特許 7455144 トレプロスチニルプロドラッグの乾燥粉末組成物およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-14

(45)【発行日】2024-03-25

(54)【発明の名称】トレプロスチニルプロドラッグの乾燥粉末組成物およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/216 20060101AFI20240315BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240315BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240315BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20240315BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20240315BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240315BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240315BHJP

【ＦＩ】

A61K31/216

A61P9/12

A61P11/00

A61P43/00 105

A61K9/14

A61K9/12

A61K47/24

A61K47/18

A61K47/26

【請求項の数】 15

(21)【出願番号】P 2021564297

(86)(22)【出願日】2020-04-28

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-30

(86)【国際出願番号】 US2020030282

(87)【国際公開番号】W WO2020223237

(87)【国際公開日】2020-11-05

【審査請求日】2023-03-17

(31)【優先権主張番号】62/840,186

(32)【優先日】2019-04-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】513204012

【氏名又は名称】インスメッド インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ドゥ， ジュ

(72)【発明者】

【氏名】プラント， アダム

(72)【発明者】

【氏名】マリニン， ウラジミール

【審査官】伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１６－５４０７３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１７／１９２９９３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Plumonary Pharmacology & Therapeutics，2018年，49，pp.104-111

【文献】J Pharmacol Exp Ther，2017年，363，pp.348-357

【文献】Drug Res，2018年，68，pp.605-614

【文献】European Respiratory Journal，2017年，50，PA2377

【文献】International Journal of Pharmaceutics，2016年，506，pp.174-183

【文献】Journal of Drug Delivery，2018年，Volume 2018，Article ID 5635010 (19 pages)

【文献】Drug Delivery，2014年，21(6)，pp.397-405

【文献】Journal of Drug Delivery Science and Technology，2019年，49，pp.97-106

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物：

【化4】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩（式中、Ｒ^１は、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、またはオクタデシルである）、
（ｂ）ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン－ポリエチレングリコール２０００および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリエチレングリコール２０００からなる群から選択される約０．０１ｗｔ％～約３ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、
（ｃ）約１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％のロイシン、ならびに
（ｄ）トレハロースおよびマンニトールからなる群から選択された糖である残部
からなり、
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の全体が１００ｗｔ％である、
乾燥粉末組成物。

【請求項2】

Ｒ^１がヘキサデシルである、請求項１に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項3】

Ｒ^１が直鎖状ヘキサデシルである、請求項２に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項4】

前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約０．０３ｗｔ％～約２．１ｗｔ％または約０．０５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、請求項１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項5】

（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％のマンニトールからなる、請求項１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項6】

処置を必要とする患者における肺高血圧症を処置するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物であって、前記乾燥粉末組成物が、乾燥粉末吸入器による吸入によって、前記患者の肺に投与される、乾燥粉末組成物。

【請求項7】

前記肺高血圧症が、肺動脈性肺高血圧症である、請求項６に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項8】

前記肺動脈性肺高血圧症が、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）によって特徴付けされたクラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶの肺動脈性肺高血圧症である、請求項７に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項9】

前記肺高血圧症が、世界保健機関（ＷＨＯ）によって特徴付けされた群１、群２、群３、群４または群５の肺高血圧症である、請求項６に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項10】

前記肺高血圧症が、慢性血栓塞栓性肺高血圧症、特発性肺動脈性肺高血圧症、家族性肺動脈性肺高血圧症、または間質性肺疾患に関連する肺高血圧症である、請求項６または９に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項11】

処置を必要とする患者における門脈肺高血圧症または肺線維症を処置するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物であって、前記乾燥粉末組成物が、乾燥粉末吸入器による吸入によって、前記患者の肺に投与される、乾燥粉末組成物。

【請求項12】

前記乾燥粉末組成物を投与するステップが、前記乾燥粉末組成物をエアロゾル化することと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を、吸入により前記患者の前記肺に投与することとを含む、請求項６から１１のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項13】

前記エアロゾル化された乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子からなる、請求項１２に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項14】

前記エアロゾル化された乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約３０％～約６０％の微粒子率を有する粒子をからなる、請求項１２または１３に記載の乾燥粉末組成物。

【請求項15】

肺高血圧症、門脈肺高血圧症、または肺線維症を処置するためのシステムであって、
請求項１から５のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物、および
乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）
を含む、システム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月２９日に出願した米国仮特許出願第６２／８４０，１８６号に基づく優先権を主張するものであり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
肺高血圧症（ＰＨ）は、肺血管系の異常な高血圧を特徴とする。これは、心不全に至る進行性の致死的疾患であり、肺動脈、肺静脈、または肺毛細管で発生し得る。症状として、患者は、息切れ、眩暈、失神、およびその他の症状を経験し、これらの症状はいずれも労作により悪化する。複数の原因が存在し、原因不明の特発性の可能性もあり、他の系の高血圧症、例えば、門脈肺高血圧症（患者は、門脈圧亢進症および肺高血圧症の両方を有する）を引き起こす可能性もある。

【0003】

肺高血圧症は、世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）（ＷＨＯ）によって５つの群に分類されている。第１群は、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）と呼ばれ、原因不明（特発性）のＰＡＨ、遺伝性ＰＡＨ（すなわち、家族性ＰＡＨまたはＦＰＡＨ）、薬物または毒物を原因とするＰＡＨ、ならびに結合組織病、ＨＩＶ感染症、肝疾患、および先天性心疾患などの状態を原因とするＰＡＨを含む。第２群の肺高血圧症は、左心性疾患に伴う肺高血圧症であることを特徴とする。第３群の肺高血圧症は、慢性閉塞性肺疾患および間質性肺疾患などの肺疾患に伴うＰＨ、ならびに睡眠関連呼吸障害（例えば、睡眠時無呼吸）に伴うＰＨであることを特徴とする。第４群のＰＨは、慢性血栓症および／または慢性塞栓症に起因するＰＨ、例えば、肺の血栓または血液凝固障害を原因とするＰＨである。第５群は、他の障害または状態、例えば、血液障害（例えば、真性赤血球増加症、本態性血小板血症）、全身性障害（例えば、サルコイドーシス、血管炎）、および代謝性障害（例えば、甲状腺疾患、糖原病）を原因とするＰＨを含む。

【0004】

肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）は、世界中でおおよそ２００，０００人の人々が罹患しており、米国にはこれらの患者のおおよそ３０，０００～４０，０００人が存在する。ＰＡＨ患者は肺動脈の狭窄を経験しており、それによって肺動脈圧が上昇し、心臓が肺に血液を送り出すのが困難になる。患者は息切れや疲労に苦しんでおり、それによって身体活動を実施する能力がかなり制限される場合が多い。

【0005】

ニューヨーク心臓協会（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）（ＮＹＨＡ）は、ＰＡＨ患者を４つの機能分類にカテゴリー分けし、疾患の重症度を査定している。ＮＹＨＡによってクラスＩにカテゴリー分けされるＰＡＨ患者は、通常の身体活動により過度の呼吸困難や疲労、胸痛または卒倒寸前にならないため、身体活動の制限を有さない。ＮＹＨＡによってクラスＩＩにカテゴリー分けされるＰＡＨ患者は、身体活動の若干の制限を有する。これらの患者は、安静時には無症状であるが、通常の身体活動によって過度の呼吸困難や疲労、胸痛または卒倒寸前になる。ＮＹＨＡによってクラスＩＩＩにカテゴリー分けされるＰＡＨ患者は、身体活動の著しい制限を有する。クラスＩＩＩのＰＡＨ患者は安静時には無症状であるが、通常の身体活動より軽い活動の結果として、過度の呼吸困難や疲労、胸痛または卒倒寸前を経験する。ＮＹＨＡによってクラスＩＶにカテゴリー分けされるＰＡＨ患者は、症状を有さずにいかなる身体活動も行うことができない。クラスＩＶのＰＡＨ患者は、安静時も呼吸困難および／または疲労を経験する可能性があり、いかなる身体活動によっても苦痛が増加する。多くの場合、クラスＩＶのＰＡＨ患者には右心不全の兆候が現れる。

【0006】

ＰＡＨを有する患者は、エンドセリン受容体アンタゴニスト（ＥＲＡ）、ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ－５）阻害剤、グアニル酸シクラーゼ刺激剤、プロスタノイド（例えば、プロスタサイクリン）、またはこれらの組合せで処置される。ＥＲＡとしては、アンブリセンタン（abrisentan）（レタイリス（Ｌｅｔａｉｒｉｓ）（登録商標））、シタキセンタン、ボセンタン（トラクリア（Ｔｒａｃｌｅｅｒ）（登録商標））、およびマシテンタン（オプスミット（Ｏｐｓｕｍｉｔ）（登録商標））が挙げられる。ＰＡＨの処置のために表示されるＰＤＥ－５阻害剤としては、シルデナフィル（レバチオ（Ｒｅｖａｔｉｏ）（登録商標））およびタダラフィル（アドシルカ（Ａｄｃｉｒｃａ）（登録商標））が挙げられる。ＰＡＨの処置のために表示されるプロスタノイドとしては、イロプロスト、エポプロステノール（epoprosentol）およびトレプロスチニル（レモジュリン（Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ）（登録商標）、タイバソ（Ｔｙｖａｓｏ）（登録商標））が挙げられる。１つの認可されたグアニル酸シクラーゼ刺激剤は、リオシグアト（アデムパス（Ａｄｅｍｐａｓ）（登録商標））である。さらに、患者は、上述の化合物の組合せで処置される場合も多い。

【0007】

門脈肺高血圧症（ＰＰＨ）は、門脈圧亢進症と肺高血圧症の共存によって定義され、肝疾患の重篤な合併症である。門脈肺高血圧症の診断は血行動態基準（ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ）に基づく：（１）門脈圧亢進症および／または肝疾患（臨床診断－腹水／静脈瘤／脾腫）、（２）安静時平均肺動脈圧＞２５ｍｍＨｇ、（３）肺血管抵抗＞２４０ダイン秒／ｃｍ^５、（４）肺動脈閉塞圧＜１５ｍｍＨｇまたは経肺圧較差（ｔｒａｎｓｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ）＞１２ｍｍＨｇ。ＰＰＨは、肝疾患の重篤な合併症であり、肝硬変を患っている患者の０．２５～４％に存在する。今日、ＰＰＨは肝移植対象者の４～６％に併存している。

【0008】

肺線維症は、肺組織に瘢痕が形成され、重篤な呼吸の問題をもたらす呼吸器疾患である。瘢痕形成、すなわち、過剰な線維結合組織の蓄積によって、壁が肥厚し、血中への酸素供給の低下の原因となる。結果として、肺線維症の患者は、永続的な息切れを患っている。一部の患者では、疾患の特定の原因を診断することができるが、他の患者では、問題の原因を決定することができず、特発性肺線維症と呼ばれる状態である。

【0009】

本発明は、肺投与に有用なトレプロスチニルプロドラッグの乾燥粉末組成物を提供することによる、肺高血圧症（ＰＨ）（肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）を含む）、門脈肺高血圧症（ＰＰＨ）、および肺線維症に対する新規な処置の選択肢、ならびに処置を必要とする患者にそれを投与するための方法に対するニーズに対処する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

発明の概要
一態様では、本開示は乾燥粉末組成物に関する。乾燥粉末組成物は、（ａ）約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物：

【化1】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩（式中、Ｒ^１は、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、またはオクタデシルである）；（ｂ）約０．０１ｗｔ％～約３ｗｔ％のジステアロイルホスファチジルエタノールアミン－ポリエチレングリコール２０００（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００）、（ｃ）約１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％のロイシン、ならびに（ｄ）トレハロースおよびマンニトールからなる群から選択された糖である残部を含む。（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の全体は１００ｗｔ％である。

【0011】

一実施形態では、Ｒ^１はテトラデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状テトラデシルである。

【0012】

一実施形態では、Ｒ^１はペンタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ペンタデシルである。

【0013】

一実施形態では、Ｒ^１はヘプタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘプタデシルである。

【0014】

一実施形態では、Ｒ^１はオクタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状オクタデシルである。

【0015】

一実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0016】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．０５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．２５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。

【0017】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。

【0018】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３６ｗｔ％～約１．２６ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．６ｗｔ％～約０．９ｗｔ％で存在する。

【0019】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約０．７５ｗｔ％で存在する。

【0020】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．４２ｗｔ％～約１．１２ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７ｗｔ％～約０．８ｗｔ％で存在する。

【0021】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．４５ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７５ｗｔ％で存在する。

【0022】

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）～約１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）の範囲内にある。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する。いっそうさらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在する。別の実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．３：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）～約０．７：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）の範囲内にある。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．５：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）である。

【0023】

本明細書において提供される乾燥粉末組成物の一実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約１５ｗｔ％～約４０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約１８ｗｔ％～約３３ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２０ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２５ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２７ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。いっそうさらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0024】

一実施形態では、糖はマンニトールである。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0025】

一実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0026】

一実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％のマンニトールを含む。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0027】

一実施形態では、乾燥粉末組成物は、次世代インパクター（ＮＧＩ）によって測定した場合、約１μｍ～約３μｍの空気動力学的質量中央粒子径（ＭＭＡＤ）の粒子を有するエアロゾルの形態で存在する。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１．３μｍ～約２．０μｍのＭＭＡＤの粒子を有するエアロゾルの形態で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0028】

一実施形態では、糖はマンニトールであり、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤの粒子を有するエアロゾルの形態で存在する。別の実施形態では、糖はマンニトールであり、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１．７μｍ～約２．７μｍのＭＭＡＤの粒子を有するエアロゾルの形態で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0029】

一実施形態では、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約３０％～約６０％の微粒子率（ＦＰＦ）の粒子を有するエアロゾルの形態で存在する。さらなる実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルである。

【0030】

別の態様では、本開示は、それを必要とする患者における肺高血圧症を処置するための方法に関する。本方法は、本明細書に開示される乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、患者の肺に投与するステップを含む。

【0031】

肺高血圧症は、一実施形態では、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）である。ＰＡＨは、一実施形態では、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）によって特徴付けされたクラスＩのＰＡＨである。別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩのＰＡＨである。別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩＩのＰＡＨである。別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＶのＰＡＨである。

【0032】

一実施形態では、肺高血圧症は、世界保健機関（ＷＨＯ）によって特徴付けされた群１の肺高血圧症である。

【0033】

別の実施形態では、肺高血圧症は、ＷＨＯによって特徴付けされた群２の肺高血圧症である。

【0034】

別の実施形態では、肺高血圧症は、ＷＨＯによって特徴付けされた群３の肺高血圧症である。

【0035】

別の実施形態では、肺高血圧症は、ＷＨＯによって特徴付けされた群４の肺高血圧症である。

【0036】

別の実施形態では、肺高血圧症は、ＷＨＯによって特徴付けされた群５の肺高血圧症である。

【0037】

さらに別の態様では、本開示は、それを必要とする患者における門脈肺高血圧症または肺線維症を処置するための方法に関する。本方法は、本明細書に開示される乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、患者の肺に投与するステップを含む。

【0038】

本明細書に記載の処置方法の一実施形態では、投与するステップは、１日１回、１日２回、または１日３回の投薬で実行される。

【0039】

本明細書に記載の処置方法の別の実施形態では、投与するステップは、乾燥粉末組成物をエアロゾル化することと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を吸入により患者の肺に投与することとを含む。一実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含む。別の実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約３０％～約６０％のＦＰＦを有する粒子を含む。

【0040】

さらに別の態様では、本開示は、肺高血圧症、門脈肺高血圧症、または肺線維症を処置するためのシステムに関する。本システムは、本明細書に開示される乾燥粉末組成物のうちの１つおよび乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）を含む。

【0041】

ＤＰＩは、一実施形態では、単回用量または複数回用量の吸入器のいずれかである。

【0042】

別の実施形態では、ＤＰＩは、予め計量されているか、またはデバイスで計量されている。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１は、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の噴霧乾燥回収に対するロイシン含量の効果を示すグラフである。

【0044】

【図2A】図２Ａ～２Ｄは、図のように、様々な量のロイシンを含有するマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＳＥＭ画像である。

【図2B】図２Ａ～２Ｄは、図のように、様々な量のロイシンを含有するマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＳＥＭ画像である。

【図2C】図２Ａ～２Ｄは、図のように、様々な量のロイシンを含有するマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＳＥＭ画像である。

【図2D】図２Ａ～２Ｄは、図のように、様々な量のロイシンを含有するマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＳＥＭ画像である。

【0045】

【図3】図３は、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末における、レーザー回折によって測定した粒径分布に対するロイシン含量の効果を示すグラフである。

【0046】

【図4】図４は、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＭＭＡＤに対するＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）含量の効果を示すグラフである。

【0047】

【図5】図５Ａ～５Ｃは、様々な入口温度で噴霧乾燥したマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＳＥＭ画像である。上のパネルの画像は高倍率で撮影し、下のパネルの画像は低倍率で撮影した。

【0048】

【図6】図６Ａおよび６Ｂは、炭酸水素アンモニウム（ＡＢＣ、０．５ｍｇ／ｍＬ）を用いてまたは用いないで１３５℃の入口温度で噴霧乾燥した、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の形態を示すＳＥＭ画像である。上のパネルの画像は高倍率で撮影し、下のパネルの画像は低倍率で撮影した。

【0049】

【図7A】図７Ａは、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１７９のＤＳＣデータを示すグラフである。

【0050】

【図7B】図７Ｂは、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１７９のＸ線回折データを示すグラフである。

【0051】

【図8】図８Ａおよび８Ｂは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の形態に対するロイシン含量の効果を示すＳＥＭ画像である。

【0052】

【図9A】図９Ａ～９Ｃは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の形態に対する噴霧乾燥入口温度の効果を示すＳＥＭ画像である。

【図9B】図９Ａ～９Ｃは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の形態に対する噴霧乾燥入口温度の効果を示すＳＥＭ画像である。

【図9C】図９Ａ～９Ｃは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の形態に対する噴霧乾燥入口温度の効果を示すＳＥＭ画像である。

【0053】

【図10A】図１０Ａは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＤＳＣデータを示すグラフである。

【0054】

【図10B】図１０Ｂは、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のＸ線回折データを示すグラフである。

【0055】

【図11】図１１は、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６７の水分吸収を示すＤＶＳ等温線プロットである（Ｃ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／Ｍａｎ／Ｌｅｕ、１／０．５／８０／２０）。

【0056】

【図12】図１２は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２の水分吸収を示すＤＶＳ等温線プロットである（Ｃ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／Ｔｒｅｈ／Ｌｅｕ、１／０．５／８０／２０）。

【0057】

【図13】図１３は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６３の水分吸収を示すＤＶＳ等温線プロットである（Ｃ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／Ｔｒｅｈ／Ｌｅｕ、１／０．５／７０／３０）。

【0058】

【図14】図１４は、マンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の加速安定性研究におけるＭＭＡＤの変化を示すグラフである。

【0059】

【図15A】図１５Ａおよび１５Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１７９のＳＥＭ画像である。

【図15B】図１５Ａおよび１５Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１７９のＳＥＭ画像である。

【0060】

【図16A】図１６Ａおよび１６Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、１．５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８３のＳＥＭ画像である。

【図16B】図１６Ａおよび１６Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、１．５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８３のＳＥＭ画像である。

【0061】

【図17A】図１７Ａおよび１７Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、２％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８４のＳＥＭ画像である。

【図17B】図１７Ａおよび１７Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３（３カ月）における、２％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８４のＳＥＭ画像である。

【0062】

【図18A】図１８Ａおよび１８Ｂは、Ｔ５（５カ月）における、それぞれ３％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）（ＳＤ－ＮＮＰ－１９０）および５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）（ＳＤ－ＮＮＰ－１９１）のマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチのＳＥＭ画像である。

【図18B】図１８Ａおよび１８Ｂは、Ｔ５（５カ月）における、それぞれ３％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）（ＳＤ－ＮＮＰ－１９０）および５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）（ＳＤ－ＮＮＰ－１９１）のマンニトールベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチのＳＥＭ画像である。

【0063】

【図19】図１９は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の加速安定性研究におけるＭＭＡＤの変化を示すグラフである。

【0064】

【図20】図２０は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の加速安定性研究におけるＦＰＦの変化を示すグラフである。

【0065】

【図21A】図２１Ａおよび２１Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２のＳＥＭ画像である。

【図21B】図２１Ａおよび２１Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２のＳＥＭ画像である。

【0066】

【図22A】図２２Ａおよび２２Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６３のＳＥＭ画像である。

【図22B】図２２Ａおよび２２Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１６３のＳＥＭ画像である。

【0067】

【図23A】図２３Ａおよび２３Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１．５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８８のＳＥＭ画像である。

【図23B】図２３Ａおよび２３Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、１．５％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８８のＳＥＭ画像である。

【0068】

【図24A】図２４Ａおよび２４Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、２％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８９のＳＥＭ画像である。

【図24B】図２４Ａおよび２４Ｂは、それぞれＴ０およびＴ３．５（３．５カ月）における、２％のＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）を含むトレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末のバッチＳＤ－ＮＮＰ－１８９のＳＥＭ画像である。

【0069】

【図25】図２５は、噴霧乾燥したトレプロスチニルパルミチルの乾燥粉末製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの圧力滴定を示すグラフである。見やすさのため、データ点は、各空気圧カテゴリー（左から右へ）内で、順に（Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ）ずらしてある。

【0070】

【図26】図２６は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの粒径分布を示すグラフである。

【0071】

【図27】図２７は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＡのＳＥＭ画像である。

【0072】

【図28】図２８は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＢのＳＥＭ画像である。

【0073】

【図29】図２９は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＣのＳＥＭ画像である。

【0074】

【図30】図３０は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＤのＳＥＭ画像である。

【0075】

【図31】図３１は、Ｔ＝０、および図のように２５℃もしくは４０℃で１～３カ月間カプセル内で保管した後、または２５℃もしくは４０℃で３カ月間バルクとして保管し、同日にカプセル内に充填し、投薬した後の、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａの微粒子量（ｆｉｎｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｄｏｓｅｓ）（ＦＰＤ）を示すグラフである。

【0076】

【図32】図３２は、Ｔ＝０、および図のように２５℃もしくは４０℃で１～３カ月間カプセル内で保管した後、または２５℃もしくは４０℃で３カ月間バルクとして保管し、同日にカプセル内に充填し、投薬した後の、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｃの微粒子量（ＦＰＤ）を示すグラフである。

【0077】

【図33】図３３は、Ｔ＝０、および図のように２５℃もしくは４０℃で１～３カ月間カプセル内で保管した後、または２５℃もしくは４０℃で３カ月間バルクとして保管し、同日にカプセル内に充填し、投薬した後の、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄの微粒子量（ＦＰＤ）を示すグラフである。

【0078】

【図34】図３４は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末製剤の動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）等温線プロットである。

【0079】

【図35】図３５は、Ｔ＝０カ月、ならびに４０℃および制御されていない周囲湿度で１．５カ月、２．５カ月、および３．５カ月間（１時点当たりｎ＝１）保管した後の、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末製剤のエアロゾル粒径分布を示すグラフである。

【0080】

【図36】図３６は、トレハロースベースのＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末製剤の吸入後の、肺におけるＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）等価物（Ｃ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）プラストレプロスチニル、ｎｇ／ｇ）および霧化されたＩＮＳ１００９の濃度を示すグラフである。

【0081】

【図37】図３７は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の、肺におけるＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）等価物（Ｃ１６ＴＲｅｑ）の濃度を示すグラフである。

【0082】

【図38】図３８は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の、肺におけるＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）の濃度を示すグラフである。

【0083】

【図39】図３９は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の、肺におけるＴＲＥの濃度を示すグラフである。

【0084】

【図40】図４０は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の、血漿中のＴＲＥの濃度を示すグラフである。

【0085】

【図41】図４１は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃに曝露されたラットにおける低酸素負荷に対するΔＲＶＰＰ応答を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0086】

発明の詳細な説明
本開示を通して、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、数値および／または範囲と併せて使用され得る。用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、記載した値に近い値を意味すると理解される。例えば、「約４０［単位］」は、４０の±２５％以内（例えば、３０～５０）、±２０％、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、±１％以内、±１％未満、またはその中の任意の他の値もしくは値の範囲もしくはそれ未満を意味し得る。

【0087】

用語「薬学的に許容される塩」は、無機または有機の塩基および無機または有機の酸を含む薬学的に許容される非毒性の塩基または酸から調製される塩を指す。塩は、薬学的に許容される限り、その性質は重要ではない。好適な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸または有機酸から調製され得る。例示的な薬学的な塩は、その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Stahl, P.H., Wermuth, C.G., Eds. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use; Verlag Helvetica Chimica Acta/Wiley-VCH: Zurich, 2002に開示される。無機酸の具体的な非限定的な例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸およびリン酸である。好適な有機酸としては、限定されないが、カルボン酸およびスルホン酸を含有する脂肪酸、脂環式酸、芳香酸、アリール脂肪酸、およびヘテロシクリル酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、ステアリン酸、サリチル酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸（パモ酸）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、アルギン酸（algenic）、３－ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸またはガラクツロン酸が挙げられる。本明細書に開示される遊離酸を含有する化合物の好適な薬学的に許容される塩としては、限定されないが、金属塩および有機塩が挙げられる。例示的な金属塩としては、以下に限定されないが、適切なアルカリ金属（Ｉａ族）の塩、アルカリ土類金属（ＩＩａ属）の塩、および他の生理学的に許容される金属が挙げられる。このような塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から作られ得る。例示的な有機塩は、第一級アミン塩、第二級アミン塩、第三級アミン塩および第四級アミン塩、例えばトロメタミン、ジエチルアミン、テトラ－Ｎ－メチルアンモニウム、Ｎ，Ｎ’ージベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）およびプロカインから作ることができる。

【0088】

本明細書を通して、数値範囲は、ある特定の量として与えられる。これらの範囲がこのうちのすべての下位範囲を含むことが理解されるべきである。よって、範囲「５０～８０」は、そのうちのすべての可能な範囲（例えば、５１～７９、５２～７８、５３～７７、５４～７６、５５～７５、６０～７０など）を含む。さらに、所与の範囲内のすべての値は、それによって包含される範囲に関する末端値であってもよい（例えば、範囲５０～８０は、５５～８０、５０～７５などのような末端値を含む範囲を含む）。

【0089】

用語「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、一実施形態では：（１）状況、障害または状態に罹患しているかまたはその素因を有している可能性があるが、その状況、障害または状態の臨床的または無症候性症状をまだ経験または呈していない対象において発症するその状況、障害または状態の臨床症状の出現を予防するかまたは遅延させること；（２）その状況、障害または状態を阻害すること（例えば、疾患の発症、またはその少なくとも１つの臨床的もしくは無症候性症状の維持処置の場合にはその再発を停止させる、低減するまたは遅延させること）；および／あるいは（３）状態を緩和する（例えば、状況、障害もしくは状態またはその臨床症状もしくは無症候性症状の少なくとも１つを後退させること）ことを含む。一実施形態では、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、状況、障害または状態を阻害すること（例えば、疾患の発症、またはその少なくとも１つの臨床的もしくは無症候性症状の維持処置の場合にはその再発を停止させる、低減するまたは遅延させること）を指す。別の実施形態では、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、状態を緩和すること（例えば、状況、障害もしくは状態またはその臨床的もしくは無症候性症状の少なくとも１つを後退させることによる）を指す。処置される対象への利益は、処置前の同一対象の状況もしくは状態と比較して、または未処置対照の対象の状況もしくは状態と比較して統計的に有意であり、利益は、対象または医師にとって少なくとも知覚できるものである。

【0090】

「有効量」は、所望の治療応答をもたらすのに十分な本開示の乾燥粉末組成物の量を意味する。

【0091】

本発明の一態様では、トレプロスチニルプロドラッグの乾燥粉末組成物が提供される。乾燥粉末組成物は：
（ａ）式（Ｉ）の化合物：

【化2】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩（式中、Ｒ^１は、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、またはオクタデシルである）であって、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％で存在する、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩；
（ｂ）約０．０１ｗｔ％～約３ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、
（ｃ）約１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％のロイシン、ならびに
（ｄ）トレハロースおよびマンニトールからなる群から選択された糖である残部
を含む。（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の全体は１００ｗｔ％である。

【0092】

一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％、約０．３ｗｔ％、約０．５ｗｔ％、約０．７ｗｔ％、約１ｗｔ％、約１．３ｗｔ％、約１．５ｗｔ％、約１．７ｗｔ％、約２．０ｗｔ％、約２．３ｗｔ％、約２．５ｗｔ％、約２．７ｗｔ％、または約３ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在する。式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩は、その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、国際出願公開第２０１５／０６１７２０号に開示されるトレプロスチニルプロドラッグである。一部の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約１０ｗｔ％、約１５ｗｔ％、約２０ｗｔ％、約２５ｗｔ％、約３０ｗｔ％、約３５ｗｔ％、約４０ｗｔ％、約４５ｗｔ％、または約５０ｗｔ％で存在する。

【0093】

ＰＥＧは、その分子量に応じて、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）またはポリオキシエチレン（ＰＯＥ）としても公知のポリエチレングリコールを指す。ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、平均ＰＥＧ分子量が２０００ｇ／ｍｏｌである分枝状または非分枝状ＰＥＧ分子を含み得る。一実施形態では、（ｂ）は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．０３ｗｔ％～約２．１ｗｔ％で存在するＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。別の実施形態では、（ｂ）は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．０５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在するＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。

【0094】

式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^１はテトラデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状テトラデシルである。

【0095】

式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩の別の実施形態では、Ｒ^１はペンタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ペンタデシルである。

【0096】

式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩の別の実施形態では、Ｒ^１はヘプタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘプタデシルである。

【0097】

式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩の別の実施形態では、Ｒ^１はオクタデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状オクタデシルである。

【0098】

式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩の別の実施形態では、Ｒ^１はヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、式（ＩＩ）の化合物：

【化3】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩である。一実施形態では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式（ＩＩ）の化合物である。さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。式（ＩＩ）の化合物はまた、Ｃ１６ＴＲまたはトレプロスチニルパルミチルとも本明細書において称される。本出願において、Ｃ１６ＴＲおよびトレプロスチニルパルミチルは交換可能に使用され、式（ＩＩ）の化合物を指す。

【0099】

一実施形態では、（ａ）は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、（ａ）は、式（Ｉ）の化合物である。別の実施形態では、（ａ）は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、（ａ）は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0100】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．０５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．２５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。

【0101】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する。

【0102】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３６ｗｔ％～約１．２６ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．６ｗｔ％～約０．９ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する。

【0103】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約０．７５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。

【0104】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．４２ｗｔ％～約１．１２ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７ｗｔ％～約０．８ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する。

【0105】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．３ｗｔ％～約０．７ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％で存在する。

【0106】

一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．４５ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在する。

【0107】

一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％、約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％、約１ｗｔ％～約２ｗｔ％、約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％、約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％、約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％、約１ｗｔ％、または約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）～約１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）、または約０．３：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）～約０．７：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）の範囲内、例えば、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、または約１：１である。一実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）～約１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）の範囲内にある。別の実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．３：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）～約０．７：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）の範囲内にある。

【0108】

一部の実施形態では、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比は、約０．５：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物）である。この重量比で、一実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する。別の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．６ｗｔ％～約０．９ｗｔ％で存在する。別の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７ｗｔ％～約０．８ｗｔ％で存在する。別の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００は、乾燥粉末組成物の総重量の約０．７５ｗｔ％で存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、乾燥粉末組成物中で上記重量パーセンテージまたは重量パーセンテージの範囲のそれぞれで存在する。一部の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、乾燥粉末組成物において上記重量パーセンテージまたは重量パーセンテージの範囲のそれぞれで存在する。

【0109】

一実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約１５ｗｔ％～約４０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約１８ｗｔ％～約３３ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２０ｗｔ％～約３０ｗｔ％、例えば約２０ｗｔ％、約２５ｗｔ％、または約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２５ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する。さらなる実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２７ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する。一実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約２０ｗｔ％で存在する。別の実施形態では、ロイシンは、乾燥粉末組成物の総重量の約３０ｗｔ％で存在する。

【0110】

一部の実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、トレハロースである。他の実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、マンニトールである。

【0111】

一実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0112】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0113】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0114】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0115】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0116】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％のマンニトールを含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。一実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（ＩＩ）の化合物、（ｂ）約０．７５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％のマンニトールを含む。

【0117】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0118】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１．５ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0119】

別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、（ａ）約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％のロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態では、乾燥粉末組成物中の（ａ）は、約１ｗｔ％の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物である。一部の実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物におけるヘキサデシルである。さらなる実施形態では、Ｒ^１は、式（Ｉ）の化合物における直鎖状ヘキサデシルであり、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。

【0120】

空気動力学的質量中央粒子径（ＭＭＡＤ）は、所与のエアロゾルの質量の５０％が空気動力学的中央粒子径（ＭＡＤ）よりも小さい粒子に関連し、質量の５０％がＭＡＤより大きい粒子に関連する、空気動力学的粒子径の値である。ＭＭＡＤは、インパクターによる測定、例えばアンダーソンカスケードインパクター（ＡＣＴ）または次世代インパクター（ＮＧＩ）によって決定することができる。一部の実施形態では、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約５μｍ、約１μｍ～約３μｍ、約１．３μｍ～約２．０μｍ、または約１．７μｍ～約２．７μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾルの形態である。一実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、マンニトールである。別の実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、トレハロースである。

【0121】

一実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖はマンニトールであり、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩで測定した場合、約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾルの形態である。別の実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖はマンニトールであり、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩで測定した場合、約１．７μｍ～約２．７μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾルの形態である。

【0122】

「微粒子率（fine particle fraction）」または「ＦＰＦ」は、カスケードインパクションによって測定した場合、直径５μｍ未満の粒径を有するエアロゾルの分率を指す。ＦＰＦは、通常パーセンテージとして表される。ＦＰＦは、患者の肺に沈着する粉末の分率と相関することが実証されている。一部の実施形態では、乾燥粉末組成物は、ＮＧＩで測定した場合、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、約３０％～約６０％、約３５％～約５５％、または約４０％～約５０％のＦＰＦを有する粒子を含むエアロゾルの形態である。一実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、マンニトールである。別の実施形態では、糖はトレハロースである。

【0123】

粉末のタップ密度は、粉末を既定の期間タップした後に、粉末に占められる体積に対する粉末の質量の比である。粉末のタップ密度は、そのランダムな高密度充填を表す。タップ密度は、USP Bulk Density and Tapped Density, United States Pharmacopeia convention, Rockville, Md., 10th Supplement, 4950-4951, 1999の方法を使用して決定することができる。一部の実施形態では、乾燥粉末組成物は、約０．２ｇ／ｍｌ～約０．８ｇ／ｍｌ、または約０．３ｇ／ｍｌ～約０．６ｇ／ｍｌのタップ密度を有する粒子を含む。一実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、マンニトールである。別の実施形態では、乾燥粉末組成物中の糖は、トレハロースである。

【0124】

本開示の乾燥粉末組成物は、凍結乾燥または噴霧乾燥技法を使用して液体組成物から生成することができる。凍結乾燥が使用される場合、凍結乾燥された組成物は粉砕され、上記所望のサイズ範囲内の粒子を含有する微細に分割された乾燥粉末を得ることができる。噴霧乾燥が使用される場合、上記所望のサイズ範囲内の粒子を含有する微細に分割された乾燥粉末を生じる条件下で、このプロセスが行われる。乾燥粉末の形態の医薬組成物を調製する例示的な方法は、そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＷＯ９６／３２１４９、ＷＯ９７／４１８３３、ＷＯ９８／２９０９６、ならびに米国特許第５，９７６，５７４号、同第５，９８５，２４８号、および同第６，００１，３３６号に開示される。例示的な噴霧乾燥方法は、そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，８４８，１９７号および同第８，１９７，８４５号に記載される。

【0125】

一部の実施形態では、本開示の乾燥粉末組成物は、以下のプロセスによって調製される。式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、およびＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００のストック溶液は、アルコール（例えば、１－プロパノール）などの有機溶媒を使用して調製される。糖（例えば、マンニトールまたはトレハロース）およびロイシンの水性ストック溶液も調製される。その後、必要量の上記ストック溶液を水および有機溶媒の混合物に添加し、噴霧乾燥供給溶液を形成する。噴霧乾燥供給溶液では、水対有機溶媒の体積比は、約３：２～約１：１であり得る。

【0126】

噴霧乾燥は、乾燥ガス流をスタートさせ、例えば約１２０℃～約１６０℃、または約１３５℃～約１５０℃の所望の入口温度に設定することによって乾燥ガスを加熱することによって開始される。噴霧乾燥出口温度が、例えば約５５℃～約６５℃の好適な温度に到達した後、液体スキッド入口を、ブランク溶媒が噴霧乾燥機中で窒素の助けを借りて霧化されるよう設定し、システムを冷却および安定化させる。生成物フィルターのパルシングを開始し、生成物フィルターパージ流を、例えば１０～２０ｓｃｆｈに設定する。システムが安定化した後、液体スキッド入口を上記で調製した供給溶液に切り替え、供給溶液がなくなるまで、プロセスを継続する。供給溶液がなくなる時点で、液体スキッド入口をブランク溶媒に戻し、溶媒を約５～約２０分間噴霧させる。この時点で、粉末は、生成物フィルターの底部で収集される。ブランク溶媒を約５～約２０分間噴霧した後、液体ライン、霧化ガス、乾燥ガスヒーター、乾燥ガス入口および最終的に排気装置を止めることによりシステムを停止する。

【0127】

一実施形態では、本開示の乾燥粉末組成物は、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）を使用して吸入により対象の肺に送達される。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、単回用量乾燥粉末吸入器である。噴霧剤を含まないデバイスであるＤＰＩは、対象の吸気を使用して乾燥粉末を対象の肺に送達する。ＤＰＩデバイスにおいて使用される乾燥粉末組成物の単位用量は、硬質カプセルの乾燥粉末ブリスターディスクであることが多い。本開示の乾燥粉末組成物を送達するのに好適な例示的なＤＰＩデバイスとしては、以下の段落に記載のデバイス、ならびにそのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，７６６，７９９号、同第７，２７８，４２５号および同第８，４９６，００２号に記載のＤＰＩが挙げられる。

【0128】

ＡＩＲ（登録商標）吸入器（Ａｌｋｅｒｍｅｓ）は、カプセルから多孔質粉末を送達する小型の呼吸活性化システムを含む。多孔質粒子は、１～５μｍの空気力学的粒子径を有する。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第９９／６６９０３号および同第００／１０５４１号を参照されたい。

【0129】

エアロライザー（Ａｅｒｏｌｉｚｅｒ）（商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、単回用量の乾燥粉末吸入器である。このデバイスでは、乾燥粉末医薬は、カプセル内に保存され、ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）でコーティングしたスチールピンでカプセル壁を突き刺すことによって放出される。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，４８８，０２７号および同第３，９９１，７６１号を参照されたい。

【0130】

Ｂａｎｇ Ｏｌｕｆｓｅｎは、最大６０回用量を含むブリスターストリップを使用する呼吸作動式吸入器を提供する。新規トリガー機構による吸入の間にのみその用量が利用可能になる。デバイスは、用量カウンターを備えており、すべての用量が使用された後に、処分され得る。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＥＰ１５２２３２５を参照されたい。

【0131】

クリックヘラー（Ｃｌｉｃｋｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ｉｎｎｏｖａｔａ ＰＬＣ）は、大型リザーバー式呼吸活性化複数回用量デバイスである。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，４３７，２７０号を参照されたい。

【0132】

ダイレクトヘラー（ＤｉｒｅｃｔＨａｌｅｒ）（商標）（Ｄｉｒｅｃｔ－Ｈａｌｅｒ Ａ／Ｓ）は、ポリプロピレン製の単回用量の、予め計量された、予め充填された、使い捨てのＤＰＩデバイスである。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７９７，３９２号を参照されたい。

【0133】

ディスカス（Ｄｉｓｋｕｓ）（商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、防湿するための二重ホイルブリスターストリップに含有された最大６０回用量を保有する使い捨ての小型ＤＰＩデバイスである。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＧＢ２２４２１３４を参照されたい。

【0134】

エクリプス（Ｅｃｌｉｐｓｅ）（商標）（Ａｖｅｎｔｉｓ）は、最大２０ｍｇの乾燥粉末組成物を送達可能な呼吸作動式の再利用可能なカプセルデバイスである。粉末は、カプセルからボルテックスチャンバーに吸引され、そこで、対象が呼吸すると、回転するボールが粉末の脱凝集を補助する。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２３０，７０７号およびＷＯ９５０３８４６を参照されたい。

【0135】

フレックスヘラー（Ｆｌｅｘｈａｌｅｒ）（登録商標）は、プラスチック製の呼吸活性化乾燥粉末吸入器であり、本明細書において提供される乾燥粉末組成物と共に使用するのに適している。

【0136】

フローカップス（ＦｌｏｗＣａｐｓ）（登録商標）（Ｈｏｖｉｏｎｅ）は、最大１４カプセルを保有する、カプセルベースの、詰め替え可能な、再利用可能な乾燥粉末受動吸入器である。吸入器自体は耐湿性である。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７３，６８６号を参照されたい。

【0137】

ジャイロヘラー（Ｇｙｒｏｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ｖｅｃｔｕｒａ）は、ブリスターのストリップを含有する使い捨ての受動ＤＰＩである。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＧＢ２４０７０４２を参照されたい。

【0138】

ハンディヘラー（ＨａｎｄｉＨａｌｅｒ）（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ ＧｍｂＨ）は、単回用量のＤＰＩデバイスである。これは、カプセル内の最大３０ｍｇの乾燥粉末組成物を送達することができる。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第０４／０２４１５６号を参照されたい。

【0139】

マイクロドーズＤＰＩ（ＭｉｃｒｏＤｏｓｅ ＤＰＩ）（Ｍｉｃｒｏｄｏｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、小型の電子ＤＰＩデバイスである。これは、圧電振動子（超音波周波数）を使用して、アルミニウムブリスター中の薬物粉末を脱凝集させる（単回または複数回用量）。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０２６，８０９号を参照されたい。

【0140】

Ｎｅｋｔａｒドライパウダー吸入器（Ｎｅｋｔａｒ Ｄｒｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｉｎｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ｎｅｋｔａｒ）は、手のひらサイズの使いやすいデバイスである。これは、標準的カプセルからの簡便な投薬および流量に依存しない肺沈着をもたらす。

【0141】

Ｎｅｋｔａｒ肺吸入器（Ｎｅｋｔａｒ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｉｎｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ｎｅｋｔａｒ）は、粉末をパッケージから効率的に取り除き、粒子を破壊し、深肺への送達に好適なエアロゾル雲を生じる。これにより、エアロゾル化粒子が、患者の呼吸中にデバイスから深肺に輸送され、喉と上気道における損失を低減することが可能になる。圧縮ガスを使用して粉末をエアロゾル化する。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＡＵ４０９０５９９および米国特許第５，７４０，７９４号を参照されたい。

【0142】

ＮＥＸＴ ＤＰＩ（商標）は、複数回用量の能力、防湿、および用量カウントを特徴とするデバイスである。デバイスは、適切な呼吸の流れに達した場合にのみ、方向（上下）および用量に関係なく使用することができる。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＥＰ１１９６１４６、米国特許第６，５２８，０９６号、ＷＯ０１７８６９３、およびＷＯ００５３１５８を参照されたい。

【0143】

ネオヘラー（Ｎｅｏｈａｌｅｒ）（登録商標）は、カプセルベースのプラスチック製呼吸活性化乾燥粉末吸入器である。

【0144】

オリエル（Ｏｒｉｅｌ）（商標）ＤＰＩは、圧電膜と非線形振動を利用して、粉末製剤をエアロゾル化する活性ＤＰＩである。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第０１６８１６９号を参照されたい。

【0145】

イタリアのＰｌａｓｔｉａｐｅによって開発されたＲＳ０１単回用量乾燥粉末吸入器は、コンパクトサイズおよび単純および有効な穿孔システムを特徴とし、ゼラチンとＨＭＰＣカプセルの両方に適応する。

【0146】

プレスエアー（Ｐｒｅｓｓａｉｒ）（商標）は、プラスチック製の呼吸活性化乾燥粉末吸入器である。

【0147】

プルビナル（Ｐｕｌｖｉｎａｌ）（登録商標）吸入器（Ｃｈｉｅｓｉ）は、呼吸活性化複数回用量（１００回用量）乾燥粉末吸入器である。乾燥粉末は、透明であり、１００回目の用量が送達された時点を表示するよう明確に印を付けたリザーバーに保存される。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，３５１，６８３号を参照されたい。

【0148】

ロトヘラー（Ｒｏｔｏｈａｌｅｒ）（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、カプセルを利用する一回用デバイスである。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７３，６８６号および同第５，８８１，７２１号を参照されたい。

【0149】

レクサムＤＰＩ（Ｒｅｘａｍ ＤＰＩ）（Ｒｅｘａｍ Ｐｈａｒｍａ）は、カプセルを用いて使用するように設計された、単回用量の再利用可能なデバイスである。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６５１，３５９号およびＥＰ０７０７８６２を参照されたい。

【0150】

Ｓ２（Ｉｎｎｏｖａｔａ ＰＬＣ）は、高濃度で乾燥粉末組成物を送達するための、再利用可能であるかまたは使い捨ての単回用量ＤＰＩである。その分散機構は、患者の肺への優れた薬物送達を達成するために、最小限の患者の努力しか必要としない。Ｓ２は、使いやすく、パッシブエンジンを有するため、電池も電源も必要としない。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、ＡＵ３３２０１０１を参照されたい。

【0151】

スカイヘラー（ＳｋｙｅＨａｌｅｒ）（登録商標）ＤＰＩ（ＳｋｙｅＰｈａｒｍａ）は、一回用、または取り換え可能なカートリッジ中に最大３００回の個々の用量を含有する複数回用量デバイスである。このデバイスは、呼吸によって動力を得て、呼吸と作動の間に連携を必要としない。そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１８２，６５５号およびＷＯ９７／２０５８９を参照されたい。

【0152】

タイフン（Ｔａｉｆｕｎ）（登録商標）ＤＰＩ（ＬＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）は、複数回用量（最大２００回）のＤＰＩデバイスである。これは呼吸作動式であり、流量に依存しない。このデバイスは、一貫して投薬するための容積用量計測システムに連結された固有の水分の均衡を保つ薬物リザーバーを含む。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１３２，３９４号を参照されたい。

【0153】

ターボヘラー（ＴｕｒｂｏＨａｌｅｒ）（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）は、その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９８３，８９３号に記載される。このＤＰＩデバイスは、最大２００回用量の乾燥粉末組成物および数マイクログラム～０．５ｍｇの用量範囲を与える複数回用量リザーバーを有する、吸気流に駆動される、複数回用量の乾燥粉末吸入器である。

【0154】

ツイストヘラー（Ｔｗｉｓｔｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）は、用量カウントの特徴を有する複数回用量デバイスであり、１４～２００回の作動が可能である。乾燥粉末組成物は、乾燥剤を含有するカートリッジにパッケージングされる。その開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８２９，４３４号を参照されたい。

【0155】

ウルトラヘラー（Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ）（登録商標）（Ａｖｅｎｔｉｓ）は、正確な用量計測と良好な分散を兼ね備える。これは、数値用量カウンター、摂取用量インジケーターおよびロックアウトメカニズムを有し、使いやすい、別個の、ポケットサイズのデバイスである。このデバイスは、最大２０ｍｇの乾燥粉末組成物を送達することが可能である。ウルトラヘラー（Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ）（登録商標）は、そのそれぞれの開示が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７８，５３８号およびＷＯ２００４０２６３８０に記載される。

【0156】

エクセロベール（Ｘｃｅｌｏｖａｉｒ）（商標）（Ｍｅｒｉｄｉｃａ／Ｐｆｉｚｅｒ）は、５～２０ｍｇの範囲の、６０回の予め計量された、密閉シールされている用量を保有する。このデバイスは、４０℃／７５％ＲＨの加速条件下で、防湿をもたらす。分散システムは、微粒子率を最大化し、最大５０％の微粒子塊を送達する。

【0157】

別の態様では、（ｉ）本明細書に記載の乾燥粉末組成物の１つおよび（ｉｉ）乾燥粉末組成物の投与のための乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）を含むシステムが提供される。ＤＰＩは、（ａ）本明細書に開示される乾燥粉末組成物を含むリザーバー、および（ｂ）乾燥粉末組成物を吸入により患者に導入するための手段を含む。リザーバーは、一実施形態では、カプセル内またはブリスターパック内に本発明の乾燥粉末組成物を含む。カプセルのシェル用材料は、ゼラチン、セルロース誘導体、デンプン、デンプン誘導体、キトサン、または合成プラスチックであり得る。ＤＰＩは、単回用量または複数回用量の吸入器であってもよい。さらに、ＤＰＩは、予め計量されていてもデバイスで計量されていてもよい。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、単回用量乾燥粉末吸入器である。

【0158】

システムは、一実施形態では、肺高血圧症、門脈肺高血圧症、または肺線維症を処置するために使用される。システムは、本明細書に開示される乾燥粉末組成物、すなわち、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩を含む乾燥粉末組成物、およびＤＰＩを含む。一実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含む。乾燥粉末吸入器は、上記のものであってもよく、単回用量もしくは複数回用量の吸入器であってもよく、および／または予め計量されているかもしくはデバイスで計量されていてもよい。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、単回用量乾燥粉末吸入器である。

【0159】

本発明の別の態様では、それを必要とする患者における肺高血圧症（ＰＨ）を処置するための方法が提供される。本方法は、本明細書に開示される乾燥粉末組成物、すなわち、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩を含む乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、患者の肺に投与するステップを含む。一実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含む。一実施形態では、投与するステップは、ＤＰＩによって乾燥粉末組成物をエアロゾル化して、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を与えることと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を、ＤＰＩによって吸入により患者の肺に投与することとを含む。一部の実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約１０μｍ、約１μｍ～約７μｍ、約１μｍ～約５μｍ、または約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含む。一実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約４０％～約７０％、約３０％～約６０％、または約５０％～約６０％のＦＰＦを有する粒子を含む。

【0160】

世界保健機関（ＷＨＯ）は、ＰＨを５つの群に分類している。群１のＰＨは、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、特発性肺動脈性肺高血圧症（ＩＰＡＨ）、家族性肺動脈性肺高血圧症（ＦＰＡＨ）、および他の疾患に伴う肺動脈性肺高血圧症（ＡＰＡＨ）を含む。例えば、膠原血管病（例えば、強皮症）、体循環と肺循環の間の先天的シャント、門脈圧亢進症および／またはＨＩＶ感染症に伴う肺動脈性肺高血圧症は、群１のＰＨに含まれる。群２のＰＨは、左心疾患、例えば、心房もしくは心室の疾患、または心臓弁膜の疾患（例えば、僧帽弁狭窄）に伴う肺高血圧症を含む。ＷＨＯの群３の肺高血圧症は、肺疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、および／または低酸素血症に伴う肺高血圧症として特徴付けられる。群４の肺高血圧症は、慢性血栓症および／または塞栓症による肺高血圧症である。群４のＰＨは、慢性血栓塞栓性肺高血圧症とも称される。群４のＰＨ患者は、血餅による血管の遮断または狭窄を経験する。群５のＰＨは、「多様な」カテゴリーであり、血液障害（例えば、真性赤血球増加症、本態性血小板血症）、全身障害（例えば、サルコイドーシス、血管炎）および／または代謝障害（例えば、甲状腺疾患、糖原病）によって引き起こされるＰＨを含む。

【0161】

本明細書において提供される方法を使用して、ＷＨＯによって特徴付けされた群１（すなわち、肺動脈性肺高血圧症またはＰＡＨ）、群２、群３、群４または群５のＰＨ患者を処置することができる。本方法の一実施形態では、処置される肺高血圧症は、慢性血栓塞栓性肺高血圧症である。

【0162】

本方法の別の実施形態では、処置される肺高血圧症は、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）である。一部の実施形態では、処置されるＰＡＨは、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）によって特徴付けされたクラスＩのＰＡＨ、クラスＩＩのＰＡＨ、クラスＩＩＩのＰＡＨ、またはクラスＩＶのＰＡＨである。

【0163】

一実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩのＰＡＨである。

【0164】

別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩのＰＡＨである。

【0165】

さらに別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩＩのＰＡＨである。

【0166】

また別の実施形態では、ＰＡＨは、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＶのＰＡＨである。

【0167】

別の態様では、本開示は、それを必要とする患者における門脈肺高血圧症（ＰＰＨ）を処置するための方法を提供する。本方法は、本明細書に開示される乾燥粉末組成物、すなわち、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩を含む乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、患者の肺に投与するステップを含む。一実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含む。一実施形態では、投与するステップは、乾燥粉末組成物を乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）でエアロゾル化して、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を与えることと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を、ＤＰＩにより患者の肺に投与することとを含む。一部の実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約１０μｍ、約１μｍ～約７μｍ、約１μｍ～約５μｍ、または約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含む。一実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約４０％～約７０％、約３０％～約６０％、または約５０％～約６０％のＦＰＦを有する粒子を含む。

【0168】

一部の実施形態では、本開示の方法によって処置されたＰＨ、ＰＡＨ、またはＰＰＨの患者は、以下の治療応答の１つまたは複数を現す：（１）肺血管抵抗係数（ＰＶＲＩ）の処置前の値からの低下、（２）平均肺動脈圧の処置前の値からの低下、（３）低酸素症スコアの処置前の値からの増加、（４）酸素化指数の処置前の値からの低下、（５）処置前と比較して改善された右心機能、および（６）処置前と比較して改善された運動能力（例えば、６分間歩行試験によって測定した場合）。

【0169】

本開示の方法の一実施形態では、ＰＨ、ＰＡＨ、またはＰＰＨの患者は、乾燥粉末組成物を１日に１回投与される。本開示の方法の別の実施形態では、ＰＨ、ＰＡＨ、またはＰＰＨの患者は、乾燥粉末組成物を１日に２回投与される。本開示の方法のまた別の実施形態では、ＰＨ、ＰＡＨ、またはＰＰＨの患者は、乾燥粉末組成物を１日に３回またはそれより多い回数投与される。一実施形態では、投与は食事と共にされる。一実施形態では、各投与は、ＤＰＩからの１～５用量（パフ）、例えば、１用量（１パフ）、２用量（２パフ）、３用量（３パフ）、４用量（４パフ）または５用量（５パフ）を含む。このＤＰＩは、一実施形態では、小型であり、患者によって移動可能である。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、単回用量乾燥粉末吸入器である。

【0170】

また別の態様では、本開示は、それを必要とする患者における肺線維症を処置するための方法を提供する。本方法は、本明細書に開示される乾燥粉末組成物、すなわち、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩を含む乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、患者の肺に投与するステップを含む。一実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。別の実施形態では、乾燥粉末組成物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含む。一実施形態では、投与するステップは、乾燥粉末組成物をＤＰＩでエアロゾル化して、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を形成することと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を、ＤＰＩにより患者の肺に投与することとを含む。一部の実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約１μｍ～約１０μｍ、約１μｍ～約７μｍ、約１μｍ～約５μｍ、または約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含む。一実施形態では、エアロゾル化された乾燥粉末組成物は、ＮＧＩによって測定した場合、約４０％～約７０％、約３０％～約６０％、または約５０％～約６０％のＦＰＦを有する粒子を含む。患者は、一実施形態では、乾燥粉末組成物を１日に１回、１日に２回、または１日に３回もしくはそれより多い回数投与される。一実施形態では、投与は食事と共にされる。一実施形態では、各投与は、ＤＰＩからの１～５用量（パフ）、例えば、１用量（１パフ）、２用量（２パフ）、３用量（３パフ）、４用量（４パフ）または５用量（５パフ）を含む。このＤＰＩは、一実施形態では、小型であり、患者によって移動可能である。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、単回用量乾燥粉末吸入器である。

【実施例】

【0171】

本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに例証される。しかし、上記実施形態と同様に、これらの実施例は、例示であり、本発明の範囲を制限するものとして決して解釈されるべきではないことに留意されたい。
（実施例１）
式（ＩＩ）の化合物（トレプロスチニルパルミチル）を含む吸入可能な乾燥粉末製剤の調製および特徴付け

【0172】

この実施例は、式（ＩＩ）によって表されるトレプロスチニルパルミチルを含むマンニトールおよびトレハロースベースの乾燥粉末製剤、Ｉｎｅｒｔ ＬｏｏｐコンデンサーＢ－２９５および減湿器Ｂ－２９６を備えたＢｕｃｈｉ Ｂ－２９０噴霧乾燥機を使用して噴霧乾燥することによるそれらの調製、ならびにこれらの製剤の特徴付けおよび安定性試験について記載する。

【0173】

構成成分としてトレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／マンニトール／ロイシン（１／０．５／８０／２０、１．５／０．７５／８０／２０、２／１／８０／２０、ｗ／ｗ）を有するマンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤を作ることに成功した。炭酸水素アンモニウムを添加せずに、１－プロパノール／Ｈ_２Ｏ共溶媒系（５０／５０、ｖ／ｖ）にすべての構成成分を溶解することによって、供給ストックを作った。マンニトールベースの乾燥粉末に関する噴霧乾燥収率は、９０％を超えていた。収集した乾燥粉末は、球形粒子、結晶性ＸＲＤプロファイル、および低水分含量を有した。

【0174】

トレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／トレハロース／ロイシン（１／０．５／８０／２０、１／０．５／７０／３０、１．５／０．７５／８０／２０、２／１／８０／２０、ｗ／ｗ）の構成成分を有するトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤は、炭酸水素アンモニウムを添加せずに、１－プロパノール／Ｈ_２Ｏ共溶媒系（５０／５０、ｖ／ｖ）に溶解されたすべての構成成分を含有する供給ストックを噴霧乾燥することによって作った。トレハロースベースの乾燥粉末は、崩れた粒子を含有し、結晶性ロイシンおよび非晶質トレハロースを提示した。トレハロースベースの乾燥粉末は、３カ月にわたって良好な物理的安定性を示した。
材料および方法
１．材料

【0175】

リン酸緩衝食塩水：ＰＢＳ、ＰＨ７．４、カタログ番号１００１０（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，）、または等価物

【0176】

塩化ナトリウム：ＡＣＳ試薬（ＪＴ Ｂａｋｅｒ、カタログ番号３６２８－０５）、または等価物

【0177】

トレプロスチニルパルミチル、式ＩＩ、上記

【0178】

ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：Ｎ－（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標）ＤＳＰＥ－０２０ＣＮ（ＮＯＦ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）、または等価物

【0179】

Ｄ－ラクトース、一水和物、（Ｓｉｇｍａ）

【0180】

Ｌ－ロイシン、（Ｓｉｇｍａ）

【0181】

炭酸水素アンモニウム（Ｓｉｇｍａ）

【0182】

無水エタノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ）

【0183】

１－プロパノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ）
２．装置

【0184】

Ｉｎｅｒｔ ＬｏｏｐコンデンサーＢ－２９５、減湿器Ｂ－２９６、二流体ノズルＩＤ ０．７ｍｍ、および高性能サイクロンセパレーター分離器（Ｂｕｃｈｉ）を備えたＢｕｃｈｉ Ｂ－２９０噴霧乾燥器

【0185】

ＳＥＭ：Ｚｅｉｓｓ－Ｓｉｇｍａ ＦＥ－ＳＥＭ（Ｇｅｒｍａｎｙ）

【0186】

ＸＲＤ：（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）

【0187】

ＤＳＣ ２５０、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ、ＵＳＡ

【0188】

タップ密度試験機、ＪＶ １０００、（Ｃｏｐｌｅｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）

【0189】

ＮＧＩ：次世代インパクター（Ｎｅｘｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔｏｒ）、（ＭＳＰ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＭＮ、ＵＳＡ）

【0190】

ＰＳＤ：ＲＯＤＯＳ／Ｍ、（Ｓｙｍｐａｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）

【0191】

Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定器：Ａｑｕａｓｔａｒ、ＡＱＶ３３、ＥＭＤ。

【0192】

ＤＬＳ：Ｍｏｂｉｕｓ（登録商標）、Ａｔｌａｓ、（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ、ＣＡ）

【0193】

高性能液体クロマトグラフ：Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ Ｍｏｄｅｌ ２６９５。ＨＰＬＣソフトウェア：Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒ（商標）３

【0194】

マグネチックスターラープレート
３．重量比１：０．５：８０：２０でトレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、トレハロース、およびロイシンを含む乾燥粉末製剤の調製

【表1】

ストック溶液の調製：

【0195】

トレプロスチニルパルミチル：１－プロパノール中１０ｍｇ／ｍＬ

【0196】

ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：１－プロパノール中１０ｍｇ／ｍＬ

【0197】

トレハロース：ＤＩ水中１５０ｍｇ／ｍＬ

【0198】

ロイシンストック：ＤＩ水中２０ｍｇ／ｍＬ：
噴霧乾燥供給溶液の調製：

【0199】

表１によれば、噴霧乾燥供給溶液は、トレプロスチニルパルミチルと、トレハロースおよびロイシンの総量との重量比が１：１００で調製した。最終供給溶液は、５０％の１－プロパノールと２０．３ｍｇ／ｍＬの固体を有した（表２）。

【0200】

トレハロースとロイシンストック溶液を最初に水相に添加し、続いて１－プロパノールを添加し、水浴中で超音波処理した。次いで、トレプロスチニルパルミチル（式（ＩＩ））とＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を別々に添加した。全プロセスにわたり、撹拌を適用した。

【表2】

トレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／Ｔｒｅｈ／Ｌｅｕ（１／０．５／８０／２０）を含有するトレハロースベースの乾燥粉末の噴霧乾燥プロセス：

【0201】

以下のパラメーターの下で噴霧乾燥器Ｂｕｃｈｉ Ｂ－２９０を使用して噴霧乾燥を実施した：１５０℃の入口温度、６４℃の出口温度、４１４Ｌ／時の噴霧空気流（３６ｍｍ、ロータメーターの高さ）、吸引速度として３５％ｍ^３／時、および７．５ｍＬ／分の供給速度（２２％）。表３にプロセスのパラメーターをまとめる。

【表3】

４．重量比１：０．５：８０：２０でトレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、マンニトール、およびロイシンを含む乾燥粉末製剤の調製

【表4】

ストック溶液の調製：

【0202】

トレプロスチニルパルミチル：１－プロパノール中１０ｍｇ／ｍＬ

【0203】

ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：１－プロパノール中１０ｍｇ／ｍＬ

【0204】

マンニトール：ＤＩ水中１５０ｍｇ／ｍＬ

【0205】

ロイシンストック：ＤＩ水中２０ｍｇ／ｍＬ
噴霧乾燥供給溶液の調製：

【0206】

表４によれば、トレプロスチニルパルミチルと、マンニトールおよびロイシンの総量との重量比が１：１００で噴霧乾燥供給溶液を調製した。最終供給溶液は、５０％の１－プロパノールと２０．３ｍｇ／ｍＬの固体を有した（表５）。

【0207】

マンニトールとロイシンストック溶液を最初に水相に添加し、続いてプロパノールを添加し、水浴中で超音波処理した。次いで、トレプロスチニルパルミチルとＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を別々に添加した。全プロセスにわたり、撹拌を適用した。

【表5】

トレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００／マンニトール／Ｌｅｕ（１／０．５／８０／２０）から構成されるマンニトールベースの乾燥粉末の噴霧乾燥プロセス：

【0208】

以下のパラメーターの下で噴霧乾燥器Ｂｕｃｈｉ Ｂ－２９０を使用して噴霧乾燥を実施した：１３５℃の入口温度、６０℃の出口温度、４１４Ｌ／時の噴霧空気流（３６ｍｍ、ロータメーターの高さ）、吸引速度として３５％ｍ^３／時、および７．５ｍＬ／分の供給速度（２２％）。表６にプロセスのパラメーターをまとめる。

【表6】

５．乾燥粉末の特徴付け
表面電子顕微鏡（ＳＥＭ）

【0209】

乾燥粉末試料（入手時のもの）をカーボンテープにかけ、次いで、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＥＭＳ１５０Ｔ ＥＳ）スパッターコーターを使用して２０ｎｍの金（Ａｕ）でコーティングした。電界放射型走査電子顕微鏡（ＦＥ－ＳＥＭ）を使用して、５ｋｅＶの作動電圧を有するＺｅｉｓｓ－Ｓｉｇｍａ ＦＥ－ＳＥＭ（Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して粒子形態を観察した。動作距離を８～１０ｍｍに保ち、比較的高い解像度を得た。
Ｘ線回折試験（ＸＲＤ）

【0210】

乾燥粉末試料（入手時のもの）をゼロ－バックグラウンド試料ホルダーに詰め、次いで、１分当たり０．０４ラジアン（ｒａｄ）の度合いの走査速度のＣｕ Ｋα（λ＝１．５４０５９８Å）放射を有する４５ｋＶおよび４０ｍＡのＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ） Ｘ’Ｐｅｒｔ回折計を使用して、構造上の特徴を評価するためにＸ線回折（ＸＲＤ）を用いた。走査範囲は、４°～４０°の度合い（２θ）であり、１ステップ当たりの時間が９７．９２秒および０．０１３１°のステップサイズであった。
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）

【0211】

およそ５～１０ｍｇの乾燥粉末をＤＳＣ試料パンに秤量し、次いで、密閉シールした。以下のように試験を実施した：２０℃で平衡化、モジュレーション温度０．３２℃で６０秒、等温１．０分、勾配５℃／分～１８０．０℃。
レーザー回折による粒径分布（ＰＳＤ）

【0212】

およそ１５ｍｇ～２０ｍｇの乾燥粉末を必要とされるガラス管に入れた。Ｓｙｍｐａｔｅｃｈ－ＨＯＬＯＳ－ＲＥＤＯＳモードを使用した。試験パラメーターは以下の通りであった：

【表1A】

水分含量試験（Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ）

【0213】

乾燥粉末中の水分含量をＫａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒを使用して分析した。おおよそ３０ｍｇの試料を秤量し、滴定容器に移した。装置、材料および作動パラメーターは、以下に記載したように使用した：
材料／装置：
（１）滴定装置：関連する天秤を有する、５ｍＬビュレットを備え付けたＡｑｕａｓｔａｒ ＡＱＶ３３ Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定器
（２）天秤：Ａｑｕａｓｔａｒ滴定器に接続することが可能なインターフェースを有する最大小数点以下４桁まで秤量することが可能な化学天秤。
（３）Ｗａｔｅｒ Ｓｔａｎｄａｒｄ １％ ＮＩＳＴ
（４）乾燥剤（Dessicant）１００％指示、またはモレキュラーシーブ、タイプ４Ａ、１／１６ペレット
（５）リントフリーのクロス、キムワイプ
（６）秤量ボート
（７）シリンジ ３ｍＬ
溶液：
（１）滴定液：Ａｑｕａｓｔａｒ ＣｏｍｂｉＴｉｔｒａｎｔ ２
（２）溶媒：６０／４０のメタノール／ホルムアミド
機器のパラメーターおよび条件：
（１）ドリフト：＜５０μｇ／分
（２）撹拌速度：４０％
（３）混合時間：３００秒
（４）終了：相対的ドリフト
かさおよびタップ密度

【0214】

タップ密度試験機、ＪＶ １０００（Ｃｏｐｌｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）によって密度試験を実施した。以下の手順を続けた。ガラス管を清浄化し、圧縮空気で乾燥させる；ガラス管を秤量し、Ｗ１と記録する；乾燥粉末をガラス管に移し、高さをＡと印付け、重量をＷ２と記録する；パラフィルムで上部を密封する；ガラス管を５ｍＬのメスシリンダーに入れ、１０分間タッピングする；タッピング後に高さをＢと印付ける；粉末を管から取り除き、清浄化し、圧縮空気で乾燥する；ガラス管を秤量し、Ｗ３と記録する；Ｂのレベルまで水を添加し、重量をＷ５と記録する；Ａのレベルまで水を添加し、重量をＷ４と記録する。（水の密度は１ｇ／ｍＬに等しいと仮定する）

【表1B】

ＮＧＩを使用する空気力学的粒径分布（ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）（ＡＰＳＤ）

【0215】

サイズ３のＶｃａｐｓ ＨＰＭＣカプセルに充填したおよそ２０ｍｇの粉末を、市販の吸入器（Ｐｌａｓｔｉａｐｅ ＲＳ０１）によって、６０Ｌ／分の体積流量で操作され、４秒間作動させた次世代カスケードインパクター（ＮＧＩ）（Ｃｏｐｌｅｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）中に分散させた。ＮＧＩ器械から各段階で収集した薬物含量をＨＰＬＣ－ＭＳで評価した。ＮＧＩ中に沈着した薬物塊（＜５μｍ）として微粒子率（ＦＰＦ）を定義し、排出量（ｅｍｉｔｔｅｄ ｄｏｓｅ）で除した。
ＨＰＬＣアッセイ

【0216】

ＰＤＡ検出器（Ｗａｔｅｒｓ ２９９６）とコロナ荷電化粒子検出器（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を備えたウォーターズアライアンスモデル２６９５を使用して、トレプロスチニル（ＴＲＥ）およびトレプロスチニルパルミチルの濃度を決定した。
カラム：ＡＣＥ ３ Ｃ８ ＨＰＬＣカラム ４．６×５０（Ｍａｃ－Ｍｏｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ、カタログ番号ＡＣＥ１１２０５４６）
カラム温度：２５℃
移動相Ａ：アセトニトリル２５％、メタノール２５％、水５０％、ギ酸０．１％、トリエチルアミン０．０１％
移動相Ｂ：アセトニトリル５０％、メタノール５０％、ギ酸０．１％、トリエチルアミン０．０１％
流量：１ｍＬ／分
ＴＲＥを測定するためのグラジエント：
注入体積：５０μＬ
ＵＶ波長：２７０±２．４ｎｍ
試料および標準物質をアセトニトリル３３％、メタノール３３％、水３３％中に溶解させた
カリブレーションは、検出力関数Ｌｏｇ（面積）＝Ａ＋Ｂ^＊Ｌｏｇ（濃度）により近似した。
保持時間 ＴＲＥ 約１．８分、Ｃ１６ＴＲ 約７．６分
総記録時間 ９分
結果
１．マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のバッチ

【0217】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の様々なバッチを噴霧乾燥によって調製した。これらのバッチでは、乾燥粉末中のトレプロスチニルパルミチルの量は１～５％（重量比、ｗ／ｗ）で変化したが、トレプロスチニルパルミチルとＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００との比は２対１に保たれた。ロイシン含量は、乾燥粉末の０～３０％（ｗ／ｗ）の間の範囲である。炭酸水素アンモニウムの効果も調査した。噴霧乾燥プロセスの間に、入口温度は１２０℃～１５０℃に変化した。表７Ａは、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の様々なバッチに関する組成および入口温度を示す。各バッチについて、トレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、マンニトール、およびロイシンの量を重量比で表示する。トレプロスチニルパルミチルとロイシンの量も、重量比でのそれらの比率によって表されるそれらのおおよその重量パーセンテージで表示する。表７Ｂは、重量比に基づいて計算した、各バッチにおけるトレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、マンニトール、およびロイシンの標的重量パーセンテージを示す。

【表7A】

【表7B】

１．１．噴霧乾燥回収に対するロイシン含量の効果

【0218】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の特性に対するロイシンの効果を評定した。４つのロイシン負荷量、すなわち０％、１０％、２０％および３０％について評定した。ロイシン含量の低下を補うために、マンニトール負荷量の増加を適用した。

【表8】

【0219】

ロイシンを含有しないバッチからの噴霧乾燥回収（％）は低かった。回収率は、ロイシンレベルが１０％および２０％まで増加すると、有意に増加した。その後、ロイシン含量が３０％までさらに増加すると、回収率はわずかに下降した（図１）。２０％のロイシンを含むバッチが、粉末密度に関して最も高い値を有した（表８）。
１．２．粉末の形態に対するロイシン含量（３０％、２０％、１０％および０％）の効果、

【0220】

粉末表面に対するロイシン含量の効果を検査するためにＳＥＭを実施した（図２Ａ～２Ｄ）。ロイシン含量の変化は、マンニトール対ロイシンの様々な重量比、すなわち７０／３０、８０／２０、９０／１０、および１００／０をもたらした。

【0221】

マンニトール対ロイシンの様々な重量比（７０／３０、８０／２０、９０／１０、および１００／０）を有するトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末試料を作製した。ＳＥＭデータは、ロイシン含量が２０％～３０％に増加することにより、しぼ面を有する粉末が生じることを示した（図２Ａおよび２Ｂ）。ロイシンを含まない乾燥粉末は、低回収率のものと一緒に、噴霧乾燥後に砕かれた（図２Ｄ）。さらなる研究では、２０％のロイシンを使用した。
１．３．ＰＳＤに対するロイシン含量の効果（レーザー回折によって試験した）

【0222】

１０、２０および３０％のロイシン（ｗ／ｗ）を含有するマンニトールベースの乾燥粉末の３つのバッチをレーザー回折によって調査した。バッチの情報を表９に示した。

【表9】

【0223】

図３に示されるように、２０％のロイシンを含む製剤が最も小さな粒径（Ｄ５０）を有した。２０％のロイシンを含む製剤をこの実施例のさらなる研究において使用することになる。
１．４．ＭＭＡＤに対する様々な量のトレプロスチニルパルミチルの効果

【0224】

様々な量のトレプロスチニルパルミチルを、乾燥粉末の特性に対するそれらの効果を調査する目的で、マンニトールベースの乾燥粉末製剤に加えた。表１０に示されるように、１％～５％の範囲に及ぶトレプロスチニルパルミチルを有し、トレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００の重量比が２：１の乾燥粉末の５つのバッチを調製した。

【表10】

【0225】

ＭＭＡＤの値は、乾燥粉末中に１～２％のトレプロスチニルパルミチルが存在する場合に一定であり、トレプロスチニルパルミチルが３～５％に増加すると有意に増加した（図４）。
１．５．粉末の形態に対する１５０℃、１３５℃および１２０℃の噴霧乾燥入口温度の効果

【0226】

同じ構成成分比を有するマンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を異なる入口温度、すなわち１５０℃、１３５℃、および１２０℃で作製した（表１１）。乾燥粉末の形態に対する入口温度の効果を最初に調査した。ＳＥＭによって、１３５℃と１２０℃のより低い入口温度で噴霧乾燥した乾燥粉末試料において、より少ない表面の破壊しか存在しないことが明らかになった（図５Ａ～５Ｃ）。１３５℃と１２０℃の間に有意差は認められなかったため（図５Ｂおよび５Ｃ）、１３５℃の入口温度をさらなる調査において使用した。

【表11】

１．６．マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の形態に対する供給ストックにおける炭酸水素アンモニウム（ＡＢＣ）の効果

【0227】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の形態に対するＡＢＣの効果を、乾燥粉末を調製する際に供給ストックにＡＢＣを添加するか、または添加しないことによって検査した（表１２）。ＡＢＣの添加によって粉末表面の変化は観察されなかった（図６Ａおよび６Ｂ）。したがって、ＡＢＣは、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末に適用されないであろう。

【表12】

１．７．マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の物理化学特性

【0228】

すべての構成成分を含有する溶液を噴霧乾燥することによって、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を作製した。マンニトールベースの乾燥粉末が、ＤＳＣ試験におけるＴｇおよび粉末Ｘ線回折試験（ＸＲＤ）における広範なピークなどのいくつかの非晶質特性を示すことが予想された。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ、１％のトレプロスチニルパルミチルおよび２０％のロイシンを有するバッチＳＤ－ＮＮＰ－１７９からのＤＳＣおよびＸＲＤのデータを示した。このバッチから、Ｔｇは検出されず、粉末ＸＲＤにおける鋭いピークが観察された。これら２つの特徴は、組成および噴霧乾燥条件の差異にかかわらず、他のバッチからも認識された。
２．トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のバッチ

【0229】

様々なバッチのトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を、噴霧乾燥を使用して作った。表１３Ａは、バッチの組成および噴霧乾燥プロセスに使用した入口温度を示す。各バッチについて、トレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、トレハロース、およびロイシンの量を重量比で表示する。表１３Ｂは、重量比に基づいて計算した、各バッチにおけるトレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、トレハロース、およびロイシンの標的重量パーセンテージを示す。これらのバッチは、トレプロスチニルパルミチル含量が１～２％（重量比、ｗ／ｗ）で変化したが、トレプロスチニルパルミチル対ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００の比は、２対１で同じに保たれた。これらのバッチにおけるロイシン含量は、２０％または３０％（ｗ／ｗ）であった。噴霧乾燥プロセス中、入口温度は１１０℃～１５５℃に変化した。

【表13A】

【表13B】

２．１．粉末の形態に対するロイシン含量の効果

【0230】

２種のレベルのロイシン（２０％および３０％）を含むトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を調製した（表１４）。ＳＥＭデータは、ロイシン含量が２０％～３０％に増加することにより、しわのよった粉末表面が生じることを示した（図８Ａおよび８Ｂ）。
２．２．粉末のエアロゾル性能に対するロイシン含量の効果

【0231】

本発明者らは、２種のレベルのロイシン、すなわち２０％および３０％をトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末に加え、それらの粒径（Ｄ５０、レーザー回折）およびＭＭＡＤを比較した（表１４）。

【表14】

【0232】

表１４のデータは、３０％のロイシンを含む乾燥粉末が、２０％のロイシンを含むものと比較して、より大きな幾何粒径（Ｄ５０）ならびに喉およびプレセパレーターへの粉末のより少ない沈着を有したことを表示している。ロイシンの可溶性が低いことが、ロイシンが最初に沈殿することの原因であろう。ロイシンの量がより多いことによって、より早い沈殿が誘発され、より大きな粒子が作製されるであろう。しかし、ＭＭＡＤには有意差がなかった。
２．３．乾燥粉末のエアロゾル性能に対するトレプロスチニルパルミチル含量の効果。

【0233】

様々な量のトレプロスチニルパルミチルを、乾燥粉末の特性に対するそれらの効果を調査する目的で、トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末に加えた。表１５に示されるように、乾燥粉末の４つのバッチを１％～２％の範囲のトレプロスチニルパルミチル含量で調製し、トレプロスチニルパルミチル／ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００の重量比を２：１に固定した。

【表15】

【0234】

乾燥粉末中により多くのトレプロスチニルパルミチルを含むと、ＭＭＡＤと喉およびプレセパレーターへの沈着とは増加したが、微粒子率（ＦＰＦ）は低下した（表１５）。
２．４．粉末の形態に対する噴霧乾燥入口温度の効果

【0235】

噴霧乾燥プロセスにおける入口温度は、水分含量、粒径および粉末の形態などの乾燥粉末の特性に影響を及ぼすことが期待された。１３０℃と１５０℃の２つの入口温度を、表１６に示したトレハロースベースのビヒクル乾燥粉末のバッチを用いて調査した。

【表16】

【0236】

ＳＥＭによって、１５０℃の高い入口温度によって粉末が砕かれたことが明らかになった（図９Ａ～９Ｃ）。しかし、最終乾燥粉末における高水分を防ぐために、トレプロスチニルパルミチルを含有するトレハロースベースの乾燥粉末に対して１５０℃を使用することになる。
２．５．トレハロースベースの乾燥粉末の物理化学特性

【0237】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末と同様に、トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を、構成成分のすべてを含有する溶液を噴霧乾燥することによって生成した。乾燥粉末が、ＤＳＣにおけるＴｇおよび粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）における広範なピークなどのいくつかの非晶質特性を示すことが予想された。

【0238】

表１７に示したトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のバッチをＤＳＣおよびＸＲＤに供した。ＤＳＣ試験では、すべてのバッチについて、６４℃～８０℃の範囲に及ぶＴｇを観察した。粉末が、バッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２およびＳＤ－ＮＮＰ－１６３において観察されたように、一晩の凍結乾燥によって２回目の乾燥を経た場合に、乾燥粉末中の水分が低下するために、Ｔｇは上昇し得る（図１０Ａ）。マンニトールベースの乾燥粉末由来のＸＲＤと比較して、トレハロースベースの乾燥粉末由来のものは、鋭いピークをあまり示さず（図１０Ｂ）、これはトレハロースの非晶質状態に原因を帰した。これらのバッチはすべて、構成成分の重量比および噴霧乾燥条件の差異にかかわらず、類似するＸＲＤデータを示した。表１７は、ＭＭＡＤ、ＦＰＦ、および喉＋プレセパレーターへの沈着を含む乾燥粉末のバッチのさらなる特性を示す。

【表17】

３．マンニトールおよびトレハロースベースの乾燥粉末の動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）プロファイル

【0239】

製品を不安定にし、パッケージングの問題を引き起こす水分を、噴霧乾燥、パッケージング、および保管中に乾燥粉末製剤に加えてもよい。噴霧乾燥の際に、乾燥粉末中の水分は、２回目の乾燥によって低減され得る。しかし、パッケージング中に、粉末は、たとえ湿度制御条件下であっても、環境に曝露された場合に水分を吸収する場合がある。マンニトールおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の水分吸収を検査した。

【0240】

図１１に示されるように、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末は、ＲＨ％が０～４０％に増加した場合、最大０．３％の水分を吸収し得る。ラクトースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末と比較して、マンニトールベースの乾燥粉末は、はるかに少ない水分しか吸収せず、これはおそらく、マンニトールベースの乾燥粉末が結晶性マンニトールとロイシンを含有しており、両方の安定形態が非水和形態であるためである。

【0241】

トレハロースベースの乾燥粉末に関する水分吸収プロファイルを図１２（２０％のロイシンを含む粉末）および図１３（３０％のロイシンを含む粉末）に示す。トレハロースベースの乾燥粉末の重量変化は、５０％のＲＨ％でピークに達した。その後、トレハロースの物理的形態が非晶質から結晶に変わることにより水分の取り込みが下降した。２０％および３０％のロイシンを含む粉末製剤は同様の水分取込みデータを有したが、後者の製剤は１％の未満の吸収しか有さなかった。しかし、脱着プロセスにおける差異は有意であった。３０％のロイシンを含む粉末は、０％のＲＨ％でより高い水分残量を提示した。
４．マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末に関する安定性試験

【0242】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末に関する安定性試験を、湿度制御なしで、３カ月にわたり４０℃で実施した。１、１．５、２、３および５％のトレプロスチニルパルミチルを含有する、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の５つのバッチを調査した（表１８）。ＮＧＩ試験によって、一般に、乾燥粉末のＭＭＡＤが２か月の時点で急激に上昇し、その後１カ月の時点のものに類似するレベルに戻ることを示した（図１４）。ＳＥＭデータは、密集した小さな線維が粉末表面で増えることを示した（図１５Ａ、１５Ｂ、１６Ａ、１６Ｂ、１７Ａ、１７Ｂ、１８Ａ、および１８Ｂ）。

【表18】

【0243】

表１９は、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のバッチの安定性データの詳細を示す。２０％のロイシンを含有するマンニトールベースの乾燥粉末のバッチのすべてにおいて、ＭＭＡＤとＦＰＦの有意な変化が観察された。さらに、初期ＭＭＡＤは、３および５％のトレプロスチニルパルミチルを含む乾燥粉末のものと比較して、１、１．５、および２％のトレプロスチニルパルミチルを含む乾燥粉末に関してより低かった。

【表19】

５．トレハロースベースの乾燥粉末に関する安定性試験

【0244】

２０％または３０％のロイシンおよび１％～２％の範囲に及ぶトレプロスチニルパルミチルを含むトレハロースベースの乾燥粉末製剤に関する安定性試験も、マンニトールベースの乾燥粉末製剤に関するのと同じ条件下で実施した。３．５カ月の研究期間にわたり、有意な変化は観察されなかった（表２０ならびに図２１Ａ、２１Ｂ、２２Ａ、２２Ｂ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ａ、および２４Ｂ）。

【表20】

【0245】

表２１は、トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のバッチの安定性データの詳細を示す。バッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２およびＳＤ－ＮＮＰ－１８８についてＭＭＡＤは有意に増加した（表２１および図１９）。ＦＰＦ値は、バッチＳＤ－ＮＮＰ－１６２では最も著しく低下した（図２０）。バッチＳＤ－ＮＮＰ－１６３（トレプロスチニルパルミチル１％、ロイシン３０％）は最も低く安定したＭＭＡＤと最も高く安定したＦＰＦを示した。

【表21】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の知見の概要

【0246】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末において、ロイシンの添加は、高い噴霧乾燥回収率をもたらした。２０％のロイシンを含むマンニトールベースの乾燥粉末は、球形の粒子形状および低い幾何直径（Ｄ５０＝２．７５μｍ）をもたらした。

【0247】

噴霧乾燥プロセスにおいて、１２０℃～１５０℃で変化した入口温度は、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の形態に影響を与えなかった。１３５℃で生成した乾燥粉末由来の水分含量がおよそ１％であったため、入口温度を１３５℃に設定した。

【0248】

ＤＳＣ試験において、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末からガラス転移は検出されず、このことは、Ｘ線回折試験（ＸＲＤ）の結果が結晶性物質を表示すことを支持した。さらに、噴霧乾燥したマンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末はほとんど吸湿性（hydroscopic）ではなく、９０％のＲＨ％で１％未満の水分しか吸収しなかった。

【0249】

マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の安定性試験において、１～２％のトレプロスチニルパルミチルを含む製剤では２カ月の時点で、より高いトレプロスチニルパルミチル含量を含む製剤では１カ月の時点で、ＭＭＡＤが急激に上昇した。その後の時点ではＭＭＡＤは下降した。すべての製剤は、保存後に粉末表面に線維を示した。
トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤に関する知見の概要

【0250】

３０％のロイシンを含有するトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末は、２０％のロイシンを含有するものと比較して、しわのよった表面ならびに喉およびプレセパレーターへの粉末の沈着の低下を有した。しかし、２つの間のＭＭＡＤに有意差は存在しなかった。

【0251】

噴霧乾燥プロセスにおける入口温度は、最終乾燥粉末中のより低い水分含量を達成するために、１５０℃を選択した。

【0252】

６４～８０℃の範囲のガラス転移温度（Ｔｇ）が観察され、これは、乾燥粉末中のトレハロースの非晶質状態を表示した。トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末は、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末と比較して、より高い水分の吸収を示した。

【0253】

安定性試験において、試験したトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のほとんどは、ＦＰＦの有意な変化を提示しなかった。すべての製剤は、保存後に粉末表面に毛髪様結晶を示した。

【0254】

まとめると、この実施例のデータは、最大２ｗｔ％の範囲のトレプロスチニルパルミチル含量がトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の物理特性に影響を及ぼさなかったことを表示している。３および５ｗｔ％のトレプロスチニルパルミチルでは、マンニトールベースの粉末の初期ＭＭＡＤの増加が認められた。ロイシン含量は、乾燥粉末のエアロゾル特性に対して重要であることが分かった。
（実施例２）
吸入可能なマンニトールおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の製造、カプセル化、および特徴付け

【0255】

この実施例は、４種のトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤、すなわち製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの噴霧乾燥およびカプセル化による製造について記載する。製剤ＡおよびＤはマンニトールベースであり、重量比と重量比に基づいて計算された標的重量パーセンテージの両方におけるそれらの組成を表２２に示す。製剤ＢおよびＣはトレハロースベースであり、重量比と重量比に基づいて計算された標的重量パーセンテージの両方におけるそれらの組成を表２３に示す。この実施例はまた、粒径、形態、水含量、溶媒含量、物理的状態、水蒸気吸着プロファイル、熱特性、および温度の関数としての重量損失に関する製剤Ａ～Ｄの特徴付けについて記載する。

【表22】

【表23】

１．製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの噴霧乾燥による製造

【0256】

それぞれおおよそ５５グラムの製造中の固体を用い、ＢＬＤ－２００噴霧乾燥機を使用して、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤを製造した。各条件間で、ブランク溶媒溶液を噴霧して、前の製剤が溶液ラインから片付けられたことを保証した。これらの条件間でさらなる噴霧乾燥機の洗浄は実行しなかった。

【0257】

４種の製剤のそれぞれを独立した溶液として調製した。光から保護せずに室温で溶液を調製した。各溶液の調製のために、以下のステップを実施した：
１．ロイシンを脱イオン水に溶解させた。
２．糖（マンニトールまたはトレハロース）を脱イオン水に溶解させた。
３．水性溶液を０．２μｍのＰＶＤＦ膜を通して濾過した。
４．ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を１－プロパノールに溶解させた。
５．トレプロスチニルパルミチルを１－プロパノールに溶解させた。
６．有機溶液を撹拌水溶液に添加した。

【0258】

噴霧乾燥製剤およびプロセス条件を表２４に列挙する。製造収率は、５４～８０質量％の範囲に及んだ。各製剤のバルク乾燥粉末のパッケージングを乾燥グローブボックス内で実行した。

【表24】

２．粉末のカプセル化

【0259】

エクセロドーズ６００Ｓを使用して、乾燥粉末製剤をカプセル化し、製剤当たり５０～５１個のカプセルに充填した。好適な相対湿度は３０％未満であった。カプセル化の概要を表２５に示す。例えば、各カプセルに、１１２．５μｇのトレプロスチニルパルミチル、５６．２μｇのＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、５１３３．８μｇのマンニトール、および２１９７．５μｇのロイシンを充填することによって、製剤Ｄの典型的なバッチ（１．５０ｗｔ％のトレプロスチニルパルミチル、０．７５ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、６８．４５ｗｔ％のマンニトール、および２９．３０ｗｔ％のロイシンを含有する）から、カプセルを作った。上記で表示したように典型的なｗｔ％値の±５％で独立して変化するかまたはその±５％以内の、各構成成分に関するｗｔ％を有する製剤Ｄの他のバッチは、同等の特性および性能を有することが観察された。カプセルをガラスジャーに収集し、０．５ｇの分子篩乾燥剤と共にフォイルバッグ中に熱で密封した。

【表25】

３．分析による特徴付け

【0260】

粒径分布、粒子形態、水含量、残留溶媒、物理的状態、水分吸着および熱特性について、４つの製剤のそれぞれを評定した。結果の概要を表２６に示す。

【表26】

３．１．粒径分布

【0261】

これらの製剤は呼吸送達の標的とされたため、標的粒径は５μｍ未満であるべきであった。粒径分布は、シロッコ２０００乾燥粉末分散ユニットを有するマルバーンマスターサイザー２２０００上で、レーザー回折によって測定した。すべての試料に関する初期圧力滴定スクリーニングを方法の開発のために実施し（ｎ＝１）、結果は、使用される３つの分散空気圧（２．５、３．０および３．５バール）間でほぼ同一であることが観察された（図２５）。この初期スクリーニングに基づき、３．０バールの分散空気圧でさらに２つの複製（ｎ＝２）を測定した。図２６および表２７に示した分布で結果を平均化した。これらの測定値について、Ｆｒａｕｎｈｏｆｅｒの近似モデルを使用した。供給率６５％、バックグラウンド測定時間１０秒および試料測定時間３０秒で小型の試料トレーを使用した。オブスキュレーションフィルタリングによって、１～６％の間のデータを捕捉することが可能となった。

【表27】

３．２．粒子形態

【0262】

４つの製剤を、それぞれ、日立ＳＵ３５００走査電子顕微鏡を使用して、５００、１５００、および５０００倍で画像化した。５０００倍で撮影した画像を図２７（製剤Ａ）、図２８（製剤Ｂ）、図２９（製剤Ｃ）および図３０（製剤Ｄ）に示す。すべての製剤は、おおよそ３μｍまたはそれより小さい直径の完全な球形および凹んだ球形の粒子を含有し、レーザー回折の結果と一致した。製剤Ｃは最もしわがよっているようであったのに対し、製剤Ａは最も「平滑」であったようであった。表面粗さはエアロゾル性能を改善し得る。すべての製剤について、粒子の有意な結晶性表面の形成または融合は観察されなかった。
３．３．水含量

【0263】

これらの製剤は、水を含む溶剤混合物から噴霧乾燥したため、メトロノーム８７４オーブンサンプルプロセッサを使用して試料の水含量を分析した。最初に、３つのブランクと３つの水標準物質を試験し、試料を試験する前にシステム適合性を決定した。２０ミリグラムの試料（ｎ＝３の複製）を、各製剤について、５０℃の開始温度から２．５℃／分の加熱速度で１４０℃に加熱した。すべての製剤に関する水含量は、表２８に示されるように３質量％未満であった。トレハロースを含有する製剤（ＢおよびＣ）は、マンニトールで製剤化したもの（ＡおよびＤ）よりも高い水含量を提示した。より高いロイシン含量を含有する製剤（ＣおよびＤ）もより高い水含量を提示した。

【表28】

３．４．残留溶媒

【0264】

噴霧溶媒中の他の構成成分は１－プロパノールであったため、Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０ガスクロマトグラフィーシステム上でヘッドスペース法を使用して、１－プロパノールの残留量を決定した。すべての試料が０．５質量％未満の１－プロパノールしか有さず（表２９）、より多くのロイシンを含む製剤（ＣおよびＤ）は、マンニトールを含有する製剤（ＡおよびＤ）と同様により少ない残量の１－プロパノールを有した。

【表29】

３．５．粉末のＸ線回折

【0265】

リガクＭｉｎｉＦｌｅｘ ６００粉末Ｘ線回折計を使用して、試料の結晶性を評価した。０．２ｍｍのゼロバックグラウンドホルダー（ＺＢＨ）ディスク上で試料を調製し、３～４０ ２θの機器にランした。製剤ＡおよびＤは、結晶性マンニトール（多形混合物と同様に）およびロイシンを提示したが、製剤ＢおよびＣは、非晶質トレハロースと共に結晶性ロイシンを提示した。

【0266】

構成成分は、噴霧乾燥された製剤と比較して、原材料と異なる回折強度を提示し得る。マンニトールを含有する製剤は、類似する回折パターンを有するようであった。トレハロースを含有する製剤もまた、類似する非晶質回折パターンを有するようであった。
３．６．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）

【0267】

熱転移を使用して、製剤の安定性を予測することができる。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ２０００示差走査熱量測定計上で、４つの製剤を走査させた。これらを密封シールし、機器にランする前に、試料を一晩乾燥環境（５％ＲＨ未満）中で平衡化した。０～１８０℃まで２．５℃／分の加熱勾配速度で、モジュレーションを±１．５℃／分に設定した。６４℃での熱事象をすべての試料について観察し、この事象はトレプロスチニルパルミチルまたはＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００の融解に相当し得る。

【0268】

熱安定性の陽性指標である結晶化事象は、これらの試料では観察されなかった。マンニトールベースの製剤（ＡおよびＤ）についてガラス転移は検出されず、これは、結晶性物質に関する粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）の結果を支持した。製剤ＡおよびＤは１６４℃で融解し、マンニトールの融解温度と一致した。製剤ＢおよびＣは、おそらく非晶質トレハロースにより、８３℃でガラス転移を提示した。製剤Ｂはまた、他の試料では観察されなかった、１３３℃および１５８℃で熱事象を有した。
３．７．熱重量分析（ＴＧＡ）

【0269】

製剤に関する熱分解データを、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ 熱重量分析計を使用して測定した。２．５℃／分の速度で０～３００℃まで試料をランした。１８０℃以降で、製剤は急速に分解し始めた。重量変化はおよそ１００℃で観察され、水含量に相当した。
３．８．動的水蒸気吸着

【0270】

Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ １上で、水の吸着および脱着プロファイルを測定した。１０％ＲＨの段階変化で、０～９０％ＲＨまで２５℃で試料をランした。４つの製剤すべてが、製剤によって、およそ５０％または６０％ＲＨで開始する重量変化事象を有したようであった。結晶化後の水吸着速度を評価するために、試料に関して２回目のサイクルを実施した。これらの試料はいずれも、２回目のサイクル中に変化が観察されず、ほとんどの試料は最終脱着ステップ中に水を保持しなかった。

【0271】

製剤Ｄから得られた吸着結果は、製剤Ａから得られた結果と比較して、より高い湿度（およそ７０％ＲＨ）での変化を表示している。製剤Ａと比較して、製剤Ｄの質量のわずかな損失がおよそ５０％ＲＨで観察され、これは、より高い湿度からのさらなる水分の吸着を伴っても継続的に質量を喪失するようであった。

【0272】

トレハロース製剤に関する取込み速度は、４０％の相対湿度で水分平衡に到達するのにおよそ５０～９０分（ロイシン含量のレベルに依存する）かかることを表示している。より低いロイシン含量では、より高いロイシン含量を有するものよりも速く水分を取り込んだ。
３．９．ＮＧＩによる空気力学的粒径分布（ＡＰＳＤ）によって評価した製剤Ａ、Ｃ、およびＤのカプセルのエアロゾル性能

【0273】

トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａ、Ｃ、およびＤのカプセルを、２５℃または４０℃で１～３カ月間保存した。カプセル化された乾燥粉末の外観の変化、例えば、褐変または明らかな増大または硬度の変化はなかった。レーザー回折によって測定した乾燥粉末製剤の粒径分布（ＰＳＤ）は、２５℃または４０℃で３カ月の保存後にも影響を受けなかった。

【0274】

トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａ、Ｃ、およびＤをカプセル化し、このカプセルを４０℃で１カ月、２カ月、もしくは３カ月保存するか、または２５℃で３カ月保存した。保存したカプセルからの製剤の微粒子量（ＦＰＤ）およびこれらの製剤の初期（Ｔ＝０）のＦＰＤをＮＧＩによって測定した。トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ａ、Ｃ、およびＤを４０℃または２５℃で３カ月間バルクとしても保存し、次いでカプセル内に充填し、同日にＦＰＤを決定するために投薬した。製剤Ａ、Ｃ、およびＤに関するＦＰＤの結果を、それぞれ図３１、３２、および３３に示す。これらのデータは、２５℃で３カ月間カプセル内で保存した後、製剤ＤがＦＰＤの最も少ない変化（－３．７％）を有したことを表示している。さらに、製剤Ｄは、２５℃で３カ月間バルクとして保存し、カプセル内に充填し、同日に投薬した場合、ＦＰＤの－５．２％の変化を有した。さらに、製剤Ａ、Ｃ、およびＤのそれぞれについて、４０℃での保存は、ＦＰＤによって測定した場合、エアロゾル性能に対する２５℃での長期保存の予測はないようであった。これらのデータに基づいて、エアロゾル性能を修正するための粉末またはカプセルの条件付けまたは前処理は必要とされない。

【0275】

上記カプセルからの製剤Ａ、Ｃ、およびＤの排出量および総回収率も決定し、結果を表３０に示した。

【表30】

【0276】

上記データは、製剤Ｄを、２５℃で３カ月間カプセル内で保存した後、および２５℃で３カ月間バルクとして保存し、その後カプセル内に充填し、同日に投薬した後に、排出量の最小の変化しか呈さなかったことを表示している。まとめると、エアロゾル性能の変化に基づいて、製剤Ｄは、２５℃で少なくとも３カ月間安定であるようである。さらに、安定性データは、今日まで、２～８℃で保存した場合に６カ月の貯蔵寿命を支持する。
（実施例３）
加速保存条件下でのトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤のエアロゾル性能の決定および該乾燥粉末製剤の吸入後のラットにおける肺の薬物動態プロファイル

【0277】

重量比が１：０．５：７０：３０のトレプロスチニルパルミチル、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、トレハロース（Ｔｒｅｈ）およびロイシン（Ｌｅｕ）から構成されるトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を、実施例１に記載したようにＢｕｃｈｉ Ｂ－２９０システムを使用する噴霧乾燥によって生成した。加速安定性研究のために、乾燥粉末を、４０℃および制御されていない周囲湿度で、密封されたガラスバイアル中で保存した。粉末のエアロゾル性能を保存の１．５、２．５、および３．５カ月後に測定した。
方法および材料
１．動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）研究

【0278】

動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）自動化重量吸着システム（ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ１ Ｐｌｕｓ、Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ、ＰＡ、ＵＳＡ）を使用して、水分吸収曲線を得た。おおよそ２０ｍｇの粉末を負荷し、２５℃で、吸着／脱着等温線のサイクル（０％の相対湿度（ＲＨ）～９０％のＲＨ～再度０％のＲＨ、１０％ＲＨの増分で）に供した。ＲＨに関する粉末塊の変化（％）を決定し、プロットした。
２．ＤＰＩデバイスおよび空気力学的粒径分布（ＡＰＳＤ）試験

【0279】

この研究では、ＲＳ０１ Ｍｏｄ．７ ＤＰＩデバイス（Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、コード２３９７００００２ＡＡ、Ｐｌａｓｔｉａｐｅ、Ｉｔａｌｙ）を使用した。６０Ｌ／分で次世代インパクター（ＮＧＩ）を使用して、トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の空気動力学的質量中央粒子径（ＭＭＡＤ）を測定した。

【0280】

おおよそ１５ｍｇのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を、サイズ番号３のＨＰＭＣカプセル（Ｑｕａｌｉｃａｐｓ， Ｉｎｃ．）内に負荷した。このカプセルをＤＰＩデバイスに負荷し、作動させて、エアロゾル粒径分布（ＡＰＳＤ）を特徴付けた。各インパクターのステージおよびフィルターに沈着した薬物量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析した。
３．鼻部による吸入

【0281】

乾燥粉末分散器（ヴィルニュスエアロゾル発生器（Ｖｉｌｎｉｕｓ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）（ＶＡＧ）、ＣＨ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）を使用して、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末を、１２ポートの鼻部吸入チャンバーを通して送達した。おおよそ１ｇの乾燥粉末をＶＡＧへと負荷した。ＶＡＧは、１．０Ｖで合計２０分間、８Ｌ／分の流量を有した。乾燥粉末送達システムは、その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Li et al., "Inhaled INS1009 Demonstrates Localized Pulmonary Vasodilation," European Respiratory Society (ERS) International Congress, 3-7 September 2016, London, United Kingdom, Abstract No:853952(poster PA2845)中に詳細に記載された。
４．ＰＫ試料の収集および分析

【0282】

ラットの肺組織を、送達の直後（約０．５時間）、薬物投薬の６、１２、および２４時間後に採取した。肺組織試料を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってトレプロスチニルパルミチルおよびトレプロスチニル（ＴＲＥ）について分析した。トレプロスチニルパルミチルの死後の加水分解を説明するために、「トレプロスチニルパルミチル等価物」に関して結果を報告する。
トレプロスチニルパルミチル等価物、ｎｇ／ｇ＝［トレプロスチニルパルミチル、ｎｇ／ｇ］＋［ＴＲＥ、ｎｇ／ｇ］^＊（ＭＭトレプロスチニルパルミチル／ＭＭ ＴＲＥ）
ＭＭ：モル質量
結果
１．動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）

【0283】

トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）を図３４に示す。乾燥粉末を最大５０％のＲＨの増加に曝露させた場合、吸収された水分は０％～８％を超えて増加し、脱着と完全に可逆的ではなく、５．５％のままであるかまたは５．５％を超えた。おおよそ４％にまたはそれ未満に水分含量を保つために、この粉末に対するＲＨへの曝露は、製造中＜３０％まで制御されてもよい。
２．空気力学的粒径分布（ＡＰＳＤ）

【0284】

１．５カ月間（Ｔ＝１．５Ｍ）、２．５カ月間（Ｔ＝２．５Ｍ）、および３．５カ月間（Ｔ＝３．５Ｍ）保存したトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末のＡＰＳＤデータならびに６０Ｌ／分でＲＳ０１ Ｍｏｄ． ７ ＤＰＩ（高い耐性）によって得られた初期のＡＰＳＤ（Ｔ＝０）を図３５および表３１に示す。４つの時点すべてからの分布は同等であった。

【表31】

【0285】

４０℃および制御されていない周囲湿度で最大３．５カ月間保存した後の、エアロゾル化された乾燥粉末の微粒子率（ＦＰＦ）、ＭＭＡＤおよび幾何標準偏差（ＧＳＤ）値を表３２にまとめる。ＦＰＦ値は、５４．６％～５８．７％の範囲であった。ＭＭＡＤ値は、１．２５μｍ～１．４４μｍの範囲であった。ＧＳＤ値は、３．５～４．１の範囲であった。

【表32】

３．ラットの肺のＰＫ結果

【0286】

霧化されたＩＮＳ１００９またはエアロゾル化されたトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末の吸入後の肺におけるトレプロスチニルパルミチル等価物（トレプロスチニルパルミチルおよびトレプロスチニル）の濃度を表３３および図３６にまとめる。霧化されたＩＮＳ１００９は、モル比４５：４５：１０のトレプロスチニルパルミチルおよび賦形剤であるスクワランおよびＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を含有し、ＰＢＳに懸濁された（その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Corboz et al., "Preclinical Pharmacology and Pharmacokinetics of Inhaled Hexadecyl-Treprostinil (C16TR), a Pulmonary Vasodilator Prodrug," J Pharmacol Exp Ther. 363:348-357(2017)を参照されたい）。霧化されたＩＮＳ１００９とＣ１６ＴＲ（トレプロスチニルパルミチル）乾燥粉末の両方は、ラットにおいて、吸入後の類似する肺ＰＫプロファイルを有した。これら２つのプロファイルの統計による比較を表３４にまとめ、両プロファイルに関する同等の傾きを実証する。

【表33】

【表34】

【0287】

まとめると、この研究は、トレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤のエアロゾル粒径分布が、密閉されたバイアル中４０℃および制御されていないＲＨで最大３．５カ月間の保存に対して再現可能であること、ならびにトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の肺ＰＫプロファイルが、霧化されたＩＮＳ１００９のものと同等であったことを表示している。
（実施例４）
ラットにおけるマンニトールおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の薬物動態評定

【0288】

この研究では、それらの主要な賦形剤として、マンニトール（すなわち、実施例２に記載されている製剤Ｄ）またはトレハロース（すなわち、実施例２に記載されている製剤Ｃ）を含む２つの異なるトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の肺および血漿中薬物動態（ＰＫ）を評定した。重量比で表現した製剤ＤおよびＣの組成、重量比に基づいて計算した標的重量パーセンテージ、ならびに各製剤の典型的バッチからの構成成分の実際の重量パーセンテージをそれぞれ、表３５Ａおよび３５Ｂにまとめる。

【表35A】

【表35B】

方法

【0289】

雄のスプラーグドーリーラット（３００～４００ｇ）を１２ポートの鼻部吸入チャンバーおよびヴィルニュスエアロゾル発生器（Ｖｉｌｉｎｉｕｓ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）（ＶＡＧ）を使用して、乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃのエアロゾルに曝露させた。チャンバーの鼻部ポートに取り付けた拘束管にラットを配置した。製剤Ｄと製剤Ｃを用いる２つの別々の研究において、各研究において９匹のラットを使用し、１つのポートをフィルター上でエアロゾル薬物を収集するために使用した。６匹のラットを使用し、１つのポートをフィルター上に沈着した薬物量の収集のために使用した、製剤Ｄに関する省略型の研究も実施した。

【0290】

薬物への曝露のために、１グラムの物質をＶＡＧに配置した。ＶＡＧからの出力を１ボルト（Ｖ）で確立し、薬物を分散させ、８Ｌ／分のバイアス空気量を有する鼻部チャンバーに送達した。空気は、鼻部チャンバーの底に侵入し、上部から出た。曝露期間は２０分に設定した。真空源（０．５Ｌ／分）をフィルターに取付け、薬物サンプリング時間を５分に確立した。フィルター上に沈着したトレプロスチニルパルミチルの量をＨＰＬＣおよび帯電エアロゾル検出器（ＣＡＤ）によって測定した。送達された薬物用量を、吸入された薬物の濃度（フィルターのデータから）、曝露期間、毎分換気量ならびに鼻に送達された薬物に対して使用された１．０の沈着率、および肺に送達された薬物に対して使用された０．１の沈着率を有する体重から計算した。用量は、体重１ｋｇ当たりで表現する。

【0291】

製剤Ｄおよび製剤Ｃに関する２つの主要な研究において、薬物への曝露の０．５、２、４、６、１２および２４時間後の時点で血液試料を収集した。血液試料を遠心分離して血漿を抽出した。これらの研究では、喉頭、気管、竜骨＋気管支および肺の呼吸組織を、薬物への曝露の０．５、６、１２および２４時間後の時点で収集した。製剤Ｄに関する省略型の研究において、血液試料を、０．５、２、４、１２および２４時間の時点で得て、呼吸組織を薬物への曝露の０．５および２４時間後の時点で採取した。血漿中のトレプロスチニル（ＴＲＥ）ならびに呼吸組織中のトレプロスチニルパルミチルおよびＴＲＥの濃度を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定した。すべての呼吸組織について、トレプロスチニルパルミチル（Ｃ１６ＴＲ）等価物（Ｃ１６ＴＲｅｑ）の濃度は、トレプロスチニルパルミチルおよびＴＲＥの濃度に由来し（Ｃ１６ＴＲｅｑ＝トレプロスチニルパルミチル＋［ＴＲＥ×６１５／３９０．５ｎｇ／ｇ］、ここで、トレプロスチニルパルミチルとＴＲＥのモル重量は、それぞれ６１５と３９０．５である。肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物および血漿中ＴＲＥのデータを使用して、以下のＰＫパラメーターを導き出した：マイクロソフトエクセルのＰＫソルバープログラムを使用する、ラムダｚ（終末相消失速度定数）、Ｔ_１／２、Ｔ_ｍａｘ、Ｃ_ｍａｘおよびＡＵＣ_{０～ｉｎｆ}。
結果

【0292】

ラットを製剤Ｄおよび製剤Ｃに曝露することにより、製剤Ｃに関して体重１ｋｇ当たり送達された総用量５８μｇと比較して、製剤Ｄに関して体重１ｋｇ当たり送達された総用量がわずかにより高い７８μｇとなった。曝露の０．５時間後に測定した肺におけるトレプロスチニルパルミチル等価物の濃度もまた、製剤Ｃに関する１７１１ｎｇ／ｇと比較して、製剤Ｄに関してはわずかにより高く、平均して３０７２ｎｇ／ｇであった。
１．肺および上気道のトレプロスチニルパルミチル、ＴＲＥおよびトレプロスチニルパルミチル等価物

【0293】

製剤Ｄと製剤Ｃの両方に関して、肺におけるトレプロスチニルパルミチル、ＴＲＥおよびトレプロスチニルパルミチル等価物の最も高い濃度は、曝露の０．５時間後に発生した。２４時間にわたり、トレプロスチニルパルミチルとＴＲＥの緩やかな単指数減少が存在し、すべての時点で、トレプロスチニルパルミチルとＴＲＥの両方の濃度は製剤Ｄでは一貫してより高かった。これらの結果は、図３７においてトレプロスチニルパルミチル等価物（Ｃ１６ＴＲｅｑ）について例証され、２４時間にわたり、肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物濃度の緩やかな減少を示すが、製剤Ｃと比較して製剤Ｄでは、トレプロスチニルパルミチル等価物の濃度は一貫してより高い。図３８は、製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の肺におけるトレプロスチニルパルミチル（Ｃ１６ＴＲ）の濃度を示す。図３９は、製剤Ｄまたは製剤Ｃの吸入後の肺におけるＴＲＥの濃度を示す。

【0294】

肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物に関する導き出されたＰＫパラメーターの比較は、ラムダｚ、Ｔ_１／２およびＴ_ｍａｘに関して製剤ＤとＣの間に主要な差異を見出さなかったが、製剤Ｄでは、肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物のＣ_ｍａｘが７９％高く、ＡＵＣ_{０～２４ｈ}は１３０％高かった（表３６）。

【表36】

【0295】

喉頭、気管、竜骨＋気管支および肺におけるトレプロスチニルパルミチルの沈着について、トレプロスチニルパルミチルの大多数（＞９７パーセント）は肺に沈着した。これは、製剤Ｄと製剤Ｃの両方で認められた。鼻組織はこの研究では収集されなかった。
２．血漿中ＴＲＥ

【0296】

血漿中のＴＲＥの最も高い濃度は、０．５時間で観察され、製剤Ｄでは２４時間かけて緩やかに減少し、製剤Ｃではより急速に減少した。血漿中ＴＲＥ濃度は、製剤Ｃでは、２４時間までに検出レベル未満であった（図４０）。

【0297】

血漿中ＴＲＥに関して導き出されたＰＫパラメーターの比較によって、製剤Ｃと比較して製剤Ｄでは、ラムダｚが３４％低く、Ｔ_１／２が５１％高いことが分かった（表３７）。製剤Ｃと比較して製剤Ｄでは、血漿中ＴＲＥのＣ_ｍａｘは１０％高く、ＡＵＣ_０～ｔは５１％高かった（表３７）。

【表37】

【0298】

まとめると、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＤおよびＣの吸入によって、トレプロスチニルの吸入と比較して、低いトレプロスチニルの血漿中Ｃ_ｍａｘ値ならびに血漿および肺において持続レベルのトレプロスチニルがもたらされる。類似する条件下で送達された製剤Ｄと製剤Ｃの間のラットにおけるＰＫプロファイル、すなわち１Ｖで２０分間のＶＡＧ出力の比較によって、製剤Ｃに関する５８μｇ／ｋｇと比較して、７８μｇ／ｋｇであった製剤Ｄに関して３４％高い送達用量がもたらされた。肺におけるトレプロスチニルパルミチル、ＴＲＥおよびトレプロスチニルパルミチル等価物の濃度は、おそらく製剤Ｄに関するより高い送達用量に起因して、製剤Ｄに関して一貫してより高かったが、いずれの製剤も２４時間にわたり、穏やかな単指数減少を実証した。製剤Ｄに関してより高く、両製剤に関して２４時間にわたり緩やかに減少した類似の傾向が血漿中のＴＲＥ濃度でも観察された。ＴＲＥおよびトレプロスチニルパルミチル曝露のほとんどが肺において発生し、喉頭、気管、竜骨＋気管支の上部呼吸領域には３パーセント未満しか沈着しなかった。

【0299】

製剤Ｄおよび製剤Ｃに関するこれらの結果は、霧化されたＩＮＳ１００９で以前に観察されたのと類似するＰＫプロファイルを実証し、これは、３０分で肺におけるトレプロスチニルパルミチル等価物および血漿中のＴＲＥの最も高い濃度を呈し、２４時間にわたってこれらは緩やかな単指数減少を有する。しかし、一方のトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤と他方の霧化されたＩＮＳ１００９の間の肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物：血漿中ＴＲＥのＣ_ｍａｘ比には有意差が存在するようである。霧化されたＩＮＳ１００９に関する典型的な肺中トレプロスチニルパルミチル等価物：血漿中ＴＲＥのＣ_ｍａｘ比は約８００であり、一方、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤に関する比は約１，６００～１３，０００の範囲に及ぶ。その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Corboz et al., J Pharmacol Exp Ther 363: 1-10(2017)を参照されたい。肺の血管拡張剤は、肺内のＴＲＥの局所活性により強く関連し、血漿中のＴＲＥのレベルにはあまり関連せず（その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Chapman RW et al., Pulm. Pharmacol. Ther. 49:104-111(2018)を参照されたい）、肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物：血漿中のＴＲＥのＣ_ｍａｘ比の予期されない差異は、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の投与によって、ＴＲＥへのより少ない全身曝露しか有益にもたらされず、よって、全身の血圧低下などの潜在的な全身的有害事象を最小化することを表示する。
（実施例５）
低酸素負荷を遠隔測定したラットにおけるマンニトールおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の有効性の評定

【0300】

この実施例は、２つの異なるトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤：実施例２および実施例４に記載のマンニトールベースの製剤Ｄおよびトレハロースベースの製剤Ｃのｉｎ ｖｉｖｏ有効性評定について記載する（表３５Ａおよび３５Ｂ）。吸入した低酸素ガス混合物への曝露によって誘導された右心室脈圧（ＲＶＰＰ）の増加の阻害を測定するために右心室内に埋め込んだ遠隔操作プローブを用いて調製したラットにおいて、有効性を決定した。
方法

【0301】

ＲＶＰＰおよび平均全身動脈血圧（ｍＳＡＰ）を測定するために右心室と下行大動脈に遠隔操作プローブを埋め込んだ雄のスプラーグドーリーラットにおいて実験を実施した。正常酸素圧の空気（２１％のＯ_２／残部Ｎ_２）を呼吸し、その後低酸素の空気（１０％のＯ_２／残部Ｎ_２）に１０分間曝露し、正常酸素圧の空気の呼吸に戻しながら、これらの心血管パラメーターを測定した。各実験において、低酸素負荷に起因するＲＶＰＰの増加（低酸素によるΔＲＶＰＰ）を、薬物への曝露の前ならびに吸入されたトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたは製剤Ｃへの曝露の１、６、１２および２４時間後に測定した。薬物製剤を、１ボルト（Ｖ）の出力のヴィルニュスエアロゾル発生器（Ｖｉｌｉｎｉｕｓ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）（ＶＡＧ）を用いて与え、１２ポートの鼻部吸入チャンバーに２０分間送達させた。８Ｌ／分のバイアスフローで、エアロゾルをＶＡＧから分散させ、鼻部吸入チャンバーの底に送達させた。フィルターを鼻部ポートのうちの１つに接続し、０．５Ｌ／分の真空流に５分間取り付けた。フィルター上に沈着したトレプロスチニルパルミチルの量をＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定した。ラットの血漿および呼吸組織試料を、トレプロスチニルパルミチルおよび／またはＴＲＥの濃度について分析した。
結果

【0302】

ラットを吸入された低酸素に曝露させることによって、正常酸素圧値に対して１０～１３ｍｍＨｇまでＲＶＰＰが増加した。低酸素負荷の終わりに、ＲＶＰＰは、数分以内に即座に低下し、１０分以内に前の低酸素値に戻った。薬物への曝露の２４時間後までの様々な時点で、低酸素に起因するΔＲＶＰＰを、薬物への曝露前に得られた２～３個の決定値からの合計値と比較することによって、薬物の効果を決定した。

【0303】

実験結果を図４１に示す。図４１では、値は平均±ＳＥＭである（製剤Ｄに関してｎ＝６～８匹のラットおよび製剤Ｃに関して４匹のラット）。－１日目は、薬物への曝露前のベースライン値を表し、０日目は、薬物への曝露後の値を表す。ΔＲＶＰＰは、右心室脈圧の増加を表す。「^＊」は、－１日目の薬物への曝露前の合計値（１、６および１２時間）と比較してＰ＜０．０５である印である。結果は、製剤Ｄへの曝露によって、１、６、１２および２４時間で観察された統計的に有意な（Ｐ＜０．０５）阻害と共に、低酸素に起因してΔＲＶＰＰが低下したことを表示している。１、６、１２および２４時間で観察された統計的に有意な（Ｐ＜０．０５）阻害と共に、製剤Ｃに関して類似する結果が得られた。製剤Ｄおよび製剤Ｃによる処置の２４時間後までに、ＲＶＰＰは、薬物への曝露前に観察されたベースライン値に戻る傾向があった。対照として、吸入されたマンニトールビヒクル（６９．４８ｗｔ％の標的重量パーセントのマンニトール、２９．７８ｗｔ％の標的重量パーセントのロイシン、および０．７４ｗｔ％の標的重量パーセントのＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を含有する）への曝露は、投与の１、６、１２および２４時間後の低酸素へのΔＲＶＰＰ応答を阻害しなかった（データは示さず）。吸入された薬物の濃度、曝露の期間、体重、毎分換気量および１．０の沈着率に基づいて、製剤Ｄの送達用量は体重１ｋｇ当たり７８μｇであり（肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物濃度が３０７２ｎｇ／ｇ）、製剤Ｃの送達用量は体重１ｋｇ当たり５８μｇであった（肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物の濃度が１７１１ｎｇ／ｇ）。その内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Alexander D.J. et al., Inhal. Toxicol. 20:1179-1189(2008)を参照されたい。

【0304】

まとめると、低酸素負荷した遠隔操作ラットにおける有効性評定は、吸入されたトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤ＣおよびＤが、薬物への曝露の最大２４時間後までＲＶＰＰの増加を阻害したことを示す。２４時間まで、低酸素に対するＲＶＰＰ応答は、薬物への曝露前に観察されたベースライン値に戻る傾向があった。比較すると、７６μｇ／ｋｇの送達用量が達成された霧化されたＩＮＳ１００９は、１２時間まで低酸素に誘導されるＲＶＰＰの増加を阻害し、２４時間までにベースライン値に戻った。それぞれ、高用量で用いられた（２１５μｇ／ｋｇ）吸入されたトレプロスチニルは、低酸素に誘導されるＲＶＰＰの増加を２時間阻害し、より少ない吸入用量（１５、５３、または１１０μｇ／ｋｇ）では１時間阻害した。これらの結果は、遠隔操作されたラットにおいて、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤による、低酸素に誘導されるＲＶＰＰの増加の阻害の延長を実証している。
（実施例６）
モルモットにおける咳およびベンチレーションに関するマンニトールおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の評価

【0305】

この実施例は、覚醒した雄のモルモットにおいて、咳、ベンチレーションの変更、気管支収縮中に典型的に見られる変更された呼吸パターンの無次元指数であるＰｅｎｈの変化を生じる、マンニトールベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄおよびトレハロースベースのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｃ（実施例２および実施例４に記載される；表３５Ａおよび３５Ｂの製剤の組成を参照されたい）の効果に関する研究について記載する。
方法

【0306】

雄のＨａｒｔｌｅｙモルモットにおいて実験を実施した。３日間の順化後に、確立された技法を使用してベンチレーション（一回呼吸量、呼吸速度および毎分換気量）、Ｐｅｎｈおよび咳を測定するために、モルモットを全身プレチスモグラフ中に配置した。そのそれぞれの内容が参照によりその全体として本明細書に組み込まれる、Corboz et al., J Pharmacol Exp Ther 363: 1-10(2017)；Chong BTY et al., J. Pharmacol. Toxicol. Methods 39, 163-168(1998)；Lomask, Exp. and Toxicol. Pathol. 57,13-20(2006)を参照されたい。咳は、大きく息を吸い込んだ後、大きく息を吐き出すことを示すプレチスモグラフの記録から測定し、手動の観察、ビデオの記録および咳の音によって確認した。ベンチレーション、Ｐｅｎｈおよび咳のデータは、乾燥粉末エアロゾルへの曝露前の１５分のベースライン期間中に測定した。製剤Ｄ、製剤Ｃおよびそれらのそれぞれのビヒクル、すなわちマンニトールビヒクル（６９．４８ｗｔ％の標的重量パーセントのマンニトール、２９．７８ｗｔ％の標的重量パーセントのロイシン、および０．７４ｗｔ％の標的重量パーセントのＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を含有する）、およびトレハロースビヒクル（６９．４８ｗｔ％の標的重量パーセントのトレハロース、２９．７８ｗｔ％の標的重量パーセントのロイシン、および０．７４ｗｔ％の標的重量パーセントのＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を含有する）を含んだ試験物を、次いで、乾燥粉末として１５分間送達させ、その後、エアロゾル化合物が投与された後の１２０分を観察期間とした。実験の全ステップでのエアロゾル送達のための空気は、エアコンプレッサーによって供給した。供給される空気の典型的な湿度は、測定した場合、およそ３０％であった。試験物への曝露の前、間および後に、ベンチレーション、Ｐｅｎｈおよび咳を測定した。ヴィルニュスエアロゾル発生器（ＶＡＧ）により、エアロゾル化した試験物を生成した。ＶＡＧからの空気流量度を４．５Ｌ／分に設定し、エアロゾルを分散させ、１Ｌ／分の湿った空気（３０％の加湿）と合わせて、プレチスモグラフへのエアロゾル送達を促進し、静電吸着の問題を最小限にした。したがって、空気の総流入量は、５．５Ｌ／分であった。ＶＡＧからの発生器の出力は、１、０．７５および０．５ボルトであり、各ＶＡＧ出力を１５分間加えて、薬物の３つの異なる用量を送達し、より多い用量はより高い電圧で送達された。空気およびエアロゾルがシステムの上部に侵入し、底部からでるように、８Ｌ／分の真空流をプレチスモグラフの底で確立した。プレチスモグラフのポートに取り付けたフィルターに、０．５Ｌ／分の別々の真空源を接続させ、薬物（トレプロスチニルパルミチル）濃度をサンプリングした。研究の全期間、すなわち１３５分間、フィルターサンプリングを維持したが、１５分の曝露時間を使用して、鼻部チャンバー内の薬物のエアロゾル濃度および吸入された総送達薬物用量を計算した。トレプロスチニルパルミチル濃度についてフィルター試料を分析した。研究の終わりに、モルモットを安楽死させ、血液（血漿）、肺、気管、喉頭および竜骨＋気管支を収集して、これらの試料中のトレプロスチニルパルミチルおよびＴＲＥ濃度を測定した。
結果

【0307】

製剤Ｄ、製剤Ｃ、またはマンニトールおよびトレハロースビヒクルの曝露は、忍容性に優れ、いかなる致死率ももたらさなかった。

【0308】

１Ｖで作製し、１５分間投与したエアロゾル化された製剤Ｄは（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり３５．８μｇ）、６匹のモルモットのうちの４匹で咳を生じさせた。この曝露に対する咳の平均数は２４±１２回の咳であった。０．７５ボルトおよび１５分間の投与の設定では（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり１２．８μｇ）、咳は、４匹のモルモットのうちの３匹で観察され、咳の平均数は１９±７回の咳であった。０．５Ｖおよび１５分間の投与の設定では（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり２．３μｇ）、４匹のモルモットのうちの４匹において咳は観察されなかった。１Ｖで１５分間投与の設定で作製したマンニトールビヒクルのエアロゾルは、４匹のモルモットのうちの４匹で咳を生じなかった（表３８）。製剤Ｄまたはマンニトールビヒクルに関してベンチレーションにおける一貫した変化がなく、この薬物により観察されたＰｅｎｈのわずかな増加は、マンニトールビヒクルと比較して有意差に達しなかった。

【0309】

１Ｖおよび１５分間の投与の設定で作製したエアロゾル化された製剤Ｃは（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり１０．２μｇ）、６匹のモルモットのうちの３匹において咳を生じ、咳の平均数は１０±５回の咳であった。０．７５Ｖ（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり４．７μｇ）および０．５Ｖ（吸入された総送達用量＝体重１ｋｇ当たり１．５μｇ）および１５分間の曝露の投与の設定では、製剤Ｃは、いずれの群においても４匹のモルモットのうちの４匹で咳を生じなかった。１Ｖの電圧で１５分間投与したトレハロースビヒクルは、４匹のモルモットのうちの４匹で咳を生じなかった（表３８）。製剤ＣまたはトレハロースビヒクルによるベンチレーションまたはＰｅｎｈにおける一貫した変化はなかった。

【0310】

肺中のトレプロスチニルパルミチル等価物の濃度は、製剤Ｄおよび製剤Ｃの両方に関して吸入された薬物用量の関数として増加し、製剤Ｄは、製剤Ｃと比較して、肺におけるトレプロスチニルパルミチル等価物のおおよそ３倍高いレベルを有した（表３８）。吸入された薬物のほとんどが肺内に沈着したため（データは示さず）、喉頭、気管および竜骨＋気管支の上部気管組織における薬物沈着のパーセンテージに、これら２つの製剤間の差異はなかった。鼻組織はこの研究では収集しなかった。

【表38】

【0311】

この研究からの結果は、咳が両製剤により発生し、製剤Ｄに関しては吸入用量の閾値が１２．８μｇ／ｋｇおよび製剤Ｃに関しては１０．２μｇ／ｋｇで見られたことを実証している。これらの各用量は、１．２３μｇ／ｋｇである、モルモットにおいて咳を引き起こすＴＲＥの吸入用量の閾値よりも１０および８倍高い。製剤Ｄまたは製剤Ｃへの曝露後に、咳の最初の発作は１７から３５分の間に発生し、これは、曝露の最初の１０分以内に発生する霧化されたＴＲＥによる咳のタイミングより遅い。

【0312】

肺におけるトレプロスチニルパルミチル等価物の濃度は、製剤Ｄよりもおおよそ３倍高く（表３８）、薬物のほとんどが肺に沈着したため（データは示さず）、喉頭、気管、および竜骨と気管支の上気道に沈着した薬物のパーセンテージにおいてこれらの２つの製剤間には差異がなかった。血漿中のＴＲＥの濃度は、製剤Ｃと比較して製剤Ｄで２から３倍高かった（表３８）。
（実施例７）
８週間のｓｕｇｅｎ－低酸素（ＳｕＨｘ）に誘導される肺動脈性肺高血圧症ラットモデルの処置におけるトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤の効果の評定

【0313】

ラットにおけるＳｕｇｅｎ－低酸素（ＳｕＨｘ）に誘導されるＰＡＨモデルは、十分に文書化されているモデルである。このモデルは、臨床疾患において見られる病態のほとんどを複製する。この実施例では、肺動脈圧（ＰＡＰ）および他の心血管パラメーター、右心室肥大、肺および心臓の組織病理ならびにＰＡＨに関連するバイオマーカーを含む、ラットにおける８週間のＳｕＨｘに誘導される肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）モデルに対する、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄ（実施例２および実施例４に記載される；表３５Ａの製剤の組成を参照されたい）ならびに吸入されたトレプロスチニル（ＴＲＥ）、静脈内トレプロスチニル（ＴＲＥ）、および経口セレキシパグの効果を評価する。
研究群、試験物およびビヒクルならびにそれらの投与

【0314】

２００から２５０ｇの体重の雄のスプラーグドーリーラットを、体重により研究群に無作為化し、体重の範囲が群にわたって均一に分布することを保証する。表３９は研究群と各研究群が受ける処置をまとめる。

【表39】

１．群１－正常酸素圧対照群

【0315】

正常酸素圧対照群（群１）は、２ｍＬ／ｋｇで１００％のＤＭＳＯの皮下注射を１回受け（ｓｕｇｅｎのためのビヒクル）、処置を受けない。
２．群２－トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄのためのビヒクルによる処置群

【0316】

トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄのためのビヒクルは、７０ｗｔ％のマンニトールおよび３０ｗｔ％のロイシンの標的組成を有する。このビヒクル処置群（群２）のラットを秤量し、ヴィルニュスエアロゾル発生器（ＶＡＧ）のカップ（１７０ｍｇのビヒクルを負荷した）に入れ、すべての物質がエアロゾル化されるまで、１日に１回、１ボルトでノーズコーンチャンバー内に投与する。エアロゾル化の期間を測定する。群３および４と並行して、この群に対するビヒクル処置を３５日間実行する。
３．群３および４－トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄによる処置群

【0317】

群３および４では、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄを秤量し、ＶＡＧのカップに入れる（９０ｍｇを使用し、５７μｇ／ｋｇの標的用量のために０．５ボルト（Ｖ）で作製し、１７０ｍｇを使用し、１３８μｇ／ｋｇの標的用量のために１Ｖで作製する）。乾燥粉末製剤を３５日間１日に１回与え、各投与に対して、すべての物質がエアロゾル化されるまでＶＡＧをそのままにする。エアロゾル化の期間を測定する。乾燥粉末製剤を４±２℃で保存する。
４．群５－吸入されたトレプロスチニル（ＴＲＥ）のための霧化されたビヒクルによる処置群

【0318】

吸入されたトレプロスチニル（ＴＲＥ）のための霧化されたビヒクルはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。群６と並行して、この霧化されたビヒクル処置群（群５）のラットは、３５日間、１日ごとに１２時間にわたり、４回、ノーズコーンチャンバー内で霧化されたＰＢＳを受ける。
５．群６－霧化されたトレプロスチニル（ＴＲＥ）による処置群

【0319】

霧化されたトレプロスチニル（ＴＲＥ）溶液は、ｐＨ７．４のＰＢＳ中に０．５ｍＭのＴＲＥを含有する。溶液を４±２℃で保存し、使用期限を調製の７日後に設定する。この溶液を使用して、１１０μｇ／ｋｇの標的用量のＴＲＥを送達し、３５日間、１日ごとに１２時間にわたり、４回、吸入によって群６のラットに投与する。
６．群７－持続注入による静脈内トレプロスチニルのためのビヒクルによる処置群

【0320】

静脈内トレプロスチニルのためのビヒクルは、３．０ｍｇ／ｍＬのｍ－Ｃｒｅｓｏｌ、５．３ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、および６．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムを含有する、ｐＨが６．０～７．２の水性溶液である。この群（群７）のラットは、ビヒクルで満たした浸透圧ポンプをそれぞれ埋め込まれ、以下の群８で指定した注入速度での持続注入に供する。群８と並行して、群７に対するビヒクルの持続注入は、３５日間続くことになる。
７．群８－持続注入による静脈内トレプロスチニル（ＴＲＥ）による処置群

【0321】

群８に対するＴＲＥの静脈内投与のために、２種の溶液を調製する。それらは、ＴＲＥの濃度においてのみ異なる。具体的には、第１の溶液は、８．７５ｍｇ／ｍＬのＴＲＥ、３．０ｍｇ／ｍＬのｍ－Ｃｒｅｓｏｌ、５．３ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、および６．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムを含有する、ｐＨが６．０～７．２の水性溶液である。第２の溶液は、１０．７ｍｇ／ｍＬのＴＲＥ、３．０ｍｇ／ｍＬのｍ－Ｃｒｅｓｏｌ、５．３ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、および６．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムを含有する、ｐＨが６．０～７．２の水性溶液である。この群（群８）の各ラットは、埋め込まれた浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴポンプ）を使用して、ＴＲＥの静脈内注入を受ける。各ＡＬＺＥＴポンプは、最初に、４５０ｇのラットに対して２８日の期間にわたり持続注入を達成し、８１０ｎｇ／ｋｇ／分の標的用量のＴＲＥを達成するのに十分である（２．５μＬ／時の注入速度に基づく）、８．７５ｍｇ／ｍＬのＴＲＥを含む第１の溶液２ｍＬで満たされる。ＡＬＺＥＴポンプは、注入の１９日目（研究全体の４０日目）に置き換えられ、おおよそ５５０ｇまでのラットの体重増加に基づき、１０．７ｍｇ／ｍＬのＴＲＥを含む第２の溶液２ｍＬで満たされる。第１および第２の溶液のＴＲＥ濃度の導出を以下に示す。ＩＶによるＴＲＥの持続注入は、３５日間続くことになる。

【0322】

第１の溶液におけるＴＲＥ濃度（８．７５ｍｇ／ｍＬ）の導出：
〇 ラットの体重は４５０ｇであると仮定する
〇 注入したＴＲＥ＝８１０ｎｇ／ｋｇ／分；＝３６４．５ｎｇ／分；＝２１．８７μｇ／時；＝５２４．８８μｇ／日；＝１８．３７ｍｇ／３５日
〇 ＡｌＺＥＴ注入速度＝２．５μＬ／時；＝６０μＬ／日；＝２１００μＬ／３５日；＝２．１ｍＬ／３５日
〇 ＴＲＥ濃度＝１８．３７ｍｇ／２．１ｍＬ＝８．７５ｍｇ／ｍＬ

【0323】

第２の溶液におけるＴＲＥ濃度（１０．７ｍｇ／ｍＬ）の導出
〇 ラットの体重は５５０ｇであると仮定する
〇 注入したＴＲＥ＝８１０ｎｇ／ｋｇ／分；＝４４５．５ｎｇ／分；＝２６．７３μｇ／時；＝６４１．５２μｇ／日；＝２２．４５ｍｇ／３５日
〇 ＡＬＺＥＴ注入速度＝２．５μＬ／時；＝６０μＬ／日；＝２１００μＬ／３５日；＝２．１ｍＬ／３５日
〇 ＴＲＥ濃度＝２２．４５ｍｇ／２．１ｍＬ＝１０．７ｍｇ／ｍＬ
８．群９－経口投与によるセレキシパグのためのビヒクルによる処置群

【0324】

セレキシパグのためのビヒクルは、０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロースを含有する、ｐＨが７．５～８．０の水性溶液である。群１０と並行して、この群のラットに、１日に２回、３５日間、経口胃管栄養法によりビヒクルを投薬する。
９．群１０－経口投与によるセレキシパグによる処置群

【0325】

０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース中に３．０ｍｇ／ｍＬのセレキシパグを含有する、ｐＨが７．５のセレキシパグ溶液を調製する。この溶液を室温で保存し、使用期限を調製の７日後に設定する。投与ごとに１０ｍＬ／ｋｇの体積で３０ｍｇ／ｋｇの標的用量のために、この溶液を、１日に２回、経口胃管栄養法によりこの群のラット（群１０）に投与する。セレキシパグ処置は３５日間続くことになる。
研究設計

【0326】

表３９は、研究設計を概説し、その詳細は以下の通りである。
１．ＰＡＨの誘導

【0327】

ラットを、２１日目に、上記のようにそれらの体重に基づいて、処置群に無作為化する。

【0328】

０日目に、ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍＬのｓｕｇｅｎ溶液を調製し、群２～１０由来のラット（表３９を参照されたい）は、ｓｕｇｅｎ（２ｍＬ／ｋｇの体積中２０ｍｇ／ｋｇ）溶液の単回皮下注射を受け、それらのケージに戻される。また、０日目に群１由来のラットは、２ｍＬ／ｋｇの１００％のＤＭＳＯ（ｓｕｇｅｎのためのビヒクル）の１回の皮下注射を受け、それらの各ゲージに戻される。

【0329】

群２～１０のラットを、窒素の混合物を使用して０．１０（１０％）に等しいＦｉＯ_２を受けるよう制御された空気で調整され、換気されたケージシステムによって周囲空気が制御されたケージ内に配置する。これらは、これらの低酸素条件下に２１日間保たれる。低酸素である間、ケージは１週間に１回清掃および交換され、ラットを１０分未満の間周囲酸素レベルに曝露する。これらは、２２日目から５６日目まで周囲酸素レベルに曝露される。群１のラットは、５６日間、周囲酸素（正常酸素圧）レベルに曝露されたケージ内のままである。ラットは、日常的に、それらの行動および健康全般の状態のいずれかの変化について観察される。

【0330】

試験物またはビヒクルによる処置が、２２日目～５６日目に投与される。食餌および水は自由に摂取される。ラットの行動および健康全般の状態について毎日観察される。１週間ごとに体重を測定する。
２．心エコー検査

【0331】

疾患の進行についての心エコー検査によるモニタリングは、すべてのラットについて、０日目、２１日目（処置前）および手術日（５６日目）に行われる。
３．血液および肺のＰＫサンプリング

【0332】

２３日目（２回目の投薬の直前）、３８日目（次の投薬の直前）および５７日目（最終投薬の２４時間後）に、静脈血（０．５ｍｌ、ＥＤＴＡで抗凝固剤処理済）をすべてのラット（正常酸素圧群およびビヒクル群を含む）からサンプリングする。ＡＬＺＥＴポンプを有するラットのために伏在静脈から、および他のすべてのラットのために頸静脈によって、血液をサンプリングする。全血を遠心分離して血漿を得て、これを分析のために－８０℃で凍結し保存する。
４．乾燥粉末の吸入（群２～４）

【0333】

処置期間中、各ラットを、１２ポートの鼻部吸入チャンバー（ＣＨ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に接続されたノーズコーン拘束チャンバー内に配置する。トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄまたはそのビヒクルを、ＶＡＧを使用して送達する。空気流を７Ｌ／分の流量でＶＡＧに導入し、鼻部吸入チャンバーに接続する。低用量のトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄで処置した群３について、９０ｍｇのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄを秤量し、ＶＡＧデアグロメレーターに負荷する。ＶＡＧを、０．５ｍｇ／Ｌの粉末濃度（約７μｇ／Ｌのトレプロスチニルパルミチル）に対応する、０．５Ｖの電圧に設定する。より高用量のトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄで処置した群４について、１７０ｍｇのトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄを秤量し、ＶＡＧデアグロメレーターに負荷し、１．０ｍｇ／Ｌの粉末濃度（約１４．７μｇ／Ｌのトレプロスチニルパルミチル）に対応する、１Ｖの電圧で送達する。粉末エアロゾル出力濃度を、ポータブルエアロゾルモニター（Ｃａｓｅｌｌａ ＭｉｃｒｏＤｕｓｔ Ｐｒｏ）で継続的にモニターする。正確な送達時間を記録する。ＶＡＧデアグロメレーター内に残った乾燥粉末を秤量し、エアロゾル化された試験乾燥粉末の実際の量を計算する。０．５Ｌ／分の真空流の真空源に接続されたガラス繊維フィルターをエアロゾル化開始の５分後に曝露ポートのうちの１つに配置し、チャンバーからのエアロゾルを５分間の間、フィルター上で収集する。すべてのフィルター試料を分析まで４℃に保つ。

【0334】

群２由来のラットは、１．０Ｖの設定で投与される、トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄのためのビヒクル１７０ｍｇを受ける。

【0335】

この研究では、２つの異なる吸入タワーおよびＶＡＧとレーザーのセット、すなわち乾燥粉末ビヒクルのための１つとトレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄのためのもう１つを使用する。

【0336】

残っている粉末をＶＡＧのデアグロメレーターから取り除いた後、ＶＡＧのすべての部品に乾燥空気をあてる。群３（低用量）と群４（高用量）の投薬の間に、タワーに乾燥空気をあて、群４の投薬後に０．５％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の水溶液、水道水および蒸留水で浄化する。
５．霧化吸入（群５および６）

【0337】

トレプロスチニルおよびそのビヒクルであるＰＢＳを、２．５から４μｍの間の質量平均エアロゾル直径（ＭＭＡＤ）を０．２～０．４ｍＬ／分の範囲の流量で送達するために製造された、Ａｅｒｏｇｅｎからのネブライザーとコントローラー（Ａｅｒｏｎｅｂ Ｐｒｏ）を使用して投与する。処置期間中、１２ポートの鼻部吸入チャンバー（ＣＨ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に接続されたノーズコーン拘束チャンバーに各ラットを配置する。霧化される溶液の体積は、６Ｌ／分の空気流で６ｍＬであり、トレプロスチニルの濃度は０．５ｍＭである。ガラス繊維フィルターを曝露ポートのうちの１つに配置し、０．５Ｌ／分の真空流で５分の期間（すなわち霧化開始の５分後に開始し、１０分で終了する）真空源に接続する。

【0338】

２つの吸入タワーと２つ別々のノーズコーンのセットを使用する；１つはＰＢＳを受ける群５のためのものであり、１つはＴＲＥを受ける群６のためのものである。

【0339】

ネブライザーを介して０．５％のＳＤＳ、水道水および蒸留水の水性溶液を経時的にランすることによって、および各使用間にＰＢＳを霧化して、すべての残留薬物を薬品カップからおよび開口板を通して洗い流すことによって、ネブライザーの浄化を実施する。霧化タワーチューブと霧化プロセスにおいて使用する他の材料も、１日に１回上記薬剤で浄化される。さらに、エアロゾル化タワーチューブおよびエアロゾル化プロセスで使用する他の材料は、各チャンバーへの投薬後に上記薬剤で浄化される。
６．ＩＶ持続注入（群７および８）

【0340】

群８由来のラットに２％のイソフルランおよび医療用空気で麻酔する。各ラットの背中を切開し、８．７５ｍｇ／ｍＬのＴＲＥを含む第１の溶液を満たしたＡＬＺＥＴポンプを配置する。カテーテルを頸静脈に埋め込み、ＡＬＺＥＴポンプに接続する。３５日間の期間にわたる持続注入のために、注入の１９日目に、カテーテルを一時的にクランプし、ＡＬＺＥＴポンプを、１０．７ｍｇ／ｍＬのＴＲＥを含む第２の溶液で満たした新しいものと置き換える。群７由来の各ラットに、ビヒクルで満たしたＡＬＺＥＴポンプを埋め込む。
７．経口投与（群９および１０）

【0341】

群１０由来のラットは、２２日目～５６日目に（３５日間）、１日に２回、経口胃管栄養法により参照化合物であるセレキシパグを受ける。連続して撹拌することによってセレキシパグの均一な懸濁液を維持するために注意を払うが、用量を胃管栄養法シリンジ中に吸い取り、１つの胃管栄養法シリンジを一気に満たし、次のシリンジを満たす前にその用量を投与する。用量は、各投与において体重１ｋｇ当たり１０ｍＬで、経口胃管栄養法により与えられる。群９由来のラットは、２２日目～５６日目に（３５日間）、経口胃管栄養法により１日に２回、ビヒクルを投薬される。
外科用器具および有効性研究ラットにおける血行動態および機能的パラメーターの測定

【0342】

１．最終投薬の２４時間後である選択された手術日に、酸素中２～２．５％のイソフルランＵＳＰ（Ａｂｂｏｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の混合物でラットに麻酔し、温熱パッド上に配置して体温を維持する。

【0343】

２．ラットを気管切開し、９０ストローク／分の頻度で体重１ｋｇ当たり約１０ｍｌに設定した陽圧の齧歯類用レスピレーターによって直ちに換気する。

【0344】

３．圧力変換器に接続したカニューレを左側の大腿動脈に挿入し、全身動脈血圧（ＳＡＰ）を測定する。

【0345】

４．胸骨切開術により心臓を曝露させ、Ｉｎｓｙｔｅの２０ＧＡ １．１６を右心室に導入し、変換器に接続した食塩水を満たしたＰＥ－５０カテーテルに迅速に引っかける。

【0346】

５．数秒の右心室圧力の記録後に、Ｉｎｓｙｔｅを肺動脈にさらに進め、さらに６０秒間ＰＡＰを記録させる。

【0347】

６．この手順の期間またはＰＡＰシグナルが喪失するまで、血行動態パラメーターを連続的に記録する。

【0348】

７．血行動態のモニタリング後、バイオマーカー分析（以下に記載される）のために、心穿刺によって血液を得る。

【0349】

８．血液試料の収集後、胸腔をさらに開口させて肺を曝露する。気管を覆う筋肉を切除し、肺および心臓を取り除く。採取した組織をＰＢＳで濯ぎ、秤量する前にすべての余分な血液を取り除く。

【0350】

９．４つの葉を分離し、これらを秤量し、液体窒素中で凍結させ、－８０℃で保存することによって、薬物濃度およびバイオマーカー分析のために、右側の肺を結紮し、直ちに収集する。

【0351】

１０．心臓の組織学およびキャスティングについて、プロセスは以下の通りである；１）群２～１０のそれぞれにおいて１１匹のラットのうちの５匹を確保し、心臓の組織学および生化学パラメーターを評価し、したがって、以下のポイント１１で記載されるように処置する；２）群２～１０のそれぞれにおける他の６匹のラットは、Ｆｕｌｔｏｎ指数を決定するための役割を果たし、ポイント１２に記載するように処置される。Ｆｕｌｔｏｎ指数のためのデータを収集した後、心組織をバイオマーカー分析のために－８０℃で保存する。

【0352】

１１．組織学のために、左側の肺を０．９％のＮａＣｌでフラッシングする。先端の丸いニードル（２３ｇ）を取り付けた、定着性の１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）で満たした１０ｍＬのシリンジを使用して、左側の肺を膨張させる。ニードルの先端を気管内に挿入し、縫合して固定する一方で、別のシリンジを肺動脈に結び付ける。肺が完全に、均一に、および一貫して拡大するまで（定着を可能とせず、肺表面を通ってにじみ出る）、肺を生理学的圧力で穏やかに膨張させる。これは、過剰な組織破壊を引き起こすことなく、最適な血管および気道の拡大をもたらす。次いで、ニードルを取り除き、気管周辺を縫合し、１：２０の組織対固定液の比で肺を１０％のＮＢＦに浸漬する。心臓をＰＢＳで濯ぎ、次いで１：２０の組織対固定液の比で１０％のＮＢＦに浸漬する。組織を２４～４８時間ホルマリン中に保つ。次いで、左側の肺および心臓を切断し、７０％エタノール中に移す。

【0353】

固定した組織をすべて包埋し、スライスして染色する。肺切片を、形態決定のためにヘマトキシリンエオシン（Ｈ＆Ｅ）で、または内皮細胞染色のためにフォンビルブランド因子（ＶＷＦ）で染色する。心臓切片を、コラーゲン線維の可視化および定量のために、Ｈ＆Ｅおよびシリウスレッドまたはトリクローム染色のいずれかで染色する。

【0354】

１２．Ｆｕｌｔｏｎ指数の一部として、心臓を切除し、隔壁で右心室を左心室から分離し、次いで別々に秤量する。Ｆｕｌｔｏｎ指数のためのデータを収集した後、心組織をバイオマーカー分析のために－８０℃で保存する。
実験データの獲得および分析

【0355】

実験追跡は、Ａｘｏｎ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからのＣｌａｍｐｆｉｔソフトウェアによって分析する。

【0356】

少なくとも１分間またはシグナルの喪失まで連続的に記録したＰＡＰを使用して、平均、拡張期、および収縮期の肺圧を抽出する。

【0357】

連続的に記録した全身動脈圧（ＳＡＰ）を使用して、平均、拡張期および収縮期の動脈圧を抽出する。

【0358】

血行動態パラメーターの記録の終わりに、隔壁を含む右心室と左心室および肺葉を摘出して、湿重量を決定する。

【0359】

以下の血行動態および心機能のパラメーターを、適切な統計分析で定量する。
－ 平均全身動脈圧
－ 平均肺動脈圧
－ 拡張期肺圧
－ 収縮期肺圧
－ 収縮期右心室圧
－ 飽和度（ＳＯ２）
－ 体重増加
－ 肺重量
－ Ｆｕｌｔｏｎ指数
－ 心拍数
－ 脈圧

【0360】

さらに、酸化ストレスのバイオマーカー、コラーゲン（Ｓｉｒｃｏｌアッセイ）およびヒドロキシプロリン含量、尿酸、ナトリウム利尿ペプチド（natriretic peptide）：ＢＮＰ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（心筋ストレスのバイオマーカー）、エンドセリン－１（心不全）、アンギオポエチン（血管新生）、フォンビルブランド因子（内皮細胞）、インターロイキン－６（心臓発作、脳卒中のバイオマーカー）、Ｔｏｌｌ受容体Ｃ（心疾患のバイオマーカー）、血漿中サイトカイン、心房性ナトリウム利尿ペプチドＡＮＰ（脳卒中、冠動脈疾患、心筋梗塞および心不全のバイオマーカー）、トポニンＴ／Ｉ（心虚血のバイオマーカー）、ならびにＣＰＫ－ＭＢ（心筋梗塞に関する心臓バイオマーカー）を含む、心臓生化学を表示する分子を検査する。

【0361】

ＰＡＨに関連する遺伝子、例えば骨形成型２（ＢＭＰＲ１）、ＢＭＰ－９、ＡＢＣＣ８、ＴＢＸ４、ＡＣＶＲＬ、ＳＭＡＤ ４／９、ＫＣＮＡ５およびＴＥＴ２も、この実施例で調査される。さらに、心臓および肺において、コラーゲン１型アルファ１（ＣＯＬ１Ａ１）、コラーゲン１型アルファ２（ＣＯＬ１Ａ２）、およびコラーゲン３型アルファ１（ＣＯＬ３Ａ１）は、コラーゲンの形成および分泌に関連する。コラーゲン生合成の重要な酵素であるＰ４ＨＡ１。ＡＣＴＧ２は、筋線維芽細胞の分化に関連する遺伝子である。これらの遺伝子の発現における変化についても調査する。

【0362】

トレプロスチニルパルミチル乾燥粉末製剤Ｄが、Ｓｕ／Ｈｘを負荷したラットの肺血管および心臓における病態生理および組織病理を向上させることが期待される。

【0363】

記載された発明は、その特定の実施形態を参照して説明されているが、本発明の真の趣旨および範囲を逸脱することなく、様々な変更がなされ、均等物に置き換え得ることが当業者によって理解されるべきである。さらに、記載された発明の目的の趣旨および範囲に対して、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスのステップ（複数可）を採用するために多くの修正がなされ得る。このような修正のすべては、本明細書に添付した特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。

【0364】

本明細書において言及した特許、特許出願、特許出願公報、雑誌論文およびプロトコールは、すべての目的で、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
（ａ）約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物：

【化4】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩（式中、Ｒ ^１ は、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、またはオクタデシルである）、
（ｂ）約０．０１ｗｔ％～約３ｗｔ％のＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、
（ｃ）約１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％のロイシン、ならびに
（ｄ）トレハロースおよびマンニトールからなる群から選択された糖である残部
を含み、
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の全体が１００ｗｔ％である、
乾燥粉末組成物。
(項目２)
（ａ）が、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である、項目１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３)
（ａ）が式（Ｉ）の化合物である、項目１または２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４)
Ｒ ^１ がテトラデシルである、項目１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５)
Ｒ ^１ が直鎖状テトラデシルである、項目４に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６)
Ｒ ^１ がペンタデシルである、項目１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７)
Ｒ ^１ が直鎖状ペンタデシルである、項目６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８)
Ｒ ^１ がヘプタデシルである、項目１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９)
Ｒ ^１ が直鎖状ヘプタデシルである、項目８に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０)
Ｒ ^１ がオクタデシルである、項目１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１１)
Ｒ ^１ が直鎖状オクタデシルである、項目１０に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１２)
Ｒ ^１ がヘキサデシルである、項目１から３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１３)
Ｒ ^１ が直鎖状ヘキサデシルである、項目１２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１４)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約０．０３ｗｔ％～約２．１ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１５)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約０．０５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目１から１４のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１６)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．０５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１７)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．０５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目１６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１８)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．０５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目１６または１７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１９)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する、項目１６から１８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２０)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．２５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する、項目１６から１９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２１)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２２)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目２１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２３)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目２１または２２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２４)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．３ｗｔ％～約１．４ｗｔ％で存在する、項目２１から２３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２５)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．５ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する、項目２１から２４のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２６)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２７)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する、項目２６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２８)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する、項目２６または２７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目２９)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．３６ｗｔ％～約１．２６ｗｔ％で存在する、項目２６から２８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３０)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．６ｗｔ％～約０．９ｗｔ％で存在する、項目２６から２９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３１)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３２)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目３１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３３)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目３１または３２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３４)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．３ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する、項目３１から３３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３５)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．５ｗｔ％～約０．７５ｗｔ％で存在する、項目３１から３４のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３６)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３７)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する、項目３６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３８)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する、項目３６または３７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目３９)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．４２ｗｔ％～約１．１２ｗｔ％で存在する、項目３６から３８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４０)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．７ｗｔ％～約０．８ｗｔ％で存在する、項目３６から３９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４１)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４２)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する、項目４１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４３)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１ｗｔ％～約１ｗｔ％で存在する、項目４１または４２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４４)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．３ｗｔ％～約０．７ｗｔ％で存在する、項目４１から４３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４５)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．５ｗｔ％で存在する、項目４１から４４のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４６)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４７)
前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目４６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４８)
前記式（Ｉ）の化合物が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１．５ｗｔ％で存在し、そして前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．１５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目４６または４７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目４９)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．４５ｗｔ％～約１．０５ｗｔ％で存在する、項目４６から４８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５０)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００が、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約０．７５ｗｔ％で存在する、項目４６から４９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５１)
（ａ）約０．１ｗｔ％～約３ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物：

【化5】

またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩（式中、Ｒ ^１ は、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、またはオクタデシルである）、
（ｂ）ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００であって、前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比が約０．１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）～約１：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）の範囲内にある、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、
（ｃ）約１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％のロイシン、ならびに
（ｄ）トレハロースおよびマンニトールからなる群から選択された糖である残部
を含み、
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の全体が１００ｗｔ％である、
乾燥粉末組成物。
(項目５２)
（ａ）が、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である、項目５１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５３)
（ａ）が式（Ｉ）の化合物である、項目５１または５２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５４)
Ｒ ^１ がテトラデシルである、項目５１から５３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５５)
Ｒ ^１ が直鎖状テトラデシルである、項目５４に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５６)
Ｒ ^１ がペンタデシルである、項目５１から５３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５７)
Ｒ ^１ が直鎖状ペンタデシルである、項目５６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５８)
Ｒ ^１ がヘプタデシルである、項目５１から５３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目５９)
Ｒ ^１ が直鎖状ヘプタデシルである、項目５８に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６０)
Ｒ ^１ がオクタデシルである、項目５１から５３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６１)
Ｒ ^１ が直鎖状オクタデシルである、項目６０に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６２)
Ｒ ^１ がヘキサデシルである、項目５１から５３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６３)
Ｒ ^１ が直鎖状ヘキサデシルである、項目６２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６４)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６５)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約２ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６６)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．２ｗｔ％～約１．８ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６７)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％～約１．５ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６８)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．４ｗｔ％～約１．６ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目６９)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７０)
前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩が、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１．５ｗｔ％で存在する、項目５１から６３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７１)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比が、約０．３：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）～約０．７：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）の範囲内にある、項目５１から７０のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７２)
前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００と、前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩との重量比が、約０．５：１（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００：前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩）である、項目５１から７１のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７３)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の総重量の約１５ｗｔ％～約４０ｗｔ％で存在する、項目１から７２のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７４)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約１８ｗｔ％～約３３ｗｔ％で存在する、項目７３に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７５)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約２０ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する、項目７４に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７６)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約２５ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する、項目７５に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７７)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約２７ｗｔ％～約３０ｗｔ％で存在する、項目７６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７８)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約２０ｗｔ％で存在する、項目７５に記載の乾燥粉末組成物。
(項目７９)
前記ロイシンが、前記乾燥粉末組成物の前記総重量の約３０ｗｔ％で存在する、項目７５に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８０)
前記糖がトレハロースである、項目１から７９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８１)
前記糖がマンニトールである、項目１から７９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８２)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８３)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８４)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８２または８３に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８５)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８６)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８５に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８７)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８５または８６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８８)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目８９)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８８に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９０)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目８８または８９に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９１)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９２)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目９１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９３)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）トレハロースである残部を含む、項目９１または９２に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９４)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９５)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目９４に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９６)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目９４または９５に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９７)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％のマンニトールを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９８)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％の前記マンニトールを含む、項目９７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目９９)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．７５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．３０ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）約６８．４５ｗｔ％の前記マンニトールを含む、項目９７または９８に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１００)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０１)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１００に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０２)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約２９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１００または１０１に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０３)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０４)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１０３に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０５)
（ａ）約１．５ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．７ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．６ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１０３または１０４に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０６)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０７)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１０６に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０８)
（ａ）約１ｗｔ％の前記式（Ｉ）の化合物、（ｂ）約０．５ｗｔ％の前記ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、（ｃ）約１９．７ｗｔ％の前記ロイシン、および（ｄ）マンニトールである残部を含む、項目１０６または１０７に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１０９)
前記乾燥粉末組成物が、次世代インパクター（ＮＧＩ）によって測定した場合、約１μｍ～約３μｍの空気動力学的質量中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する粒子を含むエアロゾルの形態で存在する、項目１から１０８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１１０)
前記乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約１．３μｍ～約２．０μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾルの形態で存在する、項目１から１０９のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１１１)
前記乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約１．７μｍ～約２．７μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含むエアロゾルの形態で存在する、項目８１および９４から１０８のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１１２)
前記乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約３０％～約６０％の微粒子率を有する粒子を含むエアロゾルの形態で存在する、項目１から１１１のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物。
(項目１１３)
それを必要とする患者における肺高血圧症を処置するための方法であって、項目１から１１２のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、前記患者の肺に投与するステップを含む、方法。
(項目１１４)
前記肺高血圧症が、肺動脈性肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１１５)
前記肺動脈性肺高血圧症が、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）によって特徴付けされたクラスＩの肺動脈性肺高血圧症である、項目１１４に記載の方法。
(項目１１６)
前記肺動脈性肺高血圧症が、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩの肺動脈性肺高血圧症である、項目１１４に記載の方法。
(項目１１７)
前記肺動脈性肺高血圧症が、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＩＩの肺動脈性肺高血圧症である、項目１１４に記載の方法。
(項目１１８)
前記肺動脈性肺高血圧症が、ＮＹＨＡによって特徴付けされたクラスＩＶの肺動脈性肺高血圧症である、項目１１４に記載の方法。
(項目１１９)
前記肺高血圧症が、世界保健機関（ＷＨＯ）によって特徴付けされた群１の肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１２０)
前記肺高血圧症が、ＷＨＯによって特徴付けされた群２の肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１２１)
前記肺高血圧症が、ＷＨＯによって特徴付けされた群３の肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１２２)
前記肺高血圧症が、ＷＨＯによって特徴付けされた群４の肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１２３)
前記肺高血圧症が、ＷＨＯによって特徴付けされた群５の肺高血圧症である、項目１１３に記載の方法。
(項目１２４)
それを必要とする患者における門脈肺高血圧症または肺線維症を処置するための方法であって、項目１から１１２のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物の有効量を、乾燥粉末吸入器による吸入によって、前記患者の肺に投与するステップを含む、方法。
(項目１２５)
前記投与するステップが、１日に１回、１日に２回、または１日に３回の投薬で実行される、項目１１３から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２６)
前記投与するステップが、前記乾燥粉末組成物をエアロゾル化することと、エアロゾル化された乾燥粉末組成物を、吸入により前記患者の前記肺に投与することとを含む、項目１１３から１２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２７)
前記エアロゾル化された乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約１μｍ～約３μｍのＭＭＡＤを有する粒子を含む、項目１２６に記載の方法。
(項目１２８)
前記エアロゾル化された乾燥粉末組成物が、ＮＧＩで測定した場合、約３０％～約６０％の微粒子率を有する粒子を含む、項目１２６または１２７に記載の方法。
(項目１２９)
肺高血圧症、門脈肺高血圧症、または肺線維症を処置するためのシステムであって、
項目１から１１２のいずれか一項に記載の乾燥粉末組成物、および
乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）
を含む、システム。
(項目１３０)
前記ＤＰＩが、単回用量または複数回用量のいずれかの吸入器である、項目１２９に記載のシステム。
(項目１３１)
前記ＤＰＩが、予め計量されているか、またはデバイスで計量される、項目１２９に記載のシステム。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15A-15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18A-18B】

【図19】

【図20】

【図21A】

【図21B】

【図22A-22B】

【図23A】

【図23B】

【図24A】

【図24B】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】