特許 7459075 スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに対して向けられた抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-03-22

(45)【発行日】2024-04-01

(54)【発明の名称】スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに対して向けられた抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240325BHJP

   C07K 16/12 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240325BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20240325BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20240325BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240325BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C07K16/12

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P31/04

A61P17/02

G01N33/569 B

C12P21/08

【請求項の数】 30

(21)【出願番号】P 2021519609

(86)(22)【出願日】2019-10-08

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(86)【国際出願番号】 US2019055144

(87)【国際公開番号】W WO2020076790

(87)【国際公開日】2020-04-16

【審査請求日】2022-10-04

(31)【優先権主張番号】62/743,501

(32)【優先日】2018-10-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504333972

【氏名又は名称】メディミューン，エルエルシー

(73)【特許権者】

【識別番号】516097907

【氏名又は名称】ヒューマブス バイオメド エスエー

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】トカジク，クリスティーン

(72)【発明者】

【氏名】セルマン，ブレット

(72)【発明者】

【氏名】ド，クン

(72)【発明者】

【氏名】ダムシュローダー，メリッサ

(72)【発明者】

【氏名】コルティ，ダヴィデ

(72)【発明者】

【氏名】ミノラ，アンドレア

【審査官】松村 真里

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１６－５３５９８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０２２－５１２６４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】mAbs，2015年，Vol.7, No.1，p.243-254

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００

Ｃ０７Ｋ １６／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１、２、３、１２、５及び６の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

ＶＨ及びＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１５及び１３の配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

重鎖及び軽鎖を含む抗体又はその抗原結合断片であって、前記重鎖及び軽鎖は、それぞれ配列番号１６及び１４の配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

（ａ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに結合し、且つ／又は（ｂ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢを中和する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１及びＩｇＡ_２重鎖定常領域からなる群から選択され、及び前記軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

ＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

半減期を改善するように操作されているＦｃ領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

ＹＴＥ変異を有するＦｃ領域を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

モノクローナル抗体又は抗原結合断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

完全長の抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

前記抗原結合断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） _２ 、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’） _３ 、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ ^２ 、（ｓｃＦｖ） _２ 又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗原結合断片。

【請求項12】

Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに対する７５ｐＭ未満の親和性を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに対する類似した結合親和性を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

検出可能な標識を更に含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む組成物。

【請求項16】

薬学的に許容される担体を更に含む、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

対象におけるスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を処置又は予防するための医薬の調製における、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片又は請求項１５若しくは１６に記載の組成物の使用。

【請求項18】

前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、敗血症、菌血症、肺炎、ＩＣＵ肺炎、皮膚又は軟組織感染症（ＳＳＴＩ）、下肢の糖尿病性感染症、糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）、骨又は関節の感染症、器具感染症、創傷感染症、手術部位感染症、骨髄炎、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１７に記載の使用。

【請求項19】

前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、抗生物質耐性Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を含む、請求項１８に記載の使用。

【請求項20】

前記ＤＦＵは、非感染、感染、又はグレード１、２若しくは３のＤＦＵである、請求項１８又は１９に記載の使用。

【請求項21】

前記対象は、手術対象及び／又は糖尿病を有する対象である、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項22】

前記対象は、ヒトである、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項23】

Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を前記処置又は予防することは、毒素の中和、細胞溶解を阻害すること、多臓器不全を阻害すること、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連敗血症を阻害すること又は前述のものの任意の組み合わせを含む、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項24】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の前記ＶＨ又は重鎖、及び前記ＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチド。

【請求項25】

請求項２４に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。

【請求項26】

請求項２４に記載のポリヌクレオチド又は請求項２５に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項27】

ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される、請求項２６に記載の宿主細胞。

【請求項28】

単離されている、請求項２６又は２７に記載の宿主細胞。

【請求項29】

抗体又はその抗原結合断片を作製する方法であって、前記抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。

【請求項30】

サンプル中のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンを検出する方法であって、前記サンプルを、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、ロイコトキシン結合抗体及びその抗原結合断片を対象とする。この抗体又は断片は、例えば、ロイコトキシンを検出するために、且つ／又はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）感染症を処置及び予防する方法において使用され得る。

【背景技術】

【0002】

薬剤耐性（ＡＭＲ）病原菌により引き起こされる感染症により、公衆衛生に対する脅威が高まっている。進行中のＡＭＲの流行は、部分的には経験的広域スペクトル抗生物質療法により煽られている。これは、深刻な細菌感染を予防か又は処置するための、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）等の病原体特異的方法の探求につながっている。抗生物質耐性菌感染症の予防又は処置のために、現在、いくつかのモノクローナル抗体が開発されている（例えば、ＤｉＧｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ，Ａ．，ａｎｄ Ｂ．Ｒ．Ｓｅｌｌｍａｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２７：７８－８５（２０１５）を参照されたい）。そのような受動免疫戦略は、標的病原体に対して即時の且つ強力な免疫グロブリン応答を提供する。

【0003】

スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、皮膚及び軟組織の感染症、心内膜炎、骨髄炎、肺炎及び菌血症等の広範な疾患を引き起こす細菌性病原体である（Ｌｏｗｙ，Ｆ．Ｄ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３９（８）：５２０－３２（１９９８））。前臨床試験は、モノクローナル抗体ベースのアプローチがＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の予防及び補助療法に有望であることを示している（例えば、Ｈａｚｅｎｂｏｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．，９（１０）：ｅ１００３６５３．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００３６５３２０１３（２０１３）；Ｒｏｕｈａ，Ｈ．，ＭＡｂｓ，７（１）：２４３－２５４（２０１５）；Ｆｏｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４２５（１０）：１６４１－１６５４（２０１３）；Ｋａｒａｕｚｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２８７（３０）：２５２０３－１５（２０１２）；及びＨｕａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５８（２）：１１０８－１７（２０１４）を参照されたい）。しかしながら、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）感染症（特に現在利用可能な抗生物質に対して耐性を示す感染症）の処置に有用な抗体の必要性が残っている。本開示は、そのような抗体を提供する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

本明細書で提供されるのは、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））ロイコトキシンに結合する抗体及びその抗原結合断片である。

【0005】

特定の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、３、１２、５及び６；（ｂ）それぞれ配列番号１～６；（ｃ）それぞれ配列番号１、２、１７、４、５及び６；（ｄ）それぞれ配列番号１、２、１７、１２、５及び６；並びに（ｅ）それぞれ配列番号１、２０、３、４、５及び６からなる群から選択される配列を含む。

【0006】

特定の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。特定の例では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ又はＡｂＭ定義ＣＤＲである。

【0007】

特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨ及びＶＬを含み、このＶＨは、配列番号７、１５、１８、２１又は２３のアミノ酸配列を含む。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨ及びＶＬを含み、このＶＬは、配列番号８又は１３のアミノ酸配列を含む。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨ及びＶＬを含み、これらＶＨ及びＶＬは、（ａ）それぞれ配列番号１５及び１３；（ｂ）それぞれ配列番号７及び８；（ｃ）それぞれ配列番号７及び１３；（ｄ）それぞれ配列番号１５及び８；（ｅ）それぞれ配列番号１８及び８；（ｆ）それぞれ配列番号１８及び１３；（ｇ）それぞれ配列番号２１及び８；並びに（ｈ）それぞれ配列番号２３及び１３からなる群から選択される配列を含む。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１５の配列を含むＶＨと、配列番号１３の配列を含むＶＬとを含む。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１６、９、１１、２２又は２４の配列を含む重鎖を含む。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１４又は１０の配列を含む軽鎖を含む。特定の例では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、この重鎖及び軽鎖は、（ａ）それぞれ配列番号１６及び１４；（ｂ）それぞれ配列番号９及び１０；（ｃ）それぞれ配列番号１１及び１０；（ｄ）それぞれ配列番号１１及び１４；（ｅ）それぞれ配列番号１６及び１０；（ｆ）それぞれ配列番号１９及び１０；（ｇ）それぞれ配列番号１９及び１４；（ｈ）それぞれ配列番号２２及び１０；並びに（ｉ）それぞれ配列番号２４及び１４からなる群から選択される配列を含む。特定の例では、抗体は、配列番号１６の配列を含む重鎖と、配列番号１４の配列を含む軽鎖とを含む

【0008】

特定の例では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体と同じＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンエピトープに結合する。

【0009】

特定の例では、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンへの、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体の結合を競合的に阻害する。

【0010】

特定の例では、抗体若しくは抗原結合断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ若しくはＨｌｇＢに結合し、且つ／又は抗体若しくは抗原結合断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ若しくはＨｌｇＢを中和する。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、（ａ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢに結合し、且つ／又は（ｂ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢを中和する。

【0011】

特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、重鎖定常領域を更に含む。特定の例では、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１及びＩｇＡ_２重鎖定常領域からなる群から選択される。特定の例では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ_１定常領域である。

【0012】

特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、軽鎖定常領域を更に含む。特定の例では、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される。特定の例では、軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。

【0013】

特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である。

【0014】

特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、半減期を改善するように操作されているＦｃ領域を含む。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＹＴＥ変異を有するＦｃ領域を含む。

【0015】

特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。

【0016】

特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、完全長の抗体である。特定の例では、抗体又は抗原結合断片は、抗原結合断片である。特定の例では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

【0017】

特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢに対する７５ｐＭ未満の親和性を有する。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに対する類似した結合親和性を有する。

【0018】

特定の例では、抗体又はその抗原結合断片は、検出可能な標識を更に含む。

【0019】

同様に本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片と、任意選択的に、薬学的に許容される担体とを含む組成物である。

【0020】

同様に本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体を使用する方法である。特定の例では、対象においてスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を処置又は予防する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は本明細書で提供される組成物をこの対象に投与することを含む。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、敗血症である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、菌血症である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、肺炎である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、ＩＣＵ肺炎である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、皮膚又は軟組織感染症（ＳＳＴＩ）である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、下肢の糖尿病性感染症である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）である。特定の例では、ＤＦＵは、非感染である。特定の例では、ＤＦＵは、感染である。特定の例では、ＤＦＵは、グレード１、２又は３のＤＦＵである。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、骨又は関節の感染症である。特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、関節感染症、器具感染症、創傷感染症、手術部位感染症又は骨髄炎である。

【0021】

特定の例では、対象は、手術対象である。

【0022】

特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、抗生物質耐性Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を含む。

【0023】

特定の例では、対象は、糖尿病を有する。

【0024】

特定の例では、対象は、ヒトである。

【0025】

特定の例では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を処置又は予防することは、毒素の中和、細胞溶解を阻害すること、多臓器不全を阻害すること、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連敗血症を阻害すること又は前述のものの任意の組み合わせを含む。

【0026】

同様に本明細書で提供されるのは、ポリヌクレオチドである。特定の例では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む。特定の例では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む。

【0027】

同様に本明細書で提供されるのは、ベクターである。特定の例では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドである。

【0028】

同様に本明細書で提供されるのは、宿主細胞である。特定の例では、宿主細胞は、本明細書で提供されるポリヌクレオチド、本明細書で提供されるベクター又は本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の例では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される。特定の例では、宿主細胞は、単離されている。

【0029】

同様に本明細書で提供されるのは、抗体又は抗原結合断片を作製する方法である。特定の例では、抗体又はその抗原結合断片を作製する方法は、この抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、本明細書で提供される宿主細胞を培養することを含む。

【0030】

同様に本明細書で提供されるのは、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンを検出する方法である。特定の例では、サンプル中のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンを検出する方法は、前記サンプルを、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】ＳＡＮ４８１と比較した複数のＳＡＮ４８１バリアントのインビトロでの活性を示すグラフを示す。ＱＤ１＝ＳＡＮ４８１－ＹＴＥ；ＱＤ２＝ＳＡＮ４８１ＶＬ２６Ｓ３２Ｙ－ＹＴＥ；ＱＤ３＝ＳＡＮ４８１ＶＨ２８Ｔ－ＹＴＥ；ＱＤ４＝ＳＡＮ４８１－ＶＨ２８Ｔ１００Ｆ－ＹＴＥ；ＱＤ５＝ＳＡＮ４８１－ＳＹ－Ｔ－ＹＴＥ；ＱＤ６＝ＳＡＮ４８１－ＳＹ－ＴＦ－ＹＴＥ；ＱＤ１１＝ＳＡＮ４８１－ＥＧ－ＹＴＥ；及びＱＤ１２＝ＳＡＮ４８１－ＳＹ－ＱＦＳ－ＹＴＥ。（実施例２を参照されたい。）

【図2】ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥがＳＡＮ４８１と同様のインビトロでのロイコトキシン中和活性を有することを示すグラフを示す。（実施例３を参照されたい。）

【図3】ＨＩｇＢ（配列番号２７）、ＬｕｋＦ（配列番号２５）及びＬｕｋＤ（配列番号２６）の入れるアラインメントを示す。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本開示は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））ロイコトキシンに結合する抗体及びその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体及びその抗原結合断片）を提供する。本開示は、例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））ロイコトキシンの検出又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の処置若しくは予防でそのような抗体及び抗原結合断片を使用する方法も提供する。

【0033】

Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、「ロイコトキシン」という用語は、細菌のロイコトキシンポリペプチド（例えば、限定されないが、天然のロイコトキシンポリペプチド及びロイコトキシンポリペプチドのアイソフォーム）を指す。「ロイコトキシン」には、完全長の未処理ロイコトキシンポリペプチド及び細胞内での処理により生じるロイコトキシンポリペプチドの形態が包含される。ロイコトキシンとして、ＬｕｋＳＦ、ロイコトキシンＥＤ（ＬｕｋＥＤ）、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ）及びロイコトキシンＡＢ（ＬｕｋＡＢ、ＬｕｋＧＨとしても既知である）が挙げられる。本明細書で使用される場合、「Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＬｕｋＦ」という用語は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、「Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＬｕｋＤ」という用語は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、「Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＨＩｇＢ」という用語は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。（図３を参照されたい）。「ロイコトキシンポリヌクレオチド」、「ロイコトキシンヌクレオチド」又は「ロイコトキシン核酸」は、ロイコトキシンをコードするポリヌクレオチドを指す。

【0034】

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子であって、この免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して標的（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又は前述の組み合わせ）を認識して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質及び抗体が所望の生物学的活性を示す限り任意の他の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの下記の５つの主要なクラスのいずれかであり得る：それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと呼ばれる、重鎖定常ドメインの同一性に基づくＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ又はこれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）。免疫グロブリンの異なるクラスは、公知のサブユニット構造及び３次元配置が異なる。抗体は、裸であり得るか、又は毒素、放射性同位体等の他の分子と共役され得る。

【0035】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｂ細胞の単独クローンにより産生されて、同じエピトープに結合する抗体を指す。対照的に、「ポリクローナル抗体」という用語は、異なるＢ細胞により産生され、同一の抗原の異なるエピトープに結合する抗体の集団を指す。

【0036】

「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合領域」は、インタクトな抗体の、抗原に結合する部分を指す。抗原結合断片は、インタクトな抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含み得る。抗体の抗原結合断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片、線状抗体並びに一本鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット又はハムスター）及びヒト等の任意の動物種から得ることができるか、又は人工的に作製することができる。

【0037】

全抗体は、典型的には、下記の４つのポリペプチドからなる：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピー及び軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピー。重鎖の各々は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域と、３つのＣ末端定常（ＣＨＩ、ＣＨ２及びＣＨ３）領域とを含み、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域と、１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域とを含む。軽鎖及び重鎖の各ペアの可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、同一の一般的構造を有し、各領域は、４つのフレームワーク領域を含み、この配列は、比較的保存されている。「フレームワーク領域」という用語は、本明細書で使用される場合、超可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）間に位置する可変領域内の比較的保存されたアミノ酸配列を指す。各可変ドメインには、４つのフレームワーク領域が存在し、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４と指定されている。これらのフレームワーク領域は、可変領域の構造フレームワークを提供するβシートを形成する（例えば、Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２００１）を参照されたい）。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として既知の３つのＣＤＲは、抗体の「超可変領域」を形成し、この超可変領域は、抗原結合に関与する。

【0038】

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

【0039】

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

【0040】

「Ｋａｂａｔ付番」という用語及び同様の用語は、当技術分野で認識されており、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域又はこれらの抗原結合断片のアミノ酸残基の付番方式を指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番方式に従って決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ＆Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番方式を使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５に続く１つ又は２つの追加のアミノ酸（Ｋａｂａｔ付番スキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）を任意選択的に含み得るアミノ酸位置３１～３５（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～６５（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置９５～１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ付番方式を使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書で説明されている抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番スキームに従って決定されている。

【0041】

Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置に言及している（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、このループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは、３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは、３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、このループは、３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。

【0042】

【表1】

【0043】

本明細書で使用される場合、「定常領域」又は「定常ドメイン」という用語は、交換可能であり、且つ当技術分野で一般的な意味を有する。定常領域は、抗体の、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を発揮し得る部分（例えば、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分）である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般的に、免疫グロブリン可変ドメインと比べて保存されたアミノ酸配列を有する。

【0044】

本明細書で使用される場合、「重鎖」とうい用語は、抗体に関連して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、ＩｇＧのサブクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３及びＩｇＧ_４）等の抗体のＩｇＡクラス、ＩｇＤクラス、ＩｇＥクラス、ＩｇＧクラス及びＩｇＭクラスをそれぞれ生じる任意の別個のタイプ（例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ））を指し得る。重鎖アミノ酸配列は、当技術分野で公知である。具体的な実施形態では、重鎖は、ヒト重鎖である。

【0045】

本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関連して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個のタイプ（例えば、カッパ（κ）又はラムダ（λ））を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当技術分野で公知である。具体的な実施形態では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

【0046】

「キメラ」抗体は、ヒト領域及び非ヒト領域の両方を含む抗体又はその断片を指す。「ヒト化」抗体は、ヒト抗体スキャホールドと、非ヒト抗体から得られるか又は誘導される少なくとも１つのＣＤＲとを含む抗体である。非ヒト抗体として、例えばげっ歯類（例えば、マウス又はラット）等の任意の非ヒト動物から単離される抗体が挙げられる。ヒト化抗体は、非ヒト抗体から得られるか又は誘導される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含み得る。完全ヒト抗体は、非ヒト動物から得られるか又は誘導されるいかなるアミノ酸残基も含まない。完全ヒト抗体及びヒト化抗体は、マウス抗体又はキメラ抗体と比べて、ヒトで免疫反応を誘発するリスクが低いと理解されるであろう（例えば、Ｈａｒｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２（３）：２５６－２６（２０１０）を参照されたい）。

【0047】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当技術分野の用語であり、抗体又はその抗原結合断片が特異的に結合し得る、抗原の局所的な領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸であり得る（線状エピトープ若しくは連続エピトープ）か、又はエピトープは、例えば、ポリペプチドの２つ以上の非連続領域から一体となり得る（コンフォメーションエピトープ、非線状エピトープ、不連続エピトープ若しくは非連続エピトープ）。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片が結合するエピトープを、例えばＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学的研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析を伴う水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィー液体スプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアレイ及び／又は変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）により決定し得る。Ｘ線結晶構造解析の場合、結晶化を、当技術分野で既知の方法のいずれかを使用して達成し得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶を、公知のＸ線回折技術を使用して研究し得、且つＸ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｂｙ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，；米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号明細書）及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３を参照されたい）等のコンピュータソフトウェアを使用して精製し得る。変異誘発マッピング研究を、当業者に既知の任意の方法を使用して達成し得る。例えば、アラニンスキャニング変異誘発技術等の変異誘発技術の説明に関して、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

【0048】

参照抗体と「同じエピトープに結合する」抗体は、参照抗体と同じアミノ酸残基に結合する抗体を指す。抗体の、参照抗体と同じエピトープに結合する能力は、水素／重水素交換アッセイ（Ｃｏａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２００９；２３：６３９－６４７を参照されたい）又はＸ線結晶構造解析により決定し得る。

【0049】

本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」及び「特異的に認識する」という用語は、抗体又はその抗原結合断片に関連して類似の用語である。これらの用語は、抗体又はその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及びこの結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間に多少の相補性を伴うことを示す。従って、例えば、第１のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに「特異的に結合する」抗体は、他のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンにも結合し得るが、関連しない非ロイコトキシンタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＢｉａＣｏｒｅ又はオクテット結合アッセイにより測定した場合、この抗体の第１のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンへの結合の約１０％未満である。

【0050】

抗体は、この抗体が、所与のエピトープへの参照抗体の結合をある程度まで遮断する限り、このエピトープ又は重複するエピトープに優先的に結合する場合、このエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害を、当技術分野で既知の任意の方法（例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ）により決定し得る。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％又は少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。

【0051】

「核酸配列」という用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー（即ちポリヌクレオチド）を包含することが意図されており、このポリマーは、一本鎖又は二本鎖であり得、且つ非天然の又は改変されたヌクレオチドを含み得る。「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）又はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかの任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。これらの用語は、分子の一次構造を指し、そのため、二本鎖ＤＮＡ及び一本鎖ＤＮＡ並びに二本鎖ＲＮＡ及び一本鎖ＲＮＡが含まれる。この用語は、均等物として、ヌクレオチド類似体及び改変されたポリヌクレオチド（例えば、限定されないが、メチル化及び／又はキャップされたポリヌクレオチド）から作製された、ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体を含む。核酸は、典型的には、リン酸結合を介して連結されて核酸配列又はポリヌクレオチドを形成するが、他の多くの連結が当技術分野で知られている（例えば、ホスホロチオエート、ボラノホスフェート及び同様のもの）。

【0052】

Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、例えば、皮膚若しくは軟組織感染症（ＳＳＴＩ）又は菌血症として発症し得る。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）細菌は、血流を通して身体の部位に移動して感染し得、肺炎、ＩＣＵ肺炎、下肢の糖尿病性感染症、糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）、骨又は関節の感染症、器具感染症、創傷感染症、手術部位感染症又は骨髄炎を引き起こす。

【0053】

「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」は、本明細書で使用される場合、物理的又は化学的な方法を使用することによる、宿主細胞への１種又は複数の外因性ポリヌクレオチドの導入を指す。多くのトランスフェクション技術が当技術分野で既知であり、例えばリン酸カルシウムＤＮＡ共沈が挙げられる（例えば、Ｍｕｒｒａｙ Ｅ．Ｊ．（ｅｄ．），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９１））；ＤＥＡＥ－デキストラン；エレクトロポレーション；カチオン性リポソーム媒介トランスフェクション；タングステン粒子により促進される微粒子衝撃（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：７７６－７７７（１９９０））；及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈（Ｂｒａｓｈ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，７：２０３１－２０３４（１９８７）を参照されたい）。ファージ又はウイルスベクターを、多くが市販されている好適なパッケージング細胞中での感染性粒子の増殖後に宿主細胞に導入し得る。

【0054】

本明細書で使用される場合、「処置」、「処置する」という用語及び同様のものは、所望の薬理学的及び／又は生理学的な効果を得ることを指す。一実施形態では、この効果は、治療的であり、即ち、この効果は、疾患及び／又は疾患に起因する有害な症状を部分的又は完全に治癒する。

【0055】

「治療上有効な量」は、所望の治療結果（例えば、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の処置）を達成するのに必要な投与量における且つ期間にわたる有効な量を指す。治療上有効な量は、個体の病状、年齢、性別及び体重並びにこの個体で所望の応答を誘発する抗体又は抗原結合断片の能力等の要因により異なり得る。

【0056】

「予防上有効な量」は、所望の予防結果（例えば、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症又は発病の予防）を達成するのに必要な投与量における且つ期間にわたる有効な量を指す。

【0057】

「投与する」、「投与すること」、「投与」という用語及び同様のものは、本明細書で使用される場合、薬物（例えば、ロイコトキシン結合抗体又はその抗原結合断片）の所望の生物学的作用部位への送達を可能にするために使用され得る方法（例えば、静脈内投与）を指す。本明細書で説明されている薬剤及び方法と共に用いられ得る投与技術は、例えば、下記に見出される：Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ。

【0058】

本開示及び本特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数形を含む。

【0059】

特に明記されない限り又は文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、包括的であると理解される。「及び／又は」という用語は、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」の両方を含むことが意図されている。同様に、「及び／又は」という用語は、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」等の語句で使用される場合、下記の実施形態の各々を包含することが意図されている：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）。

【0060】

ＩＩ．抗ロイコトキシン抗体
本明細書で提供されるのは、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに結合する抗体及びその抗原結合断片である。

【0061】

ロイコトキシンは、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の毒性因子である。ロイコトキシンは、破壊のために広範囲の免疫細胞を標的とする。ロイコトキシンとして、下記が挙げられる：Ｐａｎｔｏｎ－Ｖａｌｅｎｔｉｎｅロイコトキシン（ＬｕｋＳＦとしても既知のＬｕｋＳＦ－ＰＶ）、ロイコトキシンＥＤ（ＬｕｋＥＤ）、ガンマ溶血素（２種の毒素：ＨｌｇＡＢ及びＨｌｇＣＢとして存在する）並びにロイコトキシンＡＢ（ＬｕｋＡＢ、ＬｕｋＧＨとしても既知）。特定の例では、少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及び／又はＨＩｇＢに結合する。特定の例では、少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに結合する。

【0062】

一例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、（ｉ）配列番号１のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号３のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドと、（ｉｉ）配列番号１２のＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号６のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドとを含むか、それらから本質的になるか又はそれらからなる。別の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の重鎖ポリペプチドは、配列番号１５の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか又はそれからなる。別の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の軽鎖ポリペプチドは、配列番号１３の可変領域アミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか又はそれからなる。別の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか又はそれからなる可変重鎖と、配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか又はそれからなる可変軽鎖とを含むか、それらから本質的になるか又はそれらからなる。別の例では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか若しくはそれからなる可変重鎖及び／又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか若しくはそれからなる可変軽鎖を含むか、それらから本質的になるか又はそれらからなる。

【0063】

例示的な抗ロイコトキシン抗体の配列を下記に記載する。特定の例では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合し、且つ下記の表１及び表２からの６つのＣＤＲ（即ちＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３）を含む。

【0064】

ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体は、配列番号１～３のＶＨ ＣＤＲと、配列番号１２、５及び６のＶＬ ＣＤＲとを含む。

【0065】

【表2】

【0066】

【表3】

【0067】

特定の例では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合し、且つ例えばＶＬとの組み合わせにおいて、下記の表で列挙されている抗体のＶＨを含む。

【0068】

【表4】

【0069】

特定の例では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合し、且つ例えばＶＨ（任意選択的に、前述の表で列挙されているＶＨ）との組み合わせにおいて、下記の表で列挙されている抗体のＶＬを含む。

【0070】

【表5】

【0071】

特定の例では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合し、且つ例えば軽鎖との組み合わせにおいて、下記の表で列挙されている抗体の重鎖を含む。

【0072】

【表6】

【0073】

【表7】

【0074】

【表8】

【0075】

特定の例では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合し、且つ例えば重鎖（任意選択的に、前述の表で列挙されている重鎖）との組み合わせにおいて、下記の表で列挙されている抗体の軽鎖を含む。

【0076】

【表9】

【0077】

下記の実施例で使用する抗体の配列を表７にまとめる。

【0078】

【表10】

【0079】

特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲを、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ付番スキームに従って決定し得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２；及び米国特許第７，７０９，２２６号明細書を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ付番規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループは、重鎖アミノ酸２６～３２、３３又は３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２ループは、重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３ループは、重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、同時にＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１ループは、軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２ループは、軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３ループは、軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、このループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは、３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは、３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、このループは、３４で終わる）。

【0080】

特定の態様では、本明細書で提供されるのは、ＳＡＮ４８１抗体又はＳＡＮ４８１－ＳＹＴ抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１つ又は複数のＣＤＲを含み、このＣＤＲでは、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ ＣＤＲが同一のアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片である。

【0081】

特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲを、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２で説明されているように、ＩＭＧＴ付番方式に従って決定し得る。ＩＭＧＴ付番スキームよれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は、２６～３５位であり、ＶＨ－ＣＤＲ２は、５１～５７位であり、ＶＨ－ＣＤＲ３は、９３～１０２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ１は、２７～３２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ２は、５０～５２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ３は、８９～９７位である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）（上記を参照されたい）及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）（上記を参照されたい）で説明されているような、ＳＡＮ４８１抗体又はＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体のＩＭＧＴ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。

【0082】

特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲをＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定し得る。例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｅｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照されたい。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌにおける方法により決定されたＳＡＮ４８１抗体又はＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片である。

【0083】

特定の態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲを、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの妥協案を示し、且つＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）により使用されるＡｂＭ超可変領域を指すＡｂＭ付番スキームに従って決定し得る。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＡｂＭ付番スキームにより決定された、ＳＡＮ４８１抗体又はＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体又は抗原結合断片である。

【0084】

別の態様では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、この抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の半減期を改善するために改変されている任意の好適なクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ及びＩｇＥ）の定常領域（Ｆｃ）を含み得る。例えば、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、変異していない同一の抗体と比べて半減期を延長する変異を含むＦｃを含み得る。

【0085】

Ｆｃ領域の操作は、治療用抗体の半減期を延長し、且つインビボでの分解から防御するために当技術分野で広く使用されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体又は抗原結合断片のＦｃ領域を改変して、ＩｇＧ異化作用を媒介し、且つＩｇＧ分子を分解から防御する胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対するＩｇＧ分子の親和性を高め得る。好適なＦｃ領域アミノ酸置換又は改変は、当技術分野において既知であり、例えば三重置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（「ＹＴＥ」と呼ばれる）が挙げられる（例えば、米国特許第７，６５８，９２１号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０３０２０５８号明細書；及びＹｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，６１（１）：ｅ０１０２０－１６（２０１７）を参照されたい）。特定の態様では、少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに結合する抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ＹＴＥ変異を含むＦｃ領域を含む。

【0086】

本明細書で説明されている抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ヒト抗体、ヒト化抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体であり得るか又はそれらから得られ得る。一態様では、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片は、完全ヒト抗体である。

【0087】

ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体を、インビトロでの供給源（例えば、ハイブリドーマ又は組換えにより抗体を産生する細胞株）及びインビボでの供給源（例えば、げっ歯類、ヒト扁桃腺）等の任意の手段で得ることができる。抗体を生成する方法は、当技術分野において既知であり、例えばＫｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：５１１－５１９（１９７６）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；及びＪａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００１））で説明されている。特定の実施形態では、ヒト抗体又はキメラ抗体を、１つ又は複数の内因性免疫グロブリン遺伝子が１つ又は複数のヒト免疫グロブリン遺伝子に置き換えられているトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して生成し得る。内因性抗体遺伝子が効果的にヒト抗体遺伝子に置き換えられているトランスジェニックマウスの例として、下記が挙げられるが、これらに限定されない：Ｍｅｄａｒｅｘ ＨＵＭＡＢ－ＭＯＵＳＥ（商標）、Ｋｉｒｉｎ ＴＣ ＭＯＵＳＥ（商標）及びＫｙｏｗａ Ｋｉｒｉｎ ＫＭ－ＭＯＵＳＥ（商標）（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２３（９）：１１１７－２５（２００５）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１８１：６９－９７（２００８）を参照されたい）。ヒト化抗体を、当技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して生成し得（例えば、Ａｎ，Ｚ．（ｅｄ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ．（２００９）を参照されたい）、例えば非ヒトＣＤＲのヒト抗体スキャホールドへの移植（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６（１）：２５－３４（２００５）；及びＨｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４４（１）：１１５－１２０（２００８）を参照されたい）が挙げられる。一実施形態では、ヒト化抗体を、例えば米国特許出願公開第２０１１／０２８７４８５Ａ１号明細書で説明されいてる方法を使用して作製し得る。

【0088】

特定の態様では、本明細書で提供される抗体又は抗原断片は、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに対する類似した結合親和性を有する。

【0089】

ＩＩＩ．核酸、ベクター及び宿主細胞
同様に本明細書で提供されるのは、少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする１種又は複数の単離された核酸配列である。

【0090】

本開示は、少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片の１つ又は複数は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする１種又は複数の核酸配列を含む１種又は複数のベクターを更に提供する。このベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス若しくはアデノウイルス）又はファージであり得る。好適なベクター及びベクターの調製方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）を参照されたい）。

【0091】

少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする核酸配列に加えて、このベクターは、望ましくは、宿主細胞中でのこのコード配列の発現をもたらす発現制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）及び同様のもの）を含む。例示的な発現制御配列は、当技術分野で既知であり、例えばＧｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）で説明されている。

【0092】

少なくとも１種のロイコトキシンに結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片の１つ又は複数は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする核酸配列を含むベクターを、コードされるポリペプチドを発現し得る宿主細胞（例えば、任意の好適な原核細胞又は真核細胞）に導入し得る。従って、本開示は、このベクターを含む単離された細胞を提供する。使用し得る宿主細胞として、容易且つ確実に増殖し得、適度に速い増殖速度を有し、十分に特徴付けられた発現系を有し、容易に且つ効率的に形質転換され得るか又はトランスフェクトされ得るものが挙げられる。好適な原核細胞の例として、下記が挙げられるが、これらに限定されない：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属（例えば、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ））、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属並びにエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属の細胞。特に有用な原核細胞として、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の様々な菌株（例えば、Ｋ１２、ＨＢ１０１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．３３６９４）、ＤＨ５ａ、ＤＨ１０、ＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．５３３３８）及びＣＣ１０２）が挙げられる。好適な真核細胞は、当技術分野で既知であり、例えば酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳類細胞が挙げられる。一実施形態では、ベクターは、哺乳類細胞中で発現される。多数の好適な哺乳類宿主細胞が当技術分野で既知であり、多くは、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能である。好適な哺乳類細胞の例として、下記が挙げられるが、これらに限定されない：チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ６１）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ－細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：４２１６－４２２０（１９８０））、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）及び３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ９２）。他の好適な哺乳類細胞株は、サルＣＯＳ－１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）及びＣＯＳ－７細胞株（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１６５１）並びにＣＶ－１細胞株（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ７０）である。哺乳類細胞は、望ましくは、ヒト細胞である。例えば、哺乳類細胞は、ヒトリンパ球又はリンパ球誘導細胞株であり得、例えばプレＢリンパ球系統（ｐｒｅ－Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｒｉｇｉｎ）の細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株（Ｃｒｕｃｅｌｌ Ｈｏｌｌａｎｄ Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）又はヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３若しくは２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）であり得る。

【0093】

本明細書で説明されている抗体又は抗原結合断片（任意選択的にモノクローナル抗体又は断片）のいずれかのアミノ酸をコードする核酸配列をトランスフェクション、形質転換又は形質導入により細胞に導入し得る。

【0094】

ＩＶ．医薬組成物及び抗スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシン抗体を使用する方法
本開示は、本明細書で説明されている抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。

【0095】

本開示は、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片をコードする１種若しくは複数の核酸配列を含むか、又はそのような核酸配列を含む１種若しくは複数のベクターを含む組成物も提供する。

【0096】

本明細書で提供される組成物（例えば、抗体若しくはその抗原結合断片、１種若しくは複数の核酸配列又は１種若しくは複数のベクターを含む）は、薬学的に許容される（例えば、生理学的に許容される）組成物であり得、この組成物は、担体（例えば、薬学的に許容される（例えば、生理学的に許容される）担体と、本抗体若しくは抗原結合断片、核酸配列又はベクターとを含む。

【0097】

任意の好適な担体を本開示に関連して使用し得、そのような担体は、当技術分野で公知である。担体の選択は、部分的には、本組成物を投与し得る特定の部位及びこの組成物を投与するために使用される特定の方法により決定されるであろう。この組成物は、任意選択的に、無菌であり得る。この組成物を保存のために冷凍するか又は凍結乾燥し、使用前に好適な無菌担体で再構成し得る。この組成物を、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２００１）で説明されている従来の技術に従って生成し得る。

【0098】

本組成物は、望ましくは、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の処置及び／又は予防に有効な量で本抗体又は抗原結合断片を含む。この目的のために、本開示の方法は、ロイコトキシン結合抗体若しくはその抗原結合断片又は前述の抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体若しくは断片）を含む組成物の治療上有効な量又は予防上有効な量を投与することを含む。

【0099】

本開示は、対象（例えば、ヒト）においてスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を処置又は予防する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書で説明されているロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片を投与することを含み、この投与時、この対象においてＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症が処置又は予防される、方法を提供する。本開示は、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を処置又は予防するための医薬品の製造における、本明細書で説明されているロイコトキシン結合抗体若しくは抗原結合断片又は本明細書で説明されている抗体若しくはその断片を含む組成物の使用も提供する。

【0100】

本明細書で議論されるように、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、広範囲の臨床感染症を引き起こす主要なヒト病原体である。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、菌血症及び感染性心内膜炎並びに骨関節、皮膚及び軟組織、胸膜肺及び器具に関連する感染症の主な原因である。ヒト個体群の約３０％では、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）がコロニー形成している（Ｗｅｒｔｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，５：７５１－７６２（２００５））。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）皮膚感染症の症状として、例えば腫脹、蜂窩織炎（ｃｅｌｌｕｌｉｔｓ）及び膿痂疹が挙げられる。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、食中毒、菌血症（バクテリア血症としても既知である）、毒素性ショック症候群及び敗血症性関節炎も引き起こす場合がある。Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の疫学、病態生理学及び臨床症状は、例えば、Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．，２８（３）：６０３－６６１（２０１５）で詳細に説明されており、いくつかの異なるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）株のゲノムが配列決定されている（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ受け入れ番号ＢＸ５７１８５６、ＢＸ５７１８５７、ＢＸ５７１８５８、ＦＮ４３３５９６、ＦＮ４３３５９７、ＦＮ４３３５９８、ＨＥ６８１０９７、ＦＲ８２１７７７、ＦＲ８２１７７８、ＦＲ８２１７７９及びＦＲ８２１７８０を参照されたい）。本明細書で議論されるように、対象（例えば、ヒト対象）は、糖尿病を有し得る。

【0101】

特定の例では、本ロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片の治療上有効な量は、例えば、ヒトにおいて、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連の敗血症を阻害するか、毒素を中和するか、細胞溶解を阻害するか、多臓器不全を阻害するか、又は前述の任意の組み合わせである量である。

【0102】

代わりに、薬理学的な及び／又は生理学的な効果は、予防的であり得、即ち、この効果は、疾患又はその症状を完全又は部分的に予防する。これに関して、本開示の方法は、本ロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の「予防上有効な量」を投与することを含む。

【0103】

治療的又は予防的な有効性を、処置された患者の定期的な評価によりモニタリングし得る。病態に応じた数日以上の反復投与の場合、疾患症状の所望の抑制が起こるまで処置を繰り返し得る。しかし、他の投与レジメンが有用である可能性があり、且つ本開示の範囲内である。所望の投与量を、本組成物の単回ボーラス投与によるか、本組成物の複数回ボーラス投与によるか、又は本組成物の持続注入投与により送達し得る。

【0104】

本明細書で説明されている抗体若しくはその抗原結合断片、前述のもののいずれかをコードする核酸配列又はこの核酸配列を含むベクターの有効な量を含む組成物を、標準的な投与技術（例えば、静脈内投与経路、腹腔内投与経路、皮下投与経路及び筋肉内投与経路）を使用して対象（例えば、ヒト）に投与し得る。この組成物は、非経口的投与に好適であり得る。「非経口」という用語は、本明細書で使用される場合、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与及び腹腔内投与を含む。いくつかの実施形態では、この組成物を、静脈内注射、腹腔内注射又は皮下注射による末梢全身送達を使用して対象に投与する。

【0105】

本ロイコトキシン結合抗体若しくは抗原結合断片又はこれを含む組成物を単独で投与し得るか、又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症の処置に従来使用されている他の薬物（例えば、アジュバント）と組み合わせて投与し得る。このロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片を含む組成物を例えば１種又は複数の抗生物質（例えば、ペニシリナーゼ耐性β－ラクタム抗生物質（例えば、オキサシリン又はフルクロキサシリン））と組み合わせ使用し得る。ゲンタマイシンを使用して、心内膜炎等の深刻な感染症を治療し得る。しかしながら、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のほとんどの菌株は、現在、ペニシリンに対して耐性を示し、１００人中の２人がＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のメチシリン耐性菌（ＭＲＳＡ）を保有している。ＭＲＳＡ感染症は、典型的には、バンコマイシンで処置され、軽度の皮膚感染症は、３剤の抗生物質軟膏で治療され得る。

【0106】

治療的使用及び予防的使用に加えて、本明細書で説明されている任意の抗体又はその抗原結合断片を診断用途又は研究用途で使用し得る。これに関して、本ロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片を、対象におけるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症をモニタリングするためのアッセイで使用し得る。研究用途として、例えばサンプル（例えば、ヒトの体液又は細胞若しくは組織の抽出物）中のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を検出するために、本ロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片と標識とを利用する方法が挙げられる。このロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片を改変（例えば、検出可能な部分による共有結合的又は非共有結合的な標識）して使用し得るか、又は改変することなく使用し得る。例えば、この検出可能な成分は、放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ若しくは^１２５Ｉ）、蛍光化合物又は化学発光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン若しくはルシフェリン）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ若しくはセイヨウワサビペルオキシダーゼ）又は補欠分子族であり得る。抗体又はその抗原結合断片を検出可能な部分に別々にコンジュゲートさせるための当技術分野で既知の任意の方法を本開示に関連して用い得る（例えば、Ｈｕｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９４：４９５－４９６（１９６２）；Ｄａｖｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４－１０２１（１９７４）；Ｐａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，４０：２１９－２３０（１９８１）；及びＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，３０：４０７－４１２（１９８２）を参照されたい）。

【0107】

本明細書で説明されている任意の抗体若しくはその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体若しくは断片）、前述のもののいずれかをコードする核酸配列、この核酸配列を含むベクター又は前述のもののいずれかを含む組成物をキットで提供し得、即ち診断アッセイを実施するための説明書を含む所定量の試薬のパッケージ化された組み合わせで提供し得る。本ロイコトキシン結合抗体又は抗原結合断片が酵素で標識されている場合、このキットは、望ましくは、この酵素に必要な基質及び補助因子（例えば、検出可能な発色団又は蛍光団を生じる基質前駆体）を含む。加えて、このキットには、他の添加剤（例えば、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング緩衝液又は細胞溶解緩衝液）及び同様のもの）が含まれ得る。様々な試薬の相対量を変化させて、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を生じ得る。この試薬は、乾燥粉末（典型的には凍結乾燥粉末）として提供され得、溶解すると適切な濃度の試薬溶液を生じる賦形剤を含む。

【0108】

下記の実施例は、本発明を更に説明するが、当然のことながら、本発明の範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。

【実施例】

【0109】

実施例１
抗ロイコトキシン抗体ＳＡＮ４８１は、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。これらの配列では、いくつかの配列障害を特定した。例えば、重鎖Ｗ１００ａ（ＶＨ－ＣＤＲ３中）及びＭ２５６（Ｆｃドメイン中）の酸化を観察した。加えて、可変重鎖中のグリコシル化部位（ＮＦＳ）は、７０％グリコシル化されていた。ＶＬ－ＣＤＲ１中に２箇所のＮＳ脱アミド化部位を特定し、ＶＨ－ＣＤＲ２中にＤＧ／ＤＳ異性化部位を特定した。更に、光感受性により、１週間ＣＷＬ－２ｋＬｕｘでＳＡＮ４８１の凝集が３．５％増加した。

【0110】

改善されたＳＡＮ４８１抗体バリアントを達成するために、一連の配列バリアントを設計して試験した。これらのバリアントを、この障害を取り除き、且つこの抗体のロイコトキシン中和活性に影響を及ぼすことなく半減期を増加させるように設計した。（配列障害を取り除こうとする最初の試みにより、ＬｕｋＳＦに対する結合及び中和活性が失われた。この最初の試みは、Ｎ２８Ｔ変異を含む定常でのＷ１０２のＦ、Ｙ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｇ及びＶへの変異を含む）。半減期の延長のためにＹＴＥ変異を使用し、この同一の変異により、Ｆｃ領域中のメチオニン酸化部位（残基Ｍ２５６）も取り除かれる。

【0111】

次いで、これのバリアントをＬｕＫＳＦに対する結合及び中和能力、光安定性及び開発性に関して試験した。結果を下記の表８にまとめ、追加の情報は、下記の実施例で見出される。

【0112】

【表11】

【0113】

ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥは、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ及びＨＩｇＡＢに対するＩＣ５０がＳＡＮ４８１と類似し、光曝露下での凝集の増加が最小限であり、有意なＣＤＲの脱アミド化及び異性化（１．１％）が検出されず、安全性の問題がなく、自己会合がなく、且つ非特異的結合がないという事実を考慮して、特に有利なバリアントとしてＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥを選択した。

【0114】

実施例２
この実施例では、他のＳＡＮ４８１バリアントと異なり、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体は、ＳＡＮ４８１のインビトロでの活性を維持することが実証される。

【0115】

ＳＡＮ４８１バリアントの活性を評価するために、インビトロでのアッセイを実行した。このアッセイでは、分化したＨＬ６０ヒト単球細胞（２．５ｅ４ウェル／２５μｌ）を、図１に示すように、ＬｕｋＳＦ（それぞれ１００ｎｇ／ｍｌ）又はＨＩｇＡＢ（それぞれ４００ｎｇ／ｍｌ）と各ｍＡｂ変異体の連続希釈液（２５μｌ）との混合物５０μｌと共に、３７℃で２時間にわたりインキュベートした。細胞生存率を、Ｃｅｌｌ Ｇｌｏアッセイを使用して測定し、下記のように算出した：１００＊［（ＯＤ４５０細胞＋毒素＋ｍＡｂ）／（ＯＤ４５０細胞のみ）］。生存率の５０％阻害を達成するために必要なｍＡｂの濃度（ＩＣ_５０）を算出し、表９に報告した。

【0116】

【表12】

【0117】

ＳＡＮ４８１－ＴＦ－ＹＴＥ抗体及びＳＡＮ４８１－ＳＹＴＦ－ＹＴＥ抗体は、ＳＡＮ４８１と比較して、ＬｕｋＳＦに対する効力をそれぞれ５．０７倍及び８．５６倍失った。しかしながら、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体は、失わなかった。

【0118】

実施例３
この実施例では、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ抗体は、ＳＡＮ４８１抗体と同様のインビトロでのロイコトキシン中和を有することが実証される。

【0119】

このインビトロでのロイコトキシン中和活性を、細胞生存率を測定するアッセイにより試験した。より具体的には、分化したＨＬ６０ヒト単球細胞（２．５ｅ４ウェル／２５μｌ）を、図２に示すように、ＬｕｋＳＦ（それぞれ１００ｎｇ／ｍｌ）、ＬｕｋＥＤ（それぞれ２０００ｎｇ／ｍｌ）、ＨｌｇＣＢ（それぞれ２００ｎｇ／ｍｌ）又はＨＩｇＡＢ（それぞれ４００ｎｇ／ｍｌ）と、ＳＡＮ４８１又はＳＡＮ４８１＿ＳＹＴ－ＹＴＥの連続希釈液（２５μｌ）との混合物５０μｌと共に、３７℃で２時間にわたりインキュベートした。細胞生存率を、Ｃｅｌｌ Ｇｌｏアッセイを使用して測定して下記のように算出し：１００＊［（ＯＤ４５０細胞＋毒素＋ｍＡｂ）／（ＯＤ４５０細胞のみ）］、図２でグラフ化した。

【0120】

図２に示す結果から、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥ及びＳＡＮ４８１は、ＬｕｋＳＦ、ＨＩｇＡＢ、ＨＩｇＢＣ及びＬｕｋＥＤの全てに対して同様のインビトロでの中和活性を有することが実証される。

【0121】

実施例４
この実施例では、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥは、優れた光安定性を示すことが実証される。

【0122】

ＳＡＮ４８１バリアントの光安定性を試験した。このアッセイでは、組換え抗体に対するｍＡｂバリアントの結合親和性をＯｃｔｅｔ３８４機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）によるＢｉｏ－ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙにより測定した。固有の結合親和性の決定のために、ＰＢＳ ｐＨ ７．２、３ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、０．０５％（ｖ／ｖ）ｔｗｅｅｎ ２０（１×Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ，ＦｏｒｔｅＢｉｏ）中の２μｇ／ｍＬの抗体を抗ヒトＩｇＧ Ｆｃバイオセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で捕捉した。洗浄後、抗原タンパク質の連続希釈液を使用して、会合及び解離の測定を実行した。解離定数（ＫＤ）を、Ｏｃｔｅｔ３８４ソフトウェアｖ．７．２．を使用するデータの非線形フィットから、２つの速度定数の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）として推定した。

【0123】

結果を下記の表１０及び１１に示す。

【0124】

【表13】

【0125】

【表14】

【0126】

結果から、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥの優れた光安定性及びＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥの光ストレスサンプルの場合に結合が失われていないことが実証される。

【0127】

本明細書で引用される全ての参考文献（例えば、刊行物、特許出願及び特許）は、各参考文献が参照により組み込まれることが個別に及び具体的に示され、且つ全体が本明細書に記載されていた場合と同程度に参照により本明細書に組み込まれる。

【0128】

「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その」並びに「少なくとも１つ」という用語、並びに本発明の説明に関連して（特に下記の特許請求の範囲に関連して）同様の指示対象の使用は、別途本明細書で指示されない限り又は文脈により明確に矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈しなければならない。１つ又は複数の項目のリストに続く「少なくとも１つ」という用語の使用（例えば、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」）は、別途本明細書で指示されない限り又は文脈により明確に矛盾しない限り、列挙された項目から選択された１つの項目（Ａ若しくはＢ）又は列挙された項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈しなければならない。「含む」、「有する」、「包含する」及び「含有する」という用語は、別途注記しない限り、非限定的用語（即ち「含むが、限定されない」を意味する）と解釈しなければならない。本明細書の値の範囲の列挙は、別途本明細書で指示されない限り、範囲内にある各個別の値を個別に参照する簡略化された方法として役立つことが単に意図されており、それぞれの個別の値は、本明細書に個別に列挙されていたかのように本明細書に組み込まれる。本明細書で説明されている全ての方法は、別途本明細書で指示されない限り又は別途文脈により明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施され得る。本明細書で提供されるあらゆる例又は例示的な言語（例えば、「等」）の使用は、本発明を単により明らかにするためのものであり、別途特許請求されない限り、本発明の範囲に対する限定を与えない。本明細書中の言語は、本発明の実施に不可欠であるものとして、いずれかの特許請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。

【0129】

本発明を実行するための、本発明者らに既知の最良の態様等の本発明の好ましい実施形態は、本明細書で記載されている。この好ましい実施形態の変形形態は、前述の説明を読むことで当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者がそのような変形形態を適切に用いることを期待し、本発明者らは、本明細書で具体的に説明されている以外の方法で本発明を実施することを意図している。従って、本発明は、適用可能な法律により許可されるように、本明細書に添付された特許請求の範囲で列挙された主題の全ての改変形態及び均等物を含む。更に、その全ての可能な変形形態における上記の要素の任意の組み合わせは、別途本明細書で指示されない限り又は別途文脈により明確に矛盾しない限り、本発明に包含される。

本発明は、以下を提供する。
１． 少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、（ａ）それぞれ配列番号１、２、３、１２、５及び６；（ｂ）それぞれ配列番号１～６；（ｃ）それぞれ配列番号１、２、１７、４、５及び６；（ｄ）それぞれ配列番号１、２、１７、１２、５及び６；並びに（ｅ）それぞれ配列番号１、２０、３、４、５及び６からなる群から選択される配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
２． 少なくとも１種のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、ＳＡＮ４８１－ＳＹＴ－ＹＴＥのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体又はその抗原結合断片。
３． 前記ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ又はＡｂＭ定義ＣＤＲである、上記２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
４． ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号７、１５、１８、２１又は２３のアミノ酸配列を含む、上記１～３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
５． ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＬは、配列番号８又は１３のアミノ酸配列を含む、上記１～４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
６． ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨ及びＶＬは、（ａ）それぞれ配列番号１５及び１３；（ｂ）それぞれ配列番号７及び８；（ｃ）それぞれ配列番号７及び１３；（ｄ）それぞれ配列番号１５及び８；（ｅ）それぞれ配列番号１８及び８；（ｆ）それぞれ配列番号１８及び１３；（ｇ）それぞれ配列番号２１及び８；並びに（ｈ）それぞれ配列番号２３及び１３からなる群から選択される配列を含む、上記１～５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
７． 配列番号１５の配列を含むＶＨと、配列番号１３の配列を含むＶＬとを含む、上記１～５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
８． 配列番号１６、９、１１、２２又は２４の配列を含む重鎖を含む、上記１～７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
９． 配列番号１４又は１０の配列を含む軽鎖を含む、上記１～８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１０． 前記抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖及び軽鎖は、（ａ）それぞれ配列番号１６及び１４；（ｂ）それぞれ配列番号９及び１０；（ｃ）それぞれ配列番号１１及び１０；（ｄ）それぞれ配列番号１１及び１４；（ｅ）それぞれ配列番号１６及び１０；（ｆ）それぞれ配列番号１９及び１０；（ｇ）それぞれ配列番号１９及び１４；（ｈ）それぞれ配列番号２２及び１０；並びに（ｉ）それぞれ配列番号２４及び１４からなる群から選択される配列を含む、上記１～９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１１． 前記抗体は、配列番号１６の配列を含む重鎖と、配列番号１４の配列を含む軽鎖とを含む、上記１～９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１２． 配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体と同じＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンエピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片。
１３． Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンへの、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体の結合を競合的に阻害する抗体又はその抗原結合断片。
１４． （ａ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ若しくはＨｌｇＢに結合し、且つ／又は（ｂ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ若しくはＨｌｇＢを中和する、上記１～１３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１５． （ａ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢに結合し、且つ／又は（ｂ）ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢを中和する、上記１～１４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１６． 重鎖定常領域を更に含む、上記１～１５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
１７． 前記重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１及びＩｇＡ_２重鎖定常領域からなる群から選択される、上記１６に記載の抗体又はその抗原結合断片。
１８． 前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ_１定常領域である、上記１７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
１９． 軽鎖定常領域を更に含む、上記１～１８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２０． 前記軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される、上記１９に記載の抗体又はその抗原結合断片。
２１． 前記軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、上記２０に記載の抗体又はその抗原結合断片。
２２． ＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である、上記１～２１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２３． 半減期を改善するように操作されているＦｃ領域を含む、上記１～２２のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２４． ＹＴＥ変異を有するＦｃ領域を含む、上記１～２３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２５． モノクローナル抗体又は抗原結合断片である、上記１～２４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２６． 完全長の抗体である、上記１～２５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２７． 抗原結合断片である、上記１～９又は１２～２６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
２８． Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、上記２７に記載の抗原結合断片。
２９． Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）のＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨｌｇＢに対する７５ｐＭ未満の親和性を有する、上記１～２８のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
３０． ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ及びＨＩｇＢに対する類似した結合親和性を有する、上記１～２９のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
３１． 検出可能な標識を更に含む、上記１～３０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
３２． 上記１～３１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片と、任意選択的に、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
３３． 対象においてスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））感染症を処置又は予防する方法であって、上記１～３１のいずれかに記載の抗体若しくは抗原結合断片又は上記３２に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
３４． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、敗血症である、上記３３に記載の方法。
３５． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、菌血症である、上記３３に記載の方法。
３６． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、肺炎である、上記３３に記載の方法。
３７． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、ＩＣＵ肺炎である、上記３３に記載の方法。
３８． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、皮膚又は軟組織感染症（ＳＳＴＩ）である、上記３３に記載の方法。
３９． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、下肢の糖尿病性感染症である、上記３３に記載の方法。
４０． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）である、上記３３に記載の方法。
４１． 前記ＤＦＵは、非感染である、上記４０に記載の方法。
４２． 前記ＤＦＵは、感染である、上記４０に記載の方法。
４３． 前記ＤＦＵは、グレード１、２又は３のＤＦＵである、上記４０に記載の方法。
４４． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、骨又は関節の感染症である、上記３３に記載の方法。
４５． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、関節感染症、器具感染症、創傷感染症、手術部位感染症又は骨髄炎である、上記３３に記載の方法。
４６． 前記対象は、手術対象である、上記３３～４５のいずれかに記載の方法。
４７． 前記Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症は、抗生物質耐性Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を含む、上記３３～４６のいずれかに記載の方法。
４８． 前記対象は、糖尿病を有する、上記３３～４７のいずれかに記載の方法。
４９． 前記対象は、ヒトである、上記３３～４８のいずれかに記載の方法。
５０． Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染症を前記処置又は予防することは、毒素の中和、細胞溶解を阻害すること、多臓器不全を阻害すること、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連敗血症を阻害すること又は前述のものの任意の組み合わせを含む、上記３３～４９のいずれかに記載の方法。
５１． 上記１～３０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片の前記ＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
５２． 上記１～３０のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片の前記ＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
５３． 上記５１及び／又は５２に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。
５４． 上記５１及び／若しくは５２に記載のポリヌクレオチド、上記５３に記載のベクター又は上記５１に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び上記５２に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む宿主細胞。
５５． ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される、上記５４に記載の宿主細胞。
５６． 単離されている、上記５４又は５５に記載の宿主細胞。
５７． 抗体又はその抗原結合断片を作製する方法であって、前記抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、上記５４～５６のいずれかに記載の宿主細胞を培養することを含む方法。
５８． サンプル中のＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ロイコトキシンを検出する方法であって、前記サンプルを、上記１～３１のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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