特許 7464592 マクロファージイメージング剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-04-01

(45)【発行日】2024-04-09

(54)【発明の名称】マクロファージイメージング剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 49/08 20060101AFI20240402BHJP

   A61B 5/055 20060101ALI20240402BHJP

   C08F 210/00 20060101ALI20240402BHJP

【ＦＩ】

A61K49/08

A61B5/055

C08F210/00

【請求項の数】 1

(21)【出願番号】P 2021522801

(86)(22)【出願日】2020-05-27

(86)【国際出願番号】 JP2020020850

(87)【国際公開番号】W WO2020241665

(87)【国際公開日】2020-12-03

【審査請求日】2022-11-04

(31)【優先権主張番号】P 2019103165

(32)【優先日】2019-05-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成３０年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、医療分野研究成果展開事業 産学連携医療イノベーション創出プログラム 「未破裂脳動脈瘤のリスク評価を目指すマクロファージイメージング用新規ＭＲＩ造影剤の開発」に係る委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願

(73)【特許権者】

【識別番号】504132272

【氏名又は名称】国立大学法人京都大学

(73)【特許権者】

【識別番号】510094724

【氏名又は名称】国立研究開発法人国立循環器病研究センター

(73)【特許権者】

【識別番号】000004178

【氏名又は名称】ＪＳＲ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100141472

【弁理士】

【氏名又は名称】赤松 善弘

(72)【発明者】

【氏名】近藤 輝幸

(72)【発明者】

【氏名】木村 祐

(72)【発明者】

【氏名】孫 安生

(72)【発明者】

【氏名】松田 哲也

(72)【発明者】

【氏名】今井 宏彦

(72)【発明者】

【氏名】小関 宏和

(72)【発明者】

【氏名】青木 友浩

(72)【発明者】

【氏名】高瀬 勝行

(72)【発明者】

【氏名】宮路 正昭

(72)【発明者】

【氏名】田守 功二

(72)【発明者】

【氏名】益田 剛明

(72)【発明者】

【氏名】甲斐 宏一

【審査官】伊藤 良子

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１０４９２６９６４（ＣＮ，Ａ）

【文献】特開平０８－１６５３０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００２－０９９１１２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１４－２２２１５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１７／２０４２０９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開平０１－２８２１３９（ＪＰ，Ａ）

【文献】HEMMER, E et al.，Cytotoxic Aspects of Gadolinium Oxide Nanostructures for Up-Conversion and NIR Bioimaging，Acta Biomaterialia，2013年，Vol.9, No.1，pages 4734-4743

【文献】CHO, M et al.，Gadolinium Oxide Nanoplates With High Longitudinal Relaxivity for Magnetic Resonance Imaging，Nanoscale，2014年，Vol.6, No.22，pages 13637-13645

【文献】MIAO, X et al.，Stable and non-toxic ultrasmall gadolinium oxide nanoparticle colloids (coating material = polyacryl，RSC Advances，2018年，Vol.8，pages 3189-3197

【文献】Deli Xiao et al.，Preparation and highlighted applications of magnetic microparticles and nanoparticles: a review on recent advances，Microchimica Acta，2016年，Vol. 183，pages 2655-2675

【文献】HEMMER, E et al.，In Vitro and In Vivo Investigations of Upconversion and NIR Emitting Gd2O3:Er3+,Yb3+ Nanostructures for Biomedical Applications，Journal of Materials Science: Materials in Medicine，Vol. 23, No. 10，2012年，pages 2399-2412

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ４９／０８

Ａ６１Ｂ ５／０５５

Ｃ０８Ｆ ２１０／００

Ｇ０１Ｎ ２４／００

Ｇ０３Ｇ ５／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

磁気共鳴画像法によるマクロファージイメージングに対して用いるためのマクロファージイメージング剤であって、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上で、エチレン性不飽和結合を有するモノマーおよび架橋性モノマーを含有するモノマー成分を重合させてなるポリマーを含有する被膜が形成されている複合粒子を含有してなり、前記モノマー成分におけるエチレン性不飽和結合を有するモノマーの含有率が５０～９５質量％であり、前記モノマー成分における架橋性モノマーの含有率が５～５０質量％であり、前記エチレン性不飽和結合を有するモノマーとしてアルキル基の炭素数が１～４であるアルキル（メタ）アクリレートおよびスチレン系モノマーからなる群より選ばれた少なくとも１種のモノマーが用いられ、前記架橋性モノマーとしてジビニルベンゼンおよびトリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレートからなる群より選ばれた少なくとも１種の架橋性モノマーが用いられていることを特徴とするマクロファージイメージング剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、マクロファージイメージング剤に関する。さらに詳しくは、本発明は、マクロファージイメージング剤、当該マクロファージイメージング剤に用いられる複合粒子およびその製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

磁気共鳴画像法は、放射線を用いることなく、非侵襲的に実施することができる。したがって、磁気共鳴画像法は、生体の分子イメージングなどに用いられている。磁気共鳴画像法を用いる生体の分子イメージングとして、例えば、多糖被覆酸化鉄粒子をマクロファージイメージング剤として用いるマクロファージイメージングなどが提案されている（例えば、特許文献１参照）。

【0003】

しかし、多糖被覆酸化鉄粒子をマクロファージイメージング剤として用いた場合、当該多糖被覆酸化鉄粒子に由来する磁気共鳴信号が生体内のヘモグロビン中の鉄原子に由来するバックグラウンドノイズと重なって検出されることがある。したがって、多糖被覆酸化鉄粒子には、バックグラウンドノイズを消去する画像処理を要することから、定量性が損なわれるという欠点がある。さらに多糖被覆酸化鉄粒子には、生体への負荷が大きいという欠点がある。

【0004】

近年においては、生体内のマクロファージに関する情報を容易に画像化させることができ、しかも生体への負荷が小さいマクロファージイメージング剤が望まれている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【文献】特表２０１０－５３２２２３号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、生体内のマクロファージに関する情報を容易に画像化させることができ、しかも生体への負荷が小さいマクロファージイメージング剤、当該マクロファージイメージング剤に用いられる複合粒子およびその製造方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、
（１）磁気共鳴画像法によるマクロファージイメージングに用いられるマクロファージイメージング剤であって、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分を重合させてなるポリマーを含有する被膜が形成されてなる複合粒子を含有することを特徴とするマクロファージイメージング剤、
（２）マクロファージイメージング剤に用いられる複合粒子であって、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分を重合させてなるポリマーを含有する被膜が形成されていることを特徴とする複合粒子、および
（３）前記（２）に記載の複合粒子を製造する方法であって、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分と酸化ガドリニウム含有粒子とを混合し、得られたモノマー成分含有混合物を界面活性剤および重合開始剤の存在下で水中で乳化させた後、前記モノマー成分を重合させて酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に被膜を形成させることを特徴とする複合粒子の製造方法
に関する。

【発明の効果】

【0008】

本発明によれば、生体内のマクロファージに関する情報を容易に画像化させることができ、しかも生体への負荷が小さいマクロファージイメージング剤、当該マクロファージイメージング剤に用いられる複合粒子およびその製造方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】製造例１で得られた酸化ガドリニウム含有粒子を観察した結果を示す図面代用写真である。

【図2】実施例１で得られた複合粒子の粒子径分布を示すグラフである。

【図3】（Ａ）は実施例１で得られた複合粒子を観察した結果を示す図面代用写真、（Ｂ）は（Ａ）の破線部を拡大して観察した結果を示す図面代用写真である。

【図4】実施例２で得られた複合粒子の粒子径分布を示すグラフである。

【図5】（Ａ）は試験例１における被験試料存在下でのＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｂ）は試験例１における血清含有被験試料存在下でのＴ１強調画像の図面代用写真である。

【図6】（Ａ）は製造例４における抗ＣＤ６８抗体を用いた正常頸動脈の免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真、（Ｂ）は製造例４における抗α－ＳＭＡ抗体を用いた正常頸動脈の免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真、（Ｃ）は製造例４における抗ＣＤ６８抗体を用いた動脈瘤病変の免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真、（Ｄ）は製造例４における抗α－ＳＭＡ抗体を用いた動脈瘤病変の免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真である。

【図7】（Ａ）は実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のマウスのＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｂ）は実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から３０分間経過後のマウスのＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｃ）は実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から１時間経過後のマウスのＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｄ）は実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２時間経過後のマウスのＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｅ）は実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のマウスのＴ１強調画像の図面代用写真である。

【図8】（Ａ）は実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のラットの頸動脈のネック側のＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｂ）は実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のラットの頸動脈のネック側のＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｃ）は実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のラットの頸動脈のドーム側のＴ１強調画像の図面代用写真、（Ｄ）は実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のラットの頸動脈のドーム側のＴ１強調画像の図面代用写真である。

【図9】試験例５で得られたインキュベートされた試料における複合粒子または臨床用造影剤の濃度と細胞生存率との関係を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明のマクロファージイメージング剤は、前記したように、磁気共鳴画像法によるマクロファージイメージングに用いられるマクロファージイメージング剤であり、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分を重合させたポリマーを含有する被膜が形成された複合粒子を含有することを特徴とする。

【0011】

本発明のマクロファージイメージング剤は、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分を重合させたポリマーを含有する被膜が形成されていることから、例えば、バックグラウンドノイズを消去する画像処理などの煩雑な操作を行なわなくても、生体の内部などを容易に画像化させることができ、しかも生体に対する負荷が小さいという優れた効果を発現する。

【0012】

複合粒子は、例えば、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分と酸化ガドリニウム含有粒子とを混合し、得られたモノマー成分含有混合物を界面活性剤および重合開始剤の存在下で水中で乳化させた後、前記モノマー成分を重合させて酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に被膜を形成させることによって製造することができる。

【0013】

まず、エチレン性不飽和結合を有するモノマーを含有するモノマー成分と酸化ガドリニウム含有粒子とを混合することによってモノマー成分含有混合物を調製する。

【0014】

エチレン性不飽和結合を有するモノマーとしては、例えば、（メタ）アクリレート系モノマー、カルボキシル基含有モノマー、スチレン系モノマー、ハロゲン原子含有不飽和炭化水素系モノマー、脂肪酸ビニルエステル系モノマー、不飽和ニトリル系モノマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのエチレン性不飽和結合を有するモノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。なお、本発明において、エチレン性不飽和結合を有するモノマーは、エチレン性不飽和結合を１分子中に１個有するモノマーを意味する。

【0015】

（メタ）アクリレート系モノマーとしては、例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２－エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレートなどのアルキル基の炭素数が１～１８のアルキル（メタ）アクリレート；シクロヘキシル（メタ）アクリレートなどのシクロアルキル基の炭素数が３～６のシクロアルキル（メタ）アクリレート；エチレングリコール（メタ）アクリレートなどのオキソ基含有（メタ）アクリレート；トリフルオロエチル（メタ）アクリレート、ペンタフルオロプロピル（メタ）アクリレートなどのフルオロアルキル基の炭素数が１～８のフルオロアルキル（メタ）アクリレート；テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレートなどの環状エーテル基含有（メタ）アクリレート；２－ブロモエチル（メタ）アクリレート、３－(クロロジメチルシリル)プロピル（メタ）アクリレート、２－(アセトアセチルオキシ)エチル（メタ）アクリレート、アリル（メタ）アクリレート、２－イソシアナトエチル（メタ）アクリレート、２―アジドエチル（メタ）アクリレート、Ｎ－スクシンイミド（メタ）アクリレートなどの反応性官能基を有する（メタ）アクリレート；ペンタフルオロフェニル（メタ）アクリレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの（メタ）アクリレート系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0016】

なお、本明細書において、「（メタ）アクリレート」は、「アクリレート」または「メタクリレート」を意味し、「（メタ）アクリル」は、「アクリル」または「メタクリル」を意味する。

【0017】

カルボキシル基含有モノマーとしては、例えば、（メタ）アクリル酸、マレイン酸、フマル酸、イタコン酸などのカルボキシル基およびエチレン性不飽和二重結合を有する脂肪族系モノマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのカルボキシル基含有モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。カルボキシル基含有モノマーのなかでは、（メタ）アクリル酸が好ましい。

【0018】

スチレン系モノマーとしては、例えば、スチレン、α－メチルスチレン、ｐ－メチルスチレン、ｐ－クロロスチレン、クロロメチルスチレン、４－（トリメトキシシリル）スチレン、ペンタフルオロスチレンなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのスチレン系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0019】

ハロゲン原子含有不飽和炭化水素系モノマーとしては、例えば、塩化ビニル、塩化ビニリデン、フッ化ビニルなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのハロゲン原子含有不飽和炭化水素系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。ハロゲン原子含有不飽和炭化水素系モノマーのなかでは、塩化ビニルが好ましい。

【0020】

脂肪酸ビニルエステル系モノマーとしては、例えば、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、クロロ酢酸ビニルなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの脂肪酸ビニルエステル系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0021】

不飽和ニトリル系モノマーとしては、例えば、（メタ）アクリロニトリルなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0022】

エチレン性不飽和結合を有するモノマーのなかでは、生体への負荷を抑制する観点から、（メタ）アクリレート系モノマー、カルボキシル基含有モノマーおよびスチレン系モノマーが好ましく、アルキル基の炭素数が１～１８のアルキル（メタ）アクリレートおよびスチレンがより好ましく、複合粒子の分散安定性を向上させる観点から、アルキル基の炭素数が１～４のアルキル（メタ）アクリレートがより一層好ましく、アルキル基の炭素数が１～３のアルキル（メタ）アクリレートがさらに好ましく、メチル（メタ）アクリレートがさらに一層好ましい。

【0023】

モノマー成分におけるエチレン性不飽和結合を有するモノマーの含有率は、複合粒子を効率よく製造する観点から、好ましくは５０質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、さらに好ましくは８０質量％以上であり、複合粒子の経時的な形状安定性を向上させる観点から、１００質量％以下、好ましくは９９質量％以下、より好ましくは９７質量％以下、さらに好ましくは９５質量％以下である。

【0024】

モノマー成分は、エチレン性不飽和結合を有するモノマー以外に架橋性モノマーをさらに含有していてもよい。架橋性モノマーとしては、例えば、ジビニル系モノマー、複数の（メタ）アクリロイル基を有する（メタ）アクリレート系モノマー、複数のアリル基を有するアリル系モノマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの架橋性モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0025】

ジビニル系モノマーとしては、例えば、ジビニルベンゼンなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0026】

複数の（メタ）アクリロイル基を有する（メタ）アクリレート系モノマーとしては、例えば、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、１，６－ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、ネオペンチルグリコールジ（メタ）アクリレートなどのジ（メタ）アクリレート系モノマー；トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、テトラメチロールメタントリ（メタ）アクリレートなどのトリ（メタ）アクリレート系モノマー；テトラメチロールプロパンテトラ（メタ）アクリレートなどのテトラ（メタ）アクリレート系モノマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの複数の（メタ）アクリロイル基を有する（メタ）アクリレート系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0027】

複数のアリル基を有するアリル系モノマーとしては、例えば、ジアリルフタレート、トリアリルイソシアヌレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのアリル系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0028】

架橋性モノマーのなかでは、複合粒子の経時的な形状安定性を向上させる観点から、ジビニル系モノマーおよび複数の（メタ）アクリロイル基を有する（メタ）アクリレート系モノマーが好ましく、ジビニルベンゼンおよびトリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレートがより好ましく、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレートがさらに好ましい。

【0029】

モノマー成分における架橋性モノマーの含有率は、複合粒子の経時的な形状安定性を向上させる観点から、好ましくは１質量％以上、より好ましくは３質量％以上、さらに好ましくは５質量％以上であり、複合粒子を効率よく製造する観点から、好ましくは５０質量％以下、より好ましくは３０質量％以下、さらに好ましくは２０質量％以下である。

【0030】

モノマー成分は、本発明の目的を阻害しない範囲内でエチレン性不飽和結合を有するモノマーおよび架橋性モノマー以外の他のモノマーを含有していてもよい。

【0031】

酸化ガドリニウム含有粒子は、例えば、原料化合物と炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物と炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）とを混合し、得られた混合物を加熱することによって脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を含有する溶液を生成させ、得られた溶液を加熱し、極性溶媒と混合し、得られた混合物から沈殿物を分離することによって得ることができる。酸化ガドリニウム含有粒子は、前記沈殿物として得ることができる。

【0032】

原料化合物としては、例えば、硝酸ガドリニウム、硝酸ガドリニウムの水和物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。硝酸ガドリニウムの水和物としては、例えば、硝酸ガドリニウム六水和物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0033】

炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物としては、例えば、ペンテン、ヘキセン、ヘプテン、オクテン、ノネン、デセン、ドデセン、テトラデセン、ペンタデセン、ヘキサデセン、ヘプタデセン、オクタデセン、エイコセン、ドコセン、テトラコセンなどの炭素数５～２４のオレフィン系炭化水素化合物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物のなかでは、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よく生成させる観点から、オクタデセンが好ましい。

【0034】

原料化合物１モルあたりの炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物の量は、原料化合物の種類、炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物の種類などによって異なることから一概には決定することができないので、原料化合物の種類、炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物の種類などに応じて適宜決定することが好ましい。原料化合物１モルあたりの炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物の量は、通常、好ましくは０．５～１．５モルである。

【0035】

炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）としては、例えば、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、エイコサン酸、ドコサン酸、テトラコサン酸などの飽和脂肪酸；クロトン酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、エイコセン酸、エルカ酸、ネルボン酸などの不飽和脂肪酸；ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチルアミン、ノニルアミン、デシルアミン、ウンデシルアミン、ドデシルアミン、トリデシルアミン、テトラデシルアミン、ペンタデシルアミン、セチルアミン、オクタデシルアミン、オレイルアミンなどの脂肪族アミンなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）のなかでは、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よく生成させる観点から、炭素数６～２４の不飽和脂肪酸が好ましく、オレイン酸がより好ましい。

【0036】

原料化合物１モルあたりの炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）の量は、原料化合物の種類、炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）の種類などによって異なることから一概には決定することができないので、原料化合物の種類、炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）の種類などに応じて適宜決定することが好ましい。原料化合物１モルあたりの炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）の量は、通常、好ましくは０．１～１モルである。

【0037】

原料化合物と炭素数５～２４の不飽和炭化水素化合物と炭素数６～２４の脂肪酸（誘導体）との混合物を不活性ガス雰囲気中で加熱することによって脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を含有する溶液を得ることができる。

【0038】

混合物の加熱温度は、脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を効率よく生成させる観点から、好ましくは１００℃以上、より好ましくは１１０℃以上であり、前記と同様に脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を効率よく生成させる観点から、好ましくは２００℃以下、より好ましくは１９０℃以下である。混合物の加熱時間は、特に限定されないが、通常、好ましくは０．５～４時間、より好ましくは１～３時間である。

【0039】

混合物の加熱は、不活性ガス雰囲気中で行なわれる。不活性ガスとしては、例えば、アルゴンガス、窒素ガスなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0040】

つぎに、前記で得られた脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を含有する溶液を加熱する。前記溶液の加熱温度は、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よく生成させる観点から、好ましくは２５０℃以上、より好ましくは２７０℃以上であり、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よく生成させる観点から、好ましくは３５０℃以下、より好ましくは３３０℃以下である。前記溶液の加熱時間は、特に限定されないが、通常、好ましくは０．５～２０時間、より好ましくは１０～１５時間である。

【0041】

つぎに、加熱後の脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を含有する溶液を極性溶媒と混合し、得られた混合物から沈殿物を分離することにより、酸化ガドリニウム－脂肪酸（誘導体）複合粒子である酸化ガドリニウム含有粒子を得ることができる。

【0042】

極性溶媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの炭素数が１～４の脂肪族１価アルコール；アセトン、メチルエチルケトンなどの脂肪族ケトン化合物；アセトニトリル、ジメチルスルホキシドなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの極性溶媒は、それぞれ単独で用いてもよく、本発明の目的を阻害しない範囲で２種類以上を併用してもよい。極性溶媒のなかでは、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よく生成させる観点から、脂肪族１価アルコールおよび脂肪族ケトン化合物が好ましく、メタノールおよびアセトンがより好ましい。

【0043】

混合物からの沈殿物の分離は、例えば、遠心分離などによって行なうことができる。前記沈殿物として酸化ガドリニウム含有粒子を得ることができる。

【0044】

酸化ガドリニウム含有粒子の体積平均粒子径は、マクロファージイメージング剤の用途などによって異なることから一概には決定することができないので、マクロファージイメージング剤の用途などに応じて適宜決定することが好ましい。酸化ガドリニウム含有粒子の体積平均粒子径は、磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは５ｎｍ以上、より好ましくは８ｎｍ以上であり、マクロファージへのマクロファージイメージング剤の集積性を向上させる観点から、好ましくは２５ｎｍ以下、より好ましくは２０ｎｍ以下、さらに好ましくは１５ｎｍ以下である。

【0045】

酸化ガドリニウム含有粒子は、酸化ガドリニウム含有粒子分散液として用いることができる。酸化ガドリニウム含有粒子分散液は、例えば、酸化ガドリニウム含有粒子を必要により洗浄した後、分散媒に分散させることによって得ることができる。

【0046】

酸化ガドリニウム含有粒子の洗浄は、例えば、酸化ガドリニウム含有粒子を極性溶媒と混合して混合物を得、遠心分離によって前記混合物から酸化ガドリニウム含有粒子を回収することによって行なうことができる。前記極性溶媒は、脂肪酸（誘導体）ガドリニウム前駆体を含有する溶液に混合される極性溶媒と同様である。

【0047】

分散媒としては、例えば、脂肪族系有機溶媒などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。脂肪族系有機溶媒としては、例えば、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン、デカン、ウンデカン、ドデカン、トリデカン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキサデカン、ヘプタデカン、オクタデカンなどの炭素数が６～１８の脂肪族炭化水素化合物；ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチルアミン、ノニルアミン、デシルアミン、ウンデシルアミン、ドデシルアミン、トリデシルアミン、テトラデシルアミン、ペンタデシルアミン、ヘキサデシルアミン、ヘプタデシルアミン、オクタデシルアミンなどの炭素数が６～１８の脂肪族アミン；ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸などの炭素数６～１８の脂肪酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの脂肪族系有機溶媒は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。脂肪族系有機溶媒のなかでは、酸化ガドリニウム含有粒子の分散安定性を向上させる観点から、炭素数が６～１８の脂肪族炭化水素化合物が好ましく、炭素数が６～１０の脂肪族炭化水素化合物がより好ましく、ヘキサンおよびヘプタンがより一層好ましく、ヘプタンがさらに好ましい。

【0048】

脂肪族系有機溶媒１Ｌあたりの酸化ガドリニウム含有粒子の量は、マクロファージイメージング剤の用途などによって異なることから一概には決定することができないので、マクロファージイメージング剤の用途などに応じて適宜決定することが好ましい。脂肪族系有機溶媒１Ｌあたりの酸化ガドリニウム含有粒子の量は、通常、好ましくは１０～５００ｇ、より好ましくは５０～２５０ｇである。

【0049】

酸化ガドリニウム含有粒子分散液は、本発明の目的を阻害しない範囲で酸化ガドリニウム含有粒子および分散媒以外の他の成分を含有していてもよい。前記他の成分としては、例えば、酸化ガドリニウム含有粒子を分散媒に安定に分散させるための安定化剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0050】

安定化剤としては、例えば、界面活性剤、酸基含有化合物、アミノ基含有化合物、シラン基含有化合物、チタン原子含有化合物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの安定化剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0051】

界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、両性界面活性剤および高分子界面活性剤が挙げられる。これらの界面活性剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0052】

アニオン性界面活性剤としては、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸カリウム、ドデシル硫酸アンモニウムなどのアルキル基の炭素数が４～１６のアルキル硫酸エステルのアルカリ金属塩またはアンモニウム塩；アルキル基の炭素数が４～１６のアルキルベンゼン硫酸のアルカリ金属塩またはアンモニウム塩；アルキル基の炭素数が４～１６のコハク酸ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩；アルキル基の炭素数が４～１６のアルキルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属塩；アルキル基の炭素数が４～１６のポリオキシエチレンアルキルエーテルの硫酸エステル塩またはリン酸エステル塩；アルキル基の炭素数が４～１６のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルの硫酸エステル塩またはリン酸エステル塩；ナフタレンスルホン酸ナトリウムのホルマリン縮合物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0053】

また、アニオン性界面活性剤として、商業的に容易に入手することができるものを用いることができ、その例としては、ラテムルＳ－１８０Ａ〔花王（株）製、商品名〕、エレミノールＪＳ－２〔三洋化成（株）製、商品名〕、アクアロンＨＳ－１０〔第一工業製薬（株）製、商品名〕、アデカリアソープＳＥ－１０Ｎ〔（株）ＡＤＥＫＡ製、商品名〕などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0054】

カチオン性界面活性剤としては、例えば、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロライド、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドなどのモノアルキルトリメチルアンモニウム塩；ヘキサデシルピリジニウムクロライドなどのアルキルピリジニウム塩などの第４級アンモニウム塩などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0055】

ノニオン性界面活性剤としては、例えば、脂肪酸モノグリセライド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステルなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0056】

また、ノニオン性界面活性剤として、商業的に容易に入手することができるものを用いることができ、その例としては、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ユニオンカーバイド社製、商品名）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４（ユニオンカーバイド社製、商品名）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－３０５（ユニオンカーバイド社製、商品名）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｎ－１０１（ユニオンカーバイド社製、商品名）、Ｔｗｅｅｎ ２０（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｔｗｅｅｎ ４０（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｔｗｅｅｎ ６０（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｔｗｅｅｎ ８０（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｔｗｅｅｎ ８５（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｂｒｉｊ ３５（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｂｒｉｊ ５８（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｂｒｉｊ ７６（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｂｒｉｊ ９８（アイ・シー・アイ社製、商品名）、Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ－４０（シェル社製、商品名）、Ｉｇｅｐｏｌ ＣＯ５３０（ローヌ・プーラン社製、商品名）、Ｉｇｅｐｏｌ ＣＯ６３０（ローヌ・プーラン社製、商品名）、Ｉｇｅｐｏｌ ＣＯ７２０（ローヌ・プーラン社製、商品名）、Ｉｇｅｐｏｌ ＣＯ７３０（ローヌ・プーラン社製、商品名）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0057】

高分子界面活性剤としては、例えば、ポリビニルアルコールなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0058】

界面活性剤のなかでは、酸化ガドリニウム含有粒子の分散安定性を向上させる観点から、アニオン性界面活性剤が好ましく、アルキル基の炭素数が４～１６のアルキル硫酸エステルのアルカリ金属塩またはアンモニウム塩がより好ましく、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸カリウム、ドデシル硫酸アンモニウムがより一層好ましく、ドデシル硫酸ナトリウムがさらに好ましい。

【0059】

酸基含有化合物としては、例えば、１個のカルボキシル基を有するカルボン酸化合物、２個以上のカルボキシル基を有するカルボン酸化合物、１個のスルホ基を有するスルホン酸化合物、２個以上のスルホ基を有するスルホン酸化合物、１個のカルボキシル基と１個のスルホ基を有するスルホカルボン酸化合物、ブレンステッド酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの酸基含有化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0060】

１個のカルボキシル基を有するカルボン酸化合物としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸などの脂肪族飽和モノカルボン酸；アクリル酸、メタクリル酸、オレイン酸などの脂肪族不飽和モノカルボン酸；グリコール酸、乳酸、酒石酸などのオキシ脂肪族モノカルボン酸；シクロペンタンカルボン酸、シクロヘキサンカルボン酸などの脂環式モノカルボン酸；安息香酸、ケイ皮酸、ナフトエ酸などの芳香族モノカルボン酸；サリチル酸、マンデル酸などのオキシ芳香族モノカルボン酸；トリフルオロ酢酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0061】

２個以上のカルボキシル基を有するカルボン酸化合物としては、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、プロパン－１，２，３－トリカルボン酸、クエン酸、ドデカン二酸などの炭素数２～３０の脂肪族飽和ポリカルボン酸；マレイン酸、フマル酸、イタコン酸などの炭素数２～３０の脂肪族不飽和ポリカルボン酸；フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、トリメリット酸、ピロメリット酸などの炭素数８～３０の芳香族ポリカルボン酸；シクロブテン－１，２－ジカルボン酸、シクロペンテン－１，２－ジカルボン酸、フラン－２，３－ジカルボン酸、ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－２，３－ジカルボン酸、ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２，５－ジエン－２，３－ジカルボン酸などの炭素数５～３０の脂環式ポリカルボン酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0062】

１個のスルホ基を有するスルホン酸化合物としては、例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロパンスルホン酸、ブタンスルホン酸、ヘキサンスルホン酸、デカンスルホン酸、ウンデカンスルホン酸、ドデカンスルホン酸などの脂肪族モノスルホン酸；ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ｏ－トルエンスルホン酸、ｍ－トルエンスルホン酸、４－ドデシルベンゼンスルホン酸、４－オクチルベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などの芳香族モノスルホン酸；トリフルオロメタンスルホン酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0063】

２個以上のスルホ基を有するスルホン酸化合物としては、例えば、メチオン酸、１，１－エタンジスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、１，１－プロパンジスルホン酸、１，３－プロパンジスルホン酸、ポリビニルスルホン酸などの炭素数１～３０の脂肪族ポリスルホン酸；ｍ－ベンゼンジスルホン酸、１，４－ナフタレンジスルホン酸、１，５－ナフタレンジスルホン酸、１，６－ナフタレンジスルホン酸、２，６－ナフタレンジスルホン酸、２，７－ナフタレンジスルホン酸、スルホン化ポリスチレンなどの炭素数６～３０の芳香族ポリスルホン酸；ビス（フルオロスルホニル）イミド、ビス（トリフルオロメタンスルホニル）イミドなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0064】

１個のカルボキシル基と１個のスルホ基を有するスルホカルボン酸化合物としては、例えば、スルホ酢酸、スルホコハク酸などの炭素数が２～３０のスルホカルボン酸；ｏ－スルホ安息香酸、ｍ－スルホ安息香酸、ｐ－スルホ安息香酸、２，４－ジスルホ安息香酸、３－スルホフタル酸、３，５－ジスルホフタル酸、４－スルホイソフタル酸、２－スルホテレフタル酸、２－メチル－４－スルホ安息香酸、２－メチル－３，５－ジスルホ安息香酸、４－プロピル－３－スルホ安息香酸、４－イソプロピル－３－スルホ安息香酸、２，４，６－トリメチル－３－スルホ安息香酸、２－メチル－５－スルホテレフタル酸、５－メチル－４－スルホイソフタル酸、５－スルホサリチル酸、３－オキシ－４－スルホ安息香酸などの炭素数７～３０のスルホ芳香族カルボン酸化合物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0065】

ブレンステッド酸としては、例えば、テトラフルオロホウ酸、トリフルオロホウ酸トリフルオロメチル、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、メタ亜ヒ酸、亜ヒ酸、ヒ酸、ヘキサフルオロヒ酸、ホウ酸、次亜臭素酸、炭酸、シアン化水素、シアン酸、次亜塩素酸、亜塩素酸、過塩素酸、クロム酸、次亜ヨウ素酸、ヨウ素酸、モリブデン酸、アジ化水素酸、次亜硝酸、亜硝酸、硝酸、イソチオシアン酸、過酸化水素、ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、ピロリン酸、トリポリリン酸、ヘキサフルオロリン酸、硫化水素、硫酸、チオ硫酸、亜セレン酸、セレン酸、オルトケイ酸、フルオロアンチモン酸、亜テルル酸、テルル酸、バナジン酸、タングステン酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0066】

アミノ基含有化合物としては、例えば、パーフルオロトリエチルアミン、パーフルオロトリプロピルアミン、パーフルオロトリブチルアミン、パーフルオロトリペンチルアミン、パーフルオロトリヘキシルアミン、ビス（２，２，２－トリフルオロエチル）アミン、１Ｈ，１Ｈ－パーフルオロオクチルアミン、ペンタフルオロアニリン、３，５－ビス（トリフルオロメチル）アニリンなどの含フッ素アミンが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのアミノ基含有化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0067】

シラン基含有化合物としては、例えば、イソブチルトリメトキシシラン、ビニルトリクロロシラン、ビニルトリメトキシシラン、ビニルトリス（β－メトキシエトキシ）シラン、β－（３，４－エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、γ－グリシドオキシプロピルトリメトキシシラン、γ－（メタ）アクリロイルオキシプロピルトリメトキシシラン、Ｎ－β（アミノエチル）－γ－アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ－β（アミノエチル）－γ－アミノプロピルトリメトキシシラン、ドデシルトリメトキシシラン、ヘキシルトリメトキシシラン、メチルトリメトキシシラン、メチルトリエトキシシラン、フェニルトリメトキシシラン、ドデシルトリクロロシラン、ヘキシルトリクロロシラン、メチルトリクロロシラン、フェニルトリクロロシランなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのシラン基含有化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0068】

チタン原子含有化合物としては、例えば、チタニウムトリイソステアロイルイソプロポキサイド、（２－ｎ－ブトキシカルボニルベンゾイルオキシ）トリブトキシチタン、チタニウムアセチルアセトネート、イソ－ブトキシチタニウムエチルアセトアセテート、テトライソプロピルチタネート、テトラｎ－ブチルチタネートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのチタン原子含有化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0069】

酸化ガドリニウム含有粒子分散液における安定化剤の含有率は、安定化剤の種類などによって異なることから一概には決定することができないので、安定化剤の種類などに応じて適宜決定することが好ましい。

【0070】

酸化ガドリニウム含有粒子分散液は、そのまま用いてもよく、当該酸化ガドリニウム含有粒子分散液に含まれる分散媒の一部を他の分散媒に置換して用いてもよい。

【0071】

酸化ガドリニウム含有粒子１００質量部あたりのモノマー成分の量は、酸化ガドリニウム含有粒子をポリマーで効率よく被覆する観点から、好ましくは１０質量部以上、より好ましくは５０質量部以上、より一層好ましくは１００質量部以上、さらに好ましくは１５０質量部以上であり、磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは１０００質量部以下、より好ましくは９００質量部以下、より一層好ましくは８００質量部以下、さらに好ましくは７００質量部以下である。

【0072】

つぎに、得られたモノマー成分含有混合物を界面活性剤および重合開始剤の存在下で水中で乳化させることによってエマルションを得ることができる。

【0073】

前記界面活性剤は、酸化ガドリニウム含有粒子分散液の安定化剤に用いられる界面活性剤と同様である。前記界面活性剤は、モノマー成分と重合可能な反応基を有していてもよい。反応基としては、例えば、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイル基などのエチレン性不飽和基などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0074】

モノマー成分含有混合物１００質量部あたりの界面活性剤の量は、モノマーの種類、酸化ガドリニウム含有粒子の量、目的とする複合粒子の粒子径などによって異なることから一概には決定することができないので、モノマーの種類、酸化ガドリニウム含有粒子の量、目的とする複合粒子の粒子径などに応じて適宜決定することが好ましい。モノマー成分含有混合物１００質量部あたりの界面活性剤の量は、通常、エマルションを効率よく生成させる観点から、好ましくは０．０１質量部以上、より好ましくは０．１質量部以上であり、前記と同様にエマルションを効率よく生成させる観点から、好ましくは２０質量部以下、より好ましくは１０質量部以下である。

【0075】

重合開始剤としては、例えば、２，２’－アゾビスイソブチロニトリル、２，２’－アゾビス－（２－メチルプロパンニトリル）、２，２’－アゾビス－（２，４－ジメチルペンタンニトリル）、２，２’－アゾビス－（２－メチルブタンニトリル）、１，１’－アゾビス－（シクロヘキサンカルボニトリル）、２，２’－アゾビス－（２，４－ジメチル－４－メトキシバレロニトリル）、２，２’－アゾビス－（２，４－ジメチルバレロニトリル）、２，２’－アゾビス－（２－アミジノプロパン）塩酸塩などのアゾ化合物；過酸化ベンゾイル、クメンヒドロペルオキシド、過酸化水素、過酸化アセチル、過酸化ラウロイル、ｔｅｒｔ－ブチルペルオクテート、α－クミルペルオキシピバレートなどの過酸化物；過硫酸アンモニウムなどの過硫酸塩などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの重合開始剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0076】

モノマー成分含有混合物１００質量部あたりの重合開始剤の量は、モノマーの種類、モノマーの量などによって異なることから一概には決定することができないので、モノマーの種類、モノマーの量などに応じて適宜決定することが好ましい。モノマー成分含有混合物１００質量部あたりの重合開始剤の量は、通常、好ましくは０．１～２０質量部、より好ましくは１～１０質量部である。

【0077】

モノマー成分含有混合物は、例えば、界面活性剤、重合開始剤および水と混合した後、超音波分散機などの剪断混合装置を用いて乳化させることができる。剪断混合装置としては、例えば、プローブ式の超音波分散機などの超音波乳化機などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0078】

モノマー成分含有混合物は、モノマー成分と酸化ガドリニウム含有粒子との複合体の体積平均粒子径が所望の複合粒子の体積平均粒子径と同程度となるように水中で乳化させることが好ましい。

【0079】

超音波分散機を用いる場合、超音波の出力は、酸化ガドリニウム含有粒子を効率よくポリマーで被覆する観点から、好ましくは５Ｗ以上、より好ましくは１０Ｗ以上であり、生体の内部などを容易に画像化させることができ、しかも生体に対する負荷が小さいマクロファージイメージング剤を効率よく製造する観点から、好ましくは２００Ｗ以下、より好ましくは１５０Ｗ以下である。超音波の照射は、１回で行なってもよく、複数回に分けて行なってもよい。超音波の照射１回あたりの超音波の照射時間は、超音波の出力などによって異なることから一概には決定することができないので、超音波の出力などに応じて適宜決定することが好ましい。超音波の照射１回あたりの超音波の照射時間は、モノマー成分含有混合物を十分に乳化させ、小さい体積平均粒子径を有する複合粒子を形成させる観点から、好ましくは１０秒間以上、より好ましくは３０秒間以上、さらに好ましくは１分間以上であり、モノマー成分を効率よく酸化ガドリニウム含有粒子に付着させる観点から、好ましくは１０分間以下、より好ましくは５分間以下、さらに好ましくは３分間以下である。

【0080】

つぎに、モノマー成分を重合させることにより、酸化ガドリニウム含有粒子の表面上に前記モノマー成分を重合させたポリマーの被膜を形成させることができる。

【0081】

モノマー成分の重合は、１段で行なってもよく、多段で行なってもよい。したがって、複合粒子が有する被膜は、１層構造を有していてもよく、多層構造を有していてもよい。モノマー成分を重合させる際の重合温度は、モノマー成分に含まれるモノマーの種類などによって異なることから一概には決定することができないので、当該モノマー成分に含まれるモノマーの種類などに応じて適宜決定することが好ましい。モノマー成分の重合温度は、通常、好ましくは４０～１００℃、より好ましくは５０～９５℃である。モノマー成分を重合させる際の重合時間は、特に限定されないが、通常、好ましくは１～５０時間、より好ましくは２～２４時間である。

【0082】

複合粒子におけるポリマーの含有率は、生体への負荷を抑制する観点から、好ましくは５質量％以上、より好ましくは８質量％以上、さらに好ましくは１０質量％以上であり、マクロファージへの集積性を向上させるとともに磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは９９質量％以下であり、より好ましくは９７質量％以下、さらに好ましくは９５質量％以下である。

【0083】

複合粒子における酸化ガドリニウム含有粒子の含有率は、マクロファージイメージング剤の用途などによって異なることから一概には決定することができないので、マクロファージイメージング剤の用途に応じて適宜決定することが好ましい。複合粒子における酸化ガドリニウム含有粒子の含有率は、マクロファージへの集積性を向上させるとともに磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは１質量％以上、より好ましくは３質量％以上、さらに好ましくは５質量％以上であり、生体への負荷を抑制する観点から、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９２質量％以下、さらに好ましくは９０質量％以上である。

【0084】

複合粒子の体積平均粒子径は、マクロファージイメージング剤の用途などによって異なることから一概には決定することができないので、マクロファージイメージング剤の用途などに応じて適宜決定することが好ましい。複合粒子の体積平均粒子径は、磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは１０ｎｍ以上、より好ましくは５０ｎｍ以上、さらに好ましくは８０ｎｍ以上であり、生体への負荷を抑制するとともにマクロファージへのマクロファージイメージング剤の集積性を向上させる観点から、好ましくは２００ｎｍ以下、より好ましくは１９０ｎｍ以下、より一層好ましくは１５０ｎｍ以下、さらに好ましくは１００ｎｍ以下である。

【0085】

本発明のマクロファージイメージング剤は、複合粒子のみで構成されていてもよく、本発明の目的を阻害しない範囲で複合粒子以外に他の成分を含有していてもよい。前記他の成分としては、例えば、複合粒子を分散させるための分散媒、安定化剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0086】

分散媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコールなどのアルコール系有機溶媒；メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノンなどのケトン系有機溶媒；酢酸エチル、酢酸プロピル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテートなどのエステル系有機溶媒；エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテルなどのエーテル類；トルエン、キシレン、エチルベンゼン、トリメチルベンゼン、ヘキサン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ミネラルスピリットなどの炭化水素系有機溶媒；ジクロロメタン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類；ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドンなどのアミド系有機溶媒；鉱物油、植物油、ワックス油、シリコーン油などの油類などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。溶媒のなかでは、取り扱いが容易であることから、アルコール系有機溶媒、ケトン系有機溶媒および炭化水素系有機溶媒が好ましく、ケトン系有機溶媒および炭化水素系有機溶媒がより好ましい。これらの溶媒は、単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。

【0087】

前記安定化剤は、酸化ガドリニウム含有粒子分散液に用いられる安定化剤と同様である。

【0088】

マクロファージイメージング剤における複合粒子の含有率は、マクロファージイメージング剤の用途などによって異なることから一概に決定することができないので、マクロファージイメージング剤の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。マクロファージイメージング剤における複合粒子の含有率は、磁気共鳴信号の検出感度を向上させる観点から、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上である。マクロファージイメージング剤における複合粒子の含有率の上限値は、１００質量％であり、マクロファージイメージング剤が前記他の成分を含有する場合、他の成分の種類などに応じて、本発明の目的を阻害しない範囲で適宜決定することが好ましい。

【0089】

本発明のマクロファージイメージング剤は、マクロファージへの集積性に優れることから、例えば、マクロファージが関与する疾患などの画像診断などに用いることができる。マクロファージが関与する疾患としては、例えば、炎症；腫瘍；心筋梗塞などの心疾患；脳卒中、脳梗塞などの脳血管疾患；動脈硬化；糖尿病；アルツハイマー病などの神経疾患などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

【0090】

以上説明したように、本発明のマクロファージイメージング剤は、生体内のマクロファージに関する情報を容易に画像化させることができ、しかも生体への負荷が小さいことから、マクロファージが関与する疾患の画像診断などに好適に用いられることが期待されるものである。

【実施例】

【0091】

以下に実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。各略語の意味は、以下のとおりである。

【0092】

＜略語の説明＞
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＴＲ：繰返し時間
ＴＥ：エコー時間
ＦＯＶ：撮像視野
ＮＡ：平均数

【0093】

製造例１
硝酸ガドリニウム六水和物４５０ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）およびガラス被覆撹拌子を平底反応管内に入れた後、当該平底反応管の上部に冷却器を取り付けた。平底反応管内の減圧と平底反応管内へのアルゴンガスの導入とからなる一連の操作を３回繰り返すことによって平底反応管内の雰囲気をアルゴンガス雰囲気に置換した。アルゴンガスを平底反応管内に供給しながら平底反応管内の硝酸ガドリニウム六水和物にオレイン酸５６３ｍｇ（２ｍｍｏｌ）および１－オクタデセン２５００ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）を添加することによって混合物を得た。得られた混合物をアルゴンガス雰囲気中で撹拌しながら１１０℃で２時間加熱することによって黄色溶液を得た。得られた黄色溶液を撹拌しながら３２０℃で１４時間加熱することによって茶褐色溶液を得た。得られた茶褐色溶液を撹拌しながら室温まで冷却した後、５０ｍＬ遠沈管へ移した。この茶褐色溶液にメタノール２０ｍＬとアセトン２０ｍＬとを添加して遠沈管の内容物を激しく振盪させた後、得られた混合物を１８７３×ｇで３０分間遠心して薄茶色上清と黒色沈殿物とに分離させた。得られた黒色沈殿物にメタノール２０ｍＬとアセトン２０ｍＬとを添加し、得られた混合物を振盪させた後、１８７３×ｇで３０分間遠心する一連の操作を６回繰り返すことによって黒色沈殿物を洗浄した。洗浄後の黒色沈殿物をヘキサン１０ｍＬに分散させることによって酸化ガドリニウム含有粒子分散液を得た。

【0094】

得られた酸化ガドリニウム含有粒子分散液を希釈用溶媒〔組成：１Ｍ硝酸および１質量％ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル〕で１０００倍に希釈して測定試料を得た。偏光ゼーマン原子吸光光度計〔（株）日立ハイテクノロジーズ製、商品名：Ｚ－２７１０〕を用いて測定試料における酸化ガドリニウム含有粒子の濃度を測定し、酸化ガドリニウム含有粒子分散液における酸化ガドリニウム含有粒子の濃度を求めた。その結果、分散液における酸化ガドリニウム含有粒子の濃度は、約１００ｍＭであった。

【0095】

透過型電子顕微鏡〔日本電子（株）製、商品名：ＪＥＭ－１４００〕を用いて加速電圧１００ｋＶで測定試料に含まれる酸化ガドリニウム含有粒子を観察した。製造例１で得られた酸化ガドリニウム含有粒子を観察した結果を図１に示す。図中、スケールバーは２００ｎｍを示す。

【0096】

図１に示された結果から、酸化ガドリニウム含有粒子の直径は、約２０ｎｍであることがわかる。

【0097】

製造例２
ラウリル硫酸ナトリウム２ｍｇと過硫酸ナトリウム４ｍｇとを水１ｍＬに溶解させ、混合水溶液を得た。

【0098】

実施例１
製造例１で得られた酸化ガドリニウム含有粒子分散液（ガドリニウム濃度：１６ｍＭ）１７００μＬにヘプタン１００μＬを添加した後、７５℃で１時間加熱して濃縮することによって濃縮物を得た。濃縮物にメチルメタクリレート９０ｍｇおよびトリメチロールプロパントリメタクリレート１０ｍｇを添加することによってモノマー成分と酸化ガドリニウム含有粒子とを含有するモノマー成分含有混合物を得た。得られたモノマー成分含有混合物に製造例２で得られた混合水溶液１０００ｍｇを添加し、混合水溶液を得た。超音波ホモジナイザー〔（株）日本精機製作所製、商品名：ＵＳ３００Ｔ〕を用いて氷冷下に１５０Ｗで１分間超音波を混合水溶液に照射した後、超音波の照射を１分間停止する一連の操作を５回繰り返すことによってエマルションを得た。エマルションを７０℃で４時間加熱することによってエマルションに含まれるモノマー成分を重合させた。得られた反応液を透析膜〔スペクトラムラボラトリーズ製、商品名：Ｆｌｏａｔ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｇ２、ＭＷＣＯ：１０００ｋＤａ〕で２日間透析して反応液中に残留する不純物を除くことによって複合粒子分散液Ａを得た。

【0099】

（体積平均粒子径の測定）
複合粒子分散液Ａを超純水に懸濁させ、測定試料を得た。動的光散乱式粒径分布測定装置〔日機装（株）製、商品名：ナノトラックＵＰＡ－ＥＸ１５０〕を用いて２５℃で測定試料に含まれる複合粒子の粒子径分布を測定した。

【0100】

実施例１で得られた複合粒子の粒子径分布を図２に示す。図２に示された結果から、複合粒子の体積平均粒子径は、１６５ｎｍであることがわかる。

【0101】

（酸化ガドリニウムの含有率の測定）
実施例１で得られた複合粒子における酸化ガドリニウムの含有率を、差動型示差熱天秤〔（株）日立ハイテクサイエンス製、商品名：ＳＴＡ７３００〕を用いて５００℃で測定した。その結果、実施例１で得られた複合粒子における酸化ガドリニウムの含有率は９．６質量％であった。

【0102】

（複合粒子の観察）
複合粒子分散液Ａを希釈用溶媒〔組成：１Ｍ硝酸および１質量％ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）〕で１０００倍に希釈して測定試料を得た。透過型電子顕微鏡〔日本電子（株）製、商品名：ＪＥＭ－１４００〕を用いて加速電圧１００ｋＶで測定試料に含まれる複合粒子を観察した。実施例１で得られた複合粒子を観察した結果を図３（Ａ）、図３（Ａ）の破線部を拡大して観察した結果を図３（Ｂ）に示す。図３（Ａ）中、スケールバーは２００ｎｍを示す。図３（Ｂ）中、スケールバーは、２μｍを示す。

【0103】

図３に示された結果から、実施例１で得られた複合粒子は、酸化ガドリニウム粒子の表面上にメチルメタクリレートとトリメチロールプロパントリメタクリレートとの重合体を含有する被膜を有することがわかる。

【0104】

実施例２
実施例１において、メチルメタクリレート９０ｍｇおよびトリメチロールプロパントリメタクリレート１０ｍｇを用いる代わりにスチレン９０ｍｇおよびジビニルベンゼン１０ｍｇを用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行ない、複合粒子分散液Ｂを得た。

【0105】

（体積平均粒子径の測定）
実施例１において、複合粒子分散液Ａを用いる代わりに複合粒子分散液Ｂを用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行ない、実施例２で得られた複合粒子の体積平均粒子径を求めた。実施例２で得られた複合粒子の粒子径分布を図４に示す。図４に示された結果から、実施例２で得られた複合粒子の体積平均粒子径は、１７５ｎｍであることがわかる。

【0106】

（酸化ガドリニウムの含有率の測定）
実施例１において、複合粒子分散液Ａを用いる代わりに複合粒子分散液Ｂを用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行ない、実施例２で得られた複合粒子における酸化ガドリニウムの含有率を求めた。その結果、複合粒子Ｂにおける酸化ガドリニウム含有率は、８．３質量％であった。

【0107】

試験例１
実施例１で得られた複合粒子の濃度が０．０６２５ｍＭ、０．１２５ｍＭ、０．２５ｍＭ、０．５ｍＭまたは１ｍＭとなるように実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを生理食塩水に添加し、被験試料（実験番号１）を得た。前記において、生理食塩水を用いる代わりに１０体積％ＦＢＳ含有生理食塩水を用いたことを除き、生理食塩水を用いたときと同様の操作を行ない、血清含有被験試料（実験番号２）を得た。

【0108】

小動物用ＭＲＩ装置〔ブルカー・バイオスピン（Ｂｒｕｋｅｒ ＢｉｏＳｐｉｎ）社製、商品名：ＢｉｏＳｐｅｃ ７０／２０ ＵＳＲ〕を用いて被験試料の存在下でＴ１強調画像を撮影した。Ｔ１強調画像は、スピンエコー法にしたがい、ＴＲ＝２００ｍｓ、ＴＥ＝６．２２ｍｓ、ＦＯＶ＝４０×４０ｍｍ²、マトリックスサイズ＝２５６×２５６、ＮＡ＝２、スライス厚＝２ｍｍの条件で外部磁場強度７Ｔ、室温にて撮影した。

【0109】

試験例１における被験試料の存在下でのＴ１強調画像を図５（Ａ）、血清含有被験試料の存在下でのＴ１強調画像を図５（Ｂ）に示す。

【0110】

図５（Ａ）に示された結果から、実施例１で得られた複合粒子の存在下（複合粒子濃度が０．０６２５～１ｍＭ）でのＴ１強調画像におけるＭＲ信号強度は、実施例１で得られた複合粒子の非存在下（複合粒子濃度が０ｍＭ）でのＴ１強調画像におけるＭＲ信号強度と対比して顕著に高いことがわかる。また、図５（Ｂ）に示された結果から、生体内と同様に血清が存在している場合であっても、実施例１で得られた複合粒子の存在下（複合粒子濃度が０．０６２５～１ｍＭ）でのＴ１強調画像におけるＭＲ信号強度は、実施例１で得られた複合粒子の非存在下（複合粒子濃度が０ｍＭ）でのＴ１強調画像におけるＭＲ信号強度と対比して顕著に高いことがわかる。したがって、実施例１で得られた複合粒子は、陽性ＭＲＩ造影剤として用いることができることがわかる。

【0111】

なお、実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを用いる代わりに実施例２で得られた複合粒子分散液Ｂを用いたときにも、実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを用いたときと同様の傾向が見られる。したがって、実施例２で得られた複合粒子は、陽性ＭＲＩ造影剤として用いることができることがわかる。

【0112】

以上の結果から、本願発明の複合粒子は、陽性ＭＲＩ造影剤として用いることができることがわかる。

【0113】

比較例１
２５０ｍＬ容ポリプロピレン製ボトルに臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム５００ｍｇ、非イオン性界面活性剤〔シグマ・アルドリッチ社製、商品名：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－１２７〕４０００ｍｇ、エタノール３３．７ｍＬ、２８体積％アンモニア水１０．６６ｍＬおよび超純水９５．９６ｍＬを添加した。このポリプロピレン製ボトルに蓋をした後、当該ボトルを２５℃で８時間９００～１０００ｍｉｎ^-1の回転数で攪拌することによってミセル溶液を得た。

【0114】

オルトケイ酸テトラエチル１６９０ｍｇをミセル溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で１分間高速攪拌した。撹拌後の混合物を２５℃で２４時間静置し、白色溶液８ｍＬを得た。得られた白色溶液を４００００×ｇで２０分間遠心して粒子を沈降させた。

【0115】

沈降させた粒子を超純水８ｍＬに分散させて粒子分散液を得た。粒子分散液を１０分間攪拌した後、当該粒子分散液に２０分間超音波を照射した。超音波照射後の粒子分散液を４００００×ｇで２０分間遠心して粒子を沈降させた。その後、前記と同様にして、超純水への粒子の分散、粒子分散液の撹拌、粒子分散液への超音波の照射および粒子の沈降からなる一連の操作を２回行なった。

【0116】

その後、前記において、超純水を用いる代わりにエタノールを用いたことを除き、超純水を用いたときと同様の操作を１回行なうことによって粒子を洗浄した。洗浄後の粒子を６５℃に保たれたオーブン内に入れ、１２時間乾燥させた。得られた乾燥物をメノウ乳鉢で破砕することによって粉末を得た。得られた粉末を電気炉内に入れ、５５０℃で５時間焼成することによってシリカナノ粒子１８０ｍｇを得た。

【0117】

（体積平均粒子径の測定）
シリカナノ粒子を超純水に懸濁させ、測定試料を得た。動的光散乱式粒径分布測定装置〔マルバーン社製、商品名：ゼータサイザーナノＺＳ〕を用いて２５℃で測定試料に含まれる粒子の粒子径分布を測定した。その結果、シリカナノ粒子の体積平均粒子径は、０．１４３μｍであった。

【0118】

試験例２
ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンをＦＢＳの濃度が１０体積％、ペニシリンの濃度が１００ユニット／ｍＬ、ストレプトマイシンの濃度が１００μｇ／ｍＬとなるようにダルベッコ改変イーグル培地に添加し、細胞増殖培地を得た。

【0119】

マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４をその濃度が１．０×１０⁵細胞／ｍＬとなるように細胞増殖培地に分散させ、細胞分散液を得た。細胞分散液３ｍＬを６ウェルプレートのウェルに播種した。播種後の細胞を５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃で２４時間培養することによって細胞を６ウェルプレートのウェルに接着させた。

【0120】

実施例１で得られた複合粒子をその濃度が０．１ｍｇ／ｍＬになるよう前記ウェル内に入れた。前記ウェル内の複合粒子を５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳ１ｍＬで３回洗浄した。洗浄後の細胞に０．２５体積％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ溶液５００μＬを添加した後、得られた混合液を５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃で５分間静置して細胞を浮遊させ、細胞浮遊液を得た。細胞浮遊液に細胞増殖培地５００μＬを添加して細胞懸濁液を得た。この細胞懸濁液を１５ｍＬ容スピッツ管に回収した。細胞懸濁液が入ったスピッツ管を１０００ｒｐｍ（１８０×ｇ）で５分間遠心して上清を除去することによって複合粒子を含む細胞塊を得た。

【0121】

得られた細胞塊に細胞溶解液〔組成：２質量％トリトン Ｘ－１００および２Ｎ硝酸〕１５０μＬを添加した後、ピペッティングにより細胞を溶解させ、試料を得た。偏光ゼーマン原子吸光光度計を用いて試料に含まれるガドリニウムの量を測定することによって１細胞あたりの複合粒子の取り込み量を求めた。その結果、１細胞あたりの複合粒子の取り込み量は、６３２～１２０１ｐｇであることがわかった。

【0122】

また、前記において、実施例１で得られた複合粒子を用いる代わりに比較例１で得られたシリカナノ粒子を用いたことを除き、実施例１で得られた複合粒子を用いたときと同様の操作を行ない、１細胞あたりのシリカナノ粒子の量を求めた。その結果、１細胞あたりのシリカナノ粒子の取り込み量は、４．７２～８．６３ｐｇであることがわかった。

【0123】

これらの結果から、マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４における実施例１で得られた複合粒子の取り込み量は、マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４における比較例１で得られたシリカナノ粒子の取り込み量と対比して多いことがわかる。したがって、実施例１で得られた複合粒子は、シリカナノ粒子と対比してマクロファージに取り込まれやすいことがわかる。

【0124】

なお、前記において、実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを用いる代わりに実施例２で得られた複合粒子分散液Ｂを用いたことを除き、実施例１で得られた複合粒子を用いたときと同様の操作を行なった場合、実施例２で得られた複合粒子Ｂは、実施例１で得られた複合粒子と同様にマクロファージに取り込まれやすい傾向が見られる。

【0125】

また、前記において、実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを用いる代わりに酸化ガドリニウム粒子の表面がゼラチンまたはデキストランで被覆された複合粒子を用いたことを除き、実施例１で得られた複合粒子を用いたときと同様の操作を行なった場合、当該複合粒子は、比較例１で得られたシリカナノ粒子と同様にマクロファージに取り込まれにくい傾向が見られる。

【0126】

これらの結果から、本発明の複合粒子は、マクロファージに効率よく取り込まれることがわかる。

【0127】

製造例３
塩化ナトリウムおよびコラーゲン架橋酵素阻害剤（３－アミノプロピオニトリル）を塩化ナトリウムの濃度が８質量％およびコラーゲン架橋酵素阻害剤の濃度が０．１２質量％となるようにラット用飼料〔オリエンタル酵母工業 実験動物用飼料ＭＦ〕に混合し特殊飼料を得た。

【0128】

製造例４
７週齢の雄性スプラグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットの左総頸動脈を全身麻酔下に切断した。当該左総頸動脈を端側吻合術によって右総頸動脈に吻合し、新規の血管分岐部を作製した。術後のラットを製造例３で得られた特殊飼料で１カ月間飼育した。

【0129】

飼育後にラットの血管分岐部を観察した。その結果、血管分岐部に動脈瘤が形成されていることがわかった。また、７Ｔ－ＭＲＩ装置〔ブルカーバイオスピン（Ｂｒｕｋｅｒ ＢｉｏＳｐｉｎ）製、商品名：動物用７Ｔ ＭＲＩ／ＭＲＳシステム ＢｉｏＳｐｅｃ ７０／２０ ＵＳＲ〕で血管分岐部を撮影し、観察した。その結果、血管分岐部に嚢状の動脈瘤が形成されていることがわかった。

【0130】

動脈瘤病変を切離し、組織標本を作製した。抗ＣＤ６８抗体および抗α－ＳＭＡ抗体を用いて動脈瘤病変の組織標本の免疫組織化学染色を行なった。なお、ＣＤ６８はマクロファージのマーカーであり、α－ＳＭＡは平滑筋細胞のマーカーである。

【0131】

製造例４における抗ＣＤ６８抗体を用いた正常頸動脈の免疫組織化学染色の結果を図６（Ａ）、抗α－ＳＭＡ抗体を用いた正常頸動脈の免疫組織化学染色の結果を図６（Ｂ）、抗ＣＤ６８抗体を用いた動脈瘤病変の免疫組織化学染色の結果を図６（Ｃ）、抗α－ＳＭＡ抗体を用いた動脈瘤病変の免疫組織化学染色の結果を図６（Ｄ）に示す。図中、スケールバーは、５０μｍを示す。

【0132】

図６に示された結果から、動脈瘤病変〔図６（Ｃ）〕に含まれるＣＤ６８陽性細胞であるマクロファージの数は、正常頸動脈〔図６（Ａ）〕に含まれるマクロファージの数と対比して多いことがわかる。これらの結果から、動脈瘤病変では、マクロファージが浸潤していることがわかる。また、動脈瘤病変〔図６（Ｄ）〕に含まれるα－ＳＭＡ陽性細胞である平滑筋細胞は、正常頸動脈〔図６（Ｂ）〕に含まれる平滑筋細胞の数と対比して少ないことがわかる。これらの結果から、動脈瘤病変では、血管の平滑筋細胞層が菲薄化していることがわかる。マクロファージの浸潤および平滑筋細胞層の菲薄化は、脳動脈瘤病変の特徴的所見である。したがって、製造例４で得られたラットは、動脈瘤モデル動物として用いることができることがわかる。

【0133】

実施例３
実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを複合粒子の濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように生理食塩水に添加してマクロファージイメージング剤を得た。

【0134】

試験例３
実施例３で得られたマクロファージイメージング剤２００μＬを６週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの尾静脈に投与した。小動物用ＭＲＩ装置〔ブルカー・バイオスピン（Ｂｒｕｋｅｒ ＢｉｏＳｐｉｎ）社製、商品名：ＢｉｏＳｐｅｃ ７０／２０ ＵＳＲ〕を用いてマウスの全身のＴ１強調画像を経時的に撮影し、Ｔ１強調画像におけるＴ１コントラストの経時的変化を観察した。Ｔ１強調画像は、スピンエコー法にしたがい、ＴＲ＝２００ｍｓ、ＴＥ＝６．２２ｍｓ、ＦＯＶ＝８０×４０ｍｍ²、マトリックスサイズ＝２５６×１２８、ＮＡ＝２、スライス厚＝２ｍｍ、スライス枚数＝９枚および脂肪抑制の条件で外部磁場強度７Ｔ、室温にて撮影した。

【0135】

試験例３において、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のマウスのＴ１強調画像を図７（Ａ）、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から３０分間経過後のマウスのＴ１強調画像を図７（Ｂ）、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から１時間経過後のマウスのＴ１強調画像を図７（Ｃ）、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２時間経過後のマウスのＴ１強調画像を図７（Ｄ）、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のマウスのＴ１強調画像を図７（Ｅ）に示す。図中、矢印は、マウスの肝臓を示す。

【0136】

図７に示された結果から、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から１時間経過後、２時間後および２４時間後のＴ１強調画像では、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のＴ１強調画像と対比して肝臓におけるＴ１コントラストが上昇していることがわかる。したがって、実施例３で得られたマクロファージイメージング剤は、生体内においても陽性ＭＲ信号を発することから、陽性ＭＲＩ造影剤として用いることができることがわかる。

【0137】

実施例４
実施例１で得られた複合粒子分散液Ａを複合粒子の濃度が４０ｍｇ／ｍＬとなるように生理食塩水に添加してマクロファージイメージング剤を得た。

【0138】

試験例４
実施例４で得られたマクロファージイメージング剤１ｍＬを製造例４で得られたラット（動脈瘤モデル動物）の尾静脈に投与した。小動物用ＭＲＩ装置〔ブルカー・バイオスピン（Ｂｒｕｋｅｒ ＢｉｏＳｐｉｎ）社製、商品名：ＢｉｏＳｐｅｃ ７０／２０ ＵＳＲ〕を用いてラットの頸動脈のネック側およびドーム側の各Ｔ１強調画像を経時的に撮影し、当該Ｔ１強調画像におけるＴ１コントラストの経時的変化を観察した。Ｔ１強調画像は、ブラック－ブラッド法を併用した勾配エコー法にしたがい、ＴＲ＝７５０ｍｓ、ＴＥ＝３．２ｍｓ、フリップアングル＝９０°、ＦＯＶ＝３２×３２ｍｍ²、マトリックスサイズ＝１２８×１２８、ＮＡ＝４、スライス厚＝０．５ｍｍ、スライス枚数＝５枚、ブラック－ブラッド反転時間＝７００ｍｓおよびブラック－ブラッドスラブ厚＝５．５ｍｍの条件で外部磁場強度７Ｔ、室温にて撮影した。

【0139】

試験例４において、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のラットの頸動脈のネック側のＴ１強調画像を図８（Ａ）、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のラットの頸動脈のネック側のＴ１強調画像を図８（Ｂ）、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のラットの頸動脈のドーム側のＴ１強調画像を図８（Ｃ）、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のラットの頸動脈のドーム側のＴ１強調画像を図８（Ｄ）に示す。図中、スケールバーは、１ｍｍを示す。

【0140】

図８に示された結果から、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与終了時から２４時間経過後のＴ１強調画像〔図８（Ｂ）および（Ｄ）〕では、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤の投与前のＴ１強調画像〔図８（Ａ）および（Ｃ）〕と対比して頸動脈瘤周辺におけるＴ１コントラストが上昇していることがわかる。これらの結果から、実施例４で得られたマクロファージイメージング剤は、動脈瘤に集積したマクロファージに取り込まれることから、動脈瘤を視覚化させることができることがわかる。

【0141】

試験例５
ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンをＦＢＳの濃度が１０体積％、ペニシリンの濃度が１００ユニット／ｍＬ、ストレプトマイシンの濃度が１００μｇ／ｍＬとなるようにダルベッコ改変イーグル培地に添加し、細胞増殖培地を得た。

【0142】

マウス由来線維芽細胞株Ｌ９２９をその濃度が３．２×１０⁴／ｍＬとなるように細胞増殖培地に分散させ、細胞分散液を得た。細胞分散液１００μＬを９６ウェルプレートのウェルに播種した。播種後の細胞を５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃で２４時間培養することによって細胞を９６ウェルプレートのウェルに接着させた。

【0143】

実施例１で得られた複合粒子分散体Ａを複合粒子の濃度が０．００００１～０．１ｍｇ／ｍＬとなるように超純水１０μＬに分散させ、複合粒子分散液を得た。得られた複合粒子分散液１０μＬを、前記ウェル内の細胞を含有する試料に添加した後、前記ウェル内の複合粒子と細胞 とを含有する試料を５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベートされた試料をＰＢＳ０．１ｍＬで３回洗浄した。洗浄後の試料にＣＣＫ－８溶液〔（株）同仁化学研究所製、商品名：セルカウンティングキット－８〕１０μＬおよび細胞増殖培地１００μＬを添加した後、５体積％二酸化炭素雰囲気中にて３７℃で１．５時間インキュベートすることによって呈色反応を行なった。インキュベートされた試料を含む９６ウェルプレートをマイクロプレートリーダー〔バイオ－ラッド・ラボラトリーズ・インコーポラーティッド（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）社製、商品名：ｉＭａｒｋ〕に供し、各ウェル内のインキュベートされた試料の４５０ｎｍにおける吸光度（以下、「吸光度Ａ」という）を測定した（参照波長：６００ｎｍ）。

【0144】

また、前記において、複合粒子分散液１０μＬを用いる代わりに超純水１０μＬを用いたことを除き、複合粒子分散液１０μＬを用いたときと同様の操作を行ない、各ウェル内のインキュベートされた試料の４５０ｎｍにおける吸光度（以下、「吸光度Ｂ」という）を測定した（参照波長：６００ｎｍ）。

【0145】

吸光度Ａを吸光度Ｂで除することにより、細胞生存率を算出した。

【0146】

さらに、前記において、複合粒子分散液１０μＬを用いる代わりに臨床用造影剤〔バイエル薬品（株）製、商品名：マグネビスト（登録商標）〕１０μＬを用いたことを除き、複合粒子分散液１０μＬを用いたときと同様の操作を行ない、各ウェル内のインキュベートされた試料の４５０ｎｍにおける吸光度（以下、「吸光度Ｃ」という）を測定した（参照波長：６００ｎｍ）。

【0147】

吸光度Ｃを吸光度Ｂで除することにより、細胞生存率を算出した。

【0148】

前記で得られたインキュベートされた試料における複合粒子または臨床用造影剤の濃度と細胞生存率との関係を図９に示す。図９において、白抜き丸印は、インキュベートされた試料における複合粒子の濃度と細胞生存率との関係、白抜き三角印は、インキュベートされた試料における臨床用造影剤の濃度と細胞生存率との関係を示す。

【0149】

図９に示された結果から、実施例１で得られた複合粒子を用いたときの細胞生存率は、臨床用造影剤〔バイエル薬品（株）製、商品名：マグネビスト（登録商標）〕を用いたときの細胞生存率と同程度であることがわかる。この結果から、実施例１で得られた複合粒子は、生体への負荷が小さいことがわかる。

【0150】

なお、前記において、実施例１で得られた複合粒子を用いる代わりに実施例２で得られた複合粒子を用いたことを除き、実施例１で得られた複合粒子を用いたときと同様の操作を行なった場合、実施例２で得られた複合粒子Ｂは、実施例１で得られた複合粒子と同様に生体への負荷が小さい傾向が見られる。

【0151】

以上説明したように、本発明の複合粒子によれば、マクロファージを視覚化することができる。また、本発明の複合粒子によれば、マクロファージを視覚化することによって動脈瘤を視覚化することができる。さらに、本発明の複合粒子によれば、生体への負荷を小さくすることができる。したがって、本発明の複合粒子および当該複合粒子を含有するマクロファージイメージング剤は、マクロファージが関与する疾患の画像診断、当該疾患に対する薬物治療の効果判定などの用途に好適に用いられることが期待されるものである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】