特許 7470462 培養シート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-04-10

(45)【発行日】2024-04-18

(54)【発明の名称】培養シート

(51)【国際特許分類】

   C12M 1/16 20060101AFI20240411BHJP

   C12M 1/22 20060101ALI20240411BHJP

【ＦＩ】

C12M1/16

C12M1/22

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2023049702

(22)【出願日】2023-03-27

【審査請求日】2023-11-08

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】503174969

【氏名又は名称】株式会社アテクト

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】林田 国雄

(72)【発明者】

【氏名】木村 綾香

(72)【発明者】

【氏名】井手口 真也

(72)【発明者】

【氏名】飛田 隆志

【審査官】田ノ上 拓自

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１２－０２４０３２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１９－１８０３６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０００－２７９１６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００８－１９３９１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１７－１８４７７２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１４－２２１００７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１６－１１１９３８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｍ １／００－３／１０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

基材と、前記基材の第１表面に設けられた培地層と、前記培地層を被覆可能に設けられたカバー部材と、を有する培養シートであって、
前記カバー部材は、その表面から突出する凸部を有し、
前記培地層を被覆するように前記カバー部材を前記基材上に配置した被覆状態において、前記凸部は、前記培地層の外周を取り囲むように前記基材に接触し、
下記［ｉ］又は［ｉｉ］：
［ｉ］前記被覆状態での断面において、前記凸部は少なくとも１つの頂点を有し、かつ、前記頂点で前記基材の前記第１表面に点接触する、
［ｉｉ］前記被覆状態での断面における前記凸部の断面形状は、前記凸部の幅が先端に向かうにつれて狭くなり、かつ、前記凸部の表面の高さが先端に向かうにつれて漸増する形状であって、前記基材の前記第１表面に点接触する形状である、
を満たす、培養シート。

【請求項2】

前記第１表面は、段差のない平坦な面である、請求項１に記載の培養シート。

【請求項3】

前記カバー部材は、前記凸部で囲まれた内部領域と、前記凸部よりも外側で前記内部領域を取り囲む外部領域とを有する、請求項１又は２に記載の培養シート。

【請求項4】

前記凸部は、前記カバー部材の平面視において環状に設けられている、請求項１又は２に記載の培養シート。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、微生物を培養する際に用いられる培養シートに関する。

【背景技術】

【0002】

微生物検査等を簡便に行うために、基材シートに乾燥培地である培地層を設けた培養シートを用いることが知られている。培養シートには、培養しようとする検体以外の微生物又は異物等によって培地層が汚染されることを抑制するために、培地層を被覆するカバーシートを設けることがある（例えば、特許文献１及び２等）。培養シートで培養を行う際には、培地層を被覆した状態にあるカバーシートを開き、露出した培地層に被検液を接種した後、再びカバーシートで培地層を被覆して被検液中の検体の培養を行う。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【文献】特開２００９－１５３５０１号公報

【文献】特開２０２２－２９７３７号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

上記のようなカバーシートを開閉する操作は、手袋を装着した検査者の手で行われることがある。カバーシートの表面のうちの培地層に接触する領域に手が触れると、検体以外の微生物又は異物等が培地層に混入するいわゆるコンタミネーションの発生が懸念される。コンタミネーションの発生は、培養シートでの培養結果の誤判定を引き起こす原因になり得る。

【0005】

本発明は、培地層の汚染を抑制しやすい培養シートの提供を目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の培養シートは、基材と、前記基材の第１表面に設けられた培地層と、前記培地層を被覆可能に設けられたカバー部材と、を有する培養シートであって、
前記カバー部材は、その表面から突出する凸部を有し、
前記培地層を被覆するように前記カバー部材を前記基材上に配置した被覆状態において、前記凸部は、前記培地層の外周を取り囲むように前記基材に接触する。

【発明の効果】

【0007】

本発明によれば、培地層の汚染を抑制しやすい培養シートを提供できる。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】本発明の一実施形態に係る培養シートを模式的に示す斜視図であり、（ａ）はカバー部材が培地層を被覆した状態を示し、（ｂ）はカバー部材が培地層を被覆していない状態を示す。

【図2】図１のＩ－Ｉ’線の断面を模式的に示す断面図である。

【図3】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【図4】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【図5】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【図6】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【図7】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【図8】本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す斜視図である。

【図9】培養シートの一例を模式的に示す断面図である。

【発明を実施するための形態】

【0009】

以下、図面を参照して本発明の実施形態について説明する。以下の説明では、同一の部材については同一の符号を付し、その詳細な説明は繰り返さない。各図に示す実施形態は、任意に組み合わせることができる。

【0010】

（培養シート）
図１は、本発明の一実施形態に係る培養シートを模式的に示す斜視図であり、（ａ）はカバー部材が培地層を被覆した状態を示し、（ｂ）はカバー部材が培地層を被覆していない状態を示す。図２は、図１のＩ－Ｉ’線の断面を模式的に示す断面図である。図３～図５は、本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。

【0011】

図１に示すように、本実施形態の培養シート１は、基材１０と、基材１０の第１表面１１に設けられた培地層２と、培地層２を被覆可能に設けられたカバー部材３０とを有する。カバー部材３０は、図１（ａ）に示すように、培地層２を被覆するように基材１０上に配置した状態（以下、「被覆状態」ともいう。）としたり、図１（ｂ）に示すように、培地層２を被覆していない状態（以下、「非被覆状態」ともいう。）としたりすることができる。カバー部材３０は通常、培地層２を観察できるように透明である。

【0012】

図１（ｂ）及び図２に示すように、カバー部材３０は、その表面から突出する凸部３３を有する。凸部３３は、カバー部材３０を被覆状態としたときに、培地層２の外周を取り囲むように基材１０に接触する。凸部３３は、カバー部材３０を被覆状態としたときに、基材１０と対向する側の表面に設けることができる。

【0013】

培養シート１の培地層２は、培養しようとする細菌及びカビ等の微生物である検体が培養される領域である。培地層２には通常、検体を含む被検液が接種される。

【0014】

使用前の培養シート１では通常、カバー部材３０は被覆状態にある（図１（ａ））。培養シート１の使用時には、例えば図１（ｂ）に示すようにカバー部材３０を非被覆状態とし、ピペット等を用いて培地層２に検体を含む被検液を接種する。その後、再びカバー部材３０を被覆状態とし、必要に応じてカバー部材３０を上から軽く押さえることにより、被検液を培地層２に広げることができる。その後、検体の生育に適した温度及び湿度に設定されたインキュベーター等に培養シート１を収容して検体を培養する。培養後に培地層２に発生したコロニーは、カバー部材３０を通して観察することができる。

【0015】

培養シート１では被覆状態において、凸部３３が培地層２の外周を取り囲み、培地層２の表面を被覆するようにカバー部材３０が配置されるため、基材１０及びカバー部材３０によって取り囲まれた空間（以下、「培養空間」ともいう。）２２を形成することができる（図２～図５）。カバー部材３０の凸部３３により、被覆状態においてカバー部材３０のうちの培地層２と対向する領域を示すことができるため、検査者がカバー部材３０の培地層と対向する領域を認識しやすくなる。そのため、カバー部材３０を被覆状態から非被覆状態としたり、非被覆状態から被覆状態としたりするときに、検査者が、カバー部材３０のうちの培地層２と対向する領域に誤って触れることを抑制することができる。これにより、培地層２が汚染されることを抑制でき、培養結果の誤判定を抑制することが期待できる。

【0016】

培養シート１の培養空間２２の中に培地層２が配置されることにより、被検液が培地層２の周縁を超えて広がった場合にも、凸部３３が障壁となって被検液の流出を抑制しやすくなるため、培地層２に接種された被検液が培養空間２２の外部に広がりにくくすることができる。上記のように培養空間２２が形成されることにより、培養時に培地層２から水分が蒸発することを抑制することもできる。また、培養シート１の使用を開始するまでの間や培養時に、培地層２が検体以外の微生物及び異物等によるコンタミネーションを抑制することもできる。

【0017】

カバー部材３０の凸部３３は、少なくともその一部が、被覆状態において基材１０のいずれかの部分に接触していればよい。凸部３３は、被覆状態において基材１０の端部の側壁（第１表面１１と第２表面１２とを繋ぐ部分）に接触してもよいが、図２～図５に示すように、基材１０の第１表面１１に接触することが好ましい。凸部３３の最も突出した部分が基材１０に接触することが好ましい。

【0018】

カバー部材３０が有する凸部３３は、被覆状態としたときに培地層２と対向するカバー部材３０の領域を認識できるように設けられていればよく、被覆状態としたときに培地層２の外周を取り囲むように設けられていることが好ましい。凸部３３は、カバー部材３０の平面視において断続的に設けられていてもよいが、被検液の流出を抑制するという観点からは連続的に設けられていることが好ましい。培地層２に接種された被検液を培養空間２２内に留まりやすくするという観点から、凸部３３は、カバー部材３０を被覆状態としたときに密閉された培養空間２２が形成されるように設けることが好ましい。

【0019】

凸部３３は、図１に示すように環状に設けられていることが好ましい。凸部３３が形成する環状の形状は、被覆状態において培地層２の外周全体を取り囲むことができれば円形状に限らず、多角形状や任意の形状であってもよい。凸部３３が環状に形成されていることにより、被覆状態としたときに培地層２と対向するカバー部材３０の領域を認識しやすい。また、被覆状態において培地層２の外周を環状に取り囲むことができるため、培養空間２２の外部に被検液が広がることをより一層抑制できる。

【0020】

被覆状態での培養シート１の断面（培地層２を通る断面）での凸部３３の断面形状は、半円形状（図２等）であってもよく、三角形状（図３）及び四角形状（図４、図５）等の多角形状であってもよく、これらの組み合わせであってもよい。凸部３３の断面形状は、図２及び図３等に示すように、凸部３３の幅は、先端に向かうにつれて狭くなり、凸部３３の表面の高さは、先端に向かうにつれて漸増することが好ましい。凸部３３が環状に設けられている場合、凸部３３の断面形状は、全周にわたって同じであってもよく、異なる形状が組み合わされていてもよい。

【0021】

凸部３３の上記断面形状は、少なくとも１つの頂点を有する形状であって、被覆状態において、少なくとも上記頂点が基材１０の第１表面１１に接触することが好ましい。第１表面１１に接触する凸部３３の頂点は、１つであってもよく、２つ以上であってもよい。少なくとも１つの頂点を有する形状とは、例えば図２に示すような円弧状の他、頂点で基材１０の第１表面１１に接触するように形成された三角形状（図３）、鋸刃形状、及び正弦波形状等が挙げられる。凸部３３は、カバー部材３０の被覆状態において、第１表面１１に対向する面に頂点を有していればよく、例えば図４に示すような四角形状の凸部３３の表面のうちの第１表面１１に対向する面に、頂点を有する凹凸を形成してもよい。

【0022】

上記のように、凸部３３がその頂点で第１表面１１に接触することにより、上記断面において、凸部３３と第１表面１１とが点接触した状態となる。これにより、被検液が凸部３３と第１表面１１との接触位置に到達したときに、毛細管現象による被検液の染み出しを抑制しやすくなる。そのため、培養空間２２の外に被検液が広がることをより一層抑制することができる。一方、図４及び図５に示すように、上記断面において凸部３３と第１表面１１とが面接触した状態になると、被検液が凸部３３と第１表面１１との接触部分で毛細管現象により被検液が染み出しやすくなるため、培養空間２２の外に被検液が広がりやすい。

【0023】

図１～図４に示すように、凸部３３がカバー部材３０の外縁よりも内側に設けられることにより、カバー部材３０は、凸部３３で囲まれた内部領域３２と、凸部３３よりも外側で内部領域３２を取り囲む外部領域３４とを有していてもよく、図５に示すように、内部領域３２のみを有し、外部領域３４を有していなくてもよい。あるいは、カバー部材３０は、凸部３３よりも外側に外部領域３４を有する部分と有しない部分との両方を有していてもよい。

【0024】

カバー部材３０が内部領域３２及び外部領域３４を有する場合（図１～４）、凸部３３は内部領域３２及び外部領域３４よりも突出することができる。特に、被覆状態での上記断面において、凸部３３と基材１０の第１表面１１とが面接触する場合（例えば、図４及び図５）、カバー部材３０は外部領域３４を有することが好ましい（図４）。図５に示すように、凸部３３がカバー部材３０の外縁に至るように設けられ、カバー部材３０の被覆状態において凸部３３と第１表面１１とが面接触していると、毛細管現象により被検液がカバー部材３０の外縁まで染み出しやすく、培養シート１から被検液が漏れ出しやすい。これに対し、外部領域３４が設けられていると、毛細管現象により被検液が染み出しても、第１表面１１と外部領域３４との間の空間が形成されているため、培養シート１から被検液が漏れ出ることを抑制しやすい。

【0025】

培養シート１では１つの検体が培養されてもよい。複数の検体を培養する場合には、検体の数に応じた枚数の培養シート１を用いて培養を行ってもよい。

【0026】

培養シート１には、培養シート１の管理を容易にするために、製造ロット及びシリアルナンバー等の製造ＩＤ、製造者情報、製品の種類を示す各種記号、有効期限等の各種情報が付与されていてもよい。これらの情報は、培養シート１の基材１０又はカバー部材３０に直接印刷することによって付与してもよく、シール等を貼付することによって付与してもよい。

【0027】

以下、培養シート１の各部について詳細に説明する。図６及び図７は、本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す断面図である。図８は、本発明の他の実施形態に係る培養シートを模式的に示す斜視図である。

【0028】

（基材）
基材１０は、培地層２を支持することができる。基材１０は、シート状又は平板状であることができ、第１表面１１と、第１表面１１とは反対側の表面である第２表面１２とを有する。基材１０の第１表面１１は、その表面の一部に培地層２が設けられることにより培地層２によって被覆されており、残りの第１表面１１の部分は露出している。培地層２は、第１表面１１の任意の位置に設けることができるが、例えば図１に示すように、培養シート１の平面視において第１表面１１の中央部分に設けることができる。第１表面１１には１つの培地層２が設けられるが、２つ以上の培地層２が設けられていてもよい。

【0029】

基材１０の平面視形状は特に限定されず、例えば、円形状、半円形状、並びに、四角形及び六角形等の多角形状等であってもよく、これらを組み合わせた形状であってもよい。基材１０の平面視形状は、好ましくは四角形状であり、より好ましくは長方形又は正方形の方形である。基材１０は、図１に示すように、平面視形状の少なくとも１つの辺の一部が切欠かれていてもよく、少なくとも１つの角が面取りされた形状であってもよい。基材１０の平面視における大きさは特に限定されないが、図１に示すような略四角形状である場合、例えば一辺が４０～１００ｍｍであり、好ましくは７０～９０ｍｍである。基材１０の厚みは特に限定されないが、例えば０．１～３ｍｍであり、好ましくは０．５～２ｍｍである。

【0030】

基材１０の第１表面１１は、図２～図５に示すように段差のない平坦な面であってもよく、図６及び図７に示すように凹部１５を有していてもよい。図２～図５に示すように第１表面１１の平坦な面に培地層２が設けられる場合、培養シート１の断面において、培地層２の基材１０側とは反対側の表面と第１表面１１との間に段差が形成されるように、培地層２を設けることができる。

【0031】

第１表面１１が凹部１５を有する場合、凹部１５に培地層２を設けることができる。凹部１５は、培地層２全体を収容可能な大きさを有することが好ましい。基材１０が凹部１５を有することにより、被検液が凹部１５内に留まりやすくなるため、培養空間２２の外部に被検液が広がることを抑制することができる。

【0032】

基材１０が凹部１５を有し、凹部１５に培地層２が配置される場合、カバー部材３０の被覆状態において、凸部３３は、図６及び図７に示すように、基材１０の第１表面１１のうちの凹部１５よりも外側の領域に接触することが好ましい。これにより、被検液が凹部１５の外部に広がった場合にも、凸部３３によって、被検液が培養空間２２の外部に広がることをより一層抑制することができる。

【0033】

培養シート１の平面視において、凹部１５の平面視形状は、培地層２の平面視形状と相似の関係にあってもよく、相似の関係になくてもよい。凹部１５の平面視における面積は、培地層２の平面視における面積と同じかそれよりも大きいことが好ましい。

【0034】

凹部１５の深さは、培地層２の厚みによって調整すればよい。凹部１５に培地層２を設けたときに、培養シート１の断面において、培地層２の表面の位置が、凹部１５が形成されていない領域の第１表面１１の位置を超えないように（当該第１表面１１よりも低い位置となるように）、凹部１５の深さを設定することが好ましい。凹部１５の深さは、例えば０．１～５ｍｍであってもよく、０．２～３ｍｍであってもよく、０．５～２ｍｍであってもよい。

【0035】

基材１０の断面における凹部１５の断面形状は特に限定されず、長方形状であってもよく、図６及び図７に示すように、第１表面１１から第２表面１２に向けてテーパー状に狭くなる台形状であってもよい（図６及び図７）。

【0036】

凹部１５は、基材１０を形成するためのシート部材又は板状部材を立体加工することにより形成してもよく、シート部材又は板状部材の切削加工により形成してもよい。後述するように、基材１０が樹脂を用いて形成されている場合は、射出成形、ブロー成形、及びプレス成形等の金型を用いた樹脂成形によって凹部１５を形成してもよい。

【0037】

基材１０の第２表面１２は、図２～図６に示すように平坦な面であってもよく、図７に示すように、第１表面１１に形成された凹部１５の形状に対応する凸形状を有していてもよい。第２表面１２が有する凸形状は、第１表面１１に凹部１５を形成した結果、第２表面１２が変形したものであってもよい。第１表面１１に凹部１５を有し、第２表面１２が凸形状である基材１０は、シート部材又は板状部材の立体加工、又は樹脂成形等によって形成することができる。

【0038】

基材１０は、培養シート１を積み重ねる際の位置ずれを抑制するために、スタックリブ８を有していてもよい（図１）。スタックリブ８は、基材１０に設けられた培地層２以外の領域に設けることができ、例えば基材１０が方形等の多角形である場合、角部分に設けることができる。スタックリブ８は、基材１０の第１表面１１から第２表面１２に向かって凸状に形成することができ、第２表面１２に向かって先細りとなるテーパー形状に形成されていることが好ましい。このように形成されたスタックリブ８は、基材１０の第１表面１１では凹状に凹んだ開口部となるが、この開口部の平面視における大きさはスタックリブ８の第２表面１２側の先端を差し込み可能な大きさに形成すればよい。これにより、培養シート１を積み重ねたときに、上側に配置される培養シート１のスタックリブ８の第２表面１２側の先端が、下側に配置される培養シート１のスタックリブ８の第１表面１１側の開口部に差し込まれて固定されるため、積み重ねられた培養シート１の位置が水平方向にずれることを抑制できる。

【0039】

基材１０を構成する材料は特に限定されず、例えば、樹脂、紙、ガラス、金属、及びセラミック等が挙げられるが、好ましくは樹脂である。基材を構成する樹脂としては、熱可塑性樹脂が挙げられる。熱可塑性樹脂としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリメチルペンテン、ポリブテン－１、エチレン・テトラシクロドデセン・コポリマー、及びエチレン・２－ノルボルネン樹脂等のポリオレフィン；ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、ポリシクロへキシレンジメチレンテレフタレート、及びヒドロキシ安息香酸ポリエステル等のポリエステル；ポリアクリロニトリル、アクリロニトリル・スチレン樹脂、ブタジエン樹脂、アクリロニトリル・ブタジエン・スチレン樹脂、ポリフェニレンエーテル、ポリエーテルイミド、ポリアセタール、ポリアリレート、ポリアリルスルホン、ポリスチレン、ポリアミド（ナイロン）、ポリカーボネート、（メタ）アクリル樹脂、ポリ（メタ）アクリルスチレン、ポリエステルカーボネート、ポリブチレンサクシネート、及び３－ヒドロキシ酪酸・３－ヒドロキシヘキサン酸共重合体等からなる群より選ばれる１種以上が挙げられる。基材は、樹脂のほか、可塑剤、滑剤、表面改質剤、顔料、染料、充填剤等の添加剤を含んでいてもよい。

【0040】

基材１０は、単層構造であってもよく、２層以上の多層構造を有していてもよい。基材１０が多層構造を有する場合、各層の材料は同じであってもよく異なっていてもよい。

【0041】

（培地層）
培地層２は、基材１０の第１表面１１に形成され、検体が培養される領域である。培地層２は、乾燥状態の培地（乾燥培地）であることができる。乾燥培地は、加水によって検体の培養が可能な状態とすることができる。培地層２が乾燥培地である場合、培地層２に検体及び水を含む被検液を接種し、カバー部材３０で培地層２を被覆することにより、被検液を培地層２全体に広げることができる。上記したようにカバー部材３０は凸部３３を有する。そのため、培養シート１では、培地層２に接種された被検液が、基材１０、カバー部材３０、及び凸部３３によって形成される培養空間２２の外部に広がることを抑制できる。

【0042】

乾燥培地である培地層２は、バインダー、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、及び選択剤等のうちの１つ以上の成分を含む。培地層２は、これらの成分を溶媒中で混合して調製した培地液を、基材１０の第１表面１１に塗布し、乾燥することによって形成することができる。培地液の塗布方法としては、メタルマスク法を含むスクリーン印刷及びグラビア印刷、ディスペンサーによる塗布、並びにスプレー方式による噴霧等が挙げられる。

【0043】

バインダーは、培地層２を基材１０の第１表面１１に固着させるために用いられる。バインダーとしては、溶媒に溶解する高分子化合物が挙げられ、水及び有機溶媒のうちの少なくとも一方に溶解する高分子化合物であってもよく、これらの両方に溶解する両親媒性の高分子化合物であってもよい。バインダーとしては、例えばポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、及びポリアクリル酸等が挙げられる。バインダーは、１種又は２種以上を用いることができる。

【0044】

ゲル化剤は、検体を含む被検液中の水分を吸収してゲル化させ、検体（微生物）の生育に必要な場を提供するために用いられる。ゲル化剤としては、グァーガム、キサンタンガム、ローカストビーンガム、タラガム、タマリンドシードガム、及びカラギーナン等の増粘多糖類；ヒドロキシエチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリアクリル酸ナトリウム及びアルギン酸等が挙げられる。ゲル化剤は、１種又は２種以上を用いることができる。

【0045】

栄養成分は、検体の生育に必要な成分であり、窒素源、炭素源、無機塩類、及びビタミン等を提供するために用いられる。窒素源及び炭素源としては、ペプトン（カゼイン・獣肉・大豆等）が挙げられ、無機塩類及びビタミンとしては、酵母エキス等のエキス類、リン酸一水素カリウム、塩化ナトリウム等が挙げられる。

【0046】

発色指示薬は、コロニーを発色させることでその存在を視認しやすくするために用いられ、ｐＨの変動や検体が産生する酵素により呈色する。発色指示薬としては、トリフェニルテトラゾリウムクロライド及びテトラゾリウムバイオレット等のテトラゾリウム塩；ニュートラルレッド、フェノールレッド、及びブロモチモールブルー等のｐＨ指示薬；５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（Ｘ－Ｇａｌ）及び５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリルリン酸等の発色指示薬の酵素基質等が挙げられる。

【0047】

選択剤は、検出したい菌以外の微生物の発育を抑制するために用いられる。選択剤は、胆汁酸塩、デオキシコール酸ナトリウム、及びラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤；クリスタルバイオレット及びブリリアントグリーン等の色素；チオ硫酸ナトリウム、塩化リチウム、及びアジ化ナトリウム等の無機塩類が挙げられる。

【0048】

溶媒は、培地層に含まれる各成分を混合するために用いられ、水、有機溶媒、及びこれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１－プロパノール、及び２－プロパノール等の低級アルコールが挙げられる。溶媒は、１種又は２種以上を混合して用いることができる。

【0049】

培地層２の平面視形状は特に限定されず、例えば、円形状、半円形状、並びに、三角形、長方形、及び正方形等の多角形状等であってもよく、これらを組み合わせた形状であってもよい。培地層２の平面視形状は、好ましくは円形状である。培地層２の平面視における大きさは特に限定されないが、図１に示すような円形状である場合、直径が４０～８０ｍｍであってもよく、５０～６０ｍｍであってもよい。

【0050】

（カバー部材）
カバー部材３０は、培地層２を被覆して保護するために設けられる。カバー部材３０は、培養シート１の使用前又は培養時のコンタミネーションを抑制したり、培養時に培地層２から水分が蒸発することを抑制したり、被検液を培地層２全体に拡散させたりするために用いることができる。

【0051】

カバー部材３０は、シート状又は平板状であることができ、培地層２に発生するコロニーを観察しやすいように透明であることが好ましい。カバー部材３０は、検体の培養に適した気体透過性を有することが好ましい。

【0052】

カバー部材３０は、基材１０とは別部材であってもよく、基材１０の一部分によって構成されていてもよい。カバー部材３０が基材１０とは別部材である場合、カバー部材３０は、基材１０に予め取り付けられていることが好ましい。例えば図１に示すように、カバー部材３０の一辺を、基材１０に接着又はカシメ等の固着手段により取り付けてもよい。カバー部材３０の固着位置は、基材１０の第１表面１１であってもよく第２表面１２であってもよい。カバー部材３０が基材１０の一部で構成されている場合、基材１０を二つ折り等に折り畳むことにより、基材１０のうちの培地層２が形成されていない領域を、培地層２を被覆するカバー部材３０とすることができる。

【0053】

カバー部材３０の平面視形状は、培地層２を被覆することができれば特に制限されず、例えば、円形状、半円形状、並びに、四角形及び六角形等の多角形状等であってもよく、これらを組み合わせた形状であってもよい。カバー部材３０の平面視における大きさは、培地層２を被覆し、被覆状態で凸部３３が培地層２の外周を取り囲むことができる大きさであればよいが、培地層２よりも大きいことが好ましい。カバー部材３０の平面視における大きさは、基材１０の大きさよりも小さくてもよく、同じであってもよく、大きくてもよい。

【0054】

カバー部材３０の厚みは特に限定されないが、例えば０．０１～３ｍｍであり、好ましくは０．０１～１ｍｍであり、０．０２～０．５ｍｍであってもよく、０．０２～０．１ｍｍであってもよい。

【0055】

上記したように、カバー部材３０は凸部３３を有する。カバー部材３０が凸部３３を有することにより、カバー部材３０の重量を増加させることができる。これにより、特にカバー部材３０が自然にめくれ、培地層２が汚染されることを抑制できる。また、カバー部材３０が凸部３３を有することにより、カバー部材３０の形状を維持しやすくなる。凸部を有していないカバー部材に比較すると、カバー部材３０に発生するシワを抑制できるため、培養時に水分が蒸発して培地層２が乾燥することを抑制できる。特にカバー部材３０がフィルム等のように薄いシートである場合に、凸部３３は、カバー部材３０のめくれを好適に抑制し、カバー部材３０の形状を好適に維持できる。

【0056】

凸部３３は、カバー部材３０を形成するためのシート部材又は板状部材を立体加工することにより形成してもよく、シート部材又は板状部材の切削加工により形成してもよい。あるいは、シート部材又は板状部材に接着等により凸部３３を取り付けたり、パターン形成、印刷、塗布により凸部３３を形成したりしたものをカバー部材３０としてもよい。後述するように、カバー部材３０が樹脂を用いて形成されている場合は、射出成形、ブロー成形、及びプレス成形等の金型を用いた樹脂成形によって凸部３３を形成してもよい。樹脂成形によりカバー部材３０を得る場合、凸部３３を有することにより、成形時にカバー部材３０に反りが発生することを抑制できることが期待できる。

【0057】

カバー部材３０の凸部３３が形成された表面とは反対側の表面は、図２～図７に示すように平坦な面であってもよく、凸部３３の形状に対応する凹形状を有していてもよい。この凹形状は、凸部３３を形成した結果、凸部３３が形成された表面とは反対側の表面が変形したものであってもよい。このような形状のカバー部材３０は、シート部材又は板状部材の立体加工、又は樹脂成形等によって形成することができる。

【0058】

被覆状態にあるカバー部材３０（図１（ａ））を、非被覆状態（図１（ｂ））にする操作を行いやすくするために、図８に示すように、カバー部材３０は把持部３６を有していてもよい。把持部３６としては、例えば、カバー部材３０を被覆状態としたときに、培養シート１の平面視において、カバー部材３０の一部が基材１０からはみ出すように、カバー部材３０の一辺の一部が突出した部分であってもよい。把持部３６は、カバー部材３０を被覆状態としたときに持ち上げられる部分に設ければよい。培養シート１の平面視において、例えばカバー部材３０が基材１０の一辺に固着されている場合、当該一辺に対向する一辺に把持部３６を設ければよい。カバー部材３０が把持部３６を有することにより、基材１０を把持することなくカバー部材３０のみを把持して、カバー部材３０を非被覆状態にすることができる。

【0059】

基材１０の段差のない平坦な第１表面１１に培地層２を設ける場合、カバー部材３０の凸部３３の高さは、培地層２とカバー部材３０との間に隙間が形成されるように設定することが好ましい。例えば、カバー部材３０を被覆状態としたときの、培地層２の基材１０側とは反対側の表面とカバー部材３０の培地層２と対向する側の表面との間の距離が、０．１～３．０ｍｍ、好ましくは０．３～２．０ｍｍとなるように、上記隙間を形成すればよい。

【0060】

カバー部材３０は、被覆状態としたときに、培地層２に対向する領域（例えば上記した内部領域３２）を含むように、例えばバインダー、ゲル化剤、栄養成分、及び発色指示薬からなる群より選ばれる１種以上を含む補助層が形成されていてもよい。補助層は、基材１０に形成された培地層２に混合できない成分を含んでいてもよい。補助層は、カバー部材３０の培地層２と対向する側の表面全面に形成されていてもよい。バインダー、ゲル化剤、栄養成分、及び発色指示薬としては、上記したものが挙げられる。

【0061】

カバー部材３０は、コロニーの大きさを確認したり、コロニーの計数を行いやすくしたりするために、グラビア印刷等の印刷された格子状の模様（目盛り）を有していてもよい。印刷に用いるインキは、水に不溶であって、検体の生育に影響を与えないものが好ましい。格子状の模様は、例えば１０ｍｍ角の大きさとすることができる。

【0062】

カバー部材３０を構成する材料は特に限定されず、例えば、樹脂、紙、ガラス、金属、及びセラミック等が挙げられるが、好ましくは樹脂である。カバー部材３０を構成する樹脂としては、ポリエチレン及びポリプロピレン等のポリオレフィン；ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、等のポリエステル；ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリアクリル樹脂、ポリアミド、ポリ塩化ビニル等からなる群より選ばれる１種以上が挙げられる。カバー部材３０は、透明性、水蒸気透過性、及び酸素透過性の観点から、ポリスチレン及びポリオレフィンからなる群より選ばれる１種以上の樹脂であることが好ましい。

【0063】

カバー部材３０は、単層構造であってもよく、２層以上の多層構造を有していてもよい。基材１０が多層構造を有する場合、各層の材料は同じであってもよく異なっていてもよい。カバー部材３０のうち、凸部３３と凸部３３以外の部分とは、同じ材料であってもよく、異なる材料であってもよい。

【0064】

〔他の例〕
図９は、培養シートの一例を模式的に示す断面図である。図１～８では、基材１０に培地層２が設けられた培養シート１について説明したが、図９に示すように、培養シート５は、カバー部材３０に培地層２が設けられていてもよい。あるいは、基材１０に培地層２を設け、カバー部材３０にも培地層２を設けてもよい。この場合、基材１０に設けられた培地層２と、カバー部材３０に設けられた培地層２とは、カバー部材３０の被覆状態において、対向するように配置することが好ましい。これにより、２つの培地層２の間に被検液を挟み込むことができるため、培地層の乾燥を抑制することができる。

【0065】

［態様］
本発明の実施態様の一部を以下に示す。
〔１〕 基材と、前記基材の第１表面に設けられた培地層と、前記培地層を被覆可能に設けられたカバー部材と、を有する培養シートであって、
前記カバー部材は、その表面から突出する凸部を有し、
前記培地層を被覆するように前記カバー部材を前記基材上に配置した被覆状態において、前記凸部は、前記培地層の外周を取り囲むように前記基材に接触する、培養シート。
〔２〕 前記凸部は、前記被覆状態での断面において少なくとも１つの頂点を有し、
前記被覆状態において、少なくとも前記頂点が前記基材の前記第１表面に接触する、〔１〕に記載の培養シート。
〔３〕 前記カバー部材は、前記凸部で囲まれた内部領域と、前記凸部よりも外側で前記内部領域を取り囲む外部領域とを有する、〔１〕又は〔２〕に記載の培養シート。
〔４〕 前記凸部は、前記カバー部材の平面視において環状に設けられている、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の培養シート。

【符号の説明】

【0066】

１ 培養シート、２ 培地層、５ 培養シート、８ スタックリブ、１０ 基材、１１ 第１表面、１２ 第２表面、１５ 凹部、２２ 培養空間、３０ カバー部材、３２ 内部領域、３３ 凸部、３４ 外部領域、３６ 把持部。

【要約】

【課題】培地層の汚染を抑制しやすい培養シートを提供する。
【解決手段】培養シートは、基材と、基材の第１表面に設けられた培地層と、培地層を被覆可能に設けられたカバー部材と、を有する。カバー部材は、その表面から突出する凸部を有する。培地層を被覆するようにカバー部材を基材上に配置した被覆状態において凸部は、培地層の外周を取り囲むように基材に接触する。
【選択図】図２

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】