特許 7458567 Ｃ－ＭＥＴ結合剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-22

(45)【発行日】2024-04-01

(54)【発明の名称】Ｃ－ＭＥＴ結合剤

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240325BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240325BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240325BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240325BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K45/00

A61K47/68

A61P9/10

A61P11/06

A61P19/02

A61P29/00

A61P35/00

A61P37/06

【請求項の数】 33

(21)【出願番号】P 2020543219

(86)(22)【出願日】2019-03-12

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-07-08

(86)【国際出願番号】 EP2019056178

(87)【国際公開番号】W WO2019175186

(87)【国際公開日】2019-09-19

【審査請求日】2022-03-11

(31)【優先権主張番号】1803892.7

(32)【優先日】2018-03-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】1812487.5

(32)【優先日】2018-07-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】1816841.9

(32)【優先日】2018-10-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】523473165

【氏名又は名称】センテッサ ファーマシューティカルズ （ユーケー） リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100143638

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷部 真久

(72)【発明者】

【氏名】フィンレー，ウィリアム ジェームズ ジョナサン

【審査官】山本 晋也

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５１９３３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１２－５１０２８０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１２－５０９８８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１７－０４３６２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１７－５０７９６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１１－５０１９４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１２－５３０５１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１４－５３３２４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１５－５１１６２９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ

Ｃ１２Ｎ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗Ｃ－ＭＥＴ抗体又はその抗原結合部分であって、当該抗体又はその抗原結合部分は、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、及びＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号５７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、及びＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含む、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、及びＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、及びＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含む、又は
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、及びＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、及びＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含む、
抗Ｃ－ＭＥＴ抗体又はその抗原結合部分。

【請求項2】

（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号２を含む、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号３を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号４を含む、又は
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号５を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号６を含む、
請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。

【請求項3】

前記抗体が、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１又は２に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項4】

前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、又は前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域との両方が、１つ又は複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項5】

前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、又は前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域との両方が、前記ＣＤＲが挿入されたヒト可変領域フレームワークスキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項6】

前記ＶＨ領域が、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＨＶ１－４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項7】

前記ＶＬ領域が、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＫＶ３－２０ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１又は６に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項8】

前記抗体又は抗原結合部分が、免疫グロブリン定常領域を含有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項9】

前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹである、請求項８に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項10】

前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２である、請求項９に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項11】

前記免疫グロブリン定常領域が、免疫学的に不活性である、請求項８に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項12】

前記免疫グロブリン定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、又は野生型ヒトＩｇＧ２定常領域である、請求項８に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項13】

前記免疫グロブリン定常領域が、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する、請求項８に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項14】

前記抗体又は抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、又はｂｉｓ－ｓｃＦｖである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項15】

前記抗体又は抗原結合部分がモノクローナルである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項16】

前記抗体又は抗原結合部分が、四量体、四価、又は多特異性である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項17】

前記抗体又は抗原結合部分が、第一の抗原及び第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体又は二特異性抗原結合部分であり、前記第一の抗原がＣ－ＭＥＴであり、前記第二の抗原がＣ－ＭＥＴではない、請求項１から１６のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項18】

前記抗体又は抗原結合部分が、（ａ）ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合する、又は（ｂ）ヒトＣ－ＭＥＴ及びカニクイザルＣ－ＭＥＴに特異的に結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項19】

前記抗体又は抗原結合部分がヒトＩｇＧ４形式であり、
前記抗体又は抗原結合部分が、
（ａ）７７℃から８１℃の溶融温度（Ｔｍ）を有する、及び／又は
（ｂ）ｐＨ７．４を超える等電点（ｐＩ）を有する、
請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分。

【請求項20】

治療剤に結合された請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分を含有する免疫結合体。

【請求項21】

前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解性酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、又はアポトーシス促進剤である、請求項２０に記載の免疫結合体。

【請求項22】

請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分、又は請求項２０又は２１に記載の免疫結合体と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤と、を含有する、医薬組成物。

【請求項23】

核酸分子であって、
請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分のＶＨ領域及びＶＬ領域の両方のアミノ酸配列をコードする、核酸分子。

【請求項24】

請求項２３に記載の核酸分子を含有する発現ベクター。

【請求項25】

請求項２３に記載の核酸分子、又は請求項２４に記載の発現ベクターを含有する組換え宿主細胞。

【請求項26】

抗Ｃ－ＭＥＴ抗体又はその抗原結合部分を作製する方法であって、
前記核酸分子が発現される条件下で、請求項２５に記載の組換え宿主細胞を培養し、それにより抗体又は抗原結合部分を作製すること、及び
当該宿主細胞又は培養物から、前記抗体又は抗原結合部分を単離すること、
を含む、方法。

【請求項27】

対象において、免疫反応を強化するために用いられる、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分、請求項２０又は２１に記載の免疫結合体、又は請求項２２に記載の医薬組成物。

【請求項28】

癌、自己免疫性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、又は線維症の治療における使用のための、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分、請求項２０又は２１に記載の免疫結合体、又は請求項２２に記載の医薬組成物。

【請求項29】

前記癌が、消化管間質癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍又は中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌又は子宮内膜癌、口腔又は咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌又は虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、又は血液組織の癌である、請求項２８に記載の使用のための抗体又は抗原結合部分、免疫結合体、又は医薬組成物。

【請求項30】

前記自己免疫性疾患又は前記炎症性疾患が、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス（ｌｕｐｕｓ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、又は強直性脊椎炎である、請求項２８に記載の使用のための抗体又は抗原結合部分、免疫結合体、又は医薬組成物。

【請求項31】

前記心血管疾患が、冠動脈心疾患又はアテローム性動脈硬化症である、請求項２８に記載の使用のための抗体又は抗原結合部分、免疫結合体、又は医薬組成物。

【請求項32】

前記線維症が、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎又は喘息である、請求項２８に記載の使用のための抗体又は抗原結合部分、免疫結合体、又は医薬組成物。

【請求項33】

医薬品としての使用のための、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合部分、請求項２０又は２１に記載の免疫結合体、又は請求項２２に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１６日に出願された英国特許出願第１８１６８４１．９号明細書、２０１８年７月２１日に出願された英国特許出願第１８１２４８７．５号明細書、および２０１８年３月１２日に出願された英国特許出願第１８０３８９２．７号明細書の利益を主張するものであり、それら各開示内容は、その全体で参照により本明細書に援用される。

【0002】

電子的に提出されるテキストファイルに関する説明
本明細書とともに電子的に提出される以下のテキストファイルの内容は、その全体で参照により本明細書に援用される：コンピューター読み取り可能な形式の配列表のコピー（ファイルの名称：ＵＬＳＬ＿００１＿０３ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０１９年３月１１日、ファイルサイズは１２４キロバイト）。

【0003】

本発明は、Ｃ－ＭＥＴ（ＭＥＴ、ＭＥＴ癌原遺伝子、受容体型チロシンキナーゼ、ＡＵＴＳ９、ＨＧＦＲ、ＲＣＣＰ２、ＤＦＮＢ９７、ＯＳＦＤとしても知られる）に特異的に結合する抗体分子およびその医療用途に関する。

【背景技術】

【0004】

Ｃ－ＭＥＴ（ＭＥＴ、ＭＥＴ癌原遺伝子、受容体型チロシンキナーゼ、ＡＵＴＳ９、ＨＧＦＲ、ＲＣＣＰ２、ＤＦＮＢ９７、ＯＳＦＤとしても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属して可溶性因子ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）に結合する膜貫通型タンパク質であり、これは主として、間葉細胞で産生される。Ｃ－ＭＥＴは、その後に翻訳後に切断して、ジスルフィド結合して成熟受容体を形成するαサブユニットおよびβサブユニットを産生する一次単鎖前駆体タンパク質として発現する単回通過受容体型チロシンキナーゼである。Ｃ－ＭＥＴは、主に上皮細胞で発現し、また例えば内皮細胞、ニューロン、肝細胞、造血細胞、メラノサイト、および新生児心筋細胞等である複数の他の細胞型で観察されてきた。ＨＧＦに結合すると、この受容体は二量体化して、そのチロシンキナーゼ活性を活性化させる。このキナーゼ活性化により、シグナル伝達分子のさらに下流の活性化が生じる。それら分子は、細胞生存、増殖および分化において役割を果たすことが知られている。

【0005】

Ｃ－ＭＥＴの遺伝子の増幅および／または過剰発現は、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、胃癌、膵癌、ブドウ膜黒色腫、および乳頭状腎細胞癌等であるいくつかの重要なタイプの癌の進行と強く関連する。前臨床および臨床試験の結果から、Ｃ－ＭＥＴ／ＨＧＦシグナル伝達を遮断することで複数の癌において明白な治療利益が得られることが示唆されたが、この結果は主にＣ－ＭＥＴキナーゼ機能の低分子阻害剤を使用して得られたものである。チロシンキナーゼ阻害剤での治療後には抵抗性変異体が広く発生し、そのため治療有効性が失われてしまう。受容体が二量体化する能力を遮断することでＣ－ＭＥＴシグナル伝達を拮抗する治療用抗体は、以下の２つのメカニズムを介して抗腫瘍効果を介在する可能性がある：１．受容体を、非活性な単量体型へと固定させることにより、ＭＥＴシグナル伝達経路を強力に阻害する。２．抗体エフェクター－機能介在性の免疫細胞の会合。

【0006】

現在承認されている抗体治療剤の大部分は、免疫化されたげっ歯類に由来する。そうした抗体の多くが、マウスの相補性決定領域（ＣＤＲ）のヒトｖ－遺伝子フレームワーク配列への「移植」を介した、「ヒト化」として知られるプロセスを経ている（Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ９：７６７－７７４を参照のこと）。このプロセスは多くの場合、不正確であり、得られた抗体の標的結合アフィニティの低下が生じる。元の抗体の結合アフィニティに戻すために、通常、移植されたｖ－ドメインの可変ドメインフレームワーク中の重要な位置にマウス残基が導入される（「復帰突然変異（ｂａｃｋ－ｍｕｔａｔｉｏｎ）」としても知られる）。

【0007】

ＣＤＲ移植および復帰突然変異によりヒト化された抗体は臨床において、完全マウスｖ－ドメインによるものと比較して低い免疫反応率を誘導することが示されているが、この基礎的な移植法を使用してヒト化された抗体は、物理的に不安定である可能性があり、移植ＣＤＲループ内に免疫原性モチーフがいまだ保存されていることから、いまだ重大な臨床開発リスクを負っているままである。例えば抗Ｃ－ＭＥＴ等である抗体は、それらの作用機序の一部として免疫エフェクター機能を潜在的にもつものであって、Ｃ－ＭＥＴ＋標的細胞の食作用を促進し得るために免疫原性のリスクが特に高く、これは標的細胞に加えて抗体の抗原プロセシングを生じる。タンパク質の免疫原性に関する動物実験は、ヒトでの免疫反応の予測とはならないことが多く、治療用途の抗体操作は、予測されるヒトＴ細胞エピトープ含量、非ヒト生殖細胞系列アミノ酸含量、および精製タンパク質が凝集してしまう可能性を最小化することに焦点が置かれている。

【0008】

ゆえに理想的なヒト化アンタゴニスト性抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、ｖ－ドメイン中に、詳細に特徴解析されたヒト生殖細胞系列配列のフレームワークとＣＤＲの両方に存在する残基と同一の残基を可能な限り多く有している抗体である。潜在的患者の最大数において高度に発現される、高い安定性の生殖細胞系列との同一性を高レベルにすることで、臨床で望ましくない免疫原性を有する治療用抗体のリスクが最小化され、または異常に高い製造「原価」が最小化される。

【0009】

Ｔｏｗｎｓｅｎｄら（２０１５；ＰＮＡＳ １１２：１５３５４－１５３５９）は、抗体の作製方法を記載しており、当該方法においてラット抗体、ウサギ抗体およびマウス抗体に由来するＣＤＲは、好ましいヒトフレームワーク内に移植され、次いで「拡張バイナリー置換（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ ｂｉｎａｒｙ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」と呼ばれるヒト生殖細胞系列化（ｈｕｍａｎ ｇｅｒｍ－ｌｉｎｉｎｇ）方法が行われる。この方法は、元の抗体のパラトープにおいては基礎的な柔軟性を示したが、正確性の高い抗体－抗原の共結晶構造データが無い場合には、任意の所与の抗体のＣＤＲループ中のどの個々の残基がどの組み合わせでヒト生殖細胞系列に転換され得るかを確実に予測することは不可能なままである。さらにＴｏｗｎｓｅｎｄらの研究では、ヒト生殖細胞系列中に存在する残基を超えて、開発リスクモチーフの除去が有益となる可能性がある位置に突然変異誘導を加えることには対処していない。これは技術の限界であり、この限界によってプロセスが本質的に非効率的となり、開始抗体配列を改変する余剰な段階が必要となる。さらに現時点では、個々のｖ－ドメインのタンパク質配列で離れた位置にある改変のいずれが、リスクモチーフを排除しながら、抗原結合のアフィニティと特異性の維持を促進し得るのかは、たとえパートナーｖ－ドメイン上であったとしても正確に予測することはできない。

【0010】

このようにＣＤＲの生殖細胞系列化および開発クオリティの最適化は複雑で多因子的な課題であるため、本例においては以下をはじめとする複合的な分子の機能特性が維持されることが好ましい：標的結合特異性、ヒトおよび実験動物種（例えばカニクイザルとして知られるｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ、すなわちＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の両方に由来するＣ－ＭＥＴに対するアフィニティ、ｖ－ドメインの生物物理的安定性、ならびに／または研究、臨床および商業で使用されるタンパク質発現プラットフォームからのＩｇＧ収率。抗体操作実験から、重要なＣＤＲ中のたった１つの残基位置での突然変異であっても、これら望ましい分子特性のすべてに対し劇的な影響を与え得ることが示されている。

【0011】

国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号は、「２２４Ｇ１１」と名づけられたアンタゴニスト性マウス抗Ｃ－ＭＥＴ ＩｇＧ分子、ならびにヒト化型（ｈ２２４Ｇ１１）の調製を記載している。その２２４Ｇ１１のヒト化型は、古典的なヒト化技術、すなわちＫａｂａｔ規定のマウスＣＤＲをヒトの重鎖および軽鎖のフレームワーク配列に移植することにより作製されており、ヒトフレームワーク残基の一部は、対応する位置の２２４Ｇ１１マウス残基に復帰突然変異されている可能性がある。上述の理由によって、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号に記載される２２４Ｇ１１のヒト化型は理想的ではない。

【発明の概要】

【0012】

本発明は、多くの抗Ｃ－ＭＥＴ抗体、およびその医療用途を提供する。

【0013】

本発明の１つの態様によると、ヒトＣ－ＭＥＴに、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ－Ｙ－Ｉまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ等）－Ｆ－Ｔ－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ｙ－Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、ＳまたはＴ等）－Ｍ－Ｈ（配列番号２２）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：Ｍ－Ｇ－Ｗまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｉ等）－Ｉ－Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｎ）－Ｐ－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ）－Ｇ－Ｌまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ）－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ）－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ）－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号２３）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ／Ｅ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｔ／Ｖ等）－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｅまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｄ等）－Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｌ等）－Ｄ－Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ／Ｅ／Ｆ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｑ／Ｓ／Ｖ／Ｗ等）（配列番号２４）と、を伴う重鎖可変領域を含む。

【0014】

本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＩＦＴＡＹＴＭＨ（配列番号２５、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＳＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号２７、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。

【0015】

抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、ＳまたはＥ）－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｑ）－Ｓ－Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）－Ｌ－Ｈまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）（配列番号２８）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ｒまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ）－Ｓ－Ｔまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ）－Ｒ－Ｅ－Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ）（配列番号２９）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｑ－Ｑ－Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）－Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ）－Ｅまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｄ、Ｓ）－Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ、Ｅ、Ｒ）－Ｐ－Ｌ－Ｔ（配列番号３０）と、を伴う軽鎖可変領域をさらに含み得る。

【0016】

本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＳＳＥＳＶＤＳＹＡＮＳＦＬＨ（配列番号３１、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＲＡＳＴＲＥＳ（配列番号３２、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＳＫＥＤＰＬＴ（配列番号３３、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。

【0017】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ－Ｙ－Ｘ_１－Ｆ－Ｔ－Ｘ_２－Ｙ－Ｘ_３－Ｍ－Ｈを含み、式中、Ｘ_１はＩまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_３はＹまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２２）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｍ－Ｇ－Ｘ_１－Ｉ－Ｘ_２－Ｐ－Ｘ_３－Ｘ_４－Ｇ－Ｘ_５－Ｘ_６－Ｘ_７－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇを含み、式中、Ｘ_１はＷまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＫまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_５はＬまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_６はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_７はＮまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２３）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｘ_１－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｄ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＥまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＹまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｘ_１－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｘ_２－Ｓ－Ｘ_３－Ｌ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２８）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｘ_１－Ｘ_２－Ｓ－Ｘ_３－Ｒ－Ｅ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＲまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＳまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２９）、および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｑ－Ｑ－Ｘ_１－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｘ_４－Ｐ－Ｌ－Ｔを含み、式中、Ｘ_１はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＫまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＥまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＤまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号３０）。

【0018】

一部の態様において、本発明は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号５７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５４）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（配列番号５５）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＳＭＨ（配列番号４３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＩ（配列番号４５）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号４６）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（配列番号７６）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｊ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＬＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＥＱＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、または、
（ｋ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＧＳＥＰＬＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含む。

【0019】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号３４、配列番号４１、配列番号４３、または配列番号４８のＨＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号３５、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４９、または配列番号５４のＨＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号３６、配列番号４５、配列番号５０、または配列番号５５のＨＣＤＲ３とを含有し、および
上記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、
（ａ’）配列番号３７、配列番号４６、配列番号５１、配列番号５２、または配列番号５７のＬＣＤＲ１と、
（ｂ’）配列番号３８または配列番号５６のＬＣＤＲ２と、
（ｃ’）配列番号３９、配列番号４７、配列番号５３、または配列番号７６のＬＣＤＲ３とを含有する。

【0020】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含み、または、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含む。

【0021】

さらに本発明により、治療剤に連結された、融合された、または結合された、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。

【0022】

別の態様において、本発明は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。

【0023】

さらに、本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。

【0024】

また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。

【0025】

さらなる態様において、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養することと、当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離することと、を含む。

【0026】

本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。

【0027】

さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む。

【0028】

さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む。

【0029】

さらに、医薬品としての使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。

【0030】

別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤との併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、または使用のためのベクター、または治療方法を提供する。

【0031】

さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。

【0032】

本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与することを含む。

【0033】

例えば、自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス（ｌｕｐｕｓ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎であり得る。

【0034】

また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。

【0035】

さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。

【0036】

本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与することを含む。

【0037】

また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。

【0038】

さらに、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。

【0039】

本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。

【0040】

本発明の任意の態様における線維症は、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、嚢胞性線維症、気管支炎および喘息からなる群から選択されてもよい。

【0041】

本発明はさらに、ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗Ｃ－ＭＥＴ ＣＤＲをヒトｖ－ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣ－ＭＥＴへの結合、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴへの結合についても当該ファージライブラリーをスクリーニングする工程、
（４）スクリーニングする工程（３）から、ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合するクローンを選択する工程、ならびに
（５）工程（４）から選択された、ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する工程、を含む。

【0042】

当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化し、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化し、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善するさらなる工程を含んでもよい。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１Ａ～図１Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質に対する、ライブラリー由来の抗Ｃ－ＭＥＴ Ｆａｂの直接結合ＥＬＩＳＡおよびＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ競合スクリーニング。複数のファージ選択ブランチからクローンが誘導された。選択ブランチにおいて、ファージ群は、ビオチン化されたヒトまたはカニクイザルのＣ－ＭＥＴタンパク質に対し各ラウンドＩＩ～ＩＶで選択された。各選択ラウンドの後に、ライブラリー由来クローンは、ＥＬＩＳＡ（図１Ａ）において、およびＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ（図１Ｂ）によるｈｕＣＭＥＴに結合する際の２２４Ｇ１１ ＩｇＧの結合の遮断において、ヒト（ｈｕＣＭＥＴ）およびカニクイザル（ｃｙＣＭＥＴ）の両方に対して、ペリプラズム発現したＦａｂタンパク質としてスクリーニングされた。各ラウンドの平均±ＳＤ値は、灰色の棒で表されている。

【図2A】図２Ａ～図２Ｂ。生殖細胞系列への変異に関する、ＣＤＲ残基の寛容の分析。ヒトおよびカニクイザルのＣＭＥＴ交差反応性を示す、ＥＬＩＳＡ陽性の１３１個の固有Ｆａｂクローン群のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸保持頻度の図を、それぞれＶ_Ｌ（配列番号５８～６０）ドメイン（図２Ａ）およびＶ_Ｈ（配列番号６１～６３）（図２Ｂ）ドメインについて示す。ＨＣＤＲ３以外では、ヒト／マウス残基の突然変異誘導の標的とされた残基のみプロットされている。Ｘ軸上のカッコ内に記載されるＣＤＲ残基は、移植に使用されたヒト生殖細胞系列（ＩＧＫＶ３－２０およびＩＧＨＶ１－４６）中に存在する残基と同一である。カッコ内には無いがその値が０に設定されているＣＤＲ中の残基は、移植プロセスの間にヒト生殖細胞系列へと変異された。両方の図において、７５％での灰色の破線は、ヒト生殖細胞系列によるマウス残基の置換の寛容性に対するカットオフを表している。

【図2B】同上。

【図3】図３Ａ～図３Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質へのＩｇＧ結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。ヒト化ｈ２２４Ｇ１１、移植クローン（Ｇｒａｆｔ）、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のライブラリー由来クローンおよびデザインクローンが、ヒト（図３Ａ）およびカニクイザル（図３Ｂ）のＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定（単位ｎＭ）された。アイソタイプＩｇＧ４コントロール以外の全てのクローンは、ほぼ同等または改善されたヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ結合をもってＣ－ＭＥＴのオルソログ両方に対する結合活性を示した。

【図4】図４。ＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎにおけるＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）タンパク質のエピトープ競合解析。抗Ｃ－ＭＥＴ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）クローンに、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ技術を使用したエピトープ競合アッセイを行った。このアッセイにおいて、ライブラリー由来ＩｇＧおよびデザインＩｇＧは、２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）に対して、溶液中のヒトＣ－ＭＥＴタンパク質への結合を競合することにより、親２２４Ｇ１１エピトープの保持に関して解析された。解析されたすべてのクローンは、Ｃ－ＭＥＴに結合する２２４Ｇ１１の、強力で濃度依存性の中和を示した。

【図5】図５Ａ～図５Ｂ。ライブラリー由来リードおよび初代デザインリードのヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ＋ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するフローサイトメトリー結合。ヒトＣ－ＭＥＴがトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｋ１細胞（図５Ａ）およびカニクイザルＣ－ＭＥＴがトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｋ１細胞（図５Ｂ）に対する特異的結合に関して、ＩｇＧ４ （Ｓ２２８Ｐ）形式の抗Ｃ－ＭＥＴコントロールｈ２２４Ｇ１１およびＧｒａｆｔ、ライブラリー由来リードおよびデザインリードを検証した。ＩｇＧは、５００～０．０８ｎＭの範囲の濃度で検証された。すべてのＣ－ＭＥＴ特異的抗体で、ヒトおよびカニクイザルの細胞株の両方に対し、濃度依存性の結合が観察された。一方でアイソタイプコントロールＩｇＧ４では観察されなかった。

【図6】図６Ａ～図６Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質へのＩｇＧ結合に関する、直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。ヒト化ｈ２２４Ｇ１１、移植クローン（Ｇｒａｆｔ）、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３が、ヒト（図６Ａ）およびカニクイザル（図６Ｂ）のＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質に対する直接結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定（単位ｎＭ）された。アイソタイプＩｇＧ４コントロール以外の全てのクローンは、ほぼ同等または改善されたヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ結合をもってＣ－ＭＥＴのオルソログ両方に対する結合活性を示した。

【図7】図７。ＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎにおけるＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）タンパク質のエピトープ競合解析。抗ヒト化ｈ２２４Ｇ１１、移植クローン（Ｇｒａｆｔ）およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３が、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ技術を用いたエピトープ競合アッセイにおいて力価測定（単位ｎＭ）された。このアッセイにおいて、ライブラリー由来ＩｇＧおよびデザインＩｇＧは、２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）に対して、溶液中のヒトＣ－ＭＥＴタンパク質への結合を競合することにより、親２２４Ｇ１１エピトープの保持に関して解析された。解析されたすべてのクローンは、Ｃ－ＭＥＴに対する２２４Ｇ１１結合の、強力で濃度依存性の中和を示した。

【図8A】図８Ａ～図８Ｃ。ライブラリー由来リードおよび初代デザインリードのヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ＋ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するフローサイトメトリー結合。ヒト化ｈ２２４Ｇ１１、移植クローン（Ｇｒａｆｔ）およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３について、ヒトＣ－ＭＥＴでトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ａ）、カニクイザルＣ－ＭＥＴでトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ｂ）および非トランスフェクトＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ｃ）に対する特異的な結合に関して検証された。ＩｇＧは、５００～０．０８ｎＭの範囲の濃度で試験した。すべてのＣ－ＭＥＴ特異的抗体で、ヒトおよびカニクイザルの細胞株の両方に対し、濃度依存性の結合が観察された。一方でアイソタイプコントロールＩｇＧ４では観察されなかった。

【図8B】同上。

【図8C】同上。

【図9】図９。開発リスクＥＬＩＳＡ。ヒト化ｈ２２４Ｇ１１および、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３について、負電荷を帯びた生体分子であるインスリンおよび二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）に対する非特異的（ｏｆｆ－ｔａｒｇｅｔ）結合に関して検証した。すべてのリードクローンは、１．０の結合スコアを示し、陰性対照ＩｇＧ１のウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）およびベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）アナログのいずれかよりも有意に低かった。ボコシズマブ（Ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）およびブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）のアナログに観察されるような、インスリンまたはｄｓＤＮＡに対する強力な非特異的結合は、治療用抗体の貧弱な薬物動態に関する高リスク指標であることがわかっている。

【図10A】図１０Ａ～図１０Ｃ。ＩｇＧの電荷バリアントプロファイル。以下のＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式の抗体に関するタンパク質の電荷バリアントアッセイのデータを以下に示す：図１０Ａ：（１）ｈ２２４Ｇ１１および（２）０８Ｇ０７；図１０Ｂ：（３）ＭＨ７および（４）ＭＨ７－１；図１０Ｃ：（５）ＭＨ７－２および（６）ＭＨ７－３。全ての図において、シグナルは蛍光単位で測定される。

【図10B】同上。

【図10C】同上。

【図11】図１１。ＩｇＧの示差走査熱量測定法（ＤＳＣ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）。ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式の以下の抗体に関するＤＳＣアッセイデータを以下に示す：（ｍＡｂ－１）ｈ２２４Ｇ１１、（ｍＡｂ－２）０８Ｇ０７、（ｍＡｂ－３）ＭＨ７、（ｍＡｂ－４）ＭＨ７－１、（ｍＡｂ－５）ＭＨ７－２および（ｍＡｂ－６）ＭＨ７－３。

【図12】図１２。等電点電気泳動分析（Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ）。以下のタンパク質サンプルに関するＩＥＦアッセイデータを、以下に示す：（１）ＩＥＦマーカＳＥＲＶＡＬＹＴ（商標）３－１０、（２）ブレンツキシマブＩｇＧ１、（３）インフィキシマブ（Ｉｎｆｉｘｉｍａｂ）ＩｇＧ１、（４）ｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、（５）０８Ｇ０７ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、（６）ＭＨ７ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、（７）ＭＨ７－１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、（８）ＭＨ７－２ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）および（９）ＭＨ７－３ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本発明の第一の態様によると、ヒトＣ－ＭＥＴに、および任意にカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ－Ｙ－Ｉまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ等）－Ｆ－Ｔ－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ｙ－Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、ＳまたはＴ等）－Ｍ－Ｈ（配列番号２２）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：Ｍ－Ｇ－Ｗまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｉ等）－Ｉ－Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｎ等）－Ｐ－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ等）－Ｇ－Ｌまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ）－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ等）－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号２３）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ／Ｅ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｔ／Ｖ等）－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｅまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｄ等）－Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｌ等）－Ｄ－Ｙまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ／Ｅ／Ｆ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｑ／Ｓ／Ｖ／Ｗ等）（配列番号２４）と、を伴う重鎖可変領域を含む。

【0045】

一部の態様では、本明細書に提供される抗Ｃ－ＭＥＴ抗体または抗原結合部分は、配列番号１８または配列番号１９を含有する、または配列番号１８または配列番号１９からなる、Ｃ－ＭＥＴタンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗Ｃ－ＭＥＴ抗体または抗原結合部分は、配列番号１８または配列番号１９に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣ－ＭＥＴタンパク質に特異的に結合する。

【0046】

本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＩＦＴＡＹＴＭＨ（配列番号２５、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ２は、配列ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ３は、配列ＳＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号２７、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。

【0047】

抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、ＳまたはＥ）－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｎまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｑ）－Ｓ－Ｆまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）－Ｌ－Ｈまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）（配列番号２８）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ｒまたは任意のアミノ酸（例えば、Ａ）－Ａまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ）－Ｓ－Ｔまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ）－Ｒ－Ｅ－Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｔ）（配列番号２９）と、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｑ－Ｑ－Ｓまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｙ）－Ｋまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｇ）－Ｅまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｄ、Ｓ）－Ｄまたは任意のアミノ酸（例えば、Ｓ、Ｅ、Ｒ）－Ｐ－Ｌ－Ｔ（配列番号３０）と、を伴う軽鎖可変領域をさらに含み得る。

【0048】

本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＳＳＥＳＶＤＳＹＡＮＳＦＬＨ（配列番号３１、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＲＡＳＴＲＥＳ（配列番号３２、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＱＱＳＫＥＤＰＬＴ（配列番号３３、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示される２２４Ｇ１１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。

【0049】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ－Ｙ－Ｘ_１－Ｆ－Ｔ－Ｘ_２－Ｙ－Ｘ_３－Ｍ－Ｈを含み、式中、Ｘ_１はＩまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_３はＹまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２２）、
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、Ｍ－Ｇ－Ｘ_１－Ｉ－Ｘ_２－Ｐ－Ｘ_３－Ｘ_４－Ｇ－Ｘ_５－Ｘ_６－Ｘ_７－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇを含み、式中、Ｘ_１はＷまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＫまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_４はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_５はＬまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_６はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_７はＮまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２３）、
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、Ｘ_１－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｄ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＥまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＹまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２４）、
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｘ_１－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｘ_２－Ｓ－Ｘ_３－Ｌ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＤまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＮまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＦまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＨまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２８）、
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、Ｘ_１－Ｘ_２－Ｓ－Ｘ_３－Ｒ－Ｅ－Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＲまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＡまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＴまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＳまたは任意の他のアミノ酸であり（配列番号２９）、および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、Ｑ－Ｑ－Ｘ_１－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｘ_４－Ｐ－Ｌ－Ｔを含み、式中、Ｘ_１はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_２はＫまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ_３はＥまたは任意の他のアミノ酸であり、またＸ_４はＤまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号３０）。一部の態様において、ＨＣＤＲ１のＸ_１はＴである。一部の態様において、ＨＣＤＲ２のＸ_３はＮの保存的置換である。一部の態様において、ＨＣＤＲ２のＸ_４はＮの保存的置換である。一部の態様において、ＨＣＤＲ２のＸ_７はＮの保存的置換である。一部の態様において、ＬＣＤＲ１のＸ_２はＮの保存的置換である。一部の態様において、ＬＣＤＲ１のＸ_３はＦの保存的置換である。一部の態様において、ＬＣＤＲ２のＸ_３はＴの保存的置換である。一部の態様において、ＬＣＤＲ２のＸ_４はＳの保存的置換である。

【0050】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１－ＨＣＤＲ１－ＦＲ２－ＨＣＤＲ２－ＦＲ３－ＨＣＤＲ３－ＦＲ４を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１－ＬＣＤＲ１－ＦＲ２－ＬＣＤＲ２－ＦＲ３－ＬＣＤＲ３－ＦＲ４を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含有し、この場合において、ＨＣＤＲ１は配列番号２２であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２３であり、ＨＣＤＲ３は配列番号２４であり、ＬＣＤＲ１は配列番号２８であり、ＬＣＤＲ２は配列番号２９であり、そしてＬＣＤＲ３は配列番号３０であり、当該重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１２７（表２を参照のこと）内の重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列であり、また当該軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１２９（表２を参照のこと）内の軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列である。

【0051】

本明細書に詳述されるように、本発明者らは、国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１６５２７Ａ１号に開示されるマウス抗Ｃ－ＭＥＴ抗体２２４Ｇ１１から誘導されたＣＤＲ配列を使用し、多数の最適化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子を作製することに初めて成功した。本発明の実施形態において、これら抗体分子は、（適切な動物実験種でのインビボ試験が容易になるように）ヒトＣ－ＭＥＴならびにカニクイザルＣ－ＭＥＴの両方に特異的に結合するよう選択された。本明細書に記載される最適化された抗体分子のさらなる改良によって、可変ドメインの安定性の改善、より高い発現収率、および／または免疫原性の低下が提供された。

【0052】

本発明の好ましい最適化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子は、対応するマウスＣＤＲまたはその他（例えばフレームワーク）のアミノ酸の位置で、必ずしも最大数のヒト生殖細胞系列の置換を有するとは限らない。以下の実施例の項に詳述されるように、本発明者らは、「最大限にヒト化された」抗体分子は、抗Ｃ－ＭＥＴ結合特性および／または他の望ましい性質に関して、必ずしも「最大限に最適化」されているとは限らないことを見出した。

【0053】

本発明は、本明細書に記載される抗体分子またはその抗原結合部分のアミノ酸配列に対する改変を包含する。例えば本発明は、その性質に大きな影響を与えない、機能的に同等の可変領域およびＣＤＲを含有する抗体分子およびその対応する抗原結合部分、ならびに活性および／もしくはアフィニティが強化された、または低下したバリアントを包含する。例えばアミノ酸配列は、Ｃ－ＭＥＴに対し所望の結合アフィニティを有する抗体が得られるように変異されてもよい。１残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに単一アミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む挿入が予期される。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子、またはエピトープタグに融合された抗体分子が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、酵素またはポリペプチドの、抗体Ｎ末端または抗体Ｃ末端への融合が挙げられ、それにより血液循環中の抗体の半減期が延長される。

【0054】

本発明の抗体分子または抗原結合部分は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾を有するポリペプチド、例えば異なる糖類でのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化を有するポリペプチドを含んでもよい。例えば１つまたは複数のアミノ酸残基を付加、除去または置換させ、グリコシル化部位を形成または除去させることにより、本発明の抗体分子または抗原結合部分を変異させて、当該翻訳後修飾を変化させてもよい。

【0055】

本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去するアミノ酸置換により改変されてもよい。

【0056】

抗体分子またはその抗原結合部分において、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ－Ｙ－Ｉ／Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ａ／Ｓ－Ｙ－Ｙ／Ｓ／Ｔ／Ａ－Ｍ－Ｈ（配列番号６４）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ－Ｇ－Ｗ／Ｉ－Ｉ－Ｋ／Ｎ－Ｐ－Ｎ／Ｓ－Ｎ／Ｇ－Ｇ－Ｌ／Ｓ－Ａ／Ｔ－Ｎ／Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号６５）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｓ／Ａ／Ｅ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｔ／Ｖ－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｅ／Ｄ－Ｆ／Ｌ－Ｄ－Ｙ／Ａ／Ｅ／Ｆ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｑ／Ｓ／Ｖ／Ｗ（配列番号６６）。

【0057】

例えば、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ－Ｙ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｙ－Ａ／Ｓ／Ｔ－Ｍ－Ｈ（配列番号６７）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ－Ｇ－Ｗ／Ｉ－Ｉ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－Ｔ－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｆ－Ｑ－Ｇ（配列番号６８）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｓ／Ａ／Ｅ／Ｑ／Ｔ－Ｅ－Ｉ－Ｔ－Ｔ－Ｅ／Ｄ－Ｆ－Ｄ－Ｙ／Ｉ（配列番号６９）。

【0058】

抗体分子またはその抗原結合部分において、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｄ／Ｓ／Ｅ－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｎ／Ｑ－Ｓ－Ｆ／Ｙ－Ｌ－Ｈ／Ａ（配列番号７０）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ／Ａ－Ａ／Ｇ－Ｓ－Ｔ／Ｓ－Ｒ－Ｅ－Ｔ／Ｓ（配列番号７１）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ－Ｑ－Ｓ／Ｙ－Ｋ／Ｇ－Ｅ／Ｄ／Ｓ－Ｄ／Ｓ／Ｅ／Ｒ－Ｐ－Ｌ－Ｔ（配列番号７２）。

【0059】

例えば、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｖ－Ｄ／Ｓ／Ｅ－Ｓ－Ｙ－Ａ－Ｎ／Ｑ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｈ（配列番号７３）；ＬＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ－Ｇ－Ｓ－Ｔ－Ｒ－Ｅ－Ｔ／Ｓ（配列番号７４）；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ－Ｑ－Ｓ／Ｙ－Ｋ／Ｇ－Ｅ／Ｓ－Ｄ／Ｓ／Ｅ－Ｐ－Ｌ－Ｔ（配列番号７５）。

【0060】

本発明の特定の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分は、以下を含有してもよい：
（ａ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号４６）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号７６）、ＧＹＩＦＴＳＹＳＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４３）、ＭＧＷＩＮＰＳＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４４）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＩ（ＨＣＤＲ３；配列番号４５）、［クローン０４Ｆ０９］；または、
（ｂ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５１）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号４７）、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４８）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＬＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４９）、ＳＥＩＴＴＥＱＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号５０）、［クローン０７Ａ０１］；または、
（ｃ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＡＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号７７）、ＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号４７）、ＧＹＴＦＴＳＹＳＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号７８）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＬＴＮＹＡＱＫＦＲＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号７９）、ＥＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号８０）、［クローン０９Ａ１２］；または、
（ｄ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号７６）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＮＮＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号８１）、ＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号５５）、［クローン０９Ｂ０８］；または、
（ｅ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号４６）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＥＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号８２）、ＧＹＩＦＴＡＹＳＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号８３）、ＭＧＩＩＫＰＳＮＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号８４）、ＡＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号８５）、［クローン０７Ｃ１０］；または、
（ｆ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５２）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＹＧＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５３）、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４８）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローン０９Ｅ０４］；または、
（ｇ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５１）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号５４）、ＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号５５）、［クローン０８Ｇ０７］；または、
（ｈ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５１）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４８）、ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＳＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号８６）、ＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号５５）、［クローン０４Ｅ１０］；または、
（ｉ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５１）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号７６）、ＧＹＩＦＴＡＹＳＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号８３）、ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号８７）、ＴＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号８８）、［クローン０８Ｇ１２］；または、
（ｊ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ１］；または、
（ｋ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号８９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ２］；または、
（ｌ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＹＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号９０）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ３］；または、
（ｍ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ４］；または、
（ｎ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号８９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ５］；または、
（ｏ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＹＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号９０）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ６］；または、
（ｐ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ７］；または、
（ｑ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号８９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ８］；または、
（ｒ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＹＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号９０）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ９］；または、
（ｓ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＳ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ１０］；または、
（ｔ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号８９）、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ１１］；または、
（ｕ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＹＧＳＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号９０）、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４０）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ１２］；または、
（ｖ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ７－１］；または、
（ｗ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号４７）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ７－２］；または、
（ｘ）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（ＬＣＤＲ１；配列番号５７）、ＲＧＳＴＲＥＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号５６）、ＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号４７）、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（ＨＣＤＲ１；配列番号３４）、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３５）、ＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３６）、［クローンＭＨ７－３］。

【0061】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
一部の態様において、本発明は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号５７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５４）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（配列番号５５）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＳＭＨ（配列番号４３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＩ（配列番号４５）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号４６）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（配列番号７６）のＬＣＤＲ３を含み、
（ｊ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＬＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＥＱＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、または、
（ｋ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ならびにＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１を含む。

【0062】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域は、表１０のＶＨ領域アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有し、当該ＶＬ領域は、表１０のＶＬ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する。

【0063】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含み、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含み、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含み、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含み、または、
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含み、かつ、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含む。

【0064】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号１に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号２に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｂ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号４に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｃ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｄ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号７に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号８に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；または
（ｅ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号９に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号１０に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。

【0065】

一部の態様において、本明細書に規定される抗体または抗原結合部分は、単離されてもよい。

【0066】

本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、Ｃ－ＭＥＴへの結合を、本明細書に開示されるＣＤＲセットを含有する抗体またはその抗原結合部分と交差競合できる。一部の実施形態において、本発明は、単離された抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであって、当該抗体または抗原結合部分は、本明細書に開示するＣＤＲのセットを含む抗体または抗原結合部分と、Ｃ－ＭＥＴとの結合に関して交差競合し、また（ａ）完全なヒト生殖細胞系列フレームワークのアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＬＣＤＲ１内に「ＤＳ」異性化部位を含有せず、（ｃ）ＬＣＤＲ１内に「ＮＳ」脱アミド化部位を含有せず、（ｄ）ＬＣＤＲ１内に、酸化リスクを構成する露出「Ｆ」側鎖を含有せず、（ｅ）ＨＣＤＲ２内に「ＮＧ」脱アミド化部位を含有せず、（ｅ）ＨＣＤＲ２内に「ＮＮ」脱アミド化部位を含有せず、（ｆ）ＨＣＤＲ２内に、酸化リスクを構成する露出「Ｗ」側鎖を含有せず、および／または、（ｇ）ＬＣＤＲ３内に「ＤＰ」酸加水分解部位を含有せず、および／または、（ｈ）ＬＣＤＲ２内にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または、（ｉ）ＬＣＤＲ３内にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または、（ｊ）抗体ｈ２２４Ｇ１１の等電点と比較して、より高い等電点を示し、および／または、（ｋ）ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式であるときに、等電点電気泳動により測定された等電点が８．０以上を示す。抗体ｈ２２４Ｇ１１のアミノ酸配列は、表２で見ることができる。

【0067】

「交差競合する」、「交差競合」、「交差遮断する」、「交差遮断される」、および「交差遮断すること」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、抗体またはその部分がもつ、標的Ｃ－ＭＥＴ（例えば、ヒトＣ－ＭＥＴ）に対する直接結合または本発明の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体のアロステリック調節を介した間接的結合を干渉する能力を意味する。抗体またはその部分が、別物質による標的結合に干渉することができる度合、つまり本発明により交差遮断する、または交差競合すると言えるかどうかは、競合結合アッセイを使用して決定され得る。結合競合アッセイの一例は、ＨＴＲＦ法（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）である。１つの特に適した定量的交差競合アッセイは、ＦＡＣＳ系またはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ系の方法を使用して、標識（例えばＨｉｓタグ化、ビオチン化、または放射性標識）された抗体またはその部分と、他の抗体またはその部分との間の、標的への結合に関する競合を測定する。概して、交差競合抗体またはその部分は、例えば、アッセイの間に、および第二の抗体またはその部分の存在下で、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの記録される変位が、所与の量で存在する潜在的に交差遮断する抗体またはその断片による、（例えばＦＡＣＳ系競合アッセイにおける）理論上の最大変位（例えばコールド（例えば非標識）抗体または交差遮断されるために必要なその断片による変位）の１００％以下となるように、交差競合アッセイにおいて標的に結合することとなるものである。交差競合抗体またはその部分は、１０％～１００％、または５０％～１００％の記録される変位を有することが好ましい。

【0068】

本明細書において規定される抗体分子または抗原結合部分は、熱的に安定であってもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗Ｃ－ＭＥＴ抗体の２２４Ｇ１１またはｈ２２４Ｇ１１と実質的に同じ熱的安定性を有してもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗Ｃ－ＭＥＴ抗体の２２４Ｇ１１またはｈ２２４Ｇ１１よりも熱的な安定性が高くてもよい。一部の例では、抗体分子または抗原結合部分は、約７７℃～約８１℃の融解温度（Ｔｍ）を有してもよく、およびヒトＩｇＧ４形式であってもよい。一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分は、約７７．２℃～約８０．６℃のＴｍを有してもよく、およびヒトＩｇＧ４形式であってもよい。一部の場合において、抗原結合部分は、Ｆａｂである。抗体分子またはその抗原結合部分の溶融温度は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）アッセイにより解析されてもよい。

【0069】

一部の例では、本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗Ｃ－ＭＥＴ抗体の２２４Ｇ１１またはｈ２２４Ｇ１１よりも高い等電点（ｐＩ）を有し得る。一部の場合において、抗体分子またはその抗原結合部分は、ｐＨ約７．３より大きいかまたはｐＨ約７．４より大きいｐＩを有し得る。例えば、抗体分子またはその抗原結合部分は、ｐＨ約７．３からｐＨ約８．５のｐＩを有し得る。抗体分子またはその抗原結合部分の等電点は、タンパク質チャージバリアントアッセイで解析できる。

【0070】

本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、１つまたは複数の置換、欠失および／または挿入を含んでもよく、それらにより例えばグリコシル化部位（Ｎ結合型またはＯ結合型）、脱アミノ化部位、リン酸化部位または異性化／断片化部位などの翻訳後修飾（ＰＴＭ：ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）部位が除去される。

【0071】

３５０を超えるタイプのＰＴＭが公知である。重要なＰＴＭの型としては、リン酸化、グリコシル化（Ｎ結合型およびＯ結合型）、ＳＵＭＯ化、パルミトイル化、アセチル化、硫酸化、ミリストイル化、プレニル化、および（Ｋ残基およびＲ残基の）メチル化が挙げられる。特定のＰＴＭの原因となる推定アミノ酸部位を特定するための統計的手法は、当分野に周知である（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：１３１８－１３２１を参照のこと）。例えば置換、欠失および／または挿入によりそうした部位を除去し、次いで任意で（ａ）結合活性、および／または（ｂ）ＰＴＭの消失を検証（実験的に、および／または理論的に）することが予期される。

【0072】

例えば、２２４Ｇ１１マウスＬＣＤＲ３（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＤＰＬＴ（配列番号３３））は、６および７位の残基（ＤＰ）で推定酸加水分解部位を有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ３中の同等の位置にあるこの部位を、Ｄの置換（例えば、ＳまたはＥへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0073】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＫＳＳＥＳＶＤＳＹＡＮＳＦＬＨ（配列番号３１））は、７位の残基（Ｄ）で推定異性化部位を有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこの部位を、Ｄの置換（例えば、ＳまたはＥへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0074】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＫＳＳＥＳＶＤＳＹＡＮＳＦＬＨ（配列番号３１））は、１１位の残基（Ｎ）で推定脱アミド化部位を有すると特定されている。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこの部位を、Ｎの置換（例えば、Ｑへの）により除去することが予期される（例えばクローン０４Ｆ０９、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0075】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＫＳＳＥＳＶＤＳＹＡＮＳＦＬＨ（配列番号３１））は、１３位の残基（Ｆ）で推定酸化部位を有すると特定されており、これはＣＤＲループの溶媒露出領域であることが知られている。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置にあるこの部位を、Ｆの置換（例えば、Ｙへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0076】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＨＣＤＲ２（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６））は、３位の残基（Ｗ）で推定酸化部位を有すると特定されており、これはＣＤＲループの溶媒露出領域であることが知られている。本発明のＨＣＤＲ２中の同等の位置にあるこの部位を、Ｗの置換（例えば、Ｉへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0077】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＨＣＤＲ２（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６））は、７位の残基（Ｎ）で推定脱アミド化部位を有すると特定されており、これはＣＤＲループの溶媒露出領域であることが知られている。本発明のＨＣＤＲ２中の同等の位置にあるこの部位を、Ｎの置換（例えば、Ｓへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0078】

さらなる例では、２２４Ｇ１１マウスＨＣＤＲ２（本明細書に規定される、すなわちアミノ酸配列ＭＧＷＩＫＰＮＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２６））は、８位の残基（Ｎ）で推定脱アミド化部位を有すると特定されており、これはＣＤＲループの溶媒露出領域であることが知られている。本発明のＨＣＤＲ２中の同等の位置にあるこの部位を、Ｎの置換（例えば、Ｇへの）により除去することが予期される（例えばクローンＭＨ７、および表３および表４に見られる他のクローンと同様に）。

【0079】

抗体分子またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。

【0080】

抗体分子またはその抗原結合部分は、１つまたは複数のヒト可変ドメインフレームワークスキャホールドを含有してもよく、その中にはＣＤＲが挿入されている。例えば、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域およびＶＬ領域の両方が、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有してもよい。

【0081】

抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１－４６ ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ配列が挿入されている。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１－４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中には対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されている。

【0082】

抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ３－２０ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中には対応するＬＣＤＲ配列が挿入されている。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ３－２０ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中には対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されている。

【0083】

抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＨＶ１－４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドと、中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入されているＩＧＫＶ３－２０ヒト生殖細胞系列スキャホールドとを含有してもよい。抗体分子またはその抗原結合部分は、中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＨＶ１－４６ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域と、中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入されているＩＧＫＶ３－２０ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域とを含有してもよい。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表４または表８のクローンのいずれか１つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列であってもよい（６つすべてのＣＤＲ配列が、同じクローン由来である）。

【0084】

一部の態様では、抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。追加的な実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫学的に不活性な定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域か、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域か、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域または野生型ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、表１１のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。表１１のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１－３ＭまたはヒトＩｇＧ１－４ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。例えば、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）のＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｓ２２８Ｐ。例えば、ヒトＩｇＧ１－３ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ。一方で、ヒトＩｇＧ１－４ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓ。一部の態様では、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵの命名法（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５ Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）に従って番号付けされる。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号２０）モチーフ、またはＲＥＥＭ（配列番号２１）モチーフ（表１１の下線部分）を含有してもよい。ＲＥＥＭ（配列番号２１）アロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号２０）アロタイプよりも少ないヒト集団に存在する。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、表４または表８のクローンのいずれか１つの６つのＣＤＲアミノ酸配列、または表１１のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有してもよい。一部の態様では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は、表１１のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する免疫グロブリン重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域を含有してもよい。

【0085】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号５７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５４）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＤＦＤＹ（配列番号５５）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｆ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｇ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｈ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号３４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＥＰＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｉ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＳＭＨ（配列番号４３）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＳＮＧＬＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＩ（配列番号４５）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＱＳＹＬＨ（配列番号４６）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＳＤＰＬＴ（配列番号７６）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；
（ｊ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＬＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４９）のＨＣＤＲ２、およびＳＥＩＴＴＥＱＤＹ（配列番号５０）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＤＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５１）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＳＫＥＳＰＬＴ（配列番号４７）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含み；または
（ｋ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＩＦＴＳＹＴＭＨ（配列番号４８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＷＩＮＰＮＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＱＥＩＴＴＥＦＤＹ（配列番号３６）のＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＳＹＡＮＳＹＬＨ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１、ＲＧＳＴＲＥＳ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＱＹＧＳＥＰＬＴ（配列番号５３）のＬＣＤＲ３を含み、ならびに重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含む。

【0086】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、または配列番号１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、または配列番号２からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、または配列番号３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、または配列番号４からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、または配列番号５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、または配列番号６からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、または配列番号７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、または配列番号８からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、または
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、または配列番号９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、または配列番号１０からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。

【0087】

一部の態様において、本明細書は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、または配列番号１からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、または配列番号２からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する；
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、または配列番号３からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、または配列番号４からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する；
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、または配列番号５からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、または配列番号６からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する；
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、または配列番号７からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、または配列番号８からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する；または
（ｅ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、または配列番号９からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、または配列番号１０からなり、および重鎖定常領域は、配列番号１１～１７のいずれか１つを含有する。

【0088】

抗体分子またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）_２断片、Ｆｖ断片、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体（例えば二特異性抗体）、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、モノクローナル抗体、または融合タンパク質であってもよい。１つの実施形態では、抗体は、第一の抗原と第二の抗原とに特異的に結合する二特異性抗体であってもよく、この場合において第一の抗原はＣ－ＭＥＴであり、第二の抗原はＣ－ＭＥＴではない。抗体分子、ならびにその構築方法および使用方法は、例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ （２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（９）：１１２６－１１３６）に記載されている。

【0089】

本発明の別の態様では、治療剤に結合された、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。

【0090】

適切な治療剤の例示としては、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、ならびに細胞増殖抑制酵素および細胞溶解性酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ）が挙げられる。さらなる治療剤としては、例えば免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤をコードする遺伝子などの治療用核酸が挙げられる。これらの薬剤の記述子は、相互排他的ではなく、ゆえに治療剤は、上述の用語の１つまたは複数を使用して記載されてもよい。

【0091】

免疫結合体における使用に適した治療剤の例としては、タキサン、メイタンシン、ＣＣ－１０６５、およびデュオカルマイシン、カリケアミシンおよび他のエンジイン、ならびにオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）が挙げられる。他の例としては、抗葉酸剤、ビンアルカロイド、およびアントラサイクリンが挙げられる。植物毒素、他の生物活性タンパク質、酵素（すなわちＡＤＥＰＴ）、放射性同位体、光増感剤が、免疫結合体において使用されてもよい。さらに結合体は、細胞毒性剤として二次的な担体、例えばリポソームまたはポリマーなどを使用して作製され得る。適切な細胞毒素としては、細胞の機能を阻害または妨害し、および／または細胞の破壊をもたらす薬剤が挙げられる。代表的な細胞毒素としては、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合し、破壊するアルキル化剤、そしてタンパク質合成を破壊する、または例えばタンパク質キナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素およびサイクリンなどの必須の細胞タンパク質の機能を破壊する薬剤が挙げられる。

【0092】

代表的な細胞毒素としては限定されないが、以下に限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン（ｐｉｔａｒｕｂｉｃｉｎ）、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルジン（ｄｏｘｉｆｌｕｈｄｉｎｅ）、ペントスタチン、ブロクスジン（ｂｒｏｘｕｈｄｉｎｅ）、カペシタビン、クラドビン（ｃｌａｄｈｂｉｎｅ）、デシタビン、フロクスジン（ｆｌｏｘｕｈｄｉｎｅ）、フルダラビン、グーゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフン（ｔｉａｚｏｆｕｈｎ）、アダマイシン（ａｄｈａｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル（ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、エトポシド、タキソール、タキソールアナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチン類、マイトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、ヘミアステリン（ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ）、エスペラミシン、ならびにマイタンシノイドが挙げられる。

【0093】

適切な免疫調節剤としては、腫瘍に対するホルモンの作用を遮断する抗ホルモン剤、およびサイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御する、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。

【0094】

さらに、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子も提供される。核酸分子は、本明細書に記載される抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分の（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列をコードしてもよい。一部の態様では、本明細書に規定される核酸分子が単離されてもよい。

【0095】

さらに、本明細書に規定される本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。ベクターは、発現ベクターであってもよい。

【0096】

また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。宿主細胞は、組換え宿主細胞であってもよい。

【0097】

さらなる態様において、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養することと、当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離することと、を含む。

【0098】

本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。

【0099】

本発明はまた、細胞においてＣ－ＭＥＴシグナル伝達を阻害する方法を提供し、当該方法は、本明細書に記載の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子またはその抗原結合部分に細胞を接触させることを含む。一部の実施形態では、本発明の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子または抗原結合部分が、Ｃ－ＭＥＴを非活性化単量体型に固定する。

【0100】

さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子または抗原結合部分は、抗体エフェクター機能が介在する結合を介して対象の免疫細胞を結合する。

【0101】

さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。

【0102】

例えば、癌は、胃腸間質性癌（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌であり得る。

【0103】

本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。

【0104】

別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤と組み合わされる併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、または使用のためのベクター、または治療方法を提供する。

【0105】

さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。

【0106】

本発明はさらに、対象において自己免疫性疾患もしくは炎症性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。

【0107】

例えば、自己免疫性疾患または炎症性疾患は、関節炎、喘息、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本甲状腺炎、または強直性脊椎炎であり得る。

【0108】

また、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。

【0109】

さらに、自己免疫性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。

【0110】

本発明はさらに、対象において心血管疾患もしくは線維症を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を当該対象に投与することを含む。

【0111】

また、心血管疾患または線維症の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。

【0112】

さらに、心血管疾患または線維症の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。

【0113】

本発明の任意の態様における心血管疾患は、例えば冠動脈心疾患またはアテローム性動脈硬化症であってもよい。

【0114】

本発明の任意の態様における線維症は、例えば、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、または気管支炎であってもよい。

【0115】

一実施形態において、本発明は、治療における使用のための本明細書に開示されるアミノ酸配列を含有する抗Ｃ－ＭＥＴ抗体またはその抗原結合部分を提供する。

【0116】

本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含有してもよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、二次的な反応を引き起こさない医薬組成物に入れられる化合物または化合物の組み合わせであってもよく、例えば、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子の投与の促進、その持続期間の延長、および／もしくは体内におけるその有効性の増加、または溶液中の可溶度の上昇を可能にする。これら薬学的に許容可能なビヒクルは周知であり、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子の投与形態の効果に応じて当業者により適合される。

【0117】

一部の実施形態では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子は、凍結乾燥されて提供され、投与前に再構成されてもよい。例えば凍結乾燥された抗体分子は、滅菌水で再構成され、個体への投与前に生理食塩水と混合される。

【0118】

抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子は通常、医薬組成物の形態で投与され、当該医薬組成物は、抗体分子に加えて少なくとも１つの構成要素を含有してもよい。したがって医薬組成物は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または当業者に周知の他の物質を含有してもよい。そうした物質は、非毒性でなければならず、そして抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子の効能に干渉してはならない。担体または他の物質の正確な性質は、投与経路に依存することとなり、これは、以下に検討されるように、ボーラス、点滴、注射または任意の他の適切な経路であってもよい。

【0119】

例えば注射などによる皮下投与または静脈内投与などの非経口投与に関しては、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子を含有する医薬組成物は、発熱物質を含まず、そして適切なｐＨ、等張性および安定性の非経口に受容可能な水溶液の形態であってもよい。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射溶液、リンゲル注射溶液、乳酸リンゲル注射溶液などの等張ビヒクルを使用して適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、および／または他の添加剤を必要に応じて採用してもよく、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３’－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えばポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンなどの単糖、二糖および他の炭水化物；例えばＥＤＴＡなどのキレート剤；例えばショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；例えばナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；および／または例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

【0120】

抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子を含有する医薬組成物は、治療される状態に応じて、単独で投与されてもよく、または他の治療と併用されて、同時に、または連続のいずれかで投与されてもよい。

【0121】

本明細書に記載の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子は、ヒトまたは動物の身体の治療方法に使用されてもよく、治療には、予防的または防止的な治療が含まれる（例えば、個体において症状が発生する前に、当該個体において当該症状が発生するリスクを低下させる、その発生を遅延させる、または発生後の重症度を低下させるための治療）。治療方法は、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子を、その必要のある個体に投与することを含んでもよい。

【0122】

投与は通常、「治療有効量」でされ、これは、患者に対し有益性を示すために充分な量である。そうした有益性は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であってもよい。投与される実際の量、投与速度、および投与の経時変化は、治療されるものの、特に治療される哺乳動物の、性質および重症度、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医療従事者がわかっている他の因子に依存することとなる。例えば用量の決定などの治療の指示は、一般開業医および他の医師の責の範囲内にあり、治療される疾患の症状の重症度、および／または治療される疾患の進行に依存し得る。抗体分子の適切な投与量は、当分野に周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９－６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５－９２２）。具体的な用量は、本明細書において、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ （２００３）において示され、投与される薬剤のタイプに応じた用量が、使用され得る。抗体分子の治療有効量または適切な投与量は、そのインビトロ活性と、動物モデルにおけるインビボ活性とを比較することにより決定され得る。マウスおよび他の被験動物における有効用量を、ヒトに外挿する方法は公知である。正確な投与量は、抗体が予防用または治療用であるか、治療される領域の大きさおよび位置、抗体の正確な性質（例えば全抗体、断片）および抗体に付加された任意の検出可能な標識または他の分子の性質をはじめとする多くの因子に依存することとなる。

【0123】

典型的な抗体投与量は、全身投与に対しては１００μｇ～１ｇ、また局所投与に対しては１μｇ～１ｍｇの範囲である。初回に高い負荷投与量で、その後は１回または複数回の低投与量が投与されてもよい。典型的には、抗体は、例えばＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプなどの全抗体である。これは成人患者の単回治療用の投与量であり、小児および幼児に対しては相対的に調整され得、そして分子量に比例して他の抗体形式にも調整され得る。治療は、医師の裁量で毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で繰り返され得る。個々の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態および薬力学的性質、投与経路、ならびに治療される症状の性質に依存し得る。

【0124】

治療は定期的であってもよく、投与の間の期間は、約２週間またはそれ以上であってもよく、例えば約３週間以上、約４週間以上、約１カ月に１回以上、約５週間以上、または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は、２週～４週ごと、または４週～８週ごとであってもよい。治療は、外科手術の前、および／もしくは後に行われてもよく、ならびに／または外科的治療もしくは浸潤的手順の解剖学的位置に直接投与または適用されてもよい。適切な製剤および投与経路は、上記に記載される。

【0125】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子は、皮下注射として投与されてもよい。皮下注射は、例えば長期間または短期間の予防／治療用の自己注射器を使用して投与されてもよい。

【0126】

一部の実施形態では、抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子の治療効果は、血清抗体半減期の数倍の間、持続し得、投与量に依存する。例えば抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子の単回投与の治療効果は、個体において、１カ月以上、２カ月以上、３カ月以上、４カ月以上、５カ月以上、または６カ月以上、持続し得る。

【0127】

本発明はさらに、ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗Ｃ－ＭＥＴ ＣＤＲをヒトｖ－ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのファージライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣ－ＭＥＴへの結合について、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴへの結合についても当該ファージライブラリーを選択する工程、
（４）選択する工程（３）から、ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合する、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合するクローンをスクリーニングする工程、ならびに
（５）ヒトＣ－ＭＥＴに特異的に結合し、および任意でカニクイザルＣ－ＭＥＴにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を、工程（４）から選択されたクローンから作製する工程、を含む。

【0128】

当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化し、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化し、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善するさらなる工程を含んでもよい。

【0129】

上述の方法に適用可能な改善は、以下の実施例１に記載されるとおりである。

【0130】

本明細書で用いる場合、“Ｃ－ＭＥＴ”の語は、ＭＥＴの生物学的活性の少なくとも一部を保持する、ＭＥＴタンパク質およびそのバリアントを指す。一部の場合では、本明細書で用いる場合、Ｃ－ＭＥＴは、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含むすべての哺乳動物種の天然配列Ｃ－ＭＥＴを含む。“Ｃ－ＭＥＴ”の語は、ヒトＣ－ＭＥＴのバリアント、アイソフォームおよび種のホモログを含むために使用され得る。本発明の抗体は、ヒト以外の種に由来するＣ－ＭＥＴ、特にカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）由来のＣ－ＭＥＴと交差反応し得る。ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴアミノ酸配列の例を、表１２に提供する。ある実施形態では、抗体は、完全にヒトＣ－ＭＥＴに特異的であってもよく、非ヒトとの交差反応性を呈さなくてもよい。

【0131】

本明細書において使用される場合、本発明の抗体の文脈において使用される場合の「アンタゴニスト」、または「抗Ｃ－ＭＥＴアンタゴニスト抗体」（「抗Ｃ－ＭＥＴ抗体」と相互交換可能に称される）とは、Ｃ－ＭＥＴに結合することができる、ならびにＣ－ＭＥＴの生物学的活性を阻害することができる、および／またはＣ－ＭＥＴシグナル伝達により介在される下流経路を阻害することができる抗体を指す。抗Ｃ－ＭＥＴアンタゴニスト抗体には、例えばＣ－ＭＥＴに対する受容体結合および／または細胞反応の惹起など、Ｃ－ＭＥＴシグナル伝達により介在される下流経路を含めた、（有意に）Ｃ－ＭＥＴの生物学的活性（を含めた）を遮断する、拮抗する、抑制する、または低下させることができる抗体を包含する。本発明の目的に対し、「抗Ｃ－ＭＥＴアンタゴニスト抗体」という用語は、Ｃ－ＭＥＴそれ自体、およびＣ－ＭＥＴの生物学的活性、または活性もしくは生物学的活性の結果が、任意の意義のある程度に実質的に無効化される、減少される、または中和されるすべての用語、タイトル、ならびに機能的状態および機能的特性を包含することが明示的に理解されるであろう。

【0132】

他の受容体よりも高いアフィニティ、高いアビディティ、より容易に、および／またはより長い期間、Ｃ－ＭＥＴと結合する場合、当該抗体は、Ｃ－ＭＥＴに「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「優先的に結合する」、「結合する」または「相互作用する」。

【0133】

「抗体分子」は、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、「抗体分子」という用語は、インタクトなポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならず、任意の抗原結合断片（例えば「抗原結合部分」）またはその一本鎖、抗体を含む融合タンパク質、ならびに例えば限定されないが、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えばサメ抗体およびラクダ科抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、およびｂｉｓ－ｓｃＦｖを含む抗原認識部位を含有する免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造体も包含する。

【0134】

「抗体分子」は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を包含するが、抗体はいずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、様々なクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５種類の主要なクラスがある。これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる場合があり、例えば、ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ｌｇＡ１およびｌｇＡ２がある。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域はそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。このサブユニットの構造、および様々なクラスの免疫グロブリンの三次元構造は周知である。

【0135】

抗体分子の「抗原結合部分」という用語は、本明細書において使用される場合、Ｃ－ＭＥＴに特異的に結合する能力を保持する、インタクトな抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体分子の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片により実現され得る。抗体分子の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例示としては、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の１つのアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。

【0136】

「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に及ぶと規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスの番号である。免疫グロブリンのＦｃ領域は通常、ＣＨ２とＣＨ３の２つの定常ドメインを含有する。当分野に知られているように、Ｆｃ領域は、二量体型または単量体型で存在し得る。

【0137】

抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域の、いずれか単独または組み合わせを指す。当分野に知られているように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に繋がる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲに隣接するＦＲを選択するとき、例えば抗体のヒト化または最適化を行うとき、同じ基準クラスのＣＤＲ配列を含有する抗体由来のＦＲが好ましい。

【0138】

本出願において使用されるＣＤＲの定義は、当分野で創出された多くの異質的な、しばしば矛盾するスキームにおいて使用されるドメインを組み合わせており、免疫グロブリンレパートリー分析と、遊離状態および抗原との共結晶状態の抗体の構造分析との組み合わせに基づいている（Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ａｂＹｓｉｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．［ＰＭＩＤ：２７５６１７０７；Ｅｐｕｂ ２２ Ａｕｇｕｓｔ ２０１６］によるレビューを参照のこと）。本明細書において使用されるＣＤＲの定義（「統合（Ｕｎｉｆｉｅｄ）」定義）は、そうしたすべての過去の洞察の教示を組み込んでおり、潜在的に標的－結合の相補性を介在する完全な残基の状況を抽出するために必要なすべての適切なループ位置を含む。

【0139】

表１は、本明細書に規定される２２４Ｇ１１マウス抗Ｃ－ＭＥＴ抗体のＣＤＲのアミノ酸配列（「統合」スキーム）を、同じＣＤＲを規定する周知の代替的な系と比較して示している。

【0140】

本明細書において使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸を、機能活性を大きく有害には変化させない別のアミノ酸で置換することを指す。「保存的置換」の好ましい例は、１つのアミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ ６２置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ ８９：１０９１５－１０９１９を参照のこと）において０以上の値（≧０）を有する別のアミノ酸で置換することである。

【0141】

【化1】

【0142】

「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば任意の真核細胞クローン、原核細胞クローンもしくはファージクローンなどの１つのコピーまたはクローンから誘導された抗体またはその抗原結合部分を指し、それが作製された方法ではない。本発明のモノクローナル抗体は、均質、または実質的に均質な集団で存在することが好ましい。

【0143】

「ヒト化」抗体分子とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗原結合性の抗体下位配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体分子またはその抗原結合部分の形態を指す。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、アフィニティおよび能力を有する例えばマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であってもよい。

【0144】

「ヒト抗体または完全ヒト抗体」とは、ヒト抗体遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから誘導された、またはヒト細胞から誘導された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。

【0145】

「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列は別の種に由来する抗体分子またはその抗原結合部分を指すことが意図され、例えば、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する抗体分子などである。

【0146】

「抗体－薬剤結合体」および「免疫結合体」とは、Ｃ－ＭＥＴに結合する、抗体誘導体を含めた抗体分子またはその抗原結合部分であって、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、および／または治療剤と結合された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。

【0147】

本発明の抗体分子、またはその抗原結合部分は、例えば組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはそうした技術もしくは当分野に既に公知である他の技術との組み合わせなどの当分野に周知の技術を使用して作製され得る。

【0148】

「単離された分子」（分子が、例えばポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である場合）という用語は、その起源または誘導の源によって、（１）自然状態では付随する天然の関連構成要素と関連していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種由来の細胞により発現された分子、または（４）自然に発生しない分子である。したがって、化学的に合成された分子、または天然での起源である細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、その天然の関連構成要素から「単離される」。さらに分子は、当分野に周知の精製技術を使用した単離によって、天然の関連構成要素を実質的に含まない状態にされ得る。分子純度または均質性は、当分野に周知の多くの手段により解析され得る。例えばポリペプチドサンプルの純度は、当分野に周知の技術を使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用し、ゲルを染色してポリペプチドを可視化して解析されてもよい。ある目的に対し、ＨＰＬＣ、または精製分野で周知の他の手段を使用することにより、さらに高い分解能が提供される場合がある。

【0149】

「エピトープ」という用語は、抗体分子の抗原結合領域のうちの１つまたは複数で抗体分子に認識され、結合されることができる分子の部分、またはその抗原結合部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次のタンパク質構造の規定領域からなる場合があり、抗体またはその抗原結合部分の抗原結合領域に認識される標的の二次構造単位または二次構造ドメインの組み合わせを含む。同じくエピトープは、例えばアミノ酸または糖側鎖などの規定の化学的に活性な分子の表面群からなる場合があり、特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する場合がある。本明細書において使用される場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当分野に周知の任意の方法、例えば従来的な免疫アッセイ法、抗体競合結合アッセイ、またはｘ線結晶法もしくは関連する構造決定法（例えばＮＭＲ）により決定されたときに、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの部分として規定される。

【0150】

「結合アフィニティ」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗原－抗体の相互作用の解離速度を指す。ＫＤは、「ｏｆｆ－ｒａｔｅ（ｋ_ｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度の、「ｏｎ－ｒａｔｅ（ｋ_ｏｎ）」、すなわち会合速度に対する比率である。ゆえにＫ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。従って、Ｋ_Ｄが小さくなると、結合アフィニティは強くなる。ゆえにＫ_Ｄが１μＭであれば、Ｋ_Ｄが１ｎＭの場合と比較して結合アフィニティが弱いことを示す。抗体のＫＤ値は、当分野に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤの決定方法の１つは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用するものであり、典型的には、例えばビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））システムなどのバイオセンサーシステムを使用する。

【0151】

「有効性」という用語は、生物活性の測定値であり、本明細書に記載のＣ－ＭＥＴ活性アッセイにおいて測定される活性の５０％を阻害する、抗原Ｃ－ＭＥＴに対する抗体または抗体薬剤結合体のＩＣ_５０すなわち有効濃度として表す場合もある。

【0152】

本明細書において使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という文言は、所望の治療結果を実現するために必要な（用量での、および期間に対する、および投与手段に対する）量を指す。有効量は、活性剤の、対象に治療上有益な影響を与えるために必要な少なくとも最小量であるが、対象に毒性のある量よりは少ない量である。

【0153】

本発明の抗体分子の生物活性に関して本明細書において使用される場合、「阻害する」または「中和する」という用語は、限定されないが、Ｃ－ＭＥＴに対する抗体分子の生物活性、または抗体分子とＣ－ＭＥＴの結合相互作用を含む、阻害されるものの例えば進行または重症度を実質的に拮抗する、妨げる、予防する、抑える、減速させる、破壊する、除去する、停止させる、低下させる、または反転させる抗体の能力を意味する。

【0154】

「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターに対するレシピエントであってもよく、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫物を含み、当該子孫物は、自然の、偶発的な、または意図的な変異により、元の親細胞と完全に同一（形態において、またはゲノムＤＮＡの相補体において）であるとは限らない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。

【0155】

本明細書において使用される場合、「ベクター」とは、宿主細胞において、関心の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達することができる、そして好ましくは発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては限定されないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン縮合剤と会合したＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、および例えば産生細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。

【0156】

本明細書において使用される場合、別段が示唆されない限り、「治療すること」という用語は、そうした用語が適用される障害もしくは症状、またはそうした障害もしくは症状の１つまたは複数症状を反転させる、改善させる、進行を阻害する、進行を遅延させる、発症を遅延させる、または予防することを意味する。本明細書において使用される場合、別段の示唆が無い限り、「治療」という用語は、上述に規定される治療の行為を指す。「治療すること」という用語は、対象のアジュバント療法およびネオアジュバント療法も含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及を含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及もさらに含む。

【0157】

本明細書において、実施形態は、「含む、含有する」という文言で記載されているか、さもなければ「～からなる」および／または「本質的に～からなる」として記載される類似した実施形態も提供されることを理解されたい。

【0158】

本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または他の択一的な群で記載されている場合、本発明は、概して列挙される群全体のみならず、当該群の各メンバーを個々に、および当該主要群のうちの可能性のあるすべての亜群、そして当該群メンバーの１つまたは複数を欠いた主要群も包含する。本発明はさらに、請求される本発明の群メンバーのいずれかの１つまたは複数の明白な除外を予期するものである。

【0159】

別段の規定がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合、本明細書が定義を含めて主導をとるものとする。本明細書および特許請求の範囲の全体を通じて、「含む、含有する」という文言、または例えば「含む、含有する」または「含むこと、含有すること」といった変化形は、記述される整数値の含有、または整数値の群の含有を示唆するが、任意の他の整数値または整数値の群の除外は示唆しないと理解される。文脈により別段であることを要しない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形は単数を含むものとする。「例えば」という用語の後に続くあらゆる例示は、包括的または限定であることは意味しない。

【0160】

本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技術を採用し、それら技術は当分野の技術範囲内にある。

【0161】

本発明の特定の非限定的な実施形態を、添付の図面を参照しながら記載することとする。

【実施例】

【0162】

実施例１．最適化抗Ｃ－ＭＥＴ治療用抗体の作製
イントロダクション
本実施例において、本発明者らは、アンタゴニスト性の最適化抗Ｃ－ＭＥＴ抗体パネルの作製に成功した。これら抗Ｃ－ＭＥＴ抗体は良好に発現され、生物物理的に安定であり、溶解度が高く、そして好ましいヒト生殖細胞系列に対し最大のアミノ酸配列同一性を有している。

【0163】

材料及び方法
Ｃ－ＭＥＴライブラリーの作製および選択
Ｃ－ＭＥＴ Ｆａｂレパートリーは、大量オリゴ合成およびＰＣＲにより組み立てられた。次いで増幅されたＦａｂレパートリーを制限酵素－ライゲーションを介してファージミドベクター内にクローニングし、大腸菌ＴＧ－１細胞内に形質転換した。ファージレパートリーは、原則として過去に詳述されるようにレスキューされた（Ｆｉｎｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ６８１：３８３－４０１）。

【0164】

ファージ選択は、ストレプトアビジン磁気マイクロビーズをビオチン化Ｃ－ＭＥＴ標的タンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズをＰＢＳで３回洗浄して、５％スキムミルクタンパク質を加えたＰＢＳ ｐＨ７．４中に再懸濁させることにより実施された。これらビーズは、選択のラウンド１では１００ｎＭの標的タンパク質でコーティングされており、その後の３回の連続ラウンドでは抗原濃度は減少した。各ラウンドにおいて、ファージはトリプシンを使用して溶出され、その後、ＴＧ１細胞内に再感染された。

【0165】

ペリプラズム抽出物の作製（小スケール）
個々の大腸菌クローンにおいて、可溶性Ｆａｂの産生が行われた。対数増殖期の大腸菌ＴＧ１細胞は、１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシドイソプロピルを用いて誘導された。可溶性Ｆａｂを含有するペリプラズム抽出物は、以下の凍結／融解サイクルにより作製された：細菌細胞沈殿物を一晩、－２０℃で凍結させ、その後室温で融解させ、ＰＢＳ ｐＨ７．４中に再懸濁させた。室温で振とうし、遠心分離を行った後に、可溶性Ｆａｂを含有する上清を収集した。

【0166】

ＩｇＧの発現および精製
ｈ２２４Ｇ１１および移植したもの（Ｇｒａｆｔ）を合わせたリードパネルの抗Ｃ－ＭＥＴ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインをコードする哺乳動物コドン最適化合成遺伝子を、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（「ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）」；分子の三次構造を安定化させるヒンジ内にＳ２２８Ｐ変異を含有するヒトＩｇＧ４）およびヒトＣκドメインをそれぞれ含有する哺乳動物発現ベクター内にクローン化した。哺乳動物発現系において、重鎖および軽鎖を含有するベクターの共トランスフェクションを実施し、次いでプロテインＡ系のＩｇＧ精製、定量、ならびに変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上でＱＣを行った。

【0167】

ＦａｂおよびＩｇＧに対する直接結合ＥＬＩＳＡ
組換えタンパク質に対するリードパネルの結合および交差反応性は、最初に結合ＥＬＩＳＡにより評価された。ヒトＣ－ＭＥＴヒトＦｃタグ化組換えタンパク質、およびカニクイザルＣ－ＭＥＴヒトＦｃタグ化組換えタンパク質で、ＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底９６ウェルプレートの表面上を１μｇ／ｍｌでコーティングした。精製されたＩｇＧサンプルは、５００ｎＭから始まり０．９８ｎＭまでの２倍連続希釈で漸増して、コーティングされた抗原に結合できるようにした。Ｆａｂは、マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体、次いで西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したロバ抗マウスＩｇＧを使用して検出した。ＩｇＧは、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したマウス抗ヒトＩｇＧを使用して検出した。結合シグナルは、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン基質溶液（ＴＭＢ）を用いて可視化され、吸光度は４５０ｎｍで測定された。過去に記載（Ａｖｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，２０１８，ＭＡｂｓ １０（２），２４４－２５５を参照のこと）されるように、非特異的結合およびＰＫリスクを算出する、負電荷を帯びた生物分子表面上でのＥＬＩＳＡを介したＩｇＧ結合解析が行われた。

【0168】

ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体に対する、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎエピトープ競合アッセイ
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイ（パーキンエルマー社）は、３８４ウェルの白色マイクロタイタープレート（グライナー社）において２５μｌの最終量で実施した。反応緩衝液は、１ｘＰＢＳ ｐＨ７．３（Ｏｘｏｉｄ社、カタログ番号ＢＲ００１４Ｇ）および０．０５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（シグマ社、カタログ番号Ｐ９４１６）を含有した。精製したＩｇＧサンプルは、５０ｎＭの最終濃度で始まる３倍連続希釈で漸増され、室温で２０分間、１ｎＭの最終濃度でビオチン化ヒトＣ－ＭＥＴ－Ｈｉｓ（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）とともにインキュベートした。親ＩｇＧおよび抗ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）アクセプタービーズを添加し、混合物を室温で１時間インキュベートした。次いで、ストレプトアビジンドナービーズを添加し、室温で３０分間インキュベートした。発光は、ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（パーキンエルマー社）において測定され、ＥｎＶｉｓｉｏｎマネージャーソフトウェアを使用して解析した。値は、１秒当たりのカウント数（ＣＰＳ：Ｃｏｕｎｔｓ Ｐｅｒ Ｓｅｃｏｎｄ）として報告され、クロストークに対して補正した。

【0169】

単量体型のヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ溶液に対する、ＩｇＧアフィニティのビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））解析
精製したＩｇＧのアフィニティ（ＫＤ）は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００（ＧＥ社）上で、抗原溶液を用いてＳＰＲを介して決定された。マウス抗ヒト抗体（ＣＨ１特異的）を、２チャンネル用のウィザード指示に従い、ｐＨ４．５の酢酸緩衝液中、アミンカップリングを使用してＣＭ５センサーチップ上に２０００ＲＵレベルにまで固定した。１つのチャンネルは、バックグラウンドシグナルの補正用に使用した。標準的なランニング緩衝液であるＨＢＳ－ＥＰ ｐＨ７．４を使用した。１０μｌの１０ｍＭグリシンをｐＨ１．５で、２０μｌ／分で単回注入することにより、再生を行った。ＩｇＧサンプルは、３０μｌ／分、５０ｎＭで２分間注入され、その後、６０秒間の解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）が続いた。単量体抗原（ヒトＣ－ＭＥＴ ＨｉｓタグしたまたはカニクイザルＣ－ＭＥＴ Ｈｉｓタグ）は、１００ｎＭから６ｎＭへと希釈する２倍連続希釈で、２分間、３０μｌ／分で注入され、次いで３００秒の解離速度が続いた。得られたセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００エバリュエーション（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ社）ソフトウェアを使用して解析した。ＫＤは、１：１のラングミュア結合モデルに対し、会合相および解離相の同時フィッティングを行うことにより算出した。

【0170】

ＩｇＧのフローサイトメトリー
精製したＩｇＧを、ＣＨＯ－Ｋ１安定発現株およびＣＨＯ－Ｋ１野生型細胞上で発現したヒトならびにカニクイザルのＣ－ＭＥＴに対する結合に関して、ＦＡＣにおいて試験した。ＩｇＧサンプルは、５００ｎＭに始まり０．０８ｎＭまでの３倍連続希釈で漸増した。ＩｇＧの結合は、ＦＩＴＣに結合したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて検出した。結果は、フローサイトメーターのＢＬ－１チャンネル検出器（Ａｔｔｕｎｅ（商標）ＮｘＴ Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）において、１サンプル当たり１００００個の細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を検証することにより解析した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、カリフォルニア州ラホヤ）においてＭＦＩ値と、４つのパラメータとを使用して算出した。

【0171】

抗体ｖ－ドメイン Ｔ細胞エピトープ含量：インシリコ分析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ社（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、抗体ｖ－ドメイン中の潜在的な免疫原性を評価するために使用した。ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対して無差別的な高いアフィニティ結合を有するペプチドに関し、重要なリードのＶＬ配列およびＶＨ配列を解析した。無差別的な高いアフィニティのＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性に関する高いリスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と、３４種のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの開放末端結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）内の特定の結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）との間の有益な相互作用を予測する。これらアレルは、広く存在する最も普遍的なＨＬＡ－ＤＲアレルであり、任意の特定の民族集団で最も多く存在するものによって起こる重み付けはない。当該アレルのうちの２０種が、「開いた」ｐ１構造を含有している。そして１４種が「閉じた」構造を含有しており、８３位のグリシンがバリンで置換されている。重要な結合残基の位置は、被験タンパク質配列にわたり８アミノ酸が重複している９ｍｅｒペプチドのインシリコ生成により取得される。このプロセスによって、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチド同士を高い正確性で識別することに成功した。

【0172】

さらに、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ細胞エピトープデータベース（Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（商標）））を使用して配列を解析し、過去にインビトロでの他のタンパク質配列のヒトＴ細胞エピトープマッピング解析により特定されたＴ細胞エピトープとの合致を検索した。ＴＣＥＤ（商標）を使用して、非関連タンパク質に由来するペプチドの大きな（１０，０００個を超えるペプチド）データベースに対する任意の被験配列と、抗体配列とを検索する。

【0173】

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）解析
被験物質のＴｍは、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＰＥＡＱ－ＤＳＣ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、英国モルバーン）ランニングバージョン１．２２ソフトウェアを使用して解析した。２０～１１０℃の範囲にわたり２００℃／時の速さでサンプルを加熱した。温度データは、タンパク質濃度に基づき正規化された。タンパク質のＴｍは、加熱スキャンデータから決定された。

【0174】

電荷バリアントアッセイ
被験物の電荷バリアントのプロファイリングは、ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ Ｔｏｕｃｈ ＨＴ（パーキンエルマー社、英国ベコンズフィールド）において、製造元のプロトコルに従って、タンパク質電荷バリアントアッセイにより決定した。

【0175】

等電点電気泳動アッセイ
リードＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）タンパク質について、ＩＥＦ解析を実行し、ｐＩでの可能性のある差異を評価した。電気泳動は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）Ｎｏｖｅｘ（商標）ｐＨ ３－１０ ＩＥＦタンパク質ゲルにより、Ｎｏｖｅｘ（商標）ＩＥＦ サンプル緩衝液ｐＨ ３－１０、Ｎｏｖｅｘ（商標）ＩＥＦ Ａｎｏｄｅ ａｎｄ Ｃａｔｈｏｄｅ緩衝液を用いて実行した。
ｐＩ値は、ＩＥＦ ｐＩマーカー値（Ｓｅｒｖａ社）に基づいて評価した。ブレンツキシマブおよびインフリキシマブのＩｇＧ１を対照として含めた。

【0176】

結果および考察
好ましいヒト生殖細胞系列ｖ－遺伝子へのＣＤＲ移植
アンタゴニストマウス抗Ｃ－ＭＥＴ ＩｇＧ ２２４Ｇ１１のＣＤＲ（２２４Ｇ１１；国際公開第２０１１１５１４１２Ａ１号および表２を参照のこと）を、ＣＤＲ移植法を使用して、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンｖ－ドメインフレームワーク配列スキャホールドに最初に導入した。最適な薬剤様性能を有する最終リード治療用ＩｇＧ化合物に向けて、遺伝子操作努力を傾けるために、親抗体のＣＤＲを、「好ましい」生殖細胞系列スキャホールドのＩＧＨＶ１－４６およびＩＧＫＶ３－２０に移植することを選択した。それらスキャホールドは、良好な溶解性、高い物理的安定性を有することが知られており、発現されたヒト抗体レパートリーにおいて高頻度に使用されている。

【0177】

これらスキャホールドおよび移植されたＣＤＲの定義は、表２に概要を掲載した。キメラ抗Ｃ－ＭＥＴ抗体ｍ２２４Ｇ１１、およびヒト化ｈ２２４Ｇ１１の重鎖配列と軽鎖配列も表２に示す。このＣＤＲ移植のプロセスは周知であるが、ヒトｖ－ドメイン配列の所与のセットが非ヒトＣＤＲ移植にとって適切なアクセプターフレームワークとして機能するかどうかを予測するのは未だ困難である。不適切なフレームワークの使用は、標的結合機能の減少、タンパク質安定性の問題、さらには最終ＩｇＧの発現の低下につながり得る。そこでＣＤＲ突然変異誘導の鋳型としてＩＧＨＶ１－４６／ＩＧＫＶ３－２０移植が採用され、改善クローンの選択が行われた。

【0178】

ライブラリー作製およびスクリーニング
ＣＤＲが移植されたＩＧＫＶ３－２０／ＩＧＨＶ１－４６のｖ－ドメイン配列を、Ｆａｂファージディスプレイ形式に組み込み、突然変異誘導ライブラリーカセットを、オリゴ合成およびアセンブリにより作製した。最終Ｆａｂライブラリーをファージディスプレイベクター内にライゲートし、エレクトロポレーション法を介して大腸菌内に形質転換して、２．５×１０^９個の独立したクローンを生成した。ライブラリーの構造品質は、９６個のクローンを配列解析することにより、両ｖ－ドメインにわたって検証された。この配列解析データにより、マウスまたはヒトいずれかの生殖細胞系列の各相違位置の残基をコードする位置を、効率的におよそ５０％の頻度（または例えば、３アミノ酸がコードされている位置の３３％）でサンプリングされたことが示された。ライブラリーは、ヘルパーファージＭ１３を使用してレスキューされ、選択はビオチン化されたヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃタンパク質に対し、複数の別個のブランチにおいて実施された。

【0179】

選択後スクリーニングおよびＤＮＡシーケンシングにより、ＥＬＩＳＡ（図１Ａ）においてヒトおよびカニクイザルＣ－ＭＥＴに強い結合と、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイ（図１Ｂ）においてヒトＣ－ＭＥＴへの２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）の結合の＞５０％の阻害とを示した、１３１個の固有のヒトおよびカニクイザルＣ－ＭＥＴ結合Ｆａｂクローンの存在が明らかになった。これら１３１個のクローンの中で、フレームワーク配列は完全に生殖細胞系列を維持していた一方で、すべてのＣＤＲ中におけるヒト化変異も観察された（表３）。リードクローンは、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃの両方への結合に対するＥＬＩＳＡシグナルと比較したＣＤＲ生殖細胞系列化のレベルに基づき格付けされた。次いでこの格付けの上位９個のクローンのｖ－ドメインをＩｇＧ発現ベクターにサブクローニングし、以下のさらなる検証を行った（表４）。

【0180】

生殖細胞系列化変異は、ライブラリー選択から直接誘導されたリードクローンのすべてのＣＤＲにおいて観察されたが、配列解析を行うことで、ヒト化が最大となるようクローンをさらに設計することが可能となる可能性がある。したがって、ヒトおよびカニクイザルのタンパク質に対する結合シグナルを有する１３１個の配列－固有ヒットを使用して、この機能的に特徴解析された集団のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸の保持頻度を解析した。位置的なアミノ酸保持頻度は、Ｖ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインでの百分率として表されている（それぞれ図２Ａおよび２Ｂ）。ＲＦ＜７５％を有するマウス残基は、一連のコンビナトリアルデザインにおいて、標的－結合パラトープに必須ではない可能性がある位置とみなされ、生殖細胞系列化に対し開かれている可能性がある（表４）。驚くべき知見では、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２における１０個のマウス残基で、７５％より高い保持頻度を呈するものはなかった（図２Ａ）。この解析は、ＨＣＤＲ３外側のＶＨ配列全体が、ＩＧＨＶ１－４６に対して生殖系列同一性を与える可能性があることを強く示唆した。対照的に、Ｖ_Ｌドメインにおいて、ｈ２２４Ｇ１１配列由来の１６個のマウスＣＤＲ残基のうち８個が、＞７５％の頻度で保持されていた（図３Ａ）。

【0181】

ＲＦ＞７５％のそれらマウス残基の組合せを含有するデザインには、「ＭＨ」という接頭辞（ＭＨ＝最大限にヒト化（Ｍａｘｉｍａｌｌｙ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ））をつけた。トータルで、以下の４個のデザインＶ_Ｈドメインおよび３個のデザインＶ_Ｌドメインが生成された：これら構造は、マトリックス化された手法により共トランスフェクトされて、合計で１２個の最終デザインＩｇＧを生成する（表４）。ＭＨおよびライブラリー由来クローンのｖ－ドメインは、遺伝子合成により生成され、（コントロール抗体に加えて）ヒト発現ベクターにクローニングされ、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式で作製された。すべてのＩｇＧが、哺乳動物細胞の一過性トランスフェクションから容易に発現され、精製された。

【0182】

リードＩｇＧの特異性および有効性の特徴解析
次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃへの結合に関して試験した（図３Ａおよび３Ｂ）。この解析により、全てのライブラリー由来クローンおよびデザイン（ＭＨ）クローンが、ｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）と同等またはｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）よりも改善した、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴに対する結合活性を保持することを示した。

【0183】

ビオチン化単量体型ヒトＣ－ＭＥＴに対するｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ結合とのエピトープ競合に関するＩｇＧの試験が可能であるＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイを確立した。このアッセイにおいて、上位の性能を有するライブラリー由来ＩｇＧおよびデザインＩｇＧは、より効率的に識別された。全てのクローンは完全に濃度依存性の中和を示し、また多くのクローンはｈ２２４Ｇ１１に対して同等または改善されたｈ２２４Ｇ１１エピトープに関する競合を示したが（図４）、いくつかは、以下を含む弱い作用のエピトープ競合を示した：０８Ｂ１２、０４Ｅ１０、０９Ｂ０８、０７Ｃ１０。

【0184】

結合アフィニティのビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））解析は、すべてのＩｇＧに関して、液相の単量体型ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴタンパク質に対して実施された。全ての場合において、低いＣｈｉ^２値を伴う正確な１：１結合アフィニティが得られた（表５）。これらの解析から、ＦａｂおよびＩｇＧのＥＬＩＳＡならびにＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイにおいて最も高いＥＣ５０値およびＩＣ５０値を一貫して与えるライブラリー由来クローンは、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴに対し最も高いアフィニティ結合も示したことが示された。予期せずに、ライブラリー由来クローン０８Ｇ０７、０４Ｆ０９、０９Ｅ０４、０７Ａ０１およびデザインクローンＭＨ４およびＭＨ７の全てが、ｈ２２４Ｇ１１と比較して有意に改善されたヒトＣ－ＭＥＴへの結合アフィニティを示した（表５）。重要なことは、これらアフィニティにおける改善は、カニクイザルでの結合でも反復され、これらクローンのそれぞれはヒトＣ－ＭＥＴアフィニティの２倍以内のアフィニティを呈した。ヒトおよびカニクイザルの標的オルソログの間で３倍未満のアフィニティ差であることは、前臨床薬剤開発解析において非常に有益であり、これによって例えばサルの安全性試験、ＰＫおよびＰＤのモデリング試験などの有意に良好なデザインおよび解釈が可能となる。ビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））解析はまた、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイ（図４）でのクローン０８Ｂ１２、０４Ｅ１０、０９Ｂ０８、０７Ｃ１０で観察されたエピトープの競合能の低下が、結合エピトープでの何らかの変化ではなく、ヒトＣ－ＭＥＴ結合アフィニティの低下により引き起こされていることを示した。

【0185】

さらに、ＭＨクローンのアフィニティの比較で、結合アフィニティの維持におけるＬＣＤＲ３の影響が確認されたが、これは３位および４位の残基「ＳＫ」の変異がいずれも、ヒトおよびカニクイザルＣ－ＭＥＴに対して、クローンＭＨ７と比較して、クローンＭＨ８およびＭＨ９に関するＫＤが約１０から２０倍低下するという結果を生じたことによる（表５）。クローンＭＨ４およびＭＨ１０の比較でもまた、８位のＨＣＤＲ１残基の変異（ＴからＡ）が、クローンＭＨ１０におけるヒトＣ－ＭＥＴへの結合アフィニティの約２倍の低下を導くが、カニクイザルＣ－ＭＥＴのアフィニティで有意な低下はなかったことが確認された（表５）。しかしながら、重要なことには、このクローンＭＨ１０におけるＴからＡへの変異が、ヒト生殖細胞系列配列ＩＧＨＶ１－３に対して、ＨＣＤＲ１の完全生殖細胞系列を与えた。ＩＧＨＶ１－３およびＩＧＨＶ１－４６は、ＴからＡへの変異からＮまたはＣ末端のいずれかの方へ向けて配列同一の１０個のアミノ酸であるため、これによりチミン耐性に起因してヒトＴ細胞エピトープが完全に脱免疫化したＨＣＤＲ１配列にさせる（ヒトＴ細胞エピトープはコア９－ｍｅｒアミノ酸配列に基づく）。

【0186】

上記に概要を示した知見により、ＭＨ７クローンは、ＶＨドメインにおける単一の非生殖細胞系列のアミノ酸（ＨＣＤＲ３を除くものであり、それには対応する生殖細胞系列がない）のみを保持しながら、ｈ２２４Ｇ１１の結合アフィニティ、エピトープ特異性および種の交差反応性を完全に保持（およびそれよりも改善）することができることが確認された。さらに、ＭＨ７の完全に生殖細胞系列化されたＨＣＤＲ２は、以下のｈ２２４Ｇ１１抗体に存在する３個の潜在的なアミノ酸開発ライアビリティ（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｌｉａｂｉｌｉｔｙ）配列を除去した：３位（Ｗ）の推定上の酸化リスクに加えて、７および８位（いずれもＮ）の２つの脱アミド化リスクモチーフ。軽鎖ＭＨ７では、ｈ２２４Ｇ１１にある以下の３個のさらなる開発ライアビリティ配列が除去される：ＬＣＤＲ１の７位における「ＤＳ」アスパラギン酸異性化モチーフ、およびＬＣＤＲ１の１３位（Ｆ）における酸化リスク、およびＬＣＤＲ３の６位における「ＤＰ」酸加水分解モチーフ。一次配列におけるこれら改善は、抗体療法の製造および臨床開発の両方における直接の結果であるが、これはそれらがすべて可能性のあるタンパク質分解リスクモチーフであり、内在性の製品不均一性を導くことによる。こうしたリスクモチーフは、開発予算の問題につながり得、そこでインタクトな抗体の収率を最大化し、製品不均一性を最小限にするために、複数のプロセス改変がなされなくてはならない。分解モチーフはまた、臨床開発リスクでもあるが、これは体内で抗体分解が加速すると、分子の半減期と有効性との両方が低下する可能性があるからである。

【0187】

細胞膜でのリードＩｇＧ結合特異性のフローサイトメトリー解析
Ｃ－ＭＥＴに対する抗体を、フローサイトメトリーを介して、細胞表面での濃度依存性結合に関して分析した。ヒトまたはカニクイザルのいずれかのＣ－ＭＥＴ全長ｃＤＮＡを用いてＣＨＯ－Ｋ１細胞に安定的にトランスフェクトした。次いで抗Ｃ－ＭＥＴ ＩｇＧおよびアイソタイプコントロールＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）を全て、ヒトＣＨＯ－Ｋ１細胞（図５Ａ）およびカニクイザルＣＨＯ－Ｋ１細胞（図５Ｂ）への結合に関して、５００～０．０８ｎＭの濃度範囲にわたってＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式で試験した。アイソタイプコントロール以外のすべてのＩｇＧが、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ＋細胞に対し、ｈ２２４Ｇ１１と同等のまたはｈ２２４Ｇ１１よりも改善された濃度依存性の結合を示した。各ケースにおいて、最大ＭＦＩは、アイソタイプＩｇＧ４に関して観察されたバックグラウンドシグナルよりも１０倍超高かった。ＭＨ１、ＭＨ４、ＭＨ７およびＭＨ１０をはじめとするいくつかのクローンが、ｈ２２４Ｇ１１と比較して、ヒトおよびカニクイザル＋ ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するより強い結合特性および改善されたＥＣ５０値を呈した（表６）。

【0188】

抗体ｖ－ドメインＴ細胞エピトープ解析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ社（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．））は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、ｈ２２４Ｇ１１およびリード抗体のｖ－ドメインの両方の免疫原性の評価に使用した。ｖ－ドメイン配列の解析は、重複する９ｍｅｒペプチド（各々が最後のペプチドと８残基重複する）を用いて実施され、３４種のＭＨＣクラスＩＩアロタイプの各々に対して試験した。各９ｍｅｒを、ＭＨＣクラスＩＩ分子との潜在的な「適合」および相互作用に基づいてスコア化した。ソフトウェアにより算出されるペプチドスコアは、０～１の間である。高い平均結合スコアを出したペプチド（ｉＴｏｐｅ（商標）スコアリング機能において＞０．５５）が強調された。ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドの＞５０％（すなわち３４種のアレルのうちの１７種）が高い結合アフィニティ（スコア＞０．６）を有する場合、そうしたペプチドは、「高アフィニティ」ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドとして規定され、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有するリスクが高いとみなされる。低アフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、多くのアレル（＞５０％）に、＞０．５５の結合スコア（しかし大部分は＞０．６ではない）で結合する。配列のさらなる解析は、ＴＣＥＤ（商標）を使用して実施された。この配列を使用して、ＢＬＡＳＴサーチによりＴＣＥＤ（商標）をデータ検索し、過去にＡｂｚｅｎａ Ｌｔｄ．社で実施されたインビトロＴ細胞エピトープマッピング研究でＴ細胞反応を刺激した非関連タンパク質／抗体由来のペプチド（Ｔ細胞エピトープ）間で任意の高い配列相同性を特定した。

【0189】

ペプチドを、以下の４つのクラスに分類した：高アフィニティ外来物（「ＨＡＦ」－高免疫原性リスク）、低アフィニティ外来物（「ＬＡＦ」－低免疫原性リスク）、ＴＣＥＤ＋（過去にＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて特定されたエピトープ）、および生殖細胞系列エピトープ（「ＧＥ」－高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列）。生殖細胞系列エピトープの９ｍｅｒペプチドは、広範な生殖細胞系列ペプチドを用いた過去の研究により立証されたように、Ｔ細胞寛容によって免疫原性である可能性は低い。重要なことは、そうした生殖細胞系列のｖ－ドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の類似配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の細胞膜でのＭＨＣクラスＩＩ占有に関しても競合するため、Ｔ細胞刺激に必要とされる「活性化閾値」を達成するのに充分な外来性ペプチド提示のリスクを低下させることである。ゆえにＧＥ含量が高いことは、抗体治療剤の臨床開発において有益な性質である。

【0190】

表７に示すように、ｈ２２４Ｇ１１ ｖ－ドメインの配列は、生殖細胞系列フレームワーク配列上にヒト化されているにもかかわらず、有意な外来性エピトープリスクを含有することがわかった。ＶＬドメインでは、ｈ２２４Ｇ１１が、２つのＨＡＦペプチドモチーフ（「ＬＬＩＹＲＡＳＴＲ」（配列番号９１）および「ＩＹＲＡＳＴＲＥＳ」（配列番号９２）、いずれもＬＣＤＲ２残基を含有する）と、１つのＬＡＦモチーフ（「ＶＡＶＹＹＣＱＱＳ」（配列番号９３））を含有することがわかった。ＶＨドメインでは、ｈ２２４Ｇ１１はまた、２つのＨＡＦペプチドモチーフ（ＨＣＤＲ１残基を含有する「ＩＦＴＡＹＴＭＨ」（配列番号９４）、およびＨＣＤＲ３残基を含有する「ＶＹＹＣＡＲＳＥＩ」（配列番号９５））と、１つのＬＡＦモチーフ（ＨＣＤＲ２残基を含有する「ＭＧＷＩＫＰＮＮＧ」（配列番号９６））を含有することがわかった。

【0191】

重要なリードｖ－ドメインは、ｈ２２４Ｇ１１と比較してペプチドエピトープ含量において有意に有益な変化を示した（表７）。本明細書において採用したｖ－ドメインの操作プロセスは、ｈ２２４Ｇ１１のＣＤＲ中に含有されるマウス残基（表２、表４）を必要とすることなく、抗ＭＥＴの有効性を維持した抗体の選択に成功した。そのため、ｈ２２４Ｇ１１のｖ－ドメインにある複数のＨＡＦおよびＬＡＦのエピトープは、ライブラリー由来リードおよびデザインリードにおいて除かれ、ＨＡＦおよび／またはＬＡＦの含量の減少につながった（表７）。ＧＥエピトープ含量もまた、リードクローンのＶＨ領域内で有意に増加しており、またＴＣＥＤ＋エピトープは、あらゆるリードクローンにおいて観察されなかった（表７）。これら知見は、クローンＭＨ７で例示されるものであり、ＶＨドメインＣＤＲ１およびＣＤＲ２のほぼ完全な生殖細胞系列化が、開発ライアビリティ配列（上記に記載したような）を除去するのみならず、フレームワーク、２つのＨＣＤＲ２（「ＬＥＷＭＧＩＩＮＰ（配列番号９７）」および「ＭＧＩＩＮＰＳＧＧ」（配列番号９８））にわたる２つの新規のＧＥを存在させながら、ＨＡＦペプチドモチーフ「ＩＦＴＡＹＴＭＨＷ」（配列番号９７）およびＬＡＦモチーフ「ＭＧＷＩＫＰＮＮＧ」（配列番号９６）を除く。したがってクローンＭＨ７は、そのＶＨドメイン内に、単一の可能性のある外来性エピトープのみを残していた（表７）。

【0192】

重要なことは、いくつかのリード内の開発ライアビリティ配列を除去したＬＣＤＲ１内で行われる広範囲の突然変異誘発は（表４）、Ｔ細胞エピトープリスクモチーフを何も生成しないということが観察されたことである。ｈ２２４Ｇ１１ ＶＬ配列内にある複数の外来性エピトープも、リードクローンのＣＤＲ中に存在する生殖細胞系列化変異によって除去された。例えば、ｈ２２４Ｇ１１のＬＣＤＲ２に存在するＨＡＦペプチド「ＩＹＲＡＳＴＲＥＳ」（配列番号９２）は、９位でのＳからＴへの変異を含有するすべてのリードクローン内で除かれたことがわかった（表４）。同様に、ｈ２２４Ｇ１１のＬＣＤＲ３におけるＬＡＦペプチドモチーフは、複数のライブラリー由来クローンおよびデザインクローンに存在するようなＬＣＤＲ３配列「ＱＱＹＧＳＥＰＬＴ」（配列番号５３）および「ＱＱＳＫＥＳＰＬＴ」（配列番号４７）において除かれた（表４）。クローンＭＨ７および０７Ａ０１の両方が、免疫原性が低くまたｈ２２４Ｇ１１に対して維持されたエピトープ特性および改善されたアフィニティを示す複数のＣＤＲ配列を含有する場合（表５、図４）、上記知見により、第二世代の最大限に脱免疫化されたクローンＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３の設計を可能になる（表７、表８）。クローンＭＨ７－３は、クローンＭＨ７の予測される免疫原性の改善を行うのみならず、モチーフ「ＱＳ」でＬＣＤＲ１の１１位および１２位のアミノ酸「ＮＳ」を置換することによって、最終ＣＤＲアミノ酸のライアビリティモチーフ（脱アミド化リスク部位）の除去も行う（表８）。

【0193】

第二世代デザインクローンの解析
クローンＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３は、容易に発現されてＩｇＧ４（Ｓ２２Ｐ）として精製され、次いで、直接的力価測定ＥＬＩＳＡフォーマットでヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ－Ｆｃへの結合を試験した（図６Ａ、６Ｂ）。この解析により、３つのクローン全てが、ｈ２２４Ｇ１１、移植したもの（Ｇｒａｆｔｅｄ）、ＭＨ７および０８Ｇ０７ ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）のタンパクと同等またはそれらよりも改善した、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴに対する完全結合活性を保持することを示した。

【0194】

次いで上記に記載したようなＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイを用いて、ビオチン化単量体型ヒトＣ－ＭＥＴに対するｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ結合とのエピトープ競合に関するＩｇＧの試験を可能にした。この解析により、３つのクローン全てが、ｈ２２４Ｇ１１と同等の完全エピトープ反応性を保持したことが示された（図７）。

【0195】

フローサイトメトリー解析で、クローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３、ｈ２２４Ｇ１１、移植したもの（Ｇｒａｆｔｅｄ）、およびアイソタイプコントロールＩｇＧをそれぞれ、ヒトＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ａ）、カニクイザルＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ｂ）および非トランスフェクトＣＨＯ－Ｋ１細胞（図８Ｃ）への結合に関して、５００～０．０８ｎＭの濃度範囲にわたって、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式で試験した。アイソタイプコントロール以外のすべてのＩｇＧが、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴ＋細胞に対し、ｈ２２４Ｇ１１と同等のまたはｈ２２４Ｇ１１よりも改善された濃度依存性の結合を示した。各ケースにおいて、最大ＭＦＩは、アイソタイプＩｇＧ４に関して観察されたバックグラウンドシグナルよりも１０倍超高かった。非トランスフェクト細胞に対するＩｇＧの結合は何も観察されなかった。

【0196】

ヒトにおける低いＰＫのリスクを特定するために設計された多反応性（ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）のＥＬＩＳＡにおいて（Ａｖｅｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｍａｂｓ，２０１８）、クローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３およびｈ２２４Ｇ１１の全てが、インスリンおよびｄｓＤＮＡの両方に対して、ベースラインシグナルを示した（反応性スコアは全て１．０）。これらシグナルは、陰性対照である、臨床的に承認された抗体ベバシズマブおよびウステキヌマブのもの（スコア４．０～６．０）よりも低かった。ヒトにおいてＰＫが短いことで悩まされる、陽性対照抗体、ブリアキヌマブおよびボコシズマブは、いずれも、＞１５．０の強い陽性シグナルを呈した。

【0197】

精製した組換え外部ドメインに対する結合親和性のビアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））解析において、クローンＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３は全て、ヒトおよびカニクイザルのＣ－ＭＥＴのオルソログに対して高い結合アフィニティを保持した（表９）。

【0198】

電荷バリアント解析
電荷の不均一性解析は、産物の品質、均一性および安定性についての情報を提供するということから、モノクローナル抗体の特徴解析で重要である。組換えタンパク質における不均一性は、酵素的な翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、リジン切断）または精製中および保存中における化学修飾（例えば、酸化または脱アミド化）により生じる可能性がある。ＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ Ｔｏｕｃｈ ＨＴ等のタンパク質電荷バリアントアッセイは、メインピークに対して相対的に塩基性および酸性であるタンパク質バリアントの特定を可能にする。このマイクロ流体チップ技術は、蛍光標識後のタンパク質電荷バリアントを電気泳動的に分離する。ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式の６つの抗体（０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３およびｈ２２４Ｇ１１）の電荷バリアントプロファイルは、この方法を用いて解析して、図１０に示す。通常、ヒトＩｇＧでは、ＩｇＧ４形式のｈ２２４Ｇ１１は、見かけ上の低いｐＩを有していることに起因して（製造元の推奨では、メインアイソフォームのｐＩ範囲は７．０～９．５である）、利用可能なアッセイでの完全な溶解は達成されず、そのため、このタンパク質が他と同様に解析されたときに３つのアイソフォームのみが特定され、より酸性のアイソフォーム（ｐＩ＜７．０）は、おそらく溶解が不可能であった（図１０）。対照的に、ＩｇＧ４形式のクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３は、より均一で、よく溶解し、複合体性が低いことを示し、メインアイソフォームは、総タンパク質のうちの６０％以上に値した。図１０に示すプロファイルは、ｈ２２４Ｇ１１ ＩｇＧ４のメインアイソフォームのｐＩが７．０に近く、一方で、クローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３のＩｇＧ４のｐＩはすべて、それらの一次ＣＤＲ配列において負電荷を帯びた残基の数が低下することに起因して、ｈ２２４Ｇ１１と比較して有意に高いことを示唆した。さらに、ｈ２２４Ｇ１１と比較して、クローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３のＣＤＲにおいて脱アミド化リスクモチーフの含量の低下が、－ｖｅ電荷（酸性の）のバリアントの存在をさらに減少させ得る。このＩｇＧ４形式におけるリードクローンのｐＩがｈ２２４Ｇ１１よりも予期せずに顕著に高かったことは、治験薬において高度に有益である可能性をもつ。抗体液剤で使用する緩衝液のｐＨは、例えば保存中の脱アミド化事象の進行を最小限にするために、ｐＨ６等である酸性のｐＨであることが好ましい。したがって、溶液中での抗体の凝集リスクを最小限にするために、ｐＨ７．４より高い、好ましくはｐＨ８．０を超える塩基性の範囲である主要な機能性のｐＩを有することが、最終抗体にとって有益である。

【0199】

さらに、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式での抗体０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２、ＭＨ７－３およびｈ２２４Ｇ１１は全て、ＤＳＣアッセイで解析し、それらの熱的安定性、分子の全体的な物理的安定性に関する代理測定を確率した（図１１）。６つのＩｇＧは全て、狭い範囲にわたるＴｍ値（７７．２～８０．６℃）をもつ、高度に類似する、熱的安定なＦａｂ構造を有することがわかった。

【0200】

ｈ２２４Ｇ１１の電荷アイソフォームの完全な分散が、電荷バリアントアッセイを介して解消されなかったため、ｈ２２４Ｇ１１およびリードクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３のｐＩ特性は、等電点電気泳動（ＩＥＦ）を介して実験的に調べた。コントロールＩｇＧ１タンパク質のブレンツキシマブおよびインフリキシマブはまた含まれており、予測された特性を示した（図１２）。この解析における電荷バリアントアッセイの知見で、クローンｈ２２４Ｇ１１は、０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３に関して観察されたよりも有意に低いｐＩ範囲を呈するということが確認された（図１２）。クローンｈ２２４Ｇ１１に関して、そのＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）タンパク質は、７．４から約８．２のｐＩ範囲にわたって可視的な電荷アイソフォーム（ＩＥＦにおけるバンド）を示した。７．４の範囲における電荷アイソフォームは、製剤リスクのみならず、血液中の溶解性が低いリスクもまたあり、これはそれらのｐＩが、哺乳動物の血液のｐＨと同じであることで、ヒトにおいてインビボ凝集の可能性につながるからである。対照的に、リードクローン０８Ｇ０７は、＞７．８から約８．３という可視的なアイソフォームを示した（図１２）。重要なことは、クローンＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３の全てが、０８Ｇ０７よりもはるかに向上していることである。実際には、クローンのｐＩにおける飛躍的な進歩は、可視的なアイソフォームのｐＩが８．０から＞８．３の範囲であり、メインアイソフォームは８．３であるような、クローンＭＨ７．３までであることが明らかであった（図１２）。全てのリードクローンのｖ－ドメインフレームワーク領域が同一である場合、この知見は再び、非ヒト突然変異誘発の付加ならびにＣＤＲにおける負電荷を帯びた残基およびアスパラギンの除去により、ＣＤＲループにおける翻訳後修飾のリスクの低減を特異的に導くのみならず、リードクローンの全体的な真のｐＩ値が有意に改善されることで、全てのクローン０８Ｇ０７、ＭＨ７、ＭＨ７－１、ＭＨ７－２およびＭＨ７－３の製剤品質およびインビボでの潜在的な性能が向上することを示した。

【0201】

本明細書に概要される解析を組み合わせると、驚くべきことに、これら抗体のＣＤＲにおいて、生殖細胞系列と非生殖細胞系列のアミノ酸の両方を深くサンプリングすることで、最終分子の有効性または生物物理学的安定性を有意に妥協することなく、最終分子において免疫原性リスクおよび化学的安定性のリスクを同時に最適化することが可能となったことが示された。

【0202】

本発明は好ましい実施形態または例示的実施形態を参照して記載されているが、当業者であれば、本発明の主旨および範囲を逸脱することなくそれらに対する様々な改変および変動を行うことが可能であること、およびそうした改変は本明細書において予期されることが明白であると認識するであろう。本明細書に開示される、および添付の特許請求の範囲に記載される特定の実施形態に関し、限定は意図されておらず、何らの示唆もないものとする。

【0203】

限定されないが特許、特許出願、記事、書誌、および論文を含む本明細書に引用されるすべての書面、または書面の一部は、その全体ですべての目的に対し、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。組み込まれた書面、または書面の一部の１つまたは複数が、本出願の用語定義と矛盾する用語を定義する場合、本出願にある定義が優先される。しかしながら、本明細書に引用されるすべての参照文献、記事、公表文献、特許、公表特許、および特許出願に関する言及は、それらが正当な先行技術を構成する、または世界の任意の国における普遍的で一般的な知識の一部を形成するという承認、または任意の形態の示唆として見なされず、または見なされるべきではない。

【表1】

【表2】

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表4-1】

【表4-2】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【表10】

【表11】

【表12】

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12】

【配列表】

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