１０日、または２週の期間後に観察され得、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の増加であり得る。一般的に、そのような抗体は、１用量あたり約１０μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約５０μｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、０．１～１０ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば、０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、もしくは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、または前述の数のいずれか２つで囲まれた用量範囲内で投与される。

【0200】

本出願はまた、例えば、抗体が、対象の少なくとも１つの腫瘍に対してそのような効果を有しているかどうか決定するために、ＡＤＣＣ活性または増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体の投与前及び／または投与後に、対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を決定する方法を含む。本出願はまた、ＦＧＦＲ２阻害剤を単独またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤との組み合わせの一部のいずれかとして投与前及び／または投与後に、対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を決定する、及び／または対象の腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を決定する方法を含む。また、本明細書で含まれるのは、ＦＧＦＲ２及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の併用処置を受けている対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を決定する、及び／または対象の腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を決定する方法を含む。

【0201】

ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を決定すること、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を決定することは、例えば、組織の生検を介して、またはそのような試験のための腫瘍から試料を得るいくつかの他の方法を介して行ってもよい。そのような生検または他の試料は、一般的に、ＡＤＣＣ活性を有する抗体またはＦＧＦＲ２阻害剤の最初の投与後の、例えば、１、２、３、４、７、１７、３０．４５、または９０日目に採取してもよい。ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比は、例えば、対照、例えば、処置前の腫瘍試料、または非腫瘍組織からの試料を比較して決定してもよい。いくつかの実施形態では、数は、ＣＤ４５＋単細胞などの特定の細胞型のパーセンテージとして表してもよい。いくつかの実施形態では、特定の細胞型の数は、ＦＡＣＳ分析によって決定されてもよい。

【0202】

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加が、対照と比較してそのような試験で観察される場合、対象にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤をさらに投与してもよい。いくつかの実施形態では、増加が観察されない場合、または有意な増加が観察されない場合、ＦＧＦＲ２阻害剤またはＡＤＣＣ活性を有する抗体の投与量を増加させてもよい。

【0203】

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比の増加のそのような評価を使用して、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤との併用処置を与えるかどうか、またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を加えずに処置を継続するかどうかを決定してもよい。例えば、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与後、対象由来の腫瘍試料は、対照と比較して、ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞、マクロファージ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数、及び／またはリンパ系細胞対骨髄系細胞の比について評価してもよく、これらの種類の細胞のいずれかまたは両方の増加が試料で観察される場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、本明細書に記載の実施形態の方法にいずれかに従って、ＦＧＦＲ２阻害剤と一緒に投与してもよい。

【0204】

投与の経路、担体、追加の薬学的組成物
様々な実施形態では、抗体は、限定されないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、口腔、直腸、腹腔内、皮内、局所、経皮、及び髄腔内を含む種々の経路によって、または移植もしくは吸入によってインビボで投与され得る。主題の組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、溶液、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤、及びエアゾールを含む、固体、半固体、液体または気体形態の製剤に製剤化することができる。抗体をコードする核酸分子は、文献（例えば、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５６：１５２－１５４（１９９２）を参照されたい）に記載されているように、金微粒子上にコーティングされ、粒子照射装置または「遺伝子銃」によって皮内送達され得る。適切な製剤及び投与の経路は、意図される用途に応じて選択され得る。

【0205】

様々な実施形態では、抗体を含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体を含む製剤で提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む種々の薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、種々の薬学的に許容される補助物質、例えば、Ｐｈ調節剤及び緩衝剤、浸透圧調節剤、安定剤、湿潤剤なども利用可能である。非限定的な例示的な担体としては、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0206】

様々な実施形態では、抗体を含む組成物は、それらを水性または非水性溶媒中に、例えば、植物性もしくは他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコールなどの中に、必要に応じて、慣用の添加剤、例えば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤とともに、溶解、懸濁、または乳化させることによって、皮下投与を含む注射用に製剤化され得る。様々な実施形態では、組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などのような加圧された許容可能な噴霧剤を使用して、吸入用に製剤化され得る。組成物はまた、様々な実施形態では、生分解性または非生分解性ポリマーなどの徐放性マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的な例示的な生分解性製剤としては、ポリ乳酸－グリコール酸ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的な非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。そのような製剤を製造するある特定の方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載されている。

【0207】

１つ以上の容器を含む医薬パック及びキットであって、それぞれが抗体または抗体の組み合わせの１つ以上の用量を含むものも提供される。いくつかの実施形態では、単位用量が提供され、ここで単位用量は、１つ以上の追加の薬剤を伴うかまたは伴わずに、抗体または抗体の組み合わせを含む組成物の所定量を含有する。いくつかの実施形態では、そのような単位用量は、注射用の単回使用プレフィルドシリンジで供給される。様々な実施形態では、単位用量で含有される組成物は、生理食塩水、スクロースなど；リン酸塩などの緩衝液を含むことができ；及び／または安定かつ効果的なｐＨ範囲内で製剤化され得る。あるいは、いくつかの実施形態では、組成物は、適切な液体、例えば、滅菌水の添加時に再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、限定されないが、スクロース及びアルギニンを含む、タンパク質凝集を阻害する１つ以上の物質を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。

【0208】

薬学的組成物は、特定の適応症の治療または予防に有効な量で投与される。治療的有効量は、典型的には、治療されている対象の体重、彼もしくは彼女の身体もしくは健康状態、治療される状態の広範さ、または治療される対象の年齢に依存する。一般的に、抗体は、１用量あたり約１０μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約５０μｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。

【0209】

いくつかの実施形態では、抗体または融合分子またはポリペプチドなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、０．１～１００ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば、０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量で、または前述の数のいずれか２つで囲まれた用量範囲内で投与される。いくつかの実施形態では、抗体または融合分子またはＥＣＤポリペプチドなどのＦＧＦＲ２阻害剤は、０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、もしくは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、または前述の数のいずれか２つで囲まれた用量範囲内で投与される。

【0210】

抗体組成物は、必要に応じて対象に投与され得る。投与頻度の決定は、治療されている状態、治療されている対象の年齢、治療されている状態の重篤度、治療されている対象の一般的な健康状態などの考慮に基づいて主治医などの当業者によってなされ得る。いくつかの実施形態では、抗体の有効用量が、対象に１回以上投与される。様々な実施形態では、抗体の有効用量は、１ヶ月に１回、１ヶ月に１回未満、例えば２ヶ月毎または３ヶ月毎に投与される。他の実施形態では、抗体の有効用量は、例えば、３週間毎、２週間毎、または毎週など、１ヶ月に１回より多く投与される。いくつかの実施形態では、抗体の有効用量は、１、２、３、４または５週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、抗体の有効用量は、週に２回または３回投与される。抗体の有効用量は、対象に少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、抗体の有効用量は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間の期間を含み複数回投与されてもよい。

【0211】

本明細書に記載されるＦＧＦＲ２阻害剤及び本明細書に記載されるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む組成物も提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、例えば、それらが一緒に混合されないように、別々の容器内または単一容器の別々の区画内に含まれる。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、同じ容器または区画に存在することで、一緒に混合されてもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、癌治療で使用するための説明書を含む。

【0212】

他の免疫刺激剤との組み合わせ
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤以外の少なくとも１つの免疫刺激剤と組み合わされる。あるいは、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせは、有効量の少なくとも１つの追加の免疫刺激剤とさらに組み合わてもよい。

【0213】

免疫刺激剤は、例えば、小分子薬または生物製剤を含み得る。生物学的免疫刺激剤の例としては、限定されるものではないが、抗体、抗体断片、受容体の断片、または、例えば、受容体－リガンド結合を遮断するリガンドポリペプチド、ワクチン及びサイトカインが挙げられる。

【0214】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫刺激分子、例えば、共刺激分子のアゴニストを含むが、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫阻害分子、例えば、共阻害分子のアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞などの免疫細胞で見られる、免疫刺激分子、例えば、共刺激分子のアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞などの免疫細胞で見られる、免疫阻害分子、例えば、共阻害分子のアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＮＫ細胞などの自然免疫に関与する細胞で見られる、免疫刺激分子、例えば、共刺激分子のアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＮＫ細胞などの自然免疫に関与する細胞で見られる、免疫阻害分子、例えば、共阻害分子のアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、処置対象における抗原特異的Ｔ細胞応答を増強し、及び／または対象における自然免疫応答を増強する。

【0215】

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤と少なくとも１つの免疫刺激剤の組み合わせは、ＦＧＦＲ２阻害剤単独の投与と比較して、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルなどの動物癌モデルにおける抗腫瘍応答の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤と少なくとも１つの免疫刺激剤の組み合わせは、いずれかの薬物単独の投与と比較して、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルなどの動物癌モデルにおける付加的または相乗的応答をもたらす。

【0216】

ＦＧＦＲ２阻害剤、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及び少なくとも１つの追加の免疫刺激剤の組み合わせを伴う実施形態では、組み合わせは、ＦＧＦＲ２阻害剤単独の投与と比較して、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルなどの動物癌モデルにおける抗腫瘍応答の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２阻害剤と追加の治療薬の組み合わせは、個々の治療薬単独の投与と比較して、マウス異種移植及び／または同系腫瘍モデルなどの動物癌モデルにおける付加的または相乗的応答をもたらす。

【0217】

ある特定の実施形態では、免疫刺激剤は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーであるである刺激分子または阻害分子を標的にする。例えば、免疫刺激剤は、ポリペプチドのＢ７ファミリーの別のメンバーを標的にする（または、に特異的に結合する）薬剤であってもよい。免疫刺激剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバー、またはＴＮＦファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激受容体もしくは共阻害性受容体を標的にする薬剤であってもよい。免疫刺激剤によって標的にされ得る例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーとしては、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα １β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ならびにＮＧＦＲが挙げられる。

【0218】

いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、（ｉ）ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、及びＩＬＴ４などのＴ細胞活性化を阻害する（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）タンパク質のアンタゴニストを含んでもよく、及び／または、（ｉｉ）Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、及びＣＤ２８ＨなどのＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストを含んでもよい。

【0219】

いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞活性化を阻害する薬剤を含んでもよく、またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制サイトカイン）のアンタゴニストであり、いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞活性化を刺激するＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＦＮα（例えば、サイトカイン自体）などのサイトカインのアゴニストである薬剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＣＸＣＲ２（例えば、ＭＫ－７１２３）、ＣＸＣＲ４（例えば、ＡＭＤ３１００）、ＣＣＲ２、またはＣＣＲ４（モガムリズマブ）などのケモカインのアンタゴニストを含んでもよい。

【0220】

いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＮＫ細胞上に阻害性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞上に活性化受容体のアゴニストを含んでもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＫＩＲのアンタゴニストである。

【0221】

免疫刺激剤は、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する薬剤、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、及びイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療剤（例えば、アントラサイクリン）も含み得る。

【0222】

免疫刺激剤は、ある特定のワクチン、例えば、メソテリン標的ワクチンまたは弱毒化リステリア癌ワクチン、例えば、ＣＲＳ－２０７も含み得る。

【0223】

免疫刺激剤は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する治療、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤も含み得る。

【0224】

免疫刺激剤は、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する薬剤も含み得る。

【0225】

免疫刺激剤は、アデノシンの形成を阻害する、またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤も含み得る。

【0226】

免疫刺激剤は、Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を回復／予防する薬剤、及び腫瘍部位での自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する薬剤も含み得る。

【0227】

いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＣＤ４０アゴニスト、例えば、ＣＤ４０アゴニスト抗体を含み得る。ＦＧＦＲ２阻害剤とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の組み合わせはさらに、免疫経路の複数の要素を標的にするコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができ、例えば、以下の１つ以上と組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を増強する少なくとも１つの薬剤（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ４経路の阻害及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞の枯渇もしくは遮断による負の免疫制御を阻害する少なくとも１つの薬剤；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０及び／またはＧＩＴＲ経路を刺激する及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストで、正の免疫制御を刺激する治療；抗腫瘍Ｔ細胞の出現頻度を全身性に増加させる少なくとも１つの薬剤；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）の使用によりまたはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇により、腫瘍におけるＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇または阻害する治療；腫瘍におけるサプレッサー骨髄細胞の機能に影響する少なくとも１つの薬剤；腫瘍細胞の免疫原性を増強させる治療（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子修飾した細胞、例えば、キメラ抗原受容体により修飾された細胞を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ治療）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する少なくとも１つの薬剤；Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を回復／予防する少なくとも１つの薬剤；腫瘍部位での自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する治療；免疫刺激性サイトカインの投与または免疫抑圧的サイトカインの遮断。

【0228】

例えば、少なくとも１つの免疫刺激剤は、１つ以上の正の共刺激受容体を連結する作動剤；阻害性受容体を介してシグナル伝達を減弱させる１つ以上のアンタゴニスト（遮断剤）、例えば、腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路に打ち勝つアンタゴニスト；抗腫瘍免疫細胞の出現頻度を全身性に増加させる１つ以上の薬剤、例えば、Ｔｒｅｇを枯渇または阻害する（例えば、ＣＤ２５を阻害することで）Ｔ細胞；ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害する１つ以上の薬剤；Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を回復／予防する１つ以上の薬剤；及び腫瘍部位で自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する１つ以上の薬剤を含んでもよい。

【0229】

一実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アンタゴニストＣＴＬＡ４抗体などのＣＴＬＡ４アンタゴニストを含む。適当なＣＴＬＡ４抗体としては、例えば、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブが挙げられる。

【0230】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アンタゴニストＬＡＧ－３抗体などのＬＡＧ－３アンタゴニストを含む。適当なＬＡＧ－３抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ－７３１もしくはＩＭＰ－３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３）が挙げられる。

【0231】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストを含む。適当なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（ＷＯ１２／３２４３３）が挙げられる。

【0232】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アゴニストＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストを含む。適当なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＴＲＸ－５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ－４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されるＧＩＴＲ抗体が挙げられる。

【0233】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストを含む。適当なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。

【0234】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストを含む。適当なＣＤ２７抗体としては、例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。

【0235】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７Ｈ３を標的にするＭＧＡ２７１を含む（ＷＯ１１／１０９４００）。

【0236】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、リリルマブなどのＫＩＲアンタゴニストを含む。

【0237】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＤＯアンタゴニストを含む。ＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）またはＦ００１２８７が挙げられる。

【0238】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、Ｈｉｌｔｏｎｏｌまたはイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、レシキモド）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）を含む。

【0239】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１を含む。

【0240】

さらなる併用療法
抗体は、単独で、または他の治療様式を伴って投与され得る。それらは、他の治療様式、例えば、外科手術、化学療法、放射線療法、または別の治療用抗体などの生物製剤の投与の前に、実質的に同時に、またはその後に提供され得る。いくつかの実施形態では、癌は、外科手術、化学療法、及び放射線療法、またはそれらの組み合わせから選択される治療の後に再発または進行した。

【0241】

癌の治療のために、阻害剤は、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及び／または抗腫瘍性組成物などの１つ以上の追加の抗癌剤と併せて投与してもよい。本発明の抗体と組み合わせて使用することができる化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、抗癌剤、及び抗腫瘍性組成物の非限定例としては、以下の定義に提供される。

【0242】

「化学療法剤」とは、癌の治療において有用な化学的化合物である。化学療法剤の例としては、限定されるものではないが、チオテパ及びＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ、及びウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロロメラミンなどのエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照されたい）などの抗生物質；ジネマイシンＡなどのジネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンなど）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フォリン酸などの葉酸補給剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）クレモホールフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、及びＴａｘｏｔｅｒｅｒ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵ及びロイコボリンとの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）などのオキサリプラチン；細胞増殖を減少させるＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））及びＶＥＧＦ－Ａの阻害剤、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。

【0243】

さらなる非限定的な例示的な化学療法剤としては、例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）タモキシフェンなど）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）トレミフェンなどの、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの癌に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤；例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）酢酸メゲストロール、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）レトロゾール、及びＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）アナストロゾールなどの副腎におけるエストロゲン産生を調節するアロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼ阻害剤；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ－Ｒａｓなどの、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；遺伝子療法ワクチンなどのワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、及びＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ－２；Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。

【0244】

「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」とは、血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過性を、直接的または間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害的ＲＮＡ（ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡ）など）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組み換えタンパク質、抗体、またはそのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤は、血管新生因子またはその受容体に結合し、その血管新生活性を遮断する薬剤を含むことが理解されるべきである。例えば、抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体もしくはＦｌｔ－１受容体）に対する抗体、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する低分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、または例えば、国際特許出願第ＷＯ２００４／１１３３０４号に記載のもの）である。抗血管新生剤はまた、天然の血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなども含む。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７－３９；Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２－３１７９（例えば、悪性メラノーマにおける抗血管新生療法を列挙する表３）；Ｆｅｒｒａｒａ＆Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９－１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９－６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙する表２）；及びＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００－２０６（例えば、臨床治験において使用される抗血管新生剤を列挙する表１）を参照されたい。

【0245】

本明細書で使用する場合、「増殖阻害剤」とは、インビトロまたはインビボで細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の増殖を阻害する化合物または組成物を指す。従って、増殖阻害剤は、Ｓ期にある細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）のパーセンテージを有意に減少させるものであってもよい。増殖阻害剤の例としては、限定されるものではないが、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤などの、細胞周期進行を遮断する（Ｓ期以外の場所で）薬剤が挙げられる。古典的なＭ期ブロッカーとしては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、ならびにドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が挙げられる。Ｇ１を停止させる薬剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、及びａｒａ－ＣなどのＤＮＡアルキル化剤はまた、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報を、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」，Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば、ｐ．１３に見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、両方ともイチイに由来する抗癌薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリンダイマーからの微小管の集合を促進し、脱ポリマー化を防止することによって微小管を安定化し、細胞における有糸分裂の阻害をもたらす。

【0246】

用語「抗腫瘍性組成物」とは、少なくとも１つの活性治療剤を含む癌を治療するのに有用な組成物を指す。治療剤の例としては、限定されるものではないが、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性剤、放射線療法において使用される薬剤、抗血管新生剤、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤とは別の他の癌免疫治療剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、ならびに抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ－Ｌ２阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ３、もしくはＶＥＧＦ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、及び他の生物活性剤及び有機化学剤などのうちのの１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）などの、癌を治療するための他の薬剤が挙げられる。その組み合わせも本発明に含まれる。

【0247】

具体的な実施形態
本開示のある特定の具体的な実施形態には、以下のものが含まれる：

【0248】

１．線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）阻害剤、及び少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、少なくとも１つのプログラム細胞死１（ＰＤ－１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。

【0249】

２．少なくとも１つの免疫刺激剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤であり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗体である、実施形態１に記載の方法。

【0250】

３．ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体である、実施形態２に記載の方法。

【0251】

４．抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態３に記載の方法。

【0252】

５．抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む、実施形態４に記載の方法。

【0253】

６．抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ピディリズマブ、及びペンブロリズマブから選択される、実施形態５に記載の方法。

【0254】

７．ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態２に記載の方法。

【0255】

８．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択される抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態７に記載の方法。

【0256】

９．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む、実施形態８に記載の方法。

【0257】

１０．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択される、実施形態９に記載の方法。

【0258】

１１．少なくとも１つの免疫刺激剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤であり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、ＰＤ－１融合分子である、実施形態１に記載の方法。

【0259】

１２．融合分子が、ＡＭＰ－２２４である、実施形態１１に記載の方法。

【0260】

１３．少なくとも１つの免疫刺激剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤であり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、ＡＵＲ－０１２などのＰＤ－１ポリペプチドである、実施形態１に記載の方法。

【0261】

１４．ＦＧＦＲ２阻害剤が、ＦＧＦＲ２抗体である、実施形態１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【0262】

１５．ＦＧＦＲ２抗体が、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体である、実施形態１４に記載の方法。

【0263】

１６．ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂ抗体が、以下の特性の１つ以上を有する：
ａ．ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂに、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃよりも高い親和性で結合する、またはＦＧＦＲ２－ＩＩＩｃに検出可能に結合しない；
ｂ．ＦＧＦ２のヒトＦＧＦＲ２への結合を阻害する；
ｃ．ＦＧＦ７のヒトＦＧＦＲ２への結合を阻害する；
ｄ．マウス腫瘍モデルにおけるヒト腫瘍の増殖を阻害する；
ｅ．ＡＤＣＣ活性を誘発する；
ｆ．増強されたＡＤＣＣ活性を有する；
ｇ．非フコシル化される；ならびに
ｈ．対照と比較して、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる、実施形態１５に記載の方法。

【0264】

１７．ＦＧＦＲ２抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、
重鎖可変領域が、
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；
を含み、
軽鎖可変領域が、
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む、実施形態１５または実施形態１６に記載の方法。

【0265】

１８．ＦＧＦＲ２抗体の重鎖可変ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１７に記載の方法。

【0266】

１９．ＦＧＦＲ２抗体の軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１７または１８に記載の方法。

【0267】

２０．ＦＧＦＲ２抗体の重鎖可変領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態１７～１９のいずれか１項に記載の方法。

【0268】

２１．ＦＧＦＲ２抗体の軽鎖可変領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施形態１７～２０のいずれか１項に記載の方法。

【0269】

２２．ＦＧＦＲ２抗体の重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１７に記載の方法。

【0270】

２３．ＦＧＦＲ２抗体の軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１７または２２に記載の方法。

【0271】

２４．ＦＧＦＲ２抗体の重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、実施形態１７、２２または２３のいずれか１項に記載の方法。

【0272】

２５．ＦＧＦＲ２抗体の軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形態１７または２２～２４のいずれか１項に記載の方法。

【0273】

２６．ＦＧＦＲ２抗体が、キメラ、ヒト化、またはヒトである、実施形態１５～２５のいずれか１項に記載の方法。

【0274】

２７．ＦＧＦＲ２抗体が、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２から選択される、実施形態１５～２６のいずれか１項に記載の方法。

【0275】

２８．ＦＧＦＲ２抗体が、以下の特性の１つ以上を有する：
ａ．Ａｓｎ２９７位でフコースを欠いている；
ｂ．κ軽鎖定常領域を含む；
ｃ．ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む；
ｄ．Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性をインビトロで有する；
ｅ．Ａｓｎ２９７位でフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する；ならびに
ｆ．対照と比較して、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させることができる、実施形態１７～２７のいずれか１項に記載の方法。

【0276】

２９．ＦＧＦＲ２阻害剤が、ＦＧＦＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子である、実施形態１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【0277】

３０．ＦＧＦＲ２阻害剤が、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤと、Ｆｃドメイン、アルブミン、及びポリエチレングリコールから選択される少なくとも１つの融合パートナーとを含むＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子である、実施形態２９に記載の方法。

【0278】

３１．ＦＧＦＲ２ ＥＣＤまたはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子が、配列番号１３～３３または２９～３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３０に記載の方法。

【0279】

３２．ＦＧＦＲ２阻害剤及び免疫刺激剤が、同時または順次に投与される、実施形態１～３１のいずれか１項に記載の方法。

【0280】

３３．１つ以上の用量の免疫刺激剤をＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に投与する、実施形態３２に記載の方法。

【0281】

３４．対象が、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に完全な免疫刺激剤療法過程を受けた、実施形態３３に記載の方法。

【0282】

３５．ＦＧＦＲ２阻害剤が、第２の免疫刺激剤療法過程中に投与される、実施形態３４に記載の方法。

【0283】

３６．対象が、ＦＧＦＲ２阻害剤の投与前に少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの用量の少なくとも１つの免疫刺激剤を受けた、実施形態３３～３５のいずれか１項に記載の方法。

【0284】

３７．少なくとも１つの用量の少なくとも１つの免疫刺激剤が、ＦＧＦＲ２阻害剤と同時に投与される、実施形態３３～３６のいずれか１項に記載の方法。

【0285】

３８．１つ以上の用量のＦＧＦＲ２阻害剤を免疫刺激剤の投与前に投与する、実施形態３２に記載の方法。

【0286】

３９．対象が、少なくとも１つの免疫刺激剤の投与前に少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの用量のＦＧＦＲ２阻害剤を受けた、実施形態３８に記載の方法。

【0287】

４０．少なくとも１つの用量のＦＧＦＲ２阻害剤が、免疫刺激剤と同時に投与される、実施形態３８または実施形態３９に記載の方法。

【0288】

４１．ＦＧＦＲ２阻害剤が、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、１０、１５、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量で、または６～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、もしくは６～１５ｍｇ／ｋｇなどのｍｇ／ｋｇ用量のいずれか２つで囲まれた範囲で投与される、実施形態１～４０のいずれか１項に記載の方法。

【0289】

４２．少なくとも１つの免疫刺激剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む、実施形態３２～４１のいずれか１項に記載の方法。

【0290】

４３．ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、実施形態４２に記載の方法。

【0291】

４４．ＦＧＦＲ２阻害剤及び免疫刺激剤が、１、２、３、４、または５週間に１回投与される、実施形態１～４３のいずれか１項に記載の方法。

【0292】

４５．癌が、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、及び子宮内膜癌から選択される、実施形態１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【0293】

４６．癌が、外科手術、化学療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせから選択される治療後の再発または進行である、実施形態１～４５のいずれか１項に記載の方法。

【0294】

４７．（ａ）癌が、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の存在下もしくは不在下のいずれかで、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現することが予め決定されている、または（ｂ）方法が、癌がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを決定するさらなる工程を含み、ＦＧＦＲ２遺伝子が腫瘍細胞中で増幅されるかどうかを決定するさらなる工程も任意に含む、実施形態１～４６のいずれか１項に記載の方法。

【0295】

４８．ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される、実施形態４７に記載の方法。

【0296】

４９．過剰発現が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定される、実施形態４８に記載の方法。

【0297】

５０．ＦＧＦＲ２遺伝子増幅が、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比を得ることによって決定され、ＦＩＳＨによって決定されたＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上である場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅したと見なされる、実施形態４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【0298】

５１．癌が、胃癌または膀胱癌である、実施形態４７～５０のいずれか１項に記載の方法。

【0299】

５２．ａ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｂ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅され；
ｃ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されず；
ｄ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋もしくは２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｅ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｆ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｇ）癌が、膀胱癌であり、癌が、２０以上のＨスコアを有し；
ｈ）癌が、膀胱癌であり、癌が、１０～１９のＨスコアを有し；または
ｉ）癌が、膀胱癌であり、癌が、＜１０のＨスコアを有する、実施形態４８～５０のいずれか１項に記載の方法。

【0300】

５３．対象が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤に不十分なレスポンダーである、実施形態１～５２のいずれか１項に記載の方法。

【0301】

５４．癌のマウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤の投与が、腫瘍増殖の付加的または相乗的阻害のいずれかをもたらす、実施形態１～５３のいずれか１項に記載の方法。

【0302】

５５．癌が、乳癌であり、マウス腫瘍モデルが、４Ｔ１細胞を含む、実施形態５４に記載の方法。

【0303】

５６．マウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤の投与が、対照と比較して、腫瘍組織中のＮＫ細胞の数を増加させる、実施形態１～５５のいずれか１項に記載の方法。

【0304】

５７．マウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤の投与が、対照と比較して、腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞の数を増加させる、実施形態１～５６のいずれか１項に記載の方法。

【0305】

５８．マウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤の投与が、対照と比較して、腫瘍組織中のＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を増加させる、実施形態１～５７のいずれか１項に記載の方法。

【0306】

５９．マウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２阻害剤の投与が、対照と比較して、腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる、実施形態１～５８のいずれか１項に記載の方法。

【0307】

６０．実施形態１４～３１のいずれか１項に記載のＦＧＦＲ２阻害剤、及び実施形態２～１３のいずれか１項に記載の少なくとも１つの免疫刺激剤、例えば、少なくとも１つのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む、組成物。

【0308】

６１．ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤が、別々の容器または区画内に含まれる、実施形態６０に記載の組成物。

【0309】

６２．癌治療で使用するための説明書をさらに含む、実施形態６０または６１に記載の組成物。

【0310】

６３．癌治療で使用するための、実施形態６０～６２のいずれか１項に記載の組成物。

【0311】

６４．癌が、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、及び子宮内膜癌から選択される、実施形態６３に記載の組成物。

【0312】

６５．癌が、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の存在下または不在下のいずれかで、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現する、実施形態６３～６４のいずれか１項に記載の組成物。

【0313】

６６．ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される、実施形態６５に記載の組成物。

【0314】

６７．過剰発現が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定される、実施形態６６に記載の組成物。

【0315】

６８．癌が、２以上の、ＦＩＳＨによって決定されたＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比を有する、実施形態６３～６７のいずれか１項に記載の組成物。

【0316】

６９．癌が、胃癌または膀胱癌である、実施形態６３～６８のいずれか１項に記載の組成物。

【0317】

７０．ａ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｂ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅され；
ｃ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されず；
ｄ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋もしくは２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｅ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｆ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｇ）癌が、膀胱癌であり、癌が、２０以上のＨスコアを有し；
ｈ）癌が、膀胱癌であり、癌が、１０～１９のＨスコアを有し；または
ｉ）癌が、膀胱癌であり、癌が、＜１０のＨスコアを有する、実施形態６３～６９のいずれか１項に記載の組成物。

【0318】

７１．有効量のＦＧＦＲ２阻害剤を対象に投与することを含む、癌を有する対象の腫瘍組織中のＮＫ細胞及び／またはＰＤ－Ｌ１陽性細胞の数を増加させる方法。

【0319】

７２．ＦＧＦＲ２阻害剤が、実施形態１４～３１のいずれか１項に記載の阻害剤である、実施形態７１に記載の方法。

【0320】

７３．方法が、腫瘍増殖を阻害する、または対象における少なくとも１つの腫瘍体積を減少させる、実施形態７１または７２に記載の方法。

【0321】

７４．癌が、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、及び子宮内膜癌から選択される、実施形態７３に記載の方法。

【0322】

７５．（ａ）癌が、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の存在下もしくは不在下のいずれかで、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現することが予め決定されている、または（ｂ）方法が、癌がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを決定するさらなる工程を含み、ＦＧＦＲ２遺伝子が腫瘍細胞中で増幅されるかどうかを決定するさらなる工程も任意に含む、実施形態７１～７４のいずれか１項に記載の方法。

【0323】

７６．ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される、実施形態７５に記載の方法。

【0324】

７７．過剰発現が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定される、実施形態７６に記載の方法。

【0325】

７８．ＦＧＦＲ２遺伝子増幅が、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比によって決定され、ＦＩＳＨによって決定されたＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上である場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅したと見なされる、実施形態７５～７７のいずれか１項に記載の方法。

【0326】

７９．癌が、胃癌または膀胱癌である、実施形態７５～７８のいずれか１項に記載の方法。

【0327】

８０．ａ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｂ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅され；
ｃ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されず；
ｄ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋もしくは２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｅ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｆ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｇ）癌が、膀胱癌であり、癌が、２０以上のＨスコアを有し；
ｈ）癌が、膀胱癌であり、癌が、１０～１９のＨスコアを有し；または
ｉ）癌が、膀胱癌であり、癌が、＜１０のＨスコアを有する、実施形態７５～７９のいずれか１項に記載の方法。

【0328】

８１．方法が、ＦＧＦＲ２抗体の投与後、対象から少なくとも１つの腫瘍試料を得て、試料中のＮＫ細胞及び／またはＰＤ－Ｌ１陽性細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の数を決定すること、ならびに、ＮＫ細胞及び／またはＰＤ－Ｌ１陽性細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の数がＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対して増加している場合、少なくとも１つのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を対象に投与することをさらに含む、実施形態７１～８０のいずれか１項に記載の方法。

【0329】

８２．ＦＧＦＲ２阻害剤を対象に投与すること、ならびに、対象が、ＦＧＦＲ２抗体投与前の試料に対してＮＫ細胞及び／またはＰＤ－Ｌ１陽性細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の数が増加していると判断される場合、少なくとも１つのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤などの少なくとも１つの免疫刺激剤を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。

【0330】

８３．ＦＧＦＲ２阻害剤が、実施形態１４～３１のいずれか１項に記載の阻害剤である、実施形態８２に記載の方法。

【0331】

８４．少なくとも１つの免疫刺激剤が、実施形態２～１３のいずれか１項に記載の少なくとも１つのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む、実施形態８２または８３に記載の方法。

【0332】

８５．ＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤が、実施形態３８または３９に記載の方法に従って投与される、実施形態８２～８４のいずれか１項に記載の方法。

【0333】

８６．増強されたＡＤＣＣ活性を有するＦＧＦＲ２抗体であるＦＧＦＲ２阻害剤を投与することを含む、癌対象の腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させる方法。

【0334】

８７．抗体が、実施形態１５～２８のいずれか１項に記載の抗体である、実施形態８６に記載の方法。

【0335】

８８．マウス腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２抗体の投与により、対照と比較して、腫瘍組織中のＰＤ－Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びマクロファージの１つ以上の数を増加させる、及び／または腫瘍組織中のリンパ系細胞対骨髄系細胞の比を増加させる、実施形態８６または８７に記載の方法。

【0336】

８９．対象が、乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、頭頸部の扁平上皮癌、卵巣癌、膵癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、または子宮内膜癌を罹患している、実施形態８６～８８のいずれか１項に記載の方法。

【0337】

９０．（ａ）癌が、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の存在下もしくは不在下のいずれかで、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現することが予め決定されている、または（ｂ）方法が、癌がＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを決定するさらなる工程を含み、ＦＧＦＲ２遺伝子が腫瘍細胞中で増幅されるかどうかを決定するさらなる工程も任意に含む、実施形態８６～８９のいずれか１項に記載の方法。

【0338】

９１．ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ過剰発現が、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される、実施形態９０に記載の方法。

【0339】

９２．過剰発現が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定される、実施形態９１に記載の方法。

【0340】

９３．ＦＧＦＲ２遺伝子増幅が、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比によって決定され、ＦＩＳＨによって決定されたＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上である場合には、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅したと見なされる、実施形態９０～９２のいずれか１項に記載の方法。

【0341】

９４．対象が、胃癌または膀胱癌を罹患している、実施形態８９～９３のいずれか１項に記載の方法。

【0342】

９５．ａ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｂ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅され；
ｃ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されず；
ｄ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋もしくは２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｅ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｆ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｇ）癌が、膀胱癌であり、癌が、２０以上のＨスコアを有し；
ｈ）癌が、膀胱癌であり、癌が、１０～１９のＨスコアを有し；または
ｉ）癌が、膀胱癌であり、癌が、＜１０のＨスコアを有する、実施形態９０～９４のいずれか１項に記載の方法。

【0343】

９６．ＦＧＦＲ２抗体が、毎週、２週間毎、３週間毎、または月１回、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、１０、１５、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量で、または６～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、もしくは６～１５ｍｇ／ｋｇなどのｍｇ／ｋｇ用量のいずれか２つで囲まれた範囲で投与される、実施形態８６～９５のいずれか１項に記載の方法。

【0344】

９７．胃癌または膀胱癌患者が、ＦＧＦＲ２阻害剤による治療に応答するかどうかの決定方法であって、
胃癌または膀胱癌がＩＨＣによってＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを過剰発現するかどうかを決定することを含み、
過剰発現が、癌の少なくとも１０％の腫瘍細胞、例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％の腫瘍細胞中で１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定される、前記方法。

【0345】

９８．ＦＧＦＲ２遺伝子が、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、ＦＧＦＲ２対染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比を得ることによって増幅されるかどうかを決定することをさらに含み、
ＦＩＳＨによって決定されたＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上である場合、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅したと見なされる、実施形態９７に記載の方法。

【0346】

９９．ａ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｂ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅され；
ｃ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋のＩＨＣシグナルを有し、ＦＧＦＲ２遺伝子が増幅されず；
ｄ）癌が、胃癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋もしくは２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｅ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｆ）癌が、膀胱癌であり、癌が、少なくとも１０％の腫瘍細胞中で２＋のＩＨＣシグナルを有し；
ｇ）癌が、膀胱癌であり、癌が、２０以上のＨスコアを有し；
ｈ）癌が、膀胱癌であり、癌が、１０～１９のＨスコアを有し；または
ｉ）癌が、膀胱癌であり、癌が、＜１０のＨスコアを有する場合、
患者が、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体治療に応答すると決定される、実施形態９７または９８に記載の方法。

【0347】

１００．ＦＧＦＲ２阻害剤が、実施形態１４～３１のいずれか１項に記載の阻害剤である、実施形態９７～９９のいずれか１項に記載の方法。

【0348】

１０１．治療が、少なくとも０．１、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、１０、１５、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量で、または６～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、もしくは６～１５ｍｇ／ｋｇなどのｍｇ／ｋｇ用量のいずれか２つで囲まれた範囲でＦＧＦＲ２阻害剤を投与することを含む、実施形態９７～１００のいずれか１項に記載の方法。

【0349】

１０２．治療が、実施形態７１、８２、または８６に記載の方法を行うことを含む、実施形態９７～１０１のいずれか１項に記載の方法。

【0350】

１０３．治療が、少なくとも１つの免疫刺激剤を対象に投与することをさらに含む、実施形態９７～１０１のいずれか１項に記載の方法。

【0351】

１０４．少なくとも１つの免疫刺激剤が、実施形態２～１３のいずれか１項に記載の免疫刺激剤を含む、実施形態１０３に記載の方法。

【0352】

治療が、実施形態３２～４４のいずれか１項に記載の方法に従ってＦＧＦＲ２阻害剤及び少なくとも１つの免疫刺激剤を投与することを含み、または治療が、実施形態６０～６２のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、実施形態１０３に記載の方法。

【実施例】

【0353】

下記に説明する実施例は、純粋に本発明の例示を目的とし、決して本発明を制限するとみなすべきものではない。これらの実施例は、下記の実験が実施された全てまたは唯一の実験であることを示すものではない。使用する数字（例えば、量や温度など）に関して正確性を確保するよう努力しているが、ある程度の実験誤差及び偏差は考慮すべきである。特に指示のない限り、部は質量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。

【0354】

実施例１：ＡＤＣＣ活性は、４Ｔ１マウス乳腫瘍モデルにおける腫瘍増殖阻害に必要である
７０匹の８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（ＩＡＣＵＣカテゴリー：ＡＵＰ ２０１１ ＃０１－０３）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。動物を到着時に少なくとも３日間順応させて、食料と水に自由にアクセスできるように１ケージあたり５匹の動物を収容した。一度順応させると、動物の体重を測り、腫瘍細胞移植前に剃った。

【0355】

マウス株ＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈ由来の乳腫瘍株４Ｔ１を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ：カタログ番号ＣＲＬ－２５３９）から得た。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ １６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０－０４１－ＣＶ）中で３７℃にて細胞を培養した。

【0356】

マウスの頭部から４番目の乳腺乳頭（乳頭）下に５×１０^４個の４Ｔ１細胞を同所注射によって各マウスに接種した。その後、マウス腫瘍体積及び体重は、腫瘍体積が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３を測定するまで定期的に監視した。腫瘍が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると、マウスを腫瘍サイズに従って投与のための４つの群に分類した。第１群には、２０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－Ｇ１抗体を投与し（腹腔内（ＩＰ）、２週間に１回（ＢＩＷ））、第２群には、２０ｍｇ／ｋｇの、配列番号６～１１の重鎖及び軽鎖ＨＶＲを有する非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体（抗ＦＧＦＲ２）を投与し（ＩＰ、ＢＩＷ）、ならびに第３群には、２０ｍｇ／ｋｇの、この分子がＡＤＣＣ活性を刺激できないようにするＮ２９７Ｑ突然変異を有するＦＧＦＲ２抗体（抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑ）を投与した（ＩＰ、ＢＩＷ）。

【0357】

全体として、抗ＦＧＦＲ２による処置は、ＦｃＧ１対照と比較して、腫瘍増殖の約３０％阻害（Ｐ＜０．００１）をもたらすが、抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑによる処置は、対照と比較して、腫瘍増殖を阻害しなかった（図１ａ～ｂを参照）。これらのデータは、抗ＦＧＦＲ２腫瘍増殖阻害の機序としてＡＤＣＣの役割を支援する。

【0358】

実施例２ａ：抗ＦＧＦＲ２抗体への暴露は、腫瘍組織内のＮＫ細胞の増加、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞の増加をもたらす
免疫組織化学分析では、前述のような同所注射によって５×１０^４個の４Ｔ１細胞をＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈマウスに接種した。腫瘍が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると（０日目）、マウスを腫瘍サイズに従って２つの投与群に分類した：ビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２（ＩＰ）。各群を、（ａ）０日目に１用量もしくは２用量を受けたマウスまたは（ｂ）３日目に１用量もしくは２用量を受けたマウスに細分し、１日目または４日目にそれぞれ投与した２４時間後にマウスを安楽死させ、組織学またはＦＡＣＳ分析用に処理した。

【0359】

組織学では、１日目及び４日目に、それぞれ第１及び第２処置の２４時間後にマウスをＣＯ_２で安楽死させた後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４で灌流させた。簡潔に言えば、マウスの胸部を迅速に開き、２０ゲージの針を備えたシリンジを使用して、左心室の切開を介して、４０ｍＬのＰＢＳを大動脈に注入した。右心房の開口部を介して血液及びＰＢＳを外に出した。４Ｔ１同所性腫瘍を除去し、４℃で１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬した。２時間後、組織をＰＢＳで３回濯いだ後、ＰＢＳ中の３０％スクロース中に一晩移した。翌日、腫瘍をＯＣＴ化合物中で凍結し、－８０℃で保存した。

【0360】

各腫瘍の２０μｍ厚の連続切片に切った。切片をスーパーフロストプラススライド（ＶＷＲ）上で１～２時間乾燥させた。０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで試験片を透過処理し、室温で１時間、ＰＢＳ ０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ブロッキング溶液）中の５％ヤギ正常血清でインキュベートし、非特異的抗体結合を遮断した。１時間後、ブロッキング溶液を除去し、切片を一次抗体中で一晩インキュベートした。ＮＫ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＮＫｐ４６（ＣＤ３３５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃１３７６０２）で切片をインキュベートした。ＰＤ－Ｌ１を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＰＤ－Ｌ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃１４－５９８２－８２）で切片をインキュベートした。ＮＫ細胞及びＰＤ－Ｌ１染色は、両方の一次抗体がラット中で生成されたため、連続切片で行った。陰性対照試験片のみの二次抗体は、一次抗体ではなく５％正常血清中でインキュベートした。

【0361】

翌日、試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、ＰＢＳ中で１：４００に希釈したＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４標識ヤギ抗ラット（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１１２－５８５－１６７）二次抗体、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８標識ヤギ抗ウサギ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１１１－５４５－１４４）二次抗体で室温にて４時間インキュベートした。試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で固定し、ＰＢＳでもう一度濯ぎ、ＤＡＰＩを含むベクタシールド（Ｖｅｃｔｏｒ、Ｈ－１２００）でマウントした。ＤＡＰＩを使用して、細胞核を標識した。

【0362】

ＡｘｉｏＣａｍ（登録商標）ＨＲｃカメラを備えたＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｈｏｔ（登録商標）２＋蛍光顕微鏡で試験片を調べた。腫瘍内のＮＫｐ４６＋及びＰＤ－Ｌ１＋細胞の量及び分布を示す実験群ごとの代表的な画像を収集し、図２ａ～２ｄに示す。

【0363】

ビヒクルを注入したマウス由来の４Ｔ１腫瘍では、最小限に散在したＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞を検出し、これらの細胞のほとんどは、腫瘍周辺に位置していた（図２ａ）。比較すると、１０ｍｇ／ｋｇで抗ＦＧＦＲ２による１日の処置後、ＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞がより多数であった。これらの細胞のほとんどは腫瘍端で見つかったが、いくつかは腫瘍の中心に浸潤していた（図２ａを参照）。第２用量の抗ＦＧＦＲ２の４日後に同様の結果が観察された（図２ｂ）。

【0364】

ＰＤ－Ｌ１染色により、ビヒクルで１日処置した４Ｔ１腫瘍では、ＰＤ－Ｌ１免疫反応性は、腫瘍内の少数の細胞でしか見られないことが分かった（図２ｃ）。これに対して、１用量の抗ＦＧＦＲ２の２４時間後、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞が腫瘍の中心内でより多数であった（図２ｃ）。処置を開始した４日後に同様の結果が観察された（図２ｄ）。

【0365】

ＮＫ細胞の増加を定量化するための直交アッセイとして、前述のように２用量の生理食塩水または１０ｍｇ／Ｋｇの抗ＦＧＦＲ２を受けた４Ｔ１担癌マウスでＦＡＣＳを行った。ＦＡＣＳ分析では、腫瘍を１～２ｍｍ片に切り、振盪培養器中の１０％ ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍＬ ＤＮＡｓｅ Ｉ、及び２５０Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＩを有するＤＭＥＭ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）に３０分間、３７℃で載置した。７０μｍナイロンメッシュストレーナーに細胞を通過させ、単細胞懸濁液を、標準プロトコルに従って、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）：ＣＤ４５（ｃｌｏｎｅ ３０－Ｆ１１）及びＣＤ１１ｂ（１Ｄ３）；Ａｆｆｙｍｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）：ＣＤ１６／３２（ＦＣ受容体ブロック、９３）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６、２９Ａ１．４）、ＣＤ８ａ（５３．６７）、及びＣＤ３ｅ（１４５－２Ｃ１１）；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）：ＥｐｈＡ２（２３３７２０）；またはＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）：Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ａｑｕａから購入した抗体で染色した。細胞を固定し、翌日、ＢＤ ＬＳＲＩＩ上で獲得した。以下のゲーティング戦略：ＣＤ４５＋ＥｐｈＡ２－、一重項（ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ）、生細胞（生／死陰性）、及びＣＤ１１ｂ－によりＦｌｏｗＪｏ（Ｖ１０、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を用いて結果を分析し、生きたリンパ球を単離した。ＮＫ細胞をＮＫｐ４６＋ＣＤ３－としてゲーティングし、ＣＤ４５＋生きた単細胞のパーセントとして表した。

【0366】

図３に示すように、抗ＦＧＦＲ２で処置した腫瘍は、生理食塩水対照で処置した腫瘍と比較して、ＮＫ細胞の増加を示した。

【0367】

実施例２ｂ：抗ＦＧＦＲ２抗体及び非抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑへの暴露は、腫瘍組織内のＮＫ細胞、Ｔ細胞の増加、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞の増加をもたらす
上述した実施例１と同様に、ＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈマウスに同所注射によって５×１０^４個の４Ｔ１細胞を接種した。腫瘍が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると（０日目）、マウスを腫瘍サイズに従って３つの投与群に分類した：ビヒクル（対照群）、１０ｍｇ／ｋｇの非フコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体（ＩＰ）（抗ＦＧＦＲ２群）、及び１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ抗体（抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ群）。Ｎ２９７Ｑ修飾は、抗体のエフェクター機能を排除することを意図する抗体のＦｃドメインにおける突然変異である。

【0368】

各群を、（ａ）０日目に１用量もしくは２用量を受けたマウスまたは（ｂ）３日目に１用量もしくは２用量を受けたマウスに細分し、１日目または４日目にそれぞれ投与した２４時間後にマウスを安楽死させ、組織学またはＦＡＣＳ分析用に処理した。

【0369】

組織学では、１日目及び４日目に、それぞれ第１及び第２処置の２４時間後にマウスをＣＯ_２で安楽死させた後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４で灌流させた。簡潔に言えば、マウスの胸部を迅速に開き、２０ゲージの針を備えたシリンジを使用して、左心室の切開を介して、４０ｍＬのＰＢＳを大動脈に注入した。右心房の開口部を介して血液及びＰＢＳを外に出した。４Ｔ１同所性腫瘍を除去し、４℃で１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬した。２時間後、組織をＰＢＳで３回濯いだ後、ＰＢＳ中の３０％スクロース中に一晩移した。翌日、腫瘍をＯＣＴ化合物中で凍結し、－８０Ｃで保存した。

【0370】

各腫瘍の２０μｍ厚の連続切片に切った。切片をスーパーフロストプラススライド（ＶＷＲ）上で１～２時間乾燥させた。０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで試験片を透過処理し、室温で１時間、ＰＢＳ ０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ブロッキング溶液）中の５％ヤギ正常血清でインキュベートし、非特異的抗体結合を遮断した。１時間後、ブロッキング溶液を除去し、切片を一次抗体中で一晩インキュベートした。ＮＫ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＮＫｐ４６（ＣＤ３３５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃１３７６０２）で切片をインキュベートした。ＰＤ－Ｌ１を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＰＤ－Ｌ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃１４－５９８２－８２）で切片をインキュベートした。ＣＤ３＋Ｔ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したハムスター抗ＣＤ３抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｃａｔ＃５５３０５８）で切片をインキュベートした。ＣＤ４＋Ｔ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＣＤ４抗体（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ、ｃａｔ＃ＭＣＡ４６３５）で切片をインキュベートした。ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＣＤ８抗体（Ａｂｃａｍ、ｃａｔ＃ａｂ２２３７８）で切片をインキュベートした。ＮＫ細胞及びＰＤ－Ｌ１染色は、両方の一次抗体がラット中で生成されたため、連続切片で行った。ＣＤ３及びＣＤ４陽性細胞を同じ切片で一緒に染色した。ＣＤ３及びＣＤ８染色はまた、同じ切片で行った。陰性対照試験片のみの二次抗体は、一次抗体ではなく５％正常血清中でインキュベートした。

【0371】

翌日、試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、ＰＢＳ中で１：４００に希釈したＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４標識ヤギ抗ラット（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１１２－５８５－１６７）二次抗体、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８標識ヤギ抗ハムスター（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１２７－５４５－１６０）二次抗体で室温にて４時間インキュベートした。試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で固定し、ＰＢＳでもう一度濯ぎ、ＤＡＰＩを含むベクタシールド（Ｖｅｃｔｏｒ、Ｈ－１２００）でマウントした。ＤＡＰＩを使用して、細胞核を標識した。

【0372】

ＡｘｉｏＣａｍ（登録商標）ＨＲｃカメラを備えたＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｈｏｔ（登録商標）２＋蛍光顕微鏡で試験片を調べた。腫瘍内のＮＫｐ４６＋及びＰＤ－Ｌ１＋細胞の量及び分布を示す実験群ごとの代表的な画像を収集し、図５ａ～５ｂに示す。

【0373】

ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑを注入したマウス由来の４Ｔ１腫瘍では、最小限に散在したＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞を処置の１日後に検出し、これらの細胞のほとんどは、腫瘍周辺に位置していた（図５ａ）。比較すると、１０ｍｇ／ｋｇで抗ＦＧＦＲ２による１日の処置後、ＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞がより多数であった。これらの細胞のほとんどは腫瘍端で見つかったが、いくつかは腫瘍の中心に浸潤していた（図５ａを参照）。第２用量の抗ＦＧＦＲ２の４日後に同様の結果が観察された（図５ｂ）。

【0374】

ＰＤ－Ｌ１染色により、ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑで１日処置した４Ｔ１腫瘍では、ＰＤ－Ｌ１免疫反応性は、腫瘍内の少数の細胞でしか見られないことが分かった（図５ａ）。これに対して、１用量の抗ＦＧＦＲ２の２４時間後、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞が腫瘍の中心内でより多数であった。処置を開始した４日後に同様の結果が観察された（図５ｂ）。

【0375】

ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ４染色により、ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑで１日または４日処置した腫瘍では、Ｔ細胞浸潤は、腫瘍の周辺のみに残されていることが分かった。これに対して、４日目に、抗ＦＧＦＲ２で処置した腫瘍は、腫瘍の中心内にＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ４陽性Ｔ細胞の浸潤をもたらした（図６ａ～６ｂ）。

【0376】

ＮＫ細胞の増加を定量化するための直交アッセイとして、前述のように２用量の生理食塩水または１０ｍｇ／Ｋｇの抗ＦＧＦＲ２もしくは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑを受けた４Ｔ１担癌マウスでＦＡＣＳを行った。ＦＡＣＳ分析では、腫瘍を１～２ｍｍ片に切り、振盪培養器中の１０％ ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍＬ ＤＮＡｓｅ Ｉ、及び２５０Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＩを有するＤＭＥＭ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）に３０分間、３７℃で載置した。７０μｍナイロンメッシュストレーナーに細胞を通過させ、単細胞懸濁液を、標準プロトコルに従って、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）：ＣＤ４５（ｃｌｏｎｅ ３０－Ｆ１１）ＣＤ４、（ＧＫ１．５）及びＣＤ１１ｂ（１Ｄ３）；Ａｆｆｙｍｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）：ＣＤ１６／３２（ＦＣ受容体ブロック、９３）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６、２９Ａ１．４）、ＣＤ８ａ（５３．６７）、及びＣＤ３ｅ（１４５－２Ｃ１１）；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）：ＥｐｈＡ２（２３３７２０）；またはＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）：Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ａｑｕａから購入した抗体で染色した。細胞を固定し、翌日、ＢＤ ＬＳＲＩＩ上で獲得した。以下のゲーティング戦略：ＣＤ４５＋ＥｐｈＡ２－、一重項（ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ）、生細胞（生／死陰性）、及びＣＤ１１ｂ－によりＦｌｏｗＪｏ（Ｖ１０、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を用いて結果を分析し、生きたリンパ球を単離した。ＮＫ細胞は、ＮＫｐ４６＋ＣＤ３－としてゲーティングした。ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞は、ＣＤ３＋細胞でゲーティングし、各サブセットは、ＣＤ４５＋生きた単細胞のパーセントとして表した。

【0377】

図１０ａに示すように、抗ＦＧＦＲ２で処置した腫瘍は、生理食塩水対照または抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑで処置した腫瘍と比較して、ＮＫ細胞の増加を示した。加えて、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ４ Ｔ細胞は、第２用量（図７～９）の２４時間後に上昇し、ビヒクルまたは抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑと比較して、抗ＦＧＦＲ２処置でリンパ系細胞対骨髄系細胞の比が優先的に増加した（図１０ｂ～ｃ）。

【0378】

実施例２ｃ：抗ＦＧＦＲ２抗体及び非抗ＦＧＦＲ２ Ｎ２９７Ｑ抗体への暴露は、腫瘍組織内のＦ４８０＋マクロファージを増加させる
４Ｔ１腫瘍中のマクロファージを検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗Ｆ４８０抗体（Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ Ｉｎｃ、ｃａｔ＃ ＭＣＡ４９７Ｒ）で切片をインキュベートした。ＮＫ細胞、ＰＤ－Ｌ１、及びＦ４８０染色は、これら全ての一次抗体がラット中で生成されたため、連続切片で行った。

【0379】

対照で処置したマウス由来の４Ｔ１腫瘍では、豊富なＦ４８０＋マクロファージが、腫瘍全体に検出された（図１１、上パネル）。比較すると、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２による４日間の処置後、腫瘍内で検出されたＦ４８０＋細胞の数は増加した（図１１、中パネル）。この効果は、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２抗体で１日処置した４Ｔ１担癌マウス、または抗ＦＧＦＲ２－Ｎ２９７Ｑ突然変異体抗体で１日もしくは４日処置した４Ｔ１担癌マウスでは見られなかった（図１１、下パネル）。

【0380】

実施例３：乳房４Ｔ１同系腫瘍モデルにおけるＦＧＦＲ２抗体とＰＤ－１抗体の組み合わせ
この実施例では、非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体（抗ＦＧＦＲ２）と抗ＰＤ－１抗体（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ、クローンＲＭＰ１－１４）の組み合わせの抗腫瘍効果は、免疫適格マウスにおける乳癌の４Ｔ１同系ネズミモデルで評価した。４Ｔ１モデルは、ＦＧＦＲ２－ＩＩＩｂの適度な過剰発現を示すが、ＦＧＦＲ２増幅されない。

【0381】

７０匹の８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。動物を到着時に少なくとも３日間順応させて、食料及び水に自由にアクセスできるように１ケージあたり５匹の動物を収容した。一度順応させると、動物の体重を測り、腫瘍細胞移植前に剃った。

【0382】

マウス株ＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈ由来の乳腫瘍株４Ｔ１を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ：カタログ番号ＣＲＬ－２５３９）から得た。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ １６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０－０４１－ＣＶ）中で３７℃にて細胞を培養した。

【0383】

マウスの頭部から４番目の乳腺乳頭（乳頭）下に５×１０^４個の４Ｔ１細胞を同所注射によって各マウスに接種した。その後、マウス腫瘍体積及び体重は、腫瘍体積が１５０ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３を測定するまで定期的に監視した。腫瘍が１５０ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると、マウスを腫瘍サイズに従って投与のための４つの群に分類した。第１群には、１０ｍｇ／ｋｇのＩｇ－ＦＣ対照を投与し（腹腔内（ＩＰ）、２週間に１回（ＢＩＷ））、第２群には、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体（ＩＰ、０、３、及び７日目）を投与し、第３群には１０ｍｇ／ｋｇのＦＧＦＲ２抗体を投与し（ＩＰ、ＢＩＷ）、ならびに第４群には、それぞれ５及び１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１とＦＧＦＲ２抗体の組み合わせを投与した。

【0384】

腫瘍体積は、移植後１２日目（投与０日目）、移植後１５日目、及び移植後１８日目に測定した。図４ａ及びｂは、１８日目までに、ＦＧＦＲ２抗体は、Ｉｇ－ＦＣ対照群と比較して、マウスにおける４Ｔ１腫瘍体積を有意に減少させたことを示す（ｔ検定によって、それぞれ、Ｐ＜０．００１またはＰ＝０．０１）。ＦＧＦＲ２抗体と抗ＰＤ－１抗体の組み合わせは、ＦＧＦＲ２抗体のみと比較して、１８日目までに腫瘍体積をさらに減少させた（それぞれ、Ｐ＝０．０８）（図４ａ～ｂを参照）。ＦＧＦＲ２抗体と抗ＰＤ－１抗体の組み合わせは、抗ＰＤ－１抗体のみと比較して、１８日目までに腫瘍体積をさらに減少させた（Ｐ＜０．０１）。

【0385】

全体として、ＦＧＦＲ２抗体による処置は、ＩｇＦＣと比較して、腫瘍増殖の約２５％阻害をもたらしたが、抗ＰＤ－１抗体による処置は、対照と比較して、腫瘍増殖の０％阻害をもたらした。抗ＦＧＦＲ２と抗ＰＤ－１抗体の両方による処理は、腫瘍増殖を約４０％阻害した。これは、併用処置が少なくとも相加的な利益を有することを示している。

【0386】

以下の表は、Ｆｃ－Ｇ１対照と比較した部分腫瘍体積（ＦＴＶ）の分析を示す。

ａ：ＦＴＶ＝部分腫瘍体積＝平均ＴＶ処置／平均ＴＶ対照
ｂ：腫瘍細胞移植後の日数
ｃ：期待値＝（平均ＦＴＶ薬物１）×（平均ＦＴＶ薬物２）
ｄ：観測値＝薬物１＋薬物２の組み合わせに対する平均ＦＴＶ
ｅ：報告値＝期待値（ｃ）÷観測値（ｄ）；値＞１は相乗的応答を示すが、値＝１は相加的応答を示し、値＜１は拮抗応答を示す

【0387】

本実験は、ＮＫ細胞枯渇腫瘍組織に対する抗ＦＧＦＲ２抗体の効果を試験した。マウス株ＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈ由来の乳腫瘍株４Ｔ１を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ：カタログ番号ＣＲＬ－２５３９）から得た。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ １６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０－０４１－ＣＶ）中で３７℃にて細胞を培養した。

【0388】

マウスの頭部から４番目の乳腺乳頭（乳頭）下に５×１０^４個の４Ｔ１細胞を同所注射によって各マウスに接種した。その後、マウス腫瘍体積及び体重は、腫瘍体積が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３を測定するまで定期的に監視した。腫瘍が１２５ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると、マウスを腫瘍サイズに従って投与のための４つの群に分類した（０日目）。１群には、１０ｍｇ／ｋｇのヒトＦｃ－Ｇ１対照抗体（０日目及び３日目に腹腔内（ＩＰ））を投与した。２群には、５０ｍｇ／ｋｇのウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）、ＢａｌｂＣマウス由来のＮＫ細胞を枯渇させるように設計された抗体を０日目に静脈内に１回投与した。３群には、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２（０日目及び３日目にＩＰ）を投与した。４群には、５０ｍｇ／ｋｇのウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（０日目）を、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２（０日目及び３日目にＩＰ）と組み合わせて投与した。

【0389】

組織学では、４日目に、第２処置の２４時間後にマウスをＣＯ_２で安楽死させた後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４で灌流させた。簡潔に言えば、マウスの胸部を迅速に開き、２０ゲージの針を備えたシリンジを使用して、左心室の切開を介して、４０ｍＬのＰＢＳを大動脈に注入した。右心房の開口部を介して血液及びＰＢＳを外に出した。４Ｔ１同所性腫瘍を除去し、４℃で１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬した。２時間後、組織をＰＢＳで３回濯いだ後、ＰＢＳ中の３０％スクロース中に一晩移した。翌日、腫瘍をＯＣＴ化合物中で凍結し、－８０Ｃで保存した。

【0390】

各腫瘍の２０μｍ厚の連続切片に切った。切片をスーパーフロストプラススライド（ＶＷＲ）上で１～２時間乾燥させた。０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで試験片を透過処理し、室温で１時間、ＰＢＳ ０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ブロッキング溶液）中の５％ヤギ正常血清でインキュベートし、非特異的抗体結合を遮断した。１時間後、ブロッキング溶液を除去し、切片を一次抗体中で一晩インキュベートした。ＮＫ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＮＫｐ４６（ＣＤ３３５；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃１３７６０２）で切片をインキュベートした。ＰＤ－Ｌ１を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したラット抗ＰＤ－Ｌ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃１４－５９８２－８２）で切片をインキュベートした。ＣＤ３＋Ｔ細胞を検出するため、ブロッキング溶液中で１：５００に希釈したハムスター抗ＣＤ３抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｃａｔ＃５５３０５８）で切片をインキュベートした。ＮＫ細胞及びＰＤ－Ｌ１染色は、これら全ての一次抗体がラット中で生成されたため、連続切片で行った。陰性対照試験片のみの二次抗体は、一次抗体ではなく５％正常血清中でインキュベートした。

【0391】

翌日、試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、ＰＢＳ中で１：４００に希釈したＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４標識ヤギ抗ラット（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１１２－５８５－１６７）二次抗体、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８標識ヤギ抗ハムスター（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１２７－５４５－１６０）二次抗体で室温にて４時間インキュベートした。試験片を０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＰＢＳで濯いだ後、１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で固定し、ＰＢＳでもう一度濯ぎ、ＤＡＰＩを含むベクタシールド（Ｖｅｃｔｏｒ、Ｈ－１２００）でマウントした。ＤＡＰＩを使用して、細胞核を標識した。

【0392】

ＡｘｉｏＣａｍ（登録商標）ＨＲｃカメラを備えたＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｈｏｔ（登録商標）２＋蛍光顕微鏡で試験片を調べた。腫瘍内のＮＫｐ４６＋、ＣＤ３＋、及びＰＤ－Ｌ１＋細胞の量及び分布を示す実験群ごとの代表的な画像を収集し、図１２～１４に示す。

【0393】

Ｆｃ－Ｇ１対照抗体を注入したマウス由来の４Ｔ１腫瘍では、最小限に散在したＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞を腫瘍内に検出した（図１２、上パネル）。５０ｍｇ／ｋｇ用量のウサギ抗アシアロＧＭ１抗体の投与は、対照と比較して、ＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞の数を減少させた（図１２、２番目のパネル）。１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２による４日間の処置後、ＮＫｐ４６＋ＮＫ細胞がより多数であった（図１２を参照、３番目のパネル）。しかしながら、この増加は、抗ＦＧＦＲ２をウサギ抗アシアロＧＭ１抗体及び抗ＦＧＦＲ２と組み合わせた場合には観察されなかった。併用処置後、ＮＫｐ４６＋ＮＫ浸潤細胞の数は、対照と同等であった（図１２、４番目のパネル）。

【0394】

ＣＤ３染色により、対照で４日間処置した４Ｔ１腫瘍では、僅かにまばらなＣＤ３＋Ｔ細胞が腫瘍内で見られ、これらのほとんどは、腫瘍周辺に位置していた（図１３、上パネル）。５０ｍｇ／ｋｇ用量のウサギ抗アシアロＧＭ１抗体による処置は、対照と比較して、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数に影響を与えなかった（図１３、２番目のパネル）。１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２による４日間の処置後、ＣＤ３＋Ｔ浸潤細胞の数は、対照と同等であった（図１３、３番目のパネル）。比較すると、抗ＦＧＦＲ２をウサギ抗アシアロＧＭ１抗体と組み合わせた場合、ＣＤ３＋Ｔ浸潤細胞の数は、対照と同等であった（図１３、４番目のパネル）。

【0395】

ＰＤ－Ｌ１染色により、対照で４日間処置した４Ｔ１腫瘍では、ＰＤ－Ｌ１免疫反応性は、腫瘍内のまばらな細胞でしか見られなかった（図１４、上パネル）。ウサギ抗アシアロＧＭ１抗体による処置は、ＰＤ－Ｌ１免疫反応性に影響を与えなかった（図１４、２番目のパネル）。抗ＦＧＦＲ２のみによる処置は、ＰＤ－Ｌ１陽性細胞の数を増加させたが（図１４、３番目のパネル）、抗ＦＧＦＲ２をウサギ抗アシアロＧＭ１抗体と組み合わせて与えた場合、ＰＤ－Ｌ１染色は、対照と同様であった（図１４、４番目のパネル）。

【0396】

実施例４ｂ：抗ＦＧＦＲ２抗体から腫瘍増殖の阻害は、ＮＫ細胞枯渇剤の存在下で減衰される
本実験は、４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける抗ＦＧＦＲ２有効性に対するＮＫ細胞を枯渇させる効果を試験した。マウス株ＢＡＬＢ／ｃｆＣ３Ｈ由来の乳腫瘍株４Ｔ１を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ：カタログ番号ＣＲＬ－２５３９）から得た。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ １６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０－０４１－ＣＶ）中で３７℃にて細胞を培養した。

【0397】

マウスの頭部から４番目の乳腺乳頭（乳頭）下に５×１０^４個の４Ｔ１細胞を同所注射によって各マウスに接種した。その後、マウス腫瘍体積及び体重は、腫瘍体積が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３を測定するまで定期的に監視した。腫瘍が１００ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると、マウスを腫瘍サイズに従って投与のための４つの群に分類した（０日目）。１群には、対照としてＰＢＳを投与した（０日目及び３日目に腹腔内（ＩＰ））。２群には、５０ｍｇ／ｋｇのウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）、ＢａｌｂＣマウス由来のＮＫ細胞を枯渇させるように設計された抗体を０日目に静脈内に１回投与した。３群には、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２（０日目及び３日目にＩＰ）を投与した。４群には、５０ｍｇ／ｋｇのウサギ抗アシアロＧＭ１抗体（０日目）を、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２（０日目及び３日目にＩＰ）と組み合わせて投与し、腫瘍体積を隔週で監視した。

【0398】

全体として、抗ＦＧＦＲ２による処置は、ＰＢＳ対照群及び抗アシアロＧＭ１抗体群（Ｐ＜０．０５）と比較して、腫瘍増殖の約３５％阻害（Ｐ＜０．０１）をもたらす。抗アシアロＧＭ１抗体による処置は、ＰＢＳ対照群と比較して、腫瘍負荷に対する効果は無かった。抗アシアロＧＭ１抗体と抗ＦＧＦＲ２の組み合わせは、抗ＦＧＦＲ２群（Ｐ＜０．０５）と比較して、腫瘍増殖阻害の減衰をもたらした。これは、ＮＫ細胞及びＡＤＣＣ活性が４Ｔ１同系腫瘍モデルにおける腫瘍増殖阻害を促進するのに不可欠であることを示唆している。組織学データと組み合わせて、抗ＦＧＦＲ２は、自然及び適応免疫系を通じた腫瘍微小環境の改変を介して４Ｔ１腫瘍負荷を阻害する。

【0399】

実施例４ｃ：抗ＦＧＦＲ２駆動腫瘍増殖阻害は、適応免疫系を欠いたＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスで鈍くなる
８週齢の雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。動物を到着時に少なくとも３日間順応させて、食料及び水に自由にアクセスできるように１ケージあたり５匹の動物を収容した。一度順応させると、動物の体重を測り、腫瘍細胞移植前に剃った。

【0400】

マウス由来の同系乳房腫瘍株４Ｔ１を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ：カタログ番号ＣＲＬ－２５３９）から得た。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ １６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０－０４１－ＣＶ）中で３７℃にて細胞を培養した。

【0401】

マウスの頭部から４番目の乳腺乳頭（乳頭）下に５×１０^４個の４Ｔ１細胞を同所注射によって各マウスに接種した。その後、マウス腫瘍体積及び体重は、腫瘍体積が８０ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３を測定するまで定期的に監視した。１２日目に、腫瘍が８０ｍｍ^３＋／－２５ｍｍ^３に到達すると、マウスを腫瘍サイズに従って投与のための２つの群に分類した。第１群には、ビヒクル対照を投与し、第２群には、２０ｍｇ／Ｋｇの非フコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体を投与した（１２日目及び１５日目に腹腔内（ＩＰ））。

【0402】

ＢａｌｂＣマウス（実施例１）における腫瘍体積の約３０％減少（Ｐ＜０．００１）に対して、抗ＦＧＦＲ２抗体による処置は、自然免疫系（ＮＫ細胞及びマクロファージ）を有するが、適応免疫細胞成分（Ｔ細胞及びＢ細胞）を欠いているＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスにおいて、ビヒクル対照と比較して、腫瘍増殖の約２０％阻害（Ｐ＜０．０５）をもたらす。

【0403】

これらのデータは、抗ＦＧＦＲ２抗体が、自然免疫細胞を刺激して、腫瘍細胞死滅を即時に開始することができることを示唆しているが、ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスは、適応免疫系に関与することができないようであるため、抗ＦＧＦＲ２抗体治療に対する鈍い応答を示す。これは、抗ＦＧＦＲ２抗体が自然及び適応免疫系と協調して動作し、腫瘍微小環境の変化をもたらし、免疫適格マウスにおいて持続的な腫瘍増殖阻害をもたらすことをさらに示している。

【0404】

実施例５：抗ＦＧＦＲ２抗体で処置した、固形腫瘍が進行した癌患者の非盲検第Ｉ相試験
配列番号６～１１の重鎖及び軽鎖ＨＶＲを含む非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体の用量漸増研究では、任意の局所進行性または転移性の固形腫瘍またはリンパ腫を有し、かつ、標準治療が使い尽された約３０人の患者を、抗体で２８日サイクルにて２週間毎に治療する。研究のパート１Ａでは、患者の６つのコホートに、用量漸増研究において６つの異なる用量レベル：０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１５ｍｇ／ｋｇを投与する。２８日サイクルにおける用量制限毒性のいずれかの発生について患者を評価する。臨床的に必要であれば、さらに２８日サイクルを続けてもよい。

【0405】

パート１Ｂでは、さらなる安全性及び有効性評価を、最大で３０人の胃癌患者、及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子を増幅するかもしくはＦＧＦＲ２ｂタンパク質を過剰発現することが知られている患者で行う。このパートの対象は、パート１Ａにおける６つのコホートの現在の最大用量レベルを下回る１用量レベル、すなわち、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇを最初に受け、最大耐量がパート１Ａで同定されない場合に、可能であれば、パート１Ｂで１５ｍｇ／ｋｇに増加させる。

【0406】

研究のパート１Ａ及び１Ｂで参照用量が同定されると、パート２を開始する。パート２は、組織学的に文書化された胃癌もしくは胃食道癌または他の組織学的もしくは細胞学的に確認された固形腫瘍型を有する：（ａ）ＦＧＦＲ２増幅を伴うＦＧＦＲ２ｂ過剰発現；（ｂ）ＦＧＦＲ２増幅を伴わないＦＧＦＲ２ｂ過剰発現、または（ｃ）ＦＧＦＲ２ｂ非過剰発現を有する、及び標準治療後に進行しているかもしくは標準治療に適していない局所再発もしくは転移性疾患を有する、及びＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義される測定可能な疾患も有する患者を含む。患者を３つのコホートにグループ分けする。約３０人の患者は、（ＩＨＣ分析によって３＋と決定された）ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現、及び（ＦＩＳＨ分析によって決定された、ＦＧＦＲ２対ＣＥＮ１０の比が≧２）ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の両方を伴う胃癌を有する。約３０人の患者は、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現（ＩＨＣ ３＋）を伴うが、ＦＧＦＲ２ｂ遺伝子増幅（おおよそ１のＦＩＳＨ比）の不在下の胃癌を有する。約１０人の患者は、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現（０～２＋のＩＨＣ分析）を有さない。

【0407】

研究の詳細な目的、プロトコル、及び選択／除外基準は以下の通りである：

【0408】

主な目的は、固形腫瘍が進行した患者における抗体の用量漸増の安全性プロファイルを評価し、最大耐量（ＭＴＤ）及び推奨用量（ＲＤ）を決定すること（パート１Ａ）；ならびに本明細書で「胃癌」と総称される胃癌または胃食道癌が進行した患者における抗体の用量漸増の安全性プロファイルを評価すること（パート１Ｂ）である。副次的な目的は、（ａ）胃癌患者及び他の固形腫瘍患者において静脈内投与された抗体の単回及び複数回投与のＰＫプロファイルを特徴付けること；（ｂ）投与された抗体への長期暴露の安全性及び忍容性を評価すること；（ｃ）ＦＧＦＲ２ｂ選択された胃癌を有する患者における客観的奏効率（ＯＲＲ）を評価すること（パート２のみ）；ならびに（ｄ）ＦＧＦＲ２ｂ選択された胃癌を有する患者の応答における奏効期間を評価すること（パート２のみ）である。

【0409】

いくつかの探索的な目的は、ＦＧＦＲ２増幅の存在下または不在下のいずれかにおいて、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する胃腫瘍を有する患者における安定した疾病率及び期間を評価すること（パート２のみ）；ＦＧＦＲ２増幅の存在下または不在下のいずれかにおいて、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する胃腫瘍を有する患者における無増悪生存期間（ＰＦＳ）を評価すること（パート２のみ）；ならびに（ｃ）腫瘍組織中のＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及びＦＧＦＲ２増幅の程度と臨床成果の間の関連を探ることである。

【0410】

これは、３つのパートの非盲検の安全性、忍容性、及びＰＫ研究である。患者は、研究のパート１（ＡまたはＢ）またはパート２のいずれかに登録されるが、パート１及び２の両方には登録されない。最長で２８日（４週間）の初期スクリーニング期間後、患者を２８日サイクルで２週間毎に抗体で治療する。パート１Ａでは、登録された各患者の安全性評価及び用量制限毒性の発生（ＤＬＴ観察期間）について２８日間観察する。追加処置は、臨床的に必要な場合、その後の２８日サイクルで２週間毎に投与してもよい（延長治療期間）。パート１Ｂでは、患者を、現在のパート１ＡのＤＬＴクリア用量レベルで、２８日サイクルで２週間毎に治療する。パート２では、患者を、パート１Ａ及び１Ｂで得られたデータの評価後に選択された推奨用量（ＲＤ）で、２８日サイクルで２週間毎に抗ＦＧＦＲ２抗体で治療する。

【0411】

パート１Ａは、標準治療が使い尽された任意の局所進行性または転移性の固形腫瘍またはリンパ腫を有する患者における用量漸増研究である。おおよそ６用量コホートが予想され、最低で３人の患者が各コホートで登録される。予想される用量レベルは、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び１５ｍｇ／ｋｇである。安全性及びＰＫパラメーターの検証は、最適な標的暴露に到達するために、代替用量レベルまたは投与レジメン（例えば、低頻度の投与）でコホートを追加する決定を通知し得る。全ての用量漸増決定は、ＤＬＴ、全体的な安全性、及び忍容性の評価に基づいており、各コホートに登録された最後の患者が最初の治療サイクルを完了した後に行われるであろう。用量漸増の決定は、スポンサー及び治験責任医師からなるコホート審査委員会（ＣＲＣ）によって合意されるであろう。最大耐量（ＭＴＤ）は、サイクル１（安全性及びＰＫ評価期間）の間に３３％未満の患者がＤＬＴを経験する最大用量として定義される。ＤＬＴが３人の患者のうちの１人に観察された場合、３人の追加の患者が同じ用量レベルで登録されるであろう。用量レベルで治療された３～６人の患者のうち２人がＤＬＴを経験するまで、用量漸増を続けてもよい。その後、次の低用量がＭＴＤと見なされる。あるいは、最後のクリア用量レベルと３３％を超えるＤＬＴをもたらす用量レベルの間の中間用量は、ＭＴＤに到達したと結論を下す前に探ってもよい。ＭＴＤまたはＲＤに到達すると、３～１０人の追加の胃癌患者を、パート２を開始する前に追加し、この用量レベルで安全性及びＰＫをさらに探ってもよい。

【0412】

以下のアルゴリズムが、パート１Ａの用量漸増決定に使用される：

【0413】

ＭＴＤは同定されないが、薬物暴露が非臨床薬理学データまたは臨床ＰＫプロファイルに基づいて必要と見なされたものを超える事象では、スポンサー及び治験責任医師は、用量漸増を中止することを決定してもよい。

【0414】

サイクル１（安全性及びＰＫ評価期間）の完了時に、パート１Ａの患者は、サイクル２の１日目から開始される任意の延長治療期間に参加してもよい。抗ＦＧＦＲ２抗体は、疾患の進行、許容できない毒性、患者もしくは医師の中止の決定、死亡、または研究の終了まで、４週間のサイクルで２週間毎に投与される。

【0415】

パート１Ｂの目的は、パート２を開始する前に胃癌患者における抗ＦＧＦＲ２抗体の安全性をさらに評価し、そのＰＫを評価することである。いくつかの抗体（例えば、ベバシズマブ及びトラスツズマブ）のクリアランスは、他の固形腫瘍を有する患者よりも胃癌患者においてより迅速であることが示されている。登録された患者は、腫瘍を遡及的に試験する胃癌患者、または、ＦＧＦＲ２遺伝子を増幅するかもしくはＦＧＦＲ２ｂタンパク質を過剰発現することが知られている患者であってもよい。パート１Ａ用量漸増による千鳥状の場合には、パート１Ｂの患者は、パート１Ａで研究されているコホートの現在の最大用量レベルを下回る１用量レベルで登録される。例えば、パート１Ａで研究されている現在の用量レベルが３ｍｇ／ｋｇである場合、パート１Ｂ患者の登録は、１ｍｇ／ｋｇの用量レベルであり；パート１Ａで研究されている現在の用量レベルが６ｍｇ／ｋｇである場合、パート１Ｂ患者の登録は、３ｍｇ／ｋｇの用量レベルであろう。

【0416】

パート１Ｂでは、おおよそ３人の患者を各用量レベルで登録し、スポンサー及び治験責任医師による選択によって、１用量コホートあたり最大で６人の患者を登録してもよい。用量漸増は、パート１ＡでＭＴＤが同定されない場合、パート１Ｂで１５ｍｇ／ｋｇまで継続してもよい。

【0417】

パート２における登録は、全体的な安全性、忍容性、ＰＫ、及び非臨床データから外挿された有効な曝露の推定値に基づいて、推奨用量（ＲＤ）がＣＲＣによって同定された場合に開始される。ＲＤは、パート１Ａで同定されたＭＴＤと同じである場合もあれば、そうでない場合もある。例えば、ＭＴＤに達していない場合、またはＭＴＤでの曝露が有効性のために必要であると考えられるレベルよりもはるかに高い場合、またはパート１Ｂ患者からのデータもしくはパート１（Ａ及びＢ）の両方からのその後の治療サイクルが安全性プロファイルにおいてさらなる洞察を提供する場合、ＲＤは、ＭＴＤよりも高用量ではないが異なる用量であり得る。ＲＤが確立されると、ＦＧＦＲ２ｂ発現に基づいて選択された胃癌を有する患者を研究のパート２に登録する。抗体治療から臨床的利益の最大の可能性を有する選択された癌患者集団における安全性及び予備的有効性をさらに特徴付けるために、パート２患者を登録し、治療する。治療は、疾患の進行、許容できない毒性、患者もしくは医師の中止の決定、死亡、または研究の終了まで継続してもよい。

【0418】

パート１（ＡまたはＢ）またはパート２に登録する患者は、以下の全ての選択基準を満たさなければならない：
１）任意の研究特有の評価の前に、機関審査委員会／独立倫理委員会が承認したインフォームドコンセント形式を理解し署名する；
２）少なくとも３ヵ月の平均余命；
３）０～１のＥＣＯＧパフォーマンスステータス；
４）台湾の患者を除いて、インフォームドコンセント形式に署名した時点で年齢≧１８歳、患者の年齢は、インフォームドコンセント形式に署名した時点で≧２０歳である必要がある；
５）性的に活発な患者（すなわち、１２カ月連続の無月経によって定義された閉経を経験していないか、または永続的な避妊手術をしていない妊娠可能性のある女性、及び永続的な避妊手術をしていない男性）、２つの効果的な避妊方法を使用する意欲、そのうちの１つは、抗ＦＧＦＲ２抗体の最終投与後から６ヶ月まで、物理的障壁法（コンドーム、ペッサリー、または子宮頚部／ボルトキャップ）でなければならない。他の効果的な避妊方法は、スクリーニングの少なくとも６ヶ月前に永続的な避妊（子宮摘出及び／または両側卵巣摘出、または手術による両側卵管結紮、または精管切除）である。妊娠可能性のある女性患者は、研究の少なくとも９０日前から安定した経口避妊薬治療または子宮内またはインプラント装置を使用しているか、生き方として性交を避ける必要がある。
６）以下の臨床検査値によって確認された十分な血液学的及び生物学的機能：
ａ）骨髄機能
ｉ）ＡＮＣ≧１．５×１０^９／Ｌ
ｉｉ）血小板＞１００×１０^９／Ｌ
ｉｉｉ）ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
ｂ）肝機能
ｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦３×正常上限（ＵＬＮ）；肝転移がある場合、≦５×ＵＬＮ
ｉｉ）ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
ｃ）腎機能
ｉ）血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ
７）ＦＧＦＲ２ｂ発現及びＦＧＦＲ２増幅（パート１Ａ患者ごとに任意）の決定のために利用可能な腫瘍組織。

【0419】

研究のパート１Ａ（用量漸増）に登録する患者も、以下の選択基準を満たさなければならない：
８）局所再発または転移性であり、かつ、標準治療後に進行しているかまたは標準治療に適していない組織学的または細胞学的に確認された固形腫瘍またはリンパ腫；
９）測定可能または測定不能な疾患。

【0420】

研究のパート１Ｂに登録する患者も、以下の選択基準を満たさなければならない：
１０）組織学的に文書化された胃癌または胃食道癌；
１１）ＦＧＦＲ２ｂ発現及びＦＧＦＲ２増幅のプロスペクティブまたはレトロスペクティブな決定のための腫瘍組織；
１２）標準治療後に進行しているかまたは標準治療に適していない局所再発または転移性疾患；
１３）ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義される測定可能な疾患。

【0421】

研究のパート２（用量拡大）に登録する患者も、以下の選択基準を満たさなければならない：
１４）以下のものを有する組織学的に文書化された胃癌または胃食道癌
ａ）ＦＧＦＲ２増幅を伴うＦＧＦＲ２ｂ過剰発現、または
ｂ）ＦＧＦＲ２増幅を伴わないＦＧＦＲ２ｂ過剰発現、または
ｃ）ＦＧＦＲ２ｂ非過剰発現；
１５）標準治療後に進行しているかまたは標準治療に適していない局所再発または転移性疾患；
１６）ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義される測定可能な疾患。

【0422】

パート１（ＡまたはＢ）またはパート２に登録する患者は、以下のいずれかの基準が適用される場合、除外される：
１）未処置または症候性の中枢神経系（ＣＮＳ）転移。無症候性ＣＮＳ転移を有する患者は、少なくとも４週間臨床的に安定しており、かつ、ＣＮＳ疾患に関連する症状を管理するための外科手術、放射線療法、または任意のコルチコステロイド療法などの介入を必要としない限り適任である。
２）以下のいずれかを含む、心臓機能障害または臨床的に有意な心臓疾患：
ａ）抗体の初回スケジュール投与の≦６ヵ月前の不安定な狭心症
ｂ）抗体の初回スケジュール投与の≦６ヵ月前の急性心筋梗塞
３）ＱＴｃセグメント＞４７０ミリ秒
４）公知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する病気、または慢性Ｂ型もしくはＣ型肝炎の病歴。
５）抗体の初回投与の≦１４日前（韓国の患者では≦２８日前）に任意の抗癌治療による治療、または治験薬による別の治療的臨床研究への参加。
６）前治療からの継続的な副作用＞ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード１。
ａ）網膜疾患、または網膜疾患もしくは剥離の病歴、または眼科医の意見における、網膜剥離のリスクの増加
ｂ）網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、または中心性漿液性網膜症の現在の証拠または既往歴。
ｃ）研究１日目前の１ヵ月以内に診断された緑内障
ｄ）緑内障の継続的な医学療法。
ｅ）黄斑変性の前眼内注射またはレーザー治療。
ｆ）角膜欠陥、角膜潰瘍、角膜炎、円錐角膜、角膜移植の病歴、または、眼科医の意見において、抗ＦＧＦＲ２抗体治療にリスクをもたらし得る角膜の他の公知の異常。
ｇ）ＥＧＦＲまたはＡＬＫ ＴＫＩを受けていない、それぞれ、エクソン１９または２１のＥＧＦＲ突然変異またはＡＬＫ増幅を有するＮＳＣＬＣ患者（パート１Ａのみ）。
ｈ）抗ＨＥＲ２標的治療を受けていない、ＨＥＲ２過剰発現を有する胃癌及び乳癌患者。
ｉ）大手術は、抗ＦＧＦＲ２抗体の投与≦２８日前には許されない。全ての場合において、患者は、治療投与前に十分に回復し、安定していなければならない。
ｊ）妊娠中または授乳中の女性；妊娠可能性のある女性は、研究中に妊娠を検討してはならない。
ｋ）臨床研究と相容れない任意の重篤または不安定な付随する全身性疾患（例えば、薬物乱用、精神障害、または制御不能な併発疾患、例えば、活動性感染症、動脈血栓症、及び症候性肺塞栓症）の存在。
ｌ）研究参加に関連したリスクを増加し得る、または研究結果の解釈を妨害し得る、及び治験責任医師の意見において、研究への患者のエントリーを不適切にさせる任意の他の状態の存在。
７）ポリソルベートを含む抗ＦＧＦＲ２抗体製剤の成分に対する公知のアレルギーまたは過敏症。
８）以下のものを除く、以前の悪性腫瘍の病歴：
ａ）治療的に処置された非黒色腫皮膚癌、または
ｂ）再発の証拠無しに５年以上前に治療的に処置された固形腫瘍または
ｃ）治験責任医師の意見において、研究治療効果の決定に影響を及ぼさない他の悪性腫瘍の病歴。
９）パート１Ｂ及び２（用量拡大）では、ＦＧＦ－ＦＧＦＲ経路の任意の選択的阻害剤（例えば、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＪＮＪ－４２７５６４９３、ＢＡＹ１１７９４７０）による前治療。

【0423】

これらの選択基準または除外基準の免除は認められない。

【0424】

パート２には、以下の研究コホートＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦが関与する。コホートＡには、ＩＨＣ ３＋≧１０％腫瘍膜染色と定義される、強いＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴う胃癌を有する約３０人の患者が関与する。コホートＣには、ＩＨＣ＝０と定義されるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴わない約１０～３０人の胃癌患者が関与する。コホートＤ～Ｆも含まれ得る。コホートＤには、ＩＨＣ ２＋≧１０％及び／またはＩＨＣ ３＋＜１０％腫瘍膜染色と定義される、中程度のＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴う胃癌を有する約３０人の患者が関与する。コホートＥには、ＩＨＣ １＋及び／またはＩＨＣ ２＋＜１０％腫瘍膜染色と定義される、低ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴う胃癌を有する約３０人の患者が関与する。コホートＦには、検査した腫瘍型ごとに約３０人の非胃の固形腫瘍患者が関与する。膀胱癌患者の場合、２つのサブグループが存在する。サブグループ１は、１０～１９のＦＧＦＲ２ｂのＨスコアを有し、サブグループ２は、２０以上のＦＧＦＲ２ｂのＨスコアを有する。

【0425】

研究投薬：抗ＦＧＦＲ２抗体は、研究場所で投与するための静脈内バッグに希釈するための無菌バイアルで供給される。パート１Ａでは、患者は、２用量の抗ＦＧＦＲ２抗体を２週間間隔で受ける。初回サイクルの終わりまでに疾患の進行なく許容される場合、患者は、延長治療期間で研究を継続する資格があり、疾患の進行または研究離脱の他の原因があるまで、抗ＦＧＦＲ２抗体を２週間毎に受ける。

【0426】

用量調節：用量減少は、スポンサーとの協議及び承認後に、パート１ＡにおいてＤＬＴ期間を超えて治療中の患者、または、パート１Ｂもしくは２における任意の患者に対して許可し得る。患者は、有害事象または他の事象に対して最大２連続の用量（用量間で最大６週間）を見逃してもよく；有害事象または他の事象に対して６週間を超える追加投与の省略は、研究のスポンサーによって許可されない限り、研究から患者の除去を必要とする。パート１（Ａ及びＢ）及びパート２における患者ごとの開始用量を上回る患者内用量漸増は、許可されない。関連しない理由により患者の用量を減少させる場合、最初に割り当てられた用量への用量漸増は、スポンサーとの協議及び承認後に生じ得る。

【0427】

併用薬物療法：支持療法（例えば、制吐剤；疼痛管理のための鎮痛剤）は、研究者の裁量かつ施設の手順に従って使用してもよい。造血刺激剤は、必要であれば使用してもよい。あらゆる種類の併用抗癌治療は、乳癌または前立腺癌のための黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）調節剤などの慢性維持療法を除いては許可されない。慢性維持療法は、患者がこれらの薬剤を使用しており、かつ、１）継続使用が腫瘍測定のさらなる減少をもたらす可能性が低く、２）患者に対する標準治療を考えられる場合には継続してもよい。

【0428】

離脱：患者は、以下のいずれかが適用される場合、プロトコル規定治療を中止しなければならない：
・患者の要請または法的に認定された代理人からの要請による同意の撤回；
・患者の疾患の進行；孤立疾患の進行にもかかわらず臨床的利益を受けている患者は、医療用監視との協議後に研究を継続してもよい；
・患者に許容できない安全上のリスクをもたらすであろう任意の事象；
・臨床状態の評価に有意な程度で影響を及ぼす併発疾患；
・研究中の任意の時点で陽性妊娠検査；
・スポンサーまたはその認定代理人の特定の要請（例えば、研究が患者の安全上の理由のために終了した場合）。

【0429】

薬物動態評価：パート１Ａ及び１Ｂに登録された患者は、サイクル１中の１日目、２日目、４日目、及び８日目に血清抗ＦＧＦＲ２抗体濃度を測定するために採血される。加えて、サイクル１の１５日目、及びサイクル２～５の１日目、及びサイクル５から開始して１つおきのサイクルの１日目での注入の前と終わりの両方に、ならびに治療の終わりに血液試料を回収する。パート２の患者では、サイクル１の血液試料を１日目の注入の前と終わりの両方に、及び８日目に回収する。サイクル１の１５日目、及びサイクル２～５の１日目、及びサイクル５から開始して１つおきのサイクルの１日目での注入の前と終わりの両方に、ならびに治療の終わりに血液試料を回収し、ＦＧＦＲ２増幅を伴うかまたは伴わずにＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍を有する選択された胃癌患者のＰＫを探る。標準ＰＫパラメーターは、血清抗ＦＧＦＲ２抗体濃度－時間データに基づいて決定される。

【0430】

免疫原性：研究における全患者は、抗ＦＧＦＲ２抗体に対する抗体を測定するためにサイクル１～５及びサイクル５から１つおきのサイクルの１日目の投与前に血液試料を回収される。

【0431】

有効性評価：有効性対策としては、臨床検査及び適切なイメージング技術、好ましくは、ＲＥＣＩＳＴあたり適当なスライス厚を有する胸部、腹部、及び骨盤のコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンからなる腫瘍評価が含まれ；他の評価（核磁気共鳴画像［ＭＲＩ］）、Ｘ線、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、及び超音波）は、必要に応じて行ってもよい。腫瘍評価は、スクリーニング時に行った後、初回投与から６週間毎に２４週間行い、その後、おおよそ１２週間毎に行う。最初の完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）が一度指摘されたら、確認スキャンを４～６週間後に行わなければならない。

【0432】

安全評価：安全対策としては、ＡＥ、血液学、臨床化学、検尿、バイタルサイン、体重、併用薬／手順、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、対象の身体検査、ＥＣＧ、眼科／網膜検査、及び抗ＦＧＦＲ２抗体用量の変更が含まれる。

【0433】

本研究で計画された総登録は、おおよそ１００～１３０人の患者であり：おおよそ２０～３０人の患者がパート１Ａに登録される。パート１Ｂでは、胃癌を有する最大で３０人の患者が登録される。パート２では、以下のうちの１つ以上の登録によって探索活動を調べる：
・コホートＡ：ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現（ＩＨＣ ３＋）及びＦＧＦＲ２増幅（ＦＩＳＨ≧２比）の両方を伴う胃癌を有するおおよそ３０人の患者；
・コホートＢ：ＦＧＦＲ２選択の予測重要性の特徴付けを助けるために、ＦＧＦＲ２増幅（ＦＩＳＨ比＝１）の不在下でＦＧＦＲ２ｂ過剰発現（ＩＨＣ ３＋）を伴う胃癌を有するおおよそ３０人の患者。
・コホートＣ：ＩＨＣ＝０～２＋と定義されるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴わない約１０～３０人の胃癌患者。
・コホートＤ：ＩＨＣ ２＋≧１０％及び／またはＩＨＣ ３＋＜１０％腫瘍膜染色と定義される、中程度のＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴う胃癌を有する約３０人の患者。
・コホートＥ：ＩＨＣ １＋及び／またはＩＨＣ ２＋＜１０％腫瘍膜染色と定義される、低ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現を伴う胃癌を有する約３０人の患者。
・コホートＦ：検査した腫瘍型ごとに約３０人の非胃の固形腫瘍患者。膀胱癌患者の場合、２つのサブグループが存在する。サブグループ１は、１０～１９のＦＧＦＲ２ｂのＨスコアを有し、サブグループ２は、２０以上のＦＧＦＲ２ｂのＨスコアを有する。

【0434】

実施例６：抗ＦＧＦＲ２抗体による膀胱癌患者の治療
本実施例は、彼の主治医に血尿を提示後、２０１４年７月に膀胱癌と診断されている、上記研究（実施例５を参照）に登録された７６歳の男性の、実施例５に記載される研究の配列番号６～１１の重鎖及び軽鎖ＨＶＲを含む非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体による治療について述べる。患者は、診断膀胱鏡検査及び生検を行い、その後、原発腫瘍の切除を行った。彼は、Ｔ２、Ｎ２、Ｍ０としてステージ診断され（腫瘍は筋肉壁に浸潤し、６つサンプリングしたリンパ節のうちの３つが陽性であった）、ステージ４の対象とされた。彼は、補助療法において４サイクルのゲムシタビン及びシスプラチン（ＳＯＣ）を受けた。２０１５年３月には、補助化学療法終了の約６ヵ月後に、患者は、日常的サーベイランスのＰＥＴ及びＣＴを受けた。骨盤及び後腹膜において複数の拡大したリンパ節がＣＴにより示された一方、これらは代謝的に活性であり、かつ、再発の転移性膀胱癌（ＵＢＣ）と一致することがＰＥＴにより確認された。患者は、おおよそ２週間毎に３ｍｇ／ｋｇの用量で抗ＦＧＦＲ２抗体を受け始めた。その後、サイズが最も大きいリンパ節と全体的なリンパ節腫脹を追跡した。２０１５年４月における初期スクリーニング及び抗ＦＧＦＲ２初回投与の際には、最も大きいリンパ節は、１８×１２ｍｍであった。６週間後、最も大きいリンパ節は、１５×１１ｍｍと測定され、１２週間後、サイズは９×７ｍｍになり、約１／２に退縮した。２０１４年８月には、目立ったリンパ節腫脹は観察されなかった。その後の再ステージングスキャンにより目立ったリンパ節腫脹はないことが確認され、２０１５年１１月に行ったＰＥＴにより異常な代謝活性は示されなかった。患者は、抗ＦＧＦＲ２抗体療法を現在も継続している。

【0435】

実施例７：ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現に対する膀胱癌試料の免疫組織化学分析
膀胱癌集団におけるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現の頻度を評価するため、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用した。免疫組織化学（ＩＨＣ）は、ＧＡＬ－ＦＲ２１のネズミ可変領域を含むネズミαＦＧＦＲ２ｂ抗体を用いて、正常膀胱及びアーカイブ尿路上皮癌（ＵＣ）試料で行った（米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号を参照）。４２２個のホルマリン固定パラフィン包埋ＵＣ切片（原発及び転移の両方、全切片、または組織マイクロアレイフォーマットにおける）を染色し、発色基質を用いて検出した。膜性腫瘍細胞染色強度を０～３のスケールでスコア付けし、「０」のスコアは、反応性が観察されない場合、または腫瘍細胞の＜１０％でしか膜反応性がない場合に与えられ；「１＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において微かなもしくは僅かな知覚膜反応性がある場合、または細胞が膜の一部にのみ反応性である場合に与えられ；「２＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において弱～中程度の完全な側底膜または横膜反応性がある場合に与えられ；及び「３＋」のスコアは、腫瘍細胞の少なくとも１０％において強い完全な側底膜または横膜反応性がある場合に与えられる。腫瘍細胞の≧１０％において１＋の膜反応性がある腫瘍は、本実験で陽性と考えた。

【0436】

正常膀胱は、移行上皮の弱い染色（＜１＋）を有する。しかしながら、４２２個のアーカイブ原発ＵＣ試料のＩＨＣ分析により、ＦＧＦＲ２ｂが少なくとも１＋の発現強度で試料の＞１０％において過剰発現されることが示された。

【0437】

さらに、外科切除由来の抗ＦＧＦＲ２応答性の膀胱癌患者（実施例６を参照）の原発腫瘍試料は、１５％の２＋ＩＨＣ染色、及び３５％の１＋ＦＰＲ２－Ｄ抗体染色を有した。これは、胃癌患者由来の以前のデータと対照的であり、３＋染色を有する患者腫瘍試料を選択し、客観的応答が見られた。抗ＦＧＦＲ２抗体に対するこの患者の応答（実施例６を参照）、及びＵＣ試料における陽性ＩＨＣ染色は、膀胱癌が抗ＦＧＦＲ２抗体治療に敏感になり得る追加の兆候であることを集合的に示唆している。

【0438】

実施例８：固形腫瘍が進行した患者における、ニボルマブと併用した抗ＦＧＦＲ２抗体の非盲検の第Ｉ相試験
固形腫瘍が進行した患者におけるニボルマブと併用した配列番号６～１１の重鎖及び軽鎖ＨＶＲを含む非フコシル化ＦＧＦＲ２抗体の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び予備的有効性を評価するために、２パート、非盲検、多施設、用量漸増、及び用量拡大の研究を行う。研究の各パートは、３期間：スクリーニング（最長で２８日）、治療、及びフォローアップ（最長で１００日）からなる。抗ＦＧＦＲ２抗体及びニボルマブは、各１４日間治療サイクルの１日目に与える。抗ＦＧＦＲ２抗体を３０分かけてＩＶ注入として投与し、３０分試験を行った後、ニボルマブを３０分かけてＩＶ注入として投与する。任意のグレード３または高い注入反応が、提案された注入速度でいずれかの薬物の注入中に観察される場合、注入速度は、本研究の期間中、現在及びその後の全患者に対して６０分に延長される。研究の治療及びフォローアップ期間の完了後、全患者の生存率を追跡する。

【0439】

研究は、パート１用量漸増及びパート２用量拡大を含む。パート１は、胃癌または胃食道接合部癌（胃癌と総称される）を有する患者における、ニボルマブと併用した抗ＦＧＦＲ２抗体の２つの計画された投与コホートからなる。表現型の特徴は、この研究の用量漸増パートに研究エントリーする必要はないが、遡及的に行われる。この表現型の特徴は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によるＦＧＦＲ２ｂ及びＰＤ－Ｌ１の発現の分析が含まれるが、これらに限定されない。パート１に登録された各患者は、安全性評価及び用量制限毒性の発生（ＤＬＴ観察期間）について２８日間（または２つの１４日サイクルの完了時に）観察される。パート１に登録された任意の患者において遅延ＤＬＴ（治験薬の投与の４～６週間後に生じる任意のＡＥと定義される）の最初の発生時に、現在進行中のＤＬＴ期間とその後のＤＬＴ期間は全て、パート１に登録された残りの患者とその後の患者の全員について、４２日（または３つの１４日サイクルの完了時に）に拡大される。追加処置は、臨床的に必要な場合、その後の１４日サイクルで２週間毎に投与してもよい（延長治療期間）。

【0440】

パート２は、胃癌が進行した患者における２つの拡大コホートからなる。研究のパート２への登録は、検証されたアッセイを用いた、ＦＧＦＲ２ｂ発現のプロスペクティブＩＨＣ分析を必要とする。その腫瘍がＩＨＣによってＦＧＦＲ２ｂに対して陽性である患者は、他の適格基準を満たす限り、登録を許可される。研究のパート２における２コホートは、患者の腫瘍におけるＦＧＦＲ２ｂのＩＨＣ陽性レベルによって定義される。コホート２ａは、腫瘍が少なくとも１０％の腫瘍細胞中で１＋または２＋の強度で染色する患者を含む。コホート２ｂは、腫瘍が少なくとも１０％の腫瘍細胞中で３＋の強度で染色する患者を含む。これらのコホートの各々のオープニングは、スポンサーの裁量であろう。研究のパート２用量拡大部分は、非盲検である。適格基準の全てを満たす患者は、パート１で得られたデータの評価後に選択された推奨用量（ＲＤ）で、３ｍｇ／ｋｇのニボルマブと併用した抗ＦＧＦＲ２抗体で、１４日サイクルで２週間毎に治療される。患者は、研究のパート１またはパート２のいずれかに登録されるが、両方には登録されない。

【0441】

パート１では、２用量コホートは、最低６人の胃癌患者が各コホートに登録されることが予想される。計画された用量レベルは、以下の通りである；最初の患者は、用量レベル１に登録される：
用量レベル－１：６ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２抗体＋３ｍｇ／ｋｇのニボルマブ（ｑ２ｗ）
用量レベル１：１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２抗体＋３ｍｇ／ｋｇのニボルマブ（ｑ２ｗ）
用量レベル２：１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２抗体＋３ｍｇ／ｋｇのニボルマブ（ｑ２ｗ）

【0442】

全ての用量漸増決定は、ＤＬＴ、全体的な安全性、及び忍容性の評価に基づいており、各コホートに登録された最後の患者が所定のＤＬＴ観察期間を完了した後に行われるであろう。用量漸増の決定は、スポンサー及び治験責任医師からなるコホート審査委員会（ＣＲＣ）によって合意されるであろう。安全性及びＰＫパラメーターの検証は、最適な標的暴露に到達するために、代替用量レベルでコホートを追加する決定を通知し得る。用量レベル－１は、低用量の抗ＦＧＦＲ２抗体の検討を必要とする用量レベル１でＤＬＴが観察される場合にのみ問い合わせる。観察されたＤＬＴ≦１の最高用量レベルは、第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）と見なされる。追加の８人の患者は、ＲＰ２Ｄの同定後に研究のパート１に登録される。従って、パート１の登録は、おおよそ２０人の患者であろう。

【0443】

ＤＬＴ観察期間の完了時に、パート１の患者は、サイクル２の１日目から始まる任意の延長治療期間に参加してもよい。抗ＦＧＦＲ２抗体は、疾患の進行、許容できない毒性、患者もしくは医師の中止の要請、死亡、または研究の終了まで、４週間のサイクルで２週間毎に同じ用量レベルでニボルマブと併用して投与され続ける。

【0444】

ニボルマブと併用した抗ＦＧＦＲ２抗体の安全性及び有効性をさらに特徴付けるため、パート２には、おおよそ４０人の胃癌が進行した患者を登録し、２コホート内で、１コホートあたり２０人の患者である。これらの２コホートは、ＦＧＦＲ２ｂに対する腫瘍のＩＨＣ陽性の程度が異なるであろう。腫瘍が中央判定（低または中程度の過剰発現）によって腫瘍細胞の≧１０％において１＋または２＋とスコア付けされる患者は、コホート２Ａに置かれ；腫瘍が腫瘍細胞の≧１０％において３＋とランク付けされる患者は、コホート２Ｂに登録されるであろう。パート２の登録は、推奨用量（ＲＤ）が全体的な安全性及び忍容性に基づいてＣＲＣによって同定された時に開始される。ＲＤは、パート１で同定されたＭＴＤと同じであっても同じでなくてもよい。抗ＦＧＦＲ２抗体は、疾患の進行、許容できない毒性、患者もしくは医師の中止の要請、死亡、または研究の終了まで、４週間のサイクルで２週間毎にＲＤでニボルマブと併用して投与されるであろう。

【0445】

最初の２０人の患者の登録及び評価後、さらなる探求に値する十分な活性が観察される場合、１コホートあたり別の２０人の患者の登録を受け付ける。各コホートのオープニング及び２０人の患者のいずれかのコホートへの追加は、スポンサーの裁量で行われるであろう。

【0446】

パート２に登録された患者は、検証された免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイを用いて、ＰＤ－Ｌ１発現を遡及的に試験された腫瘍組織（アーカイブ及び／または最近）を有するであろう。原発腫瘍部位または転移性部位での生検は、選択された腫瘍マーカーの免疫浸潤及び発現を調べるために、治療前及び治療中に（実現可能として）得られる。任意の生検は、応答及び／または進行した腫瘍について、耐性機序を理解するために治療時または治療後に得てもよい。

【0447】

抗ＦＧＦＲ２抗体の用量減少は、プロトコルに概説されたガイドラインあたり、パート１においてＤＬＴ期間を超えて治療中の患者、またはパート２における任意の患者に対して許可してもよい。

【0448】

北米及び欧州から最大でおおよそ６０人の対象が、本研究に登録されることが計画される。これは、パート１用量漸増における２０人の患者と、パート２用量拡大におけるおおよそ４０人の患者を含む。

【0449】

選択基準
パート１またはパート２に登録する患者は、以下の全ての選択基準を満たさなければならない：
１．任意の研究特有の評価の前に、機関審査委員会／独立倫理委員会が承認したインフォームドコンセント形式を理解し署名する
２．少なくとも３ヵ月の平均余命
３．０～１のＥＣＯＧパフォーマンスステータス
４．インフォームドコンセント形式に署名した時点で年齢≧１８歳
５．性的に活発な患者（すなわち、１２カ月連続の無月経によって定義された閉経を経験していないか、または永続的な避妊手術をしていない妊娠可能性のある女性、及び永続的な避妊手術をしていない男性）、２つの効果的な避妊方法を使用する意欲、そのうちの１つは、抗ＦＧＦＲ２抗体の最終投与後から６ヶ月まで、物理的障壁法（コンドーム、ペッサリー、または子宮頚部／ボルトキャップ）でなければならない。他の効果的な避妊方法は、スクリーニングの少なくとも６ヶ月前に永続的な避妊（子宮摘出及び／または両側卵巣摘出、または手術による両側卵管結紮、または精管切除）である。妊娠可能性のある女性患者は、研究の少なくとも９０日前から安定した経口避妊薬治療または子宮内またはインプラント装置を使用しているか、生き方として性交を避ける必要がある。
６．以下の臨床検査値によって確認された十分な血液学的及び生物学的機能：
ａ）骨髄機能
・ＡＮＣ≧１．５×１０^９／Ｌ
・血小板＞１００×１０^９／Ｌ
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
ｂ）肝機能
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦３×正常上限（ＵＬＮ）；肝転移がある場合、≦５×ＵＬＮ
・ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
ｃ）腎機能
・血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ
７．局所再発または転移性であり、かつ、標準治療後に進行しているかまたは標準治療に適していない組織学的または細胞学的に確認された胃癌または胃食道癌。
研究のパート１（用量漸増）に登録する患者も、以下の選択基準を満たさなければならない：
７．測定可能または評価可能な疾患
研究のパート２（用量拡大）に登録する患者も、以下の選択基準を満たさなければならない：
８．ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義される測定可能な疾患
９．検証されたＩＨＣアッセイによって決定されるＦＧＦＲ２ｂ発現の腫瘍陽性
１０．ＰＤ－Ｌ１発現のレトロスペクティブ決定のための（アーカイブまたは最近の）腫瘍組織

【0450】

除外基準
パート１またはパート２に登録する患者は、以下のいずれかの基準が適用される場合、除外される：
１．未処置または症候性の中枢神経系（ＣＮＳ）転移。無症候性ＣＮＳ転移を有する患者は、少なくとも４週間臨床的に安定しており、かつ、ＣＮＳ疾患に関連する症状を管理するための外科手術、放射線療法、または任意のコルチコステロイド療法などの介入を必要としない限り適任である。
２．以下のいずれかを含む、心臓機能障害または臨床的に有意な心臓疾患：
〇抗ＦＧＦＲ２抗体の初回スケジュール投与の≦６ヵ月前の不安定な狭心症
〇抗ＦＧＦＲ２抗体の初回スケジュール投与の≦６ヵ月前の急性心筋梗塞
３．ＱＴｃセグメント＞４７０ミリ秒
４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）１型もしくは２型または公知の後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の検査で陽性の公知の病歴
５．急性または慢性感染を示すＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）または検出可能なＣ型肝炎ウイルスリボ核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）の陽性検査
６．スクリーニング時の潜在性結核（ＴＢ）に対する陽性検査（Ｑｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ検査）または活動性ＴＢの証拠
７．症候性間質肺疾患または炎症性肺炎
８．活性な、公知の、または疑われる自己免疫疾患。Ｉ型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする甲状腺機能低下症、全身治療を必要としない皮膚障害（例えば、白斑、乾癬、または脱毛症）、または外部トリガーの不在下で再発しないと予想される状態を有する患者は、登録を許可される。
９．クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む制御不能な炎症性ＧＩ疾患
１０．以前の生物学的製剤に対する抗薬物抗体、重度のアレルギー、アナフィラキシー、または他の注入関連反応の病歴
１１．ステロイドまたは局所吸収ステロイドなどの全身薬物療法の免疫抑制用量（用量＞１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは１日当量）は、腫瘍関連ＡＥ治療の場合を除いて、研究薬物投与の少なくとも２週間前に中止しなければならない。治療の２週間以内にコルチコステロイド（吸入または局所ステロイド及び副腎交換ステロイド用量＞１０ｍｇ／日のプレドニゾン当量）または他の免疫抑制薬物療法のいずれかの慢性全身治療を必要とする状態の患者は、（神経膠腫を有する患者を除いて）活動型自己免疫疾患の不在下に許可される。
１２．研究薬物投与の４週間以内に感染症の予防のための非腫瘍学ワクチン療法（例えば、ＨＰＶワクチン）。不活化季節性インフルエンザワクチンは、治療前かつ制限なしの治療中に患者に与えることができる。生ウイルスを含むインフルエンザワクチン、または他の臨床的に必要な場合、感染症（すなわち、ニューモバックス、水痘など）に対するワクチン接種は許可してもよいが、スポンサーの医療用監視と協議しなければならず、ワクチンの投与前及び投与後に研究薬物の休薬期間を必要とし得る。
１３．研究薬物投与の初回投与の≦１４日前に任意の抗癌治療による治療、または治験薬による別の治療的臨床研究への参加。
１４．前治療からの継続的な急性の副作用＞ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード１。
１５．抗ＨＥＲ２標的治療を受けていない、ＨＥＲ２過剰発現を有する胃癌患者。
１６．大手術は、ＦＰＡ１４４の投与≦２８日前には許されない。全ての場合において、患者は、治療投与前に十分に回復し、安定していなければならない。
１７．妊娠中または授乳中の女性；妊娠可能性のある女性は、研究中に妊娠を検討してはならない。
１８．臨床研究と相容れない任意の重篤または不安定な付随する全身性疾患（例えば、薬物乱用、精神障害、または制御不能な併発疾患、例えば、活動性感染症、動脈血栓症、及び症候性肺塞栓症）の存在。
１９．研究参加に関連したリスクを増加し得る、または研究結果の解釈を妨害し得る、及び治験責任医師の意見において、研究への患者のエントリーを不適切にさせる任意の他の状態の存在。
２０．抗ＦＧＦＲ２抗体またはニボルマブ製剤、例えば、ポリソルベートの成分に対する公知のアレルギーまたは過敏症。
２１．ＦＧＦ－ＦＧＦＲ経路の任意の選択的阻害剤（例えば、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＪＮＪ－４２７５６４９３、ＢＡＹ１１７９４７０）による前治療。
２２．以前の悪性腫瘍の病歴：
ａ）治療的に治療された非黒色腫皮膚癌または
ｂ）再発の証拠無しに５年以上前に治療的に治療された固形腫瘍または
ｃ）治験責任医師の意見において、研究治療効果の決定に影響を及ぼさない他の悪性腫瘍の病歴。

【0451】

薬物動態分析の場合、血液試料は、全患者から回収されるであろう。標準ＰＫパラメーターは、抗ＦＧＦＲ２抗体濃度－時間データに基づいて決定される。また、血液試料は、抗ＦＧＦＲ２抗体及びニボルマブに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）を評価するためにも回収されるであろう。

【0452】

有効性対策としては、臨床検査及び適切なイメージング技術、好ましくは、ＲＥＣＩＳＴ １．１あたり適当なスライス厚を有する胸部、腹部、及び骨盤のコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンを含む腫瘍評価が含まれ；他の評価（核磁気共鳴画像［ＭＲＩ］）、Ｘ線、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、及び超音波）は、必要に応じて行ってもよい。腫瘍評価は、スクリーニング時に行った後、初回投与から６週間毎に２４週間行い、その後、おおよそ１２週間毎に行う。最初の完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）が一度指摘されたら、確認スキャンを４～６週間後に行わなければならない。

【0453】

実現可能として必須な腫瘍生検は、パート２における全患者に対する治療前、及び治療中の１５日目または２９日目のいずれかで行われるであろう。各時点の実現可能性は、治験責任医師によって評価され、患者の安全性の考慮を含むべきである。患者はまた、文書化された腫瘍応答の際の任意の治療中生検、及び／またはスポンサーとの協議後の文書化された腫瘍進行の際の任意の治療後生検を有し得る。

【0454】

最大でおおよそ６０人の対象の試料サイズは、パート１における用量漸増の研究設計、及びパート２の治療アームにおける２０人の患者／アームに基づいている。本研究のパート２における各個々のアームは、Ｓｉｍｏｎの二段階設計を進めるであろう。ＰＤ－Ｌ１発現に対して未選択の、進行した胃癌において単剤療法としてニボルマブの観察された推定応答速度は、１２％であり；抗ＦＧＦＲ２抗体に対するＯＲＲは、腫瘍で観察されるＦＧＦＲ２ｂの発現レベルに応じて異なってもよい。コホート２Ａでは、抗ＦＧＦＲ２抗体に対する推定ＯＲＲは、０％である。コホート２Ｂでは、抗ＦＧＦＲ２抗体単剤療法に対する推定ＯＲＲは、３０％である。したがって、コホート２Ａは、最初の２０人の患者のうちで応答が観察されるのが＜２人である場合、２０人の患者拡大を登録しない。コホート２Ｂでは、登録された最初の２０人の患者のうちで客観的奏効を達成するのが＜６人の患者である場合、２０人の患者拡大は開放されない。

【0455】

配列表
以下の表は、本明細書で参照されたある特定の配列の一覧を提供する。

【図1】

【図2a】

【図2b】

【図2c】

【図2d】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10-1】

【図10-2】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16-1】

【図16-2】

【配列表】

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