(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-03-07
(45)【発行日】2024-03-15
(54)【発明の名称】インクレチン類似体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/575 20060101AFI20240308BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20240308BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240308BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240308BHJP
C12N 15/16 20060101ALN20240308BHJP
【ＦＩ】
C07K14/575 ZNA
A61K38/22
A61P3/10
A61P3/06
C12N15/16
【請求項の数】
37
(21)【出願番号】P 2022537359
(86)(22)【出願日】2020-12-11
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-02-20
(86)【国際出願番号】 US2020064512
(87)【国際公開番号】W WO2021126695
(87)【国際公開日】2021-06-24
【審査請求日】2022-06-24
(31)【優先権主張番号】62/949,661
(32)【優先日】2019-12-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】エイブラハム，ミラタ メアリー
(72)【発明者】
【氏名】アルシナ－フェルナンデス，ホルヘ
(72)【発明者】
【氏名】コスクン，タメル
(72)【発明者】
【氏名】チュイ，ホンチャン
(72)【発明者】
【氏名】ウォリス，ジェイムズ リンカーン
【審査官】野村 英雄
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／１２５９２９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１２５９３８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５０７１２４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５０４５９８（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＹＸ２ＱＧＴＸ６ＴＳＤＸ１０ＳＩＸ１３ＬＤＸ１６Ｘ１７ＡＱＸ２０Ｘ２１ＦＩＸ２４Ｘ２５ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＸ３９
［式中、
Ｘ２は、Ａｉｂであり、
Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、
Ｘ１０は、Ｙもしくは４Ｐａｌであり、
Ｘ１３は、ＬもしくはαＭｅＬであり、
Ｘ１６は、Ｏｒｎであり、
Ｘ１７は、コンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸であり、前記官能基は、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分にコンジュゲートされ、
Ｘ２０は、４Ｐａｌ、Ｉｖａ、もしくはαＭｅＬであり、
Ｘ２１は、ＡもしくはＡｉｂであり、
Ｘ２４は、Ｅもしくはｅであり、
Ｘ２５は、ＹもしくはαＭｅＹであり、
Ｘ３９は、ＥもしくはＳである］（配列番号５）
を含み、ならびに
カルボキシ末端（Ｃ末端）アミノ酸が、適宜アミド化されていてもよい、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｘ１７位にコンジュゲートに利用可能な官能基を有する前記アミノ酸が、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＫおよびＱからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｘ１７位にコンジュゲートに利用可能な官能基を有する前記アミノ酸が、Ｋである、請求項１に記載の化合物。
【請求項4】
Ｘ１７位にコンジュゲートに利用可能な官能基を有する前記アミノ酸および前記Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分が、前記アミノ酸と前記脂肪酸部分との間のリンカーによってコンジュゲートされる、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
前記リンカーが、１～４個のアミノ酸を含む、請求項４に記載の化合物。
【請求項6】
前記アミノ酸が、ＥまたはγＥである、請求項５に記載の化合物。
【請求項7】
前記リンカーが、以下の構造：Ｈ－｛ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－［Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２］ｍ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－ＣＯ｝ｎ－ＯＨ
［式中、ｍは、１～１２の整数であり、ｎは、１～１２の整数であり、ｐは、１または２である］
をさらに含む、請求項４～６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
前記リンカーが、１～４個の（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）部分をさらに含む、請求項４～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
Ｘ１７が、以下の構造：（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）ａ－（γＥ）ｂ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｃ－ＣＯ２Ｈ
［式中、ａは、０、１、または２であり、ｂは、１または２であり、ｃは、１６～２０の整数である］
を有するＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲートにより化学的に修飾されたＫである、請求項１に記載の化合物。
【請求項10】
ａが、１である、請求項９に記載の化合物。
【請求項11】
ａが、２である、請求項９に記載の化合物。
【請求項12】
ｂが、１である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項13】
ｂが、２である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項14】
ｃが、２０である、請求項９～１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項15】
Ｘ１０が、Ｙである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項16】
Ｘ１０が、４Ｐａｌである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項17】
Ｘ１３が、Ｌである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項18】
Ｘ１３が、αＭｅＬである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項19】
Ｘ２０が、４Ｐａｌである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項20】
Ｘ２０が、Ｉｖａである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項21】
Ｘ２０が、αＭｅＬである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項22】
Ｘ２１が、Ａである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項23】
Ｘ２１が、Ａｉｂである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項24】
Ｘ２４が、Ｅである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項25】
Ｘ２４が、ｅである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項26】
Ｘ２５が、Ｙである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項27】
Ｘ２５が、αＭｅＹである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項28】
Ｘ３９が、Ｅである、請求項１～２７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項29】
Ｘ３９が、Ｓである、請求項１～２７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項30】
配列番号６～１１からなる群から選択される式を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項31】
請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物を含む、２型糖尿病、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎および肥満からなる群から選択される疾患の治療剤。
【請求項32】
請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物を含む、２型糖尿病の治療剤。
【請求項33】
請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項34】
２型糖尿病、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満からなる群から選択される疾患の治療における使用のための、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項35】
前記疾患が、２型糖尿病または肥満である、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項36】
２型糖尿病、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満からなる群から選択される疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１～３０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項37】
前記疾患が、２型糖尿病または肥満である、請求項３６に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、およびグルカゴン（ＧＣＧ）受容体の各々での活性を有するインクレチン類似体に関する。本明細書に記載されるインクレチン類似体は、これらの受容体の各々で均衡のとれた活性を提供し、長期間の作用を有する、構造的特徴を有する。このようなインクレチン類似体は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／または肥満を含む状態、疾患、および障害、ならびに代謝性疾患や神経変性疾患とは考えられていない心血管疾患の治療に有用である可能性がある。
【背景技術】
【0002】
過去数十年間、糖尿病の有病率は上昇し続けている。Ｔ２ＤＭは、すべての糖尿病の約９０％を占める、糖尿病の最も一般的な形態である。Ｔ２ＤＭは、インスリン耐性に起因する高い血糖値を特徴とする。Ｔ２ＤＭの現在の標準治療としては、食事制限および運動、ならびに経口薬での治療およびＧＬＰ－１受容体アゴニストなどのインクレチンベースの療法を含む注射可能な血糖降下薬での治療が挙げられる。
【0003】
ＧＬＰ－１は、３６アミノ酸ペプチドであり、その主要な生物活性フラグメントは、グルコース依存性インスリン分泌を刺激し、糖尿病患者における高血糖を予防する、３０アミノ酸、Ｃ末端アミド化ペプチド（ＧＬＰ－１７－３６、配列番号２）として生成される。現在、デュラグルチド、エクセナチド、およびリラグルチドを含む、様々なＧＬＰ－１類似体がＴ２ＤＭを治療するために利用可能である。しかしながら、現在市販されている多くのＧＬＰ－１アナログは、嘔気および嘔吐などの胃腸の副作用によって用量が制限されている。経口薬およびインクレチンベースの療法での治療が不十分な場合は、インスリンでの治療が検討される。利用可能な治療選択肢にもかかわらず、承認された療法を受けている有意な数の個体が、血糖制御目標に達していない（例えば、Ｃａｓａｇｒａｎｄｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ３６：２２７１－２２７９を参照されたい）。
【0004】
制御されていない糖尿病は、そのような個体の罹患率および死亡率に影響を与える１つ以上の状態を引き起こし得る。Ｔ２ＤＭの主な危険因子のうちの１つは肥満であり、Ｔ２ＤＭを有する個体の多く（約９０％）は、過体重または肥満である。体脂肪蓄積の低下は、高血糖および心血管事象を含む肥満関連併存症の改善をもたらすであろうことが実証されている。したがって、より良好な疾患管理のために、グルコース制御および体重減少において有効な療法が必要とされる。
【0005】
その観点から、研究されている新しい療法は、ＧＬＰ－１受容体での活性だけでなく、ＧＩＰおよび／またはＧＣＧ受容体などの１つ以上の他の受容体での活性も有する化合物を含む。実際、特定の化合物は、トリプル受容体アゴニスト活性（すなわち、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々での活性）を有するとすでに記載されている。例えば、国際特許出願公開第２０１５／０６７７１６号は、トリプル受容体アゴニスト活性を有するＧＣＧ類似体について記載する。同様に、国際特許出願公開第２０１６／１９８６２４号は、トリプル受容体アゴニスト活性を有するエキセンジン－４類似体について記載する。同様に、国際特許出願公開第２０１４／０４９６１０号および同第２０１７／１１６２０４号は各々、トリプル受容体アゴニスト活性を有する様々な類似体について記載する。さらに、国際特許出願公開第２０１７／１５３５７５号は、ＧＩＰ受容体アゴニスト活性を有するとも述べられているＧＣＧおよびＧＬＰ－１コアゴニストについて記載する。
【0006】
Ｔ２ＤＭの治療のために典型的には使用されるものの、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、および／またはＧＣＧ受容体のうちの１つ以上での活性を有するインクレチンおよびその類似体は、例えば、アルツハイマー病、骨関連障害、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨ、肥満、ならびにパーキンソン病を含む、多くの他の状態、疾患、または障害における治療価値の可能性を有すると記載されている。例えば、Ｊａｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ．Ｍｅｔａｂ．６：４４０－４４６；Ｃａｒｂｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．３１：２３－３１、Ｆｉｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２２：３５９－３７６、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｐｏｔｅｎｔ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ａ ＮＡＳＨ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ＧＬＰ－１／Ｇｌｕｃａｇｏｎ／ＧＩＰ ｔｒｉｐｌｅ－ａｇｏｎｉｓｔ（ＨＭ１５２１１），ＡＤＡ Ｐｏｓｔｅｒ １１３９－Ｐ、Ｄｉｎｇ（２００８）Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．２３：５３６－５４３、Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１６７８：６４－７４、Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．９７：７２１－７６６、Ｆｉｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．５：２０９、Ｈｏｌｓｃｈｅｒ（２０１４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．４２：５９３－６００を参照されたい。
【0007】
それにもかかわらず、減量の利点および／または好ましい副作用プロファイルを備えた、効果的なグルコース制御を提供することができる、そのような状態、疾患および障害、特にＴ２ＤＭのための治療の必要性が残っている。また、１日１回、週３回、週２回、または週１回などの低頻度での投与を可能にする、十分に長期間の作用を伴う使用に利用可能な治療剤の必要性が存在する。
【発明の概要】
【0008】
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、上記の必要性を満たすことを目指す。したがって、本開示は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々で活性を有するインクレチン類似体について記載する。有利なことに、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、過度の活性に関連する望ましくない副作用を回避しながらその受容体のアゴニズムの利点を提供するために、各受容体で十分な活性を提供する用量の投与を可能にすることにより、これらの受容体において均衡のとれた活性を有する。また、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、１日１回、週３回、週２回、または週１回などの低頻度で投与することを可能にするＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々で長期間の作用を有する。このように、インクレチン類似体は、グルコース制御の強化、体重低下および／または体組成改善などの代謝的な利点、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）低下などの脂質的な利点、ならびに／あるいは骨質量もしくは骨形成の増加または骨吸収の減少などの他の利点をもたらす。本開示はまた、Ｔ２ＤＭ、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよび／または肥満を含む状態、疾患および障害の効果的な治療について記載している。
【0009】
したがって、本開示は、最初に、以下：
ＹＸ２ＱＧＴＸ６ＴＳＤＸ１０ＳＩＸ１３ＬＤＸ１６Ｘ１７ＡＱＸ２０Ｘ２１ＦＩＸ２４Ｘ２５ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＸ３９
［式中、Ｘ２は、Ａｉｂであり、Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、Ｘ１０は、Ｙまたは４Ｐａｌであり、Ｘ１３は、ＬまたはαＭｅＬであり、Ｘ１６は、Ｏであり、Ｘ１７は、コンジュゲートに利用できる官能基を有するアミノ酸であり、この官能基は、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分にコンジュゲートし、Ｘ２０は、４Ｐａｌ、ＩｖａまたはαＭｅＬであり、Ｘ２１は、ＡまたはＡｉｂであり、Ｘ２４は、Ｅまたはｅであり、Ｘ２５は、ＹまたはαＭｅＹであり、Ｘ３９は、ＥまたはＳである］（配列番号５）の塩基アミノ酸配列を含むインクレチン類似体であって、カルボキシ末端（Ｃ末端）アミノ酸が、適宜アミド化されていてもよい、インクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩について記載する。
ＹＸ２ＱＧＴＸ６ＴＳＤＸ１０ＳＩＸ１３ＬＤＸ１６Ｘ１７ＡＱＸ２０Ｘ２１ＦＩＸ２４Ｘ２５ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＸ３９
［式中、Ｘ２は、Ａｉｂであり、Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、Ｘ１０は、Ｙまたは４Ｐａｌであり、Ｘ１３は、ＬまたはαＭｅＬであり、Ｘ１６は、Ｏであり、Ｘ１７は、コンジュゲートに利用できる官能基を有するアミノ酸であり、この官能基は、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分にコンジュゲートし、Ｘ２０は、４Ｐａｌ、ＩｖａまたはαＭｅＬであり、Ｘ２１は、ＡまたはＡｉｂであり、Ｘ２４は、Ｅまたはｅであり、Ｘ２５は、ＹまたはαＭｅＹであり、Ｘ３９は、ＥまたはＳである］（配列番号５）の塩基アミノ酸配列を含むインクレチン類似体であって、カルボキシ末端（Ｃ末端）アミノ酸が、適宜アミド化されていてもよい、インクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩について記載する。
【0010】
いくつかの例では、位置Ｘ１７でのコンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸は、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＫまたはＱである。特定の例では、位置Ｘ１７でのコンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸は、Ｋである。
【0011】
特定の例では、Ｘ２は、Ａｉｂであり、Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、Ｘ１０は、Ｙであり、Ｘ１３は、Ｌであり、Ｘ１６は、Ｏであり、Ｘ１７は、Ｋであり、Ｘ２０は、４Ｐａｌであり、Ｘ２１は、Ａであり、Ｘ２４は、Ｅであり、Ｘ２５は、Ｙであり、Ｘ３９は、Ｅであり、その結果、インクレチン類似体は、以下：
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ（配列番号６）の塩基アミノ酸配列を含む。
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ（配列番号６）の塩基アミノ酸配列を含む。
【0012】
特定の例では、Ｘ２は、Ａｉｂであり、Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、Ｘ１０は、Ｙであり、Ｘ１３は、αＭｅＬであり、Ｘ１６は、Ｏであり、Ｘ１７は、Ｋであり、Ｘ２０は、Ｉｖａであり、Ｘ２１は、Ａであり、Ｘ２４は、Ｅであり、Ｘ２５は、αＭｅＹであり、Ｘ３９は、Ｓであり、その結果、インクレチン類似体は、以下：
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ（配列番号７）の塩基アミノ酸配列を含む。
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ（配列番号７）の塩基アミノ酸配列を含む。
【0013】
特定の例では、Ｘ２は、Ａｉｂであり、Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、Ｘ１０は、４Ｐａｌであり、Ｘ１３は、αＭｅＬであり、Ｘ１６は、Ｏであり、Ｘ１７は、Ｋであり、Ｘ２０は、αＭｅＬであり、Ｘ２１は、Ａｉｂであり、Ｘ２４は、ｅであり、Ｘ２５は、αＭｅＹであり、Ｘ３９は、Ｓであり、その結果、インクレチン類似体は、以下：
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ（配列番号８）の塩基アミノ酸配列を含む。
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ（配列番号８）の塩基アミノ酸配列を含む。
【0014】
いくつかの例では、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分は、リンカーを介したコンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸にコンジュゲートされる。特定の例では、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸部分は、－ＣＯ－（ＣＨ２）ａ－ＣＯ２Ｈの構造を有し、式中、ａは、１６～２２の整数である。特定の例では、脂肪酸部分は、Ｃ１８二価酸またはＣ２０である。同様に、いくつかの例では、リンカーは、［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ）］－アセチル（ＡＥＥＡ）、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、Ｅ、γ－グルタミン酸（γＥ）、またはそれらの組み合わせの１つ以上の単位である。
【0015】
特定の例では、リンカーおよび脂肪酸部分を含む本明細書に記載のインクレチン類似体は、以下のいずれかであり得る：
（配列番号９）、
（配列番号１０）、または
（配列番号１１）。
【化1】
【化2】
【化3】
【0016】
第二に、本明細書に記載の少なくとも１つのインクレチン類似体またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩または塩酸塩）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が記載される。いくつかの例では、医薬組成物は、担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含むことができる。
【0017】
第三に、Ｔ２ＤＭ、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、および肥満などの疾患を治療するための方法が記載される。そのような方法は、それを必要とする個体に、有効量の本明細書に記載されるインクレチン類似体を投与するステップを少なくとも含むことができる。いくつかの例では、疾患は、Ｔ２ＤＭ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたは肥満である。他の例では、疾患は、代謝性疾患または神経変性疾患とはみなされない心血管疾患である。
【0018】
いくつかの例では、本明細書に記載の少なくとも１つのインクレチン類似体を、個体に皮下（ＳＱ）投与することができる。同様に、いくつかの例では、少なくとも１つのインクレチン類似体は、毎日、隔日、週３回、週２回、週１回（すなわち、毎週）、隔週（すなわち、１週間おきに）、または毎月投与することができる。特定の例では、少なくとも１つのインクレチン誘導体は、隔日ＳＱで、週３回ＳＱで、週２回ＳＱで、週１回ＳＱで、隔週ＳＱで、または毎月ＳＱで投与することができる。特定の例では、少なくとも１つのインクレチン誘導体は、週に１回（ＱＷ）、ＳＱで投与される。
【0019】
本方法はまた、個体の体重または体の組成、および／または血糖および／または血中インスリンおよび／またはヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）および／または血中脂質を測定または取得し、次に、そのように得られた値を１つ以上のベースライン値または以前に得られた値と比較して治療の有効性を評価するなどのステップを含み得る。
【0020】
いくつかの例では、個体は肥満または太りすぎである。他の例では、個体は糖尿病（ＰｗＤ）、特にＴ２ＤＭの人である。特定の例では、個体はＴ２ＤＭで肥満であるか、Ｔ２ＤＭで太りすぎである。
【0021】
本方法はまた、食事制限および運動と組み合わせることができ、および／またはさらなる治療薬と組み合わせることができる。
【0022】
第四に、インクレチン類似体は、Ｔ２ＤＭ、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、および肥満などの疾患の治療に使用するためなど、治療に使用するために記載される。いくつかの例では、疾患は、Ｔ２ＤＭ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたは肥満である。他の例では、疾患は、代謝性疾患または神経変性疾患とはみなされない心血管疾患である。
【0023】
第五に、Ｔ２ＤＭ、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよび肥満を治療するための医薬の製造における、本明細書に記載のインクレチン類似体の使用が記載される。いくつかの例では、疾患は、Ｔ２ＤＭ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたは肥満である。他の例では、疾患は、代謝性疾患または神経変性疾患とはみなされない心血管疾患である。
【発明を実施するための形態】
【0024】
別段に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を、インクレチン類似体、医薬組成物、および方法の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料は、本明細書に記載されている。
【0025】
また、不定冠詞「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」による要素への言及は、文脈が１つおよび１つのみの要素があることを明確に要求しない限り、複数の要素が存在する可能性を排除しない。よって、不定冠詞「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、通常「少なくとも１つ」を意味する。
【0026】
定義
本明細書で使用されるとき、「約」とは、例えば、記載された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、または体積などの値（複数可）の統計的に有意な範囲内を意味する。そのような値または範囲は、所与の値または範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内の規模以内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究での特定の系に依存し、当業者によって容易に理解され得る。
本明細書で使用されるとき、「約」とは、例えば、記載された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、または体積などの値（複数可）の統計的に有意な範囲内を意味する。そのような値または範囲は、所与の値または範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内の規模以内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究での特定の系に依存し、当業者によって容易に理解され得る。
【0027】
本明細書で使用されるとき、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、またはＧＣＧ受容体のうちの１つ以上に関して、「活性」、「活性化する」、「活性化すること」などは、以下に記載されるインビトロアッセイなどの当該技術分野で知られているアッセイを使用して測定されるように、受容体に結合する、および受容体での応答を誘導する、本明細書に記載されるインクレチン類似体などの化合物の能力を意味する。
【0028】
本明細書で使用されるとき、「アミノ酸」は、化学的観点から、１つ以上のアミン基および１つ以上のカルボン酸基を含むことによって特徴付けられ、他の官能基を含み得る分子を意味する。当該技術分野で知られているように、標準アミノ酸として指定され、あらゆる生物によって産生されるほとんどのペプチド／ポリペプチド／タンパク質の構成要素として使用される２０個のアミノ酸のセットが存在する。
【0029】
本明細書で使用されるとき、「コンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸」とは、例えば、リンカーによって脂肪酸部分にコンジュゲートされ得る官能基を有する任意の標準的な、または標準的でないアミノ酸を意味する。そのような官能基の例としては、アルキニル基、アルケニル基、アミノ基、アジド基、ブロモ基、カルボキシル基、クロロ基、ヨード基、およびチオール基が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、そのような官能基を含む標準的なアミノ酸の例としては、Ｃ（チオール）、Ｄ（カルボキシル）、Ｅ（カルボキシル）、Ｋ（アミノ）およびＱ（アミド）が挙げられる。
【0030】
本明細書で使用されるとき、「類似体」は、標的受容体を活性化し、天然の受容体アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボまたはインビトロ効果を誘発する、合成のペプチドまたはポリペプチドなどの化合物を意味する。
【0031】
本明細書で使用されるとき、「代謝性疾患とはみなされない心血管疾患」などは、例えば、アテローム性動脈硬化症または心不全などの疾患を意味する。
【0032】
本明細書で使用されるとき、「Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸」とは、１６～２２個の炭素原子を有するカルボン酸を意味する。本明細書での使用に好適なＣ１６－Ｃ２２脂肪酸は、飽和一酸または飽和二酸であり得る（「二酸」は、各末端にカルボキシル基を有する）。
【0033】
本明細書で使用されるとき、「有効量」は、それを必要とする個体への単回または複数回投与により、診断または治療中のそのような個体において所望の効果（すなわち、例えば、血糖の低下、ＨｂＡ１ｃの低下、および／または体重もしくは体脂肪の低下、および／または体の組成の変化など、個体の状態に臨床的に測定可能な差異を生じさせ得る）を提供する、本明細書の１つ以上のインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩の量、濃度または用量を意味する。有効量は、既知の技法の使用によって、および同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者であれば容易に決定することができる。個体についての有効量を決定する際には、哺乳動物の種、そのサイズ、年齢、および健康状態全般、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度、関与、または重症度、個体の応答、投与される特定のインクレチン類似体、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能特性、選択される用量レジメン、併用薬の使用、ならびに他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の因子が考慮される。
【0034】
本明細書で使用されるとき、「長期間の作用」とは、インクレチン類似体の結合親和性および活性が、天然ヒトＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧよりも長い期間継続し、少なくとも１日１回、またはさらに週３回、週２回、もしくは週１回の低頻度で投与することを可能にすることを意味する。インクレチン類似体の時間作用プロファイルは、以下の例で利用されるものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定され得る。
【0035】
本明細書で使用されるとき、「グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド」または「ＧＩＰ」は、グルコースの存在下で膵臓ベータ細胞からのインスリン分泌を刺激することによってグルコース恒常性において生理的役割を果たす、インクレチンである、４２アミノ酸ペプチド（配列番号１）を意味する。
【0036】
本明細書で使用されるとき、「グルカゴン様ペプチド－１」または「ＧＬＰ－１」は、グルコース依存性インスリン分泌を刺激し、糖尿病患者における高血糖を予防することが示されている、インクレチンである、３６アミノ酸ペプチド（配列番号２）を意味する。
【0037】
本明細書で使用されるとき、「グルカゴン」または「ＧＣＧ」は、肝細胞上のＧＣＧ受容体に結合し、これを活性化することによって血糖の維持を助け、肝臓に、グリコーゲン分解と呼ばれるプロセスを通して、グリコーゲンの形態で保存されるグルコースを放出させる、２９アミノ酸ペプチド（配列番号３）を意味する。
【0038】
本明細書で使用されるとき、「オキシントモジュリン」または「ＯＸＭ」は、ＧＣＧの２９アミノ酸配列だけでなく、ＧＣＧおよびＧＬＰ－１の両方の受容体を活性化するオクタペプチドカルボキシ末端伸長も含み、ＧＬＰ－１受容体よりもＧＣＧ受容体の効力がわずかに高い、３７アミノ酸ペプチドを意味する。
【0039】
本明細書で使用される場合、「５０％効果濃度」または「ＥＣ５０」は、用量反応曲線（例えば、ｃＡＭＰ）などのアッセイエンドポイントの５０％の活性化／刺激をもたらす化合物の濃度を意味する。
【0040】
本明細書で使用される場合、「インクレチン類似体」とは、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧの各々、特にヒトＧＩＰ（配列番号１）、ヒトＧＬＰ－１（配列番号２）、およびヒトＧＣＧ（配列番号３）との構造的類似性を有するが、複数の相違を有する化合物を意味する。本明細書に記載されるインクレチン類似体は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の親和性およびその各々での活性（すなわち、トリプルアゴニスト活性）を有する化合物をもたらすアミノ酸配列を含む。
【0041】
本明細書で使用する場合、「それを必要とする個体」は、例えば、本明細書に列挙されるものを含む、治療または療法を必要とする状態、疾患、障害、または症状を有する、ヒトなどの哺乳動物を意味する。特に、治療される好ましい個体はヒトである。
【0042】
本明細書で使用されるとき、「長時間作用型」は、本明細書に記載のインクレチン類似体の結合親和性および活性が、天然のヒトＧＩＰ（配列番号１）、ヒトＧＬＰ－１（配列番号２）、および／またはヒトＧＣＧ（配列番号３）などの参照ペプチドよりも長い期間継続し、少なくとも１日１回、週３回、週２回、週１回、またはさらに月に１回ほどの低頻度で投与可能であることを意味する。本明細書に記載のインクレチン類似体の作用時間プロファイルは、以下の実施例で記載されるものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定され得る。
【0043】
本明細書で使用する場合、「非標準アミノ酸」は、細胞内で自然に発生し得るが、ペプチド合成には関与しないアミノ酸を意味する。非標準アミノ酸は、ペプチドの構成要素であってもよく、ペプチド内の標準アミノ酸の修飾によって（すなわち、翻訳後修飾を介して）生成される。非標準アミノ酸には、上記の標準Ｌ－アミノ酸とは反対の絶対キラリティーを有するＤ－アミノ酸を含み得る。
【0044】
本明細書で使用されるとき、「飽和」とは、脂肪酸部分が炭素－炭素二重結合または三重結合を含有しないことを意味する。
【0045】
本明細書で使用されるとき、「治療する」、「治療」、「治療すること」などは、既存の状態、疾患、障害、または症状の進行または重症度の抑制、遅延、停止、または逆転を意味する。
【0046】
本明細書で使用されるとき、インクレチン類似体を参照して、「トリプル受容体アゴニスト活性」とは、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々での活性を有するインクレチン類似体、特に、その受容体の過剰な活性に関連する望ましくない副作用を回避しながら、その受容体のアゴニズムの利点を提供するために各受容体で均衡のとれた十分な活性を有する類似体を意味する。また、トリプル受容体アゴニスト活性を有するインクレチン類似体は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々で長期間の作用を有し、これは１日１回、週３回、週２回、または週１回の低頻度で投与することを有利に可能にする。
【0047】
特定の略語は次のように定義される。「４Ｐａｌ」は、３－（４－ピリジル）－Ｌ－アラニンを指す。「ＡＣＲ」は、尿中アルブミン／尿中クレアチニン比を指す。「Ａｉｂ」は、α－アミノイソ酪酸を指す。「αＭｅＬ」は、α－メチルロイシンを指す。「αＭｅＫ」は、α－メチルリジンを指す。「αＭｅＦ」は、α－メチルフェニルアラニンを指す。「αＭｅＦ（２Ｆ）」は、α－メチル２－フルオロファイニルアラニンを指す。「αＭｅＹ」は、α－メチルチロシンを指す。「ａｍｕ」は、原子質量単位を指す。「ＡＵＣ」は、曲線下面積を指す。「Ｂｏｃ」は、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを指す。「ｃＡＭＰ」は、環状アデノシン一リン酸を指す。「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを指す。「ＥＩＡ／ＲＩＡ」は、酵素免疫測定法／ラジオイムノアッセイを指す。「Ｆｍｏｃ」は、フルオレニルメチルオキシカルボニルを指す。「ｈｒ」は、時間を指す。「ＨＴＲＦ」は、ホモジニアス時間分解蛍光法を指す。「ＩＶ」は、静脈内を指す。「Ｉｖａ」は、イソバリンを指す。「ｋＤａ」は、キロダルトンを指す。「ＬＣ－ＭＳ」は、液体クロマトグラフィー－質量分析を指す。「ｍｉｎ」は、分を指す。「ＭＳ」は、質量分析を指す。「Ｏｒｎ」または「Ｏ」は、オルニチンを指す。「ＯｔＢｕ」は、Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチルを指す。「Ｐｂｆ」は、ＮＧ－２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニルを指す。「ＲＰ－ＨＰＬＣ」は、逆相高速液体クロマトグラフィーを指す。「ｓｅｃ」は、秒を指す。「ＳＥＭ」は、平均の標準誤差を指す。「ＳＰＡ」は、シンチレーション近接アッセイを指す。「ＳＱ」は、皮下を指す。「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を指す。「ｔＢｕ」は、ｔｅｒｔ－ブチルを指す。「Ｔｒｔ」は、トリチルを指す。
【0048】
インクレチン類似体
本明細書に記載されるインクレチン類似体の構造的特徴は、各受容体での活性の好ましい効果を得るために、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々での十分な活性（すなわち、トリプル受容体アゴニスト活性）を有するが、他の２つの受容体での活性を圧倒するか、またはすべての３つの受容体で活性をもたらすために十分な用量で投与される場合に望ましくない副作用をもたらすかのいずれかのために、任意の１つの受容体ではそれほどの活性を有さない化合物をもたらす。特定の実施形態におけるそのような構造的特徴の非限定的な例は、配列番号５を参照して、最適なＧＣＧ、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１活性に寄与する６位のαＭｅＦ（２Ｆ）、均衡のとれた活動に寄与する１０位のＹまたは４Ｐａｌ、最適なＧＣＧおよびＧＩＰ活性に寄与する１３位のＬまたはαＭｅＬ、均衡のとれた活性に寄与する１６位のＯ、均衡のとれた活性に寄与する１７位でのアシル化、最適なＧＣＧ活性に寄与する２０位の４Ｐａｌ、Ｉｖａ、またはαＭｅＬ、最適なＧＣＧ活性に寄与する２１位のＡまたはＡｉｂ、均衡のとれた活性に寄与する２５位のＹまたはαＭｅＹを含む。そのような構造的特徴の他の例には、すべての３つ受容体での最適な結合および効力に寄与する２８～３９位の本明細書に記載されるアミノ酸が含まれる。
本明細書に記載されるインクレチン類似体の構造的特徴は、各受容体での活性の好ましい効果を得るために、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々での十分な活性（すなわち、トリプル受容体アゴニスト活性）を有するが、他の２つの受容体での活性を圧倒するか、またはすべての３つの受容体で活性をもたらすために十分な用量で投与される場合に望ましくない副作用をもたらすかのいずれかのために、任意の１つの受容体ではそれほどの活性を有さない化合物をもたらす。特定の実施形態におけるそのような構造的特徴の非限定的な例は、配列番号５を参照して、最適なＧＣＧ、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１活性に寄与する６位のαＭｅＦ（２Ｆ）、均衡のとれた活動に寄与する１０位のＹまたは４Ｐａｌ、最適なＧＣＧおよびＧＩＰ活性に寄与する１３位のＬまたはαＭｅＬ、均衡のとれた活性に寄与する１６位のＯ、均衡のとれた活性に寄与する１７位でのアシル化、最適なＧＣＧ活性に寄与する２０位の４Ｐａｌ、Ｉｖａ、またはαＭｅＬ、最適なＧＣＧ活性に寄与する２１位のＡまたはＡｉｂ、均衡のとれた活性に寄与する２５位のＹまたはαＭｅＹを含む。そのような構造的特徴の他の例には、すべての３つ受容体での最適な結合および効力に寄与する２８～３９位の本明細書に記載されるアミノ酸が含まれる。
【0049】
本明細書に記載されるインクレチン類似体の構造的特徴はまた、水溶液中の類似体の可溶性の改善、化学的および物理的製剤安定性の改善、薬物動態プロファイルの拡張、ならびに免疫原性の可能性の最小化を含む、治療処置としてのそれらの開発可能性に関連する多くの他の有益な属性を有する類似体をもたらす。そのような属性をもたらす特定の構造的特徴の非限定的な例には、最適な薬物動態（ＰＫ）プロファイルおよび開発性に寄与するＣ２０脂肪酸による１７位でのアシル化、最適な溶解性および化学的安定性に寄与する１０位または２０位の４Ｐａｌ、最適な溶解性およびＰＫに寄与する１６位のＯ、最適な溶解性および安定性に寄与する２４位のＥまたはｅ、最適な化学的安定性に寄与する２５位のＹまたはαＭｅＹ、最適な溶解性に寄与する３９位のＥまたはＳ、最適なＰＫ、免疫原性、開発性および安定性に寄与する、６、１３、１６および２８～３９位の本明細書に記載のアミノ酸を含む。
【0050】
前述の構造的特徴リストは、包括的なものではなく、例示的なものであり、本明細書に記載される例示的な類似体の有益な特性の組み合わせは、単独での任意の修飾の結果ではなく、代わりに本明細書に記載される構造的特徴の新規組み合わせを通して達成されることが留意されるべきである。加えて、前述の修飾リストの上記効果は、これらの修飾の多くが、以下に記載されるように、本明細書に記載される化合物の特性にとって重要な他の効果も有するので、排他的ではない。
【0051】
本明細書に記載のインクレチン類似体のアミノ酸配列は、典型的には１文字コード（例えば、Ｌ＝ロイシン、Ｋ＝リジン）を用いて本明細書で示される天然に存在する（標準）アミノ酸、ならびに非標準および／または標準アミノ酸のα－メチル置換残基（例えば、αＭｅＬ、αＭｅＫ、αＭｅＦ、αＭｅＦ（２Ｆ）、およびαＭｅＹ、ならびに４Ｐａｌ、Ａｉｂ、Ｉｖａ、Ｏ、およびＤ－グルタミン酸（ｅ）などの特定の他の非標準アミノ酸）を組み込む。明確には、これらの他のアミノ酸の構造を以下に示す。
【化4】
【0052】
上記のように、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、天然のヒトペプチドのいずれかと、構造的類似性を有するが、多くの構造的相違性を有する。例えば、天然ヒトＧＩＰ（配列番号１）と比較される場合、インクレチン類似体は、２～３、６～７、１３～１４、１６～１８、２０～２１、２３～２５、および２８～４２位のうちの１つ以上での修飾を含む。いくつかの例では、インクレチン類似体は、２～３、６～７、１３～１４、１６～１８、２０～２１、２３～２５、および２８～４２位の各々での天然ヒトＧＩＰ（配列番号１）のアミノ酸への修飾を含む。特定の例では、インクレチン類似体は、以下のアミノ酸修飾：２位のＡｉｂ、３位のＱ、６位のαＭｅＦ（２Ｆ）、７位のＴ、１０位のＹまたは４Ｐａｌ、１３位のＬまたはαＭｅＬ、１４位のＬ、任意選択でリンカーの使用を通して、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸を有するＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲートを通して修飾される、１７位の修飾Ｋ残基、１８位のＡ、２０位の４Ｐａｌ、ＩｖａまたはαＭｅＬ、２１位のＡまたはＡｉｂ、２３位のＩ、２４位のＥまたはｅ、２５位のＹまたはαＭｅＹ、２８位のＥ、２９位のＧ、ならびに以下のアミノ酸配列：ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＥ（配列番号１２）またはＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１３）（およびこれらの尾部のいずれかが切断された類似体）での３０～４２位のアミノ酸の置換を含む。さらに他の例では、インクレチン類似体は、アミド化されている。本明細書に記載される修飾に加えて、インクレチン類似体は、付加、欠失、挿入および／または置換などの１つ以上の追加のアミノ酸修飾を含み得るが、依然としてＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々に結合し、これを活性化することができる。
【0053】
上記のように、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、コンジュゲートに利用可能な官能基を有する標準または非標準のアミノ酸に、例えば、リンカーによって、コンジュゲートされた脂肪酸部分を含む。そのようなコンジュゲートは、アシル化と称されることもある。特定の例では、コンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸は、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＫまたはＱであり得る。特定の例では、コンジュゲートに利用可能な官能基を有するアミノ酸は、コンジュゲートがＫ側鎖のイプシロン－アミノ基に対するものである、Ｋである。
【0054】
本明細書に記載されるインクレチン類似体のアシル化は、この構造を含めるための最適な場所であると決定された、配列番号５における１７位にある。脂肪酸、および特定の例では、リンカーは、アルブミン結合剤として作用し、長期作用型化合物を生成する可能性を提供する。
【0055】
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、直接結合またはリンカーのいずれかによってアミノ酸の官能基に化学的にコンジュゲートされたＣ１６－Ｃ２２脂肪酸部分を利用する。脂肪酸部分の長さおよび組成は、インクレチン類似体の半減期、インビボ動物モデルにおけるインクレチン類似体の効力、ならびにインクレチン類似体の可溶性および安定性に影響を与える。Ｃ１６－Ｃ２２飽和脂肪一酸または二酸へのコンジュゲートは、望ましい半減期、インビボ動物モデルにおける望ましい効力、ならびに望ましい可溶性および安定性の特性を示す、インクレチン類似体をもたらす。
【0056】
本明細書での使用のための飽和Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸の例としては、それらの分岐および置換誘導体を含む、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一酸）、ヘキサデカン二酸（Ｃ１６二酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一酸）、ヘプタデカン二酸（Ｃ１７二酸）、ステアリン酸（Ｃ１８一酸）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二酸）、アラカジン酸（エイコサン酸）（Ｃ２０一酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二酸）、ヘンエイコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一酸）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１二酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２一酸）、ドコサン二酸（Ｃ２２二酸）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0057】
特定の例では、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸は、飽和Ｃ２０一酸、飽和Ｃ２０二酸、ならびにそれらの分岐および置換誘導体であり得る。より具体的な例では、Ｃ１６－Ｃ２２脂肪酸は、エイコサン二酸であり得る。
【0058】
いくつかの例では、リンカーは、１～４つのアミノ酸、アミノポリエチレングリコールカルボキシレート、またはそれらの混合物を有することができる。特定の例では、アミノポリエチレングリコールカルボキシレートは、以下の構造：
Ｈ－｛ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－［Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２］ｍ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－ＣＯ｝ｎ－ＯＨ、
［式中、ｍは、１～１２の任意の整数であり、ｎは、１～１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である。］
を有する。
Ｈ－｛ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－［Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２］ｍ－Ｏ－（ＣＨ２）ｐ－ＣＯ｝ｎ－ＯＨ、
［式中、ｍは、１～１２の任意の整数であり、ｎは、１～１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である。］
を有する。
【0059】
特定の例では、リンカーは、任意選択で１～４つのアミノ酸と組み合わされた、１つ以上のＡＥＥＡ部分を有することができる。
【0060】
リンカーが少なくとも１つのアミノ酸を含む例では、アミノ酸は、１～４つのＥまたはγＥアミノ酸残基であり得る。いくつかの例では、リンカーは、そのＤ形態を含む、１つまたは２つのＥまたはγＥアミノ酸残基を含むことができる。例えば、リンカーは、１つまたは２ついずれかのγＥアミノ酸残基を含むことができる。あるいは、リンカーは、最大３６個のＡＥＥＡ部分との組み合わせで使用される１～４つのアミノ酸残基（例えば、ＥまたはγＥアミノ酸など）を含むことができる。具体的には、リンカーは、１～４つのＥまたはγＥアミノ酸と１～４つのＡＥＥＡ部分との組み合わせであり得る。他の例では、リンカーは、１つまたは２つのγＥアミノ酸と１つまたは２つのＡＥＥＡ部分との組み合わせであり得る。
【0061】
特定の一例では、本明細書に記載のインクレチン類似体は、以下の構造：
（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）ａ－（γＥ）ｂ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｃ－ＣＯ２Ｈ
［式中、ａは、０、１、または２であり、ｂは、１または２であり、ｃは、１６または１８である。］
を有するリンカー－脂肪酸部分を有する。特定の一例では、ａは、１であり、ｂは、１であり、ｃは、１８であり、以下の構造：
を有する。
（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）ａ－（γＥ）ｂ－ＣＯ－（ＣＨ２）ｃ－ＣＯ２Ｈ
［式中、ａは、０、１、または２であり、ｂは、１または２であり、ｃは、１６または１８である。］
を有するリンカー－脂肪酸部分を有する。特定の一例では、ａは、１であり、ｂは、１であり、ｃは、１８であり、以下の構造：
【化5】
【0062】
以下の実施例１～３の化学構造に示されるように、上記のリンカー－脂肪酸部分は、Ｋ側鎖のイプシロン（ε）－アミノ基に連結することができる。
【0063】
ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、およびＧＣＧ受容体の各々に対する本明細書に記載されるインクレチン類似体の親和性は、例えば、以下の実施例に記載されるものなどの、受容体結合レベルを測定するための当該技術分野で公知の技法を使用して測定され得、一般的には阻害定数（Ｋｉ）値として表される。受容体の各々でのインクレチン類似体の活性はまた、例えば、以下に記載されるインビトロ活性アッセイを含む、当該技術分野で知られる技法を使用して測定され得、一般的には、有効濃度５０（ＥＣ５０）値として表され、これは、用量応答曲線において最大半量シミュレーションを引き起こす化合物の濃度である。
【0064】
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって投与することができる、医薬組成物として製剤することができる。そのような医薬組成物およびそれを調製するための技法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｔｒｏｙ，Ｅｄ．，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）を参照されたい。特定の例では、インクレチン類似体は、皮下投与される。
【0065】
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、いくつかの無機および有機酸／塩基のいずれかと反応して、薬学的に許容される酸／塩基付加塩を形成し得る。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な技法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，２ｎｄＲｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１）を参照されたい）。本明細書での使用のための薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、および／または酢酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【0066】
本開示はまた、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を合成する新規中間体および方法を提供し、したがって包含する。本明細書に記載される中間体およびインクレチン類似体は、当該技術分野で知られる様々な技法によって調製することができる。例えば、化学合成を使用する方法は、以下の実施例に例示される。記載される経路の各々についての具体的な合成ステップは、本明細書に記載されるインクレチン類似体を調製するために異なる方法で組み合わされ得る。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。
【0067】
本明細書に記載される特定のインクレチン類似体は、一般に、広い投与量範囲にかけて有効である。例えば、週１回投与の投与量は、約０．０１～約３０ｍｇ／個体／週の範囲内、約０．１～約１０ｍｇ／個体／週の範囲内、またはさらに約０．１～約３ｍｇ／個体／週の範囲内に含まれ得る。よって、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、１日１回、週３回、週２回、または週１回投与され、特に週１回投与され得る。
【0068】
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、様々な症状、障害、疾患、または徴候を治療するために使用され得る。特に、個体におけるＴ２ＤＭを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0069】
加えて、個体における脂質異常症を治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0070】
加えて、個体におけるメタボリックシンドロームを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0071】
加えて、個体におけるＮＡＦＬＤを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする対象に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0072】
加えて、個体におけるＮＡＳＨを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0073】
加えて、個体における肥満を治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0074】
加えて、個体における非治療的減量を誘発するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0075】
加えて、個体における代謝性疾患とはみなされない心血管疾患を治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0076】
加えて、個体における神経変性疾患を治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。
【0077】
これらの方法において、本明細書に記載のインクレチン類似体の有効性は、例えば、血中グルコースの有意な減少を観察すること、インスリンの有意な増加を観察すること、ＨｂＡ１ｃの有意な減少を観察すること、血中脂質の有意な減少を観察すること、体重または体脂肪の有意な減少を観察すること、および／または体の組成の変化を観察することによって評価することができる。
【0078】
あるいは、本発明のインクレチン類似体またはその薬学的に許容される塩は、それを必要とする個人における骨強度を改善するために使用され得る。いくつかの例では、それを必要とする個体は、骨化機能低下症もしくは類骨組織形成機能低下症を有するか、または骨折、関節筋力回復術、人工装具インプラント、歯科インプラント、および／もしくは脊椎固定から治癒している。インクレチン類似体はまた、アルツハイマー病またはパーキンソン病などの他の障害を治療するために使用され得る。
【実施例】
【0079】
以下の非限定的な実施例は、限定ではなく例示の目的で提供される。
【0080】
ペプチド合成
実施例１：インクレチン類似体１の合成
実施例１は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ－ＮＨ２（配列番号９）。
実施例１：インクレチン類似体１の合成
実施例１は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ－ＮＨ２（配列番号９）。
【0081】
以下は、残基Ａｉｂ２、αＭｅＦ（２Ｆ）６、Ｏ１６、Ｋ１７、４Ｐａｌ２０、およびＥ３９を除いて、標準的な１文字アミノ酸コードを使用する、実施例１の構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている。
【化6】
【0082】
実施例１のペプチド主鎖は、Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕ化学を用いて、ペプチド合成装置Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｘ（Ｇｙｒｏｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）にて、合成される。
【0083】
樹脂は、０．３～０．４ｍｅｑ／ｇの置換での１％のＤＶＢ架橋ポリスチレン（Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋ－ＭＢＨＡ ｌｏｗ－ｌｏａｄｉｎｇ樹脂、１００～２００メッシュ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）である。標準的な側鎖保護基が、以下の例外を除いて、使用される。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨは、１７位のＫに使用され、Ｂｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ）は１位のＹに使用される。各カップリングステップ（２×７分間）に先立ち、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ基を除去する。すべての標準的なアミノ酸カップリングは、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．３Ｍ）、ジイソプロピルカルボジイミド（０．９Ｍ）、およびＯｘｙｍａ（０．９Ｍ）の等モル比を使用して、理論上ペプチド負荷に対して９倍のモル過剰で、第１級アミンに１時間、第２級アミンに３時間実施される。例外は、３時間カップリングされるＣα－メチル化アミノ酸へのカップリングである。ペプチド骨格の合成が完了した後、樹脂をＤＣＭで６回完全に洗浄して、残留ＤＭＦを除去する。１７位のＫのＭｔｔ保護基は、ＤＣＭで、３０％ヘキサフルオロイソプロパノール（Ｏａｋｗｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）処理を２回施して（４０分処理×２回）、ペプチド樹脂から選択的に除去される。
【0084】
脂肪酸－リンカー部分のその後の付着は、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ、ＣｈｅｍＰｅｐ，Ｉｎｃ．）、Ｆｍｏｃ－グルタミン酸α－ｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｅ－ＯｔＢｕ、Ａｒｋ Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．）、およびモノ－ＯｔＢｕ－エイコサン二酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ、Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）のカップリングにより達成される。３倍過剰の試薬（ＡＡ：ＰｙＡＯＰ：ＤＩＰＥＡ＝１：１：１ｍｏｌ／ｍｏｌ）が、１時間の各カップリングに使用される。
【0085】
合成が完了したら、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄し、完全に空気乾燥させる。乾燥樹脂を１０ｍＬの分割用カクテル（ＴＦＡ：トリイソプロピルシラン：水、９２．５：２．５：５容量）で４０℃で３０分間処理する。樹脂を濾別し、各々２ｍＬのニートＴＦＡで２回洗浄し、合わせた濾液を５倍過剰量の冷ジエチルエーテル（－２０℃）で処理して、粗ペプチドを沈殿させる。その後、ペプチド／エーテル懸濁液を３５００ｒｐｍで２分間遠心分離して固体ペレットを形成し、上清を静かに移し、固体ペレットを冷エーテルでさらに２回粉砕し、真空中で乾燥させる。粗ペプチドを２０％アセトニトリル／２０％酢酸／６０％水で可溶化し、１００％アセトニトリルおよび０．１％ＴＦＡ／水バッファーシステム（６０分で３０～５０％アセトニトリル）の直線勾配を有するＬｕｎａ５μｍフェニル－ヘキシル調製用カラム（２１×２５０ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）でのＲＰ－ＨＰＬＣによって精製する。ペプチドの純度は分析用ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して評価され、プーリング基準は９５％を超える。実施例１の主なプール純度は、９８．０％超であることが分かる。最終主要生成物プールのその後凍結乾燥は、凍結乾燥ペプチドＴＦＡ塩をもたらす。分子量はＬＣ－ＭＳによって判定される（実測：Ｍ＋３＝１６３３．７、算出：Ｍ＋３＝１６３３．８）。
【0086】
実施例２：インクレチン類似体２の合成
実施例２は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノん－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号１０）。
実施例２は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノん－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号１０）。
【0087】
以下は、残基Ａｉｂ２、αＭｅＦ（２Ｆ）６、αＭｅＬ１３、Ｏ１６、Ｋ１７、Ｉｖａ２０、αＭｅＹ２５、およびＳ３９を除いて、標準的な２文字アミノ酸コードを使用する、実施例２の構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている。
【化7】
【0088】
実施例１について上述されるものと同様のプロセスを使用して、ペプチド主鎖を合成し、脂肪酸－リンカー部分にコンジュゲートし、純度を調べ、実施例２の分子量を確認する。
【0089】
実施例３：インクレチン類似体３の合成
実施例３は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号１１）。
実施例３は、以下の記載によって表される化合物である。
ＹＡｉｂＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２（配列番号１１）。
【0090】
以下は、残基Ａｉｂ２、αＭｅＦ（２Ｆ）６、４Ｐａｌ１０、αＭｅＬ１３、Ｏ１６、Ｋ１７、αＭｅＬ２０、Ａｉｂ２１、ｅ２４、αＭｅＹ２５、およびＳ３９を除いて、標準的な３文字アミノ酸コードを使用する、実施例３の構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている。
【化8】
【0091】
実施例１について上述されるものと同様のプロセスを使用して、ペプチド主鎖を合成し、脂肪酸－リンカー部分にコンジュゲートし、純度を調べ、実施例３の分子量を確認する。
【0092】
インビトロ機能
実施例４：結合親和性
放射性リガンド競合結合アッセイを使用して、実施例化合物および比較対象の平衡解離定数を決定する。このようなアッセイは、ＳＰＡ方法と、ヒトＧＩＰ受容体（ｈＧＩＰＲ；配列番号１４）、ヒトＧＬＰ－１受容体（ｈＧＬＰ－１Ｒ；配列番号１５）またはヒトＧＣＧ受容体（ｈＧＣＧＲ；ＩＤ番号：１６）を過剰に発現しているトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞から調製したメンブレンとを用いる。
実施例４：結合親和性
放射性リガンド競合結合アッセイを使用して、実施例化合物および比較対象の平衡解離定数を決定する。このようなアッセイは、ＳＰＡ方法と、ヒトＧＩＰ受容体（ｈＧＩＰＲ；配列番号１４）、ヒトＧＬＰ－１受容体（ｈＧＬＰ－１Ｒ；配列番号１５）またはヒトＧＣＧ受容体（ｈＧＣＧＲ；ＩＤ番号：１６）を過剰に発現しているトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞から調製したメンブレンとを用いる。
【0093】
アッセイは、非特異的遮断剤としてのバシトラシンの存在下で行われ、試験類似体のアシル化部分が標準的なアッセイバッファーで使用されるタンパク質成分（例えば、アルブミン）に結合することを防止する。
【0094】
競合曲線は、特異的阻害パーセント（ｙ軸）対化合物の対数濃度（ｘ軸）としてプロットされ、可変勾配（ＡＢａｓｅまたはＧｅｎｅｄａｔａ）での４パラメーター非線形回帰フィットを使用して分析される。Ｋｉ値は、式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（Ｄ／Ｋｄ））に従って計算され、式中、ＩＣ５０は、結合の５０％阻害をもたらす化合物の濃度であり、Ｄは、アッセイに使用される放射性リガンドの濃度であり、Ｋｄは、飽和結合分析から決定される、受容体および放射性リガンドの平衡解離定数である（以下の表１に示される）。
【表1】
【0095】
実施例化合物および比較対象のＫｉ値を表２に示す。
【表2】
【0096】
表２に見られるように、実施例化合物は、ｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１ＲおよびｈＧＣＧＲの各々において結合親和性を有する。
【0097】
実施例５：機能的なｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１ＲおよびｈＧＣＧＲアッセイ
方法：機能的活性は、ｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１Ｒ、またはｈＧＣＧＲを発現するＨＥＫ－２９３クローン細胞株におけるｃＡＭＰ形成を用いて決定される。ｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１Ｒ、またはｈＧＣＧＲ受容体発現細胞を、１ＸのＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５０）、０．１％のウシカゼイン（Ｓｉｇｍａ Ｃ４７６５－１０ＭＬ）、２５０μＭのＩＢＭＸ（３－イソブチル－１－メチルキサンチン、Ａｃｒｏｓカタログ番号２２８４２００１０）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中の対照ポリペプチドまたは実施例１～３の１つ（ＤＭＳＯ中２０点の濃度応答曲線、２．７５倍Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ直接希釈、３８４ウェルプレートＣｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５７０）で、２０μＬのアッセイ容量で（最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％であった）処理する。実験は、１．０％の脂肪酸フリー、グロブリンフリーのヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ３７８２）を添加した同一のアッセイ条件下でも実施される。
方法：機能的活性は、ｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１Ｒ、またはｈＧＣＧＲを発現するＨＥＫ－２９３クローン細胞株におけるｃＡＭＰ形成を用いて決定される。ｈＧＩＰＲ、ｈＧＬＰ－１Ｒ、またはｈＧＣＧＲ受容体発現細胞を、１ＸのＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５０）、０．１％のウシカゼイン（Ｓｉｇｍａ Ｃ４７６５－１０ＭＬ）、２５０μＭのＩＢＭＸ（３－イソブチル－１－メチルキサンチン、Ａｃｒｏｓカタログ番号２２８４２００１０）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中の対照ポリペプチドまたは実施例１～３の１つ（ＤＭＳＯ中２０点の濃度応答曲線、２．７５倍Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ直接希釈、３８４ウェルプレートＣｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５７０）で、２０μＬのアッセイ容量で（最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％であった）処理する。実験は、１．０％の脂肪酸フリー、グロブリンフリーのヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ３７８２）を添加した同一のアッセイ条件下でも実施される。
【0098】
３７℃で３０分インキュベーションした後、得られる細胞内ｃＡＭＰの増加を、ＣｉｓＢｉｏ ｃＡＭＰ Ｄｙｎａｍｉｃ ２ ＨＴＲＦアッセイキット（６２ＡＭ４ＰＥＪ）を使用して定量的に決定する。簡潔には、細胞溶解バッファー（１０μＬ）中のｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲート、続いてこれもまた細胞溶解バッファー（１０μＬ）中の抗体、抗ｃＡＭＰ－Ｅｕ３＋－クリプテートを添加することによって、細胞内のｃＡＭＰレベルを検出する。得られる競合アッセイを、室温で少なくとも６０分間インキュベートし、次いで、３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍおよび６２０ｎｍでの発光でＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器を使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。各ウェルにおける生成ｃＡＭＰ量（ｎＭ）を、ヒトＧＩＰ（１－４２）ＮＨ２、ｈＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２、またはｈＧＣＧについて観察される最大応答の割合に変換する。４パラメーターロジスティック方程式にフィットさせた、最大反応割合（％）対添加ペプチド濃度を使用する非線形回帰分析によって、相対ＥＣ５０値および最大割合（％）（Ｅｍａｘ）を導出する。
【0099】
結果：ｈＧＩＰ（１－４２）ＮＨ２、ｈＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２、ｈＧＣＧ、および実施例化合物についての機能的データは、以下の表３（０．１％のウシカゼイン）および表４（０．１％のウシカゼイン、１．０％のヒト血清アルブミン）にて提供される。
【表3】
【表4】
【0100】
表３に示されるように、実施例化合物は、０．１％のカゼインの存在下で、ｈＧＬＰ－１Ｒ、ｈＧＣＧＲ、およびｈＧＩＰＲからのｃＡＭＰを刺激する。
【0101】
表４に示されるように、実施例化合物は、０．１％のウシカゼインおよび１％のヒト血清アルブミンの存在下で、ｈＧＬＰ－１Ｒ、ｈＧＣＧＲおよびｈＧＩＰＲからのｃＡＭＰを刺激する。
【0102】
インビトロ機能
実施例６：雄の食餌誘発肥満（ＤＩＯ）マウスにおける薬物動態
方法：雄のＤＩＯマウスに、０．０２％のＰＳ８０を含む４０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣＬ、ｐＨ８バッファー中の実施例化合物２００ｎｍｏｌ／ｋｇ（０．９８ｍｇ／ｋｇ）を１０ｍＬ／ｋｇの容量で単回ＳＱ投与する。薬物動態学的な特性評価のために、投与後１、３、６、１２、２４、４８、および７２時間に採血する。実施例化合物の血漿濃度は、Ｑ Ｓｑｕａｒｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ ＬＬＣ（Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ）で認定された液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）法によって決定される。実施例化合物および内部標準は、タンパク質沈殿とそれに続く固相抽出を使用して、１００％のマウス血漿から抽出される。ペプチドとアシル鎖を含む実施例化合物の無傷の質量は、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（登録商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ（登録商標）質量分析計によって検出される。
実施例６：雄の食餌誘発肥満（ＤＩＯ）マウスにおける薬物動態
方法：雄のＤＩＯマウスに、０．０２％のＰＳ８０を含む４０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣＬ、ｐＨ８バッファー中の実施例化合物２００ｎｍｏｌ／ｋｇ（０．９８ｍｇ／ｋｇ）を１０ｍＬ／ｋｇの容量で単回ＳＱ投与する。薬物動態学的な特性評価のために、投与後１、３、６、１２、２４、４８、および７２時間に採血する。実施例化合物の血漿濃度は、Ｑ Ｓｑｕａｒｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ ＬＬＣ（Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ）で認定された液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）法によって決定される。実施例化合物および内部標準は、タンパク質沈殿とそれに続く固相抽出を使用して、１００％のマウス血漿から抽出される。ペプチドとアシル鎖を含む実施例化合物の無傷の質量は、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（登録商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ（登録商標）質量分析計によって検出される。
【0103】
結果：実施例化合物についてのデータを以下の表５に提供する。
【表5】
【0104】
表５に示されるように、実施例化合物は、ＤＩＯマウスにおける拡張された薬物動態プロファイルを示す。
【0105】
実施例７：雄Ｗｉｓｔａｒラットにおけるインスリン分泌に対するインビボ効果：
方法：雄Ｗｉｓｔａｒラットにおける静脈内ブドウ糖負荷試験（ｉｖＧＴＴ）を使用して、実施例化合物のインスリン分泌能を推定する。ＧＬＰ－１Ｒアゴニストであるセマグルチドを陽性対照として使用する。頸静脈および頸動脈（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ、２８０～３２０グラム）にカニューレを外科的にインプラントしたラットを、フィルタートップを有するポリカーボネートケージに、１ケージ当たり１匹収容する。ラットは、２１℃で１２時間の明暗サイクルで維持し、２０１４ Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ ｄｉｅｔ（Ｅｎｖｉｇｏ）および脱イオン水を自由に摂取する。ラットは、体重によって無作為化し、グルコース投与の１６時間前に実施例化合物を１．５ｍＬ／ｋｇでＳＱ投与し、次いで絶食させる。実施例化合物の２１１ｎＭ／ｍＬのストック濃度を、０．０２％のＰＳ８０を含む４０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０で、所望の投与濃度に希釈する。試験された用量は、ビヒクル、０．１、０．３、１、３、１０および３０ｎＭ／ｋｇである。セマグルチドは、実施例化合物（１０ｎＭ／ｋｇ用量）の各実行に関連して陽性対照として使用される。
方法：雄Ｗｉｓｔａｒラットにおける静脈内ブドウ糖負荷試験（ｉｖＧＴＴ）を使用して、実施例化合物のインスリン分泌能を推定する。ＧＬＰ－１Ｒアゴニストであるセマグルチドを陽性対照として使用する。頸静脈および頸動脈（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ、２８０～３２０グラム）にカニューレを外科的にインプラントしたラットを、フィルタートップを有するポリカーボネートケージに、１ケージ当たり１匹収容する。ラットは、２１℃で１２時間の明暗サイクルで維持し、２０１４ Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ ｄｉｅｔ（Ｅｎｖｉｇｏ）および脱イオン水を自由に摂取する。ラットは、体重によって無作為化し、グルコース投与の１６時間前に実施例化合物を１．５ｍＬ／ｋｇでＳＱ投与し、次いで絶食させる。実施例化合物の２１１ｎＭ／ｍＬのストック濃度を、０．０２％のＰＳ８０を含む４０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０で、所望の投与濃度に希釈する。試験された用量は、ビヒクル、０．１、０．３、１、３、１０および３０ｎＭ／ｋｇである。セマグルチドは、実施例化合物（１０ｎＭ／ｋｇ用量）の各実行に関連して陽性対照として使用される。
【0106】
０時点の血液試料をＥＤＴＡチューブに収集し、その後グルコースを投与する（０．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ）。血液試料を、グルコースの静脈内投与後２、４、６、１０、２０および３０分の時点のグルコースおよびインスリンのレベルを見るために収集する。血漿インスリンは、電気化学発光アッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を使用して決定する。インスリンＡＵＣを調べ、ｎ＝各群６動物でビヒクル対照と比較する。
【0107】
統計分析は、一元配置分散分析でのＪＭＰ、続いてビヒクル対照とのダネットの比較を使用して行う。
【0108】
結果：実施例化合物についてのデータを以下の表６に提供する。
【表6】
【0109】
表６に示されるように、実施例化合物は、インスリン分泌の用量依存性増加を示す。
【0110】
実施例８：ＤＩＯ Ｃ５７／Ｂ１６マウスにおける体重減少、代謝、体組成に関するインビボ研究
方法：体重減少、代謝および体の組成などのパラメーターに対する実施例化合物の効果を調査するために、実施例化合物をＣ５７Ｂｌ６ ＤＩＯマウスに投与する。これらの動物は、糖尿病ではないが、２０週間にわたって高脂肪の食餌が与えられた後、メタボリックシンドロームのすべての特性であるインスリン抵抗性および脂質異常症を示す。
方法：体重減少、代謝および体の組成などのパラメーターに対する実施例化合物の効果を調査するために、実施例化合物をＣ５７Ｂｌ６ ＤＩＯマウスに投与する。これらの動物は、糖尿病ではないが、２０週間にわたって高脂肪の食餌が与えられた後、メタボリックシンドロームのすべての特性であるインスリン抵抗性および脂質異常症を示す。
【0111】
本実施例では、２０週齢のＤＩＯ雄Ｃ５７／Ｂｌ６マウスが、カロリーが豊富な食餌で維持され、以下の研究に使用される。１２時間の明／暗サイクル（２１：００点灯）ならびに食餌（ＴＤ９５２１７）および水に自由アクセスできる温度制御した（２３～２６℃）施設に、動物を個々に収容する。１週間のビヒクルの馴化投与を伴って、施設へ３週間順応させた後、動物の各実験群が同様の体重を有するように、マウスをそれらの体重に応じて無作為化する。体重は、４０ｇ～５１ｇの範囲である。
【0112】
すべての群は、６匹のマウスを含有する。実施例化合物およびセマグルチドを、ビヒクル（ｐＨ８．０の４０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌおよび０．０２％のＰＳ－８０）中に溶解し、ＳＱ注射（１０ｍＬ／ｋｇ）によって、１４日間、毎日（１日目～１４日目）、暗サイクルの開始の３０分～９０分前に、自由に給餌されたＤＩＯマウスに投与する。最終投与の１日後（１５日目）を含む、研究期間を通して、体重および摂食量を毎日測定する。
【0113】
体重の絶対変化は、分子の最初の注射の前の同じ動物の体重を差し引くことによって計算される。０日目および１５日目に、Ｅｃｈｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）装置を使用して、核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって総脂肪質量を測定する。１５日目に、Ａｃｃｕ－Ｃｈｅｋ（登録商標）Ａｖｉｖａ（登録商標）血糖計（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）またはＨｉｔａｃｈｉ臨床血液分析装置（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用して、代謝パラメーターを測定する。血漿インスリンは、電気化学発光アッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を使用して決定する。
【0114】
データは、以下の表７および８において、１群当たり６匹の動物の平均±ＳＥＭとして示される。統計分析は、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いて多重比較のためのダネットの方法を使用して実施する。有意差はｐ＜０．０５を伴う＊で特定される。
【0115】
結果：実施例化合物についてのデータを以下の表７および８に提供する。
【表7】
【0116】
表７に示されるように、実施例化合物は、体重および脂肪質量を用量依存的に減少させる。
【表8】
【0117】
表８に示されるように、実施例化合物はまた、血糖、インスリン（インスリン感受性の増加の兆候として）、コレステロール、およびトリグリセリドを減少させる。
【0118】
配列表
以下の核酸配列および／またはアミノ酸配列が上記開示において言及され、参照のために以下に提供される。
以下の核酸配列および／またはアミノ酸配列が上記開示において言及され、参照のために以下に提供される。
【0119】
配列番号１－ヒトＧＩＰ
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ
【0120】
配列番号２－ヒトＧＬＰ－１７－３６アミド
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ－ＮＨ２
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ－ＮＨ２
【0121】
配列番号３－ヒトグルカゴン
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ
【0122】
配列番号４－ヒトＯＸＭ
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ
【0123】
配列番号５－インクレチン類似体
ＹＸ２ＱＧＴＸ６ＴＳＤＸ１０ＳＩＸ１３ＬＤＸ１６Ｘ１７ＡＱＸ２０Ｘ２１ＦＩＸ２４Ｘ２５ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＸ３９
［式中、
Ｘ２は、Ａｉｂであり、
Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、
Ｘ１０は、Ｙまたは４Ｐａｌであり得、
Ｘ１３は、ＬまたはαＭｅＬであり得、
Ｘ１６は、Ｏｒｎであり、
Ｘ１７は、コンジュゲートに利用可能な官能基を有する任意のアミノ酸であり、
Ｘ２０は、４Ｐａｌ、Ｉｖａ、またはαＭｅＬであり得、
Ｘ２１は、ＡまたはＡｉｂであり得、
Ｘ２４は、Ｅまたはｅであり得、
Ｘ２５は、ＹまたはαＭｅＹであり得、
Ｘ３９は、ＥまたはＳであり得る。］
ＹＸ２ＱＧＴＸ６ＴＳＤＸ１０ＳＩＸ１３ＬＤＸ１６Ｘ１７ＡＱＸ２０Ｘ２１ＦＩＸ２４Ｘ２５ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＸ３９
［式中、
Ｘ２は、Ａｉｂであり、
Ｘ６は、αＭｅＦ（２Ｆ）であり、
Ｘ１０は、Ｙまたは４Ｐａｌであり得、
Ｘ１３は、ＬまたはαＭｅＬであり得、
Ｘ１６は、Ｏｒｎであり、
Ｘ１７は、コンジュゲートに利用可能な官能基を有する任意のアミノ酸であり、
Ｘ２０は、４Ｐａｌ、Ｉｖａ、またはαＭｅＬであり得、
Ｘ２１は、ＡまたはＡｉｂであり得、
Ｘ２４は、Ｅまたはｅであり得、
Ｘ２５は、ＹまたはαＭｅＹであり得、
Ｘ３９は、ＥまたはＳであり得る。］
【0124】
配列番号６－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ
【0125】
配列番号７－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
【0126】
配列番号８－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
【0127】
配列番号９－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ－ＮＨ２
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩＬＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－４Ｐａｌ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ－ＮＨ２
【0128】
配列番号１０－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ｉｖａ－ＡＦＩＥ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２
【0129】
配列番号１１－インクレチン類似体
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴ－αＭｅＦ（２Ｆ）－ＴＳＤ－４Ｐａｌ－ＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＯＫ（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－αＭｅＬ－Ａｉｂ－ＦＩｅ－αＭｅＹ－ＬＬＥＧＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ－ＮＨ２
【0130】
配列番号１２－人工配列
ＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ
ＧＰＳＳＧＥＰＰＰＥ
【0131】
配列番号１３－人工配列
ＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
ＧＰＳＳＧＥＰＰＰＳ
【0132】
配列番号１４－ヒトＧＩＰ受容体
ＭＴＴＳＰＩＬＱＬＬＬＲＬＳＬＣＧＬＬＬＱＲＡＥＴＧＳＫＧＱＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮＰＥＫＮＥＡＦＬＤＱＲＬＩＬＥＲＬＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＡＴＬＬＬＡＬＬＩＬＳＬＦＲＲＬＨＣＴＲＮＹＩＨＩＮＬＦＴＳＦＭＬＲＡＡＡＩＬＳＲＤＲＬＬＰＲＰＧＰＹＬＧＤＱＡＬＡＬＷＮＱＡＬＡＡＣＲＴＡＱＩＶＴＱＹＣＶＧＡＮＹＴＷＬＬＶＥＧＶＹＬＨＳＬＬＶＬＶＧＧＳＥＥＧＨＦＲＹＹＬＬＬＧＷＧＡＰＡＬＦＶＩＰＷＶＩＶＲＹＬＹＥＮＴＱＣＷＥＲＮＥＶＫＡＩＷＷＩＩＲＴＰＩＬＭＴＩＬＩＮＦＬＩＦＩＲＩＬＧＩＬＬＳＫＬＲＴＲＱＭＲＣＲＤＹＲＬＲＬＡＲＳＴＬＴＬＶＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＰＶＴＥＥＱＡＲＧＡＬＲＦＡＫＬＧＦＥＩＦＬＳＳＦＱＧＦＬＶＳＶＬＹＣＦＩＮＫＥＶＱＳＥＩＲＲＧＷＨＨＣＲＬＲＲＳＬＧＥＥＱＲＱＬＰＥＲＡＦＲＡＬＰＳＧＳＧＰＧＥＶＰＴＳＲＧＬＳＳＧＴＬＰＧＰＧＮＥＡＳＲＥＬＥＳＹＣ
ＭＴＴＳＰＩＬＱＬＬＬＲＬＳＬＣＧＬＬＬＱＲＡＥＴＧＳＫＧＱＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮＰＥＫＮＥＡＦＬＤＱＲＬＩＬＥＲＬＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＡＴＬＬＬＡＬＬＩＬＳＬＦＲＲＬＨＣＴＲＮＹＩＨＩＮＬＦＴＳＦＭＬＲＡＡＡＩＬＳＲＤＲＬＬＰＲＰＧＰＹＬＧＤＱＡＬＡＬＷＮＱＡＬＡＡＣＲＴＡＱＩＶＴＱＹＣＶＧＡＮＹＴＷＬＬＶＥＧＶＹＬＨＳＬＬＶＬＶＧＧＳＥＥＧＨＦＲＹＹＬＬＬＧＷＧＡＰＡＬＦＶＩＰＷＶＩＶＲＹＬＹＥＮＴＱＣＷＥＲＮＥＶＫＡＩＷＷＩＩＲＴＰＩＬＭＴＩＬＩＮＦＬＩＦＩＲＩＬＧＩＬＬＳＫＬＲＴＲＱＭＲＣＲＤＹＲＬＲＬＡＲＳＴＬＴＬＶＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＰＶＴＥＥＱＡＲＧＡＬＲＦＡＫＬＧＦＥＩＦＬＳＳＦＱＧＦＬＶＳＶＬＹＣＦＩＮＫＥＶＱＳＥＩＲＲＧＷＨＨＣＲＬＲＲＳＬＧＥＥＱＲＱＬＰＥＲＡＦＲＡＬＰＳＧＳＧＰＧＥＶＰＴＳＲＧＬＳＳＧＴＬＰＧＰＧＮＥＡＳＲＥＬＥＳＹＣ
【0133】
配列番号１５－ヒトＧＬＰ－１受容体
ＭＡＧＡＰＧＰＬＲＬＡＬＬＬＬＧＭＶＧＲＡＧＰＲＰＱＧＡＴＶＳＬＷＥＴＶＱＫＷＲＥＹＲＲＱＣＱＲＳＬＴＥＤＰＰＰＡＴＤＬＦＣＮＲＴＦＤＥＹＡＣＷＰＤＧＥＰＧＳＦＶＮＶＳＣＰＷＹＬＰＷＡＳＳＶＰＱＧＨＶＹＲＦＣＴＡＥＧＬＷＬＱＫＤＮＳＳＬＰＷＲＤＬＳＥＣＥＥＳＫＲＧＥＲＳＳＰＥＥＱＬＬＦＬＹＩＩＹＴＶＧＹＡＬＳＦＳＡＬＶＩＡＳＡＩＬＬＧＦＲＨＬＨＣＴＲＮＹＩＨＬＮＬＦＡＳＦＩＬＲＡＬＳＶＦＩＫＤＡＡＬＫＷＭＹＳＴＡＡＱＱＨＱＷＤＧＬＬＳＹＱＤＳＬＳＣＲＬＶＦＬＬＭＱＹＣＶＡＡＮＹＹＷＬＬＶＥＧＶＹＬＹＴＬＬＡＦＳＶＬＳＥＱＷＩＦＲＬＹＶＳＩＧＷＧＶＰＬＬＦＶＶＰＷＧＩＶＫＹＬＹＥＤＥＧＣＷＴＲＮＳＮＭＮＹＷＬＩＩＲＬＰＩＬＦＡＩＧＶＮＦＬＩＦＶＲＶＩＣＩＶＶＳＫＬＫＡＮＬＭＣＫＴＤＩＫＣＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＴＨＥＶＩＦＡＦＶＭＤＥＨＡＲＧＴＬＲＦＩＫＬＦＴＥＬＳＦＴＳＦＱＧＬＭＶＡＩＬＹＣＦＶＮＮＥＶＱＬＥＦＲＫＳＷＥＲＷＲＬＥＨＬＨＩＱＲＤＳＳＭＫＰＬＫＣＰＴＳＳＬＳＳＧＡＴＡＧＳＳＭＹＴＡＴＣＱＡＳＣＳ
ＭＡＧＡＰＧＰＬＲＬＡＬＬＬＬＧＭＶＧＲＡＧＰＲＰＱＧＡＴＶＳＬＷＥＴＶＱＫＷＲＥＹＲＲＱＣＱＲＳＬＴＥＤＰＰＰＡＴＤＬＦＣＮＲＴＦＤＥＹＡＣＷＰＤＧＥＰＧＳＦＶＮＶＳＣＰＷＹＬＰＷＡＳＳＶＰＱＧＨＶＹＲＦＣＴＡＥＧＬＷＬＱＫＤＮＳＳＬＰＷＲＤＬＳＥＣＥＥＳＫＲＧＥＲＳＳＰＥＥＱＬＬＦＬＹＩＩＹＴＶＧＹＡＬＳＦＳＡＬＶＩＡＳＡＩＬＬＧＦＲＨＬＨＣＴＲＮＹＩＨＬＮＬＦＡＳＦＩＬＲＡＬＳＶＦＩＫＤＡＡＬＫＷＭＹＳＴＡＡＱＱＨＱＷＤＧＬＬＳＹＱＤＳＬＳＣＲＬＶＦＬＬＭＱＹＣＶＡＡＮＹＹＷＬＬＶＥＧＶＹＬＹＴＬＬＡＦＳＶＬＳＥＱＷＩＦＲＬＹＶＳＩＧＷＧＶＰＬＬＦＶＶＰＷＧＩＶＫＹＬＹＥＤＥＧＣＷＴＲＮＳＮＭＮＹＷＬＩＩＲＬＰＩＬＦＡＩＧＶＮＦＬＩＦＶＲＶＩＣＩＶＶＳＫＬＫＡＮＬＭＣＫＴＤＩＫＣＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＴＨＥＶＩＦＡＦＶＭＤＥＨＡＲＧＴＬＲＦＩＫＬＦＴＥＬＳＦＴＳＦＱＧＬＭＶＡＩＬＹＣＦＶＮＮＥＶＱＬＥＦＲＫＳＷＥＲＷＲＬＥＨＬＨＩＱＲＤＳＳＭＫＰＬＫＣＰＴＳＳＬＳＳＧＡＴＡＧＳＳＭＹＴＡＴＣＱＡＳＣＳ
【0134】
配列番号１６－ヒトＧＣＧ受容体
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ
【配列表】