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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-03-18
(45)【発行日】2024-03-27
(54)【発明の名称】アテローム性動脈硬化症の治療方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240319BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240319BHJP
C07K 16/36 20060101ALI20240319BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N ZNA
A61P9/10 101
C07K16/36
【請求項の数】
15
(21)【出願番号】P 2018552804
(86)(22)【出願日】2017-04-06
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-05-30
(86)【国際出願番号】 AU2017050297
(87)【国際公開番号】W WO2017173494
(87)【国際公開日】2017-10-12
【審査請求日】2020-03-26
【審判番号】
【審判請求日】2022-05-25
(31)【優先権主張番号】16164009.9
(32)【優先日】2016-04-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】500021413
【氏名又は名称】シーエスエル、リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】コン・パノーシス
(72)【発明者】
【氏名】カールヘインツ・ピーター
(72)【発明者】
【氏名】ハミッド・ホッセイニ
(72)【発明者】
【氏名】ヨン－チー・チェン
【合議体】
【審判長】松波 由美子
【審判官】冨永 みどり
【審判官】岡山 太一郎
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１４／２０７１９９（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
A61K
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止する、および／または対象においてアテローム性動脈硬化プラーク形成を防止する、および／または対象において易損性アテローム性動脈硬化プラークを安定化する、および／または対象においてアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止するのに使用するための、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビターを含む医薬組成物であって、ＦＸＩＩのインヒビターは、抗ＦＸＩＩａ抗体のＦｖを含むタンパク質である、前記医薬組成物。
【請求項2】
（ｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラーク形成を防止すること、および／または（ｉｉ）対象において易損性アテローム性動脈硬化プラークを安定化すること、および／または（ｉｉｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止することによって、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するのに使用するための、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビターを含む医薬組成物であって、ＦＸＩＩのインヒビターは、抗ＦＸＩＩａ抗体のＦｖを含むタンパク質である、前記医薬組成物。
【請求項3】
ＦＸＩＩのインヒビターは：（ｉ）ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合する；または
（ｉｉ）ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を阻害する、および／またはＦＸＩＩの活性化を阻害する、
請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
ＦＸＩＩのインヒビターは、抗ＦＸＩＩａ抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
抗ＦＸＩＩａ抗体は：（ｉ）以下を含むＶH：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶL：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１５に記載される配列を含むＣＤＲ３
を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項6】
抗ＦＸＩＩａ抗体は：（ｉ）配列番号１８に記載される配列を含むＶHおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶL、または
（ｉｉ）配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖
を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項7】
抗ＦＸＩＩａ抗体は、ＩｇＧ抗体である、請求項４～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
ＦＸＩＩのインヒビターは、融合パートナーに連結しており、好ましくは、融合パートナーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または半減期増強ポリペプチドを含み、好ましくは、半減期増強ポリペプチドは、アルブミン、アファミン、アルファ－フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。【請求項9】
半減期増強ポリペプチドは、リンカーを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結している、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結されたヒトアルブミンを含む融合タンパク質である、請求項７または９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
ＦＸＩＩのインヒビターは、対象に静脈内または皮下または髄腔内投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
ＦＸＩＩのインヒビターは：（ｉ）単回用量で；または
（ｉｉ）複数回の用量で；または
（ｉｉｉ）持続用量として
対象に投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で対象に投与され、好ましくは、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で対象に投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
対象は、アテローム性動脈硬化症を発生する危険性がある、ならびに／または糖尿病および／もしくは肥満に罹患している、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
対象におけるアテローム性動脈硬化症の治療または防止に使用するためのキットであって：（ａ）請求項１～１４のいずれか１項に記載の少なくとも１種の医薬組成物；
（ｂ）対象におけるアテローム性動脈硬化症の治療または防止でキットを使用するための指示書；および
（ｃ）場合により、少なくとも１つのさらなる治療的に活性な化合物または薬物
を含む、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
アテローム性動脈硬化症は先進国における主な健康負荷であり、世界的に死亡および罹患の主因であり、健康管理システムに対する主な経済的負担となる。肥満および真性糖尿病の大流行が、心筋梗塞（ＭＩ）および卒中などのアテローム性動脈硬化症関連合併症の数をかなり増加させている。
【0003】
アテローム性動脈硬化症は、動脈壁に特異的な局在型の症状発現を有する慢性の炎症性疾患である。アテローム性動脈硬化症の発生は、自然および／または適応免疫系に属する多くの細胞および因子を含む炎症プロセスによって引き起こされる。
【0004】
アテローム性動脈硬化症の発生における炎症の役割が研究されている。例えば、血中白血球、宿主防衛および炎症の媒介物は、アテローム性動脈硬化症の最も初期の病変に局在化する。炎症マーカーの上昇が、心筋の損傷とは無関係に、急性冠動脈症候群の患者の転帰を予測すること示された。さらに、炎症マーカーのＣ反応性タンパク質のレベルによって示されるような低度の慢性炎症は、アテローム性動脈硬化性合併症の危険性と相関することが示された。
【0005】
アテローム性動脈硬化病変またはアテローム性動脈硬化プラークは、２つの広範なカテゴリー：安定および不安定（易損性とも呼ばれる）に分けられる。典型的には、無症候性の傾向がある安定なアテローム性動脈硬化プラークは細胞外基質および平滑筋細胞に富むが、不安定なプラークはマクロファージおよび泡沫細胞に富み、通常脆弱であり、破裂する傾向がある。アテローム性動脈硬化プラークの不安定性は、炎症プロセスによって引き起こされる。アテローム性動脈硬化プラークは、警告なしに不安定になり、破裂する可能性があり、その結果、閉塞性動脈血栓を形成する。破裂したプラークは、プラスミノーゲン活性化因子、カテプシンおよびマトリックスメタロプロテイナーゼを含めたタンパク質分解酵素を分泌する、マクロファージなどの炎症細胞、ならびに線維化組織によって、激しく浸潤される。破裂したアテローム性動脈硬化プラークは、心筋梗塞および卒中として臨床的に顕在化する。結果として、多くの患者が突然の心臓死または致死的な卒中を患う。
【0006】
アテローム性動脈硬化病変の最も一般的な治療選択は、脂質低下薬物、例えばスタチン（例えば、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチンおよびフルバスタチン）ならびに血液希釈薬物（例えば、アスピリン、クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロル、ワルファリンおよびヘパリンのような抗凝固剤）の投与を含む。しかし、後者の治療剤の継続した使用は、危険な出血の危険性を高める。
【0007】
アテローム性動脈硬化症における凝固因子の役割も研究された。例えば、非特許文献１は、アポリポタンパク質Ｅおよび第ＸＩ因子（ＦＸＩ）を欠くマウスにおいて、アテローム性動脈硬化症の発生を研究した。この著者らは、ＦＸＩ欠損マウスでアテローム発生が遅くなることを発見した。しかし、これらの研究は、生まれたときからＦＸＩを欠いた動物に基づいており、アテローム性動脈硬化症の発生後または発生中にこのタンパク質を阻害することの効果を研究しない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【文献】Ｓｃｈｎｅｒｂら（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．、３６：４７５～４８１、２０１６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
したがって、アテローム性動脈硬化症およびその血栓性の合併症に対する向上した治療が当技術分野において必要である。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明をもたらす際に、本発明者らは、アテローム性動脈硬化症、例えば、アテローム性動脈硬化プラーク形成ならびに／またはアテローム性動脈硬化プラークの不安定性および破裂のマウスモデルにおける第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）の阻害効果を研究した。本発明者らは、ＦＸＩＩ阻害の効果を、このタンパク質が多数の生物学的経路に対して効果があり、それらのうちのいくつかがアテローム性動脈硬化症、例えば炎症に関与する可能性があるという本発明者らの理解に基づいて研究した。本発明者らは、ＦＸＩＩの阻害が、アテローム性動脈硬化症の進行を遅らせるだけでなく、病変における炎症細胞の蓄積の低減、コラーゲン沈着の増大および壊死性コア領域の低減によって証明されたように、アテローム性動脈硬化病変の発生を減弱する、病変サイズを低減する、および不安定なアテローム性動脈硬化プラークを安定化することを発見した。本発明者らは、認められた、すなわちヒトで観察される状況を模倣する、アテローム性動脈硬化症の動物モデルにＦＸＩＩのインヒビターを投与することによって、これらの効果を実証した。実験的証拠は、ＦＸＩＩインヒビターが、アテローム性動脈硬化病変の進行および発生を減弱すること、動脈炎を低減させることならびにプラークを安定化することによって、アテローム性動脈硬化症の治療および／または防止に有用であるという発見を含む。
【0011】
本発明者らによる発見は、ＦＸＩＩを阻害することによって対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するための方法の基礎を提供する。本発明者らによる発見は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療もしくは防止するための基礎、または対象においてアテローム性動脈硬化症を治療もしくは防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターも提供する。
【0012】
言い換えれば、本発明者らは、（ｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラーク形成を防止すること、および／または（ｉｉ）対象において易損性アテローム性動脈硬化プラークを安定化すること、および／または（ｉｉｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止することによって、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療もしくは防止するための基礎、または対象においてアテローム性動脈硬化症を治療もしくは防止するのに使用するための第ＸＩＩ因子のインヒビターを提供する。
【0013】
例えば、本開示は、ＦＸＩＩのインヒビターを対象に投与することを含む、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療するための方法を提供する。別の例では、本開示は、ＦＸＩＩのインヒビターを対象に投与することを含む、対象においてアテローム性動脈硬化症を防止するための方法を提供する。
【0014】
代替例では、本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。別の例では、本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。
【0015】
本発明者らは、このインヒビターが対象においてアテローム性動脈硬化病変の進行を小さくすることができることも発見した。したがって、本開示はさらに、対象においてアテローム性動脈硬化症の進行を小さくする方法または対象においてアテローム性動脈硬化症の進行を小さくするのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。例えば、本開示は、対象におけるアテローム性動脈硬化プラークの破裂の危険性を低減する、もしくは対象におけるアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止する方法、または対象におけるアテローム性動脈硬化プラークの破裂の危険性を低減する、もしくは対象におけるアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。一例では、本開示は、不安定なアテローム性動脈硬化プラークの安定化のための方法、または不安定なアテローム性動脈硬化プラークの安定化に使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。一例では、本開示は、アテローム性動脈硬化プラーク形成を防止するための方法、またはアテローム性動脈硬化プラーク形成を防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。
【0016】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的インヒビターである。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合する。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を阻害する。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩａの活性を阻害する。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩに結合し、ＦＸＩＩの活性化を阻害する。一例では、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は少なくとも約５０％阻害される。例えば、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は約６０％、または約７０％、または約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９５％、または約９９％、または約１００％阻害される。ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を決定するための方法は当技術分野で公知であり、および／または本明細書に記載される。
【0017】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターである。例えば、ＦＸＩＩインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４である。別の例では、ＦＸＩＩインヒビターはＳＰＩＮＫ－１である。さらなる例では、ＦＸＩＩインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４またはＳＰＩＮＫ－１の変異体である。
【0018】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４ではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体ではない。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１ではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１の変異体ではない。
【0019】
一例では、本開示の方法または本開示で使用するためのＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩのインヒビターを投与することを含み、このインヒビターは以下を含む：
（ｉ）野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４ポリペプチド配列（配列番号１）、もしくは：
（ａ）配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１；および／もしくは、
（ｂ）配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；または、
（ｉｉ）野生型ＳＰＩＮＫ－１ポリペプチド配列（配列番号２）、もしくは：
（ａ）Ｎ末端アミノ酸位置２～１３を配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２；および／もしくは、
（ｂ）配列番号２に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；ならびに／または、
（ｉｉｉ）ＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１（配列番号３）、Ｋ２（配列番号４）もしくはＫ３（配列番号５）のうちの１つ。
（ｉ）野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４ポリペプチド配列（配列番号１）、もしくは：
（ａ）配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１；および／もしくは、
（ｂ）配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；または、
（ｉｉ）野生型ＳＰＩＮＫ－１ポリペプチド配列（配列番号２）、もしくは：
（ａ）Ｎ末端アミノ酸位置２～１３を配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２；および／もしくは、
（ｂ）配列番号２に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；ならびに／または、
（ｉｉｉ）ＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１（配列番号３）、Ｋ２（配列番号４）もしくはＫ３（配列番号５）のうちの１つ。
【0020】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号１に記載される配列を含む。
【0021】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは改変Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された、配列番号１に記載される配列を含む。
【0022】
別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に記載される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有し、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に対して約７５％の同一性、または配列番号１に対して約８０％の同一性、または配列番号１に対して約８５％の同一性、または配列番号１に対して約９０％の同一性、または配列番号１に対して約９５％の同一性、または配列番号１に対して約９８％の同一性、または配列番号１に対して約９９％の同一性を有する。
【0023】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターＳＰＩＮＫ－１の配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号２に記載される配列を含む。
【0024】
別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｎ末端アミノ酸位置２～１３を配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２に記載される配列を含む。
【0025】
別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に記載される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有し、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に対して約７５％の同一性、または配列番号２に対して約８０％の同一性、または配列番号２に対して約８５％の同一性、または配列番号２に対して約９０％の同一性、または配列番号２に対して約９５％の同一性、または配列番号２に対して約９８％の同一性、または配列番号２に対して約９９％の同一性を有する。
【0026】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは可変領域断片（Ｆｖ）を含むタンパク質である。例えば、タンパク質は以下からなる群から選択される：
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）；または
（ｉｉｉ）ダイアボディ；
（ｉｖ）トリアボディ；
（ｖ）テトラボディ；
（ｖｉ）Ｆａｂ；
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２；
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ；
（ｉｘ）抗体の定常領域、Ｆｃもしくは重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２および／もしくはＣＨ３に連結した（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ；または
（ｘ）抗体。
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）；または
（ｉｉｉ）ダイアボディ；
（ｉｖ）トリアボディ；
（ｖ）テトラボディ；
（ｖｉ）Ｆａｂ；
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２；
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ；
（ｉｘ）抗体の定常領域、Ｆｃもしくは重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２および／もしくはＣＨ３に連結した（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ；または
（ｘ）抗体。
【0027】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは抗体である。例えば、抗体は抗ＦＸＩＩ抗体である。別の例では、抗体は抗ＦＸＩＩａ抗体である。
【0028】
例示的抗体は全長および／またはネイキッド抗体である。
【0029】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは組換え、キメラ、ＣＤＲ移植、ヒト化、合成ヒト化、霊長類化、脱免疫化またはヒトのタンパク質である。
【0030】
一例では、抗体はＩｇＧ抗体である。
【0031】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６に記載される配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【0032】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号７に記載される配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【0033】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号７に記載される配列を含むＶＬを含む。
【0034】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６および配列番号７のＶＨおよび／またはＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を含む。
【0035】
一例では、タンパク質または抗体は、前述のタンパク質または抗体のうちのいずれかをコードする核酸によってコードされたタンパク質または抗体の任意の形態であり、例えば、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基を欠く変異体である。
【0036】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１５に記載される配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１５に記載される配列を含むＣＤＲ３。
【0037】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１６に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１６に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0038】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0039】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ
（ａ）配列番号８に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載されるＣＤＲ２（ここで、位置３のＸはＤであり、位置４のＸはＩであり、位置５のＸはＰであり、位置６のＸはＴであり、位置７のＸはＫであり、位置８のＸはＧである）；および
（ｃ）配列番号１１に記載されるＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ
（ａ）配列番号１３に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載されるＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載されるＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ
（ａ）配列番号８に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載されるＣＤＲ２（ここで、位置３のＸはＤであり、位置４のＸはＩであり、位置５のＸはＰであり、位置６のＸはＴであり、位置７のＸはＫであり、位置８のＸはＧである）；および
（ｃ）配列番号１１に記載されるＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ
（ａ）配列番号１３に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載されるＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載されるＣＤＲ３。
【0040】
例えば、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号１８に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶＬを含む。
【0041】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はラムダ軽鎖定常領域を含む。
【0042】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。
【0043】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖を含む。
【0044】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は組成物内に存在する。例えば、組成物は、本明細書に記載の抗体可変領域またはＶＨまたはＶＬまたは抗体を含むタンパク質を含む。一例では、組成物は、タンパク質または抗体の１種またはそれ以上の変異体をさらに含む。例えば、組成物は、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基、例えば、抗体もしくはＶ領域のＮ末端グルタミンを欠く変異体および／または分泌シグナルのすべてまたは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド化変異体は、イソアスパラギン酸およびアスパラギン酸アイソフォームを生成することができ、または隣接するアミノ酸残基を含むスクシンアミドさえもたらすことができる。コードされたグルタミン残基の脱アミド化変異体はグルタミン酸をもたらすことができる。特定のアミノ酸配列を参照する場合に、そのような配列および変異体の異種混合物を含む組成物が含まれることが意図される。
【0045】
本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または半減期増強ポリペプチドを含む。
【0046】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的に融合パートナーに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介して融合パートナーに連結している。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的に半減期増強ポリペプチドに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介して半減期増強ポリペプチドに連結している。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的にＰＥＧに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介してＰＥＧに連結している。
【0047】
一例では、リンカーは介在性ペプチドリンカーである。例えば、リンカーは切断可能なリンカーである。
【0048】
一例では、半減期増強ポリペプチドはアルブミン、アファミン、アルファ－フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される。例えば、半減期増強ポリペプチドはアルブミンである。
【0049】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩインヒビターに連結したヒトアルブミンを含む融合タンパク質である。
【0050】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは非経口的に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは静脈内または皮下または髄腔内に投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは皮下に投与される。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは静脈内に投与される。
【0051】
本明細書に記載の任意の方法の一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、１回またはそれ以上の用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは：
（ｉ）単回用量で；または
（ｉｉ）複数回の用量で；または
（ｉｉｉ）持続注入もしくは塗布として
対象に投与される。
（ｉ）単回用量で；または
（ｉｉ）複数回の用量で；または
（ｉｉｉ）持続注入もしくは塗布として
対象に投与される。
【0052】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは対象に単回用量で投与される。
【0053】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは複数回の用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、２回用量または３回用量または４回用量または５回用量またはそれ以上の用量として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数時間の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１時間または約２時間または約３時間または約４時間または約６時間または約８時間または約１２時間または約１６時間または約２０時間または約２４時間の期間で隔てられる。
【0054】
例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数日の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１日または約２日または約３日または約４日または約５日または約６日または約７日の期間で隔てられる。
【0055】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、少なくとも１４日または少なくとも２８日隔てられる。
【0056】
例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数週間の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１週間または約２週間または約３週間または約４週間または約５週間または約６週間の期間で隔てられる。
【0057】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は少なくとも１か月間隔てられる。
【0058】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは投与過程を通して同じである。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは投与過程を通して異なる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、所定の用量数に従って、療法の開始時に週１回の頻度で投与され、次いで月１回の頻度で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは変動し得る。
【0059】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは持続用量として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはある期間にわたって持続注入として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは約１分～約２４時間の期間にわたって投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１０分～約１２時間または約１０分～約６時間または約１０分～約５時間または約１０分～約４時間または約１０分～約３時間または約１０分～約２時間または約１０分～約１時間または約３０分の期間にわたって投与される。
【0060】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは複数回投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは１回またはそれ以上投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化症が治療されるまたは防止されるまで投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、数日～数か月の期間にわたって投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１日または約２日または約３日または約４日または約５日または約６日または約１週間または約２週間または約４週間または約６週間または約２か月にわたって投与される。
【0061】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは治療的または予防的に有効な量で投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重または約５０ｍｇ／ｋｇ体重または約１００ｍｇ／ｋｇ体重または約２００ｍｇ／ｋｇ体重または約５００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇまたは約５０ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇまたは約５０ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【0062】
一例では、対象はアテローム性動脈硬化症を有する。一例では、対象はアテローム性動脈硬化症に罹患していると診断されている。一例では、対象はアテローム性動脈硬化症の治療を受けている。一例では、対象はアテローム性動脈硬化症に関連した状態（すなわち、心筋梗塞）の治療を受けている。例えば、対象はスタチンまたはワルファリンまたはβ－遮断薬または抗血小板薬による治療を受けている。
【0063】
一例では、対象は以前に心筋梗塞に罹患している。一例では、対象はスタチン、ワルファリンおよびβ－遮断薬による治療を受けている。
【0064】
本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、対象は、アテローム性動脈硬化症を発生する危険性がある。この関連で、ＦＸＩＩのインヒビターは防止的もしくは予防的様式で使用され、または一次防止様式で使用されると言うことができる。アテローム性動脈硬化症を発生する危険性がある例示的対象は、糖尿病および／または肥満に罹患している。例えば、糖尿病は２型糖尿病である。
【0065】
アテローム性動脈硬化症に罹患する危険性がある対象のさらなるまたは代替の特徴としては、以下の特徴の１つまたはそれ以上が挙げられる：
・アンギナおよび／または卒中および／または心臓発作に既に罹患している；
・末梢動脈疾患を有する；
・心疾患の家族歴を有する；
・高い血漿低密度リポタンパク質レベルを有する；
・低い血漿高密度リポタンパク質レベルを有する；および／または
・高血圧を有する。
・アンギナおよび／または卒中および／または心臓発作に既に罹患している；
・末梢動脈疾患を有する；
・心疾患の家族歴を有する；
・高い血漿低密度リポタンパク質レベルを有する；
・低い血漿高密度リポタンパク質レベルを有する；および／または
・高血圧を有する。
【0066】
一例では、アテローム性動脈硬化症に罹患する危険性がある対象は高い血漿低密度リポタンパク質レベルを有する。例えば、血漿低密度リポタンパク質レベルは少なくとも１６０ｍｇ／ｄＬである。
【0067】
一例では、アテローム性動脈硬化症に罹患する危険性がある対象は低い血漿高密度リポタンパク質レベルを有する。例えば、血漿高密度リポタンパク質レベルは約５０ｍｇ／ｄＬ未満である。
【0068】
一例では、アテローム性動脈硬化症に罹患する危険性がある対象は高血圧を有する。例えば、血圧レベルは少なくとも１４０／９０ｍｍＨｇである。
【0069】
一例では、対象はさらに５５歳以上、例えば、６５歳以上、または７５歳以上の年齢である。
【0070】
一例では、対象は炎症マーカーのレベルが上昇している。例えば、対象はＣ反応性タンパク質のレベルが上昇している（例えば、３～５ｍｇ／Ｌ）。
【0071】
本明細書に記載の任意の方法の一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の発症の前または後に対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは予防的または治療的に投与される。一例では、インヒビターは予防的に対象に投与される。一例では、インヒビターは治療的に対象に投与される。
【0072】
本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、対象のアテローム性動脈硬化症は心筋梗塞または卒中を引き起こし得る。例えば、アテローム性動脈硬化プラークの破裂は破裂部位で閉塞性動脈血栓症を引き起こし得、これは、臨床的に心筋梗塞または卒中を顕在化する。したがって、本開示は、本明細書に記載の方法を実施することによって、閉塞性動脈血栓症および／または心筋梗塞および／または卒中の危険性を低減する方法をさらに提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載の方法を実施することによって、閉塞性動脈血栓症および／または心筋梗塞および／または卒中を防止する方法を提供する。
【0073】
前述のそれぞれを評価する方法は当技術分野で公知であり、および／または本明細書に記載される。
【0074】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、以下の１つまたはそれ以上の効果を有するのに十分な量で投与される：
（ｉ）対象において閉塞性動脈血栓の可能性を低減させる；
（ｉｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変サイズを低減させる；
（ｉｉｉ）対象においてプラークの安定化を増大させる；
（ｉｖ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変における炎症細胞の蓄積を低減させる；および／または
（ｖ）対象においてアテローム生成促進的細胞集団を低減させる。
（ｉ）対象において閉塞性動脈血栓の可能性を低減させる；
（ｉｉ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変サイズを低減させる；
（ｉｉｉ）対象においてプラークの安定化を増大させる；
（ｉｖ）対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変における炎症細胞の蓄積を低減させる；および／または
（ｖ）対象においてアテローム生成促進的細胞集団を低減させる。
【0075】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化プラークを安定化するのに十分な量で投与される。例えば、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変における脂質蓄積が低減する。一例では、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変におけるコラーゲン沈着が増大する。一例では、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変における壊死性コア領域が低減する。一例では、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変における平滑筋細胞数が増加する。別の例では、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変における血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１）の発現が低減する。したがって、本開示は、本明細書に記載の方法を実施すること、または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターによって、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変において、脂質蓄積を低減させる、および／もしくはコラーゲン沈着を増大させる、および／もしくは壊死性コア領域を低減させる、および／もしくは平滑筋細胞数を増加させる、および／も
しくは血管細胞接着分子－１の発現を低減させるための方法、またはこれらに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。例えば、低減および／または増大は、ＦＸＩＩのインヒビターで治療されない対象のアテローム性動脈硬化プラークに対するものである。一例では、低減および／または増大はＦＸＩＩのインヒビターによる治療の開始前の対象のアテローム性動脈硬化プラークに対するものである。
しくは血管細胞接着分子－１の発現を低減させるための方法、またはこれらに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。例えば、低減および／または増大は、ＦＸＩＩのインヒビターで治療されない対象のアテローム性動脈硬化プラークに対するものである。一例では、低減および／または増大はＦＸＩＩのインヒビターによる治療の開始前の対象のアテローム性動脈硬化プラークに対するものである。
【0076】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変における炎症細胞の蓄積を低減するのに十分な量で投与される。例えば、対象のアテローム性動脈硬化プラークの病変におけるマクロファージの蓄積が低減する。
【0077】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化プラーク中のアテローム生成促進的細胞集団を低減させるのに十分な量で投与される。例えば、プラーク中の循環ナチュラルキラーおよび／またはナチュラルキラーＴ細胞集団が低減する。
【0078】
本明細書に記載の任意の方法の一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化症の発生の前または後に投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の発生の前に投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の発生の後に投与される。
【0079】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化症の症状の発症の後に投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化症の症状の１つまたはそれ以上を軽減または低減する用量で投与される。
【0080】
アテローム性動脈硬化症の症状は当業者に明らかであり、例えば、以下が挙げられる：
・労作またはアンギナによる胸痛；
・安静時の胸痛；
・腕、肩、腹部または顎の痛み；
・心停止；
・息切れ；
・全身の体調不良；
・対象の腕もしくは脚の麻痺もしくは脱力；
・発話困難もしくは不明瞭発語；
・一時的視力喪失；
・対象の顔の筋肉の下垂；および／または
・疲労。
・労作またはアンギナによる胸痛；
・安静時の胸痛；
・腕、肩、腹部または顎の痛み；
・心停止；
・息切れ；
・全身の体調不良；
・対象の腕もしくは脚の麻痺もしくは脱力；
・発話困難もしくは不明瞭発語；
・一時的視力喪失；
・対象の顔の筋肉の下垂；および／または
・疲労。
【0081】
本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、対象は哺乳動物、例えば、ヒトなどの霊長類である。
【0082】
本明細書に記載の使用のための治療方法またはＦＸＩＩのインヒビターは、アテローム性動脈硬化症の影響を低減する、治療するまたは防止するために、さらなる化合物を投与することをさらに含むことができる。
【0083】
本開示は、それらを必要とする対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを含む組成物も提供する。
【0084】
本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するための医薬の製造におけるＦＸＩＩのインヒビターの使用も提供する。
【0085】
本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するのに使用するために、指示書とともにパッケージ化された少なくとも１種のＦＸＩＩのインヒビターを含むキットも提供する。場合により、キットは治療的に活性な化合物または薬物をさらに含む。
【0086】
本開示は、場合により治療的に活性な化合物または薬物と組み合わせて、アテローム性動脈硬化症に罹患しているまたはアテローム性動脈硬化症に罹患する危険性がある対象にＦＸＩＩのインヒビターを投与するために、指示書とともにパッケージ化された少なくとも１種のＦＸＩＩのインヒビターを含むキットも提供する。
【0087】
アテローム性動脈硬化症の例示的影響およびＦＸＩＩのインヒビターは本明細書に記載され、前の５段落に示された本開示の例に準用すると解釈されるものとする。
【0088】
発明者は、ヒト対象の治療に使用するのに適するＦＸＩＩのインヒビター、例えば、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も産生した。このインヒビターは、すべてではないがほとんどのフレームワーク領域中残基を生殖系列ヒト抗体のものと同じにするように改変され、それによって、免疫原性の可能性を低減する、親和性成熟ヒト抗体である。この抗体はまた、ＦＸＩＩａを阻害することができ、優れた製造可能特性を有する。したがって、本開示は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も提供し、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号１８に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶＬを含む。
【0089】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はラムダ軽鎖定常領域を含む。
【0090】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、
安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。
安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。
【0091】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖を含む。
【0092】
一例では、本開示は、抗ＦＸＩＩ抗体または抗原結合性断片および担体、例えば、医薬的に許容可能な担体を含む組成物を提供する。
【0093】
一例では、組成物は、タンパク質または抗体の１種またはそれ以上の変異体をさらに含む。例えば、組成物は、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基、例えば、抗体もしくはＶ領域のＮ末端グルタミンを欠く変異体および／または分泌シグナルのすべてまたは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド化変異体は、イソアスパラギン酸およびアスパラギン酸アイソフォームを生成することができ、または隣接するアミノ酸残基を含むスクシンアミドさえもたらすことができる。コードされたグルタミン残基の脱アミド化変異体はグルタミン酸をもたらすことができる。特定のアミノ酸配列を参照する場合に、そのような配列および変異体の異種混合物を含む組成物が含まれることが意図される。
【0094】
本開示は、医学的使用のための抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【0095】
本開示は、対象において障害を治療または防止するための方法も提供し、この方法は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、障害は静脈、動脈または毛細血管の血栓形成、心臓の血栓形成、ヒトまたは動物対象の血液を人工表面と接触させる間および／または後の血栓形成、血栓塞栓症からなる群から選択され、この方法は、血栓の形成および／または安定化を防止し、それによって、３次元の腔内血栓成長を防止することによるか、または腔内血栓；ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ誘導性キニン形成またはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体活性化と関係がある、間質性肺疾患、炎症、神経学的炎症性疾患、補体活性化、線維素溶解、血管新生および疾患を防止および／または治療することによる。
【0096】
本開示は、ヒトまたは動物対象の腔内血栓の治療方法も提供し、この方法は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含み、腔内血栓は、静脈、動脈または毛細血管の血栓形成、心臓の血栓形成、ヒトまたは動物対象の血液を人工表面と接触させる間および／または後の血栓形成、血栓塞栓症；ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ誘導性キニン形成またはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体活性化と関係がある、間質性肺疾患、炎症、神経学的炎症性疾患、補体活性化、線維素溶解、血管新生および疾患からなる群から選択される障害と関係がある。例えば、静脈または動脈の血栓形成は、卒中、心筋梗塞、深部静脈血栓症、門脈血栓症、腎静脈血栓症、頸静脈血栓症、脳静脈洞血栓症、バッド・キアリ症候群またはパジェット・シュレッター病である。
【0097】
一例では、ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ誘導性キニン形成と関係がある疾患は、遺伝性血管性浮腫、肺の細菌感染症、トリパノソーマ感染症、低血圧ショック、膵炎、シャーガス病、関節痛風、関節炎、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）および敗血症の群から選択される。
【0098】
一例では、間質性肺疾患は線維増殖性および／または特発性肺線維症である。
【0099】
一例では、血栓形成は、ヒトまたは動物対象に実施される医療処置の間および／または後に、前記ヒトまたは動物対象の血液を人工表面と接触させる間および／または後に生じ、前記抗体またはその抗原結合性断片は、前記医療処置の前および／または間および／または後に投与され、さらに、
（ｉ）人工表面は対象の血液量の少なくとも８０％に曝露され、人工表面は少なくとも０．２ｍ２であり、または
（ｉｉ）人工表面は対象の体外で血液を採取するための容器であり、または
（ｉｉｉ）人工表面は、ステント、弁、腔内カテーテルまたは血液の体内補助ポンピングシステム（ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｎａｌ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｐｕｍｐｉｎｇ ｏｆ ｂｌｏｏｄ）である。
（ｉ）人工表面は対象の血液量の少なくとも８０％に曝露され、人工表面は少なくとも０．２ｍ２であり、または
（ｉｉ）人工表面は対象の体外で血液を採取するための容器であり、または
（ｉｉｉ）人工表面は、ステント、弁、腔内カテーテルまたは血液の体内補助ポンピングシステム（ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｎａｌ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｐｕｍｐｉｎｇ ｏｆ ｂｌｏｏｄ）である。
【0100】
本開示は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片でコーティングされた医療装置も提供し、この装置は心肺バイパス機、血液の酸素化のための体外膜型酸素供給システム、血液の補助ポンピング用装置、血液透析装置、血液の体外濾過用装置、血液の採取に使用するための貯蔵用容器、腔内カテーテル、ステント、人工心臓弁、ならびに／またはチューブ、カニューレ、遠心ポンプ、弁、ポートおよび／もしくはダイバーターを含めた、前記装置のうちのいずれか１つのための付属品である。
【0101】
本開示は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を医療処置を受けている患者に投与することを含む方法も提供し、医療処置は、
（ａ）心臓、
（ｂ）以下から選択される少なくとも１つの血管：大動脈、大動脈弓、頸動脈、冠動脈、腕頭動脈、椎骨脳底循環、頭蓋内動脈、腎動脈、肝動脈、腸間膜動脈および／または心臓に対して頭方の動脈系血管、
（ｃ）患者が既知の中隔欠損を有する場合、静脈血管；
の少なくとも１つとの接触を含み：
医療処置は、少なくとも１つの標的器官において虚血を引き起こし得る、体内の前記血管の少なくとも１つの中の少なくとも１つの塞栓の遊離、ならびに医療処置の前、間および／または後における抗体またはその抗原結合性断片の投与を含む。
（ａ）心臓、
（ｂ）以下から選択される少なくとも１つの血管：大動脈、大動脈弓、頸動脈、冠動脈、腕頭動脈、椎骨脳底循環、頭蓋内動脈、腎動脈、肝動脈、腸間膜動脈および／または心臓に対して頭方の動脈系血管、
（ｃ）患者が既知の中隔欠損を有する場合、静脈血管；
の少なくとも１つとの接触を含み：
医療処置は、少なくとも１つの標的器官において虚血を引き起こし得る、体内の前記血管の少なくとも１つの中の少なくとも１つの塞栓の遊離、ならびに医療処置の前、間および／または後における抗体またはその抗原結合性断片の投与を含む。
【0102】
本開示は、血管透過性の増大、特に網膜の血管透過性の増大に関連する状態、例えば、進行性網膜症、網膜症の視力を脅かす合併症、黄斑浮腫、非増殖性網膜症、増殖性網膜症、網膜浮腫、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症および網膜外傷を治療または防止するための方法も提供し、この方法は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0103】
【図1】大動脈洞病変（Ａ～Ｅ）および大動脈弓病変（Ｆ～Ｈ）におけるアテローム性動脈硬化症の発生に対する抗ＦＸＩＩ抗体治療の効果を示す図である。抗ＦＸＩＩ抗体治療は、全病変サイズ（Ａ、Ｆ）；脂質蓄積（Ｂ、Ｇ）、マクロファージ数（Ｃ、Ｈ）、コラーゲンの蓄積（Ｄ）および壊死性コア領域（Ｅ）を減弱する。平均±ＳＥＭ；ｎ＝６；＊：対照と比較してＰ＜０．０５、対応のないＴ検定。
【図2】抗ＦＸＩＩ抗体で治療されたアテローム性動脈硬化病変を有するマウスの血液におけるリンパ球プロファイルのフローサイトメトリー解析を示す図である。平均±ＳＥＭ；ｎ＝６；＊：対照と比較してＰ＜０．０５、対応のないＴ検定。
【図3】抗ＦＸＩＩで治療されたアテローム性動脈硬化病変を有するマウスのリンパ節におけるリンパ球プロファイルのフローサイトメトリー解析を示す図である。平均±ＳＥＭ；ｎ＝６；＊：対照と比較してＰ＜０．０５、対応のないＴ検定。
【図4】抗ＦＸＩＩ治療が局部的炎症を低減し、大動脈洞病変（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ）および大動脈弓病変（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）のプラークの安定化をもたらすことを示す図である。ＶＣＡＭ－１の発現（Ａ、Ｂ）；壊死性コア領域（Ｃ、Ｄ）、α－平滑筋アクチンの発現（Ｅ、Ｆ）およびコラーゲンの蓄積（Ｇ、Ｈ）について、大動脈洞病変を解析した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝６；＊：対照と比較してＰ＜０．０５、対応のないＴ検定。
【図5】抗ＦＸＩＩ抗体処理がプラークの安定化を達成することを示す図である。記載のタンデム狭窄手術を使用して不安定なアテローム性動脈硬化プラークをセグメントＩに生成し（Ａ）、アテローム性動脈硬化プラーク領域（Ｂ）；脂質量（Ｃ）；マクロファージの蓄積（Ｄ）；ＶＣＡＭ－１の発現（Ｅ）；壊死性コア領域（Ｆ）；α－平滑筋アクチンの発現（Ｇ）およびコラーゲンの蓄積（Ｈ）について解析した。平均±ＳＥＭ、抗ＦＸＩＩａ ｍＡｂ：ｎ＝１７、ＩｇＧアイソタイプ対照：ｎ＝１６、＊：対照と比較してＰ＜０．０５、対応のないＴ検定。
【発明を実施するための形態】
【0104】
配列表の解説
配列番号１は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４のアミノ酸配列である。
配列番号２は野生型ＳＰＩＮＫ－１のアミノ酸配列である。
配列番号３はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１のアミノ酸配列である。
配列番号４はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ２のアミノ酸配列である。
配列番号５はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ３のアミノ酸配列である。
配列番号６は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶＨからのアミノ酸配列である。
配列番号７は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶＬからのアミノ酸配列である。
配列番号８は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号９は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１０は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１１は 抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１２は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１３は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１４は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１５は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１６は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１７は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１８は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶＨのアミノ酸配列である。
配列番号１９は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶＬのアミノ酸配列である。
配列番号２０は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２１は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２２はヒト第ＸＩＩ因子からのアミノ酸配列である。
配列番号２３はヒトアルブミンの成熟型のアミノ酸配列である。
配列番号２４はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。
配列番号２５はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。
配列番号１は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４のアミノ酸配列である。
配列番号２は野生型ＳＰＩＮＫ－１のアミノ酸配列である。
配列番号３はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１のアミノ酸配列である。
配列番号４はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ２のアミノ酸配列である。
配列番号５はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ３のアミノ酸配列である。
配列番号６は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶＨからのアミノ酸配列である。
配列番号７は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶＬからのアミノ酸配列である。
配列番号８は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号９は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１０は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１１は 抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１２は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１３は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１４は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１５は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１６は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１７は抗ＦＸＩＩ抗体のＶＬ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１８は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶＨのアミノ酸配列である。
配列番号１９は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶＬのアミノ酸配列である。
配列番号２０は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２１は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２２はヒト第ＸＩＩ因子からのアミノ酸配列である。
配列番号２３はヒトアルブミンの成熟型のアミノ酸配列である。
配列番号２４はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。
配列番号２５はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。
【0105】
一般原則
本明細書全体にわたって、特に記載のない限りまたは文脈上特に必要でない限り、単一工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物に対する言及は、そうした工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物の１つおよび複数（すなわち、１つまたはそれ以上）を包含すると解釈されるものとする。
本明細書全体にわたって、特に記載のない限りまたは文脈上特に必要でない限り、単一工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物に対する言及は、そうした工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物の１つおよび複数（すなわち、１つまたはそれ以上）を包含すると解釈されるものとする。
【0106】
本開示が具体的に記載されるもの以外の変形および改変を受けることができることを当業者であれば理解するであろう。本開示がすべてのそのような変形および改変を含むことを理解されたい。本開示は、本明細書で個々にまたはまとめて言及されるまたは示される工程、特色、組成物および化合物のすべて、ならびに前記工程または特色のありとあらゆる組み合わせまたは任意の２つまたはそれ以上も含む。
【0107】
本開示は、本明細書に記載の特定例によって範囲が制限されるものではなく、特定例は、例示の目的のみを意図する。機能的に等価な生成物、組成物および方法は明らかに本開示の範囲内である。
【0108】
本明細書における本開示のいかなる例も、特に記載のない限り、本開示の任意の他の例に準用すると解釈されるものとする。
【0109】
特に他に定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学および生化学において）当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有すると解釈されるものとする。
【0110】
別段指示がない限り、本開示で利用される組換えタンパク質、細胞培養および免疫学的技法は標準的な手順であり、当業者に周知である。そのような技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編）、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１および２巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．ＧｌｏｖｅｒおよびＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１～４巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５および１９９６）ならびにＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までのすべての更新を含む）、Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）ならびにＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在までのすべての更新を含む）などの出典の文献の全体にわたって記載および説明されている。
【0111】
本明細書における可変領域およびその一部、免疫グロブリン、抗体およびその断片の説明および定義は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７および１９９１、Ｂｏｒｋら、Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２、３０９～３２０、１９９４、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７、１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２、８７７～８８３、１９８９、ならびに／またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３、９２７～９４８、１９９７における議論によってさらに明らかになり得る。
【0112】
本明細書におけるタンパク質または抗体のいかなる議論も、製造および／または貯蔵の間に産生される、タンパク質または抗体の任意の変異体を含むと理解される。例えば、製造または貯蔵の間に、抗体は（例えば、アスパラギンまたはグルタミン残基において）脱アミド化される、および／またはグリコシル化の変化がある、および／またはピログルタミンに変換したグルタミン残基を有する、および／または除去されたもしくは「切り取られた（ｃｌｉｐｐｅｄ）」Ｎ末端もしくはＣ末端残基を有する、および／または不完全にプロセッシングされた（結果として、抗体の末端に残る）シグナル配列の一部もしくはすべてを有する可能性がある。特定のアミノ酸配列を含む組成物は、記載されたもしくはコードされた配列および／または記載されたまたはコードされた配列の変異体の異種混合物でもよいことが理解されよう。
【0113】
用語「および／または」、例えば、「Ｘおよび／またはＹ」は、「ＸおよびＹ」か「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると理解されるものであり、両方の意味またはいずれかの意味に対する明確な支持を与えると解釈されるものとする。
【0114】
本明細書全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと」などの変形形態は、記載されるエレメント、要素（ｉｎｔｅｇｅｒ）もしくは工程または一群のエレメント、要素または工程の包含を意味するが、任意の他のエレメント、要素もしくは工程または一群のエレメント、要素または工程の排除を意味しないと理解される。
【0115】
本明細書で使用する場合、用語「に由来する」は、指定の要素を特定の供給源から得ることができる（必ずしも直接その供給源からとは限らない）ことを示すと解釈されるものとする。
【0116】
選択された定義
ハーゲマン因子またはＦＸＩＩとしても知られる凝固第ＸＩＩ因子は血漿タンパク質である。これは、セリンプロテアーゼ（またはセリンエンドペプチダーゼ）クラスの酵素である第ＸＩＩａ因子の酵素前駆体形態である。ヒトでは、第ＸＩＩ因子はＦ１２遺伝子によってコードされる。限定目的ではなく命名の目的のみのために、ヒト第ＸＩＩ因子の例示的配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００４９６．２；ＮＣＰＩタンパク質受託番号ＮＰ＿０００４９６および配列番号２２に記載されている。第ＸＩＩ因子のさらなる配列を本明細書および／もしくは公的に利用可能なデータベースに提供される配列を使用して決定することができ、ならびに／または（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までのすべての更新を含む）またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されているような）標準的な技法を使用して決定することができる。
ハーゲマン因子またはＦＸＩＩとしても知られる凝固第ＸＩＩ因子は血漿タンパク質である。これは、セリンプロテアーゼ（またはセリンエンドペプチダーゼ）クラスの酵素である第ＸＩＩａ因子の酵素前駆体形態である。ヒトでは、第ＸＩＩ因子はＦ１２遺伝子によってコードされる。限定目的ではなく命名の目的のみのために、ヒト第ＸＩＩ因子の例示的配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００４９６．２；ＮＣＰＩタンパク質受託番号ＮＰ＿０００４９６および配列番号２２に記載されている。第ＸＩＩ因子のさらなる配列を本明細書および／もしくは公的に利用可能なデータベースに提供される配列を使用して決定することができ、ならびに／または（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までのすべての更新を含む）またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されているような）標準的な技法を使用して決定することができる。
【0117】
本明細書で使用する場合、用語「第ＸＩＩ因子インヒビター」または「ＦＸＩＩインヒビター」または「ＦＸＩＩのインヒビター」は、第ＸＩＩ因子（活性化より前、すなわち、その酵素前駆体）と活性化第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩａ）のいずれかまたは両方およびＦＸＩＩの活性化のインヒビターを指す。したがって、「ＦＸＩＩのインヒビター」は、ＦＸＩＩとＦＸＩＩａ（αＦＸＩＩａとも称される）のいずれかまたは両方ならびにＦＸＩＩａ切断生成物のＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータ（ＦＸＩＩｆとも称される）を含めたＦＸＩＩの活性化のインヒビターを含むことができる。ＦＸＩＩインヒビターは、野生型インヒビターの機能的な変異体および断片を包含する。機能的な変異体または断片は、野生型分子がＦＸＩＩ、ＦＸＩＩａまたはＦＸＩＩの活性化を阻害する能力の少なくとも５０％（例えば、約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９９％、または約１００％）を保持する分子である。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは非内在性インヒビターであり；すなわち、これは、ヒトまたは動物の体内に天然に存在するインヒビターではない。
【0118】
本明細書で使用する場合、用語「直接的ＦＸＩＩインヒビター」または「直接的インヒビター」は、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）との接触（例えば、結合）を介して作用するインヒビターを指し、すなわち、ＦＸＩＩインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、その活性および／または活性化を阻害する。これに対して、間接的インヒビターは、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）タンパク質と接触することなしに作用することができる。例えば、アンチセンスＲＮＡは、ＦＸＩＩ遺伝子の発現を低下させるのに使用することができ、または小分子は、第ＸＩ因子のような下流のＦＸＩＩａ反応パートナーとの相互作用を介して、ＦＸＩＩａの効果を阻害することができ；これらは、ＦＸＩＩタンパク質と直接的に相互作用しない。したがって、間接的インヒビターは、直接的インヒビターとは対照的に、ＦＸＩＩタンパク質の上流または下流で作用する。一例では、ＦＸＩＩインヒビターはＦＸＩＩまたはＦＸＩＩａに特異的であり、特にヒトＦＸＩＩまたはＦＸＩＩａに特異的である。
【0119】
本明細書で使用する場合、用語「結合する」は、タンパク質またはその抗原結合部位と抗原との相互作用に関連して、相互作用が抗原の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存していることを意味する。例えば、抗体は、一般に、タンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識し、それに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合する場合、標識された「Ａ」およびタンパク質を含有する反応において、エピトープ「Ａ」を含有する分子（または遊離した非標識の「Ａ」）の存在は、抗体に結合している標識された「Ａ」の量を低減する。
【0120】
本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」は、タンパク質またはその抗原結合部位が、別の抗原または細胞と比べて、より頻度に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより大きな親和性で、特定の抗原またはそれを発現する細胞と反応または結合することを意味すると解釈されるものとする。例えば、タンパク質またはその抗原結合部位は、これが、多反応性自然抗体（すなわち、ヒトで天然に見られる様々な抗原に結合することが知られている天然に存在する抗体）によって一般に認識される他の血液凝固因子または抗原に結合するよりも、実質的に大きな親和性（例えば、１．５倍または２倍または５倍または１０倍または２０倍または４０倍または６０倍または８０倍～１００倍または１５０倍または２００倍）で、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）に結合する。一般に、必ずしもそうとは限らないが、結合への言及は特異的結合を意味し、各用語は他の用語に対する明示的な支持を提供することを理解されたい。
【0121】
用語「アミド分解活性」は、ＦＸＩＩのインヒビターが別のポリペプチド中の少なくとも１つのペプチド結合の加水分解を触媒する能力を指す。
【0122】
本明細書で使用する場合、用語「同一性」または「同一の」は、同一の、または保存的置換を構成するアミノ酸のパーセンテージ数を指す。相同性は、参照によって本明細書に組み入れる、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、１９８４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２、３８７～３９５）などの配列比較プログラムを使用して、決定することができる。このような方法で、アライメント中にギャップを挿入することによって、本明細書で引用されるものと同様のまたは実質的に異なる長さの配列を比較することができ、そのようなギャップは、例えば、ＧＡＰが使用する比較アルゴリズムによって、決定される。
【0123】
「半減期増強ポリペプチド」または「ＨＬＥＰ」は、患者においてまたは動物においてＦＸＩＩインヒビターの半減期をｉｎ ｖｉｖｏで増大させることができる、ポリペプチド融合パートナーである。例としては、アルブミンならびに免疫グロブリンおよびＦｃドメインなどのその断片、またはその誘導体が挙げられ、これらは、直接的にまたは切断可能なもしくは切断不可能なリンカーを介してＦＸＩＩインヒビターに融合することができる。Ｂａｌｌａｎｃｅら（ＷＯ２００１／７９２７１）は、ヒト血清アルブミンに融合した数多くの異なる治療的ポリペプチドを含む融合ポリペプチドを記載した。
【0124】
本明細書で使用する場合、用語「アルブミン」および「血清アルブミン」は、ヒトアルブミン（ＨＡ）およびその変異体を包含する。限定目的ではなく命名の目的のみのために、完全成熟型のアルブミンの例示的配列が配列番号２３に記載され、ならびに他の種由来のアルブミンおよびそれらの変異体も記載される。本明細書で使用する場合、「アルブミン」は、アルブミンのポリペプチドもしくはアミノ酸配列またはアルブミンの１つもしくはそれ以上の機能活性（例えば、生物活性）を有するアルブミン変異体を指す。ある種の例では、アルブミンは、ＦＸＩＩインヒビターの治療活性を安定化するまたは延ばすために使用される。アルブミンは、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物、例えばヒト、サル、ウシ、ヒツジまたはブタに由来し得る。非哺乳類のアルブミンも使用することができ、限定はされないが、ニワトリおよびサケ由来のアルブミンが挙げられる。アルブミン結合型ポリペプチドのアルブミン部分は治療的ポリペプチド部分と異なる動物由来でもよい。アルブミン融合タンパク質の例については、参照によりその全体を本明細書に組み入れるＷＯ２００８／０９８７２０を参照されたい。
【0125】
用語「組換え体」は、人工の遺伝子組換えの生成物を意味すると理解されたい。したがって、抗体可変領域を含む組換えタンパク質の文脈において、この用語は、Ｂ細胞の成熟中に生じる天然の組換えの生成物である、対象の体内に天然に存在する抗体を包含しない。しかし、そのような抗体が単離される場合、これは、抗体可変領域を含む単離タンパク質であるとみなされるべきである。同様に、タンパク質をコードする核酸が単離され、組換え手段を使用して発現される場合、得られるタンパク質は組換えタンパク質である。組換えタンパク質は、例えばそれが発現される細胞、組織または対象内にある場合、人工の組換え手段によって発現されるタンパク質も包含する。
【0126】
用語「タンパク質」は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合で連結された一連の連続的なアミノ酸または共有結合的もしくは非共有結合的に互いに連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を含むと解釈されるものとする。例えば、一連のポリペプチド鎖は、適切な化学結合またはジスルフィド結合を使用して共有結合させることができる。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力および疎水性相互作用が挙げられる。
【0127】
用語「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」は、前述の段落から、ペプチド結合で連結された一連の連続的なアミノ酸を意味すると理解される。
【0128】
「抗体」は、一般に、複数のポリペプチド鎖、例えば、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むポリペプチドおよび重鎖可変領域（ＶＨ）を含むポリペプチドで構成されている可変領域を含むタンパク質であるとみなされることを当業者であれば認識しているであろう。抗体は一般に定常ドメインも含み、そのうちのいくつかは、重鎖の場合には、定常断片または結晶性断片（Ｆｃ）を含む定常領域中に配置される可能性がある。ＶＨおよびＶＬは相互作用して、１つまたは少数の密接に関連する抗原に特異的に結合することができる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳動物の軽鎖はκ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかであり、哺乳動物の重鎖はα、δ、ε、γまたはμである。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものでもよい。用語「抗体」は、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヒト抗体、合成ヒト化抗体およびキメラ抗体も包含する。
【0129】
「抗ＦＸＩＩ抗体」は、ＦＸＩＩの酵素前駆体ならびにＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータ切断断片を含めた活性化タンパク質（ＦＸＩＩａ）のいずれかもしくは両方に結合するおよび／またはこれらを阻害する抗体を含む。いくつかの例では、抗体は、ＦＸＩＩａまたはＦＸＩＩａのアルファもしくはベータ鎖断片に特異的に結合する。
【0130】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」は互換的に使用されて、抗体の抗原結合性断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指す。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）でもよいし、またはそれらのアミノ酸配列変異体でもよい。
【0131】
本明細書で使用する場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合することができ、相補性決定領域（ＣＤＲ）；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、本明細書で定義されるような抗体の軽鎖および／または重鎖の一部を指す。例示的可変領域は、３つまたは４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および場合によりＦＲ４）を３つのＣＤＲとともに含む。ＩｇＮＡＲに由来するタンパク質の場合には、タンパク質はＣＤＲ２を欠いていてもよい。ＶＨは重鎖の可変領域を指す。ＶＬは軽鎖の可変領域を指す。
【0132】
本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」（同義語はＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）は、その存在が抗原結合に必要である、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。各可変ドメインは、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として特定された３つのＣＤＲ領域を有する。ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．、１９８７および１９９１、または本開示の実施における他の番号付けシステム、例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７、１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２、８７７～８８３、１９８９；ならびに／もしくはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７～９４８、１９９７の標準的番号付けシステム；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖｅｌ．Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７：５５～７７、２００３のＩＭＧＴ番号付けシステム；もしくはＨｏｎｎｅｇｈｅｒおよびＰｌｕｋｔｈｕｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３０９：６５７～６７０、２００１のＡＨＯ番号付けシステムに従って定義することができる。
【0133】
「フレームワーク領域」（ＦＲ）はＣＤＲ残基以外のそれらの可変ドメイン残基である。
【0134】
本明細書で使用する場合、用語「可変領域断片」または「Ｆｖ」は、複数のポリペプチドから構成されるか、単一のポリペプチドから構成されるかに関わらず、ＶＬおよびＶＨを含み、ＶＬおよびＶＨが結合して、抗原結合部位を有する、すなわち、抗原に特異的に結合することができる複合体を形成する、任意のタンパク質を意味すると解釈されるものとする。抗原結合部位を形成するＶＨおよびＶＬは、単一のポリペプチド鎖中または異なるポリペプチド鎖中に存在することができる。さらに、本開示のＦｖ（および本開示の任意のタンパク質）は、同じ抗原に結合してもよいし結合しなくてもよい、複数の抗原結合部位を有し得る。この用語は、抗体に直接由来する断片および組換え手段を使用して産生される、そのような断片に対応するタンパク質を包含すると理解されたい。いくつかの例では、ＶＨは重鎖定常ドメイン（ＣＨ）１に連結しておらず、および／またはＶＬは軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に連結していない。例示的Ｆｖ含有ポリペプチドまたはタンパク質としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディもしくは高次複合体、または定常領域もしくはそのドメイン、例えばＣＨ２またはＣＨ３ドメインに連結した前述のうちのいずれか、例えば、ミニボディまたは抗体が挙げられる。「Ｆａｂ断片」は、抗体の一価抗原結合性断片からなり、酵素パパインで全抗体を消化してインタクトな軽鎖および重鎖の一部からなる断片をもたらすことによって産生することができ、または組換え手段を使用して産生することができる。抗体の「Ｆａｂ’断片」は、全抗体をペプシンで処理し、続いて還元して、インタクトな軽鎖ならびにＶＨおよび単一の定常ドメインを含む重鎖の部分からなる分子をもたらすことによって、得ることができる。このように処理した抗体あたり２つのＦａｂ’断片が得られる。Ｆａｂ’断片は、組換え手段によって産生することもできる。抗体の「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つのジスルフィド結合によって互いに結合している２つのＦａｂ’断片の二量体からなり、全抗体分子を酵素ペプシンで処理し、その後の還元を行わないことによって得られる。「Ｆａｂ２」断片は、例えばロイシンジッパーまたはＣＨ３ドメインを使用して連結された２つのＦａｂ断片を含む組換え断片である。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＦｖを含有する組換え分子であり、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域は適切な可動性ポリペプチドリンカーで共有結合している。前述の議論から明らかなように、この用語は、抗体またはＶＨおよびＶＬを含むその抗原結合性断片を包含する。
【0135】
本明細書で使用する場合、用語「防止すること」、「防止する」または「防止」は、本開示の化合物を投与して、それによって、状態の少なくとも１つの症状の発生を止めるまたは妨げることを含む。
【0136】
本明細書で使用する場合、用語「治療すること」、「治療する」または「治療」は、本明細書に記載のタンパク質を投与して、それによって、特定の疾患または状態の少なくとも１つの症状を低減もしくは除去すること、または疾患または状態の進行を遅らせることを含む。
【0137】
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、ヒトを含めた任意の動物、例えば哺乳動物を意味すると解釈されるものとする。例示的対象としては、限定されないが、ヒトおよび非ヒト霊長類が挙げられる。例えば、対象はヒトである。
【0138】
アテローム性動脈硬化病変の治療または防止
本明細書における本開示は、例えば、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することを含む、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するための方法を提供する。
本明細書における本開示は、例えば、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することを含む、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するための方法を提供する。
【0139】
本開示は、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することを含む、対象においてアテローム性動脈硬化プラークの破裂を防止するための方法も提供する。
【0140】
一例では、対象はアテローム性動脈硬化症またはアテローム性動脈硬化病変に罹患している。アテローム性動脈硬化病変は、安定でもよいし、不安定でもよい。一例では、アテローム性動脈硬化病変は不安定である。例えば、アテローム性動脈硬化症に罹患している対象は、以下のような、アテローム性動脈硬化症の臨床的に許容される症状に罹患していた：
・労作もしくはアンギナによる胸痛；
・安静時の胸痛；
・腕、肩、腹部もしくは顎の痛み；
・心停止；
・息切れ；
・全身の体調不良；
・対象の腕もしくは脚の麻痺もしくは脱力；
・発話困難もしくは不明瞭発語；
・一時的視力喪失；
・対象の顔の筋肉の下垂、および／または
・疲労。
・労作もしくはアンギナによる胸痛；
・安静時の胸痛；
・腕、肩、腹部もしくは顎の痛み；
・心停止；
・息切れ；
・全身の体調不良；
・対象の腕もしくは脚の麻痺もしくは脱力；
・発話困難もしくは不明瞭発語；
・一時的視力喪失；
・対象の顔の筋肉の下垂、および／または
・疲労。
【0141】
一例では、対象はアテローム性動脈硬化症に関連する状態に罹患していたか、罹患する。例えば、対象は心筋梗塞に罹患していた。一例では、対象は卒中に罹患していた。
【0142】
本開示の方法は、動脈系のアテローム性動脈硬化症の任意の形態に容易に適用することができる。例えば、対象は、心臓または脳または脚または骨盤または腕または腎臓のアテローム性動脈硬化症の徴候および／または症状を示し得る。したがって、本開示の方法は、動脈系のアテローム性動脈硬化症を治療または防止するのに適用するために講じられると予想される。
【0143】
一例では、対象は、アテローム性動脈硬化症またはアテローム性動脈硬化病変を発生する危険性があるが、アテローム性動脈硬化症の発症はまだ起こっていない。対象は、対象が対照集団よりもアテローム性動脈硬化症を発生する危険性がより高い場合、危険性がある。対照集団は、アンギナ、卒中および／または心臓発作に罹患したことがない、またはこれらの家族歴を有する、（例えば、年齢、性別、人種および／または民族性がマッチする）一般集団から無作為に選択される１またはそれ以上の対象を含むことができる。対象を、アテローム性動脈硬化症に関連する「危険因子」がその対象に関連することが見出される場合、アテローム性動脈硬化症の危険性があるとみなすことができる。危険因子としては、例えば、対象の集団に対する統計学的または疫学的研究によって所与の障害に関連する、任意の活性、形質、事象または特性を挙げることができる。したがって、たとえ根底にある危険因子を特定する研究が対象を特に含んでいなかったとしても、アテローム性動脈硬化症の危険性があると対象を分類することができる。例えば、高い血漿低密度リポタンパク質レベルを有する対象は、アテローム性動脈硬化症を発生する危険性があり、これは、アテローム性動脈硬化症の頻度が、高い血漿低密度リポタンパク質レベルを有する対象の集団において、そうでない対象の集団と比べて増大するからである。
【0144】
一例では、アテローム性動脈硬化症の危険性がある対象としては、高コレステロール血症、糖尿病、肥満および／または高血圧の患者が挙げられる。特に高い危険性がある対象は、アンギナおよび／または卒中および／または心臓発作に既に罹患しているものである。
【0145】
上記で論じたように、本開示の方法は以下の１つまたはそれ以上の効果を達成する：
・対象において閉塞性動脈血栓の可能性を低減させる；
・対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変サイズを低減させる；
・対象においてプラークの安定化を増大させる；
・対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変における炎症細胞の蓄積を低減させる；および／または
・対象においてアテローム生成促進的細胞集団を低減させる。
・対象において閉塞性動脈血栓の可能性を低減させる；
・対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変サイズを低減させる；
・対象においてプラークの安定化を増大させる；
・対象においてアテローム性動脈硬化プラークの病変における炎症細胞の蓄積を低減させる；および／または
・対象においてアテローム生成促進的細胞集団を低減させる。
【0146】
プラークの病変サイズを評価する方法は当技術分野で公知であり、例えば、血管造影解析、血管内超音波または光干渉断層撮影（ＯＣＴ）が挙げられる。
【0147】
プラークの安定化を評価する方法は当技術分野で公知であり、例えば、血管内超音波解析または頸動脈のＭＲＩが挙げられる。
【0148】
一例では、本開示の方法は、当技術分野で公知のまたは本明細書に記載のアテローム性動脈硬化症の任意の症状を低減する。
【0149】
当業者に明らかであるように、対象におけるアテローム性動脈硬化症の症状または影響の「低減」は、アテローム性動脈硬化症に同様に罹患しているが、本明細書に記載の方法による治療を受けていない別の対象、または治療前の対象に対する比較に基づく。これは、２つの対象の並列比較を必ずしも必要とするとは限らない。むしろ、集団データを信頼することができる。例えば、本明細書に記載の方法による治療を受けていない、アテローム性動脈硬化症に罹患する対象の集団（場合により、治療される対象と、例えば、年齢、体重、糖尿病状態、コレステロールレベルが同様の対象の集団）が評価され、平均値が本明細書に記載の方法で治療される対象または対象の集団の結果と比較される。
【0150】
第ＸＩＩ因子のインヒビター
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的ＦＸＩＩインヒビター、例えば特異的ＦＸＩＩインヒビターである。例えば、特異的ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼまたは他の内在性タンパク質を約２５％以下阻害する。例えば、ＦＸＩＩの特異的インヒビター／ＦＸＩＩａインヒビターは、前記インヒビターが、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対前記インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２５％以下阻害する。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２０％以下または約１５％以下または約１０％以下または約５％以下または約１％以下阻害する。例えば、特異的ＦＸＩＩ抗体は、血漿セリンプロテアーゼＦＸＩａを約５％阻害し、ここで、前記抗体に対するＦＸＩａのモル比は１：１であり、一方で、同ＦＸＩＩ抗体はＦＸＩＩａを少なくとも約８０％、または少なくともＦＸＩＩａを約９０％阻害する。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的ＦＸＩＩインヒビター、例えば特異的ＦＸＩＩインヒビターである。例えば、特異的ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼまたは他の内在性タンパク質を約２５％以下阻害する。例えば、ＦＸＩＩの特異的インヒビター／ＦＸＩＩａインヒビターは、前記インヒビターが、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対前記インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２５％以下阻害する。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２０％以下または約１５％以下または約１０％以下または約５％以下または約１％以下阻害する。例えば、特異的ＦＸＩＩ抗体は、血漿セリンプロテアーゼＦＸＩａを約５％阻害し、ここで、前記抗体に対するＦＸＩａのモル比は１：１であり、一方で、同ＦＸＩＩ抗体はＦＸＩＩａを少なくとも約８０％、または少なくともＦＸＩＩａを約９０％阻害する。
【0151】
一例では、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、他の１つの血漿セリンプロテアーゼが約５０％より多く阻害される。
【0152】
本開示の別の例では、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、他の２つの血漿セリンプロテアーゼが約５０％より多く阻害される。
【0153】
セリンプロテアーゼインヒビター
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターである。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４またはその変異体に対応する配列を含む。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＳＰＩＮＫ－１またはその変異体に対応する配列を含む。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターである。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４またはその変異体に対応する配列を含む。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＳＰＩＮＫ－１またはその変異体に対応する配列を含む。
【0154】
Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４
一例では、本開示は、ｉｎｆｅｓｔｉｎドメイン４（「Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４」と称される）を含むＦＸＩＩのインヒビターを提供する。Ｉｎｆｅｓｔｉｎは、シャーガス病を引き起こすことが知られている寄生体トリパノソーマ・クルージの主な媒介体である吸血性昆虫ブラジルサシガメの中腸に由来するセリンプロテアーゼインヒビターのクラスである（Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、３２ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．９９１～９９７、２００２；Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、５７７ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５１２～５１６、２００４；ＷＯ２００８／０９８７２０）。この昆虫は、これらのインヒビターを使用して、摂取した血液の凝固を防ぐ。ｉｎｆｅｓｔｉｎ遺伝子は、凝固経路の異なる因子を阻害することができるタンパク質をもたらす４つのドメインをコードする。特に、ドメイン４は、ＦＸＩＩａの強いインヒビターであるタンパク質（Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４）をコードする。Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、出血合併症をもたらすことなくマウスに投与された（ＷＯ２００８／０９８７２０；Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１２１：１５１０～１７）。
一例では、本開示は、ｉｎｆｅｓｔｉｎドメイン４（「Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４」と称される）を含むＦＸＩＩのインヒビターを提供する。Ｉｎｆｅｓｔｉｎは、シャーガス病を引き起こすことが知られている寄生体トリパノソーマ・クルージの主な媒介体である吸血性昆虫ブラジルサシガメの中腸に由来するセリンプロテアーゼインヒビターのクラスである（Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、３２ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．９９１～９９７、２００２；Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、５７７ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５１２～５１６、２００４；ＷＯ２００８／０９８７２０）。この昆虫は、これらのインヒビターを使用して、摂取した血液の凝固を防ぐ。ｉｎｆｅｓｔｉｎ遺伝子は、凝固経路の異なる因子を阻害することができるタンパク質をもたらす４つのドメインをコードする。特に、ドメイン４は、ＦＸＩＩａの強いインヒビターであるタンパク質（Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４）をコードする。Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、出血合併症をもたらすことなくマウスに投与された（ＷＯ２００８／０９８７２０；Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１２１：１５１０～１７）。
【0155】
一実施形態では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４を含む。本明細書で使用する場合、用語「Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４」は、ＦＸＩＩを阻害する能力を保持する、野生型ペプチドの変異体または断片を包含する。限定目的ではなく命名の目的のみのために、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の例示的配列を配列番号１に示す。
【0156】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＦＸＩＩａを阻害するその能力のために選択される。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体を含み、変異体はＩｎｆｅｓｔｉｎドメイン４、場合により、Ｉｎｆｅｓｔｉｎドメイン１、２および／または３を含む。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は（Ｈｉｓ）６－タグが付けられたＩｎｆｅｓｔｉｎ－４構築物である。
【0157】
別の例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に連結または結合した半減期増強ポリペプチド（例えば、アルブミン、ＩｇＧのＦｃドメインまたはＰＥＧ）などの融合パートナーを含む融合タンパク質である。一例では、リンカーが融合パートナーをＩｎｆｅｓｔｉｎ－４に接続する。様々な実施形態では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されているｒＨＡ－Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４タンパク質である。一例では、組成物は、Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されているｒＨＡ－Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４タンパク質に可動性リンカーによって結合しているアルブミンを含む。別の例では、他のＦＸＩＩのＩｎｆｅｓｔｉｎ－４インヒビターが使用され、その例は、ＷＯ２００８／０９８７２０およびＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されており、これらの両方は、その全体を参照によって組み入れる。
【0158】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体である。本明細書で使用する場合、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の「変異体」という用語は、１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を有するポリペプチドを指し、「変異」は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対する置換、欠失または付加と定義される。Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の「変異体」という用語は、野生型の機能的断片または変異されたＩｎｆｅｓｔｉｎ－４配列も含む。
【0159】
一例では、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対する１つまたはそれ以上の変異は、ＦＸＩＩを阻害するためのポリペプチドの機能的能力を実質的に変えない。例えば、１つまたはそれ以上の変異は、ＦＸＩＩを阻害するためのポリペプチドの能力を完全にまたは実質的に除去しない。例えば、変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の阻害能力の少なくとも約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９８％、または約９９％またはそれ以上を保持する。
【0160】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に記載の野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のアミノ末端からの残基２～１３を含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0161】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１の残基２～１３を含み、配列番号１の残基２～１３の外側に、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）と比べて少なくとも１つのアミノ酸変異も含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、少なくとも２つのアミノ酸変異または少なくとも３つのアミノ酸変異または少なくとも４つのアミノ酸変異または少なくとも５つのアミノ酸変異を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１を含むポリペプチド配列を含む。
【0162】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列由来の６つの保存システイン残基を保持するＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体である。一例では、６つの保存システイン残基は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）の位置６、８、１６、２７、３１および４８のアミノ酸である。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、位置４８に最終的な保存システインを含む。別の例では、システイン残基の正確な位置および互いの相対位置は、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体配列における挿入または欠失が原因で、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列の位置６、８、１６、２７、３１および４８から変化し得る。
【0163】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対して少なくとも約７０％同一である。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含むポリペプチド配列を含む。
【0164】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体であり、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列由来の６つの保存システイン残基を保持し、および／または野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対して少なくとも約７０％同一の配列を有する。
【0165】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１；および配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体である。
【0166】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列の保存されたＮ末端領域アミノ酸２～１３を、および野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列との違いをもたらす、これらの保存されたＮ末端アミノ酸の外側の少なくとも１つの、場合により５つまでのアミノ酸変異を含む。本明細書で使用する場合、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ変異体の「Ｎ末端アミノ酸の外側」という用語は、配列番号１由来のアミノ酸２～１３である配列番号２４の配列を含むアミノ酸の連続的なストレッチ以外の、変異体のポリペプチド鎖に沿った任意のアミノ酸を指す。
【0167】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、配列番号１由来の６つのすべての保存システイン残基および／または野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して少なくとも約７０％同一である配列を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して約７０％、または約７５％、または約８５％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の同一性を有する配列を含むことができる。
【0168】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、配列番号１由来のアミノ酸２～１３および６つのすべての保存システイン残基を保持し、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して少なくとも約７０％同一である。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して約７０％、または約７５％、または約８５％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の同一性を有する配列を含むことができる。
【0169】
一実施形態では、ＦＸＩＩインヒビターは野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４ポリペプチド配列の変異体を含み、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３；Ｎ末端アミノ酸の外側の少なくとも１つの、場合により５つまでのアミノ酸変異；６つの保存システイン残基；および／または野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して少なくとも７０％の同一性を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。
【0170】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は配列番号２５に記載される配列を含む。一例では、配列番号２４が断片または全長野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）のＮ末端に、またはその近くに付加され、これは、ヒトタンパク質ＳＰＩＮＫ－１に由来する。
【0171】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４または変異体Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４と融合パートナーとの融合構築物を含む。例えば、融合パートナーは、ＰＥＧまたは半減期増強ポリペプチドを含む。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎは、半減期増強ポリペプチド、ヒトアルブミン（「ＨＡ」と称される）含む。いくつかの実施形態では、ＨＡは組換えタンパク質（「ｒＨＡ」と称される）である。ある種の実施形態では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４とＨＡタンパク質は、直接的に、またはリンカーペプチドを介して結合している。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＩｎｆｅｓｔｉｎ－４に連結されたヒトアルブミンを含む融合タンパク質である。
【0172】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩを阻害する能力を保持する、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体である。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体は、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４と同じ、ＦＸＩＩを阻害する能力を有する。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体はＦＸＩＩ活性および／またはＦＸＩＩの活性化を阻害する。
【0173】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターはヒト第ＸＩＩａ因子－ベータへの結合についてＩｎｆｅｓｔｉｎ－４と競合する。
【0174】
ＦＸＩＩの機能的阻害活性を評価する方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＦＸＩＩ酵素活性の阻害を試験するための直接アッセイ、長引く凝固時間（例えば、活性化部分トロンボプラスチン時間、ａＰＴＴ）、凝固の内在性経路に対処する臨床的凝血試験、または凝固を評価するｉｎ ｖｉｖｏ方法を含めた、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏの特性評価が挙げられる。
【0175】
ＳＰＩＮＫ－１
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に高い類似性を有するヒトタンパク質を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１である。ＳＰＩＮＫ－１は膵臓で発現しているＫａｚａｌタイプのセリンプロテアーゼインヒビターである（膵分泌性トリプシンインヒビターまたはＰＳＴＩとしても知られる）。Ｋａｚａｌタイプセリンプロテアーゼインヒビターファミリーは、公知のセリンプロテアーゼインヒビターの多数のファミリーのうちの１つである。様々な種由来の多くの同様のタンパク質が記載されている（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ ＭおよびＫａｔｏ Ｉ、４９ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９３～６２６、１９８０．）。限定目的ではなく命名の目的のみのために、ＳＰＩＮＫ－１の例示的配列を配列番号２に示す。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に高い類似性を有するヒトタンパク質を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１である。ＳＰＩＮＫ－１は膵臓で発現しているＫａｚａｌタイプのセリンプロテアーゼインヒビターである（膵分泌性トリプシンインヒビターまたはＰＳＴＩとしても知られる）。Ｋａｚａｌタイプセリンプロテアーゼインヒビターファミリーは、公知のセリンプロテアーゼインヒビターの多数のファミリーのうちの１つである。様々な種由来の多くの同様のタンパク質が記載されている（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ ＭおよびＫａｔｏ Ｉ、４９ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９３～６２６、１９８０．）。限定目的ではなく命名の目的のみのために、ＳＰＩＮＫ－１の例示的配列を配列番号２に示す。
【0176】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に示したＳＰＩＮＫ－２の野生型配列を含む。
【0177】
用語「ＳＰＩＮＫ－１」は、ＦＸＩＩを阻害する能力を実質的に保持する、ＳＰＩＮＫ－１の機能的な変異体および断片も包含する。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１変異体である。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に対するＳＰＩＮＫ－１配列の同一性を高めるために、野生型配列（すなわち、配列番号２）の変異体を生成することができる。本明細書で使用する場合、用語「変異体」は、ＳＰＩＮＫ－１の断片または変異されたＳＰＩＮＫ－１配列を含む。
【0178】
一例では、位置２～１３のＮ末端アミノ酸は配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるようにＳＰＩＮＫ－１（配列番号２）が変異される。
【0179】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のＮ末端部を含むＳＰＩＮＫ－１変異体である。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は配列番号１のアミノ酸２～１３を含む。
【0180】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対するＳＰＩＮＫ－１変異体の同一性を高める少なくとも１つのさらなるアミノ酸変異をＮ末端アミノ酸の外側に含むＳＰＩＮＫ－１変異体である。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対するＳＰＩＮＫ－１変異体の同一性を高める、少なくとも１つの、または少なくとも２つの、または少なくとも３つの、または少なくとも４つの、または少なくとも５つのさらなるアミノ酸変異をＮ末端アミノ酸の外側に含む。
【0181】
変異は、置換、欠失および／または付加を含むことができる。「Ｎ末端アミノ酸の外側」の変異は、配列番号２４の配列、すなわち、配列番号１のアミノ酸２～１３を含む連続的なアミノ酸ストレッチ以外の、変異体のポリペプチド鎖に沿った任意のアミノ酸の１つまたはそれ以上の変異を指す。
【0182】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、位置２～１３のＮ末端アミノ酸を配列番号１の位置２～１３のＮ末端アミノ酸と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対してポリペプチド配列の同一性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２を含むポリペプチド配列を含む。
【0183】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（すなわち、配列番号１）に対して変異体の同一性を高めるように変異されたＳＰＩＮＫ－１配列を含むＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。
【0184】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のＮ末端部を含む。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は配列番号１のアミノ酸２～１３を含む。
【0185】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２の６つの保存システイン残基を含むＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。
【0186】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１の６つの保存システイン残基は野生型ＳＰＩＮＫ－１配列（例えば、配列番号２）の位置９、１６、２４、３５、３８および５６のアミノ酸でもよい。一例では、変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ－１配列の最終的なシステイン（すなわち、配列番号２の位置５６のシステイン）を含む。一例では、６つの保存システイン残基は変異していないが、システイン残基の正確な位置および互いの相対位置は、ＳＰＩＮＫ－１変異体配列における他の場所での挿入および／または欠失が原因で、野生型ＳＰＩＮＫ－１配列の位置９、１６、２４、３５、３８および５６から変化し得る。それにもかかわらず、これらの例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は６つのすべてのシステイン残基を含む。
【0187】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に対して少なくとも７０％同一の配列を含むＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は、配列番号２に対して少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一の配列を含む。
【0188】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に対して少なくとも７０％同一の配列を含み、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持するＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。
【0189】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１の６つの保存システイン残基は変異していない。一例では、ＳＰＩＮＫ－１配列は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のＮ末端部を含むように変異される。例えば、配列番号１のアミノ酸２～１３を含むようにＳＰＩＮＫ－１配列は変異される。
【0190】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１配列は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のＮ末端部を含むように、および／または野生型ＳＰＩＮＫ－１配列に対して少なくとも７０％同一の配列を有するように変異される。例えば、ＳＰＩＮＫ－１配列は、野生型ＳＰＩＮＫ－１配列に対して少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも９９％同一の配列を含むように変異される。
【0191】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１配列は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のＮ末端部を含むように、および／または野生型ＳＰＩＮＫ－１配列に対して少なくとも７０％同一の配列を有するように、および／またはＮ末端アミノ酸の外側のＳＰＩＮＫ－１配列において少なくとも１つの変異を含むように変異される。
【0192】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、位置２～１３のＮ末端アミノ酸を配列番号１の位置２～１３のＮ末端アミノ酸と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対してポリペプチド配列の同一性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２を含むＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。
【0193】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、位置２～１３のＮ末端アミノ酸を配列番号１の位置２～１３のＮ末端アミノ酸と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対してポリペプチド配列の同一性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異および配列番号２に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含有するようにさらに改変された配列番号２を含むＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。
【0194】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩを阻害するその能力を実質的に保持するＳＰＩＮＫ－１変異体を含む。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ－１の阻害活性の少なくとも約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９８％、または約９９％を保持する。
【0195】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターはヒト第ＸＩＩａ因子－ベータへの結合についてＳＰＩＮＫ－１と競合する。
【0196】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｋ１（配列番号３）、Ｋ２（配列番号４）、およびＫ３（配列番号５）からなる群から選択されるＳＰＩＮＫ－１変異体である。
【0197】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は配列番号３に記載のＫ１である。
【0198】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は配列番号４に記載のＫ２である。
【0199】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は配列番号５に記載のＫ３である。
【0200】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に対する同一性を高めるために、Ｋ１に対してＮ末端の外側でさらなるアミノ酸置換を行うことができる。
【0201】
一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に対する同一性を高めるために、Ｋ３に対してＮ末端の外側でさらなるアミノ酸置換を行うことができる。例えば、Ｋ３に対してＮ末端の外側の５つのアミノ酸置換はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４に対する同一性を高める。
【0202】
一例では、ＳＰＩＮＫ－１変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ－１配列と少なくとも約７０％の同一性を有する。例えば、ＳＰＩＮＫ－１変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ－１配列と少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する。
【0203】
第ＸＩＩ因子抗体
例示的第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビターは抗原可変領域を含み、例えば、ＦＸＩＩに結合し、ＦＸＩＩシグナリングを中和する抗体またはその抗原結合性断片である。例えば、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性化および／または活性を阻害する。
例示的第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビターは抗原可変領域を含み、例えば、ＦＸＩＩに結合し、ＦＸＩＩシグナリングを中和する抗体またはその抗原結合性断片である。例えば、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性化および／または活性を阻害する。
【0204】
一例では、抗体可変領域はＦＸＩＩに特異的に結合する。
【0205】
例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を阻害する。
【0206】
別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩａへのＦＸＩＩの活性化を阻害する。
【0207】
適切な抗体およびその可変領域を含むタンパク質は当技術分野で公知である。
【0208】
例えば、抗第ＸＩＩ因子抗体およびその断片はＷＯ２００６／０６６８７８およびＲａｖｏｎら、Ｂｌｏｏｄ ８６：４１３４～４３（１９９５）に記載されている。さらなる抗第ＸＩＩ因子抗体がＷＯ２０１３／０１４０９２に記載されている。
【0209】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片はＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合する抗体である。
【0210】
一例では、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は少なくとも約５０％阻害される。例えば、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は約６０％、または約７０％、または約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９５％、または約９９％、または約１００％阻害される。
【0211】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩａを少なくとも約８０％阻害する。例えば、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩａ対インヒビターについて１：０．５のモル比で使用される場合、第ＸＩＩａ因子－アルファを少なくとも約８０％阻害する。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、第ＸＩＩａ因子対インヒビターについて１：０．５のモル比で使用される場合、第ＸＩＩａ因子を少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または約１００％阻害する。
【0212】
第ＸＩＩａ因子の活性の阻害を検出する方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ２０１３／０１４０９２に開示されているようなｉｎ ｖｉｔｒｏのＦＸＩＩａアミド分解活性アッセイが挙げられる。
【0213】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はヒト第ＸＩＩａ因子のアミド分解活性を阻害することができる。
【0214】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは、抗体３Ｆ７またはｇＶＲ１１５の結合親和性または特異性と類似した、ヒトＦＸＩＩａに対する結合親和性または特異性を有する。
【0215】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩまたはｇＶＲ１１５への抗体３Ｆ７の結合を競合的に阻害する。
【0216】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、失活したヒトＦＸＩＩに対するものよりも少なくとも２倍高い、ヒト第ＸＩＩａ因子－ベータに対する結合親和性を有する。例えば、ヒト第ＸＩＩａ因子－ベータに対する結合親和性は、失活したヒトＦＸＩＩに対するものよりも少なくとも約３倍、または少なくとも約４倍、または少なくとも約５倍高い。
【0217】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは、約１×１０－８Ｍ以下、例えば９．５×１０－９Ｍ以下、例えば９×１０－９Ｍ以下、例えば８．５×１０－９Ｍ以下、例えば８×１０－９Ｍ以下、例えば７．５×１０－９Ｍ以下、例えば７×１０－９Ｍ以下、例えば６．５×１０－９Ｍ以下、例えば６×１０－９Ｍ以下、例えば５．５×１０－９Ｍ以下、例えば５×１０－９Ｍの平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト第ＸＩＩａ因子－ベータに結合する。
【0218】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体またはその断片は、配列番号６に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号７に記載される配列を含むＶＬを含む。
【0219】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体またはその断片は、配列番号６に記載される配列に対して少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨを含む。例えば、ＶＨ配列は、配列番号６に記載される配列に対して少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。ＣＤＲに対する変異の例示的位置は本明細書に記載される。当業者は、フレームワーク領域に対する変異の位置を容易に特定できると予想される。一例では、列挙される配列に対する任意の変化の位置はフレームワーク領域中にある。
【0220】
一例では、抗ＦＸＩＩ抗体またはその断片は、配列番号７に記載される配列に対して少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含む。例えば、ＶＬ配列は、配列番号７に記載される配列に対して少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。ＣＤＲに対する変異の例示的位置は本明細書に記載される。当業者は、フレームワーク領域に対する変異の位置を容易に特定できると予想される。一例では、列挙される配列に対する任意の変化の位置はフレームワーク領域中にある。
【0221】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、抗ＦＸＩＩ抗体のＶＨ（配列番号６）およびＶＬ（配列番号７）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むタンパク質である。例えば、タンパク質は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｃ）配列番号９もしくは配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；
（ｄ）配列番号１１もしくは配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；および／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３もしくは配列番号１７に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｃ）配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；
（ｄ）配列番号１５もしくは配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｃ）配列番号９もしくは配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；
（ｄ）配列番号１１もしくは配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；および／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３もしくは配列番号１７に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｃ）配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；
（ｄ）配列番号１５もしくは配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３。
【0222】
別の例では、タンパク質は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１６に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１６に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0223】
一例では、タンパク質は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0224】
別の例では、タンパク質は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0225】
別の例では、タンパク質は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１７に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
（ｉ）以下を含むＶＨ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号１７に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。
【0226】
一例では、タンパク質は、配列番号８に記載のＣＤＲ１を含むＶＨを含む。
【0227】
一例では、タンパク質は、配列番号８に記載される配列に対して少なくとも８０％同一のＣＤＲ１を含むＶＨを含む。例えば、タンパク質は、配列番号８に記載される配列に対して少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ１を含むＶＨを含む。
【0228】
一例では、タンパク質は、配列番号９に記載のＣＤＲ２を含むＶＨを含む。
【0229】
一例では、タンパク質は、配列番号９に記載される配列に対して少なくとも６０％同一のＣＤＲ２を含むＶＨを含む。例えば、タンパク質は、配列番号９に記載される配列に対して少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ２を含むＶＨを含む。
【0230】
一例では、タンパク質は、配列番号１０に記載のＣＤＲ２を含むＶＨを含む。
【0231】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、アルギニン（Ｒ）、アスパラギン（Ｎ）もしくはアスパラギン酸（Ｄ）を位置３に、および／またはプロリン（Ｐ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）もしくはメチオニン（Ｍ）を位置４に、および／またはセリン（Ｓ）、プロリン（Ｐ）もしくはアラニン（Ａ）を位置５に、および／またはグリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）もしくはスレオニン（Ｔ）を位置６に、および／または任意のアミノ酸を位置７に、および／またはスレオニン（Ｔ）、グリシン（Ｇ）もしくはセリン（Ｓ）位置８に含む。
【0232】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、アスパラギン（Ｎ）を位置３に、およびバリン（Ｖ）を位置４に、およびプロリン（Ｐ）を位置５に、およびロイシン（Ｌ）を位置６に、およびチロシン（Ｙ）を位置７に、およびグリシン（Ｇ）位置８に含む。
【0233】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、アスパラギン（Ｎ）を位置３に、およびバリン（Ｖ）を位置４に、およびプロリン（Ｐ）を位置５に、およびバリン（Ｖ）を位置６に、およびグルタミン（Ｑ）を位置７に、およびグリシン（Ｇ）位置８に含む。
【0234】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、アスパラギン酸（Ｄ）を位置３に、およびイソロイシン（Ｉ）を位置４に、およびプロリン（Ｐ）を位置５に、およびスレオニン（Ｔ）を位置６に、およびリジン（Ｋ）を位置７に、およびグリシン（Ｇ）位置８に含む。
【0235】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、アスパラギン酸（Ｄ）を位置３に、およびメチオニン（Ｍ）を位置４に、およびプロリン（Ｐ）を位置５に、およびスレオニン（Ｔ）を位置６に、およびリジン（Ｋ）を位置７に、およびグリシン（Ｇ）位置８に含む。
【0236】
一例では、タンパク質は、配列番号１１に記載のＣＤＲ３を含むＶＨを含む。
【0237】
一例では、タンパク質は、配列番号１１に記載される配列に対して少なくとも８０％同一のＣＤＲ３を含むＶＨを含む。例えば、タンパク質は、配列番号１１に記載される配列に対して少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ３を含むＶＨを含む。
【0238】
一例では、タンパク質は、配列番号１２に記載のＣＤＲ３を含むＶＨを含む。
【0239】
一例では、ＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）もしくはバリン（Ｖ）を位置９に、および／またはセリン（Ｓ）もしくはリジン（Ｋ）を位置１０に、および／またはプロリン（Ｐ）、リジン（Ｋ）、スレオニン（Ｔ）もしくはヒスチジン（Ｈ）を位置１１に、および／またはヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グリシン（Ｇ）もしくはグルタミン（Ｑ）を位置１２に含む。
【0240】
一例では、タンパク質は、配列番号１３に記載のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。
【0241】
一例では、タンパク質は、配列番号１３に記載される配列に対して少なくとも５０％同一のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。例えば、タンパク質は、配列番号１３に記載される配列に対して少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。
【0242】
一例では、タンパク質は、配列番号１７に記載のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。
【0243】
一例では、タンパク質は、配列番号１７に記載される配列に対して少なくとも５０％同一のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。例えば、タンパク質は、配列番号１７に記載される配列に対して少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ１を含むＶＬを含む。
【0244】
一例では、タンパク質は、配列番号１４に記載のＣＤＲ２を含むＶＬを含む。
【0245】
一例では、タンパク質は、配列番号１４に記載される配列に対して少なくとも５０％同一のＣＤＲ２を含むＶＬを含む。例えば、タンパク質は、配列番号１４に記載される配列に対して少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ２を含むＶＬを含む。
【0246】
一例では、タンパク質は、配列番号１５に記載のＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【0247】
一例では、タンパク質は、配列番号１５に記載される配列に対して少なくとも５０％同一のＣＤＲ３を含むＶＬを含む。例えば、タンパク質は、配列番号１５に記載される配列に対して少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一のＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【0248】
一例では、タンパク質は配列番号１６に記載のＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【0249】
一例では、ＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、アラニン（Ａ）もしくはセリン（Ｓ）を位置２に、および／またはアスパラギン酸（Ｄ）、チロシン（Ｙ）、グルタミン酸（Ｅ）、スレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）もしくはセリン（Ｓ）を位置４に、および／またはアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）もしくはグルタミン酸（Ｅ）を位置５に、および／またはセリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）もしくはアルギニン（Ｒ）を位置６に、および／またはロイシン（Ｌ）もしくはバリン（Ｖ）を位置７に、および／またはグリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）もしくはリジン（Ｋ）を位置９に、および／またはバリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、スレオニン（Ｔ）、メチオニン（Ｍ）もしくはグリシン（Ｇ）を位置１０に含む。
【0250】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは親和性成熟抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体もしくはヒト化抗体またはその抗原結合性断片である。一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は抗体３Ｆ７の親和性成熟形態である。例えば、抗ＦＸＩＩ抗体は、ＶＲ１１５、ＶＲ１１２、ＶＲ２４、ＶＲ１１０またはＶＲ１１９から選択される（これらの抗体のＨＣＤＲ１～３およびＬＣＤＲ１～３の配列番号を表１において以下に示す）。
【0251】
【表1】
【0252】
配列番号１０はコンセンサス配列である。ＶＲ１１９は、位置３のＸがＮであり、位置４のＸがＶであり、位置５のＸがＰであり；位置６のＸがＬであり、位置７のＸがＹであり；位置８のＸがＧである、配列番号１０を含む。ＶＲ１１２は、位置３のＸがＮであり、位置４のＸがＶであり、位置５のＸがＰであり、位置６のＸがＶであり、位置７のＸがＱであり、位置８のＸがＧである、配列番号１０を含む。ＶＲ１１５は、位置３のＸがＤであり、位置４のＸがＩであり、位置５のＸがＰであり、位置６のＸがＴであり、位置７のＸがＫであり、位置８のＸがＧである、配列番号１０を含む。ＶＲ１１０は、位置３のＸがＤであり、位置４のＸがＭであり、位置５のＸがＰであり、位置６のＸがＴであり、位置７のＸがＫであり、位置８のＸがＧである、配列番号１０を含む。ＶＲ２４は、配列番号１７に記載されるＬＣＤＲ１を含む。
【0253】
一例では、本明細書に記載の抗体はＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。用語「安定化ＩｇＧ４定常領域」は、Ｆａｂアーム交換もしくはＦａｂアーム交換を受ける傾向または半抗体の形成もしくは半抗体を形成する傾向を低減するように改変されたＩｇＧ４定常領域を意味すると理解される。「Ｆａｂアーム交換」は、ＩｇＧ４重鎖および結合した軽鎖（半分子）が別のＩｇＧ４分子の重－軽鎖対とスワップされる、ヒトＩｇＧ４に対するタンパク質改変のタイプを指す。したがって、ＩｇＧ４分子は、２つの異なる抗原を認識する２つの異なるＦａｂアームを獲得することができる（その結果、二重特異性分子が生じる）。Ｆａｂアーム交換は、ｉｎ ｖｉｖｏで天然に生じ、精製された血液細胞または還元剤、例えば還元型グルタチオンによってｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導することができる。「半抗体」は、ＩｇＧ４抗体が解離して単一重鎖および単一軽鎖をそれぞれ含有する２つの分子を形成する場合に形成される。
【0254】
一例では、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。この位置は、ＥＵ番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、２００１、およびＥｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ、６３、７８～８５、１９６９）によるヒンジ領域の位置２２８に対応する。ヒトＩｇＧ４では、この残基は通常セリンである。セリンをプロリンに置換した後に、ＩｇＧ４ヒンジ領域は配列ＣＰＰＣを含む。この関連で、「ヒンジ領域」は、抗体の２つのＦａｂアームに可動性を与える、ＦｃとＦａｂ領域を連結する抗体重鎖定常領域のプロリンリッチ部分であることを当業者は認識するであろう。ヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド結合に関与するシステイン残基を含む。これは、一般に、Ｋａｂａｔの番号付けシステムに従って、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２２６からＰｒｏ２４３のストレッチと定義される。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド（Ｓ－Ｓ）結合を形成する最初および最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、ＩｇＧ１配列と整列させることができる（例えば、ＷＯ２０１０／０８０５３８を参照されたい）。
【0255】
安定化ＩｇＧ４抗体のさらなる例は、（例えば、ＷＯ２００６／０３３３８６に記載されているように）、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域の位置４０９のアルギニン（ＥＵ番号付けシステムに従う）がリジン、スレオニン、メチオニンまたはロイシンで置換されている抗体である。定常領域のＦｃ領域は、４０５（ＥＵ番号付けシステムに従う）に対応する位置で、以下：アラニン、バリン、グリシン、イソロイシンおよびロイシンからなる群から選択される残基をさらにまたは代わりに含むことができる。場合により、ヒンジ領域は、（上記のように）プロリンを位置２４１（すなわち、ＣＰＰＣ配列）に含む。
【0256】
一例では、本開示のＦＸＩＩのインヒビターは抗体３Ｆ７またはそのキメラ、ＣＤＲ移植もしくはヒト化バージョン、またはその抗原結合性断片である。
【0257】
一例では、抗体３Ｆ７は、配列番号６に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号７に記載される配列を含むＶＬを含む。一例では、抗体３Ｆ７は、ＶＨ（配列番号６）およびＶＬ（配列番号７）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0258】
例えば、抗体３Ｆ７は、配列番号８に記載されるＣＤＲ、配列番号９に記載されるＣＤＲ２、配列番号１１に記載されるＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに配列番号１３に記載されるＣＤＲ１、配列番号１４に記載されるＣＤＲ２および配列番号１５に記載されるＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【0259】
一例では、本開示のＸＩＩのインヒビターは抗体ＶＲ１１５である。
【0260】
例えば、抗体ＶＲ１１５は、配列番号８に記載されるＣＤＲ１、配列番号１０に記載されるＣＤＲ２（ここで、位置３のＸはＤであり、位置４のＸはＩであり、位置５のＸはＰであり、位置６のＸはＴであり、位置７のＸはＫであり、位置８のＸはＧである）および配列番号１１に記載されるＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに配列番号１３に記載されるＣＤＲ１、配列番号１４に記載されるＣＤＲ２および配列番号１５に記載されるＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【0261】
一例では、抗体は生殖系列抗体である。「生殖系列」抗体は、フレームワーク残基に変化を導入したいくつかまたはすべての体細胞変異が、ゲノム、例えばヒトゲノム中に存在する元の配列に回復している抗体である。この関連で、生殖系列抗体において、すべての変化が回復している必要はない。
【0262】
例えば、抗体は生殖系列ＶＲ１１５抗体（ｇＶＲ１１５）である。
【0263】
例えば、ｇＶＲ１１５は、配列番号１８に記載される配列を含むＶＨおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶＬを含む。
【0264】
一例では、ｇＶＲ１１５はラムダ軽鎖定常領域を含む。
【0265】
一例では、ｇＶＲ１１５は、ＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。
【0266】
一例では、ｇＶＲ１１５は、配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖を含む。
【0267】
別の例では、抗体またはその可変領域を含むタンパク質は、例えば当該技術分野において知られているような標準的な方法を使用して、産生することができる。
【0268】
第ＸＩＩ因子インヒビターの融合パートナー
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一例では、融合パートナーは半減期増強ポリペプチド（ＨＬＥＰ）を含む。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一例では、融合パートナーは半減期増強ポリペプチド（ＨＬＥＰ）を含む。
【0269】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【0270】
一例では、融合パートナーはモノ－またはポリ－（例えば、２－４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。例えば、モノ－ポリ－（例えば、２－４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分は、ＦＸＩＩインヒビターのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延ばす。
【0271】
利用可能なペグ化反応のうちのいずれかによって、ペグ化を行うことができる。ペグ化タンパク質生成物の調製の例示的方法は、一般に、（ａ）タンパク質が１つまたはそれ以上のＰＥＧ基に結合するようになる条件下で、ポリペプチドをポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）と反応させること；および（ｂ）反応生成物を得ることを含むことができる。
【0272】
限定されないが、例えば、ＥＰ０４０１３８４；Ｍａｌｉｋら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２０：１０２８～１０３５（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ、Ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、３（２）：４～１０（１９９２）；ＥＰ０１５４３１６；ＥＰ０４０１３８４；ＷＯ９２／１６２２１；ＷＯ９５／３４３２６；米国特許第５，２５２，７１４号に記載されているものを含めた、様々なＰＥＧ結合方法を当業者は認識するであろう。
【0273】
半減期増強ポリペプチド（ＨＬＥＰ）
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーは半減期増強ポリペプチド（ＨＬＥＰ）を含む。
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーは半減期増強ポリペプチド（ＨＬＥＰ）を含む。
【0274】
様々な半減期増強ポリペプチドが当業者に知られており、限定されないが、本明細書に記載のものが挙げられる。
【0275】
アルブミンタンパク質およびそれらの変異体
一例では、半減期増強ポリペプチドは、アルブミン、アファミン、アルファ－フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される。例えば、半減期増強ポリペプチドはアルブミンまたはその変異体である。
一例では、半減期増強ポリペプチドは、アルブミン、アファミン、アルファ－フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される。例えば、半減期増強ポリペプチドはアルブミンまたはその変異体である。
【0276】
一例では、半減期増強ポリペプチドは、リンカーを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結している。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結されたヒトアルブミンを含む融合タンパク質である。
【0277】
一例では、アルブミン変異体は、ヒトアルブミン（ＨＡ）配列（例えば、配列番号２３）由来の少なくとも１０、または少なくとも２０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、または少なくとも６０、または少なくとも７０アミノ酸の長さである。
【0278】
一例では、アルブミン変異体は、ヒトアルブミン（ＨＡ）配列（例えば、配列番号２３）由来の少なくとも約１５、または少なくとも２０、または少なくとも約２５、または少なくとも約３０、または少なくとも約５０またはそれ以上の連続的なアミノ酸である。
【0279】
一例では、アルブミン変異体は、ＨＡの特定のドメインの一部またはすべてを含む。アルブミン変異体は、アミノ酸の置換、欠失または付加、保存的または非保存的置換のいずれかを含んでもよく、そのような変化は、半減期増強ポリペプチドの治療活性を与える活性部位または活性ドメインを実質的に変えない。これらの変異体は、ヒトアルブミン（ＨＡ）配列と約７０％、または約７５％、または約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の同一性を有し得る。
【0280】
一例では、アルブミン変異体は断片である。一例では、アルブミン変異体は、アルブミンの少なくとも１つのドメインおよび／またはそれらのドメインの断片を含む。例えば、アルブミン変異体は、ドメイン１（配列番号２３のアミノ酸１～１９４）またはドメイン２（配列番号２３のアミノ酸１９５～３８７）またはドメイン３（配列番号２３のアミノ酸３８８～５８５）の少なくとも１つを含む。一例では、アルブミン変異体は、少なくともドメイン１および２（配列番号２３の１～３８７）またはドメイン２および３（配列番号２３の１９５～５８５）またはドメイン１および３（配列番号２３のアミノ酸１～１９４およびアミノ酸３８８～５８５）を含む。
【0281】
各ドメインは、それ自体、残基Ｌｙｓ１０６～Ｇｌｕ１１９、Ｇｌｕ２９２～Ｖａｌ３１５およびＧｌｕ４９２～Ａｌａ５１１を含む可動性サブドメイン間リンカー領域をともなって、２つの相同なサブドメイン、すなわち、配列番号２３の残基１～１０５、１２０～１９４、１９５～２９１、３１６～３８７、３８８～４９１および５１２～５８５で構成されている。
【0282】
一例では、アルブミン変異体は、アルブミンの少なくとも１つのサブドメイン全体を含む。例えば、アルブミン変異体は、配列番号２３の残基１～１０５または残基１２０～１９４または残基１９５～２９１または残基３１６～３８７または残基３８８～４９１または残基５１２～５８５を含む。
【0283】
一例では、限定されないが、アルファ－フェトプロテイン（ＷＯ２００５／０２４０４４；ＢｅａｔｔｉｅおよびＤｕｇａｉｃｚｙｋ、２０ Ｇｅｎｅ ４１５～４２２、１９８２）、アファミン（Ｌｉｃｈｅｎｓｔｅｉｎら、２６９（２７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８１４９～１８１５４、１９９４）ならびにビタミンＤ結合タンパク質（ＣｏｏｋｅおよびＤａｖｉｄ、７６ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２４２０～２４２４、１９８５）を含めた、構造的または進化的にアルブミンと関連している他のタンパク質（「アルブミンファミリータンパク質」）をＨＬＥＰとして使用することができる。これらのタンパク質をコードする遺伝子は、ヒト、マウスおよびラットにおいて同じ染色体領域にマッピングされる、構造的および機能的な類似性を有する多重遺伝子クラスターを示す。アルブミンファミリーメンバーの構造的類似性は、これらをＨＬＥＰとして使用することができることを示唆する。例えば、アルファ－フェトプロテインは、結合している治療的ポリペプチドの半減期をｉｎ ｖｉｖｏで延ばすことが主張された（ＷＯ２００５／０２４０４４）。
【0284】
一例では、半減期増強ポリペプチドは、アルファ－フェトプロテインおよびビタミンＤ結合タンパク質からなる群から選択される。例えば、半減期増強ポリペプチドはアルファ－フェトプロテインである。一例では、半減期増強ポリペプチドはビタミンＤ結合タンパク質である。
【0285】
一例では、アルブミンファミリータンパク質またはそれらの変異体は、治療活性を安定化するまたは延長することができる。
【0286】
一例では、アルブミンファミリータンパク質またはそれらの変異体は、ＦＸＩＩまたはＦＸＩＩａインヒビターに連結したＨＬＥＰとして使用される。
【0287】
一例では、アルブミンファミリータンパク質またはそれらの変異体は任意の脊椎動物に由来する。例えば、脊椎動物は哺乳動物である。一例では、哺乳動物は、ヒトでも、サルでも、ウシでも、ヒツジでも、ブタでもない。一例では、脊椎動物は非哺乳動物である。例えば、非哺乳動物はトリまたはサケである。
【0288】
一例では、アルブミン変異体は少なくとも１０アミノ酸の長さを含む。例えば、アルブミン変異体は、それらが由来するそれぞれのタンパク質配列の約１５、または約２０、または約２５、または約３０、または約５０個の連続的なアミノ酸を含む。一例では、アルブミン変異体は、それぞれのタンパク質の特定のドメインの一部またはすべてを含む。
【0289】
本明細書で論じるように、アルブミンファミリーメンバーの融合タンパク質は天然に存在する多形変異体を含むことができる。
【0290】
免疫グロブリン
一例では、半減期増強ポリペプチドは免疫グロブリン（Ｉｇ）である。
一例では、半減期増強ポリペプチドは免疫グロブリン（Ｉｇ）である。
【0291】
上述したように、用語「免疫グロブリン」は、Ｆｃ領域または１つまたはそれ以上のＩｇ定常ドメインなどの機能的断片およびその変異体を包含する。一例では、ＩｇはＦｃ領域または免疫グロブリン定常ドメインの一部を含む。定常領域は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＥ免疫グロブリンのものでもよい。一例では、治療的ポリペプチド部分は、抗体のヒンジ領域またはペプチドリンカーを介してＩｇに接続しており、これは切断可能であり得る。
【0292】
治療用タンパク質の半減期をｉｎ ｖｉｖｏで延ばすための、免疫グロブリン定常領域への治療用タンパク質の融合方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＵＳ２００４／００８７７７８、ＷＯ２００５／００１０２５、ＷＯ２００５／０６３８０８、ＷＯ２００３／０７６５６７、ＷＯ２００５／０００８９２、ＷＯ２００４／１０１７４０、ＵＳ６，４０３，０７７に記載されている。
【0293】
一例では、半減期増強ポリペプチドは免疫グロブリン領域である。例えば、免疫グロブリン領域はＦｃドメインもしくは免疫グロブリンのＦｃ断片および／またはそれらの変異体である。
【0294】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＨＬＥＰとしてのＦｃドメインまたは免疫グロブリン定常領域の一部に融合している。
【0295】
一例では、融合タンパク質は、原核または真核宿主細胞で発現される組換え分子として調製される。例えば、融合タンパク質は、細菌、もしくは酵母、もしくは植物、もしくは動物（昆虫を含める）もしくはヒト細胞株で、またはトランスジェニック動物で調製される。
【0296】
原核または真核細胞における融合タンパク質の発現方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ２００８／０９８７２０に記載されている。
【0297】
リンカー
一例では、半減期増強ポリペプチドはリンカーを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結している。例えば、リンカーはリンカーペプチドである。
一例では、半減期増強ポリペプチドはリンカーを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結している。例えば、リンカーはリンカーペプチドである。
【0298】
一例では、治療的ポリペプチドとＨＬＥＰの間に介在性ペプチドリンカーを導入することができる。
【0299】
一例では、リンカーは切断可能なリンカーである。例えば、ＨＬＥＰが治療的ポリペプチドの比活性を干渉する（例えば、立体障害による干渉）可能性がある場合、リンカーは切断可能なリンカーである。
【0300】
一例では、リンカーは凝固に関与する酵素によって切断可能である。例えば、リンカーは、内在性、外来性または共通の凝固経路の凝固プロテアーゼによって切断可能である。内在性経路の凝固プロテアーゼとしては、接触活性化経路のプロテアーゼ、例えば、ＦＸＩＩａ、ＦＸＩａまたはＦＩＸａが挙げられる。一実施形態では、リンカーはＦＸＩＩａによって切断される。外来性経路のプロテアーゼとしては、組織因子経路のプロテアーゼ、例えばＦＶＩＩａが挙げられる。共通経路のプロテアーゼとしては、フィブリンへのフィブリノーゲンの変換に関与するプロテアーゼ、例えば、ＦＸａ、ＦＩＩａおよびＦＸＩＩＩａが挙げられる。
【0301】
スクリーニングアッセイ
ＦＸＩＩシグナリングを阻害する化合物は、例えば以下に記載するような当技術分野で公知の技法を使用して特定することができる。同様に、本明細書に記載の方法における使用に適するＦＸＩＩインヒビターの量は、例えば以下に記載するような当技術分野で公知の技法を使用して、決定または推定することができる。
ＦＸＩＩシグナリングを阻害する化合物は、例えば以下に記載するような当技術分野で公知の技法を使用して特定することができる。同様に、本明細書に記載の方法における使用に適するＦＸＩＩインヒビターの量は、例えば以下に記載するような当技術分野で公知の技法を使用して、決定または推定することができる。
【0302】
ＦＸＩＩａアミド分解活性
ＦＸＩＩに結合するインヒビターについて、ＦＸＩＩａアミド分解活性のインヒビターのレベルを決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用することができる。
ＦＸＩＩに結合するインヒビターについて、ＦＸＩＩａアミド分解活性のインヒビターのレベルを決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用することができる。
【0303】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターおよび緩衝液の存在下におけるＦＸＩＩの切断のアッセイによって、アミド分解活性を測定することができる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターまたは対照の存在下または非存在下でＦＸＩＩをインキュベートする。インキュベーションおよび検出基質の添加に続いて、光学濃度の変化（すなわち、色の変化）として、アミド分解活性を分光光度的に決定する。
【0304】
アミド分解活性を効果的に阻害することが見出される化合物をＦＸＩＩのインヒビターとして特定する。
【0305】
ｉｎ ｖｉｖｏ動物モデル
一例では、アテローム性動脈硬化症の動物モデルにおいて治療効果または予防効果についてＦＸＩＩのインヒビターを試験する。
一例では、アテローム性動脈硬化症の動物モデルにおいて治療効果または予防効果についてＦＸＩＩのインヒビターを試験する。
【0306】
アテローム性動脈硬化病変に対するＦＸＩＩのインヒビターの効果を評価するための動物モデルは当技術分野で公知であり、および／または本明細書で例示される。例示的動物モデルとしては、例えば、ＡｐｏＥノックアウト（－／－）マウスモデルおよびタンデム狭窄マウスモデルが挙げられる。
【0307】
ＡｐｏＥノックアウト動物モデル
一例では、動物モデルはＡｐｏＥノックアウトマウスモデルである。
一例では、動物モデルはＡｐｏＥノックアウトマウスモデルである。
【0308】
例えば、ＦＸＩＩのインヒビターまたは対照がアテローム性動脈硬化症のモデル、例えば、ＡｐｏＥ－／－マウスモデルに投与され、ＦＸＩＩのインヒビターの治療効能が評価される。
【0309】
一例では、ＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウスは、隔日で、ＦＸＩＩのインヒビターまたは対照によって、皮下で処置される。一例では、ＡｐｏＥ－／－マウスは、２１％の脂肪および０．１５％のコレステロールを含有する高脂肪食（ＨＦＤ）が与えられる。
【0310】
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの治療効能は、アテローム性動脈硬化病変の組織学的および／または形態学的解析によって評価される。
【0311】
ＦＸＩＩのインヒビターの非存在下と比較して、ＦＸＩＩのインヒビターの存在下における動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化病変の減弱は、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の治療およびアテローム性動脈硬化プラークの安定化に有用であることを示す。
【0312】
タンデム狭窄動物モデル
一例では、動物モデルはタンデム狭窄マウスモデルである。
一例では、動物モデルはタンデム狭窄マウスモデルである。
【0313】
例えば、ＦＸＩＩのインヒビターまたは対照がアテローム性動脈硬化症のモデル、例えば、タンデム狭窄マウスモデルに投与され、ＦＸＩＩのインヒビターの治療効能が評価される。
【0314】
一例では、マウスはＡｐｏＥ－／－ノックアウトマウスである。一例では、マウスは、２１％の脂肪および０．１５％のコレステロールを含有する高脂肪食（ＨＦＤ）が与えられる。
【0315】
一例では、タンデム狭窄は頚動脈分岐近くの右総頚動脈に挿入される。
【0316】
ＦＸＩＩのインヒビターの非存在下と比較して、ＦＸＩＩのインヒビターの存在下における動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化病変の減弱は、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の治療およびアテローム性動脈硬化プラークの安定化に有用であることを示す。
【0317】
アテローム性動脈硬化病変の形態学的解析
一例では、アテローム性動脈硬化病変の発生を減弱するＦＸＩＩのインヒビターは、組織学的解析を実施することによって特定される。
一例では、アテローム性動脈硬化病変の発生を減弱するＦＸＩＩのインヒビターは、組織学的解析を実施することによって特定される。
【0318】
形態学的解析の適切な方法は当技術分野で公知であり、例えば、全病変サイズ、脂質領域、壊死性コア領域、コラーゲンの蓄積、マクロファージの蓄積ならびに例えば、ＶＣＡＭ－１およびα－平滑筋アクチンを含めたいくつかのマーカーの発現の解析が挙げられる。
【0319】
一例では、動物モデル由来のアテローム性動脈硬化病変の凍結切片は、脂質および全病変領域を検出するためのオイルレッドＯ（ＯＲＯ）標準、アテローム性動脈硬化病変の壊死性コア領域（無細胞領域）を決定するためのマイヤーのヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）、コラーゲンを検出するためのピクロシリウスレッドのいずれかで組織学的に染色される。各セグメントの組織学的試料の定量化は、１２０μｍ間隔で得られる連続的な６μｍの切片に対して行われる。様々なプラーク成分のパーセンテージは、全内膜プラーク領域で割った、特定の各パラメーターに対する陽性領域として定量化される。壊死性コアは、細胞性組織のない全プラーク領域と定義される。相対的キャップ厚は、最大の内膜厚で割った、肩と中央プラーク領域におけるキャップ厚の比と定義される。アテローム性動脈硬化病変内のＯＲＯ陽性領域および無細胞領域に対するイメージングが光学顕微鏡を使用して行われ、脂質沈着の断面領域が画像解析ソフトウェア（例えば、Ｏｐｔｉｍａｓ６．２Ｖｉｄｅｏ Ｐｒｏ－３２）を使用して定量化される。各マウスについて、病変サイズが３０ｍｍ間隔で少なくとも４つの断面領域において測定される。
【0320】
フローサイトメトリー
一例では、フローサイトメトリー解析が、脾臓、リンパ節および血液における細胞集団の解析について行われる。
一例では、フローサイトメトリー解析が、脾臓、リンパ節および血液における細胞集団の解析について行われる。
【0321】
一例では、脾臓、リンパ節および血液のＢリンパ球および非Ｂリンパ球集団が、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ－ＩＩで、蛍光色素コンジュゲート化抗体を用いて解析される。例えば、Ｂ細胞の解析については、ＰＥコンジュゲート化抗ＣＤ１９、ＡＰＣコンジュゲート化抗ＣＤ５およびＡＰＣ－Ｃｙ７コンジュゲート化抗ＣＤ１１ｂ Ａｂが使用される。例えば、非Ｂリンパ球集団の解析については、パシフィックブルーコンジュゲート化抗ＣＤ４、ＰｅｒＣＰコンジュゲート化抗ＣＤ８ａ、ＦＩＴＣコンジュゲート化抗ＴＣＲ－ｂおよびＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート化抗ＮＫ１．１Ａｂが使用される。
【0322】
ＦＸＩＩのインヒビターの非存在下と比較して、ＦＸＩＩのインヒビターの存在下における動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化病変の減弱は、ＦＸＩＩのインヒビターはアテローム性動脈硬化症の治療およびアテローム性動脈硬化プラークの安定化に有用であることを示す。
【0323】
医薬組成物および治療方法
本開示のいくつかの例では、ＦＸＩＩインヒビターは、８０％を超える、または９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える純度を有し得る。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは、混入する巨大分子、例えば、他のタンパク質および核酸に対して９９．９％を超えて純粋であり、感染性および発熱性の薬剤を含んでいない可能性がある、医薬的に純粋な状態を有し得る。
本開示のいくつかの例では、ＦＸＩＩインヒビターは、８０％を超える、または９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える純度を有し得る。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは、混入する巨大分子、例えば、他のタンパク質および核酸に対して９９．９％を超えて純粋であり、感染性および発熱性の薬剤を含んでいない可能性がある、医薬的に純粋な状態を有し得る。
【0324】
ＦＸＩＩを阻害する化合物（同義語は活性成分）は、予防的または治療的処置のために、非経口、局所、経口もしくは局部投与、エアロゾル投与または経皮投与に有用である。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは非経口的に、例えば皮下または静脈内に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは皮下に投与される。
【0325】
投与されるＦＸＩＩインヒビターの製剤は、選択される投与経路および製剤（例えば、溶液剤、乳剤、カプセル剤）によって変わり得る。投与されるＦＸＩＩインヒビターを含む適切な医薬組成物は、生理学的に許容可能な担体中で調製することができる。溶液剤または乳剤については、適切な担体としては、例えば、生理食塩水および緩衝化媒体を含めた、水性またはアルコール性／水溶液、乳濁液または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル油または不揮発性油を挙げることができる。水、緩衝水、緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコール）、デキストロース溶液およびグリシンを含めた、様々な適切な水性担体が当業者に知られている。静脈内用ビヒクルとしては、様々な添加剤、防腐剤または流体、栄養素もしくは電解質補液を挙げることができる（一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１６版、Ｍａｃｋ編、１９８０を参照されたい）。組成物は、おおよその生理的条件に適合するように、ｐＨ調整および緩衝剤ならびに毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムおよび乳酸ナトリウムなどの医薬的に許容可能な補助物質を場合により含有することができる。さらなる医薬添加剤としては、例えば、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、タルク、脱脂粉乳およびエタノールが挙げられる。ＦＸＩＩインヒビターは液体の段階で貯蔵することができ、または技術分野で公知の凍結乾燥および再構成技法に従って貯蔵のために凍結乾燥し、使用前に適切な担体中で再構成することができる。
【0326】
あるいはまたはさらに、担体または賦形剤は、ＦＸＩＩインヒビターの活性を増強する、ならびに／またはＦＸＩＩインヒビター、例えば、プロテアーゼインヒビターおよび／もしくはＤＮａｓｅインヒビターおよび／もしくはＲＮａｓｅインヒビターの阻害を低減し、それによってインヒビターの安定性を増強する化合物を含む。
【0327】
選択される媒体中の活性成分の最適濃度は、当業者に公知の手順に従って経験的な方法で決定することができ、所望の最終医薬製剤に依存する。
【0328】
本開示のＦＸＩＩインヒビターの投与のための投薬量範囲は、所望の効果をもたらすのに十分大きいものである。例えば、組成物は、治療的または予防的に有効な量のＦＸＩＩインヒビターを含む。
【0329】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、対象においてＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａのシグナリングを阻害する／低減する／防止するのに十分なＦＸＩＩインヒビターの量を意味すると解釈されるものとする。そのような量は、例えば、ＦＸＩＩインヒビターならびに／または特定の対象ならびに／または治療を受けるアテローム性動脈硬化症のタイプおよび／もしくは重症度に依存して変わることを当業者は認識するであろう。したがって、この用語は、ＦＸＩＩインヒビターの特定の量、例えば、重量または数に本開示を限定すると解釈されるべきでない。
【0330】
投薬量は、有害な副作用、例えば、過粘稠度症候群、肺水腫、うっ血性心不全などを引き起こすほど大きくすべきでない。一般に、投薬量は、患者の年齢、状態、性別および疾患の程度によって変わり、当業者が決定することができる。いかなる合併症の場合においても、個々の医師が投薬量を調整することができる。
【0331】
投薬量は、１日または数日にわたる毎日の１またはそれ以上の用量の投与において、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３００ｍｇ／ｋｇまで、例えば約０．２ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇまで、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇまで変動する可能性があり、例えば約１０ｍｇ／ｋｇである。
【0332】
いくつかの例では、ＦＸＩＩインヒビターは、後続のもの（維持量）よりも高い初回（または負荷）用量で投与される。例えば、ＦＸＩＩインヒビターは、約１０ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの間の初回用量で投与される。次いで、ＦＸＩＩインヒビターは約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの間の維持量で投与される。維持量は、７～１００日毎、例えば、１４日または２８日または５６日または８４日毎に投与することができる。
【0333】
いくつかの例では、用量漸増レジームが使用され、これは、ＦＸＩＩインヒビターが後続の用量で使用されるよりも低い用量で最初に投与される。この投薬量レジームは、最初に有害事象に苦しむ対象の場合に有用である。
【0334】
治療に十分に応答していない対象の場合には、１週間以内に複数回用量を投与することができる。あるいは、またはさらに、漸増用量を投与することができる。
【0335】
１回より多い曝露または一連の用量、例えば、化合物の少なくとも約２回の曝露、例えば、約２～６０回の曝露、より詳細には約２～４０回の曝露、最も詳細には約２から２０回の曝露を与えることによって、ＦＸＩＩインヒビターで対象を再治療することができる。
【0336】
別の例では、定められた間隔で任意の再治療を与えることができる。例えば、様々な間隔で、例えば、約２４～２８週または４８～５６週またはそれ以上などで続いて曝露を施すことができる。例えば、そのような曝露は、約２４～２６週または約３８～４２週または約５０～５４週のそれぞれの間隔で施される。
【0337】
本開示の方法は、アテローム性動脈硬化症またはアテローム性動脈硬化プラークの破裂の防止または治療のための別の治療的に有効な薬剤の投与をともなう、本開示による少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの同時投与を含むこともできる。
【0338】
一例では、本開示のＦＸＩＩインヒビターは、アテローム性動脈硬化症を防止または治療するために現在使用されているか、または開発中であるか、少なくとも１つのさらなる公知の化合物と組み合わせて使用される。そのような公知の化合物の例としては、限定されないが、スタチン（例えば、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチンおよびフルバスタチン）ならびに血液希釈薬（例えば、アスピリン、ワルファリンおよびヘパリン）が挙げられる。
【0339】
前述の内容から明らかであるように、本開示は、有効量の第１の化合物および第２の化合物をそれらを必要とする対象に投与することを含む、対象の併用治療的処置の方法を提供し、前記第１の薬剤はＦＸＩＩインヒビターであり、第２の薬剤はアテローム性動脈硬化症の防止または治療のためのものである。
【0340】
本明細書で使用する場合、成句「併用治療的処置」にあるような用語「併用」は、第２の薬剤の存在下で第１の薬剤を投与することを含む。併用治療的処置方法は、第１、第２、第３のまたはさらなる薬剤が同時投与される方法を含む。併用治療的処置方法は、第２のまたはさらなる薬剤の存在下で第１のまたはさらなる薬剤が投与される方法も含み、ここで、第２のまたはさらなる薬剤は、例えば、以前に投与していてもよい。併用治療的処置方法は、異なる実施者によって段階的に行うことができる。例えば、ある実施者が第１の薬剤を対象に投与することができ、および第２の実施者として第２の薬剤を対象に投与することができ、投与工程は、第１の薬剤（および／またはさらなる薬剤）が第２の薬剤（および／またはさらなる薬剤）の存在下での投与の後である限り、同時に、またはほぼ同時に、または離れた時間に行うことができる。実施者および対象は同じエンティティ（例えば、ヒト）でもよい。
【0341】
一例では、本開示は、対象においてアテローム性動脈硬化症を治療または防止するための方法も提供し、この方法は、本開示のＦＸＩＩインヒビターを含む第１の医薬組成物および１種または複数のさらなる化合物を含む第２の医薬組成物を対象に投与することを含む。
【0342】
一例では、本開示の方法は、アテローム性動脈硬化症に罹患しており、かつ（例えば、糖尿病および／またはコレステロールのための）別の治療を受けている対象にＦＸＩＩインヒビターを投与することを含む。
【0343】
キットおよび他の物質の組成物
本開示の別の例は、上記のアテローム性動脈硬化症の治療に有用なＦＸＩＩインヒビターを含有するキットを提供する。
本開示の別の例は、上記のアテローム性動脈硬化症の治療に有用なＦＸＩＩインヒビターを含有するキットを提供する。
【0344】
一例では、キットは、（ａ）場合により医薬的に許容可能な担体または希釈剤中に、本明細書に記載のＦＸＩＩインヒビターを含む容器；および（ｂ）対象においてアテローム性動脈硬化症を治療するための指示を有する添付文書を含む。
【0345】
本開示のこの例によれば、添付文書は容器上にあるか、容器に付随している。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器などが挙げられる。ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から容器を形成することができる。容器は、アテローム性動脈硬化症を治療するのに有効である組成物を保持するか含有し、無菌のアクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈輸液バッグでもよいし、皮下注射針によって穴をあけることができるストッパーを有するバイアルでもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤はＦＸＩＩインヒビターである。ラベルまたは添付文書は、治療に適格な対象、例えば、アテローム性動脈硬化症を有するまたはその傾向がある対象を、提供されるＦＸＩＩインヒビターおよび任意の他の医薬の投薬量および間隔に関する特定のガイダンスを用いて治療するために組成物が使用されることを示す。キットは、医薬的に許容可能な希釈緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液および／またはデキストロース溶液を含むさらなる容器をさらに含むことができる。キットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針および注射器を含めた、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
【0346】
キットは、場合により、第２の医薬を含む容器をさらに含み、ＦＸＩＩインヒビターは第１の医薬であり、この物品は、有効量で、またはアテローム性動脈硬化症に対する別の治療で第２の医薬を用いて対象を治療するための指示を添付文書にさらに含む。第２の医薬は、上記のもののうちのいずれでもよい。
【0347】
本開示は、以下の非限定例を含む。
【実施例】
【0348】
実施例１：第ＸＩＩ因子インヒビター治療はアテローム性動脈硬化病変の進行および発生を減弱する
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドの雄のＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウス（６週齢）に、隔日で、抗第ＸＩＩａ因子モノクローナル抗体３Ｆ７（１ｍｇ／ｋｇ）またはＩｇＧアイソタイプ対照（ＭｕＢＭ４－ＭｕＧ１Ｋ）を皮下に与えると同時に、２１％の脂肪および０．１５％のコレステロールを含有する高脂肪食（ＨＦＤ）（ＳＦ００－２１９、Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｆｅｅｄｓ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を８週間与えた。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドの雄のＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウス（６週齢）に、隔日で、抗第ＸＩＩａ因子モノクローナル抗体３Ｆ７（１ｍｇ／ｋｇ）またはＩｇＧアイソタイプ対照（ＭｕＢＭ４－ＭｕＧ１Ｋ）を皮下に与えると同時に、２１％の脂肪および０．１５％のコレステロールを含有する高脂肪食（ＨＦＤ）（ＳＦ００－２１９、Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｆｅｅｄｓ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を８週間与えた。
【0349】
動物を屠殺し、カテーテルを左心室に設置して、１０ｍｌ ＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて生理的圧力下で灌流した。灌流後、腕頭動脈ならびに右および左頸動脈をともなう大動脈弓全体を最適切断温度（ＯＣＴ）化合物（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｃｈｎｉｃａｌ）中で包埋し、液体窒素で凍結し、切片化するまで－８０℃で貯蔵した。
【0350】
クリオスタット（Ｚｅｉｓｓ ＭＩＣＲＯＭ ＨＭ ５５０）を使用して、６μｍ厚の横断凍結切片である凍結した頸動脈、大動脈弓および大動脈洞切片を調製した。脂質および全病変領域を検出するためのオイルレッドＯ（ＯＲＯ）標準、アテローム性動脈硬化病変の壊死性コア領域（無細胞領域）を決定するためのマイヤーのヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）、コラーゲンを検出するためのピクロシリウスレッドのいずれかで、切片を組織学的に染色した。１２０μｍ間隔で得られる連続的な６μｍの切片に対して、各セグメントについて組織学的試料の定量化を実施した。様々なプラーク成分のパーセンテージを、全内膜プラーク領域で割った特定の各パラメーターに対する陽性領域として定量化した。壊死性コアを細胞性組織のない全プラーク領域と定義した。相対的キャップ厚を最大の内膜厚で割った肩および中央プラーク領域におけるキャップ厚の比と定義した。アテローム性動脈硬化病変内のＯＲＯ陽性領域および無細胞領域に対するイメージングを光学顕微鏡を使用して行い、画像解析ソフトウェア（Ｏｐｔｉｍａｓ６．２Ｖｉｄｅｏ Ｐｒｏ－３２、Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｐａｒｋ、Ｓｏｕｔｈ Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を使用して脂質沈着の断面領域を定量化した。各マウスについて、３０ｍｍ間隔で４つの断面領域において病変サイズを測定した。
【0351】
【0352】
マクロファージはアテローム性動脈硬化病変の主な要素であるので、ＣＤ６８染色を行い、マクロファージの蓄積も４５％に顕著に低減することが明らかになった（Ｐ＜０．０５；図１Ｃ）。アテローム性動脈硬化病変のさらなる評価によって、病変におけるコラーゲン沈着の５０％の有意な増大が示された（Ｐ＜０．０５；図１Ｄ）。Ｈ＆Ｅ染色によって、病変における壊死性コア領域の５２％の有意な低減が明らかになった（Ｐ＜０．０５；図１Ｅ）。大動脈弓のアテローム性動脈硬化症も研究し、全病変、脂質およびマクロファージの蓄積の低減（それぞれ、５０％、４７％および６０％）が明らかになった（すべてＰ＜０．０５；図１Ｆ～Ｈ）。
【0353】
脾臓、リンパ節および血液における細胞集団の解析について、フローサイトメトリー解析を実施した。脾臓、ＬＮおよび血液のＢリンパ球および非Ｂリンパ球集団を、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ－ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、蛍光色素コンジュゲート化抗体（別段の記載がない限り、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ由来）を用いて解析した。Ｂ細胞については、ＰＥコンジュゲート化抗ＣＤ１９、ＡＰＣコンジュゲート化抗ＣＤ５およびＡＰＣ－Ｃｙ７コンジュゲート化抗ＣＤ１１ｂ Ａｂを使用した。非Ｂリンパ球集団については、パシフィックブルーコンジュゲート化抗ＣＤ４、ＰｅｒＣＰコンジュゲート化抗ＣＤ８ａ、ＦＩＴＣコンジュゲート化抗ＴＣＲ－ｂおよびＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート化抗ＮＫ１．１Ａｂを使用した。
【0354】
リンパ球細胞集団のフローサイトメトリー解析によって、ＦＸＩＩインヒビターによる長期にわたる治療が、他のリンパ球に影響を及ぼすことなく、ＮＫおよびＮＫＴ細胞集団を血液（図２）においてそれぞれ３５％および４２％、リンパ節（図３）においてそれぞれ３８％および４７％低減することが明らかになった（Ｐ＜０．０５）。
【0355】
実施例２：第ＸＩＩ因子インヒビター治療は動脈炎を低減し、アテローム性動脈硬化プラーク中の平滑筋細胞数を増大する
ＦＸＩＩインヒビター治療がプラーク発生の推進力としての炎症を低減したかどうかを決定するための、大動脈根および大動脈弓のアテローム性動脈硬化病変における血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１；クローンｓｃ－１５０４、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）の発現に対する長期にわたるＦＸＩＩインヒビター（３Ｆ７）治療の効果を調べた。大動脈根（４３％）および大動脈弓（３３％）のアテローム性動脈硬化病変において、ＶＣＡＭ－１の発現の低減が観察された（すべてＰ＜０．０５；図４Ａ、Ｂ）。
ＦＸＩＩインヒビター治療がプラーク発生の推進力としての炎症を低減したかどうかを決定するための、大動脈根および大動脈弓のアテローム性動脈硬化病変における血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１；クローンｓｃ－１５０４、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）の発現に対する長期にわたるＦＸＩＩインヒビター（３Ｆ７）治療の効果を調べた。大動脈根（４３％）および大動脈弓（３３％）のアテローム性動脈硬化病変において、ＶＣＡＭ－１の発現の低減が観察された（すべてＰ＜０．０５；図４Ａ、Ｂ）。
【0356】
Ｈ＆Ｅ染色によって、アイソタイプＩｇＧモノクローナル抗体治療対照群と比較して、３Ｆ７治療マウスにおいて大動脈根および大動脈弓のアテローム性動脈硬化病変の無細胞領域（壊死性コア）のサイズの有意な低減（それぞれ、３３％および５０％）も明らかになった（すべてＰ＜０．０５；図４Ｃ、Ｄ）。
【0357】
さらに、本発明者らは、α－平滑筋アクチン抗体（クローン１Ａ４；１：１００希釈；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用する免疫組織化学的検査によって、アテローム性動脈硬化プラーク中の平滑筋細胞の数に対するＦＸＩＩインヒビター治療の効果を評価した。ＦＸＩＩインヒビター治療は、大動脈根および大動脈弓において、アテローム性動脈硬化プラーク中の平滑筋細胞の数を増加させた（すべてＰ＜０．０５；図４Ｅ、Ｆ）。興味深いことに、大動脈根と大動脈弓のどちらの病変のコラーゲン量も変化しなかった（図４Ｇ、Ｈ）。
【0358】
すべての免疫組織化学的解析では、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣキットおよびＤＡＢ基質によって検出を行った。ラットＩｇＧ２Ｂ対照抗体を使用して、適用したラット抗体の染色特異性を検証した。他のアイソタイプ対照抗体（ヤギＩｇＧ、ウサギＩｇＧ）を一次抗体による各免疫染色の検証に使用した。Ｏｐｔｉｍｕｓ６．２ＶｉｄｅｏＰｒｏ－３２を使用して抗原の発現を定量化し、染色されたセグメントを全プラーク領域のパーセンテージとして表した。
【0359】
実施例３：３Ｆ７治療はプラークの安定化をもたらす
３Ｆ７がプラークを安定化する可能性があるかどうかという疑問に特に対処するために、プラーク不安定性／破裂の最近開発された独自のマウスモデルを使用した。
３Ｆ７がプラークを安定化する可能性があるかどうかという疑問に特に対処するために、プラーク不安定性／破裂の最近開発された独自のマウスモデルを使用した。
【0360】
このモデルでは、雄のＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウスに高脂肪食を６週間与えて、樹立されたアテローム性動脈硬化症を発生させた。高脂肪食の開始から６週後の１２週齢で、腹腔内注射によって、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物でＡｐｏＥ－ＫＯマウスに麻酔をかけた。首に切り込みを入れ、右総頚動脈を周囲の結合組織から切断した。１５０μｍ（または４５０μｍ）の外径のタンデム狭窄を、頚動脈分岐から１ｍｍの遠位ポイントおよび遠位狭窄から３ｍｍの近位ポイントで導入した。６－０青色編組ポリエステル線維縫合糸を、それに縛り付けられ、後に除去される１５０または４５０μｍの針とともに頸動脈の周囲に設置することによって、狭窄の径を得た。タンデム狭窄手術の直後に、ＦＸＩＩインヒビターまたはＩｇＧ対照のいずれかの同じレジメンでマウスを治療すると同時に、マウスに高脂肪食をさらに７週間与えた。実施例１および２で上述したように、動物および組織を処理した。
【0361】
図５Ａに示すように、セグメント１はプラーク不安定性の領域を示す。ＦＸＩＩインヒビターで治療したマウスで、３２％の全病変サイズの低減が観察された（図５Ｂ）。脂質およびマクロファージの蓄積も顕著に低減した（それぞれ５２％および５３％）（すべてＰ＜０．０５；図５Ｃ、Ｄ）。プラーク炎症の主な尺度としてのＶＣＡＭ－１の発現は、３Ｆ７で治療したマウスのセグメント１において３０％低減した（図５Ｅ）。プラーク不安定性のマーカーと再度みなされた壊死性コアサイズは、３Ｆ７治療によって３２％低減した（図５Ｆ）。最も印象的なことは、ほぼ２．５倍という、セグメント１のアテローム性動脈硬化病変における平滑筋細胞発現の有意な増大であった（Ｐ＜０．０５；図５Ｇ）。興味深いことに、３Ｆ７によるＦＸＩＩａの阻害はコラーゲン阻害の変化をもたらさず、これは、様々なプラークの安定化機構に対する非常に特異的な効果を主張するものである（図５Ｈ）。
【0362】
実施例４：治療動物の脂質プロファイル
３Ｆ７または対照抗体のいずれかで治療したＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウスの血漿中のコレステロールプロファイル（総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、超低密度リポタンパク質／ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリド）を以下に記載するように測定した。
３Ｆ７または対照抗体のいずれかで治療したＡｐｏＥ－／－（ＡｐｏＥ－ＫＯ）マウスの血漿中のコレステロールプロファイル（総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、超低密度リポタンパク質／ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリド）を以下に記載するように測定した。
【0363】
コレステロール
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、コレステロールレベルを測定した。
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、コレステロールレベルを測定した。
【0364】
ＣＨＯＬ試薬を、タイムドエンドポイント方法によってコレステロール濃度を測定するのに使用した。この反応では、コレステロールエステラーゼ（ＣＥ）がコレステロールエステルを加水分解して、遊離コレステロールと脂肪酸にした。遊離コレステロールはコレステロールオキシダーゼ（ＣＯ）によって酸化されて、コレステン－３－オンと過酸化水素になった。ペルオキシダーゼが過酸化水素と４－アミノアンチピリン（４－ＡＡＰ）およびフェノールの反応を触媒して、着色キノンイミン生成物を産生した。
【0365】
ＳＹＮＣＨＲＯＮ ＬＸ（登録商標）システムによって、適切な試料および試薬量をキュベット中に自動的に配分した。使用した比率は試料１部対試薬１００部であった。このシステムによって、５２０ナノメートルでの吸光度の変化をモニターした。吸光度のこの変化は、試料中のＣＨＯＬの濃度に正比例し、ＣＨＯＬ濃度を計算し、表すためにシステムによって使用した。
【0366】
ＨＤＬコレステロール
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、ＨＤＬコレステロールを測定した。
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、ＨＤＬコレステロールを測定した。
【0367】
この直接ＨＤＬコレステロール方法は、いかなるオフラインの前処理または遠心分離工程も必要ない、均一なアッセイであった。この方法は界面活性剤を使用し、これが、ＨＤＬリポタンパク質粒子のみを可溶化し、ＨＤＬコレステロールを遊離させ、これが、色素原の存在下でコレステロールエステラーゼおよびコレステロールオキシダーゼと反応して、着色生成物が産生された。同じ界面活性剤はまた、コレステロール酵素とＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびカイロミクロンリポタンパク質との反応を、これらの表面に吸着することによって阻害した。試薬中に含有されるポリアニオンは、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびカイロミクロンリポタンパク質を複合体化することによって、ＨＤＬコレステロールアッセイに対する選択性を高めた。
【0368】
ＨＤＬＤ試薬を使用して、タイムドエンドポイント方法によってコレステロール濃度を測定した。ＳＹＮＣＨＲＯＮ ＬＸ（登録商標）システムによって、適切なＨＤＬコレステロール試料および試薬量をキュベット中に自動的に配分した。使用した比率は、試料１部対試薬９３部であった。このシステムによって、５６０ナノメートルでの吸光度の変化をモニターした。吸光度のこの変化は、試料中のコレステロールの濃度に正比例し、ＨＤＬ－コレステロール濃度を計算し、表すためにシステムによって使用された。
【0369】
トリグリセリド
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、トリグリセリドを測定した。
Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｕｓｔｒａｌｉａから供給される試薬およびキャリブレーターを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＸ２０ＰＲＯアナライザーを使用する標準的な市販の酵素アッセイによって、トリグリセリドを測定した。
【0370】
トリグリセリドＧＰＯ試薬を使用して、タイムドエンドポイント方法によってトリグリセリド濃度を測定した。リパーゼの作用によって、試料中のトリグリセリドをグリセリンおよび遊離脂肪酸に加水分解した。グリセリンキナーゼ（ＧＫ）、グリセロリン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＰＯ）を使用する一連の３つの連動した酵素工程によって、３，５－ジクロロ－２－ヒドロキシベンゼンスルホン酸（ＤＨＢＳ）と４－アミノアンチピリンとの酸化カップリングが生じて、赤色キノンイミン色素が形成された。
【0371】
ＳＹＮＣＨＲＯＮ ＬＸ（登録商標）システムによって、適切な試料および試薬量をキュベット中に自動的に配分した。使用した比率は試料１部対試薬１００部であった。このシステムによって、５２０ナノメートルでの吸光度の変化をモニターした。吸光度のこの変化は、試料中のＴＧの濃度に正比例し、ＴＧ濃度を計算し、表すためにシステムによって使用された。
【0372】
結果
アッセイの結果を表２に示す。これらの結果は、ＦＸＩＩのインヒビター（３Ｆ７）が、コレステロールレベルを変えることなくアテローム性動脈硬化症の文脈において有益効果をもたらすことを示す。
アッセイの結果を表２に示す。これらの結果は、ＦＸＩＩのインヒビター（３Ｆ７）が、コレステロールレベルを変えることなくアテローム性動脈硬化症の文脈において有益効果をもたらすことを示す。
【0373】
【表2】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】