知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-09
(45)【発行日】2024-04-17
(54)【発明の名称】抗微生物特性を有する化合物
(51)【国際特許分類】
C07K 7/06 20060101AFI20240410BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240410BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20240410BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240410BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240410BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240410BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240410BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20240410BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240410BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240410BHJP
C12N 15/31 20060101ALN20240410BHJP
C12P 21/02 20060101ALN20240410BHJP
C12P 1/04 20060101ALN20240410BHJP
【ＦＩ】
C07K7/06
A61P31/04 ZNA
A61K38/08
A61P43/00 121
A61K45/00
A61P17/00
A61P1/04
A61P1/00
A61P29/00
A61P37/06
C12N15/31
C12P21/02 A
C12P1/04 A
【請求項の数】
21
(21)【出願番号】P 2021502945
(86)(22)【出願日】2019-05-17
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-09
(86)【国際出願番号】 US2019032806
(87)【国際公開番号】W WO2020018173
(87)【国際公開日】2020-01-23
【審査請求日】2022-05-12
(31)【優先権主張番号】62/700,746
(32)【優先日】2018-07-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/789,313
(32)【優先日】2019-01-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】592233750
【氏名又は名称】ノースイースタン ユニバーシティ
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ルイス，キム
(72)【発明者】
【氏名】今井 優
(72)【発明者】
【氏名】ファーブル－ゴーダル，クェンティン
(72)【発明者】
【氏名】飯西 輝
(72)【発明者】
【氏名】メイヤー，キルステン
【審査官】斉藤 貴子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１８－５００２８３（ＪＰ，Ａ）
【文献】YE, Y. et al.，Unveiling the Biosynthetic Pathway of the Ribosomally Synthesized and Post-translationally Modified Peptide Ustiloxin B in Filamentous Fungi，Angewandte Chemie International Edition，2016年，Vol. 55, Iss. 28，P. 8072-8075，https://doi.org/10.1002/anie.201602611
【文献】HUDSON, G. A. et al.，RiPP antibiotics: biosynthesis and engineering potential，Current Opinion in Microbiology，2018年，Vol. 45，P. 61-69，https://doi.org/10.1016/j.mib.2018.02.010
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
Ｃ１２Ｎ
Ａ６１Ｐ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（ＩＩ）：【化1】
の化合物および／またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項2】
請求項１に記載の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩の治療有効量を含む、医薬組成物。
【請求項3】
少なくとも１つの薬剤的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
局所投与、全身投与、非経口投与、皮下投与、経皮投与、直腸内投与、経口投与、腟内投与、鼻腔内投与、気管支内投与、眼内投与、耳内投与、静脈内投与、筋肉内投与、または腹腔内投与の形態である、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含む、請求項２～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組成物の製造方法であって、前記式（ＩＩ）の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩は、培養液中で前記化合物を産生する能力を有する微生物を培養することによって得られる、
製造方法。
【請求項7】
前記微生物は、フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９である、請求項６に記載の製造方法。
【請求項8】
グラム陰性菌を原因とする動物における感染症を治療するための、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
対象における細菌感染症または疾病の治療、寛解または予防のための医薬品の製造における、請求項１に記載の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩の使用。
【請求項10】
前記細菌感染症の原因となる細菌は、グラム陰性菌を含む、請求項９に記載の使用。
【請求項11】
前記グラム陰性菌は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、カンジダタス・リベリバクター（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、シトロバクター・ジベルサス（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｄｉｖｅｒｓｕｓ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、シゲラ・ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）、ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｄｉｔｉｓ）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ベイロネラ・パルブラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ）、アクチノバチルス・アクチノミセタムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ）、モルガネラ・モルガニー（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ ｍｏｒｇａｎｉｉ）、エドワージエラ・タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、またはエンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）である、請求項１０に記載の使用。
【請求項12】
前記細菌感染症の原因となる細菌は、多剤耐性細菌を含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項13】
前記細菌感染症の原因となる細菌は、ポリミキシン耐性変異体細菌を含む、請求項９～１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項14】
前記細菌感染症の原因となる細菌は、カルバペネム耐性細菌、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）または多剤耐性ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）を含む、請求項９～１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項15】
前記細菌感染症は、呼吸器感染症、皮膚もしくは皮膚組織感染症、尿路感染症、腹腔内感染症、血液感染症、または胃腸感染症である、請求項９～１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項16】
前記疾病は、皮膚炎症性疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、およびセリアック病から成る群から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項17】
前記対象は、哺乳類である、請求項９～１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項18】
前記対象は、ヒトである、請求項１６に記載の使用。
【請求項19】
前記対象は、非ヒトである、請求項１６に記載の使用。
【請求項20】
前記細菌感染症の原因となる細菌は、抗菌薬に対する感受性がある細菌または多剤耐性細菌を含む、請求項９～１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項21】
前記医薬品は、局所投与、全身投与、非経口投与、皮下投与、経皮投与、直腸内投与、経口投与、腟内投与、鼻腔内投与、気管支内投与、眼内投与、耳内投与、静脈内投与、筋肉内投与、または腹腔内投与を含むステップによって投与される、請求項９～１９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、２０１８年７月１９日に出願された米国特許仮出願第６２／７００，７４６号および２０１９年１月７日に出願された米国特許仮出願第６２／７８９，３１３号の優先権を主張し、これらは参照することにより本明細書に組み入れられるものとする。
【0002】
本開示は、新規抗微生物化合物およびその類似体、前記化合物を含む医薬組成物ならびに前記化合物および医薬組成物の治療のための使用に関する。本発明は、米国国立衛生研究所により認められた助成金番号Ｐ０１－ＡＩ１１８６８７の下で政府支援を受けて成された。政府は本発明における特定の権利を有する。
【背景技術】
【0003】
特定のグラム陰性菌は、感受性の高い個体における、肺炎、尿路感染症、創傷感染症、耳感染症、眼感染症、腹腔内感染症、口腔細菌異常増殖および敗血症などの重篤な合併症および感染症の原因となり得る。診療における重篤な細菌感染症の治療は、抗生物質耐性によって複雑となり得る。近年、アミノグリコシド、セファロスポリンおよび更にカルバペネムなどの広域スペクトル抗菌薬を含む多種類の抗菌薬に対する耐性があるグラム陰性菌による感染症が増えてきた。この警戒すべき傾向は、グラム陰性菌、特に、多剤耐性グラム陰性菌に対して効果的な新規抗菌薬を特定する必要性を強調する。
【0004】
ポリミキシンは、グラム陽性菌バシラス・ポリミキサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ）によって産生される抗菌薬の分類である。１９４０年代後期に最初に同定されたポリミキシン、特に、ポリミキシンＢおよびポリミキシンＥ（コリスチン）は、グラム陰性感染症の治療において、かつて使用された。しかしながら、これらの抗菌薬は、腎毒性などの副作用を示した。結果として、治療におけるこれらの使用は、最後の手段の治療に限定された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明は、特にグラム陰性病原体に対する優れた抗菌活性を示す、新規化合物およびその類似体に関する。新規化合物およびその類似体を含む医薬組成物は、皮膚および皮膚組織感染症、呼吸器感染症、敗血症、菌血症、および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含む様々な感染性疾患の治療または予防に有用である。本発明の実施形態は、細菌感染症の治療または予防にも関する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
１つの態様では、本発明は、次式（ＩＩ）：
【0007】
【化1】
【0008】
および／またはその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体（鏡像異性体を含む）、互変異性体、もしくは水和物、ならびに式（ＩＩ）のアナログ（以後、まとめて「式（ＩＩ）化合物」と呼ぶ）により表される新規化合物を含む、該化合物から本質的に成るまたは該化合物から成る。本発明はまた、式（ＩＩ）化合物、式（ＩＩ）化合物の使用、および１つ以上の式（ＩＩ）化合物を用いた細菌感染症の治療方法または予防方法を含む、またはこれらから本質的に成る医薬組成物を含む。
【0009】
別の態様では、本発明は、次式（Ｉ）：
【0010】
【化2】
【0011】
（式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、各々独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－アルキル、－ＮＨ２、－ＮＯ２、－ＣＦ３、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ－（アルキル）２、－ＮＨＣ（Ｏ）－アルキルおよびアリールから成る群から選択され、前記アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリールは各々置換されていてもよく；
Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素、直鎖または分岐鎖Ｃ１～Ｃ５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２～Ｃ６アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２～Ｃ６アルキニルから成る
群から選択され；前記アルキル、アルケニルおよびアルキニルは各々置換されていてもよく；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９およびＲ２０は、各々独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－アルキル、－ＮＨ２、－ＮＯ２、－ＣＦ３、－ＮＨ－アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－アルキルから成る群から選択され；前記アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ハロアルキルは各々置換されていてもよく；
Ａは、結合または－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、０～１０の整数であり；
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ２－、－Ｃ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（（Ｏ）アルキル）－である）
および／またはその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体（鏡像異性体を含む）、互変異性体、もしくは水和物、ならびに類似体式（Ｉ）（以後、まとめて「式（Ｉ）化合物」と呼ぶ）、により表される新規化合物を含む、該化合物から本質的に成るまたは該化合物から成る。本発明はまた、式（Ｉ）化合物、式（Ｉ）化合物の使用、および１つ以上の式（Ｉ）化合物を用いた細菌感染症の治療方法または予防方法を含む、またはこれらから本質的に成る医薬組成物を含む。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、各々独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－アルキル、－ＮＨ２、－ＮＯ２、－ＣＦ３、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ－（アルキル）２、－ＮＨＣ（Ｏ）－アルキルおよびアリールから成る群から選択され、前記アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリールは各々置換されていてもよく；
Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素、直鎖または分岐鎖Ｃ１～Ｃ５アルキル、直鎖または分岐鎖Ｃ２～Ｃ６アルケニル、直鎖または分岐鎖Ｃ２～Ｃ６アルキニルから成る
群から選択され；前記アルキル、アルケニルおよびアルキニルは各々置換されていてもよく；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９およびＲ２０は、各々独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－アルキル、－ＮＨ２、－ＮＯ２、－ＣＦ３、－ＮＨ－アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－アルキルから成る群から選択され；前記アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ハロアルキルは各々置換されていてもよく；
Ａは、結合または－（ＣＨ２）ｎ－であり、ｎは、０～１０の整数であり；
Ｘは、－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ２－、－Ｃ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル、－Ｃ（（Ｏ）アルキル）－である）
および／またはその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体（鏡像異性体を含む）、互変異性体、もしくは水和物、ならびに類似体式（Ｉ）（以後、まとめて「式（Ｉ）化合物」と呼ぶ）、により表される新規化合物を含む、該化合物から本質的に成るまたは該化合物から成る。本発明はまた、式（Ｉ）化合物、式（Ｉ）化合物の使用、および１つ以上の式（Ｉ）化合物を用いた細菌感染症の治療方法または予防方法を含む、またはこれらから本質的に成る医薬組成物を含む。
【0012】
式（Ｉ）化合物、そのプロドラッグ、薬剤的に許容可能な塩、鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、およびラセミ体は、様々なグラム陰性菌に対する有利な抗菌活性を示し、ヒトおよび他の動物における様々な細菌により誘発された様々な感染性疾患の治療または予防に有用である。
【0013】
式（Ｉ）の化合物は、次式（Ｉａ）：
【0014】
【化3】
【0015】
（式中：
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、上記に定義されている通りである）
および／またはその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体（鏡像異性体を含む）、互変異性体、もしくは水和物、ならびに類似体式（Ｉａ）（以後、まとめて「式（Ｉａ）化合物」と呼ぶ）を含む。本発明はまた、式（Ｉａ）化合物、式（Ｉａ）化合物の使用、および１つ以上の式（Ｉａ）化合物を用いた細菌感染症の治療方法または予防方法を含む、ま
たはこれらから本質的に成る医薬組成物を含む。
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、上記に定義されている通りである）
および／またはその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体（鏡像異性体を含む）、互変異性体、もしくは水和物、ならびに類似体式（Ｉａ）（以後、まとめて「式（Ｉａ）化合物」と呼ぶ）を含む。本発明はまた、式（Ｉａ）化合物、式（Ｉａ）化合物の使用、および１つ以上の式（Ｉａ）化合物を用いた細菌感染症の治療方法または予防方法を含む、ま
たはこれらから本質的に成る医薬組成物を含む。
【0016】
本発明の別の態様は、グラム陰性菌を原因とする動物における感染症の治療のための医薬組成物に関する。様々な実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩の治療有効量、ならびに薬剤的に許容可能な担体、界面活性剤、固体希釈剤、および液体希釈剤から成る群から選択される１つ以上の追加の化合物を含む。式（Ｉ）、（Ｉａ）または（ＩＩ）化合物は、必要に応じて、水和物などの薬剤的に許容可能な溶媒和物の形態で存在してよい。
【0017】
概して、本明細書で使用されるとき、用語「実質的に」は、±１０％、場合によっては、±５％を意味する。加えて、本明細書全体を通して、「一例（ｏｎｅ ｅｘａｍｐｌｅ）」、「例（ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ）」、「１つの実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、または「実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」への言及は、実施例との関連で記載された特定の特徴、構造、または特性が、本技術の少なくとも１つの実施例に含まれることを意味する。したがって、本明細書全体を通して様々な場所に記載された言い回し「一例では（ｉｎ ｏｎｅ ｅｘａｍｐｌｅ）」、「例では（ｉｎ ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ）」、「１つの実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、または「実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」は、必ずしも全てが同じ実施例を参照しているわけではない。さらに、特定の特徴、構造、ルーチン、ステップまたは特性を、本技術の１つ以上の実施例においていずれかの適切な方法で組み合わせてもよい。本明細書で提供される見出しは便宜のみを目的とし、クレームされた技術の範囲または意味を限定も解釈もする意図はない。
【図面の簡単な説明】
【0018】
【図1】式（ＩＩ）の化合物を２５４ｎｍ、保持時間１２．２５分においてモニターした、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）のクロマトグラムを図示する。
【図2】式（ＩＩ）に記載の化合物の化学構造を図示する。
【図3】大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）に対する式（ＩＩ）の化合物のインビトロ活性の結果を示すグラフである。式（ＩＩ）の化合物は、殺菌作用を示した。大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）を、指数増殖期初期まで生育し、式（ＩＩ）の化合物の２×ＭＩＣで処置した。２０時間のインキュベーション後、生細胞を計数するために大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）培養液を蒔いた。
【図4】ダロバクチンＡ生合成遺伝子クラスターおよび配列比較を図表で示す。
【図5A】図５Ａは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症モデルにおけるダロバクチンＡのインビボ有効性の結果を示すグラフである。グラフは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症を有するマウスの生存率を示す。ダロバクチンＡは、２．５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）において、ＡＴＣＣ２５９２２またはポリミキシン耐性臨床分離菌ＡＲ３５０大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症のマウスの両方を治癒することができた（治療群あたりｎ＝３）。治療は、感染の１時間後であった。１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）においてダロバクチンＡは、生存時間を延長し、５時間において血液中のＣＦＵ負荷量を著しく低減した。ゲンタマイシンを、ポジティブコントロールとして使用し、２０ｍｇ／ｋｇで与えた。
【図5B】図５Ｂは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症を有するマウスの血液中のコロニー形成単位／ミリリットル（ＣＦＵ／ｍＬ）の結果を示すグラフである。ダロバクチンＡは、２．５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）において、ＡＴＣＣ２５９２２またはポリミキシン耐性臨床分離菌ＡＲ３５０大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症のマウスの両方を治癒することができた（治療群あたりｎ＝３）。治療は、感染の１時間後であった。１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）においてダロバクチンＡは、生存時間を延長し、５時間において血液中のＣＦＵ負荷量を著しく低減した。ゲンタマイシンを、ポジティブコントロールとして使用し、２０ｍｇ／ｋｇで与えた。
【図5C】図５Ｃは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）敗血症モデルにおけるダロバクチンＡのインビボ有効性の結果を示すグラフである。緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｐ７－ＰＡ０１（ポリミキシン耐性の研究室単離菌）敗血症に対して５０ｍｇ／ｋｇにおいてダロバクチンＡを試験し、マウスを完全治癒（群あたりｎ＝３）することができた。ゲンタマイシンを、ポジティブコントロールとして使用し、２０ｍｇ／ｋｇで与えた。
【図5D】図５Ｄは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）好中球減少大腿感染症モデルにおけるダロバクチンＡのインビボ有効性の結果を示すグラフである。大腿モデルでは、感染の２時間後における５０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）ダロバクチンＡは、２４時間後に未治療コントロールと比較して大腿におけるＣＦＵ負荷量を１０分の１に低減し、２時間後、８時間後、および１４時間後に３回与えられた２５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）は、２マウスにおける検出限界未満を含み、ＣＦＵ負荷量を１００分の１に低減した。ゲンタマイシンを、ポジティブコントロールとして使用し、２０ｍｇ／ｋｇで与えた。
【図6】サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）のマウス胃腸感染症における式（ＩＩ）の化合物のインビボ有効性の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0019】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「本発明の化合物」は、まとめて、式（Ｉ）、（Ｉａ）および（ＩＩ）ならびにその薬剤的に許容可能な塩ならびに本明細書に示されている特定の化合物を意味する。本明細書において、本発明の化合物を、化学構造および／または化学名により同定する。化合物を化学構造および化学名により表し、化学構造および化学名が矛盾する場合、化学構造が化合物の同定を決定する。本発明の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を含んでよく、したがって、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体）、鏡像異性体、またはジアステレオマーなどの立体異性体として存在しうる。本発明によれば、本明細書に示されている化学構造、したがって、本発明の化合物は、対応する化合物の鏡像異性体および立体異性体の全て、すなわち、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオマーとして純粋）ならびに鏡像異性体および立体異性体混合物の両方を包含する。キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩錯体として化合物を結晶化、またはキラル溶媒中で化合物を結晶化などの周知の方法によって、鏡像異性体および立体異性体混合物を、これらの成分の鏡像異性体または立体異性体に分離することができる。鏡像異性体および立体異性体を、周知の不斉合成法によって、立体異性的または鏡像異性的に純粋な中間体、試薬、および触媒から得ることもできる。本発明の化合物は、重要なグラム陰性病原体に対して有効である。これらの化合物は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）およびシゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）に対して優れた活性を有する。さらに、本発明の化合物は、グラム陽性病原体に対する活性を有さず、グラム陰性腸内常在菌、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）に対して不活性である。後述するように、この選択性は、薬理学的に有益である。トリプトファンおよびリジン間のＣ－Ｃ結合を含むその通常と異なる構造に基づいて、本発明の化合物は、抗菌薬の新規分類に属する。事実、グラム陰性菌に対して作用する化合物の最後の新規分類は、５０年前に発見された。
【0020】
グラム陰性病原体に対する選択的活性は極めてまれであり、事実、かかる特性を有する公知化合物はたった１つ－細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）と結合することにより作用するポリミキシンしかない。本明細書による化合物はＬＰＳと結合せず、重要なことに、ポリミキシン耐性変異体に対して活性である。ポリミキシンは、多剤耐性（ＭＤＲ）グラム陰性菌
に対する最後の手段の抗菌薬である。
に対する最後の手段の抗菌薬である。
【0021】
本発明の化合物は、非常に低い耐性を有し、検出可能な細胞毒性を有しない。これらを使用して、皮膚および皮膚組織感染症、呼吸器感染症、敗血症および菌血症などのグラム陰性病原体の局所および全身感染症を治療してよい。
【0022】
本発明の化合物の別の重要な応用は、大腸の腸内細菌の病原性共生生物に対するこれらの選択的活性から得られる。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者において、腸内細菌科の叢、詳細には、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）叢は、炎症サイクルを煽る。広域スペクトル抗菌薬は、共生細菌叢を害するので、効き目が限られる。本発明の化合物は、グラム陽性菌に対して不活性であり、胃腸管の主要なグラム陰性共生成物であるバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）に対して不活性である。本発明の化合物を使用して、ＩＢＤ患者の腸内細菌叢を排除し得る。腸内細菌の有病率は、腸内菌共生バランス失調した腸の一般的特徴でもあり、本発明の化合物の１つ以上で治療する。
【0023】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アルキル」は、置換または非置換、飽和、直鎖または分岐鎖炭化水素鎖ラジカルを意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、２－メチル－１－プロピル、２－メチル－２－プロピル、２－メチル－１－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、２，２－ジメチル－１－プロピル、２－メチル－１－ペンチル、３－メチル－１－ペンチル、４－メチル－１－ペンチル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、２，２－ジメチル－１－ブチル、３，３－ジメチル－１－ブチル、２－エチル－１－ブチル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、シクロブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、およびシクロヘキシルなどのＣ１～１５直鎖、分岐鎖または環式アルキルならびにヘプチル、オクチル、ノニルおよびデシルなどの長鎖アルキル基が挙げられるが、これらに限定されない。アルキルは、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。
【0024】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アルコキシ」または「アルキルオキシ」は、－Ｏ－アルキルを意味し、アルキルは本明細書で定義されている通りである。アルコキシは、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。好ましくは、アルキルオキシのアルキル鎖は、１～５炭素原子長であり、本明細書では、例えば、「Ｃ１～５アルコキシ」と呼ぶ。１つの実施形態では、アルキルオキシのアルキル鎖は、１～１０炭素原子長であり、本明細書では、例えば、「Ｃ１～１０アルコキシ」と呼ぶ。
【0025】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アルケン」または「アルケニル基」は、その中に１つ以上の二重結合を有する一価直鎖、分岐鎖または環式炭化水素鎖を意味する。アルケンの二重結合は、別の不飽和基と非共役であっても共役していてもよい。アルケンは、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。適切なアルケンとしては、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタンジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２－エチルヘキセニル、２－プロピル－２－ブテニル、４－（２－メチル－３－ブテン）ペンテニルなどのＣ２～８アルケニル基が挙げられるが、これらに限定されない。アルケンは、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。
【0026】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する不飽和直鎖または分岐鎖炭化水素を意味する。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル
、メチルプロピニル、４－メチル－１－ブチニル、４－プロピル－２－ペンチニル、および４－ブチル－２－ヘキシニルが挙げられるが、これらに限定されない。
、メチルプロピニル、４－メチル－１－ブチニル、４－プロピル－２－ペンチニル、および４－ブチル－２－ヘキシニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【0027】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アリール」または「芳香環」は、当技術分野において周知である単環式または多環式共役環構造を意味する。適切なアリール基または芳香環の例としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、およびナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。アリール基は、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。１つの実施形態では、アリール基は単環式環であり、環は６炭素原子を含み、本明細書では「Ｃ６アリール」と呼ぶ。
【0028】
「置換アリール」としては、ハロ、アルキル、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アルコキシ、ハロアルコキシ（例えば、ジフルオロメトキシ）、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルケニル、アミノカルボニルアリール、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、アミノは１もしくは２置換基（置換してもよいアルキル、アリールまたは本明細書に記載されている他の置換基のいずれかである）を含む置換アミノ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノ、もしくはアリールスルホンアミノカルボニルなどの１つ以上の官能基、および／または本明細書に記載されているアルキル置換基のいずれかによって置換されていてもよいアリール基が挙げられる。
【0029】
本明細書で使用されるとき、単独または別の基の一部として、用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素または硫黄などの１、２、３または４個のヘテロ原子を含む５～７員芳香環ならびにアリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル環（例えば、ベンゾチオフェニル、インドリル）と縮合されたかかる環を表し、可能なＮオキシドを含む。「置換ヘテロアリール」としては、「置換アルキル」および「置換シクロアルキル」の定義で上記に含まれる置換基など、１～４つの置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基が挙げられる。置換ヘテロアリールとしては、例えば、キノリン、イソキノリン、インドール、イソインドール、カルバゾール、アクリジン、ベンゾイミダゾール、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、ベンゾチオフェン、フェナントロリン、プリンなどを含む縮合ヘテロアリール基も挙げられる。
【0030】
さらに、本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロシクロ」、「複素環」、または「複素環式環」は、飽和であってもよく不飽和であってもよく、炭素原子およびＮ、ＯまたはＳから選択される１～４ヘテロ原子から成り、窒素および硫黄ヘテロ原子が酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は四級化されていてもよい、非置換または置換安定５～７員単環式環構造を表す。複素環式環は、安定構造生成をもたらすいずれかのヘテロ原子または炭素原子において結合されていてもよい。かかる複素環式基の例としては、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソピペラジニル、オキソピペリジニル、オキソピロリジニル、オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾ
リル、チアジアゾリル、テトラヒドロピラニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、およびオキサジアゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。
リル、チアジアゾリル、テトラヒドロピラニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、およびオキサジアゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【0031】
本明細書で使用されるとき、用語「置換されていてもよい」は、例えば、アルキル、アリール、ヘテロアリールを表す化学部分は、非置換であってもよく、これらに限定されないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールアルキル、アリール、複素環、ヘテロアリール、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、カルバルコキシ、カルボキサミド、モノアルキルアミノスルフィニル、ジアルキルアミノスルフィニル、モノアルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、ヒドロキシスルホニルオキシ、アルコキシスルホニルオキシ、アルキルスルホニルオキシ、ヒドロキシスルホニル、アルコキシスルホニル、アルキルスルホニルアルキル、モノアルキルアミノスルホニルアルキル、ジアルキルアミノスルホニルアルキル、モノアルキルアミノスルフィニルアルキル、ジアルキルアミノスルフィニルアルキルなどを含む１つ以上の基によって置換されていてもよい。式Ｉの化学部分は、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールアルキル、アリール、複素環またはヘテロアリールであってよい。例えば、置換されていてもよいアルキルは、プロピルおよび２－クロロプロピルの両方を含んでよい。加えて、「置換されていてもよい」は、命名された置換基または置換基が単純に単一の置換基よりむしろ複数の置換基を有する場合の実施形態も含む。例えば、置換されていてもよいアリールは、フェニルおよび３－メチル－５－エチル－６－クロロフェニルの両方を含んでよい。
【0032】
用語「シクロアルキル」としては、単環式アルキル、二環式アルキルおよび三環式アルキルを含む１～３環を含み、環を形成する合計３～２０個の炭素、または環を形成し、かつ、アリールに関して記載されているように１もしくは２個の芳香族環と縮合していてもよい約３～１０個の炭素を含む飽和または部分的に不飽和（１つ以上の二重結合を含む）環式炭化水素基が挙げられる。
【0033】
「置換シクロアルキル」としては、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アリール、置換アリール、アリールオキシ、シクロアルキル、アルキルアミド、アルカノイルアミノ、オキソ、アシル、アリールカルボニルアミノ、アミノ、ニトロ、シアノ、チオールおよび／もしくはアルキルチオなどの１つ以上の置換基で置換されていてもよいシクロアルキル基、ならびに／または「置換アルキル」の定義に含まれる置換基のいずれかが挙げられる。
【0034】
用語「シクロアルケニル」は、少なくとも１つの二重結合を含む非芳香族単環式または二環式炭素環式環を含む。シクロアルケニル基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0035】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「アリールオキシ」は、アリールが本明細書で定義されている通りである－Ｏ－アリール基を意味する。アリールオキシ基は、非置換であってもよく、１つまたは２つの適切な置換基で置換されていてもよい。好ましくは、アリールオキシ基は単環式環であり、環は６炭素原子を含み、本明細書では「Ｃ６アリールオキシ」と呼ぶ。
【0036】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「エーテル」は、式アルキル－Ｏ－アルキル、アルキル－Ｏ－アルキニル、アルキル－Ｏ－アリール、アルケニル－Ｏ－アルケニル、アルケニル－Ｏ－アルキニル、アルケニル－Ｏ－アリール、アルキニル－Ｏ－アルキニル、アルキニル－Ｏ－アリール、アリール－Ｏ－アリールの基を意味し
、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」および「アリール」は本明細書で定義されている。
、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」および「アリール」は本明細書で定義されている。
【0037】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「カルボキシ」は、式：－ＣＯＯＨのラジカルを意味する。
【0038】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。同様に、用語「ハロ」および「Ｈａｌ」の意味は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを包含する。
【0039】
本明細書で使用されるとき、特に別段の指定がない限り、用語「置換」および「適切な置換基」は、本発明の化合物またはこれらの製造に有用な中間体の合成または医薬有用性を無効にしない基を意味する。置換基または適切な置換基の例としては、Ｃ１～１０アルキル；Ｃ１～１０アルケニル；Ｃ１～１０アルキニル；Ｃ６アリール；Ｃ３－５ヘテロアリール；Ｃ３－７シクロアルキル；Ｃ１～１０アルコキシ；Ｃ６アリールオキシ；－ＣＮ；－ＯＨ；ＳＨ；オキソ；ハロ；－ＮＯ２；－ＣＯ２Ｈ；－ＮＨ２；－ＮＨＯＨ；－ＮＨ（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｎ（Ｃ１～１０アルキル）２；－ＮＨ（Ｃ６アリール）；－ＮＨＯ（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｎ（ＯＣ１～１０アルキル）２；－ＮＨ（ＯＣ６アリール）；－Ｓ（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｓ（Ｃ６アリール）；（＝Ｏ）；－Ｎ（Ｃ６アリール）２；－ＣＨＯ；－Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｃ（Ｏ）（Ｃ６アリール）；－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１～１０アルキル）；および－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ６アリール）、－Ｃ（Ｓ）（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｃ（Ｓ）（Ｃ６アリール）；－ＳＯ２（Ｃ１～１０アルキル）；－ＳＯ２（Ｃ６アリール）、－ＳＯ（Ｃ１～１０アルキル）；－ＳＯ（Ｃ６アリール）、および－ＳＯ３Ｈ、－Ｃ（Ｓ）Ｏ（Ｃ１～１０アルキル）；－Ｃ（Ｓ）ＯＣ６アリールが挙げられるが、これらに限定されない。特定の例証となる実施形態では、置換基は、これらに限定されないが、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＯＨ、アジド、－ＳＨ、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、アルキルオキシ、アルキルチオール、アミノ、ヒドロキシルアミノ、Ｎ－アルキルアミノ、－Ｎ，Ｎ－ジアルキルアミノ、－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ、アシル、アルキルオキシカルボニル、スルホニル、ウレア、－ＮＯ２、およびトリアゾリルなどの１つまたは１つより多い適切な基であり得る。当業者は、本発明の化合物の安定性ならびに薬剤的活性および合成活性に基づいて適切な置換基を容易に選択することができる。
【0040】
本明細書で使用されるとき、言い回し「薬剤的に許容可能な塩」としては、本組成物中に使用される化合物（本発明の化合物を含む）において存在してよい酸性または塩基性基の塩が挙げられるが、これらに限定されない。本来塩基性である本組成物に含まれる化合物は、様々な無機酸および有機酸と広範囲の塩を生成することができる。かかる塩基性化合物の薬剤的に許容可能な酸付加塩を製造するために使用してよい酸は、無毒性酸付加塩を生成するもの、すなわち、これらに限定されないが、硫酸、クエン酸、マレイン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレンビス（２－ヒドロキシ－３－ナフトエ酸）塩）を含む薬剤的に許容可能なアニオンを含む塩である。アミノ部分を含む本組成物中に含まれる化合物は、上記酸に加えて、様々なアミノ酸と薬剤的に許容可能な塩を生成し得る。本来酸性である本組成物に含まれる化合物は、様々な薬剤的に許容可能なカチオンと塩基性塩を生成す
ることができる。かかる塩の例としては、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、特に、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウムおよび鉄塩が挙げられる。
ることができる。かかる塩の例としては、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、特に、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウムおよび鉄塩が挙げられる。
【0041】
本明細書で使用されるとき、用語「薬剤的に許容可能なプロドラッグ」は、インビトロまたはインビボの生物学的条件下、加水分解、酸化、あるいは他の反応をして、化合物を得ることができる化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例としては、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバメート、生加水分解性カルボネート、生加水分解性ウレイドおよび生加水分解性ホスフェート類似体などの生加水分解性部分を含む化合物が挙げられるが、これらに限定されない。プロドラッグの他の例としては、オリゴヌクレオチド、ペプチド、脂質、脂肪族および芳香族基、またはＮＯ、ＮＯ２、ＯＮＯ、およびＯＮＯ２部分を含む化合物が挙げられるがこれらに限定されない。プロドラッグは、通常、周知の方法を使用して製造することができる。
【0042】
１つの態様では、本明細書において、式（Ｉ）、式（Ｉａ）もしくは式（ＩＩ）の化合物の少なくとも１つ、または本明細書に記載されている特定の化合物の少なくとも１つの治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、該対象の細菌感染症の治療方法、寛解方法、または予防方法を提供する。化合物の投与は、皮下、経皮、直腸、腟内、鼻腔内、気管支内、眼内、または耳内など局所的であってよい。あるいは、投与は、経口投与など全身的であってよい。さらに他の代替では、投与は、非経口、静脈内、筋肉内、または腹腔内であってよい。
【0043】
本明細書で使用されるとき、用語「投与」は、化合物の組合せを投与することも含むことができる。したがって、投与は、化合物または化合物の組合せを生物に投与する形態であってよく、その結果、生物の循環系は、化合物または化合物の組合せを、これらに限定されないが、細胞もしくは複数の細胞、シナプス接合部および循環を含む標的領域へ送達する。投与は、これに限定されないが、化合物の組合せを直接注射するなど、化合物または化合物の組合せを、臓器、組織、領域、範囲、細胞もしくは細胞群と直接的に接触させることも意味し得る。
【0044】
選択された実施形態では、化合物の組合せを投与することができ、したがって、個々の化合物は互いと共に同時投与されると言うことができる。本明細書で使用されるとき、「同時投与する」は、少なくとも２つの化合物の各々を、生物活性または効果のそれぞれの期間が重複する時間枠の間に投与することを意味する。したがって、用語同時投与するは、個々の化合物の逐次ならびに同時（ｃｏｅｘｔｅｎｓｉｖｅ）投与を含み、化合物の少なくとも１つは本発明の化合物である。したがって、本発明の方法のいくつかにより化合物の組合せを「投与すること」は、本発明の個々の化合物の逐次ならびに同時（ｃｏｅｘｔｅｎｓｉｖｅ）投与を含む。同様に、言い回し「化合物の組合せ」は、個々の化合物を同時投与することを意味し、言い回し「化合物の組合せ」は、化合物を必ず同時に（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓｌｙ）または同時に（ｃｏｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ）投与しなければならないことを意味しない。加えて、個々の化合物の投与経路は、同じである必要はない。
【0045】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」および「治療」は、疾病もしくは感染症の進行を遅延させるまたは疾病もしくは感染症から回復させることを表す。疾病を治療することは、疾病もしくは感染症の症状を治療することおよび／または症状を低減することを含む。用語「予防すること」は、疾病の遅延すること、または疾病、感染症もしくはこれらの症状の発症の遅延することを表す。疾病または感染症を予防することは、疾病、感染症もしくはこれらの症状の発症を止めることを含み得る。
【0046】
本明細書で使用されるとき、用語「対象」は、動物、脊椎動物、哺乳類、げっ歯目（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス）、イヌ科（ｃａｎｉｎｅ）（例えば、イヌ）、ネコ科（ｆｅｌｉｎｅ）（例えば、ネコ）、ウマ科（ｅｑｕｉｎｅ）（例えば、ウマ）、霊長類、サル（ｓｉｍｉａｎ）（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであり得る。
【0047】
本明細書で使用されるとき、用語「投与単位」は、対象のための単位投与として適切なカプセル剤または錠剤などの物理的に分離した単位を表す。各単位は、所望の治療効果を得る所望の薬物動態プロファイルを得ると発見されたまたは思われる式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物の所定量を含む。投与単位は、少なくとも１つの薬剤的に許容可能な担体、塩、賦形剤またはこれらの組合せと共に式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物から成る。用語「用量」または「投与量」は、一度で個体が摂取するまたは投与される有効成分量を表す。
【0048】
用語「治療有効量」は、対象における所望の生物学的効果を得るのに充分な量を表す。したがって、化合物の治療有効量は、疾病もしくは感染症に罹患しているもしくは罹患しやすい対象に投与される場合、この疾病もしくは感染症を治療もしくは予防、および／またはこの疾病もしくは感染症の発症もしくは進行を遅延、および／またはこの疾病もしくは感染症の１つ以上の症状を軽減するのに充分である量であってよい。本明細書において、「薬剤的に許容可能な担体」または「薬剤的に許容可能な賦形剤」は、医薬品の製剤で使用される崩壊剤、結合剤、および潤滑剤などの非ＡＰＩ（ＡＰＩは活性医薬成分を表す）物質を表す。これらは、概して、ヒトへの投与に対して安全である。
【0049】
用語「薬剤的に許容可能な」は、連邦もしくは州政府規制機関により承認されている、または米国薬局方もしくは動物、より特にヒトにおける使用のための他の一般的に承認された薬局方にリストされていることを意味する。用語「媒体」は、本発明の化合物を共に投与する希釈剤、アジュバント、賦形剤、または担体を表す。かかる薬剤媒体は、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油および同様のものなど、石油、動物、植物由来または合成起源のものを含む、水、油などの液体であり得る。薬剤媒体は、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンのり、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、ウエアなどであり得る。加えて、助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤および着色料を使用してよい。１つの実施形態では、患者に投与される場合、本発明の化合物および薬剤的に許容可能な媒体の組合せは滅菌されている。本発明の化合物の組合せが静脈内投与される場合、水および／または油は１つの媒体である。生理食塩水ならびにブドウ糖およびグリセロール水溶液を、特に注射可能な液剤用の液体媒体として使用してもよい。適切な薬剤媒体としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールおよび同様のものなどの賦形剤も挙げられる。必要に応じて、化合物の本組合せは、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含むこともできる。
【0050】
概して、本発明の個々の化合物の各々を、いずれかの簡便な経路、例えば、経口、点滴もしくはボーラス注入、または上皮もしくは皮膚粘膜ライニング（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜、他）によって投与してもよく、別の生物活性薬と共に投与してよい。投与は、全身的または局所的であり得る。様々な送達系は公知であり、例えば、リポソームへのカプセル化、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、カプセルなどがあり、本発明の化合物の少なくとも１つを投与するために使用することができる。個々の化合物の投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、鼻腔内、脳内、腟内、経皮、直腸内、肺内または局所、詳細には、耳、鼻、眼、もしくは
皮膚が挙げられるが、これらに限定されない。投与の好ましい方法は、開業医の裁量に任されており、部分的に、内科的疾患の部位に依存するだろう。
皮膚が挙げられるが、これらに限定されない。投与の好ましい方法は、開業医の裁量に任されており、部分的に、内科的疾患の部位に依存するだろう。
【0051】
特定の実施形態では、組合せの１つ以上の化合物を、治療を必要とする領域に局所投与することが望ましいかもしれない。例えば、限定するわけではないが、外科手術中の局所注入により、局所塗布、例えば、外科手術後創傷被覆材と共に、注射により、カテーテルを用いて、坐薬を用いて、またはシラスチック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜などの膜を含む多孔質、非多孔質、もしくはゼラチン材、もしくは繊維から成るインプラントによって、これを達成し得る。
【0052】
例えば、吸入器もしくはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤を含む製剤、またはフルオロカーボンもしくは合成肺サーファクタント中にパーフュージョンすることによって、肺内投与を使用することもできる。特定の実施形態では、本発明の化合物を、従来の結合剤およびトリグリセリドなどの媒体と共に坐薬として製剤することができる。
【0053】
別の実施形態では、本発明の化合物を、媒体、特に、リポソームで送達することができる（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３；Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７－３２７参照）。
【0054】
更に別の実施形態では、本発明の方法で使用される化合物の少なくとも１つを、放出制御系で送達することができる。１つの実施形態では、ポンプを使用してよい（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７ Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，
Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１参照；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１ Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照）。更に別の実施形態では、放出制御系を、臓器、例えば、肝臓の近くに配置することができ、したがって、僅かな全身投与量しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３によるレビューで考察されている他の放出制御系を使用してよい。
Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１参照；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１ Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照）。更に別の実施形態では、放出制御系を、臓器、例えば、肝臓の近くに配置することができ、したがって、僅かな全身投与量しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３によるレビューで考察されている他の放出制御系を使用してよい。
【0055】
投与しようとする個々の化合物の各々は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、ペレット剤、カプセル剤、液剤を含むカプセル剤、散剤、徐放性製剤、坐薬、乳剤、エアロゾル剤、スプレー剤、懸濁剤、または使用に適切な他の剤形の形態をとることができる。１つの実施形態では、薬剤的に許容可能な媒体は、カプセル剤である（例えば、米国特許第５，６９８，１５５号参照）。適切な薬剤媒体の一例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔ ｅｄ．，Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ （２００６）、参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。
ｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔ ｅｄ．，Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ （２００６）、参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。
【0056】
通常、本発明の個々の化合物を静脈内投与する場合、化合物は、滅菌等張性緩衝水溶液となる。必要な場合、本発明の個々の化合物は、安定剤を含むこともできる。静脈内投与用の本発明の個々の化合物は、必要に応じて、注射部位の痛みを和らげるためのリドカインなどの局所麻酔薬を含んでよい。
【0057】
１つの実施形態では、個々の化合物を、単位剤形で一緒にまたは別々のいずれかで供給する。とにかく、例えば、活性薬の量を示しているアンプルなどの密封容器中の凍結乾燥散剤または無水濃縮物として、化合物を供給してよい。本発明の化合物または化合物の組合せを点滴により投与しようとする場合、例えば、滅菌医薬品グレードまたは生理食塩水を含む点滴ボトルを用いて分注することができる。本発明の化合物または化合物の組合せを注射により投与する場合、成分を投与前に混合し得るように、滅菌注射用水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【0058】
経口送達用組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性もしくは油性懸濁剤、顆粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与組成物は、１つ以上の必要に応じて使用する薬剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料；ペパーミント、ウインターグリーン油、またはサクランボなどの香料；着色料；および保存料を含み、薬剤的に美味な製剤を提供してよい。経口用途の即効型製剤としては、無毒性薬剤的に許容可能な賦形剤を含む混合物中に有効成分を含む錠剤またはカプセル剤が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤または結合剤（例えば、ショ糖、ソルビトール、糖、マンニトール、結晶セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）；顆粒化剤および崩壊剤（例えば、結晶セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）；結合剤（例えば、ショ糖、グルコース、マンニトール、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、結晶セルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）；ならびに潤滑剤、流動促進剤、および抗接着剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、またはタルク）であってよい。他の薬剤的に許容可能な賦形剤は、例えば、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａｒｔｈｕｒ Ｈ．Ｋｉｂｂｅ， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣに見られるように、着色料、香料、可塑剤、保水剤、緩衝剤、および同様のものであり得る。
【0059】
さらに、錠剤または丸剤の形態では、組成物を被覆して胃腸管内での崩壊および吸収を遅延させて、長時間にわたって持続的活性を提供してもよい。浸透圧的に活性駆動する化合物の周囲の選択的透過膜も、経口投与される本発明の化合物に適している。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周囲の環境からの体液を、駆動化合物により吸収され、膨潤して薬剤または薬剤組成物を開口部を通って置き換わる。これらの送達プラットフォームは、即効型製剤のスパイクプロファイルとは対照的に殆ど０次送達プロファイルを提供することができる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレ
ートなどの時間遅延材料を使用してもよい。経口用組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、他などの標準的媒体を含むことができる。かかる媒体は、好ましくは、医薬品グレードである。
ートなどの時間遅延材料を使用してもよい。経口用組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、他などの標準的媒体を含むことができる。かかる媒体は、好ましくは、医薬品グレードである。
【0060】
経口送達には、活性化合物を、結合剤（例えば、ゼラチン、セルロース、トラガカントゴム）、賦形剤（例えば、デンプン、ラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸塩、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、およびトウモロコシデンプン）、および甘味料または香料（例えば、グルコース、ショ糖、サッカリン、サリチル酸メチル、およびペパーミント）など、薬剤的に許容可能な担体を含む製剤に組み込むことができる。密閉ゼラチンカプセルまたは圧縮錠剤の形態で、製剤を経口送達することができる。カプセル剤および錠剤を当技術分野において公知の様々なコーティングで被覆して、カプセル剤および錠剤の香り、味、色、および形状を修飾することもできる。担体は固体もしくは液体、または両方であってよく、少なくとも１つの活性化合物の約０．０５重量％～約９５重量％を含んでよい活性化合物として本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物と共に製剤してよい。適切な経口製剤は、懸濁剤、シロップ剤、チューインガム剤、ウエハー剤、エリキシル剤などの形態であってもよい。
【0061】
必要に応じて、特定の形態の香り、味、色、および形状を修飾するための従来の薬剤が含まれていてもよい。加えて、嚥下することができない患者の経腸栄養管による便利な投与のため、活性化合物を、オリーブ油、トウモロコシ油およびベニバナ油などの許容可能な親油性植物油媒体に溶解することができる。
【0062】
活性化合物を、液剤もしくは懸濁剤の形態で、または使用前に液剤もしくは懸濁剤の形態に転換することができる凍結乾燥剤形で非経口的に投与することもできる。かかる製剤では、滅菌水および生理食塩水緩衝剤などの希釈剤または薬剤的に許容可能な担体を使用することができる。他の従来の溶媒、ｐＨ緩衝剤、安定剤、抗菌薬、界面活性剤、および酸化防止剤を全て含むことができる。例えば、有用な成分としては、塩化ナトリウム、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸緩衝剤、グリセリン、デキストロース、不揮発性油、メチルパラベン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、重硫酸ナトリウム、ベンジルアルコール、アスコルビン酸などが挙げられる。非経口製剤を、バイアルおよびアンプルなどのいずれもの従来の容器中で貯蔵することができる。
【0063】
局所投与の経路としては、鼻腔、口腔、粘膜、直腸、または腟塗布が挙げられる。局所投与のため、活性化合物を、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、ペースト剤、懸濁剤、ドロップ剤およびエアロゾル剤に製剤することができる。したがって、１つ以上の増粘剤、保水剤、および安定剤を製剤に含めることができる。かかる薬剤の例としては、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キサンタンガム、ワセリン、ミツロウ、または鉱油、ラノリン、スクワレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。局所投与の特定の形態は、経皮パッチ剤による送達である。経皮パッチ剤の製剤方法は、例えば、Ｂｒｏｗｎ， ｅｔ ａｌ．（１９８８） Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．３９：２２１－２２９（参照により本明細書に組み入れられる）に開示されている。使用してよい担体および賦形剤としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール類、およびこれらの２つ以上の組合せが挙げられる。活性化合物は、概して、組成物の約０．１％～約８０％（重量／重量）の濃度、例えば、約０．２％～５０％で存在する。
【0064】
活性化合物の徐放性のための皮下移植も、適切な投与経路であり得る。これは、皮下腔、例えば、前腹壁真下に適切な製剤中の活性化合物を移植するための外科手術手順を必要とする。例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｓｙｃｈ．４５：２４２－２４７参照。ハイドロゲルを、活性化合物の徐放性のための担体として使
用することができる。ハイドロゲルは、概して、当技術分野において公知である。ハイドロゲルは、通常、ネットワーク中に高分子量生体適合性ポリマーを架橋することによって製造し、水中で膨潤してゲル様物質を生成する。好ましくは、ハイドロゲルは、生分解性または生体吸収性である。本発明の目的のため、ポリエチレングリコール、コラーゲン、またはグリコール酸／Ｌ－乳酸共重合体から製造されたハイドロゲルは有用であり得る。例えば、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，７３：１７１８－１７２０参照。
用することができる。ハイドロゲルは、概して、当技術分野において公知である。ハイドロゲルは、通常、ネットワーク中に高分子量生体適合性ポリマーを架橋することによって製造し、水中で膨潤してゲル様物質を生成する。好ましくは、ハイドロゲルは、生分解性または生体吸収性である。本発明の目的のため、ポリエチレングリコール、コラーゲン、またはグリコール酸／Ｌ－乳酸共重合体から製造されたハイドロゲルは有用であり得る。例えば、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，７３：１７１８－１７２０参照。
【0065】
投与しようとする各個々の化合物の量は、症状の性質または重症度に依存し、標準的臨床秘術によって決定することができる。加えて、インビトロまたはインビボアッセイを、必要に応じて使用して、組合せの成分の各々についての最適投薬量範囲を決定する助けとしてよい。使用しようとする各成分の正確な用量は、疾病または障害の投与経路および重篤度にも依存し、開業医は各患者の環境に基づいてこれらの用量を決定することができる。しかしながら、概して、式（Ｉ）化合物、式（Ｉａ）化合物、および式（ＩＩ）化合物の各々の経口投与のための適切な投与量範囲は、通常、体重キログラム当たり本発明の化合物約０．００１ｍｇ～１０００ｍｇである。本発明の特定の実施形態では、各成分の経口用量は、体重キログラム当たり０．０１ｍｇ～１００ｍｇ、より特に、体重キログラム当たり０．１ｍｇ～５０ｍｇ、より特に、体重キログラム当たり０．５ｍｇ～２０ｍｇ、なお更により特に体重キログラム当たり１ｍｇ～１０ｍｇである。１つの実施形態では、式（Ｉ）化合物、式（Ｉａ）化合物、および式（ＩＩ）化合物の各々の経口投与量は、少なくとも約１、５、１０、２５、５０、１００、２００、３００、４００、または５００ｍｇ／日であり、３～１５日間に６００、７００、８００、９００、１０００ｍｇ／日までとなる。式（Ｉ）化合物、式（Ｉａ）化合物、および式（ＩＩ）化合物の各々を、毎日（例えば、毎日１回、２回、３回または４回）またはそれほど頻繁ではなく（例えば、隔日に１回、または週に１回もしくは２回）与えてもよい。本明細書に記載されている投与量は、投与される個々の量を表す。１つより多い化合物を投与する場合、好ましい投与量は、投与される本発明の化合物の総量に相当する。本明細書に記載されている経口用組成物は、約１０重量％～約９５重量％の有効成分を含んでよい。
【0066】
概して、個々の成分の静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための適切な投与量範囲は、体重キログラム当たり０．００１ｍｇ～１０００ｍｇ、体重キログラム当たり０．０１ｍｇ～１００ｍｇ、体重キログラム当たり０．１ｍｇ～５０ｍｇ、および体重キログラム当たり１ｍｇ～１０ｍｇである。概して、個々の成分の鼻腔内投与のための適切な投与量範囲は、通常、約０．０１ｐｇ／体重ｋｇ～１ｍｇ／体重ｋｇである。概して、坐薬は、通常、体重キログラム当たり０．０１ｍｇ～５０ｍｇの化合物を含み、０．５重量％～１０重量％の範囲の有効成分を含み得る。有効投与量は、インビトロまたは動物モデル試験システムから誘導される用量反応曲線から外挿してよい。かかる動物モデルおよびシステムは、当技術分野において周知である。
【0067】
本発明は、本発明の方法の実行において投与しようとする１つ以上の化合物を充填した１つ以上の容器を備える医薬パックまたはキットにも関する。必要に応じてかかる容器に添付されているものは、医薬品または生物製品の製造者、使用または販売を規制する政府機関により指定された書式の通知であり得、この通知は、ヒト投与に関する製造者、使用または販売の機関による承認を反映する。特定の実施形態では、キットは、１つより多い化合物を収容する。
【0068】
本明細書に記載されている化合物は、感受性のある細菌または多剤耐性、ポリミキシン耐性変異体、カルバペネム耐性細菌、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）または多剤耐性ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）による感染症の治療に有用である。
ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）による感染症の治療に有用である。
【0069】
グラム陰性菌の例としては、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、カンジダタス・リベリバクター（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、シトロバクター・ジベルサス（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｄｉｖｅｒｓｕｓ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、シゲラ・ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）、ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｄｉｔｉｓ）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ベイロネラ・パルブラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ）、アクチノバチルス・アクチノミセタムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ）、モルガネラ・モルガニー（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ ｍｏｒｇａｎｉｉ）、エドワージエラ・タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、またはヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、および多数の他のものが挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性菌の他の注目すべき群としては、シアノバクテリア、スピロヘータ、緑色硫黄細菌および緑色非硫黄細菌が挙げられる。
【0070】
医学的に関連するグラム陰性球菌としては、性行為感染症（ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ））、髄膜炎（ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、および呼吸器症状（モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ））の原因となる３種の生物が挙げられる。
【0071】
医学的に関連するグラム陰性桿菌としては、数多くの種が挙げられる。これらのいくつかは、主に、呼吸障害（（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））、主に泌尿器系障害（エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ））、および主に胃腸系障害（ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ））の原因と
なる。
なる。
【0072】
院内感染症に関連するグラム陰性菌としては、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）が挙げられ、病院施設の集中治療室における菌血症、続発性髄膜炎、および人工呼吸器関連肺炎の原因となる。１つの実施形態では、本発明の化合物および組成物は、次のグラム陰性菌：大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）、Ｓ．エンテリカ（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）：Ｋ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｋ．オキシトカ（Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ）；エンテロバクター：Ｅ．クロアカ（Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ）、Ｅ．エロゲネス（Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）；アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）：Ａ．カルコアセティカス（Ａ．ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、Ａ．バウマンニ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）；シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）、プロビデンシア・スチュアルティ（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉｉ）；プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）：Ｐ．ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、Ｐ．ブルガリス（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）の１つ以上の感染症の治療に有用である。
【0073】
１つの実施形態では、式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはこれを含む組成物は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染症、例えば、皮膚軟組織感染、胃腸感染症、尿路感染症、肺炎および敗血症の治療に有用である。
【0074】
１つの実施形態では、式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはこれを含む組成物は、Ａ．バウマンニ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染症を含むアシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）感染症、例えば、肺炎、尿路感染症および敗血症の治療に有用である。
【0075】
１つの実施形態では、式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはこれを含む組成物は、Ｋ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染症、例えば、肺炎、尿路感染症、髄膜炎および敗血症の治療に有用である。
【0076】
１つの実施形態では、式（Ｉ）、（Ｉａ）もしくは（ＩＩ）の化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはこれを含む組成物は、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）感染症を含む大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）感染症、例えば、菌血症、胆嚢炎、胆管炎、尿路感染症、新生児髄膜炎および肺炎の治療に有用である。
【0077】
本発明の化合物を、制御された条件下、微生物フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９の株を生育することにより製造してよい。本明細書に記載されているように、発酵および実質的に純粋な形態で回収することにより、化合物を得る。特に、本化合物を、以後に記載される条件下適切な培養液の好気発酵中にフォトラブダス（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ）Ｐ．カニ（Ｐ．ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９の株により製造してよい。多くの抗菌物質の製造に使用されるものなど培地は、本化合物の製造のためのこの方法における使用のために適している。
【0078】
本発明の１つの実施形態は、フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９の液内好気発酵による抗生物質製剤、例えば、式（ＩＩ）の製造に適した方法を含む。式（ＩＩ）の化合物を、樹脂吸収による発酵ブロスから回収し、様々な極性の溶媒を用いて洗浄することによって樹脂から溶出してよい。逆相高性能クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）などのクロマトグラフィー分離法によって、精製を進
めてよい。
めてよい。
【0079】
本発明の１つ以上の化合物を製造することができる更なる微生物としては、当技術分野で公知の種と比較して有利な特性を示す変異種が挙げられる。かかる細菌株を、親株の変異誘発によって生成することができる。本発明の変異株の製造に使用される変異誘発のストラテジーおよび方法、変異細菌株のスクリーニングおよび単離の手順、培地の組成は、当技術分野において公知である。
【0080】
好ましい実施形態では、式（ＩＩ）の化合物の製造のためのフォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９の培養を、適切な通気条件下、滅菌環境において混合しながら、１つ以上の吸収剤と共に容易に同化可能な炭素源、窒素源、無機塩および他の有機成分を含む培養液中で行う。本発明の抗生物質製剤の製造で使用される培養液の組成物を、実施例において詳述する。（本明細書で使用されるとき、用語「培養液）は、合成または天然成分の混合物を意味する。概して、培養液は、炭素源、窒素源、無機塩などの微量元素、および必要に応じてビタミン類または他の成長因子を含む。）
【0081】
本明細書に記載されている化合物の類似体を、本化合物をコードする野生型ゲノム配列の直接得られた変化形を使用して生合成して製造してよい。フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９のゲノム配列によれば、図４に示されているように、式（ＩＩ）の化合物（ＷＮＷＳＫＳＦ（配列番号１））ダロバクチンＡの直鎖アミノ酸配列と、ＲｉＰＰ（リボソーム翻訳系翻訳後修飾ペプチド）型抗菌薬をコードするのが典型的なオペロンに属する遺伝子の一部との一致がある。オペロンは、本発明者らが本明細書に取り入れている命名法による、ｄａｒＡ（ダロバクチンＡの前駆体ペプチド、ダロバクチンＡ、式（ＩＩ）の化合物をコードする）、ｄａｒＢＣＤ（明白にダロバクチンＡの排出のための輸送体をコードする）、ｄａｒＥ（ダロバクチンＡのトリプトファン－リジンＣ－Ｃ結合などの不活性化Ｃ－Ｃ結合の生成に必要なラジカルＳＡＭ酵素）をコードする生合成遺伝子クラスターを含む。ダロバクチンＡの７ａａ配列を、前駆体ペプチド内に示す。配列アライメントは、保存されているコアペプチドと共に多くのフォトラブダス（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ）におけるｄａｒオペロンの存在を示す。
【0082】
ダロバクチンに対する耐性を有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を得た。これらは、フォールドしてタンパク質を外膜に挿入するのを助けるＢａｍ複合体の必須成分であるＢａｍＡに位置する。
【0083】
ダロバクチンＡコアペプチドのリボソームコード化は、全アミノ酸はＬ体であることを明白に意味する。リボソームコード化は、前駆体ペプチドをコードするｄａｒＡ遺伝子におけるヌクレオチド置換によるダロバクチンＡの類似体の製造を可能とする。かかる置換を、様々な標準的生化学方法のいずれかを使用して行ってよい。ダロバクチンＡのコード領域のヌクレオチドの特異的およびランダム置換の両方を有するオリゴヌクレオチドの合成は、大きい配列のフラグメントを得る。これらのオリゴヌクレオチドは、前駆体ペプチドをコードする上流および下流配列でライゲートし、発現ベクターにクローン化し、崩壊前駆体ペプチド遺伝子と共にｄａｒオペロンを保有する細胞に形質転換する。ダロバクチンＡ類似体を、この組換えライブラリーのクローンから単離し、活性について試験する。細菌に対する増大された効力または改良された薬理学的特性を有する類似体を単離し、薬剤中に展開してよい。
【0084】
技術的に適切な場合、実施形態を組合せてもよく、したがって本開示は本明細書で提供された実施形態の全ての並べ替え／組合せにまで及ぶ。本明細書における実施例は例証する目的だけのものであり、とにかく、本発明の範囲を限定する意図はない。
【実施例】
【0085】
発酵
フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９を、１０ｍｌのＬｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ培地（ＬＢＢ）に播種し、５０ｍｌのファルコンチューブ中で振盪（２００ｒｐｍ）しながら２８℃においてインキュベートした。１０ミリリットルの一晩培養した培養液を、２Ｌエルレンマイヤーフラスコ中、１Ｌのトリプシンソイ培地（ＴＳＢ）に播種し、８～１０日間振盪（２００ｒｐｍ）しながら２８℃においてインキュベートした。
フォトラブダス・カニ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｋｈａｎｉｉ）ＤＳＭ３３６９を、１０ｍｌのＬｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ培地（ＬＢＢ）に播種し、５０ｍｌのファルコンチューブ中で振盪（２００ｒｐｍ）しながら２８℃においてインキュベートした。１０ミリリットルの一晩培養した培養液を、２Ｌエルレンマイヤーフラスコ中、１Ｌのトリプシンソイ培地（ＴＳＢ）に播種し、８～１０日間振盪（２００ｒｐｍ）しながら２８℃においてインキュベートした。
【0086】
単離
細菌細胞を、遠心分離（８，０００ｘｇ、１０分）により取り除き、上澄み液を回収した。上澄み液を活性化されたスチレン－ジビニルベンゼン樹脂（ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＸＡＤ１６Ｎ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）と共に混合し（４：１、体積／体積）、次いで、周囲温度下で一夜緩やかに振盪した。デカンテーションにより非結合物質を除去し、樹脂に吸着された化合物、ダロバクチンＡ（式（ＩＩ）に相当）を、樹脂体積の６倍量のＤＤ水で洗浄した。ダロバクチンＡを、３０分間ロータリーシェーカーで緩やかに振盪することによって、樹脂体積の０．１％（体積／体積）ギ酸を含む４倍量の５０％メタノールを用いて溶出した。有機溶媒を除去するためにロータリーエバポレーターによって溶出液を濃縮した。残水性溶出液を、０．１％（体積／体積）ギ酸で酸性化し、次いで、ルーズレジンバルク法（ｌｏｏｓｅ－ｒｅｓｉｎ ｂｕｌｋ ｐｒｏｃｅｓｓ）で陽イオン交換（ＳＰセファロースＸＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーに付した。活性化陽イオン交換樹脂を酸性化水性溶出液に添加し、４℃で一夜緩やかに振盪した。非結合物質をデカントして、樹脂を０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水で洗浄した。抗菌活性物を、ｐＨ５の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ７の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、およびｐＨ８の５０ｍＭ酢酸アンモニウムのステップグラジエントにより溶出した。抗菌活性溶出物を合わせて、凍結乾燥し、次いで、０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水中に再懸濁した。再懸濁液を、段階ｐＨ勾配を有する溶離によって直列接続された４ＨｉＴｒａｐ
ＳＰ ＸＬの第二陽イオン交換クロマトグラフィー（カートリッジ当たり５ｍＬ；合計２０ｍＬの総容積）に付した。非結合物質を０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水で洗浄し、次いで、ｐＨ５の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ７の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、およびｐＨ８の５０ｍＭ酢酸アンモニウムのステップグラジエントにより溶出した。抗菌活性溶出物を合わせて、凍結乾燥し、次いで、０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水中に再懸濁して、Ｃ１８半分取カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｃ１８、５μｍ；２５０×１０ｍｍ、Ｒｅｓｔｅｋ）で、流速５ｍＬ／分で１４分間、溶媒Ａとして水＋０．１％（体積／体積）ギ酸／溶媒Ｂとしてアセトニトリル＋０．１％（体積／体積）ギ酸を２％Ｂから開始して１４％Ｂまでの直線勾配、ダイオードアレイ検出器でモニターする２１０～４００ｎｍのＵＶ検出を使用した逆相高性能クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）に付して、１２．２５分にダロバクチンＡを得た（純度：９５％ＵＶ）。
細菌細胞を、遠心分離（８，０００ｘｇ、１０分）により取り除き、上澄み液を回収した。上澄み液を活性化されたスチレン－ジビニルベンゼン樹脂（ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＸＡＤ１６Ｎ、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）と共に混合し（４：１、体積／体積）、次いで、周囲温度下で一夜緩やかに振盪した。デカンテーションにより非結合物質を除去し、樹脂に吸着された化合物、ダロバクチンＡ（式（ＩＩ）に相当）を、樹脂体積の６倍量のＤＤ水で洗浄した。ダロバクチンＡを、３０分間ロータリーシェーカーで緩やかに振盪することによって、樹脂体積の０．１％（体積／体積）ギ酸を含む４倍量の５０％メタノールを用いて溶出した。有機溶媒を除去するためにロータリーエバポレーターによって溶出液を濃縮した。残水性溶出液を、０．１％（体積／体積）ギ酸で酸性化し、次いで、ルーズレジンバルク法（ｌｏｏｓｅ－ｒｅｓｉｎ ｂｕｌｋ ｐｒｏｃｅｓｓ）で陽イオン交換（ＳＰセファロースＸＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーに付した。活性化陽イオン交換樹脂を酸性化水性溶出液に添加し、４℃で一夜緩やかに振盪した。非結合物質をデカントして、樹脂を０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水で洗浄した。抗菌活性物を、ｐＨ５の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ７の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、およびｐＨ８の５０ｍＭ酢酸アンモニウムのステップグラジエントにより溶出した。抗菌活性溶出物を合わせて、凍結乾燥し、次いで、０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水中に再懸濁した。再懸濁液を、段階ｐＨ勾配を有する溶離によって直列接続された４ＨｉＴｒａｐ
ＳＰ ＸＬの第二陽イオン交換クロマトグラフィー（カートリッジ当たり５ｍＬ；合計２０ｍＬの総容積）に付した。非結合物質を０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水で洗浄し、次いで、ｐＨ５の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ７の５０ｍＭ酢酸アンモニウム、およびｐＨ８の５０ｍＭ酢酸アンモニウムのステップグラジエントにより溶出した。抗菌活性溶出物を合わせて、凍結乾燥し、次いで、０．１％（体積／体積）ギ酸ＤＤ水中に再懸濁して、Ｃ１８半分取カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｃ１８、５μｍ；２５０×１０ｍｍ、Ｒｅｓｔｅｋ）で、流速５ｍＬ／分で１４分間、溶媒Ａとして水＋０．１％（体積／体積）ギ酸／溶媒Ｂとしてアセトニトリル＋０．１％（体積／体積）ギ酸を２％Ｂから開始して１４％Ｂまでの直線勾配、ダイオードアレイ検出器でモニターする２１０～４００ｎｍのＵＶ検出を使用した逆相高性能クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）に付して、１２．２５分にダロバクチンＡを得た（純度：９５％ＵＶ）。
【0087】
ダロバクチンＡの構造
ダロバクチンＡを凍結乾燥後、非結晶白色粉末として単離した。
ダロバクチンＡを凍結乾燥後、非結晶白色粉末として単離した。
【0088】
ダロバクチンＡに対する化学試験は、ニンヒドリン試薬で陽性反応を示したので、第一級アミンの存在を示した。フェノールの存在を示す塩化第二鉄試験に対しても陽性に反応した。
【0089】
１μｇ／ｍｌの濃度でダロバクチンＡを直接注入することにより、ＴＨＥＲＭＯ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬハイブリッドイオントラップオービトラップ型質量分析計で得られた高解像度エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＨＲＥ
ＳＩＭＳ）は、ｍ／ｚ４８３．７０８７４における［Ｍ＋２Ｈ］２＋ピークおよびｍ／ｚ９６６．４１０４６における［Ｍ＋Ｈ］＋ピークを示した。同位体パターンは、ＣｌまたはＢｒが存在しないことを示した。正確な質量および同位体分布は、元素式Ｃ４７Ｈ５５Ｏ１２Ｎ１１と一致した。
ＳＩＭＳ）は、ｍ／ｚ４８３．７０８７４における［Ｍ＋２Ｈ］２＋ピークおよびｍ／ｚ９６６．４１０４６における［Ｍ＋Ｈ］＋ピークを示した。同位体パターンは、ＣｌまたはＢｒが存在しないことを示した。正確な質量および同位体分布は、元素式Ｃ４７Ｈ５５Ｏ１２Ｎ１１と一致した。
【0090】
５００μＬの水＋３％（体積／体積）重水および０．２５％（体積／体積）重水素化ギ酸に溶解された５ｍｇのダロバクチンＡの、Ｂｒｕｋｅｒ５００ＭＨｚにおける一次元および二次元各磁気共鳴（１Ｄおよび２Ｄ ＮＭＲ）分析は、ペプチドを示し、フェニルアラニン、２セリン、リジン、２トリプトファンおよびアスパラギンの存在を明らかにした。ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹおよびＨＭＢＣスペクトルは、ペプチド結合による異なるアミノ酸の結合を決定することを可能とし、異常なリジン－トリプトファン架橋を明らかにした。この結合は、リジンおよびトリプトファンの側鎖内の２個の不活性炭素間の共有結合を含む、Ｒ．Ｓｃｈｒａｍｍａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）により以前に記載された翻訳後修飾によって生じると思われる。
【0091】
ダロバクチンＡの酸加水分解、次いで、マーフィー試薬を用いた誘導体化ならびにＬＣ－ＭＳアミノ酸決定実験およびタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）による化合物全体のフラグメンテーションパターン分析は、新規天然産物を示すペプチドパターンを確証させた。
【0092】
抗菌スペクトル
ダロバクチンＡの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、ブロス微量希釈アッセイによって決定した。次の試験生物をダロバクチンＡのスペクトルの評価に使用した：シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、およびエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）。
ダロバクチンＡの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、ブロス微量希釈アッセイによって決定した。次の試験生物をダロバクチンＡのスペクトルの評価に使用した：シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、およびエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）。
【0093】
試験生物を、好気条件の場合は５ｍＬのミューラーヒントンＩＩ培地（ＭＨＩＩＢ）に、嫌気条件の場合はブレインハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）に播種し、細胞密度がＯＤ６００＝０．１～０．９に達するまで生育した。細胞懸濁液を、ＯＤ６００＝０．００１まで希釈し、９６μＬの細菌培養液を、９６ウェルプレート中の４μＬのダロバクチンＡに添加した（最終濃度０．５～１２８μｇ／ｍＬ）。３７℃で２０時間のインキュベーション後、試験生物の成育を目視で決定した（表１）。
【0094】
【表1】
【0095】
細胞毒性
ＨｅｐＧ２およびＦａＤｕ細胞を、７５ｃｍ２組織培養フラスコに２０ｍＬの最小必須培地（ＭＥＭ）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗菌・抗真菌抗生物質中で培養し、３７℃、５％ＣＯ２において５日間インキュベートした（細胞が７０％コンフルエントに達するまで）。増殖培地を取り出し、細胞を５ｍＬの１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。洗浄後、ＰＢＳを取り出し、２ｍＬの０．２５％トリプシンを含む１×ＥＤＴＡ溶液を添加した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２において２分間インキュベートして、細胞をフラスコから剥がした。フラスコに６ｍＬの培養培地の添加によって、トリプシンを不活化し、細胞を、凝集を避けるために緩やかにピペッティングすることによって剥がした。細胞を計数し、ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中に２×１０５細胞／ｍＬに希釈し、この懸濁液１００μｌを、透明平底組織培養治療９６ウェルプレートに添加した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２において一晩インキュベートして、細胞をプレートに接着させた。
ＨｅｐＧ２およびＦａＤｕ細胞を、７５ｃｍ２組織培養フラスコに２０ｍＬの最小必須培地（ＭＥＭ）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗菌・抗真菌抗生物質中で培養し、３７℃、５％ＣＯ２において５日間インキュベートした（細胞が７０％コンフルエントに達するまで）。増殖培地を取り出し、細胞を５ｍＬの１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。洗浄後、ＰＢＳを取り出し、２ｍＬの０．２５％トリプシンを含む１×ＥＤＴＡ溶液を添加した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２において２分間インキュベートして、細胞をフラスコから剥がした。フラスコに６ｍＬの培養培地の添加によって、トリプシンを不活化し、細胞を、凝集を避けるために緩やかにピペッティングすることによって剥がした。細胞を計数し、ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中に２×１０５細胞／ｍＬに希釈し、この懸濁液１００μｌを、透明平底組織培養治療９６ウェルプレートに添加した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２において一晩インキュベートして、細胞をプレートに接着させた。
【0096】
別々の透明丸底非組織培養処理９６ウェルプレート中、４μｌのダロバクチンＡを、９６μｌの培養培地と混合した。上澄み液を各組織培養プレートから取り出し、ダロバクチンＡを含む培養培地を、丸底プレートから組織培養プレートに移動した。細胞を、ダロバクチンＡの存在下、３７℃、５％ＣＯ２において３日間インキュベートし、この時点で、５μｌの３ｍＭレサズリン（アラマーブルー）を添加した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２において３時間インキュベートした。各細胞株の生存率を、プレートリーダーで蛍光（５５４ｎｍ／５９０ｎｍ）を読むことによって評価した（表２）。
【0097】
【表2】
【0098】
ダロバクチンＡの殺活性
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、５ｍＬのミューラーヒントンＩＩ培地（ＭＨＩＩＢ）に播種し、ＯＤ６００＝０．１～０．９まで生育した。細胞懸濁液を、ＯＤ６００＝０．００１まで希釈した。９８μＬの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）培養液を、９６ウェルプレートにおいて、２μＬのダロバクチンＡ（１６μｇ／ｍＬ、２×ＭＩＣに相当）で処置し、３７℃で２０時間インキュベートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）培養液を、抗菌薬を含まないＬｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ寒天上に播き、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を、生細胞計数のためにカウントした（図３）。
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、５ｍＬのミューラーヒントンＩＩ培地（ＭＨＩＩＢ）に播種し、ＯＤ６００＝０．１～０．９まで生育した。細胞懸濁液を、ＯＤ６００＝０．００１まで希釈した。９８μＬの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）培養液を、９６ウェルプレートにおいて、２μＬのダロバクチンＡ（１６μｇ／ｍＬ、２×ＭＩＣに相当）で処置し、３７℃で２０時間インキュベートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）培養液を、抗菌薬を含まないＬｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ寒天上に播き、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を、生細胞計数のためにカウントした（図３）。
【0099】
リポ多糖（ＬＰＳ）によるアンタゴナイゼーションアッセイ
ダロバクチンＡは、分子量９６６Ｄａの大きな化合物である。グラム陰性菌への侵入限界は、およそ５００Ｄａである。したがって、ダロバクチンＡは、リポ多糖（ＬＰＳ）を標的とするポリミキシンと同様に、細胞表面上で作用する可能性があると思われた。これを試験するために、ダロバクチンＡの活性をＬＰＳの存在下試験した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、５ｍＬのＭＨＩＩＢに播種し、細胞密度がＯＤ６００＝０．１～０．９に達するまで生育した。細胞懸濁液を、２×ＭＨＩＩＢでＯＤ６００＝０．００２まで希釈した。４０μＬのＬＰＳ溶液（最終濃度範囲０～８００μｇ／ｍＬ）および２μＬの２×ＭＩＣ抗菌液剤（最終濃度：ポリミキシン；０．５μｇ／ｍＬ、アンピシリン；１６μｇ／ｍＬ、ダロバクチンＡ；１６μｇ／ｍＬ）を、９６ウェルプレートにおいて混合し、滅菌ＤＩ水によって５０μＬまで満たした。ＬＰＳおよび抗菌液剤を、５０μＬの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞懸濁液と共に混合し、３７℃で２０時間インキュベートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の生育を、目視で決定した（表３）。
ダロバクチンＡは、分子量９６６Ｄａの大きな化合物である。グラム陰性菌への侵入限界は、およそ５００Ｄａである。したがって、ダロバクチンＡは、リポ多糖（ＬＰＳ）を標的とするポリミキシンと同様に、細胞表面上で作用する可能性があると思われた。これを試験するために、ダロバクチンＡの活性をＬＰＳの存在下試験した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、５ｍＬのＭＨＩＩＢに播種し、細胞密度がＯＤ６００＝０．１～０．９に達するまで生育した。細胞懸濁液を、２×ＭＨＩＩＢでＯＤ６００＝０．００２まで希釈した。４０μＬのＬＰＳ溶液（最終濃度範囲０～８００μｇ／ｍＬ）および２μＬの２×ＭＩＣ抗菌液剤（最終濃度：ポリミキシン；０．５μｇ／ｍＬ、アンピシリン；１６μｇ／ｍＬ、ダロバクチンＡ；１６μｇ／ｍＬ）を、９６ウェルプレートにおいて混合し、滅菌ＤＩ水によって５０μＬまで満たした。ＬＰＳおよび抗菌液剤を、５０μＬの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞懸濁液と共に混合し、３７℃で２０時間インキュベートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の生育を、目視で決定した（表３）。
【0100】
【表3】
【0101】
動物有効性
ダロバクチンＡを、２動物有効性モデルにおいて試験した（図５）。敗血症モデルでは、マウスに、２４時間以内に未治療群において１００％死亡率の原因となる接種菌液として、５％ムチン中の１０６個の細菌を注射した（腹腔内）（図５Ａ、５Ｃ）。感染の１時
間後、３つの群において、ポジティブコントロールとしてのゲンタマイシン２０ｍｇ／ｋｇ、または様々な用量レベルのダロバクチンＡで、マウスを治療した。５日間にわたって、生存率をモニターした。ダロバクチンＡは、感染症を効果的に治療し、２．５ｍｇ／ｋｇにおいて、一般的に使用されるＡＴＣＣ２５９２２株およびポリミキシンに耐性を有する臨床分離株ＡＲ３５０の両方の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対して、１００％の生存率を示した（図５Ａ）。５時間後、ＣＦＵ測定のために尾から採血し、ダロバクチンＡ治療を受けた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の有意な減少を示した（図５Ｂ）。１ｍｇ／ｋｇにおいて、ダロバクチンＡは生存時間をなお延長したが、もはや１００％治癒しなかった（図５Ａ）。ポリミキシンに耐性を有する実験室株を使用して、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）敗血症に対してダロバクチンＡを５０ｍｇ／ｋｇで試験し、１００％生存率を示した（図５Ｃ）。次いで、ダロバクチンＡを、好中球減少性マウス大腿モデルにおいて有効性について試験した。マウスに、シクロホスファミドを与えて好中球減少症を誘発（－３日目、０日目）し、次いで、マウスの右大腿において１０６ＣＦＵ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＡＲ３５０を感染させて、感染の２時間後に治療を開始した。未治療コントロール、群当たり４匹のマウスを、０、２、および２４時間において袋詰にして、感染症の進行をモニターした。治療群当たり４匹のマウスにおいて、２時間後に５０ｍｇ／ｋｇ単回注射されたダロバクチンＡ（腹腔内）を、感染の２、８、１４時間後に３回与えられた２５ｍｇ／ｋｇのダロバクチンＡ（腹腔内）、および２時間後に２０ｍｇ／ｋｇ単回注射されたゲンタマイシン（腹腔内）と比較した。マウスを２４時間において袋詰にして、無菌的に取り出した大腿をホモジナイズして寒天プレートに蒔いてＣＦＵを計数した（図５Ｄ）。５０ｍｇ／ｋｇのダロバクチンＡは、未治療コントロールと比較して感染症負荷量を１０分の１に低減し、２５ｍｇ／ｋｇを３回与えると、感染症を１００分の１に低減し、２匹のマウスにおける検出限界未満までをも含んだ。
ダロバクチンＡを、２動物有効性モデルにおいて試験した（図５）。敗血症モデルでは、マウスに、２４時間以内に未治療群において１００％死亡率の原因となる接種菌液として、５％ムチン中の１０６個の細菌を注射した（腹腔内）（図５Ａ、５Ｃ）。感染の１時
間後、３つの群において、ポジティブコントロールとしてのゲンタマイシン２０ｍｇ／ｋｇ、または様々な用量レベルのダロバクチンＡで、マウスを治療した。５日間にわたって、生存率をモニターした。ダロバクチンＡは、感染症を効果的に治療し、２．５ｍｇ／ｋｇにおいて、一般的に使用されるＡＴＣＣ２５９２２株およびポリミキシンに耐性を有する臨床分離株ＡＲ３５０の両方の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対して、１００％の生存率を示した（図５Ａ）。５時間後、ＣＦＵ測定のために尾から採血し、ダロバクチンＡ治療を受けた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の有意な減少を示した（図５Ｂ）。１ｍｇ／ｋｇにおいて、ダロバクチンＡは生存時間をなお延長したが、もはや１００％治癒しなかった（図５Ａ）。ポリミキシンに耐性を有する実験室株を使用して、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）敗血症に対してダロバクチンＡを５０ｍｇ／ｋｇで試験し、１００％生存率を示した（図５Ｃ）。次いで、ダロバクチンＡを、好中球減少性マウス大腿モデルにおいて有効性について試験した。マウスに、シクロホスファミドを与えて好中球減少症を誘発（－３日目、０日目）し、次いで、マウスの右大腿において１０６ＣＦＵ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＡＲ３５０を感染させて、感染の２時間後に治療を開始した。未治療コントロール、群当たり４匹のマウスを、０、２、および２４時間において袋詰にして、感染症の進行をモニターした。治療群当たり４匹のマウスにおいて、２時間後に５０ｍｇ／ｋｇ単回注射されたダロバクチンＡ（腹腔内）を、感染の２、８、１４時間後に３回与えられた２５ｍｇ／ｋｇのダロバクチンＡ（腹腔内）、および２時間後に２０ｍｇ／ｋｇ単回注射されたゲンタマイシン（腹腔内）と比較した。マウスを２４時間において袋詰にして、無菌的に取り出した大腿をホモジナイズして寒天プレートに蒔いてＣＦＵを計数した（図５Ｄ）。５０ｍｇ／ｋｇのダロバクチンＡは、未治療コントロールと比較して感染症負荷量を１０分の１に低減し、２５ｍｇ／ｋｇを３回与えると、感染症を１００分の１に低減し、２匹のマウスにおける検出限界未満までをも含んだ。
【0102】
したがって、ダロバクチンＡは、２．５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）、ＡＴＣＣ２５９２２およびポリミキシン耐性臨床分離菌ＡＲ３５０、ｎ＝３／治療群（感染の１時間後に治療）において大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）敗血症のマウスを治癒することができた。１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）においてダロバクチンＡは、生存時間を延長し、５時間において血液中のＣＦＵ負荷量を著しく低減した（Ａ、Ｂ）。
【0103】
本明細書において使用された用語および表現は、説明のための用語および表現として使用されており、限定するものではなく、かかる用語および表現の使用において、示されているおよび記載されている特徴のいずれもの等価物またはその部分を排除する意図はない。加えて、本発明の記載されている特定の実施形態があれば、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示されている概念を含む他の実施形態を使用してもよいことは、当業者には明白であろう。したがって、記載されている実施形態は、あらゆる点において、例証するだけのものであり、限定するものではないと見做されるべきである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6】
【配列表】