特許 7450968 乳酸菌組成物及び薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-08

(45)【発行日】2024-03-21

(54)【発明の名称】乳酸菌組成物及び薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/135 20160101AFI20240313BHJP

   A23L 33/125 20160101ALI20240313BHJP

   A61K 31/7016 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 31/702 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20240313BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240313BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240313BHJP

   C12N 1/20 20060101ALI20240313BHJP

【ＦＩ】

A23L33/135

A23L33/125

A61K31/7016

A61K31/702

A61K35/747

A61P31/04

A61P43/00 121

C12N1/20 A ZNA

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2022169386

(22)【出願日】2022-10-21

(65)【公開番号】P2023111825

(43)【公開日】2023-08-10

【審査請求日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】111104175

(32)【優先日】2022-01-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

(31)【優先権主張番号】111104157

(32)【優先日】2022-01-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

(31)【優先権主張番号】111104168

(32)【優先日】2022-01-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

【微生物の受託番号】BCRC  BCRC 911088

【微生物の受託番号】BCRC  BCRC 911089

【微生物の受託番号】BCRC  BCRC 911090

(73)【特許権者】

【識別番号】522308613

【氏名又は名称】チア チエ バイオメディカル カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】湯宏仁

(72)【発明者】

【氏名】陳志忠

(72)【発明者】

【氏名】呂英震

(72)【発明者】

【氏名】謝▲ブン▼芳

【審査官】吉岡 沙織

(56)【参考文献】

【文献】Frontiers in Microbiology，2019年，Vol.10，Article 789，pp.1-10

【文献】Frontiers in Cellular and Infection Microbiology，2021年，Vol.11，Article 804253，pp.1-10

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ２３Ｌ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＥＭＢＡＳＥ／ＦＳＴＡ／ＡＧＲＩＧＯＬＡ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効成分として、ラクトバチルスラムノサス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ
ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＪＪ１０２、ラクチプランチバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＪＪ１０３及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれる乳酸菌を含み、前記ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１は２０２１年１２月２２日に財団法人食品産業発展研究所生物資源センター（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ；ＢＣＲＣ）に寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８であり、前記ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９であり、前記ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０であり、且つ薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する乳酸菌組成物。

【請求項2】

ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を含むプレバイオティクスを更に備える請求項１に記載の乳酸菌組成物。

【請求項3】

前記プレバイオティクスの含有量は１重量％～５重量％である請求項２に記載の乳酸菌組成物。

【請求項4】

前記乳酸菌組成物は経口組成物である請求項１に記載の乳酸菌組成物。

【請求項5】

前記薬剤耐性腸内細菌はクレブシエラニューモニエのカルバペネマーゼ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ；ＫＰＣ）－２を有する請求項１に記載の乳酸菌組成物。

【請求項6】

被験対象は、有効投与量を有する前記乳酸菌組成物が少なくとも７日間投与される請求項１に記載の乳酸菌組成物。

【請求項7】

前記被験対象がマウスである場合、前記有効投与量は５．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日である請求項６に記載の乳酸菌組成物。

【請求項8】

有効成分として、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２、ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれる乳酸菌を含み、前記ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８であり、前記ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９であり、且つ前記ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０である、薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物。

【請求項9】

前記薬剤耐性腸内細菌はＫＰＣ－２を有する請求項８に記載の薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物。

【請求項10】

前記乳酸菌組成物はラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を更に含む請求項８に記載の薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、乳酸菌組成物に関し、特に薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）は、γ-プロテオバクテリア綱の腸内細菌科に属するグラム陰性菌である。腸内細菌は、環境（土壌や水等）及び生物（動物や植物等）に遍在しており、人間の腸内細菌の１つである。腸内細菌には、有益な共生細菌と、日和見的に感染する病原性細菌が含まれている。これらの病原菌は、腸間膜炎、腸熱、尿路感染症、創傷感染症、肝膿瘍、敗血症、髄膜炎、肺炎などの疾患を引き起こす可能性があり、院内感染症及び地域感染症の主な病原菌の１つである。

【0003】

抗生物質は、腸内細菌感染を治療する主な薬物であり、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）系抗生物質の抗菌範囲が広く、且つ薬剤耐性菌種が少なく、多剤耐性腸内細菌科に対する現在の最後の防衛線である。しかしながら、近年、クレブシエラニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等の腸内細菌は、カルバペネム系抗生物質に対する感受性を低下させる方法を進化させてきて、例えば、カルバペネマーゼ産生腸内細菌（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ；ＣＰＥ）がカルバペネマーゼを発現し、カルバペネム系抗生物質を分解でき、更に感染した患者の罹患率及び死亡率が増加することとなり、世界の公衆衛生に対する主要な脅威の１つである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

抗生物質等の薬物による細菌感染に対する制御に制限があることに鑑みて、薬剤耐性腸内細菌を抑制し、上記の課題を解決するための非薬物組成物を提供することが求められる。

【課題を解決するための手段】

【0005】

したがって、本発明の一態様は、有効成分として乳酸菌を含む乳酸菌組成物を提供する。乳酸菌は、ラクトバチルスラムノサス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＪＪ１０２、ラクチプランチバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、ラクトバチルスプランタルムとも呼ばれる）ＪＪ１０３及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれ、この乳酸菌組成物は、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する。

【0006】

本発明の別の態様は、有効成分として上記の乳酸菌を含む、薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物を提供する。

【0007】

本発明の上記の態様によれば、有効成分として、例えば、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２、ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれてよい乳酸菌を含む乳酸菌組成物を提出する。上記のラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１は２０２１年１２月２２日に台湾食品工業発展研究所生物資源保存及び研究センター（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ；ＢＣＲＣ）に寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８であり、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９であり、且つラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０である。この乳酸菌組成物は、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する。

【0008】

本発明の実施例において、乳酸菌組成物は、プレバイオティクスを選択的に含んでよく、プレバイオティクスがラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を含むがこれらに限定されない。本発明の実施例において、プレバイオティクスの含有量は１重量％～５重量％である。本発明の実施例において、乳酸菌組成物は経口組成物である。本発明の実施例において、薬剤耐性腸内細菌はクレブシエラニューモニエのカルバペネマーゼ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ；ＫＰＣ）－２を有する。本発明の実施例において、被験対象は、有効投与量を有する乳酸菌が少なくとも７日間投与される。本発明の実施例において、被験対象がマウスである場合、有効投与量は、例えば、５．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日であってよい。

【0009】

本発明の別の態様によれば、有効成分として、例えば、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２、ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれてよい乳酸菌を含み、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８であり、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９であり、且つラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０である、薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物を提出する。

【0010】

本発明の一実施例において、薬剤耐性腸内細菌はＫＰＣ－２を有する。本発明の実施例において、乳酸菌組成物は、ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を選択的に含んでよい。
（発明の効果）

【0011】

本発明の乳酸菌組成物及び薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物を適用すると、インビトロ及び／又はインビボでＫＰＣ－２を有する薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制できるため、本発明の乳酸菌組成物は、薬剤耐性腸内細菌感染の予防、改善及び／又は治療に応用する可能性がある。

【0012】

本発明の上記の及び他の目的、特徴、メリット及び実施例をより分かりやすくするために、添付図面の説明は以下の通りである。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明の実施例による異なるラクトバチルスラムノサスを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクトバチルスラムノサス含有量を示す折線図である。

【図2】本発明の実施例による異なるラクトバチルスパラカゼイを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクトバチルスパラカゼイ含有量を示す折線図である。

【図3】本発明の実施例による異なるラクチプランチバチルスプランタルムを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクチプランチバチルスプランタルム含有量を示す折線図である。

【図4】本発明の実施例による感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図である。

【図5】本発明の実施例による異なるグループ別の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図である。

【図6A】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０１及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図6B】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０１及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図7A】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０２及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図7B】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０２及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図8A】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０３及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図8B】それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０３及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量及びｐＨ値を示す折線図である。

【図9】本発明の実施例による異なるグループ別の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

上記のように、本発明は、有効成分として乳酸菌を含む乳酸菌組成物及び薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物を提供する。インビトロ共培養実験及び動物実験によって、乳酸菌組成物は、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制できることが実証された。

【0015】

本文に記載の「乳酸菌」（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ）とは、糖類（例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、及び／又は果糖等）を分解した後、乳酸及び／又は酢酸を生成する細菌を意味し、例えば、乳酸桿菌、ペディオコッカス、バチルス及びビフィズス菌である。注意すべきなのは、乳酸菌の異なる菌株は互いに干渉して効果に影響を与える可能性があるが、所定の菌株の組み合わせも相乗効果を生み出して、動物の体（即ち、腸）における菌株の滞留能力及び／又は効果を改善する。したがって、乳酸菌を適用する場合、菌株、被験対象及び／又は効果に応じて、単一菌株の乳酸菌又は複数菌株の乳酸菌（複合乳酸菌と呼ばれる）を選択する必要がある。

【0016】

補充して説明すべきなのは、動物の体（即ち、腸）における乳酸菌の滞留能力が優れたこととは、動物の体（即ち、腸）における乳酸菌の滞留時間が長くかつ／又は滞留の生菌数が多いことを意味し、動物の体（即ち、腸）における乳酸菌の生菌数は例えば単位重量あたりの糞便の生菌数を計算することにより評価される。一実施例において、乳酸菌は、耐酸性及び胆汁酸塩耐性を有するので、その腸内滞留能力が優れた。

【0017】

一実施例において、乳酸菌は、例えば、ラクトバチルスラムノサス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルスパラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクチプランチバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、ラクチプランチバチルスプランタルムとも呼ばれる）及び上記の任意の組み合わせからなるグループから選ばれてよい。一実施例において、ラクトバチルスラムノサスは、例えば、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８のラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１（菌株ＪＪ１０１とも呼ばれる）であってよく、ラクトバチルスパラカゼイは、例えば、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９のラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２（菌株ＪＪ１０２とも呼ばれる）であってよく、且つラクチプランチバチルスプランタルムは、例えば、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０のラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３（菌株ＪＪ１０３とも呼ばれる）であってよい。

【0018】

補充して説明すべきなのは、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３は、何れも２０２１年１２月２２日に財団法人食品産業発展研究所生物資源センター（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ；ＢＣＲＣ；アドレス：３００６２台湾新竹市食品路３３１号）に寄託され、２０２２年１月７日に生存テストを完了した。ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１も２０２２年０１月１２日にドイツ微生物細胞培養コレクション（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ；ＤＳＭＺ（アドレス：Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ． ７Ｂ、３８１２４ ブラウンシュヴァイク、ドイツ）に寄託され、受託番号がＤＳＭ ３４１２２である。ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２も２０２２年０１月１２日にＤＳＭＺに寄託され、受託番号がＤＳＭ ３４１２３である。ラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３も２０２２年０１月１２日にＤＳＭＺに寄託され、受託番号がＤＳＭ ３４１２４である。

【0019】

一実施例において、乳酸菌は、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３からなり、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の菌数比は、例えば、１～５：１～５：１～１０であってよく、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３に動物の体内で相乗効果を維持させて、より効果的に薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する。一具体例において、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の菌数比は、例えば、１：１：１であってよい。

【0020】

動物実験によって確認されたように、同属の他の菌株に比べて、動物にラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の何れか１つを３日間連続して経口投与した後、腸内に滞留する生菌数が多く、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の腸内滞留能力が優れたことを示す。

【0021】

本文に記載の「薬剤耐性腸内細菌」とは、抗生物質に対する薬剤耐性を有する腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）菌株を意味する。本文に記載の「乳酸菌による薬剤耐性腸内細菌の抑制」とは、乳酸菌と薬剤耐性腸内細菌のインビトロ共培養後、薬剤耐性腸内細菌の成長（例えば、薬剤耐性腸内細菌の含有量が少なくとも２桁低下し、９９％の抑制率に相当する）を効果的に抑制でき、又は経口投与後、動物の体における薬剤耐性腸内細菌の含有量が著しく低下する。補充して説明すべきなのは、抑制率は初期細菌数と処理後細菌数との差値の初期細菌数に対する百分率であり、初期細菌数は乳酸菌と共培養されていない薬剤耐性腸内細菌の生菌数であり、且つ処理後細菌数は乳酸菌と共培養された後の薬剤耐性腸内細菌の生菌数であり、或いは、初期細菌数は乳酸菌が経口投与されていない感染した動物の糞便における薬剤耐性腸内細菌の含有量であり、且つ処理後細菌数は乳酸菌が経口投与された後の感染した動物の糞便における薬剤耐性腸内細菌の含有量である。

【0022】

一実施例において、上記の抗生物質は、例えば、β－ラクタム系（β－ｌａｃｔａｍ）抗生物質であってよく、細胞壁の合成を妨げることにより細菌の成長を抑制することができる。β－ラクタム系抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）及びモノアミド環を含むがこれらに限定されない。一実施例において、薬剤耐性腸内細菌は、例えば、β－ラクタム系薬剤耐性腸内細菌であってよい。一実施例において、薬剤耐性腸内細菌は、例えば、カルバペネム薬剤耐性腸内細菌（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ；ＣＲＥ）であってよい。いくつかの具体例において、薬剤耐性腸内細菌は、例えば、カルバペネマーゼ産生腸内細菌（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ；ＣＰＥ）であってよい。

【0023】

補充して説明すべきなのは、カルバペネマーゼは、β－ラクタマーゼ（β－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ）の１つであり、β－ラクタム系抗生物質（例えば、カルバペネム）を水解して、ＣＰＥのβ－ラクタム系抗生物質に対する感受性を低下させることができる。クレブシエラニューモニエカルバペネマーゼ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ；ＫＰＣ）は、カルバペネマーゼの１つであり、１９９６年にクレブシエラニューモニエで最初に発見されたので、その名前が付けられた。ＫＰＣの遺伝子は、色素体に位置するため、異種間で伝播することができ、今まで、他の腸内細菌（例えば、サイトロバクター・フレウンディイ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ）、大腸菌、エンテロバクタージェルゴビエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｅｒｇｏｖｉａ）、エンテロバクターアエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクタークロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、クレブシエラオキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）、プロテウスミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ）、セラチア菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ））及び他の非腸内細菌のグラム陰性菌（例えば、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ.））のいずれにも、ＫＰＣを生じた菌株が発見されたことがある。遺伝子配列によって、ＫＰＣは、ＫＰＣ－１、ＫＰＣ－２、ＫＰＣ－３等に分類されてよい。例えば、シーケンスタイプ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｅ；ＳＴ）１１のクレブシエラニューモニエのような、ＫＰＣ－２を有する薬剤耐性腸内細菌は、臨床的によく見られる。

【0024】

動物実験によって確認されたように、ＣＰＥで感染した動物にラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の何れか１つを連続して少なくとも４日間経口投与した後、感染した動物の糞便における薬剤耐性腸内細菌の含有量を効果的に低下させることができ、且つ上記の菌株を少なくとも７日間経口投与した後、薬剤耐性腸内細菌の含有量が少なくとも２桁低下し、９９％の抑制率に相当し、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３は、何れも薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する有効性を有することは実証された。次に、同時にラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３を連続して７日間投与した後、感染した動物の腸内に滞留する薬剤耐性腸内細菌が少なくとも３桁低下し、９９．９％の抑制率に相当し、上記の３つの菌を共に使用すると、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する有効性がより優れたことを示す。

【0025】

一実施例において、乳酸菌組成物は、プレバイオティクスを選択的に含んでよく、プレバイオティクスを含む乳酸菌組成物はシンバイオティクスと呼ばれてよい。本文に記載の「プレバイオティクス」とは、宿主によって消化され得ないが、宿主の消化管における所定の菌株の成長及び／又は代謝活性に寄与して、宿主の健康を改善する物質を指す。

【0026】

一般的なプレバイオティクスは、二糖、オリゴ糖炭水化物（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ；ＯＳＣｓ）、耐性デンプン及び他の非糖物質を含み、具体的にフルクトオリゴ糖（ｆｒｕｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、ガラクトオリゴ糖（ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、ポリデキストロース（ｐｏｌｙｄｅｘｔｒｏｓｅ）、キシロオリゴ糖（ｘｙｌｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、ラクツロース（ｌａｃｔｕｌｏｓｅ）、イソマルトオリゴ糖（ｉｓｏｍａｌｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）及びイヌリン（ｉｎｕｌｉｎ）等であってよい。一実施例において、プレバイオティクスは、ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を含むがこれらに限定されない。一実施例において、ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖は、乳酸菌による酸性物質（例えば、有機酸）の産生を促進し、それにより、乳酸菌の薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する有効性を高めることができる。

【0027】

一実施例において、プレバイオティクスの含有量に制限がなく、安全な投与量を超えない程度で十分であり、腹部膨満や下痢等の不快感を避けるために、成人のプレバイオティクスの安全な１日投与量は、例えば、１０ｇ未満にすることができる。一実施例において、プレバイオティクスの含有量は、上記の乳酸菌の成長及び／又は代謝活性を十分に刺激するように、例えば１重量％～５重量％、１．５重量％～２．５重量％、又は２重量％であってよいが、上記の安全な１日投与量を超えない。

【0028】

インビトロ共培養実験によって確認されたように、ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖は、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３の何れか１つによる酸性物質の生産を促進でき、共培養液のｐＨ値を５未満にして、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する。次に、動物実験によって確認されたように、乳酸菌（プレバイオティクスを含まない）を投与することに比べて、同時に乳酸菌及びプレバイオティクスを投与すると、感染した動物の腸内の薬剤耐性腸内細菌の含有量は速く低下する（例えば、７日間投与後、感染した動物の腸内の薬剤耐性腸内細菌の含有量は少なくとも５桁低下し、少なくとも９９．９９９％の抑制率に相当する）。

【0029】

上記の乳酸菌を適用する場合、その投与経路は特に限定されなく、例えば経口投与であってよいが、実際の必要に応じて調整する。上記の乳酸菌の投与量及び投与回数も、必要に応じて柔軟に調整することができる。一実施例において、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３は、インビトロ培養液における有効投与量が１０^５ＣＦＵ／ｍＬ～１０^７ＣＦＵ／ｍＬである。一実施例において、被験対象がマウスである場合、乳酸菌の有効投与量は、例えば、５．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日であってよい。例として、上記の動物実験において、乳酸菌のマウスに対する有効投与量が１．０×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日であり、即ち２．０×１０^９ＣＦＵ／マウス（２０ｇ体重）／日である。

【0030】

補充して説明すべきなのは、動物実験において、マウスに直接薬剤耐性腸内細菌が経口投与されたので、マウス腸内における薬剤耐性腸内細菌の含有量は臨床患者よりもはるかに高い。次に、マウスは糞便を食べる習慣があり、糞便における薬剤耐性腸内細菌を繰り返して摂食する。したがって、薬剤耐性腸内細菌を効果的に低下させために、マウスに高投与量の乳酸菌を経口投与する必要がある。言い換えれば、臨床応用における成人に対する乳酸菌の有効投与量が動物実験におけるマウスに対する有効投与量よりも低い場合、効果的に薬剤耐性腸内細菌を抑制することができる。一具体例において、乳酸菌の成人に対する有効投与量は、例えば、１．０×１０^８ＣＦＵ／６０ｋｇ体重／日～１．０×１０^１０ＣＦＵ／６０ｋｇ体重／日であってよい。一実施例において、被験対象には上記の有効投与量の乳酸菌を連続して数日間投与した。一実施例において、被験対象には乳酸菌を連続して少なくとも７日間投与し、例えば、７日間～１年、又は１４日間～６カ月投与した。

【0031】

上記の乳酸菌は、薬剤耐性腸内細菌の成長を抑制する有効性を有するので、乳酸菌組成物の有効成分とされてよい。一実施例において、乳酸菌組成物は、例えば、経口組成物であってよい。一実施例において、乳酸菌組成物は、例えば、食品組成物又は医薬組成物であってよい。一実施例において、乳酸菌組成物は、食品又は薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、補助剤及び／又は添加剤を選択的に含んでよく、例えば、溶剤、乳化剤、懸濁剤、崩壊剤、接着剤、安定剤、キレート剤、希釈剤、ゲル化剤、防腐剤、潤滑剤及び／又は吸収遅延剤等であってよい。乳酸菌組成物の剤型は、特に限定されなく、例えば、水溶液、懸濁液、分散液、乳液（単相又は多相分散系、単層又は多層リポソーム）、ヒドロゲル、ゲル、固体脂質ナノ粒子、トローチ、顆粒、粉末又はカプセル等であってよい。

【0032】

以下、複数の実施例で本発明の適用を説明するが、これは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神と範囲から逸脱しない限り、多様の変更や修飾を加えることができる。
実施例一、乳酸菌の分離、培養及び微生物学的特性

【0033】

菌株ＬＹＣ１５０４、菌株ＪＪ１０１、菌株ＬＹＣ１１１９、菌株ＪＪ１０２、菌株ＬＹＣ１１２９、菌株ＬＹＣ１０３１、菌株ＬＹＣ１１１２、菌株ＬＹＣ１１１７、菌株ＬＹＣ１１４６、菌株ＬＹＣ１１５９及び菌株ＪＪ１０３等の１１株の乳酸菌（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ；ＬＡＢ）は、果実発酵物から分離されたものである。ＬＡＢを４分割法でｄｅ Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ ａｎｄ Ｓｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）寒天培地に接種し、３７℃で１６時間～１８時間培養して、単一のコロニーが得られた。次に、単一のコロニーをＭＲＳ培養液に接種し、３７℃で１６時間～２４時間培養して、ＬＡＢ培養液が得られた。ＬＡＢ培養液を遠心分離して、菌体沈殿物（ｐｅｌｌｅｔ）が得られた。

【0034】

ＬＡＢの菌体沈殿物に対するＲＮＡ精製及び逆転写を行ってから、配列識別番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ．）：１及び２のようなヌクレオチド配列に示すような上流プライマー及び下流プライマーによりポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＰＣＲ）を行って、１６Ｓ ｒＤＮＡヌクレオチドフラグメントが得られ、ヌクレオチド配列決定を行って、ＬＡＢの１６Ｓ ｒＤＮＡヌクレオチド配列が得られた。基礎局所的アライメント検索ツール（Ｂａｓｉｃ ＬＯＣＡＬ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ；ＢＬＡＳＴ）により比較して、１１株のＬＡＢに２株のラクトバチルスラムノサス（菌株ＬＹＣ１５０４及び菌株ＪＪ１０１）、３株のラクトバチルスパラカゼイ（菌株ＬＹＣ１１１９、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＬＹＣ１１２９）及び６株のラクチプランチバチルスプランタルム（菌株ＬＹＣ１０３１、菌株ＬＹＣ１１１２、菌株ＬＹＣ１１１７、菌株ＬＹＣ１１４６、菌株ＬＹＣ１１５９及び菌株ＪＪ１０３）があると鑑定した。

【0035】

上記の菌株ＪＪ１０１の１６Ｓ ｒＤＮＡヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３に示すようなものである。菌株ＪＪ１０２の１６Ｓ ｒＤＮＡヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４に示すようなものである。菌株ＪＪ１０３の１６Ｓ ｒＤＮＡヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５に示すようなものである。菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３は、２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、２０２２年１月７日に生存テストを完了し、菌株菌株ＪＪ１０１の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８であり、菌株ＪＪ１０２の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９であり、且つ菌株ＪＪ１０３の受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０であった。菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３も２０２２年０１月１２日にＤＳＭＺに寄託され、菌株菌株ＪＪ１０１の受託番号がＤＳＭ ３４１２２であり、菌株ＪＪ１０２の受託番号がＤＳＭ ３４１２３であり、且つ菌株ＪＪ１０３の受託番号がＤＳＭ ３４１２４であった。

【0036】

補充して説明すべきなのは、菌株ＪＪ１０１（ラクトバチルスラムノサス）のコロニーは、乳白色で、不透明で、円形で、表面が滑らかに突起し、きちんとしたエッジがあり、その菌体が短い棒状で、両端が丸く鈍く、シングル、ペア、短鎖、又は鎖状の形で存在し、べん毛なし、運動性なし、胞子の形成がなく、且つグラム染色が陽性である。菌株ＪＪ１０２（ラクトバチルスパラカゼイ）のコロニーは、乳白色で、不透明で、円形又は略円形であり、表面が滑らかに突起し、きちんとしたエッジがあり、その菌体が短い棒状で、両端が丸く鈍く、シングル、ペア、又は短鎖の形で存在し、べん毛なし、運動性なし、胞子の形成がなく、且つグラム染色が陽性である。菌株ＪＪ１０３（ラクチプランチバチルスプランタルム）のコロニーは、乳白色で、不透明で、円形又はやや不規則形状であり、表面が滑らかに突起し、きちんとしたエッジがあり、その菌体が棒状の線形で、両端が弧状となり、シングル、ペア、又は短鎖の形で存在し、べん毛なしであるが運動でき、胞子の形成がなく、且つグラム染色が陽性である。
実施例二、乳酸菌及び薬剤耐性腸内細菌の動物の体における滞留能力に対する評価
１．乳酸菌の動物の体における滞留能力

【0037】

ＢＡＬＢ／ｃマウス（以下、マウスと略す）を実験動物とした。５週齢の雌マウスを動物室の個別に換気された飼育ケージに飼養して、マウスを環境に順応させた。順応期間中、マウスは標準的なペレット状の固形飼料と滅菌蒸留水を自由に摂取できた。動物室の温度は２３±３℃であり、相対湿度は６０±１０％であり、且つ毎日１２時間の明期及び１２時間の暗期があった。マウスが６週齢に成長した後、追跡評価を行った。

【0038】

まず、毎日マウスに抗生物質を投与し、マウス糞便における細菌の含有量を検出して、糞便が無菌であるかを確認した。検出方法に関する説明として、マウスの新鮮な糞便を秤量した後、１ｍＬの生理学的実験水（ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ；ＮＳ）を加えて検出液に粉砕し、次に検出液をそれぞれ腸内細菌培地、ミューラーヒントン（Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ；ＭＨＢ）寒天及びＬＡＢ培地に塗り付け、３７℃で２４時間培養した後コロニー数を算出した。上記の腸内細菌培地は、１６μｇ／ｍＬのバンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、６４μｇ／ｍＬのアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）及び１６μｇ／ｍＬのセフォタキシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）のエオシンメチレンブルー（ｅｏｓｉｎ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｌｕｅ；ＥＭＢ）寒天を含み、腸内細菌の検出に用いられることができる。ＬＡＢ培地は、３２μｇ／ｍＬのバンコマイシンを含むＭＲＳ寒天であり、且つｐＨ値が５．０であり、ＬＡＢの検出に用いられることができる。

【0039】

マウスの糞便が無菌であることを確認した後、それぞれマウスに異なるＬＡＢ液の経管栄養を行い、ＬＡＢ液は上記の１１株ＬＡＢの沈殿物をそれぞれリン酸緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）に再溶解した後で得られ、ＬＡＢ含有量を調整して、マウスに２．０×１０^９ＣＦＵ／日のＬＡＢを連続して３日間経口投与した。そして、経管栄養を停止し、経管栄養を停止してから１日後、３日後及び７日後、上記のＬＡＢ培地を使用してマウス糞便におけるＬＡＢ含有量を検出し、ＬＡＢ含有量がマウス糞便重量に対するＬＡＢ生菌数の比率（単位：ＣＦＵ／ｇ）であった。

【0040】

図１を参照されたく、図１は、本発明の実施例による異なるラクトバチルスラムノサスを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクトバチルスラムノサス含有量を示す折線図であり、横軸は時間（単位：日）を示し、縦軸はラクトバチルスラムノサス含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線１０１及び折線１０３はそれぞれ菌株ＬＹＣ１５０４及び菌株ＪＪ１０１である。図１に示すように、経管栄養を停止してから１日後及び３日後、マウス糞便における菌株ＪＪ１０１（折線１０３）の含有量は菌株ＬＹＣ１５０４（折線１０１）よりも高く、経管栄養を停止してから３日後、菌株ＪＪ１０１の含有量は１０^７ＣＦＵ／ｇよりも高く、菌株ＪＪ１０１の腸内滞留能力が優れたことは確認された。

【0041】

図２を参照されたく、図２は、本発明の実施例による異なるラクトバチルスパラカゼイを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクトバチルスパラカゼイ含有量を示す折線図であり、横軸は時間（単位：日）を示し、縦軸はラクトバチルスパラカゼイ含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線２０１、折線２０３及び折線２０５はそれぞれ菌株ＬＹＣ１１１９、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＬＹＣ１２２９である。図２に示すように、経管栄養を停止してから１日後、マウス糞便における菌株ＪＪ１０２の含有量（折線２０３）は菌株ＬＹＣ１１１９及び菌株ＬＹＣ１２２９（折線２０１及び折線２０５）よりも高く、菌株ＪＪ１０２の含有量は１０^７ＣＦＵ／ｇよりも高く、菌株ＪＪ１０２の腸内滞留能力が優れたことは確認された。

【0042】

図３を参照されたく、図３は、本発明の実施例による異なるラクチプランチバチルスプランタルムを３日間連続してマウスに経口投与して経管栄養を停止した後の、マウス糞便におけるラクチプランチバチルスプランタルム含有量を示す折線図であり、横軸は時間（単位：日）を示し、縦軸はラクチプランチバチルスプランタルム含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線３０１、折線３０３、折線３０５、折線３０７、折線３０９及び折線３１１は、それぞれ菌株ＬＹＣ１０３１、菌株ＬＹＣ１１１２、菌株ＬＹＣ１１１７、菌株ＬＹＣ１１４６、菌株ＬＹＣ１１５９及び菌株ＪＪ１０３である。

【0043】

図３に示すように、経管栄養を停止してから１日間、３日間及び７日後、マウス糞便における菌株ＪＪ１０３の含有量（折線３１１）は何れも他の菌株（折線３０１～折線３０９）よりも高く、経管栄養を停止してから３日後、菌株ＪＪ１０３の含有量は１０^６ＣＦＵ／ｇ～１０^７ＣＦＵ／ｇであり、且つ経管栄養を停止してから７日後、菌株ＪＪ１０３の含有量は依然として１０^５ＣＦＵ／ｇよりも多く、他のラクチプランチバチルスプランタルムに比べて、菌株ＪＪ１０３の腸内滞留能力が優れたことは確認された。
２．薬剤耐性腸内細菌の動物の体における滞留能力

【0044】

菌株ＫＰＣ００１、菌株ＫＰＣ０１１、菌株ＫＰＣ０２１及び菌株ＫＰＣ０３５は、チーメイ（奇美）病院医学研究センター臨床研究所で分離されたＫＰＣ－２を発現する薬剤耐性腸内細菌（以下、ＣＰＥと称される）である。ＣＰＥを４分割法で腸内細菌培地に接種し、３７℃で１６時間～１８時間培養して、単一のコロニーが得られた。次に、単一のコロニーをＭＨＢに接種し、３７℃で１６時間～２４時間培養して、ＣＰＥ培養液が得られた。ＣＰＥ培養液を遠心分離させて、ＣＰＥの菌体沈殿物（ｐｅｌｌｅｔ）が得られた。

【0045】

マウス糞便が無菌となるまで、毎日マウスに抗生物質を投与した。そして、マウスにＣＰＥ液の経管栄養を行い、ＣＰＥ液は、ＣＰＥの菌体沈殿物を２０重量％脱脂粉乳を含む水溶液に再溶解し、ＣＰＥ液のＣＰＥ含有量を調整して、マウスに３．０×１０^８ＣＦＵ／日のＣＰＥを連続して３日間経口投与して、感染したマウスが得られた。そして、経管栄養を停止し、経管栄養を停止してから１日後、２日後、７日後、１０日後、１４日後、１７日後、２１日後、２４日後、２８日後、３１日後及び３５日後、再度感染したマウスの糞便を採取し、ＭＨＢ寒天を使用して糞便のＣＰＥ含有量を検出し、ＣＰＥ含有量は糞便重量に対するＣＰＥ生菌数の比率（単位：ＣＦＵ／ｇ）であった。

【0046】

図４を参照されたく、図４は、本発明の実施例による感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図であり、横軸は時間（単位：日）を示し、縦軸はＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線４０１、折線４０３、折線４０５及び折線４０７はそれぞれ菌株ＫＰＣ００１、菌株ＫＰＣ０１１、菌株ＫＰＣ０２１及び菌株ＫＰＣ０３５を示した。図４に示すように、経管栄養を停止してから１日後、マウス糞便における異なる菌株のＣＰＥ含有量は何れも約１０^１０ＣＦＵ／ｇであり、且つ経管栄養を停止してから４日後～３５日後、マウス糞便における異なる菌株のＣＰＥ含有量は依然として１０^４ＣＦＵ／ｇ～１０^６ＣＦＵ／ｇに維持された。上記の結果から示されるように、異なる菌株のＣＰＥの腸内滞留能力には差異がない。後の評価は菌株ＫＰＣ００１で行われた。
実施例三、乳酸菌の薬剤耐性腸内細菌を抑制する有効性に対する評価

【0047】

マウス糞便が無菌となるまで、毎日マウスに抗生物質を投与した。そして、マウスに３．０×１０^８ＣＦＵ／日のＣＰＥを連続して３日間経口投与して、感染したマウスが得られた。そして、感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を検出して、感染したマウスにＬＡＢが経口投与されていないＣＰＥ含有量とした。そして、感染したマウスを５群（ブランク群、実験群１、実験群２、実験群３及び実験群４）に分けた。ブランク群の感染したマウスはＰＢＳが連続して２１日間経口投与され、実験群１の感染したマウスは２．０×１０^９ＣＦＵ／日の菌株ＪＪ１０１が連続して２１日間経口投与され、実験群２の感染したマウスは２．０×１０^９ＣＦＵ／日の菌株ＪＪ１０２が連続して２１日間経口投与され、実験群３の感染したマウスは２．０×１０^９ＣＦＵ／日の菌株ＪＪ１０３が連続して２１日間経口投与され、且つ実験群４の感染したマウスは２．０×１０^９ＣＦＵ／日の複合ＬＡＢが連続して２１日間経口投与され、複合ＬＡＢは１：１：１の菌数比で菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３からなる。マウスにＬＡＢを連続して４日間、７日間、１１日間、１４日間、１８日間及び２１日間経口投与した後、感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を検出した。

【0048】

図５を参照されたく、図５は、本発明の実施例による異なるグループ別の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図であり、横軸は感染したマウスにＬＡＢを連続して経口投与する日数（単位：日）を示し、縦軸は感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線５０１、折線５０３、折線５０５、折線５０７及び折線５０９は、それぞれブランク群、実験群１、実験群２、実験群３及び実験群４を示し、且つ異なるアルファベットＡ、Ｂ、Ｃ及びＤが統計的に有意差（ｐ＜０．０５）を有することを示した。

【0049】

図５に示すように、実験群１～実験群４（折線５０３～折線５０９）の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量がブランク群（折線５０１）よりも低く、菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３の個別又は組み合わせは、何れもＣＰＥ成長を抑制する有効性を有することが確認された。感染したマウスにＬＡＢを経口投与していないＣＰＥ含有量に比べて、感染したマウスに異なるＬＡＢ菌株を連続して２１日間経口投与した後、実験群１～実験群３（折線５０３～折線５０７）の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量は２桁～３桁低下し、且つ感染したマウスに同時に３株のＬＡＢ菌株を連続して２１日間経口投与した後、実験群４の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量が少なくとも５桁低下し、少なくとも９９．９９９％の抑制率に相当し、菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３をそれぞれ経口投与したことに比べて、菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３を同時に経口投与したことは、ＣＰＥ成長を抑制する有効性が優れたことが確認された。
実施例四、シンバイオティクスによる薬剤耐性腸内細菌を抑制する有効性に対する評価
１．異なるプレバイオティクスによる乳酸菌の酸性物質の生産を促進する有効性

【0050】

ＬＡＢは、糖類を分解して酸性物質（例えば、乳酸及び／又は酢酸）を生産し、環境（例えば、腸道）ｐＨ値を低下させ、更にＣＰＥを抑制した。したがって、ＬＡＢがプレバイオティクスを効果的に利用すればするほど、このプレバイオティクス及びＬＡＢからなるシンバイオティクスは、ＣＰＥ成長を抑制する有効性がよくなる。

【0051】

上記の１１株のＬＡＢをそれぞれ異なる配方でありブドウ糖を含まないＭＲＳ培養液に接種し、３７℃で２４時間培養して、培養物が得られた。そして、培養物のｐＨ値を測定して、結果（３回繰り返した平均±標準偏差）を表１に記録して、ＮＯＮ組はＭＲＳ培養液に糖類が加えられないことを示し、ＳＵＣ組はＭＲＳ培養液に２重量％のショ糖が加えられたことを示し、ＦＯＳ組はＭＲＳ培養液に２重量％のフルクトオリゴ糖が加えられたことを示し、ＩＮ組はＭＲＳ培養液に２重量％のイヌリンが加えられたことを示し、ＩＭＯ組はＭＲＳ培養液に２重量％のイソマルトオリゴ糖が加えられたことを示し、ＬＵ組はＭＲＳ培養液に２重量％のラクツロースが加えられたことを示し、且つＸＯＳ組はＭＲＳ培養液に２重量％のキシロオリゴ糖が加えられたことを示した。

【0052】

【表1-1】

【表1-2】

【0053】

表１に示すように、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＸＯＳ組、ＩＭＯ組及びＬＵ組の培養物のｐＨ値がＮＯＮ組よりも低く、糖類がＬＡＢの酸性物質の生産を促進できることを示した。次に、菌株ＪＪ１０１はＬＵ組及びＩＭＯ組で培養物のｐＨ値が５．０よりも低く、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖が菌株ＪＪ１０１の酸性物質の生産を促進する有効性を有することを示した。菌株ＪＪ１０２はＸＯＳ組だけで培養物のｐＨ値が５．０より高く、上記の糖類のうち、キシロオリゴ糖だけが菌株ＪＪ１０２の酸性物質の生産を促進できないことを示した。菌株ＪＪ１０３はＳＵＣ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組で培養物のｐＨ値が５．０よりも低く、ショ糖、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖は菌株ＪＪ１０３の酸性物質の生産を促進する有効性を有することを示した。補充して説明すべきなのは、ショ糖は動物によって消化され、プレバイオティクスとして使用できない。したがって、複合ＬＡＢは菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３からなる場合、ラクツロース及び／又はイソマルトオリゴ糖を選択してプレバイオティクスとするべきである。
２．菌株ＪＪ１０１及び異なるプレバイオティクスからなるシンバイオティクスのｐＨ値及びＣＰＥ成長を抑制する有効性

【0054】

上記の各ＬＡＢ菌種（ラクトバチルスラムノサス、ラクトバチルスパラカゼイ及びラクチプランチバチルスプランタルム）のうち、腸内滞留能力が好ましい単株ＬＡＢ（即ち、菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３）をそれぞれＣＰＥ（菌株ＫＰＣ００１）とｐＨ ６．５の共培養液に加えて、共培養試験を行って、共培養液の初期ＬＡＢ含有量が１０^７ＣＦＵ／ｍＬであり、且つ初期ＣＰＥ含有量が１０^６ＣＦＵ／ｍＬであった。そして、共培養液に対してＬＡＢ含有量の検出、ＣＰＥ含有量の検出及びｐＨ値の検出を行って、初期ＬＡＢ含有量、ＣＰＥ含有量及びｐＨ値（０時間の培養に相当する）が得られた。ＬＡＢ含有量の検出は、共培養液をｐＨ ５．５のＭＲＳ寒天培地に塗り付け、３７℃で培養して、ＬＡＢの単一のコロニーが得られた。ＬＡＢの単一のコロニー数により、共培養液のＬＡＢ含有量（単位：ＣＦＵ／ｍＬ）を推算できる。ＣＰＥ細菌数の検出は、共培養液を１６μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＥＭＢ寒天培地に塗り付け、３７℃で培養して、ＣＰＥの単一のコロニーが得られた。ＣＰＥの単一のコロニー数により、共培養液のＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｍＬ）を推算できる。

【0055】

共培養液は、ブドウ糖を含まないＭＲＳ培養液及びＭＨＢを１：１の体積割合で調製されてなり、グループ別によっては糖類を加え又は加えなく、ＮＯＮ組の共培養液は糖類を含まなく、ＳＵＣ組の共培養液は２重量％のショ糖を含み、ＦＯＳ組の共培養液は２重量％のフルクトオリゴ糖を含み、ＩＮ組の共培養液は２重量％のイヌリンを含み、ＸＯＳ組の共培養液は２重量％のキシロオリゴ糖を含み、ＬＵ組の共培養液は２重量％のラクツロースを含み、且つＩＭＯ組の共培養液は２重量％のイソマルトオリゴ糖を含んだ。

【0056】

共培養液を３７℃で培養を行い、３時間、６時間、２４時間及び４８時間培養した後、ＬＡＢ含有量の検出、ＣＰＥ含有量の検出及びｐＨ値の検出を行った。

【0057】

上記の菌株ＪＪ１０１とＣＰＥが異なる共培養液の共培養実験において、ＬＡＢ含有量の検出結果に関する説明は以下の通りであり、４８時間培養した後、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＸＯＳ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組の共培養液の菌株ＪＪ１０１の含有量がＮＯＮ組よりも高く、１．０×１０^８ＣＦＵ／ｍＬよりも大きく且つ１．０×１０^９ＣＦＵ／ｍＬ（未図示）よりも小さくて、プレバイオティクスがインビトロで菌株ＪＪ１０１の成長に寄与することが確認された。

【0058】

図６Ａ及び図６Ｂを参照されたく、図６Ａ及び図６Ｂはそれぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０１及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量（図６Ａ）及びｐＨ値（図６Ｂ）を示す折線図である。図６Ａの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｍＬ）を示した。図６Ｂの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はｐＨ値を示した。図６Ａ及び図６Ｂの折線６０１、折線６０３、折線６０５、折線６０７、折線６０９、折線６１１及び折線６１３は、それぞれＮＯＮ組、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＸＯＳ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組を示した。

【0059】

図６Ａに示すように、２４時間培養した後、ＳＵＣ組（折線６０３）、ＦＯＳ組（折線６０５）、ＩＮ組（折線６０７）及びＬＵ組（折線６１１）の共培養液のＣＰＥ含有量が検出限界よりも低い。４８時間培養した後、ＩＭＯ組（折線６１３）の共培養液のＣＰＥ含有量は初期ＣＰＥ含有量（０時間）よりも２桁（即ち、９９％の抑制率）低下した。しかしながら、ＮＯＮ組（折線６０１）及びＸＯＳ組（折線６０９）の共培養液のＣＰＥ含有量は、４８時間培養した後で初期ＣＰＥ含有量（０時間）よりも高い。図６Ｂに示すように、２４時間～４８時間培養した後、ＳＵＣ組（折線６０３）、ＦＯＳ組（折線６０５）、ＩＮ組（折線６０７）、ＬＵ組（折線６１１）及びＩＭＯ組（折線６１３）の共培養液のｐＨ値は５よりも小さいが、ＸＯＳ組（折線６０９）及びＮＯＮ組（折線６０１）の共培養液のｐＨ値は５よりも大きい。上記の結果から確認されたように、ショ糖、フルクトオリゴ糖、イヌリン、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖は、菌株ＪＪ１０１の酸性物質の生産を促進でき、これにより共培養液のｐＨ値を５よりも小さくして、ＣＰＥ成長を抑制した。
３．菌株ＪＪ１０２及び異なるプレバイオティクスからなるシンバイオティクスのｐＨ値及びＣＰＥ成長を抑制する有効性

【0060】

上記の菌株ＪＪ１０２とＣＰＥが異なる共培養液の共培養実験において、ＬＡＢ含有量の検出結果からわかるように、４８時間培養した後、ＳＵＣ組～ＸＯＳ組及びＬＵ組～ＩＭＯ組の共培養液の菌株ＪＪ１０２の含有量は１．０×１０^８ＣＦＵ／ｍＬよりも高いが１．０×１０^９ＣＦＵ／ｍＬ（未図示）よりも小さく、且つＮＯＮ組よりも高くて、プレバイオティクスがインビトロで菌株ＪＪ１０２の成長に寄与することが確認された。

【0061】

図７Ａ及び図７Ｂを参照されたく、図７Ａ及び図７Ｂは、それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０２及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量（図７Ａ）及びｐＨ値（図７Ｂ）を示す折線図である。図７Ａの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｍＬ）を示した。図７Ｂの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はｐＨ値を示した。図７Ａ及び図７Ｂの折線７０１、折線７０３、折線７０５、折線７０７、折線７０９、折線７１１及び折線７１３は、それぞれＮＯＮ組、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＸＯＳ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組を示した。

【0062】

図７Ａに示すように、２４時間培養した後、ＦＯＳ組（折線７０５）の共培養液のＣＰＥ含有量が検出限界よりも低い。４８時間培養した後、ＳＵＣ組（折線７０３）、ＩＮ組（折線７０７）及びＬＵ組（折線７１１）の共培養液のＣＰＥ含有量が検出限界よりも低い。ＩＭＯ組（折線７１３）の共培養液のＣＰＥ含有量は初期ＣＰＥ含有量（０時間）よりも３桁（即ち、９９．９％の抑制率）低下した。ＮＯＮ組（折線７０１）及びＸＯＳ組（折線７０９）の共培養液は、４８時間培養した後のＣＰＥ含有量が初期ＣＰＥ含有量よりも高い。図７Ｂに示すように、４８時間培養した後、ＸＯＳ組（折線７０９）及びＮＯＮ組（折線７０１）の共培養液のｐＨ値は５よりも大きいが、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組のｐＨ値は何れも５よりも小さい。上記の結果から確認されたように、ショ糖、フルクトオリゴ糖、イヌリン、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖は菌株ＪＪ１０２の酸性物質の生産を促進でき、これにより共培養液のＰＨを５よりも小さくして、ＣＰＥ成長を抑制した。
４．菌株ＪＪ１０３及び異なるプレバイオティクスからなるシンバイオティクスのｐＨ値及びＣＰＥ成長を抑制する有効性

【0063】

ＬＡＢ含有量の検出結果からわかるように、４８時間培養した後、ＮＯＮ組の共培養液の菌株ＪＪ１０３の含有量は一番少なく（９．０×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）、ＳＵＣ組～ＸＯＳ組及びＬＵ組～ＩＭＯ組の共培養液の菌株ＪＪ１０３の含有量は９．０×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ（未図示）よりも高くて、プレバイオティクスがインビトロで菌株ＪＪ１０３の成長に寄与することが確認された。

【0064】

図８Ａ及び図８Ｂを参照されたく、図８Ａ及び図８Ｂは、それぞれ本発明の実施例による菌株ＪＪ１０３及びＣＰＥが異なるプレバイオティクスを含む共培養液の中で共培養された後の、共培養液のＣＰＥ含有量（図８Ａ）及びｐＨ値（図８Ｂ）を示す折線図である。図８Ａの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｍＬ）を示した。図８Ｂの横軸は時間（単位：時間）を示し、縦軸はｐＨ値を示した。図８Ａ及び図８Ｂの折線８０１、折線８０３、折線８０５、折線８０７、折線８０９、折線８１１及び折線８１３は、それぞれＮＯＮ組、ＳＵＣ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組、ＸＯＳ組、ＬＵ組及びＩＭＯ組を示した。

【0065】

図８Ａに示すように、２４時間培養した後、ＳＵＣ組（折線８０３）、ＬＵ組（折線８１１）、ＩＭＯ組（折線８１３）の共培養液のＣＰＥ含有量は検出極限よりも低いが、ＮＯＮ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組及びＸＯＳ組のＣＰＥ含有量は初期ＣＰＥ含有量よりも高い。図８Ｂに示すように、ＳＵＣ組（折線８０３）、ＬＵ組（折線８１１）及びＩＭＯ組（折線８１３）の共培養液のｐＨ値は５よりも小さいが、ＮＯＮ組、ＦＯＳ組、ＩＮ組及びＸＯＳ組の共培養液のｐＨ値は５よりも大きい。上記の結果から確認されたように、共培養液のｐＨ値が５よりも小さい場合ＣＰＥ成長を抑制できる。そして、ショ糖、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖は、菌株ＪＪ１０３の酸性物質の生産を促進でき、これにより共培養液のＰＨを５よりも小さくして、ＣＰＥ成長を抑制した。

【0066】

図６Ａ、図６Ｂ、図７Ａ、図７Ｂ、図８Ａ及び図８Ｂの結果からわかるように、ショ糖、フルクトオリゴ糖、イヌリン、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖は菌株ＪＪ１０１及び菌株ＪＪ１０２の酸性物質の生産を効果的に促進できるが、ショ糖、ラクツロース及びイソマルトオリゴ糖だけは菌株ＪＪ１０３の酸性物質の生産を効果的に促進でき、ショ糖は動物によって消化され、プレバイオティクスとして使用できないので、後の実験においてラクツロース及びイソマルトオリゴ糖をプレバイオティクスとした。
５．複合乳酸菌及び異なるプレバイオティクスからなるシンバイオティクスのＣＰＥ成長を抑制する有効性

【0067】

ＰＢＳで菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３の菌体沈殿物を再溶解して、菌株ＪＪ１０１、菌株ＪＪ１０２及び菌株ＪＪ１０３の１：１：１の菌数比で複合ＬＡＢ液が得られた。次に、２重量％のラクツロースを複合ＬＡＢ液に調製して、ラクツロースシンバイオティクスが得られ、２重量％のイソマルトオリゴ糖を複合ＬＡＢ液に調製して、イソマルトオリゴ糖シンバイオティクスが得られた。

【0068】

マウスを４組（ブランク群、対照群、実験群１及び実験群２）に分け、マウス糞便が無菌となるまで、毎日マウスに抗生物質を投与した。そして、マウスに３．０×１０^８ＣＦＵ／日のＣＰＥを連続して３日間経口投与して、感染したマウスが得られた。そして、感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を検出して、感染したマウスにＬＡＢが経口投与されていないＣＰＥ含有量とした。そして、ブランク群の感染したマウスはＰＢＳが連続して２１日間経口投与され、対照群の感染したマウスは複合ＬＡＢ液が連続して２１日間経口投与され、実験群１の感染したマウスはラクツロースシンバイオティクスが連続して２１日間経口投与され、且つ実験群２の感染したマウスはイソマルトオリゴ糖シンバイオティクスが連続して２１日間経口投与された。マウスにＬＡＢを連続して４日間、７日間、１１日間、１４日間、１８日間及び２１日間経口投与した後、マウス糞便におけるＣＰＥ含有量を検出した。補充して説明すべきなのは、対照群、実験群１及び実験群２の感染したマウスに経口投与された複合ＬＡＢの細菌数は２．０×１０^９ＣＦＵ／日であった。

【0069】

図９を参照されたく、図９は、本発明の実施例による異なるグループ別の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量を示す折線図であり、横軸はマウスにＬＡＢが経口投与された連続日数（単位：日）を示し、縦軸は感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量（単位：ＣＦＵ／ｇ）を示し、折線９０１、折線９０３、折線９０５及び折線９０７は、それぞれブランク群、対照群、実験群１及び実験群２を示し、且つ異なるアルファベットａ及びｂはグループ同士に統計的に有意差（Ｐ＜０．０５）があることを示した。

【0070】

図９に示すように、ＰＢＳ、複合乳酸菌又はシンバイオティクスを連続して２１日間経口投与した後、対照群、実験群１及び実験群２の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量が著しくブランク群よりも低くて、複合乳酸菌、ラクツロースシンバイオティクス、イソマルトオリゴ糖シンバイオティクスはＣＰＥの成長活性を抑制できることが確認された。しかしながら、ＰＢＳ、複合乳酸菌又はシンバイオティクスを連続して７日間経口投与した後、実験群１及び実験群２の感染したマウスの糞便のＣＰＥ含有量が著しく対照群よりも小さくて、複合乳酸菌（プレバイオティクスを含まない）に比べて、ラクツロースシンバイオティクス及び／又はイソマルトオリゴ糖シンバイオティクスはＣＰＥ含有量を速く低下できることが確認された。

【0071】

要するに、ラクトバチルスラムノサスＪＪ１０１、ラクトバチルスパラカゼイＪＪ１０２及びラクチプランチバチルスプランタルムＪＪ１０３等の乳酸菌は、薬剤耐性腸内細菌の成長活性を抑制でき、これらの乳酸菌は薬剤耐性腸内細菌感染の予防、改善及び／又は治療に応用する可能性があることを示した。

【0072】

まとめると、本発明は、所定の乳酸菌株、所定のプロセス、所定の有効投与量、所定の投与方式、所定の実験モデル及び所定の評価方法を例として、本発明の乳酸菌組成物及び薬剤耐性腸内細菌を抑制するための乳酸菌組成物を説明したが、当業者であれば、本発明はこれらに限定されなく、本発明の精神及び範囲から逸脱せずに、他の乳酸菌株、他のプロセス、他の有効投与量、他の投与方式、他の実験モデル及び他の評価方法を使って実行することもできることは、理解すべきである。

【0073】

本発明は複数の所定の実施例を前記の通りに開示したが、前記開示内容に対して多様の修飾、変更や変換を加えることができ、且つ理解すべきなのは、本発明の精神と範囲から逸脱しない限り、本発明の実施例のある特徴を採用するが、対応してその他の特徴を使用しない場合もあるので、本発明の精神及び特許請求の範囲は上記の実施例に限定されない。

【符号の説明】

【0074】

１０１、１０３、２０１、２０３、２０５、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、４０１、４０３、４０５、４０７、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、８０１、８０３、８０５、８０７、８０９、８１１、８１３、９０１、９０３、９０５、９０７：折線

【受託番号】

【0075】

ラクトバチルスラムノサス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＪＪ１０１は２０２１年１２月２２日に財団法人食品産業発展研究所生物資源センター（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ；ＢＣＲＣ、アドレス：３００６２台湾新竹市食品路３３１号）に寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８８である。

【0076】

ラクトバチルスパラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＪＪ１０２は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０８９である。
ラクチプランチバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＪＪ１０３は２０２１年１２月２２日にＢＣＲＣに寄託され、受託番号がＢＣＲＣ ９１１０９０である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【配列表】

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