特許 7451413 肥満の治療および体重管理のためのＧＬＰ－１組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-08

(45)【発行日】2024-03-18

(54)【発明の名称】肥満の治療および体重管理のためのＧＬＰ－１組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/26 20060101AFI20240311BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240311BHJP

   C07K 14/605 20060101ALN20240311BHJP

【ＦＩ】

A61K38/26 ZNA

A61P3/04

C07K14/605

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2020547101

(86)(22)【出願日】2019-03-08

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-06-17

(86)【国際出願番号】 CN2019077541

(87)【国際公開番号】W WO2019170153

(87)【国際公開日】2019-09-12

【審査請求日】2022-03-02

(31)【優先権主張番号】201810198521.0

(32)【優先日】2018-03-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】513243561

【氏名又は名称】上海仁会生物制▲やく▼股▲ふん▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＢＥＮＥＭＡＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．９１６ Ｚｉｐｉｎｇ Ｒｏａｄ，Ｚｈｏｕｐｕ Ｔｏｗｎ，Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ａｒｅａ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００３２１，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(72)【発明者】

【氏名】ユ，ジウェン

(72)【発明者】

【氏名】ズオ，ヤジュン

(72)【発明者】

【氏名】シャ，ジン

(72)【発明者】

【氏名】ワン，シチャン

(72)【発明者】

【氏名】キアン，リフェン

【審査官】池上 文緒

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第９８／０１９６９８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００１－５０４１０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１０／０２８６３６５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１３／００９０２８５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】Diabetes Obes. Metab. (2013) vol.15, issue 3, p.204-212

【文献】Eur. J. Pharmacol. (2014) vol.741, p.254-263

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３８／２６

Ａ６１Ｐ ３／０４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

肥満または過体重の治療において使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物はベイナグルチドを含み、前記使用がベイナグルチドを０．１１ｍｇ／日～０．６６ｍｇ／日で肥満または過体重に罹患しているヒト対象に投与することを含み、および前記投与が２～３回／日である、前記医薬組成物。

【請求項2】

前記対象が、男性対象である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記ベイナグルチドが、０．３３ｍｇ／日～０．６６ｍｇ／日である、請求項１または２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記対象が、女性対象である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記組成物が、非経口注射により投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記組成物が、静脈内注射または皮下注射によって投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記組成物が、最大３０年の期間前記対象に投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

体重の管理において使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物はベイナグルチドを含み、前記使用がベイナグルチドを０．１１ｍｇ／日～０．６６ｍｇ／日でそれを必要とするヒト対象に投与することを含み、および前記投与が２～３回／日である、前記医薬組成物。

【請求項9】

前記対象が、男性対象である、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

ベイナグルチドが、０．３３ｍｇ／日～０．６６ｍｇ／日で投与される、請求項８または９に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記対象が、女性対象である、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記組成物が、非経口注射によって投与される、請求項８～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記組成物が、静脈内注射または皮下注射によって投与される、請求項８～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記組成物が、最大３０年の期間前記対象に投与される、請求項８～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、肥満、体重管理、および他の状態を治療するための、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）を含有する水性非経口医薬組成物の様々な用量の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ＧＬＰ－１は、全身に分布するＧＬＰ－１受容体、特に膵臓のインスリン分泌β細胞に作用するインスリン分泌性ペプチドである。この種のホルモンは、インスリン分泌を促進することができ、インスリンのシグナル伝達を独立して刺激し、グルコースの血糖降下作用をもたらす。ＧＬＰ－１の不安定性には、物理的側面および化学的側面の２つの一般的側面がある。物理的不安定性には、例えば、変性、表面吸着、凝集、沈殿、ゼラチン化等が含まれ、化学的不安定性には、例えば、加水分解、脱アミノ化、酸化、ラセミ化、異性化、β脱離、ジスルフィド結合交換等が含まれる。不安定性は、貯蔵寿命を短くするだけでなく、ＧＬＰ－１組成物の有効性にも影響する。不安定性の問題を解決するには、ナノ粒子を使用してＧＬＰ－１を送達するか、またはＧＬＰ－１を改質して安定性を向上させる。しかしながら、ナノ粒子の送達は生産コストおよび製剤の複雑さを増加させ、ＧＬＰ－１の改質は毒性の増加と関連することが多い。Ｌｅｅ，Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．１１８（３）：１７３－１８０（２０１６）を参照されたい。

【0003】

したがって、安定性が増し、低用量で効力が改善された、天然の未改質形態のＧＬＰ－１を含む組成物が非常に望ましい。本明細書に開示される技術および方法は、当技術分野におけるこの必要性を満たす。

【発明の概要】

【0004】

一態様において、本開示は、肥満または過体重に罹患している対象に、ＧＬＰ－１ペプチド（例えば、ＧＬＰ－１（７－３６）、ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２、ＧＬＰ－１（７－３５）、またはＧＬＰ－１（７－３７））を含む組成物の治療有効量を投与することにより、肥満または過体重を治療する方法を提供し、ＧＬＰ－１ペプチドの治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日（例えばヒト対象において）である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１ペプチドは、組換えヒトＧＬＰ－１ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１ペプチドは、化学的に合成されたＧＬＰ－１ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１ペプチドを含む組成物（ＧＬＰ－１組成物）は、非経口注射によって投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物は、静脈内注射、筋肉内注射、または皮下注射によって投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物は、継続的または定期的な投与により、最長１年、最長２年、最長３年、最長４年、最長５年、最長６年、最長７年、最長８年、最長９年、最長１０年、最長１１年、最長１２年、最長１３年、最長１４年、最長１５年、最長１６年、最長１７年、最長１８年、最長１９年、最長２０年、最長２１年、最長２２年、最長２３年、最長２４年、最長２５年、最長２６年、最長２７年、最長２８年、最長２９年、最長３０年、または最長３１年の長期間投与される。

【0005】

いくつかの実施形態において、女性対象の肥満または過体重を治療するためのＧＬＰ－１組成物の治療有効量は、男性対象のそれよりも少ない。いくつかの実施形態において、女性対象の肥満または過体重を治療するためのＧＬＰ－１の治療有効量は、同じまたは同様の治療効果を達成するために男性対象の肥満または過体重を治療するためのそれよりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％少ない。いくつかの実施形態において、女性対象の肥満または過体重を治療するためのＧＬＰ－１の治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日である（例えばヒト対象において）。いくつかの実施形態において、男性対象の肥満または過体重を治療するためのＧＬＰ－１の治療有効量は、約３０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、約０．３３ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日（例えばヒト対象において）。

【0006】

別の態様において、本開示は、ＧＬＰ－１（７－３６）またはＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２、好ましくは組換えヒトＧＬＰ－１（７－３６）またはＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２を含む組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することにより体重を管理する方法に関し、ＧＬＰ－１組成物の治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日（例えばヒト対象において）である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１ペプチドは、化学的に合成されたＧＬＰ－１ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物は、非経口注射によって投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物は、静脈内注射、筋肉内注射、または皮下注射によって投与される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物は、継続的または定期的な投与により、最長１年、最長２年、最長３年、最長４年、最長５年、最長６年、最長７年、最長８年、最長９年、最長１０年、最長１１年、最長１２年、最長１３年、最長１４年、最長１５年、最長１６年、最長１７年、最長１８年、最長１９年、最長２０年、最長２１年、最長２２年、最長２３年、最長２４年、最長２５年、最長２６年、最長２７年、最長２８年、最長２９年、最長３０年、または最長３１年の長期間投与される。いくつかの実施形態において、対象のＧＬＰ－１組成物の体重減少は、ＧＬＰ－１組成物を投与された対象の体重減少の１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、または７５％未満である。いくつかの実施形態において、女性対象における体重管理のためのＧＬＰ－１の治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日である。いくつかの実施形態において、男性対象における体重管理のためのＧＬＰ－１の治療有効量は、約３０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重、または約０．３３ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日である。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1】緩衝液のみの対照およびリラグルチドと比較した、様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスおよびメスのラットにおける炭素粉末の胃内残留率を示す図である。

【図2】緩衝液のみの対照およびリラグルチドと比較した、様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスおよびメスのラットの小腸における炭素粉末の推進率を示す図である。

【図3】カニクイザルの肥満治療の実験計画を示す図である。４匹の食餌誘発性肥満カニクイザルを２つの治療群に分け、各群に１匹のオスのサルおよび１匹のメスのサルを入れた。試験期間の１週目の間に、各動物の食物摂取量、体重、ＢＭＩ、および体組成が測定され、ベースラインインデックスとして記録された。治療期間中（２週目～７週目）、群１の動物に第１の３週間（２週目～４週目）にブランク対照を、第２の３週間（５週目～７週目）にベイナグルチドをそれぞれ皮下投与した。群２の動物には、第１の３週間（２週目～４週目）にベイナグルチドを、第２の３週間（５週目～７週目）にブランク対照をそれぞれ皮下投与した。ベイナグルチドまたはブランク対照の投与は、両方の群で８週目に中止された。ベイナグルチド治療の有効性および可逆性は、ベースラインレベルと比較して、４週目、７週目および８週目の食物摂取量、体重、ＢＭＩ、および体組成に基づいて評価された。

【図4】［図４Ａ］ベイナグルチド治療により肥満サルの食物摂取量が減少したことを示す図である。図４Ａは、群１の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｂは、群２の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｃは、ベイナグルチド治療の前後の各動物の平均週間食物摂取量を示す。治療前：群１、１週目～４週目、および群２、１週目；治療中：群１、５週目～７週目、群２、２週目～４週目。治療中、各動物の平均週間食物摂取量は大幅な減少を示した。 ［図４Ｂ］ベイナグルチド治療により肥満サルの食物摂取量が減少したことを示す図である。図４Ａは、群１の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｂは、群２の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｃは、ベイナグルチド治療の前後の各動物の平均週間食物摂取量を示す。治療前：群１、１週目～４週目、および群２、１週目；治療中：群１、５週目～７週目、群２、２週目～４週目。治療中、各動物の平均週間食物摂取量は大幅な減少を示した。 ［図４Ｃ］ベイナグルチド治療により肥満サルの食物摂取量が減少したことを示す図である。図４Ａは、群１の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｂは、群２の各カニクイザルの１日のカロリー摂取量を示す。図４Ｃは、ベイナグルチド治療の前後の各動物の平均週間食物摂取量を示す。治療前：群１、１週目～４週目、および群２、１週目；治療中：群１、５週目～７週目、群２、２週目～４週目。治療中、各動物の平均週間食物摂取量は大幅な減少を示した。

【図5】［図５Ａ］肥満サルの体重減少を示す図である。図５Ａは、８週間の試験期間中の各動物の体重変化のパーセンテージを示す。ベイナグルチドによる治療は実線で示され、ブランク対照は点線で示されている。図５Ｂは、ベイナグルチド治療前後の各動物の体重を示す。すべての動物群は、ベイナグルチド治療後に有意な体重減少を示した（ｎ＝４）。 ［図５Ｂ］肥満サルの体重減少を示す図である。図５Ａは、８週間の試験期間中の各動物の体重変化のパーセンテージを示す。ベイナグルチドによる治療は実線で示され、ブランク対照は点線で示されている。図５Ｂは、ベイナグルチド治療前後の各動物の体重を示す。すべての動物群は、ベイナグルチド治療後に有意な体重減少を示した（ｎ＝４）。

【図6A】グリピジドまたはメトホルミンと組み合わせたベイナグルチドの、対象に対する効果を示す図である。図６Ａは、５Ａテスト群の１２週目のボディマスインデックスの変化を示す。図６Ｂは、５Ｂ試験の２週目～１２週目の間のボディマスインデックスの変化を示している（各用量のデータの４つの群は、左から右に２週、４週、８週、１２週のボディマスインデックスを示している）。図６Ｃは、試験５Ｃにおける過体重の患者および肥満患者の試験中の体重の経時変化を示すグラフである。

【図6B】グリピジドまたはメトホルミンと組み合わせたベイナグルチドの、対象に対する効果を示す図である。図６Ａは、５Ａテスト群の１２週目のボディマスインデックスの変化を示す。図６Ｂは、５Ｂ試験の２週目～１２週目の間のボディマスインデックスの変化を示している（各用量のデータの４つの群は、左から右に２週、４週、８週、１２週のボディマスインデックスを示している）。図６Ｃは、試験５Ｃにおける過体重の患者および肥満患者の試験中の体重の経時変化を示すグラフである。

【図6C】グリピジドまたはメトホルミンと組み合わせたベイナグルチドの、対象に対する効果を示す図である。図６Ａは、５Ａテスト群の１２週目のボディマスインデックスの変化を示す。図６Ｂは、５Ｂ試験の２週目～１２週目の間のボディマスインデックスの変化を示している（各用量のデータの４つの群は、左から右に２週、４週、８週、１２週のボディマスインデックスを示している）。図６Ｃは、試験５Ｃにおける過体重の患者および肥満患者の試験中の体重の経時変化を示すグラフである。

【図7】緩衝液のみの対照と比較した、１０μｇ／ｋｇ～６０μｇ／ｋｇの様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスおよびメスのラットにおける炭素粉末の胃内残留率を示す図である。

【図8】緩衝液のみの対照およびリラグルチドと比較した、１０μｇ／ｋｇ～６０μｇ／ｋｇの様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスおよびメスのラットの小腸における炭素粉末の推進率を示す図である。

【図9】１５週間にわたり高脂肪食および低脂肪食が与えられたマウスの体重変化を示す図である。

【図10】１５週間にわたり高脂肪食および低脂肪食が与えられたマウスの食物摂取量を示す図である。

【図11】インスリン抵抗性および肥満の誘導が成功したことを確認するための、特別食終了時の腹腔内グルコース負荷テスト（ＩＰＧＴＴ）の結果を示す図である。

【図12A】緩衝液のみの対照と比較した、１５μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇの様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスＤＩＯマウスにおける炭素粉末の胃内残留率を示す図である。

【図12B】緩衝液のみの対照と比較した、１５μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇの様々な用量のベイナグルチドを与えられたオスＤＩＯマウスの小腸における炭素粉末の推進率を示す図である。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．１。

【発明を実施するための形態】

【0008】

驚くべきことに、本明細書に記載のＧＬＰ－１組成物は、有意に少ない用量で、過体重および肥満の治療においてリラグルチド組成物とは著しく異なる薬物動態を達成する。さらに、女性対象のＧＬＰ－１組成物の治療有効量は、男性対象のＧＬＰ－１組成物の治療有効量よりも有意に低く、同じまたは類似の治療効果を達成する。

【0009】

世界保健機関（ＷＨＯ）は、１９４８年以来、肥満を疾患として挙げている。肥満の世界的な発生は、１９８０年以降２倍以上になっている。Ｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．３８４：７６６－７８１（２０１４）。過体重または肥満は、長期的なエネルギー摂取量がエネルギー消費量を超えていることによる、体脂肪の異常または過剰な蓄積として説明される。過体重および肥満は、心血管疾患、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、骨格筋異常、およびある特定のがん等の非伝染性疾患の重要な危険因子である。Ｖａｎ Ｂｌｏｅｍｅｎｄａａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２２１：Ｔ１－Ｔ１６（２０１４）。過体重または肥満に関連するこれらの疾患および状態は、公的医療に大きな経済的負担をかける。

【0010】

天然型のＧＬＰ－１は、食事後に腸のＬ細胞により分泌され、インスリン分泌の強力なペプチド刺激因子である。ＧＬＰ－１は、２型糖尿病の潜在的な治療法である。Ｈｏｌｓｔ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８７：１４０９－１４３９（２００７）。ＧＬＰ－１には、ＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ_２およびＧＬＰ－１（７－３７）という２つの活性型がある。循環に入ると、ＧＬＰ－１はジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）によって急速に分解され、半減期は約２分と短くなる。Ｋｉｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３６：３５８５－３５９６（１９９５）。ＧＬＰ－１およびその類似体は、血糖の制御に対する効果に加えて、体重減少の誘発、胃内容排出の遅延、および満腹感の増加に効果があることが分かっている。Ｍｏｎａｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ．２０１２：６７２６５８（２０１２）。ＦＤＡは、２０１４年１２月にＳａｘｅｎｄａ（リラグルチド３ｍｇ）を承認したが、これは、ＧＬＰ－１類似体の最初のＮＤＡアプリケーションであり、少なくとも２型肥満等の過体重に関連する少なくとも１つの疾患または状態を有する肥満の成人の低カロリーの食事および身体活動の増加で補完される長期的な体重管理である。

【0011】

本開示に関連して、本明細書で使用されるＧＬＰ－１を含む医薬組成物の「治療有効量」または「有効量」という語句は、対象において所望の治療効果を、例えば肥満または過体重の治療、体重減少を含む体重管理をもたらす医薬組成物の量である。ある特定の実施形態において、治療有効量は、最大の治療効果をもたらす医薬組成物の量である。他の実施形態において、治療有効量は、最大治療効果よりも少ない治療効果をもたらす。例えば、治療有効量は、最大の治療効果をもたらす投薬量に関連する１つ以上の副作用を回避しながら治療効果を生み出す量であってもよい。いくつかの実施形態において、治療有効量は、治療効果をもたらす最小量である。特定の組成物の治療有効量は、治療組成物の特性（例えば、活性、薬物動態、薬力学、および生物学的利用能）、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、性別、疾患の種類および病期、病歴、一般的な体調、所定の投薬量に対する反応性、ならびにその他の現在の投薬）、組成物中の任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、および保存剤の性質、ならびに投与経路を含むがそれらに限定されない、様々な因子に基づいて変動する。臨床および薬理学分野の当業者は、日常的な実験により、すなわち、医薬組成物の投与に対する対象の反応をモニタリングし、それに応じて投薬量を調整することにより、治療有効量を決定することができる。追加のガイダンスについては、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２、およびＧｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１２^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，２０１１を参照されたく、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0012】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。いくつかの実施形態において、男性対象に対する本明細書に開示されるＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量は、約３０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．３３ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。いくつかの実施形態において、女性対象に対する本明細書に開示されるＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。

【0013】

「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、状態に関して本明細書において使用される場合、状態を部分的または完全に緩和する、状態を防止する、状態の発生もしくは再発の可能性を低下させる、状態の進行もしくは発達を遅延させる、または病状に関連する１つ以上の症状の発達を排除、軽減もしくは遅延させることを指す。

【0014】

「対象」という用語は、本明細書において使用される場合、哺乳動物対象、好ましくはヒトを指す。「それを必要とする対象」とは、肥満もしくは過体重と診断された対象、体重増加のリスクがある対象、または体重増加を抑制もしくは体重減少を誘発することを望む対象を指す。「対象」および「患者」という語句は、本明細書では同義的に使用され得る。

【0015】

本明細書において使用される場合、組成物または方法に関する「含む」という用語は、組成物または方法が少なくとも列挙された要素を含むことを意味する。「本質的になる」という用語は、組成物または方法が列挙された要素を含み、組成物または方法の新規および基本的な特性に実質的に影響しない１つまたは複数の追加の要素をさらに含み得ることを意味する。例えば、列挙された要素から本質的になる組成物は、それらの列挙された要素に加えて、単離および精製方法からの１つ以上の微量汚染物質、リン酸緩衝生理食塩水等の薬学的に許容される担体、保存剤等を含み得る。「からなる」という用語は、組成物または方法が、列挙された要素のみを含むことを意味する。これらの移行句の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。

【0016】

ＧＬＰ－１を含む医薬組成物
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＧＬＰ－１組成物は、Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（配列番号：１）の配列を有する組換えヒトＧＬＰ－１（７－３６）ペプチドを含み、例えば、この開示においてベイナグルチドと呼ばれる。ベイナグルチドは、Ｃ_１４９Ｈ_２２５Ｎ_３９Ｏ_４６の分子式を有し、分子量は３２９８．７である。このペプチドは、天然型のＮＨ_２が組換えペプチドのＯＨ基で置き換えられた内因性のアミド化を除く、循環型ＧＬＰ－１の活性型と本質的に同じである。ベイナグルチドは、グリシンで伸長したＧＬＰ－１（７－３７）と同様に、Ｃ末端の遊離カルボキシル基を含む。他の実施形態において、ＧＬＰ－１（７－３５）またはＧＬＰ－１（７－３７）は、開示された技術で使用され得る。ＧＬＰ－１（７－３５）およびＧＬＰ－１（７－３７）の配列は次の通りである：
Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ（配列番号２）、および
Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号３）。

【0017】

サルモデルを使用した臨床薬物動態研究では、ベイナグルチドは、皮下投与された場合、約１５～３０分の半減期を示した。中国での糖尿病治療の第ＩＩＩ相臨床試験で、１２週間ベイナグルチド（０．２ｍｇ、ＴＩＤ）を与えられた３４６人の糖尿病患者は、１１３人の患者の対照群と比較して、有意な体重減少および血中の糖化ヘモグロビンレベルの低下を示した。これらの患者の最も一般的な副作用は悪心および嘔吐であったが、これらの副作用は一時的なものであり、他の同様のＧＬＰ－１類似体療法ほど悪くはなかった。

【0018】

ベイナグルチドは、大腸菌での発現後に単離され、その後注射可能な製剤に製剤化され得る。本開示の医薬組成物において、ＧＬＰ－１ペプチドは、約０．１～約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．２～約１０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．５～約５ｍｇ／ｍＬ、約１～約５ｍｇ／ｍＬ、または約２～約４ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。別段に明記しない限り、「約」は、記載された数値との差が±１０％の範囲内であることを意味する。例えば、本開示の製剤では、ＧＬＰ－１濃度は、２ｍｇ／ｍｌまでであり、２～８℃で約２年間暗所で保存することができる。

【0019】

本開示の医薬組成物は、約３．５～約５．０、約３．５～約４．５、約３．６～約４．２、約３．６～約４．１、約３．６～約４．０、または約３．６～約３．９のｐＨ値を有する。このｐＨ範囲では、ＧＬＰ－１組成物の安定性が改善され、組成物は２～８℃で約２年以上暗所で保存することができる。

【0020】

本明細書に開示されるＧＬＰ－１組成物は、酢酸ナトリウム、酢酸等を含む、組成物の所望のｐＨ範囲を維持するための１つ以上の緩衝塩を含み得る。ＧＬＰ－１組成物の追加の成分は、１種以上の保存剤（例えばフェノール等）、等張剤（例えばマンニトール、プロピレングリコール等）、および溶解促進剤（例えばプロピレングリコール等）を含み得る。

【0021】

いくつかの実施形態において、体重を減らすために、皮下注射によって過体重または肥満に罹患している患者にベイナグルチドを投与することができる。他の適切な注射経路も使用され得る。体重の制御または減少に対するベイナグルチドの効果は、実施例によって実証される。

【0022】

ＧＬＰ－１組成物の予防的および／または治療的使用
本開示は、肥満、過食症および／または過体重を含む様々な状態を治療または予防するためのＧＬＰ－１を含む医薬組成物の使用を提供する。本開示はまた、体重管理、胃内容排出の遅延、および／または満腹感の改善のためのＧＬＰ－１を含む医薬組成物の使用に関する。

【0023】

アメリカ疾病管理予防センター（ＣＤＣ）および世界保健機関（ＷＨＯ）が発表した基準によると、１８．５未満のＢＭＩは体重不足を示し、１８．５～２４．９の間のＢＭＩは正常または健康な体重を示し、２５．０～２９．９の間のＢＭＩは過体重を示し、３０．０以上のＢＭＩは肥満を示す。

【0024】

肥満の治療
一態様において、ＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、肥満を治療する方法が本明細書で提供され、治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。

【0025】

過食症の治療
一態様において、ＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、過食症を治療する方法が本明細書で提供され、治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。

【0026】

体重管理
別の態様において、ボディマスインデックス（ＢＭＩ）が少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、または少なくとも３％低下するようにＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、対象の体重を管理する方法が本明細書で提供され、治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。代替として、体重が少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％減少するようにＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、対象の体重を管理する方法が本明細書で提供され、治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。

【0027】

いくつかの実施形態において、体重管理は、体重減少を誘発することを含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１組成物を与えられている対象の体重は、ＧＬＰ－１組成物を与えられない対象の体重の１００％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満である。

【0028】

胃内容排出の遅延
別の態様において、ＧＬＰ－１を含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、胃内容排出を遅延させる方法が本明細書で提供され、治療有効量は、約１０μｇ／ｋｇ～約６０μｇ／ｋｇ体重の範囲内の有効成分ＧＬＰ－１、または約０．１１ｍｇ／日～約０．６６ｍｇ／日のＧＬＰ－１（例えばヒト対象において）である。

【0029】

ＧＬＰ－１の投薬量
本明細書に開示される様々な状態に対して同じまたは類似の治療効果を達成するために、ＧＬＰ－１組成物の投薬量は、リラグルチドを含む医薬組成物よりも大幅に少ない。さらに、女性対象で治療効果を引き出すためのＧＬＰ－１の最小投薬量は、男性対象で同じまたは類似の治療効果を引き出すためのＧＬＰ－１の最小投薬量よりも大幅に少ない。いくつかの実施形態において、女性対象に対するＧＬＰ－１の最小投薬量は、男性対象が同じまたは類似の治療効果を達成するためのＧＬＰ－１の最小投薬量の約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、または約２５％である。一般に、ヒト用量はマウス用量の約１／１２、ラット用量の約１／６、またはサル用量の約１／３である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ－１ペプチドの１日１回０．１ｍｇ～０．４ｍｇの用量を含む製品が本明細書で提供される。

【0030】

以下の実施例は、実施形態をより良く例示するために提供されるものであり、任意の請求される実施形態の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及される場合、それは単に例示を目的としており、本発明を限定することを意図しない。当業者は、発明の能力を行使することなく、また本発明の範囲から逸脱することなく、均等の手段または反応物質を開発することができる。本発明の境界内であることを維持しながら、本明細書に記載の手順に多くの変更を行うことができることが理解される。本発明者は、そのような変更が本発明の範囲内に含まれることを意図する。

【実施例】

【0031】

実施例１
この例は、胃内容排出の遅延に対するベイナグルチド注射製剤の効果を示す。ベイナグルチド注射製剤は、２．１ｍｌ中に４．２ｍｇ（４２，０００Ｕ）の配列番号１のベイナグルチドを含む。

【0032】

２４８ｇ～３０８ｇ（オス）または１８４ｇ～２１８ｇ（メス）の体重を有する５０匹の８週齢Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを、７日間適応摂食させ、それぞれの体重を量り、次いで、緩衝液のみの対照、低用量のベイナグルチド（１５μｇ／ｋｇ）、中用量のベイナグルチド（３０μｇ／ｋｇ）、高用量のベイナグルチド（６０μｇ／ｋｇ）、およびリラグルチド対照（２７０μｇ／ｋｇ）の５つの群に分けた。各群には１０匹のラットが含まれ、半分はオスで、半分はメスであった。ラットの尾を次のようにラベル付けした：

【表1】

【0033】

用量選択は、ヒトの用量に基づいて計算される。臨床ヒト用量は、約０．４ｍｇ／注射、１日１回注射と推定されるが、これは体表面積に基づいて計算された３６μｇ／ｋｇラット用量に相当する。したがって、ラットは中用量３０μｇ／ｋｇ、中用量の５０％の低用量、および中用量の２００％の高用量で試験された。肥満を治療するためのリラグルチドの臨床ヒト用量は、３．０ｍｇ／注射、１日１回注射であり、これは体表面積に基づいて計算された２７０μｇ／ｋｇラット用量に相当する。

【0034】

ベイナグルチド注射製剤は、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｂｅｎｅｍａｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｅｎｅｍａｅ）から提供されたが、これは４．２ｍｇ（４２，０００Ｕ）のベイナグルチドを含む２．１ｍＬの無色透明液体であった。ベイナグルチド注射製剤は、２～８℃で暗所で保存された。緩衝液のみの対照は、Ｂｅｎｅｍａｅにより無色透明の液体として提供され、ベイナグルチド注射製剤の臨床プラセボであり、２～８℃で保存された。陽性対照は、リラグルチド注射製剤であり、暗所で密封状態で保存された。ラットは、上海中医薬大学の実験動物センターで飼育および管理された。

【0035】

注射製剤は、実験時に以下のように作製および希釈された。

【表2】

【0036】

ラットに水のみを与えて１６時間絶食させた。群分けの前に、ラットの体重を測定し、体重を記録した（ケージの番号付けおよび尾のラベル付け）。体重に基づいて、ラットを無作為に５つの群に分け、各群に１０匹、半分はオス、半分はメスとした。群分け後、表１に示すようにラットにラベル付けした。

【0037】

ラットに、体重に基づく適切な量のベイナグルチドまたはリラグルチドを皮下注射により投与した。オスのラットの後に、メスのラットに群番号の順番で、１０１、２０１、３０１、４０１、５０１、１０２、２０２、３０２、４０２、５０２等で注射した。製剤は、背中の皮膚を持ち上げ、注射器の針を皮下に置いて注射することによりラットに注射した。針を回収する際、製剤の漏出を避けるために注射部位を手で押さえた。注射量は約０．１ｍｌ／１００ｇ体重である。

【0038】

皮下注射の５分後、１．５ｍｌ／１００ｇ体重で５％炭素粉末懸濁液（２％カルボキシメチルセルロース溶液中）を使用して強制給餌させた。１５分後、ラットを屠殺し、腹腔を切開し、すぐに胃の噴門と幽門を結紮した。胃を濾紙で拭いて乾かし、胃の総重量を量った。次いで、胃の内容物を取り除き、胃の正味重量を量った。幽門括約筋から炭素粉末懸濁液の前部まで、および大腸の遠位端までのそれぞれの距離を測定した。
・腸内の炭素粉末の推進距離（ｃｍ）＝幽門から炭素粉末の基端までの距離。
・強制給餌された炭素粉末の質量＝炭素粉末懸濁液の濃度×体積。
・炭素粉末の推進率（％）＝腸内の炭素粉末の推進距離（ｃｍ）／腸の全長（ｃｍ）×１００％。
・胃内残留率（％）＝（胃の総重量－胃の正味重量）／強制給餌された炭素粉末の質量×１００％。

【0039】

表３および４ならびに図１および２に示されるように、高用量のベイナグルチドを投与されたオスのラットの群、ならびに低用量、中用量および高用量のベイナグルチドを投与されたメスのラットの群は、緩衝液のみの対照群より高い胃内残留率を示し、ベイナグルチド群と対照群との間の差は、統計的に有意であった。中用量および高用量のベイナグルチドを投与されたオスのラットの群、ならびに低用量、中用量および高用量のベイナグルチドを投与されたメスのラットの群は、緩衝液のみの対照群より低い炭素粉末の推進率を示し、ベイナグルチド群と対照群との間の差は、統計的に有意であった。リラグルチドは、炭素粉末の胃内容排出および炭素粉末の推進率にある特定のレベルの阻害を示したが、リラグルチド群と対照群との間の差は統計的に有意ではなかった。したがって、リラグルチドではなく、ベイナグルチドは、ラットの胃内容排出を効果的に遅らせることができる。

【表3】

【表4】

【0040】

実施例２
この例は、ＧＬＰ－１受容体シグナル伝達経路に対するベイナグルチドの活性化効果を示す。

【0041】

ＧＬＰ－１受容体はＧタンパク質共役受容体のファミリーに属し、７つの膜貫通ドメインを有する。細胞内カルシウムレベルの蛍光検出を介して、ＧＬＰ－１受容体を安定して発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を使用し、ＧＬＰ－１受容体に対するベイナグルチドおよび陽性対照ＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ_２の効果を分析した。ベイナグルチドは、濃度依存的にＣＨＯ－Ｋ１細胞で細胞内カルシウムフローを誘導した。ベイナグルチドおよび陽性対照ＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ_２は、それぞれ１１８±４８および１４１±１８ｎＭで同様のＥＣ５０を示した。ベイナグルチドおよびＧＬＰ－１（７－３６）－ＮＨ_２の両方が、ＧＬＰ－１受容体シグナル伝達経路に対する活性化効果を十分に示した。

【0042】

実施例３
この例は、正常および糖尿病の動物モデルにおける動物の血糖値に対するベイナグルチドの効果を示す。

【0043】

ベイナグルチドは、正常なグリセミックインデックス（ＧＩ）のマウスおよびウサギでグルコース誘発性の高血糖を低下させるとともに、正常なＧＩのマウスおよびラットでアロキサンおよびストレプトゾトシンによって誘発された血糖の増加を抑えることができ、血糖低下に対するその効果を実証した。血糖が増加した動物は正常なＧＩを示し、血糖が低下すると、インスリンレベルが大幅に増加し、血糖の低下と相関していた。しかし、通常の血糖値を有する動物では、ベイナグルチドは血糖を低下させることも、血中インスリンレベルを上昇させることもせず、ベイナグルチドにより促進されるインスリン分泌がグルコース濃度に依存的であることを示した。

【0044】

実施例４
この例は、食餌誘発性肥満カニクイザルの体重減少に対するベイナグルチドの効果を示す。

【0045】

ベイナグルチド注射製剤を、食餌誘発性肥満カニクイザルに１日２回または３回、３週間皮下投与し、食欲低下および体重減少への効果、ならびに治療終了後の持続的効果および可逆性を評価した。

【0046】

この試験では、４０ｋｇ／ｍ^２超のＢＭＩを有する１４～１９歳の２匹のオス（１０．５～１１．５ｋｇ）とおよび２匹のメス（６．０～６．５ｋｇ）の肥満カニクイザルを使用した。図３に示されるように、この試験には、ブランク対照（緩衝液のみ）および対象自身の対照、複数回の増分投薬、ならびに交差投与が含まれた。サルは、年齢、性別、体重およびＢＭＩに基づいて２つの群に分けられ、各群には１匹のオスおよび１匹のメスが含まれる。

【表5】

【0047】

この試験には、ベースライン期間（第１週）、治療期間（第２週～第７週）、および回復期間（第８週）の３つの期間が含まれていた。サルが少なくとも３０日間食事時間に適応した後、各動物の体重、ＢＭＩおよび体組成を最初のベースライン期間の７日目に測定した。これらの指標は、ベイナグルチドの有効性を評価するためのベースラインとして使用された。

【0048】

治療期間中（第２週～第７週）、群１のサルに、２週目～４週目に１日に３回ブランク対照を、５週目～７週目に１日２回ベイナグルチド注射剤を皮下投与した。群２のサルには、２週目～４週目に１日３回ベイナグルチド注射製剤を、５週目～７週目に１日２回ブランク対照を皮下投与した。ベイナグルチドの耐性を改善し、ベイナグルチドの最大耐性用量を決定するために、試験中にベイナグルチドの用量を徐々に増やした。群２の動物に、２週目に毎回１０μｇ／ｋｇの用量で１日３回投与し、３週目に毎回２０μｇ／ｋｇの用量で１日３回投与し、４週目の最初の３日間毎回４０μｇ／ｋｇの用量で１日３回投与した。重度の食欲不振が観察されたため、表６に示されるように、４週目の残りの４日間は毎回用量を２０μｇ／ｋｇに減らした。

【表6】

【0049】

５週目～７週目の間の群１の動物の用量は、２週目～４週目の間の群２の動物に与えられた用量に基づいて決定された。群１の動物に、５週目の間毎回１０μｇ／ｋｇの用量で１日２回、６週目の間毎回２０μｇ／ｋｇの用量で１日２回、７週目の間毎回２０μｇ／ｋｇの用量（６週目と同じ用量）で１日２回投与した。６週間の治療期間中、各動物の体重および頭殿長を各週の終わりに測定した。体脂肪量は４週目および７週目に測定した。８週目は投与されなかった。

【0050】

この試験の８週間の間、各動物の各食事の食物摂取量を記録した。群１のベイナグルチドが食物摂取量、体重およびＢＭＩに及ぼす影響を、４週目および７週目のベースラインレベルと比較して評価した。群２のベイナグルチドが食物摂取量、体重およびＢＭＩに及ぼす影響を、１週目および４週目のベースラインレベルと比較して評価した。

【0051】

ベイナグルチドを、注射の３０分前に０．０５ｍｌ／ｋｇの容量での注射用に２ｍｇ／ｍｌから０．２、０．４、または０．８ｍｇ／ｍｌに希釈した。動物に、午前（８時３０分頃）および午後（１６時頃）のサル用の餌、またその間（１４時頃）の果物を含む、１日３回の食事を与えた。各動物に、１５０ｇのサル用の餌を与えた。３０分後、すべてのサル用の餌が消費された場合、追加の５０ｇのサル用の餌を動物に与えた。動物には各食事を終えるのに約１時間与え、残り物を計量し、食物摂取量を計算するために記録した。各動物に、表７に基づいて、同じカロリーの果物を与えた。

【表7】

【0052】

週に１回体重を測定し、１週目、４週目、および７週目の終わりに、デュアルエネルギーＸ線吸収測定（ＤＥＸＡ）スキャンを行った際に頭殿長を測定した。動物は、０．０２ｍｌ／ｋｇのシュミアンニングの筋肉内投与により麻酔された。横臥位で休んでいる間、動物の頭頂部から尾部の下部までを、頭殿長として測定した。ＢＭＩは、ＢＭＩ＝体重（ｋｇ）／頭殿長（ｍ）＾２という式を使用して計算された。動物が麻酔されている間ＤＥＸＡスキャンを行い、ＤＥＸＡスキャンに基づいて体組成を分析した。

【0053】

試験中、摂食前および摂食中に、異常行動または痛みもしくは緊張の兆候がないか、動物を少なくとも１日に３回観察した。ベイナグルチドまたはブランク対照を投与した後、食欲不振、眠気、下痢、便秘、無関心、嘔吐、炎症、または注射領域周辺のその他の状態を含む症状のいずれかについて動物を観察した。震えまたは昏睡等の低血糖の症状が観察された場合は、低血糖を確認するために動物に対し血中グルコーステストを行い、動物に保存的治療を施した。

【0054】

食物摂取
試験期間全体を通して、各動物の毎日の食物摂取量を監視した。図４Ａに示されるように、群１の動物は、ブランク対照を投与した場合、２週目～４週目は１週目の食物摂取量と同じ食物摂取量であり、ベイナグルチドを投与した場合、５週目～７週目に食物摂取量が有意に低下した。８週目の食物摂取量は、８週目に回復し、１週目に匹敵した。図４Ｂに示されるように、群２の動物は、１週目の食物摂取量と比較して、ベイナグルチドを投与した場合、２週目～４週目に食物摂取量が有意に低下した。食欲は５週目に回復し始め、投与が完了した７週後にベースラインまで回復した。

【0055】

図４Ｃに示されるように、各動物のカロリー摂取量を食物摂取量に基づいて計算し、ベイナグルチドによる治療前、治療中および治療後の値を比較した。ベイナグルチド治療期間中の各動物の週間食物／カロリー摂取量は、治療前の摂取量と比較して有意に減少した（ｐ＜０．０５）。

【0056】

したがって、１日２回または３回のベイナグルチドの皮下注射により、オスとメスの両方の肥満サルの食物摂取量が有意に減少した。実際に、群２の動物は、４週目の最初の３日間に４０μｇ／ｋｇの用量のベイナグルチドを投与すると、食欲不振の重篤な兆候を示したため、４週目の残りの日は用量を２０μｇ／ｋｇに減らす必要があった。食餌誘発性肥満カニクイザルに対するベイナグルチドの最大許容用量は、１日３回、各回２０～４０μｇ／ｋｇであると推定された。

【0057】

体重およびＢＭＩ
全試験期間中、各サルの体重を毎週測定し、すべての体重測定情報を表８に記録した。

【表8】

【0058】

図５Ａに示されるように、群１のオスおよびメスの動物は、２週目～４週目にブランク対照を投与しても体重に実質的な変化はなかったが、対照的に、群２のサルは、ベイナグルチドを投与してから継続的な体重減少を示した。さらに、群１の動物は、５週目～７週目に、ベイナグルチドが投与された際に体重減少を示した。群２のメスのサルは、５週目にブランク対照に切り替えた際に徐々に体重が増加したが、群２のオスのサルは、投与されたベイナグルチドが終了した際に、実質的な体重増加はなかった。図５Ｂに示されるように、各動物の体重を、ベイナグルチド治療の前後で比較した。ベースライン期間の体重と比較した場合、動物は３週間のベイナグルチド治療後に有意な体重減少を示した（ｐ＜０．０５）。

【0059】

各動物の頭臀長を、１週目、４週目、および７週目の終わりまでに測定し、体重および頭臀長に基づいてＢＭＩを計算した。３週間のベイナグルチド治療後、２つの群の動物のＢＭＩは減少した。

【0060】

体組成の分析
１週目、４週目、および７週目の終わりに各動物に対してＤＥＸＡスキャンを実行した。体組成に関する情報を表９に示す。

【表9】

【0061】

４週目の終わりに、ブランク対照を投与した群１の動物では、ベースラインレベルと比較して体脂肪含有量がわずかに増加したが、ベイナグルチドを投与された群２の動物では、体脂肪含有量が有意に減少した。７週目の終わりに、ベイナグルチドを投与された群１の動物も、ベースラインレベルと比較して体脂肪含有量が減少した。体脂肪率は、総体重中の体脂肪のパーセンテージに基づいて計算された。

【0062】

実施例５
試験５Ａでは、ベイナグルチド（０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、および０．２ｍｇの４つの用量群、１日３回、各回０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇまたは０．２ｍｇ）ならびに／またはグリピジド（グリピジド制御放出錠剤（Ｒｕｉ Ｙｉｎｉｎｇ）、５ｍｇを１日１回経口投与）を、スルホニル尿素（グリピジド等）の血糖制御不良の２型糖尿病患者（９６人の患者）に投与した。ベイナグルチドおよびグリピジドを単独または異なる用量で組み合わせて治療した対象の体重およびＢＭＩの変化、ならびに胃腸反応等の副作用を観察するため。

【0063】

糖尿病の治療に最適な薬剤はメトホルミンである。試験５Ｂでは、ベイナグルチド（４回用量群で０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、および０．２ｍｇ、１日３回、各回０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇまたは０．２ｍｇ）ならびにメトホルミン（経口単剤療法、治療用量≧１，０００ｍｇ／日、用量は少なくとも３か月間は安定している）を、メトホルミン制御不良の２型糖尿病患者（２４０人の患者）のみに投与した。単独または組み合わせて投与されたベイナグルチドおよびメトホルミンの効果の系統的観察をそれぞれ行った。

【0064】

試験５Ａおよび５Ｂの結果は、注射後のベイナグルチドの効果が速く、ピーク時間が投与後２０分であることを示した。その短い作用期間（約１５分の半減期）にもかかわらず、グリピジドまたはメトホルミンと組み合わせると、グリピジドまたはメトホルミン単独よりも優れた治療効果を示した。ベイナグルチド臨床試験における有害事象は、主に軽度から中程度の悪心および嘔吐であったが、そのほとんどは対象が耐えることができ、投薬中に緩和され得る。

【0065】

試験５Ｃは、試験５Ｂに基づいており、２型糖尿病患者の数を増やし、ベイナグルチドおよび経口血糖降下薬（メトホルミン）の組み合わせの有効性および安全性をさらに評価するための拡張多施設臨床試験プロトコルを設計した（０．２ｍｇ用量、１日３回、毎回０．２ｍｇ）。

【0066】

表１０（試験５Ａ、グリピジドとの組み合わせ）、表１１（試験５Ｂ、メトホルミンとの組み合わせ）、および表１２（試験５Ｃ、メトホルミンとの組み合わせ）は、２型糖尿病患者の１２週間のＢＭＩ変化を示した。

【0067】

【表10】

【0068】

３つのベイナグルチド群（０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、および０．２ｍｇ）のボディマスインデックスは、治療の８週目および１２週目に統計的に有意な（Ｐ＜０．０５）体重減少を示した。０．２ｍｇ群では、治療の１２週目のボディマスインデックス（ｋｇ／ｍ２）は０．７９±０．７９（Ｐ＜０．００１）減少し、その減少は０ｍｇ用量群（Ｐ＜０．０５）と有意に差があった（図６Ａ）。

【0069】

【表11】

【0070】

試験５Ｂにおける３つの群のボディマスインデックスの変化は、基本的に体重の変化と一致していた。群間の１２週間の比較では、０．２ｍｇ群のボディマスインデックスが最も有意に低下し、０ｍｇ群および０．１ｍｇ群の間に有意差があることが示された（Ｐ＝０．００００およびＰ＝０．００２０）。０ｍｇ群と０．１ｍｇ群との間に有意差はなかった（Ｐ＝０．２３１７）（図６Ｂ）。

【0071】

表１０～１１に示されるように、ベイナグルチドをグリピジドまたはメトホルミンと組み合わせて使用した場合、対象のＢＭＩは用量依存的に有意に減少した。

【0072】

試験５Ｃからのデータを、過体重の対象（２７．９≧ＢＭＩ≧２４．０ｋｇ／ｍ^２）および肥満患者（ＢＭＩ≧２８．０ｋｇ／ｍ^２）（１２週間の治療（８４日））のＢＭＩ基準に従って分析した。表１２Ａ、１２Ｂおよび１３は、それぞれ過体重および肥満対象に対するベイナグルチドの効果を示している（図６Ｃ）。

【表12】

【0073】

表１２Ｂ：試験期間中の過体重および肥満患者の体重（ｋｇ）（ＩＴＴ）の経時変化（テスト５Ｃデータ）

【表13】

【0074】

【表14】

【0075】

ベースラインからの体重の変化＝治療後－ベースライン。５Ｃテストデータからのデータ。

【0076】

表１２および１３に示されるように、１２週間の治療後、ベースラインからの体重減少が３％以上のベイナグルチド＋メトホルミン群の対象の割合は４０．３２％であり、体重減少が５％以上の対象の割合は２０．９７％であり、対照群（メトホルミン単独群）の減少率はそれぞれ２７．２７％および１０．３９％であった。治療後のベースラインからの変化について、対応のあるＴ検定および群間の共分散分析を行った。すべてのｐ値は０．０５未満であり、差は統計的に有意であった。統計分析により、ベイナグルチド＋メトホルミン治療群は対照群よりも体重減少が優れていることが示された。

【0077】

実施例６
この例は、オスおよびメスのラットの胃内容排出の遅延に対する様々な投薬量のベイナグルチド注射製剤の効果を実証する。ベイナグルチド注射製剤は、２．１ｍｌ中に４．２ｍｇ（４２０００Ｕ）の配列番号１のベイナグルチドを含む。

【0078】

２４０ｇ～２８７ｇ（オス）または１９４ｇ～２２７ｇ（メス）の体重を有する１１２匹の８週齢Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを、群１（緩衝液のみの対照）、群２（ベイナグルチド１０μｇ／ｋｇ）、群３（ベイナグルチド１２．５μｇ／ｋｇ）、群４（ベイナグルチド１５μｇ／ｋｇ）、群５（ベイナグルチド３０μｇ／ｋｇ）、群６（ベイナグルチド４５μｇ／ｋｇ）、および群７（ベイナグルチド６０μｇ／ｋｇ）の７つの群に分けた。動物に注射する前に、ベイナグルチド注射製剤から様々な投薬量のベイナグルチド溶液を調製し、室温で少なくとも３時間保持した。動物を注射の２９～３３時間前に絶食させ、動物には注射の５～７時間前に水を与えなかった。注射は、０．１ｍｌ／１００ｇ体重で首に皮下投与することにより行った。実験は、実施例１に記載されるように行った。

【0079】

表１４および１５ならびに図７および８に示されるように、３０μｇ／ｋｇ、４５μｇ／ｋｇ、または６０μｇ／ｋｇのベイナグルチドを投与されたオスとメスの両方のラットが、ブランクのみの対照より高い胃内残存率を示した。３０μｇ／ｋｇ、４５μｇ／ｋｇ、または６０μｇ／ｋｇのベイナグルチドを与えられたオスのラット、および１０μｇ／ｋｇ、１２．５μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、４５μｇ／ｋｇ、または６０μｇ／ｋｇのベイナグルチドを与えられたメスのラットは、ブランクのみの対照よりも低い炭素粉末の推進率を示した。したがって、データは、ヒトの臨床投薬量に対応する投薬量で、ベイナグルチドの注射が胃内容排出を有意に阻害することを示した。オスのラットおよびメスのラットの最小有効投薬量は、それぞれ３０μｇ／ｋｇおよび１０μｇ／ｋｇであり、それぞれ０．３３ｍｇ／日および０．１１ｍｇ／日のヒト用量に対応する。

【表15】

【表16】

【0080】

実施例７
この例は、オスの食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウスの胃内容排出の遅延に対する様々な投薬量のベイナグルチド注射製剤の効果を実証する。異なる動物モデルが使用されたことを除いて、実験は実施例６に記載されたのと同じ方法で行った。

【0081】

５６匹の４～６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、高脂肪食（カロリーで６０％の脂肪）および低脂肪食（カロリーで１０％の脂肪）をそれぞれ１５週間、高脂肪食を与えられたマウスの体重が３９．２～４７．９ｇに有意に増加するまで与えた。図９および図１０は、１５週間にわたる高脂肪食および低脂肪食のマウスの体重変化および食物摂取量を示す。特別食期間の終わりに、図１１に示される腹腔内グルコース負荷テスト（ＩＰＧＴＴ）により、インスリン抵抗性および肥満の誘導の成功が確認された。

【0082】

表１６ならびに図１２Ａおよび１２Ｂに示されるように、５０μｇ／ｋｇ以上のベイナグルチドを与えられたオスＤＩＯマウスは、緩衝液のみの対照よりも有意に高い胃内残存率を示した。１５μｇ／ｋｇ以上のベイナグルチドを与えられたオスＤＩＯマウスは、ブランク対照よりも有意に低い炭素粉末の推進率を示した。したがって、データは、ヒトの臨床投薬量に対応する投薬量で、ベイナグルチドの注射がＤＩＯマウスの胃内容排出を有意に阻害することを示した。有効量は、１５μｇ／ｋｇと低くなり得、これは０．１２ｍｇ／日のヒト用量に相当する。

【表17】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【配列表】

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